ES2639812T3 - Ciertos compuestos de fosfato de aminoalquil glucosaminida y sus usos - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula (III)**Fórmula** en la que X se selecciona del grupo que consiste en O y S en la posición axial o ecuatorial; Y se selecciona del grupo que consiste en O y NH; n y m son 0; R1, R2 y R3 son iguales o diferentes y son grupos alquilo de cadena lineal que tienen desde 1 a 20 átomos de carbono y donde uno de R1, R2 o R3 es opcionalmente hidrógeno; R4 se selecciona del grupo que consiste en H y metilo; p es 1 y R6 es COOH o p es 2 y R6 es OPO3H2; R8 y R9 son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en fosfono e H, y al menos uno de R8 y R9 es fosfono; y R10, R11 y R12 se seleccionan independientemente de grupos alifáticos saturados no sustituidos de cadena lineal que tienen desde 1 a 11 átomos de carbono; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

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DESCRIPCION

Ciertos compuestos de fosfato de aminoalquil glucosaminida y sus usos Referencia cruzada a aplicaciones relacionadas

Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional de los Estados Unidos 60/438,585 presentada el 6 de enero de 2003, cuyo contenido se incorpora en este documento en su totalidad.

Antecedentes de la invencion

Los receptores tipo Toll (TLR), se han relacionado con la potente respuesta inmune innata y reconocen los distintos componentes estructurales que son unicos a los patogenos; esta interaccion impulsa al sistema inmune a un estado activado, con consecuencias a corto y largo plazo. Existe un interes significativo en el desarrollo de agonistas y antagonistas de TLR ya que la manipulacion farmacologica de las respuestas inmunes innatas puede conducir a vacunas mas efectivas y con novedosas metodologfas terapeuticas para enfermedades autoinmunes, atopicas, malignas e infecciosas. El primer producto microbiano que se descubrio que era un agonista del receptor tipo Toll fue LPS, un componente de la membrana bacteriana espedfico de las bacterias gramnegativas, que activa el receptor tipo Toll 4 (TLR-4). Aunque el LPS es un potente agente inmunomodulador, su uso medicinal es limitado debido a su extrema toxicidad, incluyendo la induccion del smdrome de respuesta inflamatoria sistemica. La unidad subestructural endotoxica biologicamente activa de LPS es el lfpido A, un disacarido de glucosamina acilado con acido graso de forma multiple, fosforilado que sirve para anclar toda la estructura en la membrana externa de bacterias gramnegativas. Los efectos toxicos del lfpido A se pueden mejorar mediante la modificacion qrnmica selectiva del lfpido A para producir compuestos monofosforilados del lfpido A (MPL™ immunostimulant; Corixa Corporation; Seattle, WA). Se han descrito metodos para fabricar y usar un inmunoestimulante MPL™ y compuestos de estructura similar en un adyuvante de vacuna y otras aplicaciones (veanse, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,436,727; 4,877,611; 4,866,034 y 4,9l2,094; 4,987,237; Johnson et al., J Med Chem 42:4640-4649 (1999); Ulrich and Myers, in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach; Powell and Newman, Eds.; Plenum: New York, 495-524, 1995). En particular, estas y otras referencias demostraron que el inmunoestimulante MPL™ y los compuestos relacionados teman actividades adyuvantes significativas cuando se usaban en formulaciones de vacunas con antfgenos de protemas y carbohidratos para mejorar la inmunidad humoral y/o mediada por celulas a los antfgenos e interactuar con receptores tipo Toll.

Basandose en la experiencia con el inmunoestimulante MPL™ y otros componentes de la pared celular bacteriana, se desarrollaron una familia de nuevos compuestos sinteticos, los fosfatos de aminoalquil glucosaminida (AGP). Los compuestos AGP tambien interaccionan con TLR-4, como agonistas y antagonistas. Los AGP incluyen tanto compuestos adclicos como dclicos (Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,113,918, y 6,303,347, WO 98/50399 publicadas el 12 de octubre de 1998, Wo 01/34617, publicada el 17 de mayo de 2001, WO 01/90129, publicada el 29 de noviembre de 2001, y WO 02/12258, publicada el 14 de febrero de 2002). Al igual que el inmunoestimulante MPL™, se ha demostrado que estos compuestos conservan caractensticas adyuvantes significativas cuando se formulan con antfgenos en composiciones de vacunas y, ademas, tienen perfiles de toxicidad similares o mejorados en comparacion con el inmunoestimulante MPL™. Los aGp tambien demuestran actividad adyuvante de la mucosa y son eficaces en ausencia de antfgeno, haciendolos compuestos atractivos para el uso profilactico y/o terapeutico.

Otra ventaja significativa ofrecida por las AGP sobre el inmunoestimulante MPL™ y similares es que las AGP se pueden producir facilmente a escala comercial por medios sinteticos. Dado que se producen sinteticamente AGP estan libres de contaminantes biologicos de trazas encontrados en MPL. Como tales AGP tendnan una ventaja sobre MPL como adyuvantes de vacunas en ciertos entornos, tales como en los protocolos de inmunizacion pediatrica en los que se debe minimizar la pirogenicidad del adyuvante. Sin embargo, debido a que las AGP son sintetizados qmmicamente, una estabilidad del compuesto menor que la optima puede conducir a la acumulacion de productos de degradacion que pueden resultar en una actividad biologica variable y estabilidad de un lote a otro lote. Desde el punto de vista del desarrollo de procedimientos GMP para la fabricacion de materiales para ensayos clmicos en seres humanos, la estabilidad del lote y la variabilidad de un lote a otro lote son cuestiones importantes. Por lo tanto, son deseables los compuestos que tienen actividad biologica aumentada en comparacion con el inmunoestimulante MPL™ y similares, interaccionan con receptores tipo toll y/o estan optimizados para la smtesis de GPL a gran escala. La presente invencion responde a estas necesidades y mas proporcionando compuestos modificados para mejorar la actividad biologica, estabilidad con mayor resistencia a la degradacion enzimatica y qrnmica, y/o perfiles de seguridad mejorados.

Resumen de la invencion

En un aspecto, esta invencion comprende ciertos nuevos compuestos de fosfasto aminoalquil glucosaminida, como se definen en este documento, y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos.

Descripcion detallada de la invencion

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Los compuestos de la presente invencion son miembros de la familia 4-fosfasto aminoalquil glucosaminida (AGP). Como se describe a continuacion, los compuestos de la invencion presentan diversas modificaciones de las longitudes de las seis cadenas acilo (primarias y secundarias), modificaciones estructurales del brazo alquilo para incluir una unidad estructural fosfato, modificacion estructural para incluir un lfpido eter primario en la posicion de azucar C-3, as^ como tres lfpidos de eteres secundarios, y/o un grupo de bloqueo 6-hidroxilo.

Conocidos qmmicamente como u>-aminoalquil 2-amino-2-desoxi-4-fosfono-p-D-glucopiranosidos las AGP son una clase de mimeticos del lfpido A sinteticos que esta estructuralmente relacionado con el componente biologicamente activo principal del componente en lfpido A monofosforilo. En las AGP el azucar reductor ha sido reemplazado con una unidad aglicona de N-[(R)-3-n-alcanoiloxitetradecanoil] aminoalquilo. Al igual que otros derivados de lfpidos A de disacarido, las AGP comprenden seis acidos grasos para una actividad biologica maxima, pero a diferencia de los derivados de disacaridos, las AGP contienen una unidad de aglicona unida con p conformacionalmente flexible que permite el empaquetamiento cerrado energicamente favorable de las seis cadenas de acilo grasas. Se cree que un empaquetamiento apretado de seis acidos grasos en una disposicion hexagonal desempena un papel esencial en la bioactividad de moleculas tipo lfpido A (Seydel et al., Immunobiol; 187(3-5):191-211, 1993).

Los compuestos de la presente invencion se consideran miembros de la familia AGP. Estos compuestos incluyen modificaciones de las longitudes de las seis cadenas acilo (primaria y secundaria).

Los compuestos de la invencion son derivados del acido (R)-3-alquiloxitetradecanoico. Ri, R2 y R3 no son grupos acilo, sino son grupos alquilo de cadena lineal, haciendo los grupos RiO-, R2O- y R3O- eter en lugar de los derivados del acido carboxflico. En los compuestos de formula (III), Ri, R2 y R3 son preferiblemente grupos alquilo C6-C10. Pueden ser grupos iguales o diferentes, pero mas preferiblemente son identicos.

Tales compuestos tienen la formula general (III):

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en la que X se selecciona del grupo que consiste en O y S en la posicion axial o ecuatorial; Y se selecciona del grupo que consiste en O y NH; n y m son 0; Ri, R2 y R3 son iguales o diferentes y son grupos alquilo de cadena lineal que tienen desde 1 a aproximadamente 20 atomos de carbono y donde uno de Ri, R2 o R3 es opcionalmente hidrogeno; R4 se selecciona del grupo que consiste en H y metilo; p es i y R6 es COOH o p es 2 y R6 es OPO3H2; Rs y R9 son iguales

0 diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en fosfono e H, y al menos uno de Rs y R9 es fosfono; y Rio, Rii y Ri2 se seleccionan independientemente de grupos alifaticos saturados no sustituidos de cadena lineal que tienen desde

1 a ii atomos de carbono;

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

En realizaciones preferidas de los compuestos (III) de la invencion,

- X y Y ambos son preferiblemente atomos de oxfgeno;

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- Ri, R2 y R3 son mas preferiblemente de forma independiente seleccionados de grupos alquilo de cadena lineal C6-C10 no sustituidos;

- grupos R10, R11 y R12 son preferiblemente grupos alifaticos (esto es, alquilo) saturados no sustituidos que tienen desde 1 a 11, preferiblemente desde 3 a 9, mas preferiblemente desde 3 a 7, atomos de carbono, y mas preferiblemente son grupos alifaticos saturados no sustituidos identicos que tienen desde 3 a 7 atomos de carbono.

