JP2016507216A - 体脂肪の蓄積を低減させるためのラクトバチルスラムノサス株 - Google Patents
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Abstract
本発明は、体脂肪の蓄積を低減させるため並びに体脂肪の蓄積に起因する疾患、例えば過体重、肥満及び肥満関連疾患を治療するための、ラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株の使用に関する。【選択図】なし
Description
本発明は、プロバイオティクスの分野に関し、より具体的には脂質代謝を調節するためのそれらの使用に関する。
脂質代謝は、エネルギー恒常性において本質的部分を担う。食物のエネルギーは、身体のエネルギーニーズを満たすことが必要なときに使用できる脂質備蓄として貯蔵することができる。カロリー消費量を超える過剰なカロリー摂取は、身体内での脂肪蓄積に起因する体重増加を引き起こし、過体重に至り、より長期には肥満に至る。25以上のボディマスインデックス(BMI)は過体重とみなされ、30以上のBMIは肥満と定義される。
肥満は、高血圧、II型糖尿病、心血管疾患、肝臓疾患及び幾つかのガンを含む主要な疾患の重要なリスクファクターであるので、急速に公衆衛生上の主要な課題となりつつある。1980年から、世界中の肥満人口は倍以上に増加している。2008年には、14億人を超える成人(20歳以上)が過体重であった。このうち２億人を超える男性及びほぼ３億人の女性が肥満であった。
肥満及び関連する代謝異常が現在頻発している主原因の１つは、日常生活における身体活動の減少と、高脂肪高スクロース食物に富む欧米スタイルの食物(diet)との組合せであることが広く受け容れられている。
しかし、脂肪蓄積及び体重の個体間差は、遺伝的背景、健康状態、薬物療法、年齢又は睡眠不足のような他のファクターとも相関関係があるとされている。
しかし、脂肪蓄積及び体重の個体間差は、遺伝的背景、健康状態、薬物療法、年齢又は睡眠不足のような他のファクターとも相関関係があるとされている。
とりわけ、消化管微生物叢が増大している関心の的である。近年の多くの研究により、肥満及び肥満関連代謝異常は腸微生物叢の組成変化と関連付けられることが示されている(概説として、TREMAROLI & BACKHED, Nature, 489, 242-9, 2012；MARIK, Front Endocrinol (Lausanne), 3, 87, 2012；BURCELIN, Physiology, 27, 300-7, 2012を参照)。
したがって、プレバイオティクス、プロバイオティクス又はシンバイオティクスを用いる消化管微生物叢の操作が肥満及び肥満関連代謝異常を低減させる手助けになり得ると示唆されている(MALLAPPAら，Indian J Endocrinol Metab, 16, 20-7, 2012；DELZENNEら，Nat Rev Endocrinol, 7, 639-46, 2011)。
したがって、プレバイオティクス、プロバイオティクス又はシンバイオティクスを用いる消化管微生物叢の操作が肥満及び肥満関連代謝異常を低減させる手助けになり得ると示唆されている(MALLAPPAら，Indian J Endocrinol Metab, 16, 20-7, 2012；DELZENNEら，Nat Rev Endocrinol, 7, 639-46, 2011)。
幾つかのプロバイオティクス株は、脂肪蓄積及び/又は肥満関連代謝異常を低減させることが報告されている。LEEら(Biochim Biophys Acta, 1761, 736-44, 2006)は、抱合型リノール酸を産生するラクトバチルス ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)株PL60が食物誘因(diet-induced)肥満マウスにおいて抗肥満効果を有することを示し；ラクトバチルス ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055は、ヒト成人において腹部肥満症及び体重を低減させることが示されており(KADOOKAら，Eur J Clin Nutr, 64, 636-43, 2010)、ラクトバチルス ガセリBNR17は、高炭水化物食を与えたラットにおいて体重増加を低減させることが示されている(KANGら，J Microbiol, 48, 712-4, 2010)。ANDREASENら(Br J Nutr, 104, 1831-8, 2010)は、ラクトバチルス アシドフィラス(Lactobacillus acidophilus)NCFM投与時のインスリン抵抗性改善を報告した。ラクトバチルス プランタラム(Lactobacillus plantarum)株No. 14は、高脂肪食を与えたマウスにおいて肥満細胞のサイズを減少させることが示された(TAKEMURAら，Exp Biol Med (Maywood), 235, 849-56, 2010)。