BR112012027574B1 - aparelho de introdução de pelo menos um composto em eritrócitos, kit descartável para o aparelho e dispositivo reutilizável - Google Patents

Abstract

Aparelho e kit de encapsulação de pelo menos um composto para uso terapêutico e/ou em diagnóstico em eritrócitos. Método e aparelho portátil e altamente autorizado de introdução de pelo menos um composto em eritrócitos, em que o aparelho (1) compreende uma parte reutilizável (56) equipada com elementos mecânicos tais como bombas (31, 40, 49) e válvulas (10, 26, 29, 30, 33, 46, 50) e unidades eletrônicas tais como uma unidade de controle (15); o aparelho (1) também compreende uma parte descartável (55), que é adaptada para entrar em contato com a amostra que contém os eritrócitos e é equipada com um sistema (2) de tubos feitos de material deformável, uma série de reservatórios (6, 13, 21, 27, 28, 39, 48) e um ou mais filtros (37); o aparelho (2) permite concentração adicional dos eritrócitos após o seu tratamento; o aparelho (1) permite a introdução do composto nos eritrócitos virtualmente de forma totalmente automática.

Description

Campo da Técnica

[001] A presente invenção refere-se a um aparelho, kit, usos e método de introdução de pelo menos um composto em eritrócitos.

Antecedentes da Invenção

[002] Muitas tentativas concentraram-se recentemente no desenvolvimento de procedimentos de liberação dirigida de agentes farmacêuticos em locais específicos de pacientes ou na obtenção de liberação lenta de drogas no paciente. Sabe-se que a eficácia de uma droga pode aumentar quando o local alvo apropriado é efetivamente atingido pela droga ou quando a droga é preferencialmente liberada no órgão a ser tratado ou na célula a ser tratada. Além disso, a toxicidade de uma droga pode ser reduzida quando a quantidade total de droga administrada é minimizada, embora mantendo a sua ação terapêutica mediante lenta liberação da droga. O interesse em sistemas de administração de drogas refere-se a agentes convencionais, muitos dos quais são moléculas orgânicas relativamente simples, e a agentes farmacologicamente ativos mais complexos tais como peptídeos, proteínas, enzimas, anticorpos, oligonucleotídeos sem sentido, oligonucleotídeos de isca, citoquinas, ácidos nucleicos, suas combinações etc.

[003] Um campo de interesse recente refere-se ao uso de glóbulos vermelhos do sangue (denominados a seguir “eritrócitos” ou “RBCs”) como veículos para liberar dosagens terapêuticas de drogas na circulação sanguínea em doses baixas ou em um local desejado em pacientes. Os eritrócitos podem ser “carregados” com agentes biologicamente ativos e por meio de um processo no qual as membranas celulares dos eritrócitos são permeabilizadas e um ou mais agentes são adicionados aos eritrócitos, vedando-se novamente as membranas celulares. Esses eritrócitos “carregados” ou “tratados” oferecem diversas vantagens como sistemas de liberação e sistemas de direcionamento de drogas, pois são biodegradáveis, podem ser mantidos na circulação por longos períodos de tempo e podem ser dirigidos a células tais como macrófagos.

[004] Processos de preparação de suspensão celular carregada em uma solução fisiológica são descritos na Patente Alemã n° 23 26 244 e nos pedidos de patentes alemães publicados com o n° (0S) 23 26 161 e 24 95 119, em que as membranas celulares de eritrócitos são lisadas por meio de pressão osmótica e um campo elétrico, respectivamente.

[005] O documento Erythrocites as Carriers of Primaquine-Preparation: Characterization and Evolution (Naresh Talwar et al, Journal of Controled Release, 20 (1992) 133-142) descreve a encapsulação de fosfato em eritrócitos. Indica-se que o método sugerido envolve a lise de eritrócitos e que os eritrócitos tratados são lavados. Não é mencionado nem sugerido em nenhum lugar, entretanto, que a concentração dos eritrócitos tratados deve e/ou pode ser aumentada.

[006] A Patente Norte-Americana n° 4.224.313 (Zimmermann et al) descreve um método de preparação de uma massa de células carregada em suspensão em uma solução que aumenta a permeabilidade da membrana celular por meio de pressão osmótica induzida externamente, um campo elétrico ou ambos. O material a ser carregado inclui um agente farmacêutico que possui a capacidade, quando incorporado em uma célula, de destruir prematuramente as membranas celulares e um agente estabilizante que pode inibir a reação do agente farmacêutico com as membranas celulares.

[007] A Patente Norte-Americana n° 4.478.824 (Franco et al) descreve um método de incorporação de substâncias em eritrócitos alterando a pressão osmótica interna de RBCs por meio da ação de agentes químicos, tais como DMSO e glicerol, que podem cruzar a membrana celular e entrar nas células por meio de difusão.

[008] A Patente Norte-Americana n° 4.652.449 (Ropars et al) descreve um método e um aparelho de incorporação de materiais em eritrócitos por meio de pressão osmótica. O método e o aparelho foram empregados e testados apenas em grandes volumes de sangue. Isso limita muitas aplicações de emprego de sangue autólogo, ou seja, sangue obtido do mesmo paciente que receberá em seguida o sangue carregado com a droga.

[009] A Patente Norte-Americana n° 4.931.276 (Franco et al) descreve um método de encapsulação de agentes não iônicos em eritrócitos. O método possui eficácia limitada quando o agente desejado a ser incorporado não é aniônico ou é aniônico ou polianiônico, mas não está presente no meio aquoso virtualmente isotônico em concentração suficiente para causar os aumentos necessários da permeabilidade das células sem a destruição das células.

[0010] Heubsch et al, J. Cel. Physiol., 122: 266-272 (1985) demonstram que, em células osmoticamente inchadas, a camada dupla de lipídios que forma a membrana destaca-se do citoesqueleto da célula e a célula varia consideravelmente de tamanho e torna-se esférica. Isso não ocorre em condições normais.

[0011] O pedido de patente com número de publicação EP 1.466.968 descreve um método e uma máquina de encapsulação de substâncias ativas em eritrócitos.

[0012] Análises de métodos de incorporação de substâncias em células são fornecidas por Franco et al em Life Science 32: 2763-2768 (1983), Am. J. Hematol. 17: 393-400 (1984) e J. Cel Physiol. 129: 221-229 (1986).

[0013] Embora o uso de eritrócitos como sistemas de liberação de drogas tenha sido pesquisado por muitos, os métodos e dispositivos que implementam essas metodologias ainda não foram desenvolvidos ao ponto de serem aplicados normalmente na prática clínica, em diagnósticos e em pesquisa.

[0014] Além disso, as metodologias e os dispositivos desenvolvidos até aqui não são suficientemente flexíveis de forma a permitirem eritrócitos para qualquer tipo de uso no campo terapêutico de diagnóstico e pesquisa. Particularmente, seguindo-se os procedimentos descritos no estado da técnica, frequentemente não é possível obter um produto que possa realmente ser utilizado no campo de diagnósticos (ou terapêutico).

[0015] Um exemplo recente de aparelho para encapsular um composto em eritrócitos também é descrito na patente US 6.139.836. Embora esse aparelho represente melhoria considerável com relação ao estado da técnica anterior, ele é relativamente complexo, caro e difícil de usar. Neste particular, dever-se-á observar que a operação do aparelho da patente US 6.139.836 necessita da presença e da intervenção contínua de um operador especializado que deve operar os diferentes componentes do aparelho na sequência correta. O tratamento (carregamento) de eritrócitos, portanto, é relativamente demorado e envolve o risco do operador cometer erros.

[0016] O documento do estado da técnica US5589389 divulga um aparelho para incorporar uma ou mais substâncias biologicamente ativas em vermelho corpúsculos sanguíneos (eritrócitos) pela técnica de lise e selagem e compreendendo uma unidade de lavagem, uma unidade de lise e uma unidade de vedação.

[0017] O documento US2010280430 divulga um aparelho de infusão, em que uma linha de infusão conecta um recipiente de um líquido de infusão para um circuito extracorpóreo.

[0018] O documento JP2003523236 divulga um método para produzir um glóbulo vermelho adequado para a entrega de um agente a um vertebrado.

[0019] O documento JP2008067779 divulga um aparelho de coleta de componentes sanguíneos, incluindo um kit de coleta de sangue incluindo uma passagem de fluxo através da qual o sangue flui e uma estrutura principal do aparelho no qual o kit de coleta de sangue está montado.

[0020] O documento JPH114886 divulga um dispositivo e circuito de coleta de componentes sanguíneos que podem ser miniaturizados e reduzir a taxa de mistura de leucócitos.

[0021] Os aparelhos conhecidos não podem ser conduzidos adequadamente. Devido ao fato de que eles não podem ser conduzidos, o procedimento necessita, portanto, ser conduzido em estruturas dedicadas e não é possível operar em locais que são mais acessíveis para os pacientes. Além disso, os aparelhos conhecidos necessitam da intervenção contínua de pessoal especializado e nem sempre são precisos e/ou suficientemente eficazes.

[0022] É objeto da presente invenção fornecer um aparelho, kit, uso e método que permitam superar, ao menos parcialmente, as desvantagens do estado da técnica e sejam, ao mesmo tempo, de implementação fácil e eficaz para seu custo.

Resumo da Invenção

[0023] Segundo a presente invenção, são fornecidos um aparelho, kit, usos e método de acordo com as reivindicações independentes a seguir e, preferencialmente, de acordo com qualquer uma das reivindicações direta ou indiretamente dependentes das reivindicações independentes.

