ES2639039T3 - Péptidos de FVIII para la inducción de tolerancia inmunitaria e inmunodiagnóstico - Google Patents

Abstract

Péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos: (R1)x-P-(R2)y, en la que: P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de SEQ ID NO: 344; R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos; R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos; y cada uno de x e y es independientemente cero o uno.

Description

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reemplazo y durante la terapia de inducción de tolerancia inmunitaria.

La presente invención se basa en parte en el descubrimiento de que varias regiones de FVIII, específicamente FVIII120-122, FVIII246-266 y FVIII1401-1424, están implicadas en la respuesta inmunitaria montada frente a la proteína FVIII durante la terapia de reemplazo de factor VIII o conectadas con hemofilia adquirida. Las secuencias de aminoácidos de las regiones identificadas son TVVITLKNMASHPVSLHAVGV (SEQ ID NO: 740), AWPKMHTVNGYVNRSLPGLIG (SEQ ID NO: 68) y QANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT (SEQ ID NO: 344), respectivamente. Se cree que la presente invención proporciona, por primera vez, la identificación de estas regiones de proteína FVIII y su relación con la respuesta inmunitaria a la proteína FVIII.

Los péptidos según la presente invención incluyen péptidos que tienen al menos una porción de las regiones FVIII102-122, FVIII246-266 y FVIII1401-1424 que se compleja con una molécula de CMH de clase II para producir un epítopo de células T capaz de ser reconocido por células T implicadas en la respuesta inmunitaria de un paciente. En algunas realizaciones, los péptidos incluyen al menos nueve aminoácidos contiguos que corresponden a nueve

FVIII102-122 FVIII246-266 FVIII1401-1424

aminoácidos contiguos de , o . Tal como se describe adicionalmente a continuación, los péptidos proporcionados en el presente documento también incluyen péptidos más largos de nueve

FVIII246-266 y FVIII1401-1424

aminoácidos de longitud así como variantes de las secuencias de FVIII102-122 , . Una identificación de este tipo de los péptidos de la presente invención puede tener implicaciones en la mejora y el avance de estrategias terapéuticas diseñadas para tratar enfermedades relacionadas con la coagulación sanguínea, tales como hemofilia A.

II. Definiciones

El término “proteína factor VIII” o “proteína FVIII” se refiere a cualquier molécula de FVIII que tiene al menos una porción del dominio B intacta, y que presenta actividad biológica que está asociada con proteína FVIII humana nativa. La molécula de FVIII puede ser FVIII de longitud completa. La molécula de FVIII también puede ser una variante modificada de manera conservativa de FVIII nativo. La proteína FVIII puede derivarse de plasma humano o producirse mediante técnicas de ingeniería genética. Puede encontrarse caracterización adicional de la proteína FVIII, por ejemplo, en los párrafos [0042]-[0055] en el documento US 2010/0168018.

El término “péptido de factor VIII” o “péptido de FVIII” se refiere a los péptidos descritos en el presente documento que incluyen una secuencia de aminoácidos correspondiente a una región de la proteína FVIII que se ha descubierto que es importante en una respuesta inmunitaria frente a FVIII. Un péptido de FVIII incluye al menos nueve aminoácidos que se complejan con una proteína de CMH de clase II para la presentación a células T implicadas en la respuesta inmunitaria. Pueden estar presentes aminoácidos adicionales en cualquier extremo del núcleo de al menos nueve aminoácidos del péptido. En algunas realizaciones, un péptido de FVIII puede incluir una secuencia idéntica a la región particular de proteína FVIII humana nativa. En otras realizaciones, un péptido de FVIII puede ser una variante modificada de manera conservativa de una región de la proteína FVIII. Tal como se describe adicionalmente en el presente documento, un péptido de FVIII puede caracterizarse por un determinado porcentaje de identidad, por ejemplo, el 85 % idéntico, en relación con la secuencia de una región de proteína FVIII humana nativa.

El término “aminoácido” se refiere a aminoácidos no naturales y que se producen de manera natural, incluyendo análogos de aminoácido y miméticos de aminoácido que funcionan de manera similar a los aminoácidos que se producen de manera natural. Los aminoácidos que se producen de manera natural incluyen los codificados por el código genético, así como los aminoácidos que se modifican posteriormente, por ejemplo, hidroxiprolina, ycarboxiglutamato y O-fosfoserina. Los aminoácidos que se producen de manera natural pueden incluir, por ejemplo, aminoácidos D y L. Los aminoácidos usados en el presente documento también pueden incluir aminoácidos no naturales. Análogos de aminoácido se refiere a compuestos que tienen la misma estructura química básica que un aminoácido que se produce de manera natural, es decir, cualquier carbono que está unido a un hidrógeno, un grupo carboxilo, un grupo amino y un grupo R, por ejemplo, homoserina, norleucina, sulfóxido de metionina o metilsulfonio de metionina. Tales análogos tienen grupos R modificados (por ejemplo, norleucina) o esqueletos de péptidos modificados, pero conservan la misma estructura química básica que un aminoácido que se produce de manera natural. Miméticos de aminoácido se refiere a compuestos químicos que tienen una estructura que es diferente de la estructura química general de un aminoácido, pero que funcionan de manera similar a un aminoácido que se produce de manera natural. Puede hacerse referencia a los aminoácidos en el presente documento o bien por sus símbolos de tres letras frecuentemente conocidos o bien por los símbolos de una letra recomendados por la Comisión de nomenclatura bioquímica de la IUPAC-IUB. Del mismo modo, puede hacerse referencia a los nucleótidos por sus códigos de una única letra frecuentemente aceptados.

“Variantes modificadas de manera conservativa” se aplica a tanto secuencias de aminoácido como a secuencias de ácido nucleico. Con respecto a secuencias de ácido nucleico particulares, variantes modificadas de manera conservativa se refiere a los ácidos nucleicos que codifican secuencias de aminoácidos idénticas o esencialmente idénticas, o cuando el ácido nucleico no codifica una secuencia de aminoácidos, a secuencias esencialmente idénticas. Debido a la degeneración del código genético, un gran número de ácidos nucleicos funcionalmente idénticos codifican cualquier péptido dado. Por ejemplo, los codones GCA, GCC, GCG y GCU codifican el

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que consisten en desde 1 hasta 10 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 5 aminoácidos. En aún otra realización más, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 aminoácidos.

En una realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 150 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 100 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 25 aminoácidos. En aún otras realizaciones más, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175 ó 180 aminoácidos.

Generalmente, los péptidos de FVIII según la presente invención pueden incluir cualquier secuencia de aminoácidos presente en la región identificada de FVIII102-122, FVIII246-266 o FVIII1401-1424, o una variante modificada que puede, por ejemplo, conservar una función similar o idéntica a FVIII102-122, FVIII246-266 o FVIII1401-1424. En particular, los péptidos de FVIII de la presente invención incluyen una secuencia de aminoácidos que incluye un epítopo de células T. Los péptidos de FVIII incluyen una secuencia de al menos nueve aminoácidos que puede oscilar en porcentaje de identidad en relación con la secuencia de aminoácidos AWPKMHTVNGYVNRSLPGLIG (SEQ ID NO: 68); QANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT (SEQ ID NO: 344); o TVVITLKNMASHPVSLHAVGV (SEQ ID NO: 740). Por ejemplo, un péptido de FVIII puede tener nueve aminoácidos que son idénticos o al menos el 50 %, el 60 %, el 70 %, el 80 % o el 85 % por ciento idénticos a cualquiera de nueve aminoácidos consecutivos de FVIII102-122, FVIII246-266 o

FVIII1401-1424

.

En otro grupo de realizaciones, los péptidos de FVIII pueden tener secuencias de aminoácidos mayores de nueve aminoácidos, en los que las secuencias de aminoácidos incluyen una región que puede ser idéntica o al menos el 50 %, el 55%, el 60 %, el 65%, el 70 %, el 75%, el 80 %, el 85%, el 90%, el 91%, el 92%, el 93%, el 94%, el 95%, el 96 %, el 97 %, el 98 % o el 99 % por ciento idéntica a la secuencia de aminoácidos consecutivos de FVIII102-122 , FVIII246-266 o FVIII1401-1424. Una persona de experiencia ordinaria en la técnica apreciará que pueden usarse técnicas de mutagénesis conocidas, tales como sustitución de alanina para identificar variantes modificadas que conservan la función de la región de FVIII102-122, FVIII246-266 o FVIII1401-1424 .

Además, los péptidos de FVIII pueden incluir otras secuencias de aminoácidos adicionales en cualquier extremo de la secuencia principal de los péptidos de FVIII comentados anteriormente. Las secuencias adicionales se designan (R1)x y (R2)y. En determinadas realizaciones, R1 y R2 pueden oscilar entre 1 y aproximadamente 80 aminoácidos de longitud. Alternativamente, R1 y R2 pueden oscilar entre 1 y aproximadamente 40 aminoácidos de longitud. En determinadas realizaciones, cada uno de los subíndices x e y son independientemente cero o uno. En algunas realizaciones, tanto x como y pueden ser cero. En otras realizaciones, x puede ser uno e y puede ser cero. En aún otras realizaciones más, x puede ser cero e y puede ser uno. En otra realización, tanto x como y son uno. Pueden añadirse aminoácidos adicionales en cualquier extremo por una variedad de motivos, incluyendo aumento de la estabilidad de los péptidos, mejora en la unión a moléculas de CMH de clase II y/o células T, así como otros aspectos que apreciará una persona de experiencia ordinaria en la técnica.

