ES2594811T3 - Método para la fabricación de bioproductos con un perfil de azúcar modificado - Google Patents
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Abstract
Un método para la producción de un bioproducto sólido, en el que al menos el 80 % del contenido de oligosacárido indigerible original se ha degradado en mono- y disacáridos digeribles, que comprende las siguientes etapas: 1) proporcionar una mezcla de biomasa molida o en copos o de otra forma desintegrada, que comprende oligosacáridos y opcionalmente polisacáridos, y que además comprende partes de plantas proteináceas, agua y una o más preparaciones de enzima que contienen α-galactosidasa(s); 2) hacer reaccionar la mezcla resultante de la etapa (1) con mezcla continua y bajo condiciones en las que el contenido de agua en la mezcla inicial no supera el 65 % en peso, durante 0,15-36 horas a una temperatura de aproximadamente 20-65 ºC; 3) incubar la mezcla reaccionada de la etapa (2) a una temperatura y en un periodo de tiempo que inactiven dicha(s) α- galactosidasa(s).
Description
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DESCRIPCION
Metodo para la fabricacion de bioproductos con un perfil de azucar modificado Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a un metodo para la produccion de bioproductos con un perfil de azucar modificado que esta enriquecido en contenido de monosacarido y sacarosa y reducido en contenido de oligosacarido indigerible. Ademas, la presente invencion se refiere a un metodo en el que los azucares fermentables originalmente presentes o proporcionados por a-galactosidasa pueden convertirse adicionalmente con un hongo o bacteria.
Ademas, se refiere a los productos obtenibles por el metodo, asf como al uso de los productos obtenidos.
Antecedentes de la invencion
Existe la necesidad de bioproductos que puedan usarse principalmente como ingredientes en alimentos o piensos. Los constituyentes basicos en tales productos son protemas, grasas e hidratos de carbono.
Biomasas adecuadas para tales productos son grammeas y cultivos oleaginosos, tales como semillas, cereales y legumbres. Los cereales tienen un contenido de protema de hasta el 15 %, por ejemplo, trigo, y las legumbres tienen un contenido de hasta el 45 %, por ejemplo, soja, basado en la materia seca.
Un problema general especialmente relacionado con las legumbres es el contenido de oligosacaridos indigeribles que provocan flatulencia cuando fermentan en el estomago. La presencia de los oligosacaridos rafinosa, estaquiosa y verbascosa puede reducirse sumergiendo en agua o enzimaticamente por hidrolisis con a-galactosidasa. El problema asociado a esto es que se anade al coste del producto final debido al uso de agua en el remojo o por un tratamiento enzimatico que tiene que realizarse a un contenido de agua relativamente alto del 80 % o mas.
El documento US 6.238.725 B1 desvela un metodo de preparacion de una leguminosa en el que los oligosacaridos que provocan flatulencia se eliminan sumergiendo en agua.
El documento WO 02/15712 A2 desvela un metodo de fabricacion de un producto de protema de soja usando a- galactosidasa en el que el contenido de agua en el proceso es del 80 - 90 %. El producto de soja obtenido tiene un contenido de protema de mmimo el 60 % y un contenido total de rafinosa y estaquiosa de menos del 5 %.
El documento US 2003/019041 A1 desvela un metodo para la fabricacion de un concentrado de protema de soja usando una enzima de glucosidasa (a-galactosidasa) en el que el contenido de agua en el proceso segun los ejemplos es de aproximadamente el 90 %. Despues de la hidrolisis, los hidratos de carbono y las sales se eliminan por ultrafiltracion. El concentrado de soja obtenido tiene un contenido de protema de mmimo el 65 % y un contenido combinado de rafinosa y estaquiosa de menos del 4 %.
El documento WO 2009/143591 desvela un metodo de procesamiento de soja usando enzima(s) que es capaz de convertir los polisacaridos insolubles en azucares solubles e hidrolizar las protemas a un contenido de agua de como maximo el 35 %. No se desvela el nivel de degradacion.
El objeto de la presente invencion es proporcionar un metodo mejorado para la produccion de bioproductos con un perfil de azucar modificado que esta enriquecido en contenido de monosacarido y sacarosa y reducido en contenido de oligosacarido indigerible, que puede realizarse a costes mas bajos debido al bajo contenido de agua en el proceso.
Aun otro objeto es proporcionar un metodo en el que los azucares fermentables originalmente presentes o proporcionados por a-galactosidasa puedan convertirse adicionalmente con un hongo por ejemplo, levaduras y/o bacterias, por ejemplo, Lactobacillus.
Estos objetos se cumplen con el proceso y los productos de la presente invencion.
Sumario de la invencion
Por consiguiente, la presente invencion se refiere a un metodo para la produccion de un bioproducto solido en el que al menos el 80 % del contenido de oligosacarido (rafinosa, estaquiosa y verbascosa) indigerible de la planta original se ha degradado en mono- y disacaridos digeribles que comprende las siguientes etapas:
1) proporcionar una mezcla de biomasa molida o en copos o de otra manera desintegrada, que comprende oligosacaridos y opcionalmente polisacaridos, y que ademas comprende partes de plantas proteinaceas, agua y una o mas preparaciones de enzima que contienen a-galactosidasa(s);
2) hacer reaccionar la mezcla resultante de la etapa (1) con mezcla continua y bajo condiciones en las que el contenido
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de agua en la mezcla inicial no supera el 65% en peso, durante 0,15-36 horas a una temperature de aproximadamente 20-65 °C;
3) incubar la mezcla reaccionada de la etapa (2) a una temperature y en un periodo de tiempo que inactiven dicha(s) a- galactosidasa(s).
Es sorprendente que la hidrolisis enzimatica, es decir, la descomposicion catalftica por reaccion con agua pueda realizarse a un contenido de agua que no supera el 65 % en peso. Normalmente, el bajo contenido de agua tiende a retardar la reaccion debido a problemas de contacto mecanico con el sustrato. Dar una explicacion cientifica en esta fase serfa arriesgar. Se cree que la combinacion de pretratamiento del sustrato, la actividad de la a-galactosidasa y el procedimiento de mezcla durante la reaccion son los factores clave.
El beneficio es que el producto que resulta del metodo solo contiene cantidades menores de agua debido al bajo contenido de agua durante el proceso, y por consiguiente, el secado del producto puede realizarse a bajo coste debido a la cantidad menor de agua a eliminar.
La invention proporciona ademas un bioproducto solido obtenible por un proceso segun la invention que comprende proternas vegetales en una cantidad de hasta aproximadamente el 60% y opcionalmente gliceridos de hasta el 25 % en peso de materia seca.
La invencion tambien proporciona un bioproducto solido obtenible por un proceso como se define en las reivindicaciones 13 -20.
