ES2877797T3 - Portador de membrana para el kit de prueba de muestra líquida, kit de prueba de muestra líquida y método para producir el kit de prueba de muestra líquida - Google Patents

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Abstract

Un portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida para detectar una sustancia diana en una muestra líquida, que comprende al menos una vía de flujo que transporta la muestra líquida, en donde el portador de la membrana tiene, en su superficie, una zona de gota en donde se entrega una gota de la muestra líquida y una zona de detección para detectar la sustancia diana en la muestra líquida, se forma una microestructura que produce una acción capilar para transportar la muestra líquida en la parte inferior de la ruta de flujo, y la microestructura se proporciona para cambiar a lo largo de una dirección de transporte de la muestra líquida, en donde la microestructura está presente al menos entre la zona de gota y la zona de detección, la microestructura se proporciona de manera que un caudal de la muestra líquida en la trayectoria del flujo cambia dentro de la trayectoria del flujo; y la microestructura tiene una pluralidad de porciones convexas, la forma de la pluralidad de porciones convexas es un cono, una pirámide poligonal, un cono truncado, una pirámide poligonal truncada, un hemisferio o un semielipsoide.

Description

DESCRIPCIÓN
Portador de membrana para el kit de prueba de muestra líquida, kit de prueba de muestra líquida y método para producir el kit de prueba de muestra líquida
Campo técnico
[0001] La presente invención se refiere a un portador de membrana para un kit de prueba de muestra de líquido que implique un cambio de caudal durante una prueba, un kit de prueba de la muestra líquida usando el portador y un método para producir el kit de prueba.
Técnica anterior
[0002] Recientemente, han llamado la atención los reactivos de la prueba de punto de cuidado (POCT) que utilizan, por ejemplo, reacciones antígeno-anticuerpo para determinar la contracción de enfermedades infecciosas, embarazo, nivel de azúcar en sangre y similares. Los reactivos POCT tienen características tales como la capacidad de determinar los resultados de las pruebas en poco tiempo, la operación simple y el bajo costo. En virtud de estas características, los reactivos POCT se utilizan con frecuencia en, por ejemplo, exámenes médicos en la etapa de síntomas leves y exámenes médicos regulares y se utiliza como una herramienta de examen importante en la atención médica domiciliaria que se espera que se expanda a partir de ahora.
[0003] En la mayoría de los reactivos POCT, se realiza la determinación mediante la introducción de una muestra líquida tal como sangre en un kit de prueba y la detección de una sustancia diana predeterminada contenida en la muestra líquida. Como método para detectar una sustancia diana predeterminada de una muestra líquida, se usa con frecuencia la inmunocromatografía. La inmunocromatografía es una técnica para detectar una sustancia mediante la administración de una gota de líquido en un portador de membrana de un kit de prueba, lo que permite que la gota de líquido se mueva sobre el portador de membrana, lo que permite que una sustancia diana se una a una etiqueta y la resultante se una más específicamente a una sustancia (en lo sucesivo denominada sustancia de detección) inmovilizada en el kit de prueba para producir un cambio de color o peso, y detectar el cambio. La sustancia de detección también puede denominarse reactivo.
[0004] Como una técnica para la detección de una sustancia diana, se conoce una técnica para detectar un cambio de color producido mediante el uso de partículas de color de látex, partículas de látex fluorescentes, partículas coloidales metálicas y similares como una etiqueta por un aparato de medición óptica tal como un aparato de absorbancia de medición.
[0005] Como reactivo POCT para determinar ópticamente un cambio de color, el kit de tipo de flujo lateral que utilice una membrana de nitrocelulosa se utiliza a menudo (Literatura de Patente 1). La membrana de nitrocelulosa tiene muchos microporos que tienen un diámetro de aproximadamente varios pm y una muestra líquida se mueve a través de los microporos con la ayuda de la fuerza capilar.
[0006] Sin embargo, la membrana de nitrocelulosa, que se deriva de un producto natural, no tiene poros uniformes en tamaño y disposición. Debido a esto, el caudal de una muestra líquida varía según las membranas. Si la velocidad de flujo varía, el tiempo necesario para detectar una sustancia diana varía, con el resultado de que se puede realizar una determinación incorrecta: "no se detectó unión" antes de que se una la sustancia diana.
[0007] Con el fin de superar el problema anterior, una técnica para producir artificialmente una trayectoria de flujo micro se ideó (Literaturas de Patente 2 a 6). Si se utiliza esta técnica, se puede preparar un portador de membrana que tenga una estructura uniforme, con el resultado de que se puede reducir la posibilidad de una determinación incorrecta: "no se detectó unión" antes de que se uniera la sustancia diana.
Lista de citas
Literatura de patentes
[0008]
Literatura de patentes 1: JP 2014-062820 A
Literatura de patentes 2: JP 4597664 B
Literatura de patentes 3: JP 2012-524894 A
Literatura de patentes 4: JP 5609648 B
Literatura de patentes 5: JP 2016-011943 A
Literatura de patentes 6: JP 2013-113633 A
Literatura de Patente 7: US 2011/0284110 A
Literatura de Patente 8: JP 2013053897 A
Resumen de la invención
Problema técnico
[0009] Sin embargo, las técnicas descritas en las anteriores Literaturas de Patente, por las cuales las estructuras de trayectoria de flujo uniformes se forman en los sistemas, no logran formar las estructuras que satisfacen funciones que varían en porciones individuales en la trayectoria del flujo (por ejemplo, una porción para mezclar suficientemente un líquido y una porción para desarrollar inmediatamente un líquido); en resumen, forma "una estructura para todos". Como resultado, el rendimiento del sistema no se proporcionó lo suficiente. Para describir más específicamente, a medida que disminuye el caudal de una muestra líquida, aumenta la sensibilidad de un kit de prueba (como el nivel tan bajo de una sustancia diana se puede detectar); sin embargo, en este caso, el tiempo de determinación (tiempo hasta la estabilización de un cambio producido por una sustancia diana detectada) se vuelve largo. No se ha producido una estructura que satisfaga estas dos características.
[0010] En particular, la inmunocromatografía de flujo lateral tiene un simple sistema de detección. Debido a la simplicidad, una estructura de ruta de flujo tiende a influir en los resultados de la prueba. La literatura de patentes 7 informa que la velocidad de flujo de una muestra líquida cambia dependiendo de la estructura de la ruta de flujo; sin embargo, la literatura guarda silencio sobre el efecto producido por el cambio de caudal.
[0011] La presente invención se realizó en vista de los problemas mencionados anteriormente y está dirigida a proporcionar un kit de ensayo que permite la detección altamente sensible en un corto tiempo por inmunocromatografía que puede determinar ópticamente que se detecta una sustancia diana.
[0012] La Literatura de Patentes 8 describe un kit de prueba de muestra líquida con un pequeño canal de flujo que permite transportar la muestra líquida, en el que se proporcionan ranuras y pilares en la superficie inferior del canal de flujo.
Solución al problema
[0013] Más específicamente, la presente invención es como sigue:
De acuerdo con un aspecto, se describe un portador de membrana para un kit de prueba de muestra de líquido de detección de una sustancia diana en un líquido de muestra, que comprende al menos una trayectoria de flujo de transporte de la muestra líquida, en donde
el portador de membrana tiene, en su superficie, una zona de caída en donde se entrega una gota de la muestra líquida y una zona de detección para detectar la sustancia diana en la muestra líquida,
una acción capilar que produce la microestructura para transportar la muestra líquida se forma en la parte inferior de la ruta de flujo,
la microestructura se proporciona para cambiar a lo largo de una dirección de transporte de la muestra líquida, la microestructura está presente al menos entre la zona de caída y la zona de detección,
la microestructura se proporciona de manera que un caudal de la muestra líquida en la ruta de flujo cambia dentro de la ruta de flujo; y
la microestructura tiene una pluralidad de porciones convexas, la forma de la pluralidad de porciones convexas es un cono, una pirámide poligonal, un cono truncado, una pirámide poligonal truncada, un hemisferio o un semielipsoide.
De acuerdo con una realización preferida, se describe el portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida, en donde la microestructura se proporciona de manera que una relación de un caudal más alto a un caudal más bajo de la muestra líquida en la ruta de flujo se define por el rango más allá de 1,0 y 10 o menos. De acuerdo con una realización preferida, se describe el portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida, en donde la microestructura se proporciona de manera que tanto el caudal más bajo como el caudal más alto de la muestra líquida en la trayectoria de flujo sean de 0,30 mm/s o más y 5,0 mm/s o menos.
De acuerdo con una realización preferida, se describe el portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida, en donde una altura de la microestructura en la trayectoria de flujo está definida por el rango de 10 pm o más y 500 pm o menos.
De acuerdo con una realización preferida, se describe un portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida, en donde un área inferior de la microestructura en la trayectoria de flujo está definida por el rango de 75 pm2 o más y 250.000 pm2 o menos.
De acuerdo con una realización preferida, se describe el portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida, en donde la distancia más cercana entre las microestructuras en la trayectoria de flujo es de 500 pm o menos.
De acuerdo con una realización preferida, se describe el portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida, en donde una relación de aspecto de la microestructura se define en el intervalo de 0,1 o más y 2,0 o menos.
