ES2626820T3 - Moduladores selectivos del receptor de andrógenos - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula:**Fórmula** en la que n es 1 o 2; X es -CH2- o -O-; R1 es -CH3 o -CH2-CH3; R2 es -H o -CH3; R3 es -H o -OH; en la que R3 es -H cuando X es -O-; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

DESCRIPCION

Moduladores selectivos del receptor de androgenos

El receptor de androgenos (RA) es parte de la subfamilia de receptores de hormonas nucleares esteroideas que tambien incluye el receptor de mineralocorticoides (RM), el receptor de progesterona (RP), el receptor de estrogenos (RE) y el receptor de glucocorticoides (RG). Los androgenos esteroideos endogenos (por ejemplo, testosterona y 5a- dihidrotestosterona (DHT)) son las principales hormonas sexuales circulantes y desempenan un papel en la regulacion de diversos procesos fisiologicos. Los efectos anabolicos (por ejemplo, la construccion de tejido) de los androgenos incluyen el aumento de la masa y la fuerza musculares y el aumento de la masa y la densidad oseas, mientras que los efectos androgenicos (por ejemplo, la masculinizacion) incluyen el desarrollo de los tejidos reproductores internos (por ejemplo, prostata y vesmulas seminales), los genitales externos, los patrones de crecimiento de vello masculino y la libido. Clmicamente, la terapia de sustitucion androgenica se ha utilizado en el tratamiento de diversas afecciones y trastornos que incluyen el hipogonadismo masculino, las enfermedades de desgaste muscular y la caquexia.

Sin embargo, la terapia con androgenos esteroideos es limitada. Por ejemplo, se ha descubierto que las preparaciones de androgenos esteroideos sufren una rapida degradacion en el tugado que conduce a una biodisponibilidad oral mala y a la corta duracion de la actividad tras la administracion parenteral, variaciones en los niveles plasmaticos, hepatotoxicidad o reactividad cruzada con otros receptores de hormonas esteroideas, tales como RG, RM y RP. Adicionalmente, se ha observado que los androgenos no esteroideos y esteroideos anabolicos orales producen una mayor disminucion de las lipoprotemas de alta densidad (HDL) en los hombres y las mujeres eugonadales con respecto a los androgenos parenterales. Se ha senalado que la disminucion de HDL da como resultado malos resultados de salud cardiovascular.

Por tanto, sigue existiendo una necesidad de alternativas a la terapia con androgenos esteroideos. Mas en particular, sigue existiendo una necesidad de agonistas no esteroideos del RA que se unen al RA con mayor afinidad con respecto a los otros receptores de hormonas esteroideas. Incluso mas en particular, sigue existiendo una necesidad de moduladores selectivos de tejido del receptor de androgenos (SARM, del ingles tissue-selective androgen receptor modulator) que presenten una actividad agonista de androgenos en tejidos anabolicos tales como el musculo o el hueso, pero solo agonista parcial, antagonista parcial o antagonista en tejidos androgenicos tales como la prostata o la vesmula seminal. Los SARM pueden proporcionar los beneficios de los esteroides anabolicos tradicionales, tales como el crecimiento del musculo o del hueso, mientras que minimizan los efectos proliferativos o hipertroficos sobre los tejidos sexuales.

La solicitud de patente internacional publicada WO 08/130879 desvela derivados de tetrahidroindol y tetrahidroindazol para su uso en el tratamiento o la prevencion de enfermedades/trastornos mejorados por la inhibicion de la Protema de Choque Termico 90. Las solicitudes de patente internacional publicadas, WO09/105214 y WO06/124447, desvelan SARM no esteroideos de molecula pequena. Aun asf, existe una necesidad de nuevos compuestos SARM no esteroideos con una potencia y/o caractensticas farmacocineticas mejoradas, tales como biodisponibilidad de exposicion. Tambien existe una necesidad de compuestos SARM eficaces. Adicionalmente, existe una necesidad de compuestos SARM que aumenten la masa muscular sin el efecto secundario del agrandamiento de la glandula prostatica. Se sabe que los androgenos y los compuestos SARM disminuyen las HDL a exposiciones eficaces cuando se entregan por via oral. Por tanto, existe una necesidad de compuestos SARM que no disminuyan significativamente los niveles de HDL. La presente invencion proporciona compuestos preferidos que modulan el receptor de androgenos, que tienen un riesgo mmimo de disminucion de las HDL a dosis eficaces cuando se entregan a traves de una via transdermica.

Por tanto, la presente invencion proporciona compuestos novedosos que son agonistas del RA. Mas preferentemente, los compuestos son SARM. Dichos nuevos compuestos podnan abordar la necesidad de un tratamiento potente y eficaz de la atrofia muscular, el hipogonadismo o la caquexia con un mmimo riesgo de agrandamiento de la prostata o de disminucion de las HDL.

La presente invencion proporciona un compuesto de formula:

imagen1

en la que

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

n

es 1 o 2;

X

es -CH2- o -O-;

R1

es -CH3 o -CH2-CH3

R2

es -H o -CH3;

R3

es -H o -OH;

en la que R3 es -H cuando X es -O-; o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

La presente invencion proporciona adicionalmente una formulacion farmaceutica que comprende un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y un vetuculo, un diluyente o un excipiente farmaceuticamente aceptables. La presente invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y uno o mas vetuculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables. En una realizacion adicional, la presente invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un solvato, en la que las moleculas de solvato incluyen etanol e isopropanol. En una realizacion adicional, la presente invencion proporciona una composicion farmaceutica para el tratamiento o la prevencion de la atrofia muscular asociada al reemplazo de cadera o de rodilla, la fractura de cadera, la lesion medular o el ictus, que comprende un compuesto de la invencion en combinacion con uno o mas vetuculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables. En una realizacion adicional mas, la composicion farmaceutica comprende adicionalmente uno o mas de otros agentes terapeuticos. En otra realizacion, la composicion farmaceutica tiene un riesgo mmimo de disminucion de las HDL.

Adicionalmente, la presente invencion proporciona un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en terapia, en particular para el tratamiento o la prevencion de la atrofia muscular. Incluso adicionalmente, la presente invencion proporciona un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de la atrofia muscular. En una realizacion adicional, la presente invencion proporciona un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevencion de la atrofia muscular asociada al desuso, el traumatismo, la inmovilizacion, la lesion medular o el ictus. Incluso adicionalmente, la presente invencion proporciona un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevencion de la atrofia muscular asociada a la sustitucion de cadera o de rodilla, la fractura de cadera, la lesion medular o el ictus. Ademas, la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion de la atrofia muscular. En una realizacion adicional, la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion de la atrofia muscular asociada al reemplazo de cadera o de rodilla, la fractura de cadera, la lesion medular o el ictus.

La presente invencion tambien proporciona un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevencion del hipogonadismo. Tambien, la presente invencion proporciona un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevencion de la caquexia. Ademas, la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion del hipogonadismo o la caquexia. La presente invencion proporciona el uso de un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion del hipogonadismo o la caquexia.

La presente invencion tambien proporciona un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en la prevencion de lesiones relacionadas con cafdas en ancianos con debilidad muscular. Ademas, la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para la prevencion de lesiones relacionadas con cafdas en ancianos con debilidad muscular.

La presente invencion tambien proporciona un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inversion, el tratamiento o la prevencion de los efectos adversos de la terapia de privacion de androgenos (ADT, del ingles androgen deprivation therapy). Ademas, la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de la invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de un medicamento para la inversion, el tratamiento o la prevencion de los efectos adversos de la ADT.

La presente invencion tambien abarca productos intermedios y procedimientos utiles para la smtesis de un compuesto de la presente invencion.

Se cree que un compuesto de la presente invencion es util en el tratamiento o la prevencion de afecciones con perdida de masa muscular o de la atrofia muscular. La atrofia muscular puede producirse como un resultado natural del envejecimiento (por ejemplo, sarcopenia). Como alternativa, la atrofia muscular puede producirse como una consecuencia secundaria del desuso o la inactividad (por ejemplo, tras la sustitucion de cadera o de rodilla o la fractura de cadera), el traumatismo, la inmovilizacion (por ejemplo, el escayolado o la colocacion de una ferula en las

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

extremidades), asf como la lesion medular o el ictus. (Vease, Hafer-Macko y col., J. Rehab. Res. Develop.; 45(2): 261-272 (2008)). Por tanto, la expresion "atrofia muscular", como se usa en el presente documento, es sinonimo de perdida de masa muscular y se refiere a una afeccion en la que un paciente ha perdido masa muscular debido a una patologfa tal como el cancer, el VIH, o como resultado de un penodo o penodos prolongados de inactividad o como un tratamiento adyuvante despues de la cirugfa, donde penodos significativos de inactividad tienen o pueden tener como resultado la perdida de masa muscular. Adicionalmente como se usa en el presente documento, la expresion "atrofia muscular asociada al desuso, el traumatismo, la inmovilizacion, la lesion medular o el ictus" se refiere a la atrofia muscular que se produce como consecuencia secundaria a la incidencia del desuso o la inactividad (por ejemplo, tras el reemplazo de cadera o de rodilla o la fractura de cadera), el traumatismo, la inmovilizacion (por ejemplo, el escayolado o la colocacion de una ferula en las extremidades), la lesion medular o el ictus. Ademas, en el contexto de la lesion medular o el ictus, un compuesto de la presente invencion puede usarse como un adyuvante de la terapia de rehabilitacion convencional (por ejemplo, la terapia ffsica u ocupacional, el ejercicio, la caminata asistida y/o el entrenamiento de fuerza). Incluso adicionalmente, un compuesto de la presente invencion puede usarse para el tratamiento o la prevencion de las comorbilidades como resultado de cafdas debido a la atrofia muscular de miembros inferiores como se evidencia por los cambios en las mediciones objetivas que evaluan el riesgo de cafdas en los ancianos (vease Close y Lord, BMJ 2011; 343:d5153).

Se cree que un compuesto de la presente invencion es util en la inversion, el tratamiento o la prevencion de los efectos adversos de la terapia hormonal para el cancer de prostata, tambien denominada terapia de privacion de androgenos (ADT, del ingles androgen deprivation therapy) o terapia de supresion de androgenos.

La Figura 1 es un espectrograma de un patron de difraccion de rayos X de polvo (DRX) representativo para la Forma 1 cristalina de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo. El espectrograma de DRX se obtuvo como se describe en el Ejemplo 1C a continuacion. La Figura 2 es un espectrograma de un patron de DRX representativo para la Forma 2 cristalina de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil- benzonitrilo. El espectrograma de DRX se obtuvo como se describe en el Ejemplo 1D a continuacion. La Figura 3 es un espectrograma de un patron de DRX representativo para el solvato de etanol cristalino de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2- hidroxi-2-metilciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo. El espectrograma de DRX se obtuvo como se describe en el Ejemplo 1E a continuacion. La Figura 4 es un espectrograma de un patron de DRX representativo para el solvato de isopropanol cristalino de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metilciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo. El espectrograma de DRX se obtuvo como se describe en el Ejemplo 1F continuacion.

Se entiende que la expresion "cantidad eficaz" significa la dosis o las dosis de un compuesto de la invencion requeridas para el tratamiento de la atrofia muscular, el hipogonadismo o la caquexia en un mairnfero. Un compuesto de la presente invencion es en general eficaz en un amplio intervalo de dosificacion. Por ejemplo, las dosificaciones por dfa normalmente entran dentro del intervalo de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal. En algunos casos, pueden ser mas que adecuados niveles de dosificacion por debajo del lfmite inferior del intervalo mencionado anteriormente, mientras que en otros casos pueden emplearse dosis aun mayores manteniendo un perfil de beneficio/riesgo favorable, y por tanto no se pretende que el intervalo de dosificacion anterior limite el ambito de la invencion de ninguna manera. Se entendera que es probable que la cantidad de un compuesto administrada en realidad sea determinada por un medico, a la luz de las circunstancias relevantes, incluyendo la afeccion que se trata, la via de administracion elegida, el compuesto o compuestos administrados en realidad, la edad, el peso y la respuesta del paciente individual y la gravedad de los smtomas del paciente.

El termino "tratar" (o "tratado" o "tratamiento") como se usa en el presente documento se refiere a impedir, restringir, ralentizar, detener o invertir la progresion o la gravedad de un smtoma, una afeccion o un trastorno existentes. El termino "prevenir" (o "prevenido" o "prevencion") como se usa en el presente documento se refiere a impedir, restringir o inhibir la incidencia o la aparicion de un smtoma, afeccion o trastorno. Los smtomas, las afecciones o los trastornos pueden presentarse como acontecimientos "cronicos" o "agudos". En un acontecimiento agudo el compuesto se administra al inicio del smtoma, afeccion o trastorno y se interrumpe cuando el acontecimiento desaparece, mientras que un smtoma, una afeccion o un trastorno cronicos se tratan durante todo el transcurso del acontecimiento. La presente invencion contempla tanto el tratamiento agudo como el cronico.

Un compuesto de la presente invencion puede reaccionar con cualquiera de un numero de acidos inorganicos y organicos para formar sales de adicion de acido farmaceuticamente aceptables. Las sales farmaceuticamente aceptables y la metodologfa comun para prepararlos son bien conocidas en la tecnica. Vease, por ejemplo, P. Stahl y col. Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, segunda edicion revisada (Wiley-VCH, 2011); S.M. Berge y col., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, N.° 1, enero de 1977.

El experto en la materia apreciara que los compuestos de la invencion se componen de un nucleo que puede contener hasta tres centros quirales, como se ilustra en I(a) a continuacion:

5

10

15

20

25

30

35

imagen2

Aunque la presente invencion contempla todos los enantiomeros individuals, as^ como mezclas de los enantiomeros de dichos compuestos incluyendo los racematos, los compuestos con la configuracion absoluta que se ilustra en I(b) a continuacion son compuestos preferidos de la invencion.

imagen3

Los isomeros de los compuestos de la invencion se etiquetan como isomero 1, isomero 2, etc., comenzando por el primero en eluir (menor tiempo de retencion) del procedimiento de separacion cromatografica empleado y desvelado en el presente documento.

El experto apreciara que pueden crearse centros quirales adicionales en los compuestos de la invencion mediante la seleccion de ciertas variables. La presente invencion contempla todos los enantiomeros o diastereomeros individuales, asf como mezclas de los enantiomeros y diastereomeros de dichos compuestos, incluyendo los racematos.

El experto en la materia tambien apreciara que las designaciones (R) o (S) de Cahn-Ingold-Prelog para todos los centros quirales variaran dependiendo de los patrones de sustitucion del compuesto particular. Los enantiomeros o diastereomeros unicos pueden prepararse comenzando con reactivos quirales o mediante tecnicas de smtesis estereoselectivas o estereoespedficas. Como alternativa, los enantiomeros o diastereomeros unicos pueden aislarse de mezclas mediante tecnicas cromatograficas o de cristalizacion quirales convencionales en cualquier punto conveniente de la smtesis de compuestos de la invencion. Los enantiomeros y diastereomeros unicos de los compuestos de la invencion son una realizacion preferida de la invencion.

Como modulador del RA, un compuesto de la presente invencion puede ser util para el tratamiento de la atrofia muscular. Adicionalmente, un compuesto de la presente invencion puede ser util para el tratamiento del hipogonadismo. Incluso adicionalmente, un compuesto de la presente invencion puede ser util para el tratamiento de la caquexia. Otra realizacion de la presente invencion es un compuesto de la presente invencion para el tratamiento de una enfermedad o afeccion capaz de mejorarse o prevenirse mediante la modulacion del RA. Una realizacion adicional de la presente invencion es el uso de un compuesto de la presente invencion para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afeccion capaz de mejorarse o prevenirse mediante la modulacion del RA.

Un compuesto de la presente invencion se formula preferentemente como composiciones farmaceuticas administradas mediante una diversidad de rutas. Preferentemente, dichas composiciones son adecuadas para la entrega transdermica y se formulan como un parche, un gel topico, una pulverizacion topica o una crema topica. Dichas composiciones farmaceuticas y procedimientos para la preparacion de las mismas son bien conocidos en la tecnica. Vease, por ejemplo, Remington: The Science y Practice of Pharmacy (A. Gennaro y col., eds, 21a ed., Mack Publishing Co., 2005).

Aunque todos los compuestos ejemplificados de la invencion son agonistas del receptor de androgenos, se prefieren ciertas clases de compuestos. Los siguientes parrafos describen dichas clases preferidas:

a) n es 1;

b) n es 2;

c) X es -CH2-

d) X es -O-;

5 e) R1 es -CH3;

f) R1 es -CH2-CH3;

g) R2 es -CH3;

h) R2 es H;

i) R3 es -H;

10 j) R3 es -OH;

k) R1 es -CH2-CH3 cuando R3 es -OH;

l) R1 es -CH2CH3 cuando X es -O-;

m) R1 es -CH3 cuando X es -CH2-;

n) el compuesto de la presente invencion es la base libre;

15 o) el compuesto de la presente invencion es el solvato de etanol;

p) el compuesto de la presente invencion es el solvato de isopropanol.

Una realizacion preferida de los compuestos de la presente invencion se refiere a compuestos de la invencion de la siguiente formula,

imagen4

20 en la que

n es 1 o 2;

R1 es -CH3 o -CH2-CH3;

R2 es -H o -CH3;

R3 es -H o -OH;

25 o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos.

Otra realizacion preferida de los compuestos de la presente invencion se refiere a compuestos de la invencion de la siguiente formula,

imagen5

en la que

30 n es 1 o 2;

R1 es -CH3 o -CH2-CH3;

R2 es -H o -CH3;

o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos.

Una realizacion preferida adicional de los compuestos de la presente invencion se refiere a compuestos de la 35 siguiente formula,

imagen6

en la que

R1 es -CH3 o -CH2-CH3;

R2 es -H o -CH3;

5 R3 es -H o -OH;

o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos. En dicha realizacion, se prefiere que R1 sea -CH3. Se prefiere tambien en dicha realizacion que R1 sea -CH2-CH3 cuando R3 es -OH.

Otra realizacion preferida adicional de los compuestos de la presente invencion se refiere a compuestos de la siguiente formula,

10

15

en la que

imagen7

R1 es -CH3 o -CH2-CH3;

R2 es -H o -CH3;

R3 es -H o -OH;

o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos. En dicha realizacion, se prefiere que R1 sea -CH3. Se prefiere tambien en dicha realizacion que R1 sea -CH2-CH3 cuando R3 es -OH.

Otra realizacion preferida de los compuestos de la presente invencion se refiere a compuestos de la siguiente formula,

imagen8

20 en la que

R1 es -CH3 o -CH2-CH3;

R2 es -H o -CH3;

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En dicha realizacion, se prefiere que R1 sea -CH2CH3-.

Una realizacion preferida adicional de los compuestos de la presente invencion se refiere a compuestos de la siguiente formula,

5

en la que

R1 es -CH3 o -CH2-CH3;

R2 es -H o -CH3;

imagen9

o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos. En dicha realizacion, se prefiere que R1 sea -CH2CH3.

imagen10

o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos. Una realizacion especialmente preferida de la presente hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

invencion se refiere al compuesto, 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-

imagen11

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

Otra realizacion especialmente preferida de la presente invencion se refiere al compuesto, 2-cloro-4-[[(1S,2R)-2- hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo,

5

10

15

20

25

imagen12

o una sal farmaceuticamente aceptable sal del mismo.

