ES2774381T3

ES2774381T3 - Métodos para mejorar la eficacia de la respuesta inmune dirigida a tumores

Info

Publication number: ES2774381T3
Application number: ES15773468T
Authority: ES
Inventors: Samir Khleif
Original assignee: Univ Res Inst Inc Augusta; Augusta University Research Institute Inc
Current assignee: Univ Res Inst Inc Augusta; Augusta University Research Institute Inc
Priority date: 2014-04-03
Filing date: 2015-04-02
Publication date: 2020-07-20
Anticipated expiration: 2035-04-02
Also published as: CN106457001B; CA2948054A1; EP3126007B1; WO2015153857A8; US20170182156A1; KR20170002410A; RU2689162C2; WO2015153857A1; AU2015240727A1; CN106457001A; RU2016142210A; SG10201808746QA; JP6612252B2; EP3126007A1; SG11201608181YA; IL248079A0; US10478491B2; RU2016142210A3; EP3126007A4; JP2017511320A

Abstract

Un agonista de OX40 para el uso en retrasar o reducir el crecimiento tumoral en un sujeto que tiene un cancer asociado con el virus del papiloma humano (HVP) en relacion con un sujeto control no tratado, mediante la administracion conjunta con una indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO), y una composicion inmunogenica que comprende un antigeno tumoral del HVP, en el que el agonista de OX40 es un anticuerpo que se une especificamente a OX40 o un fragmento de union al antigeno del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos para mejorar la eficacia de la respuesta inmune dirigida a tumores

Antecedentes de la invención

Los pacientes con cáncer típicamente exhiben respuestas inmunes adaptativas contra diversos antígenos tumorales. A pesar de la presencia de esta respuesta inmune dirigida a tumores, en muchos casos la respuesta inmune del paciente es insuficiente para bloquear el crecimiento del tumor y prolongar la supervivencia. Las vacunas contra el cáncer se diseñaron originalmente para mejorar la respuesta inmune propia del paciente. Hasta la fecha, el potencial terapéutico de tales vacunas contra el cáncer no se ha realizado. En consecuencia, se requieren con urgencia métodos para mejorar la eficacia de una respuesta inmune dirigida a tumores. Wainwright et. al. (Frontiers in Immunology, Vol.

4, Article116, 2013) describe a un agonista de OX40 para el tratamiento contra el cáncer.

Sumario de la invención

La presente invención está definida por las reivindicaciones. Como se describe a continuación, los métodos para mejorar la eficacia de una respuesta inmune dirigida a tumores mediante la administración de un agonista de OX40 y un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) junto con un antígeno tumoral se describen en la presente memoria. El antígeno tumoral puede estar presente en una vacuna contra el cáncer o puede ser liberado de un tumor presente en el sujeto, por ejemplo, induciendo la apoptosis de una célula tumoral. La apoptosis de las células tumorales puede ser inducida por cualquier método conocido en la técnica (por ejemplo, radiación, quimioterapia).

En un aspecto, la invención presenta a un agonista de OX40 para utilizar en el retraso o en la reducción en el crecimiento tumoral en un sujeto que tiene un cáncer asociado al Virus del Papiloma Humano (HVP) en relación con un sujeto control no tratado, mediante la administración conjunta con el inhibidor de indolamina 2,3- dioxigenasa (IDO) y una composición inmunogénica que comprende a un antígeno tumoral del HVP, en el que el agonista de OX40 es un anticuerpo que se une específicamente a OX40 o a un fragmento de unión al antígeno del mismo. Un método para mejorar una respuesta inmune contra un antígeno tumoral en un sujeto, el método que implica administrar al sujeto un agonista de OX40 (por ejemplo, un anticuerpo agonista de OX40), un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) (por ejemplo, 1MT) , y una composición inmunogénica que contiene a un antígeno tumoral (por ejemplo, vacuna contra el cáncer), mejorando así la respuesta inmune del sujeto contra el antígeno tumoral en relación con la administración de la composición inmunogénica por si sola que se describe en la presente memoria.

Un método para retrasar o reducir (por ejemplo, al menos aproximadamente 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 75%, 80%, 90% o 100%) el crecimiento tumoral en un sujeto, el método que implica administrar al sujeto un agonista de OX40, un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) y una composición inmunogénica que contiene a un antígeno tumoral, retrasando o reduciendo así el crecimiento del tumor en el sujeto en relación con un sujeto control no tratado se describe en la presente memoria.

Un método para mejorar una respuesta inmune contra un antígeno tumoral en un sujeto, el método que implica administrar al sujeto radiación o un quimioterapéutico (por ejemplo, antraciclinas (por ejemplo, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina y valrubicina) u oxaliplatino) suficiente para inducir la apoptosis de las células tumorales, un agonista de OX40 y un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO), mejorando así la respuesta inmune del sujeto contra el antígeno tumoral en relación con la administración de la radiación o una antraciclina por si sola se describe en la presente memoria.

Un método para retrasar o reducir el crecimiento tumoral en un sujeto, el método que implica administrar al sujeto radiación o un quimioterapéutico (por ejemplo, antraciclinas (por ejemplo, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina y valrubicina) u oxaliplatino) suficiente para inducir la apoptosis de las células tumorales, se describe a un agonista de OX40 y a un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO), retrasando o reduciendo así el crecimiento tumoral en el sujeto en relación con un sujeto control no tratado se describe en la presente memoria.

Un método para aumentar la proporción de células T CD8+ a células T reguladoras dentro de un tumor en un sujeto, el método implica administrar al sujeto una cantidad eficaz de un agonista de OX40, un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO), y una composición inmunogénica que contiene a un antígeno tumoral, aumentando así la proporción CD8/Treg con el tumor se describe en la presente memoria.

Un método para aumentar la proporción de células T CD8+ a células T reguladoras dentro de un tumor en un sujeto, el método implica administrar al sujeto radiación o un quimioterapéutico (por ejemplo, antraciclinas (por ejemplo, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina y valrubicina) u oxaliplatino) suficiente para inducir la apoptosis de las células tumorales una cantidad efectiva de un agonista de OX40 y un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO), aumentando así la relación CD8/Treg con el tumor se describe en la presente memoria.

Un método para mejorar una respuesta inmune contra un antígeno tumoral de HVP en un sujeto, el método implica administrar al sujeto un anticuerpo agonista de OX40 que se une al mismo epítope OX40 que mAb 9B12, 1-MT, y una composición inmunogénica que contiene al antígeno HPV16 y a un adyuvante, mejorando así la respuesta inmune del sujeto contra el antígeno tumoral en relación con la administración de la composición inmunogénica por si sola se describe en la presente memoria.

Un método para tratar un cáncer relacionado con el HVP en un sujeto, el método que implica administrar al sujeto un anticuerpo agonista de OX40 que se une al mismo epítope OX40 que el mAb 9B12, 1-MT, y una composición inmunogénica que contiene un antígeno HPV16 y un adyuvante, el tratamiento de un cáncer relacionado con e1HVP en el sujeto se describe en la presente memoria.

En diversas realizaciones de los aspectos descritos anteriormente o cualquier otro aspecto de la invención delineado en la presente memoria, el uso aumenta (por ejemplo, al menos aproximadamente 5%, 10%, 20%, 30% o más) la proporción de células T CD8+ a células T reguladoras dentro de un tumor en el sujeto. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, la cantidad del agonista de OX40 administrada es suficiente para aumentar la proporción de células T CD8+ a células T reguladoras dentro del tumor de el sujeto. En aún otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, la cantidad del agonista de OX40 administrada es lo suficientemente baja para no aumentar a las células Treg infiltrantes de tumores en el sujeto. En aún otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, la administración aumenta (por ejemplo, al menos aproximadamente 10%, 25%, 50%, 75% o 100%) la respuesta inmune antitumoral del sujeto con respecto a la administración de la composición inmunogénica por si sola. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) es 1- metiltriptófano (1-MT), el isómero D de 1 -metil-triptófano o NLG919. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el agonista de OX40 se une específicamente a OX40. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el agonista de OX40 es un anticuerpo que se une específicamente a OX40 o a un fragmento de unión al antígeno del mismo. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico o un anticuerpo humanizado. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo se une al mismo epítope OX40 que mAb 9B12. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el antígeno tumoral es uno o más de alfa fetoproteína, antígeno carcinoembrionario, cdk4, beta-catenina, CA125, caspasa-8, antígeno tumoral epitelial, un antígeno HPV, antígeno HPV16, epítope CTL del antígeno E7 de HPV16, antígeno asociado al melanoma (MAGE) -1, MAGE-3, tirosinasa, idiotipo de superficie Ig, Her-2/neu, MUC-1, antígeno prostático específico (PSA), sialil Tn (STn), proteínas de choque térmico, gp96 , moléculas de gangliósidos GM2, GD2, GD3, antígeno carcinoembrionario (CEA) y MART-1. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, la cantidad de antígeno tumoral presente en la composición inmunogénica es suficiente para inducir una respuesta inmune anticancerígena en el sujeto. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, la administración de la composición inmunogénica estimula la actividad de los linfocitos T en el sujeto. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, la composición inmunogénica además contiene a un adyuvante. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el sujeto tiene un cáncer asociado a el HVP seleccionado del grupo que consiste en cáncer cervical, cáncer de pene, cáncer de ano, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello y cáncer de la vulva. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el uso aumenta la supervivencia del sujeto en al menos 10%, 20% o 30% o más en relación con un sujeto que recibió la administración de la composición inmunogénica por si sola. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el uso reduce el crecimiento tumoral en al menos aproximadamente un 20% con respecto al crecimiento tumoral en un sujeto control no tratado, o induce la regresión tumoral. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, el sujeto es un paciente humano. En otras realizaciones de los aspectos mencionados anteriormente, la composición inmunogénica es una vacuna contra el cáncer.

Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la descripción detallada y de las reivindicaciones.

Definiciones

A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria tienen el significado comúnmente entendido por una persona experta en la técnica a la que pertenece esta invención. Las referencias siguientes proporcionan a los expertos una definición general de muchos de los términos utilizados en esta invención: Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed, 1988); The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al. (eds.), Springer Verlag (1991); y Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). Como se utiliza en la presente memoria, los siguientes términos tienen los significados que se les atribuyen a continuación, a menos de que se especifique lo contrario.

Por "OX40" se entiende un miembro de la superfamilia de receptores TNFR que se expresa en la superficie de linfocitos T CD4+ y CD8+ activados por antígeno y linfocitos T reguladores de mamíferos. Véase, por ejemplo, Paterson, D.J., et al. Mol Immunol 24, 1281-1290 (1987); Mallett, S. et. al. EMBO J 9, 1063-1068 (1990); y Calderhead, D.M., et al. J Immunol 151, 5261-5271 (1993)). Los términos "OX40" y "receptor OX40" se utilizan indistintamente en la presente memoria. OX40 también se conoce como CD134, TNFRSF4, a CT-4 y ACT35. Las secuencias del receptor OX40 son conocidas en la técnica y se proporcionan, por ejemplo, en los números de acceso de GenBank: AAB33944 o CAE11757.

A continuación, se proporciona una secuencia ejemplar de OX40 humana:

1 mcvgarrlgr gpcaallllg lglstvtglh cvgdtypsnd rcchecrpgn gmvsrcsrsg

61 ntvcrpcgpg fyndvvsskp ckpctwcnlr sgserkqlct atqdtvcrcr agtqpldsyk

121 pgvdcapcpp ghfspgdnqa ckpwtnctla gkhtlqpasn ssdaicedrd ppatqpqetq

181 gpparpitvq pteawprtsq gpstrpvevp ggravaailg lglvlgllgp laillalyll

241 rrdqrlppda hkppgggsfr tpiqeeqada hstlaki

Por "ligando OX40" se entiende a una proteína que interactúa específicamente con el receptor OX40. Véase, por ejemplo, Baum P.R. et al. EMBO J. 13: 3992-4001 (1994)). El ligando OX40 también se conoce como CD252, CD143L, gp34 y TNFSF4. El término OX40L incluye a el ligando OX40 completo, el ligando OX40 soluble y las proteínas de fusión que comprenden una porción funcionalmente activa del ligando OX40 unida covalentemente a una segunda mitad, por ejemplo, un dominio protéico. También se incluyen dentro de la definición de OX40L a las variantes que varían en la secuencia de aminoácidos de OX4L que ocurre de manera natural pero que retienen la capacidad de unirse específicamente al receptor OX40. Además, se incluyen dentro de la definición de OX40L a las variantes que mejoran la actividad biológica de OX40.

Por "agonista de Ox40" se entiende a una molécula que interactúa específicamente con y aumenta o mejora la actividad biológica del receptor OX40. Deseablemente, la actividad biológica aumenta al menos aproximadamente 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, o incluso 100%. En ciertos aspectos, los agonistas de OX40 como se describen en la presente memoria incluyen polipéptidos de unión a OX40, tales como anticuerpos anti-OX40 (por ejemplo, anticuerpos agonistas de OX40), ligandos de OX40 o fragmentos o derivados de estas moléculas.

Por "anticuerpo OX40" se entiende un anticuerpo que se une específicamente a OX40. Los anticuerpos OX40 incluyen anticuerpos monoclonales y policlonales que son específicos para OX40 y fragmentos de unión al antígeno de los mismos. En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-OX40 como se describen en la presente memoria, son anticuerpos monoclonales (o fragmentos de unión al antígeno de los mismos), por ejemplo, anticuerpos monoclonales murinos, humanizados o completamente humanos. En una realización particular, el anticuerpo OX40 es un agonista del receptor OX40, tal y como el anticuerpo monoclonal OX40 anti-humano de ratón (9B12) descrito por Weinberg, A.D., et al. J Immunother 29, 575-585 (2006). En otras realizaciones, el anticuerpo que se une específicamente a OX40, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, se une al mismo epítope de OX40 que mAb 9B12.

Por "anticuerpo" se entiende a una molécula de inmunoglobulina que reconoce y se une específicamente a una diana. Como se utiliza en la presente memoria, el término "anticuerpo" abarca anticuerpos policlonales intactos, anticuerpos monoclonales intactos, fragmentos de anticuerpos (tales como fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv), mutantes de cadena sencilla Fv (scFv), anticuerpos multiespecíficos tales como anticuerpos biespecíficos generados a partir de al menos dos anticuerpos intactos, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos, proteínas de fusión que comprenden una porción de determinación del antígeno de un anticuerpo y cualquier otra molécula de inmunoglobulina modificada que comprende un sitio de reconocimiento del antígeno siempre que los anticuerpos exhiban la actividad biológica deseada Un anticuerpo puede ser de cualquiera de las cinco clases principales de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, o las subclases (isotipos) de las mismas (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, I gA1 e IgA2), basado en la identidad de sus dominios constantes de cadena pesada que se denominan alfa, delta, épsilon, gamma y mu, respectivamente. Las diferentes clases de inmunoglobulinas tienen estructuras de subunidades y configuraciones tridimensionales diferentes y bien conocidas.

Por "mejorar" se entiende decrecer, suprimir, atenuar, disminuir, detener o estabilizar el desarrollo o progresión de una enfermedad.

Por "fragmento de unión al antígeno" se entiende una porción de un anticuerpo intacto que se une al antígeno. En particular, el término fragmento de unión al antígeno se refiere a las regiones variables determinantes de antígeno de un anticuerpo intacto. La función de unión al antígeno de un anticuerpo puede realizarse mediante fragmentos de un anticuerpo de longitud completa. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen, entre otros, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv, anticuerpos lineales, anticuerpos de cadena sencilla y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.

Por "cáncer" se entiende una enfermedad o un trastorno caracterizado por una proliferación excesiva o una apoptosis reducida. Los cánceres ilustrativos descritos en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, leucemias (por ejemplo, leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mieloblástica aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia monocítica aguda, eritroleucemia aguda, leucemia crónica, leucemia mielocítica crónica, leucemia linfocítica crónica), policitemia vera, linfoma (enfermedad de Hodgkin, enfermedad no Hodgkin), macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de la cadena pesada y tumores sólidos como sarcomas y carcinomas (por ejemplo, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma del conducto nilo, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilm, cáncer cervical, cáncer uterino, cáncer testicular, carcinoma pulmonar, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, glioblastoma multiforme, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodenroglioma, schwannoma, meningioma, melanoma, neuroblastoma y retinoblastoma.

Por "anticuerpo quimérico" se entiende un anticuerpo en el que la secuencia de aminoácidos de la molécula de inmunoglobulina se deriva de dos o más especies. Típicamente, la región variable de las cadenas ligeras y pesadas corresponde a la región variable de los anticuerpos derivados de una especie de mamífero (por ejemplo, ratón, rata, conejo, etc.) con la especificidad, afinidad y capacidad funcional deseadas, mientras que las regiones constantes son homólogas a las secuencias en los anticuerpos derivados de otro (generalmente humano) para evitar provocar una respuesta inmune en esa especie.

En esta divulgación, "abarca", "comprende", "contiene" y "tiene" y similares pueden tener el significado que se les atribuye en la ley de patentes de EE. UU. y pueden significar "incluye", "incluyendo" y similares; "que consiste esencialmente en" o "consiste esencialmente" también tiene el significado atribuido en la ley de patentes de EE. UU. y el término es abierto, lo que permite la presencia de más de lo que se recita siempre que las características básicas o novedosas de lo que se recita no se cambien por la presencia de más de lo que se recita, pero excluye las realizaciones de la técnica anterior.

"Detecta" se refiere a identificar la presencia, ausencia o cantidad del analito a ser detectado.

Por "cantidad efectiva" se entiende la cantidad de un agente descrito en la presente memoria (por ejemplo, agonista de OX40) requerida para mejorar los síntomas de una enfermedad en relación con un paciente no tratado. La cantidad efectiva de dicho agente utilizado para practicar la presente invención para el tratamiento terapéutico de una enfermedad varía dependiendo de la forma de administración, la edad, el peso corporal y la salud general del sujeto. En última instancia, el médico o el veterinario a cargo decidirán la cantidad y el régimen de dosificación apropiados. Tal cantidad se denomina cantidad "efectiva".

Por "fragmento" se entiende una porción de un polipéptido o molécula de ácido nucleico. Esta porción contiene, preferiblemente, al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% o 90% de la longitud total de la molécula de ácido nucleico o del polipéptido de referencia. Un fragmento puede contener 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o 1000 nucleótidos o aminoácidos.

Por "anticuerpo humanizado" se entiende un anticuerpo derivado de una inmunoglobulina no humana que se ha diseñado para contener secuencias humanas. Típicamente, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas en las que los residuos de la región determinante complementaria (CDR) se reemplazan por residuos de la CDR de una especie no humana (por ejemplo, ratón, rata, conejo o hámster) que tienen la especificidad, afinidad y capacidad deseadas (Jones et al., 1986, Nature, 321: 522-525; Riechmann et al., 1988, Nature, 332: 323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science, 239: 1534-1536). En algunos casos, los residuos de la región marco Fv (FW) de una inmunoglobulina humana se reemplazan con los residuos correspondientes en un anticuerpo de una especie no humana que tiene la especificidad, afinidad y capacidad deseadas.

