ES2946262T3 - Lámina de liberación sostenida de fármaco para el tratamiento de la lesión nerviosa - Google Patents
Lámina de liberación sostenida de fármaco para el tratamiento de la lesión nerviosa Download PDFInfo
- Publication number
- ES2946262T3 ES2946262T3 ES17763162T ES17763162T ES2946262T3 ES 2946262 T3 ES2946262 T3 ES 2946262T3 ES 17763162 T ES17763162 T ES 17763162T ES 17763162 T ES17763162 T ES 17763162T ES 2946262 T3 ES2946262 T3 ES 2946262T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- sheet
- nerve
- copolymer
- drug
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 67
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 67
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 title claims abstract description 48
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 title claims abstract description 48
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 title abstract description 11
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 title abstract description 11
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims abstract description 37
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 claims abstract description 36
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 claims abstract description 36
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 claims abstract description 36
- 238000013269 sustained drug release Methods 0.000 claims abstract description 30
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229920003232 aliphatic polyester Polymers 0.000 claims abstract description 17
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 claims abstract description 17
- -1 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims description 58
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 45
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 36
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 claims description 31
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 15
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 15
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 15
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 238000001523 electrospinning Methods 0.000 claims description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 12
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 11
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 11
- 229920003213 poly(N-isopropyl acrylamide) Polymers 0.000 claims description 10
- IQAGXMNEUYBTLG-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxy-2-methylpent-2-enamide Chemical compound NC(=O)C(C)=CCCO IQAGXMNEUYBTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 claims description 6
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims description 6
- 238000009987 spinning Methods 0.000 claims description 6
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 abstract description 56
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 13
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 13
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 39
- JEWJRMKHSMTXPP-BYFNXCQMSA-M methylcobalamin Chemical compound C[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O JEWJRMKHSMTXPP-BYFNXCQMSA-M 0.000 description 36
- 235000007672 methylcobalamin Nutrition 0.000 description 36
- 239000011585 methylcobalamin Substances 0.000 description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 33
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 28
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 28
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 25
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 23
- 208000025962 Crush injury Diseases 0.000 description 21
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 19
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 17
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 15
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 14
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 14
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 12
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 11
- 230000037152 sensory function Effects 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 7
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 5
- 208000010886 Peripheral nerve injury Diseases 0.000 description 5
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 5
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 5
- JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N lactide Chemical compound CC1OC(=O)C(C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 5
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 5
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 5
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M cyanocobalamin Chemical compound N#C[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 4
- YOZNUFWCRFCGIH-BYFNXCQMSA-L hydroxocobalamin Chemical compound O[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O YOZNUFWCRFCGIH-BYFNXCQMSA-L 0.000 description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 210000003007 myelin sheath Anatomy 0.000 description 4
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 4
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710115514 Nuclear receptor coactivator 6 Proteins 0.000 description 3
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 3
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010029174 Nerve compression Diseases 0.000 description 2
- 108090000742 Neurotrophin 3 Proteins 0.000 description 2
- 102100029268 Neurotrophin-3 Human genes 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 206010039897 Sedation Diseases 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 2
- 230000002502 anti-myelin effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- IFKLAQQSCNILHL-QHAWAJNXSA-N butorphanol Chemical compound N1([C@@H]2CC3=CC=C(C=C3[C@@]3([C@]2(CCCC3)O)CC1)O)CC1CCC1 IFKLAQQSCNILHL-QHAWAJNXSA-N 0.000 description 2
- 229960001113 butorphanol Drugs 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 235000000639 cyanocobalamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011666 cyanocobalamin Substances 0.000 description 2
- 229960002104 cyanocobalamin Drugs 0.000 description 2
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 235000004867 hydroxocobalamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011704 hydroxocobalamin Substances 0.000 description 2
- 229960001103 hydroxocobalamin Drugs 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- HRLIOXLXPOHXTA-UHFFFAOYSA-N medetomidine Chemical compound C=1C=CC(C)=C(C)C=1C(C)C1=CN=C[N]1 HRLIOXLXPOHXTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002140 medetomidine Drugs 0.000 description 2
- DDLIGBOFAVUZHB-UHFFFAOYSA-N midazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NC=C2CN=C1C1=CC=CC=C1F DDLIGBOFAVUZHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003793 midazolam Drugs 0.000 description 2
- 208000019382 nerve compression syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000007830 nerve conduction Effects 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 229940032018 neurotrophin 3 Drugs 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 2
- 230000036280 sedation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 210000000431 third toe Anatomy 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 4511-42-6 Chemical compound C[C@@H]1OC(=O)[C@H](C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102100028188 Cystatin-F Human genes 0.000 description 1
- 101710169749 Cystatin-F Proteins 0.000 description 1
- 229930182843 D-Lactic acid Natural products 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N D-lactic acid Chemical compound C[C@@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 238000001134 F-test Methods 0.000 description 1
- 241001562081 Ikeda Species 0.000 description 1
- 241000283953 Lagomorpha Species 0.000 description 1
- 241000212243 Lepus americanus Species 0.000 description 1
- 241000025416 Lepus brachyurus Species 0.000 description 1
- 101150018665 MAPK3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101100534472 Mus musculus Stab2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010039670 Sciatic nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150086528 Stab2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 208000005716 Subacute Combined Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012648 alternating copolymerization Methods 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000012661 block copolymerization Methods 0.000 description 1
- 208000003295 carpal tunnel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000002932 cholinergic neuron Anatomy 0.000 description 1
- 235000006279 cobamamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011789 cobamamide Substances 0.000 description 1
- ZIHHMGTYZOSFRC-UWWAPWIJSA-M cobamamide Chemical compound C1(/[C@](C)(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC2[C@H]([C@H](O[C@@H]2CO)N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O)[C@@H](CC(N)=O)[C@]2(N1[Co+]C[C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O1)N1C3=NC=NC(N)=C3N=C1)O)[H])=C(C)\C([C@H](C/1(C)C)CCC(N)=O)=N\C\1=C/C([C@H]([C@@]\1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N/C/1=C(C)\C1=N[C@]2(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]1CCC(N)=O ZIHHMGTYZOSFRC-UWWAPWIJSA-M 0.000 description 1
- 229940022769 d- lactic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000032405 negative regulation of neuron apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007996 neuronal plasticity Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N phenol;hydrate Chemical compound O.OC1=CC=CC=C1 KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000000063 presynaptic terminal Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000002889 sympathetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009864 tensile test Methods 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 102000015533 trkA Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010064884 trkA Receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 239000002759 woven fabric Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
- A61K9/7007—Drug-containing films, membranes or sheets
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7135—Compounds containing heavy metals
- A61K31/714—Cobalamins, e.g. cyanocobalamin, i.e. vitamin B12
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/185—Nerve growth factor [NGF]; Brain derived neurotrophic factor [BDNF]; Ciliary neurotrophic factor [CNTF]; Glial derived neurotrophic factor [GDNF]; Neurotrophins, e.g. NT-3
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Psychology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Infusion, Injection, And Reservoir Apparatuses (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
Se proporciona una hoja de liberación sostenida que incluye un fármaco para tratar el daño nervioso, donde la hoja se aplica en un sitio dañado del nervio, puede mantener una alta concentración del fármaco durante un período prolongado y promueve la regeneración nerviosa sin estimular los nervios, incluso cuando la hoja se implanta en la periferia del sitio de daño del nervio. También se proporciona un método de producción para la lámina. Esta lámina de liberación sostenida de fármacos para tratar el daño nervioso es una lámina que comprende un tejido no tejido formado por nanofibras que incluyen un fármaco como la vitamina B12 y un polímero biocompatible como un poliéster alifático biodegradable, y se implanta en la periferia del nervio dañado. sitio para promover la regeneración nerviosa. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Lámina de liberación sostenida de fármaco para el tratamiento de la lesión nerviosa
La presente invención se refiere a una lámina de liberación sostenida de fármaco para usar en el tratamiento de lesiones nerviosas (también denominada simplemente "la presente lámina", en lo sucesivo). Más específicamente, la presente invención se refiere a: una lámina que contiene un fármaco que tiene un efecto terapéutico sobre lesiones nerviosas y de la cual el fármaco puede liberarse de forma sostenible; un método para producir la lámina; y otros.
La lesión de nervio periférico se clasifica en líneas generales en: lesión con discontinuidad en la que se interrumpe la continuidad en un sitio lesionado; y lesión nerviosa con continuidad en la que se retiene la continuidad en un sitio lesionado, tal como la neuropatía por atrapamiento (p. ej., síndrome del túnel carpiano). Como método para tratar la lesión con discontinuidad, se selecciona la sutura directa, el injerto de nervio autólogo o similar. Por otro lado, como método para tratar la lesión nerviosa con continuidad se selecciona la neurólisis o un tratamiento conservador. Hasta ahora, se ha avanzado en el desarrollo de conductos nerviosos artificiales para un dispositivo que tiene un efecto de regeneración sobre lesiones de nervios periféricos. Sin embargo, los conductos nerviosos artificiales son los que se deben usar solo para lesiones nerviosas con discontinuidad. Además, los conductos nerviosos artificiales pueden simplemente entrecruzar defectos en un sitio lesionado y no tienen un efecto para mejorar la regeneración de los axones nerviosos. Si se requiere un largo período para la recuperación de los nervios después de la lesión de nervio periférico, puede ocurrir un cambio irreversible en un tejido muscular. Por lo tanto, mejorar la regeneración de los axones nerviosos es un problema crítico. Además, como se mencionó anteriormente, los conductos nerviosos artificiales se pueden aplicar solo a lesiones nerviosas en las que los defectos están presentes en un sitio lesionado, y aún no existe un dispositivo para la lesión nerviosa con continuidad con la incidencia de un mayor número de pacientes. En estas situaciones, en la práctica clínica se ha demandado una herramienta que pueda aplicarse tanto a la lesión nerviosa con continuidad como a la lesión nerviosa con discontinuidad y que sea eficaz para el tratamiento de la lesión nerviosa.