ARONSSONら(PLoS One, 5, 2010)は、ラクトバチルス パラカゼイsspパラカゼイ(Lactobacillus paracasei ssp paracasei)株F19がアンギオポイエチン様４タンパク質(ANGPTL4)の発現増大により脂肪貯蔵を減少させることができることを報告した。MAら(J Hepatol, 49, 821-30, 2008)は、プロバイオティクスVSL#3が肝臓NKT細胞の増加により高脂肪食誘導性肝臓脂肪症及びインスリン抵抗性を改善することを報告した。ラクトバチルス ラムノサスGG及びラクトバチルス サケイ(Lactobacillus sakei)NR28(併用の抗肥満効果を有する)によるマウス微生物群系の改変がJIら(Benef Microbes, 3, 13-22, 2012)により報告された。ANら(Lipids Health Dis, 10, 116, 2011)は、高脂肪食誘導肥満ラットにおけるビフィドバクテリウム株(ビー.シュードカテヌラタム(B. pseudocatenulatum)SPM 1204、ビー.ロンガム(B. longum)SPM 1205及びビー.ロンガムSPM 1207)の混合物の抗肥満及び脂質低下効果を記載した。PCT出願WO2007/043933は、摂食量及び脂肪沈着を低減させるため並びに肥満及びインスリン非感受性を予防又は治療するための、ラクトバチルス カゼイF19、ラクトバチルス アシドフィラスNCFB 1748又はビフィドバクテリウム ラクティス(Bifidobacterium lactis)Bb12の使用を提案する。
これら異なるプロバイオティクスの効果は株特異的であり、そして異なる機序により媒介されているようである。よって、過体重及び肥満並びにそれらに関連する代謝性疾患の発症を抑制するために使用することができる他のプロバイオティクス株についての需要が依然として存在する。
本発明者らは、インビボモデルとして線虫(カエノルハブディティス エレガンス；Caenorhabditis elegans)を用いて、プロバイオティクス株を、脂質代謝を調整する能力について試験することを企図した。
脂肪調節経路に関与する多くの遺伝子がシー.エレガンスと哺乳動物との間で高度に保存されており(ASHRAFIら，Nature, 421, 268-72, 2003)、したがってシー.エレガンスは、肥満に関与する機序を研究するためのポピュラーなモデルになっている (ASHRAFI, WormBook, 1-20, 2007；JONES & ASHRAFI, Dis Model Mech, 2, 224-9, 2009)。
加えて、シー.エレガンスは、脂肪を脂質小滴の形態で腸細胞中及び皮下細胞中に貯蔵する。これら脂肪貯蔵は、ナイルレッドのような蛍光色素での染色後、インタクトな動物で容易に視覚化し、定量化することができ、体脂肪の蓄積に対する試験品の効果を容易に評価することを可能にする。
脂肪調節経路に関与する多くの遺伝子がシー.エレガンスと哺乳動物との間で高度に保存されており(ASHRAFIら，Nature, 421, 268-72, 2003)、したがってシー.エレガンスは、肥満に関与する機序を研究するためのポピュラーなモデルになっている (ASHRAFI, WormBook, 1-20, 2007；JONES & ASHRAFI, Dis Model Mech, 2, 224-9, 2009)。
加えて、シー.エレガンスは、脂肪を脂質小滴の形態で腸細胞中及び皮下細胞中に貯蔵する。これら脂肪貯蔵は、ナイルレッドのような蛍光色素での染色後、インタクトな動物で容易に視覚化し、定量化することができ、体脂肪の蓄積に対する試験品の効果を容易に評価することを可能にする。
本発明者らは、試験したプロバイオティクス株のうち、ラクトバチルス ラムノサスの一株(CNCM I-3690株)が、脂質貯蔵を、食物性脂肪の吸収を妨げる可逆的胃腸リパーゼインヒビターであり、肥満管理用の薬物療法で広く使用されるオルリスタット(orlistat)と同程度に減少させることを見出した。
この効果は、ラクトバチルス ラムノサスの別の１つのプロバイオティクス株である(PCT出願WO 2011/148355に記載の)CNCM I-4317株では観察されなかったので、株特異的である。
この効果は、ラクトバチルス ラムノサスの別の１つのプロバイオティクス株である(PCT出願WO 2011/148355に記載の)CNCM I-4317株では観察されなかったので、株特異的である。
CNCM I-3690株は、2006年11月19日にブダペスト条約に従いCNCMに寄託されており、PCT出願WO 2009/122042に開示され、その抗微生物特性及び免疫調節特性が報告されている。この株はまた抗酸化特性を有し、このことはPCT出願WO 2011/083354に開示されている。
