ES2851390T3

ES2851390T3 - Terapia de combinación para el cáncer

Info

Publication number: ES2851390T3
Application number: ES15798264T
Authority: ES
Inventors: Brian Wong; Julie Hambleton; Robert Sikorski; Emma Masteller; Kevin Hestir; David Bellovin; Katherine E Lewis
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co; Five Prime Therapeutics Inc
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co; Five Prime Therapeutics Inc
Priority date: 2014-10-29
Filing date: 2015-10-28
Publication date: 2021-09-06
Anticipated expiration: 2035-10-28
Also published as: CY1123957T1; HUE054012T2; EA036261B1; MX381046B; EA201790926A1; IL251464A0; KR102636539B1; BR112017008914A2; US10221244B2; TW201628653A; CA2963147A1; US11566076B2; AU2015339306A1; EP3212670B1; PT3212670T; KR20170074962A; US9765147B2; US20180094067A1; US20190202921A1; RS61602B1

Abstract

Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto; en donde dicho método comprende la administración simultánea o secuencial a dicho sujeto de un anticuerpo anti- CSF1R y un inhibidor de PD-1/PD-L1; y en donde: el anticuerpo anti-CSF1R se selecciona de: a) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 39 y una cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 46; b) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende una CDR1 de cadena pesada (HC) que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 15, una CDR2 de HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 16 y una CDR3 de HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 17 y una cadena ligera que comprende una CDR1 de cadena ligera (LC) que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 18, una CDR2 de LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 19 y una CDR3 de LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 20; y c) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 53 y una cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 60, y el inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-1 seleccionado de: a) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la región variable de cadena pesada de nivolumab y una cadena ligera que comprende la región variable de cadena ligera de nivolumab; y b) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende las CDR de cadena pesada de nivolumab y una cadena ligera que comprende las CDR de cadena ligera de nivolumab.

Description

DESCRIPCIÓN

Terapia de combinación para el cáncer

Campo técnico

Tratamiento del cáncer con anticuerpos que se unen al receptor del factor 1 estimulante de colonias (CSF1R) en combinación con inhibidores de PD-1/PD-L1.

Antecedentes

El receptor del factor 1 estimulante de colonias (denominado en el presente documento CSF1R; también denominado en la técnica FMS, FIM2, C-FMS, receptor de M-CSF y CD115) es un receptor transmembrana de un solo pase con un dominio extracelular N-terminal (ECD) y un dominio intracelular C-terminal con actividad tirosina cinasa. La unión del ligando de CSF1 o del ligando interleucina 34 (denominada en el presente documento IL-34; Lin et al., Science 320: 807-11 (2008)) a CSF1R causa la dimerización del receptor, la regulación positiva de la actividad tirosina cinasa de la proteína CSF1R, la fosforilación de los restos de tirosina de CSF1R y eventos de señalización posteriores. La activación de CSF1R por CSF1 o IL-34 da lugar al tráfico, la supervivencia, la proliferación y la diferenciación de monocitos y macrófagos, así como otros linajes celulares monocíticos, tales como osteoclastos, células dendríticas y la microglía.

Se ha encontrado que muchas células tumorales o células del estroma tumoral producen CSF1, que activa a los monocitos/macrófagos a través de CSF1R. Se ha demostrado que el nivel de CSF1 en tumores se correlaciona con el nivel de macrófagos asociados a tumores (TAM) en el tumor. Se ha encontrado que niveles más altos de TAM se correlacionan con un peor pronóstico de los pacientes en la mayoría de los cánceres. Además, se ha encontrado que CSF1 promueve el crecimiento tumoral y la progresión a metástasis en, por ejemplo, xenoinjertos de cáncer de mama humano en ratones. Véase, por ejemplo, Paulus et al., Cancer Res. 66: 4349-56 (2006). Asimismo, CSF1R desempeña un papel en la destrucción osteolítica del hueso en la metástasis ósea. Véase, por ejemplo, Ohno et al., Mol. Cancer Ther. 5: 2634-43 (2006). Los TAM promueven el crecimiento tumoral, en parte, al suprimir la función efectora de las células T antitumorales mediante la liberación de citocinas inmunosupresoras y la expresión de proteínas de superficie inhibidoras de las células T.

Las alteraciones genéticas en el cáncer proporcionan un conjunto diverso de antígenos que pueden intervenir en la inmunidad antitumoral. El reconocimiento de antígenos a través de los receptores de células T (TCR) inicia las respuestas de las células T, que están reguladas por un equilibrio entre las señales activadoras e inhibidoras. Las señales inhibidoras, o "puntos de control inmunitarios", juegan un papel importante en los tejidos normales al prevenir la autoinmunidad. La regulación positiva de las proteínas de los puntos de control inmunitarios permite que los cánceres evadan la inmunidad antitumoral. Dos proteínas de puntos de control inmunitarios han sido el foco de la inmunoterapia clínica del cáncer, el antígeno 4 asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA-4) y la proteína de muerte celular programada 1 (PD-1). La combinación de un anticuerpo anti-CTLA-4 y un anticuerpo anti-PD-1 ha sido aprobada para el tratamiento del melanoma metastásico y también se están realizando varios ensayos clínicos adicionales para estudiar el uso de esta combinación para el tratamiento de otros cánceres. Los anticuerpos anti-PD-1 y los anticuerpos anti-CTLA-4 para su uso como monoterapias también se están estudiando actualmente en ensayos clínicos como tratamiento para muchos tipos diferentes de cáncer. También se encuentran actualmente en desarrollo clínico anticuerpos anti-PD-L1 que se unen a PD-L1, uno de los ligandos de PD-1.

Es frecuente que muchos tumores expresen múltiples moléculas de puntos de control simultáneamente. Por lo tanto, se están sometiendo a pruebas clínicas combinaciones de moduladores de puntos de control con el objetivo de mejorar la eficacia. Los resultados clínicos iniciales de la combinación de un anticuerpo anti-CTLA-4 (Ac anti-CTLA-4) y un anticuerpo anti-PD-1 (Ac anti-PD-1) han demostrado mejores tasas de respuesta global y mayores tasas de respuesta completa, así como tasas de supervivencia general, en el melanoma metastásico, en comparación con controles históricos o con el Ac anti-CTLA-4 solo.

El documento US 2013/0309250 desvela un método para la inmunoterapia de un sujeto que padece cáncer, que comprende administrar al sujeto una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que inhibe la señalización de la ruta de señalización de PD-1/PD-L1. El documento US 2011/0274683 desvela anticuerpos que se unen a CSF1R y métodos de tratamiento que incluyen, pero sin limitación, el tratamiento de la artritis reumatoide, de la pérdida ósea y de la esclerosis múltiple.

Como se describe en el presente documento, en ensayos clínicos se ha demostrado una actividad antitumoral significativa de un anticuerpo anti-PD-1 en combinación con un anticuerpo anti-CSF1R.

Sumario

La invención proporciona un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto, tal como se define en las reivindicaciones. El método comprende administrar al sujeto un anticuerpo anti-CSFIR y un inhibidor de PD-1/PD-L1. El inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende las CDR de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende las regiones variables de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab. En algunas realizaciones de la divulgación, el inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-L1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-L1 comprende las CDR de cadena pesada y de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado de BMS-936559, MPDL3280A, MEDI4736 y MSB0010718C. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-L1 comprende las regiones variables de cadena pesada y de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado de BMS-936559, MPDL3280A, MEDI4736 y MSB0010718C. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-L1 se selecciona de BMS-936559, MPDL3280A, m Ed I4736 y MSB0010718C. En algunas realizaciones de la divulgación, el inhibidor de PD-1/PD-L1 es una proteína de fusión. En algunas realizaciones, la proteína de fusión es AMP-224.

El anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran de forma simultánea o secuencial. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran de manera simultánea. En algunas realizaciones, se administran una o más dosis del inhibidor de PD-1/PD-L1 antes de administrar un anticuerpo anti-CSF1R. En algunas realizaciones, el sujeto recibió un ciclo completo de terapia con inhibidor de PD-1/PD-L1 antes de la administración del anticuerpo anti-CSF1R. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R se administra durante un segundo ciclo de terapia con inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el sujeto recibió al menos uno, al menos dos, al menos tres o al menos cuatro dosis del inhibidor de PD-1/PD-L1 antes de la administración del anticuerpo anti-CSF1R. En algunas realizaciones, al menos una dosis del inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra simultáneamente con el inhibidor anti-CSF1R. En algunas realizaciones, se administran una o más dosis del anticuerpo anti-CSF1R antes de administrar un inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el sujeto ha recibido al menos dos, al menos tres, al menos tres o al menos cuatro dosis del anticuerpo anti-CSF1R antes de la administración del inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, al menos una dosis del anticuerpo anti-CSF1R se administra simultáneamente con el inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, los dos fármacos se administran el mismo día. En algunas realizaciones, los fármacos se mezclan antes de la administración y, por tanto, se administran como una mezcla. Por ejemplo, en algunas realizaciones, los fármacos pueden envasarse y almacenarse en el mismo vial (es decir, formulación de dosis fija) o, como alternativa, los viales que contienen cada fármaco por separado se pueden mezclar justo antes de la administración. En diversas realizaciones, los fármacos pueden administrarse in vivo por varias vías, entre las que se incluyen, pero sin limitación, la vía oral, intraarterial, parenteral, intranasal, intravenosa, intramuscular, intracardíaca, intraventricular, intratraqueal, bucal, rectal, intraperitoneal, intradérmica, tópica, transdérmica e intratecal, o de otro modo por implantación o inhalación.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 0,1-10 mg/kg, tal como, por ejemplo, de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0. 3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg mg/kg. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran, por ejemplo, en una de las dosis anteriores, aproximadamente una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como aproximadamente una vez cada 2 semanas.

En determinadas realizaciones, la primera dosis es una dosis terapéutica y la segunda dosis es una dosis terapéutica. En otras realizaciones, la primera dosis es una dosis subterapéutica y la segunda dosis es una dosis terapéutica. En algunas realizaciones, la primera dosis se administra a una dosis que varía desde al menos aproximadamente 80 mg hasta al menos aproximadamente 800 mg o desde al menos aproximadamente 0,1 mg/kg hasta al menos aproximadamente 10,0 mg/kg de peso corporal. En algunas realizaciones, la segunda dosis se administra a una dosis que varía desde al menos aproximadamente 80 mg hasta al menos aproximadamente 800 mg o desde al menos aproximadamente 0,1 mg/kg hasta al menos aproximadamente 10,0 mg/kg de peso corporal. En una realización particular, la primera dosis se administra a una dosis de al menos aproximadamente 3 mg/kg de peso corporal o 240 mg una vez aproximadamente cada 2 semanas.

En algunas realizaciones, al sujeto se le administran al menos dos dosis, al menos tres dosis, al menos cuatro dosis, al menos cinco dosis, al menos seis dosis, al menos siete dosis, al menos ocho dosis, al menos nueve dosis, al menos diez dosis, al menos 12 dosis o al menos 20 dosis.

En algunas realizaciones, la primera dosis es una dosis plana o una dosis basada en el peso. En otras realizaciones, la segunda dosis es una dosis plana o una dosis basada en el peso.

En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona de cáncer de pulmón no microcítico, melanoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, carcinoma de células renales, carcinoma hepatocelular, cáncer de vejiga y cáncer de endometrio. En algunas realizaciones, el cáncer es una neoplasia del sistema nervioso central. En algunas realizaciones, la neoplasia del sistema nervioso central es un glioma maligno o glioblastoma. En algunas realizaciones, el cáncer es recurrente o progresivo después de una terapia seleccionada de cirugía, quimioterapia, radioterapia, o una combinación de las mismas. En algunas realizaciones, el paciente tiene cáncer en estadio III o estadio IV, como se define en la sección de definiciones que se proporciona más adelante con respecto a cánceres particulares. En algunas realizaciones, el cáncer del paciente es metastásico. En algunas realizaciones, el sujeto no responde de manera adecuada al inhibidor de PD-1/PD-L1 o es refractario al tratamiento previo con un inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el sujeto ha recibido previamente terapia con inhibidor de PD-1/PD-L1 y, en otras realizaciones, el sujeto no ha recibido previamente terapia con inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el paciente ha recibido previamente uno o más tratamientos de quimioterapia, radioterapia o cirugía; en algunas de tales realizaciones, el paciente tiene una progresión del tumor documentada a pesar de dicho tratamiento previo. En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 tiene como resultado un efecto sinérgico sobre el crecimiento, peso y/o volumen tumoral en comparación con un modelo de xenoinjerto de ratón para el cáncer en comparación con la administración del anticuerpo anti-CSF1R o el inhibidor de PD-1/PD-L1 solo.

En algunas realizaciones de los métodos, un paciente con cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) se trata con el anticuerpo anti-CSF1R (por ejemplo, un anticuerpo anti-CSF1R tal como se describe en el presente documento, tal como un anticuerpo que comprende las CDR de cadena pesada y ligera de HuAB1) y el inhibidor de PD-1/PD-L1 (por ejemplo, un anticuerpo anti-PD-1 que comprende las c Dr de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab). En algunas de estas realizaciones, el paciente tiene enfermedad en estadio IIIB o IV y/o ha demostrado progresión o recurrencia de la enfermedad durante y/o después de un régimen de quimioterapia basado en doblete de platino u otro régimen de quimioterapia para enfermedad avanzada o metastásica. En algunas realizaciones, el paciente no ha tenido exposición previa a un inhibidor de PD-1/PD-L1 y, en otras realizaciones, el paciente es refractario al tratamiento con inhibidores de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 0,1-10 mg/kg, tal como, por ejemplo, de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran, por ejemplo, en una de las dosis anteriores, una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como aproximadamente una vez cada 2 semanas. En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 tiene como resultado un efecto sinérgico sobre el crecimiento, peso y/o volumen tumoral en comparación con un modelo de xenoinjerto de ratón para el NSCLC en comparación con la administración del anticuerpo anti-CSF1R o el inhibidor de PD-1/PD-L1 solo.

En algunas realizaciones de los métodos, el melanoma se trata con el anticuerpo anti-CSF1R (por ejemplo, un anticuerpo anti-CSF1R tal como se describe en el presente documento, tal como un anticuerpo que comprende las CDR de cadena pesada y ligera de HuAB1) y el inhibidor de PD-1/PD-L1 (por ejemplo, un anticuerpo anti-PD-1 que comprende las CDR de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab). En algunas de estas realizaciones, el paciente tiene melanoma en estadio III o IV. En algunas realizaciones, el paciente ha demostrado progresión de la enfermedad durante o después del tratamiento con al menos un inhibidor de BRAF, o tiene BRAF de tipo silvestre. En algunas realizaciones, el paciente no ha tenido exposición previa a un inhibidor de PD-1/PD-L1 y, en otras realizaciones, el paciente es refractario al tratamiento con inhibidores de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 0,1 10 mg/kg, tal como, por ejemplo, de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran, por ejemplo, en una de las dosis anteriores, una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como aproximadamente una vez cada 2 semanas. En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 tiene como resultado un efecto sinérgico sobre el crecimiento, peso y/o volumen tumoral en comparación con un modelo de xenoinjerto de ratón para el melanoma en comparación con la administración del anticuerpo anti-CSF1R o el inhibidor de PD-1/PD-L1 solo.

En algunas realizaciones de los métodos, el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (SSCHN) se trata con el anticuerpo anti-CSF1R (por ejemplo, un anticuerpo anti-CSF1R tal como se describe en el presente documento, tal como un anticuerpo que comprende las CDR de cadena pesada y ligera de HuAB1) y el inhibidor de PD-1/PD-L1 (por ejemplo, un anticuerpo anti-PD-1 que comprende las c Dr de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab). En algunas realizaciones, el paciente tiene SSCHN en estadio III o IV o tiene SSCHN recurrente o metastásico. En algunas realizaciones, el paciente ha recibido previamente quimioterapia, tal como una terapia con platino, pero ha demostrado progresión o recurrencia tumoral. En algunas realizaciones, el paciente ha recibido previamente radioterapia, opcionalmente junto con terapia con platino, pero ha demostrado progresión o recurrencia tumoral. En algunas realizaciones, el paciente no ha tenido exposición previa a un inhibidor de PD-1/PD-L1 y, en otras realizaciones, el paciente es refractario al tratamiento con inhibidores de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 0,1 10 mg/kg, tal como, por ejemplo, de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSFIR y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran, por ejemplo, en una de las dosis anteriores, una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como aproximadamente una vez cada 2 semanas. En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 tiene como resultado un efecto sinérgico sobre el crecimiento, peso y/o volumen tumoral en comparación con un modelo de xenoinjerto de ratón para el carcinoma de células escamosas en comparación con la administración del anticuerpo anti-CSF1R o el inhibidor de PD-1/PD-L1 solo.

En algunas realizaciones de los métodos, el cáncer de páncreas se trata con el anticuerpo anti-CSF1R (por ejemplo, un anticuerpo anti-CSF1R tal como se describe en el presente documento, tal como un anticuerpo que comprende las CDR de cadena pesada y ligera de HuAB1) y el inhibidor de PD-1/PD-L1 (por ejemplo, un anticuerpo anti-PD-1 que comprende las CDR de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab). En algunas realizaciones, el paciente tiene un adenocarcinoma localizado o metastásico de páncreas documentado. En algunas realizaciones, el paciente puede haber recibido previamente cirugía y/o radioterapia. En algunas realizaciones, el paciente no ha tenido exposición previa a un inhibidor de PD-1/PD-L1 y, en otras realizaciones, el paciente es refractario al tratamiento con inhibidores de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de 0,1, 0,3, 1, 2, 3 o 4 mg/kg. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 0,5-10 mg/kg, tal como, por ejemplo, de 1, 2, 3, 4 o 5 mg/kg. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran, por ejemplo, en una de las dosis anteriores, una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como una vez cada 2 semanas. En algunas realizaciones de los métodos, el cáncer colorrectal se trata con el anticuerpo anti-CSF1R (por ejemplo, un anticuerpo anti-CSF1R tal como se describe en el presente documento, tal como un anticuerpo que comprende las CDR de cadena pesada y ligera de HuAB1) y el inhibidor de PD-1/PD-L1 (por ejemplo, un anticuerpo anti-PD-1 que comprende las CDR de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab o pembrolizumab o un péptido o proteína de fusión que inhibe PD-1/PD-L1 tal como AMP-224 o AUR-012). En algunas realizaciones, el paciente tiene adenocarcinoma de colon o recto. En algunas realizaciones, el paciente tiene cáncer colorrectal metastásico. En algunas realizaciones, el paciente tiene cáncer colorrectal metastásico a pesar del tratamiento previo con uno o más de fluoropirimidina, oxaliplatino, irinotecán, bevacizumab, cetuximab o panitumumab. En algunas realizaciones, el paciente no ha tenido exposición previa a un inhibidor de PD-1/PD-L1 y, en otras realizaciones, el paciente es refractario al tratamiento con inhibidores de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 0,1-10 mg/kg, tal como, por ejemplo, de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran, por ejemplo, en una de las dosis anteriores, una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como aproximadamente una vez cada 2 semanas. En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 tiene como resultado un efecto sinérgico sobre el crecimiento, peso y/o volumen tumoral en comparación con un modelo de xenoinjerto de ratón para cáncer de páncreas (tal como un modelo que comprende células de adenocarcinoma ductal pancreático murino KRasG12D/Ink4a'/' (PDAC)) en comparación con la administración del anticuerpo anti-CSF1R o del inhibidor de PD-1/PD-L1 solo.

En algunas realizaciones de los métodos, el glioma maligno (por ejemplo, glioblastoma o gliosarcoma) se trata con el anticuerpo anti-CSF1R (por ejemplo, un anticuerpo anti-CSF1R tal como se describe en el presente documento, tal como un anticuerpo que comprende las CDR de cadena pesada y ligera de HuAB1) y el inhibidor de PD-1/PD-L1 (por ejemplo, un anticuerpo anti-PD-1 que comprende las c Dr de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab). En algunas realizaciones, se ha tratado previamente al paciente con cirugía, radioterapia y/o temozolomida. En algunas realizaciones, el paciente tiene glioma maligno de grado IV. En algunas realizaciones, el paciente no ha tenido exposición previa a un inhibidor de PD-1/PD-L1 y, en otras realizaciones, el paciente es refractario al tratamiento con inhibidores de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 0,1-10 mg/kg, tal como, por ejemplo, de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran, por ejemplo, en una de las dosis anteriores, una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como aproximadamente una vez cada 2 semanas. En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 tiene como resultado un efecto sinérgico sobre el crecimiento, peso y/o volumen tumoral en comparación con un modelo de xenoinjerto de ratón para el glioma en comparación con la administración del anticuerpo anti-CSF1R o el inhibidor de PD-1/PD-L1 solo.

En algunas realizaciones, el método comprende además administrar uno o más agentes anticancerosos adicionales. En determinadas realizaciones, el agente anticanceroso se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a CTLA-4 ("anticuerpo anti-CTLA-4 o porción de unión a antígeno del mismo") e inhibe la actividad de CTLA-4, una quimioterapia, una quimioterapia de doblete basado en platino, un inhibidor de tirosina cinasa, un inhibidor anti-VEGF, un inhibidor de indolamina-pirrol 2,3-dioxigenasa (IDO), o cualquier combinación de los mismos. En una realización, el agente contra el cáncer es ipilimumab.

En algunas realizaciones, las composiciones se proporcionan como se define en las reivindicaciones, comprendiendo un anticuerpo anti-CSFIR y un inhibidor de PD-1/PD-L1. El inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende las CDR de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende las regiones variables de cadena pesada y de cadena ligera de nivolumab. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab. En algunas realizaciones de la divulgación, el inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-L1. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-L1 comprende las CDR de cadena pesada y de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado de BMS-936559, MPDL3280A, MEDI4736 y MSB0010718C. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende las regiones variables de cadena pesada y de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado de BMS-936559, MPDL3280A, MEDI4736 y MSB0010718C. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 se selecciona de BMS-936559, MPDL3280A, m Ed I4736 y MSB0010718C. En algunas realizaciones de la divulgación, el inhibidor de PD-1/PD-L1 es una proteína de fusión. En algunas realizaciones, la proteína de fusión es AMP-224.

En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, la cadena pesada del anticuerpo y/o la cadena ligera del anticuerpo anti-CSF1R pueden tener la estructura descrita a continuación.

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, en cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, la cadena pesada del anticuerpo anti-CSF1R puede comprender una secuencia que es al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9 y 39 a 41. En cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, la cadena ligera del anticuerpo anti-CSF1R puede comprender una secuencia que es al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 46 y 47. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, la cadena pesada del anticuerpo anti-CSF1R puede comprender una secuencia que es al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9 y 39 a 41, y la cadena ligera del anticuerpo anti-CSF1R puede comprender una secuencia que es al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 46 y 47.

De acuerdo con la invención, las CDR1 de HC, CDR2 de HC y CDR3 de HC del anticuerpo anti-CSF1R comprenden el conjunto de secuencias de SEQ ID NO: 15, 16 y 17, y las CDR1 de LC, CDR2 de LC y CDR3 de LC del anticuerpo anti-CSF1R comprenden el conjunto de secuencias de SEQ ID NO: 18, 19 y 20.

De acuerdo con la invención, la cadena pesada del anticuerpo anti-CSF1R comprende una CDR1 de HC, CDR2 de HC y CDR3 de HC, en donde la CDR1 de HC, la CDR2 de HC y la CDR3 de HC comprenden el conjunto de secuencias de Se Q ID NO: 15, 16 y 17; y la cadena ligera comprende una CDR1 de LC, CDr 2 de LC y Cd R3 de LC, en donde la CDR1 de LC, la CDR2 de Lc y la CDR3 de LC comprenden el conjunto de secuencias de SEQ ID NO: 18, 19 y 20.

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, en cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R puede comprender: (a) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100% idéntica a la SEQ ID NO: 9 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 10; (b) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100% idéntica a la SEQ ID NO: 39 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ Id NO: 46; (c) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100% idéntica a la SEQ ID NO: 40 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 46; (d) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100% idéntica a la SEQ ID NO: 41 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 46; (e) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100% idéntica a la SEQ ID NO: 39 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 47; (f) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100% idéntica a la SEQ ID NO: 40 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 47; (g) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100% idéntica a la SEQ ID NO: 41 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 47.

En algunas realizaciones de la invención, el anticuerpo anti-CSF1R comprende: una cadena pesada que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 53 y una cadena ligera que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 60. En algunas realizaciones, el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 53 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 60.

En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSFIR puede unirse a CSF1R humano y/o se une a CSF1R de mono cynomolgus. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R puede bloquear la unión del ligando a CSF1R. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R puede bloquear la unión de CSF1 y/o IL-34 a CSF1R. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R puede bloquear la unión tanto de CSF1 como de IL-34 a CSF1R. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R puede inhibir la fosforilación de CSF1R inducida por ligando. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R puede inhibir la fosforilación de CSF1R inducida por CSF1 y/o IL-34. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R puede unirse a CSF1R humano con una afinidad (Kd) de menos de 1 nM. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R puede inhibir las respuestas de proliferación y/o supervivencia de monocitos en presencia de CSF1 o IL-34.

De acuerdo con la invención, el inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-1 como se define en las reivindicaciones, que puede tener una estructura como la descrita más adelante.

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, en cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el inhibidor de PD-1/PD-L1 puede ser un anticuerpo con una cadena pesada de anticuerpo que puede comprender una secuencia que es al menos un 90%, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 100 y 101. En cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, el inhibidor de PD-1/PD-L1 puede ser un anticuerpo con una cadena ligera de anticuerpo que comprende una secuencia que es al menos un 90%, al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 102 y 103.

De acuerdo con la invención, el inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo con CDR1 de cadena pesada (HC), CDR2 de HC y CDR3 de HC que comprende el conjunto de secuencias de SEQ ID NO: 105, 107 y 109 y CDR1 de cadena ligera (Lc ), CDR2 de lC y CDR3 de LC que comprende el conjunto de secuencias de SEQ ID NO: 112, 114 y 116.

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, en cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el inhibidor de PD-1/PD-L1 puede ser un anticuerpo que comprende: (a) una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 100 y una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 102; (b) una cadena pesada que comprende una secuencia de región constante que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 101 y una cadena ligera que comprende una secuencia de región constante que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 103; (c) una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 100 y una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 102; y/o (d) una cadena pesada que comprende una secuencia de región constante que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 101 y una cadena ligera que comprende una secuencia de región constante que es al menos un 95 %, al menos un 97 %, al menos un 99 % o un 100 % idéntica a la SEQ ID NO: 103.

En algunas realizaciones de la invención, el inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo que comprende: una cadena pesada que comprende una FR1 de cadena pesada (HC) que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 104, una FR2 de HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 106, una FR3 de h C que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 108 y una FR4 de He que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 110; y/o, una cadena ligera que comprende una FR1 de cadena ligera (LC) que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 111, una FR2 de LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 113, una Fr 3 de LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 115 y una FR4 de Le que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 117.

En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R o el inhibidor de PD-1/PD-L1 puede ser un anticuerpo humanizado o quimérico. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anti-CSF1R o inhibidor de PD-1/PD-L1 puede seleccionarse de un Fab, un Fv, un scFv, un Fab' y un (Fab')2. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anti-CSF1R o inhibidor de PD-1/PD-L1 puede seleccionarse de una IgA, una IgG y una IgD. En cualquiera de las composiciones o métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo anti-CSF1R o el inhibidor de PD-1/PD-L1 puede ser una IgG. En cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, el anticuerpo puede ser una IgG1, IgG2 o IgG4.

En cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, el tumor puede expresar o no PD-L1. En algunas realizaciones, el tumor es positivo para PD-L1. En otras realizaciones, el tumor es negativo para PD-L1. En cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, el tumor puede expresar o no PD-L2. En algunas realizaciones, el tumor es positivo para PD-L2. En otras realizaciones, el tumor es negativo para PD-L2.

Breve descripción de las figuras

Las FIG. 1A-C muestran un alineamiento de las regiones variables de cadena pesada humanizadas para cada uno de los anticuerpos humanizados huAbl a huAb16, como se analiza en el ejemplo 1. Los restos recuadrados son aminoácidos en la secuencia aceptora humana que se cambiaron de nuevo al correspondiente resto de ratón. Las FIG. 2A-C muestran un alineamiento de las regiones variables de cadena ligera humanizadas para cada uno de los anticuerpos humanizados huAb1 a huAb16, como se analiza en el ejemplo 1. Los aminoácidos recuadrados son restos en la secuencia aceptora humana que se cambiaron de nuevo al correspondiente resto de ratón. La FIG. 3 es un mapa de calor que muestra la correlación entre la expresión de CSF1R y Treg, la expresión de PD-L1/PD-1 y células T CD8+ en diversos cánceres.

La FIG. 4A muestra el cambio medio en el volumen tumoral a lo largo del tiempo en ratones C57BL/6 inoculados por vía subcutánea con células de carcinoma colorrectal MC38 y dosificados con un anticuerpo anti-CSF1R, un anticuerpo anti-PD-1 o una combinación de ambos anticuerpos, o con un control de IgG. Tanto el tratamiento con anti-CSF1R como el tratamiento con anti-PD-1 redujeron la tasa de crecimiento de MC38 en comparación con el control. La combinación de anti-CSF1R y anti-PD-1 reprimió el crecimiento de MC38 más que cualquier tratamiento solo (P < 0,05). La FIG. 4B muestra los volúmenes tumorales de MC38 individuales evaluados el día 11 después del inicio del tratamiento (valores p mostrados en la figura). El significado estadístico se determinó mediante una prueba t bilateral para muestras independientes.

La FIG. 5 muestra el peso medio del tumor en ratones C57BL/6 inoculados quirúrgicamente con células de adenocarcinoma ductal pancreático murino KRasG12D/Ink4a'/' (PDAC), células de carcinoma colorrectal y dosificados con un anticuerpo anti-CSF1R (calles marcadas con "008"), un anticuerpo anti-PD-1 o una combinación de ambos anticuerpos, junto con gemcitabina (GEM). El tratamiento con anti-CSF1R o anti-PD-1 redujo la carga tumoral en comparación con los ratones de control. La combinación de anti-CSF1R, anti-PD-1 y GEM redujo significativamente la carga tumoral en comparación con anti-CSF1R y GEM o anti-PD-1 y GEM (los valores de p se muestran en la figura). El significado estadístico se determinó mediante una prueba t bilateral para muestras independientes.

La FIG. 6 es una descripción de las cohortes de tratamiento para los experimentos clínicos descritos en los ejemplos 7 y 8 en los que están implicados huAB1 (también denominado FPA008) y nivolumab.

La FIG. 7 muestra criterios de aumento de dosis para los experimentos clínicos de los ejemplos 7 y 8.

La FIG. 8 muestra que el tratamiento con un anticuerpo anti-CSF1R (denominado cmFPA008) aumenta la frecuencia de células T citotóxicas y la expresión de PD-L1 y otros genes en dos modelos de tumores colorrectales de ratón. En ratones inmunocompetentes se inocularon por vía subcutánea células de carcinoma colorrectal MC38 (parte superior) o CT26 (parte inferior) y se dosificaron con cmFPA008 o IgG1 de ratón como control. La expresión génica se evaluó en muestras de tumores (n > 7 por grupo) y se normalizó a múltiples genes constitutivos. Los valores de expresión mostrados son relativos al control de IgG. El significado estadístico se determinó mediante una prueba t bilateral para muestras independientes (* p < 0,05, **p < 0,01).

Descripción detallada

Los macrófagos asociados a tumores (TAM) están implicados en la patogénesis de muchos cánceres y se correlacionan con un mal pronóstico. La inhibición de CSF1R puede reducir los TAM inmunosupresores en modelos de ratón y tumores humanos. Véase, por ejemplo, Ries et al., 2014, Cancer Cell, 25: 846-859; Pyontech et al., 2013, Nature Med., 19: 1264-1272; y Zhu et al., 2014, Cancer Res., 74: 5057-5069. La inhibición de moléculas pequeñas de CSF1R se sinergiza con el bloqueo del punto de control inmunitario en un modelo de tumor pancreático. Véase Zhu et al., 2014, Cancer Res., 74: 5057-5069. Si bien no pretende ceñirse a ninguna teoría en particular, la presente invención se refiere a métodos de tratamiento de tumores que pueden tener tanto TAM que expresan CSF1R como células T CD8+ que expresan PD-1 y serán sensibles a la terapia de combinación con un anticuerpo anti-CSF1R y un inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunos casos, los tumores que tienen tanto TAM que expresan CSF1R como células T CD8+ que expresan PD-1 pueden ser resistentes a la monoterapia con PD-1/PD-L1, pero deberían ser sensibles a la terapia de combinación. Mediante análisis de expresión, los presentes inventores han identificado ciertos tipos de tumores que tienen tanto TAM que expresan CSF1R como células T CD8+ que expresan PD-1, entre los que se incluyen, pero sin limitación, cáncer de vejiga, cáncer de cuello uterino (tal como cáncer de cuello uterino de células escamosas), carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (SCCHN), adenocarcinoma rectal, cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC), cáncer de endometrio, adenocarcinoma de próstata, cáncer de colon, cáncer de ovario (tal como cáncer de ovario epitelial seroso) y melanoma. De forma similar, sin pretender quedar ligados a ninguna teoría en particular, los tumores que tienen altos niveles de TAM que expresan CSF1R, que suprimen las células T CD8+ que expresan PD-1, pueden ser sensibles a la terapia de combinación, por ejemplo, debido a que la inhibición de TAM con un anticuerpo anti-CSF1R puede estimular a las células T CD8+ que expresan PD-1, haciendo que el tumor sea sensible a un inhibidor de PD-1/PD-L1.

Por consiguiente, la presente invención proporciona métodos para tratar cánceres que comprenden administrar un anticuerpo anti-CSF1R y un inhibidor de PD-1/PD-L1. El inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo que inhibe PD-1 como se define en las reivindicaciones. En algunas de estas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 rompe la unión de PD-L1 a PD-1. En algunas realizaciones de la divulgación, un inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo que se une a PD-L1. En algunas de estas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-L1 rompe la unión de PD-L1 a PD-1. En algunas realizaciones de la divulgación, un inhibidor de PD-1/PD-L1 es una proteína de fusión que rompe la unión de PD-L1 a PD-1, tal como AMP-224. En algunas realizaciones, un inhibidor de PD-1/PD-L1 es un péptido que rompe la unión de PD-L1 a PD-1, tal como AUR-012.

Como se ha señalado anteriormente, en ciertas realizaciones de la divulgación, el inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-L1. En algunas realizaciones, un Ac anti-PD-L1 puede sustituirse por el Ac anti-PD-1 en cualquiera de los métodos o composiciones terapéuticas desveladas en el presente documento. En determinadas realizaciones, el Ac anti-PD-L1 es BMS-936559 (anteriormente 12A4 o MDX-1105) (véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos N.° 7.943.743; documento WO 2013/173223). En otras realizaciones, el Ac anti-pD-L1 es MPDL3280A (también conocido como RG7446) (véase, por ejemplo, Herbst; patente de Estados Unidos N.° 8.217.149) o MEDI4736 (Khleif, 2013).

Los encabezados de sección utilizados en el presente documento tienen fines únicamente organizativos y no deben considerarse limitantes de la materia objeto descrita.

Definiciones

A menos que se definan de otra manera, los términos científicos y técnicos usados en relación con la presente invención tendrán los significados comúnmente entendidos por los expertos en la materia. Asimismo, a no ser que el contexto requiera otra cosa, los términos en singular incluirán las pluralidades y los términos en plural incluirán el singular.

En la técnica se conocen técnicas ilustrativas utilizadas en relación con el ADN recombinante, síntesis de oligonucleótidos, cultivo y la transformación de tejidos (por ejemplo, electroporación, lipofección), reacciones enzimáticas y técnicas de purificación. Se describen muchas de estas técnicas y procedimientos, por ejemplo, en Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)), entre otros sitios. Además, en la técnica también se conocen técnicas ilustrativas para síntesis químicas, análisis químicos, para la preparación, formulación y administración farmacéutica y para el tratamiento de pacientes.

En la presente solicitud, el uso de "o" significa "y/o" a menos que se indique otra cosa. En el contexto de una reivindicación dependiente múltiple, el uso de "o" hace referencia a más de una reivindicación dependiente o independiente anterior solamente como alternativa. Además, los términos, tales como "elemento" o "componente" abarcan tanto elementos como componentes que comprenden una unidad como elementos y componentes que comprenden más de una subunidad, a menos que se indique específicamente otra cosa.

Como se describe en el presente documento, se entiende que cualquier intervalo de concentraciones, intervalo de porcentajes, intervalo de relaciones o intervalo de números enteros incluye el valor de cualquier número entero dentro del intervalo citado y, cuando sea adecuado, fracciones del mismo (tales como una décima y una centésima de un número entero), a menos que se indique otra cosa.

Las unidades, los prefijos y los símbolos se denotan en su forma aceptada del Sistema Internacional de Unidades (SI). Los intervalos numéricos incluyen los números que definen el intervalo. Los títulos proporcionados en el presente documento no son limitaciones de los diversos aspectos de la divulgación, que se pueden obtener por referencia a la memoria descriptiva en su conjunto. Por consiguiente, los términos definidos inmediatamente a continuación se definen con más detalle por referencia a la memoria descriptiva en su totalidad.

Como se utiliza de acuerdo con la presente divulgación, se entenderá que los siguientes términos, a menos que se indique otra cosa, tienen los siguientes significados:

"Administración" se refiere a la introducción física de una composición que comprende un agente terapéutico a un sujeto, usando cualquiera de los diversos métodos y sistemas de liberación conocidos por los expertos en la materia. Las vías de administración para el Ac anti-PD-1 y/o el Ac anti-PD-L1 incluyen la vía intravenosa, intramuscular, subcutánea, intraperitoneal, espinal u otras vías de administración parenterales, por ejemplo, mediante inyección o infusión. La expresión "administración parenteral", tal como se usa en el presente documento, significa modos de administración diferentes de la administración entérica y tópica, normalmente mediante inyección, e incluye, sin limitación, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intralinfática, intralesional, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, epidural e intraesternal e infusión, así como electroporación in vivo. Las vías no parenterales incluyen una vía de administración tópica, epidérmica o mucosa, por ejemplo, oral, intranasal, vaginal, rectal, sublingual o tópica. La administración también se puede realizar, por ejemplo, una vez, una pluralidad de veces y/o durante uno o más períodos prolongados.

Un "evento adverso" (EA), tal como se usa en el presente documento, es cualquier signo desfavorable y generalmente no intencionado o indeseable (incluido un hallazgo anómalo de laboratorio), síntoma o enfermedad asociada con el uso de un tratamiento médico. Por ejemplo, un evento adverso puede estar asociado con la activación del sistema inmunitario o la expansión de células del sistema inmunitario (por ejemplo, linfocitos T) en respuesta a un tratamiento.

Un tratamiento médico puede tener uno o más EA asociados y cada EA puede tener el mismo nivel de gravedad o un nivel de gravedad diferente. La referencia a métodos capaces de "alterar los eventos adversos" significa un régimen de tratamiento que disminuye la incidencia y/o gravedad de uno o más EA asociados con el uso de un régimen de tratamiento diferente. La expresión "molécula de ácido nucleico" y el término "polinucleótido" pueden usarse indistintamente y hacen referencia a un polímero de nucleótidos. Dichos polímeros de nucleótidos pueden contener nucleótidos naturales y/o no naturales e incluyen, pero sin limitación, ADN, ARN y PNA. "Secuencia de ácido nucleico" se refiere a la secuencia lineal de nucleótidos que comprende la molécula de ácido nucleico o el polinucleótido.

Los términos "polipéptido" y "proteína" se usan indistintamente para hacer referencia a un polímero de restos de aminoácido y no se limita a una longitud mínima. Dichos polímeros de restos de aminoácidos pueden contener restos de aminoácidos naturales o no naturales e incluyen, pero sin limitación, péptidos, oligopéptidos, dímeros, trímeros y multímeros de restos de aminoácidos. La definición abarca tanto proteínas de longitud completa como fragmentos de las mismas. Los términos también incluyen modificaciones posteriores a la expresión del polipéptido, por ejemplo, glucosilación, sialilación, acetilación, fosforilación y similares. Adicionalmente, para los fines de la presente invención, un "polipéptido" se refiere a una proteína que incluye modificaciones, tales como eliminaciones, adiciones y sustituciones (generalmente de naturaleza conservativa), con respecto a la secuencia nativa, siempre que la proteína mantenga la actividad deseada. Estas modificaciones pueden ser deliberadas, como mediante mutagénesis dirigida, o pueden ser accidentales, tal como mediante mutaciones de hospedadores que producen las proteínas o errores debidos a la amplificación por la PCR.

El término "CSF1R" se refiere, en el presente documento, al CSF1R de longitud completa, que incluye el ECD N-terminal, el dominio transmembrana y el dominio de tirosina cinasa intracelular, con o sin una secuencia líder N-terminal. En algunas realizaciones, el CSF1R es un CSF1R humano que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 o de SEQ ID NO: 2.

Las expresiones "proteína de muerte celular programada 1" y "PD-1" se refieren a un receptor inmunoinhibidor que pertenece a la familia CD28. PD-1 se expresa predominantemente en células T previamente activadas in vivo, y se une a dos ligandos, PD-L1 y PD-L2. El término "PD-1", tal como se usa en el presente documento, incluye PD-1 humana (hPD-1), variantes, isoformas y homólogos de especies de hPD-1, y análogos que tienen al menos un epítopo común con hPD-1. La secuencia completa de hPD-1 se puede encontrar en el número de registro de GenBank U64863. En algunas realizaciones, la PD-1 es una PD-1 humana que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 96 (precursor, con secuencia señal) o SEQ ID NO: 97 (madura, sin secuencia señal).

Las expresiones " ligando 1 de muerte celular programada 1" y "PD-L1" (PD-L1; Homólogo 1 de B7; B7-H1; o CD274) y "Ligando 2 de muerte programada" (PD-L2; B7-DC; o CD273) son dos ligandos de glicoproteína de superficie celular para PD-1 que regulan negativamente la activación de células T y la secreción de citocinas al unirse a PD-1. El término "PD-L1", tal como se usa en el presente documento, incluye PD-L1 humana (hPD-L1), variantes, isoformas y homólogos de especies de hPD-L1, y análogos que tienen al menos un epítopo común con hPD-L1. La secuencia completa de hPD-L1 se puede encontrar en el número de registro de GenBank Q9NZQ7. En algunas realizaciones, la PD-L1 es una PD-L1 humana que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 98 (precursor, con secuencia señal) o SEQ ID NO: 99 (madura, sin secuencia señal).

"Antígeno 4 de linfocitos T citotóxicos" (CTLA-4) se refiere a un receptor inmunoinhibidor que pertenece a la familia CD28. CTLA-4 se expresa exclusivamente en células T in vivo, y se une a dos ligandos, CD80 y CD86 (también denominados B7-1 y B7-2, respectivamente). El término "CTLA-4", tal como se usa en el presente documento, incluye CTLA-4 humano (hCTLA-4), variantes, isoformas y homólogos de especies de hCTLA-4, y análogos que tienen al menos un epítopo común con hCTLA-4. La secuencia completa de hCTLA-4 se puede encontrar en el N.° de registro de GenBank AAB59385.

La expresión "Inhibidor de PD-1/PD-L1" se refiere a un resto que interrumpe la ruta de señalización de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, el inhibidor inhibe la ruta de señalización de PD-1/PD-L1 uniéndose a PD-1 y/o PD-L1. En algunas realizaciones, el inhibidor también se une a PD-L2. En algunas realizaciones, un inhibidor de PD-1/PD-L1 bloquea la unión de PD-1 a PD-L1 y/o PD-L2. Los inhibidores de PD-1/PD-L1 ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que se unen a PD-1); anticuerpos que se unen a PD-L1; proteínas de fusión, tales como AMP-224; y péptidos, tales como AUR-012.

La expresión "anticuerpo que inhibe PD-1" se refiere a un anticuerpo que se une a PD-1 o que se une a PD-L1 y por lo tanto inhibe la señalización de PD-1 y/o PD-L1. En algunas realizaciones, un anticuerpo que inhibe PD-1 se une a PD-1 y bloquea la unión de PD-L1 y/o PD-L2 a PD-1. En algunas realizaciones, un anticuerpo que inhibe PD-1 se une a PD-L1 y bloquea la unión de PD-1 a PD-L1. Un anticuerpo que inhibe PD-1 que se une a PD-L1 puede denominarse anticuerpo anti-PD-L1. Un anticuerpo que inhibe PD-1 que se une a PD-1 puede denominarse anticuerpo anti-PD-1.

"PD-L1 positivo", tal como se usa en el presente documento, se puede usar indistintamente con "expresión de PD-L1 de al menos aproximadamente un 5 %". La expresión de PD-L1 puede medirse por cualquier método conocido en la técnica. En algunas realizaciones, la expresión de PD-L1 se mide mediante una IHC automatizada. Por tanto, un tumor positivo para PD-L1 puede tener al menos aproximadamente un 5 %, al menos aproximadamente un 10 %, o al menos aproximadamente un 20 % de células tumorales que expresan PD-L1, según se mide mediante una IHC automatizada. En determinadas realizaciones, "PD-L1 positivo" significa que hay al menos 100 células que expresan PD-L1 en la superficie de las células.

"PD-L2 positivo", tal como se usa en el presente documento, se puede usar indistintamente con "expresión de PD-L2 de al menos aproximadamente un 5 %". La expresión de PD-L2 puede medirse por cualquier método conocido en la técnica. En algunas realizaciones, la expresión de PD-L2 se mide mediante una IHC automatizada. Por tanto, un tumor positivo para PD-L2 puede tener al menos aproximadamente un 5 %, al menos aproximadamente un 10 %, o al menos aproximadamente un 20 % de células tumorales que expresan PD-L2, según se mide mediante una IHC automatizada. En determinadas realizaciones, "PD-L2 positivo" significa que hay al menos 100 células que expresan PD-L2 en la superficie de las células.

Con referencia a los anticuerpos anti-CSF1R, la expresión "bloquea la unión de" un ligando, tal como CSF1 y/o IL-34, y las variantes gramaticales de la misma, se usan para hacer referencia a la capacidad para inhibir la interacción entre CSF1R y un ligando de CSF1R, tal como CSF1 y/o IL-34. Dicha inhibición puede producirse mediante cualquier mecanismo, lo que incluye la interferencia directa con la unión al ligando, por ejemplo, a causa de sitios de unión solapantes en CSF1R y/o cambios conformacionales en CSF1R inducidos por el anticuerpo que alteran la afinidad por el ligando, etc. Los anticuerpos y fragmentos de anticuerpo citados como "funcionales" se caracterizan por tener dichas propiedades.

Con referencia a los anticuerpos anti-PD-1, la expresión "bloquea la unión de" un ligando, tal como PD-L1, y variantes gramaticales de la misma, se usan para hacer referencia a la capacidad para inhibir la interacción entre PD-1 y un ligando de PD-1, tales como PD-L1. Dicha inhibición puede producirse mediante cualquier mecanismo, lo que incluye la interferencia directa con la unión al ligando, por ejemplo, a causa de sitios de unión solapantes en PD-1 y/o cambios conformacionales en PD-1 inducidos por el anticuerpo que alteran la afinidad por el ligando, etc. Los anticuerpos y fragmentos de anticuerpo citados como "funcionales" se caracterizan por tener dichas propiedades.

Con referencia a los anticuerpos anti-PD-L1, la expresión "bloquea la unión de" un ligando, tal como PD-1, y variantes gramaticales de la misma, se usan para hacer referencia a la capacidad para inhibir la interacción entre PD-L1 y un ligando de PD-L1, tales como PD-1. Dicha inhibición puede producirse mediante cualquier mecanismo, lo que incluye la interferencia directa con la unión al ligando, por ejemplo, a causa de sitios de unión solapantes en PD-L1 y/o cambios conformacionales en PD-L1 inducidos por el anticuerpo que alteran la afinidad por el ligando, etc. Los anticuerpos y fragmentos de anticuerpo citados como "funcionales" se caracterizan por tener dichas propiedades.

