ES2734494T3 - Métodos y usos para el diagnóstico de una lesión renal y de una insuficiencia renal - Google Patents

Abstract

Un método para evaluar el estado renal en un paciente con sepsis, que comprende: realizar uno o más ensayos configurados para detectar la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 y, opcionalmente, uno o más biomarcadores adicionales de beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa en una muestra de líquido corporal obtenida del paciente con sepsis para proporcionar un resultado de ensayo; y correlacionar el resultado (o resultados) del ensayo con el estado renal del paciente con sepsis, en donde dicha etapa de correlación comprende correlacionar el resultado (o resultados) del ensayo con uno o más de estratificación del riesgo y diagnóstico de insuficiencia renal aguda (IRA) del paciente con sepsis, o en donde dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de uno o más cambios futuros en el estado renal al paciente con sepsis basándose en el resultado (o resultados) del ensayo, en donde dichos uno o más cambios futuros en el estado renal comprenden futura insuficiencia renal aguda (IRA).

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos y usos para el diagnóstico de una lesión renal y de una insuficiencia renal

La presente solicitud reivindica la prioridad de la Solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos 61/568.447, presentada el 8 de diciembre de 2011, y de la Solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos 61/593.561, presentada el 1 de febrero de 2012.

Antecedentes de la invención

La siguiente discusión de los antecedentes de la invención se proporciona simplemente para ayudar al lector a comprender la invención y no se admite que describa o constituya técnica anterior de la presente invención.

El término "sepsis" se ha utilizado para describir una diversidad de afecciones clínicas relacionadas con manifestaciones sistémicas de inflamación acompañadas de una infección. Debido a las similitudes clínicas con respuestas inflamatorias secundarias a etiologías no infecciosas, la identificación de la sepsis ha sido un problema de diagnóstico particularmente problemático. Recientemente, el American College of Chest Physicians y la American Society of Critical Care Medicine (Bone et al., Chest 101: 1644-53, 1992) publicaron las definiciones para el "Síndrome de Respuesta Inflamatoria Sistémica" (o "SRIS"), que se refiere generalmente a una respuesta sistémica extensa frente a una agresión infecciosa o no infecciosa, y a los síndromes relacionados "sepsis" "sepsis grave" y "choque séptico", y se extiende al síndrome de disfunción orgánica múltiple ("SDOM"). Las definiciones descritas continuación están destinadas a cada una de estas frases para los fines de la presente solicitud.

"SRIS" se refiere a una afección que presenta dos o más de los siguientes:

una temperatura > 38 °C o < 36 °C;

una frecuencia cardiaca de > 90 latidos por minuto (taquicardia);

^{una frecuencia respiratoria de > 20 respiraciones por minuto (taquipnea) o una PaCO} 2 ^{< 4,3 kPa; y}

un número de glóbulos blancos > 12.000 por mm3, < 4.000 por mm3, o > 10 % de formas inmaduras (bandas).

"Sepsis" se refiere a SRIS, acompañado además de una infección clínicamente evidente o confirmada desde el punto de vista microbiológico. Esta infección puede ser bacteriana, fúngica, parasitaria o vírica.

"Sepsis grave" se refiere a un subconjunto de pacientes con sepsis, en los que la sepsis se acompaña adicionalmente de una hipoperfusión de órganos que se manifiesta al menos por un signo de disfunción orgánica, tal como hipoxemia, oliguria, acidosis metabólica o función cerebral alterada.

"Choque séptico" se refiere a un subconjunto de pacientes con sepsis, en los que la sepsis grave está acompañada además de hipotensión, que se manifiesta por una presión arterial sistólica < 90 mm Hg o el requisito de una intervención farmacéutica para mantener la presión arterial.

El SDOM (síndrome de disfunción orgánica múltiple) es la presencia de una función orgánica alterada en un paciente que está gravemente enfermo, por lo que la homeostasis no se puede mantener sin intervención. El SDOM primario es el resultado directo de una agresión bien definido en la cual la disfunción orgánica se produce temprano, y puede ser directamente atribuible a la agresión en sí. El SDOM secundario se presenta como consecuencia de la respuesta del hospedador y se identifica dentro del contexto del SRIS.

Una respuesta inflamatoria sistémica que conduce a un diagnóstico de SRIS puede estar relacionada tanto con la infección como con numerosas etiologías no infecciosas, que incluyen quemaduras, pancreatitis, traumatismo, golpe de calor y neoplasia. Si bien, conceptualmente, puede ser relativamente simple distinguir entre SIRS por sepsis y no séptica, no se han descrito herramientas de diagnóstico para distinguir de manera inequívoca estas afecciones relacionadas. Véase, por ejemplo, Llewelyn y Cohen, Int. Care Med. 27: S10-S32, 2001. Por ejemplo, debido a que más del 90 % de los casos de sepsis implican infección bacteriana, el "criterio de referencia" para confirmar la infección ha sido el cultivo microbiano a partir de sangre, orina, líquido pleural, líquido cefalorraquídeo, líquido peritoneal, líquido sinovial, esputo u otras muestras de tejido. Sin embargo, se ha informado que dicho cultivo, no confirmó el 50 % o más de pacientes que presentan pruebas clínicas sólidas de sepsis. Véase, por ejemplo, Jaimes et al., Int. Care Med 29: 1368-71, publicado electrónicamente el 26 de junio de 2003.

El desarrollo de lesión renal aguda (LRA) durante la sepsis aumenta la morbilidad de los pacientes, predice una mayor mortalidad, tiene un efecto significativo en múltiples funciones de órganos, se asocia con una duración aumentada de la estancia en la unidad de cuidados intensivos y, por lo tanto, consume considerables recursos sanitarios. Varios autores han señalado que, en comparación con la LRA de origen no séptico, la LRA séptico se caracteriza por una fisiopatología distinta y, por lo tanto, precisa un enfoque distinto. La LRA relacionada con sepsis se ha descrito en términos de mediadores pro- y antinflamatorios elevados y desequilibrados (la denominada "hipótesis de concentración máxima"), asociada a una disfunción endotelial grave y a una cascada de coagulación alterada actúan de forma sinérgica para inducir lesión renal mediada química y biológicamente. Los principales impedimentos para progresar en la comprensión, el diagnóstico precoz y la aplicación de tratamientos apropiados en la LRA inducida por sepsis incluyen una información histopatológica limitada, pocos modelos animales que imiten de forma estrecha la sepsis humana y una relativa escasez de herramientas de diagnóstico específicas. Véanse, por ejemplo, Zarjou y Agarwal, J. Am. Soc. Nephrol. 22: 999-1006, 2011; Ronco et al., Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 3: 531-44, 2008.

Basu et al. (2011) describen biomarcadores séricos candidatos para lesiones renales graves asociadas a choque séptico (Basu et al. (2011) "Identification of candidate serum biomarkers for severe septic shock-associated kidney injury via microarray" Critical Care 15: R: 273, pág. 1-11). Bagshaw et al. (2007) tratan los biomarcadores urinarios en la lesión renal aguda séptica (Bagshaw et al. (2007) "Urinary biomarkers in septic acute kidney injury" Intensive Care Med. 33: 1285-1296). Los documentos WO 2011/097539 A1 y WO2011/075744 A1 describen métodos y composiciones para el diagnóstico y pronóstico de la lesión renal y la insuficiencia renal.

Estas limitaciones subrayan la necesidad de mejores métodos para evaluar a los pacientes con sepsis, para identificar a los que tienen mayor riesgo de padecer LRA, particularmente en las fases tempranas y subclínicas, pero también en fases posteriores, cuando puede tener lugar la recuperación y reparación del riñón. Adicionalmente, existe la necesidad de identificar mejor a los pacientes con riesgo de tener un LRA.

Breve sumario de la invención

Es un objeto de la divulgación proporcionar métodos y composiciones para evaluar la función renal en un paciente con sepsis al que se ha diagnosticado una sepsis. Como se describe en el presente documento, la medición de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste en proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7, beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa (denominadas en el presente documento "marcador de lesión renal") se pueden usar para el diagnóstico, pronóstico, estratificación del riesgo, estadificación, seguimiento, categorización y determinación de otros diagnósticos y regímenes de tratamiento en pacientes con sepsis.

Los marcadores de lesión renal de la presente invención pueden usarse, de forma individual o en paneles que comprendan una pluralidad de marcadores de lesión renal, para la estratificación del riesgo (es decir, para identificar pacientes con sepsis con riesgo de una futura lesión de la función renal, para la progresión futura a una función renal reducida, para la progresión futura a LRA, para futuras mejoras en la función renal, etc.); para el diagnóstico de una enfermedad existente (es decir, para identificar pacientes con sepsis que han padecido una lesión de la función renal, los que han progresado a función renal reducida, los que han progresado a IRA, etc.); para el seguimiento del deterioro o mejora de la función renal; y para predecir un futuro desenlace médico, tal como una mejora o empeoramiento de la función renal, una disminución o aumento del riesgo de mortalidad, una disminución o aumento del riesgo de que un paciente con sepsis precise una terapia de depuración extrarrenal (es decir, hemodiálisis, diálisis peritoneal, hemofiltración y/o trasplante renal, una disminución o aumento del riesgo de que un paciente con sepsis se recupere de una lesión de la función renal, una disminución o aumento del riesgo de que un paciente con sepsis se recupere de una IRA, una disminución o aumento del riesgo de que un paciente con sepsis progrese a una enfermedad renal terminal, una disminución o aumento del riesgo de que un paciente con sepsis progrese a una insuficiencia renal crónica, una disminución o aumento del riesgo de que un paciente con sepsis experimente rechazo de un riñón trasplantado, etc.

En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un método para evaluar el estado renal en un paciente con sepsis, que comprende:

realizar uno o más ensayos configurados para detectar la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 y, opcionalmente, uno o más biomarcadores adicionales de beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa en una muestra de líquido corporal obtenida del paciente con sepsis para proporcionar un resultado de ensayo; y

correlacionar el resultado (o resultados) del ensayo con el estado renal del paciente con sepsis,

en donde dicha etapa de correlación comprende correlacionar el resultado (o resultados) del ensayo con uno o más de estratificación del riesgo y diagnóstico de insuficiencia renal aguda (IRA) del paciente con sepsis, o

en donde dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de uno o más cambios futuros en el estado renal al paciente con sepsis basándose en el resultado (o resultados) del ensayo,

en donde dichos uno o más cambios futuros en el estado renal comprenden futura insuficiencia renal aguda (IRA).

En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a un uso de la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 y, opcionalmente, uno o más biomarcadores adicionales de beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa para la evaluación de una lesión renal aguda, en donde la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 se mide en una muestra de líquido corporal obtenida de un paciente con sepsis.

Estos métodos comprenden realizar un método de ensayo que está configurado para detectar uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste en proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7, beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa en una muestra de líquido corporal obtenida del paciente con sepsis. El resultado (o resultados) del ensayo, por ejemplo, la concentración (o concentraciones) medida de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste en proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7, beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y la antileucoproteinasa se correlaciona/correlacionan con el estado renal del paciente con sepsis. Esta correlación con el estado renal puede incluir la correlación del resultado (o resultados) del ensayo con uno o más de la estratificación del riesgo, diagnóstico, pronóstico, estadificación, clasificación y seguimiento del paciente con sepsis como se describe en el presente documento. Por lo tanto, el método utiliza uno o más marcadores de lesión renal descritos en el presente documento para la evaluación de una lesión renal en un paciente con sepsis.

En determinadas realizaciones, los métodos para evaluar el estado renal descrito en el presente documento son métodos para la estratificación del riesgo del paciente con sepsis; es decir, la asignación de una probabilidad de uno o más cambios futuros en el estado renal al paciente con sepsis. En estas realizaciones, el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con uno o más de tales cambios futuros. Las siguientes son realizaciones preferentes de la estratificación del riesgo.

En realizaciones preferentes de la estratificación del riesgo, estos métodos comprenden la determinación del riesgo de un paciente con sepsis de una futura lesión de la función renal, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con una probabilidad de tal futura lesión de la función renal. Por ejemplo, cada concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión renal "positivo", se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de padecer una futura lesión de la función renal cuando la concentración medida está por encima del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión renal "negativo", se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de padecer una futura lesión de la función renal cuando la concentración medida está por debajo del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.

En otras realizaciones preferentes de la estratificación del riesgo, estos métodos comprenden la determinación del riesgo de un paciente con sepsis de una futura función renal reducida, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con una probabilidad de tal función renal reducida. Por ejemplo, cada una de las concentraciones medidas puede compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión renal "positivo", se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de padecer una futura función renal reducida cuando la concentración medida está por encima del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión renal "negativo", se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de una futura función renal reducida cuando la concentración medida está por debajo del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.

En todavía otras realizaciones preferentes de la estratificación del riesgo, estos métodos comprenden la determinación de la probabilidad de un paciente con sepsis de una futura mejora de la función renal, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con una probabilidad de tal futura mejora de la función renal. Por ejemplo, cada concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión renal "positivo", se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de una futura mejora de la función renal cuando la concentración medida está por debajo del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral. Para un marcador de lesión renal "negativo", se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de una futura mejora de la función renal cuando la concentración medida está por encima del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral.

En aún otras realizaciones preferentes de la estratificación del riesgo, estos métodos comprenden la determinación del riesgo de un paciente con sepsis de progresión a IRA, y el resultado (o resultados) se correlaciona/correlacionan con una probabilidad de tal progresión a IRA. Por ejemplo, cada concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión renal "positivo", se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de progresión a IRA cuando la concentración medida está por encima del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión renal "negativo", se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de progresión a IRA cuando la concentración medida está por debajo del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.

Y en otras realizaciones preferentes de la estratificación del riesgo, estos métodos comprenden la determinación del riesgo de un desenlace de un paciente con sepsis, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con una probabilidad de que se produzca un desenlace clínico relacionado con una lesión renal padecida por el paciente con sepsis. Por ejemplo, cada concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador de lesión renal "positivo", una probabilidad aumentada de uno o más de: lesión renal aguda, progresión a una fase de empeoramiento de la LRA, mortalidad, una necesidad de una terapia de depuración extrarrenal, una necesidad de retirada de toxinas renales, enfermedad renal terminal, insuficiencia cardiaca, ictus, infarto de miocardio, progresión a enfermedad renal crónica, etc., se asigna al paciente con sepsis cuando la concentración medida está por encima del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión renal "negativo", una probabilidad aumentada de uno o más de: lesión renal aguda, progresión a una fase de empeoramiento de la LRA, mortalidad, una necesidad de una terapia de depuración extrarrenal, una necesidad de retirada de toxinas renales, enfermedad renal terminal, insuficiencia cardiaca, ictus, infarto de miocardio, progresión a enfermedad renal crónica, etc., se asigna al paciente con sepsis cuando la concentración medida está por debajo del umbral, con respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.

En tales realizaciones de la estratificación del riesgo, preferentemente, la probabilidad o el riesgo asignado es que un suceso de interés sea más o menos probable que se produzca dentro de los 180 días a partir del momento en que se obtiene la muestra de líquido corporal del paciente con sepsis. En realizaciones particularmente preferentes, probabilidad o riesgo asignado se refiere a un suceso de interés que se produce dentro de un período más corto, tal como 18 meses, 120 días, 90 días, 60 días, 45 días, 30 días, 21 días, 14 días, 7 días, 5 días, 96 horas, 72 horas, 48 horas, 36 horas, 24 horas, 12 horas o menos. Un riesgo a las 0 horas del momento en que se obtiene la muestra de líquido corporal del paciente con sepsis es equivalente al diagnóstico de una afección actual.

En otras realizaciones, los métodos para evaluar el estado renal descrito en el presente documento son métodos para el diagnóstico de una lesión renal en un paciente con sepsis; es decir, evaluar si un paciente con sepsis ha padecido o no una lesión de la función renal, función renal reducida o IRA. En estas realizaciones, el resultado (o resultados) del ensayo, por ejemplo, la concentración (o concentraciones) medida de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste en proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7, beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y la antileucoproteinasa se correlaciona/correlacionan con la aparición o no de un cambio en el estado renal. Las siguientes son realizaciones preferentes diagnósticos.

En realizaciones de diagnósticos preferentes, estos métodos comprenden el diagnóstico de la aparición o no aparición de una lesión de la función renal, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con la aparición o no aparición de tal lesión. Por ejemplo, cada concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador positivo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de una lesión de la función renal cuando la concentración medida está por encima del umbral (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión de la función renal (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral). Para un marcador negativo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de una lesión de la función renal cuando la concentración medida está por debajo del umbral (en relación con la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión de la función renal (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral).

En otras realizaciones de diagnósticos preferentes, estos métodos comprenden el diagnóstico de la aparición o no aparición de una función renal reducida, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con la aparición o no aparición de una lesión que provoca función renal reducida. Por ejemplo, cada concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador positivo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de una lesión que provoca función renal reducida cuando la concentración medida está por encima del umbral (en relación con la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión que provoca función renal reducida (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral). Para un marcador negativo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de una lesión que provoca función renal reducida cuando la concentración medida está por debajo del umbral (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión que provoca función renal reducida (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral).

En aún otras realizaciones de diagnósticos preferentes, estos métodos comprenden el diagnóstico de la aparición o no aparición de IRA, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con la aparición o no aparición de una lesión que provoca IRA. Por ejemplo, cada concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador positivo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de IRA cuando la concentración medida está por encima del umbral (en relación con la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de IRA (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral). Para un marcador negativo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de IRA cuando la concentración medida está por debajo del umbral (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de IRA (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral).

En todavía otras realizaciones de diagnósticos preferentes, estos métodos comprenden el diagnóstico de un paciente con sepsis como que necesita una terapia de depuración extrarrenal, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con una necesidad de una terapia de depuración extrarrenal. Por ejemplo, cada concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador positivo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de una lesión que crea una necesidad de terapia de depuración extrarrenal cuando la concentración medida está por encima del umbral (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión que crea una necesidad de terapia de depuración extrarrenal (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral). Para un marcador negativo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de una lesión que crea una necesidad de terapia de depuración extrarrenal cuando la concentración medida está por debajo del umbral (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión que crea una necesidad de terapia de depuración extrarrenal (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral).

En todavía otras realizaciones de diagnósticos preferentes, estos métodos comprenden el diagnóstico de un paciente con sepsis como que necesita un trasplante renal y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con una necesidad de trasplante renal. Por ejemplo, cada concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador positivo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de una lesión que crea una necesidad de trasplante renal cuando la concentración medida está por encima del umbral (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión que crea una necesidad de trasplante renal (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral). Para un marcador negativo, se asigna al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de aparición de una lesión que crea una necesidad de trasplante renal cuando la concentración medida está por debajo del umbral (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral); como alternativa, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar al paciente con sepsis una probabilidad aumentada de no aparición de una lesión que crea una necesidad de trasplante renal (con respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral).