Otro tipo mas de compuesto de esta invencion tiene la formula (IV):

imagen2

en la que Y ahora esta fija como oxfgeno; X se selecciona del grupo que consiste en O y S en la posicion axial o ecuatorial; n y m son 0; Ri, R2 y R3 son iguales o diferentes y son grupos alquilo de cadena lineal que tienen desde 1 a aproximadamente 20 atomos de carbono y donde uno de R1, R2 o R3 es opcionalmente hidrogeno; R4 se selecciona del grupo que consiste en H y metilo; p es 1 y R6 es COOH o p es 2 y R6 es OPO3H2; R8 y R9 son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en fosfono e H, y

al menos uno de R8 y R9 es fosfono; y R10, R11 y R12 se seleccionan independientemente de grupos alifaticos saturados de cadena lineal no sustituida que tienen desde 1 a 10 atomos de carbono; o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

Estos compuestos tienen de este modo dos cadenas aciladas y una cadena eter no acilada.

En las realizaciones preferidas de los compuestos (IV) de la invencion,

- X es preferiblemente oxfgeno;

- R1, R2 y R3 son mas preferiblemente de forma independiente seleccionados de grupos alquilo de cadena lineal C6-C10 no sustituidos;

- grupos R10, R11 y R12 son preferiblemente grupos alifaticos (esto es, alquilo) saturados no sustituidos que tienen desde 1 a 10, preferiblemente desde 3 a 9, mas preferiblemente desde 3 a 7, atomos de carbono, y mas preferiblemente son grupos alifaticos saturados no sustituidos identicos que tienen desde 3 a 7 atomos de carbono.

Estos compuestos tienen atributos que permiten la resistencia a un metabolismo desfavorable y/o hidrolisis acuosa. Se ha postulado que la eliminacion selectiva de los acidos grasos normales en moleculas de lfpido A estructuralmente diversas por la aciloxiacilhidrolasa humana (AOAH) para producir el lfpido IVa antagonista ha evolucionado como un mecanismo de defensa para reducir la toxicidad del lfpido A (Erwin and Munford., J Biol Chem 265(27):16444-16449, 1990). Sin embargo, la mayor toxicidad del 3-D-MPL derivada naturalmente con respecto a la del componente hexaacil principal es probablemente debido a la presencia de componentes menos altamente acilados con estructuras distintas del lfpido IVa (Ulrich and Myers, Monophosphoryl lipid A as an Adjuvant. Past experiences and new directions. In: Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach. Ed. Powell M.F., Newman M.J. Plenum Press, New York, 1995; p. 495-524, Johnson et al., J Med Chem; 42:4640-4649, 1999). La variabilidad estructural en 3-D-MPL y otras preparaciones de lfpido A surge inherentemente de los LPS afines, asf como de la escision de ester durante los

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procedimientos semisinteticos y de aislamiento. De hecho, se ha informado que la escision hidrolftica facil de grupos acilo unidos a ester durante la smtesis qmmica de un Kpido A de R. capsulatus putativo, un potente antagonista de la produccion de TNF-a inducida por LPS, produce cantidades menores de subproductos agonistas indeseables, (Christ et al., Science; 268:80-83, 1995). De este modo, la inestabilidad qmmica y/o enzimatica puede ser el talon de Aquiles de un farmaco potencial basado en lfpido A que contiene enlaces esteres labil. La inestabilidad qmmica y metabolica de los acidos grasos unidos a ester presentes tanto en las moleculas agonistas del lfpido A como en las moleculas antagonistas se ha superado con analogos hidroltticamente estables que llevan enlaces eter en lugar de acidos grasos unidos a ester primario y/o secundario (Christ et al. supra, Lien et al., J Biol Chem; 276(3):1873-1880,2001).

El termino "grupo protector" (representado en este documento por "PG") se refiere a cualquiera de un gran numero de grupos usados para reemplazar el hidrogeno de un grupo hidroxi, con el fin de bloquear, prevenir o reducir la reactividad del grupo. Ejemplos de grupos protectores (y una lista de abreviaturas comunmente usadas para ellos) se pueden encontrar en T. W. Greene and P. G. Futs, "Protective Groups in Organic Chemistry" (Wiley), Beaucage and Iyer, Tetrahedron 48:2223 (1992) and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, vols. 1-8 (Wiley). Los grupos protectores de hidroxi representativos incluyen aquellos en los que el grupo hidroxi esta ya sea acilado o alquilado, tal como mediante la formacion de eteres o esteres usando, por ejemplo, grupos metilo, acetilo, bencilo, tritilo, alquilo, tetrahidropiranilo, alilo y sililo trisustituidos o en el cual el grupo hidroxi se reemplaza por fluor.

La eleccion de un grupo protector para un compuesto dado, proposito o conjunto de condiciones esta dentro de la habilidad de los expertos en el arte, y se realiza para proteger, de forma general o selectiva, el grupo reactivo en cuestion en las condiciones imperantes (presencia de otros compuestos reactivos, pH, temperatura, etc.). Los grupos protectores que se pueden usar en esta invencion incluyen grupos metilo, ftaloilo, acetilo (Ac), bencilo (Bn), 2,2,2- tricloroetoxicarbonilo (Troc), t-butildimetilsililo (TBS), t-butildifenilsililo (TBDPS), y 2,2,2-tricloro-1,1 -dimetiletil-cloroformilo (TCBOC). Tambien se puede usar un atomo de fluor como grupo protector. Como es sabido en la tecnica, un cierto grupo protector o tipo de grupo puede ser mas apropiado que otros para uso con un compuesto particular o en una situacion dada, y se aprovecha estas aptitudes en procedimientos de desarrollo que implican compuestos con grupos reactivos tales como hidroxi.

Como se discute en este documento, el termino "alifatico" por sf mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique lo contrario, un radical hidrocarburo dclico o de cadena lineal o ramificada, o combinacion de los mismos, que puede estar completamente saturado, mono- o poliinsaturado y puede incluir radicales di y multivalentes, teniendo el numero de atomos de carbono designado (esto es, C1-C10 significa uno a diez carbonos). Ejemplos de radicales hidrocarburos saturados incluyen grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, ciclohexilo, (ciclohexil) metilo, ciclopropilmetilo, homologos e isomeros de, n-pentilo, n-hexilo, n- heptilo, n-octilo y similares. Un grupo alifatico insaturado es uno que tiene uno o mas dobles enlaces o triples enlaces. Ejemplos de grupos alifaticos insaturados incluyen vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), 2,4- pentadienilo, 3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1- y 3-propinilo, 3-butinilo y los homologos e isomeros superiores. Por lo general, un grupo alifatico tendra desde 1 a 24 atomos de carbono. Un grupo "alifatico inferior" es un grupo alifatico de cadena mas corta, que generalmente tiene ocho o menos atomos de carbono.

El termino "acilo" se refiere a un grupo derivado de un acido organico por eliminacion del grupo hidroxi. Ejemplos de grupos acilo incluyen acetilo, propionilo, dodecanoflo, tetradecanoflo, isobutirilo y similares. De acuerdo con lo anterior, el termino "acilo" como se usa en este documento pretende incluir un grupo definido de otra forma como -C(O)-alifatico, donde el grupo alifatico es preferiblemente un grupo alifatico saturado.

Se entiende que el termino "sales farmaceuticamente aceptables" incluye sales de los compuestos activos que se preparan con acidos o bases relativamente no toxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares encontrados en los compuestos descritos en este documento. Cuando los compuestos de la presente invencion contienen funciones relativamente acidas, se pueden obtener sales de adicion de bases poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, ya sea pura o en un solvente inerte apropiado. Ejemplos de sales de adicion de bases farmaceuticamente aceptables incluyen sales de sodio, potasio, calcio, amonio, amino organico o magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invencion contienen funciones relativamente basicas, se pueden obtener sales de adicion de acido poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente del acido deseado, ya sea puro o en un solvente inerte apropiado. Ejemplos de sales de adicion de acido farmaceuticamente aceptables incluyen aquellos derivados de acidos inorganicos como los acidos clorhudrico, bromhndrico, mtrico, carbonico, monohidrogenocarbonico, fosforico, monohidrogenofosforico, dihidrogenofosforico, sulfurico, monohidrogensulfurico, yodhfdrico o fosforoso y similares, asf como las sales derivadas de acidos organicos relativamente no toxicos como los acidos acetico, propionico, isobutmco, maleico, malonico, benzoico, succmico, suberico, fumarico, lactico, mandelico, ftalico, bencenosulfonico, p-tolilsulfonico, dtrico, tartarico, metanosulfonico y similares. Tambien se incluyen sales de aminoacidos tales como arginato y similares, y sales de acidos organicos como acidos glucuronico o galacturonico y similares (vease, por ejemplo, Berge, S.M., et al, "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19, 1977). Ciertos compuestos espedficos de la presente invencion contienen funciones tanto basicas como acidas que permiten que los compuestos se conviertan en ya sea sales de adicion de base o de acido.

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Las formas neutras de los compuestos se pueden regenerar poniendo en contacto la sal con una base o un acido y aislando el compuesto original de la manera convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de sal en ciertas propiedades ffsicas, tales como la solubilidad en solventes polares, pero de otro modo las sales son equivalentes a la forma original del compuesto para los propositos de la presente invencion.

