ES2908300T3 - Compuestos de benzoxacepin oxazolidinona y procedimientos de uso - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica compuesta por un compuesto, que es **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo, fluidificante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos de benzoxacepin oxazolidinona y procedimientos de uso

Campo de la invención

La invención se refiere, en general, a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de benzoxacepin oxazolidinona con actividad frente a trastornos hiperproliferativos tales como cáncer. La invención también se refiere a procedimientos de uso de las composiciones farmacéuticas para el diagnóstico o tratamiento in vitro, in situ e in vivo de células de mamífero, o procesos patológicos asociados y un procedimiento de preparación de dicha composición farmacéutica.

Antecedentes de la invención

La regulación por incremento de la vía de señalización de fosfoinositida-3 cinasa (PI3K)/Akt es un rasgo característico común en la mayoría de los cánceres (Yuan y Cantley (2008) Oncogene 27:5497-510). Se han detectado desviaciones genéticas en la vía en muchos cánceres humanos (Osaka et al. (2004) Apoptosis 9:667-76) y actúan principalmente para estimular la proliferación, la migración y la supervivencia celular. La activación de la vía se produce después de activar mutaciones o amplificaciones puntuales del gen PIK3CA que codifica las isoformas de PI3K p110a (alfa) (Hennessy et al. (2005) Nat. Rev. Drug Discov. 4:988-1004). Las mutaciones genéticas de deleción o pérdida de función dentro del supresor tumoral PTEN, una fosfatasa con función opuesta a PI3K, también incrementan la señalización de la vía de PI3K (Zhang y Yu (2010) Clin. Cancer Res. 16:4325-30). Estas anomalías dan lugar a una señalización corriente abajo incrementada a través de cinasas tales como Akt y mTOR y se ha propuesto una actividad incrementada de la vía de PI3K como un rasgo característico de la resistencia al tratamiento del cáncer (Opel et al. (2007) Cancer Res. 67:735-45; Razis et al. (2011) Breast Cancer Res. Treat. 128:447-56).

La fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) es un importante nodo de señalización para las señales clave de supervivencia y crecimiento de los linfomas y es oponible por la actividad de la fosfatasa PTEN. La vía de señalización de la cinasa dependiente de fosfoinositida 3 (PI3K) es la vía regulada más incorrectamente en el cáncer de mama positivo para receptores hormonales (CM RH+). La vía de PI3K también está regulada incorrectamente en formas invasoras de linfoma (Abubaker (2007) Leukemia 21:2368-2370). Ocho por ciento de los cánceres de LDLBG (linfoma difuso de linfocitos B grandes) tienen mutaciones de aminoácido en PI3CA (subunidad catalítica alfa de la fosfatidilinositol 3 cinasa) y un 37 % son negativos para PTEN por prueba de inmunohistoquímica.

El fosfatidilinositol es uno de una serie de fosfolípidos que se encuentran en las membranas celulares y que participan en la transducción de señales intracelulares. La señalización celular por medio de fosfoinositidas fosforiladas en 3' se ha implicado en una variedad de procesos celulares, por ejemplo, transformación maligna, señalización de factores de crecimiento, inflamación e inmunidad (Rameh et al. (1999) J. Biol Chem.

274:8347-8350). La enzima responsable de generar estos productos de señalización fosforilados, la fosfatidilinositol 3-cinasa (también conocida como PI 3-cinasa o PI3K), se identificó originalmente como una actividad asociada con oncoproteínas víricas y tirosina cinasas receptoras de factores de crecimiento que fosforilan el fosfatidilinositol (PI) y sus derivados fosforilados en el hidroxilo 3' del anillo de inositol (Panayotou et al. (1992) Trends Cell Biol 2:358-60). Las fosfoinositida 3-cinasas (PI3K) son cinasas lipídicas que fosforilan lípidos en el residuo 3-hidroxilo de un anillo de inositol (Whitman et al. (1988) Nature, 332:664). Los fosfolípidos 3-fosforilados (PIP3) generados por las PI3-cinasas actúan como segundos mensajeros reclutando cinasas con dominios de unión a lípidos (incluyendo las regiones de homología con pleckstrina (PH)), tales como Akt y PDK1, cinasa 1 dependiente de fosfoinositida (Vivanco et al. (2002) Nature Rev. Cancer 2:489; Phillips et al. (1998) Cancer 83:41).

La familia de las PI3-cinasas comprende al menos 15 enzimas diferentes subclasificadas por su homología estructural y se dividen en 3 clases en base a la homología de secuencia y al producto formado por catálisis enzimática. Las PI3-cinasas de clase I se componen de 2 subunidades: una subunidad catalítica de 110 kDa y una subunidad reguladora de 85 kDa. Las subunidades reguladoras contienen dominios SH2 y se unen a residuos de tirosina fosforilados por receptores de factores de crecimiento con actividad tirosina cinasa o productos oncogénicos, induciendo de este modo la actividad PI3K de la subunidad catalítica p110 que fosforila su sustrato lipídico. Las PI3-cinasas de clase I están implicadas en importantes acontecimientos de transducción de señales corriente abajo de las citocinas, integrinas, factores de crecimiento e inmunorreceptores, lo que sugiere que el control de esta vía puede dar lugar a importantes efectos terapéuticos tales como la modulación de la proliferación celular y la carcinogénesis. Las PI3K de clase I pueden fosforilar el fosfatidilinositol (PI), el fosfatidilinositol-4-fosfato y el fosfatidilinositol-4,5-bifosfato (PIP2) para producir fosfatidilinositol-3-fosfato (PIP), fosfatidilinositol-3,4-bifosfato y fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato, respectivamente. Las PI3K de clase II fosforilan el PI y el fosfatidilinositol-4-fosfato. Las PI3K de clase III solo pueden fosforilar el PI. Una isoforma clave de PI3-cinasa en el cáncer es la PI3-cinasa de clase I, p110a, como se indica por mutaciones oncogénicas recurrentes en p110a (Samuels et al. (2004) Science 304:554; documento US 5824492; documento US 5846824; documento US 6274327). Otras isoformas pueden ser importantes en el cáncer y también están implicadas en enfermedades cardiovasculares e inmunoinflamatorias (Workman P (2004) Biochem Soc Trans 32:393-396; Patel et al. (2004) Proc. Am. Assoc. of Cáncer Res. (Resumen LB-247) 95.a Reunión Anual, 27-31 de marzo, Orlando, Florida, EE. UU.; Ahmadi K y Waterfield MD (2004) "Phosphoinositide 3-Kinase: Function and Mechanisms" Encyclopedia of Biological Chemistry (Lennarz W J, Lane M D eds.) Elsevier/Academic Press). Se han descubierto mutaciones oncogénicas de p110a (alfa) con una frecuencia significativa en tumores sólidos de colon, mama, cerebro, hígado, ovario, gástricos, de pulmón y de cabeza y cuello. Aproximadamente un 35-40 % de los tumores de cáncer de mama positivos para receptores hormonales (RH+) albergan una mutación en PIK3CA. Las anomalías en PTEN se encuentran en glioblastomas, melanomas, cánceres de próstata, endometrio, ovario, mama, pulmón, cabeza y cuello, hepatocelulares y de tiroides.

La PI3-cinasa (PI3K) es un heterodímero que consiste en las subunidades p85 y p110 (Otsu et al. (1991) Cell 65:91-104; Hiles et al. (1992) Cell 70:419-29). Se han identificado cuatro PI3K de clase I distintas, denominadas PI3K a (alfa), p (beta), 5 (delta) y y (gamma), de las que cada una consiste en una subunidad catalítica de 110 kDa distinta y una subunidad reguladora. Tres de las subunidades catalíticas, es decir, p110 alfa, p110 beta y p110 delta, interactúan cada una con la misma subunidad reguladora, p85, mientras que p110 gamma interactúa con una subunidad reguladora distinta, p101. Los patrones de expresión de cada una de estas PI3K en células y tejidos humanos son distintos. En cada uno de los subtipos PI3K alfa, beta y delta, la subunidad p85 actúa para localizar la PI3-cinasa en la membrana plasmática por la interacción de su dominio SH2 con residuos de tirosina fosforilados (presentes en un contexto de secuencia apropiado) en proteínas diana (Rameh et al. (1995) Cell, 83:821-30; Volinia et al. (1992) Oncogene, 7:789-93).

La vía de PI3-cinasa/Akt/PTEN es una diana atractiva para el desarrollo de fármacos contra el cáncer, puesto que se esperaría que dichos agentes inhiban la proliferación celular, repriman las señales de las células del estroma que proporcionan la supervivencia y quimiorresistencia de las células cancerosas, anulen la represión de la apoptosis y venzan la resistencia intrínseca de las células cancerosas a los agentes citotóxicos. La Pl3K se activa a través de la señalización de la tirosina cinasa receptora, así como activando mutaciones en la subunidad catalítica p110 de PI3K, la pérdida del supresor tumoral PTEN o a través de mutaciones de activación poco frecuentes en AKT.

Taselisib (GDC-0032, Roche RG7604, n.° de reg. CAS 1282512-48-4, Genentech Inc.), denominado como 2-(4-(2-(1-isopropil-3-metil-1H-1,2,4-triazol-5-il)-5,6-dihidrobenzo[f]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-9-il)-1H-pirazol-1-il )-2-metilpropanamida, tiene una potente actividad PI3K (Ndubaku, C. O. et al. (2013) J. Med. Chem. 56:45974610; documento WO 2011/036280; documento US 8242104; documento US 8343955) y se está estudiando en pacientes con tumores sólidos localmente avanzados o metastásicos. Taselisib (GDC-0032) es un inhibidor con conservación de isoformas beta de la subunidad catalítica de PI3K que es 31 veces más selectivo para la subunidad alfa en comparación con beta. Taselisib muestra una mayor selectividad por las isoformas PI3Ka mutantes que por las PI3Ka naturales (Olivero AG et al., AACR 2013. Resumen DDT02-01). Taselisib se está desarrollando actualmente como un tratamiento para pacientes con cáncer de mama metastásico (CMm) negativo para HER2 y positivo para receptores estrogénicos (RE) y carcinoma de pulmón no microcítico (CPNM). En el estudio de fase la con taselisib como agente único se observaron respuestas parciales (RP) en 6/34 pacientes incluidos. Las 6 respuestas se observaron en pacientes con tumores con mutación de PIK3CA (Juric D. et al. AACR 2013), indicando la necesidad de determinar el estado de mutación en PIK3CA de pacientes tratados con taselisib.

Datos clínicos recientes con inhibidores de PI3K han implicado la actividad PI3K delta como una fuente de toxicidades gastrointestinales (Akinleye et al., "Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitors as cancer therapeutics", Journal of Hematology & Oncology 2013, 6:88-104; C. Saura et al. "Phase Ib Study of the PI3K Inhibitor Taselisib (GDC-0032) in Combination with Letrozole in Patients with Hormone Receptor-Positive Advanced Breast Cancer", San Antonio Breast Cancer Symposium; 12 de diciembre de 2014, PD5-2; López et al. "Taselisib, a selective inhibitor of PIK3CA, is highly effective on PIK3CA-mutated and HER2/neu amplified uterine serous carcinoma in vitro and in vivo" (2014) Gynecologic Oncology).

Idelalisib (GS-1101, CAL-101, ZYDELIG®, Gilead Sciences Inc., n.° de reg. CAS 870281-82-6, 5-fluoro-3-fenil-2-[(1S)-1-(7H-purin-6-ilamino)propil]-4(3H)-quinazolinona) es un inhibidor selectivo de PI3K5 (delta) y está aprobado para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica, LLC (Somoza, J.R. et al. (2015) J. Biol. Chem. 290:8439-8446; documento US 6800620; documento US 6949535; documento US 8138195; documento US 8492389; documento US 8637533; documento US 8865730; documento US 8980901; documento RE44599; documento RE44638). La diarrea y la colitis están entre los acontecimientos adversos más comunes informados después del tratamiento con idelalisib (Brown et al. "Idelalisib, an inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinase p110d, for relapsed/refractory chronic lymphocytic leukemia" (2014) Blood 123(22):3390-3397; ficha técnica de Zydelig® 2014; ficha descriptiva de REMS de Zydelig®). Las toxicidades gastrointestinales significativas observadas después del tratamiento con idelalisib son consecuentes con la hipótesis de que la inhibición de PI3K5 (delta) es una fuente de toxicidades gastrointestinales. Se observaron efectos secundarios graves adicionales en ensayos clínicos de idelalisib (Zydelig®) en combinación con otros tratamientos. Los acontecimientos adversos, incluyendo las muertes, se han vinculado a infecciones tales como la neumonía. En marzo de 2016, el Comité para la Evaluación de Riesgos en Farmacovigilancia (PRAC) de la EMA emitió una advertencia provisional y una recomendación de que los pacientes reciban un tratamiento combinado con antibióticos y se supervisen de forma rutinaria para detectar infecciones cuando toman Zydelig (idelalisib). En marzo de 2016, la Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU. emitió una alerta de que "seis ensayos clínicos que exploran idelalisib (Zydelig®) en combinación con otros tratamientos se han paralizado debido a informes de una tasa incrementada de acontecimientos adversos, incluyendo la muerte".

Existe la necesidad de composiciones farmacéuticas adicionales que comprenden moduladores de PI3Ka que son útiles para tratar cánceres, en particular un inhibidor de PI3Ka que es selectivo para tumores que expresan PI3Ka mutante en relación con células que expresan PI3Ka no mutante. Existe especialmente la necesidad de dichas composiciones farmacéuticas que comprenden un agente que inhibe selectivamente la isoforma PI3Ka en relación con las isoformas PI3Kp, PI3K5 y PI3Ky, que se puede esperar que dé como resultado un margen terapéutico potenciado.

Sumario de la invención

La invención se refiere, en general, a compuestos de benzoxacepin oxazolidinona con actividad selectiva en la modulación de formas mutantes de la isoforma PI3Ka (alfa), y que tienen la estructura de fórmula I:

y estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los diversos sustituyentes se definen en el presente documento.

La invención se refiere a una composición farmacéutica compuesta por un compuesto, que es

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo, fluidificante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Otro aspecto de la invención se refiere a la composición farmacéutica como se describe anteriormente para su uso en el tratamiento de cáncer de mama.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 muestra las estructuras de rayos X de cocristales de PI3Ka con: A) taselisib (GDC-0032), B) compuesto 529 del documento US 8242104, C) compuesto 101 y D) compuesto 103.

La figura 2 muestra las estructuras de rayos X de cocristales de PI3Ka con: A) taselisib (GDC-0032) y B) compuesto 101.

La figura 3A muestra datos de inmunoelectrotransferencia que representan los niveles de p110a (p110a, p110 alfa) después de un tratamiento de 24 horas con el compuesto 101, el compuesto 103 y el compuesto 436 del documento US 8242104 en células HCC-1954 (PI3Ka con mutación H1047R).

La figura 3B muestra datos de inmunoelectrotransferencia que representan los niveles de p110a (p110a, p110 alfa) después de un tratamiento de 24 horas con el compuesto 101, el compuesto 103 y el compuesto 436 del documento US 8242104 en células HDQ-P1 (PI3Ka natural).

Descripción detallada de modos de realización ejemplares

Ahora se hará referencia en detalle a determinados modos de realización de la invención, de los que se ilustran ejemplos en las estructuras y fórmulas adjuntas. A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que se entiende comúnmente por un experto en la técnica a la que pertenece la presente invención. Aunque se pueden usar procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento en la práctica o pruebas de la invención, se describen a continuación procedimientos y materiales adecuados.

Definiciones

Cuando se indica el número de sustituyentes, el término "uno o más" se refiere al intervalo de un sustituyente al mayor número posible de sustitución, es decir, del reemplazo de un hidrógeno hasta el reemplazo de todos los hidrógenos por sustituyentes. El término "sustituyente" indica un átomo o un grupo de átomos que reemplazan un átomo de hidrógeno en la molécula original. El término "sustituido" indica que un grupo especificado tiene uno o más sustituyentes. Cuando cualquier grupo puede llevar múltiples sustituyentes y se proporciona una variedad de posibles sustituyentes, los sustituyentes se seleccionan independientemente y no necesitan ser los mismos. El término "no sustituido" quiere decir que el grupo especificado no tiene ningún sustituyente. El término "opcionalmente sustituido" quiere decir que el grupo especificado no está sustituido o está sustituido con uno o más sustituyentes, elegidos independientemente del grupo de posibles sustituyentes. Cuando se indica el número de sustituyentes, el término "uno o más" quiere decir de un sustituyente al mayor número posible de sustitución, es decir, del reemplazo de un hidrógeno hasta el reemplazo de todos los hidrógenos por sustituyentes.

El término "alquilo" como se usa en el presente documento se refiere a un radical hidrocarburo monovalente de cadena lineal o ramificada saturado de uno a doce átomos de carbono (C¹-C¹²), en el que el radical alquilo puede estar opcionalmente sustituido independientemente con uno o más sustituyentes descritos a continuación. En otro modo de realización, un radical alquilo es de uno a ocho átomos de carbono (Ci-Cs), o de uno a seis átomos de carbono (C¹-C⁶). Los ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo (Me, -CH ³), etilo (Et, -CH ²CH³), 1 -propilo (n-Pr, n-propilo, -CH ²CH²CH³), 2-propilo (i-Pr, i-propilo, -CH(CH3)2), 1 -butilo (n-Bu, n-butilo, -CH ²CH²CH²CH³), 2- metil-1-propilo (i-Bu, i-butilo, -CH2CH(CH3)2), 2-butilo (s-Bu, s-butilo, -CH(CH3)CH2CH3), 2-metil-2-propilo (t-Bu, t-butilo, -C(CH3)3), 1-pentilo (n-pentilo, -CH ²CH²CH²CH²CH³), 2-pentilo (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-pentilo (-CH(CH2CH3)2), 2-metil-2-butilo (-C(CH3)2CH2CH3), 3-metil-2-butilo (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-metil-1-butilo (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-metil-1 -butilo (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-hexilo (-CH ²CH²CH²CH²CH²CH³), 2-hexilo (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-hexilo (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-metil-2-pentilo (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3- metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-metil-3-pentilo (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-metil-3-pentilo (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimetil-2-butilo (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-dimetil-2-butilo (-CH(CH3)C(CH3)3, 1-heptilo y 1-octilo.

Los términos "carbociclo", "carbociclilo", "anillo carbocíclico" y "cicloalquilo" se refieren a un anillo saturado o parcialmente insaturado no aromático monovalente que tiene de 3 a 12 átomos de carbono (C³-C¹²) como un anillo monocíclico o de 7 a 12 átomos de carbono como un anillo bicíclico. Los carbociclos bicíclicos que tienen de 7 a 12 átomos se pueden disponer, por ejemplo, como un sistema biciclo [4,5], [5,5], [5,6] o [6,6], y los carbociclos bicíclicos que tienen 9 o 10 átomos de anillo se pueden disponer como un sistema biciclo [5,6] o [6,6], o como sistemas con puente, tales como biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[2.2.2]octano y biciclo[3.2.2]nonano. También se incluyen restos espiro carbociclilo dentro del alcance de esta definición. Los ejemplos de restos espiro carbociclilo incluyen [2.2]pentanilo, [2.3]hexanilo y [2.4]heptanilo. Los ejemplos de carbociclos monocíclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, 1-ciclopent-1-enilo, 1-ciclopent-2-enilo, 1-ciclopent-3-enilo, ciclohexilo, 1-ciclohex-1-enilo, 1-ciclohex-2-enilo, 1-ciclohex-3-enilo, ciclohexadienilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo, ciclodecilo, cicloundecilo y ciclododecilo. Los grupos carbociclilo están opcionalmente sustituidos independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento.

"Arilo" quiere decir un radical hidrocarburo aromático monovalente de 6-20 átomos de carbono (C⁶-C²⁰) derivado por la retirada de un átomo de hidrógeno de un único átomo de carbono de un sistema de anillos aromáticos original. Algunos grupos arilo están representados en las estructuras ejemplares como "Ar". Arilo incluye radicales bicíclicos que comprenden un anillo aromático condensado a un anillo saturado, parcialmente insaturado, o anillo carbocíclico aromático. Los grupos arilo típicos incluyen radicales derivados de benceno (fenilo), bencenos sustituidos, naftaleno, antraceno, bifenilo, indenilo, indanilo, 1,2-dihidronaftaleno y 1,2,3,4-tetrahidronaftilo. Los grupos arilo están opcionalmente sustituidos independientemente con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento.

Los términos "heterociclo", "heterociclilo" y "anillo heterocíclico" se usan de manera intercambiable en el presente documento y se refieren a un radical carbocíclico saturado o uno parcialmente insaturado (es decir, que tiene uno o más dobles y/o triples enlaces en el anillo) de 3 a aproximadamente 20 átomos de anillo, en el que al menos un átomo de anillo es un heteroátomo seleccionado de nitrógeno, oxígeno, fósforo y azufre, siendo C los átomos de anillo restantes, donde uno o más átomos de anillo están opcionalmente sustituidos independientemente por uno o más sustituyentes descritos a continuación. Un heterociclo puede ser un monociclo que tiene de 3 a 7 miembros de anillo (de 2 a 6 átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de N, O, P y S) o un biciclo que tiene de 7 a 10 miembros de anillo (de 4 a 9 átomos de carbono y de 1 a 6 heteroátomos seleccionados de N, O, P y S), por ejemplo: un sistema biciclo [4,5], [5,5], [5,6] o [6,6]. Los heterociclos se describen en Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), en particular, los capítulos 1, 3, 4, 6, 7 y 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 hasta la fecha), en particular, los volúmenes 13, 14, 16, 19 y 28; y J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. "Heterociclilo" también incluye radicales donde los radicales heterociclo se fusionan con un anillo saturado, parcialmente insaturado, o anillo carbocíclico o heterocíclico aromático. Los ejemplos de anillos heterocíclicos incluyen, pero no se limitan a, morfolin-4-ilo, piperidin-1-ilo, piperacinilo, piperacin-4-il-2-ona, piperacin-4-il-3-ona, pirrolidin-1-ilo, tiomorfolin-4-ilo, S-dioxotiomorfolin-4-ilo, azocan-1-ilo, acetidin-1-ilo, octahidropirido[1,2-a]piracin-2-ilo, [1,4]diacepan-1-ilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotienilo, tetrahidropiranilo, dihidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanilo, piperacinilo, homopiperacinilo, acetidinilo, oxetanilo, tietanilo, homopiperidinilo, oxepanilo, tiepanilo, oxacepinilo, diacepinilo, tiacepinilo, 2- pirrolinilo, 3-pirrolinilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo, ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo, pirazolidinilimidazolinilo, imidazolidinilo, 3- azabiciclo[3.1.0]hexanilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptanilo, azabiciclo[2.2.2]hexanilo, 3H-indolilo, quinolicinilo y N-piridilureas. También se incluyen restos espiro heterociclilo dentro del alcance de esta definición. Los ejemplos de restos espiro heterociclilo incluyen azaespiro[2.5]octanilo y azaespiro[2.4]heptanilo. Los ejemplos de un grupo heterocíclico en el que 2 átomos de anillo están sustituidos con restos oxo (=O) son pirimidinonilo y 1,1-dioxo-tiomorfolinilo.

El término "heteroarilo" se refiere a un radical aromático monovalente de anillos de 5, 6 o 7 miembros, e incluye sistemas de anillos condensados (de los que al menos uno es aromático) de 5-20 átomos, que contiene uno o más heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los ejemplos de grupos heteroarilo son piridinilo (incluyendo, por ejemplo, 2-hidroxipiridinilo), imidazolilo, imidazopiridinilo, pirimidinilo (incluyendo, por ejemplo, 4-hidroxipirimidinilo), pirazolilo, triazolilo, piracinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxadiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, indolilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, cinnolinilo, indazolilo, indolicinilo, ftalacinilo, piridacinilo, triacinilo, isoindolilo, pteridinilo, purinilo, oxadiazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo y furopiridinilo.