En todavía otras realizaciones, los métodos para evaluar el estado renal descrito en el presente documento son métodos para el seguimiento de una lesión renal en un paciente con sepsis; es decir, evaluar si la función renal está mejorando o empeorando, o no, en un paciente con sepsis que ha padecido una lesión de la función renal, función renal reducida o IRA. En estas realizaciones, el resultado (o resultados) del ensayo, por ejemplo, la concentración (o concentraciones) medida de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste en proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7, beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y la antileucoproteinasa se correlaciona/correlacionan con la aparición o no de un cambio en el estado renal. Las siguientes son realizaciones preferentes del seguimiento.

En realizaciones de seguimiento preferentes, estos métodos comprenden seguir el estado renal en un paciente con sepsis que padece una lesión de la función renal, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal en el paciente con sepsis. Por ejemplo, la concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador positivo, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar un empeoramiento de la función renal al paciente con sepsis; como alternativa, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar una mejora de la función renal al paciente con sepsis. Para un marcador negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar un empeoramiento de la función renal al paciente con sepsis; como alternativa, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar una mejora de la función renal al paciente con sepsis.

En otras realizaciones de seguimiento preferentes, estos métodos comprenden seguir el estado renal en un paciente con sepsis que padece una función renal reducida, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal en el paciente con sepsis. Por ejemplo, la concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador positivo, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar un empeoramiento de la función renal al paciente con sepsis; como alternativa, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar una mejora de la función renal al paciente con sepsis. Para un marcador negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar un empeoramiento de la función renal al paciente con sepsis; como alternativa, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar una mejora de la función renal al paciente con sepsis.

En aún otras realizaciones de seguimiento preferentes, estos métodos comprenden seguir el estado renal en un paciente con sepsis que padece una insuficiencia renal aguda, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con la aparición o no aparición de un cambio en el estado renal en el paciente con sepsis. Por ejemplo, la concentración (o concentraciones) medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador positivo, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar un empeoramiento de la función renal al paciente con sepsis; como alternativa, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar una mejora de la función renal al paciente con sepsis. Para un marcador negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar un empeoramiento de la función renal al paciente con sepsis; como alternativa, cuando la concentración medida está por encima del umbral, se puede asignar una mejora de la función renal al paciente con sepsis.

En todavía otras realizaciones, los métodos para evaluar el estado renal descrito en el presente documento son métodos para clasificar una lesión renal en un paciente con sepsis; es decir, determinar si una lesión renal en un paciente con sepsis es prerrenal, renal intrínseca o posrenal; y/o subdividir aún más estas clases en subclases tales como lesión tubular aguda, glomerulonefritis aguda, nefritis tubulointersticial aguda, nefropatía vascular aguda o enfermedad infiltrante; y/o asignar una probabilidad de que un paciente con sepsis progrese a una fase de RIFLE particular. En estas realizaciones, el resultado (o resultados) del ensayo, por ejemplo, la concentración (o concentraciones) medida de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste en proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7, beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y la antileucoproteinasa se correlaciona/correlacionan con una clase y/o subclase particular. Las siguientes son realizaciones preferentes de la clasificación.

En las realizaciones de la clasificación preferentes, estos métodos comprenden determinar si una lesión renal en un paciente con sepsis es prerrenal, renal intrínseca o posrenal; y/o subdividir aún más estas clases en subclases tales como lesión tubular aguda, glomerulonefritis aguda, nefritis tubulointersticial aguda, nefropatía vascular aguda o enfermedad infiltrante; y/o asignar una probabilidad de que un paciente con sepsis progrese a una fase de RIFLE particular, y el resultado (o resultados) del ensayo se correlaciona/correlacionan con la clasificación de lesiones para el paciente con sepsis. Por ejemplo, la concentración medida puede compararse con un valor umbral y cuando la concentración medida está por encima del umbral, se asigna una clasificación particular; como alternativa, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, se puede asignar una clasificación distinta al paciente con sepsis. El experto en la materia puede usar una diversidad de métodos para llegar a un valor umbral deseado para su uso en estos métodos. Por ejemplo, el valor de umbral se puede determinar a partir de una población normal de pacientes con sepsis seleccionando una concentración que represente el centil 75, 85, 90, 95 o 99 de un marcador de lesión renal medido en tales pacientes normales con sepsis. Como alternativa, el valor umbral puede determinarse a partir de una población "enferma" de pacientes con sepsis, por ejemplo, los que padecen una lesión o que tienen una predisposición a una lesión (por ejemplo, la progresión a IRA o algún otro desenlace clínico tal como el fallecimiento, diálisis, trasplante renal, etc.), 95mediante la selección de una concentración que represente el centil 75, 85, 90, 95 o 99 de un marcador de lesión renal medido en tales pacientes con sepsis. En otra alternativa, el valor umbral puede determinarse a partir de una medición previa de un marcador de lesión renal en el mismo paciente con sepsis; es decir, se puede usar un cambio temporal en el nivel de un marcador de lesión renal en el paciente con sepsis para asignar el riesgo al paciente con sepsis.

El análisis anterior no pretende implicar, sin embargo, que los marcadores de lesión renal descritos en el presente documento deben compararse con los umbrales individuales correspondientes. Los métodos para combinar los resultados de ensayo pueden comprender el uso de regresión logística multivariable, modelado logarítmico-lineal, análisis de redes neuronales, análisis n de m, análisis de árbol de decisión, el cálculo de razones de marcadores, etc. Este listado no pretende ser limitante. En estos métodos, un resultado combinado que se determina combinando marcadores individuales se puede tratar como si el mismo fuera un marcador; es decir, se puede determinar un umbral para el resultado combinado como se describe en el presente documento para los marcadores individuales, y el resultado combinado para un paciente individual en comparación con este umbral.

La capacidad de una prueba en particular para distinguir dos poblaciones puede establecerse utilizando el análisis ROC. Por ejemplo, las curvas ROC establecidas a partir de una "primera" subpoblación que está predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal, y una "segunda" subpoblación que no está tan predispuesta, se pueden usar para calcular una curva ROC, y el área bajo la curva proporciona una medida de la calidad de la prueba. Preferentemente, las pruebas descritas en el presente documento proporcionan un área de la curva ROC mayor que 0,5, preferentemente de al menos 0,6, más preferentemente de 0,7, todavía más preferentemente de al menos 0,8, incluso más preferentemente de al menos 0,9 y muy preferentemente de al menos 0,95.

En determinados aspectos, la concentración medida de uno o más marcadores de lesión renal, o un combinado de tales marcadores, se pueden tratar como variables continuas. Por ejemplo, cualquier concentración particular se puede convertir en una probabilidad correspondiente de una futura reducción de la función renal para el paciente con sepsis, la aparición de una lesión, una clasificación, etc. En otra alternativa más, un umbral que puede proporcionar un nivel aceptable de especificidad y sensibilidad en la separación de una población de pacientes con sepsis en "cubos", como una "primera" subpoblación (por ejemplo, que está predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal, la aparición de una lesión, una clasificación, etc.) y una "segunda" subpoblación que no está tan predispuesta. Se selecciona un valor umbral para separar esta primera y segunda poblaciones por una o más de las siguientes medidas de exactitud de la prueba:

una razón de posibilidades mayor que 1, preferentemente de al menos aproximadamente 2 o más, o de aproximadamente 0,5 o menos, más preferentemente de al menos aproximadamente 3 o más, o de aproximadamente 0,33 o menos, todavía más preferentemente de al menos aproximadamente 4 o más, o de aproximadamente 0,25 o menos, incluso más preferentemente de al menos aproximadamente 5 o más, o de aproximadamente 0,2 o menos, y muy preferentemente de al menos aproximadamente 10 o más, o de aproximadamente 0,1 o menos;

una especificidad mayor de 0,5, preferentemente de al menos aproximadamente 0,6, más preferentemente de al menos aproximadamente 0,7, todavía preferentemente de al menos aproximadamente 0,8, incluso más preferentemente de al menos aproximadamente 0,9 y muy preferentemente de al menos aproximadamente 0,95, con una sensibilidad correspondiente mayor de 0,2, preferentemente mayor de aproximadamente 0,3, más preferentemente mayor de aproximadamente 0,4, todavía preferentemente de al menos aproximadamente 0,5, incluso más preferentemente de aproximadamente 0,6, aún más preferentemente mayor de aproximadamente 0,7, todavía más preferentemente mayor de aproximadamente 0,8, más preferentemente mayor de aproximadamente 0,9 y muy preferentemente mayor de aproximadamente 0,95;

una sensibilidad mayor que 0,5, preferentemente de al menos aproximadamente 0,6, más preferentemente de al menos aproximadamente 0,7, todavía preferentemente de al menos aproximadamente 0,8, incluso más preferentemente de al menos aproximadamente 0,9 y muy preferentemente de al menos aproximadamente 0,95, con una especificidad correspondiente mayor de 0,2, preferentemente mayor de aproximadamente 0,3, más preferentemente mayor de aproximadamente 0,4, todavía preferentemente de al menos aproximadamente 0,5, incluso más preferentemente de aproximadamente 0,6, aún más preferentemente mayor de aproximadamente 0,7, todavía más preferentemente mayor de aproximadamente 0,8, más preferentemente mayor de aproximadamente 0,9 y muy preferentemente mayor de aproximadamente 0,95;

al menos aproximadamente el 75 % de sensibilidad, combinada con al menos aproximadamente el 75 % de especificidad;

una razón de verosimilitudes positiva (calculada como sensibilidad/(1-especificidad)) de mayor de 1, al menos de aproximadamente 2, más preferentemente de al menos aproximadamente 3, aún más preferentemente de al menos aproximadamente 5 y muy preferentemente de al menos aproximadamente 10; o

una razón de verosimilitudes negativa (calculada como (1-sensibilidad)/especificidad) de menos de 1, menos de o igual a aproximadamente 0,5, más preferentemente de menos de o igual a aproximadamente 0,3 y muy preferentemente de menos de o igual a aproximadamente 0,1.

El término "aproximadamente" en el contexto de cualquiera de las mediciones anteriores se refiere a /- el 5 % de una medición dada.

Además, se pueden usar múltiples umbrales para evaluar el estado renal en un paciente con sepsis. Por ejemplo, una "primera" subpoblación que está predispuesta a uno o más cambios futuros en el estado renal, la aparición de una lesión, una clasificación, etc., y una "segunda" subpoblación que no está tan predispuesta, se pueden combinar en un único grupo. Después, este grupo se subdivide en tres o más partes iguales (conocidas como terciles, cuartiles, quintiles, etc., dependiendo del número de subdivisiones). Se asigna una razón de posibilidades a los pacientes con sepsis basándose en la subdivisión en la que se encuentran. Si se considera un tercil, se puede usar el tercil más bajo o más alto como referencia para la comparación de las otras subdivisiones. A esta subdivisión de referencia se le asigna una razón de posibilidades de 1. Al segundo tercil se le asigna una razón de posibilidades que es relativa a ese primer tercil. Es decir, alguien en el segundo tercil puede tener 3 veces más probabilidades de padecer uno o más cambios futuros en el estado renal en comparación con alguien en el primer tercil. Al tercer tercil también se le asigna una razón de posibilidades que es relativa a ese primer tercil.

En determinadas realizaciones, el método de ensayo es un inmunoensayo. Los anticuerpos para su uso en tales ensayos se unirán específicamente a un marcador de lesión renal de interés de longitud completa, y también pueden unirse a uno o más polipéptidos que están "relacionados" con el mismo, como ese término se define en lo sucesivo en el presente documento. Los expertos en la materia conocen numerosos formatos de inmunoensayo. Las muestras de líquido corporal preferentes se seleccionan del grupo que consiste en orina, sangre, suero, saliva, lágrimas y plasma.

La etapas del método anterior no deben interpretarse en el sentido de que el resultado (o resultados) del ensayo del marcador de lesión renal se usa/usan de forma aislada en los métodos descritos en el presente documento. Más bien, en los métodos descritos en el presente documento se pueden incluir variables adicionales u otros indicios clínicos. Por ejemplo, un método de estratificación del riesgo, diagnóstico, clasificación, seguimiento, etc. puede combinar el resultado (o resultados) del ensayo con una o más variables medidas para el paciente con sepsis seleccionadas del grupo que consiste en información demográfica (por ejemplo, peso, sexo, edad, raza), antecedentes médicos (por ejemplo, antecedentes familiares, tipo de cirugía, enfermedad preexistente tal como aneurisma, insuficiencia cardiaca congestiva, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, arteriopatía coronaria, proteinuria, insuficiencia renal o sepsis, tipo de exposición a toxinas tales como los AINE, ciclosporinas, tacrólimus, aminoglucósidos, foscarnet, etilenglicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, medio de contraste radiopacos o estreptozotocina), variables clínicas (por ejemplo, tensión arterial, temperatura, frecuencia respiratoria), puntuaciones de riesgo (puntuación APACHE, puntuación PREDICT, puntuación de riesgo TIMI para AI/IMSEST, puntuación de riesgo de Framingham), una tasa filtración glomerular, una tasa estimada de filtración glomerular, una tasa de producción de orina, una concentración de creatinina en suero o plasma, una concentración de creatinina en la orina, una excreción parcial de sodio, una concentración de sodio en la orina, una proporción de la creatinina en la orina con respecto a la creatinina en suero o plasma, una gravedad específica en la orina, una osmolalidad de la orina, una proporción del nitrógeno ureico en la orina con respecto al nitrógeno ureico en plasma, una proporción de NUS en plasma con respecto a la creatinina, un índice de insuficiencia renal calculado como sodio en orina/(creatinina en orina/creatinina en plasma), una concentración de gelatinasa de neutrófilos (LAGN) en suero o plasma, una concentración de LAGN en la orina, una concentración de cistatina C en suero o plasma, una concentración de troponina cardiaca en suero o plasma, una concentración de PNB en suero o plasma, una concentración de NTproPNB en suero o plasma y una concentración de proPNB en suero o plasma. Otras medidas de la función renal que pueden combinarse con uno o más resultados del ensayo de marcador de lesión renal se describen en lo sucesivo en el presente documento y en Harrison's Principles of Internal Medicine, 17a Ed., McGraw Hill, Nueva York, páginas 1741-1830, y Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47a Ed., McGraw Hill, Nueva York, páginas 785-815.

Cuando se mide más de un marcador, los marcadores individuales pueden medirse en muestras obtenidas al mismo tiempo, o pueden determinarse a partir de muestras obtenidas en distintos momentos (por ejemplo, uno anterior o posterior). Los marcadores individuales también pueden medirse en las mismas muestras de líquidos corporales o en distintas. Por ejemplo, un marcador de lesión renal puede medirse en una muestra de suero o plasma y otro marcador de lesión renal puede medirse en una muestra de orina. Además, la asignación de una probabilidad puede combinar un resultado de ensayo de marcador de lesión renal individual con cambios temporales en una o más variables adicionales.

En diversos aspectos relacionados, también se divulgan dispositivos y kits para realizar los métodos descritos en el presente documento. Los kits adecuados comprenden los reactivos suficientes para realizar un ensayo para al menos uno de los marcadores de lesión renal descritos, junto con instrucciones para realizar las comparaciones de umbrales descritas.

En determinadas realizaciones, los reactivos para realizar tales ensayos se proporcionan en un dispositivo de ensayo, y tales dispositivos de ensayo pueden incluirse en tal kit. Los reactivos preferentes pueden comprender uno o más anticuerpos en fase sólida, comprendiendo el anticuerpo en fase sólida el anticuerpo que detecta la diana (o dianas) de biomarcador pretendida unido a un soporte sólido. En el caso de inmunoensayos de tipo sándwich, tales reactivos también pueden incluir uno o más anticuerpos marcados de manera detectable, comprendiendo el anticuerpo marcado de manera detectable el anticuerpo que detecta la diana (o dianas) de biomarcador pretendida unido a un marcador detectable. Los elementos opcionales adicionales que pueden proporcionarse como parte de un dispositivo de ensayo se describen en lo sucesivo en el presente documento.

Los marcadores detectables pueden incluir moléculas que son detectables en sí mismas (por ejemplo, fracciones fluorescentes, marcadores electroquímicos, marcadores de ecl (luminiscencia electroquímica), quelatos metálicos, partículas coloidales metálicas, etc.) así como moléculas que pueden detectarse indirectamente mediante la producción de un producto de reacción detectable (por ejemplo, enzimas tales como la peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, etc.), o mediante el uso de una molécula de unión específica que puede ser detectable ella misma (por ejemplo, un anticuerpo marcado que se une al segundo anticuerpo, biotina, digoxigenina, maltosa, oligohistidina, 2,4-dintrobenceno, fenilarsenato, ADNmc, ADNbc, etc.).

La generación de una señal a partir del elemento de desarrollo de señal puede realizarse utilizando diversos métodos ópticos, acústicos y electroquímicos bien conocidos en la técnica. Los ejemplos de modos de detección incluyen fluorescencia, detección radioquímica, reflectancia, absorbancia, amperometría, conductancia, impedancia, interferometría, elipsometría, etc. En determinados métodos de estos, el anticuerpo en fase sólida se acopla a un transductor (por ejemplo, una rejilla de difracción, sensor electroquímico, etc.) para la generación de una señal, mientras que en otros, un transductor que está espacialmente separado del anticuerpo en fase sólida (por ejemplo, un fluorómetro que emplea una fuente de luz de excitación y un detector óptico) genera una señal. Este listado no pretende ser limitante. Además, se pueden emplear biosensores basados en anticuerpos para determinar la presencia o cantidad de analitos, lo que elimina opcionalmente la necesidad de una molécula marcada.

Descripción detallada de la invención

La presente divulgación se refiere a métodos y composiciones para el diagnóstico, diagnóstico diferencial, estratificación del riesgo, seguimiento, clasificación y determinación de los regímenes de tratamiento en pacientes con sepsis diagnosticados con sepsis. En diversas realizaciones, una concentración medida de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste en proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7, beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina de motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa, o uno o más marcadores relacionados con las mismas, se correlacionan con el estado renal del paciente con sepsis.

El riñón es responsable de la excreción de agua y solutos del cuerpo. Sus funciones incluyen el mantenimiento del equilibrio ácido-base, la regulación de las concentraciones de electrolitos, el control del volumen sanguíneo y la regulación de la presión arterial. Por tanto, la pérdida de la función renal a través de lesiones y/o enfermedades da como resultado una morbilidad y mortalidad importantes. Se proporciona un análisis detallado de las lesiones renales en Harrison's Principles of Internal Medicine, 17a Ed., McGraw Hill, Nueva York, páginas 1741-1830. La enfermedad y/o la lesión renal pueden ser agudas o crónicas. La enfermedad renal aguda y la crónica se describen de la siguiente manera (de Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47a Ed, McGraw Hill, Nueva York, páginas 785-815): "La insuficiencia renal aguda es el empeoramiento de la función renal en horas o días, dando como resultado la retención de desechos nitrogenados (tales como el nitrógeno ureico) y la creatinina en la sangre. La retención de estas sustancias se llama azoemia. La insuficiencia renal crónica (enfermedad renal crónica) es el resultado de una pérdida anómala de la función renal durante meses o años".

