ES2847001T3 - Combinación de tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización como medicamento - Google Patents

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Abstract

Combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización como un medicamento.

Description

DESCRIPCIÓN
Combinación de tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización como medicamento
La presente invención se refiere a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1 para la utilización como medicamento. Se refiere, además, a una composición farmacéutica que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1.
Antecedentes
El cáncer de vejiga es uno de entre varios tipos de cáncer que aparecen a partir del recubrimiento epitelial (es decir, el urotelio) de la vejiga urinaria. Raramente la vejiga resulta afectada por cánceres no epiteliales, tales como el linfoma o el sarcoma. Es una enfermedad en la que se multiplican células anormales sin control en la vejiga. El tipo más común de cáncer de vejiga recapitula la histología normal del urotelio y es conocido como carcinoma de células transicionales o, más apropiadamente, carcinoma de células uroteliales. Las tasas de supervivencia a los cinco años en los Estados Unidos son de aproximadamente 77% (SEER Stat Fact Sheets: Bladder Cancer. NCI, recuperado el 18 de junio de 2014). El cáncer de vejiga es la 9a causa más importante de cáncer, con 430.00 nuevos casos (World Cancer Report 2014. Organización Mundial de la Salud, 2014, páginas del capítulo 1.1., ISBN 9283204298) y 165.000 muertes en 2012.
No se han producido avances importantes en el tratamiento del cáncer de vejiga urotelial (CJU) metastásico en los últimos 30 años. La quimioterapia todavía es el estándar de cuidado. Los resultados en el paciente, especialmente en aquellos en los que no resulta eficaz la quimioterapia o resulta mal tolerada, siguen siendo malos (Choueiri, T. K. et al. Double-blind, randomized trial of docetaxel plus vandetanib versus docetaxel plus placebo in platinum-pretreated metastatic urothelial cancer. J. Clin. Oncol. 30, 507-512, 2012; Bellmunt, J. et al. Phase III trial of vinflunine plus best supportive care compared with best supportive care alone after a platinum-containing regimen in patients with advanced transitional cell carcinoma of the urothelial tract. J. Clin. Oncol., 27, 4454-4461, 2009).
Un sello del CJU es la presencia de tasas elevadas de mutaciones somáticas (Cancer Genome Atlas Research Network., Comprehensive molecular characterization of urothelial bladder carcinoma, Nature 507,315-322, 2014; Lawrence, M. S. et al., Mutational heterogeneity in cancer and the search for new cancer-associated genes, Nature 499, 214-218, 2013; Kandoth, C. et al. Mutational landscape and significance across 12 major cancer types, Nature 502, 333-339, 2013). Estas alteraciones pueden potenciar la capacidad del sistema inmunitario del huésped de reconocer las células tumorales como foráneas debido a un número incrementado de antígenos (Chen, D. S. & Mellman, I. Oncology meets immunology: the cancer-immunity cycle, Immunity 39, 1-10, 2013).
Sin embargo, dichos cánceres también pueden eludir la vigilancia inmunitaria y erradicación mediante la expresión del ligando 1 de muerte celular programada (PD-L1, también denominado CD274 o B7-H1) en el microambiente tumoral (Chen et al., Molecular pathways: next-generation immunotherapy-inhibiting programmed death-ligand 1 and programmed death-1. Clin. Cancer Res., 18, 6580-6587, 2012; Van Rooij, N. et al., Tumor exome analysis reveals neoantigen-specific T-cell reactivity in an ipilimumab-responsive melanoma, J. Clin. Oncol. 31, e439-e442, 2013).
PD-L1 es un regulador negativo de la activación inmunitaria que actúa mediante la inhibición de la función eficaz de las células T. El factor coinhibidor 1 de muerte celular programada (PD-1) y sus ligandos son reguladores clave en un amplio espectro de respuestas inmunitarias y desempeñan un papel crucial en la autoinmunidad y autotolerancia, así como en la inmunología del cáncer. La nueva evidencia sugiere que las células de cáncer podrían utilizar la ruta de PD-1/ligando de PD (PDL) para escapar a la inmunidad antitumoral. Basándose en estos datos, actualmente se están realizando ensayos clínicos humanos de fase temprana con diana en la ruta de PD-1/PDL para múltiples cánceres humanos. Un anticuerpo anti-PD-L1 se encuentran en desarrollo de fase II para cáncer de vejiga metastásico (Powles et al., MPDL3280A (anti-PD-L1) treatment leads to clinical activity in metastatic bladder cancer, Nature. 515 (7528):558-62, 27 de nov., 2014. doi: 10.1038/nature13904.; Errico A., Immunotherapy: PD-1-PD-L1 axis: efficient checkpoint blockade against cancer, Nat Rev Clin Oncol. 12(2):63, feb., 2015. doi: 10.1038/nrclinonc.2014.221. pub. elec. 23 de dic., 2014; Muenst Set al., The PD-1/PD-L1 pathway: biological background and clinical relevance of an emerging treatment target in immunotherapy., Expert Opin Ther Targets., 19(2):201-11, feb., 2015. doi: 10.1517/14728222.2014.980235., pub. elec., 10 de dic., 2014; M. S. Soloway. Intravesical and systemic chemotherapy in the management of superficial bladder cancer. Urol.Clin.North Am. 11 (4):623-635, 1984).
El tasquinimod (en ocasiones denominado TasQ), un análogo de la quinolín-3-carboxiamida, inhibe la interacción de una proteína denominada S100A9 con sus diferentes receptores (TLR4, RAGE, EMMPRIN). El tasquinimod presenta actividades inmunomoduladoras, antiangiogénicas y antimetastásicas. Mediante la utilización como diana de S100A9, el tasquinimod modula las células mieloides supresoras, incluyendo las células mieloides supresoras y los macrófagos (Shen Let al., Tasquinimod Modulates Suppressive Myeloid Cells and Enhances Cancer Immunotherapies in Murine Models., Cancer Immunol Res. 4 de nov., 2014.; Jennbacken Ket al., Inhibition of metastasis in a castration resistant prostate cancer model by the quinoline-3-carboxamide tasquinimod (ABR-215050), Prostate. 72(8):913-24, 1 de jun., 2012. doi: 10.1002/pros.21495. pub. elec., 5 de oct., 2011; Isaacs et al., Identification of ABR-215050 as lead second generation quinoline-3-carboxamide anti-angiogenic agent for the treatment of prostate cancer, Prostate. 66(16):1768-78, 1 de dic., 2006). El tasquinomod se encuentra en desarrollo clínico de fase III para el cáncer de próstata y otros tumores sólidos.
El tasquinimod presenta como diana el microambiente tumoral y modula la función de las células mieloides reguladoras, ejerciendo propiedades inmunomoduladoras, antiangiogénicas y antimetastásicas. El tasquinimod puede suprimir, además, la respuesta hipóxica tumoral, contribuyendo a sus efectos sobre el microambiente tumoral.
Isaacs et al. (Cancer Res. 73(4), 15 de febrero, 2013) da a conocer, basándose en modelos preclínicos, que el tasquinimod resulta eficaz como agente monoterapéutico contra xenoinjertos tumorales de próstata, mama, vejiga y color, en los que la eficacia podría potenciarse adicionalmente en combinación con el fármaco dirigido tapsigargina (G202), que elimina selectivamente las células endoteliales tumorales.
Los inventores ahora han demostrado inesperadamente que el tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, bloquean la proliferación tumoral de una manera sinérgica y pueden utilizarse juntos como medicamento, en particular para el tratamiento del cáncer, y más particularmente para el tratamiento del cáncer de vejiga.
Descripción de la invención
La invención se define mediante las reivindicaciones. Cualquier materia comprendida fuera del alcance según las reivindicaciones se proporciona con fines exclusivamente informativos. Cualesquiera referencias en la descripción a métodos de tratamiento se refieren a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para la utilización en un método para el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia. Se da a conocer en la presente memoria una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización como medicamento.
En un aspecto, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 se selecciona de un anticuerpo y un péptido.
La invención se refiere a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización como medicamento.
La exposición se refiere además a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 que no es un anticuerpo, para la utilización como medicamento. Preferentemente, la exposición se refiere además a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un péptido como inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización como medicamento.
En una realización de la invención, el anticuerpo inhibe PD-L1. En otra realización, el anticuerpo inhibe PD-1.
La exposición se refiere además a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización para el tratamiento del cáncer.
La invención se refiere además a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización para el tratamiento del cáncer.
La exposición se refiere además a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 que no es un anticuerpo, para la utilización para el tratamiento del cáncer. Preferentemente, la exposición se refiere además a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un péptido como PD-1 y/o PD-L1, para la utilización para el tratamiento del cáncer.
En una realización, la combinación está destinada a la utilización en el tratamiento del cáncer en estadio avanzado. El cáncer en estadio avanzado puede seleccionarse, p.ej., de entre cáncer metastásico establecido o cáncer en estadio tardío.
En particular, dicho cáncer se selecciona de cáncer de vejiga, melanoma, cáncer de pulmón, tal como CPCNP (cáncer pulmonar de células no pequeñas), cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer pancreático, cáncer prostático, carcinoma de células renales, neoplasias malignas hematológicas, en particular neoplasias malignas hematológicas avanzadas, cáncer ovárico, en particular, cáncer ovárico resistente al platino, tumores neuroendocrinos (TNE) y tumores neuroendocrinos gastroenteropancreáticos (TNE-GEP). El cáncer de tratado con la combinación de la presente invención puede encontrarse en cualquier estadio, p.ej., estadio temprano o estadio tardío. En algunas realizaciones, el tratamiento resulta en una respuesta sostenida en el individuo tras el cese del tratamiento. En algunas realizaciones, el tratamiento produce una respuesta completa, una respuesta parcial o una enfermedad estable en el individuo.
En una realización preferente, la invención se refiere además a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización para el tratamiento de cáncer seleccionado de cáncer de vejiga, melanoma, cáncer pulmonar, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, neoplasias malignas hematológicas, en particular neoplasias malignas hematológicas avanzadas, cáncer ovárico, en particular cáncer ovárico resistente al platino, y tumores neuroendocrinos (TNE), en particular tumores neuroendocrinos gastroenteropancreáticos (TNE-GEP).
En una realización preferente, la invención se refiere además a una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización para el tratamiento de cáncer seleccionado de cáncer de vejiga, cáncer de próstata y carcinomas de células renales.
Más particularmente, la combinación para la utilización tal como se ha mencionado anteriormente es para el tratamiento del cáncer de vejiga, en particular cáncer de vejiga no invasivo muscular, cáncer de vejiga invasivo muscular y cáncer de vejiga metastásico y urotelial.
En una realización, el cáncer es cáncer de vejiga.
El cáncer de vejiga se define mediante un sistema de estadificación, que es un modo estándar para que el equipo de cuidado del cáncer describa en qué medida se ha extendido un cáncer. El sistema de estadificación que con más frecuencia se utiliza para el cáncer de vejiga es el Comité Conjunto Americano para el sistema TNM del cáncer (AJCC, por sus siglas en inglés), que se basa en 3 datos clave:
• T describe en qué medida ha crecido el tumor principal (primario) a través de la pared de la vejiga y si ha crecido hasta introducirse en tejidos próximos.
• N indica cualquier extensión del cáncer a ganglios linfáticos próximos a la vejiga.
• M indica si el cáncer se ha extendido (metastizado) o no a sitios distantes, tales como otros órganos o ganglios linfáticos que no están próximos a la vejiga.
Los números o letras aparecen después de la T, N y M para proporcionar más información sobre cada uno de dichos factores. Los números más elevados se refieren a que el cáncer es más avanzado.
Más específicamente, la categoría T describe hasta dónde ha crecido el tumor principal dentro de la pared de la vejiga (o más allá).
La pared de la vejiga presenta 4 capas principales.
• El revestimiento más interno se denomina urotelio o epitelio transicional.
• Bajo el urotelio se encuentra una capa delgada de tejido conectivo, vasos sanguíneos y nervios.
• A continuación, se encuentra una capa gruesa de músculo.
• Fuera de dicho músculo, una capa de tejido conectivo graso separa la vejiga de otros órganos próximos.
Prácticamente la totalidad de los cánceres de vejiga se inician en el urotelio. A medida que el cáncer crece hacia el interior o a través de las demás capas en la vejiga, se vuelve más avanzado.
• TX: El tumor principal no puede ser evaluado debido a la falta de información.
• T0: No hay evidencia de un tumor primario.
• Ta: Carcinoma papilar no invasivo.
• Tis: Carcinoma plano no invasivo (carcinoma plano in situ, o CPI).
• T1: el tumor ha crecido desde la capa de células que revisten la vejiga hasta el interior del tejido conectivo inferior. No ha crecido hasta el interior de la capa muscular de la vejiga.
• T2: El tumor ha crecido hacia el interior de la capa muscular.
o T2a: el tumor ha crecido únicamente hasta la mitad interna de la capa muscular.
o T2b: El tumor ha crecido hasta la mitad exterior de la capa muscular.
• T3: El tumor ha crecido a través de la capa muscular de la vejiga y hasta el interior de la capa de tejido graso que lo circunda.
o T3a: La extensión hasta el tejido graso sólo puede observarse mediante la utilización de un microscopio.
o T3b: La extensión hasta el tejido graso es suficientemente grande para observarse en pruebas de obtención de imágenes o para observarse o ser percibida por el cirujano.
• T4: El tumor se ha extendido más allá del tejido graso y hasta el interior de órgano o estructuras próximas. Puede crecer en cualquiera de los siguientes: el estroma (tejido principal) de la próstata, las vesículas seminales, útero, vagina, pared pélvica o pared abdominal.
o T4a: El tumor se ha extendido al estroma de la próstata (en hombres) o al útero y/o vagina (en mujeres). o T4b: El tumor se ha extendido a la pared pélvica o a la pared abdominal.
El cáncer de vejiga en ocasiones puede afectar a muchas zonas de la vejiga simultáneamente. En el caso de que se encuentre más de un tumor, se añade la letra 'm' a la categoría T apropiada.
Categorías N de cáncer de vejiga
La categoría N describe la extensión únicamente a los ganglios linfáticos próximos a la vejiga (en la pelvis verdadera) y los presentes a lo largo del vaso sanguíneo denominados arteria ilíaca común. Dichos ganglios linfáticos se denominan ganglios linfáticos regionales. Cualesquiera otros ganglios linfáticos se consideran ganglios linfáticos distantes. La extensión a ganglios distantes se considera metástasis (descrita en la categoría M). Habitualmente se requiere cirugía para encontrar la extensión de cáncer a ganglios linfáticos, ya que con frecuencia no se observa en las pruebas de imagen.