Los términos "tratar" y "tratamiento" se refieren a tratamiento terapéutico, en el que el objetivo es retardar (reducir) un cambio o trastorno fisiológico no deseado, tal como el desarrollo o diseminación de artritis o cáncer. Para los propósitos de la presente invención, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen alivio de los síntomas, disminución de la extensión de la enfermedad, estado estabilizado (es decir, sin empeoramiento) de la enfermedad, retraso o ralentización de la progresión de la enfermedad, mejora o paliación del estado de la enfermedad y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" también puede querer decir la prolongación de la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada si no se recibe tratamiento. Aquellos que necesitan tratamiento incluyen aquellos con la afección o trastorno.

La frase "cantidad terapéuticamente eficaz" quiere decir una cantidad de un compuesto de la presente invención que (i) trata la enfermedad, afección o trastorno particular, (ii) atenúa, mejora o elimina uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular o (iii) previene o retrasa la aparición de uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular descrito en el presente documento. En el caso de cáncer, la cantidad terapéuticamente eficaz del fármaco puede reducir el número de células cancerosas; reducir el tamaño del tumor; inhibir (es decir, ralentizar en cierto grado y preferentemente detener) la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; inhibir (es decir, ralentizar en cierto grado y preferentemente detener) la metástasis tumoral; inhibir, en cierto grado, el crecimiento tumoral; y/o aliviar en cierto grado uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. En el grado en el que el fármaco pueda evitar el crecimiento y/o destruir las células cancerosas existentes, puede ser citostático y/o citotóxico. Para el tratamiento del cáncer, se puede medir la eficacia, por ejemplo, evaluando el tiempo hasta la progresión de la enfermedad (TTP) y/o determinando la tasa de respuesta (TR).

El término "cáncer" se refiere a o describe la afección fisiológica en mamíferos que está caracterizado típicamente por un crecimiento celular no regulado. Un "tumor" comprende una o más células cancerosas. Los ejemplos de cáncer incluyen carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia o neoplasias malignas linfáticas. Los ejemplos más particulares de dichos cánceres incluyen carcinoma de células escamosas (por ejemplo, carcinoma de células escamosas epiteliales), cáncer de pulmón, incluyendo carcinoma de pulmón microcítico, carcinoma de pulmón no microcítico ("CPNM"), adenocarcinoma de pulmón y carcinoma escamoso de pulmón, cáncer del peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico o de estómago, incluyendo cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, glioblastoma, cáncer cervicouterino, cáncer ovárico, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de las glándulas salivales, cáncer de riñón o renal, cáncer de próstata, cáncer vulvar, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pene, así como cáncer de cabeza y cuello.

Las "neoplasias malignas hemáticas" son los tipos de cáncer que afectan a la sangre, médula ósea y ganglios linfáticos. Como los tres están estrechamente conectados a través del sistema inmunitario, una enfermedad que afecte a uno de los tres a menudo también afectará a los demás: aunque el linfoma es una enfermedad de los ganglios linfáticos, a menudo se disemina a la médula ósea, afectando a la sangre. Las neoplasias malignas hemáticas son neoplasias malignas ("cáncer") y se tratan, en general, por especialistas en hematología y/u oncología. En algunos centros, "hematología y oncología" es una única subespecialidad de medicina interna, mientras que en otros se consideran divisiones separadas (también existen oncólogos quirúrgicos y oncólogos de radioterapia). No todos los trastornos hemáticos son malignos ("cancerosos"); estas otras afecciones de la sangre también se pueden tratar por un hematólogo. Las neoplasias malignas hemáticas pueden derivar de cualquiera de los dos linajes celulares sanguíneos principales: líneas celulares mielocíticas y linfáticas. La línea celular mielocítica produce normalmente granulocitos, eritrocitos, trombocitos, macrófagos y mastocitos; la línea celular linfática produce linfocitos B, T, NK y plasmocitos. Los linfomas, leucemias linfocíticas y mieloma provienen de la línea linfática, mientras que la leucemia mielógena aguda y crónica, síndromes mielodisplásicos y enfermedades mieloproliferativas son de origen mielocítico. Las leucemias incluyen leucemia linfocítica aguda (LLA), leucemia mielógena aguda (LMA), leucemia linfocítica crónica (LLC), leucemia mielógena crónica (LMC), leucemia monocítica aguda (LMoA) y linfoma linfocítico pequeño (LLP). Los linfomas incluyen linfomas hodgkinianos (los cuatro subtipos) y linfomas no hodgkinianos (LNH, todos los subtipos).

Un "agente quimioterápico" es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer, independientemente del mecanismo de acción. Las clases de agentes quimioterápicos incluyen: agentes alquilantes, antimetabolitos, alcaloides vegetales como venenos del huso, antibióticos citotóxicos/antitumorales, inhibidores de topoisomerasa, anticuerpos, fotosensibilizadores e inhibidores de cinasa. Los agentes quimioterápicos incluyen compuestos usados en el "tratamiento dirigido" y quimioterapia convencional. Los ejemplos de agentes quimioterápicos incluyen: ibrutinib (IMBRUVICA™, APCI-32765, Pharmacyclics Inc./Janssen Biotech Inc.; n.° de reg. de CAS 936563-96-1, documento US 7514444), idelalisib (anteriormente CAL-101, GS 1101, GS-1101, Gilead Sciences Inc.; n.° de reg. de CAS 1146702-54-6), erlotinib (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), docetaxel (TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU (fluorouracilo, 5-fluorouracilo, n.° de reg. de CAS 51-21-8), gemcitabina (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (n.° de CAS 391210-10-9, Pfizer), cisplatino (Platinol®, (SP-4-2)-diaminodicloroplatino(II), cis-diamina, dicloroplatino(II), n.° de CAS 15663-27-1), carboplatino (n.° de CAS 41575-94-4), paclitaxel (TAXo L®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), temozolomida (4-metil-5-oxo-2,3,4,6,8-pentazabiciclo[4.3.0]nona-2,7,9-trieno-9-carboxamida, n.° de CAS 85622-93-1, Te MODAR®, TEMODa L®, Schering Plough), tamoxifeno ((Z)-2-[4-(1,2-difenilbut-1-enil)fenoxi]-N,N-dimetiletanamina, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) y doxorrubicina (ADRIAMYCIN®, n.° de CAS 23214-92-8), Akti-1/2, HPPD y rapamicina.

Los agentes quimioterápicos incluyen inhibidores de dianas de receptores de linfocitos B tales como inhibidores de BTK, Bcl-2 y JAK.

Más ejemplos de agentes quimioterápicos incluyen: oxaliplatino (ELOXATIN®, Sanofi), bortezomib (VELCADE®, Millennium Pharm.), Sutent (SUNITiNiB®, SU11248, Pfizer), letrozol (FEMARA®, Novartis), mesilato de imatinib (GLEEVEC®, Novartis), XL-518 (inhibidor de Mek, Exelixis, documento WO 2007/044515), ARRY-886 (inhibidor de Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (inhibidor de PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (inhibidor de PI3K, Novartis), XL-147 (inhibidor de PI3K, Exelixis), PTK787/ZK222584 (Novartis), fulvestrant (FASLODEX®, AstraZeneca), leucovorina (ácido folínico), rapamicina (sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), lonafarnib (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), sorafenib (NEXAVAR®, BAY43-9006, Bayer Labs), gefitinib (IRESSA®, AstraZeneca), irinotecán (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), tipifarnib (ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE™ (sin Cremophor), formulaciones de nanopartículas genomanipuladas con albúmina de paclitaxel (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), vandetanib (rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), clorambucilo, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), temsirolimus (TORISEL®, Wyeth), pazopanib (GlaxoSmithKline), canfosfamida (TELc Yt A®, Telik), tiotepa y ciclosfosfamida (CYTOXAN®, Ne OSAR®); sulfonatos de alquilo tales como busulfano, improsulfano y piposulfano; aziridinas tales como benzodopa, carbocuona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas que incluyen altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilomelamina; acetogeninas (especialmente bullatacina y bullatacinona); una camptotecina (que incluye el análogo sintético topotecán); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos adozelesin, carzelesin y bizelesin); criptoficinas (en particular criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos, KW-2189 y CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; una sarcodictina; espongistatina; mostazas de nitrógeno tales como clorambucilo, clornafazina, clorofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalán, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimustina; antibióticos tales como los antibióticos enodiinos (por ejemplo, calicheamicina, calicheamicina gamma1I, calicheamicina omegaI1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); dinemicina, dinemicina A; bisfosfonatos, tales como clodronato; una esperamicina; así como cromóforo de neocarzinostatina y cromóforos de antibióticos enodiinos de cromoproteína relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinis, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, morfolino-doxorubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina y desoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, nemorrubicina, marcelomicina, mitomicinas tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; antimetabolitos tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos del ácido fólico tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antisuprarrenales tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reforzador de ácido fólico tal como ácido folínico; aceglatona; glucósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diazicuona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglúcido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinán; lonidamina; maitansinoides tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; phenamet; pirarrubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2-etilhidracida; procarbazina; complejo de polisacáridos PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofiran; espirogermanio; ácido tenuazónico; triazicuona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromán; gacitosina; arabinósido ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino tales como cisplatino y carboplatino; vinblastina; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina (NAVELBINE®); novantrone; tenipósido; edatrexato; daunomicina; aminopterina; capecitabina (XELODA®, Roche); ibandronato; CPT-11; inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides tales como ácido retinoico; y sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.

También se incluyen en la definición de "agente quimioterápico": (i) agentes antihormonales que actúan para regular o inhibir la acción hormonal en tumores tales como antiestrógenos y moduladores selectivos de receptores estrogénicos (SERM), incluyendo, por ejemplo, tamoxifeno (incluyendo NOLVADEX®; citrato de tamoxifeno), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona y FARESTON® (citrato de toremifeno) y moduladores selectivos de receptores estrogénicos (SERD) tales como fulvestrant (FASLODEX®, Astra Zeneca); (ii) inhibidores de la aromatasa que inhiben la enzima aromatasa que regula la producción de estrógenos en las glándulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, MEGASE® (acetato de megestrol), AROMASIN® (exemestano; Pfizer), formestano, fadrozol, RIVISOR® (vorozol), FEMARA® (letrozol; Novartis) y ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca); (iii) antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprorrelina y goserelina; así como troxacitabina (un análogo de 1,3-dioxolano nucleósido citosina); (iv) inhibidores de proteína cinasa tales como inhibidores de MEK, tales como cobimetinib (documento WO 2007/044515); (v) inhibidores de cinasas lipídicas, tales como taselisib (GDC-0032, Genentech Inc.); (vi) oligonucleótidos antisentido, en particular los que inhiben la expresión de genes en vías de señalización implicadas en la proliferación celular anómala, por ejemplo, PKC-alfa, Raf y H-Ras, tales como oblimersen (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) ribozimas tales como inhibidores de la expresión de VEGF (por ejemplo, ANGIOZYME®) e inhibidores de la expresión de HER2; (viii) vacunas tales como vacunas de tratamiento génico, por ejemplo, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® y VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; inhibidores de la topoisomerasa 1 tales como LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) agentes antiangiogénicos tales como bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); y sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.

También se incluyen en la definición de "agente quimioterápico" los anticuerpos terapéuticos tales como alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); cetuximab (ERBITUX®, Imelone); panitumumab (VECTIBIX®, Amgen), rituximab (R iTuXAN®, Genentech/Biogen Idec), pertuzumab (PERJETA™, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), trastuzumab emtansina (KADCYLA®, Genentech Inc.) y tositumomab (BEXXAR, Corixia).

Un "metabolito" es un producto producido a través del metabolismo en el cuerpo de un compuesto especificado o sal del mismo. Los metabolitos de un compuesto se pueden identificar usando técnicas rutinarias conocidas en la técnica y determinar sus actividades usando pruebas tales como las descritas en el presente documento. Dichos productos pueden resultar por ejemplo de la oxidación, reducción, hidrólisis, amidación, desamidación, esterificación, desesterificación, escisión enzimática y similares, del compuesto administrado. En consecuencia, la invención incluye metabolitos de los compuestos de la invención, incluyendo los compuestos producidos por un procedimiento que comprende poner en contacto un compuesto de fórmula I de la presente invención con un mamífero durante un período de tiempo suficiente para proporcionar un producto metabólico del mismo.

El término "prospecto del envase" se usa para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en los envases comerciales de los productos terapéuticos que contienen información sobre las indicaciones, uso, dosificación, administración, contraindicaciones y/o advertencias en relación con el uso de dichos productos terapéuticos.

El término "quiral" se refiere a las moléculas que tienen la propiedad de no superponerse al compañero imagen especular, mientras que el término "aquiral" se refiere a las moléculas que son superponibles sobre su compañero imagen especular.

El término "estereoisómeros" se refiere a los compuestos que tienen una constitución química idéntica, pero difieren con respecto a la disposición de los átomos o grupos en el espacio.

"Diastereómero" se refiere a un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad y con moléculas que no son imágenes especulares entre sí. Los diastereómeros tienen diferentes propiedades físicas, por ejemplo, puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales y reactividades. Las mezclas de diastereómeros se pueden separar con procedimientos analíticos de alta resolución tales como electroforesis y cromatografía.

"Enantiómeros" se refiere a dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares no superponibles entre sí.

Las definiciones y convenciones estereoquímicas usadas en el presente documento siguen, en general, S. P. Parker, ed., McGraw-Hill Dictionary o f Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; y Eliel, E. y Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Los compuestos de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y, por lo tanto, existir en diferentes formas estereoisómeras. Se pretende que todas las formas estereoisómeras de los compuestos de la invención, diastereómeros, enantiómeros y atropisómeros, así como mezclas de los mismos, tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de girar el plano de la luz polarizada en el plano. Para describir un compuesto ópticamente activo, se usan los prefijos D y L, o R y S, para indicar la configuración absoluta de la molécula sobre su(s) centro(s) quiral(es). Los prefijos d y 1 o (+) y (-) se emplean para designar el signo de giro de la luz polarizada en el plano por el compuesto, queriendo decir (-) o 1 que el compuesto es levógiro. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrógiro. Para una estructura química dada, estos estereoisómeros son idénticos excepto porque son imágenes especulares entre sí. Un estereoisómero específico también se puede denominar enantiómero, y una mezcla de dichos isómeros a menudo se llama mezcla enantimérica. Una mezcla 50:50 de enantiómeros se denomina mezcla racémica o racemato, que se puede producir cuando no haya existido ninguna estereoselección o estereoespecificidad en una reacción o proceso químico. Los términos "mezcla racémica" y "racemato" se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantiómeras carentes de actividad óptica. Los enantiómeros se pueden separar de una mezcla racémica por un procedimiento de separación quiral, tal como cromatografía de fluidos supercríticos (SFC). La asignación de la configuración en los centros quirales en los enantiómeros separados puede ser provisional, y se representa, con propósitos ilustrativos, en las estructuras de la tabla 1, mientras que la estereoquímica está establecida de forma concluyente, tal como como a partir de datos cristalográficos de rayos X.

El término "tautómero" o "forma tautómera" se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías que son interconvertibles por medio de una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómeros protónicos (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen interconversiones por medio de la migración de un protón, tales como isomerizaciones ceto-enol e imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones por reorganización de algunos de los electrones de enlace.

El término "sales farmacéuticamente aceptables" indica sales que no son biológicamente o de otro modo indeseables. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición tanto de ácido como de base. La frase "farmacéuticamente aceptable" indica que la sustancia o composición debe ser química y/o toxicológicamente compatible con los demás ingredientes que comprende una formulación y/o con el mamífero que se va a tratar con la misma.

El término "sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable" indica las sales farmacéuticamente aceptables formadas con ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido carbónico, ácido fosfórico y ácidos orgánicos seleccionados de las clases alifática, cicloalifática, aromática, arilalifática, heterocíclica, carboxílica y sulfónica de ácidos orgánicos, tales como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido glucónico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido aspártico, ácido ascórbico, ácido glutámico, ácido antranílico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido embónico, ácido fenilacético, "mesilato" del ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluensulfónico y ácido salicíclico.

El término "sal de adición de base farmacéuticamente aceptable" indica las sales farmacéuticamente aceptables formadas con una base orgánica o inorgánica. Los ejemplos de bases inorgánicas aceptables incluyen sales de sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio, hierro, cinc, cobre, manganeso y aluminio. Las sales derivadas de bases orgánicas no tóxicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas incluyendo aminas sustituidas naturales, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, tales como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dietilaminoetanol, trimetamina, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina y resinas de poliamina.

Un "solvato" se refiere a una asociación o complejo de una o más moléculas de disolvente y un compuesto de la invención. Los ejemplos de disolventes que forman solvatos incluyen agua, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético y etanolamina.

El término "CE⁵⁰" es la "concentración eficaz semimáxima" e indica la concentración plasmática de un compuesto particular requerida para obtener un 50 % del máximo de un efecto particular in vivo.

El término "Ki" es la constante de inhibición e indica la afinidad de unión absoluta de un inhibidor particular por un receptor. Se mide usando ensayos de unión por competencia y es igual a la concentración en la que el inhibidor particular ocuparía un 50 % de los receptores si no estuviera presente ningún ligando competidor (por ejemplo, un radioligando). Los valores de Ki se pueden convertir de forma logarítmica en valores de pKi (-log Ki), en los que los valores mayores indican una potencia exponencialmente mayor.

El término "CI⁵⁰" es la concentración inhibidora semimáxima e indica la concentración de un compuesto particular requerida para obtener una inhibición de un 50 % de un proceso biológico in vitro. Los valores de CI⁵⁰ se pueden convertir de forma logarítmica en valores de pCI50 (-log CI⁵⁰), en los que los valores mayores indican una potencia exponencialmente mayor. El valor de CI⁵⁰ no es un valor absoluto, sino que depende de las condiciones experimentales, por ejemplo, las concentraciones empleadas, y se puede convertir en una constante de inhibición (Ki) absoluta usando la ecuación de Cheng-Prusoff (Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099). Se pueden calcular otros parámetros de porcentaje de inhibición, tales como CI⁷⁰, CI⁹⁰, etc.

Los términos "compuesto de la presente invención" y "compuestos de la presente invención" y "compuestos de fórmula I" incluyen los compuestos de fórmulas I y estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros, solvatos, metabolitos y sales y profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Cualquier fórmula o estructura dada en el presente documento, incluyendo los compuestos de fórmula I, también pretende representar hidratos, solvatos y polimorfos de dichos compuestos y mezclas de los mismos.

Cualquier fórmula o estructura dada en el presente documento, incluyendo los compuestos de fórmula I, también pretende representar formas no marcadas, así como formas marcadas isotópicamente de los compuestos. Los compuestos marcados isotópicamente tienen las estructuras representadas por las fórmulas dadas en el presente documento, excepto porque uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número másico seleccionado. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como, pero sin limitarse a 2H (deuterio, D), 3H (tritio), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl y 125I. Los diversos compuestos marcados isotópicamente de la presente invención, por ejemplo, aquellos en los que se incorporan isótopos radioactivos, tales como 3H, 13C y 14C. Dichos compuestos marcados isotópicamente pueden ser útiles en estudios metabólicos, estudios cinéticos de reacción, técnicas de detección o formación de imágenes, tales como tomografía por emisión de positrones (PET) o tomografía de emisión monofotónica (SPECT), incluyendo ensayos de distribución de fármacos o sustratos en tejidos, o en tratamiento radioactivo de pacientes. Los compuestos terapéuticos marcados o sustituidos con deuterio de la invención pueden tener propiedades de DMPK (metabolismo y farmacocinética de fármacos) mejoradas en relación con su distribución, metabolismo y excreción (ADME). La sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, un incremento en la semivida in vivo o reducción en los requisitos de dosificación. Un compuesto marcado con 18F puede ser útil para estudios de PET o SPECT. Se pueden preparar, en general, los compuestos marcados isotópicamente de la presente invención y profármacos de los mismos llevando a cabo los procedimientos divulgados en los esquemas o en los ejemplos y preparaciones descritos a continuación sustituyendo un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible con un reactivo no marcado isotópicamente. Además, la sustitución con isótopos más pesados, en particular, deuterio (es decir, 2H o D) puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, incremento en la semivida in vivo o reducción en los requisitos de dosificación o una mejora en el índice terapéutico. Se entiende que el deuterio se considera en este contexto un sustituyente en el compuesto de fórmula (I). La concentración de dicho isótopo más pesado, específicamente deuterio, se puede definir por un factor de enriquecimiento isotópico. En los compuestos de la presente invención, se pretende que cualquier átomo no designado específicamente como un isótopo particular represente cualquier isótopo estable de ese átomo. A menos que se establezca de otro modo, cuando una posición se designa específicamente como "H" o "hidrógeno", se entiende que la posición tiene hidrógeno en su composición isotópica de abundancia natural. En consecuencia, en los compuestos de la presente invención, se pretende que cualquier átomo designado específicamente como deuterio (D) represente deuterio.

Compuestos de benzoxacepin oxazolidinona

La presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas compuestas por un compuesto

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo, fluidificante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

La invención también proporciona un procedimiento para preparar una composición farmacéutica que comprende combinar un compuesto, que es

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con un vehículo, fluidificante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

La presente solicitud proporciona compuestos de benzoxacepin oxazolidinona de referencia: de fórmula I, que son potencialmente útiles en el tratamiento del cáncer, que tienen la estructura:

y estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que:

R1 se selecciona de -CH³ , -CH²CH³ , ciclopropilo y ciclobutilo;

R2 se selecciona de -CH³ , -CHF² , -CH²F y -CF³.

Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R1 es ciclopropilo. Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R1 es CH³ o ciclopropilo.

Los modos de realización ejemplares de compuestos de fórmula I incluyen en la que R1 es CH³.

Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R2 es -CHF².

Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R2 es CH²F.

Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R1 es ciclopropilo y R2 es -CHF².

Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R1 es ciclopropilo y R2 es -CH2F.

Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen en la que R1 es CH³ y R2 es -CHF².

Los modos de realización ejemplares de los compuestos de fórmula I incluyen los compuestos en la tabla 1.

Los compuestos de fórmula I de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y, por lo tanto, existir en diferentes formas estereoisómeras. Se pretende que todas las formas estereoisómeras de los compuestos de la invención, incluyendo, pero sin limitarse a, diastereómeros, enantiómeros y atropisómeros, así como mezclas de los mismos, tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. En algunos casos, la estereoquímica no se ha determinado o se ha asignado provisionalmente.

Además, la presente invención abarca todos los diastereómeros, incluyendo isómeros cis-trans (geométricos) y conformacionales. Por ejemplo, si un compuesto de fórmula I incorpora un doble enlace o un anillo condensado, las formas cis y trans, así como mezclas de las mismas, se abarcan dentro del alcance de la invención.

En las estructuras mostradas en el presente documento, cuando no se especifica la estereoquímica de cualquier átomo quiral particular, entonces todos los estereoisómeros se contemplan e incluyen como los compuestos de la invención. Cuando se especifica la estereoquímica por una cuña sólida o línea discontinua que representa una configuración particular, entonces ese estereoisómero se especifica y define así.

Los compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como solvatadas con disolventes farmacéuticamente aceptables, tales como agua y etanol, y se pretende que la invención abarque formas tanto solvatadas como no solvatadas.

Los compuestos de la presente invención también pueden existir en diferentes formas tautómeras y todas dichas formas se abarcan dentro del alcance de la invención. El término "tautómero" o "forma tautómera" se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías que son interconvertibles por medio de una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómeros protónicos (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen interconversiones por medio de la migración de un protón, tales como isomerizaciones ceto-enol e imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones por reorganización de algunos de los electrones de enlace.