Breve Descrição das Figuras

[0024] A presente invenção será agora descrita com referência às figuras anexas, que exibem suas realizações não limitadoras, nas quais: - a Figura 1 é um diagrama de um aparelho elaborado de acordo com a presente invenção; - a Figura 2 é um diagrama de uma segunda realização de um aparelho elaborado de acordo com a presente invenção; - a Figura 3 é um diagrama de uma terceira realização de um aparelho elaborado de acordo com a presente invenção; - a Figura 4 é uma vista em perspectiva parcial com detalhes removidos para clareza de um dispositivo reutilizável do aparelho de acordo com a Figura 1; - a Figura 5 é uma vista superior em diagrama, com detalhes removidos para clareza, do aparelho da Figura 1; - as Figuras 6 e 7 são vistas em perspectiva laterais, com detalhes removidos para clareza, do aparelho da Figura 5; - a Figura 8 exibe em forma de diagrama algumas partes do aparelho da Figura 1; - a Figura 9 exibe em forma de diagrama um dispositivo descartável do aparelho da Figura 1; - a Figura 10 é uma imagem fluoroangiográfica obtida utilizando-se uma infusão de eritrócitos carregada com verde de indocianina com hematócrito de 6,4%; e - a Figura 11 é uma imagem fluoroangiográfica obtida utilizando-se uma infusão de eritrócitos carregados com verde de indocianina com hematócrito de 54%.

Realizações da Invenção

[0025] Segundo um primeiro aspecto da presente invenção, é fornecido um aparelho de introdução de pelo menos um composto em eritrócitos.

[0026] Nas Figuras 1, 5, 6, 7 e 8, o algarismo 1 indica, como um todo, um aparelho de introdução de pelo menos um composto em eritrócitos. Particularmente, o aparelho 1 é adaptado para receber uma amostra de sangue que contém eritrócitos; receber a amostra com uma solução fisiológica de forma a separar o plasma e outros glóbulos do sangue de eritrócitos; inchar os eritrócitos e lisá-los; carregar o composto nos eritrócitos; e fechar os eritrócitos carregados de forma a obter eritrócitos tratados.

[0027] Particularmente, a solução fisiológica é salina e é, por exemplo, uma solução aquosa de NaCl a 0,9% em peso/volume. Segundo realizações alternativas, é outra solução apropriada para lavagem de sangue.

[0028] Mais especificamente, quando a amostra lavada é colocada em contato com uma primeira solução, os eritrócitos incham. Os eritrócitos inchados são expostos em seguida a uma segunda solução, que causa a sua lise total ou parcial. Em seguida, os eritrócitos lisados ou parcialmente lisados são concentrados em um hemofiltro. Os eritrócitos lisados ou parcialmente lisados são colocados em contato com pelo menos um composto. Desta forma, o composto é distribuído dentro e fora dos eritrócitos lisados ou parcialmente lisados. Em outras palavras, algumas das moléculas do composto são introduzidas nos eritrócitos. Os eritrócitos, que (neste estágio do procedimento) contêm o composto, são expostos em seguida a uma solução de vedação. A exposição à solução de vedação induz as membranas celulares a vedarem-se de volta, de forma a encapsular o composto no interior da célula. A chamada “portadora de RBCs” ou “eritrócito tratado” resultante é lavado em seguida (com a mesma solução fisiológica indicada anteriormente). Isso é feito para remover o que não foi encapsulado em RBCs durante o procedimento.

[0029] Particularmente, os compostos são encapsulados utilizando os métodos de acordo com a presente invenção.

[0030] Segundo algumas realizações, o composto é selecionado a partir do grupo que consiste de: um agente biologicamente ativo, um agente farmacologicamente ativo, nanopartículas com diâmetro de até 500 nm, meio de contraste para diagnóstico, substância que torna os eritrócitos identificáveis com detectores de fluorescência, óticos, magnéticos e/ou ecográficos (e/ou com qualquer outro método apropriado de detecção do meio de contraste incorporado por meio do procedimento nos eritrócitos). Particularmente, o composto é uma droga, sonda molecular ou pró-droga (ou seja, um precursor de um agente biológica ou farmacologicamente ativo).

[0031] Segundo algumas realizações, o composto é selecionado a partir do grupo que consiste de: peptídeos, oligopeptídeos, polipeptídeos, proteínas, enzimas, hormônios, corticoesteroides, glucocorticoides, agentes anti-inflamatórios não esteroidais, inibidores da protease, glutationa, citoquinas, toxinas, oligonucleotídeos e outros ácidos nucleicos e análogos de nucleosídeos que são bem conhecidos como agentes terapêuticos úteis. Estes incluem 6-mercaptopurina (6-MP) ou azatiopurina e fosfato de fludarabina, que são comumente utilizados como agentes imunossupressores e agentes inibidores do crescimento de células malignas, e azidotimidina fosforiliada (AZT), dideoxicitosina (ddC) e dideóxi-inosina (ddI), que são úteis como agentes antivirais, particularmente para o tratamento da AIDS.

[0032] 21-Fosfato de dexametasona (d-21P), por exemplo, pode ser encapsulado em portadoras de RBC e, ao introduzir-se as RBCs carregadas no sistema circulatório de mamíferos, o d-21P é lentamente convertido na droga dexametasona. Como dexameteasona pode cruzar a membrana celular dos eritrócitos portadores (enquanto d- 21P não pode), este processo garante que o mamífero seja abastecido com um nível constante do agente biologicamente ativo (neste caso, dexametasona) por um certo período de tempo.

[0033] Segundo realizações específicas, o composto é selecionado a partir do grupo que consiste de: aminoácidos, oligopeptídeos (dois a dez aminoácidos), polipeptídeos (dez a vinte aminoácidos), proteínas (mais de vinte aminoácidos), hormônios, corticoesteroides, glucocorticoides, FANS, glutationa, citoquinas, toxinas, oligonucleotídeos (até vinte nucleotídeos), polinucleotídeos (mais de vinte nucleotídeos). Os oligonucleotídeos e polinucleotídeos podem conter um ou mais nucleotídeos modificados ou análogos de nucleotídeos. Os aminoácidos, os oligopeptídeos e os polipeptídeos podem conter um ou mais aminoácidos modificados ou análogos de aminoácidos. Particularmente, o composto é selecionado a partir do grupo que consiste de: aminoácidos, oligopeptídeos (dois a dez aminoácidos), polipeptídeos (dez a vinte aminoácidos), proteínas (mais de vinte aminoácidos), hormônios, corticoesteroides, glucocorticoides, FANS, glutationa, citoquinas, toxinas, oligonucleotídeos (até vinte nucleotídeos), fosfato de sódio dexametasona e fosfato de sódio betametasona, glutationa, verde de indocianina (ICG).

[0034] Segundo algumas realizações, o composto é selecionado a partir do grupo que consiste de: agentes farmacológicos ativos, peptídeos, proteínas, hormônios, fosfato de sódio dexametasona e fosfato de sódio betametasona, glutationa, toxinas, oligonucleotídeos de fita simples ou fita dupla (que podem incluir análogos de nucleotídeos), nanopartículas com diâmetro de até 500 nm, agentes fluorescentes, verde de indocianina (ICG), outros agentes detectáveis por aparelhos de ressonância ótica, ecográfica ou magnética e outros agentes de contraste que podem ser utilizados como meios de diagnóstico de qualquer tipo e espécie.

[0035] O aparelho 1 compreende um sistema 2 de canais de conexão; uma unidade de introdução 3 para conduzir a amostra que contém os eritrócitos no interior do aparelho 1; uma unidade de separação 4 para separar os diferentes componentes da amostra (particularmente, o plasma e as outras células de eritrócitos); e uma unidade de combinação 5, que compreende um reservatório 6 (particularmente, um saco de coleta), no qual os eritrócitos e o composto são combinados entre si, de forma a obter os eritrócitos tratados. Dever-se-á observar que, convenientemente, o aparelho 1 possui peso de menos de 35 kg. O aparelho é, portanto, fácil de carregar.

[0036] O aparelho 1 também compreende uma entrada 7 (particularmente, uma membrana perfurável do reservatório 6) para tomar o composto no reservatório 6; e uma unidade de alimentação 8, que compreende um canal 9 para alimentar a primeira solução e um canal 10 para alimentar a segunda solução.

[0037] A primeira solução é adaptada, quando em contato com os eritrócitos, para inchar os eritrócitos e, particularmente, consiste de uma solução aquosa de um ou mais sais inorgânicos com osmolaridade geral (ou seja, adição das concentrações de todos os sais dissolvidos) de cerca de 100 mOsm/kg a cerca de 300 mOsm/kg. Mais especificamente, a primeira solução consiste de seis volumes de solução fisiológica (solução aquosa de NaCl em concentração de 0,9% em peso/volume) e 4,5 volumes de água destilada (ou deionizada).

[0038] A segunda solução é adaptada, quando em contato com os eritrócitos, para lisar os eritrócitos e, particularmente, consiste de uma solução aquosa de um ou mais sais inorgânicos com osmolaridade geral (ou seja, adição das concentrações de todos os sais dissolvidos) de cerca de 10 mOsm/kg a cerca de 150 mOsm/kg. Mais especificamente, a primeira solução consiste de seis volumes de solução fisiológica (solução aquosa de NaCl em concentração de 0,9% em peso/volume e oito volumes de água destilada (ou deionizada).

[0039] Dever-se-á observar que a entrada 7 permite não apenas a introdução do composto no interior do reservatório 6, mas também a tomada da solução de vedação para o reservatório 6. A solução de vedação é adaptada, quando em contato com os eritrócitos, para vedar novamente os eritrócitos, de forma a encapsular, ao menos parcialmente, o composto. Particularmente, a entrada 7 compreende uma membrana perfurável.