• NX: Los ganglios linfáticos regionales no pueden evaluarse debido a la falta de información.
• N0: No se ha producido extensión a ganglios linfáticos regionales.
• N1: El cáncer se ha extendido a un único ganglio linfático en la pelvis verdadera.
• N2: El cáncer se ha extendido a 2 o más ganglios linfáticos en la pelvis verdadera.
• N3: El cáncer se ha extendido a ganglios linfáticos a lo largo de la arteria ilíaca común.
Categorías M de cáncer de vejiga
• M0: No hay signos de extensión distante.
• M1: El cáncer se ha extendido a partes distantes del cuerpo. (Los sitios más comunes son ganglios linfáticos distantes, los huesos, los pulmones y el hígado).
Estadios del cáncer de vejiga
Una vez se han determinado las categorías T, N y M, se combina dicha información para encontrar el estadio global del cáncer. Los estadios del cáncer de vejiga se definen utilizando 0 y los números romanos I a IV (1 a 4). El estadio 0 es el estadio más temprano, mientras que el estadio IV es el más avanzado.
• Estadio 0a (Ta, N0, M0)
El cáncer es un carcinoma papilar no invasivo (Ta). Ha crecido hacia el centro hueco de la vejiga, aunque no ha crecido hasta el interior del tejido conectivo o músculo de la pared de la vejiga. No se ha extendido a ganglios linfáticos próximos (N0) o a sitios distantes (M0).
• Estadio 0is (Tis, N0, M0)
El cáncer es un carcinoma no invasivo plano (Tis), también conocido como carcinoma plano in situ (CPI). El cáncer crece en la capa de revestimiento interno de la vejiga únicamente. No ha crecido hacia el interior hacia la parte hueca de la vejiga ni ha invadido el tejido conectivo o músculo de la pared de la vejiga. No se ha extendido a ganglios linfáticos próximos (N0) o a sitios distantes (M0).
• Estadio I (T1, N0, M0)
El cáncer ha crecido hasta el interior de la capa de tejido conectivo bajo la capa de revestimiento de la vejiga, aunque no ha alcanzado la capa de músculo en la pared de la vejiga (T1). El cáncer no se ha extendido a ganglios linfáticos próximos (N0) o a sitios distantes (M0).
• Estadio II (T2a o T2b, N0, M0)
El cáncer ha crecido hasta el interior de la capa de músculo grueso de la pared de la vejiga, aunque no ha atravesado por completo el músculo hasta alcanzar la capa de tejido graso que circunda la vejiga (T2). El cáncer no se ha extendido a ganglios linfáticos próximos (N0) o a sitios distantes (M0).
• Estadio III (T3a, T3b o T4a, N0, M0)
El cáncer ha crecido hasta el interior de la capa de tejido graso que circunda la vejiga (T3a o T3b). Podría haberse extendido hasta el interior de la próstata, útero o vagina, aunque no crece hasta el interior de la pared pélvica o abdominal (T4a). El cáncer no se ha extendido a ganglios linfáticos próximos (N0) o a sitios distantes (M0).
• Estadio IV
Se aplica uno de los siguientes:
T4b, N0, M0: el cáncer ha crecido a través de la pared de la vejiga y hasta el interior de la pared pélvica o abdominal (T4b). El cáncer no se ha extendido a ganglios linfáticos próximos (N0) o a sitios distantes (M0).
O BIEN
Cualquiera de T, N1 a N3 o M0: El cáncer se ha extendido a ganglios linfáticos próximos (N1-N3), aunque no a sitios distantes (M0).
O BIEN
Cualquier T, cualquiera de N o M1: El cáncer se ha extendido a ganglios linfáticos distantes o a sitios tales como los huesos, hígado o pulmones (M1).
La combinación de la invención es para la utilización en el tratamiento del cáncer de vejiga de cualquiera de las categorías o estadios anteriormente identificados. Preferentemente, es para la utilización en el tratamiento del cáncer de vejiga de estadio I o más allá, o estadio II o más allá, o estadio III.
En una realización, la combinación para la utilización según la invención mejora la supervivencia libre de progresión y/o la esperanza de vida.
En un aspecto de la combinación según la exposición, el tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, se administran por separado, secuencial o simultáneamente.
En una realización de la combinación según la invención, el tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, se administran por separado, secuencial o simultáneamente.
En un aspecto de la combinación según la exposición, el tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un péptido utilizado como inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, se administran por separado, secuencial o simultáneamente.
La presente exposición se refiere además a una composición farmacéutica que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1.
La invención se refiere además a una composición farmacéutica que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1.
La presente exposición se refiere además a una composición farmacéutica que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un péptido como PD-1 y/o PD-L1.
En particular, dicha composición farmacéutica comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable.
La presente invención se refiere además a productos que comprenden tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, como preparación combinada para la utilización simultánea, la utilización separada o la utilización extendida en el tiempo (es decir, la utilización secuencial) para el tratamiento del cáncer, en particular el cáncer de vejiga. En otra realización preferente, la presente invención se refiere además a productos que comprenden tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un péptido como anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, en forma de una preparación combinada para la utilización simultánea, la utilización separada o la utilización extendida en el tiempo para el tratamiento del cáncer, en particular el cáncer de vejiga, incluyendo, p.ej., el cáncer de vejiga no invasivo muscular, el cáncer de vejiga invasivo muscular y el cáncer de vejiga urotelial metastásico y los cánceres de vejiga de cualquier categoría o estadio tal como se ha indicado anteriormente. Preferentemente, el cáncer de vejiga es un cáncer de vejiga de estadio I o más allá, o de estadio II o más allá, o de estadio III.
La presente exposición se refiere además a un método de tratamiento de cáncer, en particular cáncer de vejiga, que comprende la administración en un paciente que lo necesita, de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, en particular un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, o un péptido como inhibidor de PD-1 y/o PD-L1.
En otro aspecto, la exposición se refiere a un kit que comprende tasquinimod y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 para el tratamiento o el retraso de la progresión de un cáncer en un individuo que sufre de cáncer. El kit puede comprender un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 y un impreso en el paquete que comprende instrucciones para la utilización de tasquinimod en combinación con un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 para tratar o retrasar la progresión del cáncer en un individuo. El kit puede comprender además un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 y un impreso en el paquete que comprende instrucciones para utilizar el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 en combinación con tasquinimod para tratar o retrasar la progresión del cáncer en un individuo que sufre de cáncer. El kit puede comprender además tasquinimod y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 y un impreso en el paquete que comprende instrucciones para utilizar el tasquinimod y el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 para tratar o retrasar la progresión del cáncer en un individuo.
El impreso en el paquete especificará el cáncer que se trata utilizando el kit. En realizaciones de la invención, el cáncer de vejiga incluye, p.ej., cáncer de vejiga no invasivo muscular, cáncer de vejiga invasivo muscular y cáncer de vejiga urotelial metastásico y cánceres de vejiga de cualquier categoría o estadio, tal como se ha indicado anteriormente. Preferentemente, el cáncer de vejiga es un cáncer de vejiga de estadio I o más allá, o de estadio II o más allá, o de estadio III.
El tasquinimod, también conocido como 4-hidroxi-5-metoxi-N,1-dimetil-2-oxo-N-[4-(trifluorometil)fenil]-1,2-dihidroquinolín-3-carboxamida (CAS n° 254964-60-8), es un compuesto de fórmula (It ):
Figure imgf000007_0001
Dicho compuesto, así como los compuestos similares a tasquinimod y su procedimiento de preparación, se describen en la solicitud de patente n° WO 00/03991 (en particular en el Ejemplo 8).
Los compuestos similares al tasquinimod (no según la invención) son, p.ej., compuestos de fórmula general (I):
Figure imgf000007_0002
en la que:
A se selecciona de hidrógeno y -CORa en el que A se selecciona de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, terc-butilo, neopentilo, fenilo, bencilo y fenetilo,
R2 se selecciona de entre metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo y alilo,
R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, bromo, trifluorometilo y -OCHxFy, en el que x = 0 - 2, e y = 1 - 3 con la condición de que x y = 3 y con la condición de que R' no sea hidrógeno en el caso de que R sea metilo, R4 se selecciona de hidrógeno, flúor y cloro, con la condición de que R4 se selecciona de flúor y cloro únicamente en el caso de que R' se selecciona de entre flúor y cloro,
R1 se selecciona de entre metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, cloro, bromo, trifluorometilo, dimetilamino, -OCHxFy y -OCH2CHxFy en el que x = 0 - 2 e y = 1 - 3 con la condición de que x y = 3,
o cualquier tautómero y/o cualesquiera sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
Son ejemplos de dichos compuestos los siguientes: N-ethyl-N-(3-fluoro-phenyl)-1,2-dihidro-4-hidroxi-5-cloro-1-metil-2-oxo-quinolín-3-carboxamida, N-metil-N-(2,4-difluoro-fenil)-1,2-dihidro-4-hidroxi-5-cloro-1-metil-2-oxo-quinolín-3-carboxamida, N-metil-N-(2,5-difluoro-fenil)-1,2-dihidro-4-hidroxi-5-cloro-1-metil-2-oxo-quinolín-3-carboxamida, N-etil-N-(3-metoxi-fenil)-1,2-dihidro-4-hidroxi-5-etil-1-metil-2-oxo-quinolín-3-carboxamida, N-metil-N-(2,5-difluorofenil)-1,2-dihidro-4-hidroxi-5-metoxi-1-metil-2-oxo-quinolín-3-carboxamida, N-metil-N-(4-trifluorometil-fenil)-1,2-dihidro-4-hidroxi-5-metoxi-1 -metil-2-oxo-quinolín-3-carboxamida o N-metil-N-(2,4-difluoro-fenil)-1,2-dihidro-4-hidroxi-5,6-metilén-dioxi-1-metil-2-oxo-quinolín-3-carboxamida.
Los compuestos similares al tasquinimod son preferentemente compuestos de fórmula (Ia):
Figure imgf000007_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:
Ri se selecciona de entre H, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, flúor, cloro, bromo, trifluorometilo y trifluorometoxi,
R2 es alquilo C1-C4,
R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, bromo, trifluorometilo y trifluorometoxi,
R4 se selecciona de entre hidrógeno, flúor y cloro, con la condición de que R4 se selecciona de entre flúor y cloro únicamente en el caso de que R3 se seleccione de entre flúor y cloro, o sales farmacéuticamente aceptable de los mismos.
El término "alquilo C1-C4" se refiere a un grupo alquilo ramificado o no ramificado que presenta 1, 2, 3 o 4 átomos de carbono, es decir, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo o terc-butilo.
En algunas realizaciones, R1 se selecciona de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, flúor, cloro, bromo, trifluorometilo y trifluorometoxi. En algunas otras realizaciones, R1 se selecciona de entre etilo, n-propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, cloro, bromo, trifluorometilo y trifluorometoxi. En todavía otras realizaciones, R1 se selecciona de entre etilo, metoxi, cloro y trifluorometilo. En algunas realizaciones particulares, R1 es metoxi.
La fracción R2 es un radical alquilo C1-C4; radical que puede ser ramificado o lineal. En algunas realizaciones, R2 es un radical alquilo C1-C3. En algunas realizaciones, R2 es metilo o etilo. En algunas realizaciones particulares, R2 es metilo.
La fracción R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, bromo, trifluorometilo y trifluorometoxi. En algunas realizaciones, R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, trifluorometilo y trifluorometoxi. En algunas realizaciones particulares, R3 es trifluorometilo.
R4 se selecciona de entre hidrógeno, flúor y cloro, con la condición de que R4 se seleccione de entre flúor y cloro únicamente en el caso de que R3 se seleccione de entre flúor y cloro. En algunas realizaciones, R4 es hidrógeno o flúor. En algunas realizaciones particulares, R4 es hidrógeno.
En algunas realizaciones particulares, en un compuesto de fórmula (Ia),
R1 y R4 son tal como se ha definido anteriormente en la presente memoria,
R2 es metilo o etilo, en particular metilo, y
R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, trifluorometilo y trifluorometoxi.
En algunas otras realizaciones particulares, en un compuesto de fórmula (Ia),
R1 es tal como se ha definido anteriormente en la presente memoria,
R2 es metilo o etilo, en particular metilo,
R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, trifluorometilo y trifluorometoxi, y R4 es H.
En algunas realizaciones, R3 se encuentra en posición para, es decir, los compuestos de fórmula (Ia) puede representarse mediante la fórmula (Ib):
Figure imgf000008_0001
en la que R1, R2, R3 y R4 son tal como se ha definido anteriormente en la presente memoria.
Por ejemplo, en algunas realizaciones de un compuesto de fórmula (Ib),
R1 y R4 son tal como se ha definido anteriormente en la presente memoria,
R2 es metilo o etilo, en particular metilo, y
R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, trifluorometilo y trifluorometoxi. En algunas otras realizaciones particulares, en un compuesto de fórmula (Ib),
R1 es tal como se ha definido anteriormente en la presente memoria,
R2 es metilo o etilo, en particular metilo,
R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, trifluorometilo y trifluorometoxi, y
R4 es H.
Tal como se ha indicado anteriormente en la presente memoria, en algunas realizaciones, R4 es hidrógeno. En dichas realizaciones, el compuesto de fórmula (Ia) puede representarse mediante la fórmula (Ic):
Figure imgf000009_0001
en la que R1, R2 y R3 son tal como se ha definido anteriormente en la presente memoria.
Por ejemplo, en algunas realizaciones de un compuesto de fórmula (Ic),
R2 es metilo o etilo, en particular metilo,
R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, trifluorometilo y trifluorometoxi,
y R1 es tal como se ha definido anteriormente en la presente memoria.
En algunas realizaciones particulares de un compuesto de fórmula (Ia), R3 se encuentra en posición para y R4 es H, y el compuesto tal como se define en la presente memoria puede en este caso representarse mediante la fórmula (Id):
Figure imgf000009_0002
en la que R1, R2 y R3 son tal como se ha definido anteriormente en la presente memoria.
En algunas realizaciones particulares de un compuesto de fórmula (Id), R2 es metilo o etilo, en particular metilo; R3 se selecciona de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, trifluorometilo y trifluorometoxi y R1 es tal como se define en la presente memoria.
Para el propósito de la presente exposición, cualquier referencia a un compuesto de fórmula (I) también debe entenderse como una referencia a un compuesto de cualquiera de las fórmulas (Ia), (Ib), (Ic) y (Id), a menos que se indique lo contrario o resulte evidente a partir del contexto.