De acuerdo con otro aspecto, se describe un kit de prueba de muestra líquida para detectar una sustancia diana en una muestra líquida, que comprende el portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida en donde el portador de membrana comprende un cambio de color cuando se detecta la sustancia diana en la zona de detección.
De acuerdo con una realización preferida, el kit de prueba de muestra líquida se describe en donde se proporciona una etiqueta que comprende un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo que reacciona específicamente con la sustancia diana en la muestra líquida en al menos una parte del kit de prueba de muestra líquida para poder reaccionar con la sustancia diana, y el cambio de color es producido por la etiqueta unida a la sustancia diana.
De acuerdo con una realización preferida, se describe el kit de prueba de muestra líquida en donde el marcador es una partícula que comprende una partícula de látex coloreada o una partícula de látex fluorescente a la que se une el anticuerpo o su fragmento de unión a antígeno.
De acuerdo con una realización preferida, se describe el kit de prueba de muestra líquida en donde una sustancia de detección que detecta la sustancia diana se inmoviliza en la zona de detección, y
el cambio de color se produce sosteniendo la etiqueta por la sustancia de detección en la zona de detección para producir un color.
De acuerdo con otro aspecto, se describe un método para producir el kit de prueba de muestra líquida, comprendiendo el método inmovilizar, en la zona de detección, una sustancia de detección que produce el cambio de color manteniendo la sustancia diana en la zona de detección.
De acuerdo con otro aspecto, se describe un método para analizar una muestra líquida usando el kit de prueba de muestra líquida, comprendiendo el método:
preparar una muestra líquida mixta mezclando la muestra líquida y una etiqueta que se une específicamente a una sustancia diana en la muestra líquida para mutuamente unir la sustancia diana y la etiqueta;
entregar una gota de la muestra líquida mezclada a una zona de gota provista en el portador de membrana;
transportar la muestra líquida mezclada desde la zona de goteo a la zona de detección por la microestructura; y
detectar un cambio de color en la zona de detección.
Efectos ventajosos de la invención
[0014] Según la presente invención, es posible proporcionar un kit de ensayo que permite la detección altamente sensible en un corto tiempo por inmunocromatografía que puede determinar ópticamente que se detecta una sustancia diana.
Breve descripción de los dibujos
[0015]
La figura 1 muestra una vista superior esquemática de un kit de prueba que es una realización de la presente invención.
La figura 2 muestra una vista superior esquemática de un portador de membrana que es una realización de la presente invención.
La figura 3 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de microestructuras que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una porción convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).
La figura 4 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de una microestructura que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una porción convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).
La figura 5 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de una microestructura que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una porción convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).
La figura 6 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de una microestructura que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una porción convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).
La figura 7 muestra una vista en sección de un portador de membrana que tiene una microestructura que es una realización de la presente invención.
La figura 8 muestra una vista en planta ampliada (vista superior) de un sitio donde las microestructuras cambian en una dirección de transporte de una muestra líquida que es una realización de la presente invención.
La figura 9 muestra una vista superior esquemática que muestra una membrana que es una realización de la presente invención.
La figura 10 muestra una vista esquemática de un molde para formar una microestructura que es una realización de la presente invención.
Descripción de realizaciones
[0016] A continuación se describirán realizaciones de la presente invención.
[0017] El portador de membrana para un kit de prueba de muestra de líquido de acuerdo con una realización se refiere a, por ejemplo, una membrana de soporte para un kit de prueba de muestra de líquido, que detecta una sustancia diana en la muestra líquida.
[0018] La sustancia diana en el presente documento, que no se limita, puede ser cualquier sustancia, siempre que puede someterse a una reacción antígeno-anticuerpo con diversos patógenos, varios marcadores clínicos y anticuerpos. Los ejemplos de la sustancia diana incluyen, pero no se limitan particularmente a antígenos de virus tales como virus de la influenza, norovirus, adenovirus, virus RS, HAV, HBs y VIH; antígenos de bacterias tales como MRSA, estreptococo del grupo A, estreptococo del grupo B y bacterias Legionella; toxinas producidas por bacterias, Mycoplasma, Chlamydia trachomatis, hormonas como la gonadotropina coriónica humana; y proteína C reactiva, mioglobina, troponina miocárdica, diversos marcadores tumorales, agroquímicos y hormonas ambientales. Si la sustancia diana es particularmente una sustancia que debe detectarse y tratarse rápidamente, como virus de la influenza, norovirus, proteína C reactiva, mioglobina y troponina miocárdica, el kit de prueba de muestra líquida y el portador de membrana de acuerdo con la realización son extremadamente útiles. La sustancia diana puede ser un antígeno, que únicamente induce una respuesta inmune, o puede ser un hapteno, que no puede inducir una respuesta inmune por sí mismo pero puede inducir una respuesta inmune si se une a un anticuerpo a través de una reacción antígeno-anticuerpo. La sustancia diana generalmente se suspende o se disuelve en una muestra líquida. La muestra líquida puede ser una muestra obtenida suspendiendo o disolviendo la sustancia diana en, por ejemplo, una solución tampón.
[0019] El kit de prueba de muestra de líquido de acuerdo con la forma de realización (en lo sucesivo también simplemente como el "kit de prueba") detecta una sustancia diana en una muestra líquida. La figura 1 es una vista superior esquemática de un kit de prueba. Por ejemplo, como se muestra en la figura 1, un kit de prueba 18 tiene un portador de membrana 3 y una caja 18a para acomodar el portador de membrana 3. El portador de membrana 3 tiene, en su superficie, una zona de caída 3x sobre la cual se suministra una gota de una muestra líquida y una zona de detección 3y para detectar una sustancia diana en una muestra líquida. La zona de caída 3x está expuesta en una primera abertura 18b de la caja 18a. La zona de detección 3y está expuesta en la segunda abertura 18c de la caja 18a.
[0020] La figura 2 es una vista superior esquemática del portador de membrana 3. Como se muestra en la figura 2, el portador de membrana 3 tiene al menos una vía de flujo 2 para transportar una muestra líquida. En la parte inferior de la trayectoria de flujo 2, se proporciona una microestructura (no se muestra, los detalles se describirán más adelante). La microestructura está presente al menos entre la zona de caída 3x y la zona de detección 3y. La microestructura se puede proporcionar sobre toda la superficie del portador de membrana 3. La superficie completa del portador de membrana 3 puede servir como la vía de flujo 2 para una muestra líquida. Debido a la microestructura, se produce una acción capilar. Una muestra líquida se transporta desde la zona de caída 3x a la zona de detección 3y (a lo largo de la dirección de transporte d) a través de la microestructura con la ayuda de la acción capilar producida por la microestructura. Cuando se detecta una sustancia diana en una muestra líquida en la zona de detección 3y, cambia el color de la zona de detección 3y.
[0021] Toda la forma del soporte de la membrana 3 no está particularmente limitada; sin embargo, la forma puede ser, por ejemplo, un polígono como un rectángulo, un círculo o un elipsoide. Si el portador de membrana 3 es un rectángulo, la longitud (longitud del lado más corto) L1 del portador de membrana 3 puede ser, por ejemplo, 2 mm o más y 100 mm o menos y la anchura (longitud del lado más largo) L2 del portador de membrana 3 puede ser, por ejemplo, 2 mm o más y 100 mm o menos. El espesor del portador de la membrana, excluyendo las alturas de la microestructura, puede ser, por ejemplo, de 0,1 mm o más y de 10 mm o menos.
[0022] La microestructura se proporciona para cambiar a lo largo de, por ejemplo, la dirección de transporte d de una muestra líquida. En otras palabras, el portador de membrana 3 tiene una pluralidad de regiones (una primera región A, una segunda región B y una tercera región C dispuestas en este orden desde la zona de caída) y regiones adyacentes (primera región A y segunda región B; y la segunda región B y la tercera región C) tienen microestructuras mutuamente diferentes.
[0023] Las figuras 3 a 6 cada una muestran una microestructura proporcionada en la parte inferior de la trayectoria de flujo de acuerdo con la forma de realización y un ejemplo de partes convexas que constituyen la microestructura. En cada una de las Figuras 3 a 6, (a) es una vista en planta (vista superior) de la microestructura; y (b) es una vista en perspectiva de una de las porciones convexas que constituyen la microestructura. Como se muestra en las Figuras 3 a 6, una microestructura 7 es un conjunto de porciones convexas 8. Más específicamente, el portador de membrana 3 tiene una parte plana 9 correspondiente al fondo de la trayectoria de flujo 2 de una muestra líquida y una pluralidad de porciones convexas 8 correspondiente a la parte plana 9. El espacio entre las porciones convexas 8 sirve como camino de flujo 2 para transportar una muestra líquida a lo largo de la superficie del portador de membrana 3 con la ayuda de la acción capilar. En otras palabras, el espacio en la microestructura 7 sirve como vía de flujo 2 para transportar una muestra líquida a lo largo de la superficie del portador de membrana 3 por acción capilar. Las porciones convexas 8 pueden disponerse sobre la superficie del portador de membrana 3 de manera de traslación regular o simétrica.