[0040] Segundo algumas realizações, a solução vedante é uma solução de fosfato-inosina- glicose-piruvato-adenina (PIGPA). A solução de PIGPA compreende especificamente cerca de 33 mM de NaH2PO4; cerca de 1,606 M de KCl, cerca de 0,194 M de NaCl; cerca de 0,1 M de inosina; cerca de 5 mM de adenina; cerca de 20 mM de ATP; cerca de 0,1 M de glicose; cerca de 0,1 M de piruvato; e cerca de 4 mM de MgCl2. Segundo outras realizações, a solução vedante consiste de uma solução aquosa de um ou mais sais inorgânicos que possui osmolaridade maior ou igual a sangue (ou seja, maior ou igual a 280 mOsm/kg). Em uma realização vantajosa, cerca de 5 ml a 7 ml da solução de vedação são utilizados para vedar novamente um volume de cerca de 50 a 90 ml de eritrócitos lisados.

[0041] O aparelho 1 também compreende uma unidade de concentração 11 para concentrar o conteúdo do reservatório 6; e uma unidade de coleta 12, que compreende um reservatório 13 (particularmente um saco de coleta) para coletar eritrócitos tratados.

[0042] O sistema de canais 2 conecta (ou seja, permite a passagem de fluido entre) a unidade de introdução 3, unidade de separação 4, unidade de combinação 5, unidade de alimentação 8, unidade de concentração 11 e unidade de coleta 12.

[0043] Particularmente, o sistema de canais 2 consiste de um ou mais canais. Mais especificamente, o sistema 2 compreende um canal de conexão 14 entre a unidade de separação 4 e a unidade de combinação 5.

[0044] Segundo realizações vantajosas, no presente texto, a menos que especificado em contrário, por canal indica-se um duto que é feito de material elasticamente deformável e, de acordo com algumas realizações, é substancialmente transparente pelo menos em algumas partes. Particularmente, o duto é feito de silicone, PVC ou outros polímeros. Além disso, ele pode também conter insertos têxteis para aumentar a rigidez.

[0045] O aparelho 1 compreende uma unidade de controle 15, que é adaptada para ajustar a operação do aparelho 1. As Figuras 1 a 3 exibem as conexões elétricas (ou conexões por ondas eletromagnéticas) entre a unidade de controle e os diferentes componentes do aparelho 1 por meio de linhas finas. Convenientemente, a unidade de controle 15 compreende uma unidade de controle elétrico e uma interface de operador (HMI), que é equipada, por exemplo, com um visor e/ou um teclado por meio do qual o operador pode modificar e/ou exibir os parâmetros de operação e as especificações de operação.

[0046] Segundo algumas realizações, a unidade de introdução 3 compreende uma membrana perfurável 16 (ou, em qualquer caso, uma conexão), através da qual a amostra de sangue pode ser injetada (ou conectada) (por exemplo, por meio de uma seringa 17) no canal 18 (particularmente, um duto) do sistema de canais 2. A unidade de introdução 3 também compreende meios de ajuste 19 (particularmente, uma válvula), que são dispostos ao longo do canal 18 e são adaptados para ajustar o fluxo ao longo do canal 18. Segundo algumas realizações, o canal 18 é conectado ao canal 14 entre a unidade de separação 4 e a unidade de combinação 5.

[0047] Particularmente, os meios de ajuste 19 são adaptados para obstruir completamente o canal 18 (de forma a evitar substancialmente a passagem de fluido ao longo do canal 18) e permitir o livre fluxo de fluido através do canal 18. Mais especificamente, os meios de ajuste 19 compreendem elementos de grampo que são adaptados para deformar o canal 18, de forma a obstruir completamente o lúmen do canal 18. Os meios de ajuste 19 são operáveis pela unidade de controle 15.

[0048] Segundo algumas realizações, a unidade de separação 4 compreende um conjunto de centrifugação 20 para separar os eritrócitos e/ou os eritrócitos tratados dos demais componentes da amostra. Um reservatório 21 (particularmente, um saco de coleta) é adaptado para coletar o que houver sido separado de eritrócitos da unidade de separação 4 e (particularmente) da unidade de centrifugação 20. O reservatório 21 é conectado à unidade de centrifugação 20 por um canal (particularmente um canal do sistema 2) 22.

[0049] Segundo algumas realizações, a unidade de centrifugação 20 compreende uma placa (substancialmente horizontal) 23 adaptada para girar e uma tigela de separação 24 montada sobre a placa 23. Mais especificamente, o grupo de centrifugação 20 compreende um motor 25 (particularmente, um motor DC com sensores para detecção de velocidade, direção e corrente), que é adaptado para girar a placa 23 em volta de um eixo substancialmente vertical.

[0050] O aparelho 1 também compreende um ou mais sensores 26 para detectar ar, pressão de oxigênio parcial, dióxido de carbono, hemoglobina, ciano hemoglobina, hematócritos, osmolaridade, sensores óticos para medição da absorção/transmissão, medição de fluorescência, ressonância magnética, medição de ondas acústicas (ecografia) e/ou outros parâmetros acima no fluxo da unidade de separação 4 com relação à unidade de introdução 3. Particularmente, o sensor 26 é disposto ao longo do canal 14 entre o canal 18 e a unidade de centrifugação 20. O sensor 26 é conectado à unidade de controle 15 e é adaptado para comunicar o que foi detectado ao longo do canal 14 para a unidade de controle 15. Segundo realizações específicas, o sensor 26 é adaptado para detectar oxigênio (e/ou ar) acima no fluxo da unidade de separação 4 com relação à unidade de introdução 3.

[0051] Particularmente, o sensor 26 é um sensor de ultrassom (para detecção de bolhas de ar). O canal 14 possui (pelo menos no sensor 26) dureza Shore A (medida de acordo com ASTM D2240) de menos de 70 (e, particularmente, mais de 50; mais especificamente, mais de 60). Desta forma, o sensor 26 pode aderir-se adequadamente ao canal 14 (e, portanto, realizar as suas atividades de detecção com maior precisão).

[0052] O sensor 26 é, por exemplo, um detector de ultrassom AD8/AD9 da Introtek®. O canal 14, por exemplo, é feito de PVC XS do Grupo Sorin® Itália (pelo menos na área do sensor 26).

[0053] O sensor 26 permite a limitação da presença de agentes poluentes com o aparelho 1 e aumenta a eficiência e a precisão da introdução dos eritrócitos. Além disso, o sensor 26 permite a obtenção da discriminação exata entre ar e líquidos durante o processo automatizado, de forma a garantir que as etapas sejam realizadas corretamente e que não exista ar onde deveria haver líquido e vice-versa. O sensor 26 promove o desempenho correto do processo na sua versão mais automatizada.

[0054] A unidade de alimentação 8 compreende um reservatório 27 (particularmente, um saco), que é conectado ao sistema 2 por meio do canal 9 do sistema 2. O reservatório 27 contém a primeira solução mencionada acima.

[0055] A unidade de alimentação compreende outro reservatório 28 (particularmente, um saco), que é conectado ao sistema 2 por meio do canal 10 do sistema 2. O reservatório 28 contém a segunda solução mencionada acima.

[0056] A unidade de introdução 8 compreende meios de ajuste 29 (particularmente, uma válvula), que são dispostos ao longo do canal 9 e são adaptados para ajustar o fluxo ao longo do canal 9.

[0057] A unidade de introdução 8 compreende meios de ajuste 30 (particularmente uma válvula), que são dispostos ao longo do canal 10 e são adaptados para ajustar o fluxo ao longo do canal 10.

[0058] Particularmente, os meios de ajuste 29 e 30 são adaptados para obstruir totalmente os canais 9 e, respectivamente, 10 (de forma a evitar substancialmente a passagem de fluido ao longo dos canais 9 e 10, respectivamente) e permitir o livre fluxo do fluido através dos canais 9 e 10, respectivamente. Mais especificamente, os meios de ajuste 29 e 30 compreendem elementos de grampo correspondentes que são adaptados para deformar os canais 9 e, respectivamente, 10, de forma a obstruir totalmente o lúmen. Os meios de ajuste 29 e 30 são operáveis (independentemente entre si) pela unidade de controle 15.

[0059] A unidade de alimentação 8 também compreende meios de bombeamento 31, que são adaptados para mover a primeira e/ou a segunda solução em direção à unidade de combinação 5 (ou unidade de separação 4). Particularmente, os meios de bombeamento 31 são dispostos ao longo de um canal 32 (do sistema 2) para mover a primeira e/ou a segunda solução através do canal 32. O canal 32 conecta os canais 9 e 10 ao canal 14.

[0060] Segundo algumas realizações, os meios de bombeamento 31 compreendem uma bomba peristáltica. Mais especificamente, os meios de bombeamento 31 compreendem um rotor, sobre o qual são montados um ou mais rolos, que deformam (sufocam) o canal 32 em movimento repetido ao longo de um segmento de canal 32.

[0061] Convenientemente, a unidade de coleta 12 compreende meios de ajuste 33, que são operáveis pela unidade de controle 15 para ajustar o fluxo em direção ao reservatório 13 a partir do sistema 2. Particularmente, os meios de ajuste 33 são dispostos ao longo de um canal 34 (do sistema 2), que é conectado ao reservatório 13.

[0062] Estruturalmente, os meios de ajuste 33 são substancialmente idênticos aos meios de ajuste 29 e 30 e operam sobre o canal a 86,36 cm de forma substancialmente idêntica aos meios de ajuste 29 e 30 sobre os canais 9 e 10.

