ES2797483T3 - Composiciones y métodos comprendiendo una variante de enzima lipolítica - Google Patents

Abstract

Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma, donde la variante de enzima lipolítica o el fragmento activo de la misma presenta actividad lipolítica y comprende dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez o más modificaciones de aminoácido a una enzima lipolítica original con SEQ ID NO: 1, donde la primera modificación de aminoácido de la variante de enzima lipolítica o el fragmento activo de la misma es D130A, donde la variante de enzima lipolítica o el fragmento activo de la misma presenta al menos un 90 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, y donde la posición de aminoácido de la variante está numerada por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa establecida en SEQ ID NO: 1.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones y métodos comprendiendo una variante de enzima lipolítica

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[0001] Las enzimas lipolíticas, incluyendo las lipasas y las cutinasas, se han empleado en composiciones detergentes de limpieza para la eliminación de manchas aceitosas. Un mecanismo mediante el cual las enzimas lipolíticas funcionan es mediante la hidrólisis de triglicéridos para generar ácidos grasos. No obstante, estas enzimas normalmente son inhibidas por surfactantes y otros componentes presentes en la composición de limpieza, de tal forma que interfieren con su capacidad para eliminar las manchas aceitosas. En consecuencia, existe la necesidad de conseguir enzimas lipolíticas con una función mejorada y que puedan ser eficaces en el duro entorno de las composiciones de limpieza.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

[0002] En un primer aspecto, la invención da a conocer una variante de enzima lipolítica o un fragmento activo de la misma, donde la variante de enzima lipolítica o el fragmento activo de la misma comprende dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez o más modificaciones de aminoácido a una enzima lipolítica original que presenta la SEQ ID NO: 1, donde una primera modificación de aminoácido de la variante de enzima lipolítica o de un fragmento activo de la misma es D130A, donde la variante de enzima lipolítica o el fragmento activo de la misma presenta al menos un 90 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, y donde la posición de aminoácido de la variante está numerada por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginose establecida en SEQ ID NO: 1.

[0003] En otro aspecto, la invención también da a conocer una composición que comprende al menos una variante de enzima lipolítica, como se establece en las reivindicaciones.

[0004] En otro aspecto, la invención da a conocer un método de hidrólisis de un éster de ácido graso o triglicérido que comprende poner en contacto el éster de ácido graso o triglicérido con la variante de enzima lipolítica, según se establece en las reivindicaciones.

[0005] En otro aspecto, la invención da a conocer un método de limpieza, que comprende poner en contacto una superficie o un artículo con una composición que comprende al menos una variante de enzima lipolítica establecida en las reivindicaciones, opcionalmente, donde la superficie o el artículo es vajilla o tejido.

[0006] Otros aspectos y modos de realización de la invención se establecen en las reivindicaciones adjuntas y se describen con mayor detalle en la descripción adjunta.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

[0007] La presente invención da a conocer enzimas lipolíticas mejoradas, especialmente enzimas útiles para composiciones detergentes. En concreto, la presente invención da a conocer variantes de enzima lipolítica tal y como se establece en las reivindicaciones, presentando dos o más modificaciones, tal como una sustitución, en comparación con una enzima lipolítica original, que presentan actividad lipolítica mejorada, tal como hidrólisis mejorada de ésteres de ácido graso o triglicéridos o, por ejemplo, p-nitrofenil butirato, p-nitrofenil caprilato o pnitrofenil palmitato. La presente invención da a conocer variantes de enzimas lipolíticas, incluyendo, sin carácter limitativo, variantes de enzimas lipolíticas de lipasa, que son particularmente adecuadas y útiles en una variedad de aplicaciones de limpieza. La invención incluye composiciones que comprenden al menos una de las variantes de enzimas lipolíticas (p. ej., variantes de lipasas) expuestas en el presente documento. Algunas de dichas composiciones comprenden composiciones detergentes. La invención proporciona variantes de enzimas lipolíticas de especie Thermomyces y composiciones que comprenden una o más de dichas variantes de lipasas. Las variantes de enzima lipolítica de la presente invención pueden combinarse con otras enzimas útiles en composiciones detergentes. La invención también da a conocer métodos de limpieza utilizando variantes de enzima lipolítica de la presente invención.

[0008] La invención incluye variantes de enzima de enzimas lipolíticas tal y como se establece en las reivindicaciones.

[0009] Adicionalmente, la invención da a conocer modificaciones, tal como una sustitución, en dos, tres o más posiciones de aminoácido en una enzima lipolítica que puede ser útil en una composición detergente, en la que modificaciones favorables dan lugar a un índice de rendimiento mejorado (pl) de actividad lipolítica en comparación con la enzima lipolítica original, SEQ ID NO:1, tal y como se establece en las reivindicaciones. Estas posiciones de aminoácido pueden considerarse como posiciones útiles para modificaciones combinatorias a una enzima lipolítica original.

[0010] Salvo que se defina de otro modo en el presente documento, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que el que entienden comúnmente los expertos en la materia a la que pertenece esta invención. Aunque en la práctica de la presente invención se pueden utilizar muchos métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento, aquí se describen algunos métodos y materiales. Por consiguiente, los términos que se definen justo a continuación se encuentran definidos de manera más completa en referencia a la memoria en su conjunto.

[0011] Asimismo, en el sentido en que se usan en la presente memoria, los términos singulares "un", "una", "el" y "la" incluyen la referencia al plural salvo que el contexto indique claramente lo contrario. Salvo que se indique de otro modo, los ácidos nucleicos están escritos de izquierda a derecha en una orientación de 5' a 3'; las secuencias de aminoácidos están escritas de izquierda a derecha en una orientación de amino a carboxi, respectivamente. Ha de entenderse que la presente invención no se limita a la metodología, los protocolos y los reactivos específicos aquí descritos, dado que estos pueden variar dependiendo del contexto en el que los utilizan los expertos en la materia.

[0012] Se pretende que cada limitación numérica máxima proporcionada a lo largo de la presente memoria incluya cada limitación numérica inferior, como si dichas limitaciones numéricas inferiores se encontrasen expresamente escritas en el presente documento. Toda limitación numérica mínima dada a lo largo de esta memoria incluirá toda limitación numérica superior, como si dichas limitaciones numéricas superiores se encontrasen expresamente escritas en el presente documento. Todo intervalo numérico dado a lo largo de esta memoria incluirá todo intervalo numérico más reducido que se encuentre dentro de dicho intervalo numérico más amplio, como si dichos intervalos numéricos más reducidos estuvieran expresamente escritos en el presente texto.

[0013] Una “proteína” o “polipéptido” comprende una secuencia polimérica de residuos de aminoácidos. Los términos “proteína” y “polipéptido” se utilizan indistintamente en el presente documento. A lo largo de la presente exposición, se utiliza el código de una y tres letras para los aminoácidos tal como se define de conformidad con la comisión conjunta de nomenclatura bioquímica (JBCN, por sus siglas en inglés) de la IUPAC-IUB. Se comprenderá también que se puede codificar un polipéptido mediante más de una secuencia de nucleótidos debido a la degeneración del código genético. Las mutaciones se pueden denominar mediante el código de una letra para el aminoácido original, seguido por un número y, a continuación, el código de una letra para la variante de aminoácido. Por ejemplo, la mutación de glicina (G) en la posición 87 a serina (S) se puede representar como “G087S” o “G87S”. Múltiples mutaciones pueden indicarse insertando un "-", "+" o "," entre las mutaciones. Por ejemplo, las mutaciones en las posiciones 87 y 90 se pueden representar como “G087S-A090Y” o “G87S-A90Y” o “G87S A90Y” o “G087S A090Y”.

[0014] Los términos “derivado/a(s) de” y “obtenido/a(s) de” se refieren no solo a una enzima lipolítica producida o producible por una cepa del organismo en cuestión, sino también una enzima lipolítica codificada por una secuencia de ADN aislada de dicha cepa y producida en un organismo huésped que contiene dicha secuencia de ADN. De forma adicional, el término se refiere a una enzima lipolítica codificada por una secuencia de ADN de origen ADNc y/o sintético, y que tiene las características identificativas de la enzima lipolítica en cuestión. A modo de ejemplo, “enzimas lipolíticas derivadas de Thermomyces lanuginosa” se refiere a aquellas enzimas con actividad lipolítica que son producidas de forma natural por Thermomyces lanuginosa, así como a las enzimas lipolíticas como las producidas por fuentes de Thermomyces lanuginosa, pero que son producidas mediante el uso de técnicas de ingeniería genética por organismos no Thermomyces lanuginosa transformados con un ácido nucleico que codifica las enzimas lipolíticas.

[0015] Según se utiliza en el presente documento, el "% de identidad o porcentaje de identidad" se refiere a la similitud de secuencias. El porcentaje de identidad puede determinarse utilizando técnicas estándar conocidas en la técnica (véase, p. ej., Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 [1981]; Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 [1970]; Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 [1988]; programas de software como GAP, BESTFIT, FASTA y TFASTA del paquete de software Wisconsin Genetics Software Package (Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin); y Devereux et al., Nucl. Acids Res. 12:387-395 [1984]). Un ejemplo de algoritmo útil es PILEUP. PILEUP crea un alineamiento múltiple de secuencias a partir de un grupo de secuencias relacionadas utilizando alineamientos progresivos por pares. También puede trazar un árbol que muestre las relaciones de agrupamiento utilizadas para crear el alineamiento. PILEUP utiliza una simplificación del método de alineamiento progresivo de Feng y Doolittle (véase, Feng & Doolittle, J. Mol. Evol. 35:351-360 [1987]). El método es similar al descrito por Higgins y Sharp (véase, Higgins & Sharp, CABIOS 5:151-153 ). Unos parámetros útiles de PILEUP incluyen un peso de hueco por defecto de 3,00, un peso de longitud de hueco por defecto de 0,10 y huecos de extremo ponderados. Otro ejemplo de algoritmo útil es el algoritmo BLAST, descrito por Altschul et al., (véanse, Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 [1990]; y Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 [1993]). El programa BLAST utiliza diversos parámetros de búsqueda, la mayoría de los cuales se establecen como los valores por defecto.

[0016] El algoritmo NCBI BLAST encuentra las secuencias más relevantes en términos de similitud biológica, pero no se recomienda para secuencias de consulta (query sequences) de menos de 20 residuos (Altschul, SFi. et al (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 y Schaffer, AA et al. (2001) Nucleic Acids Res. 29:2994-3005). Entre los ejemplos de parámetros BLAST por defecto para búsquedas de secuencia de ácido nucleico se incluyen:

y los siguientes parámetros para búsquedas de secuencia de aminoácidos:

[0017] Se determina un valor porcentual (%) de identidad de secuencia de aminoácidos mediante el número de

residuos idénticos emparejados dividido por el número total de residuos de la secuencia "de referencia",

incluyendo cualquier hueco creado por el programa para un alineamiento óptimo/máximo. Si una secuencia es un

90 % idéntica a SEQ ID NO: A, SEQ ID NO: A es la secuencia "de referencia". Los algoritmos BLAST se refieren

a la secuencia "de referencia" como la secuencia "de consulta".

[0018] El algoritmo CLUSTAL W es otro ejemplo de un algoritmo de alineamiento de secuencias. Véase

Thompson et al. (1994) Nucleic Acids Res. 22:4673-4680). Los parámetros por defecto para el algoritmo

CLUSTAL W son:

[0019] En los algoritmos CLUSTAL, se incluyen deleciones que ocurren en cualquier terminal. Por ejemplo, una

variante con una deleción de cinco aminoácidos en cualquier terminal (o en el polipéptido) de un polipéptido de

500 aminoácidos presentaría un porcentaje de identidad de secuencia del 99 % (495/500 residuos idénticos *

100) en relación con el polipéptido "de referencia". Dicha variante estaría abarcada por una variante que

presenta "al menos un 99 % de identidad de secuencia" con el polipéptido.

[0020] Puede decirse que un polipéptido de interés es “sustancialmente idéntico” a un polipéptido de referencia si

el polipéptido de interés comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente un

60 %, al menos aproximadamente un 65 %, al menos aproximadamente un 70 %, al menos aproximadamente un 75 %, al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un

93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos aproximadamente un 99 % o al menos aproximadamente un 99,5 % de identidad de secuencia con respecto a la secuencia de

aminoácidos del polipéptido de referencia. El porcentaje de identidad entre dos polipéptidos tales puede

determinarse manualmente mediante la inspección de las dos secuencias polipeptídicas alineadas de forma óptima o utilizando programas de software o algoritmos (p. ej., BLAST, ALIGN, CLUSTAL) con parámetros

estándar. Un indicativo de que dos polipéptidos son sustancialmente idénticos es que el primer polipéptido

reacciona inmunológicamente de forma cruzada con el segundo polipéptido. Normalmente, los polipéptidos que

difieren en sustituciones de aminoácidos conservadoras reaccionan inmunológicamente de forma cruzada. Por

tanto, un polipéptido es sustancialmente idéntico a un segundo polipéptido, por ejemplo, cuando los dos péptidos

difieren únicamente en una sustitución conservadora de aminoácidos o una o más sustituciones conservadoras

de aminoácidos.

[0021] Puede decirse que un ácido nucleico de interés es "sustancialmente idéntico" a un ácido nucleico de

referencia si el ácido nucleico de interés comprende una secuencia nucleotídica que tiene al menos

aproximadamente un 60 %, al menos aproximadamente un 65 %, al menos aproximadamente un 70 %, al menos

aproximadamente un 75 %, al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos

aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos

aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos

aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos

aproximadamente un 99 %, o al menos aproximadamente un 99,5 % de identidad de secuencia con respecto a la

secuencia nucleotídica del ácido nucleico de referencia. El porcentaje de identidad entre dos ácidos nucleicos

tales puede determinarse manualmente mediante la inspección de las dos secuencias de ácidos nucleicos

alineadas de forma óptima o utilizando programas de software o algoritmos (p. ej., BLAST, ALIGN, CLUSTAL)

con parámetros estándar. Un indicativo de que dos secuencias de ácidos nucleicos son sustancialmente

idénticas es que las dos moléculas de ácido nucleico hibridan entre sí en condiciones rigurosas (por ejemplo, en

un intervalo de rigor medio a alto).

[0022] Un ácido nucleico o polinucleótido está “aislado” cuando está parcialmente o completamente separado de

otros componentes, incluyendo, pero sin carácter limitativo, otras proteínas, ácidos nucleicos, células, etc. De

manera similar, un polipéptido, proteína o péptido está “aislado” cuando está parcialmente o completamente

separado de otros componentes, incluyendo, pero sin carácter limitativo, otras proteínas, ácidos nucleicos,

células, etc. Desde el punto de vista de la molaridad, una especie aislada es más abundante que otras especies

en una composición. Por ejemplo, una especie aislada puede comprender al menos aproximadamente un 50 %,

aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 85 %, aproximadamente u aproximadamente un 91 %, aproximadamente un 92 %, aproximadamente

aproximadamente u aproximadamente un 95 %, aproximadamente un 96 %, aproximadamente un 97 %, aproximadamente u aproximadamente un 99 % o aproximadamente un 100 % (desde el punto de vista de la molaridad) de todas las

especies macromoleculares presentes. De forma preferible, la especie de interés está purificada hasta lograr una

homogeneidad esencial (es decir, las especies contaminantes no pueden detectarse en la composición mediante

métodos de detección convencionales). La pureza y la homogeneidad pueden determinarse utilizando un número

de técnicas ampliamente conocidas en la técnica, como electroforesis en gel de agarosa o de poliacrilamida de

una muestra de proteína o ácido nucleico, seguido de visualización tras la tinción. Si se desea, puede utilizarse

una técnica de alta resolución, como cromatografía líquida de alta resolución (HPLC, por sus siglas en inglés), o

medios similares, para la purificación del material.

[0023] El término “purificado(s)”, en aplicación a ácidos nucleicos o polipéptidos, en general, denota un ácido

nucleico o polipéptido que, en esencia, está libre de otros componentes según lo determinado por técnicas

analíticas ampliamente conocidas en la técnica (p. ej., un polipéptido o un polinucleótido purificado forma una

discreta banda en un gel de electroforesis, un eluato cromatográfico y/o un medio sometido a centrifugación en

gradiente de densidad). Por ejemplo, un ácido nucleico o polipéptido que da lugar esencialmente a una banda en

un gel de electroforesis está “purificado”. Un ácido nucleico o polipéptido purificado es al menos

aproximadamente un 50 % puro, normalmente al menos aproximadamente un 75 %, aproximadamente un 80 %,

aproximadamente un 85 %,aproximadamente un 90%, aproximadamente un 91 %, aproximadamente un 92%,

aproximadamente un 93 %, aproximadamente un 94 %, aproximadamente un 95 %, aproximadamente un 96 %,

aproximadamente un 97 %, aproximadamente un 98 %, aproximadamente un 99 %, aproximadamente un

99,5 %, aproximadamente un 99,6 %, aproximadamente un 99,7 %, aproximadamente un 99,8 % o más puro (p.

ej., porcentaje en peso desde el punto de vista de la molaridad). De forma relacionada, la invención da a conocer

métodos de enriquecimiento de composiciones para una o más moléculas de la invención, como uno o más

polipéptidos o polinucleótidos de la invención. Una composición se enriquece para una molécula cuando hay un

incremento sustancial en la concentración de la molécula después de aplicar una técnica de purificación o

enriquecimiento. Un polipéptido o un polinucleótido sustancialmente puro de la invención (p. ej., una variante de

enzima lipolítica sustancialmente pura o un polinucleótido sustancialmente puro que codifica una variante de

enzima lipolítica de la invención, respectivamente) comprenderán normalmente al menos aproximadamente un

55 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un

85 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 91 %,aproximadamente un 92 %, aproximadamente un

93 %, aproximadamente un 94 %, aproximadamente un 95 %, aproximadamente un 96 %, aproximadamente un

97 %, aproximadamente un 98 %, aproximadamente un 99 %, aproximadamente un 99,5 % o más en peso

(desde el punto de vista de la molaridad) de todas las especies macromoleculares en una composición concreta.

[0024] La posición de un residuo de aminoácido en una secuencia de aminoácidos determinada se numera normalmente en el presente documento utilizando la numeración de la posición del residuo de aminoácido correspondiente de la secuencia de aminoácidos de la lipasa de TLL de Thermomyces lanuginosa mostrada en SEQ ID NO: 1. La secuencia de aminoácidos de lipasa de TLL de T. lanuginosa de SEQ ID NO: 1, por tanto, sirve como secuencia original de referencia. Una secuencia de aminoácidos determinada, tal como una secuencia de aminoácidos de variante de enzima lipolítica descrita en la presente memoria, puede alinearse con la secuencia de TLL (SEQ ID NO: 1) mediante el uso de un algoritmo de alineamiento descrito en el presente documento, y un residuo de aminoácido de la secuencia de aminoácidos determinada que se alinea (preferiblemente, se alinea de manera óptima) con un residuo de aminoácido de la secuencia de TLL puede ser numerado convenientemente por referencia al residuo de aminoácido correspondiente de la secuencia de lipasa de TLL.

Enzimas ¡¡políticas de la invención

[0025] Tal y como se utiliza en el presente documento, una enzima lipolítica incluye una enzima, un polipéptido o una proteína que muestra una capacidad de degradación de lípido, tal como una capacidad de degradación de un triglicérido o un fosfolípido. La enzima lipolítica puede ser, por ejemplo, una lipasa, una fosfolipasa, una esterasa, una poliesterasa o una cutinasa. Las enzimas lipolíticas pueden ser enzimas lipolíticas que presentan un pliegue de / hidrolasa. Estas enzimas, normalmente, presentan una triada catalítica de serina, ácido aspártico y residuos de histidina. Las / hidrolasas incluyen lipasas y cutinasas. Las cutinasas presentan poca o ninguna activación interfacial, mientras que las lipasas suelen experimentar un cambio conformacional en presencia de una interfaz de lípido-agua (Longhi and Cambillau(1999) Biochimica et Biophysica Acta 1441:185-96). Un fragmento activo de una enzima lipolítica es una porción de una enzima lipolítica que retiene una capacidad de degradación de lípido. Un fragmento activo retiene la triada catalítica. Tal y como se utiliza en la presente memoria, la actividad lipolítica puede determinarse según cualquier procedimiento conocido en la técnica (véase, p. ej., Gupta et al., Biotechnol. Appl. Biochem., 37:63-71, 2003; Patente estadounidense n.° 5,990,069; y la publicación de patente internacional n.° WO 96/1 8729A1).

[0026] En algunos modos de realización, las enzimas lipolíticas de la presente invención son / hidrolasas. En algunos modos de realización, las enzimas lipolíticas de la presente invención son lipasas. En algunos modos de realización, las enzimas lipolíticas de la presente invención son cutinasas. En algunos modos de realización, las enzimas lipolíticas de la presente invención son poliesterasas.

Posiciones productivas de enzimas lipolíticas

[0027] La invención da a conocer modificaciones, tal como una sustitución, en dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez o más posiciones de aminoácido en una enzima lipolítica que puede ser útil en una composición detergente, en la que modificaciones favorables dan lugar a un índice de rendimiento mejorado (pl) de actividad lipolítica, tal como una hidrólisis mejorada de ésteres de ácido graso o triglicéridos o, por ejemplo, pnitrofenil butirato, p-nitrofenil caprilato o p-nitrofenil palmitato, un índice de actividad específico de pNPP/pNPB o pNPO/pNPB mayor, un índice de actividad específico de pNPB/pNPP mayor, una termoestabilidad mayor, una estabilidad detergente mayor, una estabilidad de LAS mayor, una adhesión a tejido mayor, una adhesión a tejido menor o un rendimiento de limpieza mayor, en comparación con la enzima lipolítica original. Estas posiciones de aminoácido pueden considerarse como posiciones útiles para modificaciones combinatorias a una enzima lipolítica original.

[0028] Las posiciones de aminoácido de enzima lipolítica que resulten ser posiciones útiles pueden presentar diferentes modificaciones adecuadas para su uso en una composición detergente. Las modificaciones pueden incluir una inserción, deleción o sustitución en la posición particular. En un modo de realización, una modificación es una sustitución.

[0029] En algunos modos de realización, la invención es una variante de enzima lipolítica o un fragmento activo de la misma que comprende al menos dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez o más modificaciones de aminoácido a una enzima lipolítica original, donde una primera modificación de aminoácido se da en una posición de la variante de enzima lipolítica seleccionada del grupo que consiste en 4, 11, 18, 23, 24, 27, 29, 33, 45, 48, 49, 51, 56, 58, 73, 75, 77, 90, 91, 94, 111, 130, 137, 154, 156, 163, 187, 189, 227, 233, 252, 256 y 264, donde las posiciones de aminoácido de la variante están numeradas por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa expuesta en SEQ ID NO: 1. En algunos modos de realización, la invención es una variante de enzima lipolítica o un fragmento activo de la misma, donde las al menos dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez o más modificaciones de aminoácido a una enzima lipolítica original se encuentran en una posición de la variante de enzima lipolítica seleccionada del grupo que consiste en 4, 11, 18, 23, 24, 27, 29, 33, 45, 48, 49, 51, 56, 58, 73, 75, 77, 90, 91, 94, 111, 130, 137, 154, 156, 163, 187, 189, 227, 233, 252, 256 y 264, donde las posiciones de aminoácido de la variante están numeradas por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa expuesta en SEQ ID NO: 1.

[0030] En algunos modos de realización, una variante de enzima lipolítica o un fragmento activo de la misma de la invención puede presentar dos o más modificaciones, donde las modificaciones son A018K/D027S, A018K/E045F, A018K/L075D, A018K/L075Q, A018K/T189D, D027E/G163P, D027N/E056K, D027N/N233Q, D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/T189Q, D130A/V187N, D130A/V187T, E045F/N073R, E045F/T189D, F051T/L075R, G023K/D130A, G023K/L264R, G023Q/L075Q, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, L075Q/G156W, L075R/L264R, L227M/L264R, N011K/D027S, N033D/E045F, N073R/L075D, N094R/G156W, P029E/N033D, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/L075Q, A018K/A049V/V187T, A018K/D027S/E045F, A018K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/T189D, A018K/E045F/V187T, A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/L075Q, A018K/G023Q/L075Q, A018K/K024A/V154I, A018K/L075D/T189D, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T, A018K/N033D/L075D, A018K/N033D/T189D, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, A049V/L075Q/T189D, A049V/V187T/T189D, D027E/S058M/G163P, D027N/N233Q/P256T, D027N/S058M/P256T, D027Q/N233Q/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/N073R/L075D, D027S/N233Q/P256T, D027S/S058M/P256T, D111A/D130A/L264R, D130A/T189Q/L264R, D130A/V154I/G156W, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, E045F/L075D/T189D, E045F/N073R/L075D, E056K/D130A/L264R, E056K/D130A/T189Q, F051T/I252Q/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187N/L264R, G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/L264R, G023Q/D130A/G156W, G023Q/E045F/V077I, G023Q/E056K/L075R, G023Q/K024A/G156W, G023Q/L075Q/V077I, G023Q/L075Q/V187T, G163P/L227M/L264R, I090F/N233Q/P256T, K024A/D130A/V154I, K024A/L075Q/G156W, K024A/L075Q/V077I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W/T189D, L075Q/G156W/V187N, L075Q/G156W/V187T, L075Q/N094R/V154I, L075Q/V077I/T189D, L075Q/V154I/V187T, L075Q/V187N/L264R, L075Q/V187T/L264R, L075Q/V187T/T189D, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187N/L264R, L075R/V187T/L264R, N011K/D027S/S058M, N011K/N233Q/P256T, N033D/E045F/L075D, N033D/E045F/N073R, N033D/N073RAT189D, N073R/L075D/T189D, N094R/D130A/V187T, P029E/E045F/L075D, P029E/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/L075D, P029E/N073R/L075D, Q004D/D027S/P256T, Q004D/N233Q/P256T, Q004D/S058M/N233Q, S058M/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I, V077I/V187A/T189D, V187N/T189Q/L264R, A018K/A049V/L075QAT189D, A018K/A049V/L075Q/V187T, A018K/D027S/E045F/N073R, A018K/D027S/E045F/T189D, A018K/D027S/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/A049V/V187T, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/E045F/L075Q/T189D, A018K/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/T189D, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I, A018K/G023Q/L075Q/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/V187T/T189D, A018K/K024A/D130A/G156W, A018K/L075Q/G156W/T189D, A018K/L075Q/G156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D111A, A018K/L075Q/N094R/D130A, A018K/L075Q/N094R/V187Q, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/L075Q/V187T/T189D, A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/N073R/L075D/T189D, A018K/P029E/N033D/L075D, A018K/P029E/N033D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, A018K/V154I/G156W/V187T, A049V/L075Q/V077I/T189D, A049V/L075Q/V187T/T189D, D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/G163P/L264R, D027N/E056K/N233Q/P256T, D027N/E056K/S058M/P256T, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027Q/S058M/I090F/P256T, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/L075D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/E056K/I090F/P256T, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/L075D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D027S/P029E/N033D/N073R, D027S/P029E/N033D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M, D048Q/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V154I/L264R, D111A/D130A/V187T/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, E056K/L075Q/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D027S/L075Q/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/E056K/V187T/L264R, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075Q/G156W/L264R, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187N/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/A049V/L075Q/T189D, G023Q/A049V/L075Q/V077I, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/A049V/V187T, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/L075R/V154I, G023Q/K024A/V077I/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/G156W/V187N, G023Q/L075Q/G156W/V187T, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G023Q/V154I/G156W/V187N, G091Q/V187T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, K024A/L075Q/V187T/T189Q, K024A/L075R/G156W/V187N, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/G091Q/V187N/L264R, L075G/V187H/I252Q/L264R, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/G156W/V187T/L264R, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075Q/V077I/G156W/V187N, 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T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, N011K/G023K/D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075Q/D111A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V187T/T189Q/L264K, 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G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/G023K/D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q,

G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q,

N011K/G023K/L075R/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T,

N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/H135F/V187T/T189D, o

A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049V/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R108K/H135F/D 137V/G156W/V187T/T189D, donde las posiciones de aminoácido de la variante están numeradas por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa establecida en SEQ ID NO: 1. En algunos modos de realización, la variante o el fragmento activo presenta actividad lipolítica, por ejemplo, un índice de rendimiento (pI) en relación con la enzima lipolítica original para la hidrólisis de p-nitrofenil butirato, p-nitrofenil caprilato o p-nitrofenil palmitato superior a 1,0 con un pH de 6 u 8.

[0031] En cualquiera de los modos de realización anteriores, la invención da a conocer variantes de enzimas lipolíticas de la invención que muestran una de más de entre las siguientes propiedades: actividad lipolítica mejorada, tal como una hidrólisis mejorada de p-nitrofenil butirato, p-nitrofenil caprilato o p-nitrofenil palmitato, un índice de actividad específico de pNPP/pNPB o pNPO/pNPB mayor, un índice de actividad específico de pNPB/pNPP mayor, una termoestabilidad mayor, una estabilidad detergente mayor, una estabilidad de LAS mayor, una adhesión a tejido mayor, una adhesión a tejido menor, un rendimiento de limpieza mayor, un rendimiento de lavado a mano mayor, un rendimiento de lavado manual o a mano de vajillas mejorado, un rendimiento de lavado automático de vajillas mejorado, un rendimiento de lavado de ropa mejorado y/o una estabilidad mejorada en relación con una enzima lipolítica original (p. ej., enzima lipolítica natural, tal como una lipasa natural) o una enzima de referencia (tal como SEQ ID NO: 2).

[0032] Estas posiciones de aminoácido pueden considerarse como posiciones útiles para modificaciones combinatorias a una enzima lipolítica original. Por lo tanto, la invención incluye enzimas lipolíticas que presentan una o más modificaciones en cualquiera de las posiciones anteriores.

Polipéptidos de la invención

[0033] La presente invención da a conocer polipéptidos novedosos, a los que se les puede hacer referencia de forma colectiva como "polipéptidos de la invención". Los polipéptidos de la invención incluyen polipéptidos de variante de enzima lipolítica aislados, recombinantes, sustancialmente puros o de origen no natural, entre los que se incluyen, por ejemplo, polipéptidos de variante de enzima lipolítica que tienen actividad enzimática (p. ej., actividad lipolítica). En algunos modos de realización, los polipéptidos de la invención son útiles en aplicaciones de limpieza y pueden incorporarse en composiciones de limpieza que son útiles en métodos para limpiar un artículo o una superficie (p. ej., la superficie de un artículo) que necesite limpiarse.

[0034] En algunos modos de realización, la variante de enzima lipolítica puede ser una variante de una enzima lipolítica original del género Thermomyces. Se han descubierto diversas enzimas lipolíticas del género Thermomyces que presentan una elevada identidad entre sí y con respecto a la enzima lipolítica de Thermomyces lanuginosa (TLL), como se muestra en SEQ ID NO: 1. En otros modos de realización, la variante de enzima lipolítica puede ser una variante de una enzima lipolítica original, tal como Verrucosispora, Saccharomonospora, Streptomyces, Micromonospora, Streptosporangium, Amycolatopsis, Cellulomonas, Actinosynnema, Kribbella, Thermomonospora, Deinococcus, Kineococcus, Nocardiopsis, Frankia, Jonesia, Pseudomonas, Acidovorax o Nocardioidaceae.

[0035] La secuencia de la enzima lipolítica de Thermomyces lanuginosa (TLL) se muestra a continuación:

EVSQDLFNQFNLFAQYSAAAYCGKNNDAPAGTNITCTGNACPEVEKADATFLYSFEDSGVGDV

TGFFAFDNTNKFIVFSFRGSRSIENWIGNFNFDFKEINDICSGCRGHDGFTSSWRSVADTFRQKV

ED A VREHPD YR V VFT GHSFGGAF AT V AGADFRGN GYDID VFS Y GAPR V GNR AFAEFFT V QT GG

TEYRITHTNDIVPREPPREFGYSHSSPEYWIKSGTEVPVTRNDIVKIEGIDATGGNNQPNIPDIPAH

EWYFGEIGTCE (SEQ ID NO:l).

[0036] En algunos modos de realización, la variante de enzima lipolítica puede ser una variante con una identidad de un 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 o 100 % con una enzima lipolítica del género Thermomyces. En algunos modos de realización, la variante de enzima lipolítica puede ser una variante con un 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 o 100 % de identidad con una enzima lipolítica de la especie Thermomyces lanuginosa, presentando la enzima lipolítica la secuencia mostrada en SEQ ID NO: 1.

[0037] En un modo de realización concreto, la invención es una enzima derivada del género Thermomyces. En un modo de realización concreto, la invención es una enzima derivada de una enzima lipolítica de la especie Thermomyces lanuginosa, presentando la enzima lipolítica la secuencia mostrada en SEQ ID NO: 1.

[0038] Se describen composiciones y métodos en relación con la lipasa clonada de Thermomyces lanuginosa (TLL). Las composiciones y los métodos se basan, en parte, en la observación de que la TLL clonada y expresada presenta actividad de hidrolasa de éster carboxílico (actúa en ésteres de ácido carboxílico) en presencia de una composición detergente. TLL también muestra una excelente estabilidad en composiciones detergentes, incluso en presencia de enzima proteasa. Estas características de TLL la convierten en adecuada para su uso en una variedad de aplicaciones de limpieza, donde la enzima puede hidrolizar lípidos en presencia de surfactantes y otros compuestos encontrados en composiciones detergentes.

[0039] Mientras que TLL muestra actividad contra una variedad de sustratos naturales y sintéticos, la enzima ha mostrado preferencia por los sustratos C4-C16. Esta especificidad hace que la T^l L sea adecuada para la hidrólisis de triglicéridos de cadena corta y para llevar a cabo reacciones de transesterificación en las que participan ácidos grasos de cadena corta.

[0040] En cualquiera de los modos de realización anteriores, la variante de enzima lipolítica de la invención puede presentar una actividad lipolítica mejorada en sustratos C4-C16 en relación con la enzima lipolítica original. En algunos modos de realización, variantes de la invención presentan un índice de actividad específico de pNPP/pNPB o pNPO/pNPB mayor. En algunos modos de realización, variantes de la invención presentan un índice de actividad específico de pNPB/pNPP mayor. En cualquiera de los modos de realización anteriores, la variante de enzima lipolítica de la invención puede presentar un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica original (p. ej., SEQ ID NO: 1) para la hidrólisis de p-nitrofenil butirato, p-nitrofenil caprilato o pnitrofenil palmitato superior a 1,0. Esto puede medirse a un pH de 6 u 8. En cualquiera de los modos de realización anteriores, la variante de enzima lipolítica de la invención puede presentar un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica original (p. ej., SEQ ID NO:1) para la estabilidad detergente superior a 1,0. En cualquiera de los modos de realización anteriores, la variante de enzima lipolítica de la invención puede presentar un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica original (p. ej., SEQ ID NO:1) para la estabilidad de LAS superior a 1,0. En cualquiera de los modos de realización anteriores, la variante de enzima lipolítica de la invención puede presentar un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica original (p. ej., SEQ ID nO:1) para la adhesión a tejido que sea superior a 1,0. En cualquiera de los modos de realización anteriores, la variante de enzima lipolítica de la invención puede presentar un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica original (p. ej., SEQ ID NO:1) para la adhesión a tejido inferior a 1,0. En cualquiera de los modos de realización anteriores, la variante de enzima lipolítica de la invención puede presentar un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica original (p. ej., SEQ ID NO:1) para el rendimiento de limpieza superior a 1,0. Esto puede medirse mediante el uso de un ensayo de micromuestras CS-61 utilizando media dosis de Tide® adyuvante o dosis completa de Tide®. En cualquiera de los modos de realización anteriores, la variante de enzima lipolítica de la invención puede presentar un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica de referencia (p. ej., SEQ ID NO: 2) superior a 1,0 para la hidrólisis de p-nitrofenil butirato, p-nitrofenil caprilato o p-nitrofenil palmitato, estabilidad detergente, estabilidad de LAS, adhesión a tejido o rendimiento de limpieza. En cualquiera de los modos de realización anteriores, la variante de enzima lipolítica de la invención puede presentar un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica de referencia (p. ej., SEQ ID NO: 2) inferior a 1,0 para la adhesión a tejido.

[0041] La secuencia de la enzima lipolítica de referencia, que es una variante de Thermomyces lanuginosa (TLL), se muestra a continuación:

EVSQDLFNQFNLFAQYS AAAYCGKNND APAGTNITCTGNACPEVEKADATFLYSFEDSGV GD V

TGFFAFDNTNKFIVFSFRGSRSIENWIGNFNFDFKEINDICSGCRGHDGFTSSWRSVADTFRQKV

ED A VREHPD YR V VFT GHSFGGAF AT V AGADFRGN GYDID VFS Y GAPR V GNR AFAEFFT V QT GG

TEYRITHTNDIVPREPPREFGYSHSSPEYWIKSGTEVPVRRRDIVKIEGIDATGGNNQPNIPDIPAH

EWYFGEIGTCE(SEQ ID NO: 2).

[0042] En varios de los modos de realización anteriores, las presentes composiciones y métodos dan a conocer una variante de polipéptido de TLL. La lipasa de Thermomyces lanuginosa del polipéptido original de TLL fue descrita en WO1994025577. El polipéptido de TLL maduro presenta la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Polipéptidos de TLL similares o sustancialmente idénticos pueden producirse en la naturaleza, por ejemplo, en otras cepas o aislados de T. lanuginosa. Estos y otros polipéptidos recombinantes de TLL están abarcados por las presentes composiciones y métodos.

[0043] En cualquiera de los modos de realización anteriores, la invención incluye una variante de enzima lipolítica de origen no natural, sustancialmente pura, recombinante o aislada que presenta actividad lipolítica, tal polipéptido comprende una secuencia polipeptídica que presenta al menos aproximadamente un 85%, al menos aproximadamente un 86%, al menos aproximadamente un 87%, al menos aproximadamente un 88%, al menos aproximadamente un 89%, al menos aproximadamente un 90%, al menos aproximadamente un 91%, al menos aproximadamente un 92%, al menos aproximadamente un 93%, al menos aproximadamente un 94%, al menos aproximadamente un 95%, al menos aproximadamente un 96%, al menos aproximadamente un 97%, al menos aproximadamente un 98%, al menos aproximadamente un 99 %, al menos aproximadamente un 99,5 % o un 100 % de identidad de secuencia con una enzima lipolítica original dada a conocer en el presente documento.

[0044] En algunos modos de realización, la variante de polipéptido es una variante que presenta un grado específico de homología de secuencia de aminoácidos con el polipéptido de TLL ejemplificado; por ejemplo, al menos un 70 %, al menos un 75 %, al menos un 80 %, al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o incluso al menos un 99 % de homología de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. La homología se puede determinar mediante el alineamiento de secuencias de aminoácidos, p. ej., utilizando un programa como BLAST, ALIGN o CLUSTAL, como se ha descrito en el presente documento.

[0045] También se da a conocer una secuencia de origen no natural, sustancialmente pura, recombinante o aislada que codifica una variante de enzima lipolítica que presenta actividad lipolítica, comprendiendo dicha variante de enzima lipolítica (p. ej., variante de lipasa) una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, en no más de 50, no más de 40, no más de 30, no más de 35, no más de 25, no más de 20, no más de 19, no más de 18, no más de 17, no más de 16, no más de 15, no más de 14, no más de 13, no más de 12, no más de 11, no más de 10, no más de 9, no más de 8, no más de 7, no más de 6, no más de 5, no más de 4, no más de 3 o no más de 2 residuos de aminoácido, donde las posiciones de aminoácido de la variante de lipasa están numeradas de acuerdo con la numeración de posiciones de aminoácido correspondientes en la secuencia de aminoácidos de lipasa de TLL de Thermomyces lanuginosa, que se muestra en SEQ ID NO: 1, determinado mediante el alineamiento de la secuencia de aminoácidos de variante de enzima lipolítica con la secuencia de aminoácidos de lipasa de TLL de Thermomyces lanuginosa.

[0046] En algunos modos de realización, la presente invención se refiere a polipéptidos aislados que presentan actividad de lipasa codificados por polinucleótidos que hibridan, preferiblemnte, en condiciones de muy baja rigurosidad, más preferiblemente, condiciones de baja rigurosidad, más preferiblemente, condiciones de rigurosidad media, más preferiblemente, condiciones de rigurosidad media-alta, incluso más preferiblemente, condiciones de alta rigurosidad y, lo más preferiblemente, condiciones de muy alta rigurosidad con la secuencia codificadora de polipéptido maduro de SEQ ID NO: 1 , o una cadena complementaria completa de la misma (J. Sambrook, E. F. Fritsch, and T. Maniatis, 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a edición, Cold Spring Harbor, Nueva York).

[0047] Como se ha indicado anteriormente, los polipéptidos de variante de enzima lipolítica de la invención presentan actividades enzimáticas (p. ej., actividades lipolíticas) y, por lo tanto, resultan útiles en aplicaciones de limpieza, incluyendo, aunque sin carácter limitativo, métodos para limpiar artículos de vajilla, artículos de mesa, tejidos y artículos que posean superficies duras (p. ej., la superficie dura de una mesa, tablero, pared, mueble, suelo, techo, etc.). Algunos ejemplos de composiciones de limpieza que comprenden uno o más polipéptidos de variante de enzima lipolítica de la invención se describen a continuación. La actividad enzimática (p. ej., actividad de enzima lipolítica) de un polipéptido de variante de enzima lipolítica de la invención se puede determinar fácilmente utilizando procedimientos ampliamente conocidos por los expertos en la materia. El rendimiento de las variantes de enzimas lipolíticas de la invención en la eliminación de manchas (p. ej., una mancha lipídica), la limpieza de superficies duras o el lavado de ropa, la limpieza de la vajilla o de artículos de mesa puede determinarse fácilmente utilizando procedimientos ampliamente conocidos en la técnica.

[0048] Un polipéptido de la invención puede someterse a varios cambios, como una o más inserciones, deleciones y/o sustituciones de aminoácidos, ya sean conservadoras o no conservadoras, incluso cuando dichos cambios no alteran de manera considerable la actividad enzimática del polipéptido. De forma similar, un ácido nucleico de la invención también puede someterse a varios cambios, como una o más sustituciones de uno o más ácidos nucleicos en uno o más codones, de tal forma que un codón concreto codifique el mismo aminoácido o uno diferente, teniendo como resultado bien una variación silenciosa (p. ej., una mutación en una secuencia nucleotídica tiene como resultado una mutación silenciosa en la secuencia de aminoácidos, por ejemplo, cuando el aminoácido codificado no es alterado por la mutación del ácido nucleico) o una variación no silenciosa, una o más deleciones de uno o más ácidos nucleicos (o codones) en la secuencia, una o más adiciones o inserciones de uno o más ácidos nucleicos (o codones) en la secuencia, y/o la escisión de o uno o más truncamientos de uno o más ácidos nucleicos (o codones) en la secuencia. Muchos de estos cambios en la secuencia de ácido nucleico pueden no alterar de forma sustancial la actividad enzimática de la variante de enzima lipolítica codificada resultante en comparación con la variante de enzima lipolítica codificada por la secuencia de ácido nucleico original. Un ácido nucleico de la invención también puede modificarse para incluir uno o más codones que proporcionen una expresión óptima en un sistema de expresión (p. ej., sistemas de expresión en bacterias), mientras que, si se desea, dichos uno o más codones todavía codifica(n) el/los mismo(s) aminoácido(s).

[0049] En algunos modos de realización, la presente invención da a conocer un género de polipéptidos que comprendiendo polipéptidos de variante de enzima lipolítica que presentan la actividad enzimática deseada (p. ej., actividad de enzima lipolítica o actividad de rendimiento de limpieza) que comprenden secuencias que presentan las sustituciones de aminoácidos descritas en el presente documento y que también comprenden una o más sustituciones de aminoácidos adicionales, tales como sustituciones conservadoras o no conservadoras, donde el polipéptido muestra, mantiene, o mantiene aproximadamente la actividad enzimática deseada (p. ej., actividad de enzima lipolítica o actividad de lipasa, reflejada en la actividad o el rendimiento de limpieza de la variante de enzima lipolítica). Las sustituciones de aminoácidos según la invención pueden incluir, pero sin carácter limitativo, una o más sustituciones no conservadoras de aminoácidos y/o una o más sustituciones conservadoras de aminoácidos. Una sustitución de residuo de aminoácido conservadora conlleva normalmente el intercambio de un elemento dentro de una clase funcional de residuos de aminoácidos por un residuo que pertenece a la misma clase funcional (los residuos de aminoácidos idénticos se consideran funcionalmente homólogos o se conservan calculando el porcentaje de homología funcional). Una sustitución de aminoácido conservadora conlleva normalmente la sustitución de un aminoácido en una secuencia de aminoácidos con un aminoácido funcionalmente similar. Por ejemplo, la alanina, la glicina, la serina y la treonina son funcionalmente similares y, en consecuencia, pueden servir como sustituciones conservadoras de aminoácidos entre sí. El ácido aspártico y el ácido glutámico pueden servir como sustituciones conservadoras de aminoácidos entre sí. La asparagina y la glutamina pueden servir como sustituciones conservadoras entre sí. La arginina, la lisina y la histidina pueden servir como sustituciones conservadoras entre sí. La isoleucina, la leucina, la metionina y la valina pueden servir como sustituciones conservadoras entre sí. La fenilalanina, la tirosina y el triptófano pueden servir como sustituciones conservadoras entre sí.

[0050] Pueden concebirse otros grupos de sustituciones conservadoras de aminoácidos. Por ejemplo, los aminoácidos pueden agruparse por estructura química, composición o función similar (p. ej., ácidos, básicos, alifáticos, aromáticos, contenedores de sulfuro). Por ejemplo, un grupo alifático puede comprender: Glicina (G), Alanina (A), Valina (V), Leucina (L), Isoleucina (I). Otros grupos que contienen aminoácidos que se consideran sustituciones conservadoras entre sí incluyen: aromáticos: Fenilalanina (F), Tirosina (Y), Triptófano (W); contenedores de sulfuro: Metionina (M), Cisteína (C); Básicos: Arginina (R), Lisina (K), Histidina (H); Ácidos: Ácido aspártico (D), Ácido glutámico (E); residuos sin carga no polares, Cisteína (C), Metionina (M) y Prolina (P); residuos sin carga hidrofílicos: Serina (S), Treonina (T), Asparagina (N) y Glutamina (Q). Los expertos en la materia conocen agrupaciones adicionales de aminoácidos, y se describen en varios libros de texto estándares. El listado de una secuencia polipeptídica en el presente documento, junto con los anteriores grupos de sustitución, proporciona una relación expresa de todas las secuencias polipeptídicas sustituidas de forma conservadora.

[0051] Existen más sustituciones conservadoras dentro de las clases de residuos de aminoácidos descritas anteriormente, que pueden ser adecuadas de forma alternativa o adicional. Los grupos de conservación para sustituciones más conservadoras incluyen: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alaninavalina y asparagina-glutamina. Por consiguiente, por ejemplo, en algunos modos de realización, la invención da a conocer un polipéptido de variante de enzima lipolítica recombinante o aislado (por ejemplo, una variante de lipasa) que presenta actividad lipolítica, comprendiendo dicho polipéptido de variante de enzima lipolítica una secuencia de aminoácidos que presenta al menos aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 95 %, aproximadamente un 96 %, aproximadamente un 97 %, aproximadamente un 98 %, aproximadamente un 99 %, aproximadamente un 99,5 % de identidad de secuencia con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. No se espera que una sustitución conservadora de un aminoácido por otro en una variante de enzima lipolítica de la invención altere de forma significativa la actividad enzimática o la actividad de rendimiento de limpieza de la variante de enzima lipolítica. La actividad enzimática o la actividad de rendimiento de limpieza de la enzima lipolítica resultante puede determinarse fácilmente utilizando los ensayos estándar y los ensayos descritos en el presente documento.

[0052] Las variaciones de una secuencia polipeptídica de la invención sustituidas de forma conservadora (p. ej., variantes de enzimas lipolíticas de la invención) incluyen sustituciones de un pequeño porcentaje, a menudo menor de aproximadamente un 25 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 15 %, aproximadamente un 14%, aproximadamente un 13%, aproximadamente un 12%, aproximadamente un 11 %, aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 9 %, aproximadamente un 8 %, aproximadamente un 7 % o aproximadamente un 6 % de los aminoácidos de la secuencia polipeptídica, o menos de aproximadamente un 5 %, aproximadamente un 4 %, aproximadamente un 3 %, aproximadamente un 2 % o aproximadamente un 1 % de los aminoácidos de la secuencia polipeptídica, con un aminoácido seleccionado de forma conservadora del mismo grupo de sustitución conservadora.

Ácidos nucleicos de la invención

[0053] La invención da a conocer ácidos nucleicos aislados, de origen no natural o recombinantes (también denominados en el presente documento "polinucleótidos"), a los que se les puede hacer referencia de forma colectiva como "ácidos nucleicos de la invención" o "polinucleótidos de la invención", que codifican polipéptidos de la invención. Los ácidos nucleicos de la invención, incluyendo todos los que se describen a continuación, son útiles en la producción recombinante (p. ej., expresión) de polipéptidos de la invención, normalmente a través de la expresión de un vector de expresión plásmido que comprende una secuencia que codifica el polipéptido de interés o un fragmento del mismo. Como se ha analizado previamente, los polipéptidos incluyen polipéptidos de variante de enzima lipolítica, entre los que se incluyen polipéptidos de variante de lipasa que presentan actividad enzimática (p. ej., actividad lipolítica) que son útiles en aplicaciones de limpieza y composiciones de limpieza para limpiar un artículo o una superficie (p. ej., la superficie de un artículo) que necesite limpiarse.

[0054] En algunos modos de realización, la invención expone un ácido nucleico aislado, recombinante, sustancialmente puro o de origen no natural que comprende una secuencia nucleotídica que codifica cualquier polipéptido (incluida cualquier proteína de fusión, etc.) de la invención tal como se describe anteriormente en la sección titulada "Polipéptidos de la invención" y en cualquier otra parte del presente documento. La invención da a conocer también un ácido nucleico aislado, recombinante, sustancialmente puro o de origen no natural que comprende una secuencia nucleotídica que codifica una combinación de dos o más de cualquier polipéptido de la invención descrito anteriormente y en cualquier otra parte del presente documento.

[0055] Los ácidos nucleicos de la invención pueden generarse utilizando cualquier técnica adecuada de síntesis, manipulación y/o aislamiento, o combinaciones de las mismas. Por ejemplo, un polinucleótido de la invención puede producirse utilizando técnicas de síntesis de ácidos nucleicos estándar, como técnicas de síntesis en fase sólida que son ampliamente conocidas por los expertos en la materia. La síntesis de los ácidos nucleicos de la invención también puede facilitarse (o conseguirse de forma alternativa) mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica, incluyendo, pero sin carácter limitativo, la síntesis química que utiliza el método de fosforamidita clásico (véase, p. ej., Beaucage et al. Tetrahedron Letters 22:1859-69 (1981)); o el método descrito por Matthes et al. (véase, Matthes et al., EMBO J. 3:801-805 (1984), como se suele practicar en métodos sintéticos automatizados. Los ácidos nucleicos de la invención también pueden producirse utilizando un sintetizador de ADN automático. Pueden adquirirse ácidos nucleicos personalizados a partir de una variedad de fuentes comerciales, (p. ej., The Midland Certified Reagent Company, the Great American Gene Company, Operon Technologies Inc. y DNA2.0). Otras técnicas para sintetizar ácidos nucleicos y principios relacionados se conocen en la técnica (Véase, p. ej., Itakura et al., Ann. Rev. Biochem. 53:323 (1984); e Itakura et al., Science 198:1056 (1984)).

Métodos para elaborar variantes de enzimas lipolíticas modificadas de la invención

[0056] En la técnica, se conoce una variedad de métodos que son adecuados para generar polinucleótidos modificados de la invención que codifican variantes de enzimas lipolíticas de la invención, entre los que se incluyen, sin carácter limitativo, por ejemplo, mutagénesis por saturación de sitio, mutagénesis de barrido, mutagénesis insercional, mutagénesis de deleción, mutagénesis aleatoria, mutagénesis dirigida y evolución dirigida, así como diversos otros enfoques recombinatorios. Los métodos para elaborar polinucleótidos y proteínas modificados (p. ej., variantes de enzimas lipolíticas) incluyen metodologías de barajado de ADN, métodos basados en la recombinación de genes no homólogos, como ITCHY (véase, Ostermeier et al., 7:2139-44 [1999]), SCRACHY (véase, Lutz et al. 98:11248-53 [2001]), SHIPREC (véase, Sieber et al., 19:456-60 [2001]), y NRR (véase, Bittker et al., 20:1024-9 [2001]); Bittker et al., 101:7011-6 [2004]), y métodos que se fundamentan en el uso de oligonucleótidos para insertar deleciones, inserciones y/o mutaciones aleatorias y dirigidas (véase, Ness et al., 20:1251-5 [2002]; Coco et al., 20:1246-50 [2002]; Zha et al., 4:34-9 [2003]; Glaser et al., 149:3903-13 [1992]).

Vectores, células y métodos para producir variantes de enzimas lipolíticas de la invención

[0057] La presente invención da a conocer vectores aislados o recombinantes que comprenden al menos un polinucleótido de la invención descrito en el presente documento (p. ej., un polinucleótido que codifica una variante de enzima lipolítica de la invención descrita en el presente documento), casetes de expresión o vectores de expresión aislados o recombinantes que comprenden al menos un ácido nucleico o polinucleótido de la invención, constructos de ADN aislados, sustancialmente puros o recombinantes que comprenden al menos un ácido nucleico o polinucleótido de la invención, células aisladas o recombinantes que comprenden al menos un polinucleótido de la invención, cultivos celulares que comprenden células que comprenden al menos un polinucleótido de la invención, cultivos celulares que comprenden al menos un ácido nucleico o polinucleótido de la invención, y composiciones que comprenden uno o más de dichos vectores, ácidos nucleicos, vectores de expresión, casetes de expresión, constructos de ADN, células, cultivos celulares o cualquier combinación o mezcla de los mismos.

[0058] En algunos modos de realización, la invención da a conocer células recombinantes que comprenden al menos un vector (p. ej., vector de expresión o constructo de ADN) de la invención que comprende al menos un ácido nucleico o polinucleótido de la invención. Algunas de dichas células recombinantes se transforman o se transfectan con dicho al menos un vector. Dichas células se denominan normalmente células huésped. Algunas de dichas células comprenden células bacterianas, entre las que se incluyen, pero sin carácter limitativo, las células de Bacillus, como las células de B. subtilis. Algunas de dichas células comprenden células fúngicas, entre las que se incluyen, pero sin carácter limitativo, las células de Trichoderma, como las células de T. reesei. La invención también da a conocer células recombinantes (p. ej., células huésped recombinantes) que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica de la invención.

[0059] En algunos modos de realización, la invención da a conocer un vector que comprende un ácido nucleico o polinucleótido de la invención. En algunos modos de realización, el vector es un vector de expresión o un casete de expresión en el que una secuencia polinucleotídica de la invención que codifica una variante de enzima lipolítica de la invención se encuentra ligada de forma operativa a un segmento de ácido nucleico adicional, o segmentos de ácido nucleico adicionales, necesarios para una expresión genética eficiente (p. ej., un promotor ligado de forma operativa al polinucleótido de la invención que codifica una variante de enzima lipolítica de la invención). Un vector puede incluir un terminador de la transcripción y/o un gen de selección, como un gen de resistencia a los antibióticos que permite el mantenimiento continuo en el cultivo de células huésped infectadas con plásmidos mediante el cultivo en medios antimicrobianos.

[0060] Un vector de expresión puede derivarse de ADN plasmídico o viral o, en modos de realización alternativos, contiene elementos de ambos. Entre los ejemplos de vectores se incluyen, pero sin carácter limitativo, pXX, pC194, pJH101, pE194, pHP13 (véase, Harwood and Cutting [eds.], Capítulo 3, "Molecular Biological Methods for Bacillus", John Wiley & Sons [1990]; entre los plásmidos de replicación adecuados para B. subtilis se incluyen los de la p. 92; véase también, Perego, "Integrational Vectors for Genetic Manipulations in Bacillus subtilis", en Sonenshein et al., [eds.] Bacillus subtilis and Other Gram-Positive Bacteria: Biochemistry, Physiology and Molecular Genetics, American Society for Microbiology, Washington, D.C. [1993], pp. 615-624).

[0061] Para la expresión y la producción de una proteína de interés (p. ej., variante de enzima lipolítica) en una célula, al menos un vector de expresión que comprende al menos una copia de un polinucleótido que codifica la enzima lipolítica modificada y que, preferiblemente, comprende múltiples copias, se transforma en la célula en condiciones adecuadas para la expresión de la enzima lipolítica. En algunos modos de realización de la presente invención, una secuencia polinucleotídica que codifica la variante de enzima lipolítica (así como otras secuencias incluidas en el vector) se integra en el genoma de la célula huésped, mientras que, en otros modos de realización, un vector plasmídico que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica la variante de enzima lipolítica permanece como elemento extracromosómico autónomo en el interior de la célula. La invención da a conocer tanto elementos de ácido nucleico extracromosómico como secuencias nucleotídicas entrantes que están integradas en el genoma de la célula huésped. Los vectores descritos en el presente documento son útiles para la producción de las variantes de enzimas lipolíticas de la invención. En algunos modos de realización, un constructo polinucleotídico que codifica la variante de enzima lipolítica se encuentra presente en un vector de integración que permite la integración y, opcionalmente, la amplificación del polinucleótido que codifica la variante de enzima lipolítica en el cromosoma bacteriano. Los ejemplos de sitios de integración son ampliamente conocidos por los expertos en la materia. En algunos modos de realización, la transcripción de un polinucleótido que codifica una variante de enzima lipolítica de la invención es efectuada por un promotor, que es el promotor natural para la enzima lipolítica precursora seleccionada. En algunos otros modos de realización, el promotor es heterólogo a la enzima lipolítica precursora, pero funcional en la célula huésped. Concretamente, entre los ejemplos de promotores adecuados para su uso en células huésped bacterianas se incluyen, pero sin carácter limitativo, por ejemplo, los promotores amyE, amyQ, amyL, pstS, sacB, pSPAC, pAprE, pVeg, pHpaII, el promotor del gen de amilasa maltogénica de B. stearothermophilus, el gen de amilasa (BAN) de T. lanuginosa, el gen de enzima lipolítica alcalina de B. subtilis, el gen de enzima lipolítica alcalina de B. clausii, el gen de xilosidasa de B. pumilis, el cryIIIA de B. thuringiensis y el gen de alfa-amilasa de B. licheniformis. Entre los promotores adicionales se incluyen, sin carácter limitativo, el promotor A4, así como los promotores Pr o Pl de fago lambda, y los promotores lac, trp o tac de E. coli.

[0062] Las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención se pueden producir en células huésped de cualquier microorganismo grampositivo adecuado, incluidos los hongos y las bacterias. Por ejemplo, en algunos modos de realización, la variante de enzima lipolítica se produce en células huésped de origen fúngico y/o bacteriano. En algunos modos de realización, las células huésped son Bacillus spp., Streptomyces spp., Escherichia spp., Aspergillus spp., Trichoderma spp., Pseudomonas spp., Corynebacterium spp., Saccharomyces spp., o Pichia spp. En algunos modos de realización, las variantes de enzimas lipolíticas son producidas por células huésped de Bacillus sp. Entre los ejemplos de células huésped de Bacillus sp. que son de utilidad en la producción de variantes de enzimas lipolíticas de la invención se incluyen, sin carácter limitativo, B. licheniformis, B. lentus, B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. lentus, B. brevis, B. stearothermophilus, B. alkalophilus, B. coagulans, B. circulans, B. pumilis, B. thuringiensis, B. clausii y B. megaterium, así como otros organismos del género Bacillus. En algunos modos de realización, las células huésped de B. subtilis se utilizan para la producción de variantes de enzimas lipolíticas. Las patentes estadounidenses con número 5,264,366 y 4,760,025 (RE 34,606) describen varias cepas huésped de Bacillus que pueden utilizarse para producir variantes de enzimas lipolíticas de la invención, aunque pueden utilizarse otras cepas adecuadas.

[0063] Varias cepas bacterianas industriales que pueden utilizarse para producir variantes de enzimas lipolíticas de la invención incluyen cepas de Bacillus sp. no recombinantes (esto es, naturales), así como variantes de cepas de origen natural y/o cepas recombinantes. En algunos modos de realización, la cepa huésped es una cepa recombinante, donde un polinucleótido que codifica un polipéptido de interés se ha introducido en el huésped. En algunos modos de realización, la cepa huésped es una cepa huésped de B. subtilis y, en particular, una cepa huésped de Bacillus subtilis recombinante. Se conocen numerosas cepas de B. subtilis, entre las que se incluyen, pero sin carácter limitativo, p. ej., 1A6 (ATCC 39085), 168 (1A01), SB19, W23, Ts85, B637, PB1753 a PB1758, PB3360, JH642, 1A243 (ATCC 39,087), ATCC 21332, ATCC 6051, MI113, DE100 (ATCC 39,094), GX4931, PBT 110 y PEP 211 (véase, p. ej., Hoch et al., Genetics 73:215-228 ; véanse también, los documentos de patente U.S. 4,450,235 y 4,302,544, y EP 0134048). El uso de B. subtilis como células huésped de expresión es ampliamente conocido en la técnica (véase, p. ej., Palva et al., Gene 19:81-87 [1982]; Fahnestock and Fischer, J. Bacteriol., 165:796-804 ; y Wang et al., Gene 69:39-47 [1988]).

[0064] En algunos modos de realización, la célula huésped de Bacillus es un Bacillus sp. que incluye una mutación o deleción en al menos uno de los siguientes genes: degU, degS, degR y degQ. Preferiblemente, la mutación se produce en un gen degU, y más preferiblemente, la mutación es degU(Hy)32 (véase, p. ej., Msadek et al., J. Bacteriol. 172:824-834 [1990]; y Olmos et al., Mol. Gen. Genet. 253:562-567 [1997]). Una cepa huésped adecuada es una Bacillus subtilis que porta una mutación degU32(Hy). En algunos modos de realización, el huésped de Bacillus comprende una mutación o deleción en scoC4 (véase, p. ej., Caldwell et al., J. Bacteriol.

183:7329-7340 [2001]); spoIIE (véase, p. ej., Arigoni et al., Mol. Microbiol. 31:1407-1415 [1999]); y/u oppA u otros genes del operón opp (véase, p. ej., Perego et al., Mol. Microbiol. 5:173-185 [1991]). De hecho, se contempla que cualquier mutación en el operón opp que cause el mismo fenotipo que una mutación en el gen oppA se utilizará en algunos modos de realización de la cepa de Bacillus alterada de la invención. En algunos modos de realización, estas mutaciones ocurren de forma independiente, mientras que en otros modos de realización se dan combinaciones de mutaciones. En algunos modos de realización, una cepa de células huésped de Bacillus alteradas que puede utilizarse para producir una variante de enzima lipolítica de la invención es una cepa huésped de Bacillus que ya incluye una mutación en uno o más de los genes mencionados anteriormente. Además, son de utilidad las células huésped de Bacillus sp. que comprenden mutaciones y/o deleciones de genes de enzima lipolítica endógenos. En algunos modos de realización, la célula huésped de Bacillus comprende una deleción de los genes aprE y nprE. En otros modos de realización, la célula huésped de Bacillus sp. comprende una deleción de 5 genes de enzima lipolítica, mientras que, en otros modos de realización, la célula huésped de Bacillus sp. comprende una deleción de 9 genes de enzima lipolítica (véase, p. ej., el documento de patente estadounidense con n.° de publicación de solicitud 2005/0202535).

[0065] Las células huésped se transforman con al menos un ácido nucleico que codifica al menos una variante de enzima lipolítica de la invención utilizando cualquier método adecuado conocido en la técnica. Tanto si el ácido nucleico se incorpora en un vector como si se utiliza sin la presencia de ADN plasmídico, este se introduce normalmente en un microorganismo, en algunos modos de realización, preferiblemente una célula de E. coli o una célula de Bacillus competente. Los métodos para introducir un ácido nucleico (p. ej., ADN) en células de Bacillus o células de E. coli utilizando vectores o constructos de ADN plasmídico y transformando dichos vectores o constructos de ADN plasmídico en dichas células son ampliamente conocidos. En algunos modos de realización, los plásmidos se aíslan posteriormente de células de E. coli y se transforman en células de Bacillus. No obstante, no es esencial utilizar microorganismos de intervención como E. coli y, en algunos modos de realización, un vector o constructo de ADN se introduce directamente en un huésped de Bacillus.

[0066] Los expertos en la materia están bien informados de métodos adecuados para introducir secuencias de ácidos nucleicos o polinucleotídicas de la invención en células de Bacillus (véase, p. ej., Ferrari et al., Genetics, en Harwood et al. [eds.], Bacillus, Plenum Publishing Corp., [1989] pp. 57-72; Saunders et al., J. Bacteriol.

157:718-726 ; Hoch et al., J. Bacteriol. 93:1925 -1937 ; Mann et al., Current Microbiol. 13:131-135 ; Holubova, Folia Microbiol. 30:97 [1995]; Chang et al., Mol. Gen. Genet. 168:11-115 [1979]; Vorobjeva et al., FEMS Microbiol. Lett. 7:261-263 [1980]; Smith et al., Appl. Env. Microbiol. 51:634 [1986]; Fisher et al., Arch. Microbiol.

139:213-217 [1981]; y McDonald, J. Gen. Microbiol. 130:203 [1984]). De hecho, dichos métodos como la transformación, incluyendo la transformación y la congregación de protoplastos, la transducción y la fusión de protoplastos, son ampliamente conocidos y adecuados para su utilización en la presente invención. Se utilizan métodos de transformación para introducir un vector o constructo de ADN que comprende un ácido nucleico que codifica una variante de enzima lipolítica de la presente invención en una célula huésped. Los métodos conocidos en la técnica para transformar células de Bacillus incluyen métodos como transformación de recuperación de un marcador plasmídico, que conlleva la absorción de un plásmido donante por células competentes que portan un plásmido residente parcialmente homólogo (véase, Contente et al., Plasmid 2:555-571 [1979]; Haima et al., Mol. Gen. Genet. 223:185-191 [1990]; Weinrauch et al., J. Bacteriol. 154:1077-1087 [1983]; y Weinrauch et al., J. Bacteriol. 169:1205-1211 [1987]). En este método, el plásmido donante entrante se recombina con la región homóloga del plásmido "auxiliar" residente en un proceso que imita la transformación cromosómica.

[0067] Además de los métodos utilizados comúnmente, en algunos modos de realización, las células huésped se transforman directamente con un vector o constructo de ADN que comprende un ácido nucleico que codifica una variante de enzima lipolítica de la invención (esto es, no se utiliza una célula intermedia para amplificar o procesar de cualquier otra forma el vector o constructo de ADN antes de su introducción en la célula huésped). La introducción del vector o constructo de ADN de la invención en la célula huésped incluye los métodos físicos y químicos conocidos en la técnica para introducir una secuencia de ácido nucleico (p. ej., secuencia de ADN) en una célula huésped sin inserción en un plásmido o vector. Dichos métodos incluyen, sin carácter limitativo, precipitación con cloruro de calcio, electroporación, ADN desnudo, liposomas y similares. En modos de realización adicionales, el vector o los constructos de ADN se cotransforman con un plásmido sin insertarse en el plásmido. En otros modos de realización, se deleciona un marcador selectivo de la cepa de Bacillus alterada utilizando métodos conocidos en la técnica (véase Stahl et al., J. Bacteriol. 158:411-418 [1984]; y Palmeros et al., Gene 247:255 -264 [2000]).

[0068] En algunos modos de realización, las células transformadas de la presente invención se cultivan en medios nutritivos convencionales. Las condiciones de cultivo específicas adecuadas, como la temperatura, el pH y similares, resultan conocidas para los expertos en la materia y se describen con detalle en la literatura científica. En algunos modos de realización, la invención da a conocer un cultivo (p. ej., cultivo celular) que comprende al menos una variante de enzima lipolítica o al menos un ácido nucleico de la invención. También se dan a conocer composiciones que comprenden al menos un ácido nucleico, vector o constructo de ADN de la invención.

