ES2821966T3 - Molécula de direccionamiento derivada de RBP y utilización de la misma - Google Patents

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Abstract

Molécula de direccionamiento que se dirige a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6, en la que la molécula de direccionamiento es un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP, y en la que la molécula de direccionamiento comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 3 y 6-13.

Description

DESCRIPCIÓN
Molécula de direccionamiento derivada de RBP y utilización de la misma
Campo de la técnica
La presente invención se refiere a una molécula de direccionamiento que se dirige a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada, y una célula que expresa STRA6, un agente de direccionamiento, un portador de direccionamiento, un complejo y una composición que comprende la molécula de direccionamiento, y un método de marcado, detección u obtención de imágenes de dicha célula, y similares.
Antecedentes de la técnica
Los humanos han superado muchas enfermedades mediante quimioterapia. Sin embargo, la quimioterapia que usa fármacos de molécula pequeña convencionales se ha visto afectada por los efectos secundarios provocados por el fármaco que actúa sobre células distintas de la célula diana de la terapia. En los últimos años, para superar este efecto adverso, se han desarrollado técnicas para administrar un fármaco a una célula deseada.
Un método de administración de un fármaco a una célula deseada es la utilización de una molécula de direccionamiento específica para la célula. Por ejemplo, se sabe que el retinoide y su derivado funcionan como moléculas de direccionamiento específicas para células estrelladas, células que producen la matriz extracelular en pulmón, médula ósea, riñón y tractos intestinales, fibroblastos asociados al cáncer y células cancerosas (documentos de patente 1-9, documento no de patente 1). Sin embargo, existe todavía la necesidad de moléculas de direccionamiento adicionales.
Bibliografía de la técnica anterior
Documentos de patentes
Documento de patente 1: WO 2006/068232
Documento de patente 2: WO 2008/120815
Documento de patente 3: WO 2009/036368
Documento de patente 4: WO 2009/116257
Documento de patente 5: WO 2010/014117
Documento de patente 6: WO 2010/026766
Documento de patente 7: WO 2010/029760
Documento de patente 8: WO 2011/158933
Documento de patente 9: WO 2013/073667
Documentos no de patente
Documento no de patente 1: Sato et al., Nat Biotechnol. 2008; 26(4):431-42
El documento EP 2682406 A2 se refiere a una proteína de fusión que comprende albúmina y una proteína de unión a retinol. Choi et al. (Biochem Biophys Res Commun. 3 de febrero de 2012; 418(1):191-7) describen una proteína de fusión recombinante de albúmina y proteína de unión a retinol. Kawaguchi et al. (Science. 9 de febrero de 2007; 315(5813): 820-5) describen que un receptor de membrana para proteína de unión a retinol media la captación celular de la vitamina A y divulgan una proteína de unión a retinol. Heller (J Biol Chem. 25 de mayo de 1975; 250(10): 3613­ 9) describe interacciones de proteína de unión a retinol plasmática con su receptor y divulga una proteína de unión a retinol. Park et al. (Mol Cells. Diciembre de 2012; 34(6):517-22.) describen una proteína de fusión de proteína de unión a retinol-dominio III de la albúmina.
Sumario de la invención
Problemas que van a resolverse mediante la invención
La presente invención tiene como objetivo proporcionar una molécula de direccionamiento que se dirige a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6, un agente de direccionamiento, un portador de direccionamiento, un complejo y una composición que comprende la molécula de direccionamiento, y un método de marcado de dicha célula, y similares.
Medios para resolver los problemas
Los inventores continuaron una investigación seria para resolver los problemas descritos anteriormente y encontraron que un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP funciona como una molécula de direccionamiento específica para la célula estrellada y similares, completando así la invención.
Por consiguiente, la presente invención es tal como se define en las reivindicaciones adjuntas.
Efectos de la invención
La presente invención permite utilizar un péptido que tiene una excelente trabajabilidad como molécula de direccionamiento, aumentando el grado de libertad en el diseño de una formulación, y permitiendo el desarrollo de formulaciones de direccionamiento más diversas. La presente invención también permite administrar específicamente diversos fármacos a las células causantes de una enfermedad intratable tal como fibrosis y tumor, y por tanto se espera que proporcione una gran contribución a la medicina y la medicina veterinaria.
Breve descripción de los dibujos
[Figura 1] La figura 1 es un gráfico que muestra la eficacia de la transfección de ARNip en células estrelladas hepáticas de rata (HSC) usando los bucles 1-3 de RBP como las moléculas de direccionamiento, tal como se indica mediante el grado de supresión de HSP47 de rata, el gen diana del ARNip. El eje vertical indica el nivel de expresión de HSP47 de rata en relación con el patrón interno, GAPDH de rata, refiriéndose el nivel de expresión en células no tratadas como 100. En el gráfico, “VL” significa el grupo que usa retinol en vez de cualquier bucle de RBP (es decir, VA/LipoTrust/ARNip), “L” significa el grupo que usa DMSO en vez de cualquier bucle de RBP (es decir, LipoTrust/ARNip), “sin LT” significa el grupo que usa la mezcla de ARNip y un péptido que no comprende LipoTrust™ SR, y “NT” significa el grupo no tratado, respectivamente.
[Figura 2] La figura 2 es un gráfico que muestra la eficacia de la transfección de ARNip en células estrelladas hepáticas de rata (HSC) usando el bucle 1 de RBP o su fragmento como la molécula de direccionamiento, tal como se indica mediante el grado de supresión de HSP47 de rata, el gen diana del ARNip. El eje vertical indica el nivel de expresión de HSP47 de rata en relación con el patrón interno, GAPDH de rata, refiriéndose el nivel de expresión en células no tratadas como 100. En el gráfico, “VA” significa el grupo que usa retinol en vez de cualquier péptido (es decir, VA/LipoTrust/ARNip), “(-)VA” significa el grupo que usa DMSO en vez de cualquier péptido (es decir, LipoTrust/ARNip), “ARNip+VA” significa el grupo que usa la mezcla de retinol y ARNip que no comprende LipoTrust™ SR, y “NT” significa el grupo no tratado, respectivamente.
[Figura 3] La figura 3 es un gráfico que muestra la eficacia de la transfección de ARNip en células estrelladas hepáticas de rata (HSC) usando el bucle 1 de RBP (L1) o su péptido mutante (E3K6, D3K4, D3K12) como la molécula de direccionamiento, tal como se indica mediante el grado de supresión de HSP47 de rata, el gen diana del ARNip. El eje vertical indica el nivel de expresión de HSP47 de rata en relación con el patrón interno, GAPDH de rata, refiriéndose el nivel de expresión en células no tratadas como 100. En el gráfico, “VA” significa el grupo que usa retinol en vez de cualquier péptido (es decir, VA/LipoTrust/ARNip), “(-)VA” significa el grupo que usa DMSO en vez de cualquier péptido (es decir, LipoTrust/ARNip), y “NT” significa el grupo no tratado, respectivamente.
[Figura 4] La figura 4 es un gráfico que muestra la eficacia de la transfección de ARNip en células estrelladas hepáticas de rata (HSC) usando el bucle 1 de RBP (L1) o su péptido retroinverso (RI) como la molécula de direccionamiento, tal como se indica mediante el grado de supresión de HSP47 de rata, el gen diana del ARNip. El eje vertical indica el nivel de expresión de HSP47 de rata en relación con el patrón interno, GAPDH de rata, refiriéndose el nivel de expresión en células no tratadas como 100. En el gráfico, “VA” significa el grupo que usa retinol en vez de cualquier péptido (es decir, VA/LipoTrust/ARNip), “(-)VA” significa el grupo que usa DMSO en vez de cualquier péptido (es decir, LipoTrust/ARNip), y “NT” significa el grupo no tratado, respectivamente.
[Figura 5] La figura 5 es un gráfico que muestra la eficacia de la transfección de ARNip en células estrelladas de rata (HSC) usando el bucle 1 de RBP (L1) o su péptido reorganizado al azar como la molécula de direccionamiento, tal como se indica mediante el grado de supresión de HSP47 de rata, el gen diana del ARNip. El eje vertical indica el nivel de expresión de HSP47 de rata en relación con el patrón interno, GAPDH de rata, refiriéndose el nivel de expresión en células no tratadas como 100. En el gráfico, “scr” significa el grupo que usa el péptido reorganizado al azar, “VA” significa el grupo que usa retinol en vez de cualquier péptido (es decir, VA/LipoTrust/ARNip), “DMSO” significa el grupo que usa DMSO en vez de cualquier péptido (es decir, LipoTrust/ARNip), y “NT” significa el grupo no tratado, respectivamente.
[Figura 6] La figura 6 es un gráfico que muestra la eficacia de la transfección de ARNip en cepa de células de fibrosarcoma humanas HT-1080 usando el bucle 1 de RBP (L1) como la molécula de direccionamiento, tal como se indica mediante el grado de supresión de HSP47 humano que es el gen diana del ARNip. El eje vertical indica el nivel de expresión de HSP47 humano en relación con el patrón interno, GAPDH humano, refiriéndose el nivel de expresión en células no tratadas como 100. En el gráfico, “scr” significa el grupo que usa el péptido reorganizado al azar, “VA” significa el grupo que usa retinol en vez de cualquier péptido (es decir, VA/LipoTrust/ARNip), “DMSO” significa el grupo que usa DMSO en vez de cualquier péptido (es decir, LipoTrust/ARNip), “NT” significa el grupo no tratado, y “1°” y “2°” significa los resultados del primer y segundo experimento del mismo contenido, respectivamente.
Modos de llevar a cabo la invención
A menos que se defina lo contrario en el presente documento, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen los mismos significados que los entendidos habitualmente por un experto en la técnica.
Un aspecto de la presente invención se refiere a una molécula de direccionamiento que se dirige a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6, en la que la molécula de direccionamiento se selecciona de un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP, tal como se define en la reivindicación 1.
Una “molécula de direccionamiento” en el presente documento significa una molécula que tiene una capacidad de direccionamiento para promover la administración de una sustancia unida a la molécula a una diana específica. En la presente invención, la diana es una célula seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6, y la molécula de direccionamiento de la presente invención tiene la capacidad de promover la administración de una sustancia unida a la misma a estas células diana, es decir, una capacidad de direccionamiento. En el presente documento, “promover la administración” significa administrar una sustancia a la célula diana rápidamente y/o en una gran cantidad, y/o permitir que la sustancia sea captada, en comparación con el caso sin la molécula de direccionamiento. Estos puede confirmarse fácilmente, por ejemplo, añadiendo una molécula de direccionamiento con un marcador o un fármaco unidos a la misma o una molécula de direccionamiento unida a una composición que comprende un marcador o un fármaco a un cultivo de la célula diana y comparando la ubicación del marcador o la acción del fármaco después de un tiempo definido a aquella en presencia del marcador o el fármaco que no se une a la molécula de direccionamiento (véanse, por ejemplo, los ejemplos 2-6 en la presente memoria descriptiva). Se considera que se promueve la administración si el nivel del marcador o el efecto del fármaco está aumentado en presencia de la molécula de direccionamiento en comparación con aquel en ausencia de la molécula de direccionamiento. El grado de aumento puede ser, sin limitación, tal como, por ejemplo, el 5% o más, el 10% o más, el 15% o más, el 20% o más, el 25% o más, el 30% o más, el 40% o más, el 50% o más, el 60% o más, el 70% o más, el 80% o más, el 90% o más, el 100% o más, el 150% o más, el 200% o más, o el 300% o más. Se prefiere que el nivel del marcador o la acción del fármaco en la célula diana en presencia de la molécula de direccionamiento se aumente con significación estadística en comparación con el caso en ausencia de la molécula de direccionamiento.
Una “célula estrellada” en el presente documento normalmente se refiere a una célula con forma de estrella que tiene la capacidad de almacenar vitamina A (VA). Por esta característica, “célula estrellada” se denomina a veces “célula de almacenamiento de vitamina A”. Como célula estrellada, la célula estrellada hepática (célula de Ito) en el hígado se conoce bien. Sin embargo, se ha sabido que existen células similares en ubicaciones distintas del hígado, por ejemplo, en el páncreas y las cuerdas vocales (véanse, por ejemplo, Madro et al., Med Sci Monit. Julio de 2004; 10(7):RA166-70, Jaster, Mol Cancer. 6 de octubre de 2004; 3(1):26, Fuja et al., Cell Tissue Res. 2005; 322(3):417-24), y la célula estrellada en la presente invención abarca estas células. Se sabe que una célula estrellada presenta un fenotipo de tipo miofibroblasto que se caracteriza por la expresión de a actina del músculo liso (aSMA) tras su activación mediante una estimulación tal como inflamación, y prolifera y produce una gran cantidad de colágeno, que puede ser la causa de la fibrosis (véase, por ejemplo, Fallowfield y Iredale, Expert Opin Ther Targets. Octubre de 2004; 8(5):423-35, Madro et al., 2004, citado anteriormente, Jaster, 2004, citado anteriormente). La célula estrellada en la presente invención abarca tanto célula estrellada estacionaria (quiescente) no activada como célula estrellada activada.
Un “miofibroblasto” en el presente documento se refiere a un fibroblasto caracterizado por la expresión de aSMA, y aparece en diversos órganos. Un miofibroblasto se diferencia de una célula mesenquimatosa como el fibroblasto presente en diversos órganos y en la sangre circulante y se considera que está implicado en la fibrosis y la regeneración de diversos órganos (véase, por ejemplo, Selman et al., Ann Intern Med. 16 de enero de 2001; 134(2):136-51). Un miofibroblasto puede identificarse mediante inmunotinción usando un anticuerpo anti-a-SMA marcado de manera detectable, etc.
Un “fibroblasto asociado al cáncer (CAF)” en el presente documento significa el fibroblasto positivo para a-SMA (actina del músculo liso) presente dentro y/o alrededor de una lesión cancerosa (véase, por ejemplo, el documento de patente 2). Se considera que CAF ayuda a la proliferación de células cancerosas presentes en la proximidad y está implicado en la progresión del cáncer, etc. El CAF puede identificarse mediante inmunotinción de tejido canceroso o células aisladas de tejido canceroso con un anticuerpo anti- a-SMA marcado de manera detectable.
La presencia de CAF se ha identificado en diversos cánceres tales como cáncer colorrectal, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de estómago, cáncer de vías biliares y cáncer de células basales. Según la presente divulgación, se determina si una célula es un CAF o no mediante la siguiente técnica. Concretamente, las células que están presentes dentro y/o alrededor de una lesión cancerosa se someten a inmunotinción con un anticuerpo marcado para detectar un marcador de CAF, a-SMA, tal como, por ejemplo, un anticuerpo anti-a-SMA marcado con FITC o un anticuerpo anti-a-SMA marcado con Cy3, y aquellos en los que se detecta a-SMA se determina que son CAF.