Se prevé que cualquiera o todos los compuestos similares a tasquinimod tal como se ha definido anteriormente en la fórmula (I), (Ia), (Ic) y (Id) muestre un efecto sinérgico en combinación con un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 para el tratamiento del cáncer. Por lo tanto, la exposición también se refiere a una combinación de un compuesto similar a tasquinimod y a un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 para la utilización como medicamento, particularmente para la utilización en el cáncer y más particularmente para la utilización en el cáncer de vejiga. Todos los aspectos indicados en la presente memoria para una combinación de tasquinimod con un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 se aplican igualmente a una combinación de un compuesto similar a tasquinimod y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1. De manera similar, todos los aspectos indicados en la presente memoria para composiciones farmacéuticas, productos, kits, métodos de tratamiento y usos se aplican igualmente a una combinación de un compuesto similar al tasquinimod y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1.
La expresión de "sal farmacéuticamente aceptable" de tasquinimod o un compuesto similar al tasquinimod se refiere a que el compuesto se modifica mediante la preparación de sales de ácido o base del mismo. Entre las sales farmacéuticamente aceptables se incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario del compuesto, por ejemplo a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Por ejemplo, entre dichas sales no tóxicas convencionales se incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos, tales como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico, nítrico y similares, y las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos, tales como los ácidos acético, propanoico, succínico, tartárico, cítrico, metanosulfónico, bencenosulfónico, glucurónico, glutámico, benzoico, salicílico, toluenosulfónico, oxálico, fumárico, maleico y similares. Entre las sales de adición adicionales se incluyen sales amónicas tales como trometamina, meglumina, epolamina, etc.; sales metálicas, tales como sodio, potasio, calcio, cinc o magnesio. Las sales farmacéuticamente aceptables de tasquinimod pueden sintetizarse a partir del compuesto parental mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales pueden prepararse mediante la reacción de las formas libres de ácido o base de dichos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un solvente orgánico, o en una mezcla de los dos. Generalmente, resultan preferentes medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Se encuentran listas de sales adecuadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed. (Mack Publishing Company, 1985, página 1418 PD-1 es una proteína transmembranal de tipo I de la superfamilia de las inmunoglobulinas (Ishida et al., Induced expression of PD-1, a novel member of the immunoglobulin gene superfamily, upon programmed cell death. EMBO J 1992; 11(11 ):3887-95), cuya estructura incluye un dominio extracelular, similar a la región variable de una inmunoglobulina, seguido de una región transmembranal y una cola citoplasmática (Zhang et al., Structural and functional analysis of the costimulatory receptor programmed death-1, Immunity 2004; 20(3):337-4).
Se une a dos ligandos, conocidos como PD-L1 (B7-H1, CD274) y PDL2 (B7-DC, CD273), que pertenecen a la familia de la proteína B7). PD-L1 también es conocido como cúmulo de diferenciación 274 (CD274) u homólogo 1 de B7 (B7-H1) y es una proteína que en seres humanos está codificada por el gen CD274. PD-L1 es una proteína transmembranal de tipo 1 de 40 kDa que se ha conjeturado que desempeña un papel importante en la supresión del sistema inmunitario durante sucesos particulares, tales como el embarazo, aloinjertos de tejido, enfermedad autoinmune y otros estados de enfermedad, tales como la hepatitis. Normalmente, el sistema inmunitario reacciona con antígenos foráneos, en donde se produce cierta acumulación en los ganglios linfáticos o bazo que inducen una proliferación de células T CD8+ específicas de antígeno. La formación de complejo de receptor de PD-1/PD-L1 o ligando PD-L1 de receptor B7.1 transmite una señal inhibidora que reduce la proliferación de dichas células T CD8+ en los ganglios linfáticos y complementariamente a dicho PD-1 también es capaz de controlar la acumulación de células T específicas de antígeno foráneo en los ganglios linfáticos mediante apoptosis que es mediada adicionalmente por una menor regulación del gen Bcl-2 (Chemnitz et al., (julio 2004), SHP-1 and SHP-2 associate with immunoreceptor tyrosinebased switch motif of programmed death 1 upon primary human T cell stimulation, but only receptor ligation prevents T cell activation, Journal of Immunology 173 (2): 945-54).
La expresión "inhibidor de PD-1" se refiere a cualquier inhibidor o antagonista del efecto biológico de Pd-1, es decir, una molécula que bloquea la interacción entre PD-1 y sus ligandos, PD-L1 y PD-L2.
La expresión "inhibidor de PD-L1" se refiere a cualquier inhibidor o antagonista del efecto biológico de PD-L1, es decir, una molécula que bloquea la interacción entre PD-L1 y su receptor o receptores, p.ej., PD-1 y/o B7.1 (CD80).
Un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 puede ser, p.ej., una molécula pequeña, un péptido, una proteína, un anticuerpo, un ácido nucleico antagonista, tal como ARNip, ARNmi, ARN antisentido o similar.
En la presente invención, en la combinación para la utilización según la invención, o composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 es un anticuerpo.
El experto en la materia conoce cómo determinar si un compuesto es un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 mediante el ensayo en un ensayo apropiado. La unión de inhibidores de PD-1 y/o PD-L1 y/o PD-L2 puede medirse, p.ej., en ensayos de tipo ELISA que son bien conocidos de la técnica. Los bioensayos para medir el efecto biológico de la inhibición de PD-1 y/o PD-L1 y/o PD-L2 son bien conocidos por el experto en la materia. Por ejemplo, un ensayo denominado "ensayo de reacción de linfocitos mixtos" (MLR, por sus siglas en inglés) ha sido descrito (póster LB-266, presentado en el congreso de 2014 de la Asociación Americana de Investigación del Cáncer, AACR 2014). En dicho ensayo, los monocitos sanguíneos periféricos aislados procedentes de un donante humano se diferencian en células dendríticas (CD) y después se mezclan con células T CD4+ aisladas a partir de un segundo donante. Se midieron los niveles de IL-2 tras 48 horas en presencia o en ausencia de concentraciones crecientes de un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 y se compararon con un control apropiado (tal como un control de isotipo en el caso de que el inhibidor fuese un anticuerpo).
Son ejemplos de inhibidores de PD-L1 adecuados que son péptidos, p.ej., los péptidos indicados en el documento n° WO 2013/144704, en particular un péptido denominado a UR-012, que se describe en Proceedings: AACR Annual Meeting 2014; 5-9 de abril, 2014; San Diego, CA, y que actúa como antagonista de las actividades de tanto PD-L1 como PD-L2.
La expresión "anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1" se refiere a un anticuerpo capaz de bloquear la ruta de PD-1 y/o PD-L1, preferentemente mediante el bloqueo de la unión entre PD-1 y PD-L1. Dichos anticuerpos son conocidos por el experto en la materia. Los ejemplos pueden ser nivolumab, nombre comercial: Opdivo®, también conocido como ONO-4538, BMS-936558 o MDX1106 (Bristol-Myers Squibb). Nivolumab es una IgG4 e inhibe PD-1. Son ejemplos adicionales, pembrolizumab, también conocido como MK-3475 (Merck & Co.); pidilizumab, también conocido como CT-011 (CureTech), ambos también inhibidores de PD-1. Son ejemplos de anticuerpos de PD-L1, p.ej., BMS936559, un anticuerpo IgG4 totalmente humanizado, MPDL3280A o MEDI4736, ambos anticuerpos IgG1 humanos. AMP-224 es una proteína de fusión B7-DC-Fc que puede bloquear el receptor de PD-1 competitivamente. Proteínas de fusión tales como AMP-224 son inhibidores de PD-1 y/o PD-L1, que puede utilizarse en la combinación, composición farmacéutica, producto, kit o método de tratamiento de la presente invención.
En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-1 (p.ej., un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico). En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 se selecciona del grupo que consiste en nivolumab (MDX-1106), pembrolizumab (Merck 3475) y CT-011. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 es una inmunoadhesina, tal como, p.ej., una inmunoadhesina que comprende una parte extracelular o ligante de PD-1 de PD-L1 o PD-L2 fusionada con una región constante, tal como una región Fc de una secuencia de inmunoglobulina. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 es AMP-224. En algunas realizaciones, el antagonista de unión de PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-L1. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 se selecciona del grupo que consiste en YW243.55.S70, MPDL3280A (atezolizumab) y MDX-1105. MDX-1105, también conocido como BMS-936559, es un anticuerpo anti-PD-L1 descrito en el documento n° WO2007/005874. El anticuerpo YW243.55.S70 es un anti-PD-L1 descrito en el documento n° WO 2010/077634. MDX-1106, también conocido como MDX-1106-04, ONO-4538 o BMS-936558, es un anticuerpo anti-PD 1 descrito en el documento n° WO 2006/121168. Merck 3745, también conocido como MK-3475 o SCH-900475, es un anticuerpo anti-PD-1 descrito en el documento n° WO2009/114335. CT-011, también conocido como hBAT o hBAT-1, es un anticuerpo anti-PD-1 descrito en el documento n° WO 2009/10161 1. AMP-224, también conocido como B7-DCIg, es un receptor soluble de fusión PDL2-Fc descrito en los documentos n° WO 2010/027827 y n° WO2011/066342. El atezolizumab (MPDL3280A) es un anticuerpo preferente para la utilización en el marco de la presente invención, ya que muestra resultados prometedores en el cáncer de vejiga metastásico. En particular, Roche, el fabricante de atezolizumab, publicó en julio de 2015 que:
• más de la mitad (57%) de las personas con los niveles más altos de expresión de PD-L1 en dicho estudio de fase 1a se encontraban vivos después de 1 año;
• se observaron respuestas completas (RC) en 20 por ciento de los sujetos, y
• los resultados indicaron que la expresión de PD-L1 se correlacionaba con el resultado del atezolizumab en personas con cáncer de vejiga metastásico previamente tratado.
En una realización de la presente invención, en la combinación para la utilización según la invención, o composición farmacéutica según la invencion, o productos según la invención, o métodos según la invención, los anticuerpos de PD-1 y/o PD-L1 preferentes son el pembrolizumab y el nivolumab. Otro anticuerpo preferente para la utilización dentro del alcance de la presente invención es el atezolizumab.
En una realización de la presente invención, la combinación para la utilización según la invención, o la composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, o métodos según la invención, comprende tasquinimod, o cualesquiera sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y pembrolizumab como anticuerpo de PD-1/PD-L1.
En una realización de la presente invención, la combinación para la utilización según la invención, o la composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, o métodos según la invención, comprende tasquinimod, o cualesquiera sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y pidilizumab como anticuerpo de PD-1/PD-L1.
En una realización de la presente invención, la combinación para la utilización según la invención, o la composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, o métodos según la invención, comprende tasquinimod, o cualesquiera sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y nivolumab como anticuerpo de PD-1/PD-L1.
En una realización de la presente invención, la combinación para la utilización según la invención, o la composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, o métodos según la invención, comprende tasquinimod, o cualesquiera sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y atezolizumab (MPDL3280A) como anticuerpo de PD-1/PD-L1.
En una realización de la presente invención, la combinación para la utilización según la invención, o la composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, o métodos según la invención, comprende tasquinimod, o cualesquiera sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y BMS 9356559 como anticuerpo de PD-1/PD-L1.
En una realización de la presente invención, la combinación para la utilización según la invención, o la composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, o métodos según la invención, comprende tasquinimod, o cualesquiera sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y AUR-012 como anticuerpo de PD-1/PD-L1.
Un "anticuerpo" puede ser un anticuerpo natural o convencional en el que dos cadenas pesadas se unen entre sí mediante enlaces disulfuro y cada cadena pesada se une a una cadena ligera mediante un enlace disulfuro. Existen dos tipos de cadena ligera: lambda (l) y kappa (k). Existen cinco clases (o isótopos) principales de cadena pesada, que determinan la actividad funcional de una molécula de anticuerpo: IgM, IgD, IgG, IgA y IgE, que presentan las cadenas pesadas designadas a, ó, £, y y M, respectivamente. Las clases y y a se dividen adicionalmente en subclases basándose en las diferencias relativamente menores en la secuencia y función de CH, p.ej., los seres humanos expresan las subclases siguientes: IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3, IgG4, IgA1 y IgA2. Cada cadena contiene dominios de secuencia diferentes. La cadena ligera incluye dos dominios o regiones: un dominio variable (VL) y un dominio constante (CL). La cadena pesada incluye cuatro dominios: un dominio variable (VH) y tres dominios constantes (CH1, CH2 y CH3, colectivamente denominados CH). Las regiones variables de tanto las cadenas ligeras (VL) como las cadenas pesadas (VH) determinan el reconocimiento y especificidad de unión al antígeno. Los dominios de región constante de las cadenas ligeras (CL) y pesadas (CH) confieren importantes propiedades biológicas, tales como la asociación de cadenas de anticuerpo, la secreción, la movilidad transplacentaria, la unión del complemento y la unión a receptores de Fc (FcR). El fragmento Fv es la parte N-terminal del fragmento Fab de una inmunoglobulina y consiste en las partes variables de una cadena ligera y una cadena pesada. La especificidad del anticuerpo reside en la complementariedad estructural entre el sitio de combinación de anticuerpo y el determinante antigénico. Los sitios de combinación de anticuerpo están constituidos de residuos que proceden principalmente de las regiones hipervariables o determinantes de complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés). Ocasionalmente, los residuos de las regiones no hipervariables o regiones marco (FR, por sus siglas en inglés) influyen sobre la estructura global de dominios y, por lo tanto, sobre el sitio de combinación. Las regiones determinantes de complementariedad o CDR se refieren a las secuencias de aminoácidos que juntas definen la afinidad de unión y especificidad de la región Fv natural de un sitio de unión de inmunoglobulina nativa. Cada una de las cadenas ligeras y pesadas de una inmunoglobulina presenta tres CDR, denominadas CDR1-L1, CDR2-L, CDR3-L y CDR1-H, CDR2-H y CDR3-H, respectivamente. Por lo tanto, un sitio de unión a antígeno convencional de un anticuerpo incluye seis CDR, que comprenden el juego de CDR de cada región V de una cadena pesada y una cadena ligera.
Las "regiones marco" (FR) se refieren a las secuencias de aminoácidos interpuestas entre CDR, es decir, a aquellas partes de las regiones variables de cadenas ligera y pesada de inmunoglobulina que se encuentran relativamente conservadas entre diferentes inmunoglobulinas en una única especie. Cada una de las cadenas ligeras y pesadas de una inmunoglobulina presenta cuatro FR, denominadas FR1-L, FR2-L, FR3-L, FR4-L y FR1-H, FR2-H, FR3-H y FR4-H, respectivamente.
