ES2703934T3

ES2703934T3 - Compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina y procedimiento de preparación y aplicación del mismo

Info

Publication number: ES2703934T3
Application number: ES13798006T
Authority: ES
Inventors: Chunhao Yang; Linghua Meng; Yanhong Chen; Xiang Wang; Cun Tan; Jiapeng Li; Jian Ding; Yi Chen
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Shanghai Haihe Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Shanghai Haihe Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2012-05-31
Filing date: 2013-04-23
Publication date: 2019-03-13
Anticipated expiration: 2033-04-23
Also published as: BR112014029708A2; HK1203499A1; EP2857403A1; WO2013177983A1; EP2857403A4; JP2015518010A; CN103450204A; CA2874062C; US9447101B2; US20150141644A1; KR20150009565A; AU2013270326A1; AU2013270326B2; CN103450204B; RU2589053C1; JP6067107B2; KR101824299B1; EP2857403B1; BR112014029708B1; SG11201407752YA

Abstract

Un compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina de fórmula general I, una sal, éster o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo,**Fórmula** en la que, X = CH o N; R1 es -NR5R6; R2 es**Fórmula** R3 es -NH2, -NHC(O)NHR11, -NHC(O)OR11, -NHC(O)R11, -CH2OH, -CH2S(O)2R12 o -CH2NHS(O)2R12; R4 es H o CF3; cada uno de R5 y R6 es independientemente un alquilo C1-C4 o se combinan con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo saturado de 5-8 miembros sin sustituir o un heterociclo saturado de 5-8 miembros sustituido por un sustituyente, el sustituyente es -S(O)2R12; cada uno de R7, R8, R9 y R10 es independientemente H o un alquilo C1-C3, como alternativa, R7 y R8, o R9 y R10, con los átomos de carbono a los cuales están unidos en forma de átomos de carbono puenteados, forman un bicicloheterociclo puenteado con un anillo de morfolina; R11 es un alquilo C1-C4, un cicloalquilo C3-C6 sin sustituir o un cicloalquilo C3-C6 sustituido por uno o más sustituyentes, un bencilo sin sustituir o un bencilo sustituido por uno o más sustituyentes, un fenilo sin sustituir o un fenilo sustituido por uno o más sustituyentes, un isoxazolilo sin sustituir o un isoxazolilo sustituido por uno o más sustituyentes o un piridilo sin sustituir o un piridilo sustituido por uno o más sustituyentes y el uno o más sustituyentes se seleccionan entre halógeno, un alquilo C1-C3 o un alcoxilo C1-C3, -CF3, -C(O)OR12, - C(O)NR12R15,**Fórmula** cada uno de R12 y R15 es independientemente un alquilo C1-C3.

Description

DESCRIPCIÓN

Compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina y procedimiento de preparación y aplicación del mismo

Campo técnico

La invención se refiere a derivados de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina como se muestran en la fórmula general I, a sales, ésteres o hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos y a un procedimiento de preparación y uso de los mismos. Los compuestos I, como se muestran en la fórmula general I, pueden inhibir la vía de señalización de fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K), usándose por tanto para preparar medicamentos para tratar enfermedades relacionadas con la fosfatidilinositol 3-cinasa, tales como cáncer.

Antecedentes

La PI3K es una cinasa de lípidos que puede fosforilar la posición 3 del anillo de inositol en el fosfatidilinositol para formar fosfatidilinositol-3-fosfato (PIP), fosfatidilinositol-3,4-difosfato (PIP2) y fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato (PIP3). PIP, PIP2 y PIP3, como importantes segundos mensajeros, se unen y activan diversas proteínas que contienen un dominio PH (dominio de homología de plecstrina), un dominio FYVE (nombrado siguiendo las iniciales de las proteínas Fablp, YOTB, Vaclp y EEA1 que contienen el dominio FYVE encontrado originariamente, véase Gaullier, J. M.; Simonsen, A.; D' Arrigo, A.; Bremnes, B.; Stenmark, H., Chem. Phys. Lipids, 1999, 98: 87-94.), un dominio PX (dominio de homología con Phox) y otras regiones de unión a fosfolípidos, para formar un complejo de cascada de señalización y en última instancia, regulan actividades celulares, tales como la proliferación, diferenciación, supervivencia y migración (véase Vanhaesebroeck, B.; Leevers, S. J.; Ahmadi, K.; Timms, J.; Katso, R.; Driscoll, P. C.; Woscholski, R.; Parker, P. J.; Waterfield, M. D., Annu. Rev. Biochem., 2001, 70: 535-602).

Dependiendo de las diferencias en la secuencia génica, la especificidad de sustrato y la función, la superfamilia de PI3K se agrupa en tres clases: PI3K I, II y III. Las PI3K de clase I son la clase más ampliamente estudiada hasta la fecha. Los sustratos de las PI3K son fosfatidilinositol (PI), fosfatidilinositol-4-fosfato (PI(4)P), fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2). Las PI3K de clase I son moléculas heterodiméricas compuestas por una subunidad catalítica y una subunidad reguladora. Las PI3K de clase I pueden dividirse adicionalmente en dos categorías, debido a la diferencia en la subunidad reguladora y en el mecanismo de activación: PI3K IA y PI3K IB. Entre estas, PI3K IA comprende PI3Ka, PI3Kp y PI3K8 y se activa por tirosina cinasas receptoras; mientras que PI3K IB consiste únicamente en PI3K^yy se activa por receptores acoplados a proteína G. El PI y el PI(4)P son sustratos de las PI3K de clase II. Las PI3K de clase II incluyen PI3KC2a, PI3KC2p y PI3KC2y. Se caracterizan por un dominio C2 en el extremo C-terminal, lo que indica que sus actividades están reguladas por el ion calcio. El sustrato de las PI3K de clase III es el PI. Su mecanismo de activación sigue sin estar claro hasta ahora (véase, Engelman, J. A.; Luo, J.; Cantley, L. C., Nat. Rev. Genet., 2006, 7: 606-619).

La hiperactivación de PI3K inicia la vía de señalización de fosfatidilinositol 3-cinasa/proteína cinasa B/proteína diana de mamífero de la rapamicina (PI3K/Akt/mTOR) y promueve la supervivencia y la proliferación celular, que se encuentra presente con frecuencia en aproximadamente un 60 % de los tumores humanos. PTEN (homólogo de fosfatasa y tensina eliminado en el cromosoma 10) actúa como supresor tumoral y desfosforila la posición 3 en el anillo de inositol del fosfatidilinositol y antagoniza la actividad de PI3K. Dicha función se pierde en muchos cánceres. Una mutación activa en el gen PIK3CA que codifica p110a se encuentra presente en más de un 30% de los cánceres. Además, se han encontrado con frecuencia amplificaciones génicas de PI3K3CA y de proteína cinasa B (Akt) en otros cánceres, lo que también contribuye a la expresión de proteína (véase Engelman, J. A., Nat. Rev. Cancer, 2009, 9: 550-562). Estos factores indican que PI3K está estrechamente relacionada con la tumorigénesis y la promoción. La proteína diana de la rapamicina (mTOR) es una de las importantes proteínas corriente abajo de la proteína cinasa B, que es una serina/treonina cinasa. La proteína cinasa B activa además a la proteína diana de la rapamicina fosforilando directamente a mTOR; o potenciando indirectamente la activación de mTOR inactivando el gen supresor tumoral TSC2 (proteína 2 de la esclerosis tuberosa). La mTOR activa forma parte de manera directa o indirecta en la regulación de diversos procesos relacionados con la proliferación y el crecimiento tumoral, tales como la etapa inicial de la traducción, transcripción, restructuración de microfilamentos, transporte de membrana, degradación de proteínas, vía de proteína cinasa C (PKC), síntesis de proteínas ribosómicas y síntesis de ARNt, etc. mediante la regulación de las vías de señalización corriente abajo, tales como la cinasa S6 ribosomal (S6K1 o P70S6K), la proteína de unión 1 (4E-BP1) al factor 4E de inicio de la traducción de células eucariotas (eIF-4 e), el factor de activación 3 de la transducción de señales y de la transcripción (STAT3), etc. Por lo tanto, mTOR es una proteína reguladora central del crecimiento y la proliferación celular y se ha convertido en una nueva diana para fármacos antitumorales.

Los inhibidores de PI3K y de la proteína de señalización corriente abajo mTOR son una clase de fármacos antitumorales prometedores. En este momento, se han comenzado estudios clínicos con varios inhibidores de pan-PI3K, tales como GDC-0941, XL-147, PX-866, etc. Sin embargo, ha de ampliarse el número y la diversidad de estructura para satisfacer las necesidades de la investigación y el desarrollo de nuevos fármacos contra el cáncer. Paralelamente, existen defectos en los inhibidores conocidos. Por ejemplo, PX-866, que procede de la wortmanina, es difícil de sintetizar; y se necesita mejorar la actividad de GDC-0941. Por lo tanto, cada vez atrae más interés en todo el mundo el desarrollo de nuevos fármacos antitumorales que actúen de manera selectiva sobre PI3K con una mayor actividad y una mejor seguridad.

La pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina es una estructura privilegiada en la química medicinal. Tras haberse comunicado esta estructura privilegiada como un análogo de purina (véase: Hayashi, M.; Araki, A.; Maeba, I., Heterocycles, 1992, 34: 569-574. Patil, S. A.; Otter, B. A.; Klein, R. S., Tetrahedron Lett., 1994, 35: 5339-5342), se han sintetizado cada vez más compuestos que contienen dicha estructura privilegiada y han mostrado una serie de actividades biológicas, por ejemplo, actuando como inhibidores de JAK2 (véase: Weinberg, L. R.; Albom, M. S.; Angeles, T. S. y col., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 21: 7325-7330), inhibidores de pan-Aurora cinasa (Abraham, S.; Hadd, M. J.; Tran, L. y col., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2011, 21: 5296-5300), inhibidores de la proteína cinasa activada por mitógeno p38a (p38a MAPK) (Liu, C.; Lin, J.; Wrobleski, S. T. y col., J. Med. Chem., 2010, 53: 6629-6639), inhibidores de la ALK cinasa de linfoma (Mesaros, E. F.; Thieu, T. V.; Wells, G. J. y col., J. Med. Chem., 2012, 55: 115-125), inhibidores duales de VEGFR-2/FGFR-1 (Cai, Z.-w.; Zhang, Y.; Borzilleri, R. M. y col., J. Med. Chem., 2008, 5: 1976-1980), inhibidores de VEGFR-2 (Hunt, J. T.; Mitt, T.; Borzilleri, R. y col., J. Med. Chem., 2004, 47: 4054-4059), inhibidores de EGFR1/2 (Gavai, A. V; Fink, B. E.; Fairfax, D. J. y col., J. Med. Chem., 2009, 52: 6527-6530), inhibidores de IGF-1R (véase: Wittman, M. D.; Carboni, J. M.; Yang, Z. y col. J. Med. Chem., 2009, 52: 7360-7363), o inhibidores de Met cinasa (véase: Schroeder, G. M.; Chen, X.-T.; Williams, D. K. y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2007, 18: 1945-1951). Además, se han comenzado estudios clínicos con compuestos que contienen esta estructura privilegiada de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina, tales como el inhibidor de EGFR, AC-480 (documento WO2004054514), el antagonista del receptor de VEGF-2, BMS-690514 (documento WO2005/066176A1) y el antagonista de IGF-1R, BMS-754807 (documento US2008/0009497 A1) etc. También se ha informado de procedimientos sintéticos para la estructura central de la pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina, por ejemplo, Thieu, T; Sclafani, J. A.; Levy, D. V. y col., Org. Lett., 2011, 13: 4204-4207. Además de las referencias bibliográficas anteriormente citadas, hay diversas solicitudes de patente relacionadas con la estructura central de la pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina, por ejemplo, actuando como inhibidores de cinasa (publicación n.°: US2006/0084650A1), inhibidores de EGFR cinasa (publicación n.°: US2006/0089358A1, WO2006/069395), inhibidores de VEGFR-2 y FGFR-1 (publicación n.°: WO2004/009784, WO2004/043912) y solicitudes de patente relacionadas con los procedimientos sintéticos para intermedios (W02007/005709, WO2008/083398), inhibidores de tirosina cinasa receptora (WO2007/061882, WO2008/131050), inhibidores de Aurora cinasa (publicación n.°: WO2009/136966), inhibidores de JAK cinasa (publicación n.°: WO2010/002472). Dichas pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazinas mencionadas anteriormente no abarcan ni están relacionadas con los compuestos de la presente invención y el uso de las mismas como inhibidores de PI3K.

Basándose en los motivos anteriormente mencionados, los inventores diseñaron y sintetizaron una serie de inhibidores de PI3K con pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina como estructura central. Los compuestos dela presente invención han demostrado una bioactividad excelente tanto in vitro como in vivo, y cabe esperar su desarrollo en un nuevo medicamento contra el cáncer.

