ES2905569T3 - Compuestos citotóxicos y antimitóticos y métodos para utilizarlos - Google Patents

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Geoffrey C Winters
James R Rich
Graham Albert Edwin Garnett
Alexander Laurence Mandel
Tom Han Hsiao Hsieh
Elyse Marie Josee Bourque
Stuart Daniel Barnscher
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Abstract

Un compuesto de fórmula I: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde: R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6, amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7, aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6, alquilo C1-C6, alquiltio C1-C6, carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7, cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6, guanidino, halo, haloalquilo C1-C6, heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6, hidroxilo y tio o R1 es RaRbNCH(Rc)-; Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6; Rb es alquilo C1-C6 y Rc es Rd-C(CH3)2- y Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4, alquenilo C2-C4, alquilo C1-C4, alquilamino C1-C4, alquiloxi C1-C4, amino, aminoalquilo C1-C4, halo, haloalquilo C1-C4, hidroxilo, hidroxialquilo C1- C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4, alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4, hidroxilo y tio o Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo; R2 se selecciona de: alquilo C1-C6, arilo, arilalquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C7, cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6, heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6, alcoxicarbonilo C1-C6, alquilo C1-C6, alquilamino C1-C6, amino, aminoalquilo C1-C6, aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7, arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, haloalcoxi C1-C6, halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y X está ausente.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos citotóxicos y antimitóticos y métodos para utilizarlos
Antecedentes
Campo
La invención se refiere a compuestos biológicamente activos, composiciones que los comprenden y métodos para utilizar dichos compuestos y composiciones biológicamente activos para el tratamiento del cáncer y otras enfermedades.
Descripción de la técnica relacionada
Los nuevos agentes terapéuticos contra el cáncer prometedores incluyen las dolastatinas y análogos sintéticos de dolastatina, tales como auristatinas (patentes estadounidenses n.° 5.635.483. 5.780.588. 6.323.315 y 6.884.869; Shnyder et ál. (2007) Int. J. Oncol. 31: 353-360; Otani, M. et ál. Jpn. J. Cancer Res. 2000, 91, 837-844; publ. int. PCT n.° WO 01/18032 A3, WO 2005/039492, WO2006/132670 y WO 2009/095447; Fennell, B. J. et ál. J. Antimicrob. Chemther. 2003, 51, 833-841). Se ha mostrado que las dolastatinas y auristatinas interfieren con la dinámica de los microtúbulos, mediante lo cual alteran la división celular (Woyke et ál. (2001) Antimicrob. Agents Chemother. 45 (12): 3580-3584) y tienen actividad anticancerosa (patente estadounidense n.° 5.663.149) y antifúngica (Pettit et ál. (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42: 2961-2965). Desafortunadamente, a pesar del entusiasmo temprano, la dolastatina 10 mostró resultados insatisfactorios como agente único en ensayos clínicos de fase II (Shnyder (2007), supra). Determinados compuestos en la familia de auristatinas son más prometedores como candidatos clínicos con eficacia y características farmacológicas mejoradas respecto a las dolastatinas (Pettit et ál. (1995) Anti-Cancer Drug Des. 10: 529-544; Pettit et ál. (1998) Anti-Cancer Drug Des. 13: 243-277; Shnyder (2007), supra). Se han descrito diversos análogos sintéticos de este tipo estructural (patente estadounidense n.° 6.569.834; patente estadounidense n.° 6.124.431 y Pettit et ál. (2011) J. Nat. Prod. 74:962-968). Además, se describen conjugados a fármaco de auristatina en el documento WO 2013/173391 A1, el documento WO 2013/173392 A1 y el documento WO 2013/173393 A1.
Las auristatinas tienen varias propiedades que las hacen atractivas para el desarrollo farmacéutico. Primero, estos compuestos son extremadamente potentes. Segundo, su preparación es directa debido a la estructura peptídica. Tercero, poseen perfiles farmacocinéticos y metabólicos satisfactorios en comparación con los péptidos en general o con otras clases de fármaco contra el cáncer en particular. Finalmente, la estructura peptídica de las auristatinas es similar a la de un anticuerpo, por lo tanto, cuando estos compuestos se utilizan como parte de un conjugado de fármaco y anticuerpo (ADC, por sus siglas en inglés), es menos probable que provoquen precipitación o formación de agregados de peso molecular elevado (Doronina et ál. (2003) Nat. Biotechnology 21 (7): 778-784).
Las composiciones citotóxicas y antimitóticas potentes son altamente deseables para el tratamiento de una cantidad de trastornos devastadores, que incluyen el cáncer. Aunque se han generado una amplia variedad de análogos de auristatina, muchos presentan una potencia reducida que limita la utilidad en los métodos de tratamiento médico. Por las razones que anteceden, si bien se ha progresado en este campo, existe la necesidad de compuestos antimitóticos y citotóxicos potentes adicionales que tengan las características preferidas que los vuelvan adecuados para el tratamiento de una variedad de trastornos, que incluyen el cáncer. La presente divulgación satisface estas necesidades y proporciona ventajas relacionadas adicionales.
Breve sumario
En resumen, la presente divulgación se refiere compuestos biológicamente activos, composiciones que los comprenden y métodos para utilizar dichos compuestos y composiciones. Se proporcionan compuestos de fórmula I:
Figure imgf000002_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rb es alquilo C1-C6 y
Rc es Rd-C(CH3 )2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R2 se selecciona de: alquilo C1-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y
X está ausente.
En el presente documento también se divulga un método para elaborar un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
En una realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En el presente documento también se divulga un método de uso de un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en terapia. En particular, en el presente documento se divulga un método para el tratamiento del cáncer en un mamífero que comprende administrar a un mamífero que lo necesita una cantidad eficaz de un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este o una composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En el presente documento también se divulga un método para inhibir el crecimiento tumoral en un mamífero que comprende administrar a un mamífero que lo necesita una cantidad eficaz de un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este o una composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En el presente documento también se divulga un método para matar células cancerosas in vitro mediante el uso de un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este. En el presente documento también se divulga un método para matar células cancerosas in vivo en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita una cantidad eficaz de un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este o una composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En el presente documento también se divulga un método para aumentar el tiempo de supervivencia de un mamífero que tiene cáncer, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este o una composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En el presente documento también se divulga un uso de un compuesto descrito en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en la elaboración de un medicamento para tratar el cáncer en un mamífero.
En el presente documento también se divulga un uso de un compuesto descrito en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en la elaboración de un medicamento para inhibir el crecimiento tumoral en un mamífero.
En el presente documento también se divulga un uso de un compuesto descrito en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en la elaboración de un medicamento aumentar la supervivencia de un mamífero que tiene cáncer.
En otra realización, la presente divulgación proporciona un compuesto o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano o de un animal mediante terapia.
En otra realización, la presente divulgación proporciona un compuesto o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, para su uso en el tratamiento del cáncer en un mamífero.
En otra realización, la presente divulgación proporciona un compuesto o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, para su uso en la inhibición del crecimiento tumoral en un mamífero.
En otra realización, la presente divulgación proporciona un compuesto o una composición farmacéutica descrita en el presente documento, para su uso en el aumento de la supervivencia de un mamífero que tiene cáncer.
En una realización, se proporcionan composiciones que comprenden un compuesto biológicamente activo, tal como se divulga en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este, unido de forma directa o indirecta a un resto de direccionamiento.
En una realización, la invención proporciona composiciones de fórmula II:
(T)-(L)-(D) II
en donde (T) es un resto de direccionamiento, (L) es un enlazador y (D) es un compuesto de fórmula I, Ia, Id o una sal farmacéuticamente aceptable de este. (D) se encuentra unido de forma covalente a (L).
En una realización, el resto de direccionamiento es un anticuerpo. Por consiguiente, en una realización, se proporcionan conjugados de anticuerpo-fármaco (ADC) que comprenden un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable o profármaco de este.
En el presente documento también se divulga un método para elaborar una composición de fórmula II.
En otra realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende una composición de fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable de esta y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. En el presente documento también se divulga un método de uso de una composición de fórmula II en una terapia. En particular, la presente divulgación proporciona un método para tratar el cáncer en un mamífero que comprende la administración a un mamífero que lo necesita de una cantidad eficaz de una composición de fórmula II o una composición farmacéutica que comprende una composición de fórmula II y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En el presente documento también se divulga un método para inhibir el crecimiento tumoral en un mamífero que comprende administrar a un mamífero que lo necesita de una cantidad eficaz de una composición de fórmula II o una composición farmacéutica que comprende una composición de fórmula II y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En el presente documento también se divulga un método para matar células cancerosas in vitro mediante el uso de una composición de fórmula II. En otra realización, la presente divulgación proporciona un método para matar células cancerosas in vivo en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita de una cantidad eficaz de una composición de fórmula II o una composición farmacéutica que comprende una composición de fórmula II y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En el presente documento también se divulga un método para aumentar el tiempo de supervivencia de un mamífero que tiene cáncer, que comprende la administración a un mamífero que lo necesita de una cantidad eficaz de una composición de fórmula II o una composición farmacéutica que comprende una composición de fórmula II y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En el presente documento también se divulga un uso de una composición de fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, en la elaboración de un medicamento para tratar el cáncer en un mamífero.
En el presente documento también se divulga un uso de una composición de fórmula II, en la elaboración de un medicamento para inhibir el crecimiento tumoral en un mamífero.
En el presente documento también se divulga un uso de una composición de fórmula II en la elaboración de un medicamento para aumentar la supervivencia de un mamífero que padece cáncer.
En otra realización, la presente divulgación proporciona una composición de fórmula II o una composición farmacéutica que comprende una composición de fórmula II para su uso en un método de tratamiento del cuerpo del ser humano o animal mediante la terapia.
En otra realización, la presente divulgación proporciona una composición de fórmula II o una composición farmacéutica que comprende una composición de fórmula II para su uso en el tratamiento del cáncer en un mamífero.
En otra realización, la presente divulgación proporciona una composición de fórmula II o una composición farmacéutica que comprende una composición de fórmula II para su uso en la inhibición del crecimiento tumoral en un mamífero.
En otra realización, la presente divulgación proporciona una composición de fórmula II o una composición farmacéutica que comprende una composición de fórmula II para su uso en el aumento de supervivencia de un mamífero que padece cáncer.
Estos y otros aspectos de la descripción resultarán evidentes después de las referencias a la siguiente descripción detallada.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 muestra la citotoxicidad del compuesto 5 sobre la línea celular HCC1954 Her 2 positiva.
La figura 2 muestra la citotoxicidad del compuesto 5 sobre la línea celular Jurkat Her 2 negativa. La figura 3 muestra la citotoxicidad de un ADC con trastuzumab del compuesto 5 sobre la línea celular NCI-N87 Her 2 positiva.
La figura 4 muestra la citotoxicidad de un ADC con trastuzumab del compuesto 5 sobre la línea celular HCC1954 Her 2 positiva.
La figura 5 muestra la citotoxicidad de un ADC con trastuzumab del compuesto 5 sobre la línea celular Jurkat Her 2 negativa.
La figura 6 muestra los resultados de un ensayo de unión natural de equilibrio utilizado para comparar la unión de determinados ADC con la línea celular MDA-MB-231,
La figura 7 muestra la eficacia de determinados ADC en el modelo tumoral de NCI-N87 mediante el uso de ratones NOD SCID Gamma.
La figura 8 muestra la eficacia de determinados ADC en el modelo tumoral Karpas 299 mediante el uso de ratones C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid.
La figura 9 muestra los resultados de un estudio de tolerabilidad de un ADC con trastuzumab del compuesto 14 en ratas Sprague Dawley hembras.
La figura 10 muestra los resultados de un estudio de tolerabilidad de un ADC con trastuzumab del compuesto 5 en ratas Sprague Dawley hembras.
La figura 11 muestra los resultados de un ensayo de interrupción del ciclo celular en células Jurkat tratadas con el compuesto 5.
Descripción detallada
En la siguiente descripción, determinados detalles específicos se establecen para proporcionar una comprensión exhaustiva de las diversas realizaciones de la divulgación. Sin embargo, el experto en la técnica comprenderá que la divulgación puede ponerse en práctica sin estos detalles.
Definiciones
A menos que se indique lo contrario, se pretende que los siguientes términos y frases como se usan en el presente documento tengan los siguientes significados. Cuando se utilizan marcas comerciales en el presente documento, los solicitantes pretenden incluir independientemente la formulación del producto de esa marca comercial, el fármaco genérico y el o los ingredientes farmacéuticos activos del producto de la marca comercial.
A menos que el contexto lo requiera de otro modo, a lo largo de la presente memoria descriptiva y reivindicaciones, la palabra "comprender” y sus variaciones, tales como "comprende” y "que comprende” deben interpretarse en un sentido abierto e inclusivo, es decir, como "que incluye, pero no se limita a”.
La referencia a lo largo de la presente memoria descriptiva a "una realización” significa que un rasgo, estructura o característica particular descrita respecto a la realización está incluida en al menos una realización de la presente divulgación. Por lo tanto, la aparición de la frase "en una realización" en varias secciones a lo largo de la presente memoria descriptiva no necesariamente hace referencia a la misma realización. Se aprecia que determinadas características de la invención que se describen, por motivos de claridad, en el contexto de realizaciones independientes, también se pueden proporcionar en combinación en una sola realización. Por el contrario, también pueden proporcionarse diversas características de la invención que, por motivos de brevedad, se describen en el contexto de una sola realización, de forma separada o en cualquier subcombinación adecuada.
Grupos químicos
Todas las combinaciones de las realizaciones concernientes a los grupos químicos representados por las variables (por ejemplo, Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf, Rg, Rh, Ri, Rj, Rk, Rm, R1, R2, R2a, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R4, R10, R11, X e Y contenidas en las fórmulas químicas genéricas descritas en el presente documento (por ejemplo, I, Ia, Ic, Id, If, Ig, Ii, Ij, Im, In, II, III, IV, V, VI, y VII) se incluyen específicamente en la presente invención, tal como si cada todas y cada una de las combinaciones se hubiera descrito explícitamente de manera individual, en la medida en que dichas combinaciones abarquen compuestos que den como resultado compuestos estables (es decir, compuestos que puedan aislarse, caracterizarse y evaluarse para verificar su actividad biológica). Además, todas las subcombinaciones de los grupos químicos enumerados en las realizaciones que describen dichas variables, así como las subcombinaciones de los usos e indicaciones médicas que se describen en el presente documento, también se encuentran comprendidas específicamente por la presente invención como si todas y cada una de las subcombinaciones de grupos químicos y subcombinaciones de usos e indicaciones médicas se mencionaran explícitamente y de forma individual en el presente documento. Además, en el caso de que se enumere una lista de sustituyentes para cualquier Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf, Rg, Rh, Ri, Rj, Rk, Rm, R1, R2, R2a, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R4, R10, R11, X o Y en particular en una realización y/o reivindicación en particular, se comprende que cada sustituyente individual puede eliminarse de la realización y/o reivindicación en particular y que la lista restante de sustituyentes se considerará dentro del alcance de la presente divulgación.
El término "aciloxi”, tal como se usa en el presente documento, incluye -OC(O)-alquilo, en donde alquilo es tal como se define en el presente documento. Los ejemplos de aciloxi incluyen, pero no se limitan a: formiloxi, acetoxi, propioniloxi, isobutiriloxi, pivaloiloxi y similares.
El término "aciltio”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -SC(O)-alquilo, en donde alquilo es tal como se define en el presente documento. Los ejemplos de aciltio incluyen, pero no se limitan a: formiltio, acetiltio, propioniltio, isobutiriltio, pivaloiltio y similares.
El término "alcoxi”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -O-alquilo, en donde alquilo es tal como se define en el presente documento. Los ejemplos de alquilo incluyen, pero no se limitan a: metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, sec-butoxi, isobutoxi, t-butoxi, pentiloxi, isopentiloxi, t-pentiloxi, neopentiloxi, 1-metilbutoxi, 2-metilbutoxi, n-hexiloxi y similares.
El término "alcoxicarbonilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)O-alquilo. Los ejemplos de alcoxicarbonilo incluyen, pero no se limitan a: metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, n-propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, n-butoxicarbonilo, sec-butoxicarbonilo, isobutoxicarbonilo, t-butoxicarbonilo, pentiloxicarbonilo, isopentiloxicarbonilo, t-pentiloxicarbonilo, neopentiloxicarbonilo, 1-metilbutoxicarbonilo, 2-metilbutoxicarbonilo, nhexiloxicarbonilo y similares.
El término "alquenildiílo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical divalente de hidrocarburo lineal o ramificado no saturado que contiene la cantidad especificada de átomos de carbono y uno o más enlaces dobles carbono-carbono, por ejemplo, alquenildiílo C2-C6 , alquenildiílo C2-C4 o alquenildiílo C2. Los ejemplos de alquenildiílo incluyen, pero no se limitan a: etenildiílo, n-propenildiílo, isopropenildiílo, n-butenildiílo, sec-butenildiílo, isobutenildiílo, t-butenildiílo, pentenildiílo, isopentenildiílo, t-pentenildiílo, neopentenildiílo, 1-metilbutenildiílo, 2-metilbutenildiílo, n-hexenildiílo y similares.
El término "alquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical de hidrocarburo lineal o ramificado saturado que contiene la cantidad especificada de átomos de carbono, por ejemplo, alquilo C1-C6 , alquilo C1-C4 o alquilo C2. Los ejemplos de alquilo incluyen, pero no se limitan a: metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, t-pentilo, neopentilo, 1 -metilbutilo, 2-metilbutilo, n-hexilo y similares. El término "alquildiílo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical divalente de hidrocarburo lineal o ramificado saturado que contiene la cantidad especificada de átomos de carbono, por ejemplo, alquildiílo C1-C6, alquildiílo C1-C4 o alquildiílo C2. Los ejemplos de alquildiílo incluyen, pero no se limitan a: metildiílo, etildiílo, npropildiílo, isopropildiílo, n-butildiílo, sec-butildiílo, isobutildiílo, t-butildiílo, pentildiílo, isopentildiílo, t-pentildiílo, neopentildiílo, 1-metilbutildiílo, 2-metilbutildiílo, n-hexildiílo y similares.
El término "alquilamino”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -NH-alquilo, en donde alquilo es tal como se define en el presente documento. Los ejemplos de alquilamino incluyen, pero no se limitan a: metilamino, etilamino, n-propilamino, isopropilamino, n-butilamino, sec-butilamino, isobutilamino, t-butilamino, pentilamino, isopentilamino, t-pentilamino, neopentilamino, 1-metilbutilamino, 2-metilbutilamino, n-hexilamino y similares.
El término "alquiltio”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -S-alquilo, en donde alquilo es tal como se define en el presente documento. Los ejemplos de alquiltio incluyen, pero no se limitan a: metiltio, etiltio, npropiltio, isopropiltio, n-butiltio, sec-butiltio, isobutiltio, t-butiltio, pentiltio, isopentiltio, t-pentiltio, neopentiltio, 1 metilbutiltio, 2-metilbutiltio, n-hexiltio y similares.
El término "amino", tal como se usa en el presente documento, se refiere a -NH2.
El término "aminocicloalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo cicloalquilo sustituido con un sustituyente de amino, tal como esos términos se definen en el presente documento. Los ejemplos de aminocicloalquilo incluyen, pero no se limitan a: aminociclopropilo, aminociclobutilo, aminociclopentilo, aminociclohexilo y similares.
El término "aminoalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con un sustituyente de amino, tal como esos términos se definen en el presente documento. Los ejemplos de aminoalquilo incluyen, pero no se limitan a: aminometilo, aminoetilo, amino-n-propilo, amino-isopropilo, amino-n-butilo, amino-secbutilo, aminoisobutilo, amino-f-butilo, amino-pentilo, aminoisopentilo, amino-f-pentilo, aminoneopentilo, amino-1-metilbutilo, amino-2-metilbutilo, amino-n-hexilo y similares.
El término "aminoarilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilo sustituido con un sustituyente de amino, tal como esos términos se definen en el presente documento. Los ejemplos de aminoarilo incluyen, pero no se limitan a: amino-fenilo, amino-naftalenilo y similares.
El término "aminoheterociclilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterociclilo sustituido con un sustituyente de amino, tal como esos términos se definen en el presente documento. Los ejemplos de aminoheterociclilo incluyen, pero no se limitan a: aminopirrolidinilo, aminopiperidinilo y similares.
El término "arilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical derivado de un sistema de anillos de hidrocarburo monocíclico o bicíclico, de 6 a 12 miembros, en donde al menos un anillo es aromático. Los ejemplos de arilo incluyen, pero no se limitan a: fenilo, naftalenilo, 1,2,3,4-tetrahidro-naftalenilo, 5,6,7,8-tetrahidronaftalenilo, indanilo y similares.
El término "arilalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con un sustituyente de arilo, tal como esos términos se definen en el presente documento. Los ejemplos de arilalquilo incluyen, pero no se limitan a: bencilo, fenetilo, fenilpropilo, naftalenilmetilo y similares.
El término "arildiílo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical divalente derivado de un sistema de anillos de hidrocarburo monocíclico o bicíclico de 6 a 12 miembros, en donde al menos un anillo es aromático. Los ejemplos de arildiílo incluyen fenildiílo, naftalenildiílo, 1,2,3,4-tetrahidro-naftalenildiílo, 5,6,7,8-tetrahidro-naftalenildiílo, indanildiílo y similares.
El término "carboxamida”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)NH2.
El término "carboxilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)OH.
El término "ciano", tal como se usa en el presente documento, se refiere a -CN.
El término "cicloalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical de hidrocarburo cíclico saturado que contiene la cantidad especificada de átomos de carbono, por ejemplo, alquilo C3-C7 o alquildiílo C4-C7. Los ejemplos de cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y similares.
El término "cicloalquilalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con un sustituyente de cicloalquilo, tal como esos términos se definen en el presente documento. Los ejemplos de cicloalquilalquilo incluyen, pero no se limitan a: cicopropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilmetilo, ciclopropiletilo, ciclobutiletilo, ciclopentiletilo, ciclohexiletilo y similares.
El término "cicloalquildiílo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical de hidrocarburo divalente cíclico saturado que contiene la cantidad especificada de átomos de carbono, por ejemplo, cicloalquildiílo C3-C7 o alquildiílo C4-C7. Los ejemplos de cicloalquildiílo incluyen, pero no se limitan a: ciclopropildiílo, ciclobutildiílo, ciclopentildiílo, ciclohexildiílo y similares.
El término "guanidino”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -NH-C(=NH)-NH2.
El término "halo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -F, -Cl, -Br y -I.
El término "haloacilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)-haloalquilo, en donde haloalquilo es tal como se define en el presente documento. Los ejemplos de haloacilo incluyen, pero no se limitan a: difluoroacetilo, trifluoroacetilo, 3,3,3-trifluoropropanoilo, pentafluoroproponilo y similares.
El término "haloalcoxi”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a -O-haloalquilo, en donde haloalquilo es tal como se define en el presente documento. Los ejemplos de haloalcoxi incluyen, pero no se limitan a: difluorometoxi, trifluorometoxi, 2,2,2-trifluoroetoxi, pentafluoroetoxi y similares.
El término "haloalquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo, tal como se define en el presente documento, sustituido con uno o más halógenos. Un haloalquilo sustituido completamente puede representarse mediante la fórmula CnL2n+1 en donde L es un halógeno. Cuando hay más de un halógeno presente, entonces estos pueden ser iguales o diferentes y seleccionados del grupo que consiste en F, Cl, Br y I. Los ejemplos de grupos haloalquilo incluyen, pero no se limitan a, fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, clorodifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, pentafluoroetilo y similares.
El término "heteroarilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical derivado de un sistema de anillos monocíclico o bicíclico de 6 a 12 miembros, en donde al menos un átomo del anillo es un heteroátomo y al menos un anillo es aromático. Los ejemplos de heteroátomos incluyen, pero no se limitan a: O, S, N y similares. Los ejemplos de heteroarilo incluyen, pero no se limitan a: piridilo, benzofuranilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidinilo, triazinilo, quinolinilo, benzotiazolilo, 1H-bencimidazolilo, isoquinolinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, pirrolilo, indolilo, 1 H-benzoimidazol-2-ilo, benzo[1,3]dioxol-5-ilo, 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-7-ilo, 2,3-dihidro-benzofuran-7-ilo, 2.3- dihidro-indol-1-ilo y similares.
El término "heteroarilalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con un sustituyente de heteroarilo, tal como esos términos se definen en el presente documento. Los ejemplos de heteroarilalquilo incluyen, pero no se limitan a: piridilmetilo, benzofuranilmetilo, pirazinilmetilo, piridazinilmetilo, pirimidinilmetilo, triazinilmetilo, quinolinilmetilo, benzoxazolilmetilo, benzotiazolilmetilo, 1 H-benzimidazolilmetilo, isoquinolinilmetilo, quinazolinilmetilo, quinoxalinilmetilo, pirrolilmetilo, indolilmetilo, 1 H-benzoimidazol-2-ilmetilo, benzo[1,3]dioxol-5-ilmetilo, 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-7-ilmetilo, 2,3-dihidro-benzofuran-7-ilmetilo, 2,3-dihidroindol-1-ilmetil y similares.
El término "heteroarildiílo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical divalente derivado de un sistema de anillos monocíclico o bicíclico de 6 a 12 miembros, en donde al menos un átomo del anillo es un heteroátomo y al menos un anillo es aromático. Los ejemplos de heteroátomos incluyen, pero no se limitan a: O, S, N y similares. Los ejemplos de heteroarildiílo incluyen, pero no se limitan a: tiazolildiílo, 2,4-tiazolildiílo, triazolildiílo, 1.2.3- triazolil-1,4-diílo, piridildiílo, benzofuranildiílo, pirazinildiílo, piridazinildiílo, pirimidinildiílo, triazinildiílo, quinolinildiílo, benzoxazolildiílo, benzotiazolildiílo, 1H-benzimidazolildiílo, isoquinolinildiílo, quinazolinildiílo, quinoxalinildiílo, pirrolildiílo, indolildiílo, 1H-benzoimidazol-2-ildiílo, benzo[1,3]dioxol-5-ildiílo, 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-7-ildiílo, 2,3-dihidro-benzofuran-7-ildiílo, 2,3-dihidro-indol-1-ildiílo y similares.. Los ejemplos de incluyen, pero no se limitan a: y similares.
El término "heterociclilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical derivado de un sistema de anillos no aromático monocíclico o bicíclico de 3 a 12 miembros, en donde al menos un átomo del anillo es un heteroátomo. Los ejemplos de heteroátomos incluyen, pero no se limitan a: O, S, N y similares. Un sustituyente de heterociclilo se puede unir a través de cualquiera de sus átomos de anillo disponibles, por ejemplo, un carbono del anillo o un nitrógeno del anillo. En algunas realizaciones, el grupo heterociclilo es un anillo que contiene 3, 4, 5, 6 o 7 miembros. Los ejemplos de grupo heterociclilo incluyen, pero no se limitan a: aziridin-1-ilo, aziridin-2-ilo, azetidin-1-ilo, azetidin-2-ilo, azetidin-3-ilo, piperidin-1-ilo, piperidin-2-ilo, piperidin-3-ilo, piperidin-4-ilo, morfolin-2-ilo, morfolin-3-ilo, morfolin-4-ilo, piperazin-1-ilo, piperazin-2-ilo, piperazin-3-ilo, piperazin-4-ilo, pirrolidin-1-ilo, pirrolidin-2-ilo, pirrolidin-3-ilo, [1,3]-dioxolan-2-ilo, tiomorfolin-4-ilo, [1,4]oxazepan-4-ilo, 1,1-dioxo-1A6-tiomorfolin-4-ilo, azepan-1-ilo, azepan-2-ilo, azepan-3-ilo, azepan-4-ilo, octahidro-quinolin-1-ilo, octahidro-isoquinolin-2-ilo y similares.
El término "heterociclilalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con un sustituyente de heterociclilo, tal como esos términos se definen en el presente documento. Los ejemplos de heterociclilalquilo incluyen, pero no se limitan a: azetidin-3-ilmetilo piperidin-1-ilmetilo piperidin-2-ilmetilo piperidin-3-ilmetilo piperidin-4-ilmetilo morfolin-2-ilmetilo morfolin-3-ilmetilo morfolin-4-ilmetilo piperazin-1-ilmetilo piperazin-2-ilmetilo piperazin-3-ilmetilo piperazin-4-ilmetilo pirrolidin-1-ilmetilo pirrolidin-2-ilmetilo pirrolidin-3-ilmetilo [1,3]-dioxolan-2-ilmetilo tiomorfolin-4-ilmetilo [1,4]oxazepan-4-ilmetilo 1,1-dioxo-1A6-tiomorfolin-4-ilmetilo azepan-1-ilmetilo azepan-2-ilmetilo azepan-3-ilmetilo azepan-4-ilmetilo octahidro-quinolin-1-ilmetilo octahidro-isoquinolin-2-ilo y similares.
El término "heterociclildiílo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical divalente derivado de un sistema de anillos no aromático monocíclico o bicíclico de 3 a 12 miembros, en donde al menos un átomo del anillo es un heteroátomo. Los ejemplos de heteroátomos incluyen, pero no se limitan a: O, S, N y similares. Un sustituyente de heterociclildiílo se puede unir a través de dos de cualquiera de sus átomos de anillo disponibles, por ejemplo, carbonos del anillo o nitrógenos del anillo. En algunas realizaciones, el heterociclildiílo es un anillo que contiene 3, 4, 5, 6 o 7 miembros. Los ejemplos de grupo heterociclildiílo incluyen, pero no se limitan a: aziridin-1-ildiílo, aziridin-2-ildiílo, azetidin-1-ildiílo, azetidin-2-ildiílo, azetidin-3-ildiílo, piperidin-1-ildiílo, piperidin-2-ildiílo, piperidin-3-ildiílo, piperidin-4-ildiílo, morfolin-2-ildiílo, morfolin-3-ildiílo, morfolin-4-ildiílo, piperazin-1-ildiílo, piperazin 2-ildiílo, piperazin-3-ildiílo, piperazin-4-ildiílo, pirrolidin-1 -ildiílo, pirrolidin-2-ildiílo, pirrolidin-3-ildiílo, [1,3]-dioxolan-2-ildiílo, tiomorfolin-4-ildiílo, [1,4]oxazepan-4-ildiílo, 1,1 -dioxo-1 A6-tiomorfolin-4-ildiílo, azepan-1-ildiílo, azepan-2-ildiílo, azepan-3-ildiílo, azepan-4-ildiílo, octahidro-quinolin-1 -ildiílo, octahidro-isoquinolin-2-ildiílo y similares..
El término "hidroxilo", tal como se usa en el presente documento, se refiere a -OH.
El término "hidroxialquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con un sustituyente de hidroxi, tal como esos términos se definen en el presente documento. Los ejemplos de hidroxialquilo incluyen, pero no se limitan a: hidroximetilo, hidroxietilo, hidroxi-n-propilo, hidroxiisopropilo, hidroxi-n-butilo, hidroxisec-butilo, hidroxiisobutilo, hidroxi-í-butilo, hidroxipentilo, hidroxiisopentilo, hidroxi-í-pentilo, hidroxineopentilo, hidroxi-1 -metilbutilo, hidroxi-2-metilbutilo, hidroxi-n-hexilo y similares.
El término "nitro” como se usa en el presente documento se refiere a -NO2.
El término "oxo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a =O.
El término "tio", tal como se usa en el presente documento, se refiere a -SH.
El término "tioalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a alquilo-S-, en donde alquilo es tal como se define en el presente documento. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a: metiltio, etiltio, n-propiltio, isopropiltio, n-butiltio, sec-butiltio, isobutiltio, í-butiltio, pentiltio, isopentiltio, í-pentiltio, neopentiltio, 1 -metilbutiltio, 2-metilbutiltio, n-hexiltio y similares.
Tal como se usa en el presente documento, "sustituido” indica que al menos un átomo de hidrógeno del grupo químico se reemplaza por un grupo o sustituyente diferente a hidrógeno, en donde el grupo o sustituyente diferente a hidrógeno puede ser monovalente o divalente. Cuando el grupo sustituyente es divalente, entonces se entiende que el grupo puede sustituirse adicionalmente con otro sustituyente o grupo. Cuando un grupo químico en el presente documento está "sustituido”, puede tener hasta la totalidad de la valencia de sustituciones; por ejemplo, un grupo metilo puede estar sustituido por 1, 2 o 3 sustituyentes, un grupo metileno (metildiílo) puede estar sustituido por 1 o 2 sustituyentes, un grupo fenilo puede estar sustituido por 1, 2, 3, 4 o 5 sustituyentes, un grupo naftilo puede estar sustituido por 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 sustituyentes y similares. De manera similar, "sustituido con uno o más sustituyentes” se refiere a la sustitución de un grupo con un sustituyente hasta la cantidad total de sustituyentes permitidos físicamente por el grupo. Además, cuando un grupo se sustituye con más de un grupo, estos pueden ser idénticos o pueden ser diferentes.
Los compuestos descritos en el presente documento también pueden incluir formas tautoméricas, tales como tautómeros de ceto-enol y similares. Las formas tautoméricas pueden estar en equilibrio o bloqueadas estéricamente en una forma mediante la sustitución adecuada. Se entiende que las diversas formas tautoméricas están dentro del alcance de los compuestos de la presente invención.
Se entiende y aprecia que los compuestos de fórmula I y las fórmulas relacionadas con esta pueden tener uno o más centros quirales y, por lo tanto, pueden existir como enantiómeros y/o diastereómeros. Se entiende que la invención se extiende y abarca todos dichos enantiómeros, diastereómeros y mezclas de estos, que incluyen, pero no se limitan a, racematos. Se entiende que se pretende que los compuestos de fórmula I y las fórmulas utilizadas a lo largo de esta descripción representen todos los enantiómeros individuales y mezclas de estos, a menos que se establezca o muestre lo contrario.
La expresión "grupo protector”, tal como se utiliza en el presente documento, hace referencia a un resto químico lábil que se conoce en la técnica para la protección de grupos reactivos, que incluyen, pero no se limitan a, grupos hidroxilo y amino, contra reacciones no deseadas durante procedimientos sintéticos. Los grupos hidroxilo y amino que se encuentran protegidos con un grupo protector se denominan en el presente documento "grupos hidroxilo protegidos” y "grupos amino protegidos”, respectivamente. Los grupos protectores normalmente se utilizan de forma selectiva y/o de forma ortogonal para proteger sitios durante reacciones en otros sitios reactivos y pueden eliminarse después para dejar el grupo sin protección tal como es o disponible para reacciones adicionales. Los grupos protectores tal como se conocen en la técnica se describen de forma general en Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3.a edición, John Wiley & Sons, Nueva York (1999). Los grupos pueden incorporarse de forma selectiva en compuestos de la presente divulgación como precursores. Por ejemplo, un grupo amino puede colocarse en un compuesto descrito en el presente documento, tal como un grupo azido que puede convertirse de forma química en un grupo amino en un momento deseado en la síntesis. Por lo general, los grupos se encuentran protegidos o presentes como un precursor que será inerte a las reacciones que modifiquen otras áreas de la molécula original para la conversión a sus grupos finales en un momento adecuado. Se tratan grupos protectores o precursores representativos adicionales en Agrawal, eí ál., Protocols for Oligonucleotide Conjugates, Eds, Humana Press; Nueva Jersey, 1994; Vol. 26 págs. 172. Los ejemplos de "grupos protectores hidroxilo” incluyen, pero no se limitan a, í-butilo, í-butoximetilo, metoximetilo, tetrahidropiranilo, 1-etoxietilo, 1-(2-cloroetoxi)etilo, 2-trimetilsililetilo, pclorofenilo, 2,4-dinitrofenilo, bencilo, 2,6-diclorobencilo, difenilmetilo, p-nitrobencilo, trifenilmetilo, trimetilsililo, trietilsililo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo (TBDPS), trifenilsililo, benzoilformiato, acetato, cloroacetato, tricloroacetato, trifluoroacetato, pivaloato, benzoato, p-fenilbenzoato, carbonato de 9-fluorenilmetilo, mesilato y tosilato. Los ejemplos de "grupos protectores amino” incluyen, pero no se limitan a, grupos protectores de carbamato, tales como 2-trimetilsililetoxicarbonilo (Teoc), 1 -metil-1 -(4-bifenilil)-etoxicarbonilo (Bpoc), tbutoxicarbonilo (BOC), aliloxicarbonilo (Alloc), 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc) y benciloxicarbonilo (Cbz); grupos protectores de amida, tales como formilo, acetilo, trihaloacetilo, benzoilo nitrofenilacetilo; grupos protectores de sulfonamida, tales como 2-nitrobencensulfonilo y grupos protectoresde imina e imida cíclica, tales como ftalimido y ditiasuccinoílo.
"Profármaco”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un compuesto que puede convertirse en condiciones fisiológicas o mediante solvólisis en un compuesto biológicamente activo descrito en el presente documento. Por lo tanto, el término "profármaco” se refiere a un precursor metabólico de un compuesto descrito en el presente documento que es farmacéuticamente aceptable. Un profármaco puede estar inactivo cuando se administra a un sujeto que lo necesita, pero se convierte in vivo en un compuesto activo descrito en el presente documento. En una realización, un profármaco se transforma rápidamente in vivo para proporcionar el compuesto original descrito en el presente documento, por ejemplo, mediante hidrólisis en la sangre. En una realización, un profármaco puede ser estable en el plasma o la sangre. En una realización, un profármaco puede ser una forma dirigida de un compuesto descrito en el presente documento. El compuesto de profármaco frecuentemente ofrece ventajas de solubilidad, compatibilidad con tejidos o liberación retardada en un organismo mamífero (véase, Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), págs. 79, 21 24 (Elsevier, Ámsterdam)). Se proporciona una exposición sobre profármacos en Higuchi, T., et ál., A.C.S. Symposium Series, Vol. 14 y en Bioreversible Carriers in Drug Design, Ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987.