Finalmente, la invencion proporciona un alimento, pienso, producto cosmetico o farmaceutico o un suplemento nutricional que contiene del 1 al 99 % en peso de un bioproducto solido segun la invencion.
Definiciones
En el contexto de la presente invencion, se pretende que los siguientes terminos comprendan lo siguiente, a menos que se defina en otra parte en la description.
Se pretende que los terminos “aproximadamente” o “~” indiquen, por ejemplo, la incertidumbre de medicion comunmente experimentada en la tecnica, que puede estar en el orden de magnitud de, por ejemplo, +/- 1, 2, 5, 10, 20, o incluso el 50 %.
El termino “que comprende” se interpretara como que especifica la presencia de la(s) parte(s), etapa(s), caracterfstica(s), composition (composiciones), producto(s) qmmico(s) o componente(s) establecidos, aunque no se excluye la presencia de una o mas partes, etapas, caractensticas, composiciones, productos qmmicos o componentes adicionales. Por ejemplo, una composicion que comprende un compuesto qmmico puede comprender asf compuestos qmmicos adicionales, etc.
El termino indigerible se interpretara como no digerible por los humanos y animales monogastricos/no rumiantes.
El termino “al menos el 80 % del contenido de oligosacarido indigerible original se ha degradado” se interpretara como que especifica que el contenido total de los oligosacaridos indigeribles se ha degradado al menos el 80 % y tambien incluye productos en el que un tipo de oligosacarido puede degradarse a un grado mayor que otro tipo de oligosacarido, e incluso en el que un tipo de oligosacarido puede degradarse solamente en un grado menor, siempre que el contenido total del oligosacarido original-de partida se haya reducido como se especifico por al menos el 80 %.
Biomasa:
Comprende material biologico producido por la fotosmtesis y que puede usarse como materia prima en la production industrial.
En este contexto, biomasa se refiere a materia vegetal en forma de gramrneas, cereales, semillas, frutos secos, judfas y guisantes, etc., y mezclas de los mismos.
Ademas, se prefiere una biomasa que comprende legumbres debido al contenido y composicion de proterna. Tambien contienen hidratos de carbono que comprenden alfa-galactosidos. En general, el alfa-galactosido principal es estaquiosa, excepto en los guisantes forrajeros en los que el oligosacarido principal es verbascosa.
Desintegrado de otra forma:
Significa desintegrado por coccion y/o por maceration y/o coccion a presion acida o alcalina, o tratamiento ultrasonico.
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Hidratos de carbono:
Comprenden mono-, di-, oligo- y polisacaridos.
Los azucares C5 (pentosas) son hidratos de carbono en los que los azucares monomericos componentes estan compuestos de un anillo con cinco atomos de carbono, por ejemplo, arabinosa.
Los azucares C6 (hexosas) son hidratos de carbono en los que los azucares monomericos componentes estan compuestos de un anillo con seis atomos de carbono, por ejemplo, galactosa.
Oligosacaridos y polisacaridos:
Un oligosacarido es un polfmero de sacarido que contiene un numero pequeno (que incluye hasta, por ejemplo, 8-10) de azucares monomericos componentes, tambien conocidos como azucares simples. Ejemplos tfpicos son el trisacarido rafinosa (D-galactosa-a1,6-D-glucosa-a1,p2-D-fructosa), el tetrasacarido estaquiosa (D-galactosa-a1,6-D-galactosa-a1,6- D-glucosa-a1,p2-D-fructosa) y el pentasacarido verbascosa (D-galactosa-a1,6-D-galactosa-a1,6-D-galactosa-a1,6-D- glucosa-a1,p2-D-fructosa).
Los polisacaridos son polfmeros de sacarido que contienen un gran numero de azucares monomericos componentes, tambien conocidos como hidratos de carbono complejos. Si los azucares monomericos son del mismo tipo el polisacarido se denomina un homopolisacarido, pero cuando se encuentra presente mas de un tipo se llaman heteropolisacaridos.
Ejemplos incluyen polisacaridos de almacenamiento tales como almidon y polisacaridos estructurales tales como celulosa y arabinoxilano.
Materiales proteinaceos:
Comprenden compuestos organicos hechos de aminoacidos dispuestos en una cadena lineal y unidos juntos por un enlace denominado un enlace peptidico. A una longitud de cadena de hasta aproximadamente 50 aminoacidos, el compuesto se denomina un peptido; a mayor peso molecular el compuesto organico se denomina un polipeptido o una protema.
Grasas:
Comprenden esteres entre acidos grasos y glicerol. Una molecula de glicerol puede esterificarse a una, dos y tres moleculas de acido graso que producen un monoglicerido, un diglicerido o un triglicerido, respectivamente. Usualmente, las grasas consisten principalmente en trigliceridos y cantidades menores de lecitinas, esteroles, etc. Si la grasa es liquida a temperatura ambiente, normalmente se denomina aceite. Con respecto a los aceites, grasas y productos relacionados en este contexto, se hace referencia al “Lipid Glossary 2”, F.D. Gunstone, The Oily Press, 2004.
Gliceridos:
Comprenden mono-, di- y trigliceridos.
Auxiliares de procesamiento:
1. Enzimas
La(s) enzima(s) son una clase muy grande de sustancias de protema que actuan como catalizadores. Comunmente, se dividen en seis clases, y las clases principales que entran dentro del alcance de la presente invencion pueden ser transferasas que transfieren grupos funcionales y las hidrolasas que hidrolizan diversos enlaces.
En este contexto, las enzimas de glucosido hidrolasa son importantes y especialmente la(s) a-galactosidasa(s), que es una enzima que hidroliza la alfa-galactosa terminal en alfa-galactosidos, que comprende oligosacaridos de galactosa y galacto-mananos, que liberan residuos de D-galactosa.
La actividad de a-galactosidasa en una preparation se expresa en unidades/g del producto de enzima real y se ensaya haciendo reaccionar p-nitrofenil-a-D-galactopiranosido con agua y enzima durante 10 min a 25 °C para formar D- galactosa y p-nitrofenilo que se monitoriza espectrofotometricamente a 410 nm.
Una unidad de a-galactosidasa es la actividad enzimatica que libera un micromol (10'6 moles) de p-nitrofenilo por minuto.
Ejemplos adicionales de enzimas comprenden: proteasa(s), peptidasa(s), p-galactosidasa(s), amilasa(s), glucanasa(s), pectinasa(s), hemicelulasa(s), fitasa(s), lipasa(s), fosfolipasa(s) y oxido-reductasa(s).
2. Componentes vegetates y agentes de procesamiento organico
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Algunas de las propiedades funcionales que son importantes en este contexto son: Antioxidantes, accion antibacteriana, propiedades humectantes y estimulacion de enzimas.