Sumario de la invención

El objeto de la presente invención es proporcionar un nuevo tipo de derivados de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina como se muestran en la fórmula general I.

en la que,

X = CH o N;

R1 es -NR5R6;

R2 es

R³es -NH², -NHC(O)NHR-^{i 1}, -NHC(O)ORⁿ, -CH²OH, -CH²S(O)²R¹², -CH²OS(O)²R¹²o -CH²NHS(O)²R¹²; R⁴es H o CF³;

cada uno de R⁵y R⁶es independientemente un alquilo C1-C4 o se combinan junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo saturado no sustituido o un heterociclo saturado sustituido por un sustituyente o sustituyentes, preferentemente un pirrolidilo, un piperidinilo y un piperazinilo, más preferentemente un piperazinilo; el sustituyente es -S(O)²R¹²;

cada uno de R⁷, R⁸, R⁹y R¹⁰es independientemente H o alquilo C1-C3; como alternativa, R⁷y R⁸, o R^gy R¹⁰se combinan con el átomo de carbono al cual están unidos para formar un anillo saturado de 5-8 miembros; preferentemente, R⁷y R⁸, o R^gy R¹⁰, con los átomos de carbono a los cuales están unidos en forma de átomos de carbono puenteados, forman un bicicloheterociclo puenteado con un anillo de morfolina;

R¹¹es un alquilo C1-C4, un cicloalquilo C3-C6 sin sustituir o un cicloalquilo C3-C6 sustituido por uno o más sustituyentes, un bencilo sin sustituir o un bencilo sustituido por uno o más sustituyentes, un fenilo sin sustituir o un fenilo sustituido por uno o más sustituyentes, un isoxazolilo sin sustituir o un isoxazolilo sustituido por uno o más sustituyentes o un piridilo sin sustituir o un piridilo sustituido por uno o más sustituyentes, el uno o más sustituyentes se seleccionan entre un halógeno, un alquilo C1-C3 o un alcoxilo C1-C3, -CF³, -C(O)OR¹², -C(O)NR¹²R¹⁵,

cada uno de R¹²y R¹⁵es independientemente alquilo C1-C3.

Preferentemente, la estructura de la fórmula general I es como se muestra a continuación:

en las que X, R1, R2, R3 y

Más preferentemente, R1 es dimetilamino o 1-metilsulfonilpiperazinilo;

R2 es morfolinilo, (S)-3-metilmorfolinilo u 8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ilo;

R3 es -NH2, -NHC(O)NHRn, -NHC(O)ORn, -CH2OH, -CH2S(O)2Me, o -CH2NHS(O)2Me;

R4 es H o -CF3;

R11 es un metilo, un etilo, un propilo, un ciclopropilo, un ferc-butilo, un iso-butilo, un 4-fluorobencilo, un fenilo sin sustituir o un fenilo sustituido por uno o más sustituyentes, un isoxazolilo sin sustituir o un isoxazolilo sustituido por uno o más sustituyentes o un anillo de piridina sin sustituir o un anillo de piridina sustituido por uno o más sustituyentes y el sustituyente se selecciona entre un flúor, un cloro, un trifluorometilo, un metilo, un metoxi, un etoxicarbonilo, un dimetilaminocarbonilo, un 4-metil-piperazin-1-carbonilo, un piperidin-1-carbonilo y un 4-dimetilaminopiperidin-1-carbonilo.

Más preferentemente, los compuestos representados por la fórmula general I tienen las estructuras siguientes:

Ría y R17 son iguales o diferentes y cada uno se selecciona independientemente entre alquilo C1-C4 o Ría y R17 se combinan con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un 4-metil-piperazinilo, un 4-dimetilaminopiperidilo o piperidin-1-ilo.

Más preferentemente, la presente invención proporciona los compuestos mostrados en la tabla 1.

T l 1. L r r l m r r n iv f rml nr l I

Otro objeto de la presente invención es proporcionar un procedimiento de preparación para los compuestos representados por la fórmula general I, el procedimiento de preparación comprende las etapas siguientes:

1) El derivado del pirrol 1 y cloramina en N,N-dimetilformamida anhidra se someten a reacción de N-aminación en presencia de una base para obtener el compuesto 2;

La base puede ser hidruro sódico, carbonato potásico o ferc-butóxido de potasio;

2) El compuesto representado por la fórmula 2, sin purificarse más, se somete a amonólisis para dar el compuesto 3;

3) el compuesto 3 reacciona con un aldehído aromático bajo la acción de un ácido de Lewis metálico para dar el compuesto lia, o el compuesto 3 y un aldehído, mediante catálisis por un ácido de Lewis tal como una solución de trifluoruro de boro en éter dietílico, se someten a condensación para dar una base de Schiff y después a ciclación oxidativa para dar el compuesto lia;

El ácido de Lewis metálico puede ser un reactivo de cobre monovalente o divalente, tal como bromuro de cuproso, cloruro cuproso, acetato de cobre monohidrato, bromuro de cobre, cloruro de cobre anhidro, cloruro de cobre dihidrato y similares. Preferentemente se usa el cloruro de cobre dihidrato por su alto rendimiento y su fácil procesamiento posterior en comparación con otros reactivos de cobre. El disolvente de reacción es sulfóxido de dimetilo o N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida y la temperatura de reacción es de 80-150 °C;

4) El compuesto lia se somete a cloración para dar el compuesto llb;

El agente de cloración es oxicloruro de fósforo o pentacloruro de fósforo y la base usada es N,N-dimetilanilina o 4-dimetilaminopiridina (DMAP);

5) El compuesto IIb y morfolina o un derivado de morfolina se someten a reacción de sustitución nucleofílica para dar el compuesto IIc;

6) El éster del compuesto IIc se somete a reacción de hidrólisis; o el nitro del compuesto IIc se somete primero a reducción y después se hidroliza el grupo éster de IIc;

7) El compuesto IId reacciona con una amina o un heterociclo saturado sustituido/sin sustituir que contiene un átomo de nitrógeno para dar el compuesto IIe;

aquí la amina es dimetilamina o metilsulfonilpirerazina;

8) El compuesto IIe se reduce mediante un agente reductor para dar el compuesto I';

aquí el agente reductor es complejo de borano y tetrahidrofurano o complejo de borano y dimetil sulfuro;

9) el compuesto I' también se somete a (reacción de adición con R11NCO, a esterificación o amidación con RnOC(O)Cl, a esterificación o amidación con RnC(O)OH o RnC(O)Cl o a reacción de esterificación o reacción de amidación con R12S(O)2Cl), para formar los compuestos representados por la fórmula general I.

En particular, los compuestos representados por la fórmula general Ia-If pueden prepararse mediante las etapas siguientes:

(1) Síntesis de los compuestos representados por la fórmula general IIIa-IIIc y síntesis de N-(5-formil-4-(trifluorometil)piridin-2-il)pivalamida (7):

El derivado del pirrol 1 y cloramina en N,N-dimetilformamida seca se someten a reacción de N-aminación en presencia de una base para obtener el compuesto 2, en el que la base puede ser hidruro sódico, carbonato potásico o ferc-butóxido de potasio. Sin purificarse más, el producto en bruto 2 se amonolizó directamente en un tubo cerrado herméticamente usando solución saturada de amoniaco en metanol o solución acuosa concentrada de amoniaco disponible en el comercio para dar el compuesto 3. El compuesto 3 reacciona con el aldehído aromático correspondiente (por ejemplo p-nitrobenzaldehído, acetato de 3-formil-bencilo, N-(5-formil-4-(trifluorometil)piridin-2-il)pivalamida) en presencia de un ácido de Lewis metálico adecuado para dar los compuestos IIIa, IIIb o IIIc. Los compuestos IIIa, IIIb o IIIc también se obtienen mediante la condensación del compuesto 3 y diversos aldehídos en presencia de un ácido de Lewis tal como solución de trifluoruro de boro en éter dietílico para dar una base de Schiff y posteriormente mediante ciclación oxidativa. En los que el ácido de Lewis metálico puede ser un reactivo de cobre monovalente o divalente, tal como bromuro de cuproso, cloruro cuproso, acetato de cobre monohidrato, bromuro de cobre, cloruro de cobre anhidro, cloruro de cobre dihidrato y similares. En comparación con otro reactivo de cobre, pueden obtenerse mayores rendimientos usando cloruro de cobre dihidrato y el procesamiento posterior es más fácil. El disolvente de reacción es sulfóxido de dimetilo o N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida y la temperatura de reacción es 80-150 °C.

En los que, el aldehido 7 se obtiene por un procedimiento de tres etapas. Se broma la 2-amino-4-trifluorometilpiridina (4) mediante N-bromosuccinimida en cloroformo para dar el compuesto 5. El grupo amino del compuesto 5 se protege con un grupo pivaloilo y después se obtiene el compuesto 7 usando n-butillitio y N,N-dimetilformamida en tetrahidrofurano anhidro.

(2) Síntesis de los derivados de la pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazina la y Ib en los que X = CH y R3 es NHC(O)NHR-n: Se clora el compuesto Illa mediante oxicloruro de fósforo o pentacloruro de fósforo para dar el producto 8, el cual reacciona con morfolina o su análogo a temperatura ambiente en tetrahidrofurano para obtener el compuesto 9.

El compuesto 9 se reduce en paladio al 5% o 10% sobre carbono para dar el compuesto 10, cuyo grupo éster se hidroliza en condiciones básicas para dar el ácido 11. El compuesto 11 y una amina, tal como dimetilamina o metilsulfonil piperazina, etc., se someten a condensación para dar el compuesto 12. Después 12 se reduce mediante un agente reductor para dar el compuesto 13, en el que el agente reductor puede ser complejo de borano y tetrahidrofurano o complejo de borano y dimetil sulfuro. El producto reducido 13 reacciona con una serie de isocianatos en diclorometano anhidro a temperatura ambiente o con la azida de acilo correspondiente en dioxano a temperatura de reflujo para dar la. Cuando Rn es 4-etoxicarbonil-fenilo, la se hidroliza para dar el compuesto 14. El compuesto 14 y dimetilamina, N-metilpiperazina o 4-dimetilaminopiperidina se someten a condensación para dar lb.

(3) Síntesis de los derivados de la pirrolo[2,1-/][1,2,4]tnazma Ic-e en las que X = CH y R3 es CH2OH, CH2S(O)2Ri2 o CH2NHS(O)2R12:

El compuesto clorado IlIb reacciona con morfolina o su análogo a temperatura ambiente en tetrahidrofurano para obtener el compuesto 16. El grupo éster del compuesto 16 se hidroliza para dar el compuesto 17. 17 y una amina, tal como dimetilamina o metilsulfonil piperazina, etc., se somete a condensación para dar el compuesto 18, y después se reduce 18 mediante una solución de borano y tetrahidrofurano o una solución de borano y dimetil sulfuro para dar Ic. Con el cloruro de metilsulfonilo, el hidroxilo de Ic se convierte en un buen grupo saliente de metanosulfonato y pasa a ser el compuesto 19. El compuesto 19 reacciona con alquilsulfonato sódico con irradiación por microondas en N-metilpirrolidona a 120 °C durante 30 min. para dar el compuesto Id.

Además, el compuesto 19 se somete amonólisis para dar el compuesto 20, el cual reacciona con cloruro de alquilsulfonilo para dar el compuesto le.

(4) Síntesis de los derivados de pirrolo[2,1-t][1,2,4]triazina If-lg en los que X=N, R3 es NH2, NHC(O)NHRn o NHC(O)OR11, y R4 es CF3:

El compuesto clorado IIIc reacciona con morfolina o su análogo en tetrahidrofurano a temperatura ambiente para obtener el compuesto 22. El grupo éster del compuesto 22 se hidroliza para dar el compuesto 23. 23 y una amina o un heterociclo saturado sustituido o sin sustituir se someten a condensación para dar el compuesto 24, el cual se reduce por una solución de borano y tetrahidrofurano o solución de borano y dimetil sulfuro para dar If. El compuesto If reacciona con isocianato o cloroformiato en diclorometano anhidro a temperatura ambiente para obtener Ig.

Los compuestos de acuerdo con la presente invención pueden inhibir de manera eficaz la actividad de PI3K cinasa. Por lo tanto, estos compuestos pueden usarse en el tratamiento de enfermedades asociadas con la vía de PI3K, en particular, para el tratamiento de tumores. Por lo tanto, un objeto adicional de la presente invención es proporcionar el uso de los compuestos de fórmula general I o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para la preparación de medicamentos inhibidores de fosfatidilinositol 3-cinasa y la proteína diana de mamífero de la rapamicina, es decir, para la preparación de medicamentos para tratar enfermedades relacionadas con la fosfatidilinositol 3-cinasa. Las enfermedades relacionadas con la fosfatidilinositol 3-cinasa incluyen tumores. Los tumores incluyen rabdomiosarcoma humano, cáncer de pulmón no microcítico, glioma humano, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de colon, cáncer de mama y así sucesivamente.

Además, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula general I y la composición farmacéutica también puede incluir otros ingredientes, tales como un vehículo, excipiente y similares.

También se desvela un procedimiento para tratar enfermedades relacionadas con la fosfatidilinositol 3-cinasa, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto representado por la fórmula general I.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 muestra los efectos de I-33 en la vía de señalización de PI3K de las células Rh30 de rabdomiosarcoma humano y las células U87MG de glioma humano.

La figura 2 muestra los efectos de inhibición del crecimiento de I-30 e I-33 en tumores trasplantados por vía subcutánea de U87MG de glioma humano en ratones atímicos.

Descripción detallada

La presente invención se ilustrará adicionalmente mediante los ejemplos siguientes, pero estos ejemplos no limitan la invención en modo alguno. En todos los ejemplos, la RMN 1H se registra con espectrómetros de resonancia magnética nuclear Brucher AM-400 o GEMINI-300, en los que el desplazamiento químico se representa por 5 (ppm). El espectro de masas se registra con un espectrómetro de masas MAT-95. Para la separación se usaron mallas de gel de sílice de 200-300 mesh.