[0024] La forma de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 se puede seleccionar libremente. Los ejemplos de la forma de las partes convexas 8 incluyen un cono, una pirámide poligonal, un cono truncado, una pirámide poligonal truncada, una columna poligonal, un hemisferio y un semielipsoide. Por ejemplo, la forma de las porciones convexas 8a puede ser un cono como se muestra en la figura 3. Por ejemplo, la forma de las porciones convexas 8b puede ser una pirámide cuadrada como se muestra en la figura 4. Por ejemplo, la forma de las porciones convexas 8c puede ser una pirámide hexagonal como se muestra en la figura 5. Por ejemplo, la forma de las porciones convexas 8d puede ser un prisma triangular horizontalmente largo (prisma triangular colocado de manera que una superficie lateral del prisma triangular (una superficie rectangular) esté en contacto con la parte plana 9) como se muestra en la figura 6. Por las razones de que cuando la microestructura 7 se mira hacia abajo (vista desde arriba), se puede ver toda la superficie del portador de membrana 3 y un cambio de color cuando es detectada una sustancia diana se puede comprobar fácilmente por un medio óptico, una estructura de cono tal como un cono y una pirámide poligonal es adecuada como la forma de las porciones convexas 8, entre las formas mencionadas anteriormente.
[0025] No es necesario que la forma de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 sea de forma geométricamente precisa y puede ser una forma que tiene una esquina redondeada y una forma que tiene microconvexoconcaves en la superficie.
[0026] El diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 puede ser de 10 pm o más y 1.000 pm o menos y más preferiblemente 15 pm o más y 1.000 pm o menos. El diámetro 4 de la superficie inferior 10 de la parte convexa 8 puede variar (ser diferente entre sí) entre una pluralidad de partes convexas 8 dentro del intervalo anterior. Si el diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las porciones convexas 8 es de 10 pm o más, el costo de microfabricación de un molde para formar la microestructura 7 disminuye y un número infinito de microestructura 7 puede formarse fácil y uniformemente en la superficie del portador de membrana de gran superficie 3. En consecuencia, es más práctica una microestructura constituida por las porciones convexas 8 que tienen la superficie inferior 10 de 10 pm o más de diámetro 4. Si el diámetro de cada una de las superficies inferiores 10 de las porciones convexas 8 es de 10 pm o más, la fuerza capilar requerida para mover una muestra líquida tiende a aumentar. Si el diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las porciones convexas 8 es de 1.000 pm o menos, el volumen de metal raspado de un miembro metálico en el momento de formar un molde puede reducirse, con el resultado de que los costos de fabricación para el molde y el portador de membrana 3 pueden suprimirse. Si el diámetro de cada una de las superficies inferiores 10 de las porciones convexas 8 es de 1.000 pm o menos, el área de la vía de flujo 2 en el portador de membrana 3 puede reducirse, con el resultado de que un kit 18 de prueba de muestra líquida puede miniaturizarse. Esto es ventajoso para enviar el propio kit 18 de prueba de muestra líquida.
[0027] El diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 se define como la longitud representativa de la superficie inferior 10 de la parte convexa 8. La longitud representativa que define la superficie inferior 10 es un diámetro si la forma de la superficie inferior 10 es un círculo; la longitud del lado más corto si la forma es un triángulo o un rectángulo; la longitud de la línea diagonal más larga si la forma es un polígono de un pentágono o más; y una longitud máxima de la superficie inferior 10 en el caso de formas excepto las mencionadas anteriormente.
[0028] La figura 7 es una vista en sección alineada del portador de membrana 3a que tiene una microestructura 7a tomada a lo largo de la línea VII-VII mostrada en la figura 3. Como se muestra en la figura 3 y la figura 7, si la forma de la porción convexa 8a es un cono, el diámetro 4a de la superficie inferior 10a de la parte convexa 8a corresponde al diámetro del fondo (círculo) del cono. Como se muestra en la figura 4, si la forma de la parte convexa 8b es una pirámide cuadrada regular, el diámetro 4b de la superficie inferior 10b de la parte convexa 8b es la longitud de los lados de la superficie inferior (cuadrado regular) 10b. Como se muestra en la figura 5, si la forma de la porción convexa 8c es una pirámide hexagonal regular, el diámetro 4c de la superficie inferior 10c de la porción convexa 8c es la longitud de una línea diagonal (longitud de la línea diagonal más larga) que pasa a través del centro de la superficie inferior (hexágono regular) 10c. Como se muestra en la figura 6, si la forma de la porción convexa 8d es un prisma triangular horizontalmente largo, el diámetro 4d de la superficie inferior 10d de la porción convexa 8d es la longitud del lado más corto de la superficie inferior (rectángulo) 10d (en la figura 6, la longitud del lado perpendicular a la dirección de transporte d de una muestra líquida).
[0029] La altura 6 de cada una de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 es preferiblemente 10 pm o más y 500 pm o menos y más preferiblemente 15 pm o más y 500 pm. La altura 6 de las partes convexas 8 puede variar (ser diferente entre sí) entre una pluralidad de partes convexas 8 dentro del rango anterior. Si la altura 6 de las porciones convexas 8 es de 10 pm o más, el volumen de la trayectoria de flujo 2 aumenta, con el resultado de que se puede desarrollar una muestra líquida en un tiempo más corto. Si la altura 6 de cada una de las partes convexas 8 es de 500 pm o menos, el tiempo y el costo para la formación de la microestructura 7 puede ser reducido, con el resultado de que se hace fácil de preparar la microestructura 7.
[0030] La altura 6 de la parte convexa 8 se define como una longitud máxima de la parte convexa 8 en la dirección perpendicular a la parte plana 9. Como se muestra en la Figura 3 y la Figura 7, si la forma de la parte convexa 8a es un cono, la altura 6a de la parte convexa 8a es una longitud máxima (la altura del cono) de la parte convexa 8a en la dirección perpendicular a la parte plana 9. Como se muestra en la Figura 4, si la forma de la parte convexa 8b es una pirámide cuadrada, la altura 6b de la parte convexa 8b es una longitud máxima (la altura de la pirámide cuadrada) de la parte convexa 8b en la dirección perpendicular a la parte plana 9. Como se muestra en la Figura 5, si la forma de la parte convexa 8c es hexagonal pirámide, la altura 6c de la porción convexa 8c es una longitud máxima (la altura de la pirámide hexagonal) de la parte convexa 8c en la dirección perpendicular a la parte plana 9. Como se muestra en la Figura 6, si la forma de la parte convexa 8d es un prisma triangular horizontalmente largo, la altura 6d de la parte convexa 8d es una longitud máxima (la altura de la prisma horizontalmente largo triangular) de la parte convexa 8d en la dirección perpendicular a la parte plana 9.
[0031] La zona del fondo (el área de una superficie inferior 10 de la parte convexa 8) de cada una de las porciones convexas 8 que constituyen la microestructura 7 es preferiblemente de 75 |jm2 o más y 250.000 |jm2 o menos. El área inferior de la parte convexa 8 puede variar (ser diferente entre sí) entre una pluralidad de partes convexas 8 dentro del rango anterior. Si el área inferior de la parte convexa 8 es de 78 jm o más, la microfabricación se puede realizar fácilmente, con el resultado de que el coste de fabricación de la microestructura se reduce aún más. Si el área del fondo de la porción convexa 8 es 250.000 jm 2 o menos, el número de porciones convexas 8 que constituyen la microestructura 7 dentro de un solo equipo de prueba aumenta, con el resultado de que una muestra líquida se desarrolla más fácilmente.
[0032] La distancia más cercana 5 entre las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 es preferiblemente de 500 jm o menos y más preferiblemente de 2 jm o más y 100 jm o menos. La distancia más cercana 5 de la parte convexa 8 puede variar (ser diferente entre sí) entre una pluralidad de partes convexas 8 dentro del rango. No es concebible que la distancia más cercana 5 entre las porciones convexas 8 sea menor de 0 jm . Si la distancia más cercana es de 500 jm o menos, el área de contacto entre una muestra de líquido y la ruta de flujo 2 aumenta y, por lo tanto, aumenta la fuerza capilar, con el resultado de que una muestra de líquido se puede mover más fácilmente. La "distancia más cercana entre las porciones convexas 8" aquí se refiere a la distancia más cercana entre un par de porciones convexas adyacentes 8 en la misma región.
[0033] La relación de aspecto de cada una de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 es preferentemente 0,1 o más y 2,0 o menos. La relación de aspecto aquí se refiere a un valor obtenido dividiendo la altura 6 (Lh) de la porción convexa 8 por la longitud representativa (diámetro 4) (Lv) de la superficie inferior 10 de la porción convexa 8, (Lh/Lv). Si la relación de aspecto es 0,1 o más, el área de contacto entre una muestra de líquido y la trayectoria de flujo 2 aumenta y, por lo tanto, aumenta la fuerza capilar, con el resultado de que una muestra de líquido se mueve más fácilmente. Si la relación de aspecto es 2,0 o menos, resulta fácil preparar la microestructura.