Tal como se utiliza en la presente memoria, una "región marco humana" es una región marco que es sustancialmente idéntica (aproximadamente 85% o más, en particular 90%, 95%, 97%, 99% o 100%) a la región marco de un anticuerpo humano natural.
Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "anticuerpo" denota anticuerpos convencionales y fragmentos de los mismos, así como anticuerpos de dominio único y fragmentos de los mismos, en particular cadena pesada variable de anticuerpos de dominio único y anticuerpos biespecíficos o multiespecíficos humanizados quiméricos.
Tal como se utiliza en la presente memoria, anticuerpo o inmunoglobulina también incluye "anticuerpos de dominio único" que se han descrito más recientemente y que son anticuerpos cuyas regiones determinantes de complementariedad son parte de un polipéptido de dominio único. Entre los ejemplos de los anticuerpos de dominio único se incluyen anticuerpos de cadena pesada, anticuerpos naturalmente sin cadenas ligeras, anticuerpos de dominio único derivados de anticuerpos de cuatro cadenas convencionales y anticuerpos de dominio único artificiales. Los anticuerpos de dominio único pueden derivarse de cualquier especie, incluyendo, aunque sin limitación, el ratón, el ser humano, el camello, la llama, la cabra, el conejo y un bovino. Los anticuerpos de dominio único pueden ser anticuerpos de dominio único naturales conocidos como anticuerpos de cadena pesada desprovistos de cadenas ligeras. En particular, las especies de Camelidae, por ejemplo el camello, el dromedario, la llama, la alpaca y el guanaco, producen anticuerpos de cadena pesada naturalmente desprovistos de cadenas ligeras. Los anticuerpos de cadena pesada de camélido también carecen de dominio CH1.
La cadena pesada variable de dichos anticuerpos de dominio único desprovistos de cadenas ligeras se conoce en la técnica como "VHH" o "nanocuerpo". De manera similar a los dominios VH convencionales, los VHH contienen cuatro FR y tres CDR. Los nanocuerpos presentan ventajas respecto a los anticuerpos convencionales: son aproximadamente diez veces más pequeños que las moléculas de IgG, y como consecuencia pueden producirse nanocuerpos funcionales correctamente plegados mediante la expresión in vitro, consiguiendo simultáneamente un alto rendimiento. Además, los nanocuerpos son muy estables y resistentes a la acción de las proteasas. Las propiedades y producción de los nanocuerpos han sido revisados por Harmsen y De Haard HJ (Appl. Microbiol. Biotechnol. nov. de 2007; 77(1): 13-22).
El anticuerpo de la invención podría ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal. Dicho anticuerpo monoclonal podría estar humanizado. En otro ejemplo, el anticuerpo puede ser un fragmento seleccionado del grupo que consiste en Fv, Fab, F(ab')2, Fab', dsFv, (dsFv)2 , scFv, sc(Fv)2, diacuerpos y VHH.
La expresión "anticuerpo monoclonal" o "mAb" tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a una molécula de anticuerpo de una única composición de aminoácidos que está dirigido contra un antígeno específico y no debe interpretarse que requiere la producción del anticuerpo mediante cualquier método particular. Puede producirse un anticuerpo monoclonal mediante un único clon de células B o hibridoma, aunque también puede ser recombinante, es decir, producirse mediante ingeniería de proteínas.
La expresión "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo manipulado que en su sentido más amplio contiene una o más regiones de un anticuerpo y una o más regiones de otro u otros anticuerpos. En particular, un anticuerpo quimérico comprende un dominio VH y un dominio VL de un anticuerpo derivado de un animal no humano, asociado a un dominio CH y un dominio CL de otro anticuerpo, en particular un anticuerpo humano. Como el animal no humano, puede utilizarse cualquier animal, tal como un ratón, rata, hámster, conejo o similar. Un anticuerpo quimérico también puede denotar un anticuerpo multiespecífico que presenta especificidad para como mínimo dos antígenos diferentes. En una realización, un anticuerpo quimérico presenta dominios variables de origen ratón y dominios constantes de origen humano.
La expresión "anticuerpo humanizado" se refiere a un anticuerpo que inicialmente es de origen total o parcialmente no humano y que ha sido modificado para sustituir determinados aminoácidos, en particular en las regiones marco de las cadenas pesadas y ligeras, a fin de evitar o minimizar una respuesta inmunitaria en seres humanos. Los dominios constantes de un anticuerpo humanizado mayoritariamente son dominios CH y CL humanos. En una realización, un anticuerpo humanizado presenta dominios constantes de origen humano.
Los "fragmentos" de anticuerpos comprenden una parte de un anticuerpo intacto, en particular la región de unión a antígeno o región variable del anticuerpo intacto. Entre los ejemplos de fragmentos de anticuerpo se incluyen Fv, Fab, F(ab')2, Fab', dsFv, (dsFv)2, scFv, sc(Fv)2, diacuerpos, anticuerpos biespecíficos y multiespecíficos formados de fragmentos de anticuerpos. Un fragmento de un anticuerpo también puede ser un anticuerpo de dominio único, tal como un anticuerpo de cadena pesada o VHH.
El término "Fab" denota un fragmento de anticuerpo que presenta un peso molecular de aproximadamente 50.000 Da y actividad de unión a antígeno, en el que aproximadamente la mitad del lado N-terminal de la cadena H y la cadena L completa, entre los fragmentos obtenidos mediante el tratamiento de la IgG con una proteasa, la papaína, se unen entre sí mediante un enlace disulfuro.
El término "F(ab')2" se refiere a un fragmento de anticuerpo que presenta un peso molecular de aproximadamente 100.000 Da y actividad de unión a antígeno, que es ligeramente mayor que el Fab unido mediante un enlace disulfuro de la región bisagra, entre los fragmentos obtenidos mediante tratamiento de la IgG con una proteasa, la pepsina.
El término "Fab" se refiere a un fragmento de anticuerpo que presenta un peso molecular de aproximadamente 50.000 Da y actividad de unión a antígeno, que se obtiene mediante el corte de un enlace disulfuro de la región bisagra del F(ab')2.
Un polipéptido Fv de cadena sencilla ("scFv") es un heterodímero VH::VL unido covalentemente que habitualmente se expresa a partir de una fusión génica que incluye genes codificantes de VH y VL unidos mediante un conector codificante de péptido. El fragmento scFv humano de la invención incluye CDR que se mantienen en la conformación apropiada, en particular, mediante la utilización de técnicas de recombinación génica. Los fragmentos de anticuerpo divalentes y multivalentes pueden formarse espontáneamente mediante asociación de scFv monovalentes o pueden generarse mediante acoplamiento de scFv monovalentes con un conector peptídico, tal como sc(Fv)2 divalente. "dsFv" es un heterodímero VH::VL estabilizado mediante un enlace disulfuro.
"(dsFv)2" denota los dos dsFv acoplados mediante un conector peptídico.
La expresión "anticuerpo biespecífico" o "BsAb" denota un anticuerpo que combina los sitios de unión a antígeno de dos anticuerpos dentro de una única molécula. De esta manera, los BsAb son capaces de unirse a dos antígenos simultáneamente. Se ha utilizado ingeniería genética con frecuencia creciente para diseñar, modificar y producir anticuerpos o derivados de anticuerpo con un conjunto deseado de propiedades de unión y funciones efectoras, tal como se indica en, por ejemplo, el documento n° EP 2050764 A1.
La expresión "anticuerpo multiespecífico" denota un anticuerpo que combina los sitios de unión a antígeno de dos o más anticuerpos dentro de una única molécula.
El término "diacuerpos" se refiere a fragmentos de anticuerpo pequeños con dos sitios de unión a antígeno, que comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado con un dominio variable de cadena ligera (VL) en la misma cadena polipeptídica (VH-VL). Mediante la utilización de un conector excesivamente corto para permitir el apareamiento los dos dominios en la misma cadena, se fuerza el apareamiento de los dominios con dominios complementarios de otra cadena y crea dos sitios de unión a antígeno.
Típicamente, los anticuerpos se preparan según la metodología convencional. Pueden generarse anticuerpos monoclonales utilizando el método de Kohler y Milstein (Nature 256:495, 1975). Para preparar anticuerpos monoclonales útiles en la invención, un animal huésped ratón u otro apropiado se inmuniza a intervalos adecuados (p.ej., dos veces a la semana, semanalmente, dos veces al mes o mensualmente) con las formas antigénicas relevantes. En el animal puede administrarse un "refuerzo" final de antígeno dentro de la semana anterior al sacrificio. Con frecuencia resulta deseable utilizar un adyuvante inmunitario durante la inmunización. Entre los adyuvantes inmunitarios adecuados se incluyen adyuvante completo de Freund, adyuvante incompleto de Freund, alúmina, adyuvante Ribi, Titermax de Hunter, adyuvantes de saponina, tales como QS21 o Quil A u oligonucleótidos inmunoestimulantes que contienen CpG. Otros adyuvantes adecuados son conocidos en el campo. Los animales pueden inmunizarse por vía subcutánea, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, intranasal u otras vías. Un animal dado puede inmunizarse con formas múltiples del antígeno por múltiples vías.
La presente invención proporciona, en determinadas realizaciones, composiciones y métodos que incluyen formas humanizadas de anticuerpos. Entre los métodos de humanización se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, los ind9icados en las patentes US n° 4.816.567, n° 5.225.539, n° 5.585.089, n° 5.693.761, n° 5.693.762 y n° 5.859.205. Las patentes US anteriores n° 5.585.089 y n° 5.693.761, y el documento n° WO 90/07861 también proponen cuatro posibles criterios que pueden utilizarse en el diseño de los anticuerpos humanizados. La primera propuesta era que, para un aceptor, se utilizase un marco de una inmunoglobulina humana particular que es inusualmente homóloga respecto a la inmunoglobulina donante que debe humanizarse, o se utilizase n marco de consenso de muchos anticuerpos humanos. La segunda propuesta era que, en el caso de que un aminoácido en el marco de la inmunoglobulina humana fuese inusual y el aminoácido donante en esa posición fuese típico para las secuencias humanas, se seleccionase el aminoácido donante y no el aceptor. La tercera propuesta es que, en las posiciones inmediatamente contiguas a las 3 CDR en la cadena de inmunoglobulina humanizada se seleccionase el aminoácido donante y no el aminoácido aceptor. La cuarta propuesta es utilizar el residuo aminoácido donante en las posiciones de marco en las que se predice que el aminoácido presenta un átomo de cadena lateral a 3A de las CDR en un modelo tridimensional del anticuerpo, y se predice que sea capaz de interactuar con las CDR. Los métodos anteriores son meramente ilustrativos de algunos de los métodos que utilizaría el experto en la materia para generar anticuerpos humanizados. Al experto ordinario en la materia le resultarán familiares otros métodos de humanización de anticuerpos.
En una realización de las formas humanizadas de los anticuerpos, algunos, la mayoría o todos los aminoácidos fuera de las regiones CDR han sido sustituidos por aminoácidos procedentes de moléculas de inmunoglobulina humana, aunque en donde algunos, la mayoría o todos los aminoácidos dentro de una o más regiones CDR se mantengan sin cambios. Son permisibles pequeñas adiciones, deleciones, inserciones, sustituciones o modificaciones de aminoácidos con la condición de que no anulen la capacidad del anticuerpo de unirse a un antígeno dado. Entre las moléculas de inmunoglobulina humana adecuadas se incluirían las moléculas de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e IgM. Un anticuerpo "humanizado" retendrá una especificidad antigénica siilar a la del anticuerpo original. Sin embargo, mediante la utilización de determinados métodos de humanización, puede incrementarse la afinidad y/o especificidad del anticuerpo utilizando métodos de "evolución dirigida", tal como se indica en Wu et al., I. Mol. Biol. 294:151, 1999.
Pueden prepararse además anticuerpos monoclonales totalmente humanos mediante la inmunización de ratones transgénicos para grandes porciones de loci de cadena pesada y ligera de inmunoglobulina humana. Ver, p.ej., las patentes US n° 5.591.669, n° 5.598.369, n° 5.545.806, n° 5.545.807, n° 6.150.584, y referencias citadas en las mismas. Dichos animales han sido modificados genéticamente de manera que haya una deleción funcional en la producción de anticuerpos endógenos (p.ej., murinos). Los animales se modifican adicionalmente para que contengan la totalidad o una parte de los loci de genes de inmunoglobulina de la línea germinal, de manera que la inmunización de dichos animales resultará en la producción de anticuerpos totalmente humanos del antígeno de interés. Tras la inmunización de estos ratones (p.ej., XenoMouse (Abgenix), ratones mAb_hu (Medarex/GenPharm)), pueden prepararse anticuerpos monoclonales según tecnología estándar del hibridoma. Dichos anticuerpos monoclonales presentarán secuencias de aminoácidos de inmunoglobulina humana y, por lo tanto, no provocarán respuestas de anticuerpos humanos antiratón (KAMA) al administrarlos en seres humanos.
También existen métodos in vitro para producir anticuerpos humanos. Entre ellos se incluyen la tecnología de expresión fágica (patentes US n° 5.565.332 y n° 5.573.905) y la estimulación in vitro de células B humanas (patentes USn° 5.229.275 y n° 5.567.610).
En una realización, el anticuerpo de la invención se modifica para reducir o inhibir la capacidad del anticuerpo de mediar en la funcionalidad de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y/o de citotoxicidad celular dependiente del complemento (CDC) (es decir, un anticuerpo con una función de Fc efector reducida). En particular, los anticuerpos de la presente invención no presentan porción Fc o presentan una porción Fc que no se une a FcyRI y C1q. En una realización, la porción Fc del anticuerpo no se une a FcyRI, C1q o FcyRIII. Los anticuerpos con dicha funcionalidad en general son conocidos. Existen anticuerpos de este tipo nativos, tales como anticuerpos con una región Fc de IgG4. También existen anticuerpos con partes Fc genética o químicamente alteradas para eliminar la funcionalidad de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y/o de citotoxicidad dependiente del complemento (CDC).
Los términos "tratar", "tratando", "tratado" o "tratamiento", tal como se utilizan en la presente memoria, se refieren a un tratamiento terapéutico en el que el objetivo es eliminar o reducir los síntomas. Entre los resultados clínicos beneficiosos o deseados se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, la eliminación de síntomas, el alivio de síntomas, la reducción de la extensión de la condición, un estado estabilizado (es decir, que no empeora) de la condición, el retraso o enlentecimiento de la progresión de la condición.
