ES2642086T3 - Procedimiento para la producción de ligandos de beta amiloide marcados con F-18 - Google Patents

Procedimiento para la producción de ligandos de beta amiloide marcados con F-18 Download PDF

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Description

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DESCRIPCION
Procedimiento para la produccion de ligandos de beta amiloide marcados con F-18.
Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a procedimientos que proporcionan acceso a derivados de (aril/heteroaril vinil)- fenil metil aminas [F-18]fluoropegiladas.
Antecedentes
La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurodegenerativo progresivo marcado por perdida de memoria, la cognicion y estabilidad conductual. La EA se define patologicamente por placas seniles extracelulares compuestas de depositos fibrilares del peptido beta-amiloide (Ab) y ovillos neurofibrilares compuestos de filamentos helicoidales pareados de tau hiperfosforilada. Los peptidos Ab que comprenden 39 a 43 aminoacidos derivan de la protelna precursora de amiloide mas grande (APP). En la via amiloidogenica, los peptidos Ab se escinden de APP por la proteolisis secuencial por las beta- y gamma-secretasas. Los peptidos Ab son liberados como protelnas solubles y se detectan a nivel bajo en el llquido cefalorraquldeo (LCR) en el cerebro de envejecimiento normal. Durante el progreso de la EA, los peptidos Ab se agregan y forman depositos de amiloide en el parenquima y los vasos sangulneos del cerebro, que pueden detectarse post mortem como placas difusas y seniles y amiloide vascular durante el examen histologico (para una revision reciente, vease: Blennow et al. Lancet. 2006 Jul 29; 368(9533):387-403).
La enfermedad de Alzheimer (EA) se esta convirtiendo en un gran problema economico social y de salud en todo el mundo. Hay grandes esfuerzos para desarrollar tecnicas y procedimientos para la detection temprana y el tratamiento eficaz de la enfermedad. Actualmente, el diagnostico de EA en un entorno cllnico academico de trastornos de memoria es aproximadamente 85-90% exacto (Petrella JR et al. Radiology. 2003 226:315-36). Se basa en la exclusion de una variedad de enfermedades que causan slntomas similares y el examen cuidadoso neurologico y psiquiatrico, as! como pruebas neuropsicologicas.
La formation de imagenes moleculares tiene el potencial de detectar progresion de la enfermedad o la eficacia terapeutica antes que la mayorla de los procedimientos convencionales en los campos de la neurologla, oncologla y cardiologla. Entre las varias tecnologlas prometedoras de formacion de imagenes moleculares, tal como la formacion de imagenes opticas, MRI, SPECT y PET, PET es de particular interes para el desarrollo de farmacos debido a su alta sensibilidad y capacidad de proporcionar datos cuantitativos y cineticos.
Por ejemplo, isotopos emisores de positrones incluyen por ejemplo carbono, yodo, nitrogeno y oxlgeno. Estos isotopos pueden sustituir a sus homologos no radioactivos en los compuestos diana para producir trazadores de PET que tienen propiedades biologicas similares. Entre estos isotopos, F-18 es un isotopo de marcaje preferido debido a su perlodo de semidesintegracion de 110 min., lo que permite la preparation de trazadores de diagnostico y estudio posterior de los procedimientos bioqulmicos. Ademas, su baja energla b+ (634 keV) tambien es ventajosa.
El examen histologico post mortem del cerebro sigue siendo el unico diagnostico definitivo de la enfermedad de Alzheimer. Por lo tanto, se cree que la deteccion in vivo de una caracterlstica patologica de la enfermedad - la deposition agregados amiloideos en el cerebro - tiene un fuerte impacto en la deteccion temprana de la EA y la diferencia de otras formas de demencia. Ademas, la mayorla de las terapias modificadoras de la enfermedad que estan en desarrollo estan destinadas a la reduction de la carga amiloide en el cerebro. Por lo tanto, la formacion de imagenes de la carga amiloide en el cerebro puede proporcionar una herramienta esencial para la estratificacion del paciente y el seguimiento del tratamiento (para una revision reciente, vease: Nordberg. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2008 Mar; 35 Supl. 1:S46-50).
Ademas, tambien se sabe que los depositos de amiloide juegan un papel en la amiloidosis, en la que las protelnas amiloides (por ejemplo, tau) se depositan anormalmente en diferentes organos y/o tejidos, causando la enfermedad. Para una revision reciente, vease Chiti et al. Annu Rev Biochem. 2006; 75:333-66.
Las (aril/heteroaril vinil)-fenil metil aminas fluoropegiladas, tales como 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2- fluoroetoxi)etoxi]etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina y 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin-3-il)vinil]-N- metilanilina se han marcado con F-18 fluoruro y estan cubiertas por las solicitudes de patente WO2006066104, WO2007126733 y miembros de las familias de patentes correspondientes.
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4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina
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4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina
La utilidad de estos radiotrazadores para la deteccion de placas de Ap se ha dado a conocer en la bibliografla (W. Zhang et al., Nuclear Medicine and Biology 32 (2005) 799-809; C. Rowe et al., Lancet Neurology 7 (2008) 17; S. R. Choi et al., The Journal of Nuclear Medicine 50 (2009) 1887-1894).
Para no limitar el uso de tales diagnosticos marcados con F-18, se necesitan procedimientos que permitan una fabrication robusta y segura de los trazadores marcados con F-18. Ademas, tales procedimientos deberlan proporcionar un alto rendimiento de la slntesis global para permitir la production de las cantidades del diagnostico para suministrar el radiotrazador, a pesar del perlodo de semidesintegracion de 110 min., a instalaciones sin ciclotron o instalacion de produccion radiofarmaceutica.
Se ha descrito antes la slntesis de (aril/heteroaril vinil)-fenil metil aminas fluoropegiladas, marcadas con F-18: 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina
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4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina
a) W. Zhang et al., Nuclear Medicine and Biology 32 (2005) se 799-809
Se hicieron reaccionar 4 mg de precursor 2a (metanosulfonato de 2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(terc- butoxicarbonil)(metil)amino]-fenil}vinil]fenoxi}etoxi)etoxi]etilo) en 0,2 ml de DMSO n con complejo de [F- 18]fluoruro/kryptofix/carbonato de potasio. El intermedio se desprotegio con HCl y se neutralizo con NaOH. La mezcla se extrajo con acetato de etilo. El disolvente se seco y se evaporo. El residuo se disolvio en acetonitrilo y se purifico mediante HPLC semipreparativa (acetonitrilo/5 mM de amortiguador de dimetilglutarato pH 7 9/1). Se obtuvieron en 90 min. 20% (desintegracion corregida), 11% (no corregido para la desintegracion) de 4-[(E)-2-(4- {2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina. No se describe una reformulation adicional, necesaria para obtener una disolucion adecuada para la inyeccion en seres humanos.
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b) Documento WO2006066104
Se hicieron reaccionar 4 mg de precursor 2a (metanosulfonato de 2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(terc- butoxicarbonil)(metil)amino]-fenil}vinil]fenoxi}etoxi)etoxi]etilo) en 0,2 ml de DMSO con complejo de [F- 18]fluoruro/kryptofix/carbonato de potasio. El intermedio se desprotegio con HCl y se neutralizo con NaOH. La mezcla se extrajo con acetato de etilo. El disolvente se seco y se evaporo, el residuo se disolvio en acetonitrilo, y se purifico mediante HPLC semipreparativa. Se obtuvieron 30% (desintegracion corregida), 17% (no corregido para la desintegracion) de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina en 90 min. No se describe una reformulacion adicional, necesaria para obtener una disolucion adecuada para inyeccion en un ser humano.
c) C. C. Rowe et al., Lancet Neurology 7 (2008) 129-135
Tras el radiomarcaje, la hidrolisis acida y la purificacion mediante HPLC semipreparativa, la 4-[(£)-2-(4-{2-[2-(2- [F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina se formulo via extraction en fase solida (SPE).
d) H. Wang et al., Nuclear Medicine and Biology 38 (2011) 121-127
Se hicieron reaccionar 5 mg (9,33 mmoles) de precursor 2a (metanosulfonato de 2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(terc- butoxicarbonil)(metil)amino]-fenil}vinil]fenoxi}etoxi)etoxi]etilo) en 0,5 ml de DMSO con complejo de [F- 18]fluoruro/kryptofix/carbonato de potasio. El intermedio se desprotegio con HCl y se neutralizo con NaOH. El producto bruto se diluyo con acetonitrilo/formiato de amonio 0,1M (6/4) y se purifico mediante HPLC semipreparativa. La fraction del producto se recogio, se diluyo con agua, se hizo pasar a traves de un cartucho C18 y se eluyo con etanol, produciendo 17% (no corregido para la desintegracion) de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F- 18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina en 50 min. En el mismo documento, se describe la conversion del precursor de mesilato sin proteger:
se hicieron reaccionar 5 mg (11,48 mmoles) de precursor de mesilato sin proteger (4-metanosulfonato de 2-{2-[2- (4-{(E)-2-[4-(metilamino)fenil]vinil}fenoxi)etoxi]-etoxi}etilo) en 0,5 ml de DMSO con complejo de [F- 18]fluoruro/kryptofix/carbonato de potasio. El producto bruto se diluyo con acetonitrilo/formiato de amonio 0,1m (6/4) y se purifico mediante HPLC semipreparativa. La fraccion del producto se recogio, se diluyo con agua, se hizo pasara traves de un cartucho C18 y se eluyo con etanol, produciendo 23% (no corregido para la desintegracion) de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina en 30 min. Se encontro que un procedimiento en el que el radiotrazador se purifico solo mediante SPE (sin HPLC), proporciona un producto con una pureza radioqulmica aceptable (>95%); sin embargo, la pureza qulmica fue demasiado baja, por ejemplo no se pudieron eliminar productos secundarios derivados del exceso de precursor,
e) documento US20100113763
Se hizo reaccionar 2a (metanosulfonato de 2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]fenil}vinil]- fenoxi}etoxi)etoxi]etilo) con reactivo de [F-18]fluoruro en una mezcla de ferc-alcohol y acetonitrilo. Tras la fluoracion, el disolvente se evaporo, y se anadio una mezcla de HCl y acetonitrilo. Tras la desproteccion (calentando a 100-120°C), la mezcla de producto bruto se purifico mediante HPLC (C18, 60% de acetonitrilo, 40% de formiato de amonio 0,1M). No se describe una reformulacion adicional, necesaria para obtener una disolucion adecuada para inyeccion en un ser humano.