La lista de componentes basados en planta es enorme, pero los mas importantes son los siguientes: Romero, tomillo, oregano, flavonoides, acidos fenolicos, saponinas y a- y p-acidos de lupulo, por ejemplo, de humulona y lupolona, para la modulacion de hidratos de carbono solubles. Acidos organicos adicionales, por ejemplo, acido sorbico, propionico, lactico, dtrico y ascorbico y sus sales para el ajuste de las propiedades de valor de pH, conservacion y quelantes son parte de este grupo de auxiliares de procesamiento.
3. Agentes de procesamiento inorganico
Comprenden las composiciones inorganicas que son capaces de conservar la mezcla de fermentacion contra el ataque bacteriano durante el procesamiento, por ejemplo, bisulfito de sodio, etc.
Antiaglomerantes y agentes mejoradores de flujo en el producto final, por ejemplo, silicato de potasio y aluminio, etc. Productos alimenticios procesados:
Comprenden productos lacteos, productos de carne procesada, dulces, postres, postres de helado, productos enlatados; comidas liofilizadas, aderezos, sopas, alimentos precocinados, pan, pasteles, etc.
Productos de piensos procesados:
Comprenden pienso listo para usar o ingredientes de pienso para animales tales como cerdos, terneros, aves, animales de peletena, ovejas, gatos, perros, peces y crustaceos, etc.
Productos farmaceuticos:
Comprenden productos, normalmente en forma de un comprimido o en forma granulada, que contienen uno o mas ingredientes biologicamente activos previstos para curar y/o aliviar los smtomas de una enfermedad o una afeccion. Los productos farmaceuticos comprenden ademas excipientes y/o vehfculos farmaceuticamente aceptables. Los bioproductos solidos desvelados en el presente documento son muy adecuados para su uso como un ingrediente farmaceuticamente aceptable en un comprimido o granulado.
Productos cosmeticos:
Comprenden productos previstos para la higiene personal, asf como el aspecto mejorado, tales como acondicionadores y preparaciones para el bano.
Descripcion detallada de la invencion
Los oligosacaridos indigeribles vegetales originales cuyo contenido se degrada por el proceso de la invencion son principalmente rafinosa, estaquiosa y verbascosa.
El contenido de agua en la mezcla de reaccion inicial no supera el 65 % en peso, lo cual implica que el contenido de materia seca en la mezcla es de al menos el 35 %.
El tiempo de reaccion es 0,15-36 horas a una temperatura de aproximadamente 20-65 °C. La temperatura puede variar, por ejemplo, de 25-60 °C, 30-55 °C, de 35 a 50 °C, de 40 a 45 °C; el tiempo de reaccion puede variar, por ejemplo, de 10 minutos a 36 horas, de 20 minutos a 30 horas, de 1 a 24 horas, de 2 a 20 horas, de 4 a 18 horas, de 8 a 16 horas o de 12 a 14 horas.
En una realizacion del metodo de la invencion comprende ademas que los hongos, tales como la levadura viva, y/o bacterias, se anade a la biomasa que comprende oligosacaridos y/o polisacaridos y partes de plantas proteinaceas en una relacion de materia seca entre hongo/bacteria y biomasa de 1:2 a 1:400, y que la incubacion en la etapa (3) se lleve a cabo a una temperatura y en un periodo de tiempo que inactiva dicha(s) a-galactosidasa(s) y hongos y/o bacterias. Asf, se incluyen relaciones de materia seca tales como: 1:2; 1:3; 1:4; 1:5; 1:6; 1:7; 1:8; 1:9; 1:10; 1:20; 1:30; 1:40; 1:50; 1:60; 1:70; 1:80; 1:90; 1:100, 1:200 y 1:300. La incubacion de la mezcla reaccionada puede llevarse a cabo a aproximadamente 70-150 °C, por ejemplo, 85-150 °C, que incluye 70, 75, 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150 °C durante 0,5-240 minutos, por ejemplo, 6-240 minutos, que incluyen 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 90, 120, 150, 180, 210 y 240 minutos.
Cuando se eligen las condiciones para la incubacion, el experto en la materia sabe que cuando se usan temperaturas muy altas, son necesarios tiempos de incubacion relativamente cortos.
En esta realizacion, la etapa de reaccion (2) puede realizarse bajo condiciones anaerobias y/o aerobias.
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En una segunda realization, la cantidad de la(s) preparation (preparaciones) de a-galactosidasa es del 0,001 al 1,0 % en peso de la biomasa en la mezcla inicial en la que la(s) preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa estan teniendo una actividad de 5.000 unidades de a-galactosidasa/g de producto enzimatico, y/o la reaction en la etapa (2) se realiza bajo condiciones en las que el contenido de agua en la mezcla inicial es del 30 al 65 % en peso, lo cual implica que el contenido de materia seca en la mezcla es del 35 al 70 % en peso.
Asf, el contenido de agua puede variar para ser, por ejemplo, del 35 al 60 %, del 40 al 55 % o del 45 al 50 %. Por lo tanto, el contenido de materia seca en la mezcla de reaccion proporcionada en la etapa (1) puede variar correspondientemente para ser, por ejemplo, del 40 al 65 %, del 45 al 60 % o del 50 al 55 %, por ejemplo, ser del 45 %, 50 %, 55 %, 57,5 %, 60 %, 62,5 %, 65 % o 67,5 %.
La cantidad de una o mas preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa puede variar, por ejemplo, del 0,01 al 1,0%, del 0,025 al 0,75 %, del 0,05 al 0,5 %, del 0,075 al 0,25 % o del 0,1 al 0,125 % de la(s) preparacion (preparaciones) de a- galactosidasa que tienen una actividad de 5.000 unidades de a-galactosidasa/g de producto enzimatico. La actividad de la(s) preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa puede tambien ser menor o mayor que 5.000 unidades de a- galactosidasa/g de producto enzimatico, por ejemplo, de 5 a 200.000, o de 100.000 a 150.000, 50 a 50.000 o de 500 a
10.000 unidades/g de producto enzimatico, siempre y cuando la cantidad de enzima aplicada se adapte a la concentration del producto enzimatico. Cuanto mayor sea la cantidad y la actividad de la preparacion de a-galactosidasa, menor sera el tiempo de reaccion generalmente necesario y viceversa. El experto en la materia dentro de la tecnologfa de enzimas sera consciente de esto.