Tal como se utiliza en la presente memoria y a menos que se indique lo contrario, "cáncer" se refiere al crecimiento, división o proliferación de células anormales en el cuerpo. Entre los cánceres que pueden tratarse con las combinaciones, composiciones farmacéuticas, productos y métodos indicados en la presente memoria se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, el cáncer de vejiga, el melanoma, el cáncer pulmonar, tal como CPCNP (cáncer pulmonar de células no pequeñas), el cáncer colorrectal, el cáncer de mama, el cáncer pancreático, el carcinoma de células renales, las neoplasias malignas hematológicas, en particular las neoplasias malignas hematológicas avanzadas, el cáncer ovárico, en particular el cáncer ovárico resistente al platino, los tumores neuroendocrinos (TNE) y los tumores neuroendocrinos gastroenteropancreáticos (TNE-GEP). En particular y tal como se ha mencionado anteriormente, uno de los cánceres que puede tratarse de acuerdo con la presente invención es el cáncer de vejiga, por ejemplo el cáncer de vejiga no invasivo muscular, el cáncer de vejiga invasivo muscular y el cáncer de vejiga urotelial metastásico.
La invención se refiere al tratamiento de cualquiera de las categorías y/o estadios del cáncer de vejiga tal como se ha indicado en detalle anteriormente, en particular en estadio I o más avanzado, o en estadio II o más avanzado o en estadio III.
Tal como se muestra en el Ejemplo 2, posteriormente, los datos de un modelo tumoral experimental indican que el tratamiento del cáncer con tasquinimod puede incrementar los niveles de PD-L1 sobre las células mieloides, atenuando el efecto antitumoral del tasquinimod. Por lo tanto, la adición de un inhibidor de PD-1/PD-L1 al tasquinimod puede potenciar la actividad antitumoral del tasquinimod.
En vista de dichos datos, la invención se refiere además a un método de tratamiento de un paciente que sufre de un cáncer en el que las células de cáncer expresan un nivel detectable o incrementado de p D-1 y/o PD-L1 y/o PD-L2 mediante la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de tasquinimod y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 en el paciente que lo necesita.
En una realización, el paciente en primer lugar se trata con tasquinimod durante un primer periodo, seguido del tratamiento con la combinación según la presente invención durante un segundo periodo. El primer periodo puede ser, p.ej., un periodo durante el que las células de cáncer del paciente no expresan niveles detectables de PD-1 y/o PD-L1 y/o PD-L2. El segundo periodo puede ser, p.ej., un periodo durante el que las células de cáncer del paciente expresan niveles detectables de PD-1 y/o PD-L1 y/o PD-L2.
En consecuencia, la presente invención se refiere además a una combinación para la utilización según la invención, o una composición farmacéutica según la invención, o productos (incluyendo kits) según la invención, para la utilización en el tratamiento de un cáncer en que las células de cáncer expresan un nivel detectable o incrementado de PD-1 y/o PD-L1 y/o PD-L2. Por ejemplo, la combinación de la invención puede utilizarse para el tratamiento del cáncer de vejiga, en el que las células de cáncer expresan niveles detectables de PD-L1.
La invención se refiere además a un método para identificar un paciente que sufre de un cáncer, p.ej., un cáncer de vejiga, quien con mayor probabilidad se beneficiará de un tratamiento con una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, comprendiendo dicho método:
i) en una muestra obtenida del paciente, determinar el nivel de expresión de PD-1, PD-L1 o PD-L2 expresado por las células de cáncer,
en la que un nivel detectable o incrementado de PD-1, PD-L1 o PD-L2 en la muestra obtenida del paciente en comparación con un valor de referencia indica que el paciente con toda probabilidad se beneficiará de un tratamiento con dicha combinación.
El nivel de expresión de PD-1, PD-L1 o PD-L2 puede determinarse, por ejemplo, mediante cualquier método conocido por el experto en la materia, por ejemplo mediante análisis de expresión del ARN mediante PCR, tal como, p.ej., mediante PCR en tiempo real cuantitativa, o mediante un inmunoensayo, tal como, p.ej., un ensayo de inmunosorción ligada a enzima (ELISA) o mediante métodos analíticos de análisis de citometría de flujo (FACS), como, por ejemplo, espectrometría de masas (EM), electroforesis capilar-espectrometría de masas (EC-EM), cromatografía líquida acoplada con espectrometría de masas (CL-EM, CL-EM/e M).
El término "inmunoensayo" tal como se utiliza según la presente invención incluye los ensayos de competición, reacción directa o de tipo sándwich. Entre dichos ensayos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, el ensayo de aglutinación, los inmunoensayos de marcaje y mediados por enzimas, tales como ELISA, el ensayo de tipo biotina/avidina, el radioinmunoensayo, la inmunoelectroforesis y la inmunoprecipitación, y se relaciona más directamente con el ELISA.
La espectrometría de masas (EM), la electroforesis capilar-espectrometría de masas (EC-EM), la cromatografía líquida acoplada a la espectrometría de masas (CL-EM/EM) son todos métodos analíticos muy bien conocidos por el experto en la materia.
Las técnicas citadas anteriormente se describen como métodos apropiados para medir el nivel de PD-1, PD-L1 o PD-L2, aunque el alcance de la invención no se encuentra limitado por dichos ejemplos. Puede utilizarse cualquier otro método conocido por el experto en la materia para la detección del nivel de expresión de PD-1, PD-L1 o PD-L2.
Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "muestra" se refiere a una sustancia de origen biológico. Entre los ejemplos de muestras biológicas se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, sangre, plasma, suero, biopsia o saliva. La muestra biológica según la invención puede obtenerse del sujeto mediante cualesquiera medios apropiados de muestreo conocidos por el experto en la materia.
Para determinar el nivel de expresión de PD-1, PD-L1 o PD-L2 en las células de cáncer, la muestra es preferentemente una biopsia tumoral, p.ej., de un tumor de vejiga.
Preferentemente, el valor de referencia se mide en una muestra del mismo origen tisular que la muestra del paciente de la etapa i) del método anteriormente mencionado.
Preferentemente, el "valor de referencia" corresponde al nivel normal de PD-1, PD-L1 o PD-L2.
Tal como se pretende en la presente memoria, un "nivel normal" de PD-1, PD-L1 o PD-L2 se refiere a que el nivel de PD-L1 en la muestra se encuentra dentro de los valores de corte de la norma para PD-1, PD-L1 o PD-L2. La norma es dependiente del tipo de muestra y del método utilizado para medir el nivel de PD-1, PD-L1 o PD-L2 en la muestra. En particular, el valor de referencia de PD-1, PD-L1 o PD-L2 puede corresponder, de esta manera, a la ausencia o a un nivel basal de expresión de PD-1, PD-L1 o PD-L2 en células normales.
Un nivel detectable de expresión se considera que es estadísticamente significativo en el caso de que el nivel de expresión de PD-1, PD-L1 o PD-L2 en la muestra biológica del paciente se encuentre incrementado respecto a niveles indetectables a detectables de PD-1, PD-L1 o PD-L2. Un nivel incrementado de expresión se considera estadísticamente significativo en el caso de que el nivel de expresión de PD-1, PD-L1 o PD-L2 en la muestra biológica del paciente se encuentre incrementado del orden de por lo menos 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50% respecto al valor de referencia de nivel de expresión.
En el presente contexto, el método para identificar un paciente que sufre de un cáncer, p.ej., un cáncer de vejiga, quien con mayor probabilidad se beneficiará de un tratamiento con una combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, puede llevarse a cabo utilizando un kit. El kit puede comprender, p.ej., un agente para detectar PD-1 y/o PD-L1 en una muestra del paciente. El inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 es preferentemente un anticuerpo. La muestra del paciente se selecciona de entre cualquier muestra apropiada para el tumor que se pretende tratar, p.ej., sangre, orina o una biopsia, p.ej., de la pared de la vejiga. El kit puede comprender además tasquinimod y el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 que se utilizará para tratar el paciente.
Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "paciente" se refiere a un animal de sangre caliente, tal como un mamífero, en particular un ser humano, masculino o femenino, que está afligido por, o presenta el potencial de estar afligido por una o más enfermedades y condiciones indicadas en la presente memoria.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad que resulta eficaz para reducir, eliminar, tratar o controlar los síntomas de las enfermedades y condiciones indicadas en la presente memoria. Una "cantidad eficaz" es la concentración por lo menos mínima requerida para producir una mejora medible o la prevención de un trastorno particular. Una cantidad terapéuticamente eficaz en la presente memoria puede variar según factores tales como el estado de enfermedad, la edad, el sexo y el peso del individuo, y la capacidad del anticuerpo de inducir una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente eficaz también es una cantidad en la que cualesquiera efectos tóxicos o perjudiciales del tratamiento se ven superados por los efectos terapéuticamente beneficiosos. Para el uso profiláctico, entre los resultados beneficiosos o deseados se incluyen resultados tales como la eliminación o reducción del riesgo, la disminución de la severidad o el retraso de la aparición de la enfermedad, incluyendo síntomas bioquímicos, histológicos y/o comportamentales, sus complicaciones y fenotipos patológicos intermedios que se presentan durante el desarrollo de la enfermedad. Para el uso terapéutico, entre los resultados beneficiosos o deseados se incluyen resultados clínicos tales como la reducción de uno o más síntomas resultantes de la enfermedad, incrementando la calidad de vida de aquellos que sufren la enfermedad, reduciendo la dosis de otras medicaciones requeridas para tratar la enfermedad, incrementando el efecto de otras medicaciones, tales como mediante transporte dirigido, retrasando la progresión de la enfermedad y/o prolongando la supervivencia. En el caso de cáncer o un tumor, una cantidad eficaz del fármaco puede presentar el efecto de reducir el número de células de cáncer, de reducir el tamaño del tumor, de inhibir (es decir, retrasar en cierta medida o, deseablemente, detener) la infiltración de las células de cáncer en órganos periféricos, de inhibir (es decir, retrasar en cierta medida y, deseablemente, detener) la metástasis tumoral, de inhibir en cierta medida el crecimiento tumoral y/o aliviar el cierta medida uno o más de los síntomas asociados al trastorno. Puede administrarse una cantidad eficaz en una o más administraciones. Para los fines de la presente invención, una cantidad eficaz de fármaco, compuesto o composiciones farmacéutica o combinación de los mismos, es una cantidad suficiente para conseguir un tratamiento profiláctico o terapéutico directa o indirectamente. Una "cantidad eficaz" en el contexto de administrar más de un agente terapéutico, también se refiere a la cantidad de un único agente en el caso de que, junto con otro u otros agentes, pueda conseguirse o se consigue un resultado deseable.
La expresión "que controla" pretende referirse a todos los procedimientos con los que puede producirse un enlentecimiento, retraso, interrupción, anulación o detención de la progresión de las enfermedades y condiciones indicadas en la presente memoria, aunque no indica necesariamente una eliminación total de todos los síntomas de enfermedad y condición, y pretende incluir el tratamiento profiláctico y la utilización crónica.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "excipiente farmacéuticamente aceptable" se refiere a entidades moleculares y composiciones que no producen una reacción adversa, alérgica u otra reacción adversa al administrarse en un mamífero, especialmente un ser humano, según resulte apropiado. Un excipiente farmacéuticamente aceptable se refiere a un relleno, diluyente, material de encapsulado o auxiliar de formulación sólido, semisólido o líquido no tóxico de cualquier tipo.
En una realización, la combinación para la utilización según la invención, o la composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, se utilizan para tratar el cáncer de vejiga en pacientes en los que la quimioterapia todavía no está indicada clínicamente.
De esta manera, la presente invención se refiere además a una combinación para la utilización según la invención, o composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, para la utilización en el tratamiento del cáncer, en particular de cáncer de vejiga, como un tratamiento de 1a línea.
Se refiere además a un método de tratamiento según la invención, en el que la combinación que comprende tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, en particular un anticuerpo, es un tratamiento de 1a línea.
La expresión "tratamiento de 1a línea" o "terapia de 1a línea" se refiere, en el contexto de la invención, al primer tratamiento proporcionado para tratar un cáncer, en particular cáncer de vejiga. Puede ser parte de un conjunto estándar de tratamientos, tales como cirugía y radiación. También puede utilizarse por sí solo. También puede denominarse terapia de inducción o terapia primaria.
En otra realización, la combinación para la utilización según la invención, o composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, se utilizan para tratar un cáncer, en particular cáncer de vejiga, en pacientes para los que se han indicado otras terapias como tratamientos previos. Entre dichas terapias se incluyen cirugía, quimioterapia, tal como mitomicina C, quimioterapia basada en cisplatino, gemcitabina más cisplatino o metotrexato, vinflunina, vinblastina o doxorrubicina, o terapia de radiación.
De esta manera, la presente invención se refiere además a una combinación para la utilización según la invención, o composición farmacéutica según la invención, o productos según la invención, para la utilización en el tratamiento del cáncer, en particular de cáncer de vejiga, como un tratamiento de 2a, 3 a o 4 a línea.
Se refiere además a un método de tratamiento según la invención, en el que la combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, es un tratamiento de 2a, 3a o 4a línea.
La expresión "tratamiento de 2a línea" o "terapia de 2a línea" se refiere al tratamiento que se proporciona en el caso de que el tratamiento inicial, tal como el tratamiento quimioterapéutico (tratamiento de 1a línea) no funcione o deje de funcionar.
La expresión "tratamiento de 3 a línea" o "terapia de 3 a línea" se refiere al tratamiento que se proporciona en el caso de que tanto el tratamiento inicial, tal como el tratamiento quimioterapéutico (tratamiento de 1a línea) como el tratamiento posterior (tratamiento de 2a línea) no funcione o deje de funcionar.
La expresión "tratamiento de 4 a línea" o "terapia de 4 a línea" se refiere al tratamiento que se proporciona en el caso de que tanto el tratamiento inicial, tal como el tratamiento quimioterapéutico (tratamiento de 1a línea) como el tratamiento posterior (tratamiento de 2a y 3 a línea) no funcionen o dejen de funcionar.
En una realización, la combinación para la utilización según la invención consiste en tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1/PD-L1PD-1 y/o de PD-L1, en particular pembrolizumab (Keytruda®, MK-3475, Merck) o nivolumab (Opdivo, Bristol-Myers Squibb) o atezolizumab (MPDL3280A).
Los compuestos de las combinaciones, composiciones farmacéuticas y productos de la invención pueden prepararse mediante una diversidad de vías sintéticas. Los reactivos y materias primas se encuentran disponibles comercialmente, o se sintetizan fácilmente mediante técnicas bien conocidas por el experto en la materia.