4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina
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4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)piridin-3-il]-N-metilanilina
a) S. R. Choi et al., The Journal of Nuclear Medicine 50 (2009) 1887-1894.
Se hizo reaccionar 1 mg de precursor 2b (4-metilbencenosulfonato de 2-{2-[2-({5-[(E)-2-{4-[(terc- butoxicarbonil)(metil)amino]-fenil}vinil]piridin-2-il}oxi)etoxi]etoxi}etilo) en 1 ml de DMSO con complejo de [F- 18]fluoruro/kryptofix/carbonato de potasio. El intermedio se desprotegio con HCl y se neutralizo con NaOH. El DMSO y componentes inorganicos se eliminaron mediante extraccion en fase solida en un cartucho SepPak light C18 (Waters). El producto bruto se purifico mediante HPLC semipreparativa (55% de acetonitrilo, 45% de NH4OAc 20 mM + 0,5% p/v de ascorbato de sodio). La fraccion del producto se diluyo con agua y se hizo pasar a traves de un cartucho SepPak light C18. El radiotrazador se eluyo con etanol. El rendimiento para 4-[(E)-2-(6-{2- [2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina fue 10-30% (desintegracion corregida).
b) Documento WO2010078370
Se hicieron reaccionar 1,5 mg (2,45 mmoles) de precursor 2b (4-metilbencenosulfonato de 2-{2-[2-({5-[(E)-2-{4- [(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-fenil}vinil]piridin-2-il}oxi)etoxi]etoxi}etilo) en 2 ml de DMSO con complejo de [F- 18]fluoruro/kryptofix/carbonato de potasio. El intermedio se desprotegio con HCl y se diluyo con una disolucion al 1% de NaOH para la neutralizacion. La mezcla se cargo en un cartucho de fase inversa. El cartucho se lavo con agua (que contiene 5% p/v de ascorbato de sodio). El producto bruto se eluyo con acetonitrilo en un deposito que contiene agua + 5% p/v de ascorbato de sodio y disolvente de HPLC. Tras la purificacion mediante HPLC semipreparativa, la fraccion del producto se recogio en un deposito que contiene agua + 0,5% p/v de ascorbato de sodio. La disolucion se hizo pasar a traves de un cartucho C18, el cartucho se lavo con agua (que contiene 0,5% p/v de ascorbato de sodio, y el producto final se eluyo con etanol en un vial que contiene disolucion de cloruro sodico al 0,9% con 0,5% p/v de ascorbato de sodio.
c) Y. Liu et al., Nuclear Medicine and Biology 37 (2010) 917-925
Se hizo reaccionar 1 mg (1,63 mmoles) de precursor 2b (4-metilbencenosulfonato de 2-{2-[2-({5-[(E)-2-{4-[(terc- butoxicarbonil)(metil)amino]-fenil}vinil]piridin-2-il}oxi)etoxi]etoxi}etilo) en 1 ml de DMSO con complejo de [F- 18]fluoruro/kryptofix/carbonato de potasio. El intermedio se desprotegio con HCl y se diluyo con una disolucion de NaOH al 1%. La mezcla se cargo en un cartucho Oasis HLB. El cartucho se lavo con agua, se seco en un caudal de argon, y el producto se eluyo con etanol en un vial que contiene una disolucion salina. Aunque las impurezas radioqulmicas se eliminaron mediante este procedimiento, en la disolucion del producto final quedaron subproductos no radioactivos derivados de la hidrolisis del exceso de precursor.
El rendimiento para 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina fue 34% (no corregido para la desintegracion) en 50 min. a un nivel radioactivo de 10-100 mCi (370-3700 MBq) de [F- 18]fluoruro.
d) L. Silva et al., Abstract/Poster EANM 2010
Se adapto una plataforma IBA Synthera para la slntesis de 4-[(£)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin- 3-il)vinil]-N-metilanilina. Adicionalmente, se integro un sistema de HPLC semipreparativa y otro modulo Synthera para la reformulacion.
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e) G. Casale et al. World Journal of Nuclear Medicine, 9 S1 (2010), S-174 (Abstract of 10th Congress of WFNMB, Cape Town, Africa del Sur, 18-23 de septiembre de 2010)
La fabricacien de 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina se logre mediante el uso de un medulo de slntesis IBA Synthera, combinado con un sistema de purificacien semipreparativa de HPLC y un medulo adicional para formulacien (dilucien de la fraccien de HPLC, atrapamiento en un cartucho C18, lavado y elucien con etanol).
Aunque se han investigado procedimientos de purificacien a base de cartuchos, solamente se ha demostrado y probado un eptimo de calidad de producto con respecto a la pureza radioqulmica y separacien de subproductos no radioactivos para la purificacien mediante HPLC. Hasta ahora, las (aril/heteroaril vinil)-fenil metil aminas fluoropegiladas marcadas con F-18 se han purificado mediante HPLC usando sistemas de disolventes que consisten en acetonitrilo y amortiguador acuoso. Obviamente, las fracciones del producto recogidas no se pueden usar directamente para la administracien a un paciente. Se han de eliminar el acetonitrilo y otros compuestos de los sistemas de disolventes que no son tolerados para la inyeccien en un ser humano. Esto se podrla lograr mediante evaporacien o mediante extraccien en fase selida (por ejemplo, atrapamiento en un cartucho de extraccien en fase selida C18 y elucien con etanol; vease la figura 1: cartucho C3 de extraccien en fase selida final, elucien con etanol de V8; vease tambien la figura 7, cartucho 11 de extraccien en fase selida final, elucien con etanol de uno de los viales 9).
Sin embargo, especialmente a mayores niveles de radioactividad, la descomposicien del radiotrazador debido a procesos de radiolisis puede ser un problema. Este problema es bien conocido: para evitar la radiolisis durante la purificacien de 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina, se anadie ascorbato de sodio (como depurador de radicales) al disolvente de HPLc y a las disoluciones de lavado (S. R. Choi et al, documento WO2010078370). Sin embargo, la concentracien del radiotrazador tras la HPLC mediante evaporacien o mediante extraccien en fase selida es una etapa crltica de la fabricacien. En experimentos de aumento de escala, tras la HPLC se pueden encontrar mayores purezas radioqulmicas de (aril/heteroaril vinil)- fenil metil aminas fluoropegiladas marcadas con F-18, antes de la extraccien en fase selida, en comparacien con la composicien tras la extraccien en fase selida.
En la figura 7 se ilustra el montaje general del procedimiento de fabricacien para aminas de (aril/heteroaril vinil)- fenil metil aminas fluoropegiladas marcadas con F-18 como se describe previamente. El procedimiento de fabricacien se puede dividir en tres partes principales:
A) Slntesis
B) Purificacien mediante HPLC
C) Formulacien
Las etapas en el procedimiento de fabricacien de secado de [F-18]fluoruro, radiomarcaje de la molecula precursora, y desproteccien, se llevan a cabo en la parte A del dispositivo de slntesis (figura 7). La mezcla de producto bruto se transfirie a la segunda parte B para la purificacien mediante HPLC (sobre gel de sllice de fase inversa que usa como eluyente acetonitrilo/amortiguador). Para obtener el radiotrazador en una Formulacien, adecuada para inyeccien en un ser humano, el disolvente (acetonitrilo) presente en la fraccien del producto necesita ser eliminado e intercambiado por una composicien que sea apropiada para la fabricacien de un medicamento. Tlpicamente (y descrito en las referencias anteriores), la fraccien del producto se diluye con agua (vasija “8”, figura 7, parte C), y entonces se hace pasar a traves de un cartucho de fase inversa (“11”, figura 7, parte C). El cartucho se lava con una disolucien acuosa de uno de los depesitos 9 (figura 7, parte C), y finalmente se eluye del cartucho con una disolucien etanelica (o etanol) de otro de los depesitos 9 en el vial del producto, que comprende opcionalmente otras partes y excipientes de la formulacien final. Es obvio para los expertos en la materia que la ilustracien de la figura 7 es una simplificacien del procedimiento y del equipo, y que otras partes tales como valvulas, viales, tuberlas, etc., pueden ser parte de tal procedimiento o equipo.