En una tercera realizacion, la reaccion en la etapa (2) se realiza en uno o mas transportadores no verticales de husillo con paletas interconectadas o de husillo continuo con medios de entrada para la mezcla de reaccion y aditivos y medios de salida para el producto, asf como medios de control para la velocidad de rotation, temperatura y pH. Esta realizacion puede ser una variante en la que el transportador de husillo continuo puede ser un tipo opcionalmente modificado de un transportador de tornillo de un solo alabe o varios alabes o de tornillo cruzado disenado para transportar la mezcla de reaccion y al mismo tiempo elevar el material de modo que se transporte y se agite sin compactarlo. La etapa de reaccion (2) tambien puede realizarse en una mezcladora de tornillo vertical, por ejemplo, una mezcladora Nauta.
En una cuarta realizacion del metodo de la invention, uno o mas auxiliares de procesamiento, tales como los productos de lupulo que contienen a- y p-acidos de lupulo, se anaden en cualquiera de las etapas (1), (2) y/o (3). El uno o mas auxiliares de procesamiento tambien pueden ser una enzima, un componente vegetal y/o agente de procesamiento organico y/o agente de procesamiento inorganico, como se define anteriormente en la section de definition de la presente solicitud.
En una quinta realizacion, los hongos y/o bacterias que pueden anadirse a la biomasa es levadura viva seleccionada de entre las cepas Saccharomyces cerevisiae, que incluyen levadura de cerveza usada y levadura de destilerfa usada y levaduras usadas a partir de la production de vino y levadura de panificacion, asf como cepas de Bacillus cereus y cepas de levadura que fermentan los azucares C5. La levadura viva puede anadirse, por ejemplo, en una cantidad del 0,25 al 10 %, tal como del 0,5 %, 1%, 1,5 %, 2 %, 2,5 %, 3 %, 3,5 %, 4 %, 4,5, 5 %, 6 %, 7 %, 8 % 9.
Las partes de plantas proteinaceas comprendidas en la biomasa pueden, en una 6a realizacion, ser legumbres, tales como soja, guisante, haba, altramuz, y/o cereales, tales como trigo, y/o grammeas y ademas ser como se define en la seccion de definiciones de la presente solicitud. La biomasa puede, en una 7a realizacion, comprender ademas aceites y grasas, por ejemplo, a partir de semillas de plantas oleaginosas, por ejemplo, semillas de colza y soja, y ademas como se define anteriormente en la seccion de definiciones de la presente solicitud.
En una 8a realizacion, la mezcla de reaccion que resulta de la etapa (3) se seca a un contenido de agua de no mas del 10 % en peso.
En realizaciones adicionales, la cantidad de dicha una o mas preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa es del 0,25 al 1,0 % en peso de la materia seca de la biomasa en la mezcla inicial en la que la preparacion de a-galactosidasa esta teniendo una actividad de 5.000 unidades de a-galactosidasa por g del producto enzimatico, y dicha reaccion en la etapa (2) se realiza durante 4-36 horas a una temperatura de 30-60 °C; o
la cantidad de dicha una o mas preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa es del 0,25 al 1,0% en peso de la materia seca de la biomasa en la mezcla inicial en la que la preparacion de a-galactosidasa esta teniendo una actividad de 5.000 unidades de a-galactosidasa por g del producto enzimatico, y dicha reaccion en la etapa (2) se realiza durante 436 horas a una temperatura de 50-60 °C; o
la cantidad de dicha una o mas preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa es de 0,01 al 1,0 % en peso de la materia seca de la biomasa en la mezcla inicial en la que la preparacion de a-galactosidasa esta teniendo una actividad de 5.000 unidades de a-galactosidasa por g del producto enzimatico, y dicha reaccion en la etapa (2) se realiza durante 8-36 horas
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a una temperatura de 50-60 °C; o
la cantidad de dicha una o mas preparation (preparaciones) de a-galactosidasa es del 0,05 al 1,0% en peso de la materia seca de la biomasa en la mezcla inicial en la que la preparacion de a-galactosidasa esta teniendo una actividad de 5.000 unidades de a-galactosidasa por g del producto enzimatico, dicha reaction en la etapa (2) se realiza bajo condiciones en las que el contenido de agua en la mezcla inicial es del 40-65 % y a una temperatura de 50-60 °C; o
los hongos y/o bacterias son levadura viva anadida en una cantidad del 0,25 % al 10 %.
En una realization final, el metodo se realiza como un proceso discontinuo, de lotes alimentados o continuo.
El bioproducto solido obtenible por el proceso definido en las reivindicaciones 1 a 16 comprende protemas en una cantidad de hasta aproximadamente el 60 % en peso; la cantidad puede ser menor que el 60 %, por ejemplo, 10-59 %, 40-59 %, 45-58 %, 48-55 % o 50-53 % en peso de materia seca. La cantidad de gliceridos puede ser, por ejemplo, 020 %, 2-20 %, 5-18 % o 10-15 % en peso de materia seca.
El bioproducto solido definido en la revindication 22 puede comprender hasta aproximadamente el 75 % de protema, por ejemplo, del 40-75 %, del 45-70 %, del 48 al 65 %, del 50-60 % o del 53-55 % en peso de protema. Puede comprender ademas gliceridos en una cantidad de hasta el 25 % en peso de materia seca, por ejemplo, 0-20 %, 2-20 %, 5-18 % o 1015 % en peso de materia seca.
El bioproducto solido obtenible por el proceso de las reivindicaciones 11-16 puede comprender hasta el 60 % en peso de protema o puede comprender mas del 60 % en peso de protema, por ejemplo, del 40-75 %, del 45-70 %, del 48 al 65 %, del 50-60 % o del 53-55 % en peso de protema. Pueden comprender ademas gliceridos en una cantidad de hasta el 25 % en peso de materia seca, por ejemplo, 0-20 %, 2-20 %, 5-18 % o 10-15 % en peso de materia seca.
La cantidad de protema puede ser especialmente alta cuando la biomasa se ha fermentado con levadura viva segun el proceso de la reivindicacion 2.
Los oligosacaridos rafinosa, estaquiosa y verbascosa se degradan por el metodo de la invention a mono- y disacaridos, tales como galactosa y sacarosa. La sacarosa es un producto de interes que resulta del metodo, debido a que un alto contenido de sacarosa en el bioproducto resultante contribuira a una sensation de saciedad despues del consumo. La cantidad de sacarosa puede ser tan alta como del 15-20 % en peso de materia seca.
En una realizacion, el bioproducto solido de la invencion comprende una cantidad total de rafinosa, estaquiosa y verbascosa de menos del 8 % en peso; por ejemplo, menos del 6 %, menos del 5 %, menos del 4 %, menos del 3 %, menos del 2 o menos del 1 % en peso.
