ES2804615T3 - Cepas probióticas para su uso en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis - Google Patents
Cepas probióticas para su uso en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis Download PDFInfo
- Publication number
- ES2804615T3 ES2804615T3 ES14779522T ES14779522T ES2804615T3 ES 2804615 T3 ES2804615 T3 ES 2804615T3 ES 14779522 T ES14779522 T ES 14779522T ES 14779522 T ES14779522 T ES 14779522T ES 2804615 T3 ES2804615 T3 ES 2804615T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- dsm
- bone
- lactobacillus
- ovx
- treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 52
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 title claims abstract description 20
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims description 74
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims description 74
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims description 56
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims abstract description 40
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 22
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 54
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 38
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 34
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 34
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 claims description 23
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 11
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 5
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 claims description 4
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 abstract description 64
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 44
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 35
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 25
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 21
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 18
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 18
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 18
- 102000008108 Osteoprotegerin Human genes 0.000 description 16
- 108010035042 Osteoprotegerin Proteins 0.000 description 16
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 16
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N octadec-7-ynoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC#CCCCCCC(O)=O XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 15
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 14
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 14
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 13
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 12
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 11
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 9
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 9
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 8
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 8
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 8
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 8
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 7
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 5
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 5
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 5
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 4
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 4
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 4
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 4
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 3
- 210000004349 growth plate Anatomy 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 3
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 2
- 101150008656 COL1A1 gene Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 2
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010043267 Sp7 Transcription Factor Proteins 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 102100032317 Transcription factor Sp7 Human genes 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000037118 bone strength Effects 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000013400 design of experiment Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 2
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108091006084 receptor activators Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- 108020004463 18S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 description 1
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011814 C57BL/6N mouse Methods 0.000 description 1
- 238000003650 Calcium Assay Kit Methods 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001736 Calcium glycerylphosphate Substances 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000001061 Dunnett's test Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 208000015580 Increased body weight Diseases 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 1
- 101001065556 Mus musculus Lymphocyte antigen 6G Proteins 0.000 description 1
- 101001098398 Mus musculus Osteocalcin Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010030247 Oestrogen deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 1
- 208000001164 Osteoporotic Fractures Diseases 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003262 anti-osteoporosis Effects 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 210000002048 axillary vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 229940004120 bifidobacterium infantis Drugs 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000001201 calcium accumulation Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000004227 calcium gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000013927 calcium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004494 calcium gluconate Drugs 0.000 description 1
- UHHRFSOMMCWGSO-UHFFFAOYSA-L calcium glycerophosphate Chemical compound [Ca+2].OCC(CO)OP([O-])([O-])=O UHHRFSOMMCWGSO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940095618 calcium glycerophosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000019299 calcium glycerylphosphate Nutrition 0.000 description 1
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 description 1
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 1
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940087373 calcium oxide Drugs 0.000 description 1
- 235000012255 calcium oxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011635 calcium salts of citric acid Substances 0.000 description 1
- 235000019842 calcium salts of citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940095672 calcium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000011132 calcium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L calcium;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000014510 cooky Nutrition 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000105 enteric nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000004692 intercellular junction Anatomy 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940039412 ketalar Drugs 0.000 description 1
- VCMGMSHEPQENPE-UHFFFAOYSA-N ketamine hydrochloride Chemical compound [Cl-].C=1C=CC=C(Cl)C=1C1([NH2+]C)CCCCC1=O VCMGMSHEPQENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- VPNGEIHDPSLNMU-UHFFFAOYSA-N medetomidine hydrochloride Chemical compound Cl.C=1C=CC(C)=C(C)C=1C(C)C1=CNC=N1 VPNGEIHDPSLNMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000010603 microCT Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 108700015048 receptor decoy activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 1
- 230000000450 urinary calcium excretion Effects 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/306—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on bone mass, e.g. osteoporosis prevention
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis, y/o en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o la prevención de pérdida de masa ósea, en un mamífero.
Description
DESCRIPCIÓN
Cepas probióticas para su uso en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis
Campo técnico de la invención
La presente invención se refiere a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, o a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, en combinación con al menos una cepa probiótica de Lactobacillus plantarum, para su uso en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis, y/o en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o prevención de la pérdida de masa ósea en un mamífero, preferentemente en un ser humano.
Técnica antecedente
La osteoporosis es una enfermedad en la cual los huesos se vuelven frágiles y más propensos a las fracturas. Por lo general, el hueso pierde densidad, que mide la cantidad de calcio y minerales en el hueso. La osteoporosis es el tipo más común de enfermedad ósea. Alrededor de la mitad de todas las mujeres mayores de 50 tendrá una fractura de la cadera, muñeca o vértebras (hueso de la columna) durante su vida. El hueso es un tejido vivo. El hueso existente constantemente está siendo reemplazado por hueso nuevo. La osteoporosis se presenta cuando el cuerpo no puede formar suficiente hueso nuevo, cuando gran cantidad del hueso existente es reabsorbido por el cuerpo, o en ambos. El calcio es uno de los minerales importantes que se necesitan para formar los huesos. Si las personas no obtienen suficiente calcio y vitamina D, o su cuerpo no absorbe suficiente calcio de su dieta, sus huesos pueden volverse frágiles y más propensos a las fracturas. Una disminución de estrógeno en las mujeres en el momento de la menopausia y la disminución de la testosterona en los hombres es la principal causa de pérdida de masa ósea.
Las fracturas causadas por la osteoporosis constituyen un importante problema de salud y el resultado en una enorme carga económica para los sistemas de atención de salud. El riesgo de por vida de cualquier fractura osteoporótica es alta en el mundo occidental (alrededor del 50% para las mujeres y 20% para los hombres) y las fracturas se asocian con la mortalidad y la morbilidad significativas. El hueso cortical constituye aproximadamente el 80% del hueso en el cuerpo y varios estudios han demostrado que el hueso cortical es el principal determinante de la resistencia ósea y por lo tanto la susceptibilidad de fractura. La pérdida de masa ósea después de la edad de 65 años se debe principalmente a la pérdida de hueso cortical y no hueso trabecular (Lancet, 2010, 15 de mayo; 375 (9727): 1729-36).
El esqueleto es remodelado por los osteoblastos de formación ósea (OB) y los osteoclastos de resorción ósea (OCL). El factor estimulante de colonias de macrófagos (M-CSF) aumenta la proliferación y la supervivencia de las células precursoras OCL, así como la expresión de aumento del activador receptor del factor nuclear - k B (RANK) en OCL. Esto permite que el ligando RANk (RANKL) se una e inicie la cascada de señalización que conduce a la formación de OCL. El efecto de RANKL puede inhibirse por medio de la Osteoprotegerina (OPG), que es un receptor del señuelo para RANKL.
La asociación entre la inflamación y la pérdida de hueso está bien establecida y en la resorción ósea osteodástica de enfermedades autoinmunes está impulsada por atocinas inflamatorias producidas por células T activadas. Además, varios estudios demuestran que la inflamación sistémica de bajo grado, indicada por niveles séricos moderadamente elevados de proteína reactiva C de alta sensibilidad (hsCRP), asociada con BMD baja, resorción ósea elevada y el elevado riesgo de fractura. La deficiencia de estrógenos que se produce después de la menopausia resulta en la formación aumentada y la supervivencia prolongada de los osteoclastos. Esto se sugiere que es debido a una serie de factores incluyendo la pérdida de los efectos inmunosupresores de los estrógenos, lo que resulta en una mayor producción de citocinas que promueven la osteoclastogénesis y los efectos directos de los estrógenos sobre OCL. En línea con estos datos, el bloqueo de las citocinas inflamatorias de TNFa e IL-1 conduce a una disminución en los marcadores de resorción ósea en mujeres posmenopáusicas tempranas.