El cáncer asociado con CAF no está particularmente limitado e incluye, por ejemplo, tumores sólidos tales como tumor cerebral, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de esófago, cáncer de estómago, cáncer de duodeno, cáncer de apéndice, cáncer colorrectal, cáncer de recto, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de vesícula biliar, cáncer de vías biliares, cáncer de ano, cáncer de riñón, cáncer de uréter, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer de pene, cáncer de testículo, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer de vulva, cáncer de vagina y cáncer de piel. Aunque el CAF se asocia normalmente con un cáncer, también puede asociarse con un tumor sólido maligno distinto del cáncer siempre que tenga características similares, tales como, por ejemplo, sarcomas incluyendo fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, liposarcoma, rabdomiosarcoma, leiomiosarcoma, angiosarcoma, sarcoma de Kaposi, linfangiosarcoma, sarcoma sinovial, condrosarcoma y osteosarcoma. El CAF puede estar presente en diversos órganos en los que están presentes los cánceres mencionados anteriormente, por ejemplo, en cerebro, cabeza y cuello, pecho, extremidades, pulmón, corazón, timo, esófago, estómago, intestino delgado (duodeno, yeyuno, íleon), intestino grueso (colon, ciego, apéndice, recto), hígado, páncreas, vesícula biliar, ano, riñón, uréter, vejiga, próstata, pene, testículo, útero, ovario, vulva, vagina, piel, músculo estriado, músculo liso, membrana sinovial, cartílago, hueso, tiroides, glándula suprarrenal, peritoneo, mesenterio, etc.
Un “tumor” en el presente documento incluye un tumor benigno y un tumor maligno (cáncer). En la presente divulgación, un “cáncer” abarca tumores malignos tanto epiteliales como no epiteliales, e incluye, sin limitación, por ejemplo, sarcomas tales como fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, liposarcoma, rabdomiosarcoma, leiomiosarcoma, angiosarcoma, sarcoma de Kaposi, linfangiosarcoma, sarcoma sinovial, condrosarcoma y osteosarcoma; carcinomas tales como tumor cerebral, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de esófago, cáncer de estómago, cáncer de duodeno, cáncer de apéndice, cáncer colorrectal, cáncer de recto, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de vesícula biliar, cáncer de vías biliares, cáncer de ano, cáncer de riñón, cáncer de uréter, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer de pene, cáncer de testículo, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer de vulva, cáncer de vagina y cáncer de piel, e incluye además leucemia y linfoma maligno, y similares. Una célula tumoral puede estar presente en cualquier sitio del cuerpo incluyendo, por ejemplo, en cerebro, cabeza y cuello, pecho, extremidades, pulmón, corazón, timo, esófago, estómago, intestino delgado (duodeno, yeyuno, íleon), intestino grueso (colon, ciego, apéndice, recto), hígado, páncreas, vesícula biliar, ano, riñón, uréter, vejiga, próstata, pene, testículo, útero, ovario, vulva, vagina, piel, músculo estriado, músculo liso, membrana sinovial, cartílago, hueso, tiroides, glándula suprarrenal, peritoneo, mesenterio, médula ósea, sangre, sistema vascular, sistema linfático tal como ganglios linfáticos y líquido linfático.
Una “célula que expresa STRA6” en el presente documento significa una célula que expresa STRA6 en la superficie celular. STRA6 (estimulado por el ácido retinoico 6) es un receptor de alta afinidad por la RBP (proteína de unión al retinol) presente en la superficie celular. Por tanto, se considera que la molécula de direccionamiento de la presente invención que se basa en un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP tiene capacidad de direccionamiento para las células que expresan STRA6. Se considera que STRA6 tiene la función de captar el retinol transportado por RBP al interior de una célula. Se ha confirmado que STRA6 se expresa en células cancerosas (por ejemplo, células de cáncer colorrectal), células epiteliales del pigmento de la retina (RPE), células de Sertoli y astrocitos, etc. (Sun y Kawaguchi, Int Rev Cell Mol Biol. 2011; 288: 1-41).
Se conocen las secuencias de nucleótidos de STRA6 (por ejemplo, n.os de registro de GenBank AY359089, AY358748 (humano), NM_001029924 (rata), AF062476 (murino)) y también se han desarrollado anticuerpos. Por tanto, la expresión de STRA6 puede detectarse mediante técnicas conocidas para detectar un ácido nucleico o proteína incluyendo, sin limitación, por ejemplo, inmunoprecipitación utilizando un anticuerpo anti-STRA6, EIA (inmunoensayo enzimático) (por ejemplo, ELISA (ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas), etc.), RIA (radioinmunoensayo) (por ejemplo, IRMA (ensayo inmunorradiométrico), RAST (prueba de radioalergosorbente), RIST (prueba de radioinmunoabsorción), etc.), inmunotransferencia de tipo Western, inmunohistoquímica, inmunocitoquímica, citometría de flujo, diversos métodos de hibridación que utilizan un ácido nucleico que codifica para STRA6 o su fragmento único o un transcrito (por ejemplo, ARNm) o un ácido nucleico que se hibrida específicamente con un producto sometido a corte y empalme de dicho ácido nucleico, transferencia de tipo Northern, transferencia de tipo Southern y diversas técnicas de PCR. La expresión de STRA6 se detecta preferiblemente a nivel de proteína, aunque alternativamente puede detectarse a nivel genético. Por tanto, la “célula que expresa STRA6” en la presente invención incluye no sólo las células que se sabe que expresan STRA6 sino también cualquier célula en la que la expresión de STRA6 se confirme mediante técnicas como las anteriores.
Una “RBP” en el presente documento se refiere a la RBP sérica, una proteína extracelular que está presente en la sangre. La RBP es una proteína conocida cuya presencia se ha confirmado en diversas especies animales, y su secuencia de ácido nucleico está disponible en bases de datos como GenBank. Por ejemplo, la secuencia de ácido nucleico de la RBP humana está registrada con el número de registro de GenBank NM_006744 (SEQ ID NO: 1) y la secuencia de aminoácidos con el número de registro de GenBank NP_006735 (SEQ ID NO: 2), respectivamente. No obstante, dado que podrían ser posibles mutaciones en la secuencia de aminoácidos o la secuencia de nucleótidos que se producen entre organismos individuales, lo que no interfiere con la función fisiológica de la proteína, el gen RBP o la RBP en la presente invención no se limita al ácido nucleico o proteína que tiene una secuencia idéntica a la secuencia conocida, pero puede incluir aquellas que tienen secuencias diferentes de dicha secuencia en una o más bases o aminoácidos, típicamente de una a varias bases o aminoácidos, por ejemplo una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez bases o aminoácidos. La RBP en la presente invención puede ser de cualquier especie animal, preferiblemente un vertebrado, más preferiblemente un mamífero, de manera particularmente preferible una RBP humana.
La “región de unión celular de RBP” en el presente documento significa una región de RBP que está implicada en la unión a una célula diana en la presente invención. En una realización, la región de unión celular de RBP se selecciona del grupo que consiste en los bucles 1-3 y sus fragmentos funcionales. Los bucles 1-3 son las estructuras en forma de bucle que sobresalen alrededor de la abertura del bolsillo de RBP que aloja el retinol. En la RBP humana, por ejemplo, están constituidos por los residuos de aminoácidos 46-59, 75-89 y 107-121, respectivamente, de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. Los fragmentos funcionales de los bucles 1-3 son aquellos entre los fragmentos de los bucles 1-3 que tienen la capacidad de direccionamiento a la célula diana y que pueden encontrarse, por ejemplo, generando más de un fragmento diferente de los bucles 1-3 tal como se describe en el ejemplo 2 de la presente memoria descriptiva e investigando si tienen la capacidad de direccionamiento a la célula diana. Por ejemplo, una realización particular del fragmento funcional del bucle 1 de RBP humana en la presente invención es un fragmento que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6, que es la región funcional mínima.
En una realización preferida, la región de unión celular de RBP se selecciona del grupo que consiste en el bucle 1, el bucle 2 y sus fragmentos funcionales. En una realización más preferida, la región de unión celular de RBP se selecciona del grupo que consiste en el bucle 1 y su fragmento funcional. En una realización particular, el bucle 1 y el bucle 2 son de RBP humana y tienen una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y 4, respectivamente. En una realización particular, el fragmento funcional del bucle 1 de RBP humana consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 6-13.
Un “péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP” en el presente documento (a continuación en el presente documento puede abreviarse como “péptido que contiene la región de unión celular”) incluye la secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de r Bp tal como se describió anteriormente, y al mismo tiempo significa cualquier péptido que tiene una capacidad de direccionamiento a la célula diana. Por tanto, dicho péptido no sólo consiste en la secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP sino que también incluye las que contienen secuencias de aminoácidos adicionales en el extremo N-terminal, extremo C-terminal, o extremos tanto N como C-terminal de la secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP. La secuencia de aminoácidos adicional incluye cualquier secuencia que no provoca una pérdida de capacidad de direccionamiento del péptido. Si la secuencia de aminoácidos adicional podría provocar una pérdida de capacidad de direccionamiento del péptido o no, puede evaluarse mediante, por ejemplo, una comparación experimental de capacidad de direccionamiento entre un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos adicional y la secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP, un péptido que consiste solamente en la secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP, y un péptido que no comprende secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP, o mediante análisis estructural o predicción de estructura de un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos adicional. Por ejemplo, la secuencia de aminoácidos adicional puede evaluarse para provocar una pérdida de la capacidad de direccionamiento del péptido si la capacidad de administración (es decir, una capacidad para administrar una sustancia unida al péptido a una célula diana) del péptido que comprende la secuencia de aminoácidos adicional y la secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP es menor que la capacidad de administración del péptido que consiste solamente en la secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP y al mismo tiempo si es igual o menor que la capacidad de administración del péptido que no comprende secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP, o si resulta obvio a partir del análisis estructural o de la predicción de estructura que la secuencia de aminoácidos adicional enmascararía la región de unión celular de RBP.
El péptido que contiene la región de unión celular tiene normalmente 10 aminoácidos de longitud o más, preferiblemente 10-50 aminoácidos de longitud, más preferiblemente 10-30 aminoácidos de longitud, de manera adicionalmente preferible 10-20 aminoácidos de longitud, en particular 10-14 aminoácidos de longitud.
El péptido que contiene la región de unión celular puede modificarse siempre que la modificación no provoque una pérdida de la capacidad de direccionamiento del péptido y sea según la reivindicación 1. Puede evaluarse si la modificación pudiera provocar una pérdida de la capacidad de direccionamiento del péptido o no, por ejemplo, mediante una comparación experimental de la capacidad de direccionamiento entre un péptido no modificado que contiene la región de unión celular, un péptido modificado que contiene la región de unión celular y un péptido no modificado que no comprende región de unión celular. Por ejemplo, si la capacidad de administración del péptido modificado que contiene la región de unión celular es menor que la capacidad de administración del péptido no modificado que contiene la región de unión celular y al mismo tiempo igual o menor que la capacidad de direccionamiento del péptido no modificado que no comprende la región de unión celular, la modificación puede evaluase para provocar una pérdida de la capacidad de direccionamiento del péptido. La modificación puede llevarse a cabo en todos los aminoácidos o en algunos aminoácidos del péptido. Cuando la modificación se lleva a cabo en algunos aminoácidos, puede llevarse a cabo en aminoácidos de tipos particulares o en aminoácidos en sitios particulares. Aunque no se pretende limitar el tipo o sitio del aminoácido que va a modificarse, es muy probable que una modificación en un aminoácido que no está dentro de la región funcional mínima del péptido que contiene la región de unión celular no provocará una pérdida de la capacidad de direccionamiento del péptido. Los ejemplos no limitativos de modificaciones en el péptido que contiene la región de unión celular incluyen, por ejemplo, biotinilación, miristoilación, octanoilación, palmitoilación, acetilación, maleimidación, metilación, malonilación, amidación, esterificación, farnesilación, geranilación, fosforilación, sulfatación, palmitoleoilación, pegilación y una adición de diversos marcadores (por ejemplo, las descritas en el presente documento).
Un “péptido mutante del péptido que tiene una capacidad de direccionamiento igual a un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP” en el presente documento (a continuación en el presente documento puede abreviarse como “péptido mutante”) abarca cualquier péptido que tiene una o más (por ejemplo, varias) mutaciones de aminoácidos en el péptido que contiene la región de unión celular, en particular en su región de unión celular, y que tiene una capacidad de direccionamiento igual o mayor que dicho péptido. Las mutaciones incluyen, por ejemplo, una deleción, sustitución o adición de un aminoácido o aminoácidos, y el número de aminoácidos que van a mutarse puede estar, por ejemplo, en el intervalo de desde 1 hasta 10, desde 1 hasta 9, desde 1 hasta 8, desde 1 hasta 7, desde 1 hasta 6, desde 1 hasta 5, desde 1 hasta 4, desde 1 hasta 3, desde 1 hasta 2, cuando la mutación se lleva a cabo en la región de unión celular. Más específicamente, el número de aminoácidos que van a mutarse en la región de unión celular puede ser de, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10. Cuando la mutación se lleva a cabo en una parte que no está dentro de la región de unión celular del péptido que contiene la región de unión celular, el número de aminoácidos que van a mutarse puede ser mayor que el número mencionado anteriormente para la mutación en la región de unión celular, siempre que la parte no provocará una pérdida de la capacidad de direccionamiento del péptido.
Una sustitución de un aminoácido puede ser una sustitución conservativa. Una sustitución conservativa es un concepto bien conocido en el campo de la técnica, que significa una sustitución de un aminoácido original con otro aminoácido que tiene unas propiedades fisicoquímicas similares de manera que la sustitución podría no alterar sustancialmente la función del péptido. Ya que las propiedades fisicoquímicas de un aminoácido se caracterizan por sus cadenas laterales, un ejemplo de sustitución conservativa incluye una sustitución por un aminoácido que tiene una cadena lateral que pertenece al mismo grupo que el aminoácido original. Un aminoácido puede clasificarse por la estructura y características de su cadena lateral en o bien el grupo que tiene una cadena lateral básica (tal como lisina, arginina e histidina), el grupo que tiene una cadena lateral ácida (tal como ácido aspártico y glutamato), el grupo que tiene una cadena lateral polar no cargada (tal como asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina) o el grupo que tiene una cadena lateral no polar (tal como glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano y cisteína). Por tanto, una sustitución conservativa incluye una sustitución entre aminoácidos que pertenecen al mismo grupo descrito anteriormente. Los ejemplos no limitativos de la sustitución conservativa incluyen, por ejemplo, una sustitución entre aminoácidos dentro de cada uno de los grupos que consisten en lisina y arginina; serina y treonina; glutamato y ácido aspártico; glutamina y asparagina; o valina y leucina e isoleucina.
Si péptido mutante tiene o no una capacidad de direccionamiento igual o mayor que la del péptido que contiene la región de unión celular puede confirmarse fácilmente, sin limitarse a, por ejemplo, mediante los siguientes medios: un péptido mutante o un péptido que contiene la región de unión celular con un marcador o un fármaco añadido al mismo, o un péptido mutante o un péptido que contiene la región de unión celular unido a una composición que comprende un marcador o un fármaco se añade a un cultivo de una célula diana, y la ubicación del marcador o el efecto del fármaco se compara después de un tiempo predeterminado entre el caso en el que el péptido mutante se añadió a la célula diana y el caso en el que se añadió el péptido que contiene la región de unión celular. Si el nivel del marcador o la acción del fármaco tras la adición del péptido mutante es similar a o mayor que el del caso en el que se añadió el péptido que contiene la región de unión celular, se considera que el péptido mutante tiene una capacidad de direccionamiento igual a o mayor que la del péptido que contiene la región de unión celular.
