ES2686219T3 - Compuestos químicos - Google Patents

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Abstract

Un compuesto seleccionado del grupo que comprende: 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[fenil(benzoxi-L-leucinil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[fenil(benzoxi-L-isoleucinil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[fenil(benzoxi-L-fenilalaninil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[fenil(pentoxi-L-metioninil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[1-naftil(hexoxi-L-alaninil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[1-naftil(pentoxi-L-leucinil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[1-naftil(benzoxi-L-leucinil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[1-naftil(pentoxi-L-isoleucinil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[1-naftil(pentoxi-L-fenilalaninil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[1-naftil(benzoxi-L-metioninil)]fosfato 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-O-[1-naftil(pentoxi-α,α-dimetilglicina)]fosfato; o un derivado farmacéuticamente aceptable de estos, en donde dicho derivado farmacéuticamente aceptable es cualquier sal, hidrato, solvato o forma cristalina farmacéuticamente aceptables.

Description

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DESCRIPCION
Compuestos químicos
La presente invención se relaciona con compuestos químicos útiles en el tratamiento del cáncer.
En 1957, se descubrió la actividad antitumoral de 5-Fluorouracilo (5FU). Más de cincuenta años desde que se sintetizó por primera vez, el 5FU permanece ampliamente usado en el tratamiento de tumores sólidos que incluyen de mamas, del sistema gastrointestinal, de cabeza, de cuello y ovarios y particularmente de cáncer colorrectal, ya que se aprobó por la FDA en 1962. El fluoropirimidina 5-fluorouracilo (5FU) y 5-fluoro-2'-desoxiuridina (5-FdUrd) se usan en combinación con ácido fólico como tratamiento estándar para una variedad de carcinomas, como de estómago, de colon y mamas. Además, una combinación de 5FU con leucovorin (LV) se considera como quimioterapia estándar para cáncer de colon. El fármaco 5FU se administra usualmente mediante bolo intravenoso o mediante infusión continua.
La actividad antitumoral de 5FU es comparable con la de su análogo 5-FdUrd, que actúa parcialmente como profármaco de 5FU. 5-FdUrd se aprobó por la FDA en 1970, y se ha usado extensivamente para el tratamiento clínico de carcinoma de ovarios, de mamas y del tracto gastrointestinal. Además, debido a la extracción hepática extensiva, 5-FdUrd es un fármaco útil para quimioterapia arterial hepática de metástasis del hígado, por consiguiente, se metaboliza más eficientemente por el hígado que 5FU.
Sin embargo, existe un problema en que la actividad tanto del agente 5FU como 5-FdUrd puede deteriorarse por el desarrollo de resistencia en células tumorales. El tratamiento del cáncer con 5FU se ha encontrado además que causa efectos secundarios neurotóxicos y cardiotóxicos. La toxicidad además se deriva de la falta de selectividad de 5FU hacia los tumores.
Es un objeto de la presente invención proporcionar compuestos derivados de 5-fluoro-2'-desoxiuridina que muestren una mejor actividad y/o reducida toxicidad en su tratamiento del cáncer, en comparación con las que se muestran por 5- fluoracil o 5-fluoro-2'-desoxiuridina per se.
Es un objeto adicional de la presente invención proporcionar compuestos derivados de 5-fluoro-2'-desoxiuridina que muestren un bajo nivel de resistencia en células tumorales, particularmente una resistencia en células tumorales que sea menor que la que se muestra por 5FU o por 5-FdUrd.
El documento WO 2005/012327A2 se relaciona con derivados de fosforamidato de nucleótidos y su uso en el tratamiento del cáncer.
El documento WO 99/37753A1 se relaciona con un método para la identificación de agentes terapéuticos potenciales mediante el contacto de una célula objetivo con un agente terapéutico candidato que sea un sustrato selectivo para una enzima intracelular, endógena en la célula que se potencia en su expresión, como resultado de la selección mediante terapia biológica o quimioterapia. Además, se relaciona con los métodos y ejemplos de moléculas para aniquilar de manera selectiva una célula patológica por contacto de la célula con un profármaco que sea un sustrato selectivo para la enzima intracelular, endógena. El profármaco se convierte posteriormente en una toxina celular.
De acuerdo con la presente invención se proporciona un compuesto seleccionado del grupo que comprende:
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-L-leucinil)]fosfato
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5-0-[fenil(benzoxi-L-isoleucinil)]fosfato
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-L-fenilalaninil)]fosfato
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(pentoxi-L-metioninil)]fosfato
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(hexoxi-L-alaninil)]fosfato
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5-0-[l-naftil(pentoxi-L-leucinil)]fosfato
5-Fluoro-2-desoxiuridina-5-0-[l-naftil(benzoxi-L-leucinil)]fosfato
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-L-isoleucinil)]fosfato
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-L-fenilalaninil)]fosfato
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(benzoxi-L-metioninil)]fosfato
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-a,a-dimetilglicina)]fosfato
o un derivado farmacéuticamente aceptable de estos, en donde dicho derivado farmacéuticamente aceptable es cualquier sal, hidrato, solvato o forma cristalina farmacéuticamente aceptables.
Se ha encontrado que los compuestos de la presente invención muestran actividad que los hace útiles en la profilaxis o tratamiento del cáncer en homo sapiens. Particularmente, los presentes compuestos exhiben propiedades beneficiosas que indican su capacidad para tratar el cáncer en pacientes, en tanto muestran resistencia reducida en células tumorales. Notablemente, los compuestos de la presente invención pueden mostrar una citoactividad comparable con o mejor que la de 5-fluoracil, pero con una resistencia que es comparable con o menor que la de 5-fluoracil y la de 5-fluoro-2'- desoxiuridina.
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Por "resistencia" en la presente solicitud se entiende una respuesta baja o disminuida a la terapia. La resistencia puede ser innata o adquirida. Una resistencia innata es un grado de reacción reducido en relación con otros especímenes o pacientes. Una resistencia adquirida es una efectividad reducida con el transcurso del tiempo en un paciente dado, sea o no adquirida en relación con la terapia que comprende la administración al paciente de un régimen terapéutico para tratar el cáncer, por ejemplo, un régimen terapéutico que comprende 5FU y/o 5-FdUrd. Cada resistencia innata y resistencia adquirida pueden corresponder a la regulación por disminución o baja actividad de proteínas transportadoras, que incluyen proteínas transportadoras de nucleósidos, o enzimas anabólicas necesarias o la regulación por aumento de enzimas catabólicas.
Aunque el solicitante no desea estar ligado a teoría alguna, se postula, como se discutirá adicionalmente más abajo, que las causas de resistencia en células tumorales a la actividad de 5FU y/o de 5-FdUrd podrían ser: a) deleción de quinasa activante como timidina quinasa (TK), una enzima clave requerida para la etapa inicial de fosforilación de 5-FdUrd a 5- FdUMP; b) superproducción de timidilato sintasa (TS); y/o c) transporte deficiente dentro de las células objetivo.
Sorprendentemente ahora se ha encontrado que los compuestos de la presente invención pueden mostrar actividad citostática significativa en células con nivel reducido de proteínas transportadoras de nucleósidos y/o en células deficientes de quinasas de nucleósidos y/o en células infectadas con micoplasmas.
La propiedad beneficiosa de los compuestos de la presente invención para retener marcada actividad citostática en células deficientes de quinasas de nucleósidos puede conferir in vivo una ventaja clínica en entornos celulares carentes de quinasas de nucleósidos o que tienen niveles disminuidos de quinasas y así incapaces de activar eficientemente el 5- FdUrd.
Las células infectadas con micoplasmas reducen en gran medida la actividad de nucleósidos tal como el 5-FdUrd debido, se presume, a la superproducción de timidilato sintasa (TS). El uso propuesto actualmente de los presentes compuestos en células infectadas con micoplasmas por tanto, se postula, se deriva de la propiedad beneficiosa de los presentes compuestos para actuar adicionalmente como inhibidores de TS y así permitir que los presentes compuestos retengan su actividad citostática en células infectadas con micoplasmas. Los profármacos que comprenden los compuestos de la presente invención, debido a su naturaleza lipofílica pueden captarse por las células objetivo en al menos una vía parcialmente independiente del portador transportador de nucleósidos, y así, pueden evadir mecanismos de resistencia potenciales debido a niveles reducidos de portadores transportadores de nucleósidos o nucleobases en la membrana de células objetivo.
Adicionalmente, los profármacos que comprenden los compuestos de la presente invención son sorprendentemente insensibles a la acción de la enzima catabólica Timidina Fosforilasa (TP) que frecuentemente se regula por disminución en tumores, y así, los profármacos serían más independientes de la presencia de esta enzima catabólica que 5-FdUrd.
Se ha observado que la infección por micoplasmas de las células puede reducir en gran medida la actividad de nucleósidos, que incluyen el 5-FdUrd. La administración de un inhibidor de TP restaura la actividad citostática de 5-FdUrd en cultivos de células infectadas con micoplasmas, lo que proporciona evidencia de la función deteriorante de TP en la actividad citostática final de 5-FdUrd. Esto puede ser una limitación en pacientes que están infectados con micoplasmas. A diferencia de 5-FdUrd, los profármacos de 5-FdUrd de la presente invención pueden retener alta actividad en estas células infectadas con micoplasmas.
Los presentes compuestos tienen así el potencial para superar muchas de las limitaciones de 5-FU y 5-FdUrd.
5-Fluorouracil (5FU) es uno de los primeros ejemplos de un fármaco anticancerígeno. El diseño de 5-FU se basó en la información bioquímica disponible: un átomo de flúor y un átomo de hidrógeno tienen un tamaño similar, sin embargo, un enlace carbono-flúor es mucho más fuerte que un enlace carbono-hidrógeno. La timidilato sintasa actúa mediante sustitución del hidrógeno 5 de desoxiuridina monofosfato con un grupo metilo obtenido a partir de metilen tetrahidrofolato para hacer timidilato. 5FU ejerce su efecto citotóxico a través de tres rutas diferentes. La nucleobase de 5FU y el desoxirribonucleósido de 5-FdUrd entran a las células a través de sistemas de transporte facilitado de nucleósidos. Uno de los mecanismos de acción de estos agentes es la inhibición de la enzima timidilato sintasa (TS). La nucleobase de 5FU se convierte en el desoxinucleósido de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (5-FdUrd) mediante la timidina fosforilasa. La fosforilación subsecuente del desoxinucleósido de 5-FdURd mediante timidina quinasa resulta en la formación del nucleótido citotóxico 5-fluoro-2'-desoxiuridina-5'-monofosfato (5-FdUMP). En presencia del folato reducido, 5,10-metilen- tetrahidrofolato (mTHF), el nucleótido (5-FdUMP) inhibe la timidilato sintasa (TS) debido a la incapacidad de la enzima para eliminar el átomo de flúor-5. Así, el primer y más importante mecanismo de acción de 5FU y FDUR es la inhibición de la enzima timidilato sintasa (TS). La timidilato sintasa (TS) tiene dos sustratos (dUMP y mTHF), los cuales se unen en el sitio catalítico para permitir la síntesis de dTMP. 5-FdUMP forma un complejo ternario covalente con la timidilato sintasa (TS), lo que inhibe la actividad de esta enzima y conduce al agotamiento de desoxitimidina trifosfato, necesario para la síntesis de ADN. Alternativamente, (5-FdUMP) se sintetiza después de la conversión de 5FU en 5-FUMP por OPRT, en fluorouridina difosfato (FUDP), fluorodesoxiuridina difosfato (5-FdUDP) por la ribonucleótido reductasa (RR) y finalmente en 5'-FdUMP. Se ha observado que después de la exposición terapéutica a 5FU o 5-FdUrd, las células desarrollan resistencia a estos agentes quimioterapéuticos. La superexpresión de la timidilato sintasa (TS) reduce el efecto terapéutico
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del fármaco inhibitorio TS lo que conduce a resistencia. Se observó que algunos individuos son más resistentes a la terapia dirigida con TS que otros. En segundo lugar, el desoxinucleósido 5-fluoro-2'-desoxiuridina (5-FdUrd) puede convertirse en su forma trifosfato 5-FdUTP la cual a su vez puede incorporarse en el ADN lo que causa daño celular. En tercer lugar, 5FU puede inhibir además la síntesis de ARN mediante su conversión en FUMP por OPRT y posteriormente, en dos etapas, en fluorouridina trifosfato (FUTP) que se incorpora en el ARN. Esto se presume sea otra acción potencial de 5FU.
Así la molécula 5FU no resulta en un fármaco inhibitorio óptimo de TS porque se convierte de manera ineficiente en 5- FdUMP, debido a varias etapas metabólicas requeridas para la activación metabólica de 5FU. Puede ocurrir resistencia adicional si la célula produce cantidades en exceso de dUMP que compita con el fármaco por el sitio activo.
5-FdUrd es un sustrato relativamente bueno para la timidina quinasa, que lo convierte directamente en 5-FdUMP. Los estudios in vitro, en varias líneas celulares de cáncer han demostrado que 5-FdURd es aproximadamente 5000 veces más potente como inhibidor del crecimiento celular que 5FU. Además, el profármaco 5-FdURd no muestra significativa conversión en metabolitos de ribonucleótidos en concentraciones citotóxicas. Los estudios in vivo mostraron que una cantidad significativa de 5-FdUrd se degrada en sus 5FU de bases relativas por la timidina fosforilasa, enzima para la cual 5-FdUrd muestra una buena afinidad. Esta escisión fosforolítica rápida de 5-FdUrd en 5FU in vitro e in vivo representa un obstáculo trascendental en el suministro del 5-FdUrd intacto a las células para mejor acción citotóxica. Adicionalmente, la degradación de 5-FdUrd en homogenados de intestinos de ratas y en humanos, después de la administración oral, sugiere que 5-FdUrd podría absorberse escasamente como 5-FdUrd intacto.
De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, el compuesto de la presente invención se proporciona para usar en un método de profilaxis o tratamiento de cáncer en homo sapiens. Adecuadamente, el cáncer se selecciona del grupo que comprende leucemia, cáncer pancreático, de próstata, pulmón, mama y de cuello uterino.
Particularmente, el compuesto de la presente invención es para usar en un método de profilaxis o tratamiento de cáncer en un paciente que ha desarrollado o tiene el potencial para desarrollar resistencia en células tumorales con respecto a la actividad de 5-fluoracilo o 5-fluoro-2'-desoxiuridina en la profilaxis o tratamiento de cáncer.
Por ejemplo, el compuesto de la presente invención puede usarse en un método de profilaxis o tratamiento de cáncer en un paciente con células con un reducido nivel de proteínas transportadoras de nucleósidos y/o con células deficientes de la nucleósido quinasa de y/o con células infectadas con micoplasmas, particularmente donde el cáncer es leucemia. El compuesto de la presente invención puede ser más bien o lo mismo para usar en un método de profilaxis o tratamiento de cáncer en un paciente que tiene células con nivel elevado de timidilato sintasa (TS).
De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método de profilaxis o tratamiento de cáncer que comprende administrar a un paciente de homo sapiens que necesita de dicho tratamiento una dosis efectiva de un compuesto de la presente invención. Adecuadamente, el cáncer se selecciona del grupo que comprende leucemia, cáncer pancreático, de próstata, pulmón, mama y de cuello uterino.
Particularmente, la presente invención comprende un método para tratar un paciente que ha desarrollado o tiene el potencial para desarrollar resistencia en células tumorales con respecto a la actividad de 5-fluoracilo o 5-fluoro-2'- desoxiuridina en un método de profilaxis o tratamiento de cáncer. Por ejemplo, el método de la presente invención puede comprender el tratamiento a un paciente con células con un reducido nivel de proteínas transportadoras de nucleósidos y/o con células deficientes de la nucleósido quinasa y/o con células infectadas con micoplasmas, particularmente donde el cáncer es leucemia. El método de la presente invención para tratar a un paciente puede ser más bien o lo mismo para tratar a un paciente que tiene células con un nivel elevado de timidilato sintasa (TS).
"Tumor" o "célula tumoral" como se usa en la presente solicitud, a menos que se indique de otra manera, se refiere tanto a tumores sólidos como cánceres tal como leucemia.
Los compuestos de la presente invención pueden usarse para tratar a un paciente con cáncer lo mismo de novo o junto con otra terapia contra el cáncer. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden usarse en un régimen de tratamiento contra el cáncer junto con otros fármacos anticancerígenos, tal como 5-FU y/o 5-FdUrd lo mismo, con o sin leucovorin (LV), y/u otros fármacos anticancerígenos. Alternativamente, los compuestos de la presente invención pueden usarse cuando un paciente ha fallado en responder a otros fármacos anticancerígenos, tal como por ejemplo 5FU y/o 5- FdUrd ya sea con o sin leucovorin (LV), o cuando el paciente ha mostrado resistencia a otros fármacos anticancerígenos, tal como por ejemplo 5-FU y/o 5-FdUrd ya sea con o sin leucovorin (LV).
Los compuestos de la presente invención cuando Ar es 1-naftilo, sea sustituido o no sustituido, son particularmente adecuados para usar en los usos y métodos anteriores de la presente invención, particularmente en un paciente que ha desarrollado, o que tiene el potencial para desarrollar, resistencia en células tumorales, tal como, por ejemplo, un paciente con células con un reducido nivel de células transportadoras de nucleósidos y/o con células deficientes de quinasas y/o con células infectadas con micoplasmas y/o un paciente que tiene células con elevado nivel de timidilato sintasa (TS).
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De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprenden un compuesto de la presente invención en combinación con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptables.
De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método de preparar una composición farmacéutica que comprende la etapa de combinar un compuesto de la presente invención con un excipiente, portador o diluyente farmacéuticamente aceptables.
De acuerdo con otro aspecto de la presente descripción, se proporciona un proceso para la preparación de un compuesto de la presente invención que comprende reaccionar un compuesto de la fórmula (II)
imagen1
con un compuesto de la Fórmula III:
imagen2
en donde Ar, R3, R4, R1 y R2 tienen los significados requeridos para formar los compuestos de acuerdo con la reivindicación 1.
Por "un derivado farmacéuticamente aceptable" se entiende cualquier sal, éster, sal de dicho éster, hidrato, solvato o forma cristalina o metabolito o cualquier otro compuesto farmacéuticamente aceptable que, tras la administración a un receptor, sea capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de la invención.