El término "anticuerpo", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula que comprende al menos la región determinante de la complementariedad (CDR) 1, la CDR2 y la CDR3 de una cadena pesada y al menos la CDR1, la CDR2 y la CDR3 de una cadena ligera, en donde la molécula es capaz de unirse al antígeno. El término anticuerpo incluye, pero no se limita a, fragmentos que son capaces de unirse a antígenos, tales como Fv, Fv monocatenario (scFv), Fab, Fab' y (Fab')2. El término anticuerpo también incluye, pero no se limita a, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados y anticuerpos de diversas especies tales como ratón, ser humano, mono cynomolgus, etc.

En algunas realizaciones, el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera. En algunas realizaciones, un anticuerpo comprende al menos una cadena pesada que comprende una región variable de cadena pesada y al menos una porción de una región constante de cadena pesada, y al menos una cadena ligera que comprende una región variable de cadena ligera y al menos una porción de una región constante de cadena ligera. En algunas realizaciones, el anticuerpo comprende dos cadenas pesadas, en donde cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada y al menos una porción de una región constante de cadena pesada, y dos cadenas ligeras, en donde cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera y al menos una porción de una región constante de cadena ligera. Tal como se usa en el presente documento, se considera que un Fv monocatenario (scFv) o cualquier otro anticuerpo que comprende, por ejemplo, una sola cadena de polipéptido que comprende las seis CDR (tres CDR de cadena pesada y tres CDR de cadena ligera), tiene una cadena pesada y una cadena ligera. En algunas de estas realizaciones, la cadena pesada es la región del anticuerpo que comprende las tres CDR de cadena pesada y la cadena ligera es la región del anticuerpo que comprende las tres CDR de cadena ligera.

La expresión "región variable de cadena pesada", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una región que comprende la CDR1 de cadena ligera, región marco (FR) 2, CDR2, FR3 y CDR3. En algunas realizaciones, una región variable de cadena pesada también comprende al menos una porción de una FR1 y/o al menos una porción de una FR4. En algunas realizaciones, una CDR1 de cadena pesada corresponde a los restos 26 a 35 de Kabat; una CDR2 de cadena pesada corresponde a los restos 50 a 65 de Kabat; y una CDR3 de cadena pesada corresponde a los restos 95 a 102 de Kabat. Véase, por ejemplo, Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 y 1991, NIH, Bethesda, Md.); y la figura 1. En algunas realizaciones, una CDR1 de cadena pesada corresponde a los restos 31 a 35 de Kabat; una CDR2 de cadena pesada corresponde a los restos 50 a 65 de Kabat; y una CDR3 de cadena pesada corresponde a los restos 95 a 102 de Kabat. Véase la cita anterior.

La expresión "región constante de cadena pesada", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una región que comprende al menos tres dominios constantes de cadena pesada, Ch1, Ch2 y Ch3. Las regiones constantes de cadena pesada ilustrativas no limitantes incluyen y, 6 y a. Las regiones constantes de cadena pesada ilustrativas no limitantes también incluyen £ y p. Cada región constante pesada corresponde a un isotipo de anticuerpo. Por ejemplo, un anticuerpo que comprende una región constante y es un anticuerpo IgG, un anticuerpo que comprende una región constante 6 es un anticuerpo IgD y un anticuerpo que comprende una región constante a es un anticuerpo IgA. Asimismo, un anticuerpo que comprende una región constante p es un anticuerpo IgM y un anticuerpo que comprende una región constante £ es un anticuerpo IgE. Ciertos isotipos pueden subdividirse adicionalmente en subclases. Por ejemplo, los anticuerpos IgG incluyen, pero sin limitación, anticuerpos IgG1 (que comprenden una región constante yi ), IgG2 (que comprenden una región constante Y2), IgG3 (que comprenden una región constante Y3) e IgG4 (que comprenden una región constante Y4); los anticuerpos IgA incluyen, pero sin limitación, anticuerpos IgA1 (que comprenden una región constante a i ) e IgA2 (que comprenden una región constante a2); y los anticuerpos IgG incluyen, pero sin limitación, IgM1 e IgM2.

En algunas realizaciones, una región constante de cadena pesada comprende una o más mutaciones (o sustituciones), adiciones o eliminaciones que confieren una característica deseada al anticuerpo. Una mutación ilustrativa no limitante es la mutación S241P en la región bisagra de IgG4 (entre los dominios constantes ChI y Ch2), que altera el motivo CPSCP de IgG4 a CPPCP, que es similar al motivo correspondiente en IgG1. Esta mutación, en algunas realizaciones, da como resultado un anticuerpo IgG4 más estable. Véase, por ejemplo, Angal et al., Mol. Immunol. 30: 105-108 (1993); Bloom et al., Prot. Sci. 6: 407-415 (1997); Schuurman et al., Mol. Immunol. 38: 1-8 (2001).

La expresión "cadena pesada" (abreviada como HC), tal como se usa en el presente documento, se refiere a un polipéptido que comprende al menos una región variable de cadena pesada, con o sin una secuencia líder. En algunas realizaciones, una cadena pesada comprende al menos una porción de una región constante de cadena pesada. La expresión "cadena pesada de longitud completa", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un polipéptido que comprende una región variable de cadena pesada y una región constante de cadena pesada, con o sin una secuencia líder.

La expresión "región variable de cadena ligera", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una región que comprende la CDR1 de cadena ligera, región marco (FR) 2, CDR2, FR3 y CDR3. En algunas realizaciones, una región variable de cadena ligera también comprende una FR1 y/o una FR4. En algunas realizaciones, una CDR1 de cadena ligera corresponde a los restos 24 a 34 de Kabat; una CDR2 de cadena ligera corresponde a los restos 50 a 56 de Kabat; y una CDR3 de cadena ligera corresponde a los restos 89 a 97 de Kabat. Véase, por ejemplo, Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 y 1991, NIH, Bethesda, Md.); y la figura 1.

La expresión "región constante de cadena ligera", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una región que comprende un dominio constante de cadena ligera, Cl. Las regiones constantes de cadena ligera ilustrativas no limitantes incluyen A y k.

La expresión "cadena ligera" (abreviada como LC), tal como se usa en el presente documento, se refiere a un polipéptido que comprende al menos una región variable de cadena ligera, con o sin una secuencia líder. En algunas realizaciones, una cadena ligera comprende al menos una porción de una región constante de cadena ligera. La expresión "cadena ligera de longitud completa", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un polipéptido que comprende una región variable de cadena ligera y una región constante de cadena ligera, con o sin una secuencia líder.

Un "anticuerpo quimérico", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo que comprende al menos una región variable de una primera especie (tal como un ratón, rata, mono cynomolgus, etc.) y al menos una región constante de una segunda especie (tal como un ser humano, mono cynomolgus, etc.). En algunas realizaciones, un anticuerpo quimérico comprende al menos una región variable de ratón y al menos una región constante humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo quimérico comprende al menos una región variable de mono cynomolgus y al menos una región constante humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo quimérico comprende al menos una región variable de rata y al menos una región constante de ratón. En algunas realizaciones, todas las regiones variables de un anticuerpo quimérico son de una primera especie y todas las regiones constantes del anticuerpo quimérico son de una segunda especie.

Un "anticuerpo humanizado", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo en el que se ha reemplazado al menos un aminoácido en una región marco de una región variable no humana por el aminoácido correspondiente de una región variable humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo humanizado comprende al menos una región constante humana o un fragmento de la misma. En algunas realizaciones, un anticuerpo humanizado es un Fab, un scFv, un (Fab')2, etc.

Un "anticuerpo con injerto de CDR", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo humanizado en el que se han injertado las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de una primera especie (no humana) en las regiones marco (FR) de una segunda especie (humana).

Un "anticuerpo humano", tal como se usa en el presente documento, se refiere a anticuerpos producidos en seres humanos, anticuerpos producidos en animales no humanos que comprenden genes de inmunoglobulina humanos, tales como XenoMouse®, y anticuerpos seleccionados utilizando métodos in vitro, tales como presentación en fagos, en donde el repertorio de anticuerpos se basa en secuencias de inmunoglobulinas humanas.

Un Ac "anti-antígeno" se refiere a un Ac que se une específicamente al antígeno. Por ejemplo, un Ac anti-PD-1 se une específicamente a PD-1, un Ac anti-PD-L1 se une específicamente a PD-L1 y un Ac anti-CTLA-4 se une específicamente a CTLA-4.

La expresión "secuencia líder" se refiere a una secuencia de restos de aminoácidos ubicada en el extremo N-terminal de un polipéptido que facilita la secreción de un polipéptido de una célula de mamífero. Una secuencia líder puede escindirse tras la exportación del polipéptido desde la célula de mamífero, formando una proteína madura. Las secuencias líder pueden ser naturales o sintéticas y pueden ser heterólogas u homólogas a la proteína a la que se unen. Las secuencias líder ilustrativas incluyen, pero sin limitación, secuencias líder de anticuerpos, tales como, por ejemplo, las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 3 y 4, que corresponden a secuencias líder de cadena ligera y pesada humana, respectivamente. Las secuencias líder ilustrativas no limitantes también incluyen secuencias líder de proteínas heterólogas. En algunas realizaciones, un anticuerpo carece de una secuencia líder. En algunas realizaciones, un anticuerpo comprende al menos una secuencia líder, que puede seleccionarse entre secuencias líder de anticuerpos nativos y secuencias líder heterólogas.

El término "vector" se usa para describir un polinucleótido que puede modificarse por ingeniería genética para que contenga uno o más polinucleótidos clonados que pueden propagarse en una célula hospedadora. Un vector puede incluir uno o más de los siguientes elementos: un origen de replicación, una o más secuencias reguladoras (tales como, por ejemplo, promotores y/o potenciadores) que regulan la expresión del polipéptido de interés y/o uno o más genes marcadores de selección (tales como, por ejemplo, genes de resistencia a antibióticos y genes que pueden usarse en ensayos colorimétricos, por ejemplo, p-galactosidasa). La expresión "vector de expresión" se refiere a un vector que se usa para expresar un polipéptido de interés en una célula hospedadora.

Una "célula hospedadora" se refiere a una célula que puede ser o ha sido receptora de un vector o un polinucleótido aislado. Las células hospedadoras pueden ser células procariotas o células eucariotas. Las células eucariotas ilustrativas incluyen células de mamífero, tales como células de primate o de animales no primates; células fúngicas, tales como levaduras; células vegetales; y células de insecto. Las células de mamífero ilustrativas no limitantes incluyen, pero sin limitación, células NSO, células PER.C6® (Crucell) y células 293 y CHO y sus derivados, tales como células 293-6E y DG44, respectivamente.

El término "aislado", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula que se ha separado de al menos parte de los componentes con los que normalmente se encuentra en la naturaleza. Por ejemplo, se indica que un polipéptido está "aislado" cuando se ha separado de al menos algunos de los componentes de la célula en la que se produjo. Cuando un polipéptido se secreta por una célula tras su expresión, se considera "aislar" el polipéptido la separación física del sobrenadante que contiene el polipéptido de la célula que lo produjo. De forma similar, un polipéptido se denomina "aislado" cuando no forma parte del polinucleótido de mayor tamaño (tal como, por ejemplo, del a Dn genómico o del ADN mitocondrial, en el caso de un polinucleótido de ADN) en el que se encuentra normalmente en la naturaleza o se ha separado de al menos algunos de los componentes de la célula en la que se produjo, por ejemplo, en el caso de un polinucleótido de ARN. Por tanto, un polinucleótido de ADN que está contenido en un vector dentro de una célula hospedadora puede considerarse "aislado" en tanto que el polinucleótido no se encuentre en dicho vector en la naturaleza.

La expresión "nivel elevado" significa un mayor nivel de una proteína en un tejido particular de un sujeto en relación con el mismo tejido en un control, tal como uno o más individuos que no padecen cáncer u otra afección descrita en el presente documento. El nivel elevado puede ser el resultado de cualquier mecanismo, tal como aumento de la expresión, aumento de la estabilidad, aumento de la degradación, aumento de la secreción, aumento de la eliminación, etc., de la proteína.

El término "reducir" o "reduce" significa disminuir el nivel de una proteína en un tejido particular de un sujeto en al menos un 10 %. En algunas realizaciones, un agente, tal como un anticuerpo que se une a CSF1R o un inhibidor de PD-1/PD-L1, reduce el nivel de una proteína en un tejido particular de un sujeto en al menos un 15 %, al menos un 20 %, al menos un 25 %, al menos un 30 %, al menos un 35 %, al menos un 40 %, al menos un 45 %, al menos un 50 %, al menos un 55 %, al menos un 60 %, al menos un 65 %, al menos un 70 %, al menos un 75 %, al menos un 80 %, al menos un 85 % o al menos un 90 %. En algunas realizaciones, se reduce el nivel de una proteína en relación con el nivel de la proteína antes de la puesta en contacto con un agente, tal como un anticuerpo que se une a CSF1R o un inhibidor de PD-1/PD-L1.

El término "resistente", cuando se usa en el contexto de la resistencia a un agente terapéutico, significa una respuesta reducida o una ausencia de respuesta a una dosis estándar del agente terapéutico, en relación con la respuesta del sujeto a la dosis estándar del agente terapéutico en el pasado o en relación con la respuesta esperada de un sujeto similar con un trastorno similar a la dosis convencional del agente terapéutico. Por tanto, en algunas realizaciones, un sujeto puede ser resistente al agente terapéutico aunque no se haya administrado anteriormente el agente terapéutico o el sujeto puede desarrollar resistencia al agente terapéutico después de haber respondido al agente en una o más ocasiones anteriores.

Los términos "sujeto" y "paciente" se usan indistintamente en el presente documento para referirse a un ser humano. En algunas realizaciones, también se proporcionan métodos de tratamiento de otros mamíferos entre los que se incluyen, pero sin limitación, roedores, simios, felinos, cánidos, equinos, bovinos, porcinos, ovinos, caprinos, animales mamíferos de laboratorio, animales mamíferos de granja, animales mamíferos deportivos y mamíferos mascotas.

El término "muestra", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una composición que se obtiene o procede de un sujeto que contiene una entidad celular y/o molecular de otro tipo que se va a caracterizar, cuantificar y/o identificar, por ejemplo basándose en sus características físicas, bioquímicas y/o fisiológicas. Una muestra ilustrativa es una muestra de tejido.

La expresión "muestra de tejido" se refiere a una colección de células similares obtenidas de un tejido de un sujeto. La fuente de la muestra de tejido puede ser un tejido sólido tal como el procedente de un órgano, o una muestra de tejido, biopsia o aspirado, en estado fresco, congelado y/o conservado; sangre o cualquier constituyente de la sangre; fluidos corporales, tales como líquido cefalorraquídeo, líquido amniótico, líquido peritoneal, líquido sinovial o fluido intersticial; células de cualquier momento durante la gestación o el desarrollo del sujeto. En algunas realizaciones, la muestra de tejido es una muestra de tejido de biopsia sinovial y/o una muestra de líquido sinovial. En algunas realizaciones, la muestra de tejido es una muestra de líquido sinovial. La muestra de tejido también puede ser células o líneas celulares primarias o cultivadas. Opcionalmente, la muestra de tejido se obtiene de un tejido/órgano enfermo. La muestra de tejido puede comprender compuestos que no están naturalmente mezclados con el tejido en la naturaleza, tales como conservantes, anticoagulantes, tampones, agentes de fijación, nutrientes, antibióticos o similares. Una "muestra de control" o "tejido de control", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una muestra, célula o tejido obtenido de una fuente que se sabe o que se cree que no padece la enfermedad para la que se está tratando al sujeto.

A efectos del presente documento, una "sección" de una muestra de tejido significa una parte o trozo de una muestra de tejido, tal como una sección fina de tejido o células cortada de una muestra de tejido sólida.

El término "cáncer" se usa en el presente documento para referirse a un grupo de células que presentan niveles anormalmente altos de proliferación y crecimiento. Un cáncer puede ser benigno (también conocido como tumor benigno), pre-maligno o maligno. Las células cancerosas pueden ser células cancerosas sólidas o células cancerosas leucémicas. La expresión "crecimiento canceroso" se usa en el presente documento para referirse a la proliferación o crecimiento de una célula o células que constituyen un cáncer que conduce a un aumento correspondiente en el tamaño o extensión del cáncer.

Los ejemplos de cáncer incluyen, pero sin limitación, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia. Los ejemplos más particulares no limitantes de dichos cánceres incluyen cáncer de células escamosas, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de la hipófisis, cáncer esofágico, astrocitoma, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de pulmón no microcítico (incluido el cáncer de pulmón no microcítico de células escamosas), adenocarcinoma de pulmón, carcinoma escamoso del pulmón, cáncer de peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gastrointestinal, cáncer de páncreas, glioblastoma, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer colorrectal, carcinoma de endometrio o uterino, carcinoma de las glándulas salivales, cáncer de riñón, carcinoma de células renales, cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, cáncer de cerebro, cáncer de endometrio, cáncer de testículo, colangiocarcinoma, carcinoma de vesícula biliar, cáncer gástrico, melanoma y diversos tipos de cáncer de cabeza y cuello (incluido el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello).

La expresión "cáncer recurrente" se refiere a un cáncer que ha regresado después de un régimen de tratamiento anterior, tras el cual hubo un período de tiempo durante el cual no se pudo detectar el cáncer.

El término "cáncer progresivo" es un cáncer que ha aumentado de tamaño o un tumor que se ha extendido desde el comienzo de un régimen de tratamiento. En determinadas realizaciones, un cáncer progresivo es un cáncer que ha aumentado de tamaño o un tumor que se ha extendido en al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 40 %, o al menos un 50 % desde el inicio de un régimen de tratamiento.

A modo de ejemplo, un "agente anticanceroso" promueve la regresión del cáncer en un sujeto. En algunas realizaciones, una cantidad terapéuticamente eficaz del fármaco promueve la regresión del cáncer hasta el punto de eliminar el cáncer. "Promoción de la regresión del cáncer" significa que la administración de una cantidad eficaz del fármaco, solo o en combinación con un agente anticanceroso, da como resultado una reducción en el crecimiento o el tamaño del tumor, necrosis del tumor, un descenso en la gravedad de al menos un síntoma de la enfermedad, un aumento en la frecuencia y duración de los períodos libres de síntomas de la enfermedad, o una prevención del empeoramiento o discapacidad debido a la enfermedad. Además, los términos "eficaz" y "eficacia", con respecto a un tratamiento, incluyen tanto eficacia farmacológica como seguridad fisiológica. La eficacia farmacológica se refiere a la capacidad del fármaco para promover la regresión del cáncer en el paciente. La seguridad fisiológica se refiere al nivel de toxicidad u otros efectos fisiológicos adversos a nivel celular, de órgano y/o de organismo (efectos adversos) resultantes de la administración del fármaco.

A modo de ejemplo para el tratamiento de tumores, una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente anticanceroso puede inhibir el crecimiento celular, inhibir el crecimiento tumoral o reducir el tamaño del tumor en al menos aproximadamente un 5 %, al menos aproximadamente un 10 %, en al menos aproximadamente un 15 %, al menos aproximadamente un 20 %, en al menos aproximadamente un 25 %, en al menos aproximadamente un 30 %, en al menos aproximadamente un 40 %, en al menos aproximadamente un 50 %, en al menos aproximadamente un 60 %, en al menos aproximadamente un 70 % o en al menos aproximadamente un 80 %, en al menos aproximadamente un 90 %, en al menos aproximadamente un 95 % o en al menos aproximadamente un 100 % con respecto a los sujetos no tratados, con respecto al punto de referencia o, en determinadas realizaciones, con respecto a los pacientes tratados con una terapia estándar de atención. En otras realizaciones de la invención, se puede observar una regresión tumoral y esta puede continuar durante un período de al menos aproximadamente 20 días, al menos aproximadamente 40 días o al menos aproximadamente 60 días. A pesar de estas mediciones finales de la eficacia terapéutica, la evaluación de los fármacos inmunoterapéuticos también debe tener en cuenta los patrones de respuesta "relacionados con el sistema inmunitario".

A modo de ejemplo para el tratamiento de tumores, una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente anticanceroso puede inhibir el crecimiento celular o el crecimiento tumoral en al menos aproximadamente un 20 %, en al menos aproximadamente un 30 %, en al menos aproximadamente un 40 %, en al menos aproximadamente un 50 %, en al menos aproximadamente un 60 %, en al menos aproximadamente un 70 % o en al menos aproximadamente un 80 % con respecto a los sujetos no tratados.

En otras realizaciones de la invención, se puede observar una regresión tumoral y esta puede continuar durante un período de al menos aproximadamente 20 días, al menos aproximadamente 40 días o al menos aproximadamente 60 días. A pesar de estas mediciones finales de la eficacia terapéutica, la evaluación de los fármacos inmunoterapéuticos también debe tener en cuenta los patrones de respuesta "relacionados con el sistema inmunitario".

Un patrón de respuesta "relacionado con el sistema inmunitario" se refiere a un patrón de respuesta clínica observado con frecuencia en pacientes con cáncer tratados con agentes inmunoterapéuticos que producen efectos antitumorales induciendo respuestas inmunitarias específicas del cáncer o modificando los procesos inmunitarios naturales. Este patrón de respuesta se caracteriza por un efecto terapéutico beneficioso que sigue a un aumento inicial en la carga tumoral o a la aparición de nuevas lesiones, que en la evaluación de los agentes quimioterapéuticos tradicionales se clasificaría como progresión de la enfermedad y sería sinónimo de fracaso del fármaco. Por consiguiente, la evaluación adecuada de los agentes inmunoterapéuticos puede requerir una supervisión a largo plazo de los efectos de estos agentes sobre la enfermedad diana.

Un "agente quimioterapéutico" es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer. Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen, pero sin limitación, agentes alquilantes tales como tiotepa y ciclofosfamida Cytoxan®; alquilsulfonatos, tales como busulfano, improsulfano y piposulfano; aziridinas, tales como benzodopa, carbocuona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilmelaminas, incluyendo altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolmelamina; acetogeninas (especialmente bullatacina y bullatacinona); una camptotecina (incluyendo el análogo sintético topotecán); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos, adozelesina, carzelesina y bizelesina); criptoficinas (en particular, criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos, KW-2189 y CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; una sarcodictina; espongistatina; mostazas de nitrógeno, tales como clorambucilo, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalán, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas, tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimnustina; antibióticos, tales como los antibióticos de enediina (por ejemplo, caliqueamicina, especialmente caliqueamicina gamma1I y caliqueamicina omegaI1 (véase, por ejemplo, Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)); dinemicina, incluyendo dinemicina A; bisfosfonatos, tal como clodronato; una esperamicina; así como cromóforo de neocarzinostatina y cromóforos de antibióticos de cromoproteína enediina relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina Adriamycin® (incluyendo morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolinodoxorrubicina y desoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas, tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; antimetabolitos, tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos de ácido fólico, tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina, tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina, tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos, tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antisuprarrenales, tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reabastecedor del ácido fólico, tal como ácido frolínico; aceglatona; glucósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diazicuona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglúcido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinano; lonidainina; maitansinoides, tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2-etilhidrazida; procarbazina; complejo polisacarídico PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofirano; espirogermanio; ácido tenuazónico; triazicuona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por ejemplo, paclitaxel Taxol® (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), Abraxane® exento de Cremofor, formulación de nanopartículas de paclitaxel diseñadas por ingeniería con albúmina (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) y doxetaxel Taxotere® (Rhóne-Poulenc Rorer, Antony, Francia); clorambucilo; gemcitabina Gemzar®; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino tales como cisplatino, oxaliplatino y carboplatino; vinblastina; platino; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina Navelbine®; novantrona; tenipósido; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; irinotecan (Camptosar, CPT-11) (incluido el régimen de tratamiento de irinotecan con 5-FU y leucovorina); inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides, tales como ácido retinoico; capecitabina; combretastatina; leucovorina (LV); oxaliplatino, incluido el régimen de tratamiento con oxaliplatino (FOLFOX); inhibidores de PKC-alfa, Raf, H-Ras, EGFR (por ejemplo, erlotinib (Tarceva®)) y VEGF-A que reducen la proliferación celular, y sales farmacéuticamente aceptables, ácidos o derivados de cualquiera de los anteriores.

Otros agentes quimioterapéuticos ilustrativos no limitantes incluyen agentes antihormonales que actúan regulando o inhibiendo la acción hormonal sobre cánceres, tales como antiestrógenos y moduladores selectivos de receptores de estrógenos (SERM), entre los que se incluyen, por ejemplo, tamoxifeno (incluyendo tamoxifeno Nolvadex®), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona y toremifeno Fareston®; inhibidores de aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la producción de estrógenos en las glándulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, acetato de megestrol Megase®, exemestano Aromasin®, formestanio, fadrozol, vorozol Rivisor®, letrozol Femara® y anastrozol Arimidex®; y antiandrógenos, tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; así como troxacitabina (un análogo nucleosídico de 1,3-dioxolano citosina); oligonucleótidos antisentido, en particular, los que inhiben la expresión de genes en rutas de señalización implicadas en proliferación celular anómala, tales como, por ejemplo, PKC-alfa, Raf y H-Ras; ribozimas, tales como un inhibidor de la expresión de VEGF (por ejemplo, ribozima Angiozyme®) y un inhibidor de la expresión de HER2; vacunas tales como vacunas para terapia génica, por ejemplo, vacuna Allovectin®, vacuna Leuvectin® y vacuna vaxid®; Proleukin® rIL-2; inhibidor de la topoisomerasa 1 Lurtotecan®; Abarelix® rmRH; y sales farmacéuticamente aceptables, ácidos o derivados de cualquiera de los anteriores.

Un "agente antiangiogénesis" o " inhibidor de la angiogénesis" se refiere a una sustancia de bajo peso molecular, un polinucleótido (que incluye, por ejemplo, un ARN inhibidor (ARNi o ARNip)), un polipéptido, una proteína aislada, una proteína recombinante, un anticuerpo o sus conjugados o proteínas de fusión del mismo, que inhiben la angiogénesis, vasculogénesis o permeabilidad vascular no deseada, directa o indirectamente. Debe entenderse que el agente antiangiogénesis incluye los agentes que se unen y bloquean la actividad angiogénica del factor angiogénico o su receptor. Por ejemplo, un agente antiangiogénico es un anticuerpo u otro antagonista de un agente angiogénico, por ejemplo, anticuerpos para VEGF-A (por ejemplo, bevacizumab (Avastin®)) o para el receptor de VEGF-A (por ejemplo, receptor de KDR o receptor de Flt-1), inhibidores anti-PDGFR tales como Gleevec® (mesilato de Imatinib), moléculas pequeñas que bloquean la señalización del receptor de VEGF (por ejemplo, PTK787/ZK2284, SU6668, Sutent®//SU11248 (malato de sunitinib)), AMG706, o los descritos en, por ejemplo, la solicitud de patente internacional WO 2004/113304). Los agentes antiangiogénesis también incluyen inhibidores de la angiogénesis nativos, por ejemplo, angiostatina, endostatina, etc. Véase, por ejemplo, Klagsbrun y D'Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53: 217 39; Streit y Detmar (2003) Oncogene 22: 3172-3179 (por ejemplo, la tabla 3 enumera terapias antiangiogénicas para el melanoma maligno); Ferrara y Alitalo (1999) Nature Medicine 5 (12): 1359-1364; Tonini et al. (2003) Oncogene 22: 6549-6556 (por ejemplo, la tabla 2 enumera factores antiangiogénicos conocidos); y, Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8: 200-206 (por ejemplo, la tabla 1 enumera agentes antiangiogénicos utilizados en ensayos clínicos).

Un "agente inhibidor del crecimiento", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un compuesto o composición que inhibe el crecimiento de una célula (tal como una célula que expresa VEGF), ya sea in vitro o in vivo. Por tanto, el agente inhibidor del crecimiento puede ser uno que reduce significativamente el porcentaje de células (tales como una célula que expresa VEGF) en fase S. Los ejemplos de agentes inhibidores del crecimiento incluyen, pero sin limitación, agentes que bloquean la progresión del ciclo celular (en un lugar que no sea la fase S), tales como agentes que inducen la detención en G1 y la detención en la fase M. Los bloqueantes de la fase M clásicos incluyen los agentes de la vinca (vincristina y vinblastina), taxanos e inhibidores de topoisomerasa II, tales como doxorrubicina, epirrubicina, daunorrubicina, etopósido y bleomicina. Los agentes que detienen la fase G1 y también se pasan a la detención de la fase S, por ejemplo, agentes alquilantes de ADN, tales como tamoxifeno, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, cisplatino, metotrexato, 5-fluorouracilo y ara-C. Puede encontrarse información adicional en Mendelsohn e Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, capítulo 1, titulado "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" por Murakami et al. (W.B. Saunders, Filadelfia, 1995), por ejemplo, pág. 13. Los taxanos (paclitaxel y docetaxel) son fármacos anticancerosos ambos derivados del tejo. El docetaxel (Taxotere®, Rhóne-Poulenc Rorer), procedente del tejo europeo, es un análogo semisintético del paclitaxel (Taxol®, Bristol-Myers Squibb). El paclitaxel y el docetaxel promueven el ensamblaje de microtúbulos a partir de dímeros de tubulina y estabilizan los microtúbulos impidiendo su despolimerización, lo que da como resultado la inhibición de la mitosis en las células.

La expresión "composición antineoplásica" se refiere a una composición útil para el tratamiento del cáncer que comprende al menos un agente terapéutico activo. Los ejemplos de agentes terapéuticos incluyen, pero sin limitación, por ejemplo, agentes quimioterapéuticos, agentes inhibidores del crecimiento, agentes citotóxicos, agentes utilizados en radioterapia, agentes antiangiogénesis, agentes inmunoterapéuticos contra el cáncer, agentes apoptóticos, agentes antitubulina y otros agentes para tratar el cáncer, tales como anticuerpos anti-HER-2, anticuerpos anti-CD20, un antagonista del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) (por ejemplo, un inhibidor de la tirosina quinasa), inhibidor de HER1/EGFR (por ejemplo, erlotinib (Tarceva®), inhibidores del factor de crecimiento derivados de plaquetas (por ejemplo, Gleevec® (mesilato de imatinib)), un inhibidor de COX-2 (por ejemplo, celecoxib), interferones, Inhibidores de CTLA-4 (por ejemplo, anticuerpo anti-CTLA ipilimumab (YERVOY®)), inhibidores de PD-1 (por ejemplo, anticuerpos anti-PD-1, BMS-936558), inhibidores de PD-L1 (por ejemplo, anticuerpos anti-PD-L1, MPDl3280a ), inhibidores de PD-L2 (por ejemplo, anticuerpos anti-PD-L2), inhibidores de TIM3 (por ejemplo, anticuerpos anti-TIM3), citocinas, antagonistas (por ejemplo, anticuerpos neutralizantes) que se unen a una o más de las siguientes dianas ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-beta, BlyS, APRIL, BCMA, PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, TIM3, o receptor(es) de VEGF, TRAIL/Apo2 y otros agentes químicos bioactivos y orgánicos, etc.

Un agente "antagoniza" la actividad de un factor cuando el agente neutraliza, bloquea, inhibe, suprime, reduce y/o interfiere con la actividad del factor, incluyendo su unión a uno o más receptores cuando el factor es un ligando.

"Tratamiento", tal como se usa en el presente documento, se refiere tanto a un tratamiento terapéutico como a medidas profilácticas o preventivas, en donde el objetivo es prevenir o frenar (aminorar) la patología o el trastorno en cuestión. En determinadas realizaciones, el término "tratamiento" abarca cualquier administración o aplicación de un agente terapéutico para una enfermedad en un mamífero, incluyendo un ser humano, e incluye inhibir o frenar la enfermedad o la progresión de la enfermedad; aliviar parcial o completamente la enfermedad, por ejemplo, provocando regresión, o restaurando o reparando una función perdida, ausente o defectuosa; estimulando un proceso ineficaz; o causando la estabilización de la enfermedad para que tenga una gravedad reducida. El término "tratamiento" también incluye reducir la gravedad de cualquier característica fenotípica y/o reducir la incidencia, el grado o la probabilidad de esa característica. Los que necesitan tratamiento incluyen los que ya padecen el trastorno, así como los propensos a tener el trastorno o aquellos en los que se va a prevenir el trastorno.

"Pretratamiento" o "punto de referencia" tal como se usa en el presente documento, se refiere al estado de un sujeto antes de la administración de una terapia particular, por ejemplo, antes de la administración de un agente anticanceroso, por ejemplo, una inmunoterapia, por ejemplo, un Ac anti-PD-1 o una porción de unión a antígeno del mismo o un Ac anti-CSF1R o una porción de unión a antígeno del mismo. "Pretratamiento" puede referirse al estado de un sujeto sin tratamiento previo o de un sujeto que ha tenido una o más terapias anteriores. Por consiguiente, es posible que se pueda considerar que un sujeto está en "pretratamiento" incluso si el sujeto recibió alguna forma de tratamiento o terapia en algún momento antes del presente tratamiento o terapia. Adicionalmente, "pretratamiento" puede referirse a cualquier momento hasta el momento en que se administra un tratamiento. Por ejemplo, "pretratamiento" puede incluir semanas, días, horas, minutos o segundos antes de la administración del tratamiento. En una realización particular, se puede recoger una muestra de "pretratamiento" de un sujeto inmediatamente antes de la administración de una primera dosis del tratamiento o terapia. "Pretratamiento" y "punto de referencia" se usan indistintamente en el presente documento.

"Durante el tratamiento" tal como se usa en el presente documento, se refiere al estado de un sujeto que ha recibido una o más dosis iniciales de una terapia en particular, por ejemplo, un agente anticanceroso, por ejemplo, una inmunoterapia, por ejemplo, un Ac anti-PD-1 o una porción de unión a antígeno del mismo o un Ac anti-CSF1R o una porción de unión a antígeno del mismo. "Durante el tratamiento" puede referirse a un sujeto que solo ha recibido una dosis única o un sujeto que ha recibido múltiples dosis del Ac anti-PD-1 o una porción de unión a antígeno del mismo o el Ac anti-CSF1R o una porción de unión a antígeno del mismo. En algunos aspectos, "durante el tratamiento" se refiere a un sujeto que está recibiendo un régimen continuo de una terapia particular, por ejemplo, el sujeto está siendo tratado con un Ac anti-PD-1 o una porción de unión a antígeno del mismo o un Ac anti-CSF1R o una porción de unión a antígeno del mismo. En determinadas realizaciones, la muestra "durante el tratamiento" se puede recoger de un sujeto aproximadamente el día 1, aproximadamente el día 2, aproximadamente el día 3, aproximadamente el día 4, aproximadamente el día 5, aproximadamente el día 6, aproximadamente el día 7, aproximadamente el día 8, aproximadamente el día 9, aproximadamente el día 10, aproximadamente el día 11, aproximadamente el día 12, aproximadamente el día 13, aproximadamente el día 14, aproximadamente el día 15, aproximadamente el día 16, aproximadamente el día 17, aproximadamente el día 18, aproximadamente el día 19, aproximadamente el día 20, aproximadamente el día 21, o cualquier combinación de los mismos, en donde el tratamiento se administra el día 1. En determinadas realizaciones, el tratamiento es la administración de un Ac anti-PD-1 o una porción de unión a antígeno del mismo o un Ac anti-PD-L1 o una porción de unión a antígeno del mismo. En algunas realizaciones, el Ac anti-PD-1 o una porción de unión a antígeno del mismo o el Ac anti-CSF1R o una porción de unión a antígeno del mismo se administra el día 1 de cada ciclo de 21 días. En determinadas realizaciones, la muestra durante el tratamiento se toma del sujeto aproximadamente el día 1, aproximadamente el día 2, aproximadamente el día 3, aproximadamente el día 4, aproximadamente el día 5, aproximadamente el día 6, aproximadamente el día 7, aproximadamente el día 8, aproximadamente el día 9, aproximadamente el día 10, aproximadamente el día 11, aproximadamente el día 12, aproximadamente el día 13, aproximadamente el día 14, aproximadamente el día 15, aproximadamente el día 16, aproximadamente el día 17, aproximadamente el día 18, aproximadamente el día 19, aproximadamente el día 20 o aproximadamente el día 21 del ciclo de 21 días, o cualquier combinación de los mismos. En una realización particular, la muestra durante el tratamiento se recoge el día 1 del ciclo 1, el día 1 del ciclo 2, el día 8 del ciclo 2, el día 1 del ciclo 4, o cualquier combinación de los mismos. En una realización, la muestra durante el tratamiento se recoge el día 8 del ciclo 2.

Las muestras previas al tratamiento y durante el tratamiento se pueden recoger en forma de una biopsia de tumor (por ejemplo, una biopsia con aguja gruesa), resección quirúrgica parcial o completa, extracción de sangre, o cualquier otro método conocido en la técnica. En determinadas realizaciones, los sitios del tumor seleccionados para la biopsia no han recibido radioterapia previa.

El término " inmunoterapia" se refiere al tratamiento de un sujeto afectado por, o que está en riesgo de contraer o padecer una recurrencia de una enfermedad, mediante un método que comprende inducir, potenciar, suprimir o modificar de otro modo una respuesta inmunitaria.

La expresión "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un fármaco eficaz para tratar una enfermedad o trastorno en un sujeto. En determinadas realizaciones, una cantidad eficaz se refiere a una cantidad eficaz, a las dosis y durante los periodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico o profiláctico deseado. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 de la invención puede variar según factores tales como el estado patológico, la edad, el sexo y el peso del individuo, y de la capacidad del anticuerpo o de los anticuerpos para provocar una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente eficaz abarca una cantidad en la que cualquier efecto tóxico o perjudicial de los uno o más anticuerpos se ve superado por los efectos terapéuticamente beneficiosos. En algunas realizaciones, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad del anticuerpo que es eficaz para tratar el cáncer. Una "cantidad terapéutica" se refiere a una dosis de un fármaco que ha sido aprobado para su uso por una agencia reguladora. Una "cantidad subterapéutica", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una dosis de un fármaco o agente terapéutico que es significativamente menor que la dosis aprobada. La capacidad de un agente terapéutico para promover la regresión de la enfermedad se puede evaluar utilizando diversos métodos conocidos por el profesional experto, tales como en sujetos humanos durante ensayos clínicos, en sistemas de modelos animales que predicen la eficacia en seres humanos, o analizando la actividad del agente en ensayos in vitro.

Una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a las dosis y durante los periodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado. Normalmente, pero no necesariamente, dado que se usa una dosis profiláctica en sujetos antes de o en una etapa más temprana de la enfermedad, la cantidad profilácticamente eficaz sería menor que la cantidad terapéuticamente eficaz.

Un sujeto puede caracterizarse por tener una o más "terapias previas" o por ser un sujeto "sin tratamiento previo". Tal como se usa en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, una "terapia previa" se refiere a cualquier terapia sistémica previa para un cáncer. Un sujeto "sin tratamiento previo" es aquel que nunca ha recibido ninguna terapia sistémica previa en el contexto metastásico o adyuvante.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "primera dosis" incluye una dosis única, pero puede ser más de una dosis, es decir, múltiples dosis (al menos dos dosis, al menos tres dosis o más) que se administran antes de la administración de "una segunda dosis" si las dosis múltiples se administran para determinar la susceptibilidad del paciente a una terapia con Ac anti-PD-1 o Ac anti-CSF1R, es decir, expresión diferencial de ciertas proteínas (por ejemplo, PD-L1). La expresión "primera dosis" también puede ser una dosis terapéutica, una dosis superior a una dosis terapéutica o una dosis subterapéutica.

La expresión "segunda dosis", tal como se usa en el presente documento, también puede incluir una dosis única o dosis múltiples que se administran después de la primera dosis (dosis única o dosis múltiples). La segunda dosis puede ser una dosis terapéutica.

El uso del término "dosis fija" con respecto a una composición o método de la invención significa que dos o más anticuerpos diferentes en una composición única están presentes en la composición en proporciones particulares (fijas) entre sí. En algunas realizaciones, la dosis fija está basada en el peso (por ejemplo, mg) de los anticuerpos. En determinadas realizaciones, la dosis fija está basada en la concentración (por ejemplo, mg/ml) de los anticuerpos. En algunas realizaciones, la proporción es al menos aproximadamente 1:1, aproximadamente 1:2, aproximadamente 1:3, aproximadamente 1:4, aproximadamente 1:5, aproximadamente 1:6, aproximadamente 1:7, aproximadamente 1:8, aproximadamente 1:9, aproximadamente 1:10, aproximadamente 1:15, aproximadamente 1:20, aproximadamente 1:30, aproximadamente 1:40, aproximadamente 1:50, aproximadamente 1:60, aproximadamente 1:70, aproximadamente 1:80, aproximadamente 1:90, aproximadamente 1:100, aproximadamente 1:120, aproximadamente 1:140, aproximadamente 1:160, aproximadamente 1:180, aproximadamente 1:200, aproximadamente 200:1, aproximadamente 180:1, aproximadamente 160:1, aproximadamente 140:1, aproximadamente 120:1, aproximadamente 100:1, aproximadamente 90:1, aproximadamente 80:1, aproximadamente 70:1, aproximadamente 60:1, aproximadamente 50:1, aproximadamente 40:1, aproximadamente 30:1, aproximadamente 20:1, aproximadamente 15:1, aproximadamente 10:1, aproximadamente 9:1, aproximadamente 8:1, aproximadamente 7:1, aproximadamente 6:1, aproximadamente 5:1, aproximadamente 4:1, aproximadamente 3:1, o aproximadamente 2:1 mg de primer anticuerpo por mg de segundo anticuerpo. Por ejemplo, la proporción de 3:1 de un primer anticuerpo y un segundo anticuerpo puede significar que un vial puede contener aproximadamente 240 mg del primer anticuerpo y 80 mg del segundo anticuerpo o aproximadamente 3 mg/ml del primer anticuerpo y 1 mg/ml del segundo anticuerpo.

El uso del término "dosis plana" con respecto a la composición de la invención significa una dosis que se administra a un paciente sin tener en cuenta el peso o el área de superficie corporal (BSA) del paciente. Por lo tanto, la dosis plana no se proporciona como una dosis de mg/kg, sino más bien como una cantidad absoluta del agente (por ejemplo, el anticuerpo anti-CSF1R y/o inhibidor de PD-1/PD-L1). Por ejemplo, una persona de 60 kg y una persona de 100 kg recibirían la misma dosis de la composición (por ejemplo, 240 mg de un anticuerpo anti-PD-1 y 80 mg de un anticuerpo anti-CSF1R en un vial de formulación de dosis fija única que contiene 240 mg de un anticuerpo anti-PD-1 y 80 mg de un anticuerpo anti-CSF1R (o dos viales de formulación de dosis fija que contienen 120 mg de un anticuerpo anti-PD-1 y 40 mg de un anticuerpo anti-CSF1R, etc.)).

La expresión "dosis basada en el peso", como se menciona en el presente documento, significa que una dosis que se administra a un paciente se calcula en función del peso del paciente. Por ejemplo, cuando un paciente con 60 kg de peso corporal requiere 3 mg/kg de un anticuerpo anti-PD-1 en combinación con 1 mg/kg de un anticuerpo anti-CSF1R, se pueden extraer las cantidades apropiadas del anticuerpo anti-PD-1 (es decir, 180 mg) y del anticuerpo anti-CSF1R (es decir, 60 mg) a la vez a partir de una formulación de dosificación fija de proporción 3:1 de un anticuerpo anti-PD1 y un anticuerpo anti-CSF1R.

La administración "en combinación con" uno o más agentes terapéuticos adicionales incluye la administración simultánea (concurrente) y consecutiva (secuencial) en cualquier orden.

Un "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a una carga, diluyente, material de encapsulación, auxiliar de formulación o vehículo sólido, semisólido o líquido, no tóxico, convencional en la técnica para su uso con un agente terapéutico que conjuntamente constituyen una "composición farmacéutica" para administración a un sujeto. Un vehículo farmacéuticamente aceptable es no tóxico para los receptores a las dosis y concentraciones empleadas y es compatible con otros ingredientes de la formulación. El vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para la formulación empleada. Por ejemplo, si el agente terapéutico se va a administrar por vía oral, el vehículo puede ser una cápsula de gel. Si el agente terapéutico se va a administrar por vía subcutánea, lo ideal es que el vehículo no sea irritante para la piel y que no provoque reacción en el sitio de inyección.

El término "refractario" aplicado a un tratamiento significa una falta de respuesta clínica parcial o completa a ese tratamiento. Por ejemplo, los pacientes pueden considerarse refractarios a un inhibidor de PD-1 o PD-L1 si no muestran al menos una respuesta parcial después de recibir al menos 2 dosis del inhibidor.

Los pacientes clasificados como pacientes en "estadio III" o "estadio IIIB" o "estadio IV" o "grado IV" y similares se clasifican según los sistemas de clasificación para su enfermedad particular. Por ejemplo, los pacientes con NSCLC pueden clasificarse, por ejemplo, como pacientes en "estadio IIIB" o "estadio IV" según la versión 7 del manual de la Asociación Internacional para el Estudio de la Estadificación del Cáncer de Pulmón en oncología Torácica. Los pacientes con melanoma pueden clasificarse en pacientes en "estadio III" o "IV" según el sistema de estadificación del Comité Conjunto Estadounidense sobre el Cáncer. Los pacientes con glioma maligno pueden clasificarse como pacientes de "grado IV" según los estándares de la Organización Mundial de la Salud.

Anticuerpos anti-CSF1R

Los anticuerpos anti-CSF1R incluyen, pero sin limitación, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, anticuerpos de ratón, anticuerpos humanos y anticuerpos que comprenden las CDR de cadena pesada y/o cadena ligera analizados en el presente documento.

Anticuerpos humanizados ilustrativos

En algunas realizaciones, se proporcionan anticuerpos humanizados que se unen a CSF1R. Los anticuerpos humanizados son útiles como moléculas terapéuticas, ya que los anticuerpos humanizados reducen o eliminan la respuesta inmunitaria humana a los anticuerpos no humanos (tal como la respuesta de anticuerpos humanos anti ratón (HAMA)), que puede dar como resultado una respuesta inmunitaria contra un anticuerpo terapéutico y una eficacia reducida del agente terapéutico.

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, los anticuerpos humanizados ilustrativos no limitantes incluyen de huAb1 a huAb16, descritos en el presente documento. Los anticuerpos humanizados ilustrativos no limitantes también incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada de un anticuerpo seleccionado de huAb1 a huAb16 y/o una región variable de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado de huAb1 a huAb16. Los anticuerpos humanizados ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada seleccionada entre las SEQ ID NO: 39 a 45 y/o una región variable de cadena ligera seleccionada entre las SEQ ID NO: 46 a 52. Los anticuerpos humanizados ilustrativos también incluyen, pero sin limitación, anticuerpos humanizados que comprenden CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y/o CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera del anticuerpo 0301.

Un anticuerpo humanizado anti-CSF1R comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y/o una CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera del anticuerpo 0301. Los anticuerpos anti-CSFIR humanizados ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que comprenden el conjunto de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NO: 15, 16 y 17 y que comprenden el conjunto de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NO: 18, 19 y 20.

Los anticuerpos anti-CSF1R humanizados ilustrativos no limitantes de la divulgación incluyen anticuerpos que comprenden los conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada, y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de la tabla 1 (se muestran las SEC ID NO; para información acerca de las secuencias, véase la tabla 8). Cada fila de la tabla 1 muestra la CDR1, CDR2 y Cd R3 de cadena pesada, y la CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de un anticuerpo ilustrativo.

Anticuerpos humanizados ilustrativos adicionales

En algunas realizaciones y con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, un anticuerpo anti-CSF1R humanizado comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9, 11, 13, y 39 a 45 y en donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R humanizado comprende una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 12, 14 y 46 a 52, en donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R humanizado comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9, 11, 13 y 39 a 45; y una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 12, 14 y 46 a 52; en donde el anticuerpo se une a CSF1R.

Tal como se usa en el presente documento, si un polipéptido particular es, por ejemplo, al menos un 95 % idéntico a una secuencia de aminoácidos, puede determinarse utilizando, por ejemplo, un programa informático. Cuando se determina si una secuencia particular es, por ejemplo, un 95 % idéntica a una secuencia de referencia, el porcentaje de identidad se calcula sobre la longitud total de la secuencia de aminoácidos de referencia.

