ES2882157T3 - Productos terapéuticos de anticuerpos que se unen a CTLA4 - Google Patents

Productos terapéuticos de anticuerpos que se unen a CTLA4 Download PDF

Info

Publication number
ES2882157T3
ES2882157T3 ES16749944T ES16749944T ES2882157T3 ES 2882157 T3 ES2882157 T3 ES 2882157T3 ES 16749944 T ES16749944 T ES 16749944T ES 16749944 T ES16749944 T ES 16749944T ES 2882157 T3 ES2882157 T3 ES 2882157T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
seq
antibody
ctla4
antigen
chain variable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES16749944T
Other languages
English (en)
Inventor
John Gray
Heyue Zhou
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sorrento Therapeutics Inc
Original Assignee
Sorrento Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sorrento Therapeutics Inc filed Critical Sorrento Therapeutics Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2882157T3 publication Critical patent/ES2882157T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Una proteína de unión capaz de unirse a CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de esta, en la que la proteína de unión o el fragmento se seleccionan de un grupo que consiste en un anticuerpo anti-CTLA4 totalmente humano aislado de una clase de IgG, un fragmento Fab de anticuerpo totalmente humano anti-CTLA4 y un anticuerpo humano monocatenario anti-CTLA4, y en la que la proteína de unión o el fragmento tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada de SEQ ID NO:43 y una secuencia de dominio variable de cadena ligera de SEQ ID NO:44, y en la que el dominio variable de cadena pesada y el dominio variable de cadena ligera del anticuerpo humano monocatenario anti-CTLA4 están conectados por un conector peptídico.