[0063] Convenientemente, a unidade de combinação 5 compreende um dispositivo de mistura 35 operável pela unidade de controle 15 para mover o reservatório 6, de forma a misturar o seu conteúdo. Particularmente, a unidade de combinação 5 compreende uma placa de sustentação 36 para abrigar o reservatório 6; e um acionador (do tipo conhecido e não exibido) para mover (ou seja, bascular) a placa 36 e, portanto, misturar o conteúdo do reservatório 6.

[0064] O acionador mencionado acima compreende um motor de passo e quatro sensores de posição para controlar a posição horizontal da placa 36, a oscilação em um ângulo de até +/- 30° e a manutenção de um ângulo de até 45° (essa posição mais inclinada é tomada durante o esvaziamento do reservatório 6).

[0065] Convenientemente, a unidade de combinação 5 também compreende um elemento de aquecimento (do tipo conhecido e não exibido, tal como uma resistência elétrica) controlável pela unidade de controle 15 para aquecer o conteúdo do reservatório 6. A operação do elemento de aquecimento é controlada por sondas de temperatura do tipo conhecido e não exibida para controlar a sua operação por feedback por meio da unidade de controle 15.

[0066] Convenientemente, a unidade de combinação 5 também compreende um elemento que mede continuamente o peso (do tipo conhecido e não exibido, tal como uma célula de carga) controlável pela unidade de controle 15 para medir o peso (ou volume) contido no reservatório 6.

[0067] Segundo algumas realizações, a unidade de concentração 15 compreende um filtro 37 (particularmente um hemofiltro ou filtro de diálise) para separar ao menos parcialmente os eritrócitos tratados por um líquido (particularmente, uma solução aquosa tal como a primeira e a segunda solução, a solução de vedação e/ou uma solução fisiológica).

[0068] A unidade de concentração 11 compreende um aspirador 38 (particularmente, uma bomba de vácuo que pode também operar ao contrário, como um compressor em soluções específicas de acordo com a presente invenção, que não são descritas no presente), que é controlado pela unidade de controle 15 e é adaptado para sugar pelo menos parte do líquido através do filtro 37. O aspirador 38 é controlado por um ou mais sensores de pressão do tipo conhecido (não exibido no presente).

[0069] Segundo algumas realizações da presente invenção, o aspirador 38 pode introduzir ar no sistema de canais 2, para testar a sua vedação hidráulica e verificar o seu posicionamento correto com relação a meios de ajuste sobre os quais é posicionado.

[0070] A unidade de concentração 11 também compreende um reservatório 39 (particularmente um saco ou recipiente rígido) para coletar o líquido que foi passado através do filtro 37.

[0071] Também são fornecidos meios de bombeamento 40 para colocar o conteúdo do reservatório 6 em contato com o filtro 37. Particularmente, o sistema 2 compreende um canal 41, através do qual, durante o uso, o material a ser filtrado e já submetido a filtragem passa do reservatório 6 para o filtro 37 e vice-versa; e, de acordo com algumas realizações, é criado um canal de sucção 42, que conecta o filtro 37 ao reservatório 6 e em cuja área é criada a pressão necessária para mover os fluidos ao longo do canal 41.

[0072] Meios de bombeamento 40 são dispostos ao longo do canal 42 e compreendem convenientemente uma bomba peristáltica. Mais especificamente, os membros de bombeamento 40 compreendem um rotor, sobre o qual são montados um ou mais rolos, que deformam (sufocam) o canal 42 em movimento repetido ao longo de um segmento de canal 42.

[0073] O sistema de canais 2 também compreende um canal 43, que conecta o filtro 37 ao reservatório 39; e um canal 44 que conecta o reservatório 39 ao aspirador 38.

[0074] O aparelho 1 também compreende outra unidade de alimentação 45 para alimentar uma terceira solução (particularmente, uma solução fisiológica). Particularmente, a unidade de alimentação 45 compreende meios de ajuste 46, que são operáveis pela unidade de controle 15 para ajustar o fluxo da unidade de alimentação 45.

[0075] Segundo a realização exibida, os meios de ajuste 46 são dispostos ao longo de um canal 47 (do sistema 2). Estruturalmente, os meios de ajuste 46 são substancialmente idênticos aos meios de ajuste 29 e 30 e operam sobre o canal a 119,38 cm de forma substancialmente idêntica aos meios de ajuste 29 e 30 sobre os canais 9 e 10.

[0076] Convenientemente, a unidade de alimentação 45 compreende um reservatório 48 (particularmente, um saco), que contém a solução fisiológica e é conectado ao sistema de canais 2, particularmente por meio do canal 47.

[0077] O aparelho 1 também compreende meios de bombeamento 49, que são operáveis pela unidade de controle 15 e são adaptados para mover fluidos pelo menos entre as unidades de introdução, separação, combinação e coleta 3, 4, 5 e 12. Convenientemente, os meios de bombeamento 49 são adaptados para mover fluidos entre as unidades de introdução, separação, coleta e alimentação 3, 4, 5, 12 e 45.

[0078] Meios de bombeamento 49 são dispostos ao longo do canal 14. Segundo algumas realizações, os meios de bombeamento 49 compreendem uma bomba peristáltica. Mais especificamente, os meios de bombeamento 49 compreendem um rotor, sobre o qual são montados um ou mais rolos, que deformam (sufocam) o canal 14 em movimento repetido ao longo de um segmento de canal 14.

[0079] Convenientemente, a unidade de introdução 3 e a unidade de coleta 12 são conectadas ao canal de conexão 14 entre os meios de bombeamento 49 e a unidade de combinação 5. A unidade de alimentação 8 (e, possivelmente, a unidade de alimentação 45) também é conectada ao canal de conexão 14 entre os meios de bombeamento 49 e a unidade de combinação 5.

[0080] Segundo algumas realizações, o aparelho também compreende meios de ajuste 50, que são operáveis pela unidade de controle 15 e são dispostos ao longo do mencionado canal 14. Particularmente, meios de ajuste 50 são dispostos entre a unidade de alimentação 8 e a unidade de separação 4.

[0081] Estruturalmente, os meios de ajuste 50 são substancialmente idênticos aos meios de ajuste 29 e 30 e operam sobre o canal 14 de forma substancialmente idêntica aos meios de ajuste 29 e 30 sobre os canais 9 e 10.

[0082] Segundo algumas realizações, os meios de ajuste 50 são dispostos entre a unidade de separação 4 e a unidade de alimentação 8. Segundo realizações específicas, os meios de ajuste 50 são dispostos entre a unidade de introdução 3 e a unidade de coleta 12 (e, possivelmente, a unidade de alimentação 45) de um lado e a unidade de combinação 5 do outro lado. Segundo as realizações exibidas, os meios de ajuste 50 são dispostos entre os meios de bombeamento 49 e a unidade de combinação 5.

[0083] Segundo algumas realizações que não são exibidas, o aparelho 1 não possui meios de ajuste 50.

[0084] Convenientemente, o aparelho 1 também compreende um dispositivo de pesagem 51 que é adaptado para detectar o peso dos reservatórios 27 e 28. O dispositivo de pesagem 51 também é adaptado para detectar o peso do reservatório 39. Convenientemente, o dispositivo de pesagem 51 é adaptado para detectar o peso do reservatório 21. Segundo algumas realizações (não exibidas), o dispositivo de pesagem 51 é adaptado para detectar o peso do reservatório 48.

[0085] Segundo algumas realizações (não exibidas), o dispositivo de pesagem 51 é adaptado para detectar o peso da unidade de introdução 3.

[0086] O dispositivo de pesagem 51 é adaptado para transmitir os dados detectados para a unidade de controle 15. Particularmente, a unidade de controle 15 é adaptada para ajustar a operação dos meios de ajuste 29 e 30 dos meios de bombeamento 31 e do aspirador 38 em função dos pesos dos reservatórios 27, 28 e 39 detectados pelos dispositivos de pesagem 51.

[0087] Segundo algumas realizações, o aspirador 38 pode introduzir ar no sistema de canais 2 antes que o operador introduza a seringa 17 contendo o sangue, para testar a sua vedação hidráulica e verificar o seu posicionamento correto com relação aos meios de ajuste sobre os quais é posicionado.

[0088] É detalhada a seguir uma breve descrição da operação do aparelho 1 a partir de um momento quando o operador introduz uma amostra de sangue através da membrana 16 por meio da seringa 17 (que poderá também ser substituída por um saco). A descrição a seguir especifica, a menos que indicado explicitamente em contrário, que as diferentes partes do aparelho 1 são controladas pela unidade de controle 15.

[0089] Durante a injeção da amostra, meios de ajuste 50, 33 e 46 são mantidos próximos enquanto os meios de ajuste 19 são mantidos abertos e os meios de bombeamento 49 movem a amostra em direção à unidade de separação 4. O motor 25 é operado de forma a girar a placa 23 (e a tigela de separação 24). Quando toda a amostra houver entrado na tigela de separação 24, o sensor 26 detecta a presença de compostos (particularmente oxigênio) ao longo do canal 14, meios de ajuste 19 são fechados e meios de ajuste 46 são abertos de tal forma que a solução fisiológica atinja a tigela de separação 24.

[0090] Neste ponto, a tigela de separação 24 separa os eritrócitos do plasma e outras células, que são levados para o reservatório 21.

[0091] Após a separação do plasma, o motor 25 é suspenso e os eritrócitos são levados para o reservatório 6 por meios de bombeamento em operação 49 e mantendo os meios de ajuste 19, 46 e 33 fechados e meios de ajuste 50 abertos.