Uno de los medicamentos que puede contener la presente lámina es la vitamina B12. La vitamina B12 es esencial para el funcionamiento normal de los sistemas nerviosos, y se sabe que la cantidad insuficiente de vitamina B12 produce una neuropatía sistémica denominada "degeneración combinada subaguda de la médula espinal" (Documento no de patente 1). Los autores de la presente invención han descrito que el uso de metilcobalamina en una concentración de 100 nM o más puede promover el alargamiento de las neuritas y la supervivencia de las neuronas, estos efectos pueden ser mediados por un ciclo de metilación que es una reacción asociada con la metilación, la metilcobalamina puede aumentar las actividades de Erk1/2 y Akt a través del ciclo de metilación, y la administración continua de dosis altas de metilcobalamina mejora la regeneración nerviosa y la recuperación de la función en un modelo de lesión del nervio ciático en ratas (Documento no de patente 2).
El documento de patente 1 describe un material compuesto biodegradable que contiene fibras de vidrio solubles en agua y un material aglutinante biocompatible tal como policaprolactona y tiene una forma similar a una lámina flexible para ser implantada en un cuerpo. Se describe que el material compuesto biodegradable que tiene una forma similar a una lámina flexible se enrolla alrededor de un sitio con defecto del tejido durante su uso con el fin de acelerar la cicatrización del sitio del defecto y se usa para prevenir la adhesión después de una operación quirúrgica. También se describe que el material compuesto biodegradable se puede usar como una alternativa a un injerto de nervio y, por lo tanto, se espera que el material compuesto biodegradable se aplique a una lesión nerviosa con discontinuidad. Sin embargo, el material compuesto biodegradable no tiene efecto para potenciar la regeneración de axones nerviosos.
El documento de patente 2 describe una estructura de superficie fibrosa que contiene ingredientes activos con un perfil de liberación de ingredientes activos ajustable, que comprende un sustrato de ingrediente activo fibroso, polimérico, soluble y/o descomponible y al menos un ingrediente activo que está asociado con el sustrato y puede ser liberado de la estructura de superficie fibrosa; formulaciones que contienen ingredientes activos, que comprenden dichas estructuras de superficie fibrosa; el uso de estructuras de superficie fibrosa que contienen ingredientes activos según la invención para producir formulaciones que contienen ingredientes activos; y un método para producir estructuras de superficie fibrosa según la invención.
El documento de patente 3 describe un conducto nervioso biónico de nanofibras orientadas y un método de fabricación del mismo.
El documento de patente 4 se refiere a composiciones de fibras electrohiladas que comprenden uno o más polímeros y uno o más agentes biológicamente activos. En realizaciones específicas, los agentes biológicamente activos son factores de crecimiento nervioso.
El documento de patente 5 describe telas no tejidas que contienen proteínas de factores de crecimiento y diferenciación, que están diseñadas específicamente para acelerar la regeneración de tejidos y los procesos de cicatrización de heridas de tejidos de mamíferos.
Como fármaco que puede estar contenido en la presente lámina, también se puede mencionar un extracto de pieles inflamadas de conejos a los que se inoculó virus vaccinia (también denominado "el presente extracto", en lo sucesivo) o una fracción del mismo. Con respecto al presente extracto o una preparación que contiene el presente extracto, se
conocen variedades muy amplias de actividades y efectos del mismo. Sin embargo, aún no se conoce una lámina para usar en el tratamiento de lesiones nerviosas que contenga el presente extracto.
También se pueden mencionar el factor de crecimiento nervioso (NGF), el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) y similares. Estas sustancias son proteínas secretoras que pertenecen a una familia de factores neurotróficos a la que también pertenecen la neurotrofina-3 (NT-3) y similares, y que se pueden producir en varias células, incluidas las neuronas y las células gliales (p. ej., una microglía, un astrocito, un oligodendrocito). Una neurotrofina tiene una actividad para mantener la supervivencia de las neuronas, para potenciar el alargamiento de las neuritas, para acelerar la síntesis de un neurotransmisor y similares. El NGF puede ser sintetizado y secretado en una célula diana a la que se proyecta una neurona (p. ej., una neurona, un músculo), puede pasar por un receptor de TrkA situado en el terminal del axón de una neurona, se administra a una célula de forma retrógrada y actúa en la célula. El NGF puede actuar específicamente sobre una neurona sensorial (una célula pequeña del ganglio de la raíz dorsal) o una neurona simpática posganglionar en el sistema nervioso periférico, y puede actuar específicamente sobre una neurona colinérgica del prosencéfalo basal que se proyecta a la corteza cerebral o al hipocampo en el sistema nervioso central. Se sabe que el BDNF está ubicado de forma excéntrica en el sistema nervioso central, tal como principalmente en el hipocampo, y presenta varias actividades fisiológicas, que incluyen la supervivencia/mantenimiento de las células nerviosas, la regulación de las formas de neuritas, la regulación funcional de la sinapsis y la regulación de la plasticidad neural, en los sistemas nerviosos. Sin embargo, las láminas para uso en el tratamiento de lesiones nerviosas que contienen estas neurotrofinas no son previamente conocidas.
Documento de patente 1: Patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2005-528145
Documento de patente 2: WO 2010/015709 A2
Documento de patente 3: CN 102525689 B
Documento de patente 4: WO 2007/089259 A1
Documento de patente 5: JP 2014522918 A
Documento no de patente 1: Scalabrino et al., Lab. invest., 62 (1990), 297-304
Documento no de patente 2: Okada et al., ExperimentalNeurology, 222 (2010), 191-203
La presente invención aborda el problema de proporcionar una lámina de liberación sostenida de fármaco para usar en el tratamiento de lesiones nerviosas, que puede mantener la concentración de un fármaco en un sitio de lesión en un nivel adecuado durante un período prolongado y, cuando se implanta en la periferia de un sitio de lesión nerviosa, puede mejorar la regeneración de los nervios sin aplicar estímulos que puedan afectar negativamente a los nervios.
Con el fin de resolver el problema, la presente invención incluye las siguientes invenciones. Se mencionarán más adelante más detalles de estas invenciones.
[1] Una lámina de liberación sostenida de fármaco que comprende una tela no tejida que se forma a partir de nanofibras que contienen un fármaco para usar en el tratamiento de la lesión nerviosa y un polímero biocompatible.
en donde el fármaco es vitamina B12 o un extracto de pieles inflamadas de conejos a los que se ha inoculado virus vaccinia o una fracción del mismo.
[2] La lámina de liberación sostenida de fármaco según el punto [1] mencionado anteriormente, en donde el polímero biocompatible es un poliéster alifático biodegradable o un derivado de poliacrilamida.
[3] La lámina de liberación sostenida de fármaco según el punto [2] mencionado anteriormente, en donde el poliéster alifático biodegradable se selecciona del grupo que consiste en policaprolactona o un copolímero de la misma, poli(ácido láctico) o un copolímero del mismo, poli(ácido glicólico) o un copolímero del mismo, y mezclas de estos componentes.
[4] La lámina de liberación sostenida de fármaco según el punto [2] mencionado anteriormente, en donde el derivado de poliacrilamida se selecciona del grupo que consiste en poli(N-isopropilacrilamida) o un copolímero de la misma, poli(2-hidroxietilmetacrilamida) o un copolímero de la misma, un copolímero de N-isopropilacrilamida y 2-hidroxietilmetacrilamida, y mezclas de estos componentes.
[5] La lámina de liberación sostenida de fármaco según uno cualquiera de los puntos [1] a [4] mencionados anteriormente, que además contiene ácido hialurónico.6
[6] La lámina de liberación sostenida de fármaco según uno cualquiera de los puntos [1] a [5] mencionados anteriormente, en donde el peso de la lámina es de 1 a 100 mg/cm2.
[7] Un método para producir una lámina de liberación sostenida de fármaco según uno cualquiera de los puntos [1] a [6] mencionados anteriormente, que comprende las siguientes etapas (1) y (2):
(1) preparar una solución que contiene un fármaco, un polímero biocompatible y un disolvente; y
(2) someter la solución a hilado por un método de electrohilado para formar una tela no tejida.
[8] El método para producir una lámina de liberación sostenida de fármaco según los puntos [7] mencionados anteriormente, en donde el polímero biocompatible es un poliéster alifático biodegradable o un derivado de poliacrilamida.
[9] El método de producción según el punto [8] mencionado anteriormente, en donde el poliéster alifático biodegradable se selecciona del grupo que consiste en policaprolactona o un copolímero de la misma, poli(ácido láctico) o un copolímero del mismo, poli(ácido glicólico) o un copolímero del mismo, y mezclas de estos componentes
[10] El método de producción según el punto [8] mencionado anteriormente, en donde el derivado de poliacrilamida se selecciona del grupo que consiste en poli(N-isopropilacrilamida) o un copolímero de la misma, poli(2-hidroxietilmetacrilamida) o un copolímero de la misma, un copolímero de N-isopropilacrilamida y 2-hidroxietilmetacrilamida, y mezclas de estos componentes.
De acuerdo con la presente invención, se hace posible proporcionar: una lámina de liberación sostenida de fármaco para usar en el tratamiento de lesiones nerviosas, que se puede aplicar mediante la implantación en la periferia de un sitio de lesión para que la concentración de un fármaco en el sitio se pueda mantener en un nivel adecuado durante un período prolongado, mejorando así la regeneración nerviosa; un método para producir la lámina de liberación sostenida de fármaco; y otros.
La Fig. 1 ilustra el resultado de la observación de una lámina producida de policaprolactona, con un microscopio electrónico de barrido (SEM).
La Fig. 2 ilustra el resultado de la observación de una lámina producida de poli(N-isopropilacrilamida), con un SEM. La Fig. 3 ilustra el resultado de la observación de una lámina producida de poli(NIPAAm-co-HMAAm), con un SEM. La Fig. 4 ilustra el resultado de la observación de una lámina producida de policaprolactona que contiene nanopartículas magnéticas, con un SEM.
La Fig. 5 ilustra el resultado de la observación de una lámina producida de policaprolactona recubierta con ácido hialurónico, con un SEM.
La Fig. 6 ilustra el resultado de la observación de una lámina producida de policaprolactona que contiene el presente extracto, con un SEM.
La Fig. 7 ilustra los resultados de la observación de tres tipos producidos de las presentes láminas, cada uno de los cuales contiene vitamina B12, con un SEM.
La Fig. 8 ilustra los resultados de la confirmación de las propiedades de liberación sostenida de los tres tipos producidos de las presentes láminas, cada uno de los cuales contiene vitamina B12.
La Fig. 9 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene vitamina B12 utilizando un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en rata, en donde se midió la concentración de vitamina B12 en la sangre durante la 6a semana después de una cirugía.
