ES2906109T3 - Ligandos de la integrina alfa- v beta-6 y usos de los mismos - Google Patents

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Abstract

Un ligando de la integrina αvβ6 que comprende: RG1DLXaa1Xaa2L-Xaa3Xaa4L-R1 (SEQ ID NO: 96) (Fórmula VIII) en donde R es L-arginina; G1 es L-glicina o N-metil glicina; D es ácido L-aspártico (L-aspartato); L es L-leucina; Xaa1 es L-alanina; Xaa2 es el ácido L-α-aminobutírico (Abu); Xaa3 es citrulina (Cit); Xaa4 es ácido aminoisobutírico (Aib); y R1 es opcional y, si está presente, incluye PEG y/o un grupo de unión.

Description

DESCRIPCIÓN
Ligandos de la integrina alfa- v beta-6 y usos de los mismos
Campo de la invención
Se describen ligandos de la integrina alfa-v beta-6 (avp6) que se basan en péptidos útiles para dirigirse a la integrina avp6 y/o dirigirse a células que expresan la integrina avp6. Los ligandos de la integrina avp6 pueden conjugarse con una o más moléculas de carga para facilitar el suministro de las moléculas de carga a las células que expresan la integrina avp6, tales como las células epiteliales.
Antecedentes
La integrina alfa-v beta-6 (avp6), que se expresa en varias células epiteliales, es un receptor para el péptido asociado a la latencia (LAP) del TGF-p y para las proteínas (ECM) fibronectina, vitronectina y tenascina.
Aunque es apenas detectable en epitelios de adultos sanos normales, la integrina avp6 aumenta durante la cicatrización de heridas y en diferentes tipos de cáncer (por ejemplo, cáncer de colon, ovario, endometrio y gástrico), y a menudo se asocia con un mal pronóstico del cáncer. Se ha demostrado que la integrina avp6 puede promover la invasión y la migración celular en la metástasis e inhibir la apoptosis. La integrina avp6 también puede regular la expresión de las metaloproteasas de matriz (MMP) y activar el TGF-p1. Hay evidencia crecientes, principalmente de estudios in vitro, que sugieren que la integrina avp6 puede promover la progresión del carcinoma. Por lo tanto, la integrina avp6 es atractiva como un biomarcador tumoral y diana terapéutica potencial y por su papel en la expresión de metaloproteasas de matriz (MMP) y la activación del TGF-p1.
En WO 2015/160770 se describen conjugados de péptidos pegilados biterminales que se dirigen a una integrina tal como la integrina avp6. En realizaciones particulares descritas, los conjugados de péptidos comprenden además un agente biológico tal como un agente de formación de imágenes o un agente terapéutico, por ejemplo, unido covalentemente a uno de los restos de PEG. Los conjugados de péptidos descritos son particularmente útiles para obtener imágenes de un tumor, órgano o tejido y para tratar enfermedades y trastornos mediados por integrinas tales como cáncer, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, fibrosis crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), enfisema pulmonar y enfermedad crónica de la piel herida.
Shunzi Li y otros (2011) describen que la integrina a(v)p(6) es un biomarcador para el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), así como para otros carcinomas. Se describe un péptido tetramérico, denominado H2009.1, que se une a avp6 y muestra afinidad mínima por otras integrinas de unión a RGD. Este péptido se usa para suministrar activamente paclitaxel a las células positivas para avp6.
En WO 01/00660 se describen péptidos de fórmula Ac-Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-NH2 que son activos biológicamente como ligandos de la avp6, en los que: Ac representa acetilo, X1 representa Ser, Gly, Thr, Asp, Arg, Val, Tyr, His o Ala; X2 representa Leu, Ile, Nle, Val o Phe; X3 representa Asp, Glu, Lys, Phe, Aib, Nal, Gly, Ala, Bgl o Phg; X4 representa Gly, Ala, Ser, beta-Ala u omega-Abu; X5 representa Leu, Ile, Nle, Val o Phe, y; X6 representa Arg, Har, Lys, Leu, Orn, Phe, Ala, Tyr, Gly, Ser o Asp, de manera que los aminoácidos anteriormente mencionados pueden ser derivatizados.
Anne C. Conibear y otros (2016) describen el dehidroascorbato como un subproducto de las reacciones de clic de azida-alquino (CuAAc) catalizadas por cobre. El dehidroascorbato forma productos finales de glicación avanzada (AGE) en tejidos sometidos a estrés oxidativo.
Resumen
El alcance de la invención se define en el conjunto de reivindicaciones adjuntas.
En el presente documento se describen ligandos de la integrinas avp6 que se basan en péptidos novedosos, que no son de origen natural, modificados por ingeniería genética (también denominados ligandos de avp6) como se define en las reivindicaciones adjuntas. Los ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento son estables en suero y tienen afinidad por las integrinas avp6, y pueden unirse específicamente a ellas. En el presente documento se describen además composiciones que incluyen los presentes ligandos de la integrina avp6, y procedimientos de uso para los ligandos de la integrina avp6 y composiciones descritas en el presente documento. Cualquier referencia en la descripción a procedimientos de tratamiento se refiere a los presentes ligandos de la integrina avp6 y las composiciones que comprenden estos ligandos para su uso en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.
Los ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento tienen una estabilidad mejorada en comparación con otros péptidos de unión a la integrina avp6 conocidos, tal como el péptido natural RGDLATLRQL (SEQ ID NO: 1). Si bien tienen una mayor estabilidad del suero, los ligandos novedosos de avp6 descritos en el presente documento retienen la unión a (afinidad por) la integrina avp6.
Los presentes ligandos de la integrina avp6 comprenden la fórmula general: RG1DLXaa1Xaa2L-Xaa3Xaa4L-R1 (SEQ ID NO: 96) (Fórmula VIII), en la que R es L-arginina; G1 es L-glicina o glicina N-metilo; D es ácido L-aspártico (L-aspartato); L es L-leucina; Xaa1 es L-alanina; Xaa2 es ácido L-a aminobutírico (Abu); Xaa3 es citrulina (Cit); Xaa4 es ácido aminoisobutírico (Aib) y R1 es opcional y, si está presente, incluye polietilenglicol (PEG) y/o un grupo de unión.
Como se usa en el presente documento, una "caperuza de amina terminal" comprende un resto químico que puede aumentar y/o mejorar de otra manera la resistencia a proteasas y/o las características de estabilidad del suero de un péptido natural RGDLATL. Tales mejoras se pueden determinar, por ejemplo, mediante el uso de procedimientos generalmente conocidos en la técnica, que incluyen pero no se limitan a, por ejemplo, la determinación de la vida media del ligando de la integrina avp6, el conjugado ligando de la integrina avp6-molécula de carga, o la composición que contiene el ligando de la integrina avp6 in vivo y/o in vitro. En algunas realizaciones, Z incluye una acilación, sulfonilación, o alquilación resistente a proteasas de la amina N-terminal de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento. En algunas realizaciones, la caperuza Z de amina terminal puede ser CO-alquilo, ARCO, SO2-alquilo, ArSO2, grupos alquilo o arilo. En algunas realizaciones, los grupos alquilo pueden ser grupos alquilo alifáticos lineales o ramificados y los grupos arilo pueden ser grupos aromáticos o heteroaromáticos. En algunas realizaciones, la caperuza Z de amina terminal puede ser pero no se limita a, CH3CO, CH3CH2CO, CH3(CH2)2CO, (CH3)2CHCO, CH3(CH2)3CO, (CH3)2CHCH2CO, CH3CH2CH(CH3)CO, (CH3)3CCO, CH3(CH2)4CO, CH3SO2 , CH3CH2SO2, CH3(CH2)2SO2 , (CH3)2CHSO2, CH3(CH2)3SO2, (CH3)2CHCH2SO2 , CH3CH2CH(CH3)SO2 , (CH3)3CSO2, PhCO, PhSO2, grupo alquilo que tiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 átomos de carbono, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, NH2NH, PEG, guanidinilo, CH3OCH2CH2OCH2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)2CH2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)3CH2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)4CH2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)sCH2CH2CO, CH3OCH2CH2OCH2CO, CH3O(CH2CH2O)2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)3CH2CO, CH3O(CH2CH2O)4CH2CO, CH3O(CH2CH2O)5CH2CO, CH3OCH2CH2OCO, CH3O(CH2CH2O)2CO, CH3O(CH2CH2O)3CO, CH3O(CH2CH2O)4CO, CH3O(CH2CH2O)5CO, HOCH2CH2OCH2CH2CO, HO(CH2CH2O)2CH2CH2CO, HO(CH2CH2O)3CH2CH2CO, HO(CH2CH2O)4CH2CH2CO, HO(CH2CH2O)5CH2CH2CO, HOCH2CH2OCH2CO, HO(CH2CH2O)2CH2CO, HO(CH2CH2O)3CH2CO, HO(CH2CH2O)4CH2CO, HO(CH2CH2O)5CH2CO, HOCH2CH2OCO, HO(CH2CH2O)2CO, HO(CH2CH2O)3CO, HO(CH2CH2O)4CO, HO(CH2CH2O)5CO, CH3CH2OCH2CH2OCH2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)2CH2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)3CH2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)4CH2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)sCH2CH2CO, CH3CH2OCH2CH2OCH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)3CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)4CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)5CH2CO, CH3CH2OCH2CH2OCO, CH3CH2O(CH2CH2O)2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)3CO, CH3CH2O(CH2CH2O)4CO, CH3CH2O(CH2CH2O)5CO, CH3OCH2CH2CO, HOCH2CH2CO, o CH3CH2OCH2CH2CO.
En algunas realizaciones, la caperuza de amina terminal es CH3CO.
En algunas realizaciones, cualquiera de los ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento puede unirse a una molécula de carga, un grupo reactivo y/o un grupo reactivo protegido. Puede usarse un grupo reactivo para facilitar la conjugación del ligando de la integrina avp6 a una molécula, tal como una o más moléculas de carga (por ejemplo, cualquiera de las moléculas de carga descritas en el presente documento o conocidas en la técnica). Los ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento pueden aumentar el direccionamiento de una molécula de carga a una integrina avp6 o una célula que expresa una integrina avp6. Una molécula de carga puede ser, pero no se limita a, un ingrediente o compuesto farmacéuticamente activo, un producto farmacéutico, un profármaco o una sustancia terapéuticamente valiosa. En algunas realizaciones, una molécula de carga puede ser, pero no se limita a, una molécula pequeña, un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, una inmunoglobulina, un anticuerpo monoclonal, una etiqueta o marcador, un lípido, un polinucleótido o ácido nucleico natural o modificado (por ejemplo, un compuesto oligomérico tal como un oligonucleótido antisentido o un agente de ARNi), un péptido, un aptámero, un polímero, una poliamina, una proteína, una toxina, una vitamina, un polietilenglicol, un hapteno, una digoxigenina, una biotina , un átomo o molécula radiactiva, o un fluoróforo. En algunas realizaciones, una molécula de carga incluye un ingrediente farmacéuticamente activo, un producto farmacológico, o un profármaco. En algunas realizaciones, una molécula de carga incluye un compuesto oligomérico como ingrediente farmacéuticamente activo. En algunas realizaciones, una molécula de carga incluye un agente de ARNi como ingrediente farmacéuticamente activo.
En el presente documento se describe el uso de los ligandos de avp6 descritos para dirigir una molécula de carga a una célula que expresa avp6. La célula puede estar in vitro, in situ, ex vivo o in vivo. Las referencias a los procedimientos de tratamiento en los párrafos siguientes de esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un procedimiento para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para el diagnóstico).
En otro aspecto, esta descripción proporciona composiciones que incluyen uno o más de los ligandos de avp6 modificados genéticamente, que no son de origen natural descritos en el presente documento. Por ejemplo, en algunas realizaciones, las composiciones que comprenden uno o más ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento incluyen uno o más compuesto(s) oligoméricos, tales como uno o más agente(s) de ARNi, para suministrarse a una célula in vivo. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen composiciones para suministrar un agente de ARNi a una célula in vivo, en las que el agente de ARNi se conjuga con uno o más ligandos de avp6.
Se describen composiciones que incluyen uno o más ligandos de avp6. En algunas realizaciones, una composición comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, una composición que incluye uno o más ligandos de avp6 comprenden una o más sustancias farmacéuticas o ingredientes o compuestos farmacéuticamente activos.
En otras realizaciones, las composiciones comprenden medicamentos que incluyen uno o más ligandos de avp6 como se describe en el presente documento. En algunas realizaciones, el medicamento comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones que incluyen uno o más ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento pueden suministrarse in vivo o in vitro, por ejemplo, a células epiteliales alveolares tipo I y II, células caliciformes, células epiteliales secretoras, células epiteliales ciliadas, células epiteliales de la córnea y conjuntiva, células epiteliales dérmicas, colangiocitos, enterocitos, células epiteliales ductales, células epiteliales glandulares, túbulos renales, y tumores epiteliales (carcinomas).
En otro aspecto, la presente descripción proporciona procedimientos que comprenden el uso de uno o más ligandos de avp6 y/o composiciones como se describe en el presente documento y, si se desea, poner los ligandos de avp6 y/o composiciones descritos dentro de una forma adecuada para la administración como un producto farmacéutico. En otras realizaciones, la descripción proporciona procedimientos para la fabricación de los ligandos y las composiciones, por ejemplo, medicamentos, descritos en el presente documento.
