JPWO2017217406A1 - 液体試料検査キット用膜担体、液体試料検査キット及び液体試料検査キットの製造方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、液体試料中の被検出物質を検出する検査キット用の膜担体３であって、液体試料を輸送できる少なくとも一つの流路２を備え、流路２の底面に、液体試料を輸送するための毛細管作用を生じせしめる微細構造が設けられ、微細構造が、液体試料の輸送方向ｄに沿って変化するように設けられている、液体試料検査キット用膜担体３を提供する。

Description

本発明は、検査中の流速変化を伴う液体試料検査キット用膜担体、それを用いた液体試料検査キット及びその製造方法に関する。

近年、抗原抗体反応等を用いることで、感染症への罹患や妊娠、血糖値等を測定する、Ｐｏｉｎｔ ｏｆ Ｃａｒｅ Ｔｅｓｔ（ＰＯＣＴ）試薬が注目を集めている。ＰＯＣＴ試薬は、短時間で結果の判別が可能、使用方法が簡便、安価であるといった特徴をもっている。ＰＯＣＴ試薬は、これらの特徴から、症状が軽度の段階での診察や定期診察等に多く使用されており、今後増加することが予想される在宅医療においても重要な診察ツールとなっている。

多くのＰＯＣＴ試薬では、血液等の液体試料を検査キットに導入し、その中に含まれる特定の被検出物質を検出することで判定を行っている。液体試料から特定の被検出物質を検出する方法としてイムノクロマトグラフィ法がよく用いられている。イムノクロマトグラフィ法とは、検査キットの膜担体上に滴下された液体が膜担体上を移動する中で、被検出物質と標識体とが結合し、更にこれらが検査キット中に固定化された物質（以下、検出物質という）と特異的に結合し、その結果生じた色や重量の変化等を検出するという手法である。検出物質は、試薬（ｒｅａｇｅｎｔ）と言い換えてもよい。

被検出物質を検出する手法として、標識体として着色ラテックス粒子、蛍光ラテックス粒子、金属コロイド粒子等を用いることで生じる色変化を、吸光度測定器等の光学測定機器を介して検知するものがよく知られている。

上記の色変化を光学的に判定するＰＯＣＴ試薬として、ニトロセルロース膜を用いたラテラルフロー型のキットがよく用いられている（特許文献１）。ニトロセルロース膜は、直径が数μｍ程度の微細な孔を多数有しており、その孔の中を液体試料が毛細管力によって移動する。

しかし、ニトロセルロース膜は天然物由来であり、孔径や孔同士のつながり方が一様ではないため、それぞれの膜で液体サンプルの流れる流速に差異が生じてしまう。流速に差異が生じると、被検出物質を検出するためにかかる時間も変化してしまい、その結果、被検出物質が結合を生じる前に非検出として誤って判断してしまう可能性がある。

上記の課題を解決するため、微細流路を人工的に作製するという手法が考案されている（特許文献２〜６）。この手法を用いると、均一な構造を有する膜担体を作製することができるため、被検出物質が結合を生じる前に非検出として誤って判断してしまう可能性を低減することができる。

特開２０１４−０６２８２０号公報 特許第４５９７６６４号 特表２０１２−５２４８９４号公報 特許第５６０９６４８号 特開２０１６−０１１９４３号公報 特開２０１３−１１３６３３号公報 米国特許出願公開第２０１１／０２８４１１０号明細書

しかし、上記の特許文献に記載の手法では、系内での流路構造が均一であるため、流路内各部分での役割（例えば、液体をよく混合したい部分や、液体を速やかに展開したい部分）に適合した構造が作製されておらず、最大公約数的な構造が作製されていた。その結果、系の性能が十分に発揮されていなかった。具体的に言えば、液体試料の流速が遅いほうが、検査キットの感度（どれだけ少ない量の被検出物質を検出できるか）は高くなるが、その場合判定時間（被検出物質を検出した際の変化が安定するまでの時間）は長くなってしまうため、二つの特性を両立する構造は作製できていなかった。

特にラテラルフロー型のイムノクロマトグラフィ法では、検出系がシンプルな分だけ、流路構造の影響が検査結果に反映されやすい。特許文献７では、流路構造によって液体試料の流速が変化する報告がなされているが、流速が変化することによる影響については記載がない。

本発明は、上記問題を鑑みて、例えば、被検出物質が検出されたことを光学的手法で確認可能なイムノクロマトグラフィ法において、高感度かつ短時間での判定が可能な検査キットの提供を課題とする。

すなわち、本発明は、以下の通りである。
（１）液体試料中の被検出物質を検出する検査キット用の膜担体であって、
液体試料を輸送できる少なくとも一つの流路を備え、
流路の底面に、液体試料を輸送するための毛細管作用を生じせしめる微細構造が設けられ、
微細構造が、液体試料の輸送方向に沿って変化するように設けられている、液体試料検査キット用膜担体。
（２）微細構造は、流路内における液体試料の流速が流路内で変化するように設けられている、（１）に記載の液体試料検査キット用膜担体。
（３）微細構造は、流路内における液体試料の、最も小さい流速と最も大きい流速との比が１以上１０以下となるように設けられている、（１）又は（２）に記載の液体試料検査キット用膜担体。
（４）微細構造は、流路内における液体試料の最も小さい流速と最も大きい流速とが、いずれも０．３０ｍｍ／ｓ以上５．０ｍｍ／ｓ以下となるように設けられている、（１）〜（３）の何れかに記載の液体試料検査キット用膜担体。
（５）微細構造の高さが、流路内で１０μｍ以上５００μｍ以下である、（１）〜（４）の何れかに記載の液体試料検査キット用膜担体。
（６）微細構造の底面積が、流路内で７５μｍ^２以上２５００００μｍ^２以下である、（１）〜（５）の何れかに記載の液体試料検査キット用膜担体。
（７）微細構造同士の最近接距離が、流路内で５００μｍ以下である、（１）〜（６）の何れかに記載の液体試料検査キット用膜担体。
（８）微細構造のアスペクト比が、０．１以上２．０以下である（１）〜（７）の何れかに記載の液体試料検査キット用膜担体。

（９）液体試料中の被検出物質を検出する液体試料検査キットであって、
（１）〜（８）の何れかに記載された液体試料検査キット用膜担体を備え、
膜担体は、液体試料中の被検出物質を検出するための検知ゾーンを有し、
検知ゾーンにおいて被検出物質が検出された際に、検出されたことが光学的手法で確認可能な色変化が生じる、液体試料検査キット。
（１０）液体試料中の記被検出物質と特異的に反応する抗体又はその抗原結合性断片を有する標識体が、被検出物質と反応し得るように液体試料検査キットの少なくとも一部に設けられており、
上記色変化は、被検出物質と結合した標識体によって生じる、（９）に記載の液体試料検査キット。
（１１）上記標識体が、着色ラテックス粒子又は蛍光ラテックス粒子に前記抗体又は前記抗原結合性断片が結合した粒子である、（１０）に記載の液体試料検査キット。
（１２）検知ゾーンには、被検出物質を検出する検出物質が固定されており、
上記色変化は、標識体が前記検出物質により検知ゾーンに保持されて呈色することによって生じる、（１０）又は（１１）に記載の液体試料検査キット。
（１３）（９）〜（１２）の何れかに記載された液体試料検査キットの製造方法であって、
検知ゾーンに、被検出物質を検知ゾーンに保持することによって上記色変化を生じせしめる検出物質を固定する工程を備える、液体試料検査キットの製造方法。
（１４）（９）〜（１２）の何れかに記載された液体試料検査キットを用いる、液体試料の検査方法であって、
前記液体試料と、前記液体試料中の被検出物質と特異的に結合する標識体とを混合して混合液体試料を調製し、前記被検出物質と前記標識体とを互いに結合させる工程と、
前記混合液体試料を前記膜担体に設けられた滴下ゾーンに滴下する工程と、
前記微細構造により、前記混合液体試料を前記滴下ゾーンから前記検知ゾーンへ輸送する工程と、
前記検知ゾーンにおける色変化を検知する工程と、を備える、液体試料の検査方法。