Como se usa en el presente documento, los siguientes terminos tienen los significados que se indican: "abs" se refiere a absoluto; "promotor de CMV" se refiere a promotor de citomegalovirus; "Bn" se refiere a bencilo; "BOC" se refiere a ferc-butoxicarbonilo; "CS-FBS" se refiere a suero bovino fetal tratado con carbon vegetal; "DMAC" se refiere a dimetilacetamida; "DMEM" se refiere a medio de Eagle modificado por Dulbecco; "DMF" se refiere a dimetilformamida; "DMSO" se refiere a sulfoxido de dimetilo; "DTT" se refiere a ditiotreitol; "EDTA" se refiere a acido etilendiaminotetraacetico; "EtOAc" se refiere a acetato de etilo; "EtOH" se refiere a etanol; "Ej" se refiere a ejemplo; "FBS" se refiere a suero bovino fetal; "h" se refiere a hora; "HEK" se refiere a rinon humano embrionario; "HEPES" se refiere a acido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinetanosulfonico; "IPM" se refiere a miristato de isopropilo; "LDA" se refiere a diisopropilamida de litio; "MCPBA" se refiere al acido mefa-cloroperoxibenzoico; "MeOH" se refiere a metanol; "MTBE" se refiere a metil ferc-butil eter; "min" se refiere a minutos; "NCS" se refiere a W-clorosuccinimida; "Prep" se refiere a la preparacion; "rel" se refiere a relativo; "CFS" se refiere a cromatograffa de fluido supercntico; "TBAf" se refiere a fefra-butilamonio; "TBDMS" se refiere a f-butildimetilsililo; "TBDPS" se refiere a f-butildifenilsililo; "TEA" se refiere a trietilamina; "TEMPO "se refiere a N-oxido de 2,2,6,6-tetrametilpiperidina; "THF" se refiere a tetrahidrofurano; "TMS" se refiere a trimetilsililo; "promotor de TK" se refieren a promotor de timidina cinasa; y "DRX" se refiere a la difraccion de rayos X.

En los esquemas siguientes, todos los sustituyentes a menos que se indique lo contrario, se definen como anteriormente. Los reactivos y materiales de partida generalmente estan facilmente disponibles para un experto habitual en la tecnica. Otros pueden fabricarse mediante tecnicas convencionales de qmmica organica y heterodclica que son analogas a las smtesis de compuestos estructuralmente similares conocidos y los procedimientos que se describen en las Preparaciones y Ejemplos a continuacion incluyendo cualquier procedimiento novedoso.

Los compuestos de la presente invencion comprenden hasta tres centros quirales o mas. Se reconocera por un experto en la materia que existen tecnicas comunes utiles para la separacion y la identificacion de diastereomeros o enantiomeros. Dichas tecnicas incluyen cromatograffa en gel de sflice para separar diastereomeros, cromatograffa quiral para separar enantiomeros, smtesis usando materiales de partida de configuracion conocida o hacer uso de tecnicas de smtesis que son conocidas para proporcionar una estereoqmmica definida en un centro quiral o una configuracion diastereomerica relativa, tal como cis o frans.

5

10

15

20

25

30

35

imagen13

El Esquema 1 representa la formacion de aminoalcoholes de formula (8).

En la Etapa A, una olefina dclica de formula (1) se oxido a un epoxido de formula (2). La olefina (1) se trato con un agente oxidante, tal como MCPBA, en un disolvente inerte, tal como diclorometano a 0 a 40 °C durante 2 a 24 h para obtener el epoxido (2).

En la Etapa B, un epoxido de formula (2) se abrio para proporcionar el azido-alcohol de formula (3). La reaccion transcurrio en una mezcla de disolventes de agua y MeOH usando una fuente de azida, tal como azida de sodio, en presencia de cloruro de amonio a una temperatura de 50 a 70 °C durante un penodo de 2 a 24 h. Como alternativa, la reaccion puede realizarse en un disolvente tal como DMF, con o sin la adicion de un acido de Lewis, tal como perclorato de litio, de 50 a 100 °C, preferentemente a aproximadamente 90 °C durante 12 a 72 h.

En la etapa C, la azida (3) se redujo a la amina de formula (4), que puede hacerse reaccionar directamente con un fluoro-benzonitrilo (Esquema 5). La amina (4) puede obtenerse por hidrogenacion sobre un catalizador de paladio, tal como paladio al 10 % sobre carbono, en un disolvente inerte, tal como MeOH o EtOH a aproximadamente de 10 a 40 °C.

Como alternativa, en la Etapa B1, en la que R2 es metilo, la amina (4) puede obtenerse directamente a partir del epoxido (2) por reaccion con hidroxido de amonio. La reaccion transcurrio en un recipiente a presion, en una mezcla de disolventes de agua/EtOH de 70 a 100 °C durante aproximadamente de 2 a 18 h.

Con respecto a la amina de formula (4), en la que R2 = H, el grupo metilo puede introducirse usando las Etapas D-G. La proteccion de la amina (4) con un grupo bOc en la Etapa D proporciono un amino-alcohol protegido de formula (5). Las condiciones preferidas para la proteccion de la amina usaron dicarbonato de di-ferc-butilo en una mezcla de disolventes de acetona y agua, en presencia de una base inorganica tal como NaHCO3.

En el Esquema 1 Etapa E, el amino-alcohol protegido (5) se oxido a la cetona (6). El tecnico experto reconocera que existen muchos procedimientos para efectuar una oxidacion de este tipo. Las condiciones preferidas usaron la oxidacion de Swern bien conocida. Por tanto, se combinaron cloruro de oxalilo y DMSO en un disolvente inerte, tal como diclorometano o THF, a una temperatura de -80 a -60 °C y se dejaron reaccionar a esa temperatura durante un penodo de aproximadamente 5 a 20 min para producir el intermedio reactivo cloruro de dimetilclorosulfonio. A esto le siguio la adicion del alcohol (5), de nuevo a una temperatura de -80 a -60 °C con la reaccion durante un penodo de aproximadamente 30 a 60 min. Finalmente, se anadio una base organica, tal como TEA a la misma temperatura. Se anadieron al menos 2 equivalentes de la base, normalmente de aproximadamente 5 a 6 eq de TEA y la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente durante 1 a 24 h.

Como alternativa, el alcohol (5) puede oxidarse usando condiciones de Anelli en las que se usa TEMPO cataltticamente, a una carga de catalizador de aproximadamente el 5 % en moles, en presencia de bromuro de potasio, en un sistema de disolventes bifasico de diclorometano e hipoclorito de sodio acuoso, en el que se anadieron carbonato de potasio u otra base inorganica para ajustar la solucion de hipoclorito de sodio a aproximadamente pH = 7,5-8. El TEMPO mas el alcohol (5) en diclorometano se enfrio a una temperatura de -5 a 5 °C. La temperatura se mantuvo durante la adicion de la solucion de hipoclorito de sodio con el pH ajustado y a

5

10

15

20

25

30

35

traves del resto de la reaction que transcurrio durante aproximadamente 20 min a 4h para proporcionar la cetona

(6).

En la Etapa F, la cetona (6) se sometio a una reaccion de Grignard con bromuro de metilmagnesio para proporcionar el alcohol terciario de formula (7). La reaccion transcurrio en un disolvente inerte tal como dietil eter o THF. El reactivo de Grignard, bromuro de metilmagnesio, se anadio lentamente a una temperatura de -80 a 5°C, preferentemente a una temperatura de -5 a 5°C y la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente durante 12 a 48 h.

En la Etapa G, el grupo protector BOC se retiro para proporcionar la amina desprotegida de formula (8). Las condiciones acidas para la elimination de los grupos Boc, tales como HCl en dioxano, son bien conocidos en la tecnica.

Pueden emplearse diferentes grupos protectores por un experto en la materia. Por ejemplo, la amina de formula (4) puede protegerse por bis-alquilacion con bromuro de bencilo en un sistema de disolventes, tal como acetona/agua, en presencia de una base inorganica, tal como carbonato de potasio y puede calentarse a 40 °C a la temperatura de reflujo del disolvente para proporcionar el analogo de dibencilamino. La oxidation a la cetona y la posterior reaccion con bromuro de metilmagnesio puede proporcionar el amino-alcohol terciario. Los grupos bencilo pueden retirarse usando hidrogenacion con catalizadores de Pd habituales en la tecnica, tales como negro de paladio o hidroxido de paladio sobre carbono.

Un experto en la materia reconocera que algunas de las aminas (4) estan disponibles en el mercado en forma de estereoisomeros puros, tales como (1R,2S)-2-aminociclopentanol, obviando de este modo la necesidad de Etapas A-C.

imagen14

El Esquema 2 representa la formation de amino alcoholes de formula (12) y (14), en los que la quiralidad se introdujo usando la quimica de Jacobsen comenzando con un epoxido meso de formula (9) (en el que Y = CH2, CH2CH2 o O).

Por ejemplo, en la Etapa A, se sometio un epoxido meso (9) a una apertura de anillo asimetrica con azidotrimetilsilano usando un complejo de (salen)Cr(II) quiral o un complejo de (salen)Co(II) quiral, tal como (1R,2R)- (-)-1,2-ciclohexanodiamino-N,N'-bis(3,5-di-t-butilsaliciliden)cobalto (II) (vease Jacobsen, E. N. y col. J. Org. Chem. 1997, 62, 4197-4199). La reaccion se desarrollo pura a temperatura ambiente a 60 °C durante de 4 a 24 h.

En la Etapa B, la azida (10) se redujo a la amina de formula (11), como se ha descrito previamente para el Esquema 1, Etapa C. Esto puede ir seguido de la retirada del grupo TMS usando anion fluoruro, tal como con TBAF para proporcionar un amino alcohol quiral (12).

Si se desea insertar el grupo metilo, entonces puede hacerse una manipulation adicional del grupo de protection con la amina protegida con un grupo BOC (Etapa D), una retirada de TMS (Etapa D1) y despues la elaboration al amino-alcohol de formula (14) siguiendo las Etapas E, F y G, que son exactamente analogas a las Etapas E, F y G en el Esquema 1.

El uso de otro complejo de salen quiral, por ejemplo (1S,2S)-(-)-1,2-ciclohexanodiamino-N,N’-bis(3,5-di-t- butilsaliciliden)cobalto (II) proporciono acceso a moleculas con una estereoquimica opuesta a la mostrada para los productos intermedios (10) a (14). Despues de la union al benzonitrilo (Esquema 5) los diastereomeros (grupos amino e hidroxilo cis y trans) pueden separarse convenientemente usando cromatografia en gel de silice.

5

10

15

20

25

imagen15

El Esquema 3 represents la formacion de c/s-amino alcoholes de formula (19), comenzando con un diol quiral de formula (15) (en la que Y = CH2 u O).

En la Etapa A, el diol (15) se hizo reaccionar con TBDMSCl (1,1 eq) en un disolvente inerte, tal como diclorometano, en presencia de una base organica, tal como TEA a temperatura ambiente durante de 2 a 5 dias para proporcionar el sililoxi-hidroxi (16).

En la Etapa B, el otro grupo hidroxilo de (16) se mesilo usando condiciones convencionales para proporcionar el mesilato (17). La reaccion transcurrio en un disolvente inerte, tal como diclorometano, en presencia de 2,6-lutidina y una base organica tal como trietilamina o diisopropiletilamina usando cloruro de metanosulfonilo. La reaccion se realizo a -20 °C a temperatura ambiente durante de 4 a 24 h.

En el Esquema 3, Etapa C, el mesilato (17) se sometio a un desplazamiento Sn2 con azida de sodio para proporcionar la sililoxi azida de formula (18) en la que la estereoquimica en el atomo de carbono reaccionante se habia invertido. La reaccion transcurrio en un disolvente inerte, tal como DMF a 60 a 130 °C durante de 2 dias a 2 semanas. Puede anadirse un catalizador de transferencia de fase, tal como yoduro de tetrabutilamonio.

En la Etapa D, la sililoxi azida (18) se redujo a la sililoxi amina (19) usando condiciones como las que se han descrito anteriormente para el Esquema 1, Etapa C.

El uso del enantiomero de diol (15) proporciono acceso al otro enantiomero c/s.

imagen16

En la Etapa A, la olefina de formula (20) se oxido a los epoxidos (21a) y (21b) usando MCPBA. La reaccion se realizo en un sistema bifasico de disolventes de diclorometano y bicarbonato de sodio acuoso a 0 °C a temperatura ambiente durante de 4 a 24 h. Pueden anadirse MCPBA adicional y bicarbonato de sodio acuoso si es necesario. Los epoxidos diastereomericos se separaron mediante cromatografia y se trasladaron por separado a las Etapas B y C.

En la Etapa B, los epoxidos (21a) o (21b) se abrieron con azida de sodio para proporcionar los azido-alcoholes (22a) y (22 b) como se han descrito previamente para el Esquema 1, Etapa B.

En la Etapa C, la reduccion de la azida (22a) o (22b) era analoga al Esquema 1, Etapa C, para proporcionar los amino-alcoholes (23a) o (23b).

imagen17

En el Esquema 4A se representa un procedimiento alternativo para la obtencion de los cuatro diastereoisomeros de 5 amino-dioles de formula (25a-d) usando la qulmica de Davies (vease Aciro, C. y col. Org. Biomol. Chem. 2008, 6, 3751-3761; Aciro, C. y col. Org. Biomol. Chem. 2008, 6, 3762-3770; Bond, C. W. y col. J. Org. Chem. 2009, 74, 6735-6748), en particular los de (25c) y (25d) en los que la amina y el hidroxilo adyacentes son cis entre si.

Puede obtenerse amina dibencil alllica (24) a partir de ciclohexeno mediante bromacion, seguida de desplazamiento con bromuro de dibencilamina (vease Davies). Como alternativa, el desplazamiento puede hacerse con bencilamina 10 seguida de bencilacion de la amina bencil alllica con bromuro de bencilo. Como alternativa, la amina dibencil alllica (24) podrla obtenerse directamente mediante la aminacion reductora en la cetona correspondiente con dibencilamina o bencilamina, seguida de bencilacion con bromuro de bencilo. La amina dibencil alllica de formula (24), en la que R2 = Me, puede obtenerse tratando 2-metil-2-ciclopenten-1-ol o 2-metil-2-ciclohexeno-1-ol con NCS y sulfuro de dimetilo para proporcionar 5-cloro-1-metil-ciclopenteno o el ciclohexeno correspondiente (vease Funk, R. L. y col. 15 Tetrahedron 1985, 41, 3479-3495, compuesto 46b). Se aplico la misma qulmica de desplazamiento que se ha descrito anteriormente. Un experto en la materia reconocera que el cloruro tambien podrla obtenerse mediante el tratamiento del alcohol con cloruro de tionilo.

El tecnico experto reconocera que existen otras metodologlas disponibles en la bibliografla que pueden aplicarse para obtener los diastereomeros (25a-d). Por ejemplo, a partir de la acetamida analoga (en lugar de la 20 dibencilamina), Whitten y companeros de trabajo (vease Whitten, J. P., McCarthy, J. R. y Whalon, R. M. J. Org. Chem. 1985, 50, 4399-4402) obtuvieron los cuatro diastereomeros (en los que n = 1, R2 = H). Ademas, Donohoe y companeros de trabajo (Blades, K., Donohoe, T. J., Winter, J. J. G. y Stemp, G. Tetrahedron Lett., 2000, 41, 47014704), usando la tricloroacetamida alllica analoga, consiguieron la selectividad syn usando tetraoxido de osmio catalltico en presencia de N-oxido de quinuclidina.

5

10

15

20

25

imagen18

El Esquema 5 muestra la formation de compuestos de la invention, amino benzonitrilos de formula (29) y (31) (estereoqulmica no mostrada; R3a es Ho si X = CH2, R3a tambien puede ser OTBDPS; R4 = Ho TBDMS).

En la Etapa A, un fluoro-benzonitrilo de formula (26) se sometio a una sustitucion aromatica nucleofila con una amina de formula (27), cuya slntesis se describe en los Esquemas 1-4a. La reaction transcurrio en un disolvente inerte tal como DMF, DMAC o DMSO, preferentemente en una mezcla de disolventes de DMSO/agua en una proportion de 7/1 a 10/1, en presencia de una base inorganica, preferentemente carbonato de litio, pero tambien carbonato de sodio. La reaccion se realizo en un vaso a presion a 100 a 150 °C, preferentemente aproximadamente 130 °C durante de 16 a 48h. Como alternativa, la reaccion puede realizarse satisfactoriamente usando radiation de microondas, usando simplemente una base organica, tal como diisopropiletilamina sin disolvente adicional, a una temperatura de 170 a 190 °C, preferentemente a 180 °C, para proporcionar un amino benzonitrilo de formula (28).

En la Etapa B, se desprotegieron amino benzonitrilos (28) que contenlan un grupo protector sililo (R3a o R4) usando anion fluoruro, tal como con TBAF, como se ha descrito para el Esquema 2, Etapa C.

Si se desea, pueden elaborarse adicionalmente compuestos de formula (28), en los que R2 =R4 = H para los compuestos (31) (en los que R2 = CH3) empleando las Etapas C y D. En la Etapa C, el hidroxilo del amino benzonitrilo (28) se oxido al a-ceto amino benzonitrilo (30) usando condiciones de Swern como se ha descrito previamente para el Esquema 1, Etapa E.

En la Etapa D, el a-ceto amino benzonitrilo (30) sufrio una reaccion de Grignard con bromuro de metilmagnesio para proporcionar el a-metil-a-hidroxi amino benzonitrilo de formula (31). La reaccion transcurrio en un disolvente inerte, tal como THF, a 0°Ca temperatura ambiente, durante un perlodo de 15 min - 24 h.

El 2-cloro-3-alquil-4-fluoro-benzonitrilo de formula (26), en el que R1 = CH3 o CH2CH3, se sintetizo en una etapa a partir de 2-cloro-4-fluoro-benzonitrilo usando una base organica fuerte tal como LDA, que puede generarse in situ usando diisopropilamina y n-butil-litio. El LDA se anadio gota a gota al benzonitrilo en un disolvente tal como THF, a una temperatura de -80 a -60 °C, preferentemente a -70 °C, durante un perlodo de 4 a 20 h. Se anadieron yodometano o yodoetano a la misma temperatura, durante aproximadamente de 2 a 3 h y se permitio que la temperatura se elevara a -10 a 5°C durante aproximadamente de 12 a 24 h.

5

10

15

20

25

30

35

Los diastereoisomeros o enantiomeros de los amino benzonitrilos (29) y (31) pueden separarse mediante tecnicas tales como cromatograffa en gel de sflice o cromatograffa quiral.

Preparaciones y Ejemplos

Las siguientes Preparaciones y Ejemplos ilustran adicionalmente la invencion y representan una smtesis habitual del compuesto de la invencion. Los reactivos y materiales de partida estan facilmente disponibles o pueden sintetizarse facilmente por un experto habitual en la materia. Debe entenderse que las Preparaciones y Ejemplos se exponen a modo de ilustracion y no de limitacion y que pueden hacerse diversas modificaciones por un experto habitual en la materia.

La nomenclatura de los siguientes Preparaciones y Ejemplos generalmente se realiza usando la funcion de nomenclatura IUPAC en SYMYX® Draw version 3.2.NET.

Los dibujos en los que se conoce la estereoqmmica absoluta estan etiquetados como "absoluto". Los dibujos en los que solo se conoce la relacion cis o trans entre los grupos amino e hidroxilo estan etiquetados como "relativo" y el dibujo correspondiente indica la estereoqmmica relativa usando enlaces en cuna. En cuanto a la designacion estereoqmmica, la relacion diastereomerica en el anillo monodclico generalmente se indica usando la nomenclatura cis/trans. La relacion diastereomerica en los pocos compuestos que tienen tres centros quirales en el anillo monodclico se designan, por ejemplo, por re/-(1R,2S,3S), que indica que el isomero (1R,2S,3S) y el isomero (1S,2R,3R) estan los dos presentes en la mezcla diastereomerica.

Preparacion 1

2-Cloro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo

imagen19

A una solucion de diisopropilamina (474 ml, 3,35 mol) en THF anhidro (5,8 l) a -5 °C en atmosfera de nitrogeno se le anadio gota a gota n-butil-litio 2,5 M en hexanos (1,24 l, 3,10 mol) durante 3 h y la mezcla resultante se agito a -5 °C durante una hora adicional. La solucion de LDA se anadio gota a gota a una solucion de 2-cloro-4-fluoro-benzonitrilo (400 g, 2,58 mol) en THF anhidro (5,8 l) a -70 °C durante 6 h y despues se agito a -70 °C durante la noche. Se anadio yodometano (643 ml, 10,32 mol) gota a gota durante 2,5 h y se elevo la temperatura a -5 °C durante 17 h. Se anadio cloruro de amonio acuoso saturado (3 l). La solucion se diluyo con agua (3,5 l) y se extrajo con eter diefflico (2 l, 2 veces). Las fases organicas se separaron, se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar un solido de color negro. El solido se purifico a traves de un lecho de gel de sflice eluyendo con EtOAc/hexanos (1/40) para obtener el compuesto del tftulo (323 g, 74%). RMN 1H (300 MHz, CDCla) 8 7,08 (dd, J = 8,6, 8,6 Hz, 1H), 7,54 (dd, J = 8,6, 5,6 Hz, 1H), 2,36 (d, J = 2,4 Hz, 3H).