La insuficiencia renal aguda (IRA, también conocida como lesión renal aguda o LRA) es una reducción abrupta (normalmente, detectada dentro de aproximadamente 48 horas a 1 semana) de la filtración glomerular. Esta pérdida de la capacidad de filtración da como resultado la retención de productos de desecho nitrogenados (urea y creatinina) y no nitrogenados que normalmente excreta el riñón, una reducción en la producción de orina, o ambos. Se informa que la IRA complica alrededor del 5% de los ingresos hospitalarios, el 4-15% de las cirugías con circulación extracorporal y hasta el 30 % de las hospitalizaciones en cuidados intensivos. La IRA puede clasificarse como de etiología prerrenal, renal intrínseca posrenal. La enfermedad renal intrínseca se puede dividir en glomerular, tubular, intersticiales y de anomalías vasculares. Las principales causas de la IRA se describen en la siguiente tabla, que está adaptada del Manual de Merck, 17a ed., capítulo 222:

En el caso de IRA isquémica, el curso de la enfermedad se puede dividir en cuatro fases. Durante una fase de inicio, que dura horas o días, la perfusión reducida del riñón está evolucionando hacia una lesión. La ultrafiltración glomerular se reduce, el flujo de filtrado se reduce debido a restos dentro de los túbulos y se produce una retroextravasación de filtrado a través del epitelio lesionado. La lesión renal puede estar mediada durante esta fase por reperfusión del riñón. Al inicio le sigue una fase de extensión que se caracteriza por una lesión isquémica e inflamación continuas y puede implicar daño endotelial y congestión vascular. Durante la fase de mantenimiento, que dura de 1 a 2 semanas, se produce lesión de células renales, y la filtración glomerular y la producción de orina alcanzan un mínimo. Puede seguir una fase de recuperación en la cual el epitelio renal se repara y la TFG se recupera gradualmente. A pesar de ello, la tasa de supervivencia de los pacientes con sepsis con IRA puede ser tan baja como de aproximadamente el 60 %.

Un criterio comúnmente informado para definir y detectar la LRA es un aumento abrupto (normalmente en un plazo de aproximadamente 2-7 días o en el período de hospitalización) de la creatinina en suero. Aunque el uso de la elevación de la creatinina en suero para definir y detectar la LRA está bien establecido, la magnitud de la elevación de la creatinina en suero y el momento durante el cual se mide para definir la LRA varía considerablemente entre las publicaciones. Tradicionalmente, para definir la LRA se usaron aumentos relativamente grandes de creatinina en suero, tales como del 100%, 200%, un aumento de al menos el 100% a un valor superior a 2 mg/dl, y otras definiciones. Sin embargo, la tendencia reciente para definir la LRA ha sido hacia el uso de subidas más pequeñas de creatinina en suero. La relación entre la subida de creatinina en suero, la LRA y los riesgos para la salud asociados se revisan en Praught y Shlipak, Curr Opin Nephrol Hypertens 14:265-270, 2005 y Chertow et al, J Am Soc Nephrol 16: 3365-3370, 2005. Como se describe en estas publicaciones, el empeoramiento agudo de la función renal (LRA) y el riesgo aumentado de fallecimiento y otros desenlaces perjudiciales ahora se asocian con aumentos muy pequeños de creatinina en suero. Estos aumentos pueden determinarse como un valor relativo (porcentaje) o un valor nominal. Se ha informado que aumentos relativos de creatinina en suero tan pequeños como del 20 % del valor anterior a la lesión indican un empeoramiento agudo de la función renal (LRA) y un riesgo para la salud aumentado, pero el valor más comúnmente informado para definir la LRA y el riesgo para la salud aumentado es un aumento relativo de al menos el 25%. Se ha informado que aumentos nominales tan pequeños como de 0,3 mg/dl, 0,2 mg/dl o incluso 0,1 mg/dl indican un empeoramiento de la función renal y un riesgo de fallecimiento aumentado. Para definir la LRA se han utilizado diversos períodos hasta que la creatinina en suero alcance estos valores umbral, por ejemplo, variando de 2 días, 3 días, 7 días, o un período variable definido como el tiempo que el paciente está en el hospital o en la unidad de cuidados intensivos. Estos estudios indican que no hay un umbral particular de subida de creatinina en suero (o período hasta el aumento) para el empeoramiento de la función renal o LRA, sino más bien un aumento continuo del riesgo al aumentar la magnitud de la subida de creatinina en suero.

Un estudio (Lassnigg et al., J Am Soc Nephrol 15:1597-1605, 2004) investigó tanto los aumentos como las disminuciones de la creatinina en suero. Los pacientes con una leve caída de la creatinina en suero de -0,1 a -0,3 mg/dl después de una cirugía de corazón tuvieron la tasa de mortalidad más baja. Los pacientes con una mayor caída de creatinina en suero (mayor de o igual a -0,4 mg/dl) o cualquier aumento de la creatinina en suero tuvieron una mayor tasa de mortalidad. Estos hallazgos hicieron que los autores concluyeran que incluso los cambios muy sutiles en la función renal (detectados por pequeños cambios de creatinina dentro de las 48 horas de la cirugía) afectan seriamente los desenlaces del paciente. En un esfuerzo por llegar a un consenso sobre un sistema de clasificación unificado para el uso de creatinina en suero para definir la LRA en los ensayos clínicos y en la práctica clínica, Bellomo et al., Crit Care. 8(4):R204-12, 2004, proponen las siguientes clasificaciones para estratificar a los pacientes con LRA:

"Riesgo": la creatinina en suero aumentó 1,5 veces a partir del valor inicial o una producción de orina de <0,5 ml/kg de peso corporal/hora durante 6 horas;

"Lesión": la creatinina en suero aumentó 2,0 veces a partir del valor inicial o una producción de orina <0,5 ml/kg/hora durante 12 h;

"Insuficiencia": la creatinina en suero aumentó 3,0 veces desde el valor inicial o una creatinina >355 pmol/l (con una subida de >44) o una producción de orina por debajo de 0,3 ml/kg/h durante 24 h o anuria durante al menos 12 horas;

E incluyeron dos desenlaces clínicos:

"Pérdida": necesidad persistente de terapia de depuración extrarrenal durante más de cuatro semanas.

"ESRD" (forma siglada de end stage renal disease: enfermedad renal terminal): enfermedad renal terminal -necesidad de diálisis durante más de 3 meses.

Estos criterios son denominan criterios RIFLE, los cuales proporcionan una herramienta clínica útil para clasificar el estado renal. Como se analiza en Kellum, Crit. Care Med. 36: S141-45, 2008 y Ricci et al., Kidney Int. 73, 538-546, 2008, los criterios RIFLE proporcionan una definición uniforme de LRA que se ha validado en numerosos estudios.

Más recientemente, Mehta et al., Crit. Care 1 1:R31 (doi:10.1186.cc5713), 2007, proponen las siguientes clasificaciones similares para estratificar a los pacientes con LRA, las cuales se han modificado a partir de RIFLE:

"Fase I": aumento de la creatinina en suero de más de o igual a 0,3 mg/dl (> 26,4 pmol/l) o aumento hasta más del o igual al 150 % (1,5 veces) a partir del valor inicial o una producción de orina de menos de 0,5 ml/kg por hora durante más de 6 horas;

"Fase II": aumento de la creatinina en suero hasta más del 200 % (> 2 veces) a partir del valor inicial o una producción de orina de menos de 0,5 ml/kg por hora durante más de 12 horas;

"Fase III": aumento de la creatinina en suero hasta más del 300 % (> 3 veces) a partir del valor inicial o una creatinina en suero > 354 pmol/l acompañado por un aumento agudo de al menos 44 pmol/l o una producción de orina de menos de 0,3 ml/kg por hora por 24 horas o anuria durante 12 horas.

El Grupo de trabajo de consenso sobre NIC (McCollough et al., Rev Cardiovasc Med. 2006;7(4):177-197) utiliza una subida de creatinina en suero del 25 % para definir la nefropatía inducida por contraste (que es un tipo de LRA). Aunque diversos grupos proponen criterios ligeramente distintos para usar la creatinina en suero para detectar la LRA, el consenso es que pequeños cambios en la creatinina en suero, tales como de 0,3 mg/dl o del 25 %, son suficientes para detectar l Ra (empeoramiento de la función renal) y que la magnitud del cambio de creatinina en suero es un indicador de la gravedad de la LRA y del riesgo de mortalidad.

Aunque la medición en serie de la creatinina en suero durante un período de días es un método aceptado para detectar y diagnosticar la LRA, y se considera una de las herramientas más importantes para evaluar a los pacientes con LRA, en general, se considera que la creatinina en suero tiene varias limitaciones en el diagnóstico, evaluación y seguimiento de pacientes con LRA. El período para que la creatinina en suero se eleve a valores (por ejemplo, una subida de 0,3 mg/dl o del 25 %) considerados diagnósticos para la LRA puede ser de 48 horas o más, dependiendo de la definición utilizada. Dado que la lesión celular en la LRA puede producirse en un período de horas, las elevaciones de creatinina en suero detectadas a las 48 horas o más pueden ser un indicador tardío de lesión y, por lo tanto, confiar en la creatinina en suero puede retrasar el diagnóstico de LRA. Adicionalmente, la creatinina en suero no es un buen indicador del estado exacto del riñón y de las necesidades de tratamiento durante las fases más agudas de LRA cuando la función renal está cambiando rápidamente. Algunos pacientes con LRA se recuperarán completamente, algunos necesitarán diálisis (a corto o largo plazo) y algunos tendrán otros desenlaces perjudiciales, que incluyen el fallecimiento, episodios cardiacos adversos serios y enfermedad renal crónica. Debido a que la creatinina en suero es un marcador de la tasa de filtración, no diferencia entre las causas de LRA (prerrenal, renal intrínseca, obstrucción posrenal, ateroembólica, etc.) o la categoría o ubicación de la lesión en enfermedad renal intrínseca (por ejemplo, de origen tubular, glomerular o intersticial). La producción de orina está igualmente limitada, conocer estas cosas puede ser de vital importancia en el manejo y tratamiento de pacientes con LRA.

Para los fines del presente documento, se aplican las definiciones siguientes:

Como se usa en el presente documento, una "lesión de la función renal" es una reducción medible abrupta (dentro de los 14 días, preferentemente dentro de los 7 días, más preferentemente dentro de las 72 horas y todavía más preferentemente dentro de las 48 horas) de una medida de la función renal. Dicha lesión puede identificarse, por ejemplo, por una disminución en la tasa de filtración glomerular o TFG estimada, una reducción de la producción de orina, un aumento de la creatinina en suero, un aumento de la cistatina C en suero, una necesidad de una terapia de depuración extrarrenal, etc. Una "mejora de la función renal" es un aumento medible abrupto (dentro de los 14 días, preferentemente dentro de los 7 días, más preferentemente dentro de las 72 horas y todavía más preferentemente dentro de las 48 horas) de una medida de la función renal. Los métodos preferentes para medir y/o estimar la TFG se describen en lo sucesivo en el presente documento.

Como se usa en el presente documento, "función renal reducida" es una reducción abrupta (dentro de los 14 días, preferentemente dentro de los 7 días, más preferentemente dentro de las 72 horas y todavía más preferentemente dentro de las 48 horas) de la función renal, identificada por un aumento absoluto de la creatinina en suero mayor de o igual a 0,1 mg/dl (> 8,8 pmol/l), un aumento porcentual de la creatinina en suero mayor o igual al 20 % (1,2 veces a partir del valor inicial), o una reducción de la producción de orina (oliguria documentada de menos de 0,5 ml/kg por hora).

Como se usa en el presente documento, "insuficiencia renal aguda" o "IRA" es una reducción abrupta (dentro de los 14 días, preferentemente dentro de los 7 días, más preferentemente dentro de las 72 horas y todavía más preferentemente dentro de las 48 horas) de la función renal, identificada por un aumento absoluto de la creatinina en suero mayor de o igual a 0,3 mg/dl (> 26,4 pmol/l), un aumento porcentual de la creatinina en suero mayor o igual al 50 % (1,5 veces a partir del valor inicial), o una reducción de la producción de orina (oliguria documentada de menos de 0,5 ml/kg por hora durante 6 horas). Este término es sinónimo de "lesión renal aguda" o "LRA".

Como se usa en el presente documento, la expresión "proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7" o "PUFCI7" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 (precursor humano: Swiss-Prot Q16270 (SEQ ID NO: 1))

10 20 30 40 50 60

MERPSLRALL LGAAGLLLLL LPLSSSSSSD TCGPCEPASC PPLPPLGCLL GETRDACGCC

70 80 90 100 110 120

PMCARGEGEP CGGGGAGRGY CAPGMECVKS RKRRKGKAGA AAGGPGVSGV CVCKSRYPVC

130 140 150 160 170 180

GSDGTTYPSG CQLRAASQRA ESRGEKAITQ VSKGTCEQGP SIVTPPKDIW NVTGAQVYLS

190 200 210 220 230 240

CEVIGIPTPV LIWNKVKRGH YGVQRTELLP GDRDNLAIQT RGGPEKHEVT GWVLVSPLSK

250 260 270 280

EDAGEYECHA SNSQGQASAS AKITWDALH EIPVKKGEGA EL

Los siguientes dominios se han identificado en la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7:

Restos Longitud ID de dominio

1-26 26 Péptido señal

27-282 256 Proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 Como se usa en el presente documento, la expresión "beta-2-glucoproteína 1" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la beta-2-glucoproteína 1 (precursor humano: Swiss-Prot P02749 (SEQ ID NO: 2)).

10 2C 30 40 5C 60

MISPVLILFS SFLCHVAIAG RTCPKPDDLP FSTWPI.KTF YEPGEEITYS CKPGYVSRGG

70 80 90 100 1 10 120

MRKFICPLTG LW PINTLKCT PRVCFFACIL ENGAVRYTTF EYPNTISFSC NTGFYLNGAD

130 14C 15 0 160 17C 180

SAKCTEEGKW SPELPVCAPI 7CPPPSTPTF ATLRVYKPSñ GNNSLYRDTA VFECLPQHAM

190 700 210 220 23C 240

FGNDT1TCTT HGNWTKLPEC REVKCPFPSR PDNGFVNYPA KPTLYYKDKA TFGCHDGYSL

£30 260 270 2Í<0 29 0 300

DGPEE l ECTK LGNWSAMPSC KASCXVPVXK ATWYQGERV KIQEKFKNGM LHGDKVSFFC 310 3 20 330 340

KNKEKKCSYT EDAQ CIDG TI EVPKCFKEHS SLAFWKTDA3 DVKPC

Los siguientes dominios se han identificado en la beta-2-glucoproteína 1:

Restos Longitud ID de dominio

1-19 19 Secuencia señal

20-345 326 Beta-2-glucoproteína 1

Además, se han identificado varias variantes de origen natural:

Resto Cambio

5 V a A

107 S a N

154 R a H

266 V a L

325 C a G

335 W a S

Como se usa en el presente documento, la expresión "inhibidor de metaloproteinasa 2" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor del inhibidor de metaloproteinasa 2 (precursor humano: Swiss-Prot P16035 (SEQ ID NO: 3)).

1C 2C 30 40 5C 60

MGAAARTLRL ALGLLLLATL LRPADACSCS PVHPQQAFCN ADVVIRAKAV SEKEVDSGND

70 eo so :o o n o 12 ;;

IYGNPIKRIQ YEIKQIKMFK GPEKDIEFIY TAPSSAVCGV SLDVGGKKEY LIAGKAEGDG

130 14C 150 160 17C 130

KMHITLCDFI VPWDTLSTTQ KKSLNHRYQM GCECKITRCP MIPCYISSPD ECLWMDWVTE

190 20C 210 220

KNINGHQAKF FACIKRSDGS CAWYRGAAPP KQEFLDIEDP

Los siguientes dominios se han identificado en el inhibidor de metaloproteinasa 2:

Restos Longitud ID de dominio

1-26 26 Péptido señal

27-220 194 Inhibidor de metaloproteinasa 2

Como se usa en el presente documento, la expresión "antitripsina alfa-1" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la antitripsina alfa-1 (precursor humano: Swiss-Prot P01009 (SEQ ID NO: 4)).

10 2C 30 40 bC 60

MFSSVSWGIL LLAG LCCLVP VSLAEDFQGD AAQKTDT5HH DQDHPTFNKI TFNLAEFAFS

70 ^ao 00 100 ^{n o n o}

LYRQLAHQSN S T N IF F S P V S IA TA F A M LS L GTKADTHDEI LEG LNFNLTE IP E A Q IH E G F

130 140 130 160 170 ISO

QE11RTLNQP DSQLQLTTGN G LFLSEG LKL VDKFLEDVKK LYHSEAFTVN FGDTEEAKKQ

190 200 210 220 2 10 240

INDYVEKGTQ G K IVD LVKE L DRDTVFALVN YIFFKGKWER PFEVKDTEEE DFHVDQVTTV

250 260 270 £ñ 0 2 90 300

KVFMMKRLGM FNIOHCKKLS SWVLLMKYLG W A TAIFFLFD EGKLQHLEWE L T H D IIT K F L

3 :0 320 330 340 350 360

ENEDRRSASL H LP K LS ITG T YDLKSVLGQL GITKVFSNGA DLSGVTEEAP LKLSKAVHKA

370 33C 390 400 410

V LTID E K G TE AAGAMFLEAI PM SIPPEVKF W KFFVFLMIE QNTKSPLFMG KW NPTQ K Los siguientes dominios se han identificado en la antitripsina alfa-1:

Restos Longitud ID de dominio

1-24 24 secuencia señal

25-418 394 Antitripsina alfa-1

Como se usa en el presente documento, la expresión "elastasa leucocitaria" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la elastasa leucocitaria (precursor humano: Swiss-Prot P08246 (SEQ ID NO: 5)).

1C 20 30 40 5C 63

MTLGRRLACL FLACVLPALL LGGTA1ASEI VGGRRARPHA WPFMVSLQLR GGHFCGATLI

70 60 90 100 11 0 120

APNFVMS AAH CVANVNVRAV RWL GAHNLS RREPTRQVFA VQRIFENGYD PVNLLNDIVI

130 140 150 160 170 130

LQLNGSATIN AMVQVAQLPA QGRRLGMG 'VQ C LAMGWGLLG RNRGIASVLQ ELNVTVVTSL

100 200 210 220 230 240

CRRSMVCTLV RGRQAGVCFG DSGSPLVCWG LIHGIASFVR GGCASGLYPD AFAPVAQFVN

750 260

MIDSIIQRSE DN PC PKPRDP DPASRTH

Los siguientes dominios se han identificado en la elastasa leucocitaria:

Restos Longitud ID de dominio

1-27 315 secuencia señal

28-29 2 propéptido

30-267 238 Elastasa leucocitaria

Como se usa en el presente documento, la expresión "componente P de amiloide sérico" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor del componente P de amiloide sérico (precursor humano: Swiss-Prot P02743 (SEQ ID NO: 6)).

