ES2634987T3 - Aparato y kit de encapsulación de al menos un compuesto para su uso terapéutico y/o diagnóstico en eritrocitos - Google Patents

Abstract

Un aparato para introducir al menos un compuesto en el interior de los eritrocitos; el aparato (1) comprende un sistema (2) de canales de conexión, que incluye un primer y un segundo canal (9, 10); una unidad de introducción (3) para insertar una muestra que contiene los eritrocitos en el interior del aparato (1); una unidad de separación (4) para separar los diferentes componentes de la muestra entre sí; una unidad de combinación (5), que comprende un primer depósito (6) y en el área de la cual los eritrocitos y el compuesto se combinan entre sí para obtener eritrocitos tratados; una entrada (7) para insertar el compuesto en el primer depósito (6); una unidad de alimentación (8), para introducir una primera solución a través del primer canal (9) e introducir una segunda solución a través del segundo canal (10); una unidad de concentración (11) para concentrar el contenido del primer depósito (6); y una unidad de recogida (12), que comprende un segundo depósito (13) para recoger los eritrocitos tratados; el sistema (2) de canales conecta la unidad de introducción (3), la unidad de separación (4), la unidad de combinación (5), la unidad de alimentación (8), la unidad de concentración (11) y la unidad de recogida (12); el aparato (1) se caracteriza por que comprende una unidad de control (15); y primeros medios de bombeo (49), que son accionables por la unidad de control (15) y que se diseñan para mover fluidos al menos entre la unidad de introducción (3), la unidad de separación (4), la unidad de combinación (5) y la unidad de recogida (12); la unidad de alimentación (8) comprende primeros medios de ajuste (29), que son accionables por la unidad de control (15) y que se disponen a lo largo del primer canal (9) para regular el flujo a lo largo del primer canal (9); y segundos medios de ajuste (30), que son accionables por la unidad de control (15) y que se disponen a lo largo del segundo canal (10) para regular el flujo a lo largo del segundo canal (10); la unidad de recogida (12) comprende terceros medios de ajuste (33), que son accionables por la unidad de control (15) y que se adaptan para ajustar el flujo en dirección del segundo depósito (13); el aparato se caracteriza por que comprende un sensor de aire (26) para identificar la presencia de aire en el sistema (2) de canales entre la unidad de introducción (3) y la unidad de separación (4).

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

DESCRIPCION

Aparato y kit de encapsulacion de al menos un compuesto para su uso terapeutico y/o diagnostico en eritrocitos Campo tecnico

La presente invencion se refiere a un aparato, a un kit, a sus usos y a un metodo de introduccion de al menos un compuesto en el interior de eritrocitos.

Antecedentes de la invencion

Recientemente muchos intentos se han centrado en el desarrollo de procedimientos para la liberacion dirigida de agentes farmaceuticos en sitios espedficos en un paciente o para obtener una liberacion lenta de farmacos en el paciente. Se sabe que la eficacia de un farmaco puede aumentar cuando el sitio diana apropiado es alcanzado de manera efectiva por el farmaco, o cuando el farmaco se libera preferentemente en el organo a tratar o en la celula a tratar. Ademas, la toxicidad de un farmaco puede reducirse cuando la cantidad total de farmaco administrado se minimiza aunque se mantiene su accion terapeutica hasta la liberacion lenta del farmaco. El interes en los sistemas de administracion de farmacos se refiere tanto a los agentes convencionales, muchos de los cuales son moleculas organicas relativamente simples, como a agentes activos farmacologicamente mas complejos, tales como peptidos, protemas, enzimas, anticuerpos, oligonucleotidos antisentido, oligonucleotidos senuelo, citoquinas, acidos nucleicos, y combinaciones de los mismos, etc.

Un campo de interes reciente se refiere al uso de globulos rojos (designado en lo sucesivo como “eritrocitos” o “GRs”) como portadores para liberar dosificaciones terapeuticas de farmacos en la circulacion sangumea en dosis bajas o en un sitio deseado en un paciente. Los eritrocitos pueden "cargarse" con agentes biologicamente activos y por medio de un proceso en el que las membranas celulares de los eritrocitos se hacen permeables y uno o mas agentes se anaden a los eritrocitos resellando entonces las membranas celulares. Estos eritrocitos "cargados" o "tratados" ofrecen varias ventajas como sistemas de liberacion de farmacos y sistemas de orientacion selectiva, ya que son biodegradables, pueden mantenerse en la circulacion durante largos periodos de tiempo y pueden orientarse selectivamente a celulas, tales como por ejemplo macrofagos.

Los procesos para la preparacion de una suspension celular cargada en una solucion fisiologica se divulgan en la patente alemana n.° 23 26 244 y en las solicitudes de patentes alemanas publicadas con los numeros (0s) 23 26 161 y 24 95 119, en las que las membranas celulares de eritrocitos se lisan por presion osmotica y por campo electrico, respectivamente.

El documento "Erythrocytes as carriers of primaquine-preparation: characterization and evolution" (Naresh Talwar et al.; Journal of Controlled Realease, 20 (1992) 133-142) divulga la encapsulacion de fosfato en los eritrocitos. Se indica que el metodo sugerido implica la lisis de los eritrocitos y que los eritrocitos tratados se laven. No obstante, en ninguna parte se menciona ni se sugiere que la concentracion de los eritrocitos tratados ha de aumentarse y/o puede aumentarse.

La patente de Estados Unidos n.° 4.224.313, (Zimmermann et al), divulga un metodo para preparar una masa de celulas cargadas en suspension en una solucion que aumenta la permeabilidad de la membrana celular por una presion osmotica inducida externamente o por un campo electrico o ambos. El material que se va a cargar incluye un agente farmaceutico que tiene la capacidad, cuando se incorpora en una celula, de destruir prematuramente las membranas celulares, y un agente estabilizante que puede inhibir la reaccion del agente farmaceutico con las membranas celulares.

La patente de Estados Unidos n.° 4.478.824 (Franco et al.) divulga un metodo para incorporar sustancias en el interior de eritrocitos que cambian la presion osmotica interna de los GRs por medio de la accion de agentes qmmicos, tales como DMSO y glicerol, que pueden atravesar la membrana celular y entrar en las celulas por difusion.

La patente de Estados Unidos n.° 4.652.449, (Ropars et al.), divulga un metodo y un aparato para incorporar materiales en el interior de eritrocitos por presion osmotica. El metodo y el aparato se han empleado y sometido a ensayo solo en grandes volumenes de sangre. Esto limita muchas aplicaciones para el empleo de sangre autologa, es decir, sangre obtenida del mismo paciente que luego recibira la sangre cargada con el farmaco.

La patente de Estados Unidos n.° 4.931.276, (Franco et al.), divulga un metodo para encapsular agentes no ionicos en eritrocitos. El metodo tiene una eficacia limitada cuando el agente deseado a incorporarse es no anionico, o es anionico o polianionico pero no esta presente en el medio acuoso practicamente isotonico en una concentracion suficiente para provocar los aumentos requeridos en la permeabilidad de las celulas sin la destruccion de las celulas.

Heubsch et al., J. Cell. Physiol., 122:266-272 (1985), muestran que, en las celulas osmoticamente hinchadas, la doble capa lipfdica que forma la membrana se separa del citoesqueleto de la celula, y la celula vana

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

considerablemente su tamano y se vuelve esferica. Esto no ocurre en condiciones normales.

La solicitud de patente con numero de publicacion EP1466968 divulga un metodo y una maquina para encapsular sustancias activas en eritrocitos.

Las revisiones de los metodos para la incorporacion de sustancias en celulas se proporcionan por Franco et al. en Life Science 32:2763-2768 (1983), Am. J. Hematol. 17:393-400 (1984), y J. Cell. Physiol. 129:221-229 (1986).

Aunque el uso de eritrocitos como sistemas de liberacion de farmacos ha sido investigado por muchos, los metodos y los dispositivos que implementan estas metodologfas aun no se han desarrollado hasta el punto de aplicarse normalmente en la practica clmica, en el diagnostico y en la investigacion.

Ademas, las metodologfas y los dispositivos desarrollados hasta ahora no son lo suficientemente flexibles como para permitir obtener eritrocitos para cualquier tipo de uso en el campo terapeutico, de diagnostico y de investigacion. En particular, siguiendo los procedimientos divulgados en el estado de la tecnica, a menudo no es posible obtener un producto que pueda utilizarse realmente en el campo del diagnostico (o terapeutico).

Un ejemplo reciente de un aparato para la encapsulacion de un compuesto en eritrocitos tambien se divulga en la patente US6139836. Aunque este aparato representa una mejora considerable con respecto al estado anterior de la tecnica, es relativamente complejo, costoso y diffcil de usar. A este respecto, cabe senalar que el funcionamiento del aparato de la patente US6139836 requiere la presencia y la intervencion continua de un operador especializado que ha de operar los diferentes componentes del aparato en la secuencia correcta. Por lo tanto, el tratamiento (carga) de eritrocitos demanda una gran cantidad tiempo e implica el riesgo de los errores que comete el operador.

Los aparatos conocidos no se pueden llevar a cabo de manera apropiada. Debido al hecho de que no pueden llevarse a cabo, el procedimiento necesita, por lo tanto, llevarse a cabo en estructuras dedicadas y no es posible operar en sitios que son mas accesibles a los pacientes. Ademas, los aparatos conocidos requieren la intervencion continua de personal especializado y no son siempre precisos y/o suficientemente eficaces.

Es objeto de la presente invencion proporcionar un aparato, un kit, un uso y un metodo, que permitan superar al menos parcialmente los inconvenientes del estado de la tecnica y al mismo tiempo sean faciles y rentables de implementar.

Sumario

Segun la presente invencion, se proporcionan un aparato, un kit, usos y un metodo segun las siguientes reivindicaciones independientes y, preferentemente, segun cualquiera de las reivindicaciones directa o indirectamente dependientes en las reivindicaciones independientes.