Preparacion 2

2-cloro-3-etil-4-fluoro-benzonitrilo

N

imagen20

F

El compuesto del tftulo se preparo esencialmente siguiendo el procedimiento descrito en la Preparacion 1, usando 2- cloro-4-fluoro-benzonitrilo (12,2 g, 78,4 mmol) y yodoetano (18,4 g, 9,43 ml, 118 mmol). El producto en bruto se purifico en gel de sflice usando diclorometano al 15-50 %/hexanos para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de cristales de color blanco brillante (4,06 g, 28%). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,54 (dd, J = 5,6, 8,6 Hz, 1H),

7,07 (t, J = 8,6 Hz, 1H), 2,85 (cd, J = 7,5, 2,3 Hz, 2H), 1,19 (t, J = 7,5 Hz, 3H).

5

10

15

20

25

30

1-metil-6-oxabiciclo[3.1.0]hexano

imagen21

Una solucion de 1-metilciclopenteno (25 ml, 0,24 mol) en diclorometano (770 ml) se enfrio a 5 °C en atmosfera de nitrogeno. Se anadio MCPBA (87,5 g, 0,36 mol, 1,5 eq, 71 % en peso) en porciones y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se filtro a traves de un lecho de tierra de diatomeas. El filtrado se lavo con bicarbonato de sodio acuoso saturado (500 ml) y tiosulfato de sodio acuoso al 10 % (100 ml). La porcion organica se concentro a presion reducida mientras se mantema la temperatura del bano de agua por debajo de 20 °C para obtener el compuesto del tftulo (24 g, 99 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 5 3,42 (s, 1H), 1,811,99 (m, 2H), 1,38-1,65 (m, 4H), 1,42 (s, 3H). CG-EM m/z 98 (M+).

Preparacion 4

frans-2-Amino-1-metil-ciclopentanol

imagen22

En un vaso a presion de vidrio, una solucion de 1-metil-6-oxabiciclo[3.1.0]hexano (25 g, 0,25 mol), hidroxido de amonio (50 ml, 0,36 mmol), agua (50 ml) y etanol (100 ml) se calento a 90 °C durante 4 h. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo se coevaporo dos veces con isopropanol (100 ml) para obtener el compuesto del tftulo (28,4 g) que tema una pureza de hasta el 45 % por RMN. cG-EM m/z 115 (M+). El material en bruto se uso en la siguiente etapa (Ejemplo 1) sin purificacion adicional.

Preparacion 5

imagen23

A una solucion de (1R,2S)-2-aminociclopentanol (9,3 g, 67,6 mmol) y carbonato de potasio (28,02 g, 203 mmol) en acetona (675 ml) y agua (48 ml) se le anadio bromuro de bencilo (16,1 ml, 135 mmol) en una sola porcion y la mezcla se calento a reflujo durante la noche. Se retiro el calor y la reaccion se concentro a presion reducida. El residuo se diluyo con solucion acuosa de HCl 1 M y se lavo con eter. La fase acuosa se hizo alcalina con hidroxido de sodio y se extrajo con EtOAc. La porcion organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a presion reducida para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color amarillo (16,98 g, 89 %). EN/EM m/z 282 (M+1).

Preparacion 6

imagen24

A una solucion de cloruro de oxalilo (6,28 ml, 72,4 mmol) en diclorometano (75 ml) a -60 °C en atmosfera de nitrogeno se le anadio una solucion de DMSO (10,7 ml, 151 mmol) en diclorometano (75 ml gota a gota) y se agitaron a -60 °C durante 15 min. Se anadio (1R,2S)-2-(dibencilamino)ciclopentanol (17,0 g, 60 mmol) en diclorometano (75 ml) y la reaccion se agito a -60 °C durante 30 min. Se anadio TEA (46 ml, 330 mmol) y la reaccion

5

10

15

20

25

30

35

40

45

se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante 1 h. Se anadio agua (100 ml) y la reaccion se agito durante la noche. La fase de diclorometano se separo, se seco sobre sulfato de sodio anhidro, se filtro y se concentro a presion reducida para proporcionar el compuesto del titulo en forma de un aceite de color naranja (13,96 g, 83%). EN/EM m/z 280 (M+1).

Preparacion 7

(1R,2S)-2-(Dibencilamino)-1-metil-ciclopentanol (enantioenriquecido)

imagen25

A una solucion de (2S)-2-(dibencilamino)ciclopentanona (8,31 g, 29,7 mmol) en eter dietilico (149 ml) a -78 °C se le anadio bromuro de metil magnesio (29,7 ml, 89,1 mmol, 3M en eter dietilico) lentamente. La mezcla se agito a - 78 °C durante 4 h y despues la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente. Se anadio agua a la reaccion, dando como resultado una emulsion. Se anadio acido clortudrico acuoso 1 M para romper la emulsion mientras se mantema la fase acuosa basica. La fase acuosa se extrajo dos veces con EtOAc. Las porciones organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (EtOAc al 10 %/Hexanos) para obtener el producto. El material se disolvio en acido clortudrico 1 M y se extrajo cuatro veces con EtOAc. Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presion reducida para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un solido de color naranja (3,49 g, 40 %). EN/EM m/z 296 (M+1).

Preparacion 8

(1R,2S)-2-Amino-1-metil-ciclopentanol (enantioenriquecido)

NH2

OH

absoluto

Se combinaron negro de paladio (1,617 g), MeOH (150 ml) y (1R,2S)-2-(dibencilamino)-1-metil-ciclopentanol (3,49 g,

11,8 mmol) en un frasco de Parr y se hidrogenaron a temperatura ambiente durante la noche a 50-60 psi (344,74413,69 kPa). No se observo ningun cambio por EN/EM y se anadio negro de paladio adicional (0,51 g) y la hidrogenacion continuo durante 6 horas a 30 °C/60 psi (413,69 kPa). No hubo ningun cambio aparente. La reaccion se filtro y se volvio a someter a hidrogenacion con negro de paladio recien preparado (1,04 g) en MeOH. Despues de 20 h, el EN/EM todavfa mostraba material de partida y no se observaba ningun producto. La mezcla se filtro y se concentro. El material se volvio a enviar a hidrogenacion en MeOH (100 ml) usando negro de paladio (1,02 g) durante 24 horas a 30 °C/60 psi (413,69 kPa). No hubo ningun cambio en el progreso de la reaccion. La hidrogenacion continuo con calentamiento a 60 °C a 45-60 psi (310-26-413,69 kPa) durante aproximadamente 52 h. Todavfa habfa material de partida presente por CG-EM. La mezcla se filtro y se concentro. El material resultante se volvio a someter a hidrogenacion usando negro de paladio (1,57 g) en MeOH (100 ml) a 30 °C/60 psi (413,69 kPa) durante 24 h. El analisis por EN/EM proporciono pruebas de la eliminacion de un grupo bencilo con una pequena cantidad de material de partida todavfa presente. Se anadio hidroxido de paladio al 20 % sobre carbono (0,41 g) y la hidrogenacion continuo a 30 °C/60 psi (413,69 kPa) durante 20 h. El analisis por EN/EM no mostro material de partida, pero tampoco se observo ningun pico de producto. La mezcla de reaccion se filtro y se concentro. El material resultante se volvio a someter a hidrogenacion usando negro de paladio recien preparado (1,20 g) en MeOH (100 ml) a 30 °C/60 psi (413,69 kPa) durante 23 h. El analisis por EN/eM todavfa no mostro ninguna formacion de producto. La hidrogenacion continuo con calentamiento a 40 °C durante 24 h. No hubo ningun cambio en el EN/EM. Se anadio hidroxido de paladio al 20% sobre carbono (2,05 g) y la hidrogenacion continuo a temperatura ambiente/60 psi (413,69 kPa) durante 67 h. La reaccion se filtro y se concentro. (Una pequena alfcuota (74 mg) se hidrogeno con oxido de rutenio (IV) (104 mg) en f-butanol (25 ml) a 60 °C/60 psi (413,69 kPa) durante la noche. Esto dio como resultado la reduccion del anillo de benceno sin desproteccion como se muestra por EN/EM). El material resultante se volvio a someter a hidrogenacion usando hidroxido de paladio al 20% sobre carbono (1,01 g) en MeOH (100 ml) a 40 °C/50-60 psi (344,74-413,69 kPa) durante 21 h. En el analisis por EN/EM hubo una pequena cantidad de producto a 116 (M+1) y un pico significativo a 206 (M+1) para el intermedio mono-bencilado. Se anadio negro de paladio (1,01 g) y la hidrogenacion continuo a 30 °C/60 psi (413,69 kPa) durante 23 h. El analisis por EN/EM no mostro ningun material de partida o intermedio con el pico 116 (M+1) y una posible impureza a 158. Se filtro la mezcla de reaccion a traves de tierra de diatomeas y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto del titulo en bruto en forma de un aceite de color castano (1,61 g, cuantitativo). El material se uso sin

imagen26

purificacion adicional en la siguiente etapa (Ejemplo 2) y mas tarde se descubrio que estaba racemizado parcialmente. EN/EM m/z 116 (M+1). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 7,84-7,85 (m, 1H), 5,11 (s, 1H), 3,03-3,05 (m, 1H), 1,92-1,94 (m, 1H), 1,75-1,76 (m, 1H), 1,49-1,51 (m, 1H), 1,21 (s, 3H).

Preparacion alternativa 1 de 2-amino-1-metil-ciclopentanol

5 (Preparaciones 9-12)

Preparacion 9

N-[-2-Hidroxiciclopentil]carbamato de trans-terc-butilo

imagen27

A una solucion de clorhidrato de trans-2-aminociclopentanol (100 g, 726,7 mmol), en MeOH (1,45 l) a temperatura 10 ambiente en atmosfera de nitrogeno, se el anadieron carbonato de sodio (77 g, 726,7 mmol) y dicarbonato de di- terc-butilo (182 ml, 835,7 mmol). La mezcla se agito durante la noche. La mezcla se filtro sobre un filtro de papel y se evaporo el metanol. El residuo resultante se diluyo con agua y se agito durante 30 min para proporcionar un solido de color blanco que se recogio por filtracion. El solido se seco al vado para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un solido de color crema palido (172,4 g, 89 %). RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 6,72 (d, 1H, NH), 4,61 (s 15 a, 1H), 3,76 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 1,66-1,96 (m, 2H), 1,48-1,64 (m, 2H), 1,21-1,44 (m, 2H), 1,38 (s, 9H).

Preparacion 10

N-(2-Oxociclopentil)carbamato de terc-butilo

imagen28

Se anadieron N-oxido de 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (2,2 g, 14,2 mmol) y bromuro de potasio (8,5 g, 71 mmol) a una 20 solucion de N-[2-hidroxiciclopentil]carbamato de trans-terc-butilo (75 g, 283 mmol) en diclorometano (285 ml). La mezcla se enfrio a 5 °C con agitacion. Una solucion acuosa de hipoclorito de sodio (766 ml, 566 mmol, pH ajustado a 7,5-8 mediante la adicion de 10 g de carbonato de potasio solido) recien preparada enfriada con hielo (5°C) se anadio con agitacion a la mezcla de reaccion, manteniendo la temperatura por debajo 5°C. La mezcla se agito a 5 °C durante 30 min adicionales. La mezcla de reaccion se diluyo con solucion de cloruro de sodio acuoso saturado 25 (150 ml). La fase organica se separo y se evaporo. El residuo de color rojo oleoso se purifico sobre un lecho de gel

de sflice, eluyendo con EtOAc/hexanos (1/3) para obtener el compuesto del tftulo en forma de un solido de color crema (43 g, 76 %). RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 6,99 (d, 1H, NH), 3,76 (c, 1H), 1,63-2,31 (m, 6H), 1,37 (s, 9H).

Preparacion 11

2-[Hidroxi-2-metil-ciclopentil]carbamato de terc-butilo

30

imagen29

Una solucion de N-(2-oxociclopentil)carbamato de terc-butilo (racemico) (25 g, 125,5 mmol) en eter dietftico (250 ml) se enfrio a -5 °C. Se anadio bromuro de metilmagnesio (125 ml, 375 mmol, 3 M en eter dietftico), manteniendo la temperatura a 0 °C. La reaccion se agito vigorosamente y se calento a 22 °C durante 2 h y despues se dejo calentar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se enfrio a 5 °C y se inactivo mediante la adicion 35 de una solucion de cloruro de amonio (150 ml) saturada enfriada (5°C). La mezcla se calento a temperatura ambiente. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con MTBE (150 ml, 3 veces). Las porciones organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presion reducida para obtener el compuesto del tftulo (26,4 g, 78 %) en forma de material en bruto que se uso sin purificacion adicional.

2-Amino-1-metil-ciclopentanol, clorhidrato

imagen30

A una solucion de 2-hidroxi-2-metil-ciclopentilcarbamato de ferc-butilo (25 g, 104,5 mmol) en diclorometano (210 ml)

5 se le anadio cloruro de hidrogeno en dioxano (156 ml, 6 mol, 4 M) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 3 h. El disolvente se evaporo y el material resultante se seco al vacfo hasta un peso constante para obtener el compuesto del tftulo (20,4 g) en forma de un aceite de color marron oscuro que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CG-EM 115,1 (M+); el analisis por CG-EM muestro una mezcla cis/trans en una relacion de aproximadamente 3/2.

10 Segunda preparacion alternativa de 2-amino-1-metil-ciclopentanol

(Preparaciones 13-18)

Preparacion 13

[(1S,2S)-2-Azidociclopentoxi]trimetilsilano

imagen31

15 Se trato c/s-1,2-epoxiciclopentano (11,0 g, 131 mmol) con (1R,2R)-(-)-1,2-ciclohexanodiamino-N,N'-bis(3,5-di-t- butilsaliciliden)cobalto (II) (1,58 g, 2,62 mmol). La mezcla se agito durante 5 min a temperatura ambiente, se trato con azidotrimetilsilano (20,9 ml, 18,1 g, 157 mmol) y se calento a 50 °C durante 16 h. La reaccion se diluyo con EtOAc, hexanos y eter dietflico, seguido de la adicion de tierra de diatomeas. La mezcla se filtro a traves de un lecho de tierra de diatomeas que despues se aclaro con eter dietflico y hexanos. El filtrado se concentro para proporcionar 20 el producto en bruto en forma de un aceite de color negro. El material en bruto se purifico en gel de silice (660 g, EtOAc al 0-2 %/hexanos, observado en la CCF con tincion de KMnO4) para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color amarillo palido 15,98 g (61 %). RMN1H (400 MHz, CDCl3) 5 4,00-3,96 (m, 1H), 3,65-3,61 (m, 1H), 2,05-1,99 (m, 1H), 1,93-1,89 (m, 1H), 1,80-1,75 (m, 2H), 1,58-1,53 (m, 2H), 0,13 (s, 9H).

Preparacion 14

25 N-[(1S,2S)-2-Trimetilsililoxiciclopentil]carbamato de ferc-butilo

imagen32

Una solucion de [(1S,2S)-2-azidociclopentoxi]-trimetil-silano (15,4 g, 77,6 mmol) en EtOH (141 ml) se trato con paladio al 10% sobre carbono (1,82 g, 1,71 mmol) y se hidrogeno (60 psi (413,69 kPa)) durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y se aclaro con EtOH (50 ml). 30 El filtrado se concentro al vacfo y se disolvio en acetona (81 ml). Se anadieron agua (81 ml) y carbonato de sodio (8,17 g, 77,1 mmol). La mezcla se enfrio a 0 °C y despues se trato con dicarbonato de di-f-butilo (18,6 g, 85,3 mmol). La reaccion se agito durante 72 h a temperatura ambiente y despues se concentro al vado para retirar la acetona. La mezcla se extrajo con EtOAc (150 ml, 3 veces). Los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color amarillo 35 (15,5 g, 73 %). CG-EM m/z 156 (M-NHBoc)+, 202 (M-Si(Me3))+.

5

10

15

20

25

30

35

40

N-[(1S,2S)-2-Hidroxiciclopentil]carbamato de ferc-butilo

imagen33

Se agitaron N-[(1S,2S)-2-Trimetilsililoxiciclopentil]carbamato de ferc-butilo (15,5 g, 56,7 mmol) y fluoruro de tetrabutilamonio (85,0 ml, 85,0 mmol) en THF (113 ml) a temperatura ambiente durante 1 h. Se anadio agua (50 ml) y la mezcla se concentro al vado para retirar el THF. La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (75 ml, 3 veces). Las porciones organicas combinadas se lavaron con salmuera (30 ml, 2 veces), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para proporcionar 14,7 g de producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo. El material se purifico en gel de silice (330 g) usando EtOAc al 25 %/hexanos para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un solido de color blanco (10,25 g, 90 %). CL-EN/EM m/z 224 (M+Na).

Preparacion 16

N-[(1S)-2-Oxociclopentil]carbamato de ferc-butilo

H

imagen34

absoluto

Una mezcla de cloruro de oxalilo (6,47 ml, 74,5 mmol) en THF (166 ml) se enfrio a -72 °C en atmosfera de nitrogeno y se trato gota a gota con DMSO (10,59 ml, 149,1 mmol). La mezcla se agito durante 5 min, despues de lo cual se anadio (1S,2S)-2-hidroxiciclopentilcarbamato de ferc-butilo (10,0 g, 49,7 mmol). La agitacion continuo a -75 °C durante 45 min. Se anadio trietilamina (37,4 ml, 268,3 mmol) lentamente manteniendo la temperatura por debajo de - 68 °C. Despues de que la adicion fuera completa la reaccion se dejo calentar lentamente a temperatura ambiente durante la noche. La reaccion se combino con la mezcla de reaccion de una reaccion piloto (escala de 200 mg) completada antes. Se anadio agua (100 ml) y la reaccion se concentro al vado para retirar el THF. La mezcla se extrajo con EtOAc (150 ml, 3 veces). Las porciones organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para proporcionar 12,41 g de producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo. El material se purifico en gel de silice (330 g, EtOAc al 10-40 %/hexanos) para proporcionar el compuesto del tftulo (9,17 g, 93%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5 5,04-5,02 (m, 1H), 3,98-3,96 (m, 1H), 2,65-2,63 (m, 1H), 2,44-2,39 (m, 1H), 2 ,21-2,11 (m, 1H), 2,04 (s, 1H), 1,89-1,85 (m, 1H), 1,66-1,59 (m, 1H), 1,44 (s, 9H). CG-EM m/z 199 (M+). [a]p20 = +96,9 (c 1,0, CHCb) [bibliograffa (Aube, J.; Wolfe, M. S.; Yantiss, R. K.; Cook, S. M.; Takusagawa, F. Synthetic Communicafions 1992, 22, 3003-3012) [a]p25 = +125 (c 0,2,CHCU)].

Preparacion 17

N-[(1S)-2-Hidroxi-2-metil-ciclopentil]carbamato de ferc-butilo

imagen35

A una solucion de N-[(1S)-2-oxociclopentil]carbamato de ferc-butilo (9,04 g, 45,4 mmol) en dietil eter (227 ml) a 0 °C en atmosfera de nitrogeno se le anadio bromuro de metilmagnesio (37,8 ml, 113,4 mmol, 3,0 M en eter dietflico) gota a gota. La reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito durante 2 h. Se trato una aftcuota y se analizo mediante RMN para demostrar que la reaccion pareda completa. La reaccion se interrumpio cuidadosamente con cloruro de amonio acuoso saturado (10 ml) y agua (100 ml). Se anadieron EtOAc (200 ml) y HCl 1 N (50 ml) para disolver un precipitado de color blanco. Las fases se separaron y la porcion acuosa se extrajo con EtOAc (200 ml, 2 veces). Las porciones organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para proporcionar un aceite de color amarillo (9,48 g). El analisis por CG-EM y RMN mostro aproximadamente que todavia quedaba el 20 % de material de partida. El material (7,25 g) se disolvio de nuevo en eter dietflico (227 ml) y se enfrio a 0 °C. Se anadio bromuro de metilmagnesio (13,2 ml, 39,5 mmol) en porciones, manteniendo la temperatura por debajo de 7 °C. La reaccion se calento a temperatura ambiente y se anadio en porciones otra porcion de bromuro de metilmagnesio (15,1 ml, 45,4 mmol). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante la noche momento en el que el analisis por CG-EM mostro un 5 % de material de partida restante. La reaccion se interrumpio cuidadosamente con cloruro de amonio acuoso saturado (20 ml). Se anadieron agua

5

10

15

20

25

30

35

40

(200 ml) y HCl 5 N (20 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (300 ml, 3 veces). Las porciones organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para proporcionar un aceite de color ambar oscuro (6,97 g). CG-EM m/z 158 (M-rBu)+. El analisis por CG-EM mostro una mezcla cis/trans en una relacion 68:32. Se uso tal cual sin purificacion adicional.