本発明によれば、被検出物質が検出されたことを光学的手法で確認可能なイムノクロマトグラフィ法において、高感度かつ短時間での判定が可能な検査キットの提供が可能となる。

本発明による実施形態の一例であり、検査キットの模式的な上面図である。 本発明による実施形態の一例であり、膜担体の模式的な上面図である。 （ａ）は、本発明による実施形態の一例であり、微細構造の俯瞰図（上面図）であり、（ｂ）は、（ａ）に示す微細構造を構成する凸部の斜視図である。 （ａ）は、本発明による実施形態の一例であり、微細構造の俯瞰図（上面図）であり、（ｂ）は、（ａ）に示す微細構造を構成する凸部の斜視図である。 （ａ）は、本発明による実施形態の一例であり、微細構造の俯瞰図（上面図）であり、（ｂ）は、（ａ）に示す微細構造を構成する凸部の斜視図である。 （ａ）は、本発明による実施形態の一例であり、微細構造の俯瞰図（上面図）であり、（ｂ）は、（ａ）に示す微細構造を構成する凸部の斜視図である。 本発明による実施形態の一例であり、微細構造を有する膜担体の断面図である。 本発明による実施形態の一例であり、微細構造が液体試料の輸送方向に沿って変化する箇所を拡大した俯瞰図（上面図）である。 本発明による実施形態の一例であり、膜担体の模式的な上面図である。 本発明による実施形態の一例であり、微細構造を形成するためのモールドの概略図である。

以下、本発明の実施形態について説明する。

本実施形態の液体試料検査キット用膜担体とは、例えば、液体試料中の被検出物質を検出する液体試料検査キット用の膜担体をいう。

ここで、被検出物質は、何ら限定されるものではなく、各種病原体、各種臨床マーカー等、抗体と抗原抗体反応することが可能ないかなる物質であってもよい。被検出物質の具体例として、インフルエンザウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ＨＡＶ、ＨＢｓ、ＨＩＶ等のウイルス抗原、ＭＲＳＡ、Ａ群溶連菌、Ｂ群溶連菌、レジオネラ属菌等の細菌抗原、細菌等が産生する毒素、マイコプラズマ、クラミジア・トラコマティス、ヒト絨毛性ゴナドトロピン等のホルモン、Ｃ反応性タンパク質、ミオグロビン、心筋トロポニン、各種腫瘍マーカー、農薬、及び環境ホルモン等を例示できるが、これらに限定されるものではない。被検出物質が、特に、インフルエンザウイルス、ノロウイルス、Ｃ反応性タンパク質、ミオグロビン、及び心筋トロポニンのような検出と治療措置に急を要するものである場合には、本実施形態の液体試料検査キット及び膜担体の有用性が特に大きい。被検出物質は、単独で免疫反応を誘起できる抗原であってもよく、単独では免疫反応を誘起できないが、抗体と抗原抗体反応により結合した場合に免疫反応を誘起できるハプテンであってもよい。被検出物質は、通常、液体試料中で浮遊又は溶解した状態にある。液体試料は、例えば、上記被検出物質を緩衝液に浮遊又は溶解させた試料であってよい。

本実施形態に係る液体試料検査キット（以下、単に「検査キット」ともいう）は、液体試料中の被検出物質を検出する。図１は、検査キットの模式的な上面図である。例えば、図１に示すように、検査キット１８は、膜担体３と、膜担体３を収容する筐体１８ａと、を備える。膜担体３は、その表面に、液体試料が滴下される滴下ゾーン３ｘと、液体試料中の被検出物質を検出するための検知ゾーン３ｙと、を有している。滴下ゾーン３ｘは、筐体１８ａの第一開口部１８ｂにおいて露出している。検知ゾーン３ｙは、筐体１８ａの第二開口部１８ｃにおいて露出している。

図２は、膜担体３の模式的な上面図である。図２に示すように、膜担体３は、液体試料を輸送する少なくとも一つの流路２を備えている。流路２の底面には、微細構造が設けられている（図示せず、詳細は後述）。微細構造は、少なくとも滴下ゾーン３ｘと検知ゾーン３ｙとの間に位置する。膜担体３の表面全体にわたり、微細構造が設けられていてもよい。膜担体３の表面全体が、液体試料の流路２であってよい。微細構造は、毛細管作用を生じせしめる。微細構造の毛細管作用により、液体試料は、微細構造を介して、滴下ゾーン３ｘから検知ゾーン３ｙへ（輸送方向ｄに沿って）輸送される。液体試料中の被検出物質が検知ゾーン３ｙにおいて検出されると、検知ゾーン３ｙの色が変化する。

膜担体３の全体の形状は、特に限定されないが、例えば、四角形等の多角形、円形、又は楕円形であってよい。膜担体３が四角形である場合、膜担体３の縦幅（短手方向の長さ）Ｌ１は、例えば、２ｍｍ以上１００ｍｍ以下であってよく、膜担体３の横幅（長手方向の長さ）Ｌ２は、例えば、２ｍｍ以上１００ｍｍ以下であってよい。微細構造の高さを除く膜担体の厚みは、例えば、０．１ｍｍ以上１０ｍｍ以下であってよい。

例えば、微細構造は、液体試料の輸送方向ｄに沿って変化するように設けられている。換言すると、膜担体３は、液体試料の輸送方向ｄに沿って設けられた複数の領域（滴下ゾーン側から順に、第一の領域Ａ、第二の領域Ｂ及び第三の領域Ｃ）を有し、隣接する領域（第一の領域Ａ及び第二の領域Ｂ、第二の領域Ｂ及び第三の領域Ｃ）が互いに異なる微細構造を有する。

図３〜６は、それぞれ、本実施形態における、流路の底面に設けられた微細構造及びそれを構成する凸部の一例を示す。図３〜６中、（ａ）は、それぞれ微細構造の俯瞰図（上面図）であり、（ｂ）は、それぞれ（ａ）に示す微細構造を構成する凸部の斜視図である。図３〜６に示すように、微細構造７は、凸部８の総体である。つまり、膜担体３は、液体試料の流路２の底面に相当する平坦部９と、平坦部９から突出する複数の凸部８と、を備える。毛細管作用により、複数の凸部８の間の空間が、液体試料を膜担体３の表面に沿って輸送する流路２として機能する。換言すれば、毛細管作用により、微細構造７における空隙が、液体試料を膜担体３の表面に沿って輸送する流路２として機能する。複数の凸部８は、規則的に、又は、並進対称的に、膜担体３の表面上に並んでいてよい。