10 2C 30 40 5C 60

MNKPLLWISV LTSLLEAFAH TDLSGKVFVF PRESVTDHVN LITPLEKPLQ NFTLCFRAYS

70 30 90 100 110 120

DLSRAYSLFS YNTQGRDNEL LVYKERVGEY SLYIGRHKVT SKVIEKFPAP VHICVSWESS

130 14C 150 160 170 160

SGIAEFWING TPLVKKGLRQ GYFVEAQPKI VLGQEQDSYG GKFDRSQSFV GEIGDLYMWD

100 200 210 220

SVLPPENILS AYQGTPLPAN ILDWQALNYE IR G Y V IIK P L VWV

Los siguientes dominios se han identificado en el componente P de amiloide sérico:

Restos Longitud ID de dominio

1-19 19 Péptido señal

20-223 204 Componente P de amiloide sérico

20-222 203 Componente P de amiloide sérico (1-203)

Como se usa en el presente documento, la expresión "quimiocina con motivo C-X-C 6" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la quimiocina con motivo C-X-C 6 (precursor humano: Swiss-Prot P80162 (SEQ ID NO: 7))

10 20 30 40 50 00

MSLFSSRAAR VPGPSGSLCA LLALLLLLTP PGFLASAGFV s a v a -:íl r c ,t CLRVTLRVNP

70 SO 90 10 0 L I O

KTIGKLQVFP AGPQCSKVEV VASLKNGKQV CLDPEAPFLK KVIQKILDSG NKKM

Los siguientes dominios se han identificado en la quimiocina con motivo C-X-C 6:

Restos Longitud ID de dominio

1-37 37 Péptido señal

38-114 77 quimiocina con motivo C-X-C 6

40-114 75 quimiocina con motivo C-X-C 6 (variante 1 con N procesado) 43-114 72 quimiocina con motivo C-X-C 6 (variante 2 con N procesado) 46-114 69 quimiocina con motivo C-X-C 6 (variante 3 con N procesado)

Como se usa en el presente documento, la expresión "quimiocina con motivo C-C 24" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la quimiocina con motivo C-C 24 (precursor humano: Swiss-Prot 000175 (SEQ ID n O: 8)).

10 2C 30 40 50 60

MAGLMTIVTS LLFLGVCAHH I 1 PTGSW 1 P SPCCMFFVSK R I PENRWSY QLSSRSTCLK

70 SC 90 LOO LIO

AGVIFTTKKG QQFCGDPKQE WVQRYMKNLD AKQKKASPRA RAVAVKGPVQ RYPGHQTTC

Los siguientes dominios se han identificado en la quimiocina con motivo C-C 24:

Restos Longitud ID de dominio

1-26 26 Péptido señal

27-119 93 quimiocina con motivo C-C 24

Como se usa en el presente documento, la expresión "colagenasa de neutrófilos" (también conocida como MMP-8 y metaloproteinasa de la matriz 8) se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la colagenasa de neutrófilos (precursor humano: Swiss-Prot P22894 (SEQ ID NO: 9)).

10 20 30 40 50 60

MFSLKTLPFL LLLHVQISKA FPVSSKEKNT KTVQDYLEKF YQLPSNQYQS TRKNGTNVIV

7C SC 90 100 11C 120

EKLKEMQRFF GLNVTGKPNE ETLDMMKKPR CGVPDSGGFM LTPGNPKWER TNLTYRIRNY

130 l i e 150 160 170 180

TPQLSEAEVE RAIKDAFELW SVASPLIFTR ISQGEADINI AFYQRDHGDN SPFDGPNGIL

190 20C 210 220 23C 243

AHAFQPGQGI GGDAHFDAEE TWTNTSANYN LFLVAAHEFG HSLGLAHSSD PGALMYPNYA

250 2 f¡0 2 7;; 2 üo 200 300

FRETSNYSLP QDDIDGIQAI YGLSSNPIQP TGPSTPKPCD PSLTFDAITT LRGEILFFKD

310 320 330 340 350 360

RYFWRRHPQL QRVEMNFISL FWPSLPTGIQ AAYEDFDRDL IFLFKGNQYW ALSGYDILQG

370 33C 393 400 41C 423

YPKDISNYGF PSSVQAIDAA VFYRSKTYFF VNDQFWRYDN QRQFMEPGYP KSISGAFPGI

430 440 450 400

ESKVDAVFQQ EHFFHVFSGP RYYAFDLIAQ RVTRVARGNK WLNCRYG

Los siguientes dominios se han identificado en la colagenasa de neutrófilos:

Restos Longitud ID de dominio

1-20 20 Péptido señal

21-100 80 Péptido activador

101-467 367 Colagenasa de neutrófilos

Como se usa en el presente documento, la expresión "catepsina D" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la catepsina D (precursor humano: Swiss-Prot P07339 (SEQ ID NO: 10)).

MQPSSLLPLA LCLLAAPASA LVRIPLHKFT SIRRTMSEVG GSVEDLIAKG PVSKYSQAVP

70 3C 90 130 11C 120

AVTEGPIPEV LKNYMDAQYY GEIGIGTPPQ CFTWFDTGS SNLWVPSIHC KLLDIACWIH

130 140 150 '-60 170 ISO

HKYNSDKSST YVKNGTSFDI HYGSGSLSGY LSQDTVSVPC QSASSASALG GVKVERQVFG

100 200 210 220 230 240

EATKQPGITF IAAKFDGILG MAYPRISVNN VLPVFDNLMQ QKLVDQNIFS FYLSRDPDAQ

250 260 2 70 2HÜ 200 300

PGGELMLGGT DSKYYKGSLS YLNVTRKAYW QVHLDQVEVA SGLTLCKEGC EAIVDTGTSL

310 320 330 340 330 360

MVGPVDEVRE LQKAIGAVPL IQGEYMIPCE KVSTLPAITL KLGGKGYKLS PEDYTLKVSQ

570 380 300 400 410

AGKTLCLSGF MGMDIPPPSG PLWJLGDVFI GRYYTVFDRD NNRVGFAEAA RL

Los siguientes dominios se han identificado en la catepsina D:

Restos Longitud ID de dominio

1-18 18 Péptido señal

19-64 46 Péptido activador

65-412 348 Catepsina D

65-161 348 Cadena ligera de catepsina D

169-412 348 Cadena pesada de catepsina D

Como se usa en el presente documento, la expresión "quimiocina con motivo C-X-C 13" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la quimiocina con motivo C-X-C 13 (precursor humano: Swiss-Prot O43927 (SEQ ID NO: 11)).

10 20 30 40 50 60

M KFIS TS LLL MLLVSSLSPV QGVLEVYYTS LRCRCVQESS VFIP R R FID R IQILPRGNGC

70 60 90 100

PRKEIIVW KK NKSIVCVDPQ AEWIQRMMEV LRKRSSSTLP VPVFKRKIP

Los siguientes dominios se han identificado en la quimiocina con motivo C-X-C 13:

Restos Longitud ID de dominio

1-22 22 Péptido señal

23-109 87 quimiocina con motivo C-X-C 13

Como se usa en el presente documento, la expresión "involucrina" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la involucrina (precursor humano: Swiss-Prot P07476 (precursor humano: SEQ ID NO: 12)).

10 20 30 10 30 00

MSQQHTLPVT LSPALSQELL KTVPPPVNTH QEQMKQPTPL PPPCQKVPVE LPVEVPSKQE

7c; se; 90 :o o n o 120

EKHMTAVKGL PEQECEQQQK EPQEQELQQQ HWEQHEEYQK AENPEQQLKQ EKTQRDQQLN

130 140 150 160 170 ISO

KQLEEEKKLL DQQLDQELVK RDEQLGMKKE QLLELPEQQE GHLKHLEQQE GQLKHPEQQE

190 700 710 270 730 740

GQ1E1L:EQQE GQLELPEQQE GQLELPEQQE GQ1E1L:EQQE GQLELPEQQE GQLELPQQQE

230 260 270 280 290 300

CQLELSEQQE GQLEL5EQQE GQLEHLEHQE GQLEVPEEQM GQLKYLEQQE GQLEHLDQQE

31 0 370 330 340 350 360 XQPELPEQQM GQLKHLEQQE GQPKHLEQQE GQl.KQl.KKQK GQLKHLEQQE GQLEHLEHQE 370 38C 390 400 41C 420

GQLGLPEQQV LQLKQLEKQQ GQPKHLEEEE GQLKH1 'VQGE GQLKHLVQQE GQLEQQERQV

¿130 440 450 460 470 4 S 0 EHLEQQVGQL KHLEEQEGQL KHLEQQQGQL EVPEQQVGQP KiJLEQE^KQL ELPEQQEGQV 400 500 510 32 0 530 340

KH1EK0EAQL ELPEQQVGOP KHLEQQEKHL EHPEQQDGQL KHLEQQEGQL EDLEQQKGQL

550 56C 570 500

EQPVFAPAPG QVQDIQPALP TKGEVLLPVE HQQQKQKVQW PPKHK

Como se usa en el presente documento, la expresión "subunidad beta del receptor de interleucina 6" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la subunidad beta del receptor de interleucina 6 (precursor humano: Swiss-Prot P40189 (SEQ ID NO: 13))

MLTLQTWLVQ ALFIFLTTES TGELLDPCGY ISP E SPW Q L H5NETAVCVL KEKCMDYFHV 7C SC 90 100 11C 120 NANYIVWKTN HFTIPKEQYT IINRTASSVT FTDIASLNIQ LTCNILTFGQ LECNVYGITI

1 00 140 150 160 170 180 ISGLPPEKPK NLSCIVNEGK KMRCEWDGGR ETHLETNFTL KSEWATHKFA DCKAKRDTPT

190 200 210 220 230 240 SCTVDYSTVY FVN1EVWVEA ENALGKVTSD HIMFDPVYKV KPNPPHNLSV INSEELSSIL 250 260 270 280 290 300 KLTWTNPSIK SVIILKYNIQ YRTKDASTWS QIPPEDTAST RS5FTVQDLK PFTEYVFRIR 310 32C 33S 340 35C 36S CMKEDGKGYW SDWSEEASGI TYEDRPSKAP SFWYKIDPSH TQGYRTVQLV WKTLPPFEAN

3 70 380 390 400 410 420

GKILDYEVTL TRWKSHLQNY TVNATKLTVN LTNDRYLATL TVRNLVGKSD AAVLTIPACD

430 440 450 460 470 480

FQATHPVMDL KAFPKDNMLW VEWTTPRESV KKYILEWCVL SDKAPCITDW QQEDGTVHRT

490 500 510 520 530 540

YLRGNLAESK CYLITVTPVY ADGPGSPESI KAYLKQAPPS KGPTVRTKKV GKNEAVLEWD

550 560 570 580 590 600

QLPVDVQNGF IRNYTIFYRT IIGNETAVNV DSSHTEYTLS SLTSDTLYMV RMAAYTDEGG

610 620 630 640 650 660

KDGPEFTFTT PKFAQGEIEA IW PVCLA FL LTTLLGVLFC FNKRDLIKKH IWPNVPDPSK

670 680 690 700 710 720

SHIAQWSPHT PPRHNFNSKD QMYSDGNFTD VSWEIEAND KKPFPEDLKS LDLFKKEKIN

730 740 750 760 770 780

TEGHSSGIGG SSCMSSSRPS ISSSDENESS QNTSSTVQYS TVVHSGYRHQ VPSVQVFSRS

790 800 810 820 830 840

ESTQPLLDSE ERPEDLQLVD HVDGGDGILP RQQYFKQNCS QHESSPDISH FERSKQVSSV

850 860 870 880 890 900

NEEDFVRLKQ QISDHISQSC GSGQMKMFQE VSAADAFGPG TEGQVERFET VGMEAATDEG

910

MPKSYLPQTV RQGGYMPQ

Muy preferentemente, el ensayo para la subunidad beta del receptor de interleucina 6 detecta una o más formas solubles de la subunidad beta del receptor de interleucina 6. La subunidad beta del receptor de interleucina 6 es una proteína de membrana de tipo I que tiene un dominio extracelular grande, de la que la mayor parte o toda está presente en formas solubles de la subunidad beta del receptor de interleucina 6 generadas a través de un suceso de corte y empalme alternativo que deleciona todo o una parte del dominio transmembrana, o por proteólisis de la forma unida a membrana. En el caso de un inmunoensayo, para detectar esta forma (o formas) soluble pueden usarse uno o más anticuerpos que se unen a epítopos dentro de este dominio extracelular. Los siguientes dominios se han identificado en la subunidad beta del receptor de interleucina 6:

Restos Longitud ID de dominio

1-22 22 Péptido señal

23-918 896 subunidad beta del receptor de interleucina 6

642-918 277 Dominio citoplásmico

620-641 21 dominio transmembrana

23-619 597 Dominio extracelular

330-918 589 Falta en la isoforma 2

325-329 5 RPSKA (SEQ ID NO: 14) ^ NIASF (SEQ ID NO: 15) en la isoforma 2 Como se usa en el presente documento, la expresión "factor de crecimiento de hepatocitos" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor del factor de crecimiento de hepatocitos (precursor humano: Swiss-Prot P14210 (SEQ ID NO: 16)).

10 20 30 40 50 60

MWVTKLLPAL LLQHVLLHLL LLPIAIPYAE GQRKRRNT1H EFKKSAKTTL IKIDPALKIK

70 80 90 100 110 120

TKKVNTADQC ANRCTRNKGL PFTCKAFVFD KARKQCLWFP FNSMSSGVKK EFGHEFDLYE

130 140 150 160 170 180

NKDYIRNCII GKGRSYKGTV SITKSGIKCQ PWSSMIPHEH SFLPSSYRGK DLQENYCRNP

190 200 210 220 230 240

RGEEGGPWCF TSNPEVRYEV CDIPQCSEVE CMTCNGESYR GLMDHTESGK ICQRWDHQTP

2 50 260 270 280 290 300

HRHKFLPERY PDKGFDDNYC RNPDGQPRPW CYTLDPHTRW EYCAIKTCAD NTMNDTDVPL

310 320 330 340 350 360

ETTECIQGQG EGYRGTVNTI WNGIPCQRWD SQYPHEHDMT PENFKCKDLR ENYCRNPDGS

370 380 390 400 410 420

ESPWCFTTDP NIRVGYCSQI PNCDMSHGQD CYRGNGKNYM GNLSQTRSGL TCSMWDKNME

430 440 450 460 470 480

DLHRHIFWEP DASKLNENYC RNPDDDAHGP WCYTGNPLIP WDYCPISRCE GDTTPTIVNL

490 500 510 520 530 540

DHPVISCAKT KQLRWNGIP TRTNIGWMVS LRYRNKHICG GSLIKESWVL TARQCFPSRD

550 560 570 580 590 600

LKDYEAWLGI HDVHGRGDEK CKQVLNVSQL VYGPEGSDLV LMKLARPAVL DDFVSTIDLP

610 620 630 640 650 660

NYGCTIPEKT SCSVYGWGYT GLINYDGLLR VAHLYIMGNE KCSQHHRGKV TEÑESEICAG

670 680 690 700 710 720

AEKIGSGPCE GDYGGPLVCE QHKMRMVLGV IVPGRGCAIP NRPGIFVRVA YYAKW1HKII

LTYKVPQS

Los siguientes dominios se han identificado en el factor de crecimiento de hepatocitos:

Restos Longitud ID de dominio

1-31 31 secuencia señal

32-494 463 Cadena alfa del factor de crecimiento de hepatocitos 495-728 234 Cadena beta del factor de crecimiento de hepatocitos Como se usa en el presente documento, la expresión "inhibidor de metaloproteinasa 4" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor del inhibidor de metaloproteinasa 4 (precursor humano: Swiss-Prot Q99727 (SEQ ID NO: 17)).

10 20 30 40 50 60

MPGSPRPAPS T/ÍVLLLRLLAL LRPPGLGEAC SCAPAHPQQH ICHSALVIRA K ISSE K W PA

70 80 90 100 110 120

SADPADTEKM LRYEIKQIKM FKGFEKVKDV QYIYTPFDSS LCGVKLEANS QKQYLLTGQV

130 140 150 160 170 180

LSDGKVF1HL CNYIEPWEDL SLVQRESLNH HYHLNCGCQI TTCYTVPCTI SAPNECLWTD

190 200 210 2 20

WLLERKLYGY QAQHYVCMKH VDGTCSWYRG HLPLRKEFVD IVQP

Los siguientes dominios se han identificado en el inhibidor de metaloproteinasa 4:

Restos Longitud ID de dominio

1-27 27 Secuencia señal

28-224 197 inhibidor de metaloproteinasa 4

Como se usa en el presente documento, la expresión "quimiocina con motivo C-C 18" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la quimiocina con motivo C-C 18 ^{(precursor humano: Swiss-Prot P55774 (SEQ ID n O:} 18^)).

10 20 30 40 50 60

M K G L A A A L L V L V C T M A L C S C A Q V G T N K E L C C L V Y T S W Q I P Q K F I V D Y S E T S P Q C P K P G V I

70 80

L L T K R G R Q I C A D P N K K W V Q K Y I S D L K L N A

Los siguientes dominios se han identificado en la quimiocina con motivo C-C 18:

Restos Longitud ID de dominio

1-20 20 ^{Péptido señal}

21-89 69 quimiocina con motivo C-C 18

21-88 68 ^{CCL 18 (1-68)}

23-89 67 CCL 18 (3-69)

^24-89 66 ^{CCL 18 (4-69)}

Como se usa en el presente documento, la expresión "matrilisina" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la matrilisina (Swiss-Prot P09237 (precursor humano: SEQ ID NO: 19))

10 20 30 40 50 60

MRLTVLCAVC LLPGSLALPL PQEAGGMSEL QT/ÍEQAQDYLK RFYLYDSETK NANSLEAKLK

70 80 90 10 0 110 120

EMQKFFGLPI TGMLNSRVIE IMQKPRCGVP DVAEYSLFPN SPKWTSKWT YRIVSYTRDL

130 140 150 16 0 170 180

PHITVDRLVS KALNMWGKEI PLHFRKWWG TADIMIGFAR GAHGDSYPFD GPGNTLAHAF

190 200 210 22 0 230 240

APGTGLGGDA HFDEDERWTD GSSLGINFLY AATHELGHSL GMGHSSDPNA VMYPTYGNGD

250 260

PQNFKLSQDD IKGIQKLYGK RSNSRKK

Los siguientes dominios se han identificado en la matrilisina:

Restos Longitud ID de dominio

1-17 17 péptido señal

18-94 77 péptido activador

95-267 173 Matrilisina

Como se usa en el presente documento, la expresión "quimiocina con motivo C-X-C 11" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la quimiocina con motivo C-X-C 11 (precursor humano: Swiss-Prot 014625 (SEQ ID NO: 20))

10 20 30 40 50 60

M S V K G M A I A L A V I L C A T V V Q G F P M F K R G R C L C I G P G V K A V K V A D I E K A S I M Y P S N N C D K I

70 80 90

E V I I T L K E N K G Q R C L N P K S K Q A R L I I K K V E R K N F

Los siguientes dominios se han identificado en la quimiocina con motivo C-X-C 11:

Restos Longitud ID de dominio

1-21 21 péptido señal

22-94 73 quimiocina con motivo C-X-C 11

Como se usa en el presente documento, la expresión "quimiocinas con motivo C-X-C 1,2 y 3" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que son comunes a los precursores de las quimiocinas con motivo C-X-C 1, 2 y 3 (números de referencia Swiss-Prot de los precursores humanos: quimiocina con motivo C-X-C 1 (P09341), 2 (P19875) y 3 (P19876)).