Breve descripcion de los dibujos

La invencion se describira ahora con referencia a los dibujos adjuntos, que muestran realizaciones no limitativas de los mismos, en los que:

- La Figura 1 es un diagrama de un aparato realizado segun la presente invencion;

- La Figura 2 es un diagrama de una segunda realizacion de un aparato realizado segun la presente invencion;

- La Figura 3 es un diagrama de una tercera realizacion de un aparato realizado segun la presente invencion;

- La Figura 4 es una vista en perspectiva parcial, con detalles eliminados para mayor claridad, de un dispositivo reutilizable del aparato de la figura 1;

- La Figura 5 es una vista superior esquematica, con detalles eliminados para mayor claridad, del aparato de la figura 1;

- Las Figuras. 6 y 7 son vistas en perspectiva lateral, con detalles eliminados para mayor claridad, del aparato de la figura 5;

- La Figura 8 muestra esquematicamente algunas partes del aparato de la figura 1;

- La Figura 9 muestra esquematicamente un dispositivo desechable del aparato de la figura 1;

- La Figura 10 es una imagen fluoroangiografica obtenida mediante el uso de una infusion de eritrocitos cargados

con verde de indocianina con un hematocrito del 6,4 %; y

- La Figura 11 es una imagen fluoroangiografica obtenida mediante el uso de una infusion de eritrocitos cargados con verde de indocianina con un hematocrito del 54 %.

Realizaciones de la invencion

Segun un primer aspecto de la presente invencion, se proporciona un aparato para la introduccion de al menos un compuesto en el interior de los eritrocitos.

En las figuras. 1, 5, 6, 7 y 8, la referencia numerica 1 indica en conjunto un aparato para la introduccion de al menos

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

un compuesto en el interior de eritrocitos. En particular, el aparato 1 se adapta para recibir una muestra de sangre que contiene eritrocitos; para recibir la muestra con una solucion fisiologica a fin de separar el plasma y otras celulas sangumeas de los eritrocitos; para hinchar los eritrocitos y lisarlos; para cargar el compuesto en el interior de los eritrocitos; y para cerrar los eritrocitos cargados con el fin de obtener eritrocitos tratados.

En particular, la solucion fisiologica es una solucion salina y es por ejemplo una solucion acuosa de NaCl al 0,9 % en peso/volumen. Segun realizaciones alternativas, es otra solucion adecuada para el lavado de sangre.

Mas en particular, cuando la muestra lavada se pone en contacto con una primera solucion, los eritrocitos se hinchan. Los eritrocitos hinchados se exponen entonces a una segunda solucion, llevandoles a lisarse parcial o totalmente. Posteriormente, los eritrocitos lisados o parcialmente lisados se concentran en un hemofiltro. Los eritrocitos lisados o parcialmente lisados se ponen en contacto con al menos un compuesto. Por ende, el compuesto se distribuye dentro y fuera de los eritrocitos lisados o parcialmente lisados. En otras palabras, algunas de las moleculas del compuesto se introducen en los eritrocitos. Los eritrocitos, que (en esta etapa del procedimiento) contienen el compuesto, se exponen entonces a una solucion de sellado. La exposicion a la solucion de sellado induce las membranas celulares a sellarlas de nuevo, encapsulando de este modo el compuesto en el interior de la celula. El llamado "portador de GRs" o "eritrocito tratado" resultante se lava a continuacion (con la misma solucion fisiologica como se ha indicado previamente). Esto se hace para eliminar lo que no ha sido encapsulado en los GRs durante el procedimiento.

En particular, los compuestos se encapsulan utilizando los metodos de la presente invencion.

Segun algunas realizaciones, el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: un agente biologicamente activo, un agente farmacologicamente activo, nanopartmulas con hasta 500 nm de diametro, un medio de contraste para el diagnostico, una sustancia que hace que los eritrocitos sean identificables por fluorescencia, detectores opticos, magneticos y/o ecograficos (y/o con cualquier otro metodo adecuado para detectar el medio de contraste incorporado por el procedimiento en los eritrocitos). En particular, el compuesto es un farmaco, una sonda molecular o un profarmaco (es decir, un precursor de un agente biologicamente o farmacologicamente activo).

Segun algunas realizaciones, el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: peptidos, oligopeptidos, polipeptidos, protemas, enzimas, hormonas, corticoides, glucocorticoides, agentes no esteroideos antiinflamatorios, inhibidores de la proteasa, glutation, citoquinas, toxinas, oligonucleotidos y otros acidos nucleicos y analogos de nucleosidos que son bien conocidos como agentes terapeuticos utiles. Estos incluyen 6-mercaptopurina (6-MP) o azatiopurina y fosfato de fludarabina que se utilizan comunmente como agentes inmunosupresores y agentes inhibidores del crecimiento de celulas malignas, y azidotimidina fosforilada (AZT), dideoxicitosina (ddC) y dideoxiinosina (ddl), que son utiles como agentes anti-virales, en particular en el tratamiento del SIDA.

Por ejemplo, dexametasona-21-fosfato (d-21P) puede encapsularse en los portadores de GRs y cuando los GRs cargados se introducen en el sistema circulatorio de un mairnfero, d-2lP se convierte lentamente al farmaco dexametasona. Puesto que la dexametasona puede atravesar la membrana celular de los eritrocitos portadores (mientras que d-21P no puede), este proceso asegura que el marnffero esta provisto de un nivel constante del agente biologicamente activo (en este caso dexametasona) durante un cierto periodo de tiempo.

Segun realizaciones espedficas, el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: aminoacidos, oligopeptidos (2-10 aminoacidos), polipeptidos (10-20 aminoacidos), protemas (mas de 20 aminoacidos), hormonas, corticoides, glucocorticoides, AlNEs, glutation, citoquinas, toxinas, oligonucleotidos (hasta 20 nucleotidos), polinucleotidos (mas de 20 nucleotidos). Los oligonucleotidos y polinucleotidos pueden contener uno o mas nucleotidos modificados o analogos de nucleotidos. Los aminoacidos, los oligopeptidos y los polipeptidos pueden contener uno o mas aminoacidos modificados o analogos de aminoacidos. En particular, el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: aminoacidos, oligopeptidos (2-10 aminoacidos), polipeptidos (10-20 aminoacidos), protemas (mas de 20 aminoacidos), hormonas, corticoides, glucocorticoides, AlNEs, glutation, citoquinas, toxinas, oligonucleotidos (hasta 20 nucleotidos), fosfato sodico de dexametasona y fosfato sodico de betametasona, glutation, verde de indocianina (ICG).

Segun algunas realizaciones, el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: agentes activos farmacologicos, peptidos, protemas, hormonas, fosfato sodico de dexametasona y fosfato sodico de betametasona, glutation, toxinas, oligonucleotidos monocatenarios o bicatenarios (que pueden incluir analogos de nucleotidos), nanopartmulas con un diametro de hasta 500 nm, agentes fluorescentes, verde de indocianina (ICG), otros agentes detectables por aparatos opticos, ecograficos o de resonancia magnetica, y otros agentes de contraste que pueden utilizarse como medios de diagnostico de cualquier tipo y clase.

El aparato 1 comprende un sistema 2 de canales de conexion; una unidad de introduccion 3 para llevar la muestra que contiene los eritrocitos en el interior del aparato 1; una unidad de separacion de 4 para separar los diferentes componentes de la muestra (en particular, el plasma y las otras celulas a partir de eritrocitos); y una unidad de combinacion 5, que comprende un deposito 6 (en particular, una bolsa de recogida) y en la que los eritrocitos y el compuesto se combinan entre sf a fin de obtener los eritrocitos tratados. Cabe senalar que, de manera ventajosa, el

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

aparato 1 tiene un peso inferior a 35 kg. El aparato 1 es, por lo tanto, facil de llevar.

El aparato 1 tambien comprende una entrada 7 (en particular, un septo perforable del deposito 6) para llevar el compuesto al deposito 6; y una unidad de alimentacion 8, que comprende un canal 9 para introducir la primera solucion y un canal 10 para introducir la segunda solucion.

La primera solucion se adapta, cuando entra en contacto con los eritrocitos, para hinchar los eritrocitos y, en particular, consiste en una solucion acuosa de una o mas sales inorganicas con una osmolaridad en general (es decir, la adicion de las concentraciones de todas las sales disueltas) de aproximadamente 100 mOsm/kg a aproximadamente 300 mOsm/kg. Mas en particular, la primera solucion consiste en 6 volumenes de solucion fisiologica (solucion acuosa de NaCl en una concentracion de 0,9 % en peso/volumen) y 4,5 volumenes de agua destilada (o desionizada).

La segunda solucion se adapta, cuando entra en contacto con los eritrocitos, para lisar los eritrocitos y, en particular, consiste en una solucion acuosa de una o mas sales inorganicas con una osmolaridad en general (es decir, la suma de las concentraciones de todas las sales disueltas) de aproximadamente 10 mOsm/kg a aproximadamente 150 mOsm/Kg. Mas en particular, la primera solucion consiste en 6 volumenes de solucion fisiologica (solucion acuosa de NaCl en una concentracion de 0,9 % en peso/volumen) y 8 volumenes de agua destilada (o desionizada).

Cabe senalar que la entrada 7 permite no solo introducir el compuesto en el interior del deposito 6, sino tambien llevar la solucion de sellado al deposito 6. La solucion de sellado se adapta, cuando esta en contacto con los eritrocitos, para volver a sellar los eritrocitos a fin de encapsular al menos parcialmente el compuesto. En particular, la entrada 7 comprende un septo perforable.