La Fig. 10 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene vitamina B12 usando un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en rata, en donde se midió un índice de función ciática (SFI) durante la 6a semana después de una cirugía para evaluar una función motora.
La Fig. 11 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene vitamina B12 usando un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en rata, en donde se llevó a cabo un ensayo de filamento de von Frey durante la 6a semana después de una cirugía para evaluar una función sensorial.
La Fig. 12 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene el presente extracto utilizando un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en rata, en donde se llevó a cabo un ensayo de filamento de von Frey durante la 3a semana después de una cirugía para evaluar una función sensorial.
La Fig. 13 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene vitamina B12 utilizando un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en rata, en donde se llevó a cabo una evaluación electrofisiológica durante la 6a semana después de una cirugía, y el panel (A) ilustra los resultados
del potencial de acción muscular del compuesto (CMAP), el panel (B) ilustra los resultados de la latencia terminal (TL) y el panel (C) ilustra los resultados de la velocidad de conducción nerviosa (NCV).
La Fig. 14 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene vitamina B12 utilizando un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en rata, en donde se recogió un nervio ciático durante la 6a semana después de una cirugía y luego se inmunotiñó con un anticuerpo anti-proteína básica de mielina (MBP) que es un indicador de una vaina de mielina.
La Fig. 15 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene vitamina B12 usando un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en rata, en donde se llevó a cabo una evaluación histológica durante la 6a semana después de la cirugía, y el panel (A) muestra los resultados del número total de axones y el panel (B) muestra los resultados del (número de axones positivos para MBP)/(número total de axones).
La Fig. 16 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene vitamina B12 en nervios unidos con conductos de regeneración nerviosa (NRC) utilizando un modelo de rata de nervio ciático deficiente, en donde se llevó a cabo un ensayo de filamento de von Frey durante la semana 12 después de una cirugía para evaluar una función sensorial.
La Fig. 17 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene vitamina B12 en nervios unidos con un NRC utilizando un modelo de nervio ciático deficiente de rata, donde se llevó a cabo una evaluación electrofisiológica (TL) durante la semana 12 después de una cirugía.
La Fig. 18 ilustra los resultados de un experimento para evaluar la eficacia del fármaco de la presente lámina que contiene vitamina B12 en nervios unidos con un NRC utilizando un modelo de rata deficiente en nervio ciático, en donde se llevó a cabo una evaluación electrofisiológica (NCV) durante la semana 12 después de una cirugía.
La presente invención proporciona una lámina de liberación sostenida de fármaco para usar en el tratamiento de una lesión nerviosa. La lámina de liberación sostenida de fármaco según la presente invención incluye una tela no tejida que se forma a partir de nanofibras que contienen un fármaco tal como vitamina B12 y un polímero biocompatible como un poliéster alifático biodegradable, y se implanta en la periferia de un sitio de lesión nerviosa cuando se usa. El fármaco que va a estar contenido en la lámina de liberación sostenida del fármaco descrita en el presente documento puede ser cualquiera, siempre que el fármaco tenga un efecto terapéutico sobre la lesión nerviosa. El fármaco puede seleccionarse de vitamina B12 y un extracto de pieles inflamadas de conejos a los que se ha inoculado virus vaccinia o una fracción del mismo. El fármaco puede tratar la lesión nerviosa de manera efectiva al actuar en el sitio de la lesión nerviosa para acelerar la regeneración nerviosa. La lámina de liberación sostenida de fármaco según la presente invención también incluye, dentro del alcance de la misma, una que contiene ácido hialurónico además del fármaco mencionado anteriormente.
Las enfermedades a las que se aplica la presente lámina son las lesiones nerviosas. Dado que la lámina de liberación sostenida de fármaco según la presente invención tiene una actividad potenciadora de la regeneración nerviosa, la lámina de liberación sostenida de fármaco puede tratar tanto la lesión nerviosa con continuidad como la lesión nerviosa con discontinuidad y, por lo tanto, es muy útil. Un ejemplo de lesión nerviosa con continuidad es la neuropatía por atrapamiento (un estado donde los tejidos circundantes comprimen los nervios). La lámina de liberación sostenida de fármaco según la presente invención también es eficaz para mejorar la regeneración de los nervios después de la neurorrafia (un estado en el que los nervios se suturan directamente después de una lesión nerviosa), los nervios después de la neurólisis y los nervios después de un injerto de nervio (un estado donde el injerto de nervio se ha llevado a cabo en un sitio de lesión nerviosa para proporcionar continuidad). La lámina de liberación sostenida de fármaco según la presente invención también puede presentar un efecto para mejorar el tratamiento de la lesión nerviosa con discontinuidad cuando se usa sola o en combinación con conductos nerviosos artificiales.
Los ejemplos de vitamina B12 que es un fármaco para que contenga la presente lámina incluyen cobalamina y derivados de la misma. Los ejemplos específicos de vitamina B12 incluyen metilcobalamina, cianocobalamina, hidroxocobalamina, sulfitocobalamina, adenosilcobalamina y sus sales, y cualquiera de estos compuestos puede usarse adecuadamente como un ingrediente activo para el agente de liberación sostenida de la presente invención. Entre estos compuestos, se prefiere la metilcobalamina, cianocobalamina, hidroxocobalamina o una de sus sales, y se prefiere más la metilcobalamina o una de sus sales. El contenido de vitamina B12 es preferiblemente de 1% a 30%, más preferiblemente de 2% a 10%, como concentración final de la misma.
La presente lámina está compuesta por un tejido no tejido formado por nanofibras que contienen un fármaco y un polímero biocompatible. Cada una de las nanofibras significa una sustancia fibrosa que tiene un diámetro de aproximadamente 10 nm a aproximadamente 1000 nm y una longitud que es 100 veces o más grande que el diámetro. Los ejemplos del polímero biocompatible para utilizar en la presente invención incluyen un poliéster alifático biodegradable y un derivado de poliacrilamida. Los ejemplos preferidos del poliéster alifático biodegradable incluyen policaprolactona, poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), ácido poliglicerol, poli(ácido hidroxialcanoico), poli(succinato de butileno), copolímeros de los mismos y derivados de los mismos. Desde el punto de vista de la flexibilidad y similares, el poliéster alifático biodegradable es más preferiblemente uno seleccionado del grupo que consiste en
policaprolactona o un copolímero del mismo, poli(ácido láctico) o un copolímero del mismo, poli(ácido glicólico) o un copolímero del mismo y mezclas de estos componentes. Los ejemplos específicos del copolímero incluyen un copolímero de poli(ácido láctico)-policaprolactona, poli(s-caprolactona-co-DL-lactida) y similares. Los ejemplos específicos del derivado de poliacrilamida incluyen poli(N-isopropilacrilamida) o un copolímero de la misma, poli(2-hidroxietilmetacrilamida) o un copolímero de la misma y mezclas de estos componentes. Un ejemplo específico del copolímero mencionado anteriormente es la poli(N-isopropilacrilamida) y un copolímero de N-isopropilacrilamida y 2-hidroxietilmetacrilamida.
Cada una de las nanofibras puede contener al menos un tipo de polímero biocompatible, que puede ser un copolímero de un polímero biocompatible distinto del polímero biocompatible y el polímero biocompatible o puede ser un copolímero que contiene múltiples tipos de polímeros biocompatibles. En estos casos, el tipo de copolimerización puede ser cualquiera de copolimerización en bloque, copolimerización aleatoria, copolimerización alterna y copolimerización por injerto.
La lámina que constituye la lámina de liberación sostenida del fármaco descrita en el presente documento tiene un módulo de Young de aproximadamente 100 kPa a aproximadamente 100 MPa, más preferiblemente de aproximadamente 1 MPa a aproximadamente 50 MPa. El módulo de Young se puede determinar a partir de una curva de tensión-deformación basándose en los valores de medición obtenidos utilizando una máquina de ensayo de tracción disponible comercialmente (p. ej., EZ-S500N (fabricada por Shimadzu Corporation)). El peso de la lámina es preferiblemente de 1 a 100 mg/cm12, más preferiblemente de 1 a 50 mg/cm2. El espesor de la lámina es preferiblemente de aproximadamente 100 gm a aproximadamente 1 mm, más preferiblemente de aproximadamente 100 gm a aproximadamente 500 gm. El área de la lámina no está particularmente limitada, y la lámina se puede cortar en un tamaño que se ajuste al tamaño de un sitio afectado cuando se usa. Alternativamente, la lámina se puede moldear en un tamaño fácil de usar. El tamaño a moldear es, por ejemplo, preferiblemente de 0.1 a 10 cm2, más preferiblemente de 1 a 4 cm2.
La presente lámina se implanta en la periferia de un sitio de lesión nerviosa cuando se usa. La lámina presente está formada para tener flexibilidad y, por lo tanto, la forma de uso de la lámina puede seleccionarse apropiadamente. Más específicamente, para un sitio de lesión nerviosa cuya periferia se libera y en el que quedan expuestos los nervios, se prefiere enrollar la presente lámina alrededor del sitio de lesión nerviosa o colocar la presente lámina de modo que se cubra el sitio de lesión nerviosa. Posteriormente, se devuelven los tejidos periféricos a su estado original y se sutura la piel. Dado que la presente lámina se puede formar de forma flexible, la presente lámina nunca aplica un estímulo que pueda afectar negativamente a los nervios o a los tejidos periféricos cuando se coloca en el lugar de la lesión nerviosa. Por lo tanto, la presente lámina se puede implantar en la periferia de un sitio de lesión nerviosa cuando se usa. Además, no es necesario retirar la lámina presente después del tratamiento del sitio de la lesión. Se prefiere someter la presente lámina a un tratamiento de esterilización antes de su uso. En cuanto al método para la esterilización, se selecciona preferiblemente un método por el cual el fármaco no se puede descomponer y la forma o propiedades físicas de la lámina no se pueden deteriorar. Por ejemplo, se pueden mencionar la esterilización con radiación radiactiva y la esterilización con plasma.