Un “mimético peptídico” en el presente documento significa una sustancia que tiene una característica o función igual a un péptido dado (en particular, un a-péptido que se produce de manera natural), especialmente una sustancia que puede imitar una disposición espacial de grupos funcionales que es igual a la topología de las cadenas laterales del péptido dado. Los miméticos peptídicos incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, un péptido retroinverso. Un péptido retroinverso es un péptido en el que aminoácidos que tienen una quiralidad opuesta a los aminoácidos del péptido de referencia (por ejemplo, D-aminoácidos cuando los aminoácidos en el péptido de referencia son L-aminoácidos,) se unen en orden opuesto a la secuencia de aminoácidos del péptido de referencia, y que tiene una topología de cadena lateral similar a la del péptido de referencia.
La molécula de direccionamiento de la presente invención puede producirse mediante cualquier método conocido para producir un péptido o un mimético peptídico incluyendo, sin limitación, por ejemplo, métodos de síntesis química tales como síntesis de fase sólida y síntesis de fase líquida, y síntesis mediante ingeniería genética (véase, por ejemplo, N. Leo Benoiton, Chemistry of Peptide Synthesis, CRC Press, 2005).
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un agente de direccionamiento (o una composición de direccionamiento) que comprende una molécula de direccionamiento de la presente invención para seleccionar como diana una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6.
Un “agente” y una “composición” se usan en el presente documento de manera intercambiable para significar mezcla de más de un componente (por ejemplo, compuestos). Un “agente” y una “composición” pueden dirigirse a una aplicación particular y, en este case, pueden comprender de manera apropiada componentes adecuados para la aplicación.
El agente de direccionamiento de la presente invención tiene una capacidad para promover la administración de una sustancia unida al mismo a una célula diana (capacidad de direccionamiento). En este caso, la capacidad de direccionamiento significa una capacidad similar a la mencionada para la molécula de direccionamiento de la presente invención, concretamente una capacidad para administrar una sustancia rápidamente y/o en una gran cantidad y/o para permitir su captación, en comparación con el caso sin el agente de direccionamiento.
Además de la molécula de direccionamiento de la presente invención, el agente de direccionamiento de la presente invención puede comprender un componente útil para la interacción con la sustancia que va a administrarse a la célula diana (por ejemplo, un fármaco, un portador o un marcador) tal como, sin limitación, por ejemplo, un ligador. El ligador no está particularmente limitado siempre que pueda unir la molécula de direccionamiento con la sustancia que va a administrarse, y puede usarse cualquier ligador conocido. Los ejemplos del ligador que podría estar contenido en el agente de direccionamiento de la presente invención incluyen, por ejemplo, ligadores peptídicos tales como glicinaglicina-glicina (triglicina), ligadores no peptídicos tales como glicerol, polietilenglicol, polipropilenglicol, copolímero de etilenglicol-propilenglicol, poli(alcohol vinílico), monosacáridos, polisacáridos, poliéster, poliéter y polímeros biodegradables tales como poli(ácido láctico).
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un portador de direccionamiento que administra una sustancia a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6, en el que el portador se ha dirigido con la molécula de direccionamiento de la presente invención. A continuación en el presente documento, un portador que se ha dirigido con la molécula de direccionamiento de la presente invención puede denominarse “portador de direccionamiento” mientras que un portador que no se ha dirigido con la molécula de direccionamiento de la presente invención puede denominarse simplemente “portador” para su distinción.
Un “portador” en el presente documento significa una sustancia que facilita el transporte de una o más sustancias (por ejemplo, un fármaco o un marcador) portadas por el mismo desde una parte del cuerpo hasta una célula o tejido diana y/o dentro de la célula o tejido diana. El portador puede estar constituido por un único compuesto o puede estar constituido por más de un compuesto homólogo o heterólogo. En una realización preferida, el portador puede incluir cualquier portador conocido que puede dirigirse usando la molécula de direccionamiento de la presente invención. El portador que es capaz de tal direccionamiento (es decir, direccionamiento activo) incluye tales como, sin limitación, por ejemplo, portadores que tienen una estructura lineal de cadena lineal o ramificada tal como portadores poliméricos, y portadores que tienen una estructura de partículas tal como liposomas, dendrímeros, nanopartículas y micelas macromoleculares (portadores de partículas) (por ejemplo, Marcucci y Lefoulon, Drug Discov Today. 1 de marzo de 2004; 9(5):219-28, Torchilin, Eur J Pharm Sci. Octubre de 2000;11 Supl. 2:S81-91). El portador puede ser catiónico o no catiónico (por ejemplo, aniónico o neutro). En una realización, el portador es catiónico. Además, el portador puede ser capaz de formar un lipoplejo o poliplejo con la sustancia portada por el mismo. Un lipoplejo puede formarse, por ejemplo, entre un lípido catiónico y una sustancia que tiene una carga negativa (por ejemplo, un ácido nucleico tal como un ADN), y un poliplejo puede formarse, por ejemplo, entre un policatión y una sustancia que tiene una carga negativa, respectivamente.
El portador según la invención puede comprender como componentes, por ejemplo, sin limitación, un lípido o polímero.
Los ejemplos no limitativos del lípido incluyen fosfolípidos tales como glicerofosfolípido, esfingolípidos tales como esfingomielina, esteroles tales como colesterol, aceites vegetales tales como aceite de soja y aceite de adormidera, aceites minerales y lecitina tal como lecitina de yema de huevo. Los ejemplos más específicos del lípido incluyen tal como dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), distearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleilfosfatidiletanolamina (DOPE), dilauroilfosfatidilcolina (DLPC), esteroles tales como colesterol, cloruro de D-glutamato N-(a-trimetilammonioacetil)-didodecilo (TMAG), N,N',N”,N”‘-tetrametil-N,N',N”,N”‘-tetrapalmitilespermina (TMTPS), 2,3-N-[2(espermincarboxamida)etil]-N,N-dimetil-1-propaneaminiotrifluoroacetato de dioleiloxilo (DOSPA), cloruro de N-[1-(2,3-dioleiloxi)propil]-N,N,N-trimetilamonio (DOTMA), cloruro de dioctadecildimetilamonio (DODAC), bromuro de didodecilamonio (DDAB), 1,2-dioleiloxi-3-trimetilamoniopropano (DOTAP), 3p-[N-(N',N'-dimetilaminoetano)carbamoil]colesterol (DC-Chol), bromuro de 1,2-dimiristoiloxipropil-3-dimetilhidroxietilamonio (DMRIE), cloruro de O,O'-ditetradecanoil-N-(a-trimetilammonioacetil)dietanolamina (DC-6-14). El lípido puede ser un lípido catiónico o un lípido no catiónico, por ejemplo, un lípido aniónico o un lípido neutro. En una realización, el portador según la presente invención comprende un lípido catiónico. El lípido catiónico es particularmente útil para introducir ácido nucleico cargado negativamente y similares en una célula.
Otros ejemplos no limitativos del lípido incluyen tal como el lípido catiónico y lípido unido a PEG (PEG-lípido) descritos en el documento WO 2012/170952, y el lípido ionizable descrito en el documento WO 2013/185116. Dicho lípido catiónico es un compuesto representado por la fórmula I:
Figure imgf000009_0001
en la que, Ri y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en grupos alquilo C10-C18, alquenilo C12-Ci8 y oleilo, R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 y alcanol C2-C6, X se selecciona o bien del grupo que consiste en -CH2-, -S- y -O-, o está ausente, Y se selecciona del grupo que consiste en -(CH2)n, -S(CH2)n, -O(CH2)n-, tiofeno, -SO2(CH2)n- y un éster, n=1 a 4, a=1 a 4, b=1 a 4, c=1 a 4, y Z es un contraión.
Los ejemplos no limitativos de dicho lípido catiónico incluyen, por ejemplo, los siguientes:
Figure imgf000010_0001
Los ejemplos no limitativos de dicho PEG-lípido incluyen tal como, por ejemplo, 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-PEG (PEG-DMPE), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-PEG (PEG-DPPE), 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-PEG (PEG-DSPE), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-PEG (PEG-DOPE)y ceramida de PEG. El peso molecular de PEG no está particularmente limitado y puede ser, por ejemplo, desde aproximadamente 550 hasta aproximadamente 2000, más específicamente aproximadamente 550, aproximadamente 750, aproximadamente 1000, aproximadamente 1250, aproximadamente 2000. Los ejemplos no limitativos de PEG incluyen tal como, por ejemplo, PEG 550, PEG 750, p Eg 1000, PEG 1250 y PEG 2000.
Dicho lípido ionizable es un compuesto representado por la fórmula II:
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en la que, n y m son independientemente 1, 2, 3 ó 4, Ri y R2 son independientemente alquilo C i0-C i8 o alquenilo C12-C i8, X es -CH2-, S, O, N o está ausente, L es alquileno C1-4, alquileno -S-C1-4, alquileno -O-C1-4, alquileno -O-C(O)-C1-, alquileno -S(O)2-C1-4,
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Los ejemplos no limitativos de dicho lípido ionizable incluyen, por ejemplo, los siguientes:
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El portador según la presente invención puede comprender uno o más lípidos. En una realización, el portador según la presente invención comprende un lípido catiónico y un lípido ionizable. En una realización particular, el portador según la presente invención comprende un lípido catiónico, un lípido ionizable y un PEG-lípido. Los ejemplos no limitativos de la combinación de lípidos contenidos en el portador según la presente invención incluyen tal como, por ejemplo, una combinación de HEDC y S104, una combinación de HEDC, S104, DOPE, colesterol y PEG-DMPE, una combinación de DODC, DOPE, colesterol y PEG-lípido, la combinación de HEDODC, DOPE, colesterol y PEG-lípido, y una combinación de DC-6-14, DOPE y colesterol. Los ejemplos no limitativos específicos de la combinación de lípidos contenida en el portador según la presente invención incluyen tal como, por ejemplo, HEDC:S104 (razón molar 1:1), HEDC:S104:DOPE:colesterol:PEG-DMPE (razón molar 4:4:6:5:1), DODC:DOPE:colesterol:PEG-lípido (razón molar 25:5:19:1), HEDODC:DOPE:colesterol:PEG-lípido (razón molar 25:5:19:1) y DC-6-14:DOPE:colesterol (razón molar 4:3:3).
Los ejemplos no limitativos del polímero incluyen polímeros catiónicos (policatión) tal como polietilenglicol (PEG), polietilenimina (PEI) y polilisina (por ejemplo, poli-L-lisina (PLL)), polímeros no catiónicos tales como poli(ácido láctico) (PLA), poli(ácido glicólico) (PGA), copolímero de ácido láctico-ácido glicólico (PLGA), y/o los basados en los derivados de los mismos.
En la presente invención, “que se dirige con la molécula de direccionamiento” significa que la molécula de direccionamiento está en una interacción (por ejemplo, unión) con una sustancia que va a guiarse a la célula diana (por ejemplo, una sustancia que va a administrarse tal como un portador, un fármaco o un marcador) de una manera tal que la molécula de direccionamiento puede ejercer su capacidad de direccionamiento. Los ejemplos no limitativos de la interacción entre la molécula de direccionamiento y la sustancia que va a guiarse a la célula diana incluyen, por ejemplo, cualquier enlace químico conocido tales como un enlace covalente, un enlace iónico, un enlace electrostático, un enlace hidrófobo, fuerza de van der Waals y un enlace de avidina-biotina. La molécula de direccionamiento puede estar presente de una manera que al menos su parte implicada en la interacción con la célula diana (por ejemplo, restos funcionales de bucles 1-3 de RPB, en particular, el resto funcional del bucle 2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6) se expone fuera de la sustancia que va a guiarse a la célula diana de manera que, por ejemplo, puede producirse la interacción con la célula diana. Los medios para exponer al menos la parte de la molécula de direccionamiento implicada en la interacción con la célula diana fuera del portador incluyen tal como, por ejemplo, mezclar la molécula de direccionamiento con la sustancia que va a guiarse a la diana, o unir la molécula de direccionamiento a la sustancia que va a guiarse a la diana.
El portador de direccionamiento de la presente invención puede dirigirse con una o más moléculas de direccionamiento. En una realización, el portador de direccionamiento de la presente invención se dirige con la molécula de direccionamiento en una cantidad eficaz para seleccionar como diana a la célula diana. La cantidad específica de la molécula de direccionamiento eficaz para el direccionamiento del portador de direccionamiento de la presente invención (por ejemplo, la razón molar en relación con el componente del portador) puede determinarse, por ejemplo, investigando la capacidad de direccionamiento del portador dirigido por diferentes cantidades de la molécula de direccionamiento usando los procedimientos descritos en el ejemplo 2. La cantidad de la molécula de direccionamiento eficaz para el direccionamiento del portador de direccionamiento de la presente invención puede ser, sin limitación, por ejemplo, una razón molar de 1000:1 a 1:1000, de 100:1 a 1:100, de 50:1 a 1:50, de 40:1 a 1:40, de 30:1 a 1:30, de 25:1 a 1:25, de 20:1 a 1:20, de 10:1 a 1:10, de 8:1 a 1:8, de 6:1 a 1:6, de 5:1 a 1:5, de 4:1 a 1:4, de 3:1 a 1:3 o de 2:1 a 1:2 en relación con el componente del portador (si el portador comprende más de un componente, el componente principal).
La sustancia portada por el portador de direccionamiento de la presente invención no está particularmente limitada, pero preferiblemente tiene un tamaño tal que puede transportarse físicamente en el cuerpo del organismo desde el sitio de administración hasta el sitio en el que está presente la célula diana. Por tanto, el portador de direccionamiento de la presente invención puede transportar no sólo un átomo, un compuesto, una proteína o un ácido nucleico, sino también un objeto tal como un vector, partículas de virus, una célula, un sistema de administración de fármacos compuesto de uno o más elementos, o una micromáquina. Dicha sustancia que va a administrarse tiene preferiblemente una característica que tiene algunas influencias sobre la célula diana e incluye, por ejemplo, una sustancia que marca la célula diana (por ejemplo, un marcador) o una sustancia que controla (por ejemplo, potencia o suprime) la actividad o proliferación de la célula diana (por ejemplo, un fármaco).