Ademas de las formas de sal, la presente invencion proporciona compuestos que estan en una forma de profarmaco. Los profarmacos de los compuestos descritos en este documento son aquellos compuestos que experimentan facilmente cambios qmmicos en condiciones fisiologicas para proporcionar los compuestos de la presente invencion. Ademas, los profarmacos pueden convertirse en los compuestos de la presente invencion mediante metodos qmmicos o bioqmmicos en un entorno ex vivo. Por ejemplo, los profarmacos se pueden convertir lentamente en los compuestos de la presente invencion cuando se colocan en un deposito de parche transdermico con una enzima o reactivo qmmico apropiado.

Ciertos compuestos de la presente invencion pueden existir en formas no solvatadas, asf como formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a formas no solvatadas y se pretende que esten incluidas dentro del alcance de la presente invencion. Ciertos compuestos de la presente invencion pueden existir en multiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas ffsicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invencion y estan destinadas a estar dentro del alcance de la presente invencion.

Ciertos compuestos de la presente invencion poseen atomos de carbono asimetricos (centros opticos) o dobles enlaces; los racematos, diastereomeros, isomeros geometricos e isomeros individuales estan destinados a estar comprendidos dentro del alcance de la presente invencion.

Los compuestos de la presente invencion tambien pueden contener proporciones no naturales de isotopos atomicos en uno o mas de los atomos que constituyen tales compuestos. Por ejemplo, los compuestos se pueden radiomarcar con isotopos radiactivos, tales como por ejemplo tritio (3H), yodo-125 (125I) o carbono-14 (14C). Se pretende que todas las variaciones isotopicas de los compuestos de la presente invencion ya sean radiactivas o no, esten incluidas dentro del alcance de la presente invencion.

Los compuestos de la presente invencion se pueden preparar por cualquier medio apropiado; vease la seccion de ejemplo a continuacion, muchos de los cuales han sido descritos. Por ejemplo, los procedimientos para preparar ciertos compuestos utiles en la presente invencion se describen en la Patente de los Estados Unidos No. 6,113,918; la Patente de los Estados Unidos No. 6,303,347; y PCT/US98/09385 (WO 98/50300, 12 de octubre de 1988). Otros compuestos mas se pueden preparar usando los metodos descritos en Johnson, et al., J. Med. Chem. 42:4640-4649 (1999), Johnson, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2273-2278 (1999), y PCT/US98/50399 (WO 98/50399, 12 de noviembre de 1998). En general, los metodos sinteticos descritos en las referencias anteriormente mencionadas y otros metodos sinteticos de otro modo conocidos en la tecnica son ampliamente aplicables a la preparacion de estos compuestos. Por ejemplo, al preparar compuestos que tienen diferentes grupos acilo y sustituciones, los expertos en el arte apreciaran que los metodos convergentes descritos en el mismo se pueden modificar para utilizar agentes acilantes alternativos, o se pueden iniciar con materiales comercialmente disponibles que tienen grupos acilo apropiados unidos.

En las composiciones para provocar o potenciar una respuesta inmune, los compuestos de la presente invencion se administran a un animal de sangre caliente, incluyendo seres humanos, con un antfgeno tal como una protema o antfgeno polipeptido o un polinucleotido que expresa una protema o antfgeno polipeptido. La cantidad de antfgeno administrado para obtener una respuesta deseada puede ser determinada facilmente por un experto en el arte y variara con el tipo de antfgeno administrado, ruta de administracion y programa de inmunizacion.

Los compuestos de la presente invencion tambien se pueden administrar sin un antfgeno exogeno, para obtener proteccion inmediata mediante un efecto de resistencia no espedfico, como se describe a continuacion; vease Persing et al., WIPO Publication WO 01/90129, 29 de noviembre de 2001. Se pueden usar compuestos que tienen la capacidad de estimular una resistencia no espedfica y/o provocar un efecto adyuvante en la formulacion rapida de vacuna. La administracion de compuestos de la presente invencion con antfgeno conduce a una respuesta inmune de mucosa adquirida dentro de tres a cuatro semanas. La administracion semanal de tales compuestos, por via intranasal, por ejemplo, durante un penodo de cuatro semanas proporcionana una proteccion rapida y duradera combinando la proteccion proporcionada por la respuesta inmune innata inicial, seguida por la respuesta inmune adquirida al antfgeno de interes.

Los compuestos de la presente invencion se pueden evaluar en una variedad de formatos de ensayo para identificar y seleccionar aquellos que tienen las caractensticas mas adecuadas para una aplicacion dada de la invencion. Por ejemplo, se puede usar modelos animales para identificar y evaluar perfiles de liberacion de citoquinas en circulacion sistemica tras la administracion de un compuesto de la presente invencion. Ademas, existen varios modelos in vitro e in vivo para examinar cambios en uno o mas aspectos de una respuesta inmune a diferentes componentes antigenicos con el fin de identificar los compuestos mas adecuados para provocar una respuesta inmune espedfica de interes. Por ejemplo, un compuesto se puede poner en contacto con celulas diana, tales como macrofagos, celulas dendnticas o celulas de Langerhans in vitro, y se pueden medir citoquinas elaboradas. Ademas, las matrices de expresion genica se pueden usar para identificar vfas espedficas activadas o inhibidas por un compuesto particular de interes.

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La induccion/produccion de citoquinas se puede determinar usando tratamiento de sangre humana y/o celulas con compuestos de la presente invencion y medicion de induccion por ELISA (R & D Systems). Tales metodos tambien se pueden usar para determinar si la induccion es dependiente del receptor Toll. La respuesta de linfocitos T citotoxicos despues de la administracion de los compuestos de la presente invencion se determina mediante un ensayo de citotoxicidad basado en 51Cr. Si se desea, el rendimiento del compuesto de la invencion a este respecto se puede comparar con otros compuestos conocidos por ser funcionales a este respecto, tales como ffpido A, MPL, AGP o similares. Ademas, los compuestos de la invencion se pueden evaluar en combinacion con uno o mas agentes adyuvantes y/o inmunomoduladores para identificar efectos sinergicos (veanse por ejemplo las Patentes de los Estados Unidos Nos: 6,303,347 y 6,113,918, y WO 01/90129, publicadas el 29 de noviembre de 2001.

Modelos animales tales como el modelo de desaffo de influenza de murino y el modelo de desaffo de Listeria monocytogenes de murino son utiles para evaluar la actividad adyuvante e inmunomoduladora. En resumen, el compuesto se administra seguido de un desaffo de influenza o L. monocytogenes. El mdice de enfermedad (pelo rizado, postura encorvada y respiracion laboriosa), perdida de peso y mortalidad, en el caso de influenza o numero de unidades formadoras de colonias en los bazos de ratones tratados/no tratados, en el caso de L. monocytogenes se controla como indicacion de proteccion proporcionada por la administracion del compuesto de la invencion (vease, por ejemplo, WO 01/90129 publicado el 29 de noviembre de 2001).

Composiciones farmaceuticas y metodos

Se entendera que, si se desea, los compuestos descritos en este documento se pueden administrar en combinacion con otras modalidades terapeuticas, tales como compuestos o terapias antimicrobianas, antivirales y antifungicos, diversos agentes terapeuticos basados en ADN, agentes terapeuticos basados en ARN, y/o con otros inmunoefectores. De hecho, tambien se puede incluir esencialmente cualquier otro componente, dado que el componente o componentes adicionales no producen un efecto adverso significativo al contacto con las celulas diana o tejidos huesped. Las composiciones de este modo se pueden entregar junto con varios otros agentes segun se requiera o se desee para la(s) realizacion(es) espedfica(s) de la invencion que se esta implementando. Ilustrativamente, las composiciones farmaceuticas de la invencion pueden incluir, o se pueden usar conjuntamente con, ADN que codifica una o mas protemas terapeuticas, ARN antisentido, ribozimas o similares.

Los compuestos de la invencion y composiciones que los comprenden se pueden administrar conjuntamente con un anffgeno, para proporcionar un efecto adyuvante o potenciador del anffgeno, esto es, para potenciar la respuesta inmune del paciente o sujeto. Tambien, los compuestos y composiciones se pueden administrar en ausencia de anffgeno exogeno, para el efecto terapeutico del propio compuesto.

Cuando el compuesto o composicion se administra sin anffgeno exogeno, se proporcionan metodos para tratar, mejorar y/o prevenir sustancialmente enfermedades infecciosas en sujetos eucariotas, particularmente en animales, preferiblemente en seres humanos. Dada la importancia de la senalizacion mediada por TLR en la respuesta inmune innata a la estimulacion microbiana, la capacidad para estimular tales vfas de forma selectiva y con toxicidad minima representa un enfoque potente para las modalidades de tratamiento profilactico y/o terapeutico frente a una amplia gama de agentes infecciosos.

Los metodos descritos en este documento son aplicables contra esencialmente cualquier tipo de agente infeccioso, incluyendo bacterias, virus, parasitos y hongos. Ilustrativamente, la invencion es util para el tratamiento profilactico y/o terapeutico de infecciones bacterianas por especies de Pseudomonas, Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Serratia, Candida, Staphylococci, Streptococci, Chlamydia, Mycoplasma y muchos otros. Las condiciones vfficas ilustrativas que se pueden tratar de acuerdo con la invencion incluyen las causadas, por ejemplo, por virus influenza, Adenovirus, virus parainfluenza, Rhinovirus, virus sincitial respiratorio (RSV), virus Herpes, Citomegalovirus, virus de Hepatitis, por ejemplo, virus de Hepatitis B y C, y otros. Los hongos ilustrativos incluyen, por ejemplo, Aspergillis, Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Coccidioides immitus, y otros.

Se describen en este documento metodos para el tratamiento de sujetos, particularmente sujetos inmunocomprometidos que se han desarrollado o estan en riesgo de desarrollar infecciones, tales como infecciones nosocomiales bacterianas y virales. Aproximadamente 2 millones de los 40 millones de personas hospitalizadas cada ano desarrollan infeccion nosocomial durante su estancia y aproximadamente 1% de estos, o aproximadamente 400,000 pacientes, desarrollan neumoma nosocomial, de los cuales mas de 7000 mueren. Esto hace que la neumoma nosocomial sea la principal causa de muerte en las infecciones hospitalarias. De este modo, esta realizacion satisface una necesidad significativa de enfoques profilacticos eficaces en el tratamiento de infecciones nosocomiales.

