ES2693584T3 - Uso de microorganismos probióticos para el tratamiento y prevención de obesidad y trastornos relacionados - Google Patents
Uso de microorganismos probióticos para el tratamiento y prevención de obesidad y trastornos relacionados Download PDFInfo
- Publication number
- ES2693584T3 ES2693584T3 ES07734501.5T ES07734501T ES2693584T3 ES 2693584 T3 ES2693584 T3 ES 2693584T3 ES 07734501 T ES07734501 T ES 07734501T ES 2693584 T3 ES2693584 T3 ES 2693584T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- microorganism
- metabolite
- strain
- use according
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 182
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 title claims abstract description 61
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 title claims abstract description 58
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title description 34
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title description 34
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title description 30
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims abstract description 122
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims abstract description 67
- 241000901050 Bifidobacterium animalis subsp. lactis Species 0.000 claims abstract description 36
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 29
- 229940009289 bifidobacterium lactis Drugs 0.000 claims abstract description 25
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 claims abstract description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000036186 satiety Effects 0.000 claims description 86
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 claims description 86
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 54
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims description 45
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 37
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 20
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 claims description 20
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 18
- 101800001586 Ghrelin Proteins 0.000 claims description 16
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- DLRVVLDZNNYCBX-UHFFFAOYSA-N Polydextrose Polymers OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N ghrelin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)COC(=O)CCCCCCC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N 0.000 claims description 11
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 10
- 239000000832 lactitol Substances 0.000 claims description 10
- 235000010448 lactitol Nutrition 0.000 claims description 10
- VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N lactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N 0.000 claims description 10
- 229960003451 lactitol Drugs 0.000 claims description 10
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 10
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 10
- 102000002512 Orexin Human genes 0.000 claims description 9
- 108060005714 orexin Proteins 0.000 claims description 9
- 102400000322 Glucagon-like peptide 1 Human genes 0.000 claims description 8
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 claims description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 7
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 7
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 7
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 claims description 7
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 claims description 7
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 7
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 claims description 7
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 claims description 7
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 6
- 229920001100 Polydextrose Polymers 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 235000013856 polydextrose Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000001259 polydextrose Substances 0.000 claims description 6
- 229940035035 polydextrose Drugs 0.000 claims description 6
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 claims description 5
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 claims description 5
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 claims description 5
- FVVCFHXLWDDRHG-UPLOTWCNSA-N (2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6r)-6-[(2s,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O1 FVVCFHXLWDDRHG-UPLOTWCNSA-N 0.000 claims description 4
- JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N lactulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000511 lactulose Drugs 0.000 claims description 4
- PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N lactulose keto form Natural products OCC(=O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 claims description 4
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 claims description 4
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 claims description 4
- 102000036770 Islet Amyloid Polypeptide Human genes 0.000 claims description 3
- 108010041872 Islet Amyloid Polypeptide Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001956 orexigenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 2
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 claims 2
- 102400000442 Ghrelin-28 Human genes 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 149
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 85
- 108010088847 Peptide YY Proteins 0.000 description 79
- 102100029909 Peptide YY Human genes 0.000 description 79
- YNXLOPYTAAFMTN-SBUIBGKBSA-N C([C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 YNXLOPYTAAFMTN-SBUIBGKBSA-N 0.000 description 78
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 56
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 50
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 43
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 37
- 239000000047 product Substances 0.000 description 35
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 30
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 28
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 26
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 26
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 25
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 25
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 23
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 20
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 17
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 15
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 15
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 14
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 14
- 102100025841 Cholecystokinin Human genes 0.000 description 13
- 101800001982 Cholecystokinin Proteins 0.000 description 13
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 13
- 229940107137 cholecystokinin Drugs 0.000 description 13
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 13
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 13
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 13
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 13
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 13
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 12
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 12
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 12
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 12
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 11
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 11
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 11
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 11
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 11
- 102000012004 Ghrelin Human genes 0.000 description 10
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 10
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 10
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 10
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 10
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 10
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 10
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 10
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 10
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 10
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 9
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 9
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 9
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 9
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 9
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 9
- 239000003629 gastrointestinal hormone Substances 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 8
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 8
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 8
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 230000036541 health Effects 0.000 description 8
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 8
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 101100268670 Caenorhabditis elegans acc-3 gene Proteins 0.000 description 7
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 7
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 7
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 7
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 7
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 7
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 7
- WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N 0.000 description 7
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 7
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 7
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 6
- 241001134659 Lactobacillus curvatus Species 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 6
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 6
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 6
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- -1 for example Substances 0.000 description 6
- FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N fructooligosaccharide Chemical compound OC[C@H]1O[C@@](CO)(OC[C@@]2(OC[C@@]3(OC[C@@]4(OC[C@@]5(OC[C@@]6(OC[C@@]7(OC[C@@]8(OC[C@@]9(OC[C@@]%10(OC[C@@]%11(O[C@H]%12O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]%12O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%11O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%10O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]9O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]8O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]7O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]6O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]5O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]4O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]3O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]2O)[C@@H](O)[C@@H]1O FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N 0.000 description 6
- 229940107187 fructooligosaccharide Drugs 0.000 description 6
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 6
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 6
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 5
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 5
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 5
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 5
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 5
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 5
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 5
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 5
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- OJSXICLEROKMBP-FFUDWAICSA-N 869705-22-6 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OJSXICLEROKMBP-FFUDWAICSA-N 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 4
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 235000019921 Litesse® Nutrition 0.000 description 4
- 102400000441 Obestatin Human genes 0.000 description 4
- 101800000590 Obestatin Proteins 0.000 description 4
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 4
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 4
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 4
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 4
- 235000021255 galacto-oligosaccharides Nutrition 0.000 description 4
- 150000003271 galactooligosaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 4
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 4
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 4
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 4
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 4
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 4
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 4
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 4
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 3
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 3
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 3
- 208000012696 congenital leptin deficiency Diseases 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 235000011850 desserts Nutrition 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 3
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 3
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 208000001022 morbid obesity Diseases 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 3
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 3
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 3
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- OKMWKBLSFKFYGZ-UHFFFAOYSA-N 1-behenoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO OKMWKBLSFKFYGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 229920002785 Croscarmellose sodium Polymers 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 2
- 239000004705 High-molecular-weight polyethylene Substances 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010021133 Hypoventilation Diseases 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 229920000161 Locust bean gum Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 2
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 2
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 2
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 2
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L calcium hydrogenphosphate Chemical compound [Ca+2].OP([O-])([O-])=O FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 229960001681 croscarmellose sodium Drugs 0.000 description 2
- 235000010947 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000019961 diglycerides of fatty acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 235000019525 fullness Nutrition 0.000 description 2
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 2
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 2
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229940049654 glyceryl behenate Drugs 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 2
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 2
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 235000010420 locust bean gum Nutrition 0.000 description 2
- 239000000711 locust bean gum Substances 0.000 description 2
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 description 2
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 2
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 2
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 2
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 235000019960 monoglycerides of fatty acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 2
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 2
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 2
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 2
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- MILWSGRFEGYSGM-UHFFFAOYSA-N propane-1,2-diol;propane-1,2,3-triol Chemical compound CC(O)CO.OCC(O)CO MILWSGRFEGYSGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 2
- 201000002859 sleep apnea Diseases 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 2
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 2
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 2,4-D Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UJDBFRUUHDPAEC-UHFFFAOYSA-N 2-[(Z)-octadec-9-enyl]propane-1,2,3-triol Chemical compound C(CCCCCCCC=C/CCCCCCCC)C(CO)(O)CO UJDBFRUUHDPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOKZRPRTHPWZDV-KTKRTIGZSA-N 2-[(z)-octadec-9-enoxy]propane-1,3-diol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOC(CO)CO NOKZRPRTHPWZDV-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- PVXPPJIGRGXGCY-DJHAAKORSA-N 6-O-alpha-D-glucopyranosyl-alpha-D-fructofuranose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@](O)(CO)O1 PVXPPJIGRGXGCY-DJHAAKORSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 75976-10-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 0.000 description 1
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 1
- 229940122820 Cannabinoid receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 244000116699 Lactobacillus acidophilus NCFM Species 0.000 description 1
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 102000018886 Pancreatic Polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101000983124 Sus scrofa Pancreatic prohormone precursor Proteins 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 101710187830 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 description 1
- 102100033733 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Human genes 0.000 description 1
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- UWAOJIWUVCMBAZ-UHFFFAOYSA-N [1-[1-(4-chlorophenyl)cyclobutyl]-3-methylbutyl]-dimethylazanium;chloride Chemical compound Cl.C=1C=C(Cl)C=CC=1C1(C(N(C)C)CC(C)C)CCC1 UWAOJIWUVCMBAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000002830 appetite depressant Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000002152 aqueous-organic solution Substances 0.000 description 1
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 1
- 235000015173 baked goods and baking mixes Nutrition 0.000 description 1
- 235000021168 barbecue Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 235000012839 cake mixes Nutrition 0.000 description 1
- 239000003536 cannabinoid receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 235000013353 coffee beverage Nutrition 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 235000020940 control diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 239000008278 cosmetic cream Substances 0.000 description 1
- 235000019788 craving Nutrition 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000015142 cultured sour cream Nutrition 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 235000019700 dicalcium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940095079 dicalcium phosphate anhydrous Drugs 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 235000012489 doughnuts Nutrition 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000013931 endocrine signaling Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003777 experimental drug Substances 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000021474 generally recognized As safe (food) Nutrition 0.000 description 1
- 235000021472 generally recognized as safe Nutrition 0.000 description 1
- 235000021473 generally recognized as safe (food ingredients) Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 1
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 210000005027 intestinal barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 1
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000020094 liqueur Nutrition 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 208000020442 loss of weight Diseases 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940045623 meridia Drugs 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000020166 milkshake Nutrition 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000007372 neural signaling Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 235000021140 nondigestible carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N orlistat Chemical compound CCCCCCCCCCC[C@H](OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC=O)C[C@@H]1OC(=O)[C@H]1CCCCCC AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000002638 palliative care Methods 0.000 description 1
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 description 1
- 235000014594 pastries Nutrition 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008250 pharmaceutical cream Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003893 regulation of appetite Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000006254 rheological additive Substances 0.000 description 1
- JZCPYUJPEARBJL-UHFFFAOYSA-N rimonabant Chemical compound CC=1C(C(=O)NN2CCCCC2)=NN(C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)C=1C1=CC=C(Cl)C=C1 JZCPYUJPEARBJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003015 rimonabant Drugs 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 1
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 1
- 235000014214 soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 235000020354 squash Nutrition 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 235000019722 synbiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940002552 xenical Drugs 0.000 description 1
- 235000008924 yoghurt drink Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
- A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/30—Dietetic or nutritional methods, e.g. for losing weight
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Birds (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Uso de una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo en la fabricación de un soporte para administración a un sujeto para el tratamiento y/o prevención de obesidad y/o para la prevención de una enfermedad causada por obesidad; en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus PTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolito es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el microorganismo se cultiva o se cultivó y/o del microorganismo.
Description
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
DESCRIPCION
Uso de microorganismos probioticos para el tratamiento y prevencion de obesidad y trastornos relacionados Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a la saciedad del apetito.
En una realizacion la presente invencion se refiere al uso de al menos una cepa de un microorganismo, preferentemente una bacteria acido lactica, preferentemente una bacteria probiotica, tal como Lactobacillus spp. (por ejemplo, L. acidophilus y/o L. salivarius) y/o Bifidobacterium spp. (tal como B. lactis), para preparar un soporte administrado a seres humanos o animales para modular la senalizacion de la saciedad, preferentemente para inducir la saciedad.
Ademas la presente invencion se refiere adicionalmente a al menos una cepa de un microorganismo, preferentemente una bacteria acido lactica, preferentemente una bacteria probiotica, tal como Lactobacillus spp. (por ejemplo L. acidophilus y/o L. salivarius) y/o Bifidobacterium spp. (tal como B. lactis), para uso en el tratamiento o reduccion o gestion de la obesidad y/o para uso en el tratamiento de trastornos relacionados con la obesidad.
Antecedentes tecnicos
La dieta y la perdida de peso por razones esteticas (cosmeticas) son practicadas por personas de todo el mundo. Los cientfficos, desarrolladores de medicamentos y desarrolladores de alimentos han introducido en la ultima decada una variedad de supresores del apetito y/o medicamentos para perder peso y/o gamas de alimentos "saludables" para ayudar a las personas que hacen dieta en su diffcil situacion de perder peso.
La dieta no se limita a los seres humanos, sino que incluye a otros animales, con planes de dieta para mascotas siendo comunes.
Desde una perspectiva evolutiva, los animales (incluidos seres humanos) se han adaptado a atiborrarse de comida y almacenar energfa en caso de hambruna. Desafortunadamente, sin embargo, aunque esto fue util en momentos en los que la comida escaseaba, ahora en momentos en los que es posible comer constantemente, esto puede llevar al sobrepeso y, en algunos casos, a la obesidad.
La obesidad se ha convertido en un importante problema de salud publica. Las patologfas causadas o exacerbadas por la obesidad incluyen hipertension, diabetes mellitus, apnea del sueno, hipoventilacion relacionada con la obesidad, problemas de espalda y articulaciones, enfermedades cardiovasculares, enfermedad de tugado graso no alcoholico y enfermedad por reflujo gastroesofagico.
El mdice de masa corporal (IMC) (calculado como peso en kilogramos dividido por el cuadrado de la altura en metros) es la medida mas comunmente aceptada para el sobrepeso y/o la obesidad. Un IMC superior a 25 se considera sobrepeso, mientras que la obesidad se define como un IMC de 30 o mas, con un IMC de 35 o mas considerado como comorbilidad grave y un IMC de 40 o mas considerado obesidad morbida.
La obestatina es una hormona peptfdica que se produce en las celulas que revisten el estomago y el intestino delgado de varios mairnferos, incluidos los seres humanos; reduce drasticamente el apetito en ratones y se espera que haga lo mismo en seres humanos.
De manera sorprendente, la obestatina esta codificada por el mismo gen que tambien codifica la grelina, una hormona peptfdica que aumenta el apetito. Tanto la grelina como la obestatina se obtienen a partir de una prohormona producida por el mismo gen y se dividen por procesamiento postraduccional. La finalidad de este mecanismo sigue sin estar clara, sin embargo, explica los hallazgos anteriores, en particular que la eliminacion del gen de la grelina de ratones no redujo de forma significativa su apetito.
La obestatina se ha considerado para su uso como un farmaco contra la obesidad, sin embargo, se debena administrar como un aerosol nasal o mediante inyeccion, ya que el peptido es destruido por los jugos gastricos.
En la actualidad hay pocos tratamientos para la obesidad. De los dos farmacos aprobados para uso en Estados Unidos, el Xenical™ de Roche (que bloquea la digestion de la grasa) es relativamente eficaz para estimular la perdida de peso, pero tiene algunos efectos secundarios desagradables. El otro farmaco aprobado para uso en Estados Unidos es Meridia™ de los Laboratorios Abbot, que supuestamente no se ha demostrado que sea particularmente eficaz (Schaffer A.
www.slate.com/id/2117332, 26 de abril de 2005).
www.slate.com/id/2117332, 26 de abril de 2005).
Un farmaco experimental en la actualidad en ensayos es Rimonabant™ (un antagonista del receptor de cannabinoides) que supuestamente detienen los antojos en seres humanos, reduciendo de este modo los apetitos de los pacientes obesos.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Por lo tanto, existe una necesidad de una herramienta eficaz para reducir el peso, prevenir el aumento de peso, facilitar la perdida de peso y/o tratar la obesidad.
Entre los microorganismos, en particular entre las bacterias, algunos tienen una influencia positiva en el sistema inmunologico en particular las bacterias acido lacticas y las bifidobacterias, y se describen como bacterias o cepas "probioticas".
Generalmente, por bacteria o cepa probiotica se hace referencia a un microorganismo no patogeno que, cuando se ingiere, ejerce un efecto beneficioso sobre la salud o la fisiologfa del hospedador. Estas cepas probioticas generalmente tienen la capacidad de sobrevivir al paso a traves de la parte superior del tracto digestivo. No son patogenicas, no son toxicas y ejercen su efecto beneficioso sobre la salud por un lado a traves de las interacciones ecologicas con la flora residente en el tracto digestivo, y por otro lado a traves de su capacidad para influir en el sistema inmunologico de manera positiva a traves del "GALT" (tejido linfoide asociado al intestino). Dependiendo de la definicion de probioticos, estas bacterias, cuando se administran en un numero suficiente, tienen la capacidad de avanzar vivas a traves del intestino, sin embargo, no atraviesan la barrera intestinal y, por lo tanto, sus efectos principales se inducen en el lumen y/o la pared del tracto gastrointestinal. A continuacion forman parte de la flora residente durante el periodo de administracion. Esta colonizacion (o colonizacion transitoria) permite que las bacterias probioticas ejerzan un efecto beneficioso, tal la represion de microorganismos potencialmente patogenos presentes en la flora e interacciones con el sistema inmunologico del intestino.
Las cepas probioticas usadas mas comunmente, en particular en productos lacteos, son principalmente bacterias y levaduras de los siguientes generos: Lactobacillus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Bifidobacterium spp. y Saccharomyces spp.
Entre los efectos probioticos registrados por estas bacterias, se pueden mencionar por ejemplo la mejora de la tolerancia a la lactosa, potenciacion de la funcion inmunitaria, prevencion o tratamiento de infecciones gastrointestinales y urogenitales y reduccion del riesgo de cancer. Algunas bacterias probioticas se usan en la tecnica anterior para el tratamiento o prevencion de obesidad y trastornos relacionados. Por ejemplo, el documento WO02/38165 desvela el uso de una cepa de Lactobacillus plantarum 299 para reducir el riesgo de factores implicados en el smdrome metabolico. La publicacion internacional WO2004/014403 ensena el uso de Lactobacillus reuteri PRD202 y Lactobacillus fermentum NM316 para disminuir el peso corporal y para la prevencion y tratamiento de obesidad y diabetes mellitus. El documento US2005/186189 se refiere al uso de Lactobacillus rhamnosus GM- 020 para el tratamiento de obesidad y complicaciones de la misma.
Aspectos del sumario
Un hallazgo trascendental de la presente invencion es que los microorganismos, en particular las bacterias acido lacticas y/o microorganismos probioticos y/o bacterias acido lacticas probioticas, y/o un metabolito de los mismos de acuerdo con la presente invencion inducen saciedad, en particular saciedad postprandial, en un sujeto.
