ES2819030T3 - Péptido basado en colágeno tipo II alfa-1 útil para el tratamiento de una enfermedad de la superficie ocular - Google Patents
Péptido basado en colágeno tipo II alfa-1 útil para el tratamiento de una enfermedad de la superficie ocularInfo
- Publication number
- ES2819030T3 ES2819030T3 ES17779264T ES17779264T ES2819030T3 ES 2819030 T3 ES2819030 T3 ES 2819030T3 ES 17779264 T ES17779264 T ES 17779264T ES 17779264 T ES17779264 T ES 17779264T ES 2819030 T3 ES2819030 T3 ES 2819030T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- peptide
- pharmaceutical composition
- preventing
- corneal
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 111
- 208000023715 Ocular surface disease Diseases 0.000 title claims description 17
- 102100029136 Collagen alpha-1(II) chain Human genes 0.000 title 1
- 101000771163 Homo sapiens Collagen alpha-1(II) chain Proteins 0.000 title 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 27
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 31
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 28
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 28
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 28
- 208000003556 Dry Eye Syndromes Diseases 0.000 claims description 21
- 206010013774 Dry eye Diseases 0.000 claims description 21
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 19
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 claims description 18
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 claims description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 18
- 201000000159 corneal neovascularization Diseases 0.000 claims description 18
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 claims description 18
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims description 15
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 206010055665 Corneal neovascularisation Diseases 0.000 claims description 14
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 13
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 13
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 13
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 claims description 12
- 208000006069 Corneal Opacity Diseases 0.000 claims description 11
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims description 11
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 10
- 231100000269 corneal opacity Toxicity 0.000 claims description 9
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 8
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 7
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 claims description 7
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 claims description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 6
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 6
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims description 6
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 6
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 claims description 5
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 claims description 5
- 239000006196 drop Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 230000004489 tear production Effects 0.000 claims description 4
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 claims 1
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 28
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 26
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 26
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 14
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 14
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 12
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 12
- 229940120638 avastin Drugs 0.000 description 12
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 12
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 11
- 208000005590 Choroidal Neovascularization Diseases 0.000 description 10
- 206010060823 Choroidal neovascularisation Diseases 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 9
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 8
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 8
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 8
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 7
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 7
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 7
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 7
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 6
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 6
- -1 IL-1p Proteins 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 102000009075 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 description 4
- 108010048036 Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 4
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 4
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 4
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 4
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 4
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 4
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 210000001747 pupil Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 101100381481 Caenorhabditis elegans baz-2 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 3
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100372762 Rattus norvegicus Flt1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 description 3
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 3
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FGMPLJWBKKVCDB-BYPYZUCNSA-N (2s)-1-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound ON1CCC[C@H]1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100033133 D-dopachrome decarboxylase Human genes 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 101000927579 Homo sapiens D-dopachrome decarboxylase Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000016549 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 2
- 230000002920 convulsive effect Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008508 epithelial proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- BFUUJUGQJUTPAF-UHFFFAOYSA-N 2-(3-amino-4-propoxybenzoyl)oxyethyl-diethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCOC1=CC=C(C(=O)OCC[NH+](CC)CC)C=C1N BFUUJUGQJUTPAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 4-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C1C(C(O)=O)N(C(=O)OC(C)(C)C)CC1NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 description 1
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 1
- 229930000680 A04AD01 - Scopolamine Natural products 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 101100008050 Caenorhabditis elegans cut-6 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100504320 Caenorhabditis elegans mcp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015911 Eye burns Diseases 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STECJAGHUSJQJN-GAUPFVANSA-N Hyoscine Natural products C1([C@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-GAUPFVANSA-N 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- STECJAGHUSJQJN-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-scopolamin Natural products C1C(C2C3O2)N(C)C3CC1OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 206010042736 Symblepharon Diseases 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229940087458 alcaine Drugs 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N calcein am Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=C(OC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(=O)C)C(OC(C)=O)=C1 BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 229960003449 epinastine Drugs 0.000 description 1
- WHWZLSFABNNENI-UHFFFAOYSA-N epinastine Chemical compound C1C2=CC=CC=C2C2CN=C(N)N2C2=CC=CC=C21 WHWZLSFABNNENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000010220 ion permeability Effects 0.000 description 1
- 229960004184 ketamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 210000004561 lacrimal apparatus Anatomy 0.000 description 1
- VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N lauric acid triglyceride Natural products CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCC VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 239000003149 muscarinic antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 229960004114 olopatadine Drugs 0.000 description 1
- JBIMVDZLSHOPLA-LSCVHKIXSA-N olopatadine Chemical compound C1OC2=CC=C(CC(O)=O)C=C2C(=C/CCN(C)C)\C2=CC=CC=C21 JBIMVDZLSHOPLA-LSCVHKIXSA-N 0.000 description 1
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000001179 pupillary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000011890 sandwich Nutrition 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- STECJAGHUSJQJN-FWXGHANASA-N scopolamine Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)O[C@H]2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-FWXGHANASA-N 0.000 description 1
- 229960002646 scopolamine Drugs 0.000 description 1
- 229960004499 scopolamine hydrobromide Drugs 0.000 description 1
- WTGQALLALWYDJH-MOUKNHLCSA-N scopolamine hydrobromide (anhydrous) Chemical compound Br.C1([C@@H](CO)C(=O)O[C@H]2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 WTGQALLALWYDJH-MOUKNHLCSA-N 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1.
Description
DESCRIPCIÓN
Péptido basado en colágeno tipo II a l útil para el tratamiento de una enfermedad de la superficie ocular [Campo técnico]
La presente invención se refiere a nuevos péptidos y usos de los mismos.
[Antecedentes de la técnica]
La matriz extracelular (ECM) es un componente restante en el tejido distinto de las células, está compuesta por combinaciones tridimensionales de diversas moléculas estructurales y funcionales secretadas por las células, y no se puede fabricar artificialmente porque las características y funciones de la misma aún no se han identificado completamente. La matriz extracelular juega un papel importante en el mantenimiento del entorno celular mientras determina las propiedades físicas del tejido tales como la fuerza de distracción, la fuerza compresiva y la elasticidad en la forma del tejido y controlando la presión osmótica, la permeabilidad de los iones, etc.
Además, tiene muchos factores de crecimiento y citocinas, y juega un papel en la determinación de la función de las células y, en particular, regula la diferenciación de las células en las etapas fetal y de crecimiento o sugiere la dirección del crecimiento del tejido mientras aumenta o disminución de la adhesión celular y la actividad metabólica. La matriz extracelular tiene proteínas tales como colágeno y elastina para determinar las propiedades físicas del tejido y glucoproteínas tales como fibronectina y laminina para unir células y matriz extracelular y muchos proteoglicanos tales como el condroitín sulfato sirven de soporte para mantener el volumen por mantener la forma y el volumen del tejido e interactuar activamente con las células del tejido para mantener y funcionar como un tejido u órgano único; sin embargo, los componentes y la estructura de la matriz extracelular aún no se han aclarado por completo. El documento WO 2007/146401 A2 se refiere a antagonistas de péptidos, tales como péptidos de colágeno sintéticos. El documento DE 4041 059 A1 se refiere a péptidos de fórmula R1-Ala-Gly- R2-Gly-Ala-Pro-Gly-R3. El documento EP 3329929 A1 se refiere a una composición farmacéutica para prevenir o tratar el ojo seco, incluyendo la composición farmacéutica, como componente activo, un péptido novedoso que tiene efectos, entre otras cosas, en la mejora de la producción de lágrimas y la suavidad de la superficie corneal para los ojos secos inducidos por estrés por desecación.
[Divulgación]
[Problema técnico]
Es un objeto de la presente invención proporcionar un péptido novedoso capaz de prevenir o tratar enfermedades de la superficie ocular inhibiendo o mejorando los cambios patológicos provocados por neovascularización, opacificación, fibrosis e inflamación de la córnea.
[Solución técnica]
La presente invención se define en las reivindicaciones.
La presente invención proporciona un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1.
La presente invención proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad de la superficie ocular que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
La presente invención proporciona un alimento saludable para prevenir o mejorar una enfermedad de la superficie ocular que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
También se proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar la degeneración macular que comprende un péptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
Se proporciona además un alimento saludable para prevenir o mejorar la degeneración macular que comprende un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
La presente invención proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar el ojo seco que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo. La presente invención proporciona un alimento saludable para prevenir o mejorar el ojo seco que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
[Efectos ventajosos]
Se ha confirmado que el péptido novedoso de la presente invención reduce la opacidad corneal, la neovascularización y la fibrosis e inhibe la expresión de factores inducidos por inflamación en modelos animales en los que los cambios patológicos de la superficie ocular son inducidos por quemaduras alcalinas y previene y mejora la degeneración macular inhibiendo eficazmente la angiogénesis en la retina y la coroides en la que se induce el cambio de tejido e inhibe o mejora los cambios patológicos de la célula epitelial corneal, tal como la disminución del volumen lagrimal del globo ocular, la irregularidad de la superficie corneal y la pérdida de células caliciformes conjuntivales y, de acuerdo con lo anterior, pueden proporcionar composiciones que lo comprenden como ingrediente activo como composición farmacéutica y como alimento saludable para prevenir o tratar enfermedades oculares.
[Descripción de dibujos]
La figura 1 es un informe del péptido hidroxi prolina-GQDGLAGPK sintetizado.