En algunas realizaciones de la divulgación, un anticuerpo anti-CSF1R humanizado comprende al menos una de las CDR analizadas en el presente documento. Es decir, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R humanizado comprende al menos una CDR seleccionada entre una CDR1 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR2 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR3 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR1 de cadena ligera analizada en el presente documento, una CDR2 de cadena ligera analizada en el presente documento y una CDR3 de cadena ligera analizada en el presente documento. Asimismo, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R humanizado comprende al menos una CDR mutada basada en una CDR analizada en el presente documento, en donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos en relación con la CDR analizada en el presente documento. En algunas realizaciones, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservativas. Un experto en la materia puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas para una secuencia de CDR particular, en donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas alteren significativamente las propiedades de unión del anticuerpo que comprende la CDR mutada.

Los anticuerpos anti-CSF1R humanizados ilustrativos de la divulgación también incluyen anticuerpos que compiten por la unión a CSF1R con un anticuerpo descrito en el presente documento. Por tanto, en algunas realizaciones, se proporciona un anticuerpo anti-CSF1R humanizado que compite por la unión a CSF1R con un anticuerpo seleccionado entre los Fab 0301, 0302 y 0311; y versiones de anticuerpos bivalentes (es decir, que tienen dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras) de esos Fab.

Regiones constantes ilustrativas de anticuerpos humanizados

En algunas realizaciones, un anticuerpo humanizado descrito en el presente documento comprende una o más regiones constantes humanas. En algunas realizaciones, la región constante de cadena pesada humana es de un isotipo seleccionado entre IgA, IgG e IgD. En algunas realizaciones, la región constante de cadena ligera humana es de un isotipo seleccionado entre k y A. En algunas realizaciones, un anticuerpo humanizado descrito en el presente documento comprende una región constante de IgG humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo humanizado descrito en el presente documento comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de estas realizaciones, un anticuerpo humanizado descrito en el presente documento comprende una mutación S241P en la región constante de IgG4 humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo humanizado descrito en el presente documento comprende una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera k humana.

La elección de la región constante de cadena pesada puede determinar si un anticuerpo tendrá o no función efectora in vivo. Dicha función efectora, en algunas realizaciones, incluye citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) y/o citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y puede dar como resultado la muerte de la célula a la que se une el anticuerpo. En algunos métodos de tratamiento, incluidos los métodos para tratar algunos cánceres, la muerte celular puede ser deseable, por ejemplo, cuando el anticuerpo se une a una célula que ayuda al mantenimiento o crecimiento del tumor. Las células ilustrativas que pueden ayudar al mantenimiento o crecimiento de un tumor incluyen, pero sin limitación, células de por sí tumorales, células que ayudan en el reclutamiento del sistema vascular en el tumor y células que proporcionan ligandos, factores de crecimiento o contrarreceptores que facilitan o promueven el crecimiento tumoral o la supervivencia tumoral. En algunas realizaciones, cuando es deseable la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSFIR que comprende una cadena pesada de IgG1 humana o una cadena pesada de IgG3 humana.

Un anticuerpo puede humanizarse mediante cualquier método. Los métodos ilustrativos no limitantes de humanización incluyen los métodos descritos, por ejemplo, en las Patentes de Estados Unidos n.° 5.530.101; 5.585.089; 5.693.761; 5.693.762; 6.180.370; Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-27 (1988); Verhoeyen et al., Science 239: 1534-36 (1988); y la publicación de Estados Unidos n.° US 2009/0136500.

Como se ha señalado anteriormente, un anticuerpo humanizado es un anticuerpo en el que se ha reemplazado al menos un aminoácido en una región marco de una región variable no humana con el aminoácido de la ubicación correspondiente en una región marco humana. En algunas realizaciones, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco, al menos seis, al menos siete, al menos ocho, al menos nueve, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 15 o al menos 20 aminoácidos en las regiones marco de una región variable no humana se reemplazan con un aminoácido de una o más ubicaciones correspondientes en una o más regiones marco humanas.

En algunas realizaciones, algunos de los aminoácidos humanos correspondientes utilizados para la sustitución provienen de las regiones marco de diferentes genes de inmunoglobulinas humanas. Es decir, en algunas realizaciones de este tipo, pueden reemplazarse uno o más de los aminoácidos no humanos con los aminoácidos correspondientes de una región marco humana de un primer anticuerpo humano o codificarse por un primer gen de inmunoglobulina humana, pueden reemplazarse uno o más de los aminoácidos no humanos con los aminoácidos correspondientes de una región marco humana de un segundo anticuerpo humano o codificarse por un segundo gen de inmunoglobulina humana, pueden reemplazarse uno o más de los aminoácidos no humanos con los aminoácidos correspondientes de una región marco humana de un tercer anticuerpo humano o codificarse por un tercer gen de inmunoglobulina humana, etc. Asimismo, en algunas realizaciones, no es necesario que todos los aminoácidos humanos correspondientes que se utilizan para la sustitución en una única región marco, por ejemplo, FR2, procedan del mismo marco humano. En algunas realizaciones, sin embargo, todos los aminoácidos humanos correspondientes que se utilizan para la sustitución proceden del mismo anticuerpo humano o están codificados por el mismo gen de inmunoglobulina humana.

En algunas realizaciones, un anticuerpo se humaniza reemplazando una o más regiones marco completas con las regiones marco humanas correspondientes. En algunas realizaciones, se selecciona una región marco humana que tiene el mayor nivel de homología con la región marco no humana que se está reemplazando. En algunas realizaciones, un anticuerpo humanizado de este tipo es un anticuerpo con injerto de CDR.

En algunas realizaciones, después del injerto de las CDR, uno o más aminoácidos de la región marco se cambian de nuevo al aminoácido correspondiente en la región marco de ratón. Dichas "retromutaciones" se efectúan, en algunas realizaciones, para retener uno o más aminoácidos de la región marco de ratón que parecen contribuir a la estructura de una o más de las CDR y/o que pueden estar involucrados en los contactos con antígenos y/o parecen estar involucrados en la integridad estructural general del anticuerpo. En algunas realizaciones, se realizan diez o menos, nueve o menos, ocho o menos, siete o menos, seis o menos, cinco o menos, cuatro o menos, tres o menos, dos o menos, una o cero retromutaciones en las regiones marco de un anticuerpo después del injerto de las CDR.

En algunas realizaciones, el anticuerpo humanizado también comprende una región constante de cadena pesada humana y/o una región constante de cadena ligera humana.

Anticuerpos quiméricos ilustrativos

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSFIR es un anticuerpo quimérico. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una región variable no humana y al menos una región constante humana. En algunas de estas realizaciones, todas las regiones variables de un anticuerpo anti-CSF1R son regiones variables no humanas y todas las regiones constantes de un anticuerpo anti-CSF1R son regiones constantes humanas. En algunas realizaciones, una o más regiones variables de un anticuerpo quimérico son regiones variables de ratón. La región constante humana de un anticuerpo quimérico no necesita ser del mismo isotipo que la región constante no humana, en caso de que la hubiera, a la que reemplaza. Se analizan anticuerpos quiméricos, por ejemplo, en la patente de Estados Unidos n.° 4.816.567; y en Morrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-55 (1984).

Los anticuerpos quiméricos ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos quiméricos que comprenden las regiones variables de cadena pesada y/o ligera del anticuerpo 0301. Otros anticuerpos quiméricos ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos quiméricos que comprenden CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada, y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera del anticuerpo 0301.

Los anticuerpos anti-CSF1R quiméricos ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que comprenden los siguientes pares de regiones variables de cadena pesada y ligera: SEQ ID NO: 9 y 10.

Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes de la divulgación incluyen anticuerpos que comprenden un conjunto de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada, y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera que se ha mostrado anteriormente en la tabla 1.

Otros anticuerpos quiméricos ilustrativos

En algunas realizaciones y con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, un anticuerpo anti-CSF1R quimérico comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9, 11, 13 y 39 a 45, en donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R quimérico comprende una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 12, 14 y 46 a 52, en donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R quimérico comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9, 11, 13 y 39 a 45; y una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 12, 14 y 46 a 52; en donde el anticuerpo se une a CSF1R.

En algunas realizaciones de la divulgación, un anticuerpo anti-CSF1R quimérico comprende al menos una de las CDR analizadas en el presente documento. Es decir, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R quimérico comprende al menos una CDR seleccionada de una CDR1 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR2 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR3 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR1 de cadena ligera analizada en el presente documento, una CDR2 de cadena ligera analizada en el presente documento y una CDR3 de cadena ligera analizada en el presente documento. Asimismo, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R quimérico comprende al menos una CDR mutada basada en una CDR analizada en el presente documento, en donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos en relación con la CDR analizada en el presente documento. En algunas realizaciones, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservativas. Un experto en la materia puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas para una secuencia de CDR particular, en donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas alteren significativamente las propiedades de unión del anticuerpo que comprende la CDR mutada.

Los anticuerpos anti-CSF1R quiméricos ilustrativos de la divulgación también incluyen anticuerpos que compiten por la unión a CSF1R con un anticuerpo descrito en el presente documento. Por tanto, en algunas realizaciones, se proporciona un anticuerpo anti-CSF1R quimérico que compite por la unión a CSF1R con un anticuerpo seleccionado entre los Fab 0301, 0302 y 0311; y versiones de anticuerpos bivalentes (es decir, que tienen dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras) de esos Fab.

Regiones constantes de anticuerpos quiméricos ilustrativos

En algunas realizaciones, un anticuerpo quimérico descrito en el presente documento comprende una o más regiones constantes humanas. En algunas realizaciones, la región constante de cadena pesada humana es de un isotipo seleccionado entre IgA, IgG e IgD. En algunas realizaciones, la región constante de cadena ligera humana es de un isotipo seleccionado entre k y A. En algunas realizaciones, un anticuerpo quimérico descrito en el presente documento comprende una región constante de IgG humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo quimérico descrito en el presente documento comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de estas realizaciones, un anticuerpo quimérico descrito en el presente documento comprende una mutación S241P en la región constante de IgG4 humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo quimérico descrito en el presente documento comprende una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera k humana.

Como se ha señalado anteriormente, si la función efectora es o no deseable puede depender del método particular de tratamiento previsto para un anticuerpo. Por tanto, en algunas realizaciones, cuando es deseable la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSFIR quimérico que comprende una región constante de cadena pesada de IgG1 humana o una región constante de cadena pesada de IgG3 humana. En algunas realizaciones, cuando no es deseable la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSFIR quimérico que comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 o IgG2 humana.

Anticuerpos humanos ilustrativos

Los anticuerpos humanos pueden prepararse mediante cualquier método adecuado. Los métodos ilustrativos no limitantes incluyen la producción de anticuerpos humanos en ratones transgénicos que comprenden loci de inmunoglobulinas humanas. Véase, por ejemplo, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551-55 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-8 (1993); Lonberg et al., Nature 368: 856-9 (1994); y las Patentes de Estados Unidos n.° 5.545.807; 6.713.610; 6.673.986; 6.162.963; 5.545.807; 6.300.129; 6.255.458; 5.877.397; 5.874.299; y 5.545.806.

Los métodos ilustrativos no limitantes también incluyen la producción de anticuerpos humanos utilizando bibliotecas de presentación en fagos. Véase, por ejemplo, Hoogenboom et al., J. Mol. Biol. 227: 381-8 (1992); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-97 (1991); y la publicación PCT n.° WO 99/10494.

En algunas realizaciones de la divulgación, un anticuerpo anti-CSF1R humano se une a un polipéptido que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 1. Los anticuerpos anti-CSF1R humanos ilustrativos de la divulgación también incluyen anticuerpos que compiten por la unión a CSF1R con un anticuerpo descrito en el presente documento. Por tanto, en algunas realizaciones de la divulgación, se proporciona un anticuerpo anti-CSF1R humano que compite por la unión a CSF1R con un anticuerpo seleccionado entre los Fab 0301, 0302 y 0311 y versiones de anticuerpos bivalentes (es decir, que tienen dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras) de esos Fab.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R humano comprende una o más regiones constantes humanas. En algunas realizaciones, la región constante de cadena pesada humana es de un isotipo seleccionado entre IgA, IgG e IgD. En algunas realizaciones, la región constante de cadena ligera humana es de un isotipo seleccionado entre k y A. En algunas realizaciones, un anticuerpo humano descrito en el presente documento comprende una región constante de IgG humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo humano descrito en el presente documento comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de estas realizaciones, un anticuerpo humano descrito en el presente documento comprende una mutación S241P en la región constante de IgG4 humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo humano descrito en el presente documento comprende una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera k humana.

En algunas realizaciones, cuando es deseable la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSF1R humano que comprende una región constante de cadena pesada de IgG1 humana o una región constante de cadena pesada de IgG3 humana. En algunas realizaciones, cuando no es deseable la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSF1R humano que comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 o IgG2 humana.

Otros anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos también incluyen, pero sin limitación, anticuerpos de ratón, humanizados, humanos, quiméricos y modificados por ingeniería genética que comprenden, por ejemplo, las secuencias de CDR del anticuerpo 0301. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende una región variable de cadena pesada descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende una región variable de cadena ligera descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende una región variable de cadena pesada descrita en el presente documento y una región variable de cadena ligera descrita en el presente documento. De acuerdo con la invención, un anticuerpo anti-CSF1R comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera del anticuerpo 0301 descrito en el presente documento.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende una región variable de cadena pesada de Fab 0301. Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes también incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada de un anticuerpo seleccionado entre los anticuerpos humanizados huAb1 a huAb6. Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes también incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9 y 39 a 41.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende una región variable de cadena ligera de Fab 0301. Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes también incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado entre los anticuerpos humanizados huAb1 a huAb6. Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 46 y 47.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera de Fab 0301. Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes también incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera de un anticuerpo seleccionado entre los anticuerpos humanizados huAb1 a huAb6. Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que comprenden el siguiente par de regiones variables de cadena pesada y ligera: SEQ ID NO: 9 y 10. Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes también incluyen anticuerpos que comprenden el siguiente par de cadenas pesadas y ligeras: SEQ ID NO: 33 y 34.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada de Fab 0301. Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que comprenden el conjunto de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NO: 15, 16 y 17.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de Fab 0301. Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que comprenden el conjunto de CDR1, CDR2 y Cd R3 de cadena ligera de SEQ ID NO: 18, 19 y 20.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y/o CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de Fab 0301.

Los anticuerpos anti-CSF1R ilustrativos no limitantes de la divulgación incluyen anticuerpos que comprenden los conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada, y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera que se han mostrado anteriormente en la tabla 1.

Anticuerpos ilustrativos adicionales

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9, 11, 13 y 39 a 45, en donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 12, 14 y 46 a 52, en donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9, 11, 13 y 39 a 45; y una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99% idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 12, 14 y 46 a 52; en donde el anticuerpo se une a CSF1R.

En algunas realizaciones de la divulgación, un anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una de las CDR analizadas en el presente documento. Es decir, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una CDR seleccionada de una CDR1 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR2 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR3 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR1 de cadena ligera analizada en el presente documento, una CDR2 de cadena ligera analizada en el presente documento y una CDR3 de cadena ligera analizada en el presente documento. Asimismo, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una CDR mutada basada en una CDR analizada en el presente documento, en donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos en relación con la CDR analizada en el presente documento. En algunas realizaciones, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservativas. Un experto en la materia puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas para una secuencia de CDR particular, en donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas alteren significativamente las propiedades de unión del anticuerpo que comprende la CDR mutada.

Los anticuerpos humanos anti-CSF1R ilustrativos de la divulgación también incluyen anticuerpos que compiten por la unión a CSF1R con un anticuerpo descrito en el presente documento. Por tanto, en algunas realizaciones, se proporciona un anticuerpo anti-CSFIR que compite por la unión a CSF1R con un anticuerpo seleccionado de los Fab 0301, 0302 y 0311 y versiones de anticuerpos bivalentes (es decir, que tienen dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras) de esos Fab.

Regiones constantes de anticuerpos ilustrativos

En algunas realizaciones, un anticuerpo descrito en el presente documento comprende una o más regiones constantes humanas. En algunas realizaciones, la región constante de cadena pesada humana es de un isotipo seleccionado entre IgA, IgG e IgD. En algunas realizaciones, la región constante de cadena ligera humana es de un isotipo seleccionado entre k y A. En algunas realizaciones, un anticuerpo descrito en el presente documento comprende una región constante de IgG humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo descrito en el presente documento comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de estas realizaciones, un anticuerpo descrito en el presente documento comprende una mutación S241P en la región constante de IgG4 humana. En algunas realizaciones, un anticuerpo descrito en el presente documento comprende una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera k humana.

Como se ha señalado anteriormente, si la función efectora es o no deseable puede depender del método particular de tratamiento previsto para un anticuerpo. Por tanto, en algunas realizaciones, cuando es deseable la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSFlR que comprende una región constante de cadena pesada de IgG1 humana o una región constante de cadena pesada de IgG3 humana. En algunas realizaciones, cuando no es deseable la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSFIR que comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 o IgG2 humana.

Regiones variables de cadena pesada de anti-CSF1R ilustrativas

En algunas realizaciones, se proporcionan regiones variables de cadena pesada de anticuerpo anti-CSF1R. En algunas realizaciones, una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-CSF1R es una región variable de ratón, una región variable humana o una región variable humanizada.

Una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-CSF1R comprende una CDR1, FR2, CDR2, FR3 y CDR3 de cadena pesada. En algunas realizaciones, una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-CSF1R comprende además una FR1 y/o FR4 de cadena pesada. Las regiones variables de cadena pesada ilustrativas no limitantes incluyen, pero sin limitación, regiones variables de cadena pesada que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada entre las SEQ ID NO: 9 y 39 a 41.

De acuerdo con la invención, las regiones variables de cadena pesada comprenden el conjunto de CDR1, CDR2 y CDR3 de SEQ ID NO: 15, 16 y 17.

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, en algunas realizaciones, una cadena pesada de anticuerpo anti-CSF1R comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 9 y 39 a 41, en donde la cadena pesada, junto con una cadena ligera, es capaz de formar un anticuerpo que se une a CSF1R.

En algunas realizaciones de la divulgación, una cadena pesada de anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una de las CDR analizadas en el presente documento. Es decir, en algunas realizaciones, una cadena pesada de anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una CDR seleccionada de una CDR1 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR2 de cadena pesada analizada en el presente documento y una CDR3 de cadena pesada analizada en el presente documento. Asimismo, en algunas realizaciones, una cadena pesada de anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una CDR mutada basada en una CDR analizada en el presente documento, en donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos en relación con la CDR analizada en el presente documento. En algunas realizaciones, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservativas. Un experto en la materia puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas para una secuencia de CDR particular, en donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas alteren significativamente las propiedades de unión de la cadena pesada que comprende la CDR mutada.

En algunas realizaciones, una cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada. En algunas realizaciones, una cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada humana. En algunas realizaciones, la región constante de cadena pesada humana es de un isotipo seleccionado entre IgA, IgG e IgD. En algunas realizaciones, la región constante de la cadena pesada humana es una región constante de IgG. En algunas realizaciones, una cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de estas realizaciones, la región constante de cadena pesada de IgG4 humana comprende una mutación S241P.

En algunas realizaciones, cuando es deseable la función efectora, una cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada de IgG1 o IgG3 humana. En algunas realizaciones, cuando la función efectora es menos deseable, una cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 o IgG2 humana.

Regiones variables de cadena ligera de anti-CSF1R ilustrativas

En algunas realizaciones, se proporcionan regiones variables de cadena ligera de anticuerpo anti-CSF1R. En algunas realizaciones, una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-CSF1R es una región variable de ratón, una región variable humana o una región variable humanizada.

Una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-CSF1R comprende una CDR1, FR2, CDR2, FR3 y CDR3 de cadena ligera. En algunas realizaciones, una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-CSF1R comprende además una FR1 y/o FR4 de cadena ligera. Las regiones variables de cadena ligera ilustrativas no limitantes incluyen regiones variables de cadena ligera que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 46 y 47.

De acuerdo con la invención, las regiones variables de cadena ligera comprenden el conjunto de CDR1, CDR2 y CDR3 de SEQ ID NO: 18, 19 y 20.

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, en algunas realizaciones, una cadena ligera de anticuerpo anti-CSF1R comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia seleccionada entre las SEQ ID NO: 10, 46 y 47, en donde la cadena ligera, junto con una cadena pesada, es capaz de formar un anticuerpo que se une a CSF1R.

En algunas realizaciones de la divulgación, una cadena ligera de anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una de las CDR analizadas en el presente documento. Es decir, en algunas realizaciones, una cadena ligera de anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una CDR seleccionada de una CDR1 de cadena ligera analizada en el presente documento, una CDR2 de cadena ligera analizada en el presente documento y una CDR3 de cadena ligera analizada en el presente documento. Asimismo, en algunas realizaciones, una cadena ligera de anticuerpo anti-CSF1R comprende al menos una CDR mutada basada en una CDR analizada en el presente documento, en donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos en relación con la CDR analizada en el presente documento. En algunas realizaciones, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservativas. Un experto en la materia puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas para una secuencia de CDR particular, en donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas alteren significativamente las propiedades de unión de la cadena ligera que comprende la CDR mutada.

En algunas realizaciones, una cadena ligera comprende una región constante de cadena ligera humana. En algunas realizaciones, una región constante de la cadena ligera humana se selecciona entre una región constante de la cadena ligera k humana y A humana.

Moléculas de unión a CSF1R adicionales ilustrativas

En algunas realizaciones de la divulgación, se proporcionan moléculas adicionales que se unen a CSF1R. Dichas moléculas incluyen, pero sin limitación, armazones no canónicos, tales como anticalinas, adnectinas, repeticiones de anquirina, etc. Véase, por ejemplo, Hosse et al., Prot. Sci. 15:14 (2006); Fiedler, M. y Skerra, A., "Non-Antibody Scaffolds", págs. 467-499 en Handbook of Therapeutic Antibodies, Dubel, S., ed., Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2007.

Propiedades ilustrativas de los anticuerpos anti-CSF1R

En algunas realizaciones, un anticuerpo que tiene una estructura descrita anteriormente se une a CSF1R con una afinidad de unión (Kd) de menos de 1 nM, bloquea la unión de CSF1 y/o IL-34 a CSF1R e inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por CSF1 y/o IL-34.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R se une al dominio extracelular de CSF1R (ECD de CSF1R). En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R tiene una afinidad de unión (Kd) por CSF1R de menos de 1 nM, menos de 0,5 nM, menos de 0,1 nM o menos de 0,05 nM. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R tiene una Kd de entre 0,01 y 1 nM, entre 0,01 y 0,5 nM, entre 0,01 y 0,1 nM, entre 0,01 nM y 0,05 nM o entre 0,02 nM y 0,05 nM.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R bloquea la unión del ligando a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R bloquea la unión de CSF1 a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R bloquea la unión de IL-34 a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R bloquea la unión tanto de CSF1 como de IL-34 a CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo que bloquea la unión del ligando se une al dominio extracelular de CSF1R. En algunas realizaciones, un anticuerpo bloquea la unión de ligando a CSF1R cuando reduce la cantidad de unión detectable de un ligando a CSF1R en al menos un 50 %, usando el ensayo descrito, por ejemplo, en la patente de Estados Unidos n.° 8.206.715 B2, Ejemplo 7. En algunas realizaciones, un anticuerpo reduce la cantidad de unión detectable de un ligando a CSF1R en al menos un 60%, al menos un 70 %, al menos un 80 % o al menos un 90 %. En algunas de estas realizaciones, se dice que el anticuerpo bloquea la unión del ligando en al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, etc.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por ligando. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por CSF1. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por IL-34. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R inhibe la fosforilación de CSF1R inducida tanto por CSF1 como por IL-34. En algunas realizaciones, se considera que un anticuerpo "inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por ligando" cuando reduce la cantidad de fosforilación detectable de CSF1R inducida por ligando en al menos un 50 %, usando el ensayo descrito, por ejemplo, en la patente de Estados Unidos n.° 8.206.715 B2, Ejemplo 6. En algunas realizaciones, un anticuerpo reduce la cantidad de fosforilación de CSF1R inducida por ligando detectable en al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 % o al menos un 90 %. En algunas de estas realizaciones, se dice que el anticuerpo inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por ligando en al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, etc.

En algunas realizaciones, un anticuerpo inhibe las respuestas de proliferación y/o supervivencia de monocitos en presencia de CSF1 y/o IL-34. En algunas realizaciones, se considera que un anticuerpo "inhibe las respuestas de proliferación y/o supervivencia de monocitos" cuando reduce la cantidad de respuestas de proliferación y/o supervivencia de monocitos en presencia de CSF1 y/o IL-34 en al menos un 50 %, usando el ensayo descrito, por ejemplo, en la patente de Estados Unidos n.° 8.206.715 B2, Ejemplo 10. En algunas realizaciones, un anticuerpo reduce la cantidad de respuestas de proliferación y/o supervivencia de monocitos en presencia de CSF1 y/o IL-34 en al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 % o al menos un 90 %. En algunas de estas realizaciones, se dice que el anticuerpo inhibe las respuestas de proliferación y/o supervivencia de monocitos en al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, etc.

Inhibidores de PD-1/PD-L1 ilustrativos

Los inhibidores de PD-1/PD-L1 ilustrativos incluyen anticuerpos que inhiben PD-1, tales como anticuerpos anti-PD-1 y anticuerpos anti-PD-L1. Dichos anticuerpos pueden ser anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, anticuerpos de ratón, anticuerpos humanos y anticuerpos que comprenden las CDR de cadena pesada y/o cadena ligera analizados en el presente documento. Los inhibidores de PD-1/PD-L1 también incluyen proteínas de fusión que bloquean la unión de PD-1 a PD-L1, tales como AMP-22. Se conocen en la técnica diversos anticuerpos anti-PD-1.

Anticuerpos anti-PD-1

PD-1 es un receptor de punto de control inmunitario clave expresado por células T y B activadas e interviene en la inmunosupresión. PD-1 es un miembro de la familia de receptores CD28, que incluye CD28, CTLA-4, ICOS, PD-1 y BTLA. Se han identificado dos ligandos de glicoproteína de la superficie celular para PD-1, ligando de muerte programada-1 (PD-L1) y ligando de muerte programada-2 (PD-L2), que se expresan en las células presentadoras de antígeno, así como en muchos cánceres humanos, y se ha demostrado que regulan negativamente la activación de las células T y la secreción de citocinas tras la unión a PD-1. La inhibición de la interacción PD-1/PD-L1 interviene en la potente actividad antitumoral en modelos preclínicos.

En la patente de Estados Unidos N.° 8.008.449 se han desvelado HuMAb que se unen de manera específica a PD-1 con alta afinidad. Se han descrito otros mAb anti-PD-1 en, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos n.° 6.808.710, 7.488.802, 8.168.757 y 8.354.509, y la Publicación PCT n.° WO 2012/145493. Se ha demostrado que cada uno de los HuMAb anti-PD-1 desvelados en la patente de Estados Unidos n.° 8.008.449 presenta una o más de las siguientes características: (a) se une a la PD-1 humana con una Kd de 1 x 10'7 M o menos, tal como se determina por resonancia de plasmón de superficie usando un sistema de biosensor Biacore; (b) no se une sustancialmente a las proteínas humanas CD28, CTLA-4 o ICOS; (c) aumenta la proliferación de células T en un ensayo de reacción mixta de linfocitos (MLR); (d) aumenta la producción de interferón y en un ensayo de MLR; (e) aumenta la secreción de IL-2 en un ensayo de MLR; (f) se une a PD-1 humana y a PD-1 de mono cynomolgus; (g) inhibe la unión de PD-L1 y/o PD-L2 a PD-1; (h) estimula respuestas de memoria específicas de antígeno; (i) estimula las respuestas de Ac; y (j) inhibe el crecimiento de las células tumorales in vivo. Los Ac anti-PD-1 útiles para la presente invención incluyen mAb que se unen específicamente a PD-1 humana y presentan al menos una, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro o al menos cinco de las características anteriores.

Los anticuerpos anti-PD-1 ilustrativos también incluyen, pero sin limitación, anticuerpos de ratón, humanizados, humanos, quiméricos y modificadas por ingeniería genética. Los anticuerpos anti-PD-1 de la invención comprenden las secuencias de CDR de nivolumab descritas en el presente documento. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-PD-1 comprende una región variable de cadena pesada de nivolumab descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-PD-1 comprende una región variable de cadena ligera de nivolumab descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-PD-1 comprende una región variable de cadena pesada de nivolumab descrita en el presente documento y una región variable de cadena ligera de nivolumab descrita en el presente documento. Los anticuerpos anti-PD-1 de la invención comprenden CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada de nivolumab descritas en el presente documento, que comprenden las SEQ ID NO: 105, 107 y 109, y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de nivolumab descritas en el presente documento, que comprenden las SEQ ID NO: 112, 114 y 116.

El anticuerpo anti-PD-1 comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada que comprenden las SEQ ID NO: 105, 107 y 109 respectivamente y CDR1, CDR2 y Cd R3 de cadena ligera que comprenden las SEQ ID NO: 112, 114 y 116, respectivamente. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende una región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 100. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende una región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 102. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende una región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 100 y una región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 102. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende una región constante de cadena pesada que comprende la SEC ID NO: 101 y/o una región constante de cadena ligera que comprende la SEC ID NO: 103.

Anticuerpos ilustrativos adicionales

Con sujeción a los requisitos de las reivindicaciones, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % idéntica a la SEQ ID NO: 100, en donde el anticuerpo se une a PD-1. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % idéntica a la SEQ ID NO: 102, en donde el anticuerpo se une a PD-1. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % idéntica a la SEC ID NO: 100; y una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 %, o al menos un 99 % idéntica a la SEQ ID NO: 102; en donde el anticuerpo se une a PD-1.

En algunas realizaciones de la divulgación, un anticuerpo anti-PD-1 comprende al menos una de las CDR analizadas en el presente documento. Es decir, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-PD-1 comprende al menos una CDR seleccionada de una CDR1 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR2 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR3 de cadena pesada analizada en el presente documento, una CDR1 de cadena ligera analizada en el presente documento, una c DR2 de cadena ligera analizada en el presente documento y una CDR3 de cadena ligera analizada en el presente documento. Asimismo, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-PD-1 comprende al menos una CDR mutada basada en una CDR analizada en el presente documento, en donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos en relación con la CDR analizada en el presente documento. En algunas realizaciones, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservativas. Un experto en la materia puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas para una secuencia de CDR particular, en donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservativas adecuadas alteren significativamente las propiedades de unión del anticuerpo que comprende la CDR mutada.

En una realización, el Ac anti-PD-1 es nivolumab. Nivolumab (también conocido como "Opdivo®"; anteriormente denominado 5C4, BMS-936558, MDX-1106 u ONO-4538) es un Ac IgG4 (S228P) inhibidor del punto de control inmunitario PD-1 completamente humano que evita selectivamente la interacción con ligandos de PD-1 (PD-L1 y PD-L2), bloqueando así la regulación negativa de funciones antitumorales de las células T (patente de Estados Unidos n.° 8.008.449; Wang et al., 2014 Cancer Immunol Res. 2(9): 846-56).

En otra realización de la divulgación, el Ac anti-PD-1 es pembrolizumab. Pembrolizumab (también conocido como "Keytruda®", lambrolizumab y MK-3475) es un anticuerpo monoclonal IgG4 humanizado dirigido contra el receptor de la superficie celular humano PD-1 (muerte programada-1 o muerte celular programada-1). El pembrolizumab se describe, por ejemplo, en la patente de Estados Unidos n.° 8.900.587; véase también http://www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=695789 (último acceso: 14 de diciembre de 2014). El pembrolizumab ha sido aprobado por la FDA para el tratamiento del melanoma recidivante o refractario.

En otras realizaciones de la divulgación, el Ac anti-PD-1 es MEDI0608 (anteriormente AMP-514), que es un anticuerpo monoclonal contra el receptor PD-1. Se describe MEDI0608, por ejemplo, en la patente de Estados Unidos n.° 8.609.089 B2 o en http://www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=756047 (último acceso el 14 de diciembre de 2014).

Los Ac anti-PD-1 de la divulgación utilizables en los métodos descritos también incluyen Ac aislados que se unen específicamente a PD-1 humana y compiten de forma cruzada por la unión a PD-1 humana con nivolumab (véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos N.° 8.008.449; documento WO 2013/173223). La capacidad de los Ac para competir de forma cruzada por la unión a un antígeno indica que estos Ac se unen a la misma región del epítopo del antígeno e impiden estéricamente la unión de otros Ac de competencia cruzada a esa región particular del epítopo. Se espera que estos Ac de competencia cruzada tengan propiedades funcionales muy similares a las de nivolumab gracias a que se unen a la misma región del epítopo de PD-1. Los Ac de competencia cruzada se pueden identificar fácilmente en función de su capacidad de competir con nivolumab en ensayos de unión a PD-1 estándar tales como el análisis Biacore, los ensayos ELISA o la citometría de flujo (véase, por ejemplo, documento WO 2013/173223).

En determinadas realizaciones, los Ac que compiten de forma cruzada por unirse a la PD-1 humana con, o que se unen a la misma región del epítopo de la PD-1 humana que nivolumab, son mAb. Para la administración a sujetos humanos, estos Ac que compiten de forma cruzada pueden ser Ac quiméricos, o pueden ser Ac humanizados o humanos. Tales mAb quiméricos, humanizados o humanos se pueden preparar y aislar mediante métodos bien conocidos en la técnica.

Los Ac anti-PD-1 utilizables en los métodos de la divulgación también incluyen porciones de unión a antígeno de los Ac anteriores. Se ha demostrado ampliamente que la función de unión a antígeno de un Ac puede realizarse por fragmentos de un Ac de longitud completa. Los ejemplos de los fragmentos de unión incluidos en la expresión "porción de unión a antígeno" de un Ac incluyen (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios V^l, V^h, C^l y C^{h i}; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios V^hy C^{h i}; y (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios V^ly V^hde un único brazo de un Ac.

Una proteína de fusión ilustrativa no limitante de la divulgación que es un inhibidor de PD-1/PD-L1 es AMP-224 (Amplimmune, GlaxoSmithKline).

Un péptido ilustrativo no limitante de la divulgación que es un inhibidor de PD-1/PD-L1 es AUR-012.

Conjugados de anticuerpo ilustrativos

En algunas realizaciones, se conjuga un anticuerpo con un marcador y/o un agente citotóxico. Tal como se usa en el presente documento, un marcador es un resto que facilita la detección del anticuerpo y/o facilita la detección de una molécula a la que se une el anticuerpo. Los marcadores ilustrativos no limitantes incluyen, pero sin limitación, radioisótopos, grupos fluorescentes, grupos enzimáticos, grupos quimioluminiscentes, biotina, etiquetas de epítopos, etiquetas de unión de metal, etc. Un experto en la materia puede seleccionar un marcador adecuado de acuerdo con la aplicación prevista.

Tal como se usa en el presente documento, un agente citotóxico es un resto que reduce la capacidad de proliferación de una o más células. Una célula tiene capacidad de proliferación reducida cuando la célula se vuelve menos capaz de proliferar, por ejemplo, debido a que la célula experimenta apoptosis o muere, la célula no avanza a lo largo del ciclo celular y/o no se divide, la célula se diferencia, etc. Los agentes citotóxicos ilustrativos no limitantes incluyen, pero sin limitación, radioisótopos, toxinas y agentes quimioterapéuticos. Un experto en la materia puede seleccionar un agente citotóxico adecuado de acuerdo con la aplicación prevista.

En algunas realizaciones, un marcador y/o un agente citotóxico se conjuga con un anticuerpo usando métodos químicos in vitro. Los métodos químicos de conjugación ilustrativos no limitantes son conocidos en la técnica e incluyen servicios, métodos y/o reactivos comercialmente disponibles de, por ejemplo, Thermo Scientific Life Science Research Produces (anteriormente Pierce; Rockford, IL), Prozyme (Hayward, c A), SACRI Antibody Services (Calgary, Canadá), AbD Serotec (Raleigh, NC), etc. En algunas realizaciones, cuando un marcador y/o agente citotóxico es un polipéptido, el marcador y/o el agente citotóxico pueden expresarse desde el mismo vector de expresión con al menos una cadena de anticuerpo para producir un polipéptido que comprende el marcador y/o el agente citotóxico fusionados a una cadena de anticuerpo. Un experto en la materia puede seleccionar un método adecuado para conjugar un marcador y/o un agente citotóxico con un anticuerpo de acuerdo con la aplicación prevista.

Secuencias líder ilustrativas

Para que algunas proteínas secretadas se expresen y segreguen en grandes cantidades, puede ser deseable una secuencia líder de una proteína heteróloga. En algunas realizaciones, se selecciona una secuencia líder de las SEQ ID NO: 3 y 4, que son secuencias líder de cadena ligera y de cadena pesada, respectivamente. En algunas realizaciones, el empleo de secuencias líder heterólogas puede ser ventajoso porque un polipéptido maduro resultante puede permanecer sin alterar a medida que la secuencia líder se elimina en el Re durante el proceso de secreción. La adición de una secuencia líder heteróloga puede ser necesaria para expresar y segregar algunas proteínas.

Se describen ciertas secuencias de secuencia líder ilustrativas, por ejemplo, en la base de datos de secuencias líder en línea mantenida por el Departamento de Bioquímica, Universidad Nacional de Singapur. Véase Choo et al., BMC Bioinformatics, 6: 249 (2005); y la publicación PCT n.° WO 2006/081430.

Moléculas de ácidos nucleicos que codifican anticuerpos

Se proporcionan moléculas de ácidos nucleicos que comprenden polinucleótidos que codifican una o más cadenas de un anticuerpo. En algunas realizaciones, una molécula de ácido nucleico comprende un polinucleótido que codifica una cadena pesada o una cadena ligera de un anticuerpo. En algunas realizaciones, una molécula de ácido nucleico comprende tanto un polinucleótido que codifica una cadena pesada como un polinucleótido que codifica una cadena ligera, de un anticuerpo. En algunas realizaciones, una primera molécula de ácido nucleico comprende un primer polinucleótido que codifica una cadena pesada y una segunda molécula de ácido nucleico comprende un segundo polinucleótido que codifica una cadena ligera.

En algunas de estas realizaciones, la cadena pesada y la cadena ligera se expresan a partir de una molécula de ácido nucleico, o a partir de dos moléculas de ácido nucleico separadas, como dos polipéptidos separados. En algunas realizaciones, tal como cuando un anticuerpo es un scFv, un solo polinucleótido codifica un único polipéptido que comprende tanto una cadena pesada como una cadena ligera unidas entre sí.

En algunas realizaciones, un polinucleótido que codifica una cadena pesada o una cadena ligera de un anticuerpo comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia líder que, cuando se traduce, está ubicada en el extremo N de la cadena pesada o de la cadena ligera. Como se ha analizado anteriormente, la secuencia líder puede ser la secuencia líder nativa de la cadena pesada o ligera, o puede ser otra secuencia líder heteróloga.

Las moléculas de ácidos nucleicos pueden construirse utilizando técnicas de ADN recombinante convencionales en la técnica. En algunas realizaciones, una molécula de ácido nucleico es un vector de expresión que es adecuado para la expresión en una célula hospedadora seleccionada.

Vectores de expresión y producción de anticuerpos

Se proporcionan vectores que comprenden polinucleótidos que codifican cadenas pesadas y/o cadenas ligeras de anticuerpos. También se proporcionan vectores que comprenden polinucleótidos que codifican cadenas pesadas y/o cadenas ligeras de anticuerpos. Dichos vectores incluyen, pero sin limitación, vectores de ADN, vectores de fagos, vectores víricos, vectores retrovíricos, etc. En algunas realizaciones, un vector comprende una primera secuencia polinucleotídica que codifica una cadena pesada y una segunda secuencia polinucleotídica que codifica una cadena ligera. En algunas realizaciones, la cadena pesada y la cadena ligera se expresan a partir del vector como dos polipéptidos separados. En algunas realizaciones, la cadena pesada y la cadena ligera se expresan como parte de un único polipéptido, tal como, por ejemplo, cuando el anticuerpo es un scFv.

En algunas realizaciones, un primer vector comprende un polinucleótido que codifica una cadena pesada y un segundo vector comprende un polinucleótido que codifica una cadena ligera. En algunas realizaciones, el primer vector y el segundo vector se introducen en células hospedadoras mediante transfección en cantidades similares (tales como cantidades molares similares o cantidades de masa similares). En algunas realizaciones, se introduce por transfección una proporción molar o en masa de entre 5:1 y 1:5 del primer vector y el segundo vector en células hospedadoras. En algunas realizaciones, se utiliza una proporción en masa de entre 1:1 y 1:5 para el vector que codifica la cadena pesada y el vector que codifica la cadena ligera. En algunas realizaciones, se utiliza una proporción en masa de 1:2 para el vector que codifica la cadena pesada y el vector que codifica la cadena ligera.

En algunas realizaciones, se selecciona un vector que está optimizado para la expresión de polipéptidos en células CHO o derivadas de CHO o en células NSO. Se describen tales vectores ilustrativos, por ejemplo, en Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20: 880-889 (2004).

En algunas realizaciones, se elige un vector para la expresión in vivo de cadenas pesadas de anticuerpo y/o cadenas ligeras de anticuerpo en animales, incluyendo seres humanos. En algunas de estas realizaciones, la expresión del polipéptido está bajo el control de un promotor que funciona de una manera específica de tejido. Por ejemplo, se describen los promotores específicos de hígado, por ejemplo, en la publicación PCT n.° WO 2006/076288.

Células hospedadoras

En diversas realizaciones, las cadenas pesadas de anticuerpo y/o las cadenas ligeras de anticuerpo pueden expresarse en células procariotas, tales como células bacterianas; o en células eucariotas, tales como células de hongos (tales como levaduras), células vegetales, células de insecto o células de mamífero. Tal expresión puede llevarse a cabo, por ejemplo, de acuerdo con los procedimientos conocidos en la técnica. Las células eucariotas ilustrativos que se pueden usar para expresar polipéptidos incluyen, pero sin limitación, células COS, incluyendo células COS 7; células 293, incluyendo células 293-6E; células CHO, incluyendo células COS-S y DG44; células PER.C6® (Crucell); y células NSO. En algunas realizaciones, las cadenas pesadas y/o cadenas ligeras de anticuerpo se pueden expresar en levadura. Véase, por ejemplo, la publicación de Estados Unidos n.° US 2006/0270045 A1. En algunas realizaciones, se selecciona una célula hospedadora eucariota particular en función de su capacidad para realizar modificaciones postraduccionales deseadas en las cadenas pesadas y/o cadenas ligeras de anticuerpo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, las células CHO producen polipéptidos que tienen un mayor nivel de sialilación que el mismo polipéptido producido en células 293.

La introducción de uno o más ácidos nucleicos en una célula hospedadora deseada se puede realizar por cualquier método, incluyendo, pero sin limitación, transfección con fosfato de calcio, transfección mediada por DEAE-dextrano, transfección mediada por lípidos catiónicos, electroporación, transducción, infección, etc. Se describen métodos ilustrativos no limitantes, por ejemplo, en Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3a ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001). Los ácidos nucleicos pueden transfectarse de forma transitoria o estable en las células hospedadoras deseadas, de acuerdo con cualquier método adecuado.

En algunas realizaciones, pueden producirse uno o más polipéptidos in vivo en un animal que ha sido modificado por ingeniería genética o transfectado con una o más moléculas de ácido nucleico que codifican los polipéptidos, de acuerdo con cualquier método adecuado.

Purificación de anticuerpos

Los anticuerpos pueden purificarse mediante cualquier método adecuado. Dichos métodos incluyen, pero sin limitación, el uso de matrices de afinidad o cromatografía de interacción hidrófoba. Los ligandos de afinidad adecuados incluyen el antígeno y ligandos que se unen a regiones constantes de anticuerpo. Por ejemplo, se puede usar una proteína A, proteína G, proteína A/G, o una columna de afinidad de anticuerpos para unir la región constante y para purificar un anticuerpo. La cromatografía de interacción hidrófoba, por ejemplo, una columna de butilo o fenilo, también puede ser adecuada para purificar algunos polipéptidos. Muchos métodos de purificación de polipéptidos son conocidos en la técnica.

Producción de anticuerpos sin células

En algunas realizaciones, se produce un anticuerpo en un sistema libre de células. Se describen ejemplos de sistemas libres de células no limitantes, por ejemplo, en Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003).

Composiciones Terapéuticas y Métodos

Métodos de tratamiento del cáncer

Se desvelan métodos para tratar el cáncer, que comprenden administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-CSF1R y una cantidad eficaz de un inhibidor de PD-1/PD-L1. Los anticuerpos de la invención se utilizan en tales métodos. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSFIR y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran de manera simultánea. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSFIR y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran secuencialmente. En algunas realizaciones, se administran al menos una, al menos dos, al menos tres dosis, al menos cinco dosis o al menos diez dosis de un anticuerpo anti-CSFIR antes de la administración de un inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, se administran al menos una, al menos dos, al menos tres dosis, al menos cinco dosis o al menos diez dosis de un inhibidor de PD-1/ PD-L1 antes de la administración de un anticuerpo anti-CSFIR. En algunas realizaciones, la última dosis de inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra al menos una, dos, tres, cinco o diez días, o una, dos, tres, cinco, doce o veinticuatro semanas antes de la primera dosis de inhibidor de CSFR1. En alguna otra realización, la última dosis de inhibidor de CSFR1 se administra al menos uno, dos, tres, cinco o diez días, o una, dos, tres, cinco, doce o veinticuatro semanas antes de la primera dosis de inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, un sujeto ha recibido, o está recibiendo, una terapia con inhibidor de PD-1/PD-L1 y se añade un anticuerpo anti-CSFIR al régimen terapéutico.

En algunas realizaciones, se proporciona un método para seleccionar un paciente para la terapia de combinación con un anticuerpo anti-CSFIR y un inhibidor de PD-1/PD-L1, que comprende determinar los niveles de TAM y/o células T CD8+ en el paciente. En algunas realizaciones, si los niveles de TAM de un paciente son altos, se selecciona al paciente para la terapia de combinación. En algunas realizaciones, si los niveles de TAM y células T CD8+ de un paciente son altos, se selecciona al paciente para la terapia de combinación. El nivel de tAm o células T CD8+ se considera "alto" si es al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 40 %, al menos un 50 %, al menos un 75 % o al menos un 100 % más alto que el nivel en un individuo que no tiene cáncer. En algunas realizaciones, el nivel de TAM o células T CD8+ se considera "alto" si está por encima del nivel medio que se encuentra en los individuos con cáncer. En algunas realizaciones, si los niveles de TAM de un paciente son altos y los niveles de células T CD8+ son bajos, el paciente se selecciona para la terapia de combinación con un anticuerpo anti-CSF1R y un inhibidor de PD-1/PD-L1. El nivel de células T CD8+ se considera "bajo" si es igual o inferior al nivel medio que se encuentra en los individuos con cáncer. En alguna realización, el nivel de linfocitos T CD8+ se considera "bajo" si es al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 40 %, al menos un 50 %, al menos un 75 % o al menos un 100 % más bajo que el nivel en un individuo que no tiene cáncer. En algunas realizaciones, se determina la expresión de CSF1R en los TAM del paciente. En algunas realizaciones, si los TAM del paciente expresan CSF1R, se selecciona al paciente para la terapia de combinación. En algunas realizaciones, si los TAM del paciente expresan niveles elevados de CSF1R, se selecciona al paciente para la terapia de combinación. En algunas realizaciones, se considera que los TAM de un paciente expresan niveles "elevados" de CSF1R si el nivel de CSF1R es igual o superior al nivel medio de CSF1R que se encuentra expresado en TAM en individuos con cáncer. En algunas realizaciones, si la expresión de CSF1R del paciente muestra una alta correlación con el nivel de células T CD8+, células T o expresión de PD-1/PD-L1, se selecciona al paciente para la terapia de combinación. La correlación de las expresiones se considera "alta" si es igual o superior al nivel medio encontrado en individuos con cáncer.

Los niveles de TAM, la expresión de CSF1R, los linfocitos T CD8+, las células T reguladoras y/o la expresión de PD-1 se pueden medir mediante métodos conocidos en la técnica. Los métodos no ilustrativos incluyen inmunohistoquímica (IHC), clasificación celular activada por fluorescencia (FACS), matrices de proteínas y ensayos de expresión génica, tales como la secuenciación de ARN, matrices de genes y PCR cuantitativa. En algunas realizaciones, uno o más marcadores seleccionados entre CSF1R, CD68, CD163, c D8, FoxP3, PD-1 y PD-L1 pueden detectarse por IHC, FACS o ensayo de expresión génica en secciones tumorales, o células disociadas de secciones tumorales.