Description

DESCRIPCIÓN
Productos terapéuticos de anticuerpos que se unen a CTLA4
Campo técnico
La presente descripción proporciona composiciones y métodos relacionados o derivados de anticuerpos anti-CTLA4. De modo más específico, la presente descripción proporciona anticuerpos totalmente humanos que se unen a CTLA4, fragmentos de anticuerpos de unión a CTLA4 y derivados de dichos anticuerpos, y polipéptidos de unión a CTLA4 que comprenden dichos fragmentos. Además, la presente descripción proporciona ácidos nucleicos que codifican dichos anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y derivados y polipéptidos, células que comprenden dichos polinucleótidos, métodos para fabricar dichos anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y derivados y polipéptidos, y métodos para usar dichos anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y derivados y polipéptidos, incluyendo métodos para tratar una enfermedad que requiera la estimulación o la supresión de respuestas inmunitarias. La estimulación se logra usando anticuerpos que bloquean la unión de CTLA4 humana a B7 humana, y las enfermedades susceptibles a un tratamiento mediante estimulación y potenciación de la prolongación de las respuestas inmunitarias incluyen cánceres de próstata, riñón, colon, pulmón o mama; infecciones patogénicas; enfermedades asociadas con el SNC, por ejemplo, enfermedades amiloidogénicas, que incluyen la enfermedad de Alzheimer; y enfermedades con componentes inflamatorios o alérgicos. Las enfermedades susceptibles al tratamiento incluyen la enfermedad del injerto contra el huésped, la enfermedad del huésped contra el injerto, alergia, enfermedades autoinmunitarias y otras enfermedades inflamatorias.
Antecedentes
El sistema inmunitario de los vertebrados requiere de múltiples señales para lograr una activación inmunitaria óptima; véase, por ejemplo, Janeway, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 54:1-14 (1989); Paul William E., ed., Raven Press, N.Y., Fundamental Immunology, 4a edición (1998), en particular los capítulos 12 y 13, pp. 411 a 478. Las interacciones entre linfocitos T (células T) y las células presentadoras de antígenos ("antigen presenting cells", APC) son fundamentales para la respuesta inmunitaria. Los niveles de muchas moléculas cohesivas que se encuentran sobre las células T y las APC aumentan durante una respuesta inmunitaria (Springer et al., A. Rev., Immunol., 5:223-252 (1987); Shaw y Shimuzu, Current Opinion in Immunology, eds. Kindt y Long, 1:92-97 (1988)); y Hemler, Immunology Today, 9:109-113 (1988)). Unos niveles mayores de estas moléculas pueden ayudar a explicar por qué unas APC activadas son más eficaces para estimular la proliferación de células T específicas de antígeno que las APC en reposo (Kaiuchi et al., J. Immunol., 131:109-114 (1983); Kreiger et al., J. Immunol., 135:2937-2945 (1985); McKenzie, J. Immunol., 141:2907-2911 (1988); y Hawrylowicz y Unanue, J. Immunol., 141:4083-4088 (1988)).
La respuesta inmunitaria de las células T es un proceso complejo que implica interacciones entre células (Springer et al., A. Rev., Immunol., 5:223-252 (1987)), en particular entre células T y células auxiliares, tales como APC, y la producción de mediadores inmunitarios solubles (citoquinas o linfoquinas) (Dinarello (1987), New Engl. Jour. Med., 317:940-945; Sallusto (1997), J. Exp. Med., 179:1109-1118). Esta respuesta es regulada por varios receptores de la superficie de células T, que incluyen el complejo del receptor de células T (Weiss (1986), Ann. Rev., Immunol., 4:593-619) y otras moléculas de la superficie "auxiliares" (Allison (1994), Curr. Opin. Immunol., 6:414-419; Springer (1987), supra). Muchas de estas moléculas auxiliares son antígenos de diferenciación de la superficie celular que aparecen en la naturaleza (CD), que se definen por la reactividad de anticuerpos monoclonales sobre la superficie de células (McMichael, ed., Leukocyte Typing III, Oxford Univ. Press, Oxford, N.Y. (1987)).
El CD28 tiene un único dominio similar a la región variable (V) extracelular (Aruffo y Seed, supra). Se ha identificado una molécula homóloga, CTLA4, mediante selección diferencial de un banco de ADNc de células T citolíticas murinas (Brunet (1987), Nature, 328:267-270).
La CTLA4 es una molécula de la superficie de células T que se identificó originariamente mediante selección diferencial de un banco de ADNc de células T citolíticas murinas (Brunet et al., Nature, 328:267-270 (1987)). La CTLA4 también es un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas (Ig); CTLA4 comprende un único dominio de Ig extracelular. Se han descubiertos transcritos de CTLA4 en poblaciones de células T que tienen actividad citotóxica, lo cual sugiere que la CTLA4 puede actuar en la respuesta citolítica (Brunet et al., supra; Brunet et al., Immunol. Rev., 103-21-36 (1988)). Los investigadores han descrito la clonación y el cartografiado de un gen para el homólogo humano de CTLA4 (Dariavach et al., Eur. J. Immunol., 18:1901-1905 (1988)) en la misma región cromosómica (2q33-34) que CD28 (Lafage-Pochitaloff et al., Immunogenetics, 31:198-201 (1990)). La comparación de la secuencia entre este ADN de CTLA4 humano y el que codifica las proteínas CD28 revela una significativa homología de secuencia, estando el mayor grado de homología en las regiones de yuxtamembrana y citoplásmica (Brunet et al., 1988, supra; Dariavach et al., 1988, supra).
Algunos estudios han sugerido que CTLA4 tiene una función análoga como coestimulador secundario (Linsley et al., J. Exp. Med., 176:1595-1604 (1992); Wu et al., J. Exp. Med., 185:1327-1335 (1997); y las patentes de EE. UU.
5.977.318; 5.968.510; 5.885.796; y 5.885.579). Sin embargo, otros han indicado que la CTLA4 desempeña un papel opuesto como amortiguador de la activación de células T (Krummel (1995), J. Exp. Med., 182:459-465); Krummel et al., Int'l Immunol., 8:519-523 (1996); Chambers et al., Immunity, 7:885-895 (1997)). Se ha indicado que ratones deficientes en CTLA4 sufren una linfoproliferación masiva (Chambers et al., supra). Se ha indicado que el bloqueo de CTLA4 potencia las respuestas de células T in vitro (Walunas et al., Immunity, 1:405-413 (1994)) e in vivo (Kearney (1995), J. Immunol., 155:1032-1036), exacerba la inmunidad antitumoral (Leach (1996), Science, 271:1734-1736), y potencia una enfermedad autoinmunitaria inducida (Luhder (1998), J. Exp. Med., 187:427-432). También se ha indicado que CTLA4 tiene un impacto alternativo o adicional sobre el carácter inicial de la respuesta inmunitaria de células T (Chambers (1997), Curr. Opin. Immunol., 9:396-404; Bluestone (1997), J. Immunol., 158:1989-1993; Thompson (1997), Immunity, 7:445-450). Esto es coherente con la observación de que algunos pacientes con trastornos autoinmunitarios tienen autoanticuerpos contra CTLA4. Es posible que los anticuerpos que bloquean a CTLA4 desempeñen un papel patogénico en estos pacientes (Matsui (1999), J. Immunol., 162:4328-4335).
En diversos estudios se han usado anticuerpos contra CTLA4 no humanos. Sin embargo, uno de los inconvenientes principales a los que se enfrenta el desarrollo de aplicaciones terapéuticas y de diagnóstico in vivo de anticuerpos en seres humanos es la inmunogenicidad intrínseca de las inmunoglobulinas no humanas. Por ejemplo, cuando pacientes humanos inmunocompetentes reciben dosis terapéuticas de anticuerpos monoclonales de roedor, los pacientes producen anticuerpos contra las secuencias de inmunoglobulina de roedor; estos anticuerpos antirratón humanos ("human anti-mouse antibodies", HAMA) neutralizan a los anticuerpos terapéuticos y pueden provocar toxicidad aguda. Estas y otras deficiencias de los anticuerpos previos son superadas por la provisión de anticuerpos totalmente humanos contra CTLA4 por la presente descripción.
El documento WO2009/100140 describe anticuerpos monoclonales aislados que se unen a CTLA-4.
El documento EP1792991 describe anticuerpos de CTLA-4 humanos.
El documento WO00/37504 describe anticuerpos monoclonales de CTLA-4 humanos.
The Oncologist (2007), 12, 7, pp. 873-883 describe un anticuerpo monoclonal que bloquea a CTLA-4 denominado tremelimunab.
PNAS (2009), 106, 20, pp. 8198-8203 describe una lipocalina modificada específica para CTLA-4.
Sumario
Los aspectos y las realizaciones de la presente invención se presentan en las reivindicaciones.
Esta descripción se refiere a proteínas de unión capaces de unirse a CTLA4, que incluyen anticuerpos anti-CTLA4 y sus fragmentos de unión al antígeno.
En un aspecto, la presente descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4 totalmente humano aislado de una clase de IgG que se une a un epítopo de CTLA4 con una afinidad de unión de al menos 10-6 M, que tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada que es al menos 95 % idéntica a las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en SeQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, s Eq ID NO:41, y SEQ ID NO:43, y que tiene una secuencia de dominio variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica a la secuencia de aminoácidos que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:44. En una realización, el anticuerpo totalmente humano tiene una cadena pesada y una cadena ligera, en el que el anticuerpo tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2 (denominadas en la presente A1), SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4 (denominadas en la presente A2), SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6 (denominadas en la presente A4), SEQ ID NO:7/s Eq ID NO:8 (denominadas en la presente A7), SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10 (denominadas en la presente A12), SEQ ID nO:11/SEQ ID NO:12 (denominadas en la presente B6), SEQ ID NO:13/SEQ ID NO:14 (denominadas en la presente C2), SEQ ID NO:15/SEQ ID NO:16 (denominadas en la presente D6), SEQ ID NO:17/SEQ ID NO:18 (denominadas en la presente F1), SEQ ID No :19/SEQ ID NO:20 (denominadas en la presente F3), SEQ ID nO:21/SEQ ID NO:22 (denominadas en la presente F5), SEQ ID NO:23/SEQ ID NO:24 (denominadas en la presente F6), SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26 (denominadas en la presente F7), SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28 (denominadas en la presente G1), SEQ ID NO:29/s Eq ID NO:30 (denominadas en la presente G2), SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32 (denominadas en la presente G3), SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34 (denominadas en la presente G5), SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36 (denominadas en la presente G12), SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38 (denominadas en la presente D5), SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40 (denominadas en la presente E7), SEQ ID No :41/SEQ ID NO:42 (denominadas en la presente E8), y SEQ ID No :43/SEQ ID NO:44 (denominadas en la presente CT1E1).
En otro aspecto, la presente descripción proporciona un fragmento de anticuerpo totalmente humano Fab anti-CTLA4 que comprende un dominio variable de cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, y SEQ ID NO:43, y que comprende un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:44. En una realización, el fragmento Fab de anticuerpo totalmente humano tiene una región de dominio variable de cadena pesada y una región de dominio variable de cadena ligera, en el que el anticuerpo tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11/SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13/SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15/SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17/SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19/SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21/SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23/SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:44.
La presente descripción proporciona además un anticuerpo humano monocatenario que tiene un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera conectados por un conector peptídico, en el que el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, y SEQ ID NO:43, y en el que el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SeQ ID NO:42, y SEQ ID NO:44. En ciertas realizaciones, el anticuerpo monocatenario totalmente humano tiene una región de dominio variable de cadena pesada y una región de dominio variable de cadena ligera, en el que el anticuerpo totalmente humano monocatenario tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11/SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13/SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15/SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17/SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19/SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21/SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23/SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:44.
En la descripción también se incluye un anticuerpo anti-CTLA4 aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende un dominio variable de cadena pesada que comprende regiones determinantes de la complementariedad ("complementarity determining regions", c DR) tal como se indican en una secuencia de aminoácidos de región variable de cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, y SEQ ID NO:43; y que comprende un dominio variable de cadena ligera que comprende CDR tal como se indican en una secuencia de aminoácidos de región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, y SEQ ID NO:44.
La presente descripción proporciona además un método para tratar una enfermedad que requiere la estimulación o la supresión de respuestas inmunitarias, que comprende administrar un polipéptido anti-CTLA4, en el que el polipéptido anti-CTLA4 se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo totalmente humano aislado de una clase de IgG que se une a CTLA4 y que comprende un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera; un fragmento Fab de anticuerpo totalmente humano anti-CTLA4 que comprende un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera; y un anticuerpo humano monocatenario que comprende un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera, en el que el dominio variable de cadena pesada y el dominio variable de cadena ligera están conectados a través de un conector peptídico; en el que el dominio variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, y SEQ ID NO:43, y en el que el dominio variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:44.
En ciertas realizaciones, el anticuerpo totalmente humano o fragmento de anticuerpo tiene una cadena pesada y una cadena ligera, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2 (denominadas en la presente A1), SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4 (denominadas en la presente A2), SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6 (denominadas en la presente A4), SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8 (denominadas en la presente A7), SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10 (denominadas en la presente A12), SEQ ID NO:11/SEQ ID NO:12 (denominadas en la presente B6), SEQ ID NO:13/SEQ ID NO:14 (denominadas en la presente C2), SEQ ID NO:15/SEQ ID NO:16 (denominadas en la presente D6), SEQ ID NO:17/SEQ ID NO:18 (denominadas en la presente F1), SEQ ID nO:19/SEQ ID NO:20 (denominadas en la presente F3), SEQ ID NO:21/SEQ ID NO:22 (denominadas en la presente F5), SEQ ID No :23/SEQ ID NO:24 (denominadas en la presente F6), SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26 (denominadas en la presente F7), SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28 (denominadas en la presente G1), SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30 (denominadas en la presente G2), SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32 (denominadas en la presente G3), SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34 (denominadas en la presente G5), SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36 (denominadas en la presente G12), SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38 (denominadas en la presente D5), SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40 (denominadas en la presente E7), SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:42 (denominadas en la presente E8), y SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:44 (denominadas en la presente CT1E1).
En ciertas realizaciones, el anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción tiene una Kd de al menos 1 x 10-6 M. En otras realizaciones, el anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción tiene una Kd de al menos 1 x 10-7 M. En otras realizaciones, el anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción tiene una Kd de al menos 1 x 10-8 M.
En ciertas realizaciones, el anticuerpo es de isotipo IgG1. En otras realizaciones, el anticuerpo es de isotipo IgG4. En ciertas realizaciones, el anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno, descrito en la presente es recombinante.
La descripción también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de anticuerpos anti-CTLA4 o fragmentos descritos en la presente, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En ciertas realizaciones, la descripción incluye un método para tratar un cáncer en un sujeto humano que lo necesita, que comprende administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, descrito en la presente al sujeto, de modo que se trata el cáncer.
En una realización preferida, el cáncer está asociado con una actividad perjudicial de CTLA4. Los ejemplos de dichos tipos de cáncer incluyen, pero no se limitan a cáncer de vejiga, cáncer de sangre, cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer de colon, fibrosarcoma, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de próstata, melanoma, linfoma, mesotelioma y plasmacitoma.
En otras realizaciones, la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en cánceres de próstata, riñón, colon, pulmón o mama; infecciones patogénicas; enfermedades asociadas con el SNC, enfermedad de Alzheimer amiloidogénica; y enfermedades con componentes inflamatorios o alérgicos, enfermedad del injerto contra el huésped, enfermedad del huésped contra el injerto, alergia, enfermedades autoinmunitarias y otras enfermedades inflamatorias.
Descripción de los dibujos
La figura 1 muestra la actividad funcional de los anticuerpos anti-CTLA4 listados según su capacidad para potenciar la activación de células T. El nivel de expresión de CD25 fue mayor en los cultivos a los que se le añadieron anticuerpos anti-CTLA4. El anticuerpo control usado (Ig de control) es un anticuerpo de isotipo concordante, no específico (es decir, no se une a CTLA4).
La figura 2 demuestra que, mediante la normalización de los datos con respecto a un medio control, se detectó un nivel notable de potenciación en los cultivos que recibieron anticuerpos anti-CTLA4. El anticuerpo control usado (Ig de control) es un anticuerpo de isotipo concordante, no específico (es decir, no se une a CTLA4).
Las figuras 3A y 3B muestran gráficamente las CI50 características del anticuerpo CT1E1 usando ensayos basados en CD80 (figura 3A) y CD86 (figura 3B), en comparación con el anticuerpo anti-CTLA4 ipilimumab (Yervoy).
La figura 4 muestra gráficamente los resultados procedentes de experimentos que determinan el efecto del anticuerpo anti-CTLA4 F7 sobre la respuesta a una dosis baja del superantígeno enterotoxina B de Staphylococcus (SEB). El anticuerpo control (cIg) es un anticuerpo de ¡sotipo concordante, no específico (es decir, no se une a CTLA4).
La figura 5 muestra la actividad funcional del anticuerpo anti-CTLA4 E8 y su capacidad para potenciar la activación de células T. El nivel de expresión de CD25 fue mayor en los cultivos a los que se le añadió E8. El anticuerpo control usado (Ig de control) es un anticuerpo de isotipo concordante, no específico (es decir, no se une a CTLA4). Los datos normalizados se indican a la derecha.
Descripción detallada
Definiciones
Los términos "péptido", "polipéptido" y "proteína" se refieren cada uno a una molécula que comprende dos o más restos aminoácidos unidos entre sí mediante enlaces peptídicos. Estos términos incluyen, por ejemplo, proteínas nativas y artificiales, fragmentos de proteínas y análogos de polipéptidos (tales como muteínas, variantes y proteínas de fusión) de una secuencia de proteína, así como proteínas modificadas de modo postraduccional o modificadas de otra forma covalente o no covalente. Un péptido, polipéptido o proteína puede ser monomérico o polimérico.
Un "variante" de un polipéptido (por ejemplo, un variante de un anticuerpo) comprende una secuencia de aminoácidos en la que uno o más restos aminoácidos están insertado, delecionados y/o sustituidos de la secuencia de aminoácidos, con relación a otra secuencia de polipéptido. Los variantes descritos incluyen, por ejemplo, proteínas de fusión.
Un "derivado" de un polipéptido es un polipéptido (por ejemplo, un anticuerpo) que se ha modificado de modo químico, por ejemplo, mediante conjugación con otro resto químico (tal como, por ejemplo, polietilenglicol o albúmina, por ejemplo, albúmina de suero humana), fosforilación y glicosilación. A menos que se indique lo contrario, el término "anticuerpo" incluye, además de anticuerpos que comprenden dos cadenas pesadas de longitud completa y dos cadenas ligeras de longitud completa, sus derivados, variantes, fragmentos y muteínas, cuyos ejemplos se describen a continuación.
Una "proteína de unión a antígenos" es una proteína que comprende una porción que se une a un antígeno y, opcionalmente, una porción de andamiaje o de marco que permite que la porción de unión al antígeno adopte una conformación que estimula la unión al antígeno de la proteína de unión a antígenos. Los ejemplos de proteínas de unión a antígenos incluyen anticuerpos, fragmentos de anticuerpos (por ejemplo, una porción de unión al antígeno de un anticuerpo), derivados de anticuerpos y análogos de anticuerpos. La proteína de unión a antígenos puede comprender, por ejemplo, un andamiaje de proteína alternativa o un andamiaje artificial con CDR o derivados de CDR injertados. Estos andamiajes incluyen, pero no se limitan a andamiajes derivados de anticuerpos que comprenden mutaciones introducidas, por ejemplo, para estabilizar la estructura tridimensional de la proteína de unión a antígenos, así como andamiajes totalmente sintéticos que comprenden, por ejemplo, un polímero biocompatible. Véase, por ejemplo, Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, volumen 53, número 1:121-129; Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog., 20:639-654. Además, pueden usarse miméticos de anticuerpos peptídicos ("peptide antibody mimetics", "PAM"), así como andamiajes basados en miméticos de anticuerpos que emplean componentes de fibronección como andamiaje.
Una proteína de unión a antígenos puede tener, por ejemplo, la estructura de una inmunoglobulina. Una "inmunoglobulina" es una molécula tetramérica compuesta de dos pares idénticos de cadenas polipeptídicas, y cada par tiene una cadena "ligera" (aproximadamente 25 kDa) y una cadena "pesada" (aproximadamente 50-70 kDa). La porción amino-terminal de cada cadena incluye una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos principalmente responsable del reconocimiento del antígeno. La porción carboxi-terminal de cada cadena define una región constante principalmente responsable de la función efectora. Las cadenas ligeras humanas se clasifican como cadenas ligeras kappa o lambda. Las cadenas pesadas se clasifican como mu, delta, gamma, alfa o épsilon, y definen el isotipo del anticuerpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. Preferiblemente, en una realización, los anticuerpos anti-CTLA4 descritos en la presente se caracterizan mediante sus secuencias de la región de dominio variable en las secuencias de aminoácidos pesada (VH) y ligera (VL). En una realización, el anticuerpo preferido es A6, que es un anticuerpo IgG kappa. Dentro de las cadenas ligera y pesada, las regiones variables y constantes están unidas mediante una región "J" de aproximadamente 12 o más aminoácidos, y la cadena pesada también incluye una región "D" de aproximadamente 10 aminoácidos más. Véase, en general, Fundamental Immunology, cap. 7 (Paul, W., ed., 2a ed., Raven Press, N.Y. (1989)). Las regiones variables de cada par de cadena ligera/pesada forman el sitio de unión del anticuerpo, de modo que una inmunoglobulina intacta tiene dos sitios de unión.
Las regiones variables de las cadenas de inmunoglobulinas muestran la misma estructura general de regiones marco ("framework regions", FR) relativamente conservadas, unidas por tres regiones hipervariables, también denominadas regiones determinantes de la complementariedad o CDR. Desde el N-terminal al C-terminal, las cadenas ligera y pesada comprenden los dominios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 y FR4. La asignación de aminoácidos a cada dominio se realiza según las definiciones de Kabat et al. en Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, publicación de NIH n.° 91-3242, 1991. Otros sistemas de numeración para los aminoácidos en cadenas de inmunoglobulinas incluyen IMGT™ (sistema de información ImMunoGeneTics internacional; Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol., 29:185-203, 2005) y AHo (Honegger y Pluckthun, J. Mol. Biol., 309(3):657-670, 2001).
Un "anticuerpo" se refiere a una inmunoglobulina intacta, o a una porción de unión al antígeno de esta, que compite con el anticuerpo intacto para la unión específica, a menos que se indique lo contario.
En una realización, un anticuerpo comprende un dominio variable de cadena pesada, un dominio variable de cadena ligera, una región constante de cadena ligera (CL) y regiones constantes de cadena pesada CH1 , CH2 y CH3. Las secuencias de dominio variable de cadena pesada y ligera pueden seleccionarse de las descritas en la presente en SEQ ID NO:1 a 44.
Las porciones de unión al antígeno de un anticuerpo pueden producirse mediante técnicas de ADN recombinante o mediante ruptura enzimática o química de anticuerpos intactos. Las porciones de unión al antígeno incluyen, entre otras, Fab, Fab', F(ab')2 , Fv, anticuerpo de dominio (dAb), y fragmentos de una región determinante de la complementariedad (CDR), anticuerpos monocatenarios (scFv), anticuerpos quiméricos, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, y polipéptidos que contienen al menos una porción de una inmunoglobulina que es suficiente para conferir una unión específica de antígeno al polipéptido.