Evaluación biológica

Las eficacias relativas de los compuestos de fórmula I, incluyendo el compuesto comprendido por la composición farmacéutica mostrada anteriormente como inhibidores de la actividad enzimática (u otra actividad biológica) se puede establecer determinando las concentraciones a las que cada compuesto inhibe la actividad en un grado predefinido y a continuación comparando los resultados. Típicamente, la determinación preferente es la concentración que inhibe un 50 % de la actividad en un ensayo bioquímico, es decir, la concentración inhibidora al 50 % o "CI⁵⁰". La determinación de los valores de CI⁵⁰ se puede lograr usando técnicas convencionales conocidas en la técnica. En general, se puede determinar una CI⁵⁰ midiendo la actividad de una enzima dada en presencia de un intervalo de concentraciones del inhibidor en estudio. A continuación, los valores de la actividad enzimática obtenidos experimentalmente se representan frente a las concentraciones de inhibidor usadas. La concentración del inhibidor que muestra una actividad enzimática de un 50 % (en comparación con la actividad en ausencia de cualquier inhibidor) se toma como el valor de CI⁵⁰. De forma análoga, se pueden definir otras concentraciones inhibidoras a través de determinaciones apropiadas de la actividad. Por ejemplo, en algunos contextos puede ser deseable establecer una concentración inhibidora al 90 %, es decir, CI⁹⁰, etc.

Se prepararon, caracterizaron y sometieron a prueba los compuestos de fórmula I ejemplares de la tabla 1 (incluyendo el compuesto comprendido por la composición farmacéutica descrita anteriormente) para detectar su unión a diversas isoformas y formas mutantes de PI3K de acuerdo con los procedimientos de la presente invención, y tienen las siguientes estructuras, denominaciones correspondientes (ChemBioDraw, versión 12.0.2, CambridgeSoft Corp., Cambridge MA) y actividad biológica. Cuando más de una denominación se asocie con un compuesto o intermedio de fórmula I, la estructura química definirá el compuesto.

Tabla 1. Compuestos de fórmula I

Taselisib

El compuesto conocido como taselisib, GDC-0032 y Roche RG7604 (n.° de reg. de CAS 1282512-48-4, Genentech Inc.), tiene un nombre IUPAC: 2-(4-(2-(1-isopropil-3-metil-1H-1,2,4-triazol-5-il)-5,6-dihidrobenzo[f]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-9-il)-1H-pirazol-1-il )-2-metilpropanamida y la estructura:

incluyendo estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Taselesib se puede preparar y caracterizar como se describe en los documentos WO 2011/036280, US 8242104 y US 8343955.

Pictilisib

El compuesto conocido como pictilisib, GDC-0941, Roche RG-7321 y pictrelisib (n.° de reg. de CAS 957054-30-7, Genentech Inc.) es un potente inhibidor (universal) de clase I multidiana de las isoformas de PI3K. GDC-0941 está actualmente en ensayos clínicos de fase II para el tratamiento de tumores sólidos avanzados. GDC-0941 se denomina 4-(2-(1H-indazol-4-il)-6-((4-(metilsulfonil)piperacin-1-il)metil)tieno[3,2-d]pirimidin-4-il)morfolina (documento US 7781433; documento US 7750002; Folkes et al. (2008) Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532) y tiene la estructura:

Alpelisib

El compuesto conocido como alpelisib (BYL719, Novartis, n.° de CAS: 1217486-61-7) es un inhibidor selectivo oral de la isoforma alfa de PI3K y está en ensayos clínicos para el tratamiento potencial de una variedad de tipos de tumores, incluyendo un estudio de fase III en combinación con fulvestrant para el tratamiento de segunda línea del cáncer de mama metastásico avanzado negativo para HER2, positivo para receptores hormonales (Furet, P. et al. (2013) Bioorg. Med. Chem. Lett. 23:3741-3748; documento u S 8227462; documento US 8476268; documento US 8710085). Alpelisib se denomina (S)-N1-(4-metil-5-(2-( 1,1,1 -trifluoro-2-metilpropan-2-il)piridin-4-il)tiazol-2-il)pirrolidin-1,2-dicarboxamida) y tiene la estructura:

Se determinó la capacidad de un compuesto de la invención para actuar como un inhibidor de PI3Ka con selectividad sobre PI3Kp, PI3K5 y PI3Ky usando los procedimientos del ejemplo 901. Los valores de Ki mostrados en las tablas 2A y 2B representan la media geométrica de un mínimo de tres experimentos independientes, a menos que se indique de otro modo.

La tabla 2A muestra la inhibición bioquímica de cuatro isoformas de PI3K por los compuestos de fórmula I de la tabla 1. El compuesto 101 es el compuesto comprendido por la composición farmacéutica de la presente invención. Además, se incluyen dos compuestos de PI3k sometidos a prueba clínicamente, taselisib y pictilisib, como comparativos. Los compuestos representativos de la invención presentan una fuerte actividad contra PI3Ka, y presentan una selectividad significativamente potenciada en relación con las otras isoformas PI3Kp, PI3K5 y PI3Ky en comparación con taselisib (GDC-0032) y pictilisib (GDC-0941). En particular, las proporciones de selectividad en la segunda columna por la derecha de la tabla 2A muestran que cada compuesto de fórmula I 101-107 tiene una proporción de selectividad por PI3K alfa frente a delta mucho mayor que taselisib o pictilisib. De hecho, tanto taselisib como pictilisib tienen una actividad más fuerte contra PI3k delta que contra PI3K alfa, es decir, sus proporciones de selectividad son menores que 1. Las proporciones de selectividad de los compuestos de fórmula I 101-107 varían de 301 veces a 634 veces.

La tabla 2B muestra la inhibición bioquímica de dos isoformas de PI3K, alfa y delta, y las proporciones de selectividad por PI3K alfa frente a delta para determinados compuestos comparativos del documento US 8242104, y un compuesto que tiene un grupo dimetiloxazolidin-2-ona del documento Us 8263633 (compuesto 356, columna 149). Los compuestos comparativos mostrados aquí en la tabla 2B son ejemplos de los géneros generales descritos en cada uno de los documentos US 8242104 y US 8263633. Ni el documento US 8242104 ni el documento US 8263633 divulgan un compuesto dentro del alcance de los compuestos de fórmula I de la invención. Si bien los ejemplos comparativos representativos del documento US 8242104 como se describe en la tabla 2B demuestran proporciones de selectividad por PI3Ka (alfa) frente a PI3K5 (delta) > 1, la proporción de selectividad máxima observada es de 46,9 veces. Los compuestos de fórmula I 101-107, por lo tanto, logran proporciones de selectividad significativamente mayores que los ejemplos del documento US 8242104. No existe ninguna orientación en cualquiera de los documentos US 8242104 o US 8263633 para realizar la selección de elementos estructurales de los compuestos de fórmula I para lograr la propiedad de alta selectividad por PI3K alfa frente a PI3K delta. Esta propiedad inesperada de una selectividad por PI3K alfa mayor a 300 veces se conserva en todo el espectro de los compuestos ejemplificados en la tabla 1.

Los inhibidores de PI3K actuales en ensayos clínicos, tales como taselisib (documento WO 2011/036280; documento US 8242104; documento US 8343955) y otros ejemplos representativos del documento US 8242104 presentan una actividad significativa contra la isoforma PI3K5 (delta). Esta falta de selectividad frente a PI3K5 (delta) es consecuente con la toxicidad gastrointestinal observada en el entorno clínico para taselisib. Existe la necesidad de inhibidores de PI3Ka (alfa) que contengan las características favorables representativas de los ejemplos del documento US 8242104 y que carezcan simultáneamente de actividad contra PI3K5 (delta). La presente invención proporciona compuestos que cumplen con este perfil de actividad y selectividad.

La propiedad inesperada de selectividad por PI3K alfa es ventajosa para eliminar la toxicidad gastrointestinal observada en candidatos clínicos de inhibidores de PI3K. Datos clínicos recientes con inhibidores de PI3K han implicado la actividad contra PI3K delta como fuente de toxicidades gastrointestinales (Akinleye et al., "Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitors as cancer therapeutics" Journal of Hematology & Oncology 2013, 6:88-104). Véanse en la tabla 2 los inhibidores de PI3K en ensayos clínicos, taselisib y pictilisib.

Con una selectividad significativamente mayor para la inhibición de PI3Ka (alfa) en relación con la inhibición de PI3K5 (delta), se esperaría, por lo tanto, que los compuestos de fórmula I 101-107 logren un mayor margen entre la actividad clínica derivada de la inhibición de PI3Ka (alfa) en relación con las toxicidades derivadas de la inhibición de PI3K5 (delta), en comparación con el taselisib y pictilisib sometidos a prueba clínicamente o con cualquiera de los ejemplos de los documentos US 8242104 o US 8263633. En consecuencia, los compuestos de fórmula I de la invención pueden ser útiles como agentes terapéuticos con un perfil de toxicidad disminuido en relación con los agentes que presentan una mayor inhibición de las funciones normales de PI3Kp, PI3K5 o PI3Ky.

Tabla 2A. Inhibición bioquímica de las isoformas de PI3K por los compuestos de fórmula I y los compuestos comparativos taselisib y pictilisib

Tabla 2B. Inhibición bioquímica de las isoformas de PI3K por compuestos comparativos

*El valor de Ki representa el promedio de dos experimentos,**el valor de Ki representa un único experimento

Interacciones de los compuestos con PI3K

Una base racional para la selectividad por PI3Ka por los compuestos de fórmula I (incluyendo el compuesto 101 como está comprendido por la composición farmacéutica de la presente invención) puede residir en determinadas interacciones de unión.

Se determinó la capacidad de un compuesto de la invención para interactuar específicamente con PI3Ka resolviendo la estructura de cocristales de rayos X de compuestos representativos con PI3Ka (alfa) usando los procedimientos del ejemplo 908. El diseño estructural optimizado de inhibidores de PI3K con selectividad por la isoforma PI3Ka sobre otras isoformas puede incluir un posicionamiento y disposición precisos de átomos y grupos funcionales para interactuar con residuos específicos de isoforma en el sitio de unión. En particular, se encontró que la sustitución en la posición 9 y en la posición 2 del sistema de anillo de 5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepina tiene impactos cruciales sobre la actividad específica de los compuestos contra PI3Ka.

Las figuras 1A-D muestran las estructuras de cocristales de rayos X de taselisib (GDC-0032), el compuesto de referencia 529 (documento US 8242104) y dos compuestos representativos de la invención con PI3Ka. Como se muestra en la figura 1A, taselisib (GDC-0032) contiene un grupo funcional amida primaria que se sitúa en estrecho contacto con Gln859 y Ser854, lo que parece ofrecer la posibilidad de que se produzcan interacciones de enlace de hidrógeno. El residuo Gln859 es específico de la isoforma PI3Ka, ocupando esta posición un residuo diferente en las otras isoformas (PI3Kp = Asp, PI3K5 = Asn, PI3Ky = Lys). Sin embargo, a pesar de este estrecho contacto con un residuo específico de PI3Ka, como se mide en un ensayo bioquímico, GDC-0032 tiene una actividad igual contra ambas isoformas PI3Ka y PI3K5, y solo una actividad ligeramente reducida contra la isoforma PI3Ky (véase la tabla 2A).

Como se muestra en la figura 1B, el compuesto de referencia 529 (documento US 8242104) contiene un grupo funcional amida primaria en una posición similar a la de taselisib. Esta funcionalidad está dentro de una distancia apropiada y de la geometría apropiada tanto de Ser854 como de Gln859 para producir interacciones de enlace de hidrógeno. La proporción de selectividad de 46,9 veces por PI3Ka en relación con PI3K5 (véase la tabla 2B) se puede racionalizar en vista de estas interacciones, y del conocimiento de que PI3K5 no contiene un residuo de Gln en la posición 859 y, por lo tanto, estas interacciones deberían ser específicas de PI3Ka.

Las figuras 1C y 1D muestran que la amida primaria del grupo (S)-2-aminopropanamida del compuesto 101 y el grupo (S)-2-amino-2-ciclopropilacetamida del compuesto 103 ocupan cada una un lugar muy similar en el sitio de unión a las amidas primarias de GDC-0032 y el compuesto de referencia 529 (documento US 8242104). Esta funcionalidad de amida primaria en cada compuesto representativo de la invención está dentro de una distancia apropiada y de la geometría apropiada tanto de Ser854 como de Gln859 para producir interacciones de enlace de hidrógeno ideales. A pesar de las aparentes similitudes en la colocación y orientación de los grupos funcionales, los ejemplos representativos ilustrados en las figuras 1C y 1D, así como otros compuestos de la presente invención con sustituyentes y funcionalidad similares, mejoran tras las interacciones de la amida primaria tanto de taselisib como del compuesto de referencia 529 (documento US 8242104), de modo que se observa que los compuestos de la presente invención tienen una selectividad sustancialmente incrementada por PI3Ka en relación con PI3K5, como se mide en un ensayo bioquímico. El compuesto 101 es 361 veces más selectivo y el compuesto 103 es 634 veces más selectivo, un incremento sustancial en relación con el compuesto de referencia 529 (documento US 8242104), que es solo 46,9 veces más selectivo. En vista de la similitud del posicionamiento de la funcionalidad amida primaria entre taselisib y otros compuestos del documento US 8242104 (como se ejemplifica por el compuesto de referencia 529), la selectividad incrementada por PI3Ka en relación con PI3K5, como se demuestra por los compuestos de la presente invención, es una propiedad inesperada. No existe ninguna orientación en el documento US 8242104 para realizar la selección de elementos estructurales de los compuestos de fórmula I para lograr la propiedad de alta selectividad (> 300 veces) por PI3Ka. Los compuestos de fórmula I (incluyendo el compuesto 101 de la invención) mejoran tras las interacciones de la amida primaria de GDC-0032, de modo que se observa que los compuestos de la presente invención tienen una selectividad sustancialmente incrementada por PI3Ka en relación con PI3K5, como se mide en un ensayo bioquímico en relación con los compuestos comparativos (véanse las tablas 2A y 2B).

La figura 2A muestra una estructura de rayos X de taselisib unido en el sitio activo de PI3Ka (alfa). El átomo N2 del anillo de triazol no puede interactuar directamente con la cadena lateral de Tyr836 (distancia de 4,04 A) o bien con la de Ser774 (distancia de 2,74 y 2,82 A, sin polaridad complementaria entre el ligando y el residuo). La figura 2B muestra una estructura de rayos X del compuesto 101 unido en el sitio activo de PI3Ka, y muestra que el anillo de oxazolidinona puede producir múltiples interacciones mejoradas con la proteína en relación con el anillo de triazol. La funcionalidad carbonilo está cerca de la cadena lateral de Tyr836 (2,67 A) y puede producir una interacción polar favorable. Un átomo de flúor del sustituyente oxazolidinona está en estrecho contacto (2,21 A) con el grupo hidroxilo de Ser774 y es consecuente con una interacción polar o un enlace de hidrógeno no clásico, una interacción favorable posibilitada por la polarización del enlace carbono-flúor (Bohm et al., Fluorine in Medicinal Chemistry, (2004) ChemBioChem, 5:637-643; Zhou et al., "Fluorine Bonding - How Does it Work In Protein-Ligand Interactions", (2009) J. Chem. Inf. Model., 49:2344-2355).

Todos los compuestos de la invención contienen un anillo de oxazolidinona y pueden producir la interacción mejorada con Tyr836 de PI3Ka (alfa). Algunos ejemplos de la invención también contienen un sustituyente fluorado en el anillo de oxazolidinona y pueden producir la interacción mejorada con Ser774 de PI3Ka. Ambas interacciones de unión pueden contribuir a la selectividad potenciada por PI3Ka observada para los ejemplos de la invención en relación con los ejemplos del documento US 8242104. Como se muestra en las tablas 2A y 2B, los compuestos que contienen el anillo de oxazolidinona tienen una mayor selectividad por las isoformas que los compuestos comparables que contienen el anillo de triazol. Los residuos Ser774 y Tyr836 no son exclusivos de la isoforma PI3Ka, la PI3K5 contiene estos mismos residuos en las mismas posiciones y no se predice la selectividad potenciada por las isoformas de los inhibidores de oxazolidinona por estas estructuras cristalinas. Las diferencias sutiles en el posicionamiento y la orientación de la identidad del mismo residuo entre diferentes isoformas pueden resultar de cambios sutiles en la estructura proteica secundaria y terciaria. Estas diferencias son difíciles de predecir e interpretar, incluso frente a las estructuras cristalinas de rayos X de ambas isoformas de proteínas. Las sorprendentes e inesperadas propiedades de interacciones moleculares mejoradas y de selectividad potenciada por las isoformas de los inhibidores de oxazolidinona se conservan en todo el espectro de los compuestos ejemplificados en la tabla 1.

La oxazolidinona se diferencia estructuralmente del triazol en que la oxazolidinona tiene un carbonilo, es más polar y no tiene carácter aromático. El triazol no tiene un grupo carbonilo, es menos polar y tiene carácter aromático.

El anillo de oxazolidinona proporciona un beneficio adicional en relación con el anillo de triazol en términos de un carácter sp3 incrementado y un recuento de anillos aromáticos reducido. En general, se acepta en la literatura que un número incrementado de anillos aromáticos se correlaciona con un riesgo incrementado de unión promiscua. Por el contrario, un incremento de la fracción de carbonos sp3 (n.° de carbonos sp3/n.° total de carbonos) se correlaciona con propiedades fisicoquímicas mejoradas y con una unión promiscua disminuida, disminuyendo el riesgo de toxicidad colateral. Estos conceptos se describen en las referencias Lovering et al., "Escape From Flatland", (2009) J. Med. Chem., 52:6752-6756 y Ritchie y Macdonald, "Physicochemical Descriptors of Aromatic Character and Their Use in Drug Discovery", (2014) J. Med. Chem. 57:7206-7215. El reemplazo del anillo aromático de triazol como se ejemplifica por los compuestos representativos del documento US 8242104 por un anillo heterocíclico saturado, la oxazolidinona contenida en cada ejemplo de la invención, representa una disminución favorable del riesgo de toxicidad colateral. La totalidad de los compuestos ejemplificados en el documento US 8242104 están abrumadoramente poblados por compuestos con anillos aromáticos en esta posición, con 4 ejemplos de un grupo funcional carboxamida que reemplaza al anillo aromático y ningún ejemplo de sistemas cíclicos o heterocíclicos saturados. Debido a las interacciones de unión significativamente diferentes y a los requisitos estéricos de los heterociclos aromáticos y saturados, típicamente no son intercambiables. Sin ejemplos de sistemas heterocíclicos saturados en la posición 2 del anillo de 5.6- dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepina, el documento US 8242104 no proporciona ninguna orientación sobre un procedimiento para reemplazar el anillo aromático por un heterociclo saturado mientras que retiene la actividad contra PI3Ka.

En consecuencia, los compuestos de la invención contienen sustituyentes y funcionalidad optimizados en la 5.6- dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepina tanto en la posición 9 como en la posición 2. Estos compuestos optimizados proporcionan un beneficio significativo y hasta ahora desconocido con respecto a las interacciones moleculares mejoradas y una actividad selectiva incrementada contra PI3Ka, con una actividad reducida contra PI3K5. Los compuestos de la invención pueden ser útiles como agentes terapéuticos con un margen terapéutico potenciado en relación con agentes relacionados tales como taselisib (GDC-0032).

Inhibición selectiva de PI3Ka (alfa) mutante

Se determinó la capacidad del compuesto comprendido en la composición farmacéutica de la invención (y los demás compuestos de la presente solicitud) para actuar preferentemente contra las células que contienen PI3Ka mutante midiendo la inhibición de la vía de PI3K en líneas celulares isógenas SW48: PI3Ka natural (original), con mutación E545K de dominio helicoidal y con mutación H1047R de dominio cinasa, como se describe en los procedimientos del ejemplo 902.

Análisis estadístico: Los valores de CE50 representan la media geométrica de un mínimo de 4 experimentos independientes, a menos que se indique de otro modo. Todos los estadígrafos se realizaron usando el programa informático KaleidaGraph (versión 4.1.3). Se realizó una prueba de la t de Student usando datos no emparejados con igual varianza para comparar la actividad contra las células mutantes y las células naturales. Se considera que P < 0,05 es significativo.

La tabla 3A muestra la inhibición de P-PRAS40 en células isógenas SW48 por los compuestos de fórmula I de la tabla 1. Todos estos compuestos muestran una actividad incrementada contra las células con PI3Ka mutante en relación con las células con PI3Ka natural. Los compuestos de la invención muestran una actividad similar al taselisib en células SW48 con PI3Ka mutante, con una selectividad igual a o mayor que taselisib en relación con la actividad en las células con PI3Ka natural (véase la tabla 3B).

La tabla 3B muestra la inhibición de P-PRAS40 en células isógenas SW48 por determinados compuestos comparativos del documento US 8242104, un compuesto que tiene un grupo dimetiloxazolidin-2-ona del documento US 8263633 (compuesto 356, columna 149) y pictilisib. Los compuestos comparativos mostrados aquí en la tabla 3B son ejemplos de los géneros generales descritos en cada uno de los documentos US 8242104 y Us 8263633. Ni el documento US 8242104 ni el documento US 8263633 divulgan un compuesto dentro del alcance de los compuestos de fórmula I de la invención. Los compuestos comparativos contienen ejemplos que no tienen una actividad significativamente incrementada para las células con PI3Ka mutante en relación con las células con PI3Ka natural (véanse los compuestos comparativos 436 y 549, p > 0,05). Estos compuestos son muy similares estructuralmente a los compuestos comparativos que sí presentan una actividad significativamente incrementada para las células con PI3Ka mutante en relación con las células con PI3Ka natural (véase el compuesto comparativo 529). No existe ningún elemento estructural común dentro de los compuestos comparativos que proporcione orientación sobre la inhibición selectiva de las células con PI3Ka (alfa) mutante. En términos más generales, no existe ninguna orientación en los documentos US 8242104 o bien US 8263633 para realizar la selección de elementos estructurales de los compuestos de fórmula I para lograr una actividad incrementada o equivalente contra las células con PI3Ka mutante en relación con las células con PI3Ka natural. Esta propiedad inesperada se conserva en todo el espectro de los compuestos ejemplificados en la tabla 1.

Tabla 3A. Inhibición de P-PRAS40 en células isógenas SW48 por los compuestos de fórmula I

ref. quiere decir compuesto de referencia de fórmula I.

Tabla 3B. Inhibición de P-PRAS40 en células isógenas SW48 por compuestos comparativos

*CE50 representa un único experimento

Actividad antiproliferativa en células tumorales con PI3K mutante

Se determinó la capacidad de un compuesto de la invención para actuar sobre células tumorales con PI3K mutante midiendo la CE50 de viabilidad celular en células HCC1954 (PI3Ka con mutación H1047R) y células MCF7 (PI3Ka con mutación E545K) usando los procedimientos del ejemplo 903. La tabla 4 muestra que los compuestos de fórmula I representativos 101 y 103 de la invención pueden inhibir la vía de PI3K e inhibir la proliferación en células HCC1954 y células MCF7 con un nivel de potencia similar al de los compuestos comparativos taselisib (compuesto 196, documento US 8242104), pictilisib y compuesto 436 (documento Us 8242104).

Tabla 4. Actividad antiproliferativa de los compuestos contra PI3K en células tumorales con PI3K-alfa mutante

Eficacia in vivo

Las tablas 5-8 muestran datos de estudios de inhibición del crecimiento tumoral (ICT) in vivo con compuestos contra PI3K. Se midió el cambio en el volumen del tumor durante 20 días o más en cohortes de ratones inmunodeficientes con xenoinjertos de cáncer de mama, a los que se les administró diariamente por administración PO (oral) un vehículo y compuestos contra PI3K (ejemplo 904).

La tabla 5 muestra que, a las dosis máximas toleradas (DMT), GDC-0032 (taselisib), el compuesto 103 y el compuesto 101 (comprendidos por la composición farmacéutica de la presente invención) son cada uno más eficaces que alpelisib (BYL-719) en un modelo de tumor con PI3K mutante.

La tabla 6 muestra que, a dosis menores que la dosis máxima tolerada (es decir, 25 mg/kg), el compuesto 101 es más eficaz que GDC-0032 en un modelo de tumor con PI3K mutante. Existe la posibilidad de un mayor índice terapéutico (IT) con el compuesto 101 (comprendido por la composición farmacéutica de la presente invención), puesto que se alcanza la eficacia máxima antes que la tolerabilidad máxima.