En particular, un hallazgo trascendental de la presente invencion es que las bacterias acido lacticas (tales como Lactobacillus acidophilus, por ejemplo la cepa PTA-4797; Lactobacillus salivarius; y/o Bifidobacterium lactis) y/o un metabolito de las mismas induce saciedad, en particular saciedad postprandial, en un sujeto.
En un aspecto la presente invencion proporciona el uso de una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo en la fabricacion de un soporte para administracion a un sujeto para el tratamiento y/o prevencion de obesidad y/o para la prevencion de una enfermedad causada por obesidad; en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus pTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolito es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el microorganismo se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo. En otro aspecto la presente invencion proporciona una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo para uso en un metodo para tratar y/o prevenir la obesidad y/o para la prevencion de una enfermedad causada por obesidad en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus PTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolito es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el microorganismo se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo. En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona un metodo no terapeutico para reducir el exceso de peso en un sujeto no obeso que comprende la administracion de una cantidad eficaz de una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo, en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus PTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolito es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el microorganismo se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo. En otro aspecto, la presente invencion proporciona el uso de una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo en la fabricacion de un soporte para administracion a un sujeto para el tratamiento y/o prevencion de obesidad y/o para la prevencion de una enfermedad causada por obesidad; en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus pTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolito es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el microorganismo se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo. En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo para uso en un metodo para tratar y/o prevenir la obesidad y/o prevenir una enfermedad causada por la
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
obesidad en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus PTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolite es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el microorganismo se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo. En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona un metodo no terapeutico para reducir el exceso de peso en un sujeto no obeso que comprende la administracion de una cantidad eficaz de una cepa de un microorganismo y/o un metabolite del mismo, en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus PTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolito es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el microorganismo se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo.
Aspectos detallados
Los aspectos detallados de la presente invencion se detallan a continuacion. en parte de algunos de los aspectos detallados se discuten en secciones separadas. Esto se hace para facilitar la referencia y no es limitante en modo alguno.
En un aspecto, la presente invencion proporciona el uso de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo para administracion a un sujeto para modular la senalizacion de la saciedad (por ejemplo, en el intestino).
En un aspecto, la presente invencion proporciona el uso de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo en la fabricacion de un soporte para administracion a un sujeto para modular la senalizacion de la saciedad (por ejemplo, en el intestino).
La expresion "modular la senalizacion de la saciedad" como se usa en el presente documento hace referencia a variar la amplitud y/o frecuencia de la senalizacion neuronal y/o endocrina asociada con la saciedad.
En algunas realizaciones, "modular la senalizacion de la saciedad" se refiere a variar la amplitud y/o frecuencia de marcadores de saciedad.
El termino "saciedad" como se usa en el presente documento se refiere al estado de estar saciado o con exceso de apetito, es decir, plenitud mas alla del deseo de estar totalmente satisfecho.
En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona el uso de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo en la fabricacion de un soporte para administracion a un sujeto para inducir la saciedad.
En otro aspecto, la presente invencion proporciona el uso de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento y/o prevencion de obesidad, y/o una enfermedad o trastorno relacionados con la obesidad.
Ademas en otro aspecto, la presente invencion proporciona un metodo para modular la senalizacion de la saciedad (por ejemplo, en el intestino) en un sujeto, metodo que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo.
En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona un metodo para inducir la saciedad en un sujeto, metodo que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo.
En el presente documento se desvela un metodo para tratar y/o prevenir el exceso de peso, incluyendo obesidad, y/o una enfermedad o trastorno causados por el exceso de peso, incluyendo una enfermedad relacionada con la obesidad en un sujeto, de todo que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo.
En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona un metodo cosmetico para reducir el exceso de peso en un sujeto no obeso, metodo que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo.
En otro aspecto la presente invencion proporciona un uso cosmetico de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo en la fabricacion de un soporte para administracion a un sujeto no obeso para inducir la saciedad.
En el presente documento se ensena un metodo para seleccionar un microorganismo y/o un metabolito del mismo para administracion a un sujeto para inducir la saciedad y/o tratar el exceso de peso, incluyendo la obesidad, en el que el metodo comprende las etapas de:
a) poner un microorganismo y/o un metabolito del mismo en contacto con al menos una celula epitelial,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
b) detectar la expresion de un marcador de saciedad (tal como protema tirosina tirosina (PYY)) en al menos una celula epitelial.
En el presente documento se desvela un metodo para seleccionar un microorganismo y/o un metabolite del mismo para preparar un soporte para administracion a un sujeto para inducir la saciedad y/o tratar el exceso de peso, incluyendo la obesidad, en el que el metodo comprende las etapas de:
a) poner un microorganismo y/o un metabolito del mismo en contacto con al menos una celula epitelial,
b) detectar la expresion de un marcador de saciedad (tal como protema tirosina tirosina (PYY)) en al menos una celula epitelial.
La celula o celulas epiteliales usadas durante las etapas a) o b) provienen preferentemente de la lmea de celulas Caco-2. se trata de una lmea de celulas de cancer de colon. Tambien pueden ser celulas aisladas y purificadas de biopsias de elementos de operaciones en seres humanos. Las celulas Caco-2 estan disponibles al publico en un numero de catalogos de lmeas celulares, tal como a partir de la ATCC (Coleccion Americana de Cultivos Tipo) con un numero HTB-37, por ejemplo.
La etapa a) se realiza preferentemente usando de 1 a 100 celulas de microorganismo por una celula epitelial que se va a someter a ensayo con al menos una celula epitelial.
El periodo de contacto, durante la etapa a), puede variar de 0 horas a 24 horas, y es preferentemente de aproximadamente 3 horas o al menos 3 horas.
Generalmente, la puesta en contacto con las celulas de acuerdo con la etapa a) se realiza bajo temperatura estandar, atmosferas modificadas y condiciones de esterilidad bien conocidas para una persona con experiencia en la materia, en particular en condiciones de cultivo de celulas epiteliales in vitro.
La etapa b) del proceso de seleccion de acuerdo con la invencion se realiza preferentemente detectando la expresion, y opcionalmente su nivel, del ARN mensajero del marcador de saciedad (tal como PYY), por ejemplo mediante PCR entre otros mediante PCR cuantitativa o mediante inmunohistoqmmica o mediante radioinmunoensayo. Para la deteccion de ARNm y su medicion se pueden usar otras tecnicas bien conocidas por una persona con experiencia en la materia.
Para algunos aspectos, el microorganismo de acuerdo con la presente invencion puede ser viable.
Para algunos aspectos, el microorganismo de acuerdo con la presente invencion puede estar muerto o no ser viable. Sin desear quedar ligado por la teona, se cree que los metabolitos, por ejemplo los metabolitos solubles, asociados con, por ejemplo producidos por, el microorganismo puede estar causando el efecto ventajoso del microorganismo. Para algunos aspectos, no es necesario por lo tanto que las celulas del microorganismo esten en contacto directo con las celulas diana.
Para algunos aspectos, se cree que uno o mas metabolitos asociados con, por ejemplo producidos por, el microorganismo pueden ser adecuados para conseguir los efectos beneficiosos que se ensenan en el presente documento. En tales casos, puede no ser necesario incluir los propios microorganismos.
La expresion "metabolito del mismo" como se usa en el presente documento se refiere a un extracto bruto de un medio de cultivo en el que un microorganismo de acuerdo con la presente invencion se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo. De forma adecuada, para algunos aspectos, el metabolito puede ser uno o mas compuestos aislados y/o purificados a partir del medio de cultivo y/o el microorganismo.
En algunos aspectos de forma adecuada el metabolito puede ser un metabolito soluble.
En algunos aspectos el metabolito puede ser un metabolito soluble en agua.
En algunos aspectos el metabolito puede ser un metabolito soluble en lfpido. De forma adecuada, el metabolito puede ser un metabolito que esta presente en la fase sobrenadante aislada a partir de un cultivo del microorganismo usando la metodologfa tal como se ensena en el documento de patente US 5.578.302 y/o de acuerdo con los ejemplos que se ensenan en el presente documento.
En un aspecto el metabolito se puede obtener (preferentemente obtener) mediante cultivo de Lactobacillus acidophilus PTA-4797, Bifidobacterium lactis 420, Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33 en un medio de cultivo hasta que la DO del cultivo a A600 alcanza al menos 0,6, preferentemente de 0,6 a 1,5; eliminacion de las bacterias mediante centrifugacion y/o filtracion (tal como, por ejemplo, centrifugacion a 25 °C, 5 min, 3000 g y/o filtracion esteril) para dar como resultado un filtrado que comprende dicho metabolito(s).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
De forma adecuada, el metabolito(s) se puede obtener (preferentemente obtener) usando un medio de cultivo de MRS ya sea con azucar al 1,0 % o sin azucar. De forma adecuada, el metabolito(s) se puede obtener (preferentemente obtener) por cultivo de las bacterias a 37 °C. De forma adecuada, el metabolito(s) se puede obtener (preferentemente obtener) por cultivo de las bacterias por via anaerobica.
En ensayos in vitro el metabolite en forma del filtrado se puede mezclar opcionalmente con celulas de cultivo tisular en un medio de cultivo tisular. Preferentemente, el filtrado que contiene el metabolito(s) se mezcla con el medio de cultivo celular de modo que la mezcla de filtrado/medio de cultivo tisular mixture comprende al menos un 10 % en v/v de filtrado y como maximo un 90 % en v/v de medio de cultivo tisular.
Cuando el metabolito(s) se carga sobre un soporte, la proporcion de mezcla de filtrado/soporte es preferentemente 1:10 o superior.
De forma adecuada, el microorganismo de acuerdo con la presente invencion se puede cocultivar con una o mas celulas diana permitiendo de ese modo la transferencia de fracciones solubles.
De forma adecuada, el microorganismo puede no estar en contacto de celula a celula con la celula(s) diana.
De forma adecuada, el microorganismo de acuerdo con la presente invencion o el metabolito del mismo puede estar en forma de una suspension bacteriana, antes o despues de su congelacion, en la forma de concentrados, Ya sea en forma seca, liofilizada o congelada. Sea cual sea la forma usada, la cepa se puede congelar.
De forma adecuada, el microorganismo y/o metabolito del mismo de acuerdo con la presente invencion puede contener diferentes aditivos. De forma adecuada los aditivos se pueden anadir durante su secado y/o durante su liofilizacion.
El microorganismo usado de acuerdo con la presente invencion, (tal como una cepa de Lactobacillus spp.; por
ejemplo una cepa de Lactobacillus acidophilus y/o L. salivarius y/o una cepa de Bifidobacterium, por ejemplo B.
612 812 lactis), puede comprender de 10 a 10 CFU de bacterias/g de soporte, y mas particularmente de 10 a 10 CFU de
bacterias/g de soporte, preferentemente de 109 a 1012 CFU/g para la forma liofilizada.
De forma adecuada el microorganismo usado de acuerdo con la presente invencion, (tal como una cepa de Lactobacillus spp.; por ejemplo una cepa de Lactobacillus acidophilus y/o L. salivarius y/o una cepa de Bifidobacterium, por ejemplo B. lactis), se puede administrar alguna dosificacion de aproximadamente 106 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismo/dosis, preferentemente de aproximadamente 108 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismo/dosis. Con el termino "por dosis" se hace referencia a que esta cantidad de microorganismo se proporciona a un sujeto ya sea al dfa o por ingesta, preferentemente al dfa. Por ejemplo, si el microorganismo se va a administrar en un soporte alimentario (por ejemplo en un yogur) - entonces el yogur contendra preferentemente de aproximadamente 108 a 1012 CFU del microorganismo. Como alternativa, sin embargo, esta cantidad de microorganismo se puede separar en multiples administraciones cada una consistiendo en una cantidad mas pequena de carga microbiana - siempre y cuando la cantidad total de microorganismo recibida por un sujeto encuentro momento espedfico (por ejemplo cada periodo de 24 h) sea de aproximadamente 106 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismo, preferentemente de 108 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismo.
De acuerdo con la presente invencion una cantidad eficaz de al menos una cepa de un microorganismo puede ser al menos 106 CFU de microorganismo/dosis, preferentemente de aproximadamente 106 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismo/dosis, preferentemente de aproximadamente 108 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismo/dosis.
En un ejemplo, preferentemente el microorganismo usado de acuerdo con la presente invencion, (tal como una cepa de Lactobacillus spp.; por ejemplo una cepa de Lactobacillus acidophilus y/o L. salivarius y/o una cepa de Bifidobacterium, por ejemplo B. lactis) se puede administrar alguna dosificacion de aproximadamente 106 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismoMa, preferentemente de aproximadamente 108 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismo/dfa. Por lo tanto, la cantidad eficaz en esta realizacion puede ser de aproximadamente 106 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismo/dia, preferentemente de aproximadamente 108 a aproximadamente 1012 CFU de microorganismo/dfa.
CFU se refiere a "unidades formadoras de colonias". Por gramo de soporte se hace referencia preferentemente al producto alimentario o al soporte farmaceuticamente aceptable.
De forma ventajosa, la presente invencion es una herramienta eficaz para reducir el aumento de peso y/o facilitar la perdida de peso y/o tratar o prevenir la obesidad y/o tratar o aliviar trastornos o enfermedades relacionadas con o causadas por la obesidad o que se convierten en sobrepeso.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Sin desear quedar ligado por la teona, el microorganismo y/o metabolito del mismo puede mediar en la perdida de peso y/o dar como resultado saciedad aumentando la senalizacion de la saciedad en el intestino.
Sin desear quedar ligado por la teona el microorganismo y/o metabolito puede mediar en la perdida de peso y/o dar como resultado saciedad mediante su efecto en una hormona intestinal y/o en uno o mas receptores encontrados en el intestino.
Alguno de los reguladores perifericos del apetito, incluyendo hormonas intestinales, se discuten en Stanley et al., Physiol. Review 85: 1131-1158 2005.
Sin desear quedar ligado por la teona el microorganismo y/o metabolito del mismo puede mediar en la perdida de peso y/o dar como resultado o saciedad mediante su efecto en un marcador de saciedad (tal como la hormona intestinal Peptido Tirosina Tirosina (PYY) por ejemplo).
Saciedad
El termino "saciedad" como se usa en el presente documento se refiere al estado de estar saciado o con exceso de apetito, es decir, plenitud mas alla del deseo de estar totalmente satisfecho.
De forma adecuada, la presente invencion puede ser para aumentar la saciedad.
Preferentemente la presente invenciones para inducir y/o aumentar la saciedad postprandial.
La persona con experiencia en la materia podna comprender que la saciedad y la saciedad postprandial se puede medir en un numero de formas.
Por ejemplo, sin desea quedar ligado por la teona existe una relacion entre el nivel de marcador(s) de saciedad (tal como la hormona intestinal PYY ya sea en la sangre o en el intestino) y el nivel de saciedad.
Por lo tanto, la saciedad y/o la saciedad postprandial se puede medir determinando el nivel de uno o mas marcadores de saciedad (por ejemplo PYY ya sea en la sangre del sujeto y/o en el intestino del sujeto). De forma adecuada las muestras se pueden tomar a intervalos antes de y a intervalos despues de que el sujeto consuma una comunidad espedfica. Por ejemplo, el aumento de los niveles de expresion de PYY y/o aumento de los niveles de PYY puede indicar saciedad. Las personas con experiencia habitual en la materia conocen las relaciones entre otros marcadores de saciedad y la saciedad.
Ademas, o como alternativa, la saciedad y/o saciedad postprandial se puede medir en estudios con animales midiendo la ingesta de alimento por parte del animal y/o el intervalo de tiempo entre la alimentacion del animal y/o el peso del animal. Una reduccion de la ingesta de alimento y/o peso del animal indica saciedad. Ademas, o como una alternativa, un aumento en el intervalo de tiempo entre la alimentacion del animal indica saciedad.
Ademas, o como alternativa, un sujeto puede medir de forma subjetiva la saciedad y/o saciedad postprandial mediante el uso de un cuestionario en el que a los sujetos se les hacen las siguientes preguntas: "^cuanta hambre tiene?", "^esta muy lleno?", "^cuanto puede comer?" y "^cual es su deseo de comer?". Su percepcion se puede clasificar de 0 (el valor mas bajo) a 10 (el valor mas elevado) en una escala analogica visual de 100 mm (tal como se ensena en Stock et al., J. of Clinical Endocrinology and Metabolism, publicado en primer lugar el 18 de enero de 2005 como doi:10.1210/jc.2004.1251). Al sujeto se le pide preferentemente que complete el cuestionario a intervalos antes y a intervalos despues de que el sujeto consuma una comida espedfica.
En algunos aspectos la saciedad puede hacer referencia a uno o mas de los siguientes:
a) saciedad postprandial;
b) una reduccion del hambre antes de las comidas;
c) un fortalecimiento de la saciedad dentro de la comida para reducir el tamano de la comida; y/o
d) un aumento del estado de saciedad entre comidas, que puede evitar los aumentos compensatorios en el numero de comidas y/o puede reducir el picoteo entre comidas.
En algunos aspectos la saciedad se puede medir como uno o mas de los siguientes:
i) una reduccion de la ingesta de alimentos por el sujeto en comparacion con un sujeto de ensayo comparativo y/o en comparacion con el tratamiento previo del sujeto;
ii) una reduccion del peso corporal del sujeto en comparacion con el tratamiento previo del sujeto;
iii) una reduccion de la adiposidad en comparacion con un sujeto de ensayo comparativo y/o en comparacion con el tratamiento previo del sujeto.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Marcador de saciedad
La expresion "marcador de saciedad" como se usa en el presente documento se refiere a un compuesto(s) y/o hormona u hormonas intestinales implicadas en la regulacion del apetito y/o ingesta de alimentos.
Los marcadores de saciedad incluyen, pero no se limitan a, polipeptido pancreatico (PYY), colecistoquinina (CCK), peptido 1 similar al Glucagon (GLP-1), insulina, leptina, grelina, orexinas, neuropeptido Y hipotalamico orexigenico (NPY), acido acetico, amilina, y oxintomodulina.
En una realizacion, el marcador de saciedad es preferentemente una hormona intestinal.
En una realizacion el marcador de saciedad puede ser uno o mas de PYY, CCK, GLP-1, insulina, leptina, grelina, orexinas, neuropeptido Y hipotalamico orexigenico (NPY), amilina o oxintomodulina.
De forma adecuada, el marcador de saciedad se puede seleccionar entre uno cualquiera aun mas de los siguientes: PYY, CCK, GLP-1 e insulina.