En los últimos años, la importancia de la microbiota intestinal (GM) tanto para la salud y la enfermedad se ha estudiado intensamente. La GM consiste en trillones de bacterias que en conjunto contienen 150 veces más genes que nuestro genoma humano. Se adquiere al nacer y, aunque una entidad distinta, ha coevolucionado claramente con el genoma humano y se puede considerar un órgano multicelular que se comunica y afecta a su huésped en numerosas maneras. La composición de la GM es modulada por una serie de factores ambientales tales como la dieta y los tratamientos con antibióticos. Las moléculas producidas por las bacterias del intestino pueden ser tanto beneficiosas como perjudiciales y se sabe que afectan a las células endocrinas en el intestino, el sistema nervioso entérico, la permeabilidad del intestino y el sistema inmunológico. La composición microbiana perturbada se ha postulado como implicada en una variedad de condiciones inflamatorias, dentro y fuera del intestino incluyendo la enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes, alergias a los alimentos, el eccema y el asma, así como la obesidad y el síndrome metabólico.
Las bacterias probióticas se definen como microorganismos vivos que cuando se administran en cantidades adecuadas confieren un beneficio de salud en el huésped y se cree que alteran la composición de la microbiota intestinal. Los mecanismos subyacentes sugeridos son múltiples incluyendo la solubilidad y absorción de minerales aumentadas, la función de barrera mejorada y la modulación del sistema inmunológico.
En Gilman et al, "The effect of Probiotic Bacteria on Transepithelial Calcium Transport and Calcium uptake in Human Intestinal-like Caco-2 cells (El efecto de las bacterias probióticas en el transporte de calcio transepitelial y la absorción de calcio en células Caco-2 similares a las intestinales humanas)", Curr. Issues Intestinal Microbial.
7:1-6, una cepa de Lactobacillus salivarius (UCC 118) y una cepa de Bifidobacterium infantis (UCC 35624) fue probado en la absorción de calcio y transporte de calcio transepitelial en células Caco-2 similares a las intestinales humanas en cultivo. Dichas cepas no tuvieron efecto sobre el transporte de calcio transepitelial en las células Caco-2 de 16 días completamente diferenciadas. La absorción de calcio en las monocapas de células Caco-2 después de 24 h fue significativamente mayor en las células expuestas a Lactobacillus salivarius.
El documento de patente WO99/02170 divulga el uso de lactobacilos en la preparación de composiciones entérales no fermentadas para facilitar o aumentar la absorción de minerales de la dieta, tales como caldo, zinc, hierro y magnesio. Los experimentos realizados en el mismo, en el apoyo a dicha absorción afirmada, son un modelo in vitro de transporte de caldo utilizando líneas intestinales Caco- 2 (una línea celular cancerígena).
El documento de patente KR101279852 (KR 2013-0002543) divulga composiciones para la prevención o tratamiento de la osteoporosis que contiene calcio y magnesio, además de las cepas bacterianas del ácido láctico específicas, tales como Streptococcus thermophiius con número de depósito KCTC11870BP, Lactobacillus rhamnosus con número de depósito KCTC 11868BP y Lactobacillus paracasei con el número de depósito KCTC11866BP.
Chiang et al., "Effect of bioactive compounds in lactobacilli-fermented soy skim milk on femoral bone microstructure of aging mice (El efecto de los compuestos bioactivos en la leche desnatada de soja fermentada con lactobacilos sobre la microestructura ósea femoral de ratones envejecidos)", J Sci Food Agric, 2012, 92: 328-335) divulga leche desnatada de soja fermentada por Lactobacillus paracasei de la subespecie paracasei NTU 101 y L. plantarum NTU 102, para su uso en la atenuación de la pérdida de masa ósea inducida por el envejecimiento en ratones BALB/c y posiblemente reducir el riesgo de osteopenia u osteoporosis en el envejecimiento.
El documento de patente JP 2009-114112 divulga un agente antiosteoporosis que comprende la cepa de Lactobacillus paracasei KW3110.
Aún existe una necesidad dentro de la técnica para encontrar procedimientos preventivos y terapéuticos eficaces contra la osteoporosis en seres humanos.
Sumario de la invención
La presente invención está definida por las reivindicaciones adjuntas. La presente invención se refiere, en un aspecto, a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, o a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, en combinación con al menos una cepa probiótica de Lactobacillus plantarum, para su uso en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis, y/o en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o prevención de la pérdida de masa ósea en un mamífero, preferentemente en un ser humano.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 divulga el transporte de Ca2+ probado con las diferentes cepas bacterianas como se describe en los experimentos 1 y 2.
La Figura 2 divulga el Ca2+ intracelular restante en las células después de 2 h como se describe en los experimentos 1 y 2.
La Figura divulga el diseño de experimentos y el peso corporal del experimento 3. El esquema de diseño de experimentos (A). Los ratones de ocho semanas de edad fueron tratados con vehículo (veh), una sola cepa de Lactobacillus (L) (L. para) o una mezcla de tres cepas (L. mix) durante 6 semanas, a partir de dos semanas antes de ovx o cirugía placebo (sham). Las cepas de L. fueron dadas en el agua potable a una concentración de unidades formadoras de colonias 109 (ufc)/ml mientras que los ratones control recibieron agua del grifo con vehículo. Los ratones tuvieron 14 semanas de edad al final del estudio, cuando se recogieron los tejidos para su posterior análisis. Ovx resultó en un aumento de peso corporal esperado en comparación con los ratones placebo que no fue diferente después del tratamiento probiótico (B). Los resultados se proporcionan como media ± SEM (n = 9-10), **p < 0,01. Prueba t de Student de ovx vs. placebo.
Las Figuras 4A a 4C divulgan que los probióticos protegen a los ratones de pérdida de masa ósea cortical inducida por ovx. Los ratones de ocho semanas de edad fueron tratados con vehículo (veh), una sola cepa de Lactobacillus (L) (L. para) o una mezcla de tres cepas (L. mix) durante 6 semanas, a partir de dos semanas antes de la ovx o la cirugía placebo para estudiar el efecto preventivo de tratamiento probiótico en pérdida de masa ósea inducida por ovx. Al final del experimento, los fémures disecados fueron analizados con |jCT de alta resolución y la tomografía computarizada cuantitativa periférica (pQCT). Las imágenes |jCT representativas de una sección cortical a partir de los grupos placebo y ovx tratados con veh y L. mix (A). El contenido mineral óseo cortical (BMC) (B) y área cortical (C) se midieron por pQCT en la región mediadiafisaria del fémur. Los valores se expresan como media ± SEM (n = 9-10). **p < 0,01, *p < 0,05. Prueba t de Student de ovx vs. placebo. # p < 0,05, ANOVA seguido por la prueba post hoc de Dunnett dentro de los grupos, ovx L. para y L. mix en comparación con veh de ovx.
La Figura 5 divulga que los probióticos reducen la expresión de citocinas inflamatorias y la relación RANKL/OPG en el hueso cortical. El análisis de QRT-PCR de la expresión de genes conocidos para promover la resorción ósea; (A) Factor de Necrosis Tumoral alfa (TNFa), (B) lnterleucina-1p (IL-1p), (C) lnterleucina-6 (IL-6), (D) Relación del activador receptor del ligando kappa-B del factor nuclear (RANKL) y Osteoprotegerina (OPG), y los gráficos individuales para (E) OPG, (F) y RANKL y genes conocidos para promover la formación ósea; (G) Osterix, (H) Colágeno, tipo I, al (C o lla l) e (I) la osteocalcina en el hueso cortical de ratones ovariectomizados (ovx) de 14 semanas de edad tratados con vehículo (veh) o una mezcla de tres cepas de probióticos de Lactobacillus (L. mix) durante 6 semanas, empezando dos semanas antes de ovx o la cirugía placebo para estudiar el efecto preventivo de tratamiento probiótico sobre la pérdida de masa ósea inducida por ovx. Los valores se expresan como media ± SEM, n = 9-10. *P < 0,05 en comparación con el tratamiento veh, prueba t de Student.