El tratamiento convencional del cáncer mediante el uso de compuestos quimioterapéuticos se basa mayormente en el uso de análogos de nucleósidos. Estas moléculas se diseñan para imitar los nucleósidos naturales de pirimidina y purina. Después de la captación por la célula, se fosforilan mediante enzimas celulares tales como (desoxi)citidina quinasa (dCK), timidina quinasa (TK) y/o nucleósidos/nucleótidos quinasas. Estos antimetabolitos pueden interferir posteriormente con la síntesis de novo de precursores de ADN/ARN para finalmente inhibir la síntesis de ADN/ARN lo que resulta en la actividad citotóxica/citostática (Hatse y otros, 1999; Galmarini y otros, 2002).
Los antimetabolitos basados en fluoropirimidina tales como fluorouracilo (5-FU), capecitabina y 5-fluoro-2'-desoxiuridina (5-FdUrd) se usan principalmente en el tratamiento del carcinoma de colon, mama y ovario (de Bruin y otros, 2006; Ishikawa y otros, 1998; Walko y otros, 2005). Intracelularmente, estos fármacos se metabolizan en 5-FdUMP, el cual forma un complejo inhibidor estable con timidilato sintasa (TS) y el cosustrato 5,10-metilentetrahidofolato reducido, lo que bloquea de ese modo la unión del sustrato normal dUMP a la enzima (Beck y otros, 1994; Tanaka y otros, 2000; Longley y otros, 2003). TS es la enzima responsable de la conversión de dUMP en TMP y, por lo tanto, es indispensable para la proliferación celular, que la hace un objetivo interesante para el diseño de fármacos. Entre las fluoropirimidinas mencionadas anteriormente, 5-FdUrd requiere solo una conversión metabólica, una fosforilación catalizada por TK para generar 5-FdUMP (Longley y otros,2003). Esta fosforilación obligatoria frecuentemente es la etapa limitante de la velocidad en el metabolismo de muchos fármacos anticancerígenos (que incluyen 5-FdUrd), y por lo tanto es aún uno de los factores limitantes para el uso terapéutico de los análogos de nucleósidos. Por lo tanto, se han investigado diferentes estrategias para mejorar la eficacia antitumoral de los análogos de nucleósidos (Galmarini y otros, 2002).
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La naturaleza cargada de los monofosfatos de nucleósidos en condiciones fisiológicas resulta en una penetración pobre, si la hay, a través de la membrana celular (Mehellou y otros, 2009). Por lo tanto, la administración directa de moléculas fosforiladas para eludir la primera etapa de fosforilación tiene poca ventaja terapéutica. Por tanto, se han explorado diferentes estrategias para eludir la fosforilación limitante de la velocidad mediante el uso de varios tipos de profármacos de nucleósido 5'-monofosfato para una administración de fármacos más eficiente (Hecker & Erion, 2008). La administración de profármacos de nucleótido fosforamidatos lipofílicos (ProTides) ha demostrado ser exitosa para varias moléculas con actividad antiviral/cancerígena (Harris y otros, 2001; Congiatu y otros, 2006; McGuigan y otros, 2010). Mediante enmascaramiento de las cargas del motivo de fosfato, puede lograrse una buena difusión pasiva de la membrana de los profármacos después de lo cual el profármaco se convierte rápidamente intracelularmente en el nucleósido monofosfato por escisión enzimática (Mehellou y otros, 2009).
Los micoplasmas son los organismos autorreplicantes más pequeños en la tierra y se caracterizan por la falta de una pared celular y un genoma fuertemente reducido (600-1,200 kb). Muchas de estas bacterias tienen un estilo de vida parasitario y residen en el cuerpo humano lo que causa infecciones asintomáticas (Razin y otros, 1998). Se demostró que estos procariotas tienden a colonizar preferentemente el tejido tumoral: Zhang y otros. (2001) informaron que 39.7-56 % de los cánceres humanos, el gástrico, de colon, esofágico, pulmonar y de mamas están infectados con micoplasmas en comparación con 20.9-30 % en el tejido no tumorigénico. Pehlivan y otros. (2005) encontraron >80 % de las muestras de tejido renal de pacientes con carcinoma de células renales estaban infectadas con micoplasmas en comparación con 14 % en muestras de control de tejido. Chan y otros (1996) informaron una tasa de infección de 59 % en tejidos de cáncer de ovario y otros estudios informan además una alta tasa de infección por micoplasma en tejidos gástricos (Sasaki y otros, 1995, Yang y otros, 2010) y de condiloma de cuello uterino (Kidder y otros, 1998). Debido a su conjunto reducido de genes, los micoplasmas carecen de la ruta para la síntesis de novo de pirimidina y purina y, por lo tanto, expresan una amplia serie de enzimas que metabolizan nucleósidos/nucleótidos, tales como timidina fosforilasa (TP), desoxicitidina desaminasa, etc. (Razin, 1978; Charron & Langelier, 1981; Neale y otros, 1983; Tham y otros, 1993). Ya en 1985 se observó que las enzimas codificadas por micoplasmas (por ejemplo, TP), presentes en cultivos de células contaminadas, conducen a una reducida incorporación de dTTP en los linfocitos (Sinigaglia & Talmadge, 1985). Recientemente, se ha demostrado que estas enzimas, particularmente la timidina fosforilasa codificada por micoplasma, además interfieren con la actividad citostática de varios agentes quimioterapéuticos, lo que incluye la 5-trifluorotimidina, in vitro (Bronckaers y otros, 2008; Jetté y otros, 2008; Liekens y otros, 2009). Por lo tanto, se ha formulado la hipótesis de que la eliminación de micoplasmas por antibióticos o la supresión de enzimas codificadas por micoplasmas en tejido tumoral humano puede optimizar el tratamiento de pacientes con cáncer que usan antimetabolitos de purina y pirimidina (Liekens y otros, 2009).
La presente invención se deriva del desarrollo y evaluación de profármacos de fosforamidato independiente de TK de 5- FdUrd y proporciona compuestos que pueden además ser insensibles a la inactivación dependiente de TP de su análogo de nucleósido libre. Los compuestos de la presente invención pueden proporcionar así profármacos análogos de nucleósidos insensibles a micoplasmas que pueden optimizar el tratamiento de pacientes con cáncer con el uso de un antimetabolito de pirimidina. De entre los profármacos de fosforamidato sintetizados actualmente de 5-FdUrd, se eligió CPF-373 (identificado más abajo y mencionado anteriormente como un compuesto particularmente adecuado de la invención con R4 como H) para promover estudios en profundidad. Esta molécula contiene un grupo naftilo y bencilalaninilo para enmascarar el 5'-fosfato cargado en 5-FdUMP.
Se han descrito varios mecanismos de resistencia de las células tumorales hacia las fluoropirimidinas como 5FU, 5-FdUrd y trifluorotimidina (TFT), que incluyen una actividad disminuida de las enzimas activadoras de fármacos cruciales (por ejemplo, TK y orotato fosforibosiltransferas), una actividad incrementada de enzimas inactivadoras de fármacos (es decir, la timidina fosforilasa) y/o una regulación por aumento de las enzimas objetivo (por ejemplo, TS) (Agarwal y otros, 1999; Murakami y otros, 2000; Kosaka y otros, 2004). Además, se informó que los altos niveles de TP encontrados en varios tipos de tejido canceroso son predictivos de un pronóstico menos favorable después del tratamiento con fluoropirimidinas (Kamoshida y otros, 2005; Ciaparrone y otros, 2006; Koopman y otros, 2009), aunque otros estudios no han confirmado estos hallazgos (Ciccolini y otros,2004; Koopman y otros, 2009). La presente invención se deriva del desarrollo de un profármaco para 5-FdUrd, para eludir posibles mecanismos de resistencia y susceptibilidad a la degradación por enzimas catabólicas, presentes en el microambiente tumoral.
Los compuestos que ejemplifican la presente invención, por ejemplo, CPF-373, son profármacos de fosforamidato de 5- FdUrd y se describen en la presente descripción y pueden cumplir estos objetivos. Después de la captación en las células tumorales, CPF-373, por ejemplo, genera 5-FdUMP intracelularmente después de la escisión enzimática. Los estudios de estabilidad y los estudios enzimáticos/séricos mediante tecnología de 31P RMN revelaron que el profármaco CPF-373, por ejemplo, es completamente estable en condiciones ácidas y alcalinas, pero sujeto a hidrólisis en presencia de suero o carboxipeptidasa Y, lo que resulta en la formación de derivado de nucleósido 5'-fosforamidato. Mientras que TK es una enzima clave en la activación de 5-FdUrd, se encontró que CPF-373, por ejemplo, fue mucho menos dependiente de TK para ejercer su acción citostática tanto en cultivos de células de murino (L1210) como de humano (cEm). Debido a la naturaleza lipofílica de ProTides, estas moléculas pueden suministrar nucleósido-monofosfatos directamente en la célula tumoral intacta después de la conversión en su derivado de nucleósido fosforamidato por enzimas tales como carboxiesterasas o carboxipeptidasas (es decir, carboxipeptidasa Y), lo que elimina la necesidad de una fosforilación inicial por nucleósido quinasas específicas tal como TK. Con respecto a esto, CPF-373, por ejemplo, puede ser una herramienta adecuada para el tratamiento de células tumorales con una actividad de TK modificada (ya sea adquirida o inherente). Además, dado que la expresión de TK depende de la fase S, se espera que CPF-373, por ejemplo, pueda
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además suministrar eficientemente 5-FdUMP en células tumorales que no estén en la fase S de su ciclo de replicación. Los estudios de actividad de TS revelaron que CPF-373, por ejemplo, fue capaz de inhibir a TS en líneas celulares tumorales tanto de tipo silvestre como deficientes de TK, lo que señaló nuevamente hacia un suministro intracelular eficiente del 5'-monofosfato de 5-FdUrd, y su independencia implícita de la TK celular para la activación metabólica.
Es poco probable que los compuestos de la presente invención se inactiven por enzimas catabólicas implicadas en el metabolismo de los nucleósidos. De hecho, mientras que 5-FdUrd es altamente susceptible a la hidrólisis enzimática por TP lo que resulta en la formación de 5-FU y 2-desoxirribosa-1-fosfato, su profármaco, por ejemplo CPF-373, no es un sustrato para TP procariótica (es decir, de E. coli) o de mamíferos (es decir, de eritrocitos humanos). Además, la uridina fosforilasa no reconoce, por ejemplo, a CPF-373 como sustrato, mientras que 5-FdUrd se hidroliza (pobremente, pero de forma medible) por esta enzima. Varios estudios revelaron que muchas células tumorales tienen niveles elevados de TP, que además actúa como un factor angiogénico (Koopman y otros, 2009; Bronckaers y otros, 2009). Además, hay varios informes sobre la colonización preferencial de tejido tumoral por micoplasmas (Sasaki y otros, 1995; Chan y otros, 1996; Huang y otros, 2001; Pehlivan y otros, 2005) que interfieren con la actividad citostática de varios agentes quimioterapéuticos convencionales in vitro a través de su TP codificada (Bronckaers y otros,2008; Jetté y otros, 2008; Liekens y otros, 2009). Las presentes observaciones de que 5-FdUrd, pero no, por ejemplo, CPF-373, pierde notablemente la actividad citostática cuando las células tumorales (que expresan TP) están infectadas por micoplasmas, están totalmente en concordancia con estas observaciones. Por lo tanto, la administración de un profármaco anticancerígeno insensible a TP tal como CPF-373, probado como químicamente estable en condiciones de pH extremas, puede mejorar aún más la quimioterapia contra el cáncer. En conclusión, ProTides, como CPF-373, proporciona un nuevo enfoque interesante para el desarrollo de fármacos anticancerígenos más resilientes. Por ejemplo, CPF-373 puede tener al menos varias ventajas sobre su fármaco original 5-FdUrd: ejerce su actividad citostática independiente de las TK y es resistente a la degradación metabólica por TP, una enzima que frecuentemente se regula por aumento en tumores o puede expresarse externamente por infección por micoplasmas del tejido tumoral.
El compuesto que tiene la Fórmula I o la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención puede administrarse a un paciente homo sapiens mediante cualquier medio adecuado.
Los medicamentos empleados en la presente invención se pueden administrar por ruta oral o parenteral, incluyendo intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, transdérmica, vías respiratorias (aerosol), rectal, vaginal y tópica (que incluyen bucal y sublingual).
Para la administración oral, los compuestos de la invención generalmente se proporcionarán en forma da comprimidos o cápsulas, como un polvo o gránulos, o como una solución o suspensión acuosa.
Los comprimidos para uso oral pueden incluir el ingrediente activo mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables tales como diluyentes inertes, agentes desagregantes, agentes aglutinantes, agentes lubricantes, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y conservantes. Los diluyentes inertes adecuados incluyen carbonato de sodio y calcio, fosfato de sodio y calcio y lactosa, mientras que el almidón de maíz y el ácido algínico son agentes desagregantes adecuados. Los agentes aglutinantes pueden incluir almidón y gelatina, mientras que el agente lubricante, si está presente, generalmente será estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Si se desea, los comprimidos pueden recubrirse con un material tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, para retrasar la absorción en el tracto gastrointestinal.
Las cápsulas para uso oral incluyen cápsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido, y cápsulas de gelatina blanda en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un aceite tal como aceite de maní, parafina líquida o aceite de oliva.
Las formulaciones para la administración rectal pueden presentarse como un supositorio con una base adecuada que comprende por ejemplo manteca de cacao o un salicilato.
Las formulaciones adecuadas para la administración vaginal pueden presentarse como óvulos, tampones, cremas, geles, pastas, espumas, aerosoles o fórmulas que contienen, además del ingrediente activo, los portadores que se conocen en la técnica como apropiados.
Para uso intramuscular, intraperitoneal, subcutáneo e intravenoso, los compuestos de la invención generalmente se proporcionarán en soluciones o suspensiones acuosas estériles, tamponadas a un pH e isotonicidad apropiados. Los vehículos acuosos adecuados incluyen solución de Ringer y cloruro de sodio isotónico. Las suspensiones acuosas de acuerdo con la invención pueden incluir agentes de suspensión tales como derivados de celulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y goma tragacanto, y un agente humectante tal como lecitina. Los conservantes adecuados para suspensiones acuosas incluyen p-hidroxibenzoato de etilo y de n-propilo.
Los compuestos de la invención pueden presentarse además como formulaciones liposómicas.
En general, una dosis adecuada estará en el intervalo de 0.1 a 300 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día. Una dosis más baja preferida es 0.5 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día, una dosis más baja más
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preferida es 6 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día, una dosis más baja aún más preferida es 10 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día. Una dosis adecuada está preferentemente en el intervalo de 6 a 150 mg por kilogramo de peso corporal por día, y con la máxima preferencia en el en el intervalo de 15 a 100 mg por kilogramo de peso corporal por día. La dosis deseada se presenta preferentemente como dos, tres, cuatro, cinco o seis o más subdosis administradas en intervalos apropiados durante todo el día. Estas subdosis pueden administrarse en formas de dosificación unitaria, por ejemplo, que contiene de 10 a 1500 mg, preferentemente de 20 a 1000 mg, y con la máxima preferencia de 50 a 700 mg de ingrediente activo por forma de dosificación unitaria.
Los ejemplos de la presente invención se describirán ahora, a modo de ejemplo solamente, con referencia a los dibujos acompañantes, que comprenden las Figuras 1 a 11, en donde:
La Figura 1 muestra la fórmula estructural de 5-FdUrd y su profármaco CPF-373 de fosforamidato;
La Figura 2 muestra el efecto de la timidina fosforilasa y la uridina fosforilasa sobre dThd, Urd, 5-FdUrd y CPF-373, donde los datos son la media de al menos 2 experimentos independientes (± S.D.);
La Figura 3 muestra la inhibición de TS por 5-FdUrd y CPF-373 medida por liberación de tritio a partir de [5-3H]dUrd (paneles A y B) y de [5-3H]dCyd (paneles C y D) en cultivos de células L1210/0 y por liberación de tritio a partir de [5- 3H]dCyd (paneles E y F) en cultivos de células L1210/TK-, donde los datos son la media de 2 experimentos independientes (± S.E.M.);
La Figura 4 muestra un supuesto mecanismo propuesto de activación de 5-FdUrd ProTides;
La Figura 5 muestra la escisión mediada por carboxipeptidasa del profármaco CPF-373 monitoreado mediante 31P RMN;
La Figura 6 muestra el espectro de 31P RMN del compuesto CPF-373 en suero;
La Figura 7 muestra el espectro de 31P RMN del compuesto CPF-373 en tampón pH = 1;
La Figura 8 muestra el espectro de 31P RMN del compuesto CPF-373 en tampón pH = 8;
La Figura 9 muestra los espectros de nucleósido y base relativa por 19F RMN: a) 5-FdUrd sometido al ensayo de fosforilasa (A); b) 5-FdUrd y la base 5FU en condiciones del ensayo en ausencia de la enzima (TP) (B);
La Figura 10 muestra los espectros de nucleósido y la base en tampón de fosfato de potasio (205 nM) por 19F RMN: a) 5- FdUrd sometido al ensayo de fosforilasa en ausencia de la enzima (A); b) Resultado después de la adición de la enzima (TP) (B); y
La Figura 11 muestra los espectros del compuesto de profármaco CPF-373 en el ensayo de fosforilasa: a) profármaco CPF-373 en condiciones del ensayo en ausencia de la enzima (TP) (A); b) profármaco CPF-373 sometido a la acción de la timidina fosforilasa (TP) (B).
Síntesis de compuestos
Con referencia a la Figura 1 y Esquemas 1 a 3 más abajo, los compuestos de la presente invención - como se ejemplifica por el compuesto CPF-373 (1), el cual no forma parte de la presente invención, pero se proporciona como ejemplo de referencia - se han sintetizado mediante el uso de la química de fosforocloridato. La química de fosforocloridato ha sido previamente informada por McGuigan y otros (1993, 1996, 1997). Por ejemplo, el arilfosforodiclorofosfato (2) se preparó mediante acoplamiento de 1-naftol (3) con oxicloruro de fósforo (4) en presencia de Et3N (Esquema 1) y se dejó reaccionar con el tosilato de éster bencílico de L-alanina (5) en presencia de Et3N para generar el derivado de fosforocloridato (6) (Esquema 2). El nucleósido 5-FdUrd (7) se convirtió en 5' ProTide por acoplamiento con el derivado de fosforocloridato (6) en THF, en presencia de W-metil imidazol (NMI) para dar el compuesto objetivo CPF-373 (1) (Esquema 3). La muestra se obtuvo como una mezcla de dos diastereoisómeros confirmada por la presencia de dos picos en la 31P RMN.