[0034] La microestructura 7 puede estar constituida por las partes convexas 8 mutuamente idénticas dentro de la misma región. La microestructura 7 puede estar constituida por las porciones convexas 8 mutuamente diferentes dentro de la misma región. En este caso, las partes convexas 8 mutuamente diferentes pueden disponerse a lo largo de la dirección de transporte d de una muestra de líquido en la misma región de acuerdo con una regla predeterminada. Más específicamente, las porciones convexas 8 pueden estar dispuestas en la misma región de tal manera que al menos uno de, por ejemplo, el diámetro 4 del fondo la superficie 10 de la parte convexa 8, la altura 6 de la parte convexa 8, la distancia más cercana 5 entre las partes convexas 8 y la relación de aspecto (Lh/Lv) de la parte convexa 8 cambia (aumenta o disminuye) en la dirección de transporte d de una muestra líquida de acuerdo con la regla predeterminada.
[0035] La figura 8 es una vista en planta ampliada (vista superior) de un sitio (cerca del límite entre la primera región A y la segunda región B (o la segunda región B y la tercera región C) que tienen una microestructura mutuamente diferente) donde la microestructura 7 cambia a lo largo en la dirección de transporte de la muestra líquida. Como se muestra en la figura 8, la primera región A (segunda región B) y la segunda región B (tercera región C) tienen microestructura 7A (7B) y 7B (7C) mutuamente diferentes. Por ejemplo, si la microestructura 7A (7B) de la primera región A (segunda región B) se compara con la microestructura 7B (7C) de la segunda región B (tercera región C), las porciones convexas 8A (8B) y 8B (8C) ambas tienen forma cónica, como se muestra en la figura 3; sin embargo, los diámetros 4A (4B) y 4B (4C) de los fondos de las porciones convexas 8 difieren mutuamente así como las distancias más cercanas 5A (5B) y 5B (5C) entre las porciones convexas 8 dentro de la misma región difieren mutuamente.
[0036] La microestructura 7A (7B) de la primera región A (segunda región B) y la microestructura 7B (7C) de la segunda región B (tercera región C) pueden diferir en al menos uno de, por ejemplo, la forma de la parte convexa 8, el diámetro 4 de la superficie inferior 10 de la parte convexa 8, el área inferior de la parte convexa 8, la altura 6 de la parte convexa 8, la distancia más cercana 5 entre las partes convexas 8 en la misma región y la relación de aspecto (Lh/Lv) de la convexa porción 8, excepto en el ejemplo mostrado en la figura 8.
[0037] Las regiones adyacentes (primera región A y segunda región B (o segunda región B y tercera región C)) están dispuestas a un intervalo predeterminado entre ellas. La distancia más cercana (también denominada distancia intermedia) 5D entre las porciones convexas 8 que pertenecen mutuamente a diferentes regiones es preferiblemente de 500 jm o menos. La distancia de amortiguación 5D puede ser de 1 jm o más. Si la distancia de amortiguación 5D entre las porciones convexas 8 es de 500 jm o menos, una muestra líquida se transporta más suavemente entre las regiones.
[0038] Puesto que el portador de membrana 3 tiene la microestructura 7 mencionada anteriormente, la velocidad de flujo de una muestra de líquido que fluye dentro del kit de prueba de muestra de líquido 18 (sobre el portador de membrana 3) cambia a lo largo de la dirección de transporte d de una muestra líquida. El caudal en el kit 18 de prueba de muestra líquida se evalúa basándose en el caudal medio en la región donde la microestructura 7 se forma uniformemente (primera región A, segunda región B y tercera región C). La región donde la microestructura 7 se forma uniformemente se refiere a una región donde se disponen microestructuras 7 idénticas y una región donde las microestructuras 7 cambian uniforme y continuamente de acuerdo con una regla predeterminada. El caudal medio se refiere a un valor obtenido al dividir la distancia (distancia más corta) desde el punto de inicio hasta el punto final de la región donde las microestructuras 7 se forman uniformemente en la dirección de la dirección de movimiento de una muestra líquida (dirección de transporte d) por el tiempo que tarda la muestra líquida en moverse (ser transportada) desde el punto de inicio hasta el punto final. El caudal (caudal medio en cada región) en el kit de prueba de muestra líquida 18 puede medirse mediante el método que se describe más adelante en los Ejemplos.
[0039] La figura 9 es una vista superior de un portador de membrana según otra realización. En el portador de membrana 3 mostrado en la figura 2, se proporciona una zona de detección 3y en la tercera región C; mientras que, en el portador de membrana 13 mostrado en la figura 9, la zona de detección 13y se proporciona en la segunda región B. Como se muestra en la figura 9, la zona de caída 13x y la zona de detección 13y pueden formarse sobre casi todo el lado más corto del portador de membrana 13.
[0040] La velocidad de flujo en la segunda región B que tiene la zona de detección 13y es preferiblemente lenta en comparación con la velocidad de flujo en primera región A que tiene la zona de descenso 13x. En este caso, la reactividad de una sustancia diana con una sustancia de detección se vuelve satisfactoria y la sensibilidad del kit de prueba tiende a mejorar más. En este caso, para reducir el tiempo de prueba minimizando la longitud de la segunda región B en la dirección de transporte d donde el caudal es relativamente lento, la longitud de la segunda región B en la dirección de transporte d en el portador de membrana 13 es configurada para ser más corta que la longitud de la primera región A (además, la tercera región C) en la dirección de transporte d. El caudal de la tercera región C es preferiblemente rápido en comparación con el caudal de la segunda región B que tiene la zona de detección 13y. En este caso, el tiempo que tarda una muestra líquida en moverse (transportarse) desde el punto de inicio hasta el punto final es más reducido. Como resultado, se puede reducir el tiempo de determinación y, además, puede suprimirse un flujo inverso de una muestra de líquido desde la tercera región C (región corriente abajo) a la segunda región B que tiene la zona de detección 13y.
[0041] En el kit de prueba de muestra de líquido 18, la relación de la velocidad de flujo más grande a la velocidad de flujo más pequeño es preferiblemente 1 o más y 10 o menos. La relación (del caudal más grande al caudal más pequeño) es más preferiblemente superior a 1,0 y 10 o menos y más preferiblemente 1,2 o más y 10 o menos. No es concebible que la relación (valor) obtenida al dividir el caudal más grande por el caudal más pequeño sea menor que 1. Si el valor es 10 o menos, el derrame de una muestra líquida de la ruta de flujo 2 en un sitio donde se suprimen los cambios de caudal y la terminación del desarrollo de la muestra líquida. Las frases "la tasa de flujo más pequeña" y "la tasa de flujo más grande" significan respectivamente la tasa de flujo promedio más pequeña y la tasa de flujo promedio más grande de las tasas de flujo promedio medidas individualmente en una pluralidad de regiones (primera región A, segunda región B y tercera región C) prevista en el portador de membrana 3.
[0042] La velocidad de flujo más pequeña y la velocidad de flujo más grande en el kit de prueba de muestra de líquido 18 ambas son preferiblemente 0,30 mm/s o más y 5,0 mm/s o menos. Si el caudal más pequeño es de 0,30 mm/s o más, se suprime aún más la aparición de un mal funcionamiento (por ejemplo, la terminación del desarrollo de la muestra líquida) causada por la variabilidad de los kits de prueba en producción. Si el caudal más grande es de 5,0 mm/s o menos, el flujo de una muestra de líquido a través de la ruta de flujo 2 se controla más fácilmente y el desbordamiento de la muestra de líquido de la ruta de flujo 2 puede suprimirse.
[0043] La microestructura 7 y el portador de membrana 3 del kit de prueba de muestra líquida 18 de la realización puede ser hecha de un termoplástico. En otras palabras, el portador de membrana 3 que tiene la microestructura 7 se puede producir procesando un material de base similar a una película hecho de un termoplástico. Los ejemplos del método de procesamiento incluyen impresión térmica, impresión UV, moldeo por inyección, grabado, fotolitografía, corte a máquina y procesamiento por láser. De ellos, la impresión térmica a un termoplástico es adecuada como método para aplicar un procesamiento preciso a bajo costo. Los ejemplos del termoplástico incluyen una resina de poliéster, una resina de poliolefina, una resina de poliestireno, una resina de policarbonato, una resina fluorada y una resina acrílica. Más específicamente, se pueden utilizar varios tipos de resinas, incluido el tereftalato de polietileno (PET), un polímero de cicloolefina (COP), polipropileno (PP), poliestireno (PS), policarbonato (PC), fluoruro de polivinilideno (PVDF) y polimetilmetacrilato (Pm Ma ).
[0044] En el caso de procesar usando un molde, tal como moldeo por huella y la inyección, al ser la parte superior de un cono estrecha en comparación con la parte inferior, el volumen de metal raspado en la formación del molde es menor que un molde columnar que tiene el misma zona del fondo, y así, el molde se puede preparar a bajo coste con un cono. En este caso, una sustancia diana en una muestra líquida se puede detectar a bajo costo.
[0045] Como se ha descrito anteriormente, el portador de membrana 3, que es un portador de membrana 3 para el kit de prueba de muestra de líquido 18 para la detección de una sustancia diana en una muestra líquida, tiene la microestructura 7 proporcionada sobre la superficie de la membrana de soporte 3 y responsable para producir una acción capilar para transportar una muestra líquida, y una vía de flujo 2 formada por la microestructura 7 para transportar la muestra líquida. En el portador de membrana 3, se proporcionan una pluralidad de regiones A, B y C que tienen la microestructura 7 y la trayectoria de flujo 2 a lo largo de la dirección de transporte de una muestra líquida. Los adyacentes las regiones A y B (B y C) tienen microestructuras 7 mutuamente diferentes.
