ES2817925T3 - Vacuna de ADN que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 - Google Patents
Vacuna de ADN que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 Download PDFInfo
- Publication number
- ES2817925T3 ES2817925T3 ES13832772T ES13832772T ES2817925T3 ES 2817925 T3 ES2817925 T3 ES 2817925T3 ES 13832772 T ES13832772 T ES 13832772T ES 13832772 T ES13832772 T ES 13832772T ES 2817925 T3 ES2817925 T3 ES 2817925T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- amino acid
- cancer
- expression vector
- acid sequence
- vegf
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 title claims abstract description 80
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 title claims abstract description 79
- 102000009075 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 title claims abstract description 54
- 108010048036 Angiopoietin-2 Proteins 0.000 title claims abstract description 54
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 title description 7
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 title description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 114
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 91
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 76
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 76
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 75
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 68
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims abstract description 56
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims abstract description 52
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims abstract description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 19
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 7
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 7
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 7
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 31
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 description 28
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 22
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 18
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 17
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 15
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 15
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 14
- 239000007771 core particle Substances 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 12
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 11
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 10
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 7
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 6
- 101000808007 Mus musculus Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 5
- -1 and the like Substances 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N (2s)-2,5-bis(3-aminopropylamino)-n-[2-(dioctadecylamino)acetyl]pentanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CC(=O)NC(=O)[C@H](CCCNCCCN)NCCCN)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000009840 Angiopoietins Human genes 0.000 description 3
- 108010009906 Angiopoietins Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 3
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 3
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016549 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Human genes 0.000 description 3
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 3
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 3
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 3
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- BJHCYTJNPVGSBZ-YXSASFKJSA-N 1-[4-[6-amino-5-[(Z)-methoxyiminomethyl]pyrimidin-4-yl]oxy-2-chlorophenyl]-3-ethylurea Chemical compound CCNC(=O)Nc1ccc(Oc2ncnc(N)c2\C=N/OC)cc1Cl BJHCYTJNPVGSBZ-YXSASFKJSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000924533 Homo sapiens Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 230000006444 vascular growth Effects 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- GHKMRHRXQRFQCY-UHFFFAOYSA-N 2,2-dihydroxyethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].[NH3+]CC(O)O GHKMRHRXQRFQCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000947840 Alteromonadales Species 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- ANGFUJYIVFZKJQ-UHFFFAOYSA-N CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](CC)([O-])O Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](CC)([O-])O ANGFUJYIVFZKJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000909256 Caldicellulosiruptor bescii (strain ATCC BAA-1888 / DSM 6725 / Z-1320) DNA polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710177611 DNA polymerase II large subunit Proteins 0.000 description 1
- 101710184669 DNA polymerase II small subunit Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 101150021185 FGF gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000004378 Glycyrrhizin Substances 0.000 description 1
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000283953 Lagomorpha Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 101100202339 Mus musculus Slc6a13 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 101000902592 Pyrococcus furiosus (strain ATCC 43587 / DSM 3638 / JCM 8422 / Vc1) DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101100202330 Rattus norvegicus Slc6a11 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102000008235 Toll-Like Receptor 9 Human genes 0.000 description 1
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H calcium citrate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000001354 calcium citrate Substances 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Chemical group 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 description 1
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000047825 human ANGPT2 Human genes 0.000 description 1
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 1
- 239000001341 hydroxy propyl starch Substances 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000013828 hydroxypropyl starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229940115272 polyinosinic:polycytidylic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108010056030 retronectin Proteins 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003885 sodium benzoate Drugs 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940001607 sodium bisulfite Drugs 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 1
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 1
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 235000013337 tricalcium citrate Nutrition 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00113—Growth factors
- A61K39/001135—Vascular endothelial growth factor [VEGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2730/10143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Un vector de expresión que codifica un polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico con una inserción para uso en el tratamiento o la profilaxis del cáncer, en donde la inserción es una secuencia de aminoácidos de hasta 80 aminoácidos de longitud que comprende un epítopo específico de VEGF o de angiopoyetina-2, en donde la secuencia de aminoácidos que comprende el epítopo específico está insertada entre los restos de aminoácidos 80 y 81 del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B, en donde el epítopo específico de VEGF consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 32 o 33, o una secuencia parcial de la misma que tiene 13 o más aminoácidos que contiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 31, y en donde el epítopo específico de angiopoyetina-2 consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3.
Description
DESCRIPCIÓN
Vacuna de ADN que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 Campo Técnico
La presente invención se refiere a una vacuna de ADN eficaz para el tratamiento o la profilaxis del cáncer.
Antecedentes de la Técnica
Para que un tumor crezca, es necesario aumentar la cantidad de vasos sanguíneos que transportan nutrientes y oxígeno al tumor en función del crecimiento del tumor. Se considera que las células tumorales inducen la angiogénesis de los vasos sanguíneos del tumor secretando ellos mismos factores de crecimiento vascular que estimulan el crecimiento de las células endoteliales vasculares en los vasos sanguíneos vecinos. Por lo tanto, se han realizado intentos para tratar o prevenir tumores inhibiendo la función de factores de crecimiento vascular y suprimiendo la angiogénesis tumoral. Como uno de los métodos de este tipo ha atraído la atención la terapia con vacuna que fija como objetivo factores relacionados con la angiogénesis tumoral. En la terapia con vacunas, el cáncer se trata o previene administrando un factor relacionado con la angiogénesis tumoral, un epítopo contenido en el factor o un vector de expresión que los codifica a pacientes con cáncer o dianas con riesgo de desarrollar un cáncer para inducir un anticuerpo contra el factor relacionado con la angiogénesis tumoral en el cuerpo de los pacientes, neutralizando con ello la función del factor y suprimiendo la angiogénesis tumoral. Como factor relacionado con la angiogénesis tumoral se conocen diversos factores, tales como VEGF, angiopoyetina, FGF, PDGF, y similares.
Por ejemplo, el documento de patente 1 describe un método de inhibir la proliferación de células endoteliales vasculares en el microentorno de un tumor, previniendo la angiogénesis e inhibiendo el crecimiento y la metástasis del tumor, al administrar una vacuna de ADN que codifica el receptor-1 de VEGF, el receptor-2 de VEGF o Flk-1. El documento de patente 2 describe la supresión de enfermedades relacionadas con la angiogénesis, particularmente el desarrollo y la metástasis del cáncer, utilizando vacunas de VEGF heterólogas.
Sin embargo, se ha establecido generalmente la tolerancia inmunitaria a factores tales como el VEGF y similares, ya que estos factores son los componentes propios del paciente. Por lo tanto, incluso cuando estos factores o péptidos parciales de los mismos se administren directamente a pacientes, es difícil inducir eficazmente anticuerpos contra estos factores en el cuerpo de los pacientes. Por lo tanto, es necesaria alguna idea técnica para reconocer estos auto-antígenos en el sistema inmunológico del paciente, induciendo con ello la producción de los anticuerpos contra ellos.
La proteína del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B (HBc) constituye partículas del núcleo esféricas mediante el auto-ensamblaje. Las partículas del núcleo tienen una inmunogenicidad muy alta. Cuando se utiliza un polipéptido de fusión, obtenido mediante inserción de un epítopo deseado en un sitio particular de la proteína del antígeno del HBc o conectando un epítopo deseado al extremo de la proteína del antígeno de1HBc, el epítopo se presenta en la superficie de las partículas formadas por auto-ensamblaje. Utilizando el polipéptido de fusión, el epítopo insertado es reconocido fácilmente por el sistema inmunológico y la producción de los anticuerpos que reconocen el epítopo puede inducirse de manera eficiente. Por lo tanto, utilizando la proteína del antígeno de1HBc como una plataforma de la vacuna, se han realizado intentos para inducir la producción del anticuerpo, incluso a pesar de ser difícil de que un antígeno sea reconocido por el sistema inmunológico (documento no patente 1 y documento no patente 2).
El documento de patente 3 describe partículas compuestas por una proteína del antígeno de1HBc quimérico que contiene una secuencia de aminoácidos exógena que tiene un epítopo, en donde la secuencia de aminoácidos exógena está insertada entre los restos de aminoácidos 80-81 del antígeno de1HBc. El documento de patente 4 describe una vacuna contra el cáncer, que comprende la proteína del antígeno de1HBc unida de forma no covalente a un plásmido que porta un VEGF mutado.
Sin embargo, la eficacia de las vacunas contra el factor relacionado con la angiogénesis tumoral no es lo suficientemente satisfactoria.