La quimiocina con motivo CXC 1 también se conoce como "proteína alfa regulada por crecimiento" (precursor humano Swiss-Prot P09341 (SEQ ID NO: 21)).

MARAALSAAP SNPRLLRVAL

R RAAGASVATE LRCQCLQTLQ G IH PKN IQ SV

7C 8C 90 100

HVKSPGPHCA Q TEV IATLKN GRKACLNPAS P IV K K IIE K M LNSDKSN

Los siguientes dominios se han identificado en la proteína alfa regulada por crecimiento:

Restos Longitud ID de dominio

1-34 34 Péptido señal

35-107 73 Proteína alfa regulada por crecimiento

38-107 70 GRO-alfa (4-73)

39-107 69 GRO-alfa (5-73)

40-107 68 GRO-alfa (6-73)

La quimiocina con motivo CXC 2 también se conoce como "proteína inflamatoria de macrófagos-2 alfa" (precursor humano Swiss-Prot P19875 (SEQ ID NO: 22)).

LO 20 30 40 50 60

MARATLSAAP SNPRLLRVAL LLLLLV A A S R RAAGAPLATE LRCOCLGTLG G IH LK N IQ S V

tc 8C 90 : oo

KVKSPGPHCA Q TE V IA TLK N GQKACLNPAS PM VK KIIEKM LKNGKSN

Los siguientes dominios se han identificado en la proteína inflamatoria de macrófagos-2 alfa:

Restos Longitud ID de dominio

1-34 34 Péptido señal

35-107 73 quimiocina con motivo C-X-C 2

39-107 69 GRO-beta (5-73)

La quimiocina con motivo CXC 2 también se conoce como "proteína gamma regulada por crecimiento" (precursor humano Swiss-Prot P19876 (SEQ ID NO: 23)).

10 2G 30 40 5G 6G

MAHAT L S AA P 0 N PRLLRVAL L L L L LVAAS R RAAG A S V V T E LRCQCLQT LQ G IH L K N IQ S V

70 80 90 100

NVRSPGPHCA Q T E V IA T LK N GKKACLNPAS F M V Q K IIE K I LNKG5TN

Los siguientes dominios se han identificado en la quimiocina con motivo C-X-C 3:

Restos Longitud ID de dominio

1-34 34 Péptido señal

35-107 73 quimiocina con motivo C-X-C 3

39-107 73 GRO-gamma (5-73)

Como se usa en el presente documento, la expresión "antileucoproteinasa" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor de la antileucoproteinasa (Swiss-Prot P03973 (SEQ ID NO: 24)).

10 20 30 40 50 60

MKSSGLFPFL VLLALGTLAP WAVEGSGKSF KAGVCPPKKS AQCLRYKKPE CQSDWQCPGK

7C 3C 90 100 11C 120

KRCCPDTCGI KCLDPVDTPN PTRRKPGKCP VTYGQCLMLN PPNFCEMOGQ CKRDLKCCMG

130

MCGKSCVSPV KA

Los siguientes dominios se han identificado en la antileucoproteinasa:

Restos Longitud ID de dominio

1-25 25 secuencia señal

26-132 107 Antileucoproteinasa

Como se usa en el presente documento, el término "IgA" se refiere a un anticuerpo que tiene dos subclases (IgA1 e IgA2) y que puede existir en una forma dimérica unida por una cadena J (llamada IgA secretora, o IgAs). En su forma secretora, la IgA es la principal inmunoglobulina encontrada en las secreciones mucosas, incluyendo las lágrimas, la saliva, el calostro y en secreciones del tracto genitourinario, el tracto gastrointestinal, la próstata y el epitelio respiratorio. Además, se encuentra en pequeñas cantidades en la sangre. La IgA puede medirse de forma separada de otras inmunoglobulinas tales como la IgG o la IgM, por ejemplo, utilizando anticuerpos que se unen a la cadena a de IgA.

Como se usa en el presente documento, los términos "IgG1" y "IgG subclase I" se refieren a la subclase 1 de la glucoproteína inmunoglobulina G (IgG), una importante molécula efectora de la respuesta inmunitaria humoral en el hombre. Los anticuerpos de la clase IgG expresan su actividad predominante durante una respuesta de anticuerpos secundaria. La molécula básica de inmunoglobulina G tiene una estructura de cuatro cadenas, que comprende dos cadenas pesadas (H) idénticas y dos cadenas ligeras (L) idénticas, unidas entre sí por enlaces disulfuro intercatenarios. Cada cadena pesada está codificada por 4 tipos distintos de segmentos génicos, designados V^h (variable), D (diversidad), J^h (unión) y C^h (constante). La región variable de la cadena pesada está codificada por los segmentos V^h, D y J^h. Las cadenas ligeras están codificadas por los 3 segmentos génicos, V^l, J^l y C^l. La región variable de las cadenas ligeras está codificada por los segmentos V^l, D y J^l.

Como se usa en el presente documento, los términos "IgG2" y "IgG subclase II" se refieren a la subclase 2 de la glucoproteína inmunoglobulina G (IgG), una importante molécula efectora de la respuesta inmunitaria humoral en el hombre. Los anticuerpos de la clase IgG expresan su actividad predominante durante una respuesta de anticuerpos secundaria. La molécula básica de inmunoglobulina G tiene una estructura de cuatro cadenas, que comprende dos cadenas pesadas (H) idénticas y dos cadenas ligeras (L) idénticas, unidas entre sí por enlaces disulfuro intercatenarios. Cada cadena pesada está codificada por 4 tipos distintos de segmentos génicos, designados V^h (variable), D (diversidad), J^h (unión) y C^h (constante). La región variable de la cadena pesada está codificada por los segmentos V^h, D y J^h. Las cadenas ligeras están codificadas por los 3 segmentos génicos, V^l, J^l y C^l. La región variable de las cadenas ligeras está codificada por los segmentos V^l, D y J^l.

La longitud y la flexibilidad de la región bisagra varían entre las subclases de IgG. La región bisagra de IgG1 abarca los aminoácidos 216-231 y, como es libremente flexible, los fragmentos Fab pueden girar alrededor de sus ejes de simetría y moverse dentro de una esfera centrada en el primero de los dos puentes disulfuro inter-cadenas pesadas (23). La IgG2 tiene una bisagra más corta que la IgG1, con 12 restos de aminoácidos y cuatro puentes disulfuro. La región bisagra de la IgG2 carece de un resto de glicina, es relativamente corta y contiene una doble hélice rígida de poli-prolina, estabilizada por puentes disulfuro de cadena inter-cadenas pesadas adicional. Estas propiedades restringen la flexibilidad de la molécula de IgG2 (24). La IgG3 se diferencia de las otras subclases por su singular región bisagra extendida (aproximadamente cuatro veces más larga que la bisagra de IgG1), que contiene 62 aminoácidos (incluidas 21 prolinas y 11 cisteínas) que forman una doble hélice inflexible de poli-propina (25, 26). En la IgG3, los fragmentos Fab están relativamente lejos del fragmento Fc, dando a la molécula una mayor flexibilidad. La bisagra alargada en IgG3 también es responsable de su mayor peso molecular en comparación con las otras subclases. La región bisagra de IgG4 es más corta que la de IgG1 y su flexibilidad es intermedia entre la de IgG1 e IgG2.

Las cuatro subclases de IgG también difieren con respecto al número de enlaces disulfuro inter-cadenas pesadas en la región bisagra (26). Las diferencias estructurales entre las subclases de IgG también se reflejan en su susceptibilidad a las enzimas proteolíticas. La IgG3 es muy susceptible a la escisión por estas enzimas, mientras que la IgG2 es relativamente resistente. Las IgG1 e IgG4 presentan una sensibilidad intermedia, dependiendo de la enzima utilizada. Dado que todas estas enzimas proteolíticas escinden moléculas de IgG cerca o dentro de la región bisagra, es probable que la alta sensibilidad de la IgG3 a la digestión enzimática esté relacionada con su bisagra accesible. Otra diferencia estructural entre las subclases de IgG humana es el enlace de las cadenas pesada y ligera mediante un enlace disulfuro. Este enlace une el carboxilo terminal de la cadena ligera con el resto cisteína en la posición 220 (en IgG) o en la posición 131 (en IgG2, IgG3 e IgG4) de la secuencia de CH1 de la cadena pesada.

Como consecuencia de las diferencias estructurales, las cuatro subclases de IgG pueden distinguirse entre sí, por ejemplo, utilizando anticuerpos que son específicos para las diferencias entre las isoformas. En la presente solicitud, se determina un nivel de IgG1 utilizando un ensayo que distingue esta subclase, con respecto a las otras subclases.

Como se usa en el presente documento, la expresión "relacionar una señal con la presencia o cantidad" de un analito refleja el siguiente conocimiento. Las señales de un ensayo normalmente se relacionan con la presencia o la cantidad de un analito mediante el uso de una curva patrón calculada utilizando concentraciones conocidas del analito de interés. Como se usa el término en el presente documento, un ensayo está "configurado para detectar" un analito si el ensayo puede generar una señal detectable indicativa de la presencia o cantidad de una concentración fisiológicamente relevante del analito. Debido a que un epítopo de anticuerpo es del orden de 8 aminoácidos, un inmunoensayo configurado para detectar un marcador de interés también detectará polipéptidos relacionados con la secuencia del marcador, siempre que los polipéptidos contengan el epítopo (o epítopos) necesarios para unirse al anticuerpo o anticuerpos utilizados en el ensayo. La expresión "marcador relacionado" como se usa en el presente documento con respecto a un biomarcador, tal como uno de los marcadores de lesión renal descritos en el presente documento, se refiere a uno o más fragmentos, variantes, etc., de un marcador particular o su precursor biosintético, que pueden detectarse como un sustituto del marcador en sí o como biomarcadores independientes. La expresión también se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que proceden del precursor del biomarcador formando complejo con especies adicionales, tales como proteínas de unión, receptores, heparina, lípidos, azúcares, etc.

En este sentido, el experto en la materia entenderá que las señales obtenidas de un inmunoensayo son el resultado directo de los complejos formados entre uno o más anticuerpos y la biomolécula diana (es decir, el analito) y los polipéptidos que contienen el epítopo (o epítopos) necesario al que se unen los anticuerpos. Si bien tales ensayos pueden detectar el biomarcador de longitud completa y el resultado del ensayo se expresa como una concentración de un biomarcador de interés, la señal del ensayo es en realidad el resultado de todos tales polipéptidos "inmunorreactivos" presentes en la muestra. La expresión de biomarcadores también puede determinarse mediante otros inmunoensayos, que incluyen las mediciones de proteínas (tales como las transferencias puntuales, transferencia de Western, métodos cromatográficos, espectrometría de masas, etc.) y mediciones de ácidos nucleicos (cuantificación de ARNm). Este listado no pretende ser limitante.

La expresión marcador "positivo" como se usa en el presente documento se refiere a un marcador que se determina que está elevado en pacientes con sepsis que padecen una enfermedad o afección, con respecto a los pacientes con sepsis que no padecen esa enfermedad o afección. La expresión marcador "negativo" como se usa en el presente documento se refiere a un marcador que se determina que está reducido en pacientes con sepsis que padecen una enfermedad o afección, con respecto a los pacientes con sepsis que no padecen esa enfermedad o afección.

La expresión "paciente con sepsis" como se usa en el presente documento se refiere a un organismo humano o no humano. Por lo tanto, los métodos y composiciones descritos en el presente documento son aplicables tanto a enfermedades humanas como veterinarias. Además, aunque un paciente con sepsis es preferentemente un organismo vivo, la invención descrita en el presente documento puede usarse también en necropsias. Los pacientes con sepsis preferentes son humanos, y muy preferentemente los "pacientes", como se usa en el presente documento, se refiere a seres humanos vivos que reciben atención médica por una enfermedad o afección. Esto incluye a personas sin enfermedad definida estudiadas en cuanto a signos de patología.

Preferentemente, un analito se mide en una muestra. Dicha muestra puede obtenerse de un paciente con sepsis, o puede obtenerse de materiales biológicos destinados a proporcionarse al paciente con sepsis. Por ejemplo, se puede obtener una muestra de un riñón que se está evaluando para un posible trasplante en un paciente con sepsis, y una medición del analito utilizarse para evaluar el riñón en cuanto a daño preexistente. Las muestras preferentes son muestras de líquidos corporales.

La expresión "muestra de líquido corporal" como se usa en el presente documento se refiere a una muestra de líquido corporal obtenida para fines de diagnóstico, pronóstico, clasificación o evaluación de un paciente con sepsis de interés, tal como un paciente o donante para trasplante. En determinadas realizaciones, tal muestra puede obtenerse con el fin de determinar el desenlace de una afección en curso o el efecto de un régimen de tratamiento en una afección. Las muestras de líquidos corporales preferentes incluyen sangre, suero, plasma, líquido cefalorraquídeo, orina, saliva, esputo y derrames pleurales. Además, un experto en la materia se daría cuenta de que determinadas muestras de líquidos corporales se analizarían más fácilmente después de un procedimiento de fraccionamiento o purificación, por ejemplo, separación de sangre entera en los componentes del suero o plasma.

El término "diagnóstico" como se usa en el presente documento se refiere a los métodos mediante los cuales el experto en la materia puede estimar y/o determinar la probabilidad ("una verosimilitud") de si un paciente padece o no una enfermedad o afección determinada. En el caso de la presente invención, "diagnóstico" incluye el uso de los resultados de un ensayo, muy preferentemente de un inmunoensayo, para un marcador de lesión renal descrito en el presente documento, opcionalmente junto con otras características clínicas, para llegar a un diagnóstico (es decir, la aparición o no aparición) de una lesión renal aguda o IRA para el paciente con sepsis a partir de la cual se obtuvo y analizó una muestra. Que tal diagnóstico se "determine" no se pretende que implique que el diagnóstico sea el 100 % preciso. Muchos biomarcadores son indicativos de múltiples afecciones. El médico experto no utiliza los resultados de los biomarcadores en un vacío informativo, sino que más bien los resultados de las pruebas se utilizan junto con otros indicios clínicos para llegar a un diagnóstico. Por lo tanto, un nivel medido del biomarcador en un lado de un umbral de diagnóstico predeterminado indica una mayor probabilidad de aparición de enfermedad en el paciente con sepsis con respecto a un nivel medido en el otro lado del umbral de diagnóstico predeterminado. De forma similar, un riesgo pronóstico señala una probabilidad ("verosimilitud") de que se produzca una evolución o desenlace determinado. Un nivel o un cambio en el nivel de un indicador pronóstico, que a su vez se asocia con una probabilidad aumentada de morbilidad (por ejemplo, empeoramiento de la función renal, futura IRA o fallecimiento) se denomina "indicativo de una probabilidad aumentada" de un desenlace adverso en un paciente.

Ensayos de marcadores

En general, los inmunoensayos implican poner en contacto una muestra que contiene o se sospecha que contiene un biomarcador de interés con al menos un anticuerpo que se une específicamente al biomarcador. Entonces, se genera una señal indicativa de la presencia o cantidad de complejos formados por la unión de polipéptidos de la muestra al anticuerpo. La señal se relaciona después con la presencia o cantidad del biomarcador en la muestra. El experto en la materia conoce numerosos métodos y dispositivos para la detección y el análisis de biomarcadores. Véanse, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos 6.143.576; 6.113.855; 6.019.944; 5.985.579; 5.947.124; 5.939.272; 5.922.615; 5.885.527; 5.851.776; 5.824.799; 5.679.526; 5.525.524; y 5.480.792, y The Immunoassay Handbook, David Wild, ed. Stockton Press, Nueva York, 1994.

Los dispositivos y métodos de ensayo conocidos en la técnica pueden utilizar moléculas marcadas en diversos formatos de ensayo de tipo sándwich, competitivos o no competitivos, para generar una señal que esté relacionada con la presencia o cantidad del biomarcador de interés. Los formatos de ensayo adecuados también incluyen métodos cromatográficos, espectrográficos de masas y de "transferencia" de proteínas. Adicionalmente, determinados métodos y dispositivos, tales como biosensores e inmunoensayos ópticos, pueden emplearse para determinar la presencia o cantidad de analitos sin necesidad de una molécula marcada. Véanse, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos 5.631.171; y 5.955.377. Un experto en la materia también reconoce que la instrumentación robótica que incluye, pero sin limitación, los sistemas Ac Ce SS® de Beckman, AXSYM® de Abbott, ELECSYS® de Roche, STrAt US® de Dade Behring, se encuentran entre los analizadores de inmunoensayo que tienen la capacidad de realizar inmunoensayos. Pero puede utilizarse cualquier inmunoensayo adecuado, por ejemplo, inmunoensayos ligados a enzimas (ELISA), radioinmunoensayos (los RIA), ensayos de unión competitiva, y similares.

Los anticuerpos u otros polipéptidos pueden inmovilizarse en una diversidad de soportes sólidos para su uso en ensayos. Las fases sólidas que pueden usarse para inmovilizar miembros de unión específicos incluyen las desarrolladas y/o usadas como fases sólidas en ensayos de unión en fase sólida. Los ejemplos de fases sólidas adecuadas incluyen filtros de membrana, papeles a base de celulosa, perlas (que incluyen partículas poliméricas, de látex y paramagnéticas), vidrio, láminas de silicio, micropartículas, nanopartículas, TentaGels, AgroGels, geles de PEGA, geles de SPOCC y placas de múltiples pocillos. Podría prepararse una tira de ensayo recubriendo el anticuerpo o una pluralidad de anticuerpos en una matriz sobre un soporte sólido. Después, esta tira podría sumergirse en la muestra de prueba y a continuación procesarse rápidamente a través de lavados y etapas de detección para generar una señal medible, tal como una mancha de color. Los anticuerpos u otros polipéptidos pueden unirse a zonas específicas de los dispositivos de ensayo, ya sea mediante conjugación directamente a la superficie de un dispositivo de ensayo, o mediante unión indirecta. En un ejemplo del último caso, los anticuerpos u otros polipéptidos pueden inmovilizarse sobre partículas u otros soportes sólidos, y el soporte sólido inmovilizarse en la superficie del dispositivo.

Los ensayos biológicos precisan métodos para la detección, y uno de los métodos más comunes para la cuantificación de los resultados es conjugar un marcador detectable a una proteína o ácido nucleico que tenga afinidad por uno de los componentes del sistema biológico que se estudia. Los marcadores detectables pueden incluir moléculas que son detectables en sí mismas (por ejemplo, fracciones fluorescentes, marcadores electroquímicos, quelatos metálicos, etc.) así como moléculas que pueden detectarse indirectamente mediante la producción de un producto de reacción detectable (por ejemplo, enzimas tales como la peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, etc.) o mediante una molécula de unión específica que puede ser ella misma detectable (por ejemplo, biotina, digoxigenina, maltosa, oligohistidina, 2,4-dintrobenceno, fenilarsenato, ADNmc, ADNbc, etc.).