La tabla 7 muestra que, a las dosis máximas toleradas, se observan respuestas incrementadas (RP y RC) con el compuesto 101 en comparación con GDC-0032 en un modelo de tumor con PI3K mutante. Además, a las dosis máximas toleradas, GDC-0032 y BYL-719 son igualmente eficaces.

La tabla 8 muestra que, a las dosis máximas toleradas, GDC-0032 y el compuesto 101 son más eficaces que BYL-719, y que el compuesto 101 (de la presente invención) es aproximadamente tan eficaz como GDC-0032 en un modelo de tumor con PI3K mutante.

Tabla 5. Comparación de las dosis máximas toleradas (DMT) de compuestos contra PI3K en el modelo de xenoinjerto de mama HCC-1954xl (RE-, PI3KH1047R)

Tabla 6. Estudio de búsqueda de dosis del compuesto 101 en el modelo de xenoinjerto de mama HCC-1954xl (RE-, PI3KH1047R)

Tabla 7. Estudio de búsqueda de dosis del compuesto 101 en el modelo de xenoinjerto de mama KPL-4 (RE-, PI3KH1047R)

Tabla 8. Comparación de GDC-0032, compuesto 101 y BYL-719 en el modelo de xenoinjerto PDX de mama HCI-003 (RE+, PI3KH1047R)

Inhibición de la vía en linfocitos B aislados

Se evaluó la capacidad de un compuesto de la invención para inhibir la vía de PI3K en linfocitos B por la influencia de los compuestos sobre los niveles de CD69 después del tratamiento agonista con a-IgM usando los procedimientos del ejemplo 906. Se cree que la expresión de CD69 en linfocitos B resultante del tratamiento con a-IgM está dirigida por la señalización a través de PI3K5 (delta). La tabla 9 muestra que los compuestos de fórmula 1 representativos son inhibidores más selectivos de la señalización de la vía en una línea con PI3K mutante (SW48 (H1047R)) frente a linfocitos B (columna 3) en comparación con taselisib, pictilisib, alpelisib, compuesto 436 (documento US US8242104) e idelalisib.

Tabla 9. Inhibición de la expresión de CD69 en linfocitos B por compuestos seleccionados.

*CI50 de expresión de CD69 medida en sangre completa humana y corregida multiplicando por la fu humana medida de un experimento de unión a proteínas plasmáticas.

Inhibición de la vía en células tumorales con PI3K mutante y natural

Se evaluó la capacidad de un compuesto de la invención para inhibir la señalización de la vía de PI3K en células tumorales midiendo los niveles de p-PRAS40 en las líneas HCC1954 (PI3Ka con mutación H1047R) y HDQ-P1 (PI3Ka natural), usando los procedimientos del ejemplo 907. La tabla 10 muestra que los compuestos de fórmula 1 representativos 101, 103 y 105 pueden inhibir selectivamente la vía de PI3K en células tumorales con PI3Ka mutante (HCC1954, PI3Ka con mutación H1047R) frente a PI3Ka natural (HDQ-P1, PI3Ka natural). Los compuestos 101, 103 y 105 tienen una mayor selectividad por el mutante frente a la forma natural que los compuestos comparativos taselisib, pictilisib, alpelisib y el compuesto 436 (documento US8242104).

Tabla 10. Inhibición de p-PRAS40 en líneas HCC1954 y HDQ-P1 por compuestos seleccionados.

Degradación de p110a en células tumorales con PI3K mutante

Se determinó la capacidad de un compuesto de la invención para disminuir los niveles de p110a en experimentos con las líneas HCC1954 (PI3Ka con mutación H1047R) y HDQ-P1 (PI3Ka natural), usando los procedimientos del ejemplo 905. Las figuras 3A y 3B muestran los compuestos de fórmula 1 representativos 101 y 103 que pueden promover la reducción de los niveles de p110a selectivamente en células tumorales con PI3K mutante (HCC1954, PI3Ka con mutación H1047R) frente a PI3Ka natural (HDQ-P1, PI3Ka natural) de manera dependiente de la concentración. La figura 3A muestra datos de inmunoelectrotransferencia que representan los niveles de p110a (p110a, p110 alfa) después de un tratamiento de 24 horas con el compuesto 101, el compuesto 103 y el compuesto 436 del documento US 8242104 en células HCC-1954 (PI3Ka con mutación H1047R). La figura 3B muestra datos de inmunoelectrotransferencia que representan los niveles de p110a (p110a, p110 alfa) después de un tratamiento de 24 horas con el compuesto 101, el compuesto 103 y el compuesto 436 del documento US 8242104 en células HDQ-P1 (PI3Ka natural). Los compuestos 101 y 103 influyen más fuertemente en los niveles de p110a en comparación con el compuesto 436 (documento US8242104).

Dosificación oral durante múltiples días en perros

Se evaluó la capacidad del compuesto de la invención y de los demás compuestos de fórmula de referencia) para promover la inflamación gastrointestinal y/o sistémica o provocar disminución linfática por medio de evaluación de medicina de laboratorio y anatomía patológica después de la dosificación durante múltiples días en perros Beagle (7-14 días). Los compuestos de fórmula 1 101 y 103 a múltiplos de exposición libre >5 veces superior a ICT60 (inhibición del crecimiento tumoral de un 60 % en un estudio de xenoinjerto con PI3K mutante) no promueven una firma proinflamatoria como se determina por la evaluación de medicina de laboratorio o anatmía patológica (tabla 11a, 11b). De forma similar, los compuestos 101 y 103 producen solo cantidades menores de disminución linfática a altos múltiplos de exposición. Por el contrario, los experimentos con el compuesto comparativo taselisib indican efectos proinflamatorios significativos y disminución linfática a una exposición libre <0,3 veces superior a ICT60 (tabla 11c). Los compuestos comparativos alpelisib (BYL-719) y compuesto 436 (documento US8242104) también provocan inflamación y disminución linfática a múltiplos de exposición menores en comparación con los compuestos de fórmula 1101 y 103 (tabla 11d y 11 e). El grado y la gravedad de los hallazgos son consecuentes con el incremento de la inhibición de PI3K5 (delta) a múltiplos de exposición superiores a CI⁵⁰ de CD69 para los compuestos comparativos.

Tabla 11. Dosificación durante múltiples días de compuestos de fórmula 1 y comparativos en perros.

(a)

Fu perro = 0,692; Fu ratón = 0,252 (Fu = fracción no unida en plasma de la especie)

* Múltiplos de exposición usando ICT60 de un estudio de xenoinjerto de KPL4 de 21 días; ICT60 a 2 mg/kg, 1,04 |jM h total, 0,26 |jM h libre

**CI50 de expresión de CD69 estimulada por a-IgM (sangre completa) = 67 nM

Hallazgos relacionados con la inflamación y los órganos linfáticos

(b)

Fu perro = 0,507; Fu ratón = 0,03 (Fu = fracción no unida en plasma de la especie)

* Múltiplos de exposición usando ICT60 de un estudio de ICT en HCC1954 de 21 días; ICT60 a 3 mg/kg, 1,13 j M h total, 0,03 j M h libre

**CI ⁵⁰ de expresión de CD69 estimulada por a-IgM (sangre completa) = 142 nM

Hallazgos relacionados con la inflamación y los órganos linfáticos

(c)

Fu perro = 0,28; Fu ratón = 0,10 (Fu = fracción no unida en plasma de la especie)

* Múltiplos de exposición usando ICT60 de un estudio de xenoinjerto de KPL4 de 21 días; ICT60 a 4,3 uM h (total) o 0,44 uM h libre

** CI⁵⁰ de expresión de CD69 estimulada por a-IgM (sangre completa) = 3,1 nM

Hallazgos relacionados con la inflamación y los órganos linfáticos

(d)

Fu perro = 0,68; Fu ratón = 0,36 (Fu = fracción no unida en plasma de la especie)

* Múltiplos de exposición usando ICT60 de un estudio de xenoinjerto de KPL4 de 21 días; ICT60 a 2,8 uM h total o 1,0 uM h libre

**CI50 de expresión de CD69 estimulada por a-IgM (sangre completa) = 45 nM

Hallazgos relacionados con la inflamación y los órganos linfáticos

(e)

Fu perro = 0,072; Fu ratón = 0,082 (Fu = fracción no unida en plasma de la especie)

* Múltiplos de exposición usando ICT60 de un estudio de xenoinjerto de KPL4 de 21 días; ICT60 a 72 uM h (total) o 5,9 uM h (libre)

**CI ⁵⁰ de expresión de CD69 estimulada por a-IgM (sangre completa) = 613 nM

Hallazgos relacionados con la inflamación y los órganos linfáticos

Adm inistración de los compuestos de fórm ula I

El compuesto de la invención y los demás compuestos de fórmula I se pueden administrar por cualquier vía apropiada a la afección que se va a tratar. Las vías adecuadas incluyen oral, parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intrarterial, intradérmica, intratecal y epidural), transdérmica, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal. Para el tratamiento inmunodepresor local, los compuestos se pueden administrar por administración intralesional, incluyendo perfusión, o de otro modo poniendo en contacto el injerto con el inhibidor antes del trasplante. Se apreciará que la vía preferente puede variar, por ejemplo, con la afección del receptor. Cuando el compuesto se administra por vía oral, se puede formular como una pastilla, cápsula, comprimido, etc., con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Si el compuesto se administra por vía parenteral, se puede formular con un vehículo parenteral farmacéuticamente aceptable y en una forma inyectable de dosificación unitaria, como se detalla a continuación.

Una dosis para tratar a pacientes humanos puede variar de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1000 mg de compuesto de fórmula I. Una dosis típica puede ser de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 300 mg del compuesto. Se puede administrar una dosis una vez al día (QID), dos veces por día (BID) o con más frecuencia, dependiendo de las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas, incluyendo absorción, distribución, metabolismo y excreción del compuesto particular. Además, los factores de toxicidad pueden influir en la dosificación y pauta de administración. Cuando se administra por vía oral, la pastilla, cápsula o comprimido se puede ingerir diariamente o con menos frecuencia durante un período de tiempo especificado. La pauta se puede repetir durante una serie de ciclos de tratamiento.

Procedimientos de tratamiento con los compuestos de fórm ula I

Los compuestos de fórmula I y el compuesto 101 de la presente invención son útiles para tratar a un paciente humano o animal que padece una enfermedad o trastorno que surge del crecimiento, función o comportamiento celular anómalo asociado con PI3K, tal como cáncer, que, por tanto, se puede tratar por un procedimiento que comprende la administración al mismo de un compuesto de la presente invención como se define anteriormente. Un paciente humano o animal que padece cáncer también se puede tratar por un procedimiento que comprende la administración al mismo de un compuesto de la presente invención como se define anteriormente. De este modo, la afección del paciente se puede mejorar o aliviar.

Los procedimientos de la invención también incluyen tratar un cáncer seleccionado de mama, ovario, cuello uterino, próstata, testículos, aparato genitourinario, esófago, laringe, glioblastoma, neuroblastoma, estómago, piel, queratoacantoma, pulmón, carcinoma epidermoide, carcinoma de células grandes, carcinoma de pulmón no microcítico (CPNM), carcinoma microcítico, adenocarcinoma de pulmón, óseo, colon, adenoma, páncreas, adenocarcinoma, tiroides, carcinoma folicular, carcinoma no diferenciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma de vejiga, carcinoma de hígado y conductos biliares, carcinoma de riñón, pancreático, trastornos mielocíticos, linfoma, tricoleucocitos, cavidad bucal, nasofaríngeo, faringe, labio, lengua, boca, intestino delgado, colon-recto, intestino grueso, recto, cerebro y sistema nervioso central, leucemia hodgkiniana, bronquios, tiroides, hígado y conductillo biliar intrahepático, hepatocelular, gástrico, glioma/glioblastoma, endometrial, melanoma, riñón y pelvis renal, vejiga urinaria, cuerpo uterino, cuello uterino, mieloma múltiple, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica, leucemia linfática crónica (LLC), leucemia mielocítica, cavidad oral y faringe, linfoma no hodgkiniano, melanoma y adenoma de colon velloso.

En base al análisis de expresión, el análisis inmunohistoquímico y el perfil de la línea celular, las neoplasias malignas de colon, mama, cuello uterino, estómago, pulmón y mieloma múltiple tienen más probabilidades de responder a los moduladores o inhibidores de PI3K.

La invención se refiere a una composición farmacéutica como se describe en el presente documento para su uso en el tratamiento del cáncer de mama.

La invención se refiere a una composición farmacéutica como se describe en el presente documento, en la que el cáncer de mama es un cáncer de mama positivo para receptores hormonales (RH+) que expresa una mutación de PI3KCA.

La invención se refiere a una composición farmacéutica como se describe en el presente documento, en la que el cáncer de mama expresa una mutación de PIK3CA seleccionada de E542K, E545K, Q546R, H1047L y H1047R.

Formulaciones farmacéuticas

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden el compuesto 101 descrito anteriormente) para el tratamiento terapéutico de mamíferos incluyendo seres humanos, se formula normalmente de acuerdo con la práctica farmacéutica estándar como una composición farmacéutica. De acuerdo con este aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención en asociación con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Una formulación típica se prepara mezclando un compuesto de la presente invención y un vehículo, diluyente o excipiente. Los vehículos, diluyentes y excipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen materiales tales como carbohidratos, ceras, polímeros hidrosolubles y/o hinchables, materiales hidrófilos o hidrófobos, gelatina, aceites, disolventes, agua y similares. El vehículo, diluyente o excipiente particular usado dependerá de los medios y el propósito con el que se aplica el compuesto de la presente invención. Los disolventes se seleccionan en general en base a disolventes reconocidos por los expertos en la técnica como seguros (GRAS) para administrarse a un mamífero. En general, los disolventes seguros son disolventes acuosos no tóxicos tales como agua y otros disolventes no tóxicos que son solubles o miscibles en agua. Los disolventes acuosos adecuados incluyen agua, etanol, propilenglicol, polietilenglicoles (por ejemplo, PEG 400, PEG 300), etc., y mezclas de los mismos. Las formulaciones también pueden incluir uno o más tampones, agentes estabilizantes, tensioactivos, agentes humectantes, agentes lubricantes, emulsionantes, agentes de suspensión, conservantes, antioxidantes, agentes opacificantes, agentes fluidizantes, coadyuvantes tecnológicos, colorantes, edulcorantes, agentes perfumantes, agentes saborizantes y otros aditivos conocidos para proporcionar una presentación elegante del fármaco (es decir, un compuesto de la presente invención o composición farmacéutica del mismo) o para ayudar en la fabricación del producto farmacéutico (es decir, el medicamento).

Las formulaciones se pueden preparar usando procedimientos de disolución y mezcla convencionales. Por ejemplo, el principio activo (es decir, un compuesto de la presente invención o forma estabilizada del compuesto (por ejemplo, complejo con un derivado de ciclodextrina u otro agente de formación de complejos conocido) se disuelve en un disolvente adecuado en presencia de uno o más de los excipientes descritos anteriormente. El compuesto de la presente invención se formula típicamente en formas de dosificación farmacéuticas para proporcionar una dosificación fácilmente controlable del fármaco y para posibilitar el cumplimiento por parte del paciente de la pauta prescrita.

La composición (o formulación) farmacéutica para su aplicación se puede envasar en una variedad de formas dependiendo del procedimiento usado para administrar el fármaco. En general, un artículo para su distribución incluye un recipiente en el que se ha depositado la formulación farmacéutica en una forma apropiada. Los recipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen materiales tales como frascos (de plástico y vidrio), sobres, ampollas, bolsas de plástico, cilindros de metal y similares. El recipiente también puede incluir un ensamblaje a prueba de manipulación para evitar el acceso indiscreto al contenido del envase. Además, en el recipiente se ha depositado una ficha técnica que describe el contenido del recipiente. La ficha técnica también puede incluir advertencias apropiadas.

Se pueden preparar formulaciones farmacéuticas de los compuestos de la presente invención para diversas vías y tipos de administración. Por ejemplo, un compuesto de fórmula I que tenga el grado deseado de pureza se puede mezclar opcionalmente con diluyentes, vehículos, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16.a edición, ed. Osol, A.), en forma de formulación liofilizada, polvo molido o solución acuosa. La formulación se puede llevar a cabo mezclando a temperatura ambiente, al pH apropiado y en el grado deseado de pureza, con vehículos fisiológicamente aceptables, es decir, vehículos que no son tóxicos para los receptores a las dosificaciones y concentraciones empleadas. El pH de la formulación depende principalmente del uso particular y de la concentración de compuesto, pero puede variar de aproximadamente 3 a aproximadamente 8. La formulación en un tampón acetato a pH 5 es un modo de realización adecuado.

El compuesto se puede almacenar habitualmente como una composición sólida, una formulación liofilizada o como una solución acuosa.

Las composiciones farmacéuticas de la invención se formularán, dosificarán y administrarán de un modo, es decir, cantidades, concentraciones, programas, ciclos, vehículos y vía de administración, consecuente con la buena práctica médica. Los factores para su consideración en este contexto incluyen el trastorno particular que se trata, el mamífero particular que se trata, el estado clínico del paciente individual, la causa del trastorno, el sitio de administración del agente, el procedimiento de administración, la programación de la administración y otros factores conocidos por los médicos. La "cantidad terapéuticamente eficaz" del compuesto que se va a administrar se regirá por dichas consideraciones, y es la cantidad mínima necesaria para mejorar o tratar el trastorno hiperproliferativo.

Como proposición general, la cantidad farmacéuticamente eficaz inicial del inhibidor administrado por dosis por vía parenteral estará en el intervalo de aproximadamente 0,01-100 mg/kg, a saber, de aproximadamente 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal del paciente por día, siendo el intervalo inicial típico del compuesto usado de 0,3 a 15 mg/kg/día.

Los diluyentes, vehículos, excipientes y estabilizantes aceptables no son tóxicos para los receptores en las dosificaciones y concentraciones empleadas, e incluyen tampones, tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes, incluyendo ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; fenol, alcohol butílico o bencílico; alquilparabenos, tales como metil- o propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como seroalbúmina, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos, tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos, incluyendo glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes, tales como EDTA; glúcidos, tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sales, tales como sodio; complejos de metal (por ejemplo, complejos Zn-proteína); y/o tensioactivos no iónicos, tales como TWEEN™, PLURONlCS™ o polietilenglicol (PEG). Los ingredientes farmacéuticos activos también se pueden atrapar en microcápsulas preparadas, por ejemplo, por técnicas de coacervación o por polimerización interfacial, por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli(metacrilato de metilo), respectivamente, en sistemas de administración de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. Dichas técnicas se divulgan en Remington's Pharmaceutical Sciences 16.a edición, ed. Osol, A. (1980).

Se pueden preparar preparaciones de liberación mantenida de los compuestos de fórmula I (incluyendo el compuesto 101). Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación mantenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen un compuesto de fórmula I, estando las matrices en forma de artículos conformados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Los ejemplos de matrices de liberación mantenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(metacrilato de 2-hidroxietilo) o poli(alcohol vinílico)), polilactidas (documento US 3773919), copolímeros de ácido L-glutámico y L-glutamato de gamma-etilo, copolímeros de etileno-acetato de vinilo no degradables, de ácido láctico-ácido glicólico degradables, tales como LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprorrelina) y ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico.

Las formulaciones incluyen las adecuadas para las vías de administración detalladas en el presente documento. Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en una forma farmacéutica unitaria y se pueden preparar por cualquiera de los procedimientos bien conocidos en la técnica de la farmacia. Las técnicas y formulaciones se encuentran, en general, en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Dichos procedimientos incluyen la etapa de asociar el ingrediente activo con el vehículo que constituye uno o más ingredientes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan asociando uniforme y estrechamente el ingrediente activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y, a continuación, si fuera necesario, conformando el producto.

Se pueden preparar formulaciones de un compuesto de fórmula I adecuadas para su administración oral como unidades discretas, tales como pastillas, cápsulas, sellos o comprimidos, conteniendo cada una una cantidad predeterminada de un compuesto de fórmula I. Se pueden preparar comprimidos prensados comprimiendo el ingrediente activo en una máquina adecuada en una forma de flujo libre, tal como un polvo o gránulos, mezclada opcionalmente con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, conservante, tensioactivo o agente dispersante. Se pueden preparar comprimidos moldeados moldeando en una máquina adecuada una mezcla del ingrediente activo en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos pueden estar opcionalmente recubiertos o ranurados y están formulados opcionalmente para proporcionar una liberación retardada o controlada del ingrediente activo a partir de los mismos. Se pueden preparar comprimidos, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas o en aceite, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, por ejemplo, cápsulas de gelatina, jarabes o elixires para su uso oral. Se pueden preparar formulaciones de los compuestos de fórmula I pretendidas para su uso oral de acuerdo con cualquier procedimiento conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas y dichas composiciones pueden contener uno o más agentes, incluyendo agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, para proporcionar una preparación de sabor agradable. Son aceptables los comprimidos que contienen el ingrediente activo en mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable no tóxico que sean adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio o de sodio, lactosa, fosfato de calcio o de sodio; agentes de granulación y disgregación, tales como almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, tales como almidón, gelatina o goma arábiga; y agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden estar no recubiertos o se pueden recubrir por técnicas conocidas, incluyendo microencapsulación, para retrasar su disgregación y adsorción en el tubo gastrointestinal y, de este modo, proporcionar una acción mantenida durante un período más largo. Por ejemplo, se puede emplear un material de retraso temporal, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, en solitario o con una cera.

Para el tratamiento del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo, boca y piel, las formulaciones se aplican preferentemente como una pomada o crema tópica que contiene el/los ingrediente(s) activo(s) en una cantidad, por ejemplo, de un 0,075 a un 20 % p/p. Cuando se formulan en una pomada, los ingredientes activos se pueden emplear con una base de pomada parafínica o bien una miscible en agua. De forma alternativa, los ingredientes activos se pueden formular en una crema con una base de crema de aceite en agua. Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir un polialcohol, es decir, un alcohol que tiene dos o más grupos hidroxilo, tales como propilenglicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol (incluyendo PEG 400) y mezclas de los mismos. Las formulaciones tópicas pueden incluir de forma deseable un compuesto que potencie la absorción o penetración del ingrediente activo a través de la piel u otras áreas afectadas. Los ejemplos de dichos potenciadores de la penetración dérmica incluyen dimetilsulfóxido y análogos relacionados. La fase oleosa de las emulsiones de la presente invención se puede constituir a partir de ingredientes conocidos de manera conocida. Si bien la fase puede comprender simplemente un emulsionante, deseablemente comprende una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o con tanto una grasa como un aceite. Preferentemente, se incluye un emulsionante hidrófilo conjuntamente con un emulsionante lipófilo que actúa como estabilizante. También es preferente incluir tanto un aceite como una grasa. Conjuntamente, el/los emulsionante(s) con o sin estabilizante(s) constituyen la llamada cera emulsionante, y la cera conjuntamente con el aceite y la grasa constituyen la llamada base de pomada emulsionante que forma la fase dispersada oleosa de las formulaciones de las cremas. Los emulsionantes y estabilizantes de emulsiones adecuados para su uso en la formulación de la invención incluyen Tween® 60, Span® 80, alcohol cetoestearílico, alcohol bencílico, alcohol miristílico, monoestearato de glicerilo y laurilsulfato de sodio.

Las suspensiones acuosas de compuestos de fórmula I contienen los materiales activos en mezcla con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Dichos excipientes incluyen un agente de suspensión, tal como carboximetilcelulosa, croscarmelosa, povidona, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa de sodio, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma arábiga, y agentes dispersantes o humectantes, tales como un fosfoglicérido natural, (por ejemplo, lecitina), un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso (por ejemplo, estearato de polioxietileno), un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol alifático de cadena larga (por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol), un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y un anhídrido de hexitol (por ejemplo, monooleato de sorbitán polioxietilenado). La suspensión acuosa también puede contener uno o más conservantes, tales como p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina.