En ciertas realizaciones, los anticuerpos pueden obtenerse de fuentes, tales como suero o plasma, que contienen inmunoglobulinas que tienen una especificidad antigénica variada. Si estos anticuerpos se someten a una purificación por afinidad, pueden enriquecerse en una especificidad antigénica concreta. Estas preparaciones enriquecidas de anticuerpos habitualmente están formadas por menos de aproximadamente 10 % de un anticuerpo que tiene una actividad de unión específica por el antígeno concreto. Si estas preparaciones se someten a varias rondas de purificación por afinidad, se puede aumentar la proporción de anticuerpo que tiene una actividad de unión específica por el antígeno. Los anticuerpos preparados de esta manera a menudo se denominan "monoespecíficos". El término "monoespecífico", tal como se emplea en la presente, se refiere a un anticuerpo que muestra una afinidad por un epítopo concreto. Las preparaciones de anticuerpos monoespecíficos pueden estar formadas por aproximadamente 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 99 % o 99,9 % de un anticuerpo que tiene una actividad de unión específica por el antígeno concreto.
Un "fragmento de anticuerpo" o un "fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo" comprende una porción de un anticuerpo intacto, y preferiblemente comprende los dominios variables o de unión al antígeno del anticuerpo. Los ejemplos de un fragmento de anticuerpo incluyen un Fab, un Fab', un F(ab')2 , un fragmento Fv, y un anticuerpo lineal.
Un fragmento Fab es un fragmento monovalente que contiene los dominios Vl, Vh, Cl y Cm; un fragmento F(ab')2 es un fragmento bivalente que contiene dos fragmentos Fab unidos mediante un puente disulfuro en la región de bisagra; un fragmento Fd contiene los dominio Vh y Cm; un fragmento Fv contiene los dominios Vl y Vh de un solo brazo de un anticuerpo; y un fragmento dAb contiene un dominio Vh, un dominio Vl, o un fragmento de unión al antígeno de un dominio Vh o Vl (patentes de EE. UU. 6.846.634; 6.696.245; solicitudes de publicación US 2002/02512; 2004/0202995; 2004/0038291; 2004/0009507; 2003/0039958; y Ward et al., Nature, 341:544-546, 1989).
Un anticuerpo monocatenario (scFv) es un fragmento de anticuerpo en el que una región Vl y una región Vh están unidas a través de un conector (por ejemplo, una secuencia sintética de restos aminoácidos) para formar una cadena de proteína continua, en el que el conector es lo bastante largo para permitir que la cadena de proteína se pliegue sobre sí misma y forme un sitio de unión al antígeno monovalente (véase, por ejemplo, Bird et al., 1988, Science, 242:423-26; y Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5879-83).
Los diacuerpos son anticuerpos bivalentes que comprenden dos cadenas polipeptídicas, en los que cada cadena polipeptídica comprende dominios Vh y Vl unidos mediante un conector que es demasiado corto como para permitir el apareamiento entre dos dominios sobre la misma cadena, permitiendo con ello que cada dominio se aparee con un dominio complementario sobre otra cadena polipeptídica (véase, por ejemplo, Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-48; y Poljak et al., 1994, Structure, 2:1121-23). Si las dos cadenas polipeptídicas de un diacuerpo son idénticas, entonces el diacuerpo que resulte de su apareamiento tendrá dos sitios de unión al antígeno idénticos. Pueden usarse cadenas polipeptídicas que tengan diferente secuencia para preparar un diacuerpo con dos sitios de unión al antígeno diferentes. De modo similar, los triacuerpos y los tetracuerpos son anticuerpos que comprenden tres y cuatro cadenas polipeptídicas, respectivamente, y que forman tres y cuatro sitios de unión al antígeno, respectivamente, que pueden ser iguales o diferentes.
Una proteína de unión a antígenos, tal como un anticuerpo, puede tener uno o más sitios de unión. Si existe más de un sitio de unión, los sitios de unión pueden ser idénticos entre sí o pueden ser diferentes. Por ejemplo, una inmunoglobulina humana natural generalmente tiene dos sitios de unión idénticos, mientras que un anticuerpo "biespecífico" o "bifuncional" tiene dos sitios de unión diferentes.
La expresión "anticuerpo humano" incluye todos los anticuerpos que tienen una o más regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulinas humanas. En una realización, todos los dominios variables y constantes del anticuerpo se derivan de secuencias de inmunoglobulinas humanas (denominado "anticuerpo totalmente humano"). Estos anticuerpos pueden prepararse mediante una diversidad de formas, cuyos ejemplos se describen a continuación, que incluyen mediante la inmunización con un antígeno de interés de un ratón que está genéticamente modificado para que exprese anticuerpos derivados de genes que codifican cadenas pesadas y/o ligeras humanas. En una realización preferida, un anticuerpo totalmente humano se prepara usando métodos recombinantes, de modo que el patrón de glicosilación del anticuerpo es diferente del que presenta un anticuerpo que tiene la misma secuencia, si es que existiera en la naturaleza.
Un "anticuerpo humanizado" tiene una secuencia que se diferencia de la secuencia de un anticuerpo derivado de una especie no humana en una o más sustituciones, deleciones y/o adiciones de aminoácidos, de modo que es menos probable que el anticuerpo humanizado induzca una respuesta inmunitaria y/o induce una respuesta inmunitaria menos grave, en comparación con el anticuerpo de una especie no humana, cuando se administra a un sujeto humano. En una realización, ciertos aminoácidos en los dominios de marco y constantes de las cadenas pesada y/o ligera del anticuerpo de una especie no humana se mutan para producir el anticuerpo humanizado. En otra realización, el dominio o dominios constantes procedentes de un anticuerpo humano se condensan con el dominio o dominios variables de una especie no humana. En otra realización, uno o más restos aminoácidos en una o más secuencias de CDR de un anticuerpo no humano se cambian para reducir la probable inmunogenicidad del anticuerpo no humano cuando se administra a un sujeto humano, en los que los restos aminoácidos cambiados no son cruciales para la unión inmunoespecífica del anticuerpo a su antígeno, o los cambios que se realizan en la secuencia de aminoácidos son cambios conservativos, de modo que la unión del anticuerpo humanizado al antígeno no es significativamente peor que la unión del anticuerpo no humano al antígeno. Pueden encontrarse ejemplos para fabricar anticuerpos humanizados en las patentes de EE. UU. 6.054.297, 5.886.152 y 5.877.293.
La expresión "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo que contiene una o más regiones procedentes de un anticuerpo y una o más regiones procedentes de uno o más anticuerpos distintos. En una realización, una o más de las CDR se derivan de un anticuerpo anti-CTLA4 humano. En otra realización, todas las CDR se derivan de un anticuerpo anti-CTLA4 humano. En otra realización, las CDR procedentes de más de un anticuerpo anti-CTLA4 humano se mezclan y se aparean en un anticuerpo quimérico. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico puede comprender una CDR1 procedente de la cadena ligera de un primer anticuerpo anti-PAR-2 humano, una CDR2 y una CDR3 procedentes de la cadena ligera de un segundo anticuerpo anti-CTLA4 humano, y las CDR procedentes de la cadena pesada de un tercer anticuerpo anti-CTLA4. Son posibles otras combinaciones.
Además, las regiones de marco pueden proceder de uno de anticuerpos anti-CTLA4 iguales, de uno o más anticuerpos diferentes, tales como un anticuerpo humano, o de un anticuerpo humanizado. En un ejemplo de un anticuerpo quimérico, una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica, homóloga o se deriva de un anticuerpo de una especie concreta o que pertenece a una clase o subclase de anticuerpos concreta, mientras que el resto de la cadena o cadenas son idénticas, homólogas o se derivan de uno o más anticuerpos de otra especie o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpos. También se incluyen los fragmentos de dichos anticuerpos que muestren la actividad biológica deseada (es decir, que tengan la capacidad de unirse específicamente a CTLA4). Un "anticuerpo neutralizante" o un "anticuerpo inhibidor" es un anticuerpo antagonista que inhibe la actividad CTLA4, por ejemplo, inhibe la activación proteolítica de CTLA4. En una realización, se determina la activación proteolítica de CTLA4 cuando un exceso del anticuerpo anti-CTLA4 reduce la cantidad de activación en al menos aproximadamente 20 % usando un ensayo, tales como los descritos en la presente en los ejemplos. En diversas realizaciones, la proteína de unión a antígenos reduce la cantidad de activada proteolítica de CTLA4 en al menos 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 99 % y 99,9 %.
Un "anticuerpo con CDR injertada" es un anticuerpo que comprende una o más CDR derivadas de un anticuerpo de una especie o isotipo concreto y el marco de otro anticuerpo de la misma especie o isotipo o de una especie o isotipo diferente.
Un "anticuerpo multiespecífico" es un anticuerpo que reconoce más de un epítopo sobre uno o más antígenos. Una subclase de este tipo de anticuerpo es un "anticuerpo biespecífico" que reconoce dos epítopos diferenciados sobre el mismo antígeno o sobre antígenos diferentes.
Una proteína de unión a antígenos "se une específicamente" a un antígeno (por ejemplo, CTLA4 humana) si se une al antígeno con una constante de disociación de 1 nanomolar o menor.
Un "dominio de unión al antígeno", "región de unión al antígeno" o "sitio de unión al antígeno" es una porción de una proteína de unión a antígenos que contiene restos aminoácidos (u otros restos) que interaccionan con un antígeno y contribuyen a la especificidad y afinidad por el antígeno de la proteína de unión a antígenos. Para un anticuerpo que se une específicamente a su antígeno, esto incluirá al menos parte de al menos uno de sus dominios CDR.
La expresión "polipéptido de Fc" incluye formas nativas y de muteína de polipéptidos derivados de la región Fc región de un anticuerpo. También se incluyen las formas truncadas de dichos polipéptidos que contienen la región de bisagra que estimula la dimerización. Las proteínas de fusión que comprenden restos Fc (y los oligómeros formados a partir de estos) ofrecen la ventaja de una fácil purificación mediante cromatografía de afinidad en columnas de proteína A o proteína G.
Un "epítopo" es la porción de una molécula que es unida por una proteína de unión a antígenos (por ejemplo, por un anticuerpo). Un epítopo puede comprender porciones no contiguas de la molécula (por ejemplo, en un polipéptido, restos aminoácidos que no son contiguos en la secuencia primaria del polipéptido, pero que, en el contexto de la estructura terciaria y cuaternaria del polipéptido, están lo suficientemente cercanos entre sí para ser unidos por una proteína de unión a antígenos).
El "porcentaje de identidad" o "porcentaje de homología" de dos secuencias de polinucleótidos o dos secuencias de polipéptidos se determina comparando las secuencias usando el programa informático GAP (una parte del paquete GCG Wisconsin Package, versión 10.3 (Accelrys, San Diego, Calif.)) usando sus parámetros por defecto.
Los términos "polinucleótido" y "oligonucleótido" y la expresión "ácido nucleico" se usan indistintamente a lo largo del texto e incluyen moléculas de ADN (por ejemplo, ADNc o ADN genómico), moléculas de ARN (por ejemplo, ARNm), análogos de ADN o ARN generados usando análogos de nucleótidos (por ejemplo, ácidos nucleicos peptídicos y análogos de nucleótidos no naturales), y sus híbridos. La molécula de ácido nucleico puede ser monocatenaria o bicatenaria. En una realización, las moléculas de ácido nucleico de la descripción comprenden un marco de lectura abierto contiguo que codifica un anticuerpo, o uno de sus fragmentos, derivados, muteínas o variantes.
Dos polinucleótidos monocatenarios son "el complemento" del otro si sus secuencias pueden alinearse en una orientación antiparalela, de modo que cada nucleótido en un polinucleótido se encuentra en una posición opuesta a su nucleótido complementario en el otro polinucleótido, sin la introducción de huecos y sin nucleótidos no apareados en el extremo 5' o 3' de cualquiera de las secuencias. Un polinucleótido es "complementario" con otro polinucleótido si los dos polinucleótidos pueden hibridarse entre sí bajo condiciones moderadamente rigurosas. Por tanto, un polinucleótido puede ser complementario con otro polinucleótido sin ser su complemento.
Un "vector" es un ácido nucleico que puede usarse para introducir otro ácido nucleico unido a él en una célula. Un tipo de vector es un "plásmido", que se refiere a una molécula de ADN bicatenario lineal o circular en la que pueden acoplarse segmentos de ácido nucleico adicionales. Otro tipo de vector es un vector vírico (por ejemplo, retrovirus defectuosos en la replicación, adenovirus y virus adenoasociados), en el que pueden introducirse segmentos de ADN adicionales en el genoma vírico. Ciertos vectores son capaces de una replicación autónoma en una célula huésped en la que se introducen (por ejemplo, vectores bacterianos que comprenden un origen de la replicación bacteriano y vectores de mamífero episómicos). Otros vectores (por ejemplo, vectores de mamífero no episómicos) se integran en el genoma de una célula huésped tras su introducción en la célula huésped y, con ello, se replican junto con el genoma del huésped. Un "vector de expresión" es un tipo de vector que puede dirigir la expresión de un polinucleótido elegido.
Una secuencia de nucleótidos está "unida operativamente" a una secuencia reguladora si la secuencia reguladora afecta a la expresión (por ejemplo, el nivel, la cronología, o la localización de la expresión) de la secuencia de nucleótidos. Una "secuencia reguladora" es un ácido nucleico que afecta a la expresión (por ejemplo, el nivel, la cronología, o la localización de la expresión) de un ácido nucleico con el cual está unido operativamente. La secuencia reguladora, por ejemplo, puede ejercer sus efectos directamente sobre el ácido nucleico regulado o a través de la acción de una o más moléculas distintas (por ejemplo, polipéptidos que se unen a la secuencia reguladora y/o al ácido nucleico). Los ejemplos de secuencias reguladores incluyen promotores, potenciadores y otros elementos de control de la expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación). Otros ejemplos de secuencias reguladoras se describen, por ejemplo, en Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, 185, Academic Press, San Diego, Calif.; y Baron et al., 1995, Nucleic Acids Res., 23:3605-06.
Una "célula huésped" es una célula que puede usarse para expresar un ácido nucleico, por ejemplo, un ácido nucleico de la descripción. Una célula huésped puede ser un procariota, por ejemplo, E. coli, o puede ser un eucariota, por ejemplo, un eucariota unicelular (por ejemplo, una levadura u otro hongo), una célula vegetal (por ejemplo, una célula vegetal de tabaco o tomate), una célula animal (por ejemplo, una célula humana, una célula de mono, una célula de hámster, una célula de rata, una célula de ratón, o una célula de insecto) o un hibridoma. Los ejemplos de células huésped incluyen la línea COS-7 de células de riñón de mono (ATCC CRL 1651) (véase, Gluzman et al., 1981, Cell, 23:175), células L, células C127, células 3T3 (ATCC CCL 163), células de ovario de hámster chino ("Chinese hamster ovary", CHO) o sus derivados, tales como Veggie CHO y líneas de células relacionadas que crecen en medio sin suero (véase, Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology, 28:31) o la cepa de CHO DX-B11, que es deficiente en DHFR (véase, Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216-20), células HeLa, líneas de células BHK (ATCC CRL 10), la línea celular CV1/EBNA derivada de la línea de células de riñón de mono verde africano CV1 (ATCC CCL 70) (véase, McMahan et al., 1991, EMBO J., 10:2821), células de riñón embrionario humano, tales como 293,293 EBNA o MSR 293, células epidérmicas humanas A431, células humanas Colo205, otras líneas de células de primate transformadas, células diploides normales, cepas de células derivadas de un cultivo in vitro de tejido primario, explantes primarios, células HL-60, U937, HaK o Jurkat. En una realización, una célula huésped es una célula huésped de mamífero, pero no una célula huésped humana. Generalmente, una célula huésped es una célula cultivada que puede transformarse o transfectarse con un ácido nucleico que codifica un polipéptido, que después puede expresarse en la célula huésped. La expresión "célula huésped recombinante" puede usarse para indicar una célula huésped que ha sido transformada o transfectada con un ácido nucleico que se va a expresar. Una célula huésped también puede ser una célula que comprende el ácido nucleico, pero que no lo expresa a un nivel deseado a menos que se introduzca una secuencia reguladora en la célula huésped, de modo que se una operativamente al ácido nucleico. Se entiende que la expresión célula huésped se refiere no solo a la célula pertinente en concreto, sino también a la progenie o progenie potencial de dicha célula. Debido a que pueden producirse ciertas modificaciones en las generaciones sucesivas debido, por ejemplo, a una mutación o una influencia ambiental, esta progenie puede, de hecho, no ser idéntica a la célula originaria, pero sigue estando incluida dentro del alcance de la expresión tal como se emplea en la presente.
La expresión "anticuerpo recombinante" se refiere a un anticuerpo que se expresa desde una célula o una línea celular transfectada con un vector de expresión (o quizá más de un vector de expresión, generalmente dos vectores de expresión) que comprende la secuencia codificadora del anticuerpo, en el que dicha secuencia codificadora no está asociada en la naturaleza con la célula. En una realización, un anticuerpo recombinante tiene un patrón de glicosilación que es diferente del patrón de glicosilación de un anticuerpo que tiene la misma secuencia, si es que existiera en la naturaleza. En una realización, un anticuerpo recombinante se expresa en una célula huésped de mamífero que no es una célula huésped humana. De modo notable, las células huésped de mamífero individuales tienen patrones de glicosilación exclusivos.
La expresión "cantidad eficaz", tal como se emplea en la presente, se refiere a la cantidad de un anticuerpo, o una porción de unión al antígeno de este, que se une a CTLA4, que es suficiente para realizar un tratamiento, un pronóstico o un diagnóstico de una enfermedad asociada con la señalización dependiente de CTLA4, tal como se describe en la presente, cuando se administra a un sujeto. Las cantidades terapéuticamente eficaces de anticuerpos proporcionados en la presente, cuando se usan por sí solos o en combinación, variarán dependiendo de la actividad relativa de los anticuerpos y las combinaciones (por ejemplo, para inhibir el crecimiento celular) y dependiendo del sujeto y de la afección de enfermedad que se está tratando, el peso y la edad del sujeto, la gravedad de la afección de enfermedad, la forma de administración y similares, lo cual puede ser determinado con facilidad por los expertos en la técnica.
El término "aislado" se refiere a una proteína (por ejemplo, un anticuerpo) que está sustancialmente exenta de otro material celular y/o producto químico. En una realización, un anticuerpo aislado está sustancialmente exento de otras proteínas procedentes de la misma especie. En una realización, un anticuerpo aislado es expresado por una célula de una especie diferente y está sustancialmente exento de otras proteínas procedentes de la especie diferente. Se puede hacer que una proteína esté sustancialmente exenta de componentes asociados en la naturaleza (o componentes asociados con el sistema de expresión celular usado para producir el anticuerpo) mediante aislamiento, usando técnicas de purificación de proteínas muy conocidas en la técnica. En una realización, los anticuerpos, o los fragmentos de unión al antígeno, de la descripción están aislados.
Proteínas de unión al antígeno CTLA4
La presente descripción se refiere a proteínas de unión a CTLA4, en particular anticuerpos anti-CTLA4, o sus porciones de unión al antígeno, que se unen a CTLA4, y sus usos. Diversos aspectos de la descripción se refieren a anticuerpos y fragmentos de anticuerpo, composiciones farmacéuticas, ácidos nucleicos, vectores de expresión recombinantes, y células huésped para fabricar dichos anticuerpos y fragmentos. Los métodos para usar los anticuerpos de la descripción para detectar la CTLA4 humana, para inhibir la actividad CTLA4, in vitro o in vivo, y para prevenir o tratar trastornos, tales como el cáncer, también se incluyen en la descripción.
Tal como se describe en la siguiente tabla 4, en la descripción se incluyen nuevas regiones variables de cadena pesada y ligera de anticuerpos que son específicas para CTLA4. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una cadena pesada que tiene un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 y 43. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una cadena ligera que tiene un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42 y 44. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una cadena pesada que tiene un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 y 43; y que comprende una cadena ligera que tiene un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42 y 44.
Las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) son conocidas como regiones hipervariables en los dominios variables de cadena ligera y de cadena pesada. Las porciones más altamente conservadas de los dominios variables se denominan el marco ("framework", FR). Las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) y las regiones de marco (FR) de un anticuerpo concreto pueden identificarse usando el sistema descrito por Kabat et al. supra, Lefranc et al., supra y/o Honegger y Pluckthun, supra. También resultará familiar para los expertos en la técnica el sistema de numeración descrito en Kabat et al. (1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, Va.). A este respecto, Kabat et al. definen un sistema de numeración para secuencias de dominio variable que es aplicable a cualquier anticuerpo. Los expertos en la técnica pueden asignar sin ambigüedad este sistema de "numeración de Kabat" a cualquier secuencia de aminoácidos de dominio variable, sin basarse en ningún dato experimental más allá de la propia secuencia. Se ofrece una numeración alternativa en Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 -917 (1987), y MacCallum et al., J. Mol. Biol., 262:732-745 (1996), aunque, como en Kabat, los límites de las FR están separados por los respectivos terminales de CDR como se describió anteriormente. Véase también, Chothia et al., Nature, 342, pp. 877-883 (1989); y S. Dubel, ed., Handbook of Therapeutic Antibodies, 3a ed., WILEY-VCH Verlag GmbH and Co. (2007), en los que las definiciones incluyen el solapamiento o subconjuntos de restos aminoácidos cuando se comparan entre sí.
En ciertas realizaciones, la presente descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4 que comprende las CDR de los dominios variables de cadena pesada y ligera descritos en la tabla Table 4 (SEQ ID NO:1-44). Por ejemplo, la descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene las CDR descritas en una secuencia de aminoácidos tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 y 43. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena ligera que tiene las CDR descritas en una secuencia de aminoácidos tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42 y 44. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena ligera que tiene las CDR descritas en una secuencia de aminoácidos tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42 y 44; y que comprende una región variable de cadena pesada que tiene las CDR descritas en una secuencia de aminoácidos tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21,23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 y 43.
Una o más CDR pueden incorporarse a una molécula de modo covalente o no covalente para convertirla en una proteína de unión a antígenos.
Una proteína de unión a antígenos puede incorporar la CDR o las CDR como parte de una cadena polipeptídica más larga, puede unir covalentemente la CDR o las CDR a otra cadena polipeptídica, o puede incorporar la CDR o las CDR de modo no covalente. Las CDR permiten a la proteína de unión a antígenos unirse específicamente a un antígeno de interés concreto.
En una realización, la presente descripción proporciona un anticuerpo totalmente humano aislado de una clase de IgG que se une a un epítopo de CTLA4, que tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada que es al menos 95 % idéntica a las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, y que tiene una secuencia de dominio variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica a la secuencia de aminoácidos que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, s Eq ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44.
En una realización, el anticuerpo totalmente humano aislado tiene una cadena pesada y una cadena ligera, en el que el anticuerpo tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2 (denominadas en la presente A1), SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4 (denominadas en la presente A2), SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6 (denominadas en la presente A4), SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8 (denominadas en la presente A7), SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10 (denominadas en la presente A12), SEQ ID NO:11/s Eq ID NO:12 (denominadas en la presente B6), SEQ ID nO:13/SEQ ID NO:14 (denominadas en la presente C2), SEQ ID No :15/SEQ ID NO:16 (denominadas en la presente D6), SEQ ID nO:17/SEQ ID NO:18 (denominadas en la presente F1), SEQ ID NO:19/SEQ ID NO:20 (denominadas en la presente F3), SEQ ID NO:21/SEQ ID NO:22 (denominadas en la presente F5), SEQ ID NO:23/SEQ ID NO:24 (denominadas en la presente F6), SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26 (denominadas en la presente F7), SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28 (denominadas en la presente G1), SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30 (denominadas en la presente G2), SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32 (denominadas en la presente G3), SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34 (denominadas en la presente G5), SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36 (denominadas en la presente G12), SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38 (denominadas en la presente D5), SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40 (denominadas en la presente E7), SEQ ID nO:41/SEQ ID NO:42 (denominadas en la presente E8), SEQ ID nO:43/SEQ ID NO:44 (denominadas en la presente CT1E1), y sus combinaciones.