La preparación de fases sólidas y de conjugados de marcador detectables a menudo comprende el uso de reticulantes químicos. Los reactivos de reticulación contienen al menos dos grupos reactivos y se dividen generalmente en reticulantes homofuncionales (que contienen grupos reactivos idénticos) y reticulantes heterofuncionales (que contienen grupos reactivos no idénticos). Los reticulantes homobifuncionales que se acoplan a través de aminas, sulfhidrilos o que reaccionan de forma no específica, están disponibles de muchas fuentes comerciales. Las maleimidas, los haluros de alquilo y arilo, los alfa-haloacilos y los piridil disulfuros son grupos reactivos con tiol. Las maleimidas, los haluros de alquilo y arilo, y los alfa-haloacilos reaccionan con sulfhidrilos para formar enlaces tiol éter, mientras que los piridil disulfuros reaccionan con sulfhidrilos para producir disulfuros mixtos. El producto de piridil disulfuros es escindible. Los imidoésteres también son muy útiles para reticulaciones proteína-proteína. Está disponible en el mercado una diversidad de reticulantes heterobifuncionales, combinando cada uno distintos atributos para una conjugación satisfactoria.

En determinados aspectos, se divulgan kits para el análisis de los marcadores de lesión renal descritos. El kit comprende reactivos para el análisis de al menos una muestra de prueba que comprende al menos un anticuerpo que es un marcador de lesión renal. El kit también puede incluir dispositivos e instrucciones para realizar una o más de las correlaciones de diagnóstico y/o pronóstico descritas en el presente documento. Los kits preferentes comprenderán una pareja de anticuerpos para realizar un ensayo de tipo sándwich o una especie marcada para realizar un ensayo competitivo, para el analito. Preferentemente, una pareja de anticuerpos comprende un primer anticuerpo conjugado con una fase sólida y un segundo anticuerpo conjugado con un marcador detectable, en donde cada uno de los primero y segundo anticuerpos se unen a un marcador de lesión renal. Muy preferentemente, cada uno de los anticuerpos son anticuerpos monoclonales. Las instrucciones para el uso del kit y la realización de las correlaciones pueden ser en forma de etiquetado, lo que se refiere a cualquier material escrito o grabado que se adjunta, o que acompaña de otra forma a un kit, en cualquier momento durante su fabricación, transporte, venta o uso. Por ejemplo, el término etiquetado abarca prospectos publicitarios y folletos, materiales de envasado, instrucciones, casetes de audio o vídeo, discos informáticos, así como inscripción impresa directamente sobre los kits.

Anticuerpos

El término "anticuerpo" como se usa en el presente documento se refiere a un péptido o polipéptido procedente de, modelados como o sustancialmente codificado por un gen de inmunoglobulina o genes de inmunoglobulina, o fragmentos de los mismos, que tiene la capacidad de unirse específicamente a un antígeno o epítopo. Véanse, por ejemplo, Fundamental Immunology, 3a Edición, W.E. Paul, ed., Raven Press, N.Y. (1993); Wilson (1994; J. Immunol. Methods 175:267-273; Yarmush (1992) J. Biochem. Biophys. Methods 25:85-97. El término anticuerpo incluye porciones de unión a antígeno, es decir, "sitios de unión a antígeno", (por ejemplo, fragmentos, subsecuencias, regiones determinantes de complementariedad (CDR)) que conservan la capacidad de unirse al antígeno, que incluyen (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CHl; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CHI; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un único brazo de un anticuerpo, (v) un fragmento de dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), que consiste en un dominio VH; y (vi) una región determinante de complementariedad aislada (CDR). Los anticuerpos monocatenarios también se incluyen como referencia en el término "anticuerpo".

Los anticuerpos utilizados en los inmunoensayos descritos en el presente documento preferentemente se unen de forma específica a un marcador de lesión renal descrito en el presente documento. La expresión "se une específicamente" no pretende indicar que un anticuerpo se une exclusivamente a su diana prevista, ya que, como se ha señalado anteriormente, un anticuerpo se une a cualquier polipéptido que presente el epítopo (o epítopos) al que se une el anticuerpo. Más bien, un anticuerpo "se une específicamente" si su afinidad por su diana prevista es aproximadamente 5 veces mayor en comparación con su afinidad por una molécula que no sea una diana, la cual no presenta el epítopo (o epítopos) apropiado. Preferentemente, la afinidad del anticuerpo será al menos aproximadamente 5 veces, preferentemente 10 veces, más preferentemente de 25 veces, incluso más preferentemente 50 veces y muy preferentemente 100 veces o más, mayor para una molécula diana que su afinidad para una molécula que no sea una diana. En realizaciones preferentes, los anticuerpos preferentes se unen con afinidades de al menos aproximadamente 107 M_1 y preferentemente de entre aproximadamente 108 M_1 a aproximadamente 109 M-1, de aproximadamente 109 M'1 a aproximadamente 1010 M'1 o de aproximadamente 1010 M'1 a aproximadamente 1012 M-1.

La afinidad se calcula como Kd = koff/kon ( k f es la constante disociación, Kon es la constante de asociación y Kd es la constante de equilibrio). La afinidad se puede determinar en el equilibrio midiendo la fracción unida (r) del ligando marcado a diversas concentraciones (c). Los datos se representan en un gráfico usando la ecuación de Scatchard: r/c = K(n-r): donde r = moles de ligando unido/mol de receptor en equilibrio; c = concentración de ligando libre en el equilibrio; K = constante de asociación de equilibrio; y n = número de sitios de unión al ligando por molécula de receptor. Por análisis gráfico, r/c se representa en el eje Y frente a r en el eje X, produciendo así una representación de Scatchard. La medición de la afinidad de anticuerpos mediante el análisis de Scatchard es bien conocida en la técnica. Véase, por ejemplo, van Erp et al., J. Immunoassay 12: 425-43, 1991; Nelson y Griswold, Comput. Methods Programs Biomed. 27: 65-8, 1988.

El término "epítopo" se refiere a un determinante antigénico que tiene la capacidad de unirse específicamente a un anticuerpo. Los epítopos consisten habitualmente en agrupaciones superficiales químicamente activas de moléculas tales como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar y habitualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como las características específicas de carga. Los epítopos conformacionales y no conformacionales se distinguen porque la unión a los primeros, pero no a los últimos, se pierde en presencia de disolventes desnaturalizantes.

Numerosas publicaciones analizan el uso de la tecnología de presentación en fagos para producir y explorar bibliotecas de polipéptidos en cuanto a la unión a un analito seleccionado. Véanse, por ejemplo, Cwirla et al., Proc. Natl. Acad. Sci. u Sa 87, 6378-82, 1990; Devlin et al., Science 249, 404-6, 1990, Scott y Smith, Science 249, 386-88, 1990; y Ladner et al., la Patente de Estados Unidos n.° 5.571.698. Un concepto básico de los métodos de presentación en fagos es el establecimiento de una asociación física entre el ADN que codifica un polipéptido que se va a explorar y el polipéptido. Esta asociación física la proporciona la partícula del fago, que presenta un polipéptido como parte de una cápside que encierra el genoma del fago que codifica el polipéptido. El establecimiento de una asociación física entre los polipéptidos y su material genético permite exploración simultánea masiva de un gran número de fagos que portan distintos polipéptidos. Los fagos que presentan un polipéptido con afinidad para una diana se unen a la diana, y estos fagos se enriquecen mediante exploración de afinidad para la diana. La identidad de los polipéptidos presentados en estos fagos de estos fagos puede determinarse a partir de sus genomas respectivos. Usando estos métodos, un polipéptido identificado como que tiene una afinidad de unión por una diana deseada puede sintetizarse a una escala mayor por medios convencionales. Véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. n.° 6.057.098.

Después, los anticuerpos que se generan mediante estos métodos pueden seleccionarse, en primer lugar mediante exploración en cuanto a la afinidad y la especificidad con el polipéptido de interés purificado y, si es necesario, comparando los resultados con la afinidad y especificidad de los anticuerpos con polipéptidos que se desean excluir de la unión. El procedimiento de exploración puede implicar la inmovilización de los polipéptidos purificados en pocillos separados de placas de microtitulación. La solución que contiene un posible anticuerpo o grupos de anticuerpos se coloca después en los pocillos de microtitulación respectivos y se incuba durante aproximadamente 30 min a 2 h. Después, se lavan los pocillos de microtitulación y se les añade un anticuerpo secundario marcado (por ejemplo, un anticuerpo anti-ratón conjugado con fosfatasa alcalina si los anticuerpos generados son anticuerpos de ratón), y se incuba durante aproximadamente 30 min y después se lava. Se añade el sustrato a los pocillos y aparece una reacción de color donde esté presente el anticuerpo para polipéptido (o polipéptidos) inmovilizado.

Después, los anticuerpos así identificados pueden analizarse adicionalmente en cuanto a la afinidad y la especificidad en el diseño de ensayo seleccionado. En el desarrollo de inmunoensayos para una proteína diana, la proteína diana purificada actúa como un patrón con el que juzgar la sensibilidad y la especificidad del inmunoensayo utilizando los anticuerpos que se han seleccionado. Debido a que la afinidad de unión de diversos anticuerpos puede diferir; determinadas parejas de anticuerpos (por ejemplo, en ensayos de tipo sándwich) pueden interferir entre sí estéricamente, etc., el rendimiento de un anticuerpo en el ensayo puede ser una medida más importante que la afinidad absoluta y la especificidad de un anticuerpo.

Aunque la presente solicitud describe en detalle ensayos de unión basados en anticuerpos, las alternativas a los anticuerpos como especies de unión en ensayos son bien conocidas en la técnica. Estas incluyen receptores para una diana particular, aptámeros, etc. Los aptámeros son moléculas de ácido oligonucleico o peptídicas que se unen a una molécula diana específica. Los aptámeros se crean habitualmente seleccionándolos de un grupo grande de secuencias aleatorias, pero también existen aptámeros naturales. Los aptámeros de alta afinidad que contienen nucleótidos modificados confieren características mejoradas al ligando, tales como características de suministro mejoradas o de estabilidad in vivo mejoradas. Los ejemplos de tales modificaciones incluyen sustituciones químicas en las posiciones de ribosa y/o fosfato, y/o base, y pueden incluir funcionalidades de cadenas laterales de aminoácidos.

Correlaciones de ensayos

El término "correlacionar" como se usa en el presente documento en referencia al uso de biomarcadores, se refiere a comparar la presencia o la cantidad del biomarcador (o biomarcadores) en un paciente con su presencia o cantidad en personas que se sabe que padecen o que se sabe que están en riesgo de, una dada afección; o en personas que se sabe que no tienen una dada afección. A menudo, esto toma la forma de la comparación de un resultado de ensayo en forma de una concentración de biomarcador con un umbral predeterminado seleccionado para ser indicativo de la aparición o no aparición de una enfermedad o de la probabilidad de algún desenlace futuro.

La selección de un umbral de diagnóstico implica, entre otras cosas, la consideración de la probabilidad de enfermedad, distribución de diagnósticos verdaderos y falsos en distintos umbrales de la prueba, y estimaciones de las consecuencias del tratamiento (o de una incapacidad de tratar) basándose en el diagnóstico. Por ejemplo, cuando se considera administrar una terapia específica que sea altamente eficaz y tenga un bajo nivel de riesgo, se necesitan pocas pruebas porque los médicos pueden aceptar una incertidumbre diagnóstica sustancial. Por otro lado, en situaciones donde las opciones de tratamiento son menos eficaces y más riesgosas, los médicos a menudo necesitan un mayor grado de certeza diagnóstica. Por lo tanto, el análisis del costo/beneficio está implicado en la selección de un umbral de diagnóstico.

Los umbrales adecuados se pueden determinar de diversas maneras. Por ejemplo, un umbral de diagnóstico recomendado para el diagnóstico de infarto agudo de miocardio usando la troponina cardiaca es el centil 97,5 de la concentración observada en una población normal. Otro método puede ser observar muestras seriadas del mismo paciente, donde se usa un resultado "basal" anterior para seguir los cambios temporales en el nivel de los biomarcadores.

Para seleccionar un umbral de decisión también se pueden utilizar estudios de población. Las características operativas del receptor ("ROC", forma siglada de reciever operating characteristic) surgió del campo de la detección de señales, que se desarrolló durante la Segunda Guerra Mundial para el análisis de imágenes de radar, y el análisis de ROC se usa a menudo para seleccionar un umbral que mejor pueda distinguir una subpoblación "enferma" de una subpoblación "no enferma". Un positivo falso, en este caso, se produce cuando la persona da positivo en las pruebas, pero en realidad no tiene la enfermedad. Un negativo falso, por otro lado, se produce cuando las personas das negativo en las pruebas, sugiriendo que están sanos, cuando realmente tienen la enfermedad. Para dibujar una curva ROC, la tasa de positivos verdaderos (TPV) y la tasa de positivos falsos (TPF) se determinan a medida que el umbral de decisión se varía continuamente. Dado que la TPV es equivalente a sensibilidad y la TPF es igual a 1 -especificidad, el gráfico ROC a veces se llama representación de sensibilidad frente a (1 - especificidad). Una prueba perfecta tendrá un área bajo la curva ROC de 1,0; una prueba aleatoria tendrá un área de 0,5. Se selecciona un umbral para proporcionar un nivel aceptable de especificidad y sensibilidad.

En este contexto, "enfermo" pretende referirse a una población que tiene una característica (la presencia de una enfermedad o afección, o la aparición de algún desenlace) y "no enfermo" se refiere a una población que carece de la característica. Si bien un único umbral de decisión es la aplicación más simple de tal método, se pueden usar múltiples umbrales de decisión. Por ejemplo, por debajo de un primer umbral, puede asignarse la ausencia de enfermedad con una confianza relativamente alta y, por encima de un segundo umbral, la presencia de enfermedad también puede asignarse con una confianza relativamente alta. Entre los dos umbrales puede considerarse indeterminado. Esto tiene el propósito de ser solo de naturaleza ejemplar.

Además de las comparaciones de umbrales, otros métodos para correlacionar los resultados de ensayos con la clasificación de un paciente (aparición o no aparición de la enfermedad, probabilidad de un desenlace, etc.) incluyen árboles de decisiones, conjuntos de reglas, métodos bayesianos y métodos de redes neuronales. Estos métodos pueden producir valores de probabilidad que representan el grado en que un paciente con sepsis pertenece a una clasificación de una pluralidad de clasificaciones.

Las medidas de precisión de la prueba se pueden obtener como se describe en Fischer et al., Intensive Care Med. 29: 1043-51,2003 y utilizarse para determinar la efectividad de un biomarcador dado. Estas medidas incluyen sensibilidad y especificidad, valores predictivos, razones de verosimilitud, razones de posibilidades y áreas de curva ROC. El área bajo la curva ("ABC") de una representación ROC es igual a la probabilidad de que un clasificador clasifique una instancia positiva elegida al azar más alta que una negativa elegida al azar. El área bajo la curva ROC puede considerarse equivalente a la prueba de la U de Mann-Whitney, que prueba la diferencia de mediana entre las puntuaciones obtenidas en los dos grupos considerados si los grupos son de datos continuos, o a la prueba de rangos de Wilcoxon.

Como se analiza anteriormente, las pruebas adecuadas pueden presentar uno o más de los siguientes resultados en estas diversas medidas: una especificidad mayor de 0,5, preferentemente de al menos 0,6, más preferentemente de al menos 0,7, todavía más preferentemente de al menos 0,8, incluso más preferentemente de al menos 0,9 y muy preferentemente de al menos 0,95, con una sensibilidad correspondiente mayor de 0,2, preferentemente mayor que 0,3, más preferentemente mayor que 0,4, todavía más preferentemente de al menos 0,5, incluso más preferentemente de 0,6, aún más preferentemente mayor que 0,7, todavía más preferentemente mayor que 0,8, más preferentemente mayor que 0,9 y muy preferentemente mayor que 0,95; una sensibilidad mayor que 0,5, preferentemente de al menos 0,6, más preferentemente de al menos 0,7, todavía más preferentemente de al menos 0,8, incluso más preferentemente de al menos 0,9 y muy preferentemente de al menos 0,95, con una especificidad correspondiente mayor de 0,2, preferentemente mayor que 0,3, más preferentemente mayor que 0,4, todavía más preferentemente de al menos 0,5, incluso más preferentemente de 0,6, aún más preferentemente mayor que 0,7, todavía más preferentemente mayor que 0,8, más preferentemente mayor que 0,9 y muy preferentemente mayor que 0,95; al menos el 75 % de sensibilidad, combinado con al menos el 75 % de especificidad; un área de la curva ROC de más de 0,5, preferentemente de al menos 0,6, más preferentemente de 0,7, todavía más preferentemente de al menos 0,8, incluso más preferentemente de al menos 0,9 y muy preferentemente de al menos 0,95; una razón de posibilidades distinta de 1, preferentemente de al menos aproximadamente 2 o más, o de aproximadamente 0,5 o menos, más preferentemente de al menos aproximadamente 3 o más, o de aproximadamente 0,33 o menos, todavía más preferentemente de al menos aproximadamente 4 o más, o de aproximadamente 0,25 o menos, incluso más preferentemente de al menos aproximadamente 5 o más, o de aproximadamente 0,2 o menos, y muy preferentemente de al menos aproximadamente 10 o más, o de aproximadamente 0,1 o menos; una razón de verosimilitudes positiva (calculada como sensibilidad/(1-especificidad)) de mayor de 1, de al menos 2, más preferentemente de al menos 3, todavía más preferentemente de al menos 5 y muy preferentemente de al menos 10; y o una razón de verosimilitudes negativa (calculada como (1-sensibilidad)/especificidad) de menos de 1, de menos de o igual a 0,5, más preferentemente de menos de o igual a 0,3, y muy preferentemente de menos de o igual a 0,1

Se pueden combinar indicios clínicos adicionales con el resultado (o resultados) del ensayo de marcadores de lesión renal divulgados en el presente documento. Estos incluyen otros biomarcadores relacionados con el estado renal. Otros indicios clínicos que se pueden combinar con el resultado (o resultados) del ensayo de marcadores de lesión renal incluyen información demográfica (por ejemplo, peso, sexo, edad, raza), antecedentes médicos (por ejemplo, antecedentes familiares, tipo de cirugía, enfermedad preexistente tal como aneurisma, insuficiencia cardiaca congestiva, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, arteriopatía coronaria, proteinuria, insuficiencia renal o sepsis, tipo de exposición a toxinas tales como los AINE, ciclosporinas, tacrólimus, aminoglucósidos, foscarnet, etilenglicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, medio de contraste radiopacos o estreptozotocina), variables clínicas (por ejemplo, tensión arterial, temperatura, frecuencia respiratoria), puntuaciones de riesgo (puntuación APACHE, puntuación PREDICT, puntuación de riesgo TIMI para AI/IMSEST, puntuación de riesgo de Framingham), medición de las proteína totales en orina, una tasa filtración glomerular, una tasa estimada de filtración glomerular, una tasa de producción de orina, una concentración de creatinina en suero o plasma, una medición de antígeno papilar renal 1 (RPA1); una medición de antígeno papilar renal 2 (RPA2); una concentración de creatinina en la orina, una excreción parcial de sodio, una concentración de sodio en la orina, una proporción de la creatinina en la orina con respecto a la creatinina en suero o plasma, una gravedad específica en la orina, una osmolalidad de la orina, una proporción del nitrógeno ureico en la orina con respecto al nitrógeno ureico en plasma, una proporción de NUS en plasma con respecto a la creatinina, y/o un índice de insuficiencia renal calculado como sodio en orina /(creatinina en orina/creatinina en plasma). Otras medidas de la función renal que pueden combinarse con el resultado (o resultados) del ensayo de marcador de lesión renal se describen en lo sucesivo en el presente documento y en Harrison's Principles of Internal Medicine, 17a Ed., McGraw Hill, Nueva York, páginas 1741-1830, y Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47a Ed., McGraw Hill, Nueva York, páginas 785-815.