[0069] En algunos modos de realización, las células huésped transformadas con al menos una secuencia polinucleotídica que codifica al menos una variante de enzima lipolítica de la invención se cultivan en un medio nutritivo adecuado en condiciones que permiten la expresión de la enzima lipolítica presente, tras lo cual se recupera la enzima lipolítica resultante del cultivo. El medio utilizado para cultivar las células comprende cualquier medio convencional adecuado para el cultivo de las células huésped, como medios complejos o mínimos que contienen suplementos apropiados. Los medios apropiados pueden adquirirse gracias a proveedores comerciales o se pueden preparar conforme a recetas publicadas (véanse, p. ej., los catálogos de la American Type Culture Collection). En algunos modos de realización, la enzima lipolítica producida por las células se recupera del medio de cultivo mediante procedimientos convencionales, incluyendo, a modo de ejemplo y sin carácter limitativo, la separación de las células huésped del medio mediante centrifugación o filtración, la precipitación de los componentes proteínicos del sobrenadante o filtrado por medio de una sal (p. ej., sulfato de amonio), purificación cromatográfica (p. ej., intercambio de iones, filtración en gel, afinidad, etc.). Puede utilizarse cualquier método adecuado para recuperar o purificar una variante de enzima lipolítica en la presente invención.

[0070] En algunos modos de realización, una variante de enzima lipolítica producida por una célula huésped recombinante se secreta en el medio de cultivo. Una secuencia de ácido nucleico que codifica un dominio que facilita la purificación puede utilizarse para facilitar la purificación de proteínas solubles. Un vector o constructo de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica que codifica una variante de enzima lipolítica puede comprender también una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un dominio que facilita la purificación para facilitar la purificación de la variante de enzima lipolítica (véase, Kroll et al., DNA Cell Biol. 12:441-53 [1993]). Dichos dominios que facilitan la purificación incluyen, sin carácter limitativo, por ejemplo, péptidos quelantes de metal como módulos histidina-triptófano que permiten la purificación en metales inmovilizados (véase, Porath, Protein Expr. Purif. 3:263-281 [1992]), dominios de proteína A que permiten la purificación en inmunoglobulina inmovilizada, y el dominio utilizado en el sistema de purificación por afinidad/extensión FLAGS (por ejemplo, dominios de proteína A disponibles de Immunex Corp., Seattle, Washington). La inclusión de una secuencia de enlace escindible como un Factor XA o enteroquinasa (por ejemplo, secuencias disponibles de Invitrogen, San Diego, California) entre el dominio de purificación y la proteína heteróloga también resulta de utilidad para facilitar la purificación.

[0071] Son ampliamente conocidos los ensayos para detectar y medir la actividad enzimática de una enzima, como una variante de enzima lipolítica de la invención. También son conocidos por los expertos en la materia varios ensayos para detectar y medir la actividad de las enzimas lipolíticas (p. ej., las variantes de enzimas lipolíticas de la invención). Tal y como se utiliza en el presente documento, la actividad lipolítica puede determinarse de acuerdo con cualquier procedimiento conocido en la técnica. Por ejemplo, pueden utilizarse ensayos como los ensayos de difusión en gel de lipólisis de triacilglicerol, titrimetría utilizando un método de pH-stat para medir la liberación de ácidos grasos, la liberación de p-nitrofenol de p-nitrofenil ésteres utilizando ensayos ELISA y espectrofotometría para determinar la actividad y/o especificidad de lipasa (véase, p. ej., Gupta et al., Biotechnol. Appl. Biochem, 37: 63-71, 2003). Otros ensayos pueden encontrarse, por ejemplo, en la patente estadounidense n.° 5,990,069; y en la patente con n.° de publicación internacional WO96/1 8729A1.

[0072] Puede utilizarse una variedad de métodos para determinar el nivel de producción de una enzima lipolítica madura (p. ej., variantes de enzimas lipolíticas maduras de la presente invención) en una célula huésped. Dichos métodos incluyen, sin carácter limitativo, por ejemplo, métodos que utilizan anticuerpos policlonales o monoclonales específicos para la enzima lipolítica. Entre los métodos de ejemplo se incluyen, pero sin carácter limitativo, los ensayos por inmunoabsorción ligados a enzimas (ELISA, por sus siglas en inglés), los radioinmunoensayos (RIA, por sus siglas en inglés), los inmunoensayos fluorescentes (FIA, por sus siglas en inglés) y la clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS, por sus siglas en inglés). Estos y otros ensayos son ampliamente conocidos en la técnica (véase, p. ej., Maddox et al., J. Exp. Med. 158:1211 [1983]).

[0073] En algunos otros modos de realización, la invención da a conocer métodos para elaborar o producir una variante de enzima lipolítica madura de la invención. Una variante de enzima lipolítica madura no incluye un péptido señal o una secuencia propeptídica. Algunos métodos comprenden la elaboración o producción de una variante de enzima lipolítica de la invención en una célula huésped bacteriana recombinante, como, por ejemplo, una célula de Bacillus sp. (por ejemplo, una célula de B. subtilis). En algunos modos de realización, la invención proporciona un método para producir una variante de enzima lipolítica de la invención, comprendiendo el método el cultivo de una célula huésped recombinante que comprende un vector de expresión recombinante que comprende un ácido nucleico que codifica una variante de enzima lipolítica de la invención en condiciones propicias para la producción de la variante de enzima lipolítica. Algunos de dichos métodos comprenden además la recuperación de la variante de enzima lipolítica del cultivo.

[0074] En algunos modos de realización, la invención da a conocer métodos para producir una variante de enzima lipolítica de la invención, comprendiendo los métodos: (a) introducir un vector de expresión recombinante que comprende un ácido nucleico que codifica una variante de enzima lipolítica de la invención en una población celular (p. ej., células bacterianas, como células de B. subtilis); y (b) cultivar las células en un medio de cultivo en condiciones propicias para producir la variante de enzima lipolítica codificada por el vector de expresión. Algunos de dichos métodos comprenden también: (c) aislar la variante de enzima lipolítica de las células o del medio de cultivo.

Productos para el cuidado del hogar y de tejidos

[0075] En algunos modos de realización, las variantes de enzima lipolítica de la presente invención pueden utilizarse en composiciones que comprenden un material auxiliar y una variante de enzima lipolítica, donde la composición es un producto de cuidado del hogar y de tejidos. Ejemplos de composiciones adecuadas se describen en el ejemplo 1.

[0076] En algunos modos de realización, las composiciones de productos de cuidado del hogar y de tejidos que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica, comprenden uno o más de los siguientes ingredientes (basado en el peso total de la composición): de aproximadamente 0,0005 % en peso a aproximadamente 0,5 % en peso, de aproximadamente 0,001 % en peso a aproximadamente 0,1 % en peso, o incluso de aproximadamente 0,002 % en peso a aproximadamente 0,05 % en peso de dicha variante de enzima lipolítica; y uno o más de los siguientes: de aproximadamente 0,00003 % en peso a aproximadamente 0,1 % en peso de agente matificante de tejidos; de aproximadamente 0,001 % en peso a aproximadamente 5 % en peso de cápsulas de perfume; de aproximadamente 0,001 % en peso a aproximadamente 1 % en peso, blanqueadores solubles en agua fría; de aproximadamente 0,00003 % en peso a aproximadamente 0,1% en peso de catalizadores de blanqueo; de aproximadamente 0,00003% en peso a aproximadamente 0,1 % en peso de celulasas limpiadoras de bacterias; y/o de aproximadamente 0,05 % en peso a aproximadamente 20 % en peso de tensioactivos no iónicos de Guerbet.

[0077] Tal como se utiliza en el presente documento, el "rendimiento de lavado" de una enzima lipolítica (p. ej., una variante de enzima lipolítica de la invención) se refiere a la contribución de la enzima lipolítica al lavado que proporciona un rendimiento de limpieza adicional al detergente en comparación con el detergente sin la adición de la variante de enzima lipolítica a la composición. El rendimiento de lavado se compara en condiciones de lavado pertinentes. En algunos sistemas de prueba, otros factores pertinentes, como la composición detergente, la concentración de jabonadura, la dureza del agua, el mecanismo de lavado, el tiempo, el pH y/o la temperatura pueden controlarse de tal forma que se imite(n) la(s) condición(es) típica(s) para la aplicación doméstica en un determinado segmento de mercado (p. ej., lavado de la vajilla de forma manual o a mano, lavado de la vajilla de forma automática, limpieza de artículos de vajilla, limpieza de artículos de mesa, limpieza de tejidos, etc.).

[0078] En algunos modos de realización, la composición de productos de cuidado del hogar y de tejidos es un detergente de lavado de ropa granulado o en polvo.

[0079] En algunos modos de realización, la composición de productos de cuidado del hogar y de tejidos es un detergente de lavado de ropa líquido o un detergente de lavado de vajilla.

[0080] Se pretende que el producto de cuidado del hogar y de tejidos se proporcione en cualquier forma adecuada, incluyendo un fluido o un sólido. El producto de cuidado del hogar y de tejidos puede estar en forma de bolsa de dosis unitaria, en concreto cuando está en forma de líquido y, normalmente, el producto de cuidado del hogar y de tejidos está al menos en parte, o incluso por completo, contenido en una bolsa soluble en agua. Asimismo, en algunos modos de realización de los productos de cuidado del hogar y de tejidos que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica, el producto de cuidado del hogar y de tejidos puede presentar cualquier combinación de parámetros y/o características expuestos anteriormente.

Composiciones de limpieza

[0081] Las composiciones de limpieza y las formulaciones de limpieza incluyen cualquier composición adecuada para limpiar, blanquear, desinfectar y/o esterilizar cualquier objeto, artículo y/o superficie. Dichas composiciones y formulaciones incluyen, sin carácter limitativo, por ejemplo, composiciones líquidas y/o sólidas, incluyendo composiciones de limpieza o detergentes (p. ej., composiciones detergentes para tejidos delicados y composiciones detergentes o de lavado de ropa líquidas, en pastillas, en gel, en barra, granuladas y/o sólidas; composiciones y formulaciones de limpieza para superficies duras, como para encimeras y ventanas de vidrio, madera, cerámica y metal; limpiadores de alfombras, limpiadores para hornos, ambientadores para tejidos, suavizantes para tejidos, y composiciones detergentes o de limpieza potenciadoras para lavado de ropa y artículos textiles, composiciones de limpieza aditivas para el lavado de ropa, y composiciones de limpieza de pretratado para el lavado de ropa; composiciones lavavajillas, incluyendo composiciones para el lavado de la vajilla de forma manual o a mano (p. ej., detergentes para el lavado de la vajilla de forma "manual" o "a mano") y composiciones para el lavado de la vajilla de forma automática (p. ej., "detergentes para el lavado de la vajilla de forma automática").

[0082] Las composiciones de limpieza o formulaciones de limpieza incluyen, tal como se utilizan en el presente documento y a menos que se indique otra cosa, agentes de lavado potentes o multiusos en polvo o granulados, especialmente detergentes de limpieza; agentes de lavado multiusos en forma líquida, granulada, en gel, sólida, en pastillas o en pasta, en concreto los tipos denominados detergentes líquidos potentes (HDL, por sus siglas en inglés) o detergentes en polvo potentes (HDD, por sus siglas en inglés); detergentes líquidos para tejidos delicados; agentes para el lavado de la vajilla de forma manual o a mano, incluyendo los de tipo muy espumoso; agentes de lavavajillas a mano o manuales, de lavavajillas automáticos o para el lavado de artículos de vajilla o artículos de mesa, incluidos los varios tipos en pastillas, en polvo, sólidos, granulados, líquidos, en gel o de enjuague para uso doméstico o institucional; agentes desinfectantes y de limpieza líquidos, incluidos los tipos para el lavado de manos antibacteriano, barras de limpieza, enjuagues bucales, productos para la limpieza de dentaduras, champús para automóviles, champús para alfombras, limpiadores para el baño, champús para el pelo y/o enjuagues de pelo para humanos y otros animales; geles de ducha y baños de espuma y limpiadores de metales; así como productos auxiliares de limpieza, como aditivos blanqueadores y productos de tipo "antiadherencia de manchas" o de pretratamiento. En algunos modos de realización, las composiciones granuladas se encuentran en forma "compacta"; en algunos modos de realización, las composiciones líquidas se encuentran en forma "concentrada".

[0083] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "composición detergente" o "formulación detergente" se emplea en referencia a una composición prevista para su utilización en un medio de lavado para la limpieza de objetos sucios o manchados, incluyendo artículos u objetos de tejido o sin tejido concretos. Dichas composiciones de la presente invención no se limitan a ninguna composición o formulación detergente en concreto. De hecho, en algunos modos de realización, los detergentes de la invención comprenden al menos una variante de enzima lipolítica de la invención y, además, uno o más surfactantes, transferasa(s), enzimas hidrolíticas, oxidorreductasas, mejoradores (por ejemplo, una sal mejoradora), agentes de blanqueo, activadores de blanqueo, agentes blanqueadores, colorantes fluorescentes, inhibidores de aglomerantes, agentes secuestrantes, activadores de enzimas, antioxidantes y/o solubilizantes. En algunos casos, una sal mejoradora es una mezcla de una sal de silicato y una sal de fosfato, preferiblemente con más silicato (p. ej., metasilicato sódico) que fosfato (p. ej., tripolifosfato sódico). Algunas composiciones de la invención como, por ejemplo, pero sin carácter limitativo, composiciones de limpieza o composiciones detergentes, no contienen ningún fosfato (p. ej., sal de fosfato o mejorador de fosfato).

[0084] A no ser que se indique otra cosa, todos los niveles de componentes o de composiciones que se proporcionan en el presente documento se elaboran en referencia al nivel activo de ese componente o composición, y no incluyen impurezas, como, por ejemplo, subproductos o disolventes residuales, que pueden estar presentes en fuentes disponibles en el mercado. Los pesos de los componentes enzimáticos se basan en la proteína activa total. Todos los porcentajes y relaciones se calculan en peso salvo que se indique de otro modo. Todos los porcentajes y relaciones se calculan en función de la composición total salvo que se indique de otro modo. En las composiciones detergentes de ejemplo, los niveles enzimáticos se expresan en enzima pura en peso de la composición total y, salvo que se especifique de otro modo, los ingredientes del detergente se expresan en peso de las composiciones totales.

[0085] Tal y como se indica en el presente documento, en algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención también comprenden materiales auxiliares incluyendo, pero sin carácter limitativo, surfactantes, mejoradores, blanqueadores, activadores de blanqueo, catalizadores de blanqueo, otras enzimas, sistemas de estabilización enzimática, quelantes, blanqueadores ópticos, polímeros de liberación de suciedad, agentes de transferencia de tintes, dispersantes, supresores de jabonaduras, tintes, perfumes, colorantes, sales de relleno, hidrótropos, fotoactivadores, fluorescentes, suavizantes de tejidos, acondicionadores de tejidos, surfactantes hidrolizables, conservantes, antioxidantes, agentes contra el encogimiento, agentes contra la formación de arrugas, germicidas, fungicidas, motas de color, agentes para el cuidado de la plata, contra la pérdida de lustre y/o contra la corrosión, fuentes de alcalinidad, agentes solubilizantes, portadores, coadyuvantes de elaboración, pigmentos y agentes de control del pH (véanse, p. ej., las patentes estadounidenses n.° 6,610,642, 6,605,458, 5,705,464, 5,710,115, 5,698,504, 5,695,679, 5,686,014 y 5,646,101). A continuación, se ejemplifican de forma detallada algunos modos de realización de materiales de composición de limpieza específicos. En los modos de realización en los que los materiales auxiliares de limpieza no son compatibles con las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención en las composiciones de limpieza, se utilizan métodos adecuados para mantener separados los materiales de limpieza auxiliares y la(s) enzima(s) lipolítica(s) (es decir, que no estén en contacto entre sí) hasta que la combinación de los dos componentes sea apropiada. Dichos métodos de separación incluyen cualquier método adecuado conocido en la técnica (p. ej., cápsulas recubiertas de gelatina, encapsulación, pastillas, separación física, etc.).

[0086] Las composiciones de limpieza de la presente invención se emplean, de manera ventajosa, por ejemplo, en aplicaciones de lavado de ropa, limpieza de superficies duras, aplicaciones de lavavajillas, así como en aplicaciones cosméticas como dentaduras postizas, dientes, cabello y piel. Además, debido a las ventajas singulares del aumento de eficacia en las soluciones a temperaturas inferiores, las enzimas de la presente invención son adecuadas idealmente para aplicaciones de lavado de ropa. Asimismo, las enzimas de la presente invención se utilizan en composiciones granuladas y líquidas.

[0087] Las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención también se utilizan en productos aditivos de limpieza. En algunos modos de realización, se pueden utilizar aplicaciones de limpieza de solución a baja temperatura. En algunos modos de realización, la presente invención proporciona productos aditivos de limpieza que incluyen al menos una enzima de la presente invención que resulta adecuada idealmente para su inclusión en un proceso de lavado cuando se desee una eficacia blanqueadora adicional. Dichos casos incluyen, aunque sin carácter limitativo, aplicaciones de limpieza de solución a baja temperatura. En algunos modos de realización, el producto aditivo está en su forma más simple, una o más enzimas lipolíticas. En algunos modos de realización, el aditivo se envasa en forma galénica para su adición en un proceso de limpieza. En algunos modos de realización, el aditivo se envasa en forma galénica para su adición en un proceso de limpieza en el que se emplee una fuente de peroxígeno y se desee un aumento de la eficacia blanqueadora. Cualquier unidad de dosis unitaria adecuada se puede utilizar con la presente invención, incluyendo, pero sin carácter limitativo, pastillas, comprimidos, cápsulas recubiertas de gelatina u otras unidades de dosis unitaria, como los polvos o líquidos ya medidos. En algunos modos de realización, se incluye(n) material(es) de relleno(s) y/o portador(es) para aumentar el volumen de dichas composiciones. Los materiales de relleno o portadores adecuados incluyen, sin carácter limitativo, diversas sales de sulfato, carbonato y silicato, así como talco, arcilla y similares. Algunos materiales de relleno o portadores adecuados para composiciones líquidas incluyen, pero sin carácter limitativo, agua o alcoholes primarios y secundarios de bajo peso molecular, incluyendo polioles y dioles. Ejemplos de dichos alcoholes incluyen, sin carácter limitativo, metanol, etanol, propanol e isopropanol. En algunos modos de realización, las composiciones contienen de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 90 % de dichos materiales. Los rellenos ácidos se utilizan para reducir el pH. Como alternativa, en algunos modos de realización, el aditivo de limpieza incluye ingredientes auxiliares, como se describe de forma más completa más adelante.

[0088] Las presentes composiciones de limpieza y aditivos de limpieza precisan una cantidad efectiva de al menos una de las variantes de enzima lipolítica expuestas en la invención, sola o combinada con otras enzimas lipolíticas y/o enzimas adicionales. El nivel necesario de enzima se obtiene mediante la adición de una o más variantes de enzima lipolítica de la presente invención. Normalmente, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden al menos aproximadamente un 0,0001 por ciento en peso, de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 10, de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 1 o incluso de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,1 por ciento en peso de al menos una de las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención.

[0089] Las composiciones de limpieza de la presente memoria se formulan normalmente de modo que, durante su uso en operaciones de limpieza acuosas, el agua de lavado presentará un pH de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 11,5 o aproximadamente 6,0 a 8,0 o incluso de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 10,5. Las formulaciones de producto líquido se formulan normalmente para obtener un pH puro desde aproximadamente 3,0 hasta aproximadamente 9,0 o incluso desde aproximadamente 3 a aproximadamente 8. Los productos de lavado de ropa granulados normalmente se formulan para presentar un pH de aproximadamente 6 a aproximadamente 11, o incluso de aproximadamente 8 a aproximadamente 10. Las técnicas para controlar el pH en los niveles de uso recomendados incluyen el uso de tampones, álcalis, ácidos, etc., y son ampliamente conocidas por los expertos en la materia.

[0090] Las “composiciones de limpieza con pH bajo” adecuadas presentan normalmente un pH puro desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 8 y no suelen contener surfactantes que se hidrolicen en tal entorno de pH. Dichos surfactantes incluyen surfactantes de alquil sulfato de sodio que comprenden al menos una fracción de óxido de etileno o incluso desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 16 moles de óxido de etileno. Dichas composiciones de limpieza comprenden normalmente una cantidad suficiente de un modificador de pH, como hidróxido sódico, monoetanolamina o ácido clorhídrico, para proporcionar a dicha composición de limpieza un pH puro desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 8. Dichas composiciones comprenden normalmente al menos una enzima estable en ácido. En algunos modos de realización, las composiciones son líquidos, mientras que, en otros modos de realización, estas son sólidas. El pH de dichas composiciones líquidas se mide normalmente como un pH puro. El pH de dichas composiciones sólidas se mide como un 10 % de solución de sólidos de dicha composición, donde el disolvente es agua destilada. En estos modos de realización, todas las mediciones del pH se toman a 20 °C, a menos que se indique otra cosa.

[0091] En algunos modos de realización, cuando la(s) variante(s) de enzima(s) lipolítica(s) se emplea(n) en una composición granulada o líquida, se desea que la variante de enzima lipolítica se encuentre en forma de una partícula encapsulada para proteger la variante de enzima lipolítica de otros componentes de la composición granulada durante su almacenamiento. Además, la encapsulación también es un medio para controlar la disponibilidad de la variante de enzima lipolítica durante el proceso de limpieza. En algunos modos de realización, la encapsulación potencia el rendimiento de la(s) variante(s) de enzima(s) lipolítica(s) y/o enzimas adicionales. En este sentido, las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención se encapsulan con cualquier material de encapsulación adecuado conocido en la técnica. En algunos modos de realización, el material de encapsulación normalmente encapsula al menos parte del catalizador para la(s) variante(s) de enzima(s) lipolítica(s) de la presente invención. Normalmente, el material de encapsulación es hidrosoluble y/o dispersable en agua. En algunos modos de realización, el material de encapsulación posee una temperatura de transición vítrea (Tg) de 0 °C o superior. La temperatura de transición vítrea se describe con mayor detalle en el documento WO 97/11151. El material de encapsulación se suele seleccionar entre el grupo que consiste en carbohidratos, gomas naturales o sintéticas, quitina, quitosano, celulosa y derivados de celulosa, silicatos, fosfatos, boratos, alcohol de polivinilo, polietilenglicol, ceras de parafina y combinaciones de estos. Cuando el material de encapsulación es un carbohidrato, se selecciona normalmente de entre monosacáridos, oligosacáridos, polisacáridos y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización habituales, el material de encapsulación es un almidón (véanse, p. ej., EP 0 922 499; US 4,977,252; US 5,354,559 y US 5,935,826). En algunos modos de realización, el material de encapsulación es una microesfera hecha de plástico, como termoplásticos, acrilonitrilo, metacrilonitrilo, poliacrilonitrilo, polimetacrilonitrilo y mezclas de los mismos; entre las microesferas comercializadas que se pueden utilizar se incluyen, sin carácter limitativo, las suministradas por EXPANCEL® (Stockviksverken, Suecia) y PM 6545, PM 6550, PM 7220, PM 7228, EXTENDOSPHERES®, LUXSIL®, Q-CEL® y SPHERICEL® (PQ Corp., Valley Forge, Pensilvania).

[0092] Tal como se describe en el presente documento, las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención se utilizan en particular en la industria de la limpieza, incluyendo, pero sin carácter limitativo, detergentes para el lavado de ropa o de la vajilla. Estas aplicaciones someten las enzimas a varios niveles de exigencia ambiental. Las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención proporcionan ventajas con respecto a muchas enzimas utilizadas en la actualidad debido a su estabilidad en varias condiciones.

[0093] De hecho, existe una variedad de condiciones de lavado, entre las que se incluyen extensiones del tiempo de lavado, temperaturas del agua de lavado, volúmenes del agua de lavado y formulaciones detergentes variables, a las que se exponen las enzimas lipolíticas empleadas en el lavado. Además, las formulaciones detergentes utilizadas en áreas geográficas distintas tienen distintas concentraciones de sus componentes pertinentes presentes en el agua de lavado. Por ejemplo, los detergentes europeos tienen aproximadamente 2000-9000 ppm de componentes detergentes en el agua de lavado, mientras que los detergentes japoneses tienen aproximadamente 500-1500 ppm de componentes detergentes en el agua de lavado. En América del Norte, concretamente en Estados Unidos, los detergentes tienen normalmente aproximadamente 975 ppm de componentes detergentes presentes en el agua de lavado.

[0094] Un sistema de baja concentración de detergente incluye los detergentes en los que menos de aproximadamente 800 ppm de componentes detergentes se encuentran presentes en el agua de lavado. Los detergentes japoneses suelen adscribirse al sistema de baja concentración de detergente, dado que tienen aproximadamente 667 ppm de componentes detergentes presentes en el agua de lavado.

[0095] Una concentración de detergente media incluye detergentes en los que entre aproximadamente 800 ppm y aproximadamente 2000 ppm de los componentes detergentes están presentes en el agua de lavado. Los detergentes norteamericanos se adscriben, por lo general, a los sistemas de concentración de detergente media, dado que tienen aproximadamente 975 ppm de componentes detergentes presentes en el agua de lavado. Brasil tiene normalmente aproximadamente 1500 ppm de componentes detergentes en el agua de lavado.

[0096] Un sistema de alta concentración de detergente incluye detergentes en los que más de aproximadamente 2000 ppm de componentes detergentes se encuentran presentes en el agua de lavado. Los detergentes europeos se adscriben, por lo general, a los sistemas de alta concentración de detergente, dado que tienen aproximadamente 4500-5000 ppm de componentes detergentes en el agua de lavado.

[0097] Los detergentes latinoamericanos son generalmente detergentes con mejoradores de fosfato con altos niveles de jabonadura, y la gama de detergentes utilizada en Latinoamérica puede adscribirse tanto a las concentraciones de detergente medias como a las altas, dado que las mismas varían entre 1500 ppm y 6000 ppm de componentes detergentes en el agua de lavado. Como se ha mencionado anteriormente, Brasil tiene normalmente aproximadamente 1500 ppm de componentes detergentes en el agua de lavado. Sin embargo, otras zonas geográficas con detergentes con mejoradores de fosfato con altos niveles de jabonadura, no limitadas a otros países de Latinoamérica, pueden tener sistemas de alta concentración de detergente de hasta aproximadamente 6000 ppm de componentes detergentes presentes en el agua de lavado.

[0098] En vista de lo anterior, es evidente que las concentraciones de composiciones detergentes en las soluciones típicas de lavado en todo el mundo varían desde menos de aproximadamente 800 ppm de composición detergente ("zonas geográficas con baja concentración de detergente"), por ejemplo, aproximadamente 667 ppm en Japón, hasta aproximadamente 800 ppm a aproximadamente 2000 ppm ("zonas geográficas con concentración de detergente media"), por ejemplo, aproximadamente 975 ppm en EE. UU. y aproximadamente 1500 ppm en Brasil, hasta más de aproximadamente 2000 ppm ("zonas geográficas con alta concentración de detergente"), por ejemplo, aproximadamente 4500 ppm a aproximadamente 5000 ppm en Europa y aproximadamente 6000 ppm en zonas geográficas con mejoradores de fosfato con altos niveles de jabonadura.

[0099] Las concentraciones de las soluciones típicas de lavado se determinan de forma empírica. Por ejemplo, en e E.UU., una lavadora típica soporta un volumen de aproximadamente 64,4 l de solución de lavado. Por consiguiente, para obtener una concentración de aproximadamente 975 ppm de detergente en la solución de lavado hay que añadir aproximadamente 62,79 g de composición detergente a los 64,4 l de solución de lavado. Esta cantidad es la cantidad típica introducida en el agua de lavado por el usuario al utilizar la cubeta de medida proporcionada con el detergente.

[0100] Como ejemplo adicional, distintas zonas geográficas utilizan distintas temperaturas de lavado. La temperatura del agua de lavado en Japón es normalmente inferior a la utilizada en Europa. Por ejemplo, la temperatura del agua de lavado en América del Norte y Japón se encuentra normalmente entre aproximadamente 10 y aproximadamente 30 °C (p. ej., aproximadamente 20 °C), mientras que la temperatura del agua de lavado en Europa se encuentra normalmente entre aproximadamente 30 y aproximadamente 60 °C (p. ej., aproximadamente 40 °C). No obstante, en aras de ahorrar energía, muchos consumidores están pasando a utilizar el lavado en agua fría. Además, en algunas otras regiones, normalmente se emplea agua fría para el lavado de ropa, así como para aplicaciones de lavado de la vajilla. En algunos modos de realización, el "lavado en agua fría" de la presente invención utiliza "detergente para agua fría" adecuado para un lavado a temperaturas de aproximadamente 10 °C a aproximadamente 40 °C, o de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C, o de aproximadamente 15 °C a aproximadamente 25 °C, así como cualquier otra combinación comprendida en el rango de aproximadamente 15 °C a aproximadamente 35 °C, y todos los rangos que se encuentren entre 10 °C y 40 °C.

[0101] Como ejemplo adicional, distintas zonas geográficas tienen normalmente distinta dureza del agua. La dureza del agua suele describirse en términos de granos por galón de Ca2+/Mg2+ mezclados. La dureza es una medida de la cantidad de calcio (Ca2+) y magnesio (Mg2+) en el agua. La mayoría del agua en Estados Unidos es dura, pero el grado de dureza varía. El agua moderadamente dura (60-120 ppm) a dura (121-181 ppm) tiene de 60 a 181 partes por millón (partes por millón convertido a granos por galón estadounidense es n.° de ppm dividido entre 17,1 da como resultado granos por galón) de minerales de dureza.

[0102] La dureza del agua europea es normalmente mayor que 10,5 (p. ej., aproximadamente de 10,5 hasta aproximadamente 20,0) granos por galón de Ca2+/Mg2+ mezclados (p. ej., aproximadamente 15 granos por galón de Ca2+/Mg2+ mezclados). La dureza del agua norteamericana es normalmente mayor que la dureza del agua japonesa, pero menor que la dureza del agua europea. Por ejemplo, la dureza del agua norteamericana puede ser de entre aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10 granos, aproximadamente 3 hasta aproximadamente 8 granos, o aproximadamente 6 granos. La dureza del agua japonesa suele ser menor que la dureza del agua norteamericana, normalmente menor que aproximadamente 4, por ejemplo, aproximadamente 3 granos por galón de Ca2+/Mg2+ mezclados.

[0103] Por consiguiente, en algunos modos de realización, la presente invención da a conocer variantes de enzimas lipolíticas que muestran un rendimiento de lavado sorprendente en al menos un conjunto de condiciones de lavado (p. ej., temperatura del agua, dureza del agua y/o concentración de detergente). En algunos modos de realización, las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención son comparables en cuanto al rendimiento de lavado a otras enzimas lipolíticas de lipasa. En algunos modos de realización, las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención muestran un rendimiento de lavado potenciado en comparación con las enzimas lipolíticas de lipasa comercializadas en la actualidad. Por lo tanto, en algunos modos de realización de la presente invención, las variantes de enzimas lipolíticas dadas a conocer en el presente documento muestran una mejor estabilidad oxidativa, una estabilidad térmica potenciada, capacidades de limpieza mejoradas en varias condiciones y/o una mayor estabilidad quelante. Además, las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención son de utilidad en composiciones de limpieza que no incluyen detergentes, de nuevo, por sí solas o en combinación con mejoradores y estabilizantes.

[0104] En algunos modos de realización de la presente invención, las composiciones de limpieza comprenden al menos una variante de enzima lipolítica de la presente invención a un nivel de aproximadamente un 0,00001 % hasta aproximadamente un 10 % en peso de la composición, comprendiendo el resto (p. ej., de aproximadamente un 99,999 % a aproximadamente un 90,0 %) materiales de limpieza auxiliares en peso de la composición. En algunos otros modos de realización de la presente invención, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden al menos una variante de enzima lipolítica a un nivel de aproximadamente un 0,0001% a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 2 %, de aproximadamente un 0,005 % a aproximadamente un 0,5 % en peso de la composición, comprendiendo el resto de la composición de limpieza (p. ej., de aproximadamente un 99,9999 % a aproximadamente un 90,0 %, de aproximadamente un 99,999 % a aproximadamente un 98 %, de aproximadamente un 99,995 % a aproximadamente un 99,5 % en peso) de materiales de limpieza auxiliares.

[0105] En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden una variante de enzima lipolítica tal y como se ha descrito anteriormente como componente enzimático principal, tal como en una composición monocomponente. En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden una o varias enzimas de detergente adicionales, que proporcionan beneficios en cuanto al rendimiento de limpieza y/o al cuidado de tejidos y/o al lavado de vajilla. Ejemplos de enzimas adecuadas incluyen, sin carácter limitativo, proteasas, perhidrolasas, hemicelulasas, celulasas, peroxidasas, enzimas lipolíticas, xilanasas, lipasas, fosfolipasas, esterasas, cutinasas, pectinasas, pectato liasas, mananasas, queratinasas, reductasas, oxidasas, fenoloxidasas, lipoxigenasas, ligninasas, pululanasas, tanasas, pentosanasas, malanasas, 13-glucanasas, arabinosidasas, hialuronidasas, condroitinasas, lacasas y amilasas o cualquier combinación o mezcla de las mismas. En algunos modos de realización, se utiliza una combinación de enzimas (es decir, un "cóctel") que comprende enzimas aplicables convencionales como enzima lipolítica, lipasa, cutinasa y/o celulasa junto con amilasa.

[0106] Por ejemplo, una variante de enzima lipolítica de la invención puede combinarse con una proteasa. Entre las enzimas proteolíticas se incluyen aquellas de origen animal, vegetal o microbiano. En algunos modos de realización, se utilizan enzimas proteolíticas microbianas. En algunos modos de realización, la enzima proteolítica es, preferiblemente, una enzima proteolítica microbiana alcalina o una enzima proteolítica similar a la tripsina. Algunos ejemplos de enzimas lipolíticas alcalinas incluyen las lipasas, especialmente las derivadas de Bacillus (p. ej., lentus, amyloliquefaciens, Carlsberg, 309, 147 y 168). Otros ejemplos incluyen las enzimas proteolíticas mutantes descritas en las patentes estadounidenses n.° RE 34,606, 5,955,340, 5,700,676, 6,312,936 y 6,482,628. Algunos ejemplos de proteasas adicionales incluyen, sin carácter limitativo, la tripsina (p. ej., de origen porcino o bovino) y la enzima proteasa de Fusarium descrita en el documento WO 89/06270. En algunos modos de realización, las enzimas proteasas disponibles comercialmente que se pueden utilizar en la presente invención incluyen, pero sin carácter limitativo, MAXATASE®, MAXACAL™, MAXAPEM™, OPTICLEAN®, OPTIMASE®, PROPERASE®, PURAFECT®, PURAFECT® OXP, PURAMAX™, EXCELLASE™ y PURAFAST™ (Genencor); ALCALASE®, SAVINASE®, PRIMASE®, DURAZYM™, POLARZYME®, OVOZYME®, KANNASE®, LIQUANASE®, NEUTRASE®, RELASE® y ESPERASE® (Novozymes); BLAP™ y variantes de BLAP™ (Henkel Kommanditgesellschaft auf Aktien, Düsseldorf, Alemania), y KAP (lipasa de B. alkalophilus; Kao Corp., Tokio, Japón). Se describen varias enzimas proteolíticas en los documentos WO95/23221, WO 92/21760, U.S. Pat. Publ. n.° 2008/0090747, y en los documentos U.S. Pat. n.° 5,801,039, 5,340,735, 5,500,364, 5,855,625, US RE 34,606, 5,955,340, 5,700,676, 6,312,936 y 6,482,628 y diversas otras patentes. En algunos otros modos de realización, se emplean enzimas metaloproteasas en la presente invención, incluyendo, pero sin carácter limitativo, la enzima metaloproteasa neutra descrita en el documento WO 07/044993.

[0107] En algunos modos de realización de la presente invención, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden, además, proteasas a un nivel de entre aproximadamente un 0,00001% y aproximadamente un 10 % de proteasa en peso de la composición, y el resto de materiales de limpieza auxiliares en peso de la composición. En otros modos de realización de la presente invención, las composiciones de limpieza de la presente invención también comprenden proteasas a un nivel de aproximadamente un 0,0001% hasta aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 0,001 % hasta aproximadamente un 5 %, aproximadamente un 0,001 % hasta aproximadamente un 2 %, aproximadamente un 0,005 % hasta aproximadamente un 0,5 % de proteasa en peso de la composición.

[0108] En algunos modos de realización, una variante de enzima lipolítica de la invención puede combinarse con una amilasa. En algunos modos de realización de la presente invención, se puede utilizar cualquier amilasa adecuada en la presente invención. En algunos modos de realización, puede utilizarse también cualquier amilasa (por ejemplo, alfa y/o beta) adecuada para su uso en soluciones alcalinas. Entre las amilasas adecuadas se incluyen, pero sin carácter limitativo, las de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen mutantes modificados genética o químicamente en algunos modos de realización. Entre las amilasas que son de utilidad en la presente invención se incluyen, pero sin carácter limitativo, las a-amilasas obtenidas de B. licheniformis (véase, p. ej., el documento GB 1,296,839). Entre las amilasas comercializadas que son de utilidad en la presente invención se incluyen, sin carácter limitativo, DURAMYL®, TERMAMYL®, FUNGAMYL®, STAINZYME®, STAINZYME PLUS®, STAINZYME ULTRA® y BAN™ (Novozymes), así como POWERASE™, RAPIDASE® y MAXAMYL® P (Genencor).

[0109] En algunos modos de realización de la presente invención, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden, además, amilasas a un nivel de aproximadamente un 0,00001 % a aproximadamente un 10 % de amilasas adicionales en peso de la composición, y el resto de materiales de limpieza auxiliares en peso de la composición. En algunos otros modos de realización de la presente invención, las composiciones de limpieza de la presente invención también comprenden amilasas a un nivel de aproximadamente un 0,0001% a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 2 %, de aproximadamente un 0,005 % a aproximadamente un 0,5 % de amilasa en peso de la composición.

[0110] En algunos modos de realización adicionales, se puede utilizar cualquier celulasa adecuada en las composiciones de limpieza de la presente invención. Entre las celulasas adecuadas se incluyen, aunque sin carácter limitativo, las de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen mutantes modificados química o genéticamente en algunos modos de realización. Algunas celulasas adecuadas incluyen, pero sin carácter limitativo, celulasas de Humicola insolens (véase, p. ej., la patente estadounidense n.° 4,435,307). Algunas celulasas especialmente adecuadas son las celulasas que presentan beneficios de cuidado del color (véase, p. ej., el documento EP 0 495 257). Entre las celulasas comercializadas que son de utilidad en la presente invención se incluyen, sin carácter limitativo, CELLUZYME®, CAREZYME® (Novozymes) y KAC-500(B)™ (Kao Corporation). En algunos modos de realización, las celulasas se incorporan como partes o fragmentos de celulasas naturales maduras o variantes de celulasas maduras, donde se deleciona una parte del extremo N-terminal (véase, p. ej., la patente estadounidense n.° 5,874,276). En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden, además, celulasas a un nivel de aproximadamente un 0,00001% a aproximadamente un 10 % de celulasa adicional en peso de la composición, y el resto de materiales de limpieza auxiliares en peso de la composición. En algunos otros modos de realización de la presente invención, las composiciones de limpieza de la presente invención también comprenden celulasas a un nivel de aproximadamente un 0,0001% a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 2 %, de aproximadamente un 0,005 % a aproximadamente un 0,5 % de celulasa en peso de la composición.

[0111] También se puede utilizar cualquier mananasa adecuada para su uso en composiciones detergentes en la presente invención. Entre las mananasas adecuadas se incluyen, pero sin carácter limitativo, las de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen mutantes modificados genética o químicamente en algunos modos de realización. Se conocen varias mananasas que se pueden utilizar en la presente invención (véase, p. ej., la patente estadounidense n.° 6,566,114, 6,602,842, y la patente estadounidense n.° 6,440,991). En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden, además, mananasas a un nivel de aproximadamente un 0,00001 % a aproximadamente un 10 % de mananasa adicional en peso de la composición, y el resto de materiales de limpieza auxiliares en peso de la composición. En algunos modos de realización de la presente invención, las composiciones de limpieza de la presente invención también comprenden mananasas a un nivel de aproximadamente un 0,0001 % a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 2 %, de aproximadamente un 0,005 % a aproximadamente un 0,5 % de mananasa en peso de la composición.

[0112] En algunos modos de realización, se utilizan peroxidasas en combinación con peróxido de hidrógeno o una fuente del mismo (p. ej., un percarbonato, perborato o persulfato) en las composiciones de la presente invención. En algunos modos de realización alternativos, se utilizan oxidasas en combinación con oxígeno. Ambos tipos de enzimas se utilizan para una "solución de blanqueo" (esto es, para evitar la transferencia de un tinte textil de un tejido tintado a otro tejido cuando los tejidos se lavan juntos en una solución de lavado), preferiblemente junto con un agente potenciador (véanse, p. ej., los documentos WO 94/12621 y WO 95/01426). Entre las peroxidasas/oxidasas adecuadas se incluyen, pero sin carácter limitativo, las de origen bacteriano, vegetal o fúngico. Se incluyen mutantes modificados genética o químicamente en algunos modos de realización. En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden, además, enzimas oxidasas y/o peroxidasas a un nivel de aproximadamente un 0,00001 % a aproximadamente un 10 % de oxidasa y/o peroxidasa adicional en peso de la composición, y el resto de materiales de limpieza auxiliares en peso de la composición. En algunos otros modos de realización de la presente invención, las composiciones de limpieza de la presente invención también comprenden enzimas oxidasas y/o peroxidasas a un nivel de aproximadamente un 0,0001 % a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 2 %, de aproximadamente un 0,005 % a aproximadamente un 0,5 % de enzimas oxidasas y/o peroxidasas en peso de la composición.

[0113] En algunos modos de realización, se pueden utilizar enzimas adicionales, incluyendo, pero sin carácter limitativo, perhidrolasas (véase, p. ej., el documento WO 05/056782). Además, en algunos modos de realización, el presente documento abarca mezclas de las enzimas mencionadas anteriormente, en concreto, una o más enzimas lipolíticas, amilasas, proteasas, mananasas, y/o al menos una celulasa adicional(es). De hecho, se contempla que se podrán utilizar varias mezclas de estas enzimas en la presente invención. También se contempla que los niveles variables de la(s) variante(s) de enzima(s) lipolítica(s) y una o más enzimas adicionales pueden variar de forma independiente hasta aproximadamente un 10 %, constituyendo los materiales de limpieza auxiliares el resto de la composición de limpieza. La selección específica de materiales de limpieza auxiliares se realiza con facilidad al tener en cuenta la superficie, el artículo o el tejido que va a ser limpiado, y la forma deseada de la composición para las condiciones de limpieza en el uso (p. ej., mediante el uso de detergente de lavado).

[0114] Entre los ejemplos de materiales de limpieza auxiliares adecuados se incluyen, sin carácter limitativo, surfactantes, mejoradores, blanqueadores, activadores de blanqueo, catalizadores de blanqueo, otras enzimas, sistemas de estabilización enzimática, quelantes, blanqueadores ópticos, polímeros de liberación de suciedad, agentes de transferencia de tintes, agentes inhibidores de transferencia de tintes, materiales catalíticos, peróxido de hidrógeno, fuentes de peróxido de hidrógeno, perácidos preformados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de eliminación de la suciedad de arcilla, agentes elastificantes de la estructura, dispersantes, supresores de jabonaduras, tintes, perfumes, colorantes, sales de relleno, hidrótropos, fotoactivadores, fluorescentes, suavizantes de tejidos, acondicionadores de tejidos, portadores, hidrótropos, coadyuvantes de elaboración, disolventes, pigmentos, surfactantes hidrolizables, conservantes, antioxidantes, agentes contra el encogimiento, agentes contra la formación de arrugas, germicidas, fungicidas, motas de color, agentes para el cuidado de la plata, contra la pérdida de lustre y/o contra la corrosión, fuentes de alcalinidad, agentes solubilizantes, portadores, coadyuvantes de elaboración, pigmentos y agentes de control del pH (véanse, p. ej., las patentes estadounidenses n.° 6,610,642, 6,605,458, 5,705,464, 5,710,115, 5,698,504, 5,695,679, 5,686,014 y 5,646,101). A continuación, se ejemplifican de forma detallada algunos modos de realización de materiales de composición de limpieza específicos. En los modos de realización en los que los materiales de limpieza auxiliares no son compatibles con las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención en las composiciones de limpieza, se utilizan métodos adecuados para mantener separados los materiales de limpieza auxiliares y la(s) enzima(s) lipolítica(s) (es decir, que no estén en contacto entre sí) hasta que la combinación de los dos componentes sea apropiada. Dichos métodos de separación incluyen cualquier método adecuado conocido en la técnica (p. ej., cápsulas recubiertas de gelatina, encapsulación, pastillas, separación física, etc.).

[0115] En algunos modos de realización, se incluye una cantidad efectiva de una o más variante(s) de enzima(s) lipolítica(s) proporcionada(s) en el presente documento en composiciones útiles para limpiar varias superficies que necesiten una eliminación de manchas lipídicas. Dichas composiciones de limpieza incluyen composiciones de limpieza para aplicaciones tales como la limpieza de superficies duras, tejidos y vajilla. De hecho, en algunos modos de realización, la presente invención proporciona composiciones de limpieza de tejidos, mientras que, en otros modos de realización, la presente invención proporciona composiciones de limpieza que no son para tejidos. Se pretende que la presente invención abarque composiciones detergentes en cualquier forma (esto es, líquidas, granuladas, en barra, semisólidas, en gel, en emulsiones, en pastillas, en cápsulas, etc.).

[0116] A modo de ejemplo, varias composiciones de limpieza donde se utilizan las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención se describen con más detalle más adelante. En algunos modos de realización en los que las composiciones de limpieza de la presente invención están formuladas como composiciones adecuadas para su uso en un método o varios métodos de lavado en lavadoras, las composiciones de la presente invención contienen preferiblemente al menos un surfactante y al menos un compuesto mejorador, así como uno o más materiales de limpieza auxiliares preferiblemente seleccionados de compuestos poliméricos orgánicos, agentes blanqueadores, enzimas adicionales, supresores de jabonaduras, dispersantes, dispersantes de jabones de cal, agentes de suciedad en suspensión y contra la redeposición e inhibidores de la corrosión. En algunos modos de realización, las composiciones para el lavado de ropa también contienen agentes suavizantes (esto es, como materiales de limpieza auxiliares adicionales). Las composiciones de la presente invención también utilizan productos detergentes aditivos en forma líquida o sólida. Dichos productos aditivos tienen por objeto suplementar y/o potenciar el rendimiento de las composiciones detergentes convencionales y pueden añadirse en cualquier fase del proceso de limpieza. En algunos modos de realización, la densidad de las composiciones detergentes para lavado de ropa varía desde aproximadamente 400 hasta aproximadamente 1200 g/litro, mientras que, en otros modos de realización, varía desde aproximadamente 500 hasta aproximadamente 950 g/litro de composición medida a 20 °C.

[0117] En modos de realización formulados como composiciones para su uso en métodos de lavado de vajilla manual, las composiciones de la invención contienen preferiblemente al menos un surfactante y preferiblemente al menos un material de limpieza auxiliar adicional seleccionado de compuestos poliméricos orgánicos, agentes potenciadores de jabonaduras, iones metálicos del grupo II, disolventes, hidrótropos y enzimas adicionales.

[0118] En algunos modos de realización, varias composiciones de limpieza, tales como las que se dan a conocer en la patente estadounidense n.° 6,605,458, se pueden utilizar con las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención. Por consiguiente, en algunos modos de realización, las composiciones que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica de la presente invención es una composición de limpieza de tejidos granulada compacta, mientras que en otros modos de realización, la composición es una composición de limpieza de tejidos granulada útil para el lavado de tejidos de color; en modos de realización adicionales, la composición es una composición de limpieza de tejidos granulada que proporciona suavizado a través de la capacidad de lavado; en modos de realización adicionales, la composición es una composición de limpieza de tejidos líquida potente. En algunos modos de realización, las composiciones que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica de la presente invención son composiciones de limpieza de tejidos como las descritas en las patentes estadounidenses n.° 6,610,642 y 6,376,450. Asimismo, las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención se pueden utilizar en composiciones detergentes para lavado de ropa granuladas, de especial utilidad en las condiciones de lavado de Europa o Japón (véase, p. ej., la patente estadounidense n.° 6,610,642).

[0119] En algunos modos de realización alternativos, la presente invención da a conocer composiciones de limpieza de superficies duras que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica dada a conocer en el presente documento. Así, en algunos modos de realización, las composiciones que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica de la presente invención es una composición de limpieza de superficies duras como las descritas en las patentes estadounidenses n.° 6,610,642, 6,376,450, y 6,376,450.

[0120] En otros modos de realización adicionales, la presente invención da a conocer composiciones de lavado de vajilla que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica dada a conocer en el presente documento. Así, en algunos modos de realización, las composiciones que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica de la presente invención es una composición de limpieza de superficies duras, tales como las de las patentes estadounidenses n.° 6,610,642 y 6,376,450. En algunos otros modos de realización adicionales, la presente invención da a conocer composiciones da lavado de vajillas que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica dada a conocer en el presente documento. En algunos otros modos de realización, las composiciones que comprenden al menos una variante de enzima lipolítica de la presente invención comprenden composiciones de cuidado bucal, tales como las que se describen en las patentes estadounidenses n.° 6,376,450, y 6,376,450. Las formulaciones y descripciones de los compuestos y los materiales de limpieza auxiliares contenidos en las patentes estadounidenses mencionadas anteriormente n.° 6,376,450, 6,605,458, 6,605,458, y 6,610,642, se pueden utilizar con las variantes de enzimas lipolíticas proporcionadas en el presente documento.

[0121] Las composiciones de limpieza de la presente invención se formulan en cualquier forma adecuada y se preparan mediante cualquier proceso seleccionado por el formulador; ejemplos no limitativos de ello se describen en las patentes estadounidenses n.° 5,879,584, 5,691,297, 5,574,005, 5,569,645, 5,565,422, 5,516,448, 5,489,392, y 5,486,303. Cuando se desea una composición de limpieza con un pH bajo, el pH de dicha composición se ajusta mediante la adición de un material como monoetanolamina o un material ácido como HCl.

[0122] Aunque no son esenciales a los efectos de la presente invención, los auxiliares ilustrados con carácter no limitativo en lo sucesivo son adecuados para su utilización en las composiciones de limpieza instantánea. En algunos modos de realización, estos auxiliares se incorporan, por ejemplo, para potenciar el rendimiento de limpieza o para contribuir al mismo, para el tratamiento del sustrato que se vaya a limpiar o para modificar la apariencia de la composición de limpieza, como es el caso de los perfumes, los colorantes, los tintes o similares. Se entiende que dichos auxiliares son adicionales a las variantes de enzimas lipolíticas de la presente invención. La naturaleza concreta de estos componentes adicionales, así como los niveles de incorporación de los mismos, dependerán de la forma física de la composición y de la naturaleza de la operación de limpieza para la que se va a utilizar. Entre los materiales auxiliares adecuados se incluyen, sin carácter limitativo, los surfactantes, los mejoradores, los agentes quelantes, los agentes inhibidores de la transferencia de tintes, los coadyuvantes de deposición, los dispersantes, las enzimas adicionales y los estabilizadores enzimáticos, los materiales catalíticos, los activadores de blanqueo, los potenciadores de blanqueo, el peróxido de hidrógeno, las fuentes de peróxido de hidrógeno, los perácidos preformados, los agentes dispersantes poliméricos, los agentes de eliminación de la suciedad de arcilla/contra la redeposición, los blanqueadores, los supresores de jabonaduras, los tintes, los perfumes, los agentes elastificantes de la estructura, los suavizantes de tejidos, los portadores, los hidrótropos, los coadyuvantes de elaboración y/o los pigmentos. Además de en la exposición que se presenta más abajo, pueden encontrarse ejemplos adecuados de dichos otros auxiliares y niveles de uso en las patentes estadounidenses n.° 5,576,282, 6,306,812, y 6,326,348. Los ingredientes auxiliares mencionados con anterioridad pueden constituir el resto de las composiciones de limpieza de la presente invención.

[0123] En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de acuerdo con la presente invención comprenden al menos un surfactante y/o un sistema surfactante, donde el surfactante se selecciona de entre surfactantes no iónicos, surfactantes aniónicos, surfactantes catiónicos, surfactantes anfolíticos, surfactantes zwitteriónicos, surfactantes no iónicos semipolares y mezclas de los mismos. En algunos modos de realización de composición de limpieza con un pH bajo (por ejemplo, composiciones que presentan un pH puro de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 5), la composición no contiene normalmente sulfato de alquilo etoxilado, puesto que se cree que dicho surfactante puede estar hidrolizado por dichas composiciones los contenidos ácidos. En algunos modos de realización, el surfactante está presente a un nivel desde aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 60 %, mientras que, en modos de realización alternativos, el nivel es de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 50 %, mientras que, en otros modos de realización adicionales, el nivel es de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 40 % en peso de la composición de limpieza.

[0124] En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden uno o varios mejoradores o sistemas mejoradores de detergentes. En algunos modos de realización que incorporan al menos un mejorador, las composiciones de limpieza comprenden al menos aproximadamente un 1 %, de aproximadamente un 3 % a aproximadamente un 60 %, o incluso de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 40 % de mejorador en peso de la composición de limpieza. Entre los mejoradores se incluyen, sin carácter limitativo, sales de polifosfatos de alcanolamonio, amonio y metales alcalinos; silicatos metálicos alcalinos, carbonatos de metales alcalinos y alcalinotérreos, aluminosilicatos, compuestos de policarboxilato, éter hidroxipolicarboxilatos, copolímeros de anhídrido maleico con etileno o vinilmetiléter, ácido 1, 3, 5-trihidroxi benceno-2, 4, 6-trisulfónico y ácido carboximetiloxisuccínico, las diversas sales de metal alcalino, las sales de amonio y de amonio sustituido de ácidos poliacéticos como el ácido tetraacético de etilendiamina y el ácido nitrilotriacético, así como policarboxilatos como ácido melítico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido oxidisuccínico, ácido polimaleico, ácido de benceno 1,3,5-tricarboxílico, ácido carboximetiloxisuccínico y sales solubles de estos. De hecho, se contempla que se podrá utilizar cualquier mejorador adecuado en diversos modos de realización de la presente invención.

[0125] En algunos modos de realización, los mejoradores forman complejos hidrosolubles de iones de dureza (p. ej., mejoradores secuestrantes), tales como citratos y polifosfatos (p. ej., tripolifosfato de sodio y tripolifosfato de sodio hexahidratado, tripolifosfato de potasio, y tripolifosfato con mezcla de sodio y potasio, etc.). Se contempla que se podrá utilizar cualquier mejorador adecuado en la presente invención, incluyendo los que se conocen en la técnica (véase, p. ej., EP 2100949).

[0126] En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención contienen al menos un agente quelante. Entre los agentes quelantes adecuados se incluyen, aunque sin carácter limitativo, los agentes quelantes de cobre, hierro y/o manganeso y mezclas de los mismos. En modos de realización en los que se utiliza al menos un agente quelante, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden de aproximadamente un 0,1% a aproximadamente un 15% o incluso de aproximadamente un 3,0% a aproximadamente un 10 % de agente quelante en peso de la composición de limpieza en cuestión.

[0127] En algunos otros modos de realización adicionales, las composiciones de limpieza dadas a conocer en el presente documento contienen al menos un coadyuvante de deposición. Los coadyuvantes de deposición adecuados incluyen, aunque sin carácter limitativo, polietilenglicol, polipropilenglicol, policarboxilato, polímeros de liberación de suciedad como el ácido politereftálico, arcillas como caolinita, montmorillonita, atapulgita, illita, bentonita, halloysita y mezclas de los mismos.

[0128] Como se indica en el presente documento, en algunos modos de realización, los agentes contra la redeposición se pueden utilizar en algunos modos de realización de la presente invención. En algunos modos de realización, se utilizan surfactantes no iónicos. Por ejemplo, en modos de realización de lavado de vajilla automático, se pueden utilizar surfactantes no iónicos para fines de modificación de superficies, en concreto para el laminado, para evitar la formación de películas y manchas y para mejorar el brillo. Estos surfactantes no iónicos también se utilizan para prevenir la redeposición de suciedad. En algunos modos de realización, el agente contra la redeposición es un surfactante no iónico según se conoce en la técnica (véase, p. ej., EP 2100 949).

[0129] En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención incluyen uno o más agentes inhibidores de transferencia de tintes. Los agentes inhibidores de transferencia de tintes poliméricos adecuados incluyen, sin carácter limitativo, polímeros de polivinilpirrolidona, polímeros de N-óxido de poliamina, copolímeros de N-vinilpirrolidona y N-vinilimidazol, poliviniloxazolidonas y polivinilimidazoles o mezclas de los mismos. En modos de realización en los que se utiliza al menos un agente inhibidor de transferencia de tintes, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden de aproximadamente un 0,0001 % a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 0,01 % a aproximadamente un 5 %, o incluso de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 3 % en peso de la composición de limpieza.

[0130] En algunos modos de realización, se incluyen silicatos en las composiciones de la presente invención. En algunos de dichos modos de realización, se utilizan silicatos de sodio (p. ej., disilicato de sodio, metasilicato de sodio y filosilicatos cristalinos). En algunos modos de realización, los silicatos están presentes en un nivel de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 20 %. En algunos modos de realización, los silicatos están presentes en un nivel de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 15 % en peso de la composición.

[0131] En algunos otros modos de realización adicionales, las composiciones de limpieza de la presente invención también contienen dispersantes. Los materiales orgánicos hidrosolubles adecuados incluyen, sin carácter limitativo, los ácidos homopoliméricos o copoliméricos o sus sales, en los que el ácido policarboxílico comprende al menos dos radicales carboxilo separados entre sí por no más de dos átomos de carbono.

[0132] En algunos otros modos de realización, las enzimas utilizadas en las composiciones de limpieza se estabilizan mediante cualquier técnica adecuada. En algunos modos de realización, las enzimas empleadas en el presente documento se estabilizan mediante la presencia de fuentes hidrosolubles de iones calcio y/o magnesio en las composiciones acabadas que aportan dichos iones a las enzimas. En algunos modos de realización, los estabilizadores enzimáticos incluyen oligosacáridos, polisacáridos y sales metálicas divalentes inorgánicas, incluidos metales alcalinotérreos, como sales de calcio. Se contempla que se utilizarán diversas técnicas para la estabilización enzimática en la presente invención. Por ejemplo, en algunos modos de realización, las enzimas empleadas en el presente documento se estabilizan mediante la presencia de fuentes hidrosolubles de iones zinc (II), calcio (II) y/o magnesio (II) en las composiciones acabadas que aportan dichos iones a las enzimas, así como otros iones metálicos (por ejemplo, bario (II), escandio (II), hierro (II), manganeso (II), aluminio (III), estaño (II), cobalto (II), cobre (II), níquel (II) y oxovanadio (IV)). Los cloruros y los sulfatos también se utilizan en algunos modos de realización de la presente invención. En la técnica, se conocen ejemplos de oligosacáridos y polisacáridos adecuados (p. ej., dextrinas) (véase, p. ej., el documento WO 07/145964). En algunos modos de realización, también se utilizan inhibidores reversibles de enzimas lipolíticas, como los compuestos que contienen boro (p. ej., borato, ácido 4-formil fenil borónico) y/o se puede utilizar un aldehído tripeptídico para mejorar aún más la estabilidad, según se prefiera.

[0133] En algunos modos de realización, los blanqueadores, activadores de blanqueo y/o catalizadores de blanqueo están presentes en las composiciones de la presente invención. En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden compuesto(s) blanqueador(es) orgánico(s) y/o inorgánico(s). Entre los blanqueadores inorgánicos se incluyen, sin carácter limitativo, las sales perhidratadas (p. ej., sales de perborato, percarbonato, perfosfato, persulfato y persilicato). En algunos modos de realización, las sales perhidratadas inorgánicas son sales de metales alcalinos. En algunos modos de realización, se incluyen sales perhidratadas inorgánicas como sólido cristalino, sin protección adicional, aunque, en algunos otros modos de realización, la sal se encuentra cubierta. En la presente invención, se puede utilizar cualquier sal adecuada que se conozca en la técnica (véase, p. ej., EP 2100949).

[0134] En algunos modos de realización, se utilizan activadores de blanqueo en las composiciones de la presente invención. Los activadores de blanqueo son normalmente precursores de perácidos orgánicos que potencian la acción blanqueadora durante la limpieza con temperaturas de 60 °C e inferiores. Entre los activadores de blanqueo adecuados para su uso según el presente documento se incluyen compuestos que, en condiciones de perhidrólisis, proporcionan ácidos peroxicarboxílicos alifáticos que poseen preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 átomos de carbono, en concreto, de aproximadamente 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono y/u, opcionalmente, ácido perbenzoico sustituido. En la técnica, se conocen activadores de blanqueo adicionales y se pueden utilizar en la presente invención (véase, p. ej., EP 2 100 949).

[0135] Además, en algunos modos de realización y, según se describe adicionalmente en el presente documento, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden, además, al menos un catalizador de blanqueo. En algunos modos de realización, son de utilidad el triazaciclononano de manganeso y otros complejos relacionados, así como complejos de cobalto, cobre, manganeso y hierro. Se pueden utilizar catalizadores de blanqueo adicionales en la presente invención (véanse, p. ej., US 4,246,612, 5,227,084, 4,810410, WO 99/06521 y EP 2100949).

[0136] En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención contienen uno o más complejos metálicos catalíticos. En algunos modos de realización, se utiliza un catalizador de blanqueo que contiene metal. En algunos modos de realización, el catalizador de blanqueo metálico comprende un sistema catalizador que comprende un catión de metal de transición de actividad catalítica de blanqueo definida (por ejemplo, cationes de cobre, hierro, titanio, rutenio, wolframio, molibdeno o manganeso), un catión de metal auxiliar que presenta una actividad catalítica de blanqueo mínima o nula (p. ej., cationes de zinc o de aluminio) y un secuestrante que presenta unas constantes de estabilidad definidas para los cationes metálicos catalíticos y auxiliares, en concreto ácido etilendiaminotetraacético, ácido etilendiamino tetra (metilenfosfónico) y sales hidrosolubles de los mismos (véase, por ejemplo, la patente estadounidense n.° 4,430,243). En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención se catalizan por medio de un compuesto de manganeso. Dichos compuestos y niveles de uso son ampliamente conocidos en la técnica (véase, p. ej., la patente estadounidense n.° 5,576,282). En modos de realización adicionales, los catalizadores de blanqueo de cobalto se utilizan en las composiciones de limpieza de la presente invención. En la técnica, se conocen diversos catalizadores de blanqueo de cobalto (véanse, p. ej., las patentes estadounidenses n.° 5,597,936 y 5,595,967), y se preparan fácilmente mediante procedimientos conocidos.

[0137] En algunos modos de realización adicionales, las composiciones de limpieza de la presente invención incluyen un complejo de metal de transición de un ligando macropolicíclico rígido (MRL, por sus siglas en inglés). A modo práctico, y no a modo limitativo, en algunos modos de realización, las composiciones y procesos de limpieza proporcionados en la presente invención se ajustan para proporcionar del orden de al menos una parte por cien millones de la especie de MRL activa en el medio de lavado acuoso y, en algunos modos de realización, proporcionan de 0,005 ppm a aproximadamente 25 ppm, más preferentemente de aproximadamente 0,05 ppm a aproximadamente 10 ppm y, siendo lo más preferente de aproximadamente 0,1 ppm a aproximadamente 5 ppm del MRL en el agua de lavado.

[0138] En algunos modos de realización, los metales de transición en el catalizador de blanqueo instantáneo de metal de transición incluyen, aunque sin carácter limitativo, el manganeso, el hierro y el cromo. Los MRL también incluyen, sin carácter limitativo, ligandos ultrarrígidos especiales que están entrecruzados (p. ej., 5,12-dietil-1,5,8,12-tetraazabiciclo[6.6.2]hexadecano). Los MRL de metales de transición adecuados se preparan fácilmente mediante procedimientos conocidos (véase, p. ej., WO 2000/32601, y el documento de patente estadounidense n.° 6,225,464).

[0139] En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden agentes para el cuidado de metales. Los agentes para el cuidado de metales se pueden utilizar para prevenir y/o reducir la pérdida de lustre, la corrosión y/o la oxidación de los metales, incluidos el aluminio, el acero inoxidable y metales no ferrosos (p. ej., plata y cobre). Entre los agentes adecuados para el cuidado de metales se incluyen los descritos en EP 2100949, WO 9426860 y WO 94/26859. En algunos modos de realización, el agente para el cuidado de metales es una sal de zinc. En algunos modos de realización adicionales, las composiciones de limpieza de la presente invención comprenden de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 5 % en peso de uno o más agentes para el cuidado de metales.

[0140] Tal como se ha indicado anteriormente, las composiciones de limpieza de la presente invención se formulan en cualquier forma adecuada y se preparan mediante cualquier proceso seleccionado por el formulador; ejemplos no limitativos de ello se describen en las patentes estadounidenses n.° 5,879,584, 5,691,297, 5,574,005, 5,569,645, 5,516,448, 5,489,392 y 5,486,303. En algunos modos de realización en los que se desea una composición de limpieza con un pH bajo, el pH de dicha composición se ajusta mediante la adición de un material ácido como HCl.

[0141] Las composiciones de limpieza expuestas en el presente documento son de utilidad en la limpieza de un sitio (p. ej., una superficie, vajilla, artículo o tejido). Normalmente, al menos una parte del sitio se pone en contacto con un modo de realización de la presente composición de limpieza, en su forma pura o diluida en agua de lavado y, a continuación, el sitio se lava y/o aclara de manera opcional. A efectos de la presente invención, el “lavado” incluye, sin carácter limitativo, frotado y agitación mecánica. En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza normalmente se usan en concentraciones de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 15000 ppm en solución. Cuando el disolvente de lavado es agua, la temperatura del agua normalmente oscila entre aproximadamente 5 °C y aproximadamente 90 °C y, cuando el sitio comprende un tejido, la relación de masa agua/tejido suele ser de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 30:1.

Composiciones para limpieza

[0142] Un aspecto de las presentes composiciones y métodos es una composición de limpieza que incluye una enzima lipolítica como componente. Puede utilizarse un polipéptido de enzima lipolítica como componente en composiciones detergentes para el lavado de manos, el lavado de ropa, el lavado de vajilla y para otras limpiezas de superficies duras.

[0143] En algunos modos de realización, se incorpora una enzima lipolítica en detergentes en una concentración igual o casi igual a la utilizada convencionalmente para la enzima lipolítica en detergentes. Por ejemplo, puede añadirse un polipéptido de enzima lipolítica en una cantidad correspondiente a 0,00001 - 1 mg (calculado como proteína enzimática pura) de enzima lipolítica por litro de agua de lavado/lavado de vajilla. En el presente documento, se ofrecen formulaciones de ejemplo, como se ejemplifica a continuación:

[0144] Un polipéptido de enzima lipolítica puede ser un componente de una composición detergente, como única enzima o con otras enzimas, incluyendo otras enzimas amilolíticas. Por definición, puede incluirse en la composición detergente en forma de granulado que no produce polvo, de líquido estabilizado o de enzima protegida. Los granulados que no producen polvo pueden producirse, por ejemplo, como se expone en las patentes estadounidenses n.° 4,106,991 y 4,661,452 y, opcionalmente, pueden recubrirse con métodos conocidos en la técnica. Algunos ejemplos de materiales de recubrimiento cerosos son los productos de polioxietileno (polietilenglicol, PEG) con pesos molares medios de entre 1000 y 20000, los nonilfenoles etoxilados que presentan entre 16 y 50 unidades de óxido de etileno, los alcoholes grasos etoxilados en los que el alcohol contiene entre 12 y 20 átomos de carbono y en los que hay entre 15 y 80 unidades de óxido de etileno, los alcoholes grasos, los ácidos grasos y los mono-, di- y triglicéridos de ácidos grasos. Algunos ejemplos de materiales de recubrimiento de formación de película adecuados para su aplicación mediante técnicas de lecho fluidizado se proporcionan, por ejemplo, en G^b 1483591. Las preparaciones enzimáticas líquidas pueden, por ejemplo, estabilizarse mediante la adición de un poliol, tal como propilenglicol, un azúcar o un polialcohol, ácido láctico o ácido bórico, de acuerdo con los métodos establecidos. En la técnica, se conocen otros estabilizadores enzimáticos. Las enzimas protegidas pueden prepararse según el método expuesto, por ejemplo, en EP 238216. Desde hace mucho tiempo, los polioles han sido reconocidos como estabilizadores de proteínas y como mejoradores de la solubilidad de proteína.