Un anticuerpo humanizado puede modificarse adicionalmente mediante la sustitución de residuos adicionales en la región marco Fv y/o dentro de los residuos no humanos reemplazados para refinar y optimizar la especificidad, afinidad y/o capacidad del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente la totalidad de al menos uno, y típicamente dos o tres dominios variables que contienen todas o sustancialmente todas las regiones CDR que corresponden a la inmunoglobulina no humana, mientras que todas o sustancialmente todas las regiones FW son los de una secuencia consenso de inmunoglobulina humana. Un anticuerpo humanizado también puede comprender al menos una porción de una región o dominio constantes de inmunoglobulina (Fc), típicamente el de una inmunoglobulina humana. Los ejemplos de métodos utilizados para generar anticuerpos humanizados se describen en la patente de EE. UU. Nos. 5,225,539 o 5,639,641.

Como se utiliza en la presente memoria, los anticuerpos "humanos" o "completamente humanos" incluyen anticuerpos que tienen la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana e incluyen anticuerpos aislados de bibliotecas de inmunoglobulina humana o de animales transgénicos para una o más inmunoglobulinas humanas y que no expresan inmunoglobulinas endógenas, como se describe a continuación y, por ejemplo, en la patente de EE. UU. No. 5,939,598 de Kucherlapati et al. Los anticuerpos "humanos" o "completamente humanos" también incluyen anticuerpos que comprenden al menos a el dominio variable de una cadena pesada, o al menos los dominios variables de una cadena pesada y de una cadena ligera, donde los dominios variables tienen la secuencia de aminoácidos de los dominios variables de inmunoglobulina humana.

Los anticuerpos "humanos" o "completamente humanos" también incluyen anticuerpos que comprenden, consisten esencialmente en, o consisten en variantes (incluyendo derivados). Las técnicas estándar conocidas por los expertos en la técnica pueden utilizarse para introducir mutaciones en la secuencia de nucleótidos que codifican para un anticuerpo humano, que incluyen, pero no se limitan a, mutagénesis sitio dirigida y mutagénesis mediada por PCR lo cual resulta en sustituciones de aminoácidos. Preferiblemente, las variantes (incluidos los derivados) codifican para menos de 50 sustituciones de aminoácidos, menos de 40 sustituciones de aminoácidos, menos de 30 sustituciones de aminoácidos, menos de 25 sustituciones de aminoácidos, menos de 20 sustituciones de aminoácidos, menos de 15 sustituciones de aminoácidos, menos de 10 sustituciones de aminoácidos, menos de 5 sustituciones de aminoácidos, menos de 4 sustituciones de aminoácidos, menos de 3 sustituciones de aminoácidos o menos de 2 sustituciones de aminoácidos en relación con la región VH de referencia, VHCDR1, VHCDR2, VHCDR3, VL región, VLCDR1, VLCDR2 o VLCDR3.

Por "composición inmunogénica" se entiende una composición que comprende a un antígeno capaz de inducir una respuesta inmune cuando se administra a un sujeto. El antígeno (incluido un antígeno tumoral) se proporciona típicamente en un excipiente farmacéuticamente aceptable. Si se desea, la composición inmunogénica comprende a un adyuvante. En realizaciones particulares, se proporciona un antígeno tumoral induciendo la apoptosis de un tumor in situ, liberando así a los antígenos tumorales capaces de inducir una respuesta inmune contra el tumor.

Por "anticuerpo monoclonal" se entiende un anticuerpo homogéneo implicado en el reconocimiento altamente específico y la unión de un único determinante antigénico o epítope. Esto contrasta con los anticuerpos policlonales que típicamente incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes antigénicos. El término "anticuerpo monoclonal" abarca anticuerpos monoclonales intactos y de longitud completa, así como fragmentos de anticuerpos (tales como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), mutantes de cadena sencilla (scFv), proteínas de fusión que comprenden a una porción del anticuerpo, y cualquier otra molécula de inmunoglobulina modificada que comprenda a un sitio de reconocimiento del antígeno. Además, "anticuerpo monoclonal" se refiere a tales anticuerpos elaborados de varias maneras, que incluyen, pero no se limitan a, por hibridoma, selección de fagos, expresión recombinante y animales transgénicos.

Por "mejora" se entiende una alteración positiva de al menos 10%, 25%, 50%, 75% o 100%.

Por "referencia" se entiende una condición estándar o control.

Por "se une específicamente" se entiende a un compuesto o anticuerpo que reconoce y se une a un polipéptido de la invención, pero que no reconoce ni une sustancialmente a otras moléculas en una muestra, por ejemplo, una muestra biológica, que naturalmente incluye a un polipéptido de la invención.

Por "sujeto" se entiende un mamífero, que incluye, pero no se limita a, un mamífero humano o no humano, tal y como un bovino, equino, canino, ovino o felino.

Una "región variable" de un anticuerpo se refiere a la región variable de la cadena ligera del anticuerpo o la región variable de la cadena pesada del anticuerpo, sola o en combinación. Las regiones variables de la cadena pesada y ligera consisten en cuatro regiones marco (FW) conectadas por tres regiones determinantes de complementariedad (CDR) también conocidas como regiones hipervariables. Las CDRs en cada cadena se mantienen juntas en estrecha proximidad por las regiones FW y, con las CDRs de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión al antígeno de los anticuerpos. Existen al menos dos técnicas para determinar las CDR: (1) un enfoque basado en la variabilidad de la secuencia entre especies (es decir, Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)); y (2) un enfoque basado en estudios cristalográficos de complejos antígeno-anticuerpo (Al-lazikani et al. (1997) J. Molec. Biol. 273: 927-948)). Adicionalmente, las combinaciones de estos dos enfoques a veces se utilizan en la técnica para determinar las CDR.

Se entiende que los intervalos proporcionados en la presente memoria son abreviaturas para todos los valores dentro del intervalo. Por ejemplo, se entiende que un rango de 1 a 50 incluye cualquier número, combinación de números o sub-rango del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 o 50.

Como se utiliza en la presente memoria, los términos "tratar", tratando", " tratamiento "y similares se refieren a reducir o mejorar un trastorno y/o síntomas asociados con el mismo. Se apreciará que, aunque no se excluye, tratar un trastorno o condición no requiere que el trastorno, la condición o los síntomas asociados con él se eliminen por completo.

Un sujeto es "tratado" con éxito si el sujeto muestra uno o más de lo siguiente: una reducción en el número o una ausencia total de células cancerosas; una reducción en el tamaño del tumor; estabilización, retraso o reversión del crecimiento tumoral, la inhibición del crecimiento tumoral incluye, por ejemplo, la supresión, prevención, retraso, contracción o reversión de las metástasis (por ejemplo, de la infiltración de las células cancerosas en los órganos periféricos, incluyendo, por ejemplo, la propagación de cáncer en los tejidos blandos y huesos; inhibición); alivio de uno o más síntomas asociados con el cáncer; reducción de la morbilidad y mortalidad; mejora en la calidad de vida; o alguna combinación de estos efectos.

Los resultados clínicos benéficos o deseados incluyen, pero no se limitan a, alivio de los síntomas, disminución de la extensión de la enfermedad, estabilización del estado de la enfermedad (es decir, no empeoramiento), retraso o desaceleración de la progresión de la enfermedad, mejora o paliación del estado de la enfermedad y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" también puede significar prolongar la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada en ausencia del tratamiento, o en comparación con los sujetos que reciben la terapia estándar. Aquellos que necesitan del tratamiento incluyen aquellos que ya tienen la afección o trastorno, así como aquellos que son propensos a tener la afección o trastorno o aquellos en los que se debe prevenir la afección o el trastorno.

Los términos "célula T" y "linfocito T" se pueden utilizar indistintamente para referirse a una población de linfocitos que llevan un complejo receptor de células T en la superficie celular. Mientras que los linfocitos T generalmente funcionan en la inmunidad mediada por células, se pueden dividir en una serie de subpoblaciones basadas no solo en sus funciones particulares, sino también en la expresión diferencial de ciertos antígenos intracelulares y de superficie que pueden funcionar como "marcadores" para subpoblaciones particulares de linfocitos T. En general, las células T auxiliares expresan a el antígeno de superficie CD4 y las células T citotóxicas expresan a CD8. Las subpoblaciones dentro de estos grupos y la superposición entre estos grupos se pueden identificar por otros marcadores de la superficie celular que incluyen, pero no se limitan a, CD95, c D25, FoxP3, CD28, CCR7, CD127, CD38, HLA-DR y Ki-67. Las subpoblaciones de linfocitos T se pueden identificar y/o aislarse de una población mixta de células sanguíneas mediante el uso de anticuerpos marcados, por ejemplo, mediante citometría de flujo o clasificación de células activadas por fluorescencia, descritas con más detalle en los ejemplos a continuación. Por ejemplo, las células T auxiliares pueden identificarse como que expresan CD3 y CD4, pero no FoxP3. Otras subpoblaciones superpuestas y no superpuestas de linfocitos T incluyen células T de memoria, células T inmaduras, células T maduras, células T reguladoras (Tregs), células T activadas y células T asesinas naturales (NKT).

A menos que se indique específicamente o sea obvio por el contexto, como se utiliza en la presente memoria, se entiende que el término "o" es inclusivo. A menos que se indique específicamente o sea obvio por el contexto, como se usa en la presente memoria, los términos "un", "uno" y "el" se entienden en singular o plural.

