TWI684598B

TWI684598B - 標靶化分子及其用途

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Publication number: TWI684598B
Application number: TW104110954A
Authority: TW
Inventors: 味吞憲二郎; 高橋博一; 寺田繪里加; 新津洋司郎
Original assignee: 日商日東電工股份有限公司
Priority date: 2014-04-02
Filing date: 2015-04-02
Publication date: 2020-02-11
Also published as: TW201625666A; EP3127915A1; CN106164089A; EP3127915A4; WO2015152332A1; US20170022500A1; JP6602034B2; US9976142B2; EP3127915B1; CN106164089B; JP2015199726A; CA2944417A1; ES2821966T3

Abstract

本發明的問題是提供一種標靶化分子等，其將標靶細胞進行標靶化，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及視黃酸活化蛋白6(STRA6)表現細胞所組成之群組。

為了解決上述問題，本發明提供一種標靶化分子；含有該標靶化分子之標靶化劑、載體、複合體及醫藥組成物；處置、檢查、診斷或監控與前述細胞相關的疾病的方法；及，將前述細胞進行標記、檢測或造影的方法。該標靶化分子，選擇自由(1)包含視黃醇結合蛋白(RBP)的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽、(2)具有與(1)的胜肽同等的標靶化能力之該胜肽的變異體胜肽、及(3)具有與(1)或(2)的胜肽同等的標靶化能力之胜肽模擬物所組成之群組。

Description

標靶化分子及其用途

本發明是關於一種標靶化分子；含有該標靶化分子的標靶化劑、載體、複合體及醫藥組成物；處置、檢查、診斷或監控與前述細胞相關的疾病的方法；及，將前述細胞進行標記、檢測或造影的方法等；該標靶化分子，其將標靶細胞當作標靶，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。

人類雖然藉由化學療法克服了許多的疾病，但是習知的藉由低分子藥劑所實行的化學療法，由於對於成為治療標靶之細胞以外的細胞，藥劑亦會作用而產生副作用，對此感到煩惱。近年，為了克服這個弊病，正在發展將藥劑送達至期望的細胞之技術的開發。

將藥劑送達至期望的細胞的對策之1，可舉出利用對該細胞具特異性的標靶化分子。例如，類視色素(retinoid)或其衍生物，已知發揮出作為對星狀細胞、肺、骨髓、腎臟、腸管中的細胞外基質生產細胞、癌相關纖維母細胞、癌細胞，具特異性的標靶化分子的功能(專利文獻1~9、非專利文獻1)。然而，依然存在著對更進一步的標靶化分子的需求。

[先前技術文件] (專利文獻)

專利文獻1：WO 2006/068232

專利文獻2：WO 2008/120815

專利文獻3：WO 2009/036368

專利文獻4：WO 2009/116257

專利文獻5：WO 2010/014117

專利文獻6：WO 2010/026766

專利文獻7：WO 2010/029760

專利文獻8：WO 2011/158933

專利文獻9：WO 2013/073667

(非專利文獻)

非專利文獻1：Sato et al., Nat Biotechnol. 2008；26(4)：431-42

本發明之目的在於提供一種標靶化分子；含有該標靶化分子的標靶化劑、載體、複合體及組成物；處置與前述細胞相關的疾病的方法；及，將前述細胞進行標記的方法等；該標靶化分子，其將標靶細胞進行標靶化，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及視黃酸活化蛋白6(STRA6)表現細胞所組成之群組。

本發明人，為了解決上述問題而持續深入研究後，發現包含視黃醇結合蛋白(RBP)之細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽等，發揮出作為對星狀細胞等具特異性的標靶化分子的功能，而完成了本發明。

亦即，本發明是關於以下所述。

<1>一種標靶化分子，其將標靶細胞進行標靶化，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，其中，該標靶化分子，選擇自由(1)包含RBP的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽、(2)具有與(1)的胜肽同等的標靶化能力之該胜肽的變異體胜肽、及(3)具有與(1)或(2)的胜肽同等的標靶化能力之胜肽模擬物所組成之群組。

<2>如上述<1>所述之標靶化分子，其中，細胞結合區域為RBP的環(loop)1、環2、及環1和環2的功能性片段。

<3>如上述<1>或<2>所述之標靶化分子，其中，細胞結合區域包含選擇自序列編號3和4的胺基酸序列。

<4>如上述<1>~<3>中任一項所述之標靶化分子，其中，包含選擇自序列編號3、4、6~13的胺基酸序列。

<5>如上述<1>~<4>中任一項所述之標靶化分子，其中，胜肽模擬物是基於(1)或(2)的胜肽之逆向-反轉(retro-inverso)型胜肽。

<6>一種標靶化劑，其包含如上述<1>~<5>中任何一項所述之標靶化分子，用以將標靶細胞進行標靶化，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。

<7>一種載體，其將物質送達至已被如上述<1>~<5>中任一項所述之標靶化分子進行標靶化後的標靶細胞，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。

<8>一種複合體，其以式(1)表示：X-Y-Z (1)

式中，X是標靶化部分，其包含如上述<1>~<5>中任一項所述之標靶化分子；Y是結合部分； Z是包含物質之功能性部分，該物質選擇自由藥物、標記及載體所組成之群組。

<9>如上述<8>所述之複合體，其中，載體進一步包含藥物及/或標記。

<10>一種組成物，其包含下述成分，該成分選擇自由如上述<1>~<5>中任一項所述之標靶化分子、上述<6>所述之標靶化劑、上述<7>所述之載體及如上述<8>或是<9>所述之複合體所組成之群組。

<11>如上述<10>所述之組成物，其中，包含處置與標靶細胞相關的疾病的藥物，用以處置該疾病，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。

<12>如上述<11>所述之組成物，其中，疾病為選擇自由纖維化及腫瘤性疾病所組成之群組。

<13>如上述<10>所述之組成物，其中，包含控制標靶細胞的活性或增殖的藥物，用以控制前述標靶細胞的活性或增殖，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。

<14>如上述<10>所述之組成物，其用以將物質送達至標靶細胞，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。

<15>如上述<10>所述之組成物，其包含標記，用以將標靶細胞進行標記、檢測或造影，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。

<16>如上述<10>所述之組成物，其包含標記，用以檢查、診斷或監控與標靶細胞相關的疾病，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。

<17>一種方法，其處置與標靶細胞相關的疾病，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，其中，該方法包含下述步驟：將包含處置該疾病的藥物的有效劑量之如上述<8>或是<9>所述之複合體、或如上述<11>或是<12>所述之組成物，投予給將視為必要之對象。

<18>一種方法，其將標靶細胞或包含此之組織進行標記、檢測或造影，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，其中，該方法包含下述步驟：將包含標記的有效劑量之如上述<8>或是<9>所述之複合體、或如上述<15>所述之組成物，投予給將此視為必要之對象。

<19>一種方法，其檢查、診斷或監控與標靶細胞相關的疾病，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，其中，該方法包含下述步驟：將包含標記的有效劑量之如上述<8>或是<9>所述之複合體、或如上述<16>所述之組成物，投予給將此視為必要之對象。

根據本發明，可將加工性優異的胜肽作為標靶化分子來利用，且劑型設計(dosage form design)的自由度增加，可開發更多樣的標靶化製劑。又，根據本發明，由於可將各種藥物特異性地送達至纖維化或腫瘤等，治療困難之疾病的原因細胞，故能夠期待對於醫療及獸醫醫療會有很大的貢獻。

第1圖是將在大鼠肝星狀細胞(HSC)，使用了RBP的環1~3來作為標靶化分子時的siRNA之轉染效率，藉由siRNA的標靶基因亦即大鼠HSP47的抑制程度來表示的圖表。縱軸是將未處理細胞當作100來表示大鼠HSP47相對於內部標準之大鼠GAPDH的相對表現量。圖表中，其各自意指：「VL」是使用了視黃醇(retinol)來取代RBP的各種環之群組(亦即，VA/LipoTrust/siRNA)，「L」是使用了DMSO來取代RBP的各種環之群組(亦即，LipoTrust/siRNA)，「w/o LT」是不含LipoTrust^TM SR，而使用了siRNA與胜肽的混合物之群組，「NT」是未處理群組。

第2圖是將在大鼠肝星狀細胞(HSC)，使用了RBP的環1或其片段來作為標靶化分子時的siRNA之轉染效率，藉由siRNA的標靶基因亦即大鼠HSP47的抑制程度來表示的圖表。縱軸是將未處理細胞當作100來表示大鼠HSP47相對於內部標準之大鼠GAPDH的相對表現量。圖表中，其各自意指：「VA」是使用了視黃醇來取代各種胜肽之群組(亦即，VA/LipoTrust/siRNA)，「(-)VA」是使用了DMSO來取代各種胜肽之群組(亦即，LipoTrust/siRNA)，「siRNA+VA」是不含LipoTrust^TM SR，而使用了視黃醇與siRNA的混合物之群組，「NT」是未處理群組。

第3圖是將在大鼠肝星狀細胞(HSC)，使用了RBP的環1(L1)或其變異胜肽(E3K6、D3K4、D3K12)來作為標靶化分子時的siRNA之轉染效率，藉由siRNA的標靶基因亦即大鼠HSP47的抑制程度來表示的圖表。縱軸是將未處理細胞當作100來表示大鼠HSP47相對於內部標準之大鼠GAPDH的相對表現量。圖表中，其各自意指：「VA」是使用了視黃醇來取代各種胜肽之群組(亦即，VA/LipoTrust/siRNA)，「(-)VA」是使用了DMSO來取代各種胜肽之群組(亦即，LipoTrust/siRNA)，「NT」是未處理群組。

第4圖是將在大鼠肝星狀細胞(HSC)，使用了RBP的環1(L1)或其逆向-反轉型胜肽(retro-inverso；RI)來作為標靶化分子時的siRNA之轉染效率，藉由siRNA的標靶基因亦即大鼠HSP47的抑制程度來表示的圖表。縱軸是將未處理細胞當作100來表示大鼠HSP47相對於內部標準之大鼠GAPDH的相對表現量。圖表中，其各自意指：「VA」是使用了視黃醇來取代各種胜肽之群組(亦即，VA/LipoTrust/siRNA)，「(-)VA」是使用了DMSO來取代各種胜肽之群組(亦即，LipoTrust/siRNA)，「NT」是未處理群組。

第5圖是將在大鼠星狀細胞(HSC)，使用了RBP的環1(L1)或其亂序胜肽(scrambled peptide)來作為標靶化分子時的siRNA之轉染效率，藉由siRNA的標靶基因亦即大鼠HSP47的抑制程度來表示的圖表。縱軸是將未處理細胞當作100來表示大鼠HSP47相對於內部標準之大鼠GAPDH的相對表現量。圖表中，其各自意指：「scr」是使用了亂序胜肽之群組，「VA」是使用了視黃醇來取代各種胜肽之群組(亦即，VA/LipoTrust/siRNA)，「DMSO」是使用了DMSO來取代各種肽肽之群組(亦即，LipoTrust/siRNA)，「NT」是未處理群組。

第6圖是將在人類纖維肉瘤細胞株HT-1080，使用了RBP的環1(L1)來作為標靶化分子時的siRNA之轉染效率，藉由siRNA的標靶基因亦即人類HSP47的抑制程度來表示的圖表。縱軸是將未處理細胞當作100來表示人類HSP47相對於內部標準之人類GAPDH的相對表現量。圖表中，其各自意指：「scr」是使用了亂序胜肽之群組，「VA」是使用了視黃醇來取代各種胜肽之群組(亦即，VA/LipoTrust/siRNA)，「DMSO」是使用了DMSO來取代各種胜肽之群組(亦即，LipoTrust/siRNA)，「NT」是未處理群組，「1st」、「2nd」是相同內容實驗的第1次結果與第2次結果。

於本說明書中，只要是沒有另外定義，在本說明書所使用的全部技術用語及科學用語，其具有與發明所屬技術領域中具有通常知識者一般所理解的相同意義。在本說明書中參照的全部專利、申請案、已公開申請案及其他出版物(包含線上資訊)，藉由參照其全部內容而援用於本說明書。

本發明之一態樣為關於一種標靶化分子，其將標靶細胞當作標靶，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，其中，該標靶化分子，選擇自由(1)包含RBP的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽、(2)具有與(1)的胜肽同等的標靶化能力之該胜肽的變異體胜肽、及(3)具有與(1)或(2)的胜肽同等的標靶化能力之胜肽模擬物所組成之群組。

於本說明書中，「標靶化分子」意指具有標靶化能力之分子，其促進將已結合於該標靶化分子之物質送達至特定標靶。於本發明中，標靶是標靶細胞，其選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，本發明的標靶化分子，具有促進將已結合於此標靶化分子之物質送達至此等標靶細胞的能力，亦即，具有標靶化能力。在此所謂的「促進...送達」，意指與標靶化分子不存在的情況相比，將物質迅速且/或大量地送達至標靶細胞，且/或予以攝取，這是例如，將附加有標記或藥物之標靶化分子、或結合有包含標記或藥物之組成物而成的標靶化分子，添加至標靶細胞的培養物，藉由將特定時間後之標記的存在部位或藥物的效果，與添加了未結合標靶化分子的標記或藥物等的情況比較後，就能夠輕易地確認(例如，參照本說明書之例2~6)。於標靶化分子存在的情況之標靶細胞中的標記的量、或藥物的作用，與標靶化分子不存在的情況者相比下若有增加，則送達有受到促進。就增加的程度而言，並沒有受到限定，例如，可為5%以上、10%以上、15%以上、20%以上、25%以上、30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、100%以上、150%以上、200%以上、300%以上等。又，於標靶化分子存在的情況之標靶細胞中的標記的量、或藥物的作用，與標靶化分子不存在的情況相比下，較佳為伴隨著統計學上顯著性差異而增加。

