ES2861514T3 - Dispositivo de inmunocromatografía que tiene ruidos de fondo reducidos y procedimiento para reducir los ruidos de fondo en un dispositivo de inmunocromatografía - Google Patents

Abstract

Un dispositivo inmunocromatográfico que comprende una membrana que tiene una región de detección, en la que se inmoviliza un anticuerpo o antígeno que sirve como sustancia de captura capaz de capturar una sustancia diana, para detectar la sustancia diana mediante el uso de un antígeno o anticuerpo marcado con un portador de marcado que es una partícula coloreada para formar un complejo del antígeno o anticuerpo marcado con la sustancia de captura y la sustancia diana en la región de detección de la sustancia de captura inmovilizada en el dispositivo, con base en el color del portador de marcado, en el que se permite que un colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado esté contenido en un estado seco en un miembro constituyente dispuesto en el lado aguas arriba de la región de detección del dispositivo de manera que el colorante se desarrolle junto con un espécimen cuando el espécimen se revela en el dispositivo.

Description

DESCRIPCIÓN

Dispositivo de inmunocromatografía que tiene ruidos de fondo reducidos y procedimiento para reducir los ruidos de fondo en un dispositivo de inmunocromatografía

Campo técnico

La presente invención se refiere a mejorar la visibilidad mediante la reducción del ruido de fondo para detectar con precisión una señal de una sustancia diana en un dispositivo inmunocromatográfico.

Técnica antecedente

En un dispositivo inmunocromatográfico, un portador de marcado, que se desarrolla junto con un espécimen, es un componente esencial en el procedimiento de detección de la invención. Dado que la presencia o ausencia de una sustancia objetivo se detecta principalmente con base en una imagen coloreada, el propio portador muestra un color visible. Debido a esto, la señal a detectar se ve afectada por el ruido de fondo del mismo color y pierde visibilidad. La pérdida de visibilidad ha sido un problema a resolver. Para resolver el problema, se ha propuesto que se utilice una solución de revelado que tenga un color complementario al de un portador de marcado como solución para extraer una sustancia objetivo de un espécimen y dispersarla (en lo sucesivo, extracto de espécimen) (Patente Literatura 1). Sin embargo, en este procedimiento, no se considera que cuando una cantidad indefinida de espécimen tomada por, por ejemplo, un hisopo de algodón se mezcla con un extracto de espécimen, un componente colorante también se diluye indefinidamente. El efecto proporcionado a un sistema de detección varía significativamente. Con el fin de mejorar la visibilidad mediante el uso de la relación complementaria de color entre el portador de marcado y el extracto del espécimen, es deseable que no sólo se controlen el tono sino también la luminosidad y la intensidad. En este procedimiento, sin embargo, es extremadamente difícil lidiar con la cantidad indefinida de espécimen tomada. La literatura de patentes 2 divulga un dispositivo de flujo lateral en el que está presente un tinte indeleble en toda la membrana o en el que está presente una película de color transparente sobre toda la membrana para reducir el ruido de fondo.

Mientras tanto, los reactivos de prueba, en los que se usa comúnmente un solo tipo de extracto de espécimen en una pluralidad de sistemas de detección, ahora se usan ampliamente (Literaturas no de patentes 1 a 4: QuickNavi (marca comercial) - prospecto para la gripe/ImmunoAce (marca registrada) prospecto para la gripe/Prime Check (marca registrada) FluRSV, prospecto/Nano Trap (marca registrada) manual de instrucciones IIR). Aunque no se limita a estos productos existentes, el soporte de marcado que se utilizará se selecciona entre muchos tipos de productos de diferentes colores. Es principalmente imposible desarrollar un color complementario correspondiente a todos los soportes de etiquetas. Por lo tanto, agregar un color específico a un extracto de espécimen contradice la conveniencia, es decir, el uso universal de un reactivo, y no es una elección razonable.

Lista de referencias

Bibliografía sobre patentes

Literatura de patente 1: Publicación de patente JP (Kokai) núm. 2013-228350

Literatura de patente 2: WO 03/008971 (Varian, Inc.)

Literatura que no es de patente

Literatura que no es de patente 1: QuickNavi (marca comercial)-Flu prospecto (revisado en noviembre de 2014 (13ra edición)

Literatura que no es de patente 2: ImmunoAce (marca registrada) prospecto contra la gripe (revisado en octubre de 2011 (10ma edición)

Literatura no relacionada con patentes 3 Prime Check (marca registrada) FluRSV, prospecto (revisado en enero de 2013 (3ra edición)

Literatura que no es de patente 4: Nano Trap (marca registrada) IIR manual de instrucciones (noviembre de 2014, 4ta edición)

Sumario de la Invención

Un objeto de la presente invención es mejorar la visibilidad reduciendo el ruido de fondo provocado por un portador de marcado de un anticuerpo marcado o antígeno marcado con el fin de detectar con precisión la señal de una sustancia diana en un dispositivo inmunocromatográfico.

Los presentes inventores estudiaron intensamente un procedimiento para reducir el ruido de fondo en un dispositivo inmunocromatográfico que tiene un portador de marcado acumulado mediante el uso de un anticuerpo o antígeno marcado con el portador de marcado para formar un complejo antígeno-anticuerpo en una región de detección, el ruido de fondo causado por el portador de marcado restante del anticuerpo marcado o antígeno marcado en una membrana que tiene la región de detección del dispositivo inmunocromatográfico.

Los presentes inventores han descubierto que un colorante que tiene un color complementario al color de un portador de marcado se dispone en un miembro constituyente colocado aguas arriba de una región de detección en el dispositivo de manera que el colorante se revela junto con un espécimen y un portador de marcado cuando se desarrolla el espécimen, lo que permite reducir la intensidad del color del portador de marcado en la membrana por la copresencia del portador de marcado y el colorante en la membrana, más específicamente, el colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado, para reducir el ruido de fondo. Con base en el hallazgo, se ha logrado la presente invención.

Más específicamente, la presente invención es la siguiente.

[1] Un dispositivo inmunocromatográfico que comprende

una membrana que tiene una región de detección, en la que se inmoviliza un anticuerpo o antígeno que sirve como sustancia de captura capaz de capturar una sustancia diana, para detectar la sustancia diana mediante el uso de un antígeno o anticuerpo marcado con un portador de marcado que es una partícula coloreada para formar un complejo del antígeno o anticuerpo marcado con la sustancia de captura y la sustancia diana en la región de detección de la sustancia de captura inmovilizada en el dispositivo, con base en el color del portador de marcado,

en el que se permite que un colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado esté contenido en un estado seco en un miembro constituyente del dispositivo de modo que el colorante se revele junto con un espécimen cuando el espécimen se revele en el dispositivo.

[2] El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con [1], en el que el miembro constituyente en el que se permite contener el colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado es un miembro dispuesto en el lado corriente arriba de la región de detección.