Las composiciones que incluyen uno o más ligandos de la integrina avp6 pueden administrarse a sujetos in vivo mediante el uso de vías de administración conocidas en la técnica como adecuadas para tal administración en vista de la molécula de carga que se busca administrar, que incluye, por ejemplo, la administración intravenosa, subcutánea, administración intraperitoneal, intradérmica, transdérmica, oral, sublingual, tópica, intratumoral, intranasal, o inhalada (formulaciones en aerosol o polvo seco). En algunas realizaciones, las composiciones que incluyen uno o más ligandos de la integrina avp6 pueden administrarse para el suministro sistémico, por ejemplo, mediante la administración intravenosa o subcutánea. En algunas realizaciones, las composiciones que incluyen uno o más ligandos de la integrina avp6 pueden administrarse para el suministro localizado, por ejemplo, mediante el suministro por inhalación por medio de un inhalador de polvo seco o un nebulizador. En algunas realizaciones, las composiciones que incluyen uno o más ligandos de la integrina avp6 pueden administrarse para el suministro localizado mediante la administración tópica.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula epitelial alveolar de tipo I in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula epitelial alveolar de tipo II in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula caliciforme in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula epitelial secretora in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula epitelial ciliada in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula epitelial de la córnea in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula epitelial de la conjuntiva in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula epitelial dérmica in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a un colangiocito in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a un enterocito in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula epitelial ductal in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a una célula epitelial glandular in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a un túbulo renal in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar una o más molécula(s) de carga deseadas a un tumor epitelial (carcinoma) in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con una o más moléculas de carga.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula epitelial alveolar de tipo I in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula epitelial alveolar de tipo I in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula epitelial alveolar de tipo I in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula epitelial alveolar de tipo II in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula epitelial alveolar de tipo II in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula epitelial alveolar de tipo II in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula caliciforme in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula caliciforme in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula caliciforme in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula epitelial secretora in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula epitelial secretora in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula epitelial secretora in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula epitelial ciliada in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula epitelial ciliada in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula epitelial ciliada in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula epitelial de la córnea in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula epitelial de la córnea in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula epitelial de la córnea in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula epitelial de la conjuntiva in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula epitelial de la conjuntiva in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula epitelial de la conjuntiva in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula epitelial dérmica in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula epitelial dérmica in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula epitelial dérmica in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a un colangiocito in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a un colangiocito in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en un colangiocito in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a un enterocito in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a un enterocito in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en un enterocito in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula epitelial ductal in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula epitelial ductal in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula epitelial ductal in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a una célula epitelial glandular in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a una célula epitelial glandular in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en una célula epitelial glandular in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a un túbulo renal in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a un túbulo renal in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en un túbulo renal in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un compuesto oligomérico a un tumor epitelial (carcinoma) in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más compuestos oligoméricos. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para suministrar un agente de ARNi a un tumor epitelial (carcinoma) in vivo, que comprenden administrar al sujeto uno o más ligandos de la integrina avp6 conjugados con uno o más agentes de ARNi. En algunas realizaciones, en el presente documento se describen los procedimientos para inhibir la expresión de un gen diana en un tumor epitelial (carcinoma) in vivo, los procedimientos comprenden administrar al sujeto un agente de ARNi conjugado con uno o más ligandos que tienen afinidad por la integrina avp6.
Como se usa en el presente documento, el término "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifático saturado, de cadena lineal o ramificada, que tiene de 1 a 10 átomos de carbono a menos que se especifique de otra manera. Por ejemplo, "C1-C6 alquilo" incluye grupos alquilo que tienen 1, 2, 3, 4, 5 o 6 carbonos en una disposición lineal o ramificada. Los ejemplos no limitantes de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, isopropilo, terc-butilo, n-hexilo. Como se usa en el presente documento, el término "aminoalquilo" se refiere a un grupo alquilo como se define anteriormente, sustituido en cualquier posición con uno o más grupos amino según lo permita la valencia normal. Los grupos amino pueden estar no sustituidos, monosustituidos, o disustituidos. Los ejemplos no limitantes de grupos aminoalquilo incluyen aminometilo, dimetilaminometilo, y 2-aminoprop-1-ilo.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquilo" significa un grupo anular de hidrocarburo no aromático saturado o insaturado que tiene de 3 a 14 átomos de carbono, a menos que se especifique de otra manera. Los ejemplos no limitantes de grupos cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, metilciclopropilo, 2,2-dimetil-ciclobutilo, 2-etil-ciclopentilo, y ciclohexilo. Los cicloalquilos pueden incluir múltiples anillos fusionados o espiro. Los grupos cicloalquilo están opcionalmente mono-, di-, tri-, tetra-, o penta-sustituidos en cualquier posición según lo permita la valencia normal.
Como se usa en el presente documento, el término "alquenilo" se refiere a un radical hidrocarburo no aromático, lineal, o ramificado, que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono, y que tiene de 2 a 10 átomos de carbono a menos que se especifique de otra manera. En tales grupos pueden estar presentes hasta cinco dobles enlaces carbono-carbono. Por ejemplo, "C2-C6" alquenilo se define como un radical alquenilo que tiene de 2 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquenilo incluyen, pero no se limitan a, etenilo, propenilo, butenilo, y ciclohexenilo. La porción lineal, ramificada, o cíclica del grupo alquenilo puede contener dobles enlaces y está opcionalmente mono, di, tri, tetra o penta-sustituida en cualquier posición según lo permita la valencia normal. El término "cicloalquenilo" significa un grupo hidrocarburo monocíclico que tiene el número especificado de átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono.
Como se usa en el presente documento, el término "alquinilo" se refiere a un radical hidrocarburo, lineal o ramificado, que contiene de 2 a 10 átomos de carbono, a menos que se especifique de otra manera, y que contiene al menos un triple enlace carbono-carbono. Pueden estar presentes hasta 5 triples enlaces carbono-carbono. Por lo tanto, "C2-C6 alquinilo" significa un radical alquinilo que tiene de 2 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquinilo incluyen, pero no se limitan a, etinilo, 2-propinilo, y 2-butinilo. La porción lineal o ramificada del grupo alquinilo puede estar opcionalmente mono-, di-, tri-, tetra- o penta-sustituida en cualquier posición según lo permita la valencia normal.
Como se usa en el presente documento, "alcoxilo" o "alcoxi" se refiere a un radical -O-alquilo que tiene el número indicado de átomos de carbono. Por ejemplo, alcoxi C1-6 se pretende que incluya C1, C2, C3, C4, C5 y C6 grupos alcoxi. Por ejemplo, alcoxi C1-8, se pretende que incluya C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7 y C8 grupos alcoxi. Los ejemplos de alcoxi incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, s-butoxi, t-butoxi, n-pentoxi, spentoxi, n-heptoxi, y n-octoxi.
Como se usa en el presente documento, "ceto" se refiere a cualquier grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclilo, heteroarilo, o arilo como se define en el presente documento unido a través de un puente carbonilo. Los ejemplos de grupos ceto incluyen, pero no se limitan a, alcanoílo (por ejemplo, acetilo, propionilo, butanoílo, pentanoílo, o hexanoílo), alquenoílo (por ejemplo, acriloílo), alquinoílo (por ejemplo, etinoílo, propinoílo, butinoílo, pentinoílo o hexanoílo), ariloílo (por ejemplo, benzoílo), heteroariloílo (por ejemplo, pirroloílo, imidazoloílo, quinolinoílo, o piridinoílo).
Como se usa en el presente documento, "alcoxicarbonilo" se refiere a cualquier grupo alcoxi como se define anteriormente unido a través de un puente carbonilo (es decir, -C(O)O-alquilo). Los ejemplos de grupos alcoxicarbonilo incluyen, pero no se limitan a, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, npropoxicarbonilo, t-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, o n-pentoxicarbonilo.
Como se usa en el presente documento, "ariloxicarbonilo" se refiere a cualquier grupo arilo como se define en el presente documento unido a través de un puente oxicarbonilo (es decir, -C(O)O-arilo). Los ejemplos de grupos ariloxicarbonilo incluyen, pero no se limitan a, fenoxicarbonilo y naftiloxicarbonilo.
Como se usa en el presente documento, "heteroariloxicarbonilo" se refiere a cualquier grupo heteroarilo como se define en el presente documento unido a través de un puente oxicarbonilo (es decir, -C(O)O-heteroarilo). Los ejemplos de grupos heteroariloxicarbonilo incluyen, pero no se limitan a, 2-piridiloxicarbonilo, 2-oxazoliloxicarbonilo, 4-tiazoliloxicarbonilo o pirimidiniloxicarbonilo.
Como se usa en el presente documento, "arilo" o "aromático" significa cualquier anillo de carbono monocíclico o policíclico estable de hasta 6 átomos en cada anillo, en el que al menos un anillo es aromático. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, pero no se limitan a, fenilo, naftilo, antracenilo, tetrahidronaftilo, indanilo, y bifenilo. En los casos donde el sustituyente arilo es bicíclico y un anillo no es aromático, se entiende que la unión se realiza por medio del anillo aromático. Los grupos arilo están opcionalmente mono-, di-, tri-, tetra- o penta-sustituidos en cualquier posición que permita la valencia normal.
Como se usa en el presente documento, el término "heteroarilo" representa un anillo monocíclico o policíclico estable de hasta 7 átomos en cada anillo, en el que al menos un anillo es aromático y contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados a partir del grupo que consiste en O, N, y S. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, acridinilo, carbazolilo, cinolinilo, quinoxalinilo, pirrazolilo, indolilo, benzotriazolilo, furanilo, tienilo, benzotienilo, benzofuranilo, bencimidazolonilo, benzoxazolonilo, quinolinilo, isoquinolinilo, dihidroisoindolonilo, imidazopiridinilo, isoindolonilo, indazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo, indolilo, pirazinilo, piridazinilo, piridinilo, pirimidinilo, pirrolilo, y tetrahidroquinolina. También se entiende que "heteroarilo" incluye el derivado N-óxido de cualquier heteroarilo que contenga nitrógeno. En los casos donde el sustituyente heteroarilo es bicíclico y un anillo no es aromático o no contiene heteroátomos, se entiende que la unión se realiza por medio del anillo aromático o por medio del anillo que contiene heteroátomos. Los grupos heteroarilo están opcionalmente mono-, di-, tri-, tetra-, o penta-sustituidos en cualquier posición según lo permita la valencia normal.
Como se usa en el presente documento, el término "heterociclo", "heterocíclico", o "heterociclilo" significa un heterociclo aromático o no aromático de 3 a 14 miembros que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en O, N, y S, incluidos los grupos policíclicos. Como se usa en el presente documento, el término "heterocíclico" también se considera sinónimo de los términos "heterociclo" y "heterociclilo" y se entiende que también tiene las mismas definiciones establecidas en el presente documento. "Heterociclilo" incluye los heteroarilos mencionados anteriormente, así los análogos de los mismos dihidro y tetrahidro. Los ejemplos de grupos heterociclilo incluyen, pero no se limitan a, azetidinilo, benzoimidazolilo, benzofuranilo, benzofurazanilo, benzopirazolilo, benzotriazolilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, carbazolilo, carbolinilo, cinnolinilo, furanilo, imidazolilo, indolinilo, indolilo, indolazinilo, indazolilo, isobenzofuranilo, isoindolilo, isoquinolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, naftpiridinilo, oxadiazolilo, oxooxazolidinyl, oxazolilo, oxazolina, oxopiperazinilo, oxopirrolidinilo, oxomorfolinilo, isoxazolina, oxetanilo, piranilo, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridopiridinilo, piridazinilo, piridilo, piridinonilo, pirimidilo, pirimidinonilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolilo, quinoxalinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiopiranilo, tetrahidroisoquinolinilo, tetrazolilo, tetrazolopiridilo, tiadiazolilo, tiazolilo, tienilo, triazolilo, 1,4-dioxanilo, hexahidroazepinilo, piperazinilo, piperidinilo, piridin-2-onilo, pirrolidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo dihidrobenzofuranilo, dihidrobeno zothiophenyl, dihidrobenzoxazolilo, dihidrofuranilo, dihidroimidazolilo, dihidroindolilo, dihidroisooxazolilo, dihidroisotiazolilo, dihidrooxadiazolilo, dihidrooxazolilo, dihidropirazinilo, dihidropirazolilo, dihidropiridinilo, dihidropirimidinilo, dihidropirrolilo, dihidroquinolinilo, dihidrotetrazolilo, dihidrotiadiazolilo, dihidrotiazolilo, dihidrotienilo, dihidrotriazolilo, dihidroazetidinilo, dioxidotiomorfolinilo, metilendioxibenzoil, tetrahidrofuranilo, y tetrahidrotienilo, y N-óxidos de los mismos. La unión de un sustituyente heterociclilo puede ocurrir por medio de un átomo de carbono o por medio de un heteroátomo. Los grupos heterociclilo están opcionalmente mono-, di-, tri-, tetra- o penta-sustituidos en cualquier posición según lo permita la valencia normal.
Como se usa en el presente documento, los términos "tratar", "tratamiento", y similares, significan los procedimientos o etapas que se toman para aliviar o aliviar el número, la gravedad, y/o la frecuencia de uno o más síntomas de una enfermedad o afección en un sujeto.
A menos que se indique de otra manera, el uso del símbolo
\
cómo se usa en el presente documento significa que cualquier grupo o grupos pueden estar unidos al mismo que esté de acuerdo con el alcance de las invenciones descritas en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, el término "isómeros" se refiere a compuestos que tienen fórmulas moleculares idénticas, pero que difieren en la naturaleza o la secuencia de enlace de sus átomos o en la disposición de sus átomos en el espacio. Los isómeros que difieren en la disposición de sus átomos en el espacio se denominan "estereoisómeros". Los estereoisómeros que no son imágenes especulares entre sí se denominan "diastereoisómeros", y los estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles se denominan "enantiómeros", o a veces isómeros ópticos. Un átomo de carbono que se une a cuatro sustituyentes no idénticos se denomina "centro quiral".
