ES2885802T3

ES2885802T3 - Gel para el tratamiento de heridas que puede obtenerse combinando plasma rico en plaquetas con trombina derivada de manera autóloga

Info

Publication number: ES2885802T3
Application number: ES19821179T
Authority: ES
Inventors: Janet Hadfield
Original assignee: Biotherapy Services Ltd
Current assignee: Biotherapy Services Ltd
Priority date: 2018-12-07
Filing date: 2019-12-06
Publication date: 2021-12-15
Anticipated expiration: 2039-12-06
Also published as: US11944667B2; IL283679A; CN113423420A; CY1124553T1; EP3749336A1; CA3122204C; JP2022516229A; EP3749336B1; KR20210090274A; AU2019394837A1; AU2019394837B2; CA3122204A1; GB2579630A; WO2020115503A1; DK3749336T3; GB201819987D0; JP7094593B2; KR20220035283A; SG11202105821VA; NZ776716A

Abstract

Método de elaboración de una composición para el tratamiento de heridas, en el que el método comprende; i) fraccionar una muestra de sangre completa en múltiples muestras, incluyendo una muestra de plasma rico en plaquetas (PRP), una muestra de plasma desplaquetado (PPP) y una muestra de eritrocitos, en el que la muestra de PRP tiene un nivel de hematocrito del 1-10%, ii) procesar una porción de la muestra de PPP y/o PRP para facilitar la escisión de la protrombina autóloga presente en el PPP y/o PRP para producir trombina autóloga, y iii) combinar la muestra de PRP con una porción de la muestra de PPP y una porción de la trombina producida en la etapa (ii) para producir la composición para el tratamiento de heridas; y en el que la etapa ii) se lleva a cabo a una temperatura inferior a 15ºC.

Description

DESCRIPCIÓN

Gel para el tratamiento de heridas que puede obtenerse combinando plasma rico en plaquetas con trombina derivada de manera autóloga

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método de producción de una composición para el tratamiento de heridas, en el que el tratamiento comprende plasma rico en plaquetas.

Antecedentes de la invención

Las heridas están provocadas habitualmente por lesiones físicas en el cuerpo y también pueden estar provocadas por enfermedades infecciosas o estados subyacentes. Las heridas se clasifican generalmente como o bien crónicas o bien agudas. Las heridas crónicas no pasan a través de las fases normales de cicatrización y están asociadas habitualmente a estados tales como la diabetes mellitus. Las heridas agudas se producen generalmente de manera repentina y se curan a un ritmo predecible y esperado a través de las fases normales de cicatrización.

La necesidad de tratar las heridas con rapidez y eficacia es de gran importancia dentro de la práctica médica. Por ejemplo, las heridas crónicas que no cicatrizan son una fuente importante de morbimortalidad en los pacientes diabéticos y, a menudo, si no puede tratarse una herida, entonces habrá que amputar la extremidad. Dado que la incidencia de la diabetes está aumentando, cada vez es más necesario desarrollar un tratamiento eficaz para las heridas crónicas. Actualmente, en el Reino Unido se tratan 2,2 millones de heridas crónicas al año con un coste de entre 5.100 y 5.300 millones de libras al año.

La presente invención se refiere a un método de producción de una composición para el tratamiento de heridas que contiene plasma rico en plaquetas (PRP). Esta composición es especialmente adecuada para la aplicación tópica en heridas crónicas o agudas.

La composición para el tratamiento de heridas se produce a partir de una muestra de sangre completa, y utiliza y potencia las propiedades de cicatrización de diversos componentes de la sangre. La sangre completa comprende tres tipos principales de células: eritrocitos, leucocitos y trombocitos (plaquetas), suspendidos en el plasma. Los eritrocitos son los glóbulos rojos, que contienen hemoglobina y transportan el oxígeno por el cuerpo. Los leucocitos son los glóbulos blancos que participan en la lucha contra las infecciones mediante respuestas inmunitarias innatas y adaptativas, y los trombocitos, conocidos habitualmente como plaquetas, contribuyen a la hemostasia/coagulación que detiene las hemorragias en un sitio de daño.

Las plaquetas contribuyen al proceso de cicatrización ayudando a detener las hemorragias mediante la formación de un tapón plaquetario. Cuando se detecta un sitio de daño, las plaquetas comienzan a adherirse al sitio y se activan para liberar material granular mediante un agonista tal como la trombina. Una vez que se produce la activación granular, esta estimula la liberación de factores de crecimiento que estimulan la formación de nuevo tejido e inician la fase inflamatoria de la cicatrización.

Los tratamientos de heridas basados en PRP son conocidos actualmente en la técnica. Sin embargo, los presentes inventores han descubierto sorprendentemente que el PRP puede producirse con varios niveles de hematocrito que son particularmente adecuados para el tratamiento de heridas crónicas o agudas. Más concretamente, el PRP con un nivel de hematocrito de aproximadamente el 8% conserva sustancialmente todos los leucocitos de la muestra de sangre completa y ha demostrado ser particularmente eficaz en el tratamiento de heridas agudas. El PRP producido con un nivel de hematocrito de aproximadamente el 2% está sustancialmente libre de leucocitos y ha demostrado ser particularmente eficaz en el tratamiento de heridas crónicas. Además, el presente método también permite producir el PRP con una alta concentración de plaquetas y se ha descubierto que un nivel de plaquetas de 4 a 6 veces el nivel de referencia (es decir, la concentración de plaquetas hallada en la sangre de un paciente) es el más adecuado para su uso en el tratamiento de heridas. Los sistemas de separación comerciales diseñados para la preparación de fracciones de PRP a partir de sangre completa fueron comparados por Degen et al (2016) The musculoskeletal Journal of Hospital for Special Surgery (HSSJ) vol. 13: 75-80.

La invención descrita en el presente documento proporciona un método para producir un gel para el tratamiento de heridas combinando el PRP con trombina derivada de manera autóloga. En este método, tanto el PRP como la trombina se derivan de la misma muestra de sangre completa y, como tal, el gel es una composición para el cuidado de heridas totalmente autóloga. Se han producido otros geles para el cuidado de heridas similares; sin embargo, estos usan trombina bovina, que podría dar lugar a complicaciones tales como una respuesta inmunológica y la transmisión de infecciones tales como la encefalopatía espongiforme bovina. Además, la trombina bovina no está aprobada para su uso en países tales como el Reino Unido. Al combinar el PRP con trombina autóloga, las plaquetas se activan en consecuencia y liberan factores de crecimiento, citocinas y quimiocinas, además de activar el fibrinógeno en el plasma, lo que provoca la formación del armazón de la matriz de fibrina. Los factores de crecimiento ayudan a estimular el proceso de cicatrización y la producción de la matriz extracelular de fibrina da lugar a la consistencia de gel.