[Lista de Documentos]
[documentos de patente]
documento de patente 1: JP-A-2005-519092
documento de patente 2: Publicación de patente china N° 1406629
documento de patente 3: JP-B-3228737
documento de patente 4: WO 2003/086450
[documentos no patente]
documento no patente 1: D. C. Whitacre et al., Expert Rev.Vaccines, vol. 8, n° 11, págs. 1565-1573, 2009 documento no patente 2: B. E. Clarke et al., Nature, vol. 330, págs. 381-384, 1987
Sumario de la invención
Problemas a resolver por la invención
Tal como se describe en el documento de patente 1, cuando el receptor de VEGF se utiliza como un antígeno de vacuna, dado que la diana a ser atacada por la vacuna es una célula endotelial vascular o una parte de las células cancerosas que expresan el receptor de VEGF, se exhibe un efecto antitumoral al suprimir la angiogénesis en el tumor potenciando la inmunidad citotóxica. Sin embargo, dado que el receptor de VEGF es expresado no solo en células endoteliales neovasculares del tejido tumoral, sino también en células endoteliales vasculares normales, cuando se utiliza el receptor de VEGF como un antígeno de vacuna, se puede ejercer una influencia adversa sobre la función normal de los vasos sanguíneos.
Por consiguiente, la presente invención pretende proporcionar una vacuna superior para el tratamiento o la profilaxis del cáncer, que fija como objetivo un factor relacionado con la angiogénesis tumoral y tiene un riesgo reducido de una influencia adversa sobre la función normal de los vasos sanguíneos.
Medios para Resolver los Problemas
Los autores de la presente invención han realizado intensos estudios y han encontrado que la administración de un vector de expresión del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico, obtenido al insertar un epítopo específico de factores humorales, tales como VEGF o angiopoyetina-2, entre los restos de aminoácidos 80 y 81 del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B, induce predominantemente inmunidad humoral a los factores humorales y permite el tratamiento o la profilaxis del cáncer al suprimir eficazmente la angiogénesis tumoral, al tiempo que evita una influencia adversa sobre la función normal de los vasos sanguíneos debido a la inmunidad mediada por células. Basados en estos hallazgos, realizaron más estudios y completaron la presente invención.
Es decir, la presente invención se refiere a lo siguiente.
[1] Un vector de expresión que codifica un polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico con una inserción para uso en el tratamiento o la profilaxis del cáncer, en donde la inserción es una secuencia de aminoácidos de hasta 80 aminoácidos de longitud que comprende un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2, en donde la secuencia de aminoácidos que comprende el epítopo específico está insertada entre los restos de aminoácidos 80 y 81 del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B, en donde el epítopo específico de VEGF consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 32 o 33, o una secuencia parcial de la misma que tiene 13 o más aminoácidos que contiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 31, y en donde el epítopo específico de angiopoyetina-2 consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3.
[2] El vector de expresión para uso de acuerdo con [1], en donde el cáncer es un cáncer sólido.
[3] El vector de expresión para uso de acuerdo con [1] o [2], en donde el tumor sólido es de cualquier tipo seleccionado del grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, cáncer de útero y cáncer de próstata.
[4] El vector de expresión para uso de acuerdo con uno cualquiera de [1] a [3], en donde la inserción es una secuencia de aminoácidos que comprende el epítopo específico de VEGF definido en [1].
[5] El vector de expresión para uso de acuerdo con uno cualquiera de [1] a [3], en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 o 2.
[6] El vector de expresión para uso de acuerdo con uno cualquiera de [1] a [3], en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3.
[7] El vector de expresión para uso de acuerdo con uno cualquiera de [1] - [6], en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende, además, uno o más epítopos específicos.
[8] El vector de expresión para uso de acuerdo con uno cualquiera de [1] - [7], en donde el vector de expresión se administra varias veces.
[9] El vector de expresión para uso de acuerdo con [8], en donde el vector de expresión se administra 2, 3 o 4 veces.
[10] El vector de expresión para uso de acuerdo con [9], en donde el vector de expresión se administra 3 veces.
[11] El vector de expresión para uso de acuerdo con uno cualquiera de [1] - [10], en donde el vector de expresión se administra 3 veces a intervalos de medio año.
[12] Un vector de expresión para uso de acuerdo con [1], en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende SEQ ID NO: 1 o 2, y el cáncer es cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, cáncer de útero o cáncer de próstata.
[13] Un vector de expresión para uso de acuerdo con [1], en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende SEQ ID NO: 3, y el cáncer es cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, cáncer de útero o cáncer de próstata.
[14] El vector de expresión para uso de acuerdo con [12] o [13], en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende uno o más epítopos específicos.
Efecto de la invención
La presente invención proporciona una vacuna superior para el tratamiento o la profilaxis del cáncer, que fija como objetivo un factor relacionado con la angiogénesis tumoral y tiene un riesgo reducido de una influencia adversa sobre la función normal de los vasos sanguíneos.
Dado que la vacuna de la presente invención induce predominantemente inmunidad humoral contra factores humorales tales como VEGF y angiopoyetina-2, en lugar de la inmunidad mediada por células, se puede reducir el riesgo de una influencia adversa de la inmunidad mediada por células sobre la función normal de los vasos sanguíneos.
Además, dado que el VEGF y la angiopoyetina-2 son proteínas secretadas, la inflamación del tejido no se desarrolla fácilmente, ya que un anticuerpo inducido por la vacunación se une principalmente a las proteínas secretadas en la sangre.
Breve Descripción de los Dibujos
La Fig. 1 muestra el efecto de la vacunación sobre el crecimiento de tejidos tumorales. El eje vertical muestra el volumen de tejidos tumorales y el eje horizontal muestra los días después de la inyección del tumor.
La Fig. 2 muestra el efecto de la vacunación sobre la tasa de supervivencia de ratones a los que se inyectó tumor. El eje vertical muestra la tasa de supervivencia y el eje horizontal muestra el número de días después de la inyección del tumor.
La Fig. 3 muestra restos de estructura en la interfaz VEGF-bevacizumab. Rojo: resto en la superficie de unión con bevacizumab. Amarillo: restos de Rojo de especial importancia. Azul: restos en la superficie de unión con VEGFR-1. Verde: restos en la superficie de unión con VEGFR-2. Cada uno de los restos está representado por códigos de una sola letra.
La Fig. 4 muestra la evolución en el tiempo de la vacunación con ADN. La vacunación se llevó a cabo inicialmente utilizando ratones de 6 semanas de edad (0w), y vacunaciones posteriores se administraron 2, 4 y 8 semanas después de la primera vacunación.
La Fig. 5 muestra títulos de anticuerpos anti-VEGF a las 16 semanas. Se cuantificaron títulos de IgG totales para VEGF en sueros de ratones (dilución de 100) inmunizados con HBc-mVEGF (7 a.a.), HBc-mVEGF (13 a.a.), HBc-mVEGF (17 a.a.) o HBc, respectivamente. Los datos se muestran como media ± EMT.
La Fig. 6 muestra la construcción de ADN plasmídico de la vacuna. (a) Mapas de plásmidos de pcDNA3.1-HBc (vector de control) y pcDNA3.1-HBc-mVEGF (13 a.a.) (vector de vacunación). HBc indica la secuencia completa de HBc, HBc-N indica el extremo N de HBc (1-80 a.a.) y HBc-C indica el extremo C de HBc (81-183 a.a.). mVEGF 13 a.a. indica el antígeno para la proteína VEGF de ratón. (b) Información detallada en relación con el diseño del plásmido de la vacuna de VEGF. Los trece aminoácidos (IMRIKPHQSQHIGE) (SEQ ID NO: 1), que sirvieron como un antígeno para VEGF y los enlazadores (enlazadores dipeptídicos I-T N-terminales y tripéptido GAT C-terminal), se diseñaron condensados en marco a VEGF para permitir la flexibilidad en la conformación del epítopo de VEGF cuando la superficie se expone a la partícula de HBc. El VEGF de 13 a.a. y los enlazadores están representados por códigos de una sola letra.
La Fig. 7 muestra títulos de anticuerpos anti-VEGF a las 8 semanas. Títulos de IgG totales para VEGF se incrementaron solo en sueros de ratones (dilución de 100) del grupo HBc-mVEGF (13 a.a) (panel izquierdo). La distribución de subtipos de IgG (IgG1, IgG2a e IgG2b) se evaluó también utilizando anticuerpos IgG específicos de los subtipos en sueros de ratones (dilución de 100) del grupo HBc-VEGF (13 a.a.) (panel derecho). Los datos eran media ± EMT. *p < 0,05 frente al control (HBc y solución salina).
La Fig. 8 muestra la unión específica de suero inmunizado a VEGF. El suero inmunizado utilizado como anticuerpo primario en la transferencia Western se unió no solo al mVEGF (13 a.a.) conjugado con BSA, sino también al VEGF de ratón recombinante (rmVEGF). Las muestras de carga eran las siguientes. Pista 1: VEGF-A de ratón recombinante. Pista 2: mVEGF (13 a.a.) conjugado con BSA. Pista 3: péptido de angiopoyetina-2 humana conjugado con BSA como proteína negativa. Se utilizó VG-1, anticuerpo disponible comercialmente contra VEGF, como anticuerpo positivo.