[0092] Nesse ponto, os meios de bombeamento 49 são suspensos e os meios de bombeamento 31 são operados de forma a levar a primeira solução para o reservatório 6. Durante a transferência da primeira solução no interior do reservatório 6, meios de ajuste 30 e 50 (e, particularmente, também os meios de ajuste 19, 33 e 46) são mantidos fechados enquanto os meios de ajuste 29 são mantidos abertos.

[0093] A operação dos meios de bombeamento 31 (e, portanto, a quantidade da primeira solução tomada no reservatório 1) é ajustada pela unidade de controle 15 com base no peso (e, particularmente, na variação do peso) do reservatório 27 detectado pelo dispositivo de pesagem 51.

[0094] Segundo realizações alternativas, os meios de ajuste 50 são mantidos abertos, de tal forma que parte da primeira solução atinja a tigela de separação 24, para assim lavar a tigela de separação 24. Neste caso, a parte da primeira solução que é tomada na tigela de separação 24 é transferida para o reservatório 6 operando os meios de bombeamento 49.

[0095] Após a introdução da primeira solução no reservatório 6, os meios de bombeamento 31 são travados e o acionador da placa 36 é operado de forma a inclinar suavemente o reservatório 6. A inclinação prossegue por cerca de cinco a vinte minutos. Desta forma, os eritrócitos são ao menos parcialmente inchados.

[0096] Após a inclinação, o conteúdo do reservatório 6 é tomado na tigela de separação 24 por meio da operação de meios de bombeamento 49 e manutenção dos meios de ajuste 50 abertos.

[0097] Na tigela de separação 24 (quando os meios de bombeamento 49 forem suspensos), os eritrócitos ao menos parcialmente inchados são concentrados pela operação do motor 25.

[0098] Após a concentração dos eritrócitos, o motor 25 é suspenso e os meios de bombeamento 49 são ativados de forma a levar os eritrócitos ao menos parcialmente inchados de volta para o reservatório 6.

[0099] Neste ponto, os meios de ajuste 50 são fechados e os meios de bombeamento 31 são novamente operados mantendo os meios de ajuste 29 abertos e os meios de ajuste 30 fechados, de forma a levar a segunda solução para o reservatório 6.

[00100] Segundo realizações alternativas, os meios de ajuste 50 são mantidos abertos, de tal forma que parte da segunda solução atinja a tigela de separação 24, para assim lavar a tigela de separação 24. Neste caso, a parte da segunda solução que é tomada na tigela de separação 24 é transferida para o reservatório 6 operando os meios de bombeamento 49.

[00101] A operação de meios de bombeamento 31 (e, portanto, a quantidade da segunda solução tomada no reservatório 1) é ajustada pela unidade de controle 15 com base no peso (particularmente, na variação do peso) do reservatório 28 detectado pelo dispositivo de pesagem 51.

[00102] Após a introdução da segunda solução no reservatório 6, os meios de bombeamento 31 são travados e o acionador da placa 36 é operado de forma a inclinar suavemente o reservatório 6. A operação de inclinação prossegue por cerca de um a trinta minutos, convenientemente cinco a vinte minutos. Desta forma, os eritrócitos são ao menos parcialmente lisados. Durante a mistura do reservatório 6, os meios de ajuste 50 são mantidos fechados.

[00103] Neste ponto, os meios de bombeamento 40 são operados para levar o conteúdo do reservatório 6 para o filtro 37 por meio do canal 41. Quando os eritrócitos houverem atingido o filtro 37, os meios de bombeamento 40 são suspensos e o aspirador 38 é operado de forma a concentrar os eritrócitos lisados ao menos parcialmente. A concentração é realizada até a recuperação de uma quantidade apropriada de fluido no reservatório 39. O conteúdo correto do reservatório 39 é medido detectando-se a variação do peso do reservatório 39 por meio do dispositivo de pesagem 51.

[00104] Em outras palavras, a operação do aspirador 38 (e, portanto, a quantidade da solução aquosa tomada no interior do reservatório 39) é ajustada pela unidade de controle 15 com base no peso (particularmente, na variação do peso) do reservatório 39 detectado pelo dispositivo de pesagem 51.

[00105] Após a concentração dos eritrócitos ao menos parcialmente lisados, o aspirador 38 é suspenso e os meios de bombeamento 40 são operados de forma a levar os eritrócitos de volta para o reservatório 6.

[00106] O operador injeta, portanto, o composto através da entrada 7 e, em seguida, a placa 36 é inclinada por cerca de um a 45 minutos.

[00107] Após a inclinação, o operador injeta a solução de vedação no reservatório 6 através da entrada 7. Neste ponto, o reservatório é inclinado por cerca de dez a quarenta minutos sob temperatura de cerca de 25 a 40 °C, de forma a obter os eritrócitos tratados ao menos parcialmente.

[00108] O conteúdo do reservatório 6 é, portanto, transferido para o reservatório 13 operando-se os meios de bombeamento 49 e mantendo-se os meios de ajuste 50 e 33 abertos e os meios de ajuste 46 e 19 fechados (particularmente, também os meios de ajuste 29 e 30).

[00109] Segundo uma realização (não exibida), o aparelho 1 não possui meios de bombeamento 31. Neste caso, as primeira e segunda soluções são movidas em virtude dos meios de bombeamento 49 e controle adequado dos meios de ajuste mencionados acima.

[00110] A Figura 3 exibe uma variante do aparelho 1 que difere do aparelho 1 das Figuras 1 e 8 apenas porque o aparelho 1 não possui meios de bombeamento 40, compreende meios de ajuste V (particularmente dispostos ao longo do canal 14 entre os meios de bombeamento 49 e a unidade de separação 4) e o canal 42 é conectado ao canal de conexão 14 (particularmente, entre os meios de bombeamento 49 e a unidade de separação 4). Neste caso, a transferência do conteúdo do reservatório 6 para o filtro 37 é realizada por meio da operação dos meios de bombeamento 49 e manutenção dos meios de ajuste 50 abertos e dos meios de ajuste V fechados.

[00111] Estruturalmente, os meios de ajuste V são substancialmente idênticos aos meios de ajuste 29 e 30 e operam sobre o canal 14 de forma substancialmente idêntica aos meios de ajuste 29 e 30 sobre os canais 9 e 10.

[00112] A Figura 2 exibe uma variante do aparelho 1 que permite a concentração dos eritrócitos tratados antes da transferência para o reservatório 13. A variante da Figura 2 difere da variante das Figuras 1 e 8 exclusivamente por compreender um filtro adicional 52 (particularmente, um hemofiltro ou filtro de diálise) e meios de ajuste 53 e 54 (operáveis pela unidade de controle 15). O filtro 52 e os meios de ajuste 53 são montados entre os canais 41 e 42 e são adaptados para concentrar os eritrócitos ao menos parcialmente tratados (e lavados) antes da transferência dos eritrócitos para o reservatório 13. Os meios de ajuste 54 são dispostos ao longo do canal 41 entre o reservatório 6 e o filtro 37.

[00113] Estruturalmente, os meios de ajuste 53 e 54 são substancialmente idênticos aos meios de ajuste 29 e 30 e operam de forma substancialmente idêntica aos meios de ajuste 29 e 30.

[00114] Durante o uso, particularmente após a obtenção dos eritrócitos ao menos parcialmente tratados no reservatório 6, o conteúdo do reservatório 6 é levado para o filtro 52 por meio da operação de meios de bombeamento 40 e manutenção dos meios de ajuste 54 fechados e dos meios de ajuste 53 abertos. Quando os eritrócitos houverem atingido o filtro 52, os meios de bombeamento 40 são suspensos e o aspirador 38 é operado de forma a concentrar os eritrócitos ao menos parcialmente tratados. A concentração é realizada até a recuperação de uma quantidade apropriada de fluido no reservatório 39. Após a concentração dos eritrócitos tratados ao menos parcialmente, o aspirador 38 é suspenso e os meios de bombeamento 40 são operados de forma a levar os eritrócitos de volta para o reservatório 6.

[00115] Convenientemente, o aparelho 1 compreende um dispositivo descartável 55 (vide especificamente a Figura 9) que compreende todas as partes do aparelho que entram em contato direto com os eritrócitos. Particularmente, o dispositivo 55 compreende o sistema de canais 2, reservatórios 6 e 13 e a entrada 7. Segundo algumas realizações (tais como a exibida na Figura 9), o dispositivo 55 também compreende o(s) filtro(s) 37 e/ou 52, os reservatórios 27, 28 e 48 e a tigela de separação 24. Convenientemente, o dispositivo 55 também compreende os reservatórios 21 e 39.

[00116] Dever-se-á observar que o dispositivo 55 compreende as únicas partes que estão em contato ou poderão potencialmente entrar em contato com o sangue. O fato de que o dispositivo 55 é descartável simplifica consideravelmente o uso do aparelho 1 e aumenta a segurança e a velocidade de uso.

[00117] O aparelho 1 também compreende um dispositivo reutilizável 56, que é adaptado para servir de suporte sobre o qual é montado o dispositivo 55. Alguns detalhes de uma realização do dispositivo 56 são exibidos na Figura 4.

[00118] O dispositivo 56 compreende meios de bombeamento 49 e meios de ajuste 29, 30 e 33. Segundo algumas realizações (tais como a exibida na Figura 4), o dispositivo 56 também compreende meios de bombeamento 49, meios de ajuste 19 e 46 e o motor para girar a placa 36 (e, convenientemente, a placa 36). O dispositivo 56 também compreende convenientemente o aspirador 38 (e, convenientemente, o sensor 26 e o dispositivo de pesagem 51). Segundo realizações específicas, o dispositivo 56 também compreende meios de ajuste 50. Particularmente, o dispositivo 56 também compreende meios de bombeamento 31 e/ou 40.