Sin desear quedar ligado por la teona el microorganismo y/o metabolito del mismo de la presente invencion puede inducir la saciedad aumentando los niveles en plasma de uno cualquiera o mas de: PYY, CCK, GLP-1 e insulina. El aumento se compara con un control equivalente, pero al que no se le administraron el microorganismo y/o metabolito del mismo.
En una realizacion, el microorganismo y/o metabolito del mismo de la presente invencion puede inducir saciedad aumentando los niveles de uno cualquiera o mas de los siguientes marcadores de saciedad en el intestino: PYY, CCK, GLP-1 e insulina. El aumento se compara con un control al que no se le ha administrado el microorganismo y/o metabolito del mismo.
Sin desear quedar ligado por la teona el microorganismo y/o metabolito del mismo de la presente invencion puede inducir saciedad aumentando el nivel de leptina en sangre periferica y/o mediante disminucion del nivel de leptina en el cerebro. El aumento se compara con un control al que no se le ha administrado el microorganismo y/o metabolito del mismo.
En una realizacion, el microorganismo y/o metabolito del mismo de la presente invencion puede aumentar el nivel de PYY. El aumento se compara con un control al que no se le ha administrado el microorganismo y/o metabolito del mismo.
En una realizacion alternativa o adicional, el microorganismo y/o metabolito del mismo de la presente invencion puede aumentar el nivel de CCK. El aumento se compara con un control al que no se le ha administrado el microorganismo y/o metabolito del mismo.
En otra realizacion, el microorganismo y/o metabolito del mismo de la presente invencion puede inducir saciedad disminuyendo el nivel de una o mas hormonas intestinales en el intestino y/o en el plasma tal como una cualquiera o mas de las siguientes: grelina y orexinas. La disminucion se compara con un control al que no se le ha administrado el microorganismo y/o metabolito del mismo.
En otra realizacion, el marcador de saciedad puede ser acido acetico. En esta realizacion, el microorganismo y/o metabolito del mismo de la presente invencion puede inducir saciedad aumentando el nivel de acido acetico en la sangre. El aumento se compara con un control al que no se le ha administrado el microorganismo y/o metabolito del mismo.
Soporte
El soporte usado durante el uso de acuerdo con la presente invencion es preferentemente un soporte farmaceuticamente aceptable o un producto alimentario. A continuacion se proporciona informacion adicional con respecto tanto a alimentos como a agentes farmaceuticos.
Un soporte farmaceuticamente aceptable puede ser por ejemplo un soporte en forma de comprimidos formados mediante compresion, comprimidos, capsulas, pomadas, supositorios o soluciones que se pueden beber. A continuacion se proporcionan otras formas adecuadas.
Preferentemente, el soporte usado durante el uso de acuerdo con la invencion es un producto alimentario tal como un suplemento alimentario, una bebida o un polvo a base de leche. Preferentemente es un producto lacteo de origen animal o vegetal. Como se indica a continuacion adicionalmente, en el presente documento el termino "alimento" se usa en su sentido mas amplio - y cubre alimento para seres humanos asf como alimento para animales (es decir, una alimentacion).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La expresion "producto lacteo" como se usa en el presente documento pretende hacer referencia a la inclusion de un medio que comprende leche de origen animal y/o vegetal. Como leche de origen animal se puede mencionar la leche de vaca, de oveja, de cabra o de bufalo. Como leche de origen vegetal en el presente documento se puede mencionar cualquier sustancia fermentable de origen vegetal que se pueda usar de acuerdo con la invencion, en particular con origen en sojas, arrojo cereales.
Aun mas preferentemente del soporte usado de acuerdo con la invencion es una leche fermentada o leche humanizada.
Sobrepeso/obesidad
El mdice de masa corporal (IMC) (calculado como peso en kilogramos dividido entre el cuadrado de la altura en metros) es la medicion mas comunmente aceptada para sobrepeso y/o obesidad.
Un IMC que supera 25 se considera sobrepeso.
La obesidad se define como un IMC de 30 o mas, con un IMC de 35 mas siendo considerado una comorbidez grave y un IMC de 40 o mas se considera obesidad morbida.
El termino "obesidad" como se usa en el presente documento incluye obesidad, obesidad por comorbidez y obesidad morbida. Por lo tanto, el termino "obesidad" como se usa el presente documento se puede definir que hace referencia a un sujeto que tiene un IMC mayor o igual a 30.
En algunos aspectos de forma adecuada un sujeto obeso puede tener un IMC mayor o igual a 30, de forma adecuada 35, de forma adecuada 40.
La expresion "exceso de peso" como se usa en el presente documento hace referencia al exceso de peso del sujeto. La expresion "exceso de peso" como se usa en el presente documento hace referencia a que se considera que el sujeto tiene sobrepeso. El termino "sobrepeso" como se usa en el presente documento hace referencia a que el sujeto tiene un IMC que supera 25.
El exceso de peso y/o obesidad se pueden medir usando el IMC. Por lo tanto una reduccion del exceso de peso y/o obesidad se puede medir usando el IMC.
Una reduccion en el exceso de peso y/o obesidad tambien (o como alternativa) se puede medir simplemente midiendo el peso del sujeto con respecto a un control y/o antes y despues de la administracion de los microorganismos y/o metabolito del mismo de acuerdo con la presente invencion.
Sin desear quedar ligado por la teona, tambien puede haber una relacion entre los marcadores inflamatorios en suero o sangre (tales como protema C reactiva y/o interleuquina 6 y/o TNF-RII por ejemplo) y obesidad. Ademas, Tambien puede haber una correlacion entre los marcadores inflamatorios en suero o sangre y el IMC. Por lo tanto, en una realizacion, los marcadores inflamatorios en sangre se pueden medir para determinar la obesidad y/o una reduccion de la obesidad en un sujeto.
Trastornos/enfermedades relacionados con o causados por un exceso de peso y/u obesidad
Las afecciones de la salud (es decir, trastornos y/o enfermedades) causados o exacerbados por la obesidad incluyen hipertension, diabetes mellitus, por ejemplo diabetes de tipo 2, apnea del sueno, hipoventilacion relacionada con la obesidad, problemas de espalda y articulaciones, enfermedad cardiovascular, enfermedad del tngado graso no alcoholico enfermedad de reflujo gastroesofagico.
Sujeto
El termino "sujeto", como se usa en el presente documento, hace referencia a un animal. Preferentemente con el sujeto es un mairnfero, incluyendo por ejemplo ganado (incluyendo vacuno, caballos, cerdos, pollos y ovejas), y seres humanos. En algunos aspectos of de la presente invencion el animal es un animal de comparMa (incluyendo mascotas), tales como un perro o un gato por ejemplo. En algunos aspectos de la presente invencion, en un sujeto de forma adecuada puede ser un ser humano.
Medicamento
El termino "medicamento" como se usa en el presente documento incluye medicamentos para uso tanto humano como animal y en medicina veterinaria. Ademas, el termino "medicamento" como se usa en el presente documento hace referencia a cualquier sustancia que proporcione un efecto terapeutico y/o beneficioso. El termino "medicamento" como se usa en el presente documento no esta necesariamente limitado a sustancias que necesitan Aprobacion de Marketing, pero pueden incluir sustancias que se pueden usar en cosmetica, nutraceutica, alimento
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
(incluyendo comidas y bebidas por ejemplo), cultivos probioticos, y remedios naturales. Ademas, el termino "medicamento" como se usa en el presente documento incluye un producto disenado para su incorporacion en alimentos para animales, por ejemplo alimentos para ganado y/o alimentos para mascotas.
Tratamiento
Se debe observar que en el presente documento todas las referencias a tratamiento incluyen tratamiento curativo, paliativo y profilactico.
Forma sustancialmente pura y/o forma aislada
Para algunos aspectos el microorganismo y/o metabolito de acuerdo con la presente invencion puede estar en una forma sustancialmente pura o puede estar en una forma aislada.
La expresion "forma sustancialmente pura" se usa para indicar que el microorganismo y/o metabolito de acuerdo con la presente invencion esta presente a un nivel elevado. Cuando el microorganismo y/o metabolito esta en una forma sustancialmente pura, el microorganismo y/o metabolitos es de forma deseable el componente predominante presente en una composicion. Preferentemente esta presente a un nivel de mas de un 30 %, de mas de un 50 %, de mas de un 75 %, de mas de un 90 %, o incluso de mas de un 95 %, siendo dicho nivel determinado en peso seco / una base de peso seco con respecto a la composicion total en consideracion.
A niveles muy elevados (por ejemplo, a niveles de mas de un 90 %, de mas de un 95 % o de mas de un 99 %) se puede contemplar que el componente de esta "aislado". Las sustancias biologicamente activas de la presente invencion (incluyendo polipeptidos, moleculas de acido nucleico, carbohidratos identificados/identificables mediante identificacion sistematica, lfpidos identificados/identificables mediante identificacion sistematica, restos identificados/identificables mediante identificacion sistematica, etc.) se pueden proporcionar en una forma que esta sustancialmente libre de uno o mas contaminantes con los que la sustancia se podna asociar de otro modo. Por lo tanto, por ejemplo, puede estar sustancialmente libre de uno o mas polipeptidos y/o moleculas de acido nucleico potencialmente contaminantes.
Se pueden proporcionar en una forma que este sustancialmente libre de otros componentes celulares (por ejemplo, de membranas celulares, de citoplasma, etc.). Cuando una composicion esta esencialmente libre de un contaminante dado con el contaminante estara a un nivel bajo (por ejemplo, a un nivel inferior a un 10 %, inferior a un 5 % o inferior a un 1 % basandose en el peso seco/base de peso seco que se ha establecido anteriormente).
Microorganismo
Los microorganismos viables adecuados para su uso en la presente invencion incluyen bacterias. Preferentemente, los microorganismos viables para su uso en la presente invencion son bacterias viables.
La expresion "microorganismo viable" hace referencia a un microorganismo que es metabolicamente activo.
El microorganismo puede ser un microorganismo de origen natural o puede ser un microorganismo transformado. El microorganismo tambien puede ser una combinacion de microorganismos adecuados.
El microorganismo de acuerdo con la presente invencion es Lactobacillus acidophilus PTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN0l9, o Lactobacillus salivarius 33. Preferentemente el microorganismo que se va a usar de acuerdo con la presente invencion es un microorganismo que generalmente esta reconocido como seguro y, que preferentemente esta aprobado como GRAS.
Preferentemente, el microorganismo usado de acuerdo con la presente invencion es uno que es adecuado para consumo por seres humanos y/o animales.
De forma adecuada, el microorganismo puede ser una cepa de la especie B. lactis seleccionada entre B. lactis 420 o B. lactis HN019.
Para algunas realizaciones el microorganismo puede ser una mezcla de mas de un microorganismo probiotico (preferentemente mas de una bacteria probiotica); una mezcla de mas de mas bacterias acido lacticas; o una mezcla de uno o mas microorganismos probioticos (preferentemente bacterias probioticas) y una o mas bacterias acido lacticas. Preferentemente, la mezcla puede comprender una o mas cepas de Lactobacillus spp, y/o Bifidobacterium spp.
En una realizacion preferentemente el microorganismo es al menos una cepa de Lactobacillus spp seleccionada entre Lactobacillus acidophilus PTA-4797 y Lactobacillus salivarius 33. El Lactobacillus acidophilus de acuerdo con la presente invencion es Lactobacillus acidophilus PTA-4797. Esta cepa de Lactobacillus acidophilus Ha sido registrada por Rhodia Chimie, 26, quai Alphonse Le Gallo, 92 512 BOULOGNE-BILLANCOURT Cedex Francia, de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
acuerdo con el Tratado de Budapest en la Coleccion Americana de Cultivos Tipo (ATCC), en la que se registra con el numero de registro PTA-4797.
La cepa de Lactobacillus acidophilus para uso de acuerdo con la presente invencion puede estar en forma de una mezcla con otras bacterias acido lacticas. Las bacterias acido lacticas que probablemente van a ser adecuadas De acuerdo con la invencion incluyen cualquier bacteria acido lactica usada normalmente en las industrias agncolas, alimentarias o farmaceuticas.
De forma ventajosa, cuando el producto es un producto alimentario, el microorganismo viable y/o metabolites solubles producidos por dicho microorganismo debenan permanecer eficaces durante el periodo normal de "caducidad" o fecha de "expiracion" durante la cual el producto alimentario es ofrecido para su venta por el minorista. Preferentemente con el tiempo eficaz no debena extenderse mas alla de tales fechas hasta el final del periodo normal de frescura cuando el deterioro del alimento se hace evidente. Los periodos de tiempo deseados y la vida util normal variaran de producto alimentario a producto alimentario y las personas con experiencia habitual en la materia reconoceran que los tiempos de vida util variaran dependiendo del tipo de producto alimentario, el tamano del producto alimentario, temperaturas de almacenamiento, condiciones de procesamiento, material de envasado y equipo de envasado.
Ensayo de exposicion basado en celulas caco-2
La lmea de celulas de carcinoma colorrectal humano, Caco-2, se mantiene a 37 °C y con CO2 al 5 % en MEM Modificado Con Dulbecco (Biochrom AG) suplementado con suero bovino fetal al 20 % (FBS, Gibco) glutamina estable 2 mM (Biochrom AG) y 1 X de aminoacidos no esenciales (Biochrom AG)) 20 Uml-1 de penicilina (Gibco), 20 lugml"1 de estreptomicina (Gibco) y 0,5 pgml"1 de anfotericina (Gibco). Cuando se subcultivan, las celulas se lavan con 1x PBS (Gibco) y se desprenden con Tryple Select (Gibco).
Para determinar los efectos de diversos microorganismos y/o metabolito del mismo en la hormona intestinal, tal como PYY, 6,6 x 105/cm2 de celulas Caco-2 se siembran y se diferencian en secciones de cultivo celular de Transpocillo revestido con colageno (Corning) de acuerdo con un protocolo de 5 dfas (Yamashita et al., 2001, J. Pharm. Sci. 91 (3): 669-679). Despues de la siembra en inserciones de Transpocillo las celulas Caco-2 se mantienen durante 48 h en medio que consiste en MEM modificado con Dulbecco (Biochrom AG), suero bovino fetal al 10 % (FBS, Gibco), glutamina estable 2 mM (Biochrom AG), y 1 X de aminoacidos no esenciales pero no antibioticos. Despues de 48 h el medio se cambia con medio Enterostim (BD Biosciences) suplementado con diluyente de suero MITO+ (BD Biosciences) anadido al medio de acuerdo con el protocolo proporcionado por el fabricante. Las celulas se usan en experimentos el cuarto dfa despues de la siembra en inserciones de Transpocillo o despues de que la resistencia electrica transepitelial haya aumentado a un nivel que indica la diferenciacion celular. En todos los experimentos no se usaron ni antibioticos ni suero. Los metabolitos y/o diversos microorganismos se anaden el lado apical de la insercion.
Despues de 24 horas de exposicion, el medio se descarta, las celulas dentro de las inserciones se someten a lisis y el ARN se extrae usando el Kit RNeasy Mini de Qiagen (Alemania). El ADN se digiere usando la misma DNasa sin Rnasa del fabricante. La transcripcion inversa se realiza usando la transcriptasa inversa Superscript III (Invitrogen) de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante. El patron de expresion hormonal (por ejemplo, PYY) se determina mediante PCR de TaqMan cuantitativa en tiempo real (es decir, un metodo de cuantificacion relativa - vease Holland et al., 1991 Proc. Natl. Acad. Sci. USA Aug 15; 88 (16): 7276-80; y Livak Y Scmittgen, 2001 Methods Dec; 25 (4): 402-8) usando los ajustes por defecto en un instrumento de Deteccion de Secuencias ABI Prism 7000 (Applied Biosystems)) o mediante un metodo de cuantificacion absoluta tal como PCR De TaqMan (Applied Biosystems) con el Analizador Genetico ABI Prism 7000 usando un conjunto de oligonucleotidos y un oligonucleotido patron que reconoce la hormona (por ejemplo, PYY de Homo sapiens) de forma espedfica.
La suspension microbiana para su uso en el ensayo que se ha mencionado anteriormente se puede preparar mediante cultivo del microorganismo en un medio adecuado. El cultivo se puede centrifugar para formar un sedimento celular que posteriormente se puede suspender en un medio adecuado, por ejemplo, DMEM.
La suspension de metabolitos para su uso en el ensayo que se ha mencionado anteriormente se puede preparar mediante cultivo del microorganismo en un medio de cultivo adecuado. El cultivo se puede centrifugar y/o el caldo de cultivo se puede filtrar (de forma adecuada se puede filtrar mediante esterilizacion) para proporcionar suspension del metabolito.
Los microorganismos que causan una modificacion en el nivel de expresion hormonal (por ejemplo, un aumento de PYY) en comparacion con un control sin tratar, pueden ser microorganismos de acuerdo con la presente invencion y/o que se pueden usar de acuerdo con la presente invencion.
Una persona con experiencia podna ser capaz facilmente de identificar sistematicamente microrganismos probioticos y no probioticos usando el "ensayo de exposicion basado en celulas Caco-2" para identificar microorganismos espedficos, ademas de los que se ensenan de forma espedfica en el presente documento, capaces de producir el efecto que se reivindica.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Combinacion con otros componentes
El microorganismo y/o metabolito del mismo para su uso en la presente invencion se puede usar en combinacion con otros componentes. Por lo tanto, la presente invencion tambien se refiere a combinaciones. El microorganismo y/o metabolito del mismo se puede denominar en el presente documento "la composicion de la presente invencion".
La combinacion de la presente invencion comprende la composicion de la presente invencion y otro componente que es adecuado para consumo animal o humano y es capaz de proporcionar un beneficio medico o fisiologico al consumidor.
Otros componentes de las combinacion es de la presente invencion incluyen polidextrosa, tal como Litesse®, y/o una maltodextrina y/o lactitol. Estos otros componentes se pueden anadir opcionalmente a la composicion para ayudar en el proceso de secado y para ayudar en la supervivencia de los microorganismos.