上記の微細構造７を構成する複数の凸部８の形状は、自由に選択することができる。凸部８の形状としては、例えば、円錐、多角錐、円錐台、多角錐台、円柱、多角柱、半球、半楕円体等が挙げられる。例えば、図３に示すように、凸部８ａの形状は、円錐であってよい。例えば、図４に示すように、凸部８ｂの形状は、四角錐であってもよい。例えば、図５に示すように、凸部８ｃの形状は、六角錐であってもよい。例えば、図６に示すように、凸部８ｄの形状は、横置きの三角柱（三角柱における一側面（四角形の面）が平坦部９に接するように置かれた三角柱）であってもよい。微細構造７を俯瞰した（上面から見た）際に膜担体３の全表面を視認でき、被検出物質が検出された際の色変化を光学的手法で確認しやすい点で、これらの中では、円錐や多角錐等の錐体構造が凸部８の形状として適している。

微細構造７を構成する凸部８の形状は、幾何学的に正確な形状である必要はなく、角部が丸みを帯びている形状や表面に微細な凹凸が存在する形状等であってもよい。

上記微細構造７を構成する凸部８の底面１０の径４は、１０μｍ以上１０００μｍ以下であってよく、より好ましくは１５μｍ以上１０００μｍ以下である。凸部８の底面１０の径４は、複数の凸部８間においてこの範囲で変化していてもよい（互いに異なっていてもよい）。凸部８の底面１０の径４が１０μｍ以上である場合、微細構造７を形成するためのモールドの微細加工費が安くなり、面積の大きい膜担体３の表面に無数の微細構造７を均一に作製しやすい。従って、底面１０の径４が１０μｍ以上の凸部８で構成される微細構造は、より実用的である。凸部８の底面１０の径が１０μｍ以上である場合、液体試料を移動させるのに必要な毛細管力がより強まる傾向がある。凸部８の底面１０の径４が１０００μｍ以下である場合、モールドの作製時に金属部材から削りだす金属の体積を低減でき、モールド及び膜担体３の作製費用を抑制できる。凸部８の底面１０の径が１０００μｍ以下である場合、膜担体３における流路２の面積を小さくすることができるため、液体試料検査キット１８の小型化が図られ、液体試料検査キット１８自体の輸送に有利となる。

凸部８の底面１０の径４は、凸部８の底面１０における代表長さとして定義される。底面１０における代表長さは、底面１０の形状が円の場合は直径、三角形又は四角形の場合は最も短い一辺の長さ、五角形以上の多角形の場合は最も長い対角線の長さ、それ以外の形状の場合は底面１０における最大の長さとする。

図７は、図３に示す微細構造７ａを有する膜担体３ａのＶＩＩ−ＶＩＩ線に沿った矢視断面図である。図３及び図７に示すように、凸部８ａの形状が円錐である場合、凸部８ａの底面１０ａの径４ａは、円錐の底面（円）の直径である。図４に示すように、凸部８ｂの形状が正四角錐である場合、凸部８ｂの底面１０ｂの径４ｂは、底面（正四角形）１０ｂの辺の長さである。図５に示すように、凸部８ｃの形状が正六角錐である場合、凸部８ｃの底面１０ｃの径４ｃは、底面（正六角形）１０ｃの中心を通る対角線の長さ（最も長い対角線の長さ）である。図６に示すように、凸部８ｄの形状が横置きの三角柱である場合、凸部８ｄの底面１０ｄの径４ｄは、底面（長方形）１０ｄの最も短い一辺の長さ（図６では、液体試料の輸送方向ｄと直交する方向の長さ）である。

上記微細構造７を構成する凸部８の高さ６は、好ましくは１０μｍ以上５００μｍ以下であり、より好ましくは１５μｍ以上５００μｍである。凸部８の高さ６は、複数の凸部８間においてこの範囲で変化していてもよい（互いに異なっていてもよい）。凸部８の高さ６が１０μｍ以上である場合、流路２の体積が大きくなり、液体試料がより短時間で展開可能となる。凸部８の高さ６が５００μｍ以下である場合、微細構造７を作製する時間とコストを低減でき、微細構造７の作製がより容易となる。

凸部８の高さ６は、平坦部９に直交する方向における凸部８の最大長さとして定義される。図３及び図７に示すように、凸部８ａの形状が円錐である場合、凸部８ａの高さ６ａは、平坦部９に直交する方向における凸部８ａの最大長さ（円錐の高さ）である。図４に示すように、凸部８ｂの形状が四角錐である場合、凸部８ｂの高さ６ｂは、平坦部９に直交する方向における凸部８ｂの最大長さ（四角錐の高さ）である。図５に示すように、凸部８ｃの形状が六角錐である場合、凸部８ｃの高さ６ｃは、平坦部９に直交する方向における凸部８ｃの最大長さ（六角錐の高さ）である。図６に示すように、凸部８ｄの形状が横置きの三角柱である場合、凸部８ｄの高さ６ｄは、平坦部９に直交する方向における凸部８ｄの最大長さ（横置きの三角柱の高さ）である。

上記微細構造７を構成する凸部８の底面積（凸部８の底面１０一つあたりの面積）は、好ましくは７５μｍ^２以上２５００００μｍ^２以下である。凸部８の底面積は、複数の凸部８間においてこの範囲で変化していてもよい（互いに異なっていてもよい）。凸部８の底面積が７８μｍ^２以上である場合、微細加工が容易になり、微細構造の作製のコストがより低減する。凸部８の底面積が２５００００μｍ^２以下である場合、一つの検査キット内で微細構造７を構成する凸部８の数が多くなり、液体試料の展開がより容易になる。

上記微細構造７を構成する凸部８同士の最近接距離５は、好ましくは５００μｍ以下、より好ましくは２μｍ以上１００μｍ以下である。凸部８同士の最近接距離５は、複数の凸部８間においてこの範囲で変化していてもよい（互いに異なっていてもよい）。凸部８同士の最近接距離５は、０μｍより小さいことは有りえず、５００μｍ以下である場合、液体試料と流路２との接触面積が増大し、これにより毛細管力が増大するため液体試料を移動させることがより容易になる。ここで、「凸部８同士の最近接距離」とは、同一の領域内で隣り合う一対の凸部８の最近接距離である。

上記微細構造７を構成する凸部８のアスペクト比は、好ましくは０．１以上２．０以下である。ここで言うアスペクト比とは、凸部８の高さ６（Ｌｈ）を、凸部８の底面１０の代表長さ（径４）（Ｌｖ）で割った値（Ｌｈ／Ｌｖ）である。アスペクト比が０．１以上である場合、液体試料と流路２との接触面積が増大し、これにより毛細管力が増大するため液体試料を移動させることがより容易になる。アスペクト比が２．０以下である場合、微細構造の作製がより容易になる。