Ejemplos

1. Preparación de 1-amino-5-carbamoil-1H-pirrol-3-carboxilato de metilo (3)

La mezcla de 9 g de cloruro de amonio y 330 ml de éter dietílico se enfrió a -20 °C y se añadieron 15 ml de solución acuosa concentrada de amoniaco con un cuentagotas. Se añadieron gota a gota 216 ml de solución de hipoclorito sódico al 5% (porcentaje en masa) mediante un embudo de goteo a presión constante. La mezcla se agitó a -10 °C durante 30 minutos. Después de la separación, la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (la cloramina es inestable y la salmuera se debe enfriar previamente). Se añadió cloruro de calcio anhidro en la capa orgánica y la mezcla se secó a -40 °C durante 1 hora antes de su uso.

El compuesto pirrol-1,3-dicarboxilato 1 (5g, 25,4 mmol, preparado de acuerdo con Kamijo, S., Kanazawa, C. y Yamamoto Y. J. AM. Ch EM. SOC. 2005, 127, 9260-9266, en el que los materiales de partida propiolato de metilo e isocianoacetato de etilo se adquirieron en Darui chemical Co.,Ltd) se disolvió en 25 ml de W,W-dimetilformamida anhidra y se enfrió en un baño de hielo a 0 °C. Se añadió hidruro sódico (60%, dispensado en aceite mineral, 1,22 g, 30,5 mmol) en lotes. La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Después se añadió en una porción 300 ml de solución de cloramina en éter dietílico preparada con antelación y se agitó durante una noche a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se inactivó con una solución saturada de tiosulfato sódico y se diluyó con agua. La capa de éter dietílico se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua tres veces, se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron a presión reducida para dar 6,2 g de producto en bruto, el cual se sometió directamente a amonólisis sin purificación. A cada 3 g del producto en bruto se le añadió 80 ml de solución saturada de amoniaco en metanol y se llevó a cabo la reacción a 80 °C en un tubo cerrado herméticamente durante 2 días. La mezcla de reacción se concentró para precipitar un sólido, después se dejó reposar durante aproximadamente 1 hora y se filtró para obtener 3 g de producto en forma de un sólido de color blanco. El rendimiento en dos etapas fue del 64,6 %. P.f. 222-224 °C.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 57,95 (s a, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,33 (s a, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,87 (s, 2H), 3,70 (s, 3H). EM (IE) m/z (%): 183 (M+, 100).

2. Preparación de 2-amino-4-trifluorometil-5-bromopiridina (5)

Se disolvió 2-amino-4-trifluorometilpiridina (5g, 30,8 mmol Langfang Beixin Chemical Co., Hebei) en 100 ml de cloroformo y se añadió N-bromosuccinimida (5,92 g, 33,3 mmol) en lotes. La mezcla se agitó en la oscuridad o apartado de la luz a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró y se purificó por cromatografía en columna con elución en gradiente (éter de petróleo: acetato de etilo = 10: 1 y diclorometano), para dar 4,33 g de un sólido de color rojo. Rendimiento: 58,2 %. CL-EM: 240 (M+1), 242 (M+2+1).

3. Preparación de N-(5-bromo-4-(trifluorometil)piridin-2-il) pivalamida (6)

En un baño de hielo, se añadieron gota a gota 29,8 g de cloruro de pivaloilo (226 mmol) a una solución del compuesto 5 (50,0 g, 207 mmol) y trietilamina (37,9 ml) en diclorometano (300,0 ml) durante una hora y después se agitó durante 2 horas hasta que desaparecieron los materiales de partida. Se añadieron 150 ml de agua a la solución de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se concentró y se separó a través de una columna corta con acetato de etilo para dar un sólido de color blanco (57,7 g, 85,6%).

P.f. 126-128 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCla): 58,67 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,14 (s a, 1H), 1,33 (s, 9H).

4. Preparación de N-(5-formil-4-(trifluorometil)piridin-2-il)pivalamida (7)

El compuesto 6 (15,0 g, 46,2 mmol) se disolvió en 350 ml de tetrahidrofurano anhidro y se enfrió a -78 °C en atmósfera de nitrógeno. Se añadieron lentamente 45 ml de solución de n-butillitio 2,5 M en tetrahidrofurano a la solución de reacción durante una hora. La solución de reacción se agitó a -78 °C durante 1 hora y después se añadieron lentamente gota a gota 15 ml de N,N-dimetilformamida anhidra y se agitó durante otras 2,5 h a -78 °C. A la solución de reacción se le añadió 120 ml de ácido clorhídrico diluido 1 M para inactivar la reacción. La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua (200 ml x 3), salmuera saturada (200 ml) respectivamente, después se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró y se purificó por cromatografía en columna (éter de petróleo: diclorometano: acetato de etilo = 60: 10: 1) para dar 7,1 g de un sólido de color blanco (56,1%). P.f. 96-98 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 510,32 (s a, 1 H), 9,01 (s, 1 H), 8,73 (s, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 1,38 (s, 9 H).

5. Procedimiento general de preparación para compuestos NIa-NIc

Se añadieron 5 ml de dimetilsulfóxido a una mezcla del compuesto 3 (55 mg, 0,3 mmol), un aldehido correspondiente (0,3 mmol) y cloruro de cobre dihidrato (51 mg, 0,3 mmol) y se llevó a cabo la reacción a 80-150 °C. Después de que la reacción finalizara, la mezcla de reacción se enfrió y se vertió en agua, los sólidos precipitados se filtraron. Si el producto en bruto tiene una pobre solubilidad, este se lava con metanol. Si tiene una buena solubilidad, se purifica a través de cromatografía en columna (diclorometano: metanol = 50: 1).

Preparación de 2-p-nitrofenil-4-oxo-3,4-dihidropirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-6-formiato de metilo (Illa)

De acuerdo con el procedimiento general de preparación descrito en el anterior ejemplo 5, el p-nitrobenzaldehído reacciona con el compuesto 3 para dar el compuesto IIIa en forma de un sólido de color amarillo con un rendimiento del 72,0%. P.f>300 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 512,52 (s, 1H), 8,38 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 8,22 (s, 1H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,26 (s, 1H), 3,80 (s, 3H). EMBR (IE) m/z (%): 314 (M+, 85), 283 (100). EMAR calc. C14H10N4O5: 314,0651; encontrado: 314,0659.

Preparación de 2-(3-(acetox¡lmet¡l)feml)-4-oxo-3,4-dih¡drop¡rrolo[2,1-f][1,2,4] triazin-6-carboxilato de metilo (IlIb)

De acuerdo con los procedimientos generales de preparación descritos en el anterior ejemplo 5, el acetato de 3-formilbencilo reacciona con el compuesto 3 para dar el compuesto IlIb en forma de un sólido de color blanquecino con un rendimiento el 39,0%. P.f. 202-203 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 5 12,29 (s, 1H), 8,19 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,92 (dt, J = 1,7, 7,2 Hz, 1H), 7,58 - 7,53 (m, 2H), 7,24 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,10 (s, 3H). CL-EM: 342 (M+1).

Preparación de 4-oxo-2-(6-p¡valam¡do-4-(t^fluoromet¡l)-p¡^d¡n-3-¡l)-3,4-d¡l^¡drop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-6-carbox¡lato de metilo (IIIc)

De acuerdo con el procedimiento general de preparación descrito en el anterior ejemplo 5, el compuesto 7 reacciona con el compuesto 3 para dar el compuesto IIIc en forma de un sólido color amarillo claro con un rendimiento del 25,9%. P.f. 244-245 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 512,47 (s, 1H), 10,68 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,20 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 1,28 (s, 9H). CL-EM: 438 (M+1).

6. Preparación de 2-p-n¡trofen¡l-4-clorop¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-6-carbox¡lato de metilo (8)

Se añadieron 20 ml de oxicloruro de fósforo a una mezcla del compuesto Illa (4,74 g, 15,1 mmol) y 4-dimetilamino piridina (4,34 g, 35,6 mmol) y se calentó a reflujo durante 5 horas. Después de enfriar la mezcla de reacción, se eliminó por destilación una porción de oxicloruro de fósforo a presión reducida. El residuo se vertió en hielo picado, se filtró y se secó para dar un sólido de color amarillo (4,6 g, 91,8%). P.f. 218-223 °C. RMN 1H (300 MHz, cDch): 5 8,54 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 8,36 (s, 1H), 8,34 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H). EM (IE) m/z (%): 332 (M+, 100), 334 (M+2, 33).

7. Preparación del compuesto 9

2-(p-n¡trofen¡l)-4-(morfol¡n¡l)-p¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-6-carbox¡lato de metilo (9a)

El compuesto 8 (4,6 g, 13,8 mmol) se suspend¡ó en 150 ml de tetrah¡drofurano, se añad¡eron gota a gota 3,6 ml de morfol¡na y se h¡c¡eron reacc¡onar durante 5 horas a temperatura amb¡ente. Se obtuv¡eron 3,9 g de un sól¡do por f¡ltrac¡ón y el filtrado se separó a través de una columna de cromatografía con d¡clorometano para dar 1,1 g del compuesto de color amar¡llo 9a (94,3%). P.f. 296-300 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCla): 58,45 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,29 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,14 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,17 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,91 (t, J = 4,8 Hz, 7H). CL-EM: 384 (M+1).

4-(8-oxa-3-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-3-¡l)-2-(p-n¡trofen¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-6-carbox¡lato de met¡lo (9b)

El compuesto 8 (100 mg, 0,3 mmol) se suspend¡ó en 15 ml de tetrah¡drofurano y se añad¡ó clorh¡drato de 8-oxa-3-azab¡c¡clo[3.2.1]octano (54 mg, 0,36 mmol) y una gota de tr¡et¡lam¡na y se h¡c¡eron reacc¡onar durante 3-4 h a temperatura amb¡ente. El d¡solvente se el¡m¡nó a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se lavó con agua, se secó y se pur¡f¡có a través de una columna de cromatografía con d¡clorometano, para dar 109 mg del sól¡do de color amar¡llo 9b (88,6%). P.f. 278-280 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh¡): 58,45 (d, J =9,0 Hz, 2H), 8,29 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 8,13 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,60 (s a, 4H), 3,91 (s, 3H), 3,63 (s a, 2H), 2,08 - 2,04 (m, 2H), 1,91 -1,84 (m, 2H). CL-EM: 410 (M+1).

8. Proced¡m¡ento general de preparac¡ón del compuesto 10

Un d¡solvente m¡xto de metanol y cloroformo (500 ml, 1: 1), y palad¡o al 10 % en peso sobre carbono del mater¡al de part¡da (Pd al 10 %-carbono) se añad¡ó al compuesto 9 (13 mmol) y se redujo durante 24 horas en atmósfera de h¡drógeno a temperatura amb¡ente. El palad¡o sobre carbono se el¡m¡nó por f¡ltrac¡ón sobre cel¡te y el filtrado se concentró a pres¡ón reduc¡da para obtener de forma cuant¡tat¡va el compuesto 10.

2-(p-am¡nofen¡l)-4-(morfol¡n¡l)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tr¡az¡n-6-carbox¡lato de met¡lo (10a)

Se preparó 10a a partir de 9a de acuerdo con el procedimiento general de preparación del compuesto 10. Sólido de color blanco, P.f. 238-240 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 58,13 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 5,70 (s a, 2H), 4,04 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,80 (s, 3H), 3,77 (t, J = 4,5 Hz, 4H). EM (IE) m/e (%): 353 (M+, 100).

2-(p-aminofenil)-4-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-carboxilato de metilo (10b)

Se preparó 10b a partir de 9b de acuerdo con el procedimiento general de preparación del compuesto 10. Sólido de color amarillo. P.f. 254-256 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 58,21 (s, 1H), 8,19 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,34 (s, 1H), 7,22 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 4,53 (s a, 4H), 3,81 (s, 3H), 3,49 (s a, 2H), 1,89 - 1,85 (m, 2H), 1,78 - 1,75 (m, 2H). CL-EM: 380 (M+1).

9. Procedimiento de preparación del compuesto 11

Ácido 2-(p-aminofenil)-4-(morfolinil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-carboxílico (11a)

El compuesto 10a (14mmol) se suspendió en 150 ml de etanol y se añadieron 30 ml de solución acuosa de hidróxido sódico 2 M. La mezcla de reacción se calentó a reflujo para convertirse en una solución transparente y la reacción sustancialmente se completó. Se añadieron 2 ml de ácido acético. La mayoría del disolvente se eliminó por destilación a presión reducida y los precipitados se filtraron para dar el compuesto 11a (3,25 g, 68,5%). P.f. > 300 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 57,91 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,59 (d, J =8,8 Hz, 2H), 5,49 (s, 2H), 4,02 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,77 (t, J = 4,4 Hz, 4H). EM (IE) m/e (%): 339 (M+, 100). Ácido 2-(p-aminofenil)-4-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-6-carboxílico (11b)

De acuerdo con el mismo procedimiento que el de la preparación del compuesto 11a, se hidrolizaron 360 mg de 10b (0,95 mmol) como material de partida para dar el compuesto 11b (270 mg, 77,9%). P.f. 278-280 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 512,46 (s, 1H), 8,04 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,22 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,55 (s a, 2H), 4,51 (s a, 4H), 3,48 (s a, 1H), 3,44 (s a, 1H), 1,88 - 1,85 (m, 2H), 1,79 - 1,75 (m, 2H). CL-EM: 366 (M+1).