Se describen en este documento tratamientos profilacticos para pacientes inmunocomprometidos, tales como pacientes VIH positivos, que han desarrollado o estan en riesgo de desarrollar neumoma por una infeccion oportunista o por la reactivacion de una infeccion suprimida o latente. En 1992, aproximadamente 20,000 casos de infecciones por Pneumocystis carinii en pacientes con AIDS se informaron solo en los Estados Unidos. Ademas, el 60-70% de todos los pacientes con AIDS reciben P. carinii en algun momento durante su enfermedad. De este modo, la presente invencion en esta realizacion proporciona metodos profilacticos eficaces para esta poblacion en riesgo.

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Se describen en este documento metodos para tratar otras poblaciones de pacientes que pueden estar inmunocomprometidos y/o en riesgo de desarrollar enfermedades infecciosas, incluyendo, por ejemplo, pacientes con fibrosis qmstica, enfermedad pulmonar obstructiva cronica y otros pacientes inmunocomprometidos y/o institucionalizados.

Los compuestos y composiciones descritos en este documento se pueden emplear (sin un antigeno exogeno) en metodos para tratar, mejorar o prevenir sustancialmente trastornos y condiciones alergicas, tales como sinusitis, rinosinusitis cronica, asma, dermatitis atopica y psoriasis. Este enfoque se basa al menos en parte en la capacidad de los compuestos para activar la produccion de citoquinas a partir de celulas diana que pueden competir con respuestas estereotfpicas de citoquinas de tipo alergico caracterizadas por la produccion de IL-4 o hiperreactividad a la actividad de IL-4. La administracion de algunos de los compuestos mono- y disacaridos descritos en la presente invencion resultan en la expresion de IFN-gamma e IL-12 a partir de celulas que procesan y presentan el antfgeno, asf como otras celulas, dando como resultado una expresion inhibida de citoquinas asociadas con respuestas alergicas tales como IL-4, 5, 6, 10 y 13.

Los compuestos y composiciones descritos en este documento se emplean (sin antigeno exogeno) en metodos para tratar enfermedades y afecciones autoinmunes. Los compuestos para uso en esta realizacion se seleccionaran por lo general entre aquellos capaces de antagonizar, inhibir o modular de otro modo negativamente uno o mas receptores de tipo Toll, en particular Tlr2 y/o Tlr4, de manera que una respuesta autoinmune asociada con una condicion dada sea mejorada o sustancialmente impedida. Ilustrativamente, los metodos proporcionados por esta realizacion se pueden usar en el tratamiento de afecciones tales como enfermedad inflamatoria intestinal, artritis reumatoide, artritis cronica, esclerosis multiple y psoriasis.

Los compuestos de la presente invencion tambien se pueden usar como adyuvantes e inmunoefectores que mejoran la generacion de anticuerpos en animales inmunizados, estimulan la produccion de citoquinas y estimulan una respuesta inmune mediada por celulas incluyendo una respuesta de linfocitos T citotoxicos.

En los metodos, por ejemplo, para causar la respuesta inmune de un individuo, los compuestos y composiciones descritos en este documento se pueden formular con un portador farmaceuticamente aceptable para inyeccion o ingestion. Como se usa en este documento, “portador farmaceuticamente aceptable” significa un medio que no interfiere con la actividad inmunomoduladora del ingrediente activo y no es toxico para el paciente al que se administra. Los portadores farmaceuticamente aceptables incluyen emulsiones de aceite en agua o de agua en aceite, composiciones acuosas, liposomas, microperlas y microsomas. Por ejemplo, el portador puede ser una microesfera o micropartfcula que tiene un compuesto de esta invencion dentro de la matriz de la esfera o partfcula o adsorbida sobre la superficie de la esfera o partfcula. El portador puede ser tambien una solucion acuosa o dispersion micelar que contiene trietilamina, trietanolamina u otro agente que hace que la formulacion sea de naturaleza alcalina, o una suspension que contenga hidroxido de aluminio, hidroxido de calcio, fosfato de calcio o adsorbato de tirosina. Los portadores tambien pueden incluir todos los solventes, medios de dispersion, vehfculos, recubrimientos, diluyentes, agentes antibacterianos y antifungicos, agentes isotonicos y retardantes de la absorcion, soluciones reguladoras, soluciones portadoras, suspensiones, coloides y similares. El uso de tales medios y agentes para sustancias farmaceuticas activas es bien conocido en la tecnica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el ingrediente activo, se contempla su uso en las composiciones terapeuticas.

Las formulaciones de los compuestos de la presente invencion que se pueden administrar por via parenteral, esto es, por via intraperitoneal, subcutanea o intramuscular, incluyen los siguientes portadores preferidos. Ejemplos de portadores preferidos para uso subcutaneo incluyen una solucion salina reguladora de fosfato (PBS) y 0.01-0.1% de trietanolamina en agua USP para inyeccion. Los portadores apropiados para inyeccion intramuscular incluyen etanol USP al 10%, propilenglicol al 40% y el resto una solucion isotonica aceptable tal como dextrosa al 5%.

Ejemplos de portadores preferidos para uso intravenoso incluyen etanol USP al 10%, propilenglicol USP al 40% y el resto agua USP para inyeccion. Otro portador aceptable incluye etanol USP al 10% y agua USP para Inyeccion; otro portador aceptable mas es 0.01-0.1% de trietanolamina en agua USP para inyeccion. Los solventes parenterales farmaceuticamente aceptables son tales que proporcionan una solucion o la dispersion se puede filtrar a traves de un filtro de 5 micras sin eliminar el ingrediente activo.

Un metodo preferido de administracion de las composiciones de esta invencion es la administracion a traves de la mucosa, particularmente la administracion intranasal o la administracion por inhalacion (administracion pulmonar). La administracion pulmonar de farmacos se puede conseguir mediante varios enfoques diferentes, incluyendo nebulizadores lfquidos, inhaladores de dosis medidas a base de aerosoles (MDI), y dispositivos de dispersion en polvo seco. Las composiciones para uso en administraciones de este tipo son por lo general polvos secos o aerosoles. Para la administracion de aerosoles, que es el metodo preferido de administracion de esta invencion, las composiciones se suministran por inhaladores, algunos de los cuales se describen a continuacion.

Los polvos secos contienen, ademas del ingrediente activo, un portador, un potenciador de la absorcion, y opcionalmente otros ingredientes. El portador es, por ejemplo, un mono-, di- o polisacarido, un alcohol de azucar u otro poliol. Los portadores apropiados incluyen lactosa, glucosa, rafinosa, melezitosa, lactitol, maltitol, trehalosa, sacarosa,

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manitol; y almidon. La lactosa es particularmente preferida, especialmente en forma de su monohidrato. Tambien se incluyen agentes mejoradores de la absorcion tales como polipeptidos, surfactantes, alquil glucosidos, sales de amina de acidos grasos o fosfolfpidos. Los ingredientes de la formulacion deben estar por lo general en una forma finamente dividida, esto es, su diametro medio en volumen debe ser generalmente de aproximadamente 30 a aproximadamente 200 micras, medido por un instrumento de difraccion de laser o un contador de cuchillas. El tamano de partfcula deseado se puede producir usando metodos conocidos en la tecnica, por ejemplo, molienda, micronizacion o precipitacion directa.

La via de administracion intranasal proporciona numerosas ventajas sobre muchas otras formas de administracion para los compuestos de esta invencion. Por ejemplo, una ventaja de la administracion intranasal es la conveniencia. Un sistema inyectable requiere la esterilizacion de la jeringa hipodermica y en el marco institucional, conduce a las preocupaciones entre el personal medico sobre el riesgo de contraer la enfermedad por ser accidentalmente atascado por una aguja contaminada. Tambien se deben imponer requisitos estrictos para la eliminacion segura de la aguja y la jeringa usadas en el entorno institucional. Por el contrario, la administracion intranasal requiere poco tiempo por parte del paciente y del personal medico asistente, y es mucho menos onerosa en la institucion que los inyectables.

Una segunda ventaja importante de la administracion intranasal es la aceptacion por parte del paciente del sistema de administracion de farmacos. La administracion intranasal se percibe como no invasiva, no se acompana de dolor, no tiene efectos secundarios significativos y produce la gratificacion del alivio inmediato en el paciente que presenta el smtoma. Esto es particularmente ventajoso cuando el paciente es un nino. Otra consideracion importante es que el paciente puede autoadministrarse la(s) dosis prescrita(s) de pulverizacion nasal.

Para la administracion intranasal, las composiciones de esta invencion se pueden formular como lfquidos o como solidos. Dichas composiciones pueden contener uno o mas adyuvantes, agentes para aumentar la absorcion de los ingredientes activos por permeacion a traves de la membrana nasal, y (para composiciones lfquidas) un diluyente acuoso, por ejemplo, agua. Alternativamente, el diluyente puede comprender una solucion reguladora acuosa tal como solucion reguladora de fosfato. La composicion puede ademas opcionalmente incluir uno o mas alcoholes politndricos y uno o mas agentes conservantes tales como, por ejemplo, gentamicina, bacitracina (0.005%) o cresol. Las composiciones se pueden administrar a la cavidad nasal en forma de pulverizacion usando un atomizador, nebulizador, pulverizador, cuentagotas u otro dispositivo que asegure el contacto de la solucion con la membrana mucosa nasal. El dispositivo puede ser simple, tal como un pulverizador nasal simple que puede ser usado por el paciente, o puede ser un instrumento mas elaborado para una dispensacion mas precisa de las composiciones, que se puede usar en el consultorio de un medico o en un centro medico.