微細構造７は、同一領域内において、互いに同一の凸部８から構成されていてよい。微細構造７は、同一領域内において、互いに異なる凸部８から構成されていてもよい。この場合、互いに異なる凸部８は、同一領域内において、液体試料の輸送方向ｄに沿って、一定の規則に従い並んでいてよい。つまり、凸部８は、同一の領域内において、例えば、凸部８の底面１０の径４、凸部８の高さ６、凸部８同士の最近接距離５及び凸部８のアスペクト比（Ｌｈ／Ｌｖ）の少なくとも１つが、液体試料の輸送方向ｄに沿って、一定の規則に従い変化（増大又は減少）するように並んでいてよい。

図８は、図２に示す膜担体３において、微細構造７が液体試料の輸送方向に沿って変化する箇所（互いに異なる微細構造を有する第一の領域Ａ及び第二の領域Ｂ（又は第二の領域Ｂ及び第三の領域Ｃ）の境界付近）を拡大した俯瞰図（上面図）の一例を示す。図８に示すように、第一の領域Ａ（第二の領域Ｂ）と第二の領域Ｂ（第三の領域Ｃ）とは、互いに異なる微細構造７Ａ（７Ｂ），７Ｂ（７Ｃ）を有している。例えば、第一の領域Ａ（第二の領域Ｂ）の微細構造７Ａ（７Ｂ）と第二の領域Ｂ（第三の領域Ｃ）の微細構造７Ｂ（７Ｃ）とでは、凸部８Ａ（８Ｂ），８Ｂ（８Ｃ）はいずれも図３に示したような円錐状であるが、凸部８の底面の径４Ａ（４Ｂ），４Ｂ（４Ｃ）が互いに異なっており、また、同一領域内の凸部８同士の最近接距離５Ａ（５Ｂ），５Ｂ（５Ｃ）も互いに異なっている。

第一の領域Ａ（第二の領域Ｂ）の微細構造７Ａ（７Ｂ）と第二の領域Ｂ（第三の領域Ｃ）の微細構造７Ｂ（７Ｃ）とでは、図８に示した例以外にも、例えば、凸部８の形状、凸部８の底面１０の径４、凸部８の底面積、凸部８の高さ６、同一領域内の凸部８同士の最近接距離５及び凸部８のアスペクト比（Ｌｈ／Ｌｖ）の少なくとも１つが互いに異なっていてよい。

隣接する領域（第一の領域Ａ及び第二の領域Ｂ（又は第二の領域Ｂ及び第三の領域Ｃ））は、各領域間に所定の間隔を空けて配置されている。異なる領域間における凸部８同士の最近接距離（緩衝距離ともいう）５Ｄは、好ましくは５００μｍ以下である。緩衝距離５Ｄは、１μｍ以上であってよい。凸部８同士の緩衝距離５Ｄが５００μｍ以下である場合、各領域間での液体試料の輸送がより滞りなく行われる。

膜担体３が上述した微細構造７を有することにより、液体試料検査キット１８内（膜担体３上）を流れる液体試料の流速が、液体試料の輸送方向ｄに沿って変化する。上記液体試料検査キット１８内での流速は、微細構造７が均一に作製されている領域（第一の領域Ａ、第二の領域Ｂ及び第三の領域Ｃの各領域）での平均流速をもって評価する。微細構造７が均一に作製されている領域とは、同一の微細構造７が並んでいる領域や、微細構造７が一定の規則に従って一様に変化し続ける領域をいう。平均流速とは、微細構造７が均一に作製されている領域の液体試料進行方向（輸送方向ｄ）の始点から終点までの距離（最短距離）を、液体試料が始点から終点まで進行する（輸送される）のにかかった時間で割った値である。液体試料検査キット１８内での流速（各領域での平均流速）は、後述する実施例に記載の方法で測定することができる。

図９は、他の一実施形態における膜担体の上面図である。図２に示す膜担体３では、第三の領域Ｃに検知ゾーン３ｙが設けられているが、図９に示す膜担体１３では、第二の領域Ｂに検知ゾーン１３ｙが設けられている。図９に示すように滴下ゾーン１３ｘ及び検知ゾーン１３ｙは、膜担体１３の短手方向の略全体にわたって形成されていてもよい。

検知ゾーン１３ｙを有する第二の領域Ｂにおける流速は、滴下ゾーン１３ｘを有する第一の領域Ａにおける流速と比較して遅いことが好ましい。この場合、被検出物質と検出物質との反応性が良好なものとなり、検査キットの感度がより向上する傾向がある。この場合に流速が比較的遅くなる第二の領域Ｂの輸送方向ｄにおける長さを最小限にとどめ、検査時間を短縮する観点から、この膜担体１３では、第二の領域Ｂの輸送方向ｄにおける長さは、第一の領域Ａ（更には第三の領域Ｃ）の輸送方向ｄにおける長さよりも短くなっている。また、第三の領域Ｃにおける流速は、検知ゾーン１３ｙを有する第二の領域Ｂにおける流速と比較して速いことが好ましい。この場合、液体試料が始点から終点まで進行する（輸送される）のにかかる時間がより短くなり、判定時間の短縮につながることに加えて、第三の領域Ｃ（下流側の領域）から検知ゾーン１３ｙを有する第二の領域Ｂへの液体試料の逆流を抑制することが可能となる。

上記液体試料検査キット１８内において、最も小さい流速に対する最も大きい流速の比は、好ましくは１以上１０以下である。最も小さい流速に対する最も大きい流速の比は、より好ましくは１．０を超え１０以下であり、更に好ましくは、１．２以上１０以下である。最も大きい流速を最も小さい流速で割った際の比が１より小さくなることはなく、この値が１０以下である場合、流速が変化する箇所で液体試料が流路２外にあふれたり、液体試料の展開が止まってしまったりすることが抑制される。「最も小さい流速」及び「最も大きい流速」は、膜担体３に設けられた複数の領域（第一の領域Ａ、第二の領域Ｂ及び第三の領域Ｃ）毎に測定される平均流速のうち、最も小さい平均流速及び最も大きい平均流速をそれぞれ意味する。

上記液体試料検査キット１８内での最も小さい流速と最も大きい流速は、いずれも、好ましくは０．３０ｍｍ／ｓ以上５．０ｍｍ／ｓ以下である。最も小さい流速が０．３０ｍｍ／ｓ以上である場合、検査キットの作り込み時の作製ばらつきによる不具合（例えば、液体試料の展開が停止してしまう等）がより抑制される。最も大きい流速が５．０ｍｍ／ｓ以下である場合、流路２中での液体試料の流れを制御することがより容易になり、液体試料が流路２外にあふれることを抑制できる。

本実施形態の液体試料検査キット１８の微細構造７及び膜担体３は、熱可塑性プラスチックからなっていてよい。換言すれば、熱可塑性プラスチックからなる膜状の基材を加工することにより、微細構造７を有する膜担体３を作製することができる。加工方法としては、例えば、熱インプリント、ＵＶインプリント、射出成型、エッチング、フォトリソグラフィー、機械切削、レーザー加工等が挙げられる。この中でも安価に精密な加工を施す手法として、熱可塑性プラスチックに対する熱インプリントが適している。熱可塑性プラスチックとしてはポリエステル系樹脂、ポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン系樹脂、ポリカーボネート系樹脂、フッ素系樹脂及びアクリル系樹脂等が挙げられ、具体的にはポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）等様々な種類のものを用いることができる。