Segun algunas realizaciones, la solucion de sellado es una solucion de fosfato-inosina-glucosa-piruvato-adenina (PIGPA). La solucion PIGPA comprende, en particular, aproximadamente NaH2PO4 33 mM; aproximadamente KCI 1.606 M, aproximadamente NaCl 0,194 M; aproximadamente inosina 0,1 M; aproximadamente adenina 5 mM; aproximadamente ATP 20 mM; aproximadamente glucosa 0,1 M; aproximadamente piruvato 0,1 M; y aproximadamente MgCh 4 mM. Segun otras realizaciones, la solucion de sellado consiste en una solucion acuosa de una o mas sales inorganicas que tiene una osmolaridad identica o superior a la sangre (es decir, identica o superior a 280 mOsm/kg). En una realizacion ventajosa, se utilizan aproximadamente 5 ml a 7 ml de la solucion de sellado para volver a sellar un volumen de aproximadamente 50-90 ml de eritrocitos lisados.

El aparato 1 tambien comprende una unidad de concentracion 11 para concentrar el contenido del deposito 6; y una unidad de recogida 12, que comprende un deposito 13 (en particular, una bolsa de recogida) para recoger los eritrocitos tratados.

El sistema de canales 2 conecta (es decir, permite el paso de fluido) la unidad de introduccion 3, la unidad de separacion 4, la unidad de combinacion 5, la unidad de alimentacion 8, la unidad de concentracion 11 y la unidad de recogida 12.

En particular, el sistema de canales 2 consiste en uno o mas canales. Mas en particular, el sistema 2 comprende un canal de conexion 14 entre la unidad de separacion 4 y la unidad de combinacion 5.

Segun realizaciones ventajosas, en el presente texto, a menos que se especifique lo contrario, por canal se ha previsto un conducto que esta fabricado de material elasticamente deformable y, segun algunas realizaciones, es esencialmente transparente en al menos algunas partes. En particular, el conducto esta fabricado de silicona, PVC u otros polfmeros. Ademas, tambien puede contener insertos textiles para mejorar la resistencia.

El aparato 1 comprende una unidad de control 15, que se adapta para ajustar el funcionamiento del aparato 1 .Las figuras. 1-3 muestran las conexiones electricas (o conexiones por ondas electromagneticas) entre la unidad de control y los diferentes componentes del aparato 1 por medio de lmeas finas. Ventajosamente, la unidad de control 15 comprende una unidad de control electrico y una interfaz de operador (HMI), que se proporciona por ejemplo, con una pantalla y/o un teclado a traves de los cuales el operador puede modificar y/o visualizar los parametros operativos y las especificaciones de funcionamiento.

Segun algunas realizaciones, la unidad de introduccion 3 comprende un septo perforable 16 (o en cualquier caso una conexion), a traves del cual se puede inyectar (o conectar) la muestra de sangre, (por ejemplo, por medio de una jeringa 17) en el canal 18 (en en particular, un conducto) del sistema de canales 2. La unidad de introduccion 3 comprende tambien medios de ajuste 19 (en particular, una valvula), que se disponen a lo largo del canal 18 y que se adaptan para ajustar el flujo a lo largo del canal 18. Segun algunas realizaciones, el canal 18 se conecta al canal 14 entre la unidad de separacion 4 y la unidad de combinacion 5.

En particular, los medios de ajuste 19 se adaptan para ocluir totalmente el canal 18 (a fin de impedir sustancialmente el paso de fluido a lo largo del canal 18) y permitir el flujo libre de fluido a traves del canal 18. Mas en particular, los medios de ajuste 19 comprenden elementos de sujecion que se adaptan para deformar el canal 18 para ocluir

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

totalmente el lumen del canal 18. Los medios de ajuste 19 son operables por la unidad de control 15.

Segun algunas realizaciones, la unidad de separacion 4 comprende un conjunto de centrifugacion 20 para separar los eritrocitos y/o los eritrocitos tratados de los otros componentes de la muestra. Un deposito 21 (en particular, una bolsa de recogida) se adapta para recoger lo que se ha separado de los eritrocitos por la unidad de separacion 4 (en particular) la unidad de centrifugacion 20. El deposito 21 se conecta a la unidad de centrifugacion 20 por un canal 22 (en particular un canal del sistema 2).

Segun algunas realizaciones, la unidad de centrifugacion 20 comprende una placa 23 (esencialmente horizontal) adaptada para rotar y un recipiente de separacion 24 montado en la placa 23. Mas en particular, el grupo de centrifugacion 20 comprende un motor 25 (en particular, un motor de corriente continua con sensores para la deteccion de la velocidad, la direccion y la corriente), que se adapta para rotar la placa 23 alrededor de un eje esencialmente vertical.

El aparato 1 tambien comprende un sensor 26 (o mas sensores) para detectar aire, la presion parcial de oxfgeno, dioxido de carbono, hemoglobina, cianohemoglobina, hematocritos, osmolaridad, sensores opticos para la medicion de la absorbancia/transmitancia, medicion de la fluorescencia, resonancia magnetica, medicion de ondas acusticas (ecograffa) y/u otros parametros aguas arriba de la unidad de separacion 4 con respecto a la unidad de introduccion 3. En particular, el sensor 26 se dispone a lo largo del canal 14 entre el canal 18 y la unidad centrifugacion 20. El sensor 26 se conecta a la unidad de control 15 y se adapta para comunicar lo que se ha detectado a lo largo del canal 14 a la unidad de control 15. Segun realizaciones espedficas, el sensor 26 se adapta para detectar oxfgeno (y/o aire) aguas arriba de la unidad de separacion 4 con respecto a la unidad de introduccion 3.

En particular, el sensor 26 es un sensor de ultrasonidos (para la deteccion de burbujas de aire). El canal 14 tiene (al menos en el sensor 26) una dureza Shore A (medida segun la norma ASTM D2240) inferior a 70 (y en particular superior a 50, mas espedficamente superior a 60). De este modo, el sensor 26 puede adherirse apropiadamente al canal 14 (y por lo tanto realizar actividades de deteccion con mayor precision).

El sensor 26 es por ejemplo un detector de ultrasonidos AD8/AD9 de Introtek®. El canal 14 se fabrica por ejemplo de PVC XS de Sorin Group® Italia (al menos en el area del sensor 26).

El sensor 26 permite limitar la presencia de agentes contaminantes en el aparato 1 y mejorar la eficacia y la precision de la introduccion en los eritrocitos. Ademas, el sensor 26 permite obtener la discriminacion exacta entre el aire y los lfquidos durante el proceso automatizado, asegurando asf que las etapas se realicen correctamente, y que no hay aire donde debena haber lfquido, y viceversa. El sensor 26 favorece el correcto rendimiento del proceso en su version mas automatizada.

La unidad de alimentacion 8 comprende un deposito 27 (en particular, una bolsa), que se conecta al sistema 2 a traves del canal 9 del sistema 2. El deposito 27 contiene la primera solucion mencionada anteriormente.

La unidad de alimentacion comprende otro deposito 28 (en particular, una bolsa), que se conecta al sistema 2 a traves del canal 10 del sistema 2. El deposito 28 contiene la segunda solucion mencionada anteriormente.

La unidad de introduccion 8 comprende medios de ajuste 29 (en particular, una valvula), que se disponen a lo largo del canal 9 y que se adaptan para ajustar el flujo a lo largo del canal 9.

La unidad de introduccion 8 comprende medios de ajuste 30 (en particular, una valvula), que se disponen a lo largo del canal 10 y que se adaptan para ajustar el flujo a lo largo del canal 10.

En particular, los medios de ajuste 29 y 30 se adaptan para ocluir totalmente los canales 9 y 10, respectivamente (a fin de evitar esencialmente el paso de fluido a lo largo de los canales 9 y 10, respectivamente) y permitir que el fluido fluya libremente a traves de los canales 9 y 10, respectivamente. Mas en particular, los medios de ajuste 29 y 30 comprenden elementos de sujecion correspondientes que se adaptan para deformar los canales 9 y 10, respectivamente, a fin de ocluir totalmente el lumen. Los medios de ajuste 29 y 30 son operables (independientemente unos de otros) por la unidad de control 15.

La unidad de alimentacion 8 comprende tambien medios de bombeo 31, que se adaptan para mover la primera y/o la segunda solucion en direccion a la unidad de combinacion 5 (o unidad de separacion 4). En particular, los medios de bombeo 31 se disponen a lo largo de un canal 32 (del sistema 2) para mover la primera y/o la segunda solucion a traves del canal 32. El canal 32 conecta los canales 9 y 10 al canal 14.

Segun algunas realizaciones, los medios de bombeo 31 comprenden una bomba peristaltica. Mas en particular, los medios de bombeo 31 comprenden un rotor, sobre el que se montan uno o mas rodillos, cuyo canal de deformacion (estrangulacion) 32 se mueve repetidamente a lo largo de un segmento de canal 32.

Ventajosamente, la unidad de recogida 12 comprende medios de ajuste 33, que son operables por la unidad de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

control 15 para ajustar el flujo en direccion al deposito 13 desde el sistema 2. En particular, los medios de ajuste 33 se disponen a lo largo de un canal 34 (del sistema 2), que se conecta al deposito 13.

Los medios de ajuste 33 son estructuralmente esencialmente identicos a los medios de ajuste 29 y 30 y funcionan en el canal de 86,36 cm de una manera sustancialmente identica al igual que los medios de ajuste 29 y 30 en los canales 9 y 10.

Ventajosamente, la unidad de combinacion 5 comprende un dispositivo de mezcla 35 operable por la unidad de control 15 para mover el deposito 6 con el fin de mezclar el contenido del mismo. En particular, la unidad de combinacion 5 comprende una placa de soporte 36 en el deposito para almacenamiento 6; y un accionador (del tipo conocido y no mostrado) para mover (es decir, bascular) la placa 36 y por lo tanto mezclar el contenido del deposito 6.

El accionador anteriormente mencionado comprende un motor a pasos y 4 sensores de posicion para controlar la posicion horizontal de la placa 36, la oscilacion en un angulo de hasta +/- 30° y el mantenimiento de un angulo de hasta 45° (se adopta esta posicion mas inclinada durante el vaciado del deposito 6).

