CN101146552A

CN101146552A - 用ctla4抗体和激素疗法治疗前列腺癌

Info

Publication number: CN101146552A
Application number: CNA2006800095221A
Authority: CN
Inventors: J·戈麦斯-纳瓦罗
Original assignee: Pfizer Products Inc
Current assignee: Pfizer Products Inc
Priority date: 2005-03-23
Filing date: 2006-03-03
Publication date: 2008-03-19

Abstract

本发明涉及一种治疗前列腺癌的方法，其包括给予抗CTLA4抗体，或其抗原结合部分，尤其是针对人CTLA4的人抗体，例如抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab(也称为11.2.1)、11.6.1，11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1和ipilimumab(也称为MDX－101和10D1)，与激素疗法一起联合应用。激素治疗剂包括，尤其是抗雄激素(例如，甲地孕酮、去乙酰环丙氯地孕酮、氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺)、GnRH拮抗剂(例如，阿巴瑞克和组氨瑞林)、和LH－RH促效剂(例如，亮丙瑞林、戈舍瑞林和布舍瑞林)。本发明涉及新辅助疗法、辅助疗法、PSA升高的治疗、局部或转移的前列腺癌的一线治疗、二线治疗和三线治疗。

Description

用CTLA4抗体和激素疗法治疗前列腺癌

技术领域

背景技术

由于缺少有效的治疗方法，前列腺癌目前是男性癌症死亡的第二大主要原因。为临床局限性前列腺癌而接受根治性前列腺切除术的男性在5年内有大约三分之一将需要治疗复发性前列腺癌(Syed等人，Urol.Oncol.21：235-243(2003))。生化复发的患者(即，手术后或放射治疗后其前列腺特异抗原[PSA]水平升高的患者)越来越多地接受激素疗法(HT，在此也称为“雄激素抑制疗法”、“雄激素阻断疗法”、和“抗雄激素疗法”)。可选的方案是，激素疗法可延缓至转移性疾病的临床证据出现时。最后，大多数患者会对激素疗法产生耐受，许多患者将由于癌症的进展而死亡。因此，尽管有一些进展，包括激素疗法，但对于前列腺癌治疗的新方法长期以来一直存在着需求或存在着无法满足的需求。

目前的抗肿瘤药通过多种机制作用来抑制癌细胞的生长和分裂，最终破坏恶性细胞。但，因为这些细胞毒性剂通常对肿瘤细胞没有选择性，因此会破坏正常细胞，损害生理功能，并经常伴有副作用。癌症治疗的一种可选方式是靶向免疫系统(“免疫治疗”)而不是肿瘤本身，这样患者的自身免疫系统会攻击肿瘤，而不攻击非肿瘤细胞。

一种癌症免疫治疗方法是靶向细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4；CD152)，其是一种在活化T细胞上表达的细胞表面受体。CTLA4与其天然配体，B7.1(CD80)和B7.2(CD86)的结合可将负调控信号传递至T细胞，阻断该负信号可导致动物模型中T细胞免疫功能及抗肿瘤活性增强(Thompson和Allison Immunity7：445-450(1997)；McCoy和LeGros Immunol.&Cell Biol.77：1-10(1999))。几项研究已证明使用抗体封闭CTLA4可显著地增强T细胞介导的肿瘤杀伤作用并能诱发抗肿瘤免疫(Leach等人，Science271：1734-1736(1996)；Kwon等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA94：8099-8103(1997)；Kwon等人，Natl.Acad..Sci.USA96：15074-15079(1999))。

虽然抗CTLA4抗体在癌症治疗中很有希望，但是长期以来大家都希望开发新的免疫疗法来治疗，使用这种抗体来治疗肿瘤并可减少现有化学疗法的细胞毒副作用。本发明可满足这种该需要。

发明内容

本发明包括一种治疗需要此治疗的患者的前列腺癌的方法。该方法包括给予所述患者a)一定量的激素治疗剂和b)一定量的结合人CTLA4的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其部分在给予该激素治疗剂后首次给药一天以上且不超过28天，和其中所述用量能有效地组合用于所述的治疗。

在一个实施方案中，抗体或其部分在给予激素治疗剂后两天以上时给予。

在另一个实施方案中，抗体或其部分在给予激素治疗剂后不超过21天时给予。

在进一步的实施方案中，激素治疗剂的给药在抗体或其部分的首次给药之前终止。

还是在另一个实施方案中，激素治疗剂选自抗雄激素、促性腺激素-释放激素(GnRH)拮抗剂、和促黄体生成激素-释放激素(LH-RH)促效剂。

在另一个实施方案中，癌症选自激素依赖性癌症和非激素依赖性癌症。

在一个实施方案中，癌症是非激素依赖性的，激素疗法的给药在抗体或其部分的首次给药之前终止。

在另一个实施方案中，抗体根据选自每28天给予大约10mg/kg和每三个月给予大约15mg/kg中的一个方案进行给药。

在另一个实施方案中，抗CTLA4抗体或其抗原结合部分为选自以下的至少一种抗体：

(a)对CTLA4具有大约10^-8或更大的结合亲合力的人抗体，且

其能抑制CTLA4与B7-1之间的结合以及CTLA4与B7-2之间的结合；

(b)具有包括至少一种人CDR序列的氨基酸序列的人抗体，该人CDR序列与选自4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1和ipilimumab的抗体的CDR序列相对应；

(c)具有选自4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1，11.7.1、12.3.1.1、和12.9.1.1的抗体的重链和轻链氨基酸序列的人抗体；

(d)具有选自4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、和ipilimumab的抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列的人抗体；

(e)抗体，或其抗原结合部分，其与具有选自4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、和ipilimumab的抗体的重链及轻链氨基酸序列的至少一种抗体竞争与CTLA4的结合；和

(f)抗体，或其抗原结合部分，其与具有选自4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、和ipilimumab的抗体的重链及轻链氨基酸序列的至少一种抗体交叉竞争与CTLA4的结合。

在另一个实施方案中，抗体是具有抗体ticilimumab的重链和轻链氨基酸序列的人抗体。

还是在另一个实施方案中，抗体包括重链和轻链，其中重链的重链可变区和轻链的轻链可变区氨基酸序列选自：

(a)SEQ ID NO：3的氨基酸序列和SEQ ID NO：9的氨基酸序列：

(b)SEQ ID NO：15的氨基酸序列和SEQ ID NO：21的氨基酸序列；

(c)SEQ ID NO：27的氨基酸序列和SEQ ID NO：33的氨基酸序列；

(d)由SEQ ID NO：1的核酸序列编码的氨基酸序列和由SEQ IDNO：7的核酸序列编码的氨基酸序列；

(e)由SEQ ID NO：13的核酸序列编码的氨基酸序列和由SEQID NO：19的核酸序列编码的氨基酸序列；

(f)由SEQ ID NO：25的核酸序列编码的氨基酸序列和由SEQID NO：31的核酸序列编码的氨基酸序列；

(g)抗体ipilimumab的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分为选自以下的抗体：

(a)具有包括SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的重链可变区，且另外具有包括SEQID NO：10、SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列的轻链可变区的抗体；

(b)具有包括SEQ IDNO：16、SEQ IDNO：17和SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列的重链可变区，且另外具有包括SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列的轻链可变区的抗体；

(c)具有包括SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列的重链可变区，且另外具有包括SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列的轻链可变区的抗体；

(d)具有包括抗体ipilimumab的重链CDR1、CDR2，和CDR3的氨基酸序列的重链可变区，且另外具有包括抗体ipilimumab的轻链CDR1、CDR2、和CDR3的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。

本发明包括一种治疗需要此治疗的患者的非激素依赖性前列腺癌的方法。该方法包括给予所述患者一定量的结合人CTLA4的抗体或其抗原结合部分，以及一定量的激素治疗剂，其中该激素治疗剂以多次剂量给药一个月以上，其中该抗体或其部分在该激素治疗剂的给药期问进行给药，和其中所述用量能有效地组合用于所述的治疗。

在一个实施方案中，激素治疗剂的给药周期超过两个月以上。

在另一个实施方案中，该方法进一步包括给予多次剂量的抗体或其部分超过一个月的周期，与激素治疗剂的给药周期相重叠。

在另一个实施方案中，抗体或其部分的给药周期与激素治疗剂的给药周期重叠超过两个月。

还是在另一个实施方案中，抗体或其部分的多次剂量与激素治疗剂的给药周期重叠超过六个月。

本发明包括一种治疗需要此治疗的患者的激素依赖性前列腺癌的方法。该方法包括对该患者共同给予治疗有效量的抗CTLA4抗体或其抗原结合部分，以及治疗有效量的至少两种激素治疗剂，其中该药剂选自抗雄激素、促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂、和促黄体生成激素．释放激素(LH-RH)促效剂。

在一个实施方案中，抗雄激素为比卡鲁胺(bicalutamide)，促效剂为亮丙瑞林(Ieuprolide)。

本发明包括一种用于治疗前列腺癌的药学组合物群该组合物包括治疗有效量的抗CTLA4抗体或其抗原结合部分，以及治疗有效量的至少两种激素治疗剂，其中该激素治疗剂选自抗雄激素、促性腺激素一释放激素(Gnl2d-t)拮抗剂，和促黄体生成激素．释放激素(LH-PH)促效剂。

附图说明

当结合附图进行阅读时，将更好地理解前述的发明内容以及下面的具体实施方式。为了阐明本发明，图示的(多个)实施方案中所显示的是现在优选的实施方式。但应该理解的是，本发明并不限于图中所示的具体排列形式及方式。

在附图中：

图1，其包含图lA至lD，显示了抗CTLA4抗体4.1.1的核苷酸和氨基酸序列。图1A显示了4.1.1重链的全长核苷酸序列(SEQ IDNO：1)。图1B显示了4.1.1重链的全长氨基酸序列(SEQ lD-_NO：2)，4.1.1重链可变区的氨基酸序列(sEQ lD NO：3)标注在方括号

之间，和信号肽序列标注在该“[”括号外侧的氨基末端。每个4.1.1重链CDR的氨基酸序列标有下划线。该CDR序列如下：CDRl：GFTFSSHGMH(SEQ ID NO：4)；CDR2：VIWYDGRNKYYADSv(SEQID NO：5)；和CDI隶3：GGHFGPFDY(SEQ ID NO：6)。图1C显示了4.1.1轻链的核苷酸序列(SEQ ID NO：7)。图ID显示了4.1.1轻链全长的氨基酸序列(sEQ ID NO：8)，可变区标注在方括号

之间(sEQ mNO：9)，和信号肽序列标注在醒“[”括号外侧的氨基酸末端。每个CDR的氨基酸序列标示如下：CDR1：RASQSISSSFLA(SEQID NO：10)；CDR2：GASSRAT(SEQ ID NO：11)；和CDR3：QQYGTSPWT(SEQ IDNO：12)。

图2，其包括图2A至2D，显示了抗CTLA4抗体4.13.1的核苷酸和氨基酸序列。图2A显示了4.13.1重链的全长核苷酸序列(SEQ IDNO：13)。图2B显示了4.13.1重链的全长氨基酸序列(SEQ ID NO：14)，4.13.1重链可变区的氨基酸序列标注在方括号“[]”之间(SEQ ID NO：15)。每个4.13.1重链CDR的氨基酸序列都标有下划线。这些CDR序列如下：CDR1：GFTFSSHGIH(SEQ ID NO：16)；CDR2：VIWYDGRNKDYADSV(SEQ ID NO：17)；和CDR3：VAPLGPLDY(SEQID NO：18)。图2C显示了4.13.1轻链的核苷酸序列(SEQ ID NO：19)。图2D显示了全长4.13.1轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO：9)，可变区标注在方括号“[]”之间(SEQ ID NO：21)。每个CDR的氨基酸序列标示如下：CDR1：RASQSVSSYLA(SEQ ID NO：22)；CDR2：GASSRAT(SEQ ID NO：23)；和CDR3：QQYGRSPFT(SEQ ID NO：24)。

图3，其包括图3A至3D，显示了抗CTLA4抗体11.2.1(现在称为ticilimumab)的核苷酸和氨基酸序列。图3A显示了11.2.1重链的全长核甘酸序列(SEQ ID NO：25)。图3B显示了11.2.1重链的全长氨基酸序列(SEQ ID NO：26)，11.2.1重链可变区的氨基酸序列标注在方括号“[]”之间(SEQ ID NO：27)。每个11.2.1重链CDR的氨基酸序列都标有下划线。这些CDR序列如下：CDR1：GFTFSSYGMH(SEQ ID NO：28)；CDR2：VIWYDGSNKYYADSV(SEQ ID NO：29)；和CDR3：DPRGATLYYYYYGMDV(SEQ ID NO：30)。图3C显示了11.2.1轻链的核苷酸序列(SEQ ID NO：31)。图3D显示了全长11.2.1轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO：32)，可变区标注在方括号“[]”之间(SEQ ID NO：33)。各个CDR的氨基酸序列标示如下：CDR1：RASQSINSYLD(SEQ IDNO：34)；CDR2：AASSLQS(SEQ ID NO：35)；和CDR3：QQYYSTPFT(SEQID NO：36)。

图4显示的照片证明了抗体和激素疗法联合应用的新辅助疗法对前列腺组织的作用。

具体实施方式

本发明涉及抗CTLA4抗体与至少一种激素治疗剂联合治疗需要此治疗的患者的前列腺癌的用途的各种实施方案。

除非在此另外定义，关于本发明所使用的科学及技术术语应具有本领域普通技术人员普遍理解的含义。此外，除非本文另有需要，单数的术语应包括复数，而复数的术语应包括单数。通常，关于本文中所述的细胞及组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学和蛋白和核酸化学和杂交所使用的术语和技术在本领域中是公知的并普遍使用的。

除非另有指定，本发明的方法及技术通常根据本领域所公知的方法来实施，如本说明书中所引用和讨论的一般及更特定的参考文献中所述。这些参考文献包括，例如Sambrook和Russell，Molecular Cloning，ALaboratory Approach，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY(2001)，Ausubel等人，Current ProtocolsinMolecular Biology，JohnWiley&Sons，NY(2002)，以及Harlow和Lane Antibodies：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，NY(1990)，它们在此引入本案作为参考文献。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书实施，如本领域中所普遍使用的或如在此所述的那样。关于在此所述的分析化学、合成有机化学，以及医学和药物化学所使用的术语以及实验室操作和技术在本领域中是公知的并普遍使用的。使用标准技术用于化学合成、化学分析、药学制剂、剂型、和递送，和患者的治疗。

如在此所使用的，以下的每个术语在本章节中具有与其有关的含义。

在此所使用的冠词“一(a和an)”是指该冠词的一个或一个以上(即至少一个)语法宾语。作为实例，“一组件”是指一个组件或一个以上的组件。

如在此所使用的20种常规氨基酸及其缩写遵循习惯用法。见Immunology--ASynthesis(第二版，E.S.Golub和D.R.Gren主编，SinauerAssociates，Sunderland，Mass.(1991))，其在此引入本案作为参考文献。

“保守氨基酸置换”是其中一个氨基酸残基被具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的侧链R基的另一氨基酸残基取代的作用。一般而言，保守氨基酸置换并不会实质上改变蛋白质的功能性质。若两条或多条氨基酸序列经保守置换而相互不同，则可向上调整序列一致性百分比或相似性程度以改正该置换作用的保守性。进行该调整的方法是本领域所公知的。见，例如Pearson，Methods.Mol.Biol243：307-31(1994)。