La Figura 6 divulga que la excreción fraccional de Ca se incrementó mediante la ovx en el veh tratado pero no en ratones tratados con L. para o la L. mix Ca y la creatinina se midieron en el suero y la orina de los ratones de 14 semanas de edad que habían sido tratados con vehículo (veh), una sola cepa de Lactobacillus (L) (L. para) o una mezcla de tres cepas (L. mix) durante 6 semanas, a partir de dos semanas antes de ovx o la cirugía placebo. La excreción de Ca fraccional urinaria se calculó con la fórmula FECa = (orina Ca x creatinina sérica) / (suero Ca x creatinina de orina). Los valores se proporcionan como media ± SEM, n=5 a 10 en cada grupo. *p < 0,05. Prueba t de Student de ovx vs. placebo. # p < 0,05, ANOVA seguido por la prueba post hoc de Dunnett dentro de los grupos, ovx L. para y L. mix en comparación con veh de ovx.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere, en una realización, a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, o a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, en combinación con al menos una cepa probiótica de Lactobacillus plantarum, para su uso en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis, y/o en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o prevención de la pérdida de masa ósea en un mamífero, preferentemente en un ser humano.
La presente divulgación también se refiere a al menos una cepa probiótica para su uso en el tratamiento o la prevención de osteoporosis mediante la prevención de la pérdida de hueso cortical, mediante la prevención de la pérdida de contenido mineral óseo, y mediante la prevención de resorción ósea.
El hueso cortical constituye aproximadamente el 80% del hueso en el cuerpo y varios estudios han demostrado que el hueso cortical es el principal determinante de la resistencia ósea y por lo tanto la susceptibilidad de fractura. Se ha demostrado en los experimentos de la presente memoria que una cepa prebiótica de la especie Lactobacillus paracasei ya sea solo o en combinación con las cepas de la especie Lactobacillus plantarum previene la pérdida de masa ósea cortical. También está indicado en los experimentos de la presente memoria que el tratamiento probiótico altera el estado inmune en el hueso que resulta en la resorción ósea atenuada. Además, también se muestra en los experimentos de la presente memoria que el contenido mineral óseo no se redujo en el grupo probiótico comparado con el grupo vehículo (Figuras 4A a 4C). El contenido mineral óseo en el hueso cortical fue mayor en ambos grupos probióticos en comparación con el grupo de vehículo (p < 0,05, Figura 4B).
La presente divulgación también se refiere a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, o a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, en combinación con al menos una cepa probiótica de Lactobacillus plantarum, para su uso en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis, para la prevención de la pérdida de contenido mineral óseo, para la prevención de la pérdida de masa ósea en un mamífero, preferentemente en un ser humano.
La presente divulgación también se refiere a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, o a la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, en combinación con al menos una cepa probiótica elegida de Lactobacillus plantarum, para su uso en la prevención de la pérdida de contenido mineral óseo, para la prevención de la pérdida de masa ósea en un mamífero, preferentemente en un ser humano.
En una realización de la invención, al menos dos o más cepas de Lactobacillus plantarum se usan conjuntamente en una combinación con la cepa probiótica Lactobacillus paracasei 8700:2, d Sm 13434. También se divulga al menos dos o más, por ejemplo, tres o más cepas de Lactobacillus paracasei usadas conjuntamente en combinación con al menos una cepa de Lactobacillus plantarum
En una realización de la invención, la cepa probiótica es viable, inactiva o muerta. En una realización de la invención, dichas cepas están presentes en una composición que comprende adicionalmente al menos un vehículo. El portador puede ser cualquier portador usado convencionalmente en, por ejemplo, un suplemento dietético. El portador puede ser cualquier portador a base de cereales, tales como un portador de harina de avena o portador de cebada que puede ser utilizado en un alimento funcional o cualquier otro tipo de alimentos. El portador puede ser agua o cualquier otro disolvente acuoso en el que la cepa probiótica se mezcla antes de la ingesta.
La composición puede ser complementada con Ca2+adicional en la forma de, por ejemplo, una sal, por ejemplo, carbonato de calcio, cloruro de calcio, sales de calcio de ácido cítrico, gluconato de calcio, glicerofosfato de calcio, lactato de calcio, óxido de calcio, sulfato de calcio. La ingesta diaria recomendada (RDI) de Ca2+ es de 800 mg. La cantidad de Ca2+ en la composición puede estar en el intervalo de 10-40% de la IDR, preferentemente en el intervalo del 15-30% de la IDR. Por lo tanto, la cantidad de Ca2+ por ejemplo, en forma de una sal en la composición puede estar en el intervalo de 80 - 320 mg, preferentemente 120 -240 mg. La cantidad de Ca2+ añadida a la composición puede ser ajustada a cualquier cantidad dentro del intervalo anterior a fin de que la composición sea todavía estable y proporciona a sus efectos beneficiosos.
La composición puede ser una composición seca, no fermentadas o una composición fermentada. En el caso de una composición seca, no fermentada, la fermentación se lleva a cabo después de la ingesta de la composición por un individuo, es decir, en el tracto gastrointestinal. Además, las cepas pueden estar presentes en la composición como cepas liofilizadas.
La cepa probiótica de Lactobacillus paracasei puede ser seleccionada entre Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434. Se divulga también la cepa probiótica de Lactobacillus paracasei 02:A, DSM 13432. La cepa probiótica de Lactobacillus plantarum se puede elegir de Lactobacillus plantarum 299, DSM 6595, Lactobacillus plantarum 299v, DSM 9843, Lactobacillus plantarum HEAL 9, DSM 15312, Lactobacillus plantarum SANAR 19, DSM 15313, y Lactobacillus plantarum sAnAR 99, DSM 15316.
Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 y Lactobacillus paracasei 02:A, DSM 13432, ambas fueron depositadas el 10 de abril de 2000 ante la Deutsche Sammlung von Mikroorganimsen und Zellkulturen GmbH.
Lactobacillus plantarum HEAL 9, DSM 15312, Lactobacillus plantarum HEAL 19, DSM 15313 y Lactobacillus plantarum HEAl 99, DSM 15316 fueron depositadas el 28 de noviembre de 2002 ante la Deutsche Sammlung von Mikroorganimsen und Zellkulturen GmbH.
Lactobacillus plantarum 299v, DSM 9843, fue depositada el 21 de marzo de 1995 y Lactobacillus plantarum 299, DSM 6595, fue depositada el 5 de julio de 1991 ante la Deutsche Sammlung von Mikroorganimsen und Zellkulturen GmbH.
En una realización de la invención, la composición que incluye la(s) cepa(s) probiótica(s) puede ser seleccionada entre el grupo que consiste en un producto alimenticio, un suplemento dietético, un alimento médico, un alimento funcional y un producto nutricional.
En el caso en el que dicha composición es un producto alimenticio, puede ser seleccionado entre el grupo que comprende bebidas, yogures, zumos, helados, panes, galletas, cereales, barras de salud y untables.
Cuando cualquiera de las cepas mencionadas anteriormente se utiliza en una composición tal como un suplemento dietético, el(los) portador(es) a añadir son conocidos para una persona experta. Cualesquiera otros ingredientes que se utilizan normalmente en los suplementos dietéticos son conocidos para una persona experta y también se pueden añadir de forma convencional junto con las cepas.
En una realización de la invención, la(s) cepa(s) prebiótica(s) mencionada(s) anteriormente están presentes en una composición en una cantidad de aproximadamente 1*106 a aproximadamente 1*1014 UFC, preferentemente 1*108 a 1 x1012, y más preferentemente de 1*109 a 1*1011. Las cepas también pueden ser usadas sólo en la cantidad anterior en agua o cualquier otro vehículo acuoso en el que se añaden o mezclan antes de la ingesta de las cepas.