En el documento WO2010078370 y en C.-H. Yao et al., Applied Radiation and Isotopes 68 (2010) 2293-2297 se describe un procedimiento de fabricacien “que cumple con GMP” para 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]- etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina. Para evitar la descomposicien de 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]- etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina, se anadie ascorbato de sodio al disolvente de HPLC (45% de acetonitrilo, 55% de acetato de amonio 20 mM que contiene 0,5% (p/v) de ascorbato de sodio) y la Formulacien final (0,5% (p/v) de ascorbato de sodio). El procedimiento dio hasta 18,5 GBq (25,4 ± 7,7%, corregido para la desintegracien) de 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina. La pureza radioqulmica fue 95,3 ± 2,2%.
Aunque se anadie ascorbato/acido ascerbico a los disolventes implicados en la purificacien, la pureza radioqulmica fue solamente alrededor de 95,3 ± 2,2% a niveles de actividad del producto de hasta 18,5 GBq (Yao et al.) - probablemente debido a la descomposicien por radiolisis.
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Se descubrio una variacion incluso mayor de pureza radioquimica a mayores niveles de actividad del producto para la fabricacion de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina (Ejemplo 7, figura 9, procedimiento A).
Aparte de la variacion de la pureza radioquimica, la re-Formulacion durante el procedimiento actual (conversion del radiotrazador desde el medio de HPLC en una disolucion inyectable) requiere un tiempo adicional del procedimiento, y demanda un equipo mas complejo. Por ejemplo, el procedimiento para la slntesis de 4-[(£)-2-(6- {2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina descrito por Silva et al. y por Casale et al. demanda tres modulos para el procedimiento de fabricacion global. La slntesis del producto bruto (ilustrada esquematicamente en la figura 7, Parte A) se baso en un modulo IBA Synthera, se uso un sistema de HPLC semipreparativa para la purificacion (ilustrado esquematicamente en la figura 7, Parte B), y se uso un modulo de slntesis IBA Synthera adicional para la reformulacion (ilustrado esquematicamente en la figura 7, Parte C).
El problema a resolver por la presente invencion es proporcionar un procedimiento de purificacion mediante HPLC mejorado para (aril/heteroaril vinil)-fenil metil aminas fluoropegiladas marcadas con F-18 que proporcione purezas quimicas y radioquimicas elevadas del radiotrazador, evitando una concentration del producto marcado tras la purificacion para evitar la radiolisis, especialmente a mayores niveles de radioactividad. Tal procedimiento deberia ser adecuado para la fabricacion de cantidades mas grandes (radioactividad) del radiotrazador para permitir una distribution a instalaciones formadoras de imagenes sin production radiofarmaceutica propia. Hasta ahora, la actividad maxima para una de (aril/heteroaril vinil)-fenil metil amina fluoropegilada marcada con F-18 dada a conocer es 18,5 GBq (Yao et al.). Sin embargo, incluso mayores rendimientos serian de apoyo para un uso generalizado y disponibilidad del radiotrazador. Un requisito previo del nuevo procedimiento de fabricacion deberia ser una pureza radioquimica elevada (por ejemplo >95%) en un amplio intervalo de radioactividad. Mas precisamente, tal procedimiento deberia ser adecuado para la fabricacion de mayores niveles de actividad del radiotrazador que los descritos previamente (por ejemplo, > 20 GBq, o incluso > 50 GBq, o incluso > 100 GBq), con purezas radioquimicas de manera fiable > 95%. Como una caracteristica adicional, tal procedimiento deberia ser menos complejo que los procedimientos descritos anteriormente.
Los problemas descritos anteriormente se resolvieron mediante un procedimiento de purificacion modificado. Para simplificar el montaje global para la fabricacion, se modifico la composition de disolventes para la purificacion mediante HPLc. En lugar de una mezcla de acetonitrilo/amortiguador, se usa una mezcla de etanol/amortiguador. Una ventaja de la nueva mezcla de disolventes para HPLC es que todos los constituyentes del disolvente de HPLC - en contraste con composiciones descritas previamente - son bien tolerados como parte de la Formulation, y de ese modo son adecuado para inyeccion a un ser humano. Por lo tanto, ya no se requiere una reformulacion para eliminar constituyentes del disolvente de HPLC (como se ilustra en la figura 7, Parte C). Esta ventaja adicional del nuevo procedimiento - el montaje simplificado - se ilustra esquematicamente en la figura 8. (Obviamente, esta ilustracion es una simplification que muestra un montaje general del nuevo procedimiento descrito en la presente memoria). Siguiendo el dibujo en la figura 8, la fraction del producto se recoge directamente (conmutando la valvula “7”) en el vial del producto (que podria contener otras partes de la Formulacion final). Debido a la complejidad reducida, el tiempo global de fabricacion usando el nuevo procedimiento descrito en la presente memoria es mas corto, contribuyendo directamente a mayores rendimientos no corregidos para la desintegracion en comparacion con el procedimiento usado previo en el que se usa una purificacion mediante HPLC con reformulacion adicional (que consume tiempo) en un cartucho en fase solida (SPE).
La ventaja principal del nuevo procedimiento descrito en la presente memoria es la pureza radioquimica confiablemente elevada de las (aril/heteroaril vinil)-fenil metil aminas fluoropegiladas marcadas con F-18 sintetizadas mediante el nuevo procedimiento. En el Ejemplo 7 y en la figura 9, se demuestra la pureza radioquimica dependiente del procedimiento de purificacion y la cantidad (radioactividad) de producto radiomarcado. Los puntos/cuadrados (que representan cada uno un experimento individual) y las lineas de tendencia en la figura 9 demuestran claramente que la pureza radioquimica obtenida tras la HPLC con reformulacion mediante SPE varia significativamente (figura 9, cuadrados en blanco). Especialmente a mayores niveles de radioactividad (> 20 GBq), la pureza radioquimica a menudo es incluso <95%. Por el contrario, la variabilidad de las purezas radioquimicas obtenidas por el nuevo procedimiento de la presente invencion es mucho menor y se lograron purezas radioquimicas elevadas de >95%, incluso a niveles de radioactividad del producto de mas de 50 GBq o incluso mayores que 100 GBq (figura 9, puntos negros).
Sumario de la invencion
• La presente invencion proporciona un procedimiento para la produccion de compuesto radiomarcado de
Formula I y sales adecuadas de un acido inorganico u organico del mismo, hidratos y solvatos del mismo, y
opcionalmente un vehiculo, diluyente, adyuvante o excipiente farmaceuticamente aceptable.
El procedimiento comprende las etapas de:
- radiofluorar el compuesto de Formula II
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- opcionalmente, escindir un grupo protector
- purificar y formular el compuesto de Formula I mediante HPLC usando un sistema de disolvente que puede ser parte de una Formulacion inyectable
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El procedimiento proporcionado por la presente invention se ilustra esquematicamente en la figura 8. La radiofluoracion del compuesto de Formula II, y opcionalmente la escision de un grupo protector, se llevan a cabo en la parte izquierda del equipo (figura 8, parte A). La purification del compuesto de Formula I se lleva a cabo de manera que la fraction del producto obtenida mediante HPLC (figura 8, parte B) se puede transferir directamente al vial del producto, en el que el vial del producto contiene opcionalmente vehlculos, diluyentes, adyuvantes o excipientes farmaceuticamente aceptables adicionales. Una parte adicional del procedimiento y equipo como se ilustra en la figura 7 (Parte C) ya no es requerida por el procedimiento de la presente invencion.
• Tambien se describen en la presente memoria composiciones que comprenden un compuesto radiomarcado de Formula I o sales adecuadas de un acido inorganico u organico del mismo, hidratos, complejos, esteres, amidas, solvatos y profarmacos del mismo, y opcionalmente un vehlculo, diluyente, adyuvante o excipiente farmaceuticamente aceptable.
• Tambien se describe en la presente memoria un kit para preparar una preparation radiofarmaceutica mediante el procedimiento descrito en la presente memoria, comprendiendo dicho kit un vial cerrado hermeticamente que contiene una cantidad predeterminada del compuesto de Formula II.
Descripcion de la invencion
En un primer aspecto, la presente invencion se refiere a un procedimiento para producir el compuesto de Formula I
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que comprende las etapas de:
Etapa 1: Radiomarcar el compuesto de Formula II con un agente fluorante con F-18, para obtener el compuesto de Formula I, si R = H, o para obtener el compuesto de Formula III, si R = PG
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Etapa 2: Opcionalmente, si R = PG, escindir el grupo protector PG para obtener el compuesto de Formula I Etapa 3: Purificar y formular el compuesto de Formula I
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en la que:
n = 1-6, preferentemente 2-4, mas preferentemente 3.
X se selecciona del grupo que comprende

a) CH,

b) N.
En una forma de realizacion preferida, X = CH.
En otra forma de realizacion preferida, X = N.
R se selecciona de entre el grupo que comprende

a) H,
b) PG.
PG es un “grupo protector de amina”.
En una forma de realizacion preferida, PG se selecciona del grupo que comprende:

a) Boc,
b) tritilo y
c) 4-metoxitritilo.
En una forma de realizacion mas preferida, R es H.
En otra forma de realizacion mas preferida, R es Boc.
LG es un grupo saliente.
En una forma de realizacion preferida, LG se selecciona del grupo que comprende:
a) halogeno y
b) sulfoniloxi.
Halogeno es cloro, bromo o yodo. Preferentemente, halogeno es bromo o cloro.