En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una cadena pesada que comprende un dominio CDR3 tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 y 43, y que comprende un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 %, o al menos 99 % idéntica a una secuencia tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41 y 43. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una cadena ligera que comprende un dominio CDR3 tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42 y 44, y que tiene un dominio variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 %, o al menos 99 % idéntica a una secuencia tal como se indica en una cualquiera de SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42 y 44. Por tanto, en ciertas realizaciones, el dominio CDR3 se mantiene constante, mientras que la variabilidad puede introducirse en el resto de las regiones CDR y/o de marco de las cadenas pesada y/o ligera, mientras que el anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, conserva la capacidad de unirse a CTLA4 y conserva las características funcionales, por ejemplo, afinidad de unión, del originario.
En una realización, las sustituciones realizadas dentro de una cadena pesada o ligera que es al menos 95 % idéntica (o al menos 96 % idéntica, o al menos 97 % idéntica, o al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica) son sustituciones de aminoácidos conservativas. Una "sustitución de aminoácido conservativa" es una sustitución en la que un resto aminoácido es sustituido por otro resto aminoácido que tiene una cadena lateral (grupo R) con propiedades químicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobicidad). En general, una sustitución de aminoácido conservativa no cambiará sustancialmente las propiedades funcionales de una proteína. En los casos en que dos o más secuencias de aminoácidos se diferencian entre sí por sustituciones conservativas, el porcentaje de identidad de secuencia o grado de similitud puede ajustarse hacia arriba para corregir la naturaleza conservativa de la sustitución. Los medios para realizar este ajuste son muy conocidos por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Pearson (1994), Methods Mol. Biol., 24:307-331. Los ejemplos de grupos de aminoácidos que tienen cadenas laterales con propiedades químicas similares incluyen (1) cadenas laterales alifáticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; (2) cadenas laterales de hidroxilo alifáticas: serina y treonina; (3) cadenas laterales que contiene amida: asparagina y glutamina; (4) cadenas laterales aromáticas: fenilalanina, tirosina y triptófano; (5) cadenas laterales básicas: lisina, arginina e histidina; (6) cadenas laterales ácidas: aspartato y glutamato; y (7) cadenas laterales que contienen azufre: cisteína y metionina.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo A1. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:1, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:2. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:1, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:2. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:1, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:2. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo A2. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:3, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:4. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:3, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:4. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:3, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:4. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo A4. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:5, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:6. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:5, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:6. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:5, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:6. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo A7. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:7, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:8. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:7, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:8. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:7, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:8. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo A12. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:9, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:10. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:9, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:10. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:9, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:10. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo B6. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:11, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:12. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:11, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:12. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:11, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:12. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo C2. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:13, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:14. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:13, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:14. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:13, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:14. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo D6. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:15, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:16. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:15, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:16. Debe advertirse que los anticuerpos D6 y A1 comprenden las mismas secuencias variables de cadena pesada y ligera. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:15, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:16. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo F1. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:17, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:18. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:17, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:18. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:17, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:18. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo F3. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:19, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:20. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:19, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:20. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:19, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:20. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo F5. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:21, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:22. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:21, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:22. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:21, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:22. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo F6. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:23, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:24. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:23, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:24. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:23, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:24. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo F7. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:25, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:26. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:25, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:26. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:25, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:26. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo G1. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:27, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:28. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:27, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:28. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:27, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:28. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo G2. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:29, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:30. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:29, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:30. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:29, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:30. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo G3. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:31, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:32. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:31, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:32. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:31, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:32. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo G5. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:33, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:34. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:33, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:34. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:33, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:34. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo G12. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:35, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:36. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:35, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:36. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:35, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:36. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo D5. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:37, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:38. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:37, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:38. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:37, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:38. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo E7. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:39, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:40. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:39, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:40. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:39, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:40. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo E8. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:41, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:42. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:41, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:42. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:41, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:42. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
En una realización, la presente descripción se dirige a un anticuerpo, o a un fragmento de unión al antígeno de este, que tiene las regiones de unión al antígeno del anticuerpo CT1E1. En una realización, la descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada como se indica en SEQ ID NO:43, y una secuencia de dominio variable de cadena ligera como se indica en SEQ ID NO:44. En una realización, la descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID NO:43, y un dominio variable de cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID NO:44. En una realización, la descripción incluye un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno de este, que comprende una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:43, y que comprende una región variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO:44. El anticuerpo también puede ser un isotipo IgG1 o IgG4.
Las proteínas de unión a antígenos (por ejemplo, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, derivados de anticuerpos, muteínas de anticuerpos y variantes de anticuerpos) son polipéptidos que se unen a CTLA4.
Los fragmentos de unión al antígeno de las proteínas de unión a antígenos de la descripción pueden producirse mediante técnicas convencionales. Los ejemplos de dichos fragmentos incluyen, pero no se limitan a fragmentos Fab y F(ab')2.
Los anticuerpos monocatenarios pueden formarse uniendo fragmentos de dominio variable de cadena pesada y ligera (región Fv) a través de un puente de aminoácidos (conector peptídico corto), dando como resultado una única cadena polipeptídica. Estos Fv monocatenarios (scFv) se han preparado condensando un ADN que codifica un conector peptídico entre los ADN que codifican los dos polipéptidos de dominio variable (Vl y Vh). Los polipéptidos resultantes pueden plegarse sobre sí mismos para formar monómeros de unión a antígenos, o pueden formar multímeros (por ejemplo, dímeros, trímeros o tetrámeros), dependiendo de la longitud de un conector flexible entre los dos dominios variables (Kortt et al., 1997, Prot. Eng., 10:423; Kortt et al., 2001, Biomol. Eng., 18:95-108). Combinando diferentes polipéptidos que comprenden Vl y Vh se pueden formar scFv multiméricos que se unen a diferentes epítopos (Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng., 18:31-40). Las técnicas desarrolladas para la producción de anticuerpos monocatenarios incluyen las descritas en la patente de EE. UU. 4.946.778; Bird, 1988, Science, 242:423; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5879; Ward et al., 1989, Nature, 334:544; de Graaf et al., 2002, Methods Mol. Biol., 178:379-87.
En ciertas realizaciones, la presente descripción proporciona un fragmento de anticuerpo totalmente humano Fab, que tiene una región de dominio variable procedente de una cadena pesada y una región de dominio variable procedente de una cadena ligera, en el que la secuencia de dominio variable de cadena pesada es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, y sus combinaciones, y que tiene una secuencia de dominio variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a la secuencia de aminoácidos que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, y sus combinaciones. Preferiblemente, el fragmento Fab de anticuerpo totalmente humano tiene una región de dominio variable de cadena pesada y una región de dominio variable de cadena ligera, en el que el anticuerpo tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11/SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13/SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15/SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17/SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19/SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21/SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23/SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:44, y sus combinaciones.
En una realización, la presente descripción proporciona un anticuerpo humano monocatenario, que tiene una región de dominio variable procedente de una cadena pesada y una región de dominio variable procedente de una cadena ligera y un conector peptídico que conecta las regiones de dominio variable de cadena pesada y de cadena ligera, en el que la secuencia de dominio variable de cadena pesada es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, s Eq ID NO:41, s Eq ID NO:43, y sus combinaciones, y que tiene una secuencia de dominio variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica a la secuencia de aminoácidos que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, y sus combinaciones. Preferiblemente, el anticuerpo monocatenario totalmente humano tiene una región de dominio variable de cadena pesada y una región de dominio variable de cadena ligera, en el que el anticuerpo totalmente humano monocatenario tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11/SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13/SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15/SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17/SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19/SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21/SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23/SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:44, y sus combinaciones.
Se conocen técnicas para obtener un anticuerpo de una subclase o isotipo diferente a partir de un anticuerpo de interés, es decir, conmutación de subclase. Así, pueden obtenerse anticuerpos IgG a partir de un anticuerpo IgM, por ejemplo, y viceversa. Estas técnicas permiten la preparación de nuevos anticuerpos que poseen propiedades de unión a un antígeno a partir de un anticuerpo concreto (el anticuerpo originario), pero que también muestren propiedades biológicas asociadas con un isotipo o subclase de anticuerpo diferente de el del anticuerpo originario. Pueden emplearse técnicas de ADN recombinante. En estos procedimientos puede emplearse un ADN clonado que codifica polipéptidos de anticuerpos concretos, por ejemplo, ADN que codifica el dominio constante de un anticuerpo del isotipo deseado (Lantto et al., 2002, Methods Mol. Biol., 178:303-16). Además, si se desea una IgG4, también puede desearse introducir una mutación puntual (CPSC->CPPC) en la región de bisagra (Bloom et al., 1997, Protein Science, 6:407) para aliviar una tendencia a formar enlaces disulfuro con H intracatenarios que puedan conducir a una heterogeneidad en los anticuerpos IgG4. Por tanto, en una realización, el anticuerpo de la descripción es un anticuerpo IgG1 humano. Por tanto, en una realización, el anticuerpo de la descripción es un anticuerpo IgG4 humano.
La presente descripción proporciona una serie de anticuerpos caracterizados estructuralmente por las secuencias de aminoácidos de sus regiones de dominio variable. Sin embargo, las secuencias de aminoácidos pueden sufrir algunos cambios, al mismo tiempo que conservan su alto grado de unión a sus dianas específicas. De modo más específico, muchos aminoácidos en la región de dominio variable pueden cambiarse con sustituciones conservativas, y puede predecirse que las características de unión del anticuerpo resultante no diferirán de las características de unión de la secuencia del anticuerpo de tipo salvaje. Hay muchos aminoácidos en un dominio variable de anticuerpo que no interaccionan directamente con el antígeno o que tengan un impacto sobre la unión al antígeno, y que no son cruciales para determinar la estructura del anticuerpo. Por ejemplo, un resto aminoácido no esencial predicho en cualquiera de los anticuerpos descritos se reemplaza preferiblemente por otro resto aminoácido de la misma clase. Los métodos para identificar sustituciones conservativas de aminoácidos que no eliminan la unión al antígeno son muy conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Brummell et al., Biochem., 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng., 12(10):879-884 (1999); y Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:412-417 (1997)). Near et al., Mol. Immunol., 30:369-377, 1993, explican cómo impactar o no impactar en la unión a través de mutagénesis específica dirigida a sitio. Near et al. solo mutaron los restos que pensaron que tenían una alta probabilidad de cambiar la unión al antígeno. La mayoría tuvo un efecto modesto o negativo sobre la afinidad de unión (Near et al., tabla 3) y la unión a diferentes formas de digoxina (Near et al., tabla 2). Por tanto, la descripción también incluye, en ciertas realizaciones, secuencias variables que tienen al menos 95 % de identidad con las secuencias descritas en la presente.
En ciertas realizaciones, un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, proporcionado en la presente, tiene una constante de disociación (Kd) de 1 x 10-6 M o menor; 5 x 10-7 M o menor; 1 x 10-7 M o menor; 5 x 10-8 M o menor; 1 x 10-8 M o menor; 5 x 10-9 M o menor; o 1 x 10-9 M o menor. En una realización, el anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción tiene una Kd de 1 x 10-7 M a 1 x 10-10 M. En una realización, el anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción tiene una Kd de 1 x 10-8 M a 1 x 10-10 M.
Los expertos en la técnica valorarán métodos convencionales para determinar la Kd de un anticuerpo, o uno de sus fragmentos. Por ejemplo, en una realización, la Kd se mide mediante un ensayo de unión al antígeno radiomarcado ("radiolabeled antigen binding assay", RIA). En una realización, se realiza un RIA con la versión Fab de un anticuerpo de interés y su antígeno. Por ejemplo, se mide la afinidad de unión en disolución de Fab por el antígeno equilibrando el Fab con una concentración mínima de antígeno marcado con 125I en presencia de una serie de titulación del antígeno marcado, y después capturando el antígeno unido con una placa revestida con anticuerpo anti-Fab (véase, por ejemplo, Chen et al., J. Mol. Biol., 293:865-881(1999)).
Según otra realización, la Kd se mide usando un ensayo de resonancia de plasmón de superficie BIACORE™. La expresión "resonancia de plasmón de superficie", tal como se emplea en la presente, se refiere a un fenómeno óptico que permite el análisis de interacciones en tiempo real mediante la detección de alteraciones en las concentraciones de proteínas dentro de una matriz biodetectora, por ejemplo, usando el sistema BIAcore™ (división Biacore Life Sciences de GE Healthcare, Piscataway, N.J.).
En realizaciones concretas, las proteínas de unión a antígenos de la presente descripción tienen una constante de unión (Ka) por CTLA4 de al menos 106. En otras realizaciones, las proteínas de unión a antígenos muestran una Ka de al menos 107, al menos 108, al menos 109, o al menos 1010. En otra realización, la proteína de unión a antígenos muestra una Ka sustancialmente igual a la de un anticuerpo descrito en la presente en los ejemplos.
En otra realización, la presente descripción proporciona una proteína de unión a antígenos que tiene una tasa de disociación baja de CTLA4. En una realización, la proteína de unión a antígenos tiene una Koff de 1 X 10-4 a 1 X 10-1 o menor. En otra realización, la Koff es de 5 X 10-5 a 5 X 10-1 o menor. En otra realización, la Koff es sustancialmente la misma que la de un anticuerpo descrito en la presente. En otra realización, la proteína de unión a antígenos se une a CTLA4 con sustancialmente la misma Koff que la de un anticuerpo descrito en la presente.
En otro aspecto, la presente descripción proporciona una proteína de unión a antígenos, por ejemplo, un anticuerpo anti-CTLA4 o un fragmento de unión al antígeno de este, que inhibe una actividad de CTLA4. En una realización, la proteína de unión a antígenos tiene una CI50 de 1000 nM o menor. En otra realización, la CI50 es de 100 nM o menor; en otra realización, la CI50 es de 10 nM o menor. En otra realización, la CI50 es sustancialmente la misma que la de un anticuerpo descrito en la presente en los ejemplos. En otra realización, la proteína de unión a antígenos, por ejemplo, un anticuerpo anti-CTLA4, o una porción de unión al antígeno de este, inhibe una actividad de CTLA4 con sustancialmente la misma CI50 que la de un anticuerpo descrito en la presente. En una realización, la actividad de CTLA4 que es inhibida por un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno de este, tal como se describe en la presente, es la unión de CTLA4 a CD80 y/o CD86. En una realización, un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción inhibe la unión de CTLA4 a CD80 con una CI50 de 1 x 10-9 o menor. En una realización, un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción la unión de CTLA4 a CD80 con una CI50 de 5 x 10-10 o menor. En una realización, un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción la unión de CTLA4 a CD80 con una CI50 de 1 x 10-10 o menor. En una realización, un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción inhibe la unión de CTLA4 a CD86 con una CI50 de 1 x 10-9 o menor. En una realización, un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción la unión de CTLA4 a CD86 con una CI50 de 5 x 10-10 o menor. En una realización, un anticuerpo anti-CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de este, de la descripción inhibe la unión de CTLA4 a CD86 con una CI50 de 1 x 10-10 o menor. En la técnica se conocen ejemplos de ensayos que pueden usarse para ensayar la capacidad de un anticuerpo anti-CTLA4 para inhibir la unión de CTLA4 a CD80 o CD86 y también se describen en los ejemplos proporcionados en la presente.
En otro aspecto, la presente descripción proporciona una proteína de unión a antígenos que se une a CTLA4 expresada sobre la superficie de una célula y que, cuando está unida, inhibe la actividad de señalización de CTLA4 en la célula sin provocar una significativa reducción en la cantidad de CTLA4 sobre la superficie de la célula. Puede usarse cualquier método para determinar o calcular la cantidad de CTLA4 sobre la superficie y/o en el interior de la célula. En otras realizaciones, la unión de la proteína de unión a antígenos a la célula que expresa CTLA4 provoca que se internalice menos de aproximadamente 75 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 15 %, 10 %, 5 %, 1 % o 0,1 % de la CTLA4 de la superficie de la célula.
En otro aspecto, la presente descripción proporciona una proteína de unión a antígenos que tiene una semivida de al menos un día in vitro o in vivo (por ejemplo, cuando se administra a un sujeto humano). En una realización, la proteína de unión a antígenos tiene una semivida de al menos tres días. En otra realización, la proteína de unión a antígenos tiene una semivida de cuatro días o mayor. En otra realización, la proteína de unión a antígenos tiene una semivida de ocho días o mayor. En otra realización, la proteína de unión a antígenos se derivatiza o se modifica de modo que tenga una semivida más larga, en comparación con la proteína de unión a antígenos no derivatizada o no modificada. En otra realización, la proteína de unión a antígenos contiene una o más mutaciones puntuales para aumentar la semivida en suero, tal como se describe en el documento WO00/09560.
La presente descripción proporciona además proteínas de unión a antígenos multiespecíficas, por ejemplo, una proteína de unión a antígeno biespecífica, por ejemplo, una proteína de unión a antígenos que se une a dos epítopos diferentes de CTLA4, o a un epítopo de CTLA4 y un epítopo de otra molécula, a través de dos regiones o sitios de unión al antígeno diferentes. Además, la proteína de unión a antígenos biespecífica, según se describe en la presente, puede comprender un sitio de unión a CTLA4 procedente de uno de los anticuerpos descritos en la presente y una segunda región de unión a CTLA4 procedente de otro de los anticuerpos descritos en la presente, incluyendo los descritos en la presente remitiéndose a otras publicaciones. Como alternativa, una proteína de unión a antígenos biespecífica puede comprender un sitio de unión al antígeno procedente de uno de los anticuerpos descritos en la presente y un segundo sitio de unión al antígeno procedente de otro anticuerpo de CTLA4 que sea conocido en la técnica, o procedente de un anticuerpo que se ha preparado mediante métodos conocidos o mediante los métodos descritos en la presente.