[00119] Na Figura 4, os algarismos 57 e 58 indicam um braço de trava e um abrigo para a tigela de separação 24, respectivamente.

[00120] O aparelho 1 descrito acima possui diversas vantagens com relação ao estado da técnica. Particularmente, o aparelho 1 permite automatizar quase todas as etapas de operação para obter os eritrócitos tratados. Desta forma, o tempo e a possibilidade de que o operador realize erros durante o procedimento são consideravelmente reduzidos.

[00121] O aparelho 1 também é relativamente simples, de fácil transporte e eficaz para o seu custo. O uso do aparelho 1 é adicionalmente simplificado e a segurança é aprimorada ainda mais pelo fato de que o aparelho compreende um tipo descartável de dispositivo 55.

[00122] Neste particular, dever-se-á observar que, de acordo com realizações vantajosas, o aparelho compreende não mais de três meios de bombeamento (particularmente, dois a três) e pelo menos quatro meios de ajuste (convenientemente, cinco).

[00123] Além disso, o aparelho 1 descrito acima é extremamente flexível, permitindo, entre outras coisas, a obtenção de eritrócitos tratados com diferentes concentrações de composto introduzido e também com diferentes hematócritos e volumes finais.

[00124] O aparelho 1 descrito acima permite alto grau de automação e controle (sem a necessidade de controle humano por um operador) de todas as sequências de ação que permitem a introdução de pelo menos um composto nos glóbulos vermelhos do sangue.

[00125] Conforme um segundo aspecto da presente invenção, é fornecido um kit descartável para o aparelho 1; o kit compreende o dispositivo 55 conforme definido acima ou partes do dispositivo 55 a serem montadas para obter o dispositivo 55.

[00126] Segundo um terceiro aspecto da presente invenção, o dispositivo 56 é fornecido conforme definido acima.

[00127] Segundo um quarto aspecto da presente invenção, é fornecido um método de introdução de pelo menos um composto (particularmente conforme definido acima) em eritrócitos. O método compreende uma etapa de lise, durante a qual os eritrócitos são lisados ao menos parcialmente em suspensão em uma segunda solução hipotônica (particularmente, conforme definido acima); e uma primeira etapa de concentração, em seguida à etapa de lise e durante a qual os eritrócitos lisados ao menos parcialmente são concentrados por meio de hemofiltragem.

[00128] Convenientemente, o método compreende uma etapa de inchaço, que precede a etapa de lise e, durante a qual, os eritrócitos são inchados em suspensão em uma primeira solução hipotônica (particularmente conforme definido acima), de forma a obter uma suspensão; a primeira solução hipotônica possui concentração maior de solutos com relação à segunda solução hipotônica.

[00129] Segundo algumas realizações, o método é realizado com o aparelho de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção.

[00130] O método também compreende uma etapa de combinação, que é simultânea (ou segue-se) à primeira etapa de concentração e, durante a qual, os eritrócitos ao menos parcialmente lisados são combinados com o composto; uma etapa de fechamento, que se segue à etapa de combinação e, durante a qual, os eritrócitos ao menos parcialmente lisados são fechados de forma a encapsular ao menos parcialmente o composto e obter os eritrócitos tratados; e uma segunda etapa de concentração, que se segue à etapa de fechamento e durante a qual os eritrócitos tratados são concentrados.

[00131] A concentração dos eritrócitos tratados após a etapa de fechamento (e antes da segunda etapa de concentração) é mais baixa que os eritrócitos tratados após a segunda etapa de concentração. Mais precisamente, ao final da etapa de fechamento (e antes da segunda etapa de concentração), os eritrócitos tratados encontram-se em solução em primeira concentração; ao final da segunda etapa de concentração, os eritrócitos tratados encontram-se em solução em uma segunda concentração mais alta que a primeira concentração.

[00132] Durante a segunda etapa de concentração, a água é removida da solução de eritrócitos tratados. Em outras palavras, a solução de eritrócitos tratados no final da etapa de fechamento (e antes da segunda etapa de concentração) possui fração de água mais alta com relação à fração de água da solução de eritrócitos tratados no final da segunda etapa de concentração.

[00133] Dever-se-á observar que a presente invenção, entre outras coisas, originou-se do fato de que, surpreendentemente, nem todas as concentrações de eritrócitos trados geram resultados efetivos. Este problema era completamente ausente no estado da técnica.

[00134] Convenientemente, durante a segunda etapa de concentração, os eritrócitos tratados são concentrados utilizando um hemofiltro.

[00135] Segundo algumas realizações, o método compreende uma terceira etapa de concentração, que se segue à etapa de inchaço e precede a etapa de lise, durante a qual o teor de água da suspensão é reduzido, consequentemente aumentando a concentração dos eritrócitos na suspensão.

[00136] Segundo algumas realizações, a terceira etapa de concentração é realizada utilizando uma etapa de separação que compreende uma unidade de centrifugação (particularmente conforme definido acima).

[00137] Convenientemente, durante a etapa de fechamento, os eritrócitos ao menos parcialmente lisados são colocados em contato com a solução de vedação (particularmente, conforme definido acima).

[00138] Segundo algumas realizações, o método compreende uma etapa de lavagem, que se segue à etapa de fechamento (e, possivelmente, precede a segunda etapa de concentração) e durante a qual os eritrócitos tratados são lavados com uma solução fisiológica. A etapa de lavagem é adaptada para remover o composto que não entrou nos eritrócitos e outras substâncias indesejadas (tais como proteínas ou solução de vedação).

[00139] Segundo um quinto aspecto da presente invenção, é fornecido um método de introdução de pelo menos um composto (particularmente conforme definido acima) em eritrócitos. O método compreende uma etapa de lise, durante a qual os eritrócitos são lisados ao menos parcialmente, sendo suspensos em uma segunda solução hipotônica (particularmente conforme definido acima); e uma primeira etapa de concentração, que é subsequente à etapa de lise e durante a qual os eritrócitos ao menos parcialmente lisados são concentrados por meio de hemofiltragem.

[00140] Convenientemente, o método compreende uma etapa de inchaço, que precede a etapa de lise e durante a qual os eritrócitos são inchados ao serem suspensos em uma primeira solução hipotônica (particularmente conforme definido acima), de forma a obter uma suspensão; a primeira solução hipotônica possui concentração maior de solutos com relação à segunda solução hipotônica.

[00141] O método também compreende uma etapa de combinação, que se segue à etapa de concentração e, durante a qual, os eritrócitos ao menos parcialmente lisados são combinados com o composto (ou simultaneamente com diversos compostos ao mesmo tempo); uma etapa de fechamento, que se segue à etapa de combinação e durante a qual os eritrócitos ao menos parcialmente lisados são fechados, de forma a encapsular ao menos parcialmente o(s) composto(s) e obter eritrócitos tratados; e uma segunda etapa de concentração, que se segue à etapa de inchaço e precede a etapa de lise, durante a qual o teor de água da suspensão é reduzido, consequentemente aumentando a concentração dos eritrócitos na suspensão.

[00142] Segundo algumas realizações, o método de acordo com o quinto aspecto da presente invenção possui uma ou mais características do método de acordo com o quarto aspecto da presente invenção (neste caso, dever-se-á observar que a segunda etapa de concentração do quinto aspecto corresponde à terceira etapa de concentração do quarto aspecto e vice-versa).

[00143] Segundo um sexto aspecto da presente invenção, o uso de um aparelho de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção é fornecido para introdução de pelo menos um composto dentro de eritrócitos.

[00144] Convenientemente, o composto é definido de acordo com a descrição acima.

[00145] Segundo algumas realizações, o uso do aparelho tem lugar de acordo com o quarto e/ou quinto aspecto da presente invenção.

[00146] Segundo um aspecto específico da presente invenção, é fornecido um aparelho de introdução de pelo menos um composto nos eritrócitos; o aparelho 1 é similar (substancialmente idêntico) ao descrito de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção e dele difere porque, além do sensor 26 ou alternativamente a este, ele possui uma ou mais das características a seguir. O aparelho 1 compreende o reservatório 27 e o reservatório 28 para conter a primeira e, respectivamente, a segunda solução. Os canais 9 e 10 são conectados ao reservatório 27 e, respectivamente, ao reservatório 28. O aparelho 1 compreende uma unidade de pesagem 51 para pesar os terceiro e quarto reservatórios 27, 28. A unidade de controle 15 é adaptada para controlar meios de ajuste 29 em função do peso do terceiro reservatório 27 e dos meios de ajuste 30 em função do peso do quarto reservatório 28. O aparelho 1 compreende um reservatório 21 para coletar o que foi separado dos eritrócitos pela unidade de separação 4; um sétimo reservatório que contém uma terceira solução (particularmente, uma solução fisiológica); um canal 47 conectado ao reservatório 48; e um canal 22 conectado ao reservatório 21. Os canais 9 e 10 são conectados ao reservatório 27 e, respectivamente, ao quarto reservatório 28. O aparelho 1 compreende uma unidade de pesagem 51 para pesar os reservatórios 27 e 28, o reservatório 21 e o reservatório 13. A unidade de controle 15 é adaptada para controlar meios de bombeamento 31 (e/ou 40 e/ou 49) em função do peso dos reservatórios 13 (e/ou 21 e/ou 27 e/ou 28 e/ou 39 e/ou 48).