A menos que se indique específicamente o sea obvio por el contexto, como se utiliza en la presente memoria, el término "aproximadamente" se entiende dentro de un intervalo de tolerancia normal en la técnica, por ejemplo, dentro de 2 desviaciones estándar de la media. Aproximadamente puede entenderse como dentro del 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% o 0.01% del valor establecido. A menos que el contexto aclare lo contrario, todos los valores numéricos proporcionados en este documento se modifican por el término aproximadamente.

La recitación de una lista de grupos químicos en cualquier definición de una variable en la presente memoria incluye definiciones de esa variable como cualquier grupo único o combinación de grupos listados. La recitación de una realización para una variable o un aspecto en la presente memoria incluye esa realización como cualquier realización individual o en combinación con cualquier otra realización o partes de la misma.

Cualquier composición o método proporcionado en la presente memoria puede combinarse con una o más de cualquiera de las otras composiciones y métodos proporcionados en la presente memoria.

Descripción breve de las figuras

Las Figuras 1A y 1B muestran que la administración de una vacuna contra el cáncer en combinación con un anticuerpo agonista anti-OX40 aumentó la supervivencia de los ratones en un modelo de ratón tumorigénico. La Figura 1a representa el diseño de un estudio sobre el efecto de una vacuna contra el cáncer (epítope CTL del antígeno E7 de HPV16, epítope PADRE Thelper y adyuvante QuilA) y anti-OX40 midiendo la supervivencia de ratones en un modelo de tumorigénesis en ratones. La Figura 1B son gráficas que muestran que la administración de la vacuna contra el cáncer y del anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg mejoró la supervivencia de los ratones en un modelo de ratón tumorigénico (panel superior derecho), en comparación con la administración de la vacuna contra el cáncer por si sola o el anti-OX40 por si solo, o la administración de la vacuna contra el y anti-OX40 a dosis más bajas (0.5 mg/kg, panel superior izquierdo) o más altas (2.5 mg/kg, panel inferior). De los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg, ~20% estaban vivos hasta aproximadamente 62 días después de la inyección de células tumorales TC-1.

Las Figuras 2A y 2B muestran que la administración de una vacuna contra el cáncer en combinación con un anticuerpo agonista anti-OX40 inhibió el crecimiento tumoral en ratones en un modelo de ratón tumorigénico. La Figura 2A representa el diseño de un estudio del efecto de una vacuna contra el cáncer (epítope CTL del antígeno E7 de HPV16, epítope PADRE Thelper y adyuvante QuilA) y anti-OX40 midiendo el crecimiento tumoral en ratones en un modelo de tumorigénesis en ratones. La Figura 2B son gráficas que muestran que la administración de la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg inhibió el crecimiento tumoral en un modelo de ratón tumorigénico (parte inferior, panel central), en comparación con la administración de la vacuna contra el cáncer por si sola (parte inferior, panel izquierdo) o anti-OX40 por si solo (1 mg/kg, panel central superior; 2.5 mg/kg, panel superior derecho), o la administración de la vacuna contra el cáncer y anti-OX40 a dosis más altas (2.5 mg/kg; panel inferior derecho). De los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg, los ratones mostraron un volumen tumoral reducido y/o retrasos en el crecimiento tumoral en comparación con los otros grupos de estudio. Las Figuras 3A-3C muestran que la administración de una vacuna contra el cáncer en combinación con un anticuerpo agonista anti-OX40 estimuló una respuesta inmune específica del antígeno en ratones en un modelo de ratón tumorigénico. La Figura 3A representa el diseño de un estudio del efecto de una vacuna contra el cáncer (epítope CTL del antígeno E7 de HPV16, epítope PADRE Thelper y adyuvante QuilA) y anti-OX40 mediante la evaluación de la respuesta inmune específica del antígeno y los perfiles de células T infiltrantes de tumores en un modelo de ratón de tumorigénesis. La Figura 3B son gráficas que muestran que los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 mostraron aumentos en las células T CD8 específicas del antígeno (E7) en un modelo de ratón tumorigénico, en comparación con los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer por si sola o anti-OX40 por si solo. Los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg mostraron la proporción más alta de células T CD8 específicas de E7:células T CD8 totales, en comparación con los otros grupos que recibieron la vacuna contra el cáncer y anti-OX40. La Figura 3C son gráficas que muestran que los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 mostraron aumentos en las células T CD8 específicas del antígeno (E7) en un modelo de ratón tumorigénico, en comparación con los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer por si sola o anti-OX40 por si solo. Los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg mostraron la proporción más alta de células T CD8 específicas de E7:células T reguladoras (Treg), en comparación con los otros grupos que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo anti-OX40 a dosis más bajas (0.5 mg/kg) o más altas (2.5 mg/kg).

Las Figuras 4A-4C muestran que la administración de una vacuna contra el cáncer en combinación con un anticuerpo agonista anti-OX40 aumentó la infiltración tumoral por las células T reguladoras (Treg) en un modelo de ratón tumorigénico. La Figura 4A representa el diseño de un estudio del efecto del tratamiento basado en anticuerpos anti-OX40 mediante la evaluación de perfiles de células T esplénicas e infiltrantes de tumores en un modelo de tumorigénesis en ratones. La Figura 4B son gráficas que muestran que los ratones que reciben a el anticuerpo agonista anti-OX40 (1 mg/kg; 1.75 mg/kg; 2.5 mg/kg) mostraron un aumento significativo en las células T CD4 no Treg (CD4+ FoxP3-) en el bazo, en comparación con los ratones que no recibieron tratamiento. Los ratones que recibieron a el anticuerpo agonista anti-OX40 (1 mg/kg; 1.75 mg/kg; 2.5 mg/kg) tenían niveles similares de células CD8+ (panel superior izquierdo) y células Treg (CD4+ Foxp3+; panel inferior) en el bazo, en comparación con los ratones que no recibieron tratamiento. La Figura 4C son gráficas que muestran que los ratones que recibieron anti-OX40 mostraron niveles aumentados de células Treg infiltrantes de tumores con dosis crecientes de anti-OX40 (panel inferior).

Las Figuras 5A-5D muestran que la administración de una vacuna contra el cáncer en combinación con un anticuerpo agonista anti-OX40 y un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) inhibió el crecimiento tumoral y aumentó la supervivencia en un modelo de ratón tumorigénico. La Figura 5A muestra el diseño de un estudio sobre el efecto de una vacuna contra el cáncer (epítope CTL del antígeno E7 de HPV16, epítope PADRE Thelper y adyuvante QuilA), anti-OX40 y 1 -metiltriptófano (1-MT) midiendo el crecimiento tumoral y la supervivencia de ratones en un modelo de tumorigénesis en ratones. La Figura 5B son gráficas que muestran que los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer, el anticuerpo agonista anti-OX40 (1 mg/kg) y el 1-MT inhibieron y/o retrasaron significativamente el crecimiento tumoral en un modelo de ratón tumorigénico (panel h), en comparación con otros grupos de ratones, incluidos los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y anti-OX40 (panel f) o la vacuna contra el cáncer y 1-MT (panel g). De los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer, el anticuerpo agonista anti-OX40 y 1-MT, dos ratones mostraron una reducción completa en el volumen tumoral ~35 días después de la inyección de células tumorales TC-1. La Figura 5C es una gráfica que muestra una mayor supervivencia de los ratones que reciben la vacuna contra el cáncer, el anticuerpo agonista anti-OX40 (1 mg/kg) y 1-MT, en comparación con otros grupos de ratones, incluidos los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anti-OX40 (azul) o la vacuna contra el cáncer y 1-MT (verde). Los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer, el anticuerpo agonista anti-OX40 y 1-MT mostraron un volumen tumoral reducido y/o retrasos en el crecimiento tumoral en comparación con los otros grupos de estudio. Se observó una supervivencia de hasta ~80% en estos ratones hasta aproximadamente 55 días después de la inyección de células tumorales TC-1. La Figura 5D son gráficas que muestran que la inhibición del crecimiento tumoral y la supervivencia de los ratones se correlacionaron. Los volúmenes tumorales y los días de supervivencia se trazaron para ratones individuales en el estudio.

Descripción detallada de la invención

La presente invención está definida por las reivindicaciones. Los métodos que son útiles para mejorar la eficacia de una vacuna contra el cáncer se describen en la presente memoria.

La invención se basa, al menos en parte, en el descubrimiento de que atacar a el brazo efector del sistema inmune con un anticuerpo agonista anti-OX40 y el brazo supresor del sistema inmune con un inhibidor de IDO mejora la eficacia de la vacuna contra el cáncer. La molécula OX40 es un receptor coestimulador que es expresado en las células T que puede conducir a la proliferación y a la mejora de la función efectora de las células T cuando se dirige con un anticuerpo agonista. Sin embargo, las células T efectoras son suprimidas por el inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO), que es secretado por los tumores como un mecanismo protector contra la destrucción del tumor. Como se reporta en detalle a continuación, el tratamiento con el anticuerpo agonista anti-OX40 en combinación con la vacuna contra el cáncer conduce a la mejora de las respuestas de las células T específicas del antígeno. La dosis de 1 mg/kg del anticuerpo anti-OX40 estimula el brazo efector de las células T, lo que finalmente conduce a un aumento significativo de la proporción CD8+/células T reguladoras (Treg) dentro de los tumores. Además, esta combinación de vacuna y tratamiento con anticuerpos anti-OX40 conduce a una inhibición significativa del crecimiento tumoral y a la supervivencia prolongada del ratón en comparación con los ratones que no tienen al tumor tratado (TC-1). Se observó una regresión tumoral completa en el 20% de los ratones tratados. Este efecto se incrementó significativamente cuando la vacuna y el tratamiento con anticuerpos anti-OX40 se combinaron con 1-MT, un inhibidor de la actividad de la indolamina-(2,3)-dioxigenasa (IDO). Se ha demostrado que IDO es secretada por las células tumorales, las células dendríticas supresoras y los macrófagos en el entorno del tumor, y se sabe que es responsable de suprimir a las células efectoras e inducir a las células T reguladoras. Estos datos demuestran que la combinación de la vacuna y el anticuerpo anti-OX40 con 1 -metiltriptófano (1-MT, inhibidor de IDO) conduce a una inhibición más profunda del crecimiento tumoral y a una regresión completa de los tumores establecidos en el 60% de los ratones. En conclusión, estos hallazgos indican que la focalización simultánea del brazo efector de la inmunidad con un anticuerpo anti-OX40 y el brazo supresor de la inmunidad con 1-MT, tiene un efecto sinérgico que resulta en la erradicación del tumor y es una estrategia prometedora que puede mejorar a todo el conjunto en general de la eficacia del tratamiento contra el cáncer en pacientes.