[0046] En el kit de prueba de muestra de líquido 18 de acuerdo con la forma de realización, un cambio de color se produce en la zona de detección 3y presente en el portador de membrana 3, cuando se detecta una sustancia diana. El cambio de color puede ser un cambio de color observable por un medio óptico.
[0047] Como los medios ópticos, se mencionan en su mayoría dos métodos: un medio de determinación visual y medios de medición de una intensidad de fluorescencia. En el caso de la determinación visual, es preferible producir un cambio de color expresado por una diferencia de color (AE descrita en JIS Z8781-4:2013) de 0,5 o más entre dos estímulos de color antes y después de la detección cuando el color es medido por el sistema de color del espacio de color CIE1976L*a*b *. Si la diferencia de color es 0,5 o más, se puede realizar fácilmente una determinación visual de la diferencia de color. En el caso de la determinación basada en la medición de la intensidad de la fluorescencia, es preferible producir una diferencia de color que satisfaga una relación entre la intensidad de la fluorescencia (Fll) en la zona de detección 3y y la intensidad de la fluorescencia (F12) en la región ascendente y la región descendente adyacente a la zona de detección 3y, (F11/F12) = 10/1 o más. Si la relación es 10/1 o más, la señal y el ruido se pueden separar fácilmente.
[0048] Para preparar la zona de detección 3y en el kit de prueba de muestra de líquido 18 de la realización, una sustancia de detección está inmovilizada en al menos parte de la trayectoria de flujo 2, en una realización. Más específicamente, una sustancia de detección que detecta una sustancia diana se inmoviliza en la zona de detección 3y. Se produce un cambio de color en la zona de detección 3y manteniendo una sustancia diana por la sustancia de detección (mediante reacción con la sustancia de detección) en la zona de detección 3y.
[0049] En otras palabras, un método para producir el kit de prueba de muestra de líquido 18 comprende una etapa de inmovilización, a la zona de detección 3y, una sustancia de detección que produce un cambio de color mediante la celebración de la sustancia diana en la zona de detección 3y. Debido a que una sustancia de detección (reactivo) puede inmovilizarse eficazmente en la zona de detección 3y, el tratamiento superficial puede aplicarse previamente en el sitio del portador de membrana 3, en donde se va a proporcionar la zona de detección 3y.
[0050] El método de tratamiento de superficie no está limitado y, por ejemplo, diversos métodos tales como irradiación UV, un tratamiento con UV/ozono, diversos tratamientos de plasma y modificación de la superficie con, por ejemplo, 3-aminopropiltrietoxisilano o glutaraldehído, pueden ser utilizados.
[0051] En la realización, como se menciona la sustancia de detección (reactivo), por ejemplo, un anticuerpo. El anticuerpo es un anticuerpo que se une a una sustancia diana a través de una reacción antígeno-anticuerpo y puede ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal.
[0052] El cambio de color en el zona de detección 3y se puede producir mediante una etiqueta que tiene un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno reaccionando específicamente con una sustancia diana en una muestra líquida. El cambio de color se produce, por ejemplo, sosteniendo una etiqueta con una sustancia de detección (mediante una reacción con (unión a) la sustancia de detección) en la zona de detección 3y y produciendo un color.
[0053] La etiqueta es, por ejemplo, una etiqueta en donde un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo está obligado a partículas tales como partículas coloidales y partículas de látex. El fragmento de unión a antígeno se refiere a un fragmento que se une específicamente a una sustancia diana, como un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo. El marcador puede unirse a una sustancia diana a través de un anticuerpo o un fragmento del mismo que se une al antígeno. Las partículas pueden tener propiedades magnéticas o fluorogenicidad. Los ejemplos de partículas coloidales incluyen partículas coloidales metálicas tales como partículas coloidales de oro y partículas coloidales de platino. Las partículas son preferiblemente partículas de látex en vista del control del tamaño de las partículas, la estabilidad de la dispersión y la capacidad de unión. El material de las partículas de látex no está particularmente limitado; sin embargo, es preferible el poliestireno.
[0054] En vista de la visibilidad, las partículas son preferiblemente partículas coloreadas o partículas fluorescentes y más preferiblemente partículas de color. Las partículas coloreadas son satisfactorias si el color de las mismas es detectable a simple vista. Las partículas fluorescentes son satisfactorias si contienen una sustancia fluorescente. Las partículas pueden ser partículas de látex coloreadas o partículas de látex fluorescentes. Si las partículas son partículas de látex coloreadas, el cambio de color mencionado anteriormente se detecta visualmente de forma adecuada. Si las partículas son partículas de látex fluorescentes, el cambio de color mencionado anteriormente se detecta adecuadamente mediante la medición de la intensidad de la fluorescencia.
[0055] A fin de que la etiqueta como se mencionó anteriormente reaccionara con éxito con una sustancia diana en una muestra de líquido a ser entregado gota a gota, la etiqueta se proporciona a al menos una parte del kit de prueba 18. La etiqueta puede ser proporcionada, por ejemplo, a un miembro en el kit de prueba 18 o se puede proporcionar al menos a una parte (corriente arriba de la zona de detección 3y) de la ruta de flujo 2 del portador de membrana 3. La etiqueta reacciona con (unida a) una sustancia diana sostenida por una sustancia de detección (a través de la reacción (unión) de la sustancia de detección con la sustancia diana) en la zona de detección 3y. De esta manera, se produce un cambio de color (color producido por una etiqueta) en la zona de detección 3y.
[0056] Un método para probar una muestra de líquido de acuerdo con un aspecto de la realización es un método de prueba mediante la prueba de kit 18.
[0057] El método para probar una muestra líquida usando el kit de prueba 18 puede comprender una etapa de preparación de una muestra líquida mezclado, al mezclar la muestra líquida y una etiqueta que se une específicamente a una sustancia diana en la muestra líquida para unir mutuamente la sustancia diana y la etiqueta; un paso de suministrar una gota de la muestra líquida mezclada a la zona de caída 3x proporcionada en el portador de membrana 3; una etapa de transporte de la muestra líquida mezclada desde la zona de caída 3x a la zona de detección 3y a través de la microestructura 7; y una etapa de detección de un cambio de color (color de la etiqueta) en la zona de detección 3y.
[0058] Alternativamente, el método de ensayo anterior puede comprender una etapa de suministrar una gota de una muestra líquida a la zona de caída 3x en la superficie del soporte de la membrana 3; una etapa de transporte de la muestra líquida desde la zona de caída 3x a la zona de detección 3y a través de la microestructura 7 con la ayuda de la acción capilar ejercida por la microestructura 7 (porciones convexas 8) formada en la superficie del portador de membrana 3; y un paso de unir una sustancia diana en una muestra líquida al marcador a través del anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo, además, unir la sustancia diana a un reactivo inmovilizado en la zona de detección 3y y detectar un cambio de color en la zona de detección 3y (determinando ópticamente la presencia o ausencia de cambio de color).
[0059] En el paso de unión mutua de una sustancia diana y una etiqueta en el método de ensayo anterior, un método para mezclar una muestra de líquido y la etiqueta no está particularmente limitada. Por ejemplo, se puede emplear un método para añadir una muestra líquida en un recipiente que contiene la etiqueta o un método para mezclar un líquido que contiene, por ejemplo, una etiqueta y una muestra líquida. Alternativamente, se inserta un filtro en una abertura de goteo de un recipiente que contiene, por ejemplo, una muestra de líquido, y se puede inmovilizar una etiqueta en el filtro.
Ejemplos
[0060] Se describirán las formas de realización; sin embargo, las realizaciones no están limitadas por estos Ejemplos Experimentales.
[Ejemplo Experimental 1]
<Preparación de molde>
[0061] El molde se preparó mediante procesamiento por láser y corte de la máquina. La figura 10 muestra un molde 20 para formar una microestructura. El molde 20 mostrado en la figura 10 tiene una pluralidad de regiones (primera región A, segunda región B y tercera región C) y las porciones cóncavas correspondientes a las porciones convexas de la microestructura mostrada en la figura 8 están formadas en la superficie del mismo (no mostrada). El molde 20 está hecho de aleación de aluminio A5052. En la parte central del molde dentro del rango de 30 mm x 30 mm, se aplica microfabricación. En el rango de fabricación del molde 20, la región (región A) dentro del rango de fabricación a una distancia de 16 mm hacia adentro, un lado predeterminado (20A) y la región (región C), dentro del rango de fabricación a una distancia de 11 mm hacia adentro desde el lado opuesto (20B) al lado predeterminado, las porciones cóncavas en forma de cono de 10 pm de diámetro y 10 pm de profundidad (en las Tablas, a veces denominadas como altura) están dispuestas a la distancia más cercana entre las microestructuras (5A, 5C) de 5 pm en una disposición escalonada, como se muestra en la figura 8. En el rango (región B) que no sean los rangos de fabricación anteriores, las porciones cóncavas en forma de cono de 10 pm de diámetro y 10 pm de profundidad están dispuestas a la distancia más cercana entre microestructuras (5B) de 5 pm en una disposición escalonada como se muestra en la figura 8. Nótese que, la distancia de tampón 5D entre las regiones A y B y la distancia de tampón 5D entre las regiones B y C son ambas de 5 pm.