La presente lámina se puede producir preparando una solución que contiene un fármaco como la vitamina B12 y un polímero biocompatible tal como un poliéster alifático biodegradable, y luego produciendo nanofibras usando la solución como materia prima mediante un método de hilado conocido como el método de electrohilado, un método de autoensamblaje y un método de separación de fases, y luego formando una tela no tejida por un método conocido. En la preparación de la solución que contiene un fármaco tal como vitamina B12 y un polímero biocompatible tal como un poliéster alifático biodegradable (es decir, una solución de materia prima), se puede utilizar un disolvente adecuado. El disolvente para utilizar en la solución de materia prima se elimina durante el procedimiento de hilado y no permanece en la tela no tejida. Los ejemplos del disolvente para usar en la solución de materia prima incluyen TEF, HFIP, cloroformo y DMF. Entre estos disolventes, se prefieren el TEF y similares.
Para aplicar la flexibilidad deseada a la tela no tejida, el poliéster alifático biodegradable puede contener un componente de monómero para impartir flexibilidad. Los ejemplos del componente de monómero incluyen DL-lactida, D-lactida, L-lactida, ácido D-láctico y ácido L-láctico. El contenido del componente de monómero para impartir flexibilidad se puede ajustar apropiadamente dependiendo del tipo de polímero biocompatible usado, el tipo de componente de monómero para impartir flexibilidad y el nivel de flexibilidad deseado. Alternativamente, la flexibilidad de la tela no tejida se puede mejorar controlando el peso molecular del polímero biocompatible o formando una estructura ramificada en la molécula del polímero. Se prefiere ajustar adecuadamente el peso molecular y el número de ramificaciones dependiendo del tipo de polímero biocompatible utilizado.
En el caso de que se utilice policaprolactona o un copolímero de la misma como el poliéster alifático biodegradable entre los polímeros biocompatibles, y la lámina se produzca mediante un método de electrohilado, se prefiere emplear un método de producción que implique las siguientes etapas (1) y (2):
(1) preparar una solución que contiene un fármaco, policaprolactona o un copolímero de la misma y un disolvente seleccionado de TEF, HEIP, cloroformo y DMF; y
(2) someter la solución preparada en la etapa (1) a hilado por un método de electrohilado en condiciones de un voltaje de 10 a 30 kV, un caudal de 0.1 a 1 ml/h y un tamaño de aguja de 18 a 24 G para formar una tela no tejida sobre la superficie de un electrodo.
Se prefiere que la policaprolactona o un copolímero de la misma para utilizar en la etapa (1) tenga un peso molecular medio en peso de 1000 a 300000, de 1 a 8 ramificaciones por molécula y un contenido de DL-lactida de 0 a 50% en moles. La policaprolactona o un copolímero de la misma es más preferiblemente un copolímero de policaprolactona que tiene un peso molecular medio en peso de 10000 a 100000, de 2 a 7 ramificaciones por molécula y un contenido de DL-lactida de 20 a 45% en moles, y aún más preferiblemente es un copolímero de policaprolactona que tiene un peso molecular medio en peso de 30000 a 600000, de 3 a 6 ramificaciones por molécula y un contenido de DL-lactida de 30 a 45% en moles. El disolvente para utilizar es preferiblemente TEF.
En la etapa (2), la solución (solución de materia prima) preparada en la etapa (1) se somete a hilado mediante un método de electrohilado para formar una tela no tejida sobre la superficie de un electrodo. Las condiciones para el método de electrohilado son preferiblemente las siguientes: un voltaje de 10 a 30 kV, un caudal de 0.1 a 1 ml/h y un tamaño de aguja de 18 a 24 G, y más preferiblemente son las siguientes: un voltaje de 10 a 15 kV, un caudal de 0.3 a 0.7 ml/h y un tamaño de aguja de 22 a 24 G.
En el caso de que la lámina se produzca usando, por ejemplo, poli(N-isopropilacrilamida) o un copolímero de la misma o un copolímero de N-isopropilacrilamida y 2-hidroxietilmetacrilamida como derivado de poliacrilamida entre los polímeros biocompatibles, y empleando un método de electrohilado, se prefiere emplear un método de producción que implique las siguientes etapas (1) y (2):
(1) preparar una solución que contiene un fármaco, poli(N-isopropilacrilamida) o un copolímero de la misma o un copolímero de N-isopropilacrilamida y 2-hidroxietilmetacrilamida y un disolvente seleccionado de TEF, HEIP, cloroformo y DMF; y
(2) someter la solución preparada en la etapa (1) a hilado por un método de electrohilado en las condiciones de un voltaje de 10 a 30 kV, un caudal de 0.1 a 1 ml/h y un tamaño de aguja de 18 a 24 G para formar una tela no tejida sobre la superficie de un electrodo.
En la etapa (2), la solución (solución de materia prima) preparada en la etapa (1) se somete a hilado mediante un método de electrohilado para formar una tela no tejida sobre la superficie de un electrodo. Las condiciones para el método de electrohilado son preferiblemente las siguientes: un voltaje de 10 a 30 kV, un caudal de 0.1 a 1 ml/h y un tamaño de aguja de 18 a 24 G. El voltaje y el caudal son más preferiblemente de 10 a 20 kV y 0.3 a 1 ml/h, respectivamente.
Además del fármaco tal como la vitamina B12, la presente lámina puede contener además ácido hialurónico. Puede añadirse ácido hialurónico a la solución en la etapa (1), o la tela no tejida formada en la etapa (2) puede empaparse en ácido hialurónico para recubrir la tela no tejida con ácido hialurónico.
Según el método de producción antes mencionado, se puede producir la presente lámina para implantar en un cuerpo vivo, que está compuesta por nanofibras que contienen un fármaco y un polímero biocompatible, y tiene un módulo de Young de 100 kPa a 100 MPa y un peso de 1 a 100 mg/cm2. El método para producir la presente lámina o el uso de un fármaco, nanofibra o una tela no tejida para la producción de la presente lámina también se describe en el presente documento.
El fármaco, tal como la vitamina B12, para estar contenido en la presente lámina se puede producir apropiadamente mediante un método conocido o se puede comprar un producto comercialmente disponible. Asimismo, el ácido hialurónico también se puede producir apropiadamente mediante un método conocido o se puede comprar un producto comercialmente disponible.
El presente extracto para estar contenido en la presente lámina es un extracto que contiene una sustancia activa no proteica extraída y separada de los tejidos de piel inflamados de conejos mediante la inoculación del virus vaccinia.
El presente extracto se puede obtener de la siguiente manera: los tejidos inflamados, inflamados por la inoculación con el virus vaccinia, se trituran; se añade un disolvente de extracción para eliminar los fragmentos de tejido; luego se lleva a cabo la desproteinización; la solución desproteinizada se adsorbe sobre un adsorbente; y luego se eluye el ingrediente activo. por ejemplo, de acuerdo con el siguiente procedimiento.
(A) Se recogen tejidos de piel inflamados de conejos, ratones o similares mediante la inoculación con virus vaccinia, y se trituran los tejidos inflamados. Al tejido triturado se le añade un disolvente de extracción tal como agua, agua fenolada, solución salina fisiológica o agua glicerinada con fenol añadido. Luego, la mezcla se filtra o centrifuga para obtener un líquido de extracción (filtrado o líquido sobrenadante).
(B) El pH del líquido de extracción se ajusta para que sea ácido y el líquido se calienta para la desproteinización. Luego, la solución desproteinizada se ajusta para que sea alcalina, se calienta y luego se filtra o centrifuga.
(C) El filtrado o líquido sobrenadante obtenido se acidifica y se adsorbe en un adsorbente tal como carbón activado o caolín.
(D) Al adsorbente, se añade un disolvente de extracción tal como agua, el pH se ajusta a alcalino y el componente adsorbido se eluye para obtener el extracto de tejidos inflamados a los que se ha inoculado virus vaccinia. Posteriormente, según se desee, el eluato se puede evaporar a sequedad a presión reducida o liofilizar para dar un material seco.
En cuanto a los animales, con el fin de obtener los tejidos inflamados mediante la inoculación del virus vaccinia, se pueden usar varios animales que se infectan con el virus vaccinia, tales como conejos, vacas, caballos, ovejas, cabras, monos, ratas o ratones, y los tejidos inflamados preferidos son tejidos inflamados de piel de conejos. Con respecto a un conejo, se puede utilizar cualquier conejo siempre que pertenezca a Lagomorpha. Los ejemplos de los mismos incluyen Oryctolagus cuniculus, conejo doméstico (Oryctolagus cuniculus domesticado), liebre (liebre japonesa), ratón liebre y liebre americana. Entre ellos, es adecuado utilizar conejo doméstico. En Japón, hay un conejo familiar llamado "Kato", que se ha criado desde la antigüedad y se usa con frecuencia como ganado o animal de experimentación y es otro nombre de conejo doméstico. Hay muchas razas de conejos domésticos y se utilizan ventajosamente las razas que se denominan blanco japonés y blanco de Nueva Zelanda.
El virus vaccinia usado en el presente documento puede ser de cualquier cepa. Los ejemplos de las mismas incluyen la cepa Lister, cepa Dairen, cepa Ikeda, cepa EM-63 y cepa New York City Board of Health.
Dado que el presente extracto es líquido en la etapa en la que se prepara, también es posible que dicho extracto se concentre o diluya apropiadamente para lograr una concentración deseada o liofilizado. Fraccionando el presente extracto, también es posible obtener la fracción que tiene un mayor efecto terapéutico sobre la lesión nerviosa, que se puede utilizar en la presente lámina. Un método más específico para la fabricación del presente extracto se describe, por ejemplo, en los párrafos [0024] a [0027], [0031] y similares en la publicación internacional WO2016/194816.
De acuerdo con la presente invención, también es posible producir una lámina de liberación sostenida de fármaco para usar en el tratamiento de lesiones nerviosas con continuidad que han sido excluidas de enfermedades a las que se pueden aplicar los nervios artificiales convencionales. Entre las lesiones de nervios periféricos, la lesión nerviosa con continuidad tiene una incidencia de un mayor número de pacientes. Por lo tanto, se considera que la presente invención constituye una contribución extremadamente alta a la lesión nerviosa con continuidad. Además, para la lesión nerviosa con discontinuidad, la presente lámina se puede utilizar sola o en combinación con nervios artificiales. La presente lámina se puede implantar en la periferia de un sitio de lesión nerviosa cuando se usa. Por lo tanto, se elimina la necesidad de administrar un fármaco en una dosis alta de forma continua para aumentar la concentración del fármaco en la sangre, y el fármaco puede liberarse de forma sostenible en un sitio local para acelerar la regeneración nerviosa. Además, la presente lámina está formada utilizando un polímero biocompatible y, por lo tanto, no es necesario retirarla después de un tratamiento de lesión nerviosa. La lámina presente se puede formar de manera muy flexible. Por lo tanto, la presente lámina no aplica un estímulo que pueda afectar negativamente a los nervios cuando se implanta en la periferia de un sitio de lesión nerviosa y, por lo tanto, es muy fácil de usar. Cuando se usan nervios artificiales, generalmente se necesita usar un microscopio de cirugía. Por el contrario, cuando la presente lámina se usa sola, no se necesita usar un microscopio quirúrgico y la operación es muy fácil, lo cual es ventajoso. Es decir, la presente lámina es muy útil, porque la presente lámina tiene tanto eficacia como seguridad y es muy conveniente.