OX40

El OX40 es un miembro de la familia de receptores de TNF que se expresa principalmente en células T CD4+ y CD8+ activadas y en células T reguladoras. Los agonistas de OX40 tienen una potente actividad antitumoral contra múltiples tipos de tumor, que es dependiente de las células T CD4+ y CD8+ (Kjaergaard, J., et al. Cancer Res 60, 5514-5521 (2000); Weinberg, AD, et al. JImmunol 164, 2160-2169 (2000); Gough, MJ, et al. Cancer Res 68, 5206-5215 (2008); Piconese, S., Valzasina, B. y Colombo, MP J Exp Med 205, 825-839 (2008 )). Los agonistas de OX40 aumentaron la proliferación de las células T, la producción de citocinas efectoras, la citotoxicidad y la disminución de la muerte celular inducida por la activación y aumentaron la generación de células T de memoria en sistemas modelo no humanos (Gramaglia, I., et al. J Immunol 165, 3043-3050. (2000); Maxwell, J.R., et al. J Immunol 164, 107-112 (2000); Lee, SW, et al. J Immunol 177, 4464-4472 (2006); Ruby, C.E. y Weinberg, A.D. Cancer Immunol Immunother 58, 1941-1947 (2009)).

Agonistas de OX40

Los agonistas de OX40 interactúan con el receptor OX40 en las células T CD4+ durante, o poco después, del cebado por un antígeno que da como resultado una mayor respuesta de las células T CD4+ al antígeno. Un agonista de OX40 que interactúa con el receptor OX40 en las células T CD4+ específicas del antígeno puede aumentar la proliferación de las células T en comparación con la respuesta al antígeno por si solo. La respuesta elevada al antígeno se puede mantener durante un período de tiempo sustancialmente más largo que en ausencia de un agonista de OX40. Por lo tanto, la estimulación a través de un agonista de OX40 mejora la respuesta inmune específica del antígeno al aumentar el reconocimiento de antígenos de células T, por ejemplo, células tumorales. Los agonistas de OX40 se describen, por ejemplo, en las patentes de EE. UU. Nos. 6,312,700, 7,504,101,7,622,444 y 7,959,925. Los métodos para utilizar a tales agonistas en el tratamiento contra el cáncer se describen, por ejemplo, en WO/2013/119202 y en WO/2013/130102.

Los agonistas de OX40 incluyen, pero no se limitan a moléculas de unión a OX40, por ejemplo, polipéptidos de unión, por ejemplo, ligando OX40 ("OX40L") o un fragmento de unión a OX40, variante o derivado de los mismos, tal y como dominios de ligando extracelular solubles y proteínas de fusión OX40L y anticuerpos anti-OX40 (por ejemplo, anticuerpos monoclonales como los anticuerpos monoclonales humanizados), o un fragmento, variante o derivado de unión al antígeno de los mismos. Se describen ejemplos de anticuerpos monoclonales anti-OX40, por ejemplo, en WO 95/12673 y en WO/95/21915. En ciertas realizaciones, el anticuerpo monoclonal anti-OX40 es 9B12, o un fragmento, variante o derivado de unión al antígeno del mismo, como se describe en Weinberg, A.D. et al. J Immunother 29, 575 585 (2006).

9B12 es un IgG1 murino, mAb anti-OX40 dirigido contra el dominio extracelular de OX40 humano (CD134) (Weinberg, A.D., et al. J Immunother 29, 575-585 (2006)). Se seleccionó de un panel de anticuerpos monoclonales anti-OX40 debido a su capacidad para provocar una respuesta agonista para la señalización, estabilidad de OX40 y por su alto nivel de producción por el hibridoma. Para uso en aplicaciones clínicas, 9B12 mAb se equilibra con solución salina tamponada con fosfato, pH 7.0, y su concentración se ajusta a 5.0 mg/ml por diafiltración.

Los agonistas de OX40 incluyen a una proteína de fusión en la que uno o más dominios de OX40L están unidos covalentemente a uno o más dominios de proteínas adicionales. Las proteínas de fusión OX40L de ejemplo que se pueden utilizar como agonistas de OX40 se describen en la patente de EE. UU. No. 6,312,700. Un agonista de OX40 descrito en la presente memoria incluye a un polipéptido de fusión OX40L que se autoensambla en una proteína de fusión OX40L multimérica (por ejemplo, trimérica o hexamérica). Dichas proteínas de fusión se describen, por ejemplo, en la Patente de EE. UU. No. 7,959,925. La proteína de fusión multimérica OX40L exhibe una mayor eficacia para mejorar la respuesta inmune específica del antígeno en un sujeto, particularmente un sujeto humano, debido a su capacidad de ensamblarse espontáneamente en trímeros y en hexámeros altamente estables.

Un agonista de OX40 descrito en la presente memoria capaz de ensamblarse en una forma multimérica incluye a un polipéptido de fusión que comprende en una dirección N-terminal a C-terminal: un dominio de inmunoglobulina, en el que el dominio de inmunoglobulina incluye a un dominio Fc, un dominio de trimerización, en el que dominio de trimerización incluye a un dominio de trimerización en espiral y un dominio de unión al receptor, en el que el dominio de unión al receptor es un dominio de unión al receptor OX40, por ejemplo, un OX40L o un fragmento, variante o derivado de unión a OX40, donde el polipéptido de fusión puede autoensamblarse en una proteína de fusión trimérica.

Un agonista de OX40 descrito en la presente memoria capaz de ensamblarse en una forma multimérica es capaz de unirse al receptor OX40 y estimular al menos una actividad mediada por OX40. Un agonista de OX40 descrito descrito en la presente memoria incluye a un dominio extracelular del ligando OX40.

El dominio de trimerización de un agonista de OX40 capaz de ensamblarse en una forma multimérica sirve para promover el autoensamblaje de moléculas de polipéptidos de fusión OX40L individuales en una proteína trimérica. Por lo tanto, un polipéptido de fusión OX40L con un dominio de trimerización se autoensambla en una proteína de fusión OX40L trimérica. El dominio de trimerización puede ser un dominio de cierre de isoleucina u otra estructura de polipéptido en espiral. Los dominios de trimerización en espiral de ejemplo incluyen: TRAF2 (No. de acceso Ge NbANK® Q12933, aminoácidos 299-348; Trombospondina 1 (No. de acceso p O7996, aminoácidos 291-314; Matrilin-4 (No. de acceso 095460, aminoácidos 594-618); CMP (matrilin-1) (No. de acceso NP-002370, aminoácidos 463-496; HSF1 (No. de acceso AAX42211, aminoácidos 165-191) y Cubilin (No. de acceso NP-001072, aminoácidos 104-138. El dominio de trimerización puede incluir un dominio de trimerización TRAF2, un dominio de trimerización de Matrilin-4, o una combinación de los mismos.

En realizaciones particulares, un agonista de OX40 se modifica para aumentar su vida media en suero. Por ejemplo, la vida media en suero de un agonista de OX40 se puede aumentar mediante la conjugación con una molécula heteróloga como la albúmina sérica, una región Fc de anticuerpo o PEG. Además, en ciertas realizaciones, pueden realizarse mutaciones tales como deleción, adición o mutaciones de sustitución a los anticuerpos o partes funcionales para mejorar su vida media. En una realización, la región Fc puede mutarse para incluir una, dos o las tres sustituciones siguientes M252Y, S254T y T256E, en el que la numeración corresponde al índice de UE en Kabat. Dall'Acqua et al., Properties of Human IgG1s Engineered for Enhanced Binding to the Neonatal Fc Receptor (FcRn), J Biol Chem 281 (33): 23514-23524 (2006). La realización con las tres sustituciones se denota como la variante YTE. Expresado de manera diferente, en una realización, el anticuerpo o la parte funcional tiene una región Fc que tiene Y en la posición 252Y, T en la posición 254T y E en la posición 256, en el que la numeración corresponde al índice EU en Kabat.

En ciertas realizaciones, los agonistas de OX40 se pueden conjugar con otros agentes terapéuticos o toxinas para formar inmunoconjugados y/o proteínas de fusión.

En ciertos aspectos, se puede formular un agonista de OX40 para facilitar la administración y promover la estabilidad del agente activo. En ciertos aspectos, las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente descripción comprenden a un vehículo farmacéuticamente aceptable, no tóxico, estéril, tal y como solución salina fisiológica, tampones no tóxicos, conservadores y similares. Las formulaciones adecuadas para su uso en los métodos de tratamiento descritos en la presente memoria se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.), 16th ed. (1980).