10. Procedimiento general de preparación del compuesto 12

2-(p-aminofenil)-W,A/-dimetil-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-carboxamida (12a)

Se añadió clorhidrato de dimetilamina (686 mg, 8,4 mmol) a 30 ml de N,N-dimetilformamida anhidra y se añadió carbonato potásico (3,48 g, 25,2 mmol) y se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después se añadió el compuesto 11a (4,2 mmol), HBTU (hexafluorofosfato de benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametiluronio, 4,77 g, 12,6 mmol) y trietilamina (2,9 ml, 21 mmol) y se hicieron reaccionar durante una noche a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se vertió en agua y se filtró. El filtrado se extrajo una vez con acetato de etilo, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró a sequedad. El residuo se combinó con la torta de filtro. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (diclorometano: metanol = 100: 1) para dar el compuesto de color blanco 12a (922 mg, 60,0%). P.f. 238-239 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 58,08 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,11 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,86 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,20 (s a, 6H). EM (IE) m/e (%): 366 (M+, 100).

(2-(p-aminofenil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metanona (12b)

Se obtuvo un sólido de color blanco 12b (540 mg, 31,4%) de acuerdo con el mismo procedimiento que el de la preparación del compuesto 12a, en el que se usó 1,2 g del compuesto 11a (3,54 mmol) como material de partida y se usó trifluorometanosulfonato de metilsulfonilpiperazina (1,85 g, 7,1 mmol) en lugar de clorhidrato de dimetilamina. P.f. 185-186 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCla): 88,07 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,75 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,09 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,90 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,86 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,27 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,80 (s, 3H). CL-EM: 508 (M+23).

(2-(p-aminofenil)-4-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)pirrolo[2,1-f|[1,2,4]triazin-6-il)(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metanona (12c)

Se usaron 183 mg del compuesto 11b (0,5 mmol) en lugar del compuesto 11a y se obtuvo el compuesto 12c (120 mg, 46,8%) de acuerdo con el mismo procedimiento que el de la preparación del compuesto 12b. P.f. > 300 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 87,96 (s, 1H), 7,91 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,06 (s, 1H), 6,61 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 5,53 (s, 2H), 4,51 (s a, 4H), 3,75 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,48 (s a, 1H), 3,43 (s a, 1H), 3,18 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 2,91 (s, 3H), 1,90 -1,75 (m, 4H). CL-EM: 511 (M+), 512 (M+1).

11. Procedimiento general de preparación del compuesto 13

2-(p-aminofenil)-6-(dimetilaminometil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazina (13a)

Se añadió 1 g del compuesto 12a (2,7 mmol) y 50 ml de tetrahidrofurano o dioxano en un matraz de dos bocas de 150 ml en atmósfera de nitrógeno. Se añadió gota a gota lentamente 2 M de solución de borano y dimetil sulfuro (10,8 mmol) y se calentó a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción se inactivó con metanol y se purificó por cromatografía en columna con diclorometano para dar el sólido de color blanco 13a (930 mg, 96,7%). P.f. 205 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 87,92 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,86 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,60 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 5,48 (s a, 2H), 4,02 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,92 (s, 2H), 3,77 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 2,42 (s, 6H). EM (IE) m/e (%): 352 (M+, 24).

2-(p-aminofenil)-6-[((4-metilsulfonil)piperazin-1-il)metil]-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazina (13b)

Se usó el compuesto 12b (540 mg, 1,1 mmol) en lugar del compuesto 12a como material de partida y se preparó el compuesto 13b (288 mg, 55,0%, sólido de color blanco) de acuerdo con el mismo procedimiento de preparación del compuesto 13a. P.f. 199-200 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 57,92 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,85 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 5,47 (s, 2H), 4,08 (s, 2H), 4,03 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,78 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,49 - 3,35 (m, 4H), 2,95 (s, 3H), 2,89 (t, J = 5,7 Hz, 4H). EM (IE) m/e (%): 471 (M+, 12).

4-(4-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)anilina (13c)

Se usó el compuesto 12c (100 mg, 0,195 mmol) en lugar del compuesto 12a como material de partida y se preparó el compuesto 13c de acuerdo con el mismo procedimiento de preparación del compuesto 13a en forma de un sólido de color amarillo claro (39 mg, 40,1%). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 57,89 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,61 (s, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,59 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,46 (s a, 2H), 4,50 (s a, 4H), 3,56 (s, 2H), 3,43 (s a, 1H), 3,39 (s a, 1H), 3,30 (s a, 4H), 3,11 (s a, 4H), 2,86 (s, 3H), 1,88 - 1,85 (m, 2H), 1,78 - 1,75 (m, 2H). EM (IE) m/e (%): 497 (M+, 12).

12. Procedimiento general de preparación del compuesto I (1-13, 17-20)

1-etil-3-[4-(6-(dimetilaminometil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil]urea (I-1)

El compuesto 13a (0,15 mmol) se disolvió en 10 ml de diclorometano anhidro y se añadieron 3 equiv. de isocianato de etilo y se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El compuesto diana se obtuvo por filtración.

Sólido de color blanco (22 mg, 34,6%). P.f. 222-224 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 58,65 (s, 1H), 8,09 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,48 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,16 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,05 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,78 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,12 (quint, J = 5,8, 7,1 Hz, 2H), 2,43 (s, 6H), 1,06 (t, J = 7,1 Hz, 3H). IEN-EM: 424 (M+1).

1-prop¡l-3-[4-(6-(d¡met¡lam¡nomet¡l)-4-morfolinop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]triaz¡n-2-¡l)feml]urea (I-2)

El proced¡m¡ento de preparac¡ón fue ¡dént¡co a la preparadón de I-1, salvo que el ¡soc¡anato de et¡lo se sust¡tuyó por ¡sodanato de prop¡lo. Sól¡do de color blanco (23 mg, 35,1 %). P.f. 224-225 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 58,64 (s, 1H), 8,09 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,48 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,20 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,05 (t, J = 5,1 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,78 (t, J = 5,1 Hz, 4H), 3,05 (c, J = 5,8, 7,2 Hz, 2H), 2,43 (s, 6H), 1,44 (sext, J = 7,2 Hz, 2H), 0,88 (t, J = 7,2 Hz, 3H). IEN-EM: 438 (M+1).

1-ferc-but¡l-3-[4-(6-(d¡met¡lam¡nomet¡l)-4-morfol¡nop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]triaz¡n-2-¡l)feml]urea (I-3)

El proced¡m¡ento de preparadón fue ¡dént¡co a la preparadón de I-1, salvo que el ¡soc¡anato de et¡lo se sust¡tuyó por ¡sodanato de ferc-butNo. Sól¡do de color blanco (11 mg, 16,3 %). P.f. 220-224 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 5 8,49 (s, 1H), 8,08 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,93 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 6,07 (s, 1H), 4,05 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,78 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 2,42 (s, 6H), 1,30 (s, 9H). IEN-EM: 452 (M+1).

1-[4-(6-d¡met¡lam¡nomet¡l-4-morfol¡nop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tnaz¡n-2-¡l)feml]-3-(p-fluorofeml)urea (I-4)

El proced¡m¡ento de preparadón fue ¡dént¡co a la preparadón de I-1, salvo que el ¡sodanato de et¡lo se sust¡tuyó por isocianato de p-fluorofenilo. Sólido de color blanco (30 mg, 40,9 %). P.f. 217-219 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 5 8,90 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,15 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,95 (s, 1H), 7,55 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,47 (dd, J = 4,6, 8,8 Hz, 2H), 7,13 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 7,13 (s, 1H), 4,06 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,79 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 2,43 (s, 6H). IEN-EM: 490 (M+1).

1-[4-(6-dimetilaminometil-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil]-3-(p-clorofenil)urea (I-5)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que el isocianato de etilo se sustituyó por isocianato de p-clorofenilo. Sólido de color blanco (43 mg, 56,8%). P.f. 237 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 58,95 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,15 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,95 (s, 1H), 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,13 (s, 1H), 4,06 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,79 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 2,43 (s, 6H). IEN-EM: 506 (M+1), 508 (M+2+1).

1-(3-clorofenil)-3-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)urea (I-6)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que el isocianato de etilo se sustituyó por isocianato de m-clorofenilo. Sólido de color blanco (25 mg, 33,0 %). P.f. 173-176 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 5 9,00 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,16 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,95 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,73 (t, J = 1,9 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,34 - 7,25 (m, 2H), 7,13 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,03 (dt, J = 1,9, 7,0 Hz, 1H), 4,07 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,79 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 2,43 (s, 6H). IEN-EM: 506 (M+1), 508 (M+2+1).

1-(2,4-diclorofenil)-3-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)urea (I-7)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que el isocianato de etilo se sustituyó por isocianato de 2,4-diclorofenilo. Sólido de color blanco (29 mg, 35,8%). P.f. 225 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 59,66 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,22 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,95 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,40 (dd, J = 2,4, 9,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,07 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,95 (s, 2H), 3,79 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 2,43 (s, 6H). IEN-EM: 540 (M+1), 542 (M+2+1).

1-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)3-3-trifluorometilen)urea (|-8)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que el isocianato de etilo se sustituyó por isocianato de m-trifluorofenilo. Sólido de color blanco (81 mg, 100 %). P.f. 160-163 °C. RMN 1H (300 MHz, D^mS^o-de): 59,73 (s, 1H), 9,55 (s, 1H), 8,16 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 8,01 (s, 1H), 7,96 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,52 (t, J = 7,5, 8,6 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 4,07 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,79 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 2,43 (s, 6H). IEN-EM: 540 (M+1).

1-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)-3-(p-tolil)urea (I-9)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que el isocianato de etilo se sustituyó por isocianato de p-tolilo. Sólido de color blanco (37 mg, 50,8%). P.f. 230 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 58,86 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,15 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,95 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,06 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,79 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 2,43 (s, 6H), 2,24 (s, 3H). IEN-EM: 486 (M+1).

1-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)-3-(4-metoxifenil)urea (I-10)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que el isocianato de etilo se sustituyó por isocianato de p-metoxilfenilo. Sólido de color blanco (49 mg, 65,2%). P.f. 235 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 58,82 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,14 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,94 (s, 1H), 7,55 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,12 (s, 1H), 6,87 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,06 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,95 (s, 2H), 3,79 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,72 (s, 3H), 2,43 (s, 6H). IEN-EM: 502 (M+1).

1-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)-3-(4-fluorobencil)urea (I-11)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que el isocianato de etilo se sustituyó por isocianato de p-fluorobencilo. Sólido de color blanco (32 mg, 42,4 %). P.f. 219-223 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 58,83 (s, 1H), 8,10 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,50 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,35 (dd, J = 5,7, 8,6 Hz, 2H), 7,16 (t, J = 8,6 Hz, 2H), 6,70 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 7,11 (s, 1H), 4,29 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 4,05 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,78 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 2,42 (s, 6H). IEN-EM: 504 (M+1).

1-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)-3-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)urea (I-12)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que el isocianato de etilo se sustituyó por 3,5-dimetilisoxazol-4-isocianato. Sólido de color blanco (24 mg, 31,7%). P.f. 236 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 59,05 (s, 1H), 8,14 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,94 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,55 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,06 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,79 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 2,43 (s, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,13 (s, 3H). IEN-EM: 505 (M+1).

4-(3-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)-ureido)benzoato de etilo (I-13)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que el isocianato de etilo se sustituyó por isocianato de p-etoxicarbonilfenilo. Sólido de color blanco (47 mg, 57,7%). P.f. 175-176 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 58,24 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,68 (s, 1H), 7,49 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,92 (s, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,70 (s, 1H), 4,36 (c, J = 7,0 Hz, 2H), 4,10 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 4,03 (s, 2H), 3,89 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 2,58 (s, 6H), 1,39 (t, J = 7,0 Hz, 3H). IEN-EM: 544 (M+1).

1-etil-3-(4-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)urea (I-17)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-1, salvo que 13a se sustituyó por el compuesto 13b. Sólido de color blanco (34 mg, 41,8 %). P.f. 200 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-cCe): 58,92 (s, 1H), 8,08 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,92 (s, 1H), 7,49 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,36 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,10 (s, 2H), 4,05 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,79 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,49 - 3,37 (m, 4H), 3,11 (quint, J = 5,6, 7,0 Hz, 2H), 2,96 (s, 3H), 2,89 (s a, 4H), 1,05 (t, J = 7,0 Hz, 3H). IEN-EM: 543 (M+1)

1-(4-fluorofenil)-3-(4-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo [2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)urea (I-18)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-4, salvo que 13a se sustituyó por el compuesto 13b. Sólido de color blanco (45 mg, 49,3 %). P.f. 255-256 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 58,89 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,15 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,47 (dd, J = 4,8, 8,8 Hz, 2H), 7,13 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 6,50 (s, 1H), 4,10 (s, 2H), 4,07 (s a, 4H), 3,80 (s a, 4H), 3,58 - 3,38 (m, 4H), 2,96 (s, 3H), 2,90 (s a, 4H). IEN-EM: 609 (M+1).

