ES2751457T3

ES2751457T3 - Glucocorticoides altamente potentes

Info

Publication number: ES2751457T3
Application number: ES14849674T
Authority: ES
Inventors: Huaqiang Xu; Yuanzheng He; Karsten Melcher; Wei Yi; Jingjing Shi
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Van Andel Research Institute
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Van Andel Research Institute
Priority date: 2013-09-25
Filing date: 2014-09-25
Publication date: 2020-03-31
Anticipated expiration: 2034-09-25
Also published as: CN105744937A; EP3049089A1; AU2014324961A1; JP2016531852A; EP3049089A4; EP3049089B1; US9975918B2; AU2014324961A8; CN113845558A; HK1222565A1; KR20160060688A; US20160251393A1; WO2015048316A1

Abstract

Un compuesto:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Glucocorticoides altamente potentes

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere a un nuevo compuesto glucocorticoide. La invención también se refiere a métodos para usar el compuesto, a la síntesis del compuesto y a composiciones y formulaciones que comprenden el compuesto glucocorticoide, y a sus usos.

Antecedentes de la invención

Los glucocorticoides tales como la prednisona, la dexametasona (DEX) y la budesonida son los fármacos antiinflamatorios más eficaces. Se utilizan ampliamente para tratar la inflamación y enfermedades autoinmunitarias tales como el asma, artritis, lupus y enfermedad de Crohn (1,2). Estos fármacos ejercen sus funciones fisiológicas a través de la unión al receptor de glucocorticoides (GR), un factor transcripcional activado por ligando de la superfamilia de receptores nucleares. En ausencia de glucocorticoides, el GR reside en el citoplasma y se asocia con proteínas chaperonas tales como hsp90 y hsp70. La unión de la hormona provoca un cambio conformacional en GR, que lleva a su translocación al núcleo, donde ejerce su actividad de control transcripcional, ya sea activación (transactivación) o represión (transrepresión). En la transactivation, el GR dimeriza, se une directamente a un elemento específico de respuesta a glucocorticoides y luego recluta coactivadores para activar la transcripción. En la transrepresión, el modelo general es que GR se une a otros factores de transcripción (por ejemplo, NF-kB, AP-1) para conectarse indirectamente a sus sitios de unión a través de interacciones proteína-proteína. Al conectarse cerca de un promotor diana, el GR reprime la expresión génica cadena abajo (3). En general se cree que la transrepresión no requiere dimerización de GR (4, 5).

La transrepresión es el mecanismo principal a través del cual los glucocorticoides actúan como agentes antiinflamatorios (6). La conexión de GR al promotor NF-kB/AP-1 conduce a la represión transcripcional de los principales factores proinflamatorios aguas abajo, entre los que se incluyen citocinas proinflamatorias (por ejemplo, TNF-a, IL-1 p e IL-6), quimiocinas (por ejemplo, CCL2, CCL19) y enzimas asociadas con el inicio de la inflamación (por ejemplo, COX2, MMP13 y fosfolipasa A2) (2). Debido a su acción rápida y efecto sostenible, los glucocorticoides siguen siendo la primera opción para el tratamiento de enfermedades inflamatorias. Sin embargo, el uso a largo plazo de glucocorticoides, especialmente a altas dosis, tiene muchas consecuencias adversas, entre las que se incluyen diabetes mellitus/intolerancia a la glucosa, hipertensión, obesidad y osteoporosis (7, 8). La mayoría de estas consecuencias se atribuyen a la transactivación de GR. Por ejemplo, los glucocorticoides inducen los genes que codifican las enzimas limitantes de la velocidad de la ruta de la gluconeogénesis en el hígado, glucosa-6-fosfatasa y fosfoenol piruvato carboxiquinasa (9, 10), aumentando de esta manera la síntesis de novo de glucosa y llevando finalmente a un aumento de peso o diabetes. Los glucocorticoides también inducen un gen regulador clave del desarrollo óseo, Dickkopf-1 (DKK1), cuya regulación positiva ocasiona osteoporosis y pérdida ósea (11). En general, se observa que muchos de los efectos secundarios de los glucocorticoides están asociados con el uso de altas dosis de glucocorticoides (12-14). Por ejemplo, se observó un "patrón umbral" para el uso de prednisona: a 7,5 mg al día, causa glaucoma, depresión y tensión arterial alta (12). Estos efectos secundarios están causados por la transactivación de GR, así como por la activación no diana de otros receptores como el receptor de mineralocorticoides (MR), cuya activación causa tensión arterial alta (15). Por lo tanto, es importante desarrollar glucocorticoides altamente potentes y selectivos para reducir los efectos secundarios no deseados.

La potencia y la eficacia son dos parámetros farmacocinéticos clave de los glucocorticoides. Aunque la eficacia es la actividad máxima que puede lograr un fármaco determinado, generalmente a la concentración máxima, la potencia es la concentración de un fármaco dado necesaria para alcanzar la mitad de la actividad máxima (CE50). Para dos glucocorticoides que tienen la misma eficacia, uno muy potente requerirá una dosis más baja para lograr el mismo efecto de tratamiento (14, 15). Es importante indicar que un glucocorticoide puede tener diferentes potencias para la transactivación y la transrepresión; por ejemplo, la inducción génica por GR a través de DEX requiere una concentración de glucocorticoides de 5 a 6 veces mayor que la represión génica (16-18). Esta respuesta diferencial brinda la oportunidad de desarrollar glucocorticoides altamente potentes que se pueden usar en dosis bajas para lograr la represión total de las señales de inflamación, al mismo tiempo que se produce una actividad de transactivación y efectos secundarios mínimos. Por último, el desarrollo de insensibilidad y resistencia a la terapia con glucocorticoides es un problema importante en el tratamiento de enfermedades inflamatorias comunes tales como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide y enfermedad inflamatoria intestinal (19). La resistencia a los glucocorticoides también es un problema no resuelto para los cánceres de glóbulos blancos, especialmente la leucemia aguda infantil (20). Se han identificado o propuesto varios mecanismos de resistencia a los glucocorticoides, entre los que se incluyen un cambio de rutas de quinasas, alteración de cofactores y pérdida o mutación de receptores (19, 21). Una observación común es que la afinidad del ligando por el receptor disminuye en pacientes resistentes a glucocorticoides. Dichos pacientes tratados con glucocorticoides altamente potentes han mostrado mejoría, pero el efecto disminuyó gradualmente (22). Por lo tanto, Existe una necesidad urgente de desarrollar una nueva generación de glucocorticoides más potentes.

El cortisol es un glucocorticoide endógeno producido por la glándula suprarrenal. El cortisol tiene baja potencia y capacidad de unión al receptor con respecto al glucocorticoide sintético más utilizado, tal como DEX (23). Por otro lado, el Furoato de Mometasona (MF) es un potente glucocorticoide utilizado para tratar el trastorno inflamatorio de la piel (Elocon), asma (Asmanex) e inflamación del seno nasal (Nasonex) (24, 25). MF tiene un éster de furoato lipófilo en la posición C17a del anillo D del esteroide, que se cree que es el origen de su alta potencia (26). Aquí los inventores determinaron las estructuras cristalinas del LBD de GR unido a MF y cortisol, que revelan el mecanismo subyacente que discrimina la potencia del ligando entre el MF y el cortisol. Luego se usó el mecanismo de estructura observado para diseñar varios glucocorticoides nuevos con potencia y eficacia mucho mejores, lo que podría servir como guía inicial para el desarrollo terapéutico para el tratamiento de enfermedades inflamatorias.

Cell Res. Vol 24 (16) p. 713-726 (25.04.2014) desvela el compuesto VSG22 como un modulador del receptor de glucocorticoides.

Sumario de la invención

La evolución de los fármacos con glucocorticoides fue impulsada por la demanda de reducir los efectos secundarios no deseados, manteniendo los beneficiosos efectos antiinflamatorios. La potencia es un aspecto muy importante de esta evolución, ya que muchos efectos secundarios indeseables están asociados con altas dosis. Los efectos secundarios pueden minimizarse con glucocorticoides altamente potentes que logran los mismos efectos del tratamiento a dosis más bajas. Esta demanda impulsó la evolución de los glucocorticoides de baja a alta potencia. El cortisol es un glucocorticoide endógeno que tiene una potencia relativamente baja, mientras que el Furoato de Mometasona (MF) es un glucocorticoide sintético altamente potente que se ha utilizado en el tratamiento de muchas enfermedades inflamatorias. Para comprender los mecanismos subyacentes que impulsaron la evolución de los glucocorticoides, los inventores determinaron las estructuras de rayos X del dominio de unión al ligando (LBD) del receptor de glucocorticoides (GR) unido al cortisol y MF. El LBD de GR unido a cortisol reveló que la flexibilidad del enlace sencillo 1,2 en el anillo A de los esteroides es el principal responsable de la baja afinidad del cortisol por el GR. Sin embargo, el LBD de GR unido a MF reveló que la alta potencia de MF se logra mediante su grupo furoato 17a, que llena completamente la cavidad de unión al ligando, proporcionando así contactos de anclaje adicionales para una unión de alta afinidad. Un solo aminoácido en la cavidad de unión al ligando, Q642, juega un papel discriminatorio en la potencia del ligando entre MF y cortisol. El diseño basado en la estructura condujo a la síntesis de varios glucocorticoides nuevos con una potencia muy mejorada. Conjuntamente, estos resultados revelan mecanismos estructurales clave de potencia de los glucocorticoides y proporcionan una base racional para desarrollar glucocorticoides altamente potentes.

En el presente documento se describe un compuesto de Fórmula I

Fórmula I

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

-----es un enlace o está ausente;

R1 es hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, heteroaralquilo, -OH o alcoxi, en donde R1 está opcionalmente sustituido;

R2 es hidrógeno o alquilo C1-6, en donde R2 está opcionalmente sustituido;

R3 es hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, heteroaralquilo, -OH o alcoxi, en donde R3 está opcionalmente sustituido;

cada R4 es independientemente hidrógeno,

en donde X es -O- o -NH-, e Y es alquilo Ci-6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, heteroaralquilo, alcoxi, -OH, haloalquilo o sulfonilo, en donde R4 está opcionalmente sustituido;

R5 es hidrógeno o alquilo C1-4;

R6 es hidrógeno o halo;

R7 es hidrógeno o halo; y

n es 0, 1, 2, 3, 4 o 5.

La presente invención proporciona un compuesto:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otro aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto 9, y un vehículo o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto más, la invención proporciona un método ex vivo para modular la actividad de un receptor de glucocorticoides en una muestra biológica, que comprende la etapa de poner en contacto el receptor de glucocorticoides con una cantidad eficaz del Compuesto 9.

En otro aspecto más, la invención proporciona el Compuesto 9 o una composición como se ha descrito anteriormente, para su uso en un método para tratar o reducir la gravedad de una enfermedad inflamatoria en un paciente.

Descripción detallada de las figuras

Figura 1: Estructura general de LBD de GR unido a cortisol y LBD de GR unido a MF. (A) Arquitectura de LBD de GR unido a cortisol y LBD de GR unido a MF. (B) Comparación estructural de LBD de GR unido a DEX y LBD de GR unido a MF. Las flechas indican diferencias entre los dos, 1: región de bucle antes de la hélice 1; 2: región de bucle antes de la hélice 5 a la hélice 7; 3: orientación del extremo C de la hélice AF2. (C) Mapa de densidad electrónica de cortisol y MF en la cavidad de unión a ligando de LBD de GR.

Figura 2: Potencia de cortisol, DEX y MF. (A) Estructuras químicas del cortisol, DEX y MF. Están indicados los anillos de los esteroides (A-D). Las numeraciones de átomos clave están marcadas como pequeños guiones cerca de las posiciones correctas. La diferencia entre DEX y cortisol está indicada en la estructura de DEX. Está indicado el grupo furoato de MF. (B-C) Curvas de dosis-respuesta para cortisol, DEX y MF para el indicador de inducción MMTV-Luc y el indicador de represión AP1-Luc en células AD293, URL: Unidad relativa de luciferasa. Las barras de error representan la desviación típica, n = 3. (D) Ensayo de unión a GR in vitro para MF, DEX y cortisol. CPM: cuentas por segundo. Las barras de error representan la desviación típica, n = 2.

Figura 3: La flexibilidad de los enlaces sencillos 1,2 contribuye a la baja afinidad del cortisol. (A) Red de enlaces de hidrógeno de cortisol y DEX en la cavidad de unión al ligando de LBD de GR. (B) curvas de dosis-respuesta de cortisol, prednisolona y DEX para la transactivación de GR en MMTV-Luc en células AD293. La prednisolona se diferencia del cortisol únicamente por un doble enlace 1,2. Las barras de error representan la desviación típica, n = 3.

Figura 4: La ocupación total del grupo furoato 17a en la cavidad de unión al ligando de GR. (A, B) Estructuras tridimensionales de DEX y MF. (C) Alineamiento de DEX y MF en la cavidad de unión a ligando de LBD de GR. El grupo furoato 17a de m F expande la cavidad de unión al ligando de GR y ocupa completamente la cavidad hidrófoba por encima del anillo D de los esteroides. (D) Interacciones hidrófobas detalladas del grupo furoato 17a con restos en la cavidad hidrófoba de la cavidad de unión al ligando de LBD de GR.

Figura 5: Q642 juega papeles críticos en el reconocimiento de ligandos de diferente potencia. (A) Interacción detallada de Q642 con diferentes ligandos: LBD de GR unido a DEX y LBD de GR unido a MF. (B) Actividad de transactivación de mutaciones de Q642 a una concentración no saturada de esteroides (DEX 10 nM; MF 1 nM). Las barras de error representan la desviación típica, n > 3. (C) Curvas de dosis-respuesta para MF, DEX y cortisol de GR de tipo silvestre (WT) y el mutante Q642N en MMTV-Luc en células AD293. Las barras de error representan la desviación típica, n = 3.

Figura 6: La inducción del grupo 17a-furoato aumenta la potencia de los compuestos glucocorticoides. (A) Curvas de dosis-respuesta de VSG22, VSG24, DAC y DEX en m Mt V-Luc en células A d 293. El grupo furoato en estructura química. Las barras de error representan la desviación típica, n = 3. (B) Una comparación directa de compuestos con/sin el grupo furoato 17a sobre la potencia de la actividad de transactivación en MMTV-Luc en células AD293. Las barras de error representan la desviación típica, n = 3. (C) Una comparación del Compuesto 9 con VSG22 en un ensayo de indicador de inducción.

Figura 7: Posiciones de mutaciones de solubilidad y mutaciones de cristalización". Panel superior: posiciones de mutaciones que solubilizan LBD de GR; panel inferior: mutaciones de superficie que facilitan la cristalización de LBD de GR.

Figura 8: Expresión de proteínas y purificación de mutaciones seleccionadas de LBD de GR. Los mutantes de LBD de GR se expresaron y purificaron en presencia de cortisol 10 pM.

Figura 9: Cristales de proteínas y mapas de difracción de LBD de GR unido a cortisol y MF. (A) LBD de GR unido a cortisol. (B) LBD de Gr unido a MF.

Figura 10: Las actividades transcripcionales de las mutaciones AYVTI de GR. (A) Actividad de transactivación de mutaciones AYVTI de GR en MMTV-Luc en células AD293. DEX, 100 nM. Las barras de error representan la desviación típica, n = 3. (B) Actividad de transrepresión de mutaciones AYVTI de GR en API-Luc en células AD293. DEX, 100 nM. Las barras de error representan la desviación típica, n = 3.

Figura 11: Comparaciones estructurales detalladas del grupo C-9a del esteroide y el grupo C-16 de DEX y cortisol en la cavidad de unión al ligando del LBD de GR. (A) El átomo F en la posición C-9a de DEX hace un contacto estrecho con F623, L563 y M646 en la cavidad de unión al ligando de Lb D de GR. (B) El grupo metilo C-16 de DEX hace contactos estrechos con Y735, L732, M646 y Q642 en la cavidad de unión al ligando del LBD de GR. Figura 12: Las mutaciones F623 y M639 no pueden separar la actividad de MF y DEX. (A) Actividad de transactivación de mutaciones F623 en MMTV-Luc en células AD293. DEX 10 nM, MF 1 nM. Las barras de error representan la desviación típica, n = 3. (B) Actividad de transactivación de mutaciones M639 en MMTV-Luc en células AD293. DEX 10 nM, MF 1 nM. Las barras de error representan la desviación típica, n = 3.

