ES2887079T3 - Preparación de HGF liofilizada - Google Patents
Preparación de HGF liofilizada Download PDFInfo
- Publication number
- ES2887079T3 ES2887079T3 ES15786509T ES15786509T ES2887079T3 ES 2887079 T3 ES2887079 T3 ES 2887079T3 ES 15786509 T ES15786509 T ES 15786509T ES 15786509 T ES15786509 T ES 15786509T ES 2887079 T3 ES2887079 T3 ES 2887079T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- growth factor
- liver growth
- lyophilized formulation
- aqueous solution
- trehalose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1833—Hepatocyte growth factor; Scatter factor; Tumor cytotoxic factor II
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Abstract
Una formulación liofilizada que comprende: (1) un factor de crecimiento hepático; (2) trehalosa; y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Description
DESCRIPCIÓN
Preparación de HGF liofilizada
Campo técnico
La presente invención se refiere a una formulación liofilizada que comprende factor de crecimiento hepático.
Antecedentes
El factor de crecimiento hepático (HGF) es un péptido bioactivo que tiene actividad de proliferación de células parenquimatosas hepáticas y se ha encontrado en diversas especies de animales. En seres humanos, el factor de crecimiento hepático humano (hHGF) se ha encontrado en plasma de pacientes con hepatitis fulminante (documento de patente 1) y, en los últimos años, puede producirse en masa factor de crecimiento hepático humano recombinante (rhHGF) por biotecnología (documento que no es patente 1). Se espera que estos factores de crecimiento hepáticos puedan usarse como agentes terapéuticos y profilácticos eficaces para hepatitis y cirrosis aumentando las células parenquimatosas hepáticas normales y, debido a las diversas actividades biológicas de los mismos, como agentes curativos para insuficiencia renal y lesiones en el estómago, duodeno, piel y similares resultantes de efectos secundarios de agentes antineoplásicos.
Se ha divulgado una formulación liofilizada que comprende factor de crecimiento hepático en el documento de patente 2, que comprende un factor de crecimiento hepático y un agente estabilizante tal como glicina, alanina, sorbitol, manitol o sulfato de dextrano.
El documento de patente 3 divulga una formulación liofilizada que comprende un factor de crecimiento hepático a una concentración tan baja como menos de 5 mg/ml, que es adecuada para medicamentos, comprendiendo la formulación un agente estabilizante tal como arginina, lisina, histidina, ácido glutámico o ácido aspártico.
El documento de patente 4 divulga una formulación liofilizada que comprende un factor de crecimiento hepático y un agente estabilizante tal como sacarosa purificada.
Lista de citas
Documentos de patente
[Documento de patente 1] Publicación de patente JP-A-S63-22526
[Documento de patente 2] Publicación de patente JP-A-H9-25241
[Documento de patente 3] Documento WO 2000/072873
[Documento de patente 4] Documento WO 2008/102849
Documentos que no son patente
[Documento que no es patente 1] Nature, vol. 342, pág. 440-443, 1989
Sumario de la invención
Problema a resolver por la invención
Sin embargo, las formulaciones liofilizadas que comprenden factor de crecimiento hepático divulgadas en la publicación de patente JP-A-H9-25241, WO 2000/072873 y WO 2008/102849 que tienen como objetivo aumentar la estabilidad del factor de crecimiento hepático, aún no logran proporcionar suficiente estabilidad en almacenamiento. Además, se ha conocido la manera de suprimir la generación de impurezas junto con el factor de crecimiento hepático o la manera de mantener la relación de isoformas prealmacenamiento en formulaciones liofilizadas que comprenden factor de crecimiento hepático.
Por lo tanto, un objeto de la presente invención es proporcionar una formulación liofilizada que tenga estabilidad en almacenamiento mejorada de factor de crecimiento hepático en comparación con formulaciones liofilizadas convencionales.
Medio para resolver el problema
Los autores de la presente invención han realizado estudios intensivos para conseguir el objeto descrito anteriormente y, como resultado, descubrieron que es posible conseguir el objeto con una formulación liofilizada que comprende (1) un factor de crecimiento hepático, (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Por tanto, los autores de la invención han completado la presente invención.
La presente invención proporciona lo siguiente:
1. [I] Una formulación liofilizada que comprende (1) un factor de crecimiento hepático, (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos;
2. [II] Un método para producir una formulación liofilizada, que comprende las etapas de:
1. (I) antes de la adición de (1) un factor de crecimiento hepático, ajustar el pH de una solución acuosa que comprende al menos (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, a pH 4,5 a 6,5, y preparar una solución acuosa que comprende (1) el factor de crecimiento hepático, (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; y
2. (II) liofilizar la solución acuosa que comprende el factor de crecimiento hepático obtenida en la etapa (I);
3. [3] Un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en una formulación liofilizada que comprende (1) un factor de crecimiento hepático;
4. [4] Un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en una formulación liofilizada que comprende (1) un factor de crecimiento hepático para suprimir la generación de agregados del factor de crecimiento hepático, suprimir la generación de impurezas junto con el factor de crecimiento hepático y/o retener una relación de isoformas prealmacenamiento;
5. [5] Un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en una formulación liofilizada que comprende (1) un factor de crecimiento hepático para suprimir la generación de agregados del factor de crecimiento hepático;
6. [6] Un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en una formulación liofilizada que comprende (1) un factor de crecimiento hepático para suprimir la generación de impurezas junto con el factor de crecimiento hepático;
7. [7] Un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en una formulación liofilizada que comprende (1) un factor de crecimiento hepático para retener una relación de isoformas prealmacenamiento del factor de crecimiento hepático; y
8. [8] Los puntos [1] a [7] como se describen anteriormente, en los que el factor de crecimiento hepático tiene una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1.
Efecto ventajoso
La presente invención puede proporcionar una formulación liofilizada que tenga estabilidad en almacenamiento mejorada de factor de crecimiento hepático en comparación con formulaciones liofilizadas convencionales.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 es un cromatograma representativo de impurezas junto con factor de crecimiento hepático;
La figura 2 es un cromatograma representativo de isoformas de factor de crecimiento hepático;
La figura 3 muestra la cantidad de agregados solubles en formulaciones liofilizadas ensayadas en el ejemplo de ensayo 2 inicialmente y después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes;
La figura 4 muestra la cantidad total de impurezas en formulaciones liofilizadas ensayadas en el ejemplo de ensayo 3 inicialmente y después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes;
La figura 5 muestra la relación de pico B con respecto a las isoformas en formulaciones liofilizadas ensayadas en el ejemplo de ensayo 4 inicialmente y después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes;
La figura 6 muestra la correlación entre el contenido de trehalosa y la relación de pico B con respecto a las isoformas en formulaciones liofilizadas ensayadas en el ejemplo de ensayo 4; y
La figura 7 muestra la correlación entre el contenido de arginina y la relación de pico B con respecto a las isoformas en formulaciones liofilizadas ensayadas en el ejemplo de ensayo 4.
Descripción de realizaciones
Las realizaciones de la presente invención se describen específicamente a partir de ahora en este documento. La presente invención no se limita a las realizaciones descritas a continuación y pueden modificarse de forma variada dentro del alcance de las reivindicaciones.
La formulación liofilizada de la presente invención comprende (1) un factor de crecimiento hepático, (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos (a partir de ahora en este documento también denominados "el compuesto (3)") seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Un factor de crecimiento hepático para su uso en la presente invención es una proteína que tiene la actividad de promover el crecimiento de células parenquimatosas hepáticas y no está limitada particularmente más allá de que esté purificada en la medida en que pueda usarse como medicamento. Por ejemplo, puede hacerse referencia a la publicación de patente JP-A-H11 -56382.