Ventajosamente, la unidad de combinacion 5 tambien comprende un elemento de calentamiento (del tipo conocido y no mostrado, por ejemplo una resistencia electrica) controlable por la unidad de control 15 para calentar el contenido del deposito 6. El funcionamiento del elemento de calentamiento se controla por sondas de temperatura de tipo conocido y no mostrado para controlar el funcionamiento del mismo por retroalimentacion por medio de la unidad de control 15.

Ventajosamente, la unidad de combinacion 5 tambien comprende un elemento que mide continuamente el peso (del tipo conocido y no mostrado, por ejemplo una celda de carga) controlable por la unidad de control 15 para medir el peso (o volumen) contenido en el deposito 6.

Segun algunas realizaciones, la unidad de concentracion 11 comprende un filtro 37 (en particular un hemofiltro o un filtro de dialisis) para separar al menos parcialmente los eritrocitos tratados por un lfquido (en particular, una solucion acuosa, tal como por ejemplo la primera y la segunda soluciones, la solucion de sellado y/o una solucion fisiologica).

La unidad de concentracion 11 comprende un aspirador 38 (en particular, una bomba de vado, que tambien puede funcionar a la inversa como un compresor en soluciones particulares de la presente invencion, que no se divulgan en la presente memoria), que se controla por la unidad de control 15 y que se adapta para aspirar al menos una parte del lfquido a traves del filtro 37. El aspirador 38 se controla por uno o mas sensores de presion de tipo conocido (no mostrado en la presente memoria).

Segun algunas realizaciones de la presente invencion, el aspirador 38 puede introducir aire en el interior del sistema de canales 2, para someter a ensayo la estanqueidad hidraulica del mismo y verificar su correcto posicionamiento con respecto a los medios de ajuste sobre los que se posiciona.

La unidad de concentracion 11 tambien comprende un deposito 39 (en particular, una bolsa o un contenedor ngido) para recoger el lfquido que se ha pasado a traves del filtro 37.

Los medios de bombeo 40 tambien se proporcionan para llevar el contenido del deposito 6 en contacto con el filtro 37. En particular, el sistema 2 comprende un canal 41, a traves del cual, en uso, el material a filtrar y ya sometido a filtracion pasa desde el deposito 6 al filtro 37 y viceversa; y, segun algunas realizaciones, se crea un canal de succion 42, que conecta el filtro 37 al deposito 6 y en el area de la cual se crea la presion requerida para mover los fluidos a lo largo del canal 41.

Los medios de bombeo 40 se disponen a lo largo del canal 42 y comprenden ventajosamente una bomba peristaltica. Mas en particular, los medios de bombeo 40 comprenden un rotor, sobre el que se montan uno o mas rodillos, cuyo canal de deformacion (estrangulacion) 32 se mueve repetidamente a lo largo de un segmento de canal 32.

El sistema de canales 2 tambien comprende un canal 43, que conecta el filtro 37 al deposito 39; y un canal 44 que conecta el deposito 39 al aspirador 38.

El aparato 1 tambien comprende otra unidad de alimentacion 45 para introducir una tercera solucion (en particular, una solucion fisiologica). En particular, la unidad de alimentacion 45 comprende medios de ajuste 46, que son operables por la unidad de control 15 para ajustar el flujo de la unidad de alimentacion 45.

Segun la realizacion mostrada, los medios de ajuste 46 se disponen a lo largo de un canal 47 (del sistema 2). Los medios de ajuste 46 son estructuralmente esencialmente identicos a los medios de ajuste 29 y 30 y funcionan en el canal de 119,38 cm de una manera esencialmente identica al igual que los medios de ajuste 29 y 30 en los canales 9 y 10.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Ventajosamente, la unidad de alimentacion 45 comprende un deposito 48 (en particular, una bolsa), que contiene la solucion fisiologica, y se conecta al sistema de canales 2, en particular, a traves del canal 47.

El aparato 1 tambien comprende medios de bombeo 49, que son operables por unidad de control 15 y que se adaptan para mover fluidos al menos entre las unidades de introduccion, separacion, combinacion y recogida 3, 4, 5 y 12. Ventajosamente, los medios de bombeo 49 se adaptan para mover los fluidos entre las unidades de introduccion, separacion, combinacion, recogida y alimentacion 3, 4, 5, 12 y 45.

Los medios de bombeo 49 se disponen a lo largo del canal 14. Segun algunas realizaciones, los medios de bombeo 49 comprenden una bomba peristaltica. Mas en particular, los medios de bombeo 49 comprenden un rotor, sobre el que se montan uno o mas rodillos, cuyo canal de deformacion (estrangulacion) 14 se mueve repetidamente a lo largo de un segmento de canal 14.

Ventajosamente, la unidad de introduccion 3 y la unidad de recogida 12 se conectan al canal de conexion 14 entre los medios de bombeo 49 y la unidad de combinacion 5. La unidad de alimentacion 8 (y posiblemente la unidad de alimentacion 45) tambien se conectan al canal de conexion 14 entre los medios de bombeo 49 y la unidad de combinacion 5.

Segun algunas realizaciones, el aparato comprende tambien medios de ajuste 50, que son operables por la unidad de control 15 y que se disponen a lo largo de dicho canal 14. En particular, los medios de ajuste 50 se disponen entre la unidad de alimentacion 8 y la unidad de separacion 4.

Los medios de ajuste 50 son estructuralmente esencialmente identicos a los medios de ajuste 29 y 30 y funcionan en el canal 14 de una manera sustancialmente identica al igual que los medios de ajuste 29 y 30 en los canales 9 y 10.

Segun algunas realizaciones, los medios de ajuste 50 se disponen entre la unidad de separacion 4 y la unidad de alimentacion 8. Segun realizaciones espedficas, los medios de ajuste 50 se disponen entre la unidad de introduccion 3 y la unidad de recogida 12 (y posiblemente la unidad de alimentacion 45) por un lado y la unidad de combinacion 5 por otro lado. Segun las realizaciones mostradas, los medios de ajuste 50 se disponen entre los medios de bombeo 49 y la unidad de combinacion 5.

Segun algunas realizaciones que no se muestran, el aparato 1 no tiene medios de ajuste 50.

Ventajosamente, el aparato 1 tambien comprende un dispositivo de pesaje 51 que se adapta para detectar el peso de los depositos 27 y 28. El dispositivo de pesaje 51 tambien se adapta para detectar el peso del deposito 39. Ventajosamente, el dispositivo de pesaje 51 se adapta para detectar el peso del deposito 21. Segun algunas realizaciones (no mostradas), el dispositivo de pesaje 51 se adapta para detectar el peso del deposito 48.

Segun algunas realizaciones (no mostradas), el dispositivo de pesaje 51 se adapta para detectar el peso de la unidad de introduccion 3.

El dispositivo de pesaje 51 se adapta para transmitir los datos detectados a la unidad de control 15. En particular, la unidad de control 15 se adapta para ajustar el funcionamiento de los medios de ajuste 29 y 30 de los medios de bombeo 31 y del aspirador 38 en funcion de los pesos de los depositos 27, 28 y 39 detectados por los dispositivos de pesaje 51.

Segun algunas realizaciones, el aspirador 38 puede introducir aire en el interior del sistema de canales 2 antes de que el operador introduzca la jeringa 17 que contiene la sangre, para someter a ensayo su estanqueidad hidraulica y verificar su correcto posicionamiento con respecto a los medios de ajuste en el que se posiciona.

Una breve descripcion del funcionamiento del aparato 1 se divulga en adelante comenzando en el momento en el que un operador introduce una muestra de sangre a traves del septo 16 por medio de la jeringa 17 (que tambien podna reemplazarse con una bolsa). La siguiente descripcion especifica, a menos que se indique explfcitamente lo contrario, que las diferentes partes del aparato 1 se controlan por la unidad de control 15.

Durante la inyeccion de la muestra, los medios de ajuste 50, 33 y 46 se mantienen cerrados mientras que los medios de ajuste 19 se mantienen abiertos y los medios de bombeo 49 mueven la muestra en direccion a la unidad de separacion 4. El motor 25 se hace funcionar de manera que rote la placa 23 (y el recipiente de separacion 24). Cuando la muestra completa ha entrado en un recipiente de separacion 24, el sensor 26 detecta la presencia de compuestos (en particular oxfgeno) a lo largo del canal 14, los medios de ajuste 19 se cierran y los medios de ajuste 46 se abren de manera que la solucion fisiologica alcance el recipiente de separacion 24.

En este punto, el recipiente de separacion 24 separa los eritrocitos del plasma y otras celulas, que se llevan al deposito 21.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Despues de la separacion del plasma, el motor 25 se detiene y los eritrocitos se llevan al deposito 6 por medios 49 de bombeo operativos y medios 19, 46 y 33 de ajuste de mantenimiento cerrados y medios 50 de ajuste abiertos.

En este punto, los medios de bombeo 49 se detienen y los medios de bombeo 31 funcionan con el fin de llevar la primera solucion al deposito 6. Durante la transferencia de la primera solucion en el interior del deposito 6, los medios de ajuste 30 y 50 (en particular, tambien los medios de ajuste 19, 33 y 46) se mantienen cerrados mientras que los medios de ajuste 29 se mantienen abiertos.

El funcionamiento de los medios de bombeo 31 (y por lo tanto la cantidad de la primera solucion llevada al deposito 1) se ajusta por la unidad de control 15 sobre la base del peso (en particular, de la variacion del peso) del deposito 27 detectado por el dispositivo pesaje 51.

Segun realizaciones alternativas, los medios de ajuste 50 se mantienen abiertos para que parte de la primera solucion alcance el recipiente de separacion 24 con el fin de lavar el recipiente de separacion 24. En este caso, la porcion de la primera solucion que se lleva a un recipiente de separacion 24 se transfiere al deposito 6 que opera los medios de bombeo 49.