La invención es adecuada para ser utilizada por los mamíferos, preferentemente seres humanos, tales como ancianos, posmenopáusicas y las premenopáusicas, en los que la pérdida de hueso, la pérdida de contenido mineral óseo y la pérdida de masa ósea aumentada o la resorción ósea son o pueden convertirse en un problema.
Las personas sanas pueden, naturalmente, beneficiarse también de la invención con el fin de mantenerse saludables y evitar que se enfermen por la osteoporosis.
Sección experimental
Experimento 1
Materiales y procedimientos
"Soluciones de Transporte": volumen total de 6 ml
Las soluciones de transporte contenían solución salina equilibrada de Hank (HBSS) con Ca y Mg, Hepes (2%), glutamina (4 mM), D-Glc (3, 5 g/I) y CaC^-2 H2O (1,47 g/l). El análisis de la solución dio un [Ca2+] en 10,65 mM. "Solución basal"
Similar a la solución de transporte, pero sin la adición de calcio externo. El análisis de esta solución dio un [Ca2+] 1,22 mM.
Experimento 1:
1. Control de la solución de transporte sola
2. Lactobacillus plantarum liofilizada 299 v. 0,788 mg correspondientes a 4,02 * 108 bacterias/6 ml en la solución de transporte
3. Lactobacillus plantarum 299v. 4,02 * 108 bacterias/6 ml en solución de transporte
4. Lactobacillus plantarum 299. 4,95 * 108 bacterias/6 ml en la solución de transporte
5. Lactobacillus plantarum HEAL 19, 4,95 * 108 bacterias/6 ml en solución de transporte
6. AMJ 1277. 4,95 * 108 bacterias/6 ml en solución de transporte. AMJ 1277 es una forma mutada de Lactobacillus plantarum 299v.
Experimento 2:
1. CNCM I-2332, Lactobacillus acidophilus (La 10); 4,95 * 108 bacterias/6 ml en solución de transporte 2. Lactobacillus plantarum 299 v. 4,02 * 108 bacterias/6 ml en solución de transporte
3. Control - solución de transporte sola
Todas las cepas excepto la cepa La10 se cultivaron aeróbicamente en 30 ml de MRS. (30 °C, 210 rpm). La10 se cultivó en 37 °C y cubrió con nitrógeno filtrado estéril antes de sellar. El número de células inoculadas fue de 3 * 108/matraz. Las bacterias se precultivaron durante la noche y estuvieron en fase exponencial en inoculación. Las células se cosecharon en OD600 = 0,1-0,5 y se recogió para cada cepa un volumen correspondiente a 4,02 * 108 células. Estas muestras se centrifugaron a 5000 rpm, 3 min, el sobrenadante se vertió y las células se resuspendieron en NaCI (0,9%). Las células se centrifugaron de nuevo y el sobrenadante se decantó. El sedimento lavado se suspendió ahora en la solución de transporte.
Las células Caco-2 se lavaron con PBS (2 veces) antes de la prueba. 45Ca Ch (74 kBq/ml) se añadieron a las soluciones de transporte. A continuación, se añadió la mezcla, en un volumen de 0,5 ml, apicalmente a células Caco-2 que crecen en insertos. Cada pozo entonces ha obtenido 6,7 * 107 bacterias/ml. Sólo la solución basal (1,5 ml) que contiene sólo el endógeno [Ca2*] en HBSS (1,22 mM) se añadió la Cámara basal. Las suspensiones y los controles se dejaron funcionar en las células Caco-2 durante 2 h. Fueron entonces aspiradas y las células se lavaron con regulador de pH de lavado enfriado con hielo 3 veces de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento W099/02170. Las células Caco-2 se lisaron en 0,5 ml de NaOH (0,5 M). Las soluciones en las cámaras básales se recogieron para la medición del transporte con la ayuda de centellador (Tri-carb 2800TR, Perkin Elmer). Se analizaron los Usados para 45Ca, sino también para el contenido de proteína. Todos los valores medidos de Ca2+ transporte/absorción se normalizaron en contra del contenido de proteínas en las células respectivas. Todos los pocillos se comprueban antes y después de la incubación con las soluciones de ensayo con respecto a la resistencia transepitelial (TEER). Antes y después de los ensayos, no pudieron observarse diferencias en TEER. TEER se mide para asegurarse de que el epitelio no se filtre. A diferencia de resistencia después de un ensayo puede conducir a la sospecha de que las uniones intercelulares pueden haber sido dañadas por las soluciones
utilizadas.
Resultados
Para permitir la comparación de los resultados de los experimentos 1 y 2, el transporte y datos de absorción de las cepas estudiadas se han normalizado en contra de la solución de control sin bacterias. Por lo tanto, todos los resultados se presentan como un porcentaje del control (de manera similar a como se hace en el documento de patente W099/02170). También hay que señalar que los experimentos 1 y 2 se realizaron en los días 16 y 21 de cultivo celular, respectivamente. En general, se observa que las desviaciones estándar de los resultados obtenidos son relativamente grandes. Esto podría ser debido a alguna forma de agregación de bacterias y Ca2+, dando lugar a una variación en la disponibilidad de Ca2+. Esto no se observa para las bacterias liofilizadas donde las desviaciones estándar fueron relativamente pequeñas en comparación con las muestras restantes.
Transporte de Ca2+
Los resultados del experimento 1 mostraron una mejoría significativa del transporte de Ca2+ cuando la cepa AMJ1277 estuvo presente (134,7 ± 18,9%, p = 0,002), ver Figura 1. Ninguna de las otras cepas (Lp299v liofilizado y viable, Lp299, Lp HEAL 19) dio diferencias significativas en el transporte de Ca2+, ver cuadro 1. En el experimento 2, donde La 10 y Lp299V se analizaron, no se detectaron diferencias significativas en el transporte de Ca2+ al comparar las muestras con Lp299V en comparación con el control sin bacterias (p = 0,2). Para La10 se observó una ligera disminución del transporte de Ca2+ en presencia de las mismas bacterias (79,5 ± 19,3%) y este cambio fue significativa (p = 0,049).
Absorción de Ca2+
Los datos de absorción presentados aquí muestran la cantidad de Ca2+ presente en las células después de 2 h. Para una estimación de los datos reales de absorción, se deben agregar las cantidades intracelulares de Ca2+ a la cantidad de Ca2+ detectadas en los compartimentos laterales. La suma de estos datos describe la cantidad total de Ca2+ que se ha transportado a través de la membrana apical. Los resultados de estos experimentos muestran generalmente una reducción en intracelular [Ca2+] en la presencia de bacterias, en comparación con las soluciones control libres de bacterias, véase la Figura 2. Sin embargo, sólo las diferencias de la Lp299V liofilizado y viable, fueron significativas (p = 0,04 y p = 0,02). Tenga en cuenta, que los niveles de Ca2+ intracelulares intermedios son sólo un pequeño porcentaje en comparación con la cantidad transportada de Ca2+. Debido a esto, el efecto demostrado de la absorción de Ca2+ no tiene el mismo impacto que los efectos sobre el transporte. Esto se puede observar por liofilizado y viable Lp299v, que tiene un [Ca2+] intracelular mayor, pero no demuestran una mejora en el transporte.
Conclusión
En la presencia de la cepa AMJ1277, un Lactobacillus plantarum 299v un mutante, un transporte aumentado y hasta una absorción total de calcio se observa en comparación tanto con el control y las cepas restantes. Por lo tanto, existe una variación entre las cepas analizadas.