La identificación de los sujetos que requieren tratamiento de las enfermedades y condiciones indicadas en la presente memoria se encuentra perfectamente dentro de la capacidad y conocimientos del experto en la materia. Un médico clínico experto en la materia puede identificar fácilmente, mediante la utilización de ensayos clínicos, el examen físico y la historia médica/familiar, aquellos sujetos que requieren de dicho tratamiento.
El médico o experto acreditado en diagnósticos podrá determinar fácilmente la cantidad terapéuticamente eficaz, al igual que el experto en la materia, mediante la utilización de técnicas convencionales y mediante la observación de los resultados obtenidos bajo circunstancias análogas. En la determinación de la cantidad terapéuticamente eficaz, el médico o experto acreditado en diagnósticos considera varios factores, incluyendo, aunque sin limitación, la especie del sujeto, su tamaño, edad y estado general de salud; la enfermedad específica en cuestión, el grado de afectación o la severidad de la enfermedad; la respuesta del sujeto individual; el compuesto particular administrado; el modo de administración; las características de biodisponibilidad de la preparación administrada; el régimen de dosis seleccionado; la utilización de medicación concomitante y otras circunstancias relevantes.
La cantidad de cada compuesto de las combinaciones, composiciones farmacéuticas y productos de la invención, que resultan necesarios para conseguir el efecto biológico deseado, variarán dependiendo de varios factores, incluyendo la dosis del fármaco que debe administrarse, las características químicas (p.ej., hidrofobicidad) de los compuestos utilizados, la potencia de los compuestos, el tipo de enfermedad, el estado patológico del paciente y la vía de administración.
En particular, las combinaciones para la utilización según la invención, o las composiciones farmacéuticas según la invención, o los productos según la invención, comprenden la dosis conocida como activa para el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 en la enfermedad que debe tratarse, en el cáncer en particular.
En particular, las combinaciones para la utilización según la invención, o composiciones farmacéuticas según la invención o productos según la invención, comprenden entre 0,001 y 50, más particularmente entre 0,01 y 20, y en una realización preferente, entre 0,1 y 5 mg/día de tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización, el tasquinimod se utiliza a una dosis de aproximadamente 0,25 mg o de aproximadamente 0,5 mg o de aproximadamente 1,0 mg, preferentemente al día y preferentemente por vía oral, en el marco de la presente invención.
Más particularmente, las combinaciones para la utilización según la invención, o composiciones farmacéuticas según la invención, o productos según la invención, comprenden entre 0,1 y 1 o 5 mg/día de tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y una dosis correspondiente a la dosis activa del inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 en la enfermedad que debe tratarse, y en el cáncer en particular.
Cada compuesto de las combinaciones según la invención puede administrarse por separado, secuencial o simultáneamente. En el caso de que se administren simultáneamente, los compuestos de las combinaciones de la invención pueden, p.ej., formularse en una única composición farmacéutica. Alternativamente, cada compuesto puede formularse y administrarse independientemente.
De acuerdo con lo anterior, la invención se refiere además a una combinación para la utilización tal como se ha definido anteriormente, en el que el tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, se administran por separado, secuencial o simultáneamente.
En el caso de que se administren secuencialmente, el orden de administración es flexible. Por ejemplo, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 puede administrarse antes de la administración del tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Alternativamente, la administración de tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede preceder a la administración del inhibidor de PD-1 y/o PD-L1.
En una realización, la combinación de la invención comprende aproximadamente 0,5 mg de tasquinimod y aproximadamente 5 mg/kg de un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, tal como, p.ej., nivolumab, ipilimumab o atezolizumab.
En una realización, la combinación de la invención comprende aproximadamente 0,25 mg de tasquinimod y aproximadamente 3 mg/kg de un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, tal como, p.ej., nivolumab, ipilimumab o atezolizumab.
En una realización, la combinación de la invención comprende aproximadamente 0,1 mg de tasquinimod y aproximadamente 1 mg/kg de un inhibidor de PD-1 y/o PD-L1, tal como nivolumab, ipilimumab o atezolizumab.
En el caso de que se administren por separado, pueden administrarse mediante modos iguales o diferentes de administración. Entre los ejemplos de modos de administración se incluyen la administración parenteral, p.ej., subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, así como oral. En una realización de la invención, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 se administra por vía parenteral y el tasquinimod se administra por vía oral.
En otra realización, las combinaciones para la utilización según la invención o composiciones farmacéuticas según la invención, o productos según la invención, están destinadas a la administración oral.
En el caso de que los compuestos de las combinaciones, composiciones farmacéuticas y productos tal como se han definido anteriormente se administran por separado, secuencial o simultáneamente, las composiciones, combinaciones y productos pueden adoptar diversas formas. Pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica, por ejemplo tal como se indica en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a ed.; Gennaro, A. R., Ed.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2000. Los agentes de unión y/o materiales adyuvantes farmacéuticamente compatibles pueden incluirse como parte de la composición. Las composiciones orales generalmente incluyen un portador diluyente inerte o un portador comestible. Pueden administrarse en formas de dosis unitaria, en las que la expresión "dosis unitaria" se refiere a una única dosis que es capaz de ser administrada en el paciente y que puede ser fácilmente manipulada y envasada, manteniéndose como dosis unitaria física y químicamente estable que comprende el compuesto activo mismo o como una composición farmacéuticamente aceptable, tal como se indica posteriormente en la presente memoria.
Los compuestos proporcionados en la presente memoria pueden formularse en composiciones farmacéuticas mediante la mezcla con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Dichas composiciones pueden prepararse para la utilización en la administración oral, particularmente en forma de tabletas o cápsulas, en particular tabletas orodispersables (lyoc), o la administración parenteral, particularmente en la forma de soluciones, suspensiones o emulsiones líquidas.
En particular, el anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1 se formula en una forma para inyección. En particular, el anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1 se administra cada dos o tres semanas. Por ejemplo, el pembrolizumab se formula en unos polvos liofilizados para la inyección y se administran a la dosis de 2 mg/kg cada tres semanas. El nivolumab se formula en una forma líquida para la inyección y se administra a la dosis de 3 mg/kg cada dos semanas.
En particular, el tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se formula en forma de una tableta o cápsula de gelatina dura, más particularmente que comprende entre 0,1 y 10 mg, todavía más particularmente entre 0,2 y 1,5 mg de tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y por ejemplo en una tableta de 0,25, 0,5 o 1 mg de dicho compuesto. En particular, se administra dos veces al día tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Las tabletas, píldoras, polvos, cápsulas, trociscos y similares pueden contener uno o más de los ingredientes siguientes, o compuestos de una naturaleza similar: un ligante, tal como celulosa microcristalina, o goma tragacanto; un diluyente, tal como almidón o lactosa; un desintegrante, tal como almidón y derivados de celulosa; un lubricante, tal como estearato de magnesio; un glidante, tal como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante, tal como sacarosa o sacarina, o un agente saborizante, tal como menta piperita o salicilato de metilo. Las cápsulas pueden encontrarse en forma de una cápsula dura o cápsula blanda, que están generalmente constituidas de mezclas de gelatina opcionalmente mezcladas con plastificadores, así como una cápsula de almidón. Además, las formas de unidad de dosis pueden contener otros materiales diversos que modifican la forma física de la unidad de dosis, por ejemplo recubrimientos de azúcar, shellac o agentes entéricos. Otras formas de dosis oral, jarabe o elixir pueden contener agentes edulcorantes, conservantes, pigmentos, colorantes y saborizantes. Además, los compuestos activos pueden incorporarse en preparaciones y formulaciones de disolución rápida, liberación modificada o liberación sostenida, y en los que dichas formulaciones de liberación sostenida son preferentemente bimodales.
Por ejemplo, el tasquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede formularse en forma de una tableta o cápsula de gelatina dura.
Por ejemplo, el inhibidor de PD-1 y/o PD-L1 puede formularse en forma de líquido o polvos liofilizados reconstituidos y/o diluidos para la administración mediante inyección.
Entre las preparaciones líquidas para la administración se incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones acuosas o no acuosas estériles. Entre las composiciones líquidas pueden incluirse además ligantes, tampones, conservantes, agentes quelantes, agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes, y similares. Entre los solventes no acuosos se incluyen alcoholes, propilenglicol, polietilenglicol, copolímeros de acrilato, aceites vegetales tales como aceite de oliva, y ésteres orgánicos, tales como oleato de etilo. Entre los portadores acuosos se incluyen mezclas de alcoholes y agua, hidrogeles, medios tamponados y solución salina. En particular, el polímero de láctico biodegradable biocompatible, el copolímero de láctido/glicólido, o los copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno pueden ser excipientes útiles para controlar la liberación de los compuestos activos. Entre los vehículos intravenosos pueden incluirse reabastecedores de líquidos y nutrientes, reabastecedores de electrolitos, tales como los basados en dextrosa de Ringer, y similares.
La combinación para la utilización, composiciones farmacéuticas, producto, kit o método de tratamiento de la presente invención puede combinarse adicionalmente con un tratamiento apropiado adicional del cáncer, p.ej., de cáncer de vejiga, tal como cáncer de vejiga avanzado, tal como, p.ej., la quimioterapia o la cistectomía.
La presente invención se ilustra adicionalmente mediante la figura y ejemplo siguientes.
Breve descripción de los dibujos
Figura 1: la combinación de tasquinimod y un anticuerpo de PD-1/PD-L1 sinérgicamente amplifica el efecto antitumoral en comparación con la monoterapia.
Figura 2: perfilado de la expresión génica en tumores MBT-2 derivada de ratones tratados con 30 mg/kg p.o. de tasquinimod dos veces al día desde el día 10 después de la inoculación tumoral. El tratamiento de tasquinimod se llevó a cabo durante 10 días. Los datos se representan como factor de cambio de los tumores tratados en comparación con tumores de control.
Figura 3: mediana de intensidad de fluorescencia (MIF) de PD-L1 en células CD11b+ derivadas de ratones portadores de tumores tratados con tasquinimod. Los ratones fueron tratados con 30 mg/kg p.o. de tasquinimod dos veces al día desde el día 10 después de la inoculación tumoral. El tratamiento de tasquinimod se llevó a cabo durante 7 días. Dicho análisis se llevó a cabo mediante citometría.
Figura 4: el tratamiento con tasquinimod no presentó ningún efecto sobre el crecimiento del tumor MBT-2 establecido e indujo una alteración en el perfil del eje PD-1/PD-L1. (A) Curvas de crecimiento, y (B) peso tumoral de tumores MBT-2 tratados con tasquinimod a una dosis de 30 mg/kg (sonda esofágica, dos veces al día) después de la aleatorización el día 11 después de la inoculación de células tumorales (n=12). Se sacrificaron los ratones. Se recolectaron los tumores, se digirieron y después se sometieron a tinción superficial. (C) Expresión de PD-L1 sobre células mieloides tratadas con vehículo (control) o tasquinimod, 30 mg/kg, el día 15. (D) Datos cuantitativos de la mediana de intensidad de fluorescencia de PD-L1 seleccionado sobre células mieloides infiltrantes CD11b+ (*, p<0,05; prueba de Mann-Whitney, n=5 ratones en cada grupo).
Figura 5: se inyectaron 106 células de MBT-2 por vía subcutánea en ratones C3H/HeNRj. Los animales fueron tratados con anti-PD-L1 o su isotipo (IgG2B) a la dosis de 200 pg mediante inyección intraperitoneal. El tratamiento se inicio (A) el día 1 (prueba de Student; panel izquierdo: *, P=0,0223), o (B) el día 11 después de la inoculación de células tumorales. La media correspondiente ± SEM del peso tumoral se representa en los paneles derechos: (A) día 1: anti-PD-L1 448 ± 258,3 mg vs IgG2B 1535 ± 289,9 mg (prueba de Student test; panel derecho: *, P=0,0188); (B) día 11: anti-PD-L1 806 ± 400,2 mg vs IgG2B 1180 ± 367,4 mg.
Figura 6: combinación de tasquinimod con terapia anti-PD-L1 reduce sinérgicamente el crecimiento tumoral. (A) Diseño del estudio: tumores de MBT-2 subcutáneos se dejaron crecer hasta alcanzar un tamaño medio comprendido entre 50 y 100 mm3 (día 8). Se trataron ratones (n=16) con IgG2B (control), tasquinimod anti-PD-L1 o la combinación de tasquinimod anti-PD-L1. (B) Las curvas de crecimiento tumoral representan mediciones en serie con calibrador. Las barras de error indican medias ± SEM (ANOVA unidireccional; **, P < 0,005, ***, P < 0,001). Los pesos tumorales en el punto final (día 15) se muestran en (C) (prueba de Kruskal-Wallis; *, P < 0,05, **, P < 0,005, ***, P < 0,001). Los experimentos se repitieron por lo menos cuatro veces. Se muestran los resultados de un experimento representativo.
Figura 7: la combinación de tasquinimod con anti-PD-L1 incrementa la actividad de las células T citotóxicas. (A) Datos cuantitativos del porcentaje de células CD8+ infiltrantes tumorales el día 15 después del tratamiento (n=6). (B) Panel izquierdo: las imágenes representativas muestran la inmunotinción para granzima B (tinción marrón) en tumores de grupos de control o tratados. Ampliación original: X200, inserción: vista general del tumor. Barra de escala: 50 pm Panel derecho: cuantificación de las células positivas para granzima B sobre secciones tumorales expresada como un porcentaje de las células totales utilizando un anticuerpo contra granzima B (prueba de Kruskal-Wallis; *, P=0,0326). (C) Niveles de concentración (pg/ml) de las citoquinas siguientes: se cuantificaron IL-1p, IL-7, IL-12(p70) e IL-15 en lisado tumoral de cada grupo utilizando la tecnología Luminex (n=5). (D) Se estimularon esplenocitos (n=5) de cada grupo con PMA/yonomicina en presencia de brefeldina A. Se examinó la producción de IL-2, TNF-a e IFN-y mediante tinción intracelular. Los datos representativos (medias ± SEM) muestran el porcentaje de las diferentes citoquinas seleccionadas en CD8+, analizadas mediante citometría de flujo. Los asteriscos indican significancia estadística utilizando ANOVA unidireccional (*, P<0,05; **, P<0,005). (E) Las barras representan concentraciones de IFN-y en el suero de 10 ratones de cada grupo de tratamiento. Se calcularon los valores de P basándose en la prueba de Kruskal-Wallis entre los diferentes grupos (*, P<0,05; **, P<0,005).