Preparacion 18

Clorhidrato de (2S)-2-amino-1-metil-ciclopentanol

NH?

<I

Wv-OH HCl

Una solucion de N-[(1S)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]carbamato de ferc-butilo (mezcla de diastereomeros cis y trans) (6,66 g, 30,9 mmol), HCl 4M en dioxano (46,4 ml, 185,6 mmol) y diclorometano (62 ml) se agito a temperatura ambiente durante 1 h. La reaccion se concentro al vado y despues se volvio a disolver en MeOH y se volvio a concentrar para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color marron (5,09 g). lC-EN/EM m/z 116 (M+1).

Preparacion 19

2-Amino-1-metil-ciclohexanol, clorhidrato

imagen36

Se anadio bromuro de metil magnesio (4,7 ml, 14,1 mmol, 3 M en eter dietflico) gota a gota a una solucion en agitacion de 2-oxo-ciclohexilcarbamato de ferc-butilo (1,00 g, 4,69 mmol) en eter dietflico (50 ml) a -78 °C. Despues de que la adicion fuera completa, la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante 22 h. La reaccion se interrumpio con acido clorlddrico diluido y se extrajo dos veces con EtOAc. Las porciones organicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vado para producir el compuesto del tftulo en bruto (1,02 g) en forma de una mezcla probable de N-(2-hidroxi-2-metil-ciclohexil)carbamato de ferc- butilo, EN-EM m/z 252 (M+Na) y el compuesto ciclado, 7a-metil-3,3a,4,5,6,7-hexahidro-1,3-benzoxazol-2-ona. EN- EM m/z 156 (M+1). El material en bruto se uso tal cual sin purificacion adicional.

El material se disolvio en 1,4-dioxano (15 ml) y se trato con acido clorddrico 12 M (1,1 ml) con agitacion a temperatura ambiente durante 3 dfas. La reaccion se concentro al vado, se diluyo con MeOH y se volvio a concentrar y se seco al vado para producir el compuesto del tftulo (730 mg, 94 % para 2 etapas). EN-EM m/z 130,1 (M+1).

Preparacion 20

3,6-Dihidro-2H-pirano

imagen37

Se agitaron 4-bromotetrahidropirano (20 g, 121 mmol) e hidroxido de sodio 5 N (30 ml) y se calentaron a 90 °C durante 18 h. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y la fase organica se separo de la fase acuosa. La fase organica, que contema solo el producto, se vertio en un matraz previamente pesado que contema sulfato de sodio para el secado, lo que produjo el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color amarillo palido (9,99 g, 98 %). El compuesto del tftulo se almaceno sobre sulfato de sodio ya que la volatilidad impide cualquier filtrado, aclarado y concentracion al vacfo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 5,78-5,74 (m, 1H), 5,69-5,66 (m, 1H), 3,96-3,94 (m, 2H), 3,61 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,01-1,99 (m, 2H).

Preparacion 21

4,7-Dioxabiciclo[4.1.0]heptano

imagen38

Se anadio MCPBA (29,28 g, 130,6 mmol, 77% peso/peso) a una solucion de 3,6-dihidro-2H-pirano (9,99 g,

118,8 mmol) en diclorometano (100 ml) a 0°C y se agitaron durante 1 h antes de dejar que se calentaran a temperatura ambiente y se agitaron durante 18 h. Se anadio cuidadosamente una solucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio y la mezcla se agito vigorosamente. La fase organica se separo de la fase acuosa, se seco 5 sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro al vado para proporcionar el compuesto del trtulo (9,7 g, 82 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 5 3,84 (dd, J = 2,7, 13,4 Hz, 1H), 3,74-3,70 (m, 1H), 3,38-3,26 (m, 3H), 3,10-3,09 (m, 1H), 1,87-1,82 (m, 2H).

Preparacion 22

trans-4-Azidotetrahidropiran-3-ol

10

imagen39

Se anadio azida de sodio (50,4 g, 775 mmol) a una solucion en agitacion de 4,7-dioxabiciclo[4.1.0]heptano (9,7 g, 96,9 mmol) y cloruro de amonio (23,0 g, 426 mmol) en metanol (484 ml) y agua (97 ml) y se calentaron a 65 °C en atmosfera de nitrogeno durante 18 h. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se anadio agua (200 ml). El metanol se retiro al vado y la fase acuosa restante se extrajo con EtOAc (3 veces). Las porciones organicas se 15 combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vado para producir el compuesto del trtulo en forma de un aceite de color castano (5,63 g, 41 %). RMN1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 5,40-5,33 (m, 1H), 3,783,74 (m, 2H), 3,40-3,32 (m, 3H), 2,97-2,90 (m, 1H), 1,82 -1,77 (m, 1H), 1,46-1,41 (m, 1H).

Preparacion 23

trans-4-Aminotetrahidropirano-3-ol

av N H2

'oh relativo

Una mezcla de trans-4-azidotetrahidropiran-3-ol (5,63 g, 39,3 mmol) y Pd al 10 %/C (2,09 g, 1,97 mmol) en metanol (157 ml) se hidrogeno (45 psi (310,26 kPa)) a temperatura ambiente durante 18 h. Despues de filtrar la mezcla a traves de tierra de diatomeas, el filtrado se concentro al vado para proporcionar el producto del tftulo en forma de un semisolido de color castano (4,8 g, cuantitativo). EN-EM m/z 118,1 (m+1).

25 Preparacion 24

trans-4-Azidotetrahidrofuran-3-ol

relativo

El compuesto del tftulo se preparo esencialmente siguiendo el procedimiento descrito para la Preparacion 22, usando 3,4-epoxitetrahidrofurano. El producto en bruto se obtuvo en forma de un aceite de color amarillo palido 30 (10,5 g). CG-EMm/z 129 (M+).

Preparacion 25

imagen40

N-[4-hidroxitetrahidrofurano-3-il]carbamato de trans-terc-butilo

imagen41

Una solucion de trans-4-azidotetrahidrofuran-3-ol (9,55 g, 74,0 mmol) en etanol (247 ml) se trato con paladio al 10 % 35 sobre carbono (787 mg, 0,370 mmol) y se agito durante 16 h a temperatura ambiente a 60 psi (413,69 kPa) de hidrogeno. La mezcla de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y se aclaro con EtOH (100 ml). El filtrado se concentro al vado y se disolvio en acetona (77 ml). Se anadieron agua (77 ml) y carbonato de sodio (7,79 g, 73,5 mmol) y la mezcla se enfrio a 0 °C antes de anadir dicarbonato de di-t-butilo (17,8 g, 81,3 mmol). La reaccion se agito durante 72 h a temperatura ambiente y despues se concentro al vado. La mezcla se extrajo con EtOAc 40 (300 ml, 3 veces) y los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se

concentraron para proporcionar el compuesto del trtulo en forma de un solido de color blanco (10,71 g, 71 %). RMN

5

10

15

20

25

30

35

40

1H (400 MHz, CDCI3) 5 4,82-4,81 (m, 1H), 4,28 (d, J = 0,3 Hz, 1H), 4,10-4,02 (m, 2H), 3,96-3,95 (m, 1H), 3,69 (dd, J = 3,0, 10,0 Hz, 1H), 3,61 (dd, J = 3,0, 9,5 Hz, 1H), 3,29-3,27 (m, 1H), 1,48-1,44 (m, 9H).

Preparacion 26

N-(4-oxotetrahidrofuran-3-il)carbamato de terc-butilo

imagen42

Una mezcla de cloruro de oxalilo (3,20 ml, 36,9 mmol) en THF (137 ml) se enfrio a -78 °C en atmosfera de nitrogeno y se trato gota a gota con DMSO (5,24 ml, 73,8 mmol). La mezcla se agito durante 20 min a -78 °C, despues de lo cual se anadio N-[4-hidroxitetrahidrofurano-3-il]carbamato de trans-terc-butilo (5,00 g, 24,6 mmol). La agitacion a - 78 °C continuo durante 1 h. Se anadio trietilamina (18,5 ml, 133 mmol) y la reaccion se calento a temperatura ambiente. La reaccion se agito durante 16 h, despues se anadio agua (100 ml) y la reaccion se concentro al vado para retirar el THF. La mezcla se extrajo con EtOAc (70 ml, 3 veces), los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para proporcionar 6,4 g de producto en bruto en forma de un aceite de color naranja. El producto en bruto se purifico en gel de sflice (220 g, EtOAc al 15-30 %/hexanos) para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color amarillo (2,20 g, 44%). CG-EM m/z 201 (M)+, 143 (M-t-Bu)+.

Preparacion 27 y 28

N-[4-Hidroxi-4-metil-tetrahidrofuran-3-il]carbamato de c/s-terc-butilo y N-[4-hidroxi-4-metil-tetrahidrofuran-3-

il]carbamato de trans-terc-butilo

imagen43

A una solucion de N-(4-oxotetrahidrofuran-3-il)carbamato de terc-butilo (2,12 g, 10,5 mmol) en eter dietilico (53 ml) a 0 °C en atmosfera de nitrogeno se le anadio bromuro de metilmagnesio (10,5 ml, 31,6 mmol, 3,0 M en eter dietilico en porciones). La reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito durante 16 h. La reaccion se interrumpio cuidadosamente con cloruro de amonio acuoso saturado (10 ml) y agua (100 ml). La mezcla de reaccion se extrajo con EtOAc (70 ml, 3 veces), las porciones organicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar el producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo (2,11 g). El material se purifico en gel de silice [80 g, EtOAc al 10-30 %/(diclorometano/hexanos 1:1)]. El diastereomero que eluyo primero era N-[(3S,4S)-4-hidroxi-4-metil-tetrahidrofurano-3-il]carbamato de terc-butilo racemico (y enantiomero) obtenido en forma de un aceite incoloro (1,04 g, 45%). Estereoqmmica c/s asignada basada en la RMN del Ejemplo 10. CL- EN/EM m/z 240 (M+Na). El producto que eluyo segundo era N-[(3S,4R)-4-hidroxi-4-metil-tetrahidrofurano-3- il]carbamato de terc-butilo racemico (y enantiomero) obtenido en forma de un solido de color blanco (460 mg, 20 %). Estereoqmmica trans basada en la RMN del Ejemplo 11. LC/EM m/z 240 (M+Na).

Preparacion 29

Clorhidrato de trans-4-amino-3-metil-tetrahidrofurano-3-ol

imagen44

Una solucion de N-[(3S,4R)-4-hidroxi-4-metil-tetrahidrofurano-3-il]carbamato de terc-butilo racemico (450 mg,

2,07 mmol), HCl 4,0 M en dioxano (5,2 ml, 21 mmol), dioxano (5 ml) y metanol (0,8 ml) se agito a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reaccion se concentro al vado. El residuo resultante se suspendio en diclorometano y se concentro al vado, seguido de disolucion en MeOH y concentracion al vado para proporcionar el compuesto del tftulo en bruto en forma de un aceite de color castano (366 mg, cuantitativo). LC-EN/EM m/z 118 (M+1).

5

10

15

20

25

30

Clorhidrato de c/s-4-amino-3-metil-tetrahidrofurano-3-ol

imagen45

El compuesto del tftulo se preparo esencialmente siguiendo el procedimiento que se ha descrito en la Preparacion 29, usando N-[(3S,4S)-4-hidroxi-4-metil-tetrahidrofurano-3-il]carbamato de c/s ferc-butilo (racemico). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 5 8,18-8,17 (m, 2H), 3,99-3,94 (m, 1H), 3,68-3,64 (m, 2H), 3,54 (d, J = 8,35 Hz, 1H), 3,41-3,39 (m, 1H), 1,31 (s, 3H).

Preparacion 31

(3S,4R)-4-Trimetilsililoxitetrahidrofuran-3-amina

imagen46

Una mezcla de [(3R,4S)-4-azidotetrahidrofuran-3-il]oxi-trimetil-silano (870 mg, 4,2 mmol; preparado de acuerdo con el procedimiento exacto que se encuentra en Jacobsen, E. N.; Larrow, J. F.; Schaus, S. E. J. Org. Chem. 1997, 62, 4197-4199; excepto porque se uso el (1R,2R)-(-)-1,2-ciclohexanodiamino-N,N'-bis(3,5-di-t-butilsaliciliden)cobalto (II) disponible en el mercado como catalizador), paladio al 10% sobre carbono (230 mg, 216 |jmol) y THF (22 ml) se agito a temperatura ambiente en hidrogeno (60 psi (413,69 kPa)) durante 16 h. La reaccion se filtro a traves de un lecho de tierra de diatomeas y el lecho se aclaro con THF (50 ml). El filtrado se concentro al vado para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color marron (825 mg, cuantitativo). CL-EN/EM m/z 176 (M+1).

Preparacion 32

(3R,4S)-4-Trimetilsililoxitetrahidrofuran-3-amina

imagen47

El compuesto del tftulo se preparo siguiendo esencialmente el procedimiento descrito en la Preparacion 31 usando [(3S,4R)-4-azidotetrahidrofuran-3-il]oxi-trimetil-silano (9,34 g, 46,4 mmol; preparado en configuracion estereoqmmica opuesta en comparacion con el procedimiento que se encuentra en Jacobsen, E. N.; Larrow, J. F.; Schaus, S. E. J. Org. Chem. 1997, 62, 4197-4199; excepto porque se uso (1S,2S)-(+)-1,2-ciclohexanodiamino-N,N'-bis(3,5-di-t- butilsaliciliden)cobalto (II) disponible en el mercado como catalizador) para proporcionar un aceite incoloro (7,55 g, 93 %). CL-EN/EM m/z 176 (M+1).

Preparacion 33

(3S,4S)-4-(ferc-Butil(dimetil)silil)oxitetrahidrofuran-3-ol

imagen48

Una mezcla de (3S,4S)-tetrahidrofuran-3,4-diol (9,35 g, 89,8 mmol), f-butildimetilclorosilano (14,9 g, 98,8 mmol), TEA (13,8 ml, 98,8 mmol) y diclorometano (100 ml) se agito a temperatura ambiente durante 4 dfas. La reaccion se

concentro al vado y se purifico en gel de s^lice (330 g, EtOAc al 35-80 %/hexanos, observado en el analisis por CCF usando tincion por KMnO4) para proporcionar 3,66 g (19 %) del compuesto del t^tulo en forma de un aceite de color amarillo claro. Cg-EM m/z 161 (M-fBu)+.

Preparacion 34

5 Metanosulfonato de [(3S,4S)-4-(ferc-butil(dimetil)silil)oxitetrahidrofuran-3-ilo]

imagen49

En atmosfera de nitrogeno, una solucion de (3S,4S)-4-(ferc-butil(dimetil)silil)oxitetrahidrofuran-3-ol (3,30 g, 15,1 mmol), 2,6-lutidina (0,200 ml, 1,72 mmol) y diisopropiletilamina (2,90 ml, 16,6 mmol) en diclorometano (50 ml) se enfrio a -10 °C y se trato lentamente con cloruro de metanosulfonilo (1,23 ml, 15,9 mmol). La reaccion se calento

10 hasta temperatura ambiente y se agito durante 16 h. Se anadio una segunda adicion de cloruro de metanosulfonilo (0,351 ml, 4,53 mmol) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 16 h adicionales. La reaccion se agito con HCl acuoso diluido y diclorometano. Las fases se separaron y la porcion organica se seco sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vado para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color amarillo palido (3,99 g, 89 %). CG-EM m/z 239 (M-fBu)+.

15 Preparacion 35

[(3R,4R)-4-Azidotetrahidrofuran-3-il]oxi-ferc-butil-dimetil-silano

imagen50

Se disolvio metanosulfonato de [(3S,4S)-4-(ferc-butil(dimetil)silil)oxitetrahidrofuran-3-ilo] (3,00 g, 10,1 mmol) en DMF (50 ml). Se anadio azida de sodio (1,32 g, 20,2 mmol) y la reaccion se calento a 60 °C durante 72 h. Se anadio 20 yoduro de tetra-n-butilamonio (0,400 g, 1,08 mmol) y la temperatura se elevo a 120 °C durante 14 dfas. Se anadio agua y el producto se extrajo en EtOAc. La fase organica se lavo con agua una segunda vez y despues se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro para proporcionar 2,9 g de producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo palido. El producto en bruto se purifico en gel de silice (120 g, EtOAc al 2-20 %/hexanos, observado en el analisis por CCF con tincion por KMnO4) para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un 25 aceite incoloro (1,3 g, 53 %). CG-EM m/z 186 (M-fBu)+.

Preparacion 36

(3R,4R)-4-(ferc-butil(dimetil)silil)oxitetrahidrofuran-3-amina

imagen51

Una mezcla de [(3R,4R)-4-azidotetrahidrofuran-3-il]oxi-ferc-butil-dimetil-silano (1,27 g, 5,22 mmol) y paladio al 10 % 30 sobre carbono (25 mg, 0,023 mmol) en etanol (20 ml) se agito a temperatura ambiente en un balon de hidrogeno durante 16 h. La reaccion se filtro a traves de un lecho de tierra de diatomeas y el filtrado se concentro al vado para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite incoloro (1,0 g, 88 %). CL-EN/EM m/z 218 (M+1).

5

10

15

20

25

30

35

40

2-Metilciclopent-2-en-1 -ol

imagen52

Se anadio borohidruro de sodio (8,86 g, 234 mmol) a una solucion de 2-metil-2-ciclopenten-1-ona (20,7 g, 215 mmol) en dietil eter (430 ml) a -30 °C en atmosfera de nitrogeno. La reaccion se calento hasta 0 °C y se trato con metanol (9,48 ml, 234 mmol). La reaccion se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 16 h. La reaccion se trato con metanol (9,48 ml, 234 mmol) y despues de 1 h se trato de nuevo con metanol (9,48 ml, 234 mmol). La reaccion se agito durante 72 h a temperatura ambiente, se trato con salmuera (200 ml) y se extrajo en dietil eter (300 ml, 3 veces). Las porciones organicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron al vado usando un bano de agua a 30 °C para proporcionar el compuesto del titulo en forma de un aceite incoloro (24,2 g, cuantitativo). CG-EM m/z 98 (M+).

Preparacion 38

terc-Butil-(2-metilciclopent-2-en-1-il)oxi-difenil-silano

imagen53

A una solucion de 2-metilciclopent-2-en-1-ol (23,06 g, 235,0 mmol), 1H-imidazol (32,0 g, 470 mmol) y N,N-dimetil-4- piridinamina (5,74 g, 47,0 mmol) en diclorometano (470 ml) a temperatura ambiente se le anadio terc- butilclorodifenilsilano (90,41 g, 328,94 mmol) durante 15 min. Despues de agitar la mezcla de reaccion a temperatura ambiente durante 16 h, se anadio agua (300 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (200 ml, 2 veces). Las porciones organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para proporcionar el producto en bruto (108 g) en forma de un aceite incoloro. El producto en bruto se purifico en lotes de 20 g sobre 330 g de gel de silice usando diclorometano al 0-20 %/hexano (producto observado en el analisis por CCF usando tincion con KMnO4) para proporcionar el compuesto del tttulo en forma de un aceite incoloro (25,3 g, 32 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,72-7,69 (m, 4H), 7,44-7,41 (m, 6H), 5,44-5,41 (m, 1H), 4,72-4,70 (m, 1H), 2,33-2,29 (m, 1H), 2,06-2,01 (m, 2H), 1,74-1,69 (m, 1H), 1,66-1,65 (m, 3H), 1,09 (s, 9H).