Los presentes inventores han descubierto sorprendentemente que la producción de trombina autóloga a baja temperatura mejora significativamente la consistencia del gel para el tratamiento de heridas que se produce. El gel producido tiene una consistencia casi sólida que le permite mantener la forma durante al menos 10 minutos y, en el momento de la aplicación a la herida, permanecerá intacto e in situ durante más de 48 horas. Esto proporciona eficazmente una matriz para la integración del tejido en este armazón autólogo.

Para ayudar a estabilizar aún más la consistencia del gel, puede incorporarse a la composición ácido ascórbico (vitamina C). El ácido ascórbico también proporciona beneficios adicionales, tales como la eliminación de los radicales libres, la protección de los tejidos, la síntesis de colágeno y el carácter antiinflamatorio.

El presente método proporciona una composición para el tratamiento de heridas autóloga en la que la composición o bien puede comprender una alta proporción de leucocitos o bien puede estar sustancialmente libre de leucocitos, dependiendo del tipo de herida que va a tratarse. Como tal, el uso de este método permite adaptar el nivel de leucocitos al tipo de herida que va a tratarse y da lugar a una composición para el tratamiento de heridas más rápida y eficaz. La composición se ha usado en el tratamiento de heridas crónicas en pacientes diabéticos y, en la cohorte piloto de n=15 pacientes a lo largo del transcurso del tratamiento, la reducción promedio del volumen de la herida fue > 75%. El tiempo promedio necesario para lograr el cierre de la herida fue de 17,9 días con aproximadamente 5 tratamientos de la composición para el tratamiento de heridas. Este tratamiento proporciona claramente una mejora sorprendente en el tratamiento de heridas.

La enumeración o discusión de un documento aparentemente publicado con anterioridad en esta memoria descriptiva no debe tomarse necesariamente como un reconocimiento de que el documento forma parte del estado de la técnica o es de conocimiento general común.

Sumario de la invención

Sorprendentemente, se ha descubierto que produciendo una muestra de PRP con niveles de hematocrito entre el 1-10%, pueden producirse composiciones para el tratamiento de heridas que son particularmente eficaces en heridas agudas o crónicas, dependiendo de los niveles de hematocrito usados. En particular, una muestra de PRP con un nivel de hematocrito de aproximadamente el 8%, en la que el PRP comprende una alta proporción de leucocitos, ha resultado ser eficaz en el tratamiento de heridas agudas. Mientras que una muestra de PRP con un nivel de hematocrito de aproximadamente el 2%, en la que el PRP está sustancialmente libre de leucocitos, ha resultado ser eficaz en el tratamiento de heridas crónicas. Además, los presentes inventores han descubierto que las composiciones para el tratamiento de heridas con diferentes niveles de hematocrito pueden usarse secuencialmente durante el tratamiento de una herida. Por ejemplo, cuando se trata una herida crónica, puede desbridarse la herida para inducir una fase aguda y tratarla en primer lugar con una composición con un nivel de hematocrito del 8%. Tras tratamientos posteriores de la herida, se usa una composición con un nivel de hematocrito del 2%. La combinación de estos tratamientos ha demostrado ser particularmente eficaz para lograr el cierre de la herida y su rápida cicatrización. En los ensayos se consiguió una reducción del volumen de la herida del 75% en un promedio de 5 tratamientos y 17,9 días. Debe entenderse que las referencias en el presente documento a las composiciones para el tratamiento de heridas con un determinado porcentaje de hematocrito son referencias a las composiciones producidas a partir de preparaciones de PRP producidas hasta el porcentaje de hematocrito apropiado, antes de la introducción de excipientes tales como trombina autóloga y ácido ascórbico, y pueden no indicar necesariamente el porcentaje de hematocrito final en la composición para el tratamiento de heridas preparada usando los métodos descritos en el presente documento.

Para formar la composición para el tratamiento de heridas de la invención, las muestras de PRP se combinan con trombina autóloga (por lo que la trombina se ha derivado de la misma fuente que el PRP). Esto produce una composición con una consistencia de gel que es particularmente adecuada para la aplicación tópica a las heridas. Los presentes inventores han descubierto sorprendentemente que la temperatura a la que se produce la trombina autóloga puede afectar a la consistencia de la composición para heridas final. La trombina autóloga se produce escindiendo la protrombina en trombina. Cuando este proceso se lleva a cabo a una temperatura inferior a 15°C, el gel resultante que se obtiene de la combinación de la trombina y el PRP tiene cualidades beneficiosas. Por ejemplo, el gel tiene una consistencia casi sólida que le permite mantener su forma durante aproximadamente diez minutos cuando se extrae de un molde y se ha demostrado que permanece intacto, in situ, durante más de 48 horas, rellenando eficazmente las heridas catastróficas cavernosas y proporcionando una matriz eficaz para la liberación de acción prolongada de factores de crecimiento y proteínas celulares. En comparación, los geles para el cuidado de heridas anteriores sólo mantienen su forma durante hasta aproximadamente 60 segundos. Sin querer restringirse a la teoría, se plantea la hipótesis de que la consistencia más sólida permite que el gel se mantenga dentro de la herida durante más tiempo antes de disolverse y, por tanto, puede liberar factores de crecimiento durante un periodo prolongado. Estas propiedades conducen a una mejor cicatrización, tal como puede observarse en los ejemplos proporcionados en el presente documento.

Además, la consistencia más sólida del gel ha resultado ser particularmente beneficiosa en el tratamiento de heridas en las que se ha perdido un volumen significativo de tejido. En estos casos, dado que el gel puede conservar su forma, proporciona un armazón dentro de la herida alrededor del cual puede producirse la regeneración del tejido.

Por tanto, un aspecto de la presente invención se refiere a un método de elaboración de una composición para el tratamiento de heridas, en el que el método comprende; i) fraccionar una muestra de sangre completa en múltiples muestras, incluyendo una muestra de plasma rico en plaquetas (PRP), una muestra de plasma desplaquetado (PPP) y una muestra de eritrocitos, en el que la muestra de PRP tiene un nivel de hematocrito del 1-10%, ii) procesar una porción de la muestra de PPP y/o PRP para facilitar la escisión de la protrombina autóloga presente en el PPP y/o PRP para producir trombina autóloga y iii) combinar la muestra de PRP con una porción de la muestra de PPP y una porción de la trombina producida en la etapa ii) para producir la composición para el tratamiento de heridas; y en el que la etapa ii) se lleva a cabo a una temperatura inferior a 15°C.