El término "profármaco”, incluye cualquier vehículo enlazado de forma covalente, que libera el compuesto activo descrito en el presente documento in vivo cuando dicho profármaco se administra a un sujeto mamífero. Los conjugados, que incluyen los ADC, tal como se divulga en el presente documento, son los profármacos de los compuestos descritos en el presente documento. Los profármacos de un compuesto descrito en el presente documento, se pueden preparar mediante la modificación de los grupos funcionales presentes en un compuesto descrito en el presente documento, de forma tal que las modificaciones se escindan, ya sea en manipulación de rutina o in vivo, para proporcionar el compuesto descrito en el presente documento. Los profármacos incluyen compuestos descritos en el presente documento, en donde un grupo hidroxi, amino o mercapto se enlaza con cualquier grupo que, cuando se administra el profármaco del compuesto descrito en el presente documento al sujeto mamífero, se escinde para formar un grupo hidroxi libre, amino libre o mercapto libre, respectivamente. Los ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a, derivados de acetato, formiato y benzoato de grupos funcionales de alcohol y derivados de amida de grupos funcionales de amina en los compuestos descritos en el presente documento y similares.
La presente divulgación también comprende todos los compuestos descritos en el presente documento marcados isotópicamente mediante el reemplazo de uno o más átomos con un átomo con un número de masa o masa atómica diferente. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar a los compuestos divulgados incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor, cloro y yodo, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 123I y 125I, respectivamente. Estos compuestos radiomarcados son útiles para ayudar a determinar o medir la eficacia de los compuestos, al caracterizar, por ejemplo, el sitio o el modo de acción, o la afinidad de unión a un sitio de acción farmacológicamente importante. Determinados compuestos marcados isotópicamente descritos en el presente documento, por ejemplo, aquellos que incorporan un isótopo radioactivo, son útiles para los estudios de distribución de fármacos y/o sustratos en los tejidos. Los isótopos radioactivos de tritio, es decir, 3H y carbono-14, es decir, 14C, son particularmente útiles a estos efectos en vista de su facilidad de incorporación y los medios de detección fáciles.
La sustitución con isótopos más pesados como deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas producidas por la mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, mayor semivida in vivo o menos requisitos de dosificación y, por lo tanto, pueden preferirse en algunas circunstancias.
La sustitución con isótopos que emiten positrones, tales como 11C, 18F, 15O y 13N, puede ser útil en estudios de Topografía por emisión de positrones (PET) para examinar la ocupación del receptor de sustrato. Los compuestos descritos en el presente documento marcados isotópicamente generalmente se pueden preparar mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en las preparaciones y ejemplos tal como se establece a continuación, mediante el uso de reactivo adecuado marcado isotópicamente en lugar del reactivo no marcado utilizado previamente.
También se pretende que la presente divulgación abarque los productos metabólicos in vivo de los compuestos divulgados. Dichos productos pueden resultar, por ejemplo, de la oxidación, la reducción, la hidrólisis, la amidación, la esterificación y similares del compuesto administrado, debido principalmente a procesos enzimáticos. Por consiguiente, la presente divulgación incluye compuestos producidos por un proceso que comprende la administración de un compuesto de la presente divulgación a un mamífero durante un período de tiempo suficiente para proporcionar un producto metabólico de este. Tales productos se identifican normalmente mediante la administración de un compuesto radiomarcado descrito en el presente documento en una dosis detectable a un animal, tal como una rata, un ratón, una cobaya, un mono o un ser humano, permitiendo que transcurra suficiente tiempo para que se produzca el metabolismo y aislando sus productos convertidos de la orina, la sangre u otras muestras biológicas.
"Compuesto estable” y "estructura estable”, tal como se usan en el presente documento, se refieren a un compuesto que es lo suficientemente potente para sobrevivir el aislamiento a un nivel útil de pureza de una mezcla de reacción y su formulación en un agente terapéutico eficaz.
Otras definiciones
El término "anticuerpo” en el presente documento se usa en el sentido más amplio y cubre específicamente los anticuerpos monoclonales intactos, los anticuerpos policlonales, los anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) formados a partir de al menos dos anticuerpos intactos y los fragmentos de anticuerpos, siempre que exhiban la actividad biológica deseada. El término "anticuerpo” se refiere a una molécula de inmunoglobulina de longitud total o una parte funcionalmente activa de una molécula de inmunoglobulina de longitud total, es decir, una molécula que contiene un sitio de unión al antígeno que une de forma inmunoespecífica un antígeno de un objetivo de interés o una parte de esta. La inmunoglobulina descrita en el presente documento puede ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA), clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina. Las inmunoglobulinas pueden derivar de cualquier especie. En un aspecto, la inmunoglobulina es de origen humano, murino o de conejo. En otro aspecto, los anticuerpos son policlonales, monoclonales, multiespecíficos (por ejemplo, bispecíficos), humanos, humanizados o anticuerpos quiméricos, anticuerpos lineales, anticuerpos de cadena simple, diacuerpos, maxicuerpos, minicuerpos, Fv, fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), fragmentos F(ab')2, fragmentos producidos por una biblioteca de expresión Fab, anticuerpos antiidiotípicos (anti-Id), CDR y fragmentos de unión al epítopo de cualquiera de los anteriores que se unen de forma inmunoespecífica a un antígeno objetivo.
La expresión "anticuerpo monoclonal”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo obtenido a partir de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posibles mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales incluyen anticuerpos "quiméricos” en los cuales una parte de la cadena pesada y/o ligera es idéntica u homóloga a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenecen a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de las cadenas es idéntico u homólogo a las secuencias correspondientes en los anticuerpos derivados de otra especie o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpo, así como también fragmentos de dichos anticuerpos, (véase, por ejemplo, la patente estadounidense n.° 4.816.567 y Morrison et ál., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. EEUU 81: 6851-6855). Los anticuerpos monoclonales también incluyen anticuerpos humanizados que pueden contener una región constante completamente humana y un CDR de una fuente no humana.
Un anticuerpo "intacto” es el que comprende una región variable de unión al antígeno, así como un dominio constante de cadena ligera (CL) y dominios constantes de cadena pesada, CH1 , CH2 y CH3. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de una secuencia natural (por ejemplo, dominios constantes de una secuencia natural humana) o una variante de secuencia de aminoácidos de estos.
Un anticuerpo intacto puede tener una o más "funciones efectoras” que se refieren a aquellas actividades biológicas que se pueden atribuir a la región Fc (una región Fc de secuencia nativa o una región Fc variante de secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo. Los ejemplos de funciones efectoras de anticuerpo incluyen la unión a C1q; la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC); unión al receptor Fc; citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpo (ADCC, por sus siglas en inglés); fagocitosis; regulación por disminución de los receptores de superficie celular (por ejemplo, receptor de linfocitos B; BCR), etc. En algunas realizaciones, el anticuerpo carece de función efectora.
Los "fragmentos de anticuerpo” comprenden una parte de un anticuerpo intacto, que comprende preferentemente la región de unión al antígeno o variable de este. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpos de cadena simple; maxicuerpos; minicuerpos; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.
Un anticuerpo "aislado” es uno que ha sido identificado y separado y/o recuperado de un componente de su ambiente natural. Los componentes contaminantes de su ambiente natural son materiales que interferirían con los usos diagnósticos o terapéuticos para el anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteínicos o no proteínicos. En algunas realizaciones, el anticuerpo se purificará (1) a más de un 95 % en peso del anticuerpo, tal como se determina por el método de Lowry y más preferentemente más de 99 % en peso, (2) a un punto suficiente como para obtener al menos 15 restos de secuencia de aminoácidos interna o de extremo N, por medio del uso de un secuenciador de taza giratoria o (3) a homogeneidad por SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras, mediante el uso de azul de Coomassie o, preferentemente, tinción argéntica. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de células recombinantes ya que al menos un componente del entorno natural del anticuerpo no estará presente. Generalmente, sin embargo, el anticuerpo aislado se preparará mediante al menos una etapa de purificación.
Un anticuerpo "que se une” a un antígeno de interés es aquel que es capaz de unirse a tal antígeno con suficiente afinidad para que el anticuerpo sea útil en el direccionamiento a una célula que expresa el antígeno.
Un polipéptido de "secuencia natural” es aquel que tiene la misma secuencia de aminoácidos que el polipéptido derivado de la naturaleza. Dichos polipéptidos de secuencia natural pueden aislarse de la naturaleza o pueden producirse mediante medios recombinantes o sintéticos. Por lo tanto, un polipéptido de secuencia natural puede tener la secuencia de aminoácidos de polipéptidos humanos de origen natural, polipéptidos murinos o polipéptidos de cualquier otra especie de mamíferos.
La expresión "metabolito intracelular” se refiere a un compuesto producido a partir de una reacción o proceso metabólico dentro de una célula en una composición descrita en el presente documento (por ejemplo, un conjugado de fármaco y anticuerpo (ADC)). La reacción o proceso metabólico puede ser un proceso enzimático tal como escisión proteolítica de un enlazador de péptidos de la composición de la presente o hidrólisis de un grupo funcional tal como hidrazona, éster o amida dentro de la composición de la presente. En el contexto de los conjugados, que incluyen los ADC, los metabolitos intracelulares incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos y fármacos libres, que se separaron a nivel intracelular, es decir, después de la entrada, la difusión, la absorción o el transporte en una célula (por ejemplo, mediante escisión enzimática de un ADC mediante una enzima intracelular).
En el contexto de los conjugados, que incluyen los ADC, las expresiones "escindido a nivel intracelular” y "escisión intracelular” se refieren a reacciones o procesos metabólicos dentro de una célula en una composición descrita en el presente documento mediante los cuales el acoplamiento covalente, por ejemplo, el enlazador (L), entre el resto de fármaco (D) y el resto de direccionamiento (T) (por ejemplo, un anticuerpo) se rompe, lo que produce el fármaco libre disociado de (T) dentro de la célula. En una realización, los restos escindidos de las composiciones de la presente, por lo tanto, son metabolitos intracelulares (por ejemplo, T, fragmento T-L, fragmento D-L y D). Por consiguiente, en una realización, la invención proporciona composiciones que son productos de escisión de una composición de fórmula II, cuyos productos de escisión comprenden compuestos de fórmula I.
La expresión "escisión extracelular” se refiere a una reacción o proceso metabólico fuera de una célula en una composición descrita en el presente documento por medio del cual el acoplamiento covalente, por ejemplo, el enlazador (L), entre el resto de fármaco (D) y el resto de direccionamiento (T) (por ejemplo, un anticuerpo) se rompe, lo que produce el fármaco libre disociado de (T) fuera de la célula. En una realización, los restos escindidos de las composiciones, por lo tanto, son inicialmente metabolitos extracelulares (por ejemplo, T, fragmento T-L, fragmento D-L y D), que se pueden mover a nivel intracelular mediante difusión y permeabilidad o transporte celular. Por consiguiente, en una realización, la invención proporciona composiciones que son productos de escisión de una composición de fórmula II, cuyos productos de escisión comprenden compuestos de fórmula I.
"Mamífero” incluye seres humanos y tanto animales domésticos, tales como los de laboratorio, como mascotas (por ejemplo, gatos, perros, porcinos, ganado bovino, ovejas, cabras, caballos, conejos) y animales no domésticos, tales como animales salvajes y similares.
"Opcional” u "opcionalmente” significan que el evento o circunstancia que se describe posteriormente puede ocurrir o no y que la descripción incluye instancias en las cuales dicho evento o circunstancia ocurre e instancias en las cuales no ocurre. Por ejemplo, "arilo opcionalmente sustituido” significa que el sustituyente arilo puede encontrarse sustituido o no y que la descripción incluye tanto sustituyentes arilo sustituidos como sustituyentes arilo que no tienen sustitución.
"Vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable” incluye, pero no se limita a, cualquier adyuvante, vehículo, excipiente, deslizante, agente edulcorante, diluyente, conservante, tinte/colorante, potenciador del sabor, tensioactivo, agente humectante, agente de dispersión, agente de suspensión, estabilizante, agente isotónico, disolvente o emulsionante aprobado por la United States Food and Drug Administration (u otra entidad reguladora similar de otra jurisdicción) como aceptable para su uso en seres humanos o animales domésticos.
"Sal farmacéuticamente aceptables” incluye tanto sales de adición de ácido como de base.
"Sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable” se refiere a las sales que retienen la eficacia y las propiedades biológicas de las bases libres, que no son indeseables desde el punto de vista biológico o de otro tipo, y que están formadas con ácidos inorgánicos, tales como, pero que no se limitan a, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares y ácidos orgánicos tales como, pero que no se limitan a, ácido acético, ácido 2,2-dicloroacético, ácido adípico, ácido algínico, ácido ascórbico, ácido aspártico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido 4-acetamidobenzoico, ácido canfórico, ácido canfor-10-sulfónico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido carbónico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciclámico, ácido dodecilsulfúrico, ácido etan-1,2-disulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glucoheptónico, ácido glucónico, ácido glucurónico, ácido glutámico, ácido glutárico, ácido 2-oxo-glutárico, ácido lactobiónico, ácido láurico, ácido maleico, ácido málico, ácido malónico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido múcico, ácido naftalen-1,5-disulfónico, ácido naftalen-2-sulfónico, ácido 1-hidroxi-2-naftoico, ácido nicotínico, ácido oleico, ácido orótico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido propiónico, ácido piroglutámico, ácido pirúvico, ácido salicílico, ácido 4-aminosalicílico, ácido sebácico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido tiociánico, ácido p-toluenosulfónico, ácido trifluoroacético, ácido undecilénico y similares.
"Sal de adición de base farmacéuticamente aceptable” hace referencia a aquellas sales que mantienen su eficacia biológica y las propiedades de los ácidos libres y que no son no deseables desde el punto de vista biológico o de otro modo. Estas sales se preparan a partir de la adición de una base inorgánica o una base orgánica al ácido libre. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen, pero no se limitan a, las sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio, hierro, cinc, cobre, manganeso, aluminio y similares. Las sales inorgánicas preferidas son sales de amonio, sodio, potasio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, pero no se limitan a, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas, que incluyen aminas sustituidas de origen natural, aminas cíclicas y resinas de intercambio de iones básicas, tales como resinas de amoníaco, isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, dietanolamina, etanolamina, deanol, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, benetamina, benzatina, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, trietanolamina, trometamina, purinas, piperazina, piperidina, W-etilpiperidina, resinas de poliamina y similares. Las bases orgánicas particularmente preferidas son isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclohexilamina, colina y cafeína.
Frecuentemente las cristalizaciones producen un solvato del compuesto descrito en el presente documento. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "solvato” se refiere a un agregado que comprende una o más moléculas de un compuesto descrito en el presente documento con una o más moléculas de disolvente. El disolvente puede ser agua, en cuyo caso el solvato puede ser un hidrato. De manera alternativa, el disolvente puede sr un disolvente orgánico. Por consiguiente, los compuestos de la presente divulgación pueden existir como un hidrato, que incluye un monohidrato, dihidrato, hemihidrato, sesquihidrato, trihidrato, tetrahidrato y similares, así como las formas solvatadas correspondientes. El compuesto descrito en el presente documento puede ser un solvato verdadero mientras que, en otros casos, el compuesto descrito en el presente documento puede meramente retener agua imprevista o ser una mezcla de agua más algo de disolvente imprevisto.
Una "composición farmacéutica” se refiere a una formulación de un compuesto descrito en el presente documento y un medio generalmente aceptado en la técnica para la administración del compuesto biológicamente activo a mamíferos, por ejemplo, seres humanos. Dicho medio incluye todos los vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables para este.
Los ejemplos no limitantes de trastornos a tratar en el presente documento incluyen tumores benignos y malignos; leucemia y neoplasias malignas linfoides, en particular, cáncer de mama, ovario, estómago, endometrio, de las glándulas salivales, pulmón, riñón, colon, tiroides, páncreas, próstata o vejiga; trastornos neuronales, gliales, astrocitales, hipotalámicos y otros trastornos glandulares, macrofágicos, epiteliales, estromales y blastocélicos, enfermedad autoinmunitaria, enfermedad inflamatoria, fibrosis y enfermedad infecciosa. Dadas las características y, particularmente, la potencia de las composiciones de la presente, resultará evidente para el experto en la técnica que se puede indicar el uso de los compuestos descritos en el presente documento para tratar cualquier enfermedad donde es deseable el esfuerzo de un efecto citotóxico sobre una célula objetivo.
En una realización, las composiciones descritas en el presente documento se utilizan para tratar una enfermedad autoinmunitaria. Los anticuerpos inmunoespecíficos para un antígeno de una célula que es responsable de la producción de anticuerpos autoinmunitarios puede obtenerse de cualquier organización (por ejemplo, una universidad científica o una empresa, tal como Genetech) o producirse mediante cualquier método conocido para un experto en la técnica, tal como, por ejemplo, técnicas de expresión recombinante o síntesis química. En otra realización, los anticuerpos de ligando útiles que son inmunoespecíficos para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias incluyen, pero no se limitan a: anti-anticuerpo nuclear; anti ADNcd; anticuerpo IgM, IgG anti cardiolipina, anti ADNcs; anticuerpo IgM, IgG anti fosfolípidos; anticuerpo anti SM; anticuerpo anti mitocondrial; anticuerpo tiroideo; anticuerpo microsómico; anticuerpo tiroglobulina; anti SCL-70; anti-Jo; anti-UIRNP; anti-La/SSB; anti SSA; anti SSB; anticuerpo anti células parietales; anti histonas; anti RNP; C-ANCA; P-ANCA; anti centrómero; anticuerpo anti-fibrilarina y anti GBM. En determinadas realizaciones preferidas, los anticuerpos útiles en los métodos de la presente pueden unirse tanto a un receptor como a un complejo receptor expresado en un linfocito activado.
El receptor o complejo receptor puede comprender un miembro de la superfamilia de genes de inmunoglobulina, un miembro de la superfamilia de receptor de TNF, una integrina, un receptor de citocina, un receptor de quimiocina, una proteína de histocompatibilidad principal, una lectina o una proteína de control del complemento. Los ejemplos no limitantes de miembros de la superfamilia de inmunoglobulina aceptables son CD2, CD3, CD4, CD8, c D19, CD22, CD28, CD79, CD90, CD152/CTLA-4, PD-1 e ICOS.
Los ejemplos no limitantes de miembros de la superfamilia del receptor de TNF adecuados son CD27, CD40, CD95/Fas, CD134/OX40, CD137/4-1BB, TNF-R1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA, osteoprotegerina, Apo2/TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4 y APO-3. Los ejemplos no limitantes de integrinas adecuadas son CD11a, CD11b, CD11c, CD18, CD29, CD41, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, CD103 y CD104. Los ejemplos no limitantes de lectinas adecuadas son lectina tipo C, tipo S y tipo I.
En una realización, el ligando es un anticuerpo que se une a un linfocito activado que está asociado con una enfermedad autoinmunitaria.
Las enfermedades inmunológicas que se caracterizan por la activación inadecuada de células inmunitarias que pueden tratarse o prevenirse mediante los métodos descritos en el presente documento pueden clasificarse, por ejemplo, mediante el tipo o tipos de reacción o reacciones de hipersensibilidad que subyacen al trastorno. Estas reacciones se clasifican típicamente en cuatro tipos: reacciones anafilácticas, reacciones citotóxicas (citolíticas), reacciones complejas inmunitarias o reacciones de inmunidad mediada por células (CMI, por sus siglas en inglés) (también denominadas reacciones de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH, por sus siglas en inglés)). (Véase, por ejemplo, Fundamental Immunology (William E. Paul ed., Raven Press, N.Y., 3.a ed. 1993)).
Los ejemplos específicos de enfermedades inmunológicas incluyen las siguientes: artritis reumatoide, enfermedades autoinmunitarias desmielinizantes (por ejemplo, esclerosis múltiple, encefalomielitis alérgica), oftalmopatía endocrina, uveorretinitis, lupus eritematoso sistémico, miastemia gravis, enfermedad de Grave, glomerulonefritis, trastorno hepatológico autoinmunitario, enfermedad inflamatoria intestinal (por ejemplo, enfermedad de Crohn), anafilaxis, reacción alérgica, síndrome de Sjogren, diabetes mellitus tipo I, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegner, fibromialgia, polimiositis, dermatomiositis, insuficiencia endocrina múltiple, síndrome de Schmidt, uveitis autoinmunitaria, enfermedad de Addison, adrenalitis, tiroiditis, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad tiroidea autoinmunitaria, anemia perniciosa, atrofia gástrica, hepatitis crónica, hepatitis lupoide, aterosclerosis, lupus eritematoso cutáneo subagudo, hipoparatiroidismo, síndrome de Dressler, trombocitopenia autoinmunitaria, púrpura trombocitopénica idiopática, anemia hemolítica, pénfigo vulgar, pénfigo, dermatitis herpetiforme, alopecia areata, penfigoide, escleroderma, esclerosis sistémica progresiva, síndrome de CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud, dismotilidad esofágica, esclerodactilia y telangiectasia), infertilidad autoinmunitaria masculina y femenina, espondilitis anquilosante, colitis ulcerativa, enfermedad mixta del tejido conectivo, poliarteritis nodosa, vasculitis necrosante sistémica, dermatitis atópica, rinitis atópica, síndrome de Goodpasture, enfermedad de Chagas, sarcoidosis, fiebre reumática, asma, aborto recurrente, síndrome antifosfolipídico, pulmón de granjero, eritema multiforme, síndrome postcardiotomía, síndrome de Cushing, hepatitis activa crónica autoinmunitaria, pulmón de avicultor, necrólisis epidérmica tóxica, síndrome de Alport, alveolitis, alveolitis alérgica, alveolitis fibrosante, enfermedad pulmonar intersticial, eritema nodoso, pioderma gangrenosa, reacción a la transfusión, arteritis de Takayasu, polimialgia reumática, arteritis temporal, esquistosomiasis, arteritis de células gigantes, ascariasis, aspergilosis, síndrome de Sampter, eczema, granulomatosis linfomatoide, enfermedad de Behcet, síndrome de Caplan, enfermedad de Kawasaki, dengue, encefalomielitis, endocarditis, fibrosis endomiocárdica, endoftalmitis, eritema elevatum et diutinum, psoriasis, eritroblastosis fetal, fascitis eosinofílica, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, filariasis, ciclitis, ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, ciclitis de Fuch, nefropatía de IgA, púrpura de Henoch-Schonlein, enfermedad de injerto contra huésped, rechazo del trasplante, cardiomiopatía, síndrome de Eaton-Lambert, policondritis recidivante, crioglobulinemia, macroglobulinemia de Waldenstrom, síndrome de Evan e insuficiencia gonadal autoinmunitaria. Por consiguiente, los métodos descritos en el presente documento abarcan el tratamiento de trastornos de linfocitos B (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Goodpasture, artritis reumatoide y diabetes de tipo I), linfocitos Th1 (por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, psoriasis, síndrome de Sjorgren, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Grave, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegner, tuberculosis o enfermedad aguda de injerto contra huésped) o linfocitos Th2 (por ejemplo, dermatitis atópica, lupus eritematoso sistémico, asma atópica, rinoconjuntivitis, rinitis alérgica, síndrome de Omenn, esclerosis sistémica o enfermedad crónica de injerto contra huésped). En general, los trastornos que implican células dendríticas comprenden trastornos de linfocitos Th1 y linfocitos Th2.
En determinadas realizaciones, el trastorno inmunológico está mediado por linfocitos T, que pueden incluir linfocitos T activados. Pueden administrarse ADC o derivados de ADC para agotar dichas células T activadas.
En una realización, las composiciones descritas en el presente documento pueden utilizarse para tratar la fibrosis. La fibrosis se puede producir en muchos tejidos en el cuerpo, habitualmente como resultado de la inflamación o daño, y los ejemplos incluyen, pero no se limitan a; pulmones, fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis quística; hígado, cirrosis; corazón, fibrosis endomiocárdica, infarto del miocardio anterior, fibrosis atrial; otras, fibrosis mediastinal (tejido blando del mediastino), mielofibrosis (médula ósea), fibrosis retroperitoneal (tejido blando del retroperitoneo), fibrosis masiva progresiva (pulmones); una complicación de neumoconiosis de los mineros del carbón, fibrosis sistémica nefrogénica (piel); enfermedad de Crohn (intestino), queloides (piel), escleroderma/esclerosis sistémica (piel, pulmones), artrofibrosis (rodillas, hombros, otras articulaciones), enfermedad de Peyronie (pene), contractura de Dupuytren (manos, dedos) y algunas formas de capsulitis adhesiva (hombros).
Con respecto a las enfermedades infecciosas, las composiciones descritas en el presente documento pueden utilizarse de forma directa sobre determinados patógenos o agentes infecciosos, o pueden utilizarse para ejercer un efecto citostático o citotóxico sobre una célula hospedadora que alberga o proporciona de otra manera el patógeno o agente infeccioso.
"Cantidad eficaz” o "cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a la cantidad de un compuesto que se describe en el presente documento que, cuando se administra a un mamífero, preferentemente a un ser humano, es suficiente para realizar el tratamiento, tal como se define más adelante, del diagnóstico en particular (por ejemplo, cáncer o células tumorales en el mamífero, preferentemente en un ser humano). La cantidad de un compuesto que se describe en el presente documento que constituye una "cantidad terapéuticamente eficaz” variará dependiendo del compuesto, la afección y su gravedad, la forma de administración y la edad del mamífero a tratar, pero un experto habitual en la técnica puede determinarla en forma rutinaria basándose en sus propios conocimientos y en esta divulgación.
"Tratar” o "tratamiento”, tal como se utiliza en el presente documento, abarca el tratamiento de la enfermedad o afección de interés en un mamífero, preferentemente un ser humano, que padece la enfermedad o afección de interés, e incluye:
(i) prevenir que la enfermedad o afección aparezca en un mamífero en particular, cuando tal mamífero tenga una predisposición a la afección, pero aún no se haya diagnosticado que la padece;
(ii) inhibir la enfermedad o afección, es decir, detener su desarrollo;
(iii) aliviar la enfermedad o afección, es decir, provocar la regresión de la enfermedad o afección o
(iv) aliviar los síntomas provocados por la enfermedad o afección, es decir, aliviar el dolor sin tratar la enfermedad o afección subyacente.
Una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto con respecto al tratamiento del cáncer puede reducir la cantidad de células cancerosas; reducir el tamaño del tumor; inhibir (es decir, ralentizar en cierta medida y preferentemente detener) la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; inhibir (es decir, ralentizar en cierta medida y preferentemente detener) la metástasis tumoral; inhibir, en cierta medida, el crecimiento tumoral; aumentar el tiempo de supervivencia y/o, en cierta medida, aliviar uno o más de los síntomas asociados al cáncer. En la medida que el fármaco pueda prevenir el crecimiento y/o destruir las células cancerosas existentes, este puede ser citostático y/o citotóxico. Los compuestos de la presente invención son preferentemente citotóxicos. En el caso de terapias contra el cáncer, la eficacia puede ser medida, por ejemplo, a través de la evaluación del trascurso de tiempo hasta la evolución de la enfermedad (TTP, por sus siglas en inglés) y/o la determinación de la tasa de respuesta (RR, por sus siglas en inglés).
Una "cantidad eficaz” con respecto a lograr un resultado en particular es una cantidad suficiente para lograr el resultado deseado. Por ejemplo, una "cantidad eficaz” del fármaco, cuando se hace referencia respecto a la eliminación de células cancerosas, hace referencia a una cantidad de fármaco suficiente para producir el efecto de eliminación.
Los tumores sólidos contemplados para el tratamiento mediante el uso de los compuestos que se divulgan en el presente documento incluyen, pero no se limitan a: sarcoma, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de riñón, cáncer de páncreas, cáncer óseo, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de esófago, cáncer de estómago (por ejemplo, cáncer gastrointestinal), cáncer bucal, cáncer nasal, cáncer de garganta, carcinoma de células escamosas (por ejemplo, de pulmón), carcinoma de células basales, adenocarcinoma (por ejemplo, de pulmón), carcinoma de las glándulas sudoríparas, carcinoma de las glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de las células renales, hepatoma, carcinoma del ducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilms, cáncer de cuello de útero, cáncer de útero, cáncer de testículo, cáncer microcítico de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de pulmón, cáncer no microcítico de pulmón, carcinoma epitelial, glioma, glioblastoma, astrocitoma multiforme, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, cáncer de piel, melanoma, neuroblastoma y retinoblastoma. Los cánceres de origen sanguíneo contemplados para el tratamiento que utiliza los compuestos que se divulgan en el presente documento incluyen, pero no se limitan a: leucemia linfoblástica aguda "ALL", leucemia linfoblástica de linfocitos B aguda, leucemia linfoblástica de linfocitos T aguda, leucemia mieloblástica aguda "AML", leucemia promielocítica aguda "APL", leucemia monoblástica aguda, leucemia eritroleucémica aguda, leucemia megacarioblástica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia no linfocíctica aguda, leucemia no diferenciada aguda, leucemia mielocítica crónica "CML", leucemia linfocítica crónica "CLL", leucemia de células pilosas y mieloma múltiple. Las leucemias agudas y crónicas contempladas para el tratamiento que utiliza los compuestos descritos en el presente documento incluyen, pero no se limitan a: leucemias linfoblásticas, mielógenas, linfocíticas y mielocíticas. Los linfomas contemplados para el tratamiento que utilizan los compuestos descritos en el presente documento invención incluyen, pero no se limitan a: enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de cadena pesada y policitemia vera. Otros cánceres contemplados para el tratamiento que utiliza los compuestos que se describen en el presente documento incluyen, pero no se limitan a: cáncer peritoneal, cáncer hepatocelular, hepatoma, cáncer de las glándulas salivales, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, cáncer de pene, cáncer anal, cáncer de cuello y cabeza, carcinoma de células renales y carcinoma de células grandes anaplásico agudo carcinoma de células grandes anaplásico cutáneo.
Los cánceres, que incluyen, pero no se limitan a, un tumor, una metástasis u otra enfermedad o trastorno caracterizado por crecimiento celular descontrolado o no deseado, pueden tratarse o prevenirse mediante la administración de los compuestos divulgados en el presente documento.
En otras realizaciones, se proporciona una cantidad eficaz de un compuesto divulgado en el presente documento para su uso en métodos para el tratamiento o la prevención del cáncer, que incluyen en combinación con un método adicional de tratamiento. En una realización, el método adicional de tratamiento incluye el tratamiento con un agente quimioterapéutico. En una realización, el agente quimioterapéutico es aquel con el cual no se encontró que el tratamiento del cáncer fuera refractario. En otra realización, el agente quimioterapéutico es aquel con el cual se encontró que el tratamiento del cáncer es refractario. El compuesto descrito en el presente documento puede administrarse antes, después o al mismo tiempo que el agente quimioterapéutico.
En una realización, el método adicional de tratamiento es terapia de radiación. El compuesto descrito en el presente documento puede administrarse antes, después o en el mismo momento que la radiación.
Los compuestos descritos en el presente documento también pueden administrarse a un paciente que haya experimentado o vaya a experimentar cirugía como tratamiento contra el cáncer.
En una realización específica, el compuesto descrito en el presente documento se administra de manera conjunta con el agente quimioterapéutico o con la terapia de radiación. En otra realización específica, el agente quimioterapéutico o la terapia de radiación se administran antes o después de la administración del compuesto descrito en el presente documento, en un aspecto, al menos una hora, cinco horas, 12 horas, un día, una semana, un mes. En aspectos adicionales, varios meses (por ejemplo, hasta tres meses), antes o después de la administración de un compuesto descrito en el presente documento.
Puede administrarse un agente quimioterapéutico durante una serie de sesiones. Puede administrarse cualquiera de los agentes quimioterapéuticos enumerados en el presente documento o una combinación de estos u otros conocidos en la técnica. Con respecto a la radiación, puede utilizarse cualquier protocolo de terapia de radiación según el tipo de cáncer a tratar. Por ejemplo, pero de mono no limitante, puede administrarse radiación de rayos x; en particular, puede utilizarse megavoltaje de energía alta (radiación mayor de 1 MeV de energía) para tumores profundos y puede utilizarse haz de electrones y radiación de rayos x por ortovoltaje para cánceres de piel. También pueden administrarse radioisótopos que emiten rayos gamma, tales como isótopos radioactivos de radio, cobalto y otros elementos.
Adicionalmente, se proporciona un compuesto descrito en el presente documento para su uso en métodos para tratar el cáncer como alternativa a la quimioterapia o terapia de radiación, allí donde se ha demostrado o se puede demostrar que la quimioterapia o la terapia de radiación son demasiado tóxicas, por ejemplo, producen efectos secundarios inaceptables o insoportables para el sujeto que se encuentra en tratamiento. Adicionalmente, se proporciona un compuesto descrito en el presente documento para su uso en métodos para tratar el cáncer como alternativa a la cirugía, allí donde se ha demostrado o se puede demostrar que la cirugía es inaceptable o insoportable para el sujeto que se encuentra en tratamiento.
Los compuestos descritos en el presente documento también pueden utilizarse in vitro o ex vivo, tal como para el tratamiento de determinados cánceres, que incluyen, pero no se limitan a, leucemias y linfomas, dichos tratamientos que impliquen trasplantes de células madre autólogas. Esto puede implicar un proceso de múltiples etapas en el cual las células madre hematopoyéticas autólogas del animal se cultivan y se purgan de toda célula cancerosa, luego se elimina la población de células de médula ósea restantes del animal mediante la administración de una dosis alta de un compuesto descrito en el presente documento con o sin terapia de radiación de dosis alta que la acompañe y se realiza nuevamente una infusión del injerto de células madre al animal. El cuidado paliativo se proporciona entonces mientras se restaura la función de la médula ósea y el animal se recupera.
Los métodos para el tratamiento del cáncer incluyen además la administración a un paciente que lo necesita de una cantidad eficaz de un compuesto descrito en el presente documento y otro agente terapéutico que es un agente contra el cáncer. Los agentes contra el cáncer adecuados incluyen, pero no se limitan a, metotrexato, taxol, L-asparaginasa, mercaptopurina, tioguanina, hidroxiurea, citarabina, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureas, cisplatino carboplatino, mitomicina, dacarbazina, procarbizina, topotecán, mostazas de nitrógeno, citoxán, etopósido, 5-fluorouracilo, BCNU, irinotecán, camptotecinas, bleomicina, doxorrubicina, idarrubicina, daunorrubicina, actinomicina D, dactinomicina, plicamicina, mitoxantrona, asparaginasa, vinblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina, paclitaxel y docetaxel.
Otros ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen agentes alquilantes tales como tiotepa y ciclofosfamida CYTOXAN®; sulfonatos de alquilo tales como busulfán, treosulfán, improsulfán y piposulfán; aziridinas tales como benzodopa, carboquona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas, que incluyen altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolomelamina; TLK 286 (TELCYTA™); acetogeninas (especialmente bulatacina y bulatacinona); delta-9-tetrahidrocanabinol (dronabinol, MARINOL®); betalapachona; lapachol; colchicinas; ácido betulínico; una camptotecina (que incluye el análogo sintético topotecán (HYCAMTIN®), CPT-11 (irinotecán, CAMPTOSAR®), acetilcamptotecina, escopolectina y 9-aminocamptotecina); briostatina; calistatina; CC-1065 (que incluye sus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina y bizelesina); podofilotoxina; ácido podofilínico; teniposida; criptofcinas (particularmente la criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (que incluye los análogos sintéticos KW-2189 y CB1-TM1); eleuterrobina; pancratistatina; una sarcodictiina; espongistatina; mostazas de nitrógeno tales como clorambucilo, clomafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalán, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida y mostaza de uracilo; triazinas tales como decarbazina; nitrosureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimnustina; epipodofilinas, tales como etopósido, tenipósido, topotecán, 9-aminocamptotecina, camptotecina orcrisnatol; bisfosfonatos, tales como clodronato; antibióticos tales como antibióticos enediina (por ejemplo, calicheamicina, especialmente calicheamicina gamma 1I y calicheamicina omega I1 (véase, por ejemplo, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)) y antraciclinas tales como anamicina, AD 32, alcarrubicina, daunorrubicina, dexrazoxano, DX-52-1, epirrubicina, GPX-100, idarrubicina, KRN5500, menogaril, dinemicina, que incluye dinemicina A, una esperamicina, neocarzinostatina cromófora y cromóforos antibióticos de cromoproteína enediina relacionados, aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas (por ejemplo, A2 y B2), cactinomicina, carabicina, caminomicina, carzinofilina, cromomicinis, dactinomicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina ADRIAMYCIN® (que incluye morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina, doxorrubicina liposomal y deoxidoxorrubicina), esorrubicina, marcelomicina, mitomicinas tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina y zorrubicina; terapias fotodinámicas, tales como vertoporfina (BPD-MA), ftalocianina, fotosensibilizador Pc4 y demetoxi-hipocrelina A (2BA-2-DMHA); análogos del ácido fólico tales como denopterina, pteropterina y trimetrexato; análogos de dpurina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina y tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, arabinósido de citosina, didesoxiurridina, doxifluridina, enocitabina y floxuridina; andrógenos tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano y testolactona; antisuprarrenales tales como aminoglutetimida, mitotano y trilostano; rellenador de ácido fólico tal como ácido folínico (leucovorin); aceglatona; agentes antifolato antineoplásicos tales como ALIMTA®, LY231514 Pemetrexed, inhibidores de dihidrofolato reductasa tales como metotrexato y trimetrexato; antimetabolitos tales como 5-fluorouracilo (5-FU) y sus profármacos, tales como UFT, S-1 y capecitabina, floxuridina, doxifluridina y ratitrexed; y timidilato sintasa e inhibidores de glicinamida ribonucleótido formiltransferasa tales como raltitrexed (TOMUDEX®, TDX); inhibidores de dihidropirimidina deshidrogenasa tales como eniluracil; aldofosfamida glucósido; ácido aminolevulínico; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diazicuona; elformitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglucida; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinan; lonidainina; maitansinoides tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; losoxantrona; 2-etilhidrazida; procarbazina; complejo polisacárido PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR.); razoxana; rizoxina; sizofirano; espirogermanio; ácido tenuazonico; triazicuona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente la toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina (ELDISINE®, FILDESIN®); dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromán; gacitosina; arabinósido ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides y taxanos, por ejemplo, paclitaxel TAXOL® (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE™ sin Cremophor, formulaciones de nanopartículas modificadas con albúmina de paclitaxel (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.) y doxetaxel TAXOTERE® (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, Francia); cloranbucil; gemcitabina (GEMZAR®); 6-tioguanina; mercaptopurina; platino; análogos de platino o análogos a base de platino tales como cisplatino, oxaliplatino y carboplatino; vinblastina (VELBAN®); etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina (ONCOVIN®); alcaloide de la vinca; vinorelbina (NAVELBINE®); velcade; revlimid; talidomida; IMiD3; lovastatina; verapamil; tapsigargina; 1 -metil-4-fenilpiridinio; inhibidores del ciclo celular tales como estaurosporina; novantrona; edatrexato; daunomicina; mitoxantrona; aminopterina; xeloda; ibandronato; inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); análogos de la vitamina D3, tales como EB 1089, CB 1093 y k H 1060; retinoides tales como ácido retinoico; sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores; así como combinaciones de dos o más de los anteriores, tales como CHOP, una forma abreviada para una terapia combinada de ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina y prednisolona, y FOLFOX, una forma abreviada para una pauta de tratamiento con oxaliplatino (ELOXATIN™) combinado con 5-FU y leucovorina.