En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona de cáncer de células escamosas, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de la hipófisis, cáncer esofágico, astrocitoma, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de pulmón no microcítico, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma escamoso del pulmón, cáncer de peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gastrointestinal, cáncer de páncreas, glioblastoma, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer colorrectal, carcinoma de endometrio o uterino, carcinoma de las glándulas salivales, cáncer de riñón, cáncer renal, cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, cáncer de cerebro, cáncer de endometrio, cáncer de testículo, colangiocarcinoma, carcinoma de vesícula biliar, cáncer gástrico, melanoma y diversos tipos de cáncer de cabeza y cuello. En algunas realizaciones, el cáncer de pulmón es cáncer de pulmón no microcítico o carcinoma de células escamosas de pulmón. En algunas realizaciones, la leucemia es leucemia mieloide aguda o leucemia linfocítica crónica. En algunas realizaciones, el cáncer de mama es un carcinoma de mama invasivo. En algunas realizaciones, el cáncer de ovario es un cistoadenocarcinoma seroso de ovario. En algunas realizaciones, el cáncer de riñón es un carcinoma renal de células claras de riñón. En algunas realizaciones, el cáncer de colon es un adenocarcinoma de colon. En algunas realizaciones, el cáncer de vejiga es un carcinoma urotelial de vejiga. En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de cuello uterino (tal como cáncer de cuello uterino de células escamosas), carcinoma epidermoide de cabeza y cuello, adenocarcinoma rectal, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de endometrio, adenocarcinoma de próstata, cáncer de colon, cáncer de ovario (tal como cáncer de ovario epitelial seroso) y melanoma.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R bloquea la unión de CSF1 y/o IL-34 a CSF1R y/o inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por CSF1 y/o IL-34. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R bloquea la unión de CSF1 y/o IL-34 a CSf 1r y/o inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por CSF1 y/o IL-34. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R comprende las CDR de, o las regiones variables de, un anticuerpo seleccionado de huAb1 a huAb16, descritos en el presente documento. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CSF1R comprende las CDR de, o las regiones variables de, huAb1.

En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se selecciona de una proteína de fusión (tal como AMP-224) y un anticuerpo. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se selecciona de un anticuerpo anti-PD-1 y un anticuerpo anti-PD-L1. Los anticuerpos anti-PD-1 ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que comprenden las CDR de, o las regiones variables de, un anticuerpo seleccionado de nivolumab y pembrolizumab. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 se selecciona de nivolumab y pembrolizumab. Los anticuerpos anti-PD-L1 ilustrativos no limitantes incluyen anticuerpos que comprenden las CDR de, o las regiones variables de, un anticuerpo seleccionado de BMS-936559, MPDL3280A, MEDI4736 y MSB0010718C. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-L1 se selecciona de BMS-936559, MPDL3280A, MEDI4736 y MSB0010718C.

En algunas realizaciones de los métodos que se describen en el presente documento, el sujeto es un respondedor inadecuado al inhibidor de PD-1/PD-L1. Un sujeto que es un respondedor inadecuado al inhibidor de PD-1/PD-L1, puede haber respondido previamente a un inhibidor de PD-1/PD-L1, pero puede haberse vuelto menos sensible al inhibidor de PD-1/PD-L1, o es posible que el sujeto no haya respondido nunca al inhibidor de PD-1/PD-L1. La respuesta inadecuada a un inhibidor de PD-1/PD-L1 significa que los aspectos de la afección que se esperaría que mejoraran después de una dosis estándar del inhibidor de PD-1/PD-L1 no mejoran, y/o la mejoría solo se produce si se administra una dosis mayor a la estándar. En algunas realizaciones, un respondedor inadecuado del inhibidor de PD-1/PD-L1 ha experimentado, o está experimentando, una respuesta inadecuada al inhibidor de PD-1/PD-L1 después de recibir una dosis estándar durante al menos dos semanas, al menos de tres semanas, al menos de cuatro semanas, al menos seis semanas o al menos doce semanas. Una dosis "estándar" se determina por un profesional médico y puede depender de la edad del sujeto, el peso, la historia médica, la gravedad de la enfermedad, la frecuencia de dosificación, etc. En algunas realizaciones, un respondedor inadecuado del inhibidor de PD-1/PD-L1 ha experimentado, o está experimentando, una respuesta inadecuada a un anticuerpo anti-PD-1 y/o un anticuerpo anti-PD-L1. En algunas realizaciones, un respondedor inadecuado del inhibidor de PD-1/PD-L1 ha experimentado, o está experimentando, una respuesta inadecuada a AMP-224. En algunas realizaciones, un respondedor inadecuado del inhibidor de PD-1/PD-L1 ha experimentado, o está experimentando, una respuesta inadecuada a un inhibidor de PD-1/PD-L1 seleccionado de nivolumab y pembrolizumab.

Vías de administración y vehículos

En diversas realizaciones, los anticuerpos pueden administrarse in vivo por diversas vías, entre las que se incluyen, pero sin limitación, la vía oral, intraarterial, parenteral, intranasal, intravenosa, intramuscular, intracardíaca, intraventricular, intratraqueal, bucal, rectal, intraperitoneal, intradérmica, tópica, transdérmica e intratecal, o de otro modo por implantación o inhalación. Las composiciones objeto se pueden formular en preparaciones en forma sólida, semisólida, líquida o gaseosa; entre las que se incluyen, pero sin limitación, comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, pomadas, soluciones, supositorios, enemas, inyecciones, inhaladores y aerosoles. Una molécula de ácido nucleico que codifica un anticuerpo puede aplicarse como un recubrimiento sobre micropartículas de oro y administrarse por vía intradérmica mediante un dispositivo de bombardeo de partículas, o "pistola de genes", como se describe en la bibliografía (véase, por ejemplo, Tang et al., Nature 356:152-154 (1992)). La formulación y la vía de administración apropiadas se pueden seleccionar de acuerdo con la aplicación prevista.

En diversas realizaciones, se proporcionan composiciones que comprenden anticuerpos en formulaciones con una amplia diversidad de vehículos farmacéuticamente aceptables (véase, por ejemplo, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20a ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7.a ed., Lippencott Williams y Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3a ed., Pharmaceutical Press (2000)). Se dispone de diversos vehículos farmacéuticamente aceptables que incluyen portadores, adyuvantes y diluyentes. Además, también se dispone de diversas sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables, tales como agentes de ajuste del pH y tamponantes, agentes de ajuste de la tonicidad, estabilizantes, agentes humectantes y similares. Los vehículos ilustrativos no limitantes incluyen solución salina, solución salina tamponada, dextrosa, agua, glicerol, etanol y combinaciones de los mismos.

En diversas realizaciones, las composiciones que comprenden anticuerpos pueden formularse para inyección, incluyendo la administración subcutánea, disolviendo, suspendiendo o emulsionando dichos anticuerpos en un disolvente acuoso o no acuoso, tal como aceites vegetales u otros, glicéridos de ácidos alifáticos sintéticos, ésteres de ácidos alifáticos superiores o propilenglicol; y, si se desea, con aditivos convencionales, tales como solubilizantes, agentes isotónicos, agentes de suspensión, agentes emulsionantes, estabilizantes y conservantes. En diversas realizaciones, las composiciones pueden formularse para inhalación, por ejemplo, utilizando propulsores presurizados aceptables como diclorodifluorometano, propano, nitrógeno y similares. Las composiciones también se pueden formular, en diversas realizaciones, en microcápsulas de liberación sostenida, tales como con polímeros biodegradables o no biodegradables. Una formulación biodegradable ilustrativa no limitante incluye polímero de poli(ácido áctico-ácido glicólico). Una formulación no biodegradable ilustrativa no limitante incluye un éster de ácido graso de poliglicerina. Se describen ciertos métodos para preparar tales formulaciones, por ejemplo, en el documento EP 1125584 A1.

También se proporcionan paquetes y kits farmacéuticos que comprenden uno o más recipientes, conteniendo cada uno una o más dosis de un anticuerpo o una combinación de anticuerpos. En algunas realizaciones, se proporciona una dosis unitaria en donde la dosis unitaria contiene una cantidad predeterminada de una composición que comprende un anticuerpo o combinación de anticuerpos, con o sin uno o más agentes adicionales. En algunas realizaciones, dicha dosis unitaria se suministra en una jeringa precargada de un solo uso para inyección, por ejemplo, o como un kit. En diversas realizaciones, la composición contenida en la dosis unitaria puede comprender solución salina, sacarosa o similares; un tampón, tal como fosfato o similares; y/o formularse dentro de un intervalo de pH estable y eficaz. Como alternativa, en algunas realizaciones, la composición puede proporcionarse como un polvo liofilizado que puede reconstituirse mediante la adición de un líquido apropiado, por ejemplo, agua estéril. En algunas realizaciones, la composición comprende una o más sustancias que inhiben la agregación de proteínas, entre las que se incluyen, pero sin limitación, sacarosa y arginina. En algunas realizaciones, una composición de la invención comprende heparina y/o un proteoglicano.

Las composiciones farmacéuticas se administran en una cantidad eficaz para el tratamiento o la profilaxis de la indicación específica. La cantidad terapéuticamente eficaz suele depender del peso del sujeto que se está tratando, su condición física o de salud, la extensión de la afección a tratar o la edad del sujeto que se está tratando. En general, los anticuerpos pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de aproximadamente 10 pg/kg de peso corporal a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por dosis. En algunas realizaciones, los anticuerpos pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de aproximadamente 50 pg/kg de peso corporal a aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal por dosis. En algunas realizaciones, los anticuerpos pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de aproximadamente 100 pg/kg de peso corporal a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por dosis. En algunas realizaciones, los anticuerpos pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de aproximadamente 100 pg/kg de peso corporal a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal por dosis. En algunas realizaciones, los anticuerpos pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de aproximadamente 0,5 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal por dosis. En algunas realizaciones, un inhibidor de PD-1/PD-L1, tal como un anticuerpo o proteína de fusión, se administra a una dosis de 1 a 4 mg/kg, y un anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de 0,5 a 10 mg/kg. En algunas realizaciones, un inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 1,2 o 4 mg/kg y un anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 10 mg/kg, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 10 mg/kg, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 5 mg/kg, o de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal, tal como de aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg.

En determinadas realizaciones, la dosis de un inhibidor de PD-1/PD-L1 o de un anticuerpo anti-CSFIR es una dosis fija en una composición farmacéutica. En otras realizaciones, el método de la presente invención puede usarse con una dosis plana (una dosis administrada a un paciente independientemente del peso corporal del paciente). Por ejemplo, una dosis plana de nivolumab puede ser de aproximadamente 240 mg. Por ejemplo, una dosis plana de pembrolizumab puede ser de aproximadamente 200 mg.

En algunas realizaciones, un Ac anti-CSF1R, cuando se combina con el inhibidor de PD-1/PD-L1, se puede dosificar dentro del intervalo de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 10 mg/kg, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 10 mg/kg, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 5 mg/kg, o de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal, tal como de aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg, administrados aproximadamente cada dos o tres semanas. En otras realizaciones, un anticuerpo anti-CSF1R se administra con un programa de dosificación diferente al del inhibidor de PD-1/PD-L1. En algunas realizaciones, se administra un anticuerpo anti-CSF1R aproximadamente cada semana, aproximadamente cada dos semanas, aproximadamente cada tres semanas, aproximadamente cada 4 semanas, aproximadamente cada cinco semanas, aproximadamente cada seis semanas, aproximadamente cada siete semanas, aproximadamente cada ocho semanas, aproximadamente cada nueve semanas, aproximadamente cada diez semanas, aproximadamente cada once semanas, aproximadamente cada doce semanas o aproximadamente cada quince semanas. Una dosis de un anticuerpo anti-CSF1R o inhibidor de PD-1/PD-L1 que es significativamente más baja que la dosis terapéutica aprobada puede considerarse subterapéutica. Por ejemplo, una dosis de, por ejemplo, aproximadamente 0,3 mg/kg o menos aproximadamente cada 3 o 4 semanas, puede considerarse una dosis subterapéutica en relación con una dosis terapéutica de aproximadamente 3,0 mg/kg cada 3 semanas. En determinadas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra en una dosis de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4 o aproximadamente 5 mg/kg en combinación con un anticuerpo anti-CSF1R administrado en una dosis de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg, una vez aproximadamente cada 2 semanas, una vez aproximadamente cada 3 semanas o una vez aproximadamente cada 4 semanas.

En determinadas realizaciones, la combinación de un inhibidor de PD-1/PD-L1 y un Ac anti-CSF1R se administra por vía intravenosa al sujeto en una fase de inducción aproximadamente cada 2 o 3 semanas durante 1, 2, 3 o 4 administraciones. En determinadas realizaciones, la combinación de nivolumab y Ac anti-CSF1R se administra por vía intravenosa en la fase de inducción aproximadamente cada 3 semanas durante aproximadamente 4 administraciones. La fase de inducción va seguida de una fase de mantenimiento durante la cual solo se administra al sujeto el inhibidor de PD-1/PD-L1 a una dosis de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5 o aproximadamente 10 mg/kg cada dos o tres semanas mientras el tratamiento demuestre ser eficaz o hasta que se produzca una toxicidad incontrolable o progresión de la enfermedad. En determinadas realizaciones, el nivolumab se administra durante la fase de mantenimiento a una dosis de aproximadamente 3 mg/kg de peso corporal aproximadamente cada 2 semanas.

En determinadas realizaciones, el inhibidor de PD-1/PD-L1 y el anticuerpo anti-CSF1R se formulan como una sola composición, en donde la dosis del inhibidor de PD-1/PD-L1 y la dosis del anticuerpo anti-CSF1R se combinan en una proporción de, por ejemplo, 1:50, 1:40, 1:30, 1:20, 1:10. 1:5, 1:3, 1:1, 3:1, 5:1, 10:1, 20:1, 30:1, 40:1 o 50:1. En otras realizaciones, la dosis del anticuerpo anti-CSF1R es una dosis fija. En determinadas realizaciones, la dosis del anticuerpo anti-CSF1R o del inhibidor de PD-1/PD-L1 es una dosis plana, que se administra a un paciente independientemente del peso corporal. En una realización específica, la dosis plana del inhibidor de PD-1/PD-L1 es de aproximadamente 80 mg.

Para la combinación con otros agentes anticancerosos, estos agentes se administran en sus dosis aprobadas. El tratamiento se continúa mientras se observe un efecto clínico beneficioso o hasta que se produzca una toxicidad inaceptable o progresión de la enfermedad. No obstante, en determinadas realizaciones, las dosis de estos agentes anticancerosos administradas son significativamente más bajas que la dosis aprobada, es decir, se administra una dosis subterapéutica del agente en combinación con el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1. El anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se pueden administrar a la dosis que se ha demostrado que produce la mayor eficacia como monoterapia en ensayos clínicos, por ejemplo, para nivolumab, aproximadamente 3 mg/kg de nivolumab administrados una vez aproximadamente cada tres semanas (Topalian et al., 2012a; Topalian et al., 2012), o a una dosis significativamente menor, es decir, a una dosis subterapéutica.

La dosificación y la frecuencia varían dependiendo de la semivida del Ac en el sujeto. En general, los Ac humanos muestran la semivida más larga, seguidos de los Ac humanizados, los Ac quiméricos y los Ac no humanos. La dosificación y la frecuencia de administración pueden variar dependiendo de si el tratamiento es profiláctico o terapéutico. En aplicaciones profilácticas, normalmente se administra una dosis relativamente baja a intervalos relativamente poco frecuentes durante un período de tiempo prolongado. Algunos pacientes continúan recibiendo tratamiento durante el resto de sus vidas. En aplicaciones terapéuticas, algunas veces se requiere una dosis relativamente alta a intervalos relativamente cortos hasta que la progresión de la enfermedad se reduzca o termine, o hasta que el paciente muestre una mejoría parcial o completa de los síntomas de la enfermedad. Posteriormente, al paciente se le puede administrar un régimen profiláctico.

Los niveles de dosificación reales de los principios activos en las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden variarse de tal forma que se obtenga una cantidad del principio activo que sea eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada para un paciente, una composición y un modo de administración particular, sin que sean indebidamente tóxicos para el paciente. El nivel de dosificación seleccionado dependerá de diversos factores farmacocinéticos entre los que se incluyen la actividad de las composiciones particulares de la presente invención empleadas, la vía de administración, el momento de administración, la tasa de excreción del compuesto particular que se está empleando, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales utilizados en combinación con las composiciones particulares empleadas, la edad, el sexo, el peso, la afección, el estado de salud general e historial médico previo del paciente que se está tratando, y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas. Una composición de la presente invención se puede administrar a través de una o más vías de administración utilizando uno o más de diversos métodos bien conocidos en la técnica. Como apreciarán los expertos en la materia, la vía y/o el modo de administración variarán dependiendo de los resultados deseados. Las composiciones de anticuerpos pueden administrarse en función de la necesidad de los sujetos. La determinación de la frecuencia de administración puede realizarse por personas expertas en la materia, tal como, por ejemplo, el médico a cargo del caso, basándose en las consideraciones de la afección a tratar, la edad del sujeto a tratar, la gravedad de la afección a tratar, el estado general de salud del sujeto a tratar y similares. En algunas realizaciones, se administra una dosis eficaz de un anticuerpo a un sujeto una o más veces. En diversas realizaciones, se administra una dosis eficaz de un anticuerpo al sujeto una vez al mes, menos de una vez al mes, tal como, por ejemplo, cada dos meses o cada tres meses. En otras realizaciones, se administra una dosis eficaz de un anticuerpo al sujeto más de una vez al mes, tal como, por ejemplo, cada tres semanas, cada dos semanas o todas las semanas. En algunas realizaciones, se administra una dosis eficaz de un anticuerpo una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas. En algunas realizaciones, se administra una dosis eficaz de un anticuerpo de dos o tres veces por semana. Se administra una dosis eficaz de un anticuerpo al sujeto al menos una vez. En algunas realizaciones, la dosis eficaz de un anticuerpo se puede administrar varias veces, incluso durante períodos de al menos un mes, al menos seis meses o al menos un año.

Terapia de combinación

Los anticuerpos pueden administrarse solos o con otros modos de tratamiento. Pueden proporcionarse antes, sustancialmente al mismo tiempo con, o después de otros modos de tratamiento, por ejemplo, cirugía, quimioterapia, radioterapia o administración de un producto biológico, tal como otro anticuerpo terapéutico. En algunas realizaciones, el cáncer ha reaparecido o progresado después de una terapia seleccionada de la cirugía, quimioterapia y radioterapia, o una combinación de las mismas.

Para el tratamiento del cáncer, como se describe en el presente documento, los anticuerpos pueden administrarse junto con uno o más agentes anticancerosos adicionales, tales como un agente quimioterapéutico, un agente inhibidor del crecimiento, un agente antiangiogénesis y/o una composición antineoplásica. Los ejemplos no limitantes del agente quimioterapéutico, el agente inhibidor del crecimiento, el agente antiangiogénesis, el agente anticanceroso y la composición antineoplásica que se pueden usar en combinación con los anticuerpos de la presente invención se proporcionan en el presente documento en la sección "Definiciones".

Ejemplos

Los ejemplos que se analizan a continuación están destinados a ser puramente ilustrativos de la invención y no deben considerarse limitantes de la invención de manera alguna. Los ejemplos no pretenden representar que los experimentos mostrados a continuación son todos o los únicos experimentos realizados. Se han realizado esfuerzos para garantizar la precisión con respecto a los números utilizados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.) pero deben tenerse en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales. A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es el peso molecular promedio ponderal, la temperatura está en grados centígrados y la presión es atmosférica o cercana a la atmosférica.

Ejemplo 1: Anticuerpos anti-CSFIR humanizados

Previamente se han desarrollado varios anticuerpos anti-CSF1R humanizados. Véase, por ejemplo, la publicación PCT n.°WO 2011/140249.

Las secuencias para cada una de las regiones variables de cadena pesada humanizada y las regiones variables de cadena ligera humanizada, alineadas con las secuencias de las regiones variables del anticuerpo quiméri y las secuencias de las regiones marco variables aceptoras humanas se muestran en las Figuras 1 (cadenas pesadas) y 2 (cadenas ligeras). Los cambios en las secuencias de las regiones variables humanizadas en relación con las secuencias de la región marco variable aceptora humana están recuadrados. Cada una de las CDR para cada una de las regiones variables se muestra en una región recuadrada y se etiqueta como "CDR" encima de las secuencias recuadradas.

La tabla 8, mostrada a continuación, muestra las secuencias completas para las cadenas pesadas humanizadas y cadenas ligeras humanizadas de los anticuerpos huAb1 a huAb16. En la tabla 3 se muestra el nombre y las SEQ ID NO de la cadena pesada humanizada y la cadena ligera humanizada de cada uno de esos anticuerpos.

T l : n n ^ li r h m niz h A 1 h A 1

Los 16 anticuerpos humanizados se sometieron a pruebas para determinar su unión al ECD (dominio extracelular, por sus siglas en inglés) de CSF1R de humano, mono cynomolgus y ratón, tal como se ha descrito anteriormente. Véase, por ejemplo, la publicación PCT n.°WO 2011/140249. Se observó que los anticuerpos se unían al ECD de CSF1R de humano y mono cynomolgus, pero no al ECD de CSF1R de ratón. También se observó que los anticuerpos humanizados bloquean la unión de CSF1 e IL-34 a CSF1R tanto humano como de mono cynomolgus e inhiben la fosforilación inducida por CSF1 e inducida por IL-34 de CSF1R humano expresado en células CHO. Véase, por ejemplo, la publicación PCT n.° WO 2011/140249.

Los valores de ka, kd y Kd para la unión al ECD de CSF1R se determinaron previamente y se muestran en la tabla 4. Véase, por ejemplo, la publicación PCT n.°WO 2011/140249.

Ta no

Ejemplo 2: Correlación de la expresión de CSF1R y la firma de células T en tumores

Para determinar la correlación entre las firmas de células T cancerosas y la expresión de CSF1R, se utilizaron los datos de expresión de ARNm del Atlas del Genoma del Cáncer. El Atlas del Genoma del Cáncer es una base de datos de acceso público resultante de un esfuerzo conjunto del Instituto Nacional del Cáncer (NCI) y el Instituto Nacional de Investigación del Genoma Humano (NHGRI). Véase cancergenome.nih.gov. Los niveles de ARNm se determinan utilizando la plataforma Illumina RNASeq. Se calculan las correlaciones de FOXP3, CTLA-4, CD274, PDCD1, CD8A y GZMB para todos los genes en los datos de RNASeq y para cada tipo de cáncer. A continuación, se clasifican las correlaciones. Hay aproximadamente 20486 genes en los datos de RNASeq, de forma que, para cada gen, se asigna un rango de correlación con respecto a todos los demás genes. Como ejemplo, para FOXP3 en el cáncer de colon, los rangos de correlación van de 1 a 20486. CSF1R tiene un rango de correlación de 38, lo que sugiere que está altamente correlacionado con la expresión de FOXP3. La alta correlación de FOXP3 y CSF1R es coherente con la hipótesis de que un subconjunto de cánceres de colon tiene macrófagos asociados a tumores (TAM) que expresan CSF1R y células Treg que expresan FOXP3. Puede utilizarse la extensión de este análisis a muchos tipos de cáncer y los marcadores genéticos para producir un mapa de calor que muestre los tejidos cancerosos que tienen expresión de CSF1R correlacionada con células Treg, células T CD8+ y expresión de PD-L1. Véase la Figura 3.

Ejemplo 3: Efecto del anticuerpo anti-CSFIR y un anticuerpo anti-PD-1 en tumores colorrectales de ratón in vivo

Se compraron ratones hembra C57BL/6 de siete semanas de edad de Harlan Laboratories (Livermore, CA) y se aclimataron durante seis días antes del inicio del estudio. La línea celular de carcinoma colorrectal murino MC38 se implantó por vía subcutánea sobre el costado derecho de los ratones a 0,5 x 106 células/100 pl/ratón. Antes de la inoculación, las células se cultivaron durante tres pases en medio RPMI 1640 complementado con suero bovino fetal (FBS) inactivado por calor al 10 %, L glutamina 2 mM. Las células se cultivaron a 37 °C en una atmósfera humidificada con un 5 % de CO². Al alcanzar una confluencia del 80-85 %, se recogieron las células y se resuspendieron en RPMI 1640 sin suero frío a 5 x 106 células por mililitro.

Los ratones se supervisaron dos veces por semana después de la implantación celular para determinar el crecimiento del tumor. Para las mediciones de los tumores, se midió la longitud y la anchura de cada tumor utilizando calibres y el volumen se calculó de acuerdo con la fórmula: Volumen tumoral (mm3) = (anchura (mm) x longitud (mm))2/2. El día 7, se midieron todos los tumores y los ratones se asignaron aleatoriamente a grupos de tratamiento. El volumen tumoral medio para todos los animales incluidos en los grupos de tratamiento fue de 58 mm3. Los grupos de dosificación fueron los siguientes: 1) IgG1 de ratón (Bio X Cell, Líbano occidental, NH, Estados Unidos; Clon MOPC-21) más IgG2a de rata (Bio X Cell, Clon 2A3), 2) anti-CSF1R (Bio X Cell, Clon AFS98) más IgG2a de rata, 3) anti-PD-1 (Bio X Cell, Clon RMP1-14) más IgG1 de ratón o 4) anti-CSF1R más anti-PD-1. Se siguieron midiendo los tumores al menos dos veces por semana hasta que el volumen tumoral excedió el 10% del peso del animal, o aproximadamente 2000 mm3.

El cambio en el tamaño tumoral se muestra representando gráficamente el volumen medio del tumor con respecto al día en el que se inocularon los animales con células MC38. El tratamiento con anti-CSF1R o anti-PD-1 redujo significativamente el crecimiento tumoral en comparación con el control de IgG (P <0,05). La combinación de anti-CSF1R y anti-PD-1 dio como resultado un crecimiento tumoral significativamente reducido en comparación con anti-CSF1R o anti-PD-1 solo (P <0,05). Los valores de p se calcularon utilizando análisis de prueba t bilateral para muestras independientes de los volúmenes tumorales calculados el día 11 después del inicio del tratamiento. (Véanse las figuras 4A y 4B).

Ejemplo 4: Efecto del anticuerpo anti-CSF1R y un anticuerpo anti-PD-1 en tumores pancreáticos de ratón in vivo

Se compraron ratones hembra FVB de ocho semanas de edad de Jackson Laboratories y se aclimataron durante dos semanas antes del inicio del estudio. Se implantó quirúrgicamente una línea celular de adenocarcinoma de páncreas murino derivada de ratones transgénicos KrasG12D/Ink4a'/' en el páncreas de los ratones a 0,2 x 106 células/50 pl/ratón. Antes de la inoculación, las células se cultivaron durante no más de tres pases en medio DMEM complementado con suero bovino fetal (FBS) inactivado por calor al 10 %. Las células se cultivaron a 37 °C en una atmósfera humidificada con un 5 % de CO². Al alcanzar una confluencia del 80-85 %, se recogieron las células y se resuspendieron en PBS frío con Matrigel a 4 x 106 células por mililitro.

Los ratones se supervisaron dos veces por semana después de la implantación celular para determinar el crecimiento del tumor. Los ratones se palparon cuidadosamente al menos dos veces por semana para evaluar el tamaño relativo de los tumores pancreáticos. El día 12, se evaluaron todos los tumores y los ratones se asignaron aleatoriamente a grupos de tratamiento. Los grupos de dosificación fueron los siguientes: 1) IgG1 de ratón (Bio X Cell; Clon MOPC-21) más control de vehículo, 2) anticuerpo anti-CSF1R (anticuerpo murino con afinidad similar por CSF1R murino a la de huAB1 por CSF1R humano) más vehículo, 3) anti-CSF1R más gemcitabina (GEM), 4) anticuerpo anti-PD-1 (Bio X Cell; Clon RMP1-14) más g Em o 5) anti-CSF1R más anti-PD-1 y GEM. La administración de anticuerpos anti-CSF1R comenzó el día 12, comenzando el tratamiento con anti-PD-1 y GEM el día 17. Los tumores continuaron evaluándose al menos dos veces por semana durante 20 días desde el inicio del tratamiento con anticuerpos anti-CSF1R.

El cambio en el tamaño del tumor se muestra representando gráficamente el peso medio del tumor para todos los grupos al final del estudio. El tratamiento con anticuerpo anti-CSF1R o anticuerpo anti-PD-1 redujo el crecimiento tumoral en comparación con el control de IgG. La combinación de anti-CSF1R y anti-PD-1 tuvo como resultado un crecimiento tumoral significativamente reducido en comparación con anti-CSF1R o anti-PD-1 solo (P <0,05). Los valores de P se calcularon utilizando análisis de prueba t bilateral de muestras independientes de los volúmenes tumorales calculados el día 32. (Véase la Figura 5.)

Ejemplo 5: El tratamiento con anticuerpos anti-CSFIR aumenta la frecuencia de células T citotóxicas y la expresión de PD-L1 en múltiples modelos de tumores de ratón

Se adquirieron ratones hembra C57BL/6 y BALB/c de siete semanas de edad de Charles River Laboratories (Hollister, CA) y se aclimataron durante al menos tres días antes del inicio de los estudios. Se implantaron por vía subcutánea las líneas celulares de carcinoma colorrectal murino MC38 y CT26 en el costado derecho de ratones inmunocompetentes. MC38 se inoculó a 0,5 x 106 células/100 pl/ratón, y CT26 se implantó a 1,0 x 106/200 pl/ratón. Antes de la inoculación, las células se cultivaron durante tres pases en medio RPMI 1640 complementado con suero bovino fetal (FBS) inactivado por calor al 10 %, L glutamina 2 mM. Las células se cultivaron a 37 °C en una atmósfera humidificada con un 5 % de CO². Al alcanzar una confluencia del 80-85 %, se recogieron las células y se resuspendieron a 5 x 106 células por mililitro en RPMI 1640 (MC38) o RPMI/Matrigel (CT26) frío sin suero.

Los ratones se supervisaron dos veces por semana después de la implantación celular para determinar el crecimiento del tumor. Para las mediciones de los tumores, se midió la longitud y la anchura de cada tumor utilizando calibres y el volumen se calculó de acuerdo con la fórmula: Volumen tumoral (mm3) = (anchura (mm) x longitud (mm))2/2. Comenzando el día 5 (CT26) o el día 7 (MC38), se midieron todos los tumores y los ratones se asignaron aleatoriamente a grupos de tratamiento. A los ratones se les administró IgG1 de ratón (clon MOPC-21) o anticuerpo anti-CSF1R (cmFPA008). Los estudios concluyeron 21-24 días después de la inoculación y los tumores se extirparon y congelaron rápidamente en nitrógeno líquido.

Para evaluar la expresión génica, se utilizaron ensayos QuantiGene Plex. Se lisó tejido tumoral de 7-10 ratones por grupo de tratamiento y se evaluó la expresión relativa de múltiples genes, entre los que se incluyen PTPRC (CD45), CD8a, CD4, GZMA, CSF1R y CD274 (PD-L1). Los valores de expresión génica se normalizaron frente a PPIB, GUs B y HPRT, que se utilizaron como controles. La expresión de Cd8a se normalizó adicionalmente frente a CD45 para evaluar la abundancia relativa de CD8 o frente a CD4 para examinar la proporción entre células CD8 y CD4. La Fig. 8 muestra los valores de expresión normalizados en relación con los ratones tratados con IgG para cada uno de los tumores MC38 y CT26.

Se determinó que las comparaciones de la expresión génica relativa eran estadísticamente significativas si P <0,05. Los valores de P se calcularon utilizando análisis de prueba t bilateral de muestras independientes de la expresión génica calculada de tumores tratados con anticuerpo anti-CSF1R (cmFPA008) en comparación con el control de IgG. El significado estadístico se muestra en la Fig. 8 de la siguiente manera: * p <0,05, ** p <0,01.

Ejemplo 6: Terapia de combinación con un anticuerpo anti-CSF1R y un inhibidor de PD-1/PD-L1

Se administra anticuerpo anti-CSF1R (un anticuerpo que comprende regiones variables de cadena pesada y cadena ligera de SEQ ID NO: 53 y 60, respectivamente) en combinación con un anticuerpo anti-PD-1 en dosis crecientes en sujetos con diversos tipos de tumores, entre los que se incluyen NSCLC, melanoma, SCCHN, cáncer de vejiga y cáncer de páncreas. El anticuerpo anti-CSF1R se administra a dosis que varían de 1 mg/kg a 10 mg/kg. El anticuerpo anti-CSF1R y el anticuerpo anti-PD-1 se dosifican simultáneamente cada 2 semanas.

El anticuerpo anti-CSF1R y el anticuerpo anti-PD-1 se administran a tres subconjuntos de pacientes con melanoma: sin tratamiento previo (nunca han recibido ninguno de los anticuerpos), con resistencia adquirida (han progresado después de una respuesta inicial de anticuerpos anti-PD-1) y con resistencia de novo (no han respondido a la terapia de inhibición de PD-1/PD-L1).

Se obtienen biopsias con aguja gruesa antes y después del tratamiento en un subconjunto de sujetos para evaluar posibles cambios en las células inmunitarias, el estroma y las células tumorales después del tratamiento. Además de la tinción con hematoxilina y eosina para evaluar la celularidad general del tumor, se utilizan ensayos específicos para supervisar el número y los subtipos de macrófagos. Los pacientes también se supervisan con respecto a la respuesta general, la respuesta inmunitaria y la supervivencia global.

Para algunos, la mayoría o todos los pacientes, el número de células T CD8+ aumenta después del tratamiento con la combinación y/o el número de células Treg disminuye después del tratamiento con la combinación. Además, para algunos, la mayoría o todos los pacientes, el número de macrófagos M2 potenciadores de tumores disminuye y el número de macrófagos M1 supresores de tumores aumenta después del tratamiento con la combinación. Por último, para algunos, la mayoría o todos los pacientes, la necrosis tumoral aumenta después del tratamiento con la combinación.

Ejemplo 7: Resumen de un ensayo clínico de monoterapia y terapia de combinación con un anticuerpo anti-CSF1R y un anticuerpo anti-PD-1

El anticuerpo anti-CSF1R HuAB1 se administra como monoterapia y en combinación con el anticuerpo anti-PD-1 nivolumab en pacientes con cánceres avanzados seleccionados y que no han recibido previamente un inhibidor de la ruta de CSF1R en un estudio multicéntrico, sin enmascaramiento, de aumento de la dosis y de expansión de la dosis. Nivolumab se ha aprobado previamente para su uso en melanoma, NSCLC metastásico y, en combinación con ipilmumab, un anticuerpo anti-CTLA-4, para el tratamiento del melanoma metastásico. Para los grupos combinados del estudio, HuABI y nivolumab se administrarán el día 1 de cada ciclo de tratamiento de 14 días; nivolumab se administrará como una infusión IV durante 30 minutos primero, con un descanso de 30 minutos entre 2 infusiones, seguida de una infusión IV de HuAB1 de 30 minutos.

La primera fase del estudio (fase 1a) comprende dos cohortes de referencia con monoterapia de HuAB1 (1aM1 y 1aM2) y tres cohortes de aumento de la dosis de HuAB1 en combinación con nivolumab (1aC1, 1aC2 y 1aC3). La segunda fase del estudio (fase 1b) comprende ocho cohortes (1b1 a 1b8) en seis tipos de cáncer. Participarán en el estudio aproximadamente 270 pacientes en total, 30 en la primera fase y 240 en la segunda fase con 30 en cada una de las 8 cohortes de la segunda fase. Los pacientes individuales no se inscribirán en más de uno de los grupos del estudio 1aM, 1aC o 1b. La Figura 6 muestra un esquema del diseño del estudio.

En la Fase 1a, los pacientes en monoterapia de las cohortes 1aM1 y 1aM2 reciben 2 mg/kg o 4 mg/kg de HuAB1 una vez cada 14 días (cada 2 semanas). Las cohortes de terapia de combinación 1aC1, 1aC2 y 1aC3 reciben 1, 2 o 4 mg/kg de HuAB1 y 3 mg/kg de nivolumab una vez cada 14 días (cada 2 semanas). Los pacientes de las cohortes 1aM1 y 1aC1 se tratan durante un total de dos ciclos de 14 días en un período de 28 días, seguido de las otras cohortes. También puede incluirse una cohorte de 3 mg/kg de HuAB1 y 3 mg/kg de nivolumab. En la Fase 1a, los pacientes pueden incluirse en las cohortes de monoterapia o terapia combinada si tienen un tumor sólido confirmado histológicamente o citológicamente que es localmente recurrente o metastásico y ha progresado después del tratamiento estándar o no es apropiado para el tratamiento estándar. Se excluyen los pacientes con exposición previa a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1.

En la Fase 1b, se tratan ocho cohortes de pacientes, como se expone a continuación.

Cohorte 1b1: NSCLC (sin tratamiento previo con terapia anti-PD-1, segunda o tercera línea).

Esta cohorte puede incluir pacientes con NSCLC escamoso o no escamoso documentado histológicamente o citológicamente que presentan enfermedad en estadio IIIB o IV (según la versión 7 del manual de la Asociación Internacional para el Estudio de la Estadificación del Cáncer de Pulmón en oncología Torácica) y con la enfermedad recurrente o progresiva después de una terapia multimodal (radioterapia, resección quirúrgica o quimiorradiación definitiva) para enfermedad localmente avanzada o metastásica. Puede incluir pacientes con progresión o recurrencia durante/después de un régimen de quimioterapia basado en doblete de platino para la enfermedad avanzada o metastásica. Se excluyen los pacientes con exposición previa a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1.

Cohorte 1b2: NSCLC (pacientes refractarios a fármacos dirigidos anti-PD-1).

Esta cohorte puede incluir pacientes con NSCLC documentado histológicamente o citológicamente que presenten enfermedad en estadio IIIB localmente avanzada o en estadio IV, y pacientes con evidencia radiológica de progresión de la enfermedad durante el tratamiento con un fármaco dirigido a la ruta de PD-1 que no produjo una respuesta clínica (es decir, ni RC ni PR) y con enfermedad progresiva como mejor respuesta. En el contexto de esta cohorte, los pacientes refractarios son pacientes que no han tenido respuesta clínica después de recibir al menos 2 dosis de cualquier fármaco dirigido a PD-1. Se excluyen los pacientes que son intolerantes a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1, donde la intolerancia se define como cualquier evento adverso de grado 4 relacionado con el tratamiento, o cualquier evento adverso de grado 2 o 3 relacionado con el tratamiento que sea inaceptable para el paciente y persista a pesar de las contramedidas estándar.

Cohorte 1b3: melanoma (sin terapia previa anti-PD-1)

Esta cohorte puede incluir pacientes con melanoma en estadio III o IV documentado histológicamente o citológicamente según el sistema de estadificación del Comité Conjunto Estadounidense sobre el Cáncer (AJCC), que son refractarios a, intolerantes o se han negado a la terapia estándar para el tratamiento del melanoma metastásico. Los pacientes incluidos pueden demostrar evidencia objetiva de progresión de la enfermedad a pesar del tratamiento con un inhibidor de BRAF o pueden tener BRAF de tipo silvestre. Se excluyen los pacientes con exposición previa a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1, que tienen BRAF mutante o cuyo estado mutacional de BRAF se desconoce o no se puede determinar.

Cohorte 1b4: melanoma (refractario o en recidiva con el fármaco dirigido anti-PD-1)

Los pacientes de esta cohorte pueden tener melanoma no resecable en estadio III o IV documentado histológicamente o citológicamente según el sistema de estadificación del AJCC. Los pacientes incluidos pueden mostrar pruebas radiológicas de progresión de la enfermedad durante el tratamiento con un inhibidor de punto de control o un fármaco dirigido a PD-1 que no produjo un efecto clínico beneficioso, o pueden mostrar, mientras reciben tratamiento con un fármaco dirigido a PD-1, enfermedad progresiva como la mejor respuesta o progresión de la enfermedad después de un efecto clínico beneficioso inicial. En el contexto de esta cohorte, los pacientes refractarios son pacientes que no han tenido respuesta clínica después de recibir al menos 2 dosis de cualquier fármaco dirigido a PD-1. Los pacientes incluidos pueden demostrar evidencia objetiva de progresión de la enfermedad a pesar del tratamiento con un inhibidor de BRAF o pueden tener BRAF de tipo silvestre. Cualquier terapia anticancerosa anterior, incluida la dacarbazina, un inhibidor de BRAF (si el paciente es positivo para la mutación BRAF V600) y/o el ipilimumab y la radioterapia paliativa se finalizan al menos 3 semanas antes de la administración del fármaco de estudio y el tratamiento con un fármaco dirigido a PD-1 se suspende al menos 6 semanas antes de la primera dosis del fármaco de estudio. Se excluyen los pacientes que son intolerantes a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1 como se define anteriormente, al igual que los pacientes que tienen BRAF mutante o cuyo estado mutacional de BRAF se desconoce o no puede determinarse.

Cohorte 1b5: carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (SCCHN) (segunda línea)

En esta cohorte pueden incluirse pacientes con SCCHN recurrente o metastásico documentado histológicamente o citológicamente (cavidad oral, faringe, laringe), en estadio III o IV y no susceptibles de terapia local con intención curativa (cirugía o radioterapia con o sin quimioterapia). Los pacientes también pueden tener progresión o recurrencia en los 6 meses posteriores a la última dosis de terapia con platino en escenarios adyuvante (es decir, con radiación después de la cirugía), primario (es decir, con radiación), recurrente o metastásico. La progresión clínica después de la terapia con platino es un evento admisible para la entrada y se define como la progresión de una lesión de al menos 10 mm de tamaño que se puede medir con un calibre (por ejemplo, lesión cutánea superficial según RECIST v1.1) o una lesión que se ha visualizado y registrado fotográficamente con mediciones y se muestra que ha progresado. Se excluyen los pacientes con exposición previa a un fármaco anti-PD-1.

Cohorte 1b6: cáncer de páncreas (segunda línea)

Los pacientes incluidos pueden tener un adenocarcinoma de páncreas localizado o metastásico documentado histológicamente o citológicamente, que no ha respondido a (o los pacientes no están indicados para) la terapia estándar. Los pacientes también pueden haber recibido una cirugía previa, radioterapia para el tratamiento de un adenocarcinoma de páncreas localmente avanzado o metastásico siempre que se haya documentado la progresión de la enfermedad. Todas las toxicidades deben resolverse y la última fracción del tratamiento con radiación se finalizó al menos 4 semanas antes de la primera administración del fármaco de estudio. Se excluyen los pacientes con exposición previa a un fármaco anti-PD-1.

Cohorte 1b7: cáncer colorrectal (tercera línea)

Los pacientes incluidos pueden tener un adenocarcinoma de colon o recto documentado histológicamente o citológicamente, y pueden tener cáncer colorrectal metastásico con progresión de la enfermedad documentada después de la última administración de terapias estándar o intolerancia a las terapias estándar (y las terapias aprobadas tienen que incluir una fluoropirimidina, oxaliplatino, irinotecán, bevacizumab y, si KRAS es de tipo silvestre, cetuximab o panitumumab). Se excluyen los pacientes con exposición previa a un fármaco anti-PD-1.

Cohorte 1b8: glioma maligno (primera recurrencia)

Los pacientes de esta cohorte pueden tener un glioma (glioblastoma o gliosarcoma) maligno avanzado de grado IV según la organización mundial de la salud (OMS) documentado histológicamente o citológicamente y pueden haber tenido tratamiento previo con cirugía, radioterapia y temozolomida. Los pacientes pueden tener una primera recurrencia documentada mediante una biopsia de diagnóstico o imágenes de resonancia magnética (MRI) con contraste realizadas en los 21 días posteriores a la administración del primer fármaco de estudio según los criterios de la evaluación de respuesta en neurooncología (RANO). Se excluye a los pacientes si han recibido tratamiento previo con bevacizumab u otro agente dirigido al receptor de VEGF o a VEGF, con más de una recurrencia de glioblastoma o gliosarcoma o con exposición previa a cualquier fármaco dirigido a PD-1.

A los pacientes en monoterapia se les administra HuAB1 como una infusión intravenosa de 30 minutos. Los pacientes con terapia combinada reciben primero la infusión de nivolumab a una dosis de 3 mg/kg como una infusión intravenosa de 30 minutos, el día 1 de cada ciclo de tratamiento de 14 días. Reciben HuAB1 después de la infusión de nivolumab el día 1 de cada ciclo de tratamiento de 14 días, con un descanso de 30 minutos entre las dos infusiones.

Se toma una biopsia en el sitio del tumor antes del día 1 del primer ciclo del estudio y nuevamente el día 29. Los pacientes también son evaluados con respecto a la supervivencia general después del estudio, supervivencia sin progresión y duración de la respuesta para los pacientes con respuestas confirmadas, basándose en los criterios de RECIST v1.1. Se realizan CT/MRI (tórax, abdomen, pelvis y cerebro) antes del día 1, durante el tratamiento y después del estudio, y se toman medidas de la carga tumoral. El parámetro de respuesta principal es la tasa de respuesta objetiva, que es el número de pacientes con respuesta completa o parcial dividido por el número total de pacientes tratados con enfermedad medible al inicio del estudio. La respuesta tumoral se evalúa utilizando RECIST v1.1, Apéndice F.

Ejemplo 8: Protocolo de ensayo clínico completo de fase 1a y 1b - ensayo clínico de monoterapia y terapia de combinación con un anticuerpo anti-CSF1R (HuAB1 también conocido como FPA008) y un anticuerpo anti-PD-1 (nivolumab)

1 INTRODUCCIÓN Y JUSTIFICACIÓN DEL ESTUDIO

Receptor del factor 1 estimulante de colonias y macrófagos asociados a tumores

Los macrófagos son células derivadas de mieloides que llevan a cabo diversas funciones en el cuerpo humano. Pueden colonizar tejidos (y tumores) a través de dos mecanismos distintos: siembra hematógena de monocitos circulantes o autorrenovación local en forma de macrófagos residentes en tejidos (Lavin, 2013). Ciertos estudios recientes han demostrado que los macrófagos ejercen su efecto fisiológico en el interior de, y desempeñan funciones exclusivas en, los tejidos en los que están activos (Lavin, 2014). La regulación de los macrófagos es compleja ya que estas células secretan de forma activa y responden a múltiples gradientes de citocinas y quimiocinas dentro de su entorno local.

Los macrófagos asociados a tumores (TAM) se encuentran entre los tipos de células inmunitarias más abundantes en el microentorno tumoral. Las evidencias sustanciales sugieren que los TAM están polarizados hacia un fenotipo antiinflamatorio (M2) que inhibe las respuestas inmunitarias antitumorales (Noy, 2014) a través del contacto célulacélula y de factores solubles tales como citocinas inmunosupresoras. De acuerdo con esto, los niveles elevados de TAM se asocian con un mal pronóstico en la mayoría de los cánceres (Komohara, 2014).

Después del tratamiento con agentes anti-CSF1R, los macrófagos que no se han agotado pueden repolarizarse desde un estado inmunosupresor M2 a un estado antitumoral M1 que ayudaría a las respuestas de las células T. Esta conversión, asociada con modalidades de tratamiento concurrentes, tales como el tratamiento anti-PD-1, podría tener un mayor efecto sobre la reducción del crecimiento tumoral (Ruffell, 2015).

Se ha demostrado que las tasas de respuesta en estudios de PD-L1 en curso se correlacionan con la concentración de PD-1/PD-L1 en el estroma tumoral (Tumeh, 2014). Cabe destacar que también hay una cantidad significativa de macrófagos en el estroma tumoral ya que el reclutamiento de monocitos en el estroma tumoral conduce a su desarrollo en macrófagos M2 supresores. Se ha demostrado que la asociación de monocitos y macrófagos con PD-L1 suprime la inmunidad de células T específicas de tumor y se correlaciona con una baja supervivencia en los pacientes. Predeciblemente, se demostró que el bloqueo de células positivas para PD-L1 asociadas a monocitos in vivo mejora la inmunidad de células T específicas de tumor. Los estudios in vitro también han demostrado que los monocitos activados que expresan PD-L1 demuestran una prevención considerable de la proliferación de células T específicas de tumor, producción de citocinas y potencial citotóxico (Kuang, 2009).