[3] El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con [1] o [2], en el que el miembro constituyente en el que se permite contener el colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado es una almohadilla de muestra.

[4] El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con cualquiera de [1] a [3], en el que el colorante es un tinte o un pigmento.

[5] El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con cualquiera de [1] a [3], en el que el colorante es una partícula de color.

[6] Un procedimiento para reducir el ruido de fondo en un dispositivo inmunocromatográfico, el dispositivo comprende

una membrana que tiene una región de detección, en la que se inmoviliza un anticuerpo o antígeno que sirve como sustancia de captura capaz de capturar una sustancia diana, para detectar la sustancia diana mediante el uso de un antígeno o anticuerpo marcado con un portador de marcado que es una partícula coloreada para formar un complejo del antígeno o anticuerpo marcado con la sustancia de captura y la sustancia diana en la región de detección de la sustancia de captura inmovilizada en el dispositivo, con base en el color del portador de marcado,

permitiendo que un colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado esté contenido en un estado seco en un miembro constituyente del dispositivo; y

permitir que el colorante se desarrolle junto con un espécimen en el dispositivo cuando se revela un espécimen en el dispositivo, reduciendo así la intensidad del color del ruido de fondo derivado del soporte de marcado.

[7] El procedimiento para reducir el ruido de fondo de acuerdo con [6], en el que el elemento constitutivo en el que se permite contener el colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado es un elemento dispuesto en el lado aguas arriba de la detección región.

[8] El procedimiento para reducir el ruido de fondo de acuerdo con [6] o [7], en el que el elemento constitutivo en el que se permite contener el colorante que tiene un color complementario al color del portador de etiquetas es una almohadilla de muestra.

[9] El procedimiento para reducir el ruido de fondo de acuerdo con cualquiera de [6] a [8], en el que el colorante es un tinte o un pigmento.

[10] El procedimiento para reducir el ruido de fondo de acuerdo con cualquiera de [6] a [8], en el que el colorante es una partícula de color.

Debido al dispositivo inmunocromatográfico de la presente invención o al procedimiento de la presente invención, es posible reducir el ruido de fondo y mejorar la visibilidad de una señal de detección en el dispositivo inmunocromatográfico y detectar con precisión un antígeno o anticuerpo en un espécimen.

Breve Descripción de los Dibujos

[Figura 1] La Figura 1 muestra una estructura del dispositivo inmunocromatográfico de la presente invención. [Figura 2] La Figura 2 muestra una estructura de un dispositivo inmunocromatográfico para detectar el virus de la influenza usado en los Ejemplos.

[Figura 3] La Figura 3 muestra los resultados de la verificación de la reducción del ruido de fondo en presencia o ausencia de un colorante.

[Figura 4] La Figura 4 muestra los resultados de la verificación mediante un dispositivo inmunocromatográfico de sistema de un solo color rojo.

[Figura 5] La Figura 5 muestra los resultados de la verificación del ruido de fondo cuando se utilizó un extracto de muestra común (dispositivo inmunocromatográfico con sistema de colores mezclados rojo y azul).

[Figura 6] La Figura 6 muestra los resultados de la verificación del ruido de fondo cuando se utilizó un extracto de muestra común (dispositivo inmunocromatográfico de sistema de un solo color rojo).

Descripción de las Realizaciones

Ahora, la presente invención se describirá más específicamente a continuación.

La Figura 1 muestra una realización preferida de un dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la presente invención. El dispositivo inmunocromatográfico mostrado en la Figura 1 está constituido por miembros constituyentes: una membrana 1, una región de reactivo de marcado 2, una región 3 de detección, una almohadilla 4 de muestra, una zona 5 de absorción y una lámina 6 de respaldo. Los miembros también pueden denominarse materiales o regiones.

La Figura 1A es una vista desde arriba y la Figura 1B es una vista en sección. En la realización mostrada en las figuras, la membrana 1 que tiene dos regiones de detección 3 formadas en ella, la zona de absorción 5, la región de reactivo de marcado 2 y la almohadilla de muestra 4 se laminan individualmente sobre la lámina de respaldo 6. Como se muestra en las figuras, una de las porciones extremas de la zona de absorción 5 está solapada con una de las porciones extremas de la membrana 1; la otra parte de extremo de la membrana 1 se solapa con una de las partes de extremo de la región 2 del reactivo de marcado; y la otra parte de extremo de la región 2 del reactivo de marcado se solapa con una de las partes de extremo de la almohadilla 4 de muestra. Con esta estructura, se forma una trayectoria de flujo lateral continuo.

La membrana 1 es un miembro capaz de inmovilizar una sustancia de captura para capturar una sustancia objetivo y no evitar que el líquido fluya en la dirección horizontal. La membrana 1 se forma preferiblemente por una película delgada porosa que tiene acción capilar y un material capaz de transportar un líquido y componentes dispersos en el líquido absorbiéndolos y luego revelando. Los ejemplos del material para la membrana incluyen, pero no se limitan particularmente a, celulosa, nitrocelulosa, acetato de celulosa, difluoruro de polivinilideno (PVDF), fibra de vidrio, nailon y policetona. Entre ellos, es preferible la nitrocelulosa y es más preferible una película delgada de nitrocelulosa.

La región 2 del reactivo de marcado se forma por un sustrato poroso que contiene un anticuerpo marcado que es un anticuerpo contra la sustancia diana y está marcado con un vehículo de marcado. Como material para el sustrato, se puede emplear un material generalmente utilizado, como una fibra de vidrio y una tela no tejida. El sustrato es preferiblemente una almohadilla que tiene un espesor de aproximadamente 0,3 mm a 0,6 mm para impregnarse con una gran cantidad de anticuerpo marcado.

El vehículo de marcado se refiere a una sustancia que forma un complejo con una sustancia diana y, posteriormente, puede detectarse por algún medio. Por ejemplo, se utilizan principalmente una enzima como la fosfatasa alcalina y la peroxidasa de rábano picante, un coloide metálico como el coloide de oro, una partícula como una partícula de sílice, una partícula de celulosa y una partícula de látex coloreada. Si se usa una partícula coloidal metálica o una partícula de color como una partícula de látex coloreada, dado que estos reactivos de marcado se agregan para producir color, se mide el color. Si se usa una enzima, se requieren operaciones para agregar un sustrato y terminar la reacción entre la enzima y el sustrato en un paso de medición. Por el contrario, si se usa una partícula coloidal metálica o una partícula de látex coloreada, tales operaciones no son necesarias. Recientemente, en un elemento (examen) como la influenza (virus) que requiere una gran cantidad de exámenes durante el período epidémico, se lleva a cabo una medición rápida en sitios clínicos. Dado que un reactivo de prueba rápida utilizado para este fin lo manipulan, por ejemplo, médicos, enfermeras y técnicos de laboratorio clínico in situ, se requiere una mayor simplificación del paso de medición. Por esta razón, con frecuencia se utiliza una partícula coloidal metálica o una partícula de látex coloreada de fácil manejo. Como partícula de látex coloreada, a menudo se usa una partícula de látex coloreada que usa, por ejemplo, una partícula de poliestireno. En particular, cuando se usa una partícula de látex coloreada, se pueden fabricar varios tipos de partículas de diferente color y tamaño. De hecho, hay muchos tipos de partículas disponibles comercialmente. Dado que las partículas adecuadas se pueden seleccionar de acuerdo con los propósitos individuales, se ha incrementado el número de casos que emplean partículas de látex coloreadas. Además, se propone un procedimiento para detectar una pluralidad de sustancias diana utilizando una pluralidad de partículas de látex de diferente tono de color. El dispositivo inmunocromatográfico usado en la presente invención es deseablemente un dispositivo que usa una partícula de color tal como una partícula coloidal metálica o una partícula de látex coloreada como vehículo de marcado. En la presente invención, cuando el vehículo de marcado es una partícula de color, el color del vehículo de marcado se refiere al color de la propia partícula, mientras que cuando el vehículo de marcado es una enzima, el color de un vehículo de marcado se refiere al color producido por una reacción enzimática.