Figura 8: la combinación de un modulador de células mieloides infiltrantes y un inhibidor del eje PD-1/PD-L1 incrementa la proliferación de las células T y las células T productoras de IFN-y. Se aislaron células mieloides CD11b+ a partir de tumores utilizando BD FACSAria II (BD Biosciences). Las células T se aislaron a partir de bazos de ratones no expuestos utilizando el kit de aislamiento de células pan-T de ratón (Miltenyi). Las células T marcadas con CFSE se estimularon con perlas con CD37CD28, proporción 1:1 (Life Technologies). Las células T estimuladas se cultivaron con CD11b+ (en una proporción de CD11b:células T de 1:1) y se incubaron durante 72 horas a 37°C. (A) Histogramas representativos obtenidos mediante análisis de FACS que muestran la intensidad de fluorescencia de células T-CFSE seleccionadas en CD8+. (B) Se muestra el porcentaje de células CD8+ proliferantes de diferentes grupos tratados. (C) La secreción de IFN-y en el sobrenadante del cocultivo se midió 72 horas después de la incubación a 37°C utilizando tecnología Luminex. Los experimentos se repitieron dos veces (prueba de Kruskal-Wallis, *, P<0,05).
Figura 9: se inyectaron células tumorales MBT-2 ortotópicamente en ratones C3H/HeJ hembra. Brevemente, tras un periodo de 4 h de privación de agua, los ratones fueron anestesiados utilizando una mezcla de quetamina y xilazina. Se insertó un catéter (ref. 38121224G, BD Insyte) en la vejiga a través de la uretra y se inyectaron 30 pl de HCl 0,1 N durante 15 segundos y después se sustituyeron por 30 pl de NaOH 0,1 N durante 15 segundos. Las células tumorales MBT-2 (2x106) se instilaron en la vejiga durante 45 minutos. El tratamiento se inició el día 3. Se administró tasquinimod a la dosis de 30 mg/kg mediante sonda esofágica dos veces al día durante 21 días consecutivos. Se inyectó anti-PD1 (clon: RMP1-14) o su control de isotipo (clon 2A3) por vía intraperitoneal a la dosis de 10 mg/kg dos veces a la semana durante dos semanas consecutivas (en D4, D7, D11 y D14). La supervivencia de ratones portadores de tumor MBT-2 tratados con anti-PD1, tasquinimod, la combinación o control de IgG se muestra en la fig. 9 (n=13). Se utilizó la prueba de Dunnet-Hsu para comparar la supervivencia global entre grupos.
Ejemplo 1: efecto sinérgico de la combinación de tasquinimod y un anticuerpo de PD-1/PD-L1 sobre la reducción del volumen tumoral en un modelo de cáncer de ratón.
Se llevó a cabo un estudio inicial para evaluar el efecto de una combinación de tasquinimod y un anticuerpo de PD-1/PD-L1 de la manera siguiente.
Procedimientos experimentales
Ratones y líneas celulares
Se adquirieron ratones C3H/HeN macho de seis a siete semanas de edad de JANVIER Labs. MBT-2, una línea celular de cáncer de vejiga de ratón (M. S. Soloway., Intravesical and systemic chemotherapy in the management of superficial bladder cancer, Urol.Clin.North Am. 11 (4):623-635, 1984), fue proporcionada por el banco celular JCRB y se cultivó en medio esencial mínimo de Eagle (Life Technologies) complementado con suero de feto bovino al 10%.
Crecimiento tumoral y tratamiento
Se inyectaron 1x106 células por vía subcutánea en los flancos de ratones y se dejó que creciesen hasta que los tumores alcanzaron un volumen de entre 40 y 130 mm3 (aproximadamente el día 10-11 después de la inoculación de las células tumorales). A continuación, los animales con tumores se asignaron aleatoriamente a 4 grupos diferentes, tal como se indica en la Tabla 1.
Tabla 1: grupo de animales incluidos en el estudio.
Figure imgf000021_0001
Tal como se ha mencionado en la Tabla 2, los ratones fueron tratados con tasquinimod (30 mg/kg) p.o. (per os, es decir, administración oral) dos veces al día. Para el bloqueo de PD-L1, se administraron i.p. 200 pg del anticuerpo de PD-1/PD-L1 (clon 10F.9G2, Bio-XCell) (vía intraperitoneal) en los ratones cada 3 días. Todos los estudios fueron aprobados por el comité de bioética del IPSEN (CE2A) y por los servicios de veterinaria del Ministerio francés de Agricultura y Pesca.
Tabla 2: lista de los tratamientos aplicados y dosis correspondientes.
Figure imgf000021_0002
Resultados
El anticuerpo de PD-1/PD-L1 o el tasquinimod solo presentaron un ligero impacto no significativo sobre el crecimiento tumoral de los tumores de MBT-2 (ver la Tabla 3 y la figura 1).
Sin embargo, el tratamiento de los ratones con una combinación de ambos compuestos controló eficazmente el crecimiento tumoral.
Tabla 3: media de volúmenes tumorales ± SEM (error estándar de la media) (mm3) en los diferentes grupos tratados.
Los valores de P correspondiente a una prueba T en cada grupo en la comparación con el grupo de control.
Figure imgf000022_0001
Conclusión
Tal como se ha mostrado anteriormente, el tratamiento con una combinación de tasquinimod y anticuerpo de PD-1/PD-L1 estimuló sinérgicamente la actividad antitumoral en ratones.
Ejemplo 2: perfilado de expresión génica en tumores y expresión de PD-L1 en células mieloides derivadas de ratones tratados con tasquinimod.
Métodos
PCR en tiempo real cuantitativa (qRT-PCR)
Los ratones fueron tratados tal como se ha indicado en el Ejemplo 1. Tras 10 días de tratamiento con tasquinimod, es decir, 20 días después de la inoculación tumoral, se aisló el ARN de los tumores a partir de 100 pm de criosecciones de tumor incluidas en OCT utilizando reactivo Trizol (Life Technologies). Se determinó la concentración y pureza del ARN mediante la medición de las relaciones A260/A280 con un espectrofotómetro NanoDrop ND-1000. Se comprobó la integridad del ARN utilizando el bioanalizador Agilent 2100. Se preparó el ADNc utilizando el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (Life Technologies) siguiendo las instrucciones del fabricante. Se llevó a cabo una Q-PCR con un protocolo de PCR de tres etapas (95°C durante 10 min seguido de 40 ciclos de 95°C durante 15 s y 60°C durante 1 min) utilizando la expresión génica Taqman (Life Technologies). Se calcularon los niveles de expresión como valores normalizados de expresión de ACt entre el gen diana y los dos "de mantenimiento" y Hmbs y ciclofilina A para la tecnología Taqman. Los datos se presentan como factor de inducción (2AACt) de tumores tratados en comparación con tumores de control. Las sondas utilizadas en los experimentos fueron las siguientes:
Figure imgf000022_0002
Análisis FACS
Los ratones fueron tratados tal como se ha indicado en el Ejemplo 1. Tras 7 días de tratamiento con tasquinimod, es decir, 17 días después de la inoculación tumoral, se prepararon suspensiones de células individuales a partir de tumores mediante incubación de los mismos, cortados en trozos pequeños, en colagenasa de tipo IV 8 mg/ml (Life Technologies) y ADNasa al 0,1% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) durante 45 minutos a 37°C. Los tumores se pasaron por un filtro celular de 70 pm. Las células se bloquearon con bloqueantes de Fc (clon 2.4G2, BD Biosciences) y después se tiñeron con CD11 b APC (clon M1/70) y CD274 PE Cy7 (clon MIH5) adquiridos de BD Biosciences (San José, CA) y eBioscience, respectivamente. Las células se analizaron con un Fortessa X-20 (BD Biosciences).
Resultados
Se observó una reducción de la expresión de CD206, un marcador de macrófagos M2, y un incremento de la expresión de nos2 e IL-12b, ambos conocidos por ser liberados por los macrófagos M1 (fig. 2). Dicho cambio de fenotipo de los macrófagos, de M2 a M1, inducido por tasquinimod estaba asociado a un incremento de la expresión de ARNm de Cd274 en el microambiente tumoral. Resulta interesante, e inesperado, que los presentes inventores observasen un incremento de la mediana de la intensidad de fluorescencia de PD-L1 expresada sobre las células mieloides de ratones portadores tumorales tratados con tasquinimod (fig. 3). Los resultados de los presentes inventores sugieren fuertemente que el tasquinimod induce un medio local proinflamatorio en los tumores que, a su vez, induce la expresión de PD-L1. Dicho incremento de PD-L1 tras el tratamiento de tasquinimod podría atenuar su respuesta inmunitaria antitumoral y proporciona datos sobre el funcionamiento de una combinación de tasquinimod con anti-PD-L1 en cáncer de vejiga agresivo para potenciar su actividad antitumoral.
Ejemplo 3: la expresión de PD-L1 se encuentra incrementada en tejido tumoral tras el tratamiento de tasquinimod
Los presentes inventores investigaron además si el tasquinimod era capaz de inhibir la progresión tumoral sobre tumores establecidos al administrarlo en un punto temporal posterior a la implantación tumoral. Con este fin, los animales fueron tratados al alcanzar los tumores de MBT-2 un volumen tumoral comprendido entre 50 y 100 mm3 (figs.
4A y B). En el presente contexto, inesperadamente, el tasquinimod (30 mg/kg) perdió su capacidad de inhibir el crecimiento tumoral. A pesar de los efectos inmunoestimuladores del tasquinimod que todavía se mantenían (Tabla S1), aparentemente la activación óptima de la respuesta inmunitaria adaptativa para erradicar tumores primarios resulta comprometida. Los presentes inventores plantearon la hipótesis de que dicha resistencia al tratamiento de tasquinimod podría deberse a la inducción de rutas inhibitorias de las células T, tal como el eje PD-1/PD-L1. En efecto, la expresión de ARNm de PD-L1 se observó que se encontraba incrementada en los tumores de MBT-2 tratados con tasquinimod (Tabla S1). Además, los presentes inventores observaron un incremento de la expresión de PD-L1 seleccionado sobre las células CD11b+, incluyendo MDSC monocíticas, derivadas de tumores de MBT-2 (figs. 4C y D). El nivel de expresión de PD-1 no cambió como resultado del tratamiento de tasquinimod (no mostrado). Estos datos sugieren que las alteraciones de la expresión de PD-L1 podrían ser responsables de la falta de inhibición del crecimiento tumoral en tumores de MBT-2 establecidos expuestos al tratamiento de tasquinimod. Los resultados de los presentes inventores elevaron la expresión de PD-L1 sobre las células mieloides como un potencial mecanismo de resistencia por el que los tumores escapan a los efectos del tratamiento de tasquinimod.
Estos resultados indican que la utilización de un régimen de tratamiento combinado que incluye tasquinimod y bloqueo del eje PD-L1/PD-L1 podría superar dicha resistencia.
Tabla S1: expresión diferencial de ARNm tras el tratamiento de tasquinimod.
Figure imgf000023_0001
Ejemplo 4: el tratamiento de la combinación de tasquinimod/anti-PD-L1 potencia los efectos antitumorales en BCa
Tal como se observó con el tratamiento de tasquinimod en el modelo de tumor de MBT-2, el anticuerpo anti-PD-L1 bloqueó el desarrollo tumoral al administrarlo en forma de un único agente el día 1 después de la inoculación de células tumorales (fig. 5A). Sin embargo, la actividad antitumoral del anticuerpo anti-PD-L1 se perdía en el tratamiento de tumores establecidos, potencialmente debido al incremento de la carga tumoral (figs. 6B y 5A). Por lo tanto, los presentes inventores investigaron si la combinación de un modulador de las funciones de las células mieloides y un inhibidor de punto de comprobación inmunitaria podía potenciar la respuesta antitumoral (figura 6A). Los resultados mostraron que los ratones tratados con tasquinimod en combinación con anti-PD-L1 mostraban un enlentecimiento significativo del crecimiento tumoral (fig. 6B; control: 413±51 mm3; anti-PD-L1: 325±52 mm3; tasquinimod: 343±67; combinación: 129±15 mm3) y peso tumoral (fig. 6C) en comparación con los tratamientos individuales o el grupo de control. Los presentes inventores demostraron que la combinación era superior a las monoterapias con cualquiera de los agentes en cuanto a la respuesta antitumoral.
Ejemplo 5: la combinación de tratamientos incrementa la activación de las células T.
A continuación, los presentes inventores examinaron si los tratamientos combinados podían activar las respuestas inmunitarias adaptativas. Los presentes inventores analizaron el porcentaje de TIL y su capacidad de liberar citoquinas efectoras. La combinación de tasquinimod con anti-PD-L1 indujo un incremento de 2,7 veces de TIL CD8+ (fig. 7A). En paralelo, también se observó un incremento significativo del porcentaje de células linfocíticas productoras de granzima B en el grupo de tratamiento de combinación en comparación con el control (fig. 7B). Los presentes inventores también analizaron el perfil de expresión de citoquinas en tumores expuestos al tratamiento durante 7 días (fig. 7C). IL-7 e IL-15, ambas pertenecientes a la superfamilia de IL-2, se ha informado que incrementan la supervivencia y efectos citotóxicos de las células T en mayor grado que IL-2 31. Inesperadamente, se encontraron fuertes incrementos de producción de IL-7, IL-15 e IL-12 en los tumores tratados con la combinación de tasquinimod y anti-PD-L1 en comparación con el control (fig. 7C). Estas citoquinas no se encontraban significativamente incrementadas en los grupos de tratamiento individual.
A fin de investigar adicionalmente las respuestas inmunitarias que se indujeron mediante la combinación de tasquinimod con anti-PD-L1 en el modelo de tumor de MBT-2, los presentes inventores aislaron esplenocitos procedentes de ratones portadores tumorales y los sometieron a estimulación con PMA/yonomicina durante 4 h. Se encontró un incremento de la expresión intracelular de IL-2, IFN-y y TNF-a seleccionados en CD8+ en el grupo de combinación, en comparación con el control (fig. 7D). Las CD8+ productoras de IFN-y también se encontraban incrementadas en los tumores tratados con anti-PD-LI solo. Además, se observaron cantidades elevadas de IFN-y en el suero de los ratones tratados con las terapias de combinación, en comparación con los tratados con los agentes individuales o con el grupo de control (fig. 7E). Estos datos conjuntamente indican que la combinación de tasquinimod con tratamiento de anti-PD-L1 activó el sistema inmunitario adaptativo, ejerciendo una respuesta inmunitaria citotóxica.
Ejemplo 6: la activación de células inmunitarias tanto innatas como adaptativas resulta necesaria para inducir una respuesta inmunitaria potente.