La figura 2 muestra los resultados analizando la pureza del péptido hidroxi prolina-GQDGLAGPK usando HPLC. La figura 3 muestra los resultados que confirman el peso molecular del péptido hidroxi prolina-GQDGLAGPK por Ion-Masas.
La figura 4 muestra los resultados que confirman el efecto de Hyp-GQDGLAGPK en la córnea de conejo con quemadura alcalina; la figura 4A es una fotografía de la córnea de un conejo al microscopio (SZX7, Olympus, Tokio, Japón) en los días 0, 7 y 17 después de la quemadura alcalina (barra de escala = 10 mm); la figura 4B es un gráfico que muestra el grado de neovascularización corneal; y la figura 4C es un gráfico que muestra el grado de opacificación corneal. El gráfico muestra la media ± desviación estándar de cada grupo de prueba (n = 5), y mediante la prueba t, * P <0,05 frente al valor del grupo de quemadura alcalina se consideró significativo.
La figura 5 muestra los resultados que confirman el efecto de Hyp-GQDGLAGPK sobre el cambio de espesor de la córnea de conejo con quemadura alcalina; la figura 5A es una fotografía de una sección de tejido (barra de escala = 1 mm) tomada con un microscopio virtual (NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japón); y la figura 5B es un gráfico que muestra el espesor de la córnea.
La figura 6 muestra las fotografías tomadas con un microscopio virtual (NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japón) después de la inmunotinción de fibroblastos oculares mediante el procedimiento de tinción tricrómica de Masson para confirmar el efecto de Hyp-GQDGLAGPK sobre los cambios en la fibrosis en la córnea de conejo con quemadura alcalina (barra de escala = 100 pm) y la porción que se muestra en marrón es fibroblasto.
La figura 7 muestra los resultados que confirman el efecto de Hyp-GQDGLAGPK sobre los marcadores de angiogénesis en conejos con quemadura alcalina y fotografías de secciones de tejido inmunoteñidas con anticuerpos específicos, CD31, FGF y VEGF por un microscopio virtual (NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japón) (barra de escala = 300 pm).
La figura 8 muestra los resultados que confirman el efecto de Hyp-GQDGLAGPK sobre los marcadores de inflamación en conejos con quemadura alcalina y son fotografías tomadas con un microscopio virtual (NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japón) después de la tinción inmunohistoquímica de las secciones de tejido con anticuerpos específicos tales como macrófagos, TNF a, ICAM-1, IL-1 p, IL-6 y MMP-9 (barra de escala = 300 pm).
La figura 9 muestra los resultados que confirman el efecto inhibidor sobre la angiogénesis en células HUVEC tratadas con colágeno, GDRGD (CPI) e hidroxi prolina-GQDGLAGPK (CPII).
La figura 10 muestra los resultados que confirman el grado de colapso tisular y angiogénesis según la irradiación con láser en 14 días después de la irradiación con láser.
La figura 11 muestra el efecto de inhibición de la neovascularización coroidea mediante irradiación con láser en un modelo animal seguido del tratamiento del mismo con colágeno a concentraciones de 2, 10 y 20 pg o GDRGD (CPI) e hidroxi prolina-GQDGLAGPK (CPII) a concentraciones de 2 a 20 pg,
La figura 12 muestra los resultados que confirman el efecto de inhibición de la neovascularización coroidea mediante irradiación con láser en un modelo animal seguido del tratamiento del mismo con Avastin o hidroxi prolina-GQDGLAGPK (CPII) a una concentración de 5 pg, respectivamente.
La figura 13 muestra los resultados de RT-PCR en tiempo real que confirman los niveles de expresión génica de VEGF, ICAM y MCP-1 mediante irradiación con láser en un modelo animal seguido del tratamiento del mismo con Avastin o hidroxi prolina-GQDGLAGPK (CPII) a una concentración de 5 pg, respectivamente, y extrayendo ARN de la retina y coroides después de 14 días de irradiación con láser.
La figura 14 muestra los resultados de Western blot que confirman los niveles de expresión de proteínas de VEGF, VEGFR-1 (Flt-1), VEGR-2 (Flk-1) y angiopoyetina 2 en la retina obtenida y el extracto de coroides
mediante irradiación con láser en un modelo animal seguido del tratamiento del mismo con Avastin o hidroxi prolina-GQDGLAGPK (CPII) a una concentración de 5 pg, respectivamente, y extrayendo después de 14 días de irradiación con láser.
La figura 15 muestra cambios en la cantidad de lágrimas en cada ratón según el tratamiento con solución salina normal, Hyp- GQDGLAGPK, colágeno, CsA, DQS y HA en ratones NOD.B10.H2b en los que se elimina el estrés seco como resultados cuantitativos expresados en medias ± desviación estándar inyectando solución salina normal, Hyp-GQDGLAGPK, colágeno, CsA, DQS y HA en los ojos de los ratones NOD.B10.H2b durante 3, 5, 7 y 10 días y midiendo la cantidad de lágrimas de los ratones. * P < 0,05 frente al grupo DS 10D. #P < 0,05 frente al grupo de solución salina normal. §P < 0,05 frente al grupo de tratamiento Hyp-GQDGLAGPK. flP < 0,05 frente al grupo de tratamiento con CsA. fP < 0,05 frente al grupo de tratamiento DQS. &P <0,05 frente al grupo de tratamiento con CsA.
La figura 16 muestra el efecto del péptido Hyp-GQDGLAGPK sobre la flexión de la superficie corneal; la figura 16A muestra los resultados de la imagen ocular de cada grupo tratado con solución salina normal, Hyp-GQDGLAGPK, colágeno, CsA, DQS y HA durante 3, 5, 7 y 10 días en ratones NOD.B10.H2b (DS) en los que el estrés seco es eliminado (barra de escala = 1 mm); y la figura 16B muestra cambios en las puntuaciones de suavidad de la superficie corneal de ratones tratados con solución salina normal, Hyp-GQDGLAGPK, colágeno, CsA, DQS y HA como resultados cuantitativos de la media ± desviación estándar. * P <0,05 frente al grupo DS 10D, #P <0,05 frente al grupo de solución salina normal, §P <0,05 frente al grupo de tratamiento Hyp-GQDGLAGPK, flP <0,05 frente al grupo de tratamiento con CsA, &P <0,05 frente al grupo de tratamiento con CsA.
La figura 17 muestra el efecto del péptido Hyp-GQDGLAGPK sobre el desprendimiento de células epiteliales corneales; la figura 17A muestra los resultados de la tinción con hematoxilina y eosina (barra de escala = 100) que confirman el grado de desprendimiento de células epiteliales corneales en 10 días después de administrar solución salina normal, Hyp-GQDGLAGPK, colágeno, CsA, DQS y HA en las córneas de ratones NOD.B10.H2b (barra de escala = 100 pm); y la figura 17B es un resultado cuantitativo que muestra el grado de desprendimiento de células epiteliales corneales como la media ± desviación estándar (* P <0,05 frente al grupo DS 10D).
La figura 18 muestra el efecto del péptido Hyp-GQDGLAGPK sobre la distribución de células caliciformes conjuntivales; la figura 18A muestra el resultado de la tinción PAS de la conjuntiva de ratones NOD.B10.H2b a los que se les administró solución salina normal, Hyp-GQDGLAGPK, colágeno, CsA, DQS y HA (barra de escala = 200 pm); y la figura 18B es un resultado cuantitativo que muestra el grado de distribución de las células caliciformes conjuntivales como la media ± desviación estándar (* P <0,05 frente al grupo DS 10D).
La figura 19 muestra los resultados del análisis inmunohistoquímico de los niveles de expresión de TNF-a, ICAM-1, VCAM-1, MMP-2 y MMP-9 en la glándula lagrimal de ratones NOD.B10.H2b y los resultados que confirman el grado de expresión de la factores inflamatorios mediante la administración de solución salina normal, Hyp-GQDGLAGPK, colágeno, CsA, DQS y HA a los ratones en los que se elimina el estrés seco y transcurren 10 días (barra de escala = 100 pm).
[Mejor modo]
La presente invención proporciona un péptido que consta de una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1.
Un primer aminoácido del péptido puede ser hidroxi prolina (Hyp) y más preferiblemente hidroxi prolina GQDGLAGPK.
El péptido se puede derivar de colágeno tipo II a1 y el colágeno tipo II a1 se puede aislar de una matriz extracelular derivada de condrocitos de animales.
La matriz extracelular derivada de condrocitos se puede aislar de tejido cartilaginoso y/o matriz extracelular derivada de condrocitos formada por secreción de condrocitos derivados de cartílago de un animal, y el animal se puede seleccionar del grupo que consiste en cerdos, caballos, vacas, ovejas, cabras y monos, pero no se limita a ellos.
El "péptido" de la presente invención es un compuesto en el que al menos dos a-aminoácidos están unidos por un enlace peptídico, y se denomina dipéptido, tripéptido o tetrapéptido, según el número de los aminoácidos constituyentes y un oligopéptido tiene aproximadamente 10 o menos enlaces peptídicos y un polipéptido tiene una pluralidad de enlaces peptídicos.
Los péptidos de la presente invención se preparan usando procedimientos químicos (Peptide Chemistry, A practical Textbook. Mikos Bodansky, Springer-Verlag, Berlín). Por ejemplo, los péptidos se sintetizan mediante técnicas de estado sólido (Roberge JY et al (1995) Science 269: 202-204), se escinden de la resina y se purifican mediante cromatografía líquida de alta resolución (por ejemplo, Creighton (1983) Proteins Structures and Molecular Principles, WH Freeman and Co., New York NY).