La señalización del receptor del factor 1 estimulante de colonias (CSF1R) juega un papel fundamental en la diferenciación, mantenimiento y función de los macrófagos y de un subconjunto de otras células de linaje mieloide entre las que se incluyen monocitos y osteoclastos (Hamilton, 2013). Los dos ligandos conocidos para CSF1R son CSF1 e IL34. Estos dos agonistas se unen a regiones superpuestas de CSF1R con afinidad similar (Masteller, 2014), aunque tienen poca homología de aminoácidos en común. Los ratones que carecen de CSF1R tienen deficiencias en macrófagos, lo que subraya el papel esencial de la ruta de CSF1R en la biología de este tipo de células (Dai, 2002). Es de esperar que los tratamientos farmacológicos que bloquean el CSF1R en entornos de cáncer reduzcan o reprogramen los TAM y reduzcan la inmunosupresión. De forma general, esto podría producir un microentorno tumoral más propicio para las terapias contra el cáncer de base inmunitaria.

HuAB1 es un anticuerpo monoclonal de inmunoglobulina G4 (IgG4) humanizado recombinante que se une a CSF1R humano. La interacción de HuAB1 y CSF1R antagoniza la unión de CSF1 e IL34 a CSF1R, impidiendo así la activación del receptor. HuAB1 inhibe la fosforilación de CSF1R inducida tanto por CSF1 como por iL34 en una línea celular modificada por ingeniería genética para sobreexpresar CSF1R (CHO-CSF1R), demostrando experimentalmente que HuAB1 bloquea la activación de rutas de señalización de CSF1R inducidas por ligando. HuAB1 también inhibe la proliferación y supervivencia de monocitos de sangre periférica inducida por CSF1 e IL34 in vitro, demostrando que HuAB1 inhibe no solo el inicio de las rutas de señalización de CSF1 e IL34, sino también las respuestas fisiológicas posteriores de los monocitos humanos primarios a estos ligandos.

Considerados en conjunto, estos y otros datos emergentes sugieren que el bloqueo de CSF1R con el tratamiento con HuAB1 podría aliviar el entorno tumoral inmunosupresor que generan los TAM y podría mejorar la eficacia de las terapias contra el cáncer de base inmunitaria. PD-1

Muerte celular programada-1 (PD-1; CD279) es un receptor de señalización de la superficie celular que emite señales inhibidoras que regulan el equilibrio entre la activación y la tolerancia de las células T al interactuar con sus ligandos, PD-L1 (CD274; B7-H1) y PD-L2 (B7-DC/CD273). Es una proteína transmembrana de tipo I de 55 kD que es miembro de la familia CD28 de receptores coestimuladores de células T, que también incluye el coestimulador inducible (ICOS), el antígeno 4 de linfocitos T citotóxicos (CTLA-4) y atenuador de linfocitos B y T (BTLA) (Freeman, 2000). PD-1 contiene un motivo inhibidor de tirosina del inmunorreceptor proximal de membrana intracelular (ITIM) y un motivo de interruptor basado en tirosina del inmunorreceptor distal de membrana (ITSM). El PD-1 se expresa principalmente en las células T activadas, células B y células mieloides (Nishimura, 2001a). Se ha demostrado que sus ligandos, PD-L1 y PD-L2, regulan negativamente la activación de las células T al unirse a PD-1 en sistemas tanto murinos como humanos (Cárter, 2002; Latchman, 2001). PD-1 emite una señal negativa mediante el reclutamiento de SHP-2 al resto de tirosina fosforilado en el ITSM en su región citoplásmica (Chemnitz, 2004; Sheppard, 2004).

La evidencia de un papel regulador negativo de PD-1 proviene de estudios en ratones deficientes en PD-1, que desarrollan diversos fenotipos autoinmunitarios, entre los que se incluyen miocardiopatía dilatada y un síndrome similar al lupus con artritis y nefritis (Nishimura, 1999; Nishimura, 2001b; Okazaki, 2003). La aparición de estos fenotipos autoinmunitarios depende de los antecedentes genéticos de la cepa de ratón; muchos de estos fenotipos aparecen en diferentes momentos y muestran una penetrancia variable. Además de los fenotipos de mutaciones nulas, se ha descubierto que la inhibición de PD-1 por bloqueo mediado por anticuerpos en varios modelos murinos desempeña un papel en el desarrollo de enfermedades autoinmunitarias tales como la encefalomielitis, enfermedad de injerto contra huésped y diabetes tipo I (Ansari, 2003; Blazar, 2003; Salama, 2003). Considerados en conjunto, estos resultados sugieren que el bloqueo de PD-1 tiene el potencial de activar respuestas anti-células T propias, pero estas respuestas son variables y dependen de diversos factores genéticos del hospedador. Por tanto, la deficiencia o inhibición de PD-1 no va acompañada de una pérdida universal de tolerancia a los autoantígenos.

El agente dirigido a PD-1, nivolumab, se ha probado clínicamente en varios tipos de tumores, incluido el NSCLC, melanoma y carcinoma de células renales (RCC) como agente único o en combinación con otros tratamientos. Algunos de los datos de eficacia del folleto del investigador (IB) de nivolumab se muestran en la tabla 1, proporcionada a continuación. El nivolumab como agente único tiene una eficacia duradera notable en una subpoblación de pacientes. El efecto mejorado de las combinaciones de nivolumab sugiere la posibilidad de oportunidades con beneficios adicionales para los pacientes como un régimen de combinación con otros agentes no probados.

El nivolumab está actualmente aprobado por la FDA para el melanoma no resecable o metastásico y la progresión de la enfermedad después de ipilimumab y, si el melanoma es positivo para la mutación BRAF V600, un inhibidor de BRAF. También está aprobado para el cáncer de pulmón no microcítico escamoso (NSCLC) metastásico con progresión durante o después de la quimioterapia basada en platino.

Tabla 1 - Resumen de los datos de eficacia clínica de nivolumab en melanoma NSCLC RCC

1.1 Justificación de la terapia de combinación de HuAB1 y nivolumab

El HuAB1 es un anticuerpo monoclonal humanizado dirigido contra CSF1R. Se ha demostrado que el establecimiento como objetivo de la ruta de CSF1R con anticuerpos o inhibidores de molécula pequeña es eficaz en modelos de tumores singénicos de ratón. En un modelo de adenocarcinoma de colon MC38 en ratones, un anticuerpo dirigido a CSF1R produjo una reducción significativa de TAM, que estuvo acompañada de un cambio positivo de la proporción entre c D8+ y CD4+ hacia células T CD8+ citotóxicas. En un estudio clínico reciente, se probó el RG7155 (un anticuerpo dirigido a CSF1R) en pacientes con tumores sólidos y se demostró que reducía sustancialmente los macrófagos CSF1R+CD163+ en los tumores (Ries, 2014). Esta reducción de los macrófagos también se asoció con una disminución de las células T reguladoras FOXP3+. Estos datos sugieren que otras células efectoras inmunitarias fueron influenciadas indirectamente por el bloqueo de CSF1R. En un modelo de glioblastoma multiforme (GBM) proneural de ratón, la inhibición por moléculas pequeñas de CSF1R aumentó significativamente la supervivencia e hizo retroceder los tumores establecidos (Pyonteck, 2013). En este modelo, los TAM no se agotaron, sino que, en su lugar, se convirtieron en un fenotipo más proinflamatorio en presencia de inhibición de CSF1R.

En un modelo de adenocarcinoma ductal pancreático ortotópico (PDAC), el bloqueo de la ruta de CSF1R con una molécula pequeña o un anticuerpo anti-CSF1 disminuyó selectivamente los t A m inmunosupresores, reduciendo posteriormente la inmunosupresión. Esta disminución en los TAM inmunosupresores permitió que los TAM proinflamatorios restantes ayudaran a la presentación de antígenos y reforzaran la respuesta de células T antitumorales (Zhu, 2014). Esto, a su vez, condujo a un aumento de la respuesta de interferón que regulaba positivamente los inhibidores de los puntos de control de las células T, incluyendo PD-L1, en células tumorales. Esta contrarregulación sirvió para limitar la respuesta de las células T antitumorales mediante la participación del inhibidor de células T PD-1. Cabe destacar que el tratamiento anti-PD-1 fue capaz de superar la inhibición mediada por PD-L1. El establecimiento como objetivo de PD-1 como agente único mostró una eficacia limitada para restringir el crecimiento del tumor PDAC, pero la combinación del bloqueo de PD-1 con la inhibición de CSF1R provocó una potente regresión del tumor incluso en tumores grandes establecidos.

En conjunto, estos datos sugieren que la reprogramación del compartimento de TAM en tumores mediante el bloqueo de CSF1R mediado por HuAB1 podría reducir los TAM inmunosupresores en el microentorno tumoral y mejorar la eficacia de inmunoterapias basadas en puntos de control tales como el nivolumab.

1.2 Justificación de la terapia de combinación de HuABI/nivolumab en tipos de tumores seleccionados

Los TAM pueden suprimir de forma potente las respuestas inmunitarias antitumorales. CSF1R es un receptor de la superficie celular que se expresa en TAM y regula su supervivencia y función. Se ha demostrado que los anticuerpos bloqueantes de CSF1R reducen los TAM en tumores tanto murinos como humanos (Ries, 2014). Los TAM están presentes en muchos cánceres humanos, lo que sugiere que podrían utilizarse anticuerpos bloqueantes de CSF1R, tales como HuAB1, para tratar múltiples tipos de tumores. Además, se ha demostrado que los TAM se correlacionan con un mal pronóstico en varios cánceres que incluyen el cáncer de pulmón, pancreático, de cabeza y cuello, y el melanoma, entre otros (Komohara, 2014). Además, el análisis del Atlas del Genoma del Cáncer muestra una alta correlación de CSF1R con la coexpresión de PD-1/PD-L1 y las firmas de células T en cánceres de cabeza y cuello, de pulmón y melanoma, así como en otros. En modelos preclínicos, también se ha demostrado que la inhibición de CSF1R altera la polarización de los macrófagos y bloquea la progresión del glioma (Pyonteck, 2013). El bloqueo de CSF1R también reduce los TAM y crea sinergia con el bloqueo de puntos de control de PD-1 y CTLA4 en modelos de cáncer de páncreas (Zhu, 2014). También se demostró que las células tumorales colorrectales expresan niveles relativamente más bajos de PD-L1 en comparación con el melanoma o los cánceres de pulmón y que los niveles de PD-L1 observados están presentes en las células mieloides infiltrantes (Llosa, 2015).

Actualmente, nivolumab se está probando en múltiples tipos de tumores, incluidos todos los tipos de tumores propuestos para la parte de la Fase 1b de este estudio. A medida que maduren los datos de nivolumab, ayudarán a informar la expansión de la Fase 1b de este estudio a los tipos de tumores seleccionados.

Además de los estudios en curso, nivolumab ha sido aprobado para su uso en melanoma y NSCLC escamoso. La aprobación en melanoma se basó en los resultados del estudio CheckMate 037. En el presente estudio, se compararon la eficacia y seguridad de nivolumab con la quimioterapia elegida por el investigador (ICC) como tratamiento de segunda o última línea en pacientes con melanoma avanzado. En el presente estudio, se asignaron aleatoriamente 272 pacientes a nivolumab y 133 a ICC. Se notificaron respuestas objetivas confirmadas en el 32 % de los primeros 120 pacientes del grupo de nivolumab frente al 11 % de los pacientes del grupo de ICC. Los eventos adversos de grado 3-4 atribuidos a nivolumab incluyeron aumento de lipasa, aumento de ALT, anemia y fatiga (1 % en cada caso); para el ICC, estos acontecimientos incluyeron neutropenia (14 %), trombocitopenia (6 %) y anemia (5 %). También hubo EAG (acontecimientos adversos graves) de grado 3-4 relacionados con el fármaco en el 5 % de los pacientes tratados con nivolumab y en el 9 % de los pacientes del grupo de ICC. No se produjeron muertes relacionadas con el tratamiento (Weber, 2015).

La aprobación de nivolumab en NSCLC se basó en los resultados de los estudios CheckMate 017 y CheckMate 063. CheckMate 017 reclutó pacientes con NSCLC escamoso metastásico que habían experimentado progresión de la enfermedad durante o después de un régimen de quimioterapia basado en doblete de platino previo. La OS (siglas en inglés de supervivencia general) con el tratamiento con nivolumab fue de 9,2 meses, frente a 6,0 meses con docetaxel (prospecto de Opdivo, 2015). CheckMate 063 evaluó la actividad de nivolumab en pacientes con NSCLC escamoso avanzado o refractario. El estudio reclutó y trató a 117 pacientes. De estos, el 14,5 % de los pacientes tuvo una respuesta objetiva según la evaluación de un comité de revisión de radiología independiente y el 26 % tenía enfermedad estable. El tiempo medio de respuesta fue de 3,3 meses y no se alcanzó la duración media de la respuesta. De las 17 respuestas, el 77 % estaba en curso en el momento del análisis. De los 117 pacientes, el 17 % notificó EA de grado 3-4 relacionados con el tratamiento, entre los que se incluyen: fatiga (4 %), neumonitis (3 %) y diarrea (3 %). Hubo dos muertes asociadas al tratamiento causadas por neumonía e ictus isquémico que se produjeron en pacientes con múltiples comorbilidades en el contexto de una enfermedad progresiva (Rizvi, 2015).

Los datos notificados anteriormente respaldan la investigación de HuAB1 en combinación con nivolumab en melanoma, NSCLC, cáncer de cabeza y cuello, pancreático, colorrectal y glioma.

1.3 Justificación de la dosis inicial para la monoterapia de HuABI y el aumento escalonado de la dosis combinada

El patrocinador ya ha iniciado un primer estudio clínico de fase 1 en seres humanos diseñado en 3 partes para evaluar la seguridad, PK y biomarcadores del agente único HuAB1 en voluntarios sanos y pacientes con artritis reumatoide (AR) (estudio FPA008-001). En las partes 1 y 2 de este estudio, HuAB1 se probó en voluntarios sanos a dosis de 0,2, 1, 3 y 10 mg/kg de peso corporal. En el grupo de voluntarios sanos, a 1 mg/kg, 7 sujetos recibieron una dosis única y 5 sujetos recibieron 2 dosis; a 3 mg/kg, 10 sujetos recibieron una dosis única y 2 sujetos recibieron 2 dosis; a 10 mg/kg, 6 sujetos recibieron una dosis única de HuAB1. A las cohortes de dosis múltiples se les administraron dosis con un intervalo de 14 días y se realizó un seguimiento de todos los sujetos para detectar toxicidades limitantes de la dosis (DLT) a lo largo de una ventana de 28 días.

El 23 de septiembre de 2014, 48 sujetos habían completado las partes 1 y 2 del estudio. No se notificaron DLT (siglas en inglés de toxicidad limitante de la dosis) en las partes 1 o 2. Todos los eventos adversos (EA) fueron de grado 1 o 2 y autolimitados, siendo las toxicidades más comunes relacionadas con el tratamiento con HuAB1 el prurito, edema del párpado junto con hinchazón facial, fatiga y dolor de cabeza. Se observaron elevaciones temporales de enzimas séricas tales como la creatinina quinasa (CK), lactato deshidrogenasa (LDH), alanina aminotransferasa (ALT) y aspartato aminotransferasa (AST).

En el grupo de la parte 3 en curso del estudio de fase 1, Los pacientes con AR que no respondieron a los fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad (DMARD, por sus siglas en inglés) están participando en un estudio abierto a diferentes niveles de dosis de HuAB1 de 1, 3 y 6 mg/kg de peso corporal. Se requiere que estos pacientes reciban una dosis semanal estable de metotrexato antes y durante el estudio y recibirán 2 dosis de HuAB1, con 14 días de diferencia. Además de otros análisis, se está haciendo un seguimiento a los pacientes de seguridad, farmacocinética (PK) y farmacodinámica (PD) después del régimen de 2 dosis.

En resumen, 36 voluntarios sanos y 6 pacientes con AR han recibido HuAB1 hasta la fecha, no se notificaron DLT en las partes 1 o 2, y no se han notificado toxicidades significativas relacionadas con el tratamiento en pacientes con AR en los niveles de dosis de 1 mg/kg o 3 mg/kg. El perfil de seguridad de nivolumab está bien establecido y respaldado por las recientes autorizaciones de comercialización de Estados Unidos para el tratamiento del melanoma y el NSCLC escamoso. El número de sujetos que recibieron las dosis, los niveles de dosis evaluados y el perfil actual de EA generales de HuAB1 y nivolumab respaldan el inicio simultáneo de las cohortes de monoterapia con 2 mg/kg de HuAB1 y terapia de combinación con 1 mg/kg de HuAB1 junto con 3 mg/kg de nivolumab en este estudio.

La parte de la fase 1a de este estudio consistirá en un aumento escalonado de la dosis de monoterapia en dos etapas de HuAB1 a 2 mg/kg seguido de 4 mg/kg de HuAB1. También habrá un aumento escalonado de la dosis en tres etapas de una dosis fija de 3 mg/kg de nivolumab en combinación con 1 mg/kg de HuAB 1, seguido de 2 mg/kg de HuAB 1, y después de 4 mg/kg de HuAB 1.

La cohorte de 4 mg/kg de HuAB1 en monoterapia se abrirá después de que desaparezca el período de DLT de 28 días en la cohorte de 2 mg/kg de HuAB1 en monoterapia. La cohorte de combinación de 2 mg/kg de HuAB1/nivolumab solo comenzará después de que desaparezca el período de DLT en la cohorte de combinación de 1 mg/kg de HuAB 1/nivolumab y la cohorte de 2 mg/kg de HuAB1 en monoterapia. La cohorte de combinación de 4 mg/kg de HuAB1/nivolumab se abrirá después de que desaparezca el período de DLT en las cohortes de combinación de 1 mg/kg y 2 mg/kg de HuAB1/nivolumab y en las cohortes de 2 mg/kg y 4 mg/kg de HuAB1 en monoterapia. El esquema de aumento escalonado de la dosis se muestra en la figura 7.

Todos los pacientes estarán en un programa de dosificación continuo cada 14 días y se les hará un seguimiento hasta la progresión de la enfermedad, toxicidad inaceptable o retirada del consentimiento.

1.4 Justificación de la administración de infusión de 30 minutos para cada fármaco del estudio

Los largos tiempos de infusión, especialmente cuando se administran múltiples agentes secuencialmente a un individuo, suponen una carga para los pacientes y los centros de tratamiento.

El HuAB1, un inhibidor de CSF1R, se ha administrado durante 30 minutos en estudios con voluntarios sanos y también en pacientes con AR.

Nivolumab se ha administrado de forma segura durante 60 minutos en dosis de hasta 10 mg/kg durante períodos de tratamiento ampliados. En el estudio CA209010, (un estudio de fase 2 aleatorizado, con enmascaramiento doble, de determinación de la dosis de nivolumab en sujetos con RCC de células claras avanzado/metastásico), se observó una asociación de dosis para las reacciones en el lugar de la infusión y las reacciones de hipersensibilidad (1,7 % a 0,3 mg/kg, 3,7 % a 2 mg/kg y 18,5 % a 10 mg/kg). Todos los eventos fueron de grado 1 o 2 y manejables. No se espera que una duración de la infusión de 30 minutos para 3 mg/kg de nivolumab (30 % de la dosis proporcionada a 10 mg/kg) presente problemas de seguridad más graves en comparación con la experiencia previa de 10 mg/kg de nivolumab en infusión durante 60 minutos.

De forma general, las reacciones a la infusión, incluyendo reacciones de hipersensibilidad de alto grado, han sido poco frecuentes en los estudios clínicos de nivolumab y HuAB1. Además, un descanso de 30 minutos después de la infusión de nivolumab en las cohortes de combinación garantizará el tiempo para un control de seguridad adecuado antes del inicio de la infusión de HuAB1. De forma general, no se prevé una variación en el perfil de seguridad con una infusión de 30 minutos de nivolumab o HuAB1 solos o en combinación.

1.5 Propósitos de la investigación

El propósito del grupo de fase 1a de este ensayo es evaluar la seguridad y tolerabilidad después de la administración de HuAB1 en monoterapia, así como en combinación con nivolumab en pacientes con cánceres avanzados, e identificar la dosis recomendada (DR) de HuAB1 para el grupo de combinación de fase 1b de este estudio.

El propósito del grupo de fase 1b de este ensayo es caracterizar aún más el perfil de seguridad de HuAB1 en combinación con nivolumab y evaluar el beneficio clínico a la DR de la terapia de combinación de HuAB 1/nivolumab en pacientes con cánceres avanzados seleccionados.

1.6 Objetivos

1.6.1 Objetivos de la fase 1a

1.6.1.1 Principal

Evaluar la seguridad y tolerabilidad de HuAB1 en monoterapia

Evaluar la seguridad y tolerabilidad de HuAB1 en combinación con nivolumab

Determinar la DR de HuAB1 en combinación con una dosis fija de nivolumab

1.6.1.2 Secundario

Caracterizar el perfil PK de HuAB1

Caracterizar el perfil PK de concentración pico y valle de nivolumab cuando se administra en combinación con HuAB1 Caracterizar el perfil PD de HuAB1 y nivolumab

Caracterizar la inmunogenicidad de HuAB1 y nivolumab

Evaluar la asociación de medidas de biomarcadores seleccionados y medidas de eficacia clínica mediante biopsias tumorales antes y durante el tratamiento

1.6.1.3 Exploratorio

Caracterizar aún más el perfil PD de HuAB1 y nivolumab

1.6.2 Objetivos de la fase 1b

1.6.2.1 Principal

Evaluar el beneficio clínico de HuAB1 en combinación con nivolumab en pacientes con cánceres avanzados seleccionados mediante el análisis de la tasa de respuesta objetiva (ORR, por sus siglas en inglés).

Evaluar la seguridad y tolerabilidad de HuAB1 en combinación con nivolumab en pacientes con cánceres avanzados seleccionados tratados a la DR

1.6.2.2 Secundario

Evaluar el beneficio clínico de HuAB1 en combinación con nivolumab en pacientes con cánceres avanzados seleccionados mediante el análisis de la tasa de supervivencia general (SG), duración de la respuesta (DOR, por sus siglas en inglés) y supervivencia sin progresión (PFS, por sus siglas en inglés)

Caracterizar el perfil PK de HuABI

Caracterizar el perfil PK de concentración pico y valle de nivolumab cuando se administra en combinación con HuABI

Caracterizar el perfil PD de HuAB1 y nivolumab

Caracterizar la inmunogenicidad de HuAB1 y nivolumab

1.6.2.3 Exploratorio

Caracterizar aún más el perfil PD de HuAB1 y nivolumab

1.7 Antecedentes del desarrollo del producto

1.7.1 Mecanismo de acción

1.7.1.1 HuABI

HuAB1 es un anticuerpo monoclonal IgG4 humanizado recombinante que se une a CSF1R humano. La unión de HuAB1 a CSF1R antagoniza sus ligandos naturales, CSF1 e IL34, impidiendo así la activación de CSF1R. HuAB1 contiene una sustitución de un solo aminoácido en la región bisagra para evitar el intercambio de hemidímeros.

HuAB1 inhibe la fosforilación de CSF1R inducida tanto por CSF1 como por IL34 en una línea celular modificada por ingeniería genética para sobreexpresar CSF1R (CHO-CSF1R), demostrando que HuAB1 bloquea la activación de rutas de señalización de CSF1R inducidas por ligando. HuAB1 también inhibe la proliferación y supervivencia de monocitos de sangre periférica inducida por CSF1 e IL34 in vitro, demostrando que HuAB1 inhibe no solo el inicio de las rutas de señalización de CSF1 e IL34, sino también las respuestas fisiológicas posteriores de los monocitos humanos primarios a estos ligandos.

CSF1R se expresa en células del linaje de monocitos/macrófagos y al emitir señales a través de CSF1R por medio de sus ligandos, CSF1 e IL34, ayuda a la diferenciación, mantenimiento y función de los monocitos, macrófagos y osteoclastos. Los TAM se encuentran entre los tipos de células inmunitarias más abundantes en el microentorno tumoral. Una evidencia sustancial sugiere que los TAM están polarizados hacia un fenotipo antiinflamatorio y, a través de inhibidores de la superficie celular y factores solubles, tales como citocinas inmunosupresoras, desempeñan un papel importante en la inhibición de las respuestas inmunitarias antitumorales (Noy, 2014). El CSF1 es un factor de supervivencia importante para los TAM y el direccionamiento al CSF1R a través de HuAB1 debería reducir la inmunosupresión mediada por TAM, obteniéndose como resultado el fortalecimiento de la respuesta antitumoral a la inmunoterapia. Por lo tanto, un fármaco que inhibe el CSF1R debería limitar la influencia inmunosupresora de los TAM en el microentorno tumoral y podría ser complementario y potenciar las terapias actuales contra el cáncer.

Dado que HuAB1 no reacciona de forma cruzada con el CSF1R de ratón, se desarrolló un anticuerpo sustituto, cmHuAB1, que se une y bloquea el CSF1R de ratón con una potencia similar a la observada para HuAB1 contra el CSF1R humano. cmHuAB1 contiene regiones variables de rata y una región Fc de IgG1 de ratón. La unión de cmHuAB1 al CSF1R de ratón se demostró en un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA) de unión directa y la actividad inhibidora de cmHuAB1 se demostró por su capacidad para inhibir la proliferación inducida por CSF1 e IL34 de una línea celular dependiente de CSF1/IL34 (mNFS60). El valor de CE⁵⁰para la unión de cmHuAB1 a CSF1R de ratón es de 2,4 ng/ml, y los valores de CI⁵⁰para la inhibición de la proliferación/supervivencia de células mNFS60 inducida por CSF1 de ratón e inducida por IL34 de ratón son 32,9 y 9,1 ng/ml, respectivamente.

1.7.1.2 Nivolumab

La inmunoterapia contra el cáncer se basa en la premisa de que los tumores pueden reconocerse como extraños en lugar de como propios y pueden ser atacados eficazmente por un sistema inmunitario activado. Se cree que una respuesta inmunitaria eficaz en este entorno depende de la vigilancia inmunitaria de los antígenos tumorales expresados en las células cancerosas que, en última instancia, da como resultado una respuesta inmunitaria adaptativa y la muerte de las células cancerosas. Entretanto, la progresión del tumor puede depender de la adquisición de rasgos que permiten a las células cancerosas evadir la inmunovigilancia y escapar de las respuestas inmunitarias innatas y adaptativas eficaces (Dunn, 2002; Jemal, 2011; Pardoll, 2003; Zitvogel, 2006). Los esfuerzos actuales de inmunoterapia intentan romper la aparente tolerancia del sistema inmunitario a las células tumorales y los antígenos introduciendo antígenos del cáncer mediante vacunación terapéutica o modulando los puntos de control reguladores del sistema inmunitario.

La estimulación de células T es un proceso complejo que implica la integración de numerosas señales coestimuladoras tanto positivas como negativas, además del reconocimiento de antígenos por el receptor de células T (TCR) (Greenwald, 2004). En conjunto, estas señales gobiernan el equilibrio entre la activación y la tolerancia de las células T. Se ha demostrado que la señalización de PD-1 inhibe la regulación positiva mediada por CD28 de IL-2, IL-10, IL-13, interferón-gamma (IFN-y) y Bcl-xL. También se ha observado que la señalización de PD-1 inhibe la activación de células T y la expansión de células previamente activadas. La evidencia de un papel regulador negativo de PD-1 proviene de estudios de ratones deficientes en PD-1, que desarrollan varios fenotipos autoinmunitarios (Sharpe, 2007). estos resultados sugieren que el bloqueo de PD-1 tiene el potencial de promover respuestas anti-células T propias, pero estas respuestas son variables y dependen de diversos factores genéticos del hospedador. Por tanto, la deficiencia o inhibición de PD-1 no va acompañada de una pérdida universal de tolerancia a los autoantígenos.

In vitro, el nivolumab se une a PD-1 con alta afinidad (CE⁵⁰0,39-2,62 nM) e inhibe la unión de PD-1 a sus ligandos, PD-L1 y PD-L2 (CI⁵⁰□ 1 nM). El nivolumab se une específicamente a PD-1 y no a miembros relacionados de la familia CD28 tales como CD28, ICOS, CTLA-4 y BTLA. El bloqueo de la ruta de PD-1 por nivolumab da como resultado una mejora reproducible tanto de la proliferación como de la liberación de IFN-y en una reacción mixta de linfocitos (MLR). Usando un ensayo de reestimulación de citomegalovirus (CMV) con células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC), el efecto del nivolumab sobre la respuesta de recuerdo específica de antígeno es indicativo de la secreción de IFN-y aumentada con nivolumab a partir de células T de memoria específicas de CMV de una manera dependiente de la dosis frente a un control de isotipo coincidente. El bloqueo in vivo de PD-1 por un análogo murino de nivolumab mejora la respuesta inmunitaria antitumoral y da como resultado el rechazo del tumor en varios modelos de tumores de ratón inmunocompetentes (MC38, SA1/N y PAN02) (Wolchok, 2009).

1.7.2 Resumen preclínico

1.7.2.1 HuABI

Se estudió la capacidad de cmHuAB1 para inhibir el crecimiento del cáncer in vivo en un modelo de cáncer de colon MC38 en ratones inmunocompetentes. Estos ratones se seleccionaron para permitir el establecimiento de una interacción tumor-sistema inmunitario intacta. El tratamiento con cmHuAB1 comenzó cuando los tumores alcanzaron aproximadamente 100 mm3. Los ratones se trataron una vez por semana mediante inyección intraperitoneal de cmHuAB1 a 30 mg/kg, y se comparó el crecimiento del tumor con los ratones tratados con albúmina sola. cmHuAB1 redujo significativamente el crecimiento de tumores MC38 en comparación con los ratones tratados con el control. El análisis de citometría de flujo de ratones de control mostró que el compartimento mieloide CD11b+ en los tumores MC38 estaba dominado por macrófagos CD206+. CD206 es un marcador de macrófagos M2 inmunosupresores. Estos macrófagos inmunosupresores M2 CD206+ se redujeron significativamente con el tratamiento con cmHuAB 1. La reducción de los macrófagos M2 estuvo acompañada de un aumento de células T citotóxicas CD8+ en relación con las células T CD4+totales o células T reguladoras definidas como CD4+CD25alto. Estos datos sugieren que la reducción de macrófagos inmunosupresores por cmHuAB 1 da como resultado un cambio hacia una mayor respuesta de células T citotóxicas en el tumor.

El perfil PK de HuAB1 es complejo y se caracteriza por un aclaramiento no lineal que probablemente esté mediado por la unión a CSF1R en las células. Como los monocitos y macrófagos dependen de CSF1R para su viabilidad, estas células portadoras de la diana se reducen en número después del tratamiento con HuAB1, dando como resultado una disminución del aclaramiento mediado por la diana. A medida que el aclaramiento mediado por la diana se satura con dosis altas o repetidas, el aclaramiento de HuAB1 es similar al de otros anticuerpos IgG humanos.

Tres biomarcadores PD se correlacionan con la exposición a HuAB1 en estudios no clínicos: niveles séricos de CSF1, monocitos circulantes de sangre periférica positivos para CD16 (monocitos CD16+) y marcadores séricos de resorción ósea (Trap5b y CTX). Los niveles séricos de CSF1 aumentan rápidamente y los niveles de monocitos CD16+ caen rápidamente de una manera dependiente de la dosis que se correlaciona estrechamente con la concentración plasmática de HuAB1. La saturación de la respuesta PD se logra con una dosis baja de HuAB1 (3 mg/kg por semana) en monos cynomolgus. La respuesta semimáxima (CI⁵⁰) para la reducción de monocitos CD16+ se produce a una concentración sérica de aproximadamente 3 pg/ml y la respuesta máxima se produce a aproximadamente 10 pg/ml. El nivel de monocitos negativos para CD16 (CD 16') no cambia con la exposición a HuAB1.

En los estudios toxicológicos in vivo en monos cynomolgus, en general, e1HuAB1 se toleró bien. Los hallazgos relacionados con el artículo de prueba incluyeron observaciones clínicas, cambios hematológicos y de química clínica, y cambios histopatológicos. La mayoría de estas observaciones se consideraron no adversas. La observación clínica más destacada fue el edema periorbitario reversible, visto después de una exposición prolongada a HuAB1. La aparición del edema no mostró una clara relación con los niveles de exposición, pero el edema se resolvió después del aclaramiento sistémico del fármaco. El edema periorbitario es un efecto secundario conocido de los fármacos que afectan a la ruta de CSF1 (Cassier, 2014; Ries, 2014). El principal cambio hematológico fue una disminución reversible de monocitos CD16+ circulantes, que se consideró un efecto PD. Los efectos de química clínica relacionados con HuAB1 incluyeron un aumento reversible de los niveles séricos de ALT, AST, CK y LDH. Estas anomalías de laboratorio no se asociaron con ninguna evidencia histopatológica de lesión hepática, cardíaca o del tejido muscular. Adicionalmente, la troponina cardíaca, la troponina esquelética (SkTnI), la mioglobina y la aldolasa no mostraron ningún cambio, lo que confirma la ausencia de lesión hepática o muscular. El aumento de los niveles séricos se atribuye a una disminución del aclaramiento de las moléculas de ALT, AST, CK y LDH del suero debido a un número reducido de células de Kupffer hepáticas (Radi, 2011). Por consiguiente, las elevaciones de ALT, AST, CK y LDH se consideran no tóxicas y un efecto PD indirecto de la exposición a HuAB1.

Un hallazgo histopatológico digno de mención fue la expansión reversible de las fibras de colágeno submucosas por espacio libre y cantidades variables de una matriz extracelular granular (MEC) de color azul en diversos tejidos. Este cambio no se asoció con células inflamatorias ni con ningún signo de degeneración u otra alteración de las fibras de colágeno, fibroblastos o las células del músculo liso dentro del área de expansión. También se hizo una observación similar en ratones op/op que carecen de CSF1 funcional. La reducción de macrófagos tisulares es la causa probable de la acumulación observada de ECM debido a una disminución del aclaramiento de glicosaminoglicanos, especialmente ácido hialurónico, que son prominentes en el tejido conectivo y normalmente se catabolizan por los macrófagos (Radi, 2009). Este cambio también se considera un efecto PD indirecto de HuAB1.

La troponina cardíaca I estaba por debajo del límite de cuantificación (LOQ) en todas las muestras, excepto en una mona del grupo de 150 mg/kg en el día 28. Este animal tenía un hallazgo microscópico correspondiente en el corazón. Si bien las elevaciones de la troponina cardíaca I son muy específicas para la lesión del miocardio, el nivel detectado en este mono (0,26 ng/ml) estaba ligeramente por encima del LOQ del ensayo (0,20 ng/ml) y mucho más bajo de lo que sería de esperar para un evento cardíaco adverso.

Se determinó que el nivel sin efectos adversos observables (NOAEL) para HuAB1 era de 100 mg/kg cuando se administraba en 13 dosis semanales a monos cynomolgus, lo cual proporciona un factor de seguridad 32 veces mayor basándose en el cálculo del área de superficie corporal para la dosis inicial de 1 mg/kg en seres humanos.

Se evaluó el nivel mínimo de efecto biológico anticipado (MABEL) para guiar las decisiones de dosis inicial en voluntarios sanos en el primer estudio en humanos. Los marcadores PD identificados como representativos de un efecto biológico fueron cambios en los niveles de monocitos CD16+, elevación del CSF1 plasmático y elevación en suero de ALT, AST, CK y LDH. La concentración plasmática más baja de HuAB 1 a la que se produjo un efecto biológico para cada marcador variaba de 5 pg/ml a 105 pg/ml, y la dosis de HuAB1 que correspondía a 5 pg/ml a la concentración sérica máxima (Cmáx) se estimó en 0,2 mg/kg, la dosis inicial recomendada en voluntarios sanos.

1.7.2.2 Nivolumab

Se ha demostrado que el nivolumab se une específicamente al receptor de PD-1 humano y no a miembros relacionados de la familia CD28, tales como ICOS, CTLA-4 y BTLA (IB de nivolumab, 2014). El nivolumab inhibe la interacción de PD-1 con sus ligandos, PD-L1 e PD-L2, dando como resultado una mayor proliferación de células T y liberación de IFN-y in vitro (Velu, 2009; IB de nivolumab, 2014). El análisis con un clasificador de células activadas por fluorescencia (FACS) confirmó que el nivolumab se une al ovario de hámster chino (CHO) transfectado, a las células T humanas activadas que expresan PD-1 en la superficie celular y a la PD-1 de mono cynomolgus, pero no a las moléculas de PD-1 de rata o conejo. También se ha demostrado que el nivolumab se une a la PD-1 en células T CD8+ específicas de virus de pacientes con infección crónica por el virus de la hepatitis C (Kaufmann, 2008; Rutebemberwa, 2008).

La inhibición de PD-1 en una MLR tuvo como resultado un aumento reproducible dependiente de la concentración de la liberación de IFN-y en la MLR de hasta 50 pg/ml. No se observó ningún efecto con un control de isotipo de IgG4 humana o controles de células T CD4+ y células dendríticas (DC, por sus siglas en inglés) (Wang, 2014).

En estudios de toxicología de dosis repetidas intravenosas (IV) en monos cynomolgus, el nivolumab se toleró bien en dosis de hasta 50 mg/kg, administrado semanalmente durante 5 semanas, y en dosis de hasta 50 mg/kg, administrado dos veces por semana hasta un total de 27 dosis. Los hallazgos relacionados con nivolumab se limitaron a una disminución reversible del 28 % en la triyodotironina (T³) entre las mujeres a las que se les administraron 27 dosis de 50 mg/kg de nivolumab. No se observaron cambios correspondientes en el nivel de tiroxina (T⁴) ni de hormona estimulante de la tiroides (TSH) o cambios histológicos en la tiroides. Si bien el nivolumab solo se toleró bien en monos cynomolgus, los estudios de combinación han destacado la posibilidad de una mayor toxicidad cuando se combinan con otros agentes inmunoestimuladores (IB de nivolumab IB, 2014).

Se utilizó ipilimumab (BMS-734016), un anticuerpo monoclonal (mAb) anti-CTLA-4 que bloquea la regulación negativa de la activación de células T, en combinación con nivolumab para investigar los efectos de la inhibición concurrente de los receptores de PD-1 y CTLA-4 en primates no humanos (IB de nivolumab, 2014). Aunque no se ha observado toxicidad gastrointestinal (GI) en monos cynomolgus tratados con nivolumab solo, fue evidente una toxicidad GI dependiente de la dosis en monos cynomolgus tratados semanalmente durante 4 semanas con una combinación de nivolumab ipilimumab en combinaciones de 10 y 3 mg/kg y 50 y 10 mg/kg, respectivamente. También se han observado efectos GI con baja incidencia después de la administración de ipilimumab (IB de nivolumab).

Además, se realizó un estudio de desarrollo prenatal y posnatal mejorado (ePPND) en monas cynomolgus preñadas con nivolumab (IB de nivolumab, 2014). Las monas preñadas toleraron bien la administración de nivolumab hasta 50 mg/kg cada 2 semanas; sin embargo, se determinó que nivolumab es un tóxico selectivo para el desarrollo cuando se administra desde el período de organogénesis hasta el parto a > 10 mg/kg (área bajo la curva de concentración-tiempo [AUC] desde el tiempo cero a 168 horas [AUC (0-168 h)] 117.000 pg^h/ml). Específicamente, se observó un aumento de la mortalidad durante el desarrollo (incluidas las pérdidas fetales tardías de la gestación y la prematuridad extrema con la mortalidad neonatal asociada) en ausencia de toxicidad materna manifiesta. No hubo cambios relacionados con el nivolumab en los lactantes supervivientes evaluados durante el período posnatal de 6 meses. Aunque no se ha determinado la causa de estos embarazos fallidos, los efectos relacionados con el nivolumab sobre el mantenimiento del embarazo son consistentes con el papel establecido de PD-L1 en el mantenimiento de la tolerancia maternofetal en ratones (Habicht, 2007).

1.7.3 Resumen clínico

1.7.3.1 HuABI

1.7.3.1.1 Resumen del estudio en curso de HuABI

Actualmente, HuAB1 está siendo evaluado en un primer ensayo en seres humanos con doble enmascaramiento, aleatorizado, controlado con placebo diseñado en 3 partes para estudiar la seguridad, PK y PD en voluntarios sanos y pacientes con AR. Las dos primeras partes del estudio se realizaron en voluntarios sanos y se han finalizado. En la parte 1, se asignaron aleatoriamente 8 voluntarios sanos (3:1) para recibir una única infusión IV de HuAB1 o placebo, por cohorte de dosis de 0,2, 1, 3 o 10 mg/kg. En la parte 2, se asignaron aleatoriamente 8 voluntarios sanos (3:1) para recibir 2 dosis de HuAB1 o placebo administradas con 14 días de diferencia, a 1 mg/kg o 3 mg/kg. La parte 3 del estudio evaluará al HuAB1 en pacientes con AR y actualmente está en curso. Los datos de las partes 1 y 2 se resumen a continuación.

1.7.3.1.2 Resumen de farmacología clínica de HuAB1

La PK de HuAB1 se evaluó midiendo los niveles de fármaco sistémico a lo largo del tiempo en los 36 sujetos que recibieron HuAB1 en las partes 1 y 2. Se recogieron muestras de sangre para la determinación de las concentraciones séricas de HuAB1 antes de la dosis y en diversos puntos de tiempo hasta 112 días (para la parte 1) o 98 días (para la parte 2) después de la primera dosis. Además, se recogieron muestras de sangre para la determinación de anticuerpos anti-HuAB1 antes de la dosis y en diversos puntos de tiempo desde el día 15 al día 85 (para la parte 1) o desde el día 15 al día 99 (para la parte 2).

Después de una sola administración de HuAB1 a 0,2, 1, 3 y 10 mg/kg, el aclaramiento total disminuyó con el aumento de la dosis y varió de 38,7 a 2,55 ml/día/kg. El aclaramiento total de 2,55 ml/día/kg a 10 mg/kg está dentro del intervalo de un anticuerpo monoclonal IgG humano típico. La Cmáx aumentó de manera proporcional a la dosis, pero el AUC no lo hizo. Después de 2 dosis administradas con 14 días de diferencia, no hubo acumulación a 1 mg/kg. Sin embargo, cuando la dosis se aumentó a 3 mg/kg, se observó una acumulación media de fármaco de 1,60 veces entre la primera y la segunda dosis para el AUC desde el día 1 al día 15, mientras que se observó una acumulación mínima para la Cmáx al mismo nivel de dosis. Los datos PK observados sugirieron que el CSF1R expresado en el linaje de monocitos/macrófagos y otros tipos celulares contribuía al aclaramiento de HuAB1 mediado por la diana. Como los monocitos y macrófagos dependen de CSF1R para su viabilidad, estas células portadoras de la diana se reducen en número después del tratamiento con HuAB1, dando como resultado una disminución del aclaramiento mediado por la diana. Una vez que el aclaramiento mediado por la diana se satura a dosis altas o repetidas, el aclaramiento de HuAB1 es similar al de otros anticuerpos IgG humanos.

La inmunogenicidad de HuAB1 se evaluó mediante un ensayo de electroquimioluminiscencia (ECLA) validado que medía los anticuerpos anti-HuAB1 totales en suero. El límite de detección (sensibilidad) del ensayo era de 39,1 ng/ml. Tres sujetos de la cohorte 2 (dosis única de 1 mg/kg) tenían títulos de anticuerpos positivos en cantidades muy pequeñas, dando como resultado una incidencia del 8,3% (3 de 36 sujetos que recibieron HuAB1). Los títulos de anticuerpos positivos en cantidades muy pequeñas se observaron por primera vez el día 15 en 2 sujetos y el día 57 en 1 sujeto. Dos sujetos todavía tenían títulos positivos para ADA el día 85 (el último punto de tiempo analizado). La presencia de ADA tuvo un impacto insignificante o nulo sobre la exposición a HuAB1, en comparación con los sujetos sin ADA de la misma cohorte de dosis, y no hubo secuelas clínicas asociadas según los datos disponibles.

El tratamiento con HuAB1 indujo una reducción dependiente de la dosis de monocitos CD16+ no clásicos como marcador PD para el tratamiento con HuAB1. Se analizó la relación entre la concentración sérica de HuAB1 y la reducción de monocitos CD16+ no clásicos y se determinó que era dependiente de la concentración según los datos recopilados 72 horas después del tratamiento hasta el final del estudio. A 5 pg/ml de HuAB1 en suero, se observó una reducción de monocitos CD16+ no clásicos. Por lo tanto, es de esperar que la dosis para alcanzar la concentración sérica valle de 5 pg/ml en la mayoría de los pacientes sea la dosis diana para la reducción máxima de monocitos CD16+ no clásicos. La exposición óptima necesaria para lograr la eficacia clínica queda por explorar en ensayos clínicos que utilicen HuAB1 en pacientes.

En resumen, HuAB1 presentó un aclaramiento no lineal en el intervalo de dosis probado. Las características PK observadas en voluntarios sanos confirman la dosificación de HuABI una vez cada 2 semanas o con menos frecuencia para mantener la exposición deseada al fármaco.

1.7.3.1.3 Resumen de seguridad clínica de HuABI

El número total de sujetos que recibieron HuAB1 fue de 36 tanto para la parte 1 como para la parte 2 con 6 sujetos en cada cohorte de dosis. Las decisiones de aumento escalonado de la dosis se basaron en la incidencia de DLT más EA atribuidos después del período de DLT.

HuAB1 se toleró bien en voluntarios sanos hasta dosis múltiples de 3 mg/kg. Las toxicidades más frecuentes relacionadas con el tratamiento con HuAB 1 fueron prurito, edema del párpado junto con hinchazón facial, fatiga y dolor de cabeza. Los eventos fueron de grado 1 o 2 y autolimitados. El perfil de eA es similar a lo que se ha notificado en otros compuestos que se dirigen a la ruta de CSF1R (Cassier, 2014). A 10 mg/kg, los 6 sujetos activos experimentaron edema moderado (grado 2) del párpado o hinchazón facial, algunos acompañados de hinchazón en manos y pies, visión borrosa y aumento de peso. Los eventos duraron hasta 3 meses y coincidieron con la exposición prolongada a HuAB1 a este nivel de dosis.

HuAB1 ha mostrado elevación de las enzimas hepáticas, alcanza su punto máximo a las 2-8 semanas después de la administración del fármaco y vuelve a la normalización 12 semanas después de la interrupción del fármaco. Se observaron elevaciones de CK dependientes de la dosis de hasta 6,8 veces el límite superior normal (LSN) y de LDH de hasta 3,2 veces el LSN a 1 mg/kg y más; se produjeron elevaciones de AST de hasta 2,4 veces el LSN a 3 mg/kg y más y se produjeron en un mayor porcentaje de voluntarios sanos al aumentar la dosis; y se produjo una elevación leve de ALT de hasta 1,2 veces el lSn a 10 mg/kg en 1 sujeto. Se consideró que estas elevaciones se debían más al mecanismo de acción de la inhibición de las células de Kupffer mediada por HuAB1 que a cualquier fallo orgánico o lesión y no se consideraron clínicamente significativas. HuAB1 se probó inicialmente en voluntarios sanos a una dosis de 1 mg/kg y 3 mg/kg de peso corporal. A 1 mg/kg, 7 sujetos recibieron una dosis única y 5 sujetos recibieron 2 dosis a intervalos de 14 días y se sometieron a seguimiento durante la ventana de DLT de 28 días. En el grupo de voluntarios sanos de 3 mg/kg, 10 sujetos recibieron una dosis única y 2 sujetos recibieron 2 dosis con un intervalo de 14 días y se sometieron a seguimiento de las DLT. Solo 1 sujeto en la cohorte de 3 mg/kg tuvo un aumento simultáneo de grado 1 de fosfatasa alcalina y AST.

1.7.3.2 Nivolumab

1.7.3.2.1 Resumen de farmacología clínica de nivolumab

La PK de dosis única de nivolumab se evaluó en pacientes con múltiples tipos de tumores en el estudio CA209001, mientras que la PK de dosis múltiples se está evaluando en pacientes en el estudio CA209003. Además, se ha desarrollado un modelo farmacocinético poblacional preliminar (PPK) con datos de 350 pacientes de los estudios CA209001, CA209002 y CA209003.