En una realización, se proporciona un péptido que tiene la secuencia (R1)x-P-(R2)y, en la que P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de una región de factor VIII identificada en la tabla 1, R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, y R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, en la que cada uno de x e y son independientemente cero o uno. Alternativamente, R1 y R2 pueden oscilar entre 1 y aproximadamente 40 aminoácidos de longitud. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de una región de factor VIII identificada en la tabla 1. En otra realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de una región de factor VIII identificada en la tabla 1. En algunas realizaciones, tanto x como y pueden ser cero. En otras realizaciones, x puede ser uno e y puede ser cero. En otras realizaciones, x puede ser cero e y puede ser uno. En aún otra realización más, tanto x como y pueden ser uno. En una realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 150 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 100 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 25 aminoácidos.

Tabla 1. Regiones de FVIII que incluyen epítopos de células T

Regiones que incluyen epítopos de células T

Secuencia de aminoácidos

FVIII102-119

TVVITLKNMASHPVSLHA (SEQ ID NO: 10)

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separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 aminoácidos. 5 En determinadas realizaciones, R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 40 aminoácidos, y R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 40 aminoácidos. En una realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 150 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 100 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 50 10 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 25 aminoácidos. En aún otras realizaciones más, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 15 160, 165, 170, 175 ó 180 aminoácidos.

Tabla 2. Péptidos de FVIII102-119 a modo de ejemplo

Péptido

Secuencia SEQ ID NO:

FVIII102-119-1

TVVITLKNM 1

FVIII102-119-2

TVVITLKNMA 2

FVIII102-119-3

TVVITLKNMAS 3

FVIII102-119-4

TVVITLKNMASH 4

FVIII102-119-5

TVVITLKNMASHP 5

FVIII102-119-6

TVVITLKNMASHPV 6

FVIII102-119-7

TVVITLKNMASHPVS 7

FVIII102-119-8

TVVITLKNMASHPVSL 8

FVIII102-119-9

TVVITLKNMASHPVSLH 9

FVIII102-119-10

TVVITLKNMASHPVSLHA 10

FVIII102-119-11

VVITLKNMA 11

FVIII102-119-12

VVITLKNMAS 12

FVIII102-119-13

VVITLKNMASH 13

FVIII102-119-14

VVITLKNMASHP 14

FVIII102-119-15

VVITLKNMASHPV 15

FVIII102-119-16

VVITLKNMASHPVS 16

FVIII102-119-17

WITLKNMASHPVSL 17

FVIII102-119-18

VVITLKNMASHPVSLH 18

FVIII102-119-19

VVITLKNMASHPVSLHA 19

FVIII102-119-20

VITLKNMAS 20

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VITLKNMASH 21

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VITLKNMASHP 22

FVIII102-119-23

VITLKNMASHPV 23

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VITLKNMASHPVS 24

FVIII102-119-25

VITLKNMASHPVSL 25

FVIII102-119-26

VITLKNMASHPVSLH 26

FVIII102-119-27

VITLKNMASHPVSLHA 27

FVIII102-119-28

ITLKNMASH 28

FVIII102-119-29

ITLKNMASHP 29

FVIII102-119-30

ITLKNMASHPV 30

FVIII102-119-31

ITLKNMASHPVS 31

FVIII102-119-32

ITLKNMASHPVSL 32

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ITLKNMASHPVSLH 33

FVIII102-119-34

ITLKNMASHPVSLHA 34

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TLKNMASHP 35

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TLKNMASHPV 36

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TLKNMASHPVS 37

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TLKNMASHPVSL 38

FVIII102-119-39

TLKNMASHPVSLH 39

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TLKNMASHPVSLHA 40

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LKNMASHPV 41

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LKNMASHPVS 42

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LKNMASHPVSL 43

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LKNMASHPVSLH 44

FVIII102-119-45

LKNMASHPVSLHA 45

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AWPKMHTVNGYV 59

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AWPKMHTVNGYVN 60

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AWPKMHTVNGYVNR 61

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AWPKMHTVNGYVNRS 62

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AWPKMHTVNGYVNRSLP 64

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AWPKMHTVNGYVNRSLPG 65

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AWPKMHTVNGYVNRSLPGL 66

FVIII246-266-12

AWPKMHTVNGYVNRSLPGLI 67

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AWPKMHTVNGYVNRSLPGLIG 68

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WPKMHTVNG 69

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WPKMHTVNGY 70

FVIII246-266-16

WPKMHTVNGYV 71

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WPKMHTVNGYVN 72

FVIII246-266-18

WPKMHTVNGYVNR 73

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WPKMHTVNGYVNRS 74

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WPKMHTVNGYVNRSL 75

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WPKMHTVNGYVNRSLP 76

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WPKMHTVNGYVNRSLPGL 78

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WPKMHTVNGYVNRSLPGLI 79

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WPKMHTVNGYVNRSLPGLIG 80

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PKMHTVNGY 81

FVIII246-266-27

PKMHTVNGYV 82

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PKMHTVNGYVN 83

FVIII246-266-29

PKMHTVNGYVNR 84

FVIII246-266-

PKMHTVNGYVNRS 85

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PKMHTVNGYVNRSL 86

FVIII246-266-32

PKMHTVNGYVNRSLP 87

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PKMHTVNGYVNRSLPG 88

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PKMHTVNGYVNRSLPGL 89

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PKMHTVNGYVNRSLPGLI 90

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PKMHTVNGYVNRSLPGLIG 91

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KMHTVNGYV 92

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KMHTVNGYVN 93

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KMHTVNGYVNRS 95

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KMHTVNGYVNRSL 96

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KMHTVNGYVNRSLP 97

FVIII246-266-43

KMHTVNGYVNRSLPG 98

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KMHTVNGYVNRSLPGL 99

FVIII246-266-

KMHTVNGYVNRSLPGLI 100

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KMHTVNGYVNRSLPGLIG 101

FVIII246-266-47

MHTVNGYVN 102

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MHTVNGYVNR 103

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MHTVNGYVNRS 104

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FVIII246-266-51

MHTVNGYVNRSLP 106

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MHTVNGYVNRSLPGLIG 110

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HTVNGYVNR 111

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HTVNGYVNRS 112

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FVIII246-266-81

NGYVNRSLPGLIG 136

FVIII246-266-82

GYVNRSLPG 137

FVIII246-266-83

GYVNRSLPGL 138

FVIII246-266-84

GYVNRSLPGLT 139

FVIII246-266-85

GYVNRSLPGLIG 140

FVIII246-266-86

YVNRSLPGL 141

FVIII246-266-87

YVNRSLPGLI 142

FVIII246-266-88

YVNRSLPGLIG 143

FVIII246-266-89

VNRSLPGLI 144

FVIII246-266-90

VNRSLPGLIG 145

FVIII246-266-91

NRSLPGLIG 146

C. Péptidos de factor VIII474-494

También se proporciona en el presente documento un polipéptido que tiene la secuencia (R1)x-P-(R2)y, en la que P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia de al

VIII474-494

menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor que tiene la secuencia: GEVGDTLLIIFKNQASRPYNI (SEQ ID NO: 159), R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, y R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, en la que cada uno de x e y son independientemente cero o uno.

En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII474-494 que tiene la secuencia: GEVGDTLLIIFKNQASRPYNI (SEQ ID NO: 159). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII474-494 que tiene la secuencia: GEVGDTLLIIFKNQASRPYNI (SEQ ID NO: 159). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 147 a 237. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 147 a 237. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 147 a 237. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 147 a 237. En algunas realizaciones, tanto x como y pueden ser cero. En otras realizaciones, x puede ser uno e y puede ser cero. En otras realizaciones, x puede ser cero e y puede ser uno. En aún otra realización más, tanto x como y pueden ser uno.

En determinadas realizaciones, R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 40 aminoácidos, y R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 40 aminoácidos. En una realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 150 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 100 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 25 aminoácidos. En aún otras realizaciones más, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175 ó 180 aminoácidos.