Como se usa en el presente documento, un grupo de unión es uno o más átomos que conectan una molécula o parte de una molécula con otra a una segunda molécula o una segunda parte de una molécula. En la técnica, los términos grupo de unión y espaciadores a veces se usan indistintamente. De manera similar, como se usa en la técnica, el término andamio se usa a veces indistintamente con un grupo de unión. En algunas realizaciones, un grupo de unión puede incluir un grupo de unión escindible con péptido. En algunas realizaciones, un grupo de unión puede incluir o consistir en el péptido FCitFP (SEQ ID NO: 131).
Como se usa en el presente documento, el término "unido" cuando se refiere a la conexión entre dos moléculas significa que dos moléculas están unidas por un enlace covalente o que dos moléculas están asociadas por medio de enlaces no covalentes (por ejemplo, enlaces de hidrógeno o enlaces iónicos). En algunos ejemplos, donde el término "unido" se refiere a la asociación entre dos moléculas por medio de enlaces no covalentes, la asociación entre las dos moléculas diferentes tiene una Kd de menos de 1 X 10-4 M (por ejemplo, menos de 1 X 10-5 M, menos de 1 X 10-6 M, o menos de 1 X 10-7 M) en el tampón fisiológicamente aceptable (por ejemplo, solución salina tamponada con fosfato). A menos que se indique, el término unido como se usa en el presente documento puede referirse a la conexión entre un primer compuesto y un segundo compuesto con o sin átomos o grupos de átomos intermedios.
Como se usa en el presente documento, los "aminoácidos estándar" o "aminoácidos naturales" incluyen alanina, cisteína, ácido aspártico (aspartato), ácido glutámico (glutamato), fenilalanina, glicina, histidina, isoleucina, lisina, leucina, metionina, asparagina, prolina, glutamina, arginina, serina, treonina, valina, triptófano, tirosina.
Como se usa en el presente documento, los "aminoácidos no estándar" incluyen, pero no se limitan a, selenocisteína, pirrolisina, N-formilmetionina, hidroxiprolina, selenometionina, ácido a-amino-isobutírico (Aib), ácido L-a-amino-butírico ( Abu), ácido a,Y-diaminobutírico, dehidroalanina, norleucina, aloisoleucina, t-leucina, ácido aamino-n-heptanoico, ácido a,p-diaminopropiónico, ácido p-N-oxalil-a,p-diaminopropiónico, alotreonina , homocisteína, homoserina, p-homo-alanina (p3-hA), isovalina, norvalina (Nva), citrulina (Cit), ornitina, a-metilaspartato (aMeD), a-metil-leucina (aMeL), N-metilalanina, N-metil-glicina (NMeG), N-metil leucina (NMeL), p-ciclohexilalanina (Cha), N-etilalanina, N,N-£-dimetil lisina (K(Me)2), es dimetil arginina (R(Me)2), Dap(Ac), aminoácidos L-a nalquilados y otros análogos de aminoácidos o miméticos de aminoácidos que funcionan de manera similar a los aminoácidos de origen natural.
Como se usa en el presente documento, a menos que se identifique específicamente en una estructura que tiene una conformación particular, para cada estructura en la que están presentes centros asimétricos y, por lo tanto, dan lugar a enantiómeros, diastereómeros u otras conLa figuraciones estereoisómeras, cada estructura descrita en el presente documento pretende representar todos esos posibles isómeros, incluidas sus formas ópticamente puras y racémicas. Por ejemplo, las estructuras descritas en el presente documento pretenden cubrir las mezclas de diastereómeros así como estereoisómeros individuales.
El experto en la técnica comprenderá y apreciará fácilmente que los compuestos y composiciones descritos en el presente documento pueden tener determinados átomos (por ejemplo, átomos de N, O, o S) en un estado protonado o desprotonado, según el ambiente en el que se encuentre el compuesto o se coloque la composición. En consecuencia, como se usa en el presente documento, las estructuras descritas en el presente documento contemplan que determinados grupos funcionales, tales como, por ejemplo, OH, SH, o NH, pueden protonarse o desprotonarse. La descripción en el presente documento pretende cubrir los compuestos y composiciones descritos independientemente de su estado de protonación en base al pH del ambiente, como entenderá fácilmente el experto en la técnica.
Como se usa en una reivindicación del presente documento, la frase "consiste en" excluye cualquier elemento, etapa o ingrediente no especificado en la reivindicación. Cuando se usa en una reivindicación del presente documento, la frase "consiste esencialmente en" limita el alcance de una reivindicación a las técnicas o etapas especificadas y aquellos que no afectan técnicamente las características básicas y novedosas de la invención reivindicada.
A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos que se usan en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende un experto en la técnica a la cual pertenece esta invención. Aunque procedimientos y técnicas similares o equivalentes a aquellos descritos en el presente documento también pueden usarse en la práctica o prueba de la presente invención, los procedimientos y técnicas adecuados se describen a continuación.
La farmacocinética es una preocupación general para los productos farmacéuticos que se basan en péptidos y las composiciones farmacéuticas que incluyen péptidos. Muchos péptidos, por ejemplo, no circulan en la sangre por más de unos pocos minutos debido a la degradación enzimática. Esto a menudo reduce significativamente o incluso impide su utilidad como agentes terapéuticos o como componentes de productos farmacéuticos.
Los estudios de estabilidad en diversas preparaciones de suero (por ejemplo, la medición de la degradación in vitro de péptidos en suero y/o plasma), se han convertido en importantes ensayos de cribado en el desarrollo de fármacos que se basan en péptidos. Como se muestra mediante, entre otras cosas, tales estudios, los ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento son estables en suero y tienen afinidad por, o pueden unirse a, las integrinas avp6.
Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada, y a partir de las reivindicaciones.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento sintetizado como un éster de tetrafluorofenilo (TFP). El ligando de la integrina avp6 incluye un PEG20 (veinte (20) unidades de óxido de etileno (CH2-CH2-O)) y un grupo de unión FCitFP.
La Figura 2 representa la estructura química de un ejemplo de ligandos de la integrina avp6 descrito en el presente documento sintetizado como un éster de tetrafluorofenilo (TFP). El ligando de la integrina avp6 incluye un PEG5 (cinco (5) unidades de óxido de etileno (CH2-CH2-O)).
La Figura 3 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento que incluye CH3CO como una caperuza de amina terminal, un PEG20 y un grupo de unión FCitFP.
La Figura 4 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento que incluye CH3CO como una caperuza de amina terminal y un PEG5.
La Figura 5 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento sin una caperuza de amina terminal. El ligando de la integrina avp6 incluye un PEG20 y un grupo de unión FCitFP.
La Figura 6 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento sin una caperuza de amina terminal. El ligando de la integrina avp6 incluye un PEG5.
La Figura 7 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento que incluye CH3CO como una caperuza de amina terminal.
La Figura 8 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento que incluye CH3CO como una caperuza de amina terminal, un PEG20 y un grupo de unión FCitFP. Además, en la estructura se muestra un resto de PEG de 20 kilodalton (kDa).
La Figura 9 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento que incluye CH3CO como una caperuza de amina terminal, un PEG20 y un grupo de unión FCitFP. Además, en la estructura se muestra un resto de PEG de 20 kilodalton (kDa), y la estructura se muestra unida a un compuesto oligomérico, tal como un agente de ARNi.
La Figura 10 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 tridentado descrito en el presente documento que incluye CH3CO como una caperuza de amina terminal y un PEG5, unido a un armazón de ácido bis-glutámico y un grupo reactivo PEG-azida.
La Figura 11 representa la estructura química de un ejemplo de un ligando de la integrina avp6 tridentado descrito en el presente documento que incluye CH3CO como una caperuza de amina terminal y un PEG5, unido a un armazón de ácido bis-glutámico.
La Figura 12 es un gráfico que muestra la expresión de alfa ENaC de pulmón completo de rata en ratas Sprague-Dawley de agente de ARNi alfa-ENaC desnudo sin un ligando dirigido y el mismo agente de ARNi alfa-ENaC conjugado con un armazón de poli-L-lisina y con el ligando de la integrina avp6 representado mediante la estructura de la figura 4.
Descripción detallada
En el presente documento se describen ligandos de la integrina avp6 que se basan en péptidos que no son de origen natural, modificados por ingeniería genética, que tienen estabilidad en suero y afinidad por las integrinas avp6 como se define en las reivindicaciones adjuntas. Los ligandos de la integrina avp6 pueden usarse para dirigirse a células que expresan la integrina avp6 in vitro, in situ, ex vivo, y/o in vivo. En algunas realizaciones, los ligandos de la integrina avp6 pueden conjugarse con una o más moléculas de carga para dirigir las moléculas de carga a las células que expresan la integrina avp6 in vitro, in situ, ex vivo, y/o in vivo. En algunas realizaciones, las moléculas de carga incluyen o consisten en compuestos farmacéuticamente activos. En algunas realizaciones, los ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento se conjugan con moléculas de carga para dirigir las moléculas de carga a las células epiteliales in vivo.
Los presentes ligandos de la integrina avp6 comprenden la fórmula general: RG1DLXaa1Xaa2L-Xaa3Xaa4L-R1 (SEQ ID NO: 96) (Fórmula VIII), en la que R es L-arginina; G1 es L-glicina o glicina N-metilo; D es ácido L-aspártico (L-aspartato); L es L-leucina; Xaa1 es L-alanina; Xaa2 es ácido L-a aminobutírico (Abu); Xaa3 es citrulina (Cit); Xaa4 es ácido aminoisobutírico (Aib) y R1 es opcional y, si está presente, incluye polietilenglicol (PEG) y/o un grupo de unión. Como se usa en el presente documento, en algunas realizaciones, R1 está presente y comprende un grupo PEG que tiene 1-100 unidades de óxido de etileno (CH2-CH2-O) (por ejemplo, 1 a 90, 1 a 80, 1 a 70, 1 a 60, 1 a 50, 1 a 40, 1 a 30, 1 a 20, 1 a 10, 1 a 5, 2 a 100, 2 a 90, 2 a 80, 2 a 70, 2 a 60, 2 a 50, 2 a 40, 2 a 30, 2 a 20, 2 a 10, 2 a 5, 5 a 100, 5 a 90, 5 a 80, 5 a 70, 5 a 60, 5 a 50, 5 a 40, 5 a 30, 5 a 20, 5 a 10, 10 a 100, 10 a 90, 10 a 80, 10 a 70, 10 a 60, 10 a 50, 10 a 40, 10 a 30, 10 a 20, 20 a 100, 20 a 90, 20 a 80, 20 a 70, 20 a 60, 20 a 50, 20 a 40, 20 a 30, 30 a 100, 30 a 90, 30 a 80, 30 a 70, 30 a 60, 30 a 50, 30 a 40, 40 a 100, 40 a 90, 40 a 80, 40 a 70, 40 a 60, 40 a 50, 50 a 100, 50 a 90, 50 a 80, 50 a 70, 50 a 60, 60 a 100, 60 a 90, 60 a 80, 60 a 70, 70 a 100, 70 a 90, 70 a 80, 80 a 100, 80 a 90 o 90 a 100 unidades de óxido de etileno). En algunas realizaciones, R1 está presente y comprende un grupo PEG que tiene de 2-30 unidades de óxido de etileno. En algunas realizaciones, R1 está presente y comprende un grupo PEG que tiene de 2-20 unidades de óxido de etileno. En algunas realizaciones, R1 está presente y comprende un grupo PEG que tiene de 2-10 unidades de óxido de etileno. En algunas realizaciones, R1 está presente y comprende un grupo PEG que tiene de 5-20 unidades de óxido de etileno. En algunas realizaciones, R1 está presente y comprende un grupo PEG que tiene 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 unidades de óxido de etileno. Los grupos reactivos son bien conocidos en la técnica y permiten la formación de enlaces covalentes entre dos moléculas o reactivos. Los grupos reactivos adecuados para su uso en el alcance de las invenciones del presente documento incluyen, pero no se limitan a: grupos amino, grupos amida, grupos de ácido carboxílico, azidas, alquinos, grupos propargilo, BCN(biclclo[6.1.0]nonina, DBCO(dibenzociclooctina ) tioles, grupos maleimida, grupos aminooxi, N-hidroxisuccinimida (NHS) u otro éster activado (por ejemplo, PNP, TFP, PFP), grupos bromo, aldehidos, carbonatos, tosilatos, tetrazinas, trans-cicloocteno (TCO), hidrazidas, grupos hidroxilo, disulfuros, y grupos disulfuro de ortopiridilo.
La incorporación de grupos reactivos puede facilitar la conjugación de un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento con una molécula de carga. Las reacciones de conjugación son bien conocidas en la técnica y permiten la formación de enlaces covalentes entre dos moléculas o reactivos. Las reacciones de conjugación adecuadas para uso en el alcance de las invenciones en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, reacción de acoplamiento de amida, reacción de adición de Michael, reacción de formación de hidrazona y reacción de cicloadición de química clic.
En algunas realizaciones, los ligandos dirigidos a la integrina avp6 descritos en el presente documento se sintetizan como un éster de tetrafluorofenilo (TFP), que puede ser desplazado por un grupo amino reactivo para unirse a una molécula de carga.
Los grupos reactivos protegidos también se usan comúnmente en la técnica. Un grupo protector proporciona una transformación química temporal de un grupo reactivo en un grupo que no reacciona bajo condiciones donde el grupo no protegido reacciona, por ejemplo, para proporcionar quimioselectividad en una reacción química posterior. Los grupos reactivos protegidos adecuados para usarse en el alcance de las invenciones en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, grupos BOC (t-butoxicarbonilo), Fmoc (9-fluorenilmetoxicarbonilo), grupos carboxibencilo (CBZ), ésteres bencílicos y PBF (2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonilo).