Figura 13: Propiedades de transrepresión de compuestos con un grupo furoato C-17a. (A) Curvas de dosisrespuesta de v Sg 22, VSG24, DAC y DEX sobre la actividad API-Luc en células AD293. Barras de error = SD, n = 3. (B) Una comparación directa de compuestos con y sin grupo furoato C-17a introducido sobre la potencia de la actividad de transrepresión en API-Luc en células AD293. Barras de error = SD, n = 3.

Figura 14: Ensayo de unión in vitro de proteína mutante Q642A de GR. (A) Experimento de unión al ligando in vitro usando citosol de células AD293 que expresaban GR de tipo silvestre o GR mutante Q642A. CPM: cuentas por minuto. Barras de error = SD, n = 2. Barras de error = SD, n = 2. (B) Curva de respuesta a la dosis de DEX de GR WT y GR Q642A en un ensayo indicador de MMTV-Luc. Barras de error = SD, n = 3. (C), Ensayo de competición de ligandos de GR Q642A. Barras de error = SD, n = 2.

Figura 15: Actividades de glucocorticoides VSG111, VSG112 y VSG113. Datos representados como porcentaje de DEX. Conc. de esteroides 10 nM.

Figura 16: Una comparación de VSG111 con ZK 216348 y AL438. Datos representados como porcentaje de DEX.

Las figuras anteriores se proporcionan con fines ejemplares y no deben considerarse limitantes de manera alguna.

Descripción detallada

Los glucocorticoides se han estado usando durante casi 60 años y siguen siendo la primera opción para tratar muchas enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias. Sin embargo, el uso a largo plazo de glucocorticoides puede causar muchos efectos adversos. La comprensión de la base estructural de la activación y represión de GR es muy importante para desarrollar nuevos glucocorticoides con menos efectos secundarios. Sin embargo, el bajo nivel de expresión de GR en el sistema bacteriano, especialmente para un ligando de baja afinidad, obstaculizó el estudio estructural de este importante regulador celular. Mediante la comparación de restos conservados en la familia de receptores de esteroides, los inventores habían identificado con éxito mutaciones de aminoácidos que podrían facilitar la expresión del receptor sin afectar a la función fisiológica del receptor. Este método acelerará el estudio estructural de GR, especialmente para esos ligandos de baja afinidad, tales como un ligando no esteroideo, que puede contener el futuro de la próxima generación de glucocorticoides.

El desarrollo de glucocorticoides altamente potentes se impulsó por dos tipos de urgencias, una son los efectos secundarios de los glucocorticoides causados por el uso de dosis altas y la otra son los síntomas clínicos resistentes a los glucocorticoides. Aunque la afinidad del ligando es un factor determinante en la potencia, no es el único. Los cofactores celulares también juegan papeles cruciales al reconocer las diferencias de superficie causadas por la unión del ligando y las sutiles variaciones inducidas por la unión de diferentes ligandos pueden tener efectos profundos sobre la selectividad del cofactor. Se han aplicado diferentes estrategias para modificar el esqueleto rígido de cortisol para aumentar la potencia, y condujeron al desarrollo de DEX. Una comparación estructural de LBD de GR unido a cortisol y LBD de GR unido a DEX muestra que entre las modificaciones, el doble enlace A1 es crítico para posicionar de manera óptima la cetona C3, que forma un enlace de hidrógeno clave con R611. Posteriormente, los investigadores descubrieron que un grupo de éster lipófilo, tal como un éster de alquilo o propionato (26), en la posición C-17a puede potenciar fuertemente la actividad del glucocorticoide. Uno de los medicamentos para el asma más utilizados, el propionato de fluticasona (FP), se generó reemplazando el grupo hidroxilo con un éster de propionato en la posición C-17a. Estos datos sugirieron la presencia de una cavidad hidrófoba por encima del anillo D de los esteroides en la cavidad de unión al ligando. La optimización adicional de FP con un grupo éster de furoato para reemplazar el éster de propionato creó un glucocorticoide altamente potente, el furoato de fluticasona (FF), lo que indica que el grupo furoato podría encajar mejor en la cavidad. Aunque se había resuelto la estructura del LBD de GR unido a FF (35), no se definió el mecanismo estructural de la alta potencia de MF. Aquí, los inventores han descubierto que la alta potencia de MF es atribuible tanto al grupo furoato C-17a que ocupa la cavidad completa de unión al ligando como a los cambios en la conformación de la superficie causados por la unión del ligando. Usando mutagénesis, los inventores demostraron que un solo resto de aminoácido, Q642, juega un papel crucial en el reconocimiento del grupo furoato C-17a y en la coordinación del posicionamiento de otras cadenas laterales de aminoácidos. Q642N difiere de la proteína de tipo silvestre en un solo grupo metilo, pero es suficiente para separar completamente las actividades de Mf , DEX y cortisol, indicando con qué precisión se regula la actividad del receptor.

Los inventores han demostrado que el grupo furoato C-17a puede servir como un punto de "anclaje" para colocar ligandos de baja afinidad de manera precisa y firme en la cavidad de unión al ligando. El éxito en la modificación de derivados de DAC diseñados para aumentar las propiedades de disociación demuestra una estrategia robusta para diseñar glucocorticoides disociados terapéuticos, glucocorticoides con menos síntomas clínicos de resistencia a glucocorticoides o compuestos glucocorticoides no esteroideos (esos compuestos generalmente muestran poca afinidad por el receptor). En resumen, se ha resuelto la primera estructura cristalina del LBD de GR unida a un ligando fisiológico, el glucocorticoide de baja potencia cortisol, así como la estructura del LBD unido al ligando sintético de alta potencia clínicamente importante MF. En combinación con análisis bioquímicos y mutacionales, los inventores identificaron estructuralmente los determinantes críticos de la afinidad y potencia de los glucocorticoides, y validaron estos determinantes a través del diseño basado en la estructura y la síntesis de glucocorticoides altamente potentes.

Definiciones

Para los fines de la presente divulgación, los elementos químicos se identifican de acuerdo con la Tabla Periódica de los Elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75a ed. Adicionalmente, los principios generales de la química orgánica se describen en "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausolito: 1999, y "March's Advanced Organic Chemistry", 5a Ed., Ed.: Smith, M. B. y March, J., John Wiley & Sons, Nueva York: 2001.

Para los fines de esta divulgación, la numeración de los carbonos para los compuestos de Fórmula I es la convención aceptada para estructuras de esteroides. Por consiguiente, los compuestos de Fórmula I se numeran como se indica a continuación:

Como se describe en el presente documento, los compuestos descritos en el presente documento pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, tales como los que se ilustran generalmente más arriba, o como se ilustra por las clases, subclases y especies particulares descritas en el presente documento.

Como se usa en el presente documento, un grupo "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifático saturado que contiene 1-12 (por ejemplo, 1-8, 1-6 o 1-4) átomos de carbono. Un grupo alquilo puede ser lineal o ramificado. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ferc-butilo, n-pentilo, n-heptilo o 2-etilhexilo. Un grupo alquilo puede estar sustituido (es decir, opcionalmente sustituido) con uno o más sustituyentes tales como halo, fosfo, cicloalifático [por ejemplo, cicloalquilo o cicloalquenilo], heterocicloalifático [por ejemplo, heterocicloalquilo o heterocicloalquenilo], arilo, heteroarilo, alcoxi, aroílo, heteroaroílo, acilo [por ejemplo, (alifático)carbonilo, (cidoalifático)carbonilo o (heterocidoalifático)carbonilo], nitro, ciano, amido [por ejemplo, (cidoalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocidoalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino alquilaminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, heterocicloalquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo o heteroarilaminocarbonilo], amino [por ejemplo, amino alifático, amino cicloalifático o amino heterocicloalifático], sulfonilo [por ejemplo, alifático-SÜ2-], sulfinilo, sulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo, carboxi, carbamoílo, oxicicloalifático, oxiheterocicloalifático, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroarilalcoxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi o hidroxi. Sin limitación, algunos ejemplos de alquilos sustituidos incluyen carboxialquilo (tal como HOOC-alquilo, alcoxicarbonilalquilo y alquilcarboniloxialquilo), cianoalquilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, acilalquilo, aralquilo, (alcoxiaril)alquilo, (sulfonilamino)alquilo (tal como (alquil-SO2-amino)alquilo), aminoalquilo, amidoalquilo, (cicloalifático)alquilo o haloalquilo.

Como se usa en el presente documento, un grupo "alquenilo" se refiere a un grupo carbono alifático que contiene 2-8 (por ejemplo, 2-12, 2-6 o 2-4) átomos de carbono y al menos un doble enlace. Al igual que un grupo alquilo, un grupo alquenilo puede ser lineal o ramificado. Los ejemplos de un grupo alquenilo incluyen, pero sin limitación, alilo, isoprenilo, 2-butenilo y 2-hexenilo. Un grupo alquenilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes tales como halo, fosfo, cicloalifático [por ejemplo, cicloalquilo o cicloalquenilo], heterocicloalifático [por ejemplo, heterocicloalquilo o heterocicloalquenilo], arilo, heteroarilo, alcoxi, aroílo, heteroaroílo, acilo [por ejemplo, (alifático)carbonilo, (cicloalifático)carbonilo o (heterocicloalifático)carbonilo], nitro, ciano, amido [por ejemplo, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino alquilaminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, heterocicloalquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo o heteroarilaminocarbonilo], amino [por ejemplo, amino alifático, amino cicloalifático, amino heterocicloalifático o sulfonilamino alifático], sulfonilo [por ejemplo, alquil-SO2-, cicloalifático-SO2- o aril-SO2-], sulfinilo, sulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo, carboxi, carbamoílo, oxicicloalifático, oxiheterocicloalifático, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralcoxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi o hidroxi. Sin limitación, algunos ejemplos de alquenilos sustituidos incluyen cianoalquenilo, alcoxialquenilo, acilalquenilo, hidroxialquenilo, aralquenilo, (alcoxiaril)alquenilo, (sulfonilamino)alquenilo (tal como (alquil-SO2-amino)alquenilo), aminoalquenilo, amidoalquenilo, (cicloalifático)alquenilo o haloalquenilo.

Como se usa en el presente documento, un grupo "alquinilo" se refiere a un grupo carbono alifático que contiene 2-8 (por ejemplo, 2-12, 2-6 o 2-4) átomos de carbono y tiene al menos un triple enlace. Un grupo alquinilo puede ser lineal o ramificado. Los ejemplos de un grupo alquinilo incluyen, pero sin limitación, propargilo y butinilo. Un grupo alquinilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes tales como aroílo, heteroaroílo, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, nitro, carboxi, ciano, halo, hidroxi, sulfo, mercapto, sulfanilo [por ejemplo, sulfanilo alifático o sulfanilo cicloalifático], sulfinilo [por ejemplo, sulfinilo alifático o sulfinilo cicloalifático], sulfonilo [por ejemplo, alifático-SO2-, amino alifático-SO2- o cicloalifático-SO2-], amido [por ejemplo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, alquilcarbonilamino, cicloalquilaminocarbonilo, heterocicloalquilaminocarbonilo, cicloalquilcarbonilamino, arilaminocarbonilo, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, heteroarilcarbonilamino o heteroarilaminocarbonilo], urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, cicloalifático, heterocicloalifático, arilo, heteroarilo, acilo [por ejemplo, (cicloalifático)carbonilo o (heterocicloalifático) carbonilo], amino [por ejemplo, amino alifático], sulfoxi, oxo, carboxi, carbamoílo, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático)oxi o (heteroaril)alcoxi.

Como se usa en el presente documento, un grupo "amino" se refiere a -NRXRY en donde cada uno de RX y RY es independientemente hidrógeno, alifático, cicloalifático, (cicloalifático)alifático, arilo, aralifático, heterocicloalifático, (heterocicloalifático)alifático, heteroarilo, carboxi, sulfanilo, sulfinilo, sulfonilo, (alifático)carbonilo, (cicloalifático)carbonilo, ((cicloalifático)alifático)carbonilo, arilcarbonilo, (aralifático)carbonilo, (heterocicloalifático)carbonilo, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo, (heteroaril)carbonilo o (heteroaralifático)carbonilo, cada uno de los cuales se define en el presente documento y está opcionalmente sustituido. Los ejemplos de grupos amino incluyen alquilamino, dialquilamino o arilamino. Cuando el término "amino" no es el grupo terminal (por ejemplo, alquilcarbonilamino), se representa por -NRX-. RX tiene el mismo significado que se ha definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, un grupo "arilo" utilizado solo o como parte de un resto más grande como en "aralquilo", "aralcoxi" o "ariloxialquilo" se refiere a sistemas de anillo monocíclicos (por ejemplo, fenilo); bicíclicos (por ejemplo, indenilo, naftalenilo, tetrahidronaftilo, tetrahidroindenilo); y tricíclicos (por ejemplo, fluorenil tetrahidrofluorenilo, o tetrahidroantracenilo, antracenilo) en los que el sistema de anillo monocíclico es aromático o al menos uno de los anillos en un sistema de anillo bicíclico o tricíclico es aromático. Los grupos bicíclicos y tricíclicos incluyen anillos carbocíclicos benzocondensados de 2-3 miembros. Por ejemplo, un grupo benzocondensado incluye fenilo condensado con dos o más restos carbocíclicos C4-8. Un arilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes incluyendo alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo]; cicloalifático; (cicloalifático)alifático; heterocicloalifático; (heterocicloalifático)alifático; arilo; heteroarilo; alcoxi; (cicloalifático)oxi; (heterocicloalifático)oxi; ariloxi; heteroariloxi; (aralifático)oxi; (heteroaralifático)oxi; aroílo; heteroaroílo; amino; oxo (en un anillo carbocíclico no aromático de un arilo bicíclico o tricíclico benzocondensado); nitro; carboxi; amido; acilo [por ejemplo, (alifático)carbonilo; (cicloalifático)carbonilo; ((cicloalifático)alifático)carbonilo; (aralifático)carbonilo; (heterocicloalifático)carbonilo; ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo; o (heteroaralifático)carbonilo]; sulfonilo [por ejemplo, alifático-SO2- o amino-SO2-]; sulfinilo [por ejemplo, alifático-S(O)- o cidoalifático-S(O)-]; sulfanilo [por ejemplo, alifático-S-]; ciano; halo; hidroxi; mercapto; sulfoxi; urea; tiourea; sulfamoílo; sulfamida; o carbamoílo. Como alternativa, un arilo puede estar sin sustituir.

Los ejemplos no limitantes de arilos sustituidos incluyen haloarilo [por ejemplo, mono-, di (tal como p,m-dihaloarilo) y (trihalo)arilo]; (carboxi)arilo [por ejemplo, (alcoxicarbonil)arilo, ((aralquil)carboniloxi)arilo y (alcoxicarbonil)arilo]; (amido)arilo [por ejemplo, (aminocarbonil)arilo, (((alquilamino)alquil)aminocarbonil)arilo, (alquilcarbonil)aminoarilo, (arilaminocarbonil)arilo y (((heteroaril)amino)carbonil)arilo]; aminoarilo [por ejemplo, ((alquilsulfonil)amino)arilo o ((dialquil)amino)arilo]; (cianoalquil)arilo; (alcoxi)arilo; (sulfamoil)arilo [por ejemplo, (aminosulfonil)arilo]; (alquilsulfonil)arilo; (ciano)arilo; (hidroxialquil)arilo; ((alcoxi)alquil)arilo; (hidroxi)arilo, ((carboxi)alquil)arilo; (((dialquil)amino)alquil)arilo; (nitroalquil)arilo; (((alquilsulfonil)amino)alquil)arilo; ((heterocicloalifático)carbonil)arilo; ((alquilsulfonil)alquil)arilo; (cianoalquil)arilo; (hidroxialquil)arilo; (alquilcarbonil)arilo; alquilarilo; (trihaloalquil)arilo; pamino-m-alcoxicarbonilarilo; p-amino-m-cianoarilo; p-halo-m-aminoarilo; o (m-(heterocicloalifático)-o- (alquil))arilo.