La región de detección 3 se refiere a una región (miembro) parcial de la membrana en la que se inmoviliza una sustancia de captura para capturar una sustancia objetivo. En un dispositivo inmunocromatográfico para detectar un antígeno, la sustancia diana es el antígeno y la sustancia de captura es un anticuerpo. En este caso, se proporciona al menos una de la región de detección 3, a la que se inmoviliza un anticuerpo para capturar un antígeno.

Téngase en cuenta que el número de regiones de detección 3 y el número de tipos de anticuerpos marcados contenidos en la región de reactivo de marcado 2 no se limitan a uno. Si se utilizan anticuerpos correspondientes a una pluralidad de sustancias diana a detectar, se pueden medir dos o más antígenos mediante un único dispositivo inmunocromatográfico. En el dispositivo de tal constitución, una mezcla de anticuerpos marcados está contenida en la región 2 del reactivo de marcado, los colores y concentraciones específicos de anticuerpos marcados individuales y la proporción de mezcla de los mismos son elementos importantes ya que complican un objeto de la presente invención.

La almohadilla de muestra 4 es un miembro para añadir gota a gota un espécimen o una muestra preparada a partir de un espécimen, y hecha de un material poroso que tiene capacidad de absorción de agua. Como material, se puede utilizar un material utilizado en general, como celulosa, una fibra de vidrio y una tela no tejida. Para someter una gran cantidad de muestra a inmunoensayo, el material es preferiblemente una almohadilla que tiene un grosor de aproximadamente 0,3 mm a 1 mm. Téngase en cuenta que la almohadilla de muestra y la región de reactivo de marcado 2 son las áreas que están divididas funcionalmente y no necesariamente formadas por materiales diferentes. Más específicamente, una región parcial de una almohadilla de muestra puede tener una función como región de reactivo de marcado.

La zona de absorción 5 es un miembro para absorber componentes suministrados a la membrana 1 y no implicados en una reacción en la región de detección 3. Como material, se puede utilizar un papel de filtro y una esponja que tengan una alta propiedad de retención de agua y que estén formados, por ejemplo, por un compuesto polimérico natural y un compuesto polimérico sintético generalmente utilizados, y preferiblemente se utilice un material que tenga una alta capacidad de absorción de agua para acelerar desarrollo de un espécimen.

La lámina de respaldo 6 es un miembro al que todos los miembros mencionados anteriormente, más específicamente, la membrana 1, la almohadilla de muestra 4, la región de reactivo de marcado 2 y la zona de absorción 5, deben unirse e inmovilizarse con porciones superpuestas entre ellos. La lámina de respaldo 6 no siempre es necesaria siempre que estos miembros puedan disponerse e inmovilizarse a intervalos óptimos; sin embargo, la lámina de soporte se usa general y preferiblemente en vista de la conveniencia de fabricar y utilizar.

El dispositivo inmunocromatográfico de la presente invención puede tener una región (miembro) de visualización de control. La región de visualización de control es un sitio que indica que se lleva a cabo una prueba sin fallas. Por ejemplo, la región de visualización de control está presente aguas abajo de la región de detección. Cuando un espécimen de muestra pasa a través de la región de detección y alcanza la región de visualización de control, se envía una señal, por ejemplo, una señal de color. En la región de visualización de control, se puede inmovilizar un material capaz de unirse a un anticuerpo marcado con un portador de marcado o se puede inmovilizar un reactivo tal como un indicador de pH que cambia de color cuando llega un espécimen. Cuando el anticuerpo marcado con un portador de marcado es un anticuerpo monoclonal de ratón, se puede utilizar un anticuerpo IgG antiratón.

En el dispositivo inmunocromatográfico que tiene una estructura que se muestra en la Figura 1, se agrega gota a gota un espécimen líquido a la almohadilla de muestra. A continuación, el espécimen pasa a través de una vía de flujo porosa, que se forma conectando de forma continua la almohadilla de muestra, la región del reactivo de marcado, la membrana, la región de detección y la zona de absorción. Por tanto, en la realización, todos los miembros constituyentes constituyen una región de migración de muestras. Dependiendo del material y la forma del miembro constituyente, un espécimen puede posiblemente correr a lo largo de la interfaz de los miembros sin permear en el interior de los miembros; sin embargo, la región de migración del espécimen definida en la memoria descriptiva puede ser el interior de los miembros o la interfaz entre los miembros. Por consiguiente, un dispositivo inmunocromatográfico que tiene la constitución antes mencionada se incluye en el ámbito de la memoria descriptiva.

La muestra suministrada a la almohadilla de muestra se desarrolla horizontalmente mediante una acción capilar secuencialmente hacia la región del reactivo de marcado, la membrana y la zona de absorción. En el marcado de la región del reactivo, un anticuerpo marcado se libera en un líquido simultáneamente con el desarrollo del espécimen y luego se desarrolla hacia la membrana. Si un antígeno está presente en la muestra del espécimen, el antígeno es capturado específicamente por un anticuerpo de captura en la región de detección de la membrana y el antígeno reacciona específicamente con el anticuerpo marcado para formar un complejo. De esta manera, en la región de detección, el antígeno se intercala con los anticuerpos para formar un complejo del anticuerpo marcado con la sustancia de captura y el antígeno (sustancia diana). El complejo de anticuerpo-antígeno marcado puede medirse con base en la presencia del portador de marcado como indicador en la región de detección. Por ejemplo, cuando el vehículo de marcado es una partícula de color, como una partícula coloidal metálica o una partícula de látex coloreada, si hay un antígeno presente, las partículas de color se acumulan en la región de detección, con el resultado de que la región de detección produce color. Por tanto, el antígeno puede detectarse detectando el color visualmente o mediante un dispositivo de medición óptico. Nótese que, en la presente invención, un espécimen fluye desde una almohadilla de muestra hacia la zona de absorción. Con base en la dirección del flujo, la región cercana a la almohadilla de muestra se denomina región aguas arriba y la región cercana a la zona de absorción se denomina región aguas abajo. Por ejemplo, en el dispositivo que tiene la estructura que se muestra en la Figura 1, la almohadilla de muestra y la región del reactivo de marcado están dispuestas corriente arriba de la región de detección.