La PK de nivolumab se estudió en pacientes en un intervalo de dosis de 0,1 a 20 mg/kg administrados como dosis única o en dosis múltiples cada 2 o 3 semanas. Basándose en un análisis de PPK con datos de 909 pacientes, el aclaramiento (CL) (CV %) es de 9,5 ml/h (49,7 %), la media geométrica del volumen de distribución en estado estacionario (Vss) es de 8,0 l (30,4 %) y la media geométrica de la semivida de eliminación (t-io) es de 26,7 días (101 %). Las concentraciones en estado estacionario de nivolumab se alcanzaron a las 12 semanas cuando se administró a 3 mg/kg cada 2 semanas, y la acumulación sistémica fue de aproximadamente 3 veces. La exposición a nivolumab aumentó la dosis proporcionalmente en el intervalo de dosis de 0,1 a 10 mg/kg administrados cada 2 semanas (prospecto de Opdivo, 2015).

Basándose en un análisis PK poblacional con datos de 909 pacientes, el aclaramiento de nivolumab aumentó con el aumento del peso corporal, lo que permitió una dosis basada en el peso. El análisis PK poblacional sugirió que los siguientes factores no tenían un efecto clínicamente importante sobre el aclaramiento de nivolumab: edad (29 a 87 años), género, raza, LDH basal, expresión de PD-L1, tipo de tumor, tamaño del tumor, insuficiencia renal e insuficiencia hepática leve (prospecto de Opdivo, 2015).

1.7.3.2.2 Resumen de seguridad de nivolumab

De forma general, el perfil de seguridad de nivolumab en monoterapia, así como la terapia de combinación, es manejable y generalmente consistente en todos los ensayos clínicos finalizados y en curso sin que se haya alcanzado una MTD en ninguna dosis probada hasta 10 mg/kg. No hubo patrón en la incidencia, gravedad o causalidad de los EA al nivel de dosis de nivolumab. La mayoría de los EA fueron de bajo grado (grados 1 a 2) con relativamente pocos EA de alto grado (grados 3 a 4) relacionados. La mayoría de los eventos de alto grado fueron manejables con el uso de corticosteroides o terapia de reemplazo hormonal (endocrinopatías) como se indica en los algoritmos de manejo proporcionados en el IB de nivolumab (IB de nivolumab, 2014).

En un estudio de dosis única de fase 1 finalizado (CA209001) y un estudio de dosis múltiples de fase 1 en curso (CA209003) se han tratado, respectivamente, un total de 39 y 306 pacientes con neoplasias malignas recidivantes o refractarias al tratamiento seleccionadas. Como el perfil de seguridad de CA209003 hasta la fecha es coherente con el observado para CA209001, a continuación solo se presentan datos del estudio más grande y más reciente, CA209003.

En CA209003 (n = 306, que incluye 129 pacientes con NSCLC), desde el cierre de la base de datos del 5 de marzo de 2013, se produjeron Ea de cualquier grado relacionados con el fármaco en el 75 % de los pacientes. Los EA relacionados con el fármaco más frecuentes que se produjeron en al menos el 5 % de los pacientes incluyeron fatiga (28 %), erupción (15 %), diarrea (13 %), prurito (11 %), náuseas (9 %), disminución del apetito (9 %), disminución de la hemoglobina (6 %) y pirexia (6 %). La mayoría de los eventos fueron de bajo grado, observándose los EA de grado 3/4 relacionados con el fármaco en el 17 % de los pacientes. Los EA relacionados con el fármaco de grado 3/4 más comunes que se produjeron en al menos el 1 % de los pacientes fueron fatiga (2 %), neumonitis (1 %), diarrea (1 %), dolor abdominal (1 %), hipofosfatemia (1 %) y linfopenia (1 %). Se produjeron EAG relacionados con el fármaco en el 14 % de los pacientes; el 8 % eran de grado 3/4, incluyendo neumonitis (1 %) y diarrea (1 %). El espectro, la frecuencia y la gravedad de los EA relacionados con el fármaco fueron generalmente similares en todos los niveles de dosis probados. Una revisión de los datos de seguridad por tipo de tumor (RRC, NSCLC, cáncer de próstata metastásico resistente a la castración [mCRPC], cáncer colorrectal [CRC] y melanoma) tampoco mostró diferencias clínicamente significativas en la proporción de pacientes con EA detectados en todos los tipos de tumores.

También se analizaron EA con posible causalidad relacionada con el sistema inmunitario, anteriormente denominados "eventos adversos relacionados con la inmunidad" o "eventos adversos de especial interés" teniendo en cuenta múltiples eventos, con tasas ajustadas según la duración del tratamiento. La mayoría de los eventos se produjeron en los primeros 6 meses de terapia; no se observaron toxicidades acumulativas o nuevas con la exposición prolongada al fármaco. Diecinueve de 306 pacientes (6 %) experimentaron EA seleccionados relacionados con el tratamiento de grado 3/4. Cincuenta y dos de 230 pacientes (23 %) con EA relacionados con el fármaco requirieron tratamiento con glucocorticoides sistémicos y/u otros agentes inmunosupresores. Veintiuno de 52 (40 %) reanudaron la terapia con nivolumab después de que se resolvió la toxicidad, mientras que los demás interrumpieron la terapia.

Aunque la progresión tumoral fue la causa más común de mortalidad, hubo 3 muertes relacionadas con el fármaco asociadas con neumonitis de grado 3/4. Se produjo neumonitis (de cualquier grado) en 12 de 306 pacientes (4 %) y neumonitis de grado 3/4 en 4 pacientes (1 %), con presentaciones clínicas que van desde anomalías radiográficas asintomáticas hasta infiltrados pulmonares difusos progresivos asociados con tos, fiebre y/o disnea. No se detectó una relación clara entre la aparición de neumonitis y el tipo de tumor, el nivel de dosis o la duración del tratamiento. En 9 de 12 pacientes, la neumonitis fue reversible después de la interrupción del tratamiento y/o con terapia inmunosupresora (glucocorticoides, infliximab, micofenolato).

También están disponibles otros detalles adicionales sobre el perfil de seguridad de nivolumab, incluidos los resultados de otros estudios clínicos, en el IB y en el prospecto (IB de nivolumab, 2014; prospecto de Opdivo, 2015).

1.8 Evaluación general de riesgos/beneficios

Se están estudiando en la clínica varios candidatos a fármacos que se dirigen a la ruta de CSF1R. Estos incluyen anticuerpos que bloquean la unión del ligando agonista a CSF1R o inhiben la dimerización de CSF1R, así como moléculas pequeñas que bloquean la actividad quinasa de CSF1R. Se ha notificado la seguridad, PK y PD de PD-0360324, un anticuerpo contra CSF1, en voluntarios sanos (Sadis, 2009). Los hallazgos emergentes del tratamiento más significativos (aumento de los niveles de enzimas hepáticas) y los EA (es decir, edema periorbitario) presentados con el tratamiento con PD-0360324 son coherentes con los datos obtenidos hasta la fecha con HuAB 1.

Un estudio clínico de RG7155 (un anticuerpo de CSF1R anti-dimerización) incluyó pacientes con tumores de células gigantes de tipo difuso (Dt-GCT). Los siete pacientes evaluables mostraron una respuesta metabólica parcial en las imágenes de FDG-PET (según la Organización Europea para la Investigación y el Tratamiento del Cáncer), acercándose dos pacientes a una respuesta metabólica completa. Cinco de los siete pacientes lograron respuestas parciales en la primera evaluación. Al igual que con otros agentes que se dirigen a la ruta de CSF1R, el edema periorbitario fue el EA más común (Ries, 2014).

El CSF1 es un factor de supervivencia importante para los TAM y el direccionamiento a CSF1R a través de HuAB1 debería reducir la inmunosupresión mediada por TAM, dando como resultado el fortalecimiento de la respuesta antitumoral a la inmunoterapia. La inhibición de CSF1R por HuAB1 podría limitar la influencia de los TAM en el microentorno tumoral y ser complementaria y aumentar las terapias actuales contra el cáncer.

El nivolumab ha demostrado actividad clínica en varios tipos de tumores, particularmente melanoma y NSCLC, donde ya ha obtenido la aprobación de la FDA. El nivolumab también ha demostrado un perfil de seguridad manejable. Los EA más comunes incluyeron fatiga, erupción, prurito, diarrea y náuseas.

Los informes preliminares de inhibidores específicos de CSF1R sugieren que HuAB1 puede ser un tratamiento beneficioso para pacientes con neoplasias malignas sólidas. La sólida actividad clínica demostrada por nivolumab en pacientes con melanoma avanzado, NSCLC y RCC en combinación con un perfil de seguridad manejable respalda el desarrollo adicional de este tratamiento en pacientes con cánceres avanzados.

Según los datos de seguridad clínica disponibles, las toxicidades de HuAB1 y nivolumab no se superponen (con la notable excepción de las elevaciones de las enzimas hepáticas, que se analizan más adelante) y, por lo tanto, no se esperan toxicidades acumulativas como resultado de esta combinación. HuAB1 se ha relacionado con edema periorbitario y solo ha habido un caso de edema periférico con nivolumab. Adicionalmente, el nivolumab se ha relacionado con EA relacionados con el sistema inmunitario y, hasta la fecha, no se han producido EA relacionados con el sistema inmunitario con HuAB1.

Hay un aumento temporal de las enzimas hepáticas (CK, AST, ALT y LDH) en pacientes que toman HuAB1 debido a una reducción de las células de Kupffer, y esto no se ha asociado con ninguna evidencia histopatológica de hígado, daño cardíaco o del tejido esquelético. Se sabe que el nivolumab causa toxicidad hepática a baja frecuencia. Debido al potencial de la combinación de HuAB 1 y nivolumab para producir enzimas hepáticas elevadas con diferentes mecanismos subyacentes, se han desarrollado pautas de mitigación de riesgos para detectar rápidamente y responder adecuadamente a cualquier evidencia de perturbación hepática durante este estudio (Apéndice E).

Sigue existiendo una necesidad médica no satisfecha para los pacientes con cáncer. Dados los datos clínicos y no clínicos sólidos que respaldan estas dos moléculas, los mecanismos de acción basados en el sistema inmunitario no redundantes y el cuerpo actual de datos de seguridad de múltiples estudios clínicos, la combinación lógica de estos dos fármacos puede ser beneficiosa para los pacientes con cáncer que necesitan opciones terapéuticas ampliadas.

2 PLAN DE INVESTIGACIÓN

2.1 Diseño y duración del estudio

Este estudio es un estudio de fases 1a y 1b, sin enmascaramiento, multicéntrico, estudio de aumento escalonado y expansión de la dosis para evaluar la seguridad, tolerabilidad, PK y PD de HuAB1 como monoterapia y en combinación con nivolumab en pacientes con cánceres avanzados seleccionados. El HuAB1 es un anticuerpo monoclonal humanizado dirigido contra CSF1R y el nivolumab es un anticuerpo monoclonal completamente humano dirigido contra PD-1. Para los grupos de combinación del estudio, se administrarán HuAB1 y nivolumab el día 1 de cada ciclo de tratamiento de 14 días; el nivolumab se administrará como una infusión IV durante 30 minutos primero, con un descanso de 30 minutos entre 2 infusiones, seguido de una infusión IV de HuAB1 de 30 minutos.

El estudio incluirá un aumento escalonado de la dosis de fase 1a y una expansión de la dosis de fase 1b. La fase 1a consiste en dos cohortes de referencia en monoterapia con HuAB1 (1aM1 y 1aM2) y tres cohortes de aumento escalonado de la dosis de HuAB1 en combinación con nivolumab (1aC1, 1aC2 y 1aC3). La fase 1b consiste en ocho cohortes (1b1 a 1b8) en seis tipos de cáncer. Los pacientes se inscribirán en la fase 1aM, 1aC o en la fase 1b del estudio, pero no en dos o en las tres. El esquema del estudio se muestra en la figura 6.

El estudio consistirá en 3 períodos que incluyen la selección (hasta 28 días), el tratamiento y el seguimiento/seguimiento de supervivencia.

2.1.1 Período de selección

Todas las evaluaciones de la selección deben finalizarse y revisarse por el investigador siguiendo el manual de referencia del estudio para el proceso de inscripción para confirmar que los pacientes cumplen todos los criterios de elegibilidad antes de la primera infusión del fármaco del estudio. Se debe obtener el consentimiento informado por escrito para participar en el estudio antes de realizar cualquier prueba o procedimiento de selección específico del estudio que no se considere estándar de atención. Las evaluaciones de selección se realizarán en los 28 días previos a la primera dosis del fármaco del estudio a menos que se especifique lo contrario.

Los EA relacionados con el procedimiento del estudio que se produzcan después de la firma del ICF (siglas en inglés de formulario de consentimiento informado) y antes de la administración de la primera dosis del fármaco del estudio se recopilarán durante este período.

2.1.2 Período de tratamiento

2.1.2.1 Cohortes de monoterapia de fase 1a (1aM1 y 1aM2) y cohortes de aumento escalonado de dosis de combinación (1aC1, 1aC2 y 1aC3)

La fase 1a consiste en dos cohortes de referencia en monoterapia con HuAB1 y tres cohortes de aumento escalonado de la dosis de HuAB1 en combinación con nivolumab con un mínimo de 3 pacientes inscritos en cada cohorte. Los niveles de dosis planificados y los programas para las cohortes de fase 1a son los siguientes:

Cohorte 1aM1: 2 mg/kg de HuAB1, q2w

Cohorte 1aM2: 4 mg/kg de HuABI, q2w

Cohorte 1aC1:

HuABI 3 mg/kg de nivolumab, q2w

Cohorte 1aC2: 2 mg/kg de HuABI 3 mg/kg de nivolumab, q2w

Cohorte 1aC3: 4 mg/kg de HuAB1 3 mg/kg de nivolumab, q2w

La cohorte de monoterapia de 2 mg/kg de HuAB1 (1aM1) y la cohorte de combinación de 1 mg/kg de HuAB1 nivolumab (1aC1) se iniciarán primero en paralelo con el orden de inscripción secuencial, siguiendo un diseño 3 3, que comienza con la cohorte de monoterapia 1aM1. Los pacientes de estas cohortes serán tratados durante un total de dos ciclos de tratamiento de 14 días dentro del período de DLT de 28 días.

La cohorte de 4 mg/kg de HuAB1 en monoterapia (1aM2) se abrirá después de que finalice el período de DLT en la cohorte de 2 mg/kg de HuAB1 en monoterapia (1aM1); la cohorte de combinación de 2 mg/kg de HuAB1/nivolumab solo comenzará después de que finalicen los períodos de DLT en las cohortes de combinación de HuAB1/nivolumab 1aC1 y de HuAB1 en monoterapia 1aM1. La cohorte de combinación de 4 mg/kg de HuAB1/nivolumab (1aC3) se abrirá solo después de que finalicen los períodos de DLT en las cohortes de combinación de HuAB1/nivolumab 1aC2 y de HuAB1 en monoterapia 1aC2. Dependiendo del resultado de la cohorte de 4 mg/kg de HuAB1 en monoterapia, se pueden abrir cohortes de dosis intermedias más altas o más bajas tanto para la monoterapia como para la terapia de combinación (por ejemplo, 3 mg/kg de HuAB1 solo o en combinación con nivolumab) según la decisión del Comité de Revisión de Cohortes. Todas las decisiones de aumento escalonado de la dosis se basarán en la evaluación de DLT, seguridad general y tolerabilidad. Las decisiones de aumento escalonado de la dosis se acordarán entre los investigadores y el patrocinador. Antes de iniciar cada nuevo nivel de dosis o ampliar un nivel de dosis existente, se llevará a cabo una teleconferencia de seguridad en la que el o los investigadores y el patrocinador revisarán los datos de los pacientes, incluyendo, pero sin limitación, demografía, dosificación de fármacos, medicaciones concomitantes, hematología y química del suero, y EA; y otorgarán y documentarán el acuerdo de que se considera apropiado el aumento escalonado de la dosis o la ampliación de un nivel de dosis existente. Si el o los investigadores y el patrocinador acuerdan colectivamente, después de la revisión de los datos de seguridad, PK y PD, que se debe utilizar un esquema de aumento escalonado de la dosis diferente (por ejemplo, una dosis intermedia de HuAB1 de 3 mg/kg solo o en combinación con nivolumab) que el descrito, esto estará permitido. La revisión de los parámetros de seguridad, PK y PD puede notificar decisiones de añadir cohortes con niveles de dosis o regímenes de dosis alternativos (por ejemplo, una dosificación menos frecuente) para alcanzar una exposición diana óptima.

Las decisiones de evaluación de DLT e inscripción seguirán las pautas de la Tabla 2 proporcionada a continuación:

T l 2 - Al ri m r i i n m n l n l i l f 1

El aumento escalonado de la dosis continuará en los grupos de monoterapia y tratamiento de combinación hasta que se alcance la MTD o la dosis máxima planificada de HuAB1, con un mínimo de 3 pacientes inscritos en cada cohorte.

La MTD se define como la dosis más alta asociada con DLT en menos del 33 % de los pacientes (menos de 2 de 6 pacientes) que reciben terapia de combinación de HuAB1 o HuAB1 nivolumab, administrada durante el período de DLT de 28 días. Esta será normalmente la dosis recomendada para estudios posteriores; sin embargo, basándose en la revisión de los datos de seguridad, PK y PD, la DR podría ser menor que la MTD. Si no se alcanza la MTD y la dosis más alta de HuAB1 evaluada sola o en combinación con nivolumab se tolera bien, se revisarán los datos para evaluar si se justifican nuevos aumentos escalonados de la dosis hasta 6 mg/kg de HuAB1.

Si no se alcanza la MTD durante el aumento escalonado de la dosis de combinación de la fase 1a, o los ciclos posteriores de tratamiento en las cohortes de combinación de la fase 1a finalizadas proporcionan información adicional sobre el perfil de seguridad, puede seleccionarse una DR en función de la tolerabilidad general, seguridad, PK y PD.

Si un paciente en la fase 1aC no recibe 2 dosis de cada fármaco del estudio y no completa la evaluación de seguridad (por ejemplo, informe de laboratorio de seguridad y/o EA) en el período de DLT de 28 días por motivos distintos a los EA relacionados con el fármaco (por ejemplo, progresión de la enfermedad o retirada del consentimiento), se inscribirá un paciente adicional en la cohorte de modo que la cohorte tenga al menos tres pacientes evaluables durante el período de DLT. Todas estas discusiones y decisiones se documentarán como parte del proceso de toma de decisiones de aumento escalonado de la dosis.

Una vez completado el período de DLT de 28 días, los pacientes de la fase 1a pueden participar en un período de tratamiento ampliado siguiendo las pautas de la sección 4.1.2.2.

2.1.2.1.1 Toxicidad limitante de la dosis

Una DLT se define como un EA de grado 3 relacionado con el fármaco del estudio (según los Criterios de terminología común para eventos adversos [CTCAE] v4.03 del Instituto Nacional del Cáncer [NCI]) que se produce durante el primer período de DLT de 28 días, excluyendo: exacerbación del tumor de grado 3 (definida como dolor local, irritación o erupción localizada en sitios de tumor conocido o sospechado), erupción de grado 3, evento adverso relacionado con el sistema inmunitario de grado 3 (EAI, definido a continuación) que se resolvió a un grado 1 o menos en 28 días o un EA relacionado con la infusión transitorio (que se resolvió en las 6 horas posteriores al inicio) de grado 3. Un EAI se define como un EA clínicamente significativo que se asocia con la exposición al fármaco del estudio, de etiología desconocida, y es compatible con un mecanismo mediado por el sistema inmune.

2.1.2.2 Período de tratamiento ampliado de la fase 1a

Una vez completado el período de DLT, los pacientes de las cohortes de fase 1aM y 1aC pueden participar en un período de tratamiento ampliado, que comienza el día 1 del ciclo 3 (día 29 del estudio).

Los pacientes de las cohortes de la fase 1aM pueden continuar recibiendo la monoterapia de HuAB1 al mismo nivel de dosis de HuAB1 y los pacientes de las cohortes de fase 1aC pueden continuar recibiendo HuAB 1 en combinación con nivolumab a los mismos niveles de dosis hasta la progresión de la enfermedad, toxicidad inaceptable u otra razón para la interrupción del tratamiento.

2.1.2.3 Cohortes de ampliación de la fase 1b

Para caracterizar aún más la seguridad y eficacia de HuAB1 en combinación con nivolumab, la fase 1b inscribirá hasta 8 cohortes de ampliación en 6 tipos de cáncer avanzado. La inscripción en la fase 1b comenzará cuando el Comité de Revisión de Cohortes haya identificado una DR basándose en los datos de seguridad general, tolerabilidad, PK, PD.

2.1.3 Período de seguimiento

Los pacientes que interrumpen el tratamiento mientras muestran un beneficio clínico (respuesta completa [RC], respuesta parcial [RP] o enfermedad estable [EE]) por razones distintas a la progresión de la enfermedad deben someterse a seguimiento para evaluaciones tumorales y cualquier EA relacionado con el fármaco del estudio como se especifica a continuación. El período de seguimiento comienza en la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada.

Las visitas de seguimiento incluyen lo siguiente (véase en la sección 6 el programa completo):

Las evaluaciones tumorales continuarán cada 12 (± 2) semanas.

La revisión de EA relacionados con el fármaco del estudio, hasta que estos EA se resuelvan, vuelvan al valor basal o se estabilicen según la evaluación del investigador a cargo del tratamiento. Todos los EA se documentarán durante un mínimo de 100 días después de la última dosis O hasta que se cumpla una cualquiera de las condiciones anteriores. Durante el período de seguimiento, si el paciente se somete a terapia local (por ejemplo, resección, radiación) o se inicia una nueva terapia sistémica, se debe realizar un seguimiento del paciente para la supervivencia cada 3 meses (sección 4.1.4).

2.1.4 Seguimiento de supervivencia

A un paciente que acepta el seguimiento de supervivencia después de retirarse del tratamiento del estudio, suspende el tratamiento con el fármaco del estudio debido a la progresión de la enfermedad o suspende las visitas de seguimiento descritas en la sección 4.1.3, se le realizará un seguimiento cada 3 meses para la supervivencia, o con mayor frecuencia cuando sea necesario. El seguimiento para la supervivencia se puede realizar por teléfono en lugar de una visita obligatoria en persona.

2.1.5 Duración del estudio

Los pacientes que reciben el o los fármacos del estudio pueden continuar mientras experimenten un beneficio clínico según la opinión del investigador o hasta una toxicidad inaceptable o un deterioro sintomático atribuido a la progresión de la enfermedad según lo determine el investigador después de una evaluación integrada de los datos radiográficos, resultados de la biopsia (si están disponibles) y estado clínico o retirada del consentimiento.

2.1.6 Reglas de suspensión

2.1.6.1 Reglas de suspensión para la fase 1a

Si 2 o más pacientes en cualquier nivel de dosis experimentan una DLT dentro del período de evaluación de DLT de 28 días, los investigadores y el patrocinador revisarán los datos y seguirán las pautas de la Tabla 2 (sección 4.1.2.1). Si el aumento de la dosis finaliza debido a DLT, entonces la dosis evaluada por debajo de la que se invocó la regla de suspensión se declarará MTD.

2.1.6.2 Reglas de suspensión para todas las cohortes

El manejo de las toxicidades de grado 4 o 5 relacionadas con el fármaco seguirá las Tablas de Manejo de Eventos Adversos (Apéndice E y F).

El patrocinador analizará estos casos con el Comité de Revisión de Cohortes y los investigadores del estudio, según corresponda, para determinar la inscripción adicional. Los investigadores notificarán a la IRB (siglas en inglés de junta de revisión institucional) todos los casos y decisiones con respecto a la continuación de la inscripción.

2.1.6.3 Reglas de suspensión por deterioro clínico

La evidencia clínica acumulada indica que la aparición de respuestas objetivas a los agentes que activan respuestas inmunitarias antitumorales puede seguir una cinética retardada de semanas o meses, y puede estar precedida por una progresión aparente inicial de la enfermedad con la aparición de nuevas lesiones o algún agrandamiento de las lesiones mientras ciertas lesiones indicadoras están remitiendo ("respuesta mixta"). Por tanto, es razonable permitir que los pacientes que experimenten una progresión aparente sigan recibiendo el tratamiento hasta que se confirme la progresión en la siguiente evaluación por imágenes (sección 5.3.8). Estas consideraciones deben equilibrarse con el juicio clínico sobre si el paciente se está deteriorando clínicamente y es poco probable que reciba algún beneficio del tratamiento continuado.

Se evaluará que dicho deterioro se ha producido después de un evento clínico que, según la opinión del investigador, es atribuible a la progresión de la enfermedad y es poco probable que se revierta con la continuación del tratamiento del estudio y, por lo tanto, indica que el paciente no se está beneficiando del tratamiento del estudio y no puede tratarse añadiendo cuidados de apoyo. La decisión de suspender el tratamiento debe analizarse con el monitor médico del patrocinador o una persona designada por este. Los ejemplos de eventos que pueden, según la opinión del investigador, indicar la ausencia de beneficio clínico incluyen, pero sin limitación, los siguientes:

aumento de la puntuación del Grupo Operativo de Oncología del Este (ECOG, por sus siglas en inglés) de al menos 2 puntos con respecto al valor basal (por ejemplo, de 0 a 2).

Cambios habituales tales como cambios en las actividades y síntomas, incluida la reducción del apetito y/o del sueño, conciencia alterada y aumento de los síntomas relacionados con el dolor debido al cáncer.

Progresión de la enfermedad confirmada por el investigador a cargo del tratamiento.

Cualquier entorno en el que el inicio de una nueva terapia antineoplásica se haya considerado beneficioso para el paciente, incluso en ausencia de tales eventos clínicos documentados.

2.2 Población de estudio

2.2.1 Número planificado de pacientes y centros de estudio

Se estima que el número total de pacientes planificado para este estudio es de 270; aproximadamente 30 pacientes en la parte 1a y 240 pacientes en la parte 1b (aproximadamente 30 pacientes para cada una de las ocho cohortes de fase 1b). Habrá de 65 a 70 centros de estudio que participarán en este estudio. Durante la inscripción de cualquier cohorte de ampliación, si el número observado de respuestas hace que sea poco probable lograr una tasa de respuesta diana para esa indicación (por ejemplo, 10 %), puede suspenderse o terminarse el reclutamiento adicional para esa cohorte.

2.2.2 Criterios de inclusión para todas las cohortes

Para entrar en el estudio, deben cumplirse TODOS los siguientes criterios.

1. Enfermedad medible mediante tomografía computarizada (CT)/imágenes de resonancia magnética (MRI) según los Criterios de evaluación de respuesta en tumores sólidos (RECIST) v1.1 y preferiblemente realizada dentro de los 28 días posteriores a la primera dosis.

2. Los pacientes deben tener al menos 1 sitio del tumor en el que se pueda realizar una biopsia y están dispuestos a someterse a las biopsias recomendadas antes del tratamiento, durante el tratamiento y después de la progresión (excepto para pacientes de la cohorte de glioblastoma); la biopsia posterior a la progresión es opcional para los pacientes de las cohortes de fase 1b. Las biopsias se realizarán de acuerdo con las pautas propias de la institución a cargo del tratamiento en un mínimo de 10 pacientes en cada cohorte de fase 1b.

3. Material tumoral de archivo fijado en formalina e incluido en parafina (FFPE), si está disponible

4. Comprender y firmar un iCf aprobado por la IRB/IEC (junta de revisión institucional/comité ético de la investigación, por sus siglas en inglés) antes de cualquier evaluación específica del estudio

5. Edad 18 años

6. Estado funcional ECOG de 0 o 1

7. Dispuesto y capaz de cumplir con todos los procedimientos del estudio

8. La radioterapia focal previa debe finalizarse al menos 2 semanas antes de la administración de la primera dosis del fármaco del estudio. Sin radiofármacos (estroncio, samario) en las 8 semanas anteriores a la administración del fármaco del estudio.

9. La cirugía previa que requiere anestesia general debe finalizarse al menos 2 semanas antes de la administración del fármaco del estudio. La cirugía que requiera anestesia local/epidural debe finalizarse al menos 72 horas antes de la administración del fármaco del estudio y los pacientes deben haberse recuperado.

10. Los valores de laboratorio para la selección deben cumplir los siguientes criterios:

Hematológico

a. Glóbulos blancos (WBC) 2000 células/pl

b. Neutrófilos 1500 células/pl

c. Plaquetas 100 x 103/pl

d. Hemoglobina 9,0 g/dl

Creatinina sérica < 1,5 x LSN o aclaramiento de creatinina de 40 ml/minuto (usando la fórmula de Cockcroft/Gault)

CrCl en muj ^{(140 - edad en años) x (peso en kg) x 0,85}eres = 72 x (creatinina sérica en m g/dl)

CrCl en hombres =^{(140 - edad en años) x (peso en kg)}

72 x (creatinina sérica en m g/dl)

1,5 x LSN y PTT (aPTT) < 1,5 x LSN

Hepático

a. AST o ALT < 3 x LSN sin y < 5 x LSN con metástasis hepática

b. Bilirrubina < 1,5 x LSN (excepto pacientes con síndrome de Gilbert, que deben tener bilirrubina total <3 mg/dl)

11. Las mujeres en edad fértil (WOCBP) deben tener una p-gonadotropina coriónica humana (p-hCG) sérica negativa en el momento de la selección y aceptar utilizar un método anticonceptivo fiable (por ejemplo, anticonceptivos orales, un dispositivo intrauterino o un método de doble barrera de condón y espermicida) durante al menos 28 días antes de la primera dosis de cualquier fármaco del estudio durante el período de tratamiento (y tratamiento/seguimiento si recibe el fármaco del estudio), y durante al menos 23 semanas después de la última dosis de cualquier fármaco del estudio. Se seguirán los requisitos específicos del país (por ejemplo, en el Reino Unido, las mujeres en edad fértil y los pacientes varones y sus parejas en edad fértil deben utilizar dos métodos anticonceptivos, uno de los cuales debe ser un método de barrera, a lo largo de la duración del estudio).

12. Los hombres sexualmente activos con WOCBP deben estar de acuerdo en seguir las instrucciones del o de los métodos anticonceptivos a lo largo de la duración del tratamiento con el fármaco del estudio más las 31 semanas posteriores a la finalización del tratamiento.

2.2.3 Criterios de exclusión de todas las cohortes

Los pacientes que cumplan con CUALQUIERA de los siguientes criterios serán excluidos de la entrada en el estudio.

1. Trastornos musculares clínicamente significativos o historia de estos (por ejemplo, miositis), lesión muscular reciente no resuelta o cualquier afección conocida que eleve los niveles séricos de Ck

2. Las dosis inmunosupresoras de medicaciones sistémicas, tales como esteroides o esteroides tópicos absorbidos (dosis > 10 mg/día de prednisona o equivalente diario) deben suspenderse al menos 2 semanas antes de la administración del fármaco del estudio, excepto en el caso del tratamiento con EA relacionados con el tumor. Se permiten pacientes con una afección que requiera tratamiento sistémico crónico con corticosteroides (esteroides inhalados o tópicos y dosis de esteroides de reemplazo suprarrenal > 10 mg/día de equivalente de prednisona) u otras medicaciones inmunosupresoras dentro de las 2 semanas de tratamiento, en ausencia de enfermedad autoinmunitaria activa.

3. Disminución de la función cardíaca con NYHA > clase 2

4. Trastorno cardíaco incontrolado o significativo tal como angina inestable

5. Anomalías significativas en el ECG en la selección. QTcF > 450 ms para hombres o > 470 ms para mujeres en la selección

6. Historia de anticuerpos antifármaco, reacción alérgica grave, anafiláctica u otra reacción relacionada con la infusión a un agente biológico previo

7. Historia conocida de sensibilidad a las infusiones que contienen Tween 20 (polisorbato 20) y polisorbato 80 8. Consumo regular de leche no pasteurizada o riesgo significativo conocido de exposición a infecciones intracelulares oportunistas tales como la listeria u otros patógenos similares

9. Terapias con vacunas no oncológicas para la prevención de enfermedades infecciosas (por ejemplo, vacuna contra el VPH) dentro de las 4 semanas posteriores a la administración del fármaco del estudio. La vacuna inactivada contra la gripe estacional se puede administrar a los sujetos antes del tratamiento y durante la terapia sin restricciones. Las vacunas contra la gripe que contienen virus vivos u otras vacunas indicadas clínicamente para enfermedades infecciosas (es decir, pneumovax, varicela, etc.) pueden estar permitidas; pero debe discutirse con el monitor médico del patrocinador y puede requerir un período de lavado del fármaco del estudio antes y después de la administración de la vacuna.

10. Infección actual sin resolver o historia de infección crónica, activa, clínicamente significativa (viral, bacteriana, fúngica o de otro tipo) que, en opinión del investigador, impediría que el paciente se exponga a un agente biológico o suponga un riesgo para la seguridad del paciente

11. Prueba positiva para tuberculosis latente (TB) en la selección (prueba de Quantiferon) o evidencia de TB activa 12. Falta de acceso venoso periférico o cualquier afección que pudiera interferir con la administración de fármacos o la recogida de muestras del estudio

13. Cualquier afección médica no controlada o trastorno psiquiátrico que, en opinión del investigador, plantearía un riesgo para la seguridad del paciente o interferiría con la participación en el estudio o la interpretación de los resultados de los pacientes individuales

14. Uso concomitante de estatinas durante el estudio. Sin embargo, puede permitirse la inscripción de un paciente que usa estatinas durante más de 3 meses antes de la administración del fármaco del estudio y en estado estable sin aumento de CK

15. Embarazo o lactancia

16. Enfermedad autoinmunitaria activa conocida o sospechada. Se permite la inscripción de pacientes con diabetes mellitus tipo I, hipotiroidismo que solo requiere reemplazo hormonal, trastornos de la piel (tales como vitíligo, psoriasis o alopecia) que no requieran tratamiento sistémico, o con afecciones que no se espera que reaparezcan en ausencia de un desencadenante externo.

17. Participación en otro ensayo de fármaco en investigación dentro de los 28 días previos a la administración de la primera dosis del fármaco del estudio, o mientras esté en este estudio

18. Historia conocida de pruebas positivas para el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) 1 y 2 o síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) conocido

19. Prueba positiva para el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg) o el ácido ribonucleico detectable del virus de la hepatitis C (ARN del VHC) que indica una infección aguda o crónica

20. Enfermedad pulmonar intersticial sintomática o neumonitis inflamatoria

21. Metástasis no tratadas o activas del sistema nervioso central (SNC) o leptomeníngeas. Los pacientes son elegibles si se han tratado las metástasis y los pacientes vuelven neurológicamente a los valores basales (excepto por signos o síntomas residuales relacionados con el tratamiento del SNC) durante al menos 2 semanas antes de la primera dosis de administración del fármaco del estudio

22. Evidencia de cirrosis hepática, confirmada por elevaciones de la fosfatasa alcalina y un índice ALT/AST elevado concomitantemente e hipoalbuminemia (< 3,0 g/dl)

23. Evidencia de coagulopatía o diátesis hemorrágica

24. Cualquier enfermedad inflamatoria GI no controlada, incluida la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa. 25. Exposición previa a cualquier inhibidor de la ruta de CSF1R

26. Transfusión finalizada dentro de las 72 horas previas a la primera dosis de administración del fármaco del estudio

2.2.4 Criterios adicionales de inclusión y exclusión para cohortes seleccionadas

2.2.4.1 Fase 1a

2.2.4.1.1 Cohortes de monoterapia con HuAB1

Inclusión:

1. Tumor sólido confirmado histológicamente o citológicamente que es localmente recurrente o metastásico y ha progresado después del tratamiento estándar o no es apropiado para el tratamiento estándar

2.2.4.1.2 Cohortes de combinación de HuAB1 nivolumab

Inclusión:

1. Tumor sólido confirmado histológicamente o ecológicamente que es localmente recurrente o metastásico y ha progresado después del tratamiento estándar o no es apropiado para el tratamiento estándar

Exclusión

1. Exposición previa a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1

2.2.4.2 Fase 1b

2.2.4.2.1 Cohorte 1b1: NSCLC, (sin terapia anti-PD-1 previa, segunda o tercera línea)

Inclusión:

1. Pacientes con NSCLC escamoso o no escamoso documentado histológicamente o citológicamente que presentan enfermedad en estadio IIIB o IV (según la versión 7 del manual de la Asociación Internacional para el Estudio de la Estadificación del Cáncer de Pulmón en Oncología Torácica) y con la enfermedad recurrente o progresiva después de una terapia multimodal (radioterapia, resección quirúrgica o quimiorradiación definitiva) para enfermedad localmente avanzada o metastásica

2. Progresión o recurrencia de la enfermedad durante/después de un régimen de quimioterapia basada en doblete de platino para la enfermedad avanzada o metastásica.

• La terapia de mantenimiento después de la quimioterapia basada en doblete de platino no se considera un régimen de terapia separado.

• Son elegibles los sujetos que recibieron quimiorradioterapia adyuvante, neoadyuvante o definitiva que contiene platino administrada para la enfermedad localmente avanzada y la enfermedad recurrente desarrollada (local o metastásica) dentro de los 6 meses posteriores a la finalización de la terapia.

• Son elegibles los sujetos con enfermedad recurrente > 6 meses después de la quimiorradioterapia adyuvante, neoadyuvante o definitiva que contiene platino administrada para la enfermedad localmente avanzada, que también progresó posteriormente durante o después de un régimen basado en doblete de platino administrado para tratar la recurrencia.

Exclusión:

1. Exposición previa a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1

2.2.4.2.2 Cohorte 1b2: NSCLC (refractario a fármacos dirigidos contra PD-1)

Inclusión

1. Pacientes con NSCLC documentado histológicamente o citológicamente que presentan enfermedad en estadio IIIB localmente avanzado o estadio IV.

2. El paciente tiene evidencia radiológica de progresión de la enfermedad durante el tratamiento con un fármaco dirigido a la ruta de PD-1 que no produjo una respuesta clínica (es decir, ni RC ni RP) y con enfermedad progresiva como la mejor respuesta.

3. Para ser considerados refractarios, los pacientes no deberían haber tenido respuesta clínica después de recibir al menos 2 dosis de cualquier fármaco dirigido a PD-1

Exclusión

1. Intolerancia a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1.

La intolerancia se define como cualquier EA de grado 4 relacionado con el tratamiento, o cualquier EA de grado 2 o 3 relacionado con el tratamiento que sea inaceptable para el paciente y persista a pesar de las contramedidas estándar.

2.2.4.2.3 Melanoma de cohorte 1b3 (sin terapia previa contra PD-1)

Inclusión

1. Pacientes con melanoma en estadio III o IV documentado histológicamente o citológicamente según el sistema de estadificación del Comité Conjunto Estadounidense sobre el Cáncer (AJCC), que son refractarios a, intolerantes o se han negado a la terapia estándar para el tratamiento del melanoma metastásico.

2. Evidencia objetiva de progresión de la enfermedad (clínica o radiológica) durante o después de al menos 1 inhibidor de BRAf (si el paciente es positivo para la mutación BRAF V600)

3. BRAF de tipo silvestre conocido según las pruebas de estado mutacional V600 regionalmente aceptables Exclusión

1. Terapia previa con cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1.

2. No pueden participar en este estudio los sujetos con mutaciones de BRAF y los que tienen un estado de BRAF indeterminado o desconocido

2.2.4.2.4 Cohorte 1b4: Melanoma (refractario o en recidiva con el fármaco dirigido anti-PD-1)

Inclusión:

1. Pacientes con melanoma no resecable en estadio III o IV documentado histológicamente o citológicamente según el sistema de estadificación del AJCC

2. El paciente tiene evidencia radiológica de progresión de la enfermedad durante el tratamiento con un inhibidor de punto de control o un fármaco dirigido a PD-1 que no produjo un beneficio clínico (sin RC, RP o EE) y enfermedad progresiva como la mejor respuesta o progresión de la enfermedad después del beneficio clínico inicial de la RC, PR o EE mientras recibe tratamiento con un fármaco dirigido a PD-1

3. Para ser considerados refractarios, los pacientes no deben haber tenido respuesta después de recibir al menos 2 dosis de cualquier fármaco dirigido a PD-1

4. Evidencia objetiva de progresión de la enfermedad (clínica o radiológica) durante o después de al menos 1 inhibidor de BRAf (si el paciente es positivo para la mutación BRAF V600)

5. La terapia anticancerosa anterior, incluida la dacarbazina, inhibidor de BRAF (si el paciente es positivo para la mutación BRAF V600) y/o ipilimumab y la radioterapia paliativa deben haberse finalizado al menos 3 semanas antes de la administración del fármaco del estudio

6. Sin tratamiento previo con el fármaco dirigido a PD-1 en las 6 semanas previas a la primera dosis del fármaco del estudio

Exclusión:

1. No pueden participar en este estudio los sujetos con mutaciones de BRAF y los que tienen un estado BRAF indeterminado o desconocido

2. Melanoma ocular.

3. Intolerancia previa a cualquier fármaco dirigido a PD-1

La intolerancia se define como cualquier EA de grado 4 relacionado con el tratamiento, o cualquier EA de grado 2 o 3 relacionado con el tratamiento que sea inaceptable para el paciente y persista a pesar de las contramedidas estándar. La razón de la intolerancia debe estar completamente documentada.

2.2.4.2.5 Cohorte 1b5: Carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (SCCHN) (segunda línea)

Inclusión:

1. Pacientes con SCCHN recurrente o metastásico documentado histológicamente o citológicamente (cavidad oral, faringe, laringe), en estadio III o IV y no susceptible de terapia local con intención curativa (cirugía o radioterapia con o sin quimioterapia)

2. Progresión o recurrencia en los 6 meses posteriores a la última dosis de terapia con platino en escenarios adyuvante (es decir, con radiación después de la cirugía), primario (es decir, con radiación), recurrente o metastásico. La progresión clínica después de la terapia con platino es un evento admisible para la entrada y se define como la progresión de una lesión de al menos 10 mm de tamaño que se puede medir con un calibre (por ejemplo, lesión cutánea superficial según RECIST v1.1) o una lesión que se ha visualizado y registrado fotográficamente con mediciones y se muestra que ha progresado.

Exclusión:

1. Carcinoma en recidiva o metastásico confirmado histológicamente de nasofaringe y cualquier glándula salival o histología no escamosa

2. Exposición previa a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1

2.2.4.2.6 Cohorte 1b6: Cáncer de páncreas (segunda línea)

Inclusión:

1. Adenocarcinoma de páncreas localizado o metastásico documentado histológicamente o citológicamente, que no ha respondido a (o los pacientes no están indicados para) la terapia estándar

2. Pacientes que pueden haber sido sometidos a cirugía previa y radioterapia para el tratamiento de un adenocarcinoma de páncreas localmente avanzado o metastásico siempre que se haya documentado la progresión de la enfermedad. Todas las toxicidades deben resolverse y la última fracción del tratamiento con radiación se finalizó al menos 4 semanas antes de la primera administración del fármaco de estudio Exclusión:

1. Pacientes con neoplasias de células de los islotes, tumores neuroendocrinos u otros tumores primarios en el páncreas

2. Pacientes con pancreatitis activa

3. Exposición previa a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1

4. Ascitis de grado 2 o superior

2.2.4.2.7 Cohorte 1b7: Cáncer colorrectal (tercera línea)

Inclusión:

1. Adenocarcinoma de colon o recto documentado histológicamente o citológicamente

2. CRC metastásico con progresión de la enfermedad documentada después de la última administración de terapias estándar o intolerancia a las terapias estándar (y las terapias aprobadas debían incluir una fluoropirimidina, oxaliplatino, irinotecán, bevacizumab y si KRAS es de tipo silvestre, cetuximab o panitumumab).

Exclusión:

1. Exposición previa a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1

2.2.4.2.8 Cohorte 1b8: Glioma maligno (primera recurrencia)

Inclusión:

1. Glioma (glioblastoma o gliosarcoma) maligno avanzado de grado IV documentado histológicamente o citológicamente según la Organización Mundial de la Salud (OMS)

2. Tratamiento previo con cirugía, radioterapia y temozolomida

3. Primera recurrencia documentada de GBM mediante biopsia de diagnóstico o MRI con contraste realizada dentro de los 21 días posteriores a la administración del primer fármaco del estudio según los criterios de la evaluación de respuesta en neurooncología (RANO)

4. Si toma esteroides, la dosis debe ser estable o haberse disminuido durante un mínimo de 5 días antes de la resonancia magnética inicial

Exclusión:

1. Tratamiento previo con bevacizumab u otro agente dirigido a VEGF o VEGFR

2. Evidencia reciente de más de una hemorragia del SNC de grado 1 en la exploración MRI basal

3. Historia o evidencia en el examen fisiológico/neurológico de enfermedad del SNC (por ejemplo, convulsiones) no relacionada con el cáncer a menos que se controle adecuadamente con medicación o interfiera potencialmente con el tratamiento del estudio

4. Pacientes que no pueden someterse a una MRI con contraste en la cabeza debido a una afección médica preexistente que incluye un marcapasos o un dispositivo desfibrilador cardioversor implantable (ICD)

5. Más de 1 recurrencia de glioblastoma o gliosarcoma

6. Exposición previa a cualquier fármaco dirigido a la ruta de PD-1

2.3 Medicaciones concomitantes

Se registrarán todas las medicaciones tomadas dentro de los 28 días previos a la administración de la primera dosis de cualquier fármaco del estudio y toda la terapia concomitante administrada durante el estudio hasta 100 días después de la última dosis de cualquier fármaco del estudio.

Se recopilará la información sobre todos los tratamientos previos indicados para el cáncer avanzado, incluyendo quimioterapia, bioquimioterapia, inmunoterapia, radiación, cirugía, terapia biológica y experimental.

No se recopilará información sobre la medicación concomitante después de la interrupción del estudio por parte del paciente, excepto por el uso de medicación concomitante asociado con EA relacionados con el fármaco del estudio o EA que conduzcan a la interrupción del estudio.

2.3.1 Tratamientos prohibidos y/o restringidos

Las siguientes medicaciones están prohibidas durante el estudio (a menos que se utilicen para tratar un EA relacionado con el fármaco o se especifiquen en la sección de elegibilidad):

agentes inmunosupresores

dosis inmunosupresoras de corticosteroides sistémicos. Los esteroides inhalados o tópicos y dosis de esteroides suprarrenales de reemplazo > 10 mg diarios de equivalente de prednisona están permitidos en ausencia de una enfermedad autoinmunitaria activa. Los esteroides también están permitidos para tratar EA relacionados con tumores cuando esté clínicamente indicado.

Vacunas excepto como se indica en la sección 4.3.2

Estatinas para el tratamiento de la hipercolesterolemia. Se permitirán estatinas solo si el paciente está en una dosis estable durante más de 3 meses antes del estudio y se encuentra en un estado estable sin elevaciones de CK Otras terapias, incluidas las biológicas, inmunoterapia, radioterapia no paliativa extensa, tratamientos estándar o agentes o dispositivos en investigación

2.3.2 Terapia permitida

Los pacientes pueden utilizar corticosteroides tópicos, oculares, intraarticulares, intranasales e inhalados (con una absorción sistémica mínima). Se permiten dosis de esteroides de reemplazo suprarrenal > 10 mg diarios de prednisona. Se permite un ciclo breve (menor de 3 semanas) de corticosteroides para la profilaxis (por ejemplo, alergia al tinte de contraste) o para el tratamiento de afecciones no autoinmunitarias (por ejemplo, reacción de hipersensibilidad de tipo retardado causada por un alérgeno de contacto) y también para el tratamiento de EA relacionados con tumores.

Se permiten los cuidados paliativos y de apoyo concomitantes para los síntomas relacionados con la enfermedad (incluidos los bisfosfonatos y los inhibidores de RANK-L) si se inician antes de la administración de la primera dosis del fármaco del estudio. Se permiten transfusiones cuando sea necesario.

La vacuna inactivada contra la gripe estacional se puede administrar a los sujetos mientras estén en terapia sin restricciones. Las vacunas contra la gripe que contienen virus vivos u otras vacunas indicadas clínicamente para enfermedades infecciosas (es decir, pneumovax, varicela, etc.) pueden estar permitidas; pero debe discutirse con el monitor médico del patrocinador y puede requerir un período de lavado del fármaco del estudio antes y después de la administración de la vacuna.

