ES2700586T3 - Procedimientos para la preparación de análogos de oxitocina - Google Patents
Procedimientos para la preparación de análogos de oxitocina Download PDFInfo
- Publication number
- ES2700586T3 ES2700586T3 ES15745209T ES15745209T ES2700586T3 ES 2700586 T3 ES2700586 T3 ES 2700586T3 ES 15745209 T ES15745209 T ES 15745209T ES 15745209 T ES15745209 T ES 15745209T ES 2700586 T3 ES2700586 T3 ES 2700586T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- fmoc
- gly
- resin
- formula
- hexafluorophosphate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 0 CC[C@](C)C(C)(C)C(*([C@@](CCC(NC)=O)*(C)=O)=N)=[U-] Chemical compound CC[C@](C)C(C)(C)C(*([C@@](CCC(NC)=O)*(C)=O)=N)=[U-] 0.000 description 4
- ZDVPFKWCOUJKCG-VDTYLAMSSA-N C[C@H](C1)CN[C@@H]1C(C)=O Chemical compound C[C@H](C1)CN[C@@H]1C(C)=O ZDVPFKWCOUJKCG-VDTYLAMSSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/16—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Abstract
Procedimiento para la preparación de análogos de oxitocina de fórmula I **Fórmula** en la que R1 es hidrógeno o alquilo C1-7 y R2 es hidrógeno o alquilo C1-7; o R1 y R2 conjuntamente con el átomo de nitrógeno y de carbono al que están unidos forman un heterociclo de miembros que está opcionalmente sustituido con hidroxi o halógeno; R3 es alquilo C1-7 y de sus correspondientes enantiómeros y/o isómeros ópticos de los mismos, que comprende tratar un precursor peptídico unido a resina de fórmula II **Fórmula** en la que R1, R2 y R3 son como anteriormente y R4 es un grupo protector de hidroxi; R5 es Fmoc; R6 es t-butilo, 1-adamantilo o fenilisopropilo; R7 es un grupo protector de amida; y R8 es un grupo protector de amida y sus correspondientes enantiómeros y/o isómeros ópticos de los mismos, de acuerdo con el procedimiento: b1) se escinde el grupo Fmoc R5 con una solución de piperidina o 4-metilpiperidina en un disolvente orgánico adecuado; b2) se efectúa la desprotección global y escisión de la resina en presencia de ácido trifluoroacético y un oxidante adecuado tal como tioanisol, anisol, fenol, triisopropilsilano, trietilsilano, etanoditiol o ditiotreitol; b3) se efectúa la ciclación de anillo en solución usando un agente de ciclación seleccionado de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (PyAOP), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uranio (HBTU), hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio (HATU), 15 hexafluorofosfato de O-(6-clorobenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HCTU), hexafluorofosfato de (1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbenio (COMU), 2-hidroxipiridina (HOPy) o cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (DMTMM) en presencia de una base amina orgánica seleccionada de piridina, imidazol, N,N-diisopropiletilamina, trietilamina, N-metilmorfolina, N,N-dimetil-4-aminopiridina, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno o 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano; b4) opcionalmente se aísla el análogo de oxitocina de fórmula I así obtenido y se purifica.
Description
DESCRIPCIÓN
Procedimientos para la preparación de análogos de oxitocina
La invención se refiere a un nuevo procedimiento para la preparación de análogos de oxitocina de fórmula I
en la que
R1 es hidrógeno o alquilo C1-7 y
R2 es hidrógeno o alquilo C1-7; o
R1 y R2 conjuntamente con el átomo de nitrógeno y de carbono al que están unidos forman un heterociclo de 5 miembros que está opcionalmente sustituido con hidroxi o halógeno;
R3 es alquilo C1-7
y sus correspondientes enantiómeros y/o isómeros ópticos de los mismos.
Los análogos de oxitocina de fórmula I actúan como agonistas de receptores de oxitocina y tienen el potencial de usarse para el tratamiento de trastornos neurológicos tales como autismo, estrés, incluyendo trastorno por estrés postraumático, ansiedad, incluyendo trastornos de ansiedad y depresión, esquizofrenia, trastornos psiquiátricos y pérdida de memoria, abstinencia alcohólica, toxicomanía y para el tratamiento del síndrome de Prader-Willi (publicación PCT WO 2014/095773).
La preparación de los análogos de oxitocina de acuerdo con el procedimiento descrito en la publicación PCT WO 2014/095773 se caracteriza por las siguientes etapas:
x1) escisión de Fmoc de un precursor peptídico unido a resina de fórmula X
x2) escisión del grupo alilo en una etapa posterior
x3) ciclación de anillo sobre la resina
x4) desprotección global y escisión de la resina
x5) purificación y aislamiento.
Se descubrió que este procedimiento conocido en la técnica se ve afectado por bajos rendimientos totales y selectividad de producto.
El objetivo de la presente invención, por lo tanto, fue mejorar la síntesis con respecto al rendimiento y la selectividad de los análogos de oxitocina deseados.
El objetivo se pudo lograr con el procedimiento de la presente invención como se explica a continuación en el presente documento.
El procedimiento para la preparación de análogos de oxitocina de fórmula I
en la que
R1 es hidrógeno o alquilo C1-7 y
R2 es hidrógeno o alquilo C1-7 ; o
R1 y R2 conjuntamente con el átomo de nitrógeno y de carbono al que están unidos forman un heterociclo de 5 miembros que está opcionalmente sustituido con hidroxi o halógeno;
R3 es alquilo C1-7
y de sus correspondientes enantiómeros y/o isómeros ópticos de los mismos comprende tratar un precursor peptídico unido a resina de fórmula II
en la que
R1, R2 y R3 son como anteriormente y
R4 es un grupo protector de hidroxi;
R5 es Fmoc;
R6 es t-butilo, 1-adamantilo o fenilisopropilo;
R7 es un grupo protector de amida; y
R8 es un grupo protector de amida
y sus correspondientes enantiómeros y/o isómeros ópticos de los mismos,
de acuerdo con el procedimiento:
b) en el que R6 es t-butilo, 1-adamantilo o fenilisopropilo
y las etapas b1), b2), b3) y b4) se definen por las reivindicaciones adjuntas.
Las siguientes definiciones se exponen para ilustrar y definir el significado y alcance de los diversos términos usados para describir la invención en el presente documento.
El término "alquilo C1-7" se refiere a un radical hidrocarburo alifático saturado monovalente de cadena lineal o ramificada de uno a siete átomos de carbono, preferentemente de uno a cuatro, más preferentemente de uno a dos átomos de carbono. Este término se ejemplifica además por radicales como metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, s-butilo, i-butilo, o t-butilo, pentilo y sus isómeros, hexilo y sus isómeros y heptilo y sus isómeros.
Asimismo, el término "alquilo C1-4" se refiere a un radical hidrocarburo alifático saturado monovalente de cadena lineal o ramificada de uno a cuatro átomos de carbono, con las preferencias y los ejemplos respectivos mencionados anteriormente.
El término "alquiloxi C1 -4" se refiere a una cadena de alquilo C1-4 unida a un átomo de oxígeno. Este término se ejemplifica además por radicales como metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, i-butoxi y t-butoxi.
El término "alquiloxicarbonilo C1 -4" se refiere a una cadena de alcoxi C1-4 unida a un grupo carbonilo y se ejemplifica además por los radicales alcoxi particulares explicados anteriormente unidos a un grupo carbonilo.