La descripción anterior se refiere al caso en el que se detecta un antígeno en un espécimen utilizando un anticuerpo marcado. El anticuerpo contra el antígeno mencionado anteriormente en un espécimen puede detectarse usando un antígeno como sustancia de captura y un antígeno marcado como sustancia marcada. En este caso, un antígeno al que se va a unir un anticuerpo (una sustancia diana) y marcarlo con un portador de marcado está contenido en la región del reactivo de marcado y el antígeno que captura el anticuerpo (la sustancia diana) se inmoviliza como sustancia de captura en la región de detección.

La presente invención proporciona un procedimiento para mejorar la visibilidad de una señal de detección mediante la reducción del ruido de fondo, en un dispositivo inmunocromatográfico. El ruido de fondo se refiere al ruido derivado del color del portador de marcado del anticuerpo marcado restante o el antígeno marcado en una membrana cuando el anticuerpo marcado o el antígeno marcado se desarrolla en un dispositivo por fenómeno capilar. El anticuerpo marcado o el antígeno marcado presente en la región de detección de la membrana es difícil de ver por el ruido. La presencia o ausencia de una sustancia diana mediante un dispositivo cromatográfico en el caso de que un portador de marcado sea una partícula de color, se determina mediante la observación visual del color del portador de marcado de un anticuerpo marcado o un antígeno marcado capturado y acumulado en la región de detección. Por tanto, si el ruido de fondo es alto, el anticuerpo marcado o el antígeno marcado en la región de detección es difícil de distinguir y, en ocasiones, la determinación puede resultar difícil. En particular, cuando la sustancia diana está presente en una cantidad traza, el anticuerpo marcado en la región de detección no se puede observar claramente y no se puede leer con precisión, con el resultado de que se puede realizar un juicio erróneo. Dado que el nivel del ruido de fondo varía dependiendo de la cantidad de anticuerpo marcado o antígeno marcado, el nivel del ruido de fondo es el más alto inmediatamente después de la liberación de la región del reactivo de marcado y tiende a disminuir gradualmente con el paso del tiempo. Por consiguiente, para realizar una detección rápida en sitios clínicos, es útil reducir rápidamente el alto nivel de fondo inmediatamente después del desarrollo.

En la presente invención, se permite que el colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado esté contenido en un estado seco en un miembro constituyente de un dispositivo inmunocromatográfico. Debido a esto, un espécimen suministrado a una almohadilla de muestra se desarrolla hacia una membrana. De acuerdo con esto, un anticuerpo marcado o un antígeno marcado se vuelve a eluir de la región del reactivo de marcado y se desarrolla hacia una membrana; al mismo tiempo, se vuelve a eluir y revelar un colorante que tiene un color complementario al portador de marcado. Como resultado de la copresencia del portador de marcado y el colorante en la membrana, se reduce el ruido de fondo derivado del anticuerpo marcado o del antígeno marcado.

El miembro constituyente en el que se permite contener un colorante que tiene un color complementario al portador de marcado es deseablemente un miembro dispuesto aguas arriba de la región de detección. Los ejemplos del miembro dispuesto corriente arriba de la región de detección incluyen todos los miembros presentes corriente arriba de la región de detección; más específicamente, se mencionan la membrana, la región del reactivo de marcado y la almohadilla de muestra (que están colocadas corriente arriba de la región de detección). Separadamente de éstos, se puede proporcionar un miembro que contenga un colorante en una posición arbitraria aguas arriba de la región de detección. El miembro constituyente que contiene un colorante es más deseablemente una almohadilla de muestra. Como procedimiento para permitir que un colorante esté contenido en un miembro constituyente, se puede usar cualquier técnica conocida en la técnica, como vertido, inmersión, rociado, rociado térmico y evaporación, siempre que el colorante pueda volver a eluirse con un extracto de muestra; sin embargo, en vista de la precisión y la conveniencia, es deseable un procedimiento de aplicación de un colorante mediante pulverización seguida de secado. En esta aplicación, el "estado seco" se refiere a estar seco y no mojado en la medida en que no se proporcione ninguna desventaja en vista del rendimiento y la fabricación. En un sentido preciso, por ejemplo, se puede mencionar un estado amorfo (estado vítreo).

Como colorante que tiene un color complementario al portador de marcado de la presente invención, se puede usar un tinte o pigmento conocido en la técnica. Además, no sólo se puede utilizar una sustancia que muestre color en sí misma, sino también, por ejemplo, una partícula de color a la que se adhiere, une o añade un colorante. Como partícula a colorear, se puede utilizar una partícula de resina tal como una partícula de poliestireno o una partícula de látex. El colorante que se va a usar tiene deseablemente un color complementario al color general mostrado por los anticuerpos marcados o los antígenos marcados usados en el sistema de detección.

El "color complementario" en la presente invención se refiere a un tono que reduce la intensidad del color de un portador marcador de un anticuerpo marcado o antígeno marcado cuando se mezcla con el anticuerpo marcado o el antígeno marcado y produce un color cercano a un color acromático. En la rueda de colores, un color ubicado en una diferencia angular de 120 a 180° del color de un portador de marcado de un anticuerpo o antígeno marcado tiene el efecto. Dado que el efecto es mayor cuando la diferencia angular está cerca de 180°, es más deseable un color ubicado en una diferencia angular dentro del rango de 165 a 180°. Generalmente, un "color complementario" se refiere a un color ubicado en una diferencia angular de 180° en la rueda de colores, en resumen, el color ubicado diametralmente opuesto; sin embargo, el "color complementario" en la presente invención incluye un color ubicado en una diferencia angular dentro del rango de 120 a 180° en la rueda de colores. Como rueda de colores, por ejemplo, la rueda de colores PCCS (sistema de combinación de colores, Nippon Shikiken) de 24 tonos, se conocen la rueda de colores Munsell con base en el sistema de colores Munsell y la rueda de colores Ostwald con base en el sistema de colores Ostwald. En la presente invención, el "color complementario" puede basarse en cualquiera de las ruedas de color. En consecuencia, el "color complementario" en la presente invención incluye un color complementario ubicado diametralmente opuesto a un color predeterminado en una rueda de color tal como rueda de color PCCS, rueda de color Munsell o rueda de color Ostwald y también incluye "tono adyacente" y "tono similar "que tiene una diferencia de tono de 1 a 3 del color complementario. El color complementario en la rueda de colores PCCS es un color complementario psicológico. El color complementario psicológico se refiere al color de una imagen secundaria complementaria que se ve cuando una persona mira fijamente un color cromático. Los colores complementarios de la rueda de colores de Munsell y la rueda de colores de Ostwald son colores físicos complementarios. Los colores complementarios físicos se refieren a colores que producen un color acromático cuando se mezclan. En la presente invención, el "color complementario" incluye colores complementarios psicológicos, así como colores complementarios físicos.