La Fig. 9 muestra el análisis de la transferencia Western de lisados celulares de HUVECs estimulados con mVEGF a razón de 5 ng/mL durante 10 min en presencia de suero inmunizado o de control para p-ERK y ERK total.
La Fig. 10 muestra efectos de suero inmunizado sobre la formación de tubos de HUVECs inducida por VEGF. Placas revestidas con matrigel se sembraron con HUVECs a una densidad de 1x105 células/pocillo y se incubaron en presencia de suero de control o suero inmunizado. Después de 7 horas, se fotografió y cuantificó la red capilar. Se muestran tubos endoteliales representativos. Aumento: 50X.
Los datos se muestran como medias ± EMT por triplicado.
Descripción de Realizaciones
La presente invención proporciona un vector de expresión que codifica un polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico con una inserción para uso en el tratamiento o la profilaxis del cáncer, en donde la inserción es una secuencia de aminoácidos de hasta 80 aminoácidos de longitud que comprende un epítopo específico de VEGF o angiopoyetina-2, en donde la secuencia de aminoácidos que comprende el epítopo específico está insertada entre los restos de aminoácidos 80 y 81 del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B, en donde el epítopo específico de VEGF consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 32 o 33, o una secuencia parcial de la misma que tiene 13 o más aminoácidos que contienen la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 31, y en donde el epítopo específico de angiopoyetina-2 consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 .El vector de expresión es un agente terapéutico o profiláctico para el cáncer.
Cuando se administra un vector de expresión que codifica un polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico insertado con una secuencia de aminoácidos que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2, se induce una respuesta inmune (preferiblemente una respuesta inmune humoral tal como la producción de anticuerpos y similares) contra el epítopo específico de VEGF y/o el epítopo específico de angiopoyetina-2 en el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico, y se neutraliza la actividad de VEGF y/o de angiopoyetina-2 con el anticuerpo, con lo cual se puede suprimir la angiogénesis alrededor de los tejidos cancerosos y se puede inhibir el crecimiento del tejido canceroso. Por consiguiente, el cáncer a ser el objetivo del agente terapéutico o profiláctico de la presente invención es preferiblemente un tumor sólido. Ejemplos de cánceres sólidos incluyen, pero no se limitan a cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, cáncer de útero, cáncer de próstata y similares.
Aunque el cáncer a ser el objetivo del agente terapéutico o profiláctico de la presente invención no está limitado, es preferiblemente un cáncer que expresa VEGF y/o angiopoyetina-2. La presencia o ausencia de expresión de VEGF y/o angiopoyetina-2 en el cáncer se puede confirmar mediante métodos inmunológicos (tinción inmunohistoquímica, transferencia Western, etc.) utilizando un anticuerpo específico contra VEGF y/o un anticuerpo específico contra angiopoyetina-2.
Aunque en la presente invención se pretende el uso de VEGF y angiopoyetina-2 derivados de un mamífero del objetivo de aplicación del agente terapéutico o profiláctico de la presente invención, no se limita al mismo. El objetivo de aplicación del agente terapéutico o profiláctico de la presente invención es un mamífero. Ejemplos de mamíferos incluyen roedores, tales como ratones, ratas, hámsteres, cobayas y similares, lagomorfos, tales como conejos y similares, ungulados, tales como cerdos, ganado bovino, cabras, caballos, ovejas y similares, carnívoros, tales como perros, gatos y similares, primates, tales como seres humanos, monos, Macaca mulatta, Macaca fascicularis, titíes, orangutanes, chimpancés y similares, y similares. El mamífero es preferiblemente un roedor (ratón, etc.) o un primate (ser humano, etc.). Por lo tanto, por ejemplo, cuando se aplica el agente terapéutico o profiláctico de la presente invención a seres humanos, se pretende el uso de VEGF y angiopoyetina-2 derivados de los seres humanos, pero no se limita a los mismos. También, el agente terapéutico o profiláctico de la presente invención se aplica a ratones, se pretende el uso de VEGF y angiopoyetina-2 derivados de ratón, pero no se limita a los mismos. En la presente memoria descriptiva, para un factor X particular (polipéptido o polinucleótido), "factor X derivado del organismo Y" o "factor X del organismo Y" significa que la secuencia de aminoácidos o secuencia de ácido nucleico tiene la misma o sustancialmente la misma secuencia de aminoácidos o secuencia de ácido nucleico que la secuencia de aminoácidos o secuencia de ácido nucleico del factor X expresada de forma natural en el organismo Y. "Sustancialmente igual" significa que la secuencia de aminoácidos o secuencia de ácido nucleico de interés no tiene menos de 70% (preferiblemente no menos de 80%, más preferiblemente no menos de 90%, aún más
preferiblemente no menos de 95%, lo más preferiblemente no menos de 99%) de identidad con la secuencia de aminoácidos o secuencia de ácido nucleico del factor X expresada de forma natural en el organismo Y, y se mantiene la función del factor X.
El VEGF y la angiopoyetina-2 son factores angiogénicos conocidos, y también se conocen sus secuencias de aminoácidos y secuencias de ADNc. El VEGF contiene 7 subtipos, incluyendo A, B, C, D, E, PLGF-1 y PLGF-2. Secuencias de aminoácidos representativas incluyen las siguientes y similares.
Tabla 1
Secuencias de aminoácidos representativas de angiopoyetina-2 son las siguientes.
Tabla 2
En la presente memoria descriptiva, "epítopo" se refiere a un elemento básico o unidad mínima de reconocimiento para cada uno de los anticuerpos o receptores de células T, que es un dominio, región o estructura molecular particular al que se une el anticuerpo o receptor de células T antes mencionado.
Un epítopo de VEGF y un epítopo de angiopoyetina-2 a utilizar en la presente invención son específicos para dichos VEGF y angiopoyetina-2. El ser "específico" significa que los productos génicos (excluyendo las regiones variables de la inmunoglobulina y el receptor de células T) distintos del VEGF y la angiopoyetina-2 que se expresan de forma natural en un mamífero del que se deriva el VEGF y la angiopoyetina-2, no contienen dicho epítopo.
El epítopo específico de VEGF en el vector de expresión de la invención consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 32 o 33, o una secuencia parcial de la misma que tiene 13 o más aminoácidos que contienen la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 31, y el epítopo específico de angiopoyetina-2 en el vector de expresión de la presente invención consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3.
Cuando la secuencia de aminoácidos es demasiado corta, se puede perder la antigenicidad del epítopo. Cuando la secuencia de aminoácidos es demasiado larga, el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico no forma fácilmente partículas del núcleo debido al auto-ensamblaje, como resultado de lo cual se puede no producir un anticuerpo que reconozca específicamente el epítopo, y no se puede obtener un tratamiento superior o efecto de mejora del cáncer.
Ejemplos específicos de epítopos preferibles de VEGF y angiopoyetina-2 incluyen los siguientes.
(VEGF)
(i) IMRIKPHQSQHIG (SEQ ID NO: 1)
(ii) IMRIKPHQGQHIG (SEQ ID NO: 2)
El epítopo de angiopoyetina-2) en el vector de expresión de la invención es el siguiente.
(angiopoyetina-2)
(iii) PQRQNTNKFNGIKWYY (SEQ ID NO: 3)
Un ejemplo de otro epítopo de angiopoyetina-2 es el siguiente.
(iv) YYPQRQNTNKE (SEQ ID NO: 4)
En un aspecto adicional, ejemplos específicos preferibles de VEGF incluyen los siguientes
(v) MRIKPHQ (SEQ ID NO: 31)
(vi) MQIMRIKPHQSQHIGEM (SEQ ID NO: 32)
(vii) MQIMRIKPHQGQHIGEM (SEQ ID NO: 33)
(viii) un epítopo que consiste en una secuencia parcial de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 32, que contiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 o 31
(ix) un epítopo que consiste en una secuencia parcial de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 33, que contiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2 o 31
Las SEQ ID NO: 1, 31 y 32 son secuencias de aminoácidos parciales de VEGF-A de ratón. Las SEQ ID NO: 2, 31 y 34 son secuencias de aminoácidos parciales de VEGF-A humano. Las SEQ ID NO: 3 y 4 son secuencias de aminoácidos parciales de la angiopoyetina-2 humana.
En los (viii) y (ix) arriba mencionados, la longitud de la secuencia parcial es de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 aminoácidos.
El polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B utilizado en la presente invención es
(1) un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 6, o
(2) un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácidos que no tiene menos de 90% (preferiblemente no menos de 95%, más preferiblemente no menos de 97%, aún más preferiblemente no menos de 99%) de identidad con la secuencia de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 6 y que tiene actividad para formar partículas del núcleo por auto-ensamblaje.