Experimento 3
Modelo de ratón ovariectomizado y tratamiento probiótico
La ovariectomía (ovx) resulta en la pérdida de masa ósea asociada con el estado inmunitario alterado. El propósito de este experimento fue determinar si el tratamiento probiótico protege a los ratones de la pérdida de hueso inducida por ovx. Los ratones fueron tratados con una sola cepa de Lactobacillus (L), L. paracasei DSM 13434 (L. para) o una mezcla de tres cepas, L. paracasei DSM 13434, L. plantarum DSM 15312 y DSM 15313 (L. mix) dada en el agua potable durante 6 semanas, a partir de dos semanas antes de la ovx.
Los ratones hembra C57BL/6N de seis semanas de edad se adquirieron de Charles River (Alemania). Los ratones fueron alojados en un centro de animal estándar bajo temperatura controlada (22 °C) y fotoperiodo (12 h de luz, 12 horas de oscuridad) y tuvieron libre acceso a agua fresca y comprimidos alimenticios sin soya R70 (Lactamin AB, Estocolmo, Suecia). El modelo ovariectomizado (ovx) para la osteoporosis se incluye en las directrices de la FDA para la evaluación preclínica y clínica para los agentes utilizados para el tratamiento de la osteoporosis posmenopáusica. El tratamiento con probióticos comenzó dos semanas antes de la ovx para estudiar el efecto preventivo de tratamiento probiótico en la pérdida de masa ósea inducida por la ovx. Los ratones fueron tratados con una sola cepa de Lactobacillus (L), L paracasei DSM 13434 (L. para) o una mezcla de tres cepas, L. paracasei DSM 13434, L. plantarum DSM 15312 y DSM 15313 se refiere como L. mix durante 6 semanas. Las cepas probióticas fueron seleccionados con base en sus propiedades anti-inflamatorias. Las cepas de L. fueron dadas en el agua potable a una concentración de 109 unidades formadoras de colonias (ufc)/ml mientras que los ratones de control recibieron agua del grifo con vehículo. Las botellas de agua se cambiaron todas las tardes. La
supervivencia de las cepas L. en las botellas de agua se comprobó con regularidad y después de 24 horas la concentración bajó una unidad de registro de aproximadamente 108 ufc/ml. Cada ratón bebió en promedio 4,5 ml de agua/día. Después de dos semanas de tratamiento con probióticos, los ratones fueron sometidos a una cirugía placebo u ovx bajo anestesia por inhalación con isoflurano (Forene; Abbot Escandinavia, Solna, Suecia). Cuatro semanas después de la cirugía, se recogió sangre de la vena axilar bajo anestesia con Ketalar/Domitor vet, y posteriormente se mataron a los ratones mediante dislocación cervical. Los tejidos para la preparación de ARN fueron retirados de inmediato y se congelaron en nitrógeno líquido para su posterior análisis. Los huesos se cortaron y se fijaron en paraformaldehído al 4%. Todos los experimentos animales se aprobaron por los comités éticos locales para la investigación animal de la Universidad de Gotemburgo.
Tomografía computarizada cuantitativa periférica (pQCT)
Las tomografías computarizadas se realizaron con pQCT XCT RESEARCH M (versión 4.5B, Norland, Fort Atkinson, Wisconsin, E e . UU.) que funciona a una resolución de 70 pm. Se analizaron los parámetros del hueso cortical ex vivo en la región diafisaria media del fémur.
uCT de alta resolución
Los análisis de pCT de alta resolución se llevaron a cabo en el fémur distal mediante el uso de un pCT modelo 1172 (Bruker micro-CT, Aartselaar, Bélgica). Se tomó la imagen de los fémures con una tensión del tubo de rayos X de 50 kV y corriente de 201 pA, con un filtro de aluminio 0,5 mm. La rotación angular de exploración fue de 180° y el incremento angular de 0,70°. El tamaño del voxel fue 4,48 pm isótropa. Se empleó el NRecon (versión 1.6.9) para llevar a cabo la reconstrucción después de las exploraciones. En el fémur, se seleccionó el hueso trabecular proximal a la placa de crecimiento distal para los análisis dentro de un volumen de interés (hueso cortical excluido) que comienza a una distancia de 538,5 pm desde la placa de crecimiento, y que se extiende una distancia longitudinal adicional de 134,5 pm en la dirección proximal. Se realizaron las mediciones corticales en la región diafisaria del fémur a partir de una distancia de 3.59 mm de la placa de crecimiento y que se extiende una distancia longitudinal adicional de 134,5 pm en la dirección proximal. Para el análisis de la densidad mineral ósea, el equipo se calibró con muestras estándar de cerámica.
Aislamiento de ARN y PCR en tiempo real
El ARN total se preparó a partir de hueso cortical (fémur con los extremos removidos y la médula ósea purgada con PBS antes de la congelación) y la médula ósea utilizando reactivo TriZol (Invitrogen, Lidingo, Suecia). El ARN se transcribió a la inversa en ADNc utilizando el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (#4368814, AppliedBiosystems, Estocolmo, Suecia). Los análisis RT-PCR se realizaron utilizando el Sistema de detección de secuencia 7000 ABI Prism Prism (PE Applied Biosystems). Se utilizó ensayos de RT-PCR prediseñados de Applied Biosystems (Suecia) para el análisis de IL-6 (Mm00446190_ml), IL-1p (Mm00434228_ml), TNFa (Mm00443258_ml), RANKL (Mm00441908_ml), OPG (Mm00435452_ml), Runx2 (Mm00501580_ml), Col1a1 (Mm00801666_gl), osteocalcina (Mm01741771_gl) y niveles de ARNm de TGFp1 (Mm03024053_ml) ARNm. La abundancia de ARNm de cada gen se calculó utilizando el "procedimiento estándar de la curva" (Boletín Usuario 2; PE Applied Biosystems) y se ajustó para la expresión de ARN ribosomal 18S (4308329).
Análisis de sanare
Los análisis se realizaron según las instrucciones del fabricante para el calcio en suero y orina (Kit para ensayo de calcio QuantiChrom™ (DICA-500), Sistemas de bioensayos, Hayward, CA, EE. UU.), suero y creatinina en orina (Kit para creatinina en ratones, Crystal Chem, Downers Grove, Illinois, EE. UU.). Como un marcador de la resorción ósea, los niveles séricos de los fragmentos de colágeno tipo I se evaluaron utilizando un kit ELISA RatLaps (Nordic Bioscience Diagnostics, Herlev, Dinamarca). Los niveles séricos de osteocalcina, un marcador de formación ósea, se determinaron con un kit de ensayo inmunorradiométrico de osteocalcina de ratón (Immutopics, San Clemente, CA).
Citometría de flujo
Las células de médula ósea se recogieron mediante lavado de 5 ml de PBS a través de la cavidad del hueso de un fémur usando una jeringa. Después de la centrifugación a 515 g durante 5 min, las células sedimentadas se resuspendieron en una solución de NH4CI al 0,83% con pH regulado Tris (pH 7,29) durante 5 minutos para lisar los eritrocitos y después se lavaron en PBS. Las células de médula ósea se resuspendieron en medio de cultivo RPMI (PAA Laboratories, Pasching, Austria) antes de su uso. El número total de leucocitos en la médula ósea se calculó usando un contador de células automatizado (Sysmex, Hamburgo, Alemania). Para los análisis de citometría de flujo, las células se tiñeron con anticuerpos conjugados con aloficocianina (APC) para CD4 para la detección de células T auxiliares (Beckton-Dickinson) y anticuerpos conjugados con isotiocianato de fluoresceína (FITC) para células T citotóxicas CD8 (Beckton-Dickinson) o anticuerpos conjugados con proteínas de peridininclorofila (PerCP) para Gr-1/Ly-6G (BioLegend) para eliminar los granulocitos y los anticuerpos conjugados con
FITC a CD11b para la detección de células precursoras OCL (Beckton-Dickinson). Las células se sometieron después a análisis clasificador de células activado por fluorescencia (FACS) en un FACSCalibur (BD Pharmingen, Franklin Lakes, NJ EE. UU.) y se analizaron utilizando el software FlowJo. Los resultados se expresan como la frecuencia de células (%).