[0145] La composición detergente puede encontrarse en cualquier forma útil; p. ej., en polvos, gránulos, pastas o líquida. Un detergente líquido puede ser acuoso y contener, normalmente, hasta aproximadamente un 70 % de agua y entre un 0 % y un 30 % de disolvente orgánico. Asimismo, puede encontrarse en forma de tipo de gel compacto que contiene solo aproximadamente un 30 % de agua.

[0146] La composición detergente comprende uno o varios surfactantes, y cada uno de los cuales puede ser aniónico, no iónico, catiónico o zwitteriónico. El detergente contendrá, normalmente, entre un 0 % y aproximadamente un 50 % de surfactante aniónico, tal como alquilbenzenosulfonato lineal (LAS); aolefinsulfonato (AOS); alquilsulfato (sulfato de alcoholes grasos) (AS); etoxisulfato de alcohol (AEOS o AES); alcanosulfonatos secundarios (SAS); metil ésteres de ácidos grasos a-sulfonados; ácido alquil-succínico o alquenil-succínico; o jabón. La composición puede contener, además, entre un 0 % y un 40 % de surfactantes no iónicos, tales como etoxilato de alcohol (AEO o AE), etoxilatos de alcohol carboxilado, etoxilato de nonilfenol, alquilpoliglucósidos, óxido de alquil-dimetil-amina, monoetanolamida de ácidos grasos etoxilados, monoetanolamida de ácidos grasos o polihidroxi-alquil-amidas de ácidos grasos (como se describe, por ejemplo, en WO 92/06154).

[0147] La composición detergente puede, adicionalmente, comprender una o varias enzimas adicionales, tales como proteasas, otra enzima amilolítica, cutinasa, lipasa, celulasa, pectato liasa, perhidrolasa, xilanasa, peroxidasa y/o lacasa en cualquier combinación.

[0148] El detergente puede contener entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 65 % de un mejorador de detergente o agente complejante, tal como zeolita, difosfato, trifosfato, fosfonato, citrato, ácido nitrilotriacético (NTA), ácido tetraacético de etilendiamina (EDTA), ácido dietilentriaminopentaacético (DTMPA), ácido alquil-succínico o alquenil-succínico, silicatos solubles o silicatos estratificados (p. ej., SKS-6 de Hoechst). El detergente también puede no contener mejorador de detergente, es decir, estar esencialmente libre de mejorador de detergente. Las enzimas pueden utilizarse en cualquier composición compatible con la estabilidad de la enzima. Las enzimas, en general, pueden protegerse contra componentes perjudiciales por medio de formas de encapsulación conocidas; por ejemplo, mediante granulación o secuestro en hidrogeles. Las enzimas y, en concreto, las enzimas lipolíticas, con o sin dominios de unión al almidón, pueden utilizarse en una variedad de composiciones, incluyendo aplicaciones de lavado de ropa y de vajilla, limpiadores de superficies, así como en composiciones para la producción de etanol a partir de almidón o biomasa.

[0149] El detergente puede comprender uno o más polímeros. Entre los ejemplos, se incluye la carboximetilcelulosa (CMC), la polivinilpirrolidona (PVP), el polietilenglicol (PEG), el alcohol polivinílico (PVA), los policarboxilatos como los poliacrilatos, los copolímeros de ácido maleico/acrílico y los copolímeros de ácido de lauril metacrilato/acrílico.

[0150] El detergente puede contener un sistema de blanqueo, que puede comprender una fuente de H²O², tal como perborato o percarbonato, que puede combinarse con un activador de blanqueo de formación de perácido, tal como tetraacetiletilenodiamina (TAED) o nonanoiloxibencenosulfonato (NOBS). Alternativamente, el sistema de blanqueo puede comprender peroxiácidos (p. ej., los peroxiácidos de tipo amida, imida o sulfona). El sistema de blanqueo puede ser también un sistema de blanqueo enzimático, por ejemplo, perhidrolasa, tal como el descrito en la solicitud internacional PCT n.° WO 2005/056783.

[0151] Las enzimas de la composición detergente pueden estabilizarse mediante la utilización de agentes estabilizantes convencionales; por ejemplo, un poliol como el propilenglicol o el glicerol; un azúcar o un polialcohol; ácido láctico; ácido bórico o un derivado de ácido bórico, tal como, por ejemplo, un éster de borato aromático; y la composición puede formularse como se describe en, por ejemplo, WO 92/19709 y WO 92/19708.

[0152] El detergente también puede contener otros ingredientes de detergente convencionales, tales como, por ejemplo, suavizantes de tejido, incluyendo arcillas, potenciadores de espuma, supresores de jabonaduras, agentes contra la corrosión, agentes de suciedad en suspensión, agentes contra la suciedad de redeposición, tintes, bactericidas, inhibidores de pérdida de lustre, blanqueadores ópticos o perfumes.

[0153] El pH (medido en solución acuosa con una concentración de uso) es normalmente neutro o alcalino; p. ej., pH de entre aproximadamente 7,0 y aproximadamente 11,0.

[0154] A continuación, se describen formas concretas de composiciones detergentes para la inclusión de la enzima a-lipolítica presente. Muchas de estas composiciones pueden proporcionarse en formato de dosis unitaria para una mayor facilidad de uso. Algunas formulaciones y envases de dosis unitaria se describen en, por ejemplo, US20090209445A1, US20100081598A1, US7001878B2, EP1504994B1, WO2001085888A2, WO2003089562A1, WO2009098659A1, WO2009098660A1, WO2009112992A1, WO2009124160A1, WO2009152031A1, WO2010059483A1, WO2010088112A1, WO2010090915A1, WO2010135238A1, WO2011094687A1, WO2011094690A1, WO2011127102A1, WO2011163428A1, WO2008000567A1, WO2006045391A1, WO2006007911A1, WO2012027404A1, EP1740690B1, WO2012059336A1, US6730646B1, WO2008087426A1, WO2010116139A1 y WO2012104613A1.

Composición detergente de lavado de ropa líquida potente (HDL)

[0155] Algunas composiciones detergentes de lavado de ropa HDL ilustrativas incluyen un surfactante detersivo (10 % - 40 % peso/peso), incluidos un surfactante detersivo aniónico (seleccionado de un grupo de cadena lineal o ramificada o aleatoria, alquilsulfatos sustituidos o no sustituidos, alquilsulfonatos, sulfato alcoxilado de alquilo, fosfatos de alquilo, fosfonatos de alquilo, carboxilatos de alquilo, y/o mezclas de estos); y, opcionalmente, un surfactante no iónico (seleccionado de un grupo de cadena lineal o ramificada o aleatoria, alcohol alcoxilado de alquilo sustituido o no sustituido, por ejemplo, un alcohol etoxilado de alquilo Ca-C-ia y/o alcoxilatos de alquilfenol C⁶-C¹²), donde la relación de peso entre surfactante detersivo aniónico (con un índice hidrofílico (HIc) de entre 6,0 y 9) y surfactante detersivo no iónico es mayor que 1: 1. Entre los surfactantes detersivos adecuados también se incluyen los surfactantes detersivos catiónicos (seleccionados de un grupo de compuestos de alquilpiridinio, compuestos de alquilamonio cuaternario, compuestos de alquilfosfonio cuaternario, compuestos de alquilsulfonio ternario y/o mezclas de los mismos); surfactantes detersivos anfotéricos y/o zwitteriónicos (seleccionados de un grupo de sulfobetaínas de alcanolamina); surfactantes anfolíticos; surfactantes no iónicos semipolares y mezclas de los mismos.

[0156] Opcionalmente, la composición puede incluir un polímero potenciador de la tensioactividad que consiste en polímeros desengrasantes alcoxilados anfifílicos (seleccionados de un grupo de polímeros alcoxilados que poseen propiedades hidrofílicas e hidrofóbicas ramificadas, como polialquileniminas alcoxiladas en el intervalo de 0,05 % en peso - 10 % en peso) y/o polímeros de injerto aleatorio (que normalmente comprenden una cadena principal hidrofílica que comprende monómeros seleccionados del grupo que consiste en: ácidos carboxílicos insaturados C¹-C⁶, éteres, alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres, unidades de azúcar, unidades alcoxi, anhídrido maleico, polialcoholes saturados como glicerol, y mezclas de los mismos; y cadena(s) lateral(es) hidrofóbica(s) seleccionada(s) del grupo que consiste en: grupo alquilo C⁴-C²⁵, polipropileno, polibutileno, éster de vinilo de un ácido monocarboxílico C¹-C⁶ saturado, éster alquilo C¹-C⁶ de ácido acrílico o metacrílico, y mezclas de los mismos.

[0157] La composición puede incluir polímeros adicionales, como polímeros de liberación de suciedad (incluidos poliésteres con extremos rematados aniónicamente, por ejemplo SRP1, polímeros que comprenden al menos una unidad monomérica seleccionada de entre sacárido, ácido dicarboxílico, poliol y combinaciones de estos, en configuración aleatoria o en bloque, polímeros a base de tereftalato de etileno y copolímeros de los mismos en una configuración aleatoria o en bloque, por ejemplo Repel-o-tex SF, SF-2 y ^s RP6, Texcare SRA100, SRA300, SRN100, SRN170, SRN240, SRN300 y SRN325, Marloquest SL), polímeros contra la redeposición (de un 0,1 % en peso a un 10 % en peso, incluidos polímeros de carboxilato, tales como polímeros que comprenden al menos un monómero seleccionado de entre ácido acrílico, ácido maleico (o anhídrido maleico), ácido fumárico, ácido itacónico, ácido aconítico, ácido mesacónico, ácido citracónico, ácido metilmalónico, y cualquier mezcla de los mismos, homopolímero de vinilpirrolidona, y/o polietilenglicol, peso molecular en el intervalo de 500 a 100 000 Da); polímero celulósico (incluidos aquellos seleccionados de entre alquilcelulosa, alquil alcoxialquilcelulosa, carboxialquilcelulosa, alquil carboxialquilcelulosa, ejemplos de las cuales incluyen carboximetilcelulosa, metilcelulosa, metilhidroxietilcelulosa, metilcarboximetilcelulosa, y mezclas de las mismos) y carboxilato polimérico (como copolímero aleatorio de maleato/acrilato u homopolímero de poliacrilato).

[0158] La composición puede incluir, además, ácido graso saturado o insaturado; p. ej., ácido graso C¹²-C²⁴ saturado o insaturado (de un 0 % en peso a un 10 % en peso); coadyuvantes de deposición (ejemplos de los cuales incluyen polisacáridos; p. ej., polímeros celulósicos, haluros de poli dialil dimetil amonio (DADMAC), y copolímeros de D^{a d} MAC con vinilpirrolidona, acrilamidas, imidazoles, haluros de imidazolinio, y mezclas de los mismos, en configuración aleatoria o en bloque, goma guar catiónica, celulosa catiónica tal como hidroxietilcelulosa catiónica, almidón catiónico, poliacrilamidas catiónicas, y mezclas de estos.

[0159] La composición puede incluir también agentes inhibidores de transferencia de tintes, ejemplos de los cuales incluyen ftalocianina de manganeso, peroxidasas, polímeros de polivinilpirrolidona, polímeros N-óxido de poliamina, copolímeros de N-vinilpirrolidona y N-vinilimidazol, poliviniloxazolidonas y polivinilimidazoles y/o mezclas de los mismos; agentes quelantes, entre los ejemplos de los cuales se incluye el ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido dietilentriaminopentametilenfosfónico (DTPMP), ácido hidroxietano difosfónico (HEDP), ácido etilendiamino N,N'-disuccínico (EDDS), ácido metilglicindiacético (MGDA), ácido dietilentriaminopentaacético (DTPA), ácido propilendiaminotetraacético (PDT A), 2-hidroxipiridina-N-óxido (HPNO), o ácido metilglicindiacético (MGDA), ácido glutámico N,N-ácido diacético (sal tetrasódica de ácido glutámico N,N-ácido dicarboximetil (GLDA), ácido nitrilotriacético (NTA), ácido 4,5-dihidroxi-mbencenodisulfónico, ácido cítrico y cualquier sal de los mismos, ácido N-hidroxietiletilendiaminotriacético (HEDTA), ácido trietilentetraminohexaacético (TTHA), ácido N-hidroxietiliminodiacético (HEIDA), dihidroxietilglicina (DHEG), ácido etilendiaminotetrapropiónico (EDTP), y derivados de los mismos.

[0160] La composición puede incluir también enzimas (por lo general, de aproximadamente un 0,01 % en peso de enzima activa a un 0,03 % en peso de enzima activa), seleccionadas de entre proteasas, amilasas, lipasas, celulasas, colina oxidasas, peroxidasas/oxidasas, pectato liasas, mananasas, cutinasas, lacasas, fosfolipasas, lisofosfolipasas, aciltransferasas, perhidrolasas, arilesterasas, y cualquier mezcla de las mismas. La composición puede incluir un estabilizador enzimático (ejemplos de los cuales incluyen polioles como propilenglicol o glicerol, azúcar o polialcohol, ácido láctico, inhibidor reversible de proteasas, ácido bórico, o un derivado de ácido bórico, p. ej., un éster de borato aromático, o un derivado de ácido fenilborónico, como el ácido 4-formilfenil borónico).

[0161] La composición, opcionalmente, incluye supresores de jabonaduras a base de silicona o de ácido graso; tintes matizadores, cationes de calcio y de magnesio, ingredientes de señalización visual, antiespumante (de 0,001 % en peso a aproximadamente 4,0 % en peso) y/o estructurante/espesante (de 0,01 % en peso a 5 % en peso, seleccionado del grupo que consiste en diglicéridos y triglicéridos, diestearato de etilenglicol, celulosa microcristalina, materiales a base de celulosa, celulosa microfibrilada, biopolímeros, goma xantana, goma gellan y mezclas de los mismos).

[0162] La composición se puede encontrar en cualquier forma líquida, por ejemplo, una forma de líquido o en gel, o cualquier combinación de las mismas. La composición puede encontrarse en cualquier forma de dosis unitaria, por ejemplo, una bolsa.

Composición detergente de lavado de ropa seca/sólida potente (HDD)

[0163] Algunas composiciones detergentes de lavado de ropa HDD ilustrativas incluyen un surfactante detersivo, incluidos surfactantes detersivos aniónicos (p. ej., de cadena lineal o ramificada o aleatoria, sulfatos de alquilo sustituidos o no sustituidos, alquilsulfonatos, sulfato de alquilo alcoxilado, alquilfosfatos, alquilfosfonatos, alquilcarboxilatos y/o mezclas de los mismos), surfactante detersivo no iónico (p. ej., cadena lineal o ramificada o aleatoria, alquil etoxilatos C⁸-C¹⁸ sustituidos o no sustituidos, y/o alcoxilatos de alquilfenol C⁶-C¹²), surfactantes detersivos catiónicos (p. ej., compuestos de alquilpiridinio, compuestos de alquilamonio cuaternario, compuestos de alquilfosfonio cuaternario, compuestos de alquilsulfonio ternario, y mezclas de los mismos), surfactantes detersivos zwitteriónicos y/o anfotéricos (p. ej., sulfobetaínas de alcanolamina), surfactantes anfolíticos, surfactantes semipolares no iónicos, y mezclas de estos; mejoradores, incluyendo mejoradores sin fosfato (por ejemplo, mejoradores de zeolita, ejemplos de los cuales incluyen zeolita A, zeolita X, zeolita P y zeolita MAP en el intervalo de un 0 % en peso a menos de un 10 % en peso), mejoradores de fosfato (p. ej., tripolifosfato de sodio en el intervalo de un 0 % en peso a menos de un 10 % en peso), ácido cítrico, sales de citrato y ácido nitrilotriacético, sal de silicato (p. ej., silicato de sodio o de potasio o metasilicato de sodio en el intervalo de un 0 % en peso a menos de un 10 % en peso, o silicato estratificado (SKS-6)); sal de carbonato (p. ej., carbonato de sodio y/o bicarbonato de sodio en el intervalo de un 0 % en peso a menos de un 80 % en peso); y agentes de blanqueo, incluidos fotoblanqueadores (p. ej., ftalocianinas de zinc sulfonadas, ftalocianinas de aluminio sulfonadas, tintes de xanteno, y mezclas de estos), activadores de blanqueo hidrofóbicos o hidrofílicos (p. ej., dodecanoil oxibenceno sulfonato, decanoil oxibenceno sulfonato, ácido decanoil oxibenzoico o sus sales, 3,5,5-trimetilhexano oxibenceno sulfonato, tetraacetiletilendiamina-TAED, nonanoiloxibenceno sulfonato-NOBS, quats de nitrilo, y mezclas de estos), fuentes de peróxido de hidrógeno (p. ej., sales inorgánicas de perhidrato, ejemplos de las cuales incluyen sal de sodio monohidratada o tetrahidratada de perborato, percarbonato, persulfato, perfosfato, o persilicato), perácidos preformados hidrofílicos y/o hidrofóbicos (p. ej., ácidos y sales percarboxílicos, ácidos y sales percarbónicos, ácidos y sales perimídicos, ácidos y sales peroximonosulfúricos, y mezclas de estos), y/o catalizadores de blanqueo (p. ej., potenciadores de blanqueo de imina (entre los ejemplos de los cuales se incluyen cationes y poliiones de iminio), zwitteriones de iminio, aminas modificadas, óxidos de aminas modificadas, N-sulfonil iminas, N-fosfonil iminas, N-acil iminas, dióxidos de tiadiazol, perfluoroiminas, cetonas de azúcar cíclico, y mezclas de estos, y catalizadores de blanqueo que contienen metal (p. ej., cationes de cobre, hierro, titanio, rutenio, wolframio, molibdeno o manganeso, así como cationes de un metal auxiliar como zinc o aluminio y un secuestrante como ácido etilendiaminotetraacético, etilendiaminotetra (ácido metilenfosfónico), y sales hidrosolubles de estos.

[0164] La composición puede incluir enzimas; por ejemplo, proteasas, amilasas, lipasas, celulasas, colina oxidasas, peroxidasas/oxidasas, pectato liasas, mananasas, cutinasas, lacasas, fosfolipasas, lisofosfolipasas, aciltransferasa, perhidrolasa, arilesterasa, y cualquier mezcla de las mismas.

[0165] La composición puede incluir, opcionalmente, ingredientes de detergente adicionales, incluidas microcápsulas de perfume, composición de perfume encapsulada de almidón, agentes matificantes, polímeros adicionales que incluyen polímeros de integridad de tejidos y catiónicos, ingredientes bloqueadores de tintes, agentes suavizantes de tejidos, blanqueadores (por ejemplo, blanqueadores fluorescentes C.I.), agentes floculantes, agentes quelantes, poliaminas alcoxiladas, coadyuvantes de deposición de tejidos y/o ciclodextrina. Composición detergente de lavado de vajillas automático (ADW)

[0166] Una composición detergente ADW ilustrativa incluye surfactantes no iónicos, incluyendo surfactantes etoxilados no iónicos, surfactantes de alcohol alcoxilado, alcoholes poli(oxialquilados) cubiertos de epoxi, o surfactantes de óxido de amina presentes en cantidades de 0 a 10 % en peso; mejoradores en el intervalo de 5­ 60 % que incluyen mejoradores de fosfato (p. ej., monofosfatos, difosfatos, tripolifosfatos, otros polifosfatos oligoméricos, tripolifosfatos de sodio-STPP) y mejoradores sin fosfato (p. ej., compuestos a base de aminoácidos, incluyendo ácido metilglicindiacético (MGDA) y sales y derivados de este, ácido glutámico-N,N-diacético (GLDA) y sales y derivados de este, ácido iminodisuccínico (IDS) y sales y derivados de este, carboximetilinulina y sales y derivados de esta, ácido nitrilotriacético (NTA), ácido dietilentriaminopentaacético (DTPA), ácido B-alaninodiacético (B-ADA) y sus sales, homopolímeros y copolímeros de ácidos policarboxílicos y sus sales parcial o completamente neutralizadas, ácidos policarboxílicos monoméricos y ácidos hidroxicarboxílicos y sus sales en el intervalo de 0,5 % a 50 % en peso; polímeros sulfonados/carboxilados en el intervalo de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 50 % en peso para proporcionar estabilidad dimensional; coadyuvantes de secado en el intervalo de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 10% en peso (p. ej., poliésteres, especialmente poliésteres aniónicos, opcionalmente, junto con otros monómeros con entre 3 y 6 funcionalidades propicias para la policondensación, en concreto, funcionalidades de ácido, alcohol o éster, compuestos o compuestos precursores de policarbonato-poliorganosiloxano, poliuretanopoliorganosiloxano y/o poliurea-poliorganosiloxano de los mismos, en concreto del tipo urea y carbonato cíclico reactivo); silicatos en el intervalo de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 20 % en peso (incluyendo silicatos de sodio o potasio, por ejemplo, disilicato de sodio, metasilicato de sodio y filosilicatos cristalinos); blanqueador inorgánico (p. ej., sales de perhidrato, como sales de perborato, percarbonato, perfosfato, persulfato y persilicato) y blanqueador orgánico (p. ej., peroxiácidos orgánicos, incluidos diacil y tetraacilperóxidos, especialmente ácido diperoxidodecanodioico, ácido diperoxitetradecanodioico, ácido diperoxihexadecanodioico); activadores de blanqueo (precursores orgánicos de perácido en el intervalo de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 10 % en peso); catalizadores de blanqueo (p. ej., triazaciclononano de manganeso y complejos relacionados, Co, Cu, Mn y Fe bispiridilamina y complejos relacionados, y acetato de pentamina de cobalto(III) y complejos relacionados); agentes de cuidado de metales en el intervalo de aproximadamente un 0,1 % a un 5 % en peso (p. ej., benzatriazoles, sales y complejos de metales, y/o silicatos); enzimas en el intervalo de aproximadamente 0,01 a 5,0 mg de enzima activa por gramo de composición detergente de lavado de vajillas automático (p. ej., proteasas, amilasas, lipasas, celulasas, colina oxidasas, peroxidasas/oxidasas, pectato liasas, mananasas, cutinasas, lacasas, fosfolipasas, lisofosfolipasas, aciltransferasa, perhidrolasa, arilesterasa, y sus mezclas); y componentes estabilizadores de enzimas (p. ej., oligosacáridos, polisacáridos y sales inorgánicas de metales divalentes).

Composiciones detergentes adicionales

[0167] A continuación, en los párrafos numerados, se describen formulaciones detergentes de ejemplo adicionales a las que puede añadirse la presente enzima lipolítica.

1) Una composición detergente formulada como granulado que presenta una densidad aparente de al menos 600 g/L, que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente un 7 % y aproximadamente un 12 %; etoxisulfato de alcohol (p. ej., alcohol C¹²-¹⁸, 1-2 óxido de etileno [EO]) o alquilsulfato (p. ej., C^16-18) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 4 %; etoxilato de alcohol (p. ej., alcohol C^14-15, 7 EO) entre aproximadamente un 5 % y aproximadamente un 9 %; carbonato sódico (p. Ej., Na²CO³) entre aproximadamente un 14 % y aproximadamente un 20 %; silicato soluble (p. ej., Na²O, ² SO ²) entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 6 %; zeolita (p. ej., NaA¹ SiO⁴) entre aproximadamente un 15 % y aproximadamente un 22 %; sulfato sódico (p. ej., Na²SO⁴) entre un 0 % y aproximadamente un 6 %; citrato sódico/ácido cítrico (p. ej., C⁶H⁵Na³O⁷/C⁶H⁸O⁷) entre aproximadamente un 0 % y aproximadamente un 15 %; perborato sódico (p. ej., NaBO³H²O) entre aproximadamente un 11 % y aproximadamente un 18 %; TAEd entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 6 %; carboximetilcelulosa (CMC) entre un 0 % y un 2 %; polímeros (p. ej., ácido maleico/acrílico, copolímero, PVP, PEG) 0-3 %; enzimas (calculado como enzima pura) con 0,0001-0,1 % de proteína; e ingredientes secundarios (p. ej., supresores de jabonaduras, perfumes, blanqueadores ópticos, fotoblanqueador) 0,5 %.

2) Una composición detergente formulada como granulado que presenta una densidad aparente de al menos 600 g/L, que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente un 6 % y aproximadamente un 11 %; etoxisulfato de alcohol (p. ej., alcohol C^12-18, 1-2 EO) o alquilsulfato (p. ej., C¹⁶-¹⁸) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 3 %; etoxilato de alcohol (p. ej., alcohol C^14-15, 7 EO) entre aproximadamente un 5 % y aproximadamente un 9 %; carbonato sódico (p. ej., Na²CO³) entre aproximadamente un 15 % y aproximadamente un 21 %; silicato soluble (p. ej., Na²O, ² SO²) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 4 %; zeolita (p. ej., NaA1SiO4) entre aproximadamente un 24 % y aproximadamente un 34 %; sulfato sódico (p. ej., Na²SO⁴) entre aproximadamente un 4 % y aproximadamente un 10 %; citrato sódico/ácido cítrico (p. ej., C⁶H⁵Na³Oy/C⁶H⁸Oy) entre un 0 % y aproximadamente un 15 %; carboximetilcelulosa (CMC) entre un 0 % y aproximadamente un 2 %; polímeros (p. ej., copolímero de ácido maleico/acrílico, PVP, PEG) 1-6 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; ingredientes secundarios (p. ej., supresores de jabonaduras, perfume) 0-5 %.

3) Una composición detergente formulada como granulado que presenta una densidad aparente de al menos 600 g/L, que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 9 %; etoxilato de alcohol (p. ej., alcohol C^12-15, 7 EO) entre aproximadamente un 7 % y aproximadamente un 14 %; jabón como ácido graso (p. ej., ácido graso C^16-22) entre aproximadamente un 1 y aproximadamente un 3 %; carbonato sódico (como Na²CO³) entre aproximadamente un 10 % y aproximadamente un 17 %; silicato soluble (p. ej., Na²O, ² SO²) entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 9 %; zeolita (como NaA1SiO4) entre aproximadamente un 23 % y aproximadamente un 33 %; sulfato sódico (p. ej.,, Na²SO⁴) entre un 0 % y aproximadamente un 4 %; perborato sódico (p. ej., NaBO³H²O) entre aproximadamente un 8 % y aproximadamente un 16 %; TAED, entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 8 %; fosfonato (p. ej., EDTMPA) entre un 0 % y aproximadamente un 1 %; carboximetilcelulosa (CMC) entre un 0 % y aproximadamente un 2 %; polímeros (p. ej., copolímero de ácido maleico/acrílico, PVP, PEG) 0-3 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; ingredientes secundarios (p. ej., supresores de jabonaduras, perfume, blanqueador óptico) 0-5 %.

4) Una composición detergente formulada como granulado que presenta una densidad aparente de al menos 600 g/L, que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente un 8 % y aproximadamente un 12 %; etoxilato de alcohol (p. ej., alcohol C^12-15, 7 EO) entre aproximadamente un 10% y aproximadamente un 25 %; carbonato sódico (como Na²CO³) entre aproximadamente un 14 % y aproximadamente un 22 %; silicato soluble (p. ej., Na²O, ² SO²) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 5 %; zeolita (p. ej., NaA1SiO4) entre aproximadamente un 25 % y aproximadamente un 35 %; sulfato sódico (p. ej., Na²SO⁴) entre un 0 % y aproximadamente un 10 %; carboximetilcelulosa (CMC) entre un 0 % y aproximadamente un 2 %; polímeros (p. ej., copolímero de ácido maleico/acrílico, PVP, PEG) 1-3 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; e ingredientes secundarios (p. ej., supresores de jabonaduras, perfume) 0-5 %.

5) Una composición detergente líquida acuosa que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente un 15 % y aproximadamente un 21 %; etoxilato de alcohol (p. ej., alcohol C¹²-¹⁵, 7 EO o alcohol C^12-15, 5 EO) entre aproximadamente un 12 % y aproximadamente un 18 %; jabón como ácido graso (p. ej., ácido oleico) entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 13 %; ácido alquenilsuccínico (C^12-14) entre un 0 % y aproximadamente un 13 %; aminoetanol entre aproximadamente un 8 % y aproximadamente un 18 %; ácido cítrico entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 8 %; fosfonato entre un 0 % y aproximadamente un 3 %; polímeros (p. ej, PVP, PEG) entre un 0 % y aproximadamente un 3 %; borato (p. ej., B⁴O⁷) entre un 0 % y aproximadamente un 2 %; etanol entre un 0 % y aproximadamente un 3 %; propilenglicol entre aproximadamente un 8 % y aproximadamente un 14 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; e ingredientes secundarios (p. ej., dispersantes, supresores de jabonaduras, perfume, blanqueador óptico) 0-5 %.

6) Composición detergente líquida estructurada acuosa, que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente un 15 % y aproximadamente un 21 %; etoxilato de alcohol (p. ej., alcohol C^12-15, 7 EO, o alcohol C^12-15, 5 EO) 3-9 %; jabón como ácido graso (p. ej, ácido oleico) entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 10 %; zeolita (como NaA1SiO4) entre aproximadamente un 14 % y aproximadamente un 22 %; citrato potásico entre aproximadamente un 9 % y aproximadamente un 18 %; borato (p. ej., B⁴O⁷) entre un 0 % y aproximadamente un 2 %; carboximetilcelulosa (CMC) entre un 0 % y aproximadamente un 2 %; polímeros (p. ej., PEG, PVP) entre un 0 % y aproximadamente un 3 %; polímeros de anclaje, tal como, p. ej., copolímero de laurilmetacrilato/ácido acrílico ; proporción molar 25:1, M^w 3800) entre un 0 % y aproximadamente 3 %; glicerol entre un 0 % y aproximadamente un 5 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; e ingredientes secundarios (p. ej., dispersantes, supresores de jabonaduras, perfume, blanqueadores ópticos) 0-5 %.

7) Composición detergente formulada como granulado que presenta una densidad aparente de al menos 600 g/L, que comprende sulfato de alcohol graso entre aproximadamente un 5 % y aproximadamente un 10%; monoetanolamida de ácido graso etoxilado entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 9 %; jabón como ácido graso 0-3 %; carbonato sódico (p. ej., Na²CO³) entre aproximadamente un 5 % y aproximadamente un 10 %; silicato soluble (p. ej.., Na²O, ² SO²) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 4 %; zeolita (p. ej., NaA1SiO4) entre aproximadamente un 20 % y aproximadamente un 40 %; sulfato sódico (p. ej., Na²SO⁴) entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 8 %; perborato sódico (p. ej, NaBO³H²O) entre aproximadamente un 12 % y aproximadamente un 18 %; TAED entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 7 %; polímeros (p. ej., copolímero de ácido maleico/acrílico, PEG) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 5 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; e ingredientes secundarios (p. ej., blanqueador óptico, supresores de jabonaduras, perfume) 0-5 %.

8) Composición detergente formulada como granulado, que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente un 8 % y aproximadamente un 14 %; monoetanolamida de ácido graso etoxilado entre aproximadamente un 5 % y aproximadamente un 11 %; jabón como ácido graso entre un 0 % y aproximadamente un 3 %; carbonato sódico (p. ej., Na²CO³) entre aproximadamente un 4 % y aproximadamente un 10 %; silicato soluble (Na²O, ² SO ²) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 4 %; zeolita (p. ej, NaA1SiO4) entre aproximadamente un 30 % y aproximadamente un 50 %; sulfato sódico (p. ej, Na²SO⁴) entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 11 %; citrato sódico (p. ej., C⁶H⁵Na³O⁷) entre aproximadamente un 5 % y aproximadamente un 12 %; polímeros (p. ej., PVP, copolímero de ácido maleico/acrílico, PEG) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 5 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; e ingredientes secundarios (p. ej., supresores de jabonaduras, perfume) 0-5 %.

9) Una composición detergente formulada como granulado, que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente un 6 % y aproximadamente un 12 %; surfactante no iónico entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 4 %; jabón como ácido graso entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 6 %; carbonato sódico (p. ej., Na²CO³) entre aproximadamente un 14 % y aproximadamente un 22 %; zeolita (p. ej, NaA¹ SiO⁴) entre aproximadamente un 18 % y aproximadamente un 32 %; sulfato sódico (p. ej., Na²SO⁴) entre aproximadamente un 5 % y aproximadamente un 20 %; citrato sódico (p. ej., C⁶H⁵Na³O⁷) entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 8 %; perborato sódico (p. ej., NaBO³H²O) entre aproximadamente un 4 % y aproximadamente un 9 %; activador de blanqueo (p. ej., NOBS o TAED) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 5 %; carboximetilcelulosa (Cm C) entre un 0 % y aproximadamente un 2 %; polímeros (p. ej., policarboxilato o PEG) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 5 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; e ingredientes secundarios (p. ej., blanqueador óptico, perfume) 0-5 %.

10) Composición detergente líquida acuosa, que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente un 15 % y aproximadamente un 23 %; etoxisulfato de alcohol (p. ej., alcohol C¹²-¹⁵, 2-3 EO) entre aproximadamente un 8 % y aproximadamente un 15 %; etoxilato de alcohol (p. ej., alcohol C¹²-¹⁵, 7 EO o alcohol C¹²-¹⁵, 5 EO) entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 9 %; jabón como ácido graso (p. ej., ácido láurico) entre un 0 % y aproximadamente un 3 %; aminoetanol entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 5 %; citrato sódico entre aproximadamente un 5 % y aproximadamente un 10 %; hidrótropo (p. ej.,, toluensulfonato sódico) entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 6 %; borato (p. ej., B⁴O⁷) entre un 0 % y aproximadamente un 2 %; carboximetilcelulosa entre un 0 % y aproximadamente un 1 %; etanol entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 3 %; propilenglicol entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 5 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; e ingredientes secundarios (p. ej., polímeros, dispersantes, perfume, blanqueadores ópticos) 0-5 %.

11) Composición detergente líquida acuosa, que comprende alquilbenzenosulfonato lineal (calculado como ácido) entre aproximadamente un 20 % y aproximadamente un 32 %; etoxilato de alcohol (p. ej., alcohol C¹²-¹⁵, 7 EO o alcohol C^12-15 5 EO) 6-12 %; aminoetanol entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 6 %; ácido cítrico entre aproximadamente un 8 % y aproximadamente un 14 %; borato (p. ej., B⁴O⁷) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 3 %; polímero (p. ej., copolímero de ácido maleico/acrílico, polímeros de anclaje tales como, p. ej., copolímero de laurilmetacrilato/ácido acrílico) entre un 0 % y aproximadamente un 3 %; glicerol entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 8 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1%; e ingredientes secundarios (p. ej., hidrótropos, dispersantes, perfume, blanqueadores ópticos) 0-5 %.

12) Composición detergente formulada como granulado que presenta una densidad aparente de al menos 600 g/L, que comprende surfactante aniónico (alquilbenzenosulfonato lineal, alquilsulfato, a-olefinsulfonato, metil ésteres de ácidos grasos a-sulfonados, alcanosulfonatos, jabón) entre aproximadamente un 25 % y aproximadamente un 40 %; surfactante no iónico (p. ej., etoxilato de alcohol) entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 10 %; carbonato sódico (p. ej., Na²CO³) entre aproximadamente un 8 % y aproximadamente un 25 %; silicatos solubles (p. ej., Na²O, ² SO ²) entre aproximadamente un 5 % y aproximadamente un 15 %; sulfato sódico (p. ej., Na²SO⁴) entre un 0 % y aproximadamente un 5 %; zeolita (NaA1SiO4) entre aproximadamente un 15 % y aproximadamente un 28 %; perborato sódico (p. ej., NaBO3-4H2O) entre un 0 % y aproximadamente un 20 %; activador de blanqueo (TAED o NOBS) entre un 0% y aproximadamente un 5 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; ingredientes secundarios (p. ej., perfume, blanqueadores ópticos) 0-3 %.

13) Composiciones detergentes, como se describe en las composiciones 1)-12) anteriormente, donde la totalidad o parte del alquilbenzenosulfonato lineal se sustituye por (C¹²-C¹⁸) alquilsulfato.

14) Composición detergente formulada como granulado que presenta una densidad aparente de al menos 600 g/L, que comprende (C¹²-C¹⁸) alquilsulfato entre aproximadamente un 9 % y aproximadamente un 15 %; etoxilato de alcohol entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 6 %; polihidroxialquilamida de ácido graso entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 5 %; zeolita (p. ej., NaA1siO4) entre aproximadamente un 10 % y aproximadamente un 20 %; disilicato estratificado (p. ej., SK56 de Hoechst) entre aproximadamente un 10 % y aproximadamente un 20 %; carbonato sódico (p. ej., Na²CO³) entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 12 %; silicato soluble (p. ej., Na²O, ² SO²) entre un 0 % y aproximadamente un 6 %; citrato sódico entre aproximadamente un 4 % y aproximadamente un 8 %; percarbonato sódico entre aproximadamente un 13 % y aproximadamente un 22 %; TAED entre aproximadamente un 3 % y aproximadamente un 8 %; polímeros (p. ej., policarboxilatos y PVP) entre un 0 % y aproximadamente un 5 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001-0,1 %; e ingredientes secundarios (p. ej., blanqueador óptico, fotoblanqueador, perfume, supresores de jabonaduras) 0-5 %.

15) Composición detergente formulada como granulado que presenta una densidad aparente de al menos 600 g/L, que comprende (C¹²-C¹⁸) alquilsulfato entre aproximadamente un 4 % y aproximadamente un 8 %; etoxilato de alcohol entre aproximadamente un 11 % y aproximadamente un 15 %; jabón entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 4 %; zeolita MAP o zeolita A entre aproximadamente un 35 % y aproximadamente un 45 %; carbonato sódico (como Na²CO³) entre aproximadamente un 2 % y aproximadamente un 8 %; silicato sódico (p. ej., Na²O, ² SO²) entre un 0 % y aproximadamente un 4 %; percarbonato sódico entre aproximadamente un 13 % y aproximadamente un 22 %; TAED 1-8 %; carboximetilcelulosa (CMC) entre un 0 % y aproximadamente un 3 %; polímeros (p. ej., policarboxilatos y PVP) entre un 0 % y aproximadamente un 3 %; enzimas (calculado como proteína enzimática pura) 0,0001­ 0,1 %; e ingredientes secundarios (p. ej., blanqueador óptico, fosfonato, perfume) 0-3 %.

16) Formulaciones detergentes tal y como se describen en 1)-15) anteriormente, que contienen un perácido estabilizado o encapsulado, como componente adicional o como sustituto de sistemas de blanqueo ya especificados.

17) Composiciones detergentes tal y como se describen anteriormente en 1), 3), 7), 9) y 12), donde el perborato se sustituye por percarbonato.

18) Composiciones detergentes tal y como se describen anteriormente en 1), 3), 7), 9), 12), 14) y 15), que contienen adicionalmente un catalizador de manganeso. El catalizador de manganeso, por ejemplo, es uno de los compuestos descritos en "Efficient manganese catalysts for low-temperature bleaching," Nature 369: 637-639 (1994).

19) Composición detergente formulada como líquido detergente no acuoso, que comprende un surfactante no iónico líquido, tal como, p. ej., un alcohol primario lineal alcoxilado, un sistema mejorador (p. ej., fosfato), una(s) enzima(s), y álcali. El detergente puede comprender, además, surfactante aniónico y/o un sistema de blanqueo.

[0168] Como se indica anteriormente, el presente polipéptido de enzima lipolítica puede incorporarse en una concentración empleada convencionalmente en detergentes. Actualmente, se contempla que, en la composición detergente, la enzima puede añadirse en una cantidad correspondiente a 0,00001-1,0 mg (calculado como proteína enzimática pura) de polipéptido de enzima lipolítica por litro de agua de lavado.

[0169] La composición detergente puede contener, además, otros ingredientes de detergente convencionales; por ejemplo, material defloculante, material de relleno, depresores de espuma, agentes contra la corrosión, agentes de suciedad en suspensión, agentes secuestrantes, agentes contra la suciedad de redeposición, agentes deshidratantes, tintes, bactericidas, fluorescentes, espesantes y perfumes.

[0170] La composición detergente puede formularse como una composición detergente de lavado de ropa a mano (manual) o a máquina (automático), incluyendo una composición de aditivo de lavado de ropa adecuada para el pretratamiento de tejidos manchados y una composición de suavizante de tejido añadida de enjuague, o formularse como una composición detergente para su uso en operaciones de limpieza domésticas generales de superficies duras, o formularse para operaciones de lavado de vajilla manual o automático.

[0171] Cualquiera de las composiciones de limpieza descritas en el presente documento puede incluir cualquier número de enzimas adicionales. En general, la(s) enzima(s) deberían ser compatibles con el detergente seleccionado (p. ej., con respecto al pH óptimo, la compatibilidad con otros ingredientes enzimáticos y no enzimáticos, entre otros) y la(s) enzima(s) debería(n) estar presentes en cantidades eficaces. Las siguientes enzimas se proporcionan a modo de ejemplo.

[0172] Proteasas: Entre las proteasas adecuadas se incluyen aquellas de origen animal, vegetal o microbiano. Se incluyen mutantes modificados químicamente o modificados con proteína, así como proteínas procesadas de forma natural. La proteasa puede ser una serina proteasa o una metaloproteasa, una proteasa alcalina microbiana, una proteasa similar a la tripsina o una proteasa similar a la quimotripsina. Algunos ejemplos de proteasas alcalinas son las subtilisinas, especialmente las derivadas de Bacillus, p. ej., subtilisina Novo, subtilisina Carlsberg, subtilisina 309, subtilisina 147 y subtilisina 168 (véase, p. ej., WO 89/06279). Algunos ejemplos de proteasas similares a la tripsina son la tripsina (p. ej., de origen porcino o bovino) y las proteasas de Fusarium (véase, p. ej., WO 89/06270 y WO 94/25583). Algunos ejemplos de proteasas útiles también incluyen, pero sin carácter limitativo, las variantes descritas en WO 92/19729, WO 98/20115, WO 98/20116, y WO 98/34946. Entre las enzimas proteasas disponibles en el mercado, se incluyen, sin carácter limitativo: ALCALASE®, SAVINASE®, PRIMASE™, DURALASE™, ESPERASE®, KANNASE™ y BLAZE™ (Novo Nordisk A/S y Novozymes A/S); MAXATASE®, MAXACAL™, MAXAPEM™, PROPERASE®, PURAFECT®, PURAFECT OXP™, Fⁿ2™ y ^f N3™ (Danisco US Inc.). Otras proteasas de ejemplo incluyen NprE de Bacillus amyloliquifaciens y ASP de cepa 69B4 de Cellulomonas sp.

[0173] Lipasas: Entre las lipasas adecuadas se incluyen aquellas de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen mutantes modificados químicamente, modificados proteolíticamente o modificados con proteína. Algunos ejemplos de lipasas útiles incluyen, pero sin carácter limitativo, las lipasas de Humicola (sinónimo Thermomyces), p. ej., de H. lanuginosa (T. lanuginosus) (véase, p. ej., EP 258068 y EP 305216), de H. insolens (véase, p. ej., WO96/13580); una lipasa de Pseudomonas (p. ej., de P. alcaligenes o P. pseudoalcaligenes); véase, p. ej., EP 218272), P. cepacia (véase, p. ej., EP 331 376), P. stutzeri (véase, p. ej., GB 1,372,034), cepa SD 705 de fluorescens, Pseudomonas sp. (véase, p. ej., WO 95/06720 y WO 96/27002), P. wisconsinensis (véase, p. ej., WO 96/12012); una lipasa de Bacillus (p. ej., de B. subtilis; véase, p. ej., Dartois et al. Biochemica et Biophysica Acta, 1131: 253-360 (1993)), B. stearothermophilus (véase, p. ej., j P 64/744992) o B. pumilus (véase, p. ej., WO 91/16422). Otras variantes de lipasas adicionales contempladas para su uso en las formulaciones incluyen las descritas, por ejemplo, en: WO 92/05249, WO 94/01541, WO 95/35381, WO 96/00292, WO 95/30744, WO 94/25578, WO 95/14783, WO 95/22615, WO 97/04079, WO 97/07202, EP 407225 y EP 260105. Algunas enzimas lipasas disponibles en el mercado incluyen LIPOLASE® y LIPOLASE ULTRA™ (Novo Nordisk A/S y Novozymes A/S).

[0174] Poliesterasas: En la composición, pueden incluirse poliesterasas adecuadas, tales como las que se describen, por ejemplo, en WO 01/34899, WO 01/14629, y US6933140.

[0175] Amilasas: Las composiciones pueden combinarse con otras amilasas, tal como la amilasa potenciada de no producción. Estas pueden incluir amilasas disponibles en el mercado, tales como, entre otros, STAINZYME®, NATALASE®, DURAMYL®, TERMAMYL®, FUNGAMYL® y BAN™ (Novo Nordisk A/S y Novozymes A/S); RAPIDASE®, POWERASE® y PURASTAR® (de Danisco US Inc.).

[0176] Celulasas: Pueden añadirse celulasas a las composiciones. Entre las celulasas adecuadas se incluyen aquellas de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen mutantes modificados químicamente o modificados con proteína. Algunas celulasas adecuadas incluyen las celulasas de los géneros Bacillus, Pseudomonas, Humicola, Fusarium, Thielavia, Acremonium, p. ej., las celulasas fúngicas producidas a partir de Humicola insolens, Myceliophthora thermophila y Fusarium oxysporum, expuestas, por ejemplo, en las patentes estadounidenses n.° 4,435,307; 5,648,263; 5,691,178; 5,776,757; y WO 89/09259. Las celulasas de ejemplo contempladas para su uso son las que presentan beneficios de cuidado del color para los tejidos. Algunos ejemplos de dichas celulasas son las celulasas descritas, por ejemplo, en EP 0495257, EP 0531372, WO 96/11262, WO 96/29397 y WO 98/08940. Otros ejemplos son variantes de celulasa, tales como las que se describen en WO 94/07998; WO 98/12307; WO 95/24471; PCT/DK98/00299; EP 531315; las patentes estadounidenses n.° 5,457,046; 5,686,593; y 5,763,254. Algunas celulasas disponibles en el mercado incluyen CELLUZYME® y CAREZYME® (Novo Nordisk A/S y Novozymes A/S); CLAZINASE® y PURADAX HA® (Danisco US Inc.); y KAC-500(B)™ (Kao Corporation).

[0177] Peroxidasas/Oxidasas Entre las peroxidasas/oxidasas adecuadas contempladas para su uso en las composiciones se incluyen aquellas de origen bacteriano, vegetal o fúngico. Se incluyen mutantes modificados químicamente o modificados con proteína. Algunos ejemplos de peroxidasas útiles incluyen las peroxidasas de Coprinus, p. ej., de C. cinereus, y sus variantes, tales como las que se describen en WO 93/24618, WO 95/10602 y Wo 98/15257. Algunas peroxidasas disponibles en el mercado incluyen, por ejemplo, GUARDZYME™ (Novo Nordisk A/S y Novozymes A/S).

[0178] La composición detergente también puede comprender 2,6-p-D-fructano hidrolasa, que es eficaz para la eliminación/limpieza de biopelícula presente en tejidos/ropa sucia industriales y/o domésticos.

[0179] La(s) enzima(s) de detergente puede(n) incluirse en una composición detergente mediante la adición de distintos aditivos que contienen una o varias enzimas, o mediante la adición de un aditivo combinado que comprende la totalidad de estas enzimas. Un aditivo de detergente, es decir, un aditivo suelto o un aditivo combinado, puede formularse, por ejemplo, como granulado, líquido o suspensión, entre otros. Algunas formulaciones ilustrativas de aditivo de detergente incluyen, pero sin carácter limitativo, granulados, en concreto granulados que no producen polvo; líquidos, en concreto líquidos estabilizados o suspensiones.

[0180] Los granulados que no producen polvo pueden producirse, por ejemplo, como se expone en las patentes estadounidenses n.° 4,106,991 y 4,661,452 y, opcionalmente, pueden recubrirse con métodos conocidos en la técnica. Algunos ejemplos de materiales de recubrimiento cerosos son los productos de polioxietileno (p. ej., polietilenglicol, PEG) con pesos molares medios de entre 1000 y 20000; los nonilfenoles etoxilados que presentan entre 16 y 50 unidades de óxido de etileno; los alcoholes grasos etoxilados en los que el alcohol contiene entre 12 y 20 átomos de carbono y en los que hay entre 15 y 80 unidades de óxido de etileno; los alcoholes grasos; los ácidos grasos; y los mono-, di- y triglicéridos de ácidos grasos. Algunos ejemplos de materiales de recubrimiento de formación de película adecuados para su aplicación mediante técnicas de lecho fluidizado se proporcionan, por ejemplo, en Gb 1483591. Las preparaciones enzimáticas líquidas pueden, por ejemplo, estabilizarse mediante la adición de un poliol, tal como propilenglicol, un azúcar o un polialcohol, ácido láctico o ácido bórico, de acuerdo con los métodos establecidos. Las enzimas protegidas pueden prepararse de acuerdo con el método expuesto en EP 238,216.

[0181] La composición detergente puede encontrarse en cualquier forma conveniente, por ejemplo, una barra, una pastilla, un polvo, un gránulo, una pasta o un líquido. Un detergente líquido puede ser acuoso, y suele contener hasta aproximadamente un 70 % de agua y entre un 0 % y aproximadamente un 30 % de disolvente orgánico. También se contemplan los geles detergentes compactos que contienen aproximadamente un 30 % o menos de agua. La composición detergente también puede, opcionalmente, comprender uno o varios surfactantes, que pueden ser no iónicos, incluyendo los semipolares y/o aniónicos y/o catiónicos y/o zwitteriónicos. Los surfactantes pueden estar presentes en un amplio rango, entre aproximadamente un 0,1 % y aproximadamente un 60 % en peso.

[0182] Cuando se incluyen en el mismo, el detergente normalmente contendrá entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 40 % de un surfactante aniónico, tal como alquilbenzenosulfonato lineal, a-olefinsulfonato, alquilsulfato (sulfato de alcohol graso), etoxisulfato de alcohol, alcanosulfonato secundario, metil éster de ácidos grasos a-sulfonados, ácido alquil-succínico o alquenil-succínico o jabón.

[0183] Cuando se incluyen en el mismo, el detergente normalmente contendrá entre aproximadamente un 0,2 % y aproximadamente un 40 % de un surfactante no iónico, tal como etoxilato de alcohol, etoxilato de nonilfenol, alquilpoliglucósido, óxido de alquil-dimetil-amina, monoetanolamida de ácido graso etoxilado, monoetanolamida de ácido graso, polihidroxialquilamida de ácido graso o derivados N-acilo-N-alquilo de glucosamina ("glucamidas").

[0184] El detergente puede contener entre un 0 % y aproximadamente un 65 % de un mejorador de detergente o agente complejante, tal como zeolita, difosfato, trifosfato, fosfonato, carbonato, citrato, ácido nitrilotriacético, ácido tetraacético de etilendiamina (EDTA), ácido dietilentriaminopentaacético, ácido alquil-succínico o alquenilsuccínico, silicatos solubles o silicatos estratificados (p. ej., SKS-6 de Hoechst).

[0185] El detergente puede comprender uno o más polímeros. Algunos polímeros de ejemplo incluyen carboximetilcelulosa (CMC), polivinilpirrolidona (PVP), polietilenglicol (PEG), alcohol polivinílico (PVA), poli(vinilpiridina-N-óxido), poli(vinilimidazol), policarboxilatos; p. ej., poliacrilatos, copolímeros de ácido maleico/acrílico y copolímeros de laurilmetacrilato/ácido acrílico.

[0186] La(s) enzima(s) de la composición detergente puede(n) estabilizarse mediante la utilización de agentes estabilizantes convencionales como, p. ej., un poliol (p. ej., propilenglicol o glicerol), un azúcar o un polialcohol, ácido láctico, ácido bórico o un derivado de ácido bórico (p. ej., un éster de borato aromático) o un derivado de ácido fenilborónico (p. ej., ácido 4-formilfenil borónico). La composición puede formularse tal y como se describe en WO 92/19709 y WO 92/19708.

[0187] Se contempla que, en las composiciones detergentes, en concreto, las variantes enzimáticas pueden añadirse en una cantidad correspondiente a aproximadamente entre 0,01 y aproximadamente 100 mg de proteína enzimática por litro de agua de lavado (p. ej., entre aproximadamente 0,05 y aproximadamente 5,0 mg de proteína enzimática por litro de agua de lavado o entre 0,1 y aproximadamente 1,0 mg de proteína enzimática por litro de agua de lavado).

[0188] Entre las formulaciones detergentes representativas que incluyen, ventajosamente, un polipéptido de enzima lipolítica de la presente invención se incluyen las formulaciones detergentes que se indican en WO2013063460, páginas 78-152, y, en concreto, las tablas de las páginas 94 a 152. Las enzimas lipolíticas se incorporan normalmente en la composición detergente a un nivel de entre un 0,00001 % y un 10 % de proteína enzimática en peso de la composición. En algunos modos de realización, la composición detergente comprende más de un 0,0001 %, 0,001 %, 0,01 % o 0,1 % de la enzima lipolítica en peso de la composición. En algunos modos de realización, la composición detergente comprende menos de un 1 %, 0,1 %, 0,01 % o 0,001 % de la enzima lipolítica en peso de la composición.

Métodos de evaluación de la actividad de enzima lipolítica en composiciones detergentes

[0189] En la técnica, se conocen ampliamente numerosos ensayos de limpieza lipolítica, incluyendo los ensayos de muestra y de micromuestra. Los ejemplos adjuntos describen solamente unos pocos de dichos ensayos.

[0190] Con el objetivo de ilustrar mejor las composiciones y métodos, así como sus ventajas, los siguientes ejemplos específicos se proporcionan dando por entendido que son ilustrativos y no limitativos.

Procesos de elaboración y uso de las composiciones de limpieza

[0191] Las composiciones de limpieza de la presente invención se formulan en cualquier forma adecuada y se preparan mediante cualquier proceso adecuado elegido por el formulador (véanse, p. ej., las patentes estadounidenses n.° 5,879,584, 5,691,297, 5,574,005, 5,569,645, 5,565,422, 5,516,448, 5,489,392, 5,486,303, 4,515,705, 4,537,706, 4,515,707, 4,550,862, 4,561,998, 4,597,898, 4,968,451, 5,565,145, 5,929,022, 6,294,514 y 6,376,445).

[0192] En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención se proporcionan en formato de dosis unitaria, incluyendo pastillas, cápsulas, sobres, bolsitas y bolsitas con múltiples compartimentos. En algunos modos de realización, el formato de dosis unitaria está diseñado para ofrecer una liberación controlada de los ingredientes que se encuentran en el interior de una bolsita con múltiples compartimentos (u otro formato de dosis unitaria). Los formatos de dosis unitaria y de liberación controlada adecuados se conocen en la técnica (véanse, p. ej., los documentos EP 2 100 949, WO 02/102955, la patente estadounidense n.° 4,765,916 y 4,972,017, y WO 04/111178 para materiales adecuados para su uso en formatos de dosis unitaria y de liberación controlada). En algunos modos de realización, el formato de dosis unitaria se proporciona en pastillas envueltas con una película hidrosoluble o bolsitas hidrosolubles. En el documento EP 2 100 947, se proporcionan varios formatos para dosis unitarias que son conocidos en la técnica.

Métodos de uso

[0193] En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención pueden utilizarse en superficies de limpieza (p. ej., vajilla), lavado de ropa, superficies duras, lentes de contacto, etc. En algunos modos de realización, al menos una porción de la superficie se pone en contacto con al menos un modo de realización de las composiciones de limpieza de la presente invención, en forma pura o diluida en una solución de lavado, y luego la superficie se lava o aclara de manera opcional. A efectos de la presente invención, el término "lavado" incluye, pero sin carácter limitativo, frotar y lavar mecánicamente. En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza de la presente invención se usan en concentraciones de entre aproximadamente 500 ppm y aproximadamente 15000 ppm en solución. En algunos modos de realización en los que el disolvente de lavado es agua, la temperatura del agua normalmente oscila entre aproximadamente 5 °C y aproximadamente 90 °C.

[0194] La presente invención da a conocer métodos para limpiar o lavar un artículo o una superficie (p. ej., superficie dura) que necesita limpiarse, incluidos, sin carácter limitativo, métodos para limpiar o lavar un artículo de vajilla, un artículo de mesa, un artículo de tejido, un artículo de ropa sucia, un artículo de cuidado personal, etc., entre otros, así como métodos de limpieza o lavado de una superficie dura o blanda (p. ej., una superficie dura de un artículo.

[0195] En algunos modos de realización, la presente invención da a conocer un método para limpiar un artículo, un objeto o una superficie que necesite limpiarse, comprendiendo el método poner en contacto el artículo o la superficie (o una parte del artículo o la superficie que se desee limpiar) con al menos una variante de enzima lipolítica de lipasa de la presente invención o una composición de la presente invención durante un tiempo suficiente y/o en condiciones adecuadas y/o eficaces para limpiar el artículo, el objeto, o la superficie hasta un nivel deseado. Algunos de dichos métodos comprenden también enjuagar el artículo, el objeto o la superficie con agua. Para algunos de dichos métodos, la composición de limpieza es una composición detergente para el lavado de la vajilla y el artículo o el objeto que se va a limpiar es un artículo de vajilla o un artículo de mesa. Tal como se entiende en el presente documento, un "artículo de vajilla" es un artículo utilizado generalmente para servir o comer alimentos. Un artículo de vajilla puede ser, sin carácter limitativo, p. ej., un plato, un plato llano, una copa, un bol, etc., entre otros. Tal como se entiende en el presente documento, "artículo de mesa" es un término más amplio que incluye, sin carácter limitativo, por ejemplo, platos, cubiertos, cuchillos, tenedores, cucharas, palillos chinos, artículos de cristal, jarras, salseras, recipientes para beber, artículos para servir, etc. Se pretende que el término "artículo de mesa" incluya cualquiera de estos artículos para servir o comer alimentos, o artículos similares. Para algunos de dichos métodos, la composición de limpieza es una composición detergente de lavado de vajilla automático o una composición detergente de lavado de vajilla a mano y el artículo o el objeto que se va a limpiar es un artículo de vajilla o un artículo de mesa. Para algunos de dichos métodos, la composición de limpieza es una composición detergente de lavado de ropa (p. ej., una composición detergente de lavado de ropa en polvo o una composición detergente de lavado de ropa líquida), y el artículo que se va a limpiar es un artículo de tejido. En otros modos de realización, la composición de limpieza es una composición de tratamiento previo al lavado de ropa.

[0196] En algunos modos de realización, la presente invención da a conocer métodos para limpiar o lavar un artículo de tejido que, de forma opcional, necesita limpiarse o lavarse, respectivamente. En algunos modos de realización, los métodos comprenden proporcionar una composición que comprende la variante de enzima lipolítica, incluyendo, pero sin carácter limitativo, una composición de limpieza de lavado de ropa o tejidos y un artículo de tejido o artículo de ropa sucia que necesite limpiarse, y poner en contacto el artículo de tejido o el artículo de ropa sucia (o una parte del artículo que se desee limpiar) con la composición en condiciones suficientes o eficaces para limpiar o lavar el artículo de tejido o de ropa sucia hasta un nivel deseado.

[0197] En algunos modos de realización, la presente invención da a conocer un método para limpiar o lavar un artículo o una superficie (p. ej., una superficie dura) que, de forma opcional, necesita limpiarse, comprendiendo el método proporcionar un artículo o una superficie que se va a limpiar o lavar y poner en contacto el artículo o la superficie (o una parte del artículo o la superficie que se desee limpiar o lavar) con al menos una variante de lipasa de la invención o una composición de la invención que comprende al menos una variante de lipasa tal durante un tiempo suficiente y/o en condiciones suficientes o eficaces para limpiar o lavar el artículo o la superficie hasta un nivel deseado. Dichas composiciones incluyen, sin carácter limitativo, por ejemplo, una composición de limpieza o una composición detergente de la invención (p. ej., una composición detergente de lavado de vajilla a mano, una composición de limpieza de lavado de vajilla a mano, una composición de limpieza de tejidos o ropa sucia, o una composición detergente de tejidos o ropa sucia, una composición de limpieza de lavado de ropa líquida, una composición detergente de lavado de ropa líquida, una composición de limpieza de lavado de ropa en polvo, una composición detergente de lavado de ropa en polvo, una composición detergente de lavado de vajilla automático, una composición detergente o de limpieza potenciadora de lavado de ropa, un aditivo de limpieza de lavado de ropa y una composición de pretratado de ropa sucia, etc.). En algunos modos de realización, el método se repite una o varias veces, especialmente si se desea limpieza o lavado adicional. Por ejemplo, en algunos casos, el método también comprende, de forma opcional, permitir que el artículo o la superficie permanezcan en contacto con la al menos una variante de enzima lipolítica o composición durante un período de tiempo suficiente o eficaz para limpiar o lavar el artículo o la superficie hasta el nivel deseado. En algunos modos de realización, los métodos comprenden además enjuagar el artículo o superficie con agua y/u otro líquido. En algunos modos de realización, los métodos comprenden también poner en contacto de nuevo el artículo o la superficie con al menos una variante de enzima lipolítica de la invención o una composición de la invención y permitir que el artículo o la superficie permanezcan en contacto con la al menos una variante de enzima lipolítica o composición durante un período de tiempo suficiente para limpiar o lavar el artículo o la superficie hasta el nivel deseado. En algunos modos de realización, la composición de limpieza es una composición detergente de lavado de vajilla y el artículo que se va a limpiar es un artículo de vajilla o un artículo de mesa. En algunos modos de realización de los presentes métodos, la composición de limpieza es una composición detergente de lavado de vajilla automático o una composición detergente de lavado de vajilla a mano y el artículo que se va a limpiar es un artículo de vajilla o un artículo de mesa. En algunos modos de realización de los métodos, la composición de limpieza es una composición detergente de lavado de ropa y el artículo que se va a limpiar es un artículo de tejido.

[0198] La presente invención también da a conocer métodos para limpiar un artículo de mesa o un artículo de vajilla en un lavavajillas automático, comprendiendo el método proporcionar un lavavajillas automático, poner una cantidad de una composición de lavado de vajilla automático que comprende al menos una variante de lipasa de la presente invención o una composición de la invención suficiente para limpiar el artículo de mesa o el artículo de vajilla en el lavavajillas (p. ej., poniendo la composición en un compartimento o dispensador de detergente proporcionado o adecuado en el lavavajillas), colocar un artículo de mesa o de vajilla en el lavavajillas y poner en funcionamiento el lavavajillas con el fin de limpiar el artículo de mesa o el artículo de vajilla (p. ej., de acuerdo con las instrucciones del fabricante). En algunos modos de realización, los métodos incluyen cualquier composición de lavado de vajilla automático que se describe en el presente documento, que comprende, pero sin carácter limitativo, al menos una variante de lipasa proporcionada en el presente documento. La cantidad de composición de lavado de vajilla automático que se ha de emplear puede determinarse fácilmente según las instrucciones o las recomendaciones del fabricante y puede emplearse cualquier forma de la composición de lavado de vajilla automático que comprende al menos una variante de enzima lipolítica de la invención (p. ej., líquida, en polvo, sólida, en gel, en pastilla, etc.), incluyendo cualquiera descrita en el presente documento.

[0199] La presente invención también da a conocer métodos para limpiar una superficie, un artículo o un objeto que, de forma opcional, necesite limpiarse, comprendiendo el método poner en contacto el artículo o la superficie (o una parte del artículo o la superficie que se desee limpiar) con al menos una variante de lipasa de la presente invención o una composición de limpieza de la invención en forma pura o diluida en una solución de lavado durante un tiempo suficiente y/o en condiciones suficientes o eficaces para limpiar o lavar el artículo o la superficie hasta un nivel deseado. Posteriormente, la superficie, el artículo o el objeto pueden lavarse y/o enjuagarse (de forma opcional) si se desea. A efectos de la presente invención, "lavado" incluye, sin carácter limitativo, por ejemplo, frotado y agitación mecánica. En algunos modos de realización, las composiciones de limpieza se usan en concentraciones de aproximadamente 500 ppm hasta aproximadamente 15000 ppm en solución (p. ej, solución acuosa). Cuando el disolvente de lavado es agua, la temperatura del agua normalmente oscila entre aproximadamente 5°C y aproximadamente 90 °C y, cuando la superficie, artículo u objeto comprende un tejido, la relación de masa agua/tejido normalmente va de 1:1 aproximadamente a 30:1 aproximadamente.

[0200] La presente invención también da a conocer métodos para limpiar un artículo de ropa sucia o un artículo de tejido en una lavadora, comprendiendo el método proporcionar una lavadora, poner una cantidad de una composición detergente de lavado de ropa que comprende al menos una variante de lipasa de la invención suficiente para limpiar el artículo de ropa sucia o el artículo de tejido en la máquina (p. ej., poniendo la composición en un compartimento o dispensador de detergente proporcionado o adecuado en la máquina), colocar el artículo de ropa sucia o el artículo de tejido en la máquina, y poner en funcionamiento la máquina con el fin de limpiar el artículo de ropa sucia o el artículo de tejido (p. ej., de acuerdo con las instrucciones del fabricante). Los métodos de la presente invención incluyen cualquier composición detergente de lavado de ropa descrita en el presente documento, comprendiendo, sin carácter limitativo, al menos una de entre cualquier variante de lipasa dada a conocer en el presente documento. La cantidad de composición detergente de lavado de ropa que se ha de emplear puede determinarse fácilmente según las instrucciones o las recomendaciones del fabricante y puede emplearse cualquier forma de la composición detergente de lavado de ropa que comprende al menos una variante de enzima lipolítica de la invención (p. ej., sólida, en polvo, líquida, en pastilla, en gel, etc.), incluyendo cualquiera descrita en el presente documento.

[0201] La presente invención también da a conocer métodos de hidrólisis mejorada de enlaces de éster carboxílico, tal como en triglicéridos de cadena larga. La reacción de hidrólisis puede ser útil en una variedad de industrias, incluyendo la limpieza con detergente, la industria alimentaria, la industria de sabores, la resolución biocatalítica de medicamentos, la producción de productos químicos, el desarrollo de biosensores, la biorremedicación y la cosmética y los perfumes.

[0202] En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para la transesterificación en disolventes orgánicos, tal como para la producción de equivalentes de manteca de cacao (por ejemplo, a través de la transesterificación del aceite de palma) y sustitutos de materia grasa humana, así como en la preparación de productos glicéridos, tal como en la producción de mantequilla o margarina. En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para la hidrólisis de sebo. En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para modificar el sabor de los alimentos, por ejemplo, mediante la síntesis de ésteres de ácidos grasos de cadena corta y alcoholes. En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para la producción de carne más magra al colaborar en la eliminación de grasas o al colaborar en la fermentación de salchichas, o modificando el sabor de otros alimentos, como el queso, el arroz, la leche de soja o el vino de manzana (véase US20110262591). En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para la panadería (véase WO1994004035, EP585988, EP785994).

[0203] En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para la producción de jabón a través de la hidrólisis de lípidos. En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para usos de cuidado personal, tal como la cosmética, donde las variantes pueden colaborar en la producción de emolientes, tal como miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo o 2-palmitato de etilhexilo. En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para colaborar en la digestión, el tratamiento de trastornos gastrointestinales, dispepsias y manifestaciones cutáneas de alergias digestivas.

[0204] En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para resolver mezclas racémicas de compuestos farmacéuticos. En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para la producción de biodiesel.

[0205] En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para la producción de polímeros biodegradables, tales como 1-butil oleato o éster de trimetilolpropano.

[0206] En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse en la industria textil para la eliminación de lubricantes de tamaño, la mejora de las propiedades de tinte. En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para desengrasar, tal como para desengrasar pieles animales, piel de oveja o lana. En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para aumentar el ritmo de fabricación de pasta de la pulpa. Asimismo, es útil en el control de la brea durante la fabricación de pulpa y papel (véase EP374700).

[0207] En algunos modos de realización, las variantes de la presente invención pueden utilizarse para desgomar una solución o suspensión acuosa de carbohidratos para mejorar su filtrabilidad, en concreto, un hidrolisado de almidón, especialmente un hidrolisado de almidón de trigo, que es difícil de filtrar y produce filtrados turbios. El tratamiento puede realizarse mediante la utilización de métodos ampliamente conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, EP 219,269, EP 808,903 y la patente estadounidense n.° 6,103,505.

[0208] La presente invención también da a conocer métodos de uso en panadería de acuerdo con la patente estadounidense n.° 6,558,715.