带有具有类似化学性质的侧链的氨基酸的实例包括1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸，和异亮氨酸；2)脂肪族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；3)含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺：4)芳香族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸，和色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸，和组氨酸；6)酸性侧链：天冬氨酸及谷氨酸；和7)含硫侧链：半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸置换组为：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸盐-天冬氨酸盐，和天冬酰胺-谷氨酰胺。

可选的是，保守置换是Gonnet等人，Science256：1443-45(1992)中所公开的PAM250对数-似然矩阵中具有正值的任何改变，该文献在此并入本案作为参考文献。“中度保守”置换是在该PAM250对数-似然矩阵中具有非负值的任何改变。

优选的氨基酸置换是：(1)减少对蛋白水解的易感性，(2)减少对氧化的易感性，(3)改变形成蛋白质复合体的结合亲和性，和(4)赋予或修饰这些类似物的其他物理化学或功能特性。包括置换、删除，和/或插入的类似物可包括除特定肽序列之外的序列的各种突变蛋白。例如单个或多个氨基酸置换(优选为保守氨基酸置换)可以在特定序列(优选在形成分子内接触点的(多个)结构域之外的多肽部分内，例如，CDR的外侧)中进行。保守氨基酸置换应该不会实质上改变母序列的结构特征(例如，置换氨基酸不应该有破坏发生于该母序列中的螺旋，或破坏表征该母序列的其他类型的二级结构的倾向。本领域公认的多肽二级和三级结构的实例描述在以下资料中：Proteins，Structures and MolecularPrinciples(Creighton主编，W.H.Freeman and Company，NewYork(1984))；IntroductiontoProtein Structure(C.Branden和J.Tooze主编，Garland Publishing，NewYork，N.Y.(1991))；和Thornton等人，Nature354：105(1991)，每篇资料在此都引入本案作为参考文献。

多肽的序列相似度一般使用序列分析软件来测定。蛋白分析软件使用指定与各种置换、删除和其它修饰，包括保守氨基酸置换的相似度测定来对相似的序列进行匹配。例如，Genetic Computer Group(得自Genetic Computer Group，Inc.的GCG)，也称为Wisconsin Package，是用于存取、分析和处理核苷酸及蛋白质序列的超过130种程序的集成软件包。GCG含有诸如“Gap”和“Bestfit”等程序，其可使用缺省参数来测定密切相关的多肽，如来自不同有机体物种的同源多肽之间或野生型蛋白质及其突变蛋白之间的序列相似性、同源性和/或序列一致性。见，例如GCG6.1版、9.1版，及10.0版。

也可使用缺省或推荐参数的FASTA(其是GCG6.1版中的一个程序)来比较多肽序列。FASTA(例如FAST2及FASTA3)可提供查询及检索序列间的比对和最佳重叠区的序列一致性百分比(Pearson，MethodsEnzymol.183：63-98(1990)；Pearson，Methods Mol.Biol.132：185-219(2000))。当将本发明的序列与含有大量来自不同生物体的序列的数据库进行比较时，另一优选算法为使用缺省参数的计算机程序BLAST，尤其是blastp或tblastn。见，例如Altschul等人，J.Mol.Biol.215：403-410(1990)；Altschul等人，Nucleic Acids Res.25：3389-402(1997)；这些文献在此均并入本案作为参考文献。

完整的“抗体”包括由二硫键相互连接的至少两条重(H)链及两条轻(L)链。通常见，Fundamental immunology，Ch.7(Paul，W.主编，第二版Raven Press，N，Y.(1989))(其全文并入本案作为参考文献)。每条重链由重链可变区(HCVR或VH)和重链恒定区(CH)组成。该重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(LCVR或VL)及轻链恒定区组成。该轻链恒定区由一个结构域CL组成。该VH及VL区可进一步细分成超变区，称为互补性决定区(CDR)，其散布以更具保守性称为框架区(FR)的区域。每个VH及VL都由3个CDR和4个FR组成，其按以下序列自氨基末端排列至羧基末端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。将氨基酸分配至各结构域根据Kabat的定义：SequencesofProteinsofImmunological Interest(National Institutes of Health，Bethesda，MD(1987和1991)或Chothia&Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)；Chothia等人，Nature342：878-883(1989)。

如在此所使用的术语抗体的“抗原结合部分”(或简称为“抗体部分”)是指保留了与抗原(例如CTLA4)特异结合的抗体的一或多个片段。已证明抗体的抗原-结合功能可由全长抗体的各个片段来实施。包括在术语抗体的“抗原结合部分”内的结合片段的实例包括(i)Fab片段，是由V_L、V_H、C_L和C_H1结构域所组成的单价片段；(ii)F(ab’)₂片段，是包括在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的双价片段；(iii)由V_H及C_H1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的V_L及V_H结构域组成的Fv片段；(v)由V_H结构域组成的dAb片段(Ward等人，(1989)Nature341：544-546)；和(vi)分离的互补性决定区(CDR)。而且，尽管Fv片段的两个结构域，V_L和V_H由各自的基因编码，但是可使用重组方法，通过合成连接子将其连接在一起使其成为单条蛋白链，其中V_L及V_H区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv))；见，例如Bird等人，Science242：423-426(1998)和Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85：5879-5883(1998)。这种单链抗体也要包括在术语抗体的“抗原结合部分”内。也包括其他形式的单链抗体，双特异抗体(diabody)。双特异抗生为双价、双特异性的抗体，其中V_H及V_L结构域在单条多肽链上表达，但使用的连接子太短不能在相同链上的两个结构域之间进行配对，因此迫使这些结构域与另一条链的互补性结构域配对并产生了两抗原结合为点(见，例如Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-6448(1993)；Poijak等人，Structure2：1121-1123(1994))。

仍进一步，抗体或其抗原结合部分可以是较大的免疫粘附分子的一部分，其通过该抗体或抗体部分与一种或多种其它蛋白质或肽发生共价或非共价结合而形成。这种免疫粘附分子的实例包括使用抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)核心区域来制造四聚体scFv分子(Kipriyanov等人，Human Antibodies and Hybridomas6：93-101(1995))和使用半胱氨酸残基、标记肽及C-末端的多组氨酸标记来制造双价及生物素化scFv分子(Kipriyanov等人，Mol.Immunol.31：1047-1058(1994)。其它实例包括将来自一个抗体的一个或多个CDR以共价或非共价方式并入分子内以将其制成能特异结合目的抗原如CTLA4的免疫粘附素。在这些实施方案中，(多个)CDR可被并入作为较大多肽链的一部分，可以与另一多肽链共价连接或以非共价方式并入。抗体部分，如Fab和(Fab’)₂可使用常规技术，从全抗体制备而成，如分别用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化整个抗体。而且，可以使用在此所述的标准重组DNA技术来获得抗体、抗体部分和免疫粘附分子。

就本发明而言，当在此提到“抗体”时，应理解的是也可使用其抗原结合部分。抗原结合部分与完整抗体竞争特异性结合。通常，见FundamentalImmunology Ch.7(Paul，W.主编，第二版，Raven Press，N.Y.(1989))(其全文在此并入本案作为参考文献)。抗原结合部分可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学裂解而制得。在某些实施方案中，抗原结合部分包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb、及互补性决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双特异性抗体和含有足以赋予该多肽以特异抗原结合性的抗体的至少一部分的多肽。在具有一个或多个结合位点的实施方案中，结合位点可彼此相同或可不同。

术语“人抗体”或“人序列抗体”在此可相互交换，包括具有来源于人生殖细胞免疫球蛋白序列的可变和恒定区(若存在)的抗体。本发明的人序列抗体可包括非人生殖细胞免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外的随机或定向特异诱变引入或通过体内体细胞突变引入的突变)。但如在此所使用的术语“人抗体”并不包括其中来源于另一种哺乳动物(如鼠)种系的CDR序列被移植至人框架序列上的“嵌合”抗体(即，“人源化”或PRIMATIZED^TM抗体)。

如在此所使用的术语“嵌合抗体”是指包括来源于两种或多种不同抗体的区域的抗体。在一个实施方案中，一个或多个CDR来源于人抗CTTLA4抗体。在另一实施方案中，来自一种以上的人抗CTLA4抗体的CDR合并在嵌合人抗体中。例如，嵌合抗体可包括来源于第一个人抗CD40抗体的轻链的CDR1、来自第二个人抗CTLA4抗体的轻链的CDR2和来自第三个人抗CTLA4抗体的轻链的CDR3，且来自重链的CDR可来源于一种或多种其它的抗CD40抗体。此外，框架区可来源于相同的抗-CTLA4抗体之一或来源于一个或多个不同的人。

而且，如前所述，嵌合抗体包括的抗体包括来源于一种以上物种的种系序列的部分。

如在此使用的术语“有效量”或“治疗有效量”是指当给予哺乳动物，优选人时，与不使用该化合物时检测到的反应相比，该用量能介导可检测到的治疗反应。如但不限于，抑制和/或减小肿瘤生长、肿瘤大小、转移和类似行为的治疗反应，很容易通过本领域所公认的的许多方法，例如，在此所公开的这些方法来进行评价。

专业技术人员要理解的是，可改变在此所给予的化合物或组合物的有效量，且可根据许多因素，如要治疗的疾病或不良状况、疾病的阶段、要治疗的哺乳动物的年龄、健康及身体状况、疾病的严重性、要给予的特殊化合物和类似因素很容易地来进行确定。

术语“共同给药”是指激素疗法和抗体疗法基本上同时给予患者。即，在同一天实施激素疗法和抗体疗法，或在该治疗周期中激素疗法的最后一次用药和该抗体的给药之间不超过4个月(例如，用作储存悬液的高剂量亮丙瑞林一般每4个月给药一次，这样可持续接受激素疗法)，或抗体剂量的给药与激素疗法的给药之间不超过3个月。

就抗体而言，如在此所使用的术语“竞争”是第一种抗体或其抗原结合部分与第二种抗体或其抗原结合部分竞争结合，其中与无第二种抗体存在的情况相比，在该第二种抗体的存在下，第一种抗体与其同源的抗原表位的结合，可检测到有所降低。可选的方案是，在第一中抗体存在时，第二种抗体与其抗原表位的结合也可检测到有所降低，但是事实并非如此。即，第一种抗体可抑制第二种抗体与其表位的结合，而第二种抗体不会抑制第一种抗体与其各自表位的结合。但，当可检测到每种抗体都能抑制其它抗体与其同源抗原表位或配体结合时，不论抑制程度相同、更太或更小，这些抗体被称为与各自(多个)表位的结合发生了互相“交叉竞争”。例如交叉竞争抗体可以与本发明所使用的抗体结合的表位，或部分表位结合。竞争及交叉竞争抗体的应用包括在本发明中。不管这种竞争或交叉竞争发生的机制(例如立体阻碍、构象改变或与共同抗原表位或其部分结合等)如何，专业技术人员要理解的是，根据在此提供的教授内容，这种竞争和/或交叉竞争抗体包括并可用于本发明公开的方法中。

术语“抗原表位”包括能够与免疫球蛋白或T细胞受体特异结合的任何蛋白质决定簇。抗原表位决定簇通常由分子的化学活性表面基团组成，如氨基酸或糖侧链，且通常具有特定的三维结构特性以及特定的电荷特性。构象表位与非构象表位的区别在于变性溶剂存在时前者而非后者的结合性会丧失。

如在此交替使用的术语“激素疗法”或“雄激素抑制”包括给予药剂或化合物的任何方法，从而使雄激素(雄性类固醇激素，如但不限于睾丸酮和二氢睾酮)水平与不给予该药剂或化合物或在给药之前的雄激素水平相比，有可检测到的降低。激素疗法包括，但不限于：使用抗雄激素、促性腺激素-释放激素拮抗剂、和促黄体生成激素-释放激素促效剂，及其组合。

如在此所使用的术语“抗雄激素”是指任何药剂或化合物，其能可检测到地阻断前列腺细胞上的雄激素受体，从而与给予该药剂或化合物之前的哺乳动物雄激素水平相比或与不给予该药剂或化合物的相同哺乳动物中的雄激素水平相比，能降低哺乳动物的雄激素水平。优选哺乳动物是人。

抗雄激素可以“非类固醇的”或“类固醇的”，因为这些术语在本领域中是能被理解的，并用于本说明书中。即，非类固醇抗雄激素(例如比卡鲁胺(CASODEX)、尼鲁米特(NILANDRON)、氟他胺(EULEXIN、DROGENIL)，和类似物)可竞争性地与前列腺细胞上的雄激素受体结合，抑制雄激素对前列腺的刺激作用。类固醇抗雄激素(例如甲地孕酮(MEGACE)，和去乙酰环丙氯地孕酮(ANDROCUR))不仅可抑制在细胞受体的雄激素结合，还可延缓LH从脑下垂体腺的释放。

如在此所使用的“促性腺激素-释放激素(GnRH)拮抗剂”是指可以与脑下垂体腺中的GnRH(也称为LH-RH)受体结合，从而阻断该受体而不会导致促性腺激素释放的药剂。GnRH拮抗剂包括，例如阿巴瑞克(PLENAXIS)和组氨瑞林(SUPPRELRIN)。不像LH-RH促效剂，GnRH拮抗剂不会导致可检测到的睾丸酮大幅升高。

术语“促黄体生成激素-释放激素(LH-RH促效剂”是与不给予LH-RH促效剂或在给予LH-RH促效剂之前的该激素的脑下垂体产生量相比，能够可检测到地减少可刺激睾丸酮产生的至少一种激素的脑下垂体腺产生量的药剂或化合物。如在此所使用的术语“LH-RH促效剂”是可引起LH-RH受体的连续过量刺激并将LH-RH受体复合体内在化，从而使脑下垂体细胞由于该细胞上存在的受体减少对进一步刺激耐受的药剂。其依次会导致LH的减少和随后的睾丸酮的分泌。LH-RH促效剂包括，但不限于：亮丙瑞林(leuprorelin)(亮丙瑞林(leuprolide)；LUPRON、ELIGARD)、戈舍瑞林(ZOLADEX)、布舍瑞林(SUPREFACT)、曲普瑞林(tryptorelin)(DECAPEPTYL)等。

术语“最大雄激素阻断”是指至少一种抗雄激素与至少一种LH-RH促效剂或阻断雄激素的睾丸切除术的组合。该术语包括这些方法和化合物(包括多种抗雄激素、多种LH-RH促效剂)，以及其任何排列的任何组合。

如在此使用的术语“指导性材料”包括可用以交流试剂盒中的本发明的化合物、组合，和/或组合物用于影响、缓解或治疗在此所列举的各种疾病或不良状况的用途的出版物、记录、图表或任何其它表达媒体。该指导性材料可任选地或可另外选择地描述一种或多种缓解细胞、组织或哺乳动物(包括在此其它地方所公开的)的疾病或不良状况的方法。

试剂盒的指导性材料，例如可附加在包含本发明的化合物和/或组合物的容器中或与含该化合物和/或组合物的容器一起装运。可选地是，该指导性材料可与该容器分别装运以便使接受者能协作地使用该指导性材料和该化合物。

应注意，术语“患者(patient)”或“受试者(subject)”除了可互换使用外，是指哺乳动物，如人类患者，和非人灵长类动物以及兽医的受试者，如兔、大鼠、和小鼠、以及其它动物。优选患者是人。