Análisis estadístico
Todos los resultados estadísticos se presentan como la media ± SEM. Se calcularon las diferencias entre grupos utilizando pruebas t no apareados. Las comparaciones entre múltiples grupos se calcularon mediante un análisis unidireccional de la varianza (ANOVA) seguido por la prueba de Dunnett para corregir para comparaciones múltiples. Un p < 0,05 de dos colas fue considerado significativo.
Resultados - El tratamiento con probióticos protege a los ratones de la pérdida de hueso cortical inducida por ovx y resorción ósea aumentada
Para determinar el efecto preventivo del tratamiento probiótico sobre la pérdida de masa ósea inducida por ovx, los ratones de ocho semanas de edad fueron tratados con vehículo (veh), una sola cepa de Lactobacillus (L) (L. para) o una mezcla de tres cepas (L. mix) durante 6 semanas, empezando dos semanas antes de la cirugía placebo u ovx (Figura 3A). El peso del útero se puede utilizar como un indicador de estado de estrógeno y la ovx resultó en una disminución prevista en el peso del útero que fue similar para todos los tratamientos (Tabla 2). Además, la ovx aumentó el peso corporal, la grasa corporal y el peso del timo en todos los grupos de tratamiento (Figura 3B, Tabla 2).
En los ratones tratados con vehículo, la ovx disminuyó el contenido mineral óseo cortical y el área del hueso en sección transversal cortical en la región diafisaria intermedia del fémur (p < 0,01, Figuras 4A a 4C). Es importante destacar que, la ovx no redujo el contenido mineral óseo cortical o el área del hueso en sección transversal cortical en los ratones tratados con L. para o L. mix (Figuras 4A a 4C). El contenido mineral óseo cortical fue mayor en los ratones a los que se les realizó una ovx tratados con L para y L. mix en comparación con los ratones a los que se les realizó una ovx tratados con veh (p < 0,05, Figura 4b ). Para determinar si el efecto preventivo de probióticos en el hueso cortical es causado por la resorción ósea afectada, se analizaron los niveles séricos de telopéptidos C-terminal (RatLaps). La ovx aumentó los niveles de RatLaps en ratones tratados con veh (+45±11%, p < 0,05 sobre placebo) pero no en ratones tratados con L. para (20±9%, no significativo) o tratados con L. mix (23±9%, no significativo). La formación de hueso, como se indica por la osteocalcina en suero, no se vio afectada significativamente por el tratamiento probiótico (datos no mostrados). Los parámetros de hueso trabecular (BV/TV y la BMD trabecular) en la región metafisaria distal del fémur se redujeron significativamente por ovx en todos los grupos de tratamiento (p < 0,05, Tabla 1). Estos hallazgos demuestran que el tratamiento probiótico protege a los ratones de la pérdida de hueso cortical inducida por ovx y la resorción ósea aumentada.
Los probióticos reducen la expresión de citocinas inflamatorias y la relación RANKL/OPG en hueso cortical
Para investigar el mecanismo para el efecto del tratamiento probiótico sobre la pérdida de hueso cortical inducida por ovx, medimos los transcritos de ARNm relacionados con el hueso cortical (Figura 5). Los niveles de ARNm de TNFa, una atocina inflamatoria producida por las células mieloides que promueve la osteoclastogénesis e IL-1p, un regulador descendente de los efectos de TNFa en el hueso, se redujo significativamente por el tratamiento probiótico en comparación con el tratamiento con vehículo en ratones a los que se les realizó una ovx (TNFa -46%, p < 0,05; IL-1p -61%, p < 0,05, Figura 5A y 5B). La expresión de IL-6 no difirió entre tratamientos, aunque hubo una tendencia a disminución de la expresión en el grupo de tratamiento probiótico (-20%, p=0,12, Figura 5C).
La relación RANKL/osteoprotegerina (OPG) es un determinante importante de osteoclastogénesis y, de ese modo, la resorción ósea. Es importante destacar que el tratamiento probiótico disminuyó la relación RANKL/OPG (-45%, p < 0,05 en comparación con veh, la Figura 5D) y esto fue causado por una expresión de OPG aumentada (OPG; 28%, p < 0,05 y RANKL; 1%, no significativa, Figura 5E y 5F). En contraste, los niveles de ARNm de tres genes asociados a osteoblastos, Osterix, Col1a1 y osteocalcina no fueron afectados por el tratamiento probiótico (Figuras 5G y 5H).
Estado inmune en la médula ósea
Algunos de los efectos anti-inflamatorios ejercidos por las bacterias probióticas se piensa que están mediados a través de la inducción de células T reguladoras (Treg). El análisis FACS de la médula ósea mostró que la frecuencia de Treg (CD4+ CD25+ Foxp3+) se redujo por ovx en veh tratada pero no en ratones tratados con probióticos (Tabla 2). Las células T69 son dependientes de TGFp para su inducción y el mantenimiento y la expresión de TGFp1 se incrementó en médula ósea de ratones tratados con probióticos por ovx en comparación con los tratados con vehículo por ovx (+77±19%, p < 0,01).
También se examinó si el tratamiento probiótico modula la frecuencia de las células precursoras de los osteoclastos
(preOCL) en la médula ósea. La frecuencia de preOCLs (CD11b+ Gr1-) en la médula ósea no se vio afectada por ovx en cualquiera de los grupos de tratamiento (Tabla 2).
Metabolismo mineral
La excreción fraccional urinaria de caldo (FECa = (Ca en orina x creatinina en plasma) / (Ca en plasma x creatinina en orina)) se incrementó mediante ovx en ratones tratados con veh (+86%, p < 0,05, Figura 6). El aumento inducido por ovx en FECa se impidió completamente mediante el tratamiento probiótico que sugiere la acumulación mejorada de Ca (Figura 6). Hubo una tendencia de niveles de suero aumentados de Ca después de ovx en ratones tratados con veh, pero no con probióticos (+13%, p=0,05, Tabla 3). La relación de Ca/creatinina en orina no se vio afectada por ovx en cualquiera de los grupos de tratamiento (Tabla 3).
Tabla 3
En conclusión, los datos de la presente invención muestran que los probióticos en agua potable reduce la pérdida de masa ósea cortical inducida por ovx que sugiere un potencial terapéutico para los probióticos en el tratamiento de la osteoporosis posmenopáusica. Además, los resultados apoyan la labor de la microbiota intestinal para la regulación de la masa ósea.
Los tratamientos con L. para y con L. mix protegieron a los ratones de la pérdida de masa ósea cortical inducida por ovx y de la resorción ósea aumentada. El contenido mineral óseo cortical fue mayor en los ratones a los que se les realizó una ovx tratados con L. para y mezcla de L en comparación con los ratones a los que se les realizó una ovx tratados con vehículo (veh). La excreción fraccional urinaria de calcio y los RatLaps marcadores de la resorción se incrementaron mediante la ovx en los ratones tratados con veh, pero no en los ratones tratados con L. para o la L. mix. Por lo tanto, los probióticos inhiben la excreción del calcio inducida por ovx en la orina. El tratamiento con probióticos redujo la expresión de las dos citocinas inflamatorias, TNFa e IL-1p, y aumentó la expresión de OPG en el hueso cortical de los ratones a los que se les realizó una ovx. Además, la ovx disminuyó la frecuencia de células T reguladoras (CD4+ CD25+ Foxp3+) en la médula ósea de ratones tratados con veh, pero no con probióticos. Por lo tanto, los probióticos inhiben la disminución inducida por ovx en la frecuencia de células T reguladoras en la médula ósea. Además, los probióticos aumentaron la expresión de TGFp1 en la médula ósea y los probióticos inhibieron el aumento inducido por ovx de marcador de la resorción Rat Lap. En conclusión, el tratamiento con L. para o la L. mix previene la pérdida de masa ósea cortical inducida por ovx. Los hallazgos de la invención indican que estos tratamientos probióticos alteran el estado inmunológico en el hueso como se demuestra mediante la expresión reducida de citocinas inflamatorias y la expresión de OPG aumentada, que resulta en la resorción ósea atenuada en ratones a los que se les realizó una ovx.