Preparacion 39 y Preparacion 40

re/-terc-Butil-[[(1S,4S,5S)-5-metil-6-oxabiciclo[3.1.0]hexan-4-il]oxi]difenil-silano, Diastereomero 1 y rel-terc-butil- [[(1R,4S,5R)-5-metil-6-oxabiciclo[3.1.0]hexan-4-il]oxi]difenil-silano, Diastereomero 2

imagen54

Se anadio MCPBA (77 % en peso, 5,03 g, 22,5 mmol, 0,8 eq) a una solucion a 0 °C de terc-butil-(2-metilciclopent-2- en-1-il)oxi-difenil-silano (9,45 g, 28,1 mmol) en diclorometano (94 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (28 ml). La reaccion se agito durante 16 h a temperatura ambiente y despues se trato con mas MCPBA (77 % en peso, 2,52 g, 11,2 mmol, 0,4 equiv) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (56 ml). Despues de agitar durante 2 h a temperatura ambiente la reaccion se interrumpio mediante la adicion de solucion N2SO3 acuosa saturada y la agitacion durante 30 min a temperatura ambiente La reaccion se extrajo con diclorometano (70 ml, 3 veces). Las porciones organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se purifico en gel de silice (330 g, diclorometano al 30-60 %/hexanos). El primer producto en eluir de la columna de gel de silice es re/-terc-butil-[[(1S,4S,5S)-5-metil-6-oxabiciclo[3.1.0]hexan-4-il]oxi]-difenil-silano (mezcla de enantiomeros, la estereoqmmica relativa se determino por analisis por RMN) (3,03 g, 31 %, aceite incoloro). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,68-7,64 (m, 4H), 7,45-7,42 (m, 6H), 4,21-4,20 (m, 1H), 3,35 (s, 1H), 1,93-1,88 (m, 2H), 1,45 (s, 3H), 1,43-1,40 (m, 2H), 1,08 (s, 9H). CL-EN/EM m/z 353 (M+1). El segundo producto en eluir de la columna de gel de silice es re/-terc-butil-[[(1R,4S,5R)-5-metil-6-oxabiciclo[3.1.0]hexan-4-il]oxi]difenil-silano (mezcla de enantiomeros) (5,82 g, 59 %, aceite de color blanco lechoso). RMN 1H (400 MHz, cDcI3) 8 7,73-7,69 (m, 4H), 7,467,42 (m, 6H), 4,03 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 3,11 (s, 1H), 1,90-1,85 (m, 1H), 1,48-1,43 (m, 3H), 1,30 (s, 3H), 1,08 (s, 9H). CL-EN/EM m/z 353 (M+1).

5

10

15

20

25

30

re/-(1S,2R, 5S)-2-Azido-5-(ferc-butil(difenil)silil)oxi-1-metil-ciclopentanol

imagen55

Una mezcla de re/-ferc-butil-[[(1S,4S,5S)-5-metil-6-oxabiciclo[3.1.0]hexan-4-il]oxi]difenil-silano (mezcla

enantiomerica) (1,0 g, 2,8 mmoles), azida de sodio (782 mg, 11,9 mmol) y DMF (10 ml) se agito a 60 °C durante 16 h. Se anadieron perclorato de litio (604 mg, 5,7 mmol) y azida de sodio adicional (931 mg, 14,2 mmol) y la reaccion se calento a 90 °C durante 72 h, despues se enfriaron a temperatura ambiente. La reaccion se trato con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (70 ml, 3 veces). Las porciones organicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para proporcionar el compuesto del tttulo en forma de un aceite de color amarillo palido (2,51 g). El material se traslado en bruto sin purificacion o caracterizacion adicional.

Preparacion 42

re/-(1S,2R,5R)-2-Azido-5-(ferc-butil(difenil)silil)oxi-1-metil-ciclopentanol

imagen56

El compuesto del tftulo se preparo esencialmente siguiendo el procedimiento que se ha descrito en la Preparacion 41 usando re/-ferc-butil-[[(1R,4S,5R)-5-metil-6-oxabiciclo[3.1.0]hexan-4-il]oxi]difenil-silano (mezcla enantiomerica), excepto porque la reaccion se calento a 90 °C durante 48 h y la adicion de perclorato de litio y la segunda adicion de azida de sodio se omitieron.

Preparacion 43

re/-(1S,2R,5S)-2-Amino-5-(ferc-butil(difenil)silil)oxi-1-metil-ciclopentanol

imagen57

Una mezcla de re/-(1S,2R,5S)-2-azido-5-(ferc-butil(difenil)silil)oxi-1-metil-ciclopentanol (2,28 g, 5,76 mmol, mezcla de enantiomeros) y paladio al 10% sobre carbono (61 mg) en etanol (29 ml) se hidrogeno (60 psi (413,69 kPa)) a temperatura ambiente durante 16 h. La reaccion se filtro a traves de un lecho de tierra de diatomeas y se aclaro con EtOH (50 ml). El filtrado se concentro al vado, se disolvio en diclorometano (10 ml) y se concentro al vado. El producto en bruto se purifico en gel de sflice (120 g, 1-6 % (amoniaco 2 M en metanol/diclorometano) para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color amarillo opaco (419 mg, 20 %). CL-EN/EM m/z 353 (M+1).

Preparacion 44

re/-(1S,2R,5R)-2-amino-5-(ferc-butil(difenil)silil)oxi-1-metil-ciclopentanol

imagen58

tbdps^0 relativo

El compuesto del tftulo se preparado siguiendo esencialmente el procedimiento descrito en la Preparacion 43, usando re/-(1S,2R,5R)-2-azido-5-(terc-butil(difenil)silil)oxi-1-metil-ciclopentanol para proporcionar el producto en forma de un aceite de color amarillo palido CL-EN/EM m/z 370 (M+1).

5

10

15

20

25

30

35

40

trans-2-Cloro-4-[[2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo, Isomero 2

imagen59

En un vaso a presion de vidrio, una mezcla de trans-2-amino-1-metil-ciclopentanol (8,75 g, 53 mmol, 1,5 eq), 2-cloro- 4-fluoro-3-metil-benzonitrilo (6 g, 35,4 mmol) y carbonato de litio (7,84 g, 106 mmol) en DMSO (72 ml) y agua (7,2 ml) se desgasifico durante 15 min burbujeando nitrogeno a traves de la mezcla. El vaso se cerro hermeticamente y se calento a 130 °C durante 36 h. Despues de que se enfriara a temperatura ambiente, la mezcla se inactivo sobre hielo/agua (700 ml) a 5 °C (temperatura interna) con agitacion. Despues de 15 min, el solido inicialmente pegajoso se convirtio en un solido de color crema que se recogio por filtracion y se lavo con agua fria. El solido se agito en EtOAc (100 ml) durante 30 min y se filtro a traves de un lecho de tierra de diatomeas. El filtrado de EtOAc se concentro para proporcionar 15 g de un solido de color amarillo. El material se purifico mediante cromatografia en gel de sflice usando diclorometano para eluir las impurezas y EtOAc al 10 %/diclorometano para eluir el producto final para obtener el compuesto del fitulo racemico (9,2 g, 98 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 7,48 (d, 1H), 6,90 (d, 1H), 5,51 (d, 1H), 4,66 (s, 1H), 3,65-3,74 (m, 1H), 2,21 (s, 3H), 2,01-2,13 (m, 1H), 1,50-1,78 (m, 5H), 1,07 (s, 3H). CL-EN/EM m/z (35Cl/37Cl) 265,2/267,1 (M+1). El compuesto se disolvio en MeOH (70 ml). Los enantiomeros se separaron en inyecciones de 21 mg mediante cromatografia de fluidos supercrflicos en dos columnas Chiralpak® AD-H (2 x 25 cm, 5 ^m) unidas en serie. Fase movil: dioxido de isopropanol al 20 %/carbono. Caudal: 65 ml/min. Deteccion: 215 nm. Cada desarrollo fue de 6,48 min. El primer pico en eluir se obtuvo como Isomero 1 y el segundo pico en eluir se obtuvo como el compuesto del fitulo, Isomero 2 (4,13 g, exceso enantiomerico del 100 %). El exceso enantiomerico se determino por CFS en una columna CHIRALPAK® AD-H (4,6 x 100 mm, 5 ^m) usando dioxido de isopropanol al 20 %/carbono. Caudal: 2,5 ml/min. Deteccion: 215 nm. Isomero 1 Tr = 2,53 min. Isomero 2 (compuesto del fitulo) TR = 3,06 min.

El compuesto del Ejemplo 1 tambien puede nombrarse o denominarse 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil- ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo.

Ejemplo 1A (Procedimiento alternativo)

2-Cloro-4-[[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen60

La reaccion a continuacion se realizo en seis lotes en paralelo.

Una mezcla de trans-2-amino-1-metil-ciclopentanol (34,93 g, 212,3 mmol), 2-cloro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo (30 g,

176,9 mmol), carbonato de litio (26,14 g, 353,8 mmol), DMSO (270 ml), agua (30 ml) en un reactor a presion de 420 ml se desgasifico durante 15 min burbujeando nitrogeno, se cerro hermeticamente y se calento con agitacion vigorosa a 130 °C durante 48 h. Despues de que se enfriaran a temperatura ambiente, tres de los lotes se vertieron sobre agua (9 l) y MTBE (1 l), se agitaron durante 30 min, se filtraron a traves de tierra de diatomeas y se transfirieron a un embudo de decantacion. La fase organica se separo y la fase acuosa se lavo dos veces con MTBE (1 l, 2 veces). Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vado. La elaboracion se repitio para los tres lotes restantes y todos los lotes se combinaron para aislar el producto en bruto deseado (400 g). El material se purifico en gel de sflice, eluyendo con EtOAc del 0 al 10 %/diclorometano para obtener el compuesto del fitulo racemico puro (diastereomero trans) (280 g, 99 %). El compuesto se disolvio a una concentracion de 10,3mg/ml en fase movil de isopropanol a 25 %/heptanos al 75%. Los enantiomeros se separaron en porciones de 1,16 g (113 ml) por inyeccion mediante HPLC preparativa en una columna CHIRALPAK® AD-H (11 x 35 cm, 20 ^m) usando un procedimiento de reciclaje del estado estacionario (SSR, del ingles steady

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

state recycle) (rendimiento 10,2 g/h). Fase movil: isopropanol al 25 %/heptano. Caudal: 850 ml/min. Deteccion: 290 nm. El primer pico en eluir se obtuvo como Isomero 1 (exceso enantiomerico de > 98 %) y el segundo pico en eluir se obtuvo como el compuesto del tftulo, Isomero 2 (137 g, exceso enantiomerico del 97,7%). El exceso enantiomerico se determino mediante HPLC en una columna CHIRALPAK® AD-H (4,6 x 150 mm, 5 pm) usando isopropanol al 25 %/heptano. Caudal: 0,6 ml/min. Deteccion: 270 nm. Isomero 1 Tr = 6,7 min. El isomero deseado fue el segundo en eluir en estas condiciones de HPLC quiral. Isomero 2 (compuesto del tftulo) TR = 7,9 min.

Ejemplo 1B

Recristalizacion y rayos X de cristal unico para la determinacion de la estereoqmmica absoluta de 2-cloro-4- [[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen61

Se coloco 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (21,62 g, 81,66 mmol) en un matraz de fondo redondo provisto de una manta calefactora, una termometro interno y una barra de agitacion. Se anadio acetona (33 ml) y la suspension se agito y se calento a 50 °C. A esta temperatura, el solido de color amarillento entro en solucion por completo. La solucion se calento a 60 °C. Se anadio heptano lentamente usando un embudo de adicion. Despues de anadir 75 ml, cada gota de disolvente creo una turbidez que desaparecio casi instantaneamente agitando a 60 °C. Despues de que se anadieran heptanos adicionales (50 ml), la turbidez tardo mas en desaparecer ya que la solucion se estaba saturando. La solucion se mantuvo turbia y se detuvo la adicion de heptano. La temperatura se elevo a 62 °C y se anadio acetona (5 ml) que volvio la solucion completamente transparente de nuevo. Se anadio heptano (100 ml) gota a gota volviendo la solucion turbia de nuevo. La temperatura se elevo a 67 °C y la acetona se separo por destilacion y se recogio en un aparato de Dean-Stark. La suspension se dejo enfriar a temperatura ambiente gradualmente y se dejo reposar durante 18 h. El solido de color blanco resultante se filtro y se coloco en alto vado. Despues de 4 h en alto vacfo se observo por RMN que habfa presente una cantidad significativa de acetona. El tiempo adicional en alto vacfo no elimino la acetona. El material se suspendio en hexano durante 30 min, se filtro y se coloco en alto vacfo de nuevo para proporcionar el compuesto final en forma de un solido de color blanco (18,1 g). CL-EN/EM m/z 265,0 (M+1).

Determinacion de la estereoqmmica absoluta: El compuesto tema una tendencia pronunciada a formar estructuras solvatadas con casi cada disolvente en el que tema una solubilidad significativa. Como prueba de la estereoqmmica absoluta de la molecula, se formaron cristales usando un disolvente quiral de manera que la quiralidad conocida de su estereocentro podna estar relacionada con la quiralidad del estereocentro desconocido de la molecula de farmaco. Esto sirvio como fuente de determinacion de la estereoqmmica absoluta. Un segundo procedimiento utilizado para su determinacion se realizo mediante el perfeccionamiento del parametro de estructura absoluta. La dispersion anomala, en gran parte debida al atomo de cloro "pesado" fue suficientemente significativa para concluir la estereoqmmica absoluta del compuesto directamente, como parametro perfeccionado para un valor de 0,054(11). Ambos procedimientos son procedimientos habitualmente aceptados para la determinacion de la quiralidad de los estereocentros desconocidas de moleculas organicas por cristalograffa de rayos X y proporcionaron resultados coherentes. La estructura estudiada cristalizo en forma de un "hemi" solvato de lactato de S-(-)-metilo como se describe en el presente documento, que tema una relacion de dos moleculas del farmaco por una molecula de disolvente. Se disolvio 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (35 mg, tomado de la porcion de 18,1 g descrita anteriormente) en lactato de S-(-)-metilo (500 pl). El vial de muestra se coloco "sin tapa" en un recipiente mas grande, un frasco de 100 ml Pyrex® que contema n-pentano y la botella mas grande se tapo. Se permitio que se produjera la difusion del vapor durante la noche, por lo que el n-pentano mas volatil difundio en la solucion de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo y lactato de S-(-)metilo, efectuando el crecimiento de cristales individuales. Los cristales se recogieron separando por decantacion el exceso de solucion. Uno de los cristales grandes se aislo y se analizo por difraccion de rayos X de cristal unico. La recogida de datos y los resultados de la determinacion de la estructura de cristal unico de esta forma solvatada tuvieron las siguientes caractensticas.

Se monton un cristal unico en una fibra de vidrio fina a 100(2) °K. Los datos se recogieron usando una fuente de radiacion CuKa (A = 1,54178 A) y un difractometro goniometro de 3 cftculos basado en un Bruker D8 equipado con un detector de area SMART 6000CCD (Bruker-AXS. Madison, Wisconsin, EE.UU.). El perfeccionamiento de la celda y la reduccion de datos se realizaron con el programa SAINT V7.68a (Sheldrick, G. M. SHELXS86. Acta Cryst. (1990) A46, 467-473). La celda unitaria se indexo, teniendo parametros monoclrnicos de a = 7,5457(2) A, b =

5

10

15

20

25

30

35

40

17,1858(6) A, c = 12,3017(4) A y p = 97,6870(10)°. El volumen de la celda de la estructura cristalina era 1580,93(9) A. La densidad calculada de la molecula fue de 1,331 g/cm3 a 100 °K. La estructura se resolvio por procedimientos directos (Sheldrick, G. M. SHELXS86. Acta Cryst. (1990) A46, 467-473). Todos los parametros atomicos no de hidrogeno se perfeccionaron independientemente. La eleccion del grupo espacial de P2(1) se confirmo por la convergencia satisfactoria del perfeccionamiento de mmimos cuadrados de matriz completa en F2 (Sheldrick, G. M. (1993). SHELXS93). Program for crystal structure refinement. Institute fur anorg chemie, Gottingen, Alemania) con una bondad final del ajuste de 1,038. El factor residual final, R1, fue de 0,0344 y wR2 fue 0,089. El pico y el mmimo de mayor de diferencia despues del ciclo de perfeccionamiento final fueron 0,239 y -0,298 (e A-3), respectivamente. La estereoqmmica absoluta se determino mediante el perfeccionamiento del parametro de estructura absoluta a 0,054(11), lo que indico que la estereoqmmica de la molecula era como se representa (1R,2R).

Datos de caracterizacion de difraccion de rayos X de polvo (DRXP) de formas anhidras

Los patrones de DRX de los cristales se obtuvieron en un difractometro de rayos X de polvo Bruker D4 Endeavor, equipado con una fuente de CuKa (A = 1,54056 A) y un detector Vantec, operando a 35 kV y 50 mA y con rendijas de divergencia y recepcion de 1 mm y una rendija del detector de 0,1 mm. Cada muestra se exploro entre 4 y 40 ° en 20. El polvo seco se compacto en un soporte de muestra de carga superior rebajado y se obtuvo una superficie lisa usando un portaobjetos de vidrio. Los patrones de difraccion de la forma cristalina se recogieron a la temperatura y la humedad relativa ambientales.

Es bien sabido en la tecnica cristalografica que, para cualquier forma cristalina dada, las intensidades relativas de los picos de difraccion pueden variar debido a la orientacion preferida resultado de factores tales como la morfologfa y el habito cristalinos. Cuando los efectos de la orientacion preferida estan presentes, las intensidades de pico se alteran, pero las posiciones de los picos caractensticos del polimorfo se mantienen sin cambios. Vease, por ejemplo, La Farmacopea de los Estados Unidos N.° 23, Formulario Nacional N.° 18, paginas 1843-1844, 1995. Ademas, tambien es bien sabido en la tecnica cristalografica que para cualquier forma cristalina dada las posiciones de los picos angulares pueden variar ligeramente. Por ejemplo, las posiciones de los picos pueden desplazarse debido a una variacion en la temperatura o la humedad a las que se analiza una muestra, el desplazamiento de la muestra o la presencia o ausencia de un patron interno. En el presente caso, una variabilidad de la posicion del pico de ± 0,1 en 20 tendra en cuenta estas variaciones potenciales sin impedir la identificacion ineqmvoca de la forma cristalina indicada.

Ejemplo 1C

Forma cristalina 1 de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

Se disolvio 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (430 mg) en acetona (1 ml) a la que se le anadio heptano (5 ml). La mezcla se agito a 60 °C. Despues, se dejo que la mezcla se concentrara para proporcionar una suspension espesa de color blanco y se incorporo heptano (3 ml) mientras continuaba la concentracion a 60 °C. El material se filtro al vacfo para proporcionar 308 mg (72 %) y se seco adicionalmente al vacfo a 70 °C durante la noche.

La confirmacion de una forma cristalina puede hacerse basandose en cualquier combinacion unica de distincion de picos (en unidades de ° 20), normalmente los picos mas prominentes. Por tanto, una muestra preparada de la Forma cristalina 1 de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo se caracterizo, mediante un patron de DRX usando radiacion CuKa, como que tema picos de difraccion (valores de 2-teta) como se describen en la Tabla 1 a continuacion y en particular como que tema picos a 9,18 en combinacion con uno o mas de los picos seleccionados entre el grupo que consiste en 14,87, 17,97 y 18,46; con una tolerancia para los angulos de difraccion de 0,1 grados.

Tabla 1

Picos de difraccion de rayos X de polvo del Ejemplo 1C

Pico

Angulo (° 2-teta) Intensidad (%)

1

9,18 100

2

14,87 44

3

15,12 15

4

17,97 26

5

18,46 16

6

21,84 9

7

22,77

7

8

23,07

8

9

23,87

9

10

24,40 8

Forma cristalina 2 de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-cidopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo El material recristalizado en el Ejemplo 1B se uso para caracterizar la Forma 2.

La confirmacion de una forma cristalina puede hacerse basandose en cualquier combinacion unica de distincion de 5 picos (en unidades de ° 20), normalmente los picos mas prominentes. Por tanto, una muestra preparada de la Forma cristalina 2 de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo se caracterizo, mediante un patron de DRX usando radiacion CuKa, como que tema picos de difraccion (valores de 2-teta) como se describen en la Tabla 2 a continuacion y en particular como que tema picos a 20,45 en combinacion con uno o mas de los picos seleccionados entre el grupo que consiste en 17,77, 16,15 y 12,59; con una tolerancia para los angulos de difraccion 10 de 0,1 grados.