Como se usa en el presente documento, un grupo "aralifático" tal como un grupo "aralquilo" se refiere a un grupo alifático (por ejemplo, un grupo alquilo C1-4) que está sustituido con un grupo arilo. En el presente documento se definen "alifático", "alquilo" y "arilo". Un ejemplo de un grupo aralifático tal como un grupo aralquilo es bencilo.

Como se usa en el presente documento, un grupo "aralquilo" se refiere a un grupo alquilo (por ejemplo, un grupo alquilo C1-4) que está sustituido con un grupo arilo. "Alquilo" y "arilo" se han definido anteriormente. Un ejemplo de un grupo aralquilo es bencilo. Un aralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes tales como alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo, incluyendo carboxialquilo, hidroxialquilo o haloalquilo tal como trifluorometilo], cicloalifático [por ejemplo, cicloalquilo o cicloalquenilo], (cicloalquil)alquilo, heterocicloalquilo, (heterocicloalquil)alquilo, arilo, heteroarilo, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, aroílo, heteroaroílo, nitro, carboxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, amido [por ejemplo, aminocarbonilo, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino o heteroaralquilcarbonilamino], ciano, halo, hidroxi, acilo, mercapto, alquilsulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.

Como se usa en el presente documento, un "sistema de anillo bicíclico" incluye estructuras de 8-12 miembros (por ejemplo, 9, 10 u 11) que forman dos anillos, en donde los dos anillos tienen al menos un átomo en común (por ejemplo, 2 átomos en común). Los sistemas de anillo bicíclicos incluyen bicicloalifáticos (por ejemplo, bicicloalquilo o bicicloalquenilo), bicicloheteroalifáticos, arilos bicíclicos y heteroarilos bicíclicos.

Como se usa en el presente documento, un grupo "carbociclo" o "cicloalifático" incluye un grupo "cicloalquilo" y un grupo "cicloalquenilo", cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido como se muestra a continuación.

Como se usa en el presente documento, un grupo "cicloalquilo" se refiere a un anillo carbocíclico saturado, mono o bicíclico (condensado o puenteado) de 3-10 (por ejemplo, 5-10) átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, adamantilo, norbornilo, cubilo, octahidro-indenilo, decahidro-naftilo, biciclo[3.2.1]octilo, biciclo[2.2.2]octilo, biciclo[3.3.1]nonilo, biciclo[3.3.2.]decilo, biciclo[2.2.2]octilo, adamantilo o (cicloalquil(aminocarbonil))cicloalquilo.

Un grupo "cicloalquenilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un anillo carbocíclico no aromático de 3-10 (por ejemplo, 4-8) átomos de carbono que tiene uno o más dobles enlaces. Los ejemplos de grupos cicloalquenilo incluyen ciclopentenilo, 1,4-ciclohexa-di-enilo, cicloheptenilo, ciclooctenilo, hexahidro-indenilo, octahidro-naftilo, ciclohexenilo, ciclopentenilo, biciclo[2.2.2]octenilo o biciclo[3.3.1]nonenilo.

Un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes tales como fósforo, alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo], cicloalifático, (cicloalifático)alifático, heterocicloalifático, (heterocicloalifático)alifático, arilo, heteroarilo, alcoxi, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático)oxi, ariloxi, heteroariloxi, (aralifático)oxi, (heteroaralifático)oxi, aroílo, heteroaroílo, amino, amido [por ejemplo, (alifático)carbonilamino, (cicloalifático)carbonilamino, ((cicloalifático)alifático)carbonilamino, (aril)carbonilamino, (aralifático)carbonilamino, (heterocicloalifático)carbonilamino, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilamino, (heteroaril)carbonilamino o (heteroaralifático)carbonilamino], nitro, carboxi [por ejemplo, HOOC-, alcoxicarbonilo o alquilcarboniloxi], acilo [por ejemplo, (cicloalifático)carbonilo, ((cicloalifático)alifático)carbonilo, (aralifático)carbonilo, (heterocicloalifático)carbonilo, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo o (heteroaralifático)carbonilo], ciano, halo, hidroxi, mercapto, sulfonilo [por ejemplo, alquil-SO2- y aril-SO2-], sulfinilo [por ejemplo, alquil-S(O)-], sulfanilo [por ejemplo, alquil-S-], sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.

Como se usa en el presente documento, el término "heterociclo" o "heterocicloalifático" incluye un grupo heterocicloalquilo y un grupo heterocicloalquenilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido como se muestra a continuación.

Como se usa en el presente documento, un grupo "heterocicloalquilo" se refiere a una estructura de anillo saturado monocíclico o bicíclico de 3-10 miembros (condensado o puenteado) (por ejemplo, monocíclico o bicíclico de 5 a 10 miembros), en la que uno o más de los átomos en el anillo es un heteroátomo (por ejemplo, N, O, S, o combinaciones de los mismos). Los ejemplos de un grupo heterocicloalquilo incluyen piperidilo, piperazilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrofurilo, 1,4-dioxolanilo, 1,4-ditianilo, 1,3-dioxolanilo, oxazolidilo, isoxazolidilo, morfolinilo, tiomorfolilo, octahidrobenzofurilo, octahidrocromenilo, octahidrotiocromenilo, octahidroindolilo, octahidropirindinilo, decahidroquinolinilo, octahidrobenzo[6]tiofenoílo, 2-oxa-biciclo[2.2.2]octilo, 1-aza-biciclo[2.2.2]octilo, 3-azabiciclo[3.2.1]octilo y 2,6-dioxa-triciclo[3.3.1.037]nonilo. Un grupo heterocicloalquilo monocíclico puede estar condensado con un resto fenilo para formar estructuras, tales como tetrahidroisoquinolina, que se clasificarían como heteroarilos.

Un grupo "heterocicloalquenilo", como se usa en el presente documento, se refiere a una estructura de anillo no aromático monocíclico o bicíclico (por ejemplo, monocíclico o bicíclico de 5 a 10 miembros) que tiene uno o más dobles enlaces, y en el que uno o más de los átomos en el anillo es un heteroátomo (por ejemplo, N, O o S). Los hidrocarburos heterocicloalifáticos monocíclicos y bicíclicos se numeran de acuerdo con la nomenclatura química normalizada.

Un grupo heterocicloalquilo o heterocicloalquenilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes tales como fósforo, alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo], cicloalifático, (cicloalifático)alifático, heterocicloalifático, (heterocicloalifático)alifático, arilo, heteroarilo, alcoxi, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático)oxi, ariloxi, heteroariloxi, (aralifático)oxi, (heteroaralifático)oxi, aroílo, heteroaroílo, amino, amido [por ejemplo, (alifático)carbonilamino, (cicloalifático)carbonilamino, ((cicloalifático)alifático)carbonilamino, (aril)carbonilamino, (aralifático)carbonilamino, (heterocicloalifático)carbonilamino, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilamino, (heteroaril)carbonilamino o (heteroaralifático)carbonilamino], nitro, carboxi [por ejemplo, HOOC-, alcoxicarbonilo o alquilcarboniloxi], acilo [por ejemplo, (cicloalifático)carbonilo, ((cicloalifático)alifático)carbonilo, (aralifático)carbonilo, (heterocicloalifático)carbonilo, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo o (heteroaralifático)carbonilo], nitro, ciano, halo, hidroxi, mercapto, sulfonilo [por ejemplo, alquilsulfonilo o arilsulfonilo], sulfinilo [por ejemplo, alquilsulfinilo], sulfanilo [por ejemplo, alquilsulfanilo], sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.

Un grupo "heteroarilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un sistema de anillo monocíclico, bicíclico o tricíclico que tiene de 4 a 15 átomos en el anillo en donde uno o más de los átomos en el anillo es un heteroátomo (por ejemplo, N, O, S, o combinaciones de los mismos) y en el que el sistema de anillo monocíclico e aromático o al menos uno de los anillos en los sistemas de anillo bicíclicos o tricíclicos es aromático. Un grupo heteroarilo incluye un sistema de anillo benzocondensado que tiene de 2 a 3 anillos. Por ejemplo, un grupo benzocondensado incluye benzocondensado con uno o dos restos heterocicloalifáticos de 4 a 8 miembros (por ejemplo, indolizilo, indolilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolinilo, benzo[£)]furilo, benzo[b]tiofenilo, quinolinilo o isoquinolinilo). Algunos ejemplos de heteroarilo son azetidinilo, piridilo, 1H-indazolilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo, tetrazolilo, benzofurilo, isoquinolinilo, benzotiazolilo, xanteno, tioxanteno, fenotiazina, dihidroindol, benzo[1,3]dioxol, benzo[b]furilo, benzo[b]tiofenilo, indazolilo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, purilo, cinnolilo, quinolilo, quinazolilo, cinnolilo, ftalazilo, quinazolilo, quinoxalilo, isoquinolilo, 4H-quinolizilo, benzo-1,2,5-tiadiazolilo o 1,8-naftiridilo.

Sin limitación, los heteroarilos monocíclicos incluyen furilo, tiofenilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, 2H-piranilo, 4-H-pranilo, piridilo, piridazilo, pirimidilo, pirazolilo, pirazilo o 1,3,5-triazilo. Los heteroarilos monocíclicos se numeran de acuerdo con la nomenclatura química normalizada.

Sin limitación, los heteroarilos bicíclicos incluyen indolizilo, indolilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolinilo, benzo[b]furilo, benzo[b]tiofenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolizinilo, isoindolilo, indolilo, benzo[b]furilo, benzo[b]tiofenilo, indazolilo, benzoimidazilo, benzotiazolilo, purinilo, 4H-quinolizilo, quinolilo, isoquinolilo, cinnolilo, ftalazilo, quinazolilo, quinoxalilo, 1,8-naftiridilo o pteridilo. Los heteroarilos bicíclicos se numeran de acuerdo con la nomenclatura química normalizada.

Un heteroarilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes tales como alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo]; cicloalifático; (cicloalifático)alifático; heterocicloalifático; (heterocicloalifático)alifático; arilo; heteroarilo; alcoxi; (cicloalifático)oxi; (heterocicloalifático)oxi; ariloxi; heteroariloxi; (aralifático)oxi; (heteroaralifático)oxi; aroílo; heteroaroílo; amino; oxo (en un anillo carbocíclico o heterocíclico no aromático de un heteroarilo bicíclico o tricíclico); carboxi; amido; acilo [por ejemplo, carbonilo alifático; (cicloalifático)carbonilo; ((cicloalifático)alifático)carbonilo; (aralifático)carbonilo; (heterocicloalifático)carbonilo; ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo; o (heteroaralifático)carbonilo]; sulfonilo [por ejemplo, sulfonilo o aminosulfonilo alifático]; sulfinilo [por ejemplo, sulfinilo alifático]; sulfanilo [por ejemplo, sulfanilo alifático]; nitro; ciano; halo; hidroxi; mercapto; sulfoxi; urea; tiourea; sulfamoílo; sulfamida; o carbamoílo. Como alternativa, un heteroarilo puede estar sin sustituir.

Los ejemplos no limitantes de heteroarilos sustituidos incluyen (halo)heteroarilo [por ejemplo, mono- y di-(halo)heteroarilo]; (carboxi)heteroarilo [por ejemplo, (alcoxicarbonil)heteroarilo]; cianoheteroarilo; aminoheteroarilo [por ejemplo, ((alquilsulfonil)amino)heteroarilo y ((dialquil)amino)heteroarilo]; (amido)heteroarilo [por ejemplo, aminocarbonilheteroarilo, ((alquilcarbonil)amino)heteroarilo, ((((alquil)amino)alquil)aminocarbonil)heteroarilo, (((heteroaril)amino)carbonil)heteroarilo, ((heterocicloalifático)carbonil)heteroarilo y ((alquilcarbonil)amino)heteroarilo]; (cianoalquil)heteroarilo; (alcoxi)heteroarilo; (sulfamoil)heteroarilo [por ejemplo, (aminosulfonil)heteroarilo]; (sulfonil)heteroarilo [por ejemplo, (alquilsulfonil)heteroarilo]; (hidroxialquil)heteroarilo; (alcoxialquil)heteroarilo; (hidroxi)heteroarilo; ((carboxi)alquil)heteroarilo; (((dialquil)amino)alquil]heteroarilo; (heterocidoalifático)heteroarilo; heteroarilo(cidoalifático); (nitroalquil)heteroarilo; (((alquilsulfonil)amino)alquil)heteroarilo; ((alquilsulfonil)alquil)heteroarilo; (cianoalquil)heteroarilo; (acil)heteroarilo [por ejemplo, (alquilcarbonil)heteroarilo]; (alquil)heteroarilo y (haloalquil)heteroarilo [por ejemplo, trihaloalquilheteroarilo].

Un "heteroaralifático" (tal como un grupo heteroaralquilo), como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alifático (por ejemplo, un grupo alquilo C1-4) que está sustituido con un grupo heteroarilo. En el presente documento se definen "alifático", "alquilo" y "heteroarilo".

Un grupo "heteroaralquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo (por ejemplo, un grupo alquilo C1-4) que está sustituido con un grupo heteroarilo. "Alquilo" y "heteroarilo" se han definido anteriormente. Un heteroaralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes tales como alquilo (incluyendo carboxialquilo, hidroxialquilo y haloalquilo tal como trifluorometilo), alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, (cicloalquil)alquilo, heterocicloalquilo, (heterocicloalquil)alquilo, arilo, heteroarilo, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, aroílo, heteroaroílo, nitro, carboxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, aminocarbonilo, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, ciano, halo, hidroxi, acilo, mercapto, alquilsulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.

Como se usa en el presente documento, "resto cíclico" y "grupo cíclico" se refieren a sistemas de anillo mono-, bi- y tricíclicos incluyendo cicloalifático, heterocicloalifático, arilo o heteroarilo, cada uno de los cuales se ha definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, un "sistema de anillo bicíclico puenteado" se refiere a un sistema de anillo alifático heterocíclico bicíclico o sistema de anillo cicloalifático bicíclico en el que los anillos están puenteados. Los ejemplos de sistemas de anillo bicíclicos puenteados incluyen, pero sin limitación, adamantanilo, norbornanilo, biciclo[3.2.1]octilo, biciclo[2.2.2]octilo, biciclo[3.3.1]nonilo, biciclo[3.2.3]nonilo, 2-oxabiciclo[2.2.2]octilo, 1-azabiciclo[2.2.2]octilo, 3-azabiciclo[3.2.1]octilo y 2,6-dioxa-triciclo[3.3.1.037]nonilo. Un sistema de anillo bicíclico puenteado puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes tales como alquilo (incluyendo carboxialquilo, hidroxialquilo y haloalquilo tal como trifluorometilo), alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, (cicloalquil)alquilo, heterocicloalquilo, (heterocicloalquil)alquilo, arilo, heteroarilo, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, aroílo, heteroaroílo, nitro, carboxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, aminocarbonilo, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, ciano, halo, hidroxi, acilo, mercapto, alquilsulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.

Como se usa en el presente documento, un grupo "acilo" se refiere a un grupo formilo o RX-C(O)-(tal como alquil-C(O)-, también denominado "alquilcarbonilo") donde RX y "alquilo" se han definido anteriormente. Acetilo y pivaloílo son ejemplos de grupos acilo.

Como se usa en el presente documento, un "aroílo" o "heteroaroílo" se refiere a un aril-C (O)- o un heteroaril-C(O)-. La porción de arilo y heteroarilo del aroílo o heteroaroílo está opcionalmente sustituida como se ha definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, un grupo "alcoxi" se refiere a un grupo alquil-O- donde "alquilo" se ha definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, un grupo "carbamoílo" se refiere a un grupo que tiene la estructura -O-CO-NRXRY o -NRX-CO-O-RZ, en donde RX y RY se han definido anteriormente y RZ puede ser alifático, arilo, aralifático, heterocicloalifático, heteroarilo o heteroaralifático.

Como se usa en el presente documento, un grupo "carboxi" se refiere a -COOH, -COORX, -OC(O)H, -OC(O)RX, cuando se usa como grupo terminal; o -OC(O)- o -C(O)O- cuando se usa como un grupo interno.

Como se usa en el presente documento, un grupo "haloalifático" se refiere a un grupo alifático sustituido con 1-3 halógenos. Por ejemplo, el término haloalquilo incluye el grupo -CF3.

Como se usa en el presente documento, un grupo "mercapto" se refiere a -SH.

Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfo" se refiere a -SO3H o -SO3RX cuando se usa terminalmente o -S(O)3- cuando se usa internamente.

Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfamida" se refiere a la estructura -NRX-S(O)2-NRYRZ cuando se usa terminalmente y -NRX-S(O)2-NRY- cuando se usa internamente, en donde RX, RY y RZ se han definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfonamida" se refiere a la estructura -S(O)2-NRXRY o -NRX-S(O)2-RZ cuando se usa terminalmente; o -S(O)2-NRX- o -NRX-S(O)2- cuando se usa internamente, en donde RX, RY y RZ se han definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfanilo" se refiere a -S-RX cuando se usa terminalmente y -S-cuando se usa internamente, en donde RX se ha definido anteriormente. Los ejemplos de sulfanilos incluyen alifático-S-, cicloalifático-S-, aril-S- o similares.

Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfinilo" se refiere a -S(O)-RX cuando se usa terminalmente y -S(O)- cuando se usa internamente, en donde RX se ha definido anteriormente. Los grupos sulfinilo ilustrativos incluyen alifático-S(O)-, aril-S(O)-, (cicloalifático(alifático))-S(O)-, cicloalquil-S(O)-, heterocicloalifático-S(O)-, heteroaril-S(O)- o similares.

Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfonilo" se refiere a -S(O)2-RX cuando se usa terminalmente y -S(O)2- cuando se usa internamente, en donde RX se ha definido anteriormente. Los grupos sulfonilo ilustrativos incluyen alifático-S(O)2-, aril-S(O)2-, (cicloalifático(alifático))-S(O)2-, cicloalifático-S(O)2-, heterocicloalifático-S(O)2-, heteroaril-S(O)2-, (cicloalifático(amido(alifático)))-S(O)2- o similares.

Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfoxi" se refiere a -O-SO-RX o -SO-O-RX, cuando se usa terminalmente y -O-S(O)- o -S(O)-O- cuando se usa internamente, donde RX se ha definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, un grupo "halógeno" o "halo" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.

Como se usa en el presente documento, un "alcoxicarbonilo", que está abarcado por el término carboxi, usado solo o vinculado a otro grupo se refiere a un grupo tal como alquil-O-C(O)-.

Como se usa en el presente documento, un "alcoxialquilo" se refiere a un grupo alquilo tal como alquil-O-alquil-, en donde alquilo se ha definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, un "carbonilo" se refiere a -C(O)-.

Como se usa en el presente documento, un "oxo" se refiere a =O.

Como se usa en el presente documento, el término "fosfo" se refiere a fosfinatos y fosfonatos. Los ejemplos de fosfinatos y fosfonatos incluyen -P(O)(RP)2, en donde RP es alifático, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático)oxi arilo, heteroarilo, cicloalifático o amino.

Como se usa en el presente documento, un "aminoalquilo" se refiere a la estructura (RX)2N-alquil-.

Como se usa en el presente documento, un "cianoalquilo" se refiere a la estructura (NC)-alquil-.

Como se usa en el presente documento, un grupo "urea" se refiere a la estructura -NRX-CO-NRYRZ y un grupo "tiourea" se refiere a la estructura -NRX-CS-NRYRZ cuando se usa terminalmente y -NRX-CO-NRY- o -NRx-Cs -NRy- cuando se usa internamente, en donde RX, RY y RZ se han definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, un grupo "guanidina" se refiere a la estructura -N=C(N(RXRY))N(RXRY) o -NRX-C(=NRX)NRXRY en donde RX y RY se han definido anteriormente.

Como se usa en el presente documento, el término grupo "amidino" se refiere a la estructura -C=(NRX)N(RXRY) en donde RX y RY se han definido anteriormente.

En general, el término "vecinal" se refiere a la colocación de sustituyentes en un grupo que incluye dos o más átomos de carbono, en donde los sustituyentes se unen a los átomos de carbono adyacentes.

En general, el término "geminal" se refiere a la colocación de sustituyentes en un grupo que incluye dos o más átomos de carbono, en donde los sustituyentes se unen al mismo átomo de carbono.

Los términos "terminalmente" e "internamente" se refieren a la localización de un grupo en un sustituyente. Un grupo es terminal cuando el grupo que está presente al extremo del sustituyente no está unido al resto de la estructura química. Carboxialquilo, es decir, RXO(O)C-alquilo, es un ejemplo de un grupo carboxi usado terminalmente. Un grupo es interno cuando el grupo está presente en la parte intermedia de un sustituyente de la estructura química. Alquilcarboxi (por ejemplo, alquil-C(O)O- o alquil-OC(O)-) y alquilcarboxiarilo (por ejemplo, alquil-C (O)O-aril- o alquil-O(CO)-aril-) son ejemplos de grupos carboxi usados internamente.

Como se usa en el presente documento, una "cadena alifática" se refiere a un grupo alifático de cadena lineal o ramificada (por ejemplo, grupos alquilo, grupos alquenilo o grupos alquinilo). Una cadena alifática lineal tiene la estructura -[CH2]v-, donde v es 1-12. Una cadena alifática ramificada es una cadena alifática lineal que está sustituida con uno o más grupos alifáticos. Una cadena alifática ramificada tiene la estructura -[CQQ]v- donde cada Q es, independientemente, un hidrógeno o un grupo alifático; sin embargo, Q será un grupo alifático en al menos un caso. La expresión cadena alifática incluye cadenas de alquilo, cadenas de alquenilo y cadenas de alquinilo, donde alquilo, alquenilo y alquinilo se han definido anteriormente.

La expresión "opcionalmente sustituido" se usa de manera indistinta con la frase "sustituido o no sustituido". Como se describe en el presente documento, los compuestos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, tales como los que se ilustran generalmente, o como se ilustra por las clases, subclases y especies. Como se describe en el presente documento, las variables R1, R2, R3, R4, X e Y y otras variables contenidas en las fórmulas descritas en el presente documento incluyen grupos específicos, tales como alquilo y arilo. A menos que se indique lo contrario, cada uno de los grupos específicos para las variables puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento. Cada sustituyente de un grupo específico está además opcionalmente sustituido con uno a tres de halo, ciano, oxo, alcoxi, hidroxi, amino, nitro, arilo, cicloalifático, heterocicloalifático, heteroarilo, haloalquilo y alquilo. Por ejemplo, un grupo alquilo puede estar sustituido con alquilsulfanilo y el alquilsulfanilo puede estar opcionalmente sustituido con uno a tres de halo, ciano, oxo, alcoxi, hidroxi, amino, nitro, arilo, haloalquilo y alquilo. Como un ejemplo adicional, la porción cicloalquilo de un (cicloalquil)carbonilamino puede estar opcionalmente sustituida con uno a tres de halo, ciano, alcoxi, hidroxi, nitro, haloalquilo y alquilo. Cuando dos grupos alcoxi se unen en el mismo átomo o átomos adyacentes, los dos grupos alcoxi pueden formar un anillo junto con el átomo o átomos a los que están unidos.

En general, el término "sustituido", ya esté precedido o no por el término "opcionalmente", se refiere a la sustitución de radicales hidrógeno en una estructura dada con el radical de un sustituyente especificado. Los sustituyentes específicos se han descrito anteriormente en las definiciones y a continuación en la descripción de los compuestos y ejemplos de los mismos. A menos que se indique lo contrario, un grupo opcionalmente sustituido puede tener un sustituyente en cada posición sustituible del grupo, y cuando más de una posición en una estructura dada puede estar sustituida con más de un sustituyente seleccionado entre un grupo especificado, el sustituyente puede ser el mismo o diferente en cada posición. Un sustituyente de anillo, tal como un heterocicloalquilo, puede estar unido a otro anillo, tal como un cicloalquilo, para formar un sistema de anillo espirobicíclico, por ejemplo, ambos anillos comparten un átomo común. Como reconocerá una persona experta en la materia, las combinaciones de sustituyentes previstas son aquellas combinaciones que dan como resultado la formación de compuestos estables o químicamente factibles.

La expresión "estable o químicamente factible", como se usa en el presente documento, se refiere a compuestos que no se alteran de forma sustancial cuando se los somete a condiciones para permitir su producción, detección, y preferentemente, su recuperación, purificación y uso para uno o más de los propósitos divulgados en el presente documento. En algunas realizaciones, un compuesto estable o un compuesto factible químicamente es uno que no se altera sustancialmente cuando se mantiene a una temperatura de 40 °C o menos, en ausencia de humedad u otras condiciones químicamente reactivas, durante al menos una semana.

A menos que se indique otra cosa, las estructuras representadas en el presente documento también pretenden incluir todas las formas isoméricas (por ejemplo, enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales)) de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico, isómeros de doble enlace (Z) y (E) e isómeros conformacionales (Z) y (E). Por lo tanto, los isómeros estereoquímicos individuales así como las mezclas enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales) de los presentes compuestos están dentro del alcance de la presente divulgación.

Además, a menos que se indique otra cosa, las estructuras representadas en el presente documento también pretenden incluir los compuestos que difieren solamente en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras, excepto por la sustitución de hidrógeno por deuterio o tritio, o la sustitución de un carbono por un carbono enriquecido 13C o 14C, están comprendidos dentro del alcance de la presente invención. Dichos compuestos son útiles, por ejemplo, como herramientas o sondas analíticas en ensayos biológicos, o como agentes terapéuticos.

Compuestos

En el presente documento se describe un compuesto de Fórmula I

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

-----es un enlace o está ausente;

Ri es hidrógeno, alquilo Ci-6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, heteroaralquilo, -OH o alcoxi, en donde Ri está opcionalmente sustituido;

R2 es hidrógeno o alquilo C1-6, en donde R2 está opcionalmente sustituido;

cada R4 es independientemente hidrógeno,

o

en donde X es -O- o -NH-, e Y es alquilo C1-6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, heteroaralquilo, alcoxi, -OH, haloalquilo o sulfonilo, en donde R4 está opcionalmente sustituido;

R5 es hidrógeno o alquilo C1-4;

R6 es hidrógeno o halo;

R7 es hidrógeno o halo; y

n es 0, 1,2, 3, 4 o 5.

En algunas realizaciones, R1, R2, cada uno de R3 y R4 está opcionalmente sustituido independientemente con alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, halo, CN, carboxilo u oxo.

En una realización, R1 es hidrógeno, alquilo C1-6, aralquilo, -OH o alcoxi.

En otra realización, R1 es -OH o alcoxi.

En otra realización, R1 es alcoxi.

En una realización adicional, R1 es metoxi.

En una realización, R1 es alquilo C1-6.

En otra realización, R1 es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo o ferc-butilo.

En una realización adicional, R1 es etilo.

En otra realización adicional, R1 es propilo.

En una realización, R1 es aralquilo.

En una realización adicional, R1 es bencilo.

En una realización, R2 es hidrógeno.

En una realización, R2 es alquilo C1-6.

En una realización adicional, R2 es metilo.

En una realización, R3 es hidrógeno, alquilo C1-6, aralquilo o heteroaralquilo, en donde R3 está opcionalmente sustituido con oxo.

En una realización, R3 es hidrógeno.

En una realización, R3 tiene la estructura

en donde R3a es alquilo C1-6, arilo o heteroarilo.

En una realización, R3a es alquilo C1-6. En una realización adicional, R3a es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo o ferc-butilo. En otra realización más, R3a es etilo.

En otra realización, R3a es heteroarilo. En una realización adicional, R3a es furilo, pirrolilo, pirozolilo, triazolilo, fenilo, piridilo, pirimidilo o pirazilo. En otra realización más, R3a es furilo.

En otra realización, R3 es alquilo C1-6, que está opcionalmente sustituido con oxo.

En una realización adicional, R3 es

En otra realización más, R3 es

En una realización, R3 es heteroaralquilo, que está opcionalmente sustituido con oxo.

En una realización, R3 es

En una realización, R4 es

O

X ^x -Y _»

en donde X es -NH- e Y es alquilo C1-6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, heteroaralquilo, alcoxi, -OH, haloalquilo o sulfonilo, en donde R4 está opcionalmente sustituido con halo, CN, carboxilo u oxo.

En una realización, R5 es hidrógeno.

En otra realización, R5 es metilo, etilo, propilo o butilo. En una realización adicional, R5 es metilo.

En una realización, R6 es flúor. En otra realización, R6 es cloro. En otra realización, R6 es bromo. En otra realización, R6 es yodo.

En una realización, n es 1.

En una realización, Y es aralquilo.

En una realización, Y es bencilo.

También se describen compuestos de Fórmula la

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde las variables R1 , R2, X e Y son como se han definido anteriormente.

También se describen compuestos de Fórmula Ia-1

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde las variables R1 , R2, R3, R4, R5, R6 y n son como se han definido anteriormente.

También se describen compuestos de Fórmula Ib

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde las variables Ri, R2, X e Y son como se han definido anteriormente.

También se describen compuestos de Fórmula Ia(a)

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde las variables R1 y R2 son como se han definido anteriormente.

También se describen compuestos de Fórmula Ib(a)

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde las variables Ri y R2 son como se han definido anteriormente.

También se describen compuestos de Fórmula Ib(b)

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde las variables R1 , R2 y R3 son como se han definido anteriormente.

El compuesto puede seleccionarse de:

Ċ

5

En otro aspecto más, la invención proporciona el Compuesto 9 para su uso en un método para tratar o reducir la gravedad de una enfermedad inflamatoria en un paciente.

En una realización de este aspecto, la enfermedad se selecciona entre asma, artritis, lupus, enfermedad de Crohn, enfermedades inflamatorias del intestino, enfermedad celiaca, glomerulonefritis, acné común, leucemia y cáncer pancreático. En una realización adicional, la enfermedad se selecciona entre asma y artritis.

Composiciones farmacéuticamente aceptables

En un aspecto de la presente invención, se proporcionan composiciones farmacéuticamente aceptables, en donde estas composiciones comprenden el compuesto 9 y, opcionalmente, comprenden un vehículo, adyuvante o excipiente farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, estas composiciones comprenden además opcionalmente uno o más agentes terapéuticos adicionales.

También se apreciará que algunos de los compuestos descritos en el presente documento pueden existir en su forma libre para el tratamiento o, cuando sea apropiado, como un derivado farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a las sales que son, dentro del alcance del buen criterio médico, adecuadas para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos o animales inferiores sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares y son proporcionadas con una relación beneficio/riesgo razonable. Una "sal farmacéuticamente aceptable" significa cualquier sal no tóxica o sal de un éster del compuesto de la presente invención que, tras su administración a un receptor, puede proporcionar, directa o indirectamente, el compuesto de la presente invención.

Las sales farmacéuticamente aceptables se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, S. M. Berge et al. describen sales farmacéuticamente aceptables en detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables del compuesto de la presente invención incluyen las obtenidas a partir de ácidos y bases inorgánicas y orgánicas adecuadas. Algunos ejemplos de sales de adición de ácido no tóxicas farmacéuticamente aceptables son sales de un grupo amino formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico o con ácidos orgánicos, tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico o usando otros métodos usados en la técnica, tales como intercambio iónico.

Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, edisilato (etanodisulfonato), etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, yodhidrato, 2-hidroxi-etanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, sales valerato y similares. Las sales derivadas de bases adecuadas incluyen sales de metal alcalino, de metal alcalinotérreo, de amonio y de N+(alquilo C-m )4. Las sales de metal alcalino o alcalinotérreo representativas incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares. Otras sales farmacéuticamente aceptables adicionales incluyen, cuando sea adecuado, amonio no tóxico, amonio cuaternario y cationes de amina formados usando contraiones, tales como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, alquil sulfonato y aril sulfonato inferiores.