Los ejemplos adicionales de otros componentes adecuados incluyen uno o mas de: agentes espesantes, agentes gelificantes, emulsionantes, aglutinantes, modificadores cristalinos, edulcorantes (incluyendo concordantes artificiales), modificadores de reologfa, estabilizantes, antioxidantes, colorantes con enzimas, portadores, vefnculos, excipientes, diluyentes, agentes lubricantes, agentes saborizantes, material colorante, agentes de suspension, agentes disgregantes, aglutinantes de granulacion, etc. Estos otros componentes pueden ser naturales. Estos otros componentes se pueden preparar mediante uso de tecnicas qmmicas y/o enzimaticas. El microorganismo y/o metabolito del mismo se puede encapsular. El microorganismo y/o metabolito del mismo para uso en la presente invencion se puede usar en combinacion con uno o mas lfpidos.
Por ejemplo, el microorganismo y/o metabolito del mismo para uso en la presente invencion se puede usar en combinacion con una o mas micelas lipfdicas. La micela lipfdica puede ser una micela lipfdica simple o una micela lipfdica compleja.
La micela lipfdica puede ser un agregado de moleculas orientadas de sustancias anfipaticas.
Las micelas lipfdicas pueden ser un agregado, de dimensiones coloidales, de moleculas orientadas de sustancias anfipaticas que existen en equilibrio en solucion con la especie qrnmica a partir de la que se forman. Las micelas generalmente tienen carga electrica. En solucion acuosa las moleculas individuales del agregado micelar se orientan con sus grupos polares apuntando hacia el medio acuoso y su resto hidrofobo dirigido al centro de la micela.
Las micelas lipfdicas pueden comprender un lfpido y/o un aceite.
Por lo tanto en un ejemplo la presente invencion proporciona el uso de una combinacion de al menos una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo y una micela lipfdica para modular la senalizacion de la saciedad y/o para uso para tratar y/o para uso para prevenir la obesidad y/o una enfermedad causada por la obesidad.
Como se usa en el presente documento la expresion "agente espesante o gelificante" se refiere a un producto que evita la separacion disminuyendo o evitando el movimiento de las partfculas, ya sea gotitas de lfquidos inmiscibles, Aire o solidos insolubles. El espesamiento se produce cuando las moleculas hidratadas individuales producen un aumento de la viscosidad, disminuyendo la separacion. La gelificacion se produce cuando las moleculas hidratadas se unen para formar una red tridimensional que atrapa las partfculas, inmovilizandolas de ese modo.
El termino "estabilizante" como se usa en el presente documento se define como un ingrediente o combinacion de ingredientes que mantiene un producto (por ejemplo, un producto alimentario) sin cambios en el tiempo.
El termino "emulsionante" como se usa en el presente documento se refiere a un ingrediente (por ejemplo, un ingrediente de producto alimentario) que evita la separacion de emulsiones. Las emulsiones son dos sustancias inmiscibles, una presenta en forma de gotita, contenida dentro de la otra. Las emulsiones pueden consistir en aceite en agua, en el que la gotita o fase dispersa es aceite y la fase continua es agua; o agua en aceite, en la que el agua llega a la fase dispersa y la fase continua es aceite. Las espumas, que son gas en lfquido, y suspensiones, que son solido en un lfquido, tambien se pueden estabilizar a traves del uso de emulsionantes. La aireacion se puede producir en un sistema de tres fases en las que el aire queda atrapado por aceite lfquido y a continuacion se estabiliza mediante cristales de grasa aglomerados estabilizados con una emulsionante. Los emulsionantes tienen un grupo polar con una afinidad hacia el agua (hidrofilo) y un grupo no polar que es atrafdo al aceite (lipofilo). Se absorben en las superficies de contacto de las dos sustancias, proporcionando una pelfcula interfacial que actua para estabilizar la emulsion. Las propiedades hidrofilas/lipofilas de los emulsionantes se ven influidas por la estructura de la molecula. Estas propiedades se identifican mediante el valor del equilibrio hidrofilo/lipofilo (HLB). Los valores de HLB bajos indican tendencias lipofilas mas elevadas que se usan para estabilizar las emulsiones de agua en aceite. Los valores de HLB elevados se asignan a agentes emulsionantes hidrofilos, usados generalmente en emulsiones de aceite en agua. Estos valores se obtienen a partir de sistemas sencillos. Dado que a menudo los alimentos contienen otros ingredientes que influyen en las propiedades de la emulsificacion, los valores de HLB pueden no siempre ser una directriz de viable para seleccion de emulsionantes.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Como se usa en el presente documento el termino "aglutinante" se refiere a un ingrediente (por ejemplo, un ingrediente alimentario) que une el producto en conjunto a traves de una reaccion ffsica o qmmica. Durante la "gelificacion" por ejemplo, el agua se absorbe, proporcionando un efecto de union. Sin embargo, los aglutinantes pueden absorber otros lfquidos, tales como aceites, manteniendolos dentro del producto. En el contexto de la presente invencion los aglutinantes se podnan usar generalmente en productos solidos o de bajo contenido de humedad por ejemplo productos de panadena: pastas, donuts, pan y otros.
La expresion "modificador cristalino" como se usa en el presente documento se refiere a un ingrediente (por ejemplo, un ingrediente alimentario) que influye en la cristalizacion de cualquiera de la grasa o el agua. La estabilizacion de los cristales de hielo es importante por dos razones. La primera esta relacionada directamente con la estabilidad del producto a partir de un punto de vista de separacion. Cuantos mas ciclos de congelacion/descongelacion experimenta un producto, los cristales de hielo o se hacen mas grandes. Estos cristales grandes pueden descomponer la estructura del producto, ya sea de forma natural, como es el caso de las paredes celulares, o por el caso en el que se crea por "elacion". Dado que el agua ya no se mantiene en su sitio, el producto puede presentar sineresis, o separacion, despues de la descongelacion. En segundo lugar, en el caso de un producto que se consume congelado, estos cristales grandes dan como resultado una sensacion arenosa en la boca, no deseable.
"Excipientes" o "vefnculos" se refieren a materiales adecuados para la administracion del compuesto incluyen cualquiera de tales materiales conocidos en la tecnica tales como, por ejemplo, cualquier lfquido, gel, disolvente, diluyente lfquido, solubilizante, o similar, que no es toxico y que no interactua con cualquier otro componente de la composicion de una manera perjudicial.
Los ejemplos de vefnculos nutricionalmente aceptables incluyen, por ejemplo, agua, soluciones salinas, alcohol, silicona, aceras, vaselina, aceites vegetales, polietilenglicoles, propilenglicol, liposomas, azucares, gelatina, lactosa, amilosa, estearato de magnesio, talco, tensioactivos, acido silfcico, parafina viscosa, aceite de perfume, monogliceridos y digliceridos de acidos grasos, esteres de acidos grasos de petroetral, hidroximetil-celulosa, polivinilpirrolidona, y similares.
Los ejemplos de excipientes incluyen uno o mas de: celulosa microcristalina y otras celulosas, lactosa, citrato sodico, carbonato calcico, fosfato calcico dibasico, glicina, almidon, del azucar de leche y polietilenglicoles de alto peso molecular.
Los ejemplos de agentes disgregantes incluyen uno o mas de: almidon (preferentemente almidon de mafz, patata o tapioca), glicolato de almidon sodico, croscarmelosa sodica y ciertos silicatos complejos.
Los ejemplos de aglutinantes de granulacion incluyen uno o mas de: polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxipropilcelulosa (HPC), sacarosa, maltosa, gelatina y goma arabiga.
Los ejemplos de agentes lubricantes incluyen uno o mas de: estearato de magnesio, acido estearico, behenato de glicerilo y talco.
Los ejemplos de diluyentes incluyen uno o mas de: agua, etanol, propilenglicol glicerina, y combinaciones de los mismos.
Los otros componentes se pueden usar de forma simultanea (por ejemplo, cuando se anaden en una mezcla en conjunto o cuando se administran mediante diferentes vfas) o de forma secuencial (por ejemplo, se pueden administrar mediante diferentes rutas).
Preferentemente, cuando la composicion de la presente invencion se mezcla con cualquier otro componente, Los microorganismos permanecen viables.
Como se usa en el presente documento la expresion "componente adecuado para consumo animal o humano" se refiere un compuesto que se anadio se puede anadir a la composicion de la presente invencion como un suplemento que puede tener un beneficio nutricional, un sustituto de fibra o puede tener un efecto generalmente beneficioso para el consumidor. Los ingredientes se pueden usar en una amplia variedad de productos que necesitan gelificacion, texturizacion, estabilizacion, suspension, formacion de pelfcula y estructuracion, deteccion de jugosidad, sin anadir viscosidad innecesaria. Preferentemente, los ingredientes seran capaces de mejorar el periodo de almacenamiento y estabilidad del cultivo viable.
Los componentes pueden ser prebioticos tales como alginato, xantano, pectina, goma de algarrobo (LBG), inulina, goma guar, galacto-oligosacarido (GOS), fructo-oligosacarido (FOS), polidextrosa (es decir, Litesse®), lactitol, lactosacarosa, oligosacaridos de soja, palatinosa, isomalto-oligosacaridos, gluco-oligosacaridos y xilo- oligosacaridos.
La cantidad optima de la composicion que se va a usar en la combinacion de la presente invencion dependera del producto que se va a tratar y/o el metodo de cuesta en contacto el producto con la composicion y/o el uso pretendido
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
para la misma. La cantidad de microorganismos viable usado en las composiciones debena ser una cantidad suficiente para ser eficaz y para permanecer suficientemente eficaz para mejorar el aroma, sabor, suavidad, consistencia, textura, cuerpo, sensacion en boca, viscosidad, estructura y/o propiedades organolepticas, beneficios nutricionales y/o de salud de productos alimentarios que contienen dicha composicion. Este periodo de tiempo para eficacia se debena prolongar hasta al menos el momento de la utilizacion del producto.
Concentrados
Las composiciones para uso en la presente invencion pueden estar en forma de concentrados. Generalmente, estos concentrados comprenden una concentracion sustancialmente elevada de un microorganismo viable y/o un metabolito del mismo. El microorganismo y/o metabolito del mismo en el presente documento se puede denominar "la composicion de la presente invencion" o "composiciones".
Los polvos, granulos y composiciones lfquidas en forma de concentrados se pueden diluir con agua o se pueden volver a suspender en agua u otros diluyentes adecuados, por ejemplo, un medio de crecimiento apropiado como leche o aceites minerales o vegetales, para dar composiciones listas para usar.
Las combinaciones de la presente invencion en forma de concentrados se pueden preparar de acuerdo con metodos conocidos en la tecnica.
En un aspecto de la presente invencion, el producto se pone en contacto con una composicion en una forma concentrada. Preferentemente, el producto se pone en contacto con una composicion secada por pulverizacion y/o resuspendida.
Las composiciones de la presente invencion se pueden secar por pulverizacion o se pueden liofilizar con metodos conocidos en la tecnica.
Los procesos habituales para hacer partfculas usando un proceso de secado por pulverizacion implican un material solido que se disuelve en un disolvente apropiado (por ejemplo, un cultivo de un microorganismo en un medio de fermentacion). Como alternativa, el material se puede suspender o se puede emulsionar en un no disolvente para formar una suspension o emulsion. En esta etapa se pueden anadir opcionalmente otros ingredientes (como se ha discutido anteriormente) o componentes tales como agentes antimicrobianos, agentes estabilizantes, colorantes y agentes que ayudan con el proceso de secado.
A continuacion la solucion se atomiza para formar una fina niebla de gotitas. Las gotitas entran inmediatamente en una camara de secado en la que entran en contacto con un gas de secado. El disolvente se evapora de las gotitas en el gas de secado para solidificar las gotitas, formando de ese modo partfculas. A continuacion las partfculas se separan del gas de secado y se recogen.
Productos
En la presente invencion se puede usar cualquier producto que se pueda beneficiar de la composicion. Estos incluyen, pero no se limitan a, conservas de frutas y productos lacteos y productos obtenidos a partir de productos lacteos, cosmeticos y productos farmaceuticos. En el presente documento el microorganismo y/o metabolito del mismo se puede denominar "la composicion de la presente invencion" o "la composicion".
A modo de ejemplo, la composicion de la presente invencion se puede usar como un ingrediente para refrescos, un zumo de fruta o una bebida que comprende protema de suero de leche, infusiones de salud, bebidas de cacao y bebidas de bacterias acido lacticas, yogur y yogur para beber, queso, helado, helados de hielo y postres, confitena, pasteles de bizcocho y mezclas de pasteles, bocadillos, comidas y bebidas equilibradas, rellenos de frutas, glaseados, rellenos de chocolate, rellenos con sabor a carta de queso, relleno de pasteles con sabor a frutas, pasteles y glaseado, cremas de relleno de panadena instantanea, rellenos para galletas, relleno de panadena listo para usar, relleno de calonas reducidas, bebida nutricional para adultos, bebida de soja/zumo acidificada, bebida de chocolate aseptica/mezclada, mezclas de barras, polvos de bebida, leche de soja/pura y de chocolate enriquecida con calcio, bebida de cafe enriquecida con calcio.
La composicion se puede usar adicionalmente como un ingrediente en productos alimentarios tales como salsa de queso americana, agente antiaglomerante para queso rallado y desmenuzado, salsa de chips, queso crema, crema agria sin grasa con cobertura abatida mezclada seca, crema batida lactea congelada/descongelada, puntas batidas estables congeladas/descongeladas, queso Cheddar natural bajo en grasa y ligero, yogur bajo en grasa estilo suizo, postres congelados aireados, helado en envase duro, etiqueta ecologica, econoirna mejorada y tolerancia de helado con envase duro, helado con bajo contenido de grasa: servicio suave, salsa barbacoa, salsa para mojar de queso, aderezo de queso Cottage, salsa Alfredo mezcla seca, salsa de queso mezcla, salsa de tomate mezcla seca y otros.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Para ciertos aspectos, la presente invencion se puede usar preferentemente en relacion con la produccion de yogur, tal como de vida de yogur fermentado, yogur, yogur para beber, queso, crema fermentada, postres a base de leche y otros.
De forma adecuada, la composicion se puede usa tradicionalmente como un ingrediente en una o mas de las aplicaciones de queso, aplicaciones de carne o aplicaciones que comprenden cultivos protectores.
La presente invencion tambien proporciona un metodo para preparar un alimento o un ingrediente alimentario, el metodo comprendiendo la mezcla de la composicion de acuerdo con la presente invencion con otro ingrediente alimentario.
De forma ventajosa, la presente invencion se refiere a productos que se han puesto en contacto con la composicion de la presente invencion (y opcionalmente con otros componentes/ingredientes), en la que la composicion se usa en una cantidad que puede mejorar los beneficios del producto para la nutricion y/o para la salud.
Como se usa en este documento, la expresion "que se pone en contacto" se refiere a la aplicacion directa o indirecta de la composicion de la presente invencion al producto. Los ejemplos de los metodos de aplicacion que se pueden usar incluyen, pero no se limitan a, tratamiento del producto en un material que comprende la composicion, aplicacion directa mezclando la composicion con el producto, pulverizacion de la composicion sobre la superficie del producto o inmersion del producto en una preparacion de la composicion.
Cuando el producto de la invencion es un producto alimentario, la composicion de la presente invencion se mezcla preferentemente con el producto. Como alternativa, la composicion se puede incluir en la emulsion o ingredientes sin procesar de un producto alimentario. En una alternativa adicional, la composicion se puede aplicar como condimento, glaseado, mezcla de colorante y similares.
Para algunas aplicaciones, es importante hacer que la composicion este disponible en o sobre la superficie de un producto en el que se va a influir/tratar. Esto permite que la composicion proporcione una o mas de las siguientes caractensticas favorables: beneficios de para la nutricion y/o para la salud.
Las composiciones de la presente invencion se pueden aplicar para entremezclar, revestir y/o impregnar un producto con una cantidad controlada de un microorganismo viable.
Alimento
La composicion de la presente invencion se puede usar como - o en la preparacion de - un alimento. En el presente documento, el termino "alimento" se usa en un sentido amplio - y abarca alimento tanto para seres humanos como alimento para animales (es decir, un pienso). En un aspecto preferente, la comida es para consumo humano.
El alimento puede estar en forma de una solucion o como un solido - dependiendo del uso y/o el modo de aplicacion y/o el modo de administracion.
Cuando se usa como - o en la preparacion de - un alimento - tal como alimento funcional - la composicion de la presente invencion se puede usar en conjunto con uno o mas de: un vehfculo nutricionalmente aceptable, un diluyente nutricionalmente aceptable, un excipiente nutricionalmente aceptable, un adyuvante nutricionalmente aceptable, un ingrediente nutricionalmente activo.
Preferentemente, la composicion se usa para fermentar la leche o leche reforzada con sacarosa o medio lactico con sacarosa y/o maltosa, en la que el medio resultante que contiene todos los componentes de la composicion - es decir, dicho microorganismo de acuerdo con la presente invencion - se puede anadir como un ingrediente a leche de yogur en concentraciones adecuadas - tal como por ejemplo en concentraciones en el producto final que ofrecen una dosis diaria de 106-1010 cfu. El microorganismo de acuerdo con la presente invencion se puede usar antes o despues de la fermentacion del yogur.
Para algunos aspectos los microorganismos de acuerdo con la presente invencion se usan como - o en la preparacion de - piensos para animales, tales como ganado para animales, en particular piensos para aves de corral (tales como pollos) o alimentos para mascotas.
Ingrediente alimentario
La composicion de la presente invencion se puede usar como ingrediente alimentario y/o ingrediente alimenticio.
Como se usa en el presente documento, la expresion "ingrediente alimentario" o "ingrediente alimenticio" incluye una formulacion que se puede anadir a alimentos funcionales o alimentos comestibles como un suplemento nutricional.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
El ingrediente alimentario puede estar en forma de una solucion o como un solido - dependiendo del uso y/o el modo de aplicacion y/o el modo de administracion.
Suplementos alimenticios
La composicion de la presente invencion puede ser - o se puede anadir a, suplementos alimentarios.
Alimentos funcionales
La composicion de la presente invencion puede ser - o se puede anadir a, a alimentos funcionales.
Tal como se usa en el presente documento, la expresion "alimento funcional" se refiere a alimento que es capaz de proporcionar no solo un efecto nutricional, sino que tambien es capaz de proporcionar un efecto beneficioso adicional al consumidor.
En consecuencia, los alimentos funcionales son alimentos habituales que tienen componentes o ingredientes (tales como los que se describen en el presente documento) incorporados en ellos que imparten al alimento un efecto funcional espedfico - por ejemplo, beneficio medico o fisiologico - aparte de un efecto puramente nutricional.
Aunque no existe una definicion legal de un alimento funcional, la mayona de las partes interesadas con interes en este area estan de acuerdo en que son alimentos comercializados que tienen efectos espedficos para la salud mas alla de los efectos nutricionales basicos.