En una realización, se prevé que la etapa iii) según el primer aspecto también pueda llevarse a cabo a una temperatura inferior a 15°C.

Un segundo aspecto de la invención comprende una composición para el tratamiento de heridas que puede obtenerse mediante el método según el primer aspecto.

Otro aspecto de la invención proporciona una composición para el tratamiento de heridas para su uso en un método de tratamiento de heridas en un sujeto, administrando una composición para el tratamiento de heridas que puede obtenerse mediante el método según el primer aspecto de la invención.

La invención proporciona además una composición para el tratamiento de heridas según el segundo aspecto para su uso en medicina, más particularmente para su uso en el tratamiento de una herida.

Para que la invención pueda entenderse más claramente, a continuación se describirán, a modo de ejemplo, las realizaciones de la misma con referencia a las figuras adjuntas.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 muestra un diagrama de flujo que ejemplifica las etapas tomadas durante el tratamiento de una herida.

La figura 2 muestra un diagrama de flujo que ejemplifica las etapas tomadas para el tratamiento de una herida clasificada como aguda.

La figura 3 muestra un diagrama de flujo que ejemplifica las etapas tomadas para el tratamiento de una herida clasificada como crónica.

La figura 4 muestra ejemplos de heridas de pacientes que se trataron usando la composición para el tratamiento de heridas usando el protocolo descrito en el ejemplo 1.

La figura 5 muestra una herida en el talón de un paciente diabético, que se ha tratado usando el protocolo descrito en el ejemplo 1.

La figura 6 ilustra el resultado del fraccionamiento de la sangre completa según los métodos de la invención usando el sistema Arthrex® Angel®. Esta ilustra los tipos de células que generalmente se encuentran en cada fracción y el nivel de hematocrito cambiante desde el PPP, pasando por el PRP hasta la porción de eritrocitos. Se proporcionan niveles aproximados de plaquetas para los niveles de hematocrito del 2% y del 7%.

La figura 7 ilustra la producción de PRP del sistema Arthrex® Angel® usado en los ejemplos. Para evaluar la diferencia entre la producción de PRP del sistema Arthrex® Angel® y la sangre completa, se preparó el PRP del sistema Arthrex® Angel® a partir de la sangre venosa de 6 donantes sanos con ajustes de hematocrito del 2%, del 5%, del 7%, del 10% y del 15%. La concentración de plaquetas, glóbulos blancos (WBC) y neutrófilos (NE) se midió con un hemograma completo (CBC) convencional.

Descripción detallada de la invención

En un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un método de elaboración de una composición para el tratamiento de heridas, en el que el método comprende;

i) fraccionar una muestra de sangre completa en múltiples muestras, incluyendo una muestra de plasma rico en plaquetas (PRP), una muestra de plasma desplaquetado (PPP) y una muestra de eritrocitos, en el que la muestra de PRP tiene un nivel de hematocrito del 1-10%,

ii) procesar una porción de la muestra de PPP y/o PRP para facilitar la escisión de la protrombina autóloga presente en el PPP y/o PRP para producir trombina autóloga, y

iii) combinar la muestra de PRP con una porción de la muestra de PPP y una porción de la trombina producida en la etapa (ii) para producir la composición para el tratamiento de heridas; y

en el que la etapa ii) se lleva a cabo a una temperatura inferior a 15°C.

Tal como se usa en el presente documento, el término “sangre completa” es uno de los más habituales y se refiere a una composición que comprende plasma, eritrocitos, leucocitos y plaquetas. Por tanto, la sangre completa puede ser una muestra de sangre roja extraída de un individuo que contiene todos los componentes naturales. La muestra de sangre completa también puede incluir un citrato u otro tampón adecuado para ayudar a prevenir la coagulación de la muestra. Se prevé que el tampón sea farmacológicamente aceptable.

El término “plasma rico en plaquetas (PRP)” se refiere a plasma que contiene una alta proporción o concentración de plaquetas (es decir, mayor que la sangre completa); también está sustancialmente libre de eritrocitos. El PRP se prepara fraccionando una muestra de sangre completa (por ejemplo, mediante centrifugación) y contiene plaquetas en una concentración superior a la que se encuentra en la muestra de sangre completa. Según el primer aspecto de la presente invención, el PRP puede contener más de 600 x 109 plaquetas por litro, o más de 800 x 109 plaquetas por litro, o más de 1000 x 109 plaquetas por litro, o más de 1200 x 109 plaquetas por litro, o más de 1400 x 109 plaquetas por litro, o más de 1600 x 109 plaquetas por litro, o más de 1800 x 109 plaquetas por litro, o más de 2000 x 109 plaquetas por litro, o más de 2200 x 109 plaquetas por litro, o más o más de 2400 x 109 plaquetas por litro. Además, según el primer aspecto de la presente invención, el PRP puede contener de 600 a 2400 x 109 plaquetas por litro, o de 800 a 2200 x 109 plaquetas por litro, o de 1000 a 2000 x 109 plaquetas por litro, o de 1200 a 1800 x 109 plaquetas por litro, o de 1400 a 1600 x 109 plaquetas por litro, o cualquier combinación de los mismos. El “plasma desplaquetado (PPP)” se produce fraccionando una muestra de sangre completa y se refiere a plasma que contiene una baja proporción de plaquetas, por ejemplo, menos de 1 x 109 plaquetas por litro, o menos de 1 x 108 plaquetas por litro, o menos de 1 x 107 plaquetas por litro.

Tal como se explica con más detalle a continuación, se prevé que el nivel óptimo de plaquetas en el PRP se obtenga directamente del fraccionamiento de la sangre completa para producir el PRP en la etapa i) o tras la dilución del PRP con PPP después de la etapa i). Por tanto, la concentración óptima de plaquetas en el PRP se obtiene antes de añadir la trombina autóloga (con ácido ascórbico opcional). En la figura 7 se ilustra el resultado del sistema Arthrex® Angel®.

El término “trombina autóloga”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a trombina que se ha derivado de la misma muestra de sangre completa de la que se ha derivado el PRP.

La composición para el tratamiento de heridas producida según el primer aspecto de la invención puede comprender desde 200 hasta 2400 x 109 plaquetas por litro, o desde 400 hasta 2400 x 109 plaquetas por litro, desde 600 hasta 2400 x 109 plaquetas por litro, o desde 800 hasta 2200 x 109 plaquetas por litro, o desde 1000 hasta 2000 x 109 plaquetas por litro, o desde 1200 hasta 1800 x 109 plaquetas por litro, o desde 1400 hasta 1600 x 109 plaquetas por litro.