El factor de crecimiento hepático puede ser cualquiera de los que existen de forma natural en tejido orgánico tal como hígado, bazo o riñón de mamíferos o en tejido líquido tal como plasma y suero, o los modificados que tienen secuencias de aminoácidos variantes y/o cadenas de carbohidrato variantes. Ejemplos de mamíferos incluyen seres humanos, ratas, conejos, vacas, caballos, ovejas y similares, entre los que se prefieren los seres humanos. Ejemplos de la secuencia de aminoácidos de factor de crecimiento hepático humano incluyen SEQ ID NO: 1.
El factor de crecimiento hepático puede extraerse y purificarse de tejido orgánico tal como hígado, bazo y riñón de mamíferos y de tejido líquido tal como plasma y suero, o aislarse de células que producen el factor de crecimiento hepático.
El factor de crecimiento hepático puede obtenerse introduciendo en una célula hospedadora apropiada un vector apropiado en que se ha integrado un polinucleótido que codifica el factor de crecimiento hepático mediante una técnica de genomanipulación. El vector no está limitado particularmente más allá de que permita la expresión de un polinucleótido que codifica factor de crecimiento hepático. Ejemplos del vector incluyen un vector que porta un marcador de selección que es un gen resistente a antibióticos tal como neomicina, un vector que porta un gen que codifica dihidrofolato reductasa (DHFR) o glutamina sintetasa (GS) que puede amplificarse en células animales y similares, entre los que se prefieren vectores pCI (disponibles en Promega) y vectores pcDNA (disponibles en Invitrogen). La célula hospedadora no está limitada particularmente más allá de que permita la transformación con el vector y la expresión de un factor de crecimiento hepático recombinante. Ejemplos de la célula hospedadora incluyen E s ch e ric h ia coIí, B a c illu s sub tilis , levaduras, hongos filamentosos, células vegetales, células de insecto, células animales y similares, entre las que se prefieren células animales y las células de ovario de hámster chino (CHO) son particularmente preferidas.
El factor de crecimiento hepático obtenido mediante una técnica de genomanipulación puede ser, por ejemplo, un factor de crecimiento hepático recombinante sin limitación particular. Por ejemplo, puede hacerse referencia a la publicación de patente JP-A-H3-285693. El factor de crecimiento hepático usado puede ser, por ejemplo, un factor de crecimiento hepático humano recombinante (rhHGF) obtenido de una célula hospedadora que es una célula CHO.
El factor de crecimiento hepático puede ser un factor de crecimiento hepático modificado que se modifica por sustitución, eliminación, adición o inserción o una combinación de las mismas de uno o más, preferiblemente de 1 a 10 residuos aminoacídicos en la secuencia de aminoácidos de un factor de crecimiento hepático de origen natural dentro del intervalo en que la secuencia de aminoácidos modificada retiene la actividad del factor de crecimiento hepático. El factor de crecimiento hepático modificado puede ser uno que tenga, por ejemplo, un 80 %, preferiblemente un 85 %, más preferiblemente un 90 % y aún más preferiblemente un 95 % de homología con la secuencia de aminoácidos de un factor de crecimiento hepático de origen natural. Por ejemplo, puede hacerse referencia al documento WO 90/010651, publicación de patente JP-A-H4-030000 y publicación de patente JP-A-H5-111383.
La concentración del factor de crecimiento hepático antes de liofilización no está particularmente limitada y puede ser, por ejemplo, 5 mg/ml o menos, preferiblemente 3 mg/ml o menos y más preferiblemente 1 mg/ml o menos.
La formulación liofilizada de la presente invención se administra por vía parenteral a los pacientes.
Cuando la formulación liofilizada se usa para administración pulmonar, la formulación liofilizada de la presente invención se disuelve antes de su uso y se administra a un paciente mediante nebulizador.
Cuando la formulación liofilizada se usa para inyección, la formulación liofilizada de la presente invención se disuelve antes de su uso y se administra por vía intravenosa, subcutánea o intramuscular a un paciente.
La concentración del factor de crecimiento hepático en una solución acuosa obtenida disolviendo la formulación liofilizada no está particularmente limitada y puede ser, por ejemplo, 5 mg/ml o menos. El agua para disolver la formulación liofilizada de la presente invención no está particularmente limitada más allá de que sea agua usada en la práctica médica y ejemplos de la misma incluyen agua para inyección, agua purificada esterilizada, solución salina y similares.
La trehalosa para su uso en la presente invención no está particularmente limitada más allá de que esté purificada hasta un grado farmacéuticamente aceptable y ejemplos de la misma incluyen anhídrido de trehalosa, hidrato de trehalosa y similares. Ejemplos de hidrato de trehalosa incluyen, sin limitación particular, hidrato de trehalosa (dihidrato de trehalosa) enumerado en la Farmacopea Japonesa 16.a edición y similares.
La cantidad de trehalosa añadida a la formulación liofilizada es tal que la relación en masa entre el factor de crecimiento hepático y trehalosa (a partir de ahora en este documento en este párrafo, expresada como la cantidad equivalente a anhídrido de trehalosa) es, por ejemplo, de 1:4 a 1:460, preferiblemente de 1:4 a 1:370 y más preferiblemente de 1:8 a 1:280. Como alternativa, siendo la masa total de la formulación liofilizada en términos de materia sólida 100,0 partes en masa, la trehalosa es, por ejemplo, de 20,0 a 95,0 partes en masa y preferiblemente de 30,0 a 94,0 partes en masa. Además, en una solución acuosa que comprende 1,0 mg/ml de factor de crecimiento hepático obtenido disolviendo la formulación liofilizada, la concentración de trehalosa es, por ejemplo, de 4,0 mg/ml a 460,0 mg/ml y preferiblemente de 8,0 mg/ml a 280,0 mg/ml.
El compuesto (3) para su uso en la presente invención se selecciona del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
El compuesto (3) no está particularmente limitado más allá de que esté purificado a un grado farmacéuticamente aceptable. Puede usarse uno o dos o más tipos del compuesto (3).
El compuesto (3) es preferiblemente, en vista de la supresión de la generación de agregaciones o impurezas uno o más seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
El compuesto (3) incluye, como sustancia básica, arginina, histidina, lisina y meglumina y es preferiblemente uno o más seleccionados de arginina, histidina y lisina. La cantidad del compuesto (3) añadida a la formulación liofilizada puede estar dentro del intervalo de concentración que permita la disolución del factor de crecimiento hepático sin agregación en una solución acuosa que comprenda el factor de crecimiento hepático usado para la producción de la formulación liofilizada o en una solución acuosa que comprenda el factor de crecimiento hepático obtenida disolviendo la formulación liofilizada.
La cantidad del compuesto (3) añadida a la formulación liofilizada es tal que la relación en masa entre el factor de crecimiento hepático y el compuesto (3) (a partir de ahora en este documento en este párrafo, expresada como la cantidad equivalente a una forma libre) es, por ejemplo, de 1:1 a 1:50, preferiblemente de 1:1 a 1:40 y más preferiblemente de 1:2 a 1:35. Como alternativa, siendo la masa total de la formulación liofilizada en términos de materia sólida 100,0 partes en masa, la cantidad de compuesto (3) es, por ejemplo, de 1,5 a 60,0 partes en masa y preferiblemente de 3,0 a 59,0 partes en masa. Además, en una solución acuosa que comprende 1,0 mg/ml de factor de crecimiento hepático obtenido disolviendo la formulación liofilizada, la cantidad del compuesto (3) es, por ejemplo,
de 1,0 mg/ml a 50,0 mg/ml, preferiblemente de 1,0 mg/ml a 40,0 mg/ml y más preferiblemente de 2,0 mg/ml a 35,0 mg/ml.