於本說明書中，「星狀細胞」是指典型上具有維生素A(VA)貯藏能力的星狀之細胞。由於這個性質，「星狀細胞」也被稱為「維生素A貯藏細胞」。作為星狀細胞，雖然肝臟的肝星狀細胞(亦稱為伊東細胞)相當知名，但在肝臟以外，已知在胰臟或聲帶等也有同樣的細胞存在著(例如，參照Madro et al.,Med Sci Monit.2004 Jul；10(7)：RA166-70，Jaster,Mol Cancer.2004 Oct 06；3(1)：26，Fuja et al.,Cell Tissue Res.2005；322(3)：417-24等)，本發明中的星狀細胞包含了此等細胞。已知星狀細胞若因發炎等刺激而活性化，成為呈現如以α平滑肌肌動蛋白(αSMA)的表現為特徵之肌纖維母細胞的表現型，隨著增殖而大量產生為纖維化原因的膠原蛋白(例如，Fallowfield and Iredale,Expert Opin Ther Targets.2004 Oct；8(5)：423-35，上述Madro et al.,2004，上述Jaster,2004等)。本發明中的星狀細胞，包含了未活性化之靜止(quiescent)星狀細胞及活性化星狀細胞的雙方。

於本說明書，「肌纖維母細胞」，是指以αSMA的表現為特徵之纖維母細胞，出現於各種臟器。肌纖維母細胞，認為其是從存在於各種臟器或循環血液中的纖維母細胞等的間葉細胞所分化出來，參與著各種臟器纖維化或各種的臟器再生(例如，Selman et al.,Ann Intern Med.2001 Jan 16；134(2)：136-51等)。肌纖維母細胞，能夠藉由使用了可檢測的經標記之抗α-SMA抗體的免疫染色等來鑑定。

於本說明書，「癌相關纖維母細胞(CAF)」，意指存在於癌症病變的內部及/或周圍，α-SMA(平滑肌肌動蛋白)陽性的纖維母細胞(例如參照專利文獻2等)。CAF，認為其輔助了存在於其附近的癌細胞的增殖，參與著癌症的發展等。CAF，能夠藉由使用可檢測癌症組織、或從癌症組織分離之細胞的經標記之抗α-SMA抗體進行免疫染色等來鑑定。

CAF，對於大腸癌、肺癌、前列腺癌、乳癌、胃癌、膽管癌、基底細胞癌等各種的癌症，其存在已受到確認。

在本發明，某細胞是否為CAF是以後面的手法來判定。亦即，將存在於癌症病變的內部及/或周圍的細胞，以CAF之標誌(marker)也就是抗α-SMA之標記抗體，例如，FITC標記抗α-SMA抗體或Cy3標記抗α-SMA抗體進行免疫染色，檢測出α-SMA者判定為CAF。

本發明中的伴隨CAF之癌症雖然沒有特別限定，但例如可舉出腦腫瘤、頭頸部癌，乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、闌尾癌、大腸癌、直腸癌、肝癌、胰腺癌、膽囊癌、膽管癌、肛門癌、腎癌、輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、陰莖癌、睾丸癌、子宮癌、卵巢癌、外陰癌、陰道癌、皮膚癌等實體癌。又，CAF雖然在典型上是伴隨著癌者，但只要在具有同樣性質的範圍內，亦可為伴隨著癌以外的惡性實體腫瘤，例如，纖維肉瘤、惡性纖維性組織細胞瘤、脂肪肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、血管肉瘤、卡波西氏肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤等肉瘤者，此等亦包含在本發明之範圍內。

CAF，能存在於上述之癌症所存在的各種臟器，例如，腦、頭頸部、胸部、四肢、肺、心臟、胸腺、食道、胃、小腸(十二指腸、空腸、回腸)、大腸(結腸、盲腸、闌尾、直腸)、肝臟、胰臟、膽囊、肛門、腎、輸尿管、膀胱、前列腺、陰莖、睾丸、子宮、卵巢、陰門、陰道、皮膚、橫紋肌、平滑肌、滑膜、軟骨、骨骼、甲狀腺、腎上腺、腹膜、腸繫膜等。

於本說明書中「腫瘤」，包含良性腫瘤和惡性腫瘤(癌症)。於本發明，「癌症」包含了上皮性惡性腫瘤和非上皮性惡性腫瘤兩者，例如，未受到限定而含有纖維肉瘤、惡性纖維性組織細胞瘤、脂肪肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、血管肉瘤、卡波西氏肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤等之肉瘤；腦腫瘤、頭頸部癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、闌尾癌、大腸癌、直腸癌、肝癌、胰腺癌、膽囊癌、膽管癌、肛門癌、腎癌、輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、陰莖癌、睾丸癌、子宮癌、卵巢癌、陰門癌、陰道癌、皮膚癌等之癌瘤；還有白血病或惡性淋巴瘤等。

本發明中的腫瘤細胞，能存在於身體的任意部位，例如，腦、頭頸部、胸部、四肢、肺、心臟、胸腺、食道、胃、小腸(十二指腸、空腸、回腸)、大腸(結腸、盲腸、闌尾、直腸)、肝臟、胰臟、膽囊、肛門、腎、輸尿管、膀胱、前列腺、陰莖、睾丸、子宮、卵巢、陰門、陰道、皮膚、橫紋肌、平滑肌、滑膜、軟骨、骨骼、甲狀腺、腎上腺、腹膜、腸繫膜、骨髓、血液、血管系統、淋巴結等之淋巴系統、淋巴液等。

於本說明書，「STRA6表現細胞」意指將STRA6表現於細胞表面的細胞。STRA6(視黃酸活化蛋白6，stimulated by retinoic acid 6)為RBP(視黃醇結合蛋白，retinol binding protein)的高親和性受體，存在於細胞表面。因此，將包含RBP的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽作為基礎之本發明之標靶化分子，被認為具有對STRA6表現細胞的標靶化能力。STRA6，被認為具有將RBP所運輸的視黃醇攝取到細胞內的功能。STRA6，在癌細胞(例如，大腸癌細胞)、網膜色素上皮(RPE)細胞、塞特利細胞(Sertoli cell)、星狀細胞等其表現受到確認(Sun and Kawaguchi,Int Rev Cell Mol Biol.2011；288：1-41)。

由於STRA6的基因序列為習知(例如GenBank登錄編號AY359089、AY358748(人類)、NM_001029924(大鼠)、AF062476(小鼠)等)，抗體亦正在開發，故STRA6的表現，能夠藉由習知的核酸或者蛋白質檢測手法，例如，未限定地，利用了抗STRA6抗體的免疫沈降法、EIA(enzyme immunoassay)(例如，ELISA(emzyme-linked immunosorbent assay)等)、RIA(radio immuno assay)(例如，IRMA (immunoradiometric assay)、RAST(radioallergosorbent test)、RIST(radioimmunosorbent test)等)、西方點墨法、免疫組織化學法、免疫細胞化學法、流式細胞分析法、利用了對將STRA6進行編碼的核酸或是其獨特的片段或該核酸的轉錄產物(例如mRNA)或是剪接產物進行特異性雜交之核酸的各種雜交法、北方點墨法、南方點墨法、各種的PCR法等來檢測。STRA6的表現較佳是在蛋白質層次檢測，但也可以基因層次的檢測來代替。因此，本發明中的「STRA6表現細胞」，不僅是已知有STRA6表現的細胞，也包含以如上述之手法確認到STRA6之表現的任意細胞。

於一態樣中，標靶細胞是選自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞及腫瘤細胞所組成之群組。於特定的態樣中，標靶細胞是選自由星狀細胞、肌纖維母細胞及癌相關纖維母細胞所組成之群組。於進一步特定的態樣中，標靶細胞是選自由星狀細胞及肌纖維母細胞所組成之群組。

於本說明書，「RBP」是指存在於血中的細胞外蛋白質亦即血清RBP。RBP是在各種的動物物種中確認其存在的習知蛋白質，其核酸序列和胺基酸序列可從GenBank等資料庫取得。例如，人類RBP之核酸序列是各自以GenBank登錄編號NM_006744(序列編號1)，胺基酸序列是以GenBank登錄編號NP_006735(序列編號2)受到登錄。然而，在生物個體間，由於有可能發生無損於蛋白質的生理學功能之胺基酸序列或基因序列的變異，故本發明中的RBP或是RBP基因，並不限定於具有與公知序列相同的序列之核酸或蛋白質，可包含對於同序列具有1個或2個以上，在典型上1個或數個，例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個鹼基或是胺基酸不同的序列者。本發明中的RBP，亦可為任意動物物種者，較佳為脊椎動物，更佳為哺乳動物，特佳為人類的RBP。

於本說明書，「RBP的細胞結合區域」，意思是參與了對本發明中的標靶細胞之結合的RBP區域。

於一態樣中，RBP的細胞結合區域，是選自由環1~3及其功能性片段所組成之群組。環1~3，是突出於容納視黃醇之RBP的口袋開口部之周圍的環狀結構，例如在人類RBP中，各自以序列編號2的胺基酸序列的第46~59號、第75~89號及第107~121號的胺基酸構成。環1~3的功能性片段，是環1~3的片段之中，具有對標靶細胞的標靶化能力者，這是例如，就像本說明書的例2中記載的，製作出複數環1~3的不同片段，藉由調查此是否具有對標靶細胞的標靶化能力等而能夠發現。例如，本發明中的人類RBP的環1之功能性片段的特定態樣，是含有最小功能區域也就是序列編號6的胺基酸序列的片段。

較佳的態樣中，RBP的細胞結合區域，是選自由環(loop)1、環2及此等功能性片段所組成之群組。更佳的態樣中，RBP的細胞結合區域，是選自由環1及該功能性片段所組成之群組。特定的態樣中，環1和環2為人類RBP 者，例如，各自具有序列編號3和4的胺基酸序列。特定的態樣中，人類RBP的環1的功能性片段，是由選自序列編號6~13的胺基酸序列所組成。

本說明書中，「包含RBP的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽」(以下，有簡稱為「含有細胞結合區域之胜肽」的情況)，意思是包含上述的RBP的細胞結合區域的胺基酸序列，且，具有對標靶細胞的標靶化能力的任意胜肽。因此，前述胜肽不只是僅由RBP的細胞結合區域的胺基酸序列所組成者，也包含了含有在RBP的細胞結合區域的胺基酸序列的N端、C端或是該兩者追加之胺基酸序列者。追加的胺基酸序列，包含了不使該胜肽的標靶化能力喪失的任意者。追加的胺基酸序列是否使胜肽的標靶化能力喪失，能夠藉由含有追加的胺基酸序列與RBP的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽、僅由RBP的細胞結合區域的胺基酸序列所組成的胜肽、及不含RBP的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽的標靶化能力的實驗性比較，或是含有追加的胺基酸序列之胜肽的立體結構分析或立體結構預測等來評價。例如，含有追加的胺基酸序列與RBP的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽的送達能力(亦即，將結合於胜肽的物質送達至標靶細胞的能力)，較僅由RBP的細胞結合區域的胺基酸序列所組成的胜肽的送達能力要低，且與不含RBP的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽的送達能力同等或未達於此的情況，或者，從立體結構分析或立體結構預測，明顯是追加的胺基酸序列將RBP的細胞結合區域隱藏起來的情況，則能夠評價為追加的胺基酸序列使胜肽的標靶化能力喪失。

含有細胞結合區域之胜肽，在典型上，為10個胺基酸長以上，較佳為10~50個胺基酸長，更佳為10~30個胺基酸長，再更佳為10~20個胺基酸長，特別是10~14個胺基酸長。

含有細胞結合區域之胜肽，在不使該胜肽的標靶化能力喪失的範圍內亦可接受修飾。修飾是否使胜肽的標靶化能力喪失，能夠藉由未修飾之含有細胞結合區域之胜肽、經修飾之含有細胞結合區域之胜肽、及未修飾之非含有細胞結合區域之胜肽的標靶化能力的實驗性比較等來評價。例如，經修飾之含有細胞結合區域之胜肽的標靶化能力，較未修飾之含有細胞結合區域之胜肽要低，且與未修飾之非含有細胞結合區域之胜肽的標靶化能力同等或未達於此的情況，則能夠評價為其修飾使胜肽的標靶化能力喪失。修飾，亦可對胜肽的全部胺基酸進行，亦可對一部份的胺基酸進行。在修飾是對一部份的胺基酸進行的情況，其亦可對特定種類的胺基酸進行，亦可對特定位置的胺基酸進行。雖然並非意圖限定進行修飾之胺基酸的種類或位置，但對含有細胞結合區域之胜肽之最小功能區域以外的胺基酸的修飾，認為有高的可能性不會使該胜肽的標靶化能力喪失。作為對含有細胞結合區域之胜肽的修飾的非限定例，例如可舉出生物素化、肉豆蔻醯基化、辛醯基化、棕櫚醯基化、乙醯化、馬來醯亞胺化、甲基化、丙二醯基化、醯胺化、酯化、法尼基化、香葉基化、磷酸化、硫酸化、棕櫚油醯基化、PEG化、各種標記(例如，本說明書中記載者)的加成等。