En otra realizacion, el bioproducto solido de la invencion comprende una cantidad total de rafinosa de menos del 3,0 %, por ejemplo, menos del 2 %, menos del 1,5 %, menos del 1 % o menos del 0,75 % o menos del 0,5 % o menos del 0,25 %.
En aun otra realizacion, el bioproducto solido de la invencion comprende una cantidad total de estaquiosa de menos del
1.0 %, por ejemplo, menos del 0,75 % o menos del 0,5 % o menos del 0,25 %.
La invencion tambien se refiere al uso de un bioproducto solido segun la invencion en un producto alimenticio procesado para consumo humano y/o animal; como un ingrediente que va a usarse en un producto alimenticio o pienso; o como un ingrediente de un producto cosmetico o farmaceutico o un suplemento nutricional.
Finalmente, la invencion se refiere a un producto alimenticio, pienso, cosmetico o farmaceutico o un suplemento nutricional que contiene del 1 al 99 % en peso de un bioproducto solido segun la invencion.
Ejemplos
Ejemplo 1
Hidrolisis enzimatica en un proceso a escala de laboratorio de una biomasa que comprende oligosacaridos de soja
1.1 Materiales y metodos:
La hidrolisis enzimatica de los oligosacaridos estaquiosa y rafinosa se realizo en 10 g de una biomasa de soja desgrasada y agua que contiene la enzima a-galactosidasa anadida en una cantidad para alcanzar un cierto contenido de materia seca (DM) de la mezcla, y una cierta concentration de enzimas.
La mezcla se realizo para asegurar la homogeneidad de la mezcla.
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La enzima usada en concentraciones variables basada en la materia seca de harina de soja fue un producto comercial de Advanced Enzyme Technologies, Maharasthra, India, comercializado con el nombre comercial SEBSoy 5.0 L.
La actividad de SEBSoy 5.0 L se normalizo a 5.000 U/g.
La hidrolisis enzimatica se realizo en pequenos recipientes de vidrio a 34 °C y 55 °C durante 4 a 16 horas, seguido por tratamiento termico a 100 °C para inactivar la enzima.
Despues de que se terminara la hidrolisis enzimatica, el contenido de hidratos de carbono solubles se extrajo agitando una suspension acuosa de una suspension de 10% de DM durante 30 minutos, seguido por centrifugacion durante 10 minutos a 3.000 x g.
Se analizo el contenido de mono- y oligosacaridos en los extractos acuosos de la biomasa por cromatograffa de capa fina en placas de gel de sflice 60 de CCF (Merck). Los diferentes componentes se cuantificaron por comparacion con patrones de concentracion conocida (Carbohydrate analysis - A practical approach; IRL Press, Oxford. Ed. M.F. Chaplan & J.F. Kennedy, 1986).
1.2 Resultados:
1.2a. Respuesta de dosis a diferentes temperaturas
Los resultados enumerados en la siguiente tabla se obtuvieron despues de un tiempo de reaccion de 4 horas, a 45 % de DM:
- Dosis de SEBSoy
- Temperatura 34 °C Temperatura 55 °C
- Estaquiosa
- Rafinosa Estaquiosa Rafinosa
- Referencia
- 6,0 % 2,0 % 6,0 % 2,0 %
- 0,05 %
- - - 4,0 % 3,0 %
- 0,10%
- 2,5 % 3,5 % 1,5% 2,5 %
- 0,25 %
- 1,5% 3,0 % <0,25 % 0,75 %
- 0,50 %
- 0,25 % 1,0% - -
A partir de los resultados puede observarse que la estaquiosa se reduce a concentraciones de enzima inferiores cuando la estaquiosa produce una molecula de D-galactosa y una molecula de rafinosa en la primera etapa en la hidrolisis.
La reduccion total del contenido combinado de estaquiosa y rafinosa es casi una funcion lineal de la concentracion de enzimas.
Ademas, puede observarse que un aumento en la temperatura de 34 °C a 55 °C se corresponde con el mismo efecto a un aumento de dosis por un factor de 2 a 3.
1.2-b. Efecto como una funcion del tiempo de reaccion
Los resultados enumerados en la siguiente tabla se obtuvieron con una dosis de 0,05 % de SEBSoy, y a una reaccion de temperatura de 55 °C, a 45 % de DM:
- Tiempo de reaccion en horas
- Estaquiosa Rafinosa Estaquiosa + rafinosa
- 4
- 3,5 0% 4,00 % 7,50 %
- 8
- 0,75 % 2,00 % 2,75 %
- 16
- <0,25 % 0,75 % <1,00%
A partir de los resultados puede observarse que cada aumento del tiempo de reaccion por un factor de 2 reduce el contenido combinado de estaquiosa y rafinosa por un factor de casi 3.
1.2-c. Efecto como una funcion del contenido de materia seca en la mezcla de reaccion
Los resultados enumerados en la siguiente tabla se obtuvieron con una dosis de 0,25 % de SEBSoy, y a un tiempo de reaccion de 4 horas a una temperatura de 55 °C:
- Materia seca en % en peso
- Estaquiosa Rafinosa Estaquiosa + rafinosa
- 50
- 0,25 % 1,00% 1,25%
- 55
- 0,50 % 1,25% 1,75%
- 60
- 0,75 % 1,50% 2,25 %
- 65
- 1,50% 1,75% 3,25 %
5 A partir de los resultados puede observarse que hay un aumento en el contenido total de estaquiosa y rafinosa como una funcion de materia seca y en el intervalo del 50 al 60 % el aumento es equidistante.
Ejemplo 2
Hidrolisis enzimatica en un proceso a escala de laboratorio de una biomasa que comprende oligosacaridos de guisantes
2.1 Materiales y metodos:
10 La hidrolisis enzimatica de los oligosacaridos estaquiosa, rafinosa y verbascosa se realizo en 10 g de una biomasa de guisante molido y agua que contiene la enzima a-galactosidasa anadida en una cantidad para alcanzar un contenido de materia seca (DM) de la mezcla de 50 %, y una cierta concentracion de enzimas.
La preparacion de enzima y el metodo usado fueron como se describio en el Ejemplo 1 bajo el parrafo 1.1
2.2 Resultados:
15 2.2 Respuesta de dosis a diferentes temperaturas
Los resultados enumerados en las siguientes tablas se obtuvieron despues de un tiempo de reaccion de 4 horas, a 50 % de DM:
- Dosis de SEBSoy
- Temperatura 34 °C
- Estaquiosa
- Rafinosa Verbascosa Oligosacaridos totales
- Referencia
- 4,5 % 0,5 % 3,0 % 8,0 %
- 0,05 %
- 3,5 % 2,0 % 2,5 % 8,0 %
- 0,10%
- 3,0 % 3,0 % 2,0 % 8,0 %
- 0,25 %
- 2,0 % 2,0 % 1,5% 5,5 %
- 0,50 %
- 0,5 % 1,5% 0,5 % 2,5 %
A partir de los resultados puede observarse que el usar un tiempo de reaccion de 4 horas a 34 °C requiere una dosis del 20 0,25 % para conseguir una reduccion del contenido total de oligosacaridos.