Las composiciones farmacéuticas de los compuestos de fórmula I pueden estar en forma de una preparación inyectable estéril, tal como una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular de acuerdo con la técnica conocida usando los agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente aceptable por vía parenteral no tóxico, tal como una solución en 1,3-butanodiol o preparada como un polvo liofilizado. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear están agua, solución de Ringer y solución de cloruro de sodio isotónica. Además, se pueden emplear convencionalmente aceites fijos estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este propósito, se puede emplear cualquier aceite fijo insípido, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, igualmente se pueden usar ácidos grasos, tales como ácido oleico, en la preparación de inyectables.

La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con el material de vehículo para producir una única forma farmacéutica variará dependiendo del huésped tratado y del modo de administración particular. Por ejemplo, una formulación de liberación prolongada pretendida para administración oral a seres humanos puede contener de aproximadamente 1 a 1000 mg de material activo formulado con una cantidad apropiada y conveniente de material de vehículo que puede variar de aproximadamente un 5 a aproximadamente un 95 % de las composiciones totales (peso:peso). La composición farmacéutica se puede preparar para proporcionar cantidades fácilmente mensurables para su administración. Por ejemplo, una solución acuosa pretendida para infusión intravenosa puede contener de aproximadamente 3 a 500 |jg del ingrediente activo por mililitro de solución para que se pueda producir la infusión de un volumen adecuado a una tasa de aproximadamente 30 ml/h.

Las formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones inyectables estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor pretendido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes.

Las formulaciones adecuadas para administración tópica en el ojo también incluyen colirio, en el que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un vehículo adecuado, especialmente un disolvente acuoso para el ingrediente activo. El ingrediente activo está presente preferentemente en dichas formulaciones en una concentración de aproximadamente un 0,5 a un 20 % p/p, por ejemplo, de aproximadamente un 0,5 a un 10 % p/p, por ejemplo, de aproximadamente un 1,5 % p/p.

Las formulaciones adecuadas para administración tópica en la boca incluyen pastillas para chupar que comprenden el ingrediente activo en una base saborizada, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga; y colutorios que comprenden el ingrediente activo en un vehículo líquido adecuado.

Las formulaciones para administración rectal se pueden presentar como un supositorio con una base adecuada que comprenda, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.

Las formulaciones adecuadas para administración intrapulmonar o nasal tienen un tamaño de partícula, por ejemplo, en el intervalo de 0,1 a 500 micrómetros (incluyendo tamaños de partícula en un intervalo entre 0,1 y 500 micrómetros en incrementos de micrómetros, tales como 0,5, 1, 30 micrómetros, 35 micrómetros, etc.), que se administra por inhalación rápida a través de las fosas nasales o por inhalación a través de la boca para alcanzar los sacos alveolares. Las formulaciones adecuadas incluyen soluciones acuosas u oleosas del ingrediente activo. Se pueden preparar formulaciones adecuadas para administración en aerosol o polvo seco de acuerdo con procedimientos convencionales y se pueden administrar con otros agentes terapéuticos, tales como los compuestos usados hasta ahora en el tratamiento o profilaxis de trastornos como se describe a continuación.

Las formulaciones adecuadas para administración vaginal se pueden presentar como óvulos vaginales, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones para pulverización que contengan, además del ingrediente activo, dichos vehículos, que son conocidos en la técnica por ser apropiados.

Las formulaciones se pueden envasar en recipientes de dosis unitarias o dosis múltiples, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y se pueden almacenar en una condición secada por congelación (liofilizada) que solo requiera la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua, para su inyección de inmediato antes de su uso. Las soluciones y suspensiones inyectables preparadas en el momento de su uso se preparan a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles de la clase descrita previamente. Las formulaciones de dosificación unitaria preferentes son las que contienen una dosis diaria o subdosis diaria unitaria, como se enumera anteriormente en el presente documento, o una fracción apropiada de la misma, del ingrediente activo.

Por lo tanto, la invención proporciona además composiciones veterinarias que comprenden al menos un ingrediente activo como se define anteriormente conjuntamente con un vehículo veterinario. Los vehículos veterinarios son materiales útiles para el propósito de administrar la composición y pueden ser materiales sólidos, líquidos o gaseosos, que de otro modo son inertes o aceptables en la técnica veterinaria y son compatibles con el ingrediente activo. Estas composiciones veterinarias se pueden administrar por vía parenteral, oral o por cualquier otra vía deseada.

La invención también se refiere a una composición farmacéutica como se describe en el presente documento, en la que el vehículo, fluidificante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable se selecciona de dióxido de silicio, celulosa en polvo, celulosa microcristalina, estearatos metálicos, aluminosilicato de sodio, benzoato de sodio, carbonato de calcio, silicato de calcio, almidón de maíz, carbonato de magnesio, talco sin amianto, Stear-O-Wet C, almidón, almidón 1500, laurilsulfato de magnesio, óxido de magnesio y combinaciones de los mismos.

La presente invención también se refiere a un procedimiento para preparar una composición farmacéutica que comprende combinar un compuesto, que es

0 una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con un vehículo, fluidificante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Politerapia

Los compuestos de fórmula I se pueden emplear solos o en combinación con agentes terapéuticos adicionales para el tratamiento de una enfermedad o trastorno descrito en el presente documento, tal como inflamación o un trastorno hiperproliferativo (por ejemplo, cáncer). En determinados modos de realización, un compuesto de fórmula 1 se combina en una formulación de combinación farmacéutica, o pauta posológica como politerapia, con un segundo compuesto terapéutico adicional que tiene propiedades antinflamatorias o antihiperproliferativas o que es útil para tratar una inflamación, trastorno de la respuesta inmunitaria o trastorno hiperproliferativo (por ejemplo, cáncer). El agente terapéutico adicional puede ser un inhibidor de Bcl-2, un inhibidor de JAK, un agente antinflamatorio, un agente inmunomodulador, agente quimioterápico, un potenciador de la apoptosis, un factor neurotrópico, un agente para tratar una cardiovasculopatía, un agente para tratar una hepatopatía, un agente antivírico, un agente para tratar trastornos sanguíneos, un agente para tratar la diabetes y un agente para tratar trastornos de inmunodeficiencia. El segundo agente terapéutico puede ser un agente antinflamatorio AINE. El segundo agente terapéutico puede ser un agente quimioterápico. El segundo compuesto de la formulación de combinación farmacéutica o pauta posológica tiene preferentemente actividades complementarias al compuesto de fórmula I, de modo que no se ven afectados de forma adversa entre sí. Dichos compuestos están presentes adecuadamente en combinación en cantidades que son eficaces para el propósito pretendido. En un modo de realización, una composición de la presente invención comprende un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, tautómero, solvato, metabolito o sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un agente terapéutico, tal como un AINE.

La politerapia se puede administrar como una pauta simultánea o secuencial. Cuando se administra secuencialmente, la combinación se puede administrar en dos o más administraciones. La administración combinada incluye la coadministración, usando formulaciones separadas o una única formulación farmacéutica, y la administración consecutiva en cualquier orden, en la que preferentemente existe un período de tiempo durante el que ambos (o todos los) agentes activos ejercen simultáneamente sus actividades biológicas.

Las dosificaciones adecuadas para cualquiera de los agentes coadministrados anteriores son las usadas actualmente y se pueden reducir debido a la acción combinada (sinergia) del agente recién identificado y otros agentes o tratamientos terapéuticos.

La politerapia puede proporcionar "sinergia" y demostrar ser "sinérgica", es decir, el efecto logrado cuando los ingredientes activos usados conjuntamente es mayor que la suma de los efectos que resultan de usar los compuestos por separado. Se puede conseguir un efecto sinérgico cuando los ingredientes activos se: (1) coformulan y administran o suministran simultáneamente en una formulación de dosificación unitaria combinada; (2) suministran por alternancia o en paralelo como formulaciones separadas; o (3) por alguna otra pauta. Cuando se suministran en un tratamiento de alternancia, se puede conseguir un efecto sinérgico cuando los compuestos se administran o suministran secuencialmente, por ejemplo, por diferentes inyecciones en jeringuillas separadas, pastillas o cápsulas separadas, o infusiones separadas. En general, durante el tratamiento de alternancia, se administra secuencialmente una dosificación eficaz de cada ingrediente activo, es decir, en serie, mientras que, en la politerapia, las dosificaciones eficaces de dos o más ingredientes activos se administran conjuntamente.

En un modo de realización particular del tratamiento, un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, tautómero, solvato, metabolito o sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, se puede combinar con otros agentes terapéuticos, hormonales o de anticuerpos, tales como los descritos en el presente documento, así como combinar con tratamiento quirúrgico y radioterapia. Las politerapias de acuerdo con la presente invención comprenden, por tanto, la administración de al menos un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, tautómero, solvato, metabolito o sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, y el uso de al menos otro procedimiento de tratamiento del cáncer. Las cantidades del/de los compuesto(s) de fórmula I y del/de los otro(s) agente(s) terapéutico(s) farmacéuticamente activo(s) y los momentos de administración relativos se seleccionarán para lograr el efecto terapéutico combinado deseado.

Los agentes terapéuticos adicionales empleados en combinación con un compuesto de fórmula I incluyen 5-FU, docetaxel, eribulina, gemcitabina, cobimetinib, ipatasertib, paclitaxel, tamoxifeno, fulvestrant, GDC-0810, dexametasona, palbociclib, bevacizumab, pertuzumab, trastuzumab emtansina, trastuzumab y letrozol.

Metabolitos de compuestos de fórm ula I

También entran dentro del alcance de la presente solicitud los productos metabólicos in vivo de fórmula I descritos en el presente documento. Dichos productos pueden resultar por ejemplo de la oxidación, reducción, hidrólisis, amidación, desamidación, esterificación, desesterificación, escisión enzimática y similares, del compuesto administrado. En consecuencia, la invención incluye metabolitos de los compuestos de fórmula I, incluyendo los compuestos producidos por un procedimiento que comprende poner en contacto un compuesto de la presente invención con un mamífero durante un período de tiempo suficiente para proporcionar un producto metabólico del mismo.

Se identifican típicamente productos metabólicos preparando un isótopo radiomarcado (por ejemplo, 14C o 3H) de un compuesto de la invención, administrándolo por vía parenteral en una dosis detectable (por ejemplo, mayor de aproximadamente 0,5 mg/kg) a un animal, tal como rata, ratón, cobaya, mono, o al hombre, permitiendo el tiempo suficiente para que se produzca el metabolismo (típicamente, de aproximadamente 30 segundos a 30 horas) y aislando sus productos de conversión de la orina, sangre u otras muestras biológicas. Estos productos se aíslan fácilmente, puesto que están marcados (otros se aíslan por el uso de anticuerpos que se pueden unir a epítopos que sobreviven en el metabolito). Las estructuras de los metabolitos se determinan de modo convencional, por ejemplo, por análisis por EM, CL/EM o RMN. En general, se realiza el análisis de los metabolitos de la misma forma que los estudios del metabolismo de fármacos convencionales bien conocidos por los expertos en la técnica. Los productos metabólicos, siempre que no se encuentren de otro modo in vivo, son útiles en ensayos de diagnóstico para la dosificación terapéutica de los compuestos de la solicitud.

Artícu los de fabricación

En otro modo de realización de la solicitud, se proporciona un artículo de fabricación, o "kit", que contiene materiales útiles para el tratamiento de las enfermedades y trastornos descritos anteriormente. En un modo de realización, el kit comprende un recipiente que comprende un compuesto de fórmula I, o un estereoisómero, tautómero, solvato, metabolito o sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. El kit puede comprender además una ficha técnica o prospecto del envase en o asociado con el recipiente. El término "prospecto del envase" se usa para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en los envases comerciales de productos terapéuticos que contienen información sobre las indicaciones, uso, dosificación, administración, contraindicaciones y/o advertencias en relación con el uso de dichos productos terapéuticos. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, frascos, viales, jeringuillas, envases alveolados, etc. El recipiente se puede formar a partir de una variedad de materiales, tales como vidrio o plástico. El recipiente puede contener un compuesto de fórmula I o una formulación del mismo que es eficaz para tratar la afección y puede tener una vía de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica). Al menos un agente activo de la composición es un compuesto de fórmula I. La ficha técnica o prospecto del envase indica que la composición se usa para tratar la afección de elección, tal como cáncer. Además, la ficha técnica o prospecto del envase pueden indicar que el paciente que se va a tratar es uno que tiene un trastorno, tal como un trastorno hiperproliferativo, neurodegeneración, hipertrofia cardíaca, dolor, migraña o una enfermedad o acontecimiento neurotraumático. En un modo de realización, la ficha técnica o prospectos del envase indica que la composición que comprende un compuesto de fórmula I se puede usar para tratar un trastorno que resulta de un crecimiento celular anómalo. La ficha técnica o prospecto del envase también puede indicar que la composición se puede usar para tratar otros trastornos. De forma alternativa, o adicionalmente, el artículo de fabricación puede comprender además un segundo recipiente que comprende un tampón farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyectables (BWFI), solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir además otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y de usuario, incluyendo otros tampones, diluyentes, filtros, agujas y jeringuillas.

El kit puede comprender además instrucciones para la administración del compuesto de fórmula I y, si está presente, la segunda formulación farmacéutica. Por ejemplo, si el kit comprende una primera composición que comprende un compuesto de fórmula I y una segunda formulación farmacéutica, el kit puede comprender además instrucciones para la administración simultánea, secuencial o separada de las primera y segunda composiciones farmacéuticas a un paciente que lo necesite.

En otro modo de realización, los kits son adecuados para la administración de formas orales sólidas de un compuesto de fórmula I, tales como comprimidos o cápsulas. Un kit de este tipo incluye preferentemente una serie de dosificaciones unitarias. Dichos kits pueden incluir una tarjeta que tiene las dosificaciones orientadas en el orden de su uso pretendido. Un ejemplo de un kit de este tipo es un "envase alveolado". Los envases alveolados son bien conocidos en la industria del envasado y se usan ampliamente para envasar formas farmacéuticas unitarias. Si se desea, se puede proporcionar una ayuda de recuerdo, por ejemplo, en forma de números, letras u otras marcas o con un encarte de calendario que designe los días en el programa de tratamiento en los que se pueden administrar las dosificaciones.

De acuerdo con un modo de realización, un kit puede comprender (a) un primer recipiente con un compuesto de fórmula I contenido en el mismo; y opcionalmente (b) un segundo recipiente con una segunda formulación farmacéutica contenida en el mismo, en el que la segunda formulación farmacéutica comprende un segundo compuesto con actividad antihiperproliferativa. De forma alternativa, o adicionalmente, el kit puede comprender además un tercer recipiente que comprenda un tampón farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyectables (BWFI), solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir además otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y de usuario, incluyendo otros tampones, diluyentes, filtros, agujas y jeringuillas.

En determinados otros modos de realización en los que el kit comprende una composición de fórmula I y un segundo agente terapéutico, el kit puede comprender un recipiente para contener las composiciones separadas, tal como un frasco dividido o un envase de lámina metálica dividido, sin embargo, las composiciones separadas también pueden estar contenidas dentro de un único recipiente no dividido. Típicamente, el kit comprende instrucciones para la administración de los componentes separados. La forma del kit es, en particular, ventajosa cuando los componentes separados se administran preferentemente en diferentes formas farmacéuticas (por ejemplo, oral y parenteral), se administran en diferentes intervalos de dosificación o cuando se desea la valoración de los componentes individuales de la combinación por el médico prescriptor.

Preparación de compuestos de fórm ula I

Los compuestos de fórmula I se pueden sintetizar por vías sintéticas que incluyen procedimientos análogos a los bien conocidos en las técnicas químicas, en particular, en vista de la descripción contenida en el presente documento, y aquellas para otros heterociclos descritas en: Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, editores Katritzky y Rees, Elsevier, 1997, por ejemplo, volumen 3; Liebigs Annalen der Chemie, (9): 191016, (1985); Helvetica Chimica Acta, 41:1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12):1328-31, (1990), de los que cada uno se incorpora expresamente por referencia. Los materiales de partida están disponibles, en general, de fuentes comerciales, tales como Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) o se preparan fácilmente usando procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica (por ejemplo, preparados por procedimientos descritos, en general, en Louis F. Fieser y Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (ed. de 1967-2006) o Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4.a ed., ed. Springer-Verlag, Berlín, incluyendo los suplementos (también disponibles por medio de la base de datos en línea de Beilstein).

Las transformaciones por química de síntesis y las metodologías con grupos protectores (protección y desprotección) útiles en la síntesis de los compuestos de fórmula I y los reactivos e intermedios necesarios son conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, los descritos en R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3.a ed., John Wiley and Sons (1999); y L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) y ediciones posteriores de las mismas.

Los ejemplos proporcionan procedimientos ejemplares para preparar los compuestos de fórmula I. Los expertos en la técnica apreciarán que se pueden usar otras vías de síntesis para sintetizar los compuestos de fórmula I. Aunque los materiales de partida y reactivos específicos se representan y analizan en las figuras y ejemplos, se pueden sustituir fácilmente con otros materiales de partida y reactivos para proporcionar una variedad de derivados y/o condiciones de reacción. Además, se pueden modificar además muchos de los compuestos ejemplares preparados por los procedimientos descritos en vista de la presente divulgación usando química convencional bien conocida por los expertos en la técnica.

En la preparación de compuestos de fórmulas I, puede ser necesaria la protección de la funcionalidad remota (por ejemplo, amina primaria o secundaria) de los intermedios. La necesidad de dicha protección variará dependiendo de la naturaleza de la funcionalidad remota y las condiciones de los procedimientos de preparación. Los grupos protectores de amina adecuados incluyen acetilo, trifluoroacetilo, t-butoxicarbonilo (BOC), benciloxicarbonilo (CBz) y 9-fluorenilmetilenoxicarbonilo (Fmoc). La necesidad de dicha protección se determina fácilmente por un experto en la técnica. Para una descripción general de los grupos protectores y su uso, véase T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

En los procedimientos de preparación de compuestos de fórmula I puede ser ventajoso separar los productos de reacción entre sí y/o de los materiales de partida. Los productos deseados de cada etapa o serie de etapas se separan y/o purifican hasta el grado de homogeneidad deseado por técnicas comunes en la técnica. Típicamente, dichas separaciones implican extracción multifásica, cristalización en un disolvente o mezcla de disolventes, destilación, sublimación o cromatografía. La cromatografía puede implicar cualquier número de procedimientos, incluyendo, por ejemplo: procedimientos y aparatos de cromatografía de fase inversa y de fase normal; de exclusión por tamaño; de intercambio iónico; de líquidos de alta, media y baja presión; cromatografía analítica a pequeña escala; de lecho móvil simulado (SMB) y en capa fina o gruesa preparativa, así como técnicas de cromatografía en capa fina a pequeña escala y ultrarrápida.

Otra clase de procedimientos de separación implica el tratamiento de una mezcla con un reactivo seleccionado para unirse a o de otro modo hacer separable un producto deseado, material de partida sin reaccionar o subproducto de reacción. Dichos reactivos incluyen adsorbentes o absorbentes, tales como carbón activado, tamices moleculares o medios de intercambio iónico. De forma alternativa, los reactivos pueden ser ácidos en el caso de un material básico, bases en el caso de un material ácido, reactivos de unión, tales como anticuerpos, proteínas de unión, quelantes selectivos, tales como éteres de corona, reactivos de extracción iónica líquido/líquido (LIX) o similares. La selección de procedimientos apropiados de separación depende de la naturaleza de los materiales implicados, tal como punto de ebullición y peso molecular en destilación y sublimación, presencia o ausencia de grupos funcionales polares en cromatografía y estabilidad de los materiales en medios ácidos y básicos en extracción multifásica.

Las mezclas diaestereómeras se pueden separar en sus diastereómeros individuales en base a sus diferencias fisicoquímicas por procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica, tales como por cromatografía y/o cristalización fraccionada. Los enantiómeros se pueden separar convirtiendo la mezcla enantiómera en una mezcla diaestereómera por reacción con un compuesto ópticamente activo apropiado (por ejemplo, un auxiliar quiral, tal como un alcohol quiral o cloruro de ácido de Mosher), separando los diastereómeros y convirtiendo (por ejemplo, hidrolizando) los diastereoisómeros individuales en los enantiómeros puros correspondientes. Además, algunos de los compuestos de la presente invención pueden ser atropisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos) y se consideran parte de la presente invención. También se pueden separar los enantiómeros por el uso de una columna de HPLC quiral.

Se puede obtener un único estereoisómero, por ejemplo, un enantiómero, sustancialmente libre de su estereoisómero por separación de la mezcla racémica usando un procedimiento tal como formación de diastereómeros usando agentes de separación ópticamente activos (Eliel, E. y Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds" John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113(3):283-302). Las mezclas racémicas de los compuestos quirales de la invención se pueden separar y aislar por cualquier procedimiento adecuado, incluyendo: (1) la formación de sales diastereómeras iónicas con compuestos quirales y la separación por cristalización fraccionada u otros procedimientos, (2) la formación de compuestos diastereómeros con reactivos de derivatización quirales, la separación de los diastereoisómeros y la conversión en los estereoisómeros puros y (3) la separación de los estereoisómeros sustancialmente puros o enriquecidos directamente en condiciones quirales. Véase: "Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology", Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993).

En el procedimiento (1), se pueden formar sales diastereómeras por reacción de bases quirales enantioméricamente puras, tales como brucina, quinina, efedrina, estricnina, a-metil-p-feniletilamina (anfetamina) y similares, con compuestos asimétricos que tienen funcionalidad ácida, tales como ácido carboxílico y ácido sulfónico. Se pueden inducir las sales diastereómeras para la separación por cristalización fraccionada o cromatografía iónica. Para la separación de isómeros ópticos de compuestos amino, la adición de ácidos carboxílicos o sulfónicos quirales, tales como ácido alcanforsulfónico, ácido tartárico, ácido mandélico o ácido láctico, puede dar como resultado la formación de las sales diastereómeras.

De forma alternativa, por el procedimiento (2), se hace reaccionar el sustrato que se va a separar con un enantiómero de un compuesto quiral para formar un par diastereómero (E. y Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322). Se pueden formar compuestos diastereómeros haciendo reaccionar compuestos asimétricos con reactivos de derivatización quirales enantioméricamente puros, tales como derivados de mentilo, seguido de separación de los diastereómeros e hidrólisis para proporcionar el enantiómero puro o enriquecido. Un procedimiento de determinación de la pureza óptica implica preparar ésteres quirales, tales como un éster de mentilo, por ejemplo, cloroformiato de (-)-mentilo en presencia de una base, o éster de Mosher, acetato de a-metoxi-a-(trifluorometil)fenilo (Jacob III. J. Org. Chem. (1982) 47:4165), de la mezcla racémica, y analizar el espectro de RMN de 1H para determinar la presencia de los dos enantiómeros o diastereómeros atropisómeros. Los diastereómeros estables de los compuestos atropisómeros se pueden separar y aislar por cromatografía de fase normal e inversa siguiendo los procedimientos para la separación de naftilisoquinolinas atropisómeras (documento WO 96/15111). Por el procedimiento (3) se puede separar una mezcla racémica de dos enantiómeros por cromatografía usando una fase estacionaria quiral ("Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough, ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513:375-378). Se pueden distinguir los enantiómeros enriquecidos o purificados por procedimientos usados para distinguir otras moléculas quirales con átomos de carbono asimétrico, tales como giro óptico y dicroísmo circular.

Los compuestos de la solicitud y el compuesto 101 de la presente invención se prepararon como se ilustra en los esquemas 1 y 2 generales.