En una forma de realizacion preferida, sulfoniloxi se selecciona del grupo que consiste en metanosulfoniloxi, p- toluenosulfoniloxi, trifluorometilsulfoniloxi, 4-cianofenilsulfoniloxi, 4-bromofenilsulfoniloxi, 4-nitrofenilsulfoniloxi, 2- nitrofenilsulfoniloxi, 4-isopropil-fenilsulfoniloxi, 2,4,6-triisopropil-fenilsulfoniloxi, 2,4,6-trimetilfenilsulfoniloxi, 4-terc- butil-fenilsulfoniloxi, 4-adamantilfenilsulfoniloxi y 4-metoxifenilsulfoniloxi.
En una forma de realizacion mas preferida, sulfoniloxi se selecciona del grupo que comprende:
a) metanosulfoniloxi,
b) p-toluenosulfoniloxi,
c) (4-nitrofenil)sulfoniloxi,
d) (4-bromofenil)sulfoniloxi.
En una forma de realizacion incluso mas preferida, LG es metanosulfoniloxi.
En otra forma de realizacion incluso mas preferida, LG es p-toluenosulfoniloxi.
Un compuesto preferido de Formula I es:
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4-[(£)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina. Otro compuesto preferido de Formula I es:
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4-[(£)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina. Un compuesto preferido de Formula II es:
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Metanosulfonato de 2-[2-(2-{4-[(E)-2-{4-[(ferc-butoxicarbonil)(metil)amino]fenil}vinil]fenoxi}-etoxi)etoxi]etilo. Otro compuesto preferido de Formula II es:
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4-metilbencenosulfonato de 2-[2-(2-{4-[(£)-2-{4-[(ferc-butoxicarbonil)(metil)amino]fenil}vinil]fenoxi}-etoxi)etoxi]etilo Otro compuesto preferido de Formula II es:
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4-metilbencenosulfonato de 2-{2-[2-(4-{(£)-2-[4-(metilamino)fenil]vinil}fenoxi)etoxi]etoxi}etilo Otro compuesto preferido de Formula II es:
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4-metilbencenosulfonato de 2-{2-[2-(4-{(£)-2-[4-(metilamino)fenil]vinil}fenoxi)etoxi]etoxi}etilo Otro compuesto preferido de Formula II es:
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4-metilbencenosulfonato de 2-{2-[2-({5-[(£)-2-{4-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]fenil}vinil]piridin-2-
il}oxi)etoxi]etoxi}etilo
La Etapa 1 comprende una reaccion de marcaje con [F-18]fluoro directa de compuestos de Formula II para obtener el compuesto de Formula I (si R = H), o el compuesto de Formula III (si R = PG).
El procedimiento de radiomarcaje comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de Formula II con un agente fluorante con F-18 para obtener un compuesto de Formula III o un compuesto de Formula I. En una forma de realizacion preferida, el derivado de [F-18]fluoruro es 4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabiciclo[8.8.8]- hexacosano K[F-18]F (Kryptofix K[F-18]F), K[F-18]F, H[F-18]F, KH[F-18]F2, Cs[F-18]F, Na[F-18]F o sal de [F-18]F de tetraalquilamonio (por ejemplo, [F-18]fluoruro de tetrabutilamonio). Mas preferentemente, el agente de fluoracion es K[F-18]F, H[F-18]F, [F-18]fluoruro de tetrabuti1amonio, Cs[F-18]F o KH[F-18]F2, todavla mas preferentemente K[F-18], Cs[F-18]F o [F-18]fluoruro de tetrabutilamonio.
Un agente fluorante con F-18 incluso mas preferido es kryptofix/[F-18]fluoruro de potasio, preferentemente generado a partir de [F-18]fluoruro, kryptofix y carbonato de potasio.
Las reacciones de radiofluoracion se llevan a cabo en acetonitrilo, dimetilsulfoxido o dimetilformamida, o una mezcla de los mismos. Pero tambien se pueden usar otros disolventes que son bien conocidos por un experto en la materia. El agua y/o los alcoholes pueden estar implicados en tal reaccion como codisolventes. Las reacciones de radiofluoracion se llevan a cabo durante menos de 60 minutos. Los tiempos de reaccion preferidos son menores que 30 minutos. Otros tiempos de reaccion preferidos son menos de 15 min. Estas y otras condiciones para tal radiofluoracion son conocidas por los expertos (Coenen, Fluorine-18 Labeling Methods: Features and Possibilities of Basic Reactions, (2006), en: Schubiger P.A., Friebe M., Lehmann L., (eds), PET-Chemistry - The Driving Force in Molecular Imaging. Springer, Berlin Heidelberg, p. 15-50).
En una forma de realizacion, en la Etapa 1 se usan 7,5-75 mmoles, preferentemente 10-50 mmoles, mas preferentemente 10-30 mmoles, e incluso mas preferentemente 12-25 mmoles, e incluso mas preferentemente 1325 mmoles de compuesto de Formula II.
En otra forma de realizacion, en la Etapa 1 se usan mas de 7,5 mmoles, preferentemente mas de 10 mmoles, y mas preferible mas de 12 mmoles, e incluso mas preferentemente mas de 13 mmoles de compuesto de Formula II.
En otra forma de realizacion, en la Etapa 1 se usan mas de 5 mg, preferentemente mas de 6 mg, y mas preferentemente mas de 7 mg de compuesto de Formula II.
En otra forma de realizacion, en la Etapa 1 se usan 7 mg de compuesto de Formula II.
En otra forma de realizacion, en la Etapa 1 se usan 8 mg de compuesto de Formula II.
En una forma de realizacion preferida, la radiofluoracion del compuesto de Formula II se lleva a cabo en acetonitrilo o en una mezcla de acetonitrilo y codisolventes, en la que el porcentaje de acetonitrilo es al menos 50%, mas preferentemente al menos 70%, incluso mas preferentemente al menos 90%.
Opcionalmente, si R = PG, la Etapa 2 comprende la desproteccion del compuesto de Formula III para obtener el compuesto de Formula I.
Las condiciones de reaccion son conocidas por u obvias un experto en la materia, que se escogen de las descritas en el libro texto Greene y Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, tercera edicion, pagina 494653. Las condiciones de reaccion preferidas son adicion de un acido y agitacion a 0°C-180°C; adicion de una base y calentamiento a 0°C-180°C, o una combinacion de las mismas.
Preferiblemente, la etapa 1 y etapa 2 se llevan a cabo en la misma vasija de reaccion.
La Etapa 3 comprende la purification y formulation del compuesto de Formula I usando un sistema de
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separacion mediante HPLC, en el que el eluyente del disolvente de HPLC (por ejemplo, mezclas de etanol y amortiguadores acuosos) puede ser parte de la Formulacion inyectable del compuesto de Formula I. La fraccion del producto recogida se puede diluir o mezclar con otras partes de la Formulacion. La mezcla de disolventes de HPLC consiste en etanol o un amortiguador acuoso o una mezcla de etanol/amortiguador acuoso, en la que el amortiguador acuoso consiste en componentes o excipientes que se pueden inyectar en un ser humano. Los ejemplos de tales amortiguadores acuosos son disoluciones de cloruro de sodio, amortiguador de fosfato de sodio, acido ascorbico, amortiguador de ascorbato, o mezclas de los mismos.
En una forma de realizacion preferida, el procedimiento para fabricar el compuesto de Formula I se lleva a cabo usando un modulo (revision: Krasikowa, Synthesis Modules and Automation in F-18 labeling (2006), en: Schubiger P.A., Friebe M., Lehmann L., (eds), PET-Chemistry - The Driving Force in Molecular Imaging. Springer, Berlin Heidelberg, p. 289-316), que permite una slntesis automatizada. Mas preferentemente, el procedimiento se lleva a cabo usando un modulo de un solo recipiente. Todavla mas preferentemente, el procedimiento se lleva a cabo en modulos de tipo no de casete conocidos normalmente (por ejemplo, Eckert&Ziegler Modular-Lab, GE Tracerlab FX, Raytest SynChrom) y modulos de tipo casete (por ejemplo GE Tracerlab MX, GE Fastlab, IBA Synthera, Eckert&Ziegler Modular-Lab PharmTracer); opcionalmente, se adjuntan a los mencionados modulos otros equipos tales como dispositivos de HPLC o de distri bucion.