Algunos alimentos funcionales son nutraceuticos. En el presente documento, el termino "nutraceutico" se refiere a un alimento que es capaz de proporcionar no solo un efecto nutricional y/o una satisfaccion de sabor, sino que tambien es capaz de proporcionar un efecto terapeutico (u otro beneficio) al consumidor. Los nutraceuticos cruzan las lmeas divisorias tradicionales entre alimentos y medicina.
Las encuestas han sugerido que los consumidores ponen el mayor enfasis en las demandas de alimentos funcionales relacionados con enfermedades del corazon. La prevencion del cancer es otro aspecto de la nutricion que interesa mucho a los consumidores, pero curiosamente esta es el area en la que los consumidores sienten que pueden ejercer el menor control. De hecho, segun la Organizacion Mundial de la Salud, al menos un 35 % de los casos de cancer estan relacionados con la dieta. Ademas, las demandas relacionadas con efectos de osteoporosis, salud intestinal y obesidad tambien son factores fundamentales que probablemente pueden incitar a la compra de alimentos funcionales y fomentar el desarrollo del mercado.
Probiotico
Para algunas aplicaciones, se cree que los microorganismos viables de acido lactico en la composicion de la presente invencion pueden ejercer un efecto de cultivo probiotico. Dentro del alcance de la presente invencion tambien esta anadir a la composicion de la presente invencion otros probioticos y/o prebioticos.
En el presente documento, un prebiotico es:
"un ingrediente alimentario no digerible que afecta de manera beneficiosa al hospedador al estimular de forma selectiva el crecimiento y/o la actividad de una o un numero limitado de bacterias beneficiosas".
La expresion "cultivo probiotico", como se usa en el presente documento, define microorganismos vivos (incluidas bacterias o levaduras, por ejemplo) que, cuando se ingieren o se aplican de forma local en cantidad suficiente, afecta de manera beneficiosa al organismo hospedador, es decir, le confiere uno o mas beneficios para la salud demostrables en el organismo hospedador. Los probioticos pueden mejorar el equilibrio microbiano en una o mas superficies de mucosa. Por ejemplo, la superficie de mucosa puede ser el intestino, el tracto urinario, el tracto respiratorio o la piel. El termino "probiotico", como se usa en el presente documento, tambien abarca microorganismos vivos que pueden estimular las ramas beneficiosas del sistema inmunologico y al mismo disminuye las reacciones inflamatorias en una superficie de la mucosa, por ejemplo, el intestino.
Aunque no hay lfmites inferiores o superiores para la ingesta de probioticos, se ha sugerido que al menos 106-1012, preferentemente al menos 106-1010, preferentemente lO^-l 09, cfu como una dosis diaria sera eficaz para conseguir los efectos beneficiosos para la salud en un organismo hospedador, tal como un ser humano.
Ademas del efecto probiotico que puede tener el microorganismo de acuerdo con la presente invencion, dentro del alcance de la presente invencion tambien esta proporcionar prebioticos como otros compuestos que se pueden incluir en una combinacion junto con la composicion. En el presente documento el microorganismo de acuerdo con la presente invencion y/o un metabolito del mismo se puede denominar "la composicion". El componente prebiotico de la combinacion que comprende la composicion de la presente invencion se caracteriza por una fermentacion lenta en el intestino grueso. Los prebioticos de ese tipo pueden ejercer un efecto positivo sobre la flora intestinal, de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
forma espedfica en el lado izquierdo del colon, un area del intestino que es especialmente propensa a trastornos, en particular cancer intestinal y colitis ulcerosa.
Los prebioticos generalmente son carbohidratos no digeribles (oligo- o polisacaridos) o un alcohol de azucar que no se degrada ni se absorbe en el tracto digestivo superior. Los prebioticos conocidos usados en productos comerciales y utiles de acuerdo con la presente invencion incluyen inulina (fructo-oligosacarido o FOS) y transgalacto- oligosacaridos (GOS o TOS). Otros prebioticos adecuados incluyen oligosacarido palatinosa, oligosacarido de soja, gentiooligosacarido, xilooligomeros, almidon no degradable, lactosacarosa, lactulosa, lactitol, maltitol, polidextrosa (es decir, Litesse®) o similares.
En una realizacion la presente invencion se refiere a la combinacion de un microorganismo y/o metabolito del mismo de acuerdo con la presente invencion con un prebiotico.
El prebiotico para uso en esta combinacion puede ser uno o mas de los siguientes: inulina (fructo-oligosacarido, o FOS) y transgalacto-oligosacaridos (GOS o TOS). Otros prebioticos adecuados incluyen oligosacarido palatinosa, oligosacarido de soja, gentiooligosacarido, xilooligomeros, almidon no degradable, lactosacarosa, lactulosa, lactitol, maltitol, polidextrosa (es decir, Litesse®), o lactitol.
El prebiotico se puede administrar de forma simultanea con (por ejemplo, en mezcla junto con o se puede administrar de forma simultanea mediante la misma o diferentes vfas) o de forma secuencial (por ejemplo, con la misma o diferentes vfas) el microorganismo de acuerdo con la presente invencion y/o un metabolito del mismo.
La presente invencion contempla el uso de un microorganismo y/o un metabolito del mismo en combinacion con un prebiotico en la fabricacion de un medicamento para uso en la induccion de saciedad y/o para tratar o prevenir el exceso de peso u obesidad.
Simbioticos
A presente invencion tambien contempla el uso tanto de pre- como de probioticos como ingredientes en combinacion. Con la composicion de la presente invencion que cuando se combinan se convierten en sinbioticos. En el presente documento el microorganismo de acuerdo con la presente invencion y/o un metabolito del mismo se puede denominar " la composicion". La finalidad de esto es combinar los efectos de nuevas bacterias beneficiosas y la estimulacion de las bacterias beneficiosas del propio organismo. Existe un potencial elevado en el desarrollo y en el consumo de mezclas de ese tipo, ya que algunas de estas pueden mostrar un buen efecto nutricional sinergico potente y/o efectos para la salud.
Por lo tanto la composicion de la presente invencion se puede disenar de forma espedfica para que contenga diferentes componentes que pueden proporcionar un efecto sinbiotico al consumidor.
Producto farmaceutico
La composicion de la presente invencion se puede usar como - o en la preparacion de - un producto farmaceutico. En el presente documento, la expresion "producto farmaceutico" se usa en un amplio sentido - y cubre productos farmaceuticos para seres humanos asf como productos farmaceuticos para animales (es decir, aplicaciones en veterinaria). En un aspecto preferente, el producto farmaceutico es para uso humano y/o para ganadena.
El producto farmaceutico puede ser para fines terapeuticos - que pueden ser de naturaleza curativa o paliativa o preventiva. El fruto farmaceutico puede ser incluso para fines de diagnostico.
Cuando se usa como - o en la preparacion de - un producto farmaceutico, la composicion de la presente invencion se puede usar en conjunto con uno o mas de: un vehnculo farmaceuticamente aceptable, un diluyente farmaceuticamente aceptable, un excipiente farmaceuticamente aceptable, un adyuvante farmaceuticamente aceptable, un ingrediente farmaceuticamente activo.
El producto farmaceutico se puede presentar en forma de una solucion o como un solido - dependiendo del uso y/o el modo de aplicacion y/o el modo de administracion.
Ingrediente farmaceutico
Los microorganismos de la presente invencion se pueden usar con ingredientes farmaceuticos. En el presente documento, la composicion puede ser el unico componente activo o puede ser al menos uno de un numero (es decir, 2 o mas) de componentes activos.
El ingrediente farmaceutico puede estar en forma de una solucion o con un solido - dependiendo del uso y/o el modo de aplicacion y/o el modo de administracion.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Formas
El microorganismo de la presente invencion y/o un metabolite del mismo se puede usar en cualquier forma adecuada - ya sea cuando esta solo o cuando esta presente en una composicion con otros componentes o ingredientes. En el presente documento el microorganismo de la presente invencion y/o un metabolite del mismo se puede denominar "la composicion". Del mismo modo, las combinaciones que comprenden la composicion de la presente invencion y otros componentes y/o ingredientes (es decir, ingredientes - tales como ingredientes alimentarios, ingredientes alimentarios funcionales o ingredientes farmaceuticos) se pueden usar en cualquier forma adecuada.
El microorganismo de la presente invencion se puede usar en forma de preparaciones solidas o lfquidas o alternativas de las mismas. Los ejemplos de preparaciones solidas incluyen, pero no se limitan a, comprimidos, capsulas, polvos finos, granulos y polvos que se pueden humectar, secar por pulverizacion o liofilizar. Los ejemplos de preparaciones lfquidas incluyen, pero no se limitan a, soluciones acusas, organicas o acuosas-organicas, suspensiones y emulsiones.
Los ejemplos adecuados de formas incluyen uno o mas de: comprimidos, pfldoras, capsulas, ovulos, soluciones o suspensiones, que pueden contener agentes aromatizantes o colorantes, para aplicaciones de liberacion inmediata, retardada, modificada, sostenida, pulsada o controlada.
A modo de ejemplo, si la composicion de la presente invencion se usa en forma de comprimido - tal como para su uso como un ingrediente funcional - los comprimidos tambien pueden contener uno o mas de: excipientes tales como celulosa microcristalina, lactosa, citrato sodico, carbonato de calcio, fosfato de calcio dibasico y glicina; agentes disgregantes tales como almidon (preferentemente almidon de mafz, patata o tapioca), almidon glicolato sodico, croscarmelosa sodica y ciertos silicatos complejos; aglutinantes de granulacion tales como polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxipropilcelulosa (HPC), sacarosa, gelatina y goma arabiga; se pueden incluir agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, acido estearico, behenato de glicerilo y talco.
Los ejemplos de vehteulos nutricionalmente aceptables para su uso en la preparacion de las formas incluyen, por ejemplo, agua, soluciones salinas, alcohol, silicona, ceras, vaselina, aceites vegetales, polietilenglicoles, propilenglicol, liposomas, azucares, gelatina, lactosa, amilosa, estearato de magnesio, talco, tensioactivos, acido silteico, parafina viscosa, aceite de perfume, monogliceridos y digliceridos de acidos grasos, esteres de acidos grasos de petroetral, hidroximetil-celulosa, polivinilpirrolidona y similares.
Los excipientes preferentes para las formas incluyen lactosa, almidon, una celulosa, azucar de leche o polietilenglicoles de alto peso molecular.
Para suspensiones acuosa y/o elixires, la composicion de la presente invencion se puede combinar con diversos agentes edulcorantes o saborizantes, material colorante o colorantes, con agentes emulsionantes y/o de suspension y con diluyentes tales como agua, propilenglicol glicerina, y combinaciones de los mismos.
Las formas tambien pueden incluir capsulas de gelatina; capsulas de fibra, comprimidos de fibra, etc.; o incluso bebidas de fibra.
Los ejemplos adicionales de formas estan en la forma de una crema por ejemplo. Para algunos aspectos el microorganismo y/o un metabolito del mismo se puede incluir en cremas farmaceuticas y/o cosmeticas tales como cremas solares y/o cremas para despues del sol por ejemplo.
En un aspecto, la composicion de acuerdo con la presente invencion se puede administrar en un aerosol, por ejemplo a modo de una pulverizacion nasal, por ejemplo para administracion al tracto respiratorio.
Ejemplos
La presente invencion se describira a continuacion, solamente a modo de ejemplo, en la que se puede hacer referencia a las siguientes figuras:
La Figura 1 muestra el patron de expresion genetica del Peptido YY (PYY) en celulas Caco-2 tratadas con L. acidophilus. Los datos normalizaron con respecto a la cantidad de ARN. El mdice de diferencia se calculo al igual que en Livak y Schmittgen, 2001;
La Figura 2 muestra el efecto de medio de cultivo acondicionado con L. acidophilus en la expresion de PYY en celulas Caco-2;
La Figura 3 muestra la expresion genetica de PYY despues de exposicion a diferentes microorganismos que tienen propiedades probioticas;
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La Figura 4 muestra el efecto de celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus; micelas lip^dicas simples y una combinacion de las mismas en la expresion de PYY en celulas Caco-2 diferenciadas;
La Figura 5 muestra los efectos de metabolites de L. acidophilus; micelas lipfdicas complejas y una combinacion de los mismos en la expresion de PYY en celulas Caco-2 diferenciadas; y
La Figura muestra el efecto de sobrenadante sin celulas NCFM de L. acidophilus y bacterias en la expresion de PYY; y
La Figura 7 muestra el efecto de L. curvatus 853 en la expresion de PYY.
Ejemplo 1
Analizar el patron de expresion genetica del peptido YY (PYY) en celulas Caco-2 tratadas con L. acidophilus.
Metodo:
La lmea de celulas de carcinoma de colon humano, Caco-2, se cultivo en inserciones de cultivo celular semiporoso y se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de diferenciacion de 5 dfas usando medios de diferenciacion (DM) formados por medio Entero-STIM suplementado con diluyente de suero MITO+ y que no contema antibioticos. La diferenciacion se monitorizo usando mediciones de TER y medicion de actividad de fosfatasa alcalina.
Las bacterias Lactobacillus acidophilus (cepa PTA-4797) se cultivaron en caldo de cultivo de MRS suplementado con glucosa al 1 % (peso/vol) hasta que la DO600 alcanzo 0,6-0,7. El tratamiento de L. acidophilus se anadio en el lado apical de la insercion del cultivo celular y se incubo durante 24 horas. el ARN se aislo de las celulas de acuerdo con el protocolo que se proporciona en el kit RNeasy mini (Qiagen), y el ADNc se sintetizo usando transcriptasa inversa Superscript III (Invitrogen). El patron de expresion geneticas en monitorizo usando el Verde SYBR (Applied Biosystems) con el Analizador Genetico ABI Prism 7000 con cebadores espedficos para el peptido YY de Homo sapiens. El cebador directo fue: 5' GGA GGC CTC AGC TTG ACC 3' y el cebador inverso: 5'tGc GCA CGA ACA CCA TAG 3'. El ciclo del umbral obtenido (Ct), que es el ciclo de PCR en el cual la intensidad de fluorescencia cruza un valor de umbral de fondo, se transformo en valor de expresion relativo usando el metodo de Livak et al. (2001).
Como un control, las celulas Caco-2 crecieron del mismo modo en inserciones de cultivo celular sin tratamiento con L. acidophilus.
Resultados:
Los resultados de la actividad de fosfatasa alcalina asf como las mediciones de TER indican que las celulas se diferenciaron bien (los datos no se muestran).
EL analisis de expresion genetica muestra la expresion del peptido YY (PYY) marcador de saciedad. La expresion del peptido YY (PYY) aumento con un 255 % cuando se compara con el control cuando las celulas CaCo-2 se trataron con L. acidophilus (p < 0,05, ANOVA) (Figura 1).
El L. acidophilus - tratamiento de celulas Caco-2 aumento la expresion de un marcador de saciedad, el peptido YY. El resultado indica que el consumo de Lactobacillus acidophilus pueda aumentar la saciedad postprandial mediante el aumento de la senalizacion de saciedad en el intestino.
Ejemplo 2
Experimento in vitro que imita al alimento con glucosa
Experimento con celulas Caco-2 diferenciadas. Efecto de caldo de cultivo acondicionado con L. acidophilus en celulas tratadas con diversas cantidades de glucosa
Las celulas Caco-2 se cultivaron en inserciones de cultivo celular semiporoso y se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de diferenciacion de 5 dfas usando medios de diferenciacion (DM) formados por medio Entero-STIM suplementado con diluyente de suero MITO+ y que no contema antibioticos. La diferenciacion se monitorizo usando mediciones de TER y medicion de actividad de fosfatasa alcalina. El cuarto dfa del experimento, el medio se cambio por un medio que no contema glucosa en ambos lados de la insercion y las celulas se privaron de glucosa durante 24 h.
Los tratamientos de las celulas Caco2 consistieron en celulas de control, que se trataron en el lado apical con medio que contema glucosa 0,5 mM, y 5 mM, y celulas de ensayo, que se trataron en el lado apical con medio que contema glucosa 0,5 mM, y 5 mM con adicion simultanea de tratamiento con L. acidophilus. Ademas, control se
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
incluyeron celulas Caco2 sin ninguna adicion medio que contuviera glucosa en el lado apical. En todos los pocillos se anadio glucosa 5 mM en el lado basal. Las celulas se incubaron durante 24 h a 37 °C, Co2 al 5 %.
Las bacterias L. acidophilus se cultivaron en caldo de cultivo de MRS que no contema azucar hasta que la DO600 alcanzo 0,6-0,7. Las celulas se centrifugaron y el caldo de cultivo se filtro con esterilizacion y se uso en los medios de ensayo.
El ARN se aislo de las celulas Caco2 de acuerdo con el protocolo proporcionado por el kit RNeasy mini (Qiagen), y el ADNc se sintetizo usando la transcriptasa inversa Superscript III (Invitrogen). El patron de expresion genetica de PYY se monitorizo usando la qmmica de sonda TaqMan (Applied Biosystems) con el Analizador Genetico ABI Prism 7000 usando un conjunto de oligonucleotidos que reconodan el PYY de Homo sapiens de forma espedfica.
Los oligonucleotidos inclman: cebador directo: 5' GGA GGC CTC AGC TTG ACC 3', cebador inverso: 5'TGC GCA CGA ACA CCA TAG 3', y una sonda: sonda Universal ProbeLibrary N.° 10 (Roche). El ciclo del umbral obtenido (Ct), que es el ciclo de PCR en el cual la intensidad de fluorescencia cruza un valor de umbral de fondo, se transformo en valor cuantitativo absoluto usando una curva patron a partir de oligonucleotidos sinteticos cuantificados que representaban la secuencia antisentido de la transcripcion diana que muestra la relacion lineal log inversa entre el numero de copias y el ciclo de PCR (Nurmi et al., 2005 Nutrition and Cancer 51 (1): 83-92.) La secuencia de este oligonucleotido convencional es: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG CGA TAG CTT GTG AAG CAG ACG AGC AGG AGG TGG AAG GCG AGG GAA GTC CCA AGG GCT GCA CTG CCG CAG GTC AAG CTG AGG CCT CC 3'.
Resultados
Los resultados de la actividad de fosfatasa alcalina asf como las mediciones de TER indican que las celulas estaban bien diferenciadas (los datos nos muestran).
Los resultados se muestran en la Figura 2.