Una vez que la primera solucion se ha introducido en el deposito 6, los medios de bombeo 31 se bloquean y el accionador de la placa 36 se hace funcionar de manera que se incline suavemente el deposito 6. La inclinacion prosigue durante unos 5-20 minutos. De esta manera, los eritrocitos son al menos parcialmente hinchados.

Despues de la inclinacion, el contenido del deposito 6 se lleva al recipiente de separacion 24 por los medios 49 de bombeo operativos y los medios 50 de ajuste abiertos de mantenimiento.

En un recipiente de separacion 24 (cuando los medios de bombeo 49 se detienen) los eritrocitos al menos parcialmente hinchados se concentran por el funcionamiento del motor 25.

Despues de haber concentrado los eritrocitos, el motor 25 se detiene y los medios de bombeo 49 se activan a fin de llevar los eritrocitos al menos parcialmente hinchados de nuevo al deposito 6.

En este punto, los medios de ajuste 50 se cierran y los medios de bombeo 31 funcionan manteniendo de nuevo los medios de ajuste 29 abiertos y los medios de ajuste 30 cerrados con el fin de llevar la segunda solucion al deposito 6.

Segun realizaciones alternativas, los medios de ajuste 50 se mantienen abiertos para que parte de la segunda solucion alcance el recipiente de separacion 24 con el fin de lavar el recipiente de separacion 24. En este caso, la porcion de la segunda solucion que se lleva a un recipiente de separacion 24 se transfiere al deposito 6 que opera los medios de bombeo 49.

El funcionamiento del medio de bombeo 31 (y por lo tanto la cantidad de la segunda solucion llevada al deposito 1) se ajusta por la unidad de control 15 sobre la base del peso (en particular, de la variacion del peso) del deposito 28 detectado por el dispositivo de pesaje 51.

Una vez que la segunda solucion se ha introducido en el deposito 6, los medios de bombeo 31 se bloquean y el accionador de la placa 36 se hace funcionar de manera que se incline suavemente el deposito 6. La operacion de inclinacion prosigue durante aproximadamente 1-30 minutos, ventajosamente 5-20 minutos. De esta manera, los eritrocitos se lisan al menos parcialmente. Durante la mezcla del deposito 6, los medios de ajuste 50 se mantienen cerrados.

En este punto, los medios de bombeo 40 funcionan para llevar el contenido del deposito 6 al filtro 37 a traves del canal 41. Cuando los eritrocitos han alcanzado el filtro 37, los medios de bombeo 40 se detienen y el aspirador 38 se hace funcionar entonces a fin de concentrar los eritrocitos al menos parcialmente lisados. La concentracion se realiza hasta recuperar una cantidad apropiada de fluido en el deposito 39. El contenido correcto del deposito 39 se mide mediante la deteccion de la variacion del peso del deposito 39 por medio del dispositivo de pesaje 51.

En otras palabras, el funcionamiento del aspirador 38 (y por lo tanto la cantidad de la solucion acuosa llevada al deposito 39) se ajusta por la unidad de control 15 sobre la base del peso (en particular, de la variacion del peso) del deposito 39 detectado por el dispositivo de pesaje 51.

Despues de haber concentrado los eritrocitos al menos parcialmente lisados, el aspirador 38 se detiene y los medios de bombeo 40 funcionan a fin de llevar los eritrocitos de nuevo al deposito 6.

Por lo tanto, el operador inyecta el compuesto a traves de la entrada 7 y, posteriormente, la placa 36 se inclina durante aproximadamente 1-45 minutos.

Despues de la inclinacion, el operador inyecta la solucion de sellado en el deposito 6 a traves de la entrada 7. En

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

este punto, el deposito se inclina durante aproximadamente 10-40 minutos a una temperatura de aproximadamente 25-40 °C para obtener los eritrocitos al menos parcialmente tratados.

El contenido del deposito 6 se transfiere por lo tanto al deposito 13 mediante los medios 49 de bombeo operativos, los medios 50 y 33 de ajuste de mantenimiento abiertos y los medios 46 y 19 de ajuste cerrados (en particular tambien los medios de ajuste 29 y 30).

Segun una realizacion (no mostrada), el aparato 1 no tiene medios de bombeo 31. En este caso, la primera y la segunda soluciones se mueven en virtud de los medios de bombeo 49 y apropiadamente controlan los medios de ajuste anteriormente mencionados.

La Figura 3 muestra una variante del aparato 1 que difiere del aparato 1 de las figuras 1 y 8 solo puesto que el aparato 1 no tiene medios bombeo 40, comprende los medios de ajuste V (en particular, dispuestos a lo largo del canal 14 entre los medios de bombeo 49 y la unidad de separacion 4) y el canal 42 se conecta al canal de conexion 14 (en particular, entre los medios de bombeo 49 y la unidad de separacion 4). En este caso, la transferencia del contenido del deposito 6 al filtro 37 se realiza por los medios 49 de bombeo operativos y los medios 50 de ajuste de mantenimiento abiertos y los medios de ajuste V cerrados.

Los medios de ajuste V son estructuralmente esencialmente identicos a los medios de ajuste 29 y 30 y funcionan en el canal 14 de una manera sustancialmente identica al igual que los medios de ajuste 29 y 30 en los canales 9 y 10.

La figura 2 muestra una variante del aparato 1 que permite concentrar los eritrocitos tratados antes de la transferencia al deposito 13. La variante de la figura 2 se diferencia de la variante de las figuras. 1 y 8 exclusivamente puesto que comprende un filtro adicional 52 (en particular, un hemofiltro o filtro de dialisis) y los medios de ajuste 53 y 54 (operables por la unidad de control 15). El filtro 52 y los medios de ajuste 53 se montan entre los canales 41 y 42 y se adaptan para concentrar al menos los eritrocitos parcialmente tratados (y lavados) antes de que los eritrocitos se transfieran al deposito 13. Los medios de ajuste 54 se disponen a lo largo del canal 41 entre el deposito 6 y el filtro 37.

Los medios de ajuste 53 y 54 son estructuralmente esencialmente identicos a los medios de ajuste 29 y 30 y funcionan de una manera sustancialmente identica al igual que los medios de ajuste 29 y 30.

En uso, en particular, despues de haber obtenido los eritrocitos al menos parcialmente tratados en el deposito 6, el contenido del deposito 6 se lleva al filtro 52 mediante los medios 40 de bombeo operativos y los medios 54 de ajuste de mantenimiento cerrados y los medios de ajuste 53 abiertos. Cuando los eritrocitos han alcanzado el filtro 52, los medios de bombeo 40 se detienen y el aspirador 38 se hace funcionar a fin de concentrar los eritrocitos al menos parcialmente tratados. La concentracion se realiza hasta recuperar una cantidad apropiada de fluido en el deposito 39. Despues de haber concentrado los eritrocitos al menos parcialmente tratados, el aspirador 38 se detiene y los medios de bombeo 40 funcionan a fin de llevar los eritrocitos de nuevo al deposito 6.

Ventajosamente, el aparato 1 comprende un dispositivo desechable 55 (vease, en particular, la figura 9) que comprende todas las partes del aparato que entran en contacto directo con los eritrocitos. En particular, el dispositivo 55 comprende un sistema de canales 2, los depositos 6 y 13 y la entrada 7. Segun algunas realizaciones, (por ejemplo, que se muestran en la figura 9), el dispositivo 55 comprende tambien el(los) filtro/s 37 y/o 52, los depositos 27, 28 y 48 y el recipiente de separacion 24. Ventajosamente, el dispositivo 55 tambien comprende los depositos 21 y 39.

Cabe senalar que el dispositivo 55 comprende las unicas partes que estan en contacto o potencialmente podnan entrar en contacto con la sangre. El hecho de que el dispositivo 55 sea desechable simplifica considerablemente el uso del aparato 1 y mejora la seguridad y la velocidad de uso.

El aparato 1 comprende tambien un dispositivo reutilizable 56, que se adapta para servir como un soporte sobre el que se monta el dispositivo 55. Algunos detalles de una realizacion del dispositivo 56 se muestran en la figura 4.

El dispositivo 56 comprende medios de bombeo 49 y medios de ajuste 29, 30 y 33. Segun algunas realizaciones, (como las mostradas en la figura 4), el dispositivo 56 comprende tambien medios de bombeo 49, medios de ajuste 19 y 46, el motor que rota la placa 36 (y, de manera ventajosa, la placa 36). El dispositivo 56 tambien comprende ventajosamente el aspirador 38 (y ventajosamente el sensor 26 y el dispositivo de pesaje 51). Segun realizaciones espedficas, el dispositivo 56 comprende tambien medios de ajuste 50. En particular, el dispositivo 56 comprende tambien medios de bombeo 31 y/o 40.

En la figura 4, los numeros 57 y 58 indican un brazo de cierre y una carcasa para el recipiente de separacion 24, respectivamente.

El aparato 1 divulgado anteriormente tiene varias ventajas con respecto al estado de la tecnica. En particular, el aparato 1 permite automatizar casi todas las etapas operativas para obtener los eritrocitos tratados. De esta manera,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

el tiempo y la posibilidad de que el operador cometa errores durante el procedimiento se reducen considerablemente.

El aparato 1 tambien es relativamente simple, facil de llevar y rentable. El uso del aparato 1 se simplifica aun mas y la seguridad se mejora adicionalmente ya que el aparato 1 comprende un dispositivo 55 de tipo desechable.

A este respecto, cabe senalar que, segun realizaciones ventajosas, el aparato comprende no mas de tres medios de bombeo (en particular, entre dos y tres) y al menos cuatro medios de ajuste (ventajosamente 5).

Ademas, el aparato 1 divulgado anteriormente es extremadamente flexible, permitiendo, entre otras cosas, obtener eritrocitos tratados con diferentes concentraciones de compuesto introducido y tambien con diferentes hematocritos y volumenes finales.