1-(4-(4-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)-3-(4-fluorofenil)urea (I-19)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-4, salvo que 13a se sustituyó por el compuesto 13c. Sólido de color blanco (31 mg, 32,6 %). P.f. 266-267 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 88,89 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,13 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,70 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,47 (dd, J = 5,0, 8,8 Hz, 2H), 7,13 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 6,84 (s, 1H), 4,51 (s a, 4H), 3,57 (s, 2H), 3,47 (s a, 1H), 3,43 (s a, 1H), 3,32 (s a, 4H), 3,11 (t, J = 4,0 Hz, 4H), 2,87 (s, 3H), 1,89 - 1,85 (m, 2H), 1,80 - 1,76 (m, 2H). IEN-EM: 635 (M+1).

4-(-3-(4-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)ureido)benzoato de etilo (I-20)

El procedimiento de preparación fue idéntico a la preparación de I-13, salvo que 13a se sustituyó por el compuesto 13b. Sólido de color blanco (40 mg, 40,2 %). P.f. 260-262 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 89,15 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,16 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,72 (s, 1H), 7,62 - 7,56 (m, 4H), 6,90 (s, 1H), 6,52 (s, 3H), 4,28 (c, J = 7,0 Hz, 2H), 4,05 (s a, 4H), 3,79 (s a, 4H), 3,58 (s, 2H), 3,11 (s a, 4H), 2,87 (s a, 4H), 1,31 (t, J = 7,0 Hz, 3H). IEN-EM: 663 (M+1).

13. Procedimiento general de preparación de los compuestos I-14 ~ I-16

El ácido carboxílico correspondiente (0,5 mmol) se disolvió en N,N-dimetilformamida anhidra y trietilamina (101 mg, 1 mmol) y se añadió azidofosfato de difenilo (165 mg, 0,6 mmol) y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se vertió en agua y se filtró y la torta de filtro se secó en un horno de vacío a temperatura ambiente durante 24 horas para dar azida de p-carbamoilbenzoilo. El compuesto 13 (0,1 mmol) y azida de p-carbamoilbenzoilo (0,2 mmol) en dioxano anhidro se calentaron a reflujo durante 3 horas. El disolvente se eliminó por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en un disolvente mixto de diclorometano y metanol y se purificó por cromatografía preparativa de capa fina (diclorometano: metanol = 8: 1 ), para dar un producto puro deseado.

4-(3-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)fenil)ureido)-W,W-dimetilbenzamida (I-14)

De acuerdo con el procedimiento general descrito en ejemplo 13, se usó ácido 4-(dimetilcarbamoil)benzoico como material de partida y la azida de 4-(dimetilcarbamoil)benzoilo resultante se hizo reaccionar con 13a para dar un sólido de color amarillo claro (14 mg, 25,8%). P.f. 240 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 89,59 (s, 2H), 8,16 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,99 (s, 1H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,19 (s, 1H), 4,25 (s, 2H), 4,08 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,80 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 2,96 (s, 6H), 2,69 (s, 6H). IEN-EM: 543 (M+1).

1-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)fenil)-3-(4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)fenil)urea (I-15)

De acuerdo con los procedimientos generales descritos en el ejemplo 13, se usó ácido 4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)benzoico como material de partida y la azida de 4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)benzoilo resultante se hizo reaccionar con 13a para dar un sólido de color blanco (9 mg, 15,1%). RMN 1H (300 MHz, DMSO-CÍ6): 59,63 (s a, 2H), 8,16 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,92 (s, 1H), 7,57 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,13 (s, 1H), 4,07 (s a, 6H), 3,80 (s a, 4H), 3,51 (s a, 4H), 3,06 (s a, 2H), 2,55 (s, 6H), 2,38 (s a, 2H), 2,24 (s, 3H). IEN-EM: 598 (M+1).

1-(4-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)-3-(4-(piperidin-1-carbonil)fenil)urea (I-16)

De acuerdo con el procedimiento general descrito en el ejemplo 13, se usó ácido 4-(piperidin-1-carbonil)benzoico como material de partida y la azida de 4-(piperidin-1-carbonil)benzoilo resultante se hizo reaccionar con 13a para dar un sólido de color amarillo (11 mg, 18,9%). P.f. 184-186 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 59,57 (s, 2H), 8,15 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,57 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,13 (s, 1H), 4,07 (s a, 6H), 3,79 (t, J = 4,3 Hz, 4H), 3,38 (s a, 4H), 2,58 (s, 6H), 1,60 (s a, 2H), 1,50 (s a, 4H). IEN-EM: 583 (M+1).

14. Preparación de ácido 4-(3-(-4(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolino pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)fenil)ureido)benzoico (14)

El compuesto I-20 (395 mg, 0,6 mmol) se suspendió en 20 ml de tetrahidrofurano y 10 ml de metanol y se añadieron 4 ml de solución de hidróxido potásico 1 M y se calentó a reflujo durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió y se añadieron 2 ml de ácido acético para precipitar los sólidos. Después de filtrarlos, se obtuvieron sólidos de color blanco (312 mg, 82,0%). P.f. 207-209 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 59,16 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 8,16 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,88 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,58 (d, J = 7,9 Hz, 4H), 6,87 (s, 1H), 4,04 (s a, 4H), 3,79 (s a, 4H), 3,58 (s, 2H), 3,34 (s a, 4H), 3,11 (s a, 4H), 2,87 (s, 3H). CL-EM: 635 (M+1).

15. Procedimientos generales de preparación de los compuestos I-21 ~ I-23.

Se disolvió el compuesto 14 (95 mg, 0,15 mmol), diisopropiletilamina (116 mg, 0,9 mmol) y HBTU (hexafluorofosfato de benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametiluronio, 284 mg, 0,75 mmol) en 5 ml de W,W-dimetilformamida y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Cada amina correspondiente (0,6 mmol) se añadió y se agitó a temperatura ambiente durante 4-6 horas. La mezcla de reacción se vertió en 50 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo. La mezcla resultante se separó mediante una placa preparativa (diclorometano: metanol = 10: 1) para dar un producto.

W,W-dimetil-4-(3-(4-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)fenil)ureido)benzamida (I-21)

Sólido de color amarillo claro (38 mg, 38,3%). P.f. 248-250 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 59,40 (s, 2H), 8,15 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,72 (s, 1H), 7,57 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,89 (s, 1H), 4,05 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,79 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,59 (s, 2H), 3,32 (s a, 4H), 3,12 (s a, 4H), 2,96 (s, 6H), 2,87 (s, 3H). IEN-EM: 684 (M+23).

1-(4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)fenil)-3-(4-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f|[1,2,4]triazin-2-il)fenil)urea (I-22)

Sólido de color amarillo claro (40 mg, 37,2 %). P.f. 185-188 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 59,03 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,15 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,58 - 7,52 (m, 4H), 7,34 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,89 (s, 1H), 4,04 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,79 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,59 (s, 2H), 3,50 (s a, 4H), 3,32 (s a, 4H), 3,12 (s a, 4H), 2,87 (s, 3H), 2,38 (s a, 4H), 2,24 (s, 3H). IEN-EM: 717 (M+1).

1-(4-(4-(dimetilamino)piperidin-1-carbonil)fenil)-3-(4-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f|[1,2,4]triazin-2-il)fenil)urea (I-23)

Sólido de color blanco (44 mg, 39,4%). P.f. 200-202 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO): 59,12 (s, 2H), 8,15 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,58 - 7,53 (m, 4H), 7,37 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,90 (s, 1H), 4,05 (t, J = 4,2 Hz, 4H), 3,79 (t, J = 4,2 Hz, 4H), 3,59 (s, 2H), 3,32 (s a, 8H), 3,12 (s a, 4H), 2,87 (s, 3H), 2,94 (s, 1H), 2,68 (s, 6H), 2,05 - 1,91 (m, 2H), 1,63 - 1,48 (m, 2H). IEN-EM: 745 (M+1).

16. Preparación de 2-(3-(acetox¡met¡l)fen¡l)-4-dorop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tnaz¡n-6-carbox¡lato de metilo (15)

Se preparó el compuesto 15 por el proced¡m¡ento que era ¡dént¡co al de la preparac¡ón del compuesto 8, en el que se usó el compuesto IlIb (341 mg, 1 mmol) como mater¡al de part¡da. El producto en bruto se pur¡f¡có por cromatografía en columna (éter de petróleo : acetato de et¡lo = 5 : 1) para obtener un sól¡do de color blanco (197 mg, 54,8%). P.f. 154-155 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 58,33 - 8,29 (m, 3H), 7,52 - 7,50 (m, 2H), 7,41 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,14 (s, 3H). CL-EM: 360 (M+1), 362 (M+2+1).

17. Preparac¡ón de 2-(3-(acetox¡met¡l)fen¡l)-4-morfol¡nop¡rrolo[2,1-f][1,2,4] tr¡az¡n-6-carbox¡lato de met¡lo (16)

Se preparó el compuesto 16 por el proced¡m¡ento que era ¡dént¡co al de la preparac¡ón del compuesto 9, en el que se usó el compuesto 15 (180 mg, 0,5 mmol) como mater¡al de part¡da. Sól¡do de color blanco (177 mg, 86,3%). P.f. 204-205 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 58,26 - 8,22 (m, 2H), 8,13 (s, 1H), 7,46 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 7,19 (s, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,15 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,90 (s, 3H), 3,90 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,13 (s, 3H). CL-EM: 411 (M+1).

18. Preparac¡ón de ác¡do 2-(3-(h¡drox¡met¡l)fen¡l)-4-morfol¡nop¡rrolo[2,1-f][1,2,4] tr¡az¡n-6-carboxíl¡co (17)

Se preparó el compuesto 17 por el procedimiento que era idéntico al de la preparación del compuesto 11, en el que se usó el compuesto 16 (150 mg, 0,366 mmol) como material de partida. Sólido de color blanco (111 mg, 85,7 %). P.f. 254 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 512,64 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,19 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,13 - 8,10 (m, 1H), 7,44 - 7,42 (m, 2H), 7,36 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,30 (s, 1H), 4,58 (s, 2H), 4,10 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,80 (t, J = 4,5 Hz, 4H). CL-EM: 355 (M+1).

19. Preparación de 2-(3-(hidroximetil)fenil)-A/,W-dimetil-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-6-carboxamida (18)

El compuesto 18 se preparó por un procedimiento que era idéntico al de la preparación del compuesto 12a, en el que se usó el compuesto 17 (92 mg, 0,26 mmol) como material de partida. Sólido de color blanco (80 mg, 80,8 %). P.f. 170-171 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 58,22 (s, 1H), 8,20 -8,17 (m, 1H), 7,84 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,46 -7,43 (m, 2H), 7,04 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,77 (s, 2H), 4,11 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,87 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,20 (s a, 6H). CL-EM: 382 (M+1).

20. Preparación de (3-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)fenil)metanol (I-24)

El compuesto I-24 se preparó por el procedimiento que era idéntico al de la preparación del compuesto 13a, en el que se usó el compuesto 18 (70 mg, 0,184 mmol) como material de partida. Sólido de color blanco (100 %). P.f. 163 165 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 58,20 (s, 1H), 8,11 (dt, J = 2,4, 6,0 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,45 -7,41 (m, 2H), 7,15 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,27 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 4,07 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,95 (s, 2H), 3,80 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 2,44 (s, 6H). EM (IE) m/e(%): 367 (M+, 16).

21. Preparación de metanosulfonato de 3-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)bencilo (19)

El compuesto I-24 (36,7 mg, 0,1 mmol) se disolvió en 5 ml de diclorometano anhidro y se enfrió a 0 °C. Se añadió cloruro de metanosulfonilo (14 |jl, 0,12 mmol) y trietilamina (16 |jl, 0,12 mmol). La reacción se llevó a cabo a 0 °C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se lavó sucesivamente con una solución saturada de bicarbonato sódico y agua y la capa orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y el disolvente se eliminó a presión reducida para dar 45 mg de un sólido de color blanco (100 %). P.f. 178-179 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 58,33 (s, 1H), 8,31 (dd, J = 1,8, 5,5 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 6,72 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,34 (s, 2H), 4,14 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 4,04 (s, 2H), 3,91 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,95 (s, 3H), 2,56 (s, 6H). EM (IE) m/e(%): 350 (M-MeSO3, 30).

22. Preparación de W,A/-dimetil-1-(2-(3-((metilsulfonil)metil)fenil)-4-morfolino pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-6-il)metanamina (I-25)

El compuesto 19 (45 mg, 0,1 mmol) y metilsulfinato sódico (41 mg, 0.4 mmol) se disolvieron en 2 ml de N-metilpirrolidona. La mezcla se sometió a irradiación por microondas durante 30 minutos a 120 °C con una potencia de 100 vatios. Después de completarse la reacción, la mezcla de reacción se vertió en agua, se extrajo tres veces con acetato de etilo y se extrajo tres veces con diclorometano. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato sódico anhidro. El disolvente se concentró a presión reducida hasta un volumen pequeño. El producto en bruto se purificó mediante una placa preparativa (diclorometano: metanol = 6: 1) para obtener 12 mg de un sólido de color blanco (28,0%). P.f. 143-144 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCb): 58,32 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,63 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,34 (s, 2H), 4,11 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,88 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,66 (s, 2H), 2,78 (s, 3H), 2,36 (s, 6H). EM (IE) m/e (%): 429 (M+, 12).