Como se ha descrito anteriormente, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención comprenden adicionalmente un vehículo, adyuvante o excipiente farmacéuticamente aceptable que, como se usa en el presente documento, incluye todos y cada uno de los disolventes, diluyentes u otro vehículo líquido, adyuvantes de dispersión o suspensión, agentes tensioactivos, agentes isotónicos, agentes espesantes o emulsionantes, conservantes, aglutinantes sólidos, lubricantes y similares, según sea adecuado para la forma farmacéutica particular deseada. Remington's Pharmaceutical Sciences, Decimosexta edición, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) desvela diversos vehículos utilizados en la formulación de composiciones farmacéuticamente aceptables y técnicas conocidas para la preparación de los mismos. Excepto en la medida en que cualquier medio de vehículo convencional sea incompatible con los compuestos de la invención, tal como mediante la producción de cualquier efecto biológico no deseado o la interacción de otro modo perjudicial con cualquier otro componente o componentes de la composición farmacéuticamente aceptable, su uso se contempla dentro del alcance de la presente invención. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, aunque no de forma limitativa, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como albúmina de suero humano, sustancias tampón tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico o sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrogenofosfato disódico, hidrogenofosfato potásico, cloruro de sodio, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinil pirrolidona, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloque de polietileno-polioxipropileno, lanolina, azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa y derivados de la misma, tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón; aceite de cártamo; aceite de sésamo; aceite de oliva; aceite de maíz y aceite de soja; glicoles; tales como propilenglicol o polietilenglicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; también pueden estar presentes en la composición, de acuerdo con el criterio del formulador, agentes tamponantes, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua apirógena; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico y soluciones de tampón fosfato, así como otros lubricantes compatibles no tóxicos, tales como lauril sulfato de sodio y estearato de magnesio, así como agentes colorantes, agentes de liberación, agentes de recubrimiento, edulcorantes, agentes saporíferos y perfumantes, conservantes y antioxidantes.

Uso y administración de los compuestos

En otro aspecto, la presente invención proporciona el compuesto 9 como se describe en el presente documento, para su uso en un método para tratar o reducir la gravedad de la inflamación en un sujeto, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz de una composición que comprende el compuesto a un sujeto, preferentemente un mamífero, que lo necesite. La presente invención también proporciona el compuesto 9 como se describe en el presente documento, para su uso en un método para tratar o reducir la gravedad de una enfermedad inflamatoria en un sujeto, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz de una composición que comprende el compuesto a un sujeto, preferentemente un mamífero, que lo necesite.

En otro aspecto más, la presente invención proporciona el compuesto 9 como se describe en el presente documento, para su uso en un método para tratar o reducir la gravedad de una afección, enfermedad o trastorno en el que está involucrado el receptor de glucocorticoides. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona el compuesto 9 como se describe en el presente documento, para su uso en un método para tratar una afección, enfermedad o trastorno en el que está involucrada una deficiencia de la actividad del receptor de glucocorticoides, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz de una composición que comprende el compuesto a un sujeto, preferentemente un mamífero, que lo necesite. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona el compuesto 9 como se describe en el presente documento, para su uso en un método para tratar una afección, enfermedad o trastorno inflamatorio en un sujeto, en donde el sujeto tiene actividad normal del receptor de glucocorticoides, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz de una composición que comprende el compuesto a un sujeto, preferentemente un mamífero, que lo necesite.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el compuesto 9 como se describe en el presente documento, para su uso en un método para tratar o reducir la gravedad de una afección, enfermedad o trastorno en el que está involucrado el receptor de glucocorticoides, en donde la afección, enfermedad o trastorno se selecciona de asma, artritis, lupus, enfermedad de Crohn, enfermedades inflamatorias intestinales, enfermedad celíaca, glomerulonefritis, acné común, leucemia y cáncer pancreático.

De acuerdo con la invención, una "cantidad eficaz" del compuesto o composición farmacéuticamente aceptable es la cantidad eficaz para tratar o reducir la gravedad de una o más de las enfermedades, trastornos o afecciones mencionadas anteriormente.

El compuesto 9 y las composiciones pueden administrarse usando cualquier cantidad y cualquier vía de administración eficaz para tratar o reducir la gravedad de una o más de las enfermedades, trastornos o afecciones mencionadas anteriormente.

La cantidad exacta necesaria variará de un sujeto a otro, dependiendo de la especie, edad y estado general del sujeto, la gravedad de la infección, el agente particular, su modo de administración y similares. Los compuestos de la invención se formulan preferentemente en una forma farmacéutica unitaria para facilitar la administración y la uniformidad de la dosificación. La expresión "forma farmacéutica unitaria", como se usa en el presente documento, se refiere a una unidad físicamente concreta de agente adecuada para el paciente que va a tratarse. Se entenderá, sin embargo, que la utilización diaria total de los compuestos y composiciones de la presente invención la decidirá el médico a cargo del tratamiento dentro del alcance de un buen criterio médico. El nivel específico de dosis eficaz para cualquier paciente u organismo concreto dependerá de una diversidad de factores entre los que se incluyen el trastorno que se esté tratando y la gravedad del trastorno; la actividad del compuesto específico empleado; la composición específica empleada; la edad, el peso corporal, el estado de salud general, sexo y dieta del paciente; el momento de la administración, la vía de administración y la tasa de excreción del compuesto específico empleado; la duración del tratamiento; los fármacos usados en combinación o casuales con el compuesto específico empleado y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas. El término "paciente", como se usa en el presente documento, significa un animal, preferentemente un mamífero y, aún más preferentemente, un ser humano.

Las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden administrarse a seres humanos y otros animales por vía oral, rectal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (mediante polvos, pomadas, gotas o parche), bucal, como una pulverización oral o nasal, o similares, dependiendo de la gravedad de la infección que se está tratando. En ciertas realizaciones, Los compuestos de la invención pueden administrarse por vía oral o parenteral a niveles de dosificación de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg y, preferentemente, de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg, de peso corporal del sujeto por día, una o más veces al día, para obtener el efecto terapéutico deseado.

Las formas farmacéuticas líquidas para administración oral incluyen, aunque no de forma limitativa, emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, las formas farmacéuticas líquidas pueden contener diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites (en particular, de semillas de algodón, de cacahuete, de maíz, de germen, de oliva, de ricino y de sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitano y mezclas de los mismos. Además de diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, edulcorantes, agentes saporíferos y perfumantes.

Pueden formularse preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles, de acuerdo con la técnica conocida usando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución, suspensión o emulsión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están el agua, la solución de Ringer, U.S.P. y solución de cloruro de sodio isotónica. Además, convencionalmente se usan aceites no volátiles estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este fin, puede emplearse cualquier aceite suave no volátil, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, se usan ácidos grasos tales como ácido oleico en la preparación de los inyectables.

Las formulaciones inyectables pueden esterilizarse, por ejemplo, mediante la filtración a través de un filtro de retención de bacterias o mediante la incorporación de agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse o dispersarse en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de su uso.

Para prolongar el efecto de un compuesto de la presente invención, a menudo es deseable ralentizar la absorción del compuesto mediante inyección subcutánea o intramuscular. Esto puede lograrse mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo con poca solubilidad en agua. La velocidad de absorción del compuesto depende entonces de su velocidad de disolución que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y de la forma cristalina. Como alternativa, la absorción retardada de una forma de compuesto administrado por vía parenteral se lleva a cabo disolviendo o suspendiendo el compuesto en un vehículo oleoso. Las formas de depósito inyectables se preparan formando matrices microencapsuladas del compuesto en polímeros biodegradables tales como polilactidapoliglicólido. Dependiendo de la proporción de compuesto a polímero y de la naturaleza del polímero concreto empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del compuesto. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones de depósito inyectable también se preparan atrapando al compuesto en liposomas o microemulsiones que son compatibles con los tejidos corporales.

Las composiciones para administración rectal o vaginal son preferentemente supositorios que pueden prepararse mezclando los compuestos de esta invención con excipientes o vehículos adecuados no irritantes tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera para supositorio, que son sólidos a temperatura ambiente pero líquidos a temperatura corporal y, por lo tanto, se derretirán en el recto o en la cavidad vaginal y liberarán el compuesto activo.

Las formas farmacéuticas sólidas para la administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. En dichas formas farmacéuticas sólidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un excipiente o vehículo inerte, farmacéuticamente aceptable, tal como citrato de sodio o fosfato de dicalcio y/o a) cargas o extensores tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y ácido silícico, b) aglutinantes tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polvinilpirrolidona, sacarosa y goma arábiga, c) humectantes tales como glicerol, d) agentes disgregantes tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y carbonato de sodio, e) agentes retardantes de la solución tales como parafina, f) aceleradores de la absorción tales como compuestos de amonio cuaternario, g) agentes humectantes tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, h) absorbentes tales como caolín y arcilla bentonita e i) lubricantes tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio y mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, la forma farmacéutica puede comprender agentes tamponantes.

También pueden emplearse composiciones sólidas de tipo similar como cargas en cápsulas rellenas de gelatina blanda y dura usando excipientes tales como lactosa o azúcar de la leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares. Las formas farmacéuticas sólidas de comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras y gránulos pueden prepararse con recubrimientos y envolturas, tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. Opcionalmente, pueden contener agentes opacificantes y también pueden tener una composición que libera el principio o los principios activos única o preferentemente, en una determinada parte del tracto intestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones inclusorias que pueden usarse incluyen sustancias poliméricas y ceras. También pueden emplearse composiciones sólidas de tipo similar como cargas en cápsulas rellenas de gelatina blanda y dura usando excipientes tales como lactosa o azúcar de la leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.

El compuesto activo puede estar también en forma microencapsulada con uno o más excipientes como se ha señalado anteriormente. Las formas farmacéuticas sólidas de comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras y gránulos pueden prepararse con recubrimientos y envolturas, tales como recubrimientos entéricos, recubrimientos de control de la liberación y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. En dichas formas farmacéuticas sólidas, el compuesto activo puede mezclarse con al menos un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa o almidón. Dichas formas farmacéuticas también pueden comprender, como es práctica normal, sustancias adicionales distintas de los diluyentes inertes, por ejemplo, lubricantes para formación de comprimidos y otros adyuvantes para la compresión, tales como estearato de magnesio y celulosa microcristalina. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, las formas farmacéuticas también pueden comprender agentes tamponantes. Opcionalmente, pueden contener agentes opacificantes y también pueden tener una composición que libera el principio o los principios activos única o preferentemente, en una determinada parte del tracto intestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones inclusorias que pueden usarse incluyen sustancias poliméricas y ceras.

Las formas farmacéuticas para administración tópica o transdérmica del compuesto de la presente invención incluyen pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, pulverizaciones, inhaladores o parches. El componente activo se premezcla en condiciones estériles con un vehículo farmacéuticamente aceptable y cualquier conservante o tampón necesario, según se requiera. Las formulaciones oftálmicas, gotas óticas y colirios también se contemplan dentro del alcance de la presente invención. Adicionalmente, Se contempla el uso de parches transdérmicos, que tienen la ventaja añadida de proporcionar un suministro controlado de un compuesto al organismo. Dichas formas farmacéuticas se preparan disolviendo o dispensando el compuesto en un medio adecuado. También pueden usarse potenciadores de la absorción para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel. La velocidad puede controlarse proporcionando una membrana de control de la velocidad o dispersando el compuesto en una matriz polimérica o gel.

La actividad del compuesto utilizado en la presente invención como modulador del receptor de glucocorticoides se puede analizar de acuerdo con métodos descritos en general en la técnica y en los Ejemplos del presente documento.

Ejemplos

De los siguientes ejemplos, solo los ejemplos que detallan la preparación y ensayo del Compuesto 9 son ejemplos de acuerdo con la presente invención.

Esquemas sintéticos generales

Esquema 1:

El Esquema 1 proporciona un esquema sintético general para la síntesis de compuestos de Fórmula 1-E a partir de Cortisol disponible en el mercado, en donde R1, R4 y R3a se han definido anteriormente. La oxidación del Cortisol con un reactivo tal como ácido peryódico proporciona un ácido carboxílico de Fórmula 1-A, que puede funcionalizarse adicionalmente en una etapa posterior de la síntesis. El tratamiento de 1-A con una base y reactivo de aldehído, tal como en condiciones de NaH/formiato de metilo proporciona un compuesto de Fórmula 1-B. El tratamiento de 1-B con un reactivo de hidrazina, tal como fenil hidrazina o N-bencil-3-hidrazinilbenzamida proporciona un compuesto de Fórmula 1-C. La funcionalización del resto de ácido carboxílico de un compuesto de Fórmula 1-C con un reactivo de amina de la fórmula NH2-R1 proporciona un compuesto de Fórmula 1-D. La funcionalización del sustituyente hidroxilo 17a con un cloruro de acilo de la estructura

proporciona un compuesto de Fórmula 1-E.

Esquema 2:

Los compuestos de Fórmula 2-I pueden sintetizarse a partir de compuestos de partida, tales como 2-A, de acuerdo con el Esquema 2 anterior.

La escisión oxidativa del grupo hidroxil metilo del grupo a-hidroxi acetilo de 2-A para proporcionar 2-B puede realizarse usando ácido peryódico. La reducción de los restos olefínicos de 2-B usando, por ejemplo, gas hidrógeno y un catalizador de Pd/C proporciona el producto saturado, 2-C. La bromación posterior usando, por ejemplo, bromo molecular proporciona el compuesto bis-a,a' bromuro, 2-D. La doble eliminación de los sustituyentes de bromuro usando una base, tal como carbonato de calcio, y un catalizador, tal como bromuro de litio, proporciona 2-E. La generación del enolato de 2-E puede realizarse con una base, tal como hidruro sódico, seguido de adición nucleófila de formiato de metilo, y puede proporcionar el compuesto 2-F.

La aminación de 2-F usando fenilhidrazina puede proporcionar el compuesto de pirazina 2-G. La posterior esterificación del grupo hidroxilo libre de 2-G usando un compuesto de carbonilo activado de la fórmula R3-C(O)-X, en donde X es un grupo saliente tal como cloruro, puede proporcionar un compuesto de Fórmula 2-H. La amidación del resto de ácido carboxílico de un compuesto de Fórmula 2-H usando una amina de la fórmula R2-NH2 puede proporcionar un compuesto de Fórmula 2-I.

Materiales y métodos

Expresión y purificación de proteínas. El LBD de GR (restos 525-777) que contiene mutaciones F602A, C622Y, T668V, S674T, V675I, K699A y K703A para Furoato de Mometasona y mutaciones F602A, C622Y, T668V, S674T, V675I, E684A y E688A para Cortisol se expresaron como una proteína de fusión 6xHis-GST a partir del vector de expresión pET24a (Novagen). Las proteínas de fusión modificadas contienen una etiqueta His6 (MKKGHHHHHHG) en el extremo N y un sitio de proteasa de trombina entre GST y el LBD de GR. Se cultivaron células BL21DE3 transformadas con los plásmidos de expresión en caldo LB a 16 °C a una DO600 de ~1 y se indujeron con IPTG 0,1 mM y una concentración 50 pM de furoato de mometasona o cortisol. • Las células se recogieron, se resuspendieron en 200 ml de tampón de extracción (Tris 50 mM [pH 8], NaCl 150 mM, urea 2 M, glicerol al 10% ligando 1 j M) por 12 litros de células, y se pasaron tres veces a través de una prensa francesa con presión establecida en 1000 Pa. El lisado se centrifugó a 20.000 rpm durante 30 minutos y el sobrenadante se cargó en una columna de níquel de 25 ml. La columna se lavó con 700 ml de tampón de extracción y se eluyó con 300 ml de tampón B al 50% (Tris 25 mM [pH 8], imizadol 500 mM, glicerol al 10%, ligando 1 j M). El LBD de GR se escindió durante la noche con trombina en una proporción de proteasa/proteína de 1:1000 en la cámara fría mientras se dializaba contra Tris 20 mM [pH 8], NaCl 500 mM, glicerol al 10 %, ligando 1 j M. La etiqueta H6GST se eliminó mediante la unión a una columna de níquel Ni-NTA. El material que fluyó a través de la columna se purificó adicionalmente por filtración en gel (Tris 20 mM [pH 8], NaCl 500 mM, DTT 1 mM, EDTA 1 mM, glicerol al 10%, ligando 1 j M). La proteína unida a Furoato de Mometasona formó un complejo con la versión más larga del péptido SRC2-3: SPKKKENALLRYLLDKDDTKD y se concentró con filtración a 6 mg/ml. El LBD de GR de Cortisol formó un complejo con la versión más corta SRC2-3: KENALLRYLLDKDD y B-octil glucósido al 0,2 % y se concentró con filtración a 7 mg/ml.