Agentes anti-hormonales que actúan para regular o inhibir la acción hormonal en tumores tales como antiestrógenos y moduladores del receptor de estrógenos selectivos (SERM), que incluyen, por ejemplo, tamoxifeno (que incluyen NOLVADEX® tamoxifeno), raloxifeno, megastrol, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona, y FARESTON® toremifeno; inhibidores de aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la producción de estrógenos en las glándulas adrenales, tales como, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, acetato de megestrol MEGASE®, exemestano AROMASIN®, formestanie, fadrozol, RIVISOR® vorozol, FEMARA® letrozol, y ARIMIDEX® anastrozol; y antiandrógenos tales como flutamida, bicalutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; así como también troxacitabina (un análogo de 1,3-dioxolano nucleósido citosina); oligonucleótidos antisentido, particularmente los que inhiben la expresión de genes en vías de señalización implicadas en la proliferación celular aberrante, tales como, por ejemplo, PKC-alfa, Raf, H-Ras, y receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF-R); vacunas tales como vacunas de terapia génica, por ejemplo, vacuna ALLOVECTIN®, vacuna LEUVECTIN®, y vacuna VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; inhibidor de topoisomerasa 1 LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
Compuestos novedosos
En el presente documento se divulgan compuestos de fórmula I:
Figure imgf000018_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rb es alquilo C1-C6 y
Rc es Rd-C(CH3 )2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 ; y
X es -C(O)NHCH(CH2R3)-, o X está ausente y
R3 se selecciona de: arilo, heteroarilo y cicloalquilo C3-C7 , cada uno opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado de amino e hidroxilo.
En algunas realizaciones, cuando R1 es 2-metil-1-(metilamino)propilo, y X es -C(O)NHCH(CH2Ph)-, R2 no es etilo, isopropilo, n-butilo ni fenilo.
La invención proporciona compuestos de fórmula I:
Figure imgf000018_0002
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo Ci-Ca, alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rb es alquilo C1-Ca y
Rc es Rd-C(CH3 )2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R2 se selecciona de: alquilo C1-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y
o X está ausente.
Se proporcionan también compuestos de fórmula I:
Figure imgf000019_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rb es alquilo C1-Ca y
Rc es Rd-C(CH3)2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 ; y
X está ausente.
La variable R1
En algunas realizaciones, R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6, alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6, hidroxilo y tio.
En algunas realizaciones, R1 se selecciona de: amino-alquilo C1-Ca, amino-arilo, amino-cicloalquilo C3-C7, aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de alquilo C1-C6 y halo.
En algunas realizaciones, R1 se selecciona de: 1-(d¡met¡lam¡no)-2-met¡lprop¡lo, 2-met¡l-1-(met¡lam¡no)prop¡lo, 1-aminociclopentilo, 1-am¡noc¡cloprop¡lo, 4-am¡nofen¡lo, 2-am¡nopropan-2-¡lo, 1-am¡noc¡clohex¡lo, 3-am¡noxetan-3-¡lo, 2-(met¡lam¡no)propan-2-¡lo, 1-amino-2-metilpropan-2-ilo, 2-metilpirrolidin-2-ilo, 2-amino-3-metilbutan-2-ilo, 2-aminobutan-2-ilo, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ilo, 1 -metilpiperidin-2-ilo, 3-fluoropirrolidin-3-ilo, 1,2-dimetilpirrolidin-2-ilo y 2-(dimetilamino)propan-2-ilo).
En algunas realizaciones, R1 se selecciona de: 1-(dimetilamino)-2-metilpropilo, 2-metil-1-(metilamino)propilo, 1-aminociclopentilo, 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, 2-aminopropan-2-ilo, 1-aminociclohexilo, 3-aminoxetan-3-ilo, 2-(metilamino)propan-2-ilo, 1-amino-2-metilpropan-2-ilo, 2-metilpirrolidin-2-ilo, 2-amino-3-metilbutan-2-ilo, 2-aminobutan-2-ilo, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ilo, 1 -metilpiperidin-2-ilo, 3-fluoropirrolidin-3-ilo, 1,2-dimetilpirrolidin-2-ilo, 2-(dimetilamino)propan-2-ilo), 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropilo, 1 -isopropilpiperidin-2-ilo, 2-azabiciclo[2.2.1 ]heptan-3-ilo y 2-metil-2-azabiciclo[2.2.1 ]heptan-3-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 1-(dimetilamino)-2-metilpropilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-metil-1-(metilamino)propilo.
En algunas realizaciones, R1 es 1-aminociclopentilo.
En algunas realizaciones, R1 es 1-aminociclopropilo.
En algunas realizaciones, R1 es 4-aminofenilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-aminopropan-2-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 1-aminociclohexilo.
En algunas realizaciones, R1 es 3-aminoxetan-3-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-(metilamino)propan-2-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 1-amino-2-metilpropan-2-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-metilpirrolidin-2-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-amino-3-metilbutan-2-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-aminobutan-2-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 1-metilpiperidin-2-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 3-fluoropirrolidin-3-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-metil-1-(metilamino)propilo.
En algunas realizaciones, R1 es (R)-1-(dimetilamino)-2-metilpropilo.
En algunas realizaciones, R1 es (R)-2-metil-1-(metilamino)propilo.
En algunas realizaciones, R1 es RaRbNCH(Rc)-.
En algunas realizaciones, R1 es 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropilo.
En algunas realizaciones, R1 es 1 -isopropilpiperidin-2-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-metil-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo.
La variable Ra
En algunas realizaciones, Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
En algunas realizaciones, Rb se selecciona de: H, metilo e isopropilo.
En algunas realizaciones, Rc es H.
En algunas realizaciones, Rd es metilo.
En algunas realizaciones, Re es isopropilo.
La variable Rb
En algunas realizaciones, Rb es alquilo C1-C6.
En algunas realizaciones, Rb es metilo.
La variable Rc
En algunas realizaciones, Rc es Rd-C(CH3)2-.
La variable Rd
En algunas realizaciones, Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio.
En algunas realizaciones, Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, amino-alquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxi­ alquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de p-tolilo, hidroxilo y tio.
En algunas realizaciones, Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: (2-hidroxietil)amino, (2-mercaptoetil)amino, 2-(acetiltio)etoxi, 2-aminoetoxi, 2-hidroxietoxi, 2-mercaptoetoxi, 3-metoxi, 4-metilestirilo, amino, aminometilo, cloro, flúor, hidroxilo, hidroximetilo, metilo, tio, trifluorometilo.
En algunas realizaciones, Rd se selecciona de: H, ciclohexilo, 1H-indol-3-ilo, fenilo y tien-2-ilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: (2-hidroxietil)amino, (2-mercaptoetil)amino, 2-(acetiltio)etoxi, 2-aminoetoxi, 2-hidroxietoxi, 2-mercaptoetoxi, 3-metoxi, 4-metilestirilo, amino, aminometilo, cloro, flúor, hidroxilo, hidroximetilo, metilo, tio y trifluorometilo.
En algunas realizaciones, Rd se selecciona de: H, 1H-indol-3-ilo, 1-metil-1H-indol-3-ilo, 2-metoxifenilo, 3-((2-hidroxietil)amino)fenilo, 3-((2-mercaptoetil)amino)fenilo, 3-(2-(acetiltio)etoxi)fenilo, 3-(2-hidroxietoxi)fenilo, 3-(2-mercaptoetoxi)fenilo, 3-(4-metil estiril )fe nilo, 3-(aminometil)fenilo, 3-(hidroximetil)fenilo, 3-hidroxifenilo, 3,5-difluorofenilo, 3,5-dimetilfenilo, 3-aminofenilo, 3-clorofenilo, 3-mercaptofenilo, 3-metoxifenilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-((2-hidroxietil)amino)fenilo, 4-((2-mercaptoetil)amino)fenilo, 4-(2-(acetiltio)etoxi)fenilo, 4-(2-aminoetoxi)fenilo, 4-(2-hidroxietoxi)fenilo, 4-(2-mercaptoetoxi)fenilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-(hidroximetil)fenilo, 4-aminofenilo, 4-hidroxifenilo, 4-mercaptofenilo, 4-metoxifenilo, ciclohexilo, tien-2-ilo, m-tolilo y fenilo.
En algunas realizaciones, Rd se selecciona de: H, 1H-indol-3-ilo, 1-metil-1H-indol-3-ilo, 2-metoxifenilo, 3-((2-hidroxietil)amino)fenilo, 3-((2-mercaptoetil)amino)fenilo, 3-(2-hidroxietoxi)fenilo, 3-(2-mercaptoetoxi)fenilo, 3,5-difluorofenilo, 3,5-dimetilfenilo, 3-clorofenilo, 3-mercaptofenilo, 3-metoxifenilo, 3-trifluorometilfenilo, 4-((2-hidroxietil)amino)fenilo, 4-((2-mercaptoetil)amino)fenilo, 4-4-(2-hidroxietoxi)fenilo, 4-(2-mercaptoetoxi)fenilo, 4-mercaptofenilo, 4-metoxifenilo, ciclohexilo, tien-2-ilo, m-tolilo y fenilo.
En algunas realizaciones, Rd es fenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 1-H-indol-3-ilo.
En algunas realizaciones, Rd es 1-metil-1H-indol-3-ilo.
En algunas realizaciones, Rd es 2-metoxifenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 3-((2-hidroxietil)amino)fenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 3-((2-mercaptoetil)am¡no)fen¡lo.
En algunas realizaciones, Rd es 3-(2-hidroxietoxi)fenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 3-(2-mercaptoetoxi)fenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 3,5-difluorofenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 3,5-dimetilfenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 3-clorofenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 3-mercaptofenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 3-metoxifenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 3-trifluorometilfenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 4-((2-hidroxietil)amino)fenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 4-((2-mercaptoetil)amino)fenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 4-4-(2-hidroxietoxi)fenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 4-(2-mercaptoetoxi)fenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 4-mercaptofenilo.
En algunas realizaciones, Rd es 4-metoxifenilo.
En algunas realizaciones, Rd es ciclohexilo.
En algunas realizaciones, Rd es tien-2-ilo.
En algunas realizaciones, Rd es m-tolilo.
La variable R2
En algunas realizaciones, R2 se selecciona de: alquilo C2-C6, arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6.
En algunas realizaciones, R2 se selecciona de: alquilo C2-C6, arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, amino, aminometilo, bromo, ferc-butilo, carboxamida, carboxilo, cloro, ciano, etilo, flúor, hidroxi, isopropilo, metoxi, metilo, nitro, fenilo, tio, tiometilo, trifluorometoxi y trifluorometilo.
En algunas realizaciones, R2 se selecciona de: 5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, bencilo, ciclohexilo, etilo, hexan-2-ilo, metilo, naftalen-2-ilo, piperidin-1-ilo, fenilo, propilo, piridin-3-ilo y tien-2-ilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, amino, aminometilo, bromo, ferc-butilo, carboxamida, carboxilo, cloro, ciano, etilo, flúor, hidroxi, isopropilo, metoxi, metilo, nitro, fenilo, tio, tiometilo, trifluorometoxi y trifluorometilo.
En algunas realizaciones, R2 se selecciona de: 5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, bencilo, ciclohexilo, etilo, hexan-2-ilo, naftalen-2-ilo, piperidin-1-ilo, fenilo, propilo, piridin-3-ilo y tien-2-ilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, amino, aminometilo, bromo, ferc-butilo, carboxamida, carboxilo, cloro, ciano, etilo, flúor, hidroxi, isopropilo, metoxi, metilo, nitro, fenilo, tio, tiometilo, trifluorometoxi y trifluorometilo.
En algunas realizaciones, R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-ferc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciciohexilo, piridin-3-iimetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-ferc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1'-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo y 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo.
En algunas realizaciones, R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-ferc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-ferc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1'-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo y 4-(metoxicarbonil)fenilo.
En algunas realizaciones, en donde R2 se selecciona de: arilo y aril-alquilo C1-C6 , cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: amino y amino-alquilo C1-C6.
En algunas realizaciones, R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo y bencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-aminobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-(aminometil)bencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-(aminometil)fenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-aminofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es bencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 3-mercaptopropilo.
En algunas realizaciones, R2 es 2-mercaptoetilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-(mercaptometil)fenilo.
En algunas realizaciones, R2 es p-tolilo.
En algunas realizaciones, R2 es 2,4,6-trimetilfenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-(trifluorometoxi)fenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 2,4,6-triisopropilfenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-ferc-butilfenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-clorofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 3-cianofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 2-nitrofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-metoxi-2-nitrofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-metoxifenilo.
En algunas realizaciones, R2es fenilo.
En algunas realizaciones, R2es 2-fluorobencilo.
En algunas realizaciones, R2es piperidin-1-ilo.
En algunas realizaciones, R2es o-tolilo.
En algunas realizaciones, R2es 4-bromofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es naftalen-2-ilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-metoxicarbonilfenilo.
En algunas realizaciones, R2 es -(trifluorometil)bencilo.
En algunas realizaciones, R2 es hexan-2-ilo.
En algunas realizaciones, R2 es 2- metoxietilo.
En algunas realizaciones, R2 es ciclopentilmetilo.
En algunas realizaciones, R2 es ciclohexilo.
En algunas realizaciones, R2 es piridin-3-ilmetilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-carboxifenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 3- aminofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es piridin-3-ilo.
En algunas realizaciones, R2 es tien-2-ilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4- hidroxifenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-(1-aminociclopropil)bencilo. En algunas realizaciones, R2 es 4-(1-aminociclopropil)fenilo. En algunas realizaciones, R2 es 2- metilbencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-nitrobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-clorobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es feniletilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-bromobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-cianobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 3- nitrobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4- ferc-butilbencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 2-nitrobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es -nitrofenetilo.
En algunas realizaciones, R2 es 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo En algunas realizaciones, R2 es 2-aminofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es [1,1'-bifenil]-4-ilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4'-am¡no-[1,1'-b¡fen¡l]-4-ilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-fluorobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 3-(trifluorometil)bencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 3-(trifluorometoxi)bencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 3,4-diclorobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 2-cianobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 3-clorobencilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-amino-2-etilfenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-amino-2,3-dimetilfenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-amino-3-metilfenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-amino-3-fluorofenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-amino-3-etilfenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo.
En algunas realizaciones, R2 es 4-(metoxicarbonil)fenilo.
La variable R3
En algunos compuestos divulgados en el presente documento, R3 se selecciona de: arilo, heteroarilo y cicloalquilo C3-C7 , cada uno opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado de amino e hidroxilo.
En algunos compuestos divulgados en el presente documento, R3 se selecciona de: 1H-indol-3-ilo, 4-aminofenilo, 4-hidroxifenilo, 5-hidroxipiridin-2-ilo, ciclohexilo y fenilo.
En algunos compuestos divulgados en el presente documento, R3 es 1H-indol-3-ilo.
En algunos compuestos divulgados en el presente documento, R3 es 4-aminofenilo.
En algunos compuestos divulgados en el presente documento, R3 es 4-hidroxifenilo.
En algunos compuestos divulgados en el presente documento, R3 es 5-hidroxipiridin-2-ilo.
En algunos compuestos divulgados en el presente documento, R3 es ciclohexilo.
En algunos compuestos divulgados en el presente documento, R3 es fenilo.
La variable R4
En algunas realizaciones, R4 se selecciona de: H y alquilo C1-C6.
En algunas realizaciones, R4 es H.
En algunas realizaciones, R4 es alquilo C1-C6.
En algunas realizaciones, R4 es metilo.
La variable R5
En algunas realizaciones, R5 se selecciona de: H y alquilo C1-C6.
En algunas realizaciones, R5 es H.
En algunas realizaciones, R5 es alquilo C1-C6.
En algunas realizaciones, R5 es metilo.
La variable X
En algunos compuestos divulgados en el presente documento, X es -C(O)NHCH(CH2R3)-En realizaciones de la invención, X está ausente.
Determinadas combinaciones
En algunas realizaciones, Rb es alquilo C1-C6 ; y Rc es Rd-C(CH3)2-.
En algunas realizaciones, Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo.
En algunas realizaciones, Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo seleccionado de: pirrolidinildiílo, piperidinildiílo y azepanildiílo.
En algunas realizaciones, Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un pirrolidinildiílo.
En algunas realizaciones, Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un piperidinildiílo.
En algunas realizaciones, Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un azepanildiílo.
En algunas realizaciones, cada uno de R4 y R5 se selecciona independientemente de: H y alquilo C1-C6.
En algunas realizaciones, cada uno de R4 y R5 se selecciona independientemente de: H y metilo.
En algunas realizaciones, R4 y R5 son cada uno metilo.
En algunas realizaciones, R4 es H y R5 es metilo.
Se proporcionan también compuestos de fórmula Ia:
Figure imgf000026_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7, arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y
R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de: H y alquilo C1-C6.
Se divulgan también compuestos de fórmula Ia:
Figure imgf000027_0001
y sales farmacéuticamente
Figure imgf000027_0002
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-terc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-terc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1 '-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo, y 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo y
R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de: H y metilo.
Se divulgan también compuestos de fórmula Ic:
Figure imgf000027_0003
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y
X es -C(O)NHCH(CH2R3)- o X está ausente y
R3 se selecciona de: arilo, heteroarilo y cicloalquilo C3-C7 , cada uno opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado de amino e hidroxilo y
R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de: H y alquilo C1-C6.
Se divulgan también compuestos de fórmula Ic:
Figure imgf000028_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en donde:
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-terc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-terc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1 '-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo y 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo y
X es -C(O)NHCH(CH2R3)- o X está ausente y
R3 se selecciona de: 1H-indol-3-ilo, 4-aminofenilo, 4-hidroxifenilo, 5-hidroxipiridin-2-ilo, ciclohexilo y fenilo y R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de: H y metilo.
Se proporcionan también compuestos de fórmula Id:
Figure imgf000028_0002
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 ; y
R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de: H y alquilo C1-C6.
Se divulgan también compuestos de fórmula Id:
Figure imgf000029_0001
y sales farmacéuticamente
Figure imgf000029_0002
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-terc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-terc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1 '-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo y 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo y
R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de: H y metilo.
Se divulgan también compuestos de fórmula If:
Figure imgf000029_0003
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 ; y
X es -C(O)NHCH(CH2R3)-, o X está ausente; y
R3 se selecciona de: arilo, heteroarilo y cicloalquilo C3-C7 , cada uno opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado de amino e hidroxilo.
Se divulgan también compuestos de fórmula If:
Figure imgf000030_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo y
X es -C(O)NHCH(CH2R3)-, o X está ausente y
R3 se selecciona de: 1H-indol-3-ilo, 4-aminofenilo, 4-hidroxifenilo, 5-hidroxipiridin-2-ilo, ciclohexilo y fenilo.
Se proporcionan también compuestos de fórmula Ig:
Figure imgf000030_0002
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6.
Se proporcionan también compuestos de fórmula Ig:
Figure imgf000030_0003
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo.
Se divulgan también compuestos de fórmula Ii:
Figure imgf000031_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7 -alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7, arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 ;
X es -C(O)NHCH(CH2R3)- o X está ausente y
R3 se selecciona de: arilo, heteroarilo y cicloalquilo C3-C7 , cada uno opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado de amino e hidroxilo.
También se divulgan compuestos de formula Ii:
Figure imgf000031_0002
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-terc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-terc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1'-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo y 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo;
X es -C(O)NHCH(CH2R3)-, o X está ausente y
R3 se selecciona de: 1H-indol-3-ilo, 4-aminofenilo, 4-hidroxifenilo, 5-hidroxipiridin-2-ilo, ciclohexilo y fenilo. Se proporcionan también compuestos de fórmula Ij:
Figure imgf000032_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6.
Se proporcionan también compuestos de fórmula Ij:
Figure imgf000032_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable de estos,
en donde:
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-terc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-terc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1'-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo y 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo.
Se divulgan también compuestos de fórmula Im:
Figure imgf000032_0003
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rb es alquilo C1-C6 y
Rc es Rd-C(CH3 )2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6.
Se divulgan también compuestos de fórmula Im:
Figure imgf000033_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: 1-(dimetilamino)-2-metilpropilo, 2-metil-1-(metilamino)propilo, 1-aminociclopentilo, 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, 2-aminopropan-2-ilo, 1-aminociclohexilo, 3-aminoxetan-3-ilo, 2-(metilamino)propan-2-ilo, 1-amino-2-metilpropan-2-ilo, 2-metilpirrolidin-2-ilo, 2-amino-3-metilbutan-2-ilo, 2-aminobutan-2-ilo, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ilo, 1 -metilpiperidin-2-ilo, 3-fluoropirrolidin-3-ilo, 1,2-dimetilpirrolidin-2-ilo y 2-(dimetilamino)propan-2-ilo) y
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-ferc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-ferc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1 '-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo y 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo.
Se proporcionan también compuestos de fórmula Im:
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rb es alquilo C1-C6 y
Rc es Rd-C(CH3 )2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R2 se selecciona de: alquilo C1-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6.
Se divulgan también compuestos de fórmula Im:
Figure imgf000034_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: 1-(dimetilamino)-2-metilpropilo, 2-metil-1-(metilamino)propilo, 1-aminociclopentilo, 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, 2-aminopropan-2-ilo, 1-aminociclohexilo, 3-aminoxetan-3-ilo, 2-(metilamino)propan-2-ilo, 1-amino-2-metilpropan-2-ilo, 2-metilpirrolidin-2-ilo, 2-amino-3-metilbutan-2-ilo, 2-aminobutan-2-ilo, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ilo, 1 -metilpiperidin-2-ilo, 3-fluoropirrolidin-3-ilo, 1,2-dimetilpirrolidin-2-ilo, 2-(dimetilamino)propan-2-ilo), 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropilo, 1-isopropilpiperidin-2-ilo, 2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo y 2-metil-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo; y
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-terc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-terc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1 '-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo y 4-(metoxicarbonil)fenilo.
Se divulgan también compuestos de fórmula In:
Figure imgf000035_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rb es alquilo C1-C6 y
Rc es Rd-C(CH3 )2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y
R3 se selecciona de: arilo, heteroarilo y cicloalquilo C3-C7 , cada uno opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado de amino e hidroxilo;
siempre que cuando R1 es 2-metil-1-(metilamino)propilo, y R3 es fenilo, R2 no es etilo, isopropilo, n-butilo ni fenilo.
También se divulgan compuestos de fórmula In:
Figure imgf000035_0002
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: 1-(dimetilamino)-2-metilpropilo, 2-metil-1-(metilamino)propilo, 1-aminociclopentilo, 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, 2-aminopropan-2-ilo, 1-aminociclohexilo, 3-aminoxetan-3-ilo, 2-(metilamino)propan-2-ilo, 1-amino-2-metilpropan-2-ilo, 2-metilpirrolidin-2-ilo, 2-amino-3-metilbutan-2-ilo, 2-aminobutan-2-ilo, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ilo, 1 -metilpiperidin-2-ilo, 3-fluoropirrolidin-3-ilo, 1,2-dimetilpirrolidin-2-ilo y 2-(dimetilamino)propan-2-ilo) y
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-terc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen 2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciciohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-ferc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1 '-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo y 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo y
R3 se selecciona de: 1H-indol-3-ilo, 4-aminofenilo, 4-hidroxifenilo, 5-hidroxipiridin-2-ilo, ciclohexilo y fenilo; siempre que cuando R1 es 2-metil-1-(metilamino)propilo y R3 es fenilo, R2 no es etilo, isopropilo, n-butilo ni fenilo.
También se divulgan compuestos de fórmula In:
Figure imgf000036_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R1 se selecciona de: 1-(dimetilamino)-2-metilpropilo, 2-metil-1-(metilamino)propilo, 1-aminociclopentilo, 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, 2-aminopropan-2-ilo, 1-aminociclohexilo, 3-aminoxetan-3-ilo, 2-(metilamino)propan-2-ilo, 1-amino-2-metilpropan-2-ilo, 2-metilpirrolidin-2-ilo, 2-amino-3-metilbutan-2-ilo, 2-aminobutan-2-ilo, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ilo, 1 -metilpiperidin-2-ilo, 3-fluoropirrolidin-3-ilo, 1,2-dimetilpirrolidin-2-ilo, 2-(dimetilamino)propan-2-ilo), 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropilo, 1-isopropilpiperidin-2-ilo, 2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo y 2-metil-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo y
R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-ferc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-ferc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1'-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo y 4-(metoxicarbonil)fenilo y
R3 se selecciona de: 1H-indol-3-ilo, 4-aminofenilo, 4-hidroxifenilo, 5-hidroxipiridin-2-ilo, ciclohexilo y fenilo; siempre que cuando R1 es 2-metil-1-(metilamino)propilo, y R3 es fenilo, R2 no es etilo, isopropilo, n-butilo ni fenilo.
También se divulgan compuestos de fórmula VI:
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R6 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R6 es ReRfNCH(Rg)-;
Re se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rf es alquilo C1-C6 y
Rg es Rh-C(CH3)2- y
Rh se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Re y Rf, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R7 es alquilo C2-C4 opcionalmente sustituido con alquiltio C1-C6 ;
R8 es alquilo C2-C4 opcionalmente sustituido con alquiltio C1-C6 ;
R9 se selecciona de: H y alquilo C1-C3 ;
R10 se selecciona de: alquilo C1-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 ;
Y es -C(O)NHCH(CH2R11)- o Y está ausente y
R11 se selecciona de: arilo, heteroarilo y cicloalquilo C3-C7 , cada uno opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado de amino e hidroxilo.
Se divulgan también compuestos de fórmula VI:
Figure imgf000037_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R6 se selecciona de: 1-(dimetilamino)-2-metilpropilo, 2-metil-1-(metilamino)propilo, 1-aminociclopentilo, 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, 2-aminopropan-2-ilo, 1-aminociclohexilo, 3-aminoxetan-3-ilo, 2-(metilamino)propan-2-ilo, 1-amino-2-metilpropan-2-ilo, 2-metilpirrolidin-2-ilo, 2-amino-3-metilbutan-2-ilo, 2-aminobutan-2-ilo, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ilo, 1 -metilpiperidin-2-ilo, 3-fluoropirrolidin-3-ilo, 1,2-dimetilpirrolidin-2-ilo, 2-(dimetilamino)propan-2-ilo), 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropilo, 1-isopropilpiperidin-2-ilo, 2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo y 2-metil-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo;
R7 se selecciona de: isopropilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo y 2-(metiltio)etilo;
R8 se selecciona de: isopropilo, isobutilo, sec-butilo y 2-(metiltio)etilo;
R9 se selecciona de: metilo, etilo y n-propilo;
R10 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-tere-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin-3-ilmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-tere-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1 '-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo y 4-(metoxicarbonil)fenilo;
Y es -C(O)NHCH(CH2R11)- o Y está ausente y
R11 se selecciona de: 1H-indol-3-ilo, 4-aminofenilo, 4-hidroxifenilo, 5-hidroxipiridin-2-ilo, ciclohexilo y fenilo.
También se divulgan compuestos de fórmula VII:
Figure imgf000038_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R6 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R6 es ReRfNCH(Rg)-;
Re se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rf es alquilo C1-C6 y
Rg es Rh-C(CH3)2- y
Rh se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Re y Rf, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R7 es alquilo C2-C4 opcionalmente sustituido con alquiltio C1-C6 ;
R8 es alquilo C2-C4 opcionalmente sustituido con alquiltio C1-C6 ;
R9 se selecciona de: H y alquilo C1-C3 ;
R10 se selecciona de: alquilo C1-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 ;
Y es -C(O)NHCH(CH2R11)- o Y está ausente y
R11 se selecciona de: arilo, heteroarilo y cicloalquilo C3-C7 , cada uno opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado de amino e hidroxilo.
Se divulgan también compuestos de fórmula VII:
Figure imgf000038_0002
y sales farmacéuticamente aceptables de estos, en donde:
R6 se selecciona de: 1-(dimetilamino)-2-metilpropilo, 2-metil-1-(metilamino)propilo, 1-aminociclopentilo, 1-aminociclopropilo, 4-aminofenilo, 2-aminopropan-2-ilo, 1-aminociclohexilo, 3-aminoxetan-3-ilo, 2-(metilamino)propan-2-ilo, 1-amino-2-metilpropan-2-ilo, 2-metilpirrolidin-2-ilo, 2-amino-3-metilbutan-2-ilo, 2-aminobutan-2-ilo, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ilo, 1 -metilpiperidin-2-ilo, 3-fluoropirrolidin-3-ilo, 1,2 dimetilpirrolidin-2-ilo, 2-(dimetilamino)propan-2-ilo), 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropilo, l-isopropilpiperidin-2-ilo, 2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo y 2-metil-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-3-ilo;
R7 se selecciona de: isopropilo, isobutilo, sec-butilo, ferc-butilo y 2-(metiltio)etilo;
R8 se selecciona de: isopropilo, isobutilo, sec-butilo y 2-(metiltio)etilo;
R9 se selecciona de: metilo, etilo y n-propilo;
R10 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo, bencilo, 3-mercaptopropilo, 2-mercaptoetilo, 4-(mercaptometil)fenilo, p-tolilo, 2,4,6-trimetilfenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 2,4,6-triisopropilfenilo, 4-ferc-butilfenilo, 4-clorofenilo, 3-cianofenilo, 2-nitrofenilo, 4-metoxi-2-nitrofenilo, 4-aminocarbonil-2-nitrofenilo, 4-metoxifenilo, fenilo, 2-fluorobencilo, piperidin-1-ilo, o-tolilo, 4-bromofenilo, naftalen-2-ilo, 4-metoxicarbonifenilo, 2-(trifluorometil)bencilo, hexan-2-ilo, 2-metoxietilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilo, piridin -3-i lmetilo, 4-carboxifenilo, 3-aminofenilo, piridin-3-ilo, tien-2-ilo, 4-hidroxifenilo, 4-(1-aminociclopropil)bencilo, 4-(1-aminociclopropil)fenilo, 2-metilbencilo, 4-nitrobencilo, 4-clorobencilo, fenetilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, 3-nitrobencilo, 4-ferc-butilbencilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrofenetilo, 2-cloro-3-metoxicarbonilfenilo, 2-aminofenilo, [1,1'-bifenil]-4-ilo, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ilo, 4-fluorobencilo, 3-(trifluorometil)bencilo, 3-(trifluorometoxi)bencilo, 3,4-diclorobencilo, 2-cianobencilo, 3-clorobencilo, 4-amino-2-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometoxi)fenilo, 4-amino-2,3-dimetilfenilo, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ilo, 4-amino-3-metilfenilo, 4-amino-3-fIuorofenilo, 4-amino-3-etilfenilo, 4-amino-3-(trifluorometil)fenilo y 4-(metoxicarbonil)fenilo;
Y es -C(O)NHCH(CH2R11)- o Y está ausente y
R11 se selecciona de: 1H-indol-3-ilo, 4-aminofenilo, 4-hidroxifenilo, 5-hidroxipiridin-2-ilo, ciclohexilo y fenilo. La presente divulgación incluye todas las combinaciones de uno o más compuestos seleccionados del siguiente grupo que se muestra en la Tabla A.
La presente divulgación incluye todas las combinaciones de uno o más compuestos seleccionados del siguiente grupo que se muestra en la Tabla B.
La presente divulgación incluye todas las combinaciones de uno o más compuestos seleccionados del siguiente grupo que se muestra en la Tabla C.
Tabla A
Figure imgf000039_0001
continuación
Figure imgf000040_0001
continuación
Figure imgf000041_0001
Tabla B
metilan-4-
Figure imgf000041_0002
continuación
Figure imgf000042_0001
continuación
Figure imgf000043_0001
Tabla C
Figure imgf000044_0001
De manera adicional, los compuestos individuales y géneros químicos de la presente invención, por ejemplo, los compuestos que se encuentran en la Tabla A, Tabla B y Tabla C, que incluyen diastereómeros y enantiómeros de estos, comprenden todas las sales farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de fórmula I pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos relevantes publicados en la bibliografía que son utilizados por un experto en la técnica. Los reactivos y procedimientos a modo de ejemplo para estas reacciones aparecen más adelante en los ejemplos de trabajo. También se divulga en el presente documento un método para elaborar un compuesto descrito en el presente documento.
Conjugados que comprenden los compuestos novedosos
Los compuestos descritos en el presente documento pueden utilizarse para formar conjugados, por ejemplo, conjugados de fármaco y anticuerpo (ADC). Por consiguiente, en una realización de la presente divulgación, se proporcionan composiciones conjugadas de fórmula II
(T)-(L)-(D) II
en donde (T) es un resto de direccionamiento, (L) es un enlazador opcional y (D) es un compuesto de fórmula I. En una realización, (T) es un anticuerpo. Por consiguiente, en una realización, los conjugados de fármaco y anticuerpo (ADC) comprenden compuestos (D) de fórmula I.
Tal como observará el experto en la técnica, hay disponible una amplia variedad de medios para enlazar de manera covalente (T)-(L)-(D). Se puede utilizar cualquier método conocido para enlazar los componentes del conjugado. Se puede utilizar cualquier tecnología enlazadora para enlazar (T) con (D). Además, (T), (L) y (D) se pueden modificar de cualquier manera adecuada, tal como lo reconocerá el experto en la técnica, con el fin de facilitar la formación del conjugado.
Resto de direccionamiento (T)
El resto de direccionamiento (T) de las presentes composiciones incluye dentro de su alcance cualquier unidad de un (T) que se una o se asocie de forma reactiva o forme complejo con un receptor, antígeno u otro resto receptivo asociado a una población celular objetivo dada. (T) es una molécula que se une, forma complejos o reacciona con un resto de una población celular que se busca que sea objetivo. En un aspecto, (T) actúa para liberar el fármaco (D) a la población celular objetivo particular con la cual reacciona (T). Dichos (T) incluyen, pero no se limitan a, proteínas de gran peso molecular tales como, por ejemplo, anticuerpos de longitud total, fragmentos de anticuerpos, proteínas, polipéptidos o péptidos de peso molecular más pequeño, lectinas, glucoproteínas, no péptidos, vitaminas, moléculas de transporte de nutrientes (tales como, pero no limitadas a, transferrina) o cualquier otra molécula o sustancia de unión celular.
(T) puede formar un enlace con una unidad enlazadora (L) o un fármaco (D). (T) puede formar un enlace con una unidad (L) mediante un heteroátomo de (T). Los heteroátomos que pueden encontrarse presentes en (T) incluyen azufre (en una realización, de un grupo sulfhidrilo de (T)), oxígeno (en una realización, de un grupo carbonilo, carboxilo o hidroxilo de (T)) y nitrógeno (en una realización, de un grupo amino primario o secundario de (T)). Estos heteroátomos pueden encontrarse presentes en (T) en el estado natural de (T), por ejemplo, un anticuerpo de origen natural, o pueden introducirse en (T), por ejemplo, mediante una modificación química.
En una realización, (T) tiene un grupo sulfhidrilo y (T) se une a (L) mediante el átomo de azufre del grupo sulfhidrilo. En otra realización, (T) tiene uno o más residuos de lisina que pueden modificarse de forma química para introducir uno o más grupos sulfhidrilo. (T) se une a la unidad (L) mediante el grupo sulfhidrilo. Los reactivos que pueden utilizarse para modificar las lisinas incluyen, pero no se limitan a, S-acetiltioacetato (SATA) de W-succinimidilo y clorhidrato de 2-iminotiolano (reactivo de Traut).
En otra realización, (L) puede tener uno o más grupos carbohidrato que pueden modificarse químicamente para tener uno o más grupos sulfhidrilo. (T) se une a (L) mediante el átomo de azufre del grupo sulfhidrilo. En otra realización, (T) puede tener uno o más grupos carbohidrato que pueden oxidarse para proporcionar un grupo aldehído (-CHO) (ver, por ejemplo, Laguzza et ál., 1989, J. Med. Chem. 32 (3): 548-55). El aldehído correspondiente puede formar un enlace con un sitio reactivo en una parte de (L). Los sitios reactivos que pueden reaccionar con un grupo carbonilo en (T) incluyen, pero no se limitan a, hidrazina e hidroxilamina. Se describen otros protocolos para la modificación de proteínas para el acoplamiento o asociación de (D) en Coligan et ál., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002).