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Esquema 1: Reactivos y Condiciones: (i) 1-naftol (3), oxicloruro de fósforo (4), Et2O, Et3N seco, -78oC, 30 min, después t.a., 3 h.
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Esquema 2: Reactivos y Condiciones: (i) Et3N seco, CH2CI2, -78oC, 1 h después t.a., 3h.
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Esquema 3: Reactivos y Condiciones: (i) NMI, THF seco, 10 min, después fosfocloridato (6), t.a. toda la noche
Los disolventes anhidros se obtuvieron de Aldrich y se usaron sin purificación adicional. Todas las reacciones se llevaron a cabo bajo una atmósfera de argón. Las reacciones se monitorearon con TLC analítica en placas de aluminio recubiertas previamente con gel de sílice 60-F254 y se visualizaron con espectros bajo luz UV (254 nm) y/o con 31P RMN. La cromatografía en columna se realizó en gel de sílice (35-70 jM). Los espectros de RMN con protón (1H), carbono (13C), fósforo (31P) y flúor (19F) se registraron en un espectrómetro Bruker Avance 500 a 25 °C. Los espectros se autocalibraron con el pico de disolvente deuterado y todos los espectros de 13C RMN y 31P RMN se desacoplaron de protones. La HPLC analítica se realizó mediante Varian Prostar (LC Workstation-Varian prostar 335 LC detector) mediante el uso de Varian Polaris C18-A (10 jM) como columna analítica.
Los espectros de masas de baja y alta resolución se realizaron como un servicio por la Universidad de Birmingham, mediante el uso de electrospray (ES). El microanálisis de CHN se realizó como un servicio por MEDAC Ltd., Surrey.
Procedimiento estándar A: Síntesis de Diclorofosfato (2).
Se añadió oxicloruro de fósforo (1.0 equiv) a una solución de 1-naftol (1.0 equiv) en éter dietílico en atmósfera de argón, después se añadió trietilamina anhidra (1.0 equiv) gota a gota a -78 °C y se agitó la mezcla de reacción resultante durante 1 h. Posteriormente, la mezcla de reacción se dejó calentar lentamente hasta la temperatura ambiente durante 3 h. La formación del compuesto deseado se monitoreó mediante 31P RMN. La mezcla resultante se filtró y después se evaporó al vacío bajo nitrógeno para proporcionar el aceite incoloro en bruto como producto, que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.
Síntesis de 1-Naftil Diclorofosfato (2): Se preparó de acuerdo con el Procedimiento estándar A, a partir de 1-naftol (3.00 g, 20.81 mmol), oxicloruro de fósforo (1.94 mL, 20.81 mmol), trietilamina (2.9 mL, 20.81 mmol) y éter dietílico anhidro (70 mL). Después de 1 h a -78 °C la reacción se dejó subir a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. El producto en bruto se obtuvo como un aceite. La mezcla resultante se filtró y luego se evaporó al vacío, después de la purificación por cromatografía en columna mediante elución con hexano-EtOAc, (1:1) para proporcionar un aceite incoloro (4.59 g, 84 %) [Rf = 0.93 (hexano-EtOAc, 1:1)], 31P RMN (202 MHz, CDCl3): 8r 5.07; 1H RMN (500 MHz, CDCl3): 5h 7.52-7.71 (m, 4H, ArH), 7.86-7.89 (m, 1H, ArH), 7.95-7.98 (m, 1H, ArH), 8.16-8.19 (m, 1H, ArH).
Procedimiento estándar B: Síntesis de Fosforocloridato (6).
Se añadió gota a gota una solución de fosforodicloridato de arilo (1.0 equiv) y sal de éster de aminoácido apropiada (1.0 equiv.) en diclorometano en atmósfera de argón, a trietilamina anhidra (2.0 equiv.) a -78 °C. Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó poner tibio lentamente a temperatura ambiente durante 3 horas y la formación del compuesto deseado se monitoreó mediante 31P RMN. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se redisolvió en éter
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dietílico, se filtró y se evaporó al vacío bajo nitrógeno para proporcionar un aceite incoloro en bruto, que en algunos casos se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa. El fosforocloridato de arilo sintetizado se purificó por cromatografía en columna mediante elución con hexano-EtOAc, (7:3) para proporcionar el compuesto del título como un aceite incoloro.
Síntesis de fosforocloridato de 1-naftil(bencil-L-alaninilo) (6): El fosforocloridato se preparó mediante el uso de diclorofosfato de 1-naftilo (2.50 g, 9.57 mmol), sal de tosilato de L-alanina bencil éster (3.36 g, 9.57 mmol), trietilamina seca (2.66 mL, 19.14 mmol) y diclorometano seco (35.7 mL) de acuerdo con el procedimiento general B. Purificación por cromatografía en columna mediante elución con hexano-EtOAc, (7:3) proporcionó el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (1.82 g, 47 %) [Rf = 0.90 (hexano-EtOAc, 7:3)], 31P rMN (202 MHz, CDCh, mezcla de diastereoisómeros): 6p 7.92, 8.14 (Int.: 1.00:1.00); 1H RMN (500 MHz, CDCh, mezcla de diastereoisómeros con una relación de 1:1): 6h1.42- 1.45 (m, 3H, CHCH3), 4.20-4.23 (m, 1H, CHCH3), 4.78-4.81 (m, 1H, NH), 5.09 (s, 2H, OCH2Ph), 7.09-7.73 (m, 11H, ArH), 7.97-8.12 (m, 1H, ArH).
Procedimiento estándar C: Síntesis del Nucleósido Fosforamidato (1).
Se añadió una solución del nucleósido apropiado (1.0 equiv.) en THF seco (10 mL) a NMI (5.0 equiv.) a temperatura ambiente bajo atmósfera de argón. Después de 10 minutos, la mezcla de reacción se añadió gota a gota a una solución de fosforocloridato (3.0 equiv) en THF anhidro. La reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche y se evaporó al vacío. El aceite obtenido se disolvió en CH2O2, se lavó dos veces con H2O, después con 0.5 M de HCl o como alternativa, el producto en bruto se lavó con éter dietílico. Después el producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre sílice, mediante elución con CH2Cl2-MeOH como un gradiente para proporcionar el fosforamidato.
Síntesis de 5-Fluoro-2'desoxiuridina-5'-0-[a-naftil (bencil-L-alaninil)]fosfato (1) (proporcionado como ejemplo de referencia): El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-Fluoro-2'desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), NMI (0.40 mL,
5.07 mmol) y naftil(bencil-L-alaninil)fosforocloridato (0.82 g, 3.04 mmol) de acuerdo con el procedimiento general C. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Ch until CH2Cl2-MeOH (95:5) afforded the title compound as a colourless solid (47.0 mg, 8%) [Rf = 0.19 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 636.1520. C29H2gN3OgFNaP requiere [MNa+], 636.1523); 31P RmN (202 MHz, MeOD, mezcla de diastereoisómeros): 6p 4.24, 4.59; 19F RMN (470 MHz, MeOD): 6f-167.36, -167.18; 1H RMN (500 MHz, MeOD): 6h 1.34-1.38 (m, 3H, CHCH3), 1.67-1.79 (m, 1H, H-2'), 2.08-2.17 (m, 1H, H-2'), 4.03-4.15 (m, 2H, CHCH3, H-4'), 4.24-4.36 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 5.08 (d, 1H, J = 12.0 Hz, OCHHPh), 5.13 (d, 1H, J = 12.0 Hz, OCHHPh), 6.09-6.16 (m, 1H, H-1'), 7.27-7.45 (m, 6H, ArH), 7.47-7.55 (m, 3H, ArH), 7.67-7.72 (m, 2H, ArH, H-6), 7.86-7.90 (m, 1H, ArH), 8.12-8.18 (m, 1H, ArH); 13C RMN (125 MHz, MeOD): 6o 20.3 (d, 3Jc-p = 7.6 Hz, CH3), 20.5 (d, 3Jc-p = 6.5 Hz, CH3), 40.8 (CH2), 40.9 (CH2), 51.8 (CH), 51.9 (CH), 67.6 (d, 2Jc-p = 5.3 Hz, CH2), 67.8 (d, 2Jc-p =5.2 Hz, CH2), 68.0 (CH2), 68.1 (CH2), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 86.7 (d, 3Jc-p = 8.1 Hz, CH), 86.8 (d, 3Jc- p = 8.1 Hz, CH), 86.9 (CH), 87.0 (CH), 116.2 (d, 3Jc-p = 3.3 Hz, CH), 116.5 (d, 3Jc-p= 3.5 Hz, CH), 122.6 (CH), 125.3 (CH), 125.4 (CH), 125.6 (CH), 125.7 (CH), 126.2 (CH), 126.5 (CH), 126.6 (CH), 127.6 (CH), 127.7 (CH), 127.8 (C), 127.9 (C),
128.0 (CH), 128.1 (CH), 128.9 (CH), 129.0 (CH), 129.4 (CH), 129.5 (CH), 129.6 (CH), 129.7 (CH), 136.2 (C), 137.1 (C),
137.2 (C), 141.6 (d, 1Jc-f = 233.8 Hz, C), 141.7 (d, Jc-f = 233.9 Hz, C), 147.8 (d, 2Jc-p =7.7 Hz, C), 147.9 (d, 2Jc-p =7.4
Hz, C), 150.5 (d, 4Jc-f= 4.0 Hz, C), 159.3 (d, 2Jc-f = 26.1 Hz, C), 174.6 (d, 3Jc-p =5.0 Hz, C), 174.9 (d, 3Jc-p = 4.3 Hz, C),
m/z (Es) 636 (MH+, 100 %), HPLC inversa mediante elución con (H2O/MeOH de 100/0 a 0/100) en 45 min., mostró dos picos de los diasteroisómeros con ír 34.23 min. and tR 34.59 min. Anal. Calculado para C2gH2gFN3OgP: C, 56.77; H, 4.76; N, 6.85. Encontrado: C, 56.57; H, 5.06; N, 6.72.
Desoxinucleósidos pirimidínicos radiactivos
[5-3H]dCyd (radiospecificidad: 22 Ci/mmol) y [5-3H]dUrd (radiospecificidad: 15.9 Ci/mmol) se obtuvieron de Moravek Biochemicals Inc. (Brea, CA).
Procedimiento estándar D: síntesis de fosforamidatos (método NMI)
A una solución en agitación de 5-F-dUrd (1.0 eq.) en THF anhidro, se añadió gota a gota un fosforocloridato apropiado (3.0 eq) disuelto en THF anhidro bajo una atmósfera de Ar. A esa mezcla de reacción a -78°C se añadió gota a gota NMI (5.0 eq.) durante 5 minutos. Después de 15 minutos, la mezcla de reacción se llevó a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se volvió a disolver en DCM y se lavó tres veces con 0.5 M de HCl. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró, se redujo a sequedad y se purificó por cromatografía en columna con gradiente de eluyente (DCM/MeOH 99:1 a 97:3 a 95:5).
Procedimiento estándar E: síntesis de fosforamidatos (método tBuMgCl)
A una solución en agitación de 5-FdUrd (1.0 eq.) disuelta en THF anhidro, se añadió tBuMgCl (1.1 mol eq. solución 1M en THF) gota a gota en una atmósfera de Ar, seguido de la adición (después de 30 min.) del fosforocloridato apropiado (2.0 mol eq.) disuelto en THF anhidro. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. El solvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna mediante el uso de gradiente de eluyente (DCM/MeOH 99:1 a 97:3 a 95:5)
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5-fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-L-alaninil)]fosfato (CPF381) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.40 g, 1.62 mmol), cloruro de terc-butilmagnesio en tetrahidrofurano fBuMgCl) (1.0 M, 2.43 mL, 2.43 mmol) y fenil(benzoxi-L-alaninilo)fosforocloridato (1.08 g, 3.20 mmol) de acuerdo con el procedimiento general E. Purificación por cromatografía en columna de gradiente sobre sílice, mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (71.0 mg, 8 %) [Rf = 0.35 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 586.1360. C25H27NsOgNaPF requiere [MNa+], 586.1367); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 3.74, 4.14; 1gF RMN (470 MHz, MeOD): ™f-167.57,-167.46; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.35 (d, 3H, J = 7.4 Hz, CHCHa, un diast.), 1.37 (d, 3H, J = 6.9 Hz, CHCHa, un diast.), 1.96-2.32 (m, 2H, H-2'), 3.95-4.08 (m, 2H, CHCH3, H-4'), 4.23-4.34 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 5.13 (brd, 1H, J = 12.3 Hz, OCHHPh), 5.16 (brd, 1H, J =12.3 Hz, OCHHPh, un diast.), 5.17 (brd, 1H, J = 12.2 Hz, OCHHPh, un diast.), 6.16-6.22 (m, 1H, H-1'), 7.17-7.25 (m, 3H, ArH), 7.26-7.40 (m, 7H, ArH), 7.81-7.85 (m, 1H, H-6); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c20.2 (d, 3Jc-p =7.5 Hz, CH3), 20.4 (d, 3Jc- p = 6.2 Hz, CH3), 40.6 (CH2), 40.9 (CH2), 51.6 (CH), 51.8 (CH), 67.5 (d, 2Jc-p = 5.3 Hz, CH2), 67.6 (d, 2Jc-p = 5.5 Hz, CH2),
68.0 (CH2), 71.8 (CH), 71.9 (CH), 86.6 (d, 3Jc-p = 8.0 Hz, CH), 86.8 (d, Jc-p = 8.3 Hz, CH), 86.9 (CH), 87.0 (CH), 121.4 (d, 3Jc-p = 5.1 Hz, CH), 121.5 (d, 3Jc-p = 5.6 Hz, CH), 125.5 (d, 5Jc-p = 3.2 Hz, CH), 125.8 (d, 5Jc-p =3.2 Hz, CH), 126.3 (CH),
129.0 (CHx2), 129.3 (CHx2), 129.6 (CHx2), 130.8 (CHx2), 140.9 (C), 141.6 (d, 1Jc-f = 233.6 Hz, C), 141.7 (d, 1Jc-f = 233.6 Hz, C), 150.7 (d, 4Jc-f = 5.7 Hz, C), 152.1 (d, 2Jc-f = 6.5 Hz, C), 159.2 (d, 2Jc-f = 26.3 Hz, C), 174.6 (d, 3Jc-p = 4.9 Hz, C),
174.7 (d, 3Jc-p =4.9 Hz, C), m/z (ES) 586 (MNa+, 100 %); La HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró un pico de la mezcla de diastereoisómeros contR 25.08 min. (97 %).
5-fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(metoxi-L-alaninil)]fosfato (CPF382) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), H-metilimidazol (NMI) (0.40 mL, 5.07 mmol) y fenil(metoxi-L-alaninil)fosforocloridato (0.84 g, 3.04 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (16.0 mg, 4 %) [Rf = 0.30 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 510.1045. C19H23N3O9NaPF requiere [MNa+], 510.1054); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p3.79, 4.09; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.78, -167.72; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.34 (d, 3H, J = 7.1 Hz, CHCH3, un diast.), 1.36 (d, 3H, J = 7.1 Hz, CHCH3, un diast.), 2.02-2.16 (m, 1H, H-2'), 2.25-2.34 (m, 1H, H-2'), 3.69 (s, 3H, OCH3, un diast.), 3.70 (s, 3H, OCH3, un diast.), 3.93-4.02 (m, 1H, CHCH3), 4.08-4.13 (m, 1H, H-4'), 4.27-4.45 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 6.20-6.29 (m, 1H, H-1'), 7.18-7.28 (m, 3H, ArH), 7.35-7.40 (m, 2H, ArH), 7.85 (d, 1H, 3Jh-f = 6.4 Hz, H-6); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 20.2 (d, 3Jc-p = 7.5 Hz, CH3), 20.5 (d, 3Jc-p = 6.7 Hz, CH3), 40.8 (CH2), 40.9 (CH2), 51.5 (CH3), 51.6 (CH3), 52.7 (CH),
52.8 (CH), 67.5 (d, 2Jc-p = 5.5 Hz, CH2), 67.6 (d, 2Jc-p = 5.1 Hz, CH2), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 86.7 (d, 3Jc-p = 8.2 Hz, CH),
86.8 (d, 3Jc-p =8.2 Hz, CH), 86.9 (CH), 87.0 (CH), 121.2 (d, 3Jc-p = 4.5 Hz, CH), 121.4 (d, 3Jc-p = 4.7 Hz, CH), 125.6 (d, 5Jc-p = 2.9 Hz, CH), 125.9 (d, 5Jc-p = 2.9 Hz, CH), 126.2 (CH), 130.8 (CH), 130.9 (CH), 141.6 (d, 1Jc-f = 233.8 Hz, C), 141.7 (d, 1Jc-f = 233.9 Hz, C), 150.6 (d, 4Jc-f = 3.6 Hz, C), 152.1 (d, 2Jc-p = 6.8 Hz, C), 152.2 (d, 2Jc-p = 6.8 Hz, C), 159.4 (d, 2Jc- f = 26.0 Hz, C), 175.2 (d, 3Jc-p = 4.8 Hz, C), 175.5 (d, 3Jc-p = 3.7 Hz, C), m/z (ES) 510 (MNa+, 100 %); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, smostró dos picos de los diastereoisómeros con tR 23.11 min. y tR 24.11 min. (74 % : 24 %).