インプリントや射出成型といった金型を用いた加工方法の場合、錐体は、底面に比べ上部が細くなっているため、同底面の柱体を作製するよりも金型作製時に削り出す体積は少なくて済み、金型を安価に作製することができる。この場合、液体試料中の被検出物質の検出をより安価に行うことが可能となる。

以上説明したとおり、膜担体３は、液体試料中の被検出物質を検出する液体試料検査キット１８用の膜担体３であって、膜担体３の一面上に設けられた、液体試料を輸送するための毛細管作用を生じせしめる微細構造７と、微細構造７により形成された、液体試料を輸送する流路２と、を備え、膜担体３には、液体試料の輸送方向に沿って設けられた、微細構造７及び流路２を有する複数の領域Ａ，Ｂ，Ｃが設けられ、隣接する領域Ａ，Ｂ（Ｂ，Ｃ）が互いに異なる微細構造７を有する。

本実施形態に係る液体試料検査キット１８では、膜担体３が有する検知ゾーン３ｙにおいて、被検出物質が検出された際に色変化が生じる。色変化は、光学的手法で確認可能な色変化であってよい。

上記光学的手法としては、主に目視による判定と蛍光強度を測定する手法の２つが挙げられる。目視によって判定する場合には、検知前と検知後の色をＣＩＥ１９７６Ｌ^＊ａ^＊ｂ^＊色空間の表色系で測定した際の、２つの色刺激間の色差（ＪＩＳ Ｚ８７８１−４：２０１３に記載のΔＥ）が０．５以上となるような色変化が生じることが好ましい。この色差が０．５以上であると、色の違いを目視で確認することが容易になる。蛍光強度を測定して判定する場合には、検知ゾーン３ｙでの蛍光強度（Ｆｌ１）と、検知ゾーン３ｙに隣接する上流域および下流域での蛍光強度（Ｆｌ２）との比（Ｆｌ１／Ｆｌ２）＝１０／１以上となるような色変化が生じることが好ましい。この比が１０／１以上であると、シグナルとノイズの分離が容易になる。

本実施形態の液体試料検査キット１８に検知ゾーン３ｙを作製するためには、一実施形態において、流路２の少なくとも一部に、検出物質が固定化されている。つまり、検知ゾーン３ｙには、被検出物質を検出する検出物質が固定されている。検知ゾーン３ｙにおける色変化は、被検出物質が検出物質により（検出物質と反応して）検知ゾーン３ｙに保持されることによって生じる。

言い換えれば、液体試料検査キット１８の製造方法は、検知ゾーン３ｙに、被検出物質を検知ゾーン３ｙに保持することによって色変化を生じせしめる検出物質を固定する工程を備えている。検知ゾーン３ｙに検出物質（試薬）をより効率よく固定化できる点から、膜担体３における検知ゾーン３ｙを設ける箇所に予め表面処理を施していてよい。

上記表面処理の方法としては、何ら限定されるものではなく、例えばＵＶ照射、ＵＶ／オゾン処理、各種プラズマ処理、３−ＡｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌｔｒｉｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅやＧｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅによる表面修飾等の種々の方法を用いることができる。

本実施形態において、上記検出物質（試薬）としては、例えば、抗体が挙げられる。抗体は、被出検物質と抗原抗体反応する抗体であり、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい。

検知ゾーン３ｙにおける色変化は、液体試料中の被検出物質と特異的に反応する抗体又はその抗原結合性断片を有する標識体によって生じるものであってよい。色変化は、例えば、標識体が、検出物質により（検出物質と反応（結合）して）検知ゾーン３ｙに保持されて呈色することによって生じる。

標識体は、例えば、コロイド粒子、ラテックス粒子等の粒子に上記抗体又はその抗原結合性断片が結合したものであってよい。抗原結合性断片とは、被検出物質と特異的に結合することができる断片をいい、例えば、抗体の抗原結合性断片をいう。標識体は、抗体又はその抗原結合性断片を介して被検出物質に結合することができる。粒子は、磁性又は蛍光発光性を有してもよい。コロイド粒子としては、金コロイド粒子、白金コロイド粒子の金属コロイド粒子等が挙げられる。粒子は、粒径制御、分散安定性及び結合容易性の点で、好ましくはラテックス粒子である。ラテックス粒子の材料としては特に限定されないが、ポリスチレンが好ましい。

粒子は、視認性の点で、好ましくは着色粒子又は蛍光粒子であり、より好ましくは着色粒子である。着色粒子は、肉眼で色が検出可能なものであればよい。蛍光粒子は、蛍光物質を含有すればよい。粒子は、着色ラテックス粒子又は蛍光ラテックス粒子であってよい。粒子が着色ラテックス粒子である場合、上述の色変化が、目視により好適に判定される。また、粒子が蛍光ラテックス粒子である場合、上述の色変化が、蛍光強度の測定により好適に判定される。

上述したような標識体が、滴下される液体試料中の被検出物質と反応し得るように、検査キット１８の少なくとも一部に設けられている。標識体は、例えば、検査キット１８中の部材に設けられていてよく、膜担体３の流路２の少なくとも一部（検知ゾーン３ｙより上流側）に設けられていてよい。そして、被検出物質と反応（結合）した標識体は、検出物質により（検出物質が被検出物質と反応（結合）することにより）検知ゾーン３ｙに保持される。これにより、検知ゾーン３ｙにおける色変化（標識体による呈色）が生じる。

本実施形態の一側面に係る液体試料の検査方法は、検査キット１８を用いる検査方法である。

検査キット１８を用いる、液体試料の検査方法は、液体試料と、液体試料中の被検出物質と特異的に結合する標識体とを混合して混合液体試料（混合済み液体試料）を調製し、被検出物質と標識体とを互いに結合させる工程と、混合液体試料を膜担体３に設けられた滴下ゾーン３ｘに滴下する工程と、微細構造７により、混合液体試料を滴下ゾーン３ｘから検知ゾーン３ｙへ輸送する工程と、検知ゾーン３ｙにおける色変化（標識体の呈色）を検知する工程と、を備えてよい。

また、例えば、上記検査方法は、液体試料を、膜担体３の表面のうち滴下ゾーン３ｘに滴下する工程と、膜担体３の表面に形成されている微細構造７（複数の凸部８）が奏する毛細管作用により、微細構造７を介して、液体試料を滴下ゾーン３ｘから検知ゾーン３ｙへ輸送する工程と、輸送過程において、液体試料中の被検出物質を、上記の抗体又はその抗原結合性断片を介して標識体と結合させ、更に、被検出物質を、検知ゾーン３ｙに固定された試薬と結合させて、検知ゾーン３ｙにおける色変化を検知する（色変化の有無を光学的に判定する）工程と、を備えてよい。

上記の検査方法の被検出物質と標識体とを互いに結合させる工程では、液体試料と標識体とを混合する方法は特に制限されない。例えば標識体の入れられた容器に液体試料を添加する方法でもよいし、例えば標識体をふくむ液体と液体試料とを混合してもよい。また例えば液体試料の入れられた容器の滴下口にフィルターを挟み、そのフィルター中に標識体を固定化していてもよい。