(T) puede incluir, por ejemplo, una proteína, un polipéptido o péptido, que incluye, pero no se limita a, transferrina, factores de crecimiento epidérmico ("EGF”, por sus siglas en inglés), bombesina, gastrina, péptidos que liberan gastrina, factor de crecimiento derivado de plaquetas, IL-2, IL-6, factor de crecimiento transformante ("TGF”, por sus siglas en inglés), tal como TGF-a o TGF-p, factor de crecimiento vaccinia ("VGF”, por sus siglas en inglés), factores de crecimiento insulínico y similar a la insulina I y II, lectinas y apoproteínas de lipoproteínas de baja densidad. (T) también puede incluir un anticuerpo, tal como anticuerpos policlonales o monoclonales. El anticuerpo puede dirigirse a un determinante antigénico particular, que incluye, por ejemplo, un antígeno para células cancerosas, un antígeno para virus, un antígeno para microbios, una proteína, un péptido, un carbohidrato, un químico, un ácido nucleico o fragmentos de estos. Se conocen en la técnica los métodos de producción de anticuerpos policlonales. Un anticuerpo monoclonal (mAb) respecto a un antígeno de interés puede prepararse mediante el uso de cualquier método conocido en la técnica. Estos incluyen, pero no se limitan a, la técnica de hibridoma descrita originalmente por Kohler y Milstein (1975, Nature 256, 495-497), la técnica de hibridoma de linfocitos B humanos (Kozbor et ál., 1983, Immunology Today 4:72) y la técnica de EBV-hibridoma (Cole et ál., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., págs. 77-96). El método del linfocito-anticuerpo seleccionado (SLAM, por sus siglas en inglés) (Babcook, J.S., et ál., A novel strategy for generating monoclonal antibodies from single, isolated lymphocytes producing antibodies of defined specificities. Proc Natl Acad Sci U S A, 1996. 93 (15): p. 7843-8.) y (McLean GR, Olsen OA, Watt IN, Rathanaswami P, Leslie KB, Babcook JS, Schrader JW. Recognition of human cytomegalovirus by human primary immunoglobulins identifies an innate foundation to an adaptive immune response. J Immunol. 15 de abril de 2005;174 (8): 4768-78. Tales anticuerpos pueden ser de cualquier clase de inmunoglobulina, que incluye IgG, IgM, IgE, IgA e IgD y cualquier subclase de estas. Los hibridomas que producen mAb de uso en la presente invención puede cultivarse in vitro o in vivo.
El anticuerpo monoclonal puede ser, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal humano, un anticuerpo monoclonal humanizado, un fragmento de anticuerpo o un anticuerpo quimérico (por ejemplo, un anticuerpo de humano-ratón). Los anticuerpos monoclonales humanos pueden elaborarse mediante cualquiera de numerosos métodos conocidos en la técnica (por ejemplo, Teng et ál., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. u Sa 80: 7308-7312; Kozbor et ál., 1983, Immunology Today 4: 72-79; y Olsson et ál., 1982, Meth. Enzymol. 92: 3-16). Véase también, Huse et ál., 1989, Science 246: 1275-1281 y McLean et ál. J Immunol. 15 de abril de 2005;174 (8): 4768-78.
En anticuerpo también puede ser un anticuerpo biespecífico. Se conocen en la técnica métodos para producir anticuerpos biespecíficos. La producción tradicional de anticuerpos biespecíficos de longitud completa se basa en la coexpresión de dos pares de cadena pesada/cadena ligera de inmunoglobulina, en donde las dos cadenas tienen diferentes especificidades (ver, por ejemplo, Milstein et ál., 1983, Nature 305: 537-539; publicación internacional n.° WO 93/08829, Traunecker et ál., 1991, EMBO J. 10: 3655-3659).
Conforme a un enfoque diferente, los dominios variables de anticuerpo con las especificidades de unión deseadas (sitios de combinación de anticuerpo y antígeno) se fusionan a secuencias de dominio constante de inmunoglobulina. La fusión, preferentemente, es con un dominio constante de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende al menos parte de las regiones bisagra, Ch2 y Ch3. Se prefiere que la primera región constante de cadena pesada (CH1) que contiene el sitio necesario para la unión de cadena ligera se encuentre presente en al menos una de las fusiones. Se insertan los ácidos nucleicos con secuencias que codifican las fusiones de cadena pesada de inmunoglobulina y, si se desea, de cadena ligera de inmunoglobulina, en vectores de expresión por separado y se cotransfectan en un organismo huésped adecuado. Esto proporciona una gran flexibilidad para ajustar las proporciones mutuas de los tres fragmentos de polipéptidos en realizaciones en las cuales las proporciones desiguales de las tres cadenas de los polipéptidos utilizadas en la construcción proporcionan rendimientos óptimos. Sin embargo, es posible insertar las secuencias de codificación para dos o las tres cadenas polipeptídicas en un vector de expresión cuando la expresión de al menos dos cadenas polipeptídicas en proporciones iguales produce rendimientos elevados o cuando las proporciones no son particularmente significativas.
Por ejemplo, los anticuerpos biespecíficos pueden tener una cadena pesada de inmunoglobulina híbrida con una primera especificidad de unión en un brazo y un par de cadena ligera/cadena pesada de inmunoglobulina híbrida (que proporciona una segunda especificidad de unión) en otro brazo. Esta estructura asimétrica facilita la separación del compuesto biespecífico deseado de las combinaciones de cadenas de inmunoglobulina no deseadas, ya que la presencia de una cadena ligera de inmunoglobulina únicamente en una mitad de la molécula biespecífica proporciona un modo sencillo de separación (publicación internacional n.° WO 94/04690).
Para ver detalles adicionales de la generación de anticuerpos biespecíficos véase, por ejemplo, Suresh et ál., 1986, Methods in Enzymology 121:210; Rodrigues et ál., 1993, J. Immunology 151:6954-6961; Carter et ál., 1992, Bio/Technology 10:163-167; Carter et ál., 1995, J. Hematotherapy 4:463-470; Merchant et ál., 1998, Nature Biotechnology 16:677-681. Mediante el uso de dichas técnicas, los anticuerpos biespecíficos pueden prepararse para uso en el tratamiento o la prevención de la enfermedad tal como se define en el presente documento.
Los anticuerpos bifuncionales también se describen en la publicación de patente europea n.° EPA 0 105360. Tal como se divulga en esta referencia, los anticuerpos híbridos o bifuncionales pueden derivarse, ya sea de forma biológica, es decir, mediante técnicas de fusión celular, o de forma química, especialmente con agentes de reticulación o reactivos que forman puentes disulfuro y pueden comprender anticuerpos completos o fragmentos de estos. Los métodos para obtener tales anticuerpos híbridos se describen, por ejemplo, en la publicación internacional WO 83/03679 y la publicación de patente europea n.° EPA 0217577.
El anticuerpo también puede ser un fragmento, derivado o análogo activo desde el punto de vista funcional que se une de forma inmunoespecífica a un antígeno objetivo (por ejemplo, un antígeno de cáncer, un antígeno viral, un antígeno microbiano u otros anticuerpos que se unen a células o matrices). En este sentido, "activo desde el punto de vista funcional” significa que el fragmento, derivado o análogo es capaz de reconocer el mismo antígeno que reconoció el anticuerpo del cual deriva el fragmento, derivado o análogo. Específicamente, en una realización de ejemplo, la antigenicidad del idiotipo de la molécula de inmunoglobulina puede mejorarse mediante la eliminación de las secuencias CDR y de marco que son de extremo C respecto a la secuencia CDR que reconoce específicamente el antígeno. Para determinar cuáles secuencias CDR se unen al antígeno, los péptidos sintéticos que contienen las secuencias CDR pueden utilizarse en los ensayos de unión con el antígeno mediante cualquier método de ensayo de unión conocido en la técnica (por ejemplo, el ensayo de BIAcore) (ver, por ejemplo, Kabat et ál., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, quinta edición, National Institute of Health, Bethesda, Md.; Kabat et ál., 1980, J. Immunology 125(3):961-969).
Otros anticuerpos útiles incluyen fragmentos de anticuerpos tales como, pero no se limitan a, fragmentos F(ab')2 , fragmentos Fab, Fab', fragmentos Fv y dímeros de cadena pesada y cadena ligera de anticuerpos o cualquier fragmento mínimo de estos tal como Fv o anticuerpos de cadena simple (SCA, por su sigla en inglés) (por ejemplo, tal como se describe en la patente estadounidense n.° 4,946,778; Bird, 1988, Science 242:423-42; Huston et ál., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; y Ward et ál., 1989, Nature 334:544-54).
Los anticuerpos recombinantes, tales como anticuerpos monoclonales quiméricos y humanizados, que comprenden partes tanto humanas como no humanas, que pueden elaborarse mediante el uso de técnicas estándar de ADN recombinante, también se pueden utilizar. (Véanse, por ejemplo, la patente estadounidense n.° 4.816.567; y la patente estadounidense n.° 4.816.397.) Los anticuerpos humanizados son moléculas de anticuerpos de especies no humanas que tienen una o más regiones determinantes complementarias (CDR, por su sigla en inglés) de especies no humanas y una región marco de una molécula de inmunoglobulina humana. (Véanse, por ejemplo, la patente estadounidense n.° 5.585.089.) Los anticuerpos monoclonales quiméricos y humanizados pueden producirse mediante técnicas de ADN recombinante conocidas en la técnica, por ejemplo, mediante el uso de métodos descritos en la publicación internacional n.° WO 87/02671; en la publicación de patente europea n.° 0184187; en la publicación de patente europea n.° 0171496; en la publicación de patente europea n.° 0173494; en la publicación internacional n.° WO 86/01533; en la patente estadounidense n.° 4.816.567; en la publicación de patente europea n.° 012023; Berter et ál., 1988, Science 240: 1041-1043; Liu et ál., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-3443; Liu et ál., 1987, J. Immunol. 139: 3521-3526; Sun et ál., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 214-218; Nishimura et ál., 1987, Cancer. Res. 47: 999-1005; Wood et ál., 1985, Nature 314: 446-449; Shaw et ál., 1988, J. Natl. Cancer Inst. 80: 1553-1559; Morrison, 1985, Science 229: 1202-1207; Oi et ál., 1986, BioTechniques 4: 214; en la patente estadounidense n.° 5.225.539; Jones et ál., 1986, Nature 321: 552-525; Verhoeyan et ál., 1988, Science 239: 1534 y Beidler et ál., 1988, J. Immunol. 141: 4053-4060.
Pueden utilizarse anticuerpos completamente humanos. Los anticuerpos humanos pueden prepararse, por ejemplo, mediante el uso de ratones transgénicos que sean incapaces de expresar genes de cadenas ligera y pesada de inmunoglobulina endógenos, pero que puedan expresar genes de cadena ligera y pesada humanos. Se inmunizan los ratones transgénicos de la manera tradicional con un antígeno seleccionado, por ejemplo, la totalidad o una parte de un polipéptido. Los anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno pueden obtenerse mediante el uso de tecnología de hibridoma convencional. Los transgenes de inmunoglobulina humana que albergan los ratones transgénicos se reconfiguran durante la diferenciación de linfocitos B y posteriormente experimentan un campo de clase y una mutación somática. De este modo, mediante el uso de dicha técnica, es posible producir anticuerpos IgG, IgA, IgM e IgE útiles desde el punto de vista terapéutico. Para un resumen de esta tecnología para la producción de anticuerpos humanos, véase Lonberg y Huszar (1995, Int. Rev. Immunol. 13: 65-93). Para una exposición detallada de esta tecnología para la producción de anticuerpos humanos y anticuerpos monoclonales humanos y los protocolos para la producción de tales anticuerpos, véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses n.° 5.625.126; 5.633.425; 5.569.825; 5.661.016; y 5.545.806.
Los anticuerpos humanos que reconocen un epítopo seleccionado también pueden generarse mediante el uso de una técnica que se conoce como "selección guiada”. En este enfoque, se utiliza un anticuerpo monoclonal no humano seleccionado, por ejemplo, un anticuerpo de ratón, para guiar la selección de un anticuerpo completamente humano que reconoce el mismo epítopo. (Véase, por ejemplo, Jespers et ál., 1994, Biotechnology 12: 899-903.) Los anticuerpos humanos también pueden producirse mediante el uso de diversos métodos conocidos en la técnica, que incluyen bibliotecas de expresión en fagos (véase, por ejemplo, Hoogenboom y Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227: 381; Marks et ál., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581; Quan y Carter, 2002, "The rise of monoclonal antibodies as therapeutics," en Anti-IgE and Allergic Disease, Jardieu, P. M. y Fick Jr., R. B, eds., Marcel Dekker, Nueva York, N.Y., capítulo 20, págs. 427-469).
En otras realizaciones, el anticuerpo es una proteína de fusión de un anticuerpo o un fragmento de este funcionalmente activo. Por ejemplo, un anticuerpo puede fusionarse mediante un enlace covalente (por ejemplo, un enlace peptídico) ya sea en el extremo N o en el extremo C a una secuencia de aminoácidos de otra proteína (o una parte de esta, tal como al menos una parte de 10, 20 o 50 aminoácidos de la proteína) que no es el anticuerpo.
Los anticuerpos también incluyen análogos y derivados que se encuentran modificados, es decir, mediante el acoplamiento covalente de cualquier tipo de molécula, siempre que tal unión covalente permita que el anticuerpo conserve su inmunoespecificidad de unión al antígeno. Por ejemplo, pero no de modo limitante, los derivados y análogos de los anticuerpos incluyen aquellos que se modificaron adicionalmente, por ejemplo, mediante glicosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, derivación mediante grupos protectores/de bloqueo conocidos, escisión proteolítica, unión a una unidad de anticuerpo celular u otra proteína, etc. Puede llevarse a cabo cualquier cantidad de modificaciones químicas mediante técnicas conocidas, que incluyen, pero no se limitan a una escisión química específica, acetilación, formilación, síntesis metabólica en presencia de tunicamicina, etc. Adicionalmente, el análogo o derivado puede contener uno o más aminoácidos no naturales.
Los anticuerpos pueden tener modificaciones (por ejemplo, sustituciones, eliminaciones o adiciones) en residuos de aminoácidos que interactúan con los receptores Fc. En particular, los anticuerpos incluyen anticuerpos que tienen modificaciones en residuos de aminoácidos identificados por implicarse en la interacción entre el dominio anti-Fc y el receptor FcRn (véase, por ejemplo, la publicación internacional n.° WO 97/34631). Los anticuerpos inmunoespecíficos para un antígeno objetivo pueden obtenerse en el mercado o de otras fuentes o producirse mediante cualquier método conocido para el experto en la técnica, tal como, por ejemplo, técnicas de síntesis química o de expresión recombinante. La secuencia de nucleótidos que codifica anticuerpos inmunoespecíficos para un antígeno de célula cancerosa puede obtenerse, por ejemplo, de GenBank o una base de datos similar, la bibliografía de publicaciones o mediante clonación y secuenciación habitual.
Los ejemplos de anticuerpos disponibles para el tratamiento del cáncer incluyen, pero no se limitan a, anticuerpo monoclonal anti HER2 humanizado, HERCEPTIN® (trastuzumab; Genentech); RiTuXAN® (rituximab; Genentech) que es un anticuerpo monoclonal quimérico anti CD20 para el tratamiento de pacientes con linfoma no Hodgkin; OvaRex (AltaRex Corporation, MA) que es un anticuerpo murino para el tratamiento del cáncer de ovario; Panorex (Glaxo Wellcome, NC) que es un anticuerpo murino IgG2a para el tratamiento del cáncer colorrectal; Cetuximab Erbitux (Imclone Systems Inc., NY) que es un anticuerpo quimérico IgG anti-EGFR para el tratamiento de cánceres positivos para el factor de crecimiento epidérmico, tal como el cáncer de cuello y cabeza; Vitaxin (MedImmune, Inc., MD) que es un anticuerpo humanizado para el tratamiento del sarcoma; Campath I/H (Leukosite, MA) que es un anticuerpo humanizado IgG1 para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica (CLL); Smart MI95 (Protein Design Labs, Inc., CA) que es un anticuerpo humanizado IgG anti-CD33 para el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (AML); LymphoCide (Immunomedics, Inc., NJ) que es un anticuerpo humanizado IgG anti-CD22 para el tratamiento del linfoma no Hodgkin; Smart ID10 (Protein Design Labs, Inc., CA) que es un anticuerpo humanizado anti-HLA-DR para el tratamiento del linfoma no Hodgkin; Oncolym (Techniclone, Inc., CA) que es un anticuerpo murino radiomarcado anti-HLA-Dr10 para el tratamiento del linfoma no Hodgkin; Allomune (BioTransplant, CA) que es un mAb humanizado anti-CD2 para el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin o el linfoma no Hodgkin; Avastin (Genentech, Inc., CA) que es un anticuerpo humanizado anti-VEGFpara el tratamiento de los cánceres de pulmón y colorrectal; Epratuzamab (Immunomedics, Inc., NJ y Amgen, CA) que es un anticuerpo anti-CD22 para el tratamiento del linfoma no Hodgkin; y CEAcide (Immunomedics, NJ) que es un anticuerpo humanizado anti-CEA para el tratamiento del cáncer colorrectal.
Otros anticuerpos útiles en el tratamiento del cáncer incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos contra los siguientes antígenos (los ejemplos de cáncer se indican entre paréntesis): CA125 (de ovario), CA15-3 (carcinomas), CA19-9 (carcinomas), L6 (carcinomas), Lewis Y (carcinomas), Lewis X (carcinomas), alfa fetoproteína (carcinomas), CA 242 (colorrectal), fosfatasa alcalina placentaria (carcinomas), antígeno específico de la membrana prostática (próstata), fosfatasa de ácido prostático (próstata), factor de crecimiento epidérmico (carcinomas), MAGE-1 (carcinomas), MAGE-2 (carcinomas), MAGE-3 (carcinomas), MAGE-4 (carcinomas), receptor de anti transferrina (carcinomas), p97 (melanoma), MUC1-KLH (cáncer de mama), CEA (colorrectal), gp100 (melanoma), MART1 (melanoma), antígeno prostático específico (PSA) (próstata), receptor de IL-2 (linfomas y leucemia de linfocitos T), CD20 (linfoma no Hodgkin), CD52 (leucemia), CD33 (leucemia), CD22 (linfoma), gonadotropina coriónica humana (carcinoma), CD38 (mieloma múltiple), CD40 (linfoma), mucina (carcinomas), P21 (carcinomas), MPG (melanoma) y el producto oncogén Neu (carcinomas). Algunos anticuerpos útiles específicos incluyen, pero no se limitan a, BR96 mAb (Trail et ál., 1993, Science 261: 212-215), BR64 (Trail et ál., 1997, Cancer Research 57: 100-105), mAb contra el antígeno CD40, tal como S2C6 mAb (Francisco et ál., 2000, Cancer Res. 60: 3225-3231) y variantes quiméricas y humanizadas de estos, mAb contra el antígeno cD33; mAb contra el antígeno EphA2; mAb contra el antígeno CD70, tal como mAb 1F6 y mAb 2F2 y variantes quiméricas y humanizadas de estos y mAb contra el antígeno CD30, tal como AC10 (Bowen et ál., 1993, J. Immunol. 151: 5896-5906; Wahl et ál., 2002, Cancer Res. 62 (13): 3736-42) y variantes quiméricas y humanizadas de estos. Muchos otros anticuerpos que pueden internalizarse que se unen a los antígenos asociados a tumores pueden utilizarse y se han descrito (véase, por ejemplo, Franke et ál., 2000, Cancer Biother. Radiopharm. 15: 459 76; Murray, 2000, Semin. Oncol. 27:64 70; Breitling et ál., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, Nueva York, 1998).
El anticuerpo también puede ser un anticuerpo que se une a un antígeno que se encuentra presente en una célula objetivo o una población celular objetivo. Por ejemplo, los polipéptidos transmembrana y otros marcadores pueden expresarse específicamente en la superficie de uno o más tipos particulares de células objetivo (por ejemplo, una célula cancerosa) en comparación con una o más normales (por ejemplo, una célula no cancerosa). Frecuentemente, tales marcadores se expresan de forma más abundante en la superficie de las células objetivo o exhiben mayor inmunogenicidad, en comparación con aquellos en la superficie de las células normales. La identificación de tales polipéptidos de antígenos de superficie celular ha dado lugar a la capacidad de elegir específicamente células para su destrucción mediante tratamientos basados en anticuerpos. Por lo tanto, en algunas realizaciones, los anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos contra antígenos asociados a tumores (TAA, por su sigla en inglés). Tales antígenos asociados a tumores se conocen en la técnica y pueden prepararse para su uso en la generación de anticuerpos con métodos e información conocidos en la técnica.
Véanse también los documentos EP2552957, WO/2012/116453, WO/2012/032080. Véase también Zybody™, http://www.zyngenia.com/science-technology/technology-approach.asp. Véase también la tecnología de anticuerpos humanos únicamente de cadena pesada, http://www.crescendobiologics.com/. Ver también el documento WO2010001251, plataforma basada en levaduras para anticuerpos humanos basados en levaduras http://www.adimab.com/platform-overview, la plataforma mAbLogix™ http://www.dna.com/OurApproach/ComplementaryTechnologies/AntibodyDiscovery, la plataforma de descubrimiento monoclonal http://www.igenica.com/science.php, los documentos WO2009/157771, EP2560993, WO2013004842, WO2012166560.
Además de los anticuerpos, el resto de direccionamiento (T) de las composiciones de la presente incluye dentro de su alcance cualquier unidad de un (T) que se una o se asocie de forma reactiva o forme complejo con un receptor, antígeno u otro resto receptivo asociado a una población celular objetivo dada. (T) es una molécula que se une, forma complejos o reacciona con un resto de una población celular que se busca que sea objetivo. Por ejemplo, dentro de (T) se incluyen ligandos para receptores de la superficie celular derivados de diversas fuentes, que incluyen derivados de células humanas, ligandos derivados de bacterias y ligandos derivados de patógenos. Se conoce una amplia gama de restos de direccionamiento adecuados en la técnica. Ver, por ejemplo, WO2013117705.
Resto enlazador (L)
Las composiciones de la presente incluyen además opcionalmente un resto enlazador (L). (L) es un compuesto bifuncional que puede utilizarse para unir (D) con (T) para formar una composición conjugada, T-L-D. Dichos conjugados permiten la administración selectiva de fármacos a células objetivo (por ejemplo, células tumorales). (L) incluyen un sustituyente divalente, tales como un alquildiílo, un arildiílo, un heteroarildiílo, restos tales como: -(CR2)nO(CR2)n-, unidades de repetición de alquiloxi (por ejemplo, polietilenoxi, PEG, polimetilenoxi) y alquilamino (por ejemplo, polietilenamino, Jeffamine™); y éster diácido y amidas que incluyen succinato, succinamida, diglicolato, malonato y caproamida.
Estas composiciones de la presente pueden prepararse mediante el uso de una unidad (L) que tenga un sitio reactivo para unirse a (D) y (T). En algunas realizaciones, (L) tiene un sitio reactivo que tiene un grupo electrófilo que reacciona a un grupo nucleófilo que se encuentra presente en (T). Los grupos nucleófilos útiles en (T) incluyen, pero no se limitan a, grupos sulfhidrilo, hidroxilo y amino. El heteroátomo del grupo nucleófilo de (T) reacciona a un grupo electrófilo en (L) y forma un enlace covalente con (L). Los grupos electrófilos útiles incluyen, pero no se limitan a, grupos maleimida y haloacetamida. El grupo nucleófilo en (T) proporciona un sitio conveniente para el acoplamiento con (L).
En otra realización, (L) tiene un sitio reactivo que tiene un grupo nucleófilo que es reactivo con un grupo electrófilo presente en (T). Los grupos electrófilos útiles en (T) incluyen, pero no se limitan a, grupos aldehído y cetona carbonilo. El heteroátomo de un grupo nucleófilo de (L) puede reaccionar con un grupo electrófilo en (T) y formar un enlace covalente con (T). Los grupos nucleófilos útiles en (L) incluyen, pero no se limitan a, hidrazida, oxima, amino, hidrazina, tiosemicarbazona, hidrazina carboxilato y arilhidrazida. El grupo electrófilo en (T) proporciona un sitio conveniente para el acoplamiento con (L).
Los grupos funcionales de ácido carboxílico y los grupos funcionales de cloroformiato también son sitios reactivos útiles para (L) ya que pueden reaccionar con grupos amino de (D) para formar una unión amida. También es útil como sitio reactivo un grupo funcional carbonato en (L), tal como, pero no limitado a, carbonato de p-nitrofenilo, que puede reaccionar, por ejemplo, con un grupo amino de (D) para formar un enlace carbamato.
Se comprenderá que cualquier resto enlazador presentado en la técnica previa, y en particular aquellos presentados para su uso en el contexto de la administración de fármacos, puede utilizarse en la presente invención. Sin limitar el alcance de la declaración que antecede, en una realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2012/113847. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 8.288.352. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.028.697. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.006.652. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.094.849. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.053.394. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.122.368. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.387.578. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.547.667. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S.
5.622.929. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.708.146. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 6.468.522. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 6.103.236. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 6.638.509. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 6.214.345. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 6.759.509. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2007/103288. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2008/083312. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2003/068144. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2004/016801. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2009/134976. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2009/134952. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2009/134977. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2002/08180. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2004/043493. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2007/018431. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2003/026577. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2005/077090. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2005/082023. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2007/011968. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2007/038658. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2007/059404. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2006/110476. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2005/112919. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento WO 2008/103693. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 6.756.037. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 7.087.229. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 7.122.189. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 7.332.164. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.556.623. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S.
5.643.573. En otra realización, (L) comprende un resto enlazador divulgado en el documento U.S. 5.665.358.
En una realización preferida, (L) comprende un resto enlazador divulgado en la solicitud provisional estadounidense 61/921.242, presentada el 27 de diciembre de 2013. Por consiguiente, se proporcionan composiciones conjugadas de fórmula III:
(T)-(L1)-(D1) III
en donde (T) es un resto de direccionamiento capaz de enlazarse con una célula objetivo, en donde (D1) tiene la estructura (IV) siguiente:
Figure imgf000050_0001
en donde;
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6, amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , amino-heterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6, hidroxilo y tio o R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6 ;
Rb es alquilo C1-C6 y
Rc es Rd-C(CH3 )2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde el alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente seleccionado de alquilarilo C1-C4 hidroxilo y tio o
Rb y Rc tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
X está ausente;
R2a se selecciona de: alquildiílo C2-C6 , arildiílo, cicloalquildiílo C4-C7 , heteroarildiílo y heterociclildiílo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6, alquilo C1-C6, alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 ; y en donde (L1)-(T) tiene la siguiente estructura (V):
(AA)1-(AA)n-(L2)-(T) V
en donde el grupo -NH- unido a R2a en la fórmula IV forma un enlace peptídico (JPB) con (AA)1 en la fórmula V, en donde el JPB se puede escindir de manera enzimática, en donde cada AA es independientemente un aminoácido, en donde n es un número entero de 0 a 25, en donde (L2) es opcionalmente la parte restante del enlazador (L1), en donde (T) es el resto de direccionamiento y en donde (AA)1-(AA)n, tomados juntos comprenden una secuencia de aminoácidos capaz de facilitar la escisión enzimática del JPB.
También pueden utilizarse enlazadores (L) que comprenden un componente autodestructivo. Por ejemplo, véase la patente estadounidense n.° 6.214.345. Un ejemplo de un componente autodestructivo es p-aminobencilcarbamoílo (PABC).
Pueden utilizarse en la invención enlazadores disponibles en el mercado. Por ejemplo, pueden utilizarse el enlazador con capacidad de escisión 6-[3'(2-piridilditio)-propionamido]hexanoato de sulfosuccinimidilo disponible en el mercado (sulfo-LC-SPDP: Thermo Pierce, n.° de catálogo 21650) y el enlazador sin capacidad de escisión 4-[N-maleimidometil]ciclohexan-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC: Thermo Pierc, n.° de catálogo 22360), tal como se demuestra en el presente documento.
Véase también, el documento WO2012171020, el documento WO2010138719, la gama de enlazadores comercialmente disponibles, por ejemplo, de Concortis http://www.concortis.com/home. Véase también Kim et ál., Bioconjugate Chemistry, 21 (8): 1513-1519 agosto de 2010. Véase también el documento EP2326349. Véanse también los enlazadores de química clic sin cobre, Angew. Chem. Int. Ed., 2010, 49, p. 9422-9425, ChemBioChem, 2011, 12, p. 1309-1312, http://www.synaffix.com/technology/.
Resto de fármaco (D)
(D) es un compuesto de fórmula I, tal como se describe en el presente documento. El experto en la técnica reconocerá que los compuestos descritos en el presente documento se pueden modificar de manera adecuada para facilitar una reacción de conjugación con (L) o, si (L) no está presente, con (T) y formar un conjugado (T)-(L)-(D) o (T)-(D). Se puede utilizar cualquier punto de acoplamiento en (D). En una realización, el extremo C de (D) forma el punto de acoplamiento en un conjugado de (T)-(L)-(D). En otra realización, el extremo N de (D) forma el punto de acoplamiento en un conjugado de (T)-(L)-(D). En otra realización, la cadena lateral de (D) forma el punto de acoplamiento en un conjugado de (T)-(L)-(D).
Administración
A los efectos de la administración, los compuestos de la presente divulgación pueden administrarse como químicos en bruto o pueden formularse como composiciones farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación comprenden un compuesto descrito en el presente documento y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. El compuesto descrito en el presente documento se encuentra presente en la composición en una cantidad que es eficaz para tratar una enfermedad o afección de interés particular, por ejemplo, en una cantidad suficiente para tratar el crecimiento de células tumorales o el cáncer y preferentemente con una toxicidad aceptable para el paciente. El experto en la técnica puede determinar la actividad de los compuestos descritos en el presente documento, por ejemplo, tal como se describe en los ejemplos más adelante. El experto en la técnica puede determinar fácilmente las concentraciones y dosificaciones adecuadas.
La administración de los compuestos descritos en el presente documento o sus sales farmacéuticamente aceptables, en forma pura o en una composición farmacéutica apropiada, se puede llevar a cabo mediante cualquiera de los modos de administración de agentes aceptados para cumplir con utilidades similares. Las composiciones farmacéuticas de la divulgación pueden prepararse mediante la combinación de un compuesto descrito en el presente documento con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado y puede formularse en preparaciones en formas sólida, semisólida, líquida o gaseosa, tales como comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, ungüentos, soluciones, supositorios, inyecciones, inhalantes, geles, microesferas y aerosoles. Las vías de administración habituales para tales composiciones farmacéuticas incluyen, pero no se limitan a, oral, tópica, transdérmica, por inhalación, parenteral, sublingual, bucal, rectal, vaginal e intranasal. El término parenteral tal como se utiliza en el presente documento incluye inyecciones subcutáneas, inyecciones intravenosas, intramusculares e intraesternales o técnicas de infusión. Las composiciones farmacéuticas de la descripción se formulan de modo que permitan que los principios activos contenidos en estas se encuentren biodisponibles tras la administración de la composición a un paciente. Las composiciones que se administrarán a un sujeto o paciente toman la forma de una o más unidades de dosificación, en donde, por ejemplo, un comprimido puede ser una unidad de dosificación individual y un recipiente de un compuesto descrito en el presente documento en forma de aerosol puede contener múltiples unidades de dosificación. Los métodos reales de preparación de tales formas de dosificación son conocidos o serán evidentes, para los expertos en la técnica; por ejemplo, véase Remington: The Science and Practice of Pharmacy (22.a ed.) eds. Loyd V. Allen, Jr., et ál., Pharmaceutical Press, 2012. La composición a administrar, en cualquier caso, contendrá una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para el tratamiento de una enfermedad o afección de interés, de acuerdo con las indicaciones de la presente divulgación.
Una composición farmacéutica descrita en el presente documento puede encontrarse en forma de un sólido o un líquido. En un aspecto, el o los vehículos son particulados, de modo que las composiciones se encuentran, por ejemplo, en forma de comprimido o de polvo. Los vehículos pueden ser líquidos, en donde las composiciones son, por ejemplo, un jarabe para vía oral, un líquido inyectable o un aerosol, que es útil, por ejemplo, en la administración por inhalación.
Cuando se pretenden para administración oral, las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación normalmente tienen forma sólida o líquida, en donde las formas semisólidas, semilíquidas, en suspensión y en gel se incluyen dentro de las formas consideradas en el presente documento como sólidas o líquidas.
Como composición sólida para administración oral, las composiciones farmacéuticas pueden formularse como un polvo, gránulo, comprimido, píldora, cápsula, goma de mascar, oblea o formas similares. Tal composición sólida normalmente contendrá uno o más diluyentes inertes o vehículos comestibles. Además, uno o más de los siguientes pueden encontrarse presentes: aglutinantes tales como carboximetilcelulosa, etil celulosa, celulosa microcristalina, goma tragacanto o gelatina; excipientes tales como almidón, lactosa o dextrinas, agentes desintegrantes tales como ácido algínico, alginato de sodio, Primogel, almidón de maíz y similares; lubricantes tales como estearato de magnesio o Sterotex; deslizantes tales como dióxido de silicio coloidal; agentes edulcorantes tales como sacarosa o sacarina; un agente saborizante tal como menta, salicilato de metilo o saborizante a naranja y un agente colorante. Cuando la composición farmacéutica se encuentra en forma de cápsula, por ejemplo, una cápsula de gelatina puede contener, además de los materiales del tipo antes mencionado, un vehículo líquido tal como polietilenglicol o aceite. Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden encontrarse en forma de un líquido, por ejemplo, un elíxir, un jarabe, una solución, una emulsión o una suspensión. El líquido puede ser para administración oral o para administración mediante inyección, a modo de dos ejemplos. Cuando se destinan a la administración oral, las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento normalmente contienen, además de los presentes compuestos, uno o más de un agente edulcorante, conservantes, tintes/colorantes y potenciadores de sabor. En una composición destinada a la administración por inyección, se pueden incluir uno o más de un tensioactivo, conservante, agente humectante, agente de dispersión, agente de suspensión, amortiguador, estabilizante y agente isotónico.
Las composiciones farmacéuticas líquidas descritas en el presente documento, ya sea que sean soluciones, suspensiones u otra forma similar, pueden incluir uno o más de los siguientes adyuvantes: diluyentes estériles tales como agua para inyección, solución salina, preferentemente solución salina fisiológica, solución de Ringer, cloruro de sodio isotónico, aceites no volátiles tales como mono o diglicéridos sintéticos que pueden servir como disolvente o medio de suspensión, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o metilparabeno; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfato de sodio; agentes quelantes tales como ácido etilendiaminotetraacético; soluciones tamponadas tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro de sodio o dextrosa. Las preparaciones parenterales pueden incluirse en ampollas, jeringas descartables o viales de múltiples dosis hechos de vidrio o plástico. La solución salina fisiológica se prefiere como adyuvante. Una composición farmacéutica inyectable es preferentemente estéril.
Una composición farmacéutica líquida descrita en el presente documento destinada a la administración parenteral u oral debe contener una cantidad de un compuesto descrito en el presente documento de modo que se obtenga una dosificación adecuada.
Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden destinarse a la administración tópica, en cuyo caso el vehículo puede comprender de forma adecuada una base de solución, una emulsión, un ungüento o un gel. La base, por ejemplo, puede comprender uno o más de los siguientes: vaselina, lanolina, polietilenglicoles, cera de abeja, aceite mineral, diluyentes tales como agua y alcohol y emulsificantes y estabilizantes. Pueden encontrarse presentes agentes espesantes en una composición farmacéutica para la administración tópica. Si se destina a la administración transdérmica, la composición puede incluir un parche transdérmico o dispositivo de iontoforesis.
Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden destinarse a la administración rectal, por ejemplo, en forma de un supositorio, que se derretirá en el recto y liberará el fármaco. Las composiciones para administración rectal pueden contener una base oleaginosa como excipiente adecuado no irritante. Tales bases incluyen, pero no se limitan a, lanolina, manteca de cacao y polietilenglicol.
Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden incluir varios materiales, que modifican la forma física de una unidad de dosificación sólida o líquida. Por ejemplo, la composición puede incluir materiales que forman una cubierta protectora alrededor de los principios activos. Los materiales que forman la cubierta protectora normalmente son inertes y se pueden seleccionar, por ejemplo, de azúcar, laca y otros agentes de recubrimiento entéricos. De forma alternativa, los ingredientes activos pueden revestirse en una cápsula de gelatina.
Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden prepararse en unidades de dosificación que pueden administrarse como un aerosol. El término aerosol se utiliza para indicar una variedad de sistemas que varían de aquellos de naturaleza coloidal hasta sistemas que constan de empaques presurizados. La administración se puede dar mediante gas comprimido o licuado o mediante un sistema de bombas adecuado que suministra los principios activos. Los aerosoles de los compuestos descritos en el presente documento pueden administrarse en sistemas de fase simple, bifásicos o trifásicos para administrar el o los ingredientes activos. La administración del aerosol incluye el recipiente, los activadores, las válvulas, los recipientes secundarios y similares necesarios, los cuales, en conjunto, pueden formar un kit. El experto en la técnica, sin necesidad de experimentación innecesaria, puede determinar los aerosoles preferidos.
Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden prepararse mediante una metodología bien conocida en la técnica farmacéutica. Por ejemplo, una composición farmacéutica que se destina a la administración mediante inyección puede prepararse mediante la combinación de un compuesto descrito en el presente documento con agua destilada esterilizada de modo que se forme una solución. Puede agregarse un tensioactivo para facilitar la formación de una solución o suspensión homogénea. Los tensioactivos son compuestos que interactúan de forma no covalente con el compuesto descrito en el presente documento de modo que se facilite la disolución o suspensión homogénea del compuesto en el sistema de administración acuoso.