於本說明書，「具有與包含RBP的細胞結合區域的胺基酸序列之胜肽同等的標靶化能力的該胜肽之變異體胜肽」(以下，有簡稱為「變異體胜肽」的情況)，是在含有細胞結合區域之胜肽，特別是該細胞結合區域上，具有1個或是2個以上(例如數個)的胺基酸的變異，包含具有與同胜肽同等或更勝於此的標靶化能力的任意胜肽。作為變異，例如，可舉出胺基酸的缺失、取代、加成，受到變異的胺基酸的個數，於變異在細胞結合區域的情況，例如，可在1~10個、1~9個、1~8個、1~7個、1~6個、1~5個、1~4個、1~3個、1~2個的範圍。更具體而言，細胞結合區域之受到變異的胺基酸的個數，例如，可在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個。受到變異的胺基酸的個數，於變異在含有細胞結合區域之胜肽的細胞結合區域以外之部分的情況，只要在該部分不喪失胜肽的標靶化能力的範圍內，關於細胞結合區域的變異亦可多於上述之個數。

胺基酸的取代，亦可為保存性取代。保存性取代，是該技術領域中周知的概念，意思是以實質上不變更胜肽功能的方式，將原本的胺基酸，取代為物理化學上特性類似的其他胺基酸。胺基酸的物理化學上的特性，由於是藉由其側鏈而被賦予特徵，故保存性取代的一例，是包含對具有與原本的胺基酸屬於同一群組之側鏈的胺基酸的取代。胺基酸，藉由側鏈的結構或性質，能夠分類成：具有鹼性側鏈之群組(離胺酸、精胺酸、組胺酸等)、具有酸性側鏈之群組(天門冬胺酸、麩胺酸等)、具有非電荷極性側鏈之群組(天門冬醯胺酸、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸等)、具有非極性側鏈之群組(甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸、半胱胺酸等)。因此，作為保存性取代，可舉出屬於上述之各群組之胺基酸彼此的取代。作為保存性取代的非限定例，例如，可舉出由離胺酸與精胺酸、絲胺酸與蘇胺酸、麩胺酸與天門冬胺酸、麩醯胺酸與天門冬醯胺酸、纈胺酸與白胺酸與異白胺酸所組成的各群組內之胺基酸彼此的取代。

變異體胜肽是否具有與含有細胞結合區域之胜肽同等或更勝於此的標靶化能力，例如，並沒有限定，將附加了標記或藥物的變異體胜肽或是含有細胞結合區域之胜肽，或者，將結合了含有標記或藥物之組成物的變異體胜肽或是含有細胞結合區域之胜肽添加至標靶細胞的培養物裡，於添加了變異體胜肽的標靶細胞中特定時間後之標記的存在部位或藥物的效果，能夠藉由與添加了含有細胞結合區域之胜肽的情況來比較而輕易地確認。添加了變異體胜肽時的標靶細胞中標記的量、或藥物的作用，只要與添加了含有細胞結合區域之胜肽者相比為相同程度、或有增加，則變異體胜肽成為具有與含有細胞結合區域之胜肽同等或更勝於此的標靶化能力。

於本說明書，「胜肽模擬物」，意指與指定的胜肽(特別是天然存在的α胜肽)具有同等的性質或功能的物質，特別是指可以模擬與指定的胜肽側鏈的拓樸結構(topology)同等的官能基之空間配置的物質。作為胜肽模擬物，並沒有限定，例如可舉出逆向-反轉型胜肽等。逆向-反轉型胜肽，是將具有與基準胜肽的胺基酸相反之對掌性(chirality)的胺基酸(例如，若基準胜肽的胺基酸是L型，則是D型的胺基酸)，以與基準胜肽的胺基酸序列相反的順序加以鍵結而成者，具有與基準胜肽相同的側鏈的拓樸結構。

本發明之標靶化分子，能夠藉由用以製造胜肽或胜肽模擬物的習知之任意方法，並沒有限定，例如固相合成法、液相合成法等之化學合成法、或基因工程學的合成法等來製造(例如，參照N.Leo Benoiton,Chemistry of Peptide Synthesis,CRC Press,2005等)。

本發明之其他態樣，是關於一種標靶化劑(或是標靶化組成物)，其包含本發明之標靶化分子，用以將標靶細胞進行標靶化，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。

於本說明書，「劑」和「組成物」意指可互換地使用之複數成分(例如，化合物)的混合物。「劑」和「組成物」，亦可為針對特定用途者，在該情況，亦可適當包含適合於該用途的成分。

本發明之標靶化劑，具有促進將已與此標靶化劑結合之物質送達至標靶細胞的能力(標靶化能力)。在此，標靶化能力，意指與針對本發明之標靶化分子所述之同樣的能力，亦即，意指與標靶化劑不存在時相比，將物質迅速且/或大量地送達至標靶細胞，且/或加以攝取的能力。

本發明之標靶化劑，除了本發明之標靶化分子以外，亦可包含對於送達至標靶細胞之物質(例如藥物、載體、標記等)的交互作用有益的成分，並沒有限定，例如亦可包含鏈接劑(linker)等。作為鏈接劑，只要是能將標靶化分子與送達物鍵結者則沒有特別限定，可以使用習知的任意者。作為本發明之標靶化劑所能包含的鏈接劑之例，例如，可舉出Glycine-Glycine-Glycine(三甘胺酸)等之胜肽鏈接劑、甘油、聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇-丙二醇共聚物、聚乙烯醇、單醣類、多醣類、聚酯、聚醚、聚乳酸等之生物分解性聚合物等的非胜肽鏈接劑等。

本發明之其他態樣，是關於一種載體，其將物質送達至已被本發明之標靶化分子進行標靶化後的標靶細胞，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組的標靶細胞。另外，在以下，有將已受到本發明之標靶化分子進行標靶化的載體稱為「標靶化載體」，將未受到本發明之標靶化分子進行標靶化的載體僅稱為「載體」來區別的情況。

於本說明書，「載體」意指一種物質，其易於將載持於此之1個或是2個以上的物質(例如藥物、標記等)，從身體的1部分往標靶細胞或是組織輸送、及/或往標靶細胞內或是組織內輸送。載體可由單一的化合物來構成，亦可由複數的同種或異種的化合物來構成。於較佳的態樣中，載體可藉由本發明之標靶化分子進行標靶化，可包含習知的任意者。作為此標靶化(亦即，主動標靶)可能的載體，並沒有限定，例如，可舉出聚合物載體等之具有直鏈狀或支鏈狀的線狀結構的載體、或是脂質體、樹枝狀聚合物(dendrimer)、奈米粒子、高分子微胞(polymeric micelle)等之具有粒子狀結構的載體(粒子狀載體)等(例如，Marcucci and Lefoulon,Drug Discov Today.2004 Mar 1；9(5)：219-28，Torchilin,Eur J Pharm Sci.2000 Oct；11 Suppl 2：S81-91等)。載體可為陽離子性，亦可為非陽離子性(例如陰離子性、中性)。於一態樣，載體為陽離子性。又，載體亦可為能與載持之物質形成lipoplex或polyplex者。Lipoplex為例如可在陽離子性脂質與具有陰性電荷的物質(例如，DNA等核酸)之間，而polyplex為例如可在多價陽離子與具有陰性電荷的物質之間各自形成。

本發明之載體，沒有受到限定，例如亦可將脂質、聚合物等作為構成成分。

作為脂質的非限定例，可舉出甘油磷脂質等之磷脂質；神經鞘磷脂等之神經鞘脂質；膽固醇等之固醇；大豆油、罌粟籽油等之植物油；礦物油；蛋黃卵磷脂等之卵磷脂類等。作為脂質的更具體之例，可舉出二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE)、二月桂醯基磷脂醯膽鹼(DLPC)、膽固醇等之固醇、氯化N-(α-三甲銨基乙醯基)-雙十二基-D-麩胺酸(TMAG)、N,N’,N’’,N’’’-四甲基-N,N’,N’’,N’’’-四軟脂基精胺(TMTPS)、2,3-二油醯氧基-N-〔2(精胺羧醯胺)乙基〕-N,N-二甲基-1-丙烷銨基三氟乙酸(DOSPA)、N-〔1-(2,3-二油醯氧基)丙基〕-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)、雙十八基二甲基氯化銨(DODAC)、溴化雙十二基銨(DDAB)、1,2-二油醯氧基-3-三甲基銨基丙烷(DOTAP)、3β-〔N-(N’,N’-二甲基胺乙烷)胺甲醯基〕膽固醇(DC-Chol)、溴化1,2-二肉豆蔻醯氧基丙基-3-二甲基羥乙基銨(DMRIE)、氯化O,O’-雙十四醯基-N-(α-三甲銨基乙醯基)二乙醇胺(DC-6-14)等。脂質可為陽離子性脂質，亦可為非陽離子性脂質，例如陰離子性脂質或中性脂質。於一態樣中，本發明之載體包含陽離子性脂質。陽離子性脂質，在將具有負電荷的核酸分子等導入至細胞內為特別有用。

作為脂質的其他非限定例，可舉出記載於WO 2012/170952之陽離子性脂質及PEG結合脂質(PEG-脂質)、記載於WO 2013/185116之可離子化脂質等。

前述陽離子性脂質是以式I表示之化合物：

式中，R₁及R₂是獨立選自由C₁₀~C₁₈烷基、C₁₂~C₁₈烯基、及油醯基所構成之群組；R₃及R₄是獨立選自由C₁~C₆烷基、及C₂~C₆烷醇所構成之群組；X是選自由-CH₂-、-S-、及-O-所構成之群組，或不存在；Y是選自-(CH₂)_n-、-S(CH₂)_n-、-O(CH₂)_n-、噻吩、-SO₂(CH₂)_n-、及酯；n=1~4；a=1~4；b=1~4；c=1~4；Z是相對離子。

作為前述陽離子性脂質的非限定例，例如可舉出以下者。

作為前述PEG-脂質的非限定例，例如可舉出1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-PEG(PEG-DMPE)、1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-PEG(PEG-DPPE)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-PEG(PEG-DSPE)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-PEG(PEG-DOPE)、PEG 神經醯胺等。PEG的分子量沒有特別限定，例如約550~約2000，更具體而言，可為約550、約750、約1000、約1250、約2000等。作為PEG的非限定例，例如可舉出PEG550、PEG750、PEG1000、PEG1250、PEG2000等。

前述可離子化脂質，是以式II表示之化合物或是其藥學上可容許的鹽：

式中，n及m獨立為1、2、3或4；R₁及R₂獨立為C₁₀~C₁₈烷基或C₁₂~C₁₈烯基；X是-CH₂-、S、O、N或不存在；L是C_1~4伸烷基、-S-C_1~4伸烷基、-O-C_1~4伸烷基、-O-C(O)-C_1~4伸烷基、-S(O)₂-C_1~4伸烷基、

或是

作為前述可離子化脂質的非限定例，例如可舉出以下者。

本發明之載體，亦可包含1種或2種以上的脂質。於一態樣中，本發明之載體包含陽離子性脂質與可離子化脂質。於特定的態樣中，本發明之載體包含陽離子性脂質、可離子化脂質及PEG-脂質。作為本發明之載體中包含之脂質的組合的非限定例，例如可舉出HEDC及S104之組合；HEDC、S104、DOPE、膽固醇及PEG-DMPE之組合；DODC、DOPE、膽固醇及PEG-脂質之組合；HEDODC、DOPE、膽固醇及PEG-脂質之組合；DC-6-14、DOPE及膽固醇之組合等。作為本發明之載體中包含之脂質的組合的特定之非限定例，例如可舉出HEDC：S104(1：1的莫耳比)、HEDC：S104：DOPE：膽固醇：PEG-DMPE(4：4：6：5：1的莫耳比)、DODC：DOPE：膽固醇：PEG-脂質(25：5：19：1的莫耳比)、HEDODC：DOPE：膽固醇：PEG-脂質(25：5：19：1的莫耳比)、DC-6-14：DOPE：膽固醇(4：3：3的莫耳比)等。

作為聚合物的非限定例，可舉出聚乙二醇(PEG)、聚乙烯亞胺(PEI)或聚離胺酸(例如，聚-L-離胺酸(PLL))等之陽離子性聚合物(多價陽離子)；聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)等之非陽離子性聚合物及/或以此等之衍生物為基礎者。

於本發明，所謂「以標靶化分子進行標靶化」，意指對於應誘導至標靶細胞之物質(例如載體、藥物、標記等的送達物)，標靶化分子以能夠發揮其標靶化能力的方式來進行交互作用(例如，進行鍵結)。作為標靶分子與應誘導至標靶細胞之物質的交互作用的非限定例，例如可舉出共價鍵、離子鍵、靜電鍵、疏水鍵、凡得瓦力、卵白素-生物素鍵結等習知的任意之化學鍵。標靶化分子，亦可如下述的樣式存在於應誘導至標靶細胞之物質的外部，例如以與標靶細胞之交互作用為可能的方式，至少參與了與標靶細胞之交互作用的部分(例如RPB之環1~3的功能性部分，特別是環2的功能性部分，其包含序列編號6之胺基酸序列)暴露出來的樣式。作為使標靶化分子的至少參與了與標靶細胞之交互作用的部分暴露於載體的外部的手法，例如可舉出將標靶化分子與應誘導至標靶之物質進行混合、或是使標靶化分子鍵結至應誘導至標靶之物質等。