El compuesto (3) en la presente invención puede ser una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Ejemplos de la sal farmacéuticamente aceptable incluyen un clorhidrato, una sal acetato, una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de magnesio y similares.
En la presente invención, en una formulación liofilizada que comprende (1) un factor de crecimiento hepático, comprendiendo además (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, puede mejorarse la estabilidad en almacenamiento del factor de crecimiento hepático en comparación con formulaciones liofilizadas convencionales. La estabilidad en almacenamiento, como se usa en este documento, se refiere a la supresión de la generación de agregados del factor de crecimiento hepático, la supresión de la generación de impurezas junto con el factor de crecimiento hepático y/o la retención de la relación de isoformas prealmacenamiento.
La presente invención proporciona un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en una formulación liofilizada que comprende (1) factor de crecimiento hepático.
Concretamente, la presente invención proporciona un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en una formulación liofilizada que comprende (1) factor de crecimiento hepático para suprimir la generación de agregados del factor de crecimiento hepático.
La presente invención también proporciona un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para suprimir la generación de impurezas en una formulación liofilizada que comprende (1) factor de crecimiento hepático junto con el factor de crecimiento hepático.
La presente invención proporciona además un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en una formulación liofilizada que comprende (1) factor de crecimiento hepático para retener una relación de isoformas prealmacenamiento del factor de crecimiento hepático.
El término "agregados", como se usa en este documento, se refiere a agregados de factor de crecimiento hepático y ejemplos de los mismos incluyen agregados solubles tales como dímeros y trímeros y agregados insolubles generados mediante interacciones.
En la presente invención, la cantidad de agregados puede evaluarse, por ejemplo, midiendo la cantidad de agregados solubles por cromatografía de exclusión por tamaño.
En la presente invención, la cantidad de los agregados solubles es, cuando, por ejemplo, la cantidad de agregados se evalúa para una formulación liofilizada después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes por cromatografía de exclusión por tamaño, por ejemplo, menos de un 1,4 % y preferiblemente un 1,0 % o menos. Como alternativa, la cantidad de agregados medida para una formulación liofilizada después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes por cromatografía de exclusión por tamaño es, por ejemplo, 4,6 veces o menos, preferiblemente 4 veces o menos, más preferiblemente 3,5 veces o menos y aún más preferiblemente 3 veces o menos de la cantidad de agregados antes de almacenamiento.
La cantidad de agregados insolubles puede evaluarse por, para agregados insolubles relativamente grandes con el tamaño de 1 pm o más, el método de oscurecimiento de la luz en el ensayo de materia en partículas insolubles descrito en la Farmacopea Japonesa 16.a edición o el método de imágenes de microflujo, y para agregados insolubles con el tamaño de 1 pm o menos, por el método de dispersión de luz o el método de ultracentrifugación.
El término "impureza" o "impurezas", como se usa en este documento, se refiere a una o más sustancias correspondientes al uno o más picos observados en cromatografía de fase inversa distintos del pico del factor de crecimiento hepático.
La cantidad de impurezas se evalúa por cromatografía de fase inversa. Por ejemplo, para las formulaciones liofilizadas usadas en los ejemplos en la presente memoria descriptiva, se observaron dos picos (a partir de ahora en este documento denominados respectivamente "ImpA" e "ImpB") en el tiempo de retención de aproximadamente 10
minutos y otras impurezas distintas de ImpA e ImpB (a partir de ahora en este documento denominadas "otras imp.") en el tiempo de retención de aproximadamente 6 a 7 minutos como se muestra en la figura 1.
En la presente invención, la cantidad de impurezas es, cuando, por ejemplo, la cantidad de impurezas se valúa para una formulación liofilizada después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes por cromatografía de fase inversa, por ejemplo, un 1,7 % o menos, preferiblemente un 1,5 % o menos, más preferiblemente un 1,3 % o menos y aún más preferiblemente un 1,0 % o menos. Como alternativa, la cantidad de impurezas medida para una formulación liofilizada después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes por cromatografía de fase inversa es, por ejemplo, menos de 9 veces, más preferiblemente 7 veces o menos, más preferiblemente 5 veces o menos y aún más preferiblemente 3 veces o menos de la cantidad de impurezas antes de almacenamiento.
El término "isoforma", como se usa en este documento, se refiere a una variante de carga de factor de crecimiento hepático y se refiere a una pluralidad de proteínas que tienen diferente estado de carga.
La relación de isoformas puede evaluarse, por ejemplo, por cromatografía de intercambio iónico. Por ejemplo, para las formulaciones liofilizadas usadas en los ejemplos en la presente memoria descriptiva, se observaron dos picos (a partir de ahora en este documento mencionados respectivamente "pico A" y "pico B") en 35 a 45 minutos de tiempo de retención como se muestra en la figura 2. La expresión "relación de isoformas", como se usa en este documento, se refiere a la proporción de cada isoforma con respecto a la cantidad total de isoformas.
La actividad biológica del factor de crecimiento hepático en la presente invención puede evaluarse de acuerdo con un ensayo celular que evalúa la proliferación de células epiteliales pulmonares de visón (células Mv.1.Lu) o células 4BMr5 en presencia de factor de crecimiento transformante p-1 (TGFp-1) (véase Journal of Immnological Methods. vol. 258, pág. 1-11,2001 y similares) y puede expresarse como la concentración eficaz al 50 % (CE50). El cambio en la actividad biológica de la formulación liofilizada durante almacenamiento puede expresarse como el valor cuantitativo relativo (%) obtenido dividiendo la CE50 antes de almacenamiento por la CE50 después de almacenamiento.
Para mantener el pH constante de una solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático usado para la producción de la formulación liofilizada o de una solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático obtenida disolviendo la formulación liofilizada, la formulación liofilizada puede comprender un agente tamponante.
El agente tamponante para su uso en la presente invención no está particularmente limitado más allá de que sea farmacéuticamente aceptable y ejemplos del mismo incluyen ácido fosfórico, dihidrogenofosfato de sodio, dihidrogenofosfato de sodio monohidrato, hidratos de ácido cítrico, hidratos de citrato de sodio, citrato de disodio, ácido acético, ácido acético glacial, hidratos de acetato de sodio, hidratos de carbonato de sodio, hidrogenocarbonato de sodio, glicina, glicilglicina y similares.
El agente tamponante puede usarse en forma de una solución de tampón que se usa en general tal como solución de tampón fosfato, solución de tampón de ácido cítrico y solución de tampón de ácido cítrico.
La cantidad del agente tamponante en la formulación liofilizada es, en términos de la concentración en una solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático antes de la liofilización, por ejemplo, de 1 a 100 mM. Ajustando la concentración a este intervalo, puede conseguirse pH constante de la solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático obtenida disolviendo la formulación liofilizada.
El factor de crecimiento hepático tiene solubilidad variada dependiendo del pH, estando la solubilidad en un mínimo en aproximadamente el punto isoeléctrico. Por lo tanto, puede seleccionarse el pH, teniendo en cuenta el punto isoeléctrico, de modo que el factor de crecimiento hepático pueda disolverse sin agregación en una solución acuosa que comprenda el factor de crecimiento hepático usado para la producción de la formulación liofilizada o en una solución acuosa que comprenda el factor de crecimiento hepático obtenida disolviendo la formulación liofilizada.