El término "alquenilo C2 -4" se refiere a una cadena de carbonos lineal o ramificada insaturada que contiene de 2 a 4 átomos de carbono que contiene al menos un doble enlace. Este término se ejemplifica además por radicales como vinilo, alilo y butenilo y sus isómeros.
El término "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
El término "heterociclo de 5 miembros" que se forma conjuntamente con R1 y R2 con el átomo de nitrógeno y de carbono al que están unidos representa un anillo pirrolidina opcionalmente sustituido con hidroxi o halógeno, en particular el anillo pirrolidina de prolina que está sustituido con hidroxi o flúor.
El término "grupo protector de amida" se refiere a un sustituyente sensible a ácidos o ácidos de Lewis usado convencionalmente para impedir la reactividad del grupo amida. Los grupos protectores de amida sensibles a ácidos o ácidos de Lewis adecuados se describen en Isidro-Llobet A., Alvarez, M. y Albericio F., "Amino Acid-Protecting Groups", Chem. Rev. 2009, 109, 2455-2504., Chan W. C. y White P. D. "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", Oxford University Press y Green T., "Protective Groups in Organic Synthesis", 4.a ed. por Wiley Interscience, 2007, capítulo 7, 696 y siguientes. Por lo tanto, se pueden seleccionar grupos protectores amida adecuados de tritilo, Tmob (2,4,6-trimetoxibencilo), Xan (9-xantenilo), Cpd (ciclopropildimetilcarbinilo), Mbh (4,4'-dimetoxibenzhidrilo) o Mtt (4-metiltritilo).
El término "grupo protector de hidroxi" usado para el sustituyente R4 se refiere a cualquier sustituyente usado convencionalmente para impedir la reactividad del grupo hidroxi. Se describen grupos protectores de hidroxi adecuados en Isidro-Llobet A., Alvarez, M. y Albericio F., "Amino Acid-Protecting Groups", Chem. Rev. 2009, 109, 2455-2504., Chan W. C. y White P. D. "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", Oxford University Press, Green T., "Protective Groups en Organic Synthesis", capítulo 1, John Wiley y Sons, Inc.,1991, 10-142 y se pueden seleccionar de alquilo C1-4 que está opcionalmente sustituido con fenilo o fenilo halogenado; alquenilo C2-4 ; sililo que está opcionalmente sustituido con alquilo C1-4 o fenilo o alquiloxicarbonilo C1-4.
El enlace espiral"
" representa "
indicando, por tanto, la quiralidad de la molécula.
Siempre que un carbono quiral esté presente en una estructura química, se entiende que todos los estereoisómeros asociados con ese carbono quiral están englobados por la estructura como estereoisómeros puros, así como mezclas de los mismos.
En un modo de realización particular de la presente invención, los análogos de oxitocina tienen la fórmula la
en la que R1, R2 y R3 son como anteriormente.
R1 es en particular hidrógeno o alquilo C1-4 , más en particular hidrógeno o metilo.
R2 es en particular hidrógeno o alquilo C1-4 , más en particular hidrógeno.
R1 y R2 conjuntamente con el átomo de nitrógeno y de carbono al que están unidos en particular forman el anillo pirrolidina de prolina que está opcionalmente sustituido con hidroxi o halógeno, en particular con hidroxi o flúor; R3 en particular representa n-butilo o i-butilo;
Los análogos de oxitocina incluso más particulares se enumeran a continuación:
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 (1)
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Pro-Leu-Gly-NH2 (2)
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Sar-Leu-Gly-NH2 (3)
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Sar-Nle-Gly-NH2 (4)
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-trans-4 -fluoro-Pro-Leu-Gly-NH2 (5)
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-trans-4-hidroxi-Pro-Leu-Gly-NH2 (6).
El precursor peptídico unido a resina de fórmula II tiene la fórmula
en la que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 y R8 son como anteriormente.
R1 es en particular hidrógeno o alquilo C1-4, más en particular hidrógeno o metilo.
R2 es en particular hidrógeno o alquilo C1-4 , más en particular hidrógeno.
R1 y R2 conjuntamente con el átomo de nitrógeno y de carbono al que están unidos en particular forman el anillo pirrolidina de prolina que está opcionalmente sustituido con hidroxi o halógeno, en particular con hidroxi o flúor; R3 en particular representa n-butilo o i-butilo;
R4 en particular es t-butilo, alilo, tritilo, 2-clorotritilo, t-butiloxicarbonilo, t-butildifenilsililo o t-butildimetilsililo, pero más en particular t-butilo;
R5 es Fmoc;
R6 en particular es 1-adamantilo, fenilisopropilo o t-butilo,
R7 en particular es tritilo, 2-clorotritilo, 4-metiltritilo, pero más en particular tritilo; y
R8 en particular es tritilo, 2-clorotritilo, 4-metiltritilo, pero más en particular tritilo.
El precursor peptídico unido a resina de fórmula II se puede preparar usando procedimientos conocidos por el experto en la técnica de síntesis peptídica en fase sólida, normalmente por una escisión de Fmoc repetida y un acoplamiento repetido de los aminoácidos protegidos con Fmoc deseados.
Como norma se pueden usar resinas de amida comercialmente disponibles adecuadas para la síntesis peptídica en fase sólida, en particular para la síntesis peptídica en fase sólida con Fmoc. Las resinas útiles se describen, por ejemplo, en Chan W. C. y White P. D. “Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis”, Oxford University Press. Por ejemplo, se descubrió que la resina PL-Rink (resina 4-[(2,4-dimetoxifenil)Fmoc-aminometil]fenoxiacetamido-metilo) de Agilent Technology es particularmente adecuada para el procedimiento de la presente invención.
Se puede producir escisión de Fmoc con una solución de derivados de piperidina en un disolvente orgánico adecuado. De forma ventajosa, se puede aplicar una solución de piperidina o 4-metilpiperidina en N,N-dimetilformamida o N-metilpirrolidona.
El acoplamiento sobre la resina con los aminoácidos protegidos con Fmoc puede tener lugar con un agente de acoplamiento seleccionado de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (PyAOP), hexafluorofosfato de bromotripirrolidinofosfonio (PyBroP), hidroxibenzotriazol (HOBt) y N,N'-diisopropilcarbodiimida (DIC), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU), O-(6-clorobenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HCTU), hexafluorofosfato de (1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolinocarbenio (COMU), hexafluorofosfato de tetrametilfluoroformamidinio (TFFH), 2-hidroxipiridina (HOPy) o cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (DMTMM) en presencia de una base amina orgánica y un disolvente orgánico adecuado.
Se ha descubierto que HOBt, HOPy y DIC en presencia de piridina como base amina orgánica y N,N'-dimetilformamida como disolvente orgánico son un agente de acoplamiento preferente.
La Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(OAll)-Gly-Leu-Gly-resina de fórmula X
se puede construir, por ejemplo, sobre una resina PL-Rink por escisión de Fmoc repetida y acoplamiento repetido de los siguientes aminoácidos protegidos con Fmoc en el orden descrito: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu(OAll)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH y Fmoc-Gly-OH. Como se explica anteriormente, el procedimiento puede seguir el procedimiento a) en el que R6 es alilo o 4-{N-[1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metilbutil]amino}bencilo. En este caso, el procedimiento se caracteriza por las siguientes etapas:
a1) se escinde el grupo alilo o 4-{N-[1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metilbutil]amino}bencilo R6, en una etapa posterior
a2) se escinde el grupo Fmoc R5, después de esto
a3) se efectúa la ciclación de anillo sobre la resina, en otra etapa
a4) se efectúa la desprotección global y escisión de la resina, y opcionalmente
a5) se purifica el análogo de oxitocina de fórmula I así obtenido y se aísla.