したがって、本発明の１つの目的は、対象者における体脂肪の蓄積を低減させるためのラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株又は該株を含む組成物の使用である。
したがって、本発明の１つの目的は、対象者における体脂肪の蓄積を低減させるためのラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株又は該株を含む組成物の使用である。
具体的には、本発明は、過剰な体脂肪の蓄積に起因する病状の治療、処置、予防又は緩和に使用するための、ラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株又は該株を含む組成物を包含する。
過剰な体脂肪の蓄積に起因する病状の例は、過体重、肥満及び肥満関連疾患(例えば、２型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)、高血圧など)である。
ラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株は、生存していてもしていなくてもよい菌全体の形態で使用することができる。或いは、この株は、細菌溶解物の形態で又は細菌画分の形態で使用することができる；この使用に適切な細菌画分は、例えば、シー.エレガンスでの脂質貯蔵についての特性を調べることにより選択することができる。
過剰な体脂肪の蓄積に起因する病状の例は、過体重、肥満及び肥満関連疾患(例えば、２型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)、高血圧など)である。
ラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株は、生存していてもしていなくてもよい菌全体の形態で使用することができる。或いは、この株は、細菌溶解物の形態で又は細菌画分の形態で使用することができる；この使用に適切な細菌画分は、例えば、シー.エレガンスでの脂質貯蔵についての特性を調べることにより選択することができる。
本発明はまた、ラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株又は該株を含む組成物を対象者に投与することを含んでなる、その必要がある対象者における過剰な体脂肪の蓄積を治療、緩和又は予防する方法を提供する。
本発明における使用のための組成物は、投与、特に経口投与に適切な任意の形態であることができる。この形態には、例えば、固体、半固体、液体及び粉体が含まれる。一般に、より容易な投与には液体組成物、例えば飲料形態が好ましい。
本発明における使用のための組成物は、投与、特に経口投与に適切な任意の形態であることができる。この形態には、例えば、固体、半固体、液体及び粉体が含まれる。一般に、より容易な投与には液体組成物、例えば飲料形態が好ましい。
菌が生菌の形態であるとき、組成物は、乾燥重量１ｇあたり、代表的には105〜1013コロニー形成単位(cfu)、好ましくは少なくとも106cfu、より好ましくは少なくとも107cfu、更により好ましくは少なくとも108cfu、最も好ましくは少なくとも109cfuを含んでなってもよい。これは、液体組成物の場合、一般には104〜1012コロニー形成単位(cfu)、好ましくは少なくとも105cfu、より好ましくは少なくとも106cfu、更により好ましくは少なくとも107cfu、最も好ましくは少なくとも109cfu/mlに相当する。
本発明における使用に好適な組成物は栄養組成物であり、これには、食品、特に乳製品が含まれる。これら栄養組成物にはまた補助食品及び機能性食品も含まれる。「補助食品」とは、食料品に通常使用される化合物から作られ、錠剤、粉体、カプセル、頓服水剤その他の通常は食物と関連付けられない任意の形態であり、健康に有益な効果を有する製品をいう。「機能性食品」は、健康に有益な効果を有する食物である。特に、補助食品及び機能性食品は、疾患、例えば慢性疾患に対して、生理学的効果−保護的又は治療的効果−を有することがある。
本発明における使用に適切な組成物の他の例は、医薬組成物又は美容組成物である。
本発明における使用に適切な組成物の他の例は、医薬組成物又は美容組成物である。
本発明の組成物はまた、CNCM I-3690株の他に、１以上の他の乳酸菌株(プロバイオティクスであってもなくても)、例えばラクトバチルス属、ラクトコッカス属、ストレプトコッカス属及びビフィドバクテリウム属から選択される１以上の菌株を含んでなることもできる。具体的には、この(これら)他の株は、ストレプトコッカス サーモフィラス(Streptococcus thermophilus)の１以上の株及び/又はラクトバチルス ブルガリカス(Lactobacillus bulgaricus)の１以上の株を含むことができる。
本発明は、脂質貯蔵に対する菌株CNCM I-3690の効果を説明する実施例に言及する以下の更なる説明からより明確に理解されよう。