Los compuestos descritos en el presente documento o sus sales farmacéuticamente aceptables, se administran en una cantidad terapéuticamente eficaz, la cual variará según una diversidad de factores, que incluyen la actividad del compuesto específico empleado; la estabilidad metabólica y la duración de la acción del compuesto; la edad, el peso corporal, el estado de salud, el sexo y la dieta del paciente; el modo y el tiempo de administración; la tasa de excreción; la combinación del fármaco; la gravedad del trastorno o afección particular y el sujeto que se encuentre en tratamiento.
Los compuestos descritos en el presente documento o sus derivados farmacéuticamente aceptables, se pueden administrar de forma simultánea, antes o después de la administración de uno o más de otros agentes terapéuticos. Dicha terapia de combinación incluye la administración de una formulación de dosificación farmacéutica única que contiene un compuesto descrito en el presente documento y uno o más agentes activos adicionales, así como la administración del compuesto descrito en el presente documento y de cada agente activo en su propia formulación de dosificación farmacéutica por separado. Por ejemplo, un compuesto descrito en el presente documento y otro agente activo pueden administrarse al paciente juntos en una composición de dosificación oral única, tal como un comprimido o cápsula o cada agente se puede administrar en formulaciones de dosificación oral por separado. Cuando se utilizan formulaciones de dosificación por separado, los compuestos descritos en el presente documento y uno o más de los agentes activos adicionales pueden administrarse básicamente al mismo tiempo, es decir, de forma simultánea, o de forma gradual en momentos separados, es decir, secuencialmente; se entiende que el tratamiento de combinación incluye todas estas pautas.
Los ejemplos que siguen ilustran varios métodos para elaborar los compuestos descritos en el presente documento, es decir, compuestos de fórmula I y las fórmulas relacionadas. Se entenderá que el experto en la técnica puede ser capaz de elaborar estos compuestos mediante métodos similares o mediante la combinación de otros métodos conocidos por el experto en la técnica. También se entenderá que el experto en la técnica podría ser capaz de elaborar, de una forma similar a la descrita a continuación, otros compuestos de fórmula I, que no se ilustran específicamente a continuación, mediante el uso de componentes de partida adecuados y la modificación de los parámetros de la síntesis, según se necesite. En general, los componentes de partida pueden obtenerse de fuentes tales como Sigma Aldrich, Lancaster Synthesis, Inc., Maybridge, Matrix Scientific, t Ci y Fluorochem USA, etc. o sintetizarse de acuerdo con las fuentes conocidas para el experto en la técnica (véase, por ejemplo, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5a edición (Wiley, diciembre de 2000)) o prepararse tal como se divulga en el presente documento.
Los siguientes ejemplos se proporcionan con fines ilustrativos, no limitativos. Algunos ejemplos son productos intermedios sintéticos o ejemplos de referencia (por ejemplo, el ejemplo 1.21, el ejemplo 1.24, el ejemplo 1.25, etc).
Ejemplo 1: Procedimientos de síntesis generales: Esquema de síntesis A
Figure imgf000054_0001
Esquema de síntesis B
Figure imgf000055_0001
Esquema C
Figure imgf000056_0001
Figure imgf000056_0002
Procedimiento general 2
H2 NS02R
Figure imgf000056_0003
1. Procedimiento general 9
2. R6C02H Procedimiento general 6 ResH. u OMe
R"es H o alquilo C 1-C3
es un enlace simple o un enlace doble
Figure imgf000056_0004
Ejemplo 1.1: Procedimiento General 1 - Instalación de trifluoroacetamida.
A una suspensión en agitación de amina en 1,4-dioxano se le agregó anhídrido trifluoroacético (1,1 equivalentes). La mezcla de reacción pasó de ser una suspensión a una solución y nuevamente a una suspensión. El avance de la reacción se controló mediante TLC y/o HPLC-MS para su finalización. Una vez que el material de partida se consumió totalmente, se diluyó la reacción con hexanos o dietil éter, se filtró con un embudo Buchner y se secaron los sólidos resultantes a presión reducida para proporcionar la trifluoroacetamida pura.
Ejemplo 1.2: Procedimiento general 2:
Método A: Formación de N-acil sulfonamida mediada por DCC/DMAP
A una solución en agitación del ácido en diclorometano se le agregó una solución de la sulfonamida (1,3 equivalentes, en diclorometano, W,W-dimetilformamida o una mezcla se estos, si corresponde). Luego, se agregó diciclohexilcarbodiimida (1,2 equivalentes) y posteriormente W,W-dimetilaminopiridina (1,2 equivalentes). Se controló el transcurso de la reacción mediante HPLC-MS (normalmente 16 horas) y podrían precipitarse los excesos de subproductos mediante la adición de dietiléter. Se eliminaron los sólidos mediante filtración y lavado con 1:1 de dietiléter/diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice u opcionalmente HPLC preparativa para proporcionar la W-acil sulfonamida deseada.
Método B: Formación de N-acil sulfonamida mediada por EDCI/DMAP o DCC
A una solución en agitación del ácido en diclorometano, acetato de etilo o una mezcla de estos, se le agregó una solución de la sulfonamida (1,3 equivalentes, en diclorometano, acetato de etilo o W,W-dimetilformamida o una mezcla se estos, si corresponde). Luego, se agregó diciclohexilcarbodiimida o EDCI (1,2 equivalentes) y posteriormente W,W-dimetilaminopiridina (1,2 equivalentes). Se controló el transcurso de la reacción mediante HPLC-MS (normalmente 16 horas) y podrían precipitarse los excesos de subproductos mediante la adición de dietiléter. Se eliminaron los sólidos mediante filtración y lavado con 1:1 de dietiléter/diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se concentraron y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice u opcionalmente HPLC preparativa para proporcionar la W-acil sulfonamida deseada.
Ejemplo 1.3: Procedimiento general 3 alternativo - Formación de N-acilo sulfonamida mediada por AcBt Este procedimiento se adaptó a partir de uno descrito en ARKIVOC 2004 (xii), 14-22.
Ejemplo 1.4: Procedimiento General 4 - Saponificación de trifluoroacetamida.
A una solución de la construcción que contiene trifluoroacetamida en 1,4-dioxano o metanol se le agregó hidróxido de litio (10 equivalentes) y agua (10 % v/v). Se dejó en agitación la reacción a temperatura ambiente o se calentó opcionalmente a 50 °C. Se controló el transcurso de la reacción mediante HPLC-MS. Tras la finalización, se eliminaron los volátiles a presión reducida, se ajustó el pH de la capa acuosa, si fue necesario y se lavó sucesivamente con diclorometano o acetato de etilo. Las fases orgánicas se agruparon, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron. El producto de reacción se utilizó "tal como estaba” o se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, según fuese necesario.
Ejemplo 1.4.1: Procedimiento General 4.1 - Saponificación de éster/amida.
A una solución de la construcción que contenía éster/amida en 1,4-dioxano o metanol se le agregó hidróxido de litio (10 equivalentes) y agua (10 % v/v). Se dejó en agitación la reacción a temperatura ambiente o se calentó opcionalmente a 50 °C. Se controló el transcurso de la reacción mediante HPLC-MS. Tras la finalización, se eliminaron los volátiles a presión reducida, se ajustó el pH de la capa acuosa, si fue necesario y se lavó sucesivamente con diclorometano o acetato de etilo. Las fases orgánicas se agruparon, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. El producto de reacción se utilizó "tal como estaba” o se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, según fuese necesario.
Ejemplo 1.5: Procedimiento General 5 - Formación de enlaces peptídicos mediada por DIC/Cu (II)
A una solución en agitación de ácido carboxílico en una cantidad mínima de W,W-dimetilformamida al 30 % en diclorometano se le agregó 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (0,95 equivalente), 1 -hidroxi-7-azabenzotriazol (1,0 equivalente), la amina (0,33 equivalentes) y cloruro de cobre (II) anhidro (1,0 equivalente) en secuencia con una breve pausa entre cada reactivo adicional. Se continuó la agitación a temperatura ambiente y se controló el avance de la reacción mediante HPLC-MS. Tras la finalización, se eliminaron los volátiles a presión reducida y se purificó el material residual mediante cromatografía en gel de sílice o HPLC de fase inversa para proporcionar la amida deseada con la pureza adecuada.
Ejemplo 1.6: Procedimiento General 6 - Formación de enlaces peptídicos mediada por HATU.
A una solución en agitación del ácido carboxílico en una cantidad mínima de diclorometano o W,W-dimetilformamida o mezcla de estos, a 0 °C se le agregó HATU (1,05-1,2 equivalentes) y W,W-diisopropilamina (2-4 equivalentes) o 2,4,6-colidina (2-4 equivalentes). Se continuó la agitación durante un breve período de inducción (5-20 minutos), en cuyo momento se cargó la reacción con una solución de la amina en diclorometano. Se dejó que la reacción se calentara a temperatura ambiente y se controló su evolución mediante HPLC-MS. Tras la finalización, se eliminaron los volátiles a presión reducida y se purificó el material residual mediante cromatografía en gel de sílice o HPLC de fase inversa para proporcionar amida con una pureza adecuada.
Ejemplo 1.7: Procedimiento General 7 - Eliminación del grupo Fmoc.
La construcción peptídica protegida por Fmoc se disolvió en piperidina al 20 % en W,W-dimetilformamida. Se controló el transcurso de la reacción mediante HPLC-MS. Cuando finalizó, se eliminaron todos los volátiles a presión reducida para proporcionar un residuo que se purificó mediante cromatografía en gel de sílice o se utilizó directamente en la siguiente etapa.
Ejemplo 1.8: Procedimiento General 8 - W-acilación de aminas mediante el uso de ésteres activados con NHS.
A una solución de la amina en una cantidad mínima de W,W-dimetilformamida se le agregó el correspondiente éster que contenía W-hidroxisuccinimida (1,5 equivalentes) y opcionalmente diisopropilamina (2-4 equivalentes). El progreso de la reacción se controló mediante HPLC-MS (habitualmente ~16 horas) y en ese momento se retiraron todos los volátiles a presión reducida. Luego se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice o por HPLC de fase inversa para proporcionar el producto amida deseado.
Ejemplo 1.9: Procedimiento General 9 - Eliminación del grupo Boc.
A una solución de la construcción protegida con Boc en diclorometano se le agregó ácido trifluoroacético al 10 % v/v. Se controló el transcurso de la reacción mediante HPLC-MS. Después de que terminó, se retiraron los volátiles a presión reducida. Se purificó el material residual mediante HPLC de fase inversa, cromatografía en gel de sílice o precipitación a partir de una mezcla fría de metanol/diclorometano/dietiléter.
Ejemplo 1.9.1: Procedimiento General 9.1 - Eliminación del éster de t-Bu y grupo Boc.
A una solución de la amina protegida con Boc o éster de t-Bu en diclorometano se le agregó ácido trifluoroacético al 10-20% v/v. Se controló el transcurso de la reacción mediante HPLC-MS. Después de que terminó, se retiraron los volátiles a presión reducida. Se purificó el material residual mediante HPLC de fase inversa, cromatografía en gel de sílice o precipitación a partir de una mezcla fría de metanol/diclorometano/dietiléter.
Ejemplo 1.10: Fmoc-Val-Cit-OH: Ácido (S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanoico, Fmoc-Valina-Citrulina-OH, Fmoc-VC-OH.
Figure imgf000058_0001
Se preparó el compuesto del título de acuerdo con Dubowchik et ál., Bioconjugate Chem., 2002, 13, 855-869.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 12,56 (s, 1H), 8,21 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,76 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 7,49 - 7,39 (m, 3H), 7,38 - 7,23 (m, 2H), 5,96 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 5,40 (s, 2H), 4,34 - 4,09 (m, 4H), 3,93 (dd, J = 9,1, 7,1 Hz, 1H), 3,39 (q, J = 7,0 Hz, 3H), 2,96 (q, J = 6,5 Hz, 2H), 1,97 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 1,86 - 1,63 (m, 1H), 1,57 (dtd, J = 13,9, 9,0, 5,4 Hz, 1H), 1,41 (dhept, J = 13,2, 6,9 Hz, 2H), 0,88 (dd, J = 13,3, 6,7 Hz, 6H). ). m/z calculado de C26H32N4O6497,23. hallado [M+H]+ 497,19.
Ejemplo 1.11: cido (S)-2-((S)-2-((ferc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanoico, Boc-Valina-Citrulina-OH, Boc-VC-OH.
Figure imgf000059_0001
El compuesto del título se sintetizó de acuerdo con el documento US2010/0233190 A1, con los datos espectroscópicos correspondientes.
Ejemplo 1.12: MC-NHS: 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ilo
Figure imgf000059_0002
A una solución en agitación de ácido 6-aminocaproico (10,0 g, 76,2 mmol, 1,0 eq) en ácido acético (75 ml), se le agregó anhídrido maleico (7,85 g, 80,0 mmol, 1,05 eq). Los sólidos tardaron unos pocos minutos en disolverse, después de aprox. 5 min, comenzaron a aparecer sólidos de color blanco. Después de una hora, la suspensión se espesó a una torta de color blanco. Este material se retiró en un embudo vitrificado y se lavó con tolueno y se secó al vacío con calor para eliminar todo rastro de ácido acético.
El polvo intermedio se absorbió en tolueno (250 ml), se agregó trietilamina (21,3 ml, 152 mmol, 2,0 eq) y la mezcla se calentó a reflujo con una trampa Dean-Stark. Después de 5 horas de reflujo, se enfrió la mezcla y se decantó la capa clara de tolueno del resto del residuo pegajoso en el matraz. Se eliminó el tolueno al vacío para proporcionar una sal de trietilamina de 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoato. Se volvió a disolver la sal en tolueno, y se le agregó una pequeña cantidad de ácido acético, entonces se concentró. Luego, la mezcla se absorbió en bicarbonato de sodio saturado al 50 % y se agregó HCl 1 M para ajustar el pH a 3, lo que formó un precipitado lechoso. Este se extrajo tres veces con EtOAc, los elementos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vacío para proporcionar 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoato puro (3,08 g, 19 %).
A una solución en agitación de 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoato (3,08 g, 14,6 mmol, 1,0 eq) y N-hidroxisuccinimida (1,76 g, 15,3 mmol, 1,05 eq) en EtOAc (30 ml) a 0 °C, se le agregó diciclohexilcarbodiimida (3,16 g, 15,3 mmol, 1,05 eq). Luego se dejó que la reacción se calentara a ta. Después de 20 h, se filtró la reacción y se lavó con EtOAc y se concentró el filtrado. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida para proporcionar el compuesto del título (2,16 g, 48 %) en forma de un aceite transparente que se solidificó lentamente hasta un sólido ceroso de color blanco. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) ó 6,71 (s, 2H), 3,56 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,86 (s, 4H), 2,63 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,80 (p, J = 7,4 Hz, 2H), 1,73 - 1,57 (m, 2H), 1,50 - 1,35 (m, 2H). m/z calculado para C14H16N2O6 = 308,10. Hallado [M+H]+ = 309,13. Rf = 0,28 (EtOAc al 50 %/Hex).
Ejemplo 1.13: MT-OH: Ácido 3-(2-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)etoxi)etoxi)etoxi)propanoico
Figure imgf000059_0003
Se preparó el compuesto del titulo de acuerdo con Warnecke, A., Kratz, F. Bioconjugate Chemistry 2003, 14, 377­ 387.
RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) ó 6,74 (s, 2H), 3,87 - 3,72 (m, 4H), 3,72 - 3,62 (m, 10H), 2,73 - 2,64 (m, 2H). m/z calculado para C13H29NO7 = 301,12. Hallado [M+H]+ = 302,14.
empo . : - : - - - - , - oxo- , - ro- -prro- - e ox e ox e ox propanoa o e , -dioxopirrolidin-1 -ilo.
Figure imgf000060_0001
Se trato MT-OH (2,6 g, 8,6 mmol, 1,0 eq) con diciclohexilcarbodiimida (1,87 g, 9,06 mmol, 1,05 eq) y N-hidroxisuccinimida (1,04 g, 6,06 mmol, 1,05 eq) en 30 ml de 5:1 de EtOAc/dioxano a ta. Después de 36 horas, la mezcla se filtró, se lavó con EtOAc y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida para proporcionar el compuesto del título (309 mg, 9,0 %) en forma de un aceite transparente junto con el material de partida (1,31 g, recuperado al 50 %).
RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 66,72 (s, 2H), 3,87 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,74 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,70 - 3,58 (m, 10H), 2,93 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,86 (s, 4H), 1,32 - 1,19 (m, 2H). m/z calculado para C17H22N2O9 = 398,13. Hallado [M+H]+ = 399,15, [M+Na]+ = 421,14. Rf = 0,59 (10 % (AcOH al 5 %/MeOH)/Hex al 10 %/CH2Cb).
Ejemplo 1.15: MT-VC-OH: Ácido (14R,17R)-1-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-14-isopropil-12,15-dioxo-17-(3-ureidopropil)-3,6,9-trioxa-13,16-diazaoctadecan-18-oico.
Figure imgf000060_0002
Método A
A una solución de ácido (R)-2-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanoico (Boc-VC-OH, 0,600 g, 1,602 mmol) en diclorometano (2,5 ml) se le agregó ácido trifluoroacético (2,5 ml). El transcurso de la reacción se monitoreó mediante HPLC para verificar el consumo del material de partida y luego se concentró a presión reducida, se volvió a suspender en tolueno, se concentró a presión reducida y se dejó al alto vacío durante 4 horas. Una parte del producto (H-VC-OH. TFA, 0,5 g, 1,287 mmol) se suspendió en 1,4-dioxano (0,5 ml) y se agregó MT-NHS (0,512 g, 1,287 mmol) en una sola porción, seguido por diisopropiletilamina (0,90 ml, 4 equiv) y la reacción se dejó en agitación durante la noche. La reacción se llevó a cabo hasta sequedad y el aceite resultante se disolvió en metanol antes de ser purificado mediante HPLC preparativa. La liofilización de las fracciones deseadas proporcionó el compuesto del título en forma de un polvo de color blanco (0,351 g).
Método B
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento establecido en el documento WO 2015095953 A1.
Ejemplo 1.16: (S)-2-amino-3-fenil-N-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonil)propanamida (Compuesto 1)
Figure imgf000060_0003
Se preparó a partir de Boc-fenilalanina y 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilfenil)acetamida, de acuerdo con los procedimientos generales 2 y 9. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 611,42 (s, 1H), 7,84 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,73 - 7,64 (m, 1H), 7,69 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,24 - 7,14 (m, 3H), 7,13 - 7,06 (m, 2H), 3,65 - 3,60 (m, 1H), 3,06 (dd, J = 14,2, 5,1 Hz, 1H), 2,91 (dd, J = 14,1, 7,1 Hz, 1H). m/z calculado de C17H16F3N3O4S = 415,08, hallado [M+H]+ = 416,5.
Ejemplo 1.17: (S)-2-amino-3-fenil-N-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)bencil)sulfonil)propanamida (Compuesto 2)
Figure imgf000061_0001
Se preparó a partir de Boc-fenilalanina y 2,2,2-trifluoro-W-(4-sulfamoilfenil)acetamida (Ejemplo 1.39), de acuerdo con los procedimientos generales 3 y 9. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6 ) ó 7,76 - 7,71 (m, 2H), 7,58 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,36 - 7,21 (m, 8 H), 4,34 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 8,2, 4,6 Hz, 1H), 3,21 - 3,09 (m, 1H), 2,89 (dd, J = 14,3, 8,3 Hz, 1H). m/z calculado de C18H18F3N3O4S = 429,10, hallado [M+H]+ = 430,7.
Ejemplo 1.18: (S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-ilcarbamato de tere-butilo (Compuesto 3).
Figure imgf000061_0002
Se sintetizó el compuesto del título a partir de Boc-Val-Dip-Dap-OH (0,08 g) disponible en el mercado y 2,2,2­ trifluoro-W-(4-sulfamoilfenil)acetamida mediante el uso del procedimiento general 2. m/z calculado de C37H58F3N5O10S = 821,39, hallado [M+H]+ = 823,04.
Ejemplo 1.19: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5Sj-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonamido)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 4).
Figure imgf000061_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del compuesto 3 y N,N-dimetil valina, mediante el uso de los procedimientos generales 9 y 6. m/z calculado de C39H63F3N6O9S = 848,43, hallado [M+H]+ 850,11.
Ejemplo 1.20: (S)-W-((3R,4S,5Sj-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(4-aminofenilsulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 5)
Figure imgf000061_0004
Se preparó el compuesto del título a partir del compuesto 4, mediante el uso del procedimiento general 4. m/z calculado de C37H64N6O8S = 752,45, hallado [M+H]+ 754,16.
Ejemplo 1.21: (S)-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)metilsulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1 -oxobutan-2-ilcarbamato de tere-butilo (Compuesto 6).
Figure imgf000062_0001
Se preparó el compuesto del título a partir de Boc-Val-Dil-Dap-OH disponible en el mercado, mediante el procedimiento general 2. m/z calculado de C38H60F3N5O10S = 835,40, hallado [M+H]+ = 836,7.
Ejemplo 1.22: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)metilsulfonamido)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 7).
Figure imgf000062_0002
El compuesto del titulo se preparó a partir del compuesto 6 , mediante el procedimiento general 6. m/z calculado de C40H65F3N6O9S = 862,45, hallado [M+H]+ = 863,2.
Ejemplo 1.23: (S)-W-((3R,4S,5Sj-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)metilsulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 8)
Figure imgf000062_0003
El compuesto del título se preparó a partir del compuesto 7, mediante el procedimiento general 4. m/z calculado de C38H66N6O8S = 766,47, hallado [M-C7H8O2S+H]+ = 599,0 (fragmentación de metida quinona y pérdida de 4-aminobencilsulfonato).
Ejemplo 1.24: (S)-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((S)-1 -oxo-3-fenil-1 -(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-ilcarbamato de tere-butilo (Compuesto 9).
Figure imgf000062_0004
Se sintetizó el compuesto del título a partir de Boc-Val-Dip-Dap-OH disponible en el mercado (0,07 g) y el Compuesto 1, mediante el procedimiento general 6. m/z calculado de C46H67F3N6O11S = 968,45, hallado [M+Na]+ = 992,1.
Ejemplo 1.25: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5SJ-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((S)-1-oxo-3-fenil-1 -(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonamido)propan-2-
ilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida (Compuesto 10).
Figure imgf000063_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del compuesto 9 (110 mg) y N,N-dimetil valina, mediante el uso de los procedimientos generales 9 y 6. m/z calculado de C48H72F3N7O10S = 995,50, hallado [M+H]+ 997,3.
Ejemplo 1.26: (S)-W-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((S)-1-(4-aminofenilsulfonamido)-1-oxo-3-fenilpropan-2-ilamino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamida (Compuesto 11).
Figure imgf000063_0002
Se preparó el compuesto del título a partir del compuesto 10 (100 mg), mediante el uso del procedimiento general 4. m/z calculado de C46H73N7O9S = 899,52, hallado [M+H]+ 901,3.
Ejemplo 1.27: (S)-1-(((3R,4S,5SJ-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((S)-1-oxo-3-fenil-1-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilmetilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-ilcarbamato de tere-butilo (Compuesto 12).
Figure imgf000063_0003
Se preparó el compuesto del título a partir de Boc-Val-Dil-Dap-OH disponible en el mercado y el compuesto 2, mediante el procedimiento general 6. m/z calculado de C47H69F3N6O11S =982,47, hallado [M+Na]+ = 1006,2.
Ejemplo 1.28: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5SJ-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((S)-1 -oxo-3-fenil-1-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilmetilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida (Compuesto 13).
Figure imgf000063_0004
v
El compuesto del título se preparó a partir del compuesto 12, mediante el procedimiento general 6. m/z calculado de C49H74F3N7O10S =1009,52 hallado [M+H]+ = 1011,0.
Ejemplo 1.29: (S)-W-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((S)-1-(4-aminofenilmetilsulfonamido)-1-oxo-3-fenilpropan-2-ilamino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamida (Compuesto 14).
Figure imgf000064_0001
El compuesto se preparó a partir del compuesto 13, mediante el procedimiento general 4. m/z calculado de C47H75N7O9S = 913,53 hallado [M-C7HsO2S+Na]+ = 768,1 (fragmentación de metida quinona y pérdida de 4-aminobencilsulfonato)
Ejemplo 1.30: Procedimiento general 10 - Hidrogenación
A una solución de la muestra que se reduciría en metanol, etanol, ácido acético, acetato de etilo, una mezcla de estos u otro disolvente adecuado, se le agregó un agitador magnético. El matraz que contenía la solución en agitación se equipó con un adaptador de línea de gas de dos vías y se evacuó a presión reducida y se cargó con nitrógeno. Este proceso se repitió 3 veces. Se agregó Pd al 10 % /C ya sea como un sólido o una suspensión, habitualmente paladio al 10 % molar en relación con el reactivo. El recipiente se evacuó nuevamente a presión reducida y se cargó con un globo que contenía hidrógeno. La reacción se monitoreó para verificar su finalización mediante HPLC-MS y, al finalizar, se filtró a través de una almohadilla de celite en un embudo de filtrado. EL filtrado se concentró a presión reducida y se utilizó como estaba o se purificó por medio de cromatografía de HPLC preparativa o gel de sílice.
Ejemplo 1.31: 3-(2-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)etoxi)etoxi)etoxi)propanoato de perfluorofenilo.
A una solución en agitación de ácido 3-(2-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)etoxi)etoxi)etoxi)propanoico (Ejemplo 1.13) (2,28 g, 7,57 mmol) en diclorometano (100 ml) se le agregó clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (1,59 g, 1,1 equiv) y pentafluorofenol (1,53 g, 1,1 equiv). Se dejó en agitación la reacción durante la noche, en cuyo momento la HPLC-MS indicó que ya no quedaba material de partida (Rt = 5,30 min, 490,4 m/z, gradiente completo). La mezcla de reacción en bruto se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (~ 20 ml) y la mezcla se transfirió a un embudo de separación. La fase orgánica se lavó con salmuera (~ 50 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para dar un aceite de color ligeramente amarillo. El aceite se disolvió en una cantidad mínima de diclorometano y se cargó en una columna de gel de sílice de 100 g para la purificación (Isolera, EtOAc al 10-100% en hexanos en 12 volúmenes de columna). Las fracciones que contenían el material deseado se agruparon y se concentraron a presión reducida para proporcionar un aceite incoloro (3,32 g, 94 %). Ejemplo 1.32: 4-((S)-2-(benciloxicarbonilamino)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoato de (3R,4S,5S)-íerc-butilo, Cbz-Val-Dil-OtBu.
Figure imgf000064_0002
Se preparó el compuesto del título a partir de H-Dil-OtBu • HCl y Cbz-Val-OH disponible en el mercado, mediante el procedimiento general 6.
RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) ó 7,40 - 7,30 (m, 5H), 5,54 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,73 (s, 1H), 4,54 (dd, J = 9,2, 5,6 Hz, 1H), 3,91 (s, 1H), 3,37 (s, 3H), 2,98 (s, 3H), 2,47 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 2,33 (dd, J = 15,6, 9,1 Hz, 1H), 2,07 - 1,96 (m, 1H), 1,84 - 1,60 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,45 - 1,32 (m, 2H), 1,04 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,98 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,94 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,86 (t, J = 7,4 Hz, 3H). m/z calculado de C27H44N2O6 = 492,32 hallado [M+H]+ = 515,8 [M+Na]+. Rf = 0,78 (EtOAc al 50 %/Hex).
Ejemplo 1.33: cido 3R,4 ,5 -4- -2- benciloxi carbonil amino -W,3-dimetilbutanamido -3-metoxi-5-metilheptanoico, Cbz-Val-Dil-OH.
Figure imgf000065_0001
Se preparo el compuesto del titulo a partir de Cbz-Val-Dil-OtBu (Ejemplo 1.32), mediante el uso del procedimiento general 9. m/z calculado de C23H36N2O6 = 436,26 hallado [M+Na]+ 459,81. RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 67,47 -7,22 (m, 5H), 5,21 - 4,99 (m, 2H), 4,83 - 4,54 (m, 1H), 4,39 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,96 (s, 1H), 3,43 - 3,33 (s, 3H), 3,07 (s, 3H), 2,63 (dd, J = 15,9, 2,9 Hz, 1H), 2,38 (dd, J = 15,8, 9,3 Hz, 1H), 2,15 - 1,95 (m, 1H), 1,83 (s, 1H), 1,52 -1,30 (m, 1H), 1,07 - 0,91 (m, 9H), 0,85 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
Ejemplo 1.34: 4-((S)-2-amino-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoato de (3R,4S,5S)-íerc-butilo, H-Val-Dil-OtBu.
Figure imgf000065_0002
El compuesto del título se generó a partir de Cbz-Val-Dil-OtBu (438 mg, 0,889 mmol) de acuerdo con el procedimiento general 10, para obtener el producto deseado (288 mg, 90 %) en forma de una película fina. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 64,76 (s, 1H), 3,92 (s, 1H), 3,50 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,38 (s, 3H), 2,92 (s, 3H), 2,48 (dd, J = 15,7, 3,1 Hz, 1H), 2,35 (dd, J = 15,6, 8,8 Hz, 1H), 1,93 (dq, J = 10,9, 6,5 Hz, 1H), 1,82 - 1,60 (m, 1H), 1,51 - 1,46 (m, 11H), 1,05 - 0,85 (m, 12H). m/z calculado de C19H38N2O4 = 358,28 hallado [M+Na]+ = 381,8.
Ejemplo 1.35: 4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoato de (3R,4S,5S)-íerc-butilo, Dov-Val-Dil-OtBu.
Figure imgf000065_0003
Se preparó el compuesto del título a partir de H-Val-Dil-OtBu y W,W-dimetilvalina, mediante el uso del procedimiento general 6.
RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 67,09 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,79 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,00 - 3,81 (m, 1H), 3,75 (s, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,26 (s, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,74 (s, 6H), 2,49 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 2,38 - 2,20 (m, 2H), 2,13 - 2,05 (m, 1H), 1,81 - 1,62 (m, 1H), 1,51 - 1,43 (m, 10H), 1,33 (s, 1H), 1,18 - 0,89 (m, 15H), 0,83 (t, J = 7,2 Hz, 3H). m/z calculado de C26H51N3O5 = 485,38 hallado [M+Na]+ = 508,9. Rf = 0,36 (MeOH al 50/o/CH2Ch).
Ejemplo 1.36: Ácido 4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoaico de (3R,4S,5S)-íerc-butilo, Dov-Val-Dil-OH.
Figure imgf000065_0004
Se preparó el compuesto del título a partir de Dov-Val-Dil-OtBu, mediante el uso del procedimiento general 9.
RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 64,98 (t, J = 10,0 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 9,3, 3,1 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 3,61 - 3,53 (m, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,24 (s, 3H), 3,13 (s, 3H), 2,93 (s, 3H), 2,77 (dd, J = 17,0, 9,8 Hz, 1H), 2,66 (dd, J = 17,3, 1,9 Hz, 1H), 2,31 - 2,26 (m, 1H), 2,07 (dt, J = 10,8, 5,5 Hz, 1H), 1,97 - 1,85 (m, 1H), 1,29 - 1,24 (m, 1H), 1,13 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,08 - 1,01 (m, 6H), 1,01 - 0,95 (m, 6H), 0,90 - 0,81 (m, 1H), 0,77 (t, J = 6,9 Hz, 3H) m/z calculado de C22H43N3O5 = 429,32, hallado [M+H]+ = 430,8.
. , , , , ,
,6,9-trioxo-2-oxa-4,7,10-triazatetradecan-14-oato de íerc-butilo, Fmoc-(Me)Val-Val-Dil-OtBu.
Figure imgf000066_0001
El compuesto del título se preparó a partir de Fmoc-(Me)-(L)-Valina-OH y H-Val-Dil-OtBu, mediante el procedimiento general 6. m/z calculado de C40H59N3O7 = 693,44, hallado [M+H]+ 694,98.
Ejemplo 1.38: Ácido (5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-butil)-1-(9H-fluoren-9-il)-5,8-diisopropil-12-metoxi-4,10-dimetil-3,6,9-trioxo-2-oxa-4,7,10-triazatetradecan-14-oico, Fmoc-(Me)Val-Val-Dil-OH.
Figure imgf000066_0002
Se preparó el compuesto del título a partir de Fmoc-(Me)Val-Val-Dil-OtBu, mediante el uso del procedimiento general 9. m/z calculado de C36H51N3O7 = 637,37, hallado [M+H]+ 638,91.
Ejemplo 1.39: 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilfenil)acetamida.
Figure imgf000066_0003
A una suspensión en agitación de sulfanilamida (1,72 g, 10 mmol) en dioxano (20 ml) se le agregó anhídrido trifluoroacético (1,69 ml, 1,2 eq). Los sólidos se disolvieron lentamente para crear una solución uniforme y después de un breve período de tiempo, se formó un nuevo conjunto de sólidos. La reacción se diluyó con éter dietílico (100 ml) y la suspensión resultante se filtró en un embudo Büchner. Los sólidos se recogieron y se secaron a presión reducida para proporcionar el compuesto del título con pureza adecuada para su uso (2,60 g, 97 %).
Ejemplo 1.40: (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-3-((S)-pirrolidin-2-il)-W-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonil)propanamida.
Figure imgf000066_0004
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-Dap-OH disponible en el mercado y 2,2,2-trifluoro-W-(4-sulfamoifenil)acetamida, mediante los procedimientos generales 2 y 9.
RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) ó 8,06 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,92 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 3,69 (dd, J = 6,6, 3,0 Hz, 1H), 3,48 (s, 3H), 3,51 - 3,39 (m, 1H), 3,33 - 3,14 (m, 2H), 2,64 (p, J = 7,0 Hz, 1H), 2,06 - 1,68 (m, 4H), 1,19 (d, J = 7,1 Hz, 3H). m/z calculado de C17H22F3N3O5S = 437,12, hallado [M+H]+ = 438,6.
Ejemplo 1.41: ((S)-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)phenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de bencilo
Se preparó el compuesto del título a partir de Cbz-Val-Dil-OH y el producto del ejemplo 1.40, de acuerdo con el procedimiento general 2. m/z calculado de C40H56F3N5O10S = 855,37, hallado [M+H]+ 857,07.
Ejemplo 1.42: (S)-2-amino-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida.
Figure imgf000067_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.41, de acuerdo con el procedimiento general 10. m/z calculado de C32H50F3N5O8S = 721,33, hallado [M+H]+ 722,70.
Ejemplo 1.43: (3R,4S,5S)-4-((S)-2-((R)-1-isopropilpiperidin-2-carboxamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoato de tere-butilo.
Figure imgf000067_0002
El compuesto del título se preparó a partir de ácido (R)-1-isopropilpiperidin-2-carboxílico y H-Val-Dil-OtBu, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C28H53N3O5 = 511,40, hallado [M+H]+ 512,77.
Ejemplo 1.44: Ácido (3R,4S,5S)-4-((S)-2-((R)-1-isopropilpiperidin-2-carboxamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoico.
Figure imgf000067_0003
Se preparó el compuesto del titulo a partir de rere-butilo, el producto del ejemplo 1.43, de acuerdo con el procedimiento general 9. m/z calculado de C24H45N3O5 = 455,34, hallado [M+H]+ 456,70.
Ejemplo 1.45: (R)-1 -isopropil-W-((S)-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)piperidin-2-carboxamida (Compuesto 15).
Figure imgf000067_0004
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.40 y el producto del ejemplo 1.44, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C41H65F3N6O9S = 874,45, hallado [M+H]+ 876,0.
oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)-1-isopropilpiperidin-2-carboxamida (Compuesto 16).
Figure imgf000068_0001
El compuesto del título se preparó a partir del compuesto 15, de acuerdo con el procedimiento general 4. m/z calculado de C39H66N6O8S = 778,47, hallado [M+H]+ 780,06.
Ejemplo 1.47: (1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-2-metil-1-oxopropan-2-il)carbamato de tere-butilo
Figure imgf000068_0002
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.42 y ácido a-(Boc-amino)isobutírico disponible en el mercado, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C41H65F3N6O11S = 906,44, hallado [M+H]+ 907,80.
Ejemplo 1.48: 1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-2-metil-1-oxopropan-2-il)carbamato de tere-butilo.
Figure imgf000068_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.47, de acuerdo con el procedimiento general 4. m/z calculado de C39H66N6O10S = 810,46, hallado [M+H]+ 811,84.
Ejemplo 1.49: (S)-2-(2-amino-2-metilpropanamido)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 17).
Figure imgf000068_0004
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.48, de acuerdo con el procedimiento general 9. m/z calculado de C34H58N6O8S = 710,40, hallado [M+H]+ 711,77.
Ejemplo 1.50: (6S,9S,12S,13R)-12-((S)-sec-butil)-9-isopropil-13-metoxi-2,2,5,11-tetrametil-4,7,10-trioxo-6-(2-fenilpropan-2-il)-3-oxa-5,8,11-triazapentadecan-15-oato de tere-butilo.
El compuesto del título se preparó a partir de ácido (S)-2-((terc-butox¡carbon¡l)(met¡l)am¡no)-3-met¡l-3-fen¡lbutano¡co (preparado de acuerdo con el documento WO 2015095953 A1) y H-Val-D¡l-OtBu, med¡ante el uso del proced¡m¡ento general 6. m/z calculado de C36H61N3O7 = 647,45, hallado [M+H]+ 649,12.
Ejemplo 1.51: Ácido (3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)-3-fenilbutanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoico.
Figure imgf000069_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.50, de acuerdo con el proced¡m¡ento general 9. m/z calculado de C27H45N3O5 = 491,34, hallado [M+H]+ 492,73.
Ejemplo 1.52: (1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-2-metil-1-oxopropan-2-il)carbamato de tere-butilo (Compuesto 18).