Cristalización. Los cristales de Furoato de Mometasona GR se cultivaron a temperatura ambiente en gotas colgantes que contenían 1 j l de la proteína complejada con péptido GP2 y 2 j l de la solución de pocillo que contenía citrato de sodio 0,1 M [pH6] y cloruro de sodio 2,2 M. Los cristales de cortisol GR se cultivaron a temperatura ambiente en gotas colgantes que contenían 1 j l del complejo de proteína y 1 j l de la solución de pocillo que contenía imidazol 0,1 M, pH 6,5, acetato de sodio trihidratado 1 M. Se usó sacarosa al 30 % en el tampón del pocillo como crioprotector para ambos.

Determinación de la estructura. Se utilizó el programa PHASER en CCP4 para el reemplazo molecular (36), con la estructura LBD de GR/dexametasona (código PDB: 1M2Z) (27) como modelo de búsqueda. El modelo inicial fue reconstruido y refinado manualmente usando CNS (37) y el programa REFMAC5 en CCP4 (38). Todas las figuras de estructura se prepararon usando PyMOL (El Sistema de Gráficos Moleculares PyMOL, Versión 1.3, Schrodinger LLC).

T ransfección celular y ensayos de indicador. Las células AD293 se dividieron a 20.000/pocillo en una placa de 24 pocillos un día antes de la transfección. Para la transactivación, se introdujeron por transfección 100 ng de plásmido pHHLuc (MMTV-Luc), 0,1 ng de pRShGR junto con 5 ng de phRGtkRenilla mediante X-tremeGENE 9 (Roche) en células AD293 por pocillo. Para la transrepresión, se introdujeron por transfección 10 ng de API-Luc, 100 ng de pRShGR y 5 ng de phRGtkRenilla en células AD293 por pocillo. Un día después de la transfección, las células se indujeron por diferentes tratamientos (esteroides o vehículo) 16 horas durante la noche. Las células se recogieron por tampón de lisis 1xPassive (Promega), la actividad luciferasa se analizó mediante el sistema Dual-Glo Luciferase (Promega). Los datos se representaron por Valor de Luciferasa/Valor de Renilla, como Unidades Relativas de Luciferasa (URL).

Ensayo de unión a ligando de GR in vitro . El ensayo de unión a GR in vitro es similar al descrito anteriormente (39). Básicamente, se fijó ligando [3H]Dex caliente a 25 nM y se incubó con citosol con GR al 5% más molibdato de sodio 20 mM en tampón TAPS (pH 8,8), y se añadió ligando frío (que variaba de 0,1 nM a 10 j M) para competir por la unión con el ligando caliente. Los datos se representaron como una curva de competición estándar mediante GraphPad Prism 5.

Ejemplos biológicos

Ejemplo 1: Estructura general de los LBD de GR unidos a cortisol y MF

La cristalización del LBD de GR siempre ha sido un desafío debido a su problema de solubilidad. La estructura original de LBD de GR se determinó con un ligando DEX de alta afinidad (27), unido al LBD de GR con mutación F602S, que mejora la solubilidad de las proteínas. Sin embargo, el cortisol es un ligando mucho más débil que el DEX y la mutación F602S no es suficiente para estabilizar el LBD de GR unido al cortisol, una hormona endógena (Fig. 8, carril 1). Para identificar aminoácidos que podrían aumentar la solubilidad de LBD de GR sin afectar a la estructura general, se alineó GR con los miembros más cercanos de la familia de hormonas esteroideas, MR, receptor de andrógenos (AR) y receptor de progesterona (PR), que son mucho más solubles que GR. Además de F602, los restos C622, T668, S674 y v 675 se distinguen de las secuencias conservadas de la familia, de forma que los inventores mutaron esos aminoácidos de vuelta a los restos conservados (F602A, C622Y, T668V, S674T y V675I, denominado AYVTI). La mayoría de estos restos se encuentran dentro de las proteínas teniendo los restos de PR un mejor empaquetamiento en la estructura de LBD de PR (28). De hecho, el LBD de GR AVYTI tiene una solubilidad mucho mejor que el LBD de F602S cuando se une al cortisol (Fig. 8, carril 2). El LBD de GR mutado se puede expresar y purificar con un rendimiento superior a 5 mg por litro. Sin embargo, los inventores no pudieron obtener cristales de este LBD de GR mutado unido a cortisol o m F. El LBD de GR tiene varios restos de lisina y ácido glutámico en su hélice H9, cuyas largas cadenas laterales pueden afectar a la cristalización. El LBD de GR con mutaciones de alanina de estos restos (K669A/K703A en el caso de MF y E684A/E688A en el caso del cortisol) como mutaciones de reducción de entropía en la superficie se mantuvo soluble (Fig. 8, carriles 3 y 4) y permitió que los presentes inventores obtuvieran cristales de LBD de GR unidos a MF y cortisol (Fig. 9). Todas estas mutaciones están muy lejos de la cavidad de unión al ligando y no alteran las funciones de transactivación o transrepresión de GR mediadas por ligando (Fig. 10).

Las estructuras generales de los LBD de GR unidos a MF y unidos a cortisol (Fig. 1A) son similares a las de los LBD de GR unidos a DEX, con 11 hélices que se empaquetan en tres capas de un paquete de tipo sándwich helicoidal, con la cavidad de unión al ligando enterrada en la parte inferior del paquete. Los datos estadísticos de recopilación y refinamiento de datos se resumen en la Tabla S1. La arquitectura general de LBD de GR unido a cortisol es casi idéntica a la del LBD de GR unido a DEX, aunque existen algunas diferencias notables entre LBD de GR unido a MF y LBD de GR unido a DEX, incluyendo la orientación del bucle antes de la hélice 1 (etiquetada "1" en la Fig. 1B); una expansión de la región de bucle entre las hélices 5 y 6 (etiquetada "2" en la Fig. 1B); y un cambio en la orientación C-terminal de la hélice AF-2 (etiquetada "3" en la Fig. 1B). El modo de unión a ligando de cortisol y MF están bien definidos por un mapa claro de densidad electrónica de los ligandos unidos y los restos de cavidad circundantes (Fig. 1C).

Ejemplo 2: Potencia, afinidad de cortisol, DEX y MF

El cambio de estructuras químicas (Fig. 2A) de cortisol, DEX y MF perfila la evolución de los glucocorticoides: de simple a complejo y de un nivel a múltiples niveles. La estructura de cortisol proporciona una estructura principal básica de esteroide de 4 anillos; después DEX añade el doble enlace 1,2, metilación en 16 y halogenación en 9a (Fig. 2A); y MF añade un cloro en 22 y, lo que es más importante, añade un grupo éster de furoato lipófilo en 17a (Fig. 2A), reemplazando al grupo hidroxilo de la DEX y el cortisol. Para ensayar los efectos de esos cambios químicos sobre la potencia de GR, los inventores compararon directamente las actividades de MF, DEX y cortisol tanto en la transactivación como en la transrepresión de GR en el formato de curva de dosis-respuesta completa. Para la transactivación, los inventores utilizaron un sistema indicador de luciferasa impulsado por MMTV (Fig. 2B). MF y DEX mostraron casi la misma eficacia (actividad máxima) a la concentración de saturación (1 j M), mientras que el cortisol a su concentración de saturación (10 j M) tenía solo el 80% de la eficacia de DEX. Con respecto a DEX, hubo un gran desplazamiento hacia la izquierda de la curva de dosis-respuesta de MF, lo que indica que MF es 20 veces más potente que DEX. Por otro lado, la curva de cortisol tuvo un gran desplazamiento hacia la derecha, lo que muestra que es 10 veces menos potente que DEX. Los valores de CE50 para MF, DEX y cortisol en la transactivación fueron 0,33 nM, 6,7 nM y 70 nM, respectivamente.

Para la transrepresión, se utilizó un indicador de luciferasa impulsado por API (Fig. 2C). MF, DEX y cortisol mostraron eficacias similares a su concentración de saturación. De nuevo, MF mostró una potencia mucho mayor (60 veces) que DEX, y el cortisol fue mucho más débil que DEX; los valores de CE50 para MF, DEX y cortisol en la transrepresión fueron 0,005 nM, 0,32 nM y 2,7 nM, respectivamente. De acuerdo con la observación frecuente de que la inducción requiere una mayor concentración de esteroide, la potencia de inducción fue al menos 10 veces menor que la potencia de represión para cada compuesto. Esta diferencia brinda la oportunidad de disociar la transactivación de la transrepresión mediante el uso de dosis muy bajas de glucocorticoides. Por ejemplo, a 0,1 nM, MF alcanza el 95% de la eficacia de transrepresión pero solo el 25% de la eficacia de transactivación (Fig. 2B y 2C).

En general, la alta potencia está determinada por una alta afinidad por el receptor, pero los cofactores celulares también juegan papeles importantes (29, 30). Para ensayar la afinidad de MF por GR, los inventores realizaron ensayos de competición de unión al ligando GR in vitro para MF, DEX y cortisol (Fig. 2D), que mostraron que el orden de afinidad de unión a GR era MF > DEX > cortisol. Los valores de Ki para MF, DEX y cortisol fueron 0,7 nM, 8 nM y 91 nM, respectivamente. Este resultado fue coherente con el resultado de los inventores para la potencia. Sin embargo, la diferencia en la unión de CI50 in vitro entre MF y DEX fue solo de aproximadamente 10 veces, mientras que la diferencia en potencia fue mucho mayor: 20 veces para la inducción y 60 veces para la represión (Fig. 2B y 2C). El otro componente de la diferencia en potencia tiene que aportarse por interacciones con factores celulares que reconocen los cambios conformacionales de la superficie causados por la unión de diferentes ligandos.

Ejemplo 3: La flexibilidad del enlace sencillo 1,2 contribuía a la baja afinidad del cortisol por GR

Para comprender el mecanismo subyacente de la baja afinidad del cortisol, los inventores hicieron una comparación estructural de LBD de GR unido a cortisol y LBD de GR unido a DEX. La estructura general de LBD de GR unido a cortisol es casi exactamente la misma que la del LBD de GR unido a DEX, no hay un cambio de conformación notable. Después, los inventores analizaron los detalles de la unión del ligando. Como se ha mencionado anteriormente, DEX se diferencia del cortisol solo por: el doble enlace 1,2, halogenación en 9a y metilación en 16 (Fig. 2A). El doble enlace C1-C2 de DEX hace que el anillo A del esteroide y el grupo cetona C3 se vuelvan planos, permitiendo de esta manera que la cetona C3 interactúe fácilmente con R611 y Q570 (Figura 3A). En cambio, debido a la flexibilidad del enlace sencillo C1-C2 del cortisol, el anillo A del esteroide necesita doblarse para formar un enlace de hidrógeno con R611 y Q570. Además, dado que el enlace sencillo C1-C2 del cortisol no unido oscila entre dos conformaciones (por encima y por debajo del plano del anillo A), se requiere una molécula de agua para formar una red de enlaces de hidrógeno para mantener el ligando en posición. Estas observaciones explicaron la relativamente baja afinidad del cortisol por GR. Para confirmar la importancia del doble enlace C1-C2, los presentes inventores midieron la potencia de la prednisolona, que difiere del cortisol solo por la adición del doble enlace C1-C2 (Figura 3B, color marrón), en un ensayo de transactivación. De hecho, el doble enlace C1-C2 de la prednisolona causó un desplazamiento hacia la izquierda de aproximadamente 5 veces de la curva de dosis-respuesta del cortisol (Figura 3B) y, por lo tanto, puede representar más de la mitad del desplazamiento total hacia la izquierda causado por DEX. El aumento restante de la potencia probablemente se debe a la halogenación en C-9a y la metilación en C-16, aumentando ambos la superficie de interacción dentro de la cavidad del receptor (Fig. 11).

Ejemplo 4: El Furoato 17a determinó la alta afinidad de MF

La estructura química de DEX forma una superficie bidimensional casi plana (Fig. 4A), pero en MF, el éster de furoato 17a sobresale de esa superficie formando un ángulo de casi 90 ° con respecto al plano del anillo, haciendo del ligando un objeto tridimensional (Fig. 4B). En el LBD de GR unido a DEX, hay un espacio vacío encima del anillo D del esteroide, una cavidad hidrófoba formada por la hélice 3, la hélice 5, el giro p3-p4 y la hélice 6-7 (Fig. 4C). En la estructura del LBD de GR unido a MF, el furoato 17a que sobresale expande ligeramente la cavidad de unión al ligando y ocupa la mayor parte del espacio de esa cavidad. El furoato 17a lipófilo se adapta muy bien a la cavidad hidrófoba y realiza extensas interacciones hidrófobas con los aminoácidos F623, I629, M639, C643, I559 y L563 circundantes (Fig. 4D), adquiriendo el aspecto de una bola firmemente anclada dentro de una articulación esférica, explicando así por qué MF tiene una afinidad 10 veces mayor por GR que DEX.

Ejemplo 5: Q642 juega un papel clave en el reconocimiento de los glucocorticoides de diferente potencia

Se ha descrito el reconocimiento básico de glucocorticoides por el LBD de GR (27, 31, 32). Como ocurre en el LBD de GR unido a DEX, Q570 y R611 interaccionan con el grupo ceto C-3 del anillo A del esteroide, N564 interacciona con el grupo hidroxilo C-11 del anillo C del esteroide y T739 interacciona con el grupo carbonilo C-21 de la cadena lateral (Figura 3A). Estos cuatro pares de enlaces de hidrógeno importantes mantienen la estructura principal del esteroide firmemente en su posición. Con respecto a los LBD de GR unidos a DEX y a cortisol, el intruso grupo furoato C-17a de MF causa solo un gran cambio dentro de la cavidad de unión al ligando, que es el movimiento de Q642 en la hélice 7 (Figura 5A). En la estructura de LBD de GR unido a DEX, Q642 está perpendicular al eje de la hélice 7 y forma enlaces de hidrógeno con el grupo hidroxilo C-17a de DEX. Tras la unión de m F, el grupo furoato C-17a empuja a Q642, doblándolo casi 90 ° en una posición paralela al eje de la hélice 7 (Figura 5A).

Como la orientación de Q642 es el único gran cambio en la cavidad de unión al ligando tras la unión de MF, los inventores mutaron Q642 para hacerlo más pequeño (Q642A), más grande (Q642F), hidrófobo (Q642L) o cargado (Q642E, Q642K), o para hacer solo un ligero cambio (Q642N). Los presentes inventores ensayaron esas mutaciones usando MF o DEX a una concentración sub-saturada (MF, 1 nM; DEX, 10 nM). De forma interesante, para una mutación (Q642N), casi se anuló la actividad de DEX, mientras que la actividad de MF siguió siendo máxima (Fig. 5B). Por lo tanto, una sola mutación podría separar completamente la actividad de MF de la de DEX. Otras mutaciones causaron la pérdida de la mayor parte de la actividad tanto para DEX como para MF; la excepción, Q642L, tuvo la mitad de la actividad con MF pero tuvo una actividad muy baja o nula con DEX. El furoato 17a de MF también cambió ligeramente la conformación alrededor de M560 y M639, pero las mutaciones en esos restos no tuvieron el mismo efecto que la mutación Q642N (Fig. 12).

Para analizar el papel destacado de Q642 en el reconocimiento de ligandos de diferente potencia, los inventores determinaron curvas de dosis-respuesta completas para MF, DEX y cortisol que representan potencia alta, media y baja, respectivamente, en la unión a Q642N en un ensayo de transactivación de GR (Fig. 5C). Para MF, la curva de dosis-respuesta de Q642N era indistinguible de la del tipo silvestre. Para DEX con respecto al tipo silvestre, Q642N causó un gran desplazamiento hacia la derecha de la curva, cambiando la CE50 de 7,5 nM a 40 nM, una disminución de 5 veces en la potencia. Para el cortisol, la variante del receptor Q642N era inactiva, incluso a la concentración de saturación. Por lo tanto, una sola mutación Q642N tiene la capacidad de separar completamente ligandos de potencia alta, media y baja, lo que sugiere que Q642 sirve como un sensor que reconoce ligandos de diferente potencia. Cuando se une un glucocorticoide de potencia media o baja (por ejemplo, DEX o cortisol), Q642 forma un enlace de hidrógeno con el grupo hidroxilo 17a para conectar el ligando unido en su posición dentro de la cavidad de unión al ligando. Cuando se une a un ligando altamente potente tal como MF, Q642 es empujado por el grupo lipófilo 17a. Este cambio, coordinado con otros pequeños cambios causados por la unión del ligando, altera las hélices 6, 6 y 7, ocasionando la expansión del bucle entre la hélice 5 y la hélice 6 y cambiando la orientación del extremo C de la hélice AF2 (Fig. 1B), lo que da como resultado las características de alta potencia.