以下、本実施形態を具体的に説明するが、本実施形態はこれらの実験例に限定されるものではない。

［実験例１］
＜モールドの準備＞
モールドは、レーザー加工及び機械切削によって作製した。図１０に微細構造を作成するためのモールド２０を示す。図１０に示すモールド２０は、複数の領域（第一の領域Ａ、第二の領域Ｂ及び第三の領域Ｃ）を有し、その表面には、図８に示す微細構造（凸部）に対応する凹部が形成されている（図示せず）。モールド２０はアルミ合金Ａ５０５２製である。このモールド（金型）の中心部には、３０ｍｍ×３０ｍｍの範囲に微細加工が施されている。モールド２０の加工範囲のうち、特定の一辺（２０Ａ）から加工範囲内側に１６ｍｍ分の領域（領域Ａ）と、特定の一辺の対辺（２０Ｂ）から加工範囲内側に１１ｍｍ分の領域（領域Ｃ）には、径が１０μｍ、深さ（表では高さということもある）１０μｍの円錐型の凹部が、微細構造同士の最近接距離（５Ａ、５Ｃ）を５μｍとして図８のような三角配列形式で並んでいる。上記加工範囲のそれ以外の範囲（領域Ｂ）では、径が１０μｍ、深さ１０μｍの円錐型の凹部が、領域Ｂにおける微細構造の最近接微細構造間距離最近接距離（５Ｂ）を５μｍとして図８のような三角配列形式（千鳥状）で並んでいる。なお、領域Ａ、Ｂ間及び領域Ｂ、Ｃ間境界での緩衝距離５Ｄはどちらも５μｍである。
上記のモールドの凹凸面に対し、転写した際のモールドと熱可塑性プラスチックの剥離を容易かつ確実にするため、離型処理を施した。離型処理は、ダイキン工業社製オプツールＨＤ−２１００ＴＨに約１分間浸し、乾燥させたのち、一晩静置することで行った。

＜微細構造の転写＞
上記のようにして得られたモールドを用いて、熱可塑性プラスチックに微細構造を転写した。熱可塑性プラスチックとしては、ポリスチレン（デンカ株式会社製デンカスチレンシート、膜厚３００μｍ）を用いた。加工方法として熱インプリントを用い、装置はＳＣＩＶＡＸ社製Ｘ−３００を用いた。成形温度は１２０℃、印加圧力は５．５ＭＰａとし、１０分間転写を行った。転写後は、圧力を印加したまま熱可塑性プラスチックとモールドを８０℃まで冷却し、その後圧力を除くことで、一端側から順に領域Ａ、領域Ｂ及び領域Ｃを有する膜担体を作製した。

［実験例２］
実験例１における領域Ａ、Ｂ及びＣの微細構造を、径が１００μｍ、深さ１００μｍの円錐型の凹部としたこと以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例３］
実験例１における領域Ａ、Ｂ及びＣの微細構造を、径が５００μｍ、深さ５００μｍの円錐型の凹部としたこと以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例４］
実験例１における領域Ａ及びＣの微細構造を、径が１００μｍ、深さ１００μｍの円錐型の凹部とし、領域Ｂの微細構造を径が３０μｍ、深さ３０μｍの円錐型の凹部としたこと以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例５］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造を、径が２５０μｍ、深さ２５０μｍの円錐型の凹部とし、領域Ｂの微細構造を径が３０μｍ、深さ３０μｍの円錐型の凹部としたこと以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例６］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造を、径が２５０μｍ、深さ２５０μｍの円錐型の凹部とし、領域Ｂの微細構造を径が１０μｍ、深さ１０μｍの円錐型の凹部としたこと以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例７］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造を、径が１００μｍ、深さ１００μｍの円錐型の凹部とし、領域Ｂの微細構造を径が１０μｍ、深さ１０μｍの円錐型の凹部としたこと以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例８］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造を、径が５００μｍ、深さ５００μｍの円錐型の凹部とし、領域Ｂの微細構造を径が１０μｍ、深さ１０μｍの円錐型の凹部とした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例９］
実験例４における領域Ａの微細構造を輸送方向と垂直方向に１ｍｍ幅ずつ１６区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの円錐型凹部の径及び深さが１００μｍから４．７μｍずつ減少していく（つまり、輸送方向に沿って、１００μｍから４．７μｍずつ減少していく）ものとし、更に領域Ｃの微細構造を輸送方向と垂直方向に１ｍｍ幅ずつ１１区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの円錐型凹部の径及び深さが１００μｍから７μｍずつ減少していく（つまり、輸送方向に沿って、１００μｍから７μｍずつ増大していく）ものとしたこと以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１０］
実験例４における領域Ａの微細構造を輸送方向と垂直方向に１ｍｍ幅ずつ１６区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの円錐型凹部の径及び深さが２５０μｍから１４．７μｍずつ減少していくものとし、更に領域Ｃの微細構造を輸送方向と垂直方向に１ｍｍ幅ずつ１１区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの円錐型凹部の径及び深さが２５０μｍから２２μｍずつ減少していくものとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１１］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造の径を５０μｍとし、領域Ｂの微細構造の径を１５μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１２］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造の径を５０μｍとし、領域Ｂの微細構造の径を３００μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１３］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造の径を５００μｍとし、領域Ｂの微細構造の径を３００μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１４］
実験例４における領域Ｂの微細構造を径が２００μｍ、深さ１００μｍの円錐型の凹部とした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１５］
実験例４における領域Ｂの微細構造を径が５００μｍ、深さ１００μｍの円錐型の凹部とした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１６］
実験例４における領域Ａの微細構造を輸送方向と垂直方向に１ｍｍ幅ずつ１６区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの円錐型凹部の径が１００μｍから１０μｍずつ増加していくものとし、更に領域Ｃの微細構造を輸送方向と垂直方向に１ｍｍ幅ずつ１１区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの円錐型凹部の径が１００μｍから１５μｍずつ増加していくものとし、領域Ｂの円錐型凹部の径を２５０μｍ、深さを１００μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１７］
実験例４における領域Ａの微細構造を輸送方向と垂直方向に１ｍｍ幅ずつ１６区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの円錐型凹部の径が１００μｍから２６．７μｍずつ増加していくものとし、更に領域Ｃの微細構造を１ｍｍ幅ずつ１１区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの円錐型凹部の深さが１００μｍから４０μｍずつ増加していくものとし、領域Ｂの円錐型凹部の径を５００μｍ、深さを１００μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１８］
実験例４における領域Ｂの微細構造を、径が１００μｍ、深さ１００μｍの円錐型の凹部とし、更に微細構造同士の最近接距離を３０μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例１９］
実験例４における領域Ｂの微細構造を、径が１００μｍ、深さ１００μｍの円錐型の凹部とし、更に微細構造同士の最近接距離を１００μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例２０］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造を、径が５００μｍ、深さ５００μｍの円錐型の凹部とし、領域Ｂの微細構造を径が５００μｍ、深さ５００μｍの円錐型の凹部とし更に微細構造同士の最近接距離を１００μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例２１］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造を、径が５００μｍ、深さ５００μｍの円錐型の凹部とし、領域Ｂの微細構造を径が５００μｍ、深さ５００μｍの円錐型の凹部とし更に微細構造同士の最近接距離を５００μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例２２］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造を、径が２５０μｍ、深さ２５０μｍの円錐型の凹部とし、領域Ｂの微細構造を径が２５０μｍ、深さ２５０μｍの円錐型の凹部とし更に微細構造同士の最近接距離を１００μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例２３］
実験例４における領域Ａ及びＣの微細構造を、径が２５０μｍ、深さ２５０μｍの円錐型の凹部とし、領域Ｂの微細構造を径が２５０μｍ、深さ２５０μｍの円錐型の凹部とし更に微細構造同士の最近接距離を２５０μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