Auto-ensamblaje se refiere a un fenómeno en el que moléculas disueltas en una solución se asocian para formar un conjunto. Partícula del núcleo se refiere a una estructura rígida que tiene una constitución repetitiva específica. En la presente memoria descriptiva, la partícula del núcleo puede ser un producto de etapas de síntesis o un producto de etapas biológicas.
Como polipéptido de la realización de (2), se puede mencionar un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 7 descrita en el documento WO2003/031466. También es preferible como el polipéptido de la realización de (2) un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 7, excepto que se han eliminado uno o más restos cisteína de las posiciones 48, 61, 107 y 185 o han sido sustituidas por otros restos de aminoácidos (p. ej., resto serina). Como reconocerán los expertos ordinarios en la técnica, en un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos diferente a la de SEQ ID NO: 7, restos cisteína en posiciones similares también se pueden eliminar o sustituir con otros restos de aminoácidos, y polipéptidos obtenidos por deleciones y sustituciones de este tipo también quedan abarcados en el polipéptido de la realización de (2).
El polipéptido de la realización de (2) abarca también un polipéptido variante, en el que el resto isoleucina en la posición correspondiente a la posición 97 de SEQ ID NO: 7 está sustituido con un resto leucina o un resto fenilalanina (Yuan et al., J. Virol. vol. 73, páginas 10122 - 10128 (1999)). Además, las secuencias de aminoácidos de muchas variantes de HBcAg y varios tipos de variantes de precursores del antígeno del núcleo de la hepatitis B, se han descrito en los informes de GenBank AAF121240, AF121239, X85297, X02496, X85305, X85303, AF151735, X85259, X85286, X85260, X85317, X85298, AF043593, M20706, X85295, X80925, X85284, X85275, X72702, X85291, X65258, X85302, M32138, X85293, X85315, U95551, X85256, X85316, X85296, AB033559, X59795, X8529, X85307, X65257, X85311, X85301, X85314, X85287, X85272, X65319, AB010289, X85285, AB010289, AF121242, M90520, P03153, AF110999 y M95589, y polipéptidos que contienen secuencias de aminoácidos de estas variantes quedan también abarcados en el polipéptido de la realización de (2). Las variantes arriba mencionadas tienen secuencias de aminoácidos diferentes en muchas posiciones, incluyendo restos de aminoácidos presentes en las posiciones 12, 13, 21, 22, 24, 29, 32, 33, 35, 38, 40, 42, 44, 45, 49, 51, 57, 58, 59, 64, 66, 67, 69, 74, 77, 80, 81, 87, 92, 93, 97, 98, 100, 103, 105, 106, 109, 113, 116, 121, 126, 130, 133, 135, 141, 147, 149, 157, 176, 178, 182 y 183 en SEQ ID NO:7.
Además, también quedan abarcados en el polipéptido de la realización de (2) polipéptidos que contienen las secuencias de aminoácidos de las variantes de HBcAg descritas en los documentos WO 01/98333, WO 01/77158 y WO 02/14478.
En la presente memoria descriptiva, a no ser que se indique particularmente, las posiciones de los restos de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B se
especifican con la secuencia de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 6 como patrón. Cuando un polipéptido no contiene la secuencia de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 6, la secuencia de aminoácidos del polipéptido se alinea con la secuencia de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 6, y se adopta la posición del resto de aminoácido correspondiente.
El polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B utilizado en la presente invención es preferiblemente un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 6.
En el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico a utilizar en la presente invención, una secuencia de aminoácidos que comprende un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 se Inserta entre los restos 80 y 81 del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B. Es decir, el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico a utilizar en la presente invención contiene los siguientes elementos (a) -(c):
(a) restos polipeptídicos parciales del extremo N del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B (que consiste en la secuencia de aminoácidos parcial continua del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B desde el extremo N al resto de aminoácido 80),
(b) una secuencia de aminoácidos que consiste en un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2, y
(c) restos polipeptídicos parciales del extremo C del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B (que consiste en la secuencia parcial continua de aminoácidos del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B desde el resto de aminoácido 81 al extremo C) en el orden de (a), (b), (c) desde el lado del extremo N.
El polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico a utilizar en la presente invención que tiene la constitución arriba mencionada forma partículas del núcleo debido al auto-ensamblaje, y un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 está presente en el exterior de las partículas. La secuencia de aminoácidos insertada entre el elemento constituyente (a) y el elemento constituyente (c) puede contener, además del elemento constituyente (b) (secuencia de aminoácidos que consiste en un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2), uno o más (preferiblemente 1 - 3, más preferiblemente 1) epítopos específicos. El epítopo específico adicional puede insertarse en cualquier posición entre el elemento constituyente (a) y el elemento constituyente (b) o el elemento constituyente (b) y el elemento constituyente (c). La longitud de la secuencia de aminoácidos del epítopo específico adicional es generalmente de 5 - 30 aminoácidos, preferiblemente de 6 - 25 aminoácidos, más preferiblemente de 10 - 18 aminoácidos, más preferiblemente, además, de 11 - 16 aminoácidos.
Cuando se inserta una pluralidad de epítopos específicos entre el elemento constituyente (a) y el elemento constituyente (c), los epítopos específicos pueden enlazarse directamente mediante un enlace covalente o enlazarse mediante una secuencia espaciadora. La secuencia espaciadora significa una secuencia de aminoácidos que contiene uno o más restos de aminoácidos a insertar entre dos elementos constituyentes adyacentes contenidos en el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico. Los epítopos específicos se enlazan preferiblemente a través de una secuencia espaciadora, de modo que una pluralidad de epítopos específicos se pueda presentar de manera estable al tiempo que se mantiene su estructura. La longitud de la secuencia espaciadora no está limitada, siempre que el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico forme partículas del núcleo mediante auto-ensamblaje y todos los epítopos específicos insertados se presenten fuera de las partículas, y es generalmente de 1 - 10 aminoácidos, preferiblemente de 1 - 5 aminoácidos, más preferiblemente de 1 - 3 aminoácidos, lo más preferiblemente de 2 o 3 aminoácidos.
Un epítopo específico en el lado más N-terminal entre el elemento constituyente (a) y el elemento constituyente (c), y el elemento constituyente (a) puede conectarse directamente mediante un enlace covalente o mediante una secuencia espaciadora. El elemento (a) y el epítopo espaciador en el lado más N-terminal están conectados preferiblemente a través de una secuencia espaciadora, de modo que un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 se presentarán de modo estable en el exterior de las partículas formadas por autoensamblaje de polipéptidos del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico, al tiempo que se mantiene su estructura. Aunque la longitud de la secuencia espaciadora no está limitada, siempre que el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico forme partículas del núcleo por auto-ensamblaje y un epítopo específico de VEGF y un epítopo específico de angiopoyetina-2 se presente en el exterior de las partículas, es generalmente de 1 - 10 aminoácidos, preferiblemente de 1 - 5 aminoácidos, más preferiblemente de 1 - 3 aminoácidos, lo más preferiblemente de 2 o 3 aminoácidos. Tampoco el tipo de secuencia espaciadora está limitado, siempre que el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico forme partículas del núcleo por auto-ensamblaje, y un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 se presente en el exterior de las partículas. Ejemplos de una secuencia espaciadora preferible incluyen, pero no se limitan a IT, GAT, CGG y similares.
Un epítopo específico en el lado más N-terminal entre el elemento constituyente (a) y el elemento constituyente (c), y
el elemento constituyente (c) puede conectarse directamente mediante un enlace covalente o a través de una secuencia espaciadora. El elemento (b) y el elemento (c) están conectados preferiblemente a través de una secuencia espaciadora, de modo que un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 se presentarán de modo estable en el exterior de las partículas formadas por auto-ensamblaje de polipéptidos del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico, al tiempo que se mantiene su estructura. Aunque la longitud de la secuencia espaciadora no está limitada, siempre que el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico forme partículas del núcleo debido al auto-ensamblaje y un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 se presente fuera de las partículas, es generalmente de 1 - 10 aminoácidos, preferiblemente de 1 - 5 aminoácidos, más preferiblemente de 1 - 3 aminoácidos, lo más preferiblemente de 2 o 3 aminoácidos. Tampoco el tipo de secuencia espaciadora está limitado, siempre que el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico forme partículas del núcleo por auto-ensamblaje, y un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 se presente en el exterior de las partículas. Ejemplos de secuencias espaciadoras preferibles incluyen, pero no se limitan a IT, GAT, CGG y similares.