在此所使用习惯表示法来描述多肽序列：多肽序列的左手端为氨基末端；多肽序列的右手端为羧基未端。

如在此所使用的术语“特异性结合”是指可识别和结合特定分子，但实质上并不会识别或结合样品中的其它分子的化合物，例如蛋白质、核酸、抗体和类似物。例如可识别并结合样品中的同源配体但是实质上不识别或结合该样品中的其它分子的抗体或肽抑制剂(例如可以与其同源抗原CTLA4结合的抗CTLA4抗体)。因此，在指定的测定条件下，该特异结合部分(例如抗体或其抗原结合部分)可优先与特殊靶分子结合且并不会与存在于试验样品中的其它组分显著地结合。可使用各种测定方式来选择能与目标分子特异结合的抗体。例如使用固相ELISA免疫测定法、免疫沉淀法、BIAcore及Western印迹分析来鉴定可与CTLA4特异性反应的抗体。一般特异性或选择性反应为背景信号或噪声的至少两倍，更典型地超过10倍背景信号，甚至更具体地，当平衡解离常数(K_D)≤10μM，优选≤100nM，最优选≤10nM时，抗体被称为能与抗原“特异结合”。

术语“K_D”是指特殊抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。

如在此所使用的“实质上纯的”是指一目标物种为存在的主要物种(即，以摩尔浓度计算其含量大于组合物内的任何其它单个物种)，且实质上纯的馏份优选为一组合物，其中该目标物种(例如，抗CTALA抗体)包括存在的所有大分子物种的至少大约50％(基于摩尔浓度)。通常，实质上纯的组合物可包含该组合物中存在的所有大分子物种的大约80％以上，更优选地超过大约85％、90％、95％、和99％。更优选该目标物种被纯化至主要是均质的(通过常规的检测方法在组合物中不能检测到污染物种)，其中该组合物基本上由单一的大分子物种组成。

如在此所使用的“治疗”是指减少患者所体验的疾病症状(即，肿瘤生长和/或转移或由免疫细胞的数量和/或活性而介导的其它作用)发作的频率。该术语包括给予本发明的化合物或药剂以预防或延缓疾病症状、并发症或生化指标(例如，PSA水平的升高)的发作，缓解症状或阻止或抑制该疾病、不良状况或功能障碍的进一步进展。治疗可以是预防性(预防或延缓疾病的发作，或预防临床表现或其亚临床症状的出现)或治疗性抑制或缓解该疾病出现后的症状。

I.联合治疗

本发明涉及下面所述的能结合人CTLA4的抗体或该抗体的抗原-结合部分的给药与激素疗法联合治疗前列腺癌的方法。不管该前列腺癌为激素依赖性或非依赖性的，根据本发明的方法阻断CTLA4和减少患者雄激素水平的组合可提供协同的有益治疗效果，下面将详细地进行讨论。

尽管本发明包括许多联合疗法，其中该抗体与至少一种前列腺肿瘤激素治疗剂一起给予患者，但本发明决不限于这些例证的药剂，在此提出的这些药剂仅用于说明。

在本发明的一个实施方案中，抗CTLA4抗体或其抗原—结合部分在给予激素治疗剂之后一天以上且不超过28天时给予。该激素治疗剂和该抗体的用量能有效地联合治疗前列腺癌。不管肿瘤的激素依赖性状态如何，在抗体疗法实施前都可给予激素疗法。例如，当肿瘤是激素依赖型，没有评估激素依赖性状态但之前也没有给予激素疗法，或肿瘤已知是非激素依赖型(也称为“激素抵抗型”)，结合人CTLA4的抗体或该抗体的抗原结合部分在给予激素治疗剂后一天以上且不超过28天时给予。该药剂包括，但不限于：抗雄激素、促性腺激素-释放激素(GnRH)拮抗剂、和促黄体生成激素-释放激素(LH-RH)促效剂，及其组合。

在一个实施方案中，通过在给予至少一种激素治疗剂后一天以上时给予抗CTLA4抗体介导了协同或累积作用。不想受限于本发明的任何特定理论，激素疗法可增加(可能通过前列腺的凋亡或其它结构改变)(多种)前列腺肿瘤特异性抗原与免疫系统的接触，这样对肿瘤细胞的免疫应答增强了。即激素疗法可通过肿瘤细胞的死亡介导在宿主中建立或增加肿瘤特异性抗原的来源，其接着可将肿瘤抗原提呈给宿主抗原递呈途径。抗CTLA4抗体可介导对该抗原递呈途径中肿瘤-特异性抗原水平增加而增强的免疫应答，从而提供协同效应。在可以与通过细胞死亡释放肿瘤-特异性抗原而增强免疫应答的抗CTLA4协同的其它联合治疗方法中有放射、手术和激素疗法。

此外，雄激素水平下降可增强或延长患者的免疫应答，其可经非肿瘤特异性作用而介导，例如降低雄激素水平可经与攻击该肿瘤无关的机制介导增强的免疫应答。在此公开的数据表明在雄激素阻断和本发明的抗CTLA4抗体之间可能有一种显而易见的生物相互作用，其会引起更为严重的腹泻，这种腹泻在仅使用该抗体时可观察到，表明该联合治疗的有效性提高。以前的研究认为雄激素在免疫系统中有重要作用。一般可见Grossman，Science227：257-261(1985)(讨论性腺类固醇对免疫系统的调控)；Olsen和Kovacs，Immunologic Res.23：281-288(2001)(讨论雄激素对T及B淋巴细胞发育的影响)；Sutherland等人，J.Immunol.175：2741-2753(2005)(提到在雄激素阻断后的胸腺再生)；Tanriverdi等人，J.Clin.Endocrinol.176：293-304(2003)(讨论免疫系统和CnRH及性甾体之间的潜在相互作用)；及Mercader等人，Proc Natl AcadSci USA98：14565-14570(2001)(提到在雄激素去势后前列腺的T细胞浸润增加)；Arlen等人，J Urol174：539-546(2005)(讨论使用表达前列腺抗原PSA的痘病毒载体的疫苗接种和激素疗法联合使用)。

不想受限于本发明的任何理论，雄激素阻断及抗CTLA4抗体的联合可以在前列腺内诱发高于预期的更强的免疫应答。因此，尤其使用亮丙瑞林及比卡鲁胺的组合的雄激素阻断与抗CTLA4抗体的联合使用可产生潜在的协同作用，从而提供了重要的治疗前列腺癌的新方法。

在一个实施方案中，抗体疗法是对之前尚未接受激素疗法的患者给予激素疗法后不超过28天时实施的。其可以在，例如肿瘤的激素依赖状态尚未经评估的时候进行。抗体疗法是在给予激素疗法后的至少一天且不超过28天时给予。优选激素疗法在抗体疗法的整个过程中持续进行。

在另一个实施方案中，抗体或其部分是在给予激素治疗剂后的不到21天时给予。此外，在本发明的一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分在给予激素治疗剂后两天以上时给予。

还是在另一个实施方案中，抗体在给予激素治疗剂后一天以上且不超过28天时给予，其中激素疗法的给药在给予抗体前终止。即一旦给予该抗体，患者并未接受额外的激素疗法；然而，根据需要可给予多次剂量的抗体，而不进一步给予激素疗法。同样，在另一个实施方案中，抗体在给予激素治疗剂后两天以上且不超过21天时给予，该激素疗法的给药在抗体给药之前终止。

在一个实施方案中，前列腺癌为激素依赖型，而在另一个实施方案中，该癌为非激素依赖型。因此，当抗体在给予激素治疗剂后一天以上且不超过28天时给予时，则该前列腺癌可以是激素依赖型或非激素依赖型。不管肿瘤的激素状态如何，这种给药方式可提供协同的有益治疗效应。

当肿瘤为激素依赖型时，可给予激素治疗剂。在给予激素疗法的用药剂量后至少一天且不超过28天后对该患者实施抗体疗法，在给予抗体后激素疗法可持续进行。根据本发明的一个理论，这种治疗对患者提供的好处在于其增加了(多种)肿瘤特异性抗原的暴露和/或减少了雄激素的任何免疫下调作用，因此可激发和/或延长了对该肿瘤的免疫应答，从而对该患者提供有益的治疗。激素疗法的终止与肿瘤反应有关，例如肿瘤消退、PSA水平的稳定或下降、减轻骨疼痛和类似状况，表明激素疗法的停止与肿瘤生长的控制中相对立的变化有关，当与后续的CTLA4抗体疗法联合使用可具有协同效应，从而产生治疗的益处。

在另一个实施方案中，当肿瘤为激素依赖型时，包括至少一种激素治疗剂的激素疗法与抗CTLA4抗体共同给予。即使当肿瘤为非激素依赖型时，减少雄激素的治疗与抗体疗法共同实施可提供协同或累加效应。如先前更详细地讨论，不想受限于本发明的任何特定理论，降低雄激素水平的激素疗法可能可以介导肿瘤抗原对免疫系统的暴露增加和/或减少雄激素可能介导的任何免疫抑制作用。可选的是，降低雄激素水平的激素疗法可介导对胸腺的作用，增强免疫系统进行获得性免疫应答的能力[见Sutherland等人，J.Immunol.175：2741-2753(2005)]。但本发明包括通过给予这种联合治疗通过任何机制来为患者提供有益的治疗效果。

在另一个实施方案中，抗体疗法在给予激素疗法前实施。即为了达到最大益处(例如肿瘤消退、缓解骨疼痛、降低或稳定PSA水平等)，抗体疗法可每月给予一次或每2个或3个月给予一次，然后除了抗体疗法外又进行激素疗法或停止抗体疗法，然后给予激素疗法。这是因为由于抗体的半衰期长且受之前给予的抗体疗法影响的T细胞的持续存在，之后额外的HT或用HT替代抗体疗法，可改变抗体引发的免疫应答的性质和/或增强该免疫应答。因此，本发明包括首先给予抗体疗法，优选较长的时间(例如1个月，更优选2个月，甚至更优选3个月，还更优选4个月的抗体疗法)，然后共同给予激素疗法或以激素疗法替代抗体疗法。

在一个实施方案中，抗体疗法在手术之前给予的新辅助治疗。手术后，给予激素疗法，替代连续抗体疗法或与连续抗体疗法一起实施。这是因为如前所述，在激素疗法之前给予抗体疗法，然后在不进行连续抗体疗法的情况下给予激素疗法，或在前列腺切除术后除了抗体疗法外又给予激素疗法，可对患者提供协同的治疗效应。

如前所述，许多激素治疗剂在本领域中是公知的，因此本发明包括，但不限于：例证的抗雄激素、GnRH拮抗剂，LH-RH促效剂的应用。抗雄激素包括，例如非类固醇抗雄激素，诸如，但不限于：比卡鲁胺(CASODEX)、尼鲁米特(NILANDRON)、氟他胺(EULEXIN、DROGENIL)，和类固醇抗雄激素，包括甲地孕酮(MEGACE)，和去乙酰环丙氯地孕酮(ANDROCUR))。GnRH拮抗剂尤其包括阿巴瑞克(PLENAXIS)和组氨瑞林(SUPPRELIN)。LH-RH促效剂包括，例如亮丙瑞林(亮丙瑞林；LUPRON、ELIGARD)、戈舍瑞林(ZOLADEX)、布舍瑞林(SUPREFACT)、曲普瑞林(tryptorelin)(DECAPEPTYL)等。

在另一个实施方案中，非激素依赖型前列腺癌的治疗包括给予患者抗体或其抗原结合部分，及激素治疗剂，其中激素疗法以多次剂量给药，时间超过一个月，而该抗体或其抗原结合部分在激素疗法给药期间给予。此外，这些用量能有效地联合治疗前列腺癌。如前所述，根据本发明的一个理论，甚至当前列腺癌为非激素依赖型时，激素疗法与抗体疗法的联合使用可介导肿瘤抗原的暴露和/或减少雄激素的任何免疫抑制作用，因此激素疗法与CTLA4阻断的联合可提供与仅使用任一种治疗相比更强的和/或更长时间的免疫应答。

在一个实施方案中，激素治疗剂以多次剂量给药，周期超过一个月。而且，在另一个实施方案中，在激素疗法的超过2个月的给药周期期间，以多次剂量给予抗体，周期超过一个月。超过一个月的多次剂量的抗体给药可与激素疗法的给药周期重叠。在另一个实施方案中，抗体的给药周期与激素的给药周期可重叠超过两个月。此外，还是在另一个实施方案中，抗体的给药周期与激素的给药周期可重叠超过6个月。本领域技术人员从本文公开的内容中要理解的是，激素的给药周期以及抗体的给药周期可重叠并根据需要进行调整以提供有益的治疗效果。

在另一个实施方案中，当由于肿瘤被认为是非激素依赖型而中断先前的激素疗法时，则激素疗法可以与抗CTLA4抗体一起再次给予(即，使用与先前给予的相同或不同的激素治疗剂)。在本实例中，激素疗法包括给予至少一种激素治疗剂，例如抗雄激素和LH-RH促效剂、抗雄激素和GnRH拮抗剂和抗CTLA4抗体(例如4.1.1、4.3.1、6.1.1、ticilimumab、ipilimumab)或其抗原结合部分。更优选激素治疗剂包括，但不限于：比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特，及亮丙瑞林，且与抗体一起给药，周期超过一个月。在另一个实施方案中，给予多次剂量的抗体和激素治疗剂，且抗体的给药周期与激素疗法重叠至少一个月。

还是在另一个实施方案中，对患有激素依赖型肿瘤的患者共同给予包括至少两种激素治疗剂的激素疗法和抗体疗法。即对患激素依赖型前列腺癌患者给予包括至少两种激素治疗剂以提供最大雄激素抑制治疗作用的激素疗法，其中肿瘤的肿瘤依赖性状态已经被确定和/或其中该状态并未被确定，但其中该患者尚未接受先前的激素疗法。不想受限于本发明的任何理论，最大雄激素抑制性激素疗法及抗CTLA4抗体疗法的共同给药对患者提供有益效果的原因在于这种联合应用可增加(多种)肿瘤特异性抗原的暴露和/或减少雄激素的任何免疫抑制作用，因此可引起和/或延长对该肿瘤的免疫应答，从而使对患者提供有益的治疗效果。

因此，在本发明的该实施方案中，当前列腺癌为激素依赖型时，则可给予患者有效量的独立选自抗雄激素、GnRH拮抗剂、和LH-RH促效剂的至少两种激素治疗剂，和有效量的抗CTLA4抗体或其抗原结合部分。激素治疗剂和抗体的给药可重叠且每种都可在(但未必)重叠的时间内以多次剂量给药。根据需要可调整治疗过程的时间长度且这是癌症治疗领域中的专业技术人员所公知的。

抗体和激素治疗剂的给药，同时或序贯性地，包括给予同时包括抗CTLA4抗体和一种或多种附加的激素治疗剂的药学组合物，和给予两种或多种独立的药学组合物，其中一种包括抗CTLA4抗体，而另一种(多种)包括附加的激素治疗剂。此外，尽管共同给药或联合(结合)治疗包括互相同时给药，其也包括同时、连续或单独地给予该治疗的但个组分。另外，当抗体经静脉给药而(多种)激素治疗剂经口服给药(例如比卡鲁胺，和类似药物)或经皮下或肌肉内注射(例如亮丙瑞林)，可以理解的是这种组合可以各自独立的药学组合物的形式给药。