PARTE EXPERIMENTAL

[0209] La presente invención se describe con más detalle en los siguientes ejemplos que, de ningún modo, pretenden limitar el alcance de la invención tal como se reivindica.

EJEMPLO 1

Métodos

[0210] Los siguientes ensayos son ensayos estándar utilizados en los ejemplos descritos a continuación. A veces, determinados protocolos específicos exigen desviaciones de estos ensayos estándar. En esos casos, las desviaciones de estos protocolos de ensayos estándar siguientes se identifican en los ejemplos.

A. Índice de rendimiento

[0211] El índice de rendimiento (PI, por sus siglas en inglés) de una enzima compara el rendimiento de la variante (valor medido) y el de la enzima estándar (valor teórico o valor medido) con la misma concentración de proteínas. Además, se pueden calcular los valores teóricos por medio de los parámetros de la ecuación de Langmuir de la enzima estándar.

[0212] Un índice de rendimiento (PI) mayor que 1 (PI>1) indica un rendimiento mejorado de una variante en comparación con la original (p. ej., SEQ ID NO:1) o una secuencia de referencia (p. ej., SEQ ID NO: 2, Lipex®, Novozymes), mientras que un PI de 1 (PI=1) identifica una variante que tiene un rendimiento igual que el de la estándar; y un PI menor que 1 (PI<1) identifica una variante que tiene un rendimiento peor que el de la estándar. B. Hidrólisis de ensayo de p-nitrofenil ésteres

[0213] Las variantes de TLL son analizadas para observar la actividad de lipasa en tres sustratos para-nitrofenil (pNP) éster diferentes de distintas longitudes de cadena alquílica para determinar la preferencia de longitud de cadena de las variantes de TLL. En la tabla 1-1, se proporciona información sobre los sustratos pNP éster.

[0214] Se prepara una emulsión de reacción con sustratos pNP éster mediante la utilización de 0,8 mM de pNP éster previamente suspendido en etanol (5 %) en 0,05 M HEPES ajustado a un pH de 8,2 o en 0,05 M de MES, ajustado a un pH de 6,0. Las suspensiones de pNP-éster/tampón son mezcladas y transferidas a una placa de microtitulación (MTP) de 96 pocillos que contiene la muestra enzimática, con un volumen total de 200 ^|j L. Se ajusta la dilución de las muestras enzimáticas y sus volúmenes de transferencia para mantener la reacción en un intervalo lineal. La generación de pNP liberado se monitoriza durante un periodo de 3 minutos con OD⁴⁰⁵ nm y se corrige mediante la utilización de valores en blanco (sin enzima). El producto de pNP generado por segundo se calcula mediante la utilización de una curva estándar de pNP y, a continuación, se normaliza para la muestra enzimática añadida en el pocilio (|jmol pNP/s por mg de enzima añadida). Cuando se utiliza el p-nitrofenil caprilato con un pH de 6,0, las suspensiones de pNP-éster/tampón son mezcladas y transferidas a una placa de microtitulación (MTP) de 96 pocillos que contiene la muestra enzimática, con un volumen total de 150 jL. Se cierran las placas herméticamente y se agitan durante 10 minutos a 900 rpm a 25 °C en un agitador iEMS (Thermo scientific). Tras la incubación, se añaden 50 j l de 0,2M HEPES con pH 8,2, incluyendo un 0,5 % de Triton X-100. La generación de pNP liberado se lee con OD⁴⁰⁵ nm y se corrige utilizando valores en blanco (sin enzima). El índice de rendimiento de la hidrólisis se determina mediante la comparación de la hidrólisis de la variante de enzima en un sustrato pNP éster concreto con la de una enzima TLL de referencia (SEQ ID NO:1 o 2).

[0215] La preferencia de longitud de cadena de las lipasas se determina calculando la proporción de actividades específicas de pares de sustratos con distintas longitudes de cadena alquílica. Una proporción mayor que uno indica una preferencia por una longitud de cadena más larga cuando se divide la actividad específica de una lipasa para la hidrólisis de p-nitrofenil palmitato por su actividad específica para la hidrólisis de p-nitrofenil butirato. Para el mismo cálculo, una proporción menor que uno indicaría una preferencia por una longitud de cadena alquílica más corta. La comparación de la proporción de actividad específica de hidrólisis de una variante de enzima para un par de sustrato pNP éster concreto con la de una enzima estándar proporciona una medida del nivel de cambio de la preferencia de longitud de cadena alquílica para las variantes de ^t L^l .

C. Ensayo de estabilidad detergente

[0216] La estabilidad detergente acelerada de las variantes de TLL se monitoriza sometiendo a tensiones a las variantes en una solución al 10 % (v/v) del detergente líquido potente (HDL) conocido comercialmente como detergente líquido con agua fría Tide (P&G, EE. UU.; tratado térmicamente) a una temperatura elevada.

[0217] El fermento crudo de las lipasas se diluye 20x con una solución al 10 % (v/v) de detergente líquido con agua fría Tide en una placa de PCR de 96 pocillos. Después del mezclado, se transfieren 2 jL a pocillos de una placa con 96 pocillos con 198 jL de sustrato pNP octanoato y se mide la actividad tal y como se describe en B para generar el valor exento de tensiones.

[0218] La placa de PCR se cierra herméticamente y se incuba en una máquina de PCR durante 30 minutos a 42 °C. Tras la finalización de la incubación, la placa se enfría durante 3 minutos a 4 °C antes de medir la actividad de nuevo. La actividad de las variantes de enzimas se determina mediante la transferencia de 4 ul de las mezclas incubadas a una placa de 96 pocillos que contiene 196 j l de suspensión pNP octanoato/tampón, y se mide la actividad tal y como se describe en la sección B para generar el valor sometido a tensiones.

[0219] El índice de rendimiento de la estabilidad detergente se determina mediante la comparación de la proporción de actividad de la variante de enzima sometida a tensiones frente a la exenta de tensiones con la de una enzima de TLL de referencia (SEQ ID NO:1 o 2).

D. Ensayo de termoestabilidad

[0220] La termoestabilidad acelerada de las variantes de TLL se monitoriza sometiendo a tensiones a las variantes en 50 mM HEPES, con un pH de 8,2, con 1ppm de proteasa subtilisina BPN'-Y217L a una temperatura elevada.

[0221] 95 jL de 50 mM HEPES, con un pH de 8,2 con proteasa es transferido a pocillos de placa de PCR de 96 pocillos con 5 jL de la muestra enzimática. Después del mezclado, la actividad de las variantes de enzimas se determina mediante la transferencia de 2 jL de las mezclas tampón/lipasa a una placa de 96 pocillos con 198 j l de suspensión pNP octanoato/tampón, y se mide la actividad tal y como se describe en la sección B.

[0222] La placa de PCR se cierra herméticamente y se incuba en una máquina de PCR durante 30 minutos a 69 °C. Después de la incubación, se enfría la placa a 4 °C durante 3 minutos antes de medir la actividad. La actividad de las variantes de enzimas se determina mediante la transferencia de 4 j l de las mezclas incubadas a una placa de 96 pocillos con 196 j l de suspensión pNP octanoato/tampón, y se mide la actividad tal y como se describe en la sección B.

[0223] La proporción de actividad de termoestabilidad se calcula a partir de la actividad enzimática tras el calentamiento, dividida por la actividad enzimática antes del calentamiento, y se expresa como el porcentaje de actividad restante. El índice de rendimiento de la termoestabilidad acelerada se determina mediante la comparación de la proporción de actividad de la variante de enzima con la de la enzima de TLL de referencia tratada de forma similar (SEQ ID NO:1 o 2).

E. Ensayo de estabilidad de LAS

[0224] La estabilidad acelerada de LAS (alquilbenzenosulfonato lineal, específicamente dodecilbencenosulfonato de sodio, Sigma Cat. n.° 289957) de las variantes de TLL se monitoriza al someter a tensiones a las variantes en LAS al 0,1 % diluido en tampón HEPES, con un pH de 8. 80 jL de LAS al 0,1 % (p/v) con un pH de 8,2 son transferidos a pocillos de placa de PCR de 96 pocillos con 20 jL de la muestra enzimática. Después del mezclado, la actividad de las variantes de enzimas se determina mediante la transferencia de 2 ul de las mezclas tampón/lipasa a una placa de 96 pocillos con 198 ul de suspensión pNP octanoato/tampón, y se mide la actividad tal y como se describe en la sección B.

[0225] La placa de PCR se cierra herméticamente y se incuba en una máquina de PCR durante 30 minutos a 25 °C. Después de la incubación, se enfría la placa a 4 °C durante 3 minutos antes de medir la actividad. La actividad de las variantes de enzimas se determina mediante la transferencia de 4 ^l de las mezclas incubadas a una placa de 96 pocillos con 196 ^l de suspensión pNP octanoato/tampón, y se mide la actividad tal y como se describe en la sección B.

[0226] La proporción de actividad de estabilidad de LAS se calcula a partir de la actividad enzimática tras la incubación en LAS, dividida por la actividad enzimática en ausencia de LAS y se expresa como el porcentaje de actividad restante. El índice de rendimiento de estabilidad de LAS se determina mediante la comparación de la proporción de actividad de la variante de enzima con la de la enzima de TLL de referencia tratada de forma similar (SEQ ID NO:1 o 2).

F. Ensayo de micromuestras CS-61

[0227] El rendimiento de limpieza de las variantes de lipasa se analiza en un ensayo de micromuestras. Las muestras CS-61, que son muestras de algodón previamente teñidas, teñidas con grasa de vaca y un tinte rojo (Center for Testmaterial, CFT, Países Bajos) se utilizan en un formato de placa de 96 pocillos. Las muestras se cortan en piezas de 5 mm de diámetro y se colocan en cada pocillo de la MTP.

[0228] El rendimiento de las variantes de lipasa se analiza en dos entornos de detergente: dosis completa de líquido con agua fría de Tide (tratado térmicamente durante tres horas a 95 °C, dosis final: 0,92 g/l), y mitad de la dosis de líquido con agua fría de Tide (tratado térmicamente durante tres horas a 95 °C), más adyuvante (ndodecil-p-D-maltopiranosida) (dosis final de detergente: 0,46 g/L, adyuvante: 0,272 ^M).

[0229] Las muestras de variantes de lipasa que se van a analizar se obtienen de caldo de cultivo filtrado de Millipore de cultivos cultivados en placas de MTP. Los tampones utilizados son 20 mM HEPES (concentración final) con un pH de 8,2 y la dureza del agua se ajusta a 6 gpg 2:1 Ca:Mg. Se añade un volumen de 246 ^l de la solución de detergente HDL (descrita anteriormente) a cada pocillo que contiene muestra de la placa de 96 pocillos. Para iniciar la reacción, se añaden las muestras enzimáticas con un volumen de 4 ^L en cada pocillo. Las placas se cierran herméticamente y se agitan durante 30 minutos a 900 rpm a 30 °C en un agitador iEMS (Thermo scientific). Después de la incubación, los tejidos se enjuagan 3 veces con agua desionizada utilizando un lavador de placas Hydrospeed (Tecan, Austria) y se secan a 50 °C durante la noche. La eliminación de manchas se cuantifica mediante la utilización de mediciones RGB de los tejidos enjuagados y secados, tomadas con un escáner (Microtek Scan Maker 900). Las imágenes se importan en Photoshop CSII, donde los valores de RGB se extraen de las zonas que contienen muestra utilizando IPTK 5.0 de Reindeer Graphics. Los valores del porcentaje de eliminación de suciedad (SRI) del tejido lavado se calculan en relación con los tejidos sin lavar utilizando la fórmula.

% de eliminación de suciedad (SRI) = (AF,/AF.illicial )*100

Donde

Donde

AEmicial

El índice de rendimiento del rendimiento de limpieza se calcula mediante la comparación del SRI de la variante de enzima con el SRI de una enzima de TLL de referencia (SEQ ID NO:1 o 2) con la misma dosis de enzima que la variante. Se utiliza un ajuste de Langmuir para calcular cuál sería el SRI de la enzima estándar con la misma dosis de enzima que la variante.

G. Ensayo de adhesión a tejido

[0230] La adherencia de las variantes de TLL a tejido de algodón en una solución de detergente (0,46 g/l de detergente líquido con agua fría de Tide inactivado con calor amortiguado con 20 mM HEPES, pH 8,2 y dureza del agua a una concentración de 6 gpg 2:1 Ca:Mg) se analiza mediante la utilización de un ensayo de micromuestras. Las muestras de algodón blanqueado, EMPA 221, fueron cortadas en piezas de 5 mm de diámetro y situadas en cada pocillo de una placa de 96 pocillos (3641, Corning). Un volumen de 95 ^L de la solución de detergente es añadido a cada pocillo que contiene muestra de la placa. Para iniciar el ensayo, se mezclan 5 ^L de fermento crudo en cada pocillo con 3 placas utilizadas como determinaciones de duplicado. Las placas se cierran herméticamente y se agitan durante 10 minutos a 900 rpm y 30 °C en un agitador iEMS (Thermo Scientific). Después de la incubación, las placas con micromuestras se enjuagan 3 veces con agua del grifo utilizando un lavador de placas Hydrospeed (Tecan, Austria). El nivel de enzima unida a tejido se mide mediante la adición de 200 ^L de suspensión pNP octanoato/tampón a cada pocillo de las placas enjuagadas. Después de la incubación durante 5 minutos a 30 °C en un agitador iEMS (Thermo Scientific), se transfieren 150 ^L a una nueva placa de 96 pocilios y se mide la OD 405 nm y se resta el blanco. El índice de rendimiento de la adhesión a tejido se determina mediante la comparación del nivel de actividad de cada variante de TLL con el de la enzima de TLL de referencia tratada de forma similar (SEQ ID NO:1 o 2).

H. Detergentes

[0231] Se utiliza detergente disponible en el mercado:

Líquido con agua fría Tide (P&G). Adquirido comercialmente en agosto de 2010 y tratado térmicamente (tres horas a 95 °C) para inactivar las enzimas de la formulación de producto.

I. Ensayo de determinación de proteínas

[0232] Una placa de MTP de fondo redondo con 96 pocillos (5042-1385, Agilent, 0,5 mL de polipropileno) que contiene 60 ^L de caldo de cultivo filtrado por pocillo fue utilizada para el método de determinación de proteína de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Se inyectaron 10 ^L de cada muestra en un sistema (U)HPLC Agilent 1290 (Hewlett Packard) equipado con una columna Acquity UPLC BEH300 C4 de 1,7 ^m, 2,1 x 50 mm (Waters). La proteína se unió a la columna mediante la utilización de MiliQ con ácido trifluoroacético al 0,1 % y eluyó por encima de un gradiente de hasta un 70 % de acetonitrilo con ácido trifluoroacético al 0,1 %. Se midió la absorbancia a 220 nm y los picos eluidos se integraron utilizando software ChemStation (Agilent Technologies). La concentración de proteína de las variantes de TLL se determinó a partir de una curva estándar de proteína de TLL purificada.

EJEMPLO 2

Generación de variantes de TLL

A. Generación de bibliotecas combinatorias de TLL

[0233] Para la producción en células de bacillus, el ADN plasmídico pHYT-TLLwt (descrito en la solicitud de patente estadounidense n.° 61/713,436) sirvió de plantilla para producir bibliotecas combinatorias en sitios preseleccionados de la región madura (SEQ ID NO: 3 de la solicitud de patente estadounidense n.° 61/713,436). Se encargó a GeneArt AG (Regensburg, Alemania) la creación de bibliotecas combinatorias mediante la utilización de sus protocolos estándar. Las bibliotecas consistían en células de B. subtilis transformadas que contenían el plásmido de expresión que codifica las secuencias de variantes de TLL. Los codones correspondientes para cada sitio de interés se consideraron como naturales o fueron sustituidos por codones para al menos un aminoácido de origen no natural.

[0234] SEQ ID NO:3 establece la secuencia nucleotídica del gen de TLL sintético.

gctagcgcagctggcaaagaagttagccaagatctgttcaaccaattcaaccttttcgctcaatactctgcagctgcttactgcggaaa

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cttcggcttaatcggaacatgcctttaaaagctt

[0235] Para la producción en células fúngicas, las secuencias de ADN que contienen variantes de la región codificadora para lipasa del hongo filamentoso Thermomyces lanuginosus se ordenaron sintéticamente (Invitrogen, e E. UU.) portando los sitios attB1 y attB2 para permitir que la recombinación BP Gateway® se clone en el vector pDonor221 (Invitrogen, EE. UU.). El comerciante comprobó las secuencias de los plásmidos pDonor-TLL. Todas las variantes fueron recombinadas por medio de la tecnología Gateway ® LR con el vector de destino pTTTpy2 dando lugar a variantes de pTTTpyrG2-TLL de plásmidos de expresión finales. Se generaron plásmidos en la cepa de Escherichia coli TOP10, se purificaron y se utilizaron para una transformación fúngica tal como se describirá más adelante.

[0236] El vector de expresión contiene las regiones promotora y terminadora de cbhl de Trichoderma reesei que permiten una fuerte expresión inducible de un gen de interés, confiriendo los marcadores selectivos amdS y pyr2 de Aspergillus nidulans el crecimiento de transformantes en medio mínimo con acetamida en ausencia de uridina. Los plásmidos se mantienen de manera autónoma en la célula fúngica debido a las regiones teloméricas derivadas de T. reesei. El uso de plásmidos replicativos da como resultado un aumento de las frecuencias de transformación y sortea los problemas de la expresión dependiente del locus que se observan con transformación fúngica integradora.

[0237] Mediante la utilización de un método PEG-Protoplasto, una cepa de T. reesei eliminada para las celulasas principales (Acbhl Acbh2 Aegll Aegl2 Aegl3 Abgll pyr2-) fue transformada con ADN plasmídico. Para la preparación de protoplastos, se cultivaron esporas durante 16-24 horas a 28 °C en un medio mínimo MM de Trichoderma (20 g/L glucosa, 15 g/L KH²PO⁴ , pH 4,5, 5g/L (NH⁴)²SO⁴, 0,6 g/L MgSO4^7^O, 0,6 g/L C a C h ^ O , 1 ml de 1000X solución de oligoelementos de T. reesei (5 g/L FeSO4^7H2O, 1,4 g/L ZnSO4^7H2O, 1,6 g/L MnSO⁴^ O , 3,7 g/L CoC^⁶ H²O)) con 5 mM de uridina a velocidad de agitación de 150 rpm. Las esporas germinantes fueron cosechadas mediante centrifugación y tratadas con 50 mg/ml de solución Glucanex G200 (Novozymes AG, Suiza) para lisar las paredes de las células fúngicas. Se llevó a cabo una preparación adicional de protoplastos mediante un método estándar, como describe Penttila et al. [Gene 61(1987) 155-164].

[0238] Las mezclas de transformación que contenían aproximadamente 1 |jg de ADN y 5x 106 protoplastos en un volumen total de 50 j l se mezclaron con 200 ul de solución de PEG al 25 %, se diluyeron con un volumen igual de 1,2 M de sorbitol/10 mM de Tris, pH 7,5/solución de 10 mM de CaCh y se mezclaron con 1 ml de medio mínimo (MM) de agarosa al 3 % ((20g/L de glucosa, 15 g/L de KH²PO⁴ , 1 g/L de CaC^2H2O, 1 g/L de MgSO4^7H2O, pH 4,5, 2,5 ml/L de 400X oligoelementos de T. reesei (175 g/L de ácido cítrico, 200 g/L de FeSO4^7H2O, 16 g/L de ZnSO4^7^O, 3,2 g/L de CuSO4^5H2O, 1,4 g/L de MnSO⁴^ O , 0,8 g/L de ácido bórico)) que contenía 1 M de sorbitol y 10 mM de NH⁴CL Tras el cultivo de transformantes, se reunieron esporas de cada pocillo y se reconfiguraron en nuevas placas con MM con 10 mM de acetamida para la presión selectiva adicional. Una vez formadas las esporas, se recogieron esporas y se utilizaron para la inoculación de cultivos líquidos en un formato de MTP de 24 pocillos (para el cribado) o bien en matraces de agitación (para estudios de validación) en el siguiente medio de producción: 37 g/l de glucosa, 1 g/l de soforosa, 9 g/L de casaminoácidos, 10 g/l de (NH⁴)²SO⁴, 5 g/l de KH²PO⁴ , 1 g/L de C a C h ^ O , 1 g/l de MgSO4^7^O, 33 g/L de ácido 1,4-Piperazina-bis(propanosulfónico), pH 5,5, 2,5 ml/l de oligoelementos 400X de T. reesei). Se añadió 1 ml de medio de producción para producir variantes en MTP de 24 pocillos. Para los frascos de agitación, se incrementaron los volúmenes.

[0239] Las placas se cultivaron durante 6 días a 28 °C y con un 80 % de humedad con agitación a 200 rpm. Los sobrenadantes de cultivo se recolectaron mediante filtración. Para una fermentación y purificación a mayor escala, esporas de transformantes seleccionados fueron inoculadas en los 500 ml del mismo medio de producción y cultivadas en matraces de agitación de 2 l durante 6 días a 28 °C con agitación seguida de filtración y concentración. Se monitorizó la expresión de las variantes mediante análisis SDS-PAGE.

[0240] Las bibliotecas combinatorias con combinación de posiciones en las que se crearon sustituciones se muestran en la tabla 2-1 siguiente.

Tabla 2-1: Bibliotecas de TLL y combinación de posiciones en las que se crearon sustituciones

B. Generación de variantes de gen sintético de TLL

[0241] El ADN plasmídico pHYT-TLLwt (descrito en la solicitud de patente estadounidense n.° 61/713,436) sirvió de plantilla para producir variantes, cada una con una serie fija de mutaciones en sitios previamente seleccionados de la región madura (SEQ ID NO: 3 de la solicitud de patente estadounidense n.° 61/713,436). Se encargó a GeneArt AG (Regensburg, Alemania) la creación de estas variantes mediante el uso de su tecnología de síntesis de genes. Las variantes consistían en células de B. subtilis transformadas que contenían el plásmido de expresión que codifica las secuencias de variante de TLL. GeneArt proporcionó las variantes en una placa de 96 pocilios, una variante por placa, con los cultivos congelados en glicerol. Las variantes generadas de esta manera se enumeran en la tabla 2-2 siguiente.

Tabla 2-2: Lista de variantes de gen sintético de TLL: A018K/D027S, A018K/E045F, A018K/L075D, A018K/L075Q, A018K/T189D, D027E/G163P, D027N/E056K, D027N/N233Q, D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/T189Q, D130A/V187N, D130A/V187T, E045F/N073R, E045F7T189D, F051T/L075R, G023K/D130A, G023K/L264R, G023Q/L075Q, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, L075Q/G156W, L075R/L264R, L227M/L264R, N011K/D027S, N033D/E045F, N073R/L075D, N094R/G156W, P029E/N033D, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/L075Q, AO18 K/A049V/V187T, A018K/D027S/E045F, AO18K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, A018K/E045E/N073R, A018K/E045E/T189D, AO 18K/E045F/V187T, A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/F075Q, A018K/G023Q/F075Q, AO 18K/K024A/V 1541, A018K/F075D/T189D, A018K/F075Q/G156W, A018K/F075Q/V187T, A018K/N033D/F075D, A018K/N033D/T189D, A018K/N073R/F075D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, A049V/F075Q/T189D, A049V7V1874/14891). D027E/S058M/G163P, D027N/N233Q/P256T, D027N/S058M/P256T, D027Q/N233Q/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/F075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/N073R/F075D, D027S/N233Q/P256T, D027S/S058M/P256T, D111A/D130A/E264R, D130A/T189Q/E264R, D130A/V154I/G156W, D130A/V187N/F264R, D130A/V187T/F264R, F045F/F075D/T189D, F045F/N073R/F075D, E056K/D130A/L264R, E056K/D130A/T189Q, F051T/I252Q/E264R, G023K/D130A/F264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T, G023K/E075R/L264R, G023K/V187N/F264R, G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/L264R, G023Q/D130A/G156W, G023Q/E045F/V077I, G023Q/E056K/L075R, G023Q/K024A/G156W, G023Q/L075Q/V077I, G023Q/L075Q/V187 T, G163P/L227M/L264R, I090F/N233Q/P256T, K024A/D130A/V154I, K024A/L075Q/G156W, K024A/L075Q/V077I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, F075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W/T189D, L075Q/G156W/V187N, L075Q/G156W/V187T, L075Q/N094R/V1541, L075Q/V077I/T189D, ri)75Q/V154I/V 18748 L075Q/V187N/L264R, L075Q/V18747F264R, L075Q/V187T/T189D, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, E075R/V187N/F264R, í .075R/V18747F264R, NOl 1K/D027S/S058M, NOl 1K/N233Q/P256T, N033D/E045F/L075D, N033D/E045F/N073R, N033D/N073R/T189D, N073R/L075D/T189D, N094R/D130A/V187T, P029E/E045F/L075D, P029E/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/F075D, P029E/N073R/L075D, Q004D/D027S/P256T, Q004D/N233Q/P256T, Q004D/S058M/N233Q, S058M/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I. V077I/V187A/41891). V187N/T189Q/L264R, A018K/A049V/L075Q/T189D, A018K/A049V/L075Q/V187T, AO 18K/D027S/E045F/N073R, A018K/D027S/E045F/T189D, A018K/D027S/F075D/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/A049V/V187T, AO 18K/E045F/F075D/T189D, A018K/E045F/F075Q/T189D, A018K/E045F/F075Q/V187T, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/T189D, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/F075Q/T189D, A018K/G023Q/F075Q/V077I, A018K/G023Q/F075Q/V187T, A018K/G023Q/F075R/D13 O A, A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/V187T/T189D, A018K/K024A/D130A/G156W, A018K/L075Q/G156W/T189D, AOl8K/L075Q/G156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D111A, A018K/E075Q/N094R/D130A, AO 18K/L075Q/N094RA) 187Q, AOl 8K/F075Q/V077I/N094R, AO 18K/1.075Q/V 1874744891), A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/N073R/F075D/T189D, A018K/P029E/N033D/L075D, A018K/P029E/N033D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, A018K/V154I/G156W/V187T, A049V/L075Q/V077I/T189D, A049V/L075Q/V187T/T189D, D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/G163P/L264R, D027N/E056K/N233Q/P256T, D027N/E056K/S058M/P256T, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027Q/S058M/I090F/P256T, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/L075D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/E056K/I090F/P256T, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/F075D/T189D, DÜ27S/N033D/N073R/FÜ75D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/F075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D027S/P029E/N033D/N073R, D027S/P029E/N033D/T189D, D048Q/D130A/G163P/F264R, D048Q/D137Q/G163P/E227M, D048Q/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V154PF264R, D111A/D130A/V187T/L264R, D130A/G163P/F227M/E264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/F075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, E056K/E075Q/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/F075G/I252Q/E264R, F051T/F075Q/I252Q/E264R, G023K/D027Q/F051T/E075Q, G023K/D027S/L075Q/F264R, G023K/D111 A/D 130A/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/F264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/D130A/E264R, G023K/E056K/D130A/V187N, G023K/E056K/F075R/F264R, G023K/E056K/V187T/F264R, G023K/K024A/V 154I/V187N, G023K/F075Q/D130A/V187N, G023K/F075Q/G156W/F264R, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/F264R, G023K/F075R/V187N/F264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/A049V/L075Q/T189D, G023Q/A049V/F075Q/V077I, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/A049V/V187T, G023Q/E045F/F075Q/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/F264R. G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/K024A/F075R/G156W, G023Q/K024A/F075R/V154I, G023Q/K024A/V077I/G156W, G023Q/L075Q/D130A/F264R, G023Q/L075Q/G156W/V187N, G023Q/F075Q/G156W/V187T, G023Q/L075Q/V 187T/L264R, G023Q/V154I/G156W/V187N, G091 Q/Vl87T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/F075Q/D130A/G156W, K024A/F075Q/D130A/V1541, K024A/L075Q/V 187T/T189Q, K024A/L075R/G156W/V187N, L075G/D130A/V187T/I252Q, F075G/G091Q/V187N/F264R, F075G/V187H/I252Q/F264R, F075Q/D130A/G156W/V187N, E075Q/D130A/V154I/G156W, F075Q/G156W/V187T/E264R, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075Q/V077I/G156W/V187N, E075Q/V077I/N094R/G156W, L075Q/V077I/V154PV187Q, L075Q/V077I/V187T/T189D, E075Q/V187N/T189Q/E264R, E075R/D111A/V154FG156W, L075R/D130A/V154I/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M, NOl 1K/D027N/S058M/P256T, NOl 1K/D027Q/S058M/P256T, NOl 1K/D027S/E056K/P256T, NOl 1K/D027S/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/S058M/N233Q, NOl 1K/E056K/N233Q/P256T, NOl 1K7E056K/S058M/P256T, NOl 1K/G023K/L075Q/D111 A, NOl 1K/S058M/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/E045E/N073R/L075D, P029E/E045F/N073R/T189D, P029E/N033D/E045F/L075D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/D027S/I090F/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, Q004D/N011K/D027Q/N233Q, Q004D/N011K/D027S/P256T, Q004D/N011K/E056K/S058M, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/E227M/E264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/A049V/L075Q/V187T/T189D, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, AOl8K/D027S/E045F/N073R/D137V, AOl 8K/D027S/N033D/E045F/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/N073R/T189D, A018K/D027S/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/E045F/T189D, AO18K/D027S/P029E/N033D/L075D, AO18K/D027S/P029E/N073R/L075D, AOl8K/D130A/G156W/V187N/L264R, AO 18K/D130A/G156W/V187T/L264R, AOl8K/E045F/A049V/L075Q/G156W, AOl8K/E045F/A049V/L075Q/T189D, AOl8K/E045F/A049V/L075Q/V187T, AOl8K/E045F/N073R/L075D/T189D, AOl8K/G023K/D130A/V154I/G156W, AOl8K/G023K/K024A/D130A/G156W, AOl8K/G023K/K024A/D130A/V1541, AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R, AOl8K/G023K/L075Q/D1SOAW 1541, AO 18K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/A049V/L075Q/G156W, AOl8K/(¡023Q/A049V7í.075Q/V077I, A018K/G023Q/A049V/L075QAG87T, A018K/G023Q/A049VAW7FV187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q, A018K/G023Q/E045F/A049V/V187T, AOl8K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, AOl8K/G023Q/E045F/V077FT189D, AOl8K/G023Q/K024A/D130A/V1541, AOl8K/G023Q/K024A/D130A/V187Q,

AO 18K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T,

AO 18K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, AO ISK/G023Q/V077I/I1130A/G156W, AOl8K/G023Q/V077I/V187T/T189D, AOl8K/K024A/L075Q/D130A/L264R,

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AO 18K/L075 QÍV 077I/N094R/G156W, A018K/L075Q/V187T/T189Q/L264R, A018K/N033D/E045F/L075D/T189D, A018K/P029E/E045F/N073R/L075D, AOl8K/P029E/N033D/N073R/L075D, AOl8K/V077I/G156W/V187T/T189D, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027Q/E056K/I090F/N233Q/P256T, D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027Q/F051T/L075Q/D130A/F264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/F05 IT/V 187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, 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A018K/G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, A018K/G023Q/L075Q/V077EN094R/V154I, AOl8K/G023Q/L075Q/V077I/V187T/T189D, AOl8K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl8K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, AO 18K/K024A/IÍ175Q/N094R/V154I/G156W, AOl8K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187N, AOl8K/K024A/L075Q/V077I/D1 30A/Y 187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, AOl8K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, AO 18K/L075Q/D111 A/V 154I/G156W/V187N, AOl8K/íi)75Q/Dl 11 A/V154I/T189Q/Í.264R, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, AO 18K/L075R/D130AA^ 154I/G156W/V 187N, A018K/N033D/E045F/N073R/L075D/T189D, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, A018K/P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D 130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D13OA/L227M/N233Q, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091 Q/Vl 87N/I252Q, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/F075R/D 130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V 187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, DÜ27S/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R, D027S/F075Q/D111A/G156W/V187N/T189Q, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/F075D/T189D, D048Q/D130A/G163P/F227M/N233Q/E264R, D048Q/D137Q/G163P/E227M/N233Q/E264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/E264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/E227M/E264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/E264R, D048Q/S058M/D130A/E227M/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/F227M/E264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/E264R, D048Q/S058M/G163P/F227M/N233Q/E264R, D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/E264R, E045F/A049V/L075Q/V077FV187T/T189D, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/F264R, F051T/E056K/F075Q/V187H/I252Q/F264R, F051T/F075G/G091 Q/D 130A/I252Q/F264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/E075G/G091 Q/V 187T/I252Q/E264R, F051 T/[ ,075R/D130A/VI 87N/T252Q/F264R, G023K/D027Q/F051 T/F056K/S058M/F075Q, G023K/D027S/F075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/F264R, G023K/E056K/E075R/D130A/T189Q/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187N/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187T/F264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/F264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/E264R, G023K/F051T/E075Q/D130A/I252Q/E264R, G023K/K024A/F075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/F075Q/G156W/V187T/T189Q, G023K/K024A/F075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/F075Q/V1541/Ci 156W/V187Q, G023K/K024A/F075R/D130A/V154I/V187N, G023K/F075G/D130A/V187T/I252Q/F264R, G023K/F075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023K/F075Q/N094R/V154I/V187T/F264R, G023K/F075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/E264R, G023Q/A049V/E075Q/G156W/V187T/T189D, G023Q/D027Q/E056K/F075R/I252Q/F264R, G023Q/D027S/F051T/F075Q/V187T/I252Q, GÜ23Q/DÜ27S/FÜ51T/F075Q/V187T/F264R, G023Q/D027S/F075G/D130A/V187H/F264R, G023Q/D027S/F075Q/D111A/G156W/F264R, G023Q/D027S/F075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/D027S/F075R/D111A/V187N/L264R, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077I/V187T, G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T, G023Q/E045F/F075Q/V077I/V187T/T189D, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154EL264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/G091 Q/Vl87N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/Vl87N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V 187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154EG156W/V187Q, ( 1023Q/K024A/Í .075Q/D130A/V154I/G156W. G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/V154FT189Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/G156W/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, G023Q/L075R/V154PG156W/V187N/L264R, K024A/D 111 A/Dl 30A/V187T/T189Q/E264R, K024A/F075Q/D111 A/Vl 54T/V187N/T189Q, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, K024A/L075Q/V154I/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075R/D111A/V154I/G156W/V187N, K024A/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091Q/D130A/V187H/1252Q/L264R, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/D027N/E056K/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027Q/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/S058M/I090F/P256T, N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, NO 11K/D027S/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, NO 11K/G023K/D027S/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, P029E/N033D/K074S/L075D/N101D/T189D, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, Q004D/N011K/D027S/1090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

A018K/D111 A/Dl 30A/V154T/G156W/V187T/T189Q, A018K/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, AO18K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AO 18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187Q,

^{AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077FN094R/G156 W} ,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I,

AO18K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, AOl 8K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R, A018K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156W, AOl 8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/G156W/V187T/T189D, AOl 8K/G023Q/E045F/L075Q/V077EG156WA^187T, AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W, AOl 8K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/V154I, AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V0771/D130A/G156W, AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, AO 18K/K024A/D130A/V154EG156W/V187T/L264R, AO 18 K/K024A/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, AO 18 K/K024A/L075Q/D 130 A/G156 W/V187T/T189Q, AO 18 K/K024A/L075Q/D 130 A/V154PG156 W/V 187T, AO 18 K/K024A/L075Q/V077EN094R/D13 O A/G 156 W, AOl 8K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, A018K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, AO 18K/L075Q/D111 A/V 154I/V187T/T189Q/L264R, AOl 8K/E075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/E264R, AOl 8K/L075Q/N094R/D111A/V154I/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137 Q/Gl 63P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/1252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/F075R/D130A/I252Q/F264R, D027S/F075R/V154I/G156W/V187N/T189Q/F264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/F075D/T189D, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D13ÜA/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163 P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, F051T/L075 G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075 Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V 187II/I.264R. G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Vl 87N/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156 W/T189 Q, G023K/F051T/E056K/F075R/D130A/V187T/T252Q, G023K/F051T/L075Q/G091 Q/D 130 A/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D 111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/D 130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V187N, G023K/K024A/L075Q/V077PD130A/G156W/V187Q, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/L264R, G023K/L075Q/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/V187N/L264R, G023K/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091Q/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E045F/A049V/V077I/G156 W/V187T/T189D, G023Q/E045F/F075Q/V077I7G 156W/V187T/T189D, G023Q/E056K/L075Q/D 111A/G156 W/V 187N/L264K, G023Q/E056K/L075Q/D 130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/E056K/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/LÜ75R/GÜ91 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077ED130 A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077ED130 A/V154EG156W, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D 111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D 130 A/V154P G156 W/T189 Q/L264R, G023Q/L075Q/D 130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077EN094R/D130 A/G156 W/V 187N, G023Q/L075Q/V077EN094R/D130 A/G156 W/V 187Q, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, K024A/1,075Q/D 11 l A/D 130A/V1541/G156W/Í 264R, K024A/L075Q/D 111 A/D 130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, NO 11K/AO18K/K024A/V077I/V1541/G 156 W/T189Q, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T,

NO 11K/D027S/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R,

NO 11K/E056K/L075Q/D 130A/VI54I/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N,

NO 11K/G023Q/L075Q/V 1541/V 187N/T189Q/L264R, Q004D/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/F056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, AO18 K/ G023K/K024A/E075Q/D 130Y/V154I/V187N/T189Q, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077FD130A/V154I/G156W, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/G156W, AOl 8K/G023K/K024A/L075R/D111A/V154I/V187T/L264R, AOl 8K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, AOl 8K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl 8K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/E075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, AO18 K/G023Q/K024A/L075R/V0771/N094R/D130 A/G 156 W, AO18 K/G023Q/L075Q/V077I/D 130 A/V 154I/GI56W /V187N, AO 18 K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D13 O A/V 154RG156W, AOl 8K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, AOl 8 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137 Q/Gl 63P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130 A/V 187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/R075G/D130A/V187T/1252Q/E264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/E075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/E056K/E075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V187T/L264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V 1541/G 156W/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D111A/V154PG156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187N/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130 A/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111 A/V 154I/G156W/E264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/V 187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/ G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/S058M/G091 Q/Dl 30A/V187II/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W7T189Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130 A/V154EG156 W /V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/V154EV187N, G023Q/L075Q/D 111A/D130 A/V 154EG156 W/V 187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111 A/Dl 30A/G156 W /4189Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187Q, G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/D111 A/D 130 A/V 154I/G156 W/V 18717II 89Q/E264R, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, N011K/G023K/D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

NO 11K/ G023K/E056K/L075Q/D 130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075Q/D111A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/D027S/N094R/V154T/G156W/T189Q/E264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154EG156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V187T/T189Q/L264K, AO 18 K/ G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154EG156W/V187N, AO 18K/G023K/K024A/V077ED130A/V1541/Ci 156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154EG156W/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130 A/V 154I/G156 W/V 187N, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154EG156W/L264R, D027S/E056K/E075Q/N094R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q/F264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091Q/V187N/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/E051T/F056K/L075G/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154FG156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/F075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, N011K/G023K/D027S/E056K/F075R/D111A/G156W/V187N/F264R,

NO 11K/G023K/F075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/E264R,

NO 11K/G023Q/E075Q/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/E075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

AOl 8K/G023Q/D027S/F045F/A049V/N073S/F075Q/R108K/V187T/T1891), A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/E075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/Y077I/R108K/H135F/G156W/V187H, A018K/G023Q/K024A/E075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/E264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/E264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/E075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/E264R, NOl 1K/A018K/G023K/K024A/F075R/V077FD130A/V154FV187T/T189Q, NOl 1K/G023K/E075R/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/E264R, N011K/G023Q/D027S/F056K/F075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/F264R, NOl 1K/G023Q/E056K/E075R/D111 A/l) 130A/V1541/G156W/V 187N/1,264R.

NOl 1K/G023Q/F075Q/N094R/D111A/D130A/V154FG156W/V187N/F264R, AO18K/G023K/F075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/F264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049Y/S058M/N073S/L075Q/R108K/H135F/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049Y/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10

8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

EJEMPLO 3

Actividad de hidrólisis de éster de variantes combinatorias de TLL

[0242] Algunas variantes de TLL creadas tal y como se describe en el ejemplo 2 fueron analizadas para observar la actividad de lipasa en sustratos de p-nitrofenil butirato, p-nitrofenil caprilato (octanoato) y p-nitrofenil palmitato, tal y como se describe en el ejemplo 1. El índice de rendimiento se calculó para las variantes en comparación con TLL (SEQ ID NO:1) o la secuencia de referencia, SEQ ID NO: 2.

Tabla 3-1: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 para hidrólisis de p-nitrofenil butirato a pH 8.

A018K/L075D, D027N/E056K, D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187N, E045F/N073R,

K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, L075R/L264R, P029E/N033D, V187T/L264R,

A018K/E045F/N073R, A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/L075Q, A018K/L075D/T189D,

A018K/V154PG156W, A049V/L075Q/T189D, A049V/V187T/T189D, D027E/S058M/G163P,

D027N/N233Q/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D130A/V187T/Í.264R,

E045F/L075D/T189D, E056K/D130A/T189Q, G023K/E056K/V187T, G023Q/A049V/T189D,

G023Q/D111A/L264R, G023Q/L075Q/V187T, G163P/L227M/L264R, L075G/D130A/V187H,

L075Q/D111A/D130A, L075Q/G156W/V187N, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R,

L075R/D130A/V187T, L075R/V187T/L264R, N073R/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F,

V077I/D130A/V154I, V187N/T189Q/L264R, A018K/D027S/E045F/N073R, AOl8K/D027S/N033D/L075D, AOl8K/E045F/L075D/T189D, AOl8K/E045F/L075Q/T189D,

A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/E045F/T189D, A 018 K/G023Q/17)451 /V 187T,

A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018 K/í .075Q/C 1156W /V187T,

A018K/L075Q/N094R/D130A, A018 K/í D75Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D,

D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/S058M/G163P/L264R,

D027N/E056K/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/N073R/L075D,

D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/E045F/T189D,

D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R,

D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R,

D048Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/L075Q/V0771, G023Q/A049V7V077I/G156 W, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W. G023Q/K024A/L075R/V154I, G023Q/L075Q/D130A/L264R. G023Q/V154I/G156W/V187N, K024A/L075Q/D130A/V154I, K024A/L075R/G156W/V187N, L075G/G091Q/V187N/L264R, í.075Q/I) 130A/G156W/V187N. L075Q/V077I/G156W/V187N, N011K/D027S/E056K/P256T, N011K/E056K/N233Q/P256T, N011K/S058M/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027S/I090F/P256T, Q004D/N011K/D027Q/N233Q, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, AO18K/A049V/Í.075Q/V187T/T1891), Aül 8K/D027S/E045F/L075D/T189D, Aü 18K/D027S/E045F/N073R/D137V, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R, A018K/G023Q/E045F/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/V0771/Vl 87T/T189D, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R,

AO 18K/K024A/L075Q/V 154I/T189D, AO 18K/K024A/L075R/D130A/V1541,

AO 18K/K024A/N094R/D130A/V187N, AO 18K/L075Q/D111A/D130A/V187T,

AO 18K/L075Q/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/N094R/G156W/V 187N,

AO 18K/P029E/N033D/N073R/L075D, A018K/V077I/G156W/V187T/T189D, D027E/S058M/D130A/G163171264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q,

D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027S/E056K/D111A/V187N/E264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/L075Q/D111 A/D 130A/V187N, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V187T, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/E045E/A049V/L075Q/V0771, G023Q/E051T/L075Q/G091Q/1252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075R/D 13 O A/V 1541, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G 156W, K024A/L075R/D111A/V154I/V187T, K024A/L075R/G156W/V187N/T189Q, K024A/Í,075R/V 154I/G156W/V187Q.

L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, NOl 1K/D027N/E056K/N233Q/P256T,

NOl 1K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, NOl 1K/D027Q/I090F/N233Q/P256T,

NOl 1K/D027S/E056K/N233Q/P256T, NOl 1K/G023K/D111A/G156W/L264R, P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, Q004D/D027S/E056K/N233Q/P256T, Q004D/D027S/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/N233Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/I) 130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, AOl8K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K7G023K/L075Q/V0771/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, AOl 8K/G023Q/A049V/L075Q/V077EG156W, AOl 8K/G023Q/A049V/V077EV187T/T189D, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/G156W/V187T, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/T189D, A018K/G023Q/E045F/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/L075Q/G156C/V187T, AO18K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, AO18K/G023Q/L075Q/V077EN094R/V1541, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V 154I/G156W, AO 18 K/K024A/Í .075Q/N094R/V154I/V187N, AOl8K/K024A/L075Q/V077ED130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, AO 18K/K024A/V077I/N094R/D 130A/G156W, A018K/L075Q/D111A/V154I/T189Q/L264R, AO 18 K/L075Q/D13 O A/V187N/T189 Q/L264R, A018K/N033D/E045F/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/N094R/D111A/D130A/V154T/V187N, A018K/P029E/N033D/E045F/E075D/T189D, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V 187T/I252Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R. F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075Q/V154EG156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D 130A/V154EG156W, G023Q/L075Q/N094R/D111A/G156W/L264R, G023Q/L075R/V154EG156W/V187N/L264R, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154EG156W/V187N/L264R, NO 11K/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, NO 11K/D027S/E056K/S058M/I090F/P256T, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, AOl 8K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AOl 8K/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154PV187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I,

AO 18 K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077EN094R/V154I/G156W,

AO 18 K/G023Q/E045F/ A049V/L075Q/G156 W/V187T,

AOl 8K/G023Q/E045F/L075Q/G156W/V187T/T189D,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/V154I,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N,

AOl 8 K/G023Q/l D75R/V0771/N094R/G156 W/V 187N,

AO 18K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, A018K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W,

AO 18 K/L075Q/D111A/D13 O A/V154I/G156W/L264R,

AO 18 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/V187T/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D137 Q/Gl 63P/L227M/N233Q/L264R,

E056K/L075Q/D111 A/D 130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N,

G023K/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/D 130 A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154EG156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154W187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, K024A/L075Q/D 111 A/D 130 A/V 154I/G156 W/F264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156 W/T 189Q/L264R,

NO 11K/AO18K/K024A/V077E V154I/G156 W/T189Q, N011K/D027S/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R, Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/V 154I/G156 W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W, AO 18 K/ G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/E075R/N094R/D130A/V154T/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/F075R/D130A/V187T/F264R, G023Q/D027S/E056K/F075R/D111 A/V154I/G156W/I.264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/E075G/G091Q/V187T/F264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154FV187N, G023Q/F075Q/N094R/D111 A/D 130A/G156W/T189Q/E264R, G023Q/F075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/F264R, K024A/D111 A/D 130A/V154FG156W/V187T/T189Q/F264R, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/F075Q/N094R/D111 A/D 13 O A/V 154I/T189 Q, AO 18 K/ G023K/K024A/F075R/V077I/D130 A/V 154FG156W/V187N, A018K/G023K/K024A/V077FD130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156 W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/E264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

AO18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/Y187H, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/E264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N7T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049Y/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10

8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

Tabla 3-2: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para la expresión >0,5 y con índice de rendimiento >1 para hidrólisis de p-nitrofenil butirato a pH 8 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

A018K/L075D, D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187N, E045F/N073R, K024A/V154I,

L075R/L264R, P029E/N033D, V187T/L264R, A018K/E045F/N073R, A018K/L075D/T189D,

A018K/V154PG156W, D027E/S058M/G163P, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D7T189D,

D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/V187T, G023Q/A049V/T189D, G163P/L227M/L264R,

L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T,

L075R/V187T/L264R, P029E/N033D/E045F, V187N/T189Q/L264R, A018K/E045F/L075D/T189D,

A018K/G023K/D111 A/Tl89Q, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D,

D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/S058M/G163P/L264R,

D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R,

D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D,

D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T,

E045F/L075Q/G156W/V187T, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, L075G/G091Q/V187N/L264R, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/S058M/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, AO18K/K024A/L075R/D130A/V1541, AO18K/K024A/N094R/D130A/V187N, AO18K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/Í .075R/V154I/T1890/1,264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, (r023K/l .075Q/V077I/I) 130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/Í.075Q/G 156W/V187Q,

G023Q/1.075Q/V077I/D 130A/G156W, K024A/1,075R/V 154I/G156W/V1870, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/E075Q/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156 W, AO 18K/GÍ)23Q/N094R/D 130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A^/187N, AO 18K/N094R/D111A/D130A/V1541/V187N, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/E264R. D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130AA^ 187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/E051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/E051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111 A/D 130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/E056K/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154EL264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/T252Q/I.264R, K024A/Í ,0750/1)111A/VE54T/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, AO18K/GÜ23K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187Q, AO18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AO 18K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T,

AO 18 K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G156 W/V187N,

NO 11K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077ED130A/V154I/G156W,

AO 18K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W,

A018 K/G023Q/K024A/r ,075R/V077T/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/E0514/E056K/L075Q/G091Q/V187 H/1252Q, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/1,0750/0091 Q/Vl 87T/E264R,

G023Q/D027S/E051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/1252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

AO 18K/G023K/K024A/V077ED130A/V154EG156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/II135F/V187II, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/II135F/V187II,

NO 11K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V154PG156 W/V 187N/L264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T Tabla 3-3: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para la expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor máximo de PI para hidrólisis de pnitrofenil butirato a pH 8 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

D130A/L264R, A018K/E045F/N073R, A018K/L075D/T189D, D027S/N033D/T189D,

L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T,

A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D,

D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/L075R/D130A/L264R,

G023Q/K024A/L075R/G156W, L075G/G091Q/V187N/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D,

A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V1541, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/E075R/V 187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/Y187N7T189Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075Q/V077PD130A/G156W, K024A/L075R/V154PG156W/V187Q, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R,

A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q,

A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018 K/K024A/Í .075Q/N094R/V154I/( i 156W,

A018K/K024A/L075Q/V077PD130A/V187N, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q,

D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A7T189Q/L264R,

G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/V 154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N,

G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q,

A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, AO18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO18 K/ G023K/L075Q/V077PN094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130 A/G156 W,

G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R,

G023K/K024A/L075 Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/E264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 3-4: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2 para hidrólisis de p-nitrofenil butirato a pH 8

A018K/L075D, D027N/E056K, D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187N, E045F/N073R,

K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, L075R/L264R, P029E/N033D, V187T/L264R,

AO 18K/E045F/N073R, A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/L075Q, A018K/L075D/T189D,

A018K/V154EG156W, A049V/L075Q/T189D, A049V/V187T/T189D, D027E/S058M/G163P,

D027N/N233Q/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D130A/V187T/L264R,

E045F/L075D/T189D, E056K/D130A/T189Q, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T,

G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/L264R, G023Q/L075Q/V187T, G163P/L227M/L264R,

K024A/D130A/V1541, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/G156W/V187N,

L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187T/L264R,

N073R/L075D/T189D, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, Q004D/D027S/P256T,

V077I/D130A/V154I, V187N/T189Q/L264R, A018K/D027S/E045F/N073R,

A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/E045F/L075Q/T189D,

A018K/G023K/D111 A/Tl89Q, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T,

A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/L075Q/G156W/V187T,

A018K/L075Q/N094R/D130A, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D,

D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/S058M/G163P/L264R,

D027N/E056K/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/N073R/L075D,

D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/E045F/T189D,

D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R,

D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R,

D048Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T,

G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075Q/G156W/V187N,

G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/L075Q/V077I, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/L075R/V1541, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/V154I/G156W/V187N, K024A/L075Q/D130A/V1541, K024A/F075R/G156W/V187N. r .075G/G091Q/V187N/L264R, F075Q/D130A/G156W/V187N, F075Q/V077I/G156W/V187N, N011K/D027S/E056K/P256T, N011K/E056K/N233Q/P256T, N011K/S058M/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027S/I090F/P256T, Q004D/N011K/D027Q/N233Q, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, AÜ18K/AÜ49V/Í.Ü75Q/V 187T/T189D, AO18K/D027S/E045F/L075D/T189D, AO18K/D027S/E045F/N073R/D137V, A018K/D027S/NÜ33D/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/F075D,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R, A018K/G023Q/E045F/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I,

AO 18K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/V077I/V187T/T189D, A018K/K024A/F075Q/D130A/L264R,

AO 18K/K024A/L075Q/V154PT189D, AO 18K/K024A/L075R/D130A/V1541,

AO 18 K/K024A/N094R/D13 O A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T,

AO 18K/L075Q/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/N094R/G156W/V187N,

AO 18K/P029E/N033D/N073R/L075D, A018K/V077I/G156W/V187T/T189D, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027F/S058M/G163P/F227M/F264R, D027N/S058M/T090F/N233Q/P256T, D027S/E056K/D111A/V187N/F264R. D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045E/A049V/L075Q/V 187T/T189D, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/S058M/F075Q/G091Q/I252Q, G023K/E056K/F075R/D130A/V187T, G023K/E056K/F075R/V187T/E264R, G023K/K024A/E075R/D130A/G156W, G023K/E075Q/D111 A/D 130A/V187T, G023K/F075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/F075R/D130A/V187N/F264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/A049V/F075Q/G156W/V187T, G023Q/F045F/A049V/F075Q/V077I, G023Q/F051T/F075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/E075Q/G156W/V187Q, G023Q/K024A/E075R/D130A/V154I, G023Q/F075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/E075R/D111A/V154I/V187T, K024A/E075R/G156W/V187N/T189Q, K024A/E075R/V154I/G156W/V187Q, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, NOl 1K/D027N/E056K/N233Q/P256T,

NOl 1K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, NOl 1K/D027Q/I090F/N233Q/P256T,

NOl 1K/D027S/E056K/N233Q/P256T, NOl 1K/G023K/D111A/G156W/L264R, P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, Q004D/D027S/E056K/N233Q/P256T, Q004D/D027S/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/N233Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/I) 130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, AOl8K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K7G023K/L075Q/V0771/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, AOl 8K/G023Q/A049V/L075Q/V077I/G156W, AOl8K/G023Q/A049V/V077EV187T/T189D, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/G156W/V187T, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/T189D, A018K/G023Q/E045F/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/L075Q/G156C/V187T, AO18K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, AO18K/G023Q/L075Q/V077EN094R/V1541, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V 154I/G156W, AO 18 K/K024A/Í .075Q/N094R/V154I/V187N, AOl8K/K024A/L075Q/V077ED130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, AO 18K/K024A/V077I/N094R/D 130A/G156W, A018K/L075Q/D111A/V154I/T189Q/L264R, AO 18 K/L075Q/D13 O A/V187N/T189 Q/L264R, A018K/N033D/E045F/N073R7L075D/T189D, AOl 8K/N094R/D111A/D130A/V154T/V187N, A018K/P029E/N033D/E045F/E075D/T189D, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V 187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, (1023K/K024A/ÍD75Q/V154I/C ¡ 156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V1541/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/E056K/D111 A/Dl 30A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130AA/ 154I/L264R, G023Q/F051 T/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154EG156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/N094R/D111A/G156W/L264R, G023Q/L075R/V154I/G156W/V187N/L264R, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, I.075Q/I) 130A/V154I/G 156W/V187N/E264R, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/S058M/I090F/P256T, NOl 1K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, SOS 8M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, AOl 8K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AOl 8K/E045F/L075Q/V0771/G156 W/V 187474189D, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V 187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154PV187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I,

AO 18 K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156 W,

AO 18 K/G023Q/E045F/ A049V/L075Q/G156 W/V 187T,

AOl 8K/G023Q/E045F/L075Q/G156W/V187T/T189D,

AOl 8K/G023Q/K024A/E075Q/V0771/N094R/V1541,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156 W/V 187N,

AO 18K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W,

AO 18 K/L075Q/D 111A/D130 A/V154I/G156W/L264R,

AO 18 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/V187T/L264R,

D027E/D048Q/D 130 A/D 137Q/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E0514/L075G/D130A/V187H/1252Q/L264R, D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/E075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/F264R, G023K/D027S/F051T/S058M/F075Q/D130A/V187N, G023K/D027S/F075Q/N094R/V154FG156W/T189Q, G023K/K024A/F075Q/D111A/D130A/T189Q/F264R, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/F075Q/D111A/G156W/V187N/F264R, G023Q/E056K/E075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, G023Q/F075Q/D 111 A/l) 130 A/V1541/G156W/1.264R, G023Q/F075Q/D 130 A/V154I/V187N/T189Q/F264R, G023Q/F075Q/V077PN094R/D130A/G156 W/V187N, K024A/E075Q/D111A/D130A/V154FG156W/L264R, K024A/E075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/E264R, N011K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W7I189Q, N011K/D027S/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/L264R, Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077ED130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, AO18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130 A/G156 W, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R. G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/E056K/L075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/F075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/F075R/D111 A/V 154I/G156W/F264R, G023Q/D027S/EÜ56K/SÜ58M/F075G/GÜ91 Q/Vl 87T/F264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/F075Q/V077FN094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/F075Q/N094R/D111 A/D 130A/G156W/T189Q/F264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, K024A/D111A/D130A/V1541/G156W/V187T/T189Q/L264R,

N011K/G023K/D027S/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, AO18K/G023K/K024A/V077I/D130A/V1541/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/Í.264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/I) 130A/V154I/V187T/T189Q,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/Y154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/E264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/H135F/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049V/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10 8K/H135F/D137 V/Gl 56W/Y187T/T189D

Tabla 3-5: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para la expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 para hidrólisis de p-nitrofenil butirato a pH 8 en comparación con SEQ ID NO: 2.

A018K/L075D, D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187N, E045F/N073R, K024A/V154I, L075R/L264R, P029E/N033D, V187T/L264R, A018K/E045F/N073R, A018K/L075D/T189D, A018K/V154PG156W, D027E/S058M/G163P, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D7T189D, D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T, G023Q/A049V/T189D, G163P/L227M/L264R, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187T/L264R, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, Q004D/D027S/P256T, V187N/T189Q/L264R, A018K/E045E/L075D/T189D, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/S058M/G163P/L264R, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V 187T, GÜ23K/DÜ27Q/F051T/L075Q, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, L075G/G091Q/V187N/L264R, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, AO18K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/E227M/E264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/E264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075Q/V077FD130A/G156W, K024A/L075R/V154FG156W/V187Q, NOl 1K/G023K/D111A/G156W/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, AÜ18K/G023K/L075Q/V077FG156W/V187Q, AÜ18K/GÜ23Q/KÜ24A/LÜ75R/N094R/G156W, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154FG156W, AOl8K/K024A/L075Q/V077FD130A/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/F264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/F075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/F264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/F264R, G023K/K024A/F075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/F075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/F264R, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/E075Q/D130A/V154FF264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154PG156W/V187Q, K024A/E075Q/D111A/V154I/V187N/I 18GQ, K024A/L075Q/N094R/D130A/V 154I/E264R, K024A/E075Q/V077I/N094R/D130A/V 187N, S058M/D130A/D 137Q/G163P/F227M/E264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/F264R, S058M/D130A/G163P/E227M/N233Q/E264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/E075Q/N094R/G156 W/V187Q, A018K/G023K/K024A/E075Q/N094R/V154FV187Q,

A018 K/ G023K/K024A/L075R/N094R/D13 O A/V 1541, A018K/G023K/E075Q/V077I/N094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, A018K/K024A/F075Q/D130A/V154T/G156W/V187T,

AO18 K/K024A/F075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/F264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/F264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/F264R,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/F264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/F264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/F227M/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R, G023K/D027S/F051T/S058M/F075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

G023Q/E056K/F075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R,

G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G156 W/V187N,

NO 11K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156 W/T189Q,

A018K/G023K/K024A/E075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W,

AO18 K/ G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091Q/V187T/L264R,

G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

A018K/G023K/K024A/Y077FD130A/V154FG156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11 K/G023K/L075R/V077I/D 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/I) 130A/V154I/V187T/T189Q,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/F264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 3-6: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para la expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >50 % del valor máximo de PI para hidrólisis de p-nitrofenil butirato a pH 8 en comparación con SEQ ID NO: 2.

D130A/L264R, A018K/E045F/N073R, A018K/L075D/T189D, D027S/N033D/T189D,

L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T,

A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D,

D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/L075R/D130A/L264R,

G023Q/K024A/L075R/G156W, L075G/G091Q/V187N/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D,

A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/F056K/F075R/V 187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/V187N7T189Q,

G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075Q/V077PD130A/G156W,

K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R,

A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q,

A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO18 K/K024A/Í .075Q/N094R/V154I/( 1156W,

AO18K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q,

D027S/E056K/S058M/V 187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R,

G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/V 154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N,

G023K/N094R/D111 A/G156W/V187T/Í.264R, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q,

A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO 18 K/ G023K/L075Q/V077PN094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/K024A/L075Q/V077PN094R/D13 O A/G156 W,

G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077PD13 O A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W,

AO 18 K/ G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154PG156W/V187N/L264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 3-7: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 8.

A018K/L075Q, D027S/N033D, D130A/L264R, K024A/L075Q, L227M/L264R, P029E/N033D,

A018K/G023K/L075Q, A018K/G023Q/L075Q, A018K/L075D7T189D, A018K/L075Q/G156W,

A018K/L075Q/V187T, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A049V/V187T/T189D,

D027S/N033D/T189D, E045F/N073R/L075D, G023K/V187N/L264R, G023Q/L075Q/V187T,

L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W/T189D, L075Q/G156W7V187N, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N073R/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, V077I/V187A/T189I), A018K/A049V/L075Q/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/E045E/L075D/T189D, A018K/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/V077I, AO18 K/( 1023Q/Í .075Q/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/V187T/T189D, AOl8K/L075Q/G156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D111A, A0ISK/E075Q/V077I/N094R. AOl8K/P029E/N033D/T189D, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, DÜ27S/PÜ29E/NÜ33D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/L075Q/G156W, ( ¡023Q/K024A/11)75R/V1541, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/V187T/T189Q, K024A/E075R/GI56W/VI87N, L075Q/D130A/G156W/V187N, E075Q/V077I/I) 130A/V187Q. L075Q/V077I/V187T/T189D, L075R/D13 O A/V 154I7L264R,N011 K/D027S/E056K/P256T, N011K/S058M/N233Q/P256T, P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/N011K/D027N/P256T, AOl 8K/D027S/N033D/L075D/T189D, AOl8K/D027S/P029E/E045F/T189D, AO 18K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R,

AOl 8K/G023Q/A049V/E075Q/V187T, AOl 8K/G023Q/E045F/E075Q/V187T, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R, AOl8K/K024A/L075Q/V154I/G156W, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N, AOl8K/L075Q/D111A/D130A/V187T, AO 18K/L075Q/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/N094R/G156W/V187N, A018K/L075Q/V077I/N094R/G156W, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/L075Q/G156W/T189Q/L264R, G023K/D027S/E056KA^ 187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/I7)56K/Í7)75R/V 187T/L264R, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/V0771/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/V187N7F189Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/A049V/L075 QfV 187T/T189D, G023Q/D027S/V154I/V187N/L264R, G023Q/E045F/L075QA7077I/V187T, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/V077I/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, N011K/D027N/E056K/N233Q/P256T, NOl 1K/G023K/D111A/G156W/L264R, N011K/G023K/F056K/L075Q/T189Q, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, AO18K/G023K/D111A/D130A/V154FT189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/F075Q/D130A/G156W/V187N, AO 18K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, AO 18K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/E075R/V077T/D130A/V1541, A018K/G023Q/K024A/E075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/F075Q/V077I/N094R/V154I, A018K/G023Q/L075Q/V077EV187T/T189D, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187N, A018K/K024A/F075Q/V077LD130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/F075Q/D130A/V154LT189Q/L264R, A018K/F075Q/I) 130A/V187N/T189Q/F264R, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027F/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D13 O A/D 137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/E075Q/V077I/V187T/T189D, G023K/D027S/F075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/F075R/D130A/T189Q/F264R, G023K/K024A/F075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/F075Q/V1541/Ci 156W/V187Q, G023K/K024A/F075R/D130A/V154I/V187N, G023K/F075Q/D111 A/D 130A/V154I/V187N, G023K/F075Q/N094R/V154I/V187T/L264R, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/F264R, G023Q/E045F/A049V/F075Q/V077FV187T, G023Q/E045F/F075Q/V077I/G156W/V187T, G023Q/K024A/F075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/F075R/V154FG156W/V187N/L264R, K024A/F075Q/D111A/V154I/V1S7N/T189Q, K024A/E075Q/D130A/G156W/T189Q/E264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, K024A/E075Q/V154I/V187N/T189Q/E264R, K024A/E075Q/V154I/V187T/T189Q/E264R, E075R/D130A/V154FG156W/V187N/L264R, NOl 1 K/D027N/F056K/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/F056K/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/E056K/F075Q/D130A/V187N/T189Q, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/F075D/T189D, A018K/G023K/K024A/F075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/F075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/F075Q/N094R/V154I/V187Q, A018K/G023K/K024A/F075Q/V077FN094R/G156W,

AO 18 K/ G023K/K024A/F075R/N094R/D130A/V1541,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, AOl 8K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R,

AOl 8K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156W,

AOl 8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156W/V187T, AOl 8K/G023Q/K024A/L075Q/V077FN094R/V154I,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D13 O A/G156 W, A018K7G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, AO18 K/K024A/L075Q/D111A/G156W/V187N/E264R, AOl 8 K/K024A/L075Q/D 130A/G156W/V187T/T189Q,

AO 18 K/K024A/L075Q/V0771/N094R/D130 A/G 156 W, AOl 8K/L075Q/D111A/V154FV187T/T189Q/L264R,

AOl 8 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/V187T/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D 111A/D 13 O A/G 156 W/V187N/T189 Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/E075Q/D111 A/Dl 30A/T189Q/E264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/V154I/G156W/V187N, G023K/L075R/N094R/V1541/(1156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/Í .264R, G023Q/L075Q/D130A/V154PG156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154FV187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/Í .264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, AOl 8 K/G023K/K024A/L075Q/D 130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/G156W, AOl 8K/G023K/K024A/L075R/D111A/V154I/V187T/L264R, AOl 8K/G023K/L075Q/V077FD130A/V154FG156W/V187N, AO18 K/ G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q,

AO18 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130 A/V154I/G156 W, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W,

AO 18K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/K024A/L075R/N094R/V154EG156W/V187T/T189Q,

G023K/L075Q/D111 A/V 154I/G156 W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077PD130 A/V 154EG156 W/V 187N, G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R,

K024A/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N,

AO 18K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154EG156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111 A/V 154I/G156W/T189Q/E264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023K/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154EG156W/V187N/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D

Tabla 3-8: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >1 para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 8 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

D027S/N033D, D130A/L264R, L227M/L264R, P029E/N033D, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, L075G/D130A/V187II, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, E075R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, AO18K/D027S/P029E/T189D, A018K/E045F/L075D/T1891), A018K/G023K/D111 A/Tl 89Q, A018K/L075Q/V077I/N094R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D7T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/F075D, D048Q/D130A/G163P/F264R, D130A/G163P/F227M/F264R, G023K/D027Q/F051T/F075Q, G023K/F075R/D130A/F264R, P029E/N073R/L075D/T189D, AO 18K/D027S/P029E/N033D/F075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029F/N033D/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/N233Q/F264R, D027S/1,075R/V1541/T189Q/1,264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/E075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, AO 18K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/E075Q/N094R/V 154T/G156W, A018K/K024A/E075Q/V077T/D130A/V187N, AO 18K/N094R/D111A/D130A/V154W 187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023 K/K024A/E075Q/V154I/G156W/V187Q. G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, K024A/L075Q/D 111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/V187N. AO 18K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154PV187Q,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077EN094R/V154I/G156 W,

AO 18 K/G023Q/L075R/V0771/N094R/G156 W/V 187N, A018K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/D13 O A/D 137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N7T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N7F189Q,

AO18K/G023K/K024A/V077ED130A/V154EG156W/V187T/T189Q,

G023K/K024A/L075 Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 3-9: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo para hidrólisis de pnitrofenil caprilato (octanoato) a pH 8 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

L227M/L264R, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D,

G023K/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T, A018K/D027S/P029E/T189D,

AO 18K/L075Q/V077I/N094R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027S/N033D/L075D/T189D,

D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/L075R/D130A/L264R,

P029E/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027S/L075R/V154ET189Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q,

K024A/L075R/V154EG156W/V187Q, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D,

AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N,

D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q,

K024A/L075Q/D111A/V154EV187N/T189Q, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130 A/G156 W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/K024A/L075 Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 3-10: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2 para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 8.