La longitud de la secuencia de aminoácidos insertada entre el elemento constituyente (a) y el elemento constituyente (c) no está particularmente limitada, siempre que el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico forme partículas del núcleo por auto-ensamblaje, y un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 se presente en el exterior de las partículas, y se puede tratar o prevenir el cáncer, y es de hasta 80 aminoácidos. Cuando la secuencia de aminoácidos insertada es demasiado corta, se puede perder la antigenicidad como un epítopo. Cuando la secuencia de aminoácidos insertada es demasiado larga, se dificulta la formación de partículas del núcleo por parte del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico por auto-ensamblaje y, como resultado, no se produce un anticuerpo que reconozca específicamente el epítopo insertado, y puede no obtenerse un tratamiento eficaz o un efecto de mejora del cáncer.
El vector de expresión utilizado en la presente invención es un vector recombinante que incorpora un polinucleótido que codifica el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico. Cuando el vector de expresión se administra a un mamífero objetivo, el vector de expresión se incorpora de manera intracelular al mamífero objetivo y la célula expresa el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico. Ejemplos del vector de expresión insertado con el polinucleótido que codifica el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico es un plásmido, virus, fago, cósmido y otros vectores utilizados convencionalmente en la técnica. Ejemplos de vectores plasmídicos incluyen, pero no se limitan a pCAGGS (Gene 108: 193 - 199 (1991)), pCR-X8 (Vaccine 24: 4942 - 4950 (2006)), pcDNA3.1 (nombre comercial, Invitrogen), pZeoSV (nombre comercial, Invitrogen), pBK-CMV (nombre comercial, Stratagene) y similares. El vector viral es un virus de ADN o virus de ARN. Ejemplos de vectores virales incluyen, pero no se limitan a retrovirus detoxificados, adenovirus, virus adeno-asociados, virus herpes, virus vaccinia, poxvirus, poliovirus, virus Sindbis, virus hemaglutinante de Japón (HVJ), SV40, virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y similares. Además, también se puede utilizar la envoltura del virus hemaglutinante de Japón (HVJ-E) y similares.
En el vector de expresión antes mencionado, el polinucleótido (preferiblemente ADN) que codifica el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico está conectado operativamente a un promotor capaz de exhibir una actividad promotora en las células de un mamífero (preferiblemente ser humano) que será el sujeto de administración.
El promotor a utilizar no está particularmente limitado, siempre que pueda funcionar en la célula de un mamífero (preferiblemente ser humano), que será el sujeto de administración. Ejemplos del promotor incluyen promotor pol I, promotor pol II, promotor pol III y similares. Específicamente, se utilizan promotores de virus, tales como promotor inicial derivado de SV40, citomegalovirus LTR y similares, promotores de genes de proteínas constitutivas de mamíferos, tales como promotor de genes de p-actina y similares, promotores de ARN, tales como el promotor de ARNt y similares, y similares.
El vector de expresión arriba mencionado contiene preferiblemente una señal de terminación de la transcripción, es decir, una región de terminador, aguas abajo del polinucleótido que codifica el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico. Además, puede contener un gen marcador de selección para la selección de una célula transformada (un gen que confiere resistencia a medicamentos, tales como tetraciclina, ampicilina, kanamicina y similares, un gen que complementa una mutación auxotrófica, etc.).
En una realización, el vector de expresión arriba mencionado puede incluir una secuencia inmuno-estimuladora (ISS) (a la que también se alude como CpG) para potenciar el efecto inmunológico. La secuencia inmunoestimuladora es un ADN que contiene un motivo CpG bacteriano no metilado y se sabe que actúa como un ligando de un receptor particular (receptor tipo Toll 9) (véase Biochim. Biophys. Acta 1489, 107-116 (1999) y Curr. Opin. Microbiol. 6, 472-477 (2003)). Ejemplos preferibles de la secuencia inmuno-estimuladora incluyen los siguientes. CpG-B101822 pb
5'-tga ctg tga acg ttc gag atg a-3' (SEQ ID NO: 8)
CpG-A D1920 pb (tipo D)
5'-ggt gca tcg atg cag ggg gg-3' (SEQ ID NO: 9)
CpG-CC27421 pb
5'-tcg tcg aac gtt cga gat gat-3' (SEQ ID NO: 10)
CpG-CC69525 pb
5'-tcg aac gtt cga acg ttc gaa cgt t-3' (SEQ ID NO: 11)
Alternativamente, se pueden conectar y utilizar 2, 3 o 4 de estos ISS. Ejemplos preferibles de la secuencia ISS conectada incluyen los siguientes.
5'-ggt gca tcg atg cag ggg gg tga ctg tga acg ttc gag atg a tcg tcg aac gtt cgagat gat tcg aac gtt cga acg ttc gaa cgt t-3' (SEQ ID NO: 12)
Los expertos ordinarios en la técnica pueden construir el vector de expresión antes mencionado de acuerdo con técnicas de ingeniería genética bien conocidas, descritas, por ejemplo, en "edit. Sambrook et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory (1989) N.Y." y "edit. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (1987) John Wiley & Sons”, y similares.
El vector de expresión de la presente invención se puede proporcionar como una composición farmacéutica que contiene, además de una cantidad terapéuticamente eficaz del vector de expresión arriba mencionado, cualquier soporte, por ejemplo, un soporte farmacéuticamente aceptable.
Ejemplos del soporte farmacéuticamente aceptable incluyen, aunque no se limitan a excipientes, tales como sacarosa, almidón, manitol, sorbita, lactosa, glucosa, celulosa, talco, fosfato cálcico, carbonato cálcico y similares, aglutinantes, tales como celulosa, metilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, gelatina, goma arábiga, polietilenglicol, sacarosa, almidón y similares, desintegrantes, tales como almidón, carboximetilcelulosa, hidroxipropil-almidón, almidón glicolato sódico, hidrógeno-carbonato sódico, fosfato de calcio, citrato de calcio y similares, lubricantes, tales como estearato de magnesio, Aerosil, talco, lauril sulfato de sodio y similares, compuestos aromáticos, tales como ácido cítrico, mentol, sal de amonio de glicirricina, glicina, polvo de naranja y similares, conservantes, tales como benzoato de sodio, bisulfito de sodio, metilparabeno, propilparabeno y similares, estabilizadores, tales como ácido cítrico, citrato sódico, ácido acético y similares, agentes de suspensión, tales como metilcelulosa, polivinilpirrolidona, estearato de aluminio y similares, agentes dispersantes, tales como tensioactivos y similares, diluyentes, tales como agua, solución salina y similares, ceras base, tales como manteca de cacao, polietilenglicol, queroseno blanco, y similares, y similares.
La composición farmacéutica puede contener, además, un adyuvante para potenciar su efecto. Ejemplos del adyuvante incluyen hidróxido de aluminio, adyuvante completo de Freund, adyuvante incompleto de Freund, adyuvante de pertussis, poli(I:C), CpG-ADN y similares.
Para fomentar la introducción intracelular de un vector de expresión en las células, la composición farmacéutica puede contener, además, un reactivo para la introducción de ácidos nucleicos. Como reactivo para la introducción de ácidos nucleicos se pueden utilizar lípidos catiónicos, tales como lipofectina (nombre comercial, Invitrogen), lipofectamina (nombre comercial, Invitrogen), transfectam (nombre comercial, Promega), DOTAP (nombre comercial, Roche Applied Science), dioctadecilamidoglicil espermina (DOGS), L-dioleoil fosfatidil-etanolamina (DOPE), bromuro de dimetildioctadecil-amonio (DDAB), bromuro de N,N-di-n-hexadecil-N,N-dihidroxietilamonio (DHDEAB), bromuro de N-n-hexadecil-N,N-dihidroxietilamonio (HDEAB), polibreno, poli(etilenimina) (PEI) y similares. Además, un vector de expresión puede incluirse en cualquier liposoma conocido constituido por una bicapa lipídica, tal como un liposoma electrostático. Un liposoma de este tipo puede condensarse con un virus tal como el virus hemaglutinante de Japón (HVJ) inactivado. El liposoma HVJ tiene una actividad de fusión muy alta con una membrana celular en comparación con los liposomas en general. Cuando se utiliza un retrovirus como un vector de expresión, se puede utilizar retronectina, fibronectina, polibreno y similares como reactivos de transfección.
Si bien el contenido del vector de expresión arriba mencionado en la composición farmacéutica no está particularmente limitado, y se selecciona apropiadamente dentro de un amplio intervalo, generalmente es de aproximadamente 0,00001 a 100% en peso de la composición farmacéutica completa.