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.10 g, 0.40 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.16 mL, 2.03 mmol) y (etoxi-L-alaninil)fosforocloridato (0.35 g, 1.21 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (10.0 mg, 5 %) [Rf = 0.11 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 524.1202. ^ü^sNsOgNaPF require [MNa+1, 524.1210); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 3.83, 4.11; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.67, -167.61; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.25 (t, 3H, J =7.1 Hz, CH2CH3, un diast.), 1.26 (t, 3H, J = 7.1 Hz, CH2CH3, un diast.), 1.34 (d, 3H, J = 7.2 Hz, CHCH3, un diast.), 1.36 (d, 3H, J = 7.2 Hz, CHCH3, un diast.), 2.02-2.15 (m, 1H, H-2'), 2.24-2.34 (m, 1H, H-2'), 3.90-4.00 (m, 1H, CHCH3,), 4.08-4.19 (m, 3H, CH2CH3, H-4'), 4.27-4.45 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 6.20-6.28 (m, 1H, H-1'), 7.18-7.28 (m, 3H, ArH), 7.34-7.39 (m, 2H, ArH), 7.85 (d, 1H, 3Jh-f = 6.4 Hz, H-6); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 14.4 (CH3), 15.4 (CH3), 20.3 (d, 3Jc-p = 7.6 Hz, CH3), 20.5 (d, 3Jc-p = 6.5 Hz, CH3),
40.8 (CH2), 40.9 (CH2), 51.6 (CH), 51.7 (CH), 62.4 (CH2), 62.5 (CH2), 67.5 (d, 2Jc-p = 5.4 Hz, CH2), 67.6 (d, 2Jc-p = 5.4 Hz, CH2), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 86.7 (d, 3Jc-p = 8.1 Hz, CH), 86.8 (d, 3Jc-p = 8.3 Hz, CH), 86.9 (CH), 87.0 (CH), 121.3 (d, 3Jc- p = 4.8 Hz, CH), 121.4 (d, 3Jc-p = 4.6 Hz, CH), 125.6 (d, 5Jc-p = 4.6 Hz, CH), 125.8 (d, 5Jc-p = 4.8 Hz, CH), 126.3 (CH),
130.8 (CH), 130.9 (CH), 141.6 (d, 1Jc-f = 233.7 Hz, C), 141.8 (d, Jc-f = 233.8 Hz, C), 150.8 (br C), 152.0 (d, 2Jc-p = 7.1 Hz, C), 152.1 (d, 2Jc-p = 7.1 Hz, C), 159.6 (d, 2Jc-f = 26.0 Hz, C), 174.8 (d, 3Jc-p = 5.4 Hz, C), 175.1 (d, 3Jc-p = 4.4 Hz, C), m/z (Es) 524 (MNa+, 100 %); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros con tR 25.63 min. y tR26.40 min. (71 %: 27 %).
5-fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(isopropoxi-L-alaninil)]fosfato (CPF384) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.40 mL, 5.07 mmol) y fenil(isopropoxi-L-alaninil)fosforocloridato (0.93 g, 3.04 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (31.0 mg, 6 %) [Rf = 0.21 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 538.1370. C21H27^O9NaPF requiere [MNa+], 538.1367); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 3.87, 4.13; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f-167.64, -167.56; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.22-1.26 (m, 6H, CH(CH3)2), 1.33 (d, 3H, J =7.1 Hz, CHCH3, un diast.), 1.35 (d, 3H, J =7.1 Hz, CHCH3, un diast.), 2.00-2.15 (m, 1H, H-2'), 2.23-2.34 (m, 1H, H-2'), 3.88-3.96 (m, 1H, CHCH3), 4.08-4.14 (m, 1H, H-4'), 4.27-4.45 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 4.98 (hept, 1H, J = 6.1 Hz, CH(CH3)2), 6.206.29 (m, 1H, H-1'), 7.17-7.29 (m, 3H, Ar-H), 7.34-7.40 (m, 2H, Ar-H), 7.84 (d, 1H, 3Jh-f = 6.4 Hz, H-6); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 20.3 (d, 3Jc-p = 7.6 Hz, CH3), 20.5 (d, 3Jc-p = 6.4 Hz, CH3), 21.9 (CH3X2), 22.0 (CH3X2), 40.8 (CH2), 40.9 (CH2),
51.7 (CH), 51.8 (CH), 67.5 (d, 2Jc-p = 5.4 Hz, CH2), 67.6 (d, 2Jc-p = 5.2 Hz, CH2), 70.2 (CH), 70.3 (CH), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 86.6 (d, 3Jc-p = 8.2 Hz, CH), 86.8 (d, 3Jc-p = 8.2 Hz, CH), 86.9 (CH), 87.0 (CH), 121.2 (d, 3Jc-p = 4.7 Hz, CH), 121.4 (d, 3Jc-p = 4.9 Hz, CH), 125.6 (d, 5Jc-p = 7.1 Hz, CH), 125.9 (d, 5Jc-p = 7.1 Hz, CH), 126.3 (CH), 130.8 (CH), 130.9 (CH),
141.8 (d, 1Jc-f = 234.5 Hz, C), 141.9 (d, 1Jc-f = 234.4 Hz, C), 150.7 (d, 4Jc-f = 3.7 Hz, C), 152.0 (d, 3Jc-p =6.2 Hz, C), 152.1 (d, 3Jc-p = 6.2 Hz, C), 159.3 (d, 2Jc-f = 26.3 Hz, C), 159.4 (d, 2Jc-f = 26.0 Hz, C), 174.3 (d, 3Jc-p = 5.6 Hz, C), 174.6 (d, 3Jc- p = 4.6 Hz, C), m/z (ES) 538 (MNa+, 100 %); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros con tR28.93 min. y tR 29.45 min. (44 % : 52 %).
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.30 g, 1.21 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.48 mL, 6.09 mmol) y fenil(cidohexoxi-L-alaninil)fosforodoridato (1.026 g, 3.65 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (6.7 mg, 3 %) [Rf = 0.45 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 565.48. C24H31NsOgNaPF requiere [MNa+], 565.49); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 3.86, 4.15; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.68, -167.62; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.26-1.40 (m, 3H, CHCH3), 1.41-1.50 (m, 4H, CH(CH2)5), 1.52-1.61 (m, 1H, CH(CH2)a), 1.70-1.88 (m, 5H, CH(CH2)a), 2.00-2.14 (m, 1H, H-2'), 2.23-2.34 (m, 1H, H-2'), 3.90-3.98 (m, 1H, CHCH3), 4.07-4.14 (m, 1H, H-4'), 4.29-4.39 (m, 2H, CH2OP), 4.40-4.45 (m, 1H, H-3'), 4.72-4.78 (m, 1H, CH(CH2)5), 6.20-6.28 (m, 1H, H-1'), 7.18-7.29 (m, 3H, ArH), 7.34-7.39 (m, 2H, ArH), 7.85 (d, 1H, 3Jh-f = 6.6 Hz, H-6); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 20.3 (d, 3Jc-p = 7.3 Hz, CH3), 20.6 (d, 3Jc-p = 6.5 Hz, CH3), 24.6 (CH2), 26.4 (CH2), 32.3 (CH2), 32.4 (CH2), 40.9 (CH2), 51.7 (CH), 51.9 (CH), 67.5 (d, 2Jc-p = 5.3 Hz, CH2), 67.7 (d, 2Jc-p = 5.3 Hz, CH2), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 74.9 (CH), 86.6 (d, 3Jc-p = 8.5 Hz, CH), 86.8 (d, 3Jc-p = 8.5 Hz, CH), 86.9 (CH), 87.0 (CH), 121.3 (CH), 121.4 (CH),
121.5 (CH), 121.6 (CH), 125.6 (CH), 125.7 (CH), 125.8 (CH), 125.9 (CH), 126.3 (CH), 130.1 (CH), 141.5 (d, 1Jc-f = 234.0 Hz, C), 150.7 (d, 4Jc-p = 4.0 Hz, C), 152.0 (d, 2Jc-p = 7.2 Hz, C), 152.1 (d, 2Jc-p = 7.2 Hz, C), 159.4 (d, 2Jc-f= 26.3 Hz, C),
174.3 (d, 3Jc-p =4.6 Hz, C), 174.5 (d, 3Jc-p = 4.3 Hz, C); m/z (ES) 565 (MNa+, 100 %); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros con tR
30.00 min. y tR30.45 min. (33 % : 65 %).
5-fluoro-2'desoxiuridina-5'-0-[p-nitro-fenil(etoxi-L-alaninil)]fosfato (CPF430) (proporcionado como ejemplo de referencia)
imagen11
El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.40 mL, 5.07 mmol) y p-nitro-fenil(etoxi-L-alaninil)fosforocloridato (1.02 g, 3.04 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D.Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (77.0 mg, 14 %) [Rf = 0.24 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 569.1066. C20H24N4OnNaPF requiere [MNa+], 569.1061); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 3.63, 3.67; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.89, -167.82; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.24 (t, 3H, J =7.0 Hz, CH2CH3), 1.25 (t, 3H, J = 7.0 Hz, CH2CH3), 1.36-1.40 (m, 3H, CHCH3), 2.16-2.25 (m, 1H, H-2'), 2.30-2.38 (m, 1H, H-2'), 3.95-4.00 (m, 1H, CHCH3), 4.09-4.19 (m, 3H, CH2CH3, H-4'), 4.32-4.48 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 6.21-6.29 (m, 1H, H-1'), 7.46 (d, 1H, J = 8.7 Hz, ArH), 7.49 (d, 1H, J= 8.7 Hz, ArH), 7.85 (d, 1H, 3Jh-f = 6.6 Hz, H-6), 7.87 (d, 1H, 3Jh-f = 6.6 Hz, H-6), 8.29 (d, 2H, J = 8.7 Hz, ArH); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c14.5 (CH3), 14.6 (CH3), 20.3 (d, 3Jc-p = 7.5 Hz, CH3), 20.4 (d, 3Jc-p = 6.4 Hz, CH3),
40.8 (CH2), 51.6 (CH), 51.7 (CH), 62.5 (CH2), 67.8 (d, 2Jc-p = 5.5 Hz, CH2), 68.0 (d, 2Jc-p = 5.2 Hz, CH2), 71.8 (CHx2), 86.4 (CH), 86.5 (CH), 87.0 (d, 3Jc-p = 7.5 Hz, CH), 122.1 (d, 3Jc-p = 5.2 Hz, CH), 122.5 (d, 3Jc-p = 5.0 Hz, CH), 125.7 (CH), 126.0 (CH), 126.6 (CH), 141.3 (d, 1Jc-f = 233.6 Hz, C), 141.5 (d, 1Jc-f = 233.7 Hz, C), 146.2 (C), 150.6 (d, 4Jc-p = 4.6 Hz, C), 156.9 (d, 2Jc-p = 2.6 Hz, C), 157.0 (d, 2Jc-p= 2.6 Hz, C), 159.3 (d, 2Jc-f = 26.3 Hz, C), 174.6 (d, 3Jc-p = 4.6 Hz, C), 174.9 (d, 3Jc-p = 3.7 Hz, C), m/z (ES) 569 (MNa+, 100%); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 min., 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros contR31.63 min. and tR 31.89 min. (11 %: 85 %).
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NH
El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.40 mL, 5.07 mmol) y 1-naftil(benzoxi-L-alaninil)fosforodoridato (0.82 g, 3.04 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (47.0 mg, 8 %) [Rf = 0.19 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 636.1520. C2gH2gN3OgNaPF requiere [MNa+], 636.1523); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p4.24, 4.59; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.36, -167.18; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.34-1.38 (m, 3H, CHCH3), 1.67-1.79 (m, 1H, H-2'), 2.08-2.17 (m, 1H, H-2'), 4.03-4.15 (m, 2H, CHCH3, H-4'), 4.24-4.36 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 5.08 (d, 1H, J = 12.0 Hz, OCHHPh), 5.13 (d, 1H, J = 12.0 Hz, OCHHPh), 6.09-6.16 (m, 1H, H-1'), 7.27-7.45 (m, 6H, ArH), 7.47-7.55 (m, 3H, ArH), 7.67-7.72 (m, 2H, ArH, H-6), 7.86-7.90 (m, 1H, ArH), 8.12-8.18 (m, 1H, ArH); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 20.3 (d, 3Jc- p = 7.6 Hz, CH3), 20.5 (d, 3Jc-p = 6.5 Hz, CH3), 40.8 (CH2), 40.9 (CH2), 51.8 (CH), 51.9 (CH), 67.6 (d, 2Jc-p =5.3 Hz, CH2),
67.8 (d, 2Jc-p =5.2 Hz, CH2), 68.0 (CH2), 68.1 (CH2), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 86.7 (d, 3Jc-p =8.1 Hz, CH), 86.8 (d, 3Jc-p =8.1 Hz, CH), 86.9 (CH), 87.0 (CH), 116.2 (d, 3Jc-p =3.3 Hz, CH), 116.5 (d, 3Jc-p= 3.5 Hz, CH), 122.6 (CH), 125.3 (CH), 125.4 (CH), 125.6 (CH), 125.7 (CH), 126.2 (CH), 126.5 (CH), 126.6 (CH), 127.6 (CH), 127.7 (CH), 127.8 (C), 127.9 (C), 128.0
(CH), 128.1 (CH), 128.9 (CH), 129.0 (CH), 129.4 (CH), 129.5 (CH), 129.6 (CH), 129.7 (CH), 136.2 (C), 137.1 (C), 137.2
(C), 141.6 (d, 1Jc-F = 233.8 Hz, C), 141.7 (d, 1Jc-f = 233.9 Hz, C), 147.8 (d, 2Jc-p =7.7 Hz, C), 147.9 (d, 2Jc-p = 7.4 Hz, C),
150.5 (d, 4Jc-f= 4.0 Hz, C), 159.3 (d, 2Jc-f = 26.1 Hz, C), 174.6 (d, 3Jc-p = 5.0 Hz, C), 174.9 (d, 3Jc-p = 4.3 Hz, C), m/z (ES)
636 (MNa+, 100%); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros con tR34.23 min. y tR 34.59 min. (23 % : 76 %).
5-Fluoro-2'desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(metoxi-L-alaninil)]fosfato (CPF385) (proporcionado como ejemplo de referencia)
imagen13
El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.40 mL, 5.07 mmol) y 1-naftil(metoxi-L-alaninil)fosforocloridato (0.99 g, 3.04 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (7.0 mg, 1 %) [Rf = 0.23 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 560.1198. C23H25N3O9NaPF requiere [MNa+], 560.1210); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p4.31,4.56; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.51, -167.37; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.34 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CHCH3, un diast.), 1.36 (d, 3H, J = 6.7 Hz, CHCH3, un diast.), 1.76-1.87 (m, 1H, H-2'), 2.12-2.22 (m, 1H, H-2'), 3.64 (s, 3H, OCH3, un diast.), 3.65 (s, 3H, OCH3, un diast.), 4.03-4.13 (m, 2H, CHCH3, H-4'), 4.30-4.38 (m, 2H, CH2OP), 4.41 (dd, 1H, J = 2.5 Hz, J = 5.8 Hz, H- 3'), 6.12-6.19 (m, 1H, H-1'), 7.41-7.46 (m, 1H, ArH), 7.50-7.58 (m, 3H, ArH), 7.70-7.76 (m, 2H, H-6, ArH), 7.87-7.91 (m, 1H, ArH), 8.15-8.20 (m, 1H, ArH); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 20.3 (d, 3Jc-p = 7.1 Hz, CH3), 20.4 (d, 3Jc-p = 6.5 Hz, CH3), 40.7 (CH2), 40.8 (CH2), 51.6 (CH3), 51.7 (CH3), 52.7 (CH), 52.8 (CH), 67.8 (d, 2Jc-p =5.7 Hz, CH2), 67.5 (d, 2Jc-p =
5.7 Hz, CH2), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 86.7 (d, 3Jc-p = 7.9 Hz, CH), 86.9 (d, 3Jc-p = 8.5 Hz, CH), 86.9 (CH), 87.0 (CH), 116.2 (d, 3Jc-p = 3.1 Hz, CH), 116.5 (d, 3Jc-p = 3.5 Hz, CH), 122.5 (CH), 122.6 (CH), 125.4 (CH), 125.5 (CH), 125.6 (CH), 125.7 (CH), 126.1 (CH), 126.2 (CH), 126.5 (CH), 126.6 (CH), 127.6 (CH), 127.7 (Cx2), 127.8 (CH), 127.9 (CH), 128.9 (CH),
129.0 (CH), 136.3 (C), 141.6 (d, 1Jc-F = 233.4 Hz, C), 141.7 (d, 1Jc-f = 234.1 Hz, C), 147.8 (d, 2Jc-p = 7.9 Hz, C), 148.0 (d, 2Jc-p = 7.2 Hz, C), 150.6 (C), 159.4 (d, 2Jc-f = 27.0 Hz, C), 175.2 (d, 3Jc-p = 3.9 Hz, C), 175.5 (d, 3Jc-p = 3.9 Hz, C), m/z (ES) 560 (MNa+, 100 %); HpLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros con tR 28.45 min. y tR 28.85 min. (73% : 25%).
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imagen14
El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.40 mL, 5.07 mmol) y 1-naftil(etoxi-L-alaninil) fosforocloridato (1.04 g, 3.04 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (47.0 mg, 4 %) [Rf = 0.25 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 574.1360. C24H27NsOgNaPF requiere [MNa+], 574.1367); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p4.34, 4.55; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.31, -167.16; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.20 (t, 3H, J =7.0 Hz, CH2CH3, un diast.), 1.21 (t, 3H, J = 7.0 Hz, CH2CH3, un diast.), 1.33-1.37 (m, 3H, CHCH3), 1.73-1.86 (m, 1H, H-2'), 2.12-2.21 (m, 1H, H-2'), 4.01-4.07 (m, 1H, CHCH3), 4.08-4.13 (m, 3H, CH2CH3, H-4'), 4.31-4.43 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 6.11-6.19 (m, 1H, H-1'), 7.39-7.46 (m, 1H, ArH), 7.50-7.57 (m, 3H, ArH), 7.68-7.75 (m, 2H, ArH, H-6), 7.86-7.91 (m, 1H, ArH), 8.15-8.20 (m, 1H, ArH); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 14.4 (CH3), 20.3 (d, 3Jc-p = 7.4 Hz, CH3), 20.5 (d, 3Jc-p = 6.2 Hz, CH3), 40.8 (CH2), 40.9 (CH2), 51.8 (CH), 51.9 (CH), 62.4 (CH2), 62.5 (CH2), 67.8 (d, 2Jc-p = 4.6 Hz, CH2), 67.9 (d, 2Jc-p = 4.6 Hz, CH2), 72.0 (CH), 72.1 (CH),
86.7 (d, 3Jc-p = 8.4 Hz, CH), 86.8 (d, 3Jc-p = 8.4 Hz, CH), 86.9 (CH), 87.0 (CH), 116.1 (d, 3Jc-p = 3.5 Hz, CH), 116.5 (d, 3Jc- p = 3.5 Hz, CH), 122.6 (CH), 125.4 (CH), 125.5 (CH), 125.7 (CH), 125.8 (CH), 126.1 (CH), 126.2 (CH), 126.5 (CH), 126.6 (CH), 127.5 (CH), 127.6 (C), 127.7 (C), 127.8 (CH), 127.9 (CH), 128.9 (CH), 129.0 (CH), 136.3 (C), 141.6 (d, 1Jc-f = 233.3 Hz, C), 141.7 (d, 1Jc-f = 233.4 Hz, C), 147.8 (d, 2Jc-p= 6.9 Hz, C), 148.0 (d, 2Jc-p = 6.9 Hz, C), 150.6 (C), 159.3 (d, 2Jc-f =
26.3 Hz, C), 174.8 (d, 3Jc-p = 4.8 Hz, C), 175.1 (d, 3Jc-p = 4.0 Hz, C); m/z (ES) 574 (MNa+, 100 %); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros con tR 30.77 min. y tR31.20 min. (51 %: 48 %).