Además, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad de la superficie ocular que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
La enfermedad de la superficie ocular puede ser una cualquiera seleccionada del grupo que consiste en opacidad corneal, neovascularización corneal, inflamación corneal y fibrosis corneal.
Según un ejemplo de la presente invención, el modelo animal en el que se indujo la quemadura alcalina mostró opacidad corneal inmediatamente después de la quemadura alcalina como se muestra en la figura 4A, y la neovascularización y la opacidad de la córnea aumentaron después de 7 días de quemadura alcalina, pero un modelo animal en el que se confirmaron la angiogénesis y opacidad de la córnea se trató con solución salina normal o péptido Hyp-GQDGLAGPK durante 10 días (después de 17 días de quemadura alcalina), respectivamente y la puntuación de opacidad corneal del grupo de control aumentó significativamente a 3,0 ± 0,0 como se muestra en la figura 4B y la figura 4C, y se observó la disminución de la opacificación en el grupo experimental tratado con péptido, como se muestra en la figura 4B.
Según otro ejemplo de la presente invención, se realizó la tinción tricrómica de Masson para confirmar el efecto de los péptidos Hyp-GQDGLAGPK sobre la fibrosis corneal inducida por quemaduras alcalinas y como se muestra en la figura 6, en el caso del grupo control de quemadura alcalina, se confirmó que la formación de fibroblasto marrón aumentó en la región del estroma por la quemadura alcalina, pero el aumento de fibroblasto fue inhibido en el grupo experimental tratado con péptido Hyp-GQDGLAGPK. Además, se realizó tinción con H & E para confirmar el cambio histológico de la córnea según la quemadura alcalina y como resultado, refiriéndose a la parte superior de la figura 7, se confirmó que la quemadura alcalina indujo proliferación epitelial, invasión de células inflamatorias, edema convulsivo y neovascularización en la córnea.
Sin embargo, con respecto a los cambios histológicos, el grupo experimental tratado con péptido Hyp-GQDGLAGPK mostró un efecto de mejora avanzado y, como se muestra en la figura 5A, los resultados de la tinción con H & E mostraron que la neovascularización mejoró significativamente en los tejidos tratados con péptidos.
Según otro ejemplo de la presente invención, con el fin de confirmar el efecto de cada péptido sobre la expresión de marcadores inflamatorios, las secciones de córnea se tiñeron inmunohistoquímicamente para marcadores específicos de inflamación tales como macrófagos, TNFa, ICAM-1, IL -1p, IL-6 y MMP-9 y, como resultado, la quemadura alcalina aumentó la expresión de macrófagos en el epitelio y la matriz subcutánea y proliferativa como se muestra en la figura 8, mientras que el grupo experimental tratado con el péptido Hyp-GQDGLAGPK inhibió eficazmente la expresión de macrófagos. Además, se observó la expresión de citocinas inflamatorias, incluidas las moléculas de adhesión TNFa, IL-1 p e IL-6 e ICAM-1 en el grupo de quemaduras alcalinas, pero la expresión de los factores inflamatorios disminuyó en el grupo experimental tratado con péptido. Adicionalmente, la expresión de MMP-9 se observó fuertemente en la córnea del grupo de quemaduras alcalinas, mientras que la expresión de MMP-9 se inhibió en el grupo experimental tratado con péptido.
A partir de estos resultados, se confirmó que el péptido Hyp-GQDGLAGPK es eficaz para prevenir o tratar la opacidad corneal, la angiogénesis corneal, la inflamación corneal y la fibrosis corneal.
El péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 puede derivar del colágeno tipo II a1 aislado de una matriz extracelular derivada de condrocitos (CDEM).
Más específicamente, la matriz extracelular derivada de condrocitos se puede aislar del tejido del cartílago y/o la matriz extracelular derivada de condrocitos formada por secreción de condrocitos derivados del cartílago de un animal, y el animal se puede seleccionar del grupo que consiste en cerdos, caballos, vacas, ovejas, cabras y monos, pero no se limita a ellos.
El péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 puede ser un péptido cuyo primer aminoácido es hidroxi prolina, más preferiblemente una hidroxi prolina (Hyp)-GQDGLAGPK.
El péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 puede estar contenido en una cantidad de 0,1 a 50 partes en peso en base a 100 partes en peso de la composición farmacéutica total.
La composición farmacéutica puede ser una formulación cualquiera seleccionada del grupo que consiste en colirios, inyecciones, gránulos, comprimidos, píldoras, cápsulas, geles, jarabes, suspensiones, emulsiones, gotas y líquidos. La presente invención puede proporcionar un alimento saludable para prevenir o mejorar una enfermedad de la superficie ocular que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
Además, también se proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar la degeneración macular que comprende un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
El péptido puede derivar del colágeno tipo II a l.
El péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 puede ser un péptido en el que el primer aminoácido es hidroxi prolina, y más preferiblemente prolina-GQDGLAGPK.
El péptido puede prevenir o tratar la degeneración macular inhibiendo la neovascularización del ojo, y la degeneración macular puede ser una degeneración macular relacionada con la edad, pero no se limita a la misma. Según un ejemplo de la presente invención, se irradiaron ratones con un láser para dañar los globos oculares y, después de 14 días, se extrajeron los globos oculares para la tinción con H&E.
Como resultado, como se muestra en la figura 10, se confirmó que el tejido en el sitio de irradiación con láser colapsó y se formó angiogénesis. Por otro lado, como se muestra en la figura 11, las lesiones de CNV disminuyeron en el grupo experimental que se trata con 2 pg de colágeno, CPI y CPII después de la irradiación con láser, respectivamente.
Además, el efecto inhibidor neovascular coroideo de la hidroxi prolina-GQDGLAGPK (CPII), que tiene la mejor capacidad antiangiogénica en experimentos de formación de tubos in vitro, se comparó con el de Avastin, un grupo de control positivo, y como se muestra en la figura 11, el tamaño de la lesión disminuyó significativamente más que el del grupo de control y se confirmó que era similar al del grupo de control positivo que fue tratado con Avastin a la misma concentración.
A partir de los resultados anteriores, el péptido hidroxi prolina-GQDGLAGPK puede exhibir un excelente efecto terapéutico sobre la degeneración macular relacionada con la edad que es causada por angiogénesis.
El péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 puede estar contenido en una cantidad de 0,1 a 50 partes en peso en base a 100 partes en peso de la composición farmacéutica total.
La composición farmacéutica puede ser una formulación cualquiera seleccionada del grupo que consiste en colirios, inyecciones, gránulos, comprimidos, píldoras, cápsulas, geles, jarabes, suspensiones, emulsiones, gotas y líquidos. Se proporciona además un alimento saludable para prevenir o mejorar la degeneración macular que comprende un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo. Además, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar el ojo seco que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo. El péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 puede derivar del colágeno tipo II a1.
Más específicamente, el péptido puede ser un péptido aislado de una matriz extracelular derivada de condrocitos (CDEM), la matriz extracelular derivada de condrocitos se puede aislar de tejido de cartílago y/o matriz extracelular derivada de condrocitos formada por secreción de condrocitos derivados del cartílago de un animal, y el animal se puede seleccionar del grupo que consiste en cerdos, caballos, vacas, ovejas, cabras y monos, pero no se limita a ellos.
El péptido puede ser un péptido en el que el primer aminoácido es hidroxi prolina y más preferiblemente hidroxi prolina (Hyp) -GQDGLAGPK.
Los péptidos pueden recuperar la disminución de la producción de lágrimas y el desequilibrio de la superficie corneal debido al estrés seco, e inhibir el desprendimiento de la célula epitelial corneal y la producción de factor inflamatorio. Según un ejemplo de la presente invención, como se muestra en la figura 15, la cantidad de lágrimas en ratones expuestos al estrés seco fue aproximadamente 85,5 % (grupo DS 10D, 0,03 ± 0,01 pL, p <0,05) menor que la del grupo normal (0,22 ± 0,01 pL), pero después de la remoción del estrés seco, la cantidad de lágrimas aumenta 7,9 veces (p <0,05) después de 10 días de tratamiento en ratones tratados con Hyp-GQDGLAGPK (0,23 ± 0,02 pL), que se confirma que es aproximadamente 2,8 veces (p <0,05) mayor que la del grupo de control negativo, grupo de tratamiento con solución salina normal (0,08 ± 0,01 pL) y aproximadamente 1,7 veces (p <0,05) mayor que la del grupo de control positivo, grupo de tratamiento con colágeno (0,13 ± 0,02 pL).
Además, el volumen de lágrimas del grupo de tratamiento Hyp-GQDGLAGPK fue 1,7 veces (p <0,05) 1,4 veces (p <0,05) y 1,6 veces (p <0,05) mayor que el de los grupos de tratamiento con CsA, DQS y HA (0,13 ± 0,02 pL; 0,16 ± 0,02 pL; 0,14 ± 0,01 pL), respectivamente y, de este modo, se confirmó que el efecto de Hyp-GQDGLAGPK en la mejora del volumen de lágrimas fue más eficaz que el medicamento para el tratamiento del ojo seco disponible actualmente en el mercado.