Dosis de SEBSoy
Temperatura 55 °C
- Estaquiosa Rafinosa Verbascosa Oligosacaridos totales
- Referencia
- 4,5 % 0,5 % 3,0 % 8,0 %
- 0,05 %
- 2,0 % 1,5% 1,5% 5,0 %
- 0,10%
- 0,5 % 1,5% 0,5 % 2,5 %
- 0,25 %
- <0,25 % 0,25 % <0,25 % <0,75 %
- 0,50 %
- <0,25 % <0,25 % <0,25 % <0,75 %
A partir de los resultados puede observarse que usando un tiempo de reaccion de 4 horas a 55 °C se requiere una dosis de solo el 0,05 % para conseguir una reduccion del contenido total de oligosacaridos. Esto se corresponde con un aumento en la actividad enzimatica por un factor de aproximadamente cinco cuando la temperature de reaccion se eleva 5 desde 34 °C hasta 55 °.
Ejemplo 3
Hidrolisis enzimatica en un proceso discontinuo de una biomasa que comprende oligosacaridos y protemas de soja
3.1 Materiales y metodos:
Se alimentaron 200 kg de copos de soja de los que se eliminaron los disolventes instantaneamente a un transportador de 10 husillo de un solo alabe cerrado capaz de transportar, levantar y mezclar el material. Al mismo tiempo se anadieron 170 litros de agua y 200 ml de enzima SEBSoy 5.0 L (0,1 % de dosis de una preparation que tiene una actividad de 5.000 unidades de a-galactosidasa por g de producto enzimatico) para alcanzar un contenido de materia seca de aproximadamente el 50 % en peso en la mezcla.
La mezcla se hidrolizo durante 16 horas a 34 °C y se seco a un contenido de agua del 5,6 %. Los extractos acuosos de la 15 biomasa se analizaron para el contenido de hidratos de carbono por el metodo de acido sulfurico fenolico y los oligosacaridos se cuantificaron despues de la separation por CCF (Carbohydrate analysis - A practical approach; IRL Press, Oxford. Ed. M.F. Chaplan & J.F. Kennedy, 1986).
3.2 Resultados:
Los resultados se tabulan a continuation:
- Objeto
- Valores analiticos
- Protema en DM
- 59,6 %
- Hidratos de carbono solubles
- 10,3%
- Estaquiosa
- <0,25 %
- Rafinosa
- <0,25 %
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A partir de los resultados puede observarse que un producto de la invention tiene un contenido de protema de aproximadamente el 60 % en peso de materia seca y un bajo contenido de oligosacaridos.
Ejemplo 4
Hidrolisis enzimatica y fermentation por diferentes levaduras en un proceso discontinuo de una biomasa que comprende 25 oligosacaridos y protemas de soja
4.1 Materiales y metodos:
Se alimentaron 200 kg de copos de soja de los que se eliminaron los disolventes instantaneamente a un transportador de husillo de un solo alabe cerrado capaz de transportar, levantar y mezclar el material. Al mismo tiempo se anadieron 170 litros de agua y una suspension de levadura de cerveza usada o levadura de panificacion y 200 ml de enzima SEBSoy 5.0 30 L (0,1 % de dosis de una preparacion que tiene una actividad de 5.000 unidades de a-galactosidasa por g del producto enzimatico) para alcanzar un contenido de materia seca de aproximadamente el 50 % en peso en la mezcla.
5
10
15
20
25
30
35
Las dos mezclas se hidrolizaron durante 16 horas a 34 °C y se secaron hasta un contenido de materia seca de 95 ± 0,3 %.
El producto se analizo como en el ejemplo previo.
4.2 Resultados:
Los resultados se tabulan a continuacion:
- Objeto
- Valores analiticos Valores analiticos
- Proceso con 3,5 % de levadura de cerveza usada anadida Proceso con 1,0% de levadura de panificacion anadida
- Protema en DM
- 62,2 % 61,9%
- Hidratos de carbono solubles
- 8,2 % 7,2 %
- Estaquiosa
- <0,25 <0,25 %
- Rafinosa
- <0,25 <0,25 %
A partir de los resultados puede observarse que un producto de la invention tiene un contenido de protema ligeramente mayor que el 60 % en peso de materia seca cuando el proceso se realiza con fermentation de levadura. El producto resultante tiene un bajo contenido de oligosacaridos.
Ejemplo 5
Hidrolisis enzimatica comparativa en un proceso a escala de laboratorio de una biomasa que comprende oligosacaridos de soja
En este ejemplo se ilustran los efectos de la reduction de oligosacaridos por a-galactosidasa bajo los parametros de procesamiento (temperatura y materia seca) de la presente invencion contra aquellos del documento WO 2009/143591.
En el documento WO 2009/143591 se reivindica que el contenido de agua es como maximo del 35 % o mejor del 30 % o incluso mejor del 25 %. Se menciona que la temperatura optima para la hidrolisis enzimatica esta entre 60 y 80 °C.
5.1 Materiales y metodos:
La hidrolisis enzimatica de los oligosacaridos estaquiosa y rafinosa se realizo en 10 g de una biomasa de soja desgrasada y harina de soja de grasa completa y agua que contiene la enzima a-galactosidasa anadida en una cantidad para alcanzar un cierto contenido de materia seca (DM) de la mezcla, y una cierta concentration de enzimas.
La mezcla se realizo para asegurar la homogeneidad de la mezcla.
Las enzimas usadas en concentraciones variables basadas en la materia seca de soja desgrasada o de harina de soja fueron productos comerciales disponibles de Advanced Enzyme Technologies, Maharasthra, India, comercializados con el nombre comercial SEBSoy, y a-galactosidasa de Enzyme Development Corporation (EDC) New York, EE.UU.
La actividad de las preparaciones de enzima se normalizo a 5.000 U/g.
La hidrolisis enzimatica se realizo en pequenos recipientes de vidrio a 55 °C o 70 °C durante 4 y 16 horas, seguido por tratamiento termico a 100 °C para inactivar la enzima.
Despues de que se terminara la hidrolisis enzimatica, el contenido de hidratos de carbono solubles se extrajo agitando una suspension acuosa de una suspension de 10% de DM durante 30 minutos, seguido por centrifugation durante 10 minutos a 3.000 x g.