Una molécula de carga es cualquier molécula para la que puede desearse el direccionamiento a una integrina avp6 o una célula que expresa una integrina avp6. Una molécula de carga puede ser, pero no se limita a, un ingrediente farmacéutico, un producto farmacéutico, un profármaco, una sustancia terapéuticamente valiosa, una molécula pequeña, un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, una inmunoglobulina, un anticuerpo monoclonal, una etiqueta o marcador, un lípido, un ácido nucleico o polinucleótido natural o modificado, un péptido, un polímero, una poliamina, una proteína, un aptámero, una toxina, una vitamina, un PEG, un hapteno, una digoxigenina, una biotina, un átomo radiactivo o molécula, o un fluoróforo. En algunas realizaciones, una o más moléculas de carga (por ejemplo, las mismas o diferentes moléculas de carga) se unen a uno o más ligandos de la integrina avp6 para dirigir las moléculas de carga a una célula que expresa una integrina avp6.
En algunas realizaciones, dicha una o más moléculas de cargas son un ingrediente farmacéutico o una composición farmacéutica. En algunas realizaciones, dicha una o más moléculas de cargas son un compuesto oligomérico. Como
se usa en el presente documento, un "compuesto oligomérico" es una secuencia de nucleótidos que contiene aproximadamente de 10-50 (por ejemplo, 10 a 48, 10 a 46, 10 a 44, 10 a 42, 10 a 40, 10 a 38, 10 a 36, 10 a 34, 10 a
32, 10 a 30, 10 a 28, 10 a 26, 10 a 24, 10 a 22, 10 a 20, 10 a 18, 10 a 16, 10 a 14, 10 a 12, 12 a 50 , 12 a 48, 12 a
46, 12 a 44, 12 a 42, 12 a 40, 12 a 38, 12 a 36, 12 a 34, 12 a 32, 12 a 30, 12 a 28, 12 a 26, 12 a 24, 12 a 22, 12 a
20, 12 a 18, 12 a 16, 12 a 14, 14 a 50, 14 a 48, 14 a 46, 14 a 44, 14 a 42, 14 a 40, 14 a 38 , 14 a 36, 14 a 34, 14 a
32, 14 a 30, 14 a 28, 14 a 26, 14 a 24, 14 a 22, 14 a 20, 14 a 18, 14 a 16, 16 a 50, 16 a 48, 16 a 46, 16 a 44, 16 a
42, 16 a 40, 16 a 38, 16 a 36, 16 a 34, 16 a 32, 16 a 30, 16 a 28, 16 a 26, 16 a 24 , 16 a 22, 16 a 20, 16 a 18, 50, 18 a 48, 18 a 46, 18 a 44, 18 a 42, 18 a 40, 18 a 38, 18 a 36, 18 a 34, 18 a 32, de 18 a 30, de 18 a 28, de 18 a
26, de 18 a 24, de 18 a 22, de 18 a 20, de 20 a 50, de 20 a 48, 20 a 46, 20 a 44, 20 a 42, 20 a 40, 20 a 38, 20 a 36,
20 a 34, 20 a 32, 20 a 30, 20 a 28, 20 a 26, 20 a 24, 20 a 22, 22 a 50, 22 a 48, 22 a 46, 22 a 44, 22 a 42, 22 a 40, 22
a 38, 22 a 36, 22 a 34, 22 a 32, 22 a 30, 22 a 28, 22 a 26, 22 a 24, 24 a 50, 24 a 48, 24 a 46, 24 a 44, 24 a 42, 24 a
40, 24 a 38, 24 a 36, 24 a 34, 24 a 32, 24 a 30, 24 a 28, 24 a 26, 26 a 50, 26 a 48, 26 a 46, 26 a 44, 26 a 42, 26 a
40, 26 a 38, 26 a 36, 26 a 34, 26 a 32, 26 a 30, 26 a 28, 28 a 50, 28 a 48, 28 a 46, 28 a 44, 28 a 42, 28 a 40, 28 a
38, 28 a 36, 28 a 34, 28 a 32, de 28 a 30, de 30 a 50, de 30 a 48, de 30 a 46, de 30 a 44, de 30 a 42, de 30 a 40, de
30 a 38, de 30 a 36, de 30 a 34, de 30 a 32, de 32 a 50, de 32 a 48, 32 a 46, 32 a 44, 32 a 42, 32 a 40, 32 a 38, 32 a
36, 32 a 34, 34 a 50, 34 a 48, 34 a 46, 34 a 44, 34 a 42 ,34 a 40, 34 a 38, 34 a 36, 36 a 50, 36 a 48, 36 a 46, 36 a
44, 36 a 42, 36 a 40, 36 a 38, 38 a 50, 38 a 48, 38 a 46, 38 a 44, 38 a 42, 38 a 40, 40 a 50, 40 a 48, 40 a 46, 40 a
44, 40 a 42, 42 a 50, 42 a 48, 42 a 46, 42 a 44,44 a 50, 44 a 48, 44 a 46, 46 a 50, 46 a 48, o 48 a 50) nucleótidos o
pares de bases de nucleótidos. En algunas realizaciones, un compuesto oligomérico tiene una secuencia de nucleobases que es al menos parcialmente complementaria a una secuencia codificante en un ácido nucleico diana
o gen diana expresado dentro de una célula. En algunas realizaciones, los compuestos oligoméricos, al suministrarse en una célula que expresa un gen, pueden inhibir la expresión del gen subyacente y se denominan en
el presente documento como "compuestos oligoméricos que inhiben la expresión". La expresión génica puede inhibirse in vitro o in vivo.
Los "compuestos oligoméricos" incluyen, pero no se limitan a: oligonucleótidos, oligonucleótidos de cadena sencilla, oligonucleótidos antisentido de cadena sencilla, ARN de interferencia pequeños (ARNip), ARN de doble cadena (ARNdc), microARN (miARN), ARN de horquilla pequeño (ARNhp), ribozimas, moléculas de ARN de interferencia, y sustratos más cortados. En algunas realizaciones, un compuesto oligomérico es un compuesto oligomérico de
cadena sencilla. En algunas realizaciones, un compuesto oligomérico es un compuesto oligomérico de doble cadena.
En algunas realizaciones, dicha una o más moléculas de carga es/son un "agente de ARNi", que como se define en
el presente documento es un agente que contiene una molécula de oligonucleótido de ARN o similar a ARN (por ejemplo, ARN modificado químicamente) que puede degradar o inhibir la traducción de transcritos de ARN mensajero (ARNm) de un ARNm diana de una manera específica de secuencia. Como se usa en el presente documento, los agentes de ARNi pueden operar a través del mecanismo de interferencia de ARN (es decir, mediante la inducción de la interferencia de ARN a través de la interacción con la maquinaria de la vía de interferencia de ARN (complejo de silenciamiento inducido por ARN o RISC) de células de mamífero), o por cualquier vía(s)o mecanismo(s) alternativo(s). Si bien se cree que los agentes de ARNi, como se usa ese término en
el presente documento, operan principalmente a través del mecanismo de interferencia de ARN, los agentes de
ARNi descritos no se unen mediante ni se limitan a ninguna ruta o mecanismo de acción en particular. Los agentes
de ARNi incluyen, pero no se limita a: oligonucleótidos de cadena sencilla, oligonucleótidos antisentido de cadena sencilla, ARN de interferencia pequeños (ARNip), ARN de doble cadena (ARNdc), microARN (miARN), ARN de horquilla pequeño (ARNhp) y sustratos más cortados.
Típicamente, los agentes de ARNi pueden estar compuestos por al menos una cadena sentido (también denominada cadena pasajera) que incluye una primera secuencia, y una cadena antisentido (también denominada
cadena guía) que incluye una segunda secuencia. La longitud de las cadenas sentido y antisentido de un agente de
ARNi puede ser cada una de 16 a 49 nucleótidos de longitud. En algunas realizaciones, las cadenas sentido y antisentido de un agente de ARNi tienen de forma independiente de 17 a 26 nucleótidos de longitud. En algunas realizaciones, las cadenas sentido y antisentido tienen de forma independiente de 19 a 26 nucleótidos de longitud.
En algunas realizaciones, las cadenas sentido y antisentido tienen de forma independiente de 21 a 26 nucleótidos de longitud. En algunas realizaciones, las cadenas sentido y antisentido tienen de forma independiente de 21 a 24 nucleótidos de longitud. Las cadenas sentido y antisentido pueden tener la misma longitud o longitudes diferentes.
Los agentes de ARNi incluyen una secuencia de cadena antisentido que es al menos parcialmente complementaria
a una secuencia en el gen diana, y al suministrarse a una célula que expresa la diana, un agente de ARNi puede
inhibir la expresión de uno o más genes dianas in vivo o in vitro. .
Los compuestos oligoméricos en general, y los agentes de ARNi específicamente, pueden comprender nucleótidos modificados y/o uno o más enlaces no fosfodiéster. Como se usa en el presente documento, un "nucleótido modificado" es un nucleótido distinto de un ribonucleótido (2'-hidroxinucleótido). En algunas realizaciones, al menos el 50 % (por ejemplo, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 %, al menos el 95 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 %, o el 100 %) de los nucleótidos son nucleótidos modificados.
Como se usa en el presente documento, los nucleótidos modificados incluyen, pero no se limitan a, desoxirribonucleótidos, miméticos de nucleótidos, nucleótidos abásicos, nucleótidos modificados en 2', nucleótidos de enlaces 3' a 3' (invertidos), nucleótidos que comprenden bases que no son de origen natural, nucleótidos puenteados, péptidos de ácidos nucleicos, imitadores de nucleótidos 2',3'-seco (análogos de nucleobase desbloqueados, nucleótidos bloqueados, nucleótidos 3'-O-metoxi (2' unidos con internucleósidos), 2'-F-Arabino nucleótidos, 5'-Me, 2' -fluoronucleótido, morfolinonucleótidos, desoxirribonucleótidos de fosfonato de vinilo, nucleótidos que contienen fosfonato de vinilo, y nucleótidos que contienen fosfonato de ciclopropilo. Los nucleótidos modificados en 2 ' (es decir, un nucleótido con un grupo distinto de un grupo hidroxilo en la posición 2' del anillo de azúcar de cinco miembros) incluyen, pero no se limitan a, 2'-O-metilnucleótidos, 2'-desoxi -2'-fluoronucleótidos, 2'-desoxinucleótidos, 2'-metoxietilo (2'-O-2-metoxietilo) nucleótidos, 2'-aminonucleótidos, y 2'-alquilnucleótidos.
Además, uno o más nucleótidos de un compuesto oligomérico, tal como un agente de ARNi, pueden estar unidos mediante enlaces o cadenas principales no estándar (es decir, enlaces internucleosídicos modificados o cadenas principales modificadas). Un enlace internucleósido modificado puede ser un enlace internucleósido covalente que no contiene fosfato. Los enlaces internucleosídicos modificados o las cadenas principales incluyen, pero no se limitan a, grupos 5'-fosforotioato, fosforotioatos quirales, tiofosfatos, fosforoditioatos, fosfotriésteres, aminoalquilfosfotriésteres, fosfonatos de alquilo (por ejemplo, fosfonatos de metilo o fosfonatos de 3'-alquileno), fosfonatos quirales, fosfinatos, fosforamidatos (por ejemplo, 3'-amino fosforamidato, aminoalquilfosforamidatos o tionofosforamidatos), tionoalquilfosfonatos, tionoalquilfosfotriésteres, enlaces morfolino, boranofosfatos que tienen enlaces 3'-5' normales, análogos de boranofosfatos con enlaces 2'-5', o boranofosfatos que tienen polaridad invertida en la que los pares adyacentes de unidades de nucleósido están unidos 3'-5' a 5'-3' o 2'-5' a 5'-2'.
No es necesario que todas las posiciones en un compuesto dado se modifiquen uniformemente. Por el contrario, puede incorporarse más de una modificación en un solo compuesto oligomérico o incluso en un solo nucleótido del mismo.
Las cadenas sentido y antisentido del agente de ARNi pueden sintetizarse y/o modificarse mediante procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, la descripción de agentes de ARNi dirigidos a la inhibición de la expresión de alfa-ENaC puede encontrarse, por ejemplo, en la Publicación de Solicitud de la Patente Internacional No. WO 2008/15213 1. J 2. Se pueden encontrar descripciones adicionales relacionadas con agentes de ARNi, por ejemplo, en la descripción de modificaciones que se pueden encontrar, por ejemplo, en la Solicitud de Patente Internacional No. PCT/US2017/0455446 de Arrowhead Pharmaceuticals, Inc.