En una realización particular según el primer aspecto de la invención, el método comprende además la etapa de añadir ácido ascórbico (vitamina C) a la composición para el tratamiento de heridas simultáneamente con, antes o después de la adición de la trombina. El ácido ascórbico se añade a una concentración de entre 0,5 mM y 5 mM, preferiblemente entre 2 mM y 4 mM, lo más preferiblemente entre 2,5 mM y 3 mM. En una realización preferida según el primer aspecto de la invención, el ácido ascórbico (vitamina C) se añade a la muestra de PRP. Existen varios métodos conocidos en la técnica que son adecuados para facilitar la escisión de la protrombina en trombina y que son apropiados para su uso en la presente invención. En una realización particular según el primer aspecto de la invención, la etapa ii) del método comprende poner en contacto la porción de la muestra de PPP y/o la muestra de PRP con una composición que comprende cloruro de calcio y/o etanol. Una disolución que comprende cloruro de calcio en etanol es particularmente adecuada para facilitar la escisión de la protrombina en trombina. La disolución puede contener entre aproximadamente el 5 y el 20% p/v de cloruro de calcio o entre aproximadamente el 8 y el 15% p/v de cloruro de calcio, preferiblemente la disolución contiene el 10% p/v de cloruro de calcio. El cloruro de calcio puede estar presente en una disolución que comprende etanol, en la que la disolución puede contener entre aproximadamente el 10 y el 30% v/v de etanol o entre aproximadamente el 10 y el 20% v/v de etanol, preferiblemente la disolución contiene aproximadamente el 17% v/v de etanol. Hay kits disponibles en el mercado que son adecuados para procesar una porción de la muestra de PPP y/o PRP para facilitar la escisión de la protrombina autóloga presente en el PPP y/o PRP para producir trombina autóloga; los ejemplos no limitativos de tales kits incluyen el kit ActivAT de Biotherapy Services y el Arthrex Thrombinator.

En el primer aspecto de la invención, la etapa ii) se realiza a una temperatura inferior a 15°C. En particular, la etapa ii) puede realizarse a una temperatura desde 2°C hasta 15°C, desde 4°C hasta 15°C, desde 6°C hasta 15°C, desde 8°C hasta 15°C, desde 10°C hasta 15°C o desde 12°C hasta 15°C. En esta realización, la porción de la muestra de PPP y/o PRP y las disoluciones necesarias para la reacción de escisión de la protrombina se enfrían hasta menos de 15°C. Normalmente, esto puede lograrse almacenando las disoluciones antes y durante la reacción en hielo. Esto hace que la reacción de escisión se produzca a una temperatura más baja. Cuando la trombina se combina con el PRP, las plaquetas se activan y se produce la formación del gel. Dado que se sabe que temperaturas más altas aumentan la cinética de la reacción, es muy sorprendente que la realización de la reacción de escisión a una temperatura más baja produzca una muestra de trombina que dé lugar a un gel más sólido y eficaz. Para evitar dudas, se prevé que la etapa i) según el primer aspecto se realice normalmente a temperatura ambiente. En la técnica se conocen métodos adecuados para fraccionar una muestra de sangre completa. Una característica particular de la invención es que se usa la centrifugación para fraccionar la muestra de sangre completa. Durante la etapa de fraccionamiento, la centrifugación puede realizarse en dos etapas. Puede usarse una etapa de centrifugación inicial para separar los eritrocitos de los otros componentes, seguida de una segunda etapa de centrifugación que ayuda a fraccionar las plaquetas y formar el PRP. La etapa de centrifugación inicial puede realizarse a entre 3.000 y 4.500 rpm, preferiblemente entre 3.200 y 4.000 rpm, más preferiblemente a 3.700 rpm. La segunda etapa de centrifugación puede realizarse a entre 2.000 y 3.500 rpm, preferiblemente entre 2.500 y 3.000 rpm, más preferiblemente a 2.700 rpm. Estas etapas de centrifugación pueden llevarse a cabo preferiblemente con el sistema Arthrex® Angel®.

Durante el procedimiento de fraccionamiento, la muestra de PRP se subfraccionará produciendo PRP que contiene una alta concentración de leucocitos y PRP que contiene una baja concentración de leucocitos. Por tanto, puede producirse PRP con diferentes niveles de leucocitos. Tal como se usa en el presente documento, el término “nivel de hematocrito” se refiere a la cantidad aproximada de leucocitos que están presentes en el PRP fraccionado a partir de la muestra de sangre completa.

Para producir muestras de PRP que tienen diferentes niveles de hematocrito, puede usarse un sensor que puede diferenciar entre la muestra de PPP, la muestra de PRP y la muestra de eritrocitos. El sensor también puede diferenciar entre las muestras de PRP con alto contenido de leucocitos y las muestras con bajo contenido de leucocitos. Los sensores adecuados incluyen los sensores LED. Además, hay una serie de sistemas disponibles en el mercado que son adecuados para producir PRP con un nivel de hematocrito especificado, tal como el separador de plaquetas autólogas Magellan®, el sistema de concentración de plaquetas GPS® de Biomet y el sistema Arthrex® Angel®.

Al producir una muestra de PRP con diferentes niveles de hematocrito, es posible alterar la cantidad de leucocitos presentes en el PRP. Para formar un PRP con una alta proporción de leucocitos, en el que más del 80% del total de leucocitos de la muestra de sangre completa estará presente en el PRP, el PRP debe producirse con un nivel de hematocrito más alto, por ejemplo, un nivel de hematocrito de entre el 5 y el 10%, preferiblemente un nivel de hematocrito de entre el 7 y el 9%. Para formar un PRP que esté sustancialmente libre de leucocitos, en el que menos del 10% del total de leucocitos de la muestra de sangre completa estará presente en el PRP, el PRP debe producirse con un nivel de hematocrito más bajo, por ejemplo, un nivel de hematocrito de entre el 1 y el 5%, preferiblemente un nivel de hematocrito de entre el 1 y el 3%.

Una muestra de PRP producida con un nivel de hematocrito del 2% estará sustancialmente libre de leucocitos, más específicamente menos del 10% del total de leucocitos de la muestra de sangre completa estará presente en la muestra de PRP, preferiblemente menos del 5%, más preferiblemente menos del 2%, lo más preferiblemente menos del 1%. Un PRP producido con un nivel de hematocrito del 2% estará sustancialmente libre de leucocitos, por ejemplo, el PRP puede contener menos de 12 x 108 leucocitos por litro, o menos de 6 x 108 leucocitos por litro, o menos de 3 x 108 leucocitos por litro, o menos de 12 x 107 leucocitos por litro, o menos de 6 x 107 leucocitos por litro, o menos de 3 x 107 leucocitos por litro. En una realización particular de la presente invención, la muestra de PRP tiene un nivel de hematocrito de aproximadamente el 2%. En otras realizaciones de la presente invención, la muestra de PRP puede tener un nivel de hematocrito de aproximadamente el 1, el 1,5, el 2,5, el 3, el 3,5, el 4 o el 4,5%.