23. Preparación de 1-(2-(3-(aminometil)fenil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il)-N,N-dimetilmetanamina (20)

El compuesto 19 (80 mg, 0,18 mmol) se añadió a 20 ml de una solución de metanol en amoniaco saturada. La reacción se llevó a cabo a 80 °C en un tubo cerrado herméticamente durante 8 h. Después de concentrar la mezcla de reacción, esta se purificó mediante una placa preparativa (diclorometano: metanol = 6: 1) para obtener 37 mg de un aceite incoloro (56,2%). RMN 1H (300 MHz, CDOs): 58,20 (s, 1H), 8,17 - 8,13 (m, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,41 - 7,39 (m, 2H), 6,86 (s, 1H), 4,11 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,97 (s, 2H), 3,87 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,69 (s, 2H), 2,41 (s, 6H). CL-EM: 367 (M+1).

24. Preparación de A/-(3-(6-((dimetilamino)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)bencil)metanosulfonamida (I-26)

Se preparó el compuesto I-26 por el procedimiento que era idéntico al de la preparación del compuesto 19, en el que se usó el compuesto 20 (37 mg, 0,1 mmol) como material de partida. Se obtuvo un sólido de color amarillo claro (12 mg, 26,7%) mediante una placa preparativa (diclorometano: metanol = 8: 1). P.f. 238-240 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCla): 58,20 (s, 1H), 8,19 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,47 -7,38 (m, 2 H), 6,88 (s, 1H), 4,41 (s, 2H), 4,02 (s a, 4H), 3,81 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 2,95 (s, 2H), 2,94 (s, 3H), 2,87 (s, 1H), 2,51 (s, 6H). EM (IE) m/e (%): 444 (M+, 16).

25. Preparación de 4-cloro-2-(6-pivalamido-4-(trifluorometil)piridin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-carboxilato de metilo (21)

Se preparó el compuesto 21 por el procedimiento que era idéntico al de la preparación del compuesto 8, en el que IIIc (300 mg, 0,686 mmol) se usó como material de partida. Sólido de color amarillo claro (290 mg, 92,9 %). P.f. 172 173 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 58,79 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,33 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,47 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 1,36 (s, 9H). CL-EM: 478 (M+23), 480 (M+2+23).

26. Preparación de los compuestos 22

La preparación de los compuestos 22 fue idéntica a la del compuesto 9.

4-morfolin-2-(6-pivalamido-4-(trifluorometil)piridin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-carboxilato de metilo (22a)

Se preparó el compuesto 22a a partir de 100 mg del compuesto 21 (0,22 mmol). Sólido de color blanco (73 mg, 65,8 %). P.f. 205 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 510,53 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,30 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,03 (t, J = 4,2 Hz, 4H), 3,83 (s, 3H), 3,75 (t, J = 4,2 Hz, 4H), 1,27 (s, 9H). CL-EM: 507 (M+1).

Met¡l-4-(8-oxa-3-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-3-¡l)-2-(6-p¡valam¡do-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡dm-3-¡l)p¡rrolo[2,1-f|[1,2,4]tnaz¡n-6-carboxilato (22b)

Se preparó el compuesto 22b a part¡r de 276 mg del compuesto 21 (0,61 mmol). Sól¡do de color amar¡llo claro (274 mg, 84,8 %). P.f. 175-176 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCla): 58,71 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 4,52 (s a, 4H), 3,90 (s, 3H), 3,54 (s a, 2H), 2,04 - 1,99 (m, 2H), 1,89 - 1,78 (m, 2H), 1,36 (s, 9H). CL-EM: 533 (M+1).

4-(3-met¡lmorfol¡n)-2-(6-p¡valam¡do-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡dm-3-¡l)p¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-6-carbox¡lato de (S)-met¡lo (22c)

Se preparó el compuesto 22c a part¡r de 210 mg del compuesto 21 (0,46 mmol). Sól¡do de color amar¡llo claro (145 mg, 60,4 %). P.f. 225-226 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 510,53 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,29 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 4,92 (a, 1H), 4,61 (a, 1H), 4,03 - 3,96 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,81 - 3,64 (m, 3H), 3,53 (t, J = 11,4 Hz, 1H), 1,43-1,31 (m, 3H), 1,27 (s, 9H). CL-EM: 521 (M+1).

27. Preparac¡ón de los compuestos 23

Ác¡do 2-(6-ammo-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡dm-3-¡l)-4-morfolmop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-6-carboxíl¡co (23a)

El compuesto 22a (300 mg, 0,59 mmol) se suspend¡ó en 10 ml de etanol. Se añad¡eron 1,5 ml de soluc¡ón 2 M de h¡dróx¡do potás¡co y se calentó a reflujo durante 1 hora. La reacc¡ón sustanc¡almente se completó. Se añad¡eron 2 ml de ác¡do acét¡co. La mayoría del d¡solvente se el¡m¡nó por dest¡lac¡ón a pres¡ón reduc¡da para prec¡p¡tar los sól¡dos.

Los sólidos precipitados se filtraron para dar el compuesto 23a. Sólido de color blanco (224 mg, 92,6 %). P.f. 244 245 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 512,54 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,83 (s, 3H), 4,00 (t, J = 4,0 Hz, 4H), 3,73 (t, J = 4,0 Hz, 4H). CL-EM: 409 (M+1).

Ácido 2-(6-amino-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-4-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)pirrolo[2,1-fl[1,2,4]triazin-6-carboxílico (23b)

El compuesto 23b se preparó por el procedimiento que era idéntico al de la preparación del compuesto 23a, en el que como material de partida se usó el compuesto 22b (250 mg, 0,45 mmol). Sólido de color blanco (102 mg, 51,9 %). P.f. 284-285 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe): 512,44 (s a, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,82 (s, 3H), 4,47 (s a, 2H), 4,42 (s a, 2H), 3,32 (s a, 2H), 1,87 - 1,84 (m, 2H), 1,75 - 1,68 (m, 2H). CL-EM: 435 (M+1).

Ácido (S)-2-(6-amino-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-4-(3-metilmorfolino)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-6-carboxílico (23c)

El compuesto 23c se preparó por el procedimiento que era idéntico al de la preparación del compuesto 23a, en el que como material de partida se usó el compuesto 22c (1,8 g, 3,46 mmol). Sólido de color blanco (1,33 g, 91,2%). P.f. > 300 °C. RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe): 512,76 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,11 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,85 (s, 2H), 6,82 (s, 1H), 4,89 (a, 1H), 4,52 (a, 1H), 3,97 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,76-3,63 (m, 2H), 3,51 (t, J = 10,7 Hz, 2H), 1,36 (s, 3H). CL-EM: 423 (M+1).

28. Preparación de los compuestos 24

La preparación de los compuestos 24 fue idéntica a la del compuesto 12.

(2-(6-amino-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-6-il)(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metanona (24a)

Se preparó el compuesto 24a a partir de 220 mg del compuesto 23a (0,54 mmol). Sólido de color blanco (253 mg, 84,7%). P.f. 197-198 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 58,36 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,83 (s, 3H), 4,04 -3,92 (m, 4H), 3,73 (s a, 8H), 3,20 - 3,11 (m, 4H), 2,91 (s, 3H). EM (IE) m/e (%): 554 (68, M+).

(2-(6-ammo-4-(tnfluoromet¡l)p¡nd¡n-3-¡l)-4-(8-oxa-3-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-3-¡l)p¡rrolo[2,1-f][1,2,4]triazm-6-¡l)(4-(met¡lsulfon¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)metanona (24b)

Se preparó el compuesto 24b a part¡r de 90 mg del compuesto 23b (0,21 mmol). Sól¡do de color blanco (113 mg, 93,8 %). P.f. 175 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 58,52 (s, 1H), 7,77 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,81 (s, 1H), 4,86 (s, 2H), 4,49 (s a, 4H), 3,91 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,55 (s a, 2H), 3,28 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 2,81 (s, 3H), 2,04 - 1,95 (m, 2H), 1,89 - 1,79 (m, 2H). CL-EM: 581 (M+1).

(S)-(2-(6-ammo-4-(tnfluoromet¡l)p¡nd¡n-3-¡l)-4-(3-met¡lmorfol¡no)p¡rrolo[2,1-/][1,2,4]tnazm-6-¡l)(4-(met¡lsulfon¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)metanona (24c)

Se preparó el compuesto 24c a part¡r de 2,42 g del compuesto 23c (4,86 mmol) como mater¡al de part¡da. Sól¡do de color amar¡llo claro (3 g, 92,2%). P.f. 200-202 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 58,52 (s, 1H), 7,78 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,81 (s, 1H), 4,90 (s, 3H), 4,81 - 4,40 (m, 1H), 4,03 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 3,91 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,83 - 3,72 (m, 2H), 3,66 - 3,56 (m, 2H), 3,28 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,81 (s, 3H), 1,48 (d, J = 6,2 Hz, 3H). CL-EM:

569 (M+1).

29. Preparac¡ón de 5-(6-((4-(met¡lsulfon¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)-4-morfolmop¡rrolo[2,1-f|[1,2,4]tnaz¡n-2-¡l)-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na (I-27)

Se preparó el compuesto 1-27 a part¡r de 200 mg del compuesto 24a (0.36 mmol) como mater¡al de part¡da. El procedimiento de preparación fue similar al del compuesto 13. Se usó una placa preparativa (diclorometano : metanol = 20 : 1) para la purificación. Sólido de color amarillo claro (43 mg, 22,0%). P.f. 122-123 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCl3): 58,51 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,89 (s, 2H), 4,04 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,82 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,64 (s, 2H), 3,27 (s a, 4H), 2,78 (s, 3H), 2,62 (s a, 4H). EM (IE) m/e (%): 540 (M+, 5).

30. Preparación de 1-(4-fluorofenil)-3-(5-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)-4-(trifluorometil)piridin-2-il)urea (I-28)

Se preparó I-28 a partir de 30 mg I-27 (0,055 mmol) como material de partida. El procedimiento de preparación fue el mismo que el de la síntesis del compuesto I-1. Se usó una placa preparativa (diclorometano : metanol = 10 : 1) para la purificación. Sólido de color blanco (7 mg, 18,6%). P.f. 204-205 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 5 11,38 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,57 (dd, J = 8,5, 4,4 Hz, 2H), 7,33 (s, 1H), 7,06 (t, J = 8,5 Hz, 2H), 6,72 (s, 1H), 4,10 - 4,01 (m, 4H), 3,89 - 3,81 (m, 4H), 3,67 (s, 2H), 3,30 (s a, 4H), 2,79 (s, 3H), 2,64 (s a, 4H). IEN-EM: 678 (M+1).

31. Preparación de 5-(4-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)-4-(trifluorometil)piridin-2-amina (I-29)

Se preparó I-29 a partir de 100 mg del compuesto 24b (0,17 mmol). El procedimiento de preparación fue el mismo que el del compuesto 13. Se usó una placa preparativa (diclorometano : metanol = 20 : 1) para la purificación. Sólido de color blanco (17 mg, 17,4%). P.f. 138 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCb): 58,50 (s, 1H), 7,57 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,63 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,92 (s, 2H), 4,48 (s a, 4H), 3,61 (s, 2H), 3,52 (s a, 1H), 3,47 (s a, 1H), 3,26 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,77 (s, 3H), 2,60 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,00 - 1,96 (m, 2H), 1,89 - 1,79 (m, 2H). EM (IE) m/e (%): 566 (M+, 5).

32. Preparación de 1-etil-3-(5-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolino pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)-4-(trifluorometil)piridin-2-il)urea (I-30)

Se añadió isocianato de etilo (85 mg, 1,2mmol) a la solución de I-27 (110 mg, 0.2 mmol) y 1,8-diazaciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU, 183 mg, 1,2 mmol) en diclorometano y se agitó durante dos días a temperatura ambiente. Se usó éter dietílico para volver a cristalizar y se obtuvieron 74 mg (60,5%) de un sólido de color blanco.

P.f. 208 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 59,99 (s a, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,78 (s a, 1H), 7,73 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 3,98 (s a, 4H), 3,73 (s a, 4H), 3,59 (s, 2H), 3,33 (s a, 2H), 3,16 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 3,11 (s a, 4H), 2,86 (s, 3H), 1,62 (s a, 2H), 1,09 (t, J = 7,5 Hz, 3H). CL-EM: 612 (M+1).

33. Preparación de los compuestos (I-31 ~ I-33)

Procedimiento general de preparación: A la solución de 1-27 (54 mg, 0,1 mmol) y trietilamina (101 mg, 1 mmol) en cloroformo se le añadió el cloroformiato correspondiente (0,3 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante cuatro días. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna con diclorometano / metanol (10: 1).

(5-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)-4-(trifluorometil)piridin-2-il)carbamato de fenilo (l-31)

Sólido de color amarillo claro. Rendimiento del 37,1%. P.f. 108-110 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-de): 5 11,42 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,49 -7,44 (m, 2H), 7,32 - 7,27 (m, 3H), 6,98 (s, 1H), 3,99 (s a, 4H), 3,74

(s a, 4H), 3,60 (s, 2H), 3,31 (s a, 4H), 3,12 (s a, 4H), 2,87 (s, 3H). CL-EM: 661 (M+1).