当治疗包括共同给予抗CTLA4抗体和至少两种激素治疗剂的组合时，则药剂尤其可以是抗雄激素、促性腺激素-释放激素(GnRH)拮抗剂、和促黄体生成激素-释放激素(LH-RH)促效剂。许多这种激素治疗剂在本领域中是公知的，因此本发明包括，但不限于：前述的每种激素治疗剂种类中的实例化合物。更具体地，抗雄激素包括，例如非类固醇抗雄激素包括比卡鲁胺(CASODEX)、尼鲁米特(NILANDRON)、氟他胺(EULEXIN，DROGENIL)、和类似物。类固醇抗雄激素包括甲地孕酮(MEGACE)，和去乙酰环丙氯地孕酮(ANDROCUR))。促性腺激素-释放激素GnRH拮抗剂尤其包括阿巴瑞克(PLENAXIS)和组氨瑞林(SUPPRELIN)。此外，促黄体生成激素-释放激素LH-RH促效剂包括，例如亮丙瑞林(亮丙瑞林；LUPRON、ELIGARD)、戈舍瑞林(ZOLADEX)、布舍瑞林(SUPREFACT)、曲普瑞林(DECAPEPTYL)、和类似物。在一个实施方案中，抗CTLA4抗体与抗雄激素(比卡鲁胺)和LH-RH促效剂(亮丙瑞林)共同给药，但本发明包括至少两种激素治疗剂以及单一激素治疗剂，和抗CTLA4抗体的任何组合。

如在此他处所述，亮丙瑞林是促黄体生成激素-释放激素(LH-RH)促效剂种类中的一个成员。亮丙瑞林尤其可用以治疗男性前列腺癌、女性子宫内膜异位症和纤维瘤，及儿童中心性性早熟。抗CTLA4抗体与亮丙瑞林的组合，或进一步与比卡鲁胺的组合适用于治疗前列腺癌。本发明包括联合使用抗CTLA4抗体与抗雄激素治疗，诸如，但不限于亮丙瑞林和比卡鲁胺作为治疗非转移性PSA升高(生化复发)和/或转移性前列腺癌的新辅助治疗、辅助治疗，和/或一线治疗和二线治疗。优选该组合作为前列腺癌的新辅助治疗。更具体来说，新辅助治疗是在任何后续治疗之前给予，例如激素疗法和抗体疗法的组合在前列腺切除术前给予。另外，如本说明书他处所例证，该联合治疗或抗体疗法作为单一药剂可以在前列腺切除术后继续进行。

本发明的方法可以作为新辅助治疗在手术、放疗或任何其它治疗之前进行以对肿瘤细胞致敏或对患者提供有益的治疗效果。但，本发明并不限于该新辅助治疗方案。而是可以在整个疾病及治疗连续过程中使用本发明的方法，例如，但不限于用于前列腺癌的辅助、PSA升高(在临床上出现转移证据之前)，和一线、二线和/或三线治疗。

本发明可进一步与其它药剂及治疗，例如化疗、手术、放疗、移植和类似方法联合治疗患者。即该患者可接受另外的化疗和公知的药剂，诸如，但不限于：生长因子抑制剂、生物反应调节剂、烷化剂、嵌入性抗生素、长春花生物碱、免疫调节剂、紫杉烷、选择性雌激素受体调节剂(SERM)，诸如：但不限于拉索昔芬(lasofoxifene)，和血管生成抑制剂。

有许多治疗剂，且已经描述在，例如美国专利申请公开号第2004/0005318、第2003/0086930号、第2002/0086014号、及国际专利公开号第WO03/086459号中，所有文件都在此并入本案作为参考文献。这些治疗剂包括，但不限于拓扑异构酶I抑制剂；其它抗体(贝伐单抗(bevacizumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、利妥昔单抗(rituximab)、曲妥单抗(trastuzumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、抗-IGF-1R、抗MAdCAM、抗-CD40、抗4-1BB、和类似物)；化疗剂，诸如，但不限于：依马替尼(imatinib)(GLEEVEC)、SU11248(SUTENT)、SU11662、SU14813；BAY43-9006、吲哚胺-2，3-二加氧酶(IDO)抑制剂、选择性雌激素受体调节剂(SERM；例如，拉索昔芬、紫杉烷、长春花生物碱、替莫唑胺(temozolomide)、血管生成抑制剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂、erbB2受体抑制剂、抗增生剂(例如法呢基(farnesyl)蛋白转移酶抑制剂、及αvβ3抑制剂、αvβ5抑制剂、p53抑制剂，和类似物)、免疫调节剂、细胞因子、肿瘤疫苗；肿瘤特异性抗原；基于热休克蛋白的疫苗；树枝状及干细胞治疗；烷化剂、叶酸拮抗剂；嘧啶拮抗剂；蒽环类抗生素；铂化合物；共刺激分子(例如CD4、CD25、PD-1、B7-H3、4-1BB、OX40、ICOS、CD39、HLA-DR、MHC II、和LFA、及其促效剂抗体)。

如上所述，本发明的方法可进一步与移植(例如干细胞移植)联合应用以为患有前列腺癌的患者提供有益的治疗效应。干细胞移植可根据本领域中公知的方法实施，其可以是同种异体或自体干细胞移植。此外，根据在此公开的内容，本领域技术人员应该理解移植包括淋巴细胞的继承性转移(自体的或来自HLA-匹配的供体)。当该方法包括干细胞移植时，可以在该哺乳动物的免疫系统从移植复原(例如在移植后自1至12个月内的时间内)后，给予抗体激素治疗剂组合的第一次剂量。在某些实施方案中，第一次剂量是在移植后的自1至3或自1至4个月内给予。移植方法在许多论文有所描述，包括Apppelbaum in Harrison’s Principles Internal Medicine，Chapter14，Braunwald等人主编，第15版，MeGraw-Hill Professional(2001)，其在此并入本案作为参考文献。

除了抗CTLA4抗体及激素治疗剂外，本发明也包括其它治疗剂的给药。这些治疗剂包括镇痛剂、癌症疫苗、抗血管剂、抗增生剂、止吐剂，及止泻剂。优选的止吐剂包括盐酸昂丹司琼、盐酸格拉司琼和灭吐灵。优选的止泻剂包括苯乙哌啶及阿托品(LOMOTIL)、洛哌丁胺(IMMODIUM)，及善得定(octreotide)(SANDOSTATIN)。

在另一个实施方案中，本发明包括给予一种具有止泻作用的药剂，其中该药剂适用于治疗胃肠道的慢性炎症。这些药剂尤其包括具有局部活性的类固醇(例如布地奈德(budesonide)[ENTOCORT]，和抗肿瘤坏死因子(TNF)药物(例如英夫利昔单抗(infliximab)[REMICADE]、依那西普(etanercept)[ENBREL]、及阿达木单抗(adalimumab)[HUMIRA])。

II.抗-CTLA4抗体

在一个实施方案中，CTLA4抗体包含重链，其中V_H的氨基酸序列包括SEQ ID NO：3、15和27中所示的氨基酸序列。还是在另一个实施方案中，CTLA4抗体的V_L包括SEQ ID NO：9、21和33中所示的氨基酸序列。更优选抗体的V_H及V_L区包括分别在SEQ ID NO：3(V_H4.1.1)及SEQ ID NO：9(V_L4.1.1)中所示的氨基酸序列；分别SEQ IDNO：15(V_H4.13.1)和SEQ ID NO：21(V_L4.13.1)中所示的氨基酸序列；及分别在SEQ ID NO：27(V_H ticilimumab)和SEQ ID NO：33(V_Lticilimumab)中所示的氨基酸序列。更优选该抗体是ticilimumab(也称为CP-675,206，其具有抗体ticilimumab的重链及轻链氨基酸序列)。

还是在另一个实施方案中，重链的氨基酸序列包括由包括SEQ IDNO：1、13和25中所示的核酸序列的核酸编码的氨基酸序列。还是在另一个实施方案中，轻链包括由包括SEQ ID NO：7、19和31中所示的核酸序列的核酸编码的氨基酸序列。更优选重链和轻链包括由包括分别在SEQ ID NO：1(重链4.1.1))和SEQ ID NO：7(轻链4.1.1)中所示的核酸序列；分别在SEQ ID NO：13(重链4.13.1)和SEQ IDNO：19(轻链4.13.1)中所示的核酸序列；和分别在SEQ ID NO：25(重链ticilimumab)和SEQ ID NO：31(轻链ticilimumab)中所示的核酸序列的核酸编码的氨基酸序列。

而且，抗体可包括重链氨基酸序列，其包括来自V_H3-30或3-33基因或在此的保守置换或体细胞突变的人CDR氨基酸序列。要理解的是VH3-33基因编码抗体分子的重链可变区的FR1至FR3。因此本发明包括与选自3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、2.9.1.1、ipilimumab、和DP-50的抗体FR1至FR3的序列具有至少85％，更优选至少90％，又更优选至少91％，甚至更优选至少94％，又更优选至少95％，更优选至少97％：甚至更优选至少98％，又更优选至少99％，且最优选100％的同一性。

抗体可进一步包括其轻链中来自A27或O12基因的CDR区或其可包括选自3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、2.9.1.1、ipilimumab的抗体的CDR区。

在本发明的其它实施方案中，抗体抑制CTLA4与B7-1、B7-2之间的结合或两者都抑制。抗体可抑制与B7-1的结合，优选IC50为大约100nM或更低，更优选大约10nM或更低，例如大约5nM或更低，又更优选大约2nM或更低，或甚至更优选，例如大约1nM或更低。同样，抗体可抑制与B7-2的结合，IC₅₀为大约100nM或更低，更优选10nM或更低，例如甚至更优选大约5nM或更低，又更优选大约2nM或更低或甚至更优选大约1nM或更低。

此外，在另一个实施方案中，抗CTLA4抗体对CTLA4具有大约10^-8或更高，更优选大约10^-9或更高，更优选大约10^-10或甚至更优选大约10^-11或更高的结合亲和力。

抗CTLA4抗体包括与具有选自4.1.1、6.1.1、ticilimumab、4.13.1、和4.14.3的抗体的重链及轻链氨基酸序列的抗体竞争结合作用的抗体。此外，抗CTLA4抗体可与抗体ticilimumab竞争结合作用。

在另一个实施方案中，抗体优选与具有抗体4.1.1、4.13.1、4.14.3、6.1.1或ticilimumab的重链及轻链序列、可变重链及可变轻链序列，和/或重链CDR序列和轻链CDR序列的抗体交叉竞争。例如抗体可与具有选自4.1.1、4.13.1、4.14.3、6.1.1或ticilimumab的抗体的重链及轻链氨基酸序列、可变序列和/或CDR序列的抗体的抗原表位结合。在另一个实施方案中，抗体与具有ipilimumab的重链及轻链序列或抗原结合序列的抗体交叉竞争。

在另一个实施方案中，使用抗CTLA4抗体来实践本发明，该CTLA4抗体包括重链和轻链，该重链包括选自3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、和12.9.1.1的抗体的CDR-1、CDR-2，和CDR-3的氨基酸序列，该轻链包括上述选择的抗体的CDR-1、CDR-2，和CDR-3的氨基酸序列，或包括具有来源于选自保守性变化、非保守性置换、添加和删除的CDR序列变化的序列，其中保守性变化选自非极性残基被其它非极性残基置换的作用、极性带电残基被其它极性无电荷残基置换的作用、极性带电残基被其它极性带电残基置换的作用及结构相似的残基的取代作用，其中非保守性置换选自由极性带电残基取代极性无电荷残基的作用及非极性残基取代极性残基的作用。

在本发明的另一个实施方案中，抗体含有少于10、7、5或3种来自框架区或CDR区中种系序列的氨基酸变化。在另一个实施方案中，抗体在框架区中含有少于5种氨基酸变化而在CDR区中含有少于10种变化。在一个优选的实施方案中，抗体在框架区中含有少于3种氨基酸变化，在CDR区中含有少于7种变化。在一个优选的实施方案中，框架区中的变化是保守的，且CDR区中的变化为体细胞突变。

在另一个实施方案中，抗体与抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、ipilimumab的序列分别在重链及轻链全长序列或在重链或轻链上，具有至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，又更优选至少94％，优选至少95％，更优选至少99％的序列(例如氨基酸、核酸或两者)一致性或序列相似性。甚至更优选地，抗体与选自抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、ipilimumab的抗体的重链和轻链上或分别与重链或轻链具有100％序列一致性或序列相似性。

在另一个实施方案中，抗体与种系细胞VK A27、种系细胞VK O12和种系细胞DP50(为VH3-33基因位点的等位基因)的序列分别在重链和轻链全长序列上，或在重链或轻链上具有至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，又更优选至少94％，更优选至少95％，甚至更优选至少99％的序列一致性或序列相似性。甚至更优选地，抗体与种系细胞DP50的重链序列和/或种系细胞A27或种系细胞O12的轻链序列具有100％的序列一致性或序列相似性。

在一个实施方案中，抗体与抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、ipilimumab的序列分别在重链和轻链可变区序列上或在重链或轻链可变区序列上具有至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，又更优选至少94％，优选至少95％，更优选至少99％的序列(例如氨基酸、核酸或两者)一致性或序列相似性。甚至更优选地，抗体与选自抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、ipilimumab的抗体分别在重链及轻链可变区序列上或重链或轻链序列具有100％的序列一致性或序列相似性。

在另一个实施方案中，抗体与种系细胞DP50(为V_H3-33基因位点的等位基因)的重链可变序列在重链可变序列上或与种系V_K A27或种系V_K O12的轻链可变序列具有至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，又更优选至少94％，更优选至少95％，又更优选至少99％的序列一致性或序列相似性。甚至更优选地，抗体重链区序列与种系细胞DP50的序列或与种系细胞A27或种系细胞O12的轻链序列具有100％的序列一致性或序列相似性。

在本发明的一个实施方案中，抗体与抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、ipilimumab的重链序列、轻链序列或两者，自FR1至FR4序列与FR1至FR4区的序列具有至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，又更优选至少95％，更优选至少99％的序列一致性或序列相似性。甚至更优选地，抗体与抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1，4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.11、12.9.1.1和ipilimumab自FR1至FR4在重链序列、轻链序列或两者上具有100％的序列一致性或序列相似性。

在本发明另一个实施方案中，抗体与种系细胞DP50的FR1至FR3区序列在重链序列自FR1至FR3具有至少80％，甚至更优选至少85％，又更优选至少90％，又更优选至少95％，更优选至少99％，且最优选大约100％的序列一致性或序列相似性。

还是在本发明的另一个实施方案中，抗体与种系细胞V_KA27或种系细胞V_KO12的FR1至FR4区序列与轻链序列自FR1至FR4具有至少80％，更优选至少85％，又更优选至少90％，又更优选至少95％，更优选至少99％，且最优选大约100％的序列一致性或序列相似性。

在本发明的一个实施方案中，抗体与抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、ipilimumab的重链、轻链或两者、CDR-1、CDR-2及CDR-3序列具有至少80％，更优选至少85％，又更优选至少90％，又更优选至少95％，更优选至少99％的序列一致性或序列相似性。甚至更优选地，抗体与抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、和ipilimumab在重链、轻链或两者、CDR-1、CDR-2及CDR-3序列上具有100％序列一致性或序列相似性。

在本发明的另一个实施方案中，抗体与种系细胞DP50的CDR-1和CDR-2序列的重链CDR-1及CDR-2序列具有至少80％，更优选至少85％，又更优选至少90％，又更优选至少95％，更优选至少99％，且最优选大约100％的序列一致性或序列相似性。