Ejemplos
A continuación, la presente invención se describirá en detalle con referencia a los siguientes ejemplos. Sin embargo, no se pretende que la presente invención se limite a estos ejemplos.
Ejemplo 1: Producción de lámina que contiene vitamina B12 y similares
(1) Producción de láminas de policaprolactona y similares.
A 900 mg de policaprolactona se le añadieron 4.5 ml de HEIP. La solución resultante se sometió a un tratamiento con ondas ultrasónicas durante 3 horas para preparar una dispersión líquida (concentración de la solución de polímero: 20% en peso).
Posteriormente, se aplicó un voltaje de 20 kV a la dispersión líquida mientras se alimentaba la totalidad de la dispersión líquida a una velocidad de 1.0 ml/h utilizando una jeringa de 5 ml. Las fibras hiladas sobre un sustrato metálico que tenía una lámina de aluminio colocada encima se atraparon mediante laminación para producir una lámina de policaprolactona (aguja de la jeringa utilizada: 22 G, distancia jeringa-sustrato metálico: 13 cm).
Como se muestra en la imagen de observación del microscopio electrónico de barrido (SEM) de la Fig. 1, se produjo una lámina de policaprolactona compuesta de una tela no tejida formada a partir de nanofibras.
De la misma manera, también se produjo una lámina de fibra que utiliza un copolímero de poli(N-isopropilacrilamida), N-isopropilacrilamida y 2-hidroxietilmetacrilamida (también denominada "poli(NIPAAm-co-HMAAm)", en lo sucesivo) (véanse las Figs. 2 y 3).
(2) Producción de lámina de policaprolactona que contiene nanopartículas magnéticas
A 270 mg de nanopartículas magnéticas compuestas de 900 mg de policaprolactona y Y-Fe2O3 se añadieron 4.5 ml de HEIP. La solución resultante se sometió a un tratamiento con ondas ultrasónicas durante 12 horas para preparar una dispersión líquida (concentración de la solución de polímero: 20% en peso).
Posteriormente, se aplicó un voltaje de 20 kV a la dispersión líquida mientras se alimentaba la totalidad de la dispersión líquida a una velocidad de 1.0 ml/h usando una jeringa de 5 ml. Las fibras hiladas sobre un sustrato metálico que tenía una lámina de aluminio colocada encima se atraparon mediante laminación para producir una lámina de poli(NlPAAmco-HMAAm) que contenía nanopartículas magnéticas (aguja de la jeringa utilizada: 22 G, contenido de nanopartículas magnéticas en la lámina: 30%). Como se muestra en la imagen de observación con microscopio electrónico de barrido (SEM) de la Fig. 4, se produjo una lámina de policaprolactona que contiene partículas magnéticas compuesta de una tela no tejida formada a partir de nanofibras.
(3) Producción de lámina de policaprolactona recubierta de ácido hialurónico
Se disolvió ácido hialurónico en una cantidad de 128 mg en 2.5 ml de agua pura para preparar una solución de ácido hialurónico al 5% en peso. La lámina de policaprolactona producida en el Ejemplo 1(1) se empapó en la solución de ácido hialurónico y se dejó reposar durante 24 horas. El producto resultante se liofilizó durante 72 horas para producir una lámina de policaprolactona recubierta con ácido hialurónico. En la Fig. 5 se muestra una imagen de observación con microscopio electrónico de barrido (SEM) de la lámina de policaprolactona recubierta con ácido hialurónico.
(4) Producción de lámina que contiene vitamina B12
En 6 ml de TEF se disolvieron 600 mg de poli(s-caprolactona-co-DL-lactida) y metilcobalamina (Sigma). Como poli(scaprolactona-co-DL-lactida), se usó una que tenía un peso molecular medio en peso de 40000, 4 ramificaciones por molécula y una relación molar de s-caprolactona/DL-lactida de 60:40 producida por los autores de la invención. Se disolvió metilcobalamina en cantidades de 6.5 mg, 13 mg y 20 mg para preparar tres tipos de soluciones de modo que las concentraciones finales de las soluciones fueran de 1 %, 2% y 3%, respectivamente. Posteriormente, se produjeron nanofibras empleando un método de electrohilado, y las nanofibras se formaron en forma de red para producir una tela no tejida. Más específicamente, la solución se extruyó a través de una aguja de 24 G a una velocidad de flujo de 0.5 ml/h mientras se aplicaba un voltaje de 12 kV para hilar la solución, y luego las nanofibras se atraparon por acumulación en la superficie de un electrodo para producir una tela tejida.
Como se muestra en la imagen de observación con microscopio electrónico de barrido (SEM) de la Fig. 7, se produjo una lámina que contenía vitamina B12 compuesta de una tela no tejida formada a partir de nanofibras. La lámina tenía un espesor de aproximadamente 300 μm y un peso de aproximadamente 10 mg/cm2.
De la misma manera que se mencionó anteriormente, se produjeron láminas que contenían respectivamente NGF y BDNF (que no están dentro del alcance de la presente invención) como fármacos.
(5) Producción de lámina que contiene el presente extracto
A 900 mg de policaprolactona y 270 mg de polvo de liofilización del presente extracto se añadieron 4.5 ml de HEIP. La solución resultante se sometió a un tratamiento con ondas ultrasónicas durante 3 horas para preparar una dispersión líquida (concentración de la solución de polímero: 20% en peso).
Posteriormente, se aplicó un voltaje de 20 kV a la dispersión líquida mientras se alimentaba la totalidad de la dispersión líquida a una velocidad de 0.5 ml/h usando una jeringa de 5 ml. Las fibras hiladas sobre un sustrato metálico que tenía una lámina de aluminio colocada encima se atraparon por laminación para producir una lámina que contenía el presente extracto (aguja de la jeringa utilizada: 18 G, cantidad del presente extracto que lleva la lámina: 30%).
En la Fig. 6 se muestra una imagen de observación con microscopio electrónico de barrido (SEM) de la lámina de policaprolactona que contiene el presente extracto así producido.
Ejemplo 2: Confirmación de la capacidad de liberación sostenida de la lámina que contiene vitamina B12 y otros
Se puso PBS en un volumen de 3 ml en un tubo, se sumergieron 10 mg de una lámina, se mantuvo la temperatura de la solución a 37°C, se tomaron muestras de la solución a lo largo del tiempo y luego se midió la concentración de vitamina B12. La cantidad de una muestra era de 100 μl, y la medición de la concentración de vitamina B12 se llevó a cabo mediante un método de medición de absorbancia ultravioleta-visible.
Los resultados se muestran en la Fig. 8. Los tres tipos de láminas mostraron capacidad de liberación sostenida de las mismas hasta el día 25. Teniendo en cuenta el valor máximo teórico, se considera que el período de liberación sostenida se hace más largo con el aumento del contenido de metilcobalamina. Aunque no se muestra en el dibujo,
se confirmó que los tres tipos de láminas mostraron además una liberación sostenida durante 8 semanas adicionales (hasta el día 56) a partir de entonces.
De la misma manera que se mencionó anteriormente, también se confirmó la capacidad de liberación sostenida del fármaco de las láminas que contenían respectivamente el presente extracto (dentro del alcance de la presente invención), NGF y BDNF (no dentro del alcance de la presente invención).
Ejemplo 3: Evaluación de la eficacia del fármaco utilizando un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en ratas
1. Producción de un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en ratas
Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo con la aprobación del Comité de Ética del laboratorio de animales de la Universidad de Osaka. Se utilizaron ratas Wistar macho de seis semanas de edad (peso corporal: aproximadamente 200 g). Todas las cirugías se realizaron aplicando sedación profunda con un fármaco anestésico mixto compuesto de midazolam (2 mg/kg), butorfanol (2.5 mg/kg) y medetomidina (0.15 mg/kg). Se expuso el nervio ciático izquierdo mediante operaciones limpias y se aplicó una lesión por aplastamiento en una posición 5 mm distal a una escotadura ciática con un par de fórceps. El tiempo de aplastamiento fue de 10 segundos, la frecuencia de las operaciones de aplastamiento fue tres veces y los intervalos entre las operaciones de aplastamiento fueron de 10 segundos. La fascia y la piel se suturaron juntas con nailon 4-0. Las ratas experimentales se dividieron en los siguientes cinco grupos: un grupo simulado en el que solo se llevó a cabo la exposición del nervio ciático sin aplicar lesión por aplastamiento al nervio ciático; un grupo de láminas de CTR en el que solo se realizó la exposición del nervio ciático sin aplicar lesión por aplastamiento del nervio ciático y se implantó una lámina que no contenía metilcobalamina; un grupo no tratado en el que se aplicó lesión por aplastamiento pero no se llevó a cabo ningún tratamiento; un grupo de lámina de MeCbl en el que se aplicó lesión por aplastamiento y se implantó una lámina que contenía metilcobalamina (la lámina que contenía 3% de metilcobalamina producida en el Ejemplo 1); y un grupo de bomba de MeCbl en el que se aplicó lesión por aplastamiento y se administró sistémicamente metilcobalamina (1 mg/kg/día). La administración sistémica de metilcobalamina se realizó colocando una minibomba osmótica (Modelo 2ML2; Alzet, Cuperitino, CA, EE. UU.) debajo de la piel del lomo. Todas las cirugías fueron realizadas por el mismo médico.