［実験例２４］
実験例４における領域Ａの微細構造を輸送方向と垂直方向に１ｍｍ幅ずつ１６区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの微細構造同士の最近接距離が５μｍから１．７μｍずつ増加していくものとし、更に領域Ｃの微細構造を輸送方向と垂直方向に１ｍｍ幅ずつ１１区画に分割し、領域Ｂに近づくにつれそれぞれの区画ごとの微細構造同士の最近接距離が５μｍから２．５μｍずつ増加していくものとし、更に領域Ｂの微細構造を径が１００μｍ、深さ１００μｍの円錐型の凹部、微細構造同士の最近接距離を３０μｍとした以外は、実験例１と同様の条件で膜担体を作製した。

＜検知ゾーンの作製＞
上記のように作製した膜担体の領域Ｂの構造を転写した部分のみにＵＶ処理を施した。その部分に、抗Ａ型インフルエンザＮＰ抗体浮遊液、並びに抗Ｂ型インフルエンザＮＰ抗体浮遊液を各々線幅１ｍｍで塗布し（塗布量は各３μＬ）、温風下で良く乾燥させ、検出物質を固定化した。

＜標識体のセット＞
精製抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰ抗体（上記と別の抗体）及び精製抗Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰ抗体（上記と別の抗体）を使用した。抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰ抗体に粒子径０．３９４μｍの青色ラテックス粒子(ＣＭ／ＢＬ セラダイン製)を共有結合で標識し、糖、界面活性剤及びタンパク質を含むトリス緩衝液にラテックス粒子の濃度が０．０２５ｗ／ｖ％になるように懸濁し、ソニケーションを行って充分に分散浮遊させた抗Ａ型標識体を調製した。同様に抗Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰ抗体に青色ラテックス粒子を標識した抗Ｂ型標識体を調製した。

抗Ａ型標識体と抗Ｂ型標識体とを混合し、大きさが３ｃｍ×１ｃｍのガラス繊維（３３ＧＬＡＳＳ ＮＯ．１０５３９７６６ Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ＆Ｓｃｈｕｅｌｌ製）に１平方センチメートルあたり５０μＬになる量を塗布し、温風下で良く乾燥させ、標識体パッドを作製した。その後、実験例１〜２４のようにして作製した膜担体の領域Ａの端部２ｍｍだけ標識体パッドを重ね、カッターで幅５ｍｍの短冊に裁断して一体化された液体サンプル検査キットを作製した。

＜検知評価＞
上記のように作製された液体試料検査キットの端部の標識体パッド上（滴下ゾーン）に、液体試料を１００μＬ滴下した。液体サンプルは、希釈溶液としてデンカ生研社製クイックナビ―Ｆｌｕに付属している検体浮遊液を用い、Ａ型インフルエンザウイルス Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ／３２／９２（Ｈ３Ｎ２）を４×１０^４倍に希釈したものと、Ｂ型インフルエンザウイルス Ｂ／Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ／７／９７を４×１０^３倍に希釈したものの２種を用いた。滴下後の液体試料の移動する様子を直上からデジタルカメラで録画した。この動画から、領域Ａ〜Ｃそれぞれにおける液体試料の移動する流速を評価した。流速は、Ａ型インフルエンザウイルスを希釈したものの流速と、Ｂ型インフルエンザウイルスを希釈したものの流速との、平均値を平均流速として用いた。また、流速比は、最も大きい流速を最も小さい流速で割った際の比である。この結果を表１〜３に示した。

検知の判定は、１５分間後に検知ゾーン（Ａ型インフルエンザウイルス検出部並びにＢ型インフルエンザウイルス検出部）の着色ラインの有無を目視により観察して行った。

判定の結果、Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ／３２／９２（Ｈ３Ｎ２）を４×１０^４倍に希釈したものを用いた場合はＡ型検知ゾーンのみに色の変化が確認でき、Ｂ／Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ／７／９７を４×１０^３倍に希釈したものを用いた場合はＢ型検知ゾーンのみに色の変化が確認できた。

実験例１〜２４のように作製した膜担体から、上記のように液体試料検査キットを作製した。次いで、Ａ型インフルエンザウイルス Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ／３２／９２（Ｈ３Ｎ２）の希釈倍率を４×１０^４から大きくしていった際に、試験開始後１５分後に着色ラインの有無を目視できなくなる希釈倍率（Ａ型目視判定可能な限界倍率）を求めた。その希釈倍率の１／２の希釈倍率で検査した際に、試験開始してから着色ラインの色の濃さが安定するまでの時間（Ａ型の濃さが安定するまでの時間）を求めた。その結果を表１〜３に示す。

実験例１〜２４のように作製した膜担体から、上記のように液体試料検査キットを作製した。次いで、Ｂ型インフルエンザウイルスＢ／Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ／７／９７の希釈倍率を４×１０^３から大きくしていった際に、着色ラインの有無を目視できなくなる希釈倍率（Ｂ型目視判定可能な限界倍率）を求めた。その希釈倍率の１／２の希釈倍率で検査した際に、試験開始してから着色ラインの色の濃さが安定するまでの時間（Ｂ型の濃さが安定するまでの時間）を求めた。その結果を表１〜３に示す。
濃さが安定するまでの時間は、Ａ型の濃さが安定するまでの時間と、Ｂ型の濃さが安定するまでの時間との平均値を、濃さが安定するまでの時間として用いた。

表１〜３には、各実験例について以下の基準に基づく総合評価の結果も併せて示す。
Ａ：判定時間４分以内にＡ型で５×１０^４以上、Ｂ型で５×１０^３以上の希釈倍率で判定可能なもの、又は、判定時間６分以内にＡ型で７×１０^４以上、Ｂ型で７×１０^３以上の希釈倍率で判定可能なもの。
Ｂ：総合評価がＡ、Ｃいずれにもあてはまらないもの。
Ｃ：判定時間が７分以上のもの、又は、判定可能な希釈倍率がＡ型で４×１０^４以下、又は、Ｂ型で４×１０^３以下のもの。

［実験例２５〜４５］
実験例２５〜４５における膜担体の作製は、領域Ａ〜Ｃにおいて、表４に示すとおりの微細構造（凸部）同士の最近接距離、凸部の径及び凸部の高さとなるようにすること以外は、実験例１と同様にして行った。
次いで、用いる粒子を着色ラテックス粒子から蛍光ラテックス粒子（micromer-F 蛍光ラテックス粒子 材料ポリスチレン コアフロント社製）に変更し、試験開始後４分後に着色ラインの有無をイムノクロマトリーダ（Ｃ１１７８７ 浜松ホトニクス社製）で読み取りできなくなる倍率（蛍光判定限界倍率）を求めたこと以外は、実験例１〜２４と同様にして、検知ゾーンの作製、標識体のセット及び検知評価を行った。結果を表４〜５に示した。