还是在本发明的另一个实施方案中，抗体与种系细胞VK A27或种系细胞V_K O12的CDR-1、CDR-2和CDR-3序列的轻链CDR-1、CDR-2和CDR-3序列具有至少80％，更优选至少85％，又更优选至少90％，又更优选至少95％，更优选至少99％，且最优选大约100％的序列一致性或序列相似性。

可用于本发明的抗体实例及其制备方法尤其描述在以下专利申请中：美国专利申请第09/472,087号，现授权为美国专利第6,682,736号；国际专利申请第PCT/US00/23356号(2001年3月1日以WO01/14424公开)(例如抗体ipilimumab，也称为MDX-010，Medarex，Princeton，NJ)；国际专利申请第PCT/US99/28739(2000年6月8日以WO00/32231公开)：美国专利第5,811,097号、第5,855,887号、第6,051,227号、及第6,207,156号；每个这些专利申请在此并入本说明书中作为参考文献。尽管在此提供了与这些抗体有关的氨基酸及核酸序列的资料，但可以在美国专利第6,682,736号及WO00/37504中发现进一步的资料；这些专利申请中所提出的序列在此并入本说明书中作为参考文献。

将这些抗体用于治疗各种癌症的某些用途在美国专利申请第10/153，3822号(现在以美国专利申请第2003/0086930公开)中进行了讨论，该申请在此并入本说明书作为参考文献如同完全在此提出一样。

用于本发明的方法中的人抗CTLA4抗体的特征在例如美国专利第6,682,736号中进行了广泛的讨论，且其包括具有诸如，但不限于：抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13..1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1，及ipilimumab的抗体的氨基酸序列的抗体。本发明也涉及使用包括这些抗体的重链及轻链的CDR氨基酸序列的抗体的方法，以及使用那些包括如上面引用的专利申请和专利所述的CDR区中的变化的抗体的方法。本发明也涉及包括这些抗体的重链及轻链的可变区的抗体。在另一个实施方案中，抗体是选自包括抗体3.1.1、4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、及12.9.1.1及ipilimumab的重链及轻链的全长、可变区或CDR氨基酸序列的抗体。

尽管前述的抗CTLA4抗体可以是优选的，根据在此公开的内容，专业技术人员要理解的是本发明包括多种抗CTLA4抗体，且不限于这些特定的抗体。更具体来说，尽管优选人抗体，但本发明绝不限于人抗体；此外，本发明包括不管其物种来源的有用抗体，且尤其包括嵌合型、人源化和/或灵长类化抗体。而且，尽管在此例证的抗体是使用转基因的哺乳动物，例如包括人类免疫库(repertoire)的小鼠获得的，根据在此公开的内容，专业技术人员要理解的是本发明并不限于通过此方法或通过任何其它特殊的方法而制得的抗体。相反，本发明包括通过任何方法，其包括但不限于本领域中已知的方法(例如筛选噬菌体展示文库，和类似方法)或未来要研发的产生本发明的抗CTLA4抗体的方法制得的抗CTLA4抗体。根据在此提供的，和例如Hanson等人的美国专利第6,682,736号，和美国专利申请公开第2002/0088014号中所提供的详尽的公开内容，本领域的专业技术人员可使用在此所公开的的新方法可很容易地产生和鉴别与激素治疗剂一起联合用于治疗前列腺癌的抗体。

本发明包括使用转基因非人哺乳动物，即Hanson等人的美国专利第6,682,736号中所公开的XenoMouse^TM(Abgenix，Inc.，Fremont，CA)，而产生的人抗体。

用于产生“人”抗体的另一种转基因小鼠系统被称为“HuMAb-Mouse^TM”(Medarex，Princeton，NJ)，其含有编码未重排的人重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因小位点(gene miniloci)，以及能灭活内源μ和κ链位点的靶向突变(Lonberg等人，Nature368：856-859(1994)，和美国专利第5,770,429号)。

但，本发明使用任何转基因哺乳动物，诸如，但不限于，如在，例如Tomizuka等人，Proc Natl Acad Sci USA97：722(2000)；Kuroiwa等人，Nature Biotechnol18：1086(200)：Mikayama等人的美国专利申请公开第2004/0120948号中所述的Kirin TC Mouse^TM(Kirin BeerKabushiki Kaisha，Tokyo，Japan)；和前述的HuMAb-Mouse^TM(Medarex，Princeton，NJ)和XenoMouse^TM(Abgenix，Inc.，Fremont，CA)而产生的人抗CTLA4抗体。因此，本发明包括使用任何转基因或其它非人动物而产生的抗CTLA4抗体。

在另一个实施方案中，用于本发明方法的抗体并非完全是人的，但是可以经“人源化”的。尤其是，可使用本领域所公知的技术将鼠抗体或来源于其它物种的抗体“人源化”或“灵长类化”。见，例如Winter和Harris Immunol.Today14：43-46(1993)，Wright等人，Crit.ReviewsinImmunol.12：125-168(1992)，及Cabilly等人的美国专利第4,816,567号，及Mage和Lamoyi在Antibody Production Techniques andApplications pp.79-97，Marcel Dekker，Inc.，New York，NY(1987)中的文章。因此，来源于任何物种人源化、嵌合型抗体、抗CTLA4抗体(包括如，例如Casterman和Hamers的美国专利第5,759,808号及第6,765,087号中所述的来源于骆驼科动物的单链抗体)以及任何人抗体，可与治疗剂组合来实践在此公开的新方法。

根据在此公开的内容，要理解的是用于本发明中的抗体可从转基因的非人哺乳动物，及从其衍生的杂交瘤获得，但也可在杂交瘤以外的其他细胞系中表达。

作为用于表达的宿主的哺乳动物细胞系在本领域中是公知的，包括许多来自American Type Collection(ATCC)的永生细胞株，包括，但不限于：中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO、Sp2、HEK、HeLa细胞、幼仓鼠肾脏(BHK)细胞、猴肾脏细胞(COS)、及人肝细胞癌细胞(例如HepG2)。也可使用非哺乳动物的原核细胞及真核细胞，包括细菌、酵母、昆虫、及植物细胞。

可使用本领域中公知的多种表达系统，诸如，但不限于在，例如Sambrook和Russell，Molecular Cloning，ALaboratory Approach，ColdSpring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY(2001)及Ausubel等人，Current ProtocolsinMolecular Biology，John Wiley&Sons，NY(2002)中所述的表达系统。这些表达系统尤其包括基于二氢叶酸还原酶(DHFR)的系统。参考欧洲专利第0216846B1号、第0256055B1，及第0323997B1号，和欧洲专利申请第EP89303964号，全部或部分地讨论了谷氨酰胺合成酶表达系统。在一个实施方案中，使用的抗体是使用谷氨酰胺合成酶系统(GS-NS0)在NS0细胞中制备的。这两种系统在本领域中都是公知的，并特别描述在Barnes等人，Biotech Bioengineering73：261-270(2001)，和在此所引用的参考文献中。

为了防止由非人糖基化作用引起的免疫原性、药物动力学和/或效应器功能发生变化，优选对抗体CH2结构域进行定向诱变以去除糖基化。此外，抗体可通过酶学(见，例如Thotakura等人，Meth.Enzymol.138：350(1987))和/或化学方法(见，例如Hakimuddin等人，Arch.Biochem.Biophys.259：52(1987))进行去糖基化。

此外，本发明包括使用包括糖基化模式改变的抗CTLA4抗体。根据在此公开的内容，专业技术人员能够知道抗CTLA4抗体可被修饰以包括与天然抗体相比额外的、较少的或不同的糖基化位点。这些修饰作用描述在，例如美国专利申请公开号第2003/0207336号和第2003/0157108号，和国际专利公开号第WO01/81405号和00/24893号中。

另外，本发明包括无论是何糖形(即使存在于抗体上)的抗CTLA4抗体。而且，用以广泛地对存在于糖蛋白上的糖形进行改造的方法在本领域中是公知的，且包括，例如描述在国际专利公开号第WO03/031464号、WO98/58964号、及WO99/22764号、及美国专利申请公开号第2004/0063911号、第2004/0132640号、第2004/0142856号、第2004/0072299号、及Umaria等人的美国专利第6,602,684号。

此外，本发明包括使用具有任何本领域公知的具有共价及非共价修饰的抗CTLA4抗体，这些修饰作用包括但不限于，以例如美国专利申请公开号第2003/0207346号及第2004/0132640号、及美国专利第4,640,835号、第4,496,689号、第4,301,144号、第4,670,417号、第4,791,192号、第4,179,337号中所述的方式使多肽与各种非蛋白聚合物(例如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯类)中的任一种连接。

另外，本发明包括使用抗CTLA4抗体或其抗原结合部分、包括例如，人血清蛋白多肽或其片段的嵌合蛋白。嵌合蛋白是否使用重组方法，例如通过克隆编码该嵌合蛋白的嵌合核酸，或这两种肽部分的化学连接，而产生，一旦理解了在此提供的内容，专业技术人员将知道这种嵌合蛋白在本领域中是公知的，且能为本发明的抗体赋予所需要的生物特性，诸如但不限于增加的稳定性和血清半衰期，因此这些分子也包括在本说明书中。

为用于本发明而产生的抗体开始并不需要具有所需的特定同种型。而是，所产生的抗体可具有任何同种型，且可以是以后使用常规的技术进行转换的同种型。这些方法包括直接重组技术(见，例如美国专利第4,816,397号)，和细胞-细胞融合技术(见，例如美国专利第5,916,771号)。

本发明的抗体的效应器功能可被为各种治疗用途而转换成IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM的同种型而改变。而且，可通过使用双特异抗体、免疫毒素或放射性标记物来避免依赖于补体的细胞杀伤作用。

尽管抗体4.1.1、4.13.1和ticilimumab为IgG2抗体，且在本说明书和在此所参考和并入的专利申请和专利中提供了该抗体的可变区序列(图1至3)，要理解的这些抗体的全长序列，以及包括SEQ ID NO：1至36所示的序列的任何抗体的应用，且进一步包括任何恒定区，不管是否是在本文中他处所详述的同种型，都包括在本说明书中。同样，可根据本发明方法使用含ipilimumab的全长序列的抗体或其任何部分，其包括可将ipilimumab的抗原结合部分编码的序列。

因此，一旦了解义中提供的教示，熟练的技术人员很容易知道本发明该抗CTLA4抗体—治疗剂组合可包含多种抗CTLA4抗体.

此外，根据在此公开的内容，本领域技术人员将理解本发明并不限于任何单一抗体的给药；而是，本发明包括给予至少一种抗CTLA抗体(例如4.1.1、4.13.1或ticilimumab中的一种)，并联合给予一种治疗剂。此外，抗CTLA4抗体的任何组合可以与至少一种治疗剂联合使用，且本发明包括任何这种组合及其排列。

在本发明的一个实施方案中，该方法使用名为ticilimumab的抗CTLA4抗体。在本发明的另一个实施方案中，该方法使用在例如以下专利申请及专利中所描述的抗CTLA4抗体：美国专利申请第09/472,087号，现在授权为美国专利第6,682,736号；国际专利申请PCT/US99/30895(2000年6月29日公开为WO00/37504)；美国专利申请第10/612,497号(2004年11月18日公开为US2004/0228858)；美国专利申请第19/776,649号(2004年11月18日公开为US2004/0228861)；国际专利申请PCT/US00/23356(2001年3月1日公开为WO01/14424)(例如抗体10D1，也称为MDX-010，和ipilimumab、Medarex，Prinecton，NJ)；国际专利申请PCT/US99/28739(2000年6月8日公开为WO00/32231)；美国专利第5,811,097号、第5,855,887号、第6,051,227号、和第6,207,156号；Linsley等人的美国专利第5,844,095号；国际专利申请PCT/US92/05202(1993年1月7日公开为WO93/00431)；美国专利申请第10/153,382(2003年5月8日公开为US2003/0086939)；美国专利申请第10/673,738号(2005年2月24日公开为US2005/0042223)；美国专利申请第11/085,368(2005年10月13日公开为US2005/0226875)；美国专利申请第60/624,856号(2004年11月4日提交申请)；美国专利申请第60/664,364号(2005年3月23日申请)；美国专利申请第60/664,653号(2005年3月23日提交申请)；美国专利申请第60/697,082号(2005年7月7日提交申请)；美国专利申请第60/711，707号(2005年8月26日提交申请)。

III.用药方案

可调整用药方案来为本发明的相关方法提供最佳的所需反应。例如可给予单次推注，可以经过一段时间分几次给药或根据治疗状况的紧急性需要按比例减少或增加用药量。为了方便给药用药量的均一性，制成单位剂量形式的胃肠外组合物剂型是有益的。如在此所使用“单位剂量形式”是指适于作为用于要被治疗的哺乳动物受试者的单剂量的物理独立单位；每个单位含有预定量的计算能产生所需治疗效应的活性化合物以及必要的制药学载体。本发明的单位剂量形式的规格由下列因素规定和直接取决于下列因素：(a)该抗体的独特特性和要达到的特定治疗或预防效果，及(b)本领域对将用于治疗个体的这种活性化合物的配制的固有限制。

应注意根据要缓解的不良状况的类型及严重性，用药数值可有所不同。应进一步理解的是就任何特定的受试者而言，根据个体的需要和负责或监督该组合物给药的人的专业判断，具体的用药方案应该随时间而进行调整，在此提出的用药量范围仅是为了举例，并无意限制权利要求中要求保护的组合物的范围或应用。

根据本发明给予的抗体的治疗有效量的非限制性实例范围为至少约1mg/kg、至少约5mg/kg、至少约10mg/kg、超过约10mg/kg或至少约15mg/kg，例如约1-30mg/kg或，例如约1-25mg/kg或，例如约1-20mg/kg或，例如约5-20mg/kg或，例如约10-20mg/kg或，例如约15-20mg/kg或，例如约15mg/kg。在一个实施方案中，该用量为10mg/kg。在另一个实施方案中，该用量为15mg/kg。

此外，可使用剂量递增方案来测定与抗体-激素疗法联合治疗有关的最大耐受剂量(MTD)，若有的活，评估剂量限制毒性(DLT)。剂量递增方案包括增加剂量，诸如，但不限于0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg，及15mg/kg或其任何组合。在另一个实施方案中，连续给予3mg/kg、6mg/kg及10mg/kg的剂量，且评估该患者的毒性反应(若有的活)，以及尤其是评估治疗疗效。

在一个实施方案中，该抗体以静脉制剂如在合适缓冲液系统中含约5-20mg/ml的抗体的无菌水溶液进行给药。

在一个实施方案中，部分剂量通过静脉推注给药，剩余剂量通过抗体制剂输注给药。例如抗体的0.01mg/kg静脉注射液可推注给药，预定抗体剂量的剩余部分可经静脉输注给药。可以在，例如约1.5小时至约5小时的时间内给予预定剂量的抗体。在一个实施方案中，该抗体以每小时约100毫升的速率以单次静脉输注的方式给药，该速率更优选为每小时约200毫升，且该输注速率可有专业技术人员根据本领与公认的方法来确定。