Deseablemente, la administración de un agonista de OX40 da como resultado una respuesta mejorada de linfocitos T a los antígenos en una variedad de células cancerosas, porque la activación de OX40, mientras funciona en conjunto con la estimulación antigénica de linfocitos T, no es antígeno o específico de células en sí mismo. Por lo tanto, la administración del agonista de OX40 puede utilizarse para mejorar una respuesta inmune contra prácticamente cualquier antígeno tumoral.

Una cantidad efectiva de un agonista de OX40 para administrar se puede determinar por una persona de habilidades ordinarias en el arte de métodos bien conocidos.

La respuesta clínica a la administración de un agonista de OX40 se puede evaluar utilizando técnicas de diagnóstico conocidas por los médicos, que incluyen, pero no se limitan a, exploración por resonancia magnética (MRI), imagenología radiográfica-x, exploración tomográfica computarizada (CT), citometría de flujo o análisis de clasificador celular activado por fluorescencia (FACS), histología, patología general y química sanguínea, que incluyen, pero no se limitan a, cambios detectables por ELISA, RIA y cromatografía. Además, el sujeto sometido a la terapia con un agonista de OX40 puede experimentar el efecto beneficioso de una mejora en los síntomas asociados con la enfermedad.

La administración del agonista OX40 puede realizarse a través de cualquier ruta utilizable, según lo determinado por la naturaleza de la formulación y las necesidades del paciente. En ciertas realizaciones, el agonista de OX40 se administra por infusión IV.

Dado que la estimulación inmune con agonistas de OX40 no es específica del antígeno, se puede tratar una variedad de cánceres mediante los métodos proporcionados en la presente memoria, por ejemplo, en ciertos aspectos, el cáncer es un tumor sólido o una metástasis del mismo. Los tipos de cáncer incluyen, pero no se limitan a, melanoma, cáncer gastrointestinal, carcinoma de células renales, cáncer de próstata, cáncer de pulmón o cualquier combinación de los mismos. El sitio de metástasis no es limitante y puede incluir, por ejemplo, metástasis en los ganglios linfáticos, pulmones, hígado, huesos o cualquier combinación de los mismos.

Los métodos de tratamiento contra el cáncer proporcionados en la presente memoria incluyen tratamientos contra el cáncer convencionales o no convencionales además de la administración de una vacuna contra el cáncer, un agonista de OX40 y el inhibidor de IDO. Por ejemplo, no limitativo, la administración de una vacuna contra el cáncer, un agonista de OX40 y el inhibidor de IDO se puede combinar con cirugía, radiación, quimioterapia, inmunoterapia, terapia dirigida contra el cáncer, terapia hormonal o cualquier combinación de los mismos.

El tratamiento eficaz con un agonista de OX40 incluye, por ejemplo, reducir la tasa de progresión del cáncer, retraso o estabilización del crecimiento tumoral o metastásico, contracción tumoral y/o regresión tumoral, ya sea en el sitio de un tumor primario, o en una o más metástasis.

Como se reporta a continuación en la presente memoria, la administración del agonista de OX40 y el inhibidor de IDO aumenta inesperadamente la eficacia de la composición inmunogénica que comprende a un antígeno tumoral.

Inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa

El triptófano (Trp) es un aminoácido esencial requerido para la biosíntesis de proteínas, niacina y el neurotransmisor 5-hidroxitriptamina (serotonina). La enzima indolamina 2,3-dioxigenasa (también conocida como INDO o IDO) cataliza el primer paso y limita la velocidad en la degradación de L-triptófano a N-formil-kinurenina. En las células humanas, la estimulación con IFN-y induce la activación de IDO, lo que conduce a un agotamiento de Trp, deteniendo así el crecimiento de los patógenos intracelulares dependientes de Trp, como Toxoplasma gondiiy Chlamydia trachomatis. La actividad de IDO también tiene un efecto antiproliferativo en muchas células tumorales, y la inducción de IDO se ha observado in vivo durante el rechazo de tumores alogénicos, lo que indica un posible papel de esta enzima en el proceso de rechazo tumoral.

Se ha observado que las células HeLa cocultivadas con linfocitos de sangre periférica (PBL) adquieren un fenotipo inmunoinhibidor a través de la regulación positiva de la actividad de IDO. Se creía que una reducción en la proliferación de PBL después del tratamiento con interleucina-2 (IL-2) era el resultado de IDO liberado por las células tumorales en respuesta a la secreción de IFN-y por los PBLs. Este efecto fue revertido por el tratamiento con 1 -metil-triptófano (1-MT), un inhibidor de IDO específico. Se propuso que la actividad IDO en las células tumorales puede servir para incapacitar a las respuestas antitumorales (Logan, et al., 2002, Immunology, 105: 478-87).

Los inhibidores de molécula pequeña de IDO útiles en los métodos de la invención se describen, por ejemplo, en la publicación PCT WO 99/29310, que reporta métodos para alterar la inmunidad mediada por células T que comprende alterar las concentraciones extracelulares locales de triptófano y los metabolitos de triptófano, utilizando un inhibidor de IDO como 1-metil-DL-triptófano, p-(3-benzofuranil)-DL-alanina, p-[3-benzo(b) tienil] -DL-alanina y 6-nitro-L-triptófano) (Munn, 1999). Los compuestos que tienen actividad inhibidora de indolamina-2,3-dioxigenasa (IDO) se describen adicionalmente en WO 2004/094409; y la Publicación de Patente de EE. UU. No. 7,598,287 está dirigida a métodos para tratar a un sujeto con un cáncer o una infección mediante la administración de un inhibidor de indolamina-2,3-dioxigenasa en combinación con otras modalidades terapéuticas. Los inhibidores de IDO, que incluyen Indoximod, el isómero D de 1 -metil-triptófano y NLG919, son conocidos en la técnica y están disponibles comercialmente, por ejemplo, de NewLink Genetics (Ames, IA). Otros inhibidores de IDO se describen, por ejemplo, en las publicaciones de patente de EE. UU. Nos. 20130289083.

Generando una respuesta inmune anticancerígena

Las vacunas contra el cáncer son potencialmente útiles como terapéuticas para el tratamiento de tipos específicos de cánceres. Ventajosamente, estas vacunas pueden adaptarse para tratar los cánceres de individuos particulares, al generar composiciones inmunogénicas que se dirigen a los antígenos tumorales específicos expresados en un tumor en un sujeto. Las vacunas contra el cáncer generalmente contienen células tumorales inactivadas o antígenos tumorales que estimulan a el sistema inmune del paciente. El sistema inmune responde a esta estimulación generando células con inmunorrespuesta que atacan a el cáncer. A diferencia de las vacunas para otras enfermedades que previenen la aparición de la enfermedad, las vacunas contra el cáncer generalmente se administran después de que se ha identificado que un sujeto tiene una neoplasia.

Las vacunas antigénicas utilizan antígenos específicos de tumor -- proteínas que se muestran en una célula tumoral -- para estimular a el sistema inmunitario. Al inyectar estos antígenos en el área cancerosa del paciente, el sistema inmune produce anticuerpos o linfocitos T citotóxicos para atacar a las células cancerosas que transportan ese antígeno específico. Se pueden utilizar múltiples antígenos en este tipo de vacuna para variar la respuesta del sistema inmune.

De manera adecuada, el antígeno tumoral es un antígeno específico de tumor (TSA) o un antígeno asociado a tumor (TAA). Varios antígenos tumorales y sus patrones de expresión son conocidos en la técnica y pueden seleccionarse en función del tipo de tumor a ser tratado. Los ejemplos no limitantes de antígenos tumorales incluyen alfafetoproteína (carcinoma hepatocelular), antígeno carcinoembrionario (cáncer de intestino), cdk4 (melanoma), beta-catenina (melanoma), BING-4, CA125 (cáncer de ovario), canal de cloruro activado por calcio 2 , antígeno carcinoembrionario, caspasa-8 (carcinoma de células escamosas), CDK4, CML66, ciclina-B1, Ep-Cam, antígeno tumoral epitelial (cáncer de mama), EphA3, fibronectina, un antígeno de HPV, antígeno HPV16, HPV 36, 37, CTL epítope del antígeno E7 de HPV16, ART-2, antígeno asociado a melanoma (MAGE) -1 y MAGE-3 (melanoma, mama, glioma), mesotelina, SAP 1, superviviente, telomerasa, tirosinasa (melanoma), idiotipo de superficie de Ig (por ejemplo, BCR) (linfoma), Her-2/neu (mama, ovario), MUC-1 (mama, pancreático), TAG-72, tirosinasa (melanoma) y E6 y E7 de HPV (carcinoma cervical). Los antígenos tumorales adicionales adecuados incluyen antígeno prostático específico (PSA), RAS, sialil Tn (STn), proteínas de choque térmico y péptidos tumorales asociados (por ejemplo, Gp96), moléculas de gangliósidos (por ejemplo, GM2, GD2 y GD3), antígeno carcinoembrionario (CEA) y MART-1.

Las composiciones típicamente inmunogénicas que comprenden a un antígeno tumoral se preparan en forma inyectable, ya sea como una solución líquida o como una suspensión. Las formas sólidas adecuadas para inyección también pueden prepararse como emulsiones, o con los polipéptidos encapsulados en liposomas. Los antígenos tumorales se inyectan en cualquier vehículo apropiado conocido en la técnica. Los portadores apropiados comprenden típicamente macromoléculas grandes que se metabolizan lentamente, tales como proteínas, polisacáridos, ácidos polilácticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácidos, agregados lipídicos y partículas virales inactivas. Tales portadores son bien conocidos por los expertos en la téncia. Estos portadores también pueden funcionar como adyuvantes.