El direccionamiento por la molécula de direccionamiento en el portador de direccionamiento de la presente invención puede lograrse, por ejemplo, mezclando el portador con la molécula de direccionamiento en una razón predeterminada o uniendo la molécula de direccionamiento al componente del portador. Se conocen diversos métodos para unir la molécula de direccionamiento al portador (por ejemplo, Torchilin, Nat Rev Drug Discov. Febrero de 2005; 4(2):145-60, Nobs et al., J Pharm Sci. Agosto de 2004; 93(8):1980-92, Marcucci y Lefoulon, 2004, citado anteriormente). La unión de la molécula de direccionamiento al componente del portador puede llevarse a cabo después de la preparación del portador, o puede llevarse a cabo a un componente predeterminado antes de la preparación del portador, o puede llevarse a cabo durante la preparación del portador. Además, la molécula de direccionamiento puede unirse al componente del portador directamente o a través de un ligador.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un complejo representado por una fórmula:
X-Y-Z (1)
en la que,
X es un resto de direccionamiento que comprende la molécula de direccionamiento de la presente invención,
Y es un resto de unión, y
Z es un resto funcional que comprende a sustancia seleccionada del grupo que consiste en un fármaco, un marcador y un portador.
El resto de direccionamiento en el complejo de la presente invención puede consistir en la molécula de direccionamiento de la presente invención o puede estar compuesto de la molécula de direccionamiento de la presente invención y un grupo de conexión, etc. unido a la misma que es adecuado para unirse al resto de unión. La molécula de direccionamiento de la presente invención contenida en el resto de direccionamiento puede modificarse para ser adecuada para unirse al resto de unión en un grado en el que no se pierda su capacidad de direccionamiento. Los grupos de conexión y modificaciones compatibles con la unión química a una sustancia dada se conocen bien en la técnica (por ejemplo, Torchilin, 2005, citado anteriormente, Nobs et al., 2004, citado anteriormente, Marcucci y Lefoulon, 2004, citado anteriormente). Además, el resto de direccionamiento puede comprender una única molécula de direccionamiento o puede comprender más de una molécula de direccionamiento. Cuando el resto de direccionamiento comprende más de una molécula de direccionamiento, las moléculas de direccionamiento pueden ser iguales o diferentes. Además, el resto de direccionamiento puede unirse a un único resto funcional a través de un único resto de unión o puede unirse a más de un resto funcional a través de más de un resto de unión. Cuando el resto de direccionamiento se une a más de un resto de unión y/o resto funcional, los restos de unión y/o restos funcionales pueden ser iguales o diferentes.
El resto de unión en el complejo de la presente invención puede ser un enlace químico o un ligador. El enlace químico incluye cualquier enlace químico conocido tales como un enlace covalente, un enlace iónico, un enlace electrostático, un enlace hidrófobo, fuerza de van der Waals y un enlace de avidina-biotina. El ligador es un resto químico que, por sí mismo, puede unir el resto de direccionamiento al resto funcional mediante un enlace químico. Los ligadores compatibles con la unión química de dos sustancias diferentes predeterminadas se conocen bien en la técnica. Los ejemplos no limitativos del ligador incluyen tal como, por ejemplo, ligadores peptídicos tales como glicina-glicina-glicina (triglicina), ligadores no peptídicos tales como glicerol, polietilenglicol, polipropilenglicol copolímero de etilenglicolpropilenglicol, poli(alcohol vinílico), monosacáridos, polisacáridos, poliéster, poliéter y polímeros biodegradables tales como poli(ácido láctico).
El resto de unión puede unirse a un único resto de direccionamiento o puede unirse a más de un resto de direccionamiento. Además, el resto de unión puede unirse a un único resto funcional o puede unirse a más de un resto funcional. Cuando el resto de unión se une a más de un resto de direccionamiento y/o resto funcional, los restos de direccionamiento o los restos funcionales pueden ser iguales o diferentes.
El fármaco contenido en el resto funcional en el complejo de la presente invención no está particularmente limitado e incluye cualquier fármaco asociado con la célula diana. Tales fármacos pueden interactuar con la propia célula diana o pueden interactuar con el ambiente que rodea a la célula diana, por ejemplo, células no diana presentes alrededor de la célula diana o sustancias intercelulares (por ejemplo, matriz extracelular). En una realización, el fármaco controla (por ejemplo, suprime, mantiene o promueve) la actividad o proliferación de la célula diana. En una realización particular, el fármaco suprime la actividad o proliferación de la célula diana. Determinados ejemplos específicos de tales fármacos incluyen, sin limitación, un inhibidor de TGFp (factor de crecimiento y transformación beta), HGF (factor de crecimiento de hepatocitos) o una sustancia que promueva su producción, un ligando del PPARy (receptor gamma activado por proliferador de peroxisomas), un inhibidor de angiotensina, un inhibidor de PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas), relaxina o una sustancia que promueva su producción, un inhibidor de la producción y/o secreción de un componente de la matriz extracelular, una sustancia que suprime la actividad celular, una sustancia que suprime la proliferación celular, una sustancia que induce la apoptosis, una sustancia que promueve la degradación de colágeno, un inhibidor de la sustancia que promueve la degradación de colágeno, inhibidor de PAI-1 (inhibidor del activador de plasminógeno 1), un inhibidor de a1 antitripsina, un inhibidor de angiotensinógeno, y similares.
Un inhibidor de TGFp incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, inhibidores de la actividad de TGFp tal como un receptor de tipo II de TGFp truncado (Qi et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1999; 96(5):2345-9), un receptor de tipo II de TGFp soluble (George et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1999; 96(22):12719-24), anticuerpos anti-TGFp e inhibidores de la producción de TGFp tales como moléculas de iARN (interferencia de ARN), ribozimas y ácidos nucleicos antisentido contra TGFp, y vectores que los expresan. En una realización, un inhibidor de TGFp inhibe la actividad y/o producción de TGFp1.
Un promotor de la producción de HGF y relaxina incluye, sin limitación, por ejemplo, ácidos nucleicos que codifican para HGF y relaxina, constructos de expresión que comprenden los mismos, y vectores de expresión que comprenden los mismos.
Un ligando de PPARy incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, ligandos endógenos tales como 15-deoxi-A12,14-prostaglandina J2, un ácido nitrolinoleico, una LDL oxidada (lipoproteína de baja densidad), un ácido graso de cadena larga y un eicosanoide, y ligandos exógenos tales como fármacos de tiazolidinadiona tales como troglitazona, pioglitazona, rosiglitazona, balaglitazona y rivoglitazona, y fármacos antiinflamatorios no esteroideos.
Un inhibidor de angiotensina incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, antagonistas del receptor de angiotensina tales como telmisartán, losartán, valsartán, candesartán cilexetilo, olmesartán medoxomilo andirbesartán. La angiotensina incluye angiotensina I, II, III y IV. Además, un receptor de angiotensina incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, receptor de angiotensina de tipo 1 (AT1).
Un inhibidor de PDGF incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, inhibidores de la actividad de PDGF tal como un anticuerpo anti-PDGF e inhibidores de la producción de PDGF tal como moléculas de iARN, ribozimas y ácidos nucleicos antisentido contra PDGF, y vectores que los expresan.
Una sustancia que inhibe la producción y/o secreción de un componente de la matriz extracelular incluye, sin limitación, por ejemplo, sustancias como moléculas de iARN, ribozimas y ácidos nucleicos antisentido que suprimen la expresión de componentes de la matriz extracelular tales como colágeno, proteoglicano, tenascina, fibronectina, trombospondina, osteopontina, osteonectina y elastina, o sustancias que tienen un efecto negativo dominante tal como el mutante negativo dominante, y vectores que los expresan. Los fármacos que inhiben la producción/secreción de colágeno incluyen, sin limitación, por ejemplo, inhibidores de HSP (proteína de choque térmico) 47, que es una chaperona molecular específica del colágeno esencial para los procesos comunes durante los procesos de síntesis de diversos tipos de colágeno, es decir, el transporte intracelular y la maduración de las moléculas, por ejemplo, inhibidores de la expresión de HSP47 como la molécula de iARN (por ejemplo, moléculas de ARNip descritas en el documento WO 2011/072082), ribozimas, ácidos nucleicos antisentido contra HSP47, o sustancias que tienen un efecto negativo dominante tal como un mutante negativo dominante de HSP47, y vectores que los expresan.
Una sustancia que suprime la proliferación celular incluye, sin limitación, por ejemplo, un agente alquilante (por ejemplo, ifosfamida, nimustina, ciclofosfamida, dacarbazina, melfalán, ranimustina), antibióticos antitumorales (por ejemplo, idarrubicina, epirrubicina, daunorrubicina, doxorrubicina, pirarrubicina, bleomicina, peplomicina, mitoxantrona, mitomicina C), antimetabolitos (por ejemplo, gemcitabina, enocitabina, citarabina, tegafur-uracilo, formulación de tegafur-gimeracil-oteracilo de potasio, doxifluridina, hidroxicarbamida, fluorouracilo, metotrexato, mercaptopurina), alcaloides tales como etopósido, irinotecán, vinorrelbina, paclitaxel, vincristina, vindesina y vinblastina, complejos de platino tales como carboplatino, cisplatino y nedaplatino, y estatinas como lovastatina, simvastatina.
Una sustancia que suprime la actividad celular incluye, sin limitación, por ejemplo, un inhibidor de los canales de sodio tal como amilorida.
Un agente que induce la apoptosis incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, compuesto 861, gliotoxina y atorvastatina.
Una sustancia que promueve la degradación de colágeno incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, diversas colagenasas o promotores de su producción. Los ejemplos de colagenasa incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, las de la familia de MMP tales como MMP (metaloproteinasa de matriz) 1, 2, 3, 9, 13 y 14. Un promotor de la producción de colagenasa incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, un ácido nucleico que codifica para colagenasa, constructos de expresión que los comprenden y vectores de expresión que los comprenden.
Un inhibidor de una sustancia que promueve la degradación de colágeno incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, TIMP (inhibidor tisular de metaloproteinasa, por ejemplo, TIMP1 y TIMP2). Por tanto, una sustancia que inhibe dicha sustancia incluye, sin limitación, por ejemplo, inhibidores de la actividad de TIMP, tal como un anticuerpo contra TIMP, inhibidores de la producción de TIMP, tal como moléculas de iARN (por ejemplo, las moléculas de ARNip descritas en el documento WO 2012/044620), ribozimas y ácidos nucleicos antisentido contra TIMP, y vectores que los expresan.
Un inhibidor de PAI-1 incluye, sin limitación, por ejemplo, inhibidores de la actividad de PAI-1 tal como un anticuerpo contra PAI-1, inhibidores de la producción de PAI-1 tal como moléculas de iARN, ribozimas y ácidos nucleicos antisentido contra PAI-1, y vectores que los expresan.
Un inhibidor de a1-antitripsina incluye, sin limitación, por ejemplo, inhibidores de la actividad de PAI-1 tal como un anticuerpo contra a1-antitripsina, inhibidores de la producción de a1-antitripsina tal como moléculas de iARN, ribozimas y ácidos nucleicos antisentido contra a1-antitripsina, y vectores que los expresan.
Un inhibidor de angiotensinógeno incluye, sin limitación, por ejemplo, inhibidores de la actividad de angiotensinógeno tal como un anticuerpo contra angiotensinógeno, inhibidores de la producción de angiotensinógeno tal como moléculas de iARN, ribozimas y ácidos nucleicos antisentido contra angiotensinógeno, y vectores que los expresan.
Una molécula de iARN en el presente documento significa cualquier molécula que tiene una actividad de iARN y abarca, sin limitación, por ejemplo, ARN tales como un ARNip (a Rn de interferencia pequeño), miARN (microARN), ARNhc (ARN de horquilla corta), ddRNA (ARN dirigido a ADN), piARN (ARN que interactúa con Piwi), raARNip (ARNip asociado con repeticiones) y variaciones de los mismos. Además, el ácido nucleico en el presente documento incluye un ARN, ADN, A p N, o un complejo de los mismos.
El marcador en el presente documento se refiere a cualquier sustancia que, directa o indirectamente, permite que se detecte a sí misma o a un objeto al que se une. El marcador puede seleccionarse de cualquiera de los conocidos por un experto en la técnica, por ejemplo, un gas o una sustancia que genera un gas en condiciones fisiológicas, cualquier radioisótopo, cuerpos magnéticos, un elemento que desarrolla resonancia magnética nuclear (por ejemplo, hidrógeno, fósforo, sodio o flúor), una sustancia que influye en el tiempo de relajación del elemento que desarrolla la resonancia magnética nuclear (por ejemplo, un átomo metálico o un compuesto que lo comprende), una sustancia que se une a una sustancia de marcado (por ejemplo, un anticuerpo), sustancias fluorescentes, fluoróforos, sustancias quimioluminiscentes, enzimas, biotina o un derivado de la misma, y avidina o un derivado de la misma.
El marcador en el presente documento puede ser detectable, incluyendo cualquier marcador que pueda detectarse mediante cualquier medio de detección existente. Las técnicas de detección incluyen, sin limitación, por ejemplo, una técnica que usa un dispositivo de examen óptico macroscópico (por ejemplo, un microscopio óptico, microscopio fluorescente, microscopio de contraste de fases y dispositivo de obtención de imágenes in vivo), un dispositivo de rayos X (por ejemplo, un dispositivo de rayos X simple, un dispositivo de TC (tomografía computarizada)), un dispositivo de IRM (obtención de imágenes por resonancia magnética), un dispositivo de examen de radioisótopos (dispositivo gammagráfico), un dispositivo de PET (tomografía por emisión de positrones), un dispositivo de SPECT (tomografía computarizada por emisión de fotón único), un dispositivo de examen ecográfico y un dispositivo de termografía. El marcador adecuado para cada técnica de detección es conocido por el experto en la técnica y se describe en tal como, por ejemplo, Lecchi et al., Q J Nucl Med Mol Imaging. 2007; 51 (2): 111-26.
El marcador adecuado para la detección mediante un dispositivo de examen macroscópico y óptico incluye, por ejemplo, diversos marcadores fluorescentes y luminiscentes.
Como marcadores fluorescentes específicos pueden usarse, sin limitarse a, por ejemplo, la serie Cy™ (por ejemplo, Cy™2, 3, 5, 5,5 y 7), la serie DyLight™ (por ejemplo, DyLight™ 405, 488, 549, 594, 633, 649, 680, 750 y 800), la serie Alexa Fluor(R) (por ejemplo, Alexa Fluor(R) 405, 488, 549, 594, 633, 647, 680 y 750), la serie HiLyte Fluor™ (por ejemplo, HiLyte Fluor™ 488, 555, 647, 680 y 750), la serie ATTO (por ejemplo, ATTO488, 550, 633, 647N, 655 y 740), FAM, FITC, rojo Texas, GFP, RFP y Qdot. Los marcadores fluorescentes adecuados para la obtención de imágenes in vivo incluyen, por ejemplo, los que tienen una alta biopermeabilidad y que generan fluorescencia a una longitud de onda que no es susceptible a la autofluorescencia, por ejemplo, longitud de onda de infrarrojo cercano, o los que tienen una fuerte intensidad de fluorescencia. Tales marcadores fluorescentes incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, la serie Cy™, la serie DyLight™, la serie Alexa Fluor(R), la serie HiLyte Fluor™, la serie ATTO, rojo Texas, GFP, RFP, Qdot y derivados de los mismos.