El péptido puede estar comprendido en una cantidad de 0,1 a 50 partes en peso en base a 100 partes en peso de la composición farmacéutica total.
La composición farmacéutica puede ser una formulación cualquiera seleccionada del grupo que consiste en colirios, inyecciones, gránulos, comprimidos, píldoras, cápsulas, geles, jarabes, suspensiones, emulsiones, gotas y líquidos. La presente invención puede proporcionar un alimento saludable para prevenir o mejorar el ojo seco que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad de la superficie ocular que comprende el péptido como ingrediente activo puede comprender además al menos un aditivo seleccionado del grupo que consiste en portador, excipiente, desintegrante, edulcorante, agente de revestimiento, agente de hinchamiento, lubricantes, modificadores de deslizamiento, saborizantes, antioxidantes, tampones, bacteriostáticos, diluyentes, dispersantes, tensioactivos, aglutinantes y lubricantes, que son apropiados para su uso convencional en la fabricación de composiciones farmacéuticas.
Los ejemplos específicos de portadores, excipientes y diluyentes incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, almidón, goma de acacia, alginato, gelatina, fosfato de calcio, silicato de calcio, celulosa, metilcelulosa, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, agua, metilhidroxibenzoato, propilhidroxibenzoato, talco, estearato de magnesio y aceite mineral, y las formulaciones sólidas para administración oral pueden incluir comprimidos, píldoras, polvos, gránulos, cápsulas, etc., y estas preparaciones sólidas se pueden preparar mezclándolas con al menos un excipiente tal como almidón, carbonato cálcico, sacarosa o lactosa, gelatina, etc. en la composición. También, además de los excipientes simples, se pueden usar lubricantes tales como estearato de magnesio y talco. Los ejemplos de formulación líquida para administración oral incluyen suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes, etc. y diversos excipientes tales como agentes humectantes, edulcorantes, fragancias, conservantes, etc. además del agua y la parafina líquida, que se usan comúnmente como diluyentes simples. Las formulaciones para administración parenteral incluyen soluciones acuosas esterilizadas, soluciones no acuosas, suspensiones, emulsiones, formulaciones liofilizadas, supositorios y similares. Ejemplos de soluciones no acuosas o del agente de suspensión incluyen propilenglicol, polietilenglicol, aceite vegetal tal como aceite de oliva, éster inyectable tal como oleato de etilo, etc. Como base de supositorio, se pueden usar witepsol, macrogol, tween 61, papel de cacao, laurina, glicerogelatina, etc.
Según una realización de la presente invención, la composición farmacéutica se puede administrar por vía intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intraarterial, intraperitoneal, intraesternal, percutánea, intranasal, por inhalación, tópica, rectal, oral, intraocular o intradérmica a un sujeto de una manera convencional. La dosis preferida del péptido varía según la condición y el peso corporal del sujeto, el tipo y grado de la enfermedad, la forma del fármaco, la vía de administración y el período, y los expertos en la técnica pueden seleccionarla de manera apropiada. Según una realización de la presente invención, la dosis diaria puede ser de 0,01 a 200 mg/kg, específicamente de 0,1 a 200 mg/kg, más particularmente de 0,1 a 100 mg/kg, aunque no se limita a estos. La administración se puede administrar una vez al día o dividirse en varias dosis, por lo que el alcance de la presente invención no está limitado.
En la presente invención, el "sujeto" puede ser un mamífero, incluido un ser humano, pero no se limita a estos ejemplos.
Además, en la presente invención, el alimento saludable se usa junto con otros alimentos o aditivos alimentarios distintos del péptido de la presente invención, y se puede usar adecuadamente según un procedimiento convencional. La cantidad que se va a mezclar del ingrediente activo se puede determinar apropiadamente según su propósito de uso, por ejemplo, prevención, tratamiento de salud o terapéutico.
La dosis eficaz del compuesto contenido en el alimento saludable se puede usar de acuerdo con la dosis eficaz del agente terapéutico, pero puede estar hasta el intervalo anterior para la ingesta a largo plazo con fines de salud e higiene o propósitos de control de la salud, y está claro que el componente se puede usar en una cantidad de al menos el intervalo anterior, ya que no hay ningún problema en términos de seguridad.
No existe ninguna limitación particular sobre el tipo de alimento saludable y los ejemplos del mismo incluyen carne, salchicha, pan, chocolate, dulces, bocadillos, confitería, pizza, ramen, otros fideos, gomas, productos lácteos, incluidos helados, diversas sopas, bebidas, té, bebidas, bebidas alcohólicas y complejos vitamínicos, etc.
A continuación, se describirá la presente invención en detalle con referencia a los siguientes ejemplos.
<Ejemplo experimental 1> Fabricación de un modelo animal de enfermedad de la superficie ocular
Se llevó a cabo un experimento con animales para estudios de ojos y visión según the Animal Experiment Manual aprobado por Inje University Medical School and the ARVO Statement (No.; 2014-028).
Se compraron veintiséis conejos blancos de Nueva Zelanda de 2,0 a 2,5 kg de Samtako (Osan, Corea), y una mezcla de clorhidrato de ketamina (30 mg/kg de peso corporal, Huons, Jecheon, Corea) e clorhidrato de xilazina (2,5 mg/kg, Bayer Korea Ltd., Seúl, Corea) se inyectó en los músculos para anestesia general y se realizó anestesia local usando gotas oftálmicas de propracaína Alcaine (Alcon Inc., Seúl, Corea).
A continuación, se expuso papel de filtro de 8 mm empapado con NaOH 1 N en el centro de la córnea derecha del conejo durante 1 minuto para preparar un modelo de quemadura alcalina, y la angiogénesis corneal y la opacidad corneal fueron confirmadas por la quemadura alcalina después 7 días de quemadura.
Los conejos se dividieron aleatoriamente en un grupo de quemadura alcalina (n = 5) y un grupo tratado con péptidos (n = 5). En el grupo de quemaduras alcalinas, se administró solución salina normal 4 veces al día y en el grupo tratado con péptido, se administró péptido Hyp-GQDGLAGPK de 10 mg/ml 4 veces al día, y el ojo izquierdo se usó como grupo de control.
Después de que se administró cada material de tratamiento durante 10 días, se realizaron tinción con H&E, tinción con tricrómico de Masson e inmunohistoquímica para confirmar la fibrosis, angiogénesis, inflamación y cambios en la estructura de la córnea.
<Ejemplo experimental 2> Identificación de neovascularización y opacificación de la córnea
Se realizó una evaluación clínica de la neovascularización y opacificación de la córnea.
Se evaluó un grado de neovascularización corneal de 0 a 3 puntos: 0 puntos para ausencia de angiogénesis, 1 punto para angiogénesis en la periferia de la córnea, 2 puntos para expansión de la angiogénesis hasta el borde de la pupila y 3 puntos para la expansión de la angiogénesis al centro corneal más allá del borde de la pupila. La angiogénesis corneal se evaluó como 3 puntos cuando era difícil evaluar el grado de neovascularización corneal debido a una opacificación considerable y simbléfaron extenso.
Además, se evaluó el grado de opacificación corneal de 0 a 3: 0 puntos para una córnea clara donde la parte del iris es claramente visible, 1 punto para la opacidad parcial en la parte del iris, 2 puntos cuando el borde de la pupila y la parte del iris se ve débil y 3 puntos para una opacificación completa de la parte del iris y la parte de la pupila.
<Ejemplo experimental 3> Tinción tricrómica de Masson
Los globos oculares se fijaron con paraformaldehído al 3,5 %, se lavaron y se almacenaron en alcohol al 70 % hasta que se obtuvieron secciones (6 pm) de tejido incluidas en parafina. Para visualizar la fibrosis de colágeno y el grado de fibrosis, se realizó la tinción con tricrómico de Masson de las secciones y se tomaron imágenes de las secciones mediante un microscopio virtual (NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japón).
<Ejemplo experimental 4> Tinción química para análisis histológico
Para el análisis histológico, los globos oculares se fijaron con paraformaldehído al 3,5 % y luego se congelaron en nitrógeno líquido con adherencia en un compuesto de temperatura de corte óptima (OCT; Tissue-Tek, Sakura Fine Technical Co., Ltd., Tokio, Japón).
Las muestras se fijaron en formaldehído al 4 % durante 24 horas, se secaron y luego se pegaron en cera de parafina. Luego, se prepararon secciones de tejido con un grosor de 8 pm, se realizó la tinción con hematoxilina/eosina (H&E) y se fotografiaron las imágenes de las secciones con un microscopio virtual (NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japón).
<Ejemplo experimental 5> Análisis inmunohistoquímico
Se cortaron secciones de tejido en 6 pm de espesor y se usaron para análisis inmunohistoquímico.
En primer lugar, las secciones de tejido se fijaron con paraformaldehído al 3,5 % y se impregnaron con Triton X-100 al 0,1 %, se inactivaron con albúmina de suero bovino al 2 % (BSA; todos de Sigma, St. Louis, MO) y se incubaron durante la noche a 4 °C con anti-CD31 (1:1.000; Abcam Inc., Cambridge, MA), anti-bFGF (1:1.000; Bioss Inc., Woburn, MA), anti-IL-1 p, anti-IL-6 (1:1.000 ; Cloud-Clone Corp., Houston, TX), anti-MMP-9, anti-ICMA-1, anti-TNFa, anti-macrófagos/mononucleos (1:1.000; Abnova Crop., Taipei, Taiwán) y anticuerpo primario anti- VEGF-A (Abbiotec, San Diego, CA).