Introducir el vector de expresión arriba mencionado en un tejido (o célula) de un mamífero objetivo de aplicación induce la expresión in vivo del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico arriba mencionado, induce la producción de un anticuerpo contra el epítopo de VEGF y/o el epítopo de angiopoyetina-2 contenido en el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico y suprime la angiogénesis alrededor de los tejidos cancerosos e inhibe el crecimiento de tejidos cancerosos mediante la neutralización de la actividad del VEGF y/o la angiopoyetina-2 por parte del anticuerpo inducido. Se conocen diversos métodos para introducir ácidos nucleicos tal como un vector de expresión y similares en el cuerpo (T. Friedman, Science 244:
1275-1281 (1989)), y se puede adoptar cualquier método de introducción, siempre que pueda inducir la expresión in vivo del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico arriba mencionado, inducir la producción de un anticuerpo contra el epítopo de VEGF y/o el epítopo de angiopoyetina-2 contenido en el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico, y tratar o prevenir el cáncer.
Ejemplos del método para introducir un vector de expresión en un tejido (o una célula) de mamífero in vivo incluyen, pero no se limitan al método de liposomas internos, método de liposomas electrostáticos, método de liposomas HVJ, método de liposomas HVJ-AVE, transferencia de genes mediada por receptores, método de pistola de partículas, método de ADN desnudo, método de introducción de polímero de carga eléctrica positiva, método de electroporación, y similares.
Alternativamente, se pueden aislar células tales como células de la sangre, células de la médula ósea y similares del mamífero objetivo de aplicación, y el vector de expresión arriba mencionado se puede introducir en las células ex vivo, después de lo cual las células obtenidas que contienen el vector de expresión arriba mencionado se pueden devolver al mamífero objetivo de aplicación.
Ejemplos del método para introducir un vector de expresión en una célula de mamífero ex vivo incluyen, pero no se limitan a un método de lipofección, un método de co-precipitación de fosfato cálcico, un método de DEAE-dextrano, un método de introducción directa de ADN utilizando un microcapilar de vidrio, un método de electroporación, y similares.
El vector de expresión de la presente invención puede administrarse por cualquier método, siempre que en el mamífero objetivo de administración el agente que induce la expresión in vivo del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico arriba mencionado induzca la producción de un anticuerpo contra el epítopo específico de VEGF y/o el epítopo específico de angiopoyetina-2 contenido en el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico y trate o prevenga el cáncer. Preferiblemente, el vector de expresión de la presente invención se administra por vía parenteral en una cantidad suficiente para inducir la producción de un anticuerpo contra el epítopo específico de VEGF y/o el epítopo específico de angiopoyetina-2 contenido en el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico y trate o prevenga el cáncer. Por ejemplo, inyección por vía intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intradérmica, tejido intra-adiposo, tejido de la glándula intramamaria o vía intramuscular; método de bombardeo de partículas inducido por gas (mediante pistola de electrones y similares); un método en forma de colunario y similares a través de la vía de la mucosa y similares se citan como ejemplos de los métodos de administración. En una realización, el vector de expresión de la presente invención se inyecta por vía subcutánea o intramuscular.
En una realización, el vector de expresión de la presente invención se administra por vía subcutánea mediante una jeringa sin aguja. La jeringa sin aguja es preferiblemente una jeringa de presión. Ejemplos de la jeringa sin aguja incluyen, pero no se limitan a ShimaJET (nombre comercial, SHIMADZU CORPORATION), Twinjector EZII (nombre comercial, Japan chemical research), Syrijet (nombre comercial, Keystone), ZENEO (nombre comercial, Crossject), y similares. En este caso, el vector de expresión de la presente invención se puede proporcionar como una preparación de inyección que contiene el vector de expresión arriba mencionado y una jeringa sin aguja, en donde el vector de expresión está encerrado en la jeringa sin aguja.
En una realización, el vector de expresión de la presente invención se administra por vía subcutánea, intradérmica o intramuscular con una pistola de genes. En este caso, el vector de expresión arriba mencionado se puede aplicar sobre las partículas de soporte tales como partículas de oro coloidal y similares a introducir en el cuerpo y utilizadas para la administración. Se conoce una técnica para revestir partículas de soporte con polinucleótidos (véase, por ejemplo, el documento WO 93/17706). Finalmente, el vector de expresión se puede preparar en una solución acuosa tal como solución salina fisiológica, y similares, adecuada para la administración al cuerpo.
Para inducir una buena respuesta inmune, el vector de expresión de la presente invención se administra preferiblemente múltiples veces a intervalos dados. Si bien la frecuencia se puede determinar apropiadamente vigilando el nivel de respuestas inmunes, generalmente es de 2 - 10 veces, preferiblemente de 2 - 6 veces, más preferiblemente de 2, 3 o 4 veces, lo más preferiblemente de 3 veces.
La frecuencia de administración es generalmente de 1 vez a la semana - 1 vez al año, preferiblemente una vez cada 1 - 6 meses.
En una realización, el vector de expresión de la presente invención se administra a un mamífero objetivo a intervalos de 3 veces a 6 meses.
Mientras que la dosis del vector de expresión de la presente invención depende de la inmunogenicidad del epítopo de VEGF y/o del epítopo de angiopoyetina-2 contenido en el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico codificado por el vector de expresión en un mamífero sujeto de administración, los expertos ordinarios en la técnica pueden determinar la dosis necesaria para una buena respuesta inmune al administrar una cantidad dada de un vector de expresión a un mamífero sujeto de administración, midiendo el título de anticuerpos específico contra el epítopo mediante un método de detección tal como ELISA y similares, y observar la respuesta inmune. Los expertos ordinarios en la técnica apreciarán que la inmunogenicidad del vector de expresión de la
presente invención depende de la fuerza de la secuencia reguladora, tal como el promotor utilizado para el vector de expresión como un ingrediente activo. Además, los expertos ordinarios en la técnica pueden también controlar con facilidad la dosis del vector de expresión de la presente invención en función del tipo de vector de expresión a utilizar.
Cuando se administra un vector de expresión que codifica un polipéptido de antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico insertado con una secuencia de aminoácidos que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2, se induce una respuesta inmune (preferiblemente una respuesta inmune humoral tal como la producción de anticuerpos y similares) al epítopo específico de VEGF y/o al epítopo específico de angiopoyetina-2 en el polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico expresado, y se neutraliza la actividad del VEGF y/o de angiopoyetina-2 con el anticuerpo, con lo cual se puede suprimir la angiogénesis alrededor de los tejidos cancerosos e inhibir el crecimiento de tejido canceroso. Por consiguiente, el sujeto de administración del vector de expresión de la presente invención incluye pacientes con cáncer, aquellos que tienen un historial clínico de cáncer y pacientes no cancerosos que tienen el riesgo de desarrollar cáncer, y similares. El cáncer se trata administrando a pacientes con cáncer un vector de expresión que codifica un polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico en el que se ha insertado una secuencia de aminoácidos que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2, suprimiendo con ello la angiogénesis alrededor de los tejidos cancerosos de los pacientes con cáncer e inhibiendo el crecimiento de tejidos cancerosos. Además, la metástasis se puede suprimir al suprimir la angiogénesis alrededor de la lesión micrometastásica en los pacientes con cáncer. La recurrencia del cáncer se puede suprimir administrando un vector de expresión que codifica un polipéptido de antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico insertado con una secuencia de aminoácidos que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 se administra a aquellos que tienen un historial clínico de cáncer, suprimiendo con ello la angiogénesis alrededor de la lesión micrometastásica que posiblemente se encuentre latente en el cuerpo de aquellos que tienen un historial clínico de cáncer e inhibiendo el crecimiento de los tejidos cancerosos. Además, se puede prevenir la aparición de cáncer en pacientes sin cáncer que tienen un riesgo de desarrollar cáncer mediante la administración de un vector de expresión que codifica un polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico insertado con una secuencia de aminoácidos que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 en los pacientes no cancerosos.
La presente invención se describirá con mayor detalle en lo que sigue con referencia a Ejemplos.
Ejemplos
Ejemplo 1
Preparación de la construcción que expresa HBc-mVEGF (13 aa) y HBc-hAng2 (16 aa)
El plásmido pPLc3 (Número de acceso LMBP 2470) se adquirió de BCCM/LMBP Plasmid Collection. Los fragmentos de ADN que codifican HBc modificado, en donde una secuencia de aminoácido parcial (SEQ ID NO: 1) de VEGF de ratón o una secuencia de aminoácido parcial (SEQ ID NO: 3) de angiopyetina-2 humana está insertada entre los restos de aminoácidos 80 y 81 de HBc, se obtuvieron mediante PCR y ligamiento. Este fragmento de ADN se clonó mediante TA en el kit de expresión de TA pcDNA 3.1/V5-His TOPO (Invitrogen) para dar el vector HBc-AngII ISS(-). De manera similar, la PCR se realizó utilizando un molde (plásmido pPLc3) y un conjunto de cebador (HBcF y HBcR) para preparar un fragmento de ADN que codifica un polipéptido de longitud completa de HBc, y este fragmento de ADN se clonó mediante TA en el vector pcDNA 3.1/V5-His TOPO para dar el vector de expresión HBcmVEGF y el vector de expresión HBc-hAng2. Las secuencias de aminoácidos de HBc-mVEGF y HBc-hAng2 preparados se muestran en SEQ ID NO: 28 y 30, respectivamente, y las secuencias de nucleótidos que codifican las secuencias de aminoácido se muestran en SEQ ID NO: 27 y 29, respectivamente. Las siguientes regiones corresponden a las secuencias insertadas.