在一个实施方案中，可给予该抗体的单次剂量或多次剂量。每天可频繁地至数次给予人体抗CTIA4抗体，或可较不太频繁地给予，诸如一天一次、一周一次、两周一次、一个月一次或甚至更不频繁，诸如每几个月一次或甚至每年一次或更少。可，例如每两周、每月、每20天、每25天、每28天、每30天、每40天、每50天、每两个月、每70天、每80天、每三个月、每六个月或每年给予该用药量。此外，激素治疗剂可每天数次、每天一次、每周数次、每周一次、每隔一周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每三个月一次、每六个月一次、每年一次或以位患者提供有益的治疗效果的任何其它时间进行给药。该用药量的给药频率对于专业技术人员来说是显而易见的，且其取决于许多因素，诸如但不限于，要治疗疾病的类型及严重性，及患者的年龄等。

在木发明的一个实施方案中，其中抗体和激素疗法的给药相重叠，抗体和激素治疗剂可共同给予，因为它们可单独给药，或在一天的不同时刻，以及同时给药，或在同一天，这样共同给药实质上是同时进行的。共同给药因此包括该抗体和激素治疗剂实质上同时进行给药，这样这两种成分的给药可对患者产生有益的治疗效果，且这种可检测到的有益效果比只给予一种药剂而不给予另一种药剂要高。

另外，在本发明的某些实施方案中，给予了抗体及激素治疗剂，其中激素治疗剂在给予抗体前给予，且在激素治疗剂的最后一次用药与抗体给药之间有一段休息期。休息期的持续时间可根据本领域公知的各种因素来进行调整。

如前所述，在某些实施方案中，抗体和激素治疗剂组合可进一步与许多其它化合物(尤其是其它治疗剂、细胞因子、化疗和/或抗病毒药物)联合应用。可选的是，(多种)化合物可以在抗体-治疗剂组合之前的一小时、一天、一周、一个月或甚至更长的时间给药，或其任何排列方式。此外，(多种)化合物可以在放射、干细胞移植的给药或任何治疗剂(例如细胞因子、化疗化合物，和类似药物等)的给药后一小时、一天、一周或更长的时间给予。频率及给药方案对于专业技术人员来说是显而易见的，且将取决于多种因素，诸如，但不限于：要治疗疾病的类型及严重性、动物的年龄及健康状况、要给予的化合物或多种化合物的性质、多种化合物的给药途径，和类似因素。

根据本领域中公知的标准给药方案优选以皮下注射(s.c.)或肌肉内注射(i.m.：LUPRON DEPOT)的途径给予亮丙瑞林，该给药方案尤其包括每天、每月、每隔一月、以三个或四个月间隔和类似间隔给予该化合物。而且，可调整亮丙瑞林/LUPRON DEPOT的用药量，取决于专业技术人员所了解的各种因素，其常规范围可以是从经s.c.每天给予大约1mg的亮丙瑞林至大约3.5mg，每月经i.m.给予LUPROND DEPOT每次用药量为7.5mg，每三个月给予LUPROND DEPOT，每次用药量为11.23mg和22.5mg，每四个月给予LUPRON DEPOT，每次用药量为大约30mg。在本领域中已知的许多其他给药方案中，可选的方案尤其包括每天以单次皮下注射1mg的亮丙瑞林，每三个月以一次肌肉内注射22.5mg的方式给予亮丙瑞林。在本发明的某些实施方案中，抗CTLA4抗体在亮丙瑞林给药期间、之前或之后的任何时间给药。优选亮丙瑞林每28天肌肉内注射给药，同时静脉给予抗CTLA4抗体。更优选亮丙瑞林以大约7.5mg的用量经肌肉内给药。

在本发明的实施方案中，其中亮丙瑞林和抗体的给药相重叠，尤其是其中该抗体与亮丙瑞林和比卡鲁胺一起给药，亮丙瑞林/抗体以28天的周期给药三个周期。任选地，在前列腺切除术后另外给予至少一个周期的亮丙瑞林/抗体。更优选，在手术后给予大约3个周期的亮丙瑞林/抗体。甚至更优选，在手术后的45天内开始进行手术后的第一个周期，以维持患者体内存在的抗体治疗水平。

比卡鲁胺的给药可根据本领域中公知的标准给药方案进行。简言之，优选每天以从大约50mg至200mg的用量范围给予比卡鲁胺一次。优选经口(peros)给予比卡鲁胺，其给药量为每天大约50mg。更优选，在第一个用药周期的前14天给予比卡鲁胺，又更优选，在该第一个周期(D1)的第一天共同给予比卡鲁胺、亮丙瑞林和抗CTLA4。之后优选14天后(D14)后中断比卡鲁胺的给药。在一个实施方案中，在D28及D56时共同给予亮丙瑞林和该抗体。更优选通过i.m.注射给予大约7.5mg的亮丙瑞林，通过i.v.输注给予剂量范围为从大约1mg/kg至20mg/kg的该抗体，在另一个实施方案中，该抗体剂量范围为从大约3mg/kg至15mg/kg，而在另一个实施方案中，为大约3mg/kg至10mg/kg。

根据在此公开的内容，专业技术人员要理解的是用药量和用药方佛可根据本领域中公知的方法来进行调整。即，很容易确定最大耐受剂量，且也能确定为患者提供可检测到的有益治疗效果的有效剂量。因此，尽管在此例举了某些用药量和给药方案，但是这些实施例决不限制在实施本发明时能提供给患者的用药量和给药方案。此外，一旦理解了在此提供的教授内容，本领域专业技术人员将理解的是，有益的治疗效果诸如，但不限于；在许多其它参数中尤其是肿瘤大小和/或转移的可检测到的减少、PSA水平的降低、复发的间隔时间延长，可通过本领域中已知的许多种用于评价前列腺癌治疗疗效的方法来进行评，且这些方法以及未来要被开发的许多方法包括在本说明书中。

在一个实施方案中，对患者经静脉给予包括抗CTLA4抗体的单次推注注射液，其剂量范围为大约每28天从大约1mg/kg至20mg/kg。在本发明的另一个实施方案中，以每28天大约10mg/kg的剂量给予ticilimumab。还是在另一个实施方案中，以每三个月大约15mg/kg的剂量给予ticilimumab。在给予抗体的第一天时给予一定剂量的LH-RH促效剂(亮丙瑞林)，且其后大约每28天给予一次。优选抗体和亮丙瑞林在每个用药周期的同一天内共同给予。在另一个实施方案中，每28天给予亮丙瑞林，而ticilimumab每三个月给予。另外，从共同给予抗体和亮丙瑞林的当天开始每天给予比卡鲁胺14天。优选在随后的用药周期期间不给予比卡鲁胺；但，可在随后的周期中和/或超过14天时给予比卡鲁胺。此外，本发明包括在抗体给药期间的任何时间点给予比卡鲁胺和/或亮丙瑞林，且本发明决不限制与抗体和激素治疗剂相关的给药。因此，激素疗法可以在抗体给药之前、期间和/或之后给予。

IV.药学组合物

本发明包括药学组合物的制备和应用，该药学组合物包括抗CTLA4抗体或其抗原结合部分，以及独立选自例如抗雄激素、GnRH拮抗剂，及LH-RH促效剂的至少两种激素治疗剂。这种药学组合物可由以适合给予受试者的形式的仅抗体或仅激素治疗剂的每一种(例如有效剂量的抗CTLA4、有效剂量的至少一种激素治疗剂)组成，或该药学组合物可包括抗体或激素治疗剂和一种或多种药学上可接受的载剂、一种或多种其它(活性和/或无活性)成分或这些组分的其它组合。

在一个实施方案中，抗体以水溶液经胃肠外(例如经静脉)给药，而激素治疗剂(例如抗雄激素、GnRH拮抗剂、LH-RH促效剂和类似药物)以丸剂/胶囊形式给药。但，根据在此公开的内容，专业技术人员将理解本发明并不限于这些或任何其它的制剂、剂量、给药途径和类似因素。而是，本发明包括将抗体和激素治疗剂联合给药的任何制剂或方法，包括，但不限于：经不同的给药途径分别给予不同制剂中的各种药剂(例如经静脉给予抗CTLA4抗体，而共同给予非类固醇抗雄激素(比卡鲁胺)(经口)和LH-RH促效剂(亮丙瑞林)(经肌肉内注射))，和尤其以单一组合物(例如尤其经静脉给予水性组合物)给予抗体和激素疗法(例如第二种抗CTLA4抗体，诸如，但不限于：尤其是ipilimumab)。因此下面的讨论描述了实施本发明的方法的各种制剂，其包括联合给予任何抗CTLA4抗体和任何激素治疗剂，但是本发明并不限于这些制剂，但包括本领域专业技术人员一旦理解了在此提供的教授内容之后很容易确定用于本发明的方法中的任何制剂。

本发明中使用的抗体可加入至适用于对患者给药的药学组合物中。一般该药学组合物包括抗体和药学上可接受的载剂。如在此所使用的“药学上可接受的载剂”包括任何和所有生理学相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗及吸收延缓剂和类似物。药学上可接受的载剂的实例包括水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、海藻糖、甘油、乙醇和类似物中的一种或多种以及其组合。在许多情况下，优选该组合物中包括等渗剂，例如糖类、多元醇类诸如甘露醇、山梨糖醇、或氯化钠。药学上可接受的物质，诸如湿润的或微量辅助物质诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，它们可增加该抗体或抗体部分的有效期或药效。

抗体可以具有各种形式。这些形式包括，例如液体形式，诸如液体溶剂(例如可注射的和可输注的溶液)、分散液或悬浮液和脂质体。优选的形式取决于预计使用的给药方式及治疗应用。一般优选的组合物是可注射的或可输注溶液的形式，诸如类似于那些采用其他抗体用于人类被动免疫作用的组合物。优选的给药方式是胃肠外给药(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)。在一个优选的实施方案中，抗体通过静脉内输注或注射给药。在另一个优选的实施方案中，抗体通过肌肉内或皮下注射给药。

治疗组合物一般在制造和贮存条件下必须是无菌的和稳定的。该组合物可制成为溶液、微乳液、分散液、脂质体或适于高药物浓度的其它有序结构。通过将所需量的该抗体和及上面列举的成分中的一种或组合加入至合适的溶剂中，根据需要接着进行过滤除菌制成无菌可注射溶液。一般而言，通过将活性化合物加入至含有碱性分散介质和所需的上面列举的其他成分的无菌溶媒中制成分散液。对于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂而言，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，能从先前其无菌过滤溶液中产生活性成分家加任何其它所需成分的粉剂。可，例如通过使用包衣(诸如卵磷脂)、通过保持所需粒径(就分散液而言)和通过使用表面活化剂，来保持溶液的合适流动性。可通过在组合物中包括能延缓吸收的药剂(例如单硬脂酸盐类及明胶)产生可延长吸收的可注射组合物。

可通过本领域已知的各种方法给予抗体，其包括，但不限于：经口、胃肠外、粘膜、吸入、局部、经颊、经鼻、和经直肠给药。对于许多治疗应用，优选的给药途径/方式为皮下、肌肉内、静脉注射或输注。如果需要，可使用无针注射。如专业技术人员所了解的，给药途径和/或方式将根据所需的结果而进行变化。

在某些实施方案中，可使用能防止该化合物快速释放的载剂来制备抗体，如可控释放制剂，其包括植入物、透皮贴剂和微囊递送系统。可使用生物可降解的、生物相容性聚合物诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚羟基乙酸、胶原、聚原酸酯及聚乳酸。制备这些制剂的许多方法已取得专利或普遍为本领域专业技术人员所公知。见，例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson，主编，Marcel Dekker，Inc.，New York(1978)。

在一个实施方案中，抗体作为含有5或10mg/ml的抗体，及乙酸钠、聚山梨酯80和氯化钠(pH范围为从大约5至6)的无菌水溶液以静脉制剂给药。优选该静脉制剂是含有5或100mg/ml的抗体，及20mM乙酸钠、0.20mg/ml聚山梨酯80和140mM氯化钠(pH为5.5)的无菌水溶液。

在本发明的另一个实施方案中，抗体以包括20mM组氨酸缓冲液(pH5.5)、840mg/ml海藻糖二水合物、0.20mg/ml聚山梨酯80和0.10mg/ml EDTA二钠二水合物的无菌溶液给药。在一个方面，该制剂包装在带有橡胶塞及铝封条的透明玻璃瓶内。在另一个方面，每瓶含有大约20mg/ml的抗体，每一瓶的标称填充量为大约400mg。

就激素治疗剂而言，该药剂可以生理学可接受的酯或盐的形式存在于该药学组合物中，如本领域所公知的，诸如与生理学可接受的阳离子或阴离子组合。

可通过任何已知或药理学领域中以后开发的方法制备在此所述的的药学组合物的制剂。一般而言，这些制备方法包括将活性成分与一种载剂或一或多种其它的辅助成分组合在一起，然后如果必要或需要，将该产物成形或包装成所需的单或多剂量单位。

本发明的药学组合物可大量地以单剂量单位，或多个单剂量单位进行制备、包装或出售。如在此使用的“单位剂量”是包括预定量的活性成分的单独量的药学组合物。活性成分的数量通常等于要给予受试者的活性成分的剂量或这种剂量的适宜部分，例如该剂量的一半或三分之一。

活性成分、药学可接受的载剂和在本发明的药学组合物中的任何其它成分的相对用量的变化取决于要治疗受试者的性质、大小及状况而发生变化，且进一步取决于该组合物要被给药的途径。作为实例，组合物可包括0.1％和100％(w/w)之间的活性成分。

除了活性成分之外，本发明的药学组合物可进一步包括一种或多种其它的药学活性药剂。特别考虑的其它药剂包括止吐剂、止泻剂、化疗剂、细胞因子和类似药剂。

可使用常规技术来制备本发明药学组合物的可控或持续释放制剂。

如在此所使用的药学组合物的“胃肠外给药”包括其特征为可物理性破坏患者组织，并通过该组织的破坏而给予该药学组合物的给药途径。因此胃肠外给药包括，但不限于：通过注射该组合物、通过手术切口而施用该组合物、通过穿透组织非手术伤口而施用该组合物和类似的方式给予药学组合物。尤其是，考虑胃肠外给药包括，但不限于：皮下、腹膜内、肌肉内、胸骨内注射，和肾透析输注技术。

适用于胃肠外给药的药学组合物的制剂包括与药学可接受的载剂(诸如无菌水或无菌等渗盐水)组合的活性成分。这种制剂可以适于快速推注给药或连续给药的形式进行制备、包装或出售。可注射制剂可以单位剂型，诸如以安瓿或含防腐剂的多剂量容器来进行制备、包装或出售。胃肠外给药制剂包括但不限于：悬浮液、溶液、在油性或水性溶媒中的乳液、糊状物和如下所讨论的可植入的持续释放或生物可降解的制剂。这种制剂可进一步包括一种或多种其它成分，其包括，但不限于：悬浮剂、稳定剂或分散剂。在胃肠外给药的制剂的一个实施方案中，该活性成份以干燥(即，粉剂或颗粒剂)形式提供，以便在重新配制的组合物进行胃肠外给前，使用合适的溶媒(例如无菌无热原水)进行重新配制。

药学组合物可以无菌可注射水性或油性悬浮液或溶液的形式进行制备、包装或出售。可根据已知技术来配制该悬浮液或溶液，且除了该活性成分外，可包括其它成分，诸如在此所述的分散剂、润湿剂或悬浮剂。这种无菌可注射制剂可使用无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂(诸如水或1，3-丁二醇)来进行制备。其它可接受的稀释剂及溶剂包括，但不限于：林格氏溶液(Ringer’s solution)、等渗氯化钠溶液，及不挥发油类，诸如合成的单甘油酯或甘油二酯。可使用的其它胃肠外给药制剂包括那些包括微晶形式、脂质体制剂或作为生物可降解聚合物系统的组分的活性成份的制剂。用于持续释放或移植的组合物可包括药学可接受的聚合物或疏水性物质，诸如乳液、离子交换树脂、略溶性(sparingly soluble)聚合物或略溶性盐。