La escisión del grupo alilo o 4-{N-[1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metilbutil]amino}bencilo en la etapa a1) se realiza normalmente en presencia de un compuesto de paladio o de rodio o de hidracina. Se pueden seleccionar compuestos de paladio o rodio adecuados de tetraquis(trifenilfosfina)paladio, trifenilfosfina/acetato de paladio, trietilfosfito/acetato de paladio, dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio o cloruro de tris(trifenilfosfina)rodio. Preferentemente se usan compuestos de paladio, incluso más preferentemente tetraquis(trifenilfosfina)paladio. Además, normalmente está presente un oxidante tal como fenilsilano, pirrolidina, morfolina o N-metil-N-trimetilsililtrifluoroacetamida, en particular fenilsilano.
La reacción como norma se puede producir a temperatura ambiente en un disolvente orgánico adecuado tal como cloruro de metileno, acetonitrilo o tetrahidrofurano.
Se puede realizar la escisión de Fmoc en la etapa a2) como se explica anteriormente con piperidina o 4-metilpiperidina en un disolvente orgánico adecuado.
Se efectúa la ciclación de anillo en la etapa a3) sobre la resina, usando convenientemente un agente de ciclación seleccionado de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (PyAOP), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uranio (HBTU), hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio (Ha TU), hexafluorofosfato de O-(6-clorobenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HCTU), hexafluorofosfato de (1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbenio (COMU), 2-hidroxipiridina (HOPy) o cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (DMTMM) en presencia de una base amina orgánica.
Las bases amina orgánicas adecuadas se pueden seleccionar de piridina, imidazol, N,N-diisopropiletilamina, trietilamina, N-metilmorfolina, N,N-dimetil-4-aminopiridina, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno o 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano.
Se puede realizar la etapa de ciclación a3) con PyBOP o PyAOP en presencia de N,N-diisopropiletilamina, imidazol o N-metilmorfolina como bases amina orgánicas a temperaturas de entre 0 °C a 25 °C.
Se puede efectuar la desprotección global y escisión de la resina en la etapa a4) en presencia de ácido trifluoroacético/agua y un oxidante adecuado tal como tioanisol, anisol, fenol, triisopropilsilano, trietilsilano, etanoditiol o ditiotreitol normalmente a temperaturas de entre 0 °C a 25 °C. Se ha descubierto que triisopropilsilano es un oxidante preferente.
En la etapa a5) se puede aislar el análogo de oxitocina bruto separando por filtración la resina, retirando el disolvente del filtrado y llevando además el residuo a un disolvente orgánico adecuado tal como a éter metil-t-butílico, 2-metiltetrahidrofurano o a mezclas de los mismos y por filtración final y secado.
Se puede purificar adicionalmente el análogo de oxitocina bruto por HPLC preparativa en solución con un disolvente orgánico adecuado tal como con acetonitrilo acuoso y aditivos adecuados tales como ácido trifluoroacético, ácido acético o acetato de amonio.
A continuación se pueden liofilizar las fracciones obtenidas para obtener el análogo de oxitocina puro de fórmula I. El procedimiento de la presente invención sigue el procedimiento b) en el que R6 es t-butilo, 1-adamantilo o fenilisopropilo. En este caso, el procedimiento se caracteriza por las etapas definidas por las reivindicaciones adjuntas.
La escisión de Fmoc en la etapa b1) puede tener lugar como se describe para la etapa a2) anterior.
Se puede realizar la desprotección global y escisión de la resina en la etapa b2) como se describe anteriormente en la etapa a4). Los modos de realización preferentes para la etapa a4 se aplican asimismo para la etapa b2).
Se efectúa la ciclación de anillo en la etapa b3) en solución pero se puede producir con los agentes de ciclación y las bases amina orgánicas enumeradas para la etapa a3) anterior. Los modos de realización preferentes para la etapa a3 se aplican asimismo para la etapa b3).
El aislamiento y purificación en la etapa b4) puede tener lugar de la misma manera como se describe en la etapa a5). Los modos de realización preferentes para la etapa a5 se aplican asimismo para la etapa b4).
Ejemplos
Abreviaturas:
SPPS = síntesis peptídica en fase sólida, resina PL-Rink = resina 4-[(2,4-dimetoxifenil)Fmocaminometil]fenoxiacetamido-metilo de Agilent Technology (PL1467-4749: 0,32 mmol/g 75 - 150-10-6m; PL1467-4799: 0,55 mmol/g 75-150 - 10-6m; PL1467-4689: 0,96 mmol/g 150-300 - 10-6m), Fmoc = 9-fluorenilmetoxicarbonilo, Gly = glicina, Leu = leucina, Glu(OAll) = ácido glutámico protegido con alilo, Glu(tBu) = ácido glutámico protegido con tere-butilo, Asn(Trt) = asparagina protegida con tritilo, Gln(Trt) = glutamina protegida con tritilo, Ile = isoleucina, Tyr(tBu) = tirosina protegida con tere-butilo, Sar = N-metilglicina, Pro = prolina, Nle = norleucina, DMF = N,N-dimetilformamida, HOBt = 1-hidroxibenzotriazol, HOPy = 2-hixroxipiridina, DIC = N,N'-diisopropilcarbodiimida, NEP = N-etilpirrolidona, PyBOP = hexafluorofosfato de (benzotriazol-1 -iloxi)tripirrolidinofosfonio, DIPEA = diisopropiletilamina, MeOH = metanol, CH2Ch = diclorometano, MTBE = éter metil-tere-butílico, MetF = 2-metiltetrahidrofurano, TFA = ácido trifluoroacético, MeCN = acetonitrilo, PyAOP = hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio, HBTU = hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uranio, HATU = hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio, HCTU = hexafluorofosfato de O-(6-clorobenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio, COMU = hexafluorofosfato de (1-ciano
2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbenio, DMTMM = cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio, NMP = 1 -metil-2-pirrolidinona, DMSO = dimetilsulfóxido, DMI = 1,3-dimetil-2-imidazolidinona, DMPU = 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1H)-pirimidinona, NMM = N-Metilmorfolina, DMAP = N,N-dimetil-4-aminopiridina, DIPEA = N,N-diisopropiletilamina, DBU = 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno, DABCO = 1,4 diazabiciclo[2.2.2]octano.
Ejemplo de comparación
Se realizó un experimento comparativo para la preparación de
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 (1)
de forma análoga a la descripción de síntesis del documento WO2014/095773 (ciclación en fase sólida) y como se explica en el esquema 1 a continuación:
Esquema 1:
Se ha medido la eficacia de síntesis en base al rendimiento y a la proporción de producto (1) con respecto al subproducto dímero de fórmula mostrada en el esquema 2 a continuación:
Esquema 2:
a) Escisión de Fmoc:
Se cargó un reactor de SPPS (100 ml; sintetizador peptídico CS136XT ex CSBio) con resina PL-Rink (carga.