[0062] Con el fin de separar fácilmente el molde y un termoplástico sin fallar en el momento de la impresión por transferencia, se aplicó un tratamiento de lanzamiento a la superficie convexa-cóncava del molde. El tratamiento de desmoldeo se aplicó sumergiendo el molde en Optool HD-2100TH fabricado por Daikin Industries Ltd. durante aproximadamente un minuto, secando y dejando que el molde permaneciera quieto durante la noche.
<Impresión por transferencia de la microestructura>
[0063] Usando el molde obtenido como se mencionó anteriormente, la microestructura era de impresión por transferencia para un termoplástico. Como termoplástico, se utilizó poliestireno (lámina de estireno Denka fabricada por Denka Company Limited, espesor de película 300 pm). Como método de procesamiento, se utilizó impresión térmica. Como aparato, se utilizó X-300 fabricado por SCIVAX. La impresión por transferencia se llevó a cabo a una temperatura de moldeo de 120°C y una presión aplicada de 5,5 MPa durante 10 minutos. Después de la impresión por transferencia, el termoplástico y el molde se enfriaron hasta 80°C mientras se aplicaba la presión, y luego, se eliminó la presión para preparar un portador de membrana que tenga la región A, la región B y la región C en este orden desde un extremo.
[Ejemplo Experimental 2]
[0064] Un portador de membrana A se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que, como partes cóncavas de forma cónica tienen un diámetro de 100 pm y una profundidad de 100 pm fueron utilizadas en lugar de las microestructuras de las regiones A, B y C del Ejemplo Experimental 1.
[Ejemplo Experimental 3]
[0065] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las porciones cóncavas en forma cónica que tienen un diámetro de 500 pm y una profundidad de 500 pm se utiliza en lugar de las microestructuras de las regiones A, B y C del Ejemplo Experimental 1.
[Ejemplo Experimental 4]
[0066] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las porciones cóncavas en forma cónica que tienen un diámetro de 100 pm y una profundidad de 100 pm se utilizaron en lugar de las microestructuras de las regiones A y C y se utilizaron porciones cóncavas en forma de cono con un diámetro de 30 pm y una profundidad de 30 pm en lugar de las microestructuras de la región B del Ejemplo Experimental 1.
[Ejemplo Experimental 5]
[0067] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las porciones cóncavas en forma cónica que tienen un diámetro de 250 pm y una profundidad de 250 pm fueron utilizados en lugar de las microestructuras de las regiones A y C del Ejemplo Experimental 4 y porciones cóncavas en forma de cono que tienen un diámetro de 30 pm y una profundidad de 30 pm se utilizaron en lugar de las microestructuras de la región B del Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 6]
[0068] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que se utilizaron porciones cóncavas en forma de cono que tenían un diámetro de 250 pm y una profundidad de 250 pm en lugar de las microestructuras de las regiones A y C del Ejemplo Experimental 4 y porciones cóncavas en forma de cono que tenían un diámetro de 10 pm y una profundidad de 10 pm se utilizaron en lugar de las microestructuras de la región B del Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 7]
[0069] Se preparó un portador de membrana en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que se usaron porciones cóncavas en forma de cono que tenían un diámetro de 100 pm y una profundidad de 100 pm en lugar de las microestructuras de las regiones A y C del Ejemplo Experimental 4 y porciones cóncavas en forma de cono que tenían un diámetro de 10 pm y una profundidad 10 pm se utiliza en lugar de las microestructuras de la región B del Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 8]
[0070] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las porciones cóncavas en forma cónica que tienen un diámetro de 500 pm y una profundidad de 500 pm se usaron en lugar de las microestructuras de las regiones A y C del Ejemplo Experimental 4 y se usaron porciones cóncavas en forma de cono que tenían un diámetro de 10 pm y una profundidad de 10 pm en lugar de las microestructuras de la región B del Experimental Ejemplo 4.
[Ejemplo Experimental 9]
[0071] Se preparó un portador de membrana en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que las microestructuras de la región A en el Ejemplo Experimental 4 se dividió en 16 compartimentos que tenían un ancho de 1 pm en la dirección perpendicular a la dirección de transporte de tal manera que el diámetro y la profundidad de las porciones cóncavas en forma de cono se redujeron en serie como una unidad de compartimento en 4,7 pm desde 100 mm hacia la región B (reducido en serie en 4,7 pm desde 100 pm a lo largo de la dirección de transporte); y que las microestructuras de la región C en el Ejemplo Experimental 4 se dividieron en 11 compartimentos que tenían un ancho de 1 pm en la dirección perpendicular a la dirección de transporte de tal manera que el diámetro y la profundidad de las porciones cóncavas en forma de cono se redujeron en serie como una unidad de compartimento en 7 pm desde 100 pm hacia la región B (aumentada en serie en 7 pm desde 100 pm a lo largo de la dirección de transporte).
[Ejemplo 10]
[0072] Un portador de membrana A se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de la región A en el Ejemplo Experimental 4 se dividieron en 16 compartimentos que tienen una anchura de 1 pm en la dirección perpendicular a la dirección de transporte de tal manera que el diámetro y la profundidad de las porciones cóncavas en forma de cono se reduzcan en serie como una unidad de compartimento en 14,7 pm desde 250 pm hacia la región B; y que las microestructuras de la región C en el Ejemplo Experimental 4 se dividieron en 11 compartimentos que tenían un ancho de 1 pm en la dirección perpendicular a la dirección de transporte de tal manera que el diámetro y la profundidad de las porciones cóncavas en forma de cono se redujeron en serie como una unidad de compartimiento por 22 mm de 250 pm hacia la región B.
[Ejemplo Experimental 11]
[0073] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que se especificaron las microestructuras de las regiones A y C para tener un diámetro de 50 pm y las microestructuras de la región B se especificaron para tener un diámetro de 15 pm en el Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 12]
[0074] Se preparó un portador de membrana en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que las microestructuras de las regiones A y C se especificaron por tener un diámetro de 50 pm y se especificó que las microestructuras de la región B tuvieran un diámetro de 300 pm en el Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 13]
[0075] Un portador de membrana A se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que se especificaron que las microestructuras de las regiones A y C tuvieran un diámetro de 500 pm y se especificó que las microestructuras de la región B tuvieran un diámetro de 300 pm en el Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 14]
[0076] Un portador de membrana a se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de la región B se especificaron como partes cóncavas en forma de cono con un diámetro de 200 pm y una profundidad de 100 pm en el Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 15]
[0077] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de la región B se especificaron como partes cóncavas en forma de cono con un diámetro de 500 pm y una profundidad de 100 pm en el Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 16]
[0078] Se preparó un portador de membrana en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que las microsestructuras de la región A en el Ejemplo Experimental 4 se dividieron en 16 compartimentos que tenían un ancho de 1 pm en la dirección perpendicular a la dirección de transporte de tal manera que el diámetro de las porciones cóncavas en forma de cono aumentaba en serie como una unidad de compartimento en 10 pm desde 100 pm hacia la región B; que las microestructuras de la región C en el Ejemplo Experimental 4 se dividieron en 11 compartimentos que tienen un ancho de 1 pm en la dirección perpendicular a la dirección de transporte de tal manera que el diámetro de las porciones cóncavas en forma de cono aumentó en serie como una unidad de compartimento en 15 pm desde 100 pm hacia la región B; y que se especificó que las porciones cóncavas en forma de cono en la región B tenían un diámetro de 250 pm y una profundidad de 100 pm.
[Ejemplo Experimental 17]
[0079] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de la región A en el Ejemplo Experimental 4 se dividieron en 16 compartimentos que tienen una anchura de 1 pm en la dirección perpendicular a la dirección de transporte de tal manera que el diámetro de las porciones cóncavas en forma de cono aumente en serie como una unidad de compartimento en 26,7 pm desde 100 pm hacia la región B; que las microestructuras de la región C en el Ejemplo Experimental 4 se dividieron en 11 compartimentos que tenían un ancho de 1 pm de tal manera que el diámetro de las porciones cóncavas en forma de cono aumentaba en serie como una unidad de compartimento en 40 pm desde 100 pm hacia la región B; y que se especificó que las porciones cóncavas en forma de cono en la región B tenían un diámetro de 500 pm y una profundidad de 100 pm.
[Ejemplo Experimental 18]
[0080] Un portador de membrana A se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de la región B se especificaron como partes cóncavas en forma de cono con un diámetro de 100 pm y una profundidad de 100 pm y la distancia más cercana entre las microestructuras se especificó como 30 pm en el Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 19]
[0081] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de la región B se especificaron como partes cóncavas en forma de cono que tienen un diámetro de 100 pm y una profundidad de 100 pm y la distancia más cercana entre las microestructuras se especificó como 100 pm en el Ejemplo Experimental 4.
[Ejemplo Experimental 20]
[0082] Se preparó un portador de membrana en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de las regiones A y C en el Ejemplo Experimental 4 se especificaron como porciones cóncavas en forma de cono que tenían un diámetro de 500 pm y una profundidad de 500 pm; que las microestructuras de la región B en el Ejemplo Experimental 4 se especificaron como porciones cóncavas en forma de cono que tienen un diámetro de 500 pm y una profundidad de 500 pm; y que la distancia más cercana entre las microestructuras se especificó como 100 pm.