Los adyuvantes son agentes inmunoestimulantes que mejoran la efectividad de la vacuna. Los adyuvantes efectivos incluyen, pero no se limitan a, sales de aluminio tales como hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio, péptidos de muramil, componentes de la pared celular bacteriana, adyuvantes de saponina y otras sustancias que actúan como agentes inmunoestimulantes para mejorar la efectividad de la composición.

Las composiciones inmunogénicas (por ejemplo, vacunas contra el cáncer) se administran de manera compatible con la formulación de la dosis. Por una cantidad efectiva se entiende una dosis única, o una vacuna administrada en un programa de dosis múltiples, que es efectiva para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o un trastorno. Preferiblemente, la dosis es efectiva para inhibir el crecimiento de una neoplasia. La dosis administrada va a variar, dependiendo del sujeto a tratar, la salud y el estado físico del sujeto, la capacidad del sistema inmune del sujeto para producir anticuerpos, el grado de protección deseado y otros factores relevantes. Las cantidades precisas del ingrediente activo requerido dependerán del juicio del practicante.

Como se reporta a continuación en la presente memoria, la administración del inhibidor de IDO (por ejemplo, 1-MT) y el agonista de OX40 (por ejemplo, el anticuerpo agonista de OX40) aumenta sinérgicamente la eficacia de la vacuna contra el cáncer. Preferiblemente, la administración de la composición inmunogénica que comprende a un antígeno tumoral, el anticuerpo agonista de OX40 y el inhibidor IDO reduce o retrasa el crecimiento tumoral, induce la regresión tumoral o aumenta la supervivencia del paciente en relación con la administración de tales agentes por si solos.

Además del uso de las vacunas contra el cáncer, las terapias que inducen la apoptosis de las células tumorales liberan antígenos tumorales en el cuerpo que son capaces de inducir una respuesta inmune contra el cáncer. En una realización, se puede utilizar radiación para inducir la apoptosis de las células tumorales. En consecuencia, los métodos para mejorar la eficacia de un antígeno tumoral en la inducción de una respuesta inmune anticancerígena mediante la administración de un agonista de OX40 y un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) en combinación con la radioterapia se describen en la presente memoria. En otra realización, la quimioterapia que induce la apoptosis de las células tumorales (por ejemplo, antraciclinas, oxaliplatino) se puede administrar en combinación con un agonista de OX40 y un inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO). Las antraciclinas de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, daunorubicina, doxorubicina, epirubicina, idarubicina y valrubicina.

La práctica de la presente invención emplea, a menos que se indique lo contrario, técnicas convencionales de biología molecular (incluyendo técnicas recombinantes), microbiología, biología celular, bioquímica e inmunología, que están dentro del alcance del experto en la técnica. Dichas técnicas se explican completamente en la literatura, como "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", second edition (Sambrook, 1989); "Oligonucleotide Synthesis" (Gait, 1984); "Animal Cell Culture" (Freshney, 1987); "Methods in Enzymology", "Handbook of Experimental Immunology" (Weir, 1996); "Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells" (Miller y Calos, 1987); "Current Protocols in Molecular Biology" (Ausubel, 1987); "PCR: The Polymerase Chain Reaction", (Mullis, 1994); "Current Protocols in Immunology" (Coligan, 1991). Estas técnicas son aplicables a la producción de los polinucleótidos y polipéptidos de la invención, y, como tales, pueden considerarse al hacer y practicar la invención. Se discutirán técnicas particularmente útiles para realizaciones particulares en las secciones siguientes.

Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionar a aquellos con habilidad ordinaria en la técnica una descripción completa y una descripción de cómo hacer y utilizar el ensayo, la detección y los métodos terapéuticos de la invención, y no están destinados a limitar el alcance de lo que los inventores consideran su invención.

Ejemplos

Ejemplo 1. Tratamiento con la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 aumentó la supervivencia en un modelo de ratón tumorigénico.

Se realizó un estudio en un modelo de ratón tumorigénico para determinar el efecto del tratamiento con una vacuna contra el cáncer (epítope CTL del antígeno E7 de HPV16, epítope PADRE Thelper y adyuvante QuilA) y el agonista de OX40 en la supervivencia (Figura 1A). Los ratones (C57BL6; hembras, de 6 a 8 semanas de edad) fueron inyectados con células tumorales TC-1 (7x104 s.c.). La administración del anticuerpo anti-OX40 (clon OX86) se inició el día 4 o en el día 10 después de la inyección con células TC-1. El primer día de aparición del tumor fue alrededor del día 10. El anticuerpo anti-OX40 se administró dos veces por semana a dosis de 0.5, 1.0 y 2.5 mg/kg, i.p. En total, se estudiaron 14 grupos de ratones (n = 5/grupo), incluyendo a los ratones que no recibieron tratamiento, la vacuna por si sola, anti-OX40 por si solo el día 4 (0.5, 1.0 y 2.5 mg/kg), anti-OX40 solo en el día 10 (0.5, 1.0 y 2.5 mg/kg), anti-OX40 en el día 4 (0.5, 1.0 y 2.5 mg/kg) y vacuna contra el cáncer, y anti-OX40 en el día 10 (0.5, 1.0 y 2.5 mg/kg) y la vacuna contra el cáncer. El estudio se repitió dos veces.

La vacuna contra el cáncer administrada a ratones y el anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg mostró una supervivencia mejorada, en comparación con la vacuna contra el cáncer administrada a ratones por si sola o anti-OX40 por si solo (Figura 1B). En particular, los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y anti-OX40 a dosis más bajas (0.5 mg/kg, panel superior izquierdo) o más altas (2.5 mg/kg, panel inferior) no mostraron una mejor supervivencia. De los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg, ~20% estaban vivos hasta aproximadamente 62 días después de la inyección de células tumorales TC-1. No se proporcionó ninguna diferencia significativa en la supervivencia cuando se administró el anticuerpo anti-OX40 antes de la aparición del tumor (día 4 después de la implantación del tumor) o en el primer día de la aparición del tumor (día 10 después de la implantación del tumor).

Ejemplo 2. Tratamiento con la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 disminuyó el crecimiento tumoral en un modelo de ratón tumorigénico.

Se realizó un estudio en un modelo de ratón tumorigénico para determinar el efecto del tratamiento con una vacuna contra el cáncer (epítope CTL del antígeno E7 de HPV16, epítope PADRE Thelper y adyuvante QuilA) y el agonista de OX40 en el crecimiento tumoral (Figura 2A). Los ratones (C57BL6; hembra, de 6 a 8 semanas de edad) fueron inyectados con células tumorales TC-1 (7x104 s.c.). La administración del anticuerpo anti-OX40 (clon OX86) se inició el día 4 o el día 10 después de la inyección con células TC-1. El anticuerpo anti-OX40 se administró dos veces por semana a dosis de 1.0 y 2.5 mg/kg, i.p. En total, se estudiaron 6 grupos de ratones (n = 5/grupo), incluyendo a los ratones que no recibieron tratamiento, la vacuna por si sola, anti-OX40 por si solo (1.0 y 2.5 mg/kg) y anti-OX40 (1.0 y 2.5 mg/kg) y la vacuna contra el cáncer. El estudio se repitió dos veces.

La vacuna contra el cáncer administrada en ratones y el anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg mostraron un volumen tumoral reducido y/o retrasos en el crecimiento tumoral (Figura 2B: panel inferior, medio), en comparación con la vacuna contra el cáncer administrada por si sola en ratones (Figura 2B: inferior, panel izquierdo) o anti-OX40 por si solo (Figura 2B: panel central superior, panel superior derecho). Consistentemente con otros resultados (véase, por ejemplo, Figura 1B), los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y anti-OX40 a una dosis más alta (2.5 mg/kg) no mostraron el mismo efecto sobre el crecimiento tumoral que los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-Ox40 a 1 mg/kg (Figura 2B: panel inferior derecho). Por lo tanto, el tratamiento con la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 a 1 mg/kg inhibió el crecimiento tumoral en ratones.

Ejemplo 3. Tratamiento con la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 aumentó la proporción CD8/Treg dentro de un tumor en un modelo de ratón tumorigénico.

Se realizó un estudio en un modelo de ratón tumorigénico para evaluar el efecto del tratamiento con una vacuna contra el cáncer (epítope CTL del antígeno E7 de HPV16, epítope PADRE Thelper y adyuvante QuilA) y el agonista de OX40 sobre la respuesta inmune (Figura 3A). Los ratones (C57BL6; hembras, de 6 a 8 semanas de edad) fueron inyectados con células tumorales TC-1 (7x104 s.c.). La administración del anticuerpo anti-OX40 (clon OX86) se inició el día 10 después de la inyección con células TC-1. El anticuerpo anti-OX40 se administró dos veces por semana a dosis de 0.5, 1.0 o 2.5 mg/kg, i.p. En total, se estudiaron 8 grupos de ratones (n = 5/grupo), incluyendo a los ratones que no recibieron tratamiento, la vacuna por si sola, anti-OX40 por si solo (0.5 y 1.0 mg/kg) y anti-OX40 (0.5, 1.0 y 2.5 mg/kg) y la vacuna contra el cáncer. El estudio se repitió dos veces. Las Figuras 3B y 3C muestran el efecto de varias dosis de Ox40 por si solo, o en combinación con la vacuna en células T CD8, células T CD8 específicas de E7, células T reg y la proporción CD8/Treg

Ejemplo 4. Tratamiento con la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 estimuló una respuesta inmune específica al antígeno en un modelo de ratón tumorigénico.