En algunas realizaciones, una o más moléculas de carga pueden incluir o consistir en un resto de PEG que puede actuar como un modulador farmacocinético (PK). En algunas realizaciones, una o más moléculas de carga pueden incluir un resto de PEG que tiene aproximadamente 20-900 unidades de óxido de etileno (CH2-CH2-O) (por ejemplo, 20 a 850, 20 a 800, 20 a 750, 20 a 700 , 20 a 650, 20 a 600, 20 a 550, 20 a 500, 20 a 450, 20 a 400, 20 a 350, 20 a 300, 20 a 250, 20 a 200, 20 a 150, 20 a 100, 20 a 75, de 20 a 50, de 100 a 850, de 100 a 800, de 100 a 750, de 100 a 700, de 100 a 650, de 100 a 600, de 100 a 550, de 100 a 500, de 100 a 450, de 100 a 400, de 100 a 350 , 100 a 300, 100 a 250, 100 a 200, 100 a 150, 200 a 850, 200 a 800, 200 a 750, 200 a 700, 200 a 650, 200 a 600, 200 a 550, 200 a 500, 200450, 200 a 400, 200 a 350, 200 a 300, 200 a 250, 250 a 900, 250 a 850, 250 a 800, 250 a 750, 250 a 700, 250 a 650, 250 a 600, 250 a 550 , 250 a 500, 250 a 450, 250 a 400, 250 a 350, 250 a 300, 300 a 900, 300 a 850, 300 a 800, 300 a 750, 300 a 700, 300 a 650, 300 a 600, 300 a 550, 300 a 500, 300 a 450, 300 a 400, 300 a 350, 350 a 900, 350 a 850, 350 a 800, de 350 a 750, de 350 a 700, de 350 a 650, de 350 a 600, de 350 a 550, de 350 a 500, de 350 a 450, de 350 a 400, de 400 a 900, de 400 a 850, de 400 a 800, de 400 a 750 , 400 a 700, 400 a 650, 400 a 600, 400 a 550, 400 a 500, 400 a 450, 450 a 900, 450 a 850, 450 a 800, 450 a 750, 450 a 700, 450 a 650, 450 a 600, 450 a 550, 450 a 500, 500 a 900, 500 a 850, 500 a 800, 500 a 750, 500 a 700, 500 a 650, 500 a 600, 500 a 550, 550 a 900, 550 a 850 , 550 a 800, 550 a 750, 550 a 700, 550 a 650, 550 a 600, 600 a 900, 600 a 850, 600 a 800, 600 a 750, 600 a 700, 600 a 650, 650 a 900, 650 a 850, de 650 a 800, de 650 a 750, de 650 a 700, de 700 a 900, de 700 a 850, de 700 a 800, de 700 a 750, de 750 a 900, de 750 a 850, de 750 a 800, de 800 a 900, de 850 a 900, o 850 a 900 unidades de óxido de etileno). En algunas realizaciones, una o más moléculas de carga consisten en un resto de PEG que tiene aproximadamente 455 unidades de óxido de etileno (aproximadamente 20 kilodalton (kDa) de peso molecular). En algunas realizaciones, un resto de PEG tiene un peso molecular de aproximadamente 2 kilodaltons. En algunas realizaciones, un resto de PEG tiene un peso molecular de aproximadamente 20 kilodaltons. En algunas realizaciones, un resto de PEG tiene un peso molecular de aproximadamente 40 kilodaltons. Los restos de PEG descritos en el presente documento pueden ser lineales o ramificados. Los restos de PEG pueden ser discretos (monodispersos) o no discretos (polidispersos). Los restos de PEG para usarse como molécula de carga potenciadora de la PK pueden adquirirse comercialmente. En algunas realizaciones, dicha una o más moléculas de carga incluyen un resto de PEG que puede actuar como un modulador o potenciador de la PK, así como una molécula de carga diferente, tal como un ingrediente o compuesto farmacéuticamente activo.
Los ligandos de la integrina avp6 descritos incluyen sales o solvatos de los mismos. Por solvatos de un ligando de avp6 se entienden aducciones de moléculas de disolvente inerte sobre el ligando de la integrina avp6 que se forman debido a su fuerza de atracción mutua. Los solvatos son, por ejemplo, mono o dihidratos o compuestos de adición con alcoholes, tal como, por ejemplo con metanol o etanol.
Se pueden proporcionar grupos amino libres o grupos hidroxilo libres como sustituyentes de ligandos de la integrina avp6 con los grupos protectores correspondientes.
Los ligandos de la integrina avp6 también incluyen, por ejemplo, derivados, es decir, ligandos de la integrina avp6 modificados con, por ejemplo, grupos alquilo o acilo, azúcares u oligopéptidos, que se escinden in vitro o en un organismo.
En algunas realizaciones, un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento facilita el suministro de una molécula de carga en el citosol de una célula que presenta una integrina avp6 en su superficie, ya sea a través de endocitosis mediada por ligando, pinocitosis o mediante otros medios. En algunas realizaciones, un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento facilita el suministro de una molécula de carga a la membrana plasmática de una célula que presenta una integrina avp6.
En algunas realizaciones, los ligandos de avp6 descritos mostraron una mayor estabilidad en suero en comparación con el péptido de unión a integrina avp6 de origen natural RGDLATLRQL (SEQ ID NO: 1). Como se muestra en los Ejemplos del presente documento, solo alrededor del 5 % del péptido RGDLATLRQL de origen natural (SEQ ID NO: 1) se detecta después de 4 h de incubación a 37 °C en plasma de ratón. El péptido RGDLATLRQL (SEQ ID NO: 1) no se detectó después de 8 horas a 37 °C en plasma de ratón. En algunas realizaciones, un ligando de la integrina avp6 descrito en el presente documento exhibe más del 20 % del ligando restante que se detecta mediante HPLC después de 12 horas de incubación a 37 °C en plasma de ratón. Si bien tenían una mayor estabilidad en suero a partir del péptido natural, los ligandos de la integrina avp6 descritos retuvieron la unión a (afinidad por) la integrina avp6.
Composiciones farmacéuticas
En algunas realizaciones, la presente descripción proporciona composiciones farmacéuticas que incluyen, consisten en o consisten esencialmente en uno o más de los ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento. Como se usa en el presente documento, una "composición farmacéutica" comprende una cantidad farmacológicamente efectiva de un ingrediente farmacéutico activo (API), y opcionalmente uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Los excipientes farmacéuticamente aceptables (excipientes) son sustancias distintas del ingrediente farmacéutico activo (API, producto terapéutico) que se incluyen intencionalmente en el sistema de suministro de medicamentos. Los excipientes no ejercen o no están destinados a ejercer un efecto terapéutico a la dosis prevista. Los excipientes pueden actuar para a) ayudar en el procesamiento del sistema de suministro del fármaco durante la fabricación, b) proteger, respaldar o potenciar la estabilidad, la biodisponibilidad o la aceptabilidad del API por parte del paciente, c) ayudar en la identificación del producto, y/o d) potenciar cualquier otro atributo de la seguridad general, la eficacia, de la entrega del API durante el almacenamiento o uso. Un excipiente farmacéuticamente aceptable puede ser o no una sustancia inerte.
Los excipientes incluyen, pero no se limitan a: potenciadores de la absorción, antiadherentes, agentes antiespumantes, antioxidantes, aglutinantes, agentes amortiguadores, vehículos, agentes de recubrimiento, colores, potenciadores de entrega, polímeros de entrega, dextrano, dextrosa, diluyentes, desintegrantes , emulsionantes, extensores, rellenos, sabores, deslizantes, humectantes, lubricantes, aceites, polímeros, conservantes, solución salina, sales, solventes, azúcares, agentes de suspensión, matrices de liberación sostenida, edulcorantes, agentes espesantes, agentes de tonicidad, vehículos, agentes repelentes de agua, y agentes humectantes.
Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden contener otros componentes adicionales que se encuentran comúnmente en las composiciones farmacéuticas. En algunas realizaciones, el componente adicional es un técnico farmacéuticamente activo. Los técnicos farmacéuticamente activos incluyen, pero no se limita a: antipruriginosos, astringentes, anestésicos locales o agentes antiinflamatorios (por ejemplo, antihistamínicos, difenhidramina, etc.), fármaco de molécula pequeña, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, aptámeros, y/o vacuna.
Las composiciones farmacéuticas también pueden contener conservantes, solubilizantes, estabilizantes, humectantes, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, odorantes, sales para la variación de la presión osmótica, tampones, agentes de recubrimiento o antioxidantes. También pueden contener otros agentes terapéuticamente valiosos.
Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar de varias formas dependiendo de si se desea un tratamiento local o sistémico y del área a tratar. La administración se puede realizar de cualquier forma comúnmente conocida en la técnica, como, entre otras, tópica (por ejemplo, mediante un parche transdérmico), pulmonar (por ejemplo, mediante inhalación o insuflación de polvos o aerosoles, incluido mediante nebulizador, intratraqueal, intranasal), epidérmica, transdérmica, oral o parenteral. La administración parenteral incluye, pero no se limita a, inyección o infusión intravenosa, intraarterial, subcutánea, intraperitoneal o intramuscular; administración subdérmica (por ejemplo, por medio de un dispositivo implantado), intracraneal, intraparenquimatosa, intratecal, e intraventricular. En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento se administran mediante inyección subcutánea. Las composiciones farmacéuticas pueden suministrarse por vía oral, por ejemplo en forma de tabletas, tabletas recubiertas, grageas, cápsulas de gelatina dura o blanda, soluciones, emulsiones o suspensiones. La administración también se puede realizar por vía rectal, por ejemplo mediante el uso de supositorios; localmente o por vía percutánea, por ejemplo mediante el uso de ungüentos, cremas, geles o soluciones; o por vía parenteral, por ejemplo mediante el uso de soluciones inyectables.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones acuosas estériles (donde son solubles en agua) o dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. Para la administración intravenosa, los portadores adecuados incluyen solución salina fisiológica, agua bacteriostática, Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, NJ) o solución salina tamponada con fosfato. Debe ser estable bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento y debe ser preservado contra la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El portador puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante el uso de tensioactivos. En muchos casos, será preferente incluir en la composición agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol y cloruro sódico. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se puede conseguir incluyendo en la composición un agente que retrase la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar incorporando el compuesto activo en la cantidad requerida en un solvente apropiado con uno o una combinación de los ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de esterilización mediante filtración. Generalmente, las dispersiones se preparan mediante la incorporación del compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos entre los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos de preparación incluyen secado al vacío y liofilización que produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una solución filtrada previamente estéril del mismo.
Las formulaciones adecuadas para la administración intra-articular pueden estar en forma de preparación acuosa estéril de cualquiera de los ligandos descritos en el presente documento que pueden estar en forma microcristalina, por ejemplo, en forma de suspensión microcristalina acuosa. También se pueden usar formulaciones liposomales o sistemas poliméricos biodegradables para presentar cualquiera de los ligandos descritos en el presente documento para la administración tanto intra-articular como oftálmica.
Los compuestos activos se pueden preparar con portadores que protegerán el compuesto contra la eliminación rápida del cuerpo, como una formulación de liberación controlada, que incluye implantes y sistemas de administración microencapsulados. Pueden usarse polímeros biodegradables y biocompatibles, tales como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Los procedimientos para la preparación de tales formulaciones serán evidentes para los expertos en la técnica. Las suspensiones liposomales también pueden usarse como portadores farmacéuticamente aceptables. Estos pueden prepararse de acuerdo con procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, como se describe en la Patente de EE.UU número 4,522,811.
Una composición farmacéutica puede contener otros componentes adicionales que se encuentran comúnmente en las composiciones farmacéuticas. Tales componentes adicionales incluyen, pero no se limitan a: antipruriginosos, astringentes, anestésicos locales o agentes antiinflamatorios (por ejemplo, antihistamínicos, difenhidramina, etc.). Como se usa en el presente documento, "cantidad farmacológicamente efectiva", "cantidad terapéuticamente efectiva" o simplemente "cantidad efectiva" se refiere a la cantidad de un agente farmacéuticamente activo para producir un resultado farmacológico, terapéutico o preventivo.
Los medicamentos que contienen un ligando avp6 también son un objeto de la presente invención, al igual que los procesos para la fabricación de tales medicamentos, cuyos procesos comprenden traer uno o más compuestos que contienen un ligando avp6 y, si se desea, una o más sustancias terapéuticamente valiosas, en una forma de dosificación adecuada para la administración a sujetos humanos.
Los ligandos de avp6 descritos y las composiciones farmacéuticas que comprenden los ligandos de avp6 descritos en el presente documento pueden envasarse o incluirse en un kit, recipiente, paquete, o dispensador. Los ligandos de avp6 y las composiciones farmacéuticas que comprenden los ligandos de avp6 pueden envasarse en jeringas o viales precargados.
Ejemplos
Ejemplo 1 Síntesis de ligandos de avp6 para estudios de estabilidad en suero
La resina Chem-Matrix Rink Amide se colocó en una jeringa de polipropileno fritado y se agitó en DCM durante 30 minutos antes de usarse. Se usaron las siguientes condiciones estándar de síntesis de péptidos en fase sólida. Las desprotecciones de Fmoc se llevaron a cabo empapando 40 ml de una solución de piperidina:DMF (20:80 v/v) por 1 mmol de resina durante 20 min. Los acoplamientos de amida se llevaron a cabo empapando la resina con 4 eq molar. Fmoc-aminoácido, 4 eq. molar. HBTU y 10 eq molares. Diisopropiletilamina en DMF a una concentración de 0,1 M de Fmoc-aminoácido en DMF durante 40 minutos. Se usó Fmoc-Dap(DNP)-OH para unir el cromóforo DNP a la resina, y el péptido se sintetizó a partir de la a-amina Dap. La escisión de la resina se llevó a cabo en una solución de ácido trifluoroacético durante 2 horas. El solvente se redujo al 10 % del volumen original por medio de aire a presión y se precipitó mediante el uso de Et2O. Microescisión por medio de TFA e identidad dwl producto verificada por HPLC-MS analítica. A continuación, los péptidos se purificaron hasta > 95 % de pureza en una escala preparativa Shimadzu HPLC mediante el uso de una columna Supelco "Discovery BIO" de poro ancho C18 (25 cm X 21 mm, partículas de 10 um) eluyendo con gradientes lineales de aproximadamente 1 ml/min. La pureza se evaluó mediante el uso de un HPLC Shimadzu analítico equipado con una columna Waters XBridge BEH130 C18 (250 mm X 6,6 mm, partículas de 5 ^m) mediante el uso de un disolvente B del 10-90 % durante 50 minutos. El disolvente A indica H2O:F3CCO2H 100:0,1 v/v, el disolvente B indica CH3CN:F3CCO2H 100:0,1 v/v.