本發明之標靶化載體，亦可利用1個或2個以上的標靶化分子進行標靶化。於一態樣中，本發明之標靶化載體，是利用對標靶細胞的標靶化之有效量的標靶化分子來進行標靶化。對本發明之標靶化載體的標靶化有效的標靶化分子的具體量(例如，相對於載體之構成成分的莫耳比等)，例如能夠藉由使用於例2記載之手法等，調查以不同量的標靶化分子進行標靶化之載體的標靶化能力等來決定。對本發明之標靶化載體的標靶化有效之標靶化分子的量，並沒有限定，例如相對於載體的構成成分(在包含複數的構成成分時，為主成分)，亦可為1000：1~1：1000、100：1~1：100、50：1~1：50、40：1~1：40、30：1~1：30、25：1~1：25、20：1~1：20、10：1~1：10、8：1~1：8、6：1~1：6、5：1~1：5、4：1~1：4、3：1~1：3或2：1~1：2之莫耳比。

載持於本發明之標靶化載體的送達物雖然沒有特別限制，但較佳為從投予部位到標靶細胞所存在的部位，在生物體內能夠物理性移動的大小。因此，本發明之標靶化載體，能夠運輸原子、化合物、蛋白質、核酸等分子就不用說，也能夠運輸載體、病毒粒子、細胞、以1個以上之要素構成的藥物釋放系統、微型機器等之物體。前述送達物，較佳為具有會對標靶細胞造成某些影響的性質，例如包含將標靶細胞進行標記者(例如標記)、或控制標靶細胞的活性或增殖(例如將此增強或抑制)者(例如藥物)。

本發明之標靶化載體中的標靶化分子所致的標靶化，能夠藉由將載體與標靶化分子以特定的比例混合、或在載體的構成成分上結合標靶化分子等來達成。對載體之標靶化分子的結合方法，已知有數種(例如，Torchilin,Nat Rev Drug Discov.2005 Feb；4(2)：145-60，Nobs et al.,J Pharm Sci.2004 Aug；93(8)：1980-92，上述Marcucci and Lefoulon,2004等)。對載體的構成成分之標靶化分子的結合，亦可在製備載體後進行，亦可在製備載體前對特定的構成成分進行，亦可在進行製備載體中進行。又，標靶化分子，亦可直接結合在載體的構成成分上，亦可透過鏈接劑來結合。

本發明之其他態樣，是關於一種複合體，其以式(1)表示：X-Y-Z (1)

式中，X是標靶化部分，其包含本發明之標靶化分子；Y是結合部分； Z是包含物質的功能性部分，該物質選擇自由藥物、標記及載體所組成之群組。

本發明之複合體中的標靶化部分，可由本發明之標靶化分子構成，亦可為在本發明之標靶化分子上，附著有適合與結合部分結合的連結基等。於標靶化部分包含的本發明之標靶化分子，為了適合與結合部分結合，亦可在不損及標靶化能力的程度下進行修飾。適合於與特定物質的化學鍵的連結基或修飾，在該技術領域中是廣為所知的(例如，上述Torchilin,2005、上述Nobs et al.,2004、上述Marcucci and Lefoulon,2004等)。又，標靶化部分，可含有單一的標靶化分子，亦可含有複數的標靶化分子。標靶化部分含有複數的標靶化分子時，標靶化分子亦可相同亦可不同。並且，標靶化部分，可藉由單一的結合部分與單一的功能性部分結合，但亦可藉由單一或複數的結合部分與複數的功能性部分結合。標靶化部分在與複數的結合部分及/或功能性部分結合的情況下，該結合部分及/或功能性部分亦可相同亦可不同。

本發明之複合體中的結合部分，可為化學鍵，亦可為鏈接劑。化學鍵，包含了共價鍵、離子鍵、靜電鍵、疏水鍵、凡得瓦力、卵白素-生物素鍵結等習知的任意之鍵結。鏈接劑，為透過本身而標靶化部分與功能性部分能夠藉由化學鍵來結合的化學性部分。一種鏈接劑，其適合於特定之不同的2個物質的化學鍵，在該技術領域中是廣為所知的。作為鏈接劑之非限定例，例如可舉出 Glycine-Glycine-Glycine(三甘胺酸)等之胜肽鏈接劑、甘油、聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇-丙二醇共聚物、聚乙烯醇、單醣類、多醣類、聚酯、聚醚、聚乳酸等之生物分解性聚合物等的非胜肽鏈接劑等。

結合部分，亦可與單一的標靶化部分結合，亦可與複數的標靶化部分結合。又，結合部分，亦可與單一的功能性部分結合，亦可與複數的功能性部分結合。結合部分與複數的標靶化部分及/或功能性部分結合時，該標靶化部分或功能性部分，亦可相同亦可不同。

本發明之複合體中的功能性部分所包含的藥物並沒有特別限定，包含與標靶細胞相關的任意者。該藥物，可為與標靶細胞本身進行交互作用者，亦可為與標靶細胞的周圍環境，例如與存在於標靶細胞周圍的非標靶細胞，或細胞間物質(例如，細胞外基質)進行交互作用者。於一態樣中，藥物為控制標靶細胞的活性或增殖(例如抑制、維持或促進)。於特定的態樣中，藥物為抑制標靶細胞的活性或增殖。作為該藥物的特定具體例，並沒有限定，可舉出TGFβ(Transforming growth factor-beta)阻礙物質、HGF(Hepatocyte growth factor)或其產生促進物質、PPARγ(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma)配位體、血管收縮素阻礙物質、PDGF(Platelet-derived growth factor)阻礙物質、鬆弛素或其產生促進物質、阻礙細胞外基質成分之產生及/或分泌的物質、細胞活性抑制物質、細胞增殖抑制物質、細胞凋亡誘導物質、膠原蛋白分解促進物質、膠原蛋白分解促進物質的阻礙物質、PAI-1(Plasminogen activator inhibitor-1)阻礙物質、α1抗胰蛋白酶阻礙物質、血管收縮素原阻礙物質等。

作為TGFβ阻礙物質，並沒有限定，例如可舉出截斷型TGFβII型受體(Qi et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.1999；96(5)：2345-9)、可溶性TGFβII型受體(George et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.1999；96(22)：12719-24)、抗TGFβ抗體等之TGFβ活性阻礙物質、或針對TGFβ之RNAi(RNA interference)分子、核糖脢、反義核酸等TGFβ產生阻礙物質、表現此等之載體等。於一態樣中，TGFβ阻礙物質阻礙了TGFβ1的活性及/或產生。

作為HGF或鬆弛素的產生促進物質，並沒有限定，例如可舉出將HGF或鬆弛素進行編碼的核酸、含有此之表現構築物、含有此等之表現載體等。

作為PPARγ配位體，並沒有限定，例如可舉出稱為15-去氧-Δ12,14-前列腺素J2、硝基亞麻油酸、氧化LDL(Low density lipoprotein)、長鏈脂肪酸、類二十碳酸的內因性配位體；或稱為曲格列酮、匹格列酮、羅格列酮、巴格列酮、利格列酮等之噻唑烷二酮系藥劑、非類固醇性消炎藥的外因性配位體等。

作為血管收縮素阻礙物質，並沒有限定，例如可舉出替米沙坦、洛沙坦、纈沙坦、坎地沙坦酯、奧美沙坦酯、厄貝沙坦等之血管收縮素受體拮抗物質等。血管收縮素中，包含了血管收縮素I、II、III及IV。又，作為血管收縮素受體，並沒有限定，例如可舉出血管收縮素1型受體(AT1)等。

作為PDGF阻礙物質，並沒有限定，例如可舉出抗PDGF抗體等之PDGF活性阻礙物質，或針對PDGF之RNAi分子、核糖脢、反義核酸等之PDGF產生阻礙物質、表現此等之載體等。

作為阻礙細胞外基質成分之產生及/或分泌的物質，並沒有限定，例如可舉出將膠原蛋白、蛋白多醣、生腱蛋白、纖連蛋白、凝血酶敏感蛋白、骨橋蛋白、骨連接蛋白、彈性蛋白等之細胞外基質成分的表現抑制的RNAi分子、核糖脢、反義核酸等之物質；或是顯性負變異體等之具有顯性負效應的物質；表現此等之載體等。作為阻礙膠原蛋白之產生、分泌的藥物，沒有受到限定，例如可舉出在各式各樣型式的膠原蛋白的合成過程所共通的細胞內輸送及分子成熟化中必須的膠原蛋白特異性分子伴護蛋白亦即HSP(Heat shock protein)47的阻礙物質，例如，針對HSP47之RNAi分子(例如於WO 2011/072082中記載的siRNA分子等)、核糖脢、反義核酸等HSP47表現阻礙物質；或是HSP47之顯性負變異體等具有顯性負效應的物質；表現此等之載體等。

作為細胞增殖抑制物質，並沒有限定，例如可舉出烷化劑(例如異環磷醯胺、尼莫司汀、環磷醯胺、達卡巴仁、美法侖、雷莫司汀等)；抗腫瘤抗生素(例如艾達黴素、泛艾黴素、道諾黴素、阿黴素、吡柔比星、博來黴素、派來黴素、雙羥蒽醌、絲裂黴素C等)；代謝拮抗劑(例如健擇、依諾他濱、阿糖胞苷、替加氟-尿嘧啶、替加氟-吉莫斯特-氧嗪酸鉀調配劑、去氧氟尿苷、羥基脲、氟尿嘧啶、胺基甲基葉酸、巰嘌呤等)；滅必治、愛萊諾迪肯、溫諾平、歐洲紫杉醇、太平洋紫杉醇、長春新鹼、長春地辛、長春花鹼等之生物鹼；及，卡鉑、順鉑、奈達鉑等之鉑錯合物；洛維汀、辛伐他汀(simvastatin)等之他汀等。

作為細胞活性抑制物質，並沒有限定，例如可舉出阿米洛利等之鈉通道阻礙物質等。

作為細胞凋亡誘導劑，並沒有限定，例如可舉出複方861、黴膠毒素、阿托伐他汀等。

作為膠原蛋白分解促進物質，並沒有限定，例如可舉出各種的膠原蛋白酶或其產生促進物質等。作為膠原蛋白酶之例，沒有受到限定，例如可舉出MMP(Matrix metalloproteinase)1、2、3、9、13、14等之MMP家族等。作為膠原蛋白酶的產生促進物質，並沒有限定，例如可舉出將膠原蛋白酶進行編碼的核酸、含有此之表現構築物、含有此等之表現載體等。

作為膠原蛋白分解促進物質的阻礙物質，並沒有限定，例如可舉出TIMP(Tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP1和TIMP2等)。因此，作為阻礙同物質的物質，並沒有限定，例如可舉出針對TIMP之抗體等之TIMP活性阻礙物質、針對TIMP之RNAi分子(例如於WO 2012/044620記載之siRNA分子等)、核糖脢、反義核酸等之TIMP產生阻礙物質、表現此等之載體等。

作為PAI-1阻礙物質，並沒有限定，例如可舉出針對PAI-1之抗體等PAI-1活性阻礙物質、針對PAI-1之RNAi分子、核糖脢、反義核酸等PAI-1產生阻礙物質、表現此等之載體等。

作為α1抗胰蛋白酶阻礙物質，並沒有限定，例如可舉出針對α1抗胰蛋白酶之抗體等PAI-1活性阻礙物質、針對α1抗胰蛋白酶之RNAi分子、核糖脢、反義核酸等α1抗胰蛋白酶產生阻礙物質、表現此等之載體等。

作為血管收縮素原阻礙物質，並沒有限定，例如可舉出針對血管收縮素原之抗體等血管收縮素原活性阻礙物質、針對血管收縮素原之RNAi分子、核糖脢、反義核酸等血管收縮素原產生阻礙物質、表現此等之載體等。

於本說明書，RNAi分子意指具有RNAi活性的任意分子，例如，沒有受到限定，包含了siRNA(small interfering RNA)、miRNA(micro RNA)、shRNA(short hairpin RNA)、ddRNA(DNA-directed RNA)、piRNA(Piwi-interacting RNA)、rasiRNA(repeat associated siRNA)等RNA及此等的改變體。又，本說明書中的核酸，是包含RNA、DNA、PNA、或此等的複合物。

於本說明書，標記是指能夠使其本身，或是附有該標記者直接或間接地檢測出來的任意物質。標記，能夠選自對於發明所屬技術領域中具有通常知識者為公知的任意者，例如氣體或是在生理條件下產生氣體之物質、任意的放射性同位素、磁性體、核磁共振之元素(例如氫、磷、鈉、氟等)、對核磁共振之元素的緩和時間造成影響之物質(例如金屬原子或是含此之化合物)、結合於標記化物質的物質(例如抗體)、螢光物質、螢光團、化學發光物質、酵素、生物素或該衍生物、卵白素或該衍生物等。