(5-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)-4-(trifluorometil)piridin-2-il)carbamato de etilo (I-32)

Sólido de color blanco. Rendimiento del 50,7 %. P.f. 211-213 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCI3): 58,71 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7. 92 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,30 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 4,05 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,83 (t, J= 4,5 Hz, 4H), 3,63 (s, 2H), 3,26 (s a, 4H), 2,78 (s, 3H), 2,61 (s a, 4H), 1,36 (t, J= 7,2 Hz, 3H). CL-EM: 613 (M+1).

(5-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)-4-(trifluorometil)piridin-2-il)carbamato de metilo (I-33)

Sólido de color blanco (43,4 %). P.f. 212-214 °C. RMN 1H (300 MHz, CDCh): 58,70 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,60 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,05 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,85 (s, 3H), 3,83 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,63 (s, 2H), 3,27 (s a, 4H), 2,78 (s, 3H), 2,61 (s a, 4H). CL-EM: 599 (M+1).

34. Preparación de (S)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)pirrolo[2,1-/][1,2,4]triazin-2-il)-4-(trifluorometil)piridin-2-amina (I-34)

A -40 °C, se añadió gota a gota borano 1 M-THF (80 ml) a la solución del compuesto 24c (1,8 g, 3,17 mmol) en 50 ml de tetrahidrofurano. Después de que la reacción avanzara 0,5 horas a esta temperatura, el sistema de reacción se calentó a reflujo durante 2 horas y después se enfrió a menos de 0 °C. Se añadieron gota a gota 100 ml de ácido clorhídrico concentrado y después de eso se calentó a reflujo durante 1 hora. Cuando la mayoría del ácido clorhídrico se eliminó mediante evaporación rotatoria, el pH de la solución se ajustó a aproximadamente 8 usando solución saturada de carbonato sódico. Después de extraer tres veces con acetato de etilo, la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y el disolvente se eliminó a presión reducida para dar el producto en bruto. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna con diclorometano / metanol (40: 1) para proporcionar un sólido de color blanco (56,9%). P.f. 262 °C. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 58,34 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,77 (s, 2H), 4,87 (s a, 1H), 4,47 (s a, 1H), 3,96 (s a, 1H), 3,77-3,41 (m, 8H), 3,11 (s, 6H), 2,87 (s, 3H), 1,32 (s, 3H). CL-EM: 555 (M+1).

35. Preparación de (5-(4-(3-met¡lmorfol¡n)-6-((4-(met¡lsulfon¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)p¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-2-¡l)-4-(trifluorometil)piridin-2-il)carbamato de (S)-met¡lo (1-35)

A -40 °C, se añad¡ó cloroform¡ato de met¡lo (28,85 mmol) a la soluc¡ón de 1-34 (880 mg, 1,44 mmol) y tr¡et¡lam¡na (1,5 g, 14,4 mmol) en cloroformo y se ag¡tó durante 2 h. El producto en bruto se pur¡f¡có por cromatografía en columna con d¡clorometano/metanol (60 : 1) para proporc¡onar un sól¡do de color blanco (44,2%). P.f. 150-152 °C. RMN 1H (400 MHz, CDCla): 58,70 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,92 (s a, 1H), 4,56 (s a, 1H), 4,03 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,00 - 3,52 (m, 9H), 3,27 (s, 4H), 2,78 (s, 3H), 2,62 (s, 4H), 1,47 (d, J = 6,6 Hz, 3H). CL-EM: 613 (M+1).

36. Preparac¡ón de (S)-1-et¡l-3-(5-(4-(3-met¡lmorfol¡n)-6-((4-(met¡lsulfon¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)p¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-2-¡l)-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-¡l)urea (1-36)

Se preparó el compuesto 1-36 por el m¡smo proced¡m¡ento de preparac¡ón que el del compuesto 1-30. Sól¡do de color blanco, RMN 1H (300 MHz, CDCh) 59,45 (s, 1H), 9,01 (s a, 1H), 8,63 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,93 (s a, 1H), 4,56 (s a, 1H), 4,03 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 3,89 - 3,69 (m, 2H), 3,64 (s, 2H), 3,44 (c, J = 6,9 Hz, 2H), 3,39 - 3,11 (m, 6H), 2,78 (s, 3H), 2,62 (s, 4H), 1,47 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,26 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

37. Mes¡lato de 1-et¡l-3-(5-(6-((4-(met¡lsulfon¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)met¡l)-4-morfol¡nop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-2-¡l)-4-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-¡l)urea

Se añad¡ó una soluc¡ón al 5% de ác¡do metanosulfón¡co en tetrah¡drofurano (600 |jl, 0,47 mmol) a la soluc¡ón de 1-30 (220 mg, 0,36 mmol) en 10 ml de cloroformo y se ag¡tó durante 1 h a temperatura amb¡ente. Se obtuvo el producto puro por filtración. Polvo de color blanco (99,0%). P.f. 220 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 6 9,83 (s a, 1H), 9,63 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 4,43 (s, 2H), 4,01 (s, 4H), 3,75 (s, 6H), 3,50 (s, 2H), 3,28 - 3,01 (m, 6H), 3,0 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 1,08 (t, J = 7,2 Hz, 3H). RMN 13C (126 MHz, DMSO) 6155,03, 154,57, 153,91, 153,00, 150,65, 136,78 (c, J = 32,1 Hz, CF3C), 123,24 (c, J = 274,8 Hz, CF³), 123,51, 121,78, 113,99, 113,09, 108,30 (c, J = 5,2 Hz, CF3CCH), 107,81, 66,37, 52,23, 50,49, 46,00, 42,93, 35,55, 34,45, 15,67, 15,67.

38. Mesilato de (5-(6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-4-morfolinopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)-4-(trifluorometil)piridin-2-il)carbamato de metilo

Se añadió una solución al 5% de ácido metanosulfónico en tetrahidrofurano (978 pl, 0,77 mmol) a la solución de I-33 (300 mg, 0,50 mmol) en 15 ml de tetrahidrofurano y se agitó durante 5 h a temperatura ambiente. Se añadió éter dietílico al sistema hasta que precipitaron la totalidad de los sólidos. Se obtuvo el producto puro por filtración. Sólido de color blanco (100%). P.f. 240 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-c/6): 610,94 (s, 1 H), 9,82 (s, 1 H), 8.74 (s, 1 H), 8,32 (s, 1 H), 7,99 (s, 1H), 7,19 (s, 1 H), 4,46 (s, 2 H), 4,03 (t, J = 4,8 Hz, 4 H), 3,78 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3.75 (s, 3 H), 3,67 - 3,43 (m, 4H), 3,27 - 3,05 (m, 4 H), 3,02 (s, 3 H), 2,33 (s, 3 H). RMN 13C (126 MHz, DMSO-d6): 6 154,58, 154,16, 153,88, 152,90, 151,07, 137,029 (c, J = 31 Hz, CF3C), 125,19, 123,23 (c, J = 274,9 Hz, CF3), 121,84, 113,99, 113,07, 108,60 (c, J = 5 Hz, CF3CH), 107,88, 66,35, 52,78, 52,22, 50,49, 46,03, 42,95, 35,57, 25,59.

39. Mesilato de (5-(4-(3-metilmorfolin)-6-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-il)-4-(trifluorometil)piridin-2-il)carbamato de (S)-metilo

Se añadió una solución al 5% de ácido metanosulfónico en tetrahidrofurano (589 pl, 0,46 mmol) a la solución de I-35 (231 mg, 0,38 mmol) en 15 ml de tetrahidrofurano y se agitó durante 3h a temperatura ambiente. Se eliminó el tetrahidrofurano a presión reducida para dar una gelatina. Se añadió una pequeña cantidad de metanol para disolver la gelatina. Y después se añadió gota a gota éter dietílico hasta que se precipitó el sólido. Se obtuvo el producto puro por filtración. Polvo de color blanco (80,72 %). P.f. 210 °C (descomposición). RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 610,91 (s, 1H), 9,86 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 4,90 (s a, 1H), 4,45 (s a, 3H), 4,00 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 3,88 - 3,61 (m, 7H), 3,53 (s, 4H), 3,15 (s a, 4H), 3,01 (s, 3H), 2,41 - 2,26 (m, 3H), 1,39 (s a, 3H). RMN 13C (126 MHz, DMSO-d6): 6154,60, 154,15, 153,68, 152,96, 151,09, 136,91 (c, J = 32,5 Hz, CF3C), 125,26, 123,24 (c, J = 274,9 Hz, CF3) 121,89, 114,05, 113,09, 108,60 (c, J = 5,5 Hz, CF3CH), 107,95, 70,51, 66,46, 52,78, 52,20, 50,48, 42,93, 35,58, 31,17, 13,19.

Prueba de actividad biológica

Inhibición de la actividad de PI3Ka cinasa

Procedimiento experimental

Se detectó la actividad de cinasa purificada con el ensayo luminiscente para cinasa Kinase-Glo® Plus midiendo la cantidad de la cinasa restante en la solución tras haberse completado la reacción de cinasa. La reacción de cinasa se llevó a cabo en una placa blanca de 384 pocillos (Greiner), se añadió 1 j l de compuesto de ensayo o de control de DMSO en cada pocillo que contenía 5 j l de tampón de reacción [Tris-HCl 10 mM, pH 7,5, NaCl 50 mM, MgCh 3 mM, DTT (ditiotreitol) 1 mM, CHAPS (3-[(3-colamidopropil)dimetilamonio]-1-propanosulfonato, ácido 3-(3-colaminopropil)-dimetilamino-1-propanosulfónico) al 0,05% y el tampón de reacción se complementó con una concentración 12 jM de sustrato, D-mio-fosfatidilinositol-4,5-bifosfato (difosfato de 4,5-fosfatidilinositol) y ATP (adenosín trifosfato) 2 jM. Después, se añadieron 4 j l de tampón de reacción que contenía una concentración de 62,5 nM de PI3Ka o de control no de PI3Ka para iniciar la reacción de cinasa. Tras efectuarse la reacción durante 1 hora a temperatura ambiente, se añadieron 10 j l de mezcla de Kinase Glo-Plus y se incubó durante 1 hora para inactivar la reacción. El valor de quimioluminiscencia se detectó con un lector de microplacas multifunción Envision 2104 (PerkinElmer).

Resultados experimentales

Los resultados experimentales (tabla 2) mostraron que las actividades de los siete compuestos siguientes de la presente invención sobre PI3Ka fueron comparables o más potentes a la de PI-103. Estos fueron I-22 (9,59 nM), I-27 (8,37 nM), I-28 (9,30 nM), I-30 (8,19 nM), I-32 (7,15 nM), I-33 (2,84 nM) e I-35 (5,67 nM), respectivamente.

La actividad inhibidora en la proliferación de células Rh30 de rabdomiosarcoma humano

Se sembraron células Rh30 en una placa de 96 pocillos a razón de 3000 células/pocillo. Tras adherirse las células, se añadieron los compuestos de ensayo a una concentración de 10, 3, 1, 0,3 o 0,1 jM y se incubaron durante 72 h. Se desechó el medio de cultivo y se fijaron las células con ácido tricloroacético. Tras lavarlas con agua destilada durante cinco minutos y secarlas, se añadió sulfonilrodamina B. Tras lavarlas con ácido acético glacial al 1 % cinco veces y secarlas, se añadió tampón de trihidroximetilaminometano. El valor de DO se midió usando un lector de microplacas a una longitud de onda de 560 nm. Se calculó la tasa de inhibición y los resultados se muestran en la tabla 3. Los resultados anteriores demostraron que los compuestos de la presente invención presentan una potente actividad inhibidora en la proliferación de células Rh30, en los que los valores de CI50 de I-24, I-25 e I-28 llegaron a alcanzar incluso decenas de nanomolar.

Los efectos de I-33 en la señalización de PI3K en células Rh30 de rabdomiosarcoma humano y en células U87MG de glioma humano

Procedimiento experimental

Se sembraron células Rh30 y U87MG en placas de 12 pocilios a razón de 2 x 105 células/pocillo. Al día siguiente, se incubaron las células en medio de cultivo asérico fresco sometidas a inanición durante 24 horas. Después, se trataron las células con diferentes concentraciones de compuesto 1-33 durante 1 h. Tras estimularlas con IGF-1 durante 10 minutos, se recogieron las células lisadas y se añadió tampón de carga SDS 4 x [Tris-Cl 200 mM (pH 6,8), DTT 400 mM, SDS (dodecilsulfato de sodio) al 8 %, azul de bromofenol al 0,4 %, glicerol al 40 %]. Los lisados celulares se hirvieron durante 10 minutos. Se cargó una alícuota en un gel de poliacrilamida y se llevó a cabo una electroforesis en tampón para electroforesis de Tris-glicina (Tris 25 mM, glicina 250 mM, SDS al 0,1 %) a 80-100 V durante 2-2,5 horas. Las proteínas se transfirieron del gel a una membrana de filtro de nitrocelulosa usando un procedimiento semiseco. La membrana de filtro se bloqueó con solución de bloqueo que contenía leche en polvo desnatada al 5 % (leche en polvo desnatada al 5 %, Tris-HCl 20 mM (pH 7,2-7,4), NaCl 150 mM, Tween20 al 0,1 % (v/v) en un agitador a temperatura ambiente durante 2 horas. Después, se añadió el anticuerpo primario y se hibridó a 4 °C durante una noche. La membrana se lavó con tampón de lavado [Tris-HCl 20 mM (pH 7,2-7,4), NaCl 150 mM, Tween20 al 0,1 % (v/v)] tres veces a temperatura ambiente, 15 minutos cada vez. Se añadió un anticuerpo secundario marcado con peroxidasa de rábano picante y se colocó el sistema en un agitador y se agitó suavemente a temperatura ambiente durante 1 hora. Tras lavar tres veces con el tampón de lavado, se incubó la membrana con sustrato quimioluminiscente SuperSignal West Dura (Pierce Inc., Rochford, IL). Después, se expuso la membrana, se reveló, se fijó y se tomaron fotografías.