En la presente invención, el factor de crecimiento hepático usado en los ejemplos en la presente memoria descriptiva, por ejemplo, tiene la solubilidad mínima de 0,1 a 0,2 mg/ml a aproximadamente pH neutro que es el punto isoeléctrico y tiene la solubilidad de 1,6 mg/ml o mayor a aproximadamente pH 5. Por lo tanto, una solución acuosa antes de la liofilización y una solución acuosa obtenida disolviendo la formulación liofilizada tiene un pH de, por ejemplo, de 4,5 a 6,5 y preferiblemente de 5,0 a 6,0.
En el método para producir una formulación liofilizada de factor de crecimiento hepático de la presente invención, puede usarse un agente de ajuste del pH distinto del agente tamponante para ajustar el pH de una solución acuosa antes de la liofilización.
El agente de ajuste de pH para su uso en la presente invención no está particularmente limitado más allá de que sea farmacéuticamente aceptable y ejemplos del mismo incluyen ácido clorhídrico, ácido cítrico anhidro, hidratos de ácido cítrico, hidratos de citrato de sodio, glicina, ácido succínico, ácido acético, ácido acético glacial, hidratos de acetato de sodio, ácido tartárico, hidróxido de sodio, hidrogenocarbonato de sodio, hidratos de carbonato de sodio, carbonato de sodio seco, monoetanolamina, trietanolamina, ácido láctico, lactato de sodio, ácido fosfórico, hidratos de
hidrogenofosfato de sodio, monohidrogenofosfato de sodio anhidro, dihidrogenofosfato de sodio, dihidrogenofosfato de sodio anhidro, dihidrogenofosfato de sodio cristalino, fosfato de trisodio, fosfato de dipotasio, dihidrogenofosfato de potasio y similares.
Para evitar la reducción del contenido de factor de crecimiento hepático en una solución farmacéutica a administrar, debida a la adsorción del factor de crecimiento hepático en el vidrio o resina que constituye un recipiente, después de reconstitución de la formulación liofilizada, la formulación liofilizada puede comprender un tensioactivo.
El tensioactivo para su uso en la presente invención no está particularmente limitado más allá de que sea farmacéuticamente aceptable y ejemplos del mismo incluyen tensioactivos no iónicos que incluyen específicamente polisorbato 80, polisorbato 20, poloxámeros, polietilenglicoles, HCO-40, HCO-60 y similares.
La cantidad del tensioactivo en la formulación liofilizada es, en una solución acuosa que comprende 1,0 mg/ml de factor de crecimiento hepático obtenida disolviendo la formulación liofilizada, por ejemplo, de 0,020 a 1,0 mg/ml, preferiblemente de 0,050 a 1,0 mg/ml, más preferiblemente de 0,075 a 0,5 mg/ml y aún más preferiblemente de 0,075 a 0,2 mg/ml.
La formulación liofilizada de la presente invención comprende, siendo la masa total de la formulación liofilizada en términos de materia sólida 100,0 partes en masa, de 0,1 a 4,5 partes en masa del factor de crecimiento hepático, de 20.0 a 95,0 partes en masa de trehalosa (a partir de ahora en este documento en este párrafo, expresada como la cantidad equivalente a anhídrido de trehalosa) y de 1,5 a 60,0 partes en masa del compuesto (3) (a partir de ahora en este documento en este párrafo, expresada como la cantidad equivalente a una forma libre). En una realización, siendo la masa total de la formulación liofilizada en términos de materia sólida 100,0 partes en masa, el factor de crecimiento hepático representa de 0,3 a 4,4 partes en masa, la trehalosa representa de 30,0 a 94,0 partes en masa y el compuesto (3) representa de 3,0 a 59,0 partes en masa. En otra realización, el factor de crecimiento hepático representa de 0,3 a 4,4 partes en masa, la trehalosa representa de 30,0 a 94,0 partes en masa, el compuesto (3) representa de 3,0 a 59.0 partes en masa y el polisorbato 80 representa de 0,026 a 0,7 partes en masa.
En la presente invención, la formulación liofilizada puede comprender, además, si es necesario, un aditivo tal como un vehículo, un agente de tonicidad y un antioxidante.
Un método para producir una formulación liofilizada de la presente invención comprende las etapas de:
(I) antes de la adición de (1) un factor de crecimiento hepático, ajustar el pH de una solución acuosa que comprende al menos (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, a pH 4,5 a 6,5, y preparar una solución acuosa que comprende (1) el factor de crecimiento hepático, (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; y
(II) liofilizar la solución acuosa que comprende el factor de crecimiento hepático obtenida en la etapa (I).
La formulación liofilizada de la presente invención puede producirse mediante el método de producción.
En la etapa (I), el pH de una solución acuosa que comprende al menos (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se ajusta a pH 4,5 a 6,5 y preferiblemente a pH 5,0 a 6.0.
Antes de ajustar el pH, la solución acuosa puede comprender (2) trehalosa, pero no comprende (1) factor de crecimiento hepático. Concretamente, después de ajustar el pH de la solución acuosa que comprende al menos el compuesto (3) a pH 4,5 a 6,5, se añade (1) factor de crecimiento hepático a la misma o se añaden simultánea o secuencialmente (1) factor de crecimiento hepático y (2) trehalosa a la misma.
Para ajustar el pH, puede usarse un agente tamponante y/o un agente de ajuste del pH. La temperatura de reacción durante el ajuste el pH no está particularmente limitada.
La solución acuosa que comprende al menos el compuesto (3) puede prepararse disolviendo el compuesto (3) en un disolvente.
El disolvente para la preparación de la solución acuosa que comprende al menos el compuesto (3) no está particularmente limitado más allá de que sea, por ejemplo, agua farmacéuticamente aceptable. Ejemplos del mismo incluyen agua para inyección, agua purificada esterilizada y similares.
(1) El factor de crecimiento hepático y (2) la trehalosa pueden añadirse tal cual o en forma de solución acuosa. Un disolvente para preparar una solución acuosa puede ser el mismo que o diferente del disolvente para la preparación de la solución acuosa que comprende al menos el compuesto (3). La temperatura durante la adición de (1) factor de crecimiento hepático y (2) trehalosa no está particularmente limitada.
En la etapa (I), puede añadirse un tensioactivo, otros aditivos (un vehículo, un agente de tonicidad, un antioxidante y similares) y similares, si fuera necesario.
En la etapa (II), se liofiliza la solución acuosa que comprende el factor de crecimiento hepático obtenida en la etapa (I).
La solución acuosa que comprende el factor de crecimiento hepático puede liofilizarse de acuerdo con un método común después de verter la solución acuosa que comprende el factor de crecimiento hepático en un vial o una ampolla. Se prefiere que la solución acuosa que comprende el factor de crecimiento hepático se esterilice por filtración a través de un filtro o similar y se liofilice.
Ejemplos del método de liofilización incluyen un método que comprende tres operaciones unitarias de una etapa de congelación para enfriamiento y congelación a presión normal, una etapa de secado principal para sublimación y secado del agua libre que no está vinculada con solutos a presión reducida y una etapa de secado secundaria para eliminar el agua adsorbida y cristalización del agua inherente a los solutos (para referencias, Pharm. Tech. Japan, vol.8, n.° 1, pág.75-87, 1992 y similares pueden mencionarse).