Figure imgf000016_0001
Ejemplo 2 Estabilidad en suero de los ligandos de avp6
La estabilidad en suero de los ligandos de avp6 se evaluó mediante la incubación de los ligandos de avp6 en suero de ratón y el análisis del porcentaje de péptido no digerido en varios puntos de tiempo. El ligando avp6 no digerido se determinó mediante HPLC analítica. Las soluciones de reserva individuales de los ligandos de avp6 se prepararon mediante la dilución de los péptidos en H2O a > 10 mg/ml de concentración. La concentración del ligando avp6 se evaluó mediante el uso de absorción UV/Vis (DNP: A=365, e=17300 M-1Cm-1). El ligando avp6 se diluyó a 1 mg/ml de ligando en plasma de ratón al 90 % y se colocó en una incubadora a 37 °C. En los puntos de tiempo dados (4, 8, 12 y 24 horas), la muestra se inyectó en un HPLC analítica (Shimadzu HPLC) equipado con una columna Waters XBridge BEH130 C18 (250 mm X 6,6 mm, partículas de 5 ^m) mediante el uso del disolvente B del 10-90 % durante 50 minutos. El disolvente A indica H2O:F3CCO2H 100:0,1 v/v; el disolvente B indica CH3CN:F3CCO2H 100:0,1 v/v.
El porcentaje de ligando restante después de la incubación del suero se calculó mediante el uso de la siguiente ecuación:
% restante = [(Área en t=x ) -f (Área en t=0)] X 100 %
en la que el área en t=0 fue el área bajo el pico del ligando inmediatamente después de diluir el ligando en el plasma y el área en t=x fue el área bajo el pico del péptido en el tiempo=x.
Cada péptido se unió covalentemente a la molécula de carga PEG8-Dap (DNP). A continuación, se usó el PEG8-Dap (DNP) para facilitar el análisis.
Figure imgf000017_0001
Los derivados peptídicos se unieron a la molécula de carga PEG8-Dap (DNP) y se incubaron en suero de ratón a 37 °C durante 4, 8, 12 o 24 horas. La estabilidad del derivado peptídico se midió por HPLC. Los datos se muestran en la siguiente Tabla 1 (la caperuza de amina terminal y Xaa1Xaa2 están subrayados):
Tabla 1. Estabilidad en suero de los ligandos de av@6
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Como se muestra en el presente documento, la presencia de una caperuza terminal de amina (Z) puede proporcionar una mayor estabilidad del suero. Además, como se muestra en el presente documento, la presencia de aminoácidos no estándar en Xaa1, Xaa2 y/o J (por ejemplo, Xaa3 y Xaa4) en las fórmulas descritas en el presente documento, también proporciona una mayor estabilidad en suero en comparación con el péptido natural de SEQ ID NO: 1.
Ejemplo 3 Unión de la integrina de ligandos de avp6
A. Conjugación ligando avfi6-molécula de carga. Cada ligando de avp6 se unió a una molécula de carga de polímero 1170-100B reversiblemente modificada. La molécula de carga de polímero 1170-100B (un copolímero de acrilato de etoxietilamina:acrilato de propilo 56:44 que tiene un PM de aproximadamente 45000) se marcó con Cy5 (enlazador NHS) y se combinó con aldehído-PEG24-ACit en una proporción de peso de 2:1 (polímero:aldehído-PEG24 ACit) en tampón HEPES 50 mM pH 9,0 durante 1 hora a TA para formar (aldehído-PEG24-Acit)n-1170-100B en el que n es un número entero mayor que 0. Típicamente, n fue alrededor de 10.
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aldehído-PEG24-ACit (n=24)
El polímero modificado con aldehído-PEG24-ACit se hizo reaccionar luego con PEGi2-ACit en una relación de peso de 1:8 (polímero:PEG12-ACit) en tampón HEPES 50 mM, pH 9,0 durante 1 hora a TA para formar (aldehído-PEG24-ACit)n-1170-100B-(CitA-PEG12)m , en el que m es un número entero mayor que 0.
Figure imgf000019_0002
A continuación, el polímero modificado se purificó mediante el uso de una columna giratoria Sephadex G-50 y se determinó la concentración:
mg
polímero conj. Post-purificación de fluorescencia Cy5 mg
( - ml f ) = conj. Prepurificación de fluorescencia Cy5 — conj. pre-purificación ml
Cada ligando de avp6 se modificó con HyNic para facilitar la conjugación con la molécula de carga. El polímero purificado se combinó con el ligando avp6-(PEG)8-K-HyNic en una proporción en peso de 1:1,9 (polímero: ligando avp6) en tampón NaOAC-HOAc 50 mM, pH 5,0 a TA durante la noche para formar el conjugado polímero-ligando avp6. El conjugado de polímero- ligando de avp6 se purificó mediante el uso de una columna giratoria Sephadex G-50.
(PEG)8-K-HyNic
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Figure imgf000020_0002
Ligando avp6-(PEG)8-K-HyNic
La eficacia de la conjugación se cuantificó midiendo la absorbancia del conjugado de polímero avp6 a 354 nm mediante el uso de un coeficiente de extinción de 2,9 X 101 M-1cm-1 para el enlace bis-aril hidrazona.
Concentración molar del polímero (mM)
concentración en peso del polímero (mg/ml)
_ peso molecular del polímero (Dalton) X 1000
Concentración molar de avp6 (mM)
[A354 (conj. -avp6) — A 354 (conjunción sin control de avp6)]
29
Número de avp6 por polímero concentración molar de avp6 (mM)
concentración molar del polímero (mM)
Los conjugados de polímero-avp6 se diluyeron con una solución de glucosa isotónica a las concentraciones deseadas para su posterior análisis.
B. Unión al ligando de av¡36 (análisis de citometría de flujo). Para evaluar la especificidad de la unión de los ligandos de avp6 a la integrina avp6, cada ligando avp6 o péptido de control negativo se conjugó con un polímero marcado con Cy5 (como se describe anteriormente) y se evaluó la unión a las células. Se determinó que las células HUH7 (carcinoma hepatocelular humano) y SKOV3 (carcinoma de ovario humano) exhibían una expresión muy baja en la superficie celular de avp6 y se emplearon como líneas celulares de control negativo. Las células H2009 (adenocarcinoma epitelial de pulmón humano) y CAPAN-2 (adenocarcinoma de páncreas humano) sirvieron como líneas celulares de control positivo de avp6. Las células se separaron de los matraces de cultivo con Accutase, se lavaron en PBS y se sembraron en tubos de poliestireno de fondo redondo de 5 ml a 200000 células en 200 pl de medio completo (medio de cultivo con suplementos y suero de ternero fetal). Se añadieron conjugados de polímero de ligando de avp6 o conjugados sin polímero de ligando a 5 pg/ml (concentración de polímero-Cy5) a las células, se mezclaron y se incubaron a 37 °C durante 3 horas. La incubación a 37 °C facilitó la interacción ligando/receptor que puede dar como resultado una unión estática a la superficie celular extracelular y/o complejos de ligando/receptor internalizados. La mezcla se resuspendió a intervalos de 1 hora. Después de 3 horas de incubación, las células se lavaron 2 veces con 4 ml de tampón enfriado (PBS-FCS al 2 %) y se resuspendieron en 200 pl de tampón que contenía colorante azul SYTOX 10 pM para la selección de células vivas/muertas. Las muestras se analizaron en un citómetro BD Biosciences Canto II equipado con láseres violeta (405 nm), azul (488 nm) y rojo (633 nm). Las células viables se seleccionaron inicialmente como la población negativa azul SYTOX en el detector C con el láser violeta. A continuación, se evaluó la unión/captación del conjugado de estas células viables con el láser rojo como la Intensidad de fluorescencia media (MFI) del fluoróforo Cy5. El análisis de los datos se realizó con el software FlowJo v10.1. Se determinó una relación MFI específica (sMFIr) para cada ligando de avp6 mediante la fórmula:
valor de MFI de la muestra específica/valor de MFI sin ligando.
Como se muestra en la Tabla 2, a continuación, solo el péptido Ac-RGDLAAbuLCitAibL mostró una unión modesta a las células SKOV3. Este péptido no mostró unión significativa a las células HUH7. Por lo tanto, ninguno de los péptidos probados exhibió una unión no específica. Los péptidos de control negativo AcRGaMeDLAAbuLCitAib, AcRGDaMeLAAbuLCitAib, RGELATLRQL, AcCitGDLATLCitQL, AcK(Me)2GDLATLRQL, and AcR(Me)2GDLATLRQL, que no contienen un RGD, no mostraron una unión significativa a H2009 o CAPAN-2 células de control positivas para integrina avp6 , lo que indica una falta de afinidad por la integrina avp6. La mayoría de los otros péptidos mostraron una unión a las células H2009 o CAPAN-2 que fue comparable o superior a la de los péptidos naturales, RGDLATLRQL y RGDLATL, lo que indica una buena afinidad por la integrina avp6.
Tabla 2. Unión del ligando avp6 a las células que expresan la integrina avp6 (H2009 y CAPAN-2) y células que no expresan (HUH7 y SKOV3)
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Figure imgf000024_0001
Determinadas abreviaturas de aminoácidos no estándar y otros grupos químicos identificados en la tabla anterior tienen las estructuras químicas siguientes:
Figure imgf000025_0001
Dap(guanidino) NMeG es N-metil glicina
Figure imgf000026_0001
NMeL es N-metil leucina des-amino-R es des-amino-arginina
Figure imgf000026_0002
p3-hA es p-homo-alanina meta-guanidino-benzoico
Figure imgf000026_0003
Guanidinyl-R es guanidinil-arginina MeO-PEG8
Ejemplo 4. Administración intratraqueal in vivo de agentes de ARNi dirigidos a alfa-ENaC conjugado con ligandos de la integrina avp6 en ratas
Se sintetizaron composiciones de oligonucleótidos de doble cadena que incluían una cadena sentido y una cadena antisentido con menos de 26 nucleótidos cada una (es decir, un tipo de agente de ARNi), se sintetizaron de acuerdo con la tecnología de fosforamidita en fase sólida de acuerdo con los procedimientos generales conocidos en la técnica y comúnmente usados en la síntesis de oligonucleótidos. Las síntesis de agentes de ARNi en el presente documento se realizó en un soporte sólido hecho de vidrio de poro controlado comprado comercialmente (CPG, 500 Á o 600 Á, obtenido de Prime Synthesis, Aston, PA, Ee .UU), mediante el uso de un MerMade96E® (Bioautomatización), un MerMade12® (Bioautomation), o un OP Pilot 100 (GE Healthcare) para síntesis en dependencia de la escala. Todas las fosforamiditas de ARN y ARN modificadas en 2' se compraron comercialmente (Thermo Fisher Scientific (Milwaukee, WI, EE.UU). Para la escisión y la desprotección, después de la finalización de la síntesis en fase sólida, el soporte sólido seco se trató con una solución en volumen 1:1 de 40 % wt de metilamina en agua y solución de hidróxido de amonio al 28 % (Aldrich) durante 1,5 horas a 30 °C. La solución se evaporó y el residuo sólido se reconstituyó en agua. Para la purificación, los oligómeros brutos se purificaron mediante Hp LC de intercambio aniónico mediante el uso de una columna TSKgel SuperQ-5PW de 13 ^m y un sistema Shimadzu LC-8. El tampón A fue Tris 20 mM, EDTA 5 mM, pH 9,0 y contenía acetonitrilo al 20 % y el tampón B fue el mismo que el tampón A con la adición de cloruro sódico 1,5 M. Se registraron trazas UV a 260 nm. Las fracciones apropiadas se agruparon y luego se procesaron en HPLC de exclusión por tamaño mediante el uso de una columna GE Healthcare XK 26/40 empaquetada con Sephadex G-25 fino con un tampón de procesamiento de bicarbonato de amonio 100 mM, pH 6,7 y acetonitrilo al 20 %. Para la hibridación, las cadenas complementarias se mezclaron mediante la combinación de soluciones de ARN equimolares (sentido y antisentido) en PBS 1X (solución salina tamponada con fosfato, 1X, Corning, Cellgro) para formar los agentes de ARNi. Algunos agentes de ARNi se liofilizaron y almacenaron entre -15 y -25 °C. La concentración del dúplex se determinó mediante la medición de la absorbancia de la solución en un espectrómetro UV-Vis en PBS 1X. Luego, la absorbancia de la solución a 260 nm se multiplicó por un factor de conversión y el factor de dilución para determinar la concentración del dúplex. A menos que se indique de otra manera, todo el factor de conversión fue de 0,037 mg/(mLcm). Para algunos experimentos, se calculó un factor de conversión a partir de un coeficiente de extinción determinado experimentalmente.
Los agentes de ARNi sintetizados para el Ejemplo 4 incluían una cadena antisentido que tenía una secuencia de nucleobase al menos parcialmente complementaria al gen que expresa la subunidad alfa del canal de sodio epitelial sensible a amilorida (comúnmente denominado alfa-ENaC o SCNN1A). Los agentes de ARNi alfa-ENaC se diseñaron para ser capaces de degradar o inhibir la traducción de transcritos de ARN mensajero (ARNm) de alfa-ENaC de una manera específica de secuencia, provocando de esta manera la expresión del gen alfa-ENaC. Los agentes de ARNi estaban compuestos por nucleótidos modificados y más de un enlace no fosfodiéster.