En un segundo aspecto, la presente invencion se refiere a un procedimiento totalmente automatizado y/o controlado remotamente para la produccion del compuesto de Formula I, en el que los compuestos de Formula I, II y III y las Etapas 1, 2 y 3 se describen anteriormente. En una forma de realizacion preferida, este procedimiento es un procedimiento totalmente automatizado, que cumple las directrices de las GMP, que proporciona una Formulacion de Formula I para el uso de la administration (inyeccion) en el ser humano. Tambien se describe en la presente memoria un kit para la produccion de una composition farmaceutica del compuesto de Formula I. El kit puede comprender un vial cerrado hermeticamente que contiene una cantidad predeterminada del compuesto de Formula II. Preferentemente, el kit contiene 1,5-75 mmoles, preferentemente 7,5-50 mmoles, mas preferentemente 10-50 mmoles, e incluso mas preferentemente 12-25 mmoles, e incluso mas preferentemente 1225 mmoles, e incluso mas preferentemente 13-25 mmoles de compuesto de Formula II. El kit puede contener mas de 7,5 mmoles, preferentemente mas de 10 mmoles, y mas preferentemente mas de 12 mmoles, e incluso mas preferentemente mas de 13 mmoles de compuesto de Formula II. El kit puede contener mas de 5 mg, preferentemente de mas de 6 mg, y mas preferentemente mas de 7 mg de compuesto de Formula II. El kit puede contener 7 mg de compuesto de Formula II. El kit puede contener 8 mg de compuesto de Formula II. El kit tambien contiene un disolvente o mezcla de disolventes, o los componentes para el disolvente (mezcla) para la purification mediante HPLC, en el que ese disolvente, mezcla de disolventes, o componentes son apropiados para el uso directo para inyeccion en un paciente. Opcionalmente, el kit contiene otros componentes para fabricar el compuesto de Formula I, tales como cartuchos de extraction en fase solida, reactivo para la fluoracion (como se describe anteriormente), acetonitrilo o acetonitrilo y un codisolvente, reactivo para la escision del grupo de desproteccion, disolvente o mezclas de disolventes para la purificacion, disolventes y excipiente para la Formulacion.
En una forma de realizacion, el kit contiene una plataforma (por ejemplo, casete) para un “modulo tipo casete” (tal como Tracerlab MX o IBA Synthera).
Definiciones
En el contexto de la presente invencion, las sales preferidas son sales farmaceuticamente adecuadas de los compuestos segun la invencion. La invencion tambien comprende sales que por su parte no son adecuadas para aplicaciones farmaceuticas, pero que se pueden usar, por ejemplo, para aislar o purificar los compuestos segun la invencion.
Las sales farmaceuticamente adecuadas de los compuestos segun la invencion incluyen sales de adicion de acidos de acidos minerales, acidos carboxllicos y acidos sulfonicos, por ejemplo sales de acido clorhldrico, acido bromhldrico, acido sulfurico, acido fosforico, acido metanosulfonico, acido etanosulfonico, acido toluenosulfonico, acido bencenosulfonico, acido naftalenodisulfonico, acido acetico, acido trifluoroacetico, acido propionico, acido lactico, acido tartarico, acido malico, acido cltrico, acido fumarico, acido maleico y acido benzoico.
Las sales farmaceuticamente adecuadas de los compuestos segun la invencion tambien incluyen sales de bases habituales, tales como, a tltulo de ejemplo y a tltulo de preferencia, sales de metales alcalinos (por ejemplo, sales de sodio y sales de potasio), sales de metales alcalino-terreos (por ejemplo, sales de calcio y sales de magnesio) y sales de amonio, derivadas de amonlaco o aminas organicas que tienen 1 a 16 atomos de carbono, tales como, a tltulo de ejemplo y a tltulo de preferencia, etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, procalna, dibencilamina, N-metilmorfolina, arginina, lisina, etilendiamina y N-metilpiperidina
El termino halogeno o halo se refiere a Cl, Br, F o I.
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La expresion “grupo protector de amina”, como se utiliza por si misma o como parte de otro grupo, es conocida u obvia para alguien experto en la materia, que se selecciona de una clase de grupos protectores, a saber, carbamatos, amidas, imidas, N-alquilaminas, N-arilaminas, iminas, enaminas, boranos, grupos protectores de N- P, N-sulfenilo, N-sulfonilo y N-sililo, y que se escoge de los descritos en el libro de texto de Greene y Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, tercera edicion, pagina 494-653. El grupo protector de amina es preferentemente carbobenciloxi (Cbz), p-metoxibencilcarbonilo (Moz o MeOZ), ferc-butiloxicarbonilo (BOC), 9- fluorenilmetiloxicarbonilo (FMOC), bencilo (Bn), p-metoxibencilo (PMB), 3,4-dimetoxibencilo (DMPM), p- metoxifenilo (PMP), o el grupo amino protegido es un 1,3-dioxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-ilo (ftalimido) o un grupo azido.
La expresion “grupo saliente”, como se utiliza en la presente memoria por si misma o como parte de otro grupo, es conocida u obvia para alguien experto en la materia, y significa que un atomo o grupo de atomos es desprendible de una sustancia qulmica por un agente nucleofilo. En Synthesis (1982), p. 85-125, tabla 2 (p. 86; (la ultima entrada de esta tabla 2 necesita ser corregida: “n-C4F9S(O)2-O- nonaflat” en lugar de “n-C4H9S(O)2-O- nonaflat”), Carey y Sundberg, Organische Synthese, (1995), paginas 279-281, tabla 5.8; o Netscher, Recent Res. Dev. Org. Chem., 2003, 7, 71-83, esquemas 1, 2, 10 y 15 y otros), por ejemplo, se dan ejemplos. (Coenen, Fluorine-18 Labeling Methods: Features and Possibilities of Basic Reactions, (2006), en: Schubiger P.A., Friebe M., Lehmann L., (eds), PET-Chemistry - The Driving Force in Molecular Imaging. Springer, Berlin Heidelberg, p. 15-50, expllcitamente: esquema 4 p. 25, esquema 5 p. 28, tabla 4 p. 30, figura 7 p. 33).
El termino sulfoniloxi se refiere a -O-S(O)2-Q, en el que Q es arilo opcionalmente sustituido o alquilo opcionalmente sustituido.
El termino “alquilo”, como se utiliza en la presente memoria por si mismo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo alquilo de cadena lineal o ramificado de C1-C10, tal como, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, ferc-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, heptilo, hexilo, decilo o adamantilo. Preferentemente, alquilo es alquilo de cadena lineal o ramificado de C1-C6, o alquilo de cadena lineal o ramificado de C7-C10. Alquilo inferior es un alquilo de cadena lineal o ramificado de C1-C6.
El termino “arilo”, como se utiliza en la presente memoria por si mismo o como parte de otro grupo, se refiere a grupos aromaticos monoclclicos o biclclicos que contienen de 6 a 10 carbonos en la porcion anular, tal como fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo.
Siempre que se use el termino “sustituido”, se quiere hacer referencia a que uno o mas hidrogenos en el atomo indicado en la expresion que usa “sustituido” esta/estan sustituidos por uno o mas restos del grupo que comprende halogeno, nitro, ciano, trifluorometilo, alquilo y O-alquilo, con la condicion de que no se supere la valencia normal del atomo respectivo, y de que la sustitucion de como resultado un compuesto qulmicamente estable, es decir, un compuesto que es suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento hasta un grado util de pureza de una mezcla de reaccion.
Excepto que se especifique lo contrario, cuando se haga referencia a los compuestos de Formula de la presente invencion per se, as! como a cualquier composicion farmaceutica de los mismos, la presente invention incluye todos los hidratos y sales. El termino “F-18” significa el isotopo de fluor 18F. El termino “F-19” significa el isotopo de fluor 19F.
Ejemplos
Determination de la pureza radioquimica y quimica
Las purezas radioqulmicas y qulmicas de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N- metilanilina y 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina se determinaron mediante HPLC analltica (columna: Atlantis T3; 150 x 4,6 mm, 3 pm, Waters; disolvente A: K2HPO4 5 mM pH 2,2; disolvente B: acetonitrilo; caudal: 2 ml/min., gradiente: 0:00 min. 40% B, 0:00-05:50 min. 40-90% B, 05:50-05:60 min. 90-40% B, 05:60-09:00 min. 40% B).
- Tiempo de retention de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)-vinil]-N-metilanilina: 3,5-3,9 min., dependiendo del sistema de HPLc usado para el control de calidad. Debido a diferentes equipos (por ejemplo, tuberlas), se observa una diferencia en el tiempo de retencion entre los diferentes sistemas de HPLC. La identidad de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina se verifico mediante coinyeccion con la referencia no radioactiva 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-19]fluoroetoxi)etoxi]- etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina.
- Tiempo de retencion de 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina: 3.47 min. La identidad de 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina se verifico mediante coelution con la referencia no radioactiva 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-19]fluoroetoxi)etoxi]-
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etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina.
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4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina
La sintesis de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18])fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina se ha llevado a cabo en un sintetizador de Eckert&Ziegler modular lab. Se atrapo [F-18]fluoruro (60362 MBq) en un cartucho QMA. La actividad se eluyo con una mezcla de mesilato potasico/kryptofix/n-Bu4NHCO3/metanol en el reactor. El disolvente se elimino mientras se calentaba bajo una corriente suave de nitrogeno y a vaclo. El secado se repitio tras la adicion de acetonitrilo. Se anadio al resto seco una disolucion de 4 mg de 2a en 1 ml de alcohol terc- amllico/acetonitrilo (9:1), y la mezcla se calento durante 20 min. a 120°C. Durante el calentamiento, el sistema de evacuacion del reactor se abrio para permitir la evaporacion del disolvente. Se anadio una mezcla de 2,2 ml de HCl 1,5 M, 1,1 ml de acetonitrilo y 30 mg de ascorbato de sodio, y el reactor se calento a 100°C durante 10 min. El producto bruto se neutralizo (1,5 ml de NaOH 2M + 0,3 ml de amortiguador), y se transfirio a una columna de HPLC semipreparativa (Synergy Hydro-RP, 250 x 10 mm, Phenomenex). Se hizo pasar a traves de la columna una mezcla de 60% de etanol y 40% de amortiguador de ascorbato (pH 7,0), con 3 ml/min. La fraccion del producto a »18 min. (figura 2) se recogio directamente en el vial del producto que contiene 8,5 ml de base de Formulacion (amortiguador de fosfato, acido ascorbico, PEG400). La HPLC analltica del producto final (figura 3) mostro una pureza radioqulmica y qulmica excelente. Solamente se ha detectado 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F- 18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina frla en el cromatograma de UV (figura 3, abajo), y todas las impurezas no radioactivas se han separado. Se determino que la pureza radioqulmica era 99,6%.