於本說明書，標記可為能夠檢測出者，在此之中，包含了能藉由既有的任意檢測手段來檢測出的任意標記。作為檢測手法，並沒有受到限定，例如可舉出藉由肉眼、光學檢查裝置(例如光學顯微鏡、螢光顯微鏡、位相差顯微鏡、活體(in vivo)影像裝置等)、X線裝置(例如單純X線裝置、CT(電腦斷層攝影)裝置等)、MRI(磁共振造影)裝置、核子醫學檢查裝置(閃爍造影裝置、PET(正子放射斷層攝影；positron emission tomography)裝置、SPECT(單光子放射電腦斷層攝影；single photon emission computed tomography)裝置等)、超音波檢查裝置及熱成像裝置等。適合於各檢測手法的標記為發明所屬技術領域中具有通常知識者所知，例如於Lecchi et al.,Q J Nucl Med Mol Imaging.2007；51(2)：111-26等所記載。

作為適合於用肉眼和光學檢查裝置來進行檢測的標記，例如可舉出各種的螢光標記和發光標記。

作為具體的螢光標記，並沒有受到限定，例如能夠使用Cy^TM系列(例如Cy^TM2、3、5、5.5、7等)、DyLight^TM系列(例如DyLight^TM 405、488、549、594、633、649、680、750、800等)、Alexa Fluor^(R)系列(例如Alexa Fluor^(R) 405、488、549、594、633、647、680、750等)、HiLyte Fluor^TM系列(例如HiLyte Fluor^TM 488、555、647、680、750等)、ATTO系列(例如ATTO488、550、633、647N、655、740等)、FAM、FITC、德克薩斯紅、GFP、RFP、Qdot等。作為適合於活體影像的螢光標記，例如，生體穿透性高，不易受到自家螢光影響的波長，例如可舉出發出近紅外波長之螢光者、或螢光強度高者。作為該螢光標記，並沒有限定，例如可舉出Cy^TM系列、DyLight^TM系列、Alexa Fluor^(R)系列、HiLyte Fluor^TM系列、ATTO系列、德克薩斯紅、GFP、RFP、Qdot及此等之衍生物等。

作為具體的發光標記，並沒有受到限定，例如能夠使用魯米諾、螢光素、亮光素、水母素等。

作為適合於用X線裝置進行檢測的標記，例如可舉出各種的顯影劑。作為具體的顯影劑，並沒有受到限定，例如能夠使用碘原子、碘離子、含碘化合物等。

作為適合於用MRI裝置進行檢測的標記，例如可舉出核磁共振之元素或對核磁共振之元素的緩和時間造成影響之物質等。核磁共振之元素中，包含了例如氫、磷、鈉、氟等。作為對核磁共振之元素的緩和時間造成影響之物質，沒有受到限定，各種金屬原子和含1種或2種以上之該金屬原子的化合物，例如可舉出1種或2種以上之該金屬原子的錯合物等。具體而言，並沒有受到限定，例如能夠使用釓(III)(Gd(III))、釔-88(⁸⁸Y)、銦-111(¹¹¹In)、及這些與二伸乙基三胺五乙酸(DTPA)、四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)、(1,2-乙烷二基二氮基)四乙酸(EDTA)、乙二胺、2,2’-聯吡啶(bipy)、1,10-啡啉(phen)、1,2-雙(二苯基膦基)乙烷(DPPE)、2,4-戊二酮(acac)、草酸鹽(ox)等配位子的錯合物、超順磁氧化鐵(SPIO)、一氧化錳(MnO)等。

作為適合於用核子醫學檢查裝置進行檢測的標記，例如各種放射性同位素和含1種或2種以上之該放射性同位素的化合物，例如可舉出1種或2種以上之該放射性同位素的錯合物等。作為放射性同位素，並沒有受到限定，例如能夠使用鎝-99m(^99mTc)、銦-111(¹¹¹In)、碘-123(¹²³I)、碘-124(¹²⁴I)、碘-125(¹²⁵I)、碘-131(¹³¹I)、鉈-201(²⁰¹Tl)、碳-11(¹¹C)、氮-13(¹³N)、氧-15(¹⁵O)、氟-18(¹⁸F)、銅-64(⁶⁴Cu)、鎵-67(⁶⁷Ga)、氪-81m(^81mKr)、氙-133(¹³³Xe)、鍶-89(⁸⁹Sr)、釔-90(⁹⁰Y)等。又，作為含放射性同位素的化合物，並沒有受到限定，例如可舉出¹²³I-IMP、^99mTc-HMPAO、^99mTc-ECD、^99mTc-MDP、^99mTc-替曲膦、^99mTc-MIBI、^99mTcO₄ ^-、^99mTc-MAA、^99mTc-MAG3、^99mTc-DTPA、^99mTc-DMSA、¹⁸F-FDG等。

作為適合於用超音波檢查裝置進行檢測的標記，並沒有受到限定，例如可舉出生體相容性的氣體或是在生理條件下產生氣體的物質、脂肪酸、或是含有這些物質的物質。作為氣體，沒有受到限定，例如空氣、稀有氣體、氮、N₂O、氧、二氧化碳、氫、惰性稀有氣體(例如氦、氬、氙或是氪)、氟化硫(例如六氟化硫、十氟化二硫、三氟甲基五氟化硫)、六氟化硒、鹵化矽烷(例如四甲基矽烷)、低分子烴(例如C_1~7烷(甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、戊烷等)、環烷(環丁烷、環戊烷等)、烯(乙烯、丙烯、丁烯等)等)、含氟氣體、氨等；作為在生理條件下產生氣體的物質，沒有受到限定，例如十二氟戊烷(DDFP)、在生理條件下氣化之全氟碳化物(特開2010-138137)等；作為含有上述物質的物質，可舉出含有上述物質的奈米粒子、脂質體等。作為含氟氣體，沒有受到限定，例如可舉出鹵化烴氣體(例如二氟一氯一溴甲烷、二氟一氯甲烷、二氟二氯甲烷、三氟一溴甲烷、三氟一氯甲烷、五氟一氯乙烷、四氟二氯乙烷、全氟碳化物)、氟化酮(例如全氟丙酮等)、氟化醚(例如全氟乙醚等)等。

作為全氟碳化物，沒有受到限定，例如可舉出全氟烷(例如全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟正丁烷、全氟戊烷、全氟己烷、全氟庚烷等)；全氟烯(例如全氟丙烯、全氟丁烯(例如，全氟丁-2-烯等)、全氟丁二烯等)；全氟炔(例如，全氟丁-2-炔等)；全氟環烷(例如全氟環丁烷、全氟甲基環丁烷、全氟二甲基環丁烷、全氟三甲基環丁烷、全氟環戊烷、全氟甲基環戊烷、全氟二甲基環戊烷、全氟環己烷、全氟甲基環己烷、全氟環庚烷等)等。

作為適合於用超音波檢查裝置進行檢測的標記，亦能夠利用已市售者。作為在市售中的超音波檢查用標記，沒有受到限定，例如可舉出第1世代的Albunex(Mallinckrodt)、Echovist(SHU 454，Schering)、Levovist(SHU 508，Schering)、Myomap(Quadrant)、Quantison(Quadrant)、Sonavist(Schering)、Sonazoid(GE Healthcare)等；第2世代的Definity/luminity(Bristol-Myers Squibb Medical Imaging)、Imagent-imavist(Alliance)、Optison(GE Healthcare)、biSphere/cardiosphere(POINT Biomedical)、SonoVue(BR1,Bracco)、AI700/imagify(Acusphere)等；第3世代的Echogen(Sonus Pharmaceuticals)等(Reddy et al.,World J Gastroenterol.2011 Jan 7；17(1)：42-8)。又，適合於用超音波檢查裝置進行檢測的標記，除了上述之外，於特開平5-194278、特開平8-310971、特開平8-151335、特開2002-308802、WO 2004/069284、WO 2005/120587等中亦有記載。

本發明之複合體的功能性部分所包含的標記並沒有特別限定，能夠選自上述之任意標記。又，本發明之複合體的功能性部分所包含的藥物，亦可藉由上述之任意標記進行標記。本發明之複合體的功能性部分所包含的載體亦沒有特別限定，能夠選自上述之任意載體。該載體，亦可載持上述1或2個以上的藥物及/或標記。

本發明之複合體的功能性部分所包含的藥物、標記及/或載體，為了適合於與結合部分的結合，在不損及其功能的程度內亦可加以修飾。適合於與特定物質的化學鍵的修飾，在該技術領域中相當廣為所知。作為該修飾的非限定例，例如可舉出用以形成雙硫鍵的修飾(例如硫醇化等)、用於點擊化學的修飾(例如疊氮化、炔化等)、用以形成卵白素-生物素鍵結的修飾(例如卵白素化、生物素化等)等。

功能性部分，亦可包含單一的標記、藥物或載體，亦可包含複數的標記、藥物或載體或是該等的組合。功能性部分包含了複數的標記、藥物或載體時，此等亦可相同亦可不同。又，於功能性部分中，亦可透過單一的結合部分，單一的標靶化部分進行結合，亦可透過單一的或複數的結合部分，複數的標靶化部分進行結合。功能性部分與複數的結合部分及/或標靶化部分結合時，該結合部分及/或標靶化部分亦可相同亦可不同。

於一態樣中，本發明之複合體具有化合物的形態。作為具有化合物的形態的本發明之複合體的非限定例，例如可舉出，標靶化分子透過鏈接劑(或是沒透過)，結合於標記化合物或治療化合物、或者是結合於標記化合物及/或治療化合物所結合的載體化合物(例如聚合物)者等。於其他態樣中，本發明之複合體具有組成物的形態。作為具有組成物的形態的本發明之複合體的非限定例，例如可舉出，標靶化分子透過鏈接劑(或是沒透過)，結合於標記化合物或治療化合物所結合的載體組成物(例如脂質體)者等。

本發明之另外一面，是關於一種組成物，其包含下述成分，該成分選擇自由本發明之標靶化分子、標靶化劑、標靶化載體及複合體所構成之群組。本發明之組成物，除了本發明之標靶化分子、標靶化劑、標靶化載體及/或複合體之外，可含有追加的成分，例如適合其用途的成分(例如藥物等活性成分，或標記、賦形劑等添加劑等)。本發明之組成物，亦可為用於疾病之處置的醫藥組成物。本發明之醫藥組成物，亦可含有1或2個以上的藥學上可容許的添加物(例如界面活性劑、載體、稀釋劑、賦形劑等)。藥學上可容許的添加物是在醫藥領域相當廣為所知，例如，記載於本說明書中援用其整體的Remington's Pharmaceutical Sciences,18th Ed.,Mack Publishing Co.,Easton,PA(1990)等。

本發明之複合體及組成物，由於能夠將藥物等特異性地送達至選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組的標靶細胞或是其周遭，故能夠使用在與該標靶細胞相關的疾病，例如，纖維或腫瘤性疾病的處置。使用在該用途時，本發明之複合體及組成物為處置該疾病的藥物，例如，包含抑制標靶細胞的活性或增殖的藥物。將使用在該用途的本發明之複合體及組成物，亦有稱為處置用化合物或是處置劑(或是處置用組成物)的情況。

於本說明書，「處置」是作為包含以疾病的治癒、暫時性緩解或預防等為目的之醫學上容許的全部種類的預防性及/或治療性介入者。例如，本說明書中的「處置」，包含各種目的之醫學上容許的介入，包括與標靶細胞相關之疾病發展的延遲或停止、病變的衰退或消失、該疾病發病的預防或復發的防止等。

因此，在本發明之處置用化合物或處置劑中，包含了用以治療與標靶細胞相關之疾病的治療用化合物或治療劑(或是治療用組成物)、及用以預防與標靶細胞相關之疾病的預防用化合物或預防劑(或是預防用組成物)。

作為與星狀細胞相關之疾病，沒有受到限定，例如可舉出肝纖維化、肝硬化、胰纖維化、聲帶瘢痕形成、聲帶黏膜纖維化症、喉頭的纖維化等纖維化症(參照專利文獻1)。

作為與肌纖維母細胞相關之疾病，沒有受到限定，例如可舉出肝纖維化、肝硬化、聲帶瘢痕形成、聲帶黏膜纖維化症、喉頭的纖維化、肺纖維化、胰纖維化、骨髓纖維化、心肌梗塞、心肌梗塞後的心肌的纖維化、心肌纖維化、心內膜心肌纖維化、脾纖維化、縱隔纖維化、舌黏膜下纖維化、腸管纖維化(例如，伴隨發炎性腸疾病者等)、腹膜後纖維化、子宮纖維化、硬皮症、乳腺纖維化等之各種臟器纖維化。

作為與癌相關纖維母細胞相關之疾病，沒有受到限定，例如可舉出腦腫瘤、頭頸部癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、闌尾癌、大腸癌、直腸癌、肝癌、胰腺癌、膽囊癌、膽管癌、肛門癌、腎癌、輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、陰莖癌、睾丸癌、子宮癌、卵巢癌、陰門癌、陰道癌、皮膚癌、纖維肉瘤、惡性纖維性組織細胞瘤、脂肪肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、血管肉瘤、卡波西氏肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤等之實體癌。