Esquema 1.

a) MgCl² , trietilamina, paraformaldehído, acetonitrilo, calor; b) oxaldehído, hidróxido de amonio, calor; c) carbonato de cesio, 1,2-dibromoetano, DMF, calor; d) N-yodosuccinimida, DMF, calor; e) i. EtMgBr, THF, -20 °C, ii. cloruro de amonio acuoso

Como se muestra en el esquema 1, se puede obtener 4-bromo-2-hidroxibenzaldehído 2 formilando el 3-bromofenol disponible comercialmente. El calentamiento de 2 con oxaldehído e hidróxido de amonio da 3. El anillo de oxacepina se puede formar calentando 3 con 1,2-dibromoetano. La bis-yodación se puede inducir por reacción con N-yodosuccinimida, y el grupo 3-yodo se retira selectivamente a través de tratamiento con bromuro de etilmagnesio a temperatura reducida, para dar 6.

Esquema 2.

f) oxazolidin-2-ona 4-sustituida, Cu(OAc)² , frans-N,W-dimet¡lddohexano-1,2-d¡amma, carbonato de potasio, dioxano, calor; g) HN(R2)CH(R1)CO²H, CuI, K³ PO⁴ , DMSO, calor; h) cloruro de amonio, trietilamina, HATU (hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[b¡s(d¡met¡lam¡no)met¡len]-1H-1,2,3-tr¡azolo[4,5-b]p¡r¡d¡n¡o)

Como se muestra en el esquema 2, 6 se puede acoplar a una oxazolidin-2-ona apropiadamente sustituida usando catálisis con cobre para proporcionar 7. El intermedio bromado 7 se puede acoplar a aminoácidos apropiadamente sustituidos bajo catálisis con cobre, seguido de un acoplamiento de amida mediado por HATU con cloruro de amonio para proporcionar los compuestos 8.

Ejemplos

Abreviaturas

DMSO Dimetilsulfóxido

ESI Ionización por electronebulización

HPLC Cromatografía de líquidos a alta presión

CLEM Cromatografía de líquidos-espectrometría de masas

min Minutos

N Normal

RMN Resonancia magnética nuclear

R^t Tiempo de retención

Procedimiento A de CLEM: Los experimentos se realizaron en un espectrómetro de masas con cuadrupolo Waters Micromass ZQ2000 conectado a un sistema de UPLC Waters Acquity con un detector de PDA-UV. El espectrómetro tiene una fuente de electronebulización que funciona en modo de ion positivo y negativo. Este sistema usa una columna Acquity BEH C18 de 1,7 um de 100 x 2,1 mm mantenida a 40 °C o una columna Acquity BEH Shield RP18 de 1,7 |jm de 100 x 2,1 mm mantenida a 40 °C y un caudal de 0,4 ml/minuto. El sistema de disolvente inicial era un 95 % de agua que contenía ácido fórmico al 0,1 % (disolvente A) y un 5 % de acetonitrilo que contenía ácido fórmico al 0,1 % (disolvente B) durante los primeros 0,4 minutos, seguido de un gradiente de hasta un 5 % de disolvente A y un 95 % de disolvente B durante los siguientes 5,6 minutos. Esto se mantuvo durante 0,8 minutos antes de volver a un 95 % de disolvente A y un 5 % de disolvente B durante los siguientes 0,2 minutos. El tiempo de desarrollo total fue de 8 minutos.

Procedimiento B de CLEM: Los experimentos se realizaron en un HPLC Agilent 1100 acoplado con un espectrómetro de masas MSD Agilent usando ESI como fuente de ionización. La separación por CL se realizó usando una columna Phenomenex XB-C18, 1,7 mm, 50 x 2,1 mm con un caudal de 0,4 ml/minuto. El disolvente A es agua con ácido fórmico al 0,1 % y el disolvente B es acetonitrilo con ácido fórmico al 0,1 %. El gradiente consistió en un 2 - 98 % de disolvente B durante 7 minutos y mantenimiento de un 97 % de B durante 1,5 minutos después del equilibrado durante 1,5 minutos. La temperatura de la columna de CL es de 40 °C. La absorbancia UV se midió a 220 nm y 254 nm y se aplicó un barrido completo del espectro de masas a todos los experimentos. Ejemplo 101

(S)-2-((2-((S)-4-(d¡fluoromet¡l)-2-oxooxazol¡d¡n-3-¡l)-5,6-d¡l^¡drobenzo[f]¡m¡dazo[1,2-d][1,4]oxacep¡n-9-¡l)am¡no)prop anamida 101

Etapa 1: 4-bromo-2-hidroxibenzaldehído

En un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 20 l purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno se dispuso 3-bromofenol (1300 g, 7,51 mol), dicloromagnesio (1078 g, 11,3 mol), trietilamina (3034 g, 30,0 mol) y acetonitrilo (7,8 l). Se agitó la mezcla durante 30 minutos a 40 °C. A la mezcla se le añadió paraformaldehído (676 g, 22,6 mol) a 80 °C. Se agitó la solución resultante durante 6 horas a 76 °C. Esta reacción se repitió 5 veces. Se desactivaron las mezclas de reacción combinadas por la adición de 12 l de cloruro de hidrógeno acuoso (4 N). Se ajustó el valor de pH de la solución a 5 con cloruro de hidrógeno acuoso concentrado (12 N). Se extrajo la solución resultante con 1 x 20 l de acetato de etilo. Se evaporaron a vacío los extractos orgánicos. Se purificó el residuo por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (elución: acetato de etilo al 15 % en éter de petróleo) para dar un producto bruto que se lavó con 2,4 l de éter metil-terc-butílico:hexano (1:4). Se recogieron los sólidos resultantes por filtración para proporcionar 7,0 kg (78 %) del compuesto del título como un sólido amarillo.

Etapa 2: 5-bromo-2-(1H-imidazol-2-il)fenol

En un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 20 l se dispuso una solución de 4-bromo-2-hidroxibenzaldehído (700 g, 3,50 mol) en metanol (7,0 l) y oxaldehído (40 %) (2540 g, 17,5 mol), seguido de la adición gota a gota durante 4 horas de amoniaco acuoso (25-28 %, 3500 g) con agitación y manteniendo la temperatura por debajo de 40 °C. Se agitó la solución resultante durante 15 horas a 30-35 °C. Esta reacción se repitió 9 veces. Se evaporaron a vacío las 9 mezclas de reacción combinadas manteniendo la temperatura por debajo de 45 °C. Se diluyó el residuo con 100 l de acetato de etilo con agitación durante 30 minutos. Se separaron por filtración los sólidos y se diluyó la solución resultante con agua. Se extrajo la fase acuosa con 35 l de acetato de etilo. Se evaporaron a vacío los extractos orgánicos y se purificó el residuo por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 5-75 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para proporcionar 2,4 kg (29 %) del compuesto del título como un sólido amarillo.

Etapa 3: 9-bromo-5,6-dihidrobenzo[t]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepina

En un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 20 l se dispuso una solución de 5-bromo-2-(1H-imidazol-2-il)fenol (1,4 kg, 5,86 mol) en W,W-dimetilformamida (14 l) y carbonato de cesio (7,2 kg, 22,1 mol). Se agitó la mezcla durante 20 minutos. A la mezcla de reacción se le añadió 1,2-dibromoetano (4,1 kg, 21,8 mol). Se agitó la solución resultante durante 4-12 horas a 85-90 °C, se enfrió a 15 °C y se filtró. Se lavó la torta de filtro con 3,0 l de acetato de etilo. Se diluyó el filtrado con 14 l de acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera (4 x 14 l), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y evaporó a vacío para proporcionar 1,1 kg (71 %) del compuesto del título como un sólido amarillo claro. CLEM (ESI): [M+H]+ =265; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 8,32 (d, J = 8,4, 1H), 7,35-7,24 (m, 3H), 7,06 (s, 1H), 4,47-4,42 (m, 4H).

Etapa 4: 9-bromo-2,3-diyodo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepina

En un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 20 l se dispuso 9-bromo-5,6-dih¡drobenzo[/]¡m¡dazo[1,2-d][1,4]oxacepma (2,5 kg, 9,43 mol) y N,N-dimetilformamida (12,5 l), seguido de la adición de Ñ-yodosuccinimida (6,0 kg, 26,7 mol) en varios lotes con agitación. Se agitó la solución resultante durante 12 horas a 60 °C, se enfrió a 15 °C con un baño de agua/hielo, se diluyó con 12,5 l de agua/hielo y se filtró. Se recristalizaron los sólidos filtrados en éter de petróleo para proporcionar 4,0 kg (82 %) del compuesto del título como un sólido amarillo.

Etapa 5: 9-bromo-2-yodo-5,6-d¡h¡drobenzo[/]¡m¡dazo[1,2-d][1,4]oxacepina

A un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 20 l purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno se dispuso 9-bromo-2,3-d¡yodo-5,6-d¡h¡drobenzo[f]¡m¡dazo[1,2-d][1,4]oxacep¡na (800 g, 1,55 mol) y tetrahidrofurano (2,4 l), seguido de la adición gota a gota de bromuro de etilmagnesio (solución 1 N en éter, 1,7 l) con agitación a -20 °C durante 3,5 horas. Se agitó la mezcla de reacción durante 3 horas manteniendo la temperatura a -15 °C usando un baño de hielo/sal. Se desactivó la mezcla resultante por la adición de 3,0 l de cloruro de amonio acuoso saturado, y se extrajo con acetato de etilo (2 x 8,0 l). Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera (2 x 10 l), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y evaporó a vacío. Se trituró el residuo bruto con 8,0 l de acetato de etilo:éter de petróleo (1:5), se filtró y se lavó con éter de petróleo para proporcionar 501 g (83 %) del compuesto del título como un sólido marrón. CLEM (ESI): [M+H]+ = 391; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 58,22 (d, J = 8,7, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,30-7,25 (m, 2H), 4,45-4,41 (m, 4H).

Etapa 6: (R ^^-d im etil-^^d ioxo lano^-carba ldeh ído

Se disolvió peryodato de sodio (57,0 g, 270 mmol) en agua caliente (115 ml) y se añadió sílice (200 g, 60 A, malla 220-440, tamaño de partícula 35-75 |jm). Se agitó vigorosamente la mezcla hasta que se obtuvo un polvo que fluía libremente. Esto se añadió a una solución de 1,2:5,6-¿/s-0-(1-met¡let¡l¡deno)-D-man¡tol (50 g, 190 mmol) en diclorometano (1,0 l) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtró la mezcla resultante a través de una almohadilla de Na2SO4 y se lavaron los sólidos minuciosamente con diclorometano. Se evaporaron a vacío los extractos orgánicos combinados para proporcionar 37,2 g (75 %) del compuesto del título como un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 59,73 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 4,38 (ddd, J = 7,4, 4,7, 1,9 Hz, 1H), 4,18 (dd, J = 8,8, 7,4 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 8,8, 4,7 Hz, 1H), 1,49 (s, 3H), 1,43 (s, 3H).

Etapa 7: (R ^-d ifluorom etil^^-d im etil-n^dioxo lano

A una solución de (R)-2,2-dimetil-[1,3] dioxolano-4-carbaldehído (7,08 g, 54 mmol) en diclorometano (50 ml) enfriado en un baño de agua se le añadió gota a gota trifluoruro de dietilaminosulfuro (8,4 ml, 62,6 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadió la mezcla resultante gota a gota a una solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada enfriada con hielo. Se extrajo además la mezcla con diclorometano. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío para proporcionar 6,58 g (79 %) del compuesto del título bruto como un aceite naranja. RMN de 1H (400 MHz, CDCls) 55,69 (td, J = 55,8, 4,9 Hz, 1H), 4,27 - 4,17 (m, 1H), 4,16 - 4,03 (m, 2H), 1,46 (s, 3H), 1,38 (s, 3H).

Etapa ⁸ : (R)-3-(ferc-butildimetilsilaniloxi)-1,1-difluoropropan-2-ol

Se añadió HCl en dioxano (4 N, 10,8 ml, 43,2 mmol) a una solución de (R)-4-difluorometil-2,2-dimetil[1,3]dioxolano (6,58 g, 43,2 mmol) en metanol (40 ml) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se evaporó a vacío la mezcla resultante y se formó un azeótropo con acetonitrilo. Se disolvió el residuo en N,N-dimetilformamida (10 ml) y se añadieron cloruro de ferc-butildimetilsililo (6,53 g, 43,2 mmol), trietilamina (9,0 ml, 64,9 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina (cant. catalítica). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora. Se lavó la mezcla resultante con agua y, a continuación, se extrajo con diclorometano. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el residuo bruto resultante por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-30 % de acetato de etilo en ciclohexano) para proporcionar 3,43 g (35 %) del compuesto del título como un aceite amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 55,66 (td, J = 56,4, 4,6 Hz, 1H), 3,76 - 3,60 (m, 2H), 2,46 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,00 (s, ⁶ H).

Etapa 9: ((S)-2-acido-3,3-difluoropropoxi)-ferc-butildimetilsilano

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (2,9 ml, 17,4 mmol) gota a gota a una solución de (R)-3-(ferc-butildimetilsilaniloxi)-1,1-difluoropropan-2-ol (3,43 g, 15,1 mmol) y piridina (2,0 ml, 24,2 mmol) en diclorometano (50 ml) a -20 °C y se agitó la mezcla de reacción a -20 °C durante 20 minutos y, a continuación, a 0 °C durante 1 hora. Se diluyó la mezcla resultante con HCl acuoso 0,5 N y se extrajo con diclorometano. Se secaron los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de magnesio y se evaporó a vacío. Se disolvió el residuo bruto en W,W-dimetilformamida ^{( 1 0} ml), se añadió acida de sodio (2,96 g, 45,5 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 horas. Se diluyó la mezcla resultante con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío para proporcionar 4,50 g del compuesto del título bruto. RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 55,74 (td, J = ^{5 5} ,⁴ , ^{4 , 4} Hz, 1H), 3,81 - 3,71 (m, 2H), 3,58 - 3,47 (m, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,00 (s, ⁶ H).

Etapa 10: (S)-1-(ferc-butildimetilsilaniloximetil)-2,2-difluoroetilamina

Se añadió hidróxido de paladio sobre carbono (200 mg, 20 %) a una solución de ((R)-2-acido-3,3-difluoropropoxi)-ferc-butildimetilsilano (4,50 g, bruto, se suponen ~15,1 mmol) en acetato de etilo (20 ml) y metanol (2,0 ml) y se agitó la reacción en un globo de hidrógeno durante 16 horas. Se filtró la reacción, se añadió hidróxido de paladio sobre carbono nuevo (400 mg, 20 %) y se agitó la mezcla de reacción en un globo de hidrógeno durante 16 horas. Se filtró la mezcla resultante y se evaporó a vacío el filtrado para proporcionar 3,08 g (90 %) del producto del título bruto como un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCI³) 5 5,66 (td, J = 57,0, 4,7 Hz, 1H), 3,71 - 3,57 (m, 2H), 3,00 - 2,89 (m, 1H), 1,42 (s. a., 2H), 0,82 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).

Etapa 11: (S)-4-difluorometiloxazolidin-2-ona

Se añadió HCl en dioxano (4 N, 5,0 ml, 20 mmol) a una solución de (R)-1-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-2,2-difluoroetilamina (Org. Lett., vol. 9, n.° 1,2007, 41-44) (2,30 g, 10,3 mmol) en metanol (5,0 ml) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 horas. Se evaporó a vacío la mezcla y se trituró el aceite resultante con éter dietílico para dar un sólido que se secó a vacío. Se disolvió el sólido en una mezcla de tolueno (20 ml) y KOH (2,50 g, 44,6 mmol en 20 ml de agua) a 0 °C. Se añadió fosgeno (16,3 ml, 20 % en tolueno) gota a gota, se retiró el baño de enfriamiento y se agitó la mezcla de reacción durante 1 hora. Se evaporó a vacío la mezcla, se extrajo el residuo resultante con alcoholes desnaturalizados industriales calientes y se recogió el sólido por filtración. Se evaporó a vacío el filtrado y se purificó el residuo resultante por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-100 % de acetato de etilo en ciclohexano) para proporcionar 830 mg (68 %) del compuesto del título como un sólido blanquecino. [a]D = 10,1 (c = 2,37, CHCls). RMN de 1H (400 MHz, CDCls) 55,96 (s. a., 1H), 5,78 (td, J = 55,3, 4,8 Hz, 1H), 4,54 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 4,42 (dd, J = 9,6, 4,4 Hz, 1H), 4,17 - 4,06 (m, 1H).

Etapa 12: (S)-3-(9-bromo-5,6-dihidrobenzo [/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(difluorometil)oxazolidin-2-ona

Se desgasificó una mezcla de 9-bromo-2-yodo-5,6-dihidrobenzo[f]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepina (250 mg, 0,64 mmol), (S)-4-difluorometiloxazolidin-2-ona (88 mg, 0,64 mmol), trans-W,W-dimetil-1,2-ciclohexanodiamina (36 mg, 0,26 mmol), yoduro cuproso (24 mg, 0,13 mmol) y carbonato de potasio (177 mg, 1,28 mmol) en dioxano (3,0 ml) con argón con ultrasonido. Se calentó la mezcla de reacción a 100 °C durante 5 h y a continuación se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla resultante con amoniaco acuoso al 15 % y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se trituró el residuo resultante con metanol y a continuación se purificó por medio de HPLC preparativa [C18, acetonitrilo al 60 % (ácido fórmico al 0,1 %) en agua (ácido fórmico al 0,1 %), desarrollo de 20 minutos] para proporcionar 20 mg (8 %) del compuesto del título como un sólido blanco. CLEM (ESI): [M+H]+ = 400/402. RMN de 1H (400 MHz, CDCls) 58,19 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,24 - 7,19 (m, 2H), 6,65 (ddd, J = 57,8, 54,5, 1,0 Hz, 1H), 4,87 (ddd, J = 24,0, 9,2, 4,0 Hz, 1H), 4,73 (dd, J = 9,5, 4,2 Hz, 1H), 4,53 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 4,48 - 4,43 (m, 2H), 4,38 - 4,33 (m, 2H).

Etapa 13:

(S)-2-((2-((S)-4-(difluorometil)-2-oxooxazolidin-3-il)-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-9-il)amino)prop anamida

Se suspendieron (S)-3-(9-bromo-5,6-dihidrobenzo[f]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(difluorometil)oxazolidin-2-ona (600 mg, 1,50 mmol), L-alanina (267 mg, 3,00 mmol), yoduro cuproso (57 mg, 0,30 mmol) y fosfato de potasio tribásico (637 mg, 3,00 mmol) en dimetilsulfóxido (6,0 ml). Se calentó la mezcla de reacción a 100 °C durante 2 horas. Tras dejar enfriar hasta temperatura ambiente, se añadieron dimetilsulfóxido (4,0 ml), cloruro de amonio (480 mg, 9,00 mmol) y trietilamina (3,1 ml, 22,5 mmol). A la suspensión agitada resultante se le añadió hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[¿/s(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-¿]piridinio (5,10 g, 13,5 mmol), en porciones durante 5 minutos. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora y, a continuación, se filtró a través de Celite®, lavando con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos con bicarbonato de sodio acuoso saturado y se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el residuo bruto por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-5 % de metanol en diclorometano) y, a continuación, por cromatografía de fluido supercrítico quiral para proporcionar 294 mg (46 %) de 101 como un sólido blanquecino. CLEM (ESI): Rt (min) = 2,89 [M+H]+ = 408, procedimiento = A; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 58,00 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,38 (s. a., 1H), 7,18 (s, 1H), 7.00 (s. a., 1H), 6,71 (t, J = 55,9 Hz, 1H), 6,41 (dd, J =8,8, 2,3 Hz, 1H), 6,16 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 5,02 - 4,89 (m, 1H), 4,63 - 4,52 (m, 2H), 4,39 - 4,30 (m, 4H), 3,76 (quinteto, J = 7,0 Hz, 1H), 1,30 (d, J = 7,1 Hz, 3H).

Ejemplo 102

(S)-2-ciclobutil-2-((2-((R)-4-metil-2-oxooxazolidin-3-il)-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-c(][1,4]oxacepin-9-il)amino)a cetamida 102 (referencia)

Etapa 1: (R)-4-metiloxazolidin-2-ona

A una mezcla de D-alaninol (8,65 g, 0,12 mmol) en tolueno y KOH acuoso (124 ml, 12,5 % ac., 0,28 mmol) a 0 °C se le añadió fosgeno (72,7 ml, 20 % en tolueno, 0,14 mmol) a una tasa tal que la temperatura interna permaneciera < 5 °C. Se agitó la mezcla de reacción a 0 °C durante otros 40 minutos y, a continuación, se evaporó hasta sequedad. Se extrajo el residuo bruto con alcoholes desnaturalizados industriales, se filtró la suspensión y se evaporó a vacío el filtrado. Se purificó el residuo resultante por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 40-100 % de acetato de etilo en ciclohexano) para proporcionar 10,4 g (90 %) del compuesto del título como un sólido blanco. RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 56,00 (s. a., 1H), 4,50 (t, J = 6,5 Hz, 1 H), 4,07-3,97 (m, 1 H), 3,95 (dd, J = 7,8, 6,2 Hz, 1 H), 1,30 (d, J = 6,1 Hz, 3 H).

Etapa 2: (R)-3-(9-bromo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-metiloxazolidin-2-ona y (R)-3-(9-yodo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-metiloxazolidin-2-ona

Se suspendió una mezcla de 9-bromo-2-yodo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepina (30,0 g, 76,7 mmol), (R)-4-metiloxazolidin-2-ona (7,70 g, 76,7 mmol), yoduro cuproso (1,61 g, 8,40 mmol), frans-W,W-dimetil-1,2-ciclohexanodiamina (2,7 ml, 16,9 mmol) y carbonato de potasio (14,9 g, 107 mmol) en 1,4-dioxano (200 ml) y se desgasificó la mezcla de reacción con argón con ultrasonido. Se calentó la mezcla resultante a 100 °C durante 16 h. Se diluyó la mezcla de reacción con solución de amoniaco acuosa (~16 %) y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el residuo resultante por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-100 % de acetato de etilo en ciclohexano) para proporcionar 13,4 g (~42 %) de los compuestos del título (mezcla ~2:1 de los productos 9-Br: 9-I). RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 58,28 (d, J = 7,6 Hz, 0,33H), 8,11 (d, J = 6,9 Hz, 0,66H), 7,42 - 7,38 (m, 1H), 7,28 - 7,24 (m, 1,33H), 7,23 - 7,18 (m, 0,66H), 4,77 - 4,68 (m, 1H), 4,58 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 4,49 - 4,39 (m, 2H), 4,37 - 4,30 (m, 2H), 4,08 (dd, J = 8,4, 4,5 Hz, 1H), 1,57 - 1,50 (m, 3H).

Etapa 3: (R)-3-(9-bromo-5,6-dihidroimidazo[1,2-d][1,4]benzoxacepin-2-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona

80 mg de una mezcla de (R)-3-(9-bromo-5,6-d¡h¡drobenzo[/]¡m¡dazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-metiloxazolidin-2-ona y (R)-3-(9-yodo-5,6-d¡h¡drobenzo[/]¡m¡dazo[1,2-d][1,4]oxacep¡n-2-¡l)-4-met¡loxazol¡d¡n-2-ona por medio de SFC quiral para proporcionar 27,6 mg del compuesto del título. CLEM (ESI): [M+H]+ = 364,0/366,0/367,2; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 58,22 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,31 (dd, J = 8,7, 2,1 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,65 - 4,54 (m, 2H), 4,49 - 4,43 (m, 4H), 4,09 - 4,06 (m, 1H), 1,42 (d, J = 6,0 Hz).