Tabla 2

Picos de difraccion de rayos X de polvo del Ejemplo ID

Pico

Angulo ( 2-teta) Intensidad (%)

1

14,52 17

2

16,15 49

3

17,77 72

4

20,45 100

5

21,77 23

6

25,19 33

7

26,19 29

8

26,93 13

9

30,07 22

10

30,96 29

11

32,65

11

12

35,91 32

13

37,36 14

Ejemplo IE

Solvato de etanol cristalino de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

Se peso 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (104 mg) en un pequeno vial de 15 muestra. Se anadio etanol (0,50 ml). La muestra se dejo en agitacion durante el fin de semana. Despues, el material aislado se caracterizo por difraccion de rayos X. El patron se recogio rapidamente para minimizar la conversion de fase, usando los mismos ajustes que antes, aunque con un tamano de etapa mas grande de 0,017 grados dos teta y 0,1 segundos por etapa.

La confirmacion de una forma cristalina puede hacerse basandose en cualquier combinacion unica de distincion de 20 picos (en unidades de ° 20), normalmente los picos mas prominentes. Por tanto, una muestra preparada del solvato de etanol cristalino de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo se caracterizo, mediante un patron de DRX usando radiacion CuKa, como que tema picos de difraccion (valores de 2-teta) como se describen en la Tabla 3 a continuacion y en particular como que tema picos a 7,00 en combinacion con uno o mas de los picos seleccionados entre el grupo que consiste en 17,26, 23,34 y 12,30; con una tolerancia para los angulos 25 de difraccion de 0,2 grados.

Tabla 3

Picos de difraccion de rayos X de polvo del Ejemplo IE

Pico

Angulo ( 2-teta) Intensidad (%)

1

7,00 100

2

8,59 3

3

10,13

3

4

11,89 3

5

12,30 6

6

12,91 4

7

13,95 4

8

16,76 3

9

17,26 19

10

23,34 31

Se peso 2-doro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-cidopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (114 mg) en un pequeno vial de muestra. Se anadio isopropanol (0,50 ml). La muestra se dejo en agitacion durante el fin de semana. Despues, el 5 material aislado se caracterizo por difraccion de rayos X.

La confirmacion de una forma cristalina puede hacerse basandose en cualquier combinacion unica de distincion de picos (en unidades de ° 20), normalmente los picos mas prominentes. Por tanto, una muestra preparada del solvato de etanol cristalino de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo se caracterizo, mediante un patron de DRX usando radiacion CuKa, como que tema picos de difraccion (valores de 2-teta) como se 10 describen en la Tabla 4 a continuacion y en particular como que tema picos a 7,07 en combinacion con uno o mas de los picos seleccionados entre el grupo que consiste en 6,93, 17,12 y 23,13; con una tolerancia para los angulos de difraccion de 0,2 grados.

Tabla 4

Picos de difraccion de rayos X de polvo del Ejemplo 1F

Pico

Angulo ( 2-teta) Intensidad (%)

1

6,9 43

2

7,1 100

3

12,2 6

4

13,4 3

5

16,6 3

6

17,1 30

7

23,1 46

8

23,9 2

9

26,0 2

10

31,8 2

15 Ejemplo 1G

Recristalizacion a gran escala de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

En un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 3 l, se calento 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]- 3-metil-benzonitrilo (131,4 g, 496,3 mmol) en acetona (200 ml) a 50 °C hasta que todos los solidos se disolvieron. La temperatura se elevo a 60 °C y se anadio heptano (aproximadamente 1,35 l) lentamente usando un embudo de 20 adicion. La temperatura se elevo a 65 °C y se destilo acetona (aproximadamente 15 ml) y se recogio con una trampa Dean-Stark. Despues de 1 h la temperatura se elevo a 67 °C. La solucion se sembro con acido 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2- hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (1 g) y se destilo acetona (aproximadamente 80 ml). Los cristales de siembra pueden obtenerse a partir del Ejemplo 1B o generarse a partir de los solidos obtenidos en el Ejemplo 1 o 1A o pueden obtenerse usando otros procedimientos habituales para un experto en la materia, tales 25 como recristalizacion de una pequena parte alfcuota. Despues de 1 h se retiro el calor y la suspension se dejo enfriar hasta la temperatura ambiente lentamente. Los solidos de color blanco se recogieron por filtracion y se dejaron al vado durante la noche para obtener 116,0 g de producto. Se recogio producto adicional (5,6 g) por filtracion de las aguas madre. En un matraz de 3 l, una suspension de 116,0 g del producto en hexanos (1,5 l) se sembro con 2- cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (aproximadamente 2 g) y se agitaron 30 durante 4 h. El solido de color blanco se recogio por filtracion y se dejo en una corriente de nitrogeno durante 48 horas. Precipito producto adicional (2,6 g) en el agua madre y se recogio por filtracion. Se aislo una cantidad total de

109,7 g de 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 7,47 (d, 1H), 6,90 (d, 1H), 5,48 (d, 1H), 4,64 (s, 1H), 3,65-3,74 (m, 1H), 2,19 (s, 3H), 2,01-2,13 (m, 1H), 1,50-1,78 (m, 5H), 1,03 (s, 3H). CL-EN/EM m/z (35Cl/37Cl) 265,2/267,2 (M+1). [a]o20 = +20,2 ° (c 1,0, EtOH).

35

5

10

15

20

25

30

35

40

imagen62

En un vaso a presion cerrado hermeticamente, una mezcla de 2-doro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo (1,2 g, 7,08 mmol), (1R,2S)-2-amino-1-metil-ciclopentanol (1,63 g, 14,2 mmol) y carbonato de litio (1,10 g, 14,9 mmol) en DMSO (14,4 ml) y agua (1,4 ml) se calento a 130 °C durante la noche. Despues de dejar que la reaccion se enfriara a temperatura ambiente, la mezcla se diluyo con EtOAc y se lavo dos veces con acido clorMdrico 1 N. La fase organica se concentro a presion reducida y se purifico usando cromatografia radial eluyendo con EtOAc/hexanos (EtOAc del 20 al 50 %/hexanos). El residuo resultante se volvio a purificar usando cromatografia radial con metanol al 1 %/diclorometano. El producto aislado se recristalizo con eter/hexanos, se recogio por filtracion y se seco a presion reducida para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un solido de color blanco (450 mg, 24 %). Tambien se aislo un segundo cultivo (84 mg). CL-EN/EM m/z (35Cl/37Cl) 265/267 (M+1). RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) 5 1,16 (s, 3H), 1,71-1,73 (m, 5H), 2,12-2,13 (m, 1H), 2,14 (s, 3H), 3,46-3,50 (m, 1H), 4,93 (s, 1H), 5,26-5,30 (m, 1H), 6,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 8,6 Hz, 1H). El analisis por HpLC quiral mostro que el material tenia un exceso enantiomerico del 67 %. El exceso enantiomerico se determino por CFS en una columna CHIRALPAK® ASH (4,6 x 150 mm, 5 ^m) usando dioxido de etanol al 20 %/carbono. Caudal: 5 ml/min. Deteccion: 225 nm. Isomero 1 (compuesto del tftulo): TR = 1,39 min; Isomero 2: TR = 1,99 min. La estereoqmmica absoluta del isomero 1 (1S,2R) se supo por la correlacion de los tiempos de retencion con el Isomero 1 y el Isomero 2 como se describen en el Ejemplo 3.

El material enantioenriquecido (534 mg) se disolvio en metanol (5,5 ml) y se purifico en inyecciones de 500 ^l por CFS en una columna CHIRALPAK® aS-H (2,1 x 25 cm, 5 ^m) usando etanol al 20 %/dioxido de carbono. Caudal: 70 ml/min. Deteccion: 225 nm. El compuesto del tftulo se aislo como el primer pico en eluir, Isomero 1 (326 mg) en exceso enantiomerico del 99 %. El exceso enantiomerico se determio mediante CFS como se ha descrito anteriormente.

Procedimiento alternativo (Ejemplo 2A y 2B)

Ejemplo 2A

c/s-2-Cloro-4-[[2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen63

Se anadio 2-cloro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo (12,4 g, 73,2 mmol) a una solucion recien preparada de 2-amino-1- metil-ciclopentanol, clorhidrato racemico (20,4 g) en DMSO (145 ml) en un vaso reactor a presion. Se anadieron carbonato de litio (15,5 g, 209 mmol) y agua (14,5 ml). La mezcla se agito y se desgasifico con nitrogeno durante 10 min. El reactor se cerro hermeticamente y la reaccion se agito a 130 °C durante 28 h. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con agua (1 l) y MTBE (150 ml). La mezcla se agito durante 10 min a temperatura ambiente y se filtro a traves de un lecho de tierra de diatomeas. La fase organica se separo y la fase acuosa se extrajo con MTBE (100 ml, 2 veces). Las porciones organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron para proporcionar el material en bruto. El material se purifico usando cromatografia en gel de sftice eluyendo primero con cloruro de metileno al 100% para obtener el compuesto c/s-2-cloro-4-[[2-hidroxi-2- metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (5,6 g, 20%). RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 7,47 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,26-5,30 (m, 1H), 4,93 (s, 1H), 3,46-3,50 (m, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,12-2,13 (m, 1H), 1,71-1,73 (m, 5H), 1,16 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 265,2 (M+1).

5

10

15

20

25

30

35

Despues del aislamiento del isomero cis, la elucion continuo usando una mezcla de cloruro de metileno/EtOAc (9/1) para proporcionar (3,6 g, 12%) del trans-2-cloro-4-[[2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo. RMN 1H (300 MHz, DMSO-da) 5 7,48 (d, 1H), 6,90 (d, 1H), 5,51 (d, 1H), 4,66 (s, 1H), 3,65-3,74 (m, 1H), 2,21 (s, 1H), 2,012,13 (m, 1H), 1,50-1,78 (m, 5H), 1,07 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 265,2 (M+1).

Ejemplo 2B

2-Cloro-4-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen64

Se purifico c/s-2-cloro-4-[[2-hidroxi-2-metil-cidopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (9,5 g) en inyecciones de 70 mg mediante cromatograffa de fluidos supercnticos en dos columnas CHIRALPAK® Chiralpak AS-H (2 x 25 cm, 5 |jm) unidas en serie eluyendo con etanol al 20 %/dioxido de carbono. Caudal: 65ml/min. Deteccion: 215 nm. Cada desarrollo es de 4,5 min. El primer pico en eluir proporciona el compuesto del tftulo en forma del Isomero 1 (4,23 g, exceso enantiomerico del > 98%). Isomero 1 (compuesto del tftulo): Tr = 1,40 min; Isomero 2: Tr = 1,77 min. La estereoqmmica absoluta del isomero 1 (1S,2R) se supo por la correlacion de los tiempos de retencion con el Isomero 1 y el Isomero 2 como se describen en el Ejemplo 3.

El material obtenido a partir de la purificacion por CFS se disolvio en MTBE (10 l/kg) y despues se trato con carbon vegetal (200 mg) y gel de sftice (1 g). La mezcla se agito durante 1 h y despues se filtro a traves de un lecho de tierra de diatomeas. Los filtrados se recogieron y se evaporaron para obtener el compuesto del tftulo (4,1 g) en forma de un solido de color blanco. CL-EN/EM m/z 265,2 (M+1); RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 5 1,16 (s, 3H), 1,73-1,71 (m, 5H), 2,13-2,12 (m, 1H), 2,14 (s, 3H), 3,50-3,46 (m , 1H), 4,93 (s, 1H), 5,30-5,26 (m, 1H), 6,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 8,6 Hz, 1H); Pureza quiral > 98 % ee, Chiralpak AS H, EtOH al 20 %/CO2, 65 ml/min, 215 nm.

Ejemplo 3

2-Cloro-4-[[(1R,2S)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen65

Se preparo 2-cloro-4-[[2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1 usando 2-amino-1-metil-ciclopentanol, clorhidrato y 2-cloro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo. El material en bruto se purifico usando cromatograffa en gel de sftice (EtOAc al 25-55 %/hexano) para obtener el Diastereomero 1 (0,54 g) y el Diastereomero 2 (1,56 g). Al Diastereomero 2 se le asigna la configuracion trans basandose en el co- cristal con RA.

El Diastereomero 1 (ds-2-cloro-4-[[(2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo) (500 mg) se disolvio en metanol/diclorometano 5:1 (6 ml). Los enantiomeros se separaron en inyecciones de 750 jl mediante cromatograffa de fluidos supercnticos en una columna CHIRALPAK® AD-H (2,1 x 25 cm). Fase movil: etanol al 20 %/dioxido de carbono. Caudal: 70 ml/min. Deteccion: 280 nm. Cada desarrollo fue de 3,1 min. El primer pico en eluir se obtuvo como isomero 1 (206 mg, exceso enantiomerico del 99%). La estereoqufmica absoluta del isomero 1 (1S,2R) se determino por rayos X de co-cristal con RA.

El segundo pico en eluir se obtuvo como el compuesto del tftulo (1R,2S), Isomero 2 (256 mg, exceso enantiomerico del 99 %). El exceso enantiomerico se determino por CFS en una columna CHIRALPAK® AD-H (2,1 x 25 cm, 5 jm) usando etanol al 20 %/dioxido de carbono. Caudal: 5 ml/min. Deteccion: 225 nm. Isomero 1 TR = 1,37 min; Isomero 2 Tr = 1,86 min. CL-EN/EM m/z 264,8 (M+1).

5

10

15

20

25

cis-2-Cloro-4-[[2-hidroxi-2-metil-cidohexil]amino]-3-metil-benzonitrilo y trans-2-Cloro-4-[[2-hidroxi-2-metil-

ciclohexil]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen66

Se preparo 2-cloro-4-[2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo esencialmente como se ha descrito en el Ejemplo 1 usando clorhidrato de 2-amino-1-metil-ciclohexanol y 2-doro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo. El material en bruto se purifico usando cromatografia en gel de sflice (EtOAc al 25-55 %/hexano) para obtener el primer compuesto en eluir como Diastereomero 1 (cis) (482 mg). CL-EN/EM m/z 279 (M+1) y el segundo compuesto en eluir como Diastereomero 2 (trans) (101 mg). CL-EN/EM m/z 279 (M+1). La estereoqmmica relativa se asigna en funcion de la RMN del Ejemplo 6.

Ejemplos 6 y 7

2-Cloro-4-[[(1R,2S)-2-hidroxi-2-metil-ciclohexil]amino]-3-metil-benzonitrilo (Enantiomero 1) y 2-cloro-4-[[(1S,2R)-2- hidroxi-2-metil-ciclohexil]amino]-3-metil-benzonitrilo (Enantiomero 2)

imagen67

La mezcla enantiomerica de cis-2-cloro-4-[[2-hidroxi-2-metil-ciclohexil]amino]-3-metil-benzonitrilo (450 mg) se disolvio en metanol/etanol/diclorometano 2:1:1 (4 ml) y se separo en inyecciones de 300 ^l mediante cromatografia de fluidos supercrfiicos en una columna AD-H CHIRALPAK® (2,1 x 15 cm, 5 ^m). Fase movil: etanol al 20 %/dioxido de carbono. Caudal: 70 ml/min. Deteccion: 225 nm. El primer pico en eluir se obtuvo como Enantiomero 1 y el segundo pico en eluir se obtuvo como Enantiomero 2. El exceso enantiomerico se determino por CFS en una columna CHIRALPAK® AD-H (2,1 x 25 cm, 5 ^m) usando etanol al 20 %/dioxido de carbono. Caudal: 5 ml/min. Deteccion: 225 nm.

Ejemplo 6, Enantiomero 1: 216 mg, Tr = 1,44 min, 99 % ee; CL-EN/EM m/z 279 (M+1); la estereoqmmica relativa cis determinada por RMN. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5 1,10-1,90 (m, 12H), 2,19 (s, 3H), 3,10-3,25 (m, 1H), 4,66 (d, 1H), 6,40 (d, 1H), 7,31 (d, 1H).

Ejemplo 7, Enantiomero 2: 205 mg, Tr = 1,83 min, 99 % ee; CL-EN/EM m/z 279 (M+1). La estereoqmmica absoluta de (1S,2R) se determino por rayos X con RA.

imagen68

Se prepare 2-doro-3-etN-4-[[(1S)-2-hidroxi-2-metil-ddopentN]amino]benzonitrNo esencialmente como se ha descrito 5 en el Ejemplo 1 usando (2S)-2-amino-1-metil-ciclopentanol (Preparacion 18) y 2-cloro-3-etil-4-fluoro-benzonitrilo. El material en bruto (350 mg) se purifico usando cromatografia en gel de s^lice (EtOAc al 20-60 %/hexano) para obtener el Diastereomero 1 (cis) (82 mg) y el Diastereomero 2 (trans) (29 mg).

Ejemplo 8, diastereoisomero 1: CL-EN/eM m/z 279 (M+1). El analisis por RMN mostro una estructura coherente con el diastereomero cis. RMN 1H (400 MHz, CDCls) 5 7,33 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,45 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,15-5,11 (m, 10 1H), 3,49-3,41 (m, 1H), 2,76-2,70 (m, 2H), 2,28-2,24 (m, 1H), 1,89-1,84 (m, 3H), 1,72-1,67 (m, 3H), 1,36 (s, 3H), 1,14

(t, J = 7,6 Hz, 3H). El exceso enantiomerico se determino por CFS en una columna CHIRALPAK® As-H (2,1 x 25 cm) usando EtOH al 20 %/dioxido de carbono. Caudal: 5 ml/min. Deteccion: 225 nm. 70 % ee, 85 % a TR = 1,24 min, 15 % a TR = 1,75 min.

Diastereomero 2: CL-EN/EM m/z 279 (M+1). El analisis por CL quiral mostro 60 % ee.

15 Los compuestos en la Tabla 5 a continuacion se prepararon siguiendo esencialmente el procedimiento que se ha descrito para el Ejemplo 1, usando trans-4-aminotetrahidropirano-3-ol (Preparacion 23) y 2-cloro-4-fluoro-3-metil- benzonitrilo o 2-cloro-3-etil-4-fluoro-benzonitrilo.

imagen69

Ejemplo 10

20 cis-2-Cloro-3-etil-4-[[4-hidroxi-4-metil-tetrahidrofurano-3-il]amino]benzonitrilo

imagen70

El compuesto del tftulo se prepare siguiendo esencialmente el procedimiento que se ha descrito en el Ejemplo 1, usando clorhidrato de cis-4-amino-3-metil-tetrahidrofuran-3-ol (Preparacion 30) y 2-dore-3-etil-4-fluore-benzonitrilo. El analisis por RMN en comparacion con el Ejemplo 1 y 2 indica la estereoqmmica relativa cis. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 5 7,36-7,33 (m, 1H), 6,37 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 5,30-5,25 (m, 1H), 4,30-4,26 (m, 1H), 3,87 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5 3,78-3,74 (m, 2H), 3,64-3,59 (m, 1H), 2,76 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 2,13 (s, 1H), 1,44-1,43 (m, 3H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz,

3H). CL-EN/EM m/z 281 (M+1).

Ejemplo 11

trans-2-Cloro-3-etil-4-[[4-hidroxi-4-metil-tetrahidrofurano-3-il]amino]benzonitrilo

imagen71

10 El compuesto del tftulo se prepare siguiendo esencialmente el procedimiento que se ha descrito en el Ejemplo 1, usando clorhidrato de trans-4-amino-3-metil-tetrahidrofurano-3-ol (Preparacion 29) y 2-cloro-3-etil-4-fluoro- benzonitrilo. El analisis por RMN en comparacion con el Ejemplo 1 y 2 indica la estereoqmmica relativa trans. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5 7,36 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,45 (dd, J = 6,2, 9,6 Hz, 1H), 4,27-4,24 (m, 1H), 4,03-3,98 (m, 1H), 3,84 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,71 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 4,1,9,6 Hz, 1H), 2,81-2,70 (m, 15 2H), 2,35-2,34 (m, 1H), 1,32 (s, 3H), 1,13 (t, J = 7,6 Hz, 3H). CL-EN/EM m/z 281 (M+1).