A fin de entender mejor el mecanismo que subyace al incremento observado de células CD8+ productoras de citoquinas citotóxicas en el grupo de combinación, los presentes inventores plantearon la hipótesis de que las células mieloides derivadas de los tumores tratados podrían interactuar directamente con las células T y afectar a su función. Con este fin, los presentes inventores aislaron células mieloides CD11b+ a partir de los tumores y las cultivaron con células T derivadas de bazos de ratones no expuestos.
La modulación inmunitaria de CD11b+ derivada de tumores establecidos tratados con tasquinimod presenta una capacidad limitada de incremento de la proliferación de las células T CD8+ estimuladas ex vivo (figs. 8A y B). Además, el bloqueo de PD-L1 en CD11b+ derivadas de tumores tratados con anti-PD-L1 también presentaba una capacidad moderada de activar las células T ex vivo. Cabe destacar que la combinación de moduladores de tanto células mieloides y funciones inhibitorias de las células T incrementó fuertemente el porcentaje de células CD8+ proliferantes. Lo anterior se vio acompañado de una potente secreción de IFN-y al sobrenadante en comparación con el control, tasquinimod solo o anti-PD-L1 solo (fig. 8C). En resumen, los presentes inventores encontraron que la combinación de tasquinimod y anti-PD-L1 en tumores de MBT-2 modula las células mieloides inmunosupresoras, afectando a la proliferación de células T positivas para CD8 y la producción de IFN-y. Estos datos corroboran adicionalmente la interacción sinérgica entre las células mieloides y las células T, y sugieren que las intervenciones antitumorales terapéuticas destinadas a modular la comunicación entre poblaciones celulares del sistema inmunitario tanto innato como adaptativo.
Ejemplo 7: la combinación de tasquinimod y un anticuerpo anti-PD-1 prolonga la supervivencia de ratones en un modelo tumoral significativamente más allá de la supervivencia tras el tratamiento con cualquiera de los agentes utilizado solo.
El tasquinimod solo a la dosis de 30 mg/kg no fue capaz de incrementar la mediana de supervivencia de los ratones (27 días) en comparación con 29 días para los ratones de control (fig. 9). Sin embargo, a pesar de la capacidad del tratamiento anti-PD-1 de incrementar la mediana de supervivencia de los ratones a 43 días, la combinación de tasquinimod y anti-PD-1 fue muy superior a cualquiera de los agentes utilizado solo.
Materiales y métodos:
Líneas celulares
Se adquirieron células MBT-2 del Banco celular JCRB y se cultivaron en EMEM (Life Technologies) complementado con suero de feto bovino al 10%. AY-27 fue proporcionado por Oncodesign (Dijon, Francia) y se mantuvieron en RPMI 1640 complementado con suero de feto bovino al 10%. Las líneas celulares se encontraban libres de contaminación por micoplasmas. No se llevó a cabo ningún otro ensayo de autenticación.
Experimentos in vivo
Se adquirieron ratones C3H/HeNRj macho de seis a siete semanas de edad de JANVIER Labs. Se obtuvieron ratas Fischer 344 (F344/lcoCrl) hembra de cinco a seis semanas de edad de CHARLES RIVER.
Se inyectaron células MBT-2 (1x106) por vía subcutánea en los flancos de ratones y se dejó que los tumores resultantes creciesen durante 21 días. Los tumores se midieron con calibrador y se calculó el volumen tumoral (mm3) utilizando la fórmula = (Anchura)2 x Longitud /2.
Los animales fueron tratados con diferentes dosis de tasquinimod (0,1, 1, 10 y 30 mg/kg) mediante sonda oral a un volumen de 10 ml/kg dos veces al día durante 21 días. Para bloquear PD-L1, se administraron 200 |jg de anti-PD-L1 (10F.9G2; BioXCell) o su control de isotipo (LTF-2; BioXCell) en un volumen de 100 j l mediante vía intraperitoneal en los ratones cada 3 días un total de tres a cuatro inyecciones en cada experimento.
Los procedimientos para el modelo de cáncer AY-27 intravesical fueron realizados por Oncodesign (Dijon, Francia). Se inyectaron ortotópicamente células tumorales (1x106) en la cara interna de la pared de la vejiga. El tratamiento con tasquinimod se inició el día 4 a una dosis de 2 mg/kg dos veces al día durante 28 días consecutivos. Se administró cisoplatino (CDDP, EBEVE) a una dosis de 2 mg/kg una vez al día cada 7 días desde el día 4 tras la inoculación de células tumorales. Todas las imágenes de resonancia magnética (MRI) se obtuvieron utilizando ParaVision® (Bruker Biospin).
Todos los procedimientos con los animales fueron validados por el Comité de cuidado y uso de animales de Oncodesign (Oncomet) e IPSEN (C2EA) y fueron autorizados por el Ministerio de Investigación francés.
Análisis FACS
Se prepararon suspensiones de células individuales procedentes de tumores medainte la incubación de los tumores cortados en trozos pequeños en 8 mg/ml de colagenasa IV (Life Technologies) y ADNasa al 0,1% (Sigma-Aldrich) durante 45 min a 37°C. Las células se bloquearon con bloqueantes de Fc (2.4G2) y después se tiñeron con diferentes anticuerpos contra CD11b (M1/70), F4/80 (clone BM8), CD206 (C068C2), Ly6C (AL-21), Ly6G (1A8), CD4 (RM4-5), CD3s (145-2C11), NK-1.1 (PK136) y CD8a (53-6.7) adquiridos de BD Biosciences, eBioscience y BioLegend. Para la tinción de citoquinas, las células se estimularon in vitro con cóctel de activación de leucocitos durante 4 h en presencia de GolgiPlug™ (BD Biosciences), permeabilizadas y fijadas utilizando BD Cytofix/Cytoperm™ (BD Biosciences); después, se tiñeron con los anticuerpos anti-IL-2 (JES6-5H4), anti-TNF-a (MP6-XT22) y anti-IFN-Y (XMG1.2) adquiridos de eBioscience. El análisis de citometría de flujo se llevó a cabo con un BD Fortessa X-20 (BD Biosciences). Los datos fueron analizados utilizando el software FlowJo (Tree Star Inc.). La selección de CD11b+ se llevó a cabo en un BD FACSAria™ II (BD Biosciences) con el apoyo de las instalaciones centrales del Instituto Curie (Orsay, Francia) y la pureza final alcanzada fue superior a 95%. Alternativamente, se separaron las células CD11b+ utilizando microperlas MACS® (Miltenyi). Este procedimiento rindió células predominantemente CD11b+ con una pureza superior a 80% según evaluación mediante análisis de FACS.
Ensayo de proliferación de células T ex vivo
Se aislaron células T (1x105) a partir de bazos de ratones no expuestos utilizando un kit de aislamiento de células pan-T (Miltenyi). Las células T se marcaron con el kit de proliferación celular CFSE CellTrace™ (Life Technologies) y se activaron con el activador T de ratón Dynabeads® CD3/CD28 (Life Technologies) en una proporción de perlas a células de 1:1. Se añadieron células CD11b+ aisladas (1x105) procedentes de tumores a células T marcadas en una proporción de células CD11B:células T de 1:1 y se incubaron en cultivo durante 72 h.
Ensayo de inducción de citoquinas
Se estimularon esplenocitos (1x106) con una mezcla de PMA y yonomicina en presencia de GolgiPlug™ durante 4 h (BD Biosciences). Se recolectaron las células y se tiñeron para marcadores de superficie; después, se permeabilizaron, se fijaron y se tiñeron para las citoquinas intracelulares con los anticuerpos anti-IL-2 (JES6-5H4), anti-TNF-a (MP6-XT22) y anti-IFN-Y (XMG1.2).
Inmunoquímica
La tinción S100A9 se llevó a cabo en secciones de tejido en FFPE procedentes de una micromatriz de tejidos humanos (TMA) que consistía en múltiples tejidos cancerosos (estudio sobre cáncer, Origen y Multitumor Top 4 de Asterand) o tumores BCa (FFPE TMA n° BLC241 y carcinoma de vejiga urinaria, sección n° HuCAT416, Usbiomax). Las secciones tumorales se incubaron con un anticuerpo contra S100A9 (1:5000; Abcam n° ab92507) tras la recuperación del anticuerpo en una solución de pH bajo (Dako) y reacción de peroxidasa/diaminobencidina. La intensidad de la tinción se evaluó semicuantitativamente.
Se muestrearon los tumores animales, se cortaron en dos trozos y se incluyeron en compuesto OCT o se fijaron por inmersión en formalina durante 24 h y se incluyeron en parafina. Las secciones en FFPE (5 pm) se incubaron con granzima B (1:100, Abcam n° ab4059), o anticuerpo S1o0a 9 (1:1000; R&D Systems n° AF2065/ Abcam n° ab62227) o CD8 (1:200; AbD Serotec n° MCA48R) tras la recuperación del antígeno en solución de pH bajo (Dako). La tinción se reveló mediante reacción de peroxidasa/diaminobencidina. El análisis de las imágenes se llevó a cabo en escaneos de portaobjetos utilizando el software Halo (Indica labs). Las células teñidas con granzima B se contaron y se informaron en relación al número total de células en la sección tumoral.
Determinación de citoquinas mediante ensayo multiplex
Las citoquinas se extrajeron de una sección de 1 mm de grosor de tumores incluidos en compuesto OCT congelado (VWR, Francia). Tras tres lavados en PBS, el pellet se resuspendió en PBS cóctel inhibidor de proteasas (Roche) y se molieron con perlas cerámicas en un homogeneizador (Fastprep®, MP Biomedicals). Las diferentes muestras se sometieron a ensayo para la concentración de proteínas. Las citoquinas se midieron utilizando kits de inmunoensayo Multiplex (Merck-Millipore) siguiendo las instrucciones del fabricante. La detección de la señal se llevó a cabo en un Luminex 200 (Luminex) y se registró la mediana de la intensidad de fluorescencia (MIF).
PCR en tiempo real cuantitativa (qRT-PCR)
Se adquirió la matriz de ADNc del estudio del cáncer de Origene y comprendía 381 ADNc (2 a 3 ng/pocillo) procedente de 17 tipos tisulares humanos de una zona normal o enferma.
La extracción del ARN de CD11b+ murino se llevó a cabo utilizando el kit de aislamiento de ARN PicoPure® (Life Technologies). El ARN en los tumores se aisló a partir de criosecciones de 100 pm de grosor de tumores incluidos en OCT utilizando reactivo de trizol (Life Technologies). Los ADNc se prepararon utilizando el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (Life Technologies) siguiendo las instrucciones del fabricante. El ADNc de células CD11 b+ aisladas se preamplificó (14 ciclos) utilizando la mezcla maestra TaqMan PreAmp (Life Technologies). Se llevó a cabo una PCR en tiempo real (q-PCR) con un protocolo de PCR de dos etapas (95°C durante 10 min, seguido de 40 ciclos de 95°C durante 15 s y 60°C durante 1 min) utilizando la expresión génica Taqman (Life Technologies). Las sondas que se utilizaron se documentan en la Tabla S2. Se utilziaron Hmbs como gen "de mantenimiento", cuya expresión se correlacionó con otros genes de mantenimiento cuantificados (p.ej., de ciclofilina A). Se calcularon los niveles de expresión como ACt de valores de expresión normalizados de gen diana a genes "de mantenimiento".
Tabla S2: sondas utilizadas para la qRT-PCR.
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Tabla S2 (continuación)
Figure imgf000027_0001
Estadísticas
Los datos se analizaron utilizando el software Prism 6.0 (GraphPad Software) y fueron validados por un bioestadístico. Los experimentos se repitieron dos a cuatro veces, según se requiriese. La distribución normal de los datos se evaluó utilizando la prueba de Shapiro-Wilk. En este caso, se evaluaron los valores de P mediante prueba t de Student o mediante análisis de la varianza (ANOVA). Para otras distribuciones de los datos, se utilizó una prueba de Mann-Whitney o de Kruskal-Wallis. Un valor de P inferior a 0,05 se consideró estadísticamente significativo (*, P<0,05; **, P<0,01; ***, P<0,001).

Claims (18)

REIVINDICACIONES
1. Combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización como un medicamento.
2. Combinación que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, para la utilización para el tratamiento del cáncer.
3. Combinación para la utilización según la reivindicación 2, en la que el cáncer se selecciona de: cáncer de vejiga, melanoma, cáncer pulmonar, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, neoplasias malignas hematológicas, cáncer ovárico, tumores neuroendocrinos (TNE) y tumores neuroendocrinos gastroenteropancreáticos (TNE-GEP).
4. Combinación para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para el tratamiento del cáncer de vejiga.
5. Combinación para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, para el tratamiento de cáncer de vejiga no invasivo muscular, cáncer de vejiga invasivo muscular o cáncer de vejiga urotelial metastásico.
6. Combinación para la utilización según la reivindicación 4 o 5 para el tratamiento del cáncer de vejiga de estadio I, estadio II o estadio III.
7. Combinación para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la combinación mejora la supervivencia libre de progresión y/o la esperanza de vida.
8. Combinación para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, se administran por separado, secuencialmente o simultáneamente.
9. Combinación para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1 es capaz de bloquear la ruta de PD-1 y/o PD-L1.
10. Combinación para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1 se selecciona del grupo que consiste en nivolumab, pembrolizumab, CT-011, YW243.55.S70, atezolizumab y MDX-1105.
11. Combinación para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1 es el atezolizumab.
12. Composición farmacéutica que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1.
13. Producto que comprende tasquinimod, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un anticuerpo de PD-1 y/o PD-L1, en forma de una preparación combinada para la utilización simultánea, la utilización separada o la utilización secuencial para el tratamiento del cáncer.
14. Composición farmacéutica según la reivindicación 12 o el producto según la reivindicación 13, en la que el anticuerpo de PD-1 y/o PDL1 es tal como se define en las reivindicaciones 9 a 11.
15. Combinación para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o la composición farmacéutica según la reivindicación 12 o 15, o el producto según la reivindicación 13 o 14 para la utilización de cáncer, en particular cáncer de vejiga, en forma de un tratamiento de 1a línea.
16. Combinación para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, o la composición farmacéutica según la reivindicación 12 o 14, o el producto según la reivindicación 13 o 14, para la utilización en el tratamiento de un cáncer, en el que las células de cáncer expresan niveles elevados de PD-1 y/o PD-L1, en particular en un cáncer de vejiga en el que las células de cáncer expresan un nivel detectable o incrementado de PD-1 y/o PD-L1.
17. Combinación, composición farmacéutica o producto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende un anticuerpo de PD-1.
18. Combinación, composición farmacéutica o producto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende un anticuerpo de PD-L1.
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