V.试剂盒

本发明包括用于治疗前列腺癌的各种试剂盒。在一个实施方案中，该试剂盒用于治疗激素依赖性前列腺癌，且包括治疗有效量的抗CTLA4抗体或其抗原结合部分，以及治疗有效量的至少两种激素治疗剂，以及给药器和描述该组合来实施本发明方法的使用说明书。尽管下面描述了例举的试剂盒，但根据本说明书的公开内容，其他可使用的试剂盒的内容物对于专业技术人员来说是显而易见的。这些试剂盒的每一种都包括在本发明之内。

本发明包括用于治疗需要此治疗的患者的非激素依赖性前列腺癌的试剂盒。该试剂盒包括本发明的人抗CTLA4抗体和至少一种激素治疗剂。该试剂盒进一步包括给药器，其包括，但不限于：用于将该试剂盒的各种组分给予患者的注射器。此外，该试剂盒包括了说明与应用该试剂盒来治疗患者前列腺癌的有关信息的使用说明书。

在一个实施方案中，该试剂盒包括至少一种选自4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1和10D1(ipilimumab：MDX-010，Medarex)的抗CTLA4抗体，甚至更优选的，该抗体选自4.1.1、4.13.1、6.1.1、ticilimumab和ipilimumab。更优选该抗体选自4.1.1、4.13.1、4.14.3、6.1.1和ticilimumab。

在一个实施方案中，激素治疗剂是尤其选自抗雄激素、GnRH拮抗剂、和LH-RH促效剂的至少一种药剂。在一个方面，抗雄激素为类固醇或非类固醇抗雄激素。在另一个方面，非类固醇抗雄激素尤其选自比卡鲁胺、尼鲁米特、氟他胺。类固醇抗雄激素选自甲地孕酮、去乙酰环丙氯地孕酮和类似药物。还是在另一个方面，GnRH选自阿巴瑞克和组氨瑞林。且在另一个方面，LH-RH选自亮丙瑞林、戈舍瑞林、布舍瑞林和曲普瑞林、和类似物。

本发明包括用以治疗非激素依赖性前列腺癌的试剂盒，其中该试剂盒包括抗CTLA4抗体及任何激素治疗剂(诸如，但不限于亮丙瑞林、比卡鲁胺和抗体)的任何组合。尽管优选此试剂盒，但本发明并不限于该特殊的组合。而是，该试剂盒可包括已知能减少雄激素水平的已知激素治疗剂的任何组合。此外，该试剂盒可包括用于治疗癌症的多种其它药剂。这些药剂已前面有所描述，其包括化疗化合物、癌症疫苗、信号转导抑制剂、用以治疗异常细胞生长或癌症的药剂、通过与IGF-1R结合而抑制肿瘤生长的抗体或其它配体、化疗剂(尤其是紫杉烷、长春花生物践、铂化合物、嵌入性抗生素)、和尤其是细胞因子，以及用于治疗，例如在治疗期间发生的任何毒性的缓解剂。

在此引用的每一件专利、专利申请和出版物的公开内容的全文在此并入本案作为参考文献。

本发明可参考以下的实施例来进一步详细说明。除非另外说明，这些实施例仅用于说明，且无意限制本发明。因此，本发明绝不应被视为限于以下实施例，而应该被视为包括由于在此提供的教授内容而显而易见的任何和所有变化形式。

实施例

实施例1：

在高危前列腺癌的新辅助治疗中联合使用抗CTLA4和至少两种激素治疗剂

适于接受根治性前列腺切除术的前列腺癌患者和根据现有医学标准具有中度或高度复发危险的患者皆为接受抗体-激素联合新辅助治疗的候选者。本研究的目标群体规定为使用生化复发的危险而非病理学上局限癌症的可能性。通过以下观察支持了这种方法：尽管接受“确定性”局部治疗，疾病局限于前列腺的患者仍可具有生化性的复发。因此，该患者的界定应更广泛。考虑最近的资料显示达到PSA复发的时间少于2年预示远期的复发，具早期PSA复发高危险性的患者为使用在此所公开的的新辅助(及辅助)抗体-激素联合治疗的候选者人。

对于所有患者，在用药之前评价ECOG(Eastern CooperativeOncology Group(东部肿瘤协作组))体能状况、生命体征及体重，根据临床上需要，生命体征可在用药后重复评价。在第一天时进行体检(包括眼科评价和自身免疫的体征)。获取用于血液学盘(血细胞比容、RBC计数、WBC计数、分类)、化学盘(碱性磷酸酶、钙、氯化物、GGT、LDH、镁、磷、任意葡萄糖、钠、尿素、尿酸)、尿液分析(包括蛋白尿及尿沉渣)、和其它项目(活化部分凝血激酶时间[APTT]、凝血酶原时间(PT)、自身抗体盘、C反应蛋白、TSH、T3、T4、淀粉酶、脂酶、血清C3、C4、血清Ig水平、PSA水平)的标本。

测定基线人抗人抗体(HAHA)滴定度并在给药前获得药物动力学(PK)标本。在抗体输注后0小时(刚好在施药前)和1小时时获得药物动力学资料。

于第14天评价ECOG PS和不良事件(若有的话)。获得用于血液学、化学实验室、及PT、APTT、CRP和PSA的标本。

手术前，大约在抗体-激素联合治疗最后一个周期结束后和已排定的前列腺切除术前，完成下列的评价：任何不良事件、ECOG PS、生命体征及体重、体检(包括自身免疫体征)、ECG及DRE。获得用于血液学及化学盘、以及PT、APTT、CRP和PSA的标本。

手术后大约两周，进行手术后的评价。该评价包括体检(包括自身免疫)、生命体征、ECOG体能状况、体重、血液学和化学盘、PT、APTT、TSH、T3、T4、淀粉酶、脂酶、CRP、尿液分析。另外获取用于检测自身抗体盘、PSA、睾丸酮、HAF滴定度和PK的标本。对所有患者的手术标本和不良事件进行病理学评价。

对于未接受其他周期的抗体-激素联合治疗的患者，在手术后评价后的约一个月对这些患者进行评价。评价患者的ECOG PS、体检(包括自身免疫)、及直肠指检。也获得用于PSA的血液标本。

患者每三个月进行评估，直到疾病复发或PSA进展或最长24个月或直到开始替代的治疗方案，任一种先达到都可以。

已证明具有病理学反应的患者在不使用激素治疗法的情况下，每28天可任选地接受达到3次另外的抗体周期。优选该抗体在手术后的45天内对患者给药。

于第1天及第14天对患者进行评价并如前述对该抗体-激素联合治疗的各个周期进行随访。

测定以下终点：PK参数、HAHA、反应率及进展时间。使用卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)乘积极限法计算进展时间和总生存率。

该抗体装在带有橡胶塞及铝封条的10毫升透明小玻璃瓶内。每瓶含有包括20mM乙酸钠、0.2mg/ml聚山梨酯80和140mM氯化钠(pH5.5)的无菌水溶液中的5mg/ml(小玻璃瓶具有50mg/瓶的标称装填量)抗CTLA4抗体。

在输注抗CTLA4前的至少半小时，对患者预先给予抗组织胺(H1)，但是预先给药并非必要。

对患者联合给予亮丙瑞林(LUPRON)和比卡鲁胺(CASODEX)以及抗CTLA4抗体(ticilimumab)。更具体来说，在第一天(D1)对该患者单次IV输注剂量为1mg/kg、3mg/kg或6mg/kg的抗CTLA4抗体(100mL/hr)，以及7.5mg的亮丙瑞林IM注射液(LUPRON DEPOT)。每种剂量最少给予3名患者。该研究修改为以较低剂量水平(即1mg/kg)重新开始剂量递增。3名患者接受该剂量水平并接受手术(3个月联合治疗后)。剂量递增持续至3mg/kg。剂量递增在6mg/kg和10mg/kg时进行。

从第一天(D1)开始前14天，每天一次以50mg剂量以片剂形式口服比卡鲁胺(CASODEX)。优选在D1至D14天每天在相同时刻服用比卡鲁胺，且使用患者药疗日记来记录比卡鲁胺用药的任何中断。

根据需要，给予预防性止吐药和止泻药。对于手术前的最大3个周期(D1、D28，及D56)，在输注抗体和7.5mg的LUPRON DEPOT IM注射液28天后重复该治疗。

任选地递增抗体剂量，例如从1至3mg/kg、从3至6mg/kg、和从6至10mg/kg，和类似剂量范围。使用加速滴定设计方案利用剂量加倍计划对每组3-6名受试者进行剂量递增。在各个新组内，在受试者之间不需要等待时间。直到在目前剂量水平下观察第一位受试者21天，并观察之后的受试者14天时再开放随后的分组。除非毒性或任何其它不良指征需要减少剂量，否则更优选保持该起始剂量。

手术后，优选在前列腺切除术的45天内，另外给予达到3个周期的抗体-激素联合治疗。手术后，每28天共同给予抗体(IV)和7.5mg亮丙瑞林(IM)，不给予比卡鲁胺。

值得注意的是在黑色素瘤的单剂研究中，以6mg/kg的ticilimumab治疗的3名患者中有一名发生了3级腹泻，而以6mg/kg多剂量治疗的患者没有一个发生腹泻。相反，在本研究中，用激素疗法和CTLA4阻断联合治疗的3名患者中有两名发生3级腹泻。最值得注意的是，在任何剂量水平下，腹泻的严重性(持续时间及程度)明显高于先前在任何其它研究中所发现的腹泻。例如接受3mg/kg ticilimumab和激素疗法的患者显示腹泻时间延长。这表明激素疗法和ticilimumab之间发生了交互作用，这样就增强了ticilimumab诱发腹泻的能力。腹泻被认为药物介导的，因为其腹泻有可能与ticilimumab的作用机制有关。因此，这些数据表明HT和CTLA4阻断之间有生物学相互作用，推测腹泻是一种免疫介导效应。因此，这些数据表明在由激素疗法和CTLA4阻断介导的潜在免疫介导效应之间可能有关联。已有报道对于在无任何其他治疗的情况下的单剂CTLA4阻断，黑色素瘤中的肿瘤反应可能与推测的“自身免疫突破事件”之间存在关联(见Attia等人，J Chin Oncol.23(25)：6043-6953(2005))。因此，由本研究中所观察到的腹泻严重性增加的数据表明由激素疗法和抗体疗法可介导协同作用。

以6mg/kg ticilimumab(也称为抗体11.2.1或CP-675,206)的一组3名患者加入试验中。3名患者(患者编号1005-1004)仍然留在研究中并进行了前列腺切除术。前列腺切除标本显示了可检测到的肿瘤消退及肿瘤细胞周围炎性浸润物的征象(图4)。即，经3个月的抗体疗法和激素疗法(亮丙瑞林和比卡鲁胺)后，在从患者获得前列腺切除标本中可检测到广泛的治疗效果和淋巴细胞浸润。其他两名患者发生了腹泻且没有完成本研究。

在来自用1mg/kg和6mg/kg治疗的几名患者的前列腺切除标本中观察到了治疗效果的证据。这些效果包括癌症的消退和良性前列腺腺体组织、淋巴细胞浸润(见图4)，和急性与慢性炎症的征象。在腺体组织中观察到的变化以及炎症和免疫变化的幅度都不能单单归因于雄激素阻断，因此表明抗CTLA4抗体11.2.1(也称为ticilimumab)对该前列腺腺体组织发生了免疫介导作用。

实施例2：

在临床性局限性前列腺癌的辅助治疗中联合使用抗CTLA4至少两种激素治疗剂

在每个激素治疗方案中对患有临床性局限性前列腺癌的患者给予(在放疗之前和期间)戈舍瑞林(ZOLADEX)和氟他胺(EULEXIN)，例如给予250mg EULEXIN每天3次(tid)，且每月经皮下给予3.6mgZOLADEX，总共给药4个月(放疗前2个月和放疗期间2个月)。可选的方案是，该患者再另外接受ZOLADEX24个月的治疗。这种用于辅助治疗的给药方案，一般与放疗一起使用，但不同时接受手术或在手术后使用，其描述在例如Hanks等人，J Chin Oncology21：3972-3978(2003)中。

进一步对该患者单次IV输注如在此所述的ticilimumab(100mL/hr)，其剂量为大约3mg/kg或6mg/kg或10mg/kg或15mg/kg。根据需要，可给予预防性止泻药。在已接受的初始剂量下用抗CTLA4治疗28天后，此后在没有不可耐受的毒性或疾病进展的情况下，优选不递增剂量，每28天重复该治疗至最大12个周期。可选的方案是，每3个月给予该抗体。ZOLADEX与抗体共同给药和/或每28天以3.6mg皮下给药。

优选在输注ticilimumab之前至少半小时预先给予该患者抗组织胺(H1)。推荐预先给药但并非必须。

也可给予具有止泻作用的药剂，其包括适用于治疗胃肠道慢性炎性疾病的药剂。这些药剂尤其包括具有局部活性的类固醇(例如布地奈德[ENTOCORT])，和抗肿瘤坏死因子(TNF)药物(例如英夫利昔单抗[REMICADE]、依那西普[ENBREL]和阿达木单抗[HUMIRA])。

Ticilimumab装在带有橡胶塞及铝封条的20毫升透明小玻璃瓶内。每瓶含有包括20mM组氨酸缓冲液(pH5.5)、84mg/ml海藻糖二水合物、0.2mg/ml聚山梨酯80、和0.1mg/ml EDTA二钠二水合物的无菌水溶液中的20mg/ml(标称装填量为400mg/瓶的)ticilimumab。

对于所有患者，在用药之前评价ECOG体能状况、生命体征及体重，根据临床上需要，生命体征可在用药后重复评价。在第一天时进行体检(包括眼科评价和自身免疫的体征)。获取用于检测血液学盘(血细胞比容、RBC计数、WBC计数、分类)、化学(碱性磷酸酶、钙、氯化物、GGT、LDH、镁、磷、任意葡萄糖、钠、尿素、尿酸)、尿液分析(血细胞、蛋白)、和其它项目(活化部分凝血激酶时间[APTT]、凝血酶原时间(PT)、自身抗体盘、C反应蛋白、TSH、T3、T4、淀粉酶、脂酶、血清C3、C4、血清Ig水平)和PSA水平的标本。

测定基线人抗人抗体(HAHA)滴定度并在用药前获得药物动力学(PK)标本。

测定以下终点：PK参数、HAHA、反应率及进展时间。使用卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)乘积极限法(product limit method)计算进展时间和总生存率。

抗CTLA4抗体具有选自4.1.1、4.13.1、ticilimumab和ipilimumab的至少一种抗体的重链及轻链氨基酸序列。该抗体具有ticilimumab的重链及轻链氨基酸序列。该抗CTLA4抗体为ticilimumab。