[Ejemplo Experimental 21]
[0083] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de las regiones A y C en el Ejemplo Experimental 4 se especificaron como partes cóncavas en forma de cono que tienen un diámetro de 500 pm y una profundidad de 500 pm; que las microestructuras de la región B en el Ejemplo Experimental 4 se especificaron como porciones cóncavas en forma de cono que tienen un diámetro de 500 pm y una profundidad de 500 pm; y que la distancia más cercana entre las microestructuras se especificó como 500 pm.
[Ejemplo Experimental 22]
[0084] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de las regiones A y C en el Ejemplo Experimental 4 se especificaron como partes cóncavas en forma de cono que tienen un diámetro de 250 pm y una profundidad de 250 pm; que las microestructuras de la región B en el Ejemplo Experimental 4 se especificaron como porciones cóncavas en forma de cono que tenían un diámetro de 250 pm y una profundidad de 250 pm; y que la distancia más cercana entre las microestructuras se especificó como 100 pm.
[Ejemplo Experimental 23]
[0085] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de las regiones A y C en el Ejemplo Experimental 4 se especificaron como partes cóncavas en forma de cono que tienen un diámetro de 250 pm y una profundidad de 250 pm; que las microestructuras de la región B en el Ejemplo Experimental 4 se especificaron como porciones cóncavas en forma de cono que tenían un diámetro de 250 pm y una profundidad de 250 pm; y que la distancia más cercana entre las microestructuras se especificó como 250 pm.
[Ejemplo Experimental 24]
[0086] Un portador de membrana se preparó en las mismas condiciones que en el Ejemplo Experimental 1, excepto que las microestructuras de la región A en el Ejemplo Experimental 4 se dividieron en 16 compartimentos que tenían un ancho de 1 pm en la dirección perpendicular a la dirección de transporte de tal manera que la distancia más cercana entre microestructuras aumentaba en serie como una unidad de compartimento en 1,7 pm desde 5 pm hacia la región B; que las microestructuras de la región C en el Ejemplo Experimental 4 se dividieron en 11 compartimentos que tenían un ancho de 1 pm en la dirección perpendicular a la dirección de transporte de tal manera que la distancia más cercana entre las microestructuras aumentaba en serie como una unidad de compartimento en 2,5 pm desde 5 pm hacia la región B; y que las microestructuras de la región B se especificaron como porciones cóncavas en forma de cono que tenían un diámetro de 100 pm y una profundidad de 100 pm y la distancia más cercana entre las microestructuras era de 30 pm.
<Preparación de zona de detección>
[0087] El tratamiento UV se aplica sólo a una porción de un portador de membrana preparada como se ha mencionado anteriormente y que tiene la estructura de impresión por transferencia de la región B. A la porción, se le aplicó una solución de suspensión de anticuerpos anti-NP de influenza tipo A y una solución de suspensión de anticuerpos anti-NP de influenza tipo B cada una en un ancho de línea de 1 mm (las cantidades de recubrimiento eran cada una 3 pl) y se secaron suficientemente con aire caliente para inmovilizar las sustancias detectoras.
<Preparación de la etiqueta>
[0088] Se utilizaron un anticuerpo NP anti-virus de la influenza de tipo A purificado (otro anticuerpo como se usó en lo anterior) y un anticuerpo NP de virus de influenza anti-tipo B purificado (otro anticuerpo como se usó en lo anterior) se usaron. El anticuerpo NP contra el virus de la influenza tipo A se marcó covalentemente con partículas de látex azul (CM/BL fabricadas por Ceradyne Inc.) que tenían un tamaño de partícula de 0,394 mm, suspendidas en una solución tampón Tris que contenía un azúcar, un tensioactivo y una proteína tal que la concentración de las partículas de látex llegó a ser de 0,025% p/v y se trataron ultrasónicamente para preparar una etiqueta anti-tipo A suficientemente dispersa y suspendida. El marcador anti-tipo B se preparó de manera similar marcando un anticuerpo NP anti-virus de la influenza tipo B con partículas de látex azul.
[0089] La etiqueta anti-tipo A y la etiqueta anti-tipo B se mezclaron y se aplicaron a la fibra de vidrio que tiene un tamaño de 3 cm x 1 cm (33GLASS N° 10539766, fabricado por Schleicher & Schuell) en una cantidad de 50 pL por centímetro cuadrado y se seca bien con aire caliente para producir una almohadilla de etiquetas. A continuación, la almohadilla de etiquetas se superpuso con la parte del borde (solo 2 mm) de la región A de cada uno de los portadores de membrana producidos de acuerdo con los Ejemplos Experimentales 1 a 24 y se cortó en tiras que tenían un ancho de 5 mm con un cortador para preparar kits de prueba de muestra líquida integrados.
<Evaluación de detección>
[0090] En el control de etiqueta (zona de descenso) del borde del kit de prueba de la muestra líquida preparada como se ha mencionado anteriormente, el líquido se eliminó de la muestra (100 pl). Como muestra líquida se utilizaron dos tipos de muestras; uno es una solución del virus de la influenza tipo A, A/Beijing/32/92 (H3N2) diluida con una solución de suspensión de muestras unida a Quick navi-Flu fabricada por Denka Seiken Co., Ltd. como solución de dilución, hasta 4 x 104 veces, y la otra es una solución del virus de la influenza tipo B B/Shangdong/7/97 diluida hasta 4 x 103 veces.
Después de la adición gota a gota, el comportamiento (cómo mover) de la muestra líquida se grabó en video encima de la muestra, mediante una cámara digital. A partir de la cinta de video, se evaluó la velocidad de flujo de la muestra líquida que se movía en cada una de las regiones A a C. Como tasa de flujo, se utilizó un valor promedio (tasa de flujo promedio) de la tasa de flujo de la solución diluida del virus de la influenza tipo A y la tasa de flujo de la solución diluida del virus de la influenza tipo B. Se obtuvo una relación de caudal dividiendo el caudal más grande por el caudal más pequeño. Los resultados se muestran en las Tablas 1 a 3.
[Tabla 1]
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[Tabla 1] (cont.)
Figure imgf000016_0001
[Tabla 2]
Figure imgf000017_0001
[Tabla 2] (cont.)
Figure imgf000018_0001
[Tabla 3]
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[Tabla 3] (cont.)
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[0091] La determinación de detección se realizó observando visualmente la presencia o ausencia de una línea de color en las zonas de detección (sección de detección de virus de influenza A y sección de detección de virus de influenza B) 15 minutos mas tarde.
[0092] Como resultado de la determinación, en el caso de utilizar la solución de dilución A/Beijing/92/32 (H3N2) hasta 4 x 104 veces, se observó un cambio de color sólo en la zona de detección de tipo A; mientras que en el caso de utilizar la solución de dilución B/Shangdong/7/97 hasta 4 x 103 veces, se observó un cambio de color solo en la zona de detección de tipo B.
[0093] Se prepararon kits de prueba de muestra líquida a partir de los portadores de membrana preparados como en los Ejemplos Experimentales 1 a 24, como se mencionó anteriormente. Luego, se obtuvo una tasa de dilución máxima (tasa de dilución de tipo A máxima permitida por determinación visible) en donde la presencia o ausencia de una línea coloreada no se puede observar visualmente 15 minutos después del inicio de la prueba aumentando la tasa de dilución de la influenza tipo A virus A/Beijing/32/92 (H3N2) de 4 x 104 Se llevó a cabo una prueba a una tasa de dilución 1/2 tan baja como la tasa de dilución máxima para obtener el tiempo (tiempo hasta la estabilización de la concentración de color de tipo A) hasta que se obtuvo una línea de color estable desde el inicio de la prueba. Los resultados se muestran en las Tablas 1 a 3.
[0094] Kits de prueba de muestra de líquido se prepararon a partir de los portadores de membrana preparados como en los Ejemplos Experimentales 1 a 24, como se mencionó anteriormente. Luego, se obtuvo una tasa de dilución máxima (tasa de dilución permitida de determinación visible máxima de tipo B) en donde la presencia o ausencia de una línea coloreada no se puede observar visualmente cuando se obtuvo la tasa de dilución del virus de la influenza tipo B B/Shangdong/7/97 se incrementó de 4 x 103. Se llevó a cabo una prueba a una tasa de dilución 1/2 tan baja como la tasa de dilución máxima para obtener el tiempo (tiempo hasta la estabilización de la concentración de color de tipo B) hasta que se obtuvo una línea coloreada estable desde el inicio del examen. Los resultados se muestran en las Tablas 1 a 3.
[0095] A medida que el tiempo hasta que se obtuvo una línea de color estable, se utilizó un valor medio del tiempo hasta obtenerse una línea de color estable en el tipo A y el tiempo hasta obtenerse una línea de color estable en el tipo B.
[0096] En las Tablas 1 a 3, también se muestran los resultados de las evaluaciones globales sobre Ejemplos Experimentales en base a los siguientes criterios
A: La determinación se puede realizar a una tasa de dilución de 5 x 104 o más en el tipo A y una tasa de dilución de 5 x 103 o más en el tipo B en 4 minutos, o la determinación se puede hacer a una tasa de dilución de 7 x 104 o más en el tipo A y una tasa de dilución de 7 x 103 o más en el tipo B en 6 minutos.