En la técnica se conocen numerosos métodos para preparar anticuerpos biespecíficos. Estos métodos incluyen el uso de hibridomas híbridos, como se describe en Milstein et al., 1983, Nature, 305:537, y el acoplamiento químico de fragmentos de anticuerpos (Brennan et al., 1985, Science, 229:81; Glennie et al., 1987, J. Immunol., 139:2367; patente de EE. UU. 6.010.902). Además, pueden producirse anticuerpos biespecíficos a través de medios recombinantes, por ejemplo, usando restos de cremallera de leucina (es decir, procedentes de las proteínas Fos y Jun, que preferentemente forman heterodímeros; Kostelny et al., 1992, J. Immunol., 148:1547) u otras estructuras de dominios interactivos de cerrojo y llave, como se describe en la patente de EE. UU. 5.582.996. Otras técnicas útiles incluyen las descritas en las patentes de EE. UU. 5.959.083; y 5.807.706.
En otro aspecto, la proteína de unión a antígenos comprende un derivado de un anticuerpo. El anticuerpo derivatizado puede comprender cualquier molécula o sustancia que imparta una propiedad deseada al anticuerpo, tal como una mayor semivida en un uso concreto. El anticuerpo derivatizado puede comprender, por ejemplo, un resto detectable (o marcador) (por ejemplo, una molécula radiactiva, colorimétrica, antigénica o enzimática), una esfera detectable (tal como una esfera magnética o electrodensa (por ejemplo, de oro)), o un molécula que se une a otra molécula (por ejemplo, biotina o estreptavidina), un resto terapéutico o de diagnóstico (por ejemplo, un resto radiactivo, citotóxico o farmacéuticamente activo), o una molécula que aumenta la idoneidad del anticuerpo para un uso concreto (por ejemplo, la administración a un sujeto, tal como un sujeto humano, u otros usos in vivo o in vitro). Los ejemplos de moléculas que pueden usarse para derivatizar un anticuerpo incluyen albúmina (por ejemplo, albúmina de suero humana) y polietilenglicol (PEG). Pueden prepararse derivados unidos a albúmina y PEGilados de anticuerpos usando técnicas muy conocidas en la técnica. En una realización, el anticuerpo se conjuga o se une de otro modo a transtiretina (TTR) o un variante de TTR. La TTR o el variante de TTR puede modificarse de modo químico, por ejemplo, con un producto químico seleccionado del grupo que consiste en dextrano, poli(n-vinil pirrolidona), polietilenglicoles, homopolímeros de propropilenglicol, copolímeros de poli(óxido de propileno/óxido de etileno), polioles polietoxilados y poli(alcoholes vinílicos).
Los oligómeros que contienen una o más proteínas de unión a antígenos pueden emplearse como antagonistas de CTLA4. Los oligómeros pueden estar en forma de dímeros, trímeros u oligómeros superiores unidos de modo covalente o unidos de modo no covalente. Se contemplan para su uso los oligómeros que comprenden dos o más proteínas de unión a antígenos, siendo un ejemplo un homodímero. Otros oligómeros incluyen heterodímeros, homotrímeros, heterotrímeros, homotetrámeros, heterotetrámeros, etc.
Una realización se dirige a oligómeros que comprenden múltiples proteínas de unión a antígenos unidas mediante interacciones covalentes o no covalentes entre restos peptídicos condensados con las proteínas de unión a antígenos. Estos péptidos pueden ser conectores peptídicos (espaciadores) o péptidos que tienen la propiedad de estimular la oligomerización. Las cremalleras de leucina y ciertos polipéptidos derivados de anticuerpos están entre los péptidos que pueden estimular la oligomerización de las proteínas de unión a antígenos unidas a ellos, según se describe con más detalle a continuación.
En realizaciones concretas, los oligómeros comprenden de dos a cuatro proteínas de unión a antígenos. Las proteínas de unión a antígenos del oligómero pueden estar en cualquier forma, tales como cualquiera de las formas descritas anteriormente, por ejemplo, variantes o fragmentos. Preferiblemente, los oligómeros comprenden proteínas de unión a antígenos que tienen actividad de unión a CTLA4.
En una realización, se prepara un oligómero usando polipéptidos derivados de inmunoglobulinas. La preparación de proteínas de fusión que comprenden ciertos polipéptidos heterólogos condensados con diversas porciones de polipéptidos derivados de anticuerpos (incluyendo el dominio Fc) se ha descrito, por ejemplo, en Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:10535; Byrn et al., 1990, Nature, 344:677; y Hollenbaugh et al., 1992, "Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", en Current Protocols in Immunology, supl. 4, pp. 10.19.1­ 10.19.11.
Una realización se dirige a un dímero que comprende dos proteínas de fusión creadas condensando un fragmento de unión a CTLA4 de un anticuerpo anti-CTLA4 con la región Fc de un anticuerpo. El dímero puede prepararse, por ejemplo, insertando una fusión génica que codifica la proteína de fusión en un vector de expresión apropiado, expresando la fusión génica en células huésped transformadas con el vector de expresión recombinante, y permitiendo que la proteína de fusión expresada se ensamble de una manera muy similar a las moléculas de anticuerpos, tras lo cual se forman enlacen disulfuro intercatenarios entre los restos Fc para producir el dímero. Otro método para preparar proteínas de unión a antígenos oligoméricas implica el uso de una cremallera de leucina. Los dominios de cremallera de leucina son péptidos que estimulan la oligomerización de las proteínas en las que se encuentran. Las cremalleras de leucina se identificaron originariamente en varias proteínas de unión al ADN (Landschulz et al., 1988, Science, 240:1759) y, desde entonces, se han descubierto en una diversidad de proteínas diferentes. Entre las cremalleras de leucina conocidas se encuentran péptidos naturales y sus derivados que dimerizan o trimerizan. Los ejemplos de dominios de cremallera de leucina adecuados para producir proteínas oligoméricas solubles se describen en el documento WO 94/10308, y la cremallera de leucina derivada de la proteína D tensioactiva de pulmón ("surfactant protein D", SPD) descrita en Hoppe et al., 1994, FEBS Letters, 344:191. Se describe el uso de una cremallera de leucina modificada que permite una trimerización estable de una proteína heteróloga condensada a ella en Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol., 6:267-78. En una estrategia, se expresan proteínas de fusión recombinantes que comprenden un fragmento de anticuerpo anti-CTLA4 o derivados condensados con un péptido de cremallera de leucina en células huésped adecuadas, y los fragmentos de anticuerpo anti-CTLA4 o derivados oligoméricos solubles que se forman se recuperan del sobrenadante del cultivo. Pueden usarse proteínas de unión a antígenos dirigidas contra CTLA4, por ejemplo, en ensayos para detectar la presencia de polipéptidos de CTLA4, in vitro o in vivo. Las proteínas de unión a antígenos también pueden emplearse para purificar proteínas de CTLA4 mediante cromatografía de inmunoafinidad. Pueden emplearse proteínas de unión a antígenos bloqueantes en los métodos descritos en la presente. Estas proteínas de unión a antígenos que actúan como antagonistas de CTLA4 pueden utilizarse en el tratamiento de cualquier afección inducida por CTLA4 que incluye, pero no se limita a diversos cánceres.
Las proteínas de unión a antígenos pueden emplearse como un procedimiento in vitro, o pueden administrarse in vivo para inhibir una actividad biológica inducida por CTLA4. Por tanto, pueden tratarse trastornos provocados o exacerbados (directa o indirectamente) por la activación proteolítica de CTLA4, proporcionándose ejemplos en la presente. En una realización, la presente descripción proporciona un método terapéutico que comprende la administración in vivo de una proteína de unión a antígenos bloqueante de CTLA4 a un mamífero que lo necesita en una cantidad eficaz para reducir una actividad biológica inducida por CTLA4.
En ciertas realizaciones, las proteínas de unión a antígenos de la descripción incluyen anticuerpos monoclonales totalmente humanos que inhiben una actividad biológica de CTLA4.
Las proteínas de unión a antígenos pueden prepararse mediante cualquiera de una serie de técnicas convencionales. Por ejemplo, pueden purificarse de células que las expresan de modo natural (por ejemplo, un anticuerpo puede purificarse a partir de un hibridoma que lo produce), o pueden producirse en sistemas de expresión recombinante, usando cualquier técnica conocida en la técnica. Véase, por ejemplo, Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet et al. (eds.), Plenum Press, Nueva York (1980); y Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow y Land (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1988).
Puede usarse cualquier sistema de expresión conocido en la técnica para fabricar los polipéptidos recombinantes de la descripción. En general, las células huésped se transforman con un vector de expresión recombinante que comprende ADN que codifica un polipéptido deseado. Entre las células huésped que pueden emplearse se encuentran procariotas, levaduras o células de eucariotas superiores. Los procariotas incluyen organismos gramnegativos o gram-positivos, por ejemplo, E. coli o bacilos. Las células de eucariotas superiores incluyen células de insecto y líneas celulares establecidas de origen mamífero. Los ejemplos de líneas de células huésped de mamífero adecuadas incluyen la línea COS-7 de células de riñón de mono (ATCC CRL 1651) (Gluzman et al., 1981, Cell, 23:175), células L, células 293, células C127, células 3T3 (ATCC CCL 163), células de ovario de hámster chino (CHO), células HeLa, líneas de células BHK (ATCC CRL 10), y la línea celular CV1/EBNA derivada de la línea de células de riñón de mono verde africano CV1 (ATCC CCL 70), según se describe en McMahan et al., 1991, EMBO J., 10:2821. Se describen vectores de clonación y de expresión apropiados para su uso con huéspedes celulares bacterianos, fúngicos, de levaduras y de mamífero en Pouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., 1985).
Las células transformadas pueden cultivarse bajo condiciones que estimulan la expresión del polipéptido, y el polipéptido puede recuperarse mediante procedimientos de purificación de proteínas convencionales. Uno de estos procedimientos de purificación incluye el uso de la cromatografía de afinidad, por ejemplo, en una matriz que contiene toda o una porción (por ejemplo, el dominio extracelular) de CTLA4 unida a ella. Los polipéptidos contemplados para su uso en la presente incluyen polipéptidos de anticuerpos anti-CTLA4 de mamífero recombinantes sustancialmente homogéneos sustancialmente exentos de materiales endógenos contaminantes. Las proteínas de unión a antígenos pueden prepararse y seleccionarse para las propiedades deseadas mediante cualquiera de una serie de técnicas conocidas. Algunas técnicas implican aislar un ácido nucleico que codifica una cadena polipeptídica (o una de sus porciones) de una proteína de unión a antígenos de interés (por ejemplo, un anticuerpo anti-CTLA4), y manipular el ácido nucleico a través de la tecnología del ADN recombinante. El ácido nucleico puede condensarse con otro ácido nucleico de interés, o alterarse (por ejemplo, mediante mutagénesis u otra técnica convencional) para añadir, delecionar o sustituir uno o más restos aminoácidos, por ejemplo.
Los polipéptidos de la presente descripción pueden producirse usando cualquier método convencional conocido en la técnica. En un ejemplo, los polipéptidos se producen mediante métodos de ADN recombinante insertando una secuencia de ácido nucleico (por ejemplo, un ADNc) que codifica el polipéptido en un vector de expresión recombinante, y expresando la secuencia de ADN bajo condiciones que estimulan la expresión.
Los ácidos nucleicos que codifican cualquiera de los diversos polipéptidos descritos en la presente pueden sintetizarse de modo químico. La utilización de los codones puede seleccionarse para mejorar la expresión en una célula. Esta utilización de los codones dependerá del tipo de célula seleccionado. Se han desarrollado patrones de utilización de codones especializados para E. coli y otras bacterias, así como para células de mamífero, células vegetales, células de levadura y células de insecto. Véase, por ejemplo, Mayfield et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100(2):438-42; Sinclair et al., Protein Expr. Purif., 2002 (1 ):96-105; Connell N D., Curr. Opin. Biotechnol., 2001: 12(5):446-9; Makrides et al., Microbiol. Rev., 1996, 60(3):512-38; y Sharp et al., Yeast, 1991,7(7):657-78.
Se describen técnicas generales para la manipulación de ácidos nucleicos, por ejemplo, en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2a ed., 1989; o F. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing and Wiley-Interscience, Nueva York, 1987) y actualizaciones periódicas. El ADN que codifica el polipéptido está unido operativamente a elementos reguladores transcripcionales o traduccionales derivados de genes de mamífero, víricos o de insecto. Estos elementos reguladores incluyen un promotor transcripcional, una secuencia operadora opcional para controlar la transcripción, una secuencia que codifica sitios de unión ribosómica de ARNm adecuados, y secuencias que controlan la terminación de la transcripción y la traducción. También se incorpora la capacidad para replicarse en un huésped, habitualmente conferida por un origen de la replicación, y un gen de selección para facilitar el reconocimiento de los transformantes.
El ADN recombinante también puede incluir cualquier tipo de secuencia marcadora de proteína que pueda ser útil para purificar la proteína. Los ejemplos de marcadores de proteínas incluyen, pero no se limitan a un marcador de histidina, un marcador FLAG, un marcador myc, un marcador HA o un marcador GST. Pueden encontrarse vectores de clonación y expresión apropiados para su uso con huéspedes celulares bacterianos, fúngicos, de levaduras y de mamífero en Cloning Vectors: A Laboratory Manual, (Elsevier, N.Y., 1985).
La construcción de expresión se introduce en la célula huésped usando un método apropiado para la célula huésped. En la técnica se conocen una diversidad de métodos para introducir ácidos nucleicos en células huésped que incluyen, pero no se limitan a electroporación; transfección empleando cloruro de calcio, cloruro de rubidio, fosfato de calcio, DEAE-dextrano u otras sustancias; bombardeo de microproyectiles; lipofección; e infección (cuando el vector es un agente infeccioso). Las células huésped adecuadas incluyen procariotas, levaduras, células de mamífero o células bacterianas.
Las bacterias adecuadas incluyen organismos gram-negativos o gram-positivos, por ejemplo, E. coli o Bacillus spp. También pueden usarse levaduras, preferiblemente especies de Saccharomyces, tales como S. cerevisiae, para la producción de polipéptidos. También pueden emplearse diversos sistemas de cultivo de células de mamífero o de insecto para expresar proteínas recombinantes. Se analizan sistemas de baculovirus para la producción de proteínas heterólogas en células de insecto en Luckow y Summers, (Bio/Technology, 6:47, 1988). Los ejemplos de líneas de células huésped de mamífero adecuadas incluyen células endoteliales, células de riñón de mono COS-7, CV-1, células L, C127, 3T3, células de ovario de hámster chino (CHO), células de riñón embrionario humano, HeLa, 293, 293T, y líneas de células BHK. Los polipéptidos purificados se preparan cultivando sistemas de huésped/vector adecuados para que expresen las proteínas recombinantes. Para muchas aplicaciones, el pequeño tamaño de muchos de los polipéptidos descritos en la presente hará que la expresión en E. coli sea el método preferido para la expresión. La proteína después se purifica del medio de cultivo o de extractos de células.
Las proteínas descritas en la presente también pueden producirse usando sistemas de traducción de células. Para estos fines, los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido deben modificarse para permitir la transcripción in vitro para producir ARNm y permitir la traducción separada de células del ARNm en el sistema sin células concreto que se esté utilizando (eucariota, tal como un sistema de traducción sin células de mamífero o de levadura, o procariota, tal como un sistema de traducción sin células bacteriano). Los polipéptidos de unión a CTLA4 también pueden producirse mediante síntesis química (por ejemplo, mediante los métodos descritos en Solid Phase Peptide Synthesis, 2a ed., 1984, The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.). Las modificaciones a la proteína también pueden producirse mediante síntesis química. Los polipéptidos de la presente descripción pueden purificarse mediante métodos de aislamiento/purificación para proteínas que se conocen en general en el campo de la química de proteínas. Los ejemplos no limitantes incluyen extracción, recristalización, desalación (por ejemplo, con sulfato de amonio o sulfato de sodio), centrifugación, diálisis, ultrafiltración, cromatografía de adsorción, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía hidrófoba, cromatografía en fase normal, cromatografía en fase inversa, filtración en gel, cromatografía de permeación en gel, cromatografía de afinidad, electroforesis, distribución a contracorriente o cualquiera de sus combinaciones. Después de la purificación, los polipéptidos pueden intercambiarse en diferentes tampones y/o concentrarse mediante cualquiera de una diversidad de métodos conocidos en la técnica que incluyen, pero no se limitan a filtración y diálisis.
El polipéptido purificado es preferiblemente al menos 85 % puro, más preferiblemente al menos 95 % puro, y lo más preferiblemente al menos 98 % puro. Independientemente del valor numérico exacto de la pureza, el polipéptido será lo suficientemente puro para su uso como un producto farmacéutico.
En ciertas realizaciones, la presente descripción proporciona anticuerpos monoclonales que se unen a CTLA4. Los anticuerpos monoclonales pueden producirse usando cualquier técnica conocida en la técnica, por ejemplo, inmortalizando células de bazo recolectadas de un animal transgénico después de completar el programa de inmunización. Las células de bazo pueden inmortalizarse usando cualquier técnica conocida en la técnica, por ejemplo, fusionándolas con células de mieloma para producir hibridomas. Las células de mieloma para su uso en procedimientos de fusión para producir hibridomas preferiblemente no producen anticuerpos, tienen una alta eficacia de fusión y presentan deficiencias en enzimas que hacen que sean incapaces de crecer en ciertos medios selectivos que apoyan el crecimiento solo de las células fusionadas deseadas (hibridomas). Los ejemplos de líneas celulares adecuadas para su uso en fusiones de ratón incluyen Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NS1/1.Ag 4 1, Sp210-Ag14, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 y S194/5XX0 Bul; los ejemplos de líneas celulares usadas en fusiones de rata incluyen R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F y 48210. Otras líneas celulares útiles para fusiones de células son U-266, GM1500-GRG2, LICR-LON-HMy2 y UC729-6.
Los expertos en la técnica pueden preparar con facilidad fragmentos o análogos de anticuerpos siguiendo las indicaciones de esta memoria descriptiva y usando técnicas conocidas en la técnica. Los terminales amino y carboxi preferidos de fragmentos o análogos aparecen cerca de los límites de los dominios funcionales. Los dominios estructurales y funcionales pueden identificarse mediante comparación de los datos de la secuencia de nucleótidos y/o de aminoácidos con bases de datos de secuencias públicas o privadas. Pueden usarse métodos de comparación por ordenador para identificar motivos de secuencia o dominios de conformación de proteínas predichos que aparecen en otras proteínas de estructura y/o función conocidas. Se conocen métodos para identificar secuencias de proteínas que se pliegan en una estructura tridimensional conocida. Véase, Bowie et al., 1991, Science, 253:164.
Modificaciones postraduccionales de polipéptidos
En ciertas realizaciones, los polipéptidos de unión de la descripción pueden comprender además modificaciones postraduccionales. Los ejemplos de modificaciones de proteínas postraduccionales incluyen la fosforilación, acetilación, metilación, ribosilación de ADP, ubiquitinación, glicosilación, carbonilación, sumoilación, biotinilación o adición de una cadena lateral de polipéptido o de un grupo hidrófobo. Como resultado, los polipéptidos solubles modificados pueden contener elementos que no son aminoácidos, tales como lípidos, poli- o monosacáridos, y fosfatos. Una forma de glicosilación preferida es la sialilación, que conjuga uno o más restos ácido siálico con el polipéptido. Los restos ácidos siálico mejoran la solubilidad y la semivida en suero, al mismo tiempo que reducen la posible inmunogenicidad de la proteína. Véase, Raju et al., Biochemistry, 2001,31,40(30):8868-76.
En una realización, las formas modificadas de los polipéptidos solubles pertinentes comprenden unir los polipéptidos solubles pertinentes con polímeros no proteicos. En una realización, el polímero es polietilenglicol ("PEG"), polipropilenglicol o polioxialquilenos, de la manera indicada en las patentes de EE. UU. 4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417; 4.791.192 o 4.179.337.
El PEG es un polímero hidrosoluble que está disponible en el mercado o que puede prepararse mediante polimerización de apertura de anillo del etilenglicol según métodos muy conocidos en la técnica (Sandler y Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, Nueva York, vol. 3, pp. 138-161). El término "PEG" se usa en sentido amplio para incluir cualquier molécula de polietilenglicol, independientemente de su tamaño o de la modificación en un extremo del PEG, y puede representarse mediante la fórmula: X--O(CH2CH2O)n-CH2CH2OH (1), en la que n es de 20 a 2300, y X es H o una modificación terminal, por ejemplo, un alquilo C1-4. En una realización, el PEG de la descripción termina en un extremo con hidroxi o metoxi, es decir, X es H o CH3 ("metoxi PEG"). Un PEG puede contener otros grupos químicos que son necesarios para las reacciones de unión, que son el resultado de la síntesis química de la molécula, o que son un espaciador para obtener una distancia óptima de las partes de la molécula. Además, dicho PEG puede consistir en una o más cadenas laterales de PEG que están unidas entre sí. Los PEG con más de una cadena PEG se denominan PEG ramificados o de múltiples brazos. Los PEG ramificados pueden prepararse, por ejemplo, mediante la adición de poli(óxido de etileno) a diversos polioles, que incluyen glicerol, pentaeritriol y sorbitol. Por ejemplo, puede prepararse un PEG ramificado de cuatro brazos a partir del pentaeritriol y óxido de etileno. Se describen PEG ramificados, por ejemplo, en el documento EP-A 0473084 y en la patente de EE. UU. 5.932.462. Una forma de PEG incluye dos cadenas laterales de PEG (PEG2) unidas a través de los grupos amino primarios de una lisina (Monfardini et al., Bioconjugate Chem., 6 (1995), 62-69).
La tasa de eliminación del suero del polipéptido modificado con PEG puede disminuir en aproximadamente 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o incluso 90 %, con relación a la tasa de eliminación del polipéptido de unión no modificado. El polipéptido modificado con PEG puede tener una semivida (t1/2) que es mayor con relación a la semivida de la proteína no modificada. La semivida del polipéptido de unión-PEG puede aumentar en al menos 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 125 %, 150 %, 175 %, 200 %, 250 %, 300 %, 400 % o 500 %, o incluso en 1000 % con relación a la semivida del polipéptido de unión no modificado. En algunas realizaciones, la semivida de la proteína se determina in vitro, tal como en una disolución salina tamponada o en suero. En otras realizaciones, la semivida de la proteína es una semivida in vivo, tal como la semivida de la proteína en el suero u otro fluido corporal de un animal.
Métodos terapéuticos, formulaciones y modos de administración
La presente descripción proporciona además un método para tratar una enfermedad que requiera la estimulación o la supresión de las respuestas inmunitarias, que comprende administrar un polipéptido anti-CTLA4. Cualquiera de los anticuerpos descritos en la presente puede usarse en dichos métodos. Por ejemplo, los métodos pueden realizarse usando un polipéptido anti-CTLA4 seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo totalmente humano de una clase de IgG que se une a un epítopo de CTLA4 con una afinidad de unión de al menos 10-6 M, un fragmento de anticuerpo totalmente humano Fab, que tiene una región de dominio variable procedente de una cadena pesada y una región de dominio variable procedente de una cadena ligera, un anticuerpo humano monocatenario, que tiene una región de dominio variable procedente de una cadena pesada y una región de dominio variable procedente de una cadena ligera y un conector peptídico que conecta las regiones de dominio variable de cadena pesada y de cadena ligera, que incluye las regiones variables de cadena pesada y ligera (y las CDR dentro de dicha secuencia) descritas en SEQ ID NO:1 -44 (tabla 4).
Por ejemplo, en una realización, los métodos descritos en la presente incluyen el uso de un anticuerpo totalmente humano que tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, y SEQ ID NO:43, y que tiene una secuencia de dominio variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:44.
En una realización, los métodos descritos en la presente incluyen el uso de un fragmento Fab de anticuerpo totalmente humano que tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SeQ ID NO:41, y SEQ ID NO:43, y que tiene una secuencia de dominio variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:44.
En una realización, los métodos descritos en la presente incluyen el uso de un anticuerpo humano monocatenario que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SeQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, y SEQ ID NO:43, y que comprende una secuencia de dominio variable de cadena ligera que es al menos 95 % idéntica, al menos 96 % idéntica, al menos 97 % idéntica, al menos 98 % idéntica, o al menos 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID SEQ ID
Figure imgf000024_0001
SEQ ID