Figure imgf000069_0002
Se preparó el compuesto del título a part¡r del producto del ejemplo 1.51 y el producto del ejemplo 1.42, de acuerdo con el proced¡m¡ento general 6. m/z calculado de C44H65F3N6O9S = 910,45, hallado [M+H]+ 911,91.
Ejemplo 1.53 (S)-W-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)-3-fenilbutanamido)butanamida (Compuesto 19).
Figure imgf000069_0003
Se preparó el compuesto del título a part¡r del producto del ejemplo 1.52, med¡ante el uso del proced¡m¡ento general 4. m/z calculado de C42H66N6O8S = 814,47, hallado [M+H]+ 816,08.
Ejemplo 1.54: ((S)-(-1 -(((S)-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)(metil)carbamato de tere-butilo
Figure imgf000069_0004
Se preparó el compuesto del título a part¡r del producto del ejemplo 1.42 y Boc-(Me)-(E)-Val¡na-OH d¡spon¡ble en el mercado, med¡ante el uso del proced¡m¡ento general 6. m/z calculado de C43H69F3N6O11S = 934,47, hallado [M+H]+ 935,87.
Ejemplo 1.55: ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)(metil)carbamato de tere-butilo.
Figure imgf000070_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.54, mediante el uso del procedimiento general 4. m/z calculado de C41H70N6O10S = 838,49, hallado [M+H]+ 839,85.
Ejemplo 1.56: (S)-W-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida (Compuesto 20).
Figure imgf000070_0002
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.54, mediante el uso del procedimiento general 9. m/z calculado de C36H62N6O8S = 738,43, hallado [M+H]+ 739,84.
Ejemplo 1.57: 2,2,2-Trifluoro-N-(4-(sulfamoilmetil)fenil)acetamida.
Figure imgf000070_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el documento WO 2015095953 A1.
Ejemplo 1.58: 2,2,2-Trifluoro-N-(4-sulfamoilbencil)acetamida.
Figure imgf000070_0004
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el documento WO 2015095953 A1.
Ejemplo 1.59: (S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo.
Figure imgf000070_0005
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-dolaprolina-OH disponible en el mercado y 2,2,2-trifluoro-W-(4-sulfamoilbencil)acetamida, mediante el uso del procedimiento general 2. m/z calculado de C23H32F3N3O7S = 551,19, hallado [M+Na]+ 574,92.
empo . : , - -me ox- -me - - -prro n- - - - - , , -trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonil)propanamida.
Figure imgf000071_0001
Se preparo el compuesto del titulo a partir del producto del ejemplo 1.59, mediante el uso del procedimiento general 9. m/z calculado de C18H24F3N3O5S = 451,14, hallado [M+H]+ 452,71.
Ejemplo 1.61: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 21).
Figure imgf000071_0002
Se preparó el compuesto del título a partir de Dov-Val-Dil-OH (Ejemplo 1.36) y el producto del ejemplo 1.60, mediante el uso del procedimiento general 6. m/z calculado de C40H65F3N6O9S = 862,45, hallado [M+H]+ 863,80. Ejemplo 1.62: (S)-W-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-(aminometil)fenil)sulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 22).
Figure imgf000071_0003
El compuesto del título se preparó a partir del compuesto 51, de acuerdo con el procedimiento general 4. m/z calculado de C38H66N6O8S = 766,47, hallado [M+H]+ 767,85.
Ejemplo 1.63: (S)-(1-oxo-3-fenil-1-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propan-2-il)carbamato de tere-butilo (Compuesto 63)
Figure imgf000071_0004
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-(L)-Phe-OH y 2,2,2-trifluoro-W-(4-sulfamoilbencil)acetamida (Ejemplo 1.58), mediante el uso del procedimiento general 2. m/z calculado de C23H26F3N3O6S = 529,15, hallado [M+Na]+ 552,52.
Ejemplo 1.64: -2-amino-3- enil-N- 4- 2,2,2-tri luoroacetamido metil enil sul onil propanamida.
Figure imgf000072_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.63, mediante el uso del procedimiento general 9. C18H18F3N3O4S m/z calculado de = 429,10, hallado [M+H]+ 430,51. RMN 1H (400 MHz, metanol-ck) ó 8,05 - 7,98 (m, 2H), 7,56 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,33 - 7,22 (m, 3H), 7,09 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 4,59 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 4,06 (t, J = 6 , 8 Hz, 1H), 3,15 (dd, J = 14,1, 6,3 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 14,2, 7,4 Hz, 1H).
Ejemplo 1.65: (S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-1-oxo-3-fenil-1-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propan-2-il)amino)propil)pirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo.
Figure imgf000072_0002
Se preparó el compuesto del título a partir de Boc-dolaprolina-OH disponible en el mercado y el producto del ejemplo 1.64, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C32H41F3N4O8S = 698,26, hallado [M+Na]+ 721,62.
Ejemplo 1.66: (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-W-((S)-1-oxo-3-fenil-1-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propan-2-il)-3-((S)-pirrolidin-2-il)propanamida.
Figure imgf000072_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.65, mediante el uso del procedimiento general 9. m/z calculado de C27H33F3N4O6S = 598,21, hallado [M+H]+ 599,62.
Ejemplo 1.67: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-1-oxo-3-fenil-1 -((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propan-2-il)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida (Compuesto 23).
Figure imgf000072_0004
Se preparó el compuesto del título a partir de Dov-Val-Dil-OH (Ejemplo 1.36) y el producto del ejemplo 1.66, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C49H74F3N7O10S = 1009,52, hallado [M+H]+ 1011,04.
fenilp ropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 24).
Figure imgf000073_0001
Se preparo el compuesto del titulo a partir del producto del ejemplo 1.67, de acuerdo con el procedimiento general 4. m/z calculado de C47H75N7O9S = 913,53, hallado [M+H]+ 915,09.
Ejemplo 1.69: 2,2,2-Trifluoro-N-(4-(sulfamoilmetil)bencil)acetamida.
Figure imgf000073_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el documento WO 2015095953 A1.
Ejemplo 1.70: (S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo.
Figure imgf000073_0003
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-dolaprolina-OH disponible en el marcado y 2,2,2-trifluoro-W-(4-(sulfamoilmetil)bencil)acetamida (Ejemplo 1.69), mediante el uso del procedimiento general 2. m/z calculado de C24H34F3N3O7S = 565,21, hallado [M+Na]+ 588,75.
Ejemplo 1.71: (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-3-((S)-pirrolidin-2-il)-N-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)bencil)sulfonil)propanamida.
Figure imgf000073_0004
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.69, de acuerdo con el procedimiento general 9. m/z calculado de C19H26F3N3O5S = 465,15, hallado [M+H]+ 466,77.
em po . : - - - - me amno - -me u anam o - - , , - -me ox- - - - , - -metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida (Compuesto 25).
Figure imgf000074_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.36 y el producto del ejemplo 1.71, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C41H67F3N6O9S = 876,46, hallado [M+H]+ 878,22.
Ejemplo 1.73: (S)-W-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((4-(aminometil)fenil)metil)sulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamida (Compuesto 26).
Figure imgf000074_0002
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.72, de acuerdo con el procedimiento general 4. m/z calculado de C39H68N6O8S = 780,48, hallado [M+H]+ 782,20.
Ejemplo 1.74: (S)-(1-oxo-3-fenil-1-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propan-2-il)carbamato de tere-butilo.
Figure imgf000074_0003
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-(L)-Phe-OH y 2,2,2-trifluoro-W-(4-(sulfamoilmetil)bencil)acetamida (Ejemplo 1.69), de acuerdo con el procedimiento general 2. m/z calculado de C24H28F3N3O6S = 543,17, hallado [M+Na]+ 566,78.
Ejemplo 1.75: (S)-2-amino-3-fenil-N-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)bencil)sulfonil)propanamida.
Figure imgf000074_0004
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.74, mediante el uso del procedimiento general 9. m/z calculado de C19H20F3N3O4S = 443,11, hallado [M+H]+ 444,55. RMN 1H (400 MHz, metanol^) ó 7,46 - 7,27 (m, 9H), 4,51 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 3,84 (dd, J = 9,3, 4,3 Hz, 1H), 3,29 (dd, 1H), 2,95 (dd, J = 14,5, 9,4 Hz, 1H). Ejemplo 1.76: (S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-1-oxo-3-fenil-1-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propan-2-il)amino)propil)pirrolidin-1-carboxilato.
Figure imgf000074_0005
Se preparó el compuesto del título a partir de Boc-dolaprolina-OH disponible en el mercado y el producto del ejemplo 1.75, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C33H43F3N4O8S = 712,28, hallado [M+Na]+ 735,65.
Ejemplo 1.77: (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-N-((S)-1-oxo-3-fenil-1-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propan-2-il)-3-((S)-pirrolidin-2-il)propanamida.
Figure imgf000075_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.76, mediante el uso del procedimiento general 9. m/z calculado de C28H35F3N4O6S = 612,22, hallado [M+H]+ 613,58.
Ejemplo 1.78: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-1-oxo-3-fenil-1-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propan-2-il)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 27).
Figure imgf000075_0002
Se preparó el compuesto del título a partir de Dov-Val-Dil-OH (Ejemplo 1.36) y el producto del ejemplo 1.77, mediante el uso de los procedimientos generales 9 y 6. m/z calculado de C50H76F3N7O10S = 1023,53, hallado [M+H]+ 1024,94.
Ejemplo 1.79: (S)-W-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(((4-(aminometil)fenil)metil)sulfonamido)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 28)
Figure imgf000075_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.78, mediante el uso del procedimiento general 4. m/z calculado de C48H77N7O9S = 927,55, hallado [M+H]+ 928,92.
Ejemplo 1.80: 2,2,2-trifluoro-N-(1-(4-sulfamoilfenil)ciclopropil)acetamida.
Figure imgf000075_0004
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el documento WO 2015095953 A1.
. , - - - - - - - - - - - - - , , -trifluoroacetamido)ciclopropil)fenilsulfonil)propanamida.
Figure imgf000076_0001
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-Dap-OH disponible en el mercado y 2,2,2-trifluoro-W-(1-(4-sulfamo¡fen¡l)cicloprop¡l)acetam¡da (Ejemplo 1.80), mediante los procedimientos generales 2 y 9. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 12,19 (s, 1H), 10,32 (s, 1H), 7,86 (d, J = 8 , 6 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8 , 6 Hz, 2H), 7,31 (s, 1H), 3,58 (dd, J = 5,7, 3,7 Hz, 1H), 3,28 (s, 3H), 3,11 (t, J = 6 , 8 Hz, 2H), 2,59 (dq, J = 13,0, 6,5 Hz, 1H), 1,90 - 1,68 (m, 3H), 1,63 -1,56 (m, 1H), 1,44 - 1,35 (m, 4H), 1,04 (d, J = 7,0 Hz, 3H). C20H26F3N3O5S m/z calculado de = 477,15 hallado [M+H]+ = 478,6.
Ejemplo 1.82: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(4-(1-(2,2,2-trifluoroacetamido)ciclopropil)fenilsulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 29).
Figure imgf000076_0002
Se preparó el compuesto del título a partir de Dov-Val-Dil-OH (Ejemplo 1.36) y el producto del ejemplo 1.81, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C42H67F3N6O9S = 888,46, hallado [M+H]+ = 889,3.
Ejemplo 1.83: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(4-(1-aminociclopropil)fenilsulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 30)
Figure imgf000076_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.82, de acuerdo con el procedimiento general 4. m/z calculado de C40H68N6O8S = 792,48, hallado [M+Na]+ = 815,9.
Ejemplo 1.84: (S)-2-amino-3-fenil-N-(4-(1-(2,2,2-trifluoroacetamido)ciclopropil)fenilsulfonil)propanamida.
Figure imgf000076_0004
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-Phe-OH y 2,2,2-trifluoro-W-(1-(4-sulfamoifenil)ciclopropil)acetamida (Ejemplo 1.80), mediante los procedimientos generales 2 y 9. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 10,30 (s, 1H), 7,87 (b, 3H), 7,79 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,23 - 7,16 (m, 3H), 7,08 (dd, J = 6,6, 2,9 Hz, 2H), 3,78 (s, 1H), 3,06 (dd, J = 14,2, 5,3 Hz, 1H), 2,93 (dd, J = 14,1, 7,2 Hz, 1H), 1,36 (dd, J = 6,6, 3,0 Hz, 4H). C20H20F3N3O4S m/z calculado de = 455,11 hallado [M+H]+ = 456,6.
Ejemplo 1.85: (S)-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((S)-1 -oxo-3-fenil-1 -(4-(1 -(2,2,2-trifluoroacetamido)ciclopropil)fenilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-ilcarbamato de ferc-butilo.
Figure imgf000077_0001
Se preparó el compuesto del título a partir de Boc-Val-Dil-Dap-OH disponible en el mercado y el producto del ejemplo 1.84, mediante el procedimiento general 2. m/z calculado de C49H71F3N6O11S =1008,49, hallado [M+Na]+ = 1031,9.
Ejemplo 1.86: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((S)-1 -oxo-3-fenil-1 -(4-(1 -(2,2,2-trifluoroacetamido)ciclopropil)fenilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 31).
Figure imgf000077_0002
El compuesto del título se preparó a partir del producto del ejemplo 1.85 y W,W-dimetilvalina, mediante los procedimientos generales 9 y 6. m/z calculado de C51H76F3N7O10S =1035,53, hallado [M+H]+ = 1036,5.
Ejemplo 1.87: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((S)-1-(4-(1-aminociclopropil)fenilsulfonamido)-1-oxo-3-fenilpropan-2-ilamino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 32).
Figure imgf000077_0003
Se preparó el compuesto del titulo a partir del producto del ejemplo 1.86, de acuerdo con el procedimiento general 4. m/z calculado de C49H77N7O9S =939,55, hallado [M+H]+ = 940,5.
Ejemplo 1.88: -2- 1R,2R -1-metoxi-2-metil-3-oxo-3- enilmetil sul onamido propil pirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo.
Figure imgf000078_0001
El compuesto del título se preparó a partir de Boc-dolaprolina-OH disponible en el marcado y bencilsulfonamida, mediante el uso del procedimiento general 2. m/z calculado de C21H32N2O6S = 440,20, hallado [M+H]+ 463,71.
Ejemplo 1.89: (2R,3R)-N-(bencilsulfonil)-3-metoxi-2-metil-3-((S)-pirrolidin-2-il)propanamida.
Figure imgf000078_0002
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.88, mediante el uso del procedimiento general 9. m/z calculado de C16H24N2O4S = 340,15, hallado [M+H]+ 341,75.
Ejemplo 1.90: ((S)-1 -(((S)-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((fenilmetil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1 -oxobutan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)(metil)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metilo.
Figure imgf000078_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.89 y el producto del ejemplo 1.38, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C52H73N5O10S = 959,51, hallado [M+H]+ 961,15.
Ejemplo 1.91: (S)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((fenilmetil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida (Compuesto 33).
Figure imgf000078_0004
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.90, de acuerdo con el procedimiento general 7. m/z calculado de C37H63N5O8S = 737,44, hallado [M+H]+ 739,07.
Ejemplo 1.92: (S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-3-((4-(metoxicarbonil)fenil)sulfonamido)-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo.
Figure imgf000078_0005
El compuesto del título se preparó a partir de 4-sulfamoilbenzoato de metilo y Boc-Dap-OH, de acuerdo con el procedimiento general 2. m/z calculado de C22H32N2O8S = 484,19. Hallado, [M+Na]+ = 507,6.
Ejemplo 1.93: 4-(W-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)sulfamoil)benzoato de metilo (Compuesto 34).
Figure imgf000079_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.92 y Dov-Val-Dil-OH (Ejemplo 1.36), de acuerdo con los procedimientos generales 9 y 6. m/z calculado de C22H32N2O8S = 795,45. hallado [M+Na]+ = 818,8.
Ejemplo 1.94: Ácido (S,£)-4-((S)-2-((íerc-butoxicarbonil)amino)-W,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilhex-2-enoico (Compuesto 83)
Figure imgf000079_0002
El compuesto del título se preparó a partir de (S,E)-4-((S)-2-((ferc-butoxicarbonil)amino)-W,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilhex-2-enoato de etilo, de acuerdo con el procedimiento general 4. m/z calculado de C20H36N2O5 = 384,26, hallado [M+H]+ = 407,71. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 66,80 (dd, J = 9,6, 1,8 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,16 (t, J = 10,0 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,03 (s, 3H), 1,95 (d, J = 1,5 Hz, 3H), 1,44 (s, 9H), 0,99 (s, 9H), 0,92 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,88 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 1.95: (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-3-((S)-pirrolidin-2-ml)propanoato de metilo.
Figure imgf000079_0003
A una solución en agitación de Boc-Dap-OH (0,635 g, 2,21 mmol) en diclorometano/metanol (95:5, v/v, 10 ml) se le agregó TMS-diazometano (2 M en hexanos, 1,35 ml, 1,2 equiv). La reacción se monitoreó y en el momento en el que se detuvo la efervescencia, el análisis mediante HPLC-MS indicó la conversión completa del éster. EL TMS-diazometano restante se inactivó mediante la adición de ácido acético y al desaparecer todo el color amarillo, la reacción se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en diclorometano y se retiró el grupo protector de Boc, de acuerdo con el procedimiento general 9.1. El material se utilizó "tal cual”, sin purificación adicional. m/z calculado de C10H19NO3 = 201,14, hallado [M+H]+ = 202,56. RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 63,88 (dd, J = 6,0, 3,6 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,73 - 3,62 (m, 1H), 3,52 (s, 3H), 3,32 - 3,26 (m, 2H), 2,88 - 2,74 (m, 1H), 2,15 - 1,87 (m, 4H), 1,29 (d, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 1.96: (2R,3R)-3-((S)-1-((S,E)-4-((S)-2-((íerc-butoxicarbonil)amino)-W,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilhex-2-enoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoato de metilo.
Figure imgf000079_0004
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.94 y el producto del ejemplo 1.95, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C30H53N3O7 = 567,39, hallado [M+Na]+ = 590,85. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 65,53 (dd, J = 9,0, 1,8 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,02 (dd, J = 10,6, 8,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,11 - 4,01 (m, 1H), 3,92 (dd, J = 8,2, 2,8 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,51 - 3,42 (m, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,34 - 3,23 (m, 1H), 2,89 (s, 3H), 2,54 - 2,43 (m, 1H), 1,86 (s, 3H), 1,95 - 1,77 (m, 3H), 1,70 - 1,52 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,21 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,92 (s, 9H), 0,88 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,78 (d, J = 6,6 Hz, 3H).
Ejemplo 1.97: Ácido (2R,3R)-3-((S)-1-((S,£)-4-((S)-2-((íerc-butoxicarbonil)amino)-W,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilhex-2-enoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoico.
Figure imgf000080_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.96, de acuerdo con el procedimiento general 4,1. m/z calculado de C29H51N3O7 = 553,37, hallado [M+Na]+ = 576,81. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) ó 5,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,37 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,05 (s, 1H), 4,42 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,23 - 4,17 (m, 1H), 4,02 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1H), 3,53 - 3,46 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,39 - 3,27 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 2,51 - 2,36 (m, 1H), 2,08 - 1,77 (m, 4H), 1,90 (s, 3H), 1,73 - 1,60 (m, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,25 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,95 (s, 9H), 0,91 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 1.98: ((S)-1-(((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1 -il)-2,5-dimetil-6-oxohex-4-en-3-il)(metil)amino)-3,3-dimetil-1-oxobutan-2-il)carbamato de ferc-butilo.
Figure imgf000080_0002
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.97 y el producto del ejemplo 1.39, de acuerdo con el procedimiento general 2. m/z calculado de C37H56F3N5O9S = 803,38, hallado [M+Na]+ = 826,69. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) ó 9,66 (s, 1H), 8,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,62 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,54 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,10 - 4,98 (m, 1H), 4,45 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,01 (dd, J = 7,2, 2,4 Hz, 1H), 3,94 - 3,83 (m, 1H), 3,48 - 3,43 (m, 1H), 3,41 (s, 3H), 3,35 - 3,22 (m, 1H), 2,95 (s, 3H), 2,66 - 2,55 (m, 1H), 1,87 (s, 3H), 1,91 - 1,75 (m, 2H), 1,67 - 1,53 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,14 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,96 (s, 9H), 0,89 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplo 1.99: (S)-2-amino-W-((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1 -il)-2,5-dimetil-6-oxohex-4-en-3-il)-W,3,3-trimetilbutanamida.
Figure imgf000080_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.98, de acuerdo con el procedimiento general 9.1. m/z calculado de C32H48F3N5O7S = 703,32, hallado [M+H]+ = 704,68. RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) ó 8,06 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,90 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 5,71 (dd, J = 9,5, 1,9 Hz, 1H), 5,10 - 5,00 (m, 2H), 4,30 (s, 1H), 3,85 (dd, J = 8.1, 2,7 Hz, 1H), 3,79 - 3,71 (m, 1H), 3,55 - 3,48 (m, 1H), 3,36 (s, 3H), 3,40 - 3,28 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,52 - 2,39 (m, 1H), 2,09 - 1,96 (m, 1H), 1,91 (s, 3H), 1,95 - 1,83 (m, 1H), 1,79 - 1,69 (m, 1H), 1,69 - 1,51 (m, 1H), 1,14 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,10 (s, 9H), 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-2,5-dimetil-6-oxohex-4-en-3-il)-N,3,3-trimetilbutanamida (Compuesto 35).
Figure imgf000081_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.99 y W,W-d¡met¡lval¡na, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C39H61F3N6O8S = 830,42, hallado [M+H]+ = 831,75.
Ejemplo 1.101: (S)-W-((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-2,5-dimetil-6-oxohex-4-en-3-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3,3-trimetilbutanamida (Compuesto 36).
Figure imgf000081_0002
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.100, de acuerdo con el procedimiento general 4.1. m/z calculado de C37H62N6O7S = 734,44, hallado [M+H]+ = 735,72.
Ejemplo 1.102: (S)-1-isopropil-N-((S)-1-(((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1 -il)-2,5-dimetil-6-oxohex-4-en-3-il)(metil)amino)-3,3-dimetil-1-oxobutan-2-il)piperidin-2-carboxamida (Compuesto 37).
Figure imgf000081_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.99 y ácido (R)-1-¡soprop¡lp¡per¡d¡n-2-carboxílico, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C41H63F3N6O8S = 856,44, hallado [M+H]+ = 857,80.
Ejemplo 1.103 (S)-W-((S)-1-(((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-2,5-dimetil-6-oxohex-4-en-3-il)(metil)amino)-3,3-dimetil-1 -oxobutan-2-il)-1-isopropilpiperidin-2-carboxamida (Compuesto 38).
Figure imgf000081_0004
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.102, de acuerdo con el procedimiento general 4.1. m/z calculado de C39H64N6O7S = 760,46, hallado [M+H]+ = 761,77.
Ejemplo 1.104: Ácido (S,E)-3-(1-(íerc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-il)-2-metilacrílico.
El compuesto del título se sintetizó a partir de (S,E)-2-(3-etox¡-2-met¡l-3-oxoprop-1-en-1-¡l)p¡rrol¡d¡n-1-carbox¡lato de tere-butilo (preparado de acuerdo con J. Org. Chem., 2003, 6 8 (16), págs. 6459-6462) de acuerdo con el proced¡m¡ento general 4.1. m/z calculado de C13H21NO4 = 255,15, hallado [M-Boc+H]+ = 156,5, [M-Boc+MeCN]+ = 197,5.
Ejemplo 1.105: (S,E)-2-(2-netil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)prop-1-en-1-il)pirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo.
Figure imgf000082_0001
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.104 y el producto del ejemplo 1.39, de acuerdo con el procedimiento general 2. m/z calculado de C21H26F3N3O6S = 505,15, hallado [M-Boc+H]+ = 406,5, [M+Na]+ = 528,5.
Ejemplo 1.106: (S,E)-2-metil-3-(pirrolidin-2-il)-W-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonil)acrilamida.
Figure imgf000082_0002
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.105, de acuerdo con el procedimiento general 9.1. m/z calculado de C16H18F3N3O4S = 405,10, hallado [M+H]+ = 406,5.
Ejemplo 1.107: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-1-((S)-2-((E)-2-metil-3-oxo-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)prop-1-en-1-il)pirrolidin-1-il)-1-oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida (Compuesto 39).
Figure imgf000082_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del producto del ejemplo 1.106 y el producto del ejemplo 1.36, de acuerdo con el procedimiento general 6. m/z calculado de C38H59F3N6O8S = 816,41, hallado [M+H]+ = 817,7.
Ejemplo 2: Síntesis de conjugados de enlazador y fármaco de la presente invención.
Figure imgf000082_0004
Esquema 1
El Esquema 1 ilustra una realización particular de un esquema general para la síntesis de un complejo D-L. En realizaciones adicionales de la invención, el grupo protector (PG1) se elimina de la toxina (o fármaco) antes de la adición del aminoácido (por ejemplo, AA1-AA2). En determinadas realizaciones de la invención, el anclaje incluye un grupo funcional que puede formar una unión covalente con el Objetivo. En otras realizaciones de la invención, el anclaje comprende un extensor.
Ejemplo 2.1: (S)-W-(4-(W-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)sulfamoil)fenil)-2-((S)--(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-14-isopropil-12-oxo-3,6,9-trioxa-13-azapentadecan-15-amido)-5-ureidopentanamida.
Figure imgf000083_0001
Se sintetizó el compuesto del título utilizando el procedimiento general 5 a partir de MT-VC-OH y el Compuesto 5 y se purificó mediante cromatografía HPLC preparativa. m/z calculado de C61H101N11O17S = 1291,71, hallado [M+H]+ 1292,89.
Ejemplo 2.2: (S)-W-(4-((W-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)sulfamoil)metil)fenil)-2-((S)-1-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-14-isopropil-12-oxo-3,6,9-trioxa-13-azapentadecan-15-amido)-5-ureidopentanamida.
Figure imgf000083_0002
Se sintetizó el compuesto del título utilizando el procedimiento general 5 a partir de MT-VC-OH y el compuesto 8 y se purificó mediante cromatografía HPLC preparativa. m/z calculado de C61H101N11O17S = 1305,73, hallado [M+H]+ = 1306,9.
Ejemplo 2.3: (S)-W-(4-(W-(((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanil)sulfamoil)fenil)-2-((S)-1 -(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-14-isopropil-12-oxo-3,6,9-trioxa-13-azapentadecan-15-amido)-5-ureidopentanamida.
Figure imgf000083_0003
El compuesto del titulo se preparó a partir MT-VC-OH y del compuesto 11, de acuerdo con el procedimiento general 5. m/z calculado de C70H110N12O18S = 1438,8 amu; hallado [M+H]+ = 1440,2, [(M+2H)/2]2+ = 720,5.
Ejemplo 2.4: (S)-W-(4-((W-(((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanil)sulfamoil)metil)fenil)-2-((S)-1-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-14-isopropil-12-oxo-3,6,9-trioxa-13-azapentadecan-15-amido)-5-ureidopentanamida.
Figure imgf000084_0001
Se preparó a partir del compuesto 14 y MT-VC-OH, de acuerdo con el procedimiento general 5 y se purificó mediante HPLC preparativa. m/z calculado de C71H112N12O18S = 1452,80 amu; hallado [M+H]+ = 1453,7.
Ejemplo 2.5: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-(3-(2-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)etoxi)etoxi)etoxi)propanamido)fenil)sulfonamido)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida.
Figure imgf000084_0002
Se preparó el compuesto del título a partir del compuesto 5 y MT-OH, mediante el uso del procedimiento general 6. m/z calculado de C50H81N7O14S = 1035,56, hallado [M+H]+ 1037,97.
Ejemplo 2.6: (S)-W-(1-(4-(W-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)sulfamoil)fenil)ciclopropil)-2-((S)-1-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-14-isopropil-12-oxo-3,6,9-trioxa-13-azapentadecan-15-amido)-5-ureidopentanamida.
Figure imgf000084_0003
Se preparó el compuesto del título a partir del compuesto 30, Boc-VC-OH y MT-NHS, mediante el uso del procedimiento general 8. m/z calculado de C64H105N11O17S = 1331,74, hallado [M+H]+ = 1332,8.
Ejemplo 2.7: ((S)-1 -(((S)-1 -((1 -(4-(N-(((2R,3R)-3-((S)-1 -((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(di metilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanil)sulfamoil)fenil)ciclopropil)amino)-1-oxo-5-ureidopentan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de tere-butilo.
Figure imgf000084_0004
Se preparó el compuesto del título a partir del compuesto 32 y Boc-VC-OH, mediante el uso del procedimiento general 5. m/z calculado de C65H105N11O14S =1295,76, hallado [M+H]+ = 1297,2.
Ejemplo 2.8: (S)-W-(1-(4-(W-(((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanil)sulfamoil)fenil)ciclopropil)-2-((S)-1-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-14-isopropil-12-oxo-3,6,9-trioxa-13-azapentadecan-15-amido)-5-ureidopentanamida.
Figure imgf000085_0001
El compuesto del título se preparó a partir del producto del ejemplo 2.7 y MT-NHS, mediante los procedimientos generales 9 y 8. m/z calculado de C73H114N12O18S = 1478,81, hallado [M+H]+ = 1479,7.
Ejemplo 2.9: ((S)-1 -(((S)-1 -(((3R,4S,5R)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((fenilmetil)sulfonamido)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1 -oxobutan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)(metil)carbamato de 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)bencilo.
Figure imgf000085_0002
El compuesto del título se preparó a partir del compuesto 33 y de MC-VC-PABC-OPnp disponible en el mercado. m/z calculado de C66H101N11O16S = 1335,71, hallado [M+H]+ 1337,28.
Los expertos en la técnica entenderán que es posible llevar a cabo las conversiones químicas que se muestran en los esquemas anteriores con modificaciones de uno o más parámetros. A modo de ejemplo, disolventes no nucleófilos alternativos pueden ser adecuados para la química, tales como THF, DMF, tolueno, etc. Las temperaturas de reacción pueden variar. Pueden ser adecuados reactivos alternativos para actuar como agentes de deshidratación o de activación de ácido, los cuales se utilizan normalmente en las reacciones de formación de amida, tales como ésteres de pentafluorofenilo, ésteres de NHS, EDAC, HBTU, HOBT, etc.
Ejemplo 3: Citotoxicidad de los compuestos de fórmula I en líneas celulares Jurkat y HCC1954.
Se evaluaron los compuestos en líneas celulares Jurkat y HCC1954 para comprobar su citotoxicidad. Los compuestos se titularon 1:3, comenzando con diversas concentraciones (30 nM a 1000 nM). También se tituló la citotoxina de control HTI-286 (véase, por ejemplo, el documento U.S. 7.579.323) 1:3 comenzando con una concentración de 30 nM. Las placas se incubaron durante 3 días. La viabilidad celular se cuantificó mediante el uso de reactivo CellTiter-Glo 1* a 30 pl/pocillo. La citotoxina de control mató exitosamente las células Jurkat a una concentración esperada.
Cada línea celular se cultivó en su medio de cultivo respectivo hasta el día de colocación en placas. Las células se retiraron de sus recipientes de cultivo y la suspensión celular resultante se contó mediante el uso de ViCell. Las células se diluyeron entonces en su medio de cultivo hasta 25000/ml de manera que 100 pl/pocillo = 2500 células/pocillo. Cada línea celular se colocó en placas TC de paredes negras de 96 pocillos en los 60 pocillos internos, los pocillos externos se llenaron con agua. HCC1954 se colocaron en placas un día antes de establecer el ensayo. Se diluyeron las citotoxinas, tal como se describe más adelante y se preparó una respuesta a la dosis 5* de cada compuesto mediante el uso de RPMI FBS al 10 % en una placa de 96 pocillos profundos. Esta placa de dilución "maestra” se utilizó para cada línea celular. 25 pl de las respuestas a la dosis 5* se enriquecieron en cada línea celular por triplicado. Las placas se volvieron a colocar en la incubadora y se incubaron durante 3 noches. Después de 3 noches, se cuantificó la viabilidad celular mediante el uso de reactivo CellTiter-glo 1* a 30 pl/pocillo. Después de al menos 10 minutos de incubación, se midió la luminiscencia mediante el uso de SpectraMax (500 ms de integración). Se indican los resultados en la tabla 2 y en las figuras 1 y 2.
Tabla 2
Figure imgf000086_0002
Ejemplo 3.1: Evaluación de la citotoxicidad celular de los compuestos de fórmula I en líneas celulares Jurkat, HCC1954, NCI-N87, BxPC-3, SK-OV-3 y JIMT-1
Los compuestos se evaluaron sobre una o más líneas celulares de leucemia de linfocitos T humanos Jurkat (ATCC: TIB-152); líneas celulares de cáncer de mama humano HCC1954 (ATCC: CRL-2338) y JIMT-1 (DSMZ: ACC 589); línea celular pancreática humana BxPC-3 (ATCC: CRL. 1687), línea celular de adenocarcinoma de ovario humano SK-OV-3 (ATCC: HTB-77) y línea celular de carcinoma gástrico humano NCI-N87 (ATCC: CRL. 5822); para evaluar su citotoxicidad.
En resumen, se obtuvieron células de fuentes comerciales y se cultivaron tal como se describe en el folleto del producto proporcionado. Las células se retiraron de sus recipientes de cultivo y la suspensión celular resultante se contó mediante el uso de un ViCell (Beckman Coulter), luego se colocaron en placas a 25000 células/ml (2500 células/pocillo) en placas de 96 pocillos de fondo plano y paredes negras Costar 3904 (las células se colocaron en los 60 pocillos internos de las placas TC de 96 pocillos y los pocillos del borde exterior se llenaron con agua). Se incubaron líneas celulares adherentes durante una noche a 37 °C en atmósfera de CO2 al 5 % para permitir que las células se unieran a la superficie de la placa de microtitulación, mientras que las células en suspensión (Jurkat) se colocaron en las placas inmediatamente antes de su uso. Se disolvieron las citotoxinas y se diluyeron en serie en dimetil sulfóxido y luego las soluciones se agregaron a medio de cultivo completo a cinco veces la concentración final máxima deseada. Las citotoxinas se titularon en medio de cultivo, normalmente 1:3 en ocho etapas. Se incluyó un control sin artículo de prueba presente (medio de cultivo solo) en cada placa de microtitulación por seis. Las titulaciones de toxina preparadas se agregaron (25 pl/pocillo) por triplicado a cada línea celular evaluada. Se incubaron las células y las titulaciones a 37 °C/CO2 al 5 % durante tres noches (Jurkat) y cinco noches (todas las demás líneas celulares). Después de la incubación, se midió la disponibilidad celular utilizando CellTiter-Glo® al agregar 30 pl de CellTiter-Glo® preparado a cada pocillo del ensayo. Se incubaron las muestras durante al menos veinte minutos en la oscuridad antes de medir la luminiscencia emitida utilizando un luminómetro de microplacas (500 ms de tiempo de integración). Las unidades de luminiscencia relativa (RLU, por sus siglas en inglés) recogidas se convirtieron a % de citotoxicidad utilizando solo el medio de cultivo de control mencionado anteriormente (% de citotoxicidad = 1 - [RLU de pocillo/RLU de promedio medio control solo] * 100 %). Se representaron gráficamente los datos (% citotoxicidad en func. de la concentración de ADC (log10(nM)) y se ajustaron a curvas mediante métodos de regresión no lineal mediante el uso del software GraphPad Prism v. 5.02 para obtener estimados de EC50. La citotoxina de control, normalmente HTI-286 (véase, por ejemplo, el documento U.S. 7.579.323) mató satisfactoriamente todas las líneas celulares a la concentración esperada.
Los resultados se muestran en la tabla 2.1.
Tabla 2.1
Figure imgf000086_0001
continuación
Figure imgf000087_0001
Ejemplo 4: Ensayos biológicos.
Líneas celulares: Línea celular de leucemia de linfocitos T humanos Jurkat (ATCC: TIB-152); HCC1954 (ATCC: CRL. 2338); líneas celulares pancreáticas humanas: AsPC-1 (ATCC: CRL-1682), BxPC-3 (ATCC: CRL.1687), HPAF-II (ATCC: CRL.1997), MiaPaCa2 (ATCC: CRL.1420), PANC-1 (ATCC: CRL.1469), Capan-1 (ATCC: HTB-79), Capan-2 (ATCC: HTB-80) y la línea celular de carcinoma gástrico humano NCI-N87 (ATCC: CRL. 5822); AML-193 (ATCC: CRL.9589), CCRF-CEM (ATCC: CCL-119), DU145 (ATCC: HTB-81), PC-3 (ATCC: CRL.1435), A-431 (ATCC: CRL.1555), HT-29 (ATCC: HTB-38), A-172 (ATCC: CRL.1620), NCI-H358 (ATCC: CRL.5807), A549 (ATCC: CCL-185), Colo-205 (ATCC: CCL-222), MDA-MB-231 (ATCC: HTB-26), OVCAR-3 (ATCC: HTB-161), OV-90 (ATCC: CRL.11732), OE19 (Sigma: 96071721), RT112/84 (Sigma: 85061106).