El análisis de la lámina que contenía el presente extracto como fármaco se llevó a cabo de la misma manera. Las ratas experimentales se dividieron en los siguientes cuatro grupos: un grupo simulado en el que solo se llevó a cabo la exposición del nervio ciático sin aplicar lesión por aplastamiento del nervio ciático; un grupo de láminas de CTR en el que sólo se realizó la exposición del nervio ciático sin aplicar lesión por aplastamiento del nervio ciático y se implantó una lámina que no contenía el presente extracto; un grupo no tratado en el que se aplicó lesión por aplastamiento pero no se llevó a cabo ningún tratamiento; y un grupo de láminas de NTP en el que se aplicó lesión por aplastamiento y se implantó una lámina que contenía el presente extracto (la lámina que contenía el presente extracto que se produjo en el Ejemplo 1).
También se podían implantar cada una de las láminas que contenían respectivamente NGF y BDNF (que no están dentro del alcance de la presente invención) como fármacos en una rata modelo en la que se lesionó un nervio ciático por aplastamiento.
2. Elementos de evaluación y método experimental
(1) Concentración de vitamina B12 en sangre
Se recogió sangre en una cantidad de 1 ml del ventrículo izquierdo de una rata bajo anestesia 6 semanas después de la cirugía. La sangre recolectada se centrifugó a 800 x g durante 20 minutos para recoger el líquido sobrenadante. La medición de la concentración de vitamina B12 en la sangre se encargó a BML, INC. (Tokio).
(2) Evaluación de las funciones motoras y sensoriales
Para la evaluación de una función motora, se midió un índice de función ciática (SFI) 6 semanas después de la cirugía. Para la medición de un SFI, se aplicó una tinta a la pata trasera de una rata, luego se permitió que la rata caminara sobre papel de oficina colocado en una mesa horizontal de 40 cm cuadrados y luego se registraron las huellas de la rata. Los cuatro elementos mencionados a continuación se midieron para calcular un SFI. La calificación "SFI = 0" significa que la función era normal, y la calificación "SFI = -100" significa que la función estaba deteriorada. En la evaluación, se excluyó a un individuo que sufrió necrosis en el dedo del pie o pérdida del dedo del pie. Se calculó un valor de SFI de acuerdo con la siguiente fórmula matemática. Los elementos son los siguientes.
SFI - -38*((EPL - NPL)/NPL 109.5*((ETS - NTS)/NTS) + 13.3* ((EITS - NITS) - 8
EPL: longitud de la huella experimental
NPL: longitud de la huella normal
ETS: extensión experimental de los dedos del pie
NTS: extensión normal de los dedos del pie
EIT: extensión experimental del dedo intermedio del pie
NIT: extensión normal del dedo intermedio del pie
Para la evaluación de una función sensorial, se midió un umbral mecánico de retirada de la pata trasera 6 semanas después de la cirugía utilizando un filamento de von Frey (0.008 a 26 g; Touch Test, North Coast Medical Inc, Gilroy, CA, EE. UU.). Cada una de las ratas se hizo caminar sobre una malla metálica, luego se aplicó una presión en el centro de la planta hasta que el filamento comenzó a doblarse, y luego se registró el valor en el que la rata evocaba un comportamiento de escape.
(3) Evaluación electrofisiológica
Cada una de las ratas, 3 o 6 semanas después de la cirugía, se sedó con un fármaco anestésico y luego se colocó en una mesa de operaciones en posición prono. Se expusieron el nervio ciático izquierdo y el músculo tibial anterior izquierdo. Se midió cada uno del potencial de acción muscular compuesto (CMAP) y la latencia terminal (TL) mientras se estimulaba un sitio proximal de un nervio ciático con un electrodo bipolar. Se calculó una velocidad de conducción nerviosa (NCV) a partir de valores de medición obtenidos respectivamente en un sitio proximal y un sitio distal a la lesión por aplastamiento del nervio ciático mientras se estimulaban las posiciones con un electrodo bipolar. En la medición y evaluación se utilizaron los programas informáticos AD Instruments Power Lab 2/26, Stimulus isolator, y Bio Amp y Chart & Scope (todos fabricados por AD Instruments, Bel la Vista, NSW, Australis).
(4) Evaluación histológica
Cada una de las ratas 6 semanas después de la cirugía se sedó con un fármaco anestésico, y se recogió el nervio ciático izquierdo y luego se fijó con PFA al 4% durante 5 días y con sacarosa al 20% durante 24 horas y luego se congeló y se insertó. Se cortó un tejido insertado con un espesor de 5 μm en la dirección del eje neural corto y se colocó en un portaobjetos de vidrio. El tejido cortado se secó durante 1 hora y luego se fijó con metanol al 95% durante 30 minutos. Después del bloqueo, se dejó reaccionar un anticuerpo primario a 4°C durante la noche. Se dejó reaccionar un anticuerpo secundario a temperatura ambiente durante 1 hora para marcar el núcleo con DAPI. Como anticuerpo primario, se utilizó cada uno de un anticuerpo anti-neurofilamento 200 (NF200) producidos en conejo (1:1000; 102M4784, SIGMA), que era un indicador de un axón, y mAb de ratón anti-proteína básica de mielina (MBP) (1:1000; NE1018, CALIOCHEM), que era un indicador de una vaina de mielina. Como anticuerpo secundario, se utilizó cada uno de anticuerpo anti-IgG de conejo de cabra marcado con Alexa 488 (1:1000; Lifetechnologies) y anticuerpo anti-IgG de ratón de cabra marcado con Alexa 568 (1:1000; Lifetechnologies). Se evaluó el número total de axones y la proporción de axones mielinizados (número total de axones positivos para MBP)/(número total de axones).
Ejemplo 4: Evaluación de la eficacia del fármaco utilizando un modelo de nervio ciático deficiente en rata
1. Producción de modelo de nervio ciático deficiente en rata
Se utilizaron ratas Wistar macho de seis semanas de edad (peso corporal: aproximadamente 200 g). Todas las cirugías se realizaron aplicando sedación profunda con un fármaco anestésico mixto compuesto por midazolam (2 mg/kg), butorfanol (2.5 mg/kg) y medetomidina (0.15 mg/kg). Se expuso el nervio ciático izquierdo mediante operaciones limpias, y se cortó un nervio ciático en una posición 5 mm distal a una escotadura ciática y una posición 10 mm más distal a la posición antes mencionada para producir un modelo deficiente de 10 mm.
Las ratas experimentales se dividieron en los siguientes cuatro grupos: (i) un grupo de conducto nervioso artificial lámina de MeCbl; en el que los extremos cortados de un nervio ciático se suturaron a ambos extremos respectivos de un conducto nervioso artificial que tenía un diámetro de 1.5 mm y una longitud de 12 mm con nylon 10-0 de tal manera que cada uno de los extremos cortados se estiró 1 mm en cada uno de los dos extremos, y luego se colocó una lámina que contenía metilcobalamina que tenía un ancho de 10 mm y una longitud de 14 mm para cubrir las partes suturadas; (ii) un grupo de conducto nervioso artificial; en el que los extremos cortados de un nervio ciático se suturaron a ambos extremos respectivos de un conducto nervioso artificial con nailon 10-0 de tal manera que cada uno de los extremos cortados se estiró 1 mm en cada uno de ambos extremos; (iii) un grupo de injerto de trasplante autólogo; en el que se invirtió un nervio ciático cortado y luego se suturó con nailon 10-0; y (iv) un grupo simulado: solo se realizó la exposición del nervio ciático. La fascia se suturó a la piel con nailon 4-0. Todas las cirugías fueron realizadas por el mismo médico.
Asimismo, una lámina que contenía el presente extracto (dentro del alcance de la presente invención), NGF o BDNF (no está dentro del alcance de la presente invención) como fármaco también se podía implantar en una rata modelo con nervio ciático deficiente.
2. Elementos de evaluación y métodos experimentales
(1) Evaluación de la función sensorial
Para la evaluación de la función sensorial, se midió un umbral mecánico de retirada de la pata trasera 12 semanas después de la cirugía de la misma manera que en el Ejemplo 3-2 (2).
(2) Evaluación electrofisiológica
Se calcularon la TL y la NCV 12 semanas después de la cirugía de la misma manera que en el Ejemplo 3-2 (3). (3) Evaluación histológica
Cada una de las ratas se sedó 12 semanas después de la cirugía con un fármaco anestésico, y se recogió el nervio ciático izquierdo y luego se fijó con PFA al 4% durante 7 días y con sacarosa al 20% durante 24 horas y luego se congeló y se insertó. El número total de axones y la proporción de axones mielinizados (número total de axones positivos para MBP)/(número total de axones) se evaluaron de la misma manera que en el Ejemplo 3-2 (4).
(4) Procesamiento estadístico
Todos los valores numéricos se expresaron en media ± SEM. En los Ejemplos 3-2 (1) a (4) y el Ejemplo 4, el procesamiento estadístico se realizó mediante una prueba HSD de Tukey-Kramer utilizando el software JMP versión 11 (SAS Institute).
En el ejemplo de ensayo 3-2 (5), el análisis estadístico se realizó usando el sistema SAS, versión 9.1.3 (SAS Institute), y la comparación de dos grupos se realizó mediante una prueba F, en donde se realizó una prueba t de Student cuando la dispersión era homoscedástica y se realizó una prueba de Welch cuando la dispersión era heteroscedástica.
3. Resultados
A. Evaluación de la eficacia del fármaco utilizando un modelo de lesión por aplastamiento del nervio ciático en rata (1) Concentración de vitamina B12 o similar en sangre
Los resultados se muestran en la Fig. 9. En el grupo de bomba de MeCbl (18.35 ± 2.27 ng/ml), se observó un aumento significativo de la concentración en sangre. Sin embargo, en el grupo de lámina de MeCbl (1.73 ± 0.05 ng/ml), no se observó el aumento de la concentración en sangre. En todos los grupos sin administración de fármaco (grupo simulado: 1.99 ± 0.33 ng/ml, grupo de lámina de CTR: 1.48 ± 0.05 ng/ml y grupo sin tratamiento: 1.50 ± 0.07 ng/ml), no se observó el aumento de la concentración en la sangre.
Cuando se utilizó como fármaco el presente extracto (dentro del alcance de la presente invención), NGF o BDNF (no están dentro del alcance de la presente invención), tampoco se observó el aumento de la concentración en sangre. (2) Evaluación de la función motora y la función sensorial
Los resultados de los SFI se muestran en la Fig. 10. En comparación con el grupo sin tratamiento (-20.6 ± 4.2), se observó una mejora significativa en el grupo de lámina de MeCbl (-9.0 ± 2.0) y se observó una tendencia de recuperación en el grupo de bomba de MeCbl. (-10.5 ± 2.0).