El día 1 y el día 2 del estudio, se administró a ratas macho Sprague-Dawley una dosis de 200 microlitros por vía intratraqueal a través de un dispositivo micropulverizador (Penn Century, Filadelfia, PA), que incluía los siguientes grupos de dosificación: (1) dextrosa al 5 % en vehículo de agua (D5W); (2) 1,5 mg/kg de un agente de ARNi alfa-ENaC sin ligando ("agente de ARNi desnudo"), formulado en dextrosa al 5 %; (3) 1,5 mg/kg de un agente de ARNi alfa-ENaC conjugado con el ligando de la integrina avp6 de la Figura 3 (con el ligando de la integrina avp6 conjugado en el extremo terminal 5' de la cadena sentido), formulado en dextrosa al 5 %; o (4) 1,5 mg/kg de agente de ARNi alfa-ENaC conjugado con un ligando de la integrina avp6 inactivado que tiene la estructura Ac-RGELAAbuL-CitAibL (SEQ ID NO: 132) para servir como ligando de control negativo. Se cree que el ácido aspártico (D) en el motivo 'RGD' es necesario para la unión del ligando a los receptores de la integrina alfa-v, y los ligandos con la sustitución del ácido glutámico (E) han reducido significativamente las afinidades de unión de la integrina av. El mismo agente de ARNi alfa-ENaC se usó en los Grupos 2, 3, y 4.
El ligando de la integrina avp6 que se utilizó se sintetizó como un éster de TFP (como se muestra en la Figura 1) mediante el uso de técnicas generales de síntesis de péptidos bien conocidas en la técnica y similares a las expuestas en el Ejemplo 1 del presente documento, con la excepción de la escisión de la resina, que se logró mediante el uso de HFIP al 20 % (hexofluoroisopropanol) en DCM (diclorometano) durante 30 minutos a una hora, en lugar de la escisión con TFA. El extremo terminal 5' de la cadena sentido del agente de ARNi se modificó con una amina C6 (-NH2). El ligando de la integrina TFP-éster avp6 se conjugó luego con el grupo amino ubicado en el extremo 5' terminal de la cadena sentido modificada del agente de ARNi mediante el uso de 3 equivalentes del ligando de la integrina TFP-éster avp6 en DMSO:agua 9:1 y una cantidad en exceso de trietilamina como base, a temperatura ambiente. La purificación se realizó mediante la adición de ACN a la solución para precipitar el producto y secarlo a vacío alto.
Se administró la dosis a cuatro (4) ratas por grupo. Las ratas se sacrificaron el día 5 del estudio y se aisló el ARN total de ambos pulmones después de la recolección y la homogeneización. La abundancia de ARNm de alfa-ENaC se cuantificó mediante PCR cuantitativa basada en sondas, se normalizó a la expresión de GAPDH y se expresó como fracción del vehículo del grupo de control (media geométrica, /- intervalo de confianza del 95 %).
Tabla 3. Expresión relativa de ARNm de alfa-ENaC normalizado al control del ejemplo 4
Figure imgf000027_0001
Como se muestra en la Tabla 3, anterior, el ligando avp6 de la Figura 3 conjugado con un agente de ARNi alfa-ENaC mostró una mayor eliminación relativa del ARNm de alfa-ENaC (aproximadamente 78 % de eliminación), en comparación con el agente de ARNi desnudo (46 % de eliminación) y el agente de ARNi conjugado con el ligando de control RGE (57 % de eliminación) de la diana pulmonar alfa-ENaC in vivo.
Ejemplo 5. Administración intratraqueal in vivo de agentes de ARNi dirigidos a alfa-ENaC conjugado con ligandos de la integrina avp6 en ratas
Se sintetizaron agentes de ARNi alfa-ENaC similares a los descritos en el Ejemplo 4 siguiendo los mismos procedimientos de síntesis. El día 1 y el día 2 del estudio, se administró a ratas macho Sprague-Dawley una dosis de 200 microlitros por medio de un dispositivo de micropulverización (Penn Century, Filadelfia, PA), que incluía los siguientes grupos de dosificación: (1) vehículo D5W; (2) 1,5 mg/kg de un agente de ARNi sin ligando ("agente de ARNi desnudo"), formulado en D5W; (3) 1,5 mg/kg de un agente de ARNi alfa-ENaC conjugado con el ligando de la integrina avp6 de la Figura 3, formulado en D5W; o (4) 1,5 mg/kg de un agente de ARNi alfa-ENaC conjugado con un ligando de la integrina avp6 tridentado, que tiene la estructura que se muestra en la Figura 11. Los agentes de ARNi se diseñaron para inhibir la expresión del gen alfa-ENaC. El mismo agente de ARNi alfa-ENaC se usó en los Grupos 2, 3, y 4. El extremo terminal 5' de la cadena sentido de los agentes de ARNi se modificó con una amina Ca(-NH2) como en el Ejemplo 4. Los ligandos de la integrina avp6 de la Figura 3 se sintetizaron y conjugaron con los agentes de ARNi alfa-ENaC siguiendo los mismos procedimientos del Ejemplo 4. Cuando se conjuga con el ligando avb6 que se muestra en la Figura 11, el agente de ARNi alfa-ENaC se funcionalizó primero con el éster DBCO-PEG5-NHS mediante la conjugación con el extremo terminal funcionalizado amina 5' de la cadena sentido mediante el uso de trietilamina como base. El ligando de la integrina avb6 tridentado se sintetizó con un grupo reactivo PEG-azida, como se muestra en la Figura 10. Después de la precipitación en un sistema disolvente de acetonitrilo/solución salina tamponada con fosfato, el ligando de la integrina avb6 tridentado se conjugó con el agente de ARNi mediante cicloadición sin cobre.
Se administró la dosis a cinco (5) ratas por grupo. Las ratas se sacrificaron el día 5 del estudio y se aisló el ARN total de ambos pulmones después de la recolección y la homogeneización. La abundancia de ARNm de la diana se cuantificó mediante PCR cuantitativa basada en sonda, se normalizó a la expresión de GAPDH y se expresó como fracción del grupo de control del vehículo (media geométrica, /- intervalo de confianza del 95 %).
Tabla 4. Expresión relativa de ARNm de alfa-ENaC normalizado al control del ejemplo 5
Figure imgf000028_0001
Como se muestra en la Tabla 4, anterior, la conjugación de tres ligandos de avp6 (que forman un ligando "tridentado") como se muestra en la Figura 11, con un agente de ARNi alfa-ENaC, mostró un aumento de la eliminación relativa (aproximadamente 79 %), en comparación con el agente de ARNi conjugado con un ligando avp6 (Figura 3) (71 %) y el agente ARNi desnudo (66 %) in vivo.
Ejemplo 6. Administración intratraqueal in vivo de agentes de ARNi dirigidos a alfa-ENaC conjugado con ligandos de la integrina avp6 en ratas
Se sintetizaron agentes de ARNi alfa-ENaC similares a los descritos en el Ejemplo 4 siguiendo los mismos procedimientos de síntesis. El día 1 y el día 2 del estudio, se administró a ratas macho Sprague-Dawley una dosis de 200 microlitros por medio de un dispositivo de micropulverización (Penn Century, Filadelfia, PA), que incluía los siguientes grupos de dosificación: (1) vehículo D5W; (2) 3 mg/kg de un agente de a Rní sin ligando ("agente de ARNi desnudo"), formulado en D5W; o (3) 3,0 mg/kg de un agente de ARNi alfa-ENaC conjugado con el ligando de la integrina avp6 de la Figura 3, formulado en D5W. El agente de ARNi alfa-ENaC ARNi y los ligandos de la integrina avp6 se sintetizaron y conjugaron de acuerdo con los mismos procedimientos establecidos en el Ejemplo 4.
Se administró la dosis a cinco (5) ratas por grupo. Las ratas se sacrificaron el día 5 del estudio y se aisló el ARN total de ambos pulmones después de la recolección y la homogeneización. La abundancia de ARNm de la diana se cuantificó mediante PCR cuantitativa basada en sonda, se normalizó a la expresión de GAPDH y se expresó como fracción del grupo de control del vehículo (media geométrica, /- intervalo de confianza del 95 %).
Tabla 5. Expresión relativa de ARNm de alfa-ENaC normalizado al control del ejemplo 6
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Como se muestra en la Tabla, 5 anterior, el ligando avp6 de la Figura 3 conjugado con un agente de ARNi mostró una mayor eliminación relativa (aproximadamente un 83 % de eliminación), en comparación con el agente de ARNi desnudo (aproximadamente un 51 % de eliminación) de la diana pulmonar in vivo.
Ejemplo 7 Aspiración orofaríngea in vivo de agentes de ARNi dirigidos a un gen expresado en el pulmón conjugado con ligandos de la integrina avp6 en ratas
Se sintetizaron agentes de ARNi alfa-ENaC similares a los descritos en el Ejemplo 4 siguiendo los mismos procedimientos de síntesis. El día 1 del estudio, se administró a ratas macho Sprague-Dawley mediante aspiración orofaríngea una dosis de 200 microlitros, que incluía los siguientes grupos de dosificación: (1) solución salina isotónica; (2) 0,5 mg/kg de un agente de ARNi dirigido a alfa-ENaC conjugado con el ligando de la integrina avp6 de la Figura 3, formulado en solución salina isotónica; o (3) 0,5 mg/kg de un agente de ARNi dirigido a alfa-ENaC conjugado con el ligando de la integrina avp6 de la Figura 5, formulado en solución salina isotónica. Se usaron los mismos agentes de ARNi alfa-ENaC para los Grupos 2 y 3. El extremo terminal 5' de la cadena sentido del agente ARNi se modificó con una amina C6 (-NH2), como se establece en el Ejemplo 4. El agente de ARNi alfa-ENaC y los ligandos de la integrina avp6 de la Figura 3 se sintetizaron y conjugaron de acuerdo con los mismos procedimientos establecidos en el Ejemplo 4. Para los ligandos de la integrina avp6 de la Figura 5 se sintetizaron como un éster de TFP y, además, el extremo N del ligando de la integrina avp6 se protegió mediante un grupo fmoc. A continuación, se llevó a cabo la conjugación con el agente de ARNi de la misma manera que se expone en el Ejemplo 4, seguida de la desprotección de fmoc mediante el uso de trietilamina como base.
Se administró la dosis a cinco (5) ratas por grupo. Las ratas se sacrificaron el día 9 del estudio y se aisló el ARN total de ambos pulmones después de la recolección y la homogeneización. La abundancia de ARNm de la diana se cuantificó mediante PCR cuantitativa basada en sonda, se normalizó a la expresión de GAPDH y se expresó como fracción del grupo de control del vehículo (media geométrica, /- intervalo de confianza del 95 %).
Tabla 6. Expresión relativa de ARNm de alfa-ENaC normalizado al control del ejemplo 7
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Como se muestra en la Tabla 6, anterior, tanto los ligandos de avp6 de la Figura 3 como los de la Figura 5 conjugados con un agente de ARNi mostraron la eliminación de la diana pulmonar alfa-ENaC in vivo.
Ejemplo 8. Administración intratraqueal in vivo de agentes de ARNi dirigidos a alfa-ENaC conjugado con ligandos de la integrina avp6 y armazón de poli-L-lisina en ratas
Se sintetizaron agentes de ARNi alfa-ENaC similares a los descritos en el Ejemplo 4 siguiendo los mismos procedimientos de síntesis. El día 1 y el día 2 del estudio, se administró a ratas macho Sprague-Dawley una dosis de 200 microlitros a través de un dispositivo micropulverizador (Penn Century, Filadelfia, PA) de: (1) D5W (5 % dextrosa en agua); (2) 0,5 mg/kg de un agente de ARNi sin ligando ("agente de ARNi desnudo"), formulado en D5W; (3) 1,5 mg/kg de un agente ARNi desnudo, formulado en D5W; (4) 5 mg/kg de un agente ARNi desnudo, formulado en D5W; (5) 0,5 mg/kg de un agente de ARNi alfa-ENaC conjugado con el ligando de la integrina avp6 de la Figura 4, por medio de un armazón de poli-L-lisina (PLL), formulado en D5W; (6) 1,5 mg/kg de un agente de ARNi de alfa-ENaC conjugado con el ligando de la integrina avp6 de la Figura 4, a través de un armazón de PLL, formulado en D5W; o (7) 5 mg/kg de un agente de ARNi alfa-ENaC conjugado con el ligando de la integrina avp6 de la Figura 4, por medio de un armazón de PLL formulado en D5W. Los agentes de ARNi se diseñaron para inhibir la expresión del gen alfa-ENaC. El mismo agente de ARNi alfa-ENaC se usó en los Grupos 2 a 7. El ligando de la integrina avp6 se sintetizó inicialmente como un éster de TFP (que se muestra en la Figura 2). El armazón de PLL que se usó en los Grupos 5, 6 y 7 del Ejemplo 8 fue de aproximadamente cien (100) unidades monoméricas de L-lisina (aproximadamente 12 kilodaltons). El polímero de poli-L-lisina se modificó con 3 equivalentes de SMPT (4-succinimidiloxicarbonil-alfa-metil-a (2-piridilditio) tolueno) y la amina 5' (Ce amina modificada) de la cadena con sentido del agente de ARNi fue modificado con SATA (N-succinimidil-S-acetiltioacetato). A continuación, se añadió el ligando de la integrina avp6 de la Figura 2 (15 equivalentes) como un sólido y se agitó durante una hora. Luego se añadió una alanina-citrulina-PEG12 funcionalizada escindible con proteasa (10 equivalentes; funcionalizada con paranitrofenilcarbonato). Después de 15 minutos, se añadió gota a gota el agente de ARNi modificado con SATA (un equivalente) manteniendo un pH de 8,6. Los grupos de lisina restantes fueron funcionalizados con alanina-citrulina-PEG12 funcionalizada escindible con proteasa. El producto se purificó por filtración de flujo tangencial.