Como marcadores luminiscentes específicos pueden usarse, sin limitarse a, por ejemplo, luminol, luciferina, lucigenina y aequorina y similares.
Los marcadores adecuados para la detección con un dispositivo de rayos X incluyen, por ejemplo, diversos agentes de contraste. Como agentes de contraste específicos pueden usarse, sin limitarse a, por ejemplo, un átomo de yodo, un ion de yodo, un compuesto que contiene yodo y similares.
Los marcadores adecuados para la detección con un dispositivo de IRM incluyen, por ejemplo, un elemento que desarrolla resonancia magnética nuclear, y una sustancia que influye en el tiempo de relajación del elemento que desarrolla resonancia magnética nuclear. Los elementos que desarrollan resonancia magnética nuclear incluyen tal como, por ejemplo, hidrógeno, fósforo, sodio y flúor. Las sustancias que influyen en el tiempo de relajación del elemento que desarrolla resonancia magnética nuclear incluyen tal como, sin limitación, diversos átomos metálicos, y un compuesto que comprende uno o más de dichos átomos metálicos, por ejemplo, un complejo de uno o más de dichos átomos metálicos. Específicamente pueden usarse, sin limitarse a, por ejemplo, gadolinio (III) (Gd (III)), itrio-88 (88Y), indio-111 (111In), y un complejo de uno de estos y un ligando tal como ácido dietilenetriaminapentaacético (DTPA), ácido tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetraacético (DOTA), ácido (1,2-etanodiildinitrilo)tetraacético (EDTA), etilendiamina, 2,2'-bipiridina (bipi.), 1,10-fenantrolina (fen.), 1,2-bis(difenilfosfino)etano (DPPE), 2,4-pentanodiona (acac.) u oxalato (ox.), y óxido de hierro superparamagnético (SPIO) y óxido de manganeso (MnO).
Los marcadores adecuados para la detección con un dispositivo de examen de radioisótopos incluyen, por ejemplo, diversos radioisótopos o compuestos que comprenden uno o más radioisótopos, por ejemplo, un complejo de uno o más radioisótopos. Como radioisótopos pueden usarse, sin limitarse a, por ejemplo, tecnecio-99m (99mTc), indio-111 (111In), yodo-123 (123I), yodo-124 (124I), yodo-125 (125I), yodo-131 (131I), talio-201 (201TI), carbono-11 (11C), nitrógeno-13 (13N), oxígeno-15 (15O), flúor-18 (18F), cobre-64 (64Cu), galio-67 (67Ga), kriptón-81m (81mKr), xenón-133 (133Xe), estroncio-89 (89Sr), itrio-90 (90Y) y similares. Los compuestos que comprenden radioisótopos incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, 123I-IMP, 99mTc-HMPAO, 99mTc-ECD, 99mTc-MDP, 99mTc-tetrofosmin, 99mTc-MIBI, 99mTcO4-, 99mTc-MAA, 99mTc-MAG3, 99mTc-DTPA, 99mTc-DMSA, y 18F-FDG.
Los marcadores adecuados para la detección con un dispositivo de examen ecográfico incluyen, sin limitación, por ejemplo, un gas biocompatible o una sustancia que genera un gas en condiciones fisiológicas, ácidos grasos o una sustancia que comprenda estas sustancias. Un gas incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, aire, gases nobles, nitrógeno, N2O, oxígeno, dióxido de carbono, hidrógeno, gases nobles inertes (por ejemplo, helio, argón, xenón y kriptón), fluoruro de azufre (por ejemplo, hexafluoruro de azufre, decafluoruro de disulfuro, pentafluoruro de trifluorometilazufre), hexafluoruro de selenio, silano halogenado (por ejemplo, tetrametilsilano), hidrocarburo de bajo peso molecular (tal como por ejemplo, alcano C1-7 (tal como metano, etano, propano, butano y pentano), cicloalcano (tal como ciclobutano y ciclopentano), alqueno (tal como etileno, propeno y buteno)), gases que contienen flúor y amoniaco; una sustancia que genera un gas en condiciones fisiológicas incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, dodecafluoropentano (DDFp ), un perfluorocarbono que se vaporiza en condiciones fisiológicas (documento JP A 2010­ 138137); y una sustancia que comprende dicha sustancia incluye una nanopartícula o un liposoma que comprende dicha sustancia. Los gases que contienen flúor incluyen, sin limitación, tales como, por ejemplo, gases hidrocarbonados halogenados (por ejemplo, bromoclorodifluorometano, clorodifluorometano, diclorodifluorometano, bromotrifluorometano, clorotrifluorometano, cloropentafluoroetano, diclorotetrafluoroetano y perfluorocarbono), cetonas fluoradas (por ejemplo. perfluoroacetona) y éteres fluorados (por ejemplo, perfluorodietil éter).
Un perfluorocarbono incluye, sin limitación, tal como, por ejemplo, perfluoroalcano (por ejemplo, perfluorometano, perfluoroetano, perfluoropropano, perfluorobutano, perfluoro-n-butano, perfluoropentano, perfluorohexano y perfluoroheptano), perfluoroalqueno (por ejemplo, perfluoropropeno, perfluorobuteno (por ejemplo, perfluorobut-2-eno) y perfluorobutadieno), perfluoroalquino (por ejemplo, perfluorobut-2-ino), y perfluorocicloalcano (por ejemplo, perfluorociclobutano, perfluorometilciclobutano, perfluorodimetilciclobutano, perfluorotrimetilciclobutano, perfluorociclopentano, perfluorometilciclopentano, perfluorodimetilciclopentano, perfluorociclohexano, perfluorometilciclohexano y perfluorocicloheptano).
Como un marcador adecuado para la detección con un dispositivo de examen ecográfico se pueden utilizar los que ya han estado disponibles comercialmente. Los marcadores comercialmente disponibles para el examen ecográfico incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, la 1a generación de Albunex (Mallinckrodt), Echovist (SHU 454, Schering), Levovist (SHU 508, Schering), Myomap (Quadrant), Quantison (Quadrant), Sonavist (Schering) y Sonazoid (GE Healthcare), la 2a generación de Definity/luminity (Bristol-Myers Squibb Medical Imaging), Imagent-imavist (Alliance), Optison (GE Healthcare), biSphere/cardiosphere (POlNT Biomedical), SonoVue (BR1, Bracco) y AI700/imagify (Acusphere), y la 3a generación de Echogen (Sonus Pharmaceuticals) (Reddy et al., World J Gastroenterol. 7 de enero de 2011; 17(1):42-8). También se describen los marcadores adecuados para la detección con un dispositivo de examen ecográfico, además de los descritos anteriormente, en los documentos JP A H5-194278, JP A H 8-310971, JP A H8-151335, JP A 2002-308802, WO 2004/069284 y WO 2005/120587.
El marcador contenido en el resto funcional del complejo de la presente invención no está particularmente limitado y puede seleccionarse de cualquiera de los marcadores mencionados anteriormente. Además, el fármaco contenido en el resto funcional del complejo de la presente invención puede marcarse mediante cualquiera de los marcadores mencionados anteriormente. El portador contenido en el resto funcional del complejo de la presente invención también puede seleccionarse de cualquiera de los portadores mencionados anteriormente. El portador puede portar uno o más de los fármacos y/o marcadores mencionados anteriormente.
El fármaco, el marcador y/o el portador contenido en el resto funcional del complejo de la presente invención pueden modificarse para ser adecuados para unirse al resto de unión en un grado en el que no se pierde su función. Se conocen bien en la técnica modificaciones compatibles con la unión química a una sustancia dada. Los ejemplos no limitativos de tales modificaciones incluyen tal como, por ejemplo, modificaciones para formar un enlace disulfuro (por ejemplo, tiolación), modificaciones para química click (por ejemplo, azidación, alquinilación), modificaciones para formar un enlace de avidina-biotina (por ejemplo, avidinilación, biotinilación).
El resto funcional puede comprender un marcador, un fármaco o un portador únicos, o puede comprender más de un marcador, un fármaco o un portador, o una combinación de los mismos. Cuando el resto funcional comprende más de un marcador, un fármaco o un portador, pueden ser iguales o diferentes. Además, un único resto de direccionamiento puede unirse al resto funcional a través de un único resto de unión, o más de un resto de direccionamiento puede unirse al resto funcional a través de un único o más de un resto de unión. Cuando el resto funcional se une a más de un resto de unión y/o resto de direccionamiento, dichos restos de unión y/o restos de direccionamiento pueden ser iguales o diferentes.
En una realización, el complejo de la presente invención está en forma de un compuesto. Los ejemplos no limitativos del complejo de la presente invención en forma de un compuesto incluyen, por ejemplo, aquellos en los que una molécula de direccionamiento se ha unido a un compuesto de marcado o compuesto de terapéutico, o aquellos en los que una molécula de direccionamiento se ha unido a un compuesto de portador (por ejemplo, un polímero) al que un compuesto de marcado y/o un compuesto de terapéutico se ha unido a través de un ligador (o sin ligador). En otra realización, el complejo de la presente invención está en forma de una composición. Los ejemplos no limitativos del complejo de la presente invención en forma de una composición incluyen, por ejemplo, aquellos en los que una molécula de direccionamiento se ha unido a una composición de portador (por ejemplo, un liposoma) al que un compuesto de marcado o un compuesto de terapéutico se ha unido a través de un ligador (o sin ligador).
Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición que comprende un componente seleccionado del grupo que consiste en la molécula de direccionamiento, el agente de direccionamiento, el portador de direccionamiento y el complejo de la presente invención. La composición de la presente invención puede comprender, además de la molécula de direccionamiento, el agente de direccionamiento, el portador de direccionamiento y/o el complejo de la presente invención, componentes adicionales, por ejemplo, componentes adecuados para su uso (por ejemplo, un principio activo tal como un fármaco, un marcador, un aditivo tal como un excipiente). La composición de la presente invención puede ser una composición farmacéutica que va a usarse en el tratamiento de una enfermedad. La composición farmacéutica de la presente invención puede comprender uno o más aditivos farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, un tensioactivo, portador, diluyente o excipiente). Los aditivos farmacéuticamente aceptables se conocen bien en la técnica de la medicina y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (199o).
El complejo y la composición de la presente invención son capaces de administrar fármacos etc., a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6 o los alrededores de la misma. Por tanto, puede usarse para el tratamiento de una enfermedad asociada con dicha célula diana, por ejemplo, fibrosis o una enfermedad neoplásica. Cuando se usa para tal uso, el complejo y la composición de la presente invención comprenden un fármaco que trata dicha enfermedad, por ejemplo, un fármaco que suprime la actividad o proliferación de la célula diana. El complejo y la composición de la presente invención usados para tal uso pueden denominarse algunas veces compuesto para el tratamiento o un agente de tratamiento (o una composición para el tratamiento).
El “tratamiento” en el presente documento abarca todas las clases de intervención preventiva y/o terapéutica medicamente aceptable que tiene como objetivo la cura, mejora temporal o prevención de una enfermedad. Por ejemplo, el “tratamiento” en el presente documento abarca una intervención medicamente aceptable de diversos objetos incluyendo retrasar o terminar la progresión de la enfermedad asociada con la célula diana, revertir o eliminar una lesión, o prevenir el desarrollo o recaída de dicha enfermedad.
Por consiguiente, el compuesto para el tratamiento o el agente de tratamiento de la presente invención comprende un compuesto para el tratamiento o un agente de tratamiento (o una composición para el tratamiento) para tratar una enfermedad asociada con la célula diana, y un compuesto para la prevención o un agente de prevención (o una composición para la prevención) para prevenir una enfermedad asociada con la célula diana.
Las enfermedades asociadas con célula estrelladas incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, fibrosis tales como fibrosis hepática, cirrosis hepática, fibrosis pancreática, fibrosis de las cuerdas vocales, fibrosis de la mucosa de las cuerdas vocales y fibrilación laríngea (véase, el documento de patente 1).
Las enfermedades asociadas con miofibroblasto incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, fibrosis de diversos órganos tales como fibrosis hepática, cirrosis hepática, fibrosis de las cuerdas vocales, fibrosis de la mucosa de las cuerdas vocales, fibrilación laríngea, fibrosis de pulmón, fibrosis pancreática, fibrosis de la médula ósea, infarto de miocardio, fibrilación miocárdica después de infarto de miocardio, fibrosis miocárdica, fibrosis endomiocárdica, fibrosis esplénica, fibrosis mediastínica, fibrosis de la mucosa sublingual, fibrilación del tracto intestinal (por ejemplo, la asociada con una enfermedad inflamatoria del intestino), fibrosis retroperitoneal, fibrosis del útero, escleroderma y fibrosis mamaria.
Enfermedades asociadas con fibroblastos asociados al cáncer incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, tumores sólidos tales como tumor cerebral, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de esófago, cáncer de estómago, cáncer de duodeno, cáncer de apéndice, cáncer colorrectal, cáncer de recto, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de vesícula biliar, cáncer de vías biliares, cáncer de ano, cáncer de riñón, cáncer de uréter, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer de pene, cáncer de testículo, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer de vulva, cáncer de vagina, cáncer de piel, fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, liposarcoma, rabdomiosarcoma, leiomiosarcoma, angiosarcoma, sarcoma de Kaposi, linfangiosarcoma, sarcoma sinovial, condrosarcoma y osteosarcoma.
Las enfermedades asociadas con células tumorales incluyen, sin limitación, tal como, por ejemplo, enfermedades neoplásicas tales como cualquier tumor benigno y tumor maligno de cualquier parte del cuerpo, por ejemplo, cerebro, cabeza y cuello, pecho, extremidades, pulmón, corazón, timo, esófago, estómago, intestino delgado (duodeno, yeyuno, íleon), intestino grueso (colon, ciego, apéndice, recto), hígado, páncreas, vesícula biliar, ano, riñón, uréter, vejiga, próstata, pene, testículo, útero, ovario, vulva, vagina, piel, músculo estriado, músculo liso, membrana sinovial, cartílago, hueso, tiroides, glándula suprarrenal, peritoneo, mesenterio, médula ósea, sangre, sistema vascular, sistema linfático tal como ganglios linfáticos. Los ejemplos no limitativos de tumores malignos incluyen sarcomas tales como fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, liposarcoma, rabdomiosarcoma, leiomiosarcoma, angiosarcoma, sarcoma de Kaposi, linfangiosarcoma, sarcoma sinovial, condrosarcoma y osteosarcoma, carcinomas tales como tumor cerebral, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de esófago, cáncer de estómago, cáncer de duodeno, cáncer de apéndice, cáncer colorrectal, cáncer de recto, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de vesícula biliar, cáncer de vías biliares, cáncer de ano, cáncer de riñón, cáncer de uréter, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer de pene, cáncer de testículo, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer de vulva, cáncer de vagina y cáncer de piel, y además leucemia y linfoma maligno.
Las enfermedades asociadas con células que expresan STRA6 incluyen, aparte de las enfermedades descritas anteriormente asociadas con células tumorales, enfermedades asociadas con células seleccionadas del grupo que consiste en células de RPE, células de Sertoli, astrocitos, por ejemplo, retinosis pigmentaria, degeneración macular asociada con la edad, tumor de células de Sertoli y astrocitoma.