Ejemplo 2. Sintesis de radiosfntesis de 4-[(E)-2-(4-{2[-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N- metilanilina en Tracerlab FXn
Se ha adoptado un sintetizador Tracerlab FXn para el “enfoque de HPLC de corte directo” (figura 4).
Se atrapo [F-18]fluoruro (3700 MBq) en un cartucho QMA. La actividad se eluyo con una mezcla de carbonato potasico/kryptofix/acetonitrilo/agua en el reactor. El disolvente se elimino mientras se calentaba bajo una corriente suave de nitrogeno y a vaclo. El secado se repitio tras la adicion de acetonitrilo. Se anadio una disolucion de 7 mg de 2a en 1 ml de acetonitrilo al residuo seco, y la mezcla se calento durante 8 min. a 120°C. Tras enfriar hasta 60°C, se anadio una mezcla de 0,5 ml de HCl 2M y 0,5 ml de acetonitrilo, y el reactor se calento a 110°C durante 4 min. El producto bruto se neutralizo (1 ml de NaOH 1M + 2 ml de amortiguador), y se transfirio a una columna de HPLC semipreparativa (Synergy Hydro-RP, 250 x 10 mm, Phenomenex). Se hizo pasar una mezcla de 60% de etanol y 40% de amortiguador de ascorbato (pH 7,0) a traves de la columna con 3 ml/min. La fraccion del producto a »16 min. (figura 2) se recogio directamente en el vial del producto que contiene 8,5 de base de Formulacion (amortiguador de fosfato, acido ascorbico, PEG400). Se determino que la pureza radioqulmica era >99%.
Ejemplo 3. Sintesis de radiosfntesis de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N- metilanilina en Tracerlab MX y una unidad de purificacion Eckert&Ziegler
Para la sintesis de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina se ha ensamblado un
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kit (Tabla 1).
Vial del eluyente
22 mg de kryptofix. 7 mg de carbonato de potasio en 300 ml de agua + 300 ml de acetonitrilo
Vial de tapa azul
8 ml de acetonitrilo
Vial de tapa roia
8 mg de precursor 2a
Vial de tapa verde
2 ml de HCl 1,5M + 30 mg de ascorbato de sodio
Jeringuilla de 2 ml
1,5 ml de NaOH 2M + 0,3 ml de amortiguador de fosfato
Bolsa de agua
Agua
Llnea de producto a unidad de purificacion Eckert&Ziegler
Tubo con ajustes de cierre roscado de ajuste hermetico (luer)
Cartucho de intercambio anionico
QMA light, Waters (preacondicionado)
Valvula de 3 vlas desechable
Con tuberla y aguja al vial del producto, incl. filtros esteriles
Vial del producto
Vial de 20 ml
Base de Formulacion
8,5 ml (PEG 400, Na2HPO4'H2O, acido ascorbico en agua)
Disolvente de HPLC
- etanol - agua - ascorbato de sodio - acido ascorbico
Caudal de HPLC
3 ml/min
Se adopto el diseno del casete Tracerlab MX (figura 5). Se atrapo [F-18]fluoruro en el cartucho QMA. La actividad se eluyo con mezcla de carbonato potasico/kryptofix/acetonitrilo/agua (del “vial de eluyente”) en el reactor. El disolvente se elimino mientras se calentaba bajo una corriente suave de nitrogeno y a vaclo. El secado se repitio tras la adicion de acetonitrilo. Se anadio una disolucion de 8 mg de 2a en 1,8 ml de acetonitrilo (se anadio acetonitrilo del “vial con una tapa azul” a 2a solido en el “vial con tapa roja” durante la secuencia) al resto seco, y la mezcla se calento durante 10 min. a 120°C. Se anadio HCl 5M (procedente del “vial con tapa verde”), y el reactor se calento a 110°C durante 5 min. El producto bruto se neutralizo (1 ml de NaOH 1M + 0,3 ml de amortiguador, procedente de la “jeringuilla de 2 ml”), y se transfirio a la valvula de inyeccion de la HPLC de Eckert&Ziegler (figura 6) mediante la bomba de jeringuilla izquierda del modulo MX. El producto bruto se purifico en una columna de HPLC Synergy Hydro-RP, 250 x 10 mm, Phenomenex, usando una mezcla de 60% de etanol y 40% de amortiguador de ascorbato (pH 7,0). La fraction del producto a »17,5 min. (figura 2) se recogio directamente en el vial del producto que contiene 8,5 de base de Formulation (amortiguador de fosfato, acido ascorbico, PEG400).
Ejemplo 4. Sfntesis de radiosfntesis de 4-[(E)-2-(4-(2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N- metilanilina en un Eckert&Ziegler modular lab
La slntesis se ha llevado a cabo en un sintetizador Eckert & Ziegler ModularLab usando acetonitrilo como disolvente para la fluoracion. En la Tabla 2 se resumen el montaje del sintetizador y los resultados.
Se atrapo [F-18]fluoruro en un cartucho QMA (C1). La actividad se eluyo con una mezcla de kryptofix (procedente de “V1”) en el reactor. El disolvente se elimino mientras se calentaba bajo una corriente suave de nitrogeno y a vaclo. El secado se repitio tras la adicion de 100 ml de acetonitrilo (procedente de “V2”). La disolucion de precursor 2a (procedente de “V3”) se anadio al residuo seco, y la mezcla se calento durante 10 min. a 120°C. Tras enfriar hasta 40°C, se anadieron 2 ml de HCl 1,5 M (procedente de “V4”), y la disolucion se calento durante 5 min. a 110°C.
La mezcla de producto bruto se diluyo con 1,2 ml de NaOH 2M y 0,8 ml de formiato de amonio (1M) procedente del vial “V5”, y entonces se transfirio al vial de HPLC (“Vial de Mezcla”) que contiene previamente 1 ml de acetonitrilo y 0,5 ml de etanol.
La mezcla se transfirio al circuito de inyeccion de muestra de 10 ml de la HPLC semipreparativa usando una sobrepresion de nitrogeno en el vial de HPLC (“Vial de Mezcla”) y via un sensor de llquido que controlo el final de la carga. La mezcla se cargo a una columna de HPLC semipreparativa (Synergi Hydro-RP, 250 x 10 mm, Phenomenex). Se hizo pasar una mezcla de 60% de etanol y 40% de amortiguador de ascorbato a traves de la columna con 6 ml/min. La fraccion del producto a »7 min. se recogio directamente en el vial del producto que contiene 15 ml de base de Formulacion (que consiste en amortiguador de fosfato, PEG400 y acido ascorbico). La HPLC analltica del producto final mostro una pureza radioqulmica y qulmica excelente. No se cuantifico ninguna impureza mayor que 0,3 mg/ml.
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Tabla 2
Vial V1
22 mg de kryptofix 7 mg de carbonato de potasio 300 ml de acetonitrilo 300 ml de agua
Vial V2
100 ml de acetonitrilo
Vial V3
8 mg de precursor 2a en 1,8 ml de acetonitrilo
Vial V4
2 ml de HCl 1,5M
Vial V5
1,2 ml de NaOH 2,0M 800 ml de formiato de amonio 1 M
Cartucho C1
QMA light (Waters) acondicionado con carbonato de potasio 0,5M
Vial de Mezcla
1 ml de acetonitrilo 500 ml de etanol
Columna de HPLC
Synergi Hydro-RP, 250*10 mm, 10 mm 80A, Phenomenex
Disolvente de HPLC
60% de etanol, 40% de amortiguador de ascorbato (ascorbato de sodio 5 g/l y acido ascorbico 50 mg/l)
Caudal de HPLC
6 ml/min
Actividad de inicio de [F- 18]fluoruro
46,0 GBq
Actividad del producto
19,4 GBq
Radiopureza del producto (RCP)
99%
Rendimiento radioquimico
42% (no corregido para la desintegracion)
Ejemplo 5. Sintesis de radiosfntesis de 4-[(E)-2-(4-(2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N- metilanilina en tracerlab MX y unidad de purificacion Eckert&Ziegler
La sintesis se llevo a cabo en un sintetizador GE Tracerlab MX, y la purificacion de 4 se ha llevado a cabo en una unidad de purificacion Eckert & Ziegler. El llenado del circuito de inyeccion de la HPLC se controlo usando la jeringuilla del modulo de MX. El montaje de ambos automatas y los resultados se resumen en la Tabla a continuacion. Se atrapo [F-18]fluoruro en un cartucho QMA (C1). La actividad se eluyo con una mezcla de kryptofix (procedente de “V1”) en el reactor. El disolvente se elimino mientras se calentaba bajo una corriente suave de nitrogeno y a vacio. El secado se repitio tras la adicion de acetonitrilo (procedente de “V2”). Se anadio la disolucion de precursor 2a (procedente de “V3”) al residuo seco, y la mezcla se calento durante 10 min. a 120°C. Tras enfriar hasta 40°C, se anadieron 2 ml de HCl 1,5M (procedente de “V4”), y la disolucion se calento durante 5 min. a 110°C.