El aparato 1 divulgado anteriormente permite un alto grado de automatizacion y control (sin la necesidad de un control humano por un operador) de todas las secuencias de acciones que permiten introducir al menos un compuesto en los globulos rojos.

Segun un segundo aspecto de la presente invencion, se proporciona un kit desechable para el aparato 1; el kit comprende un dispositivo 55 como se ha definido anteriormente o partes del dispositivo 55 que van a ensamblarse para obtener el dispositivo 55.

Segun un tercer aspecto de la presente invencion, el dispositivo 56 se proporciona como se ha definido anteriormente.

Segun un cuarto aspecto de la presente invencion, se proporciona un metodo para introducir al menos un compuesto (en particular, como se ha definido anteriormente) en el interior de los eritrocitos. El metodo comprende una etapa de lisis, durante la cual los eritrocitos que son al menos parcialmente lisados se suspenden en una segunda solucion hipotonica (en particular, como se ha definido anteriormente); y una primera etapa de concentracion, que es posterior a la etapa de lisis y durante la cual los eritrocitos al menos parcialmente lisados se concentran por medio de hemofiltracion.

Ventajosamente, el metodo comprende una etapa de hinchamiento, que precede a la etapa de lisis y durante la cual los eritrocitos se hinchan al ser suspendidos en una primera solucion hipotonica (en particular como se ha definido anteriormente) a fin de obtener una suspension; la primera solucion hipotonica tiene una mayor concentracion de solutos con respecto a la segunda solucion hipotonica.

Segun algunas realizaciones, el metodo se realiza con el aparato segun el primer aspecto de la presente invencion.

El metodo tambien comprende una etapa de combinacion, que es simultanea (o sigue) a la primera etapa de concentracion y durante la cual los eritrocitos al menos parcialmente lisados se combinan con el compuesto; una etapa de cierre, que sigue a la etapa de combinacion y durante la cual los eritrocitos al menos parcialmente lisados se cierran de manera que al menos encapsulan parcialmente el compuesto y obtienen los eritrocitos tratados; y una segunda etapa de concentracion, que sigue a la etapa de cierre y durante la cual se concentran los eritrocitos tratados.

La concentracion de los eritrocitos tratados despues de la etapa de cierre (y antes de la segunda etapa de concentracion) es inferior que los eritrocitos tratados despues de la segunda etapa de concentracion. Mas precisamente, al final de la etapa de cierre (y antes de la segunda etapa de concentracion) los eritrocitos tratados estan en solucion en una primera concentracion; al final de la segunda etapa de concentracion, los eritrocitos tratados estan en solucion en una segunda concentracion mayor que la primera concentracion.

Durante la segunda etapa de concentracion, el agua se retira de la solucion de eritrocitos tratados. En otras palabras, la solucion de eritrocitos tratados al final de la etapa de cierre (y antes de la segunda etapa de concentracion) tiene una fraccion de agua mas alta con respecto a la fraccion de agua de la solucion de eritrocitos tratados al final de la segunda etapa de concentracion.

Cabe senalar que la presente invencion, entre otras cosas, se deriva del hecho de que, sorprendentemente, no todas las concentraciones de eritrocitos tratados conducen a resultados efectivos. Este problema estaba completamente ausente en el estado de la tecnica.

Ventajosamente, durante la segunda etapa de concentracion, los eritrocitos tratados se concentran utilizando un hemofiltro.

Segun algunas realizaciones, el metodo comprende una tercera etapa de concentracion, que sigue a la etapa de hinchamiento y precede a la etapa de lisis y durante la cual se reduce el contenido de agua de la suspension, aumentando en consecuencia la concentracion de los eritrocitos en la suspension.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Segun algunas realizaciones, la tercera etapa de concentracion se realiza mediante el uso de una etapa de separacion que comprende una unidad de centrifugacion (en particular como se ha definido anteriormente).

Ventajosamente, durante la etapa de cierre, los eritrocitos al menos parcialmente lisados se colocan en contacto con la solucion de sellado (en particular como se ha definido anteriormente).

Segun algunas realizaciones, el metodo comprende una etapa de lavado, que sigue a la etapa de cierre (y precede posiblemente a la segunda etapa de concentracion) y durante la cual los eritrocitos tratados se lavan con una solucion fisiologica. La etapa de lavado se adapta para eliminar el compuesto que no ha entrado en los eritrocitos y otras sustancias no deseadas (por ejemplo, protemas o solucion de sellado).

Segun un quinto aspecto de la presente invencion, se proporciona un metodo para introducir al menos un compuesto (en particular como se ha definido anteriormente) en el interior de los eritrocitos. El metodo comprende una etapa de lisis, durante la cual los eritrocitos que son al menos parcialmente lisados se suspenden en una segunda solucion hipotonica (en particular como se ha definido anteriormente); y una primera etapa de concentracion, que es posterior a la etapa de lisis y durante la cual los eritrocitos al menos parcialmente lisados se concentran por medio de hemofiltracion.

Ventajosamente, el metodo comprende una etapa de hinchamiento, que precede a la etapa de lisis y durante la cual los eritrocitos se hinchan al ser suspendidos en una primera solucion hipotonica (en particular como se ha definido anteriormente) a fin de obtener una suspension; la primera solucion hipotonica tiene una mayor concentracion de solutos con respecto a la segunda solucion hipotonica.

El metodo tambien comprende una etapa de combinacion, que sigue a la etapa de concentracion y durante la cual los eritrocitos al menos parcialmente lisados se combinan con el compuesto (o simultaneamente con varios compuestos al mismo tiempo); una etapa de cierre, que sigue a la etapa de combinacion y durante la cual los eritrocitos al menos parcialmente lisados se cierran de manera que al menos parcialmente encapsulan el compuesto (o compuestos) y obtienen eritrocitos tratados; y una segunda etapa de concentracion, que sigue a la etapa de hinchamiento y precede a la etapa de lisis y durante la cual el contenido de agua de la suspension se reduce aumentando en consecuencia la concentracion de los eritrocitos en la suspension.

Segun algunas realizaciones, el metodo segun el quinto aspecto de la presente invencion tiene una o mas caractensticas del metodo del cuarto aspecto de la presente invencion (en este caso, cabe destacar que la segunda etapa de concentracion del quinto aspecto corresponde a la tercera etapa de concentracion del cuarto aspecto y viceversa).

Segun un sexto aspecto de la presente invencion, se proporciona el uso de un aparato del primer aspecto de la presente invencion para la introduccion de al menos un compuesto en el interior de los eritrocitos.

Ventajosamente, el compuesto se define segun la divulgacion anterior.

Segun algunas realizaciones, el uso del aparato tiene lugar segun el cuarto y/o quinto aspecto de la presente invencion.

Segun un aspecto espedfico de la invencion, se proporciona un aparato para la introduccion de al menos un compuesto en el interior de los eritrocitos; el aparato 1 es similar (esencialmente identico) al que se divulga segun el primer aspecto de la presente invencion y difiere del mismo puesto que ademas o como una alternativa al sensor 26, tiene una o mas de las siguientes caractensticas. El aparato 1 comprende el deposito 27 y el deposito 28 para que contengan la primera y la segunda solucion, respectivamente. Los canales 9 y 10 se conectan al deposito 27 y al deposito 28, respectivamente. El aparato 1 comprende una unidad de pesaje 51 para pesar el tercer y el cuarto depositos 27, 28. La unidad de control 15 se adapta para controlar los medios de ajuste 29 en funcion del peso del tercer deposito 27 y los medios de ajuste 30 en funcion del peso del cuarto deposito 28. El aparato 1 comprende un deposito 21 para recoger lo que se ha separado de los eritrocitos por la unidad de separacion 4; un septimo deposito 48 que contiene una tercera solucion (en particular una solucion fisiologica); un canal 47 conectado al deposito 48; y un canal 22 conectado al deposito 21. Los canales 9 y 10 se conectan al deposito 27 y al cuarto deposito 28, respectivamente. El aparato 1 comprende una unidad de pesaje 51 para pesar los depositos 27 y 28, el deposito 21 y el deposito 13. La unidad de control 15 se adapta para controlar los medios de bombeo 31 (y/o 40 y/o 49) en funcion del peso de los depositos 13 (y/o 21 y/o 27 y/o 28 y/o 39 y/o 48).

Segun aspectos adicionales de la presente invencion se proporciona lo siguiente.

La solucion (que contiene eritrocitos tratados y concentrados, es decir, obtenidos despues de la segunda etapa de concentracion) para su uso como un medicamento.

La solucion (que contiene eritrocitos tratados y concentrados, es decir, obtenidos despues de la segunda etapa de concentracion) para su uso en el diagnostico in vivo.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

El uso de la solucion (que contiene eritrocitos tratados y concentrados, es decir, obtenidos despues de la segunda etapa de concentracion) para la produccion de un medicamento.

El uso de la solucion (que contiene eritrocitos tratados y concentrados, es decir, obtenidos despues de la segunda etapa de concentracion) para la produccion de un medicamento.

Una composicion farmaceutica que comprende la solucion (que contiene eritrocitos tratados y concentrados, es decir, obtenidos despues de la segunda etapa de concentracion).

A menos que se indique expresamente lo contrario, el contenido de las referencias (documentos, textos, solicitudes de patentes, etc.) citado en este texto se incorpora integralmente en la presente. En particular, las referencias anteriormente mencionadas se incorporan en la presente memoria por referencia.

Otras caractensticas de la presente invencion resultaran de la siguiente divulgacion de algunas realizaciones del aparato 1 dadas unicamente a tftulo de ilustracion no limitativa.

Ejemplo 1

Este ejemplo divulga los ensayos de funcionamiento del dispositivo de la figura 1. El metodo utilizado en adelante sigue las indicaciones de la descripcion del funcionamiento del aparato 1 divulgado anteriormente con respecto al primer aspecto de la presente invencion.