Se administró la dosis a cinco (5) ratas por grupo. Las ratas se sacrificaron el día 5 del estudio y se aisló el ARN total de ambos pulmones después de la recolección y la homogeneización. La abundancia de ARNm de la diana se cuantificó mediante PCR cuantitativa basada en sonda, se normalizó a la expresión de GAPDH y se expresó como fracción del grupo de control del vehículo (media geométrica, /- intervalo de confianza del 95 %). Los datos se informan en el gráfico de la Figura 12.
Como se muestra en la Figura 12, el ligando avp6 de la Figura 4 conjugado con un andamio de poli-L-lisina y un agente de ARNi mostró una mayor eliminación relativa en los tres niveles de dosis en comparación con el agente de ARNi desnudo (68 % de eliminación frente a 47 % de eliminación con la dosis de 0,5 mg/kg, 78 % de eliminación frente a 47 % de reducción con la dosis de 1,5 mg/kg, y 86 % de eliminación frente a 75 % de eliminación con la dosis de 5 mg/kg).
Ejemplo 9. Captación selectiva de conjugados de ligando avp6 marcados por células epiteliales primarias in vitro Se cultivaron células primarias de músculo liso, endoteliales y epiteliales de pulmón humano y se expusieron durante 24 horas a: (1) un armazón de polímero de poliacrilato marcado con Cy3 (rojo) sin ligando (sin conjugado del ligando); o (2) un armazón de polímero de poliacrilato marcado con Cy3 (rojo) conjugado con el ligando de la integrina avp6 de la Figura 7 (conjugado del ligando avp6). Las células se tiñeron con FITC-faloidina (actina F, verde) y tinción de Hoechst (ADN, azul) y se obtuvieron imágenes mediante microscopía de fluorescencia.
Las imágenes de microscopía de fluorescencia se prepararon mediante el uso de procedimientos estándar conocidos en la técnica. Las imágenes de fluorescencia mostraron que los conjugados marcados con Cy3 sin un ligando de la integrina avp6 no fueron internalizados por ningún tipo de célula. Los conjugados de Cy3 con el ligando avp6 de la Figura 7, sin embargo, fueron internalizados por las células epiteliales pulmonares primarias (como se muestra mediante una acumulación de la señal roja dentro de los compartimentos endosómicos de las células epiteliales pulmonares primarias en la imagen), pero no fueron internalizados por las células endoteliales primarias y células de músculo liso. Esto muestra que los ligandos de la integrina avp6 descritos en el presente documento pueden internalizarse selectivamente mediante las células epiteliales que expresan la integrina avp6.
Ejemplo 10. Captación selectiva de conjugados del ligando av p6 marcados por tejidos epiteliales in vivo
A ratones C57bl/6 se les inyectó una dosis intravenosa de 120 microgramos de: (1) un armazón de polímero de poliacrilato marcado con Cy3 (rojo) sin ligando (sin conjugado de ligando) o (2) un polímero de poliacrilato marcado con Cy3 (rojo) armazón conjugado a conjugado al ligando de la integrina avp6 de la Figura 7 (ligando de avp6 conjugado) o (3) un armazón de polímero de poliacrilato marcado con Cy3 (rojo) conjugado a un ligando de la integrina avp6 inactivado que tiene la estructura Ac-RGELAAbuL-CitAibL (SEQ ID NO: 132), que como se describió previamente en el Ejemplo 4 se usa como ligando de control negativo. Veinticuatro horas después de la inyección, se sacrificaron los ratones y se recogieron, fijaron, procesaron y seccionaron los tejidos. Las secciones de tejido se tiñeron con FITC-faloidina (actina F, verde) y tinción de Hoechst (ADN, azul) y se obtuvieron imágenes mediante microscopía de fluorescencia.
A. Células epiteliales bronquiolares de pulmón. Se prepararon imágenes de microscopía de fluorescencia de células epiteliales bronquiolares de pulmón de los ratones del Ejemplo 10 mediante el uso de procedimientos estándar. A partir de estas imágenes, los conjugados marcados con Cy3 (que se muestran con marcas rojas en las imágenes) con el ligando avp6 de la Figura 7 fueron internalizados selectivamente en compartimentos endosómicos por células epiteliales bronquiolares pulmonares in vivo, mientras que esencialmente no se observó internalización epitelial con construcciones que no incluían ligando o conjugados de control RGE-ligando (es decir, no se apreció rojo en estas imágenes).
B. Tejidos epiteliales renales. Se prepararon imágenes de microscopía de fluorescencia de tejidos epiteliales tubulares de renta a partir de los ratones del Ejemplo 10 mediante el uso de procedimientos estándar. A partir de estas imágenes, los conjugados marcados con Cy3 con el ligando avp6 de la Figura 7 fueron internalizados selectivamente en compartimentos endosómicos por células epiteliales tubulares renales in vivo (que se muestran con marcas rojas en las imágenes), mientras que esencialmente no se observó internalización epitelial sin conjugados de control de ligando.
C. Células epiteliales del tracto gastrointestinal. Se prepararon imágenes de microscopía de fluorescencia de tejidos epiteliales de renta a partir de los ratones del Ejemplo 10 mediante el uso de procedimientos estándar. Los conjugados marcados con Cy3 con el ligando avp6 de la Figura 7 fueron internalizados selectivamente en compartimentos endosómicos por células epiteliales del tracto gastrointestinal in vivo tanto en el intestino delgado como en la vesícula biliar (que se muestra con marcas rojas en las imágenes), mientras que esencialmente no se observó internalización epitelial con los controles no conjugados ligandos.

Claims (12)

REIVINDICACIONES
1. Un ligando de la integrina avp6 que comprende:
RG1DLXaa1Xaa2L-Xaa3Xaa4L-R1 (SEQ ID NO: 96) (Fórmula VIII) en donde
R es L-arginina;
G1 es L-glicina o N-metil glicina;
D es ácido L-aspártico (L-aspartato);
L es L-leucina;
Xaa1 es L-alanina;
Xaa2 es el ácido L-a-aminobutírico (Abu);
Xaa3 es citrulina (Cit);
Xaa4 es ácido aminoisobutírico (Aib); y
R1 es opcional y, si está presente, incluye PEG y/o un grupo de unión.
2. El ligando de la integrina avp6 de la reivindicación 1, en donde R1 comprende un polietilenglicol que tiene de 2-20 unidades de óxido de etileno.
3. El ligando de la integrina avp6 de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el ligando de la integrina avp6 comprende una caperuza de amina terminal.
4. El ligando de la integrina avp6 de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la caperuza de amina terminal se selecciona del grupo que consiste en: CH3CO, CH3CH2CO, CH3(CH2)2c O, (CH3)2CHCO, CH3(CH2)3CO, (CH3)2CHCH2CO, CH3CH2CH(CH3)CO, (CH3)3CCO, CH3(CH2)4CO, CH3SO2, CH3CH2SO2, CH3(CH2)2SO2, (CH3)2CHSO2, CH3(CH2)3SO2, (CH3^CHCH2SO2, CH3CH2CH(CH3)SO2, (CH3)3CSO2, PhCO, PhSO2, grupo alquilo que tiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 átomos de carbono, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, NH2NH, PEG, guanidinilo, CH3OCH2CH2OCH2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)2CH2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)3CH2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)4CH2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)5CH2CH2CO, CH3OCH2CH2OCH2CO, CH3O(CH2CH2O)2CH2CO, CH3O(CH2CH2O)3CH2CO, CH3O(CH2CH2O)4CH2CO, CH3O(CH2CH2O)5CH2CO, CH3OCH2CH2OCO, CH3O(CH2CH2O)2CO, CH3O(CH2CH2O)3CO, CH3O(CH2CH2O)4CO, CH3O(CH2CH2O)5CO, HOCH2CH2OCH2CH2CO, HO(CH2CH2O)2CH2CH2CO, HO(CH2CH2O)3CH2CH2CO, HO(CH2CH2O)4CH2CH2CO, HO(CH2CH2O)5CH2CH2CO, HOCH2CH2OCH2CO, HO(CH2CH2O)2CH2CO, HO(CH2CH2O)3CH2CO, HO(CH2CH2O)4CH2CO, HO(CH2CH2O)5CH2CO, HOCH2CH2OCO, HO(CH2CH2O)2CO, HO(CH2CH2O)3CO, HO(CH2CH2O)4CO, HO(CH2CH2O)5CO, CH3CH2OCH2CH2OCH2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)2CH2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)3CH2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)4CH2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)5CH2CH2CO, CH3CH2OCH2CH2OCH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)2CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)3CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)4CH2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)5CH2CO, CH3CH2OCH2CH2OCO, CH3CH2O(CH2CH2O)2CO, CH3CH2O(CH2CH2O)3CO, CH3CH2O(CH2CH2O)4CO, CH3CH2O(CH2CH2O)5CO, CH3OCH2CH2CO, HOCH2CH2CO o CH3CH2OCH2CH2CO.
5. El ligando de la integrina avp6 de la reivindicación 4, en donde la caperuza de amina terminal es CH3CO.
6. El ligando de la integrina avp6 de la reivindicación 1, en donde el ligando de la integrina avp6 comprende la secuencia de SEQ ID NO: 4 (Ac-RGDLAAbuLCitAibL).
7. El ligando de la integrina avp6 de cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 6, en donde el ligando de la integrina avp6 se conjuga además con una molécula de carga.
8. El ligando de la integrina avp6 de cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 7, en donde el ligando de la integrina avp6 está conjugado con una molécula de carga que comprende una molécula pequeña, un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, una inmunoglobulina, un anticuerpo monoclonal, una etiqueta o marcador, un lípido, un ácido nucleico o polinucleótido natural o modificado, un péptido, un aptámero, un polímero, una poliamina, una proteína, una toxina, una vitamina, un polietilenglicol, un hapteno, una digoxigenina, una biotina, un átomo o molécula radiactiva, o un fluoróforo.
9. El ligando de la integrina avp6 de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el ligando de la integrina avp6 está conjugado con una molécula de carga que comprende un ingrediente farmacéutico activo.
10. El ligando de la integrina avp6 de cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 9, en donde el ligando de la integrina avp6 está conjugado con una molécula de carga que comprende un compuesto oligomérico.
11. El ligando de la integrina avp6 de la reivindicación 10, en donde el compuesto oligomérico es un agente de ARNi.
12. Una composición que comprende el ligando de la integrina avp6 de cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 11, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3039618A1 (en) * 2016-11-01 2018-05-11 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Alpha-v beta-6 integrin ligands and uses thereof
MA47692A (fr) 2017-02-28 2020-01-08 Morphic Therapeutic Inc Inhibiteurs de l'intégrine (alpha-v) (bêta-6)
TW201835078A (zh) 2017-02-28 2018-10-01 美商萊築理公司 αvβ6整合蛋白之抑制劑
TN2019000308A1 (en) 2017-07-06 2021-05-07 Arrowhead Pharmaceuticals Inc RNAi AGENTS FOR INHIBITING EXPRESSION OF ALPHA-ENaC AND METHODS OF USE
EP3617206A1 (en) 2018-08-29 2020-03-04 Morphic Therapeutic, Inc. Integrin inhibitors
EP3929022A4 (en) 2019-06-25 2022-04-27 LG Energy Solution, Ltd. BATTERY SYSTEM
AU2021339808A1 (en) * 2020-09-11 2023-04-06 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Skeletal muscle delivery platforms and methods of use
MX2023002853A (es) 2020-09-11 2023-03-31 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Agentes de arni para inhibir la expresion de dux4, composiciones de dichos agentes, y metodos de uso.
CN116783294A (zh) * 2020-09-11 2023-09-19 箭头药业股份有限公司 整联蛋白靶向配体及其用途
WO2024006999A2 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Cyclic-disulfide modified phosphate based oligonucleotide prodrugs

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
DE19929410A1 (de) * 1999-06-26 2000-12-28 Merck Patent Gmbh Inhibitoren des Integrins avß6
EP1274730A2 (en) * 2000-04-21 2003-01-15 Amgen, Inc. Integrin/adhesion antagonists
DE10118550A1 (de) * 2001-04-14 2002-10-17 Merck Patent Gmbh Liganden des Integrins alpha¶nu¶beta¶6¶
GB0520068D0 (en) * 2005-10-03 2005-11-09 Cancer Res Technology av peptide ligand
ES2746925T3 (es) * 2006-08-03 2020-03-09 Medimmune Ltd Anticuerpos dirigidos hacia alfaVbeta6 y uso de los mismos
AR066984A1 (es) 2007-06-15 2009-09-23 Novartis Ag Inhibicion de la expresion de la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (enac) por medio de arni (arn de interferencia)
EP2221334B1 (en) 2007-11-28 2016-12-28 FUJIFILM Corporation Method for chemically modifying biopolymer and polypeptide
AU2011333666B2 (en) * 2010-11-26 2017-02-02 Molecular Partners Ag Improved capping modules for designed ankyrin repeat proteins
AU2013221585B2 (en) * 2012-02-17 2017-03-30 Seagen Inc. Antibodies to integrin alphavbeta6 and use of same to treat cancer
WO2015160770A1 (en) * 2014-04-15 2015-10-22 The Regents Of The University Of California Bi-terminal pegylated integrin-binding peptides and methods of use thereof
WO2016164357A1 (en) 2015-04-06 2016-10-13 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Phages for biomarker capture and methods of use
EP3130912B1 (de) 2015-08-14 2017-06-28 Sick Ag Verfahren zur bestimmung der konzentration einer gaskomponente und spektrometer dafür
JOP20170161A1 (ar) 2016-08-04 2019-01-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب
CA3039618A1 (en) * 2016-11-01 2018-05-11 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Alpha-v beta-6 integrin ligands and uses thereof

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