Por el contrario, un PRP producido con un nivel de hematocrito de aproximadamente el 8% comprenderá la mayoría de los leucocitos presentes en la muestra de sangre completa; más específicamente, más del 80% del total de leucocitos de la muestra de sangre completa estará presente en el PRP, preferiblemente más del 90%, más preferiblemente más del 95%. Un PRP producido con un nivel de hematocrito del 8% comprenderá la mayoría de los leucocitos presentes en la muestra de sangre completa, por ejemplo, puede comprender más de 1 x 109 leucocitos por litro, o más de 3 x 109 leucocitos por litro, o más de 5 x 109 leucocitos por litro, o más de 10 x 109 leucocitos por litro. Preferiblemente, un PRP producido con un nivel de hematocrito del 8% puede comprender entre aproximadamente 1 x 109 y 15 x 109 leucocitos por litro, más preferiblemente puede comprender entre aproximadamente 3 x 109 y 12 x 109. Como tal, en una realización particular de la presente invención, la muestra de PRP tiene un nivel de hematocrito del 8%. En otras realizaciones de la presente invención, la muestra de PRP puede tener un nivel de hematocrito de aproximadamente el 5,5, el 6, el 6,5, el 7, el 7,5, el 8,5, el 9 o el 9,5%.

Tal como apreciará un experto habitual en la técnica, el nivel de “hematocrito” es una medición visual directa de la concentración de glóbulos rojos en la muestra. Aunque no es una medición directa del nivel de leucocitos o plaquetas en la muestra de sangre, en el contexto del fraccionamiento de sangre humana se correlaciona directamente con el nivel de leucocitos y/o plaquetas en la muestra. Esto se ilustra en la figura 6, que muestra el gradiente de hematocrito en sangre completa fraccionada usando el sistema Arthrex Angel, tal como se describe en el presente documento. En la técnica, el nivel de hematocrito se usa habitualmente como una medición conveniente que permite la medición repetible de los componentes de la sangre después del fraccionamiento. Este es el medio por el que puede automatizarse la recogida de fracciones de sangre de composición deseada. Por tanto, en la técnica, la medición del hematocrito permite la recogida automatizada de muestras de plaquetas concentradas con los niveles deseados de plaquetas. El nivel de hematocrito permite la recogida de fracciones de PRP tanto manualmente como por ordenador, ya que el nivel de hematocrito es claramente distinguible y es repetible y predecible. Los medios más invasivos para medir directamente el nivel de plaquetas no serían apropiados en el contexto de la invención, que es un método destinado a producir rápidamente una composición para el tratamiento de heridas que pueda aplicarse rápidamente a la herida del paciente. La medición del hematocrito no requiere ningún contacto directo con la muestra de sangre ni la adición de ningún factor, ya que puede realizarse simplemente con una medición óptica (detectando diferencias en la absorción de luz), como la que realizan los dispositivos usados en los ejemplos. Por tanto, el hematocrito es un marcador sustituto del nivel de plaquetas y su significado y propósito serían fácilmente apreciados por un experto habitual en la técnica.

Los presentes inventores han descubierto además que existe un nivel óptimo de plaquetas que debe estar presente en la muestra de PRP. Se encontró que la concentración de plaquetas del ^pR^pmás eficaz estaba entre 4 y 6 veces el nivel de plaquetas de referencia, en el que el nivel de plaquetas de referencia es el que se encuentra en la muestra de sangre completa. Por tanto, si la muestra de PRP contiene más de entre 4 y 6 veces el nivel de plaquetas de referencia, la muestra de PRP puede diluirse usando la muestra de PPP. Esto garantizará que la muestra de PRP contenga entre 4 y 6 veces el nivel de plaquetas de referencia, antes de la inclusión de la trombina autóloga y los excipientes tales como el ácido ascórbico.

Por tanto, tal como se apreciará en vista de lo anterior, el propósito principal de combinar una porción de la muestra de PPP con la muestra de PRP en la etapa iii) del método de la invención, antes de combinarla con la trombina activada, es lograr una muestra de PRP con un nivel óptimo de plaquetas. Por tanto, el PPP puede usarse para diluir el PRP (el PRP concentrado) antes de su posterior procesamiento. El nivel óptimo de plaquetas en el PRP antes de combinarlo con la trombina dependerá del paciente y de la herida que va a tratarse. Tal como entenderá un experto en la técnica, algunos individuos presentan niveles más altos de plaquetas, por ejemplo, debido a una disposición natural o a una enfermedad. A la inversa, algunos individuos presentarán niveles más bajos de plaquetas, por ejemplo, debido a una disposición natural o a una enfermedad. Por tanto, los métodos de la invención y la composición para el tratamiento de heridas fabricada mediante los métodos pueden adaptarse al paciente según los niveles naturales de plaquetas en la sangre del paciente, lo que afecta al volumen de PRP concentrado generado en la primera etapa del método de la invención. Tal como se ha explicado anteriormente, se prefiere que el nivel de plaquetas en el PRP antes de la adición de trombina (y opcionalmente de ácido ascórbico) esté aproximadamente entre 4 y 6 veces el nivel de plaquetas de referencia en ese paciente individual. En algunos casos, el PRP producido en la etapa i) del método de la invención tendrá un nivel de plaquetas que es aceptable para continuar el procesamiento (por ejemplo, si el paciente tiene niveles bajos de plaquetas), pero en la mayoría de los casos el PRP producido en la etapa i) tendrá un nivel de plaquetas superior al deseado. En este caso, el PPP puede usarse para diluir el PRP hasta el nivel deseado de plaquetas.

Tal como entenderá un experto en la técnica, la concentración de plaquetas en el PRP producido mediante el método es independiente del volumen de PRP concentrado que se produce en el método, por ejemplo, usando el sistema Arthrex® Angel®. Más bien, el volumen es indicativo de la cantidad de plaquetas en la muestra de sangre completa antes del procesamiento. Por tanto, el PRP se produce con una concentración casi fija de plaquetas, pero el volumen de PRP varía. La concentración de plaquetas en el PRP producido por el sistema Arthrex® Angel® es del orden de 3600 x 109 plaquetas por litro. Por ejemplo, un paciente que tenga 100 x 109 plaquetas por litro en su sangre generará aproximadamente 1 ml de PRP concentrado, que se diluirá de nuevo hasta 6 ml mediante la adición de PPP y producirá una disolución de PRP diluida con aproximadamente 600 x 109 plaquetas por litro (6x el nivel de referencia). Un paciente que tenga aproximadamente 400 x 109 plaquetas por litro en su sangre generará aproximadamente 4 ml de PRP concentrado, que se diluirá de nuevo hasta 6 ml y producirá una disolución de PRP diluida con aproximadamente 2400 x 109 plaquetas por litro (6x el nivel de referencia). Por tanto, la concentración de plaquetas en la porción de PRP antes de la adición de trombina autóloga suele estar entre 4 y 6 veces el nivel de plaquetas de referencia en la sangre completa, preferiblemente 6 veces.