Ejemplo 12

2-Cloro-4-[[(3R,4R)-4-hidroxitetrahidrofurano-3-il]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen72

El compuesto del tftulo se prepare siguiendo esencialmente el procedimiento que se ha descrito en el Ejemplo 1 20 usando (3R,4R)-4-(terc-butil(dimetil)silil)oxitetrahidrofuran-3-amina (Preparacion 36) y 2-cloro-4-fluoro-3-metil- benzonitrilo. El producto en bruto se purifico en gel de sftice usando EtOAc al 40-70 %/hexanos. El producto aislado se disolvio en THF para fabricar una solucion 0,5 M. Se anadio TBAF (2,0 ml, 2 mmol, solucion 1 M en THF) y se agitaron a temperatura ambiente durante 16 h. La solucion se concentro al vado, se anadio EtOAc y la solucion se lavo con agua (2x). La porcion organica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro. El residuo se 25 purifico mediante cromatograffa de fase inversa en sftice unida a C18 usando acetonitrilo al 15-95 %/agua + acido formico al 0,1 %. Las fracciones que conteman el compuesto del tftulo se concentraron al vado para retirar el acetonitrilo, despues se extrajeron con EtOAc. Los extractos organicos se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron al vado para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un solido de color blanco (134 mg, 19 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 7,53 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,60-5,56 (m, 1H), 5,53 (d, 30 J = 4,9 Hz, 1H), 4,33-4,29 (m, 1H), 4,05-3,99 (m, 2H), 3,92 (dd, J = 4,6, 9,6 Hz, 1H), 3,63 (dd, J = 2,4, 9,5 Hz, 1H), 3,53-3,50 (m, 1H), 2,19 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 253 (M+1).

Los ejemplos de la Tabla 6 a continuacion se prepararon siguiendo esencialmente el procedimiento descrito en el Ejemplo 12 usando el aminoalcohol protegido con TMS o TBDMS apropiado y 2-cloro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo o 2-cloro-3-etil-4-fluoro-benzonitrilo.

35

Tabla 6

Ej

Nombre qulmico

Estructura

CL-EN/EM

m/z

13

2-Cloro-4-[[(3S,4R)-4-hidroxitetrahidrofurano-3-il]amino]-3-metil-

benzonitrilo

imagen73

253 (M+1)

14

2-Cloro-4-[[(3R,4S)-4-hidroxitetrahidrofurano-3-il]amino]-3-

metil-benzonitrilo

imagen74

253 (M+1)

15

2-Cloro-3-etil-4-[[(3R,4R)-4-hidroxitetrahidrofurano-3-

il]amino]benzonitrilo

imagen75

267 (M+1)

Preparacion 46

2-Cloro-3-metil-4-[(3-oxotetrahidropiran-4-il)amino]benzonitrilo

5

A una solucion de cloruro de oxalilo (1,22 ml, 14,1 mmol) en diclorometano (15 ml) a -60 °C se le anadio gota a gota una solucion de sulfoxido de dimetilo (2,08 ml, 29,3 mmol) en diclorometano (15 ml) y se agito a -60 °C durante 15 min. Se anadio f/ans-2-cloro-4-[(3-hidroxitetrahidropiran-4-il)amino]-3-metil-benzonitrilo (3,13 g, 11,7 mmol, Ejemplo 9) en diclorometano (30 ml) a la solucion y se agito a -60 °C durante 30 min. Se anadio trietilamina (9 ml, 10 64,5 mmol) y la mezcla se calento a temperatura ambiente y se agito durante 3 h. La mezcla se diluyo con EtOAc y

se lavo dos veces con acido clorhidrico 1 N. La porcion organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro al vado para proporcionar el compuesto del tUulo en bruto en forma de un semisolido de color naranja (2,53 g, 81 %). CL-EN/EM m/z 265,2 (M+1).

El oxotetrahidropirano u oxotetrahidrofuranos de la Tabla 7 a continuacion, se prepararon esencialmente siguiendo 15 el procedimiento descrito en la Preparacion 46, usando como material de partida el alcohol apropiado y transcurriendo con de 1,2 a 1,5 eq de cloruro de oxalilo y de 2,5 a 3 eq de DMSO, a -60 a -75 °C en THF.

imagen76

Tabla 7

Prep

Nombre quimico

Estructura

CL-EN/EM

m/z

47

2-Cloro-3-etil-4-[(3-oxotetrahidropiran-4-

il)amino]benzonitrilo

imagen77

278,8 (M+1)

48

2-Cloro-3-metil-4-[[(3S)-4-oxotetrahidrofuran-3-

il]amino]benzonitrilo

imagen78

249 (M-1)

49

2-Cloro-3-metil-4-[[(3R)-4-oxotetrahidrofuran-3-

il]amino]benzonitrilo

imagen79

251 (M+1)

Ejemplos 16 y 17

2-Cloro-4-[[(3S,4S)-4-hidroxi-4-metil-tetrahidrofurano-3-il]amino]-3-metil-benzonitrilo y 2-cloro-4-[[(3S,4R)-4-hidroxi-4- 5 metil-tetrahidrofurano-3-il]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen80

Una solucion de 2-cloro-3-metil-4-[[(3S)-4-oxotetrahidrofuran-3-il]amino]benzonitrilo (148 mg, 0,590 mmol) en THF (2,4 ml) a 0°C se trato con bromuro de metilmagnesio (0,49 ml, 1,50 mmol, 3 M en eter diet^lico) gota a gota en atmosfera de nitrogeno. La reaccion se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 16 h. La reaccion se 10 interrumpio con cloruro de amonio acuoso saturado (5 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml, 3 veces). Los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para proporcionar 143 mg del producto en bruto. El producto en bruto se purifico en gel de sflice (24 g, EtOAc al 5-80 %/hexanos) para proporcionar los compuestos del tttulo.

Ejemplo 16, isomero 3S.4S: El primero en eluir de la columna fue el isomero 3S,4S que se aislo en forma de una 15 pelfcula de color amarillo (25 mg, 16%). Su diastereomerismo y, por tanto, su estereoqmmica absoluta se determinaron por analisis por RMN. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,35 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,37 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,28 (dd, J = 7,1, 9,0 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 3,77 (dt, J = 9,9, 5,6 Hz, 2H), 3,62

5

10

15

20

25

30

35

(dd, J = 7,0, 9,0 Hz, 1H), 2,34-2,30 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 1,44 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 267 (M+1).

Ejemplo 17, isomero 3S,4R: El segundo en eluir de la columna fue el isomero 3S,4R que se aislo en forma de una pelfcula de color castano (48 mg, 30 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,40-7,38 (m, 1H), 6,72-6,70 (m, 1H), 4,484,44 (m, 1H), 4,14-4,13 (m, 1H), 4,06-4,04 (m, 1H), 3,86-3,83 (m, 1H), 3,72 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,64-3,59 (m, 1H), 2,23 (s, 3H), 2,14 (s, 1H), 1,31 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 267 (M+1).

Ejemplos 18 y 19

2-Cloro-4-[[(3R,4R)-4-hidroxi-4-metil-tetrahidrofurano-3-il]amino]-3-metil-benzonitrilo y 2-cloro-4-[[(3R,4S)-4-hidroxi-4- metil-tetrahidrofurano-3-il]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen81

Los compuestos del tttulo se prepararon siguiendo esencialmente el procedimiento que se ha descrito para los Ejemplos 16 y 17, usando 2-cloro-3-metil-4-[[(3R)-4-oxotetrahidrofuran-3-il]amino]benzonitrilo. El producto en bruto se purifico en gel de silice (EtOAc al 5-80 %/hexanos).

Ejemplo 18, isomero 3R,4R: El primer isomero en eluir de la columna fue el isomero 3R,4R que se aislo en forma de un solido de color blanco (60 mg, 7 %). Su diastereomerismo y, por tanto, su estereoqmmica absoluta se determinaron por analisis por RMN. H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 7,35 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,37 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,25-5,24 (m, 1H), 4,28 (dd, J = 7,1, 9,0 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 3,79-3,75 (m, 2H), 3,62 (dd, J = 6,9, 9,0 Hz, 1H), 2,26 (s, 3H), 1,44 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 267 (M+1).

Ejemplo 19, isomero 3R,4S: El segundo isomero en eluir de la columna fue el isomero 3R,4S que se aislo en forma de un solido de color blanco (115 mg, 13 %). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 7,38 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,71 (d, J =

8.7 Hz, 1H), 4,45 (dd, J = 6,2, 9,6 Hz, 1H), 4,14-4,09 (m, 1H), 4,04-3,99 (m, 1H), 3,84 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 3,71 (d, J =

9.8 Hz, 1H), 3,63-3,60 (m, 1H), 2,23 (s, 3H), 2,04 (s, 1H), 1,31 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 267 (M+1).

Ejemplos 20 y 21

2-Cloro-4-[[(1S,2R,3S)-2,3-dihidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (Isomero 1) y 2-Cloro-4- [[(1R,2S,3R)-2,3-dihidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo (Isomero 2)

imagen82

El compuesto del tftulo protegido con TBDPS se preparo esencialmente siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 1, usando re/-(1S,2R,5R)-2-amino-5-(ferc-butil(difenil)silil)oxi-1-metil-ciclopentanol (9,84 g, 26,62 mmol, Preparacion 44) y 2-cloro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo (3,42 g, 20,17 mmol). Una solucion 0,2 M del producto en bruto en THF se trato con TBAF (30,25 ml, 30,25 mmol, 1,0 M en THF) y se agito a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se trato con agua, se concentro al vacfo y se extrajo en EtOAc. Los extractos organicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo resultante se purifico en gel de sflice (EtOAc al 25-75 %/hexanos) para proporciona el compuesto del tftulo racemico en forma de un solido de color amarillo palido (3,27 g, 58 %). El analisis por RMN indico la estereoqmmica relativa mostrada. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 7,48 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,60-5,58 (m, 1H), 4,74 (d, J = 5,4 Hz, 1H 4,27 (s, 1H), 3,82-3,80 (m, 1H), 3,55-3,53 (m, 1H), 3,29 (s, 1H), 3,15 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 2,20 (s, 3H), 2,04-2,01 (m, 1H), 1,86-1,84 (m, 1H), 1,64-1,61 (m, 2H), 0,95 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 281 (M+1).

5

10

15

20

25

30

El compuesto se disolvio en isopropanol y cloroformo (2:1). Los enantiomeros se separaron en inyecciones de 150 mg mediante cromatograffa de fluidos supercnticos en una columna CHIRALPAK® AD-H (0,5 x 1,5 cm). Fase movil: isopropanol al 30 %/dioxido de carbono. Caudal: 300 ml/min. Deteccion: 290 nm. El primer pico en eluir se obtuvo como Isomero 1 y el segundo pico en eluir se obtuvo como Isomero 2. El exceso enantiomerico se determino por CFS en una columna CHIRALpAk® AD-H (4,6 x 100 mm) usando isopropanol al 20 %/dioxido de carbono. Deteccion: 215 nm.

Ejemplo 20, (isomero 1 - 1S.2R.3S) Se aislo en forma de un solido de color blanco (1,5 g, 27 %). Tr = 1,80 min, > 99 % ee. CL-EN/EM m/z 281 (M+1).

Ejemplo 21, (isomero 2 - 1R,2S,3R) Se aislo en forma de un solido de color blanco (1,4 g, 25 %). Tr = 2,75 min, > 99 % ee. CL-EN/EM m/z 281 (M+1). La estereoqmmica absoluta (1R,2S,3R) del Isomero 2 se determino por rayos X de co-cristal de RA como se ha representado anteriormente para el dibujo del Ejemplo 21.

Ejemplo 22

re/-2-Cloro-4-[[(1R,2S,3S)-2,3-dihidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen83

El compuesto del tftulo se preparo esencialmente siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 1, usando re/- (1S,2R,5S)-2-amino-5-(terc-butil(difenil)silil)oxi-1-metil-ciclopentanol (409 mg, 1,1 mmol, Preparacion 43) y 2-cloro-4- fluoro-3-metil-benzonitrilo (142 mg, 0,84 mmol). Una solucion 0,2 M del producto en bruto en THF se trato con fluoruro de tetrabutilamonio (1,3 ml, 1,3 mmol, 1,0 M en THF) y se agito a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se trato con agua, se concentro al vado y se extrajo con EtOAc. Los extractos organicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El material resultante se purifico en gel de siMce (EtOAc al 25100 %/hexanos) para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite de color amarillo palido (15 mg, 6 %). La estereoqdmica relativa se determino por estudios de RMN. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 7,47 (d, J =

8,8 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,60-5,57 (m, 1H), 4,98 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,68 (s, 1H), 3,73-3,70 (m, 2H), 2,12 (s, 3H), 2,09-2,09 (m, 2H), 1,69-1,67 (m, 1H), 1,52-1,49 (m, 1H), 1,07 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 281 (M+1).

Ejemplo 23

re/-2-Cloro-4-[[(1R,2S,3R)-2,3-dihidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-etil-benzonitrilo

imagen84

El compuesto del tftulo se preparo siguiendo esencialmente el procedimiento descrito en el Ejemplo 20, usando re/- (1S,2R,5R)-2-amino-5-(terc-butil(difenil)silil)oxi-1-metil-ciclopentanol y 2-cloro-3-etil-4-fluoro-benzonitrilo para la reaccion de sustitucion seguido de la retirada de TBDPS con TBAF. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 7,44 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,74-5,70 (m, 1H), 4,74 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,27 (s, 1H), 3,82-3,79 (m, 1H), 3,58-3,51 (m, 1H), 2,80-2,78 (m, 2H), 2,03-2,02 (m, 1H), 1,88-1,86 (m, 1H), 1,69-1,68 (m, 1H), 1,52-1,51 (m, 1H), 1,01-0,97 (m, 3H), 0,93 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 295 (M+1).

2-Cloro-4-[[(1R,2S)-2-hidroxiciclohexil]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen85

Una mezcla de 2-cloro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo (500 mg, 2,95 mmol), diisopropiletilamina (1,29 ml, 7,37 mmol) y 5 clorhidrato de (1S,2R)-2-aminociclohexanol (670 mg, 4,42 mmol, Acros®) se calento usando un microondas CEM® a 190 °C durante 2 h y 180 °C durante 4 h. La mezcla se diluyo con diclorometano y se lavo con HCl 1 N. La fase acuosa se extrajo de nuevo con diclorometano. Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo resultante se purifico usando cromatografia radial, eluyendo con metanol al 2 %/diclorometano. El producto aislado se recristalizo con eter y hexano para proporcionar el compuesto 10 del trtulo en forma de un solido de color blanco (231 mg, 29 %). CL-EN/EM m/z 265,0 (M+1).

Los compuestos de la Tabla 8 a continuacion se prepararon siguiendo esencialmente el procedimiento descrito en el Ejemplo 24, usando el aminoalcohol quiral apropiado (disponible en el mercado) y 2-cloro-4-fluoro-3-metil- benzonitrilo.

Tabla 8

Ej

Nombre qulmico

Estructura

CL-EN/EM

m/z

25

2-Cloro-4-[[(1S,2S)-2-hidroxiciclohexil]amino]

-3-metil-benzonitrilo

imagen86

265,0 (M+1)

26

2-Cloro-4-[[(1S,2R)-2-hidroxiciclopentil]amino]

-3-metil-benzonitrilo

imagen87

251,2 (M+1)

27

2-cloro-4-[[(1R,2S)-2-hidroxiciclopentil]amino]

-3-metil-benzonitrilo

imagen88

251,2 (M+1)

5

10

15

20

25

30

2-Cloro-4-[[(1S,2R)-2-hidroxiciclohexil]amino]-3-metil-benzonitrilo

imagen89

Una solution de 2-cloro-4-fluoro-3-metil-benzonitrilo (500 mg, 2,95 mmol), clorhidrato de (1R,2S)-2-

aminociclohexanol (671 mg, 4,42 mmol, Small Molecules, Inc.) y bicarbonato de sodio (991 mg, 11,8 mmol) en DMSO (14,7 ml) y agua (2,1 ml) se calento a 130 °C durante 48 h. Despues de que se enfriara a temperatura ambiente, la mezcla se diluyo con HCl 1 N y se extrajo dos veces con EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vacio. El residuo resultante se purifico usando cromatograffa radial, eluyendo con metanol al 2 %/diclorometano para proporcionar el compuesto del fftulo en forma de un solido de color blanquecino (527 mg, 68 %). CL-EN/EM m/z 265,2 (M+1).

Ejemplo 29 y 30

2-Cloro-4-[[3-hidroxi-3-metil-tetrahidropiran-4-il]amino]-3-metil-benzonitrilo, Diastereomero 1 y 2-Cloro-4-[[3-hidroxi-3- metil-tetrahidropiran-4-il]amino]-3-metil-benzonitrilo, Diastereomero 2

imagen90

A una solucion de 2-cloro-3-metil-4-[(3-oxotetrahidropiran-4-il)amino]benzonitrilo (2,53 g, 9,56 mmol, Preparation 46) en THF (38 ml) a 0°C se le anadio bromuro de metilmagnesio (9,56 ml, 28,7 mmol, 3 M en eter diefflico) y la reaction se dejo calentar a temperatura ambiente. Despues de 1 h, la reaction se interrumpio con cloruro de amonio acuoso saturado. Se anadio EtOAc y la mezcla se lavo con agua. La portion organica se seco con sulfato de sodio, se filtro y se concentro al vacfo. El residuo resultante se purifico usando cromatograffa en gel de silice eluyendo con MeOH al 5 %/diclorometano. El material resultante se volvio a purificar con MeOH al 2 %/diclorometano, despues de nuevo con MeOH al 1,5 %/diclorometano para separar los diastereomeros. Cada producto se recristalizo usando diclorometano y eter para proporcionar los productos del fftulo.

Ejemplo 29, diastereomero 1: Aislado en forma de un solido de color blanquecino (549 mg, 21 %). La estereoqmmica relativa se desconoce. RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 5 7,47 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,74-6,72 (m, 1H), 5,04-5,00 (m, 1H), 4,95 (s, 1H), 3,80-3,75 (m, 1H), 3,58-3,54 (m, 2H), 3,42-3,38 (m, 1H), 3,26 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 2,15 (s, 3H),

I, 72-1,69 (m, 2H), 0,94 (s, 3H). LC-EN/EM m/z 281,2 (M+1).

Ejemplo 30, diastereomero 2: Aislado en forma de un solido de color blanquecino (300 mg, 11 %). La estereoqmmica relativa se desconoce. RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 5 7,42 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,28-5,24 (m, 1H), 4,68 (s, 1H), 3,82-3,78 (m, 1H), 3,61-3,60 (m, 1H), 3,40 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 3,35-3,31 (m, 1H), 3,09 (d, J =

II, 0 Hz, 1H), 2,19 (s, 3H), 1,77-1,75 (m, 2H), 1,11 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 281,2 (M+1).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

2-Cloro-3-etil-4-[[3-hidroxi-3-metil-tetrahidropiran-4-il]amino]benzonitrilo, Diastereomero 1 y 2-cloro-3-etil-4-[[3- hidroxi-3-metil-tetrahidropiran-4-il]amino]benzonitrilo, Diastereomero 2

imagen91

Los compuestos del tttulo se prepararon como diastereomeros racemicos de una manera analoga a la preparacion que se encuentra en los Ejemplos 29 y 30. Los diastereomeros se separaron mediante elucion por cromatograffa en gel de s^lice con MeOH al 1,5 %/diclorometano. Los diastereomeros se purificaron adicionalmente y se separaron usando cromatograffa en gel de sflice eluyendo con acetona al 10 %/diclorometano.

Ejemplo 31, diastereomero 1: Aislado en forma de un solido de color blanquecino (551 mg, 19 %). La estereoqdmica relativa se desconoce. RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 5 7,47-7,45 (m, 1H), 6,76-6,73 (m, 1H), 5,16-5,14 (m, 1H), 5,04-4,99 (m, 1H), 3,84-3,81 (m, 1H), 3,60-3,58 (m, 2H), 3,43-3,42 (m, 1H), 3,26-3,23 (m, 1H), 2,71-2,70 (m, 2H), 1,72-1,70 (m, 2H), 1,12-1,02 (m, 3H), 0,95 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 295,0 (M+1).