0,55 mmol/g, 5,00 g, 2,75 mmol) y piperidina al 20 % en DMF (50,0 ml). A continuación se agitó la mezcla a 25 °C durante 10 min. Después de extraer el disolvente, se añadió otra porción de piperidina al 20 % en DMF (50,0 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 30 min. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (8 x 50,0 ml) para proporcionar la resina PL-Rink sin Fmoc.
b) Acoplamiento con Fmoc-AA-derivados:
A la resina PL-Rink sin Fmoc, se le añadieron una solución de Fmoc-Gly-OH en HOBt/DMF 0,35 M (32,0 ml, 11,2 mmol), DIC 0,92 M en DMF (16,0 ml, 14,7 mmol) y piridina al 10 % en Dm F (16,0 ml, 19,8 mmol) y se agitó a 25 °C durante 3 h. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (4 x 50,0 ml) para proporcionar Fmoc-Gly-resina.
Se repitieron las etapas de escisión de Fmoc y acoplamiento de Fmoc-AA-derivado 8 veces empleando en lugar de Fmoc-Gly-OH, los siguientes Fmoc-aminoácido-derivados: Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu(OAll)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH para proporcionar Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(OAll)-Gly-Leu-Gly-resina. Se escindió una muestra de la resina (véase a continuación) para confirmar la masa correcta. EM (m/z): 1211,8 (M+H)+
c) Escisión de Fmoc:
Se llevó a cabo la escisión de Fmoc de la Gly terminal como se describe anteriormente para proporcionar H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(OAll)-Gly-Leu-Gly-resina. Se escindió una muestra de la resina (véase a continuación) para confirmar la masa correcta. EM (m/z): 989,8 (M+H)+
d) Escisión de alilo:
A H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(OAll)-Gly-Leu-Gly-resina, se le añadió una solución de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (159 mg, 0,138 mmol) y fenilsilano (3,40 ml, 27,6 mmol) en CH2Ch (50,0 ml) y se agitó a 25 °C durante 30 min. Después de extraer el disolvente, se repitió esta etapa una vez más y se lavó con DMF (2 x 50,0 ml). Se añadió una solución de ditiocarbamato de sodio (250 mg) y DIPEA (0,250 ml) en DMF (50,0 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 15 min. Después de extraer el disolvente, se repitió esta etapa una vez más. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (4 x 50,0 ml) para proporcionar H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu-Gly-Leu-Gly-resina. Se escindió una muestra de la resina (véase a continuación) para confirmar la masa correcta. EM (m/z): 949,7 (M+H)+
e) Ciclación sobre resina:
Se añadió una solución de PyBOP (2,36 g, 4,54 mmol) y DIPEA (2,40 ml, 13,8 mmol) en NEP (60,0 ml) a H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu-Gly-Leu-Gly-resina y se agitó la mezcla a 25 °C durante 4 h. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (4 x 50,0 ml), CH2Ch (3 x 50,0 ml) y MeOH (3 x 50,0 ml). Se secó la resina a 1 kPa (10 mbar) a 25 °C durante 1 día para dar c[Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu]-Gly-Leu-Gly-resina (8,60 g).
f) Desprotección global y escisión de resina:
A una solución preenfriada (10-15 °C) de triisopropilsilano (2,80 ml) en TFA (40,0 ml) y agua (10,0 ml), se le añadió c[Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu]-Gly-Leu-Gly-resina (8,60 g) y se agitó a 25 °C durante 3 h. Se separó por filtración la resina y se concentró el filtrado a vacío. Se añadió el residuo a MTBE (100 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 15 h. Se filtró la mezcla y se lavó la torta con MTBE (50,0 ml) seguido de secado para dar c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 bruto 1 (2,01 g, ensayo 11,3 % en peso, rendimiento total de un 9 %) como un sólido blanco con una pureza de un 15,9 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1). La proporción de 1/dímero fue de 8,5.
Tabla 1:
Ejemplo 1 (ciclación en fase sólida)
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 (1)
Esquema 3:
a) Escisión de Fmoc:
Se cargó un reactor de SPPS (100 ml; sintetizador peptídico CS136XT ex CSBio) con resina PL-Rink (carga.
0,55 mmol/g, 5,00 g, 2,75 mmol) y piperidina al 20 % en DMF (50,0 ml). A continuación se agitó la mezcla a 25 °C durante 10 min. Después de extraer el disolvente, se añadió otra porción de piperidina al 20 % en DMF (50,0 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 30 min. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (8 x 50,0 ml) para proporcionar la resina PL-Rink sin Fmoc.
b) Acoplamiento con Fmoc-AA-derivados:
A la resina PL-Rink sin Fmoc, se le añadieron una solución de Fmoc-Gly-OH en HOBt/DMF 0,35 M (32,0 ml, 11,2 mmol), DIC 0,92 M en DMF (16,0 ml, 14,7 mmol) y piridina al 10 % en Dm F (16,0 ml, 19,8 mmol) y se agitó a 25 °C durante 3 h. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (4 x 50,0 ml) para proporcionar Fmoc-Gly-resina.
Se repitieron las etapas de escisión de Fmoc y acoplamiento de Fmoc-AA-derivado 8 veces empleando en lugar de Fmoc-Gly-OH, los siguientes Fmoc-aminoácido-derivados: Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu(OAll)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH para proporcionar X (Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(OAll)-Gly-Leu-Gly-resina). Se escindió una muestra de la resina (véase a continuación) para confirmar la masa correcta. EM (m/z): 1211,8 (M+H)+
c) Escisión de alilo:
A X (Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(OAll)-Gly-Leu-Gly-resina), se le añadió una solución de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (159 mg, 0,138 mmol) y fenilsilano (3,40 ml, 27,6 mmol) en CH2Ch (50,0 ml) y se agitó a 25 °C durante 30 min. Después de extraer el disolvente, se repitió esta etapa una vez más y se lavó con DMF (2 x 50,0 ml). Se añadió una solución de ditiocarbamato de sodio (250 mg) y DIPEA (0,250 ml) en DMF (50,0 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 15 min. Después de extraer el disolvente, se repitió esta etapa una vez más. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (4 x 50,0 ml) para proporcionar Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu-Gly-Leu-Gly-resina. Se escindió una muestra de la resina (véase a continuación) para confirmar la masa correcta. EM (m/z): 1171,8 (M+H)+
d) Escisión de Fmoc:
Se llevó a cabo la escisión de Fmoc de la Gly terminal como se describe anteriormente para proporcionar H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu-Gly-Leu-Gly-resina. Se escindió una muestra de la resina (véase a continuación) para confirmar la masa correcta. EM (m/z): 949,7 (M+H)+
e) Ciclación sobre resina:
Se añadió una solución de PyBOP (2,36 g, 4,54 mmol) y DIPEA (2,40 ml, 13,8 mmol) en NEP (60,0 ml) a H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu-Gly-Leu-Gly-resina y se agitó la mezcla a 25 °C durante 4 h. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (4 x 50,0 ml), CH2Cl2 (3 x 50,0 ml) y MeOH (3 x 50,0 ml). Se secó la resina a 1 kPa (10 mbar) a 25 °C durante 1 día para dar c[Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu]-Gly-Leu-Gly-resina (9,17 g).
f) Desprotección global y escisión de resina:
A una solución preenfriada (10-15 °C) de triisopropilsilano (2,50 ml) en TFA (40,0 ml) y agua (10,0 ml), se le añadió c[Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu]-Gly-Leu-Gly-resina (9,17 g) y se agitó a 25 °C durante 3 h. Se separó por filtración la resina y se concentró el filtrado a vacío. Se añadió el residuo a MTBE (100 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 15 h. Se filtró la mezcla y se lavó la torta con MTBE (50,0 ml) seguido de secado para dar c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 bruto 1 (2,39 g, ensayo 40,9 % en peso, rendimiento total de un 38%) como un sólido blanco con una pureza de un 62,7% (% área HPLc , procedimiento de HPLC: columna Aquity UPLC BEH130 C18, 150 x 2,1 mm; fase móvil, A: TFA al 0,05 % en agua, B: TFA al 0,05 % en MeCN; flujo: 0,13 ml/min durante 40 min, 0,25 ml/min durante 15 min; isocrático 90/10 (A/B) durante 3 min, gradiente de 90/10 (A/B) a 62/38 (A/B) en 37min, gradiente de 62/38 (A/B) a 10/90 (A/B) en 5 min, isocrático 10/90 (A/B) durante 10 min. Temp: 60 °C, UV: 214 nm). La proporción de 1/dímero fue de 21,9.