Se permitirá el uso concomitante de estatinas solo si el paciente está en una dosis estable durante más de 3 meses antes del estudio y se encuentra en un estado estable sin elevaciones de CK.

No se administrará premedicación de rutina para las dosis iniciales de HuAB1 y nivolumab. Si un paciente presenta náuseas, vómitos u otros EA relacionados con la infusión, el paciente puede ser premedicado con antieméticos, esteroides o antihistamínicos antes de las infusiones posteriores de los fármacos del estudio a criterio del investigador. El tratamiento se administrará de acuerdo con la práctica estándar de la institución y debe registrarse en el CRF del paciente.

2.4 Interrupción por parte de los pacientes después de cualquier tratamiento con el fármaco del estudio

Los pacientes DEBEN suspender los fármacos del estudio por cualquiera de las siguientes razones:

retirada del consentimiento informado (decisión del paciente de retirarse por cualquier motivo)

Cualquier EA clínicamente significativo, resultados anormales de las pruebas de laboratorio o enfermedad intercurrente que, en opinión del investigador, indica que la continuación de la participación en el estudio no es lo mejor para el paciente

Pacientes que deben tener medicamentos concomitantes prohibidos

Embarazo

Terminación del estudio por parte del patrocinador

Pérdida de la capacidad de dar su consentimiento libremente por reclusión o encierro involuntario para el tratamiento de una enfermedad psiquiátrica o física (por ejemplo, una enfermedad infecciosa)

Progresión documentada de la enfermedad o deterioro clínico mientras se recibe la terapia activa del estudio Incumplimiento por parte del paciente

Todos los pacientes que interrumpan el tratamiento del estudio deben cumplir los procedimientos de seguimiento especificados en el protocolo, como se describe en la sección 6. La única excepción a este requisito es cuando un paciente retira su consentimiento para todos los procedimientos del estudio o pierde la capacidad de dar su consentimiento libremente (es decir, está recluido o encerrado involuntariamente para el tratamiento de una enfermedad psiquiátrica o física).

Si se retira a un paciente antes de completar el estudio, el motivo de la retirada debe introducirse en el CRF correspondiente. Se documentará la fecha y el motivo del cese de HuAB1 y/o nivolumab, y el investigador debe hacer todo lo posible para realizar los procedimientos de visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada. Se realizará un seguimiento de los pacientes durante 100 días después de la última dosis de HuAB1 por motivos de seguridad y se realizará un seguimiento de aquellos con EAG en curso hasta la resolución o estabilización.

2.5 Seguimiento después del tratamiento

Se deben obtener exploraciones tumorales de seguimiento de los pacientes que interrumpen el tratamiento mientras aún tienen un beneficio clínico (es decir, RC, RP o EE) por protocolo para determinar la duración de la respuesta, a menos que se retire el consentimiento.

3 FÁRMACOS DEL ESTUDIO

En el presente estudio, los dos fármacos del estudio, HuAB1 y nivolumab, se consideran productos [medicinales] en investigación (IP/IMP). Las descripciones de productos para HuAB1 y nivolumab se describen en la Tabla 3 y la Tabla 4:

T l - F rm i r h r m n r i f 1

Tabla 4 - Fármacos del estudio para las cohortes de aumento escalonado de la dosis de combinación de fase 1a ex ansión de la dosis de fase 1b

3.1 Productos en investigación

Un producto en investigación, también conocido como producto medicinal en investigación en algunas regiones, se define como una forma farmacéutica de una sustancia activa o placebo que se está probando o se utiliza como referencia en un estudio clínico, incluidos los productos que ya cuentan con una autorización de comercialización pero que se han utilizado o acondicionado (formulado o envasado) de forma diferente a la forma autorizada, o se han utilizado para una indicación no autorizada, o cuando se utilizan para obtener más información sobre la forma autorizada. En este protocolo, los productos en investigación son HuAB1 y nivolumab.

3.2 Dosificación y modificación de la dosis del fármaco del estudio

3.2.1 Dosificación

Para la terapia de combinación, nivolumab siempre debe administrarse primero como una infusión IV de 30 minutos, con un descanso de 30 minutos entre 2 infusiones, seguido de una infusión de 30 minutos de HuAB1. Los pacientes no pueden recibir una dosis antes de que hayan transcurrido 12 días desde la dosis anterior.

Para la cohorte de monoterapia de 4 mg/kg (1aM2) y las cohortes de aumento escalonado de la dosis de combinación 1aC2 y 1aC3, el intervalo de dosis entre el primer y el segundo paciente de cada cohorte debe ser de al menos 24 horas para la vigilancia de la seguridad.

Los cálculos de dosificación deben basarse en el peso corporal evaluado en el día 1 del ciclo 1 antes de la primera dosis de administración del fármaco del estudio. No es necesario volver a calcular las dosis posteriores si el peso del paciente está dentro del 10 % del peso utilizado para calcular la dosis anterior. Todas las dosis deben redondearse al miligramo más cercano.

Se debe vigilar cuidadosamente a los pacientes para detectar reacciones a la infusión durante la administración del fármaco del estudio. Si se observa una reacción aguda a la infusión, los pacientes deben tratarse de acuerdo con las pautas de la sección 5.3.10 y los apéndices E y F.

Las dosis de los fármacos del estudio se pueden interrumpir, retrasar o detener dependiendo de cómo tolera el tratamiento el paciente.

Todos los viales son para un solo uso. En el manual de farmacia se proporcionarán más instrucciones sobre la preparación y administración del fármaco del estudio.

3.2.1.1 Dosificación de nivolumab

Los pacientes en cohortes con terapia de combinación recibirán primero la infusión de nivolumab a una dosis de 3 mg/kg como una infusión IV de 30 minutos, el día 1 de cada ciclo de tratamiento de 14 días.

No se permitirán aumentos escalonados o reducciones de dosis de nivolumab. Los pacientes no pueden recibir una dosis antes de que hayan transcurrido 12 días desde la dosis anterior. No se recomiendan medicaciones previas para nivolumab en el primer ciclo. Véanse las instrucciones de preparación y manipulación en el IB de nivolumab.

3.2.1.2 Dosificación de HuABI

Para los pacientes de las cohortes de terapia de combinación, la infusión de HuAB1 se administrará 30 minutos después del final de la infusión de nivolumab como una infusión IV de 30 minutos, el día 1 de cada ciclo de tratamiento de 14 días. Para los pacientes de las cohortes de monoterapia, la infusión de HuAB1 se puede iniciar en cualquier momento como una infusión IV de 30 minutos el día 1 de cada ciclo de tratamiento de 14 días.

La dosificación de HuAB1 puede modificarse en función de las toxicidades observadas durante el período de tratamiento. En caso necesario, la dosis se ajustará según la tabla de modificación de la toxicidad (apéndices E y F). Un farmacéutico de investigación (u otro personal responsable) preparará la solución para su administración. Después de calcular el número de viales, basándose en el peso del paciente, el fármaco del estudio se diluirá con una inyección de cloruro de sodio al 0,9 %, USP. El HuAB1 preparado debe administrarse dentro de las 6 horas posteriores a la preparación (temperatura ambiente). La configuración de administración IV para la infusión de HuAB1 debe contener un filtro en línea de 0,22 pm o un filtro de jeringa de 0,22 pm. HuAB1 se administrará bajo supervisión médica como una infusión IV de 30 minutos (± 5 minutos) a través de una vena periférica o un catéter venoso central. No se han observado incompatibilidades entre la infusión de HuAB1 y el poli(cloruro de vinilo) (PVC), los componentes intravenosos de etileno/propileno o los frascos de vidrio.

3.2.2 Retraso de dosis para HuABI y nivolumab

La administración de HuAB1 en monoterapia o HuAB1/nivolumab en terapia de combinación debe retrasarse en los siguientes casos:

cualquier fatiga de grado 3 que no se resuelva a grado 1 o al estado basal antes de la siguiente visita de tratamiento Cualquier anomalía de laboratorio de grado 2 o 3 relacionada con el fármaco no requeriría un retraso en la dosis a menos que esté clínicamente indicado o especificado en el protocolo o en la tabla de manejo de eventos adversos. Hable con el monitor médico del patrocinador o la persona designada por este cuando sea necesario. Para conocer los retrasos en la dosis o las modificaciones para todos los demás EA, consulte las tablas de manejo de EA en el apéndice E.

los pacientes que requieran un retraso en la dosis de HuAB1 o HuAB1 nivolumab deben reevaluarse semanalmente o con mayor frecuencia si está clínicamente indicado y reanudar la dosificación del fármaco del estudio cuando se cumplan los criterios de repetición del tratamiento.

Si un paciente experimenta una reacción a la infusión de HuAB1, nivolumab o ambos fármacos del estudio, la reacción a la infusión debe tratarse siguiendo las pautas de tratamiento de la reacción a la infusión de la sección 5.3.10 y el apéndice E y F.

3.2.3 Criterios para reanudar el tratamiento con HuAB1 y nivolumab

Los pacientes pueden reanudar el tratamiento con HuAB1 o HuAB1 nivolumab cuando el o los EA relacionados con el fármaco se resuelvan a grado < 1 o al estado basal, como se indica en las tablas de manejo de EA en los apéndices E y F.

3.2.4 Reducción de la dosis de HuAB1

Se pueden permitir reducciones de la dosis de HuABI para pacientes en tratamiento prolongado más allá del período de DLT en la fase 1a o para cualquier paciente en la fase 1b según las pautas en las tablas de manejo de EA correspondientes en los apéndices E y F. Si el investigador está considerando reducciones de dosis o interrupciones que no están dentro de estas pautas, requerirán discusión y aprobación por parte del patrocinador o la persona designada por este.

3.2.5 Criterios de interrupción de la dosis de HuABI y nivolumab

El tratamiento de HuAB1 en monoterapia o HuAB1 en combinación con nivolumab debe suspenderse permanentemente en los siguientes casos:

cualquier uveítis de grado 2 relacionada con el fármaco, dolor ocular o visión borrosa que no responde a la terapia tópica y no mejora a grado 1 en el segundo período de repetición del tratamiento O que requiere tratamiento sistémico

Cualquier reacción e hipersensibilidad relacionada con la infusión de grado 3 o superior que requiera la interrupción y reinicio de la terapia requerirá una consulta con el monitor médico del patrocinador o la persona designada por este.

Cualquier EA relacionado con el fármaco, no cutáneo, de grado 3 que dure > 7 días, incluida la uveítis relacionada con el fármaco, neumonitis, hipoxia, broncoespasmo y endocrinopatías con las siguientes excepciones:

las endocrinopatías de grado 3 relacionadas con el fármaco adecuadamente controladas únicamente con reemplazo hormonal fisiológico no requieren la interrupción

Las anomalías de laboratorio de grado 3 relacionadas con el fármaco no requieren la interrupción del tratamiento excepto:

la trombocitopenia relacionada con el fármaco de grado 3 de > 7 días de duración o asociada con una hemorragia de grado > 2 requiere la interrupción. Cualquier anomalía en la prueba de función hepática (LFT) relacionada con el fármaco que cumpla los siguientes criterios requiere la interrupción:

AST o ALT 10 x LSN

Bilirrubina total > 3 x LSN (> 5 x LSN con metástasis hepáticas concurrentes)

AST o ALT > 3 x LSN Y bilirrubina total > 2 x LSN, en ausencia de un aumento concurrente de fosfatasa alcalina Cualquier anomalía de laboratorio o EA de grado 4 relacionado con el fármaco, excepto los siguientes eventos que no requieren interrupción:

Neutropenia de grado 4 □ 7 días

Linfopenia o leucopenia de grado 4 □ 7 días

Anomalías aisladas de amilasa o lipasa de grado 4 que no están asociadas con síntomas o manifestaciones clínicas de pancreatitis. Se debe consultar al monitor médico del patrocinador en caso de anomalías en la amilasa o lipasa de grado 4.

Desequilibrios/anomalías electrolíticas aisladas de grado 4 que no están asociadas con secuelas clínicas y que se corrigen con suplementos/manejo apropiado dentro de las 72 horas posteriores a su aparición Los EA de endocrinopatía de grado 4 relacionada con el fármaco, tal como insuficiencia suprarrenal, deficiencia de hormona adrenocorticotrópica (ACTH), hiper- o hipotiroidismo, o intolerancia a la glucosa, que se resuelven o se controlan adecuadamente con un reemplazo hormonal fisiológico (corticosteroides, hormonas tiroideas) o agentes de control de la glucosa, respectivamente, pueden no requerir la interrupción después de la consulta y aprobación por parte del monitor médico del patrocinador.

Cualquier evento que lleve a un retraso en la dosificación que dure > 6 semanas desde la dosis anterior requiere la interrupción, con las siguientes excepciones:

se permiten retrasos en la dosificación para permitir una disminución progresiva y prolongada en el tiempo de los esteroides para controlar los eventos adversos relacionados con el fármaco. Antes de reiniciar el tratamiento en un paciente con un retraso en la dosificación > 6 semanas de duración desde la dosis anterior, se debe consultar al monitor médico del patrocinador. Las evaluaciones de los tumores deben continuar según el protocolo aunque se retrase la dosificación. Las visitas periódicas del estudio para evaluar la seguridad y los estudios de laboratorio también deben continuar según el protocolo, o con más frecuencia si está clínicamente indicado durante dichos retrasos en la dosificación o según el criterio del investigador

Pueden permitirse retrasos en la dosificación > 6 semanas de duración desde la dosis anterior que se producen por razones no relacionadas con el fármaco si lo aprueba el monitor médico del patrocinador. Antes de reiniciar el tratamiento en un paciente con un retraso en la dosificación > 6 semanas de duración, se debe consultar al monitor médico del patrocinador. Las evaluaciones tumorales deben continuar según el protocolo cada 8 semanas aunque se retrase la dosificación. Las visitas periódicas del estudio para evaluar la seguridad y los estudios de laboratorio también deben continuar según el protocolo, o con más frecuencia si está clínicamente indicado durante dichos retrasos en la dosificación o según el criterio del investigador.

Cualquier EA, anomalía de laboratorio o enfermedad intercurrente que, a juicio del investigador, presente un riesgo clínico sustancial para el paciente al continuar la dosificación de HuAB1 y/o nivolumab

Cualquier toxicidad neurológica de grado 3 o superior

Cualquier edema periorbitario de grado 3 o superior y edema periorbitario de grado 2 persistente que requiera 2 dosis omitidas a menos que lo apruebe el monitor médico del patrocinador

Cualquier diarrea o colitis relacionada con el fármaco de grado 3 o superior que interfiera con las actividades de la vida diaria.

Cualquier toxicidad cutánea de grado 3 o 4

Cualquier uveítis de grado 3 o superior

Si se confirma que la causalidad del evento adverso que requiere la interrupción se debe a uno de los fármacos del estudio en la terapia de combinación, puede seguir administrándose el otro fármaco según el programa del protocolo en los siguientes escenarios:

resolución oportuna del evento adverso según la tabla de modificación del tratamiento

El sujeto muestra un beneficio clínico según la evaluación del investigador

3.2.6 Retrasos en la infusión y dosis om itidas con H u A B I y n ivolum ab

En el caso de que no se pueda administrar una infusión en una visita programada, debe administrarse lo antes posible. Si el retraso es de entre 1 y 3 días, se deben realizar los procedimientos de la visita programada original. Si el retraso es de más de 3 días, se deben realizar los procedimientos en la siguiente visita, y las visitas posteriores se reajustarán para seguir un intervalo de dosificación de 2 semanas (la infusión en la visita programada original se considerará una dosis omitida). El tiempo entre dos ciclos de tratamiento no debe ser inferior a 12 días.

Los pacientes pueden omitir hasta 2 dosis consecutivas (hasta 6 semanas entre dosis) y pueden reanudar el tratamiento con el fármaco del estudio si el evento vuelve al valor basal o < grado 1 dentro de las 6 semanas posteriores a la interrupción del tratamiento. La omisión de una dosificación adicional durante más de 6 semanas para los EA requerirá la interrupción del estudio por parte del paciente, a menos que el patrocinador lo permita. Los pacientes pueden omitir dosis en el transcurso de su participación en el estudio, incluidas las dosis omitidas por vacaciones programadas u otras razones personales cuando sea necesario, pero no más de 2 dosis secuencialmente a menos que lo apruebe el monitor médico del patrocinador.

3.2.7 A um ento escalonado de la dosis in trapaciente con H uAB1 y n ivolum ab

No se permite el aumento escalonado de la dosis intrapaciente de nivolumab o HuABI.

3.2.8 Tratam iento con H uAB1 y N ivolum ab después de la progresión de la enferm edad

La evidencia acumulada indica que una minoría de pacientes tratados con inmunoterapia pueden obtener un beneficio clínico a pesar de la evidencia inicial de enfermedad progresiva (Wolchok, 2009)

A los pacientes tratados con HuABI y nivolumab se les permitirá continuar el tratamiento con HuABI y nivolumab después de la enfermedad progresiva inicial definida por RECIST v1.1, con evaluación por parte del investigador, siempre que se cumplan los siguientes criterios:

los pacientes que serán tratados después de la progresión de la enfermedad deben revisar y firmar un ICF antes de continuar con el fármaco del estudio. Beneficio clínico evaluado por el investigador y sin presentar una progresión rápida de la enfermedad

Tolerancia a los fármacos del estudio

Estado funcional estable

El tratamiento después de la progresión no retrasará una intervención inminente para prevenir complicaciones graves de la progresión de la enfermedad (por ejemplo, metástasis en el SNC)

Se debe realizar una evaluación/exploración radiográfica aproximadamente 8 semanas después de la progresión inicial evaluada por el investigador para determinar si ha habido una disminución en el tamaño del tumor o ha continuado la progresión de la enfermedad.

La evaluación del beneficio clínico debe equilibrarse con el juicio clínico sobre si el paciente se está deteriorando clínicamente y es poco probable que reciba algún beneficio al continuar el tratamiento con HuABI y nivolumab.

Si el investigador considera que el paciente con HuABI y nivolumab continúa obteniendo un beneficio clínico al continuar el tratamiento, el paciente debe permanecer en el ensayo y seguir recibiendo seguimiento de acuerdo con los programas de tiempo y eventos según el protocolo.

En los pacientes que continúan la terapia del estudio con nivolumab después de la progresión, una progresión adicional se define como un aumento adicional del 10 % en la carga tumoral desde el momento de la progresión inicial. Esto incluye un aumento en la suma de los diámetros de todas las lesiones diana y/o los diámetros de las nuevas lesiones medibles en comparación con el momento de la progresión inicial. El tratamiento con HuAB1 y nivolumab debe interrumpirse de forma permanente tras la documentación de una progresión adicional.

La evaluación de nuevas lesiones seguirá las pautas de RECIST v1.1 (apéndice G).

3.2.9 A lgoritm os de m odificación de dosis p ara agentes inm uno-oncológicos

Los agentes inmuno-oncológicos están asociados con EA que pueden diferir en gravedad y duración en comparación con los EA causados por otras clases terapéuticas. HuAB1 y nivolumab se consideran agentes inmuno-oncológicos en este protocolo. El reconocimiento y la gestión tempranos de los EA asociados con agentes inmuno-oncológicos pueden mitigar la toxicidad grave. Se han desarrollado algoritmos de gestión para ayudar a los investigadores a evaluar y gestionar las siguientes clases de EA:

gastrointestinal

renal

pulmonar

hepático

endocrinopatía

cutáneo

neurológico

reacción a la infusión

edema periorbitario

uveítis

3.2.10 Tratam iento de reacciones a la in fusión relacionadas con H uAB1 y n ivolum ab

HuAB 1 y nivolumab pueden inducir reacciones de hipersensibilidad a la infusión. Si se produjera tal reacción, puede manifestarse con fiebre, escalofríos, estremecimiento, dolor de cabeza, erupción, prurito, artralgia, hipo- o hipertensión, broncoespasmo u otros síntomas.

Las reacciones a la infusión deben clasificarse de acuerdo con las pautas CTCAE v4.03. Cualquier reacción a la infusión de grado 3 o 4 debe notificarse en un plazo de 24 horas al monitor médico del estudio y notificarse como un EAG si cumple los criterios.

Primero se administrará la infusión de nivolumab, con un descanso de 30 minutos entre las 2 infusiones, seguido de una infusión de 30 minutos de HuAB1. Puede que no esté claro si una reacción a la infusión se debe a HuAB1, a nivolumab o a ambos fármacos del estudio. Por lo tanto, a continuación se proporciona un conjunto de recomendaciones de tratamiento (basadas en los tratamientos más conservadores para las reacciones a la infusión debidas a cualquiera de los fármacos del estudio) y puede modificarse según el criterio clínico, las normas y pautas de tratamiento locales y/o los síntomas específicos, según sea apropiado:

Para síntomas de grado 1: (reacción leve [por ejemplo, reacciones cutáneas localizadas que incluyen prurito leve, enrojecimiento, erupción], requiere que se reduzca la velocidad de infusión; puede estar indicada la intervención).

Disminuir la velocidad de la infusión del fármaco del estudio hasta que el paciente se recupere de los síntomas.

Permanecer junto a la cama y supervisar las constantes vitales del paciente hasta la resolución de los síntomas. Se pueden administrar 50 mg de difenhidramina según el criterio del médico a cargo del tratamiento.

Cuando los síntomas se resuelven, reiniciar la infusión a la velocidad de infusión original.

Si un paciente tiene una reacción a la infusión con nivolumab, se puede administrar HuAB1 (sin medicaciones profilácticas) si la reacción a la infusión se resuelve en 3 horas. Para propósitos de programación, la infusión de HuAB1 se puede administrar al día siguiente. Se deben administrar medicaciones profilácticas previas a la infusión antes de todas las infusiones posteriores de nivolumab.

Si un paciente tiene una reacción a la infusión con HuAB1, se deben administrar medicaciones profilácticas previas a la infusión antes de todas las infusiones posteriores de HuAB1 y nivolumab.

Se recomiendan las siguientes medicaciones profilácticas previas a la infusión antes de futuras infusiones de HuAB1 y nivolumab: 50 mg de difenhidramina (o equivalente) y/o de 325 a 1000 mg de paracetamol (acetaminofeno) al menos 30 minutos antes de las administraciones adicionales del fármaco del estudio.

Para síntomas de grado 2: (Reacción moderada [es decir, cualquier síntoma no mencionado arriba (síntomas leves) o abajo (síntomas graves) tal como prurito generalizado, enrojecimiento, erupción, disnea, hipotensión con presión arterial sistólica > 80 mmHg], requiere la interrupción de la infusión pero responde rápidamente al tratamiento de los síntomas [por ejemplo, antihistamínicos, fármacos antiinflamatorios no esteroideos, narcóticos, corticosteroides, fluidos IV]; medicaciones profilácticas previas a la infusión indicadas durante < 24 horas).

Interrumpir la infusión del fármaco del estudio.

Iniciar una infusión IV de solución salina normal y tratar al paciente con 50 mg de difenhidramina (o equivalente) por vía intravenosa y/o de 325 a 1000 mg de paracetamol (acetaminofeno).

Permanecer junto a la cama y supervisar las constantes vitales del paciente hasta la resolución de los síntomas. La terapia con corticosteroides se puede administrar según el criterio del médico a cargo del tratamiento.

Cuando los síntomas se resuelven, reiniciar la infusión al 50 % de la velocidad de infusión original; si no surgen más complicaciones después de 30 minutos, la velocidad puede aumentarse al 100 % de la velocidad de infusión original.

Supervisar al paciente de cerca. Si los síntomas reaparecen, suspender inmediatamente la infusión; no se administrarán más fármacos del estudio en esa visita. Administrar 50 mg de difenhidramina por vía intravenosa, permanecer junto a la cama y supervisar al paciente hasta que desaparezcan los síntomas.

Si un paciente tiene una reacción a la infusión con la infusión de nivolumab, puede administrarse la infusión de HuAB1 (sin medicaciones profilácticas) si la reacción a la infusión se resuelve en 3 horas. Para propósitos de programación, la infusión de HuAB1 se puede administrar al día siguiente. Se deben administrar medicaciones profilácticas previas a la infusión antes de todas las infusiones posteriores de nivolumab.

Se recomiendan las siguientes medicaciones profilácticas previas a la infusión antes de futuras infusiones de HuAB1 y nivolumab: se deben administrar 50 mg de difenhidramina (o equivalente) y/o de 325 a 1000 mg de paracetamol (acetaminofeno) al menos 30 minutos antes de las administraciones adicionales del fármaco del estudio. En caso necesario, se pueden utilizar corticosteroides (hasta 25 mg de SoluCortef o equivalente).

Se debe registrar la cantidad de fármaco del estudio infundida.

Para síntomas de grado 3 o grado 4: (Reacción grave tal como broncoespasmo, urticaria generalizada, presión arterial sistólica < 80 mmHg o angioedema; síntomas de grado 3 que incluyen síntomas prolongados, que requieren 6 horas o más para responder a la medicación sintomática y/o la interrupción de la infusión; recurrencia de los síntomas después de una mejoría inicial; hospitalización indicada por otras secuelas clínicas, tales como insuficiencia renal, infiltrados pulmonares; grado 4: ponen en riesgo la vida del paciente; ventilación con presión de soporte indicada).

Interrumpir inmediatamente la infusión del fármaco del estudio. No se administrará más fármaco del estudio. La cantidad de fármaco del estudio infundida debe registrarse en el CRF.

Iniciar una infusión IV de solución salina normal y tratar al paciente de la siguiente manera: se recomiendan broncodilatadores, de 0,2 a 1,0 mg de epinefrina de una solución 1:1.000 para administración subcutánea o de 0,1 a 0,25 mg de una solución 1:10.000 inyectada lentamente para administración IV, y/o 50 mg de difenhidramina por vía intravenosa con 100 mg de metilprednisolona (o equivalente) por vía intravenosa, según sea necesario.

Permanecer junto a la cama y supervisar las constantes vitales del paciente hasta que el paciente se recupere de los síntomas.

Se debe supervisar al paciente hasta que el investigador esté seguro de que los síntomas no volverán a aparecer.

Los investigadores deben seguir sus pautas institucionales para el tratamiento de la anafilaxia.

En el caso de síntomas de hipersensibilidad tardíos (por ejemplo, aparición de un prurito localizado o generalizado en la semana posterior al tratamiento), se puede administrar un tratamiento sintomático (por ejemplo, antihistamínico oral o corticosteroides).

3.3 Método de asignación de identificación del paciente

Los pacientes deben poder dar su consentimiento informado por escrito y cumplir todos los criterios de elegibilidad. El patrocinador o la persona designada por este no otorgarán exenciones de los criterios de inclusión o exclusión para ningún paciente inscrito en el estudio. Antes de inscribir a un paciente, deben cumplirse todos los criterios de elegibilidad.

Los pacientes que cumplan los requisitos para la fase 1a del estudio se inscribirán de la siguiente manera:

tres pacientes de la cohorte de monoterapia de fase 1aM1 se inscribirán primero para ser tratados con 2 mg/kg de HuAB1 cada 14 días durante el período de DLT de 28 días.

Una vez que la cohorte de monoterapia anterior esté completamente inscrita, se inscribirá una cohorte (1aC1) de 3 nuevos pacientes para ser tratados con 1 mg/kg de HuAB1 en combinación con 3 mg/kg de nivolumab cada 14 días durante el período de DLT de 28 días.

El aumento escalonado de la dosis a la cohorte de 4 mg/kg en monoterapia de HuAB1 (1aM2) procederá una vez finalizado el período de DLT en la cohorte de 2 mg/kg en monoterapia de HuAB1 (1aM1).

El aumento escalonado de la dosis a niveles de dosis crecientes de HuAB1 en combinación con nivolumab continuará hasta que se observen DLT en la monoterapia de HuAB1 o en las cohortes de HuAB1 en combinación con nivolumab después del análisis y el acuerdo entre los investigadores participantes y el monitor médico del patrocinador.

En la Fase 1b, se inscribirán aproximadamente 30 pacientes por cohorte. La inscripción estará abierta para todas las cohortes en paralelo y continuará hasta que se alcance el objetivo de inscripción. Una vez que se completa una cohorte, la inscripción adicional estará restringida a la cohorte o cohortes que no se hayan completado. Un total de aproximadamente 240 pacientes se inscribirán en el grupo de fase 1b del estudio.

El investigador puede repetir las pruebas de laboratorio que demuestran el cumplimiento de los requisitos y los signos vitales/ECG antes de la inscripción si un hallazgo que indica la falta de cumplimiento de los requisitos se considera un error o si es probable que un hallazgo agudo cumpla los criterios de elegibilidad al repetir la prueba.

3.4 Enmascaramiento/desenmascaramiento

Este es un estudio sin enmascaramiento y no habrá enmascaramiento ni desenmascaramiento de cara a los pacientes durante este estudio.

4 EVALUACIONES Y PROCEDIMIENTOS DEL ESTUDIO

4.1 Programa de evaluaciones

El programa de tablas de evaluación se adjunta al protocolo como apéndices A, B y C.

4.2 Procedimientos del estudio por visita

4.2.1 M onoterapia, fase 1a

4.2.1.1 Período de selección (del día -28 a l día 0)

Los pacientes que hayan dado su consentimiento total para participar en el estudio se someterán a evaluaciones de selección en los 28 días (4 semanas) previos a la administración de la primera infusión de HuAB1 (a menos que se indique lo contrario). Para determinar si el paciente cumple todos los criterios de inclusión y no viola ningún criterio de exclusión, se realizarán los siguientes procedimientos (apéndice A):

se debe obtener el consentimiento informado firmado antes de cualquier procedimiento específico del estudio Historia médica y de enfermedades completa

Características demográficas y basales

Examen físico completo, que incluya la altura y el peso

Constantes vitales (presión arterial, pulso, frecuencia respiratoria y temperatura en decúbito supino después de 5 minutos de descanso)

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Valores de laboratorio en la selección (como se describe en el apéndice A, nota al pie g)

Valores de laboratorio de seguridad clínica (como se describe en el apéndice A, nota al pie h)

ECG de 12 derivaciones (necesario en la selección y, si está clínicamente indicado, durante el estudio) Imágenes radiológicas: se debe realizar una CT/MRI dentro de los 28 días anteriores a la primera infusión de HuAB1. Si la MRI se realiza como parte del estándar de atención del paciente dentro de los 28 días posteriores a la primera infusión del estudio, no es necesario repetirla si se proporciona la documentación de los resultados y es adecuada para una evaluación.

Prueba de embarazo en suero (p-hCG), para mujeres en edad fértil

Recogida de biopsia (para análisis descritos en el apéndice D)

Notificación de EAG, cuando proceda

Documentar medicamentos anteriores y concurrentes

4.2.1.2 C iclo 1, día 1

Se realizarán los siguientes procedimientos:

antes de la infusión de HuABI (dentro de < 72 horas a menos que se indique lo contrario):

verificación de elegibilidad

Actualizar la historia médica y de enfermedades para detectar cualquier cambio con respecto a la selección Examen físico, incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Valores de laboratorio de seguridad clínica (como se describe en el apéndice A, nota al pie h); los resultados deben revisarse antes de la dosificación)

Se realizará una prueba de p-hCG en suero (evaluada por laboratorios locales) antes de la primera dosis de HuABI solo en mujeres en edad fértil

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para los análisis descritos en el apéndice D, excluidos los análisis de nivolumab)

Sangre entera (para los análisis descritos en el apéndice D)

PBMC congeladas (para análisis de fenotipo de células T)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

Administración del fármaco del estudio: HuABI por infusión IV durante 30 minutos

Administración posterior a HuABI:

Constantes vitales después de la dosis (frecuencia cardíaca, presión arterial y temperatura en decúbito supino después de 5 minutos de descanso) en los siguientes puntos de tiempo después de finalizar la infusión IV: 5 MINUTOS, 15 MINUTOS, 30 MINUTOS, Y 1 HORA

15 minutos (± 5 minutos) después de la dosis:

Recogida de muestras de sangre para suero (para PK de HuABI)

4 horas (± 60 minutos) después de la dosis:

Recogida de muestras de sangre para suero (para PK de HuABI)

4.2.1.3 C iclo 1, día 2

Los pacientes del estudio regresarán al centro del estudio el día 2 para someterse a evaluaciones posteriores a la dosis de 24 horas (± 6 horas). No se administrará ningún tratamiento durante esta visita, pero se completarán las siguientes evaluaciones:

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para PK de HuABI y panel multiplex de citocinas)

Sangre entera (para análisis de expresión génica)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.1.4 C iclo 1, día 4

Los pacientes del estudio regresarán al centro del estudio el día 4 para someterse a evaluaciones posteriores a la dosis de 72 horas (± 12 horas). No se administrará ningún tratamiento durante esta visita, pero se completarán las siguientes evaluaciones:

Extracción de sangre

Suero (para PK de HuAB1)

Sangre entera (para análisis de expresión génica y de monocitos CD14+/CD16+)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.1.5 C iclo 1, día 8

Los pacientes del estudio regresarán al centro del estudio el día 8 para someterse a evaluaciones posteriores a la dosis de 168 horas (± 24 horas). No se administrará ningún tratamiento durante esta visita, pero se completarán las siguientes evaluaciones:

Examen físico

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para PK de HuAB1 y panel multiplex de citocinas)

Sangre entera (para análisis de expresión génica y de monocitos CD14+/CD16+)

PBMC congeladas (para análisis de fenotipo de células T)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.1.6 Ciclo 2, día 1

Se realizarán los siguientes procedimientos:

examen físico, incluido el peso

Constantes vitales (presión arterial, pulso, frecuencia respiratoria y temperatura en decúbito supino después de 5 minutos de descanso) Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Valores de laboratorio de seguridad clínica (como se describe en el apéndice A, nota al pie h; los resultados deben revisarse antes de la dosificación:

Recogida de muestras de sangre para:

Sangre entera (para los análisis descritos en el apéndice D, excepto el panel de MDSC)

PBMC congeladas (para análisis de fenotipo de células T)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

Administración posterior a HuABI:

Constantes vitales después de la dosis (presión arterial, pulso, frecuencia respiratoria y temperatura en decúbito supino después de 5 minutos de descanso) en los siguientes puntos de tiempo después de completar la infusión IV:

5 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora

15 minutos (± 5 minutos) después de la dosis:

Recogida de muestras de sangre para suero (para PK de HuABI)

4.2.1.7 Fin del ciclo 2

Para los pacientes de fase 1a en la cohorte de monoterapia, si al final del ciclo 2, el investigador determina que el paciente puede beneficiarse de la continuación con la administración de HuAB1, se puede ofrecer la entrada en el período de tratamiento ampliado.

Si el paciente continúa con el período de tratamiento ampliado (ciclo 3 y posteriores), se debe proceder con los procedimientos indicados en la sección 6.2.1.8.

Si el paciente no cumple los requisitos recibir dosis adicionales de HuAB1, el paciente regresará a la clínica para la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada que se describe en la sección 6.2.1.9.

4.2.1.8 Tratamiento ampliado - Ciclo 3 y ciclos posteriores, día 1

El tratamiento ampliado de fase 1a para pacientes en la cohorte de monoterapia puede comenzar en el ciclo 3, día 1 (día 29 del estudio). Se suspenderá la dosificación si el paciente experimenta progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable.

En cada visita de infusión, los pacientes deben permanecer en el centro del estudio después de cada administración de HuAB1 hasta completar todas las evaluaciones posteriores a la dosis para la vigilancia de la seguridad. Las siguientes evaluaciones se realizarán en cada visita a menos que se indique lo contrario (apéndice A):

Antes de cada infusión del fármaco del estudio (en las 72 horas previas a menos que se indique lo contrario):

examen físico, incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Valores de laboratorio de seguridad clínica (como se describe en el apéndice A, nota al pie h; los resultados deben revisarse antes de la dosificación)

Imágenes radiológicas: CT/MRI realizada cada 8 semanas durante los primeros 12 meses para los pacientes que permanecen en tratamiento (y cada 12 semanas a partir de entonces) y 28 días (± 7 días) después de la última dosis del tratamiento del estudio.

Recogida de biopsia (solo antes del ciclo 3; para los análisis descritos en el apéndice D)

Recogida de muestras de sangre para:

suero (para los análisis descritos en el apéndice D) con las siguientes excepciones:

PK de HuABI para los ciclos 3, 5, 9, 13 y 21

ADA (anticuerpos anti-fármaco) de HuAB1 para los ciclos 3, 5, 13 y 21

ANA para los ciclos 3, 5, 9, 13, 21, después cada 6 ciclos durante el tratamiento

CSF1 e IL34 para los ciclos 3 y 9

Panel multiplex de citocinas para los ciclos 3, 9 y 21

Sangre entera (para los análisis descritos en el apéndice D) con las siguientes excepciones:

monocitos CD14+/CD16+ para los ciclos 3 y 9

Panel de MDSC solo para el ciclo 3

Análisis de expresión génica para los ciclos 3, 5, 9, 13 y 21

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

Administración del fármaco del estudio: HuAB1 por infusión IV durante 30 minutos

Administración posterior a HuAB1:

5 MINUTOS, 15 MINUTOS, 30 MINUTOS, Y 1 HORA

15 minutos (± 5 minutos) después de la dosis:

Extracción de sangre para suero (para los análisis descritos en el apéndice D) con las siguientes excepciones:

PK de HuAB1 solo para el ciclo 8

4.2.1.9 Visita de finalización de l tratam iento o term inación anticipada

Los pacientes regresarán al centro del estudio aproximadamente 28 (± 7) días después de su última infusión de HuAB1.

Se realizarán las siguientes evaluaciones:

examen físico, incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

ECG de 12 derivaciones

Imágenes radiológicas: No es necesario repetir la CT/MRI si se realiza dentro de las 8 semanas previas a la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada o si se determinó previamente la progresión del tumor.

Prueba de embarazo en suero (p-hCG), cuando proceda

Biopsia para pacientes que progresaron (para los análisis descritos en el apéndice D)

Extracción de sangre

Sangre entera (para análisis de expresión génica y monocitos CD14+/CD16+ únicamente)

Notificación de Ea , cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.2 A um ento escalonado de la dosis de com binación de fase 1a

4.2.2.1 Período de selección (del día -28 a l día 0)

Los pacientes que hayan dado su consentimiento para participar en el estudio se someterán a evaluaciones de selección en los 28 días (4 semanas) previos a la administración de la primera infusión de HuAB1 y nivolumab (a menos que se indique lo contrario). Para determinar si el paciente cumple todos los criterios de inclusión y no viola ningún criterio de exclusión, se realizarán los siguientes procedimientos (apéndice B):

Características demográficas y basales

Examen físico completo, que incluya la altura y el peso

Constantes vitales (presión arterial, pulso, frecuencia respiratoria y temperatura en decúbito supino después de 5 minutos de reposo; pulsioximetría en reposo y después de un esfuerzo)

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Valores de laboratorio en la selección (como se describe en el apéndice B, nota al pie g)

Valores de laboratorio de seguridad clínica (como se describe en el apéndice B, nota al pie h)

ECG de 12 derivaciones (necesario en la selección y, si está clínicamente indicado, durante el estudio) Imágenes radiológicas: La CT/MRI debe realizarse dentro de los 28 días anteriores al día 1 del ciclo 1. Si la CT/MRI se realiza como parte del estándar de atención del paciente dentro de los 28 días posteriores al día 1 del ciclo 1, no es necesario repetirla si se proporciona la documentación de los resultados y es adecuada para RECIST 1.1 Prueba de embarazo en suero (p-hCG), < 5 días antes del ciclo 1, día 1, para mujeres en edad fértil Recogida de biopsia (para análisis descritos en el apéndice D)

Notificación de EAG, cuando proceda

Documentar medicamentos anteriores y concurrentes

4.2.2.2 C iclo 1, día 1

Se realizarán los siguientes procedimientos:

antes de la infusión de HuAB1 y nivolumab (dentro de < 72 horas a menos que se indique lo contrario): verificación de elegibilidad

Actualizar la historia médica y de enfermedades para detectar cualquier cambio con respecto al examen físico de selección,

incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Valores de laboratorio de seguridad clínica (como se describe en el apéndice B, nota al pie h; los resultados deben revisarse antes de la dosificación)

Se realizará una prueba de p-hCG en suero (evaluada por laboratorios locales) antes de la primera dosis de fármaco del estudio solo en mujeres en edad fértil

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para los análisis descritos en el apéndice D)

Sangre entera (para los análisis descritos en el apéndice D)

PBMC congeladas (para análisis de fenotipo de células T)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

Administración del fármaco del estudio: tanto HuAB1 como nivolumab se administrarán mediante infusión IV durante 30 minutos.

Primero se administrará nivolumab, con un descanso de 30 minutos entre las 2 infusiones, seguido de HuAB1 30.

Después de la administración de HuAB1 y nivolumab:

Constantes vitales después de la dosis (presión arterial, pulso, frecuencia respiratoria y temperatura en decúbito supino después de 5 minutos de descanso) en los siguientes puntos de tiempo después de completar cada infusión IV:

5 minutos y 15 minutos después de la dosis de nivolumab

5 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora después de la dosis de HuAB1

15 minutos (± 5 minutos) después de la dosis de HuAB1:

Recogida de muestras de sangre para suero (para análisis PK de HuAB1 y nivolumab)

4 horas (± 60 minutos) después de la dosis de HuAB1:

Recogida de muestras de sangre para suero (para PK de HuAB1 únicamente)

4.2.2.3 C iclo 1, día 2

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para PK de HuAB1 y panel multiplex de citocinas)

Sangre entera (para análisis de expresión génica)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.2.4 C iclo 1, día 4

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para PK únicamente)

Sangre entera (para análisis de expresión génica y de monocitos CD14+/CD16+)

Notificación de Ea , si procede, revisión de medicamentos concomitantes

4.2.2.5 C iclo 1, día 8

Examen físico

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para PK de HuAB1 y panel multiplex de citocinas)

Sangre entera (para análisis de expresión génica y de monocitos CD14+/CD16+)

PBMC congeladas (para análisis de fenotipo de células T)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.2.6 C iclo 2, día 1

Se realizarán los siguientes procedimientos:

antes de la infusión de HuABl y nivolumab (dentro de < 72 horas a menos que se indique lo contrario):

examen físico, incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para los análisis descritos en el apéndice D)

PBMC congeladas (para análisis de fenotipo de células T)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

Administración del fármaco del estudio: tanto HuABl como nivolumab se administrarán mediante infusión IV durante 30 minutos. Primero se administrará nivolumab, con un descanso de 30 minutos entre las 2 infusiones, seguido de HuAB 1.

Después de la administración de HuABl y nivolumab:

5 minutos y 15 minutos después de la dosis de nivolumab

5 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora después de la dosis de HuABl

15 minutos (± 5 minutos) después de la dosis de HuAB1:

Recogida de muestras de sangre para suero (para PK de HuAB1 únicamente)

4.2.2.7 F in de l ciclo 2

Para los pacientes de fase 1a en la cohorte de combinación, si al final del ciclo 2 el investigador determina que el paciente puede beneficiarse de la continuación con la administración de HuAB 1 y nivolumab, se puede ofrecer la entrada en el período de tratamiento ampliado.

Si el paciente continúa con el período de tratamiento ampliado (ciclo 3 y posteriores), se debe proceder con los procedimientos indicados en la sección 6.2.2.8.

Si el paciente no cumple los requisitos para recibir más fármaco del estudio, el paciente regresará a la clínica para la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada que se describe en la sección 6.2.2.9.

4.2.2.8 Tratamiento ampliado - Ciclo 3 y ciclos posteriores, día 1

El tratamiento ampliado de fase 1a para pacientes en cohortes de aumento escalonado de la dosis de combinación puede comenzar en el ciclo 3, día 1 (día 29 del estudio).

En cada visita de infusión, los pacientes deben permanecer en el centro del estudio después de cada administración de HuAB1 y nivolumab hasta completar todas las evaluaciones posteriores a la dosis para la vigilancia de la seguridad. Las siguientes evaluaciones se realizarán en cada visita a menos que se indique lo contrario (apéndice B):

Antes de cada infusión de los fármacos del estudio (en las < 72 horas previas a menos que se indique lo contrario):

examen físico, incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Recogida de biopsia (para análisis descritos en el apéndice D)

Recogida de muestras de sangre para:

PK de HuAB1 para los ciclos 3, 5, 9, 13 y 21 únicamente

PK de nivolumab para los ciclos 3, 5, 9, 13 y 21 únicamente

ADA de HuAB1 y nivolumab solo para los ciclos 3, 5, 13 y 21

CSF1, IL34 para los ciclos 3 y 9 únicamente

Panel múltiplex de citocinas para los ciclos 3, 9 y 21 únicamente

CD14+/CD16+ para los ciclos 3 y 11 únicamente

Panel de células supresoras derivadas de mieloides para el ciclo 3 únicamente

Análisis de expresión génica para los ciclos 3, 5, 9, 13 y 21 únicamente

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

Primero se administrará nivolumab, con un descanso de 30 minutos entre las 2 infusiones, seguido de HuAB 1.

Después de la administración de HuAB1 y nivolumab:

5 minutos y 15 minutos después de la dosis de nivolumab

5 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora después de la dosis de HuAB1

15 minutos (± 5 minutos) después de la dosis de HuAB1:

Extracción de sangre para suero (para los análisis descritos en el apéndice D) con las siguientes excepciones: PK de HuAB1 y nivolumab para el ciclo 8 únicamente

4.2.2.9 Visita de finalización del tratamiento o terminación anticipada

Los pacientes regresarán al centro del estudio aproximadamente 28 (± 7) días después de su última infusión de HuAB1 y nivolumab, o en el caso de que un paciente interrumpa prematuramente el estudio.

Se realizarán las siguientes evaluaciones:

examen físico, incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

ECG de 12 derivaciones

Imágenes radiológicas: No es necesario repetir la CT/MRI si se realiza dentro de las 8 semanas previas a la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada o si se determinó previamente la progresión del tumor. Prueba de embarazo en suero (p-hCG), cuando proceda

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para los análisis descritos en el apéndice D)

Sangre entera (para análisis de monocitos CD14+/CD16+ y expresión génica solo mediante secuenciación de ARN)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.3 Expansión de dosis com binada de fase 1b

4.2.3.1 Período de selección (del día -28 a l día 0)

Los pacientes que hayan dado su consentimiento total para participar en el estudio se someterán a evaluaciones de selección en los 28 días (4 semanas) previos a la administración de la primera infusión de HuABI y nivolumab (a menos que se indique lo contrario). Para determinar si el paciente cumple todos los criterios de inclusión y no viola ningún criterio de exclusión, se realizarán los siguientes procedimientos (apéndice B):

Características demográficas y basales

Examen físico completo, que incluya la altura y el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

ECG de 12 derivaciones (necesario en la selección y, si está clínicamente indicado, durante el estudio) Imágenes radiológicas: se debe realizar una CT/MRI dentro de los 28 días anteriores a la primera infusión del fármaco del estudio. Si la MRI se realiza como parte del estándar de atención del paciente dentro de los 28 días posteriores a la primera infusión del estudio, no es necesario repetirla si se proporciona la documentación de los resultados y es adecuada para RECIST 1.1.

Prueba de embarazo en suero (p-HCG), < 5 días antes del ciclo 1, día 1, para mujeres en edad fértil Recogida de biopsia (para análisis descritos en el apéndice D)

Notificación de EAG, cuando proceda

Documentar medicamentos anteriores y concurrentes

4.2.3.2 C iclo 1, día 1

Se realizarán los siguientes procedimientos:

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para los análisis descritos en el apéndice D)

Sangre entera (para los análisis descritos en el apéndice D)

PBMC congeladas (para análisis de fenotipo de células T)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

Administración del fármaco del estudio: tanto HuAB1 como nivolumab se administrarán mediante infusión IV durante 30 minutos. Primero se administrará nivolumab, con un descanso de 30 minutos entre las 2 infusiones, seguido de HuAB 1.