本発明は、脂質貯蔵に対する菌株CNCM I-3690の効果を説明する実施例に言及する以下の更なる説明からより明確に理解されよう。
実施例：ラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690はシー.エレガンスにおける総脂肪沈着を阻害する。
シー.エレガンスの脂質封入に対するラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株及びCNCM I-4317株の効果を、レッドナイル染色個体において蛍光測定により調べた。
ラクトバチルス ラムノサス株をMRS培地で培養し、対数増殖期に復帰させた(OD600=1.5)。
シー.エレガンスの脂質封入に対するラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株及びCNCM I-4317株の効果を、レッドナイル染色個体において蛍光測定により調べた。
ラクトバチルス ラムノサス株をMRS培地で培養し、対数増殖期に復帰させた(OD600=1.5)。
実験は、野生型シー.エレガンスN2株を用いて行った。抱卵成虫から卵を単離し、卵をM9培地(10体積％ MRS、フルオロデオキシウリジン110μg/ml)＋５μg/mlコレステロール中で一晩孵化させ、マイクロタイタープレートのウェルにL1期のものを単離することで蠕虫を同期させた。この蠕虫を振盪なしで３日間25℃にて80〜85％相対湿度で成長させた。幼生を、M9培地＋コレステロールを含むプレートに移し、対照食又は実験食を与えつつ３日間25℃で80〜85％湿度にてインキュベートした。ウェルあたり少なくとも50虫を配置した。
蠕虫に、標準飼料であるイー.コリ(E. coli)OP50、イー.コリOP50＋陽性対照としてのオルリスタット、エル.ラムノサスCNCM I-3690又はエル.ラムノサスCNCM I-4317を与えた。全ての菌を４×106cfu /mlの濃度で使用した。オルリスタットは６μg/mlの濃度で使用した。カナマイシン(30μg/ml)を加えて、アッセイ中のイー.コリOP50又はエル.ラムノサス株の増殖を防止した。
レッドナイル(0.05μg/mL, Sigma, St. Louis, USA)を、給餌開始時に0,05μg/mlの濃度でプレートに加えた。
脂肪沈着は、VersaFluorTMフルオロメータシステム(Bio-Rad, Hercules, USA)を用いる蛍光定量(λ励起=480nm；λ発光=571nm)により測定した。１条件あたり計180虫を分析した。実験は三つ組で行った。
脂肪沈着は、VersaFluorTMフルオロメータシステム(Bio-Rad, Hercules, USA)を用いる蛍光定量(λ励起=480nm；λ発光=571nm)により測定した。１条件あたり計180虫を分析した。実験は三つ組で行った。
結果を図１に示す。図１は、試験した各条件についてレッドナイル染色の割合(％)を表す：** ｐ値=0,001。
これら結果により、CNCM I-4317株は、標準飼料イー.コリOP50との比較では、脂肪沈着に対して何らの効果も有さない一方、CNCM I-3690株は脂質封入を34％減少させ、これはオルリスタットで観察された脂質封入の減少に匹敵することが示される。
これら結果により、CNCM I-4317株は、標準飼料イー.コリOP50との比較では、脂肪沈着に対して何らの効果も有さない一方、CNCM I-3690株は脂質封入を34％減少させ、これはオルリスタットで観察された脂質封入の減少に匹敵することが示される。
Claims (6)
- 対象者における体脂肪の蓄積を低減させるために使用するラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株。
- 過剰な体脂肪の蓄積に起因する病状の治療、処置、予防又は緩和のために使用する請求項１に記載のラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株。
- 前記病状が過体重、肥満及び肥満関連疾患から選択される、請求項１又は２に記載のラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株。
- 経口投与し得る組成物に含まれている、請求項１〜３のいずれか１項に記載のラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株。
- 前記組成物が食品又は補助食品である、請求項４に記載のラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株。
- 前記食品が発酵乳製品である、請求項５に記載のラクトバチルス ラムノサスCNCM I-3690株。
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