5-Fluoro-2'desoxiuridina-5'-0-[1-naftil (isopropoxi-L-alaninil)] fosfato (CPF387) (proporcionado como ejemplo de referencia)
o
imagen15
NH
El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.10 g, 0.40 mmol), cloruro de terc-butilmagnesio en tetrahidrofurano (tBuMgCl) (1.0 M, 0.61 mL, 0.61 mmol) y 1-naftil(isopropoxi-L-alaninil) fosforocloridato (0.31 g, 0.89 mmol) de acuerdo con el procedimiento general E. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (71.0 mg, 17 %) [Rf = 0.21 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 588.1521. C25H29N3O9NaPF requiere [MNa+], 588.1523); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 4.38, 4.58; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.43, -167.26; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.19-1.23 (m, 6H, CH(CH3)2), 1.34-1.38 (m, 3H, CHCH3), 1.68-1.84 (m, 1H, H-2'), 2.09-2.20 (m, 1H, H-2'), 3.96-4.05 (m, 1H, CHCH3), 4.07-4.12 (m, 1H, H-4'), 4.29-4.38 (m, 2H, CH2OP), 4.39-4.42 (m, 1H, H-3'), 4.93-5.01 (m, 1H, CH(CH3)2), 5.10-6.18 (m, 1H, H-1'), 7.40-7.46 (m, 1H, ArH), 7.50-7.57 (m, 3H, ArH), 7.70-7.75 (m, 2H, H-6, ArH), 7.87-7.92 (m, 1H, ArH), 8.16-8.20 (m, 1H, ArH); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 20.3 (d, 3Jc-p = 7.1 Hz, CH3), 20.5 (d, 3Jc-p = 6.6 Hz, CH3),
21.8 (CH3), 21.9 (CH3), 22.0 (CH3), 22.1 (CH3), 40.8 (CH2), 40.9 (CH2), 51.9 (CH), 52.0 (CH), 67.8 (d, 2Jcp = 4.5 Hz, CH2),
67.9 (d, 2Jc-p = 4.8 Hz, CH2), 70.2 (CH), 70.3 (CH), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 86.6 (CH), 86.7 (CH), 86.9 (d, 3Jc-p = 8.6 Hz, CH), 87.0 (d, 3Jc-p = 8.6 Hz, CH), 116.2 (d, 3Jc-p = 2.5 Hz, CH), 116.5 (d, 3Jc-p = 2.7 Hz, CH), 122.6 (CH), 125.5 (CH),
125.7 (CH), 126.1 (CH), 126.2 (CH), 126.5 (CH), 127.5 (CH), 127.6 (C), 127.7 (C), 127.8 (CH), 127.9 (CH), 128.9 (CH),
129.0 (CH), 136.3 (C), 141.6 (d, 1Jc-f = 233.2 Hz, C), 141.7 (d, 1Jc-f = 233.4 Hz, C), 147.7 (d, 2Jc-p = 7.6 Hz, C), 147.9 (d, 2Jc-p = 7.7 Hz, C), 150.5 (C), 159.4 (d, 2Jc-f = 26.2 Hz, C), 174.4 (d, 3Jc-p = 5.0 Hz, C), 174.7 (d, 3Jc-p = 5.1 Hz, C); m/z (ES) 588 (MNa+, 100 %); HpLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros con tR 32.20 min. y tR 32.80 min. (27 % : 69 %).
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.30 g, 1.21 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.48 mL, 6.09 mmol) y fenil(ciclohexoxi-L-alaninil)fosforocloridato (1.45 g, 3.65 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (6.7 mg, 3 %) [Rf = 0.47 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)]; (Found: MNH4+, 623.2261. C2sH37N4OgNaPF requiere [MNH4+], 623.2282); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 4.35, 4.52; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.31, -167.17; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.30-1.43 (m, 3H, CHCH3), 1.44-1.56 (m, 4H, CH(CH2)5), 1.57-1.66 (m, 1H, CH(CH2)a), 1.67-1.83 (m, 5H, CH(CH2)a), 1.84-1.93 (m, 1H, H-2'), 2.09-2.20 (m, 1H, H-2'), 3.98-4.06 (m, 1H, CHCH3), 4.07-4.15 (m, 1H, H-4'), 4.29-4.38 (m, 2H, CH2OP), 4.39-4.44 (m, 1H, H-3'), 4.67-4.76 (m, 1H, CH(CH2)5), 6.09-6.19 (m, 1H, H-1'), 7.38-7.57 (m, 5H, ArH), 7.68-7.75 (m, 1H, ArH), 7.79-7.92 (m, 1H, ArH), 8.17 (d, 1H, 3Jh-f = 6.6 Hz, H-6); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 20.4 (d, 3Jc-p = 8.0 Hz, CH3), 20.6 (d, 3Jc-p = 6.5 Hz, CH), 24.5 (CH2), 26.3 (CH2), 32.3 (CH2), 40.8 (CH2), 51.8 (CH), 51.9 (CH), 67.8 (CH2), 72.0 (CH), 72.2 (CH), 75.0 (CH), 86.7 (d, 3Jc- p = 8.2 Hz, CH), 87.0 (CH), 116.1 (d, 3Jc-p = 2.5 Hz, CH), 116.4 (d, 3Jc-p = 3.0 Hz, CH), 122.6 (CH), 124.8 (CH), 125.9 (CH), 126.1 (CH), 126.2 (CH), 126.4 (CH), 126.5 (CH), 126.6 (CH), 127.6 (CH), 127.7 (Cx2), 127.8 (CH), 127.9 (CH),
128.9 (CH), 129.0 (CH), 136.3 (C), 141.6 (C), 148.0 (d, 2Jc-p =7.2 Hz, C), 150.6 (C), 159.4 (d, 2Jc-f = 27.0 Hz, C), 175.2 (d, Jc-p = 3.9 Hz, C), 175.5 (d, 3Jc-p = 3.9 Hz, C); m/z (ES) 623 (MNH4+, 100 %); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros con tR 30.50 min. y tR 31.48 min. (27 % : 69 %).
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-a,a-dimetilglicina)]fosfato (CPF393) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.40 g, 1.62 mmol), cloruro de terc-butilmagnesio en tetrahidrofurano (tBuMgCl) (1.0 M, 2.43 mL, 2.43 mmol) y fenil(benzoxi-a,a-dimetilglicina) fosforocloridato (1.17 g, 3.20 mmol) de acuerdo con el procedimiento general E. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (69.0 mg, 7 %) [Rf = 0.27 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 600.1527. C26H29N3O9NaPF requiere [MNa+], 600.1523); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 2.42, 2.47; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.80, -167.62; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.51-1.60 (m, 6H, C(CH3)2), 1.89-1.97 (m, 1H, H-2', un diast.), 2.07-2.15 (m, 1H, H-2', un diast.), 2.21 (ddd, 1H, J =3.4 Hz, 5.9 Hz, 13.5 Hz, H-2', un diast.), 2.29 (ddd, 1H, J =3.2 Hz, 6.1 Hz, 13.5 Hz, H-2', un diast.), 4.00-4.07 (m, 1H, H-4'), 4.22-4.31 (m, 2H, CH2OP), 4.32-4.36 (m, 1H, H-3', un diast.), 4.37-4.41 (m, 1H, H-3', un diast.), 5.08-5.18 (m, 2H, OCH2Ph), 6.19-6.25 (m, 1H, H-1'), 7.20-7.26 (m, 3H, ArH), 7.27-7.39 (m, 7H, ArH), 7.74 (d, 3Jh-f =6.4 Hz, H-6, un diast.), 7.80 (d, 3Jh-f = 6.4 Hz, H-6, un diast.); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 27.5 (CH3), 27.7 (d, 3Jc-p = 7.1 Hz, CH3), 27.8 (d, 3Jc-p = 7.1 Hz, CH3), 40.8 (CH2), 40.9 (CH2), 58.2 (C), 58.3 (C), 67.6 (d, 2Jc-p = 5.5 Hz, CH2), 67.7 (d, 2JC-p = 5.5 Hz, CH2),
68.3 (CH2), 71.9 (CH), 72.0 (CH), 86.6 (d, 3Jc-p = 8.1 Hz, CH), 86.8 (d, 3Jc-p =7.3 Hz, CH), 86.9 (CH), 121.4 (d, 3Jc-p = 4.8 Hz, CH), 121.6 (d, 3Jc-p = 4.5 Hz, CH), 125.6 (CH), 125.8 (CH), 125.9 (CH), 126.1 (CH), 126.2 (CH), 129.3 (CH), 129.4 (CH), 129.6 (CH), 130.7 (CH), 130.8 (CH), 137.2 (C), 137.3 (C), 141.8 (d, 1Jc-f = 233.7 Hz, C), 150.6 (C), 152.1 (d, 4Jc-f =
7.0 Hz, C), 152.1 (d,4Jc-F = 7.6 Hz, C), 159.3 (d, 2Jc-f = 26.1 Hz, C), 159.4 (d, 2Jc-f = 26.1 Hz, C), 176.5 (d, 3Jc-p = 4.0 Hz, C), 176.6 (d, 3Jc-p = 3.8 Hz, C), m/z (ES) 600.1 (MNa+, 100 %); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 35 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró un pico de la mezcla de diastereoisómeros con tR 17.71 (96 %).
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5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(etoxi-a,a-dimetilglicina)]fosfato (CPF394) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.20 g, 0.80 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.31 mL, 4.0 mmol) fenil(etoxi-a,a-dimetilglicina) fosforocloridato (0.73 g, 2.40 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (25.0 mg, 6 %) [Rf = 0.24 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 538.1367. C21H27NsOgNaPF requiere [MNa+], 538.1367); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p2.49, 2.52; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.62, -167.58; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.24 (t, 3H, J =7.1 Hz, CH2CH3, un diast.), 1.26 (t, 3H, J = 7.1 Hz, CH2CH3, un diast.), 1.44-1.54 (m, 6H, C(CH3)2), 1.95-2.04 (m, 1H, H-2', un diast.), 2.13-2.21 (m, 1H, H-2', un diast.), 2.24 (ddd, 1H, J =3.1 Hz, J = 6.3 Hz, J = 13.5 Hz, H-2', un diast.), 2.31 (ddd, 1H, J =3.2 Hz, J = 6.1 Hz, J =
13.7 Hz, H-2', un diast.), 4.08-4.19 (m, 3H, CH2CH3, H-4'), 4.33-4.49 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 6.20-6.30 (m, 1H, H-1'), 7.237.28 (m, 3H, ArH), 7.33-7.40 (m, 2H, ArH), 7.80 (d, 3Jh-f = 6.4 Hz, H-6, un diast.), 7.88 (d, 3Jh-f = 6.4 Hz, H-6, un diast.); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 14.4 (CH3), 14.5 (CH3), 27.5 (d, 3Jc-p = 7.3 Hz, CH3), 27.7 (d, 3Jc-p = 7.6 Hz, CH3), 27.8 (d, 3Jc-p = 7.6 Hz, CH3), 40.8 (CH2), 40.9 (CH2), 58.1 (C), 62.6 (CH2), 62.7 (CH2), 67.6 (d, 2Jc-p = 6.7 Hz, CH2), 67.7 (d, 2Jc-p = 5.8 Hz, CH2), 71.9 (CH), 72.0 (CH), 86.6 (d, 3Jc-p =8.1 Hz, CH), 86.8 (d, 3Jc-p = 7.6 Hz, CH), 86.9 (CH), 121.4 (d, 3Jc-p = 4.4 Hz, CH), 121.6 (d, 3Jc-p = 4.4 Hz, CH), 125.6 (CH), 125.8 (CH), 125.9 (CH), 126.1 (CH), 126.2 (CH), 130.7 (CH), 130.8 (CH), 130.9 (CH), 141.8 (d, 1Jc-f = 233.5 Hz, C), 150.6 (C), 150.7 (C), 152.2 (d, 4Jc-f = 7.3 Hz, C), 152.3 (d, 4Jc-f = 6.9 Hz, C), 159.2 (d, 2Jc-f = 20.3 Hz, C), 159.4 (d, 2Jc-f = 20.4 Hz, C), 176.6 (d, 3Jc-p = 4.2 Hz, C), 176.8 (d, 3Jc-p = 4.6 Hz, C), m/z (ES) 538.1 (MNa+, 100 %); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros con ír 18.76 min. y ír 20.44 min. (68 % : 30 %).
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(benzoxi-a,a-dimetilglicina)]fosfato (CPF395) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.40 g, 1.62 mmol), N-metilimidazol (NMI) (0.64 mL, 8.0 mmol) 1-naftil(benzoxi-a,a-dimetilglicina) fosforocloridato (2.00 g, 4.80 mmol) de acuerdo con el procedimiento general D. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (16.4 mg, 6 %) [Rf = 0.15 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 650.1678. C30H31N3O9NaPF requiere [MNa+], 650.1680); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 2.87, 3.03; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f-167.95, -167.13; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.37-1.42 (m, 6H, C(CH3)2), 1.61-1.69 (m, 1H, H-2', un diast.), 1.79-1.87 (m, 1H, H-2', un diast.), 2.06 (ddd, 1H, J = 3.0 Hz, J = 6.1 Hz, J = 13.6 Hz, H-2', un diast.), 2.15 (ddd, 1H, J = 3.2 Hz, J = 5.9 Hz, J = 13.7 Hz, H-2', un diast.), 3.98-4.04 (m, 1H, H-4'), 4.19-4.35 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 5.09-5.13 (m, 1H, OCHHPh), 5.18-5.19 (m, 1H, OCHHPh), 6.05-6.15 (m, 1H, H-1'), 7.28-7.40 (m, 7H, ArH), 7.48-7.55 (m, 3H, ArH), 7.62 (d, 3Jh-f = 6.4 Hz, H-6, un diast.), 7.70 (d, 3Jh-f = 6.4 Hz, H-6, un diast.), 7.86-7.90 (m, 1H, ArH), 8.17-8.22 (m, 1H, ArH); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 27.5 (d, 3Jc-p = 4.4 Hz, CH3), 27.9 (d, 3Jc-p = 7.3 Hz, CH3),
28.0 (d, 3Jc-p = 7.3 Hz, CH3), 40.7 (CH2), 40.8 (CH2), 65.2 (C), 67.8 (d, 2Jc-p = 6.5 Hz, CH2), 68.3 (CH2), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 86.6 (d, 3Jc-p = 8.2 Hz, CH), 86.8 (d, 3Jc-p = 7.8 Hz, CH), 86.9 (CH), 116.3 (d, 3Jc-p = 3.2 Hz, CH), 116.7 (d, 3Jc-p =
2.9 Hz, CH), 122.8 (CH), 122.9 (CH), 125.4 (CH), 125.5 (CH), 125.6 (CH), 126.0 (CH), 126.1 (CH), 126.4 (CH), 126.5 (CH), 127.4 (CH), 127.5 (CH), 127.7 (CH), 127.8 (CH), 127.9 (C), 128.0 (CH), 128.9 (CH), 129.3 (CH), 129.4 (CH), 129.6 (CH), 136.2 (C), 137.3 (C), 141.8 (d, 1Jc-f = 234.4 Hz, C), 147.9 (d, 3Jc-p =7.7 Hz, C), 148.0 (d, 3Jc-p = 8.2 Hz, C), 150.7
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(d, 4Jc-f = 3.7 Hz, C), 159.5 (d, 2Jcf = 25.8 Hz, C), 159.6 (d, 2Jcf = 25.8 Hz, C), 176.5 (C), 176.6 (C), m/z (ES) 650.0 (MNa+, 100 %); HPlC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró dos picos de los diastereoisómeros confR 20.80 min. y fR 21.00 min. (72 % : 24 %).