A018K/L075Q, D130A/L264R, K024A/L075Q, L227M/L264R, A018K/G023K/L075Q,

A018K/G023Q/L075Q, A018K/L075D7T189D, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T,

A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A049V/V187T/T189D, D027S/N033D/T189D,

E045F/N073R/L075D, G023K/V187N/L264R, G023Q/L075Q/V187T, L075G/D130A/V187H,

L075Q/D111A/D130A, E075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W/T189D, L075Q/G156W/V187N,

L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N073R/L075D/T189D, V077I/V187A/T189D,

A018K/A049V/L075Q/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/T189D,

A018K/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/( I023Q/Í .075Q/V077I,

A018K/G023Q/L075Q/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V187T/T1891),

A018K/L075Q/N094R/D111 A, A018 K/í .075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N033D/T189D,

D027E/L227M/N233Q/L264R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D,

D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q,

G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/E045F/L075Q/G156W, ( I023Q/K024A/Í .075R/V1541,

K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/Í.075Q/V 187T/T189Q, K024A/Í.075R/G156W/V 187N,

L075Q/D130A/G156W/V187N, E075Q/V077I/I) 130A/V187Q, L075Q/V077PV187T/T189D,

L075R/D130A/V154PL264R, P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/N033D/L075D/T189D,

P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/N011K/D027N/P256T, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D,

A018K/D027S/P029E/E045F/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, AO18K/K024A/Í .075Q/V154I/G156W, AO18K/K024A/N094R/D130A/V187N, AO 18K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/N094R/G156W/V187N, A018K/L075Q/V077I/N094R/G156W, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/L075Q/G156W/T189Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V 187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V 187T/L264R, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/Y187T, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/V187N7T189Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/A049V/L075Q/V187T/T189I), G023Q/E045F/L075Q/V077FV187T, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/V077I/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I, G023Q/L075Q/V077I/G156 W/V187N, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, N011K/D027N/E056K/N233Q/P256T, N011K/G023K/E056K/L075Q/T189Q, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, AO18K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, AOl8K/D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, AO18K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, AOl 8K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, AO 18K/G023K/K024A/N094R/D130A/V1541, AOl8K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, AO 18K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, AO 18K/G023K/E075R/V077I/D 130A/V1541, AOl 8K/G023Q/L075Q/V0771/N094R/V1541, A018K/G023Q/L075Q/V0771/V187T/T189D, AO 18K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18K/K024A/I ÍJ75Q/N094R/VI54I/GI56 W, AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187N, AO 18K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, AO 18K/K024A/L075R/DI30A/V187N/T189Q, AO 18K/L075Q/D130A/V154PT189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V077I/V187T/T189D, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/E075Q/V1541/G156W/V187Q, G023K/E075Q/D111A/D130A/V1541/V187N, G023K/L075Q/N094R/V154I/V187T/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, K024A/L075Q/D111A/V1541/V187N/T189Q, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187T7T189Q/L264R, L075R/D130A/V154PG156W/V187N/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/D 130 A/G156 W/V 187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/G156W.

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO 18 K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156 W/V 187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/N094R/V 1541/V 187T/L264R, A018K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156W,

AO 18 K/ G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/V1541,

AO 18K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V 1541/V 187N,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/K024A/L075Q/D 111A/G156W/V187N/L264R,

AO18 K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q,

AO18 K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130 A/G156 W,

AO 18 K/L075Q/D 111A/V154 W 187T/T189Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/V154I/G156W/V187N, G023K/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/L075Q/D 13 O A/V 154PG156 W /T189 Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154PV187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D 111 A/D 13 O A/V 154EG156 W/L264R, K024A/L075Q/D 111 A/D 130A/V187N/T189Q/L264R,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/D 130Y/V154I/V187N/T189Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/D111A/V154I/V187T/L264R, A018 K/G023K/T ,075Q/V077T/D13 O A/V 154T/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D13 O A/V 154I/G156W, AO 18 K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130 A/V 154EG156W,

AO 18 K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/E051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/K024A/L075R/N094R/V1541/Ci 156W/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D111 A/V 154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V154EV187N, G023Q/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/G156W/1189Q/L264R, K024A/D111 A/D 130A/V154EG156W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154PG156W/T189Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/D111 A/D 13 O A/V 154I/T189 Q, AO18 K/ G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/Í .264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D

Tabla 3-11: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 8 en comparación con SEQ ID NO: 2.

D130A/L264R, L227M/L264R, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, L075G/D130A/V187H, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T,

AO 18K/D027S/P029E/T189D, A018K/G023K/D111 A/Tl 89Q, A018K/L075Q/V077PN094R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/L075R/D130A/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/V187N7T189Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18 K/K024A/Í .075Q/N094R/V154I/( 1156W,

AO 18K/K024A/L075Q/V077PD130A/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q,

K024A/L075Q/D111A/V154FV187N/T189Q, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, AO18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156W,

AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 3-12: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 8 en comparación con SEQ ID NO: 2.

L227M/L264R, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D,

G023K/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T, A018K/D027S/P029E/T189D, AOl8K/L075Q/V077I/N094R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027S/N033D/L075D/T189D,

D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/L075R/D130A/L264R,

P029E/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D,

AO 18K/K024A/N094R/D130A/V187N, AOl8K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027S/L075R/V1541/1189Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/Y187N7T189Q, K024A/L075R/V154PG156W/V187Q, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D,

AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N,

D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q,

K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, AOl 8K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/K024A/L075 Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AO18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 3-13: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 para hidrólisis de p-nitrofenil palmitato a pH 8.

A018K/E045F, D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187T, G023K/L264R, K024A/L075Q,

L075R/L264R, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/L075Q, A018K/D027S/E045F,

A018K/E045F/T189D, A018K/L075D/T189D, A018K/L075Q/V187T, A018K/N033D/T189D,

A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A049V/V187T/T189D, D027N/N233Q/P256T,

D027Q/N233Q/P256T, D027S/N033D7T189D, D111A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R,

F051T/I252Q/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R,

G023K/V187N/L264R, G023K/V187T/L264R, G023Q/L075Q/V187T, G163P/L227M/L264R,

K024A/L075Q/V0771, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/G156W/V187N,

L075Q/V187N/L264R, L075Q/V187T/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T,

P029E/N073R/L075D, Q004D/D027S/P256T, V187N/T189Q/L264R, A018K/D027S/N033D/L075D,

A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/L075R/D130A,

A018K/G023Q/V077I/V187T, AO 18 K/í i)75Q/N094R/V 187Q, A018K/L075Q/V077I/N094R,

A018K/N073R/L075D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/L264R,

D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/G163P/L227M/L264R,

D027Q/S058M/I090F/P256T, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/E045F/N073R/L075D,

D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D,

D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R,

F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R,

G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R,

G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075Q/G156W/V187N,

G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/E045F/A049V/T189D,

G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075R/V154I,

G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091 Q/Vl 87T/I252Q/L264R,

K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075R/G156W/V187N,

L075G/D130A/V187T/I252Q, Í.075G/V187II/I252Q/Í.264R, Í.075Q/I) 130A/G156W/V187N,

L075Q/V077I/D130A/V187Q, N011K/S058M/N233Q/P256T, P029E/E045F/N073R/T189D,

P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/E045F/V077I/T189D, AO18K/G023Q/K024A/F075Q/G156W, A018K/G023Q/F075Q/G156W/V187T, AO18K/K024A/F075Q/D13OA/F264R, A018K/K024A/L075Q/V154I/G156W, AOl8K/K024A/F075R/N094R/D130A, AOl8K/F075Q/D111A/D130A/V187T,

AOl 8K/F075Q/N094R/D130A/V187N, A018K7F075Q/N094R/G156W/V187N, A018K/F075Q/V077I/N094R/G156W, A018K/P029E/N033D/N073R/F075D, D027E/D048Q/D137Q/L227M/F264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/E264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/1.075R/V154I/T189Q/1.264R, D027S/N033D/E045F/N073R/E075D, D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, D027S/P029E/N073R/E075D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/F227M/E264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/E264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/E264R, DI30A/D137Q/G163P/F227M/F264R, D130A/D 137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/F075G/V187N/I252Q/L264R, E056K/L075Q/G 156W/T189Q/F264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/F075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/F075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/F264R, G023K/E056K/D130A/V187N/F264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/F075R/V187T/F264R, G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V187T, G023K/L075Q/V077PD130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/A049V/E075Q/G156W/V187T, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/F075Q/G156W/V187N, G023Q/K024A/F075Q/G156W/V187Q, G023Q/F075G/G091Q/I252Q/F264R, G023Q/F075Q/D130A/1252Q/F264R, G023Q/F075Q/G091Q/1252Q/F264R, G023Q/F075Q/V077I/G156W/V187N, K024A/F075R/V154I/G156W/V187Q, F075G/D130A/V187T/I252Q/F264R, F075Q/V154I/V187N/T189Q/F264R, F075R/D130A/V187T/T189Q/F264R, N011K/G023K/D111A/G156W/F264R,

NOl 1K/G023K/E056K/L075Q/T189Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D. A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO18K/K024A/D111 A/Vl87N/T189Q/L264R, AOl8K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, AOl8K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, AOl8K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, AOl 8K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/E075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V1541/G156W/V187T/E264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G 156W, G023K/K024A/ÍD75Q/V1541/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/N094R/V154I/V187T/L264R, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187II/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I7G156W, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075R/V154I/G156W/V187N/L264R, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, L075Q/D130A/V1541/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091Q/D130A/V187H/1252Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R. A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

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AOl 8K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO18 K/ G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/V154I,

AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V 187N,

AOl 8K/K024A/D130A/V1541/G156W/V187T/L264R,

AOl 8K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/1252Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q,

F051T/E075G/G091 Q/Dl 30A/V187N/1252Q/E264R,

F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/E051T/L075G/D130A/V187H/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D 130A/V187N, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/L075R/N094R/V1541/G156 W/V187N/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091Q/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R.

G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V1541/G156 W/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130 A/Gl 56 W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D 111 A/l) 130A/V1541/G 156W/Í .264k, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/1189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154FV187N/T189Q/L264R, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V1541/G 156W/Í .264R, Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, A018 K/G023K/K024A/L075Q/D 130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130 A/V154I/G156W, A018 K/ G023Q/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/G156W/V187Q, AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D13 O A/V154I/G156W, D027F/D048Q/S058M/D137Q/G163P/T .227M/N233Q/E264R, D027E/S058M/D130 A/D 137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/V154FG156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/Vl 87T/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187 F/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/D111A/D130A/Y154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/V187N/Í.264R,

AO18 K/ G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N,

AO18K/G023K/K024A/V077PD130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V 154I/G156W/V187N,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q,

G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023K/K024A/N094R/D130 A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156 W/V187N/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/F264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 3-14: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >1 para hidrólisis de p-nitrofenil palmitato a pH 8 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

A018K/E045F, D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187T, G023K/L264R, L075R/L264R,

S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/L075D/T189D, A018K/N033D/T189D, A018K/P029E/T189D,

D027S/N033D/T189D, D ll 1A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R, F051T/I252Q/L264R,

G023K/D130A/L264R, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187N/L264R,

G023K/V187T/L264R, G163P/L227M/L264R, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R,

L075Q/V187T/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, Q004D/D027S/P256T,

V 187N/T189Q/L264R, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/G023K/D111A/T189Q,

AO 18K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/L264R,

D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/G163P/L227M/L264R,

D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/N033D/E045F7T189D, D027S/N033D/L075D7T189D,

D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D,

D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/F075Q/I252Q/F264R, G023K/D027Q/F051T/F075Q, G023K/D130A/V187N/F264R, G023K/D130A/V187T/F264R, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/F075R/D130A/F264R, G023K/F075R/V187T/F264R, G023Q/F051T/I252Q/F264R, G023Q/G091Q/I252Q/F264R, G023Q/F075Q/D130A/F264R, G023Q/F075Q/V187T/E264R, G091Q/V187T/I252Q/F264R, K024A/D130A/V154I/V187T, F075G/D130A/V187T/I252Q, F075G/V187H/I252Q/F264R, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, SOS8M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G 163P/N233Q/L264R, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/D130A/V187T/T252Q/E264R, F051T/E075G/D130A/T252Q/E264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R,F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V 187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077ED130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056KA^187N/I252Q/L264R, G023Q/E051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, K024A/L075R/V154I/G156WA^ 187Q, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V 187N/I252Q/L264R, FÜ51T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F05FF/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154FG156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051 T/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/T,075Q/G091 Q/V 187N/T252Q/E264R, K024A/1,0750/1)111 A/Vl54T/V187N/T189Q, L075Q/G091Q/D130A/V187FI/I252Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I,

AO 18 K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156 W/V 187N,

AO 18K/K024A/D130A/V1541/Ci 156W/V187T/L264R,

AO 18K/K024A/L075Q/D130A/V154FG156W/V187T, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R,

D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R,

F051T/FÜ75Q/GÜ91 Q/D 13ÜA/V187H/I252Q/F264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187 T/I252Q/F264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D 130 A/V187N,

G023Q/D027S/F051T/E056K/D130 A/I252Q/F264R,

G023Q/D027S/S058M/F075Q/D 130A/I252Q/E264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/E264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/E264R,

G023Q/E075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/E075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

A018K/G023K/K024A/E075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO18 K/G023K/K024A/E075Q/V077I/D130 A/V 154I/G156 W,

D027F/D048Q/S058M/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/N233Q/E264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/E075Q/G091 Q/Vl 87H/I252Q,

G023K/D027S/F051T/S058M/E075Q/V187H/I252Q/F264R,

G023Q/D027Q/F051T/F075Q/G091Q/D130A/I252Q/F264R,

G023Q/D027S/E056K/F075R/D111A/V154I/G156W/E264R,

G023Q/D027S/E056K/S058M/F075G/G091Q/V187T/F264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 13 O A/V 187H7I252Q/E264R,

G023Q/F051T/F075Q/G091 Q/D 13 O A/V 187T/I252Q/F264R,

G023Q/F051T/F075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

G023Q/S058M/F075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R,

A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

D027Q/F051T/S058M/E075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/E264R,

G023K/K024A/E075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/E264R,

G023Q/F051T/S058M/E075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/E264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T Tabla 3-15: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo para hidrólisis de pnitrofenil palmitato a pH 8 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

D130A/L264R, D130A/V187T, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, Q004D/D027S/P256T, A018K/L075Q/V077I/N094R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G091 Q/Yl 87T/I252Q/L264R, L075G/V187H/I252Q/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/E075R/V 187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/K024A/L075Q/G 156W/V187Q, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018 K/K024A/Í i)75Q/N094R/V 154I/C1156W, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023 K/K024A/Í .075Q/V154I/G156W/V 187Q,

G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/G091Q/V187N/I252Q/L264R,

A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T,

D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/V 187T/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/E264R

Tabla 3-16: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2 para hidrólisis de p-nitrofenil palmitato a pH 8

A018K/E045F, D027S/N033D, D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/V187T, G023K/L264R,

K024A/L075Q, L075R/L264R, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/L075Q,

AO18K/D027S/E045F, A018K/E045F/T189D, A018K/L075D/T189D, A018K/L075Q/V187T,

A018K/N033D/T189D, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A049V/V187T/T189D,

D027N/N233Q/P256T, D027Q/N233Q/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D,

D lll A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R, E045F/L075D/T189D, F051T/I252Q/L264R,

G023K/D130A/L264R, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187N/L264R,

G023K/V187T/L264R, G023Q/E056K/L075R, G023Q/L075Q/V187T, G163P/L227M/L264R,

K024A/L075Q/V0771, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/G156W/V187N,

L075Q/V187N/L264R, L075Q/V187T/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T,

L075R/V187T/L264R, N073R/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D, Q004D/D027S/P256T,

V 187N/T189Q/L264R, AOl8K/D027S/N033D/L075D, AOl8K/E045F/L075D/T189D, AOl8K/G023K/D111 A/Tl89Q, AOl8K/G023Q/L075R/D130A, AOl8K/G023Q/V077I/V187T,

A018K/G023Q/V187T/T189D, A018K/L075Q/N094R/V187Q, A018K/Í.075Q/V077I/N094R,

A018K/N073R/L075D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/L264R,

D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/G163P/L264R, D027Q/S058M/I090F/P256T, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/E045F/N073R/L075D, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/KÜ24A/L075R/V154I, GÜ23Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091Q/V187T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V1541/V1871’, K024A/L075Q/D 130A/G156W, K024A/14)75R/G156W/V187N, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/V187H/I252Q/L264R, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/V077I/D130A/V187Q, N011K/S058M/N233Q/P256T, P029E/E045F/N073R/T189D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D027S/N033D/L075D7T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V077I, A018K/G023Q/E045F/A049WV187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/E045F/V077T/T189D, A018K/G023Q/K024A/E075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, AO18K/G023Q/E075Q/V 187T/T189D.

AO18K/K024A/L075Q/D 130A/L264R, A018K/K024A/L075Q/V154I/G156W,

AO 18K/K024A/L075R/N094R/D130A, AO 18K/L075Q/D111 A/D 130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/N094R/G156W/V187N,

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AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077FN094R/V1541, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AOl 8K/K024A/D130A/V154FG156W/V187T/L264R,

AO 18 K/K024A/L075Q/D 130 A/V154FG156 W/V187T, A018K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, F051T/L075 G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075 Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130 A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/E075Q/D111 A/Dl 30A/T189Q/E264R, G023K/L075R/N094R/V154I/G156 W/V187N/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091Q/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D 130A/V154I/G156 W/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V0771/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154EG156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154J/V187N/T189Q/L264R, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/L264R, Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, AO18K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, AO18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q,

AO 18K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, D027E/D048Q/S058M/D137 Q/Gl 63P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130 A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/E051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/V 154EG156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/E075R/G091Q/D130A/V187T/T252Q/E264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/D 111 A/D 130 A/V154I/G156 W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154EG156W/T189Q,

NO 11K/G023Q/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/V187N/L264R,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154EG156W/V187N, AO 18 K/G023K/K024A/V077ED130A/V154EG156W/V187T/T189Q, AO 18K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154 W 187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/F075G/G091Q/D130A/I252Q/F264R,

NO 11K/AO18 K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q,

NOl 1K/G023Q/E056K/E075R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/F264R,

AO18K/G023K/E075R/N094R/D111 A/D 130A/Y154I/G156W/V187N/T189Q/E264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 3-17: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 para hidrólisis de p-nitrofenil palmitato a pH 8 en comparación con SEQ ID NO: 2.

A018K/E045F, D027S/N033D, D111A/F264R, D130A/F264R, D130A/V187T, G023K/F264R,

F075R/F264R, S058M/F264R, V187T/F264R, A018K/F075D/T189D, A018K/N033D/T189D,

A018K/P029E/T189D, D027S/E075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D111A/D130A/E264R,

D130A/V187N/F264R, F051T/I252Q/F264R, G023K/D130A/F264R, G023K/E056K/V187T,

G023K/F075R/F264R, G023K/V187N/F264R, G023K/V187T/E264R, G163P/F227M/F264R,

F075G/D130A/V187H, F075Q/V187N/F264R, F075Q/V187T/E264R, F075R/D130A/F264R,

F075R/D130A/V187T, F075R/V187T/F264R, Q004D/D027S/P256T, V187N/T189Q/F264R,

A018K/E045F/E075D/T189D, A018K/G023K/D111 A/Tl89Q, A018K/E075Q/V077I/N094R,

A018K/P029E/N073R/F075D, D027E/D048Q/G163P/F264R, D027E/D130A/N233Q/F264R,

D027E/D137Q/G163P/F227M, D027E/G163P/F227M/F264R, D027E/S058M/G163P/F264R,

D027S/D130A/I252Q/E264R, D027S/N033D/E045F7T189D, D027S/N033D/E075D7T189D,

D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/F075D/T189D,

D027S/P029E/N033D/F075D, D048Q/D130A/G163P/F264R, D048Q/G163P/N233Q/F264R,

E056K/D130A/V187N/F264R, F051T/D130A/I252Q/F264R, F051T/F075G/I252Q/F264R,

F051T/F075Q/I252Q/F264R, G023K/D027Q/F051T/F075Q, G023K/D130A/V187N/F264R,

G023K/D130A/V187T/F264R, G023K/E056K/F075R/F264R, G023K/F075R/D130A/F264R,

G023K/F075R/V187T/F264R, G023Q/F051T/I252Q/F264R, G023Q/G091Q/I252Q/F264R,

G023Q/F075Q/D 130A/F264R, G023Q/F075Q/V187T/F264R, G091 Q/Vl 87T/I252Q/F264R,

K024A/D130A/V154I/V187T, E075G/D130A/V187T/I252Q, E075G/V187H/I252Q/E264R,

P029E/N073R/F075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T,

S058M/G163P/F227M/F264R, S058M/G163P/N233Q/F264R, S058M/F075Q/G091Q/I252Q,

S058M/F075Q/I252Q/F264R, A018K/D027S/P029E/N033D/F075D,

AO 18K/D130A/G156W/V187N/F264R, A018K/G023Q/K024A/F075Q/G156W, A018K/P029E/N033D/N073R/F075D, D027E/D048Q/D137Q/F227M/F264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R. D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/LÜ75G/V187N/I252Q/L264R, E051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, E05i r/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F .075Q/G091Q/I252Q/F 264R, K024A/F ,075R/V154I/G156W/V1870, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, AO18K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, AO18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/N094R/D111A/DI30A/V154I/V187N. D027E/D048Q/D130A/D137II/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/Gl63P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/Gl63P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/EÜ56K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/FÜ51T/LÜ75G/GÜ91 Q/V 187N/I252Q, D027Q/L075Q/D 130A/V 187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/F264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/V187II/I252Q/F264R, F051T/E075G/G091Q/V187T/I252Q/F264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/F075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/T189Q/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187N/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187T/F264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/E264R, G023K/F051T/E075Q/D130A/I252Q/E264R, G023K/K024A/E075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/F075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/F264R. G023Q/D027S/F051T/F075Q/V187T/E264R, G023Q/D027S/F075G/D13ÜA/V187H/F264R, GÜ23Q/D027S/F075Q/D 130A/V187T/I252Q, G023Q/FÜ51T/D130A/V187T/I252Q/F264R, G023Q/F051T/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/F075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/E075Q/D130A/V187FI/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/E075G/G091 Q/D 130A/I252Q/F264R, G023Q/L075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/F264R, K024A/E075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, E075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/F227M/N233Q/F264R. A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/E075D/T189D,

AO18 K/ G023K/K024A/E075Q/N094R/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/E075R/N094R/D130A/V1541,

AO 18 K/ G023Q/E075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AOl 8K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/1264R,

AOl 8K/K024A/F075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/F264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/F227M/F264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/F264R,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/F227M/F264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/F264R,

D027E/S058M/D130A/G163P/F227M/N233Q/F264R,

D027E/S058M/D137Q/G163P/E227M/N233Q/E264R, D027Q/F051T/F075Q/D130A/V187T/I252Q/F264R, D027Q/F051T/S058M/F075Q/G091Q/I252Q/F264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/1252Q/F264R, D027S/F051T/S058M/E075Q/V187N/I252Q/F264R, D027S/F051T/S058M/E075R/D130A/I252Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R,

F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D 130A/V187N, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D 130 A/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO18K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187II/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/1.075R/D111 A/V154T/G156W/E264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/V 187T/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187II/I252Q/L264R,

AO 18K/G023K/K024A/V077FD130A/V154FG156W/V187T/T189Q, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154FG156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V1541/G156W/V 187N/IV64R.

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T Tabla 3-18: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo para hidrólisis de p-nitrofenil palmitato a pH 8 en comparación con SEQ ID NO: 2

D130A/L264R, D130A/V187T, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, Q004D/D027S/P256T, A018K/L075Q/V077I/N094R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G091 Q/Vl 87T/I252Q/L264R, L075G/V187H/I252Q/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V 187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, K024A/F075R/V154I/G156W/V1870, S058M/G163P/E227M/N233Q/E264R, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AO18 K/K024A/L075Q/D 130 A/V154I/G156 W/V187T,

D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

AO18K/G023K/K024A/L075 Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/ G091Q/V187T/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/F264R Tabla 3-19: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 6.

D027E/G163P, K024A/L075Q, P029E/N033D, A018K/D027S/E045F, A018K/L075D/T189D,

A018K/L075Q/V187T, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A049V/V187T/T189D,

D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, G023Q/L075Q/V187T, L075G/D130A/V187H,

L075Q/D111A/D130A, L075Q/G156W/T189D, L075Q/G156W/V187N, L075R/D130A/L264R,

L075R/D130A/V187T, N073R/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/L075D,

A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/G023Q/A049V/T189D,

A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/L075Q/V077I/N094R,

A018K/P029E/N033D/T189D, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D,

D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D,

D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q,

G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/E045F/A049V/T189D,

G023Q/K024A/L075R/V1541, K024A/L075Q/D130A/V154I, K024A/L075R/G156W/V187N,

L075Q/D 130A/G156W/V187N, L075Q/V077PG156W/V187N, L075Q/V077PV187T/T189D,

P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D,

A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/E045F/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I,

AO 18K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, AOl8K/L075Q/D111A/D130A/V187T, AOl8K/L075Q/N094R/G156W/V187N, AO18K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/E075R/V 187T/L264R, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/V077ED130A/G156W, G023K/N094R/G156W/Y187N/T189Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/D027S/V154I/V187N/L264R, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075R/D13ÜA/V154PT189Q/L264R, E075R/D130A/V187T/T189Q/L264R,

NOl 1K/D027N/E056K/N233Q/P256T, N011K/G023K/E056K/L075Q/ri89Q,

AO 18K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, AOl8K/G023K/D111 A/D 130A/V154FT189Q, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, AOl8K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, AOl 8K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V187T, AO 18K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T1891), A018K/G023Q/L075Q/V077I/N094R/V1541, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, AO 18K/K024A/Í .075Q/N094R/V154I/V187N, AO 18 K/K024A/L075R/D13 O A/V187N/T189Q, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/E075R/D130A/V187T/1252Q, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075Q/V154PG156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T1S9Q. K024A/L075Q/V154EV187T/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/V1541, A018K7G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AOl 8K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T,

D027E/D130 A/D 137 Q/G 163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

E056K/L075Q/D 111 A/D 130 A/G156 W/V 187N/T189Q,

G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R,

G023K/L075R/N094R/V154I/G156 W/V187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091Q/V187T/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N7T189Q, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

AO18 KJ G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130 A/V154I/G156 W,

G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/L075Q/D 111 A/V 154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/G156W/T189Q/L264R,

AO 18K/G023K/L075Q/N094R/D111 A/V 154I/G156W7T189Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/E264R

Tabla 3-20: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >1 para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 6 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

D027E/G163P, P029E/N033D, A018K/E075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D,

G023K/V187N/E264R, E075G/D130A/V187H, E075R/D130A/E264R, E075R/D130A/V187T,

P029E/N033D/E045F, AO 18K/D027S/P029E/T189D, AOl 8K/E075Q/V077PN094R,

D027E/D137Q/E227M/E264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/E075D/T189D,

D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/E075D/T189D,

D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/E075D, D048Q/D130A/G163P/E264R,

D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/L075R/D130A/L264R,

P029E/N073R/E075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E075D,

AO 18K/G023Q/K024A/E075Q/G156W, A018K/K024A/E075R/D130A/V154I,

AO 18K/K024A/N094R/D130A/V 187N, AOl8K/P029E/N033D/N073R/E075D, D027S/E075R/V154I/T189Q/E264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/E264R, G023K/D027S/E056K/V187T/E264R, G023K/E056K/D130A/V187T/E264R, G023K/E056K/E075R/D130A/V187T, G023K/E056K/E075R/V187T/E264R, G023K/E075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/E075Q/G156W/V187Q, K024A/E075R/V154I/G156W/V187Q,

A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/E075D, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R,

D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q,

K024A/L075Q/D111A/V154PV187N/T189Q, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156 W/V187T, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H

Tabla 3-21: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo para hidrólisis de pnitrofenil caprilato (octanoato) a pH 6 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

AOl8K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T,

AO 18K/D027S/P029E/T189D, AOl8K/L075Q/V077PN094R, D027S/P029E/E045F/T189D,

D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R,

D130A/G163P/L227M/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W,

AO 18K/K024A/L075R/D130A/V1541, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, AOl8K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, AO 18K/K024A/Í.075Q/N094R/V154I/(i 156W,

D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R,

G023K/K024A/L075Q/V154PG156W/V187Q, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W

Tabla 3-22: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2 para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 6.

D027E/G163P, K024A/L075Q, A018K/D027S/E045F, A018K/L075D7T189D, A018K/L075Q/V187T,

A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A049V/V187T/T189D, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, G023Q/L075Q/V187T, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/G156W/T189D, L075Q/G156W/V187N, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N073R/L075D/T189D, P029E/N033D/L075D, A018K/D027S/N033D/L075D, AO18K/D027S/P029E/T189D, A018K/G023Q/A049V/T189D, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N033D/T189D, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/EÜ45F/A049V /T189D, G023Q/K024A/L075R/V154E KÜ24 A/LÜ75 Q/D13 O A/V1541, K024A/L075R/G156W/V187N, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/V077I/G156W/V187N, L075Q/V0771/V187T/T189D, P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/D027S/N033D/L075D/T189D, AOl8K/D027S/P029E/E045F/T189D, AOl8K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, AOl8K/G023Q/K024A/D130A/V1541, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, AOl8K/K024A/F075R/D130A/V1541,

AO 18K/K024A/N094R/D130A/V187N, AOl8K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/F075Q/N094R/G156W/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027F/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027S/Í .075R/V154I/TI 89Q/F264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075RA^ 187T/L264R, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V187T, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, Í_075R/I)130A/V187T/T189Q/L264R,

NOl 1K/D027N/E056K/N233Q/P256T, NOl 1K/G023K/E056K/L075Q/T189Q, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, AOl8K/G023K/D111 A/D 130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V187T, AOl8K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077PN094R/V1541, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl8K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, AOl8K/K024A/E075Q/N094R/V154PV187N, AOl8K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D 137Q/G163P/L227M/F264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/1.075Q/V 1541/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D13 O A/V154PG156 W, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, NO 11K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, AO18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, AO18K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/V1541,

AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154PG156W/V187T, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R,

G023K/L075R/N094R/V154I/G156 W/V187N/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154PG156W/T189Q/L264R,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/D 130Y/V154I/V187N/T189Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W,

AO 18 K/ G023Q/K024A/L075R/N094R/D13 O A/V154I/G156W, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/V154PG156W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/G156W/T189Q/L264R, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/E264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R

Tabla 3-23: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 6 en comparación con SEQ ID NO: 2.

D027E/G163P, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D,

G023K/V187N/L264R, L075G/D130A/V187H, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T,

A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/L075Q/V077PN094R, D027S/N033D/E045F/T189D,

D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D,

D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q,

G023K/L075R/D130A/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/E075R/V 187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/N094R/G156W/V187N7T189Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R,

D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q,

K024A/L075Q/D111A/V154T/V187N/T189Q, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D7T189D,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H

Tabla 3-24: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento > 50 % del valor de PI máximo para hidrólisis de p-nitrofenil caprilato (octanoato) a pH 6 en comparación con SEQ ID NO: 2

AOl 8K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T, AO18K/D027S/P029E/T189D, A018K/L075Q/V077EN094R, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, AO 18K/K024A/L075R/D130A/V1541, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/F075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154PG156W/V187Q, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W

Tabla 3-25: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de actividad específico de pNPP/pNPB o pNPO/pNPB mayor en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

A018K/E045F, D111A/L264R, D130A/V187T, G023K/L264R, L075R/L264R, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/E045F7T189D, A018K/G023K/L075Q, A018K/N033D/T189D, D027N/N233Q/P256T, D027Q/N233Q/P256T, D027Q/S058M/P256T, D111A/D130A/L264R, D130A/V154PG156W, D130A/V187N/L264R, F051T/I252Q/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187T/L264R, G163P/L227M/L264R, F075Q/V187T/L264R, Q004D/D027S/P256T, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/V077I/G156W, D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/E045F/N073R/L075D, D027S/N033D/E045F/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V187T/Í.264R, E056K/D130A/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/E045F/A049V/V187T, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091 Q/Vl 87T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/V187H/I252Q/L264R, N011K/S058M/N233Q/P256T, P029E/E045F/N073R/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, AO 18K/l) 130A/G156W/V187N/Í.264R, AO 18K/E045F/A049V/L075Q/T189D, AO 18K/G023K/K024A/D130A/V1541,

AOl 8K/G023K/V077I/D 130A/V187N, AO 18K/G023Q/A049V/F075Q/V187T, AOl8K/G023Q/E045F/V077I/T189D, AOl 8K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, AO18K/K024A/N094R/G156W/V187T, AOl8K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/VI54I/GI56W/V187N/T189Q, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E045F/A049V/V077I/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077I/V187T, G023Q/E056K/V187N/1252Q/E264R, G023Q/F051T/F075Q/G091Q/I252Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V187T/T189Q, L075Q/V077FD130A/G156W/V187N, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T,

NOl 1K/D027Q/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, AOl8K/G023Q/E045F/L075Q/G156W/V187T. AO 18K/G023Q/K024A/V077I/V154I/V187N, AO 18K/G023Q/K024A/V1541/G156W/V187Q, AOl8K/K024A/D111 A/Vl87N/T189Q/L264R. AO 18K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, P051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, P051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154FG156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D 130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154FG156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075R/V154FG156W/V187N/L264R, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/D 130A/G156W/T189Q/L264R, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, NO 11K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156W/V187T, A018K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, A018K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, A018K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/E264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233 Q/L264R,

F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R,

F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075 G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/ G091 Q/V 187T/L264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130 A/V154I/G156 W/V187N,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/F264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 3-26: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 e índice de actividad específico de pNPP/pNPB o pNPO/pNPB mayor en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

A018K/E045F, D111A/L264R, D130A/V187T, G023K/L264R, L075R/L264R, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/N033D/T189D, D027Q/S058M/P256T, D111A/D130A/L264R, D130A/V154PG156W, D130A/V187N/L264R, F051T/I252Q/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187T/L264R, G163P/L227M/L264R, L075Q/V187T/L264R, Q004D/D027S/P256T, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/V077I/G156W, D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E051T/D130A/I252Q/L264R, E051T/L075G/I252Q/L264R, E051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091 Q/Vl 87T/I252Q/L264R, K024A/D130A/VI54I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/V187H/I252Q/L264R, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/D130A/V154I, AOl 8K/G023K/V077I/D 130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/N094R/G156W/V187T, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D13 O A/D 137Q/G163 P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/Í.075R/V154I/T189Q/Í .264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051 T/D 130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/E075G/D130A/T252Q/E264R, F051 T/E075G/G091 Q/Dl 30A/T,264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/L075Q/V077ED130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, NOl 1K/D027N/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, AOl8K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, AOl 8K/G023Q/K024A/V077I/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/V154I/G156W/V187Q, AÜ18K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, GÜ23K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077PD130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/V154PV187N/T189Q, L075Q/G091Q/D130A/V187FI/I252Q/L264R, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/K024A/D130A/V154FG156W/V187T/L264R,

AO18 K/K024A/N094R/D13 O A/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/D 137Q/G163P/Í .227M/N233Q/F 264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D137Q/G 163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, DÜ48Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D048Q/S058M/D130 A/Gl 63P/L227M/N233Q/L264R,

F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R,

F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075 G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/V 187T/L264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/F264R,

AO18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 3-27: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y pNPP/pNPB o pNPO/pNPB >50 % del índice de actividad específico máximo en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

D130A/V187T, D027Q/S058M/P256T, F051T/I252Q/L264R, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, L075G/V187H/I252Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, FÜ51T/LÜ75G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, AO18K/G023Q/K024A/V077FV1541/V187N, AO18K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/LÜ75Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/LÜ75Q/GÜ91Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/F051T/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111 A/V 1541/V 187N/T189Q, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, AO 18K/K024A/D130A/V154PG156W/V187T/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R,

F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R,

F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130 A/V 187T/I252Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187II/I252Q/I.264R

Tabla 3-28: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de actividad específico de pNPP/pNPB o pNPO/pNPB mayor en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

A018K/E045F, D130A/V187T, G023K/L264R, S058M/L264R, A018K/E045F/T189D, A018K/G023K/L075Q, D027N/N233Q/P256T, D027Q/N233Q/P256T, D130A/V187N/L264R, F051T/I252Q/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/V187T/L264R, Q004D/D027S/P256T, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/E045F/N073R/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/E045F/A049V/V 187T, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091Q/V187T/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q, Í,075G/V187II/I252Q/Í,264R. N011K/S058M/N233Q/P256T, P029R/F045F/N073R/T189D, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/E227M/E264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023Q/E045F/V077I/T189D, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/N033D/E045F/N073R/LÜ75D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R,

F051T/L075G/V 187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E075R/D130A/V187N/E264R, G023Q/E045F/A049V/V077I/T189D, G023Q/E045F/E075Q/V077I/V187T, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/1,075Q/D130A/T252Q/r,264R, G023Q/F .075Q/G091Q/I252Q/F 264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, S058M/G163P/L227MyN233Q/L264R, A018K/G023Q/K024A/V154EG156W/V187Q, A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, A018K/K024AA^077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, DÜ27Q/LÜ75Q/D13ÜA/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/F264R, F051T/L075G/G091Q/V187II/I252Q/L264R, F051T/F075G/G091Q/V187T/I252Q/F264R, G023K/T051T/D130A/V187N/I252Q/F264R, G023K/F051T/F075Q/D130A/I252Q/F264R, G023Q/D027S/F051T/F075Q/V187T/F264R, G023Q/F051T/G091 Q/V 187N/I252Q/F264R, G023Q/F075G/G091Q/D130A/I252Q/F264R, G023Q/L075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/P264R, G023Q/F075R/V154FG156W/V187N/F264R, K024A/F075Q/D130A/G156W/T189Q/F264R, F075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/F264R, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T, A018K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/F264R, AO18 K/K024A/N094R/D130 A/G156 W/V187T/F264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/F264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F264R,

D027E/S058M/D130 A/Gl 63P/L227M/N233Q/E264R,

D027E/S058M/D137 Q/Gl 63P/L227M/N233Q/E264R, D027Q/F051T/E075Q/D130A/V187T/I252Q/E264R,

D027Q/F051T/S058M/E075 Q/G091Q/I252Q/E264R,

D027Q/E075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R,

D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/Í.264R,

D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/F264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/F227M/N233Q/F264R,

F051T/F075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/F264R,

F051T/F075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R,

F051T/F075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/F264R,

G023Q/D027S/S058M/F075Q/D130A/I252Q/F264R,

G023Q/F051T/F075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/F264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/F264R,

G023Q/F075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/E264R,

G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/F264R,

Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T,

FÜ51T/E056K/FÜ75G/GÜ91 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R,

G023K/D027S/F051 T/S058M/L075Q/V 187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027Q/F051T/E075 Q/G091 Q/D 130A/I252Q/E264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/E264R,

G023Q/F051T/E075Q/G091 Q/D 130 A/V187H/I252Q/E264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

AO18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154FG156W/V187N,

D027Q/F051T/S058M/L075 G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075 Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R

Tabla 3-29: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 e índice de actividad específico de pNPP/pNPB o pNPO/pNpB mayor en comparación con SEQ ID NO: 2.

A018K/E045F, D130A/V187T, G023K/L264R, S058M/L264R, D130A/V187N/L264R, F051T/I252Q/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/V187T/L264R, Q004D/D027S/P256T, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091Q/V187T/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/V187H/I252Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R,

G023Q/L075Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R,

AO 18K/G023Q/K024A/V154I/G156W/V187Q, AO 18K/K024A/D111A/Y187N/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137EI/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, P051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, P051T/L075G/G091Q/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/F051T/G091 Q/V 187N/I252Q/F264R, G023Q/F075G/G091Q/D130A/I252Q/F264R, G023Q/F075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/F264R, F075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, A018K/K024A/D130A/V154FG156W/V187T/F264R, AO18K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/F264R, DÜ27E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/F264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F264R, D027E/S058M/D130A/G163P/E227M/N233Q/F264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/E264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

F051T/F075G/G091 Q/D 130A/V187N/T252Q/T ,264R,

F051T/F075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R,

F051T/F075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/E264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/E264R,

G023Q/D027S/S058M/F075Q/D130A/I252Q/F264R,

G023Q/F051T/F075Q/G091 Q/Vl 87II/I252Q/F264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/F264R,

G023Q/F075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

G023Q/S058M/E075G/G091 Q/D 130A/I252Q/E264R,

F051T/E056K/F075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/E264R, G023K/D027S/F051T/S058M/F075Q/V187H/I252Q/F264R,

GÜ23 Q/D027Q/FÜ51T/F075Q/GÜ91 Q/D 130 A/I252Q/F264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130 A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/F075Q/G091 Q/D 130 A/V 187T/I252Q/E264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/E264R,

G023Q/S058M/E075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/E264R,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R Tabla 3-30: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y pNPP/pNPB o pNPO/pNPB >50 % del índice de actividad específico máximo en comparación con SEQ ID NO: 2.

D130A/V187T, F051T/I252Q/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091Q/V187T/I252Q/L264R, L075G/V187H/I252Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V 187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/F051T/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, A018K/K024A/D130A/V154EG156W/V187T/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/L075 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R,

F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R,

F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R

Tabla 3-31: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de actividad específico de pNPB/pNPP mayor en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

A018K/L075D, A018K/T189D, D027N/E056K, D027N/N233Q, D027S/N033D, D027S/P256T, D130A/L264R, D130A/V187N, E045F/N073R, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, N094R/G156W, P029E/N033D, A018K/A049V/V187T, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/V187T, A018K/G023K/G156W, A018K/K024A/V154I, A018K/L075D/T189D, A049V/V187T/T189D, D027E/S058M/G163P, D027N/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D7T189D, D027S/S058M/P256T, D130A/V187T/L264R, E045F/L075D/T189D, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023Q/A049V7T189D, G023Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/G156W, G023Q/L075Q/V187T, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/G156W/V187N, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187T/L264R, N011K/D027S/S058M, N011K/N233Q/P256T, N073R/L075D/T189D, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, V187N/T189Q/L264R, A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/A049V/V187T, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/E045F/L075Q/T189D, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/L075Q/G156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D, A018K/V154FG156W/V187T, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/S058M/G163P/L264R, D027N/E056K/N233Q/P256T, D027N/E056K/S058M/P256T, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/E056K/I090F/P256T, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/G163P/N233Q/L264R, DI 11A/D130A/V154I/G156W, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187T/F264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075Q/G156W/V187N. G023K/E075R/D130A/F264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/K024A/D130A/G156W, (¡ÍJ23Q/K024A/1.075R/V1541, G023Q/K024A/V077I/G156W, G023Q/V154I/G156W/V187N, K024A/L075R/G156W/V187N, L075G/G091Q/V187N/L264R, F075Q/D130A/G156W/V 187N, L075Q/V077I/G156W/V187N, E075Q/V 187N/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/F264R, N011K/D027N/E056K/S058M, NOl 1K/D027Q/S058M/P256T, NOl 1K/D027S/E056K/P256T, NOl 1K/D027S/N233Q/P256T, NOl 1K/E056K/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/E045F/N073R/L075D, P029E/NÜ33D/L075D/T189D, P029E/NÜ73R/L075D/T189D, QÜÜ4D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027S/I090F/P2561', S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, A018K/A049V/L075Q/V187T/T189D, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/E045F/A049V/F075Q/V187T, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, AOl8K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R, AO18K/G023Q/A049V/F075Q/G156W, A018K/G023Q/A049V/F075Q/V187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/F075Q/V187T, AOl8K/G023Q/K024A/D130A/V1541, AO 18K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, AOl8K/G023Q/E075Q/G156W/V187T, AOl8K/G023Q/E075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/V077I/V187T/T189D,

AOl 8K/K024A/F075Q/D130A/F264R, AOl 8K/K024A/F075Q/V1541/T189D, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N, AOl 8K/K024A/N094R/G156W/V187T, AOl8K/F075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/F075Q/N094R/G156W/V187N, A018K/P029E/E045F/N073R/E075D, A018K/P029E/N033D/N073R/F075D, AOl8K/V077FG156W/V187T/T189D, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027E/S058M/G163P/F227M/F264R, D027Q/E056K/I090F/N233Q/P256T, D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E.

D048Q/S058M/G163P/E227M/F264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/F264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/E264R, D130A/G163P/F227M/N233Q/F264R, E045F/A049V/E075Q/V187T/T189D, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/F075RA^ 187T/F264R, G023K/K024A/D111 A/D 130A/V187T, G023K/K024A/F075R/D130A/G156W, G023K/F075Q/D111 A/D 130A/V187T, G023K/F075Q/D130A/V1541/T189Q, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/A049V/E075Q/G156W/V187T, G023Q/E045F/A049V/G156W/T189D, G023Q/E045F/A049V/L075Q/V0771, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/K024A/E075R/D130A/V1541, G023Q/K024A/E075R/V077I/D BOA, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R/D111A/V154I/V187T, K024A/L075R/G156W/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, N011K/D027Q/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/N233Q/P256T, N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T,

NO 11K/G023K/D111 A/G 156W/L264R, P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/S058M/P256T, Q004D/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/E056K/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/D027S/N033D/F045F/N073R/F075D, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/K024A/V077EG156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V077I/G156W, A018K/G023Q/A049V/V077EV187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/A049V/G156W/V187T, A018K/G023Q/E045F/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/F075Q/G156C/V187T, A018K/G023Q/E045F/E075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/E075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I/N094R/V154I, AO18K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/Í .075Q/N094R/V 154I/G156W, A018K/K024A/F075Q/N094R/V154T/V187N, A018K/K024A/Í ,075R/I) 130A/V187N/T189Q, A018K/F075Q/D111A/V154I/G156W/V187N, A018K/L075Q/D111A/V154I/T189Q/F264R, A018K/F075Q/D130A/V187N/T189Q/F264R, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, AO 18K/P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/F264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/F227M/F264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/F264R, D027Q/F051T/F075Q/D130A/V187H/F264R, D027Q/S058M/F075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/F264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/F075D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/F075D/T189D, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/E264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/E075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/E075R/D130A/T189Q/E264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187N/F264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/E264R, G023K/K024A/F075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/F075Q/N094R/D130A/G156W, G023 KJ K024A/F075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/F264R, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/F075Q/D 13 O A/V154RL264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/E075Q/D 13 O A/V154FG156W, G023Q/K024A/V077I/I) 130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/N094R/D111A/G156W/F264R, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/F264R, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156 W/V187N/L264R, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/D027N/E056K/I090F/N233Q/P256T, NO 11K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, AO18K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V1541/V187Q,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO 18 K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156W,

AO 18 K/G023Q/E045F/L075Q/Gl 56 W/V 187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/V154I,

AO 18K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V 187N, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154T/G156 W/V 187T,

AO 18 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/V187T/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D13 O A/V 187H/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D 130A/V187N, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/E264R, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

G023K/L075Q/D 111A/D13 O A/V154 J/G156 W/F264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/V187N/F264R,

G023Q/E056K/L075Q/D 111A/G156W/V187N/L264R,

G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G156 W/V187N, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027S/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111A/I) 130A/V154I/Í .264R,

NO 11K/G023Q/L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/GI56W/V187Q, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/V077PD130 A/V154I/G156 W, AO18K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO 18 K/ G023Q/E045F/L075Q/V077FG156W/V187T/T189D,

AO 18 K/ G023Q/K024A/L075R/N094R/D13 O A/V 154I/G156W,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130 A/G 156 W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/Vl 87H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154FV187N/T189Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/T .075R/D 130A/V 187T/T 264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154FV187N, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, K024A/D111A/D130A/V154I/C, 156W/V187T/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, AO 18 K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130 A/V 154I/G156 W/V 187N, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091 Q/Vl 87H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/F264R, G023Q/E056K/L075Q/D 111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154 W 187N/T189Q/L264R,

AO18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T,

N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 3-32: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 e índice de actividad específico de pNPB/pNPP mayor en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

A018K/L075D, D027S/N033D, D027S/P256T, D130A/L264R, D130A/V187N, E045F/N073R, K024A/V154I, N094R/G156W, P029E/N033D, A018K/A049V/Y187T, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/V187T, A018K/K024A/V154I, A018K/L075D7E189D, D027E/S058M/G163P, D027N/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/S058M/P256T, D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/G156W, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187T/L264R, N011K/N233Q/P256T, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, V187N/T189Q/L264R, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/G023K/D111 A/Tl89Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/S058M/G163P/L264R, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/G163P/N233Q/L264R,

DI 11 A/D 130A/V154I/G156W, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/V077EG156W, G023Q/K024A/D 130A/G156W, G023Q/K024A/V077I/G156W, L075G/G091Q/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R, NO 11K/D027Q/S058M/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/S058M/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, A018K/D027S/E045F/L075D7E189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, AO18K/G023Q/V077I/D130A/G156W, AO18K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/K024A/N094R/G156W/V187T, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V 187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075Q/V077ED130A/G156W,

NOl 1K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Nül 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T,

NO 11K/G023K/D111A/G156W/L264R, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, V077I/D130A/V1541/G15 ó W/V187N, AOl 8K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, AOl8K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/V077EG156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, AO 18K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, AO 18K/C 1023Q/N094R/D 130A/G156W/V187Q, AOl8K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/E264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/E264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q. G023K/K024A/L075Q/V1541/G 156W/V 187Q. G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/E264R, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/V077ED130A/V1541/G 156W, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, NOl 1K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, AO 18K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AO 18K/D111 A/D 130A/V1541/G 156W/V187T/T189Q,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154EV187Q,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077EN094R/V1541/G 156 W,

A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N,

G023K/K024A/N094R/V 154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G156 W/V187N, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T,

NO 11K/G023Q/L075Q/V154PV187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077PD130A/V154I/G156W,

AO18 K/ G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 3-33: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y pNPB/pNPP >50 % del índice de actividad específico máximo en comparación con TLL SEQ ID NO:

A018K/L075D, D027S/P256T, E045F/N073R, K024A/V154I, N094R/G156W, A018K/E045F/N073R, A018K/L075D/T189D, D027S/N033D/T189D, E056K/D130A/L264R, G023Q/A049V/T189D, K024A/D130A/V1541, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/N033D/L075D, E045F/A049V/G156W/V 187T, E045F/L075Q/G156W/V187T, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, L075G/G091Q/V187N/L264R, N011K/D027S/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/N073R/L075D/T189D, S058M/D137Q/G163P/N233Q, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, AO18K/G023Q/V077I/D130A/G156W, AOl 8K/K024A/N094R/D130A/V187N, AO18K/P029E/N033D/N073R/L075D, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, G023K/E056K/F075R/D130A/V187T, G023K/E056K/F075R/V187T/F264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, Nül 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, V0771/D130A/V1541/G156W/V187N,

AO 18K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, A018K/D027S/N033D/N073R/F075D/T189D, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111 A/D 130A/T189Q, G023Q/D027S/N094R/V154EG156W/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154EV187Q, A018K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156W,

AOl 8K/G023Q/í 1 I75R/V0771/N094 R/G15ÍAV/V187N, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/G023Q/L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/V077ED130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111 A/V 154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/ K024A/L075Q/N094R/V1541/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D

Tabla 3-34: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de actividad específico de pNPB/pNPP mayor en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

A018K/L075D, D027N/E056K, D027S/N033D, D027S/P256T, D130A/V187N, E045F/N073R, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, N094R/G156W, P029E/N033D, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/V187T, A018K/G023K/G156W, A018K/K024A/V154I, A018K/L075D/T189D, A049V/V187T/T189D, D027E/S058M/G163P, D027S/E075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/S058M/P256T, D130A/V187T/L264R, E045F/L075D/T189D, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023Q/A049Y/T189D, G023Q/K024A/G156W, G023Q/F075Q/V187T, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, Í.075Q/G156W/V187N, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, F075R/V187T/L264R, N011K/D027S/S058M, N073R/F075D/T189D, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/E045F/L075Q/T189D, A018K/G023K/D111 A/Tl89Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V 187T, A018K/G023Q/F075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/F075Q/G156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A, AO18K/F075 Q/V07 7I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D, A018K/V154I/G156W/V187T, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027N/E056K/N233Q/P256T, D027N/E056K/S058M/P256T, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/E075D/T189D, D027S/F045F7N073R/T189D, D027S/F056K/D111A/V154I, D027S/E056K/I090E/P256T, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/F075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E075D, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T, G023K/D027Q/F051T/1,075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/K024A/V154T/V187N, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/K024A/L075R/V154I, G023Q/V154EG156W/V187N, K024A/F075R/G156W/V 187N, E075G/G091Q/V187N/E264R, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075QA^077EG156WA^187N, L075QAG87N/T189Q/F264R, N011K/D027N/E056K/S058M, N011K/D027Q/S058M/P256T, N011K/D027S/E056K/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, N011K/E056K/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/E045F/N073R/L075D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027S/I090F/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, A018K/A049V/F075Q/V187T7E189D, AO 18K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/E045F/A049V/L075Q/V187T,

AO 18K/G023K/D130A/V154EG156W, AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R,

AO 18K/G023Q/A049V/E075Q/Gl56W, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V187T, A018K/G023Q/E045F/A049VA^187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, AO18K/G023Q/K024A/D130A/V1541, AO18K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/V077I/V187T/T189D,

AO 18K/K024A/L075Q/D130A/L264R, A018K/K024A/L075Q/V154I/T189D,

AO 18K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/G156W/V 187N, A018K/P029E/E045F/N073R/L075D, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, A018K/V077I/G156W/V187T/T189D, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027Q/E056K/I090F/N233Q/P256T, D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/F075Q/D 13 O A/V 154I/T189Q, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/E045F/A049V/G156W/T189D, G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077I, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, (¡023Q/Í.075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R7D111A/V154I/V187T, K024A/F ,075 R/G156W/V187N/T1890, F075Q/D130A/V187T/T189Q/F264R, [ 075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, N011K/D027Q/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/N233Q/P256T, N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/S058M/P256T, Q004D/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/E056K/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I/CÍ156W/V187N, A018K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/K024A/V077FG156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075Q/V077EG156W/V1S7Q, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V 187N, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V077I/G156W, A018K/G023Q/A049V/V077EV187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/A049V/G156W/V187T, A018K/G023Q/E045F/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/E045F7L075Q/G156C/V187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/G156WA/187T, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I/N094R/V154I, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18K/K024A/Í.075Q/N094R/V 154I/G156W, AOl 8K/K024A/L075Q/N094R/V154W 187N, AO18K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/F075Q/D111A/V154I/G156W/V187N, A018K/L075Q/D111A/V154I/T189Q/L264R, AOl 8K/F075Q/D130A/V187N/T189Q/E264R, AOl8K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, A018K/P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/E264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/F264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/F075Q/D130A/V187H/E264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/E264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/F075Q/V1541/G156W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154PF264R, G023Q/K024A/L075Q/D130A/VI54I/GI56W, G023Q/K024A/V077I/D13 O A/V 154PG156W, G023Q/L075Q/N094R/D111A/G156W/L264R, K024A/L075Q/D 111 A/V 154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111 A/l) 13 O A/V 154I/G156W/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, L075R/D13 O A/V 154FG156 W/V 187N/F264R, N011K/D027N/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/F264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/F075D/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/F075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/E075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/E075Q/N094R/V154FV187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/E075R/N094R/D130A/V1541,

AOl 8K/G023K/K024A/E075R/V154I/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/F264R, A018K/G023K/E075Q/V077PN094R/V154I/G156W,

AO 18 K/G023Q/E045F/E075Q/G156 W/V 187T/T189D,

AO 18 K/G023Q/K024A/E075Q/V077PN094R/V1541,

AO 18 K/G023Q/K024A/E075R/N094R/G156 W/V 187N,

AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AOl 8K/F075Q/N094R/D111A/V154I/V187T/F264R, D027S/E056K/F075R/D111A/G156W/V187N/F264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/1252Q/F264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/E264R,

E056K/E075Q/D 111 A/D 130 A/G156 W/V 187N/T189Q,

G023K/D027Q/F051T/E075G/D130A/V187H/E264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154EG156W/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130 A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154EG156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154EV187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, K024A/L075Q/D111 A/D 130A/V154EG156W/L264R, K024A/L075R/D I30A/VI54I/GI5ÓW/T189Q/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027S/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R,

NOl 1K/G023Q/L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/V 154I/G156 W, AOl 8K/G023K/E075R/V077T/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl 8K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130 A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/L075Q/V077I7N094R/D130A/V154RV187N, G023Q/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, K024A/D111 A/D 130A/V154EG156 W/V187171189Q/L264R,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/D111 A/D 13 O A/V 154I/T189 Q, AO 18 K/ G023K/K024A/L075R/V077I/D130 A/V 154PG156W/V187N, AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

AO18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

NOl 1K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R Tabla 3-35: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 e índice de actividad específico de pNPB/pNPP mayor en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

A018K/L075D, D027S/N033D, D027S/P256T, D130A/V187N, E045F/N073R, K024A/V154I,

N094R/G156W, P029E/N033D, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/V187T, A018K/K024A/V154I,

A018K/L075D/T189D, D027E/S058M/G163P, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D,

D027S/S058M/P256T, D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T,

G023Q/A049V/T189D, G023Q/K024A/G156W, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H,

L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187T/L264R, N094R/D130A/V187T,

P029E/N033D/E045F, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/E045F/A049V/G156W,

A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/G023K/D111 A/Tl89Q, A018K/G023Q/A049V/V187T,

AO 18K/L075Q/V077I/N094R, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D137Q/G163P/L227M,

D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/L075D/T189D,

D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/L075D/T189D,

D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/L075D/T189D,

D027S/P029E/N033D/L075D, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T,

G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/K024A/V154I/V187N,

G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, L075G/G091 Q/Vl 87N/L264R, NOl 1K/D027Q/S058M/P256T, NOl 1K/D027S/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A,

P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/S058M/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q,

AO 18K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, AOl8K/G023K/D130A/V154PG156W, AOl8K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N, AO18K/P029E/N033D/N073R/L075D. D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/DI30A/VIS7T.

G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075Q/V077IZD130A/G156W, N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, V077I/D130A/V154EG156W/V187N, AO 18K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D,

AO 18K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl 8K/K024A/E075Q/X094R/V 1541/G156W, AO 18K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V 187N/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/E075Q/V1541/G156W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/E264R, G023Q/D027S/N094R/V154PG156W/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154PG156W, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154PV187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/L075Q/V077EN094R/V154I/G156W,

AOl 8K/G023Q/L075RA^077I/N094R/G156W^/187N, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075 Q/D130A/V187N, G023K/K024A/N094R/V1541/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130 A/V 187H/I252Q/L264R,

G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N,

N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T,

NO 11K/G023Q/L075Q/V154FV187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077PD13 O A/V154I/G156W,

AO18 K/ G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/E075R/D111A/V154I/G156W/E264R,

G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/E075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/K024A/F075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/F264R,

G023Q/F051T/S058M/E075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

AO 18K/G023K/F075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/F264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/F075Q/R108K/V187T/T189D

Tabla 3-36: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y pNPB/pNPP >50 % del índice de actividad específico máximo en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

A018K/E075D, D027S/P256T, E045F/N073R, K024A/V154I, N094R/G156W, A018K/E045F/N073R, A018K/F075D/T189D, D027S/N033D/T189D, E056K/D130A/E264R, G023Q/A049V/T189D, K024A/D130A/V1541, F075R/D130A/F264R, F075R/D130A/V187T, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, AO 18K/E045F/A049V/G156W, AO 18K/E045F/F075D/T189D, AOl8K/P029E/N073R/F075D, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/F075D/T189D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/F075D/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/N033D/L075D, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/F075Q/G156W/V187T, G023K/D027Q/F051T/F075Q, G023K/F075R/D130A/F264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, F075G/G091Q/V187N/F264R, N011K/D027S/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/N073R/F075D/T189D, S058M/D137Q/G163P/N233Q,

AO 18K/D027S/E045F/F075D/T189D, AOl8K/D027S/P029E/N033D/F075D,

AO 18K/G023Q/V077I/D130A/G156W, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N, AOl8K/P029E/N033D/N073R/F075D, E045F/A049V/F075Q/V187T/T189D, G023K/E056K/F075R/D130A/V187T, G023K/E056K/F075R/V187T/F264R, G023K/K024A/D111 A/D 130A/V187T, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/F075Q/V077I/D130A/G156W, N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T,

Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, AOl8K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl8K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R,

D027S/E056K/S058M/V 187T/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q,

G023Q/D027S/N094R/V154PG156W/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R,

G023Q/K024A/V077I/D130A/V154PG156W, K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V187N,

Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AO18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187Q,

AO18 K/ G023K/L075Q/V077PN094R/V154I/G156W,

AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

G023K/K024A/N094R/V 154I/G156W/V187N/T189Q,

G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/G023Q/L075Q/V154PV187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077PD13 O A/V154I/G156W,

AO 18 K/ G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N7T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D

EJEMPLO 4

Estabilidad térmica de variantes combinatorias de TLL

[0243] La estabilidad térmica de las variantes de TLL creadas tal y como se describe en el ejemplo 2 fue analizada tal y como se describe en el ejemplo 1 (ensayo de termoestabilidad). Se calculó el índice de rendimiento para las variantes en comparación con TLL, SEQ ID NO:1 o la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

Tabla 4-1: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 en el ensayo de termoestabilidad

A018K/D027S, A018K/L075D, A018K/L075Q, A018K/T189D, D027E/G163P, D027N/E056K, D027N/N233Q, D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/T189Q, D130A/V187N, D130A/V187T, E045F/N073R, G023K/D130A, G023K/L264R, G023Q/L075Q, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, L075Q/G156W, L075R/L264R, L227M/L264R, N011K/D027S, N073R/L075D, N094R/G156W, P029E/N033D, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/L075Q, A018K/A049V/V187T, A018K/D027S/E045F, A018K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, A018K/E045F/T189D, A018K/E045F/V187T, A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/F075Q, A018K/G023Q/F075Q, A018K/K024A/V154I, A018K/F075D/T189D, A018K/F075Q/G156W, A018K/F075Q/V187T, A018K/N033D/F075D, A018K/N033D/T189D, AÜ18K/NÜ73R/F075D, AÜ18K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, A049V7V187T/T189D, D027F/S058M/G163P, D027N/N233Q/P256T, D027N/S058M/P256T, D027Q/N233Q/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/F075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/N073R/F075D, D027S/N233Q/P256T, D027S/S058M/P256T, D111A/D130A/F264R, D130A/T189Q/F264R, D130A/V154I/G156W, D130A/V187N/F264R, D130A/V187T/F264R, E045F/F075D/T189D, E045F/N073R/F075D, E056K/D130A/F264R, E056K/D130A/T189Q, G023K/D130A/F264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T, G023K/F075R/F264R, G023K/V187N/F264R, G023K/V187T/F264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/F264R, G023Q/D130A/G156W, G023Q/E056K/F075R, G023Q/K024A/G156W, G023Q/E075Q/V187T, G163P/L227M/L264R, K024A/D130A/V 1541, K024A/F075Q/G156W, K024A/F075Q/V077I, F075G/D130A/V187H, F075Q/D111A/D130A, (.0750/1)130A/V187T, L075Q/G156W/T189D, F075Q/G156W/V187N, E075Q/G156W/V187T, E075Q/N094R/VE54T, TA75Q/V077T/T189D, (.075Q/V154I/V187T, F075Q/V187T/L264R, L075Q/V187T/T189D, F075R/D130A/F264R, F075R/D130A/V187T, F075R/V187N/L264R, F075R/V187T/F264R, N011K/D027S/S058M, N011K/N233Q/P256T, N033D/N073R/T189D, N073R/F075D/T189D, N094R/D130A/V187T, P029E/E045F/F075D, P029E/F075D/T189D, P029E/N033D/F075D, P029E/N073R/F075D, Q004D/D027S/P256T, Q004D/N233Q/P256T, S058M/F227M/F264R, V077I/D130A/V154I, V077I/V187A/T189D, V187N/T189Q/F264R, A018K/A049V7Í.075Q/T189I), AO18K/A049V7Í.075Q/V187T, A018K/D027S/E045F/N073R, A018K/D027S/E045E/T189D. A018K/D027S/N033D/F075D, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/A049V/V187T, A018K/E045F/F075D/T189D, A018K/E045F/E075Q/V187T, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/T189D, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I, AO 18K/G023Q/L075Q/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/V187T/T189D, A018K/K024A/D130A/G156W, A018K/L075Q/G156W/T189D, A018K/L075Q/G156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D111A, AO 18 K/L075Q/N094R/D13 O A, A018K/L075Q/N094R/V187Q, A018K/L075Q/V077I/N094R, AO18K/L075Q/V187T/T189D, A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/P029E/N033D/L075D, AOl8K/P029E/N033D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, A049V/L075Q/V187T/T189D, D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/G163P/L264R, D027N/E056K/N233Q/P256T, D027N/E056K/S058M/P256T, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E056K/D111A/V1541, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/L075D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D027S/P029E/N033D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, D ll 1A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V154I/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, E056K/L075Q/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D027S/L075Q/L264R, G023K/D111 A/D 130A/L264R, G023K/D130A/G156W7T189Q, G023K/I) 130A/V187N/F264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/D130A/L264R, G023K/E056K/L075R/L264R, (,023 K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075Q/G156W/L264R, G023K/Í.075Q/G 156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/A049V/L075Q/T189D, G023Q/A049V/L075Q/V077I, G023Q/A049VA^077I/G 156W, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, Ci(I23Q/I;,()4517A()49V/V187T, G023Q/E045F/T.075Q/G156W, G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/L075R/V154I, G023Q/K024A/V077I/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/G156W/V187N, G023Q/I.075Q/G 156W/V187T. G023Q/V154EG156WA^ 187N, G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, K024A/L075Q/V187T/T189Q, K024A/L075R/G156W/V187N, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/G091Q/V187N/L264R, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/G156W/V187T/L264R, L075Q/V077I/D130A/V187Q, F075Q/V077I/G156W/V187N, L075Q/V077I/N094R/G156W, L075Q/V077I/V154RV187Q, L075Q/V077EV187T/T189D, L075R/D111A/V154I/G156W, L075R/D130A/V154EL264R, L075R/D130A/V187T/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M, N011K/D027Q/S058M/P256T, N011K/D027S/E056K/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, N011K/E056K/N233Q/P256T, N011K/G023K/L075Q/D111 A, N011K/S058M/N233Q/P256T, P029E/E045F/LÜ75D/T189D, P029E/E045F/N073R/L075D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D7P189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256Í’, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, Q004D/N011K/D027Q/N233Q, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/A049V/L075Q/V187T/T189D, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/N073R/T189D, AOl8K/D027S/N073R/L075D/T189D, AOl8K/D027S/P029E/E045F/T189D, AOl 8K/D027S/P029E/N033D/L075D, AO18K/D027S/P029E/N073R/L075D, AOl8K/D130A/G156W/V187N/L264R, AOl8K/D130A/G156W/V187T/L264R, AOl8K/E045F/A049V/L075Q/G156W, AO 18K/E045F/A049V/L075Q/T189D, AO 18K/11)4517A049V/í D75Q/V187T, A018K/G023K/D130A/V154EG156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, AOl8K/G023K/K024A/D130A/V154I, AOl8K/G023K/K024A/L075R/N094R, AOl8K/G023K/L075Q/D130A/V154I, AOl8K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/A049V/L075Q/G156W, AOl8K/G023Q/A049V/L075Q/V0771, AOl8K/G023Q/A049V/L075Q/V187T, AOl8K/G023Q/A049VA^077I/V 187T, AO 18K/G023Q/E045F/A049V/L075Q, A018K/G023Q/E045F/A049V/V187T, AO 18K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/E045F/V077PT189D, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I, AOl8K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, AO 18K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/V077EV187T/T189D, AO 18K/K024A/L075Q/D130A/L264R, AO 18K/K024A/L075Q/V154I/G156W, AOl8K/K024A/L075Q/V1541/11891). AOl8K/K024A/L075R/D130A/V1541, AOl8K/K024A/L075R/N094R/D130A, AO 18K/K024A/N094R7D130A/V187N, AOl8K/K024A/N094R/G156W/V187T, AOl8K/E075Q/D111 A/Dl 30A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, AO 18 K/E075Q/N094R/G156W7V187N. A018K/L075Q/V077I/N094R/G156W, A018K/L075Q/V187T/T189Q/L264R, AO 18K/N033D/E045F/L075D/T189D, A018K/P029E/N033D/N073R/F075D, A018K/V0771/G156W/V187T/T189D, D027E/D048Q/D137Q/L227M/F264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/F264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/F227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/F227M/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/E227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027E/S058M/G163P/E227M/L264R, D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027Q/F051T/E075Q/D130A/E264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/L075G/D130A/1252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/1252Q/L264R, D027S/L075Q/D 111 A/D 130A/V187N, D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D, D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D130A/V154EG156W/V187N/T189Q, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, E056K/L075Q/G156W/T189Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, E056K/N094R/G156W/V187N/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, E05 Er/L075G/D 130A/I252Q/L264R, E051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075G/V 187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075R/V187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/D111A/V154I/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/D 13 O A/V154I/T189 Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/E075Q/V187H/T252Q/E264R, G023K/TD75R/D130A/V187N/E264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/T189D, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/A049V/L075Q/V187T/T189D, G023Q/D027S/D111A/T189Q/L264R, G023Q/D027S/V154I/V187N/L264R, G023Q/E045F/A049V/G156W/T189D, G023Q/E045F/A049V/L075Q/V0771, G023Q/E045F/A049V/V077I/T189D, G023Q/E045F/L075Q/G156W/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077EV187T, G023Q/E051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/V077I/V187Q, G023Q/K024A/L075R/D130A/V1541, G023Q/K024A/L075R/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/K024A/V077I/D130A/V1541, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/GÜ91Q/I252Q/L264R, G023Q/LÜ75Q/V077ED13ÜA/G156W, G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/G156W/V187T, K024A/L075Q/V077I/G156W/V187N, K024A/L075Q/V077I/V154I/V187N, K024A/L075R/D111A/V154I/V187T, K024A/L075R/G156W/V187N/T189Q, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V187T/T189Q, L075Q/D111A/V187N/T189Q/L264R, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, L075Q/V 154I/V187N/T189Q/L264R, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075R/G156W/V187T/T189Q/L264R, E075R/V077I/N094R/V 154I/G156W, N011K/D027N/E056K/N233Q/P256T, NOl 1K/D027N/E056K/S058M/P256T,

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AO18K/K024A/L075Q/V077FD130A/V187N, AO 18K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, AO 18K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N, A018K/L075Q/D111 A/V 154FT189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/N033D/E045F/N073R/L075D/T189D, AO 18K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/F227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091 Q/Vl 87N/I252Q, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D 130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/G156W/V187N/T189Q, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/G163I7Í .227M/N233Q/F 264R, D048Q/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/F075G/G091 Q/V 187T/I252Q/F264R, F051T/F075R/D130A/V187N/I252Q/F264R, G023K/D027S/F075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/F075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/T189Q/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187N/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187T/F264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/F264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/F075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/F075Q/G156W/V187T/T189Q, G023K/K024A/E075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/F075Q/V 154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/E075R/D130A/V154I/V187N, G023K/F075G/D130A/V187T/I252Q/F264R, G023K/F075Q/D111A/D130A/V154FV187N, G023K/E075Q/N094R/V1541/V187T/F264R, G023K/E075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/E264R, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, G023Q/D027Q/E056K/E075R/I252Q/F264R, G023Q/D027S/F051T/E075Q/V187T/I252Q, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D111A/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/D027S/L075R/D111A/V187N/L264R, G023Q/D027S/N094R/V 154I/(¡ 156W/T189Q, G023Q/E045F/A049V/F075Q/G156W/V 187T, G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077RV187T, G023Q/E045F/F075Q/V077I/G156W/V 187T, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/F075Q/D130A/V154I/E264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/E264R, G023Q/F051T/E075G/G091 Q/Vl87N/I252Q, G023Q/F051T/E075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/E075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/E075Q/D130A/V154W 187N, G023Q/K024A/F075Q/V 1541/(1156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D 130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/F075G/G091Q/D130A/I252Q/F264R, G023Q/L075Q/D111A/V154I/T189Q/L264R, G023Q/E075Q/N094R/D111A/G156W/F264R, G023Q/L075Q/V077FN094R/D130A/V187Q, G023Q/E075R/V154FG156W/V187N/E264R, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/F264R, K024A/E075Q/D 111A/V154FV187N/T189Q, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/E075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/F075Q/V077I/N094R/D 130A/V187N, K024A/E075Q/V154I/G156W/T189Q/E264R, K024A/Í .075Q/V 154I/V187N/T189Q/1.264R, K024A/E075Q/V154I/V18747T189Q/F264R, K024A/Í.075R/D1 11 A/VR‘S4I/G156W/V187N. 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AO 18 K/G023K/K024A/E075Q/N094R/G156 W/V 187Q,

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G023Q/F075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/S058M/E075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, K024A/D111 A/D 130A/V154FG156W/V187T/T189Q/F264R, NO 11K/G023K/D027S/F075Q/D111 A/D 130A/V154I/TI89Q, N011K/G023K/D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

NO 11K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023K/L075Q/D111A/G156W /V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I7G156W/T189Q, NOl 1K/G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W74189Q/L264R, NOl 1K/G023Q/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/V187N/1V64K,

NO 11K/ G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189 Q/L264R, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, AO18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V187T/T189Q/Í ,264 K, AO 18 K/ G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V 187N, AO 18K/G023K/K024A/V077ED130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, AOl 8K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V0771/R108K/G156W/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W, AOl 8K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130 A/V154I/G156 W /V187N, AOl 8K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/l) 130 A/V 154I/G156W/E264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091Q/V187N/L264R, G023K/D027S/E051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/L075Q/DlllA/D130A/V1541/G156W /ri89Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130 A/V 154I/G156 W/V 187T/T189Q/L264R, G023K/T ,075Q/D 111 A/Dl 30A/V154T/G156W/V187T/T189Q/E264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154EG156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D 111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, NO 11K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/Í .264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T7T189D,

AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q,

NO 11K/AO18 K/G023K/K024A/L075R/V077PD130A/V154I/V187T/T189Q,

NOl 1K/G023K/L075R/N094R/D111 A/V 154I/G156W/V187N/T189Q/E264R,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/E264R,

AO18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T,

NOl 1K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D Tabla 4-2: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 e índice de rendimiento >1 en el ensayo de termoestabilidad en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

A018K/L075D, D027E/G163P, D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/V187N, D130A/V187T, E045F/N073R, G023K/L264R, K024A/V154I, L075R/L264R, L227M/L264R, N094R/G156W, P029E/N033D, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/V187T, AOl8K/E045F/V187T, A018K/K024A/V154I, A018K/L075D/T189D, A018K/N033D/T189D, AOl8K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, D027E/S058M/G163P, D027N/S058M/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/S058M/P256T,

D lll A/D 130A/L264R, D130A/V154I/G156W, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187N/L264R, G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/G156W, G163P/L227M/L264R, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187T/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187N/L264R, L075R/V187T/L264R, N011K/N233Q/P256T, N094R/D130A/V187T, Q004D/D027S/P256T, V187N/T189Q/L264R, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/K024A/D130A/G156W, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/N033D/F075D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/E264R, D027E/D130A/N233Q/F264R, D027E/D137Q/G163P/F227M, D027E/D137Q/F227M/F264R, D027E/G163P/F227M/F264R, D027E/F227M/N233Q/E264R, D027E/S058M/G163P/F264R, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/F075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/F075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/F075D, D048Q/D130A/G163P/F264R, D048Q/G163P/N233Q/E264R, DI 11A/D130A/V154I/G156W, D130A/G163P/E227M/E264R, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/F075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187N/F264R, E056K/D130A/V187T/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/I ) 130A/VIS7N/E264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/V077I/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G091 Q/Vl87T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/G091Q/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R, N011K/D027Q/S058M/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/V1541, AO18K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, AOl8K/K024A/L075R/D130A/V154I, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N, AOl8K7K024A/N094R/G156W/V187T, AOl8K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/L264R, D027S/E056K/D111 A/Vl 87N/L264R, D027S/L075G/D13OA/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R.