Tiempo de retención: 23,2 min (c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2), 18,8 min (H-Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu-Gly-Leu-Gly-NH2), 26,1 min (dímero)
g) Purificación y aislamiento:
Se disolvió c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 bruto en agua-MeCN (10-1) y se filtró. Se diluyó el filtrado con el mismo volumen de agua. Se purificó la solución por HPLC preparativa en una columna Kromasil-C18-100 (250 x 80 mm, tamaño de partícula 10 um, A: TFA al 0,1 %-agua, B: MeCN; flujo: 300 ml/min; isocrático 95/5 (A/B)
durante 2 min, gradiente de 95/5 (A/B) a 80/20 (A/B) en 1 min, gradiente de 80/20 (A/B) a 77/23 (A/B) en 17min, gradiente de 77/23 (A/B) a 10/90 (A/B) en 1 min, isocrático 10/90 (A/B) durante 7 min, gradiente de 10/90 (A/B) a 95/5 (A/B) en 1 min, isocrático 95/5 (A/B) durante 6 min. Se recogieron las fracciones y se liofilizó para proporcionar c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 puro 1 (0,708 g) como un polvo blanco con una pureza de un 99,2 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1). No se observó dímero en 1 puro. EM (m/z): 931,0 (M+H)+ Ejemplo 2 (ciclación en fase de solución)
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 (1)
Esquema 4:
a) Escisión de Fmoc:
Se cargó un reactor de SPPS (100 ml) con resina PL-Rink (carga. 0,55 mmol/g, 5,00 g, 2,75 mmol) y piperidina al 20 % en DMF (50 ml). A continuación se agitó la mezcla a 25 °C durante 10 min. Después de extraer el disolvente, se añadió otra porción de piperidina al 20 % en DMF (50,0 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 30 min. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (8 x 50,0 ml) para proporcionar la resina PL-Rink sin Fmoc.
b) Acoplamiento de Fmoc-AA-derivados:
A la resina PL-Rink sin Fmoc, se le añadieron una solución de Fmoc-Gly-OH en HOBt/DMF 0,35 M (32,0 ml, 11,2 mmol), DIC 0,92 M en DMF (16,0 ml, 14,7 mmol) y piridina al 10 % en Dm F (16,0 ml, 19,8 mmol) y se agitó a 25 °C durante 3 h. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (4 x 50,0 ml) para proporcionar Fmoc-Gly-resina.
Se repitieron las etapas de escisión de Fmoc y acoplamiento de Fmoc-AA-derivado 8 veces empleando en lugar de Fmoc-Gly-OH, los siguientes Fmoc-aminoácido-derivados: Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH para proporcionar X (Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(tBu)-Pro-Leu-Gly-resina). Se escindió una muestra de la resina (véase a continuación) para confirmar la masa correcta. e M (m/z): 1171,8 (M+H)+
c) Escisión de Fmoc:
Se llevó a cabo la escisión de Fmoc de la Gly terminal como se describe anteriormente. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (8 x 50,0 ml), CH2Ch (3 x 50,0 ml) y MeOH (3 x 50,0 ml). Se secó la resina a 1 kPa (10 mbar) a 25 °C durante 1 día para dar H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(tBu)-Gly-Leu-Glyresina (10,8 g).
d) Desprotección global y escisión de resina:
A una solución preenfriada (10-15 °C) de triisopropilsilano (2,50 ml) en TFA (40,0 ml) y agua (10,0 ml), se le añadió H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(tBu)-Gly-Leu-Gly-resina (10,8 g) y se agitó a 25 °C durante 3 h. Se separó por filtración la resina y se concentró el filtrado a vacío. Se añadió el residuo a MetF (100 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 15 h. Se filtró la mezcla y se lavó la torta con MetF (50,0 ml) seguido de secado para dar LP1 (H-Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu-Gly-Leu-Gly-NH2) (3,60 g) como un sólido blanco con una pureza de un 67,4 % (% área HPLC, procedimiento de HPlC véase el ejemplo 1). Em (m/z): 949,7 (M+H)+
e) Ciclación en solución:
A una mezcla de LP1 (H-Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu-Gly-Leu-Gly-NH2) (3,50 g) en NEP (60,0 ml) y DIPEA (3,13 ml, 18,4 mmol) se le añadió PyBOP (1,92 g, 3,69 mmol) y se agitó a 25 °C durante 1 h. Para completar la conversión, se añadió otra porción de PyBOP (0,960 g, 1,84 mmol) y se agitó a la misma temperatura durante 1 h. Se añadió la mezcla resultante a una solución de MTBE/MetF (400 ml/100 ml) y se agitó a 25 °C durante 15 h. Se filtró la mezcla y se lavó la torta con MTBE (50,0 ml) seguido de secado para dar c[Gly-Tyr-Leu-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 bruto 1 (4,30 g, ensayo 18,0 % en peso, rendimiento total de un 31 %) como un sólido blanco con una pureza de un 56,6 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1). La proporción de 1/dímero fue de 15,1.
f) Purificación y aislamiento:
Se disolvió c[Gly-Tyr-Leu-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 bruto en agua-MeCN (10-1) y se separó por filtración el material no disuelto. Se diluyó el filtrado con el mismo volumen de agua. Se purificó la solución por HPLC preparativa en una columna Kromasil-C18-100 (250 x 80 mm, tamaño de partícula 10 um, A: TFA al 0,1 %-agua, B: MeCN; flujo: 300 ml/min; isocrático 95/5 (A/B) durante 2 min, gradiente de 95/5 (A/B) a 80/20 (A/B) en 1 min, gradiente de 80/20 (A/B) a 77/23 (A/B) en 17min, gradiente de 77/23 (A/B) a 10/90 (A/B) en 1 min, isocrático 10/90 (A/B) durante 7 min, gradiente de 10/90 (A/B) a 95/5 (A/B) en 1 min, isocrático 95/5 (A/B) durante 6 min. Se recogieron las fracciones y se liofilizó para proporcionar c[Gly-Tyr-Leu-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 puro 1 (444 mg) como un polvo blanco con una pureza de un 99,7% (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1). No estaba presente nada de dímero en 1 puro. EM (m/z): 931,0
Ejemplo 3 a-g (Optimización de reactivos de acoplamiento):
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 (1)
De manera análoga al ejemplo 2, se realizaron las ciclaciones empleando los reactivos de acoplamiento como se enumeran en la tabla 2.
Tabla 2:
Ejemplo 4 a-g (Optimización de disolventes):
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 (1)
De manera análoga al ejemplo 2, se realizaron las ciclaciones empleando los disolventes como se enumeran en la tabla 3.
Tabla 3:
Ejemplo 5 a-g (Optimización de bases):
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Gly-Leu-Gly-NH2 (1)
De manera análoga al ejemplo 2, se realizaron las ciclaciones empleando las bases como se enumeran en la tabla 4.