Por ejemplo, en el caso de que se utilice un vehículo de marcado rojo, como una partícula de látex de poliestireno rojo, un color complementario al rojo es el azul al verde. Por tanto, se puede utilizar un colorante azul verdoso como colorante complementario. En el caso de que se utilice un portador de marcado azul, como una partícula de látex de poliestireno azul, un color complementario al azul es el naranja al rojo. Por tanto, se puede utilizar un colorante naranja como colorante complementario. Puede usarse una pluralidad de soportes de marcado de diferentes colores. Cuando se usa una partícula roja y una partícula azul en combinación, se puede usar un colorante amarillo verdoso. Los colorantes pueden mezclarse, ajustarse al color deseado y luego usarse.

Debido al uso de un colorante complementario a un portador de etiquetas, la intensidad del color del portador de etiquetas que queda en la membrana disminuye; la membrana se ve blanca y aumenta el contraste de color entre el portador de marcado y la membrana en la región de detección; y se ve claramente el color del portador de marcado en la región de detección.

En la presente invención, un dispositivo inmunocromatográfico que usa un portador de marcado rojo solo y un dispositivo inmunocromatográfico que usa un portador de marcado azul solo se denominan dispositivo inmunocromatográfico de sistema de color único rojo y dispositivo inmunocromatográfico de sistema de color único azul, respectivamente. Puede usarse una pluralidad de soportes de marcado de diferentes colores. El dispositivo inmunocromatográfico que utiliza una partícula roja y una partícula azul en combinación se denomina dispositivo inmunocromatográfico con sistema de color mixto rojo y azul.

Los ejemplos del colorante que se utilizará en el dispositivo inmunocromatográfico del sistema de un solo color rojo incluyen colorante azul verdoso como Fast Green FCF y Alizarin Cyanine Green F, colorantes azules como Brilliant Blue FCF, Indigo Carmine, Xylene Cyanol FF y Bromophenol Blue. Los ejemplos del colorante a usar en el dispositivo inmunocromatográfico del sistema de color mixto rojo y azul incluyen un colorante amarillo verdoso, es decir, amarillo SF verde claro y un colorante verde amarillo, es decir, una mezcla de Alizarina Verde Cianina F y tartrazina. Los ejemplos del colorante que se va a utilizar en el dispositivo inmunocromatográfico del sistema de un solo color azul incluyen tartrazina amarilla.

Existía un procedimiento convencional en el que se agrega previamente un colorante a un extracto de muestra (Publicación de patente JP (Kokai) núm. 2013-228350). Sin embargo, dado que un espécimen, es decir, una muestra biológica, se toma indefinidamente, por ejemplo, con un hisopo, a veces se toma un espécimen en exceso, con el resultado de que el extracto de un espécimen no se desarrolla bien y un colorante permanece en la membrana, lo que aumenta el ruido de fondo. Además de este problema, existe otro problema en el que el extracto del espécimen se diluye con una cantidad excesiva de espécimen, el color del colorante se aclara. Los factores de estos cambios se derivan del hecho de que la cantidad de extracto de espécimen que se agregará a un reactivo de prueba (también llamado kit o dispositivo) se define, aunque la cantidad de espécimen de recolección es indefinida. En la presente invención, dado que un colorante se dispone previamente en el miembro de estructura en un dispositivo inmunocromatográfico, el color no está influenciado por la cantidad de espécimen que se va a tomar. Más específicamente, a diferencia de la técnica anterior, la cantidad predeterminada de colorante está contenida en un reactivo y el revelado se lleva a cabo con una cantidad predeterminada de extracto de espécimen.

Dado que el ruido de fondo alto o bajo está estrechamente relacionado con la cantidad de portador de marcado, el nivel de ruido de fondo cambia con el paso del tiempo desde el momento de la adición gota a gota de un extracto de espécimen hasta el momento de finalización de una reacción. En un procedimiento convencional en el que se agrega un colorante a un extracto de espécimen, dado que una solución de colorante que tiene un tono de color constante se desarrolla en cualquier momento entre el comienzo del revelado con alto ruido de fondo y el tiempo de terminación con bajo ruido de fondo, la realización del procedimiento convencional no es ideal. Considerando que, en el procedimiento de la presente invención, la concentración de un colorante es alta al comienzo del desarrollo y baja en el tiempo de terminación, de manera similar al portador de marcado. La realización de la invención se relaciona con un cambio del ruido de fondo con el tiempo.

En el procedimiento de la presente invención, una muestra biológica a medir es preferiblemente un espécimen que contiene una sustancia derivada de la mucosa de un cuerpo vivo. Ejemplos de los mismos incluyen un espécimen derivado de mucosa nasofaríngea y un espécimen derivado de mucosa oral como esputo, saliva, frotis faríngeo, frotis nasal, aspirado nasal, frotis queratoconjuntival y espécimen de heces.

En el procedimiento de la presente invención, una sustancia diana a medir es un antígeno o anticuerpo que puede medirse mediante inmunoensayo, más específicamente, ensayo usando una reacción antígeno-anticuerpo. Como antígeno, se puede usar cualquier antígeno siempre que pueda producir un anticuerpo. Los ejemplos son una proteína, un polisacárido y un lípido. También se pueden medir protozoos, hongos, bacterias, micoplasmas, rickettsias, clamidia y un virus que contenga estas sustancias.

La presente invención incluye un kit de detección de antígenos o anticuerpos que contiene el dispositivo inmunocromatográfico mencionado anteriormente que tiene un colorante. El kit contiene un reactivo para tomar un espécimen, un dispositivo para tomar un espécimen y un folleto que no es el dispositivo inmunocromatográfico. Ahora, la presente invención se describirá más específicamente a continuación con base en los ejemplos siguientes; sin embargo, la presente invención no se limita a los siguientes ejemplos.

[Ejemplo 1] Preparación de un dispositivo inmunocromatográfico con sistema de color mixto rojo y azul

1. Preparación de anticuerpo antivirus de influenza A marcado (anticuerpo antitipo A marcado)

Se dializó un anticuerpo monoclonal antivirus de la influenza A contra una solución tampón (pH 6,0) y luego se mezcló con partículas rojas de látex de poliestireno para reaccionar. Posteriormente, se añadió EDAC (hidrocloruro de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida) para obtener una concentración final del 0,1% y se hizo reaccionar durante dos horas. Después del lavado, la mezcla se suspendió en Tris 5 mM, BSA (albúmina de suero bovino) al 0,04% (P/V) y las partículas de látex se dispersaron mediante un dispositivo de dispersión ultrasónico.