El nivel óptimo de plaquetas en el PRP antes de la adición de trombina se prevé que sea de aproximadamente 600 x 109 a 1400 x 109 plaquetas por litro. Preferiblemente, de aproximadamente 600 x 109 a 1200 x 109 plaquetas por litro, de aproximadamente 600 x 109 a 1000 x 109 plaquetas por litro, de aproximadamente 600 x 109 a 800 x 109 plaquetas por litro, de aproximadamente 800 x 109 a 1400 x 109 plaquetas por litro, de aproximadamente 800 x 109 a 1200 x 109 plaquetas por litro o de aproximadamente 800 x 109 a 1000 x 109 plaquetas por litro. Por tanto, el método de la invención incluye proporcionar una muestra de PRP con un nivel óptimo de plaquetas en la etapa iii), antes de la adición de trombina (y opcionalmente de ácido ascórbico).

La densidad de las plaquetas en el PRP del sistema Arthrex® Angel® en comparación con la sangre completa en los ajustes de hematocrito del 2% y del 7% y en comparación con otras máquinas disponibles en el mercado se proporciona en la tabla 2 de Degen et al (2017) a la que se hizo referencia anteriormente.

Según el primer aspecto de la invención, la composición para el tratamiento de heridas comprende un nivel de plaquetas de 200 a 2.600 x 109 plaquetas por litro, preferiblemente de 600 a 2.400 x 109 plaquetas por litro, más preferiblemente de 1.000 a 2.000 x 109 plaquetas por litro.

La composición para el tratamiento de heridas producida según el primer aspecto de la invención comprende un nivel de hematocrito final de desde el 0,5 hasta el 10% o desde el 1 hasta el 8%. En una realización, la composición para el tratamiento de heridas producida según el primer aspecto de la invención comprende un nivel de hematocrito final de desde el 0,5 hasta el 5%, desde el 0,5 hasta el 4%, desde el 0,5 hasta el 3% o desde el 0,5 hasta el 2%. En otra realización, la composición para el tratamiento de heridas producida según el primer aspecto de la invención comprende un nivel de hematocrito final de desde el 4 hasta el 10%, desde el 4 hasta el 9%, desde el 4 hasta el 8%, desde el 4 hasta el 7% o desde el 4 hasta el 6%.

Según la invención, la trombina producida de manera autóloga se combina con el PRP. La trombina actúa como agonista para activar las plaquetas de la muestra de PRP, lo que da lugar a la liberación de factores de crecimiento. Por tanto, estos factores de crecimiento pueden estar presentes dentro de la composición para el tratamiento de heridas de la invención, los ejemplos no limitativos de los factores de crecimiento presentes incluyen el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-AB), el factor de crecimiento transformante beta 1 (TGF-B1), factores de crecimiento similares a insulina (IGF-1, IGF2), el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), el factor de angiogénesis derivado de plaquetas (PDAF), el factor de crecimiento epidérmico derivado de plaquetas (PDEGF), el factor plaquetario 4 (PF-4), el factor de crecimiento de fibroblastos ácido (FGF-A), el factor de crecimiento de fibroblastos básico (FGF-B), el factor de crecimiento transformante a (TGF-A), proteínas relacionadas con p-tromboglobulina (BTG), trombospondina (TSP), fibronectina, el factor de von Willebrand (vWF), fibropéptido A, fibrinógeno, albúmina, inhibidor del activador del plasminógeno 1 (PAI-1), osteonectina, regulado tras la activación de células T normales expresado y presumiblemente secretado (RANTES), gro-a, vitronectina, dímero D de fibrina, el factor V, antitrombina III, inmunoglobulina-G (IgG), inmunoglobulina-M (IgM), inmunoglobulina-A (IgA), a2-macroglobulina, angiogenina, Fg-D, elastasa, el factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), el factor de crecimiento epidérmico (EGF), el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), el factor de necrosis tumoral (TNF), el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) e interleucina-1 (IL-1), y combinaciones de los mismos. Estos factores de crecimiento actúan de manera sinérgica para ayudar a fomentar la cicatrización.

Un segundo aspecto de la invención comprende una composición para el tratamiento de heridas que puede obtenerse mediante el método según el primer aspecto de la invención.

Una característica particular del segundo aspecto de la invención es una composición para el tratamiento de heridas que comprende plasma rico en plaquetas (PRP), trombina y ácido ascórbico, en la que la composición comprende un nivel de plaquetas superior a 200 x 109 plaquetas por litro, o superior a 400 x 109 plaquetas por litro, o superior a 600 x 109 plaquetas por litro, o superior a 800 x 109 plaquetas por litro, o superior a 1.000 x 109 plaquetas por litro.

En una realización de la composición según el segundo aspecto de la invención, el PRP y la trombina se producen a partir de una muestra de sangre completa obtenida de un único individuo.

La composición para el tratamiento de heridas de la invención puede ser para su uso en el tratamiento de heridas. En una realización particular, la composición para el tratamiento de heridas de la invención puede ser para su uso en el tratamiento de heridas agudas o crónicas.

Los presentes inventores han descubierto que una composición para el tratamiento de heridas según la invención y producida a partir de una muestra de PRP que tiene un nivel de hematocrito más bajo, por ejemplo, entre el 1 y el 5%, es eficaz en el tratamiento de heridas crónicas. Más concretamente, una composición para heridas producida a partir de un PRP con un nivel de hematocrito de aproximadamente el 2% es, de manera sorprendente, particularmente eficaz para su uso en el tratamiento de heridas crónicas. Como tal, una realización de la composición para el tratamiento de heridas de la invención puede producirse a partir de una muestra de PRP que tiene un nivel de hematocrito de entre el 1 y el 5%, preferiblemente el 2%. Así, en una realización, una composición para el tratamiento de heridas formada a partir de una muestra de PRP que tiene un nivel de hematocrito de entre el 1 y el 5%, preferiblemente el 2%, puede ser para su uso en el tratamiento de heridas crónicas en un paciente que lo necesita. Tal como se usa en el presente documento, el término “herida crónica” se refiere a una herida que no pasa a través de las fases normales de cicatrización y, a menudo, permanece en la etapa de inflamación de la curación. Los ejemplos no limitativos de heridas crónicas que pueden producirse, y que se beneficiarían de las composiciones de la invención y, por tanto, podrían tratarse con ellas, incluyen las úlceras de pie diabético, las úlceras venosas de la pierna y las úlceras por presión.