实施例3：

在PSA升高的前列腺癌患者的治疗中联合使用抗CTLA4和至少两种激素治疗剂

根据标准激素治疗方案，对手术或放疗后PSA升高的前列腺癌患者给予亮丙瑞林(LUPRON)或戈舍瑞林(ZOLADEX)(给予或不给予比卡鲁胺(CASODEX)或氟他胺(EULEXIN))，例如，大约每4周经肌肉内给予7.5mg LUPRON，大约每4周经皮下给予3.6mg ZOLADEX，仅在第一个周期的14天每天给予50mg CASODEX，并每天一日3次给予250mg EULEXIN。进一步以大约1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg或15mg/kg的剂量对该患者单次IV输注如在此所述的ticilimumab(100mL/hr)。根据需要可给予预防性止泻剂。

此后在没有不可耐受的毒性或疾病进展的情况下，不递增剂量，每28天重复该治疗。每28天以7.5mg经1M给予LUPRON。

优选在输注抗CTLA4之前至少半小时预先给予该患者抗组织胺(H1)。推荐预先给药但并非必须。

对于所有患者，在用药之前评价ECOG体能状况、生命体征及体重，根据临床上需要，生命体征可在用药后重复评价。在第一天时进行体检(包括眼科评价和自身免疫的体征)。获得用于检测血液学盘(血细胞比容、RBC计数、WBC计数、分类)、化学(碱性磷酸酶、钙、氯化物、GGT、LDH、镁、磷、任意葡萄糖、钠、尿素、尿酸)、尿液分析(血细胞、蛋白)、和其它项目(活化部分凝血激酶时间[APTT]、凝血酶原时间(PT)、自身抗体盘、C反应蛋白、TSH、T3、T4、淀粉酶、脂酶、血清C3、C4、血清Ig水平)和PSA水平的标本。

实施例4：

在非激素依赖性转移性前列腺癌的一线或二线治疗中联合使用抗 CTLA4和至少一种激素治疗剂

根据标准激素治疗方案，对转移性前列腺癌患者(手术或放疗后)给予亮丙瑞林(LUPRON)和比卡鲁胺(CASODEX)，例如，仅在第一个周期的14天每天给予50mg CASODEX，大约每4周经肌肉内给予7.5mg LUPRON。进一步以大约1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg或15mg/kg的剂量对该患者单次IV输注如在此所述的抗-CTLA4抗体(100mL/hr)。根据需要可给予预防性止吐剂及止泻剂。

此后在没有不可耐受的毒性或疾病进展的情况下，不递增剂量，每28天重复该治疗。每28天以7.5mg经IM给予LUPRON。

实施例5：

根据标准激素治疗方案，对转移性前列腺癌患者(手术或放疗后)给予亮丙瑞林(LUPRON)和比卡鲁胺(CASODEX)，例如，仅在第一个周期的14天每天给予50mg CASODEX，大约每4周经肌肉内给予7.5mg LUPRON。进一步以大约15mg/kg的剂量对该患者单次IV输注如在此所述的抗-CTLA4抗体(100mL/hr)。根据需要可给予预防性止吐剂及止泻剂。

在没有不可耐受的毒性或疾病进展的情况下，不递增剂量，每3个月重复给予该抗体。每28天以7.5mg经IM给予亮丙瑞林。

Ticilimumab装在带有橡胶塞及铝封条的20毫升透明小玻璃瓶内。每瓶含有包括20mM组氨酸缓冲液(pH5.5)、84mg/ml海藻糖二水合物、0.2mg/ml聚山梨酯80、和0.1mg/mi EDTA二钠二水合物的无菌水溶液中的20mg/ml(标称装填量为400mg/瓶的)ticilimumab。

对于所有患者，在用药之前评价ECOG体能状况、生命体征及体重，根据临床上需要，生命体征可在用药后重复评价。在第一天时进行体检(包括眼科评价和自身免疫的体征)。获得用于检测血液学盘(血细胞比容、RBC计数、WBC计数、分类)、化学(碱性磷酸酶、钙、氯化物、GGT、LDH、镁、磷、任意葡萄糖、钠、尿素、尿酸)、尿液分析(血细胞、蛋白)、和其它项目(活化部分凝血激酶时间[AP TT]、凝血酶原时间(PT)、自身抗体盘、C反应蛋白、TSH、T3、T4、淀粉酶、脂酶、血清C3、C4、血清Ig水平)和PSA水平的标本。

实施例6：

在激素依赖性前列腺癌的治疗中序贯地联合使用抗CTLA4和激素药剂

根据标准激素治疗方案，对激素依赖性前列腺癌患者(包括没有接受先前激素治疗的患者)给予至少一个疗程的包括至少一种激素治疗剂的激素治疗(例如，尤其是，大约每4周经肌肉内给予7.5mg的亮丙瑞林(LUPRON)，大约每4周经皮下给予3.6mg的戈舍瑞林(ZOLADEX)，仅在第一个周期的14天每天给予50mg比卡鲁胺(CASODEX)，且每天一日3次给予250mg氟他胺(EULEXIN))。在至少一个疗程的激素治疗，并给予最后一次剂量的激素治疗剂后经过至少一周但不超过4个月后，序贯地每4周以至少10mg/kg的剂量对患者单次IV输注如在此所述的tieilimumab(100mL/hr)。根据需要可给予预防性止泻剂。

在没有不可耐受的毒性或疾病进展的情况下，根据需要递增或不递增剂量，重复该治疗。

在输注抗CTLA4之前至少半小时预先给予该患者抗组织胺(H1)，但预先给药不是必须的。

实施例7：

根据标准激素治疗方案，对激素依赖性前列腺癌患者(包括没有接受先前激素治疗的患者)给予至少一个疗程的包括至少一种激素治疗剂的激素治疗(例如，尤其是，大约每4周经肌肉内给予7.5mg亮丙瑞林(LUPRON)，大约每4周经皮下给予3.6mg戈舍瑞林(ZOLADEX)，仅在第一个周期的14天每天给予50mg比卡鲁胺(CASODEX)，且每天一日3次给予250mg氟他胺(EULEXIN))。在至少一个疗程的激素治疗，并给予最后一次剂量的激素治疗剂后经过至少一周但不超过4个月后，序贯地大约每3个月以至少15mg/kg的剂量对患者单次IV输注如在此所述的ticilimumab(100mL/hr)。根据需要可给予预防性止泻剂。

实施例8：

在非激素依赖性前列腺癌的治疗中序贯地联合使用抗CTLA4和至少一种激素治疗剂

根据标准激素治疗方案，对例如先前接受了激素治疗(例如根据标准激素治疗方案，亮丙瑞林(LUPRON)、戈舍瑞林(ZOLADEX)、比卡鲁胺(CASODEX)、氟他胺(EULEXIN)及其组合)后的患有非激素依赖性前列腺癌的患者给予至少一个疗程的包括至少一种激素治疗剂的激素治疗(例如，大约每四周经肌肉内给予7.5mg LUPRON、大约每4周经皮下给予3.6mg ZOLADEX，仅在第一个周期的14天每天给予50mgCASODEX，且每天一日3次给予250mg EULEXIN)。在至少一个疗程的激素治疗，并给予最后一次剂量的激素治疗剂后经过至少一周但不超过大约4个月后，每28天以至少10mg/kg的剂量对患者单次IV输注如在此所述的ticilimumab(100mL/hr)。

在没有不可耐受的毒性或疾病进展的情况下，不递增剂量，重复该治疗。例如，每28天以7.5mg经IM给予LUPRON。

在输注ticilimumab之前至少半小时预先给予该患者抗组织胺(H1)，但预先给药不是必须的。

实施例9：

根据标准激素治疗方案，对例如先前接受了激素治疗(例如根据标准激素治疗方案，亮丙瑞林(LUPRON)、戈舍瑞林(ZOLADEX)、比卡鲁胺(CASODEX)、氟他胺(EULEXIN)及其组合)后的患有非激素依赖性前列腺癌的患者给予至少一个疗程的包括至少一种激素治疗剂的激素治疗(例如，大约每四周经肌肉内给予7.5mg LUPRON、大约每4周经皮下给予3.6mg ZOLADEX，仅在第一个周期的14天每天给予50mgCASODEX，且每天一日3次给予250mg EULEXIN)。在至少一个疗程的激素治疗，并给予最后一次剂量的激素治疗剂后经过至少一周但不超过大约4个月后，每3个月以至少15mg/kg的剂量对患者单次IV输注如在此所述的ticilimumab(100mL/hr)。

也可给予具有止泻作用的药剂，其包括适用于治疗胃肠道慢性炎性疾病的药剂。这些药剂尤其包括具有局部活性的类固醇(例如布地奈德[ENTTOCORT])，和抗肿瘤坏死因子(TNF)药物(例如英夫利昔单抗[REMICADE]、依那西普[ENBREL]和阿达木单抗[HUMIRA])。

Ticilimumab装在带有橡胶塞及铝封条的20毫升透明小玻璃瓶内。每瓶含有包括20mM组氨酸缓冲液(pH5.5)、84mg/ml海藻糖二水合物、0.2mg/ml聚山梨酯80、和0.1mg/ml EDTA二钠二水合物的无菌水溶液中的20mg/ml(标称装填量为400mg/瓶的)ficilimumab。

对于所有患者，在用药之前评价ECOG体能状况、生命体征及体重，根据临床上需要，生命体征可在用药后重复评价。在第一天时进行体检(包括H艮科评价和自身免疫的体征)。获得用于检测血液学盘(血细胞比容、RBC计数、WBC计数、分类)、化学(碱性磷酸酶、钙、氯化物、GGT、LDH、镁、磷、任意葡萄糖、钠、尿素、尿酸)、尿液分析(血细胞、蛋白)、和其它项日(活化部分凝血激酶H辛间[APTT]、凝血酶原时间(PT)、自身抗体盘、C反应蛋白、TSH、T3、T4、淀粉酶、脂酶、血清C3、C4、血清Ig水平)和PSA水平的标本。

测定以下终点：PK参数、HAHA、反应率及进展时问。使用卡普兰-迈耶(KalDlan-Meier)乘积极限法计算进展时间和总生存率。

抗CTLA4抗体具有选自4.1.l、4.13.1、ticilimumab和ipilimumab的至少一种抗体的重链及轻链氨基酸序列。该抗体具有ticilimumab的重链及轻链氨基酸序列。该抗CTLA4抗体为ficilimumab。

在此所引用的每篇和任意一篇专利、专利申请和出版物的公开内容的全文在此并入本说明书作为参考文献。

尽管本发明已参考具体的实施方案进行了公开，但只要不违背本发明的真正精神及范围，显而易见的是本领域专业技术人员可想到本发明的其他实施方案和变化形式。附加的权利要求要被解释为包括所有这些实施方案和等价的变化形式。

<110>辉瑞产品手有限公司(Pfizer Products Inc．)

<120>用CTLA4抗体和激素疗法治疗前列腺癌

<130>CPUSS71330

<140>PCT/US20067007650

<141>2006-03-03

<150>60/664.364

<15l>2005-03-23

<150>60/711，707

<15l>2005-08-26

<160>36

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>1392

<212>DNA

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Claims

1.一种治疗需要此治疗的患者的前列腺癌的方法，所述的方法包括给予所述患者a)一定量的激素治疗剂和b)一定量的结合人CTLA4的抗体或其抗原结合部分，其中所述的抗体或其部分在给予所述激素治疗剂后首次给药一天以上且不超过28天，且其中所述的用量能有效地组合用于所述的治疗。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的抗体或其部分在给予所述激素治疗剂后两天以上时给予。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述的抗体或其部分在给予所述激素治疗剂后不超过21天时给予。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述的激素治疗剂的给药在所述抗体或其部分的所述首次给药之前终止。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述的激素治疗剂选自抗雄激素、促性腺激素-释放激素(GnRH)拮抗剂、和促黄体生成激素-释放激素(LH-RH)促效剂。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述的癌症选自激素依赖性癌症和非激素依赖性癌症。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述的癌症是非激素依赖性的，所述的激素治疗的给药在所述抗体或其部分的所述首次给药之前终止。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述的抗体根据选自每28天给予大约10mg/kg和每三个月给予大约15mg/kg中的一个方案进行给药。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述的抗CTLA4抗体或其抗原结合部分为选自以下的至少一种抗体：

(a)对CTLA4具有大约10^-8或更大的结合亲合力的人抗体，且其能抑制CTLA4与B7-1之间的结合以及CTLA4与B7-2之间的结合；

(b)具有包括至少一种人CDR序列的氨基酸序列的人抗体，所述人CDR序列与选自4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1和ipilimumab的抗体的CDR序列相对应；

(e)抗体，或其抗原结合部分，其与具有选自4.1.1、4.8.1、4.10.2、4.13.1、4.14.3、6.1.1、ticilimumab、11.6.1、11.7.1、12.3.1.1、12.9.1.1、和ipilimumab的抗体的重链及轻链氨基酸序列的至少一种抗体竞

争与CTLA4的结合；和

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述的抗体是具有ticilimumab的重链和轻链氨基酸序列的人抗体。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述的抗体包括重链和轻链，其中所述的重链的重链可变区和所述的轻链的轻链可变区氨基酸序列选自：

(a)SEQ ID NO：3的氨基酸序列和SEQ ID NO：9的氨基酸序列：

(b)SEQ ID NO：15的氨基酸序列和SEQ ID NO：21的氨基酸序列；

(c)SEQ ID NO：27的氨基酸序列和SEQ ID NO：33的氨基酸序列；

(f)由SEQ ID NO：25的核酸序列编码的氨基酸序列和由SEQID NO：3 1的核酸序列编码的氨基酸序列；

(g)ipilimumab的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述的抗体或其抗原结合部分为选自以下的抗体：

(a)具有包括SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的重链可变区，且另外具有包括SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列的轻链可变区的抗体；

(b)具有包括SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列的重链可变区，和另外具有包括SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列的轻链可变区的抗体；

(d)具有包括抗体ipilimumab的重链CDR1、CDR2，和CDR3的氨基酸序列的重链可变区，且另外具有包括抗体ipilimumab的轻链CDR1、CDR2，和CDR3的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。

13.一种治疗需要此治疗的患者的非激素依赖性前列腺癌的方法，所述方法包括给予所述患者一定量的可结合人CTLA4的抗体或其抗原结合部分，以及一定量的激素治疗剂，其中所述的激素治疗剂以多次剂量给药一个月以上，其中所述的抗体或其部分在所述激素治疗剂的给药期间进行给药，且其中所述的用量能有效地组合用于所述的治疗。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述的激素治疗剂的给药周期超过两个月以上。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述的方法进一步包括给予多次剂量的所述抗体或其部分超过一个月的周期，其与所述激素治疗剂的给药周期相重叠。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述的抗体或其部分的所述给药周期与所述激素治疗剂的所述给药周期重叠超过两个月。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述的抗体或其部分的所述多次剂量与所述激素治疗剂的所述给药周期重叠超过六个月。

18.一种治疗需要此治疗的患者的激素依赖性前列腺癌的方法，所述方法包括对所述患者共同给予治疗有效量的抗CTLA4抗体或其抗原结合部分，以及治疗有效量的至少两种激素治疗剂，其中所述的药剂选自抗雄激素、促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂、和促黄体生成激素-释放激素(LH-RH)促效剂。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述的抗雄激素为比卡鲁胺，且所述的促效剂为亮丙瑞林。

20.一种用于治疗前列腺癌的药学组合物，所述的组合物包括治疗有效量的抗CTLA4抗体或其抗原结合部分，以及治疗有效量的至少两种激素治疗剂，其中所述的激素治疗剂选自抗雄激素、促性腺激素-释放激素(GnRH)拮抗剂，和促黄体生成激素-释放激素(LH-RH)促效剂。