Las composiciones de polvo nasal se pueden preparar mezclando el agente activo y el excipiente, ambos que poseen el tamano de partfcula deseado. En primer lugar, se prepara una solucion del agente activo y los excipientes de ciclodextrina, seguido de precipitacion, filtracion y pulverizacion. Tambien es posible eliminar el solvente por liofilizacion, seguido por la pulverizacion del polvo en el tamano de partfcula deseado usando tecnicas convencionales, conocidas de la literatura farmaceutica. La etapa final es la clasificacion por tamano, por ejemplo, mediante tamizado, para obtener partfculas que tienen preferiblemente entre 30 y 200 micras de diametro. Los polvos se pueden administrar usando un insuflador nasal, o se pueden colocar en una capsula fijada en un dispositivo de inhalacion o de insuflacion. Se penetra una aguja a traves de la capsula para hacer poros en la parte superior y el fondo de la capsula y se envfa aire para soplar las partfculas de polvo. La formulacion en polvo tambien se puede administrar en una pulverizacion por chorro de un gas inerte o suspendido en fluidos organicos lfquidos.

La composicion farmaceutica se puede administrar en un sistema de liberacion controlada o sostenida. En una realizacion, se puede usar una bomba para conseguir una liberacion controlada o sostenida (vease Langer, Science, 249:1527-1533 (1990); Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:10; Buschwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989 N. Engl. J. Med. 321:574). En otra realizacion, se pueden usar materiales polimericos para conseguir la liberacion controlada o sostenida del agonista del receptor opioide k y/o antagonista opioide (vease, por ejemplo, Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macrol. Chem. 23:61; vease tambien Levy et al., 1985 Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105; la Patente de los Estados Unidos No. 5,679,377; la Patente de los Estados Unidos No. 5,916,597, la Patente de los Estados Unidos No. 5,912,015; la Patente de los Estados Unidos No. 5,989,463; la Patente de los Estados Unidos No. 5,128,326; Publicacion PCT No. WO 99/12154; y Publicacion PCT No. WO 99/20253). Ejemplos de polfmeros usados en formulaciones de liberacion sostenida incluyen, pero no se limitan a, poli(2-hidroxi metacrilato de etilo), poli(metacrilato de metilo), poli(acido acnlico), poli(acetato de etileno-co-vinilo), poli(acido metacnlico), poliglicolidos (PLG), poliantndridos, poli(pirrolidona de N-vinilo), poli(alcohol de vinilo), poliacrilamida, poli(etilen glicol), polilactidos (PLA), poli(lactido-co-glicolidos)(PLGA), y poliortoesteres. En una realizacion preferida, el polfmero usado en una formulacion de liberacion sostenida es inerte, libre de impurezas lixiviables, estable al almacenamiento, esteril y biodegradable. En otra realizacion mas, se puede colocar un sistema de liberacion controlada o sostenida en la proximidad de la diana terapeutica, requiriendo de este modo solo una fraccion de la dosis sistematica (vease, por ejemplo, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)).

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Los portadores para uso con tales composiciones farmaceuticas son biocompatibles, y tambien pueden ser biodegradables. En ciertas realizaciones, la formulacion proporciona preferiblemente un nivel relativamente constante de liberacion del componente activo. En otras realizaciones, sin embargo, se puede desear una velocidad de liberacion mas rapida inmediatamente despues de la administracion. La formulacion de tales composiciones esta perfectamente dentro del nivel de conocimientos ordinarios en el arte usando tecnicas conocidas. Los portadores ilustrativos utiles a este respecto incluyen micropartfculas de poli(lactido-co-glicolido), poliacrilato, latex, almidon, celulosa, dextrano y similares. Otros portadores ilustrativos de liberacion retardada incluyen biovectores supramoleculares, que comprenden un nucleo hidrofflico no lfquido (por ejemplo, un polisacarido reticulado u oligosacarido) y, opcionalmente, una capa externa que comprende un compuesto anfifflico, tal como un fosfolfpido (vease, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 5,151,254 y solicitudes PCT WO 94/20078, WO/94/23701 y WO 96/06638). La cantidad de compuesto activo contenida dentro de una formulacion de liberacion sostenida depende del sitio de implantacion, de la velocidad y de la duracion esperada de la liberacion y de la naturaleza de la afeccion que se va a tratar o prevenir.

Los compuestos de la presente invencion se administran a un individuo en una cantidad eficaz o una cantidad farmaceuticamente eficaz, para causar o mejorar la respuesta inmune del individuo. Como se usa en este documento, "cantidad eficaz" o "cantidad farmaceuticamente eficaz" es la cantidad que muestra una respuesta sobre y por encima del vehnculo o controles negativos. Una "cantidad eficaz de adyuvante" es la cantidad del compuesto en cuestion que, cuando se administra junto con un antfgeno, muestra una respuesta sobre y por encima de la producida por el antigeno solo. La dosificacion precisa de los compuestos de la presente invencion que se va a administrar a un paciente dependera del compuesto particular usado, de la ruta de administracion, de la composicion farmaceutica y del paciente. Por ejemplo, cuando se administra subcutaneamente para mejorar una respuesta de anticuerpo, la cantidad de compuesto usado es desde 1 a aproximadamente 250 microgramos, preferiblemente desde aproximadamente 25 a aproximadamente 50 microgramos basado en la administracion a un tfpico paciente adulto de 70 kg.

La composicion farmaceutica es preferiblemente una que induce una respuesta inmune predominantemente del tipo Th1. Los niveles altos de citoquinas de tipo Th1 (por ejemplo, IFN-y, TNFa, IL-2 e IL-12) tienden a favorecer la induccion de respuestas inmunes mediadas por celulas a un antigeno administrado. Por el contrario, los niveles elevados de citoquinas de tipo Th2 (por ejemplo, IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10) tienden a favorecer la induccion de respuestas inmunes humorales. Despues de la aplicacion de una composicion inmunogenica como se proporciona en este documento, un paciente soportara una respuesta inmune que incluye respuestas de tipo Th1 y Th2. En una realizacion preferida, en la que una respuesta es predominantemente de tipo Th1, el nivel de citoquinas de tipo Th1 aumentara en mayor medida que el nivel de citoquinas de tipo Th2. Los niveles de estas citoquinas pueden ser facilmente evaluados usando ensayos estandar. Alternativamente, o, ademas, pueden ser deseados altos niveles de citoquinas de tipo Th2 (por ejemplo, lL-4, IL-5, IL-6 e IL-10) para ciertas aplicaciones terapeuticas. Los niveles de estas citoquinas pueden ser facilmente evaluados usando ensayos estandar. Para una revision de las familias de citoquinas, vease Mosmann and Coffman, Ann. Rev. Immunol. 7:145-173, 1989.

Las composiciones ilustrativas para uso en la induccion de citoquinas de tipo Th1 incluyen, por ejemplo, una combinacion de oligonucleotidos que contienen CpG (en el cual el dinucleotido CpG no esta metilado) como se describe, por ejemplo, en los documentos WO 96/02555, WO 99/33488 y las Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,008,200 y 5,856,462. Tambien se describen secuencias de ADN inmunoestimuladoras, por ejemplo, por Sato et al., Science 273:352, 1996. Otros inmunoestimulantes apropiados comprenden saponinas, tales como QS21 (Aquila Biopharmaceuticals Inc., Framingham, MA), y derivados de saponina relacionados y mimeticos de la misma.

Cualquiera de una variedad de inmunoestimulantes adicionales se puede incluir en las composiciones de esta invencion. Por ejemplo, citoquinas, tales como GM-CSF, interferones o interleucinas para modular adicionalmente una respuesta inmune de interes. Ademas, Montanide ISA 720 (Seppic, Francia), SAF (Chiron, California, Estados Unidos), ISCOMS (CSL), MF-59 (Chiron), la serie SBAS de adyuvantes (por ejemplo, SBAS-2 o SBAS-4, disponible de SmithKline Beecham, Rixensart, Belgica), y el inmunoestimulante Enhanzyn™ (Corixa, Hamilton, MT). Los inmunoestimulantes de eter de polioxietileno, se describen en el documento WO 99/52549A1 y tambien se pueden usar.

Las composiciones farmaceuticas a menudo comprenderan ademas uno o mas soluciones reguladoras (por ejemplo, solucion salina reguladora neutra o solucion salina reguladora de fosfato), carbohidratos (por ejemplo glucosa, manosa, sacarosa o dextranos), manitol, protemas, polipeptidos o aminoacidos tales como glicina, antioxidantes, bacteriostaticos, agentes quelantes tales como EDTA o glutation, adyuvantes (por ejemplo, hidroxido de aluminio), solutos que vuelven la formulacion isotonica, hipotonica o debilmente hipertonica con la sangre de un receptor, agentes de suspension, espesantes y/o conservantes. Alternativamente, las composiciones de la presente invencion se pueden formular como un liofilizado.

Las composiciones farmaceuticas descritas en este documento se pueden presentar en envases de dosis unitaria o multidosis, tales como ampollas o viales sellados. Tales envases se cierran por lo general de tal manera que conservan la esterilidad y la estabilidad de la formulacion hasta su uso. En general, las formulaciones se pueden almacenar como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehnculos oleosos o acuosos. Alternativamente, una composicion farmaceutica se puede almacenar en una condicion liofilizada que requiere solamente la adicion de un portador lfquido esteril inmediatamente antes del uso.

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El desarrollo de regfmenes de dosificacion y tratamiento apropiados para el uso de las composiciones particulares descritas en este documento en una variedad de regfmenes de tratamiento, incluyendo, por ejemplo, la administracion y formulacion oral, parenteral, intravenosa, intranasal e intramuscular, es bien conocido en la tecnica, algunos de los cuales se discuten brevemente a continuacion con fines generales de ilustracion.