Etapa 4:

(S)-2-c¡clobut¡l-2-((2-((R)-4-met¡l-2-oxooxazol¡d¡n-3-¡l)-5,6-d¡h¡drobenzo[f]¡m¡dazo[1,2-c(][1,4]oxacep¡n-9-¡l)am¡no)a cetato de met¡lo

Se calentó una mezcla de (4R)-3-(9-bromo-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-d][1,4]benzoxacep¡n-2-¡l)-4-met¡l-oxazol¡d¡n-2-ona (0,2746 mmol, 100 mg), yoduro cuproso (0,084 mmol, 16 mg), ác¡do (2S)-2-am¡no-2-c¡clobut¡l-acét¡co (1,10 mmol, 142 mg) y fosfato de potas¡o tr¡bás¡co (1,37 mmol, 297 mg) en d¡met¡lsulfóx¡do (3 ml) con ¡rrad¡ac¡ón de m¡croondas a 120 °C durante 2 horas. Se enfr¡ó la reacc¡ón hasta temperatura amb¡ente y se añad¡ó yodometano (1,4 mmol, 0,086 ml), y se extrajo la reacc¡ón con d¡clorometano y agua. Se comb¡naron los extractos orgán¡cos comb¡nados, se lavó con salmuera y se secó con sulfato de sod¡o, se f¡ltró y evaporó a vacío. Se pur¡f¡có el producto bruto por med¡o de cromatografía ultrarráp¡da sobre gel de síl¡ce (24 g de síl¡ce, grad¡ente de d¡solvente: 5-40 % de acetato de ¡soprop¡lo:metanol 3:1 en d¡clorometano) para proporc¡onar 100 mg (85 %) del compuesto del título.

Etapa 5:

(S)-2-c¡clobut¡l-2-((2-((R)-4-met¡l-2-oxooxazol¡d¡n-3-¡l)-5,6-d¡h¡drobenzo[f]¡m¡dazo[1,2-d][1,4]oxacep¡n-9-¡l)am¡no)a cetam¡da

A una soluc¡ón de (2S)-2-c¡clobut¡l-2-[[2-[(4R)-4-met¡l-2-oxo-oxazol¡d¡n-3-¡l]-5,6-d¡h¡dro¡m¡dazo[1,2-d][1,4]benzoxacep¡n-9-¡l]am¡no]ac etato de met¡lo (0,234 mmol, 100 mg) en tetrah¡drofurano (5 ml) se le añad¡ó agua (0,45 ml) e h¡dróx¡do de l¡t¡o monoh¡drato (0,357 mmol, 15 mg). Se ag¡tó la mezcla de reacc¡ón a temperatura amb¡ente durante 6 horas. Se evaporó a vacío la mezcla de reacc¡ón. A una soluc¡ón del res¡duo resultante en N,N-d¡met¡lformam¡da (3 ml) se le añad¡ó hexafluorofosfato de 3-óx¡do de 1-[¿/s(d¡met¡lam¡no)met¡leno]-1H-1,2,3-tr¡azolo[4,5-¿]p¡r¡d¡n¡o (0,353 mmol, 137 mg), cloruro de amon¡o (0,71 mmol, 38 mg) y N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,705 mmol, 0,123 ml) y se ag¡tó la mezcla de reacc¡ón a temperatura amb¡ente durante 1 hora. Se evaporó a vacío la mezcla de reacc¡ón y se trató el res¡duo resultante con agua, a cont¡nuac¡ón se extrajo con d¡clorometano. Se lavaron los extractos orgán¡cos comb¡nados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnes¡o y se evaporó a vacío. Se pur¡f¡có el producto bruto por med¡o de HPLC de fase ¡nversa, segu¡do de SFC y se l¡of¡l¡zó para proporc¡onar 15,0 mg (15 %) de 102. CLEM (ESI): Rt (m¡n) = 3,03, [M+H]+ = 412,2, proced¡m¡ento = D; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 57,96 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,39-7,36 (s. a., 1H), 7,13 (s, 1H), 7,00-6,97 (s. a., 1H), 6,44 (dd, J = 8,9, 2,3 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 5,96 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,62 - 4,49 (m, 2H), 4,38 - 4,28 (m, 4H), 4,06-4,03 (m, 1H), 3,70 - 3,61 (m, 1H), 2,06 - 1,75 (m, 6H), 1,42 - 1,34 (m, 3H).

Ejemplo 103:

(S)-2-cidopropil-2-((2-((S)-4-(difluorometil)-2-oxooxazolidin-3-il)-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-9-i l)amino)acetamida 103 (referencia)

Se desgasificó una mezcla de (S)-3-(9-bromo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(difluorometil)oxazolidin-2-ona del ejemplo 101, etapa 12 (400 mg, 1,00 mmol), L-ciclopropilglicina (230 mg, 2,00 mmol), yoduro cuproso (38 mg, 0,20 mmol) y fosfato de potasio tribásico (424 mg, 2,00 mmol) en dimetilsulfóxido (2,0 ml) con argón con ultrasonido. Se calentó la mezcla a 100 °C durante 5 horas, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla resultante con dimetilsulfóxido (5,0 ml) y cloruro de amonio (320 mg, 6,00 mmol) y se añadió trietilamina (1,4 ml, 10,0 mmol). A continuación, a la suspensión agitada se le añadió hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[jb/s(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-jb]piridinio (2,28 g, 6,0 mmol), en porciones y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se diluyó la mezcla resultante con una solución de amoniaco acuosa al 15 % y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el residuo bruto por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-7 % de metanol en acetato de etilo). Se disolvió el residuo en un mínimo de acetonitrilo. A continuación, se añadió agua para precipitar un sólido que se recogió por filtración y se secó a vacío para proporcionar 324 mg (75 %) de 103 como un sólido blanquecino. CLEM (ESI): Rt (min) = 3,21, [M+H]+ = 434, procedimiento = A; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 57,98 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,40 (s. a., 1H), 7,17 (s, 1H), 7,03 (s. a., 1H), 6,71 (t, J = 56,0 Hz, 1H), 6,42 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,01 - 4,89 (m, 1H), 4,63 - 4,51 (m, 2H), 4,38 - 4,29 (m, 4H), 3,15 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 1,16 - 1,05 (m, 1H), 0,56 - 0,44 (m, 3H), 0,33 - 0,25 (m, 1H).

Ejemplo 104

(S)-2-ciclopropil-2-((2-((R)-4-metil-2-oxooxazolidin-3-il)-5,6-dihidrobenzo[f]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-9-il)amino) acetamida 104 (referencia)

Se calentó una mezcla de (R) -3-(9-bromo-5,6-dihidroimidazo[1,2-d][1,4]benzoxacepin-2-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona (ejemplo 102, etapa 3) (1,098 mmol, 400 mg), yoduro cuproso (0,330 mmol, 62,8 mg), ácido (2S)-2-amino-2-ciclopropil-acético (3,295 mmol, 379,3 mg) y fosfato de potasio tribásico (4,393 mmol, 951,5 mg) en dimetilsulfóxido (35 mmol, 2,5 ml) a 110 °C durante 2 horas con irradiación de microondas. Se enfrió la reacción hasta temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le añadió hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[¿/s(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-¿]piridinio (12,08 mmol, 4260 mg), cloruro de amonio (12,08 mmol, 646 mg) y trietilamina (1,53 ml, 11,0 mmol). Después de 20 minutos a temperatura ambiente, se trató la mezcla de reacción con agua, a continuación se extrajo con diclorometano. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el producto bruto por medio de HPLC de fase inversa y se liofilizó para proporcionar 110 mg (25 % en 2 etapas) de 104. CLEM (ESI): Rt (min) = 2,588, [M+H]+ = 398,2, procedimiento = B; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 57,96 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,02 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,42 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 6,20 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,61 - 4,49 (m, 2H), 4,40 - 4,27 (m, 4H), 4,10 - 3,99 (m, 1H), 3,22 - 3,09 (m, 1H), 1,42 - 1,36 (m, 3H), 1,16 - 1,04 (m, 1H), 0,56 - 0,42 (m, 3H), 0,32 - 0,27 (m, 1H).

Ejemplo 105

(S) -2-ciclopropil-2-((2-((S)-4-(fluorometil)-2-oxooxazolidin-3-il)-5,6-dihidrobenzo[f]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-9-il) amino)acetamida 105 (referencia)

Etapa 1: (R)-1-(ferc-butildimetilsilaniloxi)-3-fluoropropan-2-ol

Se añadió cloruro de ferc-butildimetilsililo (1,60 g, 10,63 mmol) a una solución de (R)-3-fluoropropano-1,2-diol (1,00 g, 10,6 mmol), trietilamina (1,93 ml, 13,8 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina, cant. catalítica, en diclorometano a 0 °C y se dejó calentar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con agua y se extrajo con diclorometano. Se lavaron las fracciones orgánicas combinadas con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el residuo bruto resultante por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-40 % de acetato de etilo en ciclohexano) para proporcionar 1,80 g (81 %) del compuesto del título como un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 54,45 - 4,36 (m, 1H), 4,34 - 4,25 (m, 1H), 3,87 - 3,73 (m, 1H), 3,66 - 3,56 (m, 2H), 2,30 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 0,82 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).

Etapa 2: (S)-2-Acido-3-fluoropropoxi)-ferc-butildimetilsilano

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (1,67 ml, 9,93 mmol) gota a gota a una solución de (R)-1-(ferc-butildimetilsilaniloxi)-3-fluoropropan-2-ol (1,80 g, 8,60 mmol) y piridina (1,2 ml, 13,8 mmol) en diclorometano a -20 °C y se agitó la mezcla de reacción a -20 °C durante 20 minutos, a continuación a 0 °C durante 30 minutos. Se diluyó la mezcla de reacción con HCl acuoso 0,5 N y se extrajo con diclorometano. Se secaron los extractos orgánicos combinados sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se disolvió el residuo en N,N-dimetilformamida (5,0 ml) y se añadió acida de sodio (1,68 g, 25,9 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 horas. Se diluyó la mezcla resultante con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío para proporcionar el compuesto del título bruto que se utilizó sin purificación. RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 5 4,58 - 4,26 (m, 2H), 3,75 - 3,63 (m, 2H), 3,62 - 3,46 (m, 1H), 0,80 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).

Etapa 3: (S)-1-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-2-fluoroetilamina

Se añadió hidróxido de paladio (400 mg, 20 % en carbono) a una solución de ((S)-2-acido-3-fluoropropoxi)-ferc-butildimetilsilano (bruto, se suponen 8,60 mmol) en acetato de etilo (15 ml) y metanol (5,0 ml) y se agitó la mezcla de reacción en un globo de hidrógeno durante 16 horas. Se filtró la mezcla resultante, se añadió hidróxido de paladio nuevo (400 mg, 20 % en carbono) y se agitó la reacción en un globo de hidrógeno durante otras 16 horas. Se filtró la mezcla resultante y se evaporó a vacío el filtrado para proporcionar el compuesto del título como una mezcla ~2:1 de producto: material de partida, que se utilizó sin purificación.

Etapa 4: (S)-4-fluorometiloxazolidin-2-ona

Se añadió HCl en dioxano (4 N, 2,0 ml, 8,00 mmol) a una solución de (S)-1-(ferc-butildimetilsilaniloximetil)-2-fluoroetilamina (bruta, se suponen 8,60 mmol) en metanol (3,0 ml) y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 2 horas. Se evaporó a vacío la mezcla de reacción. Se disolvió el residuo resultante en una mezcla de tolueno (20 ml) y KOH (2,89 g, 51,6 mmol, 12,5 % ac.) a 0 °C. A esta mezcla se le añadió, gota a gota, fosgeno (13,6 ml, 20 % en tolueno), se retiró el baño de enfriamiento y se agitó la mezcla resultante durante 1 hora. Se evaporó a vacío la mezcla de reacción y se extrajo el residuo resultante con alcoholes desnaturalizados industriales calientes. Se evaporó a vacío el filtrado y se purificó el residuo resultante por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 50-100 % de acetato de etilo en ciclohexano) para proporcionar 450 mg (44 %, 3 etapas) del compuesto del título como un sólido blanquecino. RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 55,69 (s. a., 1H), 4,59 - 4,42 (m, 2H), 4,42 - 4,32 (m, 1H), 4,25 -4,08 (m, 2H).

Etapa 5: (S)-3-(9-bromo-5,6-dihidrobenzo[t]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(fluorometil)oxazolidin-2-ona y (S)-3-(9-yodo-5,6-dihidrobenzo[t]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(fluorometil)oxazolidin-2-ona

Se selló una mezcla de 9-bromo-2-yodo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepina (722 mg, 1,85 mmol), (S)-4-fluorometiloxazolidin-2-ona (220 mg, 1,85 mmol), 3,4,7,8-tetrametil-1,10-fenantrolina (131 mg, 0,55 mmol), Cu(OAc)².H²O (74 mg, 0,37 mmol), carbonato de potasio (510 mg, 3,70 mmol) y dioxano (6,0 ml) en un tubo y se desgasificó la mezcla con argón con ultrasonido. Se calentó la mezcla de reacción a 100 °C durante 72 horas. Se diluyó la mezcla de reacción resultante con amoniaco acuoso al 15 % y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el residuo bruto por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0- 100 % de acetato de etilo en ciclohexano) para proporcionar 390 mg (53 %) de los compuestos del título (mezcla aproximada 2:1 de los productos 9-Br y 9-I). CLEM (ESI): [M+H]+ = 382/384/430; RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 5 8.22 (d, J = 9,3 Hz, 0,7H), 8,05 (d, J = 8,8 Hz, 0,3H), 7,43 - 7,37 (m, 0,6H), 7,29 (s, 1,2H), 7,23 - 7,18 (m, 1,2H), 5,03 - 4,66 (m, 3H), 4,60 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 4,54 (dd, J = 8,6, 4,3 Hz, 1H), 4,47 - 4,43 (m, 2H), 4,37 - 4,33 (m, 2H).

Etapa 6:

(S)-2-ciclopropil-2-((2-((S)-4-(fluorometil)-2-oxooxazolidin-3-il)-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-9-il) amino)acetamida

Se desgasificó una mezcla de (S)-3-(9-bromo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(fluorometil)oxazolidin-2-ona y (S)-3-(9-yodo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(fluorometil)oxazolidin-2-ona (195 mg, mezcla ~2:1 Br:I, ~0,49 mmol), L-ciclopropilglicina (104 mg, 0,90 mmol), yoduro cuproso (17 mg, 0,09 mmol) y fosfato de potasio tribásico (190 mg, 0,90 mmol) en dimetilsulfóxido (1,5 ml) con argón con ultrasonido. Se calentó la mezcla de reacción a 100 °C durante 16 horas, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla resultante con dimetilsulfóxido (1,0 ml) y se añadieron cloruro de amonio (144 mg, 2,70 mmol) y trietilamina (950 |jl, 6,75 mmol). A continuación, a esta mezcla se le añadió hexafluorofosfato de 3-óxido de 1- [¿/s(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-¿]piridinio (1,54 g, 4,05 mmol) en porciones y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora. Se diluyó La mezcla resultante con solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el residuo bruto resultante por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-5 % de metanol en diclorometano) y, a continuación, se purificó además por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-100 % de acetato de metilo en ciclohexano) para proporcionar 90 mg (48 %) de 105 como un sólido blanquecino. CLEM (ESI): Rt (min) = 2,76 [M+H]+ = 416, procedimiento = A; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 57,94 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,40 (s. a., 1H), 7,17 (s, 1H), 7,03 (s. a., 1H), 6,41 (dd, J =8,8, 2,3 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,99 (ddd, J = 48,3, 9,8, 2,5 Hz, 1H), 4,81 - 4,56 (m, 3H), 4,40 (dd, J = 8,6, 3,9 Hz, 1H), 4,37 - 4,29 (m, 4H), 3,15 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 1,16 - 1,05 (m, 1H), 0,54 - 0,43 (m, 3H), 0,33 - 0,25 (m, 1H).

Ejemplo 106

(S)-2-((2-((S)-4-(fluorometil)-2-oxooxazolidin-3-il)-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-9-il)amino)propa namida 106 (referencia)

Se desgasificó una mezcla de (S)-3-(9-bromo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(fluorometil)oxazolidin-2-ona y (S)-3-(9-yodo-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(fluorometil)oxazolidin-2-ona (ejemplo 105, etapa 5) (195 mg, mezcla aproximada 2:1 9-Br: 9-I, un aproximado de 0,49 mmol), L-alanina (87 mg, 0,98 mmol), yoduro cuproso (17 mg, 0,09 mmol) y fosfato de potasio tribásico (208 mg, 0,98 mmol) en dimetilsulfóxido (3,0 ml) con argón con ultrasonido. Se calentó la mezcla de reacción a 100 °C durante 4 horas, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla resultante con dimetilsulfóxido (3,0 ml) y se añadieron cloruro de amonio (157 mg, 2,94 mmol) y trietilamina (683 jl, 4,8 mmol). A continuación, a esta mezcla se le añadió hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[¿/s(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-¿]piridinio (1,10 g, 2,94 mmol) en porciones y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se diluyó La mezcla resultante con solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el residuo resultante por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-5 % de metanol en diclorometano) y, a continuación, se purificó además por cromatografía de fluido supercrítico quiral para proporcionar 36 mg (19 %) de 106 como un sólido blanquecino. CLEM (ESI): Rt (min) =2,43 [M+H]+ = 390, procedimiento = A; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 57,96 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,37 (s. a., 1H), 7,17 (s, 1H), 7,00 (s. a., 1H), 6,39 (dd, J = 8,6, 1,6 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,08 - 4,55 (m, 5H), 4,42 - 4,28 (m, 4H), 3,76 (quinteto, J = 7,2 Hz, 1H), 1,30 (d, J = 7,2 Hz, 3H).

Ejemplo 107

(S)-2-((2-((S)-4-(dDifluorometil)-2-oxooxazolidin-3-il)-5,6-dihidrobenzo[/]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-9-il)amino)but anamida 107 (referencia)

Se agitó una mezcla de (S)-3-(9-bromo-5,6-dihidrobenzo[t]imidazo[1,2-d][1,4]oxacepin-2-il)-4-(difluorometil)oxazolidin-2-ona (ejemplo 101, etapa 12) (240 mg, 0,60 mmol), ácido (s)-2-aminobutírico (124 mg, 1,19 mmol), yoduro cuproso (22,8 mg, 0,119 mmol), fosfato de potasio tribásico (255 mg, 1,19 mmol) y dimetilsulfóxido (6,0 ml) en argón a 100 °C durante 6 horas. Se dejó enfriar la mezcla resultante hasta temperatura ambiente y, a continuación, se añadieron cloruro de amonio (188 mg, 3,52 mmol) y trietilamina (1,2 ml, 8,80 mmol). A la suspensión agitada se le añadió hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[¿/s(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-¿]piridinio (2,01 g, 5,28 mmol), en porciones y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora. Se diluyó la mezcla resultante con acetato de etilo, se lavó con cloruro de amonio saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó a vacío. Se purificó el producto bruto por medio de cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gradiente de disolvente: 0-10 % de metanol en acetato de etilo), se purificó además por medio de HPLC de fase inversa, a continuación cromatografía de fluido supercrítico quiral para proporcionar 73,6 mg (30 %) de 107 como un sólido blanco. CLEM (ESI): Rt (min) = 3,13, [M+H]+ = 422, procedimiento = A; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 7,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,71 (t, J = 56,0 Hz, 1H), 6,44 (dd, J = 8,8, 2,2 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,02 - 4,89 (m, 1H), 4,62 - 4,53 (m, 2H), 4,41 - 4,27 (m, 4H), 3,65 - 3,60 (m, 1H), 1,72 - 1,59 (m, 2H), 0,94 (t, J = 7,3 Hz, 3H).

Ejemplo 901 Ensayo de unión a p110a (alfa) de PI3K

Los ensayos de unión a PI3K están destinados a determinar la potencia bioquímica de los inhibidores de PI3K de molécula pequeña. La reacción de cinasa lipídica PI3K se realiza en presencia del sustrato lipídico PIP2:3PS (Promega n.° V1792) y ATP. Después de la finalización de la reacción de cinasa, se detecta el recambio de ATP a ADP por la fosforilación del sustrato lipídico usando el ensayo Promega ADP-Glo™ (Promega n.° V1792). Las reacciones se llevan a cabo usando las siguientes condiciones para cada isoforma de PI3K como en la tabla 5.

Tabla 5.

Después de 120 minutos de tiempo de reacción, se finaliza la reacción de cinasa. Cualquier ATP restante después de que la reacción se agota, dejando solo ADP. A continuación, se añade el reactivo de detección de cinasa para convertir el ADP en ATP, que se usa en una reacción acoplada luciferina/luciferasa. Se mide la salida luminiscente y se correlaciona con la actividad cinasa.

Todas las reacciones se llevan a cabo a temperatura ambiente. Para cada isoforma de PI3K se añade una mezcla de 3 |jl (1:1) de solución de enzima/sustrato lipídico a una placa de ensayo blanca de 384 pocillos (Perkin Elmer n.° 6007299) que contiene 50 nl de compuesto de prueba o DMSO solo para controles no tratados. Se inicia la reacción por la adición de 2 j l de ATP/MgCh. El tampón de reacción de cinasa contiene HEPES 50 mM, NaCl 50 mM, MgCl²3 mM, BSA al 0,01 %, DMSO al 1 % y las concentraciones de enzima y de sustrato como se indica en la tabla anterior. Se detiene la reacción por la adición de 10 j l de reactivo ADP-Glo. Se leen las placas en un sistema Perkin Elmer Envision usando el modo de luminiscencia. Se generan curvas de respuesta de dosis de 10 puntos para cada compuesto de prueba. Se determinan los valores de Ki para cada compuesto usando la ecuación de Morrison.

Ensayos de unión: Los experimentos iniciales de polarización se realizaron en un Analyst HT 96-384 (Molecular Devices Corp, Sunnyvale, CA.). Se prepararon las muestras para las mediciones de afinidad por polarización de fluorescencia por la adición de diluciones en serie 1:3 de p110alfa de PI3K (Upstate Cell Signaling Solutions, Charlottesville, VA) comenzando en una concentración final de 20 ug/ml en tampón de polarización (Tris 10 mM, pH 7,5, NaCl 50 mM, MgCh 4 mM, Chaps al 0,05 % y DTT 1 mM) hasta una concentración final de PIP² 10 mM (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT.). Después de un tiempo de incubación de 30 minutos a temperatura ambiente se detuvieron las reacciones por la adición de GRP-1 y la sonda PIP3-TAMRA (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT.) a concentraciones finales de 100 nM y 5 nM, respectivamente. Se realizó la lectura con filtros de corte estándar para el fluoróforo rodamina (Aex = 530 nm; Aem = 590 nm) en placas Proxiplates® negras de bajo volumen de 384 pocillos (PerkinElmer, Wellesley, MA). Se representaron los valores de polarización de fluorescencia en función de la concentración de proteína. Se obtuvieron los valores de CE⁵⁰ ajustando los datos a una ecuación de cuatro parámetros usando el programa informático KaleidaGraph® (Synergy Software, Reading, PA). Este experimento también establece la concentración de proteína apropiada para usar en posteriores experimentos de competencia con inhibidores.

Se determinaron los valores de CI⁵⁰ del inhibidor por la adición de 0,04 mg/ml de p110alfa de PI3K (concentración final) combinada con PIP² (concentración final de 10 mM) a los pocillos que contenían diluciones en serie 1:3 de los antagonistas en una concentración final de ATP de 25 mM (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA) en el tampón de polarización. Después de un tiempo de incubación de 30 minutos a temperatura ambiente se detuvieron las reacciones por la adición de GRP-1 y la sonda PIP3-TAMRA (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT.) a concentraciones finales de 100 nM y 5 nM, respectivamente. Se realizó la lectura con filtros de corte estándar para el fluoróforo rodamina (Aex = 530 nm; Aem = 590 nm) en placas Proxiplates® negras de bajo volumen de 384 pocillos (PerkinElmer, Wellesley, MA). Se representaron los valores de polarización de fluorescencia en función de la concentración de antagonista, y se obtuvieron los valores de CI⁵⁰ ajustando los datos a una ecuación de 4 parámetros en el programa informático Assay Explorer (MDL, San Ramon, CA).

De forma alternativa, se determinó la inhibición de PI3K en un ensayo radiométrico usando enzima recombinante purificada y ATP a una concentración de 1 |jm (micromolar). Se realizaron diluciones en serie del compuesto en DMSO al 100 %. Se incubó la reacción de cinasa durante 1 h a temperatura ambiente y se finalizó la reacción por la adición de PBS. Se determinaron los valores de CI⁵⁰ posteriormente usando un ajuste sigmoidal de la curva dosis-respuesta (pendiente variable).