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(etoxi-a,a-dimetilglicina)]fosfato (CPF396) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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El fosforamidato se preparó mediante el uso de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (0.40 g, 1.62 mmol), cloruro de ferc-butilmagnesio en tetrahidrofurano (tBuMgCl) (1.0 M, 2.43 mL, 2.43 mmol) y 1-naftil(etoxi-a,a-dimetilglicina) fosforocloridato (1.14 g, 3.20 mmol) de acuerdo con el procedimiento general E. Purificación por cromatografía en columna de gradiente mediante elución con CH2Cl2 hasta CH2Cl2-MeOH (95:5) proporcionó el compuesto del título como un sólido incoloro (54.0 mg, 2 %) [Rf = 0.10 (CH2Cl2-MeOH, 95:5)], (Encontrado: MNa+, 588.1528. C25H2gN3OgNaPF requiere [MNa+], 588.1523); 31P RMN (202 MHz, MeOD): ™p 2.91, 3.03; 19F RMN (470 MHz, MeOD): ™f -167.38, -167.21; 1H RMN (500 MHz, MeOD): ™h 1.24 (t, 3H, J = 7.1 Hz, CH2CH3, un diast.), 1.25 (t, 3H, J = 7.1 Hz, CH2CH3, un diast.), 1.50-1.55 (m, 6H, C(CH3^), 1.68-1.76 (m, 1H, H-2', un diast.), 1.87-1.94 (m, 1H, H-2', un diast.), 2.09 (ddd, 1H, J= 2.9 Hz, J =6.3 Hz, J =13.4 Hz, H- 2', un diast.), 2.19 (ddd, 1H, J = 3.0 Hz, J = 6.3 Hz, J = 13.8 Hz, H-2', un diast.), 4.07-4.10 (m, 1H, H-4'), 4.16 (q, 2H, J =
7.1 Hz, CH2CH3), 4.36-4.41 (m, 3H, CH2OP, H-3'), 6.10-6.18 (m, 1H, H-1'), 7.40-7.46 (m, 1H, ArH), 7.50-7.59 (m, 3H, ArH), 7.66-7.72 (m, 2H, ArH, H-6), 7.85-7.91 (m, 1H, ArH), 8.18-8.24 (m, 1H, ArH); 13C RMN (125 MHz, MeOD): ™c 14.4 (CH3),
27.5 (br s, CH3), 27.9 (d, 3Jc-p = 6.1 Hz, CH3), 28.0 (d, 3Jc-p = 6.1 Hz, CH3), 40.7 (CH2), 40.8 (CH2), 58.2 (C), 58.3 (C), 62.6 (CH2), 67.8 (d, 2Jc-P = 4.9 Hz, CH2), 67.9 (d, 2Jc-p = 4.5 Hz, CH2), 72.0 (CH), 72.1 (CH), 86.7 (d, 3Jc-p = 7.7 Hz, CH), 86.9 (d, 3Jc-p = 7.3 Hz, CH), 87.0 (CH), 116.3 (d, 3Jc-p = 3.2 Hz, CH), 116.6 (d, 3Jc-p = 2.9 Hz, CH), 122.8 (CH), 122.9 (CH), 125.4 (CH), 125.6 (CH), 125.7 (CH), 126.0 (CH), 126.1 (CH), 126.5 (CH), 127.4 (CH), 127.5 (CH), 127.7 (CH), 127.8 (CH),
127.9 (C), 128.0 (C), 128.9 (CH), 136.2 (C), 141.8 (d, 1Jc-f = 233.5 Hz, C), 148.0 (d, 2Jc-p =7.3 Hz, C), 148.1 (d, 2Jc-p = 7.6 Hz, C), 150.5 (C), 150.6 (C), 159.3 (d, 2Jc-f = 26.2 Hz, C), 159.4 (d, 2Jc-f = 26.6 Hz, C), 176.8 (C), 176.9 (C); m/z (ES)
588.1 (MNa+, 100 %); HPLC de fase inversa eluyendo con H2O/MeOH de 100/0 a 0/100 en 45 minutos, 1 mL/min, L = 275 nm, mostró un pico de la mezcla de diastereoisómeros confR 16.05 min. (96 %).
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-L-prolinil)]fosfato (CPF583) (proporcionado como ejemplo de referencia)
imagen23
Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar D a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), NMI (0.41 g, 5.07 mmol, 0.40 mL) y fenil(benzoxi-L-prolinil)-fosfocloridato (0.77 g, 2.03 mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna seguida de dos purificaciones por TLC preparativas dio el producto como un sólido blanco (0.010 g, 2 %). 31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 1.82 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.91
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 7.84 (d, J = 7.18 Hz, 1H, H-base), 7.39-7.33 (m, 7H, H-Ar), 7.22-7.19 (m, 3H, H-Ar), 6.26 -6.23 (m, 1H, H-1'), 5.22-5.13 (m, CH2Ph éster), 4.40-4.35 (m, 3H, NCH, 2 x H-5'), 4.33-4.28 (m, 1H, H-3'), 4.06-4.04 (m, 1H, H-4'), 3.36-3.32 (m, 2H, NCH2), 2.26-2.19 (m, 1H, H-2'), 2.18-2.13 (m, 1H, CH2-L-Pro), 2.00-1.81 (m, 4H, 3x H, CH2-L-Pro, 1 x H, H-2')
13C-RMN (MeOD, 125 MHz) 5 174.81 (C=O, éster), 159.40 (C=O, base), 152.0 (d, 2Jc-p = 6.32 Hz, OC-Ar), 150.71 (C=O, base), 141.88 (1Jc-f = 232 Hz, CF, base), 137.23 (CAr), 131.33, 129.70, 129.48, 129.45, 129.30, 126.45 (CH-Ar), 125.80, 125.53 (2 x d, 2Jc-f = 29.0 Hz, CH-base), 121.00, 120.96 (CH-Ar), 87.80 (C-1'), 86.80 (C-4'), 72.02 (C-3'), 68.16 (CH2Ph), 67.64 (d, 2Jc-p = 4.65 Hz, C-5'), 62.40 (d, 2Jc-p = 5.60 Hz, NCH), 48.03 (d, 2Jc-p = 4.80 Hz, NCH2), 41.07 (C-2'), 32.18, 32.11 (CH2-L-Pro), 26.29, 26.21 (CH2-L-Pro).
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MS (ES+) m/e: 612 (MNa+, 100%), 590 (MH+, 1 %) Masa exacta: C27H29FN3O9P requirió 589.51 5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(benzoxi-L-prolinil)]fosfato (CPF577) (proporcionado como ejemplo de referencia)
imagen24
Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar D a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), NMI (0.41 g, 5.07 mmol, 0.40 mL)y 1-naftil(benzoxi-L-prolinil)-fosfocloridato (0.84 g, 2.03 mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna seguida de dos purificaciones por TLC preparativas dio el producto como un sólido blanco (0.006 g, 1 %). 31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 2.27 19F-RMN (MeOD, 121 MHz) 5 - 167.46
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.14 - 8.12 (m, 1H, H-Ar), 7.90 - 7.89 (m, 1H, H-Ar), 7.74 - 7.71 (m, 2H, 1 x H-Ar, 1 x H- base), 7.56-7.42 (m, 4H, H-Ar), 7.36- 7.33 (m, 5H, H-Ar), 6.13 (t, J =6.38 Hz, H-1'), 5.22-5.13 (m, 2H, CH2PI-1), 4.494.46 (m, 1H, NCH), 4.42 - 4.33 (m, 2H, H-5'), 4.25 - 4.23 (m, 1H, H-3'), 4.06 - 4.04 (m, 1H, H-4'), 3.36 - 3.34 (m, 2H, NCH2), 2.23-2.15 (m, 1H, CH2-L-Pro), 2.10-2.02 (m, 2H, 1 xH, CH2-L-Pro, 1 x H, H-2'), 1.97- 1.77 (m, 2H, CH2-L-Pro), 1.631.57 (m, 1H, H-2') 13C-RMN (MeOD, 125 MHz) 5 174.82 (C=O, éster), 159.52 (C=O, base), 150.54 (C=O, base), 147.84, 147.78 (d, 2Jc-p = 6.03 Hz, OC-Ar), 141.75, 139.97 (2xd, 1Jc-f = 232 Hz, CF, base), 137.20, 136.34 (C-Ar), 129.76, 129.65, 129.44, 129.36, 129.27, 129.06, 128.95, 128.04, 128.75, 126.56 (CH-Ar), 125.41 (d, 2Jc-f = 30.0 Hz, CH-base), 122.13 (CH-Ar), 115.76 (d, 3Jc-p = 3.3 Hz, CH-Ar), 87.06 (C-1'), 86.79 (C-4'), 72.23 (C-3'), 68.15 (d, 2Jc-p = 5.46 Hz, C-5'), 68.08 (CH2PI-1), 62.53 (d, 2Jc-p = 5.60 Hz, NCH), 48.26 (d, 2Jc-p = 5.34 Hz, NCH2), 40.97 (C-2'), 32.16, 32.09 (CH2-L-Pro), 26.22, 26.15 (CH2-L-Pro).
5-Fluoro-2'desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(3,3-dimetil-1-butoxi-L-alaninil)]fosfato (CPF585) (proporcionado como ejemplo de referencia)
imagen25
Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar D a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), NMI (0.41 g, 5.07 mmol, 0.40 mL) y 1-naftil-(3,3-dimetil-1-butoxi-L-alaninil)-fosfocloridato (1.21 g, 3.04 mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna seguida de dos purificaciones por TLC preparativas dio el producto como un sólido blanco (0.010 g, 2 %).
31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.48, 4.33 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.30, - 167.47
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.20 - 8.17 (m, 1H, H-Ar), 7.91 - 7.89 (m, 1H, H-Ar), 7.77 - 7.72 (m, 2H, H-Ar), 7.58 - 7.51 (m, 3H, H-base, 2x H-Ar), 7.46-7.41 (2xt, 1H, J =7.8 Hz, H-Ar), 6.19-6.13 (m, 1H, H-1'), 4.42-4.40 (m, 1H, 1 x H-5'), 4.38-4.32 (m, 2H, H-3', 1 x H-5'), 4.14-4.00 (m, 4H, H-4', CHCH3, OCH2CH2(CH3)s), 2.21 -2.13 (m, 1H, 1 x H-2'), 1.91 - 1.76 (m, 1H, 1 x H-2'), 1.52 - 1.48 (m, 2H, OCH2CH2(CH3)s), 1.37 - 1.35 (m, 3H, CHCH3), 0.92, 0.91 (2 x s, 9H, OCH2CH2(CH3)3) 13C-RMN (MeOD, 125 MHz) 5 175.16, 174.84 (2xd, 3Jc-p = 4.75 Hz, C=O, éster), 159.56, 159.35 (C=O, éster), 150.61 (C=O, éster), 148.00, 147.86 (2 x d, 2Jc-p = 6.25 Hz, OC-Ar), 141.78, 141.73 (2 x d, 1Jc-f = 232 Hz, CF, base), 136.28 (C-Ar), 128.98, 128.95, 127.92, 127.90, 127.58, 126.57, 126.20, 126.14 (CH-Ar), 125.63, 125.55 (2 x d,2Jc- f = 34 Hz, CH, base), 122.65, 122.63 (CH-Ar), 116.48, 116.15 (2 x d, 3Jc-p = 3.0 Hz, CH-Ar), 87.01, 86.94 (C-1'), 86.73, 86.68 (d, 3Jc-p = 7.75 Hz, C-4'), 72.18, 72.07 (C-3'), 67.87, 67.85 (2 x d, 2Jc-p = 5.0 Hz, C-5'), 64.08, 64.05 (OCH2CH2(CH3)s), 51.86 (d, 3Jc-p = 5.5 Hz, CHCH3), 42.74 (OCH2CH2(CH3)s), 40.91, 40.83 (C-2'), 29.96 (OCH2CH2(CH3)s), 20.50, 20.34 (2 x d, 3Jc-p = 6.5 Hz, CHCH3).
MS (ES+) m/e: 630 (MNa+, 100 %), 608 (MH+, 10 %) Masa exacta: C28H35FN3O9P requirió 607.56
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Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar D a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.23 g, 0.93 mmol), NMI (0.38 g, 4.67 mmol, 0.37 mL) y 1-naftil-(cidobutoxi-L-alaninil)-fosfodoridato (0.85 g, 2.33 mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna seguida de purificación por TLC preparativa dio el producto como un sólido blanco (0.010 g, 2 %). 31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.54, 4.36 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.12, - 167.29
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.18 - 8.17 (m, 1H, H-Ar), 7.81 -7.87 (m, 1H, H-Ar), 7.74-7.71 (m, 2H, 1 x H-Ar, 1 x H- base), 7.60 - 7.53 (m, 3H, H-Ar), 7.46 - 7.43 (2 x t, J = 8.0 Hz, 1H, H-Ar), 6.18 - 6.12 (m, 1H, H-1'), 5.00 - 4.95 (m, 1H, OCH éster), 4.41 -4.36 (m, 3H, 2x H-5', H-3'), 4.11 -4.00 (m, 2H, H-4', CHCH3), 2.36-2.27 (m, 2H, CH2), 2.18-1.98 (m, 3H, CH2 éster, 1 x H-2'), 1.82- 1.56 (m, 3H, CH2 éster, 1 x H-2'), 1.36- 1.34 (m, 3H, CHCH3)
13C-RMN (MeOD, 125 MHz) 5 175.97, 173.34 (C=O, éster), 159.88 (C=O, base), 151.64 (C=O, base), 146.58 (OC-Ar), 141.15 (d, 1 Jc-f = 220 Hz, CF, base), 136.28 (CAr), 128.93, 127.89, 127.54, 126.52, 126.18, 126.14 (CH-Ar), 125.53, 125.44 (2 x d, 2Jc-f = 32.5 Hz, CH-base), 122.63 (CH-Ar), 116.46, 116.44 (2 x d, 3Jc-p = 2.5 Hz, CH-Ar), 86.98 (d, 3Jc-p = 6.25 Hz, C-4'), 86.71 (C-1'), 72.14, 72.04 (C-3'), 71.07 (OCH éster), 67.83 (d, 2Jc-p = 7.38 Hz, C-5'), 51.66 (d, 2Jc-p = 8.75 Hz, CHCH3), 40.89, 40.83 (C-2'), 31.03 (OCHCH2), 20.43 (CHCH3), 14.23 (CH2 éster).
MS (ES+) m/e: 600 (MNa+, 100 %), 578 (MH+, 10 %) Masa exacta: C26H29FN3O9P requirió 577.50
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1-naftil-(ciclopropilmetanoxi-L-alaninil)] fosfato (CPF579) (proporcionado como ejemplo de referencia)
imagen27
Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar D a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), NMI (0.41 g, 5.07 mmol, 0.40 mL) y 1-naftil-(ciclopropilmetanoxi-L-alaninil)-fosfocloridato (0.93 g, 2.54 mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna dio el producto como un sólido blanco (0.056 g, 10 %).
31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.58, 4.30 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.18, - 167.22
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.18 (d, J =7.0 Hz, 1H, H-Ar), 7.89 -7.87 (m, 1H, H-Ar), 7.73 - 7.70 (m, 2H, H-Ar), 7.58 - 7.53 (m, 3H, H-Ar), 7.45-7.40 (2xt, J =8.0 Hz, 1H, H-Ar), 6.17-6.11 (m, 1H, H-1'), 4.43-4.41 (m, 1H, H-5'), 4.38-4.32 (m, 2H, H-5', H-3'), 4.11 - 4.04 (m, 2H, H-4', CHCH3), 3.95 - 3.85 (m, 2H, OCH2 éster), 2.19 - 2.11 (m, 1H, H-2'), 1.84 - 1.72 (m, 1H, H-2'), 1.38, 1.36 (2 xd, J =5.0 Hz, 3H, CHCH3), 1.15-1.07 (m, 1H, OCH2CH éster), 0.59-0.50(m, 2H, CH2 éster), 0.30 - 0.24 (m, 2H, CH2 éster)
13C-RMN (MeOD, 125 MHz) 5 175.25, 174.94 (2 x d, 3Jc-p = 4.75 Hz, C=O, éster), 159.54, 159.35 (C=O, base), 150.60, 150.56 (C=O, base), 148.05, 147.86 (2 xd, 2Jc-p = 7.5 Hz, OC-Ar), 141.79, 141.73 (2xd, Jc-f = 232 Hz, CF, base), 136.29 (C-Ar), 128.94 (d, 3Jc-p = 4.4 Hz, CH-Ar), 127.89 (d, 4Jc-p = 3.7 Hz, CH-Ar), 127.56, 126.55, 126.52, 126.19, 126.16 (CH- Ar), 125.64, 125.53 (2Jc-f = 34 Hz, CH-base), 122.65 (CH-Ar), 116.54, 116.24 (2 x d, 4Jc-p = 2.6 Hz, CH-Ar), 87.04, 86.99 (C-1'), 86.90, 86.73 (2 xd, 3Jc-p = 7.1 Hz, C-4'), 72.18, 72.07 (C-3'), 71.21, 71.18 (OCH2, éster), 67.87, 67.84 (t aparente, 2Jc-p = 5.0 Hz, C-5'), 51.88 (d, 2Jc-p = 10.0 Hz, CHCH3), 40.91, 40.83 (C-2'), 20.60, 20.46 (2 xd, 3Jc-p = 6.5 Hz, CHCH3), 10.69 (OCH2CH éster), 3.70, 3.65 (2 x CH2, éster).
MS (ES+) m/e: 600 (MNa+, 100 %), 578 (MH+, 15 %) Masa exacta: C26H29FN3O9P requirió 577.50.
HPLCb (H2O/Acetonitrilo de 100/0 a 0/100 en 35 min) TA 12.91 min.
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Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar E a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), fBuMgCl (1.1 mL, 1.1 mmol) y 1-naftil-(tetrahidropiroxi-L-alaninil)-fosfodoridato (0.80 g, 2.03 mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna seguida de dos purificaciones por TLC preparativas dio el producto como un sólido blanco (0.010 g, 1.6 %).
31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 3.77, 3.22 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 168.27, - 168.35
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.60 (d, J =7.0 Hz, 2H, H-Ar), 8.22-8.19 (m, 1H, H-Ar), 7.92-7.91 (d, J =5.50 Hz, 1H, H- Ar), 7.60- 7.45 (m, 4H, H-Ar, H-base), 6.29-6.25 (m, 1H, H-1'), 5.25 - 5.17 (m, 1H, H-3'), 4.96 - 4.87 (m, 1H, CH-éster), 4.28-4.26 (m, 1H, H-4'), 4.11 -4.03 (m, 1H, CHCH3), 3.88-3.66 (m, 4H,2xOCH2a' éster, 2x H-5'), 3.55 - 3.50 (m, 2H, 2 x OCH2a" éster), 2.63 - 2.30 (m, 2H, H-2'), 1.91 - 1.85 (m, 2H, 2 x CH2b' éster), 1.65 - 1.54 (m, 2H, CH2b" éster), 1.39 - 1.35 (m, 3H, CHCH3). 13C-RMN (MeOD, 125 MHz) 5 174.34 (C=O, éster), 159.24 (C=O, base), 150.76 (C=O, base), 148.03 (OC-Ar), 141.97 (d, 1Jc-f = 238 Hz, CF, base), 136.37 (C-Ar), 128.97, 128.56, 127.61, 127.57, 126.58, 126.23, 126.16, 126.12, 125.84 (CH-Ar), 122.70 (d, 2Jc-f = 24.0 Hz, CH-base), 116.62, 116.37 (CH-Ar), 87.54 (d, 3Jc-p = 5.40 Hz, C-4'), 86.60, 86.57 (C-1'), 79.82, 79.47 (C-3'), 71.45 (CH-éster), 66.12, 66.08 (2 x OCH2a éster), 66.02 (C-5'), 51.83 (CHCH3), 39.97, 39.94 (C-2'), 32.65, 32.57 (2 x CH2b éster), 20.45, 20.30 (CHCH3).
MS (ES+) m/e: 630 (MNa+, 100 %), 608 (MH+, 10 %) Masa exacta: C27H31FN3O10P requirió 607.52.