B: No se aplica la evaluación general de A ni de C.
C: El tiempo de determinación fue de 7 minutos o más o la velocidad de dilución a la que se puede realizar la determinación es 4 x 104 o menos en el tipo A o 4 x 103 o menos en el tipo B.
[Ejemplos experimentales 25 a 45]
[0097] Portadores de membranas de los Ejemplos Experimentales 25 a 45 se prepararon de la misma manera que en el Ejemplo Experimental 1 excepto que se empleó la distancia más cercana entre microestructuras (porciones convexas) en las regiones A a C, los diámetros y la altura de las porciones convexas mostradas en la Tabla 4.
[0098] La preparación de una zona de detección, la preparación de un marcador y la evaluación de la detección se llevaron a cabo de la misma manera que en los Ejemplos Experimentales 1 a 24, excepto que las partículas que se utilizarían se cambiaron de las partículas de látex coloreadas a las partículas de látex fluorescentes (micrómero-F partículas de látex fluorescentes, material: poliestireno, fabricado por Corefront Corporation), y que la tasa de dilución (tasa de dilución permitida de determinación de fluorescencia máxima) a la que la presencia o ausencia de una línea de color no puede ser leída por un lector de inmunocromato (C11787 fabricado por Hamamatsu Photonics K. K.) 4 minutos después del inicio de la prueba se obtuvo. Los resultados se muestran en las Tablas 4 y 5.
[0099] En las Tablas 4 y 5, se muestran también evaluaciones globales en Ejemplos Experimentales en base a los siguientes criterios.
A: La tasa de dilución permitida para la determinación de fluorescencia máxima 4 minutos después del inicio de la prueba es de 3 x 106 o más en el tipo A y de 3 x 105 o más en el tipo B.
B: No se aplica la evaluación general de A ni de C.
C: La tasa de dilución permitida para la determinación de fluorescencia máxima 4 minutos después del inicio de la prueba es menos de 2 x 106 en el tipo A o menos de 2 x 105 en el tipo B.
[Tabla 4]
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Figure imgf000023_0001
Figure imgf000023_0002
[Tabla 5]
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[Tabla 5] (cont.)
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[0100] Los resultados de las Tablas 1 a 3 muestran que, en el kit de prueba de muestra líquida de la realización, el caudal se puede controlar variando la altura, el área inferior, la distancia más cercana y la relación de aspecto de las microestructuras en el camino de flujo. Como resultado, se demostró que, en la realización, se puede controlar el tiempo hasta la estabilización de la sensibilidad del kit de prueba de muestra líquida y el color, y que se puede llevar a cabo una prueba muy sensible en poco tiempo. A partir de los resultados de las Tablas 4 y 5, se confirmó que, en el kit de prueba de muestra líquida, incluso si se utilizan partículas de látex fluorescentes, se puede realizar una prueba de alta sensibilidad.
Aplicabilidad Industrial
[0101] El kit de prueba de muestra de líquido de acuerdo con la forma de realización permite la implementación de una prueba altamente sensible en un corto período de tiempo a bajo coste y es por lo tanto útil como un reactivo POCT desechable.
Lista de señales de referencia
[0102] 2: Ruta de flujo, 3,3a,13: Portador de membrana con microestructuras en el mismo, 3x, 13x: Zona de caída, 3y, 13y: Zona de detección, 4,4a, 4b, 4c, 4d: Longitud representativa de la superficie inferior de una porción convexa (diámetro del fondo de la porción convexa), 4A: Longitud representativa de la superficie inferior de una porción frontal (corriente arriba de la dirección de transporte) de un sitio donde cambian las microestructuras (diámetro del fondo de la porción convexa en la primera región A), 4B: Longitud representativa de la superficie inferior de una parte trasera de un sitio donde cambian las microestructuras (diámetro del fondo de la parte convexa en la segunda región B), 4C: Longitud representativa de la superficie inferior de una parte trasera de un sitio donde microestructuras cambian (diámetro del fondo de la porción convexa en la tercera región C), 5: Distancia más cercana entre microestructuras, 5A: Distancia más cercana entre microestructuras en la porción frontal de un sitio donde cambian las microestructuras (distancia más cercana entre microestructuras (porciones convexas)) en primera región A), 5B: Distancia más cercana entre microestructuras en la parte trasera de un sitio donde cambian las microestructuras (distancia más cercana entre microestructuras (porciones convexas) en la segunda región B), 5C: Distancia más cercana entre microestructuras en la parte trasera de un sitio donde cambian las microestructuras (distancia más cercana entre microestructuras (porciones convexas) en la tercera región C), 5D: Distancia de zona de influencia (distancia de zona de influencia en un sitio donde cambian las microestructuras), 6,6a, 6b, 6c, 6d: altura de las porciones convexas, 7,7a, 7b, 7c, 7d: Microestructura, 8,8a, 8b, 8c, 8d: Parte convexa, 9: Parte plana, 10,10a, 10b, 10c, 10d: Superficie inferior de las partes convexas, 18: Kit de prueba para muestra líquida, 18a: Caja, 18b: Primera abertura, 18c: Segunda abertura, 20: Molde, 20A: Un lado predeterminado, 20B: Lado opuesto al lado predeterminado, A: Primera región, B: Segunda región, C: Tercera región, d: Dirección de flujo de la muestra líquida (dirección de transporte)

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Un portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida para detectar una sustancia diana en una muestra líquida, que comprende al menos una vía de flujo que transporta la muestra líquida,
en donde el portador de la membrana tiene, en su superficie, una zona de gota en donde se entrega una gota de la muestra líquida y una zona de detección para detectar la sustancia diana en la muestra líquida,
se forma una microestructura que produce una acción capilar para transportar la muestra líquida en la parte inferior de la ruta de flujo, y la microestructura se proporciona para cambiar a lo largo de una dirección de transporte de la muestra líquida, en donde
la microestructura está presente al menos entre la zona de gota y la zona de detección,
la microestructura se proporciona de manera que un caudal de la muestra líquida en la trayectoria del flujo cambia dentro de la trayectoria del flujo; y
la microestructura tiene una pluralidad de porciones convexas, la forma de la pluralidad de porciones convexas es un cono, una pirámide poligonal, un cono truncado, una pirámide poligonal truncada, un hemisferio o un semielipsoide.
2. El portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la microestructura se proporciona de manera que una relación de un caudal más alto a un caudal más bajo de la muestra líquida en la ruta de flujo se define por el rango más allá de 1,0 y 10 o menos.
3. El portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la microestructura se proporciona de manera que tanto el caudal más bajo como el caudal más alto de la muestra líquida en la trayectoria de flujo sean de 0,30 mm/s o más y 5,0 mm/s o menos.
4. El portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la altura de la microestructura en la trayectoria de flujo está definida por el rango de 10 mm o más y 500 mm o menos.
5. El portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde un área inferior de la microestructura en la trayectoria de flujo está definida por el rango de 75 pm2 o más y 250.000 |jm2 o menos.
6. El portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la distancia más cercana entre las microestructuras en la trayectoria de flujo es de 500 mm o menos.
7. El portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde una relación de aspecto de la microestructura está definida por el intervalo de 0,1 o más y 2,0 o menos.
8. Un kit de prueba de muestra líquida para detectar una sustancia diana en una muestra líquida, que comprende el portador de membrana para un kit de prueba de muestra líquida según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde se produce un cambio de color cuando se detecta la sustancia diana en la zona de detección.
9. El kit de prueba de muestra líquida de acuerdo con la reivindicación 8, en donde
una etiqueta que comprende un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo que reacciona específicamente con la sustancia diana en la muestra líquida se proporciona en al menos una parte del kit de prueba de muestra líquida a ser capaz de reaccionar con la sustancia diana, y
el cambio de color es producido por la etiqueta unida a la sustancia diana.
10. El kit de prueba de muestra líquida de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el marcador es una partícula que comprende una partícula de látex coloreada o una partícula de látex fluorescente a la que se une el anticuerpo o su fragmento de unión a antígeno.
11. El kit de prueba de muestra líquida de acuerdo con la reivindicación 9 o 10, en donde una sustancia de detección que detecta la sustancia diana se inmoviliza en la zona de detección, y el cambio de color se produce sosteniendo la etiqueta por la sustancia de detección en la zona de detección para producir un color.
12. Un método para producir el kit de prueba de muestra líquida según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, que comprende inmovilizar, en la zona de detección, una sustancia de detección que produce el cambio de color manteniendo la sustancia diana en la zona de detección.
13. Un método para analizar una muestra líquida usando el kit de prueba de muestra líquida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, comprendiendo el método:
preparar una muestra líquida mezclada mezclando la muestra líquida y una etiqueta que se une específicamente a una sustancia diana en la muestra líquida para unir mutuamente la sustancia diana y la etiqueta; entregar una gota de la muestra líquida mezclada a una zona de gota provista en el portador de membrana; transportar la muestra líquida mezclada desde la zona de goteo a la zona de detección por la microestructura; y detectar un cambio de color en la zona de detección.
ES17813302T 2016-06-14 2017-06-13 Portador de membrana para el kit de prueba de muestra líquida, kit de prueba de muestra líquida y método para producir el kit de prueba de muestra líquida Active ES2877797T3 (es)

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