D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V1874, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156 W/V187Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/T090F/N233Q/P256T, N011K/G023K/D111 A/Gl 56W/E264R, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/Ci 163P/E264R.

S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, V077I/D130A/V154PG156W/V187N, A018K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, A018K/G023K/K024A/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/V077EG156W/V187Q, AO18K/G023Q/A049V/G156W/V 187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/K024A/V077I/V154EV187N, A018K/G023Q/K024A/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V0771/D130A/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/E051T/L075Q/D 130 A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/1,075G/G091 Q/D 130 A/T252Q/1,264R, F051T/1,075G/G091 Q/V 187H/T252Q/1,264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V154FG156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D 130A/V187T/I252Q, G023Q/D027S/X094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154FL264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077FD130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W. G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111 A/V 154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256 F, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D111A/D130A/V154T/G136W/V187T/T189Q,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154FV187Q, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156 W,

AO 18 K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156 W/V 187N,

AO 18K/K024A/D130A/V154FG156 W/V1871/L264R,

AO18 K/K024A/L075Q/D130 A/V154I/G156 W/V187T, AO18 K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130 A/G156W, AO 18K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D13 O A/D137Q/G163 P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/Í .227M/N233Q/F264R, F051T/L075 G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Vl 87N/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G 156 W/V 187N, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, N011K/A018K/K024A/V077I/V154FG156W/T189Q, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, NO 11K/G023Q/L075Q/V154PV187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W,

AO18 K/ G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130 A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/V 187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

AO 18K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154PG156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/Y187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/F264R, AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T Tabla 4-3: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de termoestabilidad en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

E045F/N073R, A018K/E045F/V187T, AO18 K/V 1541/(1156W, D111A/D130A/L264R,

V 187N/T189Q/L264R, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/1) 130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/D111 A/Gl56W/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/V154I/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/Í 4)75R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/N094R/D111 A/Gl 56W/V187T/L264R, G023Q/E056K/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075 Q/D 130A/V154PL264R, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187Q,

A018 K/G023K/L075Q/V077EN094R/V154I/G156 W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AO18 K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130 A/G156 W, AO18K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130 A/V154I/G156 W,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G 156 W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/E264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 4-4: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2 en el ensayo de termoestabilidad.

A018K/D027S, A018K/L075D, A018K/L075Q, A018K/T189D, D027E/G163P, D027S/N033D,

D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/T189Q, D130A/V187N. D130A/V187T,

EÜ45F/NÜ73R, FÜ51T/LÜ75R, G023K/D13ÜA, G023K/L264R, G023Q/L075Q, KÜ24A/LÜ75Q,

K024A/V154I, L075Q/D130A, L075Q/G156W, L075R/L264R, L227M/L264R, N011K/D027S,

N073R/L075D, P029E/N033D, S058M/L264R, Y187T/L264R, A018K/A049V/L075Q,

A018K/A049V/V187T, A018K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, A018K/E045I7V187T,

A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/L075Q, A018K/G023Q/L075Q, A018K/K024A/V154I,

A018K/L075D/T189D, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T, A018K/N033D/L075D,

A018K/N033D/T189D, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W,

D027E/S058M/G163P, D027N/N233Q/P256T, D027N/S058M/P256T, D027Q/N233Q/P256T,

D027Q/S058M/P256T, D027S/E075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/N073R/E075D,

D027S/N233Q/P256T, D027S/S058M/P256T, D111A/D130A/L264R, D130A/T189Q/L264R,

D130A/V154PG156W, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, E045F/L075D/T189D,

E045F/N073R/L075D, E056K/D130A/L264R, E056K/D130A/T189Q, G023K/D130A/L264R,

G023K/D130A/V 187T, (¡023K/I X)56K/V 187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187N/L264R,

G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/L264R, G023Q/D130A/G156W,

G023Q/E056K/L075R, G023Q/K024A/G156W, G023Q/E075Q/V187T, G163P/L227M/L264R,

K024A/D130A/V 1541, K024A/L075Q/G156W, K024A/LÜ75Q/V077I, L075G/D130A/V187H,

L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W74189D, L075Q/G156W/V187N,

L075Q/G156W/V187T, L075Q/N094R/V154I, L075Q/V077I/T189D, L075Q/V154I/V187T,

L075Q/V187T/L264R, L075Q/V187T/T189D, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T,

L075R/V187N/L264R, L075R/V187T/L264R, N011K/D027S/S058M, N011K/N233Q/P256T,

N073R/L075D/T189D, N094R/D130A/V187T, P029E/E045F/L075D, P029E/L075D/T189D,

P029E/N033D/L075D, P029E/N073R/L075D, Q004D/D027S/P256T, Q004D/N233Q/P256T,

S058M/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I, V187N/T189Q/L264R, A018K/A049V/L075Q/T189D,

A018K/A049V/E075Q/V187T, A018K/D027S/E045F/N073R, A018K/D027S/E045F/T189D,

A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/D111A/G156W/T189Q,

A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W, AO18K/l 4)4517A049V7V187T.

A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023K/D111 A/Tl 89Q.

A018K/G023Q/A049V/T189D, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/T189D,

A018K/G023Q/E045F/V 187T, A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/T189D,

AO 18K/G023Q/L075Q/V0771, A018K/G023Q/L075Q/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A,

A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/V187T/T189D,

A018K/K024A/D130A/G156W, A018K/L075Q/G156W/T189D, A018K/L075Q/G156W/V187T,

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NOl 1K/D027N/E056K/S058M/P256T, NOl 1K/D027N/S058M/N233Q/P256T,

NOl 1K/D027Q/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/E056K/N233Q/P256T, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, N011K/G023K/E056K/L075Q/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/V187N/T189Q, P029E/N033D/K074S/L075D/T189D, P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/S058M/P256T, Q004D/D027Q/E056K/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/E056K/S058M/P256T, Q004D/D027S/E056K/N233Q/P256T, Q004D/D027S/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/N233Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, AO18K/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, AO18K/D027S/P029E/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, AOl8K/G023K/D111A/D130A/V1541/T189Q, AOl 8K/G023K/K024A/L075R/D111A/L264R, AOl8K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, AO 18K/G023K/K024A/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/K024A/V077PG156W/V187Q, AOl 8K/G023K/í.075Q/I) 130A/G156W/V 187N, AOl8K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, AOl8K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V1541, AOl8K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, AOl 8K/G023Q/A049V/í,075Q/V0771/G156W, AOl 8K/G023Q/A049V/1D75Q/V077I/V187T, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/G156W/V187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/T189D, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077I, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V187T, A018K/G023Q/E045F/G156W/V187T/T189D, AO 18K/(1023Q/I4)45171 Í175Q/C¡ 156W/V 187'1. 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AO 18K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, AOl8K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, AOl8K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N, AOl8K/L075Q/D111A/V1541/1189Q/L264R, AO 18K/L075Q/D130A/V154PT189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V187N7F189Q/L264R, A018K/L075R/D130A/V1541/G156W/V187N, AOl8K/N033D/E045F/N073R/L075D/T189D, AOl8K/N094R/D111 A/D 130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, DÜ27Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/G156W/V187N/T189Q, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, F051T/L075R/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/E075R/D130A/V187N/E264R, G023K/E056K/E075R/D130A/V187T/E264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/G156W/V187T/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/N094R/V154I/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, G023Q/D027Q/E056K/L075R/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/I252Q, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D111A/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/D027S/L075R/D111A/V187N/L264R, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156W/V187T, GÜ23Q/EÜ56K/D111 A/D 13ÜA/V187N/T189Q, GÜ23Q/E056K/LÜ75Q/D130A/V154EL264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/1252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/1252Q, G023Q/F051T/L075Q/D 13 O A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D 130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/VI54I/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/V154I/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/G156W/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, G023Q/L075R/V154I/G156W/V187N/L264R, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/D 130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, K024A/L075Q/V154I/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V 154I/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075R/D111A/V154I/G156W/V187N, K024A/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V154I/( i 156W/V187N/L264R, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, NO 11K/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, NO 11K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023K/D027S/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, NO 11K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, P029E/N033D/K074S/L075D/N101D/T189D, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D13 O A/D 137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/E075D/T189D,

AO18K/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154FV187Q,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156 W,

AO 18 K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156 W/V 187T,

AO 18 K/G023Q/E045F/L075Q/Gl 56W/V187T/T189D,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077PD130 A/G 156 W,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V0771/N094R/V1541, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/VI54I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D13 O A/G 156 W,

AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, AOl 8K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, AO18 K/K024A/L075Q/D111A/G156 W/V187N/L264R, AO18 K/K024A/L075Q/D 130A/G156W/V 187T/T189Q, AOl 8K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, AO 18 K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W, AO 18K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, A018K/L075Q/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/E264R, A018K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, AO 18 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/V187T/L264R, D027E/D048Q/D 13 O A/D137Q/G163 P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163I7Í .227M/N233Q/I264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/G156 W/V 187N/T189Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, F051T/L075 G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130 A/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Vl 87N/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023K/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/D 130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N, GÜ23 K/K024A/L075Q/V077FD130A/G156W/V187Q, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023K/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/I _264R, G023K/L075Q/D 111 A/V 154I/G156W/1189Q/L264R, G023K/L075Q/D 130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/V187N/L264R, G023K/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/V 154I/G156 W/V187N/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156 W/V187T/T189D, G023Q/F056K/1,075Q/D 111A/G156W/V187N/E264R, G023Q/E056K/L075Q/D 130A/V154FG156W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/Vl 87H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077ED130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077ED130A/V154EG156W, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/Í _264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154EV187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G156W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/Í .264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W7T189Q,

NOl 1K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R,

NOl 1K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q,

NOl 1K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, AOl 8 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V0771/D130A/V1541/G156W, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/G156W, AOl 8K/G023K/L075Q/V077ED130A/V154I/G156W/V187N, AOl 8K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D13 O A/V154I/G156W, AOl 8 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, AO 18 K/G023Q/L075Q/V077I/D 130 A/V154I/G156 W/V187N, AOl 8K/K024A/E075Q/V077T/N094R/D130A/V1541/G156W, AO 18 K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156 W/V 187T/L264R, AOl 8 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130 A/D 137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130 A/V 187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V1541/G156 W/V 187T/L264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V1541/G 156 W/V 187T/T189Q, G023K/L075Q/D111 A/V 154EG156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V1541/G 156 W/V 187N/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/E051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130 A/V154I/G156 W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/D 111A/D130 A/V 154EG156 W/V 187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111 A/Dl 30A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187Q, G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/D111 A/D 130A/V134I/G1VAV/V187T/T189Q/E264R, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, N011K/G023K/D027S/E075R/V154T/G156 W/V 187N/T189Q,

NO 11K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075Q/D111A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/D027S/N094R/V154EG156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154EG156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V187T/T189Q/L264K, AO 18 K/ G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154EG156W/V187N, AO 18K/G023K/K024A/V077ED130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154EG156W/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/F075Q/V077I/R108K/G156W/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/E075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W,

A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N,

A018K/K024A/L075Q/N094R/V154EG156W/V187N/T189Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V1541/(1156W/E264R,

D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/l) 130A/V187N/T189Q/Í.264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091Q/V187N/L264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q,

GÜ23K/D027S/L075Q/D111 A/D 13ÜA/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V1541/G156W/T189Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091Q/V187N/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

G023Q/E056K/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

NOl 1K/G023K/D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R,

NOl 1K/G023K/E075R/D111 A/Dl 30A/V1541/V187N/T189Q/Í 264K,

NO 11K/G023Q/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/II135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135E/V187H,

A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H7I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q,

NOl 1K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077ED130A/V154EV187T/T189Q, NOl 1K/G023K/L075R/N094R/D111 A/V 1541/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 13 O A/V 154I/G156W/V187N/L2Ó4R.

AO18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, NOl 1K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D11 lA/V154I/G156W/V187N7ri89Q/L264R, AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T7T189D Tabla 4-5: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de termoestabilidad en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

A018K/L075D, D027E/G163P, D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/L264R,

D130A/V187N, D130A/V187T, E045F/N073R, F051T/L075R, G023K/L264R, K024A/V154I,

L075R/L264R, L227M/L264R, P029E/N033D, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/V187T,

A018K/E045F/V187T, A018K/K024A/V154I, A018K/L075D7T189D, A018K/N033D7T189D,

A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, D027E/S058M/G163P, D027N/S058M/P256T,

D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/S058M/P256T,

DI 11A/D130A/L264R, D130A/V154I/G156W, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/Í.264R,

E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T,

G023K/L075R/L264R, G023K/V187N/L264R, G023K/V187T/E264R, G023Q/A049V/T189D,

G023Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/G156W, G163P/L227M/L264R, K024A/D130A/V154I,

L075G/D130A/V187H, L075Q/V187T/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T,

L075R/V187N/L264R, L075R/V187T/L264R, N011K/N233Q/P256T, N094R/D130A/V187T,

Q004D/D027S/P256T, V187N/T189Q/L264R, A018K/D027S/P029E/T189D,

A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W,

A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/G023K/D111 A/Tl89Q, A018K/G023Q/A049V/V187T,

A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/K024A/D130A/G156W, A018K/Í .075Q/V077I/N094R,

A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/L264R,

D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R,

D027E/G163P/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/G163P/L264R,

D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/D130A/I252Q/L264R,

D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D,

D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D,

D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, DI 11A/D130A/V154PG156W,

D130A/G163P/L227M/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T, E056K/D130A/V187N/L264R,

E056K/D130A/V187T/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R,

G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187N/L264R,

G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/L075R/L264R,

G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R,

G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/V077I/( 1156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G091Q/V187T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/G091Q/V187N/L264R, L075G/V187II/I252Q/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R, N011K/D027Q/S058M/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W,

Aül 8K/GÜ23K/KÜ24A/D130A/V1541, AO18K/G023K/V077I/D13ÜA/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, AO18K/G023Q/K024A/L075Q/G156W,

AO 18K/K024A/L075R/D130A/V1541, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/K024A/N094R/G156W/V187T, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/L264R, D027S/E056K/D111 A/Vl 87N/L264R, D027S/L075G/D13OA/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/F227M/I264R. D048Q/D137Q/G163P/Í 227M/Í 264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154FG156W/V187N/T189Q, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111 A/D 130A/V187T, G023K/K024A/D111 A/Gl56W/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T,

NOl 1K/G023K/D111A/G156W/L264R, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M7D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, A018K/G023K/K024A/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/V077EG156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/K024A/V077I/V154PV187N, A018K/G023Q/K024A/V154PG156W/V187Q, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, AOl8K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, AO18K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D 137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163I7N233Q/I 264R, 1)02717S058M/I) 130A/Í 227M/N233Q/Í 264R, D027E/S058M/D137Q/Gl 63P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V18717L264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V 154EG156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, ( '.023Q/I-056K/1V75Q/D 130A/V154I/1.264R, G023Q/F051T/D130A/V 187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187FI/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D 130A/V154I/G156W, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/DI 11A/V154W 187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V 154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V 187N, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D111A/D130 A/V 154PG156W/V187T/T189Q,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154FV187Q, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130 A/V1541, A018K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156 W /V187N,

AO 18 K/K024A/D 130A/V154PG156W/V187T/L264R,

AO 18 K/K024A/L075Q/D 130A/V154I/G156W/V187T,

A018 K/K024A/T .075Q/V077T/N094R/D130 A/G156W, A018K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R.

D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R,

D048Q/D13 O A/D 137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Vl 87N/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/F056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077FN094R/D130A/G156 W/V187N, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, N011K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W/T189Q,

AOl 8 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/V154I/G156W, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/V077T/N094R/D130A/G156W, AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130 A/G156 W, D027E/D048Q/D 130 A/D 137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130 A/V1871FI252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130 A/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111 A/V 154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/Vl 87T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156 W/V 187N/T189Q, G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

AO18K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

D027Q/F051T/S058M/F075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

G023K/K024A/F075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/F264R,

G023Q/F051T/S058M/F075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

NO 11K/G023K/F075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/H135F/G156W/Y187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/E075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/D 130A/V154I/V187T/T189Q,

N011K/G023Q/E056K/E075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/E264R,

AO 18K/G023K/E075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/E264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049Y/S058M/N073S/E075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/E075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 4-6: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de termoestabilidad en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

A018K/E075D, D027E/G163P, E045F/N073R, E227M/F264R, A018K/E045F/V187T, A018K/E075D/T189D, G163P/E227M/E264R, E075R/V187N/F264R, A018K/E045F/A049V/G156W, D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/G163P/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F, D048Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023Q/L075Q/D130A/L264R, L075G/G091Q/V187N/L264R, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R,

AO 18K/D027S/E045F/L075D/T189D, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q,

G023Q/L075Q/D 130A/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q, 1)02717D048Q/D 130A/I) 13711/G163P/F2Ó4R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/FÜ51T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/E051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D 130A/V154I/Í.264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/Í 227M/F264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187II/I252Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, GÜ23Q/D027S/SÜ58M/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051Í/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/Vl 87H/I252Q/L264R, N011K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W/T189Q,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091Q/V187T/L264R,

G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

A018K/G023K/K024A/V077PD130A/V154PG156W/V187T/T189Q,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

NO 11K/AO18 K/C1023 K/K024A/í .075 R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D

EJEMPLO 5

Estabilidad detergente de variantes combinatorias de TLL

[0244] La estabilidad detergente de las variantes de TLL creadas tal y como se describe en el ejemplo 2 fue analizada tal y como se describe en el ejemplo 1 (ensayo de estabilidad detergente). Se calculó el índice de rendimiento para las variantes en comparación con TLL, SeQ ID NO:1 o la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

Tabla 5-1: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 en el ensayo de estabilidad detergente.

A018K/D027S, A018K/L075Q, A018K/T189D, D027E/G163P, D027N/E056K, D027N/N233Q,

D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/T189Q, D130A/V187N, G023K/D130A,

G023Q/L075Q, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, L075Q/G156W, N011K/D027S,

N073R/L075D, N094R/G156W, P029E/N033D, A018K/A049V/L075Q, A018K/A049V/V187T,

AO18K/D027S/E045F, A018K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, A018K/E045F/T189D,

A018K/E045F/V187T, A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/L075Q, A018K/G023Q/L075Q,

AO 18K/K024A/V1541, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T, A018K/N033D/T189D,

A018K/N073R/L075D, A018K/V154I/G156W, A049V/L075Q/T189D, A049V/V187T/T189D,

D027E/S058M/G163P, D027N/N233Q/P256T, D027N/S058M/P256T, D027Q/N233Q/P256T,

D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/N073R/L075D,

D027S/N233Q/P256T, D027S/S058M/P256T, D111A/D130A/L264R, D130A7T189Q/L264R,

D130A/V154PG156W, D130A/V187T/L264R, E045F/L075D/T189D, E045F/N073R/L075D,

E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/V187N/L264R,

G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/L264R, G023Q/D130A/G156W,

G023Q/E056K/L075R, G023Q/K024A/G156W, G023Q/L075Q/V187T, I090F/N233Q/P256T,

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AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154RV187Q,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/G156W,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO 18 K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023K/E075Q/V077I/N094R/V1541/G156W,

AO 18 K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156 W/V187T,

AO 18 K/G023Q/E045F/L075Q/Gl 56W/V187T/T189D,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077ED130 A/G156 W, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077EN094R/V1541, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W,

AO 18 K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156 W/V 187N, A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q,

AO 18K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, A018K/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/G156W, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F0511/L075G/D130A/V187H/1252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, F051T/L075 G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/FÜ51T/LÜ75G/D13ÜA/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023K/F051T/L075Q/G091 Q/D 130 A/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D 111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/D 130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/V077ED130A/G156W/V187Q, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023K/F075Q/D111 A/Dl 30A/V154T/G156W/Í 264R, G023K/L075Q/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V187T/L264R, G023K/L075R/N094R/V1541/G156 W/V 187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E045F/A049V/V077I/G156W/V187T/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077EG156W/V187T7T189D, G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D 130A/V1541/G 156 W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077ED130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077ED130 A/V154I/G156W, G023Q/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/Í .264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156 W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156 W/V187Q, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/Í .264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027S/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154PV187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, N011K/G023Q/L075Q/V154FV187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018 K/G023K/K024A/L075Q/D 13 O Y /V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/E075Q/V077T/D130AAG 54T/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077FD130A/V1541/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, AO18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130 A/G 156 W, AO18 K/G023Q/L075Q/V077I/D130 A/V154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/V154I/G156W, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130 A/V 187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187T/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V 154I/G156W/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/FÜ51T/SÜ58M/GÜ91 Q/D 13ÜA/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D 111A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W7T189Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130 A/V154FG156 W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/V154FV187N, G023Q/L075Q/D 111A/D130 A/V 154I/G156 W/V 187N/L264R, G023Q/E075Q/N094R/D111 A/Dl 30A/G156W/T189Q/Í 264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187Q, G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/G023K/D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

NO 11K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/D027S/N094R/V154FG156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154FG156W/V187N, AO 18 K/ G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154FG156W/V187N, A018K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, AOl 8 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130 A/V154I/G156W/V187N,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/l) 130A/V154I/G1^{56W /L 264 R,} G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091Q/V187N/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091 Q/V 187H/I252Q,

G023K/E056K/L075Q/D 111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023K/L075Q/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154FG156W/V187N/L264R,

G023Q/E056K/L075Q/D 111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/V154EG156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130 A/V154I/G156 W/V187T/T189Q,

AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/E075Q/R108K/V187T/T189D,

AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D,

AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V0771/D130A/V1541/V187T/T189Q, N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/Í .264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049V/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10 8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

Tabla 5-2: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de estabilidad detergente en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

D027E/G163P, D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/V187N, K024A/V154I,

N094R/G156W, P029E/N033D, A018K/A049V/V187T, A018K/E045F/V187T, A018K/K024A/V154I,

Aü 18K/NÜ33D/T189D, A018K/V154I/G156W, D027E/S058M/G163P, D027N/SÜ58M/P256T,

D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/S058M/P256T,

D111A/D130A/L264R, D130A/V154I/G156W, D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/L264R,

G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/V187N/E264R. G023K/V187T/L264R,

G023Q/A049V/T189D, G023Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/G156W, I090F/N233Q/P256T,

K024A/D130A/V1541, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T,

NO 11K/N233Q/P256T, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, Q004D/D027S/P256T,

Q004D/S058M/N233Q, V187N/T189Q/L264R, A018K/D027S/P029E/T189D,

A018K/D111 A/Gl 56W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W,

A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/V077I/G156W,

A018K/K024A/D 130A/G156W, A018K/E075Q/V077I/N094R. A018K/N033D/L075D/T189D,

D027E/D137Q/G163P/L227M, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T,

D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D,

D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D,

D111 A/D 130A/V154I/G156W, D111 A/D 130A/V187T/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T,

E045F/L075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q,

G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R,

G023K/D130A/V187T/T189Q, G023 K/K024A/V 1541/V187N. G023K/L075R/D130A/L264R,

G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/F051T/I252Q/L264R,

G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W,

G023Q/K024A/V077I/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R,

K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, NO 11K/D027Q/S058M/P256T,

N011K/D027S/N233Q/P256T, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T,

Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T,

Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/L075Q/G091Q/I252Q,

A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023K/D130A/V154I/G 156W.

A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, AO18K/G023K/K024A/D130A/Y1541, AO18K/G023K/V077I/D130A/V187N, AO 18K/G023Q/K024A/D130A/V187Q,

AO 18K/G023Q/K024A/L075Q/G 156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I,

AO 18K/K024A/N094R/G156W/V187T, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E045F/A049V/F075Q/V 187T/T189D, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, E051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, E051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/E075R/V 187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/F075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/F075R/D130A/V187N/E264R, G023K/L075R/D13ÜA/V187T/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156 W/V187Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T,

NOl 1K/G023K/D111A/G156W/L264R, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, AO18K/G023K/K024A/V077PG156 W/V187 Q, AO18K/G023K/Í ,075Q/V077I/G 156W/V187Q, AO18K/G023Q/A049V/G156W/V 187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/K024A/V077I/V154I/V187N, AOl 8K/G023Q/K024A/V1541/G156W/V 187Q, AOl 8K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl 8K/K024A/Í .075Q/N094R/V154T/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, E051T/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/F075Q, G023K/D027S/F075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/F075R/V187N/I252Q/F264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/E264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187N/E264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187T/F264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/F264R, G023K/F051T/F075Q/D130A/I252Q/F264R, G023K/K024A/F075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V1541/G156W/V 187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V1541/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/E264R, G023Q/D027S/F051T/E075Q/V187T/E264R, G023Q/D027S/E075G/D130A/V187H/E264R, G023Q/D027S/F075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V1541/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/F051T/F075Q/D130A/V187II/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154FG156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D 130A/G156W/V 187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/F075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/F075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/F264R, K024A/F075Q/D111A/V1541/V187N/T189Q, K024A/F075Q/N094R/D130A/V154I/F264R, K024A/F075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, F075Q/G091 Q/D 13 O A/V 187H/I252Q/F264R, NOl 1K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, AOl 8K/D027S/P029E/N033D/N073R/F075D/T189D, Aül 8K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/L075Q/V077PN094R/V154I/G156W,

AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AOl 8K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T,

AO18 K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W,

D027Q/F051T/E075Q/D 130A/V187T/I252Q/E264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/E264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/E264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/F264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/F227M/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/E227M/N233Q/F264R,

F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/E264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Vl 87N/I252Q,

G023K/D027S/F051T/S058M/F075 Q/D 130A/V187N, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

G023Q/D027S/S058M/F075Q/D130A/I252Q/F264R, G023Q/E056K/F075R/D111A/D130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130 A/V 187H/I252Q/F264R,

G023Q/F051T/F075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/E264R,

G023Q/F075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

G023Q/L075Q/V0771/N094R/D130 A/G156W/V187N,

G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/E264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T,

NOl 1K/G023Q/L075Q/V154PV187N/T189Q/L264R,

Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130 A/G156 W,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/V 187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

NO 11K/G023K/F075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

NO 11K/AO18 K/G023K/K024A/F075R/V077PD130A/V154I/V187T/T189Q,

N011K/G023Q/E056K/E075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156 W/V 187N/Í .264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 5-3: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de estabilidad detergente en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

D027S/P256T, K024A/V154I, A018K/A049V/V187T, A018K/K024A/V154I, A018K/V154I/G156W, D027N/S058M/P256T, D027S/S058M/P256T, G023Q/A049V/T189D, L075Q/V187N/L264R, N011K/N233Q/P256T, P029E/N033D/E045F, Q004D/D027S/P256T, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/V077I/G156W, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/N033D/E045F/T189D, DI 11A/D130A/V154I/G156W, E045F/F075Q/G156W/V187T, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/K024A/V154I/V187N, G023Q/A049V/V077I/G 156W, G023Q/K024A/F075R/G156W, K024A/D130A/V 154I/V187T, N011K/D027Q/S058M/P256T, NOl 1K/D027S/N233Q/P256T, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, AO18K/G023K/K024A/D130A/G156W, AO18K/G023K/K024A/D130A/V1541,

AOl 8K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, GÜ23K/E056K/LÜ75R/D130A/V187T, G023K/E056K/E075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/E075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/F075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075QA/077I/D130A/G156W, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

NOl 1K/D027N/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T,

NOl 1K/G023K/D111A/G156W/L264R, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/G163P/F227M/N233Q/F264R, V077I/D130A/V154I/G15ÓW/V187N,

AO 18K/G023K/K024A/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/F075Q/V077I/G156W/V187Q, AO 18K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/V077I/V1541/V187N, AO 18K/G023Q/K024A/V154I/G156 W/V187 Q, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/F075Q/N094R/V1541/G156W, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187T/F264R, G023K/K024A/F075Q/D111A/D130A7T189Q, G023K/K024A/F075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/F075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/E264R, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/F075Q/D130A/V154PF264R, G023Q/K024A/D130A/V154FG156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, K024A/F075Q/D111 A/V 1541/V 187N/T189Q, K024A/F075Q/N094R/D130A/V154I/F264R, K024A/F075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, NOl 1K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/F075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/F075Q/N094R/V1541/V 187Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/F075R/N094R/D130A/V1541,

AO 18 K/ G023K/E075Q/V077PN094R/V154I/G156 W,

AO 18 K/K024A/E075Q/D 130A/V154I/G156W/V187T,

G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Vl 87N/I252Q,

G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077PD130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G 156W/V187N/E264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 5-4: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2 en el ensayo de estabilidad detergente

A018K/D027S, A018K/L075D, A018K/L075Q, D027E/G163P, D027N/E056K, D027N/N233Q, D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/L264R, G023K/D130A, G023Q/L075Q, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, L075Q/G156W, N073R/L075D, P029E/N033D, A018K/A049V/L075Q, A018K/A049V/V187T, A018K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, A018K/E045F/T189D, A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/L075Q, A018K/G023Q/L075Q, A018K/K024A/V1541, A018K/L075D/T189D, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T, A018K/N033D/L075D, A018K/N033D/T189D, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154PG156W, A049V/L075Q/T189D, A049V/V187T/T189D, D027E/S058M/G163P, D027N/N233Q/P256T, D027N/S058M/P256T, D027Q/N233Q/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/N073R/L075D, D027S/N233Q/P256T, D027S/S058M/P256T, D130A/V187T/L264R, E045F/L075D/T189D, E045F/N073R/L075D, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/V187N/L264R, G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/E056K/L075R, G023Q/L075Q/V187T, I090F/N233Q/P256T, K024A/L075Q/G156W, K024A/L075Q/V077I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W/T189D, L075Q/G156W/V187N, L075Q/G156W/V187T, L075Q/V077PT189D, L075Q/V154PV187T, L075Q/V187N/L264R, L075Q/V187T/T189D, L075R/D130A/V187T, N011K/D027S/S058M, N011K/N233Q/P256T, N033D/E045F/L075D, N033D/N073R/T189D, N073R/L075D/T189D, N094R/D130A/V187T, P029E/E045F/L075D, P029E/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/L075D, P029E/N073R/L075D, Q004D/D027S/P256T, S058M/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I, A018K/A049V/L075Q/T189D, A018K/D027S/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D, AO18K/D027S/P029E/T189D, AO18K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/T189D, AOl8K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I, AOl8K/G023Q/L075Q/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, AOl8K/G023Q/V077I/G156W, AOl8K/G023Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/V187T/T189D, A018K/L075Q/G156W/T189D, A018K/L075Q/G156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A, A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/N073R/L075D/T189D, A018K/P029E/N033D/L075D, A018K/P029E/N033D/T189D, A018K/V154I/G156W/V187T, A049V/l.075Q/V077I/T1891), A049V/l.075Q/V187T/T1891), D027E/D137Q/G163P/L227M, D027N/E056K/N233Q/P256T, D027N/E056K/S058M/P256T, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/E056K/I090F/P256T, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/L075D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D027S/P029E/N033D/N073R, D027S/P029E/N033D/T189D, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V 154I/L264R, E045F/L075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/E264R, E056K/E075Q/V187N/E264R, F051T/E075Q/1252Q/E264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D027S/L075Q/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075Q/G156W/L264R, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/A049V/L075Q/T189D, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, G023Q/E051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R. G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/L075RA?154I, G023Q/K024A/V077I/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/G156W/V187N, G023Q/L075Q/G156W/V187T, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G023Q/V154EG156W/V187N, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V1541, K024A/ÍD75Q/V187T/T189Q, K024A/L075 R/G156W/V 187N, L075G/D130AA ^187T/I252Q, L075G/G091 Q/Vl 87N/L264R, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V1541/G156W, L075Q/G156W/V187T/L264R, L075Q/V0771/D130A/V187Q, L075QA/077I/G156WA^187N, 11)75Q/V077I/N094R/G 156W, L075Q/V077I/V154PV187Q, L075QA/077FV187T/T189D, L075R/D111A/V154PG156W, ID75R/I) 130A/V154I/E264R, N011K/D027N/E056K/S058M, N011K/D027Q/S058M/P256T, N011K/D027S/E056K/P256T, NO 11K/D027S/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/S058M/N233Q, NOl 1K/E056K/N233Q/P256T, NOl 1K/G023K/L075Q/D111A, NOl 1K/S058M/N233Q/P256T, P029E/E045F/F075D/T189D, P029E/E045E/N073R/L075D, P029E/N033D/E045F/F075D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/D027S/I090F/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/F264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/A049V/L075Q/V187T/T189D, A018K/D027S/N033D/F075D/T189D, A018K/D027S/N033D/N073R/T189D, AO18K/D027S/P029E/E045F/T189D, AO18K/D027S/P029E/N033D/L075D, AO18K/D027S/P029E/N073R/L075D, AO18K/E045F/A049V/L075Q/T189D, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W,

AOl 8K/G023K/K024A/D130A/V1541, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R,

AO 18K/G023K/L075Q/D130A/V1541, AO I8K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/A049V/L075Q/G156W, AOl 8K/G023Q/A049V/F075Q/V187T,

AO 18K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, AO 18K/G023Q/K024A/D130A/V1541,

AO 18K/G023Q/K024A/L075Q/G 156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, AOl8K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, AO 18K/G023Q/V077I/V187T/T1891), AOl8K/K024A/L075Q/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V154I/T189D,

AO 18 K/K024A/L075R/D13 O A/V1541, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T,

AOl 8K/T,075Q/G 156W/V187T/T189D, A018K/E075Q/V0771/N094R/G156W, A018K/V077I/G156W/V187T/T189D, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/L227M/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/Gl63P/N233Q, D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/I090F/N233Q/P256T, D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D, D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/D130A/V187H/1252Q/L264R, E056K/L075Q/G156W/T189Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, E056K/N094R/G156W/V187N/L264R, E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/F264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/D111A/V154I/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/H056K/E075R/V 187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/V154FT189Q, G023K/L075Q/V077FD130A/G156W, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, GÜ23K/L075R/D130A/V187T/L264R, GÜ23K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/T189D, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/A049V/L075Q/V187T/T189D, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, G023Q/D027S/V154I/V187N/L264R, G023Q/E045F/A049V/G156W/T189D, G023Q/E045F/L075Q/G156W/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077FV187T, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/V077I/V187Q, G023Q/K024A/L075R/D 130A/V1541, G023Q/K024A/L075R/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, G091Q/D130A/V187FT/T252Q/E264R, K024A/E075Q/D111 A/Gl 56W/V187T, K024A/L075Q/V077I/G156W/V 187N, K024A/L075Q/V077I/V154FV187N, K024A/L075R/D111A/V154I/V187T, K024A/L075R/G156W/V187N/T189Q, K024A/L075R/V154FG156W/V187Q, L075Q/D111A/V187N/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, L075Q/V154FV187N/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/G156W/V187T/T189Q/L264R, L075R/V077I/N094R/V154I/G156W, N011K/D027N/E056K/N233Q/P256T, N011K/D027N/E056K/S058M/P256T, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, N011K/D027Q/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027Q/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/N233Q/P256T, N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T, 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AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/V1541/V187Q,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/G156 W,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075R/N094R/D13 O A/V 1541,

A018K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

A018K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/E045F/L075Q/G156W/V187T/T189D, AO18K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W, AOl 8K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/V154I, AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, AO 18 K/K024A/L075Q/D130 A/G156W/V187T/T189Q, AO 18 K/K024A/L075Q/D 130 A/V154PG156 W/V187T, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q, D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, D027S/F051 T/P075G/G091Q/V187T/T252Q/F264R, D027S/F051T/S058M/F075R/D130A/I252Q/F264R, D027S/F075R/V154I/G156W/V187N/T189Q/F264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/F264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/F227M/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/F227M/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R, E056K/F075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, F051T/F075 G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/F264R, F051T/F075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R, G023K/D027Q/F051T/F075G/D130A/V187H/F264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/F075Q/D 130A/V187N, G023K/D027S/F075Q/N094R/V154PG156W/T189Q, G023K/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q, G023K/K024A/F075Q/D 111A/D130A/T189Q/F264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/V077ED130 A/G156 W/V187Q, G023K/K024A/N094R/V 154I/G156W/V187N/T189Q, G023K/L075Q/D 111A/D130 A/V154I/G156W/L264R, G023K/L075Q/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D 130 A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/V 154I/G156W/V187T/L264R, G023K/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E045F/L075Q A/077I/G156 W/V187T/T189D, G023Q/E056K/L075Q/D 111 A/G 156 W/V 187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D 130 A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/Vl 87H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077FD130 A/G 156 W/V 187N, G023Q/K024A/E075Q/V077T/D130A/V154T/G156W, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D 111 A/D 130 A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G 156 W/V 187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G 156 W/V 187Q, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D 111 A/D 130 A/V154I/G156 W/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111 A/D 130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/A018K/K024A/V077FV154FG156W/T189Q, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154FV187N/T189Q, NO 11K/ G023K/L075Q/D 111A/D130A/V154I/V187N, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/V077LD130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/G156W, AOl 8K/G023K/L075Q/V077FD130A/V154I/G156W/V187N, AOl 8K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077LD13 O A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, AO18 K/G023Q/L075Q/V077I/D130 A/V154I/G156 W/V187N, D027E/D048Q/D130 A/D137 Q/Gl 63P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137 Q/Gl 63P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130 A/V 187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/L264R, G023K/K024A/E075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/E264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V154I/G156W/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D111A/V154PG156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187N/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111 A/V 154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/Vl 87T/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/1252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077PD130A/V154I/G156 W/V 187N, G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V1541/V 187N, G023Q/L075Q/D111A/D130 A/V154I/G156 W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111 A/Dl 30A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187Q, G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/G023K/D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

NO 11K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I7G156W/T189Q, N011K/G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, AO 18K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V1541/G156W/V187N, AO 18K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130 A/V 154I/G156 W/V 187N, D027Q/F051T/S058M/E075G/G091 Q/D 130A/V187T/T252Q/T .264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/l) 130 A/V 154I/G156W/E264R. G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091 Q/V 187N/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130 A/V 154I/G156 W/V 187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D 111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/G023K/D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111 A/V 154I/C ¡ 156 W/V 187N/T189Q/Í V64R, NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

AO18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q,

NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/I) 130A/V154I/V187T/T189Q,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/F264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T,

N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D

Tabla 5-5: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de estabilidad detergente en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

A018K/L075D, D027E/G163P, D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/L264R, K024A/V154I, P029E/N033D, A018K/A049V/V187T, A018K/K024A/V154I, A018K/L075D/T189D, A018K/N033D/T189D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, D027E/S058M/G163P, D027N/S058M/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D7T189D, D027S/S058M/P256T, D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/V187N/L264R, G023K/V187T/E264R, G023Q/A049V/T189D, I090F/N233Q/P256T, E075G/D130A/V187II, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T, N011K/N233Q/P256T, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, Q004D/D027S/P256T,

AO 18K/D027S/P029E/T189D, A018K/D111A/G156W/T189Q, AO 18 K/l) 130A/G156W/V187'E A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/G023K/D111 A/Tl89Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/N033D/L075D/T189D, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, DI 11A/D130A/V154EG156W, E045F/L075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/K024A/V 154I/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/V077EG156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V 187T/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/G091Q/V187N/L264R, NOl 1K/D027Q/S058M/P256T, NOl 1K/D027S/N233Q/P256T, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T. Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/F264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, S058M/F075Q/I252Q/F264R, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, AO18K/G023K/K024A/D130A/V1541, AO18K/G023K/V077I/D130A/V187N, AOl8K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, DÜ27S/EÜ56K/D111A/V187N/F264R, D027S/E051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, F051 T/r.075Q/V 187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/F075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/F056K/V 187T/F264R, G023K/E056K/D130A/V187N/F264R, G023K/E056K/D130A/V187T/E264R, G023K/F056K/F075R/D130A/V187T, G023K/F056K/F075R/V187N/F264R, G023K/E056K/F075R/V187T/F264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V1871.

G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/E075Q/V077LD130A/G156W, G023K/F075Q/V187H/I252Q/E264R, G023K/F075R/D130A/V187N/F264R, G023K/F075R/D130A/V187T/F264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/F075G/I252Q/F264R, G023Q/F051T/F075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/F075Q/G156W/V187Q, G023Q/E075G/G091Q/I252Q/E264R, G023Q/F075Q/D130A/I252Q/E264R, G023Q/F075Q/G091Q/I252Q/F264R, G023Q/F075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/F075R/V154I/G156W/V187Q,

NOl 1K/D027N/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T, N011K/G023K/D111A/G156W/E264R, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/F264R, S058M/D130A/G163P/E227M/F264R, S058M/G163P/F227M/N233Q/F264R, V077I/1) 130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/V0771/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/V077VG156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/V077I/V154FV187N, A018K/G023Q/K024A/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18K/K024A/E075Q/N094R/V154I/G156W, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/F264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/Gl63P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/E051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V 187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/GÜ91 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/LÜ75G/GÜ91 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/L264R, G023K/F051T/F075Q/D 130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/F075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/F075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/F264R, G023Q/D027S/F051T/F075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/F075G/D130A/V187H/F264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154FF264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/F264R, G023Q/F051T/F075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/F075Q/D130A/V187H/T252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/F075G/G091 Q/D 130A/I252Q/F264R, G023Q/F075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, K024A/F075Q/D 111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/F075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/F075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, F075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, N011K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/F264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/F264R, S058M/D130A/G163P/F227M/N233Q/F264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/F075D/T189D, A018K/D111A/D130 A/V 154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/F075Q/N094R/V154FV187Q,

AO18 K/ G023K/K024A/F075R/N094R/D13 O A/V 1541, A018K/G023K/F075Q/V077I/N094R/V154I/G156W,

AO 18 K/K024A/F075Q/D 130A/V154FG156W/V187T, D027E/D048Q/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R,

D027E/D048Q/S058M/D13 O A/D 137Q/G163 P/E264R,

D027E/D048Q/S058M/D130 A/Gl 63P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130 A/Gl 63P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Vl 87N/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/Dl 30A/V187H/T252Q/E264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077PN094R/D130A/G156 W/V187N, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, N011K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W/T189Q, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077LD130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D 130 A/D 137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/DÜ48 Q/SÜ58M/D137 Q/Gl 63P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130 A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

AO18K/G023K/K024A/V077ED130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G 156W/V187N/E264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 5-6: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de estabilidad detergente en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

D027S/N033D, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, E056K/D130A/L264R,

G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/V187N/L264R, G023K/V187T/L264R,

L075G/D130A/V187H, A018K/D027S/P029E/T189D, D027Q/E056K/N233Q/P256T,

D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D,

D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, E056K/D130A/V187T/L264R,

G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/K024A/V154I/V187N,

G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q,

P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T,

A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R,

G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, (¡023K/L075Q/V077I/I) 130A/G156W. G023K/L075Q/V187II/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R,

G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, A018K/G023K/E075Q/V077I/G156W/V187Q,

D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q,

D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q,

G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D13ÜA/V187N/L264R,

G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R,

G023K/F051T/L075Q/D13OA/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q,

G023K/K024A/L075Q/V154FG156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N,

G023Q/D027S/F051T/L075Q/V 187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R,

G023Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q,

G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, NO 11K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T,

Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/ID75Q/V077T/N094R/V154T/G156W,

D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

D027S/F051T/S058M/T ,075R/D130A/T252Q/T 264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D 130A/V187N,

G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, N011K/A018K/K024A/V077I/V154I/G156W/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077FD130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W,

F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130 A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/V 187T/L264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187F1/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154RG156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

NO 11K/AO18 K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q

EJEMPLO 6

Estabilidad de LAS de variantes combinatorias de TLL

[0245] La estabilidad de LAS de las variantes de TLL creadas tal y como se describe en el ejemplo 2 fue analizada tal y como se describe en el ejemplo 1 (ensayo de estabilidad de LAS). Se calculó el índice de rendimiento para las variantes en comparación con TLL, SEQ ID NO:1 o la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

Tabla 6-1: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 en el ensayo de estabilidad de LAS.

A018K/L075Q, A018K/T189D, D027E/G163P, D027N/E056K, D027N/N233Q, D027S/N033D,

D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/T189Q, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/D130A,

G023Q/L075Q, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, L075Q/G156W, N011K/D027S,

N073R/L075D, N094R/G156W, P029E/N033D, A018K/A049V/L075Q, A018K/A049V/V187T,

A018K/D027S/E045F, A018K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, A018K/E045F/T189D,

A018K/E045F/V187T, A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/L075Q, A018K/G023Q/L075Q,

A018K/K024A/V 1541, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T, A018K/N033D/T189D,

A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154PG156W, A049V/V187T/T189I),

D027E/S058M/G163P, D027N/N233Q/P256T, D027N/S058M/P256T, D027Q/N233Q/P256T,

D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/N073R/L075D,

D027S/N233Q/P256T, D027S/S058M/P256T, D111A/D130A/L264R, D130A/V154I/G156W,

E045F/L075D/T189D, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/V187N/E264R,

G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D130A/G156W, G023Q/E056K/L075R,

G023Q/K024A/G156W, G023Q/L075Q/V187T, I090F/N233Q/P256T, K024A/D130A/V154I,

K024A/L075Q/G156W, K024A/L075Q/V077I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A,

L075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W7T189D, L075Q/G156W/V187N, L075Q/G156W/V187T,

L075Q/N094R/V154I, L075Q/V077I/T189D, E075Q/V154I/V187T, L075Q/V187N/L264R,

L075Q/V 187T/T189D, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N011K/D027S/S058M,

N011K/N233Q/P256T, N033D/E045F/L075D, N033D/N073R/T189D, N073R/L075D/T189D,

N094R/D130A/V187T, P029E/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/L075D,

P029E/N073R/L075D, Q004D/D027S/P256T, Q004D/S058M/N233Q, V077PD130A/V154I,

V077I/V187A/T189D, A018K/A049V/L075Q/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/D111A/G156W/T189Q, AO18 K/l) 130A/G156W/V187T,

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AO18 K/D027S/P029E/E045F/T189D, AO18K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D, A018K/E045F/A049V/L075Q/G156W, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, AOl8K/G023K/K024A/D130A/V1541, AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R, AOl8K/G023K/L075Q/D130A/V154I, AOl8K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/A049V/L075Q/G156W, AOl8K/G023Q/A049V/Í.075Q/V077I, AOl8K/G023Q/A049V/L075Q/V187T, A018K7G023Q/A049V/V077I/V187T, AOl8K/G023Q/E045E/A049V/L075Q, AOl8K/G023Q/E045E/A049V/V187T,

AO 18 K/ G023Q/E045F/L075Q/V187T, AO 18 K/G023Q/K024A/D13 O A/V1541,

AO 18 K/ G023Q/K024A/D13 O A/V187 Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W,

AO 18K/G023Q/L075 Q/G 156W/V187T, AO 18 K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/V077I/V187T/T189D, A018K/K024A/E075Q/V154I/G156W,

AO 18K/K024A/L075Q/V 154ET189D, AOl8K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/K024A/N094R/G156W/V187T,

AO 18K/L075Q/D111 A/D 130A/V187T, A018K/L075Q/G156W/V187T/T189D, AOl8K/L075Q/N094R/D130A/V187N, AOl8K/E075Q/N094R/G156W/V187N,

AO 18K/L075Q/V077I/N094R/G156 W, AOl 8K/V077I/G156W/V187T/T189IX D027E/D048Q/D137Q/E227M/E264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/E264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/Gl63P/N233Q, D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027Q/E056K/I090F/N233Q/P256T, D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/E056K/D111A/V187N/F264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/F075R/V154I/T189Q/F264R, D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/F075D, D027S/P029E/N073R/F075D/T189D, D048Q/S058M/G163P/N233Q/F264R, D130A/G163P/F227M/N233Q/F264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/D130A/V187H/I252Q/F264R, E056K/L075Q/G 156W/T189Q/E264R, E056K/L075R/D130A/V187I7L264R, E056K7N094R/G156W/V187N/L264R, F051T/S058M/F075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/D111A/V154I/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/F056K/F075R/D130A/V187T, G023K7E056K/L075R/V 187N/E264R, ( Í023K/IX156K/10)75R/V187 I /IA64R, G023K/K024A/D 111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/K024A/L075R/D13OA/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156 W, G023K/L075Q/V187II/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R. 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A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, AO 18K/G023K/K024A/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/K024A/V077PG156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V077FG156W, A018K/G023Q/A049V/F075Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/G156W/V187T, AOl 8K/G023Q/E045F/A049V/F075Q/T189D, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V0771, A018K/G023Q/E045F/A049V/F075Q/V187T, A018K/G023Q/E045F/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/F075Q/G156C/V187T, A018K/G023Q/E045F/F075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/K024A/F075R/N094R/G156W, AOl8K/G023Q/K024A/V077I/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/F075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/F075Q/V077I/D130A/G156W, AO18K/G023Q/F075Q/V077I/D130A/V187N, AO18K/G023Q/í i)75Q/V0771/G156W/V187N, A018K/G023Q/F075Q/V077I/N094R/V154I, A018K/G023Q/L075Q/V077FV187T/T189D, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/F075Q/N094R/V1541/G156W, AOl8K/K024A/F075Q/N094R/V154I/V187N, A018K/K024A/F075Q/V077I/D130A/V187N, AO 18 K/K024A/F075R/D13 O A/V 187N/T189Q, AO 18K/1.075Q/I) 1 I IA/VI54I/GI56W/VI87N, AO 18 K/F075R/D13 O A A/ 154I/G156W/V187N, A018K/N033D/E045F/N073R/L075D/T189D, AO 18K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D13OA/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/G156W/V187N/T189Q, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/F227M/F264R, DI 11A/D130A/V154I/G156W/V187N/F264R, F051T/F075G/G091Q/D130A/I252Q/F264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/F075Q, G023K/D027S/F075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/F075R/V187N/I252Q/F264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/T189Q/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187N/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V 187T/F264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V 187H/F264R, G023K/K024A/F075Q/D 111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/F075Q/G156W/V187T/T189Q, G023K/K024A/F075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/F075Q/V154FG156W/V187Q, G023K/K024A/F075R/D130A/V154I/V187N, G023K/F075Q/D111 A/D 130A/V154I/V187N, G023K/F075Q/N094R/V154I/V187T/F264R, G023K/F075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/F264R, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, G023Q/D027S/F051T/F075Q/V187T/I252Q, G023Q/D027S/F075G/D130A/V187H/F264R, G023Q/D027S/F075Q/D 111A/G156W/F264R, G023Q/D027S/F075R/D111 A/Vl87N/F264R, G023Q/D027S/N094R/V154FG156W/P189Q, G023Q/F045F/F075Q/V0771/G156W/V187T, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/F264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V154FG156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154RG156W, G023Q/L075Q/D111A/V154I/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, G023Q/L075R/V154FG156W/V187N/L264R, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/V154FV187N/T189Q, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D 130A/V187N, K024A/L075Q/V154I/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, K024A/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D13ÜA/V154I/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/D027N/E056K/I090F/N233Q/P256T, NO 11K/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, NO 11K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027Q/S058M/I090F/N233Q/P256T, NO 11K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023K/D027S/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/Y187N/T189Q, P029E/N033D/K074S/L075D/N101D/T189D, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, Q004D/N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/r .075D/T189D, AO18K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V 187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154FV187Q,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156 W,

AO 18 K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156 W/V 187T,

AO 18 K/G023Q/E045F/L075Q/Gl 56W/V187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W^/187T,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077ED130 A/G156 W,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077EN094R/V1541, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/VI54I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D13 O A/G 156 W,

A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, AO18 K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q, AO18 K/K024A/L075Q/D 130 A/V154I/G156 W/V187T, D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q, D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Vl 87N/I252Q, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/4189Q, G023K/F051T/E056K/L075R/D130 A/V 187T/I252Q, G023K/F051T/L075Q/G091 Q/D 130 A/V 187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D 111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/D 130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/V077ED130A/G156W/V187Q, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/L264R, G023K/F075Q/D111 A/Vl 54T/G156W/T189Q/Í 264R. G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V 187T/L264R, G023K/L075R/N094R/V154I/G156 W/V 187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E045F/A049V/V077I/G156W/V187T/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077FG156W/V187T/T189D, G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D 130A/V154I/G156 W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077ED130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077J/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D 130 A/V154EG156W/T189 Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154EV187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156 W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156 W/V187Q, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/Í .264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111 A/D 130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V 154I/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N,

NO 11K/G023Q/L075Q/V1541/V187N74189Q/L264R, Q004D/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018 K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077FD130A/V154I/G156W, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/E075Q/V077T/D130A/V154T/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I7G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130 A/G 156 W, AO 18 K/G023Q/L075Q/V077I/D130 A/V154I/G 156 W/V 187N, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130 A/V 187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V 187 F/L264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V154FG156W/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D111 A/V 154FG156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187N/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/ G091Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130 A/V154I/G156 W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D11IA/G156W/T189Q/E264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154FG156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130 A/V 154I/V187N, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/GI56W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, N011K/G023K/D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

NO 11K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q,

NO 11K/G023Q/D027S/N094R/V154I/G156 W/T 189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/F 075Q/N094R/D111 A/Dl 30A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H, AO18K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/II135F/G156W, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, AO 18K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/1.264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091Q/V187N/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091 Q/V 187H/1252Q, G023K/D027S/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154EG156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/Í.264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/D027S/E056K/L075R/D111 A/Gl 56W/V187N/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154EV187N/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/Í .264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130 A/V 154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

AO18 K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075 Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/V187T/T189D,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/D130 A/V 154EV187T/T189Q,

NOl 1K/G023K/L075R/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/E264R,

NOl 1K/G023Q/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/E264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T,

NOl 1K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049V/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10 8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

Tabla 6-2: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de estabilidad de LAS en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

D027E/G163P, D027S/N033D, D027S/P256T, D111A/L264R, D130A/V187N, D130A/V187T, K024A/V154I, N094R/G156W, P029E/N033D, A018K/A049V/V187T, A018K/E045F/V187T, AO18K/K024A/V 1541, A018K/N033D/T189D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, D027E/S058M/G163P, D027N/S058M/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/S058M/P256T, D111A/D130A/L264R, D130A/V154I/G156W, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/V187N/L264R, G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/G156W, I090F/N233Q/P256T, K024A/D130A/V1541, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N011K/N233Q/P256T, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, Q004D/D027S/P256T, Q004D/S058M/N233Q, AOl 8K/D027S/P029E/T189D, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/V077I/G156W, AO 18K/K024A/D130A/G156W, AOl 8K/L075Q/V077I/N094R, AOl 8K/N033D/L075D/T189D, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D137Q/G163P/L227M, D111A/D130A/V154I/G156W, DI 11 A/D 130A/V187T/L264R, E045F/L075Q/G156W/V187T, E056K/D130A/V187T/L264R, F051T/D13OA/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/K024A/V154I/V187N, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/V077I/G156W, K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, N011K/D027Q/S058M/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023K/D130A/V154FG156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W,

AO 18K/G023K/K024A/D130A/V1541, AOl8K/G023K/V077I/D130A/V187N, AOl8K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, AOl8K/K024A/L075R/D130A/V1541, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N,

AO 18K/K024A/N094R/G156 W/V 187T, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D048Q/G163P/N233Q/E264R, D027F/G163IVÍ 227M/N233Q/Í ,264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154l/(¡ 156W/V187N/T189Q, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056KyV187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075Q/V187II/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/Í.075Q/V077I/D 130A/G156W.

K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T,

NOl 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T, NOl 1K/G023K/D111A/G156W/L264R, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, AO18 K/(¡023 K/K024A/V077I/C i 156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/V077PG156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/K024A/V077I/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/V154PG156W/V187Q, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, AO 18K/N094R/D111 A/D 130A/V154I/V187N, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/1D75R/D130A/T189Q/Í 264R, G023K/I '056K/Í 075R/D 130A/V187N/F264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/Í264R. G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/V1541/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, NOl 1K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/ F189D, A018K/D111A/D130A/V154EG156W/V187T/T189Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154EV187Q,

AO18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AOl 8K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156W,

AOl 8K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V 187N,

AO 18K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N,

G023K/K024A/N094R/V 154I/G156W/V187N/T189Q,

G023Q/D027S/S058M/L075Q/D 130 A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T,

NO 11K/G023Q/L075Q/V154FV187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130 A/G156 W /V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W,

AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156 W,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/E075Q/G091 Q/V 187H/T252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/Vl 87T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/II135F/V187II, D027Q/F051T/S058M/E075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/K024A/E075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/E075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/E075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077PD130A/V1541/V187T/T189Q, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154PG156W/V187N/L264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T Tabla 6-3: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de estabilidad de lAs en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

D027S/P256T, D130A/V187T, K024A/V154I, A018K/A049V/V187T, A018K/E045F/V187T,

A018K/K024A/V1541, A018K/V154I/G156W, D027N/S058M/P256T, D027Q/S058M/P256T,

D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189I). D027S/S058M/P256T, D130A/V154I/G156W,

G023K/D130A/V 187T, G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, I090F/N233Q/P256T,

K024A/D130A/V154I, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, N011K/N233Q/P256T,

N094R/D130A/V187T, Q004D/D027S/P256T, Q004D/S058M/N233Q, A018K/D027S/P029E/T189D,

A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/G023K/D111A/T189Q,

A018K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/K024A/D130A/G156W,

D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/N033D/E045F/T189D,

D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D,

D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D137Q/G163P/L227M, 1)111 A/D130A/V154I/G156W,

E045F/L075Q/G156W/V187T, F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q,

G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/L075R/L264R,

G023K/K024A/V 154I/V187N, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/K024A/D130A/G156W,

G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/V077I/G156W, K024A/I) 130A/V154I/V187T,

N011K/D027Q/S058M/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, Q004D/D027N/E056K/P256T,

Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T,

Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D,

A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/V154T, A018 K/G023K/V( 1771/1)130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V1541, AO18K/K024A/N094R/G156W/V187T, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111 A/Gl56W/T189Q, G023K/1.075Q/V077I/1) 130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075Q/V077FD130A/G156W, K024A/L075R/V154FG156W/V187Q, N011K/D027N/SÜ58M/N233Q/P256T,

NOl 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T, NOl 1K/G023K/D111A/G156W/L264R, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, AOl8K/G023K/K024A/V077FG156W/V187Q, AOl8K/G023K/L075Q/V077I/G 156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, AOl 8K/G023Q/K024A/V077FV154I/V187N, AO18K/G023Q/K024A/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl 8K/K024A/Í.075Q/N094R/V 154I/G156W, AOl8K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V1541/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/F189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V 154FG156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154EL264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/Vl 87N/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, K024A/L075Q/D111A/V1541/V187N/T189Q, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, N011K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, AOl 8K/D111 A/Dl30A/V1541/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AOl 8K/K024A/L075Q/D130A/VI54I/G156W/V187T, G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, N011K/D027N/E056K/S058M/1090F/N233Q/P256T,

NOl 1K/G023Q/L075Q/V 1541/V 187N/T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077PD13 O A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156 W/V 187N/F264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D.