Los resultados de la prueba de filamento de von Frey se muestran en la Fig. 11. En comparación con el grupo no tratado (117.8 ± 11.7 g), se observó una mejora significativa en el grupo de lámina de MeCbl (80 ± 7.6 g) al igual que en el grupo de bomba de MeCbl (77.8 ± 7.0 g).
Los resultados de la prueba de filamento de von Frey para la lámina que contiene el presente extracto como fármaco se muestran en la Fig. 12. En comparación con el grupo no tratado (2.75 ± 0.41), se observó una mejora significativa en el grupo de lámina de NTP (1.35 ± 0.13) .
Cuando se implantó la lámina que contenía, como fármaco, NGF o BDNF (no están dentro del alcance de la presente invención), también se observó la mejora en la función motora y la función sensorial.
(3) Evaluación electrofisiológica
Los resultados se muestran en la Fig. 13. El panel (A) muestra los resultados de los CMAP, el panel (B) muestra los resultados de las TL y el panel (C) muestra los resultados de las NCV. En los CMAP y TL, en comparación con el grupo no tratado (CMAP: 19.5 ± 2.3 mV, TL: 3.45 ± 0.08 ms), no se observó una mejora significativa en el grupo de lámina de MeCbl (CMAP: 18.5 ± 1.5 mV, TL: 3.27 ± 0.09 ms) y el grupo de bomba de MeCbl (CMAP: 19.5 ± 1.5 mV, TL: 3.24 ± 0.07 ms). Por el contrario, con respecto a las NCV, en comparación con el grupo no tratado (28.2 ± 2.5 m/s), se observó una mejora significativa tanto en el grupo de lámina de MeCbl (44.4 ± 2.8 m/s) como en el grupo de bomba de MeCbl (43.2 ± 2.5 m/s).
Cuando se implantó la lámina que contenía como fármaco el presente extracto (dentro del alcance de la presente invención), NGF o BDNF (no están dentro del alcance de la presente invención), también se observó la mejora.4 (4) Evaluación histológica
Los resultados son visibles en las Figs. 14 y 15. En la Fig. 14 se muestran imágenes de microscopio obtenidas mediante inmunotinción de vainas de mielina con un anticuerpo anti-MBP, en donde las partes blanquecinas son vainas de mielina teñidas. La Fig. 15(A) muestra los resultados del número total de axones, y la Fig. 15(B) muestra los resultados de la relación de axones mielinizados (número de axones positivos para MBP)/(número total de axones).
Con respecto al número de axones regenerados por mm cuadrado, no se observó diferencia significativa entre el grupo no tratado (2843 ± 68/mm2), el grupo de lámina de MeCbl (2733 ± 142/mm2) y el grupo de bomba de MeCbl (2735 ± 77/mm2). Con respecto a la relación de axones mielinizados (número de axones positivos para MBP)/(número total de axones), en comparación con el grupo no tratado (85.0 ± 0.9%), se observó una mejora significativa en el grupo de lámina de MeCbl (91.0 ± 0.8%) como en el grupo de bomba de MeCbl (91.5 ± 0.6%).
Cuando se implantó la lámina que contenía como fármaco el presente extracto (dentro del alcance de la presente invención), NGF o BDNF (no están dentro del alcance de la presente invención), también se observó la mejora.
B. Evaluación de la eficacia del fármaco utilizando un modelo de nervio ciático deficiente de rata
(1) Evaluación de la función sensorial
Los resultados se muestran en la Fig. 16. En el ensayo del filamento de von Frey, en comparación con el grupo del conducto nervioso artificial (172.0 ± 36.7 g), se observó una mejora significativa en el grupo del conducto nervioso artificial lámina de MeCbl (84.0 ± 9.80 g).
Cuando se implantó la lámina que contenía como fármaco el presente extracto (dentro del alcance de la presente invención), NGF o BDNF (no están dentro del alcance de la presente invención), también se observó la mejora.
(2) Evaluación electrofisiológica
Los resultados de las TL se muestran en la Fig. 17, y los resultados de las NCV se muestran en la Fig. 18. En las TL, en comparación con el grupo de conducto nervioso artificial (4.67 ± 0.37 m/s), se observó una mejora en el grupo de conducto nervioso artificial lámina de MeCbl (3.43 ± 0.12 m/s). En las NCV, en comparación con el grupo de conducto nervioso artificial (16.3 ± 3.13 m/s), se observó una tendencia de mejora en el grupo de conducto de regeneración nerviosa lámina de MeCbl (29.5 ± 4.50 m/s).
Cuando se implantó la lámina que contenía como fármaco el presente extracto (dentro del alcance de la presente invención), NGF o BDNF (no están dentro del alcance de la presente invención), también se observó la mejora.
(3) Evaluación histológica
Con respecto al número de axones regenerados por mm cuadrado y la relación de axones mielinizados (número de axones positivos para MBP)/(número total de axones), se observó una mejora en el grupo de conducto nervioso artificial lámina de MeCbl en comparación con el grupo de conducto nervioso artificial.
Cuando se implantó la lámina que contenía como fármaco el presente extracto (dentro del alcance de la presente invención), NGF o BDNF (no están dentro del alcance de la presente invención), también se observó la mejora.
Cuando la lámina que contenía fármaco se implantó por vía tópica en un sitio de lesión nerviosa, se observó la mejora de la recuperación después de la lesión nerviosa sin necesidad de aumentar la concentración del fármaco en la sangre. Es decir, se observó la recuperación de una función motora, una función sensorial y una función electrofisiológica tras la lesión nerviosa, y también se observó la mejora en un análisis de la marcha. Además, desde el punto de vista histológico se observó el aumento del número de axones mielinizados. Como se mencionó anteriormente, la presente invención es muy útil para la recuperación de funciones después de una lesión del nervio periférico
Claims (10)
1. Una lámina de liberación sostenida de fármaco que comprende una tela no tejida que se forma a partir de nanofibras que contienen un fármaco para usar en el tratamiento de una lesión nerviosa y un polímero biocompatible, en donde el fármaco es vitamina B12 o un extracto de pieles inflamadas de conejos a los que se ha inoculado virus vaccinia o una fracción del mismo.
2. La lámina de liberación sostenida de fármaco según la reivindicación 1, en donde el polímero biocompatible es un poliéster alifático biodegradable o un derivado de poliacrilamida.
3. La lámina de liberación sostenida de fármaco según la reivindicación 2, en donde el poliéster alifático biodegradable se selecciona del grupo que consiste en policaprolactona o un copolímero de la misma, poli(ácido láctico) o un copolímero del mismo, poli(ácido glicólico) o un copolímero del mismo y mezclas de estos componentes.
4. La lámina de liberación sostenida de fármaco según la reivindicación 2, en donde el derivado de poliacrilamida se selecciona del grupo que consiste en poli(N-isopropilacrilamida) o un copolímero de la misma, poli(2-hidroxietilmetacrilamida) o un copolímero de la misma, un copolímero de N-isopropilacrilamida y 2-hidroxietilmetacrilamida y mezclas de estos componentes.
5. La lámina de liberación sostenida de fármaco según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que además contiene ácido hialurónico.
6. La lámina de liberación sostenida de fármaco según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el peso de la lámina es de 1 mg/cm2 a 100 mg/cm2.
7. Un método para producir una lámina de liberación sostenida de fármaco según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende las siguientes etapas (1) y (2):
(1) preparar una solución que contiene un fármaco, un polímero biocompatible y un disolvente; y
(2) someter la solución a hilado por un método de electrohilado para formar una tela no tejida.
8. El método para producir una lámina de liberación sostenida de fármaco según la reivindicación 7, en donde el polímero biocompatible es un poliéster alifático biodegradable o un derivado de poliacrilamida.
9. El método de producción según la reivindicación 8, en donde el poliéster alifático biodegradable se selecciona del grupo que consiste en policaprolactona o un copolímero de la misma, poli(ácido láctico) o un copolímero del mismo, poli(ácido glicólico) o un copolímero del mismo y mezclas de estos componentes.