Se analizo el contenido de mono- y oligosacaridos en los extractos acuosos de la biomasa por cromatograffa de capa fina en placas de gel de sflice 60 de CCF (Merck). Los diferentes componentes se cuantificaron por comparacion con patrones de concentracion conocida (Carbohydrate analysis - A practical approach; IRL Press, Oxford. Ed. M.F. Chaplan & J.F. Kennedy, 1986).
5.2 Resultados:
A. Parametros de la presente invencion: DM 45 %, temperature 55 °C y tiempo de reaccion 16 horas
- Biomasa
- Enzima Estaquiosa Rafinosa Estaquiosa + rafinosa Reduccion de oligosacaridos en %
- Soja desgrasada
- - 6,0 % 3,0 % 9,0 % 0
- Soja desgrasada
- 0,05 % de SEBSoy < 0,25 % 0,75 % < 1,0% > 89
- Soja desgrasada
- 0,05 % de EDC < 0,25 % 0,5 % < 0,75 % > 92
- Soja con grasa completa
- - 5,0 % 2,0 % 7,0 % 0
- Soja con grasa completa
- 0,05 % de SEBSoy < 0,25 % 0,5 % < 0,75 % > 89
- Soja con grasa completa
- 0,05 % de EDC < 0,25 % < 0,25 % < 0,5 % > 92
A partir de los resultados puede observarse que en los parametros de procesamiento de la presente invencion, la reduccion de oligosacaridos en la biomasa es mayor del 89 % despues de un tiempo de reaccion de 16 horas a una dosis 5 enzimatica del 0,05 %.
B. Parametros de la presente invencion: DM 45 %, temperatura 55 °C y tiempo de reaccion 4 horas
- Biomasa
- Enzima Estaquiosa Rafinosa Estaquiosa + rafinosa Reduccion de oligosacaridos en %
- Soja desgrasada
- - 6,0 % 3,0 % 9,0 % 0
- Soja desgrasada
- 0,25 % de SEBSoy < 0,25 % < 0,25 % < 0,5 % >94
- Soja desgrasada
- 0,25 % de EDC < 0,25 % < 0,25 % < 0,5 % >94
- Soja con grasa completa
- - 5,0 % 2,0 % 7,0 % 0
- Soja con grasa completa
- 0,25 % de SEBSoy < 0,25 % < 0,25 % < 0,5 % >93
- Soja con grasa completa
- 0,25 % de EDC < 0,25 % < 0,25 % < 0,5 % >93
A partir de los resultados puede observarse que en los parametros de procesamiento de la presente invencion la reduccion de oligosacaridos en la biomasa es mayor del 93 % despues de un tiempo de reaccion de 4 horas a una dosis 10 enzimatica del 0,25 %.
C. Parametros del documento WO 2009/143591: DM 70 %, temperatura 70 °C y tiempo de reaccion 4 horas
- Biomasa
- Enzima Estaquiosa Rafinosa Estaquiosa + rafinosa Reduccion de oligosacaridos en %
- Soja desgrasada
- - 6,0 % 3,0 % 9,0 % 0
- Soja desgrasada
- 0,25 % de SEBSoy 4,0 % 3,0 % 7,0 % 22
- Soja desgrasada
- 0,25 % de EDC 2,5 % 3,0 % 5,5 % 39
- Soja con grasa completa
- - 5,0 % 2,0 % 7,0 % 0
- Soja con grasa completa
- 0,25 % de SEBSoy 3,0 % 2,5 % 5,5 % 21
- Soja con grasa completa
- 0,25 % de EDC 3,0 % 2,0 % 5,0 % 28
A partir de los resultados puede observarse que en los parametros de procesamiento del documento WO 2009/143591 la reduccion de oligosacaridos en la biomasa se encuentra en el intervalo del 21 - 39 % despues de un tiempo de reaccion de 4 horas a una dosis enzimatica del 0,25 %.
D. Parametros del documento WO 2009/143591: DM 70 %, temperature 70 °C y tiempo de reaccion 16 horas
- Biomasa
- Enzima Estaquiosa Rafinosa Estaquiosa + rafinosa Reduccion de oligosacaridos en %
- Soja desgrasada
- - 6,0 % 3,0 % 9,0 % 0
- Soja desgrasada
- 0,05 % de SEBSoy 6,0 % 3,0 % 9,0 % 0
- Soja desgrasada
- 0,05 % de EDC 3,5 % 3,0 % 6,5 % 28
- Soja con grasa completa
- - 5,0 % 2,0 % 7,0 % 0
- Soja con grasa completa
- 0,05 % de SEBSoy 5,0 % 2,0 % 7,0 % 0
- Soja con grasa completa
- 0,05 % de EDC 4,0 % 2,0 % 6,0 % 14
A partir de los resultados puede observarse que en los parametros de procesamiento del documento WO 2009/143591 la reduccion de oligosacaridos en la biomasa se encuentra en el intervalo del 0 - 28 % despues de un tiempo de reaccion de 5 16 horas a una dosis enzimatica del 0,05 %.
5.3 Conclusion:
A partir de los resultados es evidente que los parametros de procesamiento usados en el documento WO 2009/143591 (temperatura y contenido de materia seca) no son capaces de producir la transformacion del 80 % o mas de los oligosacaridos presentes en una biomasa que se origina a partir de soja; asf, no es posible obtener el nivel elevado de 10 degradacion en mono- y disacaridos digeribles como puede obtenerse por el metodo de la invencion.
Claims (27)
- 51015202530354045REIVINDICACIONES1. Un metodo para la produccion de un bioproducto solido, en el que al menos el 80 % del contenido de oligosacarido indigerible original se ha degradado en mono- y disacaridos digeribles, que comprende las siguientes etapas:1) proporcionar una mezcla de biomasa molida o en copos o de otra forma desintegrada, que comprende oligosacaridos y opcionalmente polisacaridos, y que ademas comprende partes de plantas proteinaceas, agua y una o mas preparaciones de enzima que contienen a-galactosidasa(s);2) hacer reaccionar la mezcla resultante de la etapa (1) con mezcla continua y bajo condiciones en las que el contenido de agua en la mezcla inicial no supera el 65% en peso, durante 0,15-36 horas a una temperatura de aproximadamente 20-65 °C;3) incubar la mezcla reaccionada de la etapa (2) a una temperatura y en un periodo de tiempo que inactiven dicha(s) a- galactosidasa(s).
- 2. Metodo segun la reivindicacion 1, que comprende ademas que hongos y/o bacterias se anaden a la biomasa en una cantidad que produce una relacion de materia seca de hongos/bacterias con respecto a la biomasa de 1:2 a 1:400, en el que dicha incubacion en la etapa (3) se lleva a cabo a una temperatura y en un periodo de tiempo que inactivan dicha(s) a-galactosidasa(s) y hongos y/o bacterias.