Administración posterior a HuABI y nivolumab:

5 minutos y 15 minutos después de la dosis de nivolumab

5 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora después de la dosis de HuAB1

15 minutos (± 5 minutos) después de la dosis de HuAB1:

4 horas (± 60 minutos) después de la dosis de HuAB1:

Recogida de muestras de sangre para suero (para PK de HuAB1 únicamente)

4.2.3.3 C iclo 1, día 2

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para PK de HuAB1 y panel multiplex de citocinas)

Sangre entera (para análisis de expresión génica)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.3.4 C iclo 1, día 4

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (solo para PK de HuAB1)

Sangre entera (para análisis de expresión génica y de monocitos CD14+/CD16+)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.3.5 C iclo 1, día 8

Examen físico

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para PK de HuAB1 y panel multiplex de citocinas)

Sangre entera (para análisis de expresión génica y de monocitos CD14+/CD16+)

PBMC congeladas (para análisis de fenotipo de células T)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.3.6 C iclo 2, día 1

Se realizarán los siguientes procedimientos:

antes de la infusión de HuAB1 y nivolumab (dentro de < 72 horas a menos que se indique lo contrario):

examen físico, incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Recogida de muestras de sangre para:

Suero (para los análisis descritos en el apéndice D)

PBMC congeladas (para análisis de fenotipo de células T)

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

Administración posterior a HuAB1 y nivolumab:

5 minutos y 15 minutos después de la dosis de nivolumab

5 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora después de la dosis de HuAB1

15 minutos (± 5 minutos) después de la dosis de HuAB1:

Recogida de muestras de sangre para suero (para PK de HuAB1 únicamente)

4.2.3.7 C iclo 3 y ciclos posteriores, día 1

examen físico, incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

Recogida de biopsia (para análisis descritos en el apéndice D)

Extracción de sangre

PK de HuAB1 para los ciclos 3, 5, 9, 13 y 21 únicamente

PK de nivolumab para los ciclos 3, 5, 9, 13 y 21 únicamente

ADA de HuAB1 y nivolumab solo para los ciclos 3, 5, 13 y 21

CSF1, IL34 para los ciclos 3 y 9 únicamente

Panel múltiplex de citocinas para los ciclos 3, 9 y 21 únicamente

CD14+/CD16+ para los ciclos 3 y 9 únicamente

Panel de MDSC solo para el ciclo 3

Análisis de expresión génica para los ciclos 3, 5, 9, 13 y 21 únicamente

Notificación de EA, cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

Después de la administración de HuABl y nivolumab:

5 minutos y 15 minutos después de la dosis de nivolumab

5 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora después de la dosis de HuAB1

15 minutos (± 5 minutos) después de la dosis de HuAB1:

Extracción de sangre para suero (para los análisis descritos en el apéndice D) con las siguientes excepciones: PK de HuABI y nivolumab para el ciclo 8 únicamente

4.2.3.8 Visita de finalización de l tratam iento o term inación anticipada

Se realizarán las siguientes evaluaciones:

examen físico, incluido el peso

Evaluación del estado funcional según la escala ECOG

ECG de 12 derivaciones

Prueba de embarazo en suero (p-HCG)

Biopsia opcional para pacientes que progresaron (para los análisis descritos en el apéndice D)

Extracción de sangre

Suero (para los análisis descritos en el apéndice D)

Sangre entera (para análisis de monocitos CD14+/CD16+ únicamente)

Notificación de Ea , cuando proceda

Revisión de medicaciones concomitantes

4.2.4 Seguim iento y seguim iento de supervivencia para todos los pacientes

Después de la visita de interrupción del tratamiento del estudio, debe realizarse un seguimiento de cada EA en curso hasta que el evento se haya resuelto hasta el grado basal, el suceso se evalúe por el investigador como estable, el paciente abandone el seguimiento, el paciente retire el consentimiento, o cuando se haya determinado que el tratamiento del estudio no es la causa del EA.

La aparición de los EAG se recopilará hasta 100 días después de la última dosis del tratamiento del estudio o hasta que se resuelvan. Posteriormente, solo se recopilarán los EAG que el investigador determine que están relacionados con el tratamiento del estudio.

Además, También se recogerán muestras de suero 100 días después de la última dosis para analizar la PK de HuABI, ADA de HuABI y ADA de nivolumab.

Los pacientes que hayan interrumpido el tratamiento del estudio por motivos distintos a la progresión de la enfermedad continuarán sometiéndose a evaluaciones tumorales aproximadamente cada 8 semanas (± 2 semanas) desde la visita de interrupción del tratamiento del estudio hasta la progresión de la enfermedad.

Después de la visita de interrupción del tratamiento del estudio, a todos los pacientes (independientemente del motivo de la interrupción) se les registrarán las terapias contra el cáncer y se les hará un seguimiento de la supervivencia cada 3 meses hasta la muerte, pérdida del seguimiento, retirada del consentimiento o terminación del estudio por parte del patrocinador.

En el caso de los pacientes que retiran su consentimiento del estudio pero aceptan participar en el seguimiento de supervivencia, solo se recopilará información de supervivencia cada 3 meses.

4.3 Evaluaciones del estudio

4.3.1 Evaluaciones de seguridad

Al inicio, se obtendrá una historia médica para detectar las condiciones subyacentes relevantes. Los exámenes iniciales deben incluir peso, altura, estado funcional según la escala ECOG (apéndice G), ECG, presión arterial (PA), frecuencia cardíaca (FC), temperatura y saturación de oxígeno mediante pulsioximetría en reposo (también se debe supervisar la cantidad de oxígeno suplementario, si es pertinente) dentro de los 28 días anteriores a la primera dosis.

Se realizarán evaluaciones de seguridad, incluida la hematología del suero, química, ECOG, peso y otras evaluaciones, incluido el ECG (si está indicado clínicamente) como parte de la atención estándar durante cada visita antes de la dosificación, como se indica en los apéndices A, B y C. También se supervisará al paciente para detectar cualquier EA relacionado con la infusión durante la dosificación y se realizará el seguimiento correspondiente según las pautas del protocolo. Se administrarán premedicaciones, incluidos esteroides, antihistamínicos u otros tratamientos antes de la dosis futura si el paciente desarrolla reacciones a la infusión según las pautas del protocolo.

Se evaluará la seguridad de cualquier paciente que haya recibido el fármaco del estudio. Las evaluaciones de toxicidad serán continuas durante la fase de tratamiento y las visitas de seguimiento en persona. Una vez que los pacientes alcanzan la fase de seguimiento de supervivencia, se aceptan llamadas telefónicas documentadas/correspondencia por correo electrónico para evaluar el estado del paciente.

Los EA y los valores de laboratorio se clasificarán de acuerdo con el CTCAE v4.03 del NCI

Debe evaluarse la saturación de oxígeno por pulsioximetría en reposo (también se debe supervisar la cantidad de oxígeno suplementario, si es pertinente) en cada visita del estudio antes de la dosificación. Si un paciente muestra cambios en la pulsioximetría u otros signos pulmonares (hipoxia, fiebre) o síntomas (por ejemplo, disnea, tos, fiebre) compatibles con posibles EA pulmonares, el paciente debe ser evaluado inmediatamente para descartar toxicidad pulmonar, de acuerdo con la tabla de manejo de sospecha de toxicidad pulmonar en el apéndice E.

Los exámenes físicos deben realizarse cuando esté indicado clínicamente. Si hay algún cambio clínicamente significativo nuevo o que empeora desde el último examen, se deben informar cambios en la página apropiada de EAG o EA no graves.

Deben realizarse medidas adicionales, incluidas las pruebas de laboratorio no requeridas por el estudio cuando esté indicado clínicamente o para cumplir la normativa local. Las toxicidades de laboratorio (por ejemplo, evaluaciones de enzimas hepáticas que se sospecha que están inducidas por fármacos) se supervisarán durante la fase de seguimiento a través de laboratorios del centro/locales hasta que se resuelvan todas las toxicidades relacionadas con el fármaco del estudio, vuelvan al valor basal o se consideran estables.

Es posible que algunas de las evaluaciones a las que se hace referencia en esta sección no se registren como datos en el CRF. Están destinadas a ser utilizadas como vigilancia de la seguridad por el médico a cargo del tratamiento. Se pueden realizar pruebas o evaluaciones adicionales cuando sea clínicamente necesario o cuando lo requieran las regulaciones institucionales o locales.

4.3.2 E valuaciones de eficacia

4.3.2.1 Parám etros p rincipales de eficacia

El parámetro principal de eficacia es la tasa de respuesta objetiva (ORR; número de pacientes con respuesta confirmada de RC o RP, dividido por el número total de pacientes tratados con enfermedad medible al inicio del estudio). El estado de la respuesta tumoral se evaluará mediante RECIST v1.1 (apéndice F). Se puede solicitar una revisión independiente de las evaluaciones tumorales según el criterio del patrocinador.

4.3.2.2 Parám etros de eficacia adicionales

Los parámetros de eficacia adicionales pueden incluir los siguientes: supervivencia general (SG, SG a 1 año y mediana de SG), supervivencia sin progresión (PFS) y duración de la respuesta (DOR) para los pacientes con respuestas confirmadas, basándose en RECIST v1.1.

Se realizarán CT/MRI (tórax, abdomen, pelvis y cerebro) en la selección, durante el tratamiento y al final del estudio/terminación anticipada según el protocolo. Las mediciones del cambio en la carga tumoral deben revisarse y documentarse después de cada medición.

4.3.2.3 B iopsia de tum or

Se recogerá una biopsia en el sitio del tumor primario en la selección y también a los 29 días de tratamiento (antes del ciclo 3, día 1) para todos los pacientes de la fase 1a y 10 pacientes por cohorte en la fase 1b. A los pacientes en la parte de la fase 1a del estudio también se les realizará una biopsia posterior al tratamiento cuando se documente la progresión del tumor. Esta biopsia posterior a la progresión será opcional para los pacientes en la fase 1b. Se evaluarán las biopsias para detectar leucocitos asociados a tumores, proliferación tumoral y marcadores de muerte celular.

4.3.3 Evaluaciones farm acocinéticas

Se recogerán muestras de sangre de todos los pacientes para la evaluación PK de HuAB1 y nivolumab (fase 1a y 1b).

Se recogerán muestras de sangre para medir la concentración sérica de HuAB1 durante el ciclo 1 en los días 1, 2, 4 y 8. Las muestras de sangre se recogerán tanto antes como al final de la infusión para el ciclo 2. Además, se recogerán muestras de sangre al final de la infusión para el ciclo 8 y antes de la infusión en los ciclos 3, 5, 9, 13 y 21. También se recogerá una muestra de sangre para el análisis PK 100 días después de la última dosis y en la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada.

Los pacientes inscritos en el aumento escalonado de la dosis de la fase 1a y la fase 1b tendrán una muestra de sangre para medir la concentración sérica de nivolumab antes y al final de la infusión del ciclo 1. Además, se recogerán muestras de sangre antes de la infusión de los ciclos 2, 3, 5, 9, 13 y 21. También se recogerá una muestra de sangre para el análisis PK 100 días después de la última dosis y en la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada.

Los parámetros PK estándar se determinarán en función de los datos de concentración de HuAB1 en suero-tiempo, según sea adecuado. Se evaluará la posible interacción farmacocinética fármaco-fármaco entre HuAB1 y nivolumab.

4.3.3.1 Recogida y procesam iento farm acocinético

Las muestras de sangre se recogerán y procesarán para suero de acuerdo con las instrucciones proporcionadas en un manual de laboratorio separado.

4.3.3.2 A nális is farm acocinético de m uestras

La concentración de HuAB1 en suero se determinará en suero utilizando un método ELISA validado. La concentración de nivolumab en suero se determinará en suero utilizando un método ECLA validado.

4.3.4 Evaluaciones de inm unogenic idad

Las muestras de sangre se recogerán antes de la infusión en los ciclos 1, 2, 3, 5, 13 y 21, 100 días después de la última dosis y en la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada para medir los ADA para HuAB1 y nivolumab. Los ADA para HuAB1 en suero se medirán mediante un ECLA de puente validado que utiliza la tecnología Meso Scale Discovery (MSD). Los ADA para nivolumab en suero se medirán mediante un método ECLA validado.

4.3.5 Evaluaciones de biom arcadores

Se investigará diversos factores que potencialmente podrían predecir la respuesta clínica a la combinación de HuAB1 y nivolumab en toda la sangre periférica y en muestras tumorales tomadas de pacientes antes y durante el tratamiento. Los datos de estas investigaciones se evaluarán en busca de asociaciones con datos de respuesta y/o seguridad (EA). Además, los análisis de marcadores entre los grupos de tratamiento proporcionarán los datos necesarios para identificar y validar biomarcadores con valor predictivo frente a pronóstico. En un manual de biomarcadores se proporcionarán instrucciones completas sobre la recogida, procesamiento, manejo y envío de todas las muestras aquí descritas.

4.3.5.1 M uestras de tejido tum oral

Las muestras de tejido tumoral en forma de bloque incluido en parafina o cortes no teñidos se enviarán para la evaluación IHC central. Estas muestras de biopsia deben ser por escisión, incisión o con aguja gruesa, ya que los aspirados con aguja fina u otras muestras de citología son insuficientes para los análisis de biomarcadores posteriores. Se están recogiendo muestras de tejido para evaluar el efecto PD de los fármacos del estudio en el microentorno tumoral. Estas muestras también pueden someterse a secuenciación de genes para determinar el efecto de los fármacos del estudio sobre las rutas de los genes, así como las firmas de genes identificadas asociadas con la resistencia a la respuesta. Estos análisis pueden ayudar a predecir la respuesta futura al tratamiento. En el apéndice D se describe un resumen de los análisis a realizar.

Se obtendrán muestras de biopsia de tumor antes del tratamiento, así como durante el tratamiento, para examinar los infiltrados inmunitarios y la expresión de marcadores tumorales seleccionados. El tejido tumoral que se obtiene de estas muestras se dividirá, cuando corresponda, entre una muestra fresca congelada que se utilizará para el análisis de expresión génica y una muestra fijada con formalina que se utilizará para la IHC.

Las secciones de tejido teñidas se enviarán al laboratorio central, donde serán evaluadas por un patólogo y recibirán una puntuación para la positividad de PD-L1.

Las muestras pueden evaluarse para determinar la expresión de genes, ARN y/o proteínas relacionados con el sistema inmunitario o con la enfermedad, así como para determinar la presencia de poblaciones de células inmunitarias utilizando diversas metodologías que incluyen, pero sin limitación, IHC, qRT-PCR, detección de mutaciones genéticas e hibridación fluorescente in situ (FISH). Se están evaluando otros métodos de expresión de biomarcadores tumorales.

4.3.5.2 Suero

Se extraerán muestras de sangre para análisis exploratorios de biomarcadores séricos en los momentos indicados en el programa de evaluaciones (apéndices A, B y C). Las muestras de sangre se procesarán para recoger suero y luego se almacenarán en estado congelado antes del análisis. Además de los análisis PK y ADA mencionados anteriormente, las muestras de suero se analizarán para determinar el efecto PD de los fármacos del estudio sobre las concentraciones de ligando de CSF1R y citocinas. Las muestras pueden evaluarse mediante ELISA, serómica y/u otros métodos relevantes de ensayo de proteínas basados en multiplex. Los análisis de marcadores séricos también pueden ayudar a establecer una firma de biomarcadores que pueda predecir el beneficio o correlacionarse con la eficacia y que se puede utilizar para informar este y futuros estudios. Los tiempos de recogida de muestras se presentan en el apéndice C y los análisis a realizar se describen en el apéndice D.

4.3.5.3 Sangre entera para la evaluación de polim orfism os de un solo nucleótido (SNP)

Se recogerán muestras de sangre entera de todos los pacientes para una evaluación farmacogenética exploratoria y se conservarán en estado congelado antes del análisis. El ADN genómico se extraerá y posteriormente se evaluará en busca de polimorfismos de un solo nucleótido y otras variaciones genéticas en genes candidatos que puedan predisponer a los pacientes a beneficiarse o a EA. El uso adicional de estos datos puede incluir análisis correlativos destinados a identificar asociaciones genotípicas con biomarcadores clínicamente relevantes identificados por otras metodologías descritas en esta sección.

4.3.5.4 C itom etría de flujo

Las muestras de pretratamiento y durante el tratamiento se analizarán mediante citometría de flujo para estudiar los efectos de HuAB1 y nivolumab sobre diversos subconjuntos de células inmunitarias de sangre periférica. Se evaluarán muestras de sangre entera para confirmar el efecto PD previsto de HuAB1 sobre la reducción de monocitos CD16+. Se analizarán muestras de PBMC para determinar si el bloqueo de PD-1 combinado con el direccionamiento a CSF1R afectará a la activación y función de las células T periféricas. Las muestras de PBMC pueden evaluarse para determinar los niveles de células supresoras derivadas de mieloides y el fenotipo de los monocitos. Los tiempos de recogida de muestras se presentan en el apéndice C y los análisis a realizar se describen en el apéndice D.

4.3.5.5 P erfiles de expresión génica

Se evaluarán las alteraciones en el patrón de expresión génica en muestras tumorales, usando secuenciación de ARN y qPCR, con especial énfasis en las rutas de la función inmunológica. Todas las muestras recogidas se almacenarán y podrán utilizarse para investigaciones posteriores relevantes para la respuesta inmunitaria tumoral.

5 CONSIDERACIONES ESTADÍSTICAS

Todos los análisis serán descriptivos y se presentarán por grupo de dosis y en general según corresponda. Los datos recopilados en este estudio se presentarán mediante tablas de resumen y listas de datos de pacientes. Las variables continuas se resumirán utilizando parámetros estadísticos descriptivos, específicamente la media, mediana, desviación estándar, mínimo y máximo. Las variables categóricas se resumirán por frecuencias y porcentajes.

5.1 Determinación del tamaño de la muestra

Aproximadamente 30 pacientes se inscribirán en la fase 1a (aumento escalonado de la dosis); es de esperar que entre 3 y 6 pacientes sean tratados en cada cohorte de aumento escalonado de la dosis de acuerdo con el algoritmo descrito en la figura 6. La tabla 5 resume la probabilidad de aumentar hasta la siguiente cohorte de dosis para varias tasas de DLT real.

Tabla 5 - Probabilidad de aumento escalonado de la dosis toxicidad limitante de la dosis

La tasa de respuesta objetiva es la variable de eficacia principal para la parte de la fase 1b del estudio. Con aproximadamente 30 pacientes en cada tipo de enfermedad, la mitad del intervalo de confianza del 95 % para la tasa de respuesta correspondiente estaría dentro del 18 %.

5.2 Poblaciones para análisis

Toda la población inscrita: todos los pacientes que firman el ICF y se registraron en el IXRS.

Población de seguridad: todos los pacientes que reciben al menos una dosis de HuAB1 y/o nivolumab.

Población PK: todos los pacientes que reciben al menos una dosis de HuAB1 y tienen datos de concentración sérica disponibles evaluables para la determinación del perfil PK. En todos los pacientes que recibieron al menos una dosis de nivolumab, se determinará el perfil de PK pico y valle.

Pacientes con biomarcadores: Todos los pacientes que reciben al menos una dosis de HuABI y/o nivolumab y tienen datos de biomarcadores disponibles.

Pacientes con inmunogenicidad: Todos los pacientes que reciben al menos una dosis de HuAB1 y/o nivolumab y tienen datos de ADA disponibles.

5.3 Criterios de valoración

5.3.1 Criterios de valoración de la fase 1a

5.3.1.1 Principal

Seguridad

La incidencia de EA de grado 3 y grado 4 y anomalías de laboratorio clínico definidas como DLT.

La incidencia de EA, anomalías de laboratorio clínico y anomalías del ECG

5.3.1.2 Secundario

Farmacocinética

Los siguientes parámetros farmacocinéticos se obtendrán a partir de los datos de concentración-tiempo para HuAB 1 cuando sea apropiado y aplicable. También pueden calcularse otros parámetros, tales como la relación de acumulación y dependencia de la dosis. La posible interacción farmacocinética fármaco-fármaco entre HuAB 1 y nivolumab se evaluará según corresponda.

Área bajo la curva de concentración sérica-tiempo (AUC)

Concentración máxima en suero (Cmáx)

Concentración mínima en suero (Cmín)

Volumen de distribución en estado estacionario (Vss)

El perfil PK de concentración pico y valle se obtendrá a partir de los datos de concentración en suero de nivolumab cuando sea apropiado y aplicable.

Inmunogenicidad

La inmunogenicidad, definida como una respuesta inmunitaria a HuAB 1 o a nivolumab, se evaluará midiendo los anticuerpos anti-HuAB1 totales y los anticuerpos anti-nivolumab totales de todos los pacientes. Las pruebas de inmunogenicidad consistirán en cribado, confirmación y titulación tanto para HuAB1 como para nivolumab.

Biomarcadores farmacodinámicos

Cambios en subconjuntos de monocitos de sangre entera por citometría de flujo

Cambios en el análisis multiplex de niveles de citocinas

Niveles de expresión de biomarcadores en muestras de biopsia de tumores medidos por IHC

5.3.1.3 Exploratorio

Biomarcadores farmacodinámicos

Cambios en los niveles séricos de marcadores seleccionados

Cambios en los fenotipos de células T periféricas y otros leucocitos por citometría de flujo

Niveles de MDSC periféricas por citometría de flujo

Cambios en la expresión génica en sangre entera o PBMC

5.3.2 Criterios de valoración de la fase 1b

5.3.2.1 Principal

Eficacia

La tasa de respuesta objetiva (ORR) se definirá como el número total de pacientes con respuestas confirmadas de RC o RP dividido por el número total de pacientes con respuesta evaluable

Seguridad

La incidencia de EA, EAG, anomalías de laboratorio clínico y anomalías del ECG

La incidencia de interrupciones del tratamiento, modificaciones, interrupciones debidas a eventos adversos

EA de grado 3 y grado 4 y anomalías de laboratorio clínico

5.3.2.2 Secundario

Farmacocinética

Área bajo la curva de concentración sérica-tiempo (AUC)

Concentración máxima en suero (Cmáx)

Concentración mínima en suero (Cmín)

Volumen de distribución en estado estacionario (Vss)

Inmunogenicidad

Biomarcadores farmacodinámicos

Cambios en subconjuntos de monocitos de sangre entera por citometría de flujo

Cambios en el análisis multiplex de niveles de citocinas

Eficacia

La supervivencia general (SG) se definirá como el tiempo entre la primera dosis del fármaco del estudio y la muerte. SG de un año

Mediana de SG

La duración de la respuesta (DOR) se definirá como el tiempo desde la respuesta (RC o RP) hasta el inicio de la PD que se confirma posteriormente.

La supervivencia sin progresión (PFS) se definirá para cada paciente como el tiempo desde la primera dosis hasta la primera observación de progresión de la enfermedad o muerte por cualquier causa.

5.3.2.3 Exploratorio

Biomarcadores farmacodinámicos

Cambios en los niveles séricos de marcadores seleccionados

Niveles de MDSC periféricas por citometría de flujo

Cambios en la expresión génica en sangre entera o PBMC

5.4 Análisis

5.4.1 Características dem ográficas y basales

Los datos demográficos, la historia médica, otras características basales, la enfermedad concomitante y la medicación concomitante se resumirán por cohorte y en general. Para determinar si se cumplen los criterios para la realización del estudio, se proporcionarán las tablas y listas correspondientes. Estas incluirán una evaluación de las desviaciones del protocolo, el recuento del fármaco del estudio y otros datos que puedan afectar a la realización general del estudio. 5.4.2 A nális is de eficacia

Para cada tipo de enfermedad, la respuesta al tratamiento se resumirá por ORR, definida como la relación entre el número de pacientes que consiguen una respuesta objetiva y el número de pacientes inscritos. Se construirá un intervalo de confianza exacto para la tasa de respuesta. La supervivencia general, la supervivencia al año y la supervivencia media se estimarán mediante el método de Kaplan-Meier. También se presentará el intervalo de confianza correspondiente.

5.4.3 A nális is de seguridad

Se realizarán análisis de seguridad para los pacientes incluidos en la población de seguridad. Los EA, la información de laboratorio clínico, las constantes vitales, el estado funcional según la escala ECOG, el peso y los ECG se presentarán en tablas y se resumirán.

Los EA se resumirán en general y con resúmenes separados para los EAG, EA que llevan a la interrupción, EA que producen la muerte y EA de grado 3 o superior según el CTCAE versión 4.03 del NCI.

El peso y las constantes vitales se resumirán de forma descriptiva (n, media, desviación estándar, mediana, mínimo y máximo). El estado funcional según la escala ECOG se resumirá de manera categórica y descriptiva.

Se proporcionarán tablas de turnos que muestran los recuentos y porcentajes de pacientes clasificados por grado basal y grado máximo durante el tratamiento para los datos de laboratorio por cohorte y en general. Un cambio importante de laboratorio se define como un cambio de un grado 0 basal a un grado 3 (no hematológico) o un grado 4 (hematológico) durante el tratamiento, o un cambio de un grado 1 basal a grado 4 durante el tratamiento. El número y el porcentaje de pacientes con cambios importantes de laboratorio se presentarán en tablas por cohorte y en general.

5.4.4 A nális is farm acocinéticos

Los datos de concentración sérica individual y media de HuAB1 y nivolumab frente al tiempo se representarán por nivel de dosis. Se presentará en formato de tabla la estadística resumida para los datos de concentración séricatiempo y los parámetros PK estimados de HuAB1, cuando sea adecuado. Se evaluará la posible interacción fármacofármaco entre HuAB 1 y nivolumab.

Para HuAB1, se estimarán parámetros PK que incluyen la Cmáx, AUC, Cvalle CL y Vss. Otros parámetros farmacocinéticos, así como la variabilidad entre pacientes, la acumulación de HuAB1 y la proporcionalidad de la dosis se evaluarán cuando se disponga de datos. Los datos farmacocinéticos (HuAB1 y/o nivolumab) recogidos en este estudio pueden utilizarse en combinación con otros estudios para el modelado de exposición-respuesta o PK poblacional, que formará parte de un informe separado.

5.4.5 Inm unogenic idad

Se proporcionará una lista de todos los datos de inmunogenicidad disponibles tanto para HuAB1 como para nivolumab. Adicionalmente, se proporcionará una lista de datos de inmunogenicidad de aquellos pacientes con al menos un ADA positivo en cualquier momento por nivel de dosis. La frecuencia de pacientes con al menos una evaluación positiva de ADA y la frecuencia de pacientes que desarrollan ADA después de una evaluación inicial negativa se proporcionarán por dosis. Para examinar la posible relación entre inmunogenicidad y seguridad, pueden examinarse la frecuencia y el tipo de EA de especial interés mediante el estado de inmunogenicidad general. Se pueden explorar las asociaciones entre las concentraciones previas a la dosis de HuAB1 o nivolumab y las correspondientes evaluaciones de ADA.

5.4.6 A nális is de biom arcadores

Para evaluar los efectos PD de HuAB1 y nivolumab sobre diversos biomarcadores exploratorios (tales como factores solubles, subconjuntos de células inmunitarias de sangre periférica y otros marcadores evaluados por IHC), se presentarán en formato de tabla las estadísticas resumidas para estos marcadores y sus cambios (o cambios porcentuales) desde el inicio, por visita y dosis. Además, el curso temporal de los resultados de los biomarcadores exploratorios se investigará gráficamente, mediante gráficos de resumen o gráficos de pacientes individuales a lo largo del tiempo. Los patrones de cambio en estos valores de biomarcadores a lo largo del tiempo y cómo los patrones difirieron entre los niveles de dosis pueden investigarse adicionalmente utilizando modelos adecuados, por ejemplo, mediante modelos lineales de efectos mixtos.

Se investigarán las posibles asociaciones de medidas de biomarcadores con medidas de eficacia clínica, incluida la SG, según la disponibilidad de datos. Pueden utilizarse métodos tales como, pero sin limitación, la regresión logística para investigar más a fondo tales asociaciones.

Si, en el momento del cierre de la base de datos para los criterios de valoración principales y secundarios, no se dispone de datos de biomarcadores relacionados con los objetivos exploratorios, es posible que estos resultados de análisis de biomarcadores no se incluyan en el CSR (siglas en inglés de informe del estudio clínico), sino que se notifiquen por separado.

Expresión de marcador sérico seleccionado:

los análisis de expresión son de naturaleza descriptiva y están destinados a examinar la distribución de la expresión y evaluar las posibles asociaciones entre la expresión y las medidas de eficacia. Si hay una indicación de una asociación significativa, el trabajo futuro evaluará la expresión como un biomarcador predictivo, incluida la selección de un límite de expresión óptimo para clasificar a los pacientes como positivos o negativos. La selección y validación de corte se llevará a cabo en todos los estudios y se notificará fuera de los CSR individuales. Adicionalmente, los análisis detallados indicados a continuación pueden notificarse fuera del CSR para garantizar la integridad de cualquier posible análisis de validación utilizando datos de este estudio.

Se realizarán los siguientes análisis:

lista de datos de biomarcadores seleccionados

Resumen de la adquisición y las características de la muestra tumoral

Resumen de estadística de expresión por subgrupos seleccionados y en general

Diagrama de caja de expresión por grupo de tratamiento y en general

Las curvas de Sg para cada grupo de tratamiento se estimarán utilizando el método de límite de producto de Kaplan-Meier (KM) para cada subgrupo de cuartil de expresión y para el subgrupo de pacientes con un resultado de IHC desconocido o indeterminado. Los cuartiles de expresión se definirán en función de la población general. Los intervalos de confianza del 95 % bilaterales para la mediana de la SG se calcularán mediante el método de Brookmeyer y Crowley.

Las curvas de PFS determinadas por el investigador para cada grupo de tratamiento se estimarán utilizando el método de límite de producto de KM para cada subgrupo de cuartil de expresión y para el subgrupo de pacientes con un resultado de IHC desconocido o indeterminado. Los cuartiles de expresión se definirán en función de la población general. Los intervalos de confianza del 95 % bilaterales para la mediana de la PFS se calcularán mediante el método de Brookmeyer y Crowley.

Las ORR determinadas por el investigador se calcularán por grupo de tratamiento junto con los IC del 95 % exactos utilizando el método de Clopper-Pearson para cada subgrupo de cuartil de expresión y para el subgrupo de pacientes con un resultado de expresión desconocido o indeterminado. Los cuartiles de expresión se definirán en función de la población general. Se calcularán las razones de probabilidades asociadas y los IC del 95 %.

Diagramas de caja de expresión frente a estado de respuesta por grupo de tratamiento

Diagrama de distribución acumulativa de expresión frente a percentil de población por grupo de tratamiento y en general

Diagramas en cascada de expresión individual por grupo de tratamiento

Diagrama de bosque de las razones de riesgo de SG y PFS con IC del 95 % para cada subgrupo de cuartil de expresión y para el subgrupo de pacientes con un resultado de IHC desconocido o indeterminado. Los cuartiles de expresión se definirán en función de la población general.

5.5 Análisis intermedio

No se prevé ningún análisis intermedio formal.

El patrocinador (y/o la persona designada por este) y el investigador o investigadores revisarán los datos de seguridad de cada cohorte de dosis antes del aumento escalonado o reducción de la dosis. Además, se puede realizar un resumen de datos provisionales en varias ocasiones antes de completar el estudio para facilitar las decisiones del programa y para respaldar presentaciones o publicaciones.

continuación

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APÉNDICE A - Programa de evaluaciones

Fase 1a Monoterapia y combinación de HuAB1 - Programa de evaluaciones del paciente

Notas para el programa de evaluaciones de la fase 1a

a. A menos que se especifique, el procedimiento debe finalizarse en las ± 72 horas posteriores al momento programado y debe sincronizarse con el día de administración de la infusión de HuAB1.

b. Cualquier evaluación clínica, estudio de laboratorio o pruebas adicionales no especificadas se pueden obtener en cualquier momento, si está clínicamente indicado. c. Se realizará un examen físico estándar según lo determine el investigador, particularmente para dar seguimiento a los hallazgos físicos hasta su resolución. Se deben realizar exámenes físicos específicos en cualquier momento para dar seguimiento a los informes de EA.

e. Solo es necesario registrar la altura en la selección (para el cálculo del IMC). Es necesario registrar el peso en el día 1 de cada ciclo. La dosis se ajustará solo si el cambio de peso es > 10 % desde la primera dosis en el ciclo 1, día 1.

e. Las constantes vitales incluyen pulso, frecuencia respiratoria, presión arterial y temperatura en decúbito supino. Medir antes de la dosis y después de finalizar cada infusión IV en los siguientes puntos de tiempo: 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora después de la dosis (30 minutos y 1 hora después de HuAB1 solamente). La pulsioximetría se realiza en reposo y después del esfuerzo antes de la dosificación solamente.

f. Las evaluaciones del estado del paciente según la escala ECOG deben realizarse dentro de las 72 horas previas a la dosificación (día 1 de cada ciclo).

g. Las pruebas de laboratorio para la selección incluyen serología para hepatitis B (HBsAg y HBcAb), hepatitis C (anticuerpos contra el VHC), anticuerpo contra el VIH y prueba de Quantiferon (para TB latente).

h. Pruebas de laboratorio de seguridad clínica:

Hematología incluyendo CBC con diferencial, plaquetas, hemoglobina, hematocrito, RBC e índices de RBC Química incluye CK (creatinina quinasa), AST (aspartato transaminasa), ALT (alanina transaminasa), bicarbonato, bilirrubina, (directa y total), BUN (nitrógeno ureico en sangre), calcio, cloruro, creatinina, glucosa, LDH (lactato deshidrogenasa), fósforo, potasio, sodio y, si procede, embarazo en suero. Si el nivel de CK está elevado en cualquier momento, obtener troponinas (cardíaca y esquelética), isoenzimas CK, aldolasa y ECG; repetir la CK y estas pruebas adicionales diariamente o con otro intervalo según esté clínicamente indicado, hasta que se resuelva o se alcance la estabilidad. Si están elevados los niveles de AST o ALT, obtener bilirrubina sérica total, fosfatasa alcalina; repetir diariamente o con otro intervalo, según esté clínicamente indicado, hasta que se resuelva o se alcance la estabilidad. Se pueden obtener pruebas adicionales en cualquier momento, si está clínicamente indicado. Análisis de orina solo se realizará en la selección y cuando esté clínicamente indicado.

i. Obtener registros de ECG en la visita de selección y finalización del tratamiento/terminación anticipada (después de la extracción de sangre PK, registrar la hora exacta). Se deben obtener ECG adicionales en cualquier momento, si la CK sérica o la troponina cardíaca están elevadas; si son anómalos (excluyendo taquicardia sinusal), se deben obtener ECG (si está clínicamente indicado), hasta que la anomalía se resuelva o se estabilice clínicamente. Se pueden obtener ECG adicionales en cualquier momento, si está clínicamente indicado. Los ECG de cada paciente deben obtenerse en la misma máquina siempre que sea posible. Para minimizar la variabilidad, es importante que los pacientes estén en posición de reposo durante al menos 5 minutos antes de cada evaluación de ECG. La posición del cuerpo debe mantenerse constantemente para cada evaluación de ECG para evitar cambios en la frecuencia cardíaca. Deben evitarse las distracciones ambientales (por ejemplo, televisión, radio, conversación) durante el período de reposo previo al ECG y durante el registro del ECG.

j. CT/MRI de los sitios del tumor medidos según los criterios de evaluación de la respuesta en tumores sólidos (RECIST) v1.1. Si el paciente termina antes de las CR/MRI programadas, el sujeto debe someterse a exploraciones en la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada. El centro debe utilizar la misma modalidad de medición para mantener la coherencia en los distintos puntos de tiempo.

k. Se realiza cada 8 semanas durante los primeros 12 meses para los pacientes que permanecen en tratamiento (y cada 12 semanas a partir de entonces) y 28 días (± 7 días) después de la última dosis del tratamiento del estudio. No es necesario repetir las exploraciones CT/MRI si se realizan dentro de las 8 semanas anteriores a la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada o si se determinó previamente la progresión del tumor.

l. Todas las mujeres en edad fértil (incluidas las que se han sometido a una ligadura de trompas) se someterán a una prueba de embarazo en suero durante la selección, el día 1 del ciclo 1 y en la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada y cuando esté clínicamente indicado.

m. La biopsia en el sitio del tumor primario o metastásico se tomará en la selección y antes de la dosis del día 1 del ciclo 3. Se recomienda que los pacientes con progresión documentada se sometan a otra biopsia al final del tratamiento. Se evaluarán las biopsias para detectar leucocitos asociados a tumores, proliferación tumoral y marcadores de muerte celular.

n. Se recogerán muestras para análisis PK, PD y ADA. No todas las visitas requerirán la recogida de las tres muestras: véase en el apéndice C el programa de recogida.

o. Se recogerá sangre para evaluar la Cmáx y Cmín el día 1 de los fármacos del estudio en los ciclos 1, 2, 3, 5, 8, 9, 13, 21 y al final del tratamiento.

p. Prueba de anticuerpos antinucleares (ANA) mediante anticuerpo fluorescente indirecto (IFA). Si el título es positivo, comprobar la velocidad de sedimentación de eritrocitos (ESR) y la proteína C reactiva (CRP) para confirmar el resultado. Se comprobará antes de la dosis en los ciclos 1, 2, 3, 5, 9, 13, 21, y después cada 6 ciclos durante el tratamiento y en la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada.

q. El fármaco del estudio HuAB1 /- nivolumab se administrará cada 2 semanas en ciclos de 14 días durante 4 semanas. La dosificación puede continuar hasta la progresión de la enfermedad o hasta que se alcance una toxicidad inaceptable.

r. Estas evaluaciones deben realizarse antes de cada dosis posterior (con las excepciones indicadas en el apéndice B) para los pacientes que continúan el tratamiento sin signos de enfermedad progresiva o toxicidad APÉNDICE B - Programa de evaluaciones

Fase 1b HuAB1 Nivolumab - Programa de evaluaciones del paciente

Notas para el programa de evaluaciones de la fase 1b

a. A menos que se especifique, el procedimiento debe finalizarse en las ± 72 horas posteriores al punto de tiempo programado y debe sincronizarse con el día de administración de la infusión de HuAb 1.

b. Cualquier evaluación clínica, estudio de laboratorio o pruebas adicionales no especificadas se pueden obtener en cualquier momento, si está clínicamente indicado.

c. Se realizará un examen físico estándar según lo determine el investigador, particularmente para dar seguimiento a los hallazgos físicos hasta su resolución. Se deben realizar exámenes físicos específicos en cualquier momento para dar seguimiento a los informes de EA. Se tomará una foto de los ojos del sujeto al inicio del estudio y, posteriormente, en las visitas de seguimiento, según esté clínicamente indicado.

e. Solo es necesario registrar la altura en la selección (para el cálculo del IMC). Es necesario registrar el peso en el día 1 de cada ciclo. La dosis se ajustará solo si el cambio de peso es > 10 % desde la primera dosis.

e. Las constantes vitales incluyen pulso, frecuencia respiratoria, presión arterial y temperatura en decúbito supino. Medir antes de la dosis y después de finalizar la infusión IV en los siguientes puntos de tiempo: 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos y 1 hora después de la dosis (30 minutos y 1 hora para HuAB1 solamente). La pulsioximetría se realiza en reposo y después del esfuerzo antes de la dosificación solamente.

f. Las evaluaciones del estado del paciente según la escala ECOG deben realizarse dentro de las 96 horas previas a la dosificación (día 1 de cada ciclo).

h. Pruebas de laboratorio de seguridad clínica:

i. Obtener registros de ECG en la visita de selección y finalización del tratamiento/terminación anticipada (después de la extracción de sangre PK/PD, registrar la hora exacta). Se deben obtener ECG adicionales en cualquier momento, si la CK sérica o la troponina cardíaca están elevadas; si son anómalos (excluyendo taquicardia sinusal), se deben obtener ECG (si está clínicamente indicado), hasta que la anomalía se resuelva o se estabilice clínicamente. Se pueden obtener ECG adicionales en cualquier momento, si está clínicamente indicado. Los ECG de cada paciente deben obtenerse en la misma máquina siempre que sea posible. Para minimizar la variabilidad, es importante que los pacientes estén en posición de reposo durante al menos 5 minutos antes de cada evaluación de ECG. La posición del cuerpo debe mantenerse constantemente para cada evaluación de ECG para evitar cambios en la frecuencia cardíaca. Deben evitarse las distracciones ambientales (por ejemplo, televisión, radio, conversación) durante el período de reposo previo al ECG y durante el registro del ECG. Se pueden obtener pruebas adicionales en cualquier momento, si está clínicamente indicado.

j. CT/MRI de los sitios del tumor medidos según los criterios de evaluación de la respuesta en tumores sólidos (RECIST) v1.1. Si el sujeto termina antes de la exploración CT/MRI programada, el sujeto debe someterse a exploraciones en la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada. La respuesta según CT/MRI se evaluará utilizando RECIST v1.1. En el caso de melanoma resistente a PD-1 y cáncer de pulmón escamoso, las exploraciones CT se tienen que realizar al final de los ciclos 4 y 6. El centro debe utilizar preferentemente la misma modalidad de medición para mantener la coherencia en los distintos puntos de tiempo. Las evaluaciones de tumores para todos los demás tipos de cáncer se realizarán cada 2 meses (4 ciclos) a menos que esté clínicamente indicado.

k. Se realiza cada 8 semanas durante los primeros 12 meses para los sujetos que permanecen en tratamiento (y cada 12 semanas a partir de entonces) y 28 días (± 7 días) después de la última dosis del tratamiento del estudio. No es necesario repetir las exploraciones CT/MRI si se realizan dentro de las 8 semanas anteriores a la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada o si se determinó previamente la progresión del tumor.

l. Todas las mujeres en edad fértil (incluidas las que se han sometido a una ligadura de trompas) se someterán a una prueba de embarazo en suero en la selección y en la visita de finalización del tratamiento/terminación anticipada y cuando esté clínicamente indicado.

m. La biopsia en el sitio del tumor primario o metastásico se tomará en la selección y antes de la dosis del día 1 del ciclo 3. Se recomienda que los sujetos con progresión documentada se sometan a otra biopsia al final del tratamiento. Se evaluarán las biopsias para detectar leucocitos asociados a tumores, proliferación tumoral y marcadores de muerte celular.

q. Tanto HuAB1 como nivolumab se administrarán mediante infusión IV durante 30 minutos. Primero se administrará nivolumab, con un descanso de 30 minutos entre las 2 infusiones, seguido de infusión de 30 minutos de HuAB1.

r. El fármaco del estudio HuAB1 nivolumab se administrará cada 2 semanas en ciclos de 14 días y continuará hasta la progresión de la enfermedad o hasta que se alcance una toxicidad inaceptable.

s. Estas evaluaciones deben realizarse antes de cada dosis posterior (con las excepciones indicadas en el apéndice B) para los pacientes que continúan el tratamiento sin signos de enfermedad progresiva o toxicidad.

APÉNDICE C - Programa de recogida de muestras

Fase 1a/b: Diagrama de flujo del estudio para la recogida de muestras de sangre para evaluaciones farmacocinéticas y farmacodinámicas

continuación

Apéndice D - Recogida de muestras para análisis PD

Muestras de sangre

Análisis de sangre entera

Monocitos CD14+/CD16+

Expresión génica

ADN para análisis de SNP

Análisis de suero

PK de HuAB1

PK de nivolumab

ADA de HuAB1

ADA de nivolumab

ANA (si el resultado es positivo, comprobar la ESR y la CRP para confirmarlo)

Multiplex de citocinas en suero

Marcadores séricos seleccionados

Análisis de PBMC congeladas para caracterización de células T, monocitos y células supresoras derivadas de mieloides por citometría de flujo

• Muestras de biopsia de tumor

• Análisis IHC de biomarcadores seleccionados

• Análisis de expresión génica

• Clonalidad del receptor de células T

• Análisis de neoantígeno

TABLA DE SECUENCIAS

La Tabla 10 proporciona ciertas secuencias analizadas en el presente documento. Todas las secuencias de polipéptidos y anticuerpos se muestran sin secuencias líder, a menos que se indique otra cosa.

T l 1 : n i D ri i n

(co n tin u a c ió n )

continuación

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continuación

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continuación

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(co n tin u a c ió n )

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo anti-CSFIR y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto;

en donde dicho método comprende la administración simultánea o secuencial a dicho sujeto de un anticuerpo anti-CSF1R y un inhibidor de PD-1/PD-L1; y en donde:

el anticuerpo anti-CSF1R se selecciona de:

a) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 39 y una cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 46;

b) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende una CDR1 de cadena pesada (HC) que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 15, una CDR2 de h C que tiene la secuencia de SEQ ID n O: 16 y una CDR3 de HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 17 y una cadena ligera que comprende una CDR1 de cadena ligera (LC) que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 18, una CDR2 de LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 19 y una CDr 3 de LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 20; y

c) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 53 y una cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 60, y

el inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-1 seleccionado de:

a) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la región variable de cadena pesada de nivolumab y una cadena ligera que comprende la región variable de cadena ligera de nivolumab; y b) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende las CDR de cadena pesada de nivolumab y una cadena ligera que comprende las CDR de cadena ligera de nivolumab.

2. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según la reivindicación 1, en donde el inhibidor de PD-1/PD-L1 es nivolumab.

3. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según las reivindicaciones 1 o 2, en donde el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran de manera simultánea.

4. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según las reivindicaciones 1 o 2, en donde se administran una o más dosis del inhibidor de PD-1/PD-L1 antes de administrar el anticuerpo anti-CSF1R.

5. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según la reivindicación 4,

en donde el sujeto recibió un curso completo de la terapia con el inhibidor de PD-1/PD-L1 antes de la administración del anticuerpo anti-CSF1R y el anticuerpo anti-CSF1R se administra opcionalmente durante un segundo curso de terapia con el inhibidor de PD-1/PD-L1.

6. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, en donde al menos una dosis del inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra simultáneamente con el inhibidor anti-CSF1R.

7. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según las reivindicaciones 1 o 2, en donde se administran una o más dosis del anticuerpo anti-CSF1R antes de administrar el inhibidor de PD-1/PD-L1.

8. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según la reivindicación 7,

en donde el sujeto recibió al menos dos, al menos tres o al menos cuatro dosis del anticuerpo anti-CSF1R antes de la administración del inhibidor de PD-1/PD-L1 y, opcionalmente, al menos una dosis del anticuerpo anti-CSF1R se administra simultáneamente con el inhibidor de PD-1/PD-L1.

9. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de 1, 2, 3 o 4 mg/kg.

10. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 0,5-10 mg/kg.

11. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 1-4 mg/kg, tal como de 1, 2 o 4 mg/kg, y el anticuerpo anti-CSF1R se administra a una dosis de 0,5 a 10 mg/kg.

12. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el anticuerpo anti-CSF1R y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administran una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como una vez por semana, o tal como una vez cada 2 semanas, o una vez cada 3 semanas.

13. Un anticuerpo anti-CSFIR y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el cáncer se selecciona de cáncer de pulmón no microcítico, melanoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, carcinoma de células renales, carcinoma hepatocelular, cáncer de vejiga, glioma maligno, cáncer colorrectal y cáncer de endometrio.

14. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el cáncer es recurrente o progresivo después de una terapia seleccionada de cirugía, quimioterapia, radioterapia, o una combinación de las mismas.

15. Un anticuerpo anti-CSF1R y/o un inhibidor de PD-1/PD-L1 para su uso según una de las reivindicaciones anteriores, en donde el cáncer se selecciona de cáncer de pulmón no microcítico, melanoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, carcinoma de células renales, carcinoma hepatocelular, cáncer de vejiga, cáncer de endometrio y glioma maligno; y

en donde el anticuerpo anti-CSFIR se administra a una dosis de 1,2 o 4 mg/kg una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como una vez por semana, o tal como una vez cada 2 semanas, o una vez cada 3 semanas y el inhibidor de PD-1/PD-L1 se administra a una dosis de 0,5 a 10 mg/kg una vez cada 1, 2, 3, 4 o 5 semanas, tal como una vez por semana, o tal como una vez cada 2 semanas, o una vez cada 3 semanas.

16. Una composición que comprende un anticuerpo anti-CSF1R y un inhibidor de PD-1/PD-L1 en donde:

el anticuerpo anti-CSF1R se selecciona de:

el inhibidor de PD-1/PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-1 seleccionado de:

a) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende la región variable de cadena pesada de nivolumab y una cadena ligera que comprende la región variable de cadena ligera de nivolumab;

b) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende las CDR de cadena pesada de nivolumab y una cadena ligera que comprende las CDR de cadena ligera de nivolumab; y

c) nivolumab.