Tabla 4:
Ejemplo 6 a-d (Comparación de la carga de resina/equivalente de aminoácido):
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Pro-Leu-Gly-NH2 (2)
Esquema 5:
De manera análoga al ejemplo 2, se sintetizó el péptido cíclico puro 2 empleando los Fmoc-AA-ácidos: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH
Escala de síntesis: 9,60 mmol (carga: véase el ejemplo 6a-d; resina 30,0 g)
Rendimiento: 40 % (después de purificación)
Pureza: 98,2 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
Tiempo de retención: 29,8 min (procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
EM (m/z): 971,5 (M+H)+
Se determinaron la pureza y el rendimiento del péptido lineal intermedio LP2 (H-Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu-Pro-Leu-Gly-NH2) empleando las cargas de resina/equivalentes de aminoácido como se enumeran en la tabla 5.
Tabla 5:
Ejemplo 7
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Pro-Leu-Gly-NH2 (2)
Se realizó el ejemplo 7 de manera análoga al ejemplo 2, con la excepción de que se realizaron las ciclaciones empleando N-metilmorfolina como base.
a) Escisión de Fmoc:
Se cargó un reactor de SPPS (250 ml; sintetizador peptídico CS536XT ex CSBio) con resina PL-Rink (carga.
0,55 mmol/g, 10,0 g, 5,50 mmol) y piperidina al 20 % en DMF (100 ml). A continuación se agitó la mezcla a 25 °C durante 10 min. Después de extraer el disolvente, se añadió otra porción de piperidina al 20 % en DMF (100 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 30 min. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (8 x 100 ml) para proporcionar resina PL-Rink sin Fmoc.
b) Acoplamiento de Fmoc-AA-derivados:
A la resina PL-Rink sin Fmoc, se le añadieron una solución de Fmoc-Gly-OH en HOBt/DMF 0,35 M (64,0 ml, 22,4 mmol), DIC 0,92 M en DMF (32,0 ml, 29,4 mmol) y piridina al 10 % en D m F (32,0 ml, 39,6 mmol) y se agitó a 25 °C durante 3 h. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con DMF (4 x 100,0 ml) para proporcionar Fmoc-Gly-resina.
Se repitieron las etapas de escisión de Fmoc y acoplamiento de Fmoc-AA-derivado 8 veces empleando en lugar de Fmoc-Gly-OH, los siguientes Fmoc-aminoácido-derivados: Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH para proporcionar Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(tBu)-Pro-Leu-Gly-resina. Se escindió una muestra de la resina (véase a continuación) para confirmar la masa correcta. e M (m/z): 1211,1 (M+H)+
c) Escisión de Fmoc:
Se llevó a cabo la escisión de Fmoc de la Gly terminal como se describe anteriormente. Después de extraer el disolvente, se lavó la resina resultante con D m F (8 x 100 ml), CH2Cl2 (3 x 100 ml) y MeOH (3 x 100 ml). Se secó la resina a 1 kPa (10 mbar) a 25 °C durante 1 día para dar H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(tBu)-Pro-Leu-Glyresina (18,6 g). Se escindió una muestra de la resina (véase a continuación) para confirmar la masa correcta. EM (m/z): 989,7 (M+H)+
d) Desprotección global y escisión de resina:
A una solución preenfriada (10-15 °C) de triisopropilsilano (3,00 ml) en TFA (48,0 ml) y agua (12,0 ml), se le añadió H-Gly-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Glu(tBu)-Pro-Leu-Gly-resina (6,00 g) y se agitó a 25 °C durante 3 h. Se separó por filtración la resina y se concentró el filtrado a vacío. Se añadió el residuo a MetF (120 ml) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 15 h. Se filtró la mezcla y se lavó la torta con MetF (60,0 ml) seguido de secado para dar H-Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu-Pro-Leu-Gly-NH2 LP2 (1,84 g) como un sólido blanco con una pureza de un 87,3 % (% área H p L C , procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1). Tiempo de retención: 23,9 min (procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1); EM (m/z): 989,7 (M+H)+
e) Ciclación en solución:
A una mezcla de H-Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu-Pro-Leu-Gly-NH2 LP2 (300 mg) en N-etilpirrolidona (3,60 ml) y NMM (0,167 ml, 1,52 mmol) se le añadió PyBOP (237 mg, 0,455 mmol) y se agitó a 25 °C durante 1 h. Para completar la conversión, se añadió otra porción de PyBOP (47,4 mg, 0,0910 mmol) y se agitó a la misma temperatura durante 1 h. Se añadió la mezcla resultante a una solución de MTBE (24,0 ml) y MetF (6,00 ml), y a continuación se agitó a 25 °C durante 15 h. Se filtró la mezcla y se lavó la torta con MTBE (15,0 ml). Se disolvió la torta en agua/MeCN (10/1, 3,3 ml) y se separaron por filtración los materiales no disueltos. Se liofilizó el filtrado para dar c[Gly-Tyr-Leu-Gln-Asn-Glu]-Pro-Leu-Gly-NH2 bruto 2 (313 mg, ensayo 54,0 % en peso, rendimiento total de un 60 %) como un sólido blanco con una pureza de un 71,4 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1). EM (m/z): 971,5 (M+H)+
Ejemplo 8
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Sar-Leu-Gly-NH2 (3)
De manera análoga al ejemplo 2, se sintetizó el péptido cíclico puro 3 empleando los Fmoc-AA-ácidos: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH
Escala de síntesis: 9,60 mmol (carga. 0,32 mmol/g, resina 30,0 g)
Rendimiento: 41 % (después de purificación)
Pureza: 98,9 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
Tiempo de retención: 27,6 min (procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
EM (m/z): 945,5 (M+H)+
Ejemplo 9
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-Sar-Nle-Gly-NH2 (4)
De manera análoga al ejemplo 2, se sintetizó el péptido cíclico puro 4 empleando los Fmoc-AA-ácidos: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH
Escala de síntesis: 9,60 mmol (carga. 0,32 mmol/g, resina 30,0 g)
Rendimiento de un 41 % (después de purificación)
Pureza: 99,2 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
Tiempo de retención: 25,9 min (procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
EM (m/z): 945,5 (M+H)+
Ejemplo 10
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-trans-4-fluoro-Pro-Leu-Gly-NH2 (5)
De manera análoga al ejemplo 2, se sintetizó el péptido cíclico puro 5 empleando los Fmoc-AA-ácidos: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-trans-4-fluoro-Pro-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH
Escala de síntesis: 9,60 mmol (carga. 0,32 mmol/g, resina 30,0 g)
Rendimiento: 39 % (después de purificación)
Pureza: pureza de un 98,8 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
Tiempo de retención: 25,7 min (procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
EM (m/z): 988,5 (M+H)+
Ejemplo 11
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-trans-4-hidroxi-Pro-Leu-Gly-NH2 (6)
De manera análoga al ejemplo 2, se sintetizó el péptido cíclico puro 6 empleando los Fmoc-AA-ácidos: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-trans-4-terc-butoxi-Pro-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH
Escala de síntesis: 9,60 mmol (carga. 0,32 mmol/g, resina 30,0 g)
Rendimiento: 22 % (después de purificación)
Pureza: pureza de un 98,7 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
Tiempo de retención: 23,3 min (procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
EM (m/z): 987,5 (M+H)+.