Posteriormente, se incubó el anticuerpo secundario durante 45 minutos en la sección y se visualizó la respuesta inmunológica con cromógeno de diaminobencidina (DAB), y la sección se tiñó con contraste con hematoxilina de Mayer (Sigma) durante 30 segundos a temperatura ambiente.
Las secciones teñidas se fotografiaron mediante un microscopio virtual (NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japón).
<Ejemplo experimental 6> Ensayo de tubos
El efecto antiangiogénico de la hidroxi prolina-GQDGLAGPK se confirmó mediante un ensayo de tubos usando células endoteliales vasculares humanas (HUVEC).
Se tiñeron células HUVEC con calceína-AM y luego se dispensaron en una placa de 48 pocillos recubierta con Matrigel, se trataron con colágeno, CPI y CPII a concentraciones junto con 50 ng/ml de VEGF humano
recombinante, y después de 4 horas de incubación a 37 °C, se observó la formación del tubo mediante microscopía de fluorescencia (Leica) y la longitud del tubo se analizó mediante el software Image lab (Bio-Rad Laboratories).
<Ejemplo experimental 7> Modelado de animales experimentales y neovascularización coroidea (CNV)
Se adquirieron ratones C57BL/6 de Orient Bio y los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices aprobadas por the University of Inje (No, 2013-053) y ARVO con respecto al uso en animales para estudios de ojos y visión. Se trataron ratones C57BL/6 de 6 semanas de edad con láser de diodo verde (532 nm, 150 mW, 0,1 s, 50 pM, fotocoagulador) para dañar el área del nervio óptico retiniano. Inmediatamente después de la irradiación con láser, CP1, CPII y el grupo de control positivo Avastin se disolvieron en PBS y se administraron 5 mg cada uno por día en el globo ocular durante 5 días. El experimento anterior para cada grupo de experimentos se realizó usando ambos ojos de cinco ratones cada uno.
<Ejemplo experimental 8> Análisis histológico
Para observar los cambios de tejido por láser, se extrajeron ojos de ratón y se fijaron con formalina al 10 % y se pegaron profundamente en la mezcla de OCT.
Las muestras de tejido de 8 pm tratadas con el procedimiento descrito anteriormente se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E) y se fotografiaron con un microscopio virtual (NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japón) y se analizaron.
<Ejemplo experimental 9> Montaje plano de retina-coroides
Después de 14 días de irradiación con láser, se realizó un montaje plano de retina-coroides para confirmar el efecto inhibidor de CPII sobre el tamaño de la lesión de CNV. El ratón se anestesió y se inyectó con 25 mg/ml de FITC-dextrano en 100 ml de retroorbital. Después de 30 minutos, se sacrificó al ratón y se extrajo el globo ocular y se fijó con formalina al 10 % y luego, se retiraron la córnea y el cristalino y se montaron en plano sobre el cubreobjetos. La neovasculatura teñida con FITC-dextrano se observó mediante microscopía de fluorescencia (Leica) y el tamaño de la lesión se midió mediante el programa Image J.
<Ejemplo experimental 10> Análisis cuantitativo de RT-PCR en tiempo real
Con el fin de confirmar el efecto inhibidor de la hidroxi prolina-GQDGLAGPK sobre la expresión génica relacionada con la neovascularización, se extrajo ARN usando el Mini kit RNeasy (Qiagen) en una mezcla de retina y coroides de globos oculares de ratones extraídos, y se sintetizó ADNc usando cebador oligo (dT) y transcriptasa inversa. Los productos de PCR se amplificaron usando el conjunto de cebadores específicos (COSMOGENETECH, Corea) que se muestra en la Tabla 1 y SYBR Green PCR 2X PreMix (Enzynomics) y para las condiciones de PCR, las muestras se incubaron a 95 °C, durante 10 minutos y se realizaron 40 ciclos de PCR a 95 °C, durante 15 segundos, 60 °C, durante 30 segundos y 72 °C, durante 15 segundos. La cuantificación relativa se calculó usando el procedimiento 2-(DDCT) [Livak and Schmittgen, 2001; DDCT = grupo de control (CT, diana-CT, actina) grupo de control (CT, diana-CT, actina)].
[Tabla 1]
<Ejemplo experimental 11> Western blot
La mezcla de retina y coroides de ratón se disolvió en tampón Pro-PREP (iNtRON) que contenía cóctel inhibidor de proteasa y cóctel inhibidor de fosfatasa, y se extrajo la proteína.
La proteína extraída se cuantificó usando el kit de ensayo BCA (Pierce) y se mezcló con tampón de carga de gel SDS y se desnaturalizó hirviéndola a 100 °C, durante 5 minutos. Las proteínas se sometieron a electroforesis en geles SDS-PAGE y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa (Millipore), y luego para bloquear la unión de proteínas no específicas, las membranas se incubaron en leche desnatada al 5 % durante 1 hora y se trataron con VEGF, Flk-1, Flt- 1, angiopoyetina-2 y p-actina (Santa Cruz Biotechnology) como anticuerpo primario para realizar
inmunotransferencia general. Posteriormente, la proteína inmunorreactiva se detectó mediante el kit ECL (Advansta) y el sistema DOC de gel múltiple.
<Ejemplo experimental 12> Modelado de animales de experimentación y secado
Los ratones NOD.B10.H2b se adquirieron en Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, EE.UU.). Los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices aprobadas por the University of Inje (No.; 2014-029) y ARVO con respecto al uso de animales para la investigación ocular y visual. Los ratones NOD.B10.H2b de 12 a 16 semanas de edad se expusieron a un 40-50 % de humedad ambiental y ventilación usando un ventilador durante 18 horas al día como estrés seco y se inyectaron subcutáneamente con 0,5 mg/0,2 ml de bloqueador de los receptores muscarínicos. Además, se inyectó bromhidrato de escopolamina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) alternativamente en las caderas de las ratas cuatro veces al día durante 10 días a las 9 am, 12 pm, 3 pm y 6 pm. Los ratones tratados con el procedimiento anterior se sacrificaron 10 días después y no restringieron el comportamiento del animal ni la ingesta de alimentos y agua durante el período experimental.
Después de 10 días de estrés seco ocular, se detuvo la inyección de escopolamina y se cambió a un ambiente normal de humedad y temperatura y se eliminó el estrés seco, se disolvieron 10 mg/ml de Hyp-GQDGLAGPK y colágeno en solución salina normal para administrar 5 pl cada 5 veces al día durante 10 días, y se administraron solución salina normal y 0,1 % HA al globo ocular 5 veces al día durante 10 días. Se usaron tres ratones en cada uno de los seis grupos experimentales usando ambos ojos de los ratones y se repitieron todos los experimentos.
<Ejemplo experimental 13> Comprobación de la cantidad de lágrimas
La producción de lágrimas se midió mediante un procedimiento informado usando hilos de algodón impregnados con rojo fenol (Zone-Quick, Oasis, Glendora, CA) (Villareal AL, Farley W, Pflugfelder SC. Effect of topical ophthalmic epinastine and olopatadine on tear volume in mice. Eye Contact Lens. 2006; 32 (6): 272-276). La cantidad de lágrimas se midió con una pinza médica, y el hilo se colocó en el costado del canto durante 20 segundos, y el hilo enrojecido al mojarse con lágrimas se observó con un microscopio (SZX7; Olympus Corp, Tokyo, Japón) para expresar en milímetros. El líquido lagrimal medido en milímetros se comparó con una curva estándar expresada como un hilo de algodón que se empapó con la cantidad de lágrimas esperada de la solución básica de ratón (1500 ml de sal al 0,9 % y 5 ml de NaOH 5 n ) durante 20 segundos.
<Ejemplo experimental 14> Evaluación de la capacidad de flexión de la superficie corneal
En cuanto a la curvatura de la superficie corneal, se obtuvo una imagen reflejada del anillo blanco a partir de una iluminación de anillo de fibra óptica de un microscopio estereoscópico (SZX7; Olympus) después de anestesiar al animal. La suavidad de la córnea se evaluó clasificando la irregularidad de las células epiteliales de la córnea reflejadas en el anillo blanco de la imagen digital. La puntuación de gravedad de la irregularidad corneal se calculó dividiendo el anillo de reflexión en cuadrantes y clasificándolo en 5 grados según el grado de irregularidad. Ninguna irregularidad es de grado 0, la irregularidad de 1/4 (trimestre) es de grado 1; irregularidad de 2/4 (dos cuartos) es grado 2; irregularidad de 3/4 (tres cuartos) es grado 3; toda la irregularidad es de grado 4; y la irregularidad grave es de grado 5 y, de este modo, se confirmaron todos los anillos.
<Ejemplo 1> Análisis de proteínas y síntesis de péptidos
El análisis de proteínas de la matriz extracelular derivada de condrocitos animales se realizó en el grupo de Baek del Center of Biomedical Mass Spectrometry (Diatech Korea Co., Ltd., Seoul, Corea).
Se obtuvo una hidroxi prolina-GQDGLAGPK (Hyp-GQDGLAGPK SEQ ID NO: 1) mediante el análisis de proteína anterior, que corresponde a una porción de la secuencia de aminoácidos de la proteína de colágeno tipo II a1 y los péptidos se sintetizaron en BIOCELTRAN ( Chuncheon, Corea), como se muestra en la figura 1.