Combinar los resultados del ensayo/los indicios clínicos de esta manera puede comprender el uso de regresión logística multivariable, modelado logarítmico-lineal, análisis de redes neuronales, análisis n de m, análisis de árbol de decisión, etc. Este listado no pretende ser limitante.

Diagnóstico de insuficiencia renal aguda

Como se ha señalado anteriormente, las expresiones "lesión renal (o de riñón) aguda" e "insuficiencia renal (o de riñón) aguda" como se usan en el presente documento se definen en parte en términos de cambios en la creatinina en suero a partir de un valor inicial. La mayoría de las definiciones de IRA tienen elementos comunes, que incluyen el uso de la creatinina en suero y, a menudo, la diuresis. Los pacientes pueden presentar disfunción renal sin una medida inicial disponible de la función renal para su uso en esta comparación. En ese caso, se puede estimar un valor inicial de creatinina en suero suponiendo que el paciente inicialmente tenía una TFG normal. La tasa de filtración glomerular (TFG) es el volumen de líquido filtrado en los capilares glomerulares renales (del riñón) en la cápsula de Bowman por unidad de tiempo. La tasa de filtración glomerular (TFG) puede calcularse midiendo cualquier sustancia química que tenga un nivel estable en la sangre y se filtre libremente, pero no se reabsorba ni secrete, por los riñones. La TFG se expresa normalmente en unidades de ml/min:

Concen -tración de orina x Flujo de orina

TFG = --------- -------------- - ---- ------- j -------------Concentración plasmática

Al normalizar el TFG con respecto a la superficie corporal, se puede suponer una TFG de aproximadamente 75-100 ml/min por 1,73 m2. Por lo tanto, la tasa medida es la cantidad de sustancia en la orina que se originó a partir de un volumen de sangre calculable.

Existen varias técnicas distintas utilizadas para calcular o estimar la tasa de filtración glomerular (TFG o TFGe). En la práctica clínica, sin embargo, para medir la TFG se utiliza la depuración de creatinina. La creatinina es producida de forma natural por el cuerpo (la creatinina es un metabolito de la creatina, que se encuentra en el músculo). Se filtra libremente en el glomérulo, pero también la secretan de forma activa los túbulos renales en cantidades muy pequeñas, de modo que la depuración de creatinina sobreestima la TFG real en un 10-20 %. Este margen de error es aceptable considerando la facilidad con la que se mide la depuración de creatinina.

La depuración de creatinina (DCr) se puede calcular si los valores para la concentración de creatinina en la orina (Ocr), el caudal de orina (V) y la concentración en plasma de creatinina (Pcr) son conocidos. Dado que el producto de la concentración de orina y el caudal de orina produce la tasa de excreción de creatinina, también se dice que la depuración de creatinina es su tasa de excreción (CruxV) dividida por su concentración en plasma. Esto se representa comúnmente de forma matemática como:

Cr0xV

Dcr = CrP

Habitualmente, se realiza una recogida de orina de 24 horas, entre la vejiga vacía una mañana hasta el contenido de la vejiga a la mañana siguiente, y después se realiza un análisis de sangre comparativo:

Crn x Volumen de 24 horas

DCr = — ---------------------------------_{CrP x 24 x 60 minutos}

Para permitir la comparación de resultados entre personas de distintos tamaños, la DCr a menudo se corrige en cuanto la superficie corporal (SC) y se expresa comparada con un hombre de tamaño promedio en ml/min/1,73 m2. Si bien la mayoría de los adultos tienen una SC que se aproxima a 1,7 (1,6-1,9), los pacientes extremadamente obesos o delgados deben corregir su DCr para su Sc real:

DCr x 1,73

La precisión de la medición de la depuración de creatinina (incluso cuando la recogida es completa) es limitada porque a medida que disminuye la tasa de filtración glomerular (TFG), aumenta la secreción de creatinina y, por lo tanto, la subida de la creatinina en suero es menor. Por lo tanto, la excreción de creatinina es mucho mayor que la carga filtrada, dando como resultado una sobreestimación potencialmente grande de la TFG (tanto como una diferencia del doble). Sin embargo, para fines clínicos, es importante determinar si la función renal es estable o si empeora o mejora. Esto a menudo se determina siguiendo sola la creatinina en suero. Al igual que la depuración de creatinina, la creatinina en suero no será un reflejo preciso de la TFG en la condición de no equilibrio de IRA. No obstante, el grado en que la creatinina en suero cambia desde el valor inicial reflejará el cambio en la TFG. La creatinina en suero se mide fácil y sencillamente y es específica para la función renal.

Con el fin de determinar la producción de orina en una producción de orina basada en ml/kg/h, la recogida y medición de la orina por hora es adecuada. En el caso de que, por ejemplo, solo estuviere disponible una producción acumulada de 24 horas y no se proporcionasen los pesos de los pacientes, se han descrito modificaciones menores de los criterios de producción de orina RIFLE. Por ejemplo, Bagshaw et al., Nephrol. Dial. Transplant. 23: 1203-1210, 2008, asumen un peso promedio del paciente de 70 kg y a los pacientes se les asigna una clasificación RIFLE basada en lo siguiente: <35 ml/h (Riesgo), <21 ml/h (Lesión (Injury)) o <4 ml/h (Insuficiencia (Failure)).

Selección de un régimen de tratamiento

Una vez obtenido el diagnóstico, el médico puede seleccionar fácilmente un régimen de tratamiento que sea compatible con el diagnóstico, tal como iniciar una terapia de depuración extrarrenal, retirar el suministro de compuestos que se sabe que dañan el riñón, un trasplante de riñón, retrasar o evitar procedimientos que se sabe que dañan el riñón, modificar la administración de diuréticos, iniciar la terapia dirigida al objetivo, etc. El experto en la materia conoce los tratamientos apropiados para numerosas enfermedades analizadas en relación con los métodos de diagnóstico descritos en el presente documento. Véase, por ejemplo, Manual Merck de diagnóstico y terapia, 17a Ed. Merck Research Laboratories, Whitehouse Station, NJ, 1999. Además, dado que los métodos y composiciones descritos en el presente documento proporcionan información pronóstica, los marcadores descritos en el presente documento pueden usarse para seguir un ciclo de tratamiento. Por ejemplo, un estado pronóstico mejorado o empeorado puede indicar que un tratamiento en particular es o no eficaz.

Un experto en la materia aprecia fácilmente que la presente invención está bien adaptada para conseguir los objetos y obtener los fines y ventajas mencionados, así como los inherentes a la misma. Los ejemplos proporcionados en el presente documento son representativos de realizaciones preferentes y son ejemplares.

Ejemplo 1: Recogida de muestras de pacientes con sepsis séptica

El objetivo de este estudio fue recoger muestras de pacientes que se esperaba que estuvieran en la UCI durante al menos 48 horas cuando se incorporaron al estudio. Para ser incorporarse al estudio, cada paciente debe cumplir con todos los siguientes criterios de inclusión y ninguno de los siguientes criterios de exclusión:

Criterios de inclusión: hombres y mujeres de 18 años o mayores y que adquieren sepsis o tuvieran sepsis al ingreso.

Criterios de exclusión

embarazo conocido;

individuos internos en un establecimiento sanitario;

trasplante renal previo;

empeoramiento agudo conocido de la función renal antes de la inclusión en el estudio (por ejemplo, cualquier categoría de criterios RIFLE);

haber recibido diálisis (ya sea aguda o crónica) dentro de los 5 días anteriores a la incorporación en el estudio o con necesidad inminente de diálisis en el momento de la incorporación en el estudio;

infección conocida con el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) o un virus de la hepatitis;

que cumpla solo con el criterio de inclusión SC <90 mmHg expuesto anteriormente y no tiene choque en la opinión del médico a cargo o del investigador principal.

Después de proporcionar el consentimiento informado, se recogió una muestra de sangre anticoagulada con EDTA (10 ml) y muestras de orina (25-30 ml) de cada paciente. Después se recogen muestras de sangre y orina a las 4 (± 0,5) y 8 (± 1) horas después de la administración de contraste (si corresponde); a las 12 (± 1), 24 (± 2) y 48 (± 2) horas después de la inclusión en el estudio y de allí en adelante diariamente hasta el día 7 al día 14, mientras el paciente con sepsis está hospitalizado. La sangre se recoge mediante punción venosa directa o mediante otra vía venosa disponible, tal como un manguito femoral existente, vía venosa central, vía intravenosa periférica o vía heparinizada. Estas muestras de sangre del estudio se procesan a plasma en la unidad clínica, se congelan y envían a Astute Medical, Inc., San Diego, CA. Las muestras de orina del estudio se congelan y envían a Astute Medical, Inc.

Ejemplo 2. Formato de inmunoensayo

Los analitos se miden utilizando técnicas de inmunoensayo enzimático convencional de tipo sándwich. Un primer anticuerpo que se une al analito se inmoviliza en pocillos de una microplaca de poliestireno de 96 pocillos. Los patrones de analitos y las muestras de prueba se pipetean en los pocillos apropiados y cualquier analito presente se unido al anticuerpo inmovilizado. Después de lavar cualquier sustancia no unida, se añade a los pocillos un segundo anticuerpo conjugado con peroxidasa de rábano picante que se una al analito, formando de este modo complejos de tipo sándwich con el analito (si está presente) y el primer anticuerpo. Después de un lavado para eliminar cualquier reactivo de enzima-anticuerpo no unido, se añade a los pocillos una solución de sustrato que comprenda tetrametilbencidina y peróxido de hidrógeno. El color se desarrolla en proporción a la cantidad de analito presente en la muestra. El desarrollo del color se detiene y la intensidad del color se mide a 540 nm o 570 nm. Se asigna una concentración de analito a la muestra de prueba en comparación con una curva de calibración determinada a partir de los patrones de analitos.

Las concentraciones para los diversos marcadores se informan de la siguiente manera:

Proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 ng/ml

beta-2-glucoproteína 1 ng/ml

inhibidor de metaloproteinasa 2 pg/ml

alfa-1 antitripsina ng/ml

elastasa de neutrófilos ng/ml

componente amiloide P sérico ng/ml

quimiocina con motivo C-X-C 6 pg/ml

inmunoglobulina A ng/ml

inmunoglobulina G, subclase I ng/ml

quimiocina con motivo C-C 24 pg/ml

colagenasa de neutrófilos pg/ml

catepsina D pg/ml

quimiocina con motivo C-X-C 13 pg/ml

involucrina ng/ml

subunidad beta del receptor de interleucina 6 pg/ml

factor de crecimiento de hepatocitos pg/ml

mezcla de CXCL-1, -2, -3 pg/ml

inmunoglobulina G, subclase II ng/ml

inhibidor de metaloproteinasa 4 pg/ml

quimiocina con motivo C-C 18 ng/ml

matrilisina pg/ml

quimiocina con motivo C-X-C 11 pg/ml

antileucoproteinasa (WAP4) pg/ml

Ejemplo 3. Uso de marcadores de lesión renal para evaluar pacientes con sepsis

Los pacientes del estudio de sepsis (Ejemplo 1) se clasificaron el estado del riñón como sin lesión (0), riesgo de lesión (R), lesión (I) e insuficiencia (F) de acuerdo con la fase máxima alcanzada dentro de los 7 días desde la incorporación al estudio, determinado mediante los criterios RIFLE. Se recogieron muestras de sangre anticoagulada con EDTA (10 ml) y muestras de orina (25-30 ml) de cada paciente en el momento de la inclusión en el estudio, 4 (± 0,5) y 8 (± 1) horas después de la administración de contraste (si corresponde); a las 12 (± 1), 24 (± 2) y 48 (± 2) horas después de la inclusión en el estudio y de allí en adelante diariamente hasta el día 7 al día 14, mientras el paciente con sepsis está hospitalizado. Cada uno de los marcadores se midió mediante métodos de inmunoensayo usando reactivos de ensayo disponibles en el mercado en las muestras de orina y en el componente plasmático de las muestras de sangre recogidas.

Se definieron dos cohortes para representar una población "enferma" y una "normal". Si bien estos términos se utilizan por conveniencia, "enfermo" y "normal" simplemente representan dos cohortes para la comparación (digamos RIFLE 0 frente RIFLE R, I y F); RIFLE 0 frente a RIFLE R; RIf Le 0 y R frente a RIFLE I y F; etc.). El momento "fase máxima anterior" representa el momento en que se recoge una muestra, con respecto al momento en que un paciente en particular alcanza la fase más baja de enfermedad como se define para esa cohorte, dividido en tres grupos que son /-12 horas. Por ejemplo, "24 horas antes", que utiliza 0 frente a R, I, F como las dos cohortes significaría 24 horas (+/-12 horas) antes de alcanzar la etapa R (o I si no hay muestra en R, o F si no hay muestra en R o I).

Se generó una curva de características operativas del receptor (ROC) para cada biomarcador medido y se determinó el área bajo cada curva (ABC) ROC. Los pacientes de la cohorte 2 también se separaron de acuerdo con el motivo de adjudicación a la cohorte 2 como basándose en mediciones de creatinina en suero (Crs), basándose en la producción de orina (PO) o basándose en las mediciones de creatinina en suero o la producción de orina. Usando el mismo ejemplo analizado anteriormente (0 frente a R, I, F), para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose solo en las mediciones de creatinina en suero, la cohorte de la fase 0 puede incluir pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en la producción de orina; para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose solo en la producción de orina, la cohorte de la fase 0 puede incluir pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en las mediciones de creatinina en suero; y para los pacientes adjudicados a la fase R, I o F basándose en las mediciones de creatinina en suero o la producción de orina, la cohorte de la fase 0 solo contiene pacientes en la fase 0 para las mediciones de creatinina en suero y la producción de orina. Asimismo, en los datos para pacientes adjudicados basándose en las mediciones de creatinina en suero o la producción de orina, se utiliza el método de adjudicación que produjo la fase de RIFLE más severa.

La capacidad para distinguir la cohorte 1 de la Cohorte 2 se determinó usando el análisis ROC. ET es el error típico del ABC, n es el número de muestra o de pacientes individuales ("pts", como se indica). Los errores típicos se calculan como se describe en Hanley, J. A. y McNeil, B.J., The meaning and use of the area under a receiver operating characteristic (ROC) curve. Radiology (1982) 143: 29-36; Los valores de p se calculan con una prueba Z bilateral. Un ABC < 0,5 es indicativo de un marcador negativo para la comparación, y un ABC > 0,5 es indicativo de un marcador positivo para la comparación.

Se seleccionaron diversas concentraciones umbral (o "límite"), y se determinaron la sensibilidad y especificidad asociadas para distinguir la cohorte 1 de la cohorte 2. RP es la razón de posibilidades calculada para la concentración límite particular y el IC del 95 % es el intervalo de confianza para la razón de posibilidades.

A continuación en las tablas 1-12, se utiliza como cohorte de la enfermedad una población que adquiere sepsis los días 1-7 o que tiene sepsis al ingreso; en las tablas 13-24, solo se incluyeron los pacientes con sepsis al ingreso.

Tabla 1: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase R, I o F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

Quimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

Factor de crecim iento de hepatocitos

Crs o PO 0 h antes de la fase de LRA 24 h antes de la fase de LRA 48 h antes de la fase de LRA Cohorte 1 |Cohorte 2 Cohorte 1 |Cohorte 2 Cohorte 1 |Cohorte 2

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulín ico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 2: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 o R de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase I o F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 3: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina recogidas en las 12 horas siguientes de alcanzar la fase R de la Cohorte 1 (pacientes que alcanzaron pero que no progresaron más allá de la fase R de RIFLE) y de la Cohorte 2 (pacientes que alcanzaron la fase I o F de RIFLE)

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 4: Comparación de los niveles máximos de marcadores en muestras de orina recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 de RIFLE) y los valores máximos en muestras de orina recogidas de los sujetos entre el momento de la inclusión en el estudio y a las 0, 24 y 48 horas antes de alcanzar la fase F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

Quimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

Quimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 5: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 de RIFLE) y en muestras con EDTA recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase R, I o F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

|Solo PO |0 h antes de la fase de LRA |24 h antes de la fase de LRA |48 h antes de la fase de LRA

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Alfa-1-antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 6: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 o R de RIFLE) y en muestras con EDTA recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase I o F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

Quimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

|Solo Crs |0 h antes de la fase de LRA |24 h antes de la fase de LRA |48 h antes de la fase de LRA

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 7: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA recogidas en las 12 horas siguientes de alcanzar la fase R de la Cohorte 1 (pacientes que alcanzaron pero que no progresaron más allá de la fase R de RIFLE) y de la Cohorte 2 (pacientes que alcanzaron la fase I o F de RIFLE).

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

Catepsina D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 8: Comparación de los niveles máximos de marcadores en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 de RIFLE) y los valores máximos en muestras con EDTA recogidas de los sujetos entre el momento de la inclusión en el estudio y a las 0, 24 y 48 horas antes de alcanzar la fase F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

Quimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 9: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0, R o I de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de la Cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase R de RIFLE) a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase I de RIFLE.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 10: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0, R o I de RIFLE) y en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase F de RIFLE) a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase I de RIFLE.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

Quimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 11: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina en el momento de la inclusión en el estudio recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 o R de RIFLE en 48 horas) y en muestras de orina en el momento de la inclusión en el estudio recogidas de la Cohorte 2 (sujetos que alcanzan la fase I o F de RIFLE en 48 horas). Las muestras en el momento de la inclusión de pacientes que ya estaban en la fase I o F de RIFLE se incluyeron en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

Quimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inm n l lin 1

Inm n l lin 2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 12: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA en el momento de la inclusión en el estudio recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 o R de RIFLE en 48 horas) y en muestras con EDTA en el momento de la inclusión en el estudio recogidas de la Cohorte 2 (sujetos que alcanzan la fase I o F de RIFLE en 48 horas). Las muestras en el momento de la inclusión de pacientes que ya estaban en la fase I o F se incluyeron en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Alfa-1-antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 13: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase R, I o F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

Quimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

Quimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulín ico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Alfa-1-antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 14: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 o R de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase I o F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

Quimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 15: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina recogidas en las 12 horas siguientes de alcanzar la fase R de la Cohorte 1 (pacientes que alcanzaron pero que no progresaron más allá de la fase R de RIFLE) y de la Cohorte 2 (pacientes que alcanzaron la fase I o F de RIFLE).