Se realizaron ocho ensayos de carga con fosfato sodico de dexametasona (empleando 500 mg para cada procedimiento) en los globulos rojos humanos que se derivan a partir de 50 ml de sangre entera procedente de donantes sanos.

Los materiales utilizados para los ensayos son:

• dispositivo de la figura 4;

• dispositivo de la figura 9;

• solucion hipotonica 1 (400 ml con una osmolaridad de 180 mOsm/Kg), solucion hipotonica 2 (200 ml con una osmolaridad de 120 mOsm/kg);

• solucion hipertonica resellada (PIGPA) (NaH2PO4 aproximadamente 33 mM; KCl aproximadamente 1,606 M, NaCl aproximadamente 0,194 M; inosina aproximadamente 0,1 M; adenina aproximadamente 5 mM; ATP aproximadamente 20 mM; glucosa aproximadamente 0,1 M; piruvato aproximadamente 0,1 M; y MgCh aproximadamente 4 mM) (7 ml a 2.500-3.800 mOsm/kg).

• fosfato sodico de dexametasona en una solucion acuosa de 500 mg/20 ml (utilizado por completo)

• solucion salina fisiologica de calidad inyectable (solucion acuosa de NaCl al 0,9 % en peso/volumen) (bolsas de 2 l de los cuales se utilizaron 1,8 l; 0,8 litros para el primer lavado y 1 l para el segundo lavado)

• 50 ml de sangre entera procedente de un donante sano anticoagulada con 10.000 UI de heparina sodica

Resultados

Los datos obtenidos por los ensayos se muestran en la tabla siguiente, donde puede verificarse la reproducibilidad real de los resultados entre diferentes ensayos de la desviacion estandar.

Tabla 1

DESVIACION estAndar MEDIA

Datos en el pre- procedimiento de sangre entera

Volumen de sangre entera (ml) 50,0 0,5

VCM (femtolitros)

87,7 2,1

Hematocritos (%)

40,0 4,6

Datos post- procedimiento

VCM (femtolitros) 80,1 3,9

Hematocritos (%) (sin concentracion adicional)

10,0 1,7

Volumen de recogida (sin concentracion adicional) (ml)

83,9 3,9

Fosfato sodico de dexametasona encapsulado en globulos rojos (mg)

12,30 3,0

Eficacia en la recuperacion de globulos rojos con respecto al numero inicial (%)

43,1 10,3

Datos tras la concentracion final adicional

Hematocritos (%) (tras la concentracion) 60,7 7,2

Final

Volumen de recogida (sin concentracion adicional) (ml) 8,2 2,5

La Tabla 1 muestra los datos la sangre entera del pre-procedimiento, los datos despues del procedimiento de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

encapsulacion (incluyendo la carga del farmaco en los globulos rojos) y, finalmente, el efecto del aumento del hematocrito como consecuencia de la concentracion final por medio de un filtro de hemoconcentracion adicional (o dializador como se muestra en la figura 2).

Mediante la eficacia de la etapa de post-procedimiento se tiene en su lugar por objeto el porcentaje de las celulas de sangre recuperadas con respecto a las celulas de sangre iniciales que comenzaron el proceso y se correlaciona el peso neto de la bolsa de recogida y el valor del hematocrito al final del proceso en relacion con el volumen y el valor del hematocrito inicial de la sangre que se utiliza para el procedimiento.

Los datos anteriores muestran que el objeto de la presente invencion permite obtener eritrocitos cargados de una manera extremadamente efectiva y practica y con rendimientos optimos.

Ejemplo 2

Nanoparticulas superparamagneticas

Las nanoparticulas superparamagneticas ya estan disponibles y se utilizan como agentes de contraste en imagenes por resonancia magnetica (IRM). No obstante, una vez inyectadas en la circulacion sangumea por inyeccion IV, las nanoparticulas se cubren rapidamente por los componentes plasmaticos de la sangre, un proceso conocido como opsonizacion que resulta fundamental en la determinacion de la confianza de las nanoparticulas haciendolas facilmente reconocibles por el sistema de defensa principal del cuerpo, es decir, el sistema de fagocitos mononucleares. Por lo tanto, la encapsulacion de las nanoparticulas superparamagneticas en eritrocitos humanos se ha obtenido mediante el presente aparato, a fin de evitar su rapida eliminacion de la circulacion sangumea y por lo tanto obtener intervalos temporales de imagen mas amplios en aplicaciones de resonancia magnetica intravascular (PCT/EP07/06349 administracion de agentes de contraste para formacion de imagenes por resonancia magnetica). Como ejemplo, la carga del agente de contraste SHU555A se ha realizado mediante el procedimiento divulgado anteriormente y un aparato que son el objeto de la presente patente, como en la figura 1. La concentracion de SHU555A en el interior de los eritrocitos, al final del procedimiento, se determino siguiendo las mediciones de RMN de la relaxividad (T1 y T2) de las muestras. El rendimiento de encapsulacion computado de este modo determino concentraciones SHU555A en los eritrocitos en el intervalo de Fe 1-2,1 mM.

Con el fin de verificar si las celulas cargadas con las nanoparticulas magneticas mediante el aparato divulgado en la figura 1 mantuvieron las propiedades de los eritrocitos nativos, se llevaron a cabo mediciones de algunos indicadores de la integridad celular. Sobre la base de estas mediciones, fue posible establecer que el procedimiento no condujo a modificaciones significativas de las propiedades de GRs, como el volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentracion de hemoglobina corpuscular media (CHCM) que resultan en los intervalos del ejemplo previo (dex 21 P). Como conclusion, las nanoparticulas superparamagneticas seleccionadas se encapsularon con exito dentro de los GRs por medio de la utilizacion del aparato mostrado en la figura 1, proporcionando por lo tanto un producto con los requisitos para su uso en clmicas para utilizarse para fines de diagnostico en IRM (imagen de resonancia magnetica).

Ejemplo 3

Agente de contraste verde de indocianina (ICG)

Otra aplicacion de la tecnica innovadora en relacion con el transporte de moleculas exogenas en globulos rojos se representa por la encapsulacion de agentes de contraste que se van a utilizar en fluoroangiograffa o con otros metodos de deteccion optica y/o de fluorescencia. Como ejemplo, se muestran los resultados de la encapsulacion del agente de contraste verde de indocianina (ICG) obtenido con el aparato como se muestra en la figura 2. Esto se propone como una nueva estrategia para fines de diagnostico y terapeuticos para la visualizacion y/o la fotocoagulacion de nuevos vasos de la coroides en enfermedades degenerativas y vasculares de la retina.

ICG es un agente de contraste infrarrojo (IR) que contiene tricarbocianina y es aprobado por la FDA para uso diagnostico para visualizar la vascularizacion de la retina y para la terapia fotodinamica. Su uso como un agente de contraste saca ventaja del hecho de que la mayona de las moleculas biologicas ni absorben ni emiten en la region cercana de IR, lo que conduce a una fluorescencia libre de interferencias. El uso real de ICG como un marcador fluorescente y el agente fotoestabilizante se limita no obstante por varios factores: inestabilidad en agua, degradacion debido a la luz y al calor, semivida corta en la circulacion sangumea (aproximadamente 2-4 minutos) y rapida depuracion hepatobiliar debido a la union a las protemas plasmaticas. Ademas, las moleculas de ICG pueden difundirse a traves de los vasos y el proceso de difusion podna influir en la semiologfa angiografica. La administracion de ICG en el compartimiento vascular mediante el uso de eritrocitos como portadores permite superar tales limitaciones. De este modo, una vez que la molecula esta dentro de los GRs, esta por un lado protegido de la inactivacion por factores endogenos y, por el otro lado, su encapsulacion en GRs autologos implica una proteccion del organismo contra los efectos toxicos del propio agente (nauseas, vomitos, erupcion cutanea, choque hipotensivo, etc.). A tenor de esto y con el fin de mejorar significativamente las caractensticas de la angiograffa coroidal y de la fotocoagulacion con laser, el aparato en la version mostrada en la figura 2 se utilizo a fin de cargar ICG en los

5

10

15

20

25

30

35

eritrocitos humanos autologos. Despues se cargaron los globulos rojos, que se concentraron de nuevo mediante el uso de un segundo hemofiltro con el fin de obtener la misma cantidad de ICG en un volumen reducido de suspension de eritrocitos que tiene un hematocrito superior y por lo tanto una concentracion de ICG superior.

Cuando el procedimiento de encapsulacion de ICG se completo utilizando el aparato como se define en la figura 2, asf con una etapa final de concentracion adicional de eritrocitos, se obtuvieron 6 ml de ICG que contiene GRs (0,3 pmoli/ml de GR) con un hematocrito del 44 % que se puede aumentar adicionalmente hasta un hematocrito al 60 % mediante la extension de la etapa de concentracion.

Ejemplo 4

Orientacion selectiva de los eritrocitos con sustancias farmacologicamente activas encapsuladas y/o sustancias encapsuladas para su uso diagnostico

La orientacion selectiva a los macrofagos de eritrocitos que contienen farmacos y/o medios de contraste puede conseguirse por el aparato mostrado en la figura siguiendo un procedimiento similar al utilizado en el ejemplo 1. Cuando se utilizo fludarabina como un agente de encapsulacion, se adquirio una concentracion final de 0,8 mM. Los eritrocitos tratados de esta manera se reconocieron por IgGs autologas en porcentajes de mas del 80 % en numero total de celulas procesadas.

Ejemplo 5

Se obtuvo una primera solucion de eritrocitos cargados con verde de indocianina. Esta solucion (que no se concentro despues de cargar la indocianina en los eritrocitos) tema un hematocrito de 6,4 % y se inyecto en un paciente. La figura 10 es una imagen fluoroangiografica del paciente tratado de esta manera.

Se obtuvo una segunda solucion de eritrocitos cargados con verde de indocianina. Esta solucion (que no se concentro despues de cargar la indocianina en los eritrocitos) tema un hematocrito de 54 % y se inyecto en un paciente. La figura 11 es una imagen fluoroangiografica del paciente tratado de esta manera.