El complejo y la composición de la presente invención puede ser para controlar (por ejemplo, suprimir, mantener o promover) la actividad o proliferación de una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6, y en este caso, incluyen fármacos que suprimen la actividad o proliferación de la célula diana.
La molécula de direccionamiento, el agente de direccionamiento, el portador de direccionamiento, el complejo y la composición de la presente invención pueden ser para administrar una sustancia a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6. La sustancia que va a administrarse no está particularmente limitada e incluye, por ejemplo, sustancias que van a administrarse que pueden portarse por el portador de direccionamiento de la presente invención mencionado anteriormente, o el fármaco o el marcador mencionados anteriormente descritos en el presente documento que está contenido en el resto funcional del complejo de la presente invención. La administración de la sustancia puede llevarse a cabo in vitro o in vivo.
El complejo y la composición de la presente invención es capaz de administrar un marcador a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6. Por tanto, puede usarse para marcar la célula diana o un tejido que comprende la misma. El complejo y la composición de la presente invención usados para tal uso puede denominarse algunas veces compuesto para marcar o agente de marcado (o composición para marcar). El compuesto para marcar o el agente de marcado de la presente invención comprende un marcador. Los ejemplos no limitativos del marcador comprenden los descritos anteriormente. El compuesto para marcar o el agente de marcado de la presente invención pueden usarse para detectar u obtener imágenes de la célula o tejido diana que comprende el mismo descrito anteriormente. El agente de marcado de la presente invención usado para tal uso puede denominarse algunas veces compuesto para detectar o agente de detección (o composición para detectar), o compuesto para obtener imágenes o agente de obtención de imágenes (o composición para obtener imágenes).
El marcado, detección u obtención de imágenes de una célula o un tejido puede llevarse a cabo in vitro o in vivo. La detección u obtención de imágenes de una célula o un tejido también puede llevarse a cabo de manera no destructiva, preferiblemente de manera no invasiva. En este caso, “de manera no invasiva” significa que la detección u obtención de imágenes no destruirán el tejido de interés; por ejemplo, cuando el tejido de interés es el hígado, la detección u obtención de imágenes incluye exponer el hígado mediante cirugía abierta u obtener imágenes de la superficie del hígado mediante endoscopia, sin incidir el hígado y explorar dentro de él. Además, “de manera no invasiva” significa que la detección del marcador contenido en el agente de detección o agente de obtención de imágenes se lleva a cabo sin dañar de manera intencionada el organismo, e incluye normalmente la detección fuera del organismo, aunque también se incluye la detección insertando un detector tal como un endoscopio o sonda ecográfica a través de una abertura natural tal como la cavidad oral, la cavidad nasal, el ano, la uretra, el conducto auditivo o la vagina.
El compuesto para marcar o el agente de marcado de la presente invención puede usarse para el examen o diagnóstico de una enfermedad asociada con la célula diana. Por ejemplo, se sabe que una célula estrellada o un miofibroblasto prolifera en la lesión de fibrosis, de manera que un alto nivel de un marcador que se detecta en un tejido indica una gran población de célula estrelladas o miofibroblastos que están presentes en el tejido, proporcionando un índice de fibrosis que afecta a ese tejido (véase, por ejemplo, el documento de patente 7). Por otro lado, ya que un fibroblasto asociado al cáncer o una célula tumoral se ubica en un tejido canceroso o tumoral, la detección de un alto nivel de un marcador en una parte particular del cuerpo del sujeto es un índice de la presencia de un cáncer o tumor en esa parte. El compuesto para marcar o el agente de marcado de la presente invención puede denominarse particularmente algunas veces compuesto para examinar o agente de examen (o composición para examinar), o compuesto para diagnosticar o agente de diagnóstico (o composición para diagnosticar). En este caso, un examen de una enfermedad incluye, por ejemplo, comparar el índice medido (por ejemplo, la intensidad de señal del agente de marcado) con un patrón predeterminado (por ejemplo, valor de corte predeterminado) y presentar el resultado del examen (por ejemplo, un resultado positivo o negativo del examen) sobre la enfermedad basándose en la comparación, pero sin identificar la enfermedad. Por tanto, no es necesaria la opinión de un médico para el examen de la enfermedad. Por otro lado, un diagnóstico de una enfermedad incluye la identificación de la enfermedad por un médico basándose en diversas informaciones.
El compuesto para marcar o el agente de marcado de la presente invención también puede usarse para monitorizar una enfermedad asociada con la célula diana. El compuesto para marcar o el agente de marcado de la presente invención usado para tal uso puede denominarse particularmente algunas veces compuesto para monitorizar o agente de monitorización (o composición para monitorizar). En este caso, la monitorización de una enfermedad significa monitorizar a lo largo del tiempo una transición de una enfermedad en determinado sujeto, por ejemplo, una remisión, exacerbación o persistencia, etc. de la enfermedad.
El compuesto para detectar, el agente de detección, el compuesto para obtener imágenes y el agente de obtención de imágenes de la presente invención pueden usarse para el examen, el diagnóstico o la monitorización de determinada enfermedad, cuando una célula diana presenta un comportamiento característico en dicha enfermedad, por ejemplo, sin limitarse a, cuando la célula diana prolifera de manera anómala en dicha enfermedad. Tal enfermedad incluye una enfermedad asociada con la célula diana. Por tanto, el compuesto para detectar, el agente de detección, el compuesto para obtener imágenes y el agente de obtención de imágenes de la presente invención pueden constituir una realización del compuesto para detectar, el agente de detección, un compuesto para diagnosticar, un agente de diagnóstico, un compuesto para monitorizar o un agente de monitorización de la presente invención.
El compuesto para marcar o agente de marcado de la presente invención también puede usarse para evaluar el efecto de un tratamiento sobre una enfermedad asociada con una célula diana. El compuesto para marcar o el agente de marcado de la presente invención usado para tal uso puede denominarse particularmente algunas veces compuesto para evaluar o agente de evaluación (o composición para evaluar).
El complejo y la composición de la presente invención pueden administrarse a través de diversas vías incluyendo vías oral y parenteral, por ejemplo, sin limitación, vías oral, intravenosa, intramuscular, subcutánea, tópica, rectal, intraarterial, intraportal, intraventricular, transmucosa, percutánea, intranasal, intraperitoneal, intrapulmonar e intrauterina, y pueden formularse en una forma de dosificación adecuada para cada vía de administración. Cualquier forma de dosificación y métodos de formulación conocidos pueden emplearse según sea apropiado (véase, por ejemplo, “Standard Pharmaceutics [HYOJUN YAKUZAIGAKU]”, Watanabe, Yoshiteru et al. eds., Nankodo Co., Ltd., 2003; y Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA(1990)).
Por ejemplo, formas de dosificación adecuadas para la administración oral incluyen tal como, sin limitación, polvos, gránulos, comprimidos, cápsulas, líquidos, suspensiones, emulsiones, geles y jarabes. Las formas de dosificación adecuadas para administración parenteral incluyen inyecciones tales como disoluciones inyectables, suspensiones inyectables, emulsiones inyectables e inyecciones preparadas cuando sea necesario. Las formulaciones para administración parenteral pueden estar en forma de una disolución o suspensión estéril isotónica acuosa o no acuosa.
El complejo y la composición de la presente invención pueden proporcionarse en cualquier forma. En vista de la estabilidad en almacenamiento, puede proporcionarse en una forma que puede prepararse cuando sea necesario, por ejemplo, en una forma que puede preparar un médico y/o un farmacéutico, una enfermera u otro personal sanitario auxiliar en una escena médica o sus alrededores. En este caso, el complejo y la composición de la presente invención se proporcionan como uno o más recipientes que comprenden al menos uno de sus constituyentes esenciales, y se preparen antes de su uso, por ejemplo, en el plazo de 24 horas, preferiblemente en el plazo de 3 horas, y más preferiblemente inmediatamente antes de su uso. Para la preparación, pueden usarse reactivos, disolventes, aparatos de dispensación normalmente disponibles en el lugar de preparación según sea apropiado.
También se divulga en el presente documento un kit o envase que comprende el portador de direccionamiento, el complejo o la composición de la presente invención o los constituyentes de los mismos, para preparar el portador de direccionamiento, el complejo y la composición de la presente invención, para administrar una sustancia a una célula diana, para controlar la actividad o proliferación de la célula diana, para tratar, examinar, diagnosticar o monitorizar una enfermedad asociada con la célula diana, para marcar, detectar u obtener imágenes de la célula diana o un tejido que comprende la misma, o para evaluar el efecto del tratamiento para la enfermedad asociada con la célula diana, y al portador de direccionamiento, el complejo o la composición de la presente invención o los constituyentes de los mismos proporcionados en forma de tal kit o envase.
Cada constituyente del portador de direccionamiento, el complejo o la composición de la presente invención contenido en el kit o envase es tal como se describió anteriormente para el portador de direccionamiento, el complejo o la composición de la presente invención. El kit puede comprender además, además de los descritos anteriormente, una instrucción para los métodos de preparación o de uso (por ejemplo, el método de administración) del portador de direccionamiento, el complejo o la composición de la presente invención, por ejemplo, una instrucción escrita para su uso o un medio que registra la información sobre el método de uso, por ejemplo, un disco flexible, CD, DVD, disco Blue-ray, tarjeta de memoria, memoria USB, y similares. Además, aunque el kit o envase pueden comprender todos los constituyentes para constituir completamente el portador de direccionamiento, el complejo o la composición de la presente invención, el kit o envase puede no comprender necesariamente todos los constituyentes. Por tanto, el kit o envase puede no comprender reactivos o un disolvente que están normalmente disponibles en una escena médica o instalación experimental, por ejemplo, agua esterilizada, solución salina fisiológica, disolución de glucosa, y similar.
También se divulga en el presente documento un método para controlar la actividad o proliferación de una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada, un miofibroblasto, un fibroblasto asociado al cáncer, una célula tumoral y una célula que expresa STRA6, en el que el método comprende una etapa de administrar una cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención que comprende un fármaco que controla la actividad o proliferación de dicha célula diana a un sujeto o célula o tejido que lo necesita. En este caso, controlar la actividad o proliferación de la célula diana incluye la supresión, el mantenimiento y la promoción de la actividad o proliferación. Por tanto, una cantidad eficaz en el método anterior es, por ejemplo, una cantidad que suprime, mantiene o promueve la actividad o proliferación de la célula diana. El mantenimiento de la actividad o proliferación de la célula diana incluye mantener la actividad o proliferación en el estado inicial en la condición en la que la actividad o proliferación de la célula diana se suprime o promueve a lo largo del tiempo. La célula o el tejido al que se le administra el complejo o la composición de la presente invención comprende normalmente la célula diana y puede estar presente dentro o fuera del organismo. Por tanto, el método anterior que comprende una etapa de administrar el complejo o la composición de la presente invención a una célula o un tejido abarca los llevados a cabo in vitro, ex vivo o in vivo.
Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un método de tratamiento de una enfermedad asociada con una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada, un miofibroblasto, un fibroblasto asociado al cáncer, una célula tumoral y una célula que expresa STRA6, en el que el método comprende una etapa de administrar una cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención que comprende un fármaco que trata dicha enfermedad a un sujeto que lo necesita. En este caso, una cantidad eficaz es, por ejemplo, una cantidad que previene el desarrollo y recaída de dicha enfermedad, o una cantidad que cura dicha enfermedad. Las enfermedades asociadas con la célula diana y los fármacos que tratan dichas enfermedades son tal como se describió anteriormente para el compuesto para el tratamiento y el agente de tratamiento de la presente invención.
La invención también se refiere a un método de marcado tal como se define en la reivindicación 11. Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un método de marcado, detección u obtención de imágenes de una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada, un miofibroblasto, un fibroblasto asociado al cáncer, una célula tumoral y una célula que expresa STRA6 o un tejido que comprende los mismos, en el que el método comprende una etapa de administrar una cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención que comprende un marcador a un sujeto o célula o tejido que lo necesita. En este caso, una cantidad eficaz es, por ejemplo, una cantidad que es capaz de marcar de manera detectable la célula diana o el tejido diana. Como el marcador en dicho método pueden usarse, por ejemplo, los descritos en el presente documento. Las células o el tejido a los que se les administra el complejo o la composición de la presente invención pueden incluir la célula diana, y pueden estar presentes dentro o fuera del organismo. Por tanto, los métodos de la divulgación descritos anteriormente que comprenden administrar el complejo o la composición de la presente invención a la célula o el tejido incluyen aquellos realizados in vitro, ex vivo o in vivo.
Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un método de examen, diagnóstico o monitorización de una enfermedad asociada con una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada, un miofibroblasto, un fibroblasto asociado al cáncer, una célula tumoral y una célula que expresa STRA6, en el que el método comprende una etapa de administrar una cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención que comprende un marcador a un sujeto que lo necesita. En este caso, una cantidad eficaz es, por ejemplo, una cantidad que es capaz de marcar de manera detectable la célula diana o tejido diana. Como el marcador en dicho método pueden usarse, por ejemplo, los descritos en el presente documento. Las enfermedades asociadas con la célula diana son tal como se describió anteriormente para el compuesto para el tratamiento y el agente de tratamiento de la presente invención. Cuando la célula diana presenta un comportamiento característico de la enfermedad, por ejemplo, sin limitarse a, cuando la célula diana prolifera de manera anómala en determinada enfermedad, el examen, el diagnóstico o la monitorización de la enfermedad asociada con la célula diana también puede llevarse a cabo detectando u obteniendo imágenes de la célula diana con una cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención que comprende un marcador.
Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un método de evaluación del efecto del tratamiento para una enfermedad asociada con una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada, un miofibroblasto, una fibroblasto asociado al cáncer, una célula tumoral y una célula que expresa STRA6, en el que el método comprende una etapa de administrar una cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención que comprende un marcador a un sujeto que lo necesita. En este caso, una cantidad eficaz es, por ejemplo, una cantidad que es capaz de marcar de manera detectable la célula diana o el tejido diana. Como el marcador en dicho método pueden usarse, por ejemplo, los descritos en el presente documento. Las enfermedades asociadas con la célula diana son tal como se describió anteriormente para el compuesto para el tratamiento y el agente de tratamiento de la presente invención.
Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un método de administración de una sustancia a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada, un miofibroblasto, un fibroblasto asociado al cáncer, una célula tumoral y una célula que expresa STRA6, en el que el método comprende una etapa de dirigir la sustancia con una molécula de direccionamiento, un agente de direccionamiento o un portador de direccionamiento de la presente invención, y una etapa de administrar la sustancia dirigida a un sujeto o un medio que comprende una célula diana. La sustancia que va administrarse no está particularmente limitada e incluye tales como, por ejemplo, un marcador, un fármaco, un portador que puede comprender un marcador y/o fármaco. El método de administración incluye los realizados in vitro, ex vivo o in vivo.
La cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención en cada uno de los métodos es preferiblemente una cantidad que no provoca un efecto adverso que exceda los beneficios de su administración. La cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención en cada uno de los métodos puede determinarse según sea apropiado basándose en una prueba in vitro usando células cultivadas, etc., o una prueba en un animal de laboratorio tal como un ratón, una rata, un perro o un cerdo, o un modelo animal de la enfermedad. Tales métodos de prueba son bien conocidos por un experto en la técnica.
La cantidad específica del complejo o la composición administrada a un sujeto en el método puede determinarse teniendo en cuenta diversas condiciones asociadas con el sujeto que necesita la administración tal como, por ejemplo, el tipo de la diana, el objetivo del método, el contenido de la terapia, el tipo de la enfermedad, la gravedad del síntoma, el estado de salud general, edad, peso corporal, sexo y dieta del sujeto, tiempo y frecuencia de la administración, medicación simultánea, grado de respuesta a la terapia, y cumplimiento terapéutico de la terapia. La dosificación total diaria del complejo o la composición de la presente invención puede ser, sin limitarse a, por ejemplo, de desde aproximadamente 1 |ig/kg hasta aproximadamente 1000 mg/kg de peso corporal, desde aproximadamente 10 |ig/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal, o desde aproximadamente 100 |ig/kg hasta aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal. Alternativamente, la dosificación puede calcularse basándose en la superficie corporal del paciente.
Las vías de administración incluyen diversas vías que incluyen tanto las vías orales como parenterales tales como, por ejemplo, vías oral, intravenosa, intramuscular, subcutánea, tópica, rectal, intra-arterial, intraportal, intraventricular, transmucosa, transdérmica, intranasal, intraperitoneal, intrapulmonar e intrauterina.
La frecuencia de la administración varía dependiendo de la naturaleza de la formulación o composición usada o las condiciones del sujeto como anteriormente, aunque puede ser, por ejemplo, múltiples veces al día (es decir, 2, 3, 4, 5 o más veces al día), una vez al día, una vez en varios días (es decir, una vez en 2, 3, 4, 5, 6, 7 días, etc.), varias veces a la semana (por ejemplo, 2, 3 ó 4 veces a la semana), una vez a la semana, o una vez en varias semanas (es decir, cada 2, 3 ó 4 semanas).
El método de marcado, detección, obtención de imágenes, examen, diagnóstico, monitorización y/o evaluación puede comprender además la detección de un marcador contenido en el complejo o la composición de la presente invención que comprende el marcador. El marcador puede estar contenido en el complejo o la composición en el momento de la detección, o puede estar presente de manera separada del complejo o la composición. La detección del marcador puede llevarse a cabo mediante cualquier técnica que pueda detectar el marcador, por ejemplo, sin limitación, mediante una técnica que usa un dispositivo de examen óptico macroscópico (por ejemplo, un microscopio óptico, un microscopio fluorescente, un microscopio de contraste de fases y un dispositivo de obtención de imágenes in vivo), un dispositivo de rayos X (por ejemplo, un dispositivo de rayos X simple o dispositivo de TC (tomografía computarizada)), un dispositivo de IRM (obtención de imágenes por resonancia magnética), un dispositivo de examen de radioisótopos (por ejemplo, un dispositivo gammagráfico, PET o SPECT), un dispositivo de examen ecográfico y un dispositivo de termografía. Los marcadores adecuados para cada técnica de detección son conocidos por un experto en la técnica (véase, por ejemplo, Lecchi et al., 2007, citado anteriormente), y los ejemplos no limitativos se han descrito ya anteriormente.
Puede detectarse u obtenerse imágenes de la célula diana in vivo. Para tal detección u obtención de imágenes, puede usarse cualquier dispositivo adecuado para la detección in vivo, tal como, sin limitación, un dispositivo de examen óptico (por ejemplo, un dispositivo de obtención de imágenes in vivo), un dispositivo de rayos X (por ejemplo, un dispositivo de rayos X simple o dispositivo de TC (tomografía computarizada)), un dispositivo de IRM (obtención de imágenes por resonancia magnética), un dispositivo de examen de radioisótopos (un dispositivo gammagráfico, PET o SPECT), un dispositivo de examen ecográfico y un dispositivo de termografía, y los marcadores adecuados para tal detección también son conocidos por un experto en la técnica (véase, por ejemplo, Lecchi et al., 2007, citado anteriormente).
Detectando u obteniendo imágenes de la célula diana in vivo, puede determinarse la localización de la célula diana (por ejemplo, un órgano y aparato) o la lesión de la enfermedad asociada con la célula diana. Por tanto, la presente divulgación también se refiere a un método de determinación de la localización de la célula diana y/o la lesión de la enfermedad asociada con la célula diana, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención que comprende un marcador a un sujeto que lo necesita. Tal método es útil para diagnosticar la enfermedad asociada con la célula diana.
Además, detectar u obtener imágenes de la célula diana in vitro o in vivo puede proporcionar información útil para diagnosticar la enfermedad asociada con la célula diana, tal como el número o la distribución de la célula diana. Por tanto, la presente divulgación también se refiere a un método para ayudar al diagnóstico de una enfermedad asociada con la célula diana, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del complejo o la composición de la presente invención que comprende un marcador. El método puede comprender además proporcionar al médico información útil para diagnosticar la enfermedad asociada con la célula diana.
Los métodos de examen y diagnóstico de la enfermedad asociada con la célula diana y el método para ayudar al diagnóstico de una enfermedad asociada con la célula diana puede comprender además una etapa de comparar el resultado de la detección del marcador en el sujeto con el resultado de referencia de la detección del marcador. El resultado de referencia de la detección puede ser, por ejemplo, el resultado de detección del marcador en un sujeto que se sabe que no tiene la enfermedad asociada con la célula diana (también denominado “sujeto negativo”), que también se denomina “referencia negativa”, o el resultado de la detección del marcador en un sujeto que se sabe que tiene la enfermedad asociada con la célula diana (también denominado “sujeto positivo”), que también se denomina “referencia positiva”. El resultado de referencia de la detección del marcador puede ser una media o una mediana del resultado de la detección en más de un sujeto negativo o positivo.
Por consiguiente, el método de examen de la enfermedad asociada con la célula diana puede comprender además, por ejemplo, una etapa de presentar el resultado negativo de la detección cuando el resultado de la detección del marcador en el sujeto era igual a (por ejemplo, no significativamente diferente de) la referencia negativa, y/o una etapa de presentar el resultado positivo de la detección cuando el resultado de la detección del marcador en el sujeto era significativamente mayor que la referencia negativa, y/o una etapa de presentar el resultado positivo de la detección cuando el resultado de detección del marcador en el sujeto era igual a (por ejemplo, no significativamente diferente de) la referencia positiva.
El resultado de la detección del marcador en los métodos de detección, obtención de imágenes, examen, diagnóstico, monitorización y/o evaluación puede ser una intensidad de señal y/o distribución de señales del marcador detectado.
Una intensidad de señal de un marcador significa una intensidad o medición análoga de diversas señales generadas a partir del marcador, por ejemplo, una señal fluorescente, señal luminiscente, señal magnética o señal radiactiva, y se mide normalmente mediante medios apropiados para la detección. Los ejemplos específicos de los medios para la detección son tal que se han descrito ya anteriormente. La intensidad de señal puede obtenerse del sujeto completo o puede obtenerse de una parte o área determinada del sujeto. Además, la intensidad de señal puede ser un valor medio frente al área o volumen de la parte medida, o un valor integrado. Cuando la intensidad de señal varía a lo largo del tiempo, la intensidad de señal en el presente método puede ser de un determinado punto de tiempo, o pueden ser las integradas durante determinado periodo de tiempo. Cuando el número o la actividad de las células diana aumenta con la progresión de la enfermedad, un aumento en la intensidad de señal puede ser un índice de la presencia o progresión de la enfermedad, mientras que, de lo contrario, una disminución en la intensidad de señal puede ser un índice de una mejora en la enfermedad.
La distribución de señales del marcador significa la información asociada con la ubicación de la señal generada a partir del marcador en el sujeto, que puede ser bidimensional o tridimensional. Comparando la distribución de señales con la relación posicional anatómica de los órganos o la información estructural del tejido, como una imagen de TC, una imagen de IRM o una ecografía, puede identificarse el tejido a partir del cual se genera la señal. Cuando la señal varía a lo largo del tiempo, la distribución de señales en el presente método puede ser de un determinado punto de tiempo, o pueden ser las integradas durante determinado período de tiempo. Cuando el área de la presencia de las células diana se expande con la progresión de la enfermedad, la expansión de la distribución de señales puede ser un índice de la presencia o progresión de la enfermedad, mientras que, por el contrario, una disminución en la distribución de señales puede ser un índice de mejora de la enfermedad.
En los métodos, la intensidad y distribución de señales puede evaluarse en combinación. La evaluación de la ubicación y la intensidad de la señal detectada puede proporcionar una determinación más precisa y una información más correcta.
El método de monitorización divulgado en el presente documento puede comprender además comparar el resultado de la detección del marcador en el primer punto de tiempo con el del segundo punto de tiempo que es después del primer punto. Por ejemplo, cuando el resultado de la detección es un índice del número de las células diana (por ejemplo, la intensidad de señal o distribución de señales del marcador captado por las células diana), un índice más pequeño en el segundo punto de tiempo que el índice en el primer punto de tiempo indica una disminución en el número de las células diana; cuando la enfermedad asociada con la célula diana se exacerba por la proliferación de la célula diana, un índice más pequeño en el segundo punto de tiempo que el índice en el primer punto de tiempo significa una mejora en dicha enfermedad. Por ejemplo, un resultado de una mejora en la enfermedad puede presentarse si la intensidad de señal en el segundo punto de tiempo es menor que la del primer punto de tiempo, mientras que, por lo contrario, un resultado de una exacerbación de la enfermedad puede presentarse si la intensidad de señal en el segundo punto de tiempo es mayor que la del primer punto de tiempo. Además, por ejemplo, un resultado de una mejora en la enfermedad puede presentarse si la distribución de señales en el segundo punto de tiempo se disminuye en comparación con la del primer punto de tiempo, mientras que, por lo contrario, un resultado de una exacerbación de la enfermedad puede presentarse si la distribución de señales en el segundo punto de tiempo se expande en comparación con la del primer punto de tiempo.
El método de evaluación divulgado en el presente documento puede comprender además comparar el resultado de la detección del marcador en el primer punto de tiempo antes del tratamiento con el resultado de la detección del marcador en el segundo punto de tiempo después del tratamiento después del primer punto de tiempo, o comparar el resultado de la detección del marcador en el primer punto de tiempo después del primer tratamiento con el resultado de la detección del marcador en el segundo punto de tiempo después del segundo tratamiento que se llevó a cabo después del primer tratamiento. Por ejemplo, cuando el resultado de la detección es un índice del número de las células diana (por ejemplo, la intensidad de señal o distribución de señales del marcador captado por las células diana), un índice más pequeño en el segundo punto de tiempo que el índice en el primer punto de tiempo indica una disminución en el número de las células diana; cuando la enfermedad asociada con la célula diana se exacerba por la proliferación de la célula diana, un índice más pequeño en el segundo punto de tiempo que el índice en el primer punto de tiempo significa una mejora en dicha enfermedad, concretamente un efecto positivo por el tratamiento. Por ejemplo, la enfermedad se ha mejorado por el tratamiento si la intensidad de señal en el segundo punto de tiempo es menor que la del primer punto de tiempo, y por tanto puede presentarse el resultado de que el tratamiento ha sido exitoso. Por el contrario, si la intensidad de señal en el segundo punto de tiempo es mayor que la del primer punto de tiempo, la enfermedad se empeoró por el tratamiento, y puede presentarse el resultado de que o bien el tratamiento no fue muy exitoso o bien que fue fallido. Además, por ejemplo, la enfermedad se ha mejorado por el tratamiento si la distribución de señales en el segundo punto de tiempo se disminuye en comparación con el primer punto de tiempo, y por tanto puede presentarse el resultado de que el tratamiento ha sido exitoso. Por el contrario, si la distribución de señales en el segundo punto de tiempo se expande en comparación con la del primer punto de tiempo, la enfermedad se empeoró por el tratamiento, y puede presentarse el resultado de que el o bien el tratamiento no fue muy exitoso o bien que fue fallido.
En el presente documento, el término “sujeto” significa un individuo de cualquier organismo vivo, preferiblemente un animal, más preferiblemente un mamífero, preferiblemente además un individuo humano. En la presente invención, el sujeto puede estar sano (por ejemplo, sin determinada o ninguna enfermedad) o puede padecer una enfermedad. Sin embargo, en casos en los que se contempla el tratamiento, examen, diagnóstico o monitorización de una enfermedad asociada con la célula diana, el sujeto significa normalmente un sujeto que padece o está en riesgo de padecer dicha enfermedad; en los casos en los que se contempla la evaluación de un tratamiento contra una enfermedad asociada con la célula diana, el sujeto significa normalmente un sujeto que se somete o está a punto de someterse a una terapia contra dicha enfermedad.
Ejemplos
En los siguientes ejemplos, la presente invención se explicará en más detalles. Estos ejemplos tienen como objetivo demostrar la presente invención, pero no limitar el alcance de la presente invención.
Ejemplo 1: preparación de un complejo molécula de direccionamiento-portador.
Se prepararon los siguientes péptidos como moléculas de direccionamiento:
Tabla 1
Figure imgf000026_0001
Se obtuvieron todos los péptidos anteriores de Sigma-Genosys. Se preparó como control positivo, vitamina A (todotrans-retinol, Sigma Aldrich). Se disolvió la vitamina A en DMSO a una concentración de 10 mM para preparar una disolución madre y se crioconservó hasta su uso. Como portador al que se une la molécula de direccionamiento, se preparó LipoTrust™ SR (Hokkaido System Science Co.,Ltd.) que comprende un lípido catiónico que forma liposomas DC-6-14, y como fármaco que se porta por el portador, se preparó un ARNip contra HSP47 (HSP47 C, Hokkaido System Science Co., Ltd.). Las secuencias del ARNip se muestran a continuación (en las secuencias, las letras minúsculas expresan ARN y las letras mayúsculas expresan ADN, respectivamente):
Figure imgf000027_0001
Se disolvió el ARNip en agua libre de nucleasa (Ambion, n.° de cat. AM9937) a una concentración de 10 mg/ml para preparar una disolución madre y se crioconservó hasta su uso.
Se disolvió LipoTrust™ SR en agua libre de nucleasa (Ambion, n.° de cat. AM9937) a una concentración de 1 mM del lípido catiónico. Se colocaron 10 jllI de esta disolución de liposomas en un tubo Eppendorf, a la que se le añadió 1 L de la disolución madre de cada péptido anterior disuelta en DMSO a una concentración predeterminada (1,1 mM, 1,25 mM, 2,5 mM, 3,4 mM, 5 mM o 10 mM para los experimentos cuyos resultados se muestran en la figura 1; 90 mM para los experimentos cuyos resultados se muestran en la figura 2) o la disolución madre de vitamina A anterior, y se agitó con vórtex la mezcla durante 15 segundos. A esta mezcla, se le añadieron 1,5 |il de la disolución madre de ARNip anterior y se mezcló, luego se añadieron 17,5 |il de disolución acuosa de glucosa al 5% (OTSUKA GLUCOSE INJECTION 5%, Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) y se mezcló. Se dejó reposar a la sombra la disolución de complejo liposoma-péptido (o vitamina A)-ARNip (lipoplejo) así obtenida durante 15 min a temperatura ambiente. Además, se preparó una mezcla del péptido y ARNip sin LipoTrust™ SR como control.