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 6-4: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2 en el ensayo de estabilidad de LAS. D130A/V187T, N011K/D027S, A018K/D027S/N073R, D027N/N233Q/P256T, D027S/L075Q/G091Q, E045F/L075D/T189D, G023K/V187T/L264R, I090F/N233Q/P256T, N033D/E045F/L075D, N033D/N073R/T189D, Q004D/S058M/N233Q, A018K/L075Q/G156W/T189D,

AO 18K/L075Q/V 187T/T189D, A049V/L075Q/V077FT189D, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/L075D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/N033D/N073R, D048Q/D137Q/G163P/L227M, G023K/D027S/L075Q/L264R, G023K/E056K/L075R/L264R, G023Q/A049V/L075Q/V077I, G023Q/D027S/D111A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, N011K/D027Q/S058M/P256T, N011K/E056K/N233Q/P256T, N011K/G023K/L075Q/D111 A, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D 130A/G156W, L075R/D111 A/D 130A/V187N7T189Q, N011K/D027N/E056K/N233Q/P256T, N011K/D027N/E056K/S058M/P256T, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, N011K/D027Q/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027Q/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/N233Q/P256T, N011K/G023K/E056K/L075Q/T189Q, Q004D/D027S/E056K/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/S058M/N233Q, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D/T189D, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/E264R, D027S/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/G156W/V187N/T189Q, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/D130A/T189Q, G023K/E075Q/V077I/D E30A/G156W/VIS7Q, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/I252Q, G023Q/D027S/L075R/D111A/V187N/L264R, G023Q/E056K/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154PL264R, NO 11K/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, NO 11K/D027Q/S058M/I090E/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/G023K/D027S/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, P029E/N033D/K074S/L075D/N101D/T189D, Q004D/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, D027Q/F051T/F075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q,

G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q, G023K/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156 W/T189Q,

G023K/F051T/F075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q,

G023K/F075Q/D 111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/F264R, N011K/F056K/E075Q/D130A/V154T/V187N/T189Q, N011K/G023K/E075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T,

F051T/E056K/E075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/E075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/E075R/D130A/V187T/F264R, G023K/F051T/E056K/E075R/G091 Q/D 130A/V187T/E264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/E075R/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023Q/D027S/F075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/F075Q/R108K/V187T/T189D,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091Q/V187N/L264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q,

G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023K/E056K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/Í .264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091Q/V187N/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/AO18 K/G023K/K024A/L075R/V077FD130A/V154I/V187T/T189Q,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R

Tabla 6-5: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de estabilidad detergente en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

D130A/V187T, D027S/L075Q/G091Q, G023K/V187T/L264R, I090F/N233Q/P256T, Q004D/S058M/N233Q, D027S/N033D/L075D/T189D, D048Q/D137Q/G163P/L227M, G023K/E056K/L075R/L264R, N011K/D027Q/S058M/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/D111 A/D 130A/V187T, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/D130A/T189Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154PL264R, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q,

G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130 A/V187N/I252Q,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

NO 11 K/AO 18 K/G023K/K024A/L075R/V077PD130A/V154I/V187T/T189Q

Tabla 6-6: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de estabilidad de LAS en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

D130A/V187T, G023K/V187T/L264R, I090F/N233Q/P256T, Q004D/S058M/N233Q,

D048Q/D137Q/G163P/L227M, G023K/E056K/L075R/L264R, Q004D/D027Q/N233Q/P256T,

Q004D/N011K/D027S/P256T, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T,

D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R,

D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/Í.264R,

Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q,

F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q

EJEMPLO 7

Adhesión a tejido de variantes combinatorias de TLL

[0246] La adherencia de las variantes de TLL creadas tal y como se describe en el ejemplo 2 a tejido de algodón en una solución de detergente fue analizada tal y como se describe en el ejemplo 1 (ensayo de adhesión). Se calculó el índice de rendimiento para una adhesión mayor o menor para las variantes en comparación con TLL, SEQ ID NO:1 o la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

Tabla 7-1: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

A018K/L075Q, D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/L264R,

L075R/L264R, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/V187T, A018K/G023Q/L075Q,

A018K/K024A/V1541, A018K/L075Q/G156W, A018K/N033D/T189D, A018K/P029E/T189D,

D l l l A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, F051T/I252Q/L264R,

G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R,

G023K/V187N/L264R, G023K/V187T/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/Í.075Q/V 187T,

G163P/L227M/L264R, K024A/L075Q/V077I, L075Q/G156W/T189D, Í.075Q/G156W/V187N,

L075Q/G156W/V187T, L075Q/V154EV187T, L075Q/V187N/L264R, E075Q/V187T/T189D,

L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N073R/L075D/T189D, P029E/L075D/T189D,

A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/G023K/D111A7F189Q, A018K/G023Q/A049V/V187'E

A018K/G023Q/L075Q/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A,

A018K/K024A/D 130A/G156W, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/G163P/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, P051T/L075G/I252Q/L264R, P051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q. G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/K024A/V154FV187N, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/A049V/L075Q/T189D, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/G156W/V187N, G023Q/L075Q/V 187T/L264R, G091Q/V187T/I252Q/L264R, K024A/D13ÜA/V154I/V187T, K024A/L075R/G156W/V187N, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/V187H/I252Q/L264R, L075Q/D130A/G156 W/V187N, E075Q/V077I/D130A/V187Q, L075Q/V077FV154I/V187Q, L075R/D111A/V154I/G156W, L075R/D130A/V154I/L264R, P029E/N033D/L075D/T189D, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D130A/GI56W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/V154I, AO18K/G023K/V077I/D130A/V187N, AO18K/G023Q/K024A/D13 O A/V 187Q, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, A018K/K024A/L075R/N094R/D130A, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/K024A/N094R/G156W/V187T,

AO 18K/L075Q/D 111 A/D 130A/V187T, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/E264R, D027E/S058M/G163IVÍ .227M/Í 264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, E056K/L075Q/G156W/T189Q/L264R, E051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V 187N, G023Q/K024A/L075R/G156W/V187Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/G156W/V187T, K024A/L075Q/V077I/G156W/V187N, K024A/L075Q/V077I/V154I/V187N, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R,

L075Q/D 111A/V187N/T189Q/L264R, L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/D111 A/G 156W/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, AO18K/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075Q/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, AOl8K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, AOl8K/G023Q/K024A/V077I/V154I/V187N, AO 18K/G023Q/K024A/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/L075Q/V077L/G156W/V187N, AO 18K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, AOl8K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, AOl8K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/E227M/E264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/E264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, DI 11A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/E056K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, E051T/L075R/D130A/V187N/1252Q/L264R, G023K/D027Q/E051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154W 187N, G023K/E075Q/N094R/V 154I/V187T/L264R, G023K/N094R/D111A/GI56W/V1874/E264R, G023Q/D027S/I05147E075Q/V 187T/L264R. G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/G091 Q/Vl 87N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187FI/I252Q, G023Q/K024A/D 130A/V1541/G156W/V187Q. G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075R/V154I/G156W/V187N/L264R, K024A/L075Q/D 111A/V154I/V187N/T189Q, K024A/L075Q/V154I/V187N7T189Q/L264R, KÜ24A/L075Q/V 1541 A/ 187T/T189Q/L264R, K024A/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/DlllA/D130A/V154I/V187N/ri89Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R. S058M/D13 O A/D 137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R. A018K/D111A/D130A/V154FG156W/V187T/T189Q,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/D 130A/G156W/V187N,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AO 18K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/G156W, A018K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154T/V187N,

AO 18K/K024A/D130 A/V 1541/G 156 W/V187T/L264R, A018K/K024A/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q, A018K/K024A/L075Q/D130A/V1541/G 156 W/V 1874'.

A018K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R,

A018K/L075Q/D111 A/V 154I/V187T/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, D027S/F05 FF/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D13 O A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051471,075Q/G091 Q/D 130 A/V187H/T252Q/1,264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D 130 A/V 187N, G023K/K024A/L075Q/D 111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/D130A/V187471489Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V077PD130 A/G156W/V187Q, G023K/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D 111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075 Q/V0771/D130 A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D 13 O A/V 1541/G156 W/4489 Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023Q/l ,075Q/V077T/N094R/D130A/G156W/V187N, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/Í ,264R, L075Q/D111 A/D 130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, NO 11K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W/1189Q, AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/D 130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D111 A/V 1541/V 1871/1,264R, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130 A/G156 W/V187 Q,

Aü 18K/KÜ24A/LÜ75R/D13ÜA/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/Dl 30A/I252Q/L264R, G023Q/DÜ27Q/FÜ51T/S058M/LÜ75R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/Vl 87T/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/D111A/D130A/V154FG156W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023K/D027S/L075R/V154FG156W/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V187T/T189Q/L264K, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154FG156W/V187N, A018K/G023K/K024A/V077FD130A/V154FG156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154FG156W/T189Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D 111 A/D 130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156 W/V187N/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, NO 11K/AO18K/G023K/K024A/Í.075R/V077I/D 130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/G156 W/V 187N/L264R Tabla 7-2: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/L264R, L075R/L264R, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/V187T, A0I8K/K024A/V1541, A018K/N033D/T189D, A018K/P029E/T189D, D111A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, F051T/I252Q/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187N/L264R, G023K/V I S7T/F264R, G023Q/A049V/T189D, G163P/L227M/L264R, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/G023K/D111A/T189Q, A018K/G023Q/A049V7V187T.

A018K/K024A/D130A/G156W, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/G163P/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R,

D111 A/D 130A/V154I/G156W, D111 A/D 130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/F056K/E075R/E264R, G023K/K024A/VE54T/V187N, G023K/E075R/V1S7T/Í 264R, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091Q/V187T/I252Q/L264R. K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/V187H/I252Q/L264R, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, SÜ58M/L075Q/GÜ91Q/I252Q, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/V1541, A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/K024A/N094R/G156W/V187T, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154FT189Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R,

G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/D111 A/Gl56W/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, AO18K/G023K/K024A/V077PG156 W/V187 Q, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/V077I/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/V154PG156W/V187Q, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18K/K024A/D111 A/Vl87N/T189Q/L264R, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, AO 18K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/Gl63P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G1 A3P/Í 227M/N233Q/F 264R, D048Q/S058M/D130A/G163IVÍ 227M/Í 264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/E051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/G091 Q/Vl87N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154PG156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/V187N/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D 111A/V154PV187N/T189Q, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V187Q, AOl 8K/K024A/D130A/V154PG156W/V187T/L264R,

AO 18 K/K024A/L075Q/D130A/V154FG156W/V187T, AOl 8K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/T ,075G/G091 Q/D 130 A/V187N/T252Q/F264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D 130 A/V 187N, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G156 W/V 187N, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

NO 11K/AO18K/K024A/V077PV154PG156W/T189Q, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R,

G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/ G091Q/V187T/L264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

A018K/G023K/K024A/V077ED130A/V154EG156W/V187T/T189Q,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/D130A/V154EV187T/T189Q,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/E264R Tabla 7-3: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/L264R, L075R/L264R,

S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/V187T, A018K/K024A/V154I, D111A/D130A/L264R,

D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, F051T/I252Q/L264R, G023K/D130A/L264R,

G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187T/L264R, L075Q/V187N/L264R,

L075R/D130A/L264R, A018K/G023K/D111A/T189Q, D027E/D130A/N233Q/L264R,

D027S/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R, DI 11A/D130A/V187T/L264R,

E056K/D130A/V187N/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R,

G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/L075R/L264R,

G023K/K024A/V154I/V187N, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R,

G023Q/L075Q/D 130A/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091 Q/Vl 87T/I252Q/L264R,

K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, S058M/G163P/L227M/L264R,

S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/D130A/V1541, A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R,

F051T/L075G/V 187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, GÜ23Q/LÜ75Q/D130A/I252Q/L264R, GÜ23Q/LÜ75Q/G091Q/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, A018K/G023K/K024A/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/V077I/V154I/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, AO18 K/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/Vl 87H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, I;()51171 ;056K/I) 130A/V 187N/I252Q/Í 264R, F051T/E075G/G091 QA l^87H/T252Q/T.264R, F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130AA 1^87T/I252Q, G023K/D130A/V154EG156WA^ 187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154EG156W/V187Q, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/G091 Q/Vl 87N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/Vl87N/I252Q, G023Q/E051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156WA^187N, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/V187N/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D 111 A/V 154EV187N/T189Q, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, Aü 18 K/KÜ24 A/D13ÜA/V154PG156W/V187T/L264R, A018K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/F075R/D130A/I252Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/F227M/N233Q/L264R,

F051T/F075G/G091 Q/D 130A/Y187N/I252Q/F264R,

F051T/F075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R,

F051T/F075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/F051T/F075Q/G091Q/V187H/I252Q/F264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/E264R,

G023Q/E075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/E264R,

G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/E264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/E227M/N233Q/E264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/E264R,

G023Q/D027S/E056K/E075R/D111A/V154I/G156W/F264R,

G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/ G091 Q/V 187T/E264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/E264R,

G023Q/F051T/E075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/E264R,

G023Q/F051T/E075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/E264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/E264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/E264R,

G023Q/F051T/S058M/E075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/E264R,

N011K/G023Q/E056K/E075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/Í.264R Tabla 7-4: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/L264R, L075R/L264R,

S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/V187T, A018K/K024A/V154I, A018K/N033D/T189D,

DI 11A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, F051T/I252Q/L264R,

G023K/D130A/L264R, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187T/L264R,

G023Q/L075Q/V187T, L075Q/G156W/V187N, L075Q/G156W/V187T, L075Q/V187N/L264R,

L075R/D130A/L264R, A018K/D027S/P029E7T189D, A018K/G023K/D111A/T189Q,

A018K/G023Q/L075Q/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A,

D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R, DI 11A/D130A/V154I/G156W, DI 11A/D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, E051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q. G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V 187T/L264R, G091Q/V187T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075 R/G156 W/V187N, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/V187H/I252Q/L264R, L075Q/V077I/D 130A/V187Q, P029E/N033D/L075D/T189D, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, AO18K/D130A/G156W/V187N/L264R,

Aü 18 K/ G023K/KÜ24 A/D13 O A/G156 W, AO18 K/G023K/KÜ24 A/D13 O A/V1541, AOl8K/G023K/V0771/D130A/V187N, AOl8K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N,

AO 18K/L075Q/D111 A/D 130A/V187T, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027S/F051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/1189Q/L264R, D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, E056K/E075Q/G156W/T189Q/E264R, F051 T/Dl 30A/V187T/1252Q/E264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130 A/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/D 130A/Gl56W/L264R, G023K/L075R/D130A/V 187N/L264R, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075R/G156W/V187Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/G156 W/V187N, G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D 111A/G156W/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, L075Q/D111 A/V 187N/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, AOl8K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, AO 18K/G023K/K024A/V077PG156W/V 187Q, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075Q/G156W/V187N/L264R, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/V077I/V154PV187N, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, AO18K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, AO18K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, AO 18K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R.

D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, E051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/E056K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, F051T/L075R/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V 154EG156W/V187Q, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154EV187N, G023K/L075Q/N094R/V1541/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/E075Q/D130A/V187H/T252Q, G023Q/K024A/D130A/V154T/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091 Q/Vl87N/I252Q/L264R, G023Q/L075R/V154I/G156W/V187N/L264R, K024A/L075Q/D111 A/V 154I/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, L075R/D130A/V154EG156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D 130A/V187N/T189Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, AO 18 K/G023K/K024A/L075Q/D 130A/G156W/V187N,

AO 18 K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154EV187N,

AO 18 K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R,

AO 18 K/K024A/L075Q/D 111A/G156W/V187N/L264R,

AO 18 K/K024A/L075Q/D 130A/G156W/V187T/T189Q, A018K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R,

AO 18 K/L075Q/D 11IA/VI54I/V187T/T189Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/V154FG156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/D 130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V077PD130A/G156W/V187Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/E075Q/G091 Q/Vl 87T/T252Q/E264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D 130 A/V154EG156 W/T189Q/L264R, G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/E264R.

L075Q/D111 A/D 130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018 K/G023K/K024A/L075Q/D 130Y/V154I/V187N/T189Q, AO18K/G023K/K024A/L075R/D111 A/V 154I/V187T/L264R, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077PD130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/ G091Q/V187T/L264R,

G023Q/D027S/S058M/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

K024A/D111 A/D 130A/V154EG156W/V187T/T189Q/L264R,

N011K/G023K/D027S/L075R/V154EG156W/V187N/T189Q,

A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154EG156W/V187N/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/E264R Tabla 7-5: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/L264R, L075R/L264R,

S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/V187T, A018K/K024A/V154I, A018K/N033D/T189D,

DI 11A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, F051T/I252Q/L264R,

G023K/D130A/L264R, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187T/L264R,

L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/L264R, A018K/D027S/P029E7T189D,

A018K/G023K/D111A/T189Q, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/L264R,

D027S/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R, DI 11A/D130A/V154I/G156W,

DI 11 A/D 130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R,

F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R,

G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/K024A/V154I/V187N,

G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/L264R,

G023Q/L075Q/V 187T/L264R, G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T,

L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/V187H/I252Q/L264R, S058M/G163P/L227M/L264R,

S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/V1541, A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027S/E051T/V187N/I252Q/L264R, D027S/F075G/D130A/I252Q/F264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V 154I/T189Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154EG156W/V187N/T189Q, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R,

F051T/F075G/V 187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, GÜ23K/EÜ56K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/F264R, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/F075Q/D130A/I252Q/E264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, AO18K/G023K/K024A/V077I/G 156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/V077I/V154FVT87N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl8K/K024A/D111 A/Vl87N/T189Q/L264R, AO 18 K/K024A/L075Q/V077ED13 O A/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/F264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/E227M/N233Q/E264R, D027E/S058M/D137Q/G163I7Í 227M/Í 264K, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/E227M/N233Q/E264R. F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/F051 T/D 130A/V187N/I252Q/F264R, G023K/F051T/F075Q/D130A/I252Q/F264R, G023K/K024A/F075Q/V154FG156W/V187Q, G023Q/D027S/F051T/F075Q/V187T/F264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/F264R, G023Q/D027S/F075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/G091 Q/V 187N/I252Q/F264R, G023Q/F051T/F075G/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/F051T/F075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/F075G/G091Q/D130A/I252Q/F264R, G023Q/L075Q/G091 Q/Vl87N/I252Q/F264R, K024A/L075Q/D11IA/VI54I/V187N/T189Q, F075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/F264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, AO18 K/K024A/D130 A/V154I/G156 W/V187T/L264R,

AO18K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R,

D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

F051T/L075G/G091 Q/D 130A/Y187N/I252Q/L264R,

F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/Y187H/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/ G091 Q/V 187T/L264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156 W/V 187N/E264R

Tabla 7-6: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

D111A/L264R, D130A/L264R, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/L264R, L075R/L264R, S058M/L264R, V187T/L264R, A018K/A049V/V187T, A018K/K024A/V154I, D111A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, F051T/I252Q/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/E056K/V187T, G023K/L075R/L264R, G023K/V187T/L264R, E075Q/V187N/E264R, L075R/D130A/L264R, A018K/G023K/D111A/T189Q, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R, DI 11A/D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D130A/V 187N/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/L075R/L264R, G023K/K024A/V154I/V187N, G023Q/F051T/I252Q/L264R, G023Q/G091Q/I252Q/L264R, GÜ23Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V187T/L264R, G091Q/V187T/I252Q/L264R, K024A/D130A/V1541/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/L075Q/I252Q/L264R, A018K/D130A/(r 156W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/D130A/V1541, AO18K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D13 O A/V187Q, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, D027E/D048Q/D137Q/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027S/F05 l'l /V 187N/I252Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154T/G156W/V187N/T189Q, E056K/E075G/V187N/T252Q/E264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/L075R/D130AA ^187N/L264R, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, A018K/G023K/K024A/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, AO 18 K/C ¡023Q/K024A/V077I/V154I/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187 T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D 130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154FG156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/E075Q/V 154I/G 156W/V187Q, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V 187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/G091 Q/Vl 87N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075G/G091 Q/Vl87N/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q,G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/G091Q/V187N/I252Q/L264R, KÜ24A/LÜ75Q/D111A/V154FV187N/T189Q, LÜ75Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, A018K./D 111 A/Dl 30A/V1541/G156W/V1871/1189Q, AO18 K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R,

AO18 K/K024A/N094R/D130 A/G156 W/V187T/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130 A/G 163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

D027S/F051T/S058M/L075Q/V187N/I252Q/L264R,

D027S/F051T/S058M/1.075R/D130 A/T252Q/E264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R,

F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R,

G023Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075G/G091 Q/V 187T/L264R,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187FI/I252Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R Tabla 7-7: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

A018K/D027S, A018K/E045F, A018K/L075D, A018K/T189D, D027E/G163P, D027N/E056K,

D027N/N233Q, D027S/N033D, D027S/P256T, D130A/T189Q, E045F/N073R, E045F/T189D,

F051T/L075R, G023K/D130A, G023Q/L075Q, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A,

L075Q/G156W, L227M/L264R, N011K/D027S, N033D/E045F, N073R/L075D, N094R/G156W,

P029E/N033D, A018K/A049V/L075Q, A018K/D027S/E045F, A018K/D027S/N073R,

AO18K/D027S/T189D, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/T189D, A018K/E045F/V187T,

A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/L075Q, A018K/L075D/T189D, A018K/L075Q/V187T,

A018K/N033D/L075D, A018K/N073R/L075D, A018K/V154I/G156W, A049V/L075Q/T189D,

A049V/V187T/T189D, D027E/S058M/G163P, D027N/N233Q/P256T, D027N/S058M/P256T,

D027Q/N233Q/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D7T189D,

D027S/N073R/L075D, D027S/N233Q/P256T, D027S/S058M/P256T, D130A/T189Q/L264R,

D130A/V154PG156W, E045F/L075D/T189D, E045F/N073R/L075D, E056K/D130A/L264R,

E056K/D130A/T189Q, G023Q/D111A/L264R, G023Q/D130A/G156W, G023Q/E045F/V077I,

G023Q/E056K/L075R, G023Q/K024A/G156W, G023Q/E075Q/V077I, I090F/N233Q/P256T,

K024A/D130A/V 1541, K024A/L075Q/G156W, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A,

L075Q/D130A/V187T, L075Q/N094R/V154I, L075Q/V077I/T189D, L075Q/V187T/L264R,

L075R/V187N/L264R, L075R/V187T/L264R, N011K/D027S/S058M, N011K/N233Q/P256T,

N033D/E045F/L075D, N033D/E045F/N073R, N033D/N073R/T189D, N094R/D130A/V187T,

P029E/E045F/L075D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/L075D, P029E/N073R/L075D,

Q004D/D027S/P256T, Q004D/N233Q/P256T, Q004D/S058M/N233Q, S058M/L227M/L264R,

V077I/D130A/V154I, V077I/V187A/T189D, V187N/T189Q/L264R, A018K/A049V/L075Q/T189D,

A018K/A049V/L075Q/V187T, A018K/D027S/E045F/N073R, A018K/D027S/E045F/T189D,

A018K/D027S/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D111A/G156W/T189Q,

A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/A049V/V187T,

A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/E045F/L075Q/T189D, A018K/E045F/L075Q/V187T,

A018K/G023Q/A049V/T189D, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045I7V187T,

A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/V077I, A018K/G023Q/V077I/G156W,

A018K/G023Q/V077I/V 187T, A018K/G023Q/V187T/T189D, A018K/L075Q/G156W/T189D,

A018K/L075Q/G156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D111A, A018K/L075Q/N094R/D130A, A018K/L075Q/N094R/V187Q, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/E075Q/V187T/T189I), A018K/N033D/L075D/T189D, AOl8K/N073R/L075D/T189D, AOl8K/P029E/N033D/L075D, A018K/P029E/N033D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, A018K/V154I/G156W/V187T, A049V/L075Q/V077I/T189D, A049V/L075Q/V187T/T189D, D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027N/E056K/N233Q/P256T, D027N/E056K/S058M/P256T, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027Q/S058M/I090F/P256T, D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/F075D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/E056K/I090F/P256T, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/E075D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029F7E045F/E075D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D027S/P029E/N033D/N073R, D027S/P029E/N033D/T189D, D048Q/D137Q/G163P/L227M, D111A/D130A/V154EL264R. D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T, 1Í045F/E075Q/G156W/V187T, E056K/L075Q/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/F>027S/L075Q/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R, G023K/D130A/G156W/F189Q, G023K/E056K/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N, G023K/E056K/V187T/L264R, G023K/L075Q/G156W/L264R, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187N/L264R, G023Q/A049V/E075Q/V077I, G023Q/A049V/V077PG156W, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/A049V/V187T, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/L075R/V154I, G023Q/K024A/V077I/G156W, G023Q/L075Q/G156W/V187T, (¡023Q/V154I/G156W/V187N. 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A018 K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156W/V187T,

A018 K/G023Q/E045E/L075Q/G156 W/V187T/T189D, A018K7G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V 187T, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077FD130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D13 O A/G156 W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D111A/D130A/V154EG156W/L264R,

AO 18 K/L075Q/D130 A/Gl 56 W/V 187N/T189Q/L264R,

A018 K/L075Q/N094R/D111A/V1541/V187T/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/T ,075Q/G091 Q/D 130 A/V 187T/T252Q, D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/L075D/T189D,

D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V 187N/T189Q, G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Vl 87N/I252Q, G023K/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023K/F051T/E056K/F075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/F051T/F075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023K/K024A/F075Q/N094R/V154I/G156 W/V187N, G023K7K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023K/F075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156 W/L264R, G023K/F075Q/D 111 A/V154FG156W/T189 Q/L264R, G023K/E075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/E264R, G023K/E075Q/N094R/D130A/V154I/V187N/E264R, G023K/E075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/E264R, G023Q/D027S/F075Q/V154I/G156 W/V 187N/F264R, G023Q/E045F/A049V/V077I/G156W/V187T/T189D, G023Q/E045F/E075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, G023Q/E056K/L075Q/D 130A/V154FG156W/T189Q, G023Q/F051T/E056K/E075R/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187FT/I252Q/F264R, G023Q/K024A/F075Q/V077I/D130 A/V154I/G156W, G023Q/F075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/F075Q/V077I/N094R/D130 A/G156 W/V 187Q, K024A/F075Q/D111 A/D 130A/V187N/T189Q/F264R, K024A/F075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/F264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, NO 11K/D027S/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/E075Q/D111A/D130A/V154I/F264R, NO 11K/E056K/E075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/G023K/F075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, NO 11K/G023Q/F075Q/V154FV187N/T189Q/F264R, Q004D/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077FD130A/V154I/G156W, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/G156W, AOl 8K/G023K/L075Q/V077FD130A/V154I/G156W/V187N, AOl 8K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, AO18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130 A/G156 W, AO18 K/G023Q/L075Q/V077I/D130 A/V154I/G156 W/V187N, AO 18 K/K024A/L075Q/V0771/N094R/D130 A/V1541/G156W, AOl 8 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137 Q/Gl 63P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V154I/G156W/V187T/T189Q, G023K/E075Q/D111 A/Vl 541/G156W/V187N/T189Q/E264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187N/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D111 A/V 1541/V 187N/T189Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/D 111A/D130A/V154I/G156W/V187N/E264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156 W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187Q, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/T189Q. N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075Q/D111A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R,

NO 11K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R,

NO 11K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, AO18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V154I/T189Q, AO18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130 A/V154I/G156 W/V187N,

AO 18K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T,

AO 18K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/1’189D,

AO 18K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091Q/V187N/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/D027S/E075Q/N094R/D111 A/Dl 30A/V154I/G156W/E264R, G023Q/E056K/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R,

NO 11K/G023Q/L075Q/D111 A/V 154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/E045E/A049V/S058M/N073S/L075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H7I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/N094R/D111 A/V 154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154EG156W/V187N/L264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/H135F/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049Y/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10 8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

Tabla 7-8: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento <1 en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

A018K/E045F, A018K/L075D, D027E/G163P, D027S/N033D, D027S/P256T, E045F/N073R, F051T/L075R, K024A/V154I, L227M/L264R, N033D/E045F, N094R/G156W, P029E/N033D, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/V187T, A018K/L075D/T189D, A018K/V154I/G156W, D027E/S058M/G163P, D027N/S058M/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/S058M/P256T, D130A/V154I/G156W, E056K/D130A/L264R, G023Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/G156W, I090F/N233Q/P256T, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187T/L264R, L075R/V187N/L264R, L075R/V187T/L264R, N011K/N233Q/P256T, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, Q004D/D027S/P256T, Q004D/S058M/N233Q, V187N/T189Q/L264R, A018K/D111A/G156W7T189Q, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/G023Q/V077I/G156W, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D137Q/G163P/L227M, D130A/G163P/L227M/L264R, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T, F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/E056K/D130A/V187N, G023K/E056K/V187T/L264R, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/V077I/G156W, L075G/G091Q/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R, NO 11K/D027Q/S058M/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D, AOl8K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/E045F/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027Q/F051T/L075Q/D130A/L264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V 187T/T189D, E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q,

G()23 K/l)(I27S/I.056K/V187'F/Í .264 R, G023K/F056K/F075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P2561’, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, AO18K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R7G156W, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q, D027E/D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R. D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F05FF/G091 Q/D 130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/D130A7T189Q, G023K/K024A/Í .075k/D 130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q. G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154PL264R, G023Q/F031T/D130A/V187T/T252Q/E264R, G023Q/K024A/V077T/D130A/V154T/G156W, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N. NO 11K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AO 18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I,

AO18 K/ G023K/L075Q/V 07 TUN 094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/F075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D13 O A/G156 W, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/G091 Q/V 187N/I252Q, G023K7K024A/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/F051T/E056K/F075R/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/F264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T,

NO 11K/G023Q/F075Q/V154FV187N/T189Q/F264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/E075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/E075Q/V077PD130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/E075Q/V077PN094R/D130A/G156W,

AO 18 K/ G023Q/K024A/E075R/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/F227M/N233Q/E264R, F051T/E056K/F075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/E264R, G023K/D027S/F051T/E056K/F075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/F075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023Q/F051T/S058M/E075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

AO 18K/G023K/F075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/F264R,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/F075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 7-9: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento <50 % del valor de PI máximo en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

A018K/E045F, A018K/E075D, D027E/G163P, D027S/P256T, E045F/N073R, F051T/E075R,

K024A/V154I, E227M/E264R, N033D/E045F, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/V187T,

A018K/V154FG156W, D027N/S058M/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/F075Q/G091Q,

D027S/S058M/P256T, E056K/D130A/F264R, G023Q/K024A/G156W, I090F/N233Q/P256T, N011K/N233Q/P256T, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F, Q004D/D027S/P256T, Q004D/S058M/N233Q, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045E/L075D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D048Q/D137Q/G163P/L227M, 14)451/A049V/G136W/VIS7T. E045F/L075Q/G156W/V187T, G023K/E056K/D130A/V187N, G023K/E056K/V187T/L264R, G023Q/K024A/L075R/G156W, L075G/G091Q/V 187N/L264R, N011K/D027Q/S058M/P256T, NOl 1K/D027S/N233Q/P256T, NÜ33D/E045F/NÜ73R/T189A, Q004D/DÜ27N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, AO18K/D027S/E045F/L075D/T189D, A018K/E045F/N073R/L075D/T189D,

AO18 K/K024A/L075R/D13 O A/V1541, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/L264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V 187N/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/E075Q/V187II/I252Q/E264R, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W,

NO 11K/D027N/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/D137Q/G163P/F227M/N233Q, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N. G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/N094R/V154EG156W/T189Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154PL264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024AA^077I/D130A/V154I/G156W, NOl 1K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, G023Q/F051T/E056K/L075R/G091Q/V187H/1252Q,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130 A/V 187H/I252Q/L264R,

NOl 1K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T,

NOl 1K/G023Q/L075Q/V154PV187N/T189Q/L264R,

Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130 A/V154I/G156 W,

AO18 K/ G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N7T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023Q/F051T/S058M/F075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/F264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135E/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/E075Q/R108K/V187T/T189D

Tabla 7-10: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento <1 en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

A018K/D027S, A018K/E045F, A018K/F075D, A018K/T189D, D027E/G163P, D027N/E056K,

D027N/N233Q, D027S/P256T, D130A/T189Q, E045F/N073R, E045F/T189D, F051T/F075R,

G023K/D130A, G023Q/F075Q, K024A/V154I, F227M/F264R, N011K/D027S, N033D/E045F,

N073R/L075D, A018K/A049V/L075Q, A018K/D027S/E045F, A018K/D027S/N073R,

AO 18K/D027S/T189D, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/T189D, A018K/E045F/V187T,

A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/F075Q, A018K/N033D/F075D, A018K/N073R/F075D,

A018K/V154PG156W, A049V/F075Q/T189D, A049V/V187T/T189D, D027N/N233Q/P256T,

D027N/S058M/P256T, D027Q/N233Q/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/F075Q/G091Q,

D027S/N073R/L075D, D027S/N233Q/P256T, D027S/S058M/P256T, D130A/V154I/G156W,

E045F/F075D/T189D, E045F/N073R/F075D, E056K/D130A/F264R, E056K/D130A/T189Q,

G023Q/D111A/E264R, G023Q/E045F/V077I, G023Q/E056K/F075R, G023Q/K024A/G156W,

G023Q/L075Q/V0771,1090F/N233Q/P256T, K024A/L075Q/G156W, L075Q/D130A/V187T,

F075Q/N094R/V154I, F075Q/V077I/T189D, N011K/D027S/S058M, N011K/N233Q/P256T,

N033D/E045F/F075D, N033D/E045F/N073R, N033D/N073R/T189D, N094R/D130A/V187T,

P029E/E045F/F075D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/F075D, P029E/N073R/E075D,

Q004D/D027S/P256T, Q004D/N233Q/P256T, Q004D/S058M/N233Q, S058M/F227M/F264R,

V077I/D130A/V154I, V077I/V187A/T189D, A018K/A049V/F075Q/T189D,

A018K/D027S/E045F/N073R, A018K/D027S/E045F/T189D, A018K/D027S/F075D/T189D,

A018K/D027S/N033D/F075D, A018K/D111A/G156W7T189Q, A018K/E045F/A049V/G156W,

A018K/E045F/A049V/V187T, A018K/E045F/L075D7T189D, A018K/E045F/L075Q/T189D,

A018K/E045F/F075Q/V187T, A018K/G023Q/A049V/T189D, A018K/G023Q/E045F/T189D,

A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/F075Q/G156W/T189D,

A018K/F075Q/G156W/V187T, A018K/F075Q/N094R/D111A, A018K/F075Q/N094R/D130A,

AO 18K/F075Q/V 187T/T189D, A018K/N073R/F075D/T189D, A018K/P029E/N033D/T189D,

A018K/P029E/N073R/F075D, A018K/V154I/G156W/V187T, A049V/F075Q/V077FT189D, A049V/L075Q/V187T/T189D, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027N/E056K/N233Q/P256T, D027N/E056K/S058M/P256T, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027Q/S058M/I090F/P256T, D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/L075D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/E056K/I090F/P256T, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/L075D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/E045F/N073R, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/N073R, D048Q/D137Q/G163P/L227M, E045F/A049V/G156W/V187T, E045F/L075Q/G156W/V187T, G023K/D027S/L075Q/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N, G023K/E056K/V 187T/L264R, G023K/L075Q/G156W/L264R, G023K/L075R/V187N/L264R, G023Q/A049V/L075Q/V077I, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/A049V/V187T, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/V154I/G156W/V187N, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, L075G/G091Q/V187N/L264R, E075Q/I) 130A/V154I/G156W, L075Q/G156W/V187T/L264R, E075Q/V077I/G 156W/V187N, E075Q/V077I/V187T/T189D, L075Q/V187N/T189Q/L264R, NOl 1K/D027N/E056K/S058M, NOl 1K/D027N/S058M/P256T, NOl 1K/D027Q/S058M/P256T, NOl 1K/D027S/E056K/P256T, NOl 1K/D027S/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/S058M/N233Q, NOl 1K/E056K/N233Q/P256T, NOl 1K/E056K/S058M/P256T, NOl 1K/G023K/L075Q/D111 A, NOl 1K/S058M/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/E045F/N073R/L075D, P029E/E045F/N073R/T189D, P029E/N033D/E045F/E075D, Q004D/D027N/E056K/P256T, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/D027S/I090F/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, Q004D/N011K/D027Q/N233Q, Q004D/N011K/D027S/P256T, Q004D/N011K/E056K/S058M, A018K/A049V/L075Q/V187T/T189D, AOl8K/D027S/E045F/L075D/T189D, AOl8K/D027S/E045F/N073R/D137V, A018K/D027S/N033D/E045F/T189D, A018K/D027S/N033D/N073R/T189D, A018K/D027S/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/E045F/T189D, AOl8K/D027S/P029E/N073R/L075D, A018K/D130A/G156W/V187T/L264R, AOl8K/E045F/A049V/L075Q/G156W, AOl8K/E045F/A049V/L075Q/T189D, AOl8K/E045F/A049V/L075Q/V187T, AOl8K/E045F/N073R/L075D/T189D, AOl8K/G023K/L075Q/D130A/V1541, AO18K/G023Q/A049V/L075Q/G156W, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V077I, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V187T, A018K/G023Q/A049V/V077FV187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q,

AO 18K/G023Q/E045F/A049V/V187T, AOl8K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/E045FA^077I/T189D, A018K/G023Q/K0247VD130A/V154I, AOl8K/G023Q/V077I/V187T/T189D, AOl8K/K024A/L075Q/V154I/T189D,

AO 18 K/K024A/L075R/D13 O A/V1541, A018K/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/L075Q/V187T/T189Q/L264R, A018K/N033D/E045F/L075D/T189D, A018K/P029E/E045F/N073R/L075D, A018K/V077I/G156W/V187T/T189D, D027E/D048Q/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027Q/E056K/I090F/N233Q/P256T, D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027Q/F051T/L075Q/D130A/L264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/P029E/E045F/N073R/L075D, D027S/P029E/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F/NÜ73R, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, E056K/N094R/G156W/V187N/L264R, E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/D111A/V154I/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/A049V/L075Q/G156W/T189D, G023Q/A049V/I.075Q/V 187T/T189D, G023Q/D027S/D111 A/Tl 89Q/E264R, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, G023Q/D027SA^ 154I/V187N/L264R, G023Q/E045F/A049V/G156W/T189D, G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077I, G023Q/E045F/A049VA^077I/T189D, G023Q/E045F/L075Q/G156W/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077PV187T, G023Q/K024A/L075Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R/D111A/V154I/V187T, K024A/L075R/G156W/V187N/T189Q, L075Q/D111 A/D 130A/V187T/T189Q, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077FD130A/G156W/V187N, L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, L075R/V077I/N094R/V154I/G156W, N011K/D027N/E056K/N233Q/P256T, N011K/D027N/E056K/S058M/P256T, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Nül 1K/D027Q/E056K/SÜ58M/N233Q, N011K/D027Q/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027Q/S058M/I090F/P256T, N011K/D027Q/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/N233Q/P256T, N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T, N011K/G023Q/L075Q/V187N/T189Q, P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, P029E/N033D/K074S/L075D/T189D, Q004D/D027N/E056K/S058M/P256T, Q004D/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/E056K/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/E056K/S058M/P256T, Q004D/D027S/E056K/N233Q/P256T, Q004D/D027S/E056K/S058M/P256T, Q004D/D027S/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/N233Q, Q004D/N011K/D027Q/S058M/N233Q, Q004D/N011K/I090F/N233Q/P256T, S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/D027S/N033D/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, Aü 18K/EÜ45F/A049V/L075Q/V077FV187T, Aü 18K/G023K/D111A/D130A/V154PT189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D111A/L264R, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D 130A/V1541, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V077FG156W, A018K/G023Q/A049V/V077I/V187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/A049V/G156W/V187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/T189D, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077I, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V187T, A018K/G023Q/E045F/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/L075Q/G156C/V187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/N094R/V1541, A018K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, AO18K/L075Q/D111 A/V 154I/G156W/V187N, A018K/L075Q/D111A/V154I/T189Q/L264R, A018K/N033D/E045F/N073R/L075D/T189D, A018K/P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/E264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/E227M/N233Q, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/G156W/V187N7T189Q. D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V077FV187471' 189D, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/G156W/V187T/T189Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/L075Q/V077FD130A/G156W/V187Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D111A/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075R/D111A/V187N/L264R, GÜ23Q/D027S/N094R/V154FG156W/T189Q, G023Q/E045F/AÜ49V/LÜ75Q/G156W/V187T, G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077FV1874’, G023Q/E045F7L075Q/V077FG156W/V187T, G023Q/E045F/L075Q/V077FV187T/T189D, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187NTT189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154FL264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D 130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/V077I/I) 130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/N094R/D111A/G156W/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075R/D111A/V154I/G156W/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, N011K/D027N/E056K/I090F/N233Q/P256T, NOl 1K/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, NOl 1K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027Q/S058M/I090F/N233Q/P256T, NO 11K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/E056K/S058M/I090F/P256T, NO 11K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/G023K/D027S/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, NO 11K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, P029E/N033D/K074S/L075D/N101D/T189D, Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, Q004D/N011K/D027S/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, AOl 8K/E045F/L075Q/V077FG156W/V 187T/T189D,

AO18 K/G023Q/E045F/ A049V/L075Q/G156 W/V187T,

AO18 K/G023Q/E045F/L075Q/Gl 56W/V187T/T189D, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077FG156W/V187T,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N,

AOl 8K/L075Q/D111 A/D 130A/V154FG156W/L264R,

AO 18 K/L075Q/D130 A/G156 W/V 187N/T189Q/L264R,

AOl 8 K/T ,075Q/N094R/D111 A/Vl 54T/V187T/F264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/L075R/D111A/G156W/V187N/L264R, D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/L075D/T189D, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R,

E056K/L075Q/D111 A/D 130A/G156W/V187N/T189Q.

G023K/D027S/L075Q/N094R/V154FG156W/T189Q, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q,

G023K/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154EG156W/L264R,

G023K/L075Q/D 111A/V154FG156W/T189Q/L264R,

G023K/L075Q/D 130 A/G156 W/V 187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/V187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/V154I/G156 W/V 187N/L264R,

G023Q/E045F/A049V/V077I/G156 W/V187T/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, G023Q/E051T/E056K/L075R/G091Q/V187H/I252Q.

G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/E264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027S/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q,

NO 11K/E056K/L075Q/D 111A/D130A/V154I/L264R, NOl 1K/E056K/L075Q/D 130A/V154 W 187N/T189Q, NOl 1K/G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V1541/V187N, NOl 1K/G023Q/L075Q/V154EV187N/T189Q/L264R, Q004D/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077ED130A/V154I/G156W, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, AO 18 K/ G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/E075R/V0771/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/L264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V154I/G156W/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D 111A/V154I/G156 W/V 187N/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D 130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D111A/V154EV187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V1541/G156W/T189Q/L264R, NOl 1K/G023K/D027S/L075Q/D111 A/D 130A/V154I/T189Q, NOl 1K/ G023K/E056K/L075Q/D 130A/V154I/T189Q/L264R, NO 11K/G023K/L075Q/D 111A/G156 W/V 187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q,

N011K/G023Q/L075Q/D111 A/l) 130A/V154I/V187N/Í.264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154PG156W/V187N, A018K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

AO18 K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V187N/T189Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/F264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/l) 130A/V187N/T189Q/Í .264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/T189Q/Í.264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

NO 11K/G023K/D027S/E056K/L075R/D111 A/Gl 56W/V187N/L264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

AO 18 K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075 Q/R108K/V187T/T189D,

AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/V187T/T189D,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023K/L075R/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/1.264R,

NO 11K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/L075Q/N094R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/F264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

NOl 1K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/H135F/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049Y/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10 8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

Tabla 7-11: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento <1 en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

A018K/E045F, A018K/L075D, D027E/G163P, D027S/P256T, E045F/N073R, F051T/L075R,

K024A/V154I, L227M/L264R, N033D/E045F, A018K/E045F/N073R, A018K/E045F/V187T,

A018K/V154I/G156W, D027N/S058M/P256T, D027Q/S058M/P256T, D027S/L075Q/G091Q,

D027S/S058M/P256T, D130A/V154PG156W, E056K/D130A/L264R, G023Q/K024A/G156W,

I090F/N233Q/P256T, N011K/N233Q/P256T, N094R/D130A/V187T, P029E/N033D/E045F,

Q004D/D027S/P256T, Q004D/S058M/N233Q, A018K/D111A/G156W/T189Q,

AO18K/E045F/A049V/G156W, A018K/E045F/L075D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D,

D027E/D137Q/L227M/L264R, D027N/S058M/N233Q/P256T, D027Q/E056K/N233Q/P256T,

D027S/E045F/L075D/T189D, D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R,

D027S/N033D/F075D/T189D, D027S/P029F/E045F/N073R, D027S/P029E/E045F/T189D,

D027S/P029E/N033D/E045F, D048Q/D137Q/G163P/L227M, I ;045I 7A049V/G 156W/V187T.

E045F/L075Q/G156W/V187T, G023K/E056K/D130A/V187N, G023K/E056K/V187T/L264R,

G023Q/K024A/L075R/G156W, L075G/G091Q/V187N/L264R, N011K/D027Q/S058M/P256T,

N011K/D027S/N233Q/P256T, N033D/E045F/N073R/T189A, Q004D/D027N/E056K/P256T,

Q004D/D027N/S058M7P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T, Q004D/D027Q/S058M/P256T,

Q004D/N011K/D027S/P256T, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D,

Aü 18K/E045F/NÜ73R/L075D/T189D, Aü 18K/KÜ24A/L075R/D130A/V1541, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027Q/F05FF/L075Q/D130A/L264R, D027S/E056K/D11IA/VI87N/E2Ó4R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/L075R/D130A/V187N/F264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/T090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/N233Q/P256T, S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D,

A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D,

A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, D027E/D048Q/S058M7D130A/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R,

D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/GÜ91Q/D130A/I252Q/L264R,

G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q,

G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q,

G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, N011K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T,

Q004D/N011K/D027N/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, G023Q/F051T/E056K/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T,

NO 11K/G023Q/L075Q/V154PV187N7T189Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077ED13 O A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W,

F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N7T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D

Tabla 7-12: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento <50 % del valor de PI máximo en el ensayo de adhesión a tejido en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

A018K/E045F, A018K/L075D, D027E/G163P, E045F/N073R, F051T/L075R, K024A/V154I,

L227M/L264R, N033D/E045F, A018K/E045F/N073R, A018K/V154I/G156W, D027S/L075Q/G091Q,

D027S/S058M/P256T, E056K/D130A/L264R, I090F/N233Q/P256T, N011K/N233Q/P256T,

Q004D/S058M/N233Q, A018K/D111A/G156W/T189Q, A018K/E045F/L075D/T189D,

D027E/D137Q/L227M/L264R, D027Q/E056K/N233Q/P256T, D027S/E045F/L075D/T189D,

D027S/E045F/N073R/T189D, D027S/N033D/E045F/N073R, D027S/P029E/E045F/N073R,

D027S/P029E/N033D/E045F, D048Q/D137Q/G163P/L227M, G023K/E056K/D130A/V187N,

G023K/E056K/V187T/L264R, G023Q/K024A/L075R/G156W, L075G/G091 Q/Vl 87N/L264R,

N033D/E045F/N073R/T189A, Q004D/D027N/S058M/P256T, Q004D/D027Q/N233Q/P256T,

Q004D/D027Q/S058M/P256T, Q004D/N011K/D027S/P256T, A018K/D027S/E045F/L075D/T189D,

A018K/E045F/N073R/L075D/T189D, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, D027Q/F051T/L075Q/D 130A/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075G/I252Q/L264R,

NOl 1K/D027N/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/I090F/N233Q/P256T, S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q, A018K/D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, AOl8K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q,

D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q,

G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N7T189Q,

G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, NOl 1K/D027S/E056K/I090F/N233Q/P256T,

Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R,

G023Q/F051T/E056K/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AO18 K/ G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D

EJEMPLO 8

Rendimiento de limpieza de variantes combinatorias de TLL

[0247] El rendimiento de limpieza de las variantes de TLL creadas tal y como se describe en el ejemplo 2 fue analizado tal y como se describe en el ejemplo 1 (ensayo de micromuestras CS-61) mediante el uso de media dosis de Tide® adyuvante o dosis completa de Tide®. Se calculó el índice de rendimiento para las variantes en comparación con TLL, SEQ ID NO:1 o la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

Tabla 8-1: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando media dosis de Tide® adyuvante

A018K/L075Q, A018K/T189D, D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187T, G023K/D130A,

K024A/L075Q, L075Q/D130A, L075Q/G156W, L075R/L264R, N033D/E045F, P029E/N033D,

V187T/L264R, A018K/A049V/L075Q, A018K/D027S/E045F, A018K/D027S/N073R,

A018K/D027S/T189D, A018K/E045F/T189D, A018K/E045F/V187T, A018K/G023K/L075Q,

A018K/G023Q/L075Q, A018K/L075D/T189D, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T,

A018K/N033D/L075D, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A049V/V187T/T189D,

D027E/S058M/G163P, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D027S/N233Q/P256T,

DI 11A/D130A/L264R, E045F/N073R/L075D, E056K/D130A/T189Q, F051T/I252Q/L264R,

G023K/E056K/V187T, G023K/V187N/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/L264R, G023Q/E056K/L075R, G023Q/L075Q/V077I, G023Q/E075Q/V187T. G163P/L227M/L264R, K024A/L075Q/V077I, L075G/D130A/V187II, L075Q/D111A/D130A, E075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W/T189D, L075Q/G156W/V187N, L075Q/V077I/T189D, L075Q/V154FV187T, L075Q/V187N/L264R, L075Q/V187T/L264R, L075Q/V187T/T189D, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187N/L264R, N033D/E045F/L075D, N033D/E045F/N073R, N033D/N073R/T189D, N073R/L075D/T189D, P029E/E045F/L075D, P029E/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/L075D, P029E/N073R/L075D, Q004D/N233Q/P256T, S058M/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I, V077I/V187A/T189D, V187N/T189Q/L264R, AO18 K/A049V/L075Q/T189D, AO18 K/A049V/L075Q/V187T, AO18K/D027S/E045F/T189D, Aü 18K/D027S/N033D/LÜ75D, Aü 18K/D027S/P029E/T189D, AÜ18K/D130A/G156W/V187T, AO 18K/E045E/L075Q/T189D, A018K/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/A049V/T189D, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/L075Q/T189D, AOl8K/G023Q/L075Q/V077I, AOl 8K/G023Q/L075Q/V187T, AOl8K/G023Q/L075R/D130A, AOl 8K/G023Q/V187T/T189D, AOl8K/L075Q/G156W/T189D, AOl8K/L075Q/N094R/D111 A, A018K/L075Q/N094R/V187Q, AOl 8K/E075Q/V077I/N094R, A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/N073R/L075D/T189D, A018K/P029E/N033D/T189D, A049V/L075Q/V077FT189D, A049V/L075Q/V 187T/T189D, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/G163P/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/Í 1)75D/Tl 89D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/E075D, D027S/P029E/N033D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/IÍ175Q/V187N7Í.264R. F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/F075Q/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/V187T/F264R, (1023 K/K024A/V154I/V187N, G023K/F075Q/D130A/V187N, G023K/F075Q/G156W/L264R, (¡023K/íi)75Q/G 156W/V187N, G023K/L075R/D130A/F264R, G023K/F075R/V187N/L264R, G023Q/A049V/L075Q/T189D, G023Q/A049V/L075Q/V077I, G023Q/A049VAr077I/G156W, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, (1023Q/K024A/L075R/V1541, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/G156WA^187N, G023Q/L075Q/G156W/V187T, G023Q/L075QA ^187T/L264R, K024A/D130A/VI54I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/V187T/T189Q, K024A/L075R/G156W/V187N, L075G/D130A/V187T/1252Q, L075GA ^187FFI252Q/L264R, L075Q/D130A/G156W/V187N, ID75Q/I) 130A/V1541/C, 156W, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075QA/077FG156W/V187N, Í0)75Q/V077I/N094R/G 156W, L075Q/V077FV154I/V187Q, L075Q/V077I/V187T/T189D, L075R/D130A/V154I/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R, N011K/D027N/S058M/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, NOl 1K/E056K/S058M/P256T, P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/E045F/N073R/L075D, P029E/E045E/N073R/T189D, P029E/N033D/E045E/L075D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027S/I090F/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, AO18K/D027S/E045F/N073R/D137V, A018K/D027S/N033D/E045F/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/E045F7T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/E045F/N073R/L075D/T189D, AOl8K/G023K/D130A/V154I/G156W, AOl8K/G023K/K024A/D130A/G156W,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R, AOl8K/G023K/L075Q/D130A/V154I,

AO 18K/G023Q/A049V/L075Q/G156W, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V187T, A018K/G023Q/A049V/V077EV187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T,

AO 18 K/ G023Q/K024A/D13 O A/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W,

AO 18K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, AO 18K/G023Q/Í.075Q/V187T/T1891), AOl8K/G023Q/V077I/D130A/G156W, AOl8K/G023Q/V077I/V187T/T189D, AOl8K/K024A/L075Q/D130A/L264R, AOl8K/K024A/L075Q/V154I/G156W, AOl8K/K024A/L075Q/V154I/T189D, AOl8K/K024A/L075R/N094R/D130A, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T,

AOl 8K/E075Q/N094R/D130A/V187N, AOl 8K/E075Q/N094R/G156W/V187N, A018K/L075Q/V077I/N094R/G156W, A018K/N033D/E045F/L075D7T189D, A018K/P029E/E045F/N073R/L075D, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D, D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, E056K/L075Q/G156W/T189Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/F264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/F264R, F051T/F075G/V187N/I252Q/F264R, F051T/F075Q/G091Q/D130A/F264R,

F051 T/F075Q/V 187N/I252Q/F264R, F051T/S058M/F075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/F264R, G023K/D111A/V154I/V187T/F264R, G023K/E056K/D130A/V187T/F264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187T, G023K/E056K/F075R/V187N/F264R, G023K/E056K/F075R/V187T/F264R, G023K/K024A/E075R/D130A/G156W, G023K/E075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/F075Q/D130A/G156W/F264R, G023K/F075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/F075Q/V187H/I252Q/F264R, G023K/F075R/D130A/V187T/F264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/AÜ49V/FÜ75Q/G156W/T189D, G023Q/A049V/F075Q/G156W/V187T, G023Q/A049V/F075Q/V187T/T189D, G023Q/D027S/D111A/T189Q/F264R, G023Q/D027S/VI54I/V187N/F264K, G023Q/E045F/E075Q/G156W/T189D, G023Q/E045F/F075Q/V077I/V187T, G023Q/E056K/V187N/I252Q/F264R, G023Q/F051T/E075Q/G091Q/I252Q, G023Q/K024A/E075Q/G156 W/V187N, G023Q/K024A/E075Q/V077I/V187Q, G023Q/K024A/E075R/D130A/V1541, G023Q/K024A/E075R/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D 130A/V1541, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/E264R, G023Q/E075Q/D 130A/I252Q/F264R, G023Q/F075Q/V077I/D130A/G156W, G023Q/E075Q/V077I/G156 W/V 187N, G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/F264R, K024A/E075Q/D 111A/G156W/V187T, K024A/E075Q/V077I/G156W/V187N, K024A/F .075Q/V077I/V1541/V187N, K024A/F075R/V154I/G156W/V187Q, F075G/D130A/V187T/I252Q/E264R, F075Q/D111 A/D 130A/V187T/T189Q, F075Q/D111A/V187N/T189Q/F264R, E075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, F075Q/V1541/V 187N/T189Q/E264R, F075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, F075R/D130A/V154I/T189Q/F264R, E075R/D130A/V187T/T189Q/E264R, F075R/G156W/V187T/T189Q/E264R, N011K/D027N/E056K/N233Q/P256T, N011K/D027N/E056K/S058M/P256T, N011K/G023K/D111A/G156W/F264R, N011K/G023K/E056K/L075Q/T189Q. 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D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/Gl63P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091 Q/Vl 87N/1252Q, 1)0270/11)51 T/[ 1)750/1) 130A/V18711/1 /264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156 W/V 187N/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, 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G023Q/K024A/L075Q/D130A/VIMI/GI56W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, G023Q/L075R/V154FG156W/V187N/L264R, KÜ24A/D111 A/D 13ÜA/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V1541/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, K024A/L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075R/D111A/V154I/G156W/V187N, K024A/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D 111 A/D 130A/V154FG156 W/T189 Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, NO 11K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023K/D027S/V154FG156W/T189Q, NO 11K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, NO 11K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, P029E/N033D/K074S/L075D/N101D/T189D, Q004D/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/F227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/E045F/L075Q/V077FG156W/V187T/T189D, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V187Q,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156 W,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077PD130 A/G156 W, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077FN094R/V1541,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/D130 A/V154PV187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D13 O A/G 156 W,

AO 18 K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156 W/V 187N,

AO18 K/K024A/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, AO18 K/K024A/L075Q/D 130A/G156W/V187T/T189Q, AOl 8K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, AO 18 K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, AO 18 K/L075Q/D 111A/V154 W 187T/T189Q/L264R, AO 18 K/L075Q/N094R/D111 A/V 154I/V187T/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q, D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/E075R/D130A/T252Q/E264R, D027S/L075R/V154I/G156 W/V187N/T189Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, E051T/L075 G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091 Q/D 130 A/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D 130A/V187N, G023K/D027S/L075Q/N094R/V154EG156W/T189Q, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D 111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D 111A/V154EG156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/D 130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V187N, G023K/K024A/L075Q/V077ED130A/G156W/V187Q, G023K/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/L075R/N094R/V154I/G156 W/V 187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E045F/A049V/V077I/G156 W/V 187T/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V1541/G 156 W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130 A/Gl 56 W/V 187N, G023Q/K024A/L075Q/V077ED130A/V1541/G 156 W, G023Q/L075Q/D130A/V154EG156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154EV187N/T1S9Q/L264R, G023Q/L075Q/V077EN094R/D130A/G156 W/V 187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156 W/V 187Q, G023Q/S058M/Í 075G/G091 Q/l) 130A/T252Q/E264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111 A/D 130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W7T189Q, N011K/E056K/L075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/D111A/V154 W 187T/L264R, A018K/G023K/L075Q/V077ED130A/V1541/G 156 W/V 187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156 W/V 187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, AO18 K/ G023Q/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/G156W/V187Q, AO18 K/ G023Q/K024A/L075R/D13 O A/V 154EG156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I7D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W, AO18K/K024A/L075R/D130 A/V154I/G156W/V187T/L264R, AO18 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156 W/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, FÜ51T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130 A/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/VI87II/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V154PG156W/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130 A/V 154I/G156 W/V187N/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/E075R/G091Q/V187N/T252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D 130 A/V 154I/G156 W/T 189Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111 A/V 154I/V187N/T189Q/E264R. G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130 A/V 18711/I252Q/E264R, G023Q/E051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077ED130A/V154PG156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W7T189Q/L264R. G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, NO 11K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, NO 11K/G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R, NO 11K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q,

A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N,

AO18K/G023K/K024A/V077I/D130A/Y154I7G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154EG156W/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/FI135F/G156W,

A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/KÜ24 A/LÜ75 R/N094R/D130 A/V154I/G156 W/V187N,

A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D 130A/V154I/G156W/I.264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M7L075Q/G091Q/V187N/L264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q,

G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V 187N/T189Q/L264R,

G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

G023Q/E056K/T ,075Q/D 111A/D130A/V154T/G156W/T189Q/E264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023Q/L075Q/D 111A/V154EG156 W/V 187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

AO 18K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/II135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q,

G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077VD130A/V154I/V187T/T189Q,

N011K/G023K/L075R/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154FG156W/V187N/L264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156 W/V 187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/H135F/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049V/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10 8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

Tabla 8-2: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando media dosis de Tide® adyuvante en comparación con Tl L SEQ ID NO: 1

D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187T, L075R/L264R, N033D/E045F, P029E/N033D, V187T/L264R, A018K/E045I7V187T, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027E/S058M/G163P, D027S/L075Q/G091Q, D027S/N033D/T189D, D111A/D130A/L264R, F051T/I252Q/L264R, G023K/E056K/V187T, G023K/V187N/L264R, G023Q/A049V/T189D, G163P/L227M/L264R, L075G/D130A/V187H, L075Q/V187N/L264R, L075Q/V187T/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187N/L264R, P029E/N033D/E045F,

V 187N/T189Q/L264R, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/N033D/L075D/T189D, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/G163P/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, 14)56K/l) 130A/V187N/Í.264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/I252Q/L264R, F051T/L075Q/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/V187T/L264R, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/A049V/V077I/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, G023Q/L075Q/V 187T/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075G/V187H/I252Q/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R, N011K/D027S/N233Q/P256T, P029E/N073R/L075D/T189D, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/E045F/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/D130A/V154PG156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W,

A018K/G023 Q/V077I/I ) 130A/G156W, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/S058M/G163P/L227M/L264R, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075G/G091Q/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/E189Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/L075G/V187N/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/V 187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/V187N/I252Q/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V 187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/V187N/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/I252Q, G023Q/L075G/G091Q/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, K024A/L075R/V154I/G156W/V 187Q, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/D111 A/Gl56W/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/E227M/N233Q/E264R, A018K/G023K/K024A/V077T/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, AO18K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T1891). A018K/G023Q/K024A/V077I/V154EV187N, AO 18K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q. A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077ED130A/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/L075Q/D130A/V 187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/E264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, GÜ23Q/FÜ51T/G091Q/V187N/I252Q/L264R, GÜ23Q/F051T/LÜ75G/GÜ91Q/V187N/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, K024A/L075Q/N094R/D13 O A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, AO18 K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/ G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO 18 K/ G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AOl 8K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T,

AOl 8K/K024A/E075Q/V0771/N094R/D130A/G156W,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q/L264R,

D027Q/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

F051T/L075G/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N,

G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G156 W/V187N,

G023Q/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, N011K/A018K/K024A/Y077FV154FG156W/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/G156W,

D027E/D048Q/D 130 A/D 137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q,

G023Q/D027S/S058M/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

A018K/G023K/K024A/V077ED130A/V154EG156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/D130A/V154EV187T/T189Q,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/E264R,

AO18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 8-3: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando media dosis de Tide® adyuvante en comparación con Tl L SEQ ID NO: 1

P029E/N033D, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, G023Q/A049V/T189D, L075G/D130A/V187II, L075Q/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187N/L264R, P029E/N033D/E045F, A018K/D027S/P029E/T189D, AO18K/L075Q/V077I/N094R, A018K/N033D/L075D/T189D, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, C¡023K/l)130A/VIS7T/Í,264R, G023Q/A049V/V077I/G156W. L075G/D130A/V187T/I252Q, L075R/D130A/V187T/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D, S058M/D137Q/G163P/N233Q, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, Aül8K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, Aül8K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/D027S/E056K/V 137T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, (¡023K/l 4)56K/í 7)75R/V187N/Í.264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/E075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R,

AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/E227M/E264R, D027E/D130A/G163P/I.227M/N233Q/T.264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V187T/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/N094R/D111 A/G156W/V187T/I.264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, K024A/L075QA?077I/N094R/D130A/V187N, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154E(¡156W/V 187T, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, N011K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W/T189Q,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156WA7187Q,

A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

NO 11K/AO18 K/( 1023 K/K024A/í .075 R/V077I/I) 130A/V154I/V187T/T189Q,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/Í.264R,

AO18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N7T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T

Tabla 8-4: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2 en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando media dosis de Tide® adyuvante.

A018K/L075Q, A018K/T189D, G023K/D130A, K024A/L075Q, L075Q/D130A, L075Q/G156W, P029E/N033D, A018K/A049V/L075Q, A018K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, A018K/E045F/T189D, A018K/G023K/L075Q, A018K/G023Q/L075Q, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T, A018K/N033D/L075D, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A049V/V187T/T189D, D027S/N033D/T189D, D027S/N233Q/P256T, E056K/D130A/T189Q, G023K/V187N/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/L264R, G023Q/E056K/L075R, G023Q/L075Q/V0771, G023Q/L075Q/V187T, K024A/L075Q/V077I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W7T189D, L075Q/G156W/V187N, L075Q/V077I/T189D, L075Q/V154PV187T, L075Q/V187T/T189D, L075R/D130A/V187T, L075R/V187N/L264R, N073R/L075D/T189D, P029E/E045F/L075D, P029E/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, P029E/N073R/L075D, Q004D/N233Q/P256T, S058M/L227M/L264R, V077I/V187A/T189D,

AO 18K/A049V/L075Q/T189D, A018K/A049V/L075Q/V187T, A018K/D027S/N033D/L075D, AO 18K/D027S/P029E/T189D, A018K/E045F/L075Q/T189D, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/L075Q/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I, A018K/G023Q/L075Q/V187T, A018K/G023Q/V187T/T189D, A018K/L075Q/N094R/D111 A, A018K/L075Q/N094R/V187Q, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/N073R/L075D/T189D, A049V/L075Q/V077PT189D, A049V/L075Q/V187T/T189D, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D027S/P029E/N033D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/F227M/F264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E056K/L075Q/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/F075Q/D130A/V187N, G023K/L075Q/G156W/L264R, G023K/Í.075Q/G 156W/V187N, G023K/L075R/V187N/L264R, G023Q/A049V/L075Q/T189D, G023Q/A049V/L075Q/V077I, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, G023Q/K024A/F075R/V 1541, G023Q/L075Q/G156W/V187N, G023Q/L075Q/G156W/V187T, K024A/L075Q/V187T/T189Q, K024A/L075R/G156W/V187N, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075Q/D130A/G156W/V187N,L075Q/V077I/D130A/V187Q, í .075Q/V077I/G156W/V187N, F075Q/V077I/N094R/G156W, L075Q/V077I/V154I/V187Q, L075Q/V077I/V187T/T189D, L075R/D130A/V154EL264R, N011K/E056K/S058M/P256T, P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/E045F/N073R/L075D, P029E/E045F/N073R/'n 89D, P029E/N033D/E045F/L075D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027S/I090F/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, A018K/D027S/E045F/N073R/D137V, A018K/D027S/N033D/E045F/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, AO18K/D027S/N073R/L075D/T189D, AO18K/D027S/P029E/E045F/T189D, AO18K/D027S/P029E/N073R/L075D, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R, A018K/G023K/L075Q/D130A/V154I,

AO 18K/G023Q/A049V/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R,

AO 18K/K024A/L075Q/V154I/G156W, A018K/K024A/L075R/N094R7D130A, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/E075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/G156W/V187N, A018K/L075Q/V077I/N094R/G156W, A018K/N033D/E045F/L075D/T189D, A018K/P029E/E045F/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D, D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075Q/G156W/T189Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, (¡023K/l)027S/i;056K/Vl 87T/L264R, G023K/D111A/V154I/V187T/Í .264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075RA^ 187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K7L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/A049V/L075Q/G156W/T189D, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/A049V/L075Q/V187T/T189D, G023Q/D027S/V154I/V187N/L264R, G023Q/E045F/L075QA/077I/V187T, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187N, G023Q/K024A/F075Q/V077I/V187Q, ( 1023Q/K024A/Í4)75R/Ci 156W/V187Q.

G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I, G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, G091Q/D130A/V187II/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/G156W/V187T, K024A/L075Q/V077I/G156 W/V187N, K024A/E075Q/V077FV1541/V187N, K024A/E075R/V154FG156W/V187Q, L075Q/D111A/V187N/T189Q/L264R, L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/F264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075R/G156W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, N011K/G023K/E056K/L075Q/T189Q, P029E/N033D/E045F/F075D/T189D, P029E/N033D/K074S/L075D/T189D, P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027Q/E056K/N233Q/P256T, Q0Ü4D/NÜ11K/D027Q/E056K/N233Q, Q004D/N011K/I090E/N233Q/P256T, A018K/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, AO18K/D027S/N033D/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, AOl8K/G023K/D111A/D130A/V154PT189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/E075Q/G156W/V187N/L264R, AOl 8K/G023K/E075R/V077I/D 130A/V154I, AO 18K/G023Q/A049V/L075Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/T189D, A018K/(¡023Q/Í4)75Q/G156W/V187T/T1891), AOl8K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, AO 18 K/K024A/Í .075Q/N094R/V 154I/V187N, AO 18K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, AOl8K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, AO 18 K/L075Q/D 13 O A/V 154I/T189 Q/L264R, AO 18K/[ ,0750/1) 130A/V 187N7T189Q/1264R, AOl 8K/E075R/D130A/V1541/G156W/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/E264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/F264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/F264R, D027Q/F051T/F075Q/D130A/V187H/F264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/E056K/S058M/V 187T/I252Q/F264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, D048Q/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/F264R, DI 11A/D130A/V154I/G156W/V187N/F264R, F051T/F075G/G091 Q/D 130A/I252Q/F264R, G023K/D027S/F075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/F264R, G023K/K024A/F075Q/V154PG156W/V187Q, G023K/K024A/F075R/D130A/V154I/V187N, G023K/F075Q/D 111 A/D 130A/V1541/V187N, G023K/F075Q/N094R/V154I/V187T/L264R, G023K/L075Q/V0771/D130A/G156W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/F264R, G023Q/A049V/F075Q/G156W/V 187T/T189D, G023Q/D027Q/E056K/F075R/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E075Q/V 187T/I252Q, G023Q/E045F/E075Q/V077I/G156W/V187T, G023Q/E045F/E075Q/V07 1VN 187T/T189D, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, K024A/L075Q/V154W 187N/T189Q/L264R, K024A/N094R/V154FG156W/T189Q/L264R, L075Q/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, N011K/D027S/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023K/D027S/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, P029E/N033D/K074S/L075D/N101D/T189D, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/G156W, AOl 8K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

AOl 8K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V0771/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/V1541,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W,

AO18 K/K024A/L075Q/D111A/G156 W/V187N/L264R,

AO18 K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q,

AO 18 K/K024A/L075Q/D 130 A/V154PG156 W/V 187T,

AO 18 K/L075Q/D 111 A/D 130 A/V 154I/G156 W/L264R,

AOl 8K/L075Q/D111A/V154I/V187T/T189Q/L264R,

AO 18 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/V187T/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/E227M/N233Q/E264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q,

D027S/F051T/L075G/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/L075Q/N094R/V154PG156 W/T189Q, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q,

G023K/K024A/L075Q/D 111 A/V 154I/G156 W/V 187N, G023K/K024A/L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N,

G023K/ K024A/L075Q/V0771/D130A/G156W/V187Q,

G023K/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V 187T/L264R, G023K/L075R/N094R/V154PG156W/V187N/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R,

G023Q/E045F/A049V/V077I/G156 W/V187T/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V1541/G156W/T189Q, G023Q/F051T/L075R/G091Q/V187N/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130 A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/D130A/V154EG156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130 A/V 154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077EN094R/D130A/G156 W/V 187N, G023Q/L075Q/V077EN094R/D130A/G156 W/V 187Q, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154 W 187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018 K/G023K/K024A/L075Q/D 130Y/V154I/V187N/T189Q, A018 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V 187Q, AO18 K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/D111 A/V 154I/V187T/L264R, A018K/G023K/L075Q/V077ED130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018 K/G023Q/K024A/T ,075Q/V077T/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, AO 18 K/G023Q/L075Q/V077I/D130 A/V 154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/V154I/G156W, AO 18 K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156 W/V 187T/L264R, A018 K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D 130 A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091 Q/D 130 A/V 187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/F075R/D130A/V187T/F264R, G023K/F051T/E056K/F075R/G091 Q/D 130A/V187T/F264R, G023K/K024A/F075Q/N094R/V154I/G156 W/V 187T/L264R, G023K/K024A/F075R/N094R/V154I/G156W/V187T/T189Q, G023K/E075Q/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187N/E264R, G023Q/D027S/E056K/E075R/D111 A/V 154I/G156W/L264R,

G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187N/I252Q,

G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q,

G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/E056K/L075Q/D111A/V154I/V187N/T189Q/Í .264R.