5-Fluoro-2'desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(pentoxi-L-alaninil)]fosfato (CPF581) (proporcionado como ejemplo de referencia)
imagen29
Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar E a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), fBuMgCl (1.1 mL, 1.1 mmol) y 1-naftil-(pentoxi-L-alaninil)-fosfocloridato (0.78 g, 2.03 mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna dio el producto como un sólido blanco (0.047 g, 8 %).
31 P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.48, 4.32 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.18, - 167.29
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.25- 8.17 (m, 1H, H-Ar), 8.05 - 7.95 (m, 2H, H-Ar), 7.85 - 7.60 (m, 2H, H-Ar, H-base), 7.65 - 7.48 (m, 3H, H-Ar), 6.30 - 6.18 (m, 1H, H-1'), 4.60 - 4.37 (m, 3H, 2 x H-5', H-3'), 4.28 - 4.00 (m, 4H, H-4', CHCH3, OCH2CH2CH2CH2CH3), 2.32 - 2.12 (m, 1H, H-2'), 1.95 - 1.75 (m, 1H, H-2'), 1.70 - 1.55 (m, 2H, OCH2CH2CH2CH2CH3), 1.50 - 1.28 (m, 7H, 4 x H OCH2CH2CH2CH2CH3, CHCH3), 0.83, 0.82 (2 x d, J = 7.9 Hz, 3H, OCH2CH2CH2CH2CH3) 13C-RMN (MeOD, 125 MHz) 5 175.22, 174.91 (C=O, éster), 159.5 (C=O, base), 150.54 (C=O, base), 147.90, 147.88 (OCAr), 141.75 (d, 1Jc-f = 225 Hz, CF, base), 136.37 (CAr), 128.95, 127.90, 127.56, 126.55, 126.19 (CH-Ar), 125.64, 125.53 (2 xd, 2Jc-f = 34.0 Hz, CH-base), 122.65 (CH-Ar), 116.51, 116.21 (CH-Ar), 87.03, 86.96 (C-1'), 86.85, 86.74 (C-4'), 72.16,
72.05 (C-3'), 67.87 (d, 2Jc-p = 5.0 Hz, C-5'), 66.54 (OCH2), 51.87, 51.81 (d, 2Jc-p = 7.5 Hz, CHCH3), 40.87, 40.80 (C-2'), 29.35, 29.10 (CH2 éster), 23.33 (CH2 éster), 20.60, 20.43 (2 x d, 3Jc-p = 6.5 Hz, CHCH3), 14.28 (CH3, éster).
MS (ES+) m/e: 616 (MNa+, 100 %), 594 (MH+, 10 %) Masa exacta: C27H33FN3O9P requirió 593.54.
HPLCb (H2O/Acetonitrilo de 100/0 a 0/100 en 35 min) TA 15.56 min.
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1-naftil-(ciclopentoxi-L-alaninil)] fosfato (CPF582) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar E a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), fBuMgCl (1.1 mL, 1.1 mmol) y 1-naftil-(ddopentoxi-L-alaninil)-fosfodoridato (0.77 g, 2.03 mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna dio el producto como un sólido blanco (0.030 g, 5 %).
31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.53, 4.37 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.07, - 167.19
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.18 - 8.16 (m, 1H, H-Ar), 7.89-7.85 (m, 1H, H-Ar), 7.70 (t aparente, J = 6.50 Hz, 2H, H-Ar), 7.57-7.50 (m, 3H, 2x H-Ar, H-base), 7.45-7.40 (m, 1H, H-Ar), 6.16 - 6.11 (m, 1H, H-1'), 5.15-5.09 (m, 1H, OCH éster), 4.41 -4.30 (m, 3H, 2 x H-5', H-3'), 4.11 -4.08 (m, 1H, H-4'), 4.04-3. 98 (m, 1H, CHCH3), 2.19 - 2.10 (m, 1H, H-2'), 1.861.73 (m, 3H, OCHCH2 éster), 1.73 - 1.56 (m, 6H, H-2', CH2 éster), 1.35, 1.34 (2 x d, J = 6.57 Hz, CHCH3)
13C-RMN (MeOD, 125 MHz) 5 174.68, 174.64 (C=O, éster), 159.27 (C=O, base), 150.51 (C=O, base), 147.86 (d, 2Jc-p =
7.5 Hz, OC-Ar), 141.78, 141.72 (2 x d, 1Jc-f = 232 Hz, CF-base), 136.30 (C-Ar), 128.95, 128.54, 127.94, 127.80, 127.60, 127.56, 127.17, 126.80, 126.54, 126.19, 126.16 (CH-Ar), 125.66, 125.53 (2 x d, 2Jc-f = 34 Hz, CH-base), 122.65, 122.61 (CH-Ar), 116.53, 116.22 (2 x d, 4Jc-p = 3.75 Hz, CH-Ar), 86.99, 86.96 (C-1'), 86.70 (d, 3Jc-p = 7.50 Hz, C-4'), 79.64, 79.61 (OCH éster), 72.21, 72.07 (C-3'), 67.89, 67.85 (2 x d, 2Jc-p = 5.0 Hz, C-5'), 51.92 (d, 2Jc-p = 5.0 Hz, CHCH3), 40.92, 40.86 (C-2'), 33.65, 33.61, 33.52, 33.47 (2 x CH2 éster), 24.68, 24.66 (CH2 éster), 20.45, 20.30 (2 x d, 3Jc-p = 6.25 Hz, CHCH3). MS (ES+) m/e: 614 (MNa+, 100 %), 592 (MH+, 30 %) Masa exacta: C27H31FN3O9P requirió 591.52 HPLCb (H2O/Acetonitrilo de 100/0 a 0/100 en 35 min) TA 14.03 min.
5-Fluoro-2'desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(2-indanoxi-L-alaninil)]fosfato
referencia)
(CPF597) (proporcionado como ejemplo de
imagen31
Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar E a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.30 g, 1.22 mmol), fBuMgCl (1.34 mL, 1.34 mmol) y 1-naftil-(2-indanoxi-L-alaninil)-fosfocloridato (1.06 g, 2.43 mmol) en THF (20 mL). La purificación en columna dio el producto como un sólido blanco (0.045 g, 6 %).
31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.62, 4.30 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.14, - 167.34
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.15 - 8.12 (m, 1H, H-Ar, Naph), 7.89 - 7.87 (m, 1H, H-Ar, Naph), 7.72 - 7.67 (m, 2H, H-Ar, Naph), 7.56 - 7.46 (m, 3H, 2 x H-Ar, H-base), 7.40 - 7.37 (m, 1H, H-Ar), 7.20 - 7.12 (m, 4H, H-Ar, Ph), 6.14 - 6.08 (m, 1H, H-1'), 5.49-5.46 (m, 1H, OCH éster), 4.32-4.26 (m, 3H, 2x H-5', H-3'), 4.04-3.98 (m, 1H, H-4', CHCH3), 3.30-3.24 (m, 2H, 2 xCH éster), 2.99-2.91 (m, 2H, 2 x CH éster), 2.14-2.07 (m, 1H, H-2'), 1.75 - 1.64 (m, 1H, H-2'), 1.33- 1.29 (m, 3H, CHCH3)
13C-RMN (MeOD, 125 MHz) 5 175.02, 174.66 (2 x d, 3Jc-p = 3.75 Hz, C=O, éster), 159.48 (2Jc-f = 25.0 Hz, C=O, base), 150.57 (C=O, base), 147.97, 147.80 (2 x d, 2Jc-p = 7.5 Hz, OC-Ar), 141.73, 141.68 (2 x d, Jc-f = 232.5 Hz, CF-base), 141.54, 141.49, 141.48, 139.10, 136.27, 136.26 (C-Ar), 129.01, 128.94, 128.91, 127.91, 127.87, 128.85, 127.80, 127.77, 127.60, 127.57, 127.50, 126.20, 126.18, 125.69 (CH-Ar), 125.50, 125.43 (2xd,2Jc-f = 25 Hz, CH-base), 122.64, 122.60, 121.85 (CH-Ar), 116.57, 116.26 (2 x d, 4Jc-p = 2.5 Hz, CH-Ar), 86.96 (C-1'), 86.87, 86.66 (2 x d, 3Jc-p = 7.50 Hz, C-4'), 77.85, 79. (OCH éster), 72.21, 72.07 (C-3'), 67.77, 67.75 (2 x d, 2Jc-p = 6.25 Hz, C-5'), 51.97, 51.82 (CHCH3), 40.91, 40.86 (C-2'), 40.44, 40.43, 40.38, 40.34 (2 x CH2 éster), 20.30, 20.16 (2 x d, 3Jc-p = 6.25 Hz, CHCH3)
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-L-metioninil)]fosfato (CPF586) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar D a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), NMI (0.41 g, 5.07 mmol, 0.40 mL) y fenil(benzoxi-L-metioninil)-fosfodoridato (0.7 g, mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna dio el producto como un sólido amarillento (0.014 g, 2 %).
31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.34, 3.94 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.40, - 167.69
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 7.83 - 7.80 (m, 1H, H-Ar), 7.74 - 7.72 (m, 1H, H-Ar), 7.64 - 7.62 (m, 1H, H-Ar), 7.37 - 7.32 (m, 6H, H-Ar, H-base), 7.26 - 7.17 (m, 2H, H-Ar), 6.25 - 6.17 (m, 1H, H-1'), 5.18, 5.13 (sistema AB, Jab = 12.0 Hz, 2H, CH2PI-1), 4.40-4.35 (m, 1H, H-3'), 4.32 - 4.22 (m, 2H, H-5'), 4.16-4.03 (m, 2H, NHCH, H-4'), 2.44, 2.36 (2 xt, J =7.50 Hz, CH2S), 2.16-2.08 (m, 1H, 1 x H-2'), 1.98- 1.82 (m, 6H, 1 x H-2', NHCHCH2CH2SCH3),
MS (ES+) m/e: 646 (MNa+, 100 %), 624 (MH+, 10 %) Masa exacta: C27H31FN3O9P requirió 623.56
5-Fluoro-2'desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(benzoxi-L-fenilalaninil)]fosfato (CPF587) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar D a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), NMI (0.41 g, 5.07 mmol, 0.40 mL) y 1-naftil(benzoxi-L-fenilalaninil)-fosfocloridato (1.45 g, mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna dio el producto como un sólido blanco (0.007 g, 1 %).
31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.27, 4.14 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 166.99, - 167.18
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.11 -8.00 (m, 1H, H-Ar, Ar), 7.89-7.85 (m, 1H, H-Ar), 7.69-7.67 (m, 1H, H-Ar), 7.60-7.49 (m, 3H, 2 x H-Ar, H-base), 7.37- 7.33 (m, 2H, H-Ar), 7.25-7.12 (m, 10H, H-Ar), 6.09-6.04 (m, 1H, H-1'), 5.11 - 5.01 (m, 2H, CH2PI-1), 4.29 - 4.18 (m, 1H, CHCH3), 4.15 - 4.08 (m, 1H, H-3'), 4.02 - 3.95 (m, 2H, H-5'), 3.86 - 3.67 (m, 1H, H-4'), 3.14-3.10 (m, 1H, 1 x NHCHCH2PI-1), 2.91 -2.82 (m, 1H, 1 x NHCHCH2PI-1), 2.12-2.06, 2.00- 1.95 (2xm, 1H, H-2'), 1.68 - 1.62, 1.42- 1.36 (2 x m, 1H, H-2')
5-Fluoro-2'desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(2,2-dimetilpropoxi-L-alaninil)]fosfato (CPF588) (proporcionado como ejemplo de referencia)
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Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar D a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), NMI (0.41 g, 5.07 mmol, 0.40 mL) y 1-naftil-(2,2-dimetilpropoxi-L-alaninil)-fosfodoridato (0.77, mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna dio el producto como un sólido blanco (0.006 g, 1 %).
31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.56, 4.33 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.32, - 167.43
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.19 - 8.16 (m, 1H, H-Ar, Ar), 7.91 - 7.89 (m, 1H, H-Ar), 7.74 - 7.71 (m, 2H, H-Ar), 7.57 - 7.51 (m, 3H, 2 x H-Ar, H-base), 7.46 - 7.41 (m, 1H, H-Ar), 6.17 - 6.10 (m, 1H, H-1'), 4.42-4.30 (m, 3H, H-3', 2x H-5'), 4.134.07 (m, 2H, H-4', CHCH3), 3.86, 3.75 (sistema AB, Jas = 10.50 Hz, 2H, CH2C(CH3)3), 2.18 - 2.10 (m, 1H, H-2'), 1.81 -1.70 (m, 1H, H-2'), 1.41 -1.38 (m, 3H, CHCH3), 0.95, 0.94 (2 x s, 9H, CH2C(CH3)3)
5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1-naftil-(butoxi-L-alaninil)] fosfato (CPF589) (proporcionado como ejemplo de referencia)
imagen34
Se preparó de acuerdo con el procedimiento estándar D a partir de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (0.25 g, 1.01 mmol), NMI (0.41 g, 5.07 mmol, 0.40 mL) y 1-naftil-(butoxi-L-alaninil)-fosfocloridato (0.75 g, mmol) en THF (10 mL). La purificación en columna dio el producto como un sólido blanco (0.006 g, 1%).
31P-RMN (MeOD, 202 MHz) 5 4.52, 4.35 19F-RMN (MeOD, 470 MHz) 5 - 167.36, - 167.49
1H-RMN (MeOD, 500 MHz) 5 8.19 - 8.16 (m, 1H, H-Ar, Naph), 7.1 - 7.89 (m, 1H, H-Ar, Naph), 7.75 - 7.72 (m, 2H, H-Ar, Naph), 7.58-7.51 (m, 3H, 2 x H-Ar, H-base), 7.46-7.41 (m, 1H, H-Ar), 6.18 - 6.11 (m, 1H, H-1'), 4.42-4.40 (m, 1H, 1 x H-5'), 4.37-4.32 (m, 2H, 1 x H-5', H-3'), 4.12-4.01 (m, 4H, H-4', CHCH3, OCH2 CH2CH2CH3), 2.20-2.12 (m, 1H, H-2'), 1.85- 1.73 (m, 1H, H-2'), 1.61 - 1.54 (m, 2H, OCH2CH2CH2CH3), 1.39- 1.31 (m, 5H, OCH2CH2CH2CH3, CHCH3), 0.930.89 (m, 3H, OCH2CH2CH2CH3)
Ensayos biológicos
Los datos experimentales que tienen que ver con los compuestos que encarnan la presente invención se describen más abajo.
Cultivo de células
Las células L1210/0 de leucemia de murino y CEM/0 de linfocitos T humanos se obtuvieron de la Colección Americana de Tipos de Cultivos (ATCC) (Rockville, MD). Las células humanas de glioblastoma U87 fueron amablemente proporcionadas por el Dr. E. Menue (Institut Pasteur, París, Francia). Las células deficientes en timidina quinasa CEM/TK- fueron un amable obsequio del Prof. S. Eriksson (actualmente en la Universidad de Uppsala, Uppsala, Suecia) y del Prof. A. Karlsson (Instituto Karolinska, Estocolmo, Suecia). Las L1210/TK- deficientes en timidina quinasa se derivaron a partir de células L1210/0 después de la selección para la resistencia contra 5-bromo-2'-dUrd (Balzarini y otros, 1982). La infección de líneas celulares relevantes con Mycoplasma hyorhinis (ATCC) resultó en líneas celulares infectadas crónicamente más conocidas como L1210.Hyor y U87.Hyor. Todas las células se mantuvieron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) (Invitrogen, Carlsbad, CA) con suero bovino fetal al 10 % (FBS) (Biochrom AG, Berlín, Alemania), Hepes 10 mM y 1 mM de piruvato de sodio (Invitrogen). Las células se cultivaron a 37 °C en una incubadora humidificada con una fase gaseosa de 5 % de CO2.
Ensayos citostáticos
Ensayos citostáticos Las células monocapas (U87 y U87.Hyor) se sembraron en placas de microvaloración de 48 pocillos (Nunc™, Roskilde, Dinamarca) a 10,000 células/pocillo. Después de 24 horas, se añadió un volumen igual de medio nuevo que contenía los compuestos de ensayo. El día 5, las células se digirieron con tripsina y se contaron en un contador Coulter (Analis, Suarlée, Bélgica). Las células en suspensión (L1210/0, L1210/TK-, L1210.Hyor, CEM/0, CEM/TK-) se sembraron en placas de microvaloración de 96 pocillos (Nunc™) a 60,000 células/pocillo en presencia de una cantidad dada de los compuestos de prueba. Las células se dejaron proliferar durante 48 h (L1210) o 72 horas (CEM) y después se contaron en un contador Coulter. La concentración inhibitoria de 50 % (IC50) se definió como la concentración de compuesto requerida para reducir el número de células viables en un 50 %.
Ensayo 1. Las muestras se ensayaron para determinar la actividad biológica frente a una gama de líneas celulares tumorales con los datos registrados en la Tabla 1 más abajo. Los datos se expresan como CC50 en ^M, es decir,
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concentración citostática requerida para inhibir la proliferación celular en un 50 %. Las líneas celulares empleadas fueron L1210/0 (una línea celular de leucemia), FM3A/0 (una línea celular de cáncer de mama), Cem/0 (una línea celular de leucemia linfoblástica aguda) y HeLa (una línea celular de cuello uterino).
La Tabla 1 contiene además datos comparativos para 5FU, 5-FdUrd y los compuestos de referencia CPF 382, CPF 437 y CPF 438. La estructura de CPF 382 se proporciona más arriba. La estructura de cada uno de CPF 437 y CPF 438 es la siguiente:
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Como puede verse a partir de los datos en la Tabla 1, los compuestos de la presente invención pueden exhibir una actividad citostática que es comparable con o mejor que la del 5-FU, mientras que exhiben una actividad citostática marcada en células deficientes en nucleósido quinasas. Dicha actividad citostática en células deficientes en nucleótidos quinasas está en contraste directo con la de 5-FdUrd.
Como puede verse además a partir de la Tabla 1, la actividad en células TK- de los compuestos que encarnan la presente invención puede ser marcadamente mayor que la de los compuestos de referencia CPF 382, CPF 437 y CPF 438.