La temperatura durante la etapa de congelación es, por ejemplo, -40 °C o menos. La temperatura durante la etapa de secado principal es, por ejemplo, de -20 °C a 10 °C. La temperatura durante la etapa de secado secundaria es, por ejemplo, de 20 °C a 30 °C. La presión reducida es, por ejemplo, 10 Pa o menos.
El término "torta", como se usa en este documento, se refiere a una materia sólida porosa en la formulación liofilizada. Las características de la formulación liofilizada pueden evaluarse por observación visual de la estructura porosa o color de una torta o solubilidad de la formulación liofilizada en agua u observación visual de la solución acuosa así obtenida.
La formulación liofilizada de la presente invención en general es una torta aceptablemente blanca y se disuelve rápidamente en agua para dar una solución acuosa transparente e incolora.
Por otro lado, una solución acuosa obtenida disolviendo una formulación liofilizada convencional puede ser turbia posiblemente debido a la generación de agregados insolubles que pueden derivar del factor de crecimiento hepático y similares. Por tanto, las características de la solución acuosa obtenida disolviendo la formulación liofilizada pueden ser indicativas de la generación de agregados insolubles. El hecho de que la solución acuosa sea transparente después de almacenamiento de la formulación liofilizada significa que se suprime la generación de agregados insolubles.
Ejemplos
La presente invención se describe más específicamente a partir de ahora en este documento mediante ejemplos que no limitan la presente invención.
El factor de crecimiento hepático usado en los presente ejemplos se preparó sintetizando completamente un gen basado en la información de secuencia de aminoácidos divulgada en la publicación de patente JP-A-H11-056382, incorporando el gen en un vector, expresando la proteína en células CHO y aislando y purificando la proteína.
(Ejemplo 1 a 25 y ejemplos comparativos 1 a 7)
Se prepararon formulaciones liofilizadas de los ejemplos y ejemplos comparativos por el método descrito a continuación en este documento. Las tablas 1 a 4 indican las cantidades (mg) de componentes por ml de cada solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático. Los valores en las tablas están redondeados a una cifra decimal. Las soluciones acuosas que comprenden factor de crecimiento hepático se prepararon en el valor que varía de 100 ml a 250 ml.
Tabla 1.
Tabla 2.
Tabla 3.
Tabla 4.
<Preparación de tampón de mezcla>
De acuerdo con el volumen de cada solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático y la concentración indicada en las tablas 1 a 4, se mezclaron componentes distintos del factor de crecimiento hepático o polisorbato 80 y se agitaron con una cantidad apropiada de agua para inyección (aproximadamente un 80 % del volumen de la solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático). Después de confirmar visualmente la disolución, se ajustó el pH a 5,5 con ácido clorhídrico y/o hidróxido de sodio y el volumen se ajustó con agua para inyección para dar un tampón de mezcla.
<Preparación de solución acuosa que comprende factor de crecim iento hepático>
Se preparó una solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático mediante el siguiente procedimiento.
(a) Una solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático se ajustó para que tuviera la concentración del factor de crecimiento hepático como se indica en la tabla 1 por ultrafiltración usando el tampón de mezcla anterior. La concentración de factor de crecimiento hepático se calculó a partir de la siguiente fórmula (A) después de determinar la absorbancia a 280 nm en un espectrofotómetro de ultravioleta-visible (usando una cubeta con una trayectoria de luz de 1 cm):
Concentración de proteína (mg/ml) = (A280/1,73) x D (A)
en la que:
A280: absorbancia a 280 nm;
1,73: absorbancia teórica de una solución de muestra con un 0,1 % de concentración con la trayectoria de luz de 1 cm y a 280 nm; y
D: factor de dilución después de medición.
(b) Después de ello se añadió polisorbato 80 para obtener la concentración deseada como se indica en la tabla 1, seguido de filtración a través de un filtro estéril (nombre del producto: filtro MILLEX GV 0,22 pm, disponible en Millipore) para dar la solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático.
<Etapa de liofilización>
La solución acuosa que comprende factor de crecimiento hepático se dividió a 1 ml en viales de vidrio de 5 ml que después se cerraron parcialmente con tapones de caucho. Después de liofilización de acuerdo con el programa indicado en la tabla 5, cada vial se cerró completamente con el tampón de caucho. Después se fijó un tapón de aluminio al vial de vidrio para dar una formulación liofilizada.
El ejemplo comparativo 5 es una formulación liofilizada producida de acuerdo con la formulación divulgada en el documento WO 2000/072873. El ejemplo comparativo 6 es una formulación liofilizada producida de acuerdo con la formulación divulgada en el documento WO 2008/102849.
Tabla 5.
(Ejemplo de ensayo 1)
Las formulaciones liofilizadas obtenidas de los ejemplos 1 a 11 y ejemplos comparativos 1 a 6 se examinaron para las características de las formulaciones liofilizadas, la solubilidad de las formulaciones liofilizadas en agua para inyección y las características de las soluciones acuosas obtenidas después de disolución de acuerdo con los siguientes procedimientos.
<Método>
Cada formulación liofilizada obtenida se observó visualmente (formación de torta y tonalidad de color) en fondos blanco y negro en un entorno con 1000 a 3000 lux. Después se añadió agua para inyección (1 ml) a cada formulación liofilizada que se dejó reposar antes de observación visual de la solubilidad de la formulación liofilizada y el color de la solución obtenida.
El término "instantánea" indicado en la tabla 6 se refiere a que la formulación se disolvió completamente en 1 minuto y la expresión "ligeramente soluble" se refiere a que la formulación no se disolvió completamente incluso después de 1 minuto.
<Resultados>
Los resultados para las muestras de los ejemplos 1 a 4 y ejemplos comparativos 1 a 6 se muestran en la tabla 6. Los ejemplos 1 a 4 formaron tortas blancas y mostraron solubilidad preferible. El ejemplo comparativo 1 que comprende xilitol y el ejemplo comparativo 3 que comprende sorbitol no formaron tortas y eran sólidos fundidos blancos o incoloros. El ejemplo comparativo 5 que no comprendía un sacárido era un sólido blanco sin formación de una torta que se observa en general para formulaciones liofilizadas. Los ejemplos 5 a 11 también formaron tortas blancas de forma simular a los ejemplos 1 a 4 y mostraron solubilidad preferible.
Tabla 6.
Las formulaciones liofilizadas obtenidas se almacenaron en una cámara termostática a 25 °C, 40 °C o 60 °C durante 2 semanas o 1 mes seguido de los siguientes ensayos.
(Ejemplo de ensayo 2)
La cantidad de agregados solubles en los ejemplos 1 a 25 y los ejemplos comparativos 1 a 7 se evalúo como sigue. <Método>
Se añadió agua para inyección (1 ml) a cada formulación liofilizada de ejemplo y ejemplo comparativo para disolución en enfriamiento con hielo. La solución se agitó moderadamente para obtener una solución uniforme que después se dejó reposar durante 5 minutos. La solución obtenida se distribuyó en piezas de vial de 250 pl que se colocaron en viales de HPLC para obtener muestras.
Cada muestra se midió por cromatografía de exclusión por tamaño en las siguientes condiciones analíticas para la cantidad de agregados solubles antes y después de almacenamiento y se calculó la cantidad de agregados solubles por el método de porcentaje de área.