Para investigar el papel exacto de Q642 en la unión de diferentes ligandos, los presentes inventores ensayaron la capacidad de unión al ligando de GR Q642A, para el cual DEX casi no tiene actividad de transactivación a una sola concentración no saturada (Figura 5B). En un ensayo de unión in vitro usando el citosol de células AD293 que expresaban GR de tipo silvestre o GR Q642A, el mutante Q642A mostró una pérdida sustancial de afinidad de unión a DEX en comparación con GR de tipo silvestre (Kd (Q642A) = 22,3 nM frente a Kd (WT) = 5,2 nM), pero siguió conservando algo de afinidad a una alta concentración de ligando (Fig. 14A). Por otro lado, Q642A casi no mostró actividad de transactivación, incluso a una concentración de saturación de DEX, en un ensayo de indicador (Fig. 14B). Estos datos muestran que la falta de transactivación por DEX de GR Q642A se debe tanto a una disminución en la afinidad por el ligando como a un cambio de conformación que inhibe la activación de GR. A diferencia de DEX y cortisol, Q642 no forma un enlace de hidrógeno con MF. Para determinar si Q642A todavía tiene la capacidad de unirse a MF, los presentes inventores realizaron un experimento de unión competitiva utilizando la proteína mutante GR Q642A (Fig. 14C). Tanto MF como cortisol pudieron competir con la unión de 3H-DEX a GR Q642A, pero con una gran disminución de la afinidad (la Ki para MF y cortisol fueron 9 nM y 250 nM, respectivamente, en comparación con la de GR de tipo silvestre a 0,7 nM y 91 nM, respectivamente). Tomados conjuntamente, estos resultados sugieren que Q642 actúa como un pilar para soportar la cresta de la hélice 7 formando un enlace de hidrógeno con ligandos que contienen grupos hidroxilo C-17a, mientras empuja a ligandos con un grupo furoato C-17a. La sustitución de Q642 con un pequeño resto como la alanina puede provocar el colapso de la cresta de la hélice 7 y, por lo tanto, perder toda la transactivación.

Ejemplo 6: Diseño molecular de nuevos glucocorticoides

Lo siguiente correlaciona los números de designación de compuestos como se analiza en el presente documento:

La estructura de LBD de GR unida a MF reveló que la alta potencia de MF se logra principalmente por las interacciones que aumentan la afinidad del grupo furoato 17a con restos de la cavidad de unión al ligando. Los presentes inventores aplicaron estos conocimientos estructurales al diseño de nuevos glucocorticoides con el objetivo de obtener glucocorticoides aún más potentes. Previamente, los presentes inventores habían determinado la estructura cristalina del LBD de GR unido al deacilcortivazol (DAC) (32), un glucocorticoide sintético que tiene un grupo voluminoso de fenilpirazol en la cetona C-3 del anillo A del esteroide (Fig. 6A). El DAC es un glucocorticoide de alta afinidad que se ha utilizado en el tratamiento de la leucemia aguda infantil resistente a los glucocorticoides (22). Sin embargo, DAC tiene una fuerte citotoxicidad cuando se usa a altas concentraciones, y las células cancerosas desarrollan gradualmente resistencia al medicamento (33). DAC tiene un grupo hidroxilo en la posición C-17a. El LBD de GR unido a MF sugirió la posibilidad de desarrollar un glucocorticoide superpotente reemplazando el grupo hidroxilo 17a de DAC con un grupo furoato 17a. Los presentes inventores eligieron un resto DAC VSG24 como punto de partida (Fig. 6A). VSG24 por sí mismo casi no tiene actividad en el ensayo de indicador de MMTV. La sustitución del grupo hidroxilo 17a por un éster de furoato (VSG22) aumentó enormemente tanto la potencia como la eficacia, dando como resultado un cambio de CE50 mayor de 1000 veces. La potencia de VSG24F fue mejor que las de DEX y DAC (Fig. 6A). Estos datos demuestran el poder de un grupo lipófilo en la posición C17a para aumentar la potencia de los glucocorticoides. Aunque VSG22 sigue siendo un poco más débil que MF, el cambio espectacular de potencia a través de un simple cambio en C17a indica el poder de esta estrategia para mejorar la potencia de los glucocorticoides. Se ha utilizado una estrategia similar para mejorar la potencia del propionato de fluticasona, obteniéndose un compuesto altamente potente de furoato de fluticasona, un medicamento para el asma ampliamente utilizado (34).

La estructura de LBD de GR unido a DAC revela que tenía un canal no descubierto previamente abierto por el grupo fenilpirazol de DAC (32). Se diseñaron y sintetizaron varios de estos glucocorticoides introduciendo un grupo aún mayor en la cetona C-3 (VSG02, VSG03, VSG15; Fig. 5B). Todos estos compuestos mostraron una potencia relativamente baja para GR. Basándose en la estructura de LBD de GR unido a MF, los inventores introdujeron un grupo furoato en la posición C-17a, produciendo los compuestos correspondientes VSG10, VSG11 y VSG14, respectivamente. De los tres compuestos, el furoato 17a aumentó enormemente tanto la potencia como la eficacia de GR (Fig. 6B; Fig. 13), sugiriendo además que la adición del furoato 17a podría ser una estrategia general para aumentar la potencia de los glucocorticoides diseñados.

Ejemplos sintéticos

Síntesis del compuesto 1-A:

Se disolvió Cortisol (3,6 g, 10 mmol) en metanol (60 ml) y después se añadió gota a gota ácido peryódico (4,5 g en 60 ml de agua, 20 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después, el metanol se concentró y se añadió H2O (100 ml), lo que formó un precipitado. El precipitado se filtró, se lavó con agua (15 x 3 ml) y se secó al aire para dar el Compuesto 1-A (2,8 g) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 8 12,22 (s, 1H), 5,55 (s, 1H), 4,77 (s, 1H), 4,40 - 4,08 (m, 2H), 1,37 (s, 3H), 0,88 (s, 3H).

Síntesis del compuesto 1-B:

El Compuesto 1-A (1,7 g, 5 mmol) se disolvió en tolueno seco (15 ml) y se añadió formiato de metilo (2 ml). Después, se añadió NaH (900 mg, 20 mmol, dispersión al 60% en aceite mineral) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después, se añadió HCl 1 N (120 ml) y la mezcla se extrajo varias veces con EtOAc. El disolvente se secó y se retiró para dar 1,8 g del Compuesto 1-B en forma de una espuma de color amarillo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LR-Masa (ESI) m/z: 375,3 [M - H]+.

Síntesis del compuesto 1-Ca:

El Compuesto 1-B (1,8 g, 5 mmol) se disolvió en AcOH (15 ml) y H2O (3 ml) y se añadió N-bencil-3-hidrazinilbenzamida (1,1 g, 5 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Se añadió agua fría (100 ml) y el precipitado se filtró, se lavó con H2O (10 x 3 ml) y se secó al aire para dar el Compuesto 1-Ca (1,9 g) en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 89,24 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 8,01 (s, 0H), 7,90 (dt, J = 7,3, 1,6 Hz, 1H), 7,67 - 7,58 (m, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,37 - 7,20 (m, 4H), 6,15 (s, 1H), 4,49 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 4,30 (m, 1H), 1,23 (s, 3H), 0,90 (s, 2H).

Síntesis del Compuesto 1-Da:

Usando un procedimiento idéntico al descrito para la preparación del Compuesto 1-Ca, y usando fenilhidrazina en lugar de N-bencil-3-hidrazinilbenzamida, se proporcionó el Compuesto 1-Da en forma de un sólido de color blanco. LR-Masa (ESI) m/z: 447,3 [M - H]+.

Síntesis del Compuesto 1:

El Compuesto 1-Ca (290 mg, 0,5 mmol) se disolvió en DMF seca (4 ml) y se añadieron DMAP (183 mg, 1,5 mmol), Bop (265 mg, 0,6 mmol) y clorhidrato de etilamina (50 mg, 0,6 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, se añadió H2O (20 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto en bruto se purificó por cromatografía con DCM:MeOH (20:1) para proporcionar el Compuesto 1 en forma de un sólido de color blanco (75%). 1H RMN (CDCla, 400 MHz) 8 : 7,98 (s, 1H, Ph-H), 7,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,60-7,52 (m, 2H), 7,40 (s, 1H), 7,38-7,29 (m, 5H, Ph-H), 6,68 (t, 1H, NH), 6,41 (t, 1H, NH), 6,11 (s, 1H, CH=C), 5,34 (s, 1H, OH), 4,66 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,48 (s a, 1H, OH), 3,50-3,45 (m, 1H), 3,26-3,23 (m, 2H), 2,98 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,67 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,51-1,19 (m, 20H), 1,05 (s, 3H, CH3); LR-Masa (ESI) m/z: 609,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 2:

A una solución del Compuesto 1 (120 mg, 0,2 mmol), TEA (0,056 ml, 0,4 mmol) en DCM seco (1 ml) se le añadió cloruro de a-furoílo (29 mg, 0,22 mmol) a 0 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto en bruto, que se purificó por cromatografía con DCM:MeOH (50:1) para proporcionar el Compuesto 2 en forma de un sólido de color blanco (82%). 1H RMN (CDCls, 400 MHz) 8: 7,99 (s, 1H, Ph-H), 7,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,64-7,52 (m, 3H), 7,43 (s, 1H), 7,34-7,28 (m, 5H, Ph-H), 7,17 (d, 1H), 6,73 (t, 1H, NH), 6,51-6,50 (m, 1H), 6,14 (s, 1H, CH=C), 5,60 (t, 1H, NH), 4,64 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 4,57 (s a, 1H, OH), 4,48 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,50-3,48 (m, 1H), 3,27-3,24 (m, 2H), 3,01 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,73 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,51-1,15 (m, 20H), 1,03 (s, 3H, CH3); LR-Masa (ESI) m/z: 703,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 3:

Usando un procedimiento coherente con el procedimiento descrito para la preparación del Compuesto 1, y usando clorhidrato de 1-aminopropano en lugar de clorhidrato de etilamina, se proporcionó el Compuesto 3 en forma de un sólido de color blanco (68%). 1H RMN (CDCls, 400 MHz) 8: 7,99 (s, 1H, Ph-H), 7,79 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,60-7,52 (m, 2H), 7,41 (s, 1H), 7,38-7,29 (m, 5H, Ph-H), 6,64 (t, 1H, NH), 6,17 (t, 1H, NH), 6,11 (s, 1H, CH=C), 4,66 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,49 (s a, 1H, OH), 3,50-3,45 (m, 1H), 3,26-3,23 (m, 2H), 2,98 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,67 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,51 1,19 (m, 19H), 1,01 (s, 3H, CH3), 0,89 (t, 3H); LR-Masa (ESI) m/z: 623,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 4:

Usando un procedimiento idéntico al descrito para la preparación del Compuesto 2, y usando el Compuesto 3 en lugar del Compuesto 1, se proporcionó el Compuesto 4 en forma de un sólido de color blanco (75 %). 1H RMN (CDCb, 400 MHz) 8 : 7,95 (s, 1H, Ph-H), 7,82 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,58-7,50 (m, 3H), 7,43 (s, 1H), 7,34-7,28 (m, 5H, Ph-H), 7,18 (d, 1H), 6,91 (t, 1H, NH), 6,51-6,50 (m, 1H), 6,12 (s, 1H, CH=C), 5,63 (t, 1H, NH), 4,65 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 4,57 (s a, 1H, OH), 3,50-3,48 (m, 1H), 3,25-3,20 (m, 2H), 3,02 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,75 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,51-1,15 (m, 19H), 1,05 (s, 3H, CH3), 0,87 (t, 3H); LR-Masa (ESI) m/z: 717,4 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 6:

Usando un procedimiento idéntico al descrito para el Compuesto 1, y usando bencilamina en lugar de clorhidrato de etilamina; seguido de un procedimiento idéntico al descrito para el Compuesto 2, se proporcionó el Compuesto 6 en forma de un sólido de color blanco (61 %). 1H RMN (CDCb, 400 MHz) 8 : 7,99 (s, 1H, Ph-H), 7,58 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,57-7,50 (m, 3H), 7,42 (s, 1H), 7,36-7,26 (m, 10H, Ph-H), 7,13 (d, 1H), 6,54 (t, 1H, NH), 6,51-6,49 (m, 1H), 6,14 (s, 1H, CH=C), 5,83 (t, 1H, NH), 4,65 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 4,54 (s a, 1H, OH), 4,48 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,50-3,45 (m, 1H), 3,01 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,74 (d, J = 12 Hz, 1H), 1,97-1,15 (m, 17H), 1,06 (s, 3H, CH3); LR-Masa (ESI) m/z: 765,4 [M H]+; 787,4 [M Na]+.

Síntesis del Compuesto 5:

Usando un procedimiento idéntico al descrito para el Compuesto 6, y usando cloruro de propanoílo en lugar de cloruro de a-furoílo, se proporcionó el Compuesto 5 en forma de un sólido de color blanco (55%). 1H RMN (CDCb, 400 MHz) 8: 7,96 (s, 1H, Ph-H), 7,78 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,56-7,50 (m, 2H), 7,35 (s, 1H), 7,34-7,28 (m, 10H, Ph-H), 6,52-6,55 (t, 1H, NH), 6,13 (s, 1H, CH=C), 5,67-5,64 (t, 1H, NH), 4,65 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 4,44-4,33 (m, 2H), 3,50-3,45 (m, 1H), 2,99 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 2,69 (d, J = 15,7 Hz, 1H), 2,25 (t, 2H), 1,97-1,07 (m, 20H), 1,05 (s, 3H, CH3); LR-Masa (ESI) m/z: 727,4 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 7:

Usando un procedimiento idéntico al descrito para la preparación del Compuesto 1, y usando clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina en lugar de clorhidrato de etilamina y el Compuesto 1-Da en lugar del Compuesto 1-Ca, se proporcionó el Compuesto 7 en forma de un sólido de color blanco (46%). 1H RMN (cfe-DMSO, 400 MHz) 8 : 7,53-7,48 (m, 4H, Ph-H), 7,45 (s, 1H), 7,39-7,35 (m, 1H, Ph-H), 6,13 (s, 1H, CH=C), 4,78 (s, 1H, OH), 3,67 (s, 3H, OCH3), 3,58 (s, 1H, OH), 3,16 (m, 1H), 3,0 (d, J = 16 Hz, 1H), 2,74 (d, J = 16 Hz, 1H), 2,71 (s, 3H, NCH3), 2,36-1,29 (m, 13H), 1,25 (s, 3H, CH3), 1,04 (s, 3H, CH3); LR-Masa (ESI): m/z 492,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 8:

Usando un procedimiento idéntico al descrito para la preparación del Compuesto 2, y usando el Compuesto 7 en lugar del Compuesto 1, se proporcionó el Compuesto 8 en forma de un sólido de color blanco (71%). 1H RMN (cfe-DMSO, 400 MHz) 8 : 8,18 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,75-7,50 (m, 7H), 6,79 (s, 1H), 6,20 (s, 1H, CH=C), 4,75 (s, 1H, OH), 3,35 (s, 3H, OCH3), 3,0 (d, J = 16 Hz, 1H), 2,97 (m, 1H), 2,74 (d, J = 16 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H, NCH3), 2,38-1,29 (m, 13H), 1,27 (s, 3H, CH3), 1,09 (s, 3H, CH3); LR-Masa (ESI): m/z 586,2 [M H]+.

Síntesis del compuesto 2-B:

El Compuesto 2-A disponible en el mercado (4,1 g, 10 mmol) se disolvió en metanol (60 ml) y después se añadió gota a gota ácido peryódico (4,5 g en 60 ml de agua, 20 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El metanol se concentró y se añadió H2O (100 ml). El precipitado se filtró, se lavó con agua (15 x 3 ml) y se secó al aire para dar el compuesto 2-B (3,2 g) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMs O) 8: 12,47 (s, 1H), 7,26 (dd, J = 10,2, 1,2 Hz, 1H), 6,28 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,63 (ddd, J = 48,5, 9,6, 6,7 Hz, 1H), 5,33 (dd, J = 3,8, 1,7 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,17 - 4,09 (m, 1H), 3,34 (s, 1H), 2,84 (ddd, J = 11,1, 7,1,4,1 Hz, 1H), 2,26 - 2,16 (m, 1H), 1,49 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,86 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 397,1 [M H]+.