Ejemplo 12 (ciclación en fase sólida)
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-trans-4-fluoro-Pro-Leu-Gly-NH2 (5)
De manera análoga al ejemplo 1 empleando un sintetizador peptídico CS536XT de CSBio, se sintetizó el péptido cíclico puro 5 empleando los Fmoc-AA-ácidos: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-trans-4-fluoro-Pro-OH, Fmoc-Glu(OAll)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH. A lo largo de toda la síntesis, para la escisión de Fmoc se usó 4-metilpiperidina al 10 % en DMF en lugar de piperidina al 20 % en DMF, y se llevaron a cabo todos los acoplamientos aminoacídicos en la secuencia lineal empleando HOPy en lugar de HOBt. En la etapa de ciclación sobre resina promovida por PyBOP final, se usó 4-metilmorfolina en lugar de DIPEA como base y se realizó la ciclación en DMF en lugar de NEP como disolvente. Se llevó a cabo la purificación por HPLC preparativa de c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-trans-4-fluoro-Pro-Leu-Gly-NH2 bruto en una columna Kromasil-C18-100 (250 x 4,6 mm, tamaño de partícula 10 um, A: NH4OAc 20 mM pH5, B: MeCN; flujo: 1 ml/min; isocrático 90/10 (A/B) durante 1 min, gradiente de 90/10 (A/B) a 80/20 (A/B) en 1 min, gradiente de 80/20 (A/B) a 75/25 (A/B) en 10 min, gradiente de 75/25 (A/B) a 10/90 (A/B) en 1 min, gradiente de 10/90 (A/B) durante 5 min, gradiente de 10/90 (A/B) a 90/10 (A/B) en 0,1 min, isocrático 90/10 (A/B) durante 6,9 min. Se diluyeron las fracciones recogidas con agua (1:1) y se concentró/desaló cargando en una columna Kromasil C18-100-10 acondicionada (agua/ACN 90/10) (250 x 4,6 mm) y se eluyó después de esto con agua/ACN (1:1). Se evaporaron las fracciones recogidas (UV 280 nm, valor umbral 1000 mAu) en evaporador giratorio para retirar el ACN y se liofilizó después de esto para proporcionar el péptido puro como un producto liofilizado blanco.
Escala de síntesis: 5,50 mmol (carga 0,55 mmol/g, resina 10,0 g)
Rendimiento: 34 % (después de purificación)
Pureza: pureza de un 98,8 % (% área HPLC, procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
Tiempo de retención: 25,3 min (procedimiento de HPLC véase el ejemplo 1)
EM (m/z): 989,5 (M+H)+
Ejemplo 13 (ciclación en fase sólida)
c[Gly-Tyr-Ile-Gln-Asn-Glu]-trans-4-fluoro-Pro-Leu-Gly-NH2 (5)
De manera análoga al ejemplo 13, se sintetizó el péptido cíclico puro 5 empleando HOBt en lugar de HOPy a lo largo de toda la síntesis del péptido lineal sobre resina.
Escala de síntesis: 5,50 mmol (carga 0,55 mmol/g, resina 10,0 g)
Rendimiento: 25 % (después de purificación)
Claims (5)
1. Procedimiento para la preparación de análogos de oxitocina de fórmula I
en la que
R1 es hidrógeno o alquilo C1-7 y
R2 es hidrógeno o alquilo C1-7 ; o
R1 y R2 conjuntamente con el átomo de nitrógeno y de carbono al que están unidos forman un heterociclo de 5 miembros que está opcionalmente sustituido con hidroxi o halógeno;
R3 es alquilo C1-7
y de sus correspondientes enantiómeros y/o isómeros ópticos de los mismos, que comprende tratar un precursor peptídico unido a resina de fórmula II
en la que
R1, R2 y R3 son como anteriormente y
R4 es un grupo protector de hidroxi;
R5 es Fmoc;
R6 es t-butilo, 1-adamantilo o fenilisopropilo;
R7 es un grupo protector de amida; y
R8 es un grupo protector de amida
y sus correspondientes enantiómeros y/o isómeros ópticos de los mismos,
de acuerdo con el procedimiento:
b1) se escinde el grupo Fmoc R5 con una solución de piperidina o 4-metilpiperidina en un disolvente orgánico adecuado;
b2) se efectúa la desprotección global y escisión de la resina en presencia de ácido trifluoroacético y un oxidante adecuado tal como tioanisol, anisol, fenol, triisopropilsilano, trietilsilano, etanoditiol o ditiotreitol;
b3) se efectúa la ciclación de anillo en solución usando un agente de ciclación seleccionado de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (PyAOP), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uranio (HBTU), hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio (HATU), hexafluorofosfato de O-(6-clorobenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HCTU), hexafluorofosfato de (1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbenio (COMU), 2-hidroxipiridina (HOPy) o cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (DMTMM) en presencia de una base amina orgánica seleccionada de piridina, imidazol, N,N-diisopropiletilamina, trietilamina, N-metilmorfolina, N,N-dimetil-4-aminopiridina, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno o 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano;
b4) opcionalmente se aísla el análogo de oxitocina de fórmula I así obtenido y se purifica.
2. Procedimiento de la reivindicación 1, en el que el análogo de oxitocina tiene la fórmula Ia
en la que R1, R2 y R3 son como anteriormente y en el que el precursor peptídico unido a resina de fórmula II tiene la fórmula
en la que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 y R8 son como anteriormente.
3. Procedimiento de las reivindicaciones 1 o 2, en el que
R1 es hidrógeno o alquilo C1-4 y
R2 es hidrógeno o alquilo C1-4 ; o
R1 y R2 conjuntamente con el átomo de nitrógeno y de carbono al que están unidos forman un anillo pirrolidina de prolina que está opcionalmente sustituido con hidroxi o halógeno;
R3 representa n-butilo o i-butilo;
R4 es t-butilo, alilo, tritilo, 2-clorotritilo, t-butiloxicarbonilo, t-butildifenilsililo o t-butildimetilsililo;
R5 es Fmoc;
R6 es ilo, 1-adamantilo, fenilisopropilo o t-butilo;
R7 es tritilo, 2-clorotritilo, 4-metiltritilo; y
R8 es tritilo, 2-clorotritilo, 4-metiltritilo.
4. Procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el precursor peptídico unido a resina de fórmula II se prepara sobre la resina por escisión de Fmoc repetida y acoplamiento de los respectivos aminoácidos protegidos con Fmoc.
5. Procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la resina es una resina 4-[(2,4-dimetoxifenil)Fmoc-aminometil]fenoxiacetamido-metilo.