Detector: UV 280 nm;
Columna: columna de protección (nombre comercial: TSKgel G3000SWXL, disponible en Tosoh Corporation); Temperatura de columna: 30 °C;
Fase móvil: obtenida disolviendo 39 g de dihidrogenofosfato de sodio dihidrato, 87,5 g de cloruro de sodio y 5,0 g de lauril sulfato de sodio en 5000 ml de agua y ajustando el pH de la solución a 7,5 con una solución de hidróxido de sodio de 2 mol/l;
Inyección de la muestra: 50 pl; y
Caudal: 1 ml/min.
<Resultados>
Los resultados de medición de la cantidad de agregados solubles en las muestras inicialmente (antes de almacenamiento) y después de almacenamiento a 25 °C, 40 °C o 60 °C durante 2 semanas o 1 mes se muestran en las tablas 7 a 9. Los resultados de medición de la cantidad de agregados solubles en las muestras de los ejemplos 1 a 4 y los ejemplos comparativos 1 a 6 inicialmente y después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes se muestran en la figura 3. Además, la correlación entre el contenido de trehalosa en las formulaciones liofilizadas y la cantidad de agregados solubles se muestra en la tabla 10.
De acuerdo con la tabla 7, la cantidad de agregados solubles en los ejemplos comparativos 1 a 6 se aumentó con un aumento en el periodo de almacenamiento y la temperatura de almacenamiento. La cantidad de agregados solubles se aumentó significativamente después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes.
De acuerdo con las tablas 7 y 8 paralelamente, dicho cambio significativo en la cantidad de agregados solubles como en los ejemplos comparativos no se observó para los ejemplos 1 a 11 en las condiciones de almacenamiento ensayadas. Por tanto, se suprimió la generación de agregados solubles en los ejemplos 1 a 11 incluso en la condición de almacenamiento de 60 °C.
De acuerdo con las tablas 9 y 10, la cantidad de agregados solubles se aumentó significativamente en el ejemplo comparativo 7 que no comprendía trehalosa.
Paralelamente no se observó cambio significativo en la cantidad de agregados solubles para los ejemplos 12 a 15 que comprenden diversas cantidades de factor de crecimiento hepático y los ejemplos 23 a 25 que comprenden diversas cantidades de arginina.
Tabla 7.
Tabla 8.
Tabla 9.
Tabla 10.
(Ejemplo de ensayo 3)
La cantidad de impurezas en los ejemplos 1 a 25 y los ejemplos comparativos 1 a 7 se evalúo como sigue.
<Método>
Las muestras usadas fueron las de viales de HPLC preparadas para evaluación de la cantidad de agregados solubles. Cada muestra se midió por cromatografía de fase inversa en las siguientes condiciones analíticas para la cantidad de impurezas antes y después de almacenamiento y se calculó la cantidad de impurezas por el método de porcentaje de área.
Detector: UV 215 nm;
Columna: columna de fase inversa (nombre comercial: Inertsil WP300-C8, disponible en GL Sciences Inc.) fijada con la columna de protección GL Cart;
Temperatura de columna: 40 °C;
Fase móvil A: agua/ácido trifluoroacético (1000:1);
Fase móvil B: acetonitrilo/ácido trifluoroacético (1000:0,85);
Inyección de la muestra: 25 gl;
Caudal: 1 ml/min; y
Gradiente: la relación de volumen de la fase móvil B con respecto a la cantidad total de la fase móvil A y la fase móvil B: 15 % (inicial) - 70 % (27,5 min) - 70 % (30 min) - 15 % (30,01 min) - 15 % (35 min).
<Resultados>
Los resultados de medición de la cantidad de impurezas en las muestras de los ejemplos 1 a 11 y los ejemplos comparativos 1 a 6 inicialmente (antes de almacenamiento) y después de almacenamiento a 25 °C, 40 °C o 60 °C durante 2 semanas o 1 mes se muestran en las tablas 11 y 12. Los resultados de medición de la cantidad total de impurezas en las muestras de los ejemplos 1 a 4 y los ejemplos comparativos 1 a 6 inicialmente y después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes se muestran en la figura 4.
De acuerdo con la tabla 11, la cantidad total de impurezas en los ejemplos 1 a 4 no se cambió sustancialmente en las condiciones de almacenamiento de 25 °C y 40 °C. De acuerdo con las tablas 11 y 12, un aumento en la cantidad total de impurezas en los ejemplos 1 a 11 fue como mucho 2 veces con respecto al valor inicial incluso en la condición de almacenamiento de 60 °C, mientras que un aumento en la cantidad en formulaciones de todos los ejemplos comparativos fue casi 10 veces o más. En la condición de almacenamiento de 60 °C, se descubrió que cualquiera de ImpA, ImpB y otras imp. Se aumentó en formulaciones de todos los ejemplos comparativos. Por tanto, se suprimió la generación de impurezas en los ejemplos 1 a 11 incluso en la condición de almacenamiento de 60 °C.
En los ejemplos 12 a 25, no se observó cambio significativo en la cantidad total de impurezas en cualquier condición de almacenamiento.
Tabla 11.
Tabla 12.
(Ejemplo de ensayo 4)
La relación de isoformas en los ejemplos 1 a 25 y los ejemplos comparativos 1 a 7 se evalúo como sigue.
<Método>
Las muestras usadas fueron las de viales de HPLC preparadas para evaluación de la cantidad de agregados.
Cada muestra se midió por cromatografía de intercambio iónico en las siguientes condiciones analíticas para la cantidad de isoformas antes y después de almacenamiento y se calculó la relación de isoformas por el método de porcentaje de área.
Detector: UV 215 nm;
Columna: nombre comercial: Agilent Bio SCX NP5 PK, disponible en Agilent Technologies;
Temperatura de columna: 30 °C;
Fase móvil A: 50 mmol/l de tampón Tris-HCI (pH 9,0);
Fase móvil B: 50 mmol/l de tampón Tris-HCI (pH 9,0), 1 mol/l de NaCl
Inyección de la muestra: 50 gl;
Caudal: 0,5 ml/min; y
Gradiente: la relación de volumen de la fase móvil B con respecto a la cantidad total de la fase móvil A y la fase móvil B: 20 % (inicial) - 60 % (50 min) - 80 % (51 min) - 80 % (60 min) - 20 % (60,01 min) - 20 % (80 min).
<Resultados>
Los resultados de medición del cambio en la cantidad de isoformas expresada como la relación de pico B con respecto a la suma de pico A y pico B en las muestras inicialmente (antes de almacenamiento) y después de almacenamiento a 25 °C, 40 °C o 60 °C durante 2 semanas o 1 mes se muestran en las tablas 13 a 15. Los resultados de medición del cambio de relación de isoformas expresada como la relación de pico B en las muestras de los ejemplos 1 a 4 y los ejemplos comparativos 1 a 6 inicialmente y después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes se muestran en la figura 5. Además, la correlación entre el contenido de trehalosa en las formulaciones liofilizadas y la relación de pico B se muestra en la figura 6 y la correlación entre el contenido de arginina y la relación de pico B se muestra en la figura 7.
De acuerdo con las tablas 13 y 14, se observó poco cambio en la relación de isoformas de pico B en los ejemplos 1 a 11 y el ejemplo comparativo 5 en las condiciones de almacenamiento ensayadas, mientras que la relación de isoformas de pico B se cambió significativamente en otros ejemplos comparativos en la condición de almacenamiento de 60 °C. Por tanto, se suprimió el cambio en la relación de isoformas en los ejemplos 1 a 11 incluso en la condición de almacenamiento de 60 °C. En el ejemplo comparativo 1, se observó un cambio significativo después de almacenamiento, concretamente la isoforma de pico A se eliminó, de modo que se observó solamente la isoforma detectada que era pico B y un pico que no era una isoforma.