2. Preparación de anticuerpo antivirus de influenza B marcado (anticuerpo antitipo B marcado)

Se dializó un anticuerpo monoclonal NP antivirus de la influenza B contra una solución tampón (pH 6,0) y luego se mezcló con partículas de látex de poliestireno azul para hacerlas reaccionar. Posteriormente, se añadió EDAC para obtener una concentración final del 0,1% y se hizo reaccionar durante dos horas. Después del lavado, la mezcla se suspendió en Tris 5 mM, BSA (albúmina de suero bovino) al 0,04% (P/V) y las partículas de látex se dispersaron mediante un dispositivo de dispersión ultrasónico.

3. Preparación de la almohadilla de anticuerpo marcado

El anticuerpo antitipo A marcado y el anticuerpo antitipo B marcado preparados en las Secciones 1 y 2 anteriores se añadieron en cantidades iguales y se agitaron a temperatura ambiente y 150 rpm durante 5 minutos. La mezcla de anticuerpos marcada se pulverizó sobre toda la superficie del carrete de tela no tejida de celulosa que tenía una anchura de 10 mm, utilizando un aparato de pulverización de presión positiva. Después de la pulverización, la tela no tejida se secó al aplicar aire caliente a 50 °C durante 10 minutos para preparar una almohadilla de anticuerpo marcado.

4. Preparación de anticuerpo antivirus de influenza A para inmovilización en la membrana (anticuerpo antitipo A para inmovilización)

Se dializó un anticuerpo monoclonal NP antivirus de la influenza A purificado diferente del anticuerpo usado en la Sección 1 frente a una solución de inmovilización (Tris-HCl 10 mM (pH 7,5)). Después de la diálisis, se llevó a cabo una filtración de 0,22 |jm y se llevó a cabo una dilución con la solución de inmovilización para preparar el anticuerpo antitipo A para la inmovilización.

5. Preparación de anticuerpo antivirus de influenza B (anticuerpo antitipo B para inmovilización) para inmovilización Se dializó un anticuerpo monoclonal NP antivirus de la influenza B purificado diferente del anticuerpo usado en la Sección 2 frente a una solución de inmovilización (Tris-HCl 10 mM (pH 7,5)). Después de la diálisis, se llevó a cabo una filtración de 0,22 jm y se llevó a cabo una dilución con la solución de inmovilización para preparar el anticuerpo antitipo B para la inmovilización.

6. Preparación de la membrana sobre la que se inmovilizan los anticuerpos.

Como membrana, se utilizó una lámina de membrana de nitrocelulosa (blanca) de 3 cm (ancho) x 10 cm (largo). El anticuerpo antitipo A para inmovilización se aplicó linealmente a la posición de la membrana a una distancia de 8 mm de uno de los extremos en la dirección longitudinal (este extremo se definió como el extremo aguas arriba y el extremo opuesto se definió como aguas abajo fin); el anticuerpo antitipo B para inmovilización se aplicó linealmente a la posición a una distancia de 10 mm y un anticuerpo IgG antiratón se aplicó linealmente a la posición a una distancia de 12 mm, utilizando un aparato de pulverización de presión positiva para preparar regiones de detección. Después de la aplicación, la membrana se secó al aplicar aire caliente a 45 °C durante 10 minutos.

7. Preparación de la almohadilla impregnada con un colorante de sistema de color mixto rojo y azul

Se preparó una solución de colorante (0,001 % de alizarina cianina verde F, 0,002 % de tartrazina) mezclando colorantes para obtener un color verde amarillento, y se pulverizó sobre toda la superficie del carrete de tela no tejida de poliéster que tenía un ancho de 20 mm utilizando un positivo. aparato de pulverización a presión. Después de la pulverización, la tela no tejida se secó al aplicar aire caliente a 50 °C durante 10 minutos para preparar una almohadilla impregnada de colorante.

8. Preparación de dispositivo inmunocromatográfico para la detección de virus de influenza

La estructura de un dispositivo inmunocromatográfico para detectar virus de la influenza era la misma que se muestra en la Figura 2. La almohadilla de anticuerpo etiquetada 2 (preparada en la Sección 3), la membrana 1 para inmovilizar un anticuerpo, que tiene las regiones de detección 3 (preparada en la Sección 6), la almohadilla 4 impregnada de colorante (preparada en la Sección 7) y otros miembros (la lámina de respaldo 6, la zona de absorción 5) se adhirieron. La construcción resultante se cortó en trozos (5 mm) a lo largo de la dirección longitudinal para preparar los dispositivos inmunocromatográficos que se muestran en la Figura 2.

[Ejemplo 2] Preparación de un dispositivo inmunocromatográfico del sistema de un solo color rojo

1. Preparación de antiMycoplasma pneumoniae anticuerpo (anticuerpo anti-Mp marcado)

Un anti Mycoplasma pneumoniae monoclonal se dializó frente a una solución tampón (pH 6,0) y luego se mezcló con partículas rojas de látex de poliestireno para reaccionar. Posteriormente, se añadió EDAC (hidrocloruro de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida) para obtener una concentración final del 0,1 % y se hizo reaccionar durante dos horas. Después del lavado, la mezcla se suspendió en Tris 5 mM, BSA (albúmina de suero bovino) al 0,04 % (P/V) y las partículas de látex se dispersaron mediante un dispositivo de dispersión ultrasónico.

2. Preparación de la almohadilla de anticuerpo marcado

El anticuerpo antiMp marcado preparado en la Sección 1 se extendió sobre toda la superficie de la bobina de tela no tejida de celulosa que tenía una anchura de 10 mm utilizando un aparato de pulverización de presión positiva. Después de la pulverización, la tela no tejida se secó al aplicar aire caliente a 50 °C durante 10 minutos para preparar una almohadilla de anticuerpo marcado.

3. Preparación de anti-Mycoplasma pneumoniae anticuerpo (anticuerpo antiMp para inmovilización) para inmovilización a membrana

Un anticuerpo monoclonal anti Mycoplasma pneumoniae purificado diferente del anticuerpo usado en la Sección 1 se dializó frente a una solución de inmovilización (Tris-HCl 10 mM (pH 7,5)). Después de la diálisis, se llevó a cabo una filtración de 0,22 jm y se llevó a cabo una dilución con la solución de inmovilización para preparar el anticuerpo antiMp para la inmovilización.

4. Preparación de la membrana sobre la que se inmovilizan los anticuerpos.

Como membrana, se utilizó una lámina de membrana de nitrocelulosa (blanca) de 3 cm (ancho) x 10 cm (largo). El anticuerpo antiMp para la inmovilización se aplicó linealmente a la posición de la membrana a una distancia de 9 mm de uno de los extremos en la dirección longitudinal (este extremo se definió como el extremo aguas arriba y el extremo opuesto se definió como el extremo aguas abajo); y se aplicó linealmente un anticuerpo antiratón de IgG a la posición de la membrana a una distancia de 12 mm, utilizando un aparato de pulverización de presión positiva para preparar regiones de detección. Después de la aplicación, la membrana se secó al aplicar aire caliente a 45 °C durante 10 minutos.