El día anterior a agregar los compuestos, se agregaron células HCC1954 AsPC-1, BxPC-3, HPAF-II, MiaPaCa2, PANC-1, Capan-1, Capan-2 y NCI-N87 a placas de microtitulación tratadas con cultivo de tejido de 96 pocillos con paredes opacas mediante el uso de medio de cultivo completo a una densidad de 2500 células/100 microlitros (pl) de medio. Estas líneas celulares adherentes se incubaron durante la noche a 37 °C/CO2 al 5% para permitir que las células se acoplen a la superficie de la placa de microtitulación. El día que se agregaron los compuestos, se agregaron células Jurkat para separar las placas de microtitulación de 96 pocillos a 2500 células/100 pl mediante el uso del mismo medio de cultivo que para HCC1954. Los compuestos primero se diluyeron en serie en dimetil sulfóxido y luego las diluciones preparadas se agregaron a medio de cultivo completo a cinco veces la concentración final máxima deseada. Los compuestos entonces se titularon 1:3, ocho etapas. Un control sin compuesto (medio de crecimiento solo) se incluyó en cada placa de microtitulación por sextuplicado. Las titulaciones de compuestos preparadas se agregaron (25 pl/pocillo) por triplicado. Las titulaciones de compuestos y células se incubaron a 37 °C/CO2 al 5% durante tres noches. Después de la incubación, la viabilidad celular se midió utilizando el reactivo CellTiter-Glo® al agregar 30 pl de CellTiter-Glo® preparado a cada pocillo de ensayo. Se incubó el ensayo durante al menos veinte minutos en la oscuridad antes de medir la luminiscencia emitida utilizando un luminómetro de microplacas (500 ms de tiempo de integración). Las unidades de luminiscencia relativa (RLU, por sus siglas en inglés) recogidas se convirtieron a % de citotoxicidad utilizando solo el medio de cultivo de control mencionado anteriormente (% citotoxicidad = 1 -[RLU de pocillo/RLU de promedio medio control solo]).
Se utilizó GraphPad Prism® para la generación de valores de EC50 mediante el uso de ajuste de curva de regresión no lineal de tres parámetros.
Ejemplo 5: Ejemplos de conjugados de fármaco y anticuerpo.
1. Ejemplos de enlazadores
Tal como reconocerá un experto en la técnica, el enlazador en particular utilizado para la formación del conjugado dependerá del grupo reactivo del compuesto reactivo utilizado para la formación del enlace. A modo de ejemplo, y dentro del alcance de la presente invención, los compuestos que tienen un resto de tiol pueden utilizarse para la formación del conjugado. En algunos de los ejemplos presentes, puede utilizarse el enlazador con capacidad de escisión 6-[3'(2-piridilditio)-propionamido]hexanoato de sulfosuccinimidilo disponible en el mercado (sulfo-LC-SPDP: Thermo Pierce, n.° de catálogo 21650) y el enlazador sin capacidad de escisión 4-[W-maleimidometil]ciclohexan-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC: Thermo Pierce, n.° de catálogo 22360) para las reacciones de conjugación del fármaco y el anticuerpo. El procedimiento de acoplamiento se lleva a cabo en dos etapas principales: 1) incorporación de los enlazadores en el anticuerpo por medio de reacción con grupos amina principales del anticuerpo (residuos de lisina) y el resto de éster de W-hidroxisuccinimida (NHS) de los enlazadores y 2) reacción con los grupos de maleimida (SMCC) incorporados o grupo 2-piridilditio (LC-SPDP) con compuestos que contienen tiol.
2. Activación del anticuerpo con enlazadores escindibles (LC-SPDP) o no escindibles (SMCC)
Se diluyó anticuerpo (Herceptin®) ya sea en fosfato de potasio con pH 8 (sulfo-LC-SPDP) o D-PBS (Invitrogen) con pH 7,4 (SMCC) hasta 5 mg/ml. Al anticuerpo diluido se le agregó enlazador recientemente diluido, mediante el uso de agua ultrapura para sulfo-LC-SPDP o V,W-dimetilacetamida (DMA) anhidra para SMCC. 10-14 veces de exceso molar de SMCC:anticuerpo o sulfo-LC-SPDP:anticuerpo da como resultado la incorporación de 5-7 enlazadores/anticuerpo. La reacción de "activación” del anticuerpo y enlazador se incubó a 28 °C durante 2 horas. Después de la incubación, el enlazador sin reaccionar se retira de cada muestra de anticuerpo mediante el uso de columnas de destilación/cromatografía de exclusión por tamaño Zeba™ de 40 kda (Thermo Pierce, n.° de catálogo 87771 o 87772, dependiendo de la escala). Durante la misma etapa de cromatografía, se intercambia el amortiguador en preparación para la siguiente reacción: ya sea amortiguador de fosfato/EDTA con pH 6,5 (LC-SPDP) o amortiguador de citrato/EDTA con pH 5 (SMCC). Las preparaciones purificadas entonces se analizaron para verificar el contenido de proteína total en función de una curva de anticuerpo estándar mediante el uso del ensayo de BCA adaptado de microplacas (Thermo Pierce, n.° de catálogo 23225). Para estimar la extensión de la incorporación del enlazador, se llevó a cabo una reacción a baja escala con exceso de cisteína (~10 veces en comparación con la concentración de proteína). Después de 10 minutos de incubación, la cisteína sin reaccionar se detecta mediante el uso de ácido 5,5-ditio-bis-(2-nitrobenzoico) (reactivo de Ellman, Thermo Pierce, n.° de catálogo 22582). Al interpolar la concentración de una curva estándar de cisteína, la concentración del enlazador se determinó mediante la sustracción del valor determinado de la concentración conocida de cisteína utilizada.
3. Reacción de compuestos que contienen tiol con anticuerpo activado por enlazador
En la segunda etapa de la reacción de acoplamiento, el anticuerpo activado se utilizó primero al diluir la preparación hasta 2 mg/ml, mediante el uso ya sea de amortiguador de fosfato/EDTA con pH 6,5 (LC-SPDP) o amortiguador de citrato/EDTA con pH 5 (SMCC). Antes del uso, los compuestos de /V-acil sulfonamida que contienen tiol se reducen mediante el uso de perlas de TCEP-agarosa para asegurar que el grupo tiol esté disponible para reaccionar con los enlazadores incorporados. En resumen, se diluyeron los compuestos hasta 5 mM mediante el uso de amortiguador de fosfato/EDTA con pH 6,5. En las instancias donde la solubilidad acuosa es un problema, se agrega un volumen pequeño de HCl al 37 % (1:300) y esto es suficiente para solubilizar los compuestos a 5 mM. Se equilibran perlas de TCEP-agarosa (Thermo Pierce, n.° de catálogo 77712) con amortiguador de fosfato/EDTA/DMA al 10 % antes del uso. Las diluciones del compuesto se rotan con perlas de TCEP-agarosa durante al menos 0,5 horas o hasta 3 horas. Los compuestos reducidos se recogen mediante centrifugado con un filtro que excluye la TCEP-agarosa. La extensión de la reducción y concentración de tiol se mide mediante el uso de un reactivo de Ellman (en comparación con una curva estándar de cisteína). Los compuestos que contienen tiol reducidos se agregan entonces a las muestras de anticuerpo activado con un exceso molar de ~ 2 veces en comparación con las concentraciones de enlazador determinadas anteriormente. Para monitorear la efectividad de la reacción de acoplamiento, se prepara un control de conjugación "durante la noche” mediante la dilución de cada compuesto en amortiguador de fosfato/EDTA con pH 6,5 o amortiguador de citrato/EDTA con pH 5 con el mismo factor de dilución que se utiliza en la reacción de conjugación. Las soluciones madre de compuesto restantes se congelan a -80 °C. Las reacciones y los controles durante la noche se incuban a temperatura ambiente durante la noche. A la mañana siguiente, las soluciones madre congeladas se descongelan y se prepara otro control para cada compuesto exactamente como el control "durante la noche” - este es el control "fresco”. Se compara un pequeño volumen de cada conjugación con los controles de compuesto durante la noche y fresco mediante el uso del reactivo de Ellman. El compuesto que no reaccionó se purificó y extrajo del ADC mediante el uso de columnas de destilación/exclusión por tamaño Zeba™ de 40 kda; durante la misma etapa, se intercambia el amortiguador por D-PBS con pH 7,4 (Invitrogen). Los ADC purificados se analizan entonces para verificar: contenido total de proteína (ensayo BCA, protocolo Pierce microBCA), afinidad relativa por la unión al antígeno (unión natural de equilibrio) y muerte citotóxica selectiva de células HER2 positivas (HCC1954) en comparación con células HER2 negativas (Jurkat).
4. Ensayo de citotoxicidad
En el día antes de agregar artículos de prueba, se agregan las células HCC1954 a placas de microtitulación tratadas con cultivo de tejido de 96 pocillos de fondo transparente y paredes opacas mediante el uso de medio de cultivo completo con una densidad de 2500 células/100 pl de medio. Las células HCC1954 se incuban durante la noche a 37 °C/CO2 al 5% para permitir que las células se acoplen a la superficie de la placa de microtitulación. El día que se agregan los artículos de prueba, se agregan células Jurkat para separar las placas de microtitulación de 96 pocillos a 2500 células/100 pl mediante el uso del mismo medio de cultivo que para HCC1954. Para comparar la muerte celular por ADC con la obtenida con los compuestos libres, los compuestos de V-acil sulfonamida primero se diluyen en serie mediante el uso de dimetil sulfóxido o DMA y luego las diluciones preparadas se agregan a medio de cultivo completo a cinco veces la concentración final. Los compuestos entonces se titulan 1:3, ocho etapas. Para evaluar los ADC, se diluyen directamente en medio de cultivo a cinco veces la concentración final. Los ADC entonces se titulan 1:3, ocho etapas. Se incluye un control sin artículo de prueba presente (medio de cultivo solo) en cada placa de microtitulación por seis. Se le agrega el compuesto/titulaciones de ADC (25 pl/pocillo) por triplicado tanto a las células HCC1954 como a las células Jurkat. Las titulaciones y células se incuban a 37 °C/CO2 al 5% durante tres noches. Después de la incubación, la viabilidad celular se mide utilizando el reactivo CellTiter-Glo® al agregar 30 pl de CellTiter-Glo® preparado a cada pocillo de ensayo. Se incuba el ensayo durante al menos veinte minutos en la oscuridad antes de medir la luminiscencia emitida utilizando un luminómetro de microplacas (500 ms de tiempo de integración). Las unidades de luminiscencia relativa (RLU, por sus siglas en inglés) recogidas se convierten a % de citotoxicidad utilizando solo el medio de cultivo de control mencionado anteriormente (% de citotoxicidad = 1 - [RLU de pocillo/RLU de promedio medio control solo]).
5. Análisis de conjugado de fármaco y anticuerpo (ADC) mediante espectrometría de masas EsiToF
Se utiliza un instrumento de espectrometría de masas (MS, por sus siglas en inglés) de ionización por electropulverización y tiempo de vuelo (EsiToF) (QStar XL Hybrid quadrupole-TOF LC/MSMS; AB Sciex) para determinar el peso molecular de los ADC y para evaluar la proporción entre anticuerpo y fármaco (DAR, por sus siglas en inglés). El instrumento de MS EsiToF se equipa con una fuente de pulverización turbo de ionización por electropulverización. La recogida de datos se realiza en el modo iónico positivo y la corriente iónica total de la muestra se adquiere en un intervalo de masa de 2000 m/z a 4000 m/z mediante el uso del software Analyst QS 1.1. La fuente de iones se hace funcionar con un voltaje de aguja de pulverización iónico de 5,2 KV, una nebulización (gas 1) de 25 (unidades arbitrarias), una cortina de gas de 30 (unidades arbitrarias), un potencial de desaglomeración de 150 V y una temperatura de 150 °C. Las soluciones de muestra de prueba de ADC se introducen a 5 pl/min en la fuente de iones mediante infusión directa por medio de capilaridad de sílice condensada con la ayuda de una jeringa y una bomba de jeringa. Típicamente, DAR oscila entre 0 y 4.
6. Preparación de la muestra de ADC para análisis de MS ESI-ToF
Todas las muestras de ADC de desglicosilan mediante el uso de endoglicosidasa EndoS(IgGZERO)™ y el amortiguador se intercambia por agua antes del análisis de MS EsiToF. En resumen, la muestra de ADC original se pasa a través de un concentrador Amicon MWCO de 100 K para el intercambio de amortiguador por amortiguador de fosfato de sodio. La muestra con intercambio de amortiguador se trata entonces con IgGZERO™ (1 unidad/1 pg de anticuerpo) en amortiguador de escisión de fosfato de sodio, que contiene NaCl 150 mM y se incuba durante 30 minutos a 37 °C. Al ADC desglicosilado resultante se le vuelve a intercambiar el amortiguador por agua mediante el uso de un concentrador Amicon MWCO de 100 K, y se diluye con ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo/agua (50/50 % v/v) hasta una concentración de 3,0 pg/pl antes del análisis.
Ejemplo 6: Ejemplos de conjugados de fármaco y anticuerpo
1. Preparación de conjugados de fármaco y anticuerpo a partir de toxinas MCvcPABC, métodos generales A una solución de anticuerpo (1-10 mg/ml) en borato de sodio 25 mM, cloruro de solución 25 mM, DTPA 1 mM (pH 8,0) se le agrega TCEP de una solución madre recién preparada (1-10 mM) en el mismo amortiguador (2,0-3,0 equivalentes molares). La solución se mezcla completamente y se incuba a 37 °C durante 2 horas antes de enfriarla en hielo. En algunas instancias, la solución reducida de anticuerpo se diluye adicionalmente ya sea en solución salina amortiguada con fosfato helada que contiene DTPA 1 mM (concentración final de proteína de 2,0 mg/ml) o cloruro de sodio 25 mM, DTPA 1 mM (pH 8,0), borato de sodio 25 mM helado, para obtener una solución con una concentración final de proteína de entre 1 y 4 mg/ml. A la solución reducida de proteína almacenada en hielo se le agrega toxina funcionalizada con maleimida (10-12 equivalentes molares) de una solución madre de DMSO 10 mM. La reacción de conjugación se mezcla inmediatamente por completo mediante inversión y se deja continuar la conjugación durante un período de aproximadamente 1 hora antes de la purificación mediante pasaje por columnas centrífugas desalinizantes Zeba™ (40 KDa MWCO; Peirce) preequilibradas con solución salina amortiguada con fosfato o citrato de sodio 10 mM, cloruro de sodio 150 mM, pH 5,5. El eluato se agrupa, se esteriliza por filtro (Steriflip®, Millipore) y se almacena a 4 °C. Los ADC purificados se analizan para verificar el contenido de proteína total (ensayo de ácido bicincónico, protocolo microBCA de Pierce, n° de catálogo 23225). El producto de ADC se caracteriza mediante PAGE reductora y no reductora, HPLC-HIC, SEC y RP-UPLC-MS. La distribución de fármaco y DAR promedio se derivan de la interpretación de los datos de HIC y LC-MS con referencia a PAGE no reductora. Los estimados de DAR están normalmente en el intervalo de 3,5-4,5. La afinidad relativa de ADC por la unión al antígeno (unión natural de equilibrio) se realiza de la forma descrita (anteriormente/posteriormente). La citotoxicidad selectiva de los conjugados de fármaco y anticuerpo se evalúa al probar la muerte de líneas celulares tanto positivas al antígeno como negativas al antígeno.
2. Ensayo de citotoxicidad in vitro selectiva de células positivas al antígeno mediante conjugados de fármaco y anticuerpo.
Se demuestra la muerte selectiva de una línea celular positiva al antígeno (que incluye las líneas celulares HCC1954, NCI-N87, HPAF-II y BxPC-3) en comparación con células Jukart negativas al antígeno para cada conjugado preparado. En resumen, se obtienen células de la ATCC y se cultivan tal como se describe en el folleto del producto proporcionado. Se colocan 25000 células/ml (2500 células/pocillo) en placas de 96 pocillos de fondo plano con paredes oscuras Costar 3904. Se incuban células de líneas celulares adherentes durante una noche a 37 °C en una atmósfera de CO2 al 5 % para permitir que las células se unieran a la superficie de la placa de microtitulación, mientras que las células en suspensión (Jurkat) se colocan en las placas inmediatamente antes de su uso. Se diluyen ADC directamente en el medio de cultivo celular adecuado a cinco veces la concentración final deseada. Estos ADC se titulan normalmente 1:3 durante ocho etapas. Se incluye un control sin artículo de prueba presente (medio de cultivo solo) en cada placa de microtitulación por seis. Las titulaciones de ADC preparadas se agregan (25 pl/pocillo) por triplicado a cada línea celular evaluada. Se incuban las células y las titulaciones a 37 °C/CO2 al 5 % durante tres noches (Jurkat) y cinco noches (todas las demás líneas celulares). Después de la incubación, la viabilidad celular se mide utilizando el reactivo CellTiter-Glo® al agregar 30 pl de CellTiter-Glo® preparado a cada pocillo de ensayo. Se incuban las muestras durante al menos veinte minutos en la oscuridad antes de medir la luminiscencia emitida utilizando un luminómetro de microplacas (500 ms de tiempo de integración). Las unidades de luminiscencia relativa (RLU, por sus siglas en inglés) recogidas se convierten a % de citotoxicidad utilizando solo el medio de cultivo de control mencionado anteriormente (% de citotoxicidad = 1 - [RLU de pocillo/RLU de promedio medio control solo]). Se representan gráficamente los datos (% citotoxicidad en func. de la concentración de ADC (log10 (nM)) y se analizan mediante métodos de regresión no lineal utilizando el software GraphPad Prism v. 5.02 para obtener estimados de EC50.
3. Estimación de la proporción entre anticuerpo y fármaco (DAR)
El grado promedio de conjugado de enlazador y toxina respecto al anticuerpo se evalúa mediante cromatografía de interacción hidrofóbica y espectrometría de masas-cromatografía líquida de alto rendimiento. Estas técnicas se describen en Antibody Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology vol. 1045, 2013. págs. 275-284. L. Ducry, Ed., y Asish B. Chakraborty, Scott J. Berger y John C. Gebler, Characterization of an IgG1 Monoclonal Antibody and related Sub-structures by LC/ESI-TOF/MS: Application note, Waters Corporation. Marzo de 2007. 720002107EN, Habitualmente, el DAR oscila entre 0 y 4.
Método 1. Cromatografía de interacción hidrofóbica
Los conjugados de anticuerpo se someten a cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC, por sus siglas en inglés) en una columna de butilo-NPR TSKgel® (Tosoh Bioscience; 4,6 mm x 35 mm i.d.; 2,5 pm de tamaño de partícula) conectada a un HPLC serie 1100 de Agilent. Las muestras se inyectan (5 pl) a o por encima de 4 mg/ml. Cuando sea necesario, se concentran los ADC antes de la inyección mediante el uso de dispositivo de concentración centrífuga PALL Nanosep Omega (n.° de parte OD010C34). Se emplea una elución de gradiente lineal comenzando a una fase móvil A al 95 %/fase móvil B al 5 %, pasando a una fase móvil A al 5 %/fase móvil B al 95 % durante un período de 12 minutos (fase móvil A: sulfato de amonio 1,5 M fosfato de sodio 25 mM con pH 6,95, y fase móvil B: isopropanol al 25 %, fosfato de sodio 25 mM al 75 % con pH 6,95). La inyección de anticuerpo sin modificar proporcionó un medio para identificar el pico con DAR = 0. Los anticuerpos se detectan basándose en una absorbancia a 280 nm.
Método 2. Cromatografía líquida de ultra-rendimiento-espectrometría de masas para estimar la DAR
Se utiliza cromatografía líquida de ultra-rendimiento de fase inversa en tándem con ESl-QToF-espectrometría de masas (UPLC-ESI-QToF-Ms) para caracterizar conjugados de fármaco y anticuerpo para la extensión de la conjugación del fármaco después de la reducción con ditiotreitol. La caracterización se lleva a cabo utilizando un Bio Acquity-UPLC® (clase H) acoplado a un espectrómetro de masas QToF Quattro-Premier™ con una fuente iónica de electropulverización (WATERS Corporation). El análisis de UPLC de la muestra de ADC reducido se lleva a cabo a 70 °C con una columna de 50 x 2,0 mm 5 u PR-1 100A PolymerX™ (Phenomenex, Inc.) y con una fase móvil compuesta por el disolvente A: acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético/ácido fórmico (10/90/0,1/0,1, % v/v) y el disolvente B: acetonitrilo/ácido fórmico (100/0,1, v/v). Los componentes de la muestra de ADC reducido se eluyen con un gradiente lineal comenzando con disolvente A/disolvente B (80/20 v/v y una velocidad de caudal de 0,3 ml/min hasta disolvente A/disolvente B (40/60, v/v) durante 25 minutos y luego hasta disolvente A/disolvente B (10/90, % v/v) durante 2 minutos antes de equilibrar de vuelta a las condiciones iniciales. El tiempo total de ejecución es de 30 minutos. Los datos de corriente iónica total (TIC, por sus siglas en inglés) de MS ESI-ToF se recogen con un intervalo de 500-4500 m/z mediante el uso del software de adquisición de datos MassLynx™ (Waters Corporation). Los datos de masa del componente de muestra se recogen en el modo V iónico positivo y la fuente de ESI se hace funcionar a temperatura de fuente: 150 °C, temperatura de desolvatación: 350 °C, gas de desolvatación: 800 l/h, voltaje de cono de muestra: 60 V, voltaje capilar: 3,0 kV, gas de desolvatación: nitrógeno y gas de colisión: argón. Los espectros de TIC sumados para cada pico se desconvolucionaron mediante el algoritmo Maximum Entropy™ 1 (Max-Ent1) para generar los datos de masa neutra del componente de pico.
4. Preparación de muestras de ADC reducido para el análisis de UPLC/ESI-ToF MS
La reducción de los enlaces disulfuro en el anticuerpo del ADC (~ 1 pg/pl de solución) para generar las cadenas ligera y pesada se lleva a cabo mediante el uso de DTT 20 mM a 60 °C durante 20 minutos. Se emplea un volumen de inyección de 5-10 pl de la muestra de ADC reducido para el análisis de UPLC/ESI-ToF-MS.
Ejemplo 6.1 Ejemplos de conjugados de fármaco y anticuerpo
1. Preparación de conjugados de fármaco y anticuerpo a partir de enlazadores de fármacos funcionalizados con maleimida, métodos generales
A una solución de anticuerpo (1-10 mg/ml) en solución salina amortiguada con fosfato (pH 7,4) se le agregó TCEP de una solución madre recién preparada (1-10 mM) en el mismo amortiguador (2,0-3,0 equivalentes molares). La solución se mezcló completamente y se incubó a 37 °C durante 2 horas antes de enfriarla en hielo. En algunas instancias, la solución reducida de anticuerpo se diluyó adicionalmente con solución salina amortiguada con fosfato helada que contenía DTPA 1 mM para obtener una solución con una concentración final de proteína de entre 1 y 5 mg/ml. A la solución reducida de proteína almacenada en hielo se le agregó enlazador de fármaco funcionalizado con maleimida (8-10 equivalentes molares) de una solución madre de DMSO 10-20 mM. La reacción de conjugación se mezcló inmediatamente por completo mediante inversión y se dejó continuar la conjugación durante un período de aproximadamente 1 hora antes de la purificación mediante pasaje por columnas centrífugas desalinizantes Zeba™ (40 KDa MWCO; Peirce) preequilibradas con solución salina amortiguada con fosfato. El eluato se agrupó, se esterilizó por filtro (Steriflip®, Millipore) y se almacenó a 4 °C. El ADC purificado se analizó para verificar el contenido de proteína total (ensayo de ácido bicincónico, protocolo microBCA de Pierce, n° de catálogo 23225). El producto de Ad C se caracterizó mediante PAGE reductora y no reductora, HPLC-HIC, SEC y RP-UPLC-MS. La distribución de fármaco y DAR promedio se derivaron de la interpretación de los datos de HIC y LC-MS con referencia a PAGE no reductora. Los estimados de DAR estuvieron normalmente en el intervalo de 3,5-4,2. La afinidad relativa de ADC por la unión al antígeno (unión natural de equilibrio) se realizó de la forma descrita (posteriormente). La citotoxicidad selectiva de los conjugados de fármaco y anticuerpo se evaluó al probar la muerte de líneas celulares tanto positivas al antígeno como negativas al antígeno en un ensayo de citotoxicidad celular.
2. Ensayo de citotoxicidad in vitro selectiva de conjugados de fármaco y anticuerpo sobre células positivas al antígeno
Los conjugados de fármaco y anticuerpo se evaluaron para verificar la citotoxicidad en líneas celulares cultivadas que incluyen la línea celular de leucemia de linfocitos T humanos (ATCC: TIB-152); líneas celulares de cáncer de mama humano HCC1954 (ATCC: CRL-2338) y JIMT-1 (DSMZ: Ac C 589), línea celular de adenocarcinoma de ovario humano SK-OV-3 (a Tc C: HTB-77); línea celular de carcinoma gástrico humano NCI-N87 (ATCC: CRL-5822); línea celular de linfoma no Hodgkin humano Karpas299 (Health Protection Agency Culture Collections: 06072604) y línea celular de linfoma de Burkitt humano Ramos (ATCC: n.° de catálogo c RL-1596). Se demostró la muerte selectiva de una línea celular positiva al antígeno (que incluye las líneas celulares HCC1954, NCI-N87, SK-OV-3 y JIMT-1 para conjugados a base de Trastuzumab; línea celular Ramos para conjugados a base de Rituximab; Karpas 299 para conjugados a base de brentuximab (cAC-10) respecto a una o más líneas celulares negativas al antígeno (Jurkat, Karpas299 y Ramos para conjugados a base de Trastuzumab; NCI-N87 para conjugados a base de brentuximab (cAC-10) y Rituximab) para cada conjugado preparado. En resumen, se obtuvieron células de fuentes comerciales y se cultivaron tal como se describe en el folleto del producto proporcionado. Se sembraron las células a 25.000 células/ml (2.500 células/pocillo) en placas de 96 pocillos de fondo plano, con paredes oscuras Costar 3904. Se incubaron líneas celulares adherentes durante una noche a 37 °C en atmósfera de CO2 al 5 % para permitir que las células se unieran a la superficie de la placa de microtitulación, mientras que las células en suspensión (Jurkat) se colocaron en las placas inmediatamente antes de su uso. Se diluyeron ADC directamente en el medio de cultivo celular adecuado a cinco veces la concentración máxima final deseada. Estos ADC se titularon normalmente 1:3 durante ocho etapas. Se incluyó un control sin artículo de prueba presente (medio de cultivo solo) en cada placa de microtitulación por seis. Cada una de las titulaciones de ADC preparadas se agregó (25 pl/pocillo) por triplicado a cada línea celular evaluada. Se incubaron las células y las titulaciones a 37 °C/CO2 al 5 % durante tres noches (Jurkat) y cinco noches (todas las demás líneas celulares). Después de la incubación, se midió la disponibilidad celular utilizando CellTiter-Glo® al agregar 30 pl de CellTiter-Glo® preparado a cada pocillo del ensayo. Se incubaron las muestras durante al menos veinte minutos en la oscuridad antes de medir la luminiscencia emitida utilizando un luminómetro de microplacas (500 ms de tiempo de integración). Las unidades de luminiscencia relativa (RLU, por sus siglas en inglés) recogidas se convirtieron a % de citotoxicidad utilizando solo el medio de cultivo de control mencionado anteriormente (% de citotoxicidad = 1 - [RLU de pocillo/RLU de promedio medio control solo]). Se representaron gráficamente los datos (% citotoxicidad en func. de la concentración de ADC (log10(nM)) y se ajustaron a curvas mediante métodos de regresión no lineal mediante el uso del software GraphPad Prism v. 5.02 para obtener estimados de EC50.
3. Examen de la proporción entre anticuerpo y fármaco (DAR)
El grado promedio de conjugado de enlazador y toxina respecto al anticuerpo se evaluó mediante cromatografía de interacción hidrofóbica y espectrometría de masas-cromatografía líquida de alto rendimiento. Estas técnicas se describen en Antibody Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology vol. 1045, 2013. págs. 275-284. L. Ducry, Ed., y Asish B. Chakraborty, Scott J. Berger y John C. Gebler, Characterization of an IgG1 Monoclonal Antibody and related Sub-structures by LC/ESI-TOF/MS: Application note, Waters Corporation. Marzo de 2007. 720002107EN,
Método 1. Cromatografía de interacción hidrofóbica
Los conjugados de anticuerpo se sometieron a cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC, por sus siglas en inglés) en una columna de butilo-NPR TSKgel® (Tosoh Bioscience; 4,6 mm x 35 mm i.d.; 2,5 pm de tamaño de partícula) conectada a un HPLC serie 1100 de Agilent. Las muestras se inyectaron (5 pl) a o por encima de 4 mg/ml.
Se empleó una elución de gradiente lineal comenzando a una fase móvil A al 95 %/fase móvil B al 5 %, pasando a una fase móvil A al 5 %/fase móvil B al 95 % durante un período de 12 minutos (fase móvil A: sulfato de amonio 1,5 M fosfato de sodio 25 mM con pH 6,95, y fase móvil B: isopropanol al 25 %, fosfato de sodio 25 mM al 75 % con pH 6,95). Los gradientes alternativos que utilizaban los mismos componentes de fase móvil ofrecieron una resolución mejorada de algunos conjugados. La inyección de anticuerpo sin modificar proporcionó un medio para identificar el pico con DAR = 0. Los anticuerpos fueron detectados basándose en una absorbancia a 280 nm.
Método 2. Cromatografía líquida de ultra-rendimiento-espectrometría de masas para estimar la DAR
Se utilizó cromatografía líquida de ultra-rendimiento de fase inversa en tándem con ESI-QToF-espectrometría de masas (UPLC-ESI-QToF-MS) para caracterizar conjugados de fármaco y anticuerpo para la extensión de la conjugación del fármaco después de la reducción con ditiotreitol. La caracterización se llevó a cabo utilizando un Bio Acquity-UPLC® (clase H) acoplado a un espectrómetro de masas QToF Quattro-Premier™ con una fuente iónica de electropulverización (WATERS Corporation). El análisis de UPLC de la muestra de ADC reducido se llevó a cabo a 70 °C con una columna de 50 * 2,0 mm 5 u PR-1 100A PolymerX™ (Phenomenex, Inc.) y con una fase móvil compuesta por disolvente A: acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético/ácido fórmico (10/90/0,1/0,1, % v/v) y disolvente B: acetonitrilo/ácido fórmico (100/0,1, v/v). Los componentes de la muestra de ADC reducido se eluyeron con un gradiente lineal comenzando con disolvente A/disolvente B (80/20 v/v y una velocidad de caudal de 0,3 ml/min hasta disolvente A/disolvente B (40/60, v/v) durante 25 minutos y luego hasta disolvente A/disolvente B (10/90, % v/v) durante 2 minutos antes de equilibrar de vuelta a las condiciones iniciales. El tiempo total de ejecución fue de 30 minutos. Los datos de corriente iónica total (TIC, por sus siglas en inglés) de MS ESl-ToF se adquirieron con un intervalo de 500-4500 m/z mediante el uso del software de adquisición de datos MassLynx™ (Waters Corporation). Los datos de masa del componente de muestra se adquirieron en el modo V iónico positivo y la fuente de ESI se hace funcionar a temperatura de fuente: 150 °C, temperatura de desolvatación: 350 °C, gas de desolvatación: 800 l/h, voltaje de cono de muestra: 60 V, voltaje capilar: 3,0 kV, gas de desolvatación: nitrógeno y gas de colisión: argón. Los espectros de TIC sumados para cada pico se desconvolucionaron mediante el algoritmo Maximum Entropy™ 1 (Max-Ent1) para generar los datos de masa neutra del componente de pico.
4. Preparación de muestras de ADC reducido para el análisis de UPLC/ESI-ToF MS
La reducción de los enlaces disulfuro en el anticuerpo del ADC (~ 1 pg/pl de solución) para generar las cadenas ligera y pesada se llevó a cabo mediante el uso de DTT 20 mM a 60 °C durante 20 minutos. Se empleó un volumen de inyección de 5-10 pl de la muestra de ADC reducido para el análisis de UPLC/ESI-ToF-MS.
5. Determinación de la afinidad relativa de ADC para el antígeno mediante el uso de un ensayo de unión natural de equilibrio
La unión de anticuerpos y conjugados de estos se clasificó mediante el uso de un ensayo de unión natural de equilibrio. El experimento se llevó a cabo para comparar la unión de Trastuzumab y conjugados de fármaco y anticuerpo a base de Trastuzumab a la línea celular MDA-MB-231 (ATCC: HTB-26). Las células MDA-MB-231 se cultivaron tal como se describe en el folleto del producto proporcionado por el proveedor. Se lavaron las células (~ 60 % de confluencia) con PBS y se retiraron del matraz de cultivo mediante el uso de amortiguador de disociación (Sigma 5914), luego se volvieron a suspender en medio de cultivo celular y se transfirieron a una placa con fondo en forma de V de 96 pocillos (Sartstedt 82.1583.001; 50000 células por pocillo) antes de sedimentar las células (400 * g, 3 min) y descartar el sobrenadante. El anticuerpo y conjugados de fármaco y anticuerpo se titularon en medio de cultivo celular helado, 1:3 a partir de una concentración inicial de 60 pg/ml. Estas titulaciones (20 pl) se utilizaron para resuspender los sedimentos celulares y luego se incubaron con células durante la noche para alcanzar el equilibrio. El anticuerpo no unido se lavó y extrajo mediante sedimentación dos veces y resuspensión de las células en amortiguador FACS (200 pl; PBS pH 7,4 que contenía FBS al 1 %), luego se sedimentaron y resuspendieron en el mismo amortiguador (200 pl) que contenía 2 pg/ml de IgG antihumana Gt-Fc-Alexa647 (Jackson Immuno, n.° de catálogo 109-605-098) y 2,5 pg/ml de 7-actinomicina D (Sigma, n.° de catálogo A9400) e incubación en hielo durante 30 minutos. Las células se lavaron como se indicó anteriormente, se volvieron a suspender en 50 pl de amortiguador FACS y se analizaron mediante citometría de flujo (BD Accuri) y excluyendo eventos 7-AAD positivos. Se utilizó GraphPad para ajustar las curvas a los datos mediante el uso de análisis de regresión no lineal con 4 parámetros y pendiente variable. Los datos de un experimento de clasificación relativa representativo se muestran en la figura 6.
Ejemplo 7: Conjugados de fármaco y anticuerpo de compuestos de fórmula I.
Mediante el uso de métodos similares a los descritos en los ejemplos 5 y 6, se prepararon los siguientes ADC de trastuzumab, en donde n = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8. El promedio de n fue ~ 4.
T-MTvc-Compuesto 5
Figure imgf000093_0001
La citotoxicidad de T-MTvc-Compuesto 5 sobre líneas celulares NCI-N87 y HCC1954 Her2 positivas y sobre la línea celular Jurkat Her2 negativa se muestra en la tabla 3 y las figuras 3-5.
Tabla 3
Figure imgf000093_0003
Ejemplo 7.1: Conjugados de fármaco y anticuerpo de compuestos de fórmula I.
Mediante el uso de métodos similares a los descritos en el ejemplo 6.1, se prepararon los siguientes conjugados de fármaco y anticuerpo a partir de Trastuzumab (Herceptin, Roche), Rituximab (Rituxan, Roche) y brentuximab (cAC-10) donde, en promedio, n es aproximadamente 4.
T-MTvc-Compuesto 5
Figure imgf000093_0002
R-MTvc-Compuesto 5
T-MTvc-Compuesto 11
Ċ
Figure imgf000094_0001
T-MTvc-Compuesto 30
Figure imgf000095_0002
T-MCvcPABC-Compuesto 80
Figure imgf000095_0001
La citotoxicidad de los conjugados de fármaco y anticuerpo del ejemplo 7 se evaluó sobre líneas celulares tanto positivas al antígeno como negativas al antígeno. Los resultados se muestran en la tabla 3.1.
Tabla 3.1
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Ejemplo 8: Estudio sobre la eficacia de las toxinas en ratones con tumores PC-3
Los artículos de prueba se administran por vía IV. La dosificación está cerca de la dosificación máxima tolerada. Se administra una inyección del artículo de prueba cada siete días durante cuatro repeticiones/inyecciones o una inyección cada siete días durante tres repeticiones/inyecciones. Vehículo: Trehalosa al 6,3 %, Tween® 20 al 0,05 %, amortiguador de citrato 20 mM, pH 5,0, 4 °C.
1. Resumen del procedimiento
Se inoculan ratones lampiños atímicos hembra, adquiridos de Harían Laboratories de 7-8 semanas de edad, por vía subcutánea en la espalda con 5 * 106 células tumorales PC-3 en el día experimental 0. Los tumores se miden cada lunes, miércoles y viernes. Once tumores alcanzan 150-200 mm3 de tamaño, se asignan los animales a uno de 4 grupos de tratamiento al equilibrar el tamaño del tumor promedio entre grupos. Los animales se tratan con su producto respectivo y las mediciones de los tumores continúan cada lunes, miércoles y viernes.
2. Células PC-3: Preparación de las células—Cultivo de tejido
Se obtiene la línea celular de adenocarcinoma humano de próstata Pc-3 de la ATCC (n.° de catálogo CRL-1435). Las células se inician a partir de un vial congelado de solución madre de laboratorio, que se congela a partir del vial original de la ATCC, se evalúa para verificar que sean negativo al micoplasma y se mantiene en tanques de nitrógeno líquido en el laboratorio. Se recogen los cultivos celulares con pasaje 3 y 10 y 80-90 % de confluencia para estudios in vivo. Las células se cultivan en medio F12 de Ham complementado con L-glutamina 2 mM y FBS al 10 %, en un entorno a 37 °C/CO2 al 5 %. Las células se subcultivan una vez a la semana con una proporción dividida de 1:3 a 1:6 y se expanden. El medio se renueva una vez a la semana.
3. Preparación celular—Recolección para la implantación
Las células se enjuagan brevemente una vez con 2 ml de solución fresca de tripsina/EDTA (tripsina al 0,25 % con EDTA 4 Na), luego se aspira la tripsina/EDTA sobrante. Luego se agregan 1,5 ml de tripsina/EDTA y el matraz se deja horizontal para asegurar que las células se recubran de tripsina/EDTA. Las células entonces se incuban a 37 °C durante unos pocos minutos. Las células se observan en un microscopio invertido para asegurar que la capa celular se disperse, luego se agrega medio fresco y se toma una muestra celular de 50 pl y se mezcla con azul de tripano (1:1), las células se cuentan y se evalúa la viabilidad celular mediante el uso de un Cellometer® Auto T4. Las células se centrifugan a 1.000 rpm durante 7 minutos y el sobrenadante se aspira. Las células entonces se vuelven a suspender en medio de cultivo hasta la concentración adecuada para la inoculación. El volumen de inyección es de 100 pl por animal.