A partir de la comparacion de las dos imagenes, resulta evidente que, sorprendentemente, cuando la solucion diluida (figura 10) no permite un diagnostico, la solucion concentrada (figura 11) permite un facil diagnostico.

A este respecto, cabe senalar que, antes de la presente invencion, no era previsible que el resultado de un aumento de la concentracion diera un resultado claro. En particular, es absolutamente sorprendente que los eritrocitos cargados no se dispersaron en el organismo, pero en su lugar se movfan juntos y por lo tanto permiten obtener una imagen extremadamente clara.

Claims (18)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   55

   60

   65

   REIVINDICACIONES

   1. Un aparato para introducir al menos un compuesto en el interior de los eritrocitos; el aparato (1) comprende un sistema (2) de canales de conexion, que incluye un primer y un segundo canal (9, 10); una unidad de introduccion (3) para insertar una muestra que contiene los eritrocitos en el interior del aparato (1); una unidad de separacion (4) para separar los diferentes componentes de la muestra entre sf; una unidad de combinacion (5), que comprende un primer deposito (6) y en el area de la cual los eritrocitos y el compuesto se combinan entre sf para obtener eritrocitos tratados; una entrada (7) para insertar el compuesto en el primer deposito (6); una unidad de alimentacion (8), para introducir una primera solucion a traves del primer canal (9) e introducir una segunda solucion a traves del segundo canal (10); una unidad de concentracion (11) para concentrar el contenido del primer deposito (6); y una unidad de recogida (12), que comprende un segundo deposito (13) para recoger los eritrocitos tratados;

   el sistema (2) de canales conecta la unidad de introduccion (3), la unidad de separacion (4), la unidad de combinacion (5), la unidad de alimentacion (8), la unidad de concentracion (11) y la unidad de recogida (12); el aparato (1) se caracteriza por que comprende una unidad de control (15); y primeros medios de bombeo (49), que son accionables por la unidad de control (15) y que se disenan para mover fluidos al menos entre la unidad de introduccion (3), la unidad de separacion (4), la unidad de combinacion (5) y la unidad de recogida (12); la unidad de alimentacion (8) comprende primeros medios de ajuste (29), que son accionables por la unidad de control (15) y que se disponen a lo largo del primer canal (9) para regular el flujo a lo largo del primer canal (9); y segundos medios de ajuste (30), que son accionables por la unidad de control (15) y que se disponen a lo largo del segundo canal (10) para regular el flujo a lo largo del segundo canal (10);

   la unidad de recogida (12) comprende terceros medios de ajuste (33), que son accionables por la unidad de control (15) y que se adaptan para ajustar el flujo en direccion del segundo deposito (13);

   el aparato se caracteriza por que comprende un sensor de aire (26) para identificar la presencia de aire en el sistema (2) de canales entre la unidad de introduccion (3) y la unidad de separacion (4).
2. 2. El aparato segun la reivindicacion 1, donde la unidad de alimentacion (8) comprende segundos medios de bombeo (31), que son accionables por la unidad de control (15) y que se disenan para mover la primera y la segunda solucion en direccion de la unidad de combinacion (5).
3. 3. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, donde la unidad de combinacion (5) comprende un dispositivo de mezcla (35) controlable por la unidad de control (15) para mover el primer deposito (6) para mezclar el contenido del mismo; y al menos un elemento de calentamiento controlable por la unidad de control (15) para calentar el contenido del primer deposito (6).
4. 4. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, que comprende un tercer deposito (27) y un cuarto deposito (28) para contener la primera y respectivamente la segunda solucion; los primeros y segundos canales (9, 10) se conectan al tercer deposito (27) y al cuarto deposito (28), respectivamente; el aparato (1) comprende una unidad de pesaje (51) para pesar el tercer y el cuarto depositos (27, 28); la unidad de control (15) se adapta para controlar los primeros medios de ajuste (29) en funcion del peso del tercer deposito (27) y los segundos medios de ajuste (30) en funcion del peso del cuarto deposito (28).
5. 5. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, comprende una unidad de alimentacion (45) adicional, que se disena para introducir una tercera solucion (en particular una solucion fisiologica) a lo largo de un tercer canal (47) del sistema (2) de canales y comprende cuatro medios de ajuste (46), que son accionables por la unidad de control (15) y que se disponen a lo largo del tercer canal (47) para regular el flujo a lo largo del tercer canal (47).
6. 6. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, donde el sistema (2) de canales comprende un canal de conexion (14) entre la unidad de combinacion (5) y la unidad de separacion (4); dichos primeros medios de bombeo (49) se disponen a lo largo del canal de conexion (14); la unidad de introduccion (3), la unidad de recogida (12) y posiblemente la unidad de alimentacion (8), y la unidad de alimentacion (45) adicional se conectan al canal de conexion (14) entre los primeros medios de bombeo (49) y la unidad de combinacion (5).
7. 7. El aparato segun la reivindicacion 6, comprende quintos medios de ajuste (50), que son accionables por la unidad de control (15) y que se disponen a lo largo de dicho canal de conexion (14) entre la unidad de alimentacion (8) y la unidad de separacion (4) y entre la unidad de introduccion (3), la unidad de recogida (12) y posiblemente la unidad de alimentacion (45) adicional, por un lado y la unidad de combinacion (5) por otro lado.
8. 8. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, donde la unidad de introduccion (3) comprende sextos medios de ajuste (19), que son accionables por la unidad de control (15) y que se adaptan para regular el flujo a partir de la unidad de introduccion (3).
9. 9. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, donde la unidad de concentracion (11) comprende un filtro (37) para separar al menos parcialmente los eritrocitos tratados del lfquido; un aspirador (38), que se controla por la unidad de control (15) y que se adapta para aspirar al menos una parte del lfquido a traves del filtro (37).
10. 10. El aparato segun la reivindicacion 9, donde la unidad de concentracion (11) comprende un quinto deposito (39)

    5

    10

    15

    20

    25

    30

    35

    40

    45

    para recoger el Ifquido que ha pasado a traves del filtro (37); y terceros medios de bombeo (40) para transportar el contenido del primer deposito (6) en contacto con el filtro (37); el aparato (1) comprende una unidad de pesaje (51) para pesar el quinto deposito (39); la unidad de control (15) se adapta para controlar el aspirador (38) en funcion del peso del quinto deposito (39) detectado por la unidad de pesaje (51).
11. 11. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, donde la unidad de separacion (4) comprende un conjunto de centrifugacion (20) para separar los eritrocitos y/o los eritrocitos tratados de los otros componentes.
12. 12. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, que comprende un tercer deposito (27) y un cuarto deposito (28) para contener la primera y respectivamente la segunda solucion; un sexto deposito (21) para recoger lo que se ha separado de los eritrocitos por la unidad de separacion (4); un septimo deposito (48) que contiene una tercera solucion (en particular una solucion fisiologica); un tercer canal (47) conectado al septimo deposito (48); y un cuarto canal (22) conectado al sexto deposito (21); los primeros y segundos canales (9, 10) se conectan al tercer deposito (27) y respectivamente al cuarto deposito (28); el aparato (1) comprende una unidad de pesaje (51) para pesar los tercer y cuarto depositos (27, 28), el sexto deposito (21) y el segundo deposito (13); la unidad de control (15) se adapta para controlar los medios de bombeo (31, 40, 49) en funcion del peso de los depositos (13, 21, 27, 28, 39, 48).
13. 13. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, que comprende un dispositivo reutilizable (56), que comprende medios de bombeo, medios de ajuste, la unidad de control (15) y posiblemente una placa rotatoria (25) del conjunto de centrifugacion, el sensor de aire (26), el dispositivo de pesaje (51) y el aspirador (38); y un dispositivo desechable (55) que comprende el sistema (2) de canales, los depositos y posiblemente el(los) filtro/s y un recipiente de separacion (24) del conjunto de centrifugacion (20).
14. 14. El aparato segun una de las reivindicaciones precedentes, donde la unidad de combinacion (5) comprende un dispositivo de mezcla (35) controlable por la unidad de control (15) para mover el primer deposito (6) para mezclar el contenido del mismo; y al menos un dispositivo de pesaje para pesar el contenido del primer deposito (6).
15. 15. Un kit desechable para el aparato (1) segun una de las reivindicaciones precedentes; el kit comprende el sistema (2) de canales y los depositos conectados al sistema (2) de canales del aparato (1); el kit se caracteriza por que al menos uno de los canales (14) del sistema (2) de canales tiene al menos un segmento que presenta una dureza Inferior a 70 Shore A; dicho segmento se adapta para disponerse en el sensor (26).
16. 16. El kit segun la reivindicacion 15, comprende al menos un filtro (37) para la unidad de concentracion (11), un recipiente de separacion (24) para un conjunto de centrifugacion (20) para la unidad de separacion (4), un sexto deposito (21) para recoger lo que se ha separado de los eritrocitos por la unidad de separacion (4) y un septimo deposito (48) para contener la tercera solucion (en particular una solucion fisiologica).
17. 17. Un dispositivo reutilizable caracterizado por que se realiza segun la reivindicacion 13.
18. 18. Uso de un aparato para introducir al menos un compuesto en el interior de los eritrocitos; el uso se caracteriza por que el aparato se realiza segun una de las reivindicaciones 1 a 14; el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: agentes farmacologicos activos, peptidos, protemas, hormonas, fosfato sodico de dexametasona y fosfato sodico de betametasona, glutation, toxinas, oligonucleotidos monocatenarios o bicatenarios (que pueden incluir analogos de nucleotidos), nanopartfculas con un diametro de hasta 500 nm, agentes fluorescentes, otros agentes detectables por aparatos opticos, ecograficos, o de resonancia magnetica, y otros agentes de contraste que pueden utilizarse como medios de diagnostico de cualquier clase y tipo.