En una realización, el anticuerpo totalmente humano tiene una cadena pesada y una cadena ligera, en el que el anticuerpo tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11/SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13/SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15/SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17/SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19/SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21/SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23/SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:44.
En una realización, el fragmento Fab de anticuerpo totalmente humano tiene una región de dominio variable de cadena pesada y una región de dominio variable de cadena ligera, en el que el anticuerpo tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11/SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13/SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15/SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17/SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19/SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21/SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23/SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:44.
En una realización, el anticuerpo monocatenario totalmente humano tiene una región de dominio variable de cadena pesada y una región de dominio variable de cadena ligera, en el que el anticuerpo totalmente humano monocatenario tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1/SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3/SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5/SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7/SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9/SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11/SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13/SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15/SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17/SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19/SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21/SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23/SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25/SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27/SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31/SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33/SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35/SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37/SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39/SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41/SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:43/SEQ ID NO:44.
En una realización, los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpos de la descripción se usan para tratar una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en cánceres de próstata, riñón, colon, pulmón o mama; infecciones patogénicas; enfermedades asociadas con el SNC, enfermedad de Alzheimer amiloidogénica; y enfermedades con componentes inflamatorios o alérgicos, enfermedad del injerto contra el huésped, enfermedad del huésped contra el injerto, alergia, enfermedades autoinmunitarias y otras enfermedades inflamatorias.
Los anticuerpos y sus fragmentos de unión al antígeno de la descripción pueden usarse para tratar enfermedades, tales como el cáncer. En una realización, la descripción incluye métodos para tratar un cáncer que es un cáncer asociado a CTLA4. La expresión "cáncer asociado a CTLA4" se refiere a un cáncer o a una transformación de células maligna que está asociado con una expresión o actividad aberrante de CTLA4, por ejemplo, una mayor expresión o actividad de CTLA4. Los ejemplos de un cáncer asociado a CTLA4 incluyen, pero no se limitan a cáncer de vejiga, cáncer de sangre, cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer colorrectal, fibrosarcoma, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de próstata, melanoma, linfoma, mesotelioma y plasmacitoma (véase, por ejemplo, Grosso et al., Cancer Immun., 2013, 13:5; Postow et al., JCO, 20 de enero, 2015; Kvistborg et al., Science Translational Medicine, 17 de septiembre, 2014, vol. 6, n.° 254, p. 254; Hersh et al., J. Clin. Oncol., 2008, 26:resumen 9022). En ciertas realizaciones, un cáncer asociado con CTLA4 es cualquier cáncer en un individuo en el que se detecten biomarcadores que se correlacionan con una actividad clínica anti-CTLA-4, por ejemplo, un aumento en el recuento absoluto de linfocitos, la expresión sostenida del coestimulador de células T inducible (''inducible T cell costimulator", ICOS) en células T (Liakou et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2008, 105:14987-14992) o una sobrerregulación de HLA-DR/CD45RO en células T (Comin-Anduix B., et al., J. Transl. Med., 2008, 6:22).
Los anticuerpos totalmente humanos contra CTLA4 humana, tal como se describen en la presente, pueden usarse en métodos de tratamiento que requieran la estimulación o la supresión de respuestas inmunitarias. La estimulación se logra usando anticuerpos que bloquean la unión de CTLA4 humana a B7 humana, y las enfermedades susceptibles a un tratamiento mediante estimulación y potenciación de la prolongación de las respuestas inmunitarias incluyen cánceres de próstata, riñón, colon, pulmón o mama; infecciones patogénicas; enfermedades asociadas con el SNC, por ejemplo, enfermedades amiloidogénicas, que incluyen la enfermedad de Alzheimer; y enfermedades con componentes inflamatorios o alérgicos. La inmunosupresión también puede lograrse usando anticuerpos contra CTLA4 humana, por ejemplo, mediante la inducción de células T reguladoras (Coquerelle et al., Gut, 2009, 58:1363-1373). Las enfermedades susceptibles al tratamiento incluyen la enfermedad del injerto contra el huésped, la enfermedad del huésped contra el injerto, alergia, enfermedades autoinmunitarias y otras enfermedades inflamatorias.
Los anticuerpos anti-CTLA4 (y sus fragmentos) de la descripción también son útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias y el rechazo de trasplantes de injertos de células, órganos o tejidos. En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-CTLA4 (y sus fragmentos) son útiles para tratar una enfermedad autoinmunitaria seleccionada de artritis reumatoide y artritis idiopática juvenil.
La presente descripción incluye un método para tratar o prevenir la infección por S. aureus, que comprende administrar un polipéptido anti-CTLA4. Las técnicas y las dosificaciones para la administración variarán dependiendo del tipo de polipéptido específico y la afección específica que se está tratando, pero pueden ser determinadas con facilidad por los expertos en la técnica. En general, las agencias reguladoras requieren que un reactivo de proteína que se vaya a usar como producto terapéutico se formule para que tenga unos niveles aceptablemente bajos de pirógenos. Por consiguiente, las formulaciones terapéuticas se distinguirán de otras formulaciones, en general, porque son sustancialmente apirógenas, o al menos no contienen más que unos niveles aceptables de pirógenos, según lo determine la agencia reguladora apropiada (por ejemplo, FDA).
Las composiciones terapéuticas de la presente descripción pueden administrarse con un diluyente, vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, en una forma de dosificación unitaria. La administración puede ser parenteral (por ejemplo, intravenosa, subcutánea), oral o tópica, como ejemplos no limitantes. Además, puede emplearse cualquier técnica de terapia génica usando ácidos nucleicos que codifiquen los polipéptidos de la descripción, tal como el transporte de ADN desnudo, vectores y genes recombinantes, transporte basado en células, que incluye la manipulación ex vivo de las células del paciente, y similares.
La composición puede estar en forma de una píldora, comprimido, cápsula, líquido o comprimido de liberación sostenida para la administración oral; o un líquido para la administración intravenosa, subcutánea o parenteral; un gel, loción, ungüento, crema, o un polímero u otro vehículo de liberación sostenida para la administración local.
Se pueden encontrar métodos muy conocidos en la técnica para fabricar formulaciones, por ejemplo, en "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20a ed., ed. A. R. Gennaro A R., 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfia, Pa.). Las formulaciones para la administración parenteral pueden contener, por ejemplo, excipientes, agua estéril, disolución salina, polialquilenglicoles, tales como polietilenglicol, aceites de origen vegetal, o naftalenos hidrogenados. Puede usarse un polímero de lactida biocompatible y biodegradable, un copolímero de lactida/glicólido, o copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno para controlar la liberación de los compuestos. Pueden emplearse formulaciones de nanopartículas (por ejemplo, nanopartículas biodegradables, nanopartículas de lípidos sólidas, liposomas) para controlar la biodistribución de los compuestos. Otros sistemas de administración parenteral potencialmente útiles incluyen partículas de copolímeros de etileno-acetato de vinilo, bombas osmóticas, sistemas de infusión implantables, y liposomas. La concentración del compuesto en la formulación varía dependiendo de una serie de factores, que incluyen la dosificación del fármaco que se va a administrar y la vía de administración.
El polipéptido puede administrarse opcionalmente como una sal farmacéuticamente aceptable, tales como sales de adición de ácidos no tóxicas o complejos metálicos que se emplean habitualmente en la industria farmacéutica. Los ejemplos de sales de adición de ácidos incluyen ácidos orgánicos, tales como ácido acético, láctico, pamoico, maleico, cítrico, málico, ascórbico, succínico, benzoico, palmítico, subérico, salicílico, tartárico, metansulfónico, toluensulfónico o trifluoroacético, o similares; ácidos poliméricos, tales como ácido tánico, carboximetilcelulosa, o similares; y ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, o similares. Los complejos metálicos incluyen cinc, hierro, y similares. En un ejemplo, el polipéptido se formula en presencia de acetato de sodio para aumentar la estabilidad térmica.
Las formulaciones para un uso oral incluyen comprimidos que contienen el ingrediente o ingredientes activos en una mezcla con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes o cargas (por ejemplo, sacarosa y sorbitol), agentes lubricantes, deslizantes y antiadhesivos (por ejemplo, estearato de magnesio, estearato de cinc, ácido esteárico, sílices, aceites vegetales hidrogenados, o talco). Las formulaciones para un uso oral también pueden proporcionarse como comprimidos masticables, o como cápsulas de gelatina dura, en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, o como cápsulas de gelatina blanda, en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio de aceite.
Preferiblemente, en ciertas realizaciones, los anticuerpos descritos se administran mediante inhalación, pero la aerosolización de anticuerpos de IgG completos puede demostrar ser limitante, debido a su tamaño molecular (aproximadamente 150k Da). Para maximizar los dispositivos de aerosolización del mercado disponibles, pueden ser necesarios fragmentos Fab más pequeños. En este caso, también puede ser necesario generar fragmentos Fab a partir de las moléculas de IgG originarias. Por tanto, los inventores realizarán estudios iniciales usando metodologías de digestión basadas en enzimas convencionales para la generación de fragmentos Fab, que después se caracterizarán en paralelo con moléculas de IgG completas.
Una dosis terapéuticamente eficaz se refiere a una dosis que produce los efectos terapéuticos para los cuales se administra. La dosis exacta dependerá del trastorno que se va a tratar, y puede ser determinada por los expertos en la técnica usando técnicas conocidas. En general, el polipéptido se administra de aproximadamente 0,01 pg/kg a aproximadamente 50 mg/kg diarios, preferiblemente de 0,01 mg/kg a aproximadamente 30 mg/kg diarios, lo más preferiblemente de 0,1 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg diarios. El polipéptido puede administrarse a diario (por ejemplo, una, dos, tres veces o cuatro veces diarias) o preferiblemente con menos frecuencia (por ejemplo, cada semana, cada dos semanas, cada tres semanas, cada mes o cada trimestre). Además, tal como se conoce en la técnica, pueden ser necesarios ajustes según la edad, así como el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el momento de la administración, la interacción con fármacos y la gravedad de la enfermedad, y estos podrán determinarse mediante experimentación habitual por parte de los expertos en la técnica.
Un polipéptido de unión a CTLA4, tal como se describe en la presente, puede administrarse por sí mismo o en combinación con una o más terapias adicionales, tales como quimioterapia, radioterapia, inmunoterapia, intervención quirúrgica, o cualquiera de sus combinaciones. Una terapia a largo plazo es igualmente posible, así como una terapia adyuvante en el contexto de otras estrategias de tratamiento, tal como se describió anteriormente.
En ciertas realizaciones de dichos métodos, uno o más agentes terapéuticos de polipéptidos pueden administrarse juntos (de modo simultáneo) o en momentos diferentes (de modo secuencial). Además, los agentes terapéuticos de polipéptidos pueden administrarse con otro tipo de compuestos para tratar el cáncer o para inhibir la angiogénesis. En ciertas realizaciones, los agentes de anticuerpos anti-CTLA4 pertinentes de la descripción pueden usarse por sí solos.
En ciertas realizaciones, los polipéptidos de unión, o sus fragmentos, pueden estar marcados o no marcados para fines de diagnóstico. Generalmente, los ensayos de diagnóstico implican detectar la formación de un complejo que surge de la unión de un polipéptido de unión a la CTLA4. Los polipéptidos de unión o los fragmentos pueden estar marcados directamente, de modo similar a los anticuerpos. Puede emplearse una diversidad de marcadores que incluyen, pero no se limitan a radionúclidos, fluorescentes, enzimas, sustratos de enzimas, cofactores de enzimas, inhibidores de enzimas y ligandos (por ejemplo, biotina, haptenos). Los expertos en la técnica conocen numerosos inmunoensayos apropiados (véanse, por ejemplo, las patentes de EE. UU. 3.817.827; 3.850.752; 3.901.654; y 4.098.876). Cuando no están marcados, los polipéptidos de unión pueden usarse en ensayos, tales como ensayos de aglutinación. Los polipéptidos de unión no marcados también pueden usarse en combinación con otro reactivo (uno o más) adecuado que puede emplearse para detectar al polipéptido de unión, tal como un reactivo de anticuerpo marcado con el polipéptido de unión u otro reactivo adecuado (por ejemplo, una proteína A marcada). En una realización, los polipéptidos de unión de la presente descripción pueden utilizarse en inmunoensayos de enzimas, en los que los polipéptidos pertinentes se conjugan con una enzima. Cuando una muestra biológica que comprende una proteína de CTLA4 se combina con los polipéptidos de unión pertinentes, se produce la unión entre los polipéptidos de unión y la proteína de CTLA4. En una realización, una muestra que contiene células que expresan una proteína de CTLA4 (por ejemplo, células endoteliales) se combina con los anticuerpos pertinentes y se produce la unión entre los polipéptidos de unión y las células que portan una proteína de CTLA4 reconocida por el polipéptido de unión. Estas células unidas pueden separarse de los reactivos no unidos y puede determinarse la presencia del conjugado de polipéptido de unión-enzima unido específicamente a las células, por ejemplo, poniendo en contacto la muestra con un sustrato de la enzima que produce un color u otro cambio detectable cuando se actúa sobre la enzima. En otra realización, los polipéptidos de unión pertinentes pueden estar no marcados y puede añadirse un segundo polipéptido marcado (por ejemplo, un anticuerpo) que reconozca al polipéptido de unión pertinente.
En ciertos aspectos, también pueden prepararse kits para su uso para detectar la presencia de una proteína de CTLA4 en una muestra biológica. Estos kits incluirán un polipéptido que se une a CTLA4 que se une a una proteína de CTLA4 o a una porción de dicho receptor, así como uno o más reactivos auxiliares adecuados para detectar la presencia de un complejo entre el polipéptido de unión y la proteína del receptor, o sus porciones. Las composiciones de polipéptidos de la presente descripción pueden proporcionarse en forma liofilizada, por sí solas o en combinación con anticuerpos adicionales específicos para otros epítopos. Los polipéptidos de unión y/o anticuerpos, que pueden estar marcados o no marcados, pueden incluirse en los kits con ingredientes adjuntos (por ejemplo, tampones, tales como Tris, fosfato y carbonato, estabilizantes, excipientes, biocidas y/o proteínas inertes, por ejemplo, albúmina de suero bovina). Por ejemplo, los polipéptidos de unión y/o anticuerpos pueden proporcionarse como una mezcla liofilizada con los ingredientes adjuntos, o los ingredientes adjuntos pueden proporcionarse por separado para su combinación por parte del usuario. En general, estos materiales adjuntos estarán presentes en menos de aproximadamente 5 % en peso, basado en la cantidad de polipéptido de unión activo o anticuerpo, y habitualmente estarán presentes en una cantidad total de al menos 0,001 % en peso basado en la concentración de polipéptido o anticuerpo. Cuando se emplea un segundo anticuerpo capaz de unirse al polipéptido de unión, dicho anticuerpo puede proporcionarse en el kit, por ejemplo, en un vial o recipiente separado. El segundo anticuerpo, si está presente, generalmente está marcado, y puede formularse de una manera análoga a las formulaciones de anticuerpos descritas anteriormente.
Las secuencias de polipéptidos se indican usando las abreviaturas de una letra o de tres letras convencionales. A menos que se indique lo contrario, cada secuencia de polipéptido tiene un amino terminal a la izquierda y un carboxi terminal a la derecha; cada secuencia de ácido nucleico monocatenaria y la hebra superior de cada secuencia de ácido nucleico bicatenaria tiene un terminal 5' a la izquierda y un terminal 3' a la derecha. Una secuencia de polipéptido concreta también puede describirse explicando cómo se diferencia de una secuencia de referencia. Habiendo descrito en detalle la presente invención, esta se comprenderá con más claridad remitiéndose a los siguientes ejemplos, que se incluyen sólo como ilustración y no pretenden ser limitantes de la invención.
Ejemplo 1
Se identificaron anticuerpos humanos específicos para la CTLA4 humana y se seleccionaron según sus características terapéuticas, que incluyen la especificidad para CTLA4 y un alto grado de afinidad por CTLA4 (por ejemplo, al menos 10-6 M). Los anticuerpos identificados se describen en la tabla 4.
Para determinar si los anticuerpos anti-CTLA4 tienen actividad funcional, se determinó su capacidad para potenciar la activación de células T. Se depuraron células mononucleares de sangre periférica ("peripheral blood mononuclear cells", PBMC) de los monocitos usando anticuerpos anti-CD 14 biotinilados, seguido de la determinación de la reactividad con esferas magnéticas revestidas con antibiotina usando una columna magnética. Se recogió la fracción de células eluidas de una columna mantenida en un campo magnético, produciendo una población de linfocitos que contenía <1 % de monocitos. Los linfocitos se añadieron a pocillos prerrevestidos con anti-CD3 inmovilizado (5 mg/ml). Se añadieron los anticuerpos de ensayo a estos pocillos a 10 mg/ml. Después de tres días de cultivo, las células se ensayaron para la activación celular midiendo la expresión de CD25. De modo específico, después de tres días de cultivo, las células se recolectaron y se tiñeron con anti-CD25 humano como una medida de la activación celular. El nivel de expresión de CD25 fue mayor en los cultivos a los que se les habían añadido los anticuerpos anti-CTLA4 (figura 1). El anticuerpo control fue un anticuerpo de isotipo concordante, no específico (es decir, no se une a CTLA4). Mediante la normalización de los datos con respecto al medio control, se detectó un nivel notable de potenciación en los cultivos que recibieron los anticuerpos anti-CTLA4 (figura 2).
Ejemplo 2
Este ejemplo determina la cinética de afinidad para un ejemplo de anticuerpo (F7) descrito en la presente. La tabla 1 muestra la cinética de actividad para el anticuerpo F7.
Tabla 1: Características de unión del anticuerpo F7
Figure imgf000027_0001
Este ejemplo ilustra las afinidades de unión de ejemplos de anticuerpos anti-CTLA4 descritos en la presente. Las afinidades se determinaron usando resonancia de plasmón de superficie (Biacore). Brevemente, un anticuerpo anti-Fc humano (GE, BR-1008-39) se inmovilizó sobre un chip detector CM5 hasta aproximadamente 1000 RU usando la metodología de acoplamiento NHS/EDC convencional. Los anticuerpos se capturaron (aproximadamente 10 pg/ml) durante 60 s a un caudal de 10 pl/min. La CTLA4 humana recombinante/His se diluyó en serie en tampón de tránsito (HBS-EP). Todas las mediciones se realizaron a un caudal de 30 pL/min. Las superficies se regeneraron con MgCL 3 M durante 60 s. Se usó un modelo de unión A1:1 (Langmuir) para ajustar los datos.
Ejemplo 3
El siguiente ejemplo describe la caracterización del anticuerpo anti-CTLA4 humano CT1E1. La secuencia de aminoácidos de las cadenas variables pesada y ligera de CT1E1 se proporciona en SEQ ID NO:43 y 44, respectivamente.
Los estudios de reactividad cruzada del anticuerpo anti-CTLA4 CT1E1 revelaron que CT1E1 no solo era específico para la CTLA4 humana, sino que presentaba reactividad cruzada con CTLA4 de cynomolgus y murina. Usando una placa de 96 pocillos de Ni-NTA con CTLA4 humana recombinante/His, CTLA4 de cynomolgus/His o CTLA4 de ratón/His, se capturó 1 pg/mL. La placa se incubó durante 30 min a temperatura ambiente, se lavó 3 veces con PBS-Tween (PBST), después se añadieron anticuerpos anti-CTLA4 (aproximadamente 1 pg/mL) diluidos en caseína, y se incubó durante 30 min con agitación. La placa se lavó 3 veces con PBST, se añadió anti-Fc humano de cabra conjugado con peroxidasa de rábano (HRP) (1:500 en caseína), después se añadió 3,3',5,5'-tetrametilbencidina (TMB) como sustrato, y se reveló durante aproximadamente 5 min. Se usó H2SO42 M para detener la reacción y se leyó la DO a 450 nm.
También se determinó la afinidad del anticuerpo CT1E1 por la CTLA4 humana usando resonancia de plasmón de superficie (BiaCore). Se inmovilizó un anticuerpo anti-Fc humano (GE, BR-1008-39) sobre un chip detector CM5 hasta aproximadamente 1000 RU usando la metodología de acoplamiento NHS/EDC convencional. Los anticuerpos se capturaron (aproximadamente 10 pg/ml) durante 60 s a un caudal de 10 ul/min. El PD-L1 humano recombinante/His se diluyó en serie en tampón de tránsito (HBS-EP). Todas las mediciones se realizaron en tampón HBS-EP a un caudal de 30 pL/min. El anticuerpo se diluyó de modo apropiado para obtener una serie de concentraciones. Se usó un modelo de unión 1:1 (Langmuir) para ajustar los datos. Se usó el valor de Chi2 (chi cuadrado) como guía para ajustar la calidad. Los resultados de los estudios de afinidad se proporcionan en la siguiente tabla 2.
Tabla 2: Características de unión de CT1E1
Figure imgf000028_0001
Se realizaron ensayos para determinar la capacidad del anticuerpo CT1E1 para inhibir la actividad CD80 y CD86. Una placa de 96 pocillos Ni-NTA se revistió con 1 pg/mL de CD80 o CD86 humana recombinante con un marcador de hexahistidina a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadieron premezclas de 30 pL de IgG diluidas en 3 veces en serie (comenzando a 25 pg/mL) y 30 pL de CTLA4 humana recombinante 0,006 pL/mL (como una fusión de Fc humano) y se incubaron las mezclas durante 30 minutos, y después se lavó la placa con PBS-Tween (PBST) 3 veces. Las mezclas se trasladaron a 50 pL a la placa de ELISA y se incubaron durante 30 min con agitación. La placa se lavó 3 veces con PBST, después se añadió anti-Fc humano de cabra conjugado con peroxidasa de rábano (HRP) (1:500 en caseína), después se añadió 3,3',5,5'-tetrametilbencidina (TMB) como sustrato, y se reveló durante 30 min. Se usó H2SO42 M para detener la reacción y se leyó la DO a 450 nm.
Los resultados de los estudios se describen en las figuras 3A (CD80) y 3B (CD86). Se determinó que el valor de CI50 de CT1E1 para CD80 era de aproximadamente 0,31 x 10-9, y de aproximadamente 0,32 x 10-9 para CD86. De modo sorprendente, el anticuerpo CT1E1 presentó un mejor valor de CI50 para CD80 y CD86 frente a la CI50 calculada del anticuerpo control ipilimumab (Yervoy), que es un anticuerpo anti-CTLA4 humano que es capaz de inhibir la actividad CTLA4 de modo que las células T citotóxicas pueden, por ejemplo, destruir a las células de cáncer. Los valores de CI50 calculados para CD80 y CD86 para el ipilimumab y CT1E1 se describen en las figuras 3A y 3B.
Ejemplo 4
Este ejemplo describe experimentos que estudian el efecto del anticuerpo anti-CTLA4 F7 sobre la respuesta a una dosis baja del superantígeno enterotoxina B de Staphylococcus (SEB). El uso de SEB como estímulo proporciona un medio para estudiar la activación de células T en respuesta a un antígeno. Mientras que anti-CD3 es un activador de células T policlonal, SEB es un activador oligoclonal.
Se realizaron experimentos en los que se usó anti-CD25 humano como una medición de la activación celular. Se usaron dos concentraciones diferentes del anticuerpo F7 (30 gg y 10 gg). También se usó un control negativo, que era un anticuerpo de isotipo concordante que no se une a CTLA4. Después de tres días, se midió el porcentaje de activación de las células CD25.
Tal como se muestra en la figura 4, el porcentaje de células CD25 activadas aumentó en células tratadas con ambas concentraciones del anticuerpo anti-CTLA4 F7 (30 gg y 10 gg). Mediante la normalización de los datos con respecto al medio control, se detectó un nivel notable de potenciación (mediante las células CD25) en los cultivos que recibieron el anticuerpo F7 anti-CTLA4 (figura 4).
Ejemplo 5
El anticuerpo E8 se estudió más a fondo en otros estudios de afinidad y funcionales. Se determinó la afinidad del anticuerpo E8 por la CTLA4 humana usando resonancia de plasmón de superficie (BiaCore). Los resultados del estudio se proporcionan en la siguiente tabla 3.
Tabla 3: Estudio Biacore del anticuerpo E8
Figure imgf000029_0001
Además de los estudios de afinidad, la figura 5 proporciona resultados que demuestran la actividad funcional del anticuerpo E8. El ensayo funcional descrito en la figura 5 es similar a los métodos usados en el ensayo CD26 del ejemplo 1.
Tabla 4: Secuencias de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada y ligera Región del dominio variable de cadena pesada Región del dominio variable de cadena ligera
Figure imgf000030_0001
Re ión del dominio variable de cadena esada Re ión del dominio variable de cadena li era
Figure imgf000031_0001
Re ión del dominio variable de cadena esada Re ión del dominio variable de cadena li era
Figure imgf000032_0001