Tabla 4. Péptidos de FVIII474-494 a modo de ejemplo

Péptido

Secuencia SEQ ID NO:

FVIII474-494-1

GEVGDTLLI 147

FVIII474-494-2

GEVGDTLLII 148

FVIII474-494-3

GEVGDTLLIIF 149

FVIII474-494-4

GEVGDTLLIIFK 150

FVIII474-494-5

GEVGDTLLIIFKN 151

FVIII474-494-6

GEVGDTLLIIFKNQ 152

FVIII474-494-7

GEVGDTLLIIFKNQA 153

FVIII474-494-8

GEVGDTLLIIFKNQAS 154

FVIII474-494-9

GEVGDTLLIIFKNQASR 155

FVIII474-494-

GEVGDTLLIIFKNQASRP 156

FVIII474-494-11

GEVGDTLLIIFKNQASRPY 157

FVIII474-494-12

GEVGDTLLIIFKNQASRPYN 158

FVIII474-494-13

GEVGDTLLIIFKNQASRPYNI 159

FVIII474-494-14

EVGDTLLII 160

FVIII474-494-15

EVGDTLLIIF 161

FVIII474-494-16

EVGDTLLIIFK 162

FVIII474-494-17

EVGDTLLIIFKN 163

FVIII474-494-18

EVGDTLLIIFKNQ 164

FVIII474-494-19

EVGDTLLIIFKNQA 165

FVIII474-494-

EVGDTLLIIFKNQAS 166

FVIII474-494-21

EVGDTLLIIFKNQASR 167

FVIII474-494-22

EVGDTLLIIFKNQASRP 168

FVIII474-494-23

EVGDTLLIIFKNQASRPY 169

FVIII474-494-24

EVGDTLLIIFKNQASRPYN 170

FVIII474-494-25

EVGDTLLIIFKNQASRPYNI 171

FVIII474-494-26

VGDTLLIIF 172

FVIII474-494-27

VGDTLLIIFK 173

FVIII474-494-28

VGDTLLIIFKN 174

FVIII474-494-29

VGDTLLIIFKNQ 175

FVIII474-494-

VGDTLLIIFKNQA 176

FVIII474-494-31

VGDTLLIIFKNQAS 177

FVIII474-494-32

VGDTLLIIFKNQASR 178

FVIII474-494-33

VGDTLLIIFKNQASRP 179

FVIII474-494-34

VGDTLLIIFKNQASRPY 180

FVIII474-494-35

VGDTLLIIFKNQASRPYN 181

FVIII474-494-36

VGDTLLIIFKNQASRPYNI 182

FVIII474-494-37

GDTLLIIFK 183

FVIII474-494-38

GDTLLIIFKN 184

FVIII474-494-39

GDTLLIIFKNQ 185

FVIII474-494-

GDTLLIIFKNQA 186

FVIII474-494-41

GDTLLIIFKNQAS 187

FVIII474-494-42

GDTLLIIFKNQASR 188

FVIII474-494-43

GDTLLIIFKNQASRP 189

FVIII474-494-44

GDTLLIIFKNQASRPY 190

FVIII474-494-45

GDTLLIIFKNQASRPYN 191

FVIII474-494-46

GDTLLIIFKNQASRPYNI 192

FVIII474-494-47

DTLLIIFKN 193

FVIII474-494-48

DTLLIIFKNQ 194

FVIII474-494-49

DTLLIIFKNQA 195

FVIII474-494-

DTLLIIFKNQAS 196

FVIII474-494-51

DTLLIIFKNQASR 197

FVIII474-494-52

DTLLIIFKNQASRP 198

FVIII474-494-53

DTLLIIFKNQASRPY 199

FVIII474-494-54

DTLLIIFKNQASRPYN 200

FVIII474-494-55

DTLLIIFKNQASRPYNI 201

FVIII474-494-56

TLLIIFKNQ 202

FVIII474-494-57

TLLIIFKNQA 203

FVIII474-494-58

TLLIIFKNQAS 204

FVIII474-494-59

TLLIIFKNQASR 205

FVIII474-494-

TLLIIFKNQASRP 206

FVIII474-494-61

TLLIIFKNQASRPY 207

FVIII474-494-62

TLLIIFKNQASRPYN 208

FVIII474-494-63

TLLIIFKNQASRPYNI 209

FVIII474-494-64

LLIIFKNQA 210

5

10

15

20

25

30

35

FVIII474-494-65

LLIIFKNQAS 211

FVIII474-494-66

LLIIFKNQASR 212

FVIII474-494-67

LLIIFKNQASRP 213

FVIII474-494-68

LLIIFKNQASRPY 214

FVIII474-494-69

LLIIFKNQASRPYN 215

FVIII474-494-70

LLIIFKNQASRPYNI 216

FVIII474-494-71

LIIFKNQAS 217

FVIII474-494-72

LIIFKNQASR 218

FVIII474-494-73

LIIFKNQASRP 219

FVIII474-494-74

LIIFKNQASRPY 220

FVIII474-494-75

LIIFKNQASRPYN 221

FVIII474-494-76

LIIFKNQASRPYNI 222

FVIII474-494-77

IIFKNQASR 223

FVIII474-494-78

IIFKNQASRP 224

FVIII474-494-79

IIFKNQASRPY 225

FVIII474-494-80

IIFKNQASRPYN 226

FVIII474-494-81

IIFKNQASRPYNI 227

FVIII474-494-82

IFKNQASRP 228

FVIII474-494-83

IFKNQASRPY 229

FVIII474-494-84

IFKNQASRPYN 230

FVIII474-494-85

IFKNQASRPYNI 231

FVIII474-494-86

FKNQASRPY 232

FVIII474-494-87

FKNQASRPYN 233

FVIII474-494-88

FKNQASRPYNI 234

FVIII474-494-89

KNQASRPYN 235

FVIII474-494-90

KNQASRPYNI 236

FVIII474-494-91

NQASRPYNI 237

D. Péptidos de factor VIII540-560

También se proporciona en el presente documento un polipéptido que tiene la secuencia (R1)x-P-(R2)y, en la que P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia de al

VIII540-560

menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor que tiene la secuencia: PTKSDPRCLTRYYSSFVNMER (SEQ ID NO: 250), R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, y R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, en la que cada uno de x e y son independientemente cero o uno.

En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII540-560 que tiene la secuencia: PTKSDPRCLTRYYSSFVNMER (SEQ ID NO: 250). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII540-560 que tiene la secuencia: PTKSDPRCLTRYYSSFVNMER (SEQ ID NO: 250). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 238 a 328. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 238 a 328. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 238 a 328. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 238 a 328. En algunas realizaciones, tanto x como y pueden ser cero. En otras realizaciones, x puede ser uno e y puede ser cero. En otras realizaciones, x puede ser cero e y puede ser uno. En aún otra realización más, tanto x como y pueden ser uno.

En una realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 80 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 70 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 60 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 40 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 30 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 20 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 10 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 5 aminoácidos. En aún otra realización más, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44,

45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 aminoácidos.

En una realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 150 aminoácidos. En otra realización, el péptido de 5 FVIII consiste en desde 9 hasta 100 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 25 aminoácidos. En aún otras realizaciones más, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 10 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175 ó 180 aminoácidos.

Tabla 5. Péptidos de FVIII540-560 a modo de ejemplo

Péptido

Secuencia SEQ ID NO:

FVIII540-560-1

PTKSDPRCL 238

FVIII540-560-2

PTKSDPRCLT 239

FVIII540-560-3

PTKSDPRCLTR 240

FVIII540-560-4

PTKSDPRCLTRY 241

FVIII540-560-5

PTKSDPRCLTRYY 242

FVIII540-560-6

PTKSDPRCLTRYYS 243

FVIII540-560-7

PTKSDPRCLTRYYSS 244

FVIII540-560-8

PTKSDPRCLTRYYSSF 245

FVIII540-560-9

PTKSDPRCLTRYYSSFV 246

FVIII540-560-10

PTKSDPRCLTRYYSSFVN 247

FVIII540-560-11

PTKSDPRCLTRYYSSFVNM 248

FVIII540-560-12

PTKSDPRCLTRYYSSFVNME 249

FVIII540-560-13

PTKSDPRCLTRYYSSFVNMER 250

FVIII540-560-14

TKSDPRCLT 251

FVIII540-560-15

TKSDPRCLTR 252

FVIII540-560-16

TKSDPRCLTRY 253

FVIII540-560-17

TKSDPRCLTRYY 254

FVIII540-560-18

TKSDPRCLTRYYS 255

FVIII540-560-19

TKSDPRCLTRYYSS 256

FVIII540-560-20

TKSDPRCLTRYYSSF 257

FVIII540-560-21

TKSDPRCLTRYYSSFV 258

FVIII540-560-22

TKSDPRCLTRYYSSFVN 259

FVIII540-560-23

TKSDPRCLTRYYSSFVNM 260

FVIII540-560-24

TKSDPRCLTRYYSSFVNME 261

FVIII540-560-25

TKSDPRCLTRYYSSFVNMER 262

FVIII540-560-26

KSDPRCLTR 263

FVIII540-560-27

KSDPRCLTRY 264

FVIII540-560-28

KSDPRCLTRYY 265

FVIII540-560-29

KSDPRCLTRYYS 266

FVIII540-560-30

KSDPRCLTRYYSS 267

FVIII540-560-31

KSDPRCLTRYYSSF 268

FVIII540-560-32

KSDPRCLTRYYSSFV 269

FVIII540-560-33

KSDPRCLTRYYSSFVN 270

FVIII540-560-34

KSDPRCLTRYYSSFVNM 271

FVIII540-560-35

KSDPRCLTRYYSSFVNME 272

FVIII540-560-36

KSDPRCLTRYYSSFVNMER 273

FVIII540-560-37

SDPRCLTRY 274

FVIII540-560-38

SDPRCLTRYY 275

FVIII540-560-39

SDPRCLTRYYS 276

FVIII540-560-40

SDPRCLTRYYSS 277

FVIII540-560-41

SDPRCLTRYYSSF 278

FVIII540-560-42

SDPRCLTRYYSSFV 279

FVIII540-560-43

SDPRCLTRYYSSFVN 280

FVIII540-560-44

SDPRCLTRYYSSFVNM 281

FVIII540-560-45

SDPRCLTRYYSSFVNME 282

FVIII540-560-46

SDPRCLTRYYSSFVNMER 283

FVIII540-560-47

DPRCLTRYY 284

FVIII540-560-48

DPRCLTRYYS 285

FVIII540-560-49

DPRCLTRYYSS 286

FVIII540-560-50

DPRCLTRYYSSF 287

FVIII540-560-51

DPRCLTRYYSSFV 288

FVIII540-560-52

DPRCLTRYYSSFVN 289

FVIII540-560-53

DPRCLTRYYSSFVNM 290

FVIII540-560-54

DPRCLTRYYSSFVNME 291

FVIII540-560-55

DPRCLTRYYSSFVNMER 292

FVIII540-560-56

PRCLTRYYS 293

FVIII540-560-57

PRCLTRYYSS 294

FVIII540-560-58

PRCLTRYYSSF 295

FVIII540-560-59

PRCLTRYYSSFV 296

FVIII540-560-60

PRCLTRYYSSFVN 297

FVIII540-560-61

PRCLTRYYSSFVNM 298

FVIII540-560-62

PRCLTRYYSSFVNME 299

FVIII540-560-63

PRCLTRYYSSFVNMER 300

FVIII540-560-64

RCLTRYYSS 301

FVIII540-560-65

RCLTRYYSSF 302

FVIII540-560-66

RCLTRYYSSFV 303

FVIII540-560-67

RCLTRYYSSFVN 304

FVIII540-560-68

RCLTRYYSSFVNM 305

FVIII540-560-69

RCLTRYYSSFVNME 306

FVIII540-560-70

RCLTRYYSSFVNMER 307

FVIII540-560-71

CLTRYYSSF 308

FVIII540-560-72

CLTRYYSSFV 309

FVIII540-560-73

CLTRYYSSFVN 310

FVIII540-560-74

CLTRYYSSFVNM 311

FVIII540-560-75

CLTRYYSSFVNME 312

FVIII540-560-76

CLTRYYSSFVNMER 313

FVIII540-560-77

LTRYYSSFV 314

FVIII540-560-78

LTRYYSSFVN 315

FVIII540-560-79

LTRYYSSFVNM 316

FVIII540-560-80

LTRYYSSFVNME 317

FVIII540-560-81

LTRYYSSFVNMER 318

FVIII540-560-82

TRYYSSFVN 319

FVIII540-560-83

TRYYSSFVNM 320

FVIII540-560-84

TRYYSSFVNME 321

FVIII540-560-85

TRYYSSFVNMER 322

FVIII540-560-86

RYYSSFVNM 323

FVIII540-560-87

RYYSSFVNME 324

FVIII540-560-88

RYYSSFVNMER 325

FVIII540-560-89

YYSSFVNME 326

FVIII540-560-90

YYSSFVNMER 327

FVIII540-560-91

YSSFVNMER 328

E. Péptidos de factor VIII1401-1424

La presente invención proporciona un péptido tal como se define en las reivindicaciones 1-5. También se 5 proporciona en el presente documento un polipéptido que tiene la secuencia (R1)x-P-(R2)y, en la que P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos

VIII1401-1424

nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor que tiene la secuencia: QANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT (SEQ ID NO: 344), R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, y R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, en la 10 que cada uno de x e y son independientemente cero o uno.

En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII1401-1424 que tiene la secuencia: QANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT (SEQ ID NO: 344). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que 15 tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII1401-1424 que tiene la secuencia: QANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT (SEQ ID NO: 344). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 329 a 464. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 329 a 464. En una 20 realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 329 a 464. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos

seleccionada de SEQ ID NO: 329 a 464. En algunas realizaciones, tanto x como y pueden ser cero. En otras realizaciones, x puede ser uno e y puede ser cero. En otras realizaciones, x puede ser cero e y puede ser uno. En aún otra realización más, tanto x como y pueden ser uno.

5 En una realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 80 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 70 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 60 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son 10 por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 40 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 30 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 20 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 10 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias 15 de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 5 aminoácidos. En aún otra realización más, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 aminoácidos. 20 En una realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 150 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 100 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 25 aminoácidos. En aún otras realizaciones más, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 25 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175 ó 180 aminoácidos.

30 Tabla 6. Péptidos de FVIII1401-1424 a modo de ejemplo

Péptido

Secuencia SEQ ID NO:

FVIII1401-1424-1

QANRSPLPI 329

FVIII1401-1424-2

QANRSPLPIA 330

FVIII1401-1424-3

QANRSPLPIAK 331

FVIII1401-1424-4

QANRSPLPIAKV 332

FVIII1401-1424-5

QANRSPLPIAKVS 333

FVIII1401-1424-6

QANRSPLPIAKVSS 334

FVIII1401-1424-7

QANRSPLPIAKVSSF 335

FVIII1401-1424-8

QANRSPLPIAKVSSFP 336

FVIII1401-1424-9

QANRSPLPIAKVSSFPS 337

FVIII1401-1424-10

QANRSPLPIAKVSSFPSI 338

FVIII1401-1424-11

QANRSPLPIAKVSSFPSIR 339

FVIII1401-1424-12

QANRSPLPIAKVSSFPSIRP 340

FVIII1401-1424-13

QANRSPLPIAKVSSFPSIRPI 341

FVIII1401-1424-14

QANRSPLPIAKVSSFPSIRPIY 342

FVIII1401-1424-15

QANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYL 343

FVIII1401-1424-16

QANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT 344

FVIII1401-1424-17

ANRSPLPIA 345

FVIII1401-1424-18

ANRSPLPIAK 346

FVIII1401-1424-19

ANRSPLPIAKV 347

FVIII1401-1424-20

ANRSPLPIAKVS 348

FVIII1401-1424-21

ANRSPLPIAKVSS 349

FVIII1401-1424-22

ANRSPLPIAKVSSF 350

FVIII1401-1424-23

ANRSPLPIAKVSSFP 351

FVIII1401-1424-24

ANRSPLPIAKVSSFPS 352

FVIII1401-1424-25

ANRSPLPIAKVSSFPSI 353

FVIII1401-1424-26

ANRSPLPIAKVSSFPSIR 354

FVIII1401-1424-27

ANRSPLPIAKVSSFPSIRP 355

FVIII1401-1424-28

ANRSPLPIAKVSSFPSIRPI 356

FVIII1401-1424-29

ANRSPLPIAKVSSFPSIRPIY 357

FVIII1401-1424-30

ANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYL 358

FVIII1401-1424-31

ANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT 359

FVIII1401-1424-32

NRSPLPIAK 360

FVIII1401-1424-33

NRSPLPIAKV 361

FVIII1401-1424-34

NRSPLPIAKVS 362

FVIII1401-1424-35

NRSPLPIAKVSS 363

FVIII1401-1424-36

NRSPLPIAKVSSF 364

FVIII1401-1424-37

NRSPLPIAKVSSFP 365

FVIII1401-1424-38

NRSPLPIAKVSSFPS 366

FVIII1401-1424-39

NRSPLPIAKVSSFPSI 367

FVIII1401-1424-40

NRSPLPIAKVSSFPSIR 368

FVIII1401-1424-41

NRSPLPIAKVSSFPSIRP 369

FVIII1401-1424-42

NRSPLPIAKVSSFPSIRPI 370

FVIII1401-1424-43

NRSPLPIAKVSSFPSIRPIY 371

FVIII1401-1424-44

NRSPLPIAKVSSFPSIRPIYL 372

FVIII1401-1424-45

NRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT 373

FVIII1401-1424-46

RSPLPIAKV 374

FVIII1401-1424-47

RSPLPIAKVS 375

FVIII1401-1424-48

RSPLPIAKVSS 376

FVIII1401-1424-49

RSPLPIAKVSSF 377

FVIII1401-1424-50

RSPLPIAKVSSFP 378

FVIII1401-1424-51

RSPLPIAKVSSFPS 379

FVIII1401-1424-52

RSPLPIAKVSSFPSI 380

FVIII1401-1424-53

RSPLPIAKVSSFPSIR 381

FVIII1401-1424-54

RSPLPIAKVSSFPSIRP 382

FVIII1401-1424-55

RSPLPIAKVSSFPSIRPI 383

FVIII1401-1424-56

RSPLPIAKVSSFPSIRPIY 384

FVIII1401-1424-57

RSPLPIAKVSSFPSIRPIYL 385

FVIII1401-1424-58

RSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT 386

FVIII1401-1424-59

SPLPIAKVS 387

FVIII1401-1424-60

SPLPIAKVSS 388

FVIII1401-1424-61

SPLPIAKVSSF 389

FVIII1401-1424-62

SPLPIAKVSSFP 390

FVIII1401-1424-63

SPLPIAKVSSFPS 391

FVIII1401-1424-64

SPLPIAKVSSFPSI 392

FVIII1401-1424-65

SPLPIAKVSSFPSIR 393

FVIII1401-1424-66

SPLPIAKVSSFPSIRP 394

FVIII1401-1424-67

SPLPIAKVSSFPSIRPI 395

FVIII1401-1424-68

SPLPIAKVSSFPSIRPIY 396

FVIII1401-1424-69

SPLPIAKVSSFPSIRPIYL 397

FVIII1401-1424-70

SPLPIAKVSSFPSIRPIYLT 398

FVIII1401-1424-71

PLPIAKVSS 399

FVIII1401-1424-72

PLPIAKVSSF 400

FVIII1401-1424-73

PLPIAKVSSFP 401

FVIII1401-1424-74

PLPIAKVSSFPS 402

FVIII1401-1424-75

PLPIAKVSSFPSI 403

FVIII1401-1424-76

PLPIAKVSSFPSIR 404

FVIII1401-1424-77

PLPIAKVSSFPSIRP 405

FVIII1401-1424-78

PLPIAKVSSFPSIRPI 406

FVIII1401-1424-79

PLPIAKVSSFPSIRPIY 407

FVIII1401-1424-80

PLPIAKVSSFPSIRPIYL 408

FVIII1401-1424-81

PLPIAKVSSFPSIRPIYLT 409

FVIII1401-1424-82

LPIAKVSSF 410

FVIII1401-1424-83

LPIAKVSSFP 411

FVIII1401-1424-84

LPIAKVSSFPS 412

FVIII1401-1424-85

LPIAKVSSFPSI 413

FVIII1401-1424-86

LPIAKVSSFPSIR 414

FVIII1401-1424-87

LPIAKVSSFPSIRP 415

FVIII1401-1424-88

LPIAKVSSFPSIRPI 416

FVIII1401-1424-89

LPIAKVSSFPSIRPIY 417

FVIII1401-1424-90

LPIAKVSSFPSIRPIYL 418

FVIII1401-1424-91

LPIAKVSSFPSIRPIYLT 419

FVIII1401-1424-92

PIAKVSSFP 420

FVIII1401-1424-93

PIAKVSSFPS 421

FVIII1401-1424-94

PIAKVSSFPSI 422

FVIII1401-1424-95

PIAKVSSFPSIR 423

FVIII1401-1424-96

PIAKVSSFPSIRP 424

FVIII1401-1424-97

PIAKVSSFPSIRPI 425

FVIII1401-1424-98

PIAKVSSFPSIRPIY 426

FVIII1401-1424-99

PIAKVSSFPSIRPIYL 427

FVIII1401-1424-100

PIAKVSSFPSIRPIYLT 428

FVIII1401-1424-101

IAKVSSFPS 429

FVIII1401-1424-102

IAKVSSFPSI 430

FVIII1401-1424-103

IAKVSSFPSIR 431

FVIII1401-1424-104

IAKVSSFPSIRP 432

FVIII1401-1424-105

IAKVSSFPSIRPI 433

FVIII1401-1424-106

IAKVSSFPSIRPIY 434

FVIII1401-1424-107

IAKVSSFPSIRPIYL 435

FVIII1401-1424-108

IAKVSSFPSIRPIYLT 436

FVIII1401-1424-109

AKVSSFPSI 437

FVIII1401-1424-110

AKVSSFPSIR 438

FVIII1401-1424-111

AKVSSFPSIRP 439

FVIII1401-1424-112

AKVSSFPSIRPI 440

FVIII1401-1424-113

AKVSSFPSIRPIY 441

FVIII1401-1424-114

AKVSSFPSIRPIYL 442

FVIII1401-1424-115

AKVSSFPSIRPIYLT 443

FVIII1401-1424-116

KVSSFPSIR 444

FVIII1401-1424-117

KVSSFPSIRP 445

FVIII1401-1424-118

KVSSFPSIRPI 446

FVIII1401-1424-119

KVSSFPSIRPIY 447

FVIII1401-1424-120

KVSSFPSIRPIYL 448

FVIII1401-1424-121

KVSSFPSIRPIYLT 449

FVIII1401-1424-122

VSSFPSIRP 450

FVIII1401-1424-123

VSSFPSIRPI 451

FVIII1401-1424-124

VSSFPSIRPIY 452

FVIII1401-1424-125

VSSFPSIRPIYL 453

FVIII1401-1424-126

VSSFPSIRPIYLT 454

FVIII1401-1424-127

SSFPSIRPI 455

FVIII1401-1424-128

SSFPSIRPIY 456

FVIII1401-1424-129

SSFPSIRPIYL 457

FVIII1401-1424-130

SSFPSIRPIYLT 458

FVIII1401-1424-131

SFPSIRPIY 459

FVIII1401-1424-132

SFPSIRPTYL 460

FVIII1401-1424-133

SFPSIRPIYLT 461

FVIII1401-1424-134

FPSIRPIYL 462

FVIII1401-1424-135

FPSIRPIYLT 463

FVIII1401-1424-136

PSIRPIYLT 464

F. Péptidos de factor VIII1785-1805

También se proporciona en el presente documento un polipéptido que tiene la secuencia (R1)x-P-(R2)y, en la que P 5 es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia de al

VIII1785-1805

menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor que tiene la secuencia: EVEDNIMVTFRNQASRPYSFY (SEQ ID NO: 477), R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, y R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, en la que cada uno de x e y son independientemente cero o uno. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos

10 que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII1785-1805 que tiene la secuencia: EVEDNIMVTFRNQASRPYSFY (SEQ ID NO: 477).

En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una

15 secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII1785-1805 que tiene la secuencia: EVEDNIMVTFRNQASRPYSFY (SEQ ID NO: 477). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 465 a 555. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 465 a 555. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que

20 tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 465 a 555. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 465 a 555. En algunas realizaciones, tanto x como y pueden ser cero. En otras realizaciones, x puede ser uno e y puede ser cero. En otras realizaciones, x puede ser cero e y puede ser uno. En aún otra realización más, tanto x como y pueden ser uno.

En una realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 80 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 70 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de 5 aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 60 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 40 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 30 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en 10 desde 1 hasta 20 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 10 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 5 aminoácidos. En aún otra realización más, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 15 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 aminoácidos.

En una realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 150 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 100 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 20 50 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 25 aminoácidos. En aún otras realizaciones más, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155,

25 160, 165, 170, 175 ó 180 aminoácidos.

Tabla 7. Péptidos de FVIII1785-1805 a modo de ejemplo

Péptido

Secuencia SEQ ID NO:

FVIII1785-1805-1

EVEDNIMVT 465

FVIII1785-1805-2

EVEDNIMVTF 466

FVIII1785-1805-3

EVEDNIMVTFR 467

FVIII1785-1805-4

EVEDNIMVTFRN 468

FVIII1785-1805-5

EVEDNIMVTFRNQ 469

FVIII1785-1805-6

EVEDNIMVTFRNQA 470

FVIII1785-1805-7

EVEDNIMVTFRNQAS 471

FVIII1785-1805-8

EVEDNIMVTFRNQASR 472

FVIII1785-1805-9

EVEDNIMVTFRNQASRP 473

FVIII1785-1805-10

EVEDNIMVTFRNQASRPY 474

FVIII1785-1805-11

EVEDNIMVTFRNQASRPYS 475

FVIII1785-1805-12

EVEDNIMVTFRNQASRPYSF 476

FVIII1785-1805-13

EVEDNIMVTFRNQASRPYSFY 477

FVIII1785-1805-14

VEDNIMVTF 478

FVIII1785-1805-15

VEDNIMVTFR 479

FVIII1785-1805-16

VEDNIMVTFRN 480

FVIII1785-1805-17

VEDNIMVTFRNQ 481

FVIII1785-1805-18

VEDNIMVTFRNQA 482

FVIII1785-1805-19

VEDNIMVTFRNQAS 483

FVIII1785-1805-20

VEDNIMVTFRNQASR 484

FVIII1785-1805-21

VEDNIMVTFRNQASRP 485

FVIII1785-1805-22

VEDNIMVTFRNQASRPY 486

FVIII1785-1805-23

VEDNIMVTFRNQASRPYS 487

FVIII1785-1805-24

VEDNIMVTFRNQASRPYSF 488

FVIII1785-1805-25

VEDNIMVTFRNQASRPYSFY 489

FVIII1785-1805-26

EDNIMVTFR 490

FVIII1785-1805-27

EDNIMVTFRN 491

FVIII1785-1805-28

EDNIMVTFRNQ 492

FVIII1785-1805-29

EDNIMVTFRNQA 493

FVIII1785-1805-30

EDNIMVTFRNQAS 494

FVIII1785-1805-31

EDNIMVTFRNQASR 495

FVIII1785-1805-32

EDNIMVTFRNQASRP 496

FVIII1785-1805-33

EDNIMVTFRNQASRPY 497

FVIII1785-1805-34

EDNIMVTFRNQASRPYS 498

FVIII1785-1805-35

EDNIMVTFRNQASRPYSF 499

FVIII1785-1805-36

EDNIMVTFRNQASRPYSFY 500

FVIII1785-1805-37

DNIMVTFRN 501

FVIII1785-1805-38

DNIMVTFRNQ 502

FVIII1785-1805-39

DNIMVTFRNQA 503

FVIII1785-1805-40

DNIMVTFRNQAS 504

FVIII1785-1805-41

DNIMVTFRNQASR 505

FVIII1785-1805-42

DNIMVTFRNQASRP 506

FVIII1785-1805-43

DNIMVTFRNQASRPY 507

FVIII1785-1805-44

DNIMVTFRNQASRPYS 508

FVIII1785-1805-45

DNIMVTFRNQASRPYSF 509

FVIII1785-1805-46

DNIMVTFRNQASRPYSFY 510

FVIII1785-1805-47

NIMVTFRNQ 511

FVIII1785-1805-48

NIMVTFRNQA 512

FVIII1785-1805-49

NIMVTFRNQAS 513

FVIII1785-1805-50

NIMVTFRNQASR 514

FVIII1785-1805-51

NIMVTFRNQASRP 515

FVIII1785-1805-52

NIMVTFRNQASRPY 516

FVIII1785-1805-53

NIMVTFRNQASRPYS 517

FVIII1785-1805-54

NIMVTFRNQASRPYSF 518

FVIII1785-1805-55

NIMVTFRNQASRPYSFY 519

FVIII1785-1805-56

IMVTFRNQA 520

FVIII1785-1805-57

IMVTFRNQAS 521

FVIII1785-1805-58

IMVTFRNQASR 522

FVIII1785-1805-59

IMVTFRNQASRP 523

FVIII1785-1805-60

IMVTFRNQASRPY 524

FVIII1785-1805-61

IMVTFRNQASRPYS 525

FVIII1785-1805-62

IMVTFRNQASRPYSF 526

FVIII1785-1805-63

IMVTFRNQASRPYSFY 527

FVIII1785-1805-64

MVTFRNQAS 528

FVIII1785-1805-65

MVTFRNQASR 529

FVIII1785-1805-66

MVTFRNQASRP 530

FVIII1785-1805-67

MVTFRNQASRPY 531

FVIII1785-1805-68

MVTFRNQASRPYS 532

FVIII1785-1805-69

MVTFRNQASRPYSF 533

FVIII1785-1805-70

MVTFRNQASRPYSFY 534

FVIII1785-1805-71

VTFRNQASR 535

FVIII1785-1805-72

VTFRNQASRP 536

FVIII1785-1805-73

VTFRNQASRPY 537

FVIII1785-1805-74

VTFRNQASRPYS 538

FVIII1785-1805-75

VTFRNQASRPYSF 539

FVIII1785-1805-76

VTFRNQASRPYSFY 540

FVIII1785-1805-77

TFRNQASRP 541

FVIII1785-1805-78

TFRNQASRPY 542

FVIII1785-1805-79

TFRNQASRPYS 543

FVIII1785-1805-80

TFRNQASRPYSF 544

FVIII1785-1805-81

TFRNQASRPYSFY 545

FVIII1785-1805-82

FRNQASRPY 546

FVIII1785-1805-83

FRNQASRPYS 547

FVIII1785-1805-84

FRNQASRPYSF 548

FVIII1785-1805-85

FRNQASRPYSFY 549

FVIII1785-1805-86

RNQASRPYS 550

FVIII1785-1805-87

RNQASRPYSF 551

FVIII1785-1805-88

RNQASRPYSFY 552

FVIII1785-1805-89

NQASRPYSF 553

FVIII1785-1805-90

NQASRPYSFY 554

FVIII1785-1805-91

QASRPYSFY 555

G. Péptidos de factor VIII2025-2045

También se proporciona en el presente documento un polipéptido que tiene la secuencia (R1)x-P-(R2)y, en la que P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia de al

VIII2025-2045

menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor que tiene la secuencia: LHAGMSTLFLVYSNKCQTPLG (SEQ ID NO: 568), R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1

5

10

15

20

25

30

35

40

hasta 80 aminoácidos, y R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, en la que cada uno de x e y son independientemente cero o uno.

En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII2025-2045 que tiene la secuencia: LHAGMSTLFLVYSNKCQTPLG (SEQ ID NO: 568). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII2025-2045 que tiene la secuencia: LHAGMSTLFLVYSNKCQTPLG (SEQ ID NO: 568). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 556 a 646. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 556 a 646. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 556 a 646. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 556 a 646. En algunas realizaciones, tanto x como y pueden ser cero. En otras realizaciones, x puede ser uno e y puede ser cero. En otras realizaciones, x puede ser cero e y puede ser uno. En aún otra realización más, tanto x como y pueden ser uno.

En una realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 80 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 70 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 60 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 40 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 30 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 20 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 10 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 5 aminoácidos. En aún otra realización más, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 aminoácidos.

En una realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 150 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 100 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 25 aminoácidos. En aún otras realizaciones más, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175 ó 180 aminoácidos.

Tabla 8. Péptidos de FVIII2025-2045 a modo de ejemplo

Péptido

Secuencia SEQ ID NO:

FVIII2025-2045-1

LHAGMSTLF 556

FVIII2025-2045-2

LHAGMSTLFL 557

FVIII2025-2045-3

LHAGMSTLFLV 558

FVIII2025-2045-4

LHAGMSTLFLVY 559

FVIII2025-2045-5

LHAGMSTLFLVYS 560

FVIII2025-2045-6

LHAGMSTLFLVYSN 561

FVIII2025-2045-7

LHAGMSTLFLVYSNK 562

FVIII2025-2045-8

LHAGMSTLFLVYSNKC 563

FVIII2025-2045-9

LHAGMSTLFLVYSNKCQ 564

FVIII2025-2045-10

LHAGMSTLFLVYSNKCQT 565

FVIII2025-2045-11

LHAGMSTLFLVYSNKCQTP 566

FVIII2025-2045-12

LHAGMSTLFLVYSNKCQTPL 567

FVIII2025-2045-13

LHAGMSTLFLVYSNKCQTPLG 568

FVIII2025-2045-14

HAGMSTLFL 569

FVIII2025-2045-15

HAGMSTLFLV 570

FVIII2025-2045-16

HAGMSTLFLVY 571

FVIII2025-2045-17

HAGMSTLFLVYS 572

FVIII2025-2045-18

HAGMSTLFLVYSN 573

FVIII2025-2045-19

HAGMSTLFLVYSNK 574

FVIII2025-2045-20

HAGMSTLFLVYSNKC 575

FVIII2025-2045-21

HAGMSTLFLVYSNKCQ 576

FVIII2025-2045-22

HAGMSTLFLVYSNKCQT 577

FVIII2025-2045-23

HAGMSTLFLVYSNKCQTP 578

FVIII2025-2045-24

HAGMSTLFLVYSNKCQTPL 579

FVIII2025-2045-25

HAGMSTLFLVYSNKCQTPLG 580

FVIII2025-2045-26

AGMSTLFLV 581

FVIII2025-2045-27

AGMSTLFLVY 582

FVIII2025-2045-28

AGMSTLFLVYS 583

FVIII2025-2045-29

AGMSTLFLVYSN 584

FVIII2025-2045-30

AGMSTLFLVYSNK 585

FVIII2025-2045-31

AGMSTLFLVYSNKC 586

FVIII2025-2045-32

AGMSTLFLVYSNKCQ 587

FVIII2025-2045-33

AGMSTLFLVYSNKCQT 588

FVIII2025-2045-34

AGMSTLFLVYSNKCQTP 589

FVIII2025-2045-35

AGMSTLFLVYSNKCQTPL 590

FVIII2025-2045-36

AGMSTLFLVYSNKCQTPLG 591

FVIII2025-2045-37

GMSTLFLVY 592

FVIII2025-2045-38

GMSTLFLVYS 593

FVIII2025-2045-39

GMSTLFLVYSN 594

FVIII2025-2045-40

GMSTLFLVYSNK 595

FVIII2025-2045-41

GMSTLFLVYSNKC 596

FVIII2025-2045-42

GMSTLFLVYSNKCQ 597

FVIII2025-2045-43

GMSTLFLVYSNKCQT 598

FVIII2025-2045-44

GMSTLFLVYSNKCQTP 599

FVIII2025-2045-45

GMSTLFLVYSNKCQTPL 600

FVIII2025-2045-46

GMSTLFLVYSNKCQTPLG 601

FVIII2025-2045-47

MSTLFLVYS 602

FVIII2025-2045-48

MSTLFLVYSN 603

FVIII2025-2045-49

MSTLFLVYSNK 604

FVIII2025-2045-50

MSTLFLVYSNKC 605

FVIII2025-2045-51

MSTLFLVYSNKCQ 606

FVIII2025-2045-52

MSTLFLVYSNKCQT 607

FVIII2025-2045-53

MSTLFLVYSNKCQTP 608

FVIII2025-2045-54

MSTLFLVYSNKCQTPL 609

FVIII2025-2045-55

MSTLFLVYSNKCQTPLG 610

FVIII2025-2045-56

STLFLVYSN 611

FVIII2025-2045-57

STLFLVYSNK 612

FVIII2025-2045-58

STLFLVYSNKC 613

FVIII2025-2045-59

STLFLVYSNKCQ 614

FVIII2025-2045-60

STLFLVYSNKCQT 615

FVIII2025-2045-61

STLFLVYSNKCQTP 616

FVIII2025-2045-62

STLFLVYSNKCQTPL 617

FVIII2025-2045-63

STLFLVYSNKCQTPLG 618

FVIII2025-2045-64

TLFLVYSNK 619

FVIII2025-2045-65

TLFLVYSNKC 620

FVIII2025-2045-66

TLFLVYSNKCQ 621

FVIII2025-2045-67

TLFLVYSNKCQT 622

FVIII2025-2045-68

TLFLVYSNKCQTP 623

FVIII2025-2045-69

TLFLVYSNKCQTPL 624

FVIII2025-2045-70

TLFLVYSNKCQTPLG 625

FVIII2025-2045-71

LFLVYSNKC 626

FVIII2025-2045-72

LFLVYSNKCQ 627

FVIII2025-2045-73

LFLVYSNKCQT 628

FVIII2025-2045-74

LFLVYSNKCQTP 629

FVIII2025-2045-75

LFLVYSNKCQTPL 630

FVIII2025-2045-76

LFLVYSNKCQTPLG 631

FVIII2025-2045-77

FLVYSNKCQ 632

FVIII2025-2045-78

FLVYSNKCQT 633

FVIII2025-2045-79

FLVYSNKCQTP 634

FVIII2025-2045-80

FLVYSNKCQTPL 635

FVIII2025-2045-81

FLVYSNKCQTPLG 636

FVIII2025-2045-82

LVYSNKCQT 637

FVIII2025-2045-83

LVYSNKCQTP 638

imagen9

FVIII2160-2180-6

NPPIIARYIRLHPT 652

FVIII2160-2180-7

NPPIIARYIRLHPTH 653

FVIII2160-2180-8

NPPIIARYIRLHPTHY 654

FVIII2160-2180-9

NPPIIARYIRLHPTHYS 655

FVIII2160-2180-

NPPIIARYIRLHPTHYSI 656

FVIII2160-2180-11

NPPIIARYIRLHPTHYSIR 657

FVIII2160-2180-12

NPPIIARYIRLHPTHYSIRS 658

FVIII2160-2180-13

NPPIIARYIRLHPTHYSIRST 659

FVIII2160-2180-14

PPIIARYIR 660

FVIII2160-2180-15

PPIIARYIRL 661

FVIII2160-2180-16

PPIIARYIRLH 662

FVIII2160-2180-17

PPIIARYIRLHP 663

FVIII2160-2180-18

PPIIARYIRLHPT 664

FVIII2160-2180-19

PPIIARYIRLHPTH 665

FVIII2160-2180-

PPIIARYIRLHPTHY 666

FVIII2160-2180-21

PPIIARYIRLHPTHYS 667

FVIII2160-2180-22

PPIIARYIRLHPTHYSI 668

FVIII2160-2180-23

PPIIARYIRLHPTHYSIR 669

FVIII2160-2180-24

PPIIARYIRLHPTHYSIRS 670

FVIII2160-2180-25

PPIIARYIRLHPTHYSIRST 671

FVIII2160-2180-26

PIIARYIRL 672

FVIII2160-2180-27

PIIARYIRLH 673

FVIII2160-2180-28

PIIARYIRLHP 674

FVIII2160-2180-29

PIIARYIRLHPT 675

FVIII2160-2180-

PIIARYIRLHPTH 676

FVIII2160-2180-31

PIIARYIRLHPTHY 677

FVIII2160-2180-32

PIIARYIRLHPTHYS 678

FVIII2160-2180-33

PIIARYIRLHPTHYSI 679

FVIII2160-2180-34

PIIARYIRLHPTHYSIR 680

FVIII2160-2180-35

PIIARYIRLHPTHYSIRS 681

FVIII2160-2180-36

PIIARYIRLHPTHYSIRST 682

FVIII2160-2180-37

IIARYIRLH 683

FVIII2160-2180-38

IIARYIRLHP 684

FVIII2160-2180-39

IIARYIRLHPT 685

FVIII2160-2180-

IIARYIRLHPTH 686

FVIII2160-2180-41

IIARYIRLHPTHY 687

FVIII2160-2180-42

IIARYIRLHPTHYS 688

FVIII2160-2180-43

IIARYIRLHPTHYSI 689

FVIII2160-2180-44

IIARYIRLHPTHYSIR 690

FVIII2160-2180-45

IIARYIRLHPTHYSIRS 691

FVIII2160-2180-46

IIARYIRLHPTHYSIRST 692

FVIII2160-2180-47

IARYIRLHP 693

FVIII2160-2180-48

IARYIRLHPT 694

FVIII2160-2180-49

IARYIRLHPTH 695

FVIII2160-2180-

IARYIRLHPTHY 696

FVIII2160-2180-51

IARYIRLHPTHYS 697

FVIII2160-2180-52

IARYIRLHPTHYSI 698

FVIII2160-2180-53

IARYIRLHPTHYSIR 699

FVIII2160-2180-54

IARYIRLHPTHYSIRS 700

FVIII2160-2180-55

IARYIRLHPTHYSIRST 701

FVIII2160-2180-56

ARYIRLHPT 702

FVIII2160-2180-57

ARYIRLHPTH 703

FVIII2160-2180-58

ARYIRLHPTHY 704

FVIII2160-2180-59

ARYIRLHPTHYS 705

FVIII2160-2180-

ARYIRLHPTHYSI 706

FVIII2160-2180-61

ARYIRLHPTHYSIR 707

FVIII2160-2180-62

ARYIRLHPTHYSIRS 708

FVIII2160-2180-63

ARYIRLHPTHYSIRST 709

FVIII2160-2180-64

RYIRLHPTH 710

FVIII2160-2180-65

RYIRLHPTHY 711

FVIII2160-2180-66

RYIRLHPTHYS 712

FVIII2160-2180-67

RYIRLHPTHYSI 713

FVIII2160-2180-68

RYIRLHPTHYSIR 714

5

10

15

20

25

30

35

40

FVIII2160-2180-69

RYIRLHPTHYSIRS 715

FVIII2160-2180-70

RYIRLHPTHYSIRST 716

FVIII2160-2180-71

YIRLHPTHY 717

FVIII2160-2180-72

YIRLHPTHYS 718

FVIII2160-2180-73

YIRLHPTHYSI 719

FVIII2160-2180-74

YIRLHPTHYSIR 720

FVIII2160-2180-75

YIRLHPTHYSIRS 721

FVIII2160-2180-76

YIRLHPTHYSIRST 722

FVIII2160-2180-77

IRLHPTHYS 723

FVIII2160-2180-78

IRLHPTHYSI 724

FVIII2160-2180-79

IRLHPTHYSIR 725

FVIII2160-2180-80

IRLHPTHYSIRS 726

FVIII2160-2180-81

IRLHPTHYSIRST 727

FVIII2160-2180-82

RLHPTHYSI 728

FVIII2160-2180-83

RLHPTHYSIR 729

FVIII2160-2180-84

RLHPTHYSIRS 730

FVIII2160-2180-85

RLHPTHYSIRST 731

FVIII2160-2180-86

LHPTHYSIR 732

FVIII2160-2180-87

LHPTHYSIRS 733

FVIII2160-2180-88

LHPTHYSIRST 734

FVIII2160-2180-89

HPTHYSIRS 735

FVIII2160-2180-90

HPTHYSIRST 736

FVIII2160-2180-91

PTHYSIRST 737

I. Péptidos de factor VIII102-122

También se proporciona en el presente documento un polipéptido que tiene la secuencia (R1)x-P-(R2)y, en la que P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia de al

VIII102-122

menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor que tiene la secuencia: TVVITLKNMASHPVSLHAVGV (SEQ ID NO: 740), R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, y R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos, en la que cada uno de x e y son independientemente cero o uno.

En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII102-122 que tiene la secuencia: TVVITLKNMASHPVSLHAVGV (SEQ ID NO: 740). En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de un péptido de factor VIII102-122 que tiene la secuencia: TVVITLKNMASHPVSLHAVGV (SEQ ID NO: 740).

En el contexto de la presente invención, los péptidos de FVIII102-122 también incluyen péptidos de FVIII102-119. Por consiguiente, en una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 1 a 55 y 738 a 773. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 1 a 55 y 738 a 773. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con respecto a una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 1 a 55 y 738 a 773. En una realización, P es una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 1 a 55 y 738 a 773. En algunas realizaciones, tanto x como y pueden ser cero. En otras realizaciones, x puede ser uno e y puede ser cero. En otras realizaciones, x puede ser cero e y puede ser uno. En aún otra realización más, tanto x como y pueden ser uno.