6. Procedimiento de la reivindicación 1 para la preparación de análogos de oxitocina de fórmula Ia
en la que
R1 es hidrógeno o alquilo C1-4 y
R2 es hidrógeno o alquilo C1-4; o
R1 y R2 conjuntamente con el átomo de nitrógeno y de carbono al que están unidos forman un anillo pirrolidina de prolina que está opcionalmente sustituido con hidroxi o halógeno;
R3 es n-butilo o i-butilo
y de sus correspondientes enantiómeros y/o isómeros ópticos de los mismos.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP14180161 | 2014-08-07 | ||
| PCT/EP2015/067881 WO2016020349A1 (en) | 2014-08-07 | 2015-08-04 | Processes for the preparation of oxytocin analogues |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2700586T3 true ES2700586T3 (es) | 2019-02-18 |
Family
ID=51298582
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES15745209T Active ES2700586T3 (es) | 2014-08-07 | 2015-08-04 | Procedimientos para la preparación de análogos de oxitocina |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20170174725A1 (es) |
| EP (1) | EP3177635B1 (es) |
| JP (1) | JP6744293B2 (es) |
| KR (1) | KR20170040231A (es) |
| CN (1) | CN106573958A (es) |
| AU (1) | AU2015299118B2 (es) |
| CA (1) | CA2954228A1 (es) |
| ES (1) | ES2700586T3 (es) |
| HK (1) | HK1231495A1 (es) |
| HR (1) | HRP20181916T1 (es) |
| IL (1) | IL248981B (es) |
| MX (1) | MX369345B (es) |
| MY (1) | MY178266A (es) |
| PL (1) | PL3177635T3 (es) |
| RU (1) | RU2696276C2 (es) |
| SG (1) | SG11201700877PA (es) |
| SI (1) | SI3177635T1 (es) |
| TR (1) | TR201815872T4 (es) |
| WO (1) | WO2016020349A1 (es) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2907454C (en) | 2013-03-21 | 2021-05-04 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Synthesis of hydantoin containing peptide products |
| EP2976325B1 (en) | 2013-03-21 | 2017-03-01 | Sanofi-Aventis Deutschland GmbH | Synthesis of cyclic imide containing peptide products |
| SI3666258T1 (sl) | 2014-09-19 | 2024-04-30 | Ferring Bv | Postopek zdravljenja Prader-Willijevega sindroma |
| EP3852723A4 (en) | 2018-09-20 | 2022-06-29 | Levo Therapeutics, Inc. | Stable intranasal formulations of carbetocin |
| TW202034899A (zh) | 2018-09-20 | 2020-10-01 | 克里斯托弗 Ｓ 布萊恩特 | 卡貝縮宮素藥品及其製備方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2063979C1 (ru) * | 1992-02-24 | 1996-07-20 | Всесоюзный научно-исследовательский институт технологии кровезаменителей и гормональных препаратов | Пептиды последовательности окситоцина |
| JP3576554B2 (ja) * | 1993-09-21 | 2004-10-13 | 協和醗酵工業株式会社 | 新規ペプチド |
| FI20021763A0 (fi) * | 2002-10-03 | 2002-10-03 | Karyon Oy Ab Ltd | Uusia terapeuttisesti aktiivisia aineita ja niiden käyttö |
| JP4564375B2 (ja) * | 2004-08-18 | 2010-10-20 | 太陽化学株式会社 | テアニンの製造方法 |
| DK2935312T3 (en) * | 2012-12-21 | 2018-10-22 | Hoffmann La Roche | Peptides as oxytocin agonists |
-
2015
- 2015-08-04 CA CA2954228A patent/CA2954228A1/en not_active Abandoned
- 2015-08-04 WO PCT/EP2015/067881 patent/WO2016020349A1/en active Application Filing
- 2015-08-04 SG SG11201700877PA patent/SG11201700877PA/en unknown
- 2015-08-04 TR TR2018/15872T patent/TR201815872T4/tr unknown
- 2015-08-04 SI SI201530502T patent/SI3177635T1/sl unknown
- 2015-08-04 JP JP2017506865A patent/JP6744293B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2015-08-04 AU AU2015299118A patent/AU2015299118B2/en not_active Ceased
- 2015-08-04 PL PL15745209T patent/PL3177635T3/pl unknown
- 2015-08-04 MX MX2016016050A patent/MX369345B/es active IP Right Grant
- 2015-08-04 ES ES15745209T patent/ES2700586T3/es active Active
- 2015-08-04 RU RU2017105184A patent/RU2696276C2/ru active
- 2015-08-04 CN CN201580035667.8A patent/CN106573958A/zh active Pending
- 2015-08-04 MY MYPI2016002054A patent/MY178266A/en unknown
- 2015-08-04 KR KR1020177003094A patent/KR20170040231A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-08-04 EP EP15745209.5A patent/EP3177635B1/en active Active
-
2016
- 2016-11-15 IL IL248981A patent/IL248981B/en active IP Right Grant
-
2017
- 2017-02-07 US US15/426,550 patent/US20170174725A1/en not_active Abandoned
- 2017-05-24 HK HK17105259.6A patent/HK1231495A1/zh unknown
-
2018
- 2018-11-16 HR HRP20181916TT patent/HRP20181916T1/hr unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20170040231A (ko) | 2017-04-12 |
| AU2015299118A1 (en) | 2016-12-01 |
| IL248981B (en) | 2021-02-28 |
| RU2696276C2 (ru) | 2019-08-01 |
| IL248981A0 (en) | 2017-01-31 |
| EP3177635B1 (en) | 2018-10-03 |
| JP6744293B2 (ja) | 2020-08-19 |
| MX2016016050A (es) | 2017-02-28 |
| JP2017527545A (ja) | 2017-09-21 |
| CA2954228A1 (en) | 2016-02-11 |
| US20170174725A1 (en) | 2017-06-22 |
| PL3177635T3 (pl) | 2019-02-28 |
| TR201815872T4 (tr) | 2018-11-21 |
| MX369345B (es) | 2019-11-06 |
| EP3177635A1 (en) | 2017-06-14 |
| AU2015299118B2 (en) | 2020-07-09 |
| HRP20181916T1 (hr) | 2019-01-11 |
| SG11201700877PA (en) | 2017-03-30 |
| SI3177635T1 (sl) | 2019-01-31 |
| CN106573958A (zh) | 2017-04-19 |
| RU2017105184A (ru) | 2018-09-07 |
| HK1231495A1 (zh) | 2017-12-22 |
| MY178266A (en) | 2020-10-07 |
| RU2017105184A3 (es) | 2019-02-15 |
| WO2016020349A1 (en) | 2016-02-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2700586T3 (es) | Procedimientos para la preparación de análogos de oxitocina | |
| ES2830974T3 (es) | Nuevo agente protector de xanteno | |
| JP5951006B2 (ja) | 大環状デプシペプチド類の製造方法および新規中間体 | |
| WO2015155676A1 (en) | Novel aldehyde acetal based processes for the manufacture of macrocyclic depsipeptides and new intermediates | |
| ES2354488T3 (es) | Alfa-n-metilación de aminoácidos. | |
| ES2954660T3 (es) | Método para preparación de liraglutida usando un grupo de unión de BAL | |
| US20220112234A1 (en) | Method for producing peptide compound, protective group-forming reagent, and condensed polycyclic compound | |
| WO2017175233A1 (en) | Process for large scale liquid phase synthesis of carbetocin and its novel intermediates | |
| EP2864347B1 (en) | Synthesis of beta-turn peptidomimetic cyclic compounds | |
| CN114667136A (zh) | Trofinetide的组合物 | |
| ES2957487T3 (es) | Método para la escisión del grupo Fmoc | |
| ES2330102T3 (es) | Proceso para la preparacion del hexapeptido biciclico nepadutant. | |
| SK285387B6 (sk) | Spôsob prípravy cyklo(Asp-DPhe-NMeVal-Arg-Gly) | |
| JP2020529472A (ja) | ペプチド化合物の環化放出関連する出願の相互参照 | |
| EP4011902A1 (en) | Method for producing peptide compound, reagent for forming protecting group, and hydrazine derivative | |
| WO2011150500A1 (en) | Cyclic amino acid molecules containing aziridine amino acids and methods of preparing same | |
| EP4269423A1 (en) | Method for producing peptide, reagent for forming protective group, and fused polycyclic compound | |
| CN116997559A (zh) | 氨基酸或肽的制造方法、保护基形成用试剂及化合物 | |
| ES2296544B1 (es) | Procedimiento para la obtencion de peptidos biciclicos. |