Además, una composición para el tratamiento de heridas según la invención producida a partir de una muestra de PRP que tiene un nivel de hematocrito más alto, por ejemplo, entre el 5 y el 10%, es eficaz en el tratamiento de heridas agudas. Más concretamente, una composición para heridas producida a partir de un PRP con un nivel de hematocrito de aproximadamente el 8% es particularmente eficaz para su uso en el tratamiento de heridas agudas. Como tal, una realización de la composición para el tratamiento de heridas según la invención puede producirse a partir de una muestra de PRP que tiene un nivel de hematocrito de entre el 5 y el 10%, preferiblemente el 8%. Así, en una realización, una composición para el tratamiento de heridas formada a partir de una muestra de PRP que tiene un nivel de hematocrito de entre el 5 y el 10%, preferiblemente el 8%, puede usarse en el tratamiento de heridas agudas en un paciente que lo necesita. Tal como se usa en el presente documento, el término “herida aguda” se usa para referirse a una lesión o daño que se produce de manera repentina y no a lo largo del tiempo. Una herida crónica puede convertirse en una herida aguda si se somete a procedimientos tales como desbridamiento, en los que se elimina el tejido muerto o dañado de una herida para dejar al descubierto el tejido sano. Esto expone la herida a la sangre y, por tanto, estimula la cicatrización natural. Estos procedimientos se usan habitualmente durante el tratamiento de heridas crónicas y el experto conocerá los métodos adecuados.

La composición para el tratamiento de heridas de la invención se solidifica preferiblemente en una consistencia de gel una vez producida. Por tanto, puede usarse un molde para adaptar la forma del gel a la herida que va a tratarse o puede cortarse en un tamaño o una forma específicos dependiendo de la herida que va a tratarse y de la preferencia del médico. Dado que la composición para el tratamiento de heridas de la presente invención tiene una estructura más estable que las composiciones anteriores, es más fácil cortar o moldear el gel para adaptarlo a una herida particular.

Una realización de la invención se refiere a una composición para el tratamiento de heridas para su uso en un método de tratamiento de una herida mediante la aplicación de una composición para el tratamiento de heridas de la presente invención. Este método puede comprender múltiples aplicaciones de composiciones para el tratamiento de heridas en el transcurso del tratamiento. Por ejemplo, una herida puede someterse a un desbridamiento seguido de la aplicación de una composición para el tratamiento de heridas producida a partir de una muestra de PRP que tiene un nivel de hematocrito más alto, por ejemplo, entre el 5 y el 10%. Esta herida puede someterse a un tratamiento posterior mediante la aplicación de una composición para el tratamiento de heridas producida a partir de una muestra de PRP con un nivel de hematocrito más bajo, por ejemplo entre el 1 y el 5%. Otro aspecto de la presente invención es una composición para el tratamiento de heridas para su uso en un método de tratamiento de heridas en un sujeto mediante la administración de una composición para el tratamiento de heridas que puede obtenerse mediante el método según el primer aspecto de la invención. Así, la composición para el tratamiento de heridas para su uso en el método de tratamiento de heridas en un sujeto según la invención puede comprender las siguientes etapas;

i) obtener una muestra de sangre completa del sujeto que va a tratarse,

ii) fraccionar una muestra de sangre completa en múltiples muestras, incluyendo una muestra de plasma rico en plaquetas (PRP), una muestra de plasma desplaquetado (PPP) y una muestra de eritrocitos, en el que la muestra de PRP tiene un nivel de hematocrito del 1-10%,

iii) procesar una porción de la muestra de PPP y/o PRP para facilitar la escisión de la protrombina autóloga presente en el PPP y/o PRP para producir trombina autóloga, y

iv) combinar la muestra de PRP con una porción de la muestra de PPP y una porción de la trombina producida en la etapa (iii) para producir la composición para el tratamiento de heridas, en el que la composición para el tratamiento de heridas comprende un nivel de plaquetas superior a 600 x 109 plaquetas por litro, y

v) aplicar la composición para el tratamiento de heridas a la herida del sujeto que va a tratarse; y en el que la etapa iii) se lleva a cabo a una temperatura inferior a 15°C.

La composición para el tratamiento de heridas para su uso en el método de tratamiento de una herida según la presente invención puede comprender inicialmente el desbridamiento de una herida crónica para exponer un lecho de herida limpio, convirtiéndola eficazmente en una herida aguda, o tratar inicialmente una herida aguda, con la composición para el tratamiento de heridas de la invención producida a partir de una muestra de PRP de alto hematocrito, por ejemplo, el 8%. A continuación, en las siguientes etapas de tratamiento, cuando la fase aguda inicial de la cicatrización ha terminado y la herida puede considerarse crónica, el método de la invención puede comprender entonces la aplicación de la composición para el tratamiento de heridas de la invención producida a partir de una composición de PRP que tiene un hematocrito más bajo, por ejemplo, el 2%. Pueden realizarse múltiples aplicaciones de esta segunda etapa, según convenga, hasta que se produzca una cicatrización satisfactoria.

Por tanto, otra realización de la presente invención es una composición para el tratamiento de heridas para su uso en un método de tratamiento de heridas agudas en un sujeto mediante la administración de una composición para el tratamiento de heridas según la invención producida a partir de una muestra de PRP que tiene un nivel de hematocrito del 8%. Por consiguiente, otra realización de la presente invención es una composición para el tratamiento de heridas para su uso en un método de tratamiento de heridas crónicas en un sujeto mediante la administración de una composición para el tratamiento de heridas según la invención producida a partir de una muestra de PRP que tiene un nivel de hematocrito del 2%.

La presente invención proporciona una composición para el tratamiento de heridas para su uso en terapia, en particular para su uso en métodos de tratamiento de heridas, en la que la composición para el tratamiento de heridas puede obtenerse mediante el siguiente método;

en el que la etapa ii) se lleva a cabo a una temperatura inferior a 15°C.

La invención también proporciona una composición para el tratamiento de heridas según el segundo aspecto para su uso en medicina, en particular para su uso en el tratamiento de heridas crónicas o agudas, tal como se expone en el presente documento.

Todas las realizaciones descritas en relación con los aspectos anteriores de la invención están pensadas para ser igualmente aplicables al aspecto anterior de la invención, cuando sea apropiado.