Síntesis del compuesto 2-C:

El Compuesto 2-B (1,9 g, 5 mmol) se disolvió en metanol (200 ml) y se añadió Pb/C(200 mg). Después de agitar a temperatura ambiente en atmósfera de H2 durante 1 día. La solución se filtró a través de una capa de Celite y después se concentró a presión reducida para dar 2-C (1,8 g) para su uso posterior sin purificación. 1H RMN (400 MHz, DMs O) 8: 5,20 - 4,99 (m, 1H), 4,93 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 4,21 (m, 1H), 2,89 - 2,77 (m, 1H), 2,56 (m, J = 15,9 Hz, 1H), 1,24 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,86 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 401,2 [M H]+

Síntesis del compuesto 2-D:

El Compuesto 2-C (1,6 g) en ácido acético (40 ml) se trató sucesivamente con bromuro de hidrógeno 6,6 M en ácido acético (1,6 ml) y una solución de bromo en ácido acético (4,5 ml). Después de agitar a temperatura ambiente durante 40 min. La dilución con agua dio 2-D en bruto (2,1 g). 1H RMN (300 MHz, DMSO) 8: 5,32 - 4,96 (m, 3H), 4,69 (m, 2H), 4,18 (m, 1H), 3,07 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,81 (s, 1H), 1,31 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,84 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 559,1 [M H]+.

Síntesis del compuesto 2-E:

El Compuesto 2-D (2,0 g) se añadió a una suspensión agitada vigorosamente de carbonato de calcio (1,1 g) y bromuro de litio anhidro (0,8 g) en dimetilacetamida (17 ml) mantenida a 100 °C en una atmósfera de nitrógeno. Después de 3 h, la mezcla enfriada se vertió en un exceso de ácido clorhídrico diluido, la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto en bruto se purificó por cromatografía para dar el compuesto 2-E en forma de un sólido de color blanco para dar un sólido (0,6 g, 43%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 5,85 (s, 1H), 5,62 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 5,27 - 5,19 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 3,07 - 2,78 (m, 3H), 2,70 - 2,58 (m, 1H), 2,42 -2,03 (m, 6H), 1,45 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,89 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 397,1 [M H]+.

Síntesis del compuesto 2-F:

El Compuesto 2-E (0,5 g) se disolvió en tolueno seco (15 ml) y formiato de metilo (2 ml). Después, se añadió NaH (900 mg, 20 mmol, dispersión al 60% en aceite mineral). Después de agitar a temperatura ambiente durante 4 h, se añadió HCl 1 N (120 ml) y la mezcla se extrajo varias veces con EtOAc. El disolvente se secó y se retiró para dar 0,6 g de 2-F en forma de una espuma de color amarillo para su uso posterior sin purificación. LR-Masa (ESI) m/z: 425,3 [M H]+.

Síntesis del compuesto 2-G:

El Compuesto 2-F (0,50 g) se disolvió en AcOH (15 ml) y H2O (3 ml) y se añadió fenilhidrazina (0,14 g). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Se añadió agua fría (100 ml), el precipitado se filtró, se lavó con H2O (10 x 3 ml) y se secó al aire para dar el compuesto 2-G (0,44 g) en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO) 6: 7,61 (s, 1H), 7,58 - 7,49 (m, 4H), 7,42 (m, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,33 - 5,20 (m, 2H), 4,16 (s, 1H), 2,38 - 2,29 (m, 1H), 2,10 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 1,71 (c, J = 11,5 Hz, 1H), 1,53 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 1,26 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,87 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 497,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 2-Ha:

A una solución del Compuesto 2-G (400 mg) y TEA (300 ml) en DCM seco (10 ml) se le añadió cloruro de a-furoílo (200 mg) a 0 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía con DCM : MeOH (50 : 1) para dar 2-Ha en forma de un sólido de color blanco (82%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 6: 8,01 - 7,98 (m, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,60 - 7,51 (m, 5H), 7,45 (m, 1H), 7,16 (dd, J = 3,5, 0,6 Hz, 1H), 6,70 (dd, J = 3,5, 1,7 Hz, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,38 (dd, J = 21,7, 8,8 Hz, 2H), 4,26 (s, 1H), 1,29 (s, 3H), 1,23 (s, 2H), 1,11 (s, 3H), 0,92 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 591,2 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 9 (compuesto de la presente invención):

Una solución del Compuesto 2-Ha (58 mg) en CH2CI2 (1 ml) se trató con (COCl)2

(20 |jl). Después de agitar durante 1 h, la solución se evaporó al vacío y después se disolvió en DCM seco (1 ml), Se añadió clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (20 mg) a 0 °C en atmósfera de N2 seguido de Et3N (50 jl). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía con DCM : MeOH (50 : 1) para dar el Compuesto 9 en forma de un sólido de color blanco (42%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 7,99 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,61 - 7,51 (m, 4H), 7,45 (m, 1H), 7,16 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 6,70 (dd, J = 3,4, 1,7 Hz, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,47 - 5,28 (m, 2H), 4,27 (s, 1H), 3,52 (s, 3H), 3,11 (s, 3H), 1,29 (s, 3H), 1,11 (s, 3H), 0,86 (d, J = 6,4 Hz, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 634,3 [M H]+. La Fig. 6(C) muestra una comparación del Compuesto 9 con VSG22 en un ensayo indicador de inducción.

Síntesis Alternativa del Compuesto 1-A:

Se disolvió Cortisol (3,6 g, 10 mmol) en EtOH (60 ml) y después se añadió gota a gota ácido peryódico (3,0 g en 60 ml de agua, 20 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El EtOH se concentró y se añadió H2O (100 ml). El precipitado se filtró, se lavó con agua fría (15 x 3 ml) y se secó al aire para dar el compuesto 1-A (3,0 g) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 812,22 (s, 1H), 5,55 (s, 1H), 4,77 (s, 1H), 4,40 - 4,08 (m, 2H), 1,37 (s, 3H), 0,88 (s, 3H).

Síntesis Alternativa del Compuesto 1-B:

El Compuesto 1-A (1,7 g, 5 mmol) se disolvió en THF seco (15 ml) y formiato de metilo (2 ml). Después, se añadió NaH (900 mg, 20 mmol, dispersión al 60% en aceite mineral). Después de agitar a temperatura ambiente durante 4 h, se añadió HCl 1 N (120 ml) y la mezcla se extrajo varias veces con EtOAc. El disolvente se secó y se retiró para dar 1,8 g del compuesto 1-B en forma de una espuma de color amarillo para su uso posterior sin purificación. LR-Masa (ESI) m/z: 375,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 1-Cb:

El Compuesto 1-B (1,8 g, 5 mmol) se disolvió en AcOH (15 ml), y se añadió (3-nitrofenil)hidrazina (0,75 g, 5 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Se añadió agua fría (100 ml), el precipitado se filtró, se lavó con H2O (10 x 3 ml) y se secó al aire para dar el compuesto 1-Cb (1,1 g) en forma de un sólido de color amarillo. LR-Masa (ESI) m/z: 494,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 1-Cc:

Usando (4-nitrofenil)hidrazina y un procedimiento idéntico al descrito para la preparación de 1-Cb se dio 1-Cc en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 8,36 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,61 (s, 1H), 6,32 (s, 1H), 4,28 (m, 3H), 1,26 (s, 3H), 0,90 (d, J = 5,7 Hz, 4H). LR-Masa (ESI) m/z: 494,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 13:

A una solución del compuesto 1-Cb (100 mg, 0,2 mmol), y TEA (0,056 ml, 0,4 mmol) en DCM seco (1 ml) se le añadió cloruro de a-furoílo (29 mg, 0,22 mmol) a 0 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía con DCM : MeOH (50 : 1) para dar el compuesto 13 en forma de un sólido de color amarillo (68%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 8,27 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 8,25 - 8,19 (m, 1H), 7,99 (m, 2H), 7,81 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,37 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 3,5, 1,7 Hz, 1H), 6,29 (s, 1H), 4,41 (m, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,01 (s, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 588,2 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 14:

A una solución del compuesto 1-Cc (100 mg, 0,2 mmol), y TEA (0,056 ml, 0,4 mmol) en DCM seco (1 ml) se añadió le cloruro de a-furoílo (29 mg, 0,22 mmol) a 0 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía con DCM : MeOH (50 : 1) para dar el compuesto 14 en forma de un sólido de color amarillo (71%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 8,37 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 7,98 (m, 1H), 7,82 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,37 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 3,6, 1,7 Hz, 1H), 6,34 (s, 1H), 4,40 (m, 3H), 1,26 (s, 3H), 1,01 (s, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 588,2 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 15:

El Compuesto 13 (290 mg, 0,5 mmol) se disolvió en DMF seca (4 ml), y se añadieron DMAP (183 mg, 1,5 mmol), Bop (265 mg, 0,6 mmol) y clorhidrato de etilamina (50 mg, 0,6 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, se añadió H2O (20 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto en bruto se purificó por cromatografía con DCM - MeOH (20:1) para dar el compuesto 15 en forma de un sólido de color amarillo (75%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 8,29 - 8,10 (m, 3H), 7,97 (t, J = 8,7 Hz, 2H), 7,81 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,33 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 7,8, 5,6 Hz, 4H), 7,23 - 7,17 (m, 1H), 6,68 (dd, J = 3,5, 1,7 Hz, 1H), 6,28 (s, 1H), 4,52 - 4,24 (m, 4H), 1,26 (s, 3H), 0,92 (s, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 677,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 16:

El Compuesto 14 (290 mg, 0,5 mmol) se disolvió en DMF seca (4 ml), y se añadieron DMAP (183 mg, 1,5 mmol), Bop (265 mg, 0,6 mmol) y clorhidrato de etilamina (50 mg, 0,6 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, se añadió H2O (20 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto en bruto se purificó por cromatografía con DCM - MeOH (20:1) para dar el compuesto 16 en forma de un sólido de color amarillo (67 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 8,36 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 8,13 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,81 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,35 - 7,17 (m, 6H), 6,67 (dd, J = 3,5, 1,7 Hz, 1H), 6,33 (s, 1H), 4,50 - 4,23 (m, 4H), 1,26 (s, 3H), 0,92 (s, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 677,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 17:

El Compuesto 15 (68 mg, 0,1 mmol) se disolvió en MeOH (4 ml) y se añadieron H2O (1 ml), Fe (56 mg, 1,0 mmol) y NH4CI (53 mg, 1,0 mmol). Después de agitar a reflujo durante 6 h, la mezcla se filtró, se lavó con EtOAc y se concentró a presión reducida. El producto en bruto se purificó por cromatografía con DCM - MeOH (20:1) para dar el compuesto 17 en forma de un sólido de color blanco (75%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8 : 8,19 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,42 - 7,22 (m, 6 H), 7,17 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,73 (dd, J = 3,7, 1,6 Hz, 2H), 6,65 - 6,56 (m, 2H), 6,21 (s, 1H), 5,43 (s, 2H), 4,55 - 4,31 (m, 4H), 1,30 (s, 3H), 0,98 (s, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 647,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 18:

El Compuesto 16 (68 mg, 0,1 mmol) se disolvió en MeOH (4 ml) y se añadieron H2O (1 ml), Fe (56 mg, 1,0 mmol) y NH4Cl (53 mg, 1,0 mmol). Después de agitar a reflujo durante 6 h, la mezcla se filtró, se lavó con EtOAc y se concentró a presión reducida. El producto en bruto se purificó por cromatografía con DCM - MeOH (20:1) para dar el compuesto 18 en forma de un sólido de color blanco (79%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8 : 8,19 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,42 - 7,22 (m, 7H), 7,12 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,79 - 6,61 (m, 3H), 6,05 (s, 1H), 5,35 (s, 2H), 4,52 - 4,31 (m, 4H), 1,30 (s, 3H), 0,98 (s, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 647,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 19:

A una solución del compuesto 17 (65 mg, 0,1 mmol), y TEA (0,028 ml, 0,2 mmol) en DCM seco (1 ml) se le añadió cloruro de ciclopropanocarbonilo (13 mg, 0,12 mmol) a 0 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía con DCM : MeOH (50 : 1) para dar el compuesto 19 en forma de un sólido de color amarillo (88 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8 : 10,40 (s, 1H), 8,14 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 7,97 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,41 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,31 - 7,11 (m, 6 H), 6,67 (dd, J = 3,5, 1,7 Hz, 1H), 6,20 (s, 1H), 4,48 - 4,26 (m, 4H), 1,25 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,83 - 0,80 (m, 4H). LR-Masa (ESI) m/z: 715,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 10:

A una solución del compuesto 18 (65 mg, 0,1 mmol), y TEA (0,028 ml, 0,2 mmol) en DCM seco (1 ml) se le añadió cloruro de ciclopropanocarbonilo (13 mg, 0,12 mmol) a 0 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía con DCM : MeOH (50 : 1) para dar el compuesto 10 en forma de un sólido de color amarillo (82 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 10,36 (s, 1H), 8,14 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,72 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,39 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,29 - 7,19 (m, 4H), 6,67 (dd, J = 3,4, 1,7 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 4,49 - 4 ,24 (m, 4H), 1,24 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,84 - 0,79 (m, 4H). LR-Masa (ESI) m/z: 715,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 11:

A una solución del compuesto 17 (65 mg, 0,1 mmol), y TEA (0,028 ml, 0,2 mmol) en DCM seco (1 ml) se le añadió isocianatoetano (14 mg, 0,2 mmol) a 0 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía con DCM : MeOH (50 : 1) para dar el compuesto 11 en forma de un sólido de color amarillo (85 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 8,68 (s, 1H), 8,14 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,38 - 7,17 (m, 8H), 6,99 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 13,2, 7,8 Hz, 2H), 5,76 (s, 1H), 4,49 - 4,27 (m, 4H), 3,11 (m, 2H), 1,25 (s, 3H), 1,06 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,93 (s, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 718,3 [M H]+.

Síntesis del Compuesto 12:

A una solución del compuesto 18 (65 mg, 0,1 mmol), y TEA (0,028 ml, 0,2 mmol) en DCM seco (1 ml) se le añadió isocianatoetano (14 mg, 0,2 mmol) a 0 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía con DCM : MeOH (50 : 1) para dar el compuesto 12 en forma de un sólido de color amarillo (84 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 8: 8,68 (s, 1H), 8,14 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,38 - 7,17 (m, 8H), 6,99 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 13,2, 7,8 Hz, 2H), 5,76 (s, 1H), 4,49 - 4,27 (m, 4H), 3,11 (m, 2H), 1,25 (s, 3H), 1,06 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,93 (s, 3H). LR-Masa (ESI) m/z: 718,3 [M H]+.

Las Figuras 15 y 16 muestran los datos de actividad relacionados con los Compuestos VSG111, VSG112 y VSG113 (respectivamente, también Compuestos 10, 11 y 12). Véase la Figura 15, que muestra las actividades de los glucocorticoides VSG111, VSG112 y VSG113 (datos representados como porcentaje de DEX; conc. de esteroide 10 nM); y la Figura 16, que muestra una comparación de VSG111 con ZK 216348 (véase Schacke, H., et al, Proc Natl Acad Sci USA, Jan 6; 101(1):227-32 en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14694204) y AL438 (véase Coghlan, M.J., et al. Mol Endocrinol., 2003 May; 17(5):860-9 en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12586843) (datos repesentados como pocentaje de DEX.)

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la reivindicación 1, y un vehículo o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

3. Un método ex-vivo para modular la actividad de un receptor de glucocorticoides en una muestra biológica, comprendiendo el método poner en contacto el receptor de glucocorticoides con un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o composición de acuerdo con la reivindicación 2.

4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o composición de acuerdo con la reivindicación 2 para su uso como un medicamento.

5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o composición de acuerdo con la reivindicación 2 para su uso en un método para tratar o reducir la gravedad de una enfermedad inflamatoria en un paciente.

6. El compuesto o composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la enfermedad comprende asma, artritis, lupus, enfermedad de Crohn, enfermedades inflamatorias del intestino, enfermedad celiaca, glomerulonefritis, acné común, leucemia o cáncer pancreático; preferiblemente asma o artritis.