[00147] Segundo aspectos adicionais da presente invenção, é fornecido o seguinte: - a solução (contendo eritrócitos tratados e concentrados, ou seja, obtida após a segunda etapa de concentração) para uso como medicamento; - a solução (contendo eritrócitos tratados e concentrados, ou seja, obtida após a segunda etapa de concentração) para uso em diagnóstico in vivo; - o uso da solução (contendo eritrócitos tratados e concentrados, ou seja, obtidos após a segunda etapa de concentração) para a produção de medicamento; - o uso da solução (contendo eritrócitos tratados e concentrados, ou seja, obtidos após a segunda etapa de concentração) para a produção de medicamento; e - uma composição farmacêutica que compreende a solução (contendo eritrócitos tratados e concentrados, ou seja, obtida após a segunda etapa de concentração).

[00148] A menos que indicado explicitamente em contrário, o conteúdo das referências (documentos, textos, pedidos de patente etc.) mencionadas neste texto é integralmente incorporado ao presente. Particularmente, as referências mencionadas acima são incorporadas ao presente como referência.

[00149] Características adicionais da presente invenção resultarão da descrição a seguir de algumas realizações do aparelho 1 fornecidas como mera forma de ilustração não limitadora.

Exemplo 1

[00150] O presente exemplo descreve testes de operação do dispositivo da Figura 1. O método utilizado a seguir segue as indicações da descrição da operação do aparelho 1 descrito acima com relação ao primeiro aspecto da presente invenção.

[00151] Foram realizados oito testes de carregamento com fosfato de sódio dexametasona (empregando 500 mg para cada procedimento) em glóbulos vermelhos do sangue derivados de 50 ml de sangue integral de doadores saudáveis.

[00152] Os materiais utilizados para os testes são: - dispositivo da Figura 4; - dispositivo da Figura 9; - solução hipotônica 1 (400 ml com osmolaridade de 180 mOsm/kg), solução hipotônica 2 (200 ml com osmolaridade de 120 mOsm/kg); - solução hipertônica de nova vedação (PIGPA) (cerca de 33 mM de NaH2PO4; cerca de 1,606 M de KCl, cerca de 0,194 M de NaCl; cerca de 0,1 M de inosina; cerca de 5 mM de adenina; cerca de 20 mM de ATP; cerca de 0,1 M de glicose; cerca de 0,1 M de piruvato; e cerca de 4 mM de MgCl2) (7 ml a 2500-3800 mOsm/kg); - fosfato de sódio dexametasona em solução aquosa a 500 mg/20 ml (completamente utilizada); - solução salina fisiológica de grau injetável (solução aquosa de NaCl a 0,9% em peso/volume) (sacos de 2 l, dos quais foram utilizados 1,8 l; 0,8 litros para a primeira lavagem e 1 l para a segunda lavagem); e - 50 ml de sangue integral de doador saudável anticoagulado com 10000 UI de heparina sódica.

[00153] Resultados:

[00154] Os dados obtidos pelos testes são exibidos na tabela a seguir, na qual pode ser verificada a capacidade de reprodução real dos resultados entre os diferentes testes por meio de desvio padrão. Tabela 1

[00155] A Tabela 1 exibe os dados do sangue integral antes do procedimento, os dados após o procedimento de encapsulação (incluindo o carregamento da droga nos glóbulos de sangue integral) e, por fim, o feito do aumento do hematócrito em consequência da concentração final por meio de um filtro hemoconcentrador adicional (ou dialisador, conforme exibido na Figura 2).

[00156] Por eficácia da etapa pós-procedimento, indica-se, por sua vez, o percentual dos glóbulos sanguíneos recuperados com relação aos glóbulos sanguíneos iniciais que começaram o processo e correlaciona o peso líquido do saco de coleta e o valor do hematócrito ao final do processo com relação ao volume e ao valor do hematócrito inicial do sangue utilizado para o procedimento.

[00157] Os dados acima demonstram que o objeto da presente invenção permite a obtenção de eritrócitos carregados de forma extremamente eficaz e prática e com rendimentos ideais.

Exemplo 2

[00158] Nanopartículas superparamagnéticas:

[00159] Nanopartículas superparamagnéticas já estão disponíveis e são utilizadas como agentes de contraste em formação de imagens por ressonância magnética (MRI). Uma vez injetadas na circulação sanguínea por meio de injeção intravenosa, entretanto, as nanopartículas são rapidamente cobertas pelos componentes plasmáticos do sangue, um processo conhecido como opsonização que surge como central na determinação da fé das nanopartículas, tornando-as facilmente reconhecíveis para o sistema principal de defesa do corpo, ou seja, o sistema de fagócitos mononucleares. A encapsulação de nanopartículas superparamagnéticas em eritrócitos humanos foi obtida, portanto, pelo aparelho do presente, a fim de evitar a sua rápida remoção da circulação sanguínea e, portanto, obter faixas de tempo de imagem mais amplas em aplicações de ressonância magnética intravascular (PCT/EP07/06349, Fornecimento de Agentes de Contraste para Formação de Imagens por Ressonância Magnética). O carregamento do agente de contraste SHU555A, por exemplo, foi realizado por meio do procedimento e aparelho descritos acima que são objeto da presente patente, tal como na Figura 1. A concentração de SHU555A dentro dos eritrócitos ao final do procedimento foi determinada seguindo-se medições de NMR da capacidade de relaxamento (T1 e T2) das amostras. O rendimento de encapsulação computado desta forma determinou concentrações de SHU555A nos eritrócitos na faixa de 1 a 2,1 mM de Fe.

[00160] A fim de verificar se as células carregadas com as nanopartículas magnéticas por meio do aparelho descrito na Figura 1 mantiveram as propriedades dos eritrócitos nativos, foram conduzidas medições de alguns indicadores da integridade celular. Com base nessas medições, foi possível estabelecer que o procedimento não gera modificações significativas das propriedades de RBCs tais como volume corpuscular médio (MCV), hemoglobulina corpuscular média (MCH) e concentração de hemoglobulina corpuscular média (MCHC), que resultam nas faixas do exemplo anterior (dex 21 P). Em conclusão, as nanopartículas superparamagnéticas foram encapsuladas com sucesso nos RBCs por meio do uso do aparelho exibido na Figura 1, de forma a fornecer um produto com as exigências de uso clínico para emprego para fins de diagnóstico em MRI (formação de imagens por ressonância magnética).

Exemplo 3

[00161] Agente de contraste verde de indocianina (ICG):

[00162] Outra aplicação do método inovador relativo ao transporte de moléculas exógenas em glóbulos vermelhos do sangue é representada pela encapsulação de agentes de contraste a serem utilizados em fluoroangiografia ou com outros métodos de detecção por fluorescência e/ou ótica. Como exemplo, são exibidos resultados da encapsulação do agente de contraste verde de indocianina (ICG) obtido com o aparelho conforme exibido na Figura 2. Isso é proposto como nova estratégia com fins de diagnóstico e terapêuticos para exibição e/ou fotocoagulação de novos vasos do coroide em doenças vasculares e degenerativas da retina.

[00163] ICG é um agente de contraste de infravermelho (IR) que contém tricarbocianina e é aprovado pela FDA para uso em diagnóstico para exibir a vascularização da retina e para terapia fotodinâmica. O seu uso como agente de contraste aproveita-se do fato de que a maior parte das moléculas biológicas não absorve nem emite na região próxima de IR, de forma a gerar fluorescência livre de interferências. O uso real de ICG como marcador fluorescente e agente fotoestabilizante é limitado, entretanto, por diversos fatores: instabilidade em água, degradação devido à luz e ao calor, meia vida curta na circulação sanguínea (cerca de dois a quatro minutos) e rápida liberação hepatobiliar devido à união a proteínas do plasma. Além disso, as moléculas de ICG podem difundir-se através dos vasos e o processo de difusão poderá influenciar a semiologia angiográfica. O fornecimento de ICG no compartimento vascular utilizando eritrócitos como portadores permite superar essas limitações. Desta forma, quando a molécula estiver dentro dos RBCs, ela é, por um lado, protegida contra a desativação por fatores endógenos e, por outro lado, a sua encapsulação em RBCs autólogos indica proteção do organismo contra os efeitos tóxicos do próprio agente (náuseas, vômitos, erupções, choque hipotensivo etc.). À luz disso e a fim de aprimorar significativamente as características de angiografia coroidal e de fotocoagulação a laser, foi utilizado o aparelho da versão exibida na Figura 2, de forma a carregar ICG em eritrócitos humanos autólogos. Após o carregamento dos glóbulos vermelhos do sangue, eles foram concentrados novamente utilizando um segundo hemofiltro, de forma a obter a mesma quantidade de ICG em um volume reduzido de suspensão de eritrócitos que possui hematócrito superior e, portanto, concentração mais alta de ICG.

[00164] Ao completar-se o procedimento de encapsulação de ICG utilizando o aparelho definido na Figura 2, portanto, com uma etapa final de concentração adicional de eritrócitos, foram obtidos 6 ml de ICG contendo RBCs (0,3 μmol/ml de RBCs) com 44% de hematócritos, que podem ser aumentados ainda mais até 60% de hematócritos por meio de extensão da etapa de concentração.

Exemplo 4

[00165] Direcionamento de eritrócitos com substâncias farmacologicamente ativas encapsuladas e/ou substâncias encapsuladas para uso em diagnóstico:

[00166] O direcionamento a macrófagos de eritrócitos que contêm drogas e/ou meios de contraste pode ser atingido pelo aparelho exibido na figura seguindo um procedimento similar ao utilizado no Exemplo 1. Ao utilizar-se fludarabina como agente de encapsulação, obteve-se concentração final de 0,8 mM. Os eritrócitos tratados desta forma foram reconhecidos por IgGs autólogos em percentuais de mais de 80% do número total de células processadas.