La adicion de caldo de cultivo de L. acidophilus aumento o la expresion de PYY en 1,3 veces en las muestras que conteman glucosa 0,5 mM (p < 0,05, ANOVA) y 2 veces en las muestras que conteman grupos 5 mM (p < 0,05) en comparacion con el control respectivo con una cantidad de glucosa similar). El cocultivo de L. acidophilus junto con celulas Caco2 aumento la expresion de PYY en 1,7 veces en las muestras que conteman glucosa 0,5 mM, and y en 2 veces en las muestras que conteman glucosa 5 mM en comparacion con las respectivas celulas de control con valores similares de glucosa.
Ejemplo 3
Experimentos in vitro con otros probioticos
Las celulas Caco-2 se cultivaron en inserciones de cultivo celular semiporoso y se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de diferenciacion de 5 dfas usando medios de diferenciacion (DM) formados por medio Entero-STIM suplementado con diluyente de suero MITO+ y que no contema antibioticos. La diferenciacion se monitorizo usando mediciones de TER y medicion de actividad de fosfatasa alcalina.
Los tratamientos de las celulas Caco2 consistieron en celulas de control, que se trataron con medio de cultivo de Caco-2, y celulas de ensayo, que se trataron con caldo de cultivo prebiotico en medio de cultivo de Caco-2. Ademas, se incluyeron las celulas Caco2 de control con adicion de caldo de cultivo de MRS diluido en medio de cultivo de Caco-2. Las celulas se incubaron durante 24 horas a 37 °C, CO2 al 5 %.
Las bacterias pro bioticas se cultivaron en caldo de cultivo de MRS suplementado con un 1 % (peso/vol) de glucosa hasta que la DO600 alcanzo 0,6-0,7. Las celulas se centrifugaron y el caldo de cultivo se filtro con esterilizacion y se uso en el medio de ensayo. Las cepas probioticas sometidas a ensayo incluyeron las siguientes cepas comercializadas: B. lactis 420 (de Danisco), B. lactis HN019 (Nombre comercial Howaru™ Bifido - Danisco A/S) y L. salivarius Ls-33 (de Danisco).
El ARN se aislo de las celulas Caco2 de acuerdo con el protocolo proporcionado por el kit RNeasy mini (Qiagen), y el ADNc se sintetizo usando la transcriptasa inversa Superscript III (Invitrogen). El patron de expresion genetica de PYY se monitorizo usando la qmmica de sonda TaqMan (Applied Biosystems) con el Analizador Genetico ABI Prism 7000 usando un conjunto de oligonucleotidos que reconodan el PYY de Homo sapiens de forma espedfica.
Los oligonucleotidos inclman: cebador directo: 5' GGA GGC CTC AGC TTG ACC 3', cebador inverso: 5'TGC GCA CGA ACA CCA TAG 3', y una sonda: sonda Universal ProbeLibrary N.° 10 (Roche). El ciclo del umbral obtenido (Ct), que es el ciclo de PCR en el cual la intensidad de fluorescencia cruza un valor de umbral de fondo, se transformo en un valor cuantitativo absoluto usando una curva patron a partir de oligonucleotidos sinteticos cuantificados que representaban la secuencia antisentido de la transcripcion diana que muestra la relacion lineal log inversa entre el numero de copias y el ciclo de PCR (Nurmi et al., 2005 Nutrition and Cancer 51 (1): 83-92.). La secuencia de este
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
oligonucleotido convencional es: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG CGA TAG CTT GTG AAG CAG ACG AGC AGG AGG TGG AAG GCG AGG GAA GTC CCA AGG GCT GCA CTG CCG CAG GTC AAG CTG AGG CCT CC 3'.
Resultados:
Los resultados se muestran en la Figura 3.
La adicion de B. lactis 420 y B. Lactis HN019 aumento la expresion de PYY en un 76 % y un 68 %, respectivamente, en comparacion con el control. El tratamiento de L. salivarius 33 aumento la expresion de PYY en un 67 % en comparacion con el control. Por lo tanto, otras materias distintas a L. acidophilus pueden tener el mismo efecto inductor de saciedad.
Ejemplo 4
Medida de la senalizacion de la saciedad en sangre en ratas
En este estudio como un modelo humano se usaron ratas aunque existen algunas diferencias fisiologicas. A diferencia del estomago humano, la parte proximal del estomago de la esta casi libre de jugo gastrico lo que permite que las bacterias sobrevivan y fielmente en el alimento en ese lugar. Esto puede producir diferencias en la saciedad entre el ser humano y la rata. Por lo tanto del plasma de rata obtenido usando el protocolo que sigue a continuacion se analizara para senales neuroendocrinologicas que surgen del estomago (grelina, leptina), intestino (CCK, GLP-1, PYY, orexinas) o metabolitos en circulacion sangumea (acido acetico, glucosa) y sus respuestas hormonales (insulina).
El tracto gastrointestinal es rico en celulas endocrinas y neuronales que sintetizan y secretan peptidos que aumentan la saciedad, colecistoquinina (CCK) y peptido YY (PYY), como respuesta a los estfmulos intraluminales asociados con la ingestion de una comida. La CCK inhibe la ingesta de comida rapidamente, y la duracion de la inhibicion es relativamente breve. Tambien se sabe que los acidos grasos de cadena corta producidos por microbios del intestino inducen saciedad induciendo la hormona intestinal PYY. Los probioticos tambien pueden producir la disminucion del apetito estimulando los peptidos grelina y orexina. La concentracion en plasma de los mencionados anteriormente aumenta antes de la comida y disminuyen rapidamente despues de la comida.
En consecuencia, la atencion se centrara en los niveles en plasma de peptidos que aumentan la saciedad CCK y PYY y tambien peptidos que estimulan el apetito grelina u orexina como un indicador del control de la ingesta de alimento corto plazo despues del suplemento con probioticos. Ademas, la concentracion en plasma de acido acetico se analizara para observar el nivel de productos de fermentacion en plasma.
Las ratas Wistar macho (HsdRddHan:WIST) con un peso de 248 g (STDEV 12,1 g) en el momento del inicio de los experimentos se alojaron a 21 °C en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h con acceso libre a agua corriente a voluntad. Durante el periodo de aclimatacion (14 dfas) los ciclos normales se invirtieron y las ratas fueron entrenadas para consumir todo su alimento (20 g/dfa,) dentro de las 5 h desde el inicio del ciclo de oscuridad a las 8 AM. La Dieta Formulab 5008 usada fue una dieta con alto contenido de protema, y alto contenido de energfa y contema carbohidratos digeribles 49,5 5 y fibra. Las ratas se colocaron de forma aleatoria en dos grupos de tratamiento de 20 animales cada uno, y un grupo de 5 ratas. El ultimo grupo se anestesio a las 8 AM antes de recibir el alimento para proporcionar muestras de sangre en ayunas. Los grupos restantes fueron: Bifido 420 (1010), NCFM (1010), NCFM(1010) + lactitol (2 g), lactitol (2 g) solo y grupo de control. El Lactitol se incluyo ya que se sabe que aumenta la concentracion de PYY en circulacion por via postprandial. Todos los objetos de ensayo se administraron mediante alimentacion con tubo en un volumen de 2,5 ml de agua esteril/animal. al grupo de control se le administro agua esteril sin ningun suplemento, en las mismas condiciones. A los animales se les proporciono alimento convencional despues de la dosificacion. Cada grupo de ensayo se dividio en cinco subgrupos y cada subgrupo a su vez se anestesio para tomar muestras de sangre a las 1, 5, 10 y 24 h despues del inicio del ciclo de oscuridad. Las ratas se anestesiaron con dioxido de carbono para tomar muestras de sangre mediante puncion cardiaca.
Las concentraciones de PYY se analizaran a partir del plasma de acuerdo con Gee y Johnson (2005). Otras hormonas que se pueden analizar incluyen: GLP-1 con radioinmunoensayo (RIA) de acuerdo con Deacon et al., (2002) Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 282: E873-E879, grelina con RIA, CCK de acuerdo con Paloheimo y Rehfeld (1995), orexina de acuerdo con Heinonen et al., (2005), y acido acetico mediante HPLC. Todas las muestras de sangre se extraeran mediante puncion cardiaca en tubos de EDTA. Las muestras se centrifugaron a 1.600 x g a 4 °C durante 15 minutos. La fraccion de plasma se eliminara y se transferira a tubos recien preparados y se almacenara a -70 °C hasta su analisis.
Ensayos para monitorizar la ingesta de alimento en una comida
Se usan ratas Wistar macho como se ha descrito anteriormente. En cada grupo se usan diez ratas (grupos de ratas de control y alimentadas con dieta de ensayo).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La ratas primero tienen diez dfas de aclimatacion al ensayo, tras lo cual el ensayo comienza y tiene una duracion de diez d^as. Las ratas se dividen en cinco grupos, un grupo de control y cuatro grupos de ensayo. En todos los grupos, la ratas se alimentan a voluntad con dieta de control. El grupo de control recibe solucion salina mediante una sonda una vez al dfa y los grupos de ensayo reciben L. acidophilus en una cantidad de 108 y 1010 con sonda una vez al dfa. Las ratas se alimentan preferentemente durante el ciclo de oscuridad.
La ingesta de alimentos y el aumento de peso se monitorizan despues de cada ciclo de oscuridad en cada rata.
Las investigaciones preliminares sugieren que la adicion de microorganismos, y en particular de cepas probioticas, en el alimento de las ratas disminuye la ingesta de alimentos por estas ratas.
Ensayo clinico: estudio de senalizacion de la saciedad postprandial en seres humanos
Un estudio piloto se pudo realizar con 15-20 voluntarios (sujetos humanos). Los sujetos son sus propios controles (dos ensayos separados con cualquiera de bebida de control o bebida de ensayo).
Los sujetos son preferentemente un numero igual de hombres y mujeres sanos de edad media (mdice de masa corporal IMC de aproximadamente 25).
Los sujetos se someten a una noche de ayuno.
A partir de ese momento, se les administra una bebida de ensayo (que comprende una o mas de las cepas de interes que se desvelan en la presente memoria descriptiva), y bebida de control (si las cepas de interes).
A continuacion, se toman muestras de sangre venosa a las 0, 2 y 5 horas.
Los sujetos tienen que rellenar un cuestionario, para hacer referencia a las sensaciones de hambre y saciedad que han tenido despues de haber tomado la bebida de ensayo o de control.
En paralelo, las concentraciones de PYY se miden a partir del plasma (Peninsula Laboratories, San Carlos, CA, USA).
Ejemplo 5
Experimento con celulas Caco-2 diferenciadas. Efecto de caldo de cultivo acondicionado de L. acidophilus en celulas tratadas con lipidos
Este experimento se realiza para imitar un alimento con acidos grasos:
El experimento se realizo con celulas Caco-2 que se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de 5 dfas (Yamashita, S., Konishi, K., Yamazaki, Y., Taki, Y., Sakane, T., Sezaki, H. y Furuyama, Y. (2002) JPharm Sci 91, 669-79). Las celulas se diferenciaron hasta que la resistencia electrica transepitelial (TEER) era de aproximadamente 200 ohm*cm2. Las micelas lipfdicas complejas se prepararon de acuerdo con (Chateau, D., Pauquai, T., Delers, F., Rousset, M., Chambaz, J. y Demignot, S. (2005) J. Cell Physiol 202, 767-776) con o sin 10 % metabolitos de NCFM de L. acidophilus. Las celulas Caco-2 se trataron con las micelas lipfdicas durante 3 horas tras lo cual la expresion de PYY se midio a partir de las celulas.
Materiales y Metodos
Las celulas Caco-2 (HTB-37, Coleccion Americana de Cultivos Tipo, ATCC) se mantuvieron a 37 °C en una atmosfera de CO2 al 5 % humidificada en medio de cultivo basal que consistfa en Medio de Eagle Modificado con Dulbecco (DMEM, Invitrogen Carlsbad, CA, US) suplementado con FBS al 20 % (Invitrogen), glutamina estable 2 mM (Invitrogen), 1 x de aminoacidos no esenciales (Invitrogen), 20 U/ml de penicilina (Invitrogen), 20 pg/ml de estreptomicina (Invitrogen), y 0,5 pg/ml de anfotericina (Invitrogen).
Las celulas Caco-2 se usaron en el pase 26 y se sembraron como 6,6 x 105 celulas/cm2 en inserciones de cultivo celular de 12 pocillos (BIOCOAT HTS, BD Biosciences, Le Pont de Claix, Francia) y se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de 5 dfas (Yamashita, S., Konishi, K., Yamazaki, Y., Taki, Y., Sakane, T., Sezaki, H. y Furuyama, Y. (2002) JPharm Sci 91, 669-79). En resumen, despues de la siembra, las celulas se incubaron durante la noche a 37 °C en una atmosfera de CO2 al 5 % humidificada en medio de cultivo de celulas basales sin antibioticos, tras lo cual el medio se aspiro y se sustituyo con medio de diferenciacion (Entero-STIM, BD Biosciences), suplementado con diluyente de suero MITO+ (BD Biosciences) 250 pl/250 ml de medio. Al 4° dfa de cultivo, el medio se sustituyo, y al 5° dfa se realizo el experimento con micelas lipfdicas.
Las celulas NCFM de L. acidophilus (de Danisco Cultures, Paris, Francia) se cultivaron a 37 °C por via anaerobica en caldo de cultivo de Man, Rogosa y Sharpe (MRS) suplementado con glucosa al 1,0 % hasta que la DO600 alcanzo 0,6-0,7. La densidad de las celulas bacterianas se determino con citometna de flujo (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, CA, US) como se ha descrito anteriormente (Apajalahti, J. H., Kettunen, H., Kettunen, A.,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Holben, W. E., Nurminen, P. H., Rautonen, N. y Mutanen, M. (2002) Appl. Environ. Microbiol. 68, 4986-4995). Los sobrenadantes sin celulas se recogieron mediante centrifugacion (25 °C, 5 min, 3000 g) y el sobrenadante se retiro. El sobrenadante sin celulas NCFM de L. acidophilus (denominados posteriormente como metabolitos de NCFM de L. acidophilus) asf como el control de MRS se diluyeron a un 10 % (v/v) en medio de diferenciacion y las micelas lipfdicas complejas se prepararon en los medios resultantes (vease a continuacion).
Las micelas lip^dicas complejas se prepararon en taurocolato 24 mM (Sigma, St Louis, MO, USA) en medio de diferenciacion. La composicion de las micelas complejas usada fue: acido oleico 0,6 mM - taurocolato 2 mM - 0,2- mono-oleilglicerol 2 mM - colesterol 0,05 mM - fosfatidilcolina 0,2 mM. Un mililitro de micelas se preparo mezclando acido oleico (6 pl de solucion de reserva 100 mM) con otros lfpidos (2 pl) en un tubo de vidrio esteril. Los lfpidos se secaron en atmosfera de gas nitrogeno a temperatura ambiente y el residuo se disolvio en 83 pl de taurocolato 24 mM en medio de diferenciacion y el volumen se llevo hasta 1 ml ya fuera con medio de diferenciacion desnudo, con medio de diferenciacion que consiste en un 10 % (v/v) MRS, o con medio de diferenciacion que consiste en un 10 % (v/v) metabolitos de NcFm de L. acidophilus.
Las micelas lipfdicas se aplicaron al quinto dfa de la diferenciacion de Caco-2 en el lado apical de las celulas, y se dejo que reaccionaran con las celulas durante 3 horas. Como controles 10 % (v/v) MRS y se usaron micelas lipfdicas complejas sin metabolitos de NCFM de L. acidophilus. Se prepararon en medio de diferenciacion.
Despues de los tratamientos los medios de cultivo celular se aspiraron en las celulas se sometieron a lisis con 150 pl of RA1 (Macherey-Nagel, Duren, Alemania) suplementado con p-mercaptoetanol al 1 % (Sigma). El ARN de los lisados celulares se recogio con el kit de aislamiento de ARN Nucleospin 96 de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante (Macherey-Nagel). La smtesis de la primera hebra de ADNc se realizo con cebadores aleatorios usando Superscript III de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante (Invitrogen). El patron de expresion de PYY en las muestras se analizo usando el Sistema de Deteccion de Secuencias ABI PRISM (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) usando oligonucleotidos que detectan de forma espedfica PYY de Homo sapiens. Los oligonucleotidos inclrnan: cebador directo: 5' GGA GGC CTC AGC TTG ACC 3'; cebador inverso: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG 3'; y la sonda: sonda Universal ProbeLibrary N.° 10 (Roche). El ciclo del umbral obtenido (Ct), que es el ciclo de PCR en el cual la intensidad de fluorescencia cruza un valor de umbral de fondo, se transformo en valor cuantitativo absoluto usando una curva patron a partir de oligonucleotidos sinteticos cuantificados que representaban la secuencia antisentido de la transcripcion diana que muestra la relacion lineal log inversa entre el numero de copias y el ciclo de PCR (Nurmi, J. T., Puolakkainen, P. A. y Rautonen, N. E. (2005) Nutr Cancer 51, 83-92). La secuencia de este oligonucleotido convencional es: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG CGA TAG CTT GTG AAG CAG ACG AGC AGG AGG TGG AAG GCG AGG GAA GTC CCA AGG GCT GCA CTG CCG CAG GTC AAG CTG AGG CCT CC 3'.
El analisis estadfstico se realizo con ensayo de t de Student.
Resultados
Los resultados se muestran en la Figura 5.
La expresion del peptido YY marcador de saciedad (PYY) aumento cuando las celulas Caco-2 se trataron con metabolitos de NCFM de L. acidophilus solos o combinados con las micelas lipfdicas complejas.
En el experimento con micelas lipfdicas complejas (formadas por acido oleico 0,6 mM, 2-mono-oleilglicerol 2 mM, colesterol 0,2 mM y L-a-fosfatidilcolina 0,05 mM), el caldo de cultivo de MRS combinado con la mezcla de micelas lipfdicas complejas no induda la expresion de PYY cuando se comparo con el tratamiento con micelas lipfdicas complejas solo. Los metabolitos de NCFM de L. acidophilus aumentaron la expresion de PYY en comparacion con los controles (p < 0,05 cuando se comparan con micelas lipfdicas complejas solo, y p = 0,05 cuando se comparan con un 10 % de MRS solo). Cuando las micelas lipfdicas complejas se combinaron con los metabolitos de NcFm de L. acidophilus al 10 % aumento adicionalmente la expresion de PYY (p < 0,05 cuando se compara con cualquiera del tratamiento con micelas lipfdicas complejas, o con el tratamiento con MRS al 10 %).