作為與腫瘤細胞相關之疾病，沒有受到限定，例如可舉出，於身體的任意部位，例如腦、頭頸部、胸部、四肢、肺、心臟、胸腺、食道、胃、小腸(十二指腸、空腸、回腸)、大腸(結腸、盲腸、闌尾、直腸)、肝臟、胰臟、膽囊、肛門、腎、輸尿管、膀胱、前列腺、陰莖、睾丸、子宮、卵巢、陰門、陰道、皮膚、橫紋肌、平滑肌、滑膜、軟骨、骨骼、甲狀腺、腎上腺、腹膜、腸繫膜、骨髓、血液、血管系統、淋巴結等之淋巴系統等中的任意良性腫瘤及惡性腫瘤等之腫瘤性疾病。作為惡性腫瘤的非限定例，可舉出纖維肉瘤、惡性纖維性組織細胞瘤、脂肪肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、血管肉瘤、卡波西氏肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤等之肉瘤；腦腫瘤、頭頸部癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、闌尾癌、大腸癌、直腸癌、肝癌、胰腺癌、膽囊癌、膽管癌、肛門癌、腎癌、輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、陰莖癌、睾丸癌、子宮癌、卵巢癌、陰門癌、陰道癌、皮膚癌等之癌瘤；還有白血病和惡性淋巴瘤等。

作為與STRA6表現細胞相關之疾病，除了上述的腫瘤細胞相關之疾病以外，還有選自由RPE細胞、塞特利細胞、星狀細胞所構成之群組的細胞相關之疾病，例如可舉出視網膜色素變性症、老年性黃斑部變性症、塞特利細胞瘤、星狀細胞瘤等。

本發明之複合體及組成物，可為用以控制標靶細胞的活性或增殖(例如抑制、維持或促進)者，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，在那種情況，包含了抑制標靶細胞的活性或增殖的藥物。

本發明之標靶化分子、標靶化劑、標靶化載體、複合體及組成物，可為用以將物質送達至標靶細胞者，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。被送達的物質沒有受到特別限定，例如，包含了上述的本發明之標靶化載體能載持的送達物、和本發明之複合體的功能性部分所包含的上述之藥物或記載於本說明書中的標記等。物質之送達，可在試管內(in vitro)或是活體內(in vivo)進行。

本發明之複合體及組成物，由於能夠將標記送達至標靶細胞，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞、及STRA6表現細胞所組成之群組，故能夠用在用以標記該標靶細胞或含此細胞之組織。亦有將用在該用途的本發明之複合體及組成物，稱為標記用化合物或標記劑(或是標記用組成物)的情況。本發明之標記用化合物或標記劑包含了標記。標記的非限定例，包含了在上述表示者。本發明之標記用化合物或標記劑，能夠用在上述標靶細胞或含此細胞之組織的檢測或造影。有將用於該用途的本發明之標記劑，特別稱為檢測用化合物或檢測劑(或是檢測用組成物)、或稱為造影用化合物或造影劑(或是造影用組成物)的情況。

細胞或是組織的標記、檢測或造影，可在試管內或活體內進行。又，細胞或是組織的檢測或造影，可以非破壊性地，較佳為非侵入性地進行。在此，所謂「非破壊性地」，意指不破壞成為檢測或造影的對象的組織，例如，只要成為對象的組織為肝臟，則包含進行剖腹露出肝臟、或藉由內視鏡得到肝臟表面的影像等，但不包含至將肝臟切開來探索其內部。又，所謂「非侵入性地」，意指非意圖性傷害生體，來檢測出檢測劑或造影劑所包含的標記，在典型上包含了從生體外的檢測，但也包含了從口腔、鼻腔、肛門、尿道、耳道、陰道等之天然的開口部將內視鏡或超音波探頭等檢測器插入來進行檢測。

本發明之標記用化合物或標記劑，能夠用在用以與標靶細胞相關之疾病的檢查或診斷。例如，星狀細胞或肌纖維母細胞，已知於纖維化的病灶進行增殖時，只要在某組織檢測出的標記量若多，則在該處星狀細胞或肌纖維母細胞會大量存在，成為該組織受到纖維化侵犯的指標(例如參照專利文獻7)。又，癌相關纖維母細胞或腫瘤細胞，由於位於癌症組織或腫瘤組織，只要在對象的身體的特定部位檢測出許多的標記，則成為在該部位癌症或腫瘤存在著的指標。也有將用於該用途的本發明之標記用化合物或標記劑，特別稱為檢查用化合物或檢查劑(或是檢查用組成物)、或稱為診斷用化合物或診斷劑(或是診斷用組成物)的情況。在此，疾病的檢查，例如包含將經測定之指標(例如來自標記劑的信號強度)與特定的基準(例如特定的截止值)做比較，提出基於此與疾病相關的檢查結果(例如陽性或陰性的檢查結果)等，但不包含查明疾病。因此，疾病的檢查，醫師的判斷為非必要。另一方面，疾病的診斷，則包含醫師根據各式各樣的資訊來查明疾病。

本發明之標記用化合物或標記劑，又能夠用在用以與標靶細胞相關之疾病的監控。有將用在該用途的本發明之標記用化合物或標記劑，特別稱為監控用化合物或監控劑(或是監控用組成物)的情況。在此，疾病的監控，是指將特定的對象中的疾病的演進，例如疾病的緩和、加重、持續等，歷時性地進行監控。

本發明之檢測用化合物、檢測劑、造影用化合物及造影劑，能夠使用在標靶細胞於特定的疾病中顯示特徵性舉動的情況，例如，沒有受到限定，如標靶細胞於特定的疾病中異常地進行增殖的情況，能夠使用在該疾病的檢查、診斷或監控。該特定的疾病，包含了與標靶細胞相關之疾病。因此，本發明之檢測用化合物、檢測劑、造影用化合物及造影劑，有成為本發明之檢查用化合物、檢查劑、診斷用化合物、診斷劑、監控用化合物或監控劑的一種態樣的情況。

本發明之標記用化合物或標記劑，又能夠用在用以評價對與標靶細胞相關之疾病的處置的效果。有將用在該用途的本發明之標記用化合物或標記劑，特別稱為評價用化合物或評價劑(或是評價用組成物)的情況。

本發明之複合體及組成物，可以包含經口和非經口之兩者的各種途徑來投予，例如，並沒有限定，以經口、靜脈內、肌肉內、皮下、局部、直腸、動脈內、門脈內、心室內、經黏膜、經皮、鼻內、腹腔內、肺內及子宮內等途徑來投予，亦可以適合於各投予途徑的劑形進行製劑。該劑形及製劑方法能夠適當採用任意的公知者(例如，參照標準藥劑學，渡邊喜照等編，南江堂，2003年，Remington's Pharmaceutical Sciences,18th Ed.,Mack Publishing Co.,Easton,PA(1990)等)。

例如，作為適合於經口投予的劑形，並沒有限定，可舉出散劑、顆粒劑、錠劑、膠囊、液劑、懸浮劑、乳劑、凝膠劑、糖漿劑等，又作為適合於非經口投予的劑形，可舉出溶液性注射劑、懸浮性注射劑、乳濁性注射劑、使用時製備型注射劑等注射劑。非經口投予用製劑，能夠為水性或非水性的等張性無菌溶液或懸浮液的形態。

本發明之複合體及組成物，可以任一種形態來供給，但從保存安定性的觀點而言，亦可以使用時可製備的形態，例如，在醫療現場或是在其附近，藉由醫師及/或藥劑師、護理師、或是其他的醫務輔助人員等製備而得的形態來提供。此時，本發明之複合體及組成物，是以1個或2個以上之容器來提供，該容器含有至少1種對該複合體及組成物而言必須之構成要素，使用之前，例如24小時前以內，較佳為3小時前以內，然後更佳為在使用的當前進行製備。在製備時，能夠於製備的場所中適當使用一般可到手的試劑、溶劑、調劑器具等。

本發明之更進一步的態樣，亦關於一種套件或組件，和以這樣的套件或組件的形態提供之本發明之標靶化載體、複合體或是組成物、或者其必要構成要素；其中，該套件或組件包含本發明之標靶化載體、複合體或是組成物、或者其構成要素，其用以製備本發明之標靶化載體、複合體及組成物；用以將物質送達至標靶細胞；用以控制標靶細胞的活性或增殖；用以處置、檢查、診斷或監控與標靶細胞相關之疾病；用以將標靶細胞或含該細胞之組織進行標記、檢測或造影；用以評價對於與標靶細胞相關之疾病的處置效果。

本發明之套件或組件中所包含的本發明之標靶化載體、複合體或是組成物的各構成要素，就如同上述針對本發明之標靶化載體、複合體或是組成物所言。本套件，除了上述之外，亦可進一步包含關於本發明之標靶化載體、複合體或是組成物的製備方法和使用方法(例如，投予方法等)等指示，例如，記錄有關於使用說明書和使用方法之資訊的媒體，例如軟性磁碟、CD、DVD、藍光光碟、記憶卡、USB記憶體等。又，本發明之套件或組件，雖然可包含用以完成本發明之標靶化載體、複合體或是組成物的所有構成要素，但也不一定要包含所有的構成要素。因此，本發明之套件或組件，亦可不含有在醫療現場、或實驗施設等一般可到手的試劑或溶劑，例如無菌水、或生理食鹽水、葡萄糖溶液等。

本發明之其他態樣，是關於一種方法，其用以控制標靶細胞的活性或增殖，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組的，該方法含有一步驟，是將包含控制前述標靶細胞的活性或增殖的藥物的有效劑量的本發明之複合體或是組成物，投予至將此視為必要之對象、或者細胞或組織。在此，標靶細胞的活性或增殖的控制，包含了該活性或增殖的抑制、維持或促進。因此，所謂上述方法中的有效劑量，例如是可抑制、維持或促進標靶細胞的活性或增殖的量。標靶細胞的活性或增殖的維持，包含了標靶細胞的活性或增殖於受到歷時性地抑制或促進的狀態下，將該活性或增殖維持在初期的狀態中。投予本發明之複合體或組成物的細胞或是組織，在典型上包含標靶細胞，亦可存在於生體內，亦可存在於生體外。因此，含有將本發明之複合體或是組成物投予至細胞或是組織的步驟的前述方法，包含了在試管內、活體外(ex vivo)或活體內進行。

本發明之其他態樣，是關於一種方法，其處置與標靶細胞相關的疾病，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，該方法含有一步驟，是將包含處置前述疾病的藥物的有效劑量的本發明之複合體或是組成物，投予給將此視為必要之對象。在此，所謂有效劑量，例如是預防該疾病的發病及復發，或治癒該疾病的量。與標靶細胞相關之疾病及處置此疾病的藥物，如同上述針對本發明之處置用化合物及處置劑所言。

本發明之其他態樣，是關於一種方法，其將標靶細胞或是含此細胞之組織進行標記、檢測或造影，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，該方法含有一步驟，是將包含標記的有效劑量的本發明之複合體或是組成物，投予至將此視為必要之對象、或者細胞或組織。在此，所謂有效劑量，例如是可將標靶細胞或是標靶組織檢測出來而能標記的量。又，作為於前述方法中的標記，例如能夠使用本說明書中記載者。投予本發明之複合體或是組成物的細胞或是組織，亦可包含標靶細胞，亦可存在於生體內，或存在於生體外。因此，前述方法，其包含將本發明之複合體或是組成物投予至細胞或是組織的步驟，包含了在試管內、活體外或活體內進行。

本發明之其他態樣，是關於一種方法，其檢查、診斷或監控與標靶細胞相關的疾病，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，該方法含有一步驟，是將包含標記的有效劑量的本發明之複合體或是組成物，投予給將此視為必要之對象。在此，所謂有效劑量，例如是可將標靶細胞或是標靶組織檢測出來而能標記的量。又，作為於前記方法中的標記，例如能夠使用本說明書中記載者；與標靶細胞相關之疾病，如同上述針對本發明之處置用化合物及處置劑所言。與標靶細胞相關之疾病的檢查、診斷或監控，亦能夠藉由在標靶細胞於該疾病中顯示出特徵性的行為的情況下，例如，沒有受到限定，標靶細胞於特定的疾病中似乎異常地增殖的情況下，以包含標記的有效劑量的本發明之複合體或是組成物將標靶細胞進行檢測或造影來實行。

本發明之其他態樣，是關於一種方法，其用以評價對與標靶細胞相關的疾病的處置之效果，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，該方法含有一步驟，是將包含標記的有效劑量的本發明之複合體或是組成物，投予給將此視為必要之對象。在此，所謂有效劑量，例如是可將標靶細胞或是標靶組織檢測出來而能標記的量。又，作為於前述方法中的標記，例如能夠使用本說明書中記載者；與標靶細胞相關之疾病，如同上述針對本發明之處置用化合物及處置劑所言。

本發明之其他態樣，是關於一種方法，其將物質送達至標靶細胞，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組，該方法含有兩步驟，一步驟為將前述物質以本發明之標靶化分子、標靶化劑或標靶化載體來進行標靶化；一步驟為將經標靶化的前述物質投予至對象、或是含有標靶細胞的媒體。送達的物質沒有特別限定，例如可舉出標記、藥物、亦可含有標記及/或藥物的載體等。本發明之送達方法，包含了在試管內、活體外或活體內進行。

本發明之各種方法中的本發明之複合體或是組成物的有效劑量，較佳為不會產生超出來自投予獲得之益處的不良影響。本發明之各種方法中的本發明之複合體或是組成物的有效劑量，能夠根據使用了培養細胞等的試管內試驗；和小鼠、大鼠、犬或豬等的實驗動物；和疾病模式動物中的試驗來適當決定，這樣的試驗法對於發明所屬技術領域中具有通常知識者是相當廣為所知的。