La mezcla de producto bruto se diluyo con 1,2 ml de NaOH 2M y 0,8 ml de formiato de amonio (1M) de la jeringuilla “S1”, y entonces se transfirio al vial de HPLC (“Vial de Mezcla”), en el que se anadieron por separado 1 ml de acetonitrilo (procedente de “V2”) y 0,5 ml de etanol (procedente de “V5”).
La mezcla promedio de 6-7 ml se transfirio a una jeringuilla de 30 ml, que entonces empujo la totalidad del volumen en el circuito de inyeccion de muestra de 10 ml de la HPLC semipreparativa. La mezcla se cargo a la columna de HPLC semipreparativa (Synergi Hydro-RP, 250 x 10 mm, Phenomenex). Se hizo pasar una mezcla de 60% de etanol y 40% de amortiguador de ascorbato a traves de la columna con 6 ml/min. La fraccion del producto a »9 min. se recogio directamente durante 50 s en el vial del producto que contiene 15 ml de base de Formulacion (que consiste en amortiguador de fosfato, PEG400 y acido ascorbico). La HPLC analitica del producto final mostro una pureza radioquimica y quimica excelente. No se cuantifico ninguna impureza mayor que 0,5 mg/ml.
Tabla 3
Vial V1
22 mg de kryptofix 7 mg de carbonato de potasio 300 ml de acetonitrilo 300 ml de agua
Vial V2
8 ml de acetonitrilo
Vial V3
8 mg de precursor en 1,8 ml de acetonitrilo
Vial V4
2 ml de HCl 1,5M
Vial V5
8 ml de etanol
1,2 ml de NaOH 2,0M
Jeringuilla S1
800 ml de formiato de amonio 1 M
Cartucho C1
QMA light (Waters) acondicionado con carbonato de potasio 0,5M
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Columna de HPLC
Synergi Hydro-RP, 250*x10 mm, 10 mm 80A, Phenomenex
Disolvente de HPLC
60% de etanol, 40% de amortiguador de ascorbato (ascorbato de sodio 5 g/l y acido ascorbico 50 mg/l)
Caudal de HPLC
6 ml/min
Actividad de inicio de [F- 18]fluoruro
36,9 GBq
Actividad del producto
14,2 GBq
Radiopureza del producto (RCP)
100%
Rendimiento radioquimico
38% (no corregido para la desintegracion)
Ejemplo 6. sintesis de radiosfntesis de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N- metilanilina en Tracerlab MX y una unidad de purificacion Eckert&Ziegler
La sintesis se llevo a cabo en un sintetizador GE Tracerlab MX, y la purificacion de 4 se ha llevado a cabo en una unidad de purificacion Eckert & Ziegler. El llenado del circuito de inyeccion de la HPLC se controlo mediante un detector de fluidos de la unidad de purificacion Eckert&Ziegler. El montaje de ambos automatas y los resultados se resumen en la Tabla a continuacion. Se atrapo [F-18]fluoruro en un cartucho QMA (C1). La actividad se eluyo con una mezcla de kryptofix (procedente de “V1”) en el reactor. El disolvente se elimino mientras se calentaba bajo una corriente suave de nitrogeno y a vacio. El secado se repitio tras la adicion de acetonitrilo (procedente de “V2”). Se anadio la disolucion de precursor (procedente de “V3”) al residuo seco, y la mezcla se calento durante 10 min. a 120°C. Tras enfriar hasta 40°C, se anadieron 2 ml de HCl 1,5M (procedente de “V4”), y la disolucion se calento durante 5 min. a 110°C.
La mezcla de producto bruto se diluyo con 1,2 ml de NaOH 2M y 0,8 ml de formiato de amonio (1M) de la jeringuilla “S1”. Se anadieron por separado 1 ml de acetonitrilo (procedente de “V2”) y 0,5 ml de etanol (procedente de “V5”), y entonces se transfirio a la jeringuilla derecha del automata GE TracerLab MX.
La mezcla se transfirio al circuito de inyeccion de muestra de 10 ml de la HPLC semipreparativa usando la jeringuilla derecha del automata GE TracerLab MX via un sensor de liquidos que controlo el final de la carga. La mezcla se cargo a la columna de HPLC semipreparativa (Synergi Hydro-RP, 250 x 10 mm, Phenomenex). Se hizo pasar una mezcla de 60% de etanol y 40% de amortiguador de ascorbato a traves de la columna con 6 ml/min. La fraccion del producto a »9 min. se recogio directamente durante 50 s en el vial del producto que contiene 15 ml de base de Formulacion (que consiste en amortiguador de fosfato, PEG400 y acido ascorbico). La HPLC analitica del producto final mostro una pureza radioquimica y quimica excelente. No se cuantifico ninguna impureza mayor que 0,7 mg/ml.
Tabla 4
Vial V1
22 mg de kryptofix 7 mg de carbonato de potasio 300 ml de acetonitrilo 300 ml de agua
Vial V2
8 ml de acetonitrilo
Vial V3
8 mg de precursor en 1,8 ml de acetonitrilo
Vial V4
2 ml de HCl 1,5M
Vial V5
8 ml de etanol
Jeringuilla S1
1,2 ml de NaOH 2,0M 800 ml de formiato de amonio 1 M
Cartucho C1
QMA light (Waters) acondicionado con carbonato de potasio 0,5M
Columna de HPLC
Synergi Hydro-RP, 250*x10 mm, 10 mm 80A, Phenomenex
Disolvente de HPLC
60% de etanol, 40% de amortiguador de ascorbato (ascorbato de sodio 5 g/l y acido ascorbico 50 mg/l)
Caudal de HPLC
6 ml/min
Actividad de inicio de [F- 18]fluoruro
62,2 GBq
Actividad del producto
24,8 GBq
Radioactividad del producto (RCP)
100%
Rendimiento radioquimico
40% (no corregido para la desintegracion)
Ejemplo 7. Influencia del procedimiento de purificacion sobre la pureza radioquimica
Se llevo a cabo una serie de sintesis de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina en dos sintetizadores diferentes (Eckert & Ziegler modular lab y GE tracerlab MX) como se describe de forma
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general en los ejemplos 1, 3-6. Los radiomarcajes se han llevado a cabo usando 4-10 mg de precursor 2a en acetonitrilo, asi como en mezcla de alcohol terc-amilico/acetonitrilo a 100-120°C durante 10-20 min. (en el caso de los radiomarcajes en alcohol terc-amilico, el disolvente se evaporo previamente a la desproteccion). El grupo protector de N-Boc se elimino calentando con HCl (1,5M-2M).
Las mezclas de producto bruto se purificaron individualmente mediante uno de los dos procedimientos A) o B). Metodo A):
La mezcla de producto bruto obtenida tras la desproteccion se neutraliza con una mezcla de NaOH 2M y formiato de amonio 0,1M, y se inyecta en una HPLC semipreparativa (por ejemplo columna: Gemini C18, 10 x 250 mm, 5 pm, Phenomenex; disolvente: 70% de acetonitrilo, 30% de amortiguador de formiato de amonio 0,1M con ascorbato sodico 5 mg/ml, caudal 3 ml/min.). La fraccion del producto se recoge en un matraz que contiene aprox. 160 ml de agua con ascorbato sodico 10 mg/ml. La mezcla se hace pasar a traves de un cartucho C18 (tC18 SepPak environmental, Waters). El cartucho se lava con aprox. 8-10 ml de EtOH al 20% en agua (que contiene ascorbato sodico 10 mg/ml). Finalmente, el producto se eluye con 1,5 a 3 ml de etanol en un vial que contiene 8,5 a 17 ml de “base de Formulacion” (que comprende PEG400, amortiguador de fosfato y acido ascorbico).
Metodo B):
La mezcla de producto bruto obtenida tras la desproteccion se neutraliza con una mezcla de NaOH 2M y formiato de amonio 0,1M, y se inyecta en una HPLC semipreparativa (columna: por ejemplo: Gemini C18, 10 x 250 mm, 5 pm, Phenomenex o Synergi Hydro-RP, 250 x 10 mm, 10 pm 80A, Phenomenex o Synergi Hydro-RP, 250 x 10 mm, 4 pm 80A, Phenomenex; disolvente: 60-70% de etanol, 40-30% de amortiguador de ascorbato » 5 mg/ml de ascorbato; caudal 3 ml/min. o 4 ml/min. o 6 ml/min.). La fraccion del producto se recoge directamente en un vial que contiene “base de la Formulacion” (que comprende PEG400, amortiguador de fosfato y acido ascorbico) para proporcionar 10-24 ml de la Formulacion final. El tiempo de corte del pico se ajusto en el software para obtener una Formulacion que comprende 15% de EtOH.
Cada cuadrado en blanco (cada uno resultante para una sintesis que comprende una purificacion mediante el procedimiento A, 110 experimentos) y cada punto en negro (cada uno resultante para una sintesis que comprende una purificacion mediante el procedimiento B, 105 experimentos) en la figura 9 representa un experimento individual para la fabricacion de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N- metilanilina. La tendencia de la pureza radioquimica en correlacion con la radioactividad del producto final se ilustra mediante lineas de tendencia lineales.