Tabla 1
L1210/0 L1210/TK- FM3A/0 FM3ArTK- Cem/0 Cem/TK- HeLa HeLa/TK-
5-FdUrd
0.00082 ± 0.00008 3.1 ±0.2 0.028 ± 0.002 1.5 ± 0.1
5-FdUrd (2)
0.0010 ± 0.0001 4.8 ±4.0 0.0065 ± 0.0055 0.70 ± 0.02 0.026 ± 0.000 4.4 ±2.9 0.029 ± 0.007 1.4 ±0.5
5-FdUrd (3)
0.0011 ± 0.0002 3.0 ±0.1 0.022 ± 0.006 3.0 ±0.4 0.050 ± 0.011 1.4 ±0.4
FU
0.33 ±0.17 +i o 0.18 ±0.02 18 ±5 0.54 ± 0.12
CPF 382(1)
0.0255 37.8 0.346 32.7
CPF 382(2)
0.0271 39.3 0.21 29.2
CPF 437
36 ±5 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100
CPF 438
0.12 ±0.02 51 ±9 2.1 ±0.6 32 ±2 3.7 ±0.5 72 ±0

Claims (15)

  1. 5
    10
    15
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    Reivindicaciones
    1. Un compuesto seleccionado del grupo que comprende:
    5-Fluoro-2-desoxiuridina-5-0-[fenil(benzoxi-L-leucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2-desoxiuridina-5-0-[fenil(benzoxi-L-isoleucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-L-fenilalaninil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(pentoxi-L-metioninil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1-naftil(hexoxi-L-alaninil)]fosfato
    5-Fluoro-2-desoxiuridina-5-0-[1-naftil(pentoxi-L-leucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2-desoxiuridina-5-0-[1-naftil(benzoxi-L-leucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-L-isoleucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-L-fenilalaninil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(benzoxi-L-metioninil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-a,a-dimetilglicina)]fosfato;
    o un derivado farmacéuticamente aceptable de estos, en donde dicho derivado farmacéuticamente aceptable es cualquier sal, hidrato, solvato o forma cristalina farmacéuticamente aceptables.
  2. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en donde el compuesto se selecciona del grupo que comprende:
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-L-leucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-L-isoleucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(benzoxi-L-fenilalaninil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[fenil(pentoxi-L-metioninil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(hexoxi-L-alaninil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-L-leucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(benzoxi-L-leucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-L-isoleucinil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-L-fenilalaninil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(benzoxi-L-metioninil)]fosfato
    5-Fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[l-naftil(pentoxi-a,a-dimetilglicina)]fosfato.
  3. 3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en donde el compuesto es 5-fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1- naftil(pentoxi-L-leucinil)]fosfato
    o un derivado farmacéuticamente aceptable de estos, en donde dicho derivado farmacéuticamente aceptable es cualquier sal, hidrato, solvato o forma cristalina farmacéuticamente aceptables.
  4. 4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 3 en donde el compuesto es 5-fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1- naftil(pentoxi-L-leucinil)]fosfato.
  5. 5. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en donde el compuesto es 5-fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1- naftil(hexoxi-L-alaninil)]fosfato
    o un derivado farmacéuticamente aceptable de estos, en donde dicho derivado farmacéuticamente aceptable es cualquier sal, hidrato, solvato o forma cristalina farmacéuticamente aceptables.
  6. 6. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 5 en donde el compuesto es 5-fluoro-2'-desoxiuridina-5'-0-[1- naftil(hexoxi-L-alaninil)]fosfato.
  7. 7. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el compuesto es para usar en un método de profilaxis o tratamiento en homo sapiens.
  8. 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7 en donde el cáncer se selecciona del grupo que comprende leucemia, cáncer pancreático, de próstata, de pulmón, de mamas; de cuello uterino; del esófago; gastrointestinal, que incluye cáncer gástrico, de intestino delgado, de colon y de recto; cáncer de cabeza y cuello; y cáncer de ovario.
  9. 9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7 o la reivindicación 8 para usar en un método de profilaxis o tratamiento de cáncer en un paciente seleccionado de:
    A) un paciente que ha desarrollado o tiene el potencial para desarrollar resistencia en células tumorales con respecto a la actividad de 5-fluoracil o 5-fluoro-2'-desoxiuridina en la profilaxis o el tratamiento de cáncer;
    B) un paciente con células con nivel reducido de proteínas transportadoras de nucleósidos;
    C) un paciente con células deficientes en nucleósido quinasa;
    10
    D) un paciente con células infectadas con micoplasmas; y/o
    E) un paciente con células con nivel elevado de timidilato sintasa (TS).
  10. 10. El compuesto para usar de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9 para usar junto con otra terapia anticancerígena.
  11. 11. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en combinación con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptables.
  12. 12. Un método de preparación de una composición farmacéutica que comprende la etapa de combinar un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 con un excipiente, portador o diluyente farmacéuticamente aceptables.
    imagen1
    Fármaco intacto remanente Fármaco intacto remanente
    FIGURA 2(A)
    Timidina Fosforilasa (TP) de E.coli
    imagen2
    • dThd —B— 5-FdUrd CPF-373 -í|E— Urd
    FIGURA 2(B)
    Tiniklina Fosforilasa (TP) de humano
    imagen3
    -♦-dThd -B—5-Fdllrd -±-CPF-373 -%r- Urd
    Fármaco intacto remanente
    FIGURA 2(C)
    Uridina Fosforilasa (UP) de humano
    imagen4
    dThd 5-FdUrd —ár~ CPF-373 -J|é— Urd
    ICsoÍMM) ICsoíuM)
    FIGURA 3(A)
    Inhibición de TS en células L1210/0 por 5-FdUrd (sustrato: [5-3H]dUrd)
    0,0015-1 0,0010,0005 -
    o -■
    m -
    30 mln 2 h
    Tiempo de preincubación
    imagen5
    FIGURA 3(B)
    Inhibición de TS en células L121Q/0 por CPF-373 (sustrato: [5-3H]dUrd)
  13. 0.3,
    0,25
    0,2
    0,15
    0,1
    0,05-
    0J
    I
    30 min
    2 h
    4 h
    Tiempo de preincubación
    FIGURA 3(C)
    Inhibición de TS en células L1210/0 por 5-FdUrd (sustrato: [5-3H]dCyd)
    imagen6
    imagen7
    imagen8
    i:- •:
    • • :• • •.
    FIGURA 3(E)
    Inhibición de TS en células L121Q/TK por 5-FdUrd
    (sustrato: [5-3H]dCyd)
    30 mm
    Tiempo de preincubación
    FIGURA 3(F)
    Inhibición de TS en células L1210/TK por CPF-373
    (sustrato: [5--H]dCyd:i
    30 mm 2 h
    Tiempo de preincubación
    imagen9
    FIGURA 5
    imagen10
    11 10 9876543210
    FIGURA 6
    t = 12 h 30 min
    t = 8 h
    t = 4 h 15 min
    t = 4h
    t=l h
    imagen11
    t = 15 min t= 12 h 3C
    m
    Blanco
    JUl
    "T-
    11
    lo
    "T"
    9
    —rp
    7
    -r
    6
    ~T"
    5
    "T
    4
    ^T"
    3
    en
    NJ
    t= 14 h t = 7 h
    J
    t * 12 min
    t - 14h_
    i = 7 h
    A
    Blanco
    J L . ...
    11
    10 9 8 7 6
    5 4
    3
    ■f"".....1
    2 1
    ■P"......
    0 ppm
    en
    co
    imagen12
    13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2
    0 -1 -2 -3 -4 -5 -6 -7 ppm
    1
  14. -165.17 ppm-
    •169.50 ppm
    r- ■ r......"i—"■--r—— —..................................................V,.,.,.T........
    -10 -20 -30 -40 -50 -60 -70 -80 -90 -100 -110-120-130-140-150-160-170-180 -190-200 ppm
    en
    imagen13
    -10 -20 -30 -40 -50 -60 -70 -80 -90 -100-110-120 -130-140-150-160-170-180-190-200 ppm
    FIGURA 10(A)
    en
    en
  15. -165.83 ppm
    imagen14
    imagen15
    “i-----1-----1-----»-----1-----1-----1-----'-----i-----'-----1-----»-----1-----»-----1-----1-----1-----'-----1-----r
    -20 -40 -60 -80 -100 -120 -140 -160 -180 -200
    FIGURA 10(B)
    ->—171.23 ppm
    imagen16
    imagen17
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Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201016855D0 (en) 2010-10-06 2010-11-17 Nucana Biomed Ltd Chemical compounds
WO2012117246A1 (en) 2011-03-01 2012-09-07 Nucana Biomed Limited Phosphoramidate derivatives of 5 - fluoro - 2 ' - deoxyuridine for use in the treatment of cancer
SI3235824T1 (sl) 2012-11-16 2019-08-30 University College Cardiff Consultants Limited Zmes rp / sp gemcitabin-(fenil-(benziloksi-l-alaninil))-fosfata
WO2015013352A2 (en) * 2013-07-25 2015-01-29 Patel Hasmukh B Nucleoside phosphoramidates and phosphoramidites
CN104447923B (zh) * 2013-09-23 2018-03-30 中国药科大学 2’‑脱氧‑2’‑氟‑2’‑甲基核苷衍生物及其制备方法与在制药中的用途
RU2553996C1 (ru) * 2013-11-27 2015-06-20 Андрей Александрович Иващенко Замещенные (2r,3r,5r)-3-гидрокси-(5-пиримидин-1-ил)тетрагидрофуран-2-илметил арил фосфорамидаты
CN106659765B (zh) 2014-04-04 2021-08-13 德玛医药 二脱水半乳糖醇及其类似物或衍生物用于治疗非小细胞肺癌和卵巢癌的用途
WO2015181624A2 (en) * 2014-05-28 2015-12-03 Idenix Pharmaceuticals, Inc Nucleoside derivatives for the treatment of cancer
CN105153257B (zh) * 2014-06-12 2019-03-05 正大天晴药业集团股份有限公司 索非布韦的制备方法
RS60968B1 (sr) 2014-06-25 2020-11-30 NuCana plc Prolekovi gemcitabina
PL225283B1 (pl) * 2014-07-24 2017-03-31 Univ Im Adama Mickiewicza W Poznaniu Pochodne 2,3’-anhydro-2’-deoksy-5-fluorourydyny o działaniu cytotoksycznym, sposób wytwarzania i zastosowanie
DK3224268T3 (da) 2014-11-28 2019-09-02 NuCana plc Nye 2'- og/eller 5'-aminosyreesterphosphoramidat 3'-deoxyadenosinderivater som anti-cancerforbindelser
CN108368147A (zh) * 2015-05-27 2018-08-03 南方研究院 用于治疗癌症的核苷酸
CN108431016A (zh) * 2015-11-16 2018-08-21 艾可瑞恩治疗公司 核酸前体药物
GB201522764D0 (en) * 2015-12-23 2016-02-03 Nucana Biomed Ltd Formulations of phosphate derivatives
GB201609600D0 (en) * 2016-06-01 2016-07-13 Nucuna Biomed Ltd Cancer treatments
GB201609601D0 (en) * 2016-06-01 2016-07-13 Nucana Biomed Ltd Phosphoramidate compounds
LU100724B1 (en) 2016-07-14 2018-07-31 Atea Pharmaceuticals Inc Beta-d-2'-deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-beta-c-substituted-4'-fluoro-n6-substituted-6-amino-2-substituted purine nucleotides for the treatment of hepatitis c virus infection
EP3865136A1 (en) 2016-09-07 2021-08-18 ATEA Pharmaceuticals, Inc. 2'-substituted-n6-substituted purine nucleotides for corona virus treatment
EP3538124A4 (en) 2016-11-13 2020-07-22 Imagine Pharma COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DIABETES, HIGH BLOOD PRESSURE AND HYPERCHOLESTERINEMIA
CN109863160B (zh) 2016-12-23 2022-06-07 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 核苷磷酸类化合物及其制备方法和用途
RU2644156C1 (ru) * 2017-02-28 2018-02-08 Александр Васильевич Иващенко Пролекарство ингибитора NS5B HCV полимеразы, способ его получения и применения
GB201709471D0 (en) * 2017-06-14 2017-07-26 Nucana Biomed Ltd Diastereoselective synthesis of hosphate derivatives
JP2020530035A (ja) 2017-08-08 2020-10-15 スン・ヤット−セン・ユニバーシティＳｕｎ Ｙａｔ−Ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 多剤耐性腫瘍を治療するための方法および組成物
GB201713916D0 (en) * 2017-08-30 2017-10-11 Nucana Biomed Ltd Treatment regimens
GB201715011D0 (en) 2017-09-18 2017-11-01 Nucana Biomed Ltd Floxuridine synthesis
GB201720279D0 (en) 2017-12-05 2018-01-17 Nucana Biomed Ltd Anticancer compounds
CN111836823B (zh) * 2018-03-09 2023-06-30 国立研究开发法人科学技术振兴机构 β修饰磷酸化合物前体、β修饰磷酸化合物、反应阻碍剂和包含这些化合物的医药品以及反应阻碍方法
CN110387226A (zh) * 2018-04-20 2019-10-29 天津大学 一种用于检测肿瘤的荧光探针及用途
US20220017940A1 (en) * 2018-11-30 2022-01-20 The University Of Tokyo Fluorescent probe for detecting carboxypeptidase activity
GB201904544D0 (en) 2019-04-01 2019-05-15 NuCana plc Anticancer compounds
CN110840907B (zh) * 2019-08-16 2022-11-25 南京医科大学 一类自由基敏感的尿嘧啶类ProTide前药及其药物用途
WO2021173713A1 (en) 2020-02-27 2021-09-02 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against covid-19
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
EP4204428A1 (en) * 2020-08-31 2023-07-05 Emory University 5'-substituted nucleoside monophosphates, prodrugs thereof, and uses related thereto

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2802005A (en) 1957-08-06 S-eluorourace
US1002239A (en) 1902-04-11 1911-09-05 Stromberg Carlson Telephone Telephone system.
US2945038A (en) 1956-09-26 1960-07-12 Hoffmann La Roche 5-fluorocytosine and preparation thereof
US3201387A (en) 1963-09-18 1965-08-17 Heidelberger Charles 5-trifluoromethyluracil, derivatives thereof, and processes for preparing the same
US3792039A (en) 1971-12-27 1974-02-12 Miles Lab Poly 2'-fluoro-2'-deoxyuridylic acid
DD279248A1 (de) 1989-01-01 1990-05-30 Akad Wissenschaften Ddr Verfahren zur herstellung von 2',3'-didesoxythymidin-5'-diamidophosphaten
GB9505025D0 (en) * 1995-03-13 1995-05-03 Medical Res Council Chemical compounds
RU2197964C2 (ru) * 1995-04-12 2003-02-10 Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани Фармацевтическая композиция, композиция стандартной лекарственной формы и способ лечения злокачественных новообразований, опухолей и вирусных инфекций
DK1045897T3 (da) * 1998-01-23 2002-05-13 Newbiotics Inc Enzymatisk katalyserede, terapeutiske midler
US7462605B2 (en) 1998-01-23 2008-12-09 Celmed Oncology (Usa), Inc. Phosphoramidate compounds and methods of use
JP4982019B2 (ja) 1999-07-22 2012-07-25 セルメド オンコロジー （ユーエスエイ）， インコーポレイテッド 酵素によって触媒される治療活性化
DE10109657A1 (de) 2001-02-28 2002-09-05 Menarini Ricerche Spa Verfahren zur Herstellung von (E)-5-(2-Bromvinyl)-2`-desoxyuridin
EP1404694A1 (en) 2001-06-21 2004-04-07 Glaxo Group Limited Nucleoside compounds in hcv
GB0317009D0 (en) 2003-07-21 2003-08-27 Univ Cardiff Chemical compounds
US8399428B2 (en) 2004-12-09 2013-03-19 Regents Of The University Of Minnesota Nucleosides with antiviral and anticancer activity
GB0505781D0 (en) 2005-03-21 2005-04-27 Univ Cardiff Chemical compounds
CA2618335C (en) 2005-08-15 2015-03-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Antiviral phosphoramidates of 4'-substituted pronucleotides
US7888330B2 (en) 2005-11-09 2011-02-15 Wayne State University Phosphoramidate derivatives of FAU
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
TWI598358B (zh) 2009-05-20 2017-09-11 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
CN101922935B (zh) 2010-07-16 2012-07-18 北京大学 一种最小互易结构干涉型全光纤陀螺仪
BR112013001267A2 (pt) 2010-07-19 2016-05-17 Gilead Sciences Inc métodos para a preparação de pró-fármacos de fosforamidato diasteromericamente puro
WO2012040126A1 (en) 2010-09-22 2012-03-29 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleotide analogs
CA2810928A1 (en) 2010-09-22 2012-03-29 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleotide analogs
WO2012048013A2 (en) 2010-10-06 2012-04-12 Inhibitex, Inc. Phosphorodiamidate derivatives of guanosine nucleoside compounds for treatment of viral injections
GB201016855D0 (en) 2010-10-06 2010-11-17 Nucana Biomed Ltd Chemical compounds
MY161407A (en) 2011-03-01 2017-04-14 Janssen Pharmaceutica Nv 6,7-DIHYDRO-PYRAZOLO[1,5-a]PYRAZIN-4-YLAMINE DERIVATIVES USEFUL AS INHIBITORS OF BETA-SECRETASE (BACE)
WO2012117246A1 (en) * 2011-03-01 2012-09-07 Nucana Biomed Limited Phosphoramidate derivatives of 5 - fluoro - 2 ' - deoxyuridine for use in the treatment of cancer
MX2020004054A (es) 2014-06-25 2021-11-30 NuCana plc Formulacion que comprende un profarmaco de gemcitabina.
DK3224268T3 (da) 2014-11-28 2019-09-02 NuCana plc Nye 2'- og/eller 5'-aminosyreesterphosphoramidat 3'-deoxyadenosinderivater som anti-cancerforbindelser
KR20180021697A (ko) 2015-05-14 2018-03-05 뉴카나 피엘씨 암 치료
GB201522764D0 (en) 2015-12-23 2016-02-03 Nucana Biomed Ltd Formulations of phosphate derivatives
GB201609600D0 (en) 2016-06-01 2016-07-13 Nucuna Biomed Ltd Cancer treatments
GB201709471D0 (en) 2017-06-14 2017-07-26 Nucana Biomed Ltd Diastereoselective synthesis of hosphate derivatives

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US11559542B2 (en) 2023-01-24
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CN104974206A (zh) 2015-10-14
MX339822B (es) 2016-06-13
BR112013021986B1 (pt) 2021-07-27
SI3447061T1 (sl) 2022-02-28
PT3031812T (pt) 2018-10-18
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