於本發明之方法中投予至對象的複合體或是組成物的具體的用量，可考慮到關於需要投予之對象的各種條件，例如標靶的種類、方法的目的、治療內容、疾病的種類、症狀的嚴重程度、對象的一般健康狀態、年齡、體重、對象的性別、飲食、投予的時期和頻率、正在併用的醫藥、對治療的反應性、及對於治療的順從性等來決定。本發明之複合體或是組成物的1日總投予量，沒有受到限定，例如亦可為約1μg/kg~約1000mg/體重kg、約10μg/kg~約100mg/體重kg、約100μg/kg~約10mg/體重kg。或者，投予量亦可基於患者的表面積來計算。

作為投予途徑，包含經口和非經口之兩者的各種途徑，例如包含經口、靜脈內、肌肉內、皮下、局部、直腸、動脈內、門脈內、心室內、經黏膜、經皮、鼻內、腹腔內、肺內及子宮內等途徑。

投予頻率，依照使用的製劑或組成物的性狀，和如上述的對象的條件而有不同，例如亦可為1日多次(亦即1日2、3、4次或5次以上)、1日1次、每數日(亦即每2、3、4、5、6、7日等)、1週內數次(例如，1週內2、3、4次等)、每1週內、每數週內(亦即每2、3、4週內等)。

本發明之標記、檢測、造影、檢查、診斷、監控及/或評價方法，亦可進一步包含檢測含標記的本發明之複合體或是組成物所含有的標記。標記，在檢測的時點亦可包含於複合體或是組成物中，亦可與該複合體或是組成物分離而存在。標記的檢測，能夠透過可檢測出標記的任意手法來進行，並沒有限定，例如藉由肉眼、光學檢查裝置(例如光學顯微鏡、螢光顯微鏡、位相差顯微鏡、活體影像裝置等)、X線裝置(例如單純X線裝置、CT(電腦斷層攝影)裝置等)、MRI(磁共振造影)裝置、核子醫學檢查裝置(閃爍造影裝置、PET裝置、SPECT裝置等)、超音波檢查裝置及熱成像裝置的手法等。適合於各檢測手法的標記是發明所屬技術領域中具有通常知識者所廣為所知(例如參照上述Lecchi et al.,2007等)，非限定性之例已如同上述所言。

於一態樣中，標靶細胞是在活體內受到檢測或造影。該檢測或造影中，並沒有限定，能夠使用適合於光學檢查裝置(例如活體影像裝置等)、X線裝置(例如單純X線裝置、CT(電腦斷層攝影)裝置等)、MRI(磁共振造影)裝置、核子醫學檢查裝置(閃爍造影裝置、PET裝置、SPECT裝置等)、超音波檢查裝置及熱成像裝置等之活體內檢測的任意裝置，適合於該檢測的標記亦是發明所屬技術領域中具有通常知識者所廣為所知(例如參照上述Lecchi et al.,2007等)。

藉由將標靶細胞在活體內進行檢測或造影，能夠決定標靶細胞的存在部位(例如臟器或器官)，或是與標靶細胞相關之疾病的病灶。因此，本發明亦關於一種方法，其決定標靶細胞的存在部位及/或與標靶細胞相關之疾病的病灶，包含將含標記的本發明之複合體或是組成物的有效劑量，投予給將此視為必要之對象。該方法，能有助於與標靶細胞相關之疾病的診斷。

又，藉由將標記在試管內或活體內進行檢測，能夠獲得標靶細胞的數量、分布等有助於與標靶細胞相關之疾病的診斷的資訊。因此，本發明亦關於一種方法，其輔助診斷與標靶細胞相關之疾病，包含將含標記的本發明之複合體或是組成物的有效劑量，投予給將此視為必要之對象。同方法，亦可進一步包含將有助於與標靶細胞相關之疾病的診斷的資訊提供給醫師。

本發明之與標靶細胞相關之疾病的檢查和診斷方法、及輔助診斷與標靶細胞相關之疾病的方法，亦可進一步包含一步驟，是將對象中的標記之檢測結果，與成為基準的標記之檢測結果進行比較。成為基準的標記之檢測結果，例如亦可為已知不具有與標靶細胞相關之疾病的對象(亦稱為「陰性對象」)中的標記之檢測結果(亦稱為「陰性基準」)，或者是，已知具有與標靶細胞相關之疾病的對象(亦稱為「陽性對象」)中的標記之檢測結果(亦稱為「陽性基準」)。成為基準的標記之檢測結果，亦可為複數的陰性對象或是陽性對象中的檢測結果之平均值或中央值。

因此，本發明之與標靶細胞相關之疾病的檢查方法，例如，能夠進一步包含對象中的標記之檢測結果是與陰性基準同等(例如，與其並無顯著不同)的情況下，提出陰性的檢查結果的步驟；及/或對象中的標記之檢測結果是顯著地高於陰性基準的情況下，提出陽性的檢查結果的步驟；及/或對象中的標記之檢測結果是與陽性基準同等(例如，與其並無顯著不同)的情況下，提出陽性的檢查結果的步驟等。

本發明之檢測、造影、檢查、診斷、監控及/或評價方法中的標記的檢測結果，亦可為經檢測之標記的信號強度及/或信號分布。

在此標記的信號強度，是指從標記所發出的各種信號，例如螢光信號、發光信號、磁性信號、放射性信號等之強度或是類似於此之測定值，在典型上是以適切的檢測手段來測定。檢測手段的具體例，已如同上述所言。信號強度，可為獲得自對象的整體者，亦可為獲得自對象的特定部位或區域者。又，信號強度，亦可為相對於測定之部位的面積或體積的平均值，亦可為積算值。信號強度在歷時性變化時，本方法中的信號強度，亦可為某特定時點者，亦可為針對某期間而積算者。依據疾病的發展標靶細胞的數量、活性等增大時，信號強度的增強可為疾病的存在或是發展的指標，相反地信號強度的減弱，可為疾病改善的指標。

標記的信號分布，是指關於從標記發出信號的對象的位置資訊，此可為2次元亦可為3次元。藉由將信號分布與解剖學上的臟器的位置關係、或是CT影像、MRI影像、超音波影像等之組織的結構性資訊做對照，能夠查出信號是從哪個組織所發出。信號分布在歷時性變化時，本方法中的信號分布，亦可為某特定時點者，亦可為針對某期間而積算者。依據疾病的發展標靶細胞的存在區域擴大時，信號分布的擴大可為疾病的存在或是發展的指標，相反地信號分布的縮小，可為疾病改善的指標。

在本發明之方法中，亦能組合信號強度與信號分布來評價。藉由評價在哪個位置上怎樣程度的強度的信號被檢測出來，能夠進行提供更精確的判定和更正確的資訊。

本發明之監控方法，亦可進一步包含將第1時點的標記的檢測結果，與較第1時點之後的第2時點的標記的檢測結果做比較。例如，檢測結果為關於標靶細胞之數量的指標(例如，來自吞噬至標靶細胞的標記的信號強度、信號分布等)時，在第2時點的指標比在第1時點的指標要小，是表示標靶細胞的數量減少，若與標靶細胞相關之疾病，是因標靶細胞的增殖而惡化者，則是指該與標靶細胞相關之疾病已改善。例如，在此，若第2時點中的信號強度比第1時點中的信號強度要低，則可提出疾病正在改善的結果，又相反地若第2時點中的信號強度比第1時點中的信號強度要強，則可提出疾病正在惡化的結果。再者，例如，若第2時點中的信號分布比第1時點中的信號分布要縮小，則可提出疾病正在改善的結果，又相反地若第2時點中的信號分布比第1時點中的信號分布要擴大，則可提出疾病正在惡化的結果。

本發明之評價方法，亦可進一步包含將處置前的第1時點之標記的檢測結果，與較第1時點之後的處置後的第2時點之標記的檢測結果，或者，將第1處置之後的第1時點之標記的檢測結果，與在第1處置之後進行的第2處置之後的第2時點之標記的檢測結果做比較。例如，檢測結果為關於標靶細胞之數量的指標(例如，來自吞噬至標靶細胞的標記的信號強度、信號分布等)時，在第2時點的指標比在第1時點的指標要小，是表示標靶細胞的數量減少，若與標靶細胞相關之疾病，是因為標靶細胞的增殖而惡化者，則是指該與標靶細胞相關之疾病已改善，亦即，是指處置的效果為正面。例如，在此，若第2時點中的信號強度比第1時點中的信號強度要低，則疾病因處置而在改善，因此，可提出處置正邁向成功的結果，又相反地若第2時點中的信號強度比第1時點中的信號強度要強，則疾病因處置而在惡化，可提出處置並不太成功或不成功的結果。再者，例如，若第2時點中的信號分布比第1時點中的信號分布要縮小，則疾病因處置而在改善，因此，則可提出處置正邁向成功的結果，又相反地若第2時點中的信號分布比第1時點中的信號分布要擴大，則疾病因處置而在惡化，可提出處置並不太成功或不成功的結果。

於本說明書，用語「對象」，是指任意的生物個體，較佳為動物，更佳為哺乳動物，再更佳為人類的個體。於本發明，對象可作為健全(例如沒有特定或任意的疾病)，亦可作為罹患某些疾病者，但各自在策劃與標靶細胞相關之疾病的處置、檢查、診斷、監控等的情況下，典型上是指罹患該疾病，或有罹患風險的對象；在策劃對與標靶細胞相關之疾病的處置之效果的評價的情況下，典型上是指正在接受對該疾病的治療，或正要接受的對象。

[實施例]

用以下的例來更詳細地說明本發明，但此等之例的目的在舉例證明，並非限制本發明之範圍者。

<例1>標靶化分子-載體複合體的製作

作為標靶化分子，準備了以下之胜肽：

上述胜肽，全都是得自於Sigma-Genosys。作為陽性對照，準備了維生素A(全反式視黃醇，Sigma Aldrich)。維生素A是以10mM的濃度溶解在DMSO中來製備原液，冷凍保存到使用時。作為結合有標靶化分子的載體，分別準備了含有脂質體形成性陽離子性脂質DC-6-14的LipoTrust^TM SR(Hokkaido System Science)，作為載持於載體的藥物，分別準備了對HSP47之siRNA(HSP47C，Hokkaido System Science)。siRNA的序列顯示如下(序列中，小文字分別表示RNA，大文字分別表示DNA)。

義股：5’ ggacaggccucuacaacuaTT 3’(序列編號14)

反義股：5’ uaguuguagaggccuguccTT 3’(序列編號15)

siRNA是以10mg/ml的濃度溶解在無核酸酶水(Ambion,Cat.No.AM9937)中來製備原液，冷凍保存到使用時。

將脂質體溶液10μl放入微量離心管裡，該脂質體溶液是將LipoTrust^TM SR以陽離子性脂質為平均1mM的濃度溶解在無核酸酶水(Ambion,Cat.No.AM9937)中而得，對此添加1μl的以特定之濃度溶解在DMSO中的上述各胜肽的原液(針對在第1圖顯示結果的實驗，是1.1mM、1.25mM、2.5mM、3.4mM、5mM或10mM；針對在第2圖顯示結果的實驗，是90mM)或是上述維生素A原液，用漩渦攪拌器攪拌15秒。在此混合液中，添加上述siRNA原液1.5μl並混合後，添加5%葡萄糖水溶液(大塚糖液5%，大塚製藥)17.5μl並混合。如此而獲得之脂質體-胜肽(或維生素A)-siRNA複合體(lipoplex)溶液，在室溫遮光靜置15分鐘。又，作為對照，也準備了不含LipoTrust^TM SR之胜肽與siRNA的混合物。

<例2>siRNA對星狀細胞的導入

在siRNA導入的2天前，依據Schaefer等人(Schaefer et al.,Hepatology.1987 Jul-Aug；7(4)：680-7)的方法，將自大鼠肝臟製備之肝星狀細胞(HSC)，以0.2×10⁵個/孔的密度均勻地播種在6孔盤上，並培養在含有10%胎牛血清(Thermo HyClone,Cat.No.SH30070.03)、2%L-麩醯胺酸(Sigma Aldrich,Cat.No.G7513)及1%青黴素-鏈黴素(Sigma Aldrich,Cat.No.G1146)的Dulbecco改進的Eagle培養基(D-MEM,Sigma Aldrich,Cat.No.D6546，以下稱為「培養基」)中。

除去培養基，在各孔重新添加培養基900μl，於37℃培養30分鐘以上。在例1所得到的各種lipoplex溶液30μl中添加5%葡萄糖水溶液100μl而成為130μl混合溶液，將此之中的100μl添加到對應的孔中。此時的 siRNA的最終濃度為11.5μg/ml。於37℃、5%CO₂培養30分鐘後，除去含有lipoplex溶液的培養基，置換為培養基進行普通培養24~36小時。