En una realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 80 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 70 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 60 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 40 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 30 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 20 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 10 aminoácidos. En otra realización, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 5 aminoácidos. En aún otra realización más, R1 y R2 son por separado o ambos secuencias de aminoácidos que consisten en desde 1 hasta 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 aminoácidos.

En una realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 150 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 100 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 50 aminoácidos. En otra realización, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 25 aminoácidos. En aún otras realizaciones más, el péptido de FVIII consiste en desde 9 hasta 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 5 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175 ó 180 aminoácidos.

10 Tabla 10. Péptidos de FVIII102-122 a modo de ejemplo

Péptido

Secuencia SEQ ID NO:

FVIII102-122-738

TVVITLKNMASHPVSLHAV 738

FVIII102-122-739

TVVITLKNMASHPVSLHAVG 739

FVIII102-122-740

TVVITLKNMASHPVSLHAVGV 740

FVIII102-122-741

VVITLKNMASHPVSLHAV 741

FVIII102-122-742

VVITLKNMASHPVSLHAVG 742

FVIII102-122-743

VVITLKNMASHPVSLHAVGV 743

FVIII102-122-744

VITLKNMASHPVSLHAV 744

FVIII102-122-745

VITLKNMASHPVSLHAVG 745

FVIII102-122-746

VITLKNMASHPVSLHAVGV 746

FVIII102-122-747

ITLKNMASHPVSLHAV 747

FVIII102-122-748

ITLKNMASHPVSLHAVG 748

FVIII102-122-749

ITLKNMASHPVSLHAVGV 749

FVIII102-122-750

TLKNMASHPVSLHAV 750

FVIII102-122-751

TLKNMASHPVSLHAVG 751

FVIII102-122-752

TLKNMASIIPVSLIIAVGV 752

FVIII102-122-753

LKNMASHPVSLHAV 753

FVIII102-122-754

LKNMASHPVSLHAVG 754

FVIII102-122-755

LKNMASHPVSLHAVGV 755

FVIII102-122-756

KNMASHPVSLHAV 756

FVIII102-122-757

KNMASHPVSLHAVG 757

FVIII102-122-758

KNMASHPVSLHAVGV 758

FVIII102-122-759

NMASHPVSLHAV 759

FVIII102-122-760

NMASHPVSLHAVG 760

FVIII102-122-761

NMASHPVSLHAVGV 761

FVIII102-122-762

MASHPVSLHAV 762

FVIII102-122-763

MASHPVSLHAVG 763

FVIII102-122-764

MASHPVSLHAVGV 764

FVIII102-122-765

ASHPVSLHAV 765

FVIII102-122-766

ASHPVSLHAVG 766

FVIII102-122-767

ASHPVSLHAVGV 767

FVIII102-122-768

SHPVSLHAV 768

FVIII102-122-769

SHPVSLHAVG 769

FVIII102-122-770

SHPVSLHAVGV 770

FVIII102-122-771

HPVSLHAVG 771

FVIII102-122-772

HPVSLHAVGV 772

FVIII102-122-773

PVSLHAVGV 773

IV. Métodos de producción de péptidos de FVIII

15 En otro aspecto, la presente invención se refiere además a métodos para producir péptidos de FVIII. En algunas realizaciones, los péptidos de FVIII de la presente invención pueden producirse usando técnicas de síntesis en fase sólida (por ejemplo, Fmoc o t-Boc) o líquida generalmente conocidas en la técnica. Véanse, por ejemplo, Chan & White, Eds., Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach (Oxford University Press, 2000); Benoiton, Chemistry of Peptide Synthesis (CRC Press, 2005); Howl, Peptide Synthesis and Applications (Humana Press,

20 2010).

Se divulga en el presente documento un método de preparación de un péptido de FVIII, comprendiendo el método: a) sintetizar un péptido usando técnicas de síntesis en fase sólida o fase líquida, teniendo el péptido de FVIII la secuencia: (R1)x-P-(R2)y, en la que P es una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % de identidad con 25 respecto a una secuencia de al menos nueve aminoácidos consecutivos de una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 68, 344 y 740, R1 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos; R2 es una secuencia de aminoácidos que consiste en desde 1 hasta 80 aminoácidos; y cada uno de x e y es

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células con 10 g/ml de rFVIII humano o con 1 g/ml de conjuntos péptido/péptido durante 24 horas a 37 ºC, 5 % de CO2. Se recogieron los sobrenadantes y se midió la liberación de IL-2 al sobrenadante de cultivo usando un ELISA de IL-2 (BioLegend, San Diego, CA) o Bio-Plex de IL-2 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) según el protocolo de los fabricantes. Una liberación de IL-2  20 pg/ml en presencia pero no en ausencia de FVIII (o péptidos) se consideró positiva, o alternativamente un aumento de 10 veces en la liberación de IL-2 en presencia de FVIII en comparación con la ausencia de FVIII se consideró positiva.

Subclonación de hibridomas de células T: Para garantizar que cada clon representa sólo un tipo de hibridoma de células T, se subclonaron todos los clones. Se diluyeron clones de hibridoma a una dilución limitante de 0,3 células/pocillo y se cocultivaron con 200 células alimentadoras/pocillo. Se produjeron células alimentadoras mediante tratamiento con mitomicina C de las células de pareja de fusión, células BW. Se trataron 2x108 células BW con 0,1 mg de mitomicina C de Streptomyces caespitosus (Sigma Aldrich) durante 10 minutos a temperatura ambiente y 25 minutos a 37 ºC, 5 % de CO2 en el incubador. Se seleccionaron cinco subclones en crecimiento por clon y se sometieron a prueba para determinar su especificidad de FVIII.

Conjuntos de péptidos de FVIII usados para especificar las especificidades de hibridomas de células T: Se produjeron conjuntos de péptidos de FVIII usando el método de síntesis SPOT tal como se describe por Ay et al. (Biopolimers 88:64-75 (2007)). En resumen, se sintetizaron péptidos de 15 meros sobre dos membranas de celulosa idénticas. Se cortaron las membranas en tiras verticales y horizontales. Se liberaron los péptidos de las tiras de membrana y se usaron como conjuntos de péptidos en pruebas de especificidad tal como se describió anteriormente. Se disolvieron los péptidos en DMSO (Hybrimax, Sigma Aldrich) y se diluyeron adicionalmente con PBS.

Resultados

Se produjeron 181 clones de hibridoma específicos de FVIII. Se cribaron estos clones frente a una biblioteca de péptidos que abarcaba el FVIII humano completo. Se usaron péptidos de 15 meros con una desviación de tres aminoácidos. Usando este enfoque, se identificaron seis regiones de FVIII diferentes que contenían péptidos unidos a HLA-DRB1*1501. Se encontraron dos dominios peptídicos dentro del dominio A1, dos péptidos dentro del dominio A2, uno dentro del dominio B, dos dentro del dominio A3 y un dominio peptídico dentro del dominio C1 de FVIII humano. El péptido de FVIII1401-1424 no se había descrito anteriormente (tabla 11). Los péptidos FVIII474-494 , FVIII545-559, FVIII1788-1802 y FVIII2161-2175 se identificaron ya en el documento WO 09/071886, que usó programas de predicción por ordenador seguido por tecnología de hibridomas de células T. El péptido FVIII2030-2044 se divulgó en el documento WO 03/087161. El péptido FVIII2161-2180 ya se publicó por Jacquemin et al., Blood 101(4):1351-8 (2003).

Tabla 11. Regiones de FVIII que incluyen epítopos de células T

Regiones que incluyen epítopos de células T

Secuencia de aminoácidos Divulgaciones

FVIII102-122

TVVITLKNMASHPVSLHAVGV (SEQ ID NO: 740) FVIII107-121 divulgado en el documento WO 2003/087161 FVIII100-118 divulgado en el documento WO/2009/095646

FVIII246-266

AWPKMHTVNGYVNRSLPGLIG (SEQ ID NO: 68) FVIII253-268 divulgado en el documento WO/2009/095646

FVIII474-494

GEVGDTLLIIFKNQASRPYNI (SEQ ID NO: 159) FVIII475-495 divulgado en el documento WO 2009/071886 FVIII477-495 divulgado en el documento WO/2009/095646

FVIII540-560

PTKSDPRCLTRYYSSFVNMER (SEQ ID NO: 250) FVIII542-562 divulgado en el documento WO 2009/071886 FVIII545-569 divulgado en el documento WO/2009/095646

FVIII1401-1424

QANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLT (SEQ ID NO: 344) Un péptido de la presente invención

FVIII1785-1805

EVEDNIMVTFRNQASRPYSFY (SEQ ID NO: 477) FVIII1785-1805 divulgado en el documento WO 2009/071886 FVIII1787-1805 divulgado en el documento WO/2009/095646

FVIII2025-2045

LHAGMSTLFLVYSNKCQTPLG (SEQ ID NO: 568) FVIII2030-2044 divulgado en el documento WO 2003/087161

FVIII2160-2180

NPPIIARYIRLHPTHYSIRST (SEQ ID NO: 659) FVIII2158-2178 divulgado en el documento WO 2009/071886 y FVIII2161-2180 Jacquemin et al., citado anteriormente. FVIII2164-2183 divulgado en el documento WO

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Claims (1)

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