La pureza radioquimica obtenida tras la HPLC con re-Formulacion mediante SPE (metodo A) varia significativamente (figura 9, cuadrados en blanco). Especialmente a mayores niveles radioactivos (> 20 GBq), la pureza radioquimica es a menudo incluso <95%.
Por el contrario, la variabilidad es mucho menor para el procedimiento B). Se lograron purezas radioquimicas consistentemente elevadas de >95% a niveles de actividad del producto de mas de 50 GBq, e incluso mayores que 100 GBq (figura 9, puntos negros).
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Ejemplo 8. Sintesis de 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}piridin-3-il)vinil]-N-metilanilina en Tracerlab FXN
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4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)piridin-3-il]-N-metilanilina
Se ha adoptado un sintetizador Tracerlab FXN para el “enfoque de HPLC de corte directo” (figura 4).
Se atrapo [F-18]fluoruro (10 GBq) en un cartucho QMA. La actividad se eluyo con una mezcla de carbonato potasico/kryptofix/acetonitrilo/agua en el reactor. El disolvente se elimino mientras se calentaba bajo una corriente suave de nitrogeno y a vaclo. El secado se repitio tras la adicion de acetonitrilo. Se anadio una disolucion de 8 mg de 2b en 1,5 ml de acetonitrilo al residuo seco, y la mezcla se calento durante 10 min. a 120°C. Tras enfriar hasta 60°C, se anadio 1 ml de HCl 1,5M, y el reactor se calento a 110°C durante 5 min. El producto bruto se neutralizo (1 ml de NaOH 1M/formiato de amonio), se diluyo (con 0,5 ml de EtOH y 1,5 ml de MeCN) y se transfirio a una columna de HPLC semipreparativa (Synergy Hydro-RP, 250 x 10 mm, Phenomenex). Se hizo pasar una mezcla de 60% de etanol y 40% de amortiguador de ascorbato (ascorbato de sodio 5 g/l y acido ascorbico 50 mg/l pH 7,0) a traves de la columna con 3 ml/min. La fraccion del producto a »10 min. (vease la figura 10) se recogio directamente durante 100 s y se mezclo con 15 ml de base de Formulacion (amortiguador de fosfato, acido ascorbico, PEG400).
Se obtuvieron 4,2 GBq (42% no corregido para desintegracion) en un tiempo de sintesis global de 60 min. Se determino que la pureza radioqulmica (determinada mediante HPLC, tR = 3,42 min.) era >99%.
Ejemplo 9. Sintesis de 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]fluoroetoxi)etoxi]-etoxi}fenil)vinil]-N-metilanilina en Tracerlab FXN
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55
Se ha adoptado un sintetizador Tracerlab FXn para el “enfoque de HPLC de corte directo” (figura 4).
Se atrapo [F-18]fluoruro (6,85 GBq) en un cartucho QMA. La actividad se eluyo con una mezcla de carbonato potasico/kryptofix/acetonitrilo/agua en el reactor. El disolvente se elimino mientras se calentaba bajo una corriente suave de nitrogeno y a vaclo. El secado se repitio tras la adicion de acetonitrilo. Se anadio una disolucion de 8 mg de 2c en 1,5 ml de acetonitrilo al residuo seco, y la mezcla se calento durante 10 min. a 120°C. Tras enfriar hasta 60°C, el producto bruto se diluyo con 4 ml de eluyente de HPLC, y se transfirio a una columna de HPLC semipreparativa (Synergy Hydro-RP, 250 x 10 mm, Phenomenex). Se hizo pasar una mezcla de 60% de etanol y 40% de amortiguador de ascorbato (ascorbato de sodio 5 g/l y acido ascorbico 50 mg/l pH 7,0) a traves de la columna con 3 ml/min. La fraccion del producto a »12 min. se recogio directamente durante 100 s y se mezclo con 15 ml de base de Formulacion (amortiguador de fosfato, acido ascorbico, PEG400).
Se obtuvieron 2,54 GBq (37% no corregido para desintegracion) en un tiempo de slntesis global de 53 min. Se determino que la pureza radioqulmica (determinada mediante HPLC, tR = 3,78 min.) era >99%.
Descripcion de las figuras
figura 1 Montaje de Tracerlab FXn para purificacion con re-Formulacion (adoptado del software de tracerlab).
figura 2 Cromatograma de la purificacion usando columna Synergy en un Eckert&Ziegler modular lab (canal de radioactividad)
figura 3 HPLC analltica de producto radiomarcado (canal de radioactividad parte superior, canal de UV parte inferior)
figura 4 Montaje de Tracerlab FXn para purificacion sin re-formulacion (adoptado del software de tracerlab)
figura 5 Montaje de Tracerlab MX (adoptado del software Coincidence FDG)
figura 6 Montaje de la unidad de purificacion Eckert&Ziegler (adoptado del software de Modual-Lab)
figura 7 Ilustracion esquematica del procedimiento y equipo para fabricar de (aril/heteroaril vinil)-fenil metil aminas fluoropegiladas marcadas con F-18, que comprende tres partes: A) Slntesis, B) HPLC, C) Formulacion; que incluye (1) viales para reactivos y disolventes, (2) una vasija de reaccion, (3) llnea diana para el F-18, opcionalmente llneas para gases, vaclo, etc., (4) opcionalmente detector de fluidos o filtro, etc., (5) valvula de inyeccion, (6), columna de HPLC, (7) valvula para corte del pico, (W) llnea o llneas de residuos, (8) vasija para recogida/dilucion de la fraccion de HPLC, (9) viales de disolvente para lavado y elucion, (10) valvula, (11), cartucho, por ejemplo cartucho C18 para atrapar el producto, (12) valvula.
figura 8 Ilustracion esquematica del procedimiento y equipo para fabricar (aril/heteroaril vinil)-fenil metil aminas fluoropegiladas marcadas con F-18, que comprende dos partes: A) Slntesis, B) HPLC; que incluye (1) viales para reactivos y disolventes, (2) una vasija de reaccion, (3) linea diana para F-18, opcionalmente lineas para gases, vacio, etc., (4) opcionalmente detector de fluidos o filtro, etc., (5) valvula de inyeccion, (6) columna HPLC, (7) valvula para corte del pico.
figura 9 Influencia del procedimiento de purificacion sobre la pureza radioquimica
figura 10 Cromatograma de la purificacion de 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]fluoro-etoxi)etoxi]etoxi}piridin-3- il)vinil]-N-metilanilina en Eckert&Ziegler modular lab (canal de radioactividad)

Claims (10)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    REIVINDICACIONES
    1. Procedimiento para producir un compuesto de Formula I
    imagen1
    que comprende las etapas de:
    Etapa 1: radiomarcar el compuesto de Formula II con un agente de fluoracion F-18, para obtener el compuesto de Formula I, si R = H, o para obtener el compuesto de Formula III, si R = PG
    imagen2
    Etapa 2: si R = PG, escindir el grupo protector PG para obtener un compuesto de Formula I Etapa 3: purificar y formular el compuesto de Formula I en el que: n = 1-6,
    X se selecciona de entre el grupo que consiste en

    a) CH,

    b) N,
    R se selecciona de entre el grupo que consiste en

    a) H,
    b) PG,
    PG es un “grupo protector de amina”,
    LG es un grupo saliente,
    en el que en la etapa 3 se utiliza un metodo de HPLC, en el que el disolvente o la mezcla de disolventes de HPLC es parte de una formulacion inyectable de compuesto I adecuada para inyeccion en seres humanos, en el que el disolvente de HPLC se selecciona de entre el grupo que consiste en etanol, un amortiguador acuoso o una mezcla de etanol/amortiguador acuoso.
  2. 2. Procedimiento segun la reivindicacion 1, en el que PG se selecciona de entre el grupo que consiste en:
    a) Boc,
    b) tritilo y
    c) 4-metoxitritilo.
  3. 3. Procedimiento segun la reivindicacion 1 o 2, en el que LG se selecciona de entre el grupo que consiste en:
    a) halogeno, y
    b) sulfoniloxi,
    5
    10
    15
    20
    25
    halogeno es cloro, bromo o yodo.
  4. 4. Procedimiento segun la reivindicacion 3, en el que el sulfoniloxi se selecciona de entre el grupo que comprende:
    a) metanosulfoniloxi,
    b) p-toluenosulfoniloxi,
    c) (4-nitrofenil)sulfoniloxi,
    d) (4-bromofenil)sulfoniloxi.
  5. 5. Procedimiento segun la reivindicacion 1, en el que n = 3 y X = CH.
  6. 6. Procedimiento segun la reivindicacion 1, en el que n = 3, X = CH, R = Boc, y LG = metanosulfoniloxi.
  7. 7. Procedimiento segun las reivindicaciones 1 a 6, en el que el amortiguador acuoso se selecciona de entre el
    grupo de disoluciones de cloruro de sodio, amortiguador de fosfato de sodio, acido ascorbico, amortiguador de
    ascorbato, o mezclas de los mismos.
  8. 8. Procedimiento segun las reivindicaciones 1 a 7, en el que el disolvente de HPLC es una mezcla de etanol y un amortiguador acuoso que comprende acido ascorbico o sales de acido ascorbico.
  9. 9. Procedimiento segun las reivindicaciones 1 a 8, en el que se utilizan 10-50 mmoles de un compuesto de formula II.
  10. 10. Procedimiento segun las reivindicaciones 1 a 9, en el que el procedimiento se lleva a cabo como un procedimiento automatizado completamente.
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