5. Preparación de la almohadilla impregnada con un colorante rojo del sistema monocolor

Se preparó una solución de colorante (0,001 % Fast Green FCF) que presentaba un color azul verdoso y se pulverizó sobre toda la superficie de la bobina de tela no tejida de poliéster que tenía una anchura de 20 mm utilizando un aparato de pulverización de presión positiva. Después de la pulverización, la tela no tejida se secó al aplicar aire caliente a 50 °C durante 10 minutos para preparar una almohadilla impregnada de colorante.

6. Preparación de dispositivo inmunocromatográfico para la detección Mycoplasma pneumoniae

La estructura de un dispositivo inmunocromatográfico para detectar Mycoplasma pneumoniae fue el mismo que se muestra en la Figura 2, excepto que se utilizó una única región de detección. Se adhirieron la almohadilla de anticuerpo marcada (preparada en la Sección 2), la membrana en la que se inmovilizan los anticuerpos (preparada en la Sección 4), la almohadilla impregnada de colorante (preparada en la Sección 5) y otros miembros (lámina de respaldo, zona de absorción). La construcción resultante se cortó en trozos (5 mm) a lo largo de la dirección longitudinal para preparar los dispositivos inmunocromatográficos que se muestran en la Figura 2.

[Ejemplo 3] Verificación de la reducción del ruido de fondo en presencia o ausencia de colorante

1. Verificación en dispositivo inmunocromatográfico con sistema de color mixto rojo y azul (sistema de detección de color mixto rojo y azul)

Se prepararon un dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con el Ejemplo 1 que emplea una almohadilla de muestra previamente preparada al aplicar un colorante amarillo verdoso seguido de secado, y un dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con el Ejemplo 1 que emplea una almohadilla de muestra sin recubrimiento. Se añadió gota a gota por separado un extracto de espécimen al dispositivo empleando una almohadilla de muestra previamente preparada mediante la aplicación de un colorante amarillo verdoso seguido de secado, y el dispositivo empleando una almohadilla de muestra sin recubrimiento. Tres minutos más tarde, se compararon los fondos de las membranas (ver Figura 3).

Como se muestra en la Figura 3 y la Tabla 1, la membrana del dispositivo que usa una almohadilla de muestra impregnada con un colorante (Figura 3, figura inferior) se ve blanca en comparación con el dispositivo que no contiene colorante. A partir de esto, se encontró que se redujo el ruido de fondo y se vio claramente el color en la región de detección.

2. Verificación en dispositivo inmunocromatográfico del sistema de un solo color rojo (sistema de detección de un solo color rojo)

Se prepararon un dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con el Ejemplo 2 que emplea una almohadilla de muestra previamente preparada mediante la aplicación de un colorante azul verdoso, seguido de secado, y un dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con el Ejemplo 2 que emplea una almohadilla de muestra sin recubrimiento.

Un extracto de espécimen (que contiene inactivado y diluido Mycoplasma pneumoniae antígeno) se añadió gota a gota por separado al dispositivo usando una almohadilla de muestra previamente preparada mediante la aplicación de un colorante azul verdoso, seguido de secado, y el dispositivo empleando una almohadilla de muestra sin recubrimiento. Tres minutos más tarde, se compararon los fondos de las membranas (ver Figura 4).

Como se muestra en la Figura 4 y la Tabla 1, la membrana del dispositivo que emplea una almohadilla de muestra impregnada con un colorante (Figura 4, figura inferior) se ve blanca en comparación con el dispositivo que no contiene colorante. A partir de esto, se encontró que se redujo el ruido de fondo y se vio claramente el color en la región de detección.

[Tabla 1]

[Ejemplo 4] Verificación del ruido de fondo cuando se utiliza un extracto de espécimen común

Un dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con el Ejemplo 1 (dispositivo inmunocromatográfico con sistema de color mixto rojo y azul, dispositivos núm. 1 a 4) que emplea una almohadilla de muestra previamente preparada mediante la aplicación de un colorante amarillo verdoso seguido de secado (dispositivo núm. 2) y dispositivos inmunocromatográficos de acuerdo con el Ejemplo 1 empleando una almohadilla de muestra que no tiene recubrimiento (dispositivos números 1, 3 y 4) se prepararon. Un dispositivo inmunocromatográfico (dispositivo inmunocromatográfico de sistema de un solo color rojo, dispositivos Nos.5 a 8) de acuerdo con el Ejemplo 2 empleando una almohadilla de muestra previamente preparada mediante la aplicación de un colorante azul verdoso seguido de secado (dispositivo núm. 6) y dispositivos inmunocromatográficos de acuerdo con el Ejemplo 2 (dispositivos Nos. 5, 7 y 8) empleando una almohadilla de muestra sin recubrimiento.

Se añadió gota a gota un extracto de espécimen incoloro al dispositivo (dispositivo núm. 2) empleando una almohadilla de muestra preparada al aplicar un colorante amarillo verdoso seguido de secado, y el dispositivo (dispositivo núm. 6) empleando una almohadilla de muestra preparada mediante la aplicación de un colorante azul verdoso seguido de secado. Con respecto a los dispositivos, (dispositivos núm. 1, 3 y 4), según el ejemplo 1, que emplean una almohadilla de muestra sin recubrimiento, se añadió gota a gota un extracto de espécimen incoloro (al dispositivo núm. 1 (control 1), un extracto de espécimen que contenía un colorante amarillo verdoso (al dispositivo núm. 3) o un extracto de espécimen que contenía un colorante azul verdoso (al dispositivo núm. 4). Con respecto a los dispositivos, según el ejemplo 2 (dispositivos núm. 5, 7 y 8), que emplean una almohadilla de muestra sin recubrimiento, se añadió gota a gota un extracto de espécimen incoloro (al dispositivo núm. 5 (control 2), un extracto de espécimen que contenía un colorante amarillo verdoso (al dispositivo núm. 7) o un extracto de espécimen que contenía un colorante azul verdoso (al dispositivo núm. 8). Tres minutos más tarde, se compararon los niveles de ruido de fondo de las membranas de los dispositivos individuales.

Como se muestra en la Tabla 2, en el dispositivo inmunocromatográfico del sistema de un solo color rojo (sistema de detección de un solo color rojo) (dispositivo núm. 8) usando un extracto de espécimen que contiene un colorante azul verdoso, el ruido de fondo fue bajo en comparación con el control 2. En el dispositivo inmunocromatográfico del sistema de colores mezclados rojo y azul (sistema de detección de colores mezclados rojo y azul) (dispositivo núm.