En ciertas aplicaciones, las composiciones farmaceuticas descritas en este documento se pueden administrar por administracion oral a un animal. Como tales, estas composiciones se pueden formular con un diluyente inerte o con un vehuculo comestible asimilable, o pueden estar contenidas en capsulas de gelatina dura o blanda, o se pueden comprimir en forma de comprimidos, o se pueden incorporar directamente con el alimento de la dieta.

Los compuestos activos se pueden incorporar incluso con excipientes y usarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, trociscos, capsulas, elfxires, suspensiones, jarabes, obleas y similares (vease, por ejemplo, Mathiowitz et al., Nature 1997 Mar 27;386(6623):410-4; Hwang et al., Crit Rev Ther Drug Carrier Sits 1998;15(3):243-84; la Patente de los Estados Unidos 5,641,515; la Patente de los Estados Unidos 5,580,579 y la Patente de los Estados Unidos 5,792,451). Los comprimidos, trociscos, pastillas, capsulas y similares pueden contener tambien cualquiera de una variedad de componentes adicionales, por ejemplo, un aglutinante, tal como goma tragacanto, acacia, almidon de mafz o gelatina; excipientes, tales como fosfato dicalcico; un agente desintegrante, tal como almidon de mafz, almidon de patata, acido algmico y similares; un lubricante, tal como estearato de magnesio; y se puede adicionar un agente edulcorante, tal como sacarosa, lactosa o sacarina, o un agente aromatizante, tal como menta, aceite de gaulteria o aroma de cereza. Cuando la forma unitaria de dosificacion es una capsula, puede contener, ademas de materiales del tipo anterior, un portador lfquido. Otros materiales pueden estar presentes como revestimientos o para modificar de otro modo la forma ffsica de la unidad de dosificacion. Por ejemplo, los comprimidos, pfldoras o capsulas se pueden recubrir con goma laca, azucar o ambos. Por supuesto, cualquier material usado en la preparacion de cualquier forma unitaria de dosificacion debe ser farmaceuticamente puro y sustancialmente no toxico en las cantidades empleadas. Ademas, los compuestos activos se pueden incorporar en la preparacion y formulaciones de liberacion sostenida.

Por lo general, estas formulaciones contendran al menos aproximadamente 0.1% del compuesto activo o mas, aunque el porcentaje del ingrediente o ingredientes activos puede, por supuesto, ser variado y puede estar convenientemente entre aproximadamente 1 o 2% y aproximadamente 60% o 70% o mas del peso o volumen de la formulacion total. Naturalmente, la cantidad de compuesto(s) activo(s) en cada composicion terapeuticamente util se puede preparar de tal manera que se obtenga una dosificacion apropiada en cualquier dosis unitaria dada del compuesto. Factores tales como solubilidad, biodisponibilidad, semivida biologica, ruta de administracion, vida util del producto, asf como otras consideraciones farmacologicas seran contemplados por un experto en el arte de preparacion de tales formulaciones farmaceuticas, y como tal, pueden ser deseables una variedad de dosificaciones y regfmenes de tratamiento.

Para la administracion oral, las composiciones se pueden incorporar alternativamente con uno o mas excipientes en forma de un enjuague bucal, una pasta dental, un comprimido bucal, una pulverizacion oral o una formulacion sublingual administrada por via oral. Alternativamente, el ingrediente activo se puede incorporar en una solucion oral tal como una que contiene borato de sodio, glicerina y bicarbonato de potasio, o se dispersa en una pasta dental, o se adiciona en una cantidad terapeuticamente eficaz a una composicion que puede incluir agua, aglutinantes, abrasivos, agentes aromatizantes, agentes espumantes, y humectantes.

Alternativamente, las composiciones se pueden formar en una forma de comprimido o solucion que se puede colocar debajo de la lengueta o disolverse de otro modo en la boca.

En ciertas circunstancias, sera deseable entregar las composiciones farmaceuticas descritas en este documento parenteral, intravenosa, intramuscular o incluso intraperitoneal. Tales enfoques son bien conocidas para el experto en el arte, algunas de las cuales se describen adicionalmente, por ejemplo, en la Patente de los Estados Unidos 5,543,158; la Patente de los Estados Unidos 5,641,515 y la Patente de los Estados Unidos 5,399,363. Las soluciones de los compuestos activos como base libre o sales farmacologicamente aceptables se pueden preparar en agua adecuadamente mezclada con un surfactante, tal como hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones tambien se pueden preparar en glicerol, polietilenglicoles lfquidos, y mezclas de los mismos y en aceites. Bajo condiciones ordinarias de almacenamiento y uso, estas preparaciones generalmente contendran un conservante para prevenir el crecimiento de microorganismos.

Las formas farmaceuticas ilustrativas apropiadas para uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas esteriles y polvos esteriles para la preparacion extemporanea de soluciones o dispersiones inyectables esteriles (por ejemplo, vease la Patente de los Estados Unidos 5,466,468). En todos los casos, la forma debe ser esteril y debe ser fluida en la medida en que exista una facilidad de capacidad de inyeccion. Debe ser estable bajo las condiciones de fabricacion y almacenamiento y debe preservarse contra la accion contaminante de microorganismos, tales como bacterias y hongos. El portador puede ser un solvente o medio de dispersion que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol lfquido y similares), mezclas apropiadas de los mismos y/o aceites vegetales. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento, tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de partfcula requerido en el caso de dispersion y/o mediante el uso de surfactantes. La prevencion de la accion de microorganismos puede ser facilitada por diversos agentes antibacterianos y antifungicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, acido sorbico, timerosal y similares. En muchos casos, sera

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preferible incluir agentes isotonicos, por ejemplo, azucares o cloruro de sodio. La absorcion prolongada de las composiciones inyectables puede ser provocada por el uso en las composiciones de agentes retardadores de la absorcion, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Para la administracion parenteral en una solucion acuosa, la solucion se debe regular adecuadamente si es necesario y el diluyente lfquido se hace primero isotonico con suficiente solucion salina o glucosa. Estas soluciones acuosas particulares son especialmente apropiadas para la administracion intravenosa, intramuscular, subcutanea e intraperitoneal. A este respecto, un medio acuoso esteril que se puede emplear sera conocido para los expertos en el arte a la luz de la presente divulgacion. Por ejemplo, se puede disolver una dosis en 1 ml de solucion de NaCl isotonica y se adiciona a 1000 ml de fluido de hipodermoclisis o se inyecta en el sitio de infusion propuesto (vease, por ejemplo, "Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th Edition, paginas 1035-1038 y 1570-1580). Cierta variacion en la dosificacion necesariamente ocurrira dependiendo de la condicion del sujeto que se este tratando. Ademas, para la administracion humana, las preparaciones preferiblemente cumpliran con preferencia la esterilidad, pirogenicidad y los estandares generales de seguridad y pureza segun lo requerido por the FDA Office of Biologies standards.

Las composiciones descritas en la presente invencion se pueden formular en una forma neutra o de sal. Las sales farmaceuticamente aceptables ilustrativas incluyen las sales de adicion de acido (formadas con los grupos amino libres de la protema) y que se forman con acidos inorganicos tales como, por ejemplo, acidos clorhndrico o fosforico, o acidos organicos tales como acetico, oxalico, tartarico, mandelico, y similares. Las sales formadas con los grupos carboxilo libres tambien se pueden derivar de bases inorganicas tales como, por ejemplo, hidroxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o ferricos, y bases organicas tales como isopropilamina, trimetilamina, histidina, procama y similares. Tras la formulacion, las soluciones se administraran de una manera compatible con la formulacion de dosificacion y en una cantidad tal que sea terapeuticamente eficaz.

Las composiciones farmaceuticas se pueden administrar por pulverizaciones intranasales, inhalacion, y/u otros vehnculos de administracion de aerosoles. Los metodos para suministrar genes, acidos nucleicos y composiciones de peptidos directamente a los pulmones a traves de aerosoles nasales se han descrito, por ejemplo, en la Patente de los Estados Unidos 5,756,353 y la Patente de los Estados Unidos 5,804,212. Del mismo modo, la administracion de farmacos que utilizan resinas de micropartfculas intranasales (Takenaga et al., J Controlled Release 1998 Mar 2;52(1- 2):81-7) y compuestos de lisofosfatidil-glicerol (la Patente de los Estados Unidos 5,725,871) son tambien bien conocidos en las artes farmaceuticas. Del mismo modo, la administracion ilustrativa transmucosa del farmaco en forma de una matriz de soporte de politetrafluoroeteileno se describe en la Patente de los Estados Unidos 5,780,045.

En ciertos casos, se utilizan liposomas, nanocapsulas, micropartfculas, partfculas lipfdicas, vesfculas y similares, para la introduccion de las composiciones de la presente invencion en organismos/celulas huespedes apropiados. En particular, las composiciones descritas en el presente documento se pueden formular para su administracion ya sea encapsuladas en una partfcula lipfdica, un liposoma, una vesfcula, una nanosfera o una nanopartfcula o similares. Alternativamente, las composiciones de la presente invencion se pueden unir, ya sea covalentemente o no covalentemente, a la superficie de tales vehnculos portadores.

La formacion y uso de preparaciones de liposomas y tipo liposomas como portadores potenciales de farmacos es generalmente conocido para los expertos en el arte (vease, por ejemplo, Lasic, Trends Biotechnol 1998 Jul; 16(7):307- 21; Takakura, Nippon Rinsho 1998 Mar; 56(3):691-5; Chandran et al., Indian J Exp Biol. 1997 Aug; 35(8):801-9; Margalit, Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 1995; 12(2-3):233-61; Patente de los Estados Unidos 5,567,434; Patente de los Estados Unidos 5,552,157; Patente de los Estados Unidos 5,565,213; Patente de los Estados Unidos 5,738,868 y Patente de los Estados Unidos 5,795,587).