Nucleótidos N°s 244 - 297 de SEQ ID NO: 27 (de estos, los nucleótidos N°s 250 - 288 codifican SEQ ID NO: 1) Aminoácidos N°s 81 - 88 de SEQ ID NO: 28 (de estos, los aminoácidos N°s 83 - 85 corresponden a SEQ ID NO: 1) Nucleótidos N°s 244 - 306 de SEQ ID NO: 29 (de estos, los nucleótidos N°s 250 - 297 codifican SEQ ID NO: 3) Aminoácidos N°s 81 - 101 de SEQ ID NO: 30 (de estos, los aminoácidos N°s 83 - 98 corresponden a SEQ ID NO: 3) Ejemplo 2
Cada uno de los vectores de expresión (HBc, HBc-mVEGF, HBc-hAng2) preparados en el Ejemplo 1 se introdujeron en ratones BALB/c (hembras, de 6 semanas de edad) mediante un electroporador. Después de la inmunización durante 3 veces a intervalos de 2 semanas (0, 2, 4 semanas) y de un lapso de 4 semanas, se administró una inmunización adicional (8 semanas). Células Colon26 (CT-26) en la fase de crecimiento bajo cultivo en RPMI (FBS al 10 %, pc/mc) se recuperaron mediante tripsina y se suspendieron en PBS para dar una suspensión celular con una concentración de 1 x 107 células/mL en PBS. Una semana después de la inmunización adicional final (9 semanas), se rasuró el lomo del ratón inmunizado y la suspensión celular (100 mL, 1 x 106 células/ratón) se inyectó por vía subcutánea (Día 0). El diámetro del tumor se midió con un calibrador vernier (volumen del tumor = diámetro
largo x diámetro corto x diámetro corto / 2).
En los ratones inmunizados con HBc-mVEGF y HBc-hAng2, se suprimió el crecimiento del tumor (Fig. 1) y aumentó la tasa de supervivencia después del trasplante del tumor (Fig. 2) en comparación con el vector control negativo. Ejemplo 3
(Resultados)
Producción de una vacuna de ADN para VEGF
Para confirmar si este sistema de vacuna de ADN inducía lo suficientemente la producción de anticuerpos anti-VEGF, ratones BALB/c hembras fueron inmunizados con pcDNA3.1-HBc-mVEGF (1 a.a.) [HBc-mVEGF (7 a.a.)], pcDNA3.1-HBc [HBc] o solución salina, respectivamente, mediante administración intramuscular utilizando un electroporador, tres veces cada dos semanas y un refuerzo adicional después de la tercera inmunización (Figs. 3 y 4). Como resultado, se observó un título algo mayor de anticuerpo anti-VEGF en el grupo de HBc-mVEGF (7 a.a.) en comparación con el grupo control (HBc y solución salina) (Fig. 5). Debido a que esta secuencia de 7 a.a. podría no ser suficiente para que el epítopo de células B indujera el anticuerpo anti-VEGF, la secuencia larga también se diseñó como un antígeno candidato que cubría la superficie de unión con bevacizumab, VEGFR-1 o VEGFR-2. 6 o 10 aminoácidos se añadieron a la secuencia del núcleo, creando con ello la secuencia de 13 aminoácidos diana (IMRIKPHQSQHIG; 13 a. a.) (SEQ ID NO: 1) y la secuencia de 17 aminoácidos (MQIMRIKPHQSQHIGEM; 17 a. a.) (SEQ ID NO: 32), respectivamente (Fig. 3). Después se construyeron de manera similar y se vacunó a ratones con pcDNA3.1-mVEGF (13 a.a.) [HBc-mVEGF (13 a.a.)] y pcDNA3.1-mVEGF (17 a.a.) [HBc-mVEGF (17 a.a.)]. Tal como se muestra en la Fig. 5, ambos antígenos indujeron con éxito la producción de anticuerpo anti-VEGF. Se observó un título relativamente elevado de anti-VEGF en el grupo HBc-mVEGF (13 a.a.) en comparación con los grupos de 17 a.a. y 7 a.a. (Fig. 5). Por lo tanto, se decidió que 13 a.a. (IMRIKPHQSQHIG fuese el antígeno de la vacuna de ADN de VEGF utilizando el sistema HBc (Fig. 6a y b). La funcionalidad del vector de expresión de HBc-mVEGF (13 a. a.) se confirmó en células COS-7 transfectadas. Cada una de las construcciones expresaba ARNm en la longitud esperada y proteína de la masa molecular esperada.
Se confirmó el título de anticuerpos anti-VEGF a la octava semana, cuatro semanas después de la tercera inmunización (Fig. 1d) y se observó un título elevado en el grupo de HBc-mVEGF (13 a.a.) (Fig. 7a y 8). En el análisis de subtipos de IgG, esta inmunización podría conducir a respuestas inmunes sesgadas por Thl con producción predominante de IgG2a e IgG2b (Fig. 7b). Los autores de la presente invención confirmaron, además, si el suero producido mediante inmunización con HBc-mVEGF (13 a.a.) reconocería la proteína VEGF-A de ratón recombinante en el análisis de la transferencia western. La unión específica de suero inmunizado con proteína de VEGF recombinante se confirmó utilizando el anticuerpo comercial contra VEGF, VG-1 (Fig. 8).
Actividad de neutralización de anticuerpo anti-VEGF producido mediante vacunación de ADN de VEGF
Para examinar la actividad neutralizante de suero procedente de ratones vacunados, los autores de la invención purificaron IgG de ratón de suero utilizando la columna de proteína G tal como se describe en la sección de método. El tratamiento de suero inmunizado, pero no de suero control, atenuó de manera significativa la fosforilación de ERK1/2 inducida por VEGF-A en HUVECs (Fig. 9). En la formación en tubo de HUVECs en matrigel, en presencia de EBM-2 con FBS al 0,4 % y complemento al 0,4 %, la adición de suero inmunizado atenuó también de manera significativa la formación en tubo de HUVECs, en comparación con la adición de suero control (Fig. 10).
Método
Medición de anticuerpo anti-mVEGF en suero
Ocho o dieciséis semanas después de la primera inmunización, se recogió suero de los ratones inmunizados de todos los grupos. Los niveles de suero de anticuerpos anti-VEGF en estos ratones se midieron mediante ELISA. Brevemente, placas ELISA se revistieron con 5 gg/mL de BSA conjugado con péptido de VEGF de 13 a.a. en tampón carbonato durante la noche a 4°C. Diluciones en serie (1:100 a 1:312500) de muestras de suero procedentes de los ratones inmunizados se añadieron a los pocillos y se añadió IgG de ratón conjugada con HRP (IgG entera, GE Helthcare, Reino Unido, cada uno de los subtipos; Abcam, Reino Unido). Después de cuatro lavados con PBST, se añadió 3,3’,5,5’-tetrametilbenzidina (TMB, Sigma Aldrich, EE.UU.). La producción del producto de reacción azul se detuvo añadiendo 0,5 mol/L de ácido sulfúrico, y el producto final resultante (amarillo) se leyó a 450 nm.
Purificación de IgG
Suero de ratón se purificó utilizando la columna de proteína G de acuerdo con las instrucciones del fabricante (kit MabTrap; GE Healhcare, Reino Unido). Brevemente, muestras de suero se ajustaron a la composición del tampón de unión (fosfato sódico 20 mM, pH 7,0). En la columna de proteína G se separó por lavado el conservante de etanol con agua destilada y se equilibró con tampón de unión. Se aplicó el suero diluido y la columna se lavó con tampón de unión hasta que no aparecía material en el efluente. Después de ello, la fracción de IgG se eluyó mediante tampón de
Claims (14)
1. Un vector de expresión que codifica un polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B quimérico con una inserción para uso en el tratamiento o la profilaxis del cáncer, en donde la inserción es una secuencia de aminoácidos de hasta 80 aminoácidos de longitud que comprende un epítopo específico de VEGF o de angiopoyetina-2, en donde la secuencia de aminoácidos que comprende el epítopo específico está insertada entre los restos de aminoácidos 80 y 81 del polipéptido del antígeno del núcleo del virus de la hepatitis B, en donde el epítopo específico de VEGF consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 32 o 33, o una secuencia parcial de la misma que tiene 13 o más aminoácidos que contiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 31, y en donde el epítopo específico de angiopoyetina-2 consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3.