4) que utiliza el mismo extracto de espécimen, el color azulado del fondo era alto en comparación con el control 1, lo que indica que el nivel de ruido era mayor. La Figura 5 muestra los antecedentes del dispositivo núm. 4. La Figura 5 (figura superior) muestra el resultado del dispositivo núm. 1 (control 1) y la Figura 5 (figura inferior) muestra el resultado del dispositivo núm. 4. La Figura 5 muestra que el color azulado del fondo del dispositivo núm. 4 es alto.

De manera similar, en el dispositivo inmunocromatográfico del sistema de colores mezclados rojo y azul (sistema de detección de colores mezclados rojo y azul) (dispositivo núm. 3) que utiliza un extracto de espécimen que contiene un colorante amarillo verdoso, el ruido de fondo es bajo en comparación con el control 1. En el dispositivo inmunocromatográfico del sistema de color único rojo (sistema de detección de color único rojo) (dispositivo núm. 7) utilizando el mismo extracto de espécimen, no se obtuvo un efecto de mejora del ruido de fondo. La Figura 6 muestra los antecedentes del dispositivo núm. 7. La Figura 6 (figura superior) muestra el resultado del dispositivo núm. 5 (control 2) y la Figura 6 (figura inferior) muestra el resultado del dispositivo núm. 7. La Figura 6 muestra que la densidad del fondo del dispositivo núm. 7 es indistinguible de la densidad del fondo del dispositivo núm. 5 (control 2).

Más específicamente, si un extracto de espécimen que contiene un colorante preparado de acuerdo con cualquiera de los sistemas de detección se usa en el otro sistema de detección, no se proporciona un efecto anticipado y el rendimiento original adicional del extracto de espécimen puede deteriorarse. Se muestra que el mismo extracto de espécimen no se puede utilizar en común.

En el procedimiento de la presente solicitud, se obtuvo un efecto de reducción de ruido de fondo anticipado en cualquiera de los sistemas de detección utilizando el mismo extracto de espécimen incoloro en común.

[Tabla 2]

[Ejemplo 5] Verificación del efecto de la variación de la cantidad recolectada del espécimen sobre el ruido de fondo 1. Efecto de la cantidad recolectada del espécimen en el procedimiento convencional

Se preparó un dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con el Ejemplo 2 que emplea una almohadilla de muestra a la que no se aplicó colorante. Se añadió gota a gota un extracto de espécimen (cantidad de fraguado de colorante/cantidad relativa 1), al que se añadió una cantidad óptima de colorante, como control. En una simulación de un caso en el que se toma una gran cantidad de espécimen, se añadió gota a gota el colorante antes mencionado que contenía el extracto del espécimen, al que se le añadió un pseudoespécimen incolora en una cantidad predeterminada y se realizó una prueba. Tres minutos más tarde, se compararon los niveles de ruido de fondo de las membranas en dispositivos individuales.

2. Efecto de la cantidad de recogida de espécimen en el procedimiento de la presente invención

En el dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con el ejemplo 2, se preparó una almohadilla de muestra (cantidad de fraguado de colorante/cantidad relativa 1), que se preparó previamente al aplicar un colorante azul verdoso, seguido de secado, y se añadió gota a gota un extracto de espécimen incoloro y utilizado como control. En una simulación de un caso en el que se tomó una gran cantidad de espécimen, se añadió gota a gota un extracto de espécimen, al que se mezcló un pseudoespécimen incolora en una cantidad predeterminada y se llevó a cabo una prueba. Tres minutos más tarde, se compararon los niveles de ruido de fondo de las membranas en dispositivos individuales.

Como se muestra en la Tabla 3, en un procedimiento convencional, a medida que aumenta la cantidad recolectada de espécimen, la cantidad de colorante suministrada por goteo disminuye, lo que sugiere que el efecto de mejora del ruido de fondo rojo derivado de un anticuerpo marcado disminuye. Por el contrario, en el procedimiento de la presente invención, se muestra que la cantidad de colorante desarrollado en el sistema de detección no cambia y siempre se ejerce un cierto efecto.

[Tabla 3]

Aplicabilidad Industrial

Un antígeno y un anticuerpo en el espécimen pueden detectarse con precisión utilizando el dispositivo inmunocromatográfico de la presente invención.

Lista de signos de referencia

1 Membrana

2 Etiquetado de la región del reactivo

3 Región de detección

4 Almohadilla de muestra

5 Zona de absorción

6 Hoja de respaldo

Claims (8)

REIVINDICACIONES

1. Un dispositivo inmunocromatográfico que comprende

una membrana que tiene una región de detección, en la que se inmoviliza un anticuerpo o antígeno que sirve como sustancia de captura capaz de capturar una sustancia diana, para detectar la sustancia diana mediante el uso de un antígeno o anticuerpo marcado con un portador de marcado que es una partícula coloreada para formar un complejo del antígeno o anticuerpo marcado con la sustancia de captura y la sustancia diana en la región de detección de la sustancia de captura inmovilizada en el dispositivo, con base en el color del portador de marcado,

en el que se permite que un colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado esté contenido en un estado seco en un miembro constituyente dispuesto en el lado aguas arriba de la región de detección del dispositivo de manera que el colorante se desarrolle junto con un espécimen cuando el espécimen se revela en el dispositivo.

2. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el miembro constituyente en el que se permite contener el colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado es una almohadilla de muestra.

3. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que el colorante es un tinte o un pigmento.

4. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que el colorante es una partícula de color.

5. Un procedimiento para reducir el ruido de fondo en un dispositivo inmunocromatográfico, comprendiendo el dispositivo

una membrana que tiene una región de detección, en la que se inmoviliza un anticuerpo o antígeno que sirve como una sustancia de captura capaz de capturar una sustancia diana, para detectar la sustancia diana mediante el uso de un antígeno o anticuerpo marcado con un portador de marcado que es una partícula coloreada para formar un complejo del antígeno o anticuerpo marcado con la sustancia de captura y la sustancia diana en la región de detección de la sustancia de captura inmovilizada en el dispositivo, con base en el color del portador de marcado,

el procedimiento que comprende

permitir que un colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado esté contenido en un estado seco en un miembro constituyente dispuesto en el lado corriente arriba de la región de detección del dispositivo; y

permitir que el colorante se desarrolle junto con un espécimen en el dispositivo cuando se revela un espécimen en el dispositivo, reduciendo así la intensidad del color del ruido de fondo derivado del portador de marcado.

6. El procedimiento para reducir el ruido de fondo de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el miembro constituyente en el que se permite contener el colorante que tiene un color complementario al color del portador de marcado es una almohadilla de muestra.

7. El procedimiento para reducir el ruido de fondo de acuerdo con la reivindicación 5 o 6, en el que el colorante es un tinte o un colorante.

8. El procedimiento para reducir el ruido de fondo de acuerdo con la reivindicación 5 o 6, en el que el colorante es una partícula de color.