Ejemplo 6
Efecto de celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus en celulas Caco-2 diferenciadas tratadas con lipidos
El experimento se realizo con celulas Caco-2 que se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de 5 dfas (Yamashita, S., Konishi, K., Yamazaki, Y., Taki, Y., Sakane, T., Sezaki, H. y Furuyama, Y. (2002) J Pharm Sci 91, 669-79). Las celulas se diferenciaron hasta que la resistencia electrica transepitelial (TEER) era de aproximadamente 200 ohm*cm2. Las micelas lipfdicas complejas se prepararon de acuerdo con (Chateau, D., Pauquai, T., Delers, F., Rousset, M., Chambaz, J. y Demignot, S. (2005) J. Cell Physiol 202, 767-776), con o sin celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus en una proporcion de 50 celulas bacterianas con respecto a una celula Caco-2. Las celulas Caco-2 se trataron con las micelas lipfdicas durante 3 horas tras lo cual la expresion de PYY se midio a partir de las celulas.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Materiales y Metodos
Las celulas Caco-2 (HTB-37, Coleccion Americana de Cultivos Tipo, ATCC) se mantuvieron a 37 °C en una atmosfera de CO2 al 5 % humidificada en medio de cultivo basal que consistia en Medio de Eagle Modificado con Dulbecco (DMEM, Invitrogen Carlsbad, CA, US) suplementado con FBS al 20 % (Invitrogen), glutamina estable 2 mM (Invitrogen), 1 x de aminoacidos no esenciales (Invitrogen), 20 U/ml de penicilina (Invitrogen), 20 pg/ml de estreptomicina (Invitrogen), y 0,5 pg/ml de anfotericina (Invitrogen).
Las celulas Caco-2 se usaron en el pase 26 y se sembraron como 6,6 x 105 celulas/cm2 en inserciones de cultivo celular de 12 pocillos (BIOCOAT HTS, BD Biosciences, Le Pont de Claix, Francia) y se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de 5 dfas (Yamashita, S., Konishi, K., Yamazaki, Y., Taki, Y., Sakane, T., Sezaki, H. y Furuyama, Y. (2002) JPharm Sci 91, 669-79). En resumen, despues de la siembra, las celulas se incubaron durante la noche a 37 °C en una atmosfera de CO2 al 5 % humidificada en medio de cultivo de celulas basales sin antibioticos, tras lo cual el medio se aspiro y se sustituyo con medio de diferenciacion (Entero-STIM, BD Biosciences), suplementado con diluyente de suero MITO+ (BD Biosciences) 250 pl/250 ml de medio. Al 4° dfa de cultivo, el medio se sustituyo, y al 5° dfa se realizo el experimento con micelas lipfdicas.
Las celulas NCFM de L. acidophilus (de Danisco Cultures, Paris, Francia) se cultivaron a 37 °C por via anaerobica en caldo de cultivo de Man, Rogosa y Sharpe (MRS) suplementado con un 1,0 % (peso/volumen) de glucosa hasta que la DO600 alcanzo 0,6-0,7. La densidad de las celulas bacterianas se determino con citometna de flujo (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, CA, US) como se ha descrito anteriormente (Apajalahti, J. H., Kettunen, H., Kettunen, A., Holben, W. E., Nurminen, P. H., Rautonen, N. y Mutanen, M. (2002) Appl. Environ. Microbiol. 68, 4986-4995). Las celulas bacterianas se recogieron mediante centrifugacion (25 °C, 5 min, 3000 g) y el sobrenadante se retiro. Las celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus se lavaron una vez con medio de diferenciacion y las micelas lipfdicas simples se prepararon con las bacterias (vease a continuacion).
Las micelas lipfdicas simples se prepararon en taurocolato 24 mM (Sigma, St Louis, MO, USA) en medio de diferenciacion. La composicion de las micelas simples fue: acido oleico 0,6 mM - taurocolato 2 mM. Un mililitro de micelas se preparo a partir de acido oleico (6 pl de solucion de reserva 100 mM) en un tubo de vidrio esteril. El acido oleico se seco en atmosfera de gas nitrogeno a temperatura ambiente y el residuo se disolvio en 83 pl de taurocolato 24 mM en medio de diferenciacion y el volumen se llevo hasta 1 ml ya sea con medio de diferenciacion desnudo, con medio de diferenciacion que consiste en un 10 % (v/v) de MRS, o con medio de diferenciacion que consiste en un celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus en una proporcion de 50 celulas bacterianas con respecto a una celula Caco-2.
Las micelas lipfdicas se aplicaron al quinto dfa de la diferenciacion de Caco-2 en el lado apical de las celulas, y se dejo que reaccionaran con las celulas durante 3 horas. Como controles se uso un 10 % (v/v) de medio MRS y micelas lipfdicas simples sin celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus. Se prepararon en medio de diferenciacion.
Despues de los tratamientos los medios de cultivo celular se aspiraron en las celulas se sometieron a lisis con 150 pl de RA1 (Macherey-Nagel, Duren, Alemania) suplementado con p-mercaptoetanol al 1 % (Sigma). El ARN de los lisados celulares se recogio con el kit de aislamiento de ARN Nucleospin 96 de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante (Macherey-Nagel). La smtesis de la primera hebra de ADNc se realizo con cebadores aleatorios usando Superscript III de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante (Invitrogen). El patron de expresion de PYY en las muestras se analizo usando el Sistema de Deteccion de Secuencias ABI PRISM (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) usando oligonucleotidos que detectan de forma espedfica PYY de Homo sapiens. Los oligonucleotidos inclrnan: cebador directo: 5' GGA GGC CTC AGC TTG ACC 3'; cebador inverso: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG 3'; y la sonda: sonda Universal ProbeLibrary N.° 10 (Roche). El ciclo del umbral obtenido (Ct), que es el ciclo de PCR en el cual la intensidad de fluorescencia cruza un valor de umbral de fondo, se transformo en valor cuantitativo absoluto usando una curva patron a partir de oligonucleotidos sinteticos cuantificados que representaban la secuencia antisentido de la transcripcion diana que muestra la relacion lineal log inversa entre el numero de copias y el ciclo de PCR (Nurmi, J. T., Puolakkainen, P. A. y Rautonen, N. E. (2005) Nutr Cancer 51, 83-92).
La secuencia de este oligonucleotido convencional es: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG CGA TAG CTT GTG AAG CAG ACG AGC AGG AGG TGG AAG GCG AGG GAA GTC CCA AGG GCT GCA CTG CCG CAG GTC AAG CTG AGG CCT CC 3'.
El analisis estadfstico se realizo con ensayo de t de Student.
Resultados
Los resultados se muestran en la Figura 4.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La expresion del peptido YY marcador de saciedad (PYY) aumento cuando las celulas Caco-2 se trataron con celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus solo o combinado con las micelas lip^dicas simples.
En el experimento con micelas lipfdicas simples formadas por acido oleico 0,6 mM en taurocolato 2 mM, el caldo de cultivo de MRS combinado con la mezcla de micelas lipfdicas simples no indujo la expresion de PYY cuando se comparo con el tratamiento con micelas lipfdicas solo. Las celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus aumentaron la expresion de PYY en comparacion con los controles (p < 0,05 cuando se comparan con micelas lipfdicas solo, y cuando se comparan con un 10 % de MRS solo). Cuando las micelas lipfdicas se combinaron con las celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus en una proporcion de 50 celulas bacterianas con respecto a una celula Caco-2 la expresion de PYY se indujo del mismo modo aun que la alta variacion provoco una disminucion de la significancia estadfstica (p = 0,08 cuando se compara con el tratamiento con micelas lipfdicas complejas).
Ejemplo 7
Efecto de L. acidophilus NCFM en la expresion de PYY (Series de tiempo)
Esbozo del ensayo
El experimento se realizo con celulas Caco-2 que se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de 5 dfas (Yamashita, S., Konishi, K., Yamazaki, Y., Taki, Y., Sakane, T., Sezaki, H. y Furuyama, Y. (2002) JPharm Sci 91, 669-79). Las celulas se diferenciaron hasta que la resistencia electrica transepitelial (TEER) era de aproximadamente 200 ohm*cm2. Las celulas se trataron con celulas bacterianas (50 microbios: Una celula Caco-2) o con un 0,1 % (v/v), un 1 % (v/v), y un 10 % (v/v) de sobrenadante sin celulas diluido en medio de cultivo de celulas Caco-2. Las muestras para estudios de expresion de PYY se recogieron en dos puntos temporales 3 h y 24 h despues de administrar las sustancias de ensayo.
Materiales y Metodos
Las celulas Caco-2 (HTB-37, Coleccion Americana de Cultivos Tipo, ATCC) se mantuvieron a 37 °C en una atmosfera de CO2 al 5 % humidificada en medio de cultivo basal que consistfa en Medio de Eagle Modificado con Dulbecco (DMEM, Invitrogen Carlsbad, CA, US) suplementado con FBS al 20 % (Invitrogen), glutamina estable 2 mM (Invitrogen), 1 x de aminoacidos no esenciales (Invitrogen), 20 U/ml de penicilina (Invitrogen), 20 pg/ml de estreptomicina (Invitrogen), y 0,5 pg/ml de anfotericina (Invitrogen).
Las celulas Caco-2 se usaron en el pase 58 y se sembraron como 6,6 x 105 celulas/cm2 en inserciones de cultivo celular de 12 pocillos (BIOCOAT HTS, BD Biosciences, Le Pont de Claix, Francia) y se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de 5 dfas (Yamashita, S., Konishi, K., Yamazaki, Y., Taki, Y., Sakane, T., Sezaki, H. y Furuyama, Y. (2002) J Pharm Sci 91, 669-79). En resumen, despues de la siembra, las celulas se incubaron durante la noche a 37 °C en una atmosfera de CO2 al 5 % humidificada en medio de cultivo de celulas basales sin antibioticos, tras lo cual el medio se aspiro y se sustituyo con medio de diferenciacion (Entero-STIM [BD Biosciences] suplementado con diluyente de suero MITO+ [BD Biosciences], 250 pl/250 ml de medio.) Al 4° dfa de cultivo, el medio se sustituyo, y al 5° dfa se realizo el experimento con bacterias asf como con sobrenadante sin celulas.
La cepa NCFM de L. acidophilus (Danisco Cultures, Paris, Francia) se cultivo recien preparada en condiciones anaerobicas a 37 °C en caldo de cultivo de Man, Rogosa y Sharpe (MRS) suplementado con glucosa al 1,0 % (p/v) hasta que la DO600 alcanzo 1,0-1,5. El sobrenadante sin celulas se recogio mediante centrifugacion (25 °C, 5 min, 3000 g) y se retiro, y se diluyo a un 0,1 % (v/v), un 1 % (v/v) y un 10 % (v/v) en medio de diferenciacion, y se filtro a traves de unidades de filtro de jeringa esteriles de 0,2 pm (Sartorius, Goettingen, Alemania). La densidad de las celulas bacterianas se calculo basandose en el valor de la DO, y se lavaron una vez con EnteroStim y se volvieron a suspender en EnteroStim en una proporcion de 50 celulas bacterianas con respecto a una celula Caco-2. Las sustancias de ensayo se aplicaron sobre el lado apical de las celulas Caco-2.
Despues de los tratamientos los medios de cultivo celular se aspiraron en las celulas se sometieron a lisis con 150 pl de RA1 (Macherey-Nagel, Duren, Alemania) suplementado con p-mercaptoetanol al 1 % (Sigma). Las muestras para el analisis de expresion de PYY de muestras de NCFM de L. acidophilus se tomaron despues de 3 h y 24 h de incubacion. El aRn de los lisados celulares se recogio con el kit de aislamiento de ARN Nucleospin 96 de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante (Macherey-Nagel). La smtesis de la primera hebra de ADNc se realizo con cebadores aleatorios usando Superscript III de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante (Invitrogen). El patron de expresion de PYY en las muestras se analizo usando el Sistema de Deteccion de Secuencias ABI PRISM (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) usando oligonucleotidos que detectan de forma espedfica PYY de Homo sapiens. Los oligonucleotidos inclrnan: cebador directo: 5' GGA GGC CTC AGC TTG ACC 3'; cebador inverso: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG 3'; y la sonda: sonda Universal ProbeLibrary N.° 10 (Roche). El ciclo del umbral obtenido (Ct), que es el ciclo de PCR en el cual la intensidad de fluorescencia cruza un valor de umbral de fondo, se transformo en valor cuantitativo absoluto usando una curva patron a partir de oligonucleotidos sinteticos cuantificados que representaban la secuencia antisentido de la transcripcion diana que muestra la relacion lineal log inversa entre el numero de copias y el ciclo de PCR (Nurmi, J. T., Puolakkainen, P. A. y
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Rautonen, N. E. (2005) Nutr Cancer 51, 83-92). La secuencia de este oligonucleotido convencional es: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG CGA TAG CTT GTG AAG CAG ACG AGC AGG AGG TGG AAG GCG AGG GAA GTC CCA AGG GCT GCA CTG CCG CAG GTC AAG CTG AGG CCT CC 3'.
El analisis estadfstico se realizo con ANOVA.
Resultados
La Figura 6 muestra el efecto del sobrenadante sin celulas de NCFM de L. acidophilus y bacterias en la expresion de PYY. Se usaron tres diluciones diferentes de sobrenadante sin celulas de un 0,1 (v/v), un 1 % (v/v), y un 10 % (v/v). Las muestras para el estudio de expresion de PYY se recogieron 3 y 24 horas despues de la aplicacion de la sustancia de ensayo. * p < 0,05 en comparacion con el control de Enterostim (medio); LA NCFM bact = bacterias NCFM de L. acidophilus.
Las celulas bacterianas de NCFM de L. acidophilus aumentaron la expresion de PYY en ambos puntos temporales, 3 h y 24 h despues de la aplicacion de las bacterias.
El sobrenadante sin celulas aumento la expresion de PYY como un 10 % de dilucion despues de 3 h de incubacion.
La dosis asf como el momento del tratamiento influye en la expresion de PYY. Las celulas bacterianas, en particular las celulas bacterianas viables, pueden tener un efecto mas sostenible en la expresion de PYY que los metabolitos.
Ejemplo 8
Efecto de las celulas bacterianas de L. curvatus 853 en la expresion de PYY
El experimento se realizo con celulas Caco-2 que se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de 5 dfas (Yamashita, S., Konishi, K., Yamazaki, Y., Taki, Y., Sakane, T., Sezaki, H. y Furuyama, Y. (2002) JPharm Sci 91, 669-79). Las celulas se diferenciaron hasta que la resistencia electrica transepitelial (TEER) era de aproximadamente 200 ohm*cm2. Las celulas se trataron con las celulas bacterianas de L. curvatus 853 (50 microbios: Una celula Caco-2. Las muestras para analisis de expresion genetica se recogieron despues de 4 horas de tratamiento.
Materiales y Metodos
Las celulas Caco-2 (HTB-37, Coleccion Americana de Cultivos Tipo, ATCC) se mantuvieron a 37 °C en una atmosfera de CO2 al 5 % humidificada en medio de cultivo basal que consistfa en Medio de Eagle Modificado con Dulbecco (DMEM, Invitrogen Carlsbad, CA, US) suplementado con FBS al 20 % (Invitrogen), glutamina estable 2 mM (Invitrogen), 1 x de aminoacidos no esenciales (Invitrogen), 20 U/ml de penicilina (Invitrogen), 20 pg/ml de estreptomicina (Invitrogen), y 0,5 pg/ml de anfotericina (Invitrogen).
Las celulas Caco-2 se usaron en el pase 58 y se sembraron como 6,6 x 105 celulas/cm2 en inserciones de cultivo celular de 12 pocillos (BIOCOAT HTS, BD Biosciences, Le Pont de Claix, Francia) y se diferenciaron de acuerdo con un protocolo de 5 dfas (Yamashita, S., Konishi, K., Yamazaki, Y., Taki, Y., Sakane, T., Sezaki, H. y Furuyama, Y. (2002) J Pharm Sci 91, 669-79). En resumen, despues de la siembra, las celulas se incubaron durante la noche a 37 °C en una atmosfera de CO2 al 5 % humidificada en medio de cultivo de celulas basales sin antibioticos, tras lo cual el medio se aspiro y se sustituyo con medio de diferenciacion (Entero-STIM [BD Biosciences] suplementado con diluyente de suero MITO+ [BD Biosciences], 250 pl/250 ml de medio.) Al 4° dfa de cultivo, el medio se sustituyo, y al 5° dfa se realizo el experimento con celulas bacterianas.
L. curvatus 853 se cultivo recien preparado en condiciones anaerobicas a 37 °C en caldo de cultivo de Man, Rogosa y Sharpe (MRS) suplementado con glucosa al 1,0 % hasta que la DO600 alcanzo 1,0-1,5. El sobrenadante sin celulas se recogio mediante centrifugacion (25 °C, 5 min, 3000 g) y se retiro. La densidad de las celulas bacterianas se calculo basandose en el valor de la DO, y se lavaron una vez con EnteroStim, se diluyeron y se aplicaron sobre el lado apical de las celulas Caco-2.
Despues del tratamiento de 4 horas, los medios de cultivo celular se aspiraron en las celulas se sometieron a lisis con 150 pl de RA1 (Macherey-Nagel, Duren, Alemania) suplementado con p-mercaptoetanol al 1 % (Sigma). El ARN de los lisados celulares se recogio con el kit de aislamiento de ARN Nucleospin 96 de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante (Macherey-Nagel). La smtesis de la primera hebra de ADNc se realizo con cebadores aleatorios usando Superscript III de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante (Invitrogen). El patron de expresion de PYY en las muestras se analizo usando el Sistema de Deteccion de Secuencias ABI PRISM (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) usando oligonucleotidos que detectan de forma espedfica PYY de Homo sapiens. Los oligonucleotidos inclrnan: cebador directo: 5' GGA GGC CTC AGC TTG ACC 3'; cebador inverso: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG 3'; y la sonda: sonda Universal ProbeLibrary N.° 10 (Roche). El ciclo del umbral obtenido (Ct), que es el ciclo de PCR en el cual la intensidad de fluorescencia cruza un valor de
5
10
15
20
25
umbral de fondo, se transformo en valor cuantitativo absoluto usando una curva patron a partir de oligonucleotidos sinteticos cuantificados que representaban la secuencia antisentido de la transcripcion diana que muestra la relacion lineal log inversa entre el numero de copias y el ciclo de PCR (Nurmi, J. T., Puolakkainen, P. A. y Rautonen, N. E. (2005) Nutr Cancer 51, 83-92). La secuencia de este oligonucleotido convencional es: 5' TGC GCA CGA ACA CCA TAG CGA TAG CTT GTG AAG CAG ACG AGC AGG AGG TGG AAG GCG AGG GAA GTC CCA AGG GCT GCA CTG CCG CAG GTC AAG CTG AGG CCT CC 3'.