Se realizó un estudio en un modelo de ratón tumorigénico para evaluar el efecto del tratamiento con una vacuna contra el cáncer (epítope CTL del antígeno E7 de HPV16, epítope PADRE Thelper y adyuvante QuilA) y el agonista de OX40 sobre la respuesta inmune (Figura 4A). Los ratones (C57BL6; hembras, de 6 a 8 semanas de edad) fueron inyectados con células tumorales TC-1 (7x104 s.c.). La administración del anticuerpo anti-OX40 (clon OX86) se inició el día 10 después de la inyección con células TC-1. El anticuerpo anti-OX40 se administró dos veces por semana a dosis de 1.0, 1.75 o 2.5 mg/kg, i.p. En total, se estudiaron 4 grupos de ratones (n = 5/grupo), incluyendo a los ratones que no recibieron tratamiento y anti-OX40 por si solo (1.0, 1.75 y 2.5 mg/kg). El estudio se repitió dos veces.

No se detectó ningún efecto sobre el porcentaje o el número de células T CD8+ en el bazo (Figura 4B: panel superior izquierdo) o tumor (Figura 4C: panel superior derecho) después del tratamiento con el anticuerpo anti-OX40 para todas las dosis. Las tres dosis aumentaron significativamente a las células T CD4 no Treg (CD4+ FoxP3‘) en el bazo (Figura 4B, panel superior derecho) y dentro del tumor (Figura 4C, panel superior derecho). Los ratones que recibieron el anticuerpo agonista anti-OX40 tenían niveles similares de células Treg (CD4+ Foxp3+; Figura 4B: panel inferior), en comparación con los ratones que no recibieron tratamiento. Sin embargo, los ratones que recibieron anti-OX40 mostraron niveles incrementados de células Treg infiltrantes de tumores con dosis crecientes de anti-OX40 (Figura 4C: panel inferior). Sin limitarse a una teoría en particular, el aumento de las células Treg infiltrantes de tumores podría explicar la falta de efecto terapéutico cuando se utilizaron 2.5 mg/kg de anti-OX40 Ab con la vacuna contra el cáncer.

Ejemplo 5. Tratamiento con la vacuna contra el cáncer, el anticuerpo agonista anti-OX40 y el inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) disminuyeron el crecimiento tumoral y aumentaron la supervivencia en un modelo de ratón tumorigénico.

El tumor TC-1 de ratón que expresa a la oncoproteína E7 de HPV-16, se utiliza como sustituto de tumores humanos infectados con HPV-16. Los ratones (C57BL6; hembras, de 6 a 8 semanas de edad) fueron inyectados con células tumorales TC-1 (7x104 sc) en el día 0. La administración del anticuerpo anti-OX40 (clon OX86) se inició el día 10 después de la inyección con células TC-1. El anticuerpo anti-OX40 se administró dos veces por semana a 1.0 mg/kg, i.p. A partir del día 10, se administró 1 -metil-triptófano (1-MT) a los ratones añadiendo 1-MT (2 mg/ml) a su agua potable. En total, se estudiaron 8 grupos de ratones (n = 5/grupo), incluyendo a los ratones que no recibieron tratamiento, anti-OX40 por si solo (1.0 mg/kg), 1-MT por si solo, anti-OX40 y 1-MT, vacuna contra el cáncer por si sola, vacuna contra el cáncer y anti-OX40 (1.0 mg/kg), vacuna contra el cáncer y 1-MT, y vacuna contra el cáncer, anti-OX40 y 1-MT.

Los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer, el anticuerpo agonista anti-OX40 (1 mg/kg) y 1-MT inhibieron significativamente y/o retrasaron el crecimiento tumoral en un modelo de ratón tumorigénico (Figura 5B: panel h), en comparación con otros grupos de ratones, incluyendo a los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y anti-OX40 (Figura 5B: panel f) o la vacuna contra el cáncer y 1-MT (Figura 5B: panel g). De los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer, el anticuerpo agonista anti-OX40 y 1-MT, dos ratones mostraron una reducción completa en el volumen del tumor -35 días después de la inyección de las células tumorales TC-1. Los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer, el anticuerpo agonista anti-OX40 (1 mg/kg) (rojo) y MT-1 tuvieron una mayor supervivencia en comparación con otros grupos de ratones, incluyendo a los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y anti-OX40 (azul) o contra el cáncer y 1-MT (verde) (Figura 5C). Se observó una supervivencia de hasta ~80% en estos ratones hasta aproximadamente 55 días después de la inyección de células tumorales TC-1. En contraste, ~20% de los ratones que recibieron la vacuna contra el cáncer y el anticuerpo agonista anti-OX40 estuvieron vivos hasta aproximadamente 55 días después de la inyección de células tumorales TC-1, de acuerdo con los resultados anteriores (véase, por ejemplo, Figura 1B). La inhibición del crecimiento tumoral y la supervivencia de los ratones se correlacionaron (Figura 5D). Por lo tanto, la adición de 1-MT al tratamiento con la vacuna contra el cáncer y anti-OX40 condujo a un aumento significativo en la potencia terapéutica del tratamiento (por ejemplo, regresión completa del 60% frente al 20%). Los resultados presentados en la presente memoria demuestran que el uso de agonistas de OX40 e inhibidores de IDO en combinación con vacunas contra el cáncer tiene el potencial de aumentar la eficacia de las vacunas contra el cáncer.

Los resultados descritos anteriormente en la presente memoria se llevaron a cabo utilizando los siguientes materiales y métodos.

Se obtuvieron ratones (C57BL6; hembras, 6-8 semanas de edad) del Laboratorio Jackson (Bar Harbor, Maine) y se mantuvieron bajo condiciones libres de patógenos.

Las células TC-1 que se derivaron por cotransfección de las proteínas tempranas 6 y 7 (E6 y E7) de la cepa 16 del virus del papiloma humano (HPV16) y el oncogén ras activado a células epiteliales pulmonares primarias de ratón C57BL/6 se obtuvieron de ATCC (Manassas, VA). Las células TC-1 se cultivaron en RPMI 1640 suplementado con FBS al 10%, penicilina y estreptomicina (100 U/ml cada una) y L-glutamina (2 mM) a 37° C con 5% de CO2.

La vacuna que consiste en el epítope CTL del antígeno E7 (E749-57, un péptido de 9-mero (RAHYNIVTF)), mezclado con el epítope PADRE Thelper 13-mero (aKChaVAAWTLKAAa) (ambos de Celtek Bioscience (Nashville, TN)) y adyuvante QuilA (Brenntag, Dinamarca). El anticuerpo anti-OX40 (clon OX86) fue proporcionado por Medimmune. Se obtuvo 1-metil-D-triptófano (1-MT) de Sigma-Aldrich (St. Louis, m O).

En los experimentos donde el análisis del crecimiento tumoral y la supervivencia fueron el punto final, los ratones (n = 5/grupo) fueron implantados con 70,000 células TC-1 en el día 0. El anticuerpo anti-OX40 (1 mg/kg, i.p.) fue inyectado el día 4 o el día 10 después de la implantación del tumor. El día 10, cuando todos los ratones tenían tumores de ~3-4 mm de diámetro, a los animales de los grupos apropiados se les inyectó la vacuna (E7-100 |jg/ratón, PADRE-20 |jg/ratón, Qui1A 10 jg/ratón) s.c. Los ratones de los grupos apropiados recibieron 1-MT en agua potable (2 mg/ml) también a partir del día 10 después de la implantación del tumor durante todo el experimento. Los ratones fueron tratados con la vacuna semanalmente durante todo el experimento; El anticuerpo anti-OX40 se administró dos veces por semana. Los tumores se midieron cada 3-4 días utilizando calibradores digitales, y el volumen del tumor se calculó utilizando la fórmula V = (W2 x L)/2, donde V es volumen, L es longitud (diámetro más largo) y W es ancho (diámetro más corto). En estos experimentos, los ratones fueron sacrificados cuando se volvieron moribundos, los tumores se ulceraron o el volumen del tumor alcanzó 1.5 cm3.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un agonista de OX40 para el uso en retrasar o reducir el crecimiento tumoral en un sujeto que tiene un cáncer asociado con el virus del papiloma humano (HVP) en relación con un sujeto control no tratado, mediante la administración conjunta con una indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO), y una composición inmunogénica que comprende un antígeno tumoral del HVP, en el que el agonista de OX40 es un anticuerpo que se une específicamente a OX40 o un fragmento de unión al antígeno del mismo.

2. El agonista de OX40 para el uso de la reivindicación 1, en el que dicho uso aumenta la proporción de células T CD8+ a células T reguladoras dentro de un tumor del sujeto.

3. El agonista de OX40 para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que el inhibidor de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) es 1-metiltriptófano (1-MT), el isómero D de 1 -metil-triptófano o NLG919.

4. El agonista de OX40 para el uso de la reivindicación 3, en el que el inhibidor de IDO es 1-MT.

5. El agonista de OX40 para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que el antígeno tumoral es un antígeno HPV16 o un epítope CTL del antígeno E7 de HPV16.

6. El agonista de OX40 para el uso de la reivindicación 5, en el que el uso estimula la actividad de linfocitos T en el sujeto.

7. El agonista de OX40 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que la composición inmunogénica comprende además a un adyuvante.

8. El agonista de OX40 para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el sujeto tiene un cáncer asociado con el HVP seleccionado del grupo que consiste en cáncer cervical, cáncer de pene, cáncer anal, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello y cáncer de la vulva.

9. El agonista de OX40 para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que el sujeto es un paciente humano.

10. El agonista de OX40 para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que la composición inmunogénica es una vacuna contra el cáncer.

11. El agonista de OX40 para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que el producto es administrado por infusión intravenosa.