10. El método de producción según la reivindicación 8, en donde el derivado de poliacrilamida se selecciona del grupo que consiste en poli(N-isopropilacrilamida) o un copolímero de la misma, poli(2-hidroxietilmetacrilamida) o un copolímero de la misma, un copolímero de N-isopropilacrilamida y 2-hidroxietilmetacrilamida, y mezclas de estos componentes.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2016043873 | 2016-03-07 | ||
| JP2017008913 | 2017-01-20 | ||
| JP2017037270 | 2017-02-28 | ||
| PCT/JP2017/008730 WO2017154822A1 (ja) | 2016-03-07 | 2017-03-06 | 神経損傷治療用薬剤徐放シート |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2946262T3 true ES2946262T3 (es) | 2023-07-14 |
Family
ID=59789448
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES17763162T Active ES2946262T3 (es) | 2016-03-07 | 2017-03-06 | Lámina de liberación sostenida de fármaco para el tratamiento de la lesión nerviosa |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11324704B2 (es) |
| EP (1) | EP3427726B1 (es) |
| JP (2) | JP6750820B2 (es) |
| KR (1) | KR102323065B1 (es) |
| CN (2) | CN116473948A (es) |
| AU (1) | AU2017230387B9 (es) |
| CA (1) | CA3016391A1 (es) |
| DK (1) | DK3427726T3 (es) |
| ES (1) | ES2946262T3 (es) |
| IL (1) | IL261533B (es) |
| PL (1) | PL3427726T3 (es) |
| SG (1) | SG11201806797UA (es) |
| TW (1) | TWI790202B (es) |
| WO (1) | WO2017154822A1 (es) |
| ZA (1) | ZA201805801B (es) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3421989A4 (en) * | 2016-02-24 | 2019-08-14 | Osaka University | TEST METHODS |
| WO2018056412A1 (ja) * | 2016-09-23 | 2018-03-29 | 国立大学法人大阪大学 | シュワン細胞分化促進剤及び末梢神経再生促進剤 |
| CN111511373A (zh) | 2017-12-21 | 2020-08-07 | 国立大学法人大阪大学 | 神经系统疾病治疗剂 |
| AU2019302176A1 (en) * | 2018-07-09 | 2021-01-21 | National Institute For Materials Science | Nonwoven fabric, method for manufacturing same, and composition for electrospinning |
| KR102245629B1 (ko) * | 2019-04-10 | 2021-04-30 | 주식회사 제네웰 | 히알루론산계 녹는 필름, 이의 제조방법 및 이에 사용되는 이형지 |
| CN115023246A (zh) * | 2020-01-14 | 2022-09-06 | 日本脏器制药株式会社 | 医用片材 |
| GB202000714D0 (en) | 2020-01-17 | 2020-03-04 | Ucl Business | Biomaterials |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60255726A (ja) * | 1984-05-31 | 1985-12-17 | Eisai Co Ltd | 消化性潰瘍治療剤 |
| US6110472A (en) * | 1992-12-10 | 2000-08-29 | Hemogen Inc. | Vitamin B12 containing scalp and skin treatment compositions |
| JPH07241433A (ja) * | 1994-03-02 | 1995-09-19 | Chiyoda Corp | 悪臭気ガスの生物処理方法及びその装置 |
| US6274564B1 (en) * | 1996-09-18 | 2001-08-14 | William J. Sarill | Compositions of cobalamin and related corrinoids, and uses thereof |
| US20120220962A1 (en) * | 1999-12-16 | 2012-08-30 | Technology Recovery Systems, Llc | Transdermal and topical administration of vitamins using basic permeation enhancers |
| US6685956B2 (en) * | 2001-05-16 | 2004-02-03 | The Research Foundation At State University Of New York | Biodegradable and/or bioabsorbable fibrous articles and methods for using the articles for medical applications |
| GB0210517D0 (en) * | 2002-05-03 | 2002-06-19 | Giltech Ltd | Material |
| JP2005220070A (ja) * | 2004-02-05 | 2005-08-18 | Medgel Corp | 神経再生および保護のための生体吸収性高分子ハイドロゲル製剤 |
| EP1576952A1 (en) * | 2004-03-18 | 2005-09-21 | OctoPlus Technologies B.V. | Hydrogel microspheres with improved release profile |
| US20100303881A1 (en) * | 2006-02-02 | 2010-12-02 | The John Hopkins University | Therapeutic Electrospun Fiber Compositions |
| JP2007236551A (ja) * | 2006-03-07 | 2007-09-20 | National Institute For Materials Science | キチン誘導体複合材料及び医療用材料 |
| IL183171A0 (en) * | 2007-05-14 | 2007-09-20 | Inna Rvdoy Dr | Use of vitamin b12 for treatment and prevention of mucosal lesions |
| JP2011530661A (ja) * | 2008-08-08 | 2011-12-22 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 活性成分の制御放出を伴う有効成分含有繊維表面構造体、その使用、およびその生産のための方法 |
| TW201103448A (en) * | 2009-07-30 | 2011-02-01 | Laing Ban International Inc | Automatic cigarette maker |
| JP5903044B2 (ja) * | 2010-06-25 | 2016-04-13 | 日本臓器製薬株式会社 | 被検物質の判定又は評価方法 |
| CN102525689B (zh) * | 2010-12-20 | 2015-06-24 | 上海市第六人民医院 | 取向纳米纤维仿生神经导管及其制作方法 |
| EP2537538A1 (en) * | 2011-06-22 | 2012-12-26 | Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Von Pharmaka mbH | Bioresorbable Wound Dressing |
| US20150037375A1 (en) | 2011-07-19 | 2015-02-05 | Trustees Of Boston University Et Al | Doping agents and polymeric compositions thereof for controlled drug delivery |
| TWI584825B (zh) * | 2012-05-14 | 2017-06-01 | 帝人股份有限公司 | 薄片成形體及止血材 |
| CN109432073A (zh) * | 2013-01-08 | 2019-03-08 | 帕萨罗杰卡有限公司 | Mgbg在制备治疗或预防进行性ms及其进展的药物中的用途 |
| EP2944711B1 (en) * | 2013-01-11 | 2017-12-27 | National Institute for Materials Science | Nanofiber having self-heating properties and biologically active substance release properties, production method for same, and nonwoven fabric having self-heating properties and biologically active substance release capabilities |
| JP5897069B2 (ja) * | 2014-06-26 | 2016-03-30 | クリスタル・デリバリー・ビー・ブイ | 制御放出系の調製方法 |
| TWI711456B (zh) * | 2015-05-29 | 2020-12-01 | 日商日本臟器製藥股份有限公司 | 牛痘病毒接種炎症組織萃取物及其用途以及其判定或評估方法 |
-
2017
- 2017-03-06 CA CA3016391A patent/CA3016391A1/en active Pending
- 2017-03-06 PL PL17763162.9T patent/PL3427726T3/pl unknown
- 2017-03-06 DK DK17763162.9T patent/DK3427726T3/da active
- 2017-03-06 KR KR1020187028337A patent/KR102323065B1/ko active IP Right Grant
- 2017-03-06 SG SG11201806797UA patent/SG11201806797UA/en unknown
- 2017-03-06 CN CN202310584830.2A patent/CN116473948A/zh active Pending
- 2017-03-06 ES ES17763162T patent/ES2946262T3/es active Active
- 2017-03-06 AU AU2017230387A patent/AU2017230387B9/en active Active
- 2017-03-06 US US16/082,594 patent/US11324704B2/en active Active
- 2017-03-06 EP EP17763162.9A patent/EP3427726B1/en active Active
- 2017-03-06 CN CN201780015992.7A patent/CN108883077A/zh active Pending
- 2017-03-06 JP JP2018504470A patent/JP6750820B2/ja active Active
- 2017-03-06 WO PCT/JP2017/008730 patent/WO2017154822A1/ja active Application Filing
- 2017-03-07 TW TW106107388A patent/TWI790202B/zh active
-
2018
- 2018-08-29 ZA ZA2018/05801A patent/ZA201805801B/en unknown
- 2018-09-02 IL IL261533A patent/IL261533B/en unknown
-
2020
- 2020-07-03 JP JP2020115903A patent/JP7057573B2/ja active Active
-
2021
- 2021-02-01 US US17/163,871 patent/US20210205234A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3427726A1 (en) | 2019-01-16 |
| TWI790202B (zh) | 2023-01-21 |
| US20210205234A1 (en) | 2021-07-08 |
| SG11201806797UA (en) | 2018-09-27 |
| IL261533B (en) | 2021-12-01 |
| JP7057573B2 (ja) | 2022-04-20 |
| EP3427726A4 (en) | 2019-10-09 |
| KR20180120219A (ko) | 2018-11-05 |
| CN116473948A (zh) | 2023-07-25 |
| TW201737901A (zh) | 2017-11-01 |
| JP6750820B2 (ja) | 2020-09-02 |
| CN108883077A (zh) | 2018-11-23 |
| JP2020169201A (ja) | 2020-10-15 |
| EP3427726B1 (en) | 2023-05-03 |
| PL3427726T3 (pl) | 2023-07-10 |
| WO2017154822A1 (ja) | 2017-09-14 |
| ZA201805801B (en) | 2019-05-29 |
| AU2017230387A1 (en) | 2018-10-04 |
| DK3427726T3 (da) | 2023-05-15 |
| US11324704B2 (en) | 2022-05-10 |
| AU2017230387B9 (en) | 2022-08-04 |
| AU2017230387B2 (en) | 2022-07-21 |
| US20190083415A1 (en) | 2019-03-21 |
| CA3016391A1 (en) | 2017-09-14 |
| IL261533A (en) | 2018-10-31 |
| KR102323065B1 (ko) | 2021-11-08 |
| JPWO2017154822A1 (ja) | 2019-04-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2946262T3 (es) | Lámina de liberación sostenida de fármaco para el tratamiento de la lesión nerviosa | |
| Samadian et al. | Sophisticated polycaprolactone/gelatin nanofibrous nerve guided conduit containing platelet-rich plasma and citicoline for peripheral nerve regeneration: in vitro and in vivo study | |
| Houshyar et al. | Peripheral nerve conduit: materials and structures | |
| Zhang et al. | Polymer scaffolds facilitate spinal cord injury repair | |
| Panseri et al. | Electrospun micro-and nanofiber tubes for functional nervous regeneration in sciatic nerve transections | |
| Koh et al. | In vivo study of novel nanofibrous intra-luminal guidance channels to promote nerve regeneration | |
| Wang et al. | Collagen-based biomaterials for tissue engineering | |
| Tyler et al. | Nanomedicine for treating spinal cord injury | |
| Dong et al. | Oriented nanofibrous P (MMD-co-LA)/Deferoxamine nerve scaffold facilitates peripheral nerve regeneration by regulating macrophage phenotype and revascularization | |
| Shen et al. | Large-area irradiated low-level laser effect in a biodegradable nerve guide conduit on neural regeneration of peripheral nerve injury in rats | |
| BR112019013403A2 (pt) | Método e matriz produzida por eletrofiação | |
| Li et al. | Co-delivery of dexamethasone and green tea polyphenols using electrospun ultrafine fibers for effective treatment of keloid | |
| US20180021485A1 (en) | Method for manufacturing drug-containing biodegradable fiber material by electrospinning | |
| Manoukian et al. | Biopolymer-nanotube nerve guidance conduit drug delivery for peripheral nerve regeneration: In vivo structural and functional assessment | |
| Agrahari et al. | Electrospun nanofibers in drug delivery: fabrication, advances, and biomedical applications | |
| Chen et al. | Electrospun composite nanofibers with all-trans retinoic acid and MWCNTs-OH against cancer stem cells | |
| Ichihara et al. | Development of new nerve guide tube for repair of long nerve defects | |
| PL239827B1 (pl) | Włóknina opatrunkowa i sposób wytwarzania włókniny opatrunkowej | |
| Mukhatyar et al. | Molecular sequelae of topographically guided peripheral nerve repair | |
| Wlaszczuk et al. | Poly (D, L-Lactide-Co-Glycolide) tubes with multifilament chitosan yarn or chitosan sponge core in nerve regeneration | |
| KR20170066305A (ko) | 기능성 생체 이식형 의료기기 | |
| TWI748090B (zh) | 加速急性創傷性周邊神經損傷復元之複合生物材料及其應用 | |
| US20220354779A1 (en) | Nanofiber- and nanowhisker-based transfection platforms | |
| Smirnova et al. | Tissue reconstruction of skin failures and soft-tissue injuries using regenerative medicine methods | |
| Singh | Electrospinning–A Novel Approach to Developing Drug Delivery System |