Se realizó HPLC para confirmar la pureza de la hidroxil prolina-GQDGLAGPK sintetizada y, como resultado, se confirmó que el péptido hidroxil prolina-GQDGLAGPK se sintetizó con una pureza del 99,3 % como se muestra en la figura 2.
Además, como resultado de confirmar el peso molecular del péptido hidroxil prolina-GQDGLAGPK mediante Ion-Masas, se confirmó que el peso molecular del péptido hidroxil prolina-GQDGLAGPK era 654,99 como se muestra en la figura 3.
<Ejemplo 2> Identificación de neovascularización corneal y cambio de opacificación por péptido
Después de 7 días de quemadura alcalina de la córnea, se realizó la evaluación clínica de la neovascularización y opacificación de la córnea.
Como resultado, se confirmó que la opacidad de la córnea se produjo inmediatamente después de la quemadura alcalina, como se muestra en la figura 4A y la neovascularización corneal y la opacidad aumentaron después de 7 días de quemadura alcalina.
Después de que se confirmaron la neovascularización y opacificación de la córnea, el tratamiento con solución salina normal o péptido Hyp-GQDGLAGPK durante 10 días (después de 17 días de quemadura alcalina) dio como resultado un aumento significativo en la puntuación de opacidad de la córnea del grupo de control a 3,0 como se muestra en la figura 4B y la figura 4C, y la puntuación de neovascularización fue de 2,8, lo que indica que la neovascularización se extendió más allá del margen pupilar hacia el centro corneal.
Por otro lado, como se muestra en la figura 4B, se confirmó que el efecto de reducción de la opacidad se mostró en el grupo experimental tratado con péptido.
A partir de los resultados anteriores, se confirmó que el péptido Hyp-GQDGLAGPK es eficaz para inhibir la opacificación corneal.
<Ejemplo 3> Confirmación del cambio del espesor de la córnea por péptido
Se analizó el espesor de la córnea de las secciones teñidas con H&E fotografiadas con un microscopio virtual (NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japón) usando el programa NDP view (Hamamatsu, EE.UU.).
Como resultado, se confirmó que el espesor de la córnea aumentó desde el intervalo normal de 526,6 pm a 960,6 pm después de la quemadura alcalina, como se muestra en la figura 5B.
Sin embargo, después de 10 días de tratamiento con péptido Hyp-GQDGLAGPK, se confirmó que el espesor de la córnea se redujo a 550,0 pm (p <0,05) en el grupo experimental tratado con péptido que en el grupo de quemaduras alcalinas.
<Ejemplo 4> Identificación del efecto de inhibición de la fibrosis corneal de péptidos
Se realizó la tinción con tricrómico de Masson para confirmar el efecto del péptido Hyp-GQDGLAGPK sobre la fibrosis corneal inducida por quemaduras alcalinas.
Como resultado, se confirmó que el grupo de control de quemadura alcalina aumentaba la formación de fibroblasto marrón en la parte del estroma por la quemadura alcalina, como se muestra en la figura 6, pero se confirmó que el aumento de fibroblastos se suprimió en el grupo experimental tratado con péptido Hyp-GQDGLAGPK.
A partir de los resultados anteriores, se confirmó que el péptido Hyp-GQDGLAGPK inhibe el aumento de fibroblastos y es eficaz para inhibir la fibrosis corneal.
<Ejemplo 5> Identificación del efecto de inhibición de la neovascularización corneal de péptidos
Se realizó tinción con H&E para confirmar los cambios histológicos de la córnea según la quemadura alcalina.
Como resultado, con referencia a la parte superior de la figura 7, se confirmó que la proliferación epitelial, la invasión de células inflamatorias, el edema convulsivo y la neovascularización fueron inducidas en la córnea por la quemadura alcalina.
Sin embargo, con respecto a los cambios histológicos anteriores, el grupo tratado con el péptido Hyp-GQDGLAGPK mostró un efecto de mejora avanzado y, como se muestra en la figura 5a , los resultados de la tinción H&E también mostraron que la neovascularización mejoró significativamente en los tejidos tratados con péptido.
A partir de los resultados anteriores, se confirmó que el péptido Hyp-GQDGLAGPK afecta la neovascularización y, de este modo, la córnea con quemadura alcalina se trató con péptidos Hyp-GQDGLAGPK y se realizó inmunotinción en las secciones de la córnea usando CD31, FGF y VEGF, que son marcadores específicos de neovascularización corneal.
Como resultado, se confirmó que los marcadores de neovascularización CD31, FGF y VEGF se expresaban fuertemente en células de matriz de fibroblastos de acuerdo con la quemadura alcalina, como se muestra en la figura 7.
Sin embargo, se observaron disminuciones significativas de CD31, FGF y VEGF en el epitelio, subepitelio y matriz en el grupo tratado con péptido.
A partir de los resultados anteriores, se confirmó que el péptido Hyp-GQDGLAGPK es eficaz para inhibir la neovascularización corneal.
<Ejemplo 6> Identificación de efectos antiinflamatorios de péptidos
Como resultado de la tinción H&E anterior, se confirmó que las células inflamatorias penetraron en la córnea por la quemadura alcalina. Por lo tanto, para confirmar el efecto de cada péptido sobre la expresión de marcadores inflamatorios, se realizó inmunotinción con marcadores inflamatorios específicos tales como macrófagos, TNFa, ICAM-1, IL-1 p, IL-6 y MMP-9 en la secciones corneales.
Como resultado, se confirmó que la quemadura alcalina aumentó la expresión de macrófagos en el epitelio, subepitelio y matriz proliferativa como se muestra en la figura 8, mientras que la expresión de macrófagos se inhibió eficazmente en el grupo experimental tratado con el péptido Hyp-GQDGLAGPK. Además, la expresión de citocinas inflamatorias, incluidas las moléculas de adhesión de TNFa, IL-1 p e IL-6 e ICAM-1, aumentó en el grupo de quemaduras alcalinas, pero la expresión de los factores inflamatorios disminuyó en el grupo experimental tratado con el péptido. Adicionalmente, la expresión de MMP-9 se observó fuertemente en la córnea del grupo de quemaduras alcalinas, mientras que la expresión de MMP-9 se inhibió en el grupo experimental tratado con péptido.
<Ejemplo 7> Confirmación del efecto de inhibición de la neovascularización de péptidos
Se realizó un ensayo de tubos usando células endoteliales vasculares humanas (HUVEC) para confirmar el efecto antiangiogénico de hidroxil prolina-GQDGLAGPK.
Como resultado, como se muestra en la figura 9, la formación de tubos del grupo tratado con VEGF aumentó aproximadamente al menos 1,5 veces que la del grupo no tratado con VEGF, mientras que los grupos experimentales tratados con colágeno, CPI y CPII mostraron una inhibición significativa de la angiogénesis. En particular, CPII inhibió la formación de tubos de una manera dependiente de la concentración y disminuyó casi en el mismo grado la angiogénesis del grupo no tratado con VEGF. También se confirmó que era un nivel similar del grupo tratado con Avastin, un remedio para la degeneración macular relacionada con la edad.
<Ejemplo 8> Confirmación del efecto de inhibición de la neovascularización coroidea de péptidos
Se irradió un globo ocular de ratón con láser de la misma manera que en el ejemplo experimental 7 y 14 días después de la irradiación con láser, se extrajo el globo ocular y se realizó la tinción H&E.
Como resultado, como se muestra en la figura 10, se confirmó que el tejido en el sitio de irradiación con láser colapsó y se formó una angiogénesis. Por otro lado, como se muestra en la figura 3, las lesiones de CNV se redujeron en el grupo experimental tratado con colágeno, CPI y CPII mediante inyección intraocular durante 5 días, respectivamente, que se trataron todos con 2 pg.
Para comparar el efecto de inhibición de la neovascularización coroidea de hidroxil prolina-GQDGLAGPK (CPII), que tiene la mejor eficacia antiangiogénica en el experimento de formación de tubos in vitro, con el grupo de control positivo Avastin, respectivamente 5 pg de CPII y Avastin se inyectaron intraocularmente durante 5 días consecutivos inmediatamente después de la irradiación con láser, se extrajeron los globos oculares 14 días después de la irradiación con láser y se tiñeron los vasos sanguíneos con FITC-dextrano, y se realizaron experimentos de montaje plano para medir el tamaño de la lesión de CNV.
Como resultado, como se muestra en la figura 11, el tamaño de la lesión del grupo tratado con CPII disminuyó significativamente más pequeño que el del grupo de control, y se confirmó que era similar al tamaño de la lesión del grupo de control positivo tratado con Avastin a la misma concentración.
<Ejemplo 9> Confirmación del efecto de inhibición del gen y la proteína de péptidos relacionados con la neovascularización
Después de 14 días de irradiación con láser en ratón, se extrajo el ARN de la retina y la coroides para analizar la expresión génica mediante RT-PCR en tiempo real.
Como resultado, como se muestra en la figura 12, la expresión de VEGF, que es un gen típico relacionado con la neovascularización, aumentó aproximadamente 55 veces en el grupo tratado con láser, pero disminuyó a un nivel similar al del grupo no tratado con láser en el grupo tratado con Avastin y grupo tratado con CPII.
Por otro lado, los genes ICAM y MCP-1 aumentaron aproximadamente 300 y 10 veces en el grupo tratado con láser, respectivamente, pero también disminuyeron significativamente en el grupo tratado con CPII.