Los siguientes ejemplos ilustran la invención.

Ejemplo 1

En el siguiente ejemplo se describen las etapas llevadas a cabo cuando se trata una herida, por ejemplo, en un paciente diabético.

Etapa 1

Se produce un PRP con un nivel de hematocrito del 8% para su uso en el primer tratamiento. Las heridas se “refrescan quirúrgicamente” mediante desbridamiento quirúrgico del tejido necrótico para exponer una base fresca de la herida aguda. La composición para el tratamiento de heridas se produce según la siguiente formulación. Esta formulación está diseñada para ajustarse volumétricamente y se duplica en volumen para tratar heridas de más de >7000 mm3.

i. 5 ml de PRP procesados a partir de 52 ml de sangre completa. El PRP contiene 5-6x la concentración de plaquetas hallada en la muestra de sangre completa.

ii. Añadir 0,75 ml de ácido ascórbico, 500 mg/5 ml USP.

iii. Añadir 2 ml de trombina autóloga para activar la gelificación del fluido de PRP/ácido ascórbico.

El primer tratamiento contiene plaquetas concentradas y una gran “dosis” de leucocitos. Esta etapa puede denominarse tratamiento de hiperestimulación. Puede usarse un apósito semioclusivo tal como Opsite para cubrir el gel y la herida.

Etapa 2

El segundo tratamiento se realiza después de 48 horas. Para el segundo tratamiento y los siguientes se usa un PRP con un nivel de hematocrito del 2%. Los tratamientos posteriores se realizan semanalmente / cada 7 días.

Usando un nivel de hematocrito del 2%, se elimina >98% de los leucocitos a partir del PRP y se produce la composición para el tratamiento de heridas según la siguiente formulación.

ii. Añadir 0,75 ml de ácido ascórbico, 500 mg /5 ml USP.

Si la herida no muestra una mejora del cierre de la herida >30% a la semana, la herida debe tratarse con la formulación aguda con un nivel de hematocrito del 8%.

El enfoque permite un tratamiento repetible y robusto de las heridas crónicas en un entorno clínico.

Ejemplo 2

En un entorno clínico se trataron 18 heridas en 15 pacientes. 5 tenían una pérdida de tejido extensa con hueso/tendón/cartílago expuestos; 3 estaban en diálisis; 4 tenían una neuropatía periférica significativa; 4 tenían osteomielitis profunda; 1 tenía una deficiencia nutricional grave relacionada con un trastorno alimentario. Volumen promedio de la herida al inicio del tratamiento: 8203,3 mm3 (intervalo de 141,3 - 41257,2 mm3). Las heridas se trataron siguiendo la metodología descrita en el ejemplo 1. Volumen promedio de la herida a la finalización del tratamiento con PRP: 2783,2 mm3 (intervalo de 0,5 - 28809 mm3). Reducción promedio del volumen de la herida a la finalización del tratamiento: 75%. Número total de días para una cicatrización >90% después del inicio del tratamiento con PRP: 17,9 días (intervalo de 6 - 40 días). Fue necesaria una intervención quirúrgica posterior al tratamiento en 1 paciente que sufrió una amputación mayor; el resto fueron dados de alta sin intervenciones adicionales.

La figura 4 muestra ejemplos de heridas de pacientes que se trataron en este estudio y en la tabla 1 se detalla la reducción del volumen de la herida a lo largo del tratamiento y el número de días que se tardó en conseguir una cicatrización <90%.

Tabla 1

Ejemplo 3

Se sometió un paciente diabético a desbridamiento quirúrgico de una herida y a la eliminación de osteomielitis en la región del talón. Esta herida se trató entonces con la composición para el tratamiento de heridas de la presente invención. Se administraron tres tratamientos durante 14 días.

A lo largo de los 14 días, la disminución del volumen curvo fue de -36581,2 mm3 (-90,7%). El cambio de volumen fue de -417,3 mm3 (-30,8%), lo que muestra un aumento de volumen a medida que la herida granula y regenera tejido para cerrar la herida. La disminución del área de la herida fue de -1051,1 mm2 (-25,8%). En la figura 5 se muestran imágenes de la cicatrización durante el transcurso del tratamiento.

La composición para el tratamiento de heridas se produjo según la invención. La siguiente tabla demuestra el efecto de realizar la conversión de protrombina en trombina a una temperatura inferior a 15°C sobre algunas de las características clave del tratamiento de heridas.

Las concentraciones de plaquetas, neutrófilos y glóbulos blancos se expresan como un factor del nivel inicial.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Método de elaboración de una composición para el tratamiento de heridas, en el que el método comprende; i) fraccionar una muestra de sangre completa en múltiples muestras, incluyendo una muestra de plasma rico en plaquetas (PRP), una muestra de plasma desplaquetado (PPP) y una muestra de eritrocitos, en el que la muestra de PRP tiene un nivel de hematocrito del 1-10%,

ii) procesar una porción de la muestra de PPP y/o PRP para facilitar la escisión de la protrombina autóloga presente en el p Pp y/o PRP para producir trombina autóloga, y

en el que la etapa ii) se lleva a cabo a una temperatura inferior a 15°C.

2. Método según la reivindicación 1, en el que la etapa iii) se lleva a cabo a una temperatura inferior a 15°C.

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, que comprende además la etapa de añadir ácido ascórbico a la composición para el tratamiento de heridas simultáneamente con, antes o después de la adición de la trombina.

4. Método según cualquier reivindicación anterior, en el que la muestra de PRP tiene un nivel de hematocrito del 8%.

5. Método según cualquier reivindicación anterior, en el que la muestra de PRP tiene un nivel de hematocrito del 2%.

6. Método según cualquier reivindicación anterior, en el que la composición para el tratamiento de heridas comprende un nivel de plaquetas de 600 a 2.400 x 109 plaquetas por litro.

7. Composición para el tratamiento de heridas que puede obtenerse mediante el método según cualquier reivindicación anterior.

8. Composición para el tratamiento de heridas según la reivindicación 7, para su uso en el tratamiento de heridas, opcionalmente heridas crónicas o agudas.

9. Composición para el tratamiento de heridas que puede obtenerse mediante el método según la reivindicación 4.

10. Tratamiento de heridas según la reivindicación 9, para su uso en el tratamiento de heridas agudas.

11. Composición para el tratamiento de heridas que puede obtenerse mediante el método según la reivindicación 5.

12. Composición para el tratamiento de heridas según la reivindicación 11, para su uso en el tratamiento de heridas crónicas.

13. Composición para el tratamiento de heridas según la reivindicación 11, para su uso en el tratamiento de una herida que se ha tratado previamente con una composición para el tratamiento de heridas según la reivindicación 9.