Com onente amiloide de P sérico

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

Quimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

F r r im i n h i

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Cola enasa de neutrófilos

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Tabla 16: Comparación de los niveles máximos de marcadores en muestras de orina recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 de RIFLE) y los valores máximos en muestras de orina recogidas de los sujetos entre el momento de la inclusión en el estudio y a las 0, 24 y 48 horas antes de alcanzar la fase F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

Quimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

Quimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhib idor de metalo roteinasa 4

Tabla 17: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 de RIFLE) y en muestras con EDTA recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase R, I o F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

Quimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

Quimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1 -antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 18: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 o R de RIFLE) y en muestras con EDTA recogidas de los sujetos a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase I o F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con motivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Cola enasa de neutrófilos

Alfa-1-antitri sina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 19: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA recogidas en las 12 horas siguientes de alcanzar la fase R de la Cohorte 1 (pacientes que alcanzaron pero que no progresaron más allá de la fase R de RIFLE) y de la Cohorte 2 (pacientes que alcanzaron la fase I o F de RIFLE).

Com onente amiloide de P sérico

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Tabla 20: Comparación de los niveles máximos de marcadores en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 de RIFLE) y los valores máximos en muestras con EDTA recogidas de los sujetos entre el momento de la inclusión en el estudio y a las 0, 24 y 48 horas antes de alcanzar la fase F en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Antileuco roteinasa

Tabla 21: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0, R o I de RIFLE) y en muestras de orina recogidas de la Cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase R de RIFLE) a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase I de RIFLE.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con motivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 22: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0, R o I de RIFLE) y en muestras con EDTA recogidas de la Cohorte 2 (sujetos que progresan a la fase F de RIFLE) a las 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la fase I de RIFLE.

Com onente amiloide de P sérico

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Antileuco roteinasa

Tabla 23: Comparación de los niveles de marcadores en muestras de orina en el momento de la inclusión en el estudio recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 o R de RIFLE en 48 horas) y en muestras de orina en el momento de la inclusión en el estudio recogidas de la Cohorte 2 (sujetos que alcanzan la fase I o F de RIFLE en 48 horas). Las muestras en el momento de la inclusión de pacientes que ya estaban en la fase I o F de RIFLE se incluyeron en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

uimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con motivo C-X-C 11

Quimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inmuno lobulina G1

Inmuno lobulina G2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Cola enasa de neutrófilos

Antileuco roteinasa

Inhib idor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Tabla 24: Comparación de los niveles de marcadores en muestras con EDTA en el momento de la inclusión en el estudio recogidas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresaron más allá de la fase 0 o R de RIFLE en 48 horas) y en muestras con EDTA en el momento de la inclusión en el estudio recogidas de la Cohorte 2 (sujetos que alcanzan la fase I o F de RIFLE en 48 horas). Las muestras en el momento de la inclusión de pacientes que ya estaban en la fase I o F se incluyeron en la Cohorte 2.

Com onente amiloide de P sérico

B -2- li r ín 1

uimiocina con m otivo C-C 18

Quimiocina con m otivo C-C 24

in D

M z l r ín lf mm r l r r im i n

uimiocina con m otivo C-X-C 11

uimiocina con m otivo C-X-C 13

uimiocina con m otivo C-X-C 6

Elastasa de neutrófilos

F r r im i n h i

Inmuno lobulina A

Proteína de unión al factor de crecim iento insulínico 7

Inm n l lin 1

Inm n l lin 2

ni l r r in rl in

Involucrina

Matrilisina

Antileuco roteinasa

Inhibidor de metalo roteinasa 2

Inhibidor de metalo roteinasa 4

Los ejemplos proporcionados en el presente documento son representativos de realizaciones preferentes y son ejemplares.

Por lo tanto, por ejemplo, en cada caso en el presente documento, cualquiera de las expresiones "que comprende", "que consiste esencialmente en" y "que consiste en" pueden reemplazarse por cualquiera de los otros dos términos. Se exponen otras realizaciones dentro de las siguientes reivindicaciones.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Un método para evaluar el estado renal en un paciente con sepsis, que comprende:

realizar uno o más ensayos configurados para detectar la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 y, opcionalmente, uno o más biomarcadores adicionales de beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa en una muestra de líquido corporal obtenida del paciente con sepsis para proporcionar un resultado de ensayo; y correlacionar el resultado (o resultados) del ensayo con el estado renal del paciente con sepsis,

en donde dicha etapa de correlación comprende correlacionar el resultado (o resultados) del ensayo con uno o más de estratificación del riesgo y diagnóstico de insuficiencia renal aguda (IRA) del paciente con sepsis, o en donde dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de uno o más cambios futuros en el estado renal al paciente con sepsis basándose en el resultado (o resultados) del ensayo,

en donde dichos uno o más cambios futuros en el estado renal comprenden futura insuficiencia renal aguda (IRA).

2. Un método de acuerdo con uno de la reivindicación 1, en donde dichos resultados de ensayo comprenden una concentración medida en orina o plasma de la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 y al menos 1, 2 o 3 de:

una concentración medida en orina o plasma de beta-2-glucoproteína 1, una concentración medida en orina o plasma de inhibidor de metaloproteinasa 2, una concentración medida en orina o plasma de alfa-1 antitripsina, una concentración medida en orina o plasma de elastasa de leucocitos, una concentración medida en orina o plasma de componente amiloide P sérico, una concentración medida en orina o plasma de quimiocina con motivo C-X-C 6, una concentración medida en orina o plasma de inmunoglobulina A, una concentración medida en orina o plasma de inmunoglobulina G subclase I, una concentración medida en orina o plasma de quimiocina con motivo C-C 24, una concentración medida en orina o plasma de colagenasa de neutrófilos, una concentración medida en orina o plasma de catepsina D, una concentración medida en orina o plasma de quimiocina con motivo C-X-C 13, una concentración medida en orina o plasma de involucrina, una concentración medida en orina o plasma de subunidad beta del receptor de interleucina 6, una concentración medida en orina o plasma de factor de crecimiento de hepatocitos, una concentración medida en orina o plasma de CXCL-1, una concentración medida en orina o plasma de CXCL-2, una concentración medida en orina o plasma de CXCL-3, una concentración medida en orina o plasma de inmunoglobulina G subclase II, una concentración medida en orina o plasma de inhibidor de metaloproteinasa 4, una concentración medida en orina o plasma de quimiocina con motivo C-C 18, una concentración medida en orina o plasma de matrilisina, una concentración medida en orina o plasma de quimiocina con motivo C-X-C 11, y una concentración medida en orina o plasma de antileucoproteinasa.

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dichos uno o más cambios futuros en el estado renal comprenden un desenlace clínico relacionado con una lesión renal padecida por el paciente con sepsis, o en donde la probabilidad de uno o más cambios futuros en el estado renal es que un suceso de interés sea más o menos probable que se produzca dentro de los 30 días a partir del momento en que se ha obtenido la muestra de líquido corporal del paciente con sepsis,

en donde la probabilidad de uno o más cambios futuros en el estado renal es preferentemente que un suceso de interés sea más o menos probable que se produzca dentro de un periodo seleccionado del grupo que consiste en 21 días, 14 días, 7 días, 5 días, 96 horas, 72 horas, 48 horas, 36 horas, 24 horas y 12 horas.

4. Un método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-2, en donde una pluralidad de resultados de ensayo se combinan usando una función que convierte la pluralidad de resultados de ensayo en un único resultado combinado, o en donde el paciente con sepsis es un paciente con sepsis grave, o

en donde el paciente con sepsis es un paciente con choque séptico, o

en donde dicha etapa de correlación comprende asignar un diagnóstico de aparición o no aparición de uno o más de una lesión de la función renal, función renal reducida o IRA al paciente con sepsis basándose en el resultado (o resultados) del ensayo, o

en donde dicha etapa de correlación comprende evaluar si la función renal está mejorando o empeorando, o no, en un paciente con sepsis que ha padecido una lesión de la función renal, función renal reducida o IRA basándose en el resultado (o resultados) del ensayo, o

en donde dicho método es un método para diagnosticar la aparición o no aparición de una lesión de la función renal en dicho paciente con sepsis, o

en donde dicho método es un método para diagnosticar la aparición o no aparición de función renal reducida en dicho paciente con sepsis, o

en donde dicho método es un método para diagnosticar la aparición o no aparición de insuficiencia renal aguda en dicho paciente con sepsis.

5. Un método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-2,

en donde dicho método es un método para diagnosticar la aparición o no aparición de una necesidad de terapia de depuración extrarrenal en dicho paciente con sepsis, o

en donde dicho método es un método para diagnosticar la aparición o no aparición de una necesidad de trasplante renal en dicho paciente con sepsis, o

en donde dicho método es un método para asignar un riesgo de futura aparición o no aparición de una lesión de la función renal en dicho paciente con sepsis, o

en donde dicho método es un método para asignar un riesgo de futura aparición o no aparición de función renal reducida en dicho paciente con sepsis, o

en donde dicho método es un método para asignar un riesgo de futura aparición o no aparición de insuficiencia renal aguda en dicho paciente con sepsis, o

en donde dicho método es un método para asignar un riesgo de futura aparición o no aparición de una necesidad de terapia de depuración extrarrenal en dicho paciente con sepsis, o

en donde dicho método es un método para asignar un riesgo de futura aparición o no aparición de una necesidad de trasplante renal en dicho paciente con sepsis.

6. Un método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-2, en donde dichos uno o más cambios futuros en el estado renal comprenden uno o más de una futura lesión de la función renal, futura función renal reducida, futura mejora de la función renal y futura insuficiencia renal aguda (IRA) dentro de las 72 horas a partir del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde dichos uno o más cambios futuros en el estado renal comprenden uno o más de una futura lesión de la función renal, futura función renal reducida, futura mejora de la función renal y futura insuficiencia renal aguda (IRA) dentro de las 48 horas a partir del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o en donde dichos uno o más cambios futuros en el estado renal comprenden uno o más de una futura lesión de la función renal, futura función renal reducida, futura mejora de la función renal y futura insuficiencia renal aguda (IRA) dentro de las 24 horas a partir del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal.

7. Un método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-2, en donde el paciente con sepsis está en la fase 0 o R de RIFLE.

8. Un método de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el paciente con sepsis está en la fase 0 de RIFLE, y dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el paciente con sepsis alcance la fase R, I o F de RIFLE dentro de las 72 horas, preferentemente dentro de las 48 horas o preferentemente dentro de las 24 horas, en donde el paciente con sepsis está preferentemente en la fase 0 de RIFLE, y dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el paciente con sepsis alcance la fase I o F de RIFLE dentro de las 72 horas, preferentemente dentro de las 48 horas o preferentemente dentro de las 24 horas, o

en donde el paciente con sepsis está preferentemente en la fase 0 de RIFLE, y dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el paciente con sepsis alcance la fase F de RIFLE dentro de las 72 horas, preferentemente dentro de las 48 horas o preferentemente dentro de las 24 horas, o

en donde el paciente con sepsis está en la fase 0 o R de RIFLE, y dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el paciente con sepsis alcance la fase I o F de RIFLE dentro de las 72 horas, preferentemente dentro de las 48 horas o preferentemente dentro de las 24 horas,

en donde el paciente con sepsis está preferentemente en la fase 0 o R de RIFLE, y dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el paciente con sepsis alcance la fase F de RIFLE dentro de las 72 horas, preferentemente dentro de las 48 horas o preferentemente dentro de las 24 horas, o

en donde el paciente con sepsis está en la fase R de RIFLE, y dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el paciente con sepsis alcance la fase I o F de RIFLE dentro de las 72 horas, preferentemente dentro de las 48 horas o preferentemente dentro de las 24 horas,

en donde el paciente con sepsis está preferentemente en la fase R de RIFLE, y dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el paciente con sepsis alcance la fase F de RIFLE dentro de las 72 horas, preferentemente dentro de las 48 horas o preferentemente dentro de las 24 horas.

9. Un método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-2, en donde el paciente con sepsis está en la fase 0, R o I de RIFLE y dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el paciente con sepsis alcance la fase F de RIFLE dentro de las 72 horas, preferentemente dentro de las 48 horas o preferentemente dentro de las 24 horas,

en donde el paciente con sepsis está preferentemente en la fase I de RIFLE y dicha etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el paciente con sepsis alcance la fase F de RIFLE dentro de las 72 horas, preferentemente dentro de las 48 horas o preferentemente dentro de las 24 horas.

10. Un método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-2, en donde el paciente con sepsis no está en insuficiencia renal aguda, o

en donde el paciente con sepsis no ha experimentado un aumento de 1,5 veces o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde el paciente con sepsis tiene una producción de orina de al menos 0,5 ml/kg/h durante las 6 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde el paciente con sepsis no ha experimentado un aumento de 0,3 mg/dl o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o en donde el paciente con sepsis (i) no ha experimentado un aumento de 1,5 veces o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, (ii) tiene una producción de orina de al menos 0,5 ml/kg/h durante las 6 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, y (iii) no ha experimentado un aumento de 0,3 mg/dl o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde el paciente con sepsis no ha experimentado un aumento de 1,5 veces o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde el paciente con sepsis tiene una producción de orina de al menos 0,5 ml/kg/h durante las 6 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o en donde el paciente con sepsis (i) no ha experimentado un aumento de 1,5 veces o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, (ii) tiene una producción de orina de al menos 0,5 ml/kg/h durante las 12 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, y (iii) no ha experimentado un aumento de 0,3 mg/dl o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde dicha etapa de correlación comprende la asignación de uno o más de: una probabilidad de que dentro de las 72 horas el paciente con sepsis (i) experimente un aumento de 1,5 veces o más de la creatinina en suero, (ii) tenga una producción de orina de menos de 0,5 ml/kg/h durante un período de 6 horas, o (iii) experimente un aumento de 0,3 mg/dl o más de la creatinina en suero, o

en donde el paciente con sepsis no ha experimentado un aumento de 2 veces o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal.

11. Un método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-2, en donde el paciente con sepsis tiene una producción de orina de al menos 0,5 ml/kg/h durante las 12 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde el paciente con sepsis (i) no ha experimentado un aumento de 2 veces o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, (ii) tiene una producción de orina de al menos 0,5 ml/kg/h durante las 2 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, y (iii) no ha experimentado un aumento de 0,3 mg/dl o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde el paciente con sepsis no ha experimentado un aumento de 3 veces o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde el paciente con sepsis tiene una producción de orina de al menos 0,3 ml/kg/h durante las 24 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o anuria durante las 12 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de fluido corporal, o

en donde el paciente con sepsis (i) no ha experimentado un aumento de 3 veces o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, (ii) tiene una producción de orina de al menos 0,3 ml/kg/h durante las 24 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o anuria durante las 12 horas anteriores al momento en que se obtuvo la muestra de fluido corporal, y (iii) no ha experimentado un aumento de 0,3 mg/dl o más de la creatinina en suero sobre un valor inicial determinado antes del momento en que se obtuvo la muestra de líquido corporal, o

en donde dicha etapa de correlación comprende la asignación de uno o más de: una probabilidad de que dentro de las 72 horas el paciente con sepsis (i) experimente un aumento de 2 veces o más de la creatinina en suero, (ii) tenga una producción de orina de menos de 0,5 ml/kg/h durante un período de 12 horas, o (iii) experimente un aumento de 0,3 mg/dl o más de la creatinina en suero, o

en donde dicha etapa de correlación comprende la asignación de uno o más de: una probabilidad de que dentro de las 72 horas el paciente con sepsis (i) experimente un aumento de 3 veces o más de la creatinina en suero, o (ii) tenga una producción de orina de menos de 0,3 ml/kg/h durante un período de 24 horas o anuria durante un periodo de 12 horas.

12. Un método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-11, en donde la muestra de líquido corporal es una muestra de orina, y/o

en donde dicho método comprende realizar ensayos que detectan la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 y uno, dos o más de beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa.

13. El uso de la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 y, opcionalmente, uno o más biomarcadores adicionales de beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa para la evaluación de una lesión renal aguda, en donde la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 se mide en una muestra de líquido corporal obtenida de un paciente con sepsis.

14. El uso de la reivindicación 13, en donde el uso se realiza con un kit, comprendiendo el kit:

reactivos para realizar uno o más ensayos configurados para detectar la proteína de unión al factor de crecimiento de insulínico 7, y, opcionalmente, uno o más marcadores adicionales de lesión renal seleccionados de beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa,

en donde dichos reactivos comprenden preferentemente uno o más reactivos de unión, cada uno de los cuales se une específicamente a uno de dichos marcadores de lesión renal,

en donde una pluralidad de reactivos de unión están contenidos preferentemente en un único dispositivo de ensayo, o

en donde al menos uno de dichos ensayos está configurado preferentemente como un ensayo de unión de tipo sándwich, o

en donde al menos uno de dichos ensayos está configurado preferentemente como un ensayo de unión competitiva.

15. El uso de la reivindicación 13 a realizarse con un sistema para evaluar niveles de biomarcadores, comprendiendo el sistema para evaluar niveles de biomarcadores:

una pluralidad de reactivos que se unen específicamente para la detección de la pluralidad de biomarcadores que comprenden la proteína de unión al factor de crecimiento insulínico 7 y, opcionalmente, uno o más adicionales de beta-2-glucoproteína 1, inhibidor de metaloproteinasa 2, alfa-1 antitripsina, elastasa leucocitaria, componente amiloide P sérico, quimiocina con motivo C-X-C 6, inmunoglobulina A, inmunoglobulina G subclase I, quimiocina con motivo C-C 24, colagenasa de neutrófilos, catepsina D, quimiocina con motivo C-X-C 13, involucrina, subunidad beta del receptor de interleucina 6, factor de crecimiento de hepatocitos, CXCL-1, -2, -3, inmunoglobulina G subclase II, inhibidor de metaloproteinasa 4, quimiocina con motivo C-C 18, matrilisina, quimiocina con motivo C-X-C 11 y antileucoproteinasa;

un instrumento de ensayo configurado para recibir una muestra de orina y poner en contacto la pluralidad de reactivos con la muestra de orina, para generar uno o más resultados de ensayo indicativos de la unión de cada biomarcador que se somete a ensayo a un reactivo de unión específico respectivo en la pluralidad de reactivos, y para correlacionar el uno o más resultados del ensayo con una probabilidad de empeoramiento o mejora de la función renal,

en donde los reactivos comprenden preferentemente una pluralidad de anticuerpos, al menos uno de los cuales se une a cada uno de los biomarcadores que se someten a ensayo,

en donde el instrumento de ensayo comprende preferentemente un dispositivo de ensayo y un lector del dispositivo de ensayo, en donde la pluralidad de anticuerpos se inmoviliza en una pluralidad de ubicaciones predeterminadas dentro del dispositivo de ensayo, en donde el dispositivo de ensayo está configurado para recibir la muestra de orina de manera que la muestra de orina se pone en contacto con la pluralidad de ubicaciones predeterminadas, y en donde el lector del dispositivo de ensayo interroga la pluralidad de ubicaciones predeterminadas para generar los resultados del ensayo.