Además, para evaluar el efecto de CPII sobre la expresión de los marcadores proteicos relacionados con la neovascularización, se extrajeron proteínas de la retina y la coroides después de 14 días de la irradiación con láser para realizar la inmunotransferencia de VEGF, VEGFR-1 (Flt -1), VEGR-2 (Fik-1) y angiopoyetina 2.
Como resultado, como se muestra en la figura 13, se confirmó que la expresión de angiopoyetina 2 y VEGFR-1, -2, que son los factores promotores de la angiogénesis, se incrementó significativamente con la irradiación láser. Especialmente, la expresión de VEFG, que se sabe que juega el papel más importante en la neovascularización, aumentó notablemente. Sin embargo, en el grupo experimental tratado con CPII, la expresión de las proteínas anteriores se redujo notablemente y fue casi similar a la de Avastin, un remedio para la degeneración macular relacionada con la edad.
<Ejemplo 10> Confirmación del efecto de generación de lágrimas
El grado de generación de lágrimas se midió mediante hilos de algodón impregnados con rojo fenol.
Como resultado, como se muestra en la figura 15, se confirmó que la cantidad de lágrimas de los ratones NOD.B10.H2b disminuyó a un nivel significativo, aproximadamente 85,5 % por el estrés seco, en comparación con el grupo normal (0,22 ± 0,01 gl) (grupo DS 10D, 0,03 ± 0,01 gl, p <0,05). Por otro lado, en el grupo tratado con Hyp-GQDGLAGPK (0,23 ± 0,02 gl) luego de eliminar el estrés seco, la cantidad de lágrimas se incrementó 7,9 veces (p <0,05) a los 10 días después del tratamiento y alrededor de 2,8 veces (P < 0,05) del grupo de control negativo tratado con solución salina normal (0,08 ± 0,01 gl) (P <0,05) y alrededor de 1,7 veces (p <0,05) del grupo de control positivo (0,13 ± 0,02 gl) tratado con colágeno, respectivamente.
Además, en comparación con CsA (ciclosporina A; 0,13 ± 0,02 gl), DQS (0,16 ± 0,02 gl) y HA (Hyaluni; 0,14 ± 0,01 gl) que son remedios para el ojo seco, la cantidad de lágrimas del grupo tratado con Hyp-GQDGLAGPK aumentaron 1,7 veces (p <0,05), 1,4 veces (p <0,05) y 1,6 veces (p <0,05), respectivamente.
A partir de los resultados anteriores, se confirmó que Hyp-GQDGLAGPK recuperó la cantidad de lágrimas disminuida a un nivel más alto que el remedio para el ojo seco disponible comercialmente.
<Ejemplo 11> Confirmación de la capacidad de flexión de la superficie corneal
Se cuantificó el grado de curvatura de la córnea en cada grupo de experimentos para confirmar la capacidad de flexión de la superficie de la córnea.
Como resultado, como se muestra en la figura 16, se confirmó que el grado de curvatura de la superficie corneal de un ratón expuesto al estrés seco durante 10 días fue aproximadamente 13 veces (4,33 ± 0,58 puntos; p <0,05) mayor que el de las córneas normales (0,33 ± 0,58 puntos). Por otro lado, la capacidad de flexión de la superficie corneal en el grupo tratado con Hyp-GQDGLAGPK (2,0 ± 0 puntos) se redujo significativamente en un 53,8 % (p <0,05) el día 10 después de la eliminación del estrés seco, que se reduce en 40 % (p <0,05) del grupo de control negativo tratado con solución salina normal (3,33 ± 1,53 puntos) y 45,5 % (p <0,05) del grupo de control positivo tratado con colágeno (3,67 ± 1,16 puntos).
Además, en comparación con los grupos tratados con CsA, DQS y HA (3,33 ± 0,58 puntos; 3,0 ± 1,0 puntos; 3,0 ± 0 puntos) que son remedios para el ojo seco, se redujo el grado de curvatura de la superficie corneal en un 40 % (p <0,05), 33,3 % (p <0,05) y 33,3 % (p <0,05), respectivamente.
A partir de los resultados anteriores, se confirmó que Hyp-GQDGLAGPK es más eficaz para mejorar la curvatura de la superficie corneal que el remedio para el ojo seco.
<Ejemplo 12> Confirmación del efecto de inhibición del desprendimiento de células epiteliales corneales
Para confirmar el efecto de los péptidos sobre el desprendimiento de células epiteliales de la córnea, se tiñeron con H&E córneas de ratón de cada grupo experimental.
Como resultado, como se muestra en la figura 17, el desprendimiento de células epiteliales de la córnea aumentó 24 veces (2,29 ± 0,57/0,1 mm2, p <0,05) por estrés seco. Por otro lado, el desprendimiento de células epiteliales corneales se redujo en un 83,3 % (p <0,05) en el grupo tratado con Hyp-GQDGLAGPK (0,38 ± 0,17/0,1 mm2) después de la eliminación del estrés seco. Además, el desprendimiento de células epiteliales corneales se redujo en un 71,4 % (p <0,05) del grupo de control negativo tratado con solución salina normal (1,33 ± 0,17/0,1 mm2) y un 55,6 % (p <0,05) del grupo de control positivo tratado con colágeno (0,86 ± 0,29/0,1 mm2).
Además, en comparación con los grupos tratados con CsA, DQS y HA que son remedios para el ojo seco (1,52 ± 0,33/0,1 mm2; 0,095 ± 0,17/0,1 mm2; 1,71 60/0,1 mm2), se redujo en 75 % (p <0,05), 60 % (p <0,05) y 77,8 % (p <0,05), respectivamente.
A partir de los resultados anteriores, se confirmó que Hyp-GQDGLAGPK es más eficaz para reducir el desprendimiento de células epiteliales de la córnea que el remedio para el ojo seco.
<Ejemplo 13> Confirmación del efecto sobre la distribución de células caliciformes conjuntivales
Se observó la distribución de las células caliciformes conjuntivales según el colirio en ratones con ojo seco.
Como resultado, como se muestra en la figura 18, la célula caliciforme se redujo en un 58,2 % (6,02 ± 0,29/0,1 mm2, p <0,05) en comparación con la conjuntiva normal (14,38 ± 0,44/0,1 mm2) por estrés seco. Por otro lado, la célula caliciforme se recuperó 2,3 veces (p <0,05) en el grupo tratado con Hyp-GQDGLAGPK (13,9 ± 0,83/0,1 mm2) después de la eliminación del estrés seco, que se incrementa 2,6 veces (p <0,05) del grupo de control negativo tratado con solución salina normal (5,43 ± 0,29/0,1 mm2) y 1,3 veces (p <0,05) del grupo de control positivo (11,05 ± 0,33/0,1 mm2) tratado con colágeno, respectivamente.
Además, en comparación con los grupos tratados con CsA, DQS y HA que son remedios para el ojo seco (11,14 ± 0,76/0,1 mm2; 8,86 ± 0,29/0,1 mm2; 8,67 ± 0,17/0,1 mm2), se recuperó 1,2 veces (p <0,05), 1,5 veces (p <0,05) y 1.6 veces (p <0,05), respectivamente.
Claims (16)
1. Un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1.
2. El péptido de la reivindicación 1, en el que un primer aminoácido es hidroxi prolina (Hyp).
3. El péptido de la reivindicación 1, en el que el péptido se deriva del colágeno tipo II a1.
4. El péptido de la reivindicación 3, en el que el colágeno tipo II a1 se aísla de una matriz extracelular derivada de condrocitos de animales.
5. Una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad de la superficie ocular, que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
6. La composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad de la superficie ocular de la reivindicación 5, en la que la enfermedad de la superficie ocular es una cualquiera seleccionada del grupo que consiste en opacidad corneal, neovascularización corneal, inflamación corneal y fibrosis corneal.
7. La composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad de la superficie ocular de la reivindicación 5, en la que el péptido se deriva del colágeno tipo II a1 aislado de una matriz extracelular derivada de condrocitos (CDEM).
8. La composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad de la superficie ocular de la reivindicación 5, en la que el péptido está contenido en una cantidad de 0,1 a 50 partes en peso en base a 100 partes en peso de la cantidad total de la composición farmacéutica.
9. La composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad de la superficie ocular de la reivindicación 5, en la que la composición farmacéutica es una formulación cualquiera seleccionada del grupo que consiste en colirios, inyecciones, gránulos, comprimidos, píldoras, cápsulas, geles, jarabes, suspensiones, emulsiones, gotas y líquidos.
10. Un alimento saludable para prevenir o mejorar una enfermedad de la superficie ocular que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
11. Una composición farmacéutica para prevenir o tratar el ojo seco que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
12. La composición farmacéutica para prevenir o tratar el ojo seco de la reivindicación 11, en la que el péptido se deriva del colágeno tipo II a1.
13. La composición farmacéutica para prevenir o tratar el ojo seco de la reivindicación 11, en la que el péptido recupera la disminución de la producción de lágrimas y el desequilibrio de la superficie corneal debido al estrés seco e inhibe la descamación de las células epiteliales corneales y la producción de factores inflamatorios.
14. La composición farmacéutica para prevenir o tratar el ojo seco de la reivindicación 11, en la que el péptido está contenido en una cantidad de 0,1 a 50 partes en peso en base a 100 partes en peso de la cantidad total de la composición farmacéutica.