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1 Una proteína de unión capaz de unirse a CTLA4, o un fragmento de unión al antígeno de esta, en la que la proteína de unión o el fragmento se seleccionan de un grupo que consiste en un anticuerpo anti-CTLA4 totalmente humano aislado de una clase de IgG, un fragmento Fab de anticuerpo totalmente humano anti-CTLA4 y un anticuerpo humano monocatenario anti-CTLA4, y en la que la proteína de unión o el fragmento tiene una secuencia de dominio variable de cadena pesada de SEQ ID NO:43 y una secuencia de dominio variable de cadena ligera de SEQ ID NO:44, y en la que el dominio variable de cadena pesada y el dominio variable de cadena ligera del anticuerpo humano monocatenario anti-CTLA4 están conectados por un conector peptídico.
    .- La proteína de unión o el fragmento de la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento del cáncer.
    3.- La proteína de unión o el fragmento para el uso de la reivindicación 2, en el que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de vejiga, cáncer de sangre, cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer de colon, fibrosarcoma, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de próstata, melanoma, linfoma, mesotelioma y plasmacitoma.
    .- La proteína de unión o el fragmento de la reivindicación 1, para su uso como un medicamento.
    5. - La proteína de unión o el fragmento de la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en infecciones patogénicas, enfermedades asociadas con el SNC, enfermedad de Alzheimer amiloidogénica, y enfermedades con componentes inflamatorios o alérgicos, enfermedad del injerto contra el huésped, enfermedad del huésped contra el injerto, alergia, enfermedades autoinmunitarias y otras enfermedades inflamatorias.
    6. - Una composición farmacéutica que comprende la proteína de unión o el fragmento de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
ES16749944T 2015-02-13 2016-02-12 Productos terapéuticos de anticuerpos que se unen a CTLA4 Active ES2882157T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562116353P 2015-02-13 2015-02-13
PCT/US2016/017713 WO2016130898A2 (en) 2015-02-13 2016-02-12 Antibody therapeutics that bind ctla4