Ejemplo 2: introducción del ARNip en una célula estrellada.
Dos días antes de la introducción del ARNip, se inocularon de manera uniforme células estrelladas hepáticas (HSC) preparadas a partir de un hígado de rata según el método de Schaefer et al. (Schaefer et al., Hepatology. Julio-agosto de 1987; 7(4):680-7) en una placa de 6 pocilios a una densidad de 0,2*105/poc¡llo y se cultivaron en un medio de Eagle modificado con Dulbecco (D-MEM, Sigma Aldrich, n.° de cat. D6546, a continuación en el presente documento denominado “medio de cultivo”) que contenía suero bovino fetal al 10% (Thermo HyClone, n.° de cat. SH30070.03), L-glutamina al 2% (Sigma Aldrich, n.° de cat. G7513) y penicilina-estreptomicina al 1% (Sigma Aldrich, n.° de cat. G1146).
Se retiró el medio de cultivo, se añadieron 900 |il de medio de cultivo recién preparado a cada pocilio, y luego se incubó esto durante al menos 30 minutos a 37°C. A 30 |il de cada disolución de lipoplejo obtenida en el ejemplo 1, se añadieron 100 |il de disolución de glucosa al 5% para hacer una disolución mixta de 130 |il, y se añadieron 100 |il de dicha mezcla al pocilio correspondiente. La concentración final del ARNip en este momento era de 11,5 |ig/ml. Después de incubar a 37°C, en el 5% de CO2 durante 30 minutos, se retiró el medio que comprende la disolución de lipoplejo y se sustituyó con el medio de cultivo, y esto se cultivó en condiciones normales durante 24-36 horas.
Se llevó a cabo la extracción de ARN total de cada muestra usando el kit RNeasy Mini (Qiagen). En primer lugar, se retiró el medio de cultivo, y se dispensaron en cada pocilio 350 |il/pocillo de cada uno de la disolución de RLT/2ME que se preparó antes mezclando disolución de RLT unido al kit RNeasy Mini con 2-mercaptoetanol al 1% (v/v) (2ME, Wako). Se homogeneizó el volumen total del lisado celular con QIAshredder (Qiagen), se centrifugó a 4°C y 12000 rpm durante 2 min, y luego se extrajo el ARN total según las instrucciones el fabricante. Se cuantificó el a Rn obtenido usando un dispositivo NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Scientific), y se sintetizó ADNc mediante RT-PCR. Se hicieron reaccionar 20 |il del volumen total/tubo de la disolución de reacción que consistía en 4 |il de la mezcla de transcriptasa inversa (Super Script VILO Master Mix, Invitrogen, 11755-250) y 16 |il del ARN total de cada muestra (que contenía 100-500 ng o más de ARN) a 25°C durante 5 min, a 42°C durante 60 min, luego a 85°C durante 5 min, respectivamente, y se almacenó posteriormente a 4°C.
Se analizó la supresión de la expresión de HSP47 mediante PCR cuantitativa. Como molde patrón, se usó la muestra de células no tratadas en series de dilución de 10 veces (la disolución madre, diluciones de 10 y 100 veces). A cada pocilio de MicroAmp (placa óptica de reacción de 96 pocilios, Applied Biosystems, n.° de cat. 4306737) se le añadió una premezcla de 48 |il que consistía en 22 |il de agua estéril, 25 |il de Power SYBR(R) Green (Applied Biosystems, n.° de cat. 4367669) y 1 l I de mezcla de cebadores. La mezcla de cebadores comprende 50 |iM de cada uno del conjunto de cebadores contra HSP47 o GAPDH, un gen de patrón interno, tal como se muestra a continuación:
HSP47 de rata:
5' TGACCTGCAGAAACATCTGG 3' (cebador directo, SEQ ID NO: 16)
5' AGGAAGATGAAGGGGTGGTC 3' (cebador inverso, SEQ ID NO: 17)
GAPDH (el patrón interno, común en humano/rata)
5' ACCATCTTCCAGGAGCGAGA 3' (cebador directo, SEQ ID NO: 18)
5' GCATGGACTGTGGTCATGAG 3' (cebador inverso, SEQ ID NO: 19)
Al pocilio correspondiente, se le añadieron 2 |il del ADNc del molde obtenido a partir de cada muestra para lograr un volumen total de 50 |il. Esto se ajustó en un dispositivo de PCR en tiempo real (7300 Real Time PCR System, Applied Biosystems) y se hizo reaccionar en las condiciones de la siguiente tabla.
Tabla 2
9 5 t : 1 O min 1 ciclo
Figure imgf000028_0001
Los resultados se muestran en las figuras 1 y 2. Los gráficos indican el nivel de expresión de HSP47 en relación con GAPDH en cada una de las condiciones, refiriéndose a las células no tratadas como 100. Un valor más pequeño indica una mayor supresión de la expresión de HSP47, concretamente una introducción eficaz de ARNip. El resultado mostrado en la figura 1 indica que había una supresión dependiente de la concentración de la expresión de HSP47 cuando se usaron el bucle 1 y el bucle 2 como moléculas de direccionamiento, y en particular que la tasa de supresión por el complejo que usa el bucle 1 como molécula de direccionamiento era comparable a la de la vitamina A. Además, los resultados mostrados en la figura 2 indican que la tasa de supresión por los complejos que usan como moléculas de direccionamiento las partes del bucle 1 que comprenden los péptidos en los que se han acortado los extremos N-y C-terminales del bucle 1 en 1 aminoácido cada uno (n.° 10 y n.os de 10-1 a 10-6 de péptidos) era comparable con las del bucle 1 y la vitamina A. La siguiente tabla contiene los valores numéricos de los resultados mostrados en la figura 2.
Tabla 3 *
Figure imgf000028_0002
* Se usó VA a la concentración final de 7,7 |iM y se usó cada péptido a la concentración final de 69,2 |iM.
Los resultados descritos anteriormente indican que el péptido que comprende la secuencia del resto de unión celular de RBP es útil como molécula de direccionamiento para administrar un fármaco, etc. de manera específica de células estrelladas.
Ejemplo 3: direccionamiento por un péptido mutante.
Para verificar que el direccionamiento a la célula estrellada por el bucle 1 de RBP es debido o bien a la composición de aminoácidos del péptido o la secuencia de aminoácidos del péptido, se llevó a cabo un experimento similar al ejemplo 2 usando células estrelladas hepáticas de rata y el bucle 1 de RBP y los péptidos mutantes mostrados en la siguiente tabla. Se preparó el lipoplejo que comprende cada péptido de una manera similar al ejemplo 1 usando disolución madre de péptidos 10 mM en DMSO, y se añadió a cada pocillo que contenía células estrelladas hepáticas de rata de manera que la concentración final del péptido era de 7,7 |iM y la del ARNip era de 11,5 |ig/ml.
Tabla 4
Figure imgf000029_0001
El péptido mutante 1 es un bucle 1 de RBP en el que se ha reemplaza la lisina en la posición 3 con un glutamato y el glutamato en la posición 6 con una lisina, respectivamente. El péptido mutante 2 es un bucle 1 de RBP en el que se ha reemplazado la lisina en la posición 3 con un ácido aspártico, y el ácido aspártico en la posición 4 con una lisina, respectivamente. El péptido mutante 3 es un bucle 1 de RBP en el que se ha reemplazado la lisina en la posición 3 con un ácido aspártico, y el ácido aspártico en la posición 12 con una lisina, respectivamente. Por tanto, estos péptidos mutantes son idénticos al bucle 1 de RBP en su composición de aminoácidos, pero son diferentes en sus secuencias de aminoácidos.
A partir del resultado mostrado en la figura 3, el grado de la supresión de la expresión del gen HSP47 era menor en cualquiera de los grupos que usan los péptidos mutantes 1, 2 y 3 como moléculas de direccionamiento en comparación con el grupo que usa el bucle 1 de RBP como molécula de direccionamiento, lo que sugiere que el factor importante para la supresión de la expresión génica es más bien la propia secuencia de aminoácidos del bucle 1 de RBP que su composición de aminoácidos.
Ejemplo 4: direccionamiento por miméticos peptídicos.
Para verificar si un mimético peptídico del resto de unión celular de RBP podría actuar como molécula de direccionamiento para la célula estrellada, se llevó a cabo un experimento similar al ejemplo 2 usando células estrelladas hepáticas de rata, y un péptido retroinverso del bucle 1 de RBP (RI:d-INDQLFLGEPDKKA-amida (un péptido que está constituido por D-aminoácidos que tienen una secuencia opuesta a SEQ ID NO: 3)) como mimético peptídico, y el bucle 1 de RBP (L1:SEQ ID NO: 3) como péptido de control. Se preparó el lipoplejo que comprende cada péptido de una manera similar al ejemplo 1 usando disolución madre de péptidos 30 mM en DMSO, y se añadió a los pocillos que comprendían células estrelladas hepáticas de rata de manera que la concentración final del péptido era de 23,1 |iM y la concentración final del ARNip era de 11,5 |ig/ml.
A partir del resultado mostrado en la figura 4, se entiende que tiene el péptido retroinverso tiene casi la misma capacidad de direccionamiento que el del bucle 1 de RBP. Debido a que el péptido retroinverso tiene una conformación espacial análoga (topología) de dichas cadenas como el péptido original, este resultado indica que un mimético peptídico que tiene una topología de cadenas laterales similar a la de un péptido que actúa como molécula de direccionamiento a una célula estrellada tal como los descritos en los ejemplos 1 a 3 también podría actuar como la molécula de direccionamiento a la célula estrellada.
Ejemplo 5: direccionamiento por un péptido reorganizado al azar.
Para confirmar que el direccionamiento por el bucle 1 de RBP a una célula estrellada no depende de la composición de aminoácidos del péptido sino de la secuencia de aminoácidos del péptido, se llevó a cabo un experimento similar al ejemplo 2 usando células estrelladas hepáticas de rata, y el bucle 1 de RBP (L1 : SEQ ID NO: 3) como péptido de prueba y un péptido reorganizado al azar que tenía la misma composición de aminoácidos que el péptido de prueba y una secuencia de aminoácidos diferente de esta (scr:AKFQKLEPGDDLNI, SEQ ID NO: 23). Se preparó el lipoplejo que comprende cada péptido de una manera similar al ejemplo 1 usando disolución madre de péptidos 10 mM en DMSO, y se añadió a los pocillos que comprendían células estrelladas de rata de manera que la concentración final del péptido era de 7,7 |iM y la concentración final del ARNip era de 11,5 |ig/ml. A partir de los resultados mostrados en la figura 5, la tasa de expresión del gen HSP47 se disminuyó significativamente en el grupo que usa el bucle 1 de RBP como molécula de direccionamiento, mientras que el resultado en el grupo que usa el péptido reorganizado al azar como molécula de direccionamiento era casi el mismo que el resultado en el grupo que no usa molécula de direccionamiento (VA(-)), lo que sugiere que el factor importante para el direccionamiento es más bien la propia secuencia de aminoácidos del bucle 1 de RBP que la composición de aminoácidos.
Ejemplo 6: direccionamiento a una célula cancerosa.
Para verificar si el péptido del resto de unión celular de RBP podría actuar como molécula de direccionamiento dirigida a una célula cancerosa, se llevó a cabo un experimento similar al ejemplo 2 usando células de la cepa de células de fibrosarcoma humanas HT-1080, y el bucle 1 de RBP como péptido de prueba (L1:SEQ ID NO: 3) y un péptido reorganizado al azar (scr:AKFQKLEPGDDLNI, SEQ ID NO: 23) como péptido de control negativo. Se preparó el

Claims (12)

  1. REIVINDICACIONES
    i . Molécula de direccionamiento que se dirige a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6, en la que la molécula de direccionamiento es un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la región de unión celular de RBP, y en la que la molécula de direccionamiento comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 3 y 6-13.
  2. 2. Agente de direccionamiento que comprende la molécula de direccionamiento según la reivindicación 1, para su uso en seleccionar como diana una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6 en un sujeto.
  3. 3. Portador de direccionamiento que comprende la molécula de direccionamiento según la reivindicación 1 y un portador, en el que el portador de direccionamiento es para su uso en la administración de una sustancia a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6 en un sujeto.
  4. 4. Complejo representado por una fórmula:
    X-Y-Z (1)
    en la que,
    X es un resto de direccionamiento que comprende la molécula de direccionamiento según la reivindicación 1,
    Y es un resto de unión, y
    Z es un resto funcional que comprende una sustancia seleccionada del grupo que consiste en un fármaco, un marcador y un portador, en la que opcionalmente el portador comprende además un fármaco y/o un marcador.
  5. 5. Composición que comprende un componente seleccionado del grupo que consiste en la molécula de direccionamiento según la reivindicación 1, el agente de direccionamiento según la reivindicación 2, el portador según la reivindicación 3 y el complejo según la reivindicación 4.
  6. 6. Composición según la reivindicación 5, en la que la composición comprende un fármaco que trata una enfermedad asociada con una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6, en la que la composición es para su uso en el tratamiento de la enfermedad en un sujeto, y en la que la enfermedad se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en fibrosis y enfermedades neoplásicas.
  7. 7. Composición según la reivindicación 5, en la que la composición comprende un fármaco que controla la actividad o proliferación de una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6, en la que la composición es para su uso en el control de la actividad o proliferación de dicha célula diana en un sujeto, y en la que la célula que expresa STRA6 se selecciona del grupo que consiste en células epiteliales del pigmento de la retina, células de Sertoli y astrocitos.
  8. 8. Composición según la reivindicación 5, en la que la composición es para su uso en la administración de una sustancia a una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6 en un sujeto.
  9. 9. Composición según la reivindicación 5, en la que la composición comprende un marcador, y en la que la composición es para su uso en el marcado, la detección o la obtención de imágenes de una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6 en un sujeto.
  10. 10. Composición según la reivindicación 5, en la que la composición comprende un marcador, y en la que la composición es para su uso en el examen, el diagnóstico o la monitorización de una enfermedad asociada con una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6 en un sujeto.
  11. 11. Método de marcado, detección u obtención de imágenes de una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6 o un tejido que comprende las mismas, en el que el método comprende una etapa de administrar una cantidad eficaz del complejo según la reivindicación 4 o la composición según la reivindicación 5 in vitro, en el que la composición comprende un marcador, y en el que la composición es adecuada para su uso en el marcado, la detección o la obtención de imágenes de una célula diana seleccionada del grupo que consiste en una célula estrellada y una célula que expresa STRA6 en un sujeto.
  12. 12. Portador de direccionamiento según la reivindicación 3, en el que el portador comprende un componente lipídico.
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