Ejemplo 32, diastereomero 2: Aislado en forma de un solido de color blanquecino (392 mg, 13 %). La estereoqdmica relativa se desconoce. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 7,40 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 5,41-5,38 (m, 1H), 4,69 (s, 1H), 3,86-3,81 (m, 1H), 3,59-3,58 (m, 1H), 3,42-3,38 (m, 1H), 3,34-3,28 (m, 1H), 3,11-3,07 (m, 1H), 2,78-2,75 (m, 2H), 1,81-1,80 (m, 1H), 1,67-1,63 (m, 1H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (t, J = 7,4 Hz, 3H). CL-EN/EM m/z 295,0 (M+1).

Ejemplo 33 y 34

2-Cloro-3-etil-4-[[3-hidroxi-3-metil-tetrahidropiran-4-il]amino]benzonitrilo, Isomero 1 y 2-cloro-3-etil-4-[[3-hidroxi-3- metil-tetrahidropiran-4-il]amino]benzonitrilo, Isomero 2

El Ejemplo 32 (Diastereomero 2) se disolvio en metanol/diclorometano 2:1 (9 ml) y se separo en inyecciones de 1000 |jl mediante cromatograffa de fluidos supercnticos en una columna AD-H CHIRALPAK® (2,1 x 15 cm, 5 pm). Fase movil: etanol al 25 %/dioxido de carbono. Caudal: 70 ml/min. Deteccion: 225 nm. Cada desarrollo fue de 3,5 min. El primer pico en eluir se obtuvo como Isomero 1 y el segundo pico en eluir se obtuvo como Isomero 2. El exceso enantiomerico se determino por CFS en una columna CHIRALPAK® AD-H (2,1 x 15 cm, 5 mm) usando 25 % de etanol/dioxido de carbono. Caudal: 5 ml/min. Deteccion: 225 nm.

Ejemplo 33, Isomero 1: Se aislo en forma de una espuma de color blanco (256 mg, 49 %). Tr = 1,14 min, 99 % ee. Ejemplo 34, Isomero 2: Se aislo en forma de una espuma de color blanco (221 mg, 42 %) Tr = 1,86 min, 99 % ee. RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 5 7,47-7,45 (m, 1H), 6,76-6,73 (m, 1H), 5,16-5,14 (m, 1H), 5,04-4,99 (m, 1H), 3,843,81 (m, 1H), 3,60-3,58 (m, 2H), 3,43-3,42 (m, 1H), 3,26-3,23 (m, 1H), 2,71-2,70 (m, 2H), 1,72-1,70 (m, 2H), 1,121,02 (m, 3H), 0,95 (s, 3H). CL-EN/EM m/z 295,0 (M+1).

Ensayo de union al receptor nuclear de hormonas esteroideas

Se usaron lisados celulares de celulas HEK293 de rinon embrionario humano que sobreexpresan RM humano (receptor de mineralocorticoides), RG (receptor de glucocorticoides), RA (receptor de androgenos) o RP (receptor de progesterona) para ensayos de union competitiva receptor-ligando para determinar valores de ki. Los procedimientos habituales se proporcionan a continuacion.

Brevemente, se realizaron ensayos de union competitiva a receptores de esteroides en un tampon que contema tampon HEpES 20 mM (pH = 7,6), EDTA 0,2 mM, NaCl 75 mM, MgCh 1,5 mM, glicerol al 20 %, molibdato de sodio 20 mM, DTT 0,2 mM, aprotinina 20 mg/ml y leupeptina 20 mg/ml (tampon de ensayo). Normalmente, los ensayos de union a receptores de esteroides incluyeron ligandos radiomarcados, tales como [3H]-aldosterona 0,25 nM para la union a RM, [3H]-dexametasona 0,3 nM para la union a RG, [3H]-metiltrienolona 0,36 nM para la union a RA y [3H]- metiltrienolona 0,29 nM para la union a Rp, y o bien 20 jg de lisado 293-MR, 20 jg de lisado de 293-GR, 22 jg de lisado de 293-AR o 40 jg de lisado 293-PR por pocillo. Los ensayos se realizaron normalmente en formato de 96 pocillos. Los compuestos de ensayo que competfan se anadieron a diversas concentraciones que variaban de aproximadamente 0,01 nM a 10 jM. La union no espedfica se determino en presencia de aldosterona 500 nM para la union a RM de union, dexametasona 500 nM para la union a RG o metiltrienolona 500 nM para la union a RA y RP. Las reacciones de union (140 ml) se incubaron durante la noche a 4 °C, despues se anadieron a cada reaccion

70 |jl de tampon de carbon vegetal-dextrano fno (que contema por 50 ml de tampon de ensayo, 0,75 g de carbon vegetal y 0,25 g de dextrano). Las placas se mezclaron durante 8 min en un agitador orbital a 4 °C. Las placas se centrifugaron a 3000 rpm a 4 °C durante 10 min. Una parte alfcuota de 120 jl de la mezcla de reaccion de union se transfirio despues a otra placa de 96 pocillos y se anadieron 175 jl de fluido de centelleo Wallac Optiphase Hisafe 5 3™ a cada pocillo. Las placas se cerraron hermeticamente y se agitaron vigorosamente en un agitador orbital.

Despues de una incubacion de 2 h, las placas se leyeron en un contador Wallac MICROBETA®.

Los datos se usaron para calcular una CI50 estimado y el porcentaje de inhibicion a 10 jM. La Kd para [3H]- aldosterona para la union a RM, [3H]-dexametasona para la union a RG, [3H]-metiltrienolona para la union a Ra o [3H]-metiltrienolona para la union a RP, se determino mediante la union de saturacion. Los valores de CI50 para los 10 compuestos se convirtieron en Ki usando la ecuacion de Cheng Prushoff.

Los compuestos de los Ejemplos del presente documento se sometieron a ensayo esencialmente como se ha descrito anteriormente y presentaron un valor de Ki para RA inferior a 1 jM. Los siguientes compuestos ejemplificados de la invencion se sometieron a ensayo esencialmente como se ha descrito anteriormente y presentaron la siguiente afinidad para RA como se ilustra en la Tabla 9 a continuacion.

15 Tabla 9

Ej

RA (Ki nM) RG (Ki nM) RM (Ki nM) RP (Ki nM)

1

2,03 >6020 1450 872

2

0,684 462 1.840 448

5

16,9 >3120 415 520

16

5,21 2390 >7010 1220

20

38,1 >5730 >7150 >7960

32

162 >5820 3960 4290

Los datos de la Tabla 9 muestran que los compuestos de la Tabla 9 son ligandos potentes y selectivos para el RA. Ensayo de indicador AR/ARE C2C12

Como indicador de la actividad agonista en el tejido muscular, se realizo el ensayo de indicador AR/ARE C2C12. 20 Brevemente, las celulas C2C12 de mioblasto de raton se cotransfectaron usando el reactivo Fugene™. Se transfecto un plasmido indicador que contema GRE/ARE (elemento de respuesta a glucocorticoides/elemento de respuesta a androgenos) y un promotor de TK aguas arriba del ADNc del indicador de la luciferasa, con un plasmido que expresaba constitutivamente el receptor de androgenos humano (RA) usando un promotor de CMV viral. Las celulas se transfectaron en matraces de 150 cm2 en medio DMEM con CS-FBS al 4 %. Despues de 5 h de incubacion, se 25 tripsinizaron las celulas transfectadas, se sembraron en placas de 96 pocillos en medio DMEM que contema CS- FBS al 4 %, se incubaron durante 2 h y despues se expusieron a diversas concentraciones de compuestos de ensayo que variaban de aproximadamente 0,0 nM a 10 pM. Despues de 24 h de incubaciones con compuestos, las celulas se lisaron y se determino la actividad luciferasa mediante tecnicas convencionales. Los datos se ajustaron a una logfstica de ajuste de 4 parametros para determinar los valores de CE50. El % de eficacia se determino frente a 30 la estimulacion maxima obtenida con metiltrienolona 10 nM.

Pueden disenarse facilmente ensayos funcionales de modulacion de receptores hormonales nucleares de hormonas esteroideas similares a los descritos anteriormente por el experto en la materia. Los compuestos de los Ejemplos del presente documento se sometieron a ensayo esencialmente como se ha descrito anteriormente como se ilustra en la Tabla 10 a continuacion.

35 Tabla 10

Ej

CE50 de C2C12 de RA (nM)

1

0,499 (n = 10)

2

0,0398 (n = 6)

5

4,88

16

73,7

20

146

32

274

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Los datos de la Tabla 10 demuestran que los compuestos de la Tabla 10 son un agonista del RA humano.

Modelo in vivo de eficacia y selectividad

La atrofia muscular con sarcopenia inducida por hipogonadismo puede producirse como resultado de diferentes patolog^as que incluyen el envejecimiento, la caquexia por cancer, la sepsis, la denervacion, el desuso, la inactividad, quemaduras, VIH-smdrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), insuficiencia renal o cardfaca cronica, descarga/microgravedad y distrofias musculares etc. La secuencia de acontecimientos que conduce a la perdida de musculo en estas diversas afecciones es diferente, pero en conjunto conduce a un desequilibrio entre las vfas anabolicos muscular y catabolicas musculares, de manera que hay una perdida neta en la masa y la funcion muscular que puede medirse en un modelo retardado de gonadectoirna en rata a traves de cambios en los pesos en humedo del musculo elevador del ano (EA) y del musculo perineal del bulbo cavernoso (BC).

Se castraron (gonadectomizaron o "GDX") Ratas Sprague Dawley machos (de 8 semanas de edad) de acuerdo con los procedimientos aprobados (Charles River Labs) y se dejo que se debilitaran durante seis semanas. Tambien se prepararon ratas con operacion simulada emparejadas por edad. (Las ratas con operacion simulada son animales que han sido expuestos a los mismos procedimientos quirurgicos que los animales castrados excepto porque sus testfculos no se retiraron). Los animales se alojaron en una habitacion de temperatura controlada (24 °C) con un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas invertido (oscuridad 10:00/22:00) y agua y alimentos disponibles a voluntad.

Para demostrar la eficacia in vivo, los compuestos de la presente invencion se administraron diariamente mediante aplicacion transdermica a las ratas de 14 semanas de edad castradas (peso corporal de aproximadamente 400450 g). Los animales se asignaron al azar en funcion del peso corporal antes de atribuirles un puesto de ensayo, de manera que los pesos corporales de todos los grupos de tratamiento estan dentro del 5 % los unos de los otros. Los compuestos de ensayo se administraron a los animales usando vehfculos convencionales. Por ejemplo, para la formulacion transdermica, se utilizan etanol al 81,6 %, miristato de isopropilo al 7,6 %, agua al 9,6 %, Carbopol® al 0,4%, edetol al 0,826% (etilendiamina-N,N,N',N'-tetra-2-propanol). Las ratas con operacion simulada que no recibieron tratamiento se usaron como controles positivos de tratamiento mientras que las ratas castradas tratadas solo con vehfculo se usaron como controles negativos de tratamiento.

Los animales de ensayo se trataron por via transdermica durante un penodo de tiempo de dos semanas con, por ejemplo, 0,3, 1 o 5 mg/kg/dfa de un compuesto de la presente invencion. Despues del tratamiento de dos semanas, como indicador de la actividad, se determino el peso en humedo del musculo EA y del musculo BC en el grupo de ensayo y se comparo con el peso en humedo del EA y el BC del grupo de control castrado de vehfculo solo. Los pesos en humedo de los musculos obtenidos tanto en el grupo de ensayo como en el grupo con vehfculo solo se normalizaron con respecto al peso corporal total. Como indicador de la actividad selectiva tisular, el peso en humedo de la prostata (P) de animales de ensayo se comparo de manera similar con el peso en humedo de las prostatas del grupo de control simulado. De nuevo, los pesos en humedo de las prostatas obtenidas tanto del grupo de ensayo como del grupo de control simulado se normalizaron con respecto al peso corporal total.

Los valores de porcentaje de eficacia (% de Ef.) pueden determinarse como se inddica a continuacion: % de Ef. = ((Peso humedo de EA o BC o P en animal de ensayo/peso corporal total del animal de ensayo) / (peso en humedo de EA o BC o P en animal de control/peso corporal total del animal control)) * 100.

Siguiendo los procedimientos esencialmente como se ha descrito anteriormente, el compuesto del Ejemplo 1 presento la siguiente actividad en el modelo de eficacia y selectividad en rata in vivo anteriormente mencionado como se muestra en la Tabla 11 a continuacion:

Tabla 11

Dosis (mg/kg/d), via

Peso de EA % de eficacia frente al control (GDX) (ensayo de la t de Dunnett, p < 0,05) Peso de BC % de eficacia frente al control (GDX) (ensayo de la t de Dunnett, p < 0,05) Peso de P % de eficacia frente al control (SIMULADO) (ensayo de la t de Dunnett, p < 0,05)

0,03, TD

114,6 106,2 3,9

0,3, TD

212,5 204,4 7,3

1, TD

237,2 272,6 11,8

5, TD

233,8 295,1 12,1

TD = via de administracion transdermica; EA = musculo elevador del ano ; BC = musculo del bulbo cavernoso; P = prostata; GDX = gonadectomizado

De forma similar, el compuesto del Ejemplo 2 presenta la siguiente actividad en el modelo de eficacia y selectividad en rata in vivo anteriormente mencionado como se

5

10

15

20

25

30

35

40

muestra en la Tabla 12 a continuacion:

Tabla 12

Dosis (mg/kg/d), via

Peso de EA % de eficacia frente al control (GDX) (ensayo de la t de Dunnett, p < 0,05) Peso de BC % de eficacia frente al control (GDX) (ensayo de la t de Dunnett, p < 0,05) Peso de P % de eficacia frente al control (SIMULADO) (ensayo de la t de Dunnett, p < 0,05)

0,01, TD

130,6 100,0 3,8

0,1, TD

230,7 199,1 7,2

1, TD

328,7 353,0 24,7

5, TD

340,6 386,5 29,0

TD = via de administracion transdermica; EA = musculo elevador del ano ; BC = musculo del bulbo cavernoso; P = prostata; GDX = gonadectomizado

En conjunto, estos resultados demuestran que el Ejemplo 1 y el Ejemplo 2 son moduladores selectivos del receptor de androgenos (SARM) que presentan un aumento dependiente de la dosis de los musculos estriados EA y BC altamente sensibles despues de 2 semanas de tratamiento, con una acumulacion mmima de riesgo androgenico (aumento en los pesos en humedo de la prostata) en los mismos animales usando un modelo retardado de gonadectoirna en rata.

Modelo in vivo de disminucion del colesterol HDL inducida por moduladores del RA

Se utilizaron macacas de Java para el presente estudio, que se realizo para evaluar los efectos de los moduladores del receptor de androgenos sobre el colesterol HDL (lipoprotema de alta densidad). Se ha demostrado que este modelo animal responde a los androgenos mediante la disminucion del colesterol HDL y se considera predictivo de la misma respuesta en seres humanos (Nantermet P. y col., Endocrinol 149(4):1551-61).

Se alojaron individualmente macacas hembras adultas jovenes, de aproximadamente 5-8 kg de peso, en una habitacion de clima controlado (temperatura 72 ± 8 °F (22,22 ± 4,45 °C) y una humedad relativa del 30 %-70 %) con un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas y agua y comida disponibles a voluntad. Los compuestos de la presente invencion se administraron a diario mediante aplicacion topica a 6 macacas/compuesto durante 2 semanas. Si se sometio a ensayo mas de un compuesto en un estudio dado, las macacas se asignaron a grupos de manera que cada grupo tuviera pesos corporales similares. Se rasuraron dos sitios de aplicacion en la parte posterior del cuello y el compuesto se aplico mediante la extension sobre una zona rasurada usando una jeringuilla de 1 ml con una aguja de calibre 16. La aplicacion diaria se alterno entre los dos sitios para minimizar la posibilidad de irritacion de la piel. Los compuestos de ensayo se administraron a los animales usando vehmulos adecuados para la aplicacion topica tales como una combinacion de etanol al 81,6%, IPM al 7,6%, agua al 9,6%, Carbopol® al 0,4% y edetol al 0,826 % (etilendiamina-N,N,N',N 'tetra-2-propanol). El volumen de dosis convencional era de 0,15 ml/kg.

Antes del inicio de la administracion, se extrajo sangre de las macacas en al menos 2 dfas, despues de un ayuno durante la noche, con el fin de establecer un valor basal para los parametros de patologfa clmica (definidos como un panel Chem18 + HDL, que incluye parametros de qmmica clmica de hematologfa y suero). El primer dfa de administracion se definio como el Dfa 1. Tambien se extrajo sangre tres veces durante el curso del estudio de 14 dfas (por ejemplo, en los dfas 3, 7 y 13) para la evaluacion del panel Chem18 + HDL usando el Roche Systems Analyzer. Los animales se mantuvieron en ayunas durante la noche antes de este procedimiento. Las macacas se observaron a diario para detectar anomalfas (incluyendo la irritacion de la piel) y signos de dolor o malestar. Los pesos corporales se recogieron antes de la dosis y cerca de la finalizacion del estudio. Tambien se recogio sangre para la evaluacion de los criterios de valoracion farmacocineticos, para confirmar la exposicion en los Dfas 1 y 14. Se determinaron parametros adicionales para evaluar la salud de los animales.

Siguiendo los procedimientos esencialmente como se ha descrito anteriormente, el compuesto del Ejemplo 1 presento la siguiente actividad en el modelo in vivo en macacas de disminucion de HDL anteriormente mencionado despues de 3, 7 y 14 dosis, como se muestra en la Tabla 13 a continuacion. Los datos de colesterol HDL se expresaron como porcentaje de disminucion con respecto a la media aritmetica de dos determinaciones de valores basales antes de la dosificacion.

Tabla 13

Dosis (mg/kg/dfa)

Despues de 3 dosis (%) Despues de 7 dosis (%) Despues de 14 dosis (%)

0,035

13 7,1 10

0,18

16 29 33

Estos datos demuestran que la entrega transdermica del compuesto del Ejemplo 1 tiene un efecto mmimo sobre el HDL en macacos.

Claims (12)

1. 5

   10

   15

   20

   REIVINDICACIONES

   imagen1

   en la que

   n es 1 o 2;

   X es -CH2- o -O-;

   R1 es -CH3 o -CH2-CH3; R2 es -H o -CH3;

   R3 es -H o -OH;

   en la que R3 es -H cuando X es -O-; o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

   imagen2

   en la que

   n es 1 o 2;

   R1 es -CH3 o -CH2-CH3; R2 es -H o -CH3;

   R3 es -H o -OH;

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo 3. Un compuesto de la Reivindicacion 1 o 2 de formula

   imagen3

   en la que

   R1 es -CH3 o -CH2-CH3;

   5

   10

   R2 es -H o -CH3;

   R3 es -H o -OH;

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
2. 4. Un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4 de formula:

   imagen4

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
3. 5. Un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4 que tiene la formula

   imagen5

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
4. 6. Un compuesto de la Reivindicacion 5 que es 2-cloro-4-[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metilciclopentil]amino]-3-metil- benzonitrilo.
5. 7. Un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4 que tiene la formula

   imagen6

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

   15 8. Un compuesto de la Reivindicacion 7 que es 2-cloro-4-[[(1S,2R)-2-hidroxi-2-metil-ciclopentil]amino]-3-metil-

   benzonitrilo.
6. 9. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y uno o mas vehfculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables.

   20 10. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la Reivindicacion 9, que se formula como un parche.
7. 11. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la Reivindicacion 9, que se formula como un gel topico.
8. 12. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la Reivindicacion 9, que se formula como una crema topica.
9. 13. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la Reivindicacion 9, que se formula como una pulverizacion topica.
10. 14. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la Reivindicacion 9 que comprende un solvato.
11. 15. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la Reivindicacion 14 que es 2-cloro-4-[[[(1R,2R)-2-hidroxi-2-metil- ciciclopentil]amino]-3-metil-benzonitrilo • solvato de etanol en forma cristalina caracterizado por un patron de difraccion de rayos X de polvo obtenido a partir de una fuente de CuKa (A = X A) que comprende picos a:

    5 a) 7,00, 17,26, 12,30 y 23,34 +/- -0,2 en 20; o

    b) 7,00, 8,59, 12,30, 16,76, 17,26 y 23,34 +/- -0,2 en 20; o

    c) 7,00, 8,59, 10,13, 11,89, 12,30, 12,91, 13,95, 16,76, 17,26, 23,34 +/--0,2 en 20.
12. 16. Un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en terapia.

    10 17. Un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo,

    para su uso en el tratamiento de la atrofia muscular.