Los liposomas se han usado con exito con un numero de tipos celulares que son normalmente diffciles de transfectar mediante otros procedimientos, incluyendo suspensiones de celulas T, cultivos de hepatocitos primarios y celulas PC 12 (Renneisen et al., J Biol Chem. 1990 Sep 25;265(27):16337-42; Muller et al., DNA Cell Biol. 1990 Apr;9(3):221-9). Ademas, los liposomas estan libres de las restricciones de longitud de ADN que son tfpicas de los sistemas de administracion basados en virus. Los liposomas se han usado eficazmente para introducir genes, diversos farmacos, agentes radioterapeuticos, enzimas, virus, factores de transcripcion, efectores alostericos y similares, en una variedad de lmeas celulares cultivadas y animales. Ademas, el uso de liposomas no parece estar asociado con respuestas autoinmunes o toxicidad inaceptable despues de la administracion sistemica.

En ciertos casos, los liposomas se forman a partir de fosfolfpidos que se dispersan en un medio acuoso y forman espontaneamente vesfculas de doble capa concentricas multilamelares (tambien llamadas vesfculas multilamelares (MLV)).

Alternativamente, se describen en este documento formulaciones de nanocapsulas farmaceuticamente aceptables de las composiciones descritas en este documento. Las nanocapsulas generalmente pueden atrapar compuestos de una manera estable y reproducible (vease, por ejemplo, Quintanar-Guerrero et al., Drug Dev Ind Pharm. 1998 Dec;24(12):1113-28). Para evitar efectos secundarios debidos a la sobrecarga polimerica intracelular, tales partfculas ultrafinas (dimensionadas alrededor de 0.1 pm) se pueden disenar usando polfmeros que son capaces de ser degradados in vivo. Tales partfculas se pueden preparar como se describe, por ejemplo, por Couvreur et al., Crit Rev

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Ther Drug Carrier Syst. 1988;5(1):1-20; zur Muhlen et al., Eur J Pharm Biopharm. 1998 Mar;45(2):149-55; Zambaux et al. J Controlled Release. 1998 Jan 2;50(1-3):31-40; y la Patente de los Estados Unidos 5,145,684.

Terapias contra el cancer

Los enfoques inmunologicos para la terapia contra el cancer se basan en el reconocimiento de que las celulas cancerosas pueden evadir a menudo las defensas del cuerpo frente a celulas y moleculas aberrantes o extranas y que estas defensas pueden estimularse terapeuticamente para recuperar el terreno perdido, por ejemplo, paginas 623-648 en Klein, Immunology (Wiley-Interscience, New York, 1982). Numerosas observaciones recientes de que diversos efectores inmunes pueden inhibir directa o indirectamente el crecimiento de tumores han llevado a un interes renovado en este enfoque de la terapia contra el cancer, por ejemplo, Jager, et al., Oncology 2001;60(1):1-7; Renner, et al., Ann Hematol 2000 Dec;79(12):651-9.

Los cuatro tipos de celulas basicos cuya funcion se ha asociado con la inmunidad de celulas antitumorales y la eliminacion de celulas tumorales del cuerpo son: i) linfocitos B que secretan inmunoglobulinas en el plasma sangumeo para identificar y marcar las celulas invasoras no propias; ii) monocitos que secretan las protemas del complemento que son responsables de lisar y procesar las celulas invasoras diana recubiertas con inmunoglobulina; iii) linfocitos asesinos naturales que tienen dos mecanismos para la destruccion de celulas tumorales, citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos y muerte natural; y iv) linfocitos T que poseen receptores espedficos de antfgeno y que tienen la capacidad de reconocer una celula tumoral que lleva moleculas marcadoras complementarias (Schreiber, H., 1989, in Fundamental Immunology (ed). W. E. Paul, pp. 923-955).

La inmunoterapia contra el cancer generalmente se centra en inducir respuestas inmunes humorales, respuestas inmunes celulares, o ambas. Ademas, esta bien establecido que la induccion de celulas T auxiliares CD4+ es necesaria para inducir secundariamente anticuerpos o celulas T CD8+ citotoxicas. Los antfgenos polipeptfdicos que son selectivos

0 idealmente espedficos para las celulas cancerosas ofrecen un enfoque potente para inducir respuestas inmunes contra el cancer, y son un aspecto importante de la presente invencion.

Por lo tanto, en otros aspectos de la presente invencion, las composiciones farmaceuticas descritas en este documento se pueden usar para estimular una respuesta inmune contra el cancer. Dentro de tales metodos, las composiciones farmaceuticas descritas en este documento se administran a un paciente, por lo general un animal de sangre caliente, preferiblemente un ser humano. Un paciente puede o no estar afligido con cancer. Las composiciones farmaceuticas y las vacunas se pueden administrar antes o despues de la extirpacion quirurgica de tumores primarios y/o tratamiento tales como la administracion de radioterapia o farmacos quimioterapeuticos convencionales. Como se discutio anteriormente, la administracion de las composiciones farmaceuticas puede ser por cualquier metodo apropiado, incluyendo la administracion por via intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutanea, intranasal, intradermica, anal, vaginal, topica y oral.

En ciertas realizaciones, la inmunoterapia puede ser inmunoterapia activa, en la que el tratamiento se basa en la estimulacion in vivo del sistema inmune endogeno del huesped para reaccionar contra tumores con la administracion de agentes modificadores de la respuesta inmune (tales como polipeptidos y polinucleotidos como se proporciona en este documento).

Las rutas y la frecuencia de administracion de las composiciones terapeuticas descritas en este documento, asf como la dosificacion, variaran de individuo a individuo y pueden establecerse facilmente usando tecnicas estandar. En general, las composiciones farmaceuticas y las vacunas se pueden administrar por inyeccion (por ejemplo, intracutanea, intramuscular, intravenosa o subcutanea), intranasal (por ejemplo, por aspiracion) u por via oral. Preferiblemente, entre

1 y 10 dosis se pueden administrar durante un periodo de 52 semanas. Preferiblemente, se administran 6 dosis, a intervalos de 1 mes, y en lo sucesivo, se pueden administrar periodicamente vacunas de refuerzo. Los protocolos alternativos pueden ser apropiados para pacientes individuales. Una dosis apropiada es una cantidad de un compuesto que, cuando se administra como se ha descrito anteriormente, es capaz de promover una respuesta inmune antitumoral y esta al menos 10-50% por encima del nivel basal (esto es, sin tratamiento). Tal respuesta se puede monitorizar midiendo los anticuerpos antitumorales en un paciente o mediante la generacion dependiente de la vacuna de celulas efectoras citolfticas capaces de destruir las celulas tumorales del paciente in vitro. Tales vacunas tambien deben ser capaces de causar una respuesta inmune que conduce a un resultado clmico mejorado (por ejemplo, remisiones mas frecuentes, supervivencia completa o parcial o mas larga sin enfermedad) en pacientes vacunados en comparacion con pacientes no vacunados. En general, para composiciones farmaceuticas y vacunas que comprenden uno o mas polipeptidos, la cantidad de cada polipeptido presente en una dosis oscila entre aproximadamente 25 |ig y 5 mg por kg de huesped. Los tamanos de dosis apropiados variaran con el tamano del paciente, pero por lo general variaran de aproximadamente 0.1 mL a aproximadamente 5 mL.

En general, una dosis y un regimen de tratamiento apropiados proporcionan el compuesto o compuestos activos en una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapeutico y/o profilactico. Dicha respuesta puede monitorizarse estableciendo un resultado clmico mejorado (por ejemplo, remisiones mas frecuentes, supervivencia completa o parcial o mas larga sin enfermedad) en pacientes tratados en comparacion con pacientes no tratados. Los aumentos en las respuestas inmunes preexistentes a una protema tumoral generalmente se correlacionan con un resultado clmico

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mejorado. Tales respuestas inmunes se pueden evaluar generalmente utilizando ensayos estandar de proliferacion, citotoxicidad o citoquinas, que se pueden realizar utilizando muestras obtenidas de un paciente antes y despues del tratamiento.

La presente invencion se describe adicionalmente por medio de los siguientes ejemplos no limitantes y ejemplos de prueba que se dan solamente con fines ilustrativos.

Ejemplos

Ejemplo de referencia 1

Modificaciones de la cadena de acilo graso primario

Este ejemplo describe la preparacion de derivados de acidos grasos primarios que tienen cadenas acilo graso primario de longitud variable, solas o en combinacion con cadenas de acidos grasos secundarios variables. Por ejemplo, los compuestos 1a-c y 2a-c, en los que los acidos grasos primarios de cadena corta (Ca) y media (C10) se combinan con acidos grasos secundarios de cadena corta, media o larga.

imagen3

Estos compuestos se preparan ya sea utilizando el aglicona de serina bien establecido (Ri=CO2H) o, alternativamente, usando una unidad qmmicamente mas estable e ionizable de aglicona fosfato de serinol (Ri=CH2OPO3H2). La seleccion de fosfato de serilo/serinol se basara en la comparacion de las actividades biologicas de derivados de serilo conocidos 3a,b con nuevos fosfatos de serinol 4a,b.