De acuerdo con la figura 6, se descubrió que la relación de isoformas de pico B se disminuía con un aumento en el contenido de trehalosa en las formulaciones. Asimismo, también se observó una disminución en la relación de isoformas de pico B para la formulación del ejemplo comparativo 7 que no comprendía trehalosa.
De acuerdo con la figura 7, se descubrió que la relación de ¡soformas de pico B se disminuía con una disminución en el contenido de arginina en las formulaciones en la condición de almacenamiento de 60 °C durante 1 mes.
Paralelamente no se observó cambio en la relación de isoformas de acuerdo con el cambio en el contenido de factor de crecimiento hepático en las formulaciones.
Tabla 13.
Tabla 14.
Tabla 15.
(Ejemplo de ensayo 5)
La cantidad de agregados insolubles en los ejemplos 1 a 25 y los ejemplos comparativos 1 a 7 se evalúo como sigue. <Método>
Se añadió agua para inyección (1 ml) a cada formulación liofilizada que se dejó reposar y después se diluyó en agua para inyección o cada solución acuosa de placebo para dar una muestra. Cada muestra se midió en un analizador de imágenes de partículas en flujo para el número de micropartículas insolubles antes y después de almacenamiento y se calculó el número de micropartículas insolubles de acuerdo con la siguiente fórmula:
Number of microparticles (number/vial) = P x 1000 x V/(n x v)
en la que:
P: número de partículas detectadas;
V: volumen de la solución de muestra (ml);
n: número de mediciones; y
v: volumen de la muestra por medición.
<Resultados>
Los resultados de medición de la cantidad de agregados insolubles en las muestras de los ejemplos 1 a 11 y los ejemplos comparativos 1 a 6 inicialmente (antes de almacenamiento) y después de almacenamiento a 60 °C durante 2 semanas o 1 mes se muestran en las tablas 16 y 17.
De acuerdo con la tabla 16, la cantidad de agregados insolubles en los ejemplos comparativos 1 a 6 se aumentó después de almacenamiento a 60 °C durante 1 mes. De acuerdo con las tablas 16 y 17 paralelamente, dicho cambio significativo en la cantidad de agregados insolubles como en los ejemplos comparativos no se observó para los ejemplos 1 a 11. Por tanto, se suprimió la generación de agregados insolubles en los ejemplos 1 a 11 incluso en la condición de almacenamiento de 60 °C durante 1 mes. No se observó cambio significativo en la cantidad de agregados insolubles para los ejemplos 12 a 25.
Tabla 16.
Tabla 17.
(Ejemplo de ensayo 6)
La actividad biológica del ejemplo 1, el ejemplo comparativo 5 y el ejemplo comparativo 6 se evaluó como sigue. <Método>
Se cultivaron células epiteliales pulmonares de visón (células Mv.1.Lu), se confirmó la viabilidad de las células y después se preparó una solución celular a 1 x 105/ml. Se añadió una solución de factor de crecimiento transformante p-1 (TGFp-1) a cada pocillo de una placa de ensayo de 96 pocillos y se añadió una solución de muestra a cada pocillo de una concentración de factor de crecimiento hepático de 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64 o 128 ng/ml. La solución celular de 1 x 105/ml se añadió entonces y la placa se incubó en una estufa de incubación de dióxido de
Claims (3)
1. Una formulación liofilizada que comprende:
(1) un factor de crecimiento hepático;
(2) trehalosa; y
(3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
2. Un método para producir una formulación liofilizada, que comprende las etapas de:
(I) antes de la adición de (1) un factor de crecimiento hepático, ajustar el pH de una solución acuosa que comprende al menos (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, a pH 4,5 a 6,5, y preparar una solución acuosa que comprende (1) el factor de crecimiento hepático, (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; y
(II) liofilizar la solución acuosa que comprende el factor de crecimiento hepático obtenida en la etapa (I). 3. Un método para estabilizar un factor de crecimiento hepático incluyendo (2) trehalosa y (3) uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en arginina, histidina, lisina, meglumina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, creatina, creatinina, tris(hidroximetil)aminometano y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en una formulación liofilizada que comprende (1) un factor de crecimiento hepático.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014092888 | 2014-04-28 | ||
| PCT/JP2015/062523 WO2015166885A1 (ja) | 2014-04-28 | 2015-04-24 | Ｈｇｆ凍結乾燥製剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2887079T3 true ES2887079T3 (es) | 2021-12-21 |
Family
ID=54358614
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES15786509T Active ES2887079T3 (es) | 2014-04-28 | 2015-04-24 | Preparación de HGF liofilizada |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11547743B2 (es) |
| EP (1) | EP3138575B1 (es) |
| JP (1) | JP6568846B2 (es) |
| KR (1) | KR102291913B1 (es) |
| CN (1) | CN106456695B (es) |
| AU (1) | AU2015254307B2 (es) |
| BR (1) | BR112016025051A2 (es) |
| CA (1) | CA2947396C (es) |
| ES (1) | ES2887079T3 (es) |
| IL (1) | IL248377B (es) |
| LT (1) | LT3138575T (es) |
| MX (1) | MX2016013667A (es) |
| RU (1) | RU2693472C2 (es) |
| SG (2) | SG11201608583YA (es) |
| TW (2) | TWI674902B (es) |
| WO (1) | WO2015166885A1 (es) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11548926B2 (en) | 2016-03-17 | 2023-01-10 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Method for producing an active hepatocyte growth factor (HGF) |
| KR20240035394A (ko) * | 2021-05-14 | 2024-03-15 | 클라리스 바이오쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 | 안질환 치료를 위한 성장 인자 조성물 |
Family Cites Families (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2564486B2 (ja) | 1986-07-14 | 1996-12-18 | 修治 橋本 | 肝細胞増殖因子 |
| NZ232813A (en) | 1989-03-10 | 1992-08-26 | Snow Brand Milk Products Co Ltd | Human fibroblast glycoprotein, cell differentiation, blood vessel endothelial cell growth factor, cellular immunology inforcing factor of 78 or 74 thousand daltons plus or minus two thousand daltons |
| JP2706704B2 (ja) | 1989-06-05 | 1998-01-28 | 敏一 中村 | 組換ヒト肝実質細胞増殖因子 |