15. La composición farmacéutica para prevenir o tratar el ojo seco de la reivindicación 11, en la que la composición farmacéutica es una formulación cualquiera seleccionada del grupo que consiste en colirios, inyecciones, gránulos, comprimidos, píldoras, cápsulas, geles, jarabes, suspensiones, emulsiones, gotas y líquidos.
16. Un alimento saludable para prevenir o mejorar el ojo seco que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, como ingrediente activo.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020160043298A KR101794713B1 (ko) | 2016-04-08 | 2016-04-08 | 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물 |
| KR1020160043305A KR101810163B1 (ko) | 2016-04-08 | 2016-04-08 | 안구 표면질환 예방 또는 치료용 약학조성물 |
| KR1020160043300A KR101810158B1 (ko) | 2016-04-08 | 2016-04-08 | 연골세포 세포외기질 유래 펩타이드 |
| KR1020160043296A KR101798183B1 (ko) | 2016-04-08 | 2016-04-08 | 건성안 예방 또는 치료용 약학조성물 |
| PCT/KR2017/001419 WO2017175963A1 (ko) | 2016-04-08 | 2017-02-09 | 연골세포 세포외기질 유래 펩타이드 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2819030T3 true ES2819030T3 (es) | 2021-04-14 |
Family
ID=60000731
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES19151372T Active ES2822289T3 (es) | 2016-04-08 | 2017-02-09 | Péptido a base de colágeno tipo II alfa-1 para su uso en el tratamiento de la degeneración macular |
| ES17779264T Active ES2819030T3 (es) | 2016-04-08 | 2017-02-09 | Péptido basado en colágeno tipo II alfa-1 útil para el tratamiento de una enfermedad de la superficie ocular |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES19151372T Active ES2822289T3 (es) | 2016-04-08 | 2017-02-09 | Péptido a base de colágeno tipo II alfa-1 para su uso en el tratamiento de la degeneración macular |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10709768B2 (es) |
| EP (2) | EP3539559B1 (es) |
| JP (2) | JP6770169B2 (es) |
| CN (2) | CN109310731B (es) |
| AU (2) | AU2017247626B2 (es) |
| ES (2) | ES2822289T3 (es) |
| WO (1) | WO2017175963A1 (es) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX2019013799A (es) * | 2017-05-17 | 2020-08-13 | Yuyu Pharma Inc | Peptido novedoso y composicion farmaceutica para tratar una enfermedad ocular que comprende el mismo como un ingrediente farmaceutico activo. |
| TW202031675A (zh) * | 2018-11-14 | 2020-09-01 | 南韓商柳柳製藥股份有限公司 | 治療眼睛疾病之肽及醫藥組合物 |
| US11613558B2 (en) | 2018-11-14 | 2023-03-28 | Yuyu Pharma, Inc. | Peptides and pharmaceutical compositions for treating eye diseases |
| US20240228538A1 (en) * | 2019-05-21 | 2024-07-11 | Eyebio Korea | Novel Peptide Compound Or Pharmaceutically Acceptable Salt Thereof |
| JP2023516677A (ja) * | 2020-03-05 | 2023-04-20 | ユーユー ファーマ，インコーポレーテッド | ペプチド及び医薬組成物による炎症性疾患の治療 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4041059A1 (de) * | 1990-12-20 | 1992-06-25 | Max Planck Gesellschaft | Arthritis-unterdrueckende peptide sowie diese enthaltende pharmazeutische zubereitungen |
| US6110689A (en) * | 1994-01-21 | 2000-08-29 | Osteometer A/S | Method of assaying collagen fragments in body fluids, a test kit and means for carrying out the method and use of the method to diagnose the presence of disorders associated with the metabolism of collagen |
| PL1660057T3 (pl) | 2003-08-27 | 2012-10-31 | Ophthotech Corp | Terapia łączona do leczenia zaburzeń związanych z neowaskularyzacją gałki ocznej |
| US7718366B2 (en) * | 2004-08-18 | 2010-05-18 | National Health Research Institutes | Methods and compositions relating to COL2A1 gene mutations and osteonecrosis |
| US20090304686A1 (en) * | 2006-03-08 | 2009-12-10 | Universotair Medisch Centrum Utrecht | Interfering in activation of an immune cell by influencing interaction of lair and collagen |
| CA2657948A1 (en) * | 2006-06-14 | 2007-12-21 | Cell-Matrix, Inc. | Denatured collagen peptides and uses thereof |
| US20090131303A1 (en) | 2007-11-16 | 2009-05-21 | Bor-Shyue Hong | Methods and compositions for treating dry eye |
| GB0818273D0 (en) * | 2008-10-06 | 2008-11-12 | Cambridge Entpr Ltd | Modulation of cellular activity and differentiation |
| KR101438744B1 (ko) * | 2012-08-02 | 2014-09-15 | 전남대학교산학협력단 | 아디포넥틴을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 또는 염증성 안구표면 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR101555296B1 (ko) * | 2013-12-10 | 2015-09-23 | 인제대학교 산학협력단 | 연골세포 유래 세포외 기질을 유효성분으로 함유하는 건성안 예방 또는 치료용 약학조성물 |
| KR101721059B1 (ko) | 2014-12-26 | 2017-03-30 | 주식회사 아이바이오코리아 | 안구 표면 질환 예방 또는 치료용 약학조성물 |
| KR101690539B1 (ko) * | 2015-07-30 | 2016-12-29 | 주식회사 아이바이오코리아 | 건성안 예방 또는 치료용 약학조성물 |
-
2017
- 2017-02-09 CN CN201780035505.3A patent/CN109310731B/zh active Active
- 2017-02-09 ES ES19151372T patent/ES2822289T3/es active Active
- 2017-02-09 WO PCT/KR2017/001419 patent/WO2017175963A1/ko active Application Filing
- 2017-02-09 JP JP2019503878A patent/JP6770169B2/ja active Active
- 2017-02-09 EP EP19151372.0A patent/EP3539559B1/en active Active
- 2017-02-09 US US16/091,998 patent/US10709768B2/en active Active
- 2017-02-09 EP EP17779264.5A patent/EP3441081B1/en active Active
- 2017-02-09 AU AU2017247626A patent/AU2017247626B2/en active Active
- 2017-02-09 ES ES17779264T patent/ES2819030T3/es active Active
- 2017-02-09 CN CN201910099020.1A patent/CN110025765B/zh active Active
-
2018
- 2018-11-02 US US16/178,618 patent/US10532084B2/en active Active
- 2018-11-12 JP JP2018212325A patent/JP6640311B2/ja active Active
-
2019
- 2019-01-07 AU AU2019200063A patent/AU2019200063B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109310731A (zh) | 2019-02-05 |
| JP6640311B2 (ja) | 2020-02-05 |
| ES2822289T3 (es) | 2021-04-30 |
| US20190111112A1 (en) | 2019-04-18 |
| EP3441081A1 (en) | 2019-02-13 |
| JP2019519597A (ja) | 2019-07-11 |
| JP6770169B2 (ja) | 2020-10-14 |
| US20190100572A1 (en) | 2019-04-04 |
| AU2019200063B2 (en) | 2019-10-31 |
| EP3441081A4 (en) | 2019-09-18 |
| US10532084B2 (en) | 2020-01-14 |
| US10709768B2 (en) | 2020-07-14 |
| CN110025765A (zh) | 2019-07-19 |
| EP3441081B1 (en) | 2020-07-15 |
| AU2017247626B2 (en) | 2019-08-29 |
| AU2019200063A1 (en) | 2019-01-24 |
| EP3539559B1 (en) | 2020-08-26 |
| CN109310731B (zh) | 2022-03-29 |
| CN110025765B (zh) | 2022-03-29 |
| AU2017247626A1 (en) | 2018-11-29 |
| JP2019065013A (ja) | 2019-04-25 |
| EP3539559A1 (en) | 2019-09-18 |
| WO2017175963A1 (ko) | 2017-10-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2819030T3 (es) | Péptido basado en colágeno tipo II alfa-1 útil para el tratamiento de una enfermedad de la superficie ocular | |
| US9695218B2 (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating ocular surface disease | |
| ES2952700T3 (es) | Composiciones oftálmicas y métodos de uso de las mismas | |
| ES2786630T3 (es) | Composición farmacéutica para prevenir o tratar los ojos secos | |
| KR20180074928A (ko) | 건성안 예방 또는 치료용 동물 의약품 조성물 | |
| KR20170115731A (ko) | 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물 | |
| ES2921360T3 (es) | Compuestos para el tratamiento de enfermedades oculares asociadas a una vascularización excesiva | |
| AU2019262664A1 (en) | PEDF-derived peptides for promoting meibomian gland regeneration and uses thereof | |
| KR101798183B1 (ko) | 건성안 예방 또는 치료용 약학조성물 | |
| KR101810163B1 (ko) | 안구 표면질환 예방 또는 치료용 약학조성물 | |
| KR102023827B1 (ko) | 안구 건조증 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 짧은 합성 펩티드의 용도 | |
| O'MALLEY et al. | Experimentally induced adverse effects of alpha-chymotrypsin | |
| AU2019463840B2 (en) | Short synthetic peptide and their uses for treating retinal degenerative diseases and/or tissue injuries | |
| KR101818151B1 (ko) | 트렌스페린을 포함하는 허혈성망막병증 예방 및 치료용 조성물 |