各樣品的全RNA之萃取，是使用了RNeasy Mini kit(Qiagen)來進行。首先除去培養基，於事前在RNeasy Mini kit附屬的RLT溶液中混合2-巰基乙醇(2ME，Wako)1%(v/v)而製備成RLT/2ME溶液，將此溶液在每1孔注入350μl。將細胞溶解物的總量以QIAshredder(Qiagen)進行勻化，於4℃以12000rpm離心2分鐘後，依據製造者的指示萃取出全RNA。獲得之RNA，以NanoDrop 2000(Thermo Fisher Scientific)進行定量，以RT-PCR合成出cDNA。反應液，其每1管是由反轉錄酶混合物(Super Script VILO Master Mix,Invitrogen,11755-250)4μl、各樣品的全RNA 16μl(含100~500ng以上的RNA)之合計20μl所構成，分別在25℃反應5分鐘，在42℃反應60分鐘，然後在85℃反應5分鐘後，以4℃保存。

HSP47的表現抑制，是以定量PCR來解析。作為標準模板，是使用了未處理細胞樣品的10倍稀釋系列(原液、10倍稀釋溶液及100倍稀釋溶液)。在MicroAmp(Optical 96-well Reaction Plate,Applied Biosystems,Cat.No.4306737)的各孔中，添加了由無菌水22μl、Power SYBR^(R) Green(Applied Biosystems,Cat.No.4367669)25μl及引子混合物1μl所構成的48μl預混物。引子混合物各自包含了50μM的於以下所示之對HSP47或是對身為內部標準基因的GAPDH的引子組。

大鼠HSP47：5’ TGACCTGCAGAAACATCTGG 3’(順向引子，序列編號16)

5’ AGGAAGATGAAGGGGTGGTC 3’(反向引子，序列編號17)

GAPDH(內部標準，人類、大鼠共通)

5’ ACCATCTTCCAGGAGCGAGA 3’(順向引子，序列編號18)

5’ GCATGGACTGTGGTCATGAG 3’(反向引子，序列編號19)

在對應的孔中，添加由各樣品獲得之模板cDNA 2μl，合計為50μl。將盤以薄膜密封，設置於即時定量PCR裝置(7300 Real Time PCR System,Applied Biosystems)中，以下表的條件進行反應。

[表2]

結果顯示於第1~2圖。圖表是將未處理細胞當作100，來表示於各條件中HSP47相對於GAPDH的相對表現量，值越小HSP47的表現越受到抑制，亦即，表示siRNA已有效率地導入了。第1圖中顯示的結果，在將環1和環2作為標靶化分子而使用的情況中，可見到濃度依存性的HSP47的表現抑制，特別是將環1作為標靶化分子來使用的複合體所引起的抑制率，顯示出能與維生素A的該樣品匹敵。又，第2圖中顯示的結果，將含有從環1的N末端和C末端起漸漸縮短1個胺基酸而成之胜肽(胜肽No.10及No.10-1~10-6)的部分作為標靶化分子來使用的複合體所引起的抑制率，顯示出能與環1及維生素A的該樣品匹敵。下表是將第2圖中顯示的結果進行數值化者。

[表3]

*VA是以最終濃度為7.7μM，各胜肽是以最終濃度為69.2μM來使用。

以上的結果，顯示出包含RBP的細胞結合部分之序列之胜肽，作為將藥物等特異性送達至星狀細胞的標靶化分子為有用。

<例3>藉由變異胜肽所實行的標靶化

為了驗證藉由RBP環1所實施的對星狀細胞的標靶化，是否為藉由胜肽的胺基酸組成所導致、還是藉由胺基酸序列所導致，而分別使用大鼠肝星狀細胞作為細胞，使用RBP環1和於下表表示之變異胜肽作為胜肽，進行與例2相同的實驗。含有各胜肽的lipoplex，是使用DMSO中的10mM之胜肽原液並與例1同樣地進行製備，以胜肽的最終濃度成為7.7μM，siRNA的最終濃度成為11.5μg/ml的方式，添加至含有大鼠肝星狀細胞的孔中。

[表4]

另外，變異胜肽1是分別把RBP環1之第3的離胺酸取代為麩胺酸，第6的麩胺酸取代為離胺酸；變異胜肽2是分別把第3的離胺酸取代為天門冬胺酸，第4的天門冬胺酸取代為離胺酸；變異胜肽3是分別把第3的離胺酸取代為天門冬胺酸，第12的天門冬胺酸取代為離胺酸。因此，此等之變異胜肽是與RBP環1在胺基酸組成相同，但在胺基酸序列不同。

從第3圖中顯示的結果來看，由於不管是在將變異胜肽1、2及3作為標靶化分子使用之群組中的哪一個，與將RBP環1作為標靶化分子使用之群組相比之下，HSP47基因表現的抑制程度較低，故教示了在基因表現抑制上，並非RBP環1的胺基酸組成，而是胺基酸序列本身較為重要。

<例4>藉由胜肽所實行的模擬物的標靶化

為了驗證RBP的細胞結合部分的胜肽模擬物，是否有作為對星狀細胞的標靶化分子而產生作用，而分別使用大鼠肝星狀細胞作為細胞，使用RBP環1的逆向-反轉型胜肽(RI：d-INDQLFLGEPDKKA-醯胺(以具有與序列編號3相反之序列的D-胺基酸所構成的胜肽))作為胜肽模擬物，使用RBP環1(L1：序列編號3)作為對照胜肽，進行與例2相同的實驗。另外，含有各胜肽的lipoplex，是使用DMSO中的30mM之胜肽原液並與例1同樣地進行製備，以胜肽的最終濃度成為23.1μM，siRNA的最終濃度成為11.5μg/ml的方式，添加至含有大鼠肝星狀細胞的孔中。

從第4圖中顯示的結果來看，可知逆向-反轉型胜肽具有與RBP環1幾乎相同的標靶化能力。逆向-反轉型胜肽，因為具有與母胜肽類似的側鏈之空間立體結構(拓樸結構)，故此結果顯示出，具有與如在例1~3記載之作為對星狀細胞的標靶化分子而產生作用的胜肽同樣的側鏈拓樸結構的胜肽模擬物，亦作為對星狀細胞的標靶化分子而產生作用。

<例5>藉由亂序胜肽所實行的標靶化

為了確認藉由RBP環1所實行的對星狀細胞的標靶化，並非依存於胜肽的胺基酸組成，而是依存於胺基酸序列，而分別使用大鼠肝星狀細胞作為細胞，使用RBP環1(L1：序列編號3)作為試驗胜肽，使用與試驗胜肽的胺基酸組成相同但胺基酸序列不同的亂序胜肽(scr：AKFQKLEPGDDLNI，序列編號23)作為比較胜肽，進行與例2相同的實驗。另外，含有各胜肽的lipoplex，是使用DMSO中的10mM之胜肽原液並與例1同樣地進行製備，以胜肽的最終濃度成為7.7μM，siRNA的最終濃度成為11.5μg/ml的方式，添加至含有大鼠星狀細胞的孔中。

從第5圖中顯示的結果來看，由於相對於在將RBP環1作為標靶化分子使用之群組中HSP47基因表現率顯著地降低，在將亂序胜肽作為標靶化分子使用之群組中，與在未使用標靶化分子之群組(VA(-))的結果幾乎相同，故教示了在標靶化上，並非RBP環1的胺基酸組成，而是胺基酸序列本身較為重要。

<例6>對癌細胞的標靶化

為了驗證RBP的細胞結合部分的胜肽，是否有作為對癌細胞的標靶化分子而產生作用，而分別使用人類纖維肉瘤細胞株之HT-1080細胞作為細胞，使用RBP環1(L1：序列編號3)作為試驗胜肽，使用亂序胜肽(scr：AKFQKLEPGDDLNI，序列編號23)作為陰性對照胜肽，進行與例2相同的實驗。另外，含有各胜肽的lipoplex，是使用DMSO中的10mM之胜肽原液並與例1同樣地進行製備，以胜肽的最終濃度成為7.7μM，siRNA的最終濃度成為11.5μg/ml的方式，添加至含有HT-1080細胞的孔中。又，作為對HSP47的引子組是使用以下者(對GAPDH之引子組，是使用例2中記載之人類、大鼠共通者)。

人類HSP47：5’ TGACCTGCAGAAACACCTGG 3’(順向引子，序列編號24)

5’ AGGAAGATGAAGGGGTGGTC 3’(反向引子，序列編號25)

從第6圖中顯示的結果來看，可知RBP的細胞結合部分的胜肽，與維生素A同樣地作為對癌細胞的標靶化分子而產生作用。因為已知維生素A作為對各種癌細胞的標靶化分子而產生作用(參照專利文獻2)，故此結果顯示出，於例1~4中記載的胜肽及胜肽模擬物，亦作為對各種癌細胞的標靶化分子而產生作用。

例1~6的結果又教示了，本發明之標靶化分子，具有與專利文獻1~9及非專利文獻1中記載之維生素A等同等的標靶化能力，而能夠成功地應用於此等文獻中記載的用途，例如，應用於各種臟器纖維化或腫瘤性疾病的處置、檢測、造影及診斷；星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞等細胞的標記、檢測及造影等。

許多各式各樣的改變，能夠不超出本發明之精神而達成，為發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解。因此，應當理解本說明書中所記載的本發明之形態僅為例示，並沒有限制本發明之範圍的意圖。

<110> Nitto Denko Corporation

<120> Targeting molecule and use thereof

<130> F2584NDFM

<150> JP 2014-075953

<151> 2014-04-02

<160> 25

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 941

<212> DNA

<213> Homo Sapiens

<400> 1

<210> 2

<211> 200

<212> PRT

<213> Homo Sapiens

<400> 2

<210> 3

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Synthetic RBP loop 1

<400> 3

<210> 4

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Synthetic RBP loop 2

<400> 4

<210> 5

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Synthetic RBP loop 3

<400> 5

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Peptide No. 10

<400> 6

<210> 7

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Peptide No. 10-1

<400> 7

<210> 8

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Peptide No. 10-2

<400> 8

<210> 9

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Peptide No. 10-3

<400> 9

<210> 10

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Peptide No. 10-4

<400> 10

<210> 11

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Peptide No. 10-5

<400> 11

<210> 12

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Peptide No. 10-6

<400> 12

<210> 13

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Peptide No. 10-7

<400> 13

<210> 14

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: HSP47 siRNA sense strand

<400> 14

<210> 15

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: HSP47 siRNA antisense strand

<400> 15

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<220>

<223> rat HSP47 forward primer

<400>16

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<220>

<223> rat HSP47 reverse primer

<400> 17

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<220>

<223> GAPDH forward primer

<400> 18

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<220>

<223> GAPDH reverse primer

<400> 19

<210> 20

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Variant peptide E3K6

<400> 20

<210> 21

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Variant peptide D3K4

<400> 21

<210> 22

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Variant peptide D3K12

<400> 22

<210> 23

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> Scramble peptide

<400> 23

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<220>

<223> human HSP47 forward primer

<400> 24

<210> 25

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<220>

<223> human HSP47 reverse primer

<400> 25

Claims

一種標靶化分子，其將標靶細胞進行標靶化，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及視黃酸活化蛋白6(STRA6；stimulated by retinoic acid 6)表現細胞所組成之群組，其中，該標靶化分子係選擇自由下述所組成之群組：(1)由視黃醇結合蛋白(RBP；retinol binding protein)的細胞結合區域的胺基酸序列所組成之胜肽，該胺基酸序列是選擇自由序列編號3、4和6~13的胺基酸序列所組成之群組；及(2)胜肽模擬物，其是基於(1)的胜肽之逆向-反轉型胜肽。
如請求項1所述之標靶化分子，其中，細胞結合區域為RBP的環1、環2、及環1和環2的功能性片段。
如請求項1或2所述之標靶化分子，其中，細胞結合區域包含選擇自序列編號3和4的胺基酸序列。
如請求項1或2所述之標靶化分子，其中，包含選擇自序列編號3、4、6~13的胺基酸序列。
一種標靶化劑，其包含如請求項1~4中任一項所述之標靶化分子，用以將標靶細胞進行標靶化，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。
一種載體，其將物質送達至已被如請求項1~4中任一項所述之標靶化分子進行標靶化後的標靶細胞，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。
一種複合體，其以式(1)表示：X-Y-Z (1)式中，X是標靶化部分，其包含如請求項1~4中任一項所述之標靶化分子；Y是結合部分；Z是包含物質之功能性部分，該物質選擇自由藥物、標記及載體所組成之群組。
如請求項7所述之複合體，其中，載體進一步包含藥物及/或標記。
一種組成物，其包含下述成分，該成分選擇自由如請求項1~4中任一項所述之標靶化分子、如請求項5所述之標靶化劑、如請求項6所述之載體、及如請求項7或8項所述之複合體所組成之群組。
如請求項9所述之組成物，其中，包含處置與標靶細胞相關的疾病的藥物，用以處置該疾病，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。
如請求項10所述之組成物，其中，疾病為選擇自由纖維化及腫瘤性疾病所組成之群組。
如請求項9所述之組成物，其中，包含控制標靶細胞的活性或增殖的藥物，用以控制前述標靶細胞的活性或增殖，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。
如請求項9所述之組成物，其用以將物質送達至標靶細胞，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。
如請求項9所述之組成物，其包含標記，用以將標靶細胞進行標記、檢測或造影，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。
如請求項9所述之組成物，其包含標記，用以檢查、診斷或監控與標靶細胞相關的疾病，該標靶細胞選擇自由星狀細胞、肌纖維母細胞、癌相關纖維母細胞、腫瘤細胞及STRA6表現細胞所組成之群組。