| JP2577091B2 (ja) | 1989-08-11 | 1997-01-29 | 三菱化学株式会社 | 肝実質細胞増殖因子及びそれをコードする遺伝子 |
| JP3036782B2 (ja) | 1990-04-03 | 2000-04-24 | 三菱化学株式会社 | ヒト肝実質細胞増殖因子の生産方法および該因子を産生する形質転換体 |
| JP2777678B2 (ja) | 1990-06-11 | 1998-07-23 | 敏一 中村 | 組換ヒト肝実質細胞増殖因子及びその製造方法 |
| JP3072628B2 (ja) | 1990-11-19 | 2000-07-31 | 敏一 中村 | ヒト肝実質細胞増殖因子をコードする染色体ｄｎａ |
| JP3213985B2 (ja) | 1991-10-18 | 2001-10-02 | 三菱化学株式会社 | 新規なタンパク質 |
| JP3232714B2 (ja) | 1992-11-20 | 2001-11-26 | 三菱化学株式会社 | 新規なタンパク質およびそれをコードする遺伝子 |
| CA2102463A1 (en) | 1992-11-05 | 1994-05-06 | Mitsubishi Chemical Corporation | Protein and gene encoding said protein |
| JP3698721B2 (ja) * | 1993-02-23 | 2005-09-21 | ジェネンテク・インコーポレイテッド | 有機溶媒を用いて処理したポリペプチドの賦形剤安定化 |
| JP2747979B2 (ja) | 1994-08-19 | 1998-05-06 | 雪印乳業株式会社 | ヒト由来の糖蛋白質からなる生理活性因子を有効成分とする医薬 |
| JP3927248B2 (ja) | 1995-07-11 | 2007-06-06 | 第一製薬株式会社 | Ｈｇｆ凍結乾燥製剤 |
| JP2859577B2 (ja) | 1996-03-27 | 1999-02-17 | 三菱化学株式会社 | 肝実質細胞増殖因子 |
| JP4463885B2 (ja) | 1996-12-05 | 2010-05-19 | 敏一 中村 | 劇症肝炎疾患治療剤 |
| JP2980888B2 (ja) | 1998-07-09 | 1999-11-22 | 三菱化学株式会社 | 肝実質細胞増殖因子をコードする遺伝子 |
| ATE359809T1 (de) | 1999-05-31 | 2007-05-15 | Mitsubishi Chem Corp | Gefriergetrocknete hgf-präparationen |
| JP4090236B2 (ja) | 2000-12-05 | 2008-05-28 | 三菱化学株式会社 | 活性型肝細胞増殖因子アクティベーターに対する特異的抗体とその使用法 |
| DE10204792A1 (de) | 2002-02-06 | 2003-08-14 | Merck Patent Gmbh | Lyophilisierte Zubereitung enthaltend Immuncytokine |
| US7432044B2 (en) | 2004-07-26 | 2008-10-07 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for modulating hepatocyte growth factor activation |
| US7741096B2 (en) | 2004-12-10 | 2010-06-22 | Genentech, Inc. | Crystal structure of hepatocyte growth factor activator complexed with Kunitz domain inhibitor |
| JP5093783B2 (ja) | 2006-04-20 | 2012-12-12 | クリングルファーマ株式会社 | Ｈｇｆ前駆体蛋白質改変体及びその活性型蛋白質 |
| CA2673260A1 (en) * | 2006-12-20 | 2008-07-03 | Bayer Healthcare Llc | Factor vii and viia compositions |
| WO2008102452A1 (ja) * | 2007-02-22 | 2008-08-28 | Kringle Pharma Inc. | Ｈｇｆ製剤 |
| CN102271707B (zh) * | 2008-10-29 | 2015-04-08 | 阿布林克斯公司 | 单域抗原结合性分子的制剂 |
| BR112012009245A2 (pt) | 2009-10-19 | 2019-09-24 | Genentech Inc | ''anticorpo,polinucleotídeo,celula hospedeira,método para fabricar um anticorpo,imunoconjugado,formulação farmacêutica e uso do anticorpo'' |
| WO2011102845A1 (en) * | 2010-02-18 | 2011-08-25 | Transtech Pharma, Inc. | Rage fusion protein compositions and methods of use |
| JP2012051822A (ja) | 2010-08-31 | 2012-03-15 | Institute Of Physical & Chemical Research | 肺癌診断用ポリペプチド、肺癌の検出方法、および治療効果の評価方法 |
| US9272018B2 (en) | 2011-04-18 | 2016-03-01 | Kyoto University | Acute hepatic insufficiency depressant and method for evaluating drug efficacy thereof |
| WO2013018851A1 (ja) | 2011-08-02 | 2013-02-07 | 独立行政法人国立がん研究センター | 誘導肝幹細胞から肝分化誘導する方法及び誘導肝前駆細胞 |
| EP2908862B1 (en) | 2012-10-20 | 2018-03-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Cancer cell trap |
| RU2506946C1 (ru) * | 2012-11-28 | 2014-02-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Технология лиофилизации обогащенной тромбоцитами плазмы с сохранением жизнеспособности факторов tgf pdgf vegf |
| US20200341014A1 (en) | 2016-03-18 | 2020-10-29 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | PD Marker of Hepatocyte Growth Factor (HGF) |
| CN106175986B (zh) | 2016-07-26 | 2017-12-01 | 复旦大学附属中山医院 | 一种瓣膜夹合器 |
-
2015
- 2015-04-24 ES ES15786509T patent/ES2887079T3/es active Active
- 2015-04-24 US US15/305,049 patent/US11547743B2/en active Active
- 2015-04-24 SG SG11201608583YA patent/SG11201608583YA/en unknown
- 2015-04-24 RU RU2016146121A patent/RU2693472C2/ru active
- 2015-04-24 LT LTEPPCT/JP2015/062523T patent/LT3138575T/lt unknown
- 2015-04-24 AU AU2015254307A patent/AU2015254307B2/en active Active
- 2015-04-24 TW TW104113328A patent/TWI674902B/zh active
- 2015-04-24 JP JP2016516354A patent/JP6568846B2/ja active Active
- 2015-04-24 KR KR1020167029770A patent/KR102291913B1/ko active IP Right Grant
- 2015-04-24 CA CA2947396A patent/CA2947396C/en active Active
- 2015-04-24 TW TW108125333A patent/TWI728409B/zh active
- 2015-04-24 MX MX2016013667A patent/MX2016013667A/es active IP Right Grant
- 2015-04-24 EP EP15786509.8A patent/EP3138575B1/en active Active
- 2015-04-24 SG SG10201809228RA patent/SG10201809228RA/en unknown
- 2015-04-24 WO PCT/JP2015/062523 patent/WO2015166885A1/ja active Application Filing
- 2015-04-24 BR BR112016025051-6A patent/BR112016025051A2/pt active Search and Examination
- 2015-04-24 CN CN201580021294.9A patent/CN106456695B/zh active Active
-
2016
- 2016-10-18 IL IL248377A patent/IL248377B/en active IP Right Grant
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2282161T3 (es) | Formulaciones de glp-2. | |
| ES2686331T5 (es) | Composiciones de lipopéptidos y métodos relacionados | |
| ES2408784T3 (es) | Preparaciones liofilizadas de HGF | |
| ES2648367T3 (es) | Procedimiento de preparación de una composición farmacéutica liofilizada que contiene mitomicina C | |
| ES2593727T3 (es) | Composición de caspofungina | |
| BR112016002939A2 (pt) | composições farmacêuticas parenterais aquosas estáveis de peptídeos insulinotrópicos | |
| ES2311789T3 (es) | Composiciones liofilizadas estabilizadas que comprenden inhibidor de la via del factor tisular o variantes del inhibidor de la via del factor tisular. | |
| WO2017002030A1 (en) | Stable liquid formulations of melphalan | |
| CA2675622C (en) | Hgf preparation | |
| ES2887079T3 (es) | Preparación de HGF liofilizada | |
| ES2694561T3 (es) | Composición de anidulafungina | |
| ES2749474T3 (es) | Agente farmacéutico estable y liofilizado que contiene nocatiacina | |
| WO2014102731A1 (en) | Novel pharmaceutical compositions of romidepsin | |
| EP3013316A1 (en) | Stable intravenous formulation | |
| KR20220034053A (ko) | 재조합 단백질의 안정적인 제형 | |
| ES2595160T3 (es) | Uso combinado de un glucosaminoglicano sulfatado y una hialuronidasa para mejorar la biodisponibilidad del Factor VIII | |
| RU2776108C2 (ru) | Лиофилизированный состав на основе hgf | |
| TW201607564A (zh) | 經安定化的多肽水性製劑 | |
| JPWO2008102849A1 (ja) | Ｈｇｆ製剤 |