El analisis estadfstico se realizo con ANOVA.
Resultados
La Figura 7 muestra el efecto de L. curvatus 853 en la expresion de PYY. Las muestras para el estudio de expresion de PYY se recogieron 4 horas despues de la aplicacion de la sustancia de ensayo. * p < 0,05 en comparacion con el medio solo de control.
Las celulas bacterianas de L. curvatus 853 aumentaron la expresion de PYY despues de 4 horas de incubacion. Referencias
Livak KJ, y Schmittgen TD (2001) Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods, 25 (4): 402-8.
Yamashita S, Konishi K, Yamazaki Y, Taki Y, Sakane T, Sezani H, Furuyama Y (2002) New and better protocols for a short-term Caco-2 cell culture system. J Pharm Sci 91 (3): 669-679.
Claims (19)
- 5101520253035404550556065REIVINDICACIONES1. Uso de una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo en la fabricacion de un soporte para administracion a un sujeto para el tratamiento y/o prevencion de obesidad y/o para la prevencion de una enfermedad causada por obesidad; en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus PTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolito es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el microorganismo se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo.
- 2. Uso de acuerdo con la reivindicacion 1 en el que el microorganismo y/o un metabolito del mismo modula uno o mas marcadores de saciedad.
- 3. Uso de acuerdo con la reivindicacion 2 en el que la modulacion se produce de forma postprandial.
- 4. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en el que el microorganismo y/o un metabolito del mismo modula uno o mas de los marcadores de saciedad seleccionados entre el grupo que consiste en: PYY, CCK, Grelina, Leptina, GLP-1, orexinas, neuropeptido Y hipotalamico orexigenico, acido acetico, amilina y oxintomodulina.
- 5. Uso de acuerdo con la reivindicacion 4 en el que el nivel de uno o mas de los siguientes marcadores de saciedad aumenta en plasma y/o el intestino: PYY, CCK, GLP-1, leptina (en sangre periferica), insulina y acido acetico.
- 6. Uso de acuerdo con la reivindicacion 4 en el que el nivel de uno o mas de los siguientes marcadores de saciedad disminuye: grelina, orexinas y leptina (en el cerebro).
- 7. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que el soporte es un soporte farmaceuticamente aceptable o un producto alimentario.
- 8. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que el soporte es un medicamento.
- 9. Uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente en el que el microorganismo es la cepa PTA-4797 de Lactobacillus acidophilus.
- 10. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que el microorganismo y/o un metabolito del mismo se usa en combinacion con uno o mas lfpidos y/o una o mas micelas lipfdicas.
- 11. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que el microorganismo y/o metabolito del mismo se usa en combinacion con un prebiotico.
- 12. Uso de acuerdo con la reivindicacion 11 en el que el prebiotico es uno mas de los siguientes: inulina, un transgalacto-oligosacarido, oligosacarido de palantinosa, oligosacarido de soja, gentiooligosacarido, oxilooligomeros, almidon no degradable, lactosacarosa, lactulosa, lactitol, maltitol, o polidextrosa.
- 13. Una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo para uso en un metodo para tratar y/o prevenir la obesidad y/o prevenir una enfermedad causada por la obesidad en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus PTA- 4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolito es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el microorganismo se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo.
- 14. Una cepa de un microorganismo o un metabolito del mismo para uso de acuerdo con la reivindicacion 13 en el que la cepa se incorpora en un soporte.
- 15. Una cepa de un microorganismo o un metabolito del mismo para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 13 o 14 en la que el soporte es un soporte farmaceuticamente aceptable o un producto alimentario.
- 16. Una cepa de un microorganismo o un metabolito del mismo para uso de acuerdo con la reivindicacion 15 en la que el soporte es un medicamento.
- 17. Una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16 en la que el microorganismo y/o metabolito del mismo se administra en combinacion con un prebiotico.
- 18. Una cepa de un microorganismo y/o un metabolito del mismo para uso de acuerdo con la reivindicacion 17 en la que el prebiotico es uno mas de los siguientes: inulina, un transgalacto-oligosacarido, oligosacarido de palantinosa, oligosacarido de soja, gentiooligosacarido, oxilooligomeros, almidon no degradable, lactosacarosa, lactulosa, lactitol, maltitol, o polidextrosa.
- 19. Un metodo no terapeutico para reducir el exceso de peso en un sujeto no obeso que comprende la administracion de una cantidad eficaz de una cepa de un microorganismo y/o un metabolite del mismo, en el que la cepa es Lactobacillus acidophilus PTA-4797, o Bifidobacterium lactis 420, o Bifidobacterium lactis HN019, o Lactobacillus salivarius 33, y en el que el metabolite es un extracto bruto de un medio de cultivo en el que el 5 microorganismo se cultiva o se cultivo y/o del microorganismo.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US76249106P | 2006-01-27 | 2006-01-27 | |
US762491P | 2006-01-27 | ||
PCT/IB2007/001186 WO2007085970A2 (en) | 2006-01-27 | 2007-01-26 | Use of probiotic microorganisms for the treatment and prevention of obesity and related disorders |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2693584T3 true ES2693584T3 (es) | 2018-12-12 |
Family
ID=38309585
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES07734501.5T Active ES2693584T3 (es) | 2006-01-27 | 2007-01-26 | Uso de microorganismos probióticos para el tratamiento y prevención de obesidad y trastornos relacionados |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8257695B2 (es) |
EP (1) | EP1981516B1 (es) |
JP (1) | JP2009524640A (es) |
CN (1) | CN101410128A (es) |
BR (1) | BRPI0707336A2 (es) |
DK (1) | DK1981516T3 (es) |
ES (1) | ES2693584T3 (es) |
MX (1) | MX2008009726A (es) |
PL (1) | PL1981516T3 (es) |
RU (1) | RU2008134892A (es) |
WO (1) | WO2007085970A2 (es) |
Families Citing this family (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010534074A (ja) * | 2007-07-25 | 2010-11-04 | カンピナ ネーデルランド ホールディング ビー.ブイ. | 飽和および/または充足を誘発するプロバイオティックス |
EP2030623A1 (en) * | 2007-08-17 | 2009-03-04 | Nestec S.A. | Preventing and/or treating metabolic disorders by modulating the amount of enterobacteria |
PL2209527T3 (pl) | 2007-10-11 | 2013-03-29 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Kompozycje farmaceutyczne zawierające probiotyki L.acidophilus i Bifidobacterium lactis do stosowania w leczeniu zaburzenia czynnościowego jelit |
DK2123168T3 (da) * | 2008-05-16 | 2012-04-10 | Nestec Sa | Lactobacillus paracasei og vægtkontrol |
US20110189149A1 (en) * | 2008-06-20 | 2011-08-04 | Remy Burcelin | New Uses of Lactic Acid Bacteria and Bifidobacteria |
ES2357408T3 (es) | 2009-01-06 | 2011-04-26 | Rosebud Ag | Composición simbiótica y su procedimiento de fabricación. |
US8986675B2 (en) * | 2009-03-10 | 2015-03-24 | Jinis Biopharmaceuticals Co. | Compositions and methods for prevention and treatment of obesity and obesity related metabolic syndrome |
US20120027737A1 (en) * | 2009-03-25 | 2012-02-02 | Chr-Hansen A/S | Use of probiotics to ameliorate diet-induced insulin resistance |
WO2010108950A1 (en) | 2009-03-25 | 2010-09-30 | Chr. Hansen A/S | Use of a probiotic to regulate body weight |
EP2308499A1 (en) * | 2009-09-30 | 2011-04-13 | Nestec S.A. | Bifidobacterium longum ATCC BAA-999 (BL999) and weight control |
FR2955774A1 (fr) | 2010-02-02 | 2011-08-05 | Aragan | Preparation destinee a traiter l'exces ponderal et les desordres associes et applications de ladite preparation |
WO2011148220A1 (en) * | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Compagnie Gervais Danone | Probiotic strains for use in improving transepithelial resistance |
ES2389547B1 (es) | 2010-12-07 | 2013-08-08 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Bifidobacterium cect 7765 y su uso en la prevención y/o tratamiento del sobrepeso, la obesidad y patologías asociadas. |
CN102670661B (zh) * | 2011-03-08 | 2013-10-02 | 惠宏襄 | 用于刺激胰高血糖素样肽-1分泌的药物 |
JP2013147457A (ja) * | 2012-01-19 | 2013-08-01 | Yakult Honsha Co Ltd | メタボリックシンドローム予防改善剤 |
EP2645099A1 (en) * | 2012-03-30 | 2013-10-02 | Phares Pharmaceutical Research N.V. | Biorelevant compositions |
CA3092318A1 (en) * | 2012-09-20 | 2014-03-27 | Prothera, Inc. | Probiotic compositions and methods for the treatment of obesity and obesity-related conditions |
WO2014072771A1 (en) * | 2012-11-12 | 2014-05-15 | Compagnie Gervais Danone | Lactobacillus rhamnosus strain for reducing body fat accumulation |
JP2016501010A (ja) * | 2012-11-12 | 2016-01-18 | コンパニ・ジェルベ・ダノンCompagnie Gervais Danone | 体重増加及び/又はインスリン抵抗性を低減させるためのラクトバチルスラムノサス株の使用 |
CN105074460B (zh) * | 2013-03-28 | 2018-06-15 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 作为用于重量增加预防的益生元功效的生物标记物的硫酸吲哚酚 |
US9518975B2 (en) * | 2013-03-28 | 2016-12-13 | Nestec S.A. | Alpha-keto-isovalerate as a biomarker of prebiotic efficacy for weight gain prevention |
US20160120963A1 (en) * | 2013-06-12 | 2016-05-05 | University College Cork, National University Of Ireland | Bile salt hydrolase bsh1 for regulating weight gain, serum cholesterol levels, and liver triglycerides in a mammal; bacteria strains expressing bsh1 variants |
WO2016193829A1 (en) | 2015-06-05 | 2016-12-08 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Pharmaceutical and food compositions for inducing satiation and prolonging satiety in subjects in need thereof. |
US10729770B2 (en) | 2013-12-05 | 2020-08-04 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Bacterial influence on regulation of appetite via ClpB protein mimicry of alpha-MSH |
WO2015082633A1 (en) * | 2013-12-05 | 2015-06-11 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Bacterial influence on regulation of appetite via clpb protein mimicry of alpha-msh |
WO2015121455A1 (fr) * | 2014-02-14 | 2015-08-20 | Vesale Pharma Sa | Composition comprenant au moins un probiotique |
EP3104868A2 (fr) * | 2014-02-14 | 2016-12-21 | Vesale Pharma Sa | Utilisations de compositions comprenant du bifidobacterium animalis ssp. lactis lmg p-28149 |
WO2015121458A2 (fr) * | 2014-02-14 | 2015-08-20 | Vesale Pharma Sa | Composition comprenant du bifidobacterium animalis ssp. lactis |
BE1000016B1 (fr) * | 2014-04-25 | 2016-02-01 | Vesale Pharma Nv | Composition comprenant du bifidobacterium animalis ssp. lactis. |
BE1000017B1 (fr) * | 2014-04-25 | 2016-01-21 | Vesale Pharma Nv | Composition comprenant au moins un probiotique |
RU2717018C2 (ru) * | 2014-10-02 | 2020-03-17 | Инсерм (Энститю Насьональ Де Ля Сантэ Э Де Ля Решерш Медикаль) | Фармацевтические и пищевые композиции для индукции насыщения и продления чувства сытости у нуждающихся в этом субъектов |
CA2964480A1 (en) | 2014-10-31 | 2016-05-06 | Whole Biome Inc. | Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders |
KR102125548B1 (ko) | 2015-02-10 | 2020-06-24 | 주식회사 지니스 | 비만 억제능을 갖는 균주 및 이를 함유하는 약학 조성물 |
KR20160116252A (ko) * | 2015-03-27 | 2016-10-07 | 전남대학교산학협력단 | 비환원성 말단의 불포화형 만뉴론산 올리고당 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물 |
JP6813974B2 (ja) * | 2016-07-14 | 2021-01-13 | 株式会社明治 | グレリン分泌促進剤 |
EP3630128B1 (en) * | 2017-05-22 | 2024-04-17 | Compagnie Gervais Danone | Compositions and methods for decreasing a population of bilophila wadsworthia or inhibiting the growth thereof |
EP3675882A4 (en) | 2017-08-30 | 2021-07-28 | Pendulum Therapeutics, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MICROBIOMA ASSOCIATED DISORDERS |
CN112823015A (zh) * | 2018-08-01 | 2021-05-18 | N.M.B.医学应用有限公司 | 减少卡路里的吸收和改变所消耗的营养物的营养价值的口服施用的补充剂及方法 |
KR102616412B1 (ko) * | 2021-07-30 | 2023-12-21 | 주식회사 메디오젠 | 비피도박테리움 애니말리스 락티스 mg741 균주를 포함하는 비만 또는 비알콜성 지방간 예방 또는 치료용 조성물 |
KR20230112214A (ko) * | 2022-01-20 | 2023-07-27 | 주식회사 쎌바이오텍 | 프로바이오틱스 유래 배양여과물을 포함하는 항노화 화장료 조성물 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0577903B1 (fr) | 1992-07-06 | 1997-12-17 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Agent antigastrite |
JP2001292728A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Enajikku Kk | 肥満防止食品 |
JP4580542B2 (ja) * | 2000-05-17 | 2010-11-17 | 株式會社バイオニア | 肥満又は糖尿病治療用微生物及びその微生物を含む医薬組成物 |
SE0004124D0 (sv) * | 2000-11-10 | 2000-11-10 | Probi Ab | New use |
EP1408760B1 (en) * | 2001-02-19 | 2009-04-01 | Société des Produits Nestlé S.A. | Consumable product containing probiotics |
CN1372201A (zh) * | 2002-04-03 | 2002-10-02 | 张平 | 一种网络安全新方法 |
US6942857B2 (en) * | 2002-08-09 | 2005-09-13 | Bioneer Corporation | Microorganisms for preventing and/or treating obesity or diabetes mellitus |
JP2005013211A (ja) * | 2002-09-27 | 2005-01-20 | Wakamoto Pharmaceut Co Ltd | 乳酸菌含有食品組成物 |
AU2003285937A1 (en) * | 2002-10-22 | 2004-05-13 | University Of Vermont And State Agriculture College | Symbiotic food products comprising oats and methods for manufacturing the same |
US7001756B1 (en) * | 2004-02-19 | 2006-02-21 | Genmont Biotech Inc. | Microorganism strain of GM-020 of Lactobacillus rhamnosus and its use for treating obesity |
KR100686558B1 (ko) * | 2004-09-02 | 2007-02-23 | 씨제이 주식회사 | 체지방 저하 기능성 락토바실러스 플랜타륨와 이를 함유한 식품 |
WO2006052135A2 (en) * | 2004-11-15 | 2006-05-18 | Nizo Food Research B.V. | Satiety enhancing compositions |
SE529185C2 (sv) * | 2005-10-07 | 2007-05-22 | Arla Foods Amba | Användning av probiotiska bakterier för tillverkning av livsmedel eller läkemedel för förhindrande av övervikt |
-
2007
- 2007-01-26 PL PL07734501T patent/PL1981516T3/pl unknown
- 2007-01-26 MX MX2008009726A patent/MX2008009726A/es not_active Application Discontinuation
- 2007-01-26 ES ES07734501.5T patent/ES2693584T3/es active Active
- 2007-01-26 JP JP2008551907A patent/JP2009524640A/ja active Pending
- 2007-01-26 WO PCT/IB2007/001186 patent/WO2007085970A2/en active Application Filing
- 2007-01-26 RU RU2008134892/13A patent/RU2008134892A/ru not_active Application Discontinuation
- 2007-01-26 BR BRPI0707336-4A patent/BRPI0707336A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2007-01-26 EP EP07734501.5A patent/EP1981516B1/en active Active
- 2007-01-26 CN CNA2007800113262A patent/CN101410128A/zh active Pending
- 2007-01-26 DK DK07734501.5T patent/DK1981516T3/en active
- 2007-01-28 US US12/162,160 patent/US8257695B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX2008009726A (es) | 2009-03-05 |
US20100061967A1 (en) | 2010-03-11 |
CN101410128A (zh) | 2009-04-15 |
PL1981516T3 (pl) | 2019-03-29 |
JP2009524640A (ja) | 2009-07-02 |
WO2007085970A3 (en) | 2008-05-08 |
RU2008134892A (ru) | 2010-03-10 |
DK1981516T3 (en) | 2018-12-03 |
EP1981516A2 (en) | 2008-10-22 |
WO2007085970A2 (en) | 2007-08-02 |
BRPI0707336A2 (pt) | 2011-05-03 |
EP1981516B1 (en) | 2018-08-08 |
US8257695B2 (en) | 2012-09-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2693584T3 (es) | Uso de microorganismos probióticos para el tratamiento y prevención de obesidad y trastornos relacionados | |
ES2702977T3 (es) | Bifidobacterias para el tratamiento de diabetes y afecciones relacionadas | |
ES2396865T3 (es) | Probióticos para influenciar el metabolismo de las grasas y la obesidad | |
ES2305256T3 (es) | Acido lipoteicoico derivado de bacterias de acido lactico para el uso como medicamento y en el tratamiento de enfermedades bacterianas. | |
JP2007507485A (ja) | 非ステロイド抗炎症薬に付随する副作用をビフィドバクテリウム属の微生物を用いて治療する方法 | |
EP3442549B1 (en) | Bifidobacteria for increasing lean body mass | |
US20240115630A1 (en) | Bifidobacteria for reducing food, energy and/or fat intake | |
JPWO2018003900A1 (ja) | 栄養状態改善に使用するための組成物 | |
Shori et al. | Advances in Biotechnology | |
US20240041953A1 (en) | Lactobacilli for treating cardiac dysfunction | |
JP2020180095A (ja) | 血中尿酸値低減用組成物、及び高尿酸血症予防又は改善用組成物、並びに、該組成物を用いた医薬品組成物及び飲食品組成物 |