表４〜５には、各実験例について以下の基準に基づく総合評価の結果も併せて示す。
Ａ：試験開始後４分での蛍光判定可能な限界倍率が、Ａ型で３×１０^６以上、Ｂ型で３×１０^５以上であるもの。
Ｂ：総合評価がＡ、Ｃいずれにもあてはまらないもの。
Ｃ：試験開始後４分での蛍光判定可能な限界倍率が、Ａ型で２×１０^６未満、Ｂ型で２×１０^５未満であるもの。

表１〜３の結果から、本実施形態による液体試料検査キットは、流路中の微細構造の高さ、底面積、最近接距離、アスペクト比を変化させることで、流速を調整できることが示された。その結果、本実施形態は、液体試料検査キットの感度や着色が安定するまでの時間を調整することができ、高感度かつ短時間な検査が実施可能であることが示された。また、表４〜５の結果から、上記液体試料検査キットにおいて、粒子を蛍光ラテックス粒子とした場合であっても、高感度な検査が実施可能であることが確認された。

本実施形態の液体試料検査キットは、短時間で高感度な検査を安価に実施することができるため、使い捨て可能なＰＯＣＴ試薬に有用である。

２ 流路
３，３ａ，１３ 微細構造が設けられた膜担体
３ｘ，１３ｘ 滴下ゾーン
３ｙ，１３ｙ 検知ゾーン
４，４ａ，４ｂ，４ｃ，４ｄ 凸部の底面における代表長さ（凸部の底面の径）
４Ａ 微細構造が変化する箇所での前方（輸送方向の上流側）の底面の代表長さ（第一の領域Ａにおける凸部の底面の径）
４Ｂ 微細構造が変化する箇所での後方の底面の代表長さ（第二の領域Ｂにおける凸部の底面の径）
４Ｃ 微細構造が変化する箇所での後方の底面の代表長さ（第三の領域Ｃにおける凸部の底面の径）
５ 最近接微細構造間距離
５Ａ 微細構造が変化する箇所での前方の最近接微細構造間距離（第一の領域Ａにおける微細構造（凸部）同士の最近接微細構造間距離）
５Ｂ 微細構造が変化する箇所での後方の最近接微細構造間距離（第二の領域Ｂにおける微細構造（凸部）同士の最近接微細構造間距離）
５Ｃ 微細構造が変化する箇所での後方の最近接微細構造間距離（第三の領域Ｃにおける微細構造（凸部）同士の最近接微細構造間距離）
５Ｄ 緩衝距離（微細構造が変化する箇所での緩衝距離）
６，６ａ，６ｂ，６ｃ，６ｄ 凸部の高さ
７，７ａ，７ｂ，７ｃ，７ｄ 微細構造
８，８ａ，８ｂ，８ｃ，８ｄ 凸部
９ 平坦部
１０，１０ａ，１０ｂ，１０ｃ，１０ｄ 凸部の底面
１８ 液体試料用の検査キット
１８ａ 筐体
１８ｂ 第一開口部
１８ｃ 第二開口部
２０ モールド
２０Ａ 特定の一辺
２０Ｂ 特定の一辺の対辺
Ａ 第一の領域
Ｂ 第二の領域
Ｃ 第三の領域
ｄ 液体試料の流れる方向（輸送方向）

Claims (14)

1. 液体試料中の被検出物質を検出する検査キット用の膜担体であって、
   前記液体試料を輸送できる少なくとも一つの流路を備え、
   前記流路の底面に、前記液体試料を輸送するための毛細管作用を生じせしめる微細構造が設けられ、
   前記微細構造が、前記液体試料の輸送方向に沿って変化するように設けられている、液体試料検査キット用膜担体。
2. 前記微細構造は、前記流路内における前記液体試料の流速が前記流路内で変化するように設けられている、請求項１に記載の液体試料検査キット用膜担体。
3. 前記微細構造は、前記流路内における前記液体試料の、最も小さい流速と最も大きい流速との比が１以上１０以下となるように設けられている、請求項１又は２に記載の液体試料検査キット用膜担体。
4. 前記微細構造は、前記流路内における前記液体試料の最も小さい流速と最も大きい流速とが、いずれも０．３０ｍｍ／ｓ以上５．０ｍｍ／ｓ以下となるように設けられている、請求項１〜３の何れか一項に記載の液体試料検査キット用膜担体。
5. 前記微細構造の高さが、前記流路内で１０μｍ以上５００μｍ以下である、請求項１〜４の何れか一項に記載の液体試料検査キット用膜担体。
6. 前記微細構造の底面積が、前記流路内で７５μｍ^２以上２５００００μｍ^２以下である、請求項１〜５の何れか一項に記載の液体試料検査キット用膜担体。
7. 前記微細構造同士の最近接距離が、前記流路内で５００μｍ以下である、請求項１〜６の何れか一項に記載の液体試料検査キット用膜担体。
8. 前記微細構造のアスペクト比が、０．１以上２．０以下である、請求項１〜７の何れか一項に記載の液体試料検査キット用膜担体。
9. 液体試料中の被検出物質を検出する液体試料検査キットであって、
   請求項１〜８の何れか一項に記載された液体試料検査キット用膜担体を備え、
   前記膜担体は、前記液体試料中の前記被検出物質を検出する検知ゾーンを有し、
   前記検知ゾーンにおいて、前記被検出物質が検出された際に色変化が生じる、液体試料検査キット。
10. 前記液体試料中の前記被検出物質と特異的に反応する抗体又はその抗原結合性断片を有する標識体が、前記被検出物質と反応し得るように前記液体試料検査キットの少なくとも一部に設けられており、
    前記色変化は、前記被検出物質と結合した前記標識体によって生じる、請求項９に記載の液体試料検査キット。
11. 前記標識体が、着色ラテックス粒子又は蛍光ラテックス粒子に前記抗体又は前記抗原結合性断片が結合した粒子である、請求項１０に記載の液体試料検査キット。
12. 前記検知ゾーンには、前記被検出物質を検出する検出物質が固定されており、
    前記色変化は、前記標識体が前記検出物質により前記検知ゾーンに保持されて呈色することによって生じる、請求項１０又は１１に記載の液体試料検査キット。
13. 請求項９〜１２の何れか一項に記載された液体試料検査キットの製造方法であって、
    前記検知ゾーンに、前記被検出物質を前記検知ゾーンに保持することによって前記色変化を生じせしめる検出物質を固定する工程を備える、液体試料検査キットの製造方法。
14. 請求項９〜１２の何れか一項に記載された液体試料検査キットを用いる、液体試料の検査方法であって、
    前記液体試料と、前記液体試料中の被検出物質と特異的に結合する標識体とを混合して混合液体試料を調製し、前記被検出物質と前記標識体とを互いに結合させる工程と、
    前記混合液体試料を前記膜担体に設けられた滴下ゾーンに滴下する工程と、
    前記微細構造により、前記混合液体試料を前記滴下ゾーンから前記検知ゾーンへ輸送する工程と、
    前記検知ゾーンにおける色変化を検知する工程と、を備える、液体試料の検査方法。

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