Resultados experimentales

Los resultados experimentales (figura 1) mostraron que I-33 inhibió significativamente la transducción de la señalización de PI3K en células Rh30 de rabdomiosarcoma humano y de células U87MG de glioma humano.

Actividad inhibidora de I-30 e I-33 en la proliferación de células de cáncer humanas de diversos tejidos Se seleccionaron I-30 e I-33 para probar su actividad en la proliferación de células de cáncer humanas procedentes de diversos tipos de tejido. Los resultados se muestran en la tabla 4.

T l 4. A ivi inhi i r I- I- n n n l l l n r h m n

Como se muestra en la tabla 4, la actividad de los compuestos 1-30 y 1-33 es comparable con la del control positivo, GDC0941 (que se adquirió de Shanghai Han-Xiang Chemical Co., LTD., dimesilato) contra la proliferación de diversas líneas celulares, tales como células de cáncer de colon C-HCT-116, células de cáncer colorrectal C-LOVO, células de cáncer de endometrio ERL95-2, células de cáncer gástrico G-MKN-45, células de hepatoma L-BEL-7402 y células de rabdomiosarcoma S-RH30. Sin embargo, las actividades de los compuestos son significativamente más potentes que las del control positivo en la inhibición de la proliferación de células B-BT474.

Los efectos inhibidores en el crecimiento de xenoinjerto de neuroglioma humano U87-MG trasplantado por vía subcutánea en ratones atímicos

Procedimiento experimental

Se cortaron tumores bien desarrollados en ratones atímicos en fragmentos de 1,5 mm3 y se trasplantaron en el flanco derecho de ratones atímicos en condiciones estériles. Se midieron los diámetros de los tumores trasplantados por vía subcutánea en ratones atímicos con un calibre Vernier. Cuando el tumor alcanzó un volumen de 100 200 mm3, se asignó aleatoriamente a los ratones a diversos grupos: grupo de 50 mg/kg y grupo de 25 mg/kg de 1-33 mesilato; grupo de 50 mg/kg de 1-30 mesilato; grupo de 50 mg/kg de GDC0941 dimesilato y grupo de control. A los grupos de control se les administró la misma cantidad de disolvente sin medicar y los grupos de tratamiento recibieron los compuestos de ensayo (p.o.). Los compuestos se administraron una vez al día durante tres semanas. Durante el experimento, se midió el tamaño de los tumores dos veces a la semana y al mismo tiempo, se tomaron medidas del peso corporal de los ratones. El volumen tumoral (VT) se calculó del siguiente modo: v T = 1/2 x a x b2, en la que a y b representan la longitud y la anchura, respectivamente. El volumen tumoral relativo (VTR) se calculó del siguiente modo: VTR = Vt/Vü, en la que V0 es el volumen al comienzo del tratamiento y Vt es el volumen medido en cada ocasión. El índice de evaluación de la actividad antitumoral fue la tasa de proliferación tumoral relativa T/C (%), cuya fórmula de cálculo fue la siguiente: T/C(%) = (T^vtr/ C^vtr)^x100 %, T^vtr: VTR del grupo de tratamiento; C^vtr: v Tr del grupo de control negativo.

Resultados experimentales

Los resultados experimentales se muestran en la tabla 5 y la figura 2. Se administró I-33 mesilato por vía oral a una dosis de 50 mg/kg o 20 mg/kg cada día. Tras una semana, el crecimiento tumoral en el grupo tratado con I-33 se frenó de manera significativa. Tras administrarse sucesivamente durante tres semanas, I-33 mesilato inhibió significativamente el crecimiento del xenoinjerto de U87mG trasplantado por vía subcutánea en ratones atímicos (figura 2). El valor de T/C en el 21er día fue del 25,65 % y del 32,61 %, respectivamente. I-33 mesilato mostró una actividad más potente que GDC0941 (50 mg/kg) en la inhibición del crecimiento tumoral. I-30 mesilato a 50 mg/kg también mostró efectos inhibidores significativos en el crecimiento tumoral. El valor de T/C de I-30 mesilato a 50 mg/kg en el 21er día fue del 37,26 %, mientras que el grupo de GDC0941 a 50 mg/kg fue del 51,40 %.

Tabla 5. Tasas de crecimiento tumoral relativas de xenoinjerto de U87-MG de neuroglioma humano en ratones atímicos

Grupo Tasa de proliferación tumoral relativa T/C (%)

_d0d3 d7 d10 d14 d17 d21 GDC0941 50 mg/kg 100,00 75,12 79,34 74,75 56,86 53,57 51,40

I-30 (mesilato) 50 mg/kg 100,00 67,89 54,35 60,45 42,46 41,64 37,26

I-33 (mesilato) 50 mg/kg 100,00 82,76 59,61 54,74 36,93 29,89 25,65

I-33 (mesilato) 20 mg/kg 100,00 84,69 65,90 55,24 37,48 31,92 32,61

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina de fórmula general I, una sal, éster o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo,

en la que,

X = CH o N;

R1 es -NR5R6;

R2 es

R3 es -NH2, -NHC(O)NHRn, -NHC(O)ORn, -NHC(O)Rn, -CH2OH, -CH2S(O)2R12 o -CH2NHS(O)2R12;

R4 es H o CF3;

cada uno de R5 y R6 es independientemente un alquilo C1-C4 o se combinan con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo saturado de 5-8 miembros sin sustituir o un heterociclo saturado de 5-8 miembros sustituido por un sustituyente, el sustituyente es -S(O)2R12;

cada uno de R7, R8, R9 y R10 es independientemente H o un alquilo C1-C3, como alternativa, R7 y R8, o Rg y R10, con los átomos de carbono a los cuales están unidos en forma de átomos de carbono puenteados, forman un bicicloheterociclo puenteado con un anillo de morfolina;

R11 es un alquilo C1-C4, un cicloalquilo C3-C6 sin sustituir o un cicloalquilo C3-C6 sustituido por uno o más sustituyentes, un bencilo sin sustituir o un bencilo sustituido por uno o más sustituyentes, un fenilo sin sustituir o un fenilo sustituido por uno o más sustituyentes, un isoxazolilo sin sustituir o un isoxazolilo sustituido por uno o más sustituyentes o un piridilo sin sustituir o un piridilo sustituido por uno o más sustituyentes y el uno o más sustituyentes se seleccionan entre halógeno, un alquilo C1-C3 o un alcoxilo C1-C3, -CF3, -C(O)ORi2, -C(O)NRl2Rl5,

cada uno de R12 y R15 es independientemente un alquilo C1-C3.

2. El compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina, la sal, éster o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo de la reivindicación 1, en el que, el compuesto tiene la estructura siguiente, mostrada en la fórmula general I:

en la que,

X = CH o N;

Ri es -NR5R6;

R2 es

R3 es -NH2, -NHC(O)NHRii, -NHC(O)ORii, -NHC(O)Rii, -CH2OH, -CH2S(O)2Ri2 o -CH2NHS(O)2Ri2;

R4 es H o CF3;

cada uno de R5 y R6 es independientemente un alquilo C1-C4 o se combinan con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar piperazinilo sustituido por -S(O)2R12;

cada uno de R7, R8, R9 y R10 es independientemente H o un alquilo C1-C3, como alternativa, R7 y R8 forman un bicicloheterociclo puenteado con un anillo de morfolina;

R11 es un alquilo C1-C4, bencilo o un bencilo sustituido por uno o más sustituyentes, un fenilo sin sustituir o un fenilo sustituido por uno o más sustituyentes o un isoxazolilo sustituido por uno o más sustituyentes y el uno o más sustituyentes se seleccionan entre halógeno, un alquilo C1-C3 o un alcoxilo C1-C3, -CF3, -C(O)OR12, -C(O)NR12R15,

cada uno de R12 y R15 es independientemente un alquilo C1-C3.

3. El compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina, la sal, éster o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo de la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene la estructura siguiente, mostrada en la fórmula general A o la fórmula general B:

4. El compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina, la sal, éster o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo de la reivindicación 1 o 3, en el que,

R2 es

R5 y R6 se combinan con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo saturado sin sustituir o un heterociclo saturado sustituido por un sustituyente, en el que el heterociclo saturado es pirrolidilo, piperidinilo o piperazinilo y el sustituyente es -S(O)2Ri2.

5. El compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina, la sal, éster o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo de la reivindicación 4, en el que,

R1 es dimetilamino o 1-metilsulfonilpiperazinilo;

R2 es

R11 es un metilo, un etilo, un propilo, un ciclopropilo, un ferc-butilo, un iso-butilo, un 4-fluorobencilo, un fenilo sin sustituir o un fenilo sustituido por uno o más sustituyentes, un isoxazolilo sin sustituir o un isoxazolilo sustituido por uno o más sustituyentes o un anillo de piridina sin sustituir o un anillo de piridina sustituido por uno o más sustituyentes y el sustituyente se selecciona entre un flúor, un cloro, un trifluorometilo, un metilo, un metoxi, un etoxicarbonilo, un dimetilaminocarbonilo, un 4-metil-piperazin-1-carbonilo, un piperidin-1-carbonilo y un 4-dimetilamino-piperidin-1-carbonilo.

6. El compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina, la sal, éster o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo de la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene la estructura siguiente de fórmula general:

en la que, Ri, R2, R11 y R12 son como se define en la reivindicación 1,

Ri6 y R17 son idénticos o diferentes y cada uno se selecciona independientemente entre un alquilo C1-C4 o Ri6 y R17 se combinan con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un 4-metil-piperazinilo, un 4 dimetilaminopiperidinilo o piperidin-1-ilo.

7. El compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina, la sal, éster o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo de la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene la estructura siguiente de fórmula general:

8. Un procedimiento de preparación para los compuestos de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina de la reivindicación 1, que comprende las etapas siguientes:

en la que, R13 es un nitro o -CH2OAC; R14 es una amina o -CH2OH;

1) el derivado de pirrol 1 y cloramina en N,N-dimetilformamida anhidra se someten a reacción de W-aminación en presencia de una base para obtener el compuesto 2;

2) el compuesto representado por la fórmula 2 sin purificar se somete a amonólisis para dar el compuesto 3; 3) el compuesto 3 reacciona con un aldehído aromático bajo la acción de un ácido de Lewis metálico para dar el compuesto lia, o el compuesto 3 y un aldehído, mediante catálisis por un ácido de Lewis tal como una solución de trifluoruro de boro en éter dietílico, se someten a condensación para dar una base de Schiff y después a ciclación oxidativa para dar el compuesto lia;

4) el compuesto lia se somete a reacción de cloración en presencia de una base para dar el compuesto llb; 5) el compuesto llb y R2-H se someten a reacción de sustitución nucleófila para dar el compuesto lic;

6) el grupo éster del compuesto llc se somete a reacción de hidrólisis; o el grupo nitro del compuesto llc se somete a reacción de reducción y después se hidroliza el grupo éster de llc;

7) el compuesto lld reacciona con una amina R1-H amina o un heterociclo saturado de 3-8 miembros sustituido o sin sustituir que contiene al menos un átomo de nitrógeno para dar el compuesto lle, y el sustituyente es -S(O)2R12;

8) el compuesto lle se reduce mediante un agente reductor para dar el compuesto I';

9) el compuesto l' también se somete a reacción de adición con R11NC0 , a reacción de esterificación o a reacción de amidación con RnOC(O)Cl, a reacción de esterificación o a reacción de amidación con RnC(O)OH o RnC(O)Cl o a reacción de esterificación o a reacción de amidación con R12S(O)2Cl, para formar los compuestos representados por la fórmula general l.

9. El procedimiento de preparación de la reivindicación 8, en la que,

la base en la etapa 1 ) es hidruro sódico, carbonato potásico o ferc-butóxido de potasio;

el ácido de Lewis metálico en la etapa 3) puede ser un reactivo de cobre monovalente o divalente y la temperatura de reacción es 80-150 °C;

el agente de cloración en la etapa 4) is oxicloruro de fósforo o pentacloruro de fósforo y la base usada es N,N-dimetilanilina o 4-dimetilaminopiridina;

la amina en la etapa 7) es dimetilamina o 1-metilsulfonil piperazina;

el agente reductor en la etapa 8) es complejo de borano y tetrahidrofurano o complejo de borano y dimetil sulfuro.

10. El procedimiento de preparación de la reivindicación 9, en la que,

el reactivo de cobre es bromuro cuproso, cloruro cuproso, acetato de cobre monohidrato, bromuro de cobre, cloruro de cobre anhidro o cloruro de cobre dihidrato; y el disolvente de reacción es dimetilsulfóxido o N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida.

11. El compuesto de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina de la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de una enfermedad relacionada con la fosfatidilinositol 3-cinasa, seleccionada entre el grupo que consiste en rabdomiosarcoma humano, cáncer de pulmón no microcítico, glioma humano, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de colon o cáncer de mama.

12. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de acuerdo con la reivindicación 1.