G023Q/K024A/L075Q/V077ED130A/V154PG156W/V187N,

G023Q/L075Q/V077I/N094R/D 130A/V154I/G156W/V187Q,

N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I7G156W/T189Q,

N011K/G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V1541/1189Q,

AOl 8K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N,

AO 18 K/ G023K/L075Q/N094R/D111 A/V 154I/G156W/T189Q/L264R,

AO 18 K/ G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W,

AOl 8K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N,

AOl 8K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027S/E056K/E075Q/N094R/D111 A/Dl 30A/V154I/G156W/E264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091Q/V187N/L264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q,

G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154EG156W/V187N/L264R,

N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/L075Q/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D, AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/S058M/F075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, AOl 8K/G023Q/K024A/F075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/E075G/G091 Q/D 130A/I252Q/F264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/F075R/G091 Q/D 130A/V187H/1252Q/F264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q,

G023Q/L075R/N094R/D111 A/D 130 A/V 154I/G156 W/V187N/T189Q/L264R,

N011K/G023K/L075R/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049Y/S058M/N073S/L075Q/R108K/H135F/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049V/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10 8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

Tabla 8-5: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando media dosis de Tide® adyuvante en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

P029E/N033D, A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R,

G023Q/A049V/T189D, L075G/D130A/V187H, L075R/D130A/V187T, L075R/V187N/L264R,

P029E/N033D/E045F, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/L075Q/V077FN094R,

A018K/N033D/L075D/T189D, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027S/N033D/L075D/T189D,

D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R,

D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q,

P029E/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W,

A018 K/K024A/N094R/D130A/V187N, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233 Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/D027S/E056K/V 187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/F056K/F075R/V 187N/L264R,

G023 K/E056K/L075R/V 187T/L264R, G023K/L075Q/V077PD130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q,

N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W,

A018K/K024A/L075Q/V077PD130A/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/Y187T/I252Q,

D027S/E056K/S058M/V 187T/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

F051T/L075 G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q,

G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R,

G023 K/K024A/L075Q/V 154FG156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N,

G023K/N094R/D111 A/G 156 W/V 187T/F264R, K024A/L075Q/V077FN094R/D130A/V187N,

A018 K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

A018 K/K024A/L075Q/D 130A/V154I/G156 W/V 187'F

D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q,

A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

G023K/K024A/L075 Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/E264R,

AO18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 8-6: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando media dosis de Tide® adyuvante en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, L075R/D130A/V187T, D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D, AO 18K/K024A/N094R/D130A/V187N, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, K024A/L075R/V154PG156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154PG156W, D027E/D048 Q/D 130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048 Q/D 137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, D027E/D048 Q/D 130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 8-7: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando dosis completa de Tide®.

A018K/D027S, A018K/L075Q, A018K/T189D, D027N/E056K, D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187N, E045F7T189D, G023K/D130A, G023K/L264R, K024A/L075Q, K024A/V154I, L075Q/D130A, L075Q/G156W, L227M/L264R, N033D/E045F, P029E/N033D, V187T/L264R, A018K/A049V/L075Q, A018K/D027S/E045F, A018K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, AO18K/E045E/T189D, A018K/G023K/G156W, A018K/G023K/L075Q, A018K/G023Q/L075Q, AO18K/K024A/V1541, A018K/L075D/T189D, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T, A018K/N033D/L075D, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, A049V/V187T/T189D, D027E/S058M/G163P, D027Q/N233Q/P256T, D027S/N033D/T189D, D027S/N233Q/P256T, D111A/D130A/L264R, E045F/N073R/L075D, E056K/D130A/T189Q, G023K/D130A/F264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T, G023K/V187N/E264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/F264R, G023Q/E056K/E075R, G023Q/K024A/G156W, G023Q/L075Q/V077I, G023Q/L075Q/V187T, K024A/E075Q/G156W, KÜ24A/F075Q/V077F F075G/D130A/V187H, F075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W/T189D, E075Q/G156W/V187N, L075Q/G156W/V187T, L075Q/V077I7T189D, L075Q/V154I/V187T, L075Q/V187N/L264R, F075Q/V187T/E264R, E075Q/V187T7T189D, F075R/D130A/L264R, E075R/D13 O A/V187T, F075R/V187N/L264R, E075R/V187T/E264R, N011K/D027S/S058M, N033D/E045F/N073R, N033D/N073R/T189D, N073R/L075D/T189D, P029E/E045F/L075D, P029E/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/L075D, P029E/N073R/L075D, S058M/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I, V077I/V187A/T189D, VI87N/T189Q/Í.264R, A018K/A049V/L075Q/T189D, AO 18K/A049V/L075Q/V187T, A018K/D027S/E045F/N073R, AO 18K/D027S/E045F/T189D, AOl8K/D027S/N033D/L075D, AOl8K/D027S/P029E/T189D, AO 18K/E045F/L075D/T189D, A018K/E045F/L075Q/T189D, A018K/E045F/L075Q/V187T, AOl 8K/G023K/D111 A/Tl 89Q, AOl 8K/G023Q/A049V/T189D, AOl 8K/G023Q/A049V/V187T, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I, A018K/G023Q/L075Q/V187T, AOl8K/G023Q/L075R/DBOA, AO 18K/G023Q/V077I/V187T. AOl8K/G023Q/V187T/T189D, A018K/L075Q/G156W/T189D, AO 18 K/I J)75Q/(i 156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D111A, A018K/L075Q/N094R/V187Q, A018K/L075Q/V077I/N094R, A018K/L075Q/V187T/T189D, A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/N073R/L075D/T189D, A018K/P029E/N033D/T189D, A018K/P029E/N073R/L075D, A049V/L075Q/V077I/T189D, A049V/E075Q/V187T/T189D, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D027S/P029E/N033D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R, DI 11 A/D13()y\/V154I/F264R. D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130AA/187T/L264R, E056K/L075Q/V187N/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D027S/L075Q/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/L264R, G023K/E056KA^ 187T/L264R, G023K/K024A/V154I/V1S7N, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075Q/G156W/L264R, G023K/L075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187N/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/A049V/L075Q/T189D, G023Q/A049V/L075Q/V077I, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/A049V/V 187T, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/K024A/L075R/V1541, G023Q/L075Q/G156W/V187N, G023Q/L075 Q/G 156 W/V187T, G023Q/L075Q/V187T/L264R, K024A/I ) 130A/V 1541/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/E075Q/V 187T/T189Q, K024A/L075R/G156W7V187N, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/V077ED130A/V187 Q, r.075Q/V077I/G 156W/V187N, L075Q/V077I/N094R/G156W, E075Q/V077I/V 154T/V187Q, [ .075Q/V077I/V IS7T/T1891), L075R/D11 IA/V1541/G156W, L075R/D130A/V154I/L264R, N011K/D027N/S058M/P256T, N011K/D027S/E056K/P256T, N011K/D027S/N233Q/P256T, N011K/G023K/L075Q/D111 A, P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/E045F/N073R/L075D, P029E/E045F/N073R/T189D, P029E/N033D/E045F/L075D.

P029E/N033D/F075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027S/I090F/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, Q004D/N011K/D027Q/N233Q, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, A018K/D027S/F045F/N073R/D137V, A018K/D027S/N033D/E045F/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, AO18K/D027S/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/E045F/T189D, AO18K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/E045F/A049V/L075Q/V187T,

AO 18K/E045F/N073R/L075D/T 189D, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R,

AO 18K/G023K/L075Q/D 130A/V1541, AO 18K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/A049V/L075Q/G156W, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V077I, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V187T, A018K/G023Q/A049V77077EV187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q, A018K/G023Q/E045F/A049V/V187T,

AO 18K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/E045F/V077VT189D,

AO 18K/G023Q/K024A/D130A/V 1541, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q,

AO 18K/G023Q/K024A/L075Q/G 156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/V077FD130A/G156W, A018K/G023Q/V077T/V187T/T189D, A018K/K024A/[ ,0750/1) 130A/[ ,264R, A018K/K024A/L075Q/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V154I/T189D,

AO 18K/K024A/L075R/D130A/V1541, AO 18K/K024A/L075R/N094R/D BOA, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, AO 18 K/í ,075Q/N094R/( i 156W/V187N, A018K/L075Q/V077I/N094R/G156W, A018K/N033D/E045F/L075D/T189D, A018K/P029E/E045F/N073R/L075D, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, A018K/V077EG156W/V187T/T189D, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, D027S/E075R/V154I/T 189Q/L264R, D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D, DÜ27S/P029E/N073R/LÜ75D/T189D, DÜ48Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075Q/G156W/T189Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091 Q/D 130A/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/D111A/V154I/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111 A/D 130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/E075Q/D 130A/V154T/T189Q, G023K/E075Q/V077T/D130A/G156W, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/A049V/L075Q/G156W/T189D, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/A049V/L075Q/V187T/T189D, G023Q/D027S/V154I/V187N/L264R, G023Q/E045F/A049V/G156W/T189D, G023Q/E045F/L075Q/G156W/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077I/V187T, G023Q/K024A/L075Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/V077I/V187Q, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/K024A/V077I/D130A/V1541, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/G156W/V187T, KÜ24A/L075Q/V077I/G156W/V187N, K024A/L075Q/V077I/V154EV187N, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075Q/D 111 A/D 130A/V 187174189Q, L075Q/D111 A/V 187N/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, L075R/D111 A/D 130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075R/G156W/V187T/T189Q/F264R, L075R/V077I/N094R/V1541/G156W, N011K/D027N/E056K/N233Q/P256T,

NOl 1K7D027N/E056K/S058M/P256T, NOl 1K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, N011K/G023K/E056K/L075Q/T189Q, P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, P029E/N033D/K074S/L075D/T189D, P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027S/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/N233Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, SOS8M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/D027S/N033D/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, A018K/E045F/A049V/L075Q/V0771/V187T, A018K/G023K/D111A/D130A/V1541/T189Q, AOl8K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, AO18K/G023K/K024A/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/K024A/V077EG156W/V187Q, AOl3K/G023K/ÍD75Q/DI30A/GI56W/VIS7N, AO 18K/G023K/L075Q/G156 W/V187N/L264R, A0I8K/G023K/E075Q/V077I/GI56W/VI87Q, AOl8K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, AO 18K/G023K/L075R/V077I/D130A/V1541, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/A049V/L075Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/T189D, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077I, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V187T, AO 18K/G023Q/14)451 ;/í .075Q/G 156W/V 187T, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, AO 18K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, AOl8K/G023Q/Il)75Q/V077l/m30A/VI87N, AOl 8K/G023Q/F075Q/V0771/G156W/V187N, AO 18K/G023Q/1D75Q/V0771/N094R/V 1541, AOl8K/G023Q/E075Q/V077I/V187T/T189D, AOl8K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, AOl8K/K024A/D111A/V187N/T189Q/F264R, AO 18K/K024A/E075Q/N094R/V154I/G156W, AOl8K/K024A/E075Q/N094R/V154I/V187N, AO 18K/K024A/E075Q/V077LD130A/V187N, AOl8K/K024A/E075R/D130A/V187N/T189Q, AOl8K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, AOl8K/E075Q/D130A/V154I/T189Q/F264R, A018K/F075Q/D130A/V187N/T189Q/E264R, A018K/E075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A0I8K/N094R/DIIIA/DI30A/VI54I/VI87N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/E264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/F227M/F264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/E264R, D027E/D048Q/S058M7G163P/N233Q/F264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/F227M/N233Q/F264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/F264R, D027Q/F051T/E075G/D130A/I252Q/E264R, D027Q/F051T/E075G/G091Q/V187N/I252Q, D027Q/F051T/E075Q/D130A/V187H/F264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/1252Q, D027S/E056K/S058M/'V187T/1252Q/L264R, D027S/G091Q/D130A/V187N/I252Q/E264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/T189D, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, DI 11A/D130A/V154I/Ci 156W/V187N/Í.264R. E045F/A049V/L075Q/V077I7V187T/T189D, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/E056K/S058M/F075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/F075R/V187N/I252Q/F264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/F075R/D130A/V187N/F264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/F264R, G023K/K024A/F075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/E075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/E075Q/V154I/G156W/V187Q, C ¡023K/K024A/Í 4J75R/D 130A/V154I/VIS7N, G023K/F075G/D130A/V187T/I252Q/F264R, G023K/F075Q/D111A/D130A/V154W187N, G023K/L075Q/N094R/V154I/V187T/L264R, G023K/F075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, G023Q/D027Q/E056K/L075R/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/L075Q/V187T/I252Q, G023Q/D027S/E075Q/D 111A/G156W/E264R, G023Q/E045F/A049V/F075Q/G156 W/V 187T, G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077I/V187T, G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T, G023Q/E045F/L075Q/V077I/V187T/T189D, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/D 130A/V154EG156W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187N, C;023Q/K024A/V077I/D 130A/V154I/G156W, G023Q/L075QA^077I/N094R/D130A/V 187Q, G023Q/L075R/V154I/G156W/V 1 S7\7L2Ó4R, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075QA^077I/N094R/D130A/V 187N, K024A/L075QA^154I/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V 1541/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, K024A/N094R/V154I/G156W/T189Q/Í 264R, í .0750/1) 111 A/Dl30A/V154T/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V154EG156W/V187N/L264R, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, N011K/D027S/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023K/D027S/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, P029E/N033D/K074S/L075D/N101D/T189D. Q004D/D027N/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, AO18 K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AO18 K/ G023K/K024A/L075Q/D 130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

AO 18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/G156 W,

AO18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, AO18K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, AOl 8K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R, A018K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156W, AOl 8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156W/V187T, AOl 8K/G023Q/E045F/F075Q/V077I/G156W/V187T, AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W, AOl 8K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/V154I, AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V0771/D130A/G156W, AOl 8K/G023Q/E075R/V077I/N094R/G156W/V187N, AO 18 K/K024A/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, AO 18 K/K024A/L075Q/D 130 A/G156 W/V187T/T189Q, AO 18 K/K024A/L075Q/D 130 A/V154I/G156 W/V 187T, AO 18 K/K024A/L075Q/V077EN094R/D13 O A/G 156 W, AO 18 K/L075Q/D111A/D130 A/V 154PG156 W/L264R, AO 18K/L075Q/D111A/V154I/V187T/T189Q/L264R, AOl 8K/L075Q/N094R/D111A/V154I/V187T/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/E227M/E264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/F075G/D130A/V187H/I252Q/F264R, D027Q/F051T/F075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/F075G/G091Q/V187T/I252Q/F264R, D027S/F075R/V154I/G156W/V187N/T189Q/F264R, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R/F075D/T189D, D048Q/D130A/D137Q/G163P/F227M/N233Q/F264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/F227M/N233Q/F264R, E056K/F075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/F075G/D130A/V187H/E264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q, G023K/D027S/F075Q/N094R/V154FG156W/T189Q, G023K/F051T/F056K/F075R/D130A/V187T/1252Q, G023K/K024A/E075Q/D 111A/V154PG156W/V187N, G023K/K024A/E075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/E075Q/N094R/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/L075Q/V077ED130A/G156W/V187Q, G023K/L075Q/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/L075R/N094R/V154EG156 W/V187N/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091 Q/V 187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E045F/A049V/V077I/G156 W/V 187T/T189D, G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, G023Q/E056K/L075Q/D111A/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130 A/Gl 56 W/V 187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130 A/V 154EG156 W, G023Q/L075Q/D 111A/D130A/V154I/G156W/Í .264k, G023Q/L075Q/D130A/V154EG156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D 130 A/V 1541/V187N/T1S9Q/L264R, G023Q/L075Q/V077EN094R/D130A/G156 W/V 187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156 W/V 187Q, K024A/E075Q/D111 A/Dl 30A/V187N/T189Q/E264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111 A/D 130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/AO18K/K024A/V077I/V154I/G156W/T189Q, N011K/D027S/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077LD130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/D111 A/V 1541/V 187T/L264R, A018K/G023K/L075Q/V077ED130A/V154I/GI56W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130 A/V154I/G156 W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D13 O A/G156 W, AO18 K/G023Q/L075Q/V077LD13 OA/V154I/G156 W/V187N, AO18 K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130 A/V 154P G156 W,

AO 18 K/K024A/L075R/D 130A/V154I/G156W/V187T/L264R,

AO 18 K/L075Q/N094R/D111 A/V 154I/G156W/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F056K/F075G/D130 A/V 187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/F075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/E056K/E075R/G091Q/D130 A/V 187T/E264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/F264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V154I/G156W/V187T/T189Q, G023K/E075Q/D 111 A/V 154I/G156W/V187N/T189Q/E264R, G023K/E075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/E264R, G023Q/D027S/E056K/F075R/D111A/V154I/G156W/F264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091 Q/V 187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/Dl 30A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/E264R, G023Q/D027S/F075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, G023Q/E056K/F075Q/D111 A/V 154I/V187N/T189Q/F264R, G023Q/E056K/F075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/F264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I7D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154PV187N, G023Q/F075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/F264R, G023Q/F075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, K024A/D111 A/D 130A/V154FG156W/V187T/T189Q/F264R, N011K/G023K/D027S/E075R/V154PG156W/V187N/T189Q, N011K/ G023K/E056K/L075Q/D 130A/V154I/T189Q/F264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/D027S/N094R/V1541/G156W/1189Q/F264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/F264R,

AO 18 K/ G023K/K024A/F075Q/N094R/D111 A/D 13 OA/V 154I/T189 Q, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, AO18K/G023K/K024A/V077I/D130A/Y154I7G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R.

A018K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/FI135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/G156W/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W, A018K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/KÜ24 A/LÜ75 R/N094R/D130 A/V154I/G156 W/V187N, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M7L075Q/G091Q/V187N/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V 187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091 Q/Vl 87N/I252Q/L264R, G023Q/D027S/E075Q/N094R/D130A/V154T/G156W/V187N/E264R,

NO 11K/G023K/L075R/D111 A/D 130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023Q/L075Q/D111A/V154PG156 W/V 187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, AO 18K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/II135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I7N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/1189Q/L264R, NO 11K/AO18 K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023K/L075R/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, AO18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T,

NOl 1K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/H135F/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049Y/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10 8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

Tabla 8-8: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando dosis completa de Tide® en comparación con TLL SEQ ID NO: 1

D027S/N033D, D130A/L264R, D130A/V187N, G023K/L264R, K024A/V154I, L227M/L264R, N033D/E045F, P029E/N033D, V187T/L264R, A018K/K024A/V154I, A018K/L075D/T189D, AOl8K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, D027E/S058M/G163P, D027S/N033D/T189D,

D l l l A/D 130A/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023K/E056K/V187T, G023K/V187N/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/K024A/G156W, L075G/D130A/V187H, L075Q/V 187N/L264R, L075Q/V187T/L264R, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, L075R/V187N/L264R, L075R/V187T/L264R, P029E/N033D/E045F, V187N/T189Q/L264R,

AO 18K/D027S/P029E/T189D, AOl8K/E045F/L075D/T189D, AOl8K/G023K/D111 A/Tl89Q, AOl8K/G023Q/A049V/V187T, AOl8K/L075Q/V077I/N094R, AOl8K/N033D/L075D/T189D, AOl8K/P029E/N073R/L075D, D027E/D137Q/G163P/L227M, D027E/D137Q/L227M/L264R, D027E/L227M/N233Q/L264R, D027S/N033D/E045F/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/N073R/T189D, D027S/P029E/E045F/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075Q, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/V 187T/L264R, G023K/K024A/V154I/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023K/L075R/V187T/L264R, G023Q/K024A/L075R/G156W, G023Q/L075Q/V187T/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V 187T/I252Q, NOl 1K/D027S/N233Q/P256T, P029E/N073R/L075D/T189D, S058M/D137Q/G163P/N233Q, S058M/G163P/N233Q/L264R, S058M/L075Q/G091Q/I252Q, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/E045F/N073R/L075D/T189D, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W,

AO 18K/G023K/K024A/D130A/G156W, AO 18K/G023K/V077I/D130A/V187N,

AO 18K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I,

AO 18K/K024A/N094R/D130A/V187N, AOl8K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D137Q/G163P/N233Q, D027S/E056K/D111A/V187N/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233E, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/L075G/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, F051T/S058M/L075Q/G091Q/I252Q, G023K/D027S/E056K/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, GÜ23K/LÜ75Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, G023Q/K024A/L075Q/G156 W/V187Q, G023Q/L075Q/V077ED130A/G156W, K024A/L075R/V154EG156 W/V 187 Q, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, AO18K/D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/E045F/L075D, A018K/G023K/K024A/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/Í V75Q/V077I/G 156W/V 187Q, A018K/G023Q/A049V/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/D111A/V187N/T189Q/L264R, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/E075Q/V077I/D130A/V 187N, AO 18 K/N094R/D111A/D13 O A/V1541/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/E227M/E264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/E264R, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q, D027Q/S058M/E075R/D130A/V187T/I252Q.

D027S/E056K/S058M/V 187T/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023K/D027Q/E051T/E056K/S058M/L075Q, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156W/V187Q, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/V0771/D130A/V154I/G156W, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, Q004D/N011K/D027N/I090F/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/S058M/N233Q/P256T, S058M/D13 O A/D 137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

Aü 18K/G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/V187Q, AO18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, A018K/G023K/L075Q/V077I/N094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N,

AO 18 K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T,

AO 18 K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D13 O A/G156 W, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/G091Q/V187N/I252Q,

G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130 A/G 156 W/V187N,

NO 11K/AO18K/K024A/V077PV154PG156W/T189Q, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077PD130A/V154I/G156W,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D 130 A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075R/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/V077PD130A/V154PG156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/ G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, NO 11 K/AO 18K/G023K/K024A/L075R/V077PD130A/V154I/V187T/T189Q, A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V0771/R108K/H135F/G156W/V187T Tabla 8-9: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando dosis completa de Tide®en comparación con TLL SEQ ID NO: 1.

A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R,

L075R/D13ÜA/V187T, L075R/V187N/L264R, A018K/D027S/P029E/T189D,

AO18K/L075Q/V0771/N094R, A018K/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045E,

D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, G023K/D130A/V187T/E264R.

P029E/N073R/L075D/T189D, A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V187T/T189D, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/D027S/E056K/V187T/E2Ó4R, G023K/E056K/D130A/V187T/Í 264R, G023K/E056K/F ,075R/l) 130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V 187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R,

K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023K/E075Q/V077I/G156W/V187Q,

A018K/K024A/L075Q/V077PD130A/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

DÜ27E/D137Q/G 163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V154I/G156 W/V187Q,

G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q,

A018 K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130 A/V1541, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130 A/D137 Q/L227M/N233Q/L264R, N011K/A018K/K024A/V077T/V154T/G156W/T189Q,

Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R, A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V187N/T189Q/L264R,

NO 11K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

NO 11K/A018 K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q,

A018K/G023K/L075R/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R Tabla 8-10: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento >1 en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2 en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando dosis completa de Tide®

A018K/L075Q, A018K/T189D, E045F/T189D, G023K/D130A, K024A/L075Q, L075Q/D130A, L075Q/G156W, L227M/L264R, A018K/A049V/L075Q, A018K/D027S/N073R, A018K/D027S/T189D, A018K/E045F/T189D, A018K/G023K/L075Q, A018K/G023Q/L075Q, A018K/L075D/T189D, A018K/L075Q/G156W, A018K/L075Q/V187T, A018K/N033D/L075D, A018K/N073R/L075D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W, D027S/N033D/T189D, D027S/N233Q/P256T, E056K/D130A/T189Q, G023K/V187N/L264R, G023Q/A049V/T189D, G023Q/D111A/L264R, G023Q/E056K/L075R, G023Q/L075Q/V077I, G023Q/Í.075Q/V187T, K024A/L075Q/G156W, K024A/L075Q/V0771, L075G/D130A/V187H, F075Q/D130A/V187T, L075Q/G156W/T189D, L075Q/G156W/V187N, F075Q/G156W/V187T, L075Q/V077PT189D, L075Q/V154PV187T, L075Q/V 187N/L264R, L075Q/V187T/T189D, F075R/D130A/V187T, F075R/V187N/F264R, N073R/L075D/T189D, P029E/E045F/L075D, P029E/L075D/T189D, P029E/N033D/E045F, P029E/N033D/L075D, P029E/N073R/L075D, S058M/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I, V077I/V187A/T189D, V187N/T189Q/L264R, A018K/A049V/L075Q/T189D, A018K/A049V/L075Q/V187T, A018K/D027S/E045F/N073R, A018K/D027S/E045F/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/A049V/T189D, A018K/G023Q/E045F/T189D, A018K/G023Q/E045F/V187T, A018K/G023Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075Q/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I, A018K/G023Q/L075Q/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/G023Q/V077I/V187T, A018K/G023Q/V187T/T189D, A018K/L075Q/G156W/T189D, A018K/L075Q/N094R/D111A, A018K/L075Q/N094R/V187Q, AO18K/íi)75Q/V077I/N094R, AO18K/F075Q/V 187T/T1891), A018K/N033D/L075D/T189D, A018K/N073R/L075D/T189D, A018K/P029E/N033D/T189D, A049V/L075Q/V187T/T189D, D027S/E056K/D111A/V154I, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/E045F/L075D, D027S/P029E/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D027S/P029E/N033D/T189D, D048Q/D130A/G163P/L264R,

DI 11A/D130A/V154I/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E056K/L075Q/V187N/L264R, G023K/D027S/L075Q/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075Q/G 156W/L264R, G023K/Í.075Q/G156W/V187N, G023K/L075R/V187N/L264R, G023Q/A049V/L075Q/T189D, G023Q/A049V/L075Q/V077I, G023Q/D027S/D111A/G156W, G023Q/E045F/A049V/T189D, G023Q/E045F/L075Q/G156W, G023Q/E045F/L075Q/V187T, G023Q/K024A/F075R/V1541, G023Q/L075Q/G156W/V187N, G023Q/L075Q/G 156W/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/V187T/T189Q, K024A/L075R/G156W/V187N, í .075Q/l) 130A/G156W/V187N, í .075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/V077LD130A/V187Q, E075Q/V077I/G156W/V187N, L075Q/V077I/N094R/G156W, L075Q/V077I/V154iyV187Q, L075Q/V077W187T/T189D, L075R/D111A/V154I/G156W, L075R/D130A/V154EL264R, N011K/D027N/S058M/P256T, NOl 1K/D027S/E056K/P256T, NOl 1K/G023K/L075Q/D111 A, P029E/E045F/L075D/T189D, P029E/E045F/N073R/L075D, P029E/E045F/N073R/T189D, P029E/N033D/L075D/T189D, P029E/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027S/I090F/P256T, Q004D/N011K/D027N/P256T, Q004D/N011K/D027Q/N233Q, AO18K/D027S/E045F/N073R/D137V, AOl8K/D027S/N033D/E045F/T189D, A018K/D027S/N033D/L075D/T189D, A018K/D027S/N073R/L075D/T189D, AOl8K/D027S/P029E/E045F/T189D, AOl8K/D027S/P029E/N033D/L075D,

AO 18 K/E045F/A049V/L075Q/V187T, AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R, AOl8K/G023K/L075Q/D130A/V1541, A018K/G023Q/A049V/L075Q/G156W, AOl8K/G023Q/A049V/L075Q/V077I, AO 18K/G023Q/A049V/I,075Q/V187T, A018K/G023Q/A049V/V077I/V187T, AOl8K/G023Q/E045F/A049V/L075Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V187T, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I,

AO 18K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T, AOl8K/G023Q/L075Q/V187T/T189D, A018K/G023Q/V077I/V187T/T189D, AOl8K/K024A/L075Q/D130A/L264R, A018K/K024A/L075Q/V154I/G156W, AOl8K/K024A/L075R/D130A/V1541, AO 18K/K024A/L075R/N094R/D130A, AOl8K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/G156W/V187N, A018K/L075Q/V077I/N094R/G156W,

AOl 8K/N033D/E045F/E075D/T189D, AOl 8K/P029R/E045F/N073R/E075D, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D048Q/S058M/G163P/N233Q, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, E)027S/r.075R/V154I/T189Q/G264R, D027S/N033D/E045F/N073R/L075D, D027S/N033D/N073R/L075D/T189D, D027S/P029E/N033D/E045F/N073R, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D, D027S/P029E/N073R/L075D/T189D, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D137Q/G163P/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075QA^ 187T/T189D, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075Q/G156W/T189Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/D027S/E056K^/187T/L264R, G023K/D111A/V154I/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/K024A/L075R/D 130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075Q/V187H/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q.

G023Q/A049V/L075Q/G156W/T189D, G023Q/A049V/L075Q/G156W/V187T, G023Q/A049V/L075Q/V187T/T189D. G023Q/D027S/V154I/V187N/L264R, G023Q/E045F/L075Q/G 156W/T 189D, G023Q/E045F/L075Q/V077I/V187T, G023Q/K024A/L075Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075Q/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/V187Q, G023Q/K024A/L075R/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/K024A/V077ED130A/V1541, G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/G156W/V187T, K024A/L075Q/V077EG156W/V187N, KÜ24A/LÜ75Q/V077I/V154EV187N, K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, L075Q/D111A/V187N/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077FD130A/G156W/V187N, L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075R/G156W/V187T/T189Q/L264R, L075R/V077EN094R/V154EG156W, N011K/D027N/E056K/N233Q/P256T, N011K/D027N/E056K/S058M/P256T, N011K/G023K/D111A/G156W/L264R, N011K/G023K/E056K/L075Q/T189Q, P029E/N033D/E045F/L075D/T189D, P029E/N033D/K074S/L075D/T189D, P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, Q004D/D027S/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/N233Q, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/D027S/N033D/E045F/L075D/T189D, A018K/D027S/P029F/N073R/E075D/T189D, A018K/E045F/A049V/E075Q/V077T/V187T, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075Q/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/L075Q/V077I/G156W/V187Q, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077ED130A/V154I, AO18K/G023Q/A049V/L075Q/V0771/V187T, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/T189D, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V0771, A018K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/V187T, A018K/G023Q/E045E/L075Q/G156W/V187T, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W, A018K/G023Q/L075Q/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077ED130A/V187N, A018K/G023Q/L075Q/V077I/G156W/V187N, A018K/G023Q/L075Q/V077I/V187T/T189D, A018K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077ED130A/V187N, AO 18K/K024A/L075R/D130A/V187N7T189Q, A018K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/L075Q/D 130A/V187N7F189Q/L264R, A018K/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D13OA/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V18711/L264R, D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, F051T/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075Q/V154FG156W/V187Q, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/L075Q/D 111 A/D 130A/V154W 187N, G023K/L075Q/N094R/V154I/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156 W/V187Q, G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, GÜ23Q/A049V/L075Q/G156W/V187T/T189D, G023Q/D027Q/E056K/L075R/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F05FF/L075Q/V187T/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D111A/G156W/L264R, G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156 W/V 187T, G023Q/E045F/A049V/L075Q/V077PV187T, G023Q/E045F/L075Q/V077FV187T/T189D, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D 130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V154FG156W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, G023Q/L075R/V154FG156W/V187N/L264R, K024A/D111 A/D 130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V154I/V187T/T189Q/L264R, K024A/N094R/V154FG156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111 A/D 130A/V154PV187N/T189Q, L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, N011K/D027N/S058M/I090F/N233Q/P256T, N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, NOl 1K/D027S/S058M/T090F/N233Q/P256T, N011K/E056K/F075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023K/D027S/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, NO 11K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, P029E/N033D/K074S/L075D/N101D/T189D, Q004D/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q, AOl 8K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156 W/V 187Q,

AO18 K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/G156W, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154F

AO 18K/G023K/K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/N094R/V154I/V187T/L264R,

AO 18 K/G023K/L075Q/V077FN094R/V154I/G156 W,

AO 18 K/G023Q/E045F/A049V/L075Q/G156 W/V 187T, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077FG156W/V187T,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075 Q/V077I/D130 A/G156 W,

AO 18 K/G023Q/K024A/L075Q/V077PN094R/V1541,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/D130A/VI54I/V187N,

AOl 8K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W/V187N,

AO18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, AO 18 K/K024A/L075Q/D111A/G156 W/V187N/L264R, AO 18 K/K024A/L075Q/D 130A/G156W/V 187T/T189Q, AO 18 K/L075Q/D 111A/V154 W 187T/T189Q/L264R, AO 18 K/L075Q/N094R/D111 A/V 154I/V187T/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/F075Q/G091 Q/D 130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/F075G/G091Q/V187T/I252Q/F264R, D027S/P029F/N033D/F045F/N073R/L075D74189D, D048Q/D130A/D137Q/G163P/F227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/F264R, E056K/F075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/E075G/D130A/V187H/E264R, G023K/D027S/E075Q/N094R/V154I/G156 W/T189Q, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/K024A/E075Q/D 111A/V154PG156W/V187N, G023K/K024A/E075Q/D 130A/V187T/T189Q/E264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/1,075Q/V077T/D130 A/G 156 W/V 187Q, G023K/F075Q/D 111A/V154I/G156W/T189Q/F264R, G023K/F075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/F264R, G023K/F075Q/N094R/V154I/G156W/V187T/F264R, G023K/F075R/N094R/V154I/G156W/V187N/F264R, G023Q/D027S/F075Q/G091 Q/V 187T/I252Q/F264R, G023Q/E045F/A049V/V077I/G156W/V187T/T189D, G023Q/E045F/E075Q/V077FG156W/V187T/T189D, G023Q/E056K/F075Q/D 130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/F051T/F075R/G091 Q/V 187N/I252Q/F264R, G023Q/K024A/F075Q/V077PD130A/G156 W/V 187N, G023Q/K024A/F075Q/V077PD130 A/V 154FG156W, G023Q/F075Q/D130A/V154PG156W/T189Q/F264R, G023Q/F075Q/D130A/V1541/V187N/T189Q/L264R, G023Q/E075Q/V077I/N094R/D130 A/G156W/V187Q, K024A/E075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/F264R, E075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/E264R, NOl 1K/D027S/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q,

NOl 1K/E056K/L075Q/D130A/V154 W 187N/T189Q,

NOl 1K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, Q004D/N011K/D027Q/E056K/S058M/N233Q/P256T, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077ED130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W, AOl 8K/G023K/K024A/L075R/D111A/V154I/V187T/L264R, A018K/G023K/F075Q/V0771/D130A/V1541/G156W/V187N, AOl 8K/G023K/F075R/V077I/N094R/D 130A/G156W/V187Q, AOl 8K/G023Q/E045F/E075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, AO18 K/ G023Q/K024A/L075Q/V077I/D13 O A/G156W/V187Q, AO18 K/ G023Q/K024A/L075R/D13 O A/V 154PG156 W/V 187N, AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D13 O A/V 154I/G156W, AO 18 K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130 A/G156 W, AO 18 K/G023Q/L075Q/V077I/D130 A/V 154I/G156W/V187N, AOl 8 K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/V154I/G156W, AOl 8K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, AOl 8K/E075Q/N094R/D111 A/Vl 54I/G156W/T189Q/E264R, D027E/D048Q/D130 A/D 137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187T/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156 W/V187T/L264R, G023K/K024A/L075R/N094R/V154I/GI56W/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D111A/V154EG156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156 W/V 187N/L264R, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111 A/V 154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/F075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/F264R, G023Q/F056K/L075Q/D111 A/V 154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/N094R/D111A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/E264R, G023Q/F075Q/V077I/N094R/D130 A/V 154I/G156 W/V 187Q, N011K/G023K/D027S/L075R/V154I/G156W/V187N/T189Q, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/V154FG156W/T189Q, N011K/G023Q/D027S/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/V154I/G156W/T189Q/L264R,

AOl 8K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, AOl 8K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/T189Q/L264R, A018K/G023Q/D027S/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V0771/R108K/G156W/V187H, AO18 K/ G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108 K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/V077I/R108K/H135F/G156W, AOl 8K/G023Q/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D,

AO 18 K/ G023Q/K024A/L075R/N094R/D130 A/V154I/G156W/V187N, AOl 8K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/D 130A/V154I/G156W/[ 264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111 A/l) 130A/VIS7N/T189Q/Í.264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075Q/G091Q/V187N/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/V187H/I252Q, G023K/D027S/E075Q/D111A/D130A/V1541/G156W/T189Q/E264R, G023K/E056K/L075Q/D111 A/D 130 A/V154I/G156 W/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075G/G091 Q/V 187N/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154EG156W/V187N/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111 A/V 154I/G156W/V187N/T189Q/E264R, A018K/G023Q/D027S/E045F/A049V/N073S/L075Q/R108K/V187T/T189D, AOl 8K/G023Q/D027S/E045F/A049V/S058M/L075Q/R108K/V187T/T189D, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/H135F/G156W/V187T, AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, A018K/G023Q/D027S/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/G156W/V187H, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077VN094R/D130A/V1541/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091 Q/D 130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091 Q/D 130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/Í .264R, N011K/G023K/L075R/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N/T189Q/Í .264R,

NOl 1K/G023Q/L075Q/N094R/D111 A/l) 130A/V154I/G156W/V187N/E264R, AO18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

NOl 1K/G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/V154I/G156W/V187N7T189Q/L264R,

AOl 8K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/V187T7T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/E045F/A049V/S058M/N073S/L075Q/R108K/H135F/V187T/T189D,

A018K/G023Q/D027S/P029E/N033D/E045F/A049Y/S058M/N073S/K074S/L075Q/V077I/N101D/R10

8K/H135F/D137 V/Gl 56W/V187T/T189D

Tabla 8-11: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >1 en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando dosis completa de Tide® en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2

L227M/L264R, A018K/L075D/T189D, A018K/P029E/T189D, A018K/V154I/G156W,

D027S/N033D/T189D, G023K/V187N/L264R, G023Q/A049V/T189D, L075G/D130A/V187H,

L075Q/V 187N/F264R, E075R/D130A/V187T, F075R/V187N/F264R, P029E/N033D/E045F,

V 187N/T189Q/L264R, A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/L075Q/V077I/N094R,

A018K/N033D/L075D/T189D, D027S/N033D/L075D/T189D, D027S/P029E/L075D/T189D,

D027S/P029E/N033D/E045F, D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R,

D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D,

A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/P029E/N033D/N073R/L075D, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027S/L075R/V154I/T189Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E045F/A049V/L075Q/V 187T/T189D, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/D027S/E056K/V 187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/E056K/E075R/V 187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/Í .075Q/V077I/I) 130A/G156W,

G023K/L075Q/V 187H/I252Q/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/N094R/G156W/V187N/T189Q, K024A/L075R/V154EG156W/V187Q,

NO 11K/G023K/D111A/G156W/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R,

A018K/G023K/L075Q/V077EG156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/G156W,

AO 18K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N,

D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R,

G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R,

G023K/K024A/L075Q/V154EG156W/V187Q, G023K/Í.075G/D130A/V187T/I252Q/Í.264R,

G023K/N094R/D111A/G156W/V187T/L264R, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/G156W/V187Q, AO18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541,

AO18 K/ G023K/L075Q/V077EN094R/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075R/V077I/N094R/G156W/V187N, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

AO 18 K/ G023K/K024A/L075Q/V077ED13 O A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077EN094R/D130A/G156W,

AO 18 K/ G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091 Q/V 187H/I252Q, G023Q/D027S/E056K/L075R/D111A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/D027S/F051T/S058M/G091 Q/D 130A/V187N/I252Q, A018K/G023Q/D027S/P029E/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H, G023K/K024A/L075Q/N094R/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

AO 18 K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/EI135F/G156W/V187T, A018K/G023Q/D027S/P029E/S058M/L075Q/V077I/R108K/H135F/V187H,

AO 18K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R

Tabla 8-12: A continuación, se muestran variantes de TLL con índice de rendimiento para expresión >0,5 en comparación con TLL SEQ ID NO: 1 y con índice de rendimiento >50 % del valor de PI máximo en el ensayo de micromuestras CS-61 utilizando dosis completa de Tide®en comparación con la secuencia de referencia SEQ ID NO: 2.

A018K/P029E/T189D, D027S/N033D/T189D, L075R/D130A/V187T, L075R/V187N/L264R,

A018K/D027S/P029E/T189D, A018K/L075Q/V077EN094R, A018K/N033D/L075D/T189D,

D027S/P029E/N033D/L075D, D048Q/D130A/G163P/L264R, P029E/N073R/L075D/T189D,

A018K/D027S/P029E/N033D/L075D, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/V187T/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R,

K024A/L075R/V154I/G156W/V187Q, AO18 K/K024A/Í .075Q/V077I/I) 130A/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/L075R/V187N/I252Q/L264R, (1023 K/K024A/Í .075Q/V154I/C1156W/V187Q, A018K/D027S/P029E/N033D/N073R/L075D/T189D,

AO 18K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V1541, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, Q004D/N011K/D027S/E056K/S058M/N233Q/P256T, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077PN094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/D027S/F051T/E056K/L075Q/G091Q/V187H/I252Q

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma, donde la variante de enzima lipolítica o el fragmento activo de la misma presenta actividad lipolítica y comprende dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez o más modificaciones de aminoácido a una enzima lipolítica original con SEQ ID NO: 1, donde la primera modificación de aminoácido de la variante de enzima lipolítica o el fragmento activo de la misma es D130A, donde la variante de enzima lipolítica o el fragmento activo de la misma presenta al menos un 90 % de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, y donde la posición de aminoácido de la variante está numerada por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa establecida en SEQ ID NO: 1.

2. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma de acuerdo con la reivindicación 1, donde las dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez o más modificaciones de aminoácido a la enzima lipolítica original se encuentran en posiciones de la variante de enzima lipolítica seleccionadas del grupo que consiste en 23, 4, 11, 18, 24, 27, 29, 33, 45, 48, 49, 51, 56, 58, 73, 75, 77, 90, 91, 94, 111, 137, 154, 156, 163, 187, 189, 227, 233, 252, 256 y 264, y donde las posiciones de aminoácido de la variante están numeradas por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa establecida en SEQ ID NO: 1.

3. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que consiste en dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez o más modificaciones de aminoácido a la enzima lipolítica original, donde las dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez o más modificaciones de aminoácido se encuentran en posiciones de la variante de enzima lipolítica seleccionadas del grupo que consiste en 23, 4, 11, 18, 24, 27, 29, 33, 45, 48, 49, 51, 56, 58, 73, 75, 77, 90, 91, 94, 111, 137, 154, 156, 163, 187, 189, 227, 233, 252, 256 y 264, y donde las posiciones de aminoácido de la variante están numeradas por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa establecida en SEQ ID NO: 1.

4. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde la variante o el fragmento activo de la misma comprende modificaciones de aminoácido:

G023/D027/F051/E056/S058/L075/G091/D130/V187/I252/L264;

G023/E056/L075/D130/V187/L264;

D027/D048/058/D130/D137/G163/L227/N233/L264;

A018/G023/K024/L075/V077/N094/D130/V154/G156/V187;

A018/G023/K024/L075/N094/D111/D130/V154/G156/V187/T189/L264; o N011/G023/D027/E056/L075/N094/D111/D130/V154/G156/V187/T189/L264,

y donde las posiciones de aminoácido de la variante están numeradas por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa establecida en SEQ ID NO: 1.

5. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) en relación con la enzima lipolítica original para la hidrólisis de p-nitrofenil butirato, p-nitrofenil caprilato o pnitrofenil palmitato que es superior a 1,0.

6. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde:

(a) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre: D130A/L264R, D130A/V187N, L075Q/D130A, E056K/D130A/T189Q, L075G/D130A/V187H,

L075Q/D111A/D130A, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, V077I/D130A/V154I,

A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/L075Q/N094R/D130A, G023K/L075R/D130A/L264R,

G023Q/L075Q/D130A/L264R, K024A/L075Q/D130A/V1541, L075Q/D130A/G156W/V187N,

A018K/G023Q/K024A/D130A/V1541, A018K/G023Q/V0771/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R, A018K/K024A/L075R/D130A/V1541, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130AA/187T, G023K/L075Q/V0771/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/K024A/L075R/D130A/V1541, G023Q/L075Q/V0771/D130A/G156W, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, S058M/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130AA/154I/V187N, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075QA/077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156WA/187N, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N,

G023K/K024A/L075Q/D111A/D 130A/T189Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

N011K/D027S/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q,

N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W,

A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W,

A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q,

A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W,

A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W,

G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R,

G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q,

G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N,

G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

K024A/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q,

A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N,

A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para la hidrólisis de p-nitrofenil butirato superior a 1,0, opcionalmente donde el índice de rendimiento se mide a un pH de 8; o

(b) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre: D130A/L264R, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T,

L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A,

D048Q/D130A/G163P/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, G023K/L075R/D130A/L264R,

K024A/L075Q/D130A/G156W, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/V077I/D130A/V187Q,

L075R/D130A/V154I/L264R, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I,

A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N,

A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N,

D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R,

G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T,

G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T,

G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I,

G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, GL075R/D130A/V154I/T189Q/L264R,

L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q,

A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I,

A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154IA/187N, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R,

K024A/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q,

A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N,

A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para la hidrólisis de p-nitrofenil caprilato superior a 1,0, opcionalmente donde el índice de rendimiento se mide a un pH de 8; o

(c) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre: D130A/L264R, D130A/V187T, D111A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R,

G023K/D130A/L264R, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075R/D130A/L264R,

L075R/D130A/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, D027E/D130A/N233Q/L264R,

D027S/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R,

F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R,

G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/L075Q/D130A/L264R,

K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, L075G/D130A/V187T/I252Q,

L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/V077I/D130A/V187Q,

A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R,

A018K/K024A/L075R/N094R/D130A, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T,

A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R,

D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R,

D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R,

F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R,

F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R,

G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T,

G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W,

G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R,

S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R,

A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N,

A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q,

A018K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R,

D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R,

D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R,

F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R,

G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, F051T/L075G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/G091Q/V187T /I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/F051T/S058M/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/V187T /I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R,

A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q,

A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q,

A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q,

A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/S058M/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N,

G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130AA/187H/I252Q/L264R,

K024A/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R,

A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N,

A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para la hidrólisis de p-nitrofenil palmitato superior a 1,0, opcionalmente donde el índice de rendimiento se mide a un pH de 8; o

(d) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre: D130A/L264R, D130A/T189Q, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/D130A,

L075Q/D130A, D111A/D130A/L264R, D130A/T189Q/L264R, D130A/V154I/G156W,

D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/L264R, E056K/D130A/T189Q,

G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023Q/D130A/G156W, K024A/D130A/V154I,

L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075R/D130A/L264R,

L075R/D130A/V187T, N094R/D130A/V187T, V077I/D130A/V154I,

A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/K024A/D130A/G156W,

A018K/L075Q/N094R/D130A, D027E/D130A/N233Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R,

D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V154I/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R,

D130A/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R,

F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q,

G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/E056K/D130A/L264R, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075R/D130A/V154I/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/D130A/G156W/V187T/L264R, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/V154I, A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/K024A/L075R/N094R/D130A, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, E056K/N094R/G156W/V187N/L264R, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V187T/T189Q, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075QA/077I/D130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/1252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075R/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/1252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/V0771/D130A/G156W/V187Q, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, K024A/D111A/D130AA/187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075QA/077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, A018K/K024A/L075Q/V0771/N094R/D130A/G156W, A018K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, A018K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, A018K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D 130A/V187T/I252Q, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163 P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, F051T/L075G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/V187N/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D 130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075G/G091Q/D130A/V187T /I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, G023Q/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/D 130A/V154I/G156W/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/D027S/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091Q/D 130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130AA/187T/T189Q/L264K, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N,

D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R,

D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130AA/187N/T189Q/L264R,

G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R,

G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q,

N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077!/D130A/V154I/V187T/T189Q,

N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica de referencia que presenta la secuencia de SEQ ID NO: 1 para la termoestabilidad superior a 1,0; o

(e) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre: D130A/T189Q, D130A/V187N, G023K/D130A, L075Q/D130A, D111A/D130A/L264R, D130A/T189Q/L264R, D130A/V154I/G156W, D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/L264R,

G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023Q/D130A/G156W, K024A/D130A/V154I,

L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075R/D130A/V187T,

N094R/D130A/V187T, V077I/D130A/V154I, A018K/D130A/G156W/V187T,

A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/K024A/D130A/G156W, A018K/L075Q/N094R/D130A,

D027S/D130A/I252Q/L264R, D111A/D130A/V154l/G156W, D111A/D130A/V154I/L264R,

D111A/D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R,

G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R,

G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R,

G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, K024ND130A/V154I/V187T,

K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, K024A/L075Q/V187T/T189Q,

K024A/L075R/G156W/V187N, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075Q/D130A/G156W/V187N,

L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075R/D130A/V154I/L264R,

A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W,

A018K/G023K/K024A/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/V154I,

A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I,

A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I,

A018K/K024A/L075R/N094R/D130A, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T,

A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R,

D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D 130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075QA/077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075QA/077I/D130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D027S/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R,

A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D 130A/V187T/I252Q, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, F051T/L075G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075G/G091Q/D130A/V187T /I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156WA/187Q, G023Q/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/D027S/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para la estabilidad detergente superior a 1,0; o

(f) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre: D130A/T189Q, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/D130A, L075Q/D130A,

D111A/D130A/L264R, D130A/V154I/G156W, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023Q/D130A/G156W, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N094R/D130A/V187T, V077I/D130A/V154I, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/K024A/D130A/G156W, A018K/L075Q/N094R/D130A, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V154I/L264R, D111A/D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023Q/K024A/D130A/G156W, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075R/D130A/V154I/L264R, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/V154I, A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, L075Q/D111A/D130A/V187T/T189Q, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075QA/077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/L075R/D130AA/154I/G156W/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156WA/187Q, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q,

G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091 Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para la estabilidad de LAS superior a 1,0; o

(g) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre: D130A/L264R, D130A/V187N, D130A/V187T, D111A/D130A/L264R, D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/K024A/D130A/G156W, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R, D048Q/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023Q/L075Q/D130A/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075R/D130A/V154I/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/V154I, A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/K024A/L075R/N094R/D130A, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/L075Q/D130NI252Q/L264R,

G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/N094R/D111A/D130AA/154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156WA/187N/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075R/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, A018K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

F051T/L075G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/K024A/L075Q/D111A/D 130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/S058M/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/V187T /I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, G023Q/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V187T/T189Q/L264K, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para la adhesión a tejido superior a 1,0; o

(h) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre: D130A/T189Q, G023K/D130A, L075Q/D130A, D130A/T189Q/L264R, D130AA/154I/G156W, E056K/D130A/L264R, E056K/D130A/T189Q, G023Q/D130A/G156W, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, N094R/D130A/V187T, V077I/D130A/V154I, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A, D111A/D130A/V154I/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/E056K/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/K024A/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075R/D130A/V187T/L264R, A018K/D130A/G156W/V187T/L264R, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/L075Q/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/L264R, D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/D130AA/187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/K024A/V077I/D130A/V1541, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, L075Q/D111A/D130A/V187T/T189Q, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075QA/077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, A018K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D 130A/V187T/I252Q, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/D027S/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

G023K/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187T/L264R,

G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para la adhesión a tejido inferior a 1,0; o

(i) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre: D130A/L264R, D130A/V187T, G023K/D130A, L075Q/D130A, D111A/D130A/L264R,

E056K/D130A/T189Q, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, V077I/D130A/V154I,

A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R, D111A/D130A/V154I/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/L075Q/D130A/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075R/D130A/V154I/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R, A018K/K024A/L075R/N094R/D130A, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187H/1252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V187T/T189Q, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075QA/077I/D130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/1252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/V0771/D130A/G156W/V187Q, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D130AA/154I/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/D130AA/154I/G156W/V187N/L264R, L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N,

A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I,

A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W,

A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N,

A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W,

A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q,

A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T,

A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W,

A018K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R,

D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R,

D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R,

D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R,

D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q,

D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R,

D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R,

D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R,

D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R,

E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q,

F051T/L075G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R,

F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R,

G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R,

G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N,

G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q,

G023K/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q,

G023K/K024A/L075Q/D111A/D 130A/T189Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R,

G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q,

G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R,

G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q,

G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q,

G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N,

G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W,

G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R,

G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R,

G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N,

G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q,

G023Q/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R,

K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para el rendimiento de limpieza superior a 1,0, (j) bien la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre:

D130A/L264R, D130A/V187N, G023K/D130A, L075Q/D130A, D111A/D130A/L264R, E056K/D130A/T189Q, G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/L075R/D130A, D048Q/D130A/G163P/L264R, D111A/D130A/V154I/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/L264R, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075R/D130A/V154I/L264R, A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/D130A/V154I, A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/K024A/L075R/N094R/D130A, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027S/L075Q/D111A/D130A/V187N, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I, G023Q/L075Q/V0771/D130A/G156W, G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V187T/T189Q, L075Q/D111A/V187N/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R,

L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/K024A/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/V0771/D130A/G156W/V187Q, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D130A/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, A018K/K024A/L075Q/V0771/N094R/D130A/G156W, A018K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q, D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/L227M/N233Q/L264R,

E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q,

G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/K024A/L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/D027S/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, K024A/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para el rendimiento de limpieza superior a 1,0;

donde las posiciones de aminoácido de la variante están numeradas por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa establecida en SEQ ID NO: 1, y donde los índices de rendimiento (pI) son relativos a una enzima lipolítica de referencia que presenta la secuencia de SEQ ID NO:1.

7. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma de acuerdo con la reivindicación 6, donde:

la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre:

D130A/L264R, D130A/T189Q, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/D130A,

L075Q/D130A, D111A/D130A/L264R, D130A/T189Q/L264R, D130A/V154I/G156W,

D130A/V187N/L264R, D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/L264R, E056K/D130A/T189Q,

G023K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023Q/D130A/G156W, K024A/D130A/V154I,

L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075R/D130A/L264R,

L075R/D130A/V187T, N094R/D130A/V187T, V077I/D130A/V154I,

A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/K024A/D130A/G156W,

A018K/L075Q/N094R/D130A, D027E/D130A/N233Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R,

D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V154I/L264R, D130A/G163P/L227M/L264R,

D130A/G163P/N233Q/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R,

F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q,

G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q,

G023K/E056K/D130A/L264R, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023K/L075R/D130A/L264R,

G023Q/K024A/D130A/G156W, G023Q/L075Q/D130A/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T,

K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, L075G/D130A/V187T/I252Q,

L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/V077I/D130A/V187Q,

L075R/D130A/V154I/L264R, L075R/D130A/V187T/L264R,

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A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/E056K/L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, K024A/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, N011K/G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V187T/T189Q/L264K, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) en relación con una enzima lipolítica de referencia que presenta la secuencia de SEQ ID NO: 1 para la termoestabilidad superior a 1,0; o

la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre:

D130A/T189Q, D130A/V187N, D130A/V187T, G023K/D130A, L075Q/D130A, D111A/D130A/L264R, D130A/V154I/G156W, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023Q/D130A/G156W, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075Q/D130A/V187T, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N094R/D130A/V187T, V077I/D130A/V154I, A018K/D130A/G156W/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/K024A/D130A/G156W, A018K/L075Q/N094R/D130A, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V154I/L264R, D111A/D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187T/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D111A/D130A/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023K/L075Q/D130A/V187N, G023Q/K024A/D130A/G156W, K024A/D130A/V154I/V187T, K024A/L075Q/D130A/G156W, K024A/L075Q/D130A/V154I, L075G/D130A/V187T/I252Q, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075Q/D130A/V154I/G156W, L075Q/V077I/D130A/V187Q, L075R/D130A/V154I/L264R, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/V154I, A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/K024A/L075R/D130A/V154I, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, E056K/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D130A/G156W, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I,

G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, L075Q/D111A/D130A/V187T/T189Q, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/D130A/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/D130A/V154I, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V187N, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D027S/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/E056K/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187Q, K024A/D111A/D130A/V187T/T189Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075QA/077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, L075R/D130AA/154I/G156W/V187N/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V187N/T189Q, N011K/G023Q/L075Q/D130A/V187N/T189Q, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187T/T189Q, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q,

G023K/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q,

G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, K024A/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, K024A/L075Q/D111A/D130A/V187N/T189Q/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R, N011K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/V187N, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130Y/V154I/V187N/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023K/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/E045F/L075Q/V077I/G156W/V187T/T189D, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, A018K/G023Q/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023K/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187T/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130AA/154I/G156W/V187Q, N011K/G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/T189Q, N011K/G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, D027S/E056K/L075Q/N094R/D111A/D130AA/187N/T189Q/L264R, G023K/D027S/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, N011K/G023K/L075R/V077I/D130AA/154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023K/D027S/F051T/E056K/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q, G023Q/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R, N011K/A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/V187T/T189Q, N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, N011K/G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R,

opcionalmente, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de rendimiento (pI) para la estabilidad de LAS superior a 1,0.

8. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre:

D130A/V187T, D111A/D130A/L264R, D130A/V154I/G156W, D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/L264R, A018K/D130A/G156W/V187T, D027E/D130A/N233Q/L264R, D027S/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L264R, D111A/D130A/V154I/G156W, D111A/D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/V187N/L264R, F051T/D130A/I252Q/L264R, G023K/D130A/V187N/L264R, G023K/D130A/V187T/T189Q, G023Q/L075Q/D130A/L264R, K024A/D130A/V154I/V187T, L075G/D130A/V187T/I252Q,

A018K/D130A/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/K024A/D130A/V154I, A018K/G023K/V077I/D130A/V187N, A018K/L075Q/N094R/D130A/V187N, D027E/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L264R, D027S/L075G/D130A/I252Q/L264R, D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q, F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, F051T/L075G/D130A/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/L264R, G023K/E056K/D130A/V187N/L264R,

G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/G156W/T189Q, G023K/L075Q/V077I/D130A/G156W, G023K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023Q/L075Q/D130A/I252Q/L264R, L075G/D130A/V187T/I252Q/L264R, L075Q/D111A/D130A/V187T/T189Q, L075Q/V077I/D130A/G156W/V187N, S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, A018K/K024A/V0771/N094R/D130A/G156W, D027E/D048Q/D130A/D137H/G163P/L264R, D027E/D048Q/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/G091Q/D130A/1252Q/L264R, D027Q/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027S/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023K/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, G023K/E056K/L075R/D130AA/I87T/L264R, G023K/F051T/D130A/V187N/I252Q/L264R, G023K/F051T/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/L075G/D130A/V187H/L264R, G023Q/D027S/L075Q/D130A/V187T/I252Q, G023Q/F051T/L075Q/D130AA/187H/I252Q, G023Q/K024A/D130A/V154I/G156W/V187Q, G023Q/K024A/V077I/D130A/G156W/V187N, G023Q/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, K024A/L075Q/D130A/G156W/T189Q/L264R, L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, A018K/K024A/D130A/V154I/G156W/V187T/L264R, A018K/K024A/N094R/D130A/G156W/V187T/L264R, A018K/L075Q/D130A/G156W/V187N/T189Q/L264R, D027E/D048Q/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/N233Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D027E/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, D027Q/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, D027S/F051T/S058M/L075R/D130A/I252Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/L264R, D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/L075G/G091Q/D130A/V187N/I252Q/L264R, F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/D027S/F051T/E056K/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/L075Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/L075G/G091Q/D130A/V187T /I252Q/L264R, G023Q/S058M/L075G/G091Q/D130A/I252Q/L264R, D027E/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L227M/N233Q/L264R, F051T/E056K/L075G/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/I252Q/L264R, G023Q/D027S/S058M/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R,

G023Q/F051T/L075Q/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/L075R/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/S058M/L075R/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/V187N, D027Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075Q/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, N011K/G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

donde las posiciones de aminoácido de la variante están numeradas por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa establecida en SEQ ID NO: 1, opcionalmente donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de actividad específico de pNPP/pNPB o pNPO/pNPB mayor en comparación con SEQ ID NO: 1.

9. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde la variante comprende modificaciones de aminoácido seleccionadas entre:

D130A/L264R, D130A/V187N, L075Q/D130A, D130A/V187T/L264R, E056K/D130A/L264R, G023K/D130A/V187T, G023Q/D130A/G156W, K024A/D130A/V154I, L075G/D130A/V187H, L075Q/D111A/D130A, L075R/D130A/L264R, L075R/D130A/V187T, N094R/D130A/V187T, A018K/G023Q/L075R/D130A, A018K/L075Q/N094R/D130A, D111A/D130A/V154I/G156W, E056K/D130A/V187T/L264R, G023K/D130A/G156W/T189Q, G023K/L075R/D130A/L264R, G023Q/K024A/D130A/G156W, L075Q/D130A/G156W/V187N, L075R/D130A/V187T/L264R, A018K/G023K/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/K024A/D130A/G156W, A018K/G023Q/K024A/D130A/V154I, A018K/G023Q/K024A/D130A/V187Q, A018K/G023Q/V077I/D130A/G156W, A018K/K024A/L075Q/D130A/L264R, A018K/K024A/N094R/D130A/V187N, A018K/L075Q/D111A/D130A/V187T, D048Q/S058M/D130A/N233Q/L264R, D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, D130A/G163P/L227M/N233Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187T, G023K/K024A/D111A/D130A/V187T, G023K/K024A/L075R/D130A/G156W, G023K/L075Q/D111A/D130A/V187T, G023K/L075Q/D130A/V154I/T189Q, G023Q/K024A/L075R/D130A/V154I, G023Q/K024A/L075R/V077I/D130A, G023Q/L075Q/V077I/D130A/G156W, L075Q/D130A/V187T/T189Q/L264R, L075Q/N094R/D130A/G156W/V187T, L075R/D130A/V154I/T189Q/L264R, L075R/D130A/V187T/T189Q/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/N094R/D130A/V154I, A018K/G023K/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/L075R/N094R/D130A/V187N, A018K/G023Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/K024A/L075R/D130A/V187N/T189Q, A018K/L075Q/D130A/V187N/T189Q/L264R, A018K/N094R/D111A/D130A/V154I/V187N, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L264R, D027Q/E056K/S058M/D130A/I252Q/L264R, D027Q/F051T/L075Q/D130A/V187H/L264R, D027Q/S058M/L075R/D130A/V187T/I252Q, D048Q/S058M/D130A/D137Q/G163P/L264R, G023K/D027S/L075R/D130A/V187T/I252Q, G023K/E056K/L075R/D130A/T189Q/L264R, G023K/E056K/L075R/D130A/V187N/L264R, G023K/F051T/G091Q/D130A/V187H/L264R, G023K/K024A/L075Q/D111A/D130A/T189Q, G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W, G023K/K024A/L075R/D130A/V154I/V187N, G023Q/E056K/L075Q/D130A/V154I/L264R, G023Q/F051T/D130A/V187T/I252Q/L264R, G023Q/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W, G023Q/K024A/V077I/D130A/V154I/G156W, K024A/L075Q/N094R/D130A/V154I/L264R, K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V187N, L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q, L075Q/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, L075R/D130A/V154I/G156W/V187N/L264R, S058M/D130A/D137Q/G163P/N233Q/L264R, A018K/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/D130A/G156W/V187N, A018K/G023K/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I, A018K/K024A/L075Q/D130A/V154I/G156W/V187T, D027E/D048Q/S058M/D130A/G163P/L227M/L264R, D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/I252Q/L264R, E056K/L075Q/D111A/D130A/G156W/V187N/T189Q, G023K/D027Q/F051T/L075G/D130A/V187H/L264R, G023K/D027S/F051T/S058M/L075Q/D130A/V187N, G023K/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/I252Q,

G023K/K024A/L075Q/D111A/D 130A/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023K/L075Q/N094R/D130A/V154I/V187N/L264R, G023Q/E056K/L075R/D111A/D130A/V187N/T189Q, G023Q/F051T/G091Q/D130A/V187H/I252Q/L264R, G023Q/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/V077I/N094R/D130A/G156W/V187N,

K024A/L075Q/D111A/D 130A/V154I/G156W/L264R, K024A/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, N011K/D027S/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q, N011K/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023K/K024A/L075Q/V077I/D130A/V154I/G156W, A018K/G023K/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W/V187Q, A018K/G023Q/K024A/L075R/N094R/D130A/V154I/G156W, A018K/G023Q/K024A/L075R/V077I/N094R/D130A/G156W, G023K/D027S/F051T/E056K/L075R/D130A/V187T/L264R, G023K/E056K/L075Q/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, G023Q/D027Q/F051T/S058M/L075R/D130A/V187T/L264R, G023Q/D027S/F051T/S058M/G091Q/D130A/V187N/I252Q, G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/V187N, G023Q/L075Q/N094R/D111A/D130A/G156W/T189Q/L264R, G023Q/L075Q/N094R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, K024A/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, A018K/G023K/K024A/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/T189Q, A018K/G023K/K024A/L075R/V077I/D130A/V154I/G156W/V187N, G023K/K024A/N094R/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q/L264R, G023Q/D027S/L075Q/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/L264R, G023Q/E056K/L075Q/D111A/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, G023Q/F051T/S058M/L075G/G091Q/D130A/V187T/I252Q/L264R, N011K/G023K/L075R/D111A/D130A/V154I/V187N/T189Q/L264R, A018K/G023Q/K024A/L075Q/V077I/N094R/D130A/V154I/G156W/V187Q,

N011K/G023Q/D027S/E056K/L075R/D130A/V154I/G156W/T189Q/L264R, A018K/G023K/L075R/N094R/D111A/D130A/V154I/G156W/V187N/T189Q/L264R,

donde las posiciones de aminoácido de la variante están numeradas por correspondencia con la secuencia de aminoácidos de la lipasa de Thermomyces lanuginosa establecida en SEQ ID NO: 1, donde la variante o el fragmento activo presenta un índice de actividad específico de pNPB/pNPP mayor en comparación con SEQ ID NO: 1.

10. Variante de enzima lipolítica o fragmento activo de la misma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde la variante comprende modificaciones de aminoácido D130A/V187T, D130A/T189Q,

D130A/T189Q, G23K/D130A, V077I/D130A/V154I, G23K/D130A/V187T,

G23K/D130A/V187T/T189Q, o

N11K/G23K/L75R/V77I/D130A/V154I/G156W/V187T/T189Q.

11. Composición que comprende al menos una variante de enzima lipolítica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, opcionalmente donde:

(a) la composición es una composición de limpieza, opcionalmente una composición detergente, y/o (b) dicha composición es una composición granulada, en polvo, sólida, en barra, líquida, en pastilla, en gel, en pasta o de dosis unitaria, y/o

(c) dicha composición es una composición detergente de lavado de ropa, una composición detergente de vajilla, una composición de limpieza de superficies duras o un aditivo de detergente de lavado de ropa, opcionalmente donde el detergente de vajilla es una composición detergente de lavado de vajilla a mano o una composición detergente de lavado de vajilla automático, y/o

(d) dicha composición también comprende al menos un agente blanqueador, y/o

(e) dicha composición de limpieza no tiene fosfatos o donde dicha composición de limpieza contiene fosfato, y/o

(f) la composición también comprende al menos una enzima adicional, opcionalmente seleccionada del grupo que consiste en proteasa, hemicelulasa, celulasa, peroxidasa, enzima lipolítica, enzima metalolipolítica, xilanasa, lipasa, fosfolipasa, esterasa, perhidrolasa, cutinasa, pectinasa, pectato liasa, mananasa, queratinasa, reductasa, oxidasa, fenoloxidasa, lipoxigenasa, ligninasa, pululanasa, tanasa, pentosanasa, malanasa, B-glucanasa, arabinosidasa, hialuronidasa, condroitinasa, lacasa y amilasa.

12. Método de hidrólisis de un éster de ácido graso o triglicérido que comprende poner en contacto el éster de ácido graso o triglicérido con la variante de enzima lipolítica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10.

13. Método de limpieza, que comprende poner en contacto una superficie o un artículo con una composición que comprende al menos una variante de enzima lipolítica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 o una composición establecida en la reivindicación 11, opcionalmente donde la superficie o el artículo es vajilla o tejido.

14. Método de acuerdo con la reivindicación 13, donde dicho método también comprende la etapa de enjuagar dicha superficie o artículo tras poner en contacto dicha superficie o artículo con dicha composición de limpieza, opcionalmente comprendiendo también la etapa de secar dicha superficie o artículo tras dicho enjuague de dicha superficie o artículo.