4. Implantación de células tumorales—SC en la espalda
En el día 0, 5,0 * 106 de células tumorales se implantan por vía subcutánea en la espalda de ratones a un volumen de 100 pl mediante el uso de una aguja calibre 27/28 bajo anestesia con isoflurano.
5. Alojamiento de los animales
Los animales se alojan en jaulas ventiladas, 2 a 5 animales por jaula, en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas. Los animales reciben comida esterilizada y agua a voluntad y el alojamiento y uso de los animales se realiza de acuerdo con las pautas del Consejo Canadiense del Cuidado Animal. Los animales se manipulan de forma aséptica y las jaulas se cambian cada 10-14 días.
6. Recolección de datos (tamaño tumoral)
Los ratones se monitorean cada lunes, miércoles y viernes para verificar el desarrollo tumoral. Las dimensiones de los tumores establecidos se miden con calibres. Los volúmenes tumorales se calculan de acuerdo con la ecuación [L * W2] 2, en donde la longitud (L) es el eje mayor del tumor. Los animales también se pesan al momento de la medición tumoral. Los tumores se dejan crecer hasta un máximo de 800 mm3.
7. Métodos de análisis: Curvas de volumen tumoral X crecimiento por día experimental
Se representan gráficamente los volúmenes tumorales de cada grupo durante los días de tratamiento. Las curvas de crecimiento finalizan para cada grupo en el momento en el que el animal alcanza la meta experimental de tamaño tumoral (800 mm3) o en el último día del estudio. Cualquier animal que se retire del estudio antes de finalizar la curva de crecimiento del grupo se retira por completo del estudio.
8. Exclusiones de animales
Cualquier animal con tumores ulcerativos, que requirieran la eutanasia del animal, con volúmenes tumorales de 700 mm3 o menores se retira del estudio y no contribuye al análisis de los datos (excepto por los días hasta la reaparición, si el tamaño tumoral final es > 2,0 veces mayor que en el día del tratamiento).
Ejemplo 9: Hallazgo del intervalo de dosis de eficacia de conjugados de fármaco y anticuerpo en el modelo tumoral NCI-N87 mediante el uso de ratones NOD SCID Gamma
Los artículos de prueba se administran por vía IV, un solo tratamiento. Las dosificaciones evaluadas son de 3, 7 y 12 mg/kg. Vehículo: citrato de sodio 20 mM, trehalosa al 6,3 %, Tween® 20 al 0,02 %, pH 5, 4 °C.
1. Resumen del procedimiento
76 (setenta y seis) ratones hembra NOD/SCID Gamma (NSG), obtenidos de The Jackson Laboratory (ratones JAX®) de 7-8 semanas de edad, se inoculan por vía subcutánea en la espalda baja con 5 * 106 células tumorales NCI-N87 en matrigel en el día experimental 0. Los tumores se miden cada lunes, miércoles y viernes. Once tumores alcanzan 150-200 mm3 de tamaño, se asignan los animales a uno de 10 grupos de tratamiento al equilibrar el tamaño del tumor promedio entre grupos. Los animales se tratan con su producto respectivo y las mediciones de los tumores continúan cada lunes, miércoles y viernes.
2. Preparación de las células—Cultivo de tejido: Células NCI-N87
Las células del carcinoma gástrico humano NCI-N87 se derivan a partir de una metástasis de hígado de un carcinoma bien diferenciado de estómago que se extrae antes del tratamiento citotóxico. Se pasa el tumor como un xenoinjerto en ratones lampiños atímicos durante tres pasadas antes de que se establezca la línea celular. Las células NCI-N87 se obtienen de la ATCC (n.° de catálogo CRL-5822) y se evalúan como negativas en RADIL a patógenos de ratón y micoplasma.
Las células se inician a partir de un vial congelado de solución madre de laboratorio, que se congela a partir del vial original de la ATCC y se mantienen en tanques de nitrógeno líquido en el laboratorio. Se recogen los cultivos celulares con pasaje 3 y 10 y 80-90 % de confluencia para estudios in vivo. Las células NCI-N87 se cultivan en medio RPMI 1640 con L-glutamina 1,0 mM y FBS al 10 %, en un entorno a 37 °C/CO2 al 5 %. Las células se subcultivan una o dos veces a la semana con una proporción dividida de 1:3 o 1:4 y se expanden. El medio se renueva una vez a la semana. Las células se congelan con DMSO al 5 %.
3. Preparación celular—Recolección para la implantación
Las células se enjuagan brevemente una vez en solución salina balanceada de Hank sin Ca, Mg. Se agrega una solución fresca de tripsina/EDTA (tripsina al 0,25 % con EDTA 4 Na) y el matraz se deja horizontal para asegurar que las células se cubran con tripsina/EDA y luego se aspira la tripsina/EDTA sobrante. Las células se incuban a 37 °C durante unos pocos minutos. Las células se observan en un microscopio invertido hasta que la capa celular se hubo dispersado y se agrega entonces medio fresco. Luego se recogen 50 pl de suspensión celular y se mezclan con azul de tripano (1:1) y las células se cuentan y evalúan para verificar su viabilidad en un hemocitómetro. La viabilidad debe ser > 90 %. Las células se centrifugan a 125 RCF (1000 rpm) durante 7 minutos y el sobrenadante se aspira. Las células se vuelven a suspender en medio de cultivo frío hasta 2 veces la concentración final deseada (100 * 106/ml). La suspensión se mezcla (sobre hielo) con matrigel (1:1). Las suspensiones celulares resultantes (50 * 106 células/ml) se utilizan para suministrar 5 * 106 células en un volumen de inyección de 100 pl por animal. Todo el equipamiento que entra en contacto con matrigel (agujas, jeringas, puntas de pipetas) se enfría antes de la inyección.
4. Implantación de células tumorales—SC (NCI-N87)
Antes de la inoculación, se afeita un área de aproximadamente 2 * 2 cm en la región baja de la espalda de cada ratón y se limpia con alcohol. En el día 0, 5,0 * 106 de células tumorales se implantan por vía subcutánea en la espalda de ratones a un volumen de 100 pl mediante el uso de una aguja calibre 27/28 bajo anestesia con isoflurano.
5. Alojamiento de los animales
Los animales se alojan en jaulas ventiladas, 2 a 5 animales por jaula, en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas. Los animales recibieron comida esterilizada y agua a voluntad y el alojamiento y uso de los animales se realiza de acuerdo con las pautas del Consejo Canadiense del Cuidado Animal. Los animales se manipulan de forma aséptica y las jaulas se cambian cada 10-14 días.
6. Recolección de datos (tamaño tumoral)
Los ratones se monitorearon cada lunes, miércoles y viernes para verificar el desarrollo tumoral. Las dimensiones de los tumores establecidos se midieron con calibres. Los volúmenes tumorales se calcularon de acuerdo con la ecuación [L * W2] 2, en donde la longitud (L) es el eje mayor del tumor. Los animales también se pesaron al momento de la medición tumoral. Los tumores se dejaron crecer hasta un máximo de 800 mm3.
7. Métodos de análisis: Curvas de volumen tumoral X crecimiento por día experimental
Se representan gráficamente los volúmenes tumorales de cada grupo durante los días de tratamiento. Las curvas de crecimiento finalizan para cada grupo en el momento en el que el animal alcanza la meta experimental de tamaño tumoral (800 mm3) o en el último día del estudio. Cualquier animal que se retire del estudio antes de finalizar la curva de crecimiento del grupo se retira por completo del estudio.
8. Exclusiones de animales
Cualquier animal con tumores ulcerativos, que requirieran la eutanasia del animal, con volúmenes tumorales de 700 mm3 o menores se retira del estudio y no contribuye al análisis de los datos (excepto por los días hasta la reaparición, si el tamaño tumoral final es > 2,0 veces mayor que en el día del tratamiento).
Ejemplo 10: Comparación de eficacia de conjugados de fármaco y anticuerpo en el modelo tumoral NCI-N87 mediante el uso de ratones NOD SCID Gamma
Los artículos de prueba se administran por vía IV, mediante una administración de 3 mg/kg. Vehículo: citrato de sodio 20 mM, trehalosa al 6,3 %, Tween® 20 al 0,02 %, pH 5.
1. Resumen del procedimiento
24 (veinticuatro) ratones hembra NOD/SCID Gamma (NSG), obtenidos de The Jackson Laboratory (ratones JAX®) de 7-8 semanas de edad, se inoculan por vía subcutánea en la espalda baja con 5 x 106 células tumorales NCI-N87 en matrigel en el día experimental 0. Los tumores se miden cada lunes, miércoles y viernes. Once tumores alcanzan 150-200 mm3 de tamaño, se asignan los animales a uno de 3 grupos de tratamiento al equilibrar el tamaño del tumor promedio entre grupos. Los animales se tratan con su producto respectivo y las mediciones de los tumores continúan cada lunes, miércoles y viernes.
2. Preparación de las células—Cultivo de tejido: Células NCI-N87
Las células del carcinoma gástrico humano NCI-N87 se derivan a partir de una metástasis de hígado de un carcinoma bien diferenciado de estómago que se extrae antes del tratamiento citotóxico. Se pasa el tumor como un xenoinjerto en ratones lampiños atímicos durante tres pasadas antes de que se establezca la línea celular. Las células NCI-N87 se obtienen de la ATCC (n.° de catálogo CRL-5822) y se evalúan como negativas en RADIL a patógenos de ratón y micoplasma.
Las células se inician a partir de un vial congelado de solución madre de laboratorio, que se congela a partir del vial original de la ATCC y se mantienen en tanques de nitrógeno líquido en el laboratorio. Se recogen los cultivos celulares con pasaje 3 y 10 y 80-90 % de confluencia para estudios in vivo. Las células NCI-N87 se cultivan en medio RPMI 1640 con L-glutamina 1,0 mM y FBS al 10 %, en un entorno a 37 °C/CO2 al 5 %. Las células se subcultivan una o dos veces a la semana con una proporción dividida de 1:3 o 1:4 y se expanden. El medio se renueva una vez a la semana. Las células se congelan con DMSO al 5 %.
3. Preparación celular—Recolección para la implantación
Las células se enjuagan brevemente una vez en solución salina balanceada de Hank sin Ca, Mg. Se agrega una solución fresca de tripsina/EDTA (tripsina al 0,25 % con EDTA 4 Na) y el matraz se deja horizontal para asegurar que las células se cubran con tripsina/EDA y luego se aspira la tripsina/EDTA sobrante. Las células se incuban a 37 °C durante unos pocos minutos. Las células se observan en un microscopio invertido hasta que la capa celular se hubo dispersado, se agrega entonces medio fresco. Luego se recogen 50 pl de suspensión y se mezclan con azul de tripano (1:1) y las células se cuentan y evalúan para verificar su viabilidad en un hemocitómetro. La viabilidad debe ser > 90 %. Las células se centrifugan a 125 RCF (1000 rpm) durante 7 minutos y el sobrenadante se aspira. Las células se vuelven a suspender en medio de cultivo frío hasta 2 veces la concentración final deseada (100 x 106/ml). La suspensión se mezcla (sobre hielo) con matrigel (1:1). Las suspensiones celulares resultantes (50 x 106 c/ml) se utilizan para suministrar 5 x 106 células en un volumen de inyección de 100 pl por animal. Todo el equipamiento que entra en contacto con matrigel (agujas, jeringas, puntas de pipetas) se enfría antes de la inyección.
4. Implantación de células tumorales - vía subcutánea (NCI-N87)
Antes de la inoculación, se afeita un área de aproximadamente 2 x 2 cm en la región baja de la espalda de cada ratón y se limpia con alcohol. En el día 0, 5,0 x 106 de células tumorales se implantan por vía subcutánea en la espalda de ratones a un volumen de 100 pl mediante el uso de una aguja calibre 27/28 bajo anestesia con isoflurano.
5. Alojamiento de los animales
Los animales se alojan en jaulas ventiladas, 2 a 5 animales por jaula, en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas. Los animales reciben comida esterilizada y agua a voluntad y el alojamiento y uso de los animales se realiza de acuerdo con las pautas del Consejo Canadiense del Cuidado Animal. Los animales se manipulan de forma aséptica y las jaulas se cambian cada 10-14 días.
6. Recolección de datos (tamaño tumoral)
Los ratones se monitorean cada lunes, miércoles y viernes para verificar el desarrollo tumoral. Las dimensiones de los tumores establecidos se miden con calibres. Los volúmenes tumorales se calculan de acuerdo con la ecuación [L x w 2] 2, en donde la longitud (L) es el eje mayor del tumor. Los animales también se pesan al momento de la medición tumoral. Los tumores se dejan crecer hasta un máximo de 800 mm3.
7. Métodos de análisis: Curvas de volumen tumoral X crecimiento por día experimental
Se representan gráficamente los volúmenes tumorales de cada grupo durante los días de tratamiento. Las curvas de crecimiento finalizan para cada grupo en el momento en el que el animal alcanza la meta experimental de tamaño tumoral (800 mm3) o en el último día del estudio. Cualquier animal que se retire del estudio antes de finalizar la curva de crecimiento del grupo se retira por completo del estudio.
8. Exclusiones de animales
Cualquier animal con tumores ulcerativos, que requirieran la eutanasia del animal, con volúmenes tumorales de 700 mm3 o menores se retira del estudio y no contribuye al análisis de los datos (excepto por los días hasta la reaparición, si el tamaño tumoral final es > 2,0 veces mayor que en el día del tratamiento).
Ejemplo 10.1: Comparación de eficacia de conjugados de fármaco y anticuerpo en el modelo tumoral NCI-N87 mediante el uso de ratones NOD SCID Gamma
Los artículos de prueba se administraron por vía IV, un solo tratamiento, 5 mg/kg. Vehículo: solución salina amortiguada con fosfato sin calcio ni magnesio, pH 7,4.
1. Resumen del procedimiento
Ratones hembra NOD/SCID Gamma (NSG), obtenidos de The Jackson Laboratory (ratones JAX®) de 7-8 semanas de edad, se inocularon por vía subcutánea en la espalda baja con 5 x 106 células tumorales NCI-N87 en matrigel en el día experimental 0. Los tumores se midieron cada lunes, miércoles y viernes. Once tumores alcanzaron 150-200 mm3 de tamaño, se asignaron los animales a uno de 10 grupos de tratamiento al equilibrar el tamaño del tumor promedio entre grupos. Los animales se trataron con su producto respectivo y las mediciones de los tumores continuaron cada lunes, miércoles y viernes.
2. Preparación de las células—Cultivo de tejido: Células NCI-N87
Las células del carcinoma gástrico humano NCI-N87 se derivaron a partir de una metástasis de hígado de un carcinoma bien diferenciado de estómago que se extrajo antes del tratamiento citotóxico. Se pasó el tumor como un xenoinjerto en ratones lampiños atímicos durante tres pasadas antes de que se estableciera la línea celular. Las células NCI-N87 se obtuvieron de la ATCC (n.° de catálogo CRL-5822) y se evaluaron como negativas en RADIL a patógenos de ratón y micoplasma.
Las células se iniciaron a partir de un vial congelado de solución madre de laboratorio, que se congeló a partir del vial original de la ATCC y se mantuvieron en tanques de nitrógeno líquido en el laboratorio. Se recogieron los cultivos celulares con pasaje 3 y 10 y 80-90 % de confluencia para estudios in vivo. Las células NCI-N87 se cultivaron en medio RPMI 1640 con L-glutamina 1,0 mM y FBS al 10 %, en un entorno a 37 °C/CO2 al 5 %. Las células se subcultivaron una o dos veces a la semana con una proporción dividida de 1:3 o 1:4 y se expandieron. El medio se renovó una vez a la semana. Las células se congelaron con DMSO al 5 %.
3. Preparación celular—Recolección para la implantación
Las células se enjuagaron brevemente una vez en solución salina balanceada de Hank sin Ca, Mg. Se agregó una solución fresca de tripsina/EDTA (tripsina al 0,25 % con EDTA 4 Na) y el matraz se dejó horizontal para asegurar que las células se cubrieran con tripsina/EDA, y luego se aspiró la tripsina/EDTA sobrantes. Las células se incubaron a 37 °C durante unos pocos minutos. Las células se observaron en un microscopio invertido hasta que la capa celular se hubo dispersado y se agregó entonces medio fresco. Luego se recogieron 50 pl de suspensión y se mezclaron con azul de tripano (1:1) y las células se contaron y evaluaron para verificar su viabilidad en un hemocitómetro. La viabilidad era > 90 %. Las células se centrifugaron a 125 RCF (1000 rpm) durante 7 minutos y el sobrenadante se aspiró. Las células se volvieron a suspender en medio de cultivo frío hasta 2 veces la concentración final deseada (100 x 106/ml). La suspensión se mezcló (sobre hielo) con matrigel (1:1). Las suspensiones celulares resultantes (50 x 106 células/ml) se utilizaron para suministrar 5 x 106 células en un volumen de inyección de 100 pl por animal. Todo el equipamiento que entrara en contacto con matrigel (agujas, jeringas, puntas de pipetas) se enfrió antes de la inyección.
4. Implantación de células tumorales—SC (NCI-N87)
Antes de la inoculación, se afeitó un área de aproximadamente 2 x 2 cm en la región baja de la espalda de cada ratón y se limpió con alcohol. En el día 0, 5,0 x 106 de células tumorales se implantaron por vía subcutánea en la espalda de ratones a un volumen de 100 pl mediante el uso de una aguja calibre 27/28 bajo anestesia con isoflurano.
5. Alojamiento de los animales
Los animales se alojan en jaulas ventiladas, 2 a 5 animales por jaula, en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas. Los animales recibieron comida esterilizada y agua a voluntad y el alojamiento y uso de los animales se realizó de acuerdo con las pautas del Consejo Canadiense del Cuidado Animal. Los animales se manipularon de forma aséptica y las jaulas se cambiaron cada 10-14 días.
6. Recolección de datos (tamaño tumoral)
Los ratones se monitorearon cada lunes, miércoles y viernes para verificar el desarrollo tumoral. Las dimensiones de los tumores establecidos se midieron con calibres. Los volúmenes tumorales se calcularon de acuerdo con la ecuación [L x W2] 2, en donde la longitud (L) es el eje mayor del tumor. Los animales también se pesaron al momento de la medición tumoral. Los tumores se dejaron crecer hasta un máximo de 800 mm3.
7. Métodos de análisis: Curvas de volumen tumoral X crecimiento por día experimental
Se representan gráficamente los volúmenes tumorales de determinados grupos de tratamiento durante los días de tratamiento en la figura 7. Las curvas de crecimiento finalizan para cada grupo en el momento donde el animal alcanza la meta experimental de tamaño tumoral (800 mm3) o en el último día del estudio. Cualquier animal que se haya retirado del estudio antes de finalizar la curva de crecimiento del grupo se retiró por completo del estudio. 8. Exclusiones de animales
Cualquier animal con tumores ulcerativos, que requirieran la eutanasia del animal, con volúmenes tumorales de 700 mm3 o menores se retiró del estudio y no contribuyó al análisis de los datos (excepto por los días hasta la reaparición, si el tamaño tumoral final era > 2,0 veces mayor que en el día del tratamiento).
Ejemplo 11: Comparación de eficacia de conjugados de fármaco y anticuerpo en el modelo tumoral Karpas 299 mediante el uso de ratones C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid.
Los artículos de prueba se administraron por vía IV, con cuatro administraciones de 1 mg/kg en el día 21, día 25, día 29 y día 33. Vehículo: solución salina amortiguada con fosfato sin calcio ni magnesio, pH 7,4.
1. Resumen del procedimiento
Ratones hembra C.B-17/lcrHsd-Prkdcscid (CB.17-SCID), obtenidos de Harlan, se inocularon con 1 millón de células de la línea tumoral que expresa CD30 Karpas 299 por vía subcutánea en la espalda baja. Los ratones se monitorearon cada lunes, miércoles y viernes para verificar el desarrollo tumoral. Las dimensiones de los tumores establecidos se midieron con calibres. Los volúmenes tumorales se calcularon de acuerdo con la ecuación [L x W2] 2, en donde la longitud es el eje mayor del tumor. Los animales también se pesaron al momento de la medición tumoral. Los animales se aleatorizaron el día 21 basándose en el volumen tumoral cuando el tamaño tumoral promedio era de 141,32 mm3. Los ratones por grupo se redujeron a 6 al momento de la aleatorización. Se programó que los ratones recibieran administraciones de bolo intravenoso en el día 21, día 25, día 29 y día 33 de su compuesto respectivo y los tumores se midieron cada lunes, miércoles y viernes.
1. Preparación de las células—Cultivo de tejido: Karpas 299
La línea celular de linfoma de linfocitos T humanos Karpas 299 se estableció a partir de la sangre periférica de un hombre de 25 años con linfoma no Hodgkin de linfocitos T en 1986; ahora se clasifica como linfoma anaplásico de células grandes (ALCL, por sus siglas en inglés) CD30+; las células portan el gen de fusión NPM-ALK. Las células Karpas 299 se obtuvieron de la Health Protection Agency Culture Collections (n.° de catálogo 06072604 y se evaluaron como negativas para micoplasma).
Las células se iniciaron a partir de un vial congelado de solución madre de laboratorio. Los cultivos celulares con pasaje de 3 a 10 y cuya densidad se mantuvo entre 5 x 105 y 2 x 106 células/ml se recogieron para estudios in vivo. Las células se cultivaron como suspensión en RPMI 1640 glutamina 2 mM suero fetal bovino al 20 %, en un entorno a 37 °C en CO2 al 5 %. Las células se subcultivaron una vez a la semana con una proporción dividida de 1:3 y se expandieron.
2. Preparación celular—Recolección para la implantación
Las células se centrifugaron y lavaron una vez con una solución salina balanceada de Hank sin Ca, Mg. Luego se recogieron 50 pl de suspensión y se mezclaron con azul de tripano (1:1) y las células se contaron y evaluaron para verificar su viabilidad en un Cellometer Auto4. La viabilidad era > 90 %. Las células se centrifugaron a 200 g durante 7 minutos y el sobrenadante se aspiró. Las células se volvieron a suspender en medio de cultivo para la inoculación sc. La suspensión celular resultante se utilizó para administrar 1 x 106 células por vía subcutánea a un volumen de 50 pl.
3. Implantación de células tumorales - vía subcutánea (Karpas 299)
Antes de la inoculación, se afeitó un área de aproximadamente 2 x 2 cm en la región baja de la espalda de cada ratón y se limpió con alcohol. En el día 0, 1 x 106 de células se implantaron por vía subcutánea en la espalda de ratones a un volumen de 50 pl mediante el uso de una aguja calibre 27/28 bajo anestesia con isoflurano.
4. Alojamiento de los animales
Los animales se alojaron en jaulas ventiladas, 3 a 4 animales por jaula, en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas. Los animales recibieron comida esterilizada y agua a voluntad y el alojamiento y uso de los animales se realizó de acuerdo con las pautas del Consejo Canadiense del Cuidado Animal. Los animales se manipularon de forma aséptica y las jaulas se cambiaron cada 10-14 días.
5. Recolección de datos (tamaño tumoral)
Los ratones se monitorearon para verificar el desarrollo tumoral cada fin de semana, comenzando 11 días después de la inoculación. Las dimensiones de los tumores establecidos se midieron con calibres. Los volúmenes tumorales se calcularon de acuerdo con la ecuación [L x W2] 2, en donde la longitud (mm) es el eje mayor del tumor. Los animales también se pesaron al momento de la medición tumoral (lunes, miércoles y viernes únicamente. Una vez que se administraron los tratamientos, los tumores se midieron tres veces por semana el lunes, miércoles y viernes. Los tumores se dejaron crecer hasta un máximo de 800 mm3.
6. Métodos de análisis: Curvas de volumen tumoral X crecimiento por día experimental
Se representan gráficamente los volúmenes tumorales de cada grupo durante los días de tratamiento en la figura 8. Las curvas de crecimiento finalizan para cada grupo en el momento en el que el animal alcanza la meta experimental de tamaño tumoral (800 mm3) o en el último día del estudio. Cualquier animal que se haya retirado del estudio antes de finalizar la curva de crecimiento del grupo se retiró por completo del estudio.
7. Exclusiones de animales
Cualquier animal con tumores ulcerativos, que requirieran la eutanasia del animal, con volúmenes tumorales de 700 mm3 o menores se retiró del estudio y no contribuyó al análisis de los datos (excepto por los días hasta la reaparición, si el tamaño tumoral final era > 2,0 veces mayor que en el día del tratamiento).
Ejemplo 12: Tolerabilidad de conjugados de fármaco y anticuerpo en ratas hembra Sprague Dawley Los artículos de prueba se administraron por vía IV, con una única administración en el día 0. Formulación del artículo de prueba: solución salina amortiguada con fosfato sin calcio ni magnesio, pH 7,4.
1. Resumen del procedimiento
Cuarenta y tres ratas hembra Sprague Dawley (especie 001) se obtuvieron de Charles River Labs y se dejaron aclimatar durante un período de 5 días antes de comenzar el estudio. Los artículos de prueba se administraron por vía IV, en el día 0. Los pesos de los animales y las observaciones clínicas se tomaron antes de la inyección en el día de la inyección, a diario durante al menos tres días después de la administración, tres veces por semana después de esto hasta la meta experimental del estudio (preferentemente cada lunes, miércoles y viernes) y justo antes de la eutanasia. En el día 22, se realizó la eutanasia de los animales mediante CO2 y se realizó la necropsia. Se fotografió cualquier observación inusual.
2. Alojamiento de los animales
Los animales se alojaron en jaulas ventiladas, 2-3 por jaula, en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas. Los animales recibieron comida y agua a voluntad y el alojamiento y uso de los animales se realizó de acuerdo con las pautas del Consejo Canadiense del Cuidado Animal. Las jaulas se cambiaron una vez a la semana. Fue obligatorio un período de aclimatación de al menos 5 días antes de iniciar el tratamiento. Se realizó un examen físico y determinación del peso corporal durante el período de aclimatación. Solamente se utilizaron animales sanos para el estudio. Todos los animales se identificaron mediante un tatuaje en la cola. Las jaulas se marcaron con tarjetas individuales con información acerca del número de protocolo, número de habitación, director del estudio, teléfono del director del estudio, especie y raza, peso, fecha de recepción y proveedor.
3. Administración del artículo de prueba
Los animales se pesaron individualmente y se les administraron los volúmenes necesarios del artículo de prueba para suministrar la dosis prescrita.
4. Administración intravenosa
A las ratas se les administraron soluciones por medio de inyección intravenosa (IV) de bolo. Las soluciones de dosificación se administraron por medio de bolo intravenoso mediante el uso de una aguja < 23 G a través de la vena lateral de la cola. El volumen de dosificación de 7 ml/kg se ajustó al peso corporal individual tomado el día antes del día de inyección. Las ratas tratadas se devolvieron a sus jaulas y se observaron hasta que se produjese la hemostasia.
5. Observaciones de los animales y recopilación de datos
El monitoreo para verificar toxicidad aguda se facilitó mediante el uso de un "Registro de observación clínica posterior a la inyección” para evaluar la morbidez y ayudar a determinar metas ex perimentales más humanas hasta 24 horas después de la administración. Al final del día de trabajo en un día de administración (~ 6 horas después de la dosificación), si los animales presentaban síntomas clínicos a un nivel en el que no se pudieran dejar durante la noche en observación, se los sacrificó y se consideró que habían alcanzado la meta experimental de toxicidad o se monitorearon de forma regular hasta que se considerara que era seguro dejarlos durante la noche.
Después de 24 horas de la administración, se monitorearon los animales para verificar la toxicidad crónica mediante el uso de un "Registro de observación clínica para el monitoreo de la tolerabilidad”. Los animales se monitorearon con el siguiente cronograma/frecuencia: Antes de la inyección en el día de la inyección, a diario durante al menos tres días después de la administración, tres veces por semanas después de esto hasta la meta experimental del estudio (preferentemente cada lunes, miércoles y viernes) y justo antes de la eutanasia. Los animales se monitorearon más frecuentemente si presentaban señales significativas de morbidez. Cualquier animal que alcanzara la meta experimental humana se sacrificó y se realizaron las necropsias para identificar cualquier anomalía importante en el hígado, bazo, riñón, pulmón, corazón, tracto gastrointestinal y vejiga.
Los resultados del estudio de tolerabilidad se muestran en las figuras 9 y 10.
Estos datos demuestran que los compuestos truncados de fórmula I, en donde X está ausente, son tolerados mejor que sus equivalentes de longitud completa, en donde X es -C(O)NHCH(CH2R3)-.
Ejemplo 13. Ensayo de interrupción del ciclo celular
Se obtuvieron células Jurkat (ATCC), cultivadas en medio RMPI-1640 complementado con FBS al 10 %, en crecimiento logarítmico. 1 millón de células/ml se colocaron en una placa de cultivo de tejido de 12 pocillos en un volumen de 950 pl. Las células se trataron con el compuesto 5 en 50 pl de medio de cultivo, de manera que la concentración final del compuesto 5 fuese 50 nM, a las células de control se les colocaron 50 pl de medio de cultivo solo. Se incubaron las células durante 24 horas, a 37 °C y 5 % de CO2 en una incubadora humidificada. Después de la incubación, las células se volvieron a suspender completamente y se transfirieron tubos de FACS de 5 ml y se almacenaron en hielo. Se realizaron dos lavados mediante el centrifugado de las células en una centrífuga de rotor giratorio a 450 x g durante 4 minutos y se volvieron a suspender en 1 ml de PBS helado. Las células se fijaron a través de la adición de 3 ml de etanol helado al 100 % por goteo en un vórtice y se almacenaron inmediatamente a 4 °C durante 1 hora. Durante 1 hora de incubación, se prepararon las siguientes soluciones de tinción en PBS helado: 10 pg/ml de yoduro de propidio, 10 U/ml de ARNasa 1f y Triton X-100 al 0,05 %. Después de 1 hora de incubación por fijación, se retiró el etanol mediante el centrifugado de las células, tal como se describió anteriormente y se lavaron dos veces en 1 ml de PBS helado. Las células se volvieron a suspender en 500 pl de la solución de tinción mencionada anteriormente y se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora. Se recogieron los eventos en un citómetro BD C6 HTFC y se retiraron desechos y dobletes mediante regulación. Se generaron histogramas mediante el uso de FCS Express y se representó gráficamente la cantidad de eventos en función de la fluorescencia en FL-3. Se muestran los datos representativos de este ensayo en la figura 11. Los histogramas de contenido de ADN muestran la mayoría de las células sin tratar en la fase G0/G1 con un desplazamiento marcado hacia la fase G2/M del ciclo celular después del tratamiento con el compuesto 5.

Claims (26)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula I:
Figure imgf000103_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de este,
en donde:
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7 alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6;
Rb es alquilo C1-C6 y
Rc es Rd-C(CH3 )2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4 , alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4 , amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4 , alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente que se selecciona de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Rb y Rc, tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
R2 se selecciona de: alquilo C1-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y
X está ausente.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en donde R1 se selecciona de: amino-alquilo C1-C6 , amino-arilo, aminocicloalquilo C3-C7, amino-heterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que se seleccionan de alquilo C1-C6 y halo.
3. El compuesto de la reivindicación 1, en donde R1 es RaRbNCH(Rc)-.
4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R2 se selecciona de: alquilo C2-C6 , arilo, arilalquilo C1-C6, cicloalquilo C4-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6, alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6, halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6.
5. El compuesto de la reivindicación 1 que tiene la fórmula Ia:
Figure imgf000104_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de este,
en donde:
R2 se selecciona de: alquilo C1-C6, arilo, arilalquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C7, cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6, heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6, alcoxicarbonilo C1-C6, alquilo C1-C6, alquilamino C1-C6, amino, aminoalquilo C1-C6, aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7, arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6, haloalcoxi C1-C6, halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y
R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de: H y alquilo C1-C6.
6. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula Id:
Figure imgf000104_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable de este,
donde:
R2 se selecciona de: alquilo C1-C6, arilo, arilalquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C7, cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6, heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6, alcoxicarbonilo C1-C6, alquilo C1-C6, alquilamino C1-C6, amino, aminoalquilo C1-C6, aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7, arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6, haloalcoxi C1-C6, halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y
R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de: H y alquilo C1-C6.
7. El compuesto de la reivindicación 5 o 6, en donde: R2 se selecciona de: alquilo C2-C6, arilo, arilalquilo C1-C6, cicloalquilo C4-C7, cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6, heteroarilo, heteroarilalquilo C1-C6 y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6, alcoxicarbonilo C1-C6, alquilo C1-C6, alquilamino C1-C6, amino, aminoalquilo C1-C6, aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7, arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6, haloalcoxi C1-C6, halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6.
8. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en donde cada uno de R4 y R5 es alquilo C1-C6.
9. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en donde cada uno de R4 y R5 es metilo.
10. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en donde R4 es H y R5 es alquilo C1-C6.
11. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en donde R4 es H y R5 es metilo.
12. El compuesto de una de las reivindicaciones 1 a 11, en donde R2 se selecciona de: arilo, arilalquilo C1-C6, heteroarilo y heteroarilalquilo C1-C6, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6, alcoxicarbonilo C1-C6, alquilo C1-C6, alquilamino C1-C6, amino, aminoalquilo C1-C6, aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7, arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloacilo C1-C6, haloalquilo C1-C6, haloalcoxi C1-C6, halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6.
13. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde R2 se selecciona de: arilo y arilalquilo Ci -Ca, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: amino, aminoalquilo C1-C6 y aminocicloalquilo C3-C7.
14. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde R2 se selecciona de: 4-aminobencilo, 4-(aminometil)bencilo, 4-(aminometil)fenilo, 4-aminofenilo y bencilo.
15. El compuesto de la reivindicación 1 seleccionado de los siguientes o una sal farmacéuticamente aceptable de este:
Figure imgf000105_0001
continuación
Figure imgf000106_0001
16. Un compuesto seleccionado de los siguientes o una sal farmacéuticamente aceptable de este:
Figure imgf000106_0002
continuación
Figure imgf000107_0001
17. Una composición de fórmula II:
(T)-(L)-(D) II
en donde (T) es un resto de direccionamiento capaz de unirse a una célula objetivo, (L) es un enlazador y (D) es un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.
18. La composición de la reivindicación 17, en donde (L)-(D) tiene una de las estructuras siguientes:
Figure imgf000108_0001
19. Una composición de fórmula III:
(T)-(L1)-(D1) III
en donde:
(T) es un resto de direccionamiento capaz de unirse a una célula objetivo;
(D1) es el compuesto de la reivindicación 1 que tiene la estructura (IV):
Figure imgf000109_0001
en donde:
R1 se selecciona de: aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , aminoheterociclilo y heterociclilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de arilo, arilalquilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquiltio C1-C6 , carboxilo, carboxamida, cicloalquilo C3-C7 , cicloalquil C3-C7-alquilo C1-C6 , guanidino, halo, haloalquilo C1-C6 , heterociclilo, heterociclilalquilo C1-C6 , hidroxilo y tio o
R1 es RaRbNCH(Rc)-;
Ra se selecciona de: H y alquilo C1-C6;
Rb es alquilo C1-C6 y
Rc es Rd-C(CH3 )2- y
Rd se selecciona de: H, arilo, cicloalquilo C3-C7 y heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: aciltio C1-C4 , alquenilo C2-C4 , alquilo C1-C4, alquilamino C1-C4 , alquiloxi C1-C4, amino, aminoalquilo C1-C4 , halo, haloalquilo C1-C4 , hidroxilo, hidroxialquilo C1-C4 y tio, en donde alquenilo C2-C4, alquilamino C1-C4 y alquiloxi C1-C4 están además opcionalmente sustituidos con un sustituyente seleccionado de alquilarilo C1-C4 , hidroxilo y tio o
Rb y Rc tomados junto con los átomos a los que cada uno se une, forman un heterociclildiílo;
X está ausente;
R2a se selecciona de: alquildiílo C2-C6 , arildiílo, cicloalquildiílo C4-C7 , heteroarildiílo y heterociclildiílo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de: alcoxi C1-C6 , alcoxicarbonilo C1-C6 , alquilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , amino, aminoalquilo C1-C6 , aminoarilo, aminocicloalquilo C3-C7 , arilo, carboxamida, carboxilo, ciano, haloalquilo C1-C6 , haloalcoxi C1-C6 , halo, hidroxilo, nitro, tio y tioalquilo C1-C6 y (L1)-(T) tiene la estructura (V):
(AA)1-(AA)n-(L2)-(T) V
en donde:
el grupo -NH- unido a R2a en la fórmula IV forma un enlace peptídico enzimáticamente escindible (JPB) con (AA)1 en la fórmula V;
cada AA es independientemente un aminoácido;
n es un número entero de 0 a 25 y
(L2) es opcionalmente la porción restante del enlazador (L1)
y en donde (AA)1-(AA)n, tomados juntos comprenden una secuencia de aminoácido capaz de facilitar la escisión enzimática del JPB.
20. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, en donde (T) es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo monoclonal.
21. La composición de la reivindicación 20, en donde el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo biespecífico.
22. La composición de la reivindicación 20 o 21, en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se une específicamente a un antígeno para células cancerosas.
23. La composición de la reivindicación 22, en donde el antígeno para células cancerosas es HER2.
24. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o una sal farmacéuticamente aceptable de este o la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23 y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
25. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23, para su uso en terapia.
26. El compuesto o composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 25, en donde la terapia es tratamiento contra el cáncer.
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