Experimento 4
En este experimento se probó si los mismos probióticos como se mencionó anteriormente afectarán los mismos parámetros como los anteriores (es decir, la masa ósea cortical, el contenido mineral óseo, la resorción ósea) en ratones hembra que ya han sido ovariectomizadas y por lo tanto ya han perdido masa ósea. Los ratones hembra ovariectomizadas son un modelo bien establecido de la pérdida de masa ósea postmenopáusica en mujeres. La línea de tiempo de los experimentos será como se indica a continuación.
Ratones Ovariectomizados => 4 semanas => tratamiento con probióticos durante 6 semanas => Fin
Los probióticos se darán en el agua potable y comenzarán primero 4 semanas después de ovariectomización. La dosis será 109 ufc/ml/día y ovariectomización tendrá lugar a las 9-10 semanas de edad. Los análisis después de experimento terminado serán (CT) del hueso para medir la densidad y el espesor, así como el análisis de suero y los marcadores óseos.
Claims (11)
1. Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis, y/o en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o la prevención de pérdida de masa ósea, en un mamífero.
2. Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en combinación con al menos una cepa probiótica de Lactobacillus plantarum.
3. Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, en la que dicha al menos una cepa probiótica de Lactobacillus plantarum se elige entre Lactobacillus plantarum 299, DSM 6595, Lactobacillus plantarum 299v, DSM 9843, Lactobacillus plantarum HEAL 9, DSM 15312, Lactobacillus plantarum HEAL 19, DSM 15313 y Lactobacillus plantarum HEAL 99, DSM 15316.
4. Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en combinación con Lactobacillus plantarum HEAL 9, DSM 15312 y Lactobacillus plantarum HEAL 19, DSM 15313.
5. Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el mamífero es un ser humano.
6. Una composición que comprende Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis, y/o en el aumento de la absorción de iones Ca2+ en el tratamiento o la prevención de pérdida de masa ósea, en un mamífero, en la que la composición comprende adicionalmente al menos un vehículo.
7. Una composición que comprende Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, en la que dicha composición se proporciona en forma de un producto alimenticio, un suplemento dietético, un alimento médico, un alimento funcional o un producto nutricional.
8. Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una composición que comprende Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con la reivindicación 6 o 7, en la que los lactobacilos están presentes en una cantidad de aproximadamente 1*10® a aproximadamente 1*1014 UFC.
9. Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con la reivindicación 8 o una composición que comprende Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en la que los lactobacilos están presentes en una cantidad de aproximadamente 1*108 a aproximadamente 1*1012UFC.
10. Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con la reivindicación 9 o una composición que comprende Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en la que los lactobacilos están presentes en una cantidad de aproximadamente 1*109 a aproximadamente 1*1011 UFC.
11. Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 u 8 a 10, o una composición que comprende Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, en el que la osteoporosis es osteoporosis posmenopáusica.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE1350414 | 2013-04-03 | ||
| SE1351571 | 2013-12-20 | ||
| PCT/SE2014/050399 WO2014163568A1 (en) | 2013-04-03 | 2014-04-03 | Probiotic strains for use in treatment or prevention of osteoporosis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2804615T3 true ES2804615T3 (es) | 2021-02-08 |
Family
ID=51659047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES14779522T Active ES2804615T3 (es) | 2013-04-03 | 2014-04-03 | Cepas probióticas para su uso en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10245290B2 (es) |
| EP (1) | EP2981274B1 (es) |
| JP (1) | JP6103675B2 (es) |
| KR (2) | KR102000514B1 (es) |
| CN (3) | CN116889579A (es) |
| AU (1) | AU2014250113B2 (es) |
| BR (1) | BR112015025256B1 (es) |
| CA (1) | CA2908051C (es) |
| DK (1) | DK2981274T3 (es) |
| ES (1) | ES2804615T3 (es) |
| HK (1) | HK1220129A1 (es) |
| HR (1) | HRP20201139T1 (es) |
| MX (1) | MX371418B (es) |
| NZ (1) | NZ712959A (es) |
| PL (1) | PL2981274T3 (es) |
| PT (1) | PT2981274T (es) |
| RS (1) | RS60527B1 (es) |
| RU (1) | RU2636027C2 (es) |
| WO (1) | WO2014163568A1 (es) |
| ZA (1) | ZA201507275B (es) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101867768B1 (ko) | 2016-08-12 | 2018-06-15 | 한국식품연구원 | 락토바실러스 아시도필루스를 포함하는 갱년기 예방 또는 치료용 조성물 |
| WO2018030837A1 (ko) * | 2016-08-12 | 2018-02-15 | 한국식품연구원 | 락토바실러스 아시도필루스를 포함하는 갱년기 예방 또는 치료용 조성물 |
| CN106858605A (zh) * | 2016-12-26 | 2017-06-20 | 吉林舒润生物科技有限公司 | 一种用于预防及治疗骨吸收相关疾病的益生菌钙功能食品 |
| MX2019008292A (es) * | 2017-01-12 | 2019-09-16 | Probi Ab | Composiciones probioticas y usos de las mismas. |
| TWI604052B (zh) * | 2017-02-20 | 2017-11-01 | 景岳生物科技股份有限公司 | 促進骨質再生的植物乳桿菌菌株ｇｍｎｌ－６６２及其組合物 |
| CN108567800A (zh) * | 2017-03-07 | 2018-09-25 | 景岳生物科技股份有限公司 | 副干酪乳杆菌菌株gmnl-653用于制备抗骨质流失的组合物的用途 |
| TWI607758B (zh) * | 2017-03-07 | 2017-12-11 | 景岳生物科技股份有限公司 | 改善乾癬症狀的副乾酪乳桿菌菌株ｇｍｎｌ－６５３及其組合物 |
| TWI607759B (zh) * | 2017-07-07 | 2017-12-11 | 景岳生物科技股份有限公司 | 副乾酪乳桿菌菌株ｇｍｎｌ－６５３用於製備抗骨質流失的組合物的用途 |
| CN108624520B (zh) * | 2017-03-16 | 2022-01-25 | 景岳生物科技股份有限公司 | 促进骨质再生的植物乳杆菌菌株gmnl-662及其组合物 |
| CA3081210C (en) * | 2017-11-02 | 2023-04-11 | University-Industry Cooperation Group Of Kyung Hee University | Lactic acid bacteria and use for preventing or treating inflammatory diseases |
| CN108030096A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-05-15 | 浙江民生健康科技有限公司 | 一种钙铁锌与益生菌组合物及其应用 |
| RU2764639C1 (ru) * | 2018-02-02 | 2022-01-19 | Кобиолабс, Инк. | Штамм kbl396 lactobacillus plantarum и его применение |
| TWI664910B (zh) * | 2018-04-24 | 2019-07-11 | 葡萄王生技股份有限公司 | 乳酸桿菌屬、其醫藥組合物及可食用組合物於治療、預防或改善骨質疾病的用途 |