- 3. Metodo segun la reivindicacion 2, en el que dicha reaccion en la etapa (2) se realiza bajo condiciones anaerobias y/o aerobias.
- 4. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la cantidad de dicha(s) preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa es del 0,001 al 1,0 % en peso de la materia seca de la biomasa en la mezcla inicial en la que la(s) preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa estan teniendo una actividad de 5.000 unidades de a- galactosidasa por g del producto enzimatico, y/o dicha reaccion en la etapa (2) se realiza bajo condiciones en las que el contenido de agua en la mezcla inicial es del 30 al 65 % en peso.
- 5. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende ademas que dicha reaccion en la etapa (2) se realiza en uno o mas transportadores no verticales de husillo con paletas interconectadas o de husillo continuo con medios de entrada para la mezcla de reaccion y aditivos y medios de salida para el producto, asf como medios de control para la velocidad de rotacion, temperatura y pH, o en una mezcladora de tornillo vertical, por ejemplo, una mezcladora Nauta.
- 6. Metodo segun la reivindicacion 5, en el que el transportador de husillo continuo es un tipo opcionalmente modificado de un transportador de tornillo de un solo alabe o varios alabes o de tornillo cruzado disenado para transportar la mezcla de reaccion y al mismo tiempo elevar el material de modo que se transporte y se agite sin compactarlo.
- 7. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que uno o mas auxiliares de procesamiento, tales como productos de lupulo que contienen a- y p-acidos de lupulo, se anaden en cualquiera de las etapas (1) y (2).
- 8. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 2-7, en el que dicho hongo y/o bacteria es levadura viva seleccionada de entre las cepas de Saccharomyces cerevisiae, que incluyen levadura de cerveza usada y levadura de destilerfa usada y levaduras usadas a partir de la produccion de vino y levadura de panificacion, asf como cepas de fermentacion que fermentan los azucares C5.
- 9. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dichas partes de plantas proteinaceas son legumbres, tales como soja, haba, guisante, altramuz, y/o cereales, tales como trigo, y/o semillas, tales como semillas de colza, y/o grammeas cuyas partes vegetales pueden desgrasarse.
- 10. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicha biomasa comprende ademas aceites y grasas, por ejemplo, a partir de semillas de plantas oleaginosas, por ejemplo, semillas de colza y soja.
- 11. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el bioproducto resultante de la etapa (3) se seca a un contenido de agua de no mas del 10 % en peso.
- 12. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la reaccion de la mezcla en la etapa 2) se produce a 20-55 °C.
- 13. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la cantidad de dicha(s) preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa es del 0,25 al 1,0 % en peso de la materia seca de biomasa en la mezcla inicial en la que dicha(s) preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa estan teniendo una actividad de 5.000 unidades de a- galactosidasa por g del producto enzimatico, y dicha reaccion en la etapa (2) se realiza durante 4-36 horas a una510152025303540temperature de 30-60 °C.
- 14. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que la cantidad de dicha(s) preparation(preparaciones) de a-galactosidasa es del 0,25 al 1,0 % en peso de la materia seca de biomasa en la mezcla inicial en la que dicha(s) preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa estan teniendo una actividad de 5.000 unidades de a- galactosidasa por g del producto enzimatico, y dicha reaction en la etapa (2) se realiza durante 4-36 horas a una temperatura de 50-60 °C.
- 15. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que la cantidad de dicha(s) preparacion(preparaciones) de oj- galactosidasa es del 0,01 al 1,0 % en peso de la materia seca de la biomasa en la mezcla inicial enla que dicha(s) preparacion (preparaciones) de a-galactosidasa estan teniendo una actividad de 5.000 unidades de a- galactosidasa por g de producto enzimatico, y dicha reaccion en la etapa (2) se realiza durante 8-36 horas a una temperatura de 50-60 °C.
- 16. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que la cantidad de dicha(s) preparacion(preparaciones) de a-galactosidasa es de 0,05 al 1,0 % en peso de la materia seca de la biomasa en la mezcla inicial en la que las preparaciones de a-galactosidasa estan teniendo una actividad de 5.000 unidades de a-galactosidasa por g del producto enzimatico, dicha reaccion en la etapa (2) se realiza bajo condiciones en las que el contenido de agua en la mezcla inicial es del 40-65 % y a una temperatura de 50-60 °C.
- 17. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 2-16, en el que el hongo y/o bacteria es levadura viva anadida en una cantidad del 0,25 % al 10 %.
- 18. Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes realizado como un proceso discontinuo, de lotes alimentados o continuo.
- 19. Un bioproducto solido obtenible por un proceso segun una cualquiera de las reivindicaciones 13 -18.
- 20. Un bioproducto solido obtenible por un proceso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-18, que comprende protemas vegetales en una cantidad de hasta aproximadamente el 60 % en peso y opcionalmente gliceridos en una cantidad de hasta el 25 % en peso de materia seca.
- 21. Bioproducto solido segun la revindication 20 que comprende protemas vegetales en una cantidad de menos de aproximadamente el 60 % en peso.
- 22. Un bioproducto solido obtenible por un proceso segun una cualquiera de las reivindicaciones 2-18, que comprende protemas vegetales en una cantidad de hasta aproximadamente el 75 % en peso y opcionalmente gliceridos en una cantidad de hasta el 25 % en peso de materia seca.
- 23. Bioproducto solido segun una cualquiera de las reivindicaciones 19-22, en el que la cantidad total de rafinosa, estaquiosa y verbascosa es menos del 8 % en peso, por ejemplo, menos del 5 % en peso o menos del 2 % en peso.
- 24. Bioproducto solido segun una cualquiera de las reivindicaciones 19-23, en el que la cantidad de rafinosa es menos del 3,0 %, por ejemplo, menos del 2 %, menos del 1,5 %, menos de 1 %, menos de 0,75 %, menos de 0,5 % o menos de 0,25 %.
- 25. Bioproducto solido segun una cualquiera de las reivindicaciones 19-24, en el que la cantidad de estaquiosa es menos del 1,0 %, por ejemplo, menos de 0,75 % o menos del 0,5 % o menos del 0,25 %.
- 26. Uso de un bioproducto segun cualquiera de las reivindicaciones 19-25, en un producto alimenticio procesado para consumo humano y/o animal o como un ingrediente que va a usarse en un producto alimenticio o pienso o como un ingrediente de un producto cosmetico o farmaceutico o un suplemento nutricional.
- 27. Un alimento, pienso, producto cosmetico o farmaceutico o un suplemento nutricional que contiene del 1 al 99 % en peso de un bioproducto solido segun una cualquiera de las reivindicaciones 19-25.
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