Exemplo 5

[00167] Foi obtida uma primeira solução de eritrócitos carregados com verde de indocianina. Essa solução (que não foi concentrada após carregar a indocianina nos eritrócitos) apresentou 6,4% de hematócritos e foi injetada no paciente. A Figura 10 é uma imagem fluoroangiográfica do paciente tratado desta forma.

[00168] Foi obtida uma segunda solução de eritrócitos carregada com verde de indocianina. Essa solução (que não foi concentrada após o carregamento da indocianina nos eritrócitos) continha 54% de hematócritos e foi injetada em um paciente. A Figura 11 é uma imagem fluoroangiográfica do paciente tratado dessa forma.

[00169] A partir da comparação das duas imagens, fica claro que, surpreendentemente, quando a solução diluída (Figura 10) não permitir diagnóstico, a solução concentrada (Figura 11) permite fácil diagnóstico.

[00170] Neste particular, dever-se-á observar que, antes da presente invenção, não era previsível que o resultado de uma concentração mais alta seria esse resultado claro. Particularmente, é absolutamente surpreendente que os eritrócitos carregados não eram dispersos no organismo, mas sim movidos juntos e, portanto, permite-se a obtenção de uma imagem extremamente clara.

Claims (16)

1. Aparelho (1) de introdução de pelo menos um composto em eritrócitos; compreendendo um sistema (2) de canais de conexão, que inclui primeiro e segundo canais (9, 10); uma unidade de introdução (3) para inserção de uma amostra que contém os eritrócitos no interior do aparelho (1); uma unidade de separação (4) para separar os diferentes componentes da amostra entre si; uma unidade de combinação (5), que compreende um primeiro reservatório (6) e em cuja área os eritrócitos e o composto são combinados entre si, de forma a obter eritrócitos tratados; uma entrada (7) para inserção do composto no primeiro reservatório (6); uma unidade de alimentação (8) para alimentar uma primeira solução através do primeiro canal (9) e alimentar uma segunda solução através do segundo canal (10); uma unidade de concentração (11) para concentrar o conteúdo do primeiro reservatório (6); e uma unidade de coleta (12) que compreende um segundo reservatório (13) para coletar eritrócitos tratados; em que o sistema (2) de canais conecta a unidade de introdução (3), a unidade de separação (4), a unidade de combinação (5), a unidade de alimentação (8), a unidade de concentração (11) e a unidade de coleta (12); em que o aparelho (1) compreende uma unidade de controle (15); e primeiros meios de bombeamento (49), que são acionáveis pela unidade de controle (15) e são projetados para mover fluidos pelo menos entre a unidade de introdução (3), a unidade de separação (4), a unidade de combinação (5) e a unidade de coleta (12); a unidade de alimentação (8) compreende primeiros meios de ajuste (29), que são acionáveis pela unidade de controle (15) e são dispostos ao longo do primeiro canal (9) para regular o fluxo ao longo do primeiro canal (9); e segundos meios de ajuste (30), que são acionáveis pela unidade de controle (15) e dispostos ao longo do segundo canal (10) para regular o fluxo ao longo do segundo canal (10); a unidade de coleta (12) compreende terceiros meios de ajuste (33), que são acionáveis pela unidade de controle (15) e adaptados para ajustar o fluxo em direção ao segundo reservatório (13); e caracterizado por o aparelho compreender um sensor de ar (26) para identificar a presença de ar no sistema (2) de canais entre a unidade de introdução (3) e a unidade de separação (4); a unidade de concentração (11) compreende um filtro (37) para separar ao menos parcialmente os eritrócitos tratados do líquido; e um aspirador (38), que é controlado pela unidade de controle (15) e é adaptado para sugar ao menos parte do líquido através do filtro (37).

2. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a unidade de alimentação (8) compreender segundos meios de bombeamento (31), que são acionáveis pela unidade de controle (15) e são projetados para mover as primeira e segunda soluções em direção à unidade de combinação (5).

3. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por a unidade de combinação (5) compreender um dispositivo de mistura (35) controlável pela unidade de controle (15) para mover o primeiro reservatório (6), de forma a misturar o seu conteúdo; e pelo menos um elemento de aquecimento controlável pela unidade de controle (15) para aquecer o conteúdo do primeiro reservatório (6).

4. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por compreender um terceiro reservatório (27) e um quarto reservatório (28) para conter, respectivamente, as primeira e segunda soluções; em que os primeiro e segundo canais (9, 10) são conectados ao terceiro reservatório (27) e ao quarto reservatório (28), respectivamente; o aparelho (1) compreende uma unidade de pesagem (51) para pesar os terceiro e quarto reservatórios (27, 28); a unidade de controle (15) é adaptada para controlar os primeiros meios de ajuste (29) em função do peso do terceiro reservatório (27) e os segundos meios de ajuste (30) em função do peso do quarto reservatório (28).

5. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por compreender uma unidade de alimentação adicional (45), que é projetada para alimentar uma terceira solução (particularmente uma solução fisiológica) ao longo de um terceiro canal (47) do sistema (2) de canais e compreende quartos meios de ajuste (46), que são acionáveis pela unidade de controle (15) e são dispostos ao longo do terceiro canal (47) para regular o fluxo ao longo do terceiro canal (47).

6. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por o sistema (2) de canais compreender um canal de conexão (14) entre a unidade de combinação (5) e a unidade de separação (4); em que os mencionados primeiros meios de bombeamento (49) são dispostos ao longo do canal de conexão (14); a unidade de introdução (3), a unidade de coleta (12) e, possivelmente, a unidade de alimentação (8) e a unidade de alimentação adicional (45) são conectadas ao canal de conexão (14) entre os primeiros meios de bombeamento (49) e a unidade de combinação (5).

7. Aparelho, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por compreender quintos meios de ajuste (50), que são acionáveis pela unidade de controle (15) e são dispostos ao longo do mencionado canal de conexão (14) entre a unidade de alimentação (8) e a unidade de separação (4) e entre a unidade de introdução (3), a unidade de coleta (12) e, possivelmente, a unidade de alimentação adicional (45) por um lado e a unidade de combinação (5) por outro lado.

8. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por a unidade de introdução (3) compreender sextos meios de ajuste (19), que são acionáveis pela unidade de controle (15) e são adaptados para regular o fluxo da unidade de introdução (3).

9. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por a unidade de concentração (11) compreender um quinto reservatório (39) de coleta do líquido que tenha passado através do filtro (37); e terceiros meios de bombeamento (40) para conduzir o conteúdo do primeiro reservatório (6) em contato com o filtro (37); em que o aparelho (1) compreende uma unidade de pesagem (51) para pesar o quinto reservatório (39); e a unidade de controle (15) é adaptada para controlar o aspirador (38) em função do peso do quinto reservatório (39) detectado pela unidade de pesagem (51).

10. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por a unidade de separação (4) compreender um conjunto de centrifugação (20) para separar os eritrócitos e/ou os eritrócitos tratados dos outros componentes.

11. Aparelho, de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por compreender um terceiro reservatório (27) e um quarto reservatório (28) para conter, respectivamente, as primeira e segunda soluções; um sexto reservatório (21) de coleta do que foi separado dos eritrócitos pela unidade de separação (4); um sétimo reservatório (48) que contém uma terceira solução (particularmente, uma solução fisiológica); um terceiro canal (47) conectado ao sétimo reservatório (48); e um quarto canal (22) conectado ao sexto reservatório (21); em que os primeiro e segundo canais (9, 10) são conectados ao terceiro reservatório (27) e, respectivamente, ao quarto reservatório (28); o aparelho (1) compreende uma unidade de pesagem (51) para pesar os terceiro e quarto reservatórios (27, 28), o sexto reservatório (21) e o segundo reservatório (13); a unidade de controle (15) é adaptada para controlar os meios de bombeamento (31; 40; 49) em função do peso dos reservatórios (13; 21; 27; 28; 39; 48).

12. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por compreender um dispositivo reutilizável (56), que compreende meios de bombeamento, meios de ajuste, a unidade de controle (15) e, possivelmente, uma placa giratória (25) do conjunto de centrifugação, o sensor de ar (26), o dispositivo de pesagem (51) e o aspirador (38); e um dispositivo descartável (55) que compreende o sistema (2) de canais, os reservatórios e, possivelmente, o(s) filtro(s) e uma tigela de separação (24) do conjunto de centrifugação (20).

13. Aparelho, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por a unidade de combinação (5) compreender um dispositivo de mistura (35) controlável pela unidade de controle (15) para mover o primeiro reservatório (6) de forma a misturar o seu conteúdo; e pelo menos um dispositivo de pesagem para pesar o conteúdo do primeiro reservatório (6).

14. Kit descartável para o aparelho (1) conforme definido em qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por o kit compreender o sistema (2) de canais e os reservatórios conectados ao sistema (2) de canais do aparelho (1); pelo menos um dos canais (14) do sistema (2) de canais possui pelo menos um segmento com dureza de menos de 70 Shore A; e o mencionado segmento é adaptado para que seja disposto no sensor (26).

15. Kit, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por compreender pelo menos um filtro (37) para a unidade de concentração (11), uma tigela de separação (24) para um conjunto de centrifugação (20) para a unidade de separação (4), um sexto reservatório (21) para coletar o que foi separado dos eritrócitos pela unidade de separação (4) e um sétimo reservatório (48) para conter a terceira solução (particularmente uma solução fisiológica).

16. Dispositivo reutilizável caracterizado por ser de acordo com a reivindicação 12.

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