Ejemplo 902 Inhibición selectiva de PI3Ka (alfa) mutante

Se determinó la capacidad de un compuesto de la invención de actuar preferentemente contra células que contienen PI3Ka (alfa) mutante midiendo la inhibición de la vía de PI3K en líneas celulares isógenas SW48: PI3Ka natural (original) con mutación E545K de dominio helicoidal y con mutación H1047R de dominio cinasa. Los siguientes ensayos están destinados a determinar la potencia celular y la selectividad por el mutante de los inhibidores de PI3Ka de molécula pequeña. El ensayo utiliza líneas celulares isógenas que expresan PI3Ka WT, PI3Ka con mutación E545K/+ (Horizon Discovery 103-001) o PI3Ka con mutación H1047R/+ (Horizon Discovery 103-005). Se mide la potencia de la inhibición de pPRAS40 por PI3Ka en cada línea celular después de 24 horas de tratamiento con el compuesto. Se determina la selectividad por el mutante de los inhibidores de PI3Ka por las proporciones de potencia de CE⁵⁰ en las líneas celulares WT frente a E545K y en las líneas celulares WT frente a H1047R.

Cultivo celular: Se mantienen las líneas celulares en una estufa de incubación de cultivo celular a 37 °C y 5 % de CO² en medio de cultivo celular que contiene RPMI1640 (preparado en Genentech), FBS al 10 % (Gibco 16140-071), L-glutamina 2 mM (preparada en Genentech) y HEPES 10 mM pH 7,2 (preparado en Genentech). Se dividen las células cada 72 horas en una proporción 1:8 usando tripsina-EDTA al 0,25 % (Gibco 25200).

Procedimiento de ensayo: Se obtienen las células y se siembran en placas de ensayo tratadas con cultivo de tejido de 384 pocillos (Greiner, n.° de cat. 781091) y se incuban durante la noche a 37 °C con 5 % de CO². Se siembran las tres líneas celulares (WT, E545K y H1047R) y se someten a ensayo en paralelo. Al día siguiente, se diluyen en serie los compuestos de prueba en dimetilsulfóxido (DMSO) y se añaden a las células (concentración final de DMSO de 0,5 %). A continuación, se incuban las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO². Después de 24 horas, se lisan las células y se miden los niveles de pPRAS40 usando el kit de ensayo de 384 pocillos para pPRAS40 personalizado de Meso-Scale (Meso Scale Discovery, n.° de cat. L21CA-1). Se añaden los lisados celulares a las placas de ensayo recubiertas previamente con anticuerpos contra PRAS40 fosforilado. Se deja que el PRAS40 fosforilado de las muestras se una a los anticuerpos de captura durante la noche a 4 °C. Se añade el anticuerpo de detección (anti-PRAS40 total, marcado con una marca SULFO-TAG electroquimioluminiscente) al lisado unido y se incuba durante 1 hora a temperatura ambiente. Se añade el tampón de lectura de MSD de modo que cuando se aplica un voltaje a los electrodos de la placa, los marcadores unidos a la superficie del electrodo emiten luz. El instrumento MSD Sector mide la intensidad de la luz y mide cuantitativamente la cantidad de fósforo-PRAS40 en la muestra. Se calcula el porcentaje de inhibición de la fosforilación de PRAS40 por concentraciones variables de los compuestos de prueba en relación con controles no tratados. Se calculan los valores de CE⁵⁰ usando el modelo de dosis-respuesta de regresión logística no lineal de 4 parámetros.

Análisis estadístico: Los valores de CE⁵⁰ representan la media geométrica de un mínimo de 4 experimentos independientes. Todos los estadígrafos se realizaron usando el programa informático KaleidaGraph (versión 4.1.3). Se realizó una prueba de la t de Student usando datos no emparejados con igual varianza para comparar la actividad contra las células mutantes y las células naturales. Se considera que P < 0,05 es significativo.

Ejemplo 903 Ensayos de viabilidad celular in vitro

Se sembraron las células (1500 células/pocillo) en placas de 384 pocillos durante 16 h. El día 2 se prepararon nueve diluciones en serie 1:3 del compuesto en DMSO en una placa de 96 pocillos. A continuación, se diluyeron además los compuestos en medios de crecimiento usando un robot Rapidplate (Zymark Corp.). A continuación, se añadieron los compuestos diluidos a pocillos por cuadruplicado en placas de células de 384 pocillos y se incubaron a 37 °C y un 5 % de CO². Después de 4 d, se midieron los números relativos de células viables por luminiscencia usando Cell-Titer Glo (Promega) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se leyeron en un lector Wallac Multilabel Reader (Perkin-Elmer). Se calcularon los valores de CE50 usando el programa informático Prism 6.0 (GraphPad).

Ejemplo 904 Eficacia del xenoinjerto de tumor de ratón in vivo

Ratones: Los ratones hembra con inmunodeficiencia combinada grave (C.B-17 SCID.bg Charles River Labs, San Diego), ratones NOD.SCID (Charles River Labs, Hollister) o ratones NCR.nude (Taconic) tenían de 8 a 9 semanas de edad y tenían un intervalo de peso corporal de 18-26 gramos el día 0 del estudio. Los animales recibieron agua a voluntad y una dieta Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010 (LabDiet St. Louis, MO). Los ratones se alojaron en microaisladores en un ciclo de luz de 12 horas. Genentech cumple específicamente con las recomendaciones de la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio con respecto a la restricción, la cría, los procedimientos quirúrgicos, la regulación de alimentos y líquidos y la atención veterinaria. El programa de cuidado y uso de animales de Genentech está acreditado por la Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International (AAALAC), que garantiza el cumplimiento de las normas aceptadas para el cuidado y uso de animales de laboratorio. Los ratones se alojaron en Genentech en jaulas de microaisladores para roedores estándar y se aclimataron a las condiciones del estudio durante al menos 3 días antes del implante de células tumorales. Para el estudio solo se usaron animales que parecían estar sanos y que no presentaban anomalías evidentes.

Implantación tumoral: Los xenoinjertos se iniciaron con células cancerosas (HCC1954x1 o KPL4) o bien con tumores de paso (HCI-003). Se cultivaron las células en medio RPMI 1640 complementado con suero fetal bovino al 10 %, glutamina 2 mM, 100 unidades/ml de penicilina, 100 |jg/ml (microgramos por ml) de sulfato de estreptomicina y 25 jg/m l de gentamicina, se obtuvieron en la fase logarítmica del crecimiento y se resuspendieron en Matrigel sin rojo fenol al 50 % (Becton Dickinson Bioscience; San José, CA) y solución salina equilibrada de Hank a una concentración de 3 x 106 o 5 x 106 células/ml, dependiendo del tiempo de duplicación de la línea celular. Para el modelo derivado del paciente HCI-003, se implantaron subcutáneamente 30 mg de microesferas de cera de abejas que contenían aproximadamente 1 mg de 17^ (beta)-estradiol 3 días antes del implante de fragmentos tumorales. Se implantaron células o fragmentos tumorales en 2/3 del cuerpo adiposo mamario, y se supervisó el crecimiento tumoral a medida que el tamaño promedio se aproximaba al intervalo objetivo de 100 a 250 mm3. Cuando la mayoría de los tumores alcanzaron el intervalo objetivo, se distribuyeron los ratones en grupos de 7-10 ratones en base al volumen del tumor.

Agentes terapéuticos: Se suministraron los compuestos contra PI3K como una base libre en polvo seco y se almacenaron a temperatura ambiente protegidos de la luz. El vehículo para taselisib (GDC-0032) y BYL719 fue metilcelulosa al 0,5 %: Tween 80 al 0,2 % (MCT) en agua desionizada. El control de vehículo para el compuesto 101 fue una nanosuspensión de metilcelulosa al 0,5 %/Tween-80 al 0,2 % (MCT). La nanosuspensión de MCT se prepara preparando inicialmente una suspensión de MCT. Una vez preparada, se usan microesferas de vidrio de 1 mm y una barra de agitación magnética de tierras raras para moler la suspensión de MCT durante aproximadamente 24 horas para producir una nanosuspensión fina. Se usó un analizador de tamaño de partícula para verificar el tamaño de partícula final. Las dosis de fármaco se prepararon semanalmente y se almacenaron a 4 °C.

Tratamiento: Los ratones recibieron (vehículo) o la dosificación en mg/kg indicada de los compuestos contra PI3K (expresada como equivalente de base libre), v.o. por alimentación por sonda gástrica diaria durante 21-28 días en un volumen de 100 jl, microlitros (5 ml/kg).

Criterio de valoración: Se midió el volumen del tumor en 2 dimensiones (largo y ancho), usando calibres Ultra Cal IV (modelo 54 10 111; Fred V. Fowler Company), como sigue: volumen del tumor (mm3) = (largo x ancho2) x 0,5 y se analizó usando Excel versión 11.2 (Microsoft Corporation). Se usó un enfoque de un modelado de efectos mixtos lineales (LME) para analizar la medición repetida de los volúmenes del tumor de los mismos animales a lo largo del tiempo (Pinheiro J, et al. "nlme: linear and nonlinear mixed effects models", 2009; paquete R versión 3.2.5. Este enfoque aborda tanto las mediciones repetidas como los abandonos modestos debidos a cualquier muerte de animales no relacionada con el tratamiento antes del final del estudio. Se usaron interpolaciones segmentarias de regresión cúbica para ajustar un perfil no lineal a las evoluciones temporales del log2 de volumen del tumor en cada nivel de dosis. A continuación, estos perfiles no lineales se relacionaron con la dosis dentro del modelo mixto. Se calculó la inhibición del crecimiento tumoral como porcentaje del control de vehículo (% de ICT) como el porcentaje del área bajo la curva (ABC) ajustada para el grupo de dosis respectivo por día en relación con el vehículo, usando la siguiente fórmula: % de ICT = 100 x (1 - ABCdosis/ABCveh). Usando esta fórmula, un valor de ICT de un 100 % indica estasis tumoral, un valor de ICT de más de un (>) 1 % pero menos de un (<) 100 % indica un retraso en el crecimiento tumoral y un valor de ICT de más de un (>) 100 % indica remisión tumoral. La respuesta parcial (RP) para un animal se definió como una remisión tumoral de más de un (>) 50 % pero menos de un (<) 100 % del volumen del tumor inicial. La respuesta completa (RC) se definió como un 100 % de remisión tumoral (es decir, tumor no mensurable) en cualquier día durante el estudio.

Toxicidad: Los animales se pesaron diariamente durante los primeros cinco días del estudio y dos veces por semana después de esto. Se midió el peso corporal de los animales usando una báscula Adventurer Pro® AV812 (Ohaus Corporation). Se calculó el porcentaje de cambio de peso como sigue: cambio de peso corporal (%) = [(pesodía nuevo - pesodía ⁰)/pesodía ⁰] x 100. Los ratones se observaron con frecuencia para detectar signos manifiestos de cualquier efecto secundario adverso relacionado con el tratamiento, y se registraron los signos clínicos de toxicidad cuando se observaron. La toxicidad aceptable se define como una pérdida de peso corporal (PC) media de grupo de menos de un 20 % durante el estudio y no más de una muerte relacionada con el tratamiento (RT) entre diez animales tratados. Cualquier pauta posológica que dé como resultado una mayor toxicidad se considera por encima de la dosis máxima tolerada (DMT). Una muerte se clasifica como RT si es atribuible a los efectos secundarios del tratamiento como se evidencia por los signos clínicos y/o la autopsia, o también se puede clasificar como RT si se debe a causas desconocidas durante el período de dosificación o dentro de los 10 días posteriores a la última dosis. Una muerte se clasifica como NRT si no exiten pruebas de que la muerte estuviera relacionada con los efectos secundarios del tratamiento.

Ejemplo 905. Cultivo celular y experimentos de inhibidores in vitro

Se cultivaron las líneas celulares en condiciones estándar de cultivo de tejidos en medio RPMI con suero fetal bovino al 10 %, 100 U/ml de penicilina y 100 |jg/ml de estreptomicina. HCC-1954 y HDQ-P1 son líneas celulares de cáncer de mama (American Type Culture Collection; Manassas, VA). Se dispusieron las células HCC-1954 y HDQ-P1 en cada pocillo de una placa de cultivo de tejidos de 6 pocillos a 80.000 células/pocillo y se incubaron a 37 °C durante la noche. Se incubaron las células con las concentraciones indicadas de cada compuesto durante 24 horas. Después de la incubación, se lavaron las células una vez con solución salina tamponada con fosfato (PBS) fría y se lisaron en tampón de extracción celular Biosource™ (Invitrogen; Carlsbad, CA) complementado con inhibidores de proteasa (F. Hoffman-LaRoche; Mannheim, Alemania), fluoruro de fenilmetilsulfonilo 1 mM y combinados de inhibidores de fosfatasa 1 y 2 (Sigma-Aldrich; St. Louis, MO). Se determinaron las concentraciones de proteínas usando el kit de ensayo de proteínas Pierce BCA (Thermo Fisher Scientific; Rockford, IL).

Ensayos de proteínas

Se determinó la concentración de proteína usando el kit de ensayo de proteínas Pierce BCA (Rockford, IL). Para las inmunotransferencias, se separaron cantidades iguales de proteína por electroforesis a través de geles de gradiente 4-12 % de NuPage Bis-Tris (Invitrogen; Carlsbad, CA); se transfirieron las proteínas a membranas de nitrocelulosa usando el sistema iBlot y el protocolo de InVitrogen. Los anticuerpos contra p110alfa y fosfo-Akt (Ser473) se obtuvieron de Cell Signaling (Danvers, MA). Los anticuerpos contra p-actina y GAPDH eran de Sigma.

Ejemplo 906 Expresión de CD69 en linfocitos B, ensayo de sangre humana completa para expresión de CD69 en linfocitos B CD19+ CD27'

Cultivo celular: Se distribuyó sangre humana completa en placas de 96 pocillos profundos a 100 j l por pocillo. Se diluyeron los compuestos en DMSO para generar las concentraciones patrón deseadas y, a continuación, se diluyeron además en PBS a la concentración de trabajo deseada y se añadieron en un volumen de 5,5 j l por pocillo. A continuación, se incubaron las muestras durante 1 hora a 37 °C en 5 % de CO² antes de la adición de 5 jg (10 j l por pocillo) de anti-F(ab')2 de IgM de cabra (Southern Biotech, AL) y se incubaron durante 18 horas a 37 °C en 5 % de CO². Todos los tratamientos se sometieron a prueba por duplicado.

Procedimientos de aislamiento y tinción celular: Después de la incubación, se determinó el nivel de expresión de CD69 en las células CD19+ CD27' tiñendo las muestras de sangre completa con un combinado de CD27; 10 jl/pocillo (clon L128; BD Biosciences, NJ) CD19; 7,5 jl/pocillo (clon SJ25C1; BD Biosciences, NJ) y CD69; 10 j l (clon FN50; BD Biosciences, NJ). Además, se tiñó la sangre humana completa de cada donante con anticuerpos de control fluorescente con isotipo compatible. Después de la adición del combinado de anticuerpos apropiado, se tiñeron las muestras de sangre completa durante 30 minutos en la oscuridad y, a continuación, se lisaron usando lisis de BD Pharm (BD Bioscience, NJ). A continuación, se lavaron las muestras resultantes con tampón FACS (solución salina tamponada con fosfato (sin Ca/Mg++), EDTA 1 mM, HEPES 25 mM pH 7,0, suero fetal bovino al 1 % (inactivado por calor) y se fijaron en tampón FACS complementado con formaldehído al 0,1 % (Polysciences Inc, PA) y Pluronic F-68 al 0,1 % (Sigma, MO). Se adquirieron los datos usando un BD LSR-II (BD Biosciences) con el programa informático BD FACSDiva.

Expresión de CD69 en linfocitos B CD19+ CD27-. Se evaluaron las células por citometría de flujo para determinar los niveles de CD19, CD27 y CD69 usando el programa informático BD FACSDiva y se determinó la media de IMF de CD69 de la población de linfocitos CD19+ CD27-. Se determinó la concentración del compuesto dando como resultado una inhibición de un 50 % de la media de IMF de CD69 (CI⁵⁰) usando el programa informático Genedata (Genedata Screener, MA).

Ejemplo 907 CE⁵⁰ de pPRAS40 en HCC1954 y HDQP1

Se siembran las células en placas de ensayo tratadas para cultivo de tejidos de 384 pocillos y se incuban durante la noche. Al día siguiente, se tratan las células con los compuestos y se incuban durante 24 horas. Después de 24 horas, se lisan las células y se miden los niveles de pPRAS40 usando la plataforma de ensayo Meso-Scale. Estas líneas celulares son bastante útiles para caracterizar la selectividad de los inhibidores de PI3Ka por PI3Ka mutante. La línea celular HCC 1954 expresa PI3Ka mutante (E545K) frente a WT en HDQP1.

Principio del ensayo: La plataforma MSD proporciona un procedimiento de medición de los niveles fosforilados de pPRAS40 en una única muestra. Se añaden los lisados celulares a las placas de ensayo recubiertas previamente con anticuerpos contra PRAS40 total. Después de la lisis celular, se deja que el PRAS40 de las muestras se una a los anticuerpos de captura. Se añade el anticuerpo de detección (anti-fosfo PRAS40), marcado con un compuesto electroquimioluminiscente MSD SULFO-TAG, al lisado unido. Se añade el tampón de lectura de MSD de modo que cuando se aplica un voltaje a los electrodos de la placa, los marcadores unidos a la superficie del electrodo emiten luz. El instrumento MSD Sector mide la intensidad de la luz y mide cuantitativamente la cantidad de fósforo_EGFR en la muestra (principio del ensayo de Meso Scale).

Materiales:

Procedimiento:

• Compuestos preparados a una concentración de 2 mM en DMSO. Preparar la placa de valoración de compuesto en DMSO, 1:3 en DMSO puro.

• La placa original con DMSO contiene 72 pl de 13 compuestos.

• Compuesto de control selectivo para mutante: Añadir 72 ul de compuesto de control 2 mM al pocillo B2 de cada placa de ensayo. Este compuesto de control demuestra una potencia aproximadamente 20 veces mayor en la línea celular HCC1954 frente a la línea HDQP1.

• Usando una pipeta multicanal, transferir 36 ul de cada pocillo con compuesto al pocillo directamente inferior (por ejemplo, de B2 a C2) para establecer curvas de dosis-respuesta duplicadas.

• Usar el procedimiento Biomek Fx titulado "SLS_serial dilution/1 plate_384_3_13_3x" para preparar diluciones en serie de los compuestos en la placa original.

• Sellar y mantener las placas con DMSO tanto original como derivada con un sellador de calor cuando no se esté usando.

Día 1: siembra de células

1. Sembrar 12.500 células en 45 ul de medio para cada línea celular. Dejar que las células se asienten/fijen a la placa durante 15-20 min a temperatura ambiente.

2. Incubar las células durante la noche en una estufa de incubación con control de CO2 y humedad a 37 °C.

Día 2: preparación de placas de compuesto y tratamiento con el compuesto

1. Para la placa de dilución intermedia 10X: añadir 95 ul de medio sin suero en una placa de polipropileno Greiner de 384 pocillos de perfil estándar.

2. Usar el protocolo biomek Fx para la dilución intermedia de los compuestos en los medios y adición a células: "SLS Intermed Dil Add 5 ul to Cells, julio 13, 2012". Este protocolo de Biomek transfiere 5 ul de la placa con DMSO derivada a la placa de dilución intermedia que contiene 95 ul de medio y mezcla los medios+los compuestos. A continuación, el procedimiento transfiere 5 ul de la placa de dilución intermedia a la placa de células apropiada.

3. Incubar las células tratadas a 37 grados durante 24 horas en una estufa de incubación humidificada con CO2 al 5 %.

Día 3: lisis celular y adición a placas de MSD

Bloquear la placa de ensayo de MSD con 50 ul de solución bloqueadora A/tampón de lavado de MSD 1X al 3 % 1-2 h a temperatura ambiente. Esta solución se puede almacenar a 4 °C durante hasta un mes. El tampón de bloqueo A contiene tampón de lavado de MSD 1x . 20 ml de tampón de lavado Tris 1X y 600 mg de solución bloqueadora A.

Preparar el tampón de lisis:

Aspirar los medios y lisar las células

1. Lisar las células en 50 |jl de tampón de lisis. Lisar a temperatura ambiente durante 10-20 minutos en un agitador de placas.

2. Mientras las células se lisan, lavar las placas bloqueadas con 1x tampón de lavado de MSD.

3. Transferir 42 ul de lisados (21 21 jl) a una placa de ensayo con pPRAS40 de MSD bloqueada.

4. Sellar las placas de MSD e incubar a 4 °C con agitación durante la noche.

Día 4: ensayo de MSD/Detección

8. Preparar una solución de solución bloqueadora A al 1 % en tampón de lavado de MSD 1X. (20 ml de tampón de lavado Tris 1X y 200 mg de solución bloqueadora A (1 % p/v). Esta solución se puede almacenar a 4 °C durante hasta un mes.

9. Lavar las placas de MSD con tampón de lavado de MSD 1x.

10. Añadir 10 j l del anticuerpo de detección SULFO-TAG diluido a las placas. Incubar durante 1 h con agitación a temp. ambiente.

11. Lavar las placas 4X con tampón de lavado de MSD 1X.

12. Añadir 35 |jl de tampón de lectura 1X con pipeteo inverso para evitar burbujas.

13. Leer la placa de inmediato en el instrumento MSD SECTOR.

Ejemplo 908 Cocristalografía con p110a (alfa)

Se produjo p110a (alfa) truncada en el extremo N de acuerdo con Chen et al. y Nacht et al. (Chen, P., Y. L. Deng, S. Bergqvist, M. D. Falk, W. Liu, S. Timofeevski y A. Brooun "Engineering of an isolated p110alpha subunit of PI3Kalpha permits crystallization and provides a platform for structure-based drug design", (2014) Protein Sci 23(10): 1332-1340; Nacht, M. et al. (2013) "Discovery of a potent and isoform-selective targeted covalent inhibitor of the lipid kinase PI3Kalpha", J. Med. Chem. 56(3): 712-721).

Se aplicaron protocolos estándar para la producción de cristales en presencia de los compuestos del proyecto. Se conservaron los cristales obtenidos para la recopilación de datos de difracción por inmersión en nitrógeno líquido y se montaron en una línea de luz sincrotrón que producía rayos X monocromáticos. Se recopilaron, redujeron y fusionaron los datos de difracción usando protocolos estándar. Las celdas unitarias cristalográficas y el grupo espacial fueron isomorfos con los reportados previamente (Nacht, 2013; Chen, 2014). La disposición de los compuestos del proyecto en mapas de densidad electrónica y el refinamiento cristalográfico a unos límites de resolución de entre 2,36 y 2,56 A se realizaron usando protocolos estándar.

En la presente solicitud, las unidades ul, umol, etc., significan jl, jmol, etc.

Claims (6)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica compuesta por un compuesto, que es

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo, fluidificante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el vehículo, fluidificante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable se selecciona de dióxido de silicio, celulosa en polvo, celulosa microcristalina, estearatos metálicos, aluminosilicato de sodio, benzoato de sodio, carbonato de calcio, silicato de calcio, almidón de maíz, carbonato de magnesio, talco sin amianto, Stear-O-Wet C, almidón, almidón 1500, laurilsulfato de magnesio, óxido de magnesio y combinaciones de los mismos.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 o 2 para su uso en el tratamiento del cáncer de mama.

4. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que el cáncer de mama es un cáncer de mama positivo para receptores hormonales (HR+) que expresa una mutación de PIK3CA.

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 4 en la que el cáncer de mama expresa una mutación de PIK3CA seleccionada de E542K, E545K, Q546R, H1047L y H1047R.

6. Un procedimiento para preparar una composición farmacéutica que comprende combinar un compuesto, que es

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con un vehículo, fluidificante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.