| AU2019289515A1 (en) | 2018-06-18 | 2021-01-28 | Probi Ab | Probiotic compositions and uses thereof |
| KR102107443B1 (ko) * | 2018-08-31 | 2020-05-07 | (주)바이오리듬 | 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 유산균 프로바이오틱스 제제 |
| US11980647B2 (en) | 2018-09-05 | 2024-05-14 | Solarea Bio, Inc. | Methods and compositions for treating musculoskeletal diseases, treating inflammation, and managing symptoms of menopause |
| EP3846830A4 (en) * | 2018-09-05 | 2022-07-06 | Solarea Bio, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MUSCULOSKELETAL DISEASES |
| KR102120479B1 (ko) * | 2018-10-30 | 2020-06-09 | 주식회사 종근당바이오 | 프로바이오틱스를 유효 성분으로 포함하는 이차성 골다공증의 예방 또는 치료용 조성물 |
| GB201905386D0 (en) * | 2019-04-16 | 2019-05-29 | Probi Ab | Probiotic compositions and uses thereof |
| CN111109607A (zh) * | 2020-01-10 | 2020-05-08 | 青岛康益生物科技有限公司 | 一种用于预防和治疗骨质疏松症的健康食品 |
| CN111718903A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-09-29 | 江南大学 | 一种筛选可预防和/或治疗骨质疏松的药物的方法 |
| CN111621449B (zh) * | 2020-07-02 | 2022-07-12 | 安徽善和生物科技有限公司 | 一种益生菌及其在继发性骨质疏松中的应用 |
| TWI770811B (zh) * | 2021-02-05 | 2022-07-11 | 國立臺灣大學 | 一種益生菌、其組合物及用途 |
| CN115607595B (zh) * | 2021-07-13 | 2023-12-22 | 百岳特生物技术（上海）有限公司 | 诺丽果发酵物于制备改善体态及肌肤状况的组合物的用途 |
| WO2023092150A1 (en) | 2021-11-22 | 2023-05-25 | Solarea Bio, Inc. | Methods and compositions for treating musculoskeletal diseases, treating inflammation, and managing symptoms of menopause |
| US20230190834A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-22 | Solarea Bio, Inc. | Immunomodulatory compositions comprising microbial entities |
| CN114634901B (zh) * | 2022-05-18 | 2022-08-30 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一种促进骨骼健康的干酪乳杆菌lc16及其培养方法与应用 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1003532B2 (en) * | 1997-07-05 | 2008-11-05 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Lactobacilli to increase absorption of minerals by intestinal cells |
| GB9920578D0 (en) | 1999-08-31 | 1999-11-03 | Nestle Sa | Composition for maintenance of bone or dental health or treatment of bone or dental disorders |
| SE0003100D0 (sv) | 2000-09-01 | 2000-09-01 | Probi Ab | New strains |
| SE529199C2 (sv) * | 2005-07-05 | 2007-05-29 | Probi Ab | Förstärkt absorption |
| CN1927010A (zh) * | 2005-09-06 | 2007-03-14 | 天津科技大学 | 具有增加骨密度、抑制血管紧张素转化酶功能的无乳糖发酵大豆乳及其制备方法 |
| WO2007040446A1 (en) * | 2005-10-06 | 2007-04-12 | Probi Ab | Use of lactobacillus for treatment of autoimmune diseases |
| JP2009114112A (ja) * | 2007-11-06 | 2009-05-28 | Tsujido Kagaku Kk | 抗骨粗鬆症剤 |
| JP2009114111A (ja) * | 2007-11-06 | 2009-05-28 | Tsujido Kagaku Kk | カルシウム吸収促進剤 |
| JP2009144111A (ja) * | 2007-12-18 | 2009-07-02 | Kansai Paint Co Ltd | 塗料組成物及び塗膜形成方法 |
| SE533778C2 (sv) | 2009-05-14 | 2011-01-11 | Probi Ab | Probiotisk fruktdryck |
| KR101279852B1 (ko) * | 2011-06-29 | 2013-07-09 | 주식회사 쎌바이오텍 | 골다공증 예방 또는 치료용 조성물 |
-
2014
- 2014-04-03 ES ES14779522T patent/ES2804615T3/es active Active
- 2014-04-03 MX MX2015014016A patent/MX371418B/es active IP Right Grant
- 2014-04-03 CN CN202310824073.1A patent/CN116889579A/zh active Pending
- 2014-04-03 WO PCT/SE2014/050399 patent/WO2014163568A1/en active Application Filing
- 2014-04-03 PT PT147795223T patent/PT2981274T/pt unknown
- 2014-04-03 AU AU2014250113A patent/AU2014250113B2/en active Active
- 2014-04-03 KR KR1020157030629A patent/KR102000514B1/ko active IP Right Grant
- 2014-04-03 EP EP14779522.3A patent/EP2981274B1/en active Active
- 2014-04-03 NZ NZ712959A patent/NZ712959A/en unknown
- 2014-04-03 DK DK14779522.3T patent/DK2981274T3/da active
- 2014-04-03 CN CN201480020011.4A patent/CN105188723A/zh active Pending
- 2014-04-03 PL PL14779522T patent/PL2981274T3/pl unknown
- 2014-04-03 JP JP2016506288A patent/JP6103675B2/ja active Active
- 2014-04-03 CA CA2908051A patent/CA2908051C/en active Active
- 2014-04-03 RU RU2015147106A patent/RU2636027C2/ru active
- 2014-04-03 US US14/782,138 patent/US10245290B2/en active Active
- 2014-04-03 KR KR1020177036076A patent/KR102129934B1/ko active IP Right Grant
- 2014-04-03 CN CN202310826128.2A patent/CN117064923A/zh active Pending
- 2014-04-03 RS RS20200844A patent/RS60527B1/sr unknown
- 2014-04-03 BR BR112015025256-7A patent/BR112015025256B1/pt active IP Right Grant
-
2015
- 2015-10-01 ZA ZA2015/07275A patent/ZA201507275B/en unknown
-
2016
- 2016-07-13 HK HK16108237.8A patent/HK1220129A1/zh unknown
-
2020
- 2020-07-20 HR HRP20201139TT patent/HRP20201139T1/hr unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2804615T3 (es) | Cepas probióticas para su uso en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis | |
| JP5923492B2 (ja) | 腸管神経系の改善に用いるためのプロバイオティクス株 | |
| Prisciandaro et al. | Probiotic factors partially improve parameters of 5-fluorouracil-induced intestinal mucositis in rats | |
| US20080102061A1 (en) | Use hydrolyzed medium containing microorganisms medicinally | |
| ES2336222T3 (es) | Una composicion que tiene actividades inmunorreguladoras que comprende lactobacillus pensosus. | |
| KR20200128501A (ko) | 성체줄기세포 유래의 나노베시클 및 이의 표적 치료용 용도 | |
| Salah et al. | Lactobacillus plantarum TN8 exhibits protective effects on lipid, hepatic and renal profiles in obese rat | |
| JP5925274B2 (ja) | 子宮内膜症の予防及び／又は改善剤及びこれを含んでなる飲食品組成物 | |
| ES2675309T3 (es) | Uso de una cepa de Lactobacillus rhamnosus para reducir la ganancia de peso y/o la resistencia a la insulina | |
| Szabo et al. | Safety evaluation of Lactobacillus pentosus strain b240 | |
| Arribas et al. | Evaluation of the preventative effects exerted by Lactobacillus fermentum in an experimental model of septic shock induced in mice | |
| JP5816273B2 (ja) | 経上皮抵抗の改善に用いるためのプロバイオティクス株 | |
| KR102593778B1 (ko) | 유산균의 생리활성 효능 증진용 조성물 | |
| WO2022223005A1 (zh) | 使用植物乳杆菌twk10来促进骨愈合的方法 | |
| Singh et al. | Introduction to Synbiotics | |
| Lawenius et al. | Role of Gut Microbiota, Gut-Brain and Gut Liver Axes in Physiological Regulation of Inflammation, Energy Balance, and Metabolism: Pasteurized Akkermansia muciniphila protects from fat mass gain but not from bone loss | |
| JP2024512621A (ja) | 乳酸菌の生理活性効果増強用組成物 |