2. El vector de expresión para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el cáncer es un cáncer sólido.
3. El vector de expresión para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el tumor sólido es de cualquier tipo seleccionado del grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, cáncer de útero y cáncer de próstata.
4. El vector de expresión para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la inserción es una secuencia de aminoácidos que comprende el epítopo específico de VEGF definido en la reivindicación 1.
5. El vector de expresión para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 o 2.
6. El vector de expresión para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3.
7. El vector de expresión para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende, además, uno o más epítopos específicos.
8. El vector de expresión para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el vector de expresión se administra varias veces.
9. El vector de expresión para uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el vector de expresión se administra 2, 3 o 4 veces.
10. El vector de expresión para uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el vector de expresión se administra 3 veces.
11. El vector de expresión para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el vector de expresión se administra 3 veces a intervalos de medio año.
12. El vector de expresión para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende SEQ ID NO: 1 o 2, y el cáncer es cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, cáncer de útero o cáncer de próstata.
13. El vector de expresión para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende SEQ ID NO: 3, y el cáncer es cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, cáncer de útero o cáncer de próstata.
14. El vector de expresión para uso de acuerdo con la reivindicación 12 o 13, en donde la secuencia de aminoácidos de la inserción comprende uno o más epítopos específicos.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012191717 | 2012-08-31 | ||
| PCT/JP2013/073045 WO2014034735A1 (ja) | 2012-08-31 | 2013-08-28 | Ｖｅｇｆ及び／又はアンギオポエチン－２の特異的エピトープを含むｄｎａワクチン |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2817925T3 true ES2817925T3 (es) | 2021-04-08 |
Family
ID=50183541
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES13832772T Active ES2817925T3 (es) | 2012-08-31 | 2013-08-28 | Vacuna de ADN que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10543261B2 (es) |
| EP (1) | EP2891497B1 (es) |
| JP (2) | JP6422022B2 (es) |
| KR (1) | KR102205077B1 (es) |
| CN (1) | CN104768575B (es) |
| ES (1) | ES2817925T3 (es) |
| HK (2) | HK1210433A1 (es) |
| WO (1) | WO2014034735A1 (es) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3222289A4 (en) * | 2014-11-20 | 2018-07-04 | AnGes MG, Inc. | Dna-peptide combination vaccine |
| WO2022071513A1 (ja) | 2020-10-02 | 2022-04-07 | 国立大学法人大阪大学 | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する改良型ＤＮＡワクチン |
| WO2022152939A1 (en) | 2021-01-18 | 2022-07-21 | Conserv Bioscience Limited | Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US1406629A (en) | 1917-07-03 | 1922-02-14 | John S Erickson | Combination lock |
| NZ235315A (en) | 1989-09-19 | 1991-09-25 | Wellcome Found | Chimaeric hepadnavirus core antigen proteins and their construction |
| DK0584348T3 (da) | 1992-03-11 | 2005-09-19 | Powderject Vaccines Inc | Genetisk vaccine mod immundefektvirusser |
| KR100808313B1 (ko) | 2000-04-07 | 2008-02-27 | 유니버시티 오브 리즈 이노베이션즈 리미티드 | 비형 간염 코어 항원 융합 단백질 |
| JP2004500868A (ja) * | 2000-06-22 | 2004-01-15 | セルテック ファーマスーティカルズ リミテッド | Ｂ型肝炎コア抗原の修飾 |
| US20030138769A1 (en) | 2000-08-16 | 2003-07-24 | Birkett Ashley J. | Immunogenic HBc chimer particles having enhanced stability |
| CN1298385C (zh) | 2001-08-13 | 2007-02-07 | 四川大学华西医院 | 异种血管内皮细胞生长因子疫苗及其制备方法 |
| AU2002362696B2 (en) | 2001-10-05 | 2008-05-29 | Cytos Biotechnology Ag | Angiotensin peptide-carrier conjugates and uses thereof |
| US7094410B2 (en) | 2002-03-02 | 2006-08-22 | The Scripps Research Institute | DNA vaccine against proliferating endothelial cells and methods of use thereof |
| CU23178A1 (es) | 2002-04-15 | 2006-09-22 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | INMUNOTERAPIA ACTIVA ANTIANGIOGéNICA |
| GB0213878D0 (en) | 2002-06-17 | 2002-07-31 | Protherics Plc | Use |
| CN105085678B (zh) | 2004-12-21 | 2019-05-07 | 阿斯利康公司 | 血管生成素-2的抗体及其应用 |
| SI2274008T1 (sl) | 2008-03-27 | 2014-08-29 | Zymogenetics, Inc. | Sestavki in metode za zaviranje PDGFRBETA in VEGF-A |
| US8268314B2 (en) | 2008-10-08 | 2012-09-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies |
| JO3182B1 (ar) | 2009-07-29 | 2018-03-08 | Regeneron Pharma | مضادات حيوية بشرية عالية الالفة مع تولد الاوعية البشرية - 2 |
| AR080794A1 (es) * | 2010-03-26 | 2012-05-09 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos bivalentes biespecificos anti- vegf/ anti-ang-2 |
| US9113492B2 (en) * | 2011-11-07 | 2015-08-18 | Qualcomm Incorporated | Method and apparatus for transmit priority determination within a link |
| JP3228737U (ja) | 2020-07-08 | 2020-11-12 | 正伸 原田 | 面マスクホルダー |
-
2013
- 2013-08-28 US US14/424,937 patent/US10543261B2/en active Active
- 2013-08-28 EP EP13832772.1A patent/EP2891497B1/en active Active
- 2013-08-28 WO PCT/JP2013/073045 patent/WO2014034735A1/ja active Application Filing
- 2013-08-28 KR KR1020157007934A patent/KR102205077B1/ko active IP Right Grant
- 2013-08-28 CN CN201380045197.4A patent/CN104768575B/zh active Active
- 2013-08-28 JP JP2014533052A patent/JP6422022B2/ja active Active
- 2013-08-28 ES ES13832772T patent/ES2817925T3/es active Active
-
2015
- 2015-11-17 HK HK15111302.3A patent/HK1210433A1/xx unknown
- 2015-11-19 HK HK15111396.0A patent/HK1210600A1/xx unknown
-
2018
- 2018-04-16 JP JP2018078757A patent/JP2018138573A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104768575B (zh) | 2017-09-08 |
| KR20150070116A (ko) | 2015-06-24 |
| CN104768575A (zh) | 2015-07-08 |
| JP6422022B2 (ja) | 2018-11-14 |
| EP2891497B1 (en) | 2020-07-01 |
| HK1210433A1 (en) | 2016-04-22 |
| KR102205077B1 (ko) | 2021-01-20 |
| HK1210600A1 (en) | 2016-04-29 |
| JP2018138573A (ja) | 2018-09-06 |
| EP2891497A4 (en) | 2016-05-04 |
| WO2014034735A1 (ja) | 2014-03-06 |
| US10543261B2 (en) | 2020-01-28 |
| EP2891497A1 (en) | 2015-07-08 |
| JPWO2014034735A1 (ja) | 2016-08-08 |
| US20150202271A1 (en) | 2015-07-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2526510C2 (ru) | Композиция для лечения рака легких, прежде всего, немелкоклеточного рака легких (нмкрл) | |
| ES2675825T3 (es) | Vacunación tumoral que involucra una respuesta inmunitaria contra la proteína propia CLDN18.2 | |
| ES2413079T3 (es) | Métodos y composiciones para desencadenar respuestas inmunitarias multivalentes contra epítopos dominantes y subdominantes expresados en células cancerosas y estroma tumoral | |
| ES2306670T3 (es) | Procedimiento de induccion y/o intensificacion de la respuesta inmunitaria frente a antigenos tumorales. | |
| US9913886B2 (en) | DNA vaccine containing specific epitope of apolipoprotein (a) | |
| US12116396B2 (en) | LAMP constructs | |
| ES2817925T3 (es) | Vacuna de ADN que contiene un epítopo específico de VEGF y/o un epítopo específico de angiopoyetina-2 | |
| ES2668672T3 (es) | Vacuna de ADN | |
| WO2019101062A9 (zh) | 重组疫苗及其应用 | |
| ES2951684T3 (es) | Métodos y composiciones para estimular la respuesta inmune | |
| CA3005910A1 (en) | Vaccination with mica/b alpha 3 domain for the treatment of cancer | |
| US20230072079A1 (en) | Nucleic acid vaccination using neo-epitope encoding constructs | |
| SK5712001A3 (en) | Pharmaceutical composition | |
| TW202114732A (zh) | 遞送b型肝炎病毒(hbv)疫苗之脂質奈米顆粒或脂質體 | |
| RU2782422C2 (ru) | Терапевтическая противораковая неоэпитопная вакцина | |
| CN117813108A (zh) | 基于肽的新抗原疫苗的多组分化学组合物 |