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3a ftj=Cc aciiD(RC-S36) -C to acilo (RC-S2 7)

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4a R?-Ca acilo 4b Rj'tio acilo

Los derivados de los compuestos modificados de cadena primaria se sintetizan mediante una modificacion de un metodo descrito anteriormente (B1 en Johnson et al., Johnson et al., Patente de los Estados Unidos No. 6,355,251) que emplea un intermedio avanzado comun que permite la introduccion de los acidos aciloxi unidos con amida y ester cerca del final de la smtesis (Esquema I). La etapa inicial en la smtesis es la glicosilacion del aceptor 6 con el tetraacetato 5 conocido (preparado en 4 etapas a partir de la glucosamina) para dar el p-glicosido 7 y la conversion de 7 en el intermedio avanzado comun (CAI) 8, que esta optimizado para R1=CO2Bn. La 4-O-acilacion selectiva y la N- desproteccion/acilacion resultan en el derivado de hexaacil 9, que se convierte en 3-4 etapas a 1a-c o 2a-c mediante fosforilacion y desbloqueo.

imagen6

Los acidos (R)-3-n-alcanoiloxialcanoicos requisito se preparan de acuerdo con Keegan et al., Tetrahedron: Asymmetry; 7(12):3559-3564, 1996, comenzando con los esteres 3-oxo-metilo apropiados. La alta pureza qmmica y diastereomerica de los productos 1 y 2 se consigue mediante ya sea cromatograffa en fase normal sobre silica gel o, alternativamente, 5 mediante cromatograffa de celulosa o cromatograffa de particion Kquido-Kquido en gel Sephadex LH-20. La pureza de las sales de trietilamonio aisladas se establece mediante medios espectroscopicos (IR, 1H y 13C RMN) y ffsicos (analisis de combustion, FABMS), asf como por HPLC.

Ejemplo de referencia 2

Compuestos de glicol y fosfonooxietilo (PE)

10 Este ejemplo describe la smtesis de compuestos de glicilo 11a,b y compuestos fosfonooxietil (PE) 12a,b, que son casi regioisomericos con 3a,b y 4a,b.

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11a aciln

lib Ri=Cu acila

imagen8

12a Rj-c:$ acila 12b Rj-Clj acila

Estos compuestos se preparan mas facilmente mediante una smtesis mas convergente que la descrita en el esquema I, en el cual se acopla un donador de glicosilo C6 o C10 comun 13 con una unidad aceptora N-acilada apropiada (o, 15 alternativamente, N-Troc protegido-no mostrado) 14 o 15 en presencia de ion plata para dar p-glicosidos 16 (esquema II). El aceptor de glicina 14 se prepara de acuerdo con Bulusu et a., J Med chem; 35(19):3463-3469, 1992 a partir de etanolamina y bromoacetato de bencilo (o t-butilo) seguido de N-acilacion o proteccion. El fosfato 15 se prepara mediante monofosforilacion de dietanolamina N-acilada (o protegida). N-desproteccion/acilacion o N, N-diacilacion en el caso de aglicona Troc-protegida (Jiang et al., Tetrahedron; 58(43):8833-8842, 2002) de los p-glicosidos 16 y escision 20 del fenilo y otros grupos protectores del derivado hexaacilado resultante 17 se espera que proporcione los compuestos

deseados 11a,b y 12a,b, que se a^slan y caracterizan como sus sales de trietilamonio despues de purificacion cromatografica sobre silica o gel LH-20 o celulosa DEAE.

Los compuestos 16 son nuevos y forman otro aspecto mas de esta invencion.

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imagen9

Lfpidos de eter secundarios

Este ejemplo describe la smtesis de derivados de acido (R)-3-alquiloxitetradecanoico (18a,b) los cuales son resistentes a metabolismo desfavorable y/o hidrolisis acuosa. Para sintetizar los compuestos 18a,b, se deben hacer inicialmente los analogos de eter lfpido de los compuestos de acidos grasos secundarios 3a,b o los correspondientes fosfatos de serinol 10 5a,b. Como se muestra retrosinteticamente en el esquema III, la smtesis de las moleculas diana 18a,b se puede

conseguir sustituyendo el acido (R)-3-hexiloxitetradecanoico o el acido (R)-3-deciloxitetradecanoico por los aciloxiacidos correspondientes comenzando con la 3-O-acilacion selectiva del intermedio avanzado comun 8 en el esquema I y procediendo a traves del intermedio 9 (R2=alquilo C6 o C10, n=9). Los alquiloxiacidos 19 requisito se sintetizan a partir del acido (R)-3-hidroxitetradecanoico o su ester fenadlico, intermedios en las smtesis de aciloxiacidos, por metodos 15 conocidos con un rendimiento total >50% (Keegan et al., Tetrahedron: Asymmetry; 7(12):3559-3564, 1996, Watanabe et al., Carbohydr Res; 332(3):257-277, 2001, Jiang., Bioorg Med Chem Lett; 12(16):2193-2196, 2002, Christ et al., Patente de los Estados Unidos No. 5,530,113. 1996).

imagen10

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NHT'^l 'IH-rr-r

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8 ^l=Oh-OBi-

Intermedio avanzado comun

ih™ n= ■ ibubC»}

18b 1 !: r -1L lb Cd)

Esquema III

Ejemplo de referencia 4

L^pidos de eter primarios y secundarios

Este ejemplo describe compuestos (20a,b) que contienen un Upido eter primario en la posicion de azucar C-3 asf como 5 tres l^pidos de eter secundarios. Estos compuestos se sintetizan por alquilacion del acetonido 21, un intermedio en la smtesis del donante de glicosilo 13 (esquema II), con sulfonato 22, que a su vez se genera en una etapa a partir del precursor de alcohol de 19, para dar el dieter 23 (esquema IV). La funcionalizacion 4,6 y la activacion anomerica proporcionan el cloruro de glicosilo 24, el cual se procesa a continuacion como en el esquema II usando los alquiloxiacidos correspondientes en las etapas de N-acilacion. En un esquema alternativo, el derivado 2-azido42 o 210 trifluoroacetamido45 se puede emplear en la etapa de 3-O-alquilacion.

imagen11

Compuestos C-6 modificados

Este ejemplo describe los compuestos que tienen un 6-hidroxilo bloqueado. Este ejemplo, un eter metflico o un grupo 15 fluoro, se utiliza junto con compuestos de fosfato de serilo o serinol 25a,b y 26a,b. Como se ha mencionado anteriormente, estos compuestos tambien forman un aspecto de la invencion.

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Los compuestos se preparan a partir del diol 27 tal como se muestra en el esquema V. El Intermedio 27, obtenido en dos etapas a partir del acetonido 21, esta funcionalizado en la posicion 6 mediante metodos conocidos (Christ et al., Patente de los Estados Unidos No: 5,530,113, 1996; Watanabe et al., Carbohydr Res; 333(3):203-231, 2001) para proporcionar el alcohol 28. La conversion de 28 a los cloruros 29 en dos etapas y la elaboracion segun el Esquema II proporciona las moleculas diana 25a,b y 26a,b. Los compuestos con enlaces eter primarios y/o secundarios como se describe en el ejemplo 4 anterior se pueden modificar como se describe en este ejemplo para proteger adicionalmente las moleculas contra la degradacion qmmica y enzimatica.

imagen13

Claims (6)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto que tiene la formula (III)

   imagen1

   en la que X se selecciona del grupo que consiste en O y S en la posicion axial o ecuatorial; Y se selecciona del grupo 5 que consiste en O y NH; n y m son 0; R1, R2 y R3 son iguales o diferentes y son grupos alquilo de cadena lineal que tienen desde 1 a 20 atomos de carbono y donde uno de Ri, R2 o R3 es opcionalmente hidrogeno; R4 se selecciona del grupo que consiste en H y metilo; p es 1 y R6 es COOH o p es 2 y R6 es OPO3H2; R8 y R9 son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en fosfono e H, y al menos uno de R8 y R9 es fosfono; y R10, R11 y R12 se seleccionan independientemente de grupos alifaticos saturados no sustituidos de cadena lineal que tienen desde 1 a 11 10 atomos de carbono;

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
2. 2. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en el que X y Y son oxfgeno, R1, R2 y R3 se seleccionan independientemente de grupos alquilo de cadena lineal C6-C10, y R10, R11 y R12 son independientemente grupos alifaticos saturados no sustituidos de cadena lineal que tienen desde 3 a 9 atomos de carbono.

   15 3. Un compuesto segun la reivindicacion 2, en el que R10, R11 y R12 son independientemente grupos alifaticos no

   sustituidos de cadena lineal que tienen desde 3 a 7 atomos de carbono.
3. 4. Un compuesto que tiene la formula (IV):

   imagen2

   en la que X se selecciona del grupo que consiste en O y S en la posicion axial o ecuatorial; n y m son 0; Ri, R2 y R3 son iguales o diferentes y son grupos alquilo de cadena lineal que tienen desde 1 a 20 atomos de carbono y donde uno de Ri, R2 o R3 es opcionalmente hidrogeno; R4 se selecciona del grupo que consiste en H y metilo; p es 1 y R6 es COOH o p es 2 y R6 es OPO3H2; R8 y R9 son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en fosfono e H, y al 5 menos uno de R8 y R9 es fosfono; y R10, R11 y R12 se seleccionan independientemente de grupos alifaticos saturados no sustituidos de cadena lineal que tienen desde 1 a 10 atomos de carbono;

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
4. 5. Un compuesto segun la reivindicacion 4, en el que X es oxfgeno, R1, R2 y R3 se seleccionan independientemente de grupos alquilo de cadena lineal C6-C10, y R10, R11 y R12 son independientemente grupos alifaticos saturados no

   10 sustituidos de cadena lineal que tienen desde 3 a 9 atomos de carbono
5. 6. Un compuesto segun la reivindicacion 5, en el que R10, R11 y R12 son independientemente grupos alifaticos no sustituidos de cadena lineal que tienen desde 3 a 7 atomos de carbono.
6. 7. Una composicion farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 4, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y un portador farmaceuticamente aceptable.

   15 8. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 4, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo,

   para uso en la mejora de la respuesta inmune de un sujeto.