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2882157T3 true ES2882157T3 (es) 2021-12-01

Family

ID=56614957

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES16749944T Active ES2882157T3 (es) 2015-02-13 2016-02-12 Productos terapéuticos de anticuerpos que se unen a CTLA4

Country Status (13)

Country Link
US (3) US10202453B2 (es)
EP (3) EP3949984A1 (es)
JP (3) JP6917902B2 (es)
KR (1) KR20180006367A (es)
CN (2) CN108271359B (es)
AR (1) AR103675A1 (es)
AU (2) AU2016219170B2 (es)
CA (1) CA2976446A1 (es)
ES (1) ES2882157T3 (es)
IL (3) IL292578A (es)
MX (3) MX384026B (es)
TW (1) TW201636369A (es)
WO (2) WO2016130898A2 (es)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160075772A1 (en) * 2014-09-12 2016-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Treatment of Fibrodysplasia Ossificans Progressiva
CA2976446A1 (en) * 2015-02-13 2016-08-18 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind ctla4
SI3303394T1 (sl) 2015-05-29 2020-10-30 Agenus Inc. Protitelesa proti-CTLA-4 in postopki njihove uporabe
CN116059219A (zh) 2015-07-16 2023-05-05 比奥克斯塞尔医疗股份有限公司 一种使用免疫调节治疗癌症的新颖方法
US11542332B2 (en) 2016-03-26 2023-01-03 Bioatla, Inc. Anti-CTLA4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
TWI640536B (zh) 2016-06-20 2018-11-11 克馬伯有限公司 抗體
WO2018035710A1 (en) 2016-08-23 2018-03-01 Akeso Biopharma, Inc. Anti-ctla4 antibodies
JP6976322B2 (ja) * 2016-10-10 2021-12-08 クラウン バイオサイエンス，インコーポレイテッド（タイツァン） 新規抗ｃｔｌａ４抗体
US11013802B2 (en) 2016-12-07 2021-05-25 Agenus Inc. Anti-CTLA-4 antibodies and methods of use thereof
CN110545844A (zh) * 2017-02-21 2019-12-06 瑞美德生物医药科技有限公司 使用结合细胞毒性t淋巴细胞抗原-4(ctla-4)的抗体的癌症治疗
US20220411506A1 (en) * 2017-03-15 2022-12-29 Suzhou Galaxy Biopharma Co., Ltd. Ctla4 antibody, pharmaceutical composition and use thereof
JP7173993B2 (ja) * 2017-05-19 2022-11-17 ウーシー バイオロジクス（シャンハイ）カンパニー リミテッド 細胞傷害性ｔリンパ球関連タンパク質４（ｃｔｌａ－４）に対する新規モノクローナル抗体
TWI799432B (zh) * 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
CN111511762B (zh) 2017-08-21 2025-05-06 天演药业公司 抗cd137分子及其用途
DK3710484T5 (da) * 2017-12-20 2024-08-26 Harbour Biomed Shanghai Co Ltd Ctla-4-bindende antistoffer og anvendelser deraf
WO2019148444A1 (en) * 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Anti-ctla4 antibodies and methods of making and using the same
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
EP3801464A4 (en) * 2018-05-31 2022-03-16 Sorrento Therapeutics, Inc. ANTI-LYMPHICAL SYSTEM-DIRECTED DRUG RELEASE METHODS
US20210236547A1 (en) * 2018-06-05 2021-08-05 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Rapid production, expansion, and increased purity of car-t cells using beads with protein l
CN110760002A (zh) * 2018-07-25 2020-02-07 南京金斯瑞生物科技有限公司 人源化抗人ctla4单克隆抗体及其制备方法和用途
NZ775959A (en) * 2018-10-31 2022-08-26 Bioatla Inc Anti-ctla4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
EP3898677A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 OSE Immunotherapeutics Bifunctional anti-pd-1/il-7 molecule
KR20210141447A (ko) 2018-12-26 2021-11-23 실리오 디벨럽먼트, 인크. 항-ctla4 항체 및 이의 사용 방법
IL316757A (en) * 2018-12-27 2025-01-01 Gigagen Inc Anti-CTLA-4 binding proteins and methods of using them
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
WO2021011480A1 (en) * 2019-07-12 2021-01-21 The Research Foundation For The State University Of New York Compositions and methods to block and bind cxcr4 to modulate cellular function
WO2021122866A1 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecules comprising an il-7 variant
US20230045494A1 (en) 2020-02-28 2023-02-09 Orega Biotech Combination therapies based on ctla4 and il-17b inhibitors
AU2021299338A1 (en) * 2020-07-02 2023-02-23 Gigagen, Inc. Anti-CTLA-4 binding proteins and methods of use thereof
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
CA3213917A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Nicolas Poirier New scaffold for bifunctional molecules with improved properties
WO2022214652A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
JP2025525886A (ja) 2022-08-02 2025-08-07 オーエスイー・イミュノセラピューティクス Ｃｄ２８に対する多機能性分子
EP4687990A1 (en) 2023-03-30 2026-02-11 Ose Immunotherapeutics Method of synthesis of targeted lipid nanoparticle and uses thereof
WO2024200823A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell enhancing molecule and use thereof
WO2025242835A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Ose Immunotherapeutics Molecules comprising masking linkers and uses thereof for the treatment of cancer

Family Cites Families (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3901654A (en) 1971-06-21 1975-08-26 Biological Developments Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors
US3817827A (en) 1972-03-30 1974-06-18 Scott Paper Co Soft absorbent fibrous webs containing elastomeric bonding material and formed by creping and embossing
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4098876A (en) 1976-10-26 1978-07-04 Corning Glass Works Reverse sandwich immunoassay
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US6010902A (en) 1988-04-04 2000-01-04 Bristol-Meyers Squibb Company Antibody heteroconjugates and bispecific antibodies for use in regulation of lymphocyte activity
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
JP3051145B2 (ja) 1990-08-28 2000-06-12 住友製薬株式会社 新規なポリエチレングリコール誘導体修飾ペプチド
US5582996A (en) 1990-12-04 1996-12-10 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Bifunctional antibodies and method of preparing same
DE4118120A1 (de) 1991-06-03 1992-12-10 Behringwerke Ag Tetravalente bispezifische rezeptoren, ihre herstellung und verwendung
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US6887471B1 (en) * 1991-06-27 2005-05-03 Bristol-Myers Squibb Company Method to inhibit T cell interactions with soluble B7
US5851795A (en) 1991-06-27 1998-12-22 Bristol-Myers Squibb Company Soluble CTLA4 molecules and uses thereof
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
WO1994010308A1 (en) 1992-10-23 1994-05-11 Immunex Corporation Methods of preparing soluble, oligomeric proteins
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
US20020142374A1 (en) 1998-08-17 2002-10-03 Michael Gallo Generation of modified molecules with increased serum half-lives
DK2112166T3 (en) * 1998-12-23 2019-02-04 Pfizer Human monoclonal antibodies to CTLA-4
NZ517202A (en) * 1999-08-24 2004-05-28 Medarex Inc Human CTLA-4 antibodies and their uses
GB9928787D0 (en) 1999-12-03 2000-02-02 Medical Res Council Direct screening method
EP1261376A1 (en) * 2000-01-27 2002-12-04 Genetics Institute, LLC Antibodies against ctla4(cd152), conjugates comprising same, and uses thereof
DE60143798D1 (de) * 2000-06-16 2011-02-17 Cambridge Antibody Tech Immunspezifisch bindende antikörper gegen blys
US6938003B2 (en) 2000-06-30 2005-08-30 Mahesh Harpale Method and apparatus for a credibility reporting system to augment an online exchange
GB0025144D0 (en) 2000-10-13 2000-11-29 Medical Res Council Concatenated nucleic acid sequences
IL149701A0 (en) * 2001-05-23 2002-11-10 Pfizer Prod Inc Use of anti-ctla-4 antibodies
IL164287A0 (en) * 2002-04-12 2005-12-18 Medarex Inc Methods of treatment using ctla-4 antibodies
US7285269B2 (en) * 2002-12-02 2007-10-23 Amgen Fremont, Inc. Antibodies directed to tumor necrosis factor
US20040202995A1 (en) 2003-04-09 2004-10-14 Domantis Nucleic acids, proteins, and screening methods
CA2560919A1 (en) * 2004-03-26 2005-10-06 Pfizer Products Inc. Uses of anti-ctla-4 antibodies
NZ580607A (en) * 2004-05-27 2011-05-27 Crucell Holland Bv Binding molecules capable of neutralizing rabies virus and uses thereof
CN101146552A (zh) * 2005-03-23 2008-03-19 辉瑞产品有限公司 用ctla4抗体和激素疗法治疗前列腺癌
EP1863532A1 (en) * 2005-03-23 2007-12-12 Pfizer Products Incorporated Anti-ctla4 antibody and indolinone combination therapy for treatment of cancer
EP2240204A1 (en) * 2008-02-04 2010-10-20 Medarex, Inc. Anti-clta-4 antibodies with reduced blocking of binding of ctla-4 to b7 and uses thereof
RS54233B1 (sr) * 2008-08-25 2015-12-31 Amplimmune Inc. Kompozicije pd-1 antagonista i postupci za njihovu primenu
EP3604330A1 (en) * 2011-02-25 2020-02-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fcgammariib-specific fc antibody
GB201103955D0 (en) * 2011-03-09 2011-04-20 Antitope Ltd Antibodies
HRP20181717T1 (hr) * 2012-09-27 2018-12-28 Merus N.V. Bispecifična igg protutijela kao aktivatori t stanice
CA2976446A1 (en) * 2015-02-13 2016-08-18 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind ctla4
US20170233476A1 (en) * 2016-02-12 2017-08-17 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody Therapeutics That Bind CTLA4

Also Published As

Publication number Publication date
IL253963B (en) 2021-07-29
EP3949984A1 (en) 2022-02-09
JP2021054857A (ja) 2021-04-08
AU2021282431A1 (en) 2021-12-23
US20160237154A1 (en) 2016-08-18
MX384026B (es) 2025-03-14
CN108271359B (zh) 2021-11-09
CN114014930A (zh) 2022-02-08
IL292578A (en) 2022-06-01
WO2016130898A3 (en) 2016-10-20
IL253963A0 (en) 2017-10-31
US10202453B2 (en) 2019-02-12
CA2976446A1 (en) 2016-08-18
TW201636369A (zh) 2016-10-16
US11155623B2 (en) 2021-10-26
AR103675A1 (es) 2017-05-24
US20220002415A1 (en) 2022-01-06
AU2016219170A1 (en) 2017-09-21
WO2016130986A1 (en) 2016-08-18
JP2022084942A (ja) 2022-06-07
CN108271359A (zh) 2018-07-10
MX2022011935A (es) 2022-10-20
MX2017010412A (es) 2018-07-06
IL284336A (en) 2021-07-29
EP3256165B1 (en) 2021-07-14
JP6917902B2 (ja) 2021-08-11
KR20180006367A (ko) 2018-01-17
JP2018508573A (ja) 2018-03-29
IL284336B (en) 2022-06-01
WO2016130898A2 (en) 2016-08-18
EP3256165A4 (en) 2018-10-24
US20190127469A1 (en) 2019-05-02
AU2016219170B2 (en) 2021-09-09
MX2021007947A (es) 2021-08-16
EP4151231A1 (en) 2023-03-22
EP3256165A2 (en) 2017-12-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2882157T3 (es) Productos terapéuticos de anticuerpos que se unen a CTLA4
JP7137646B2 (ja) Ｃｄ４７に結合する抗体医薬
US9902772B2 (en) Antibody therapeutics that bind LAG3
JP2018510151A (ja) Ｔｉｍ３に結合する抗体医薬
AU2016229087A1 (en) Antibody therapeutics that bind PSMA
US20170233476A1 (en) Antibody Therapeutics That Bind CTLA4
HK40066445A (en) Antibody therapeutics that bind ctla4