ES2580331T3 - Derivados de esterol, método para preparar los mismos, composiciones farmacéuticas que contienen los mismos y uso de los mismos para el tratamiento de glioblastomas múltiples - Google Patents
Derivados de esterol, método para preparar los mismos, composiciones farmacéuticas que contienen los mismos y uso de los mismos para el tratamiento de glioblastomas múltiples Download PDFInfo
- Publication number
- ES2580331T3 ES2580331T3 ES12305518.8T ES12305518T ES2580331T3 ES 2580331 T3 ES2580331 T3 ES 2580331T3 ES 12305518 T ES12305518 T ES 12305518T ES 2580331 T3 ES2580331 T3 ES 2580331T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- group
- compound
- formula
- substituted
- unsubstituted
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 title claims description 48
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 12
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 title description 8
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 title description 8
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 title description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 45
- 125000004400 (C1-C12) alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 16
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 12
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims abstract description 3
- 125000005915 C6-C14 aryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 claims abstract description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000003808 silyl group Chemical group [H][Si]([H])([H])[*] 0.000 claims abstract description 3
- 125000000475 sulfinyl group Chemical group [*:2]S([*:1])=O 0.000 claims abstract description 3
- 125000000565 sulfonamide group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000001391 thioamide group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 claims abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 128
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- -1 6- methylheptan-2-yl Chemical group 0.000 claims description 33
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 claims description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 21
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 14
- 230000003140 astrocytic effect Effects 0.000 claims description 13
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 11
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 10
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 8
- 125000005098 aryl alkoxy carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 6
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- SIJBDWPVNAYVGY-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethyl-1,3-dioxolane Chemical group CC1(C)OCCO1 SIJBDWPVNAYVGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 2
- OZPFVBLDYBXHAF-UHFFFAOYSA-M 2,2-dimethyl-1,3-dioxolane-4-carboxylate Chemical compound CC1(C)OCC(C([O-])=O)O1 OZPFVBLDYBXHAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 claims 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 125000004446 heteroarylalkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 98
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 59
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 38
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 33
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 28
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 23
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 18
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 16
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 15
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 12
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 11
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 11
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 9
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 8
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000006540 mitochondrial respiration Effects 0.000 description 7
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000007399 Nuclear hormone receptor Human genes 0.000 description 6
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 238000004305 normal phase HPLC Methods 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 5
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 5
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 5
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 3
- 230000004098 cellular respiration Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N dichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Cl JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 3
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 3
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 3
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 3
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YIKKMWSQVKJCOP-ABXCMAEBSA-N 7-ketocholesterol Chemical compound C1C[C@H](O)CC2=CC(=O)[C@H]3[C@@H]4CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]4(C)CC[C@@H]3[C@]21C YIKKMWSQVKJCOP-ABXCMAEBSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 2
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N Lomustine Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1CCCCC1 GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- UVZUFUGNHDDLRQ-LLHZKFLPSA-N cholesteryl benzoate Chemical compound O([C@@H]1CC2=CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 UVZUFUGNHDDLRQ-LLHZKFLPSA-N 0.000 description 2
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 229940120124 dichloroacetate Drugs 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 2
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical group 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 230000010627 oxidative phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- UKLNMMHNWFDKNT-UHFFFAOYSA-M sodium chlorite Chemical compound [Na+].[O-]Cl=O UKLNMMHNWFDKNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960002218 sodium chlorite Drugs 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 2
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- MGRVRXRGTBOSHW-UHFFFAOYSA-N (aminomethyl)phosphonic acid Chemical compound NCP(O)(O)=O MGRVRXRGTBOSHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HAIBGXNWAUQCEG-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane-4-carboxylic acid Chemical group OC(=O)C1COCO1 HAIBGXNWAUQCEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 1H-indene Natural products C1=CC=C2CC=CC2=C1 YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YWLKXMKIKWXYSQ-UHFFFAOYSA-N 2-n,6-n-dimethylpyridine-2,6-diamine Chemical compound CNC1=CC=CC(NC)=N1 YWLKXMKIKWXYSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Chemical class S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100036009 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- OYXZMSRRJOYLLO-UHFFFAOYSA-N 7alpha-Hydroxycholesterol Natural products OC1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 OYXZMSRRJOYLLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYXZMSRRJOYLLO-KGZHIOMZSA-N 7beta-hydroxycholesterol Chemical compound C([C@@H]1O)=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 OYXZMSRRJOYLLO-KGZHIOMZSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100021906 Cyclin-O Human genes 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 239000012624 DNA alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940126161 DNA alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 229940123780 DNA topoisomerase I inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000008013 Electron Transport Complex I Human genes 0.000 description 1
- 108010089760 Electron Transport Complex I Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 101000783681 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000897441 Homo sapiens Cyclin-O Proteins 0.000 description 1
- 101000837626 Homo sapiens Thyroid hormone receptor alpha Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-N-nitrosourea Chemical compound O=NN(C)C(N)=O ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical compound CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124117 Pyruvate dehydrogenase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N Streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JACAAXNEHGBPOQ-LLVKDONJSA-N Talampanel Chemical compound C([C@H](N(N=1)C(C)=O)C)C2=CC=3OCOC=3C=C2C=1C1=CC=C(N)C=C1 JACAAXNEHGBPOQ-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- 102100028702 Thyroid hormone receptor alpha Human genes 0.000 description 1
- 239000000365 Topoisomerase I Inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004103 aerobic respiration Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 230000004099 anaerobic respiration Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000002178 anthracenyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000012984 antibiotic solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002102 aryl alkyloxo group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000006567 cellular energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- VYLVYHXQOHJDJL-UHFFFAOYSA-K cerium trichloride Chemical compound Cl[Ce](Cl)Cl VYLVYHXQOHJDJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- AMLYAMJWYAIXIA-VWNVYAMZSA-N cilengitide Chemical compound N1C(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H]1CC1=CC=CC=C1 AMLYAMJWYAIXIA-VWNVYAMZSA-N 0.000 description 1
- 229950009003 cilengitide Drugs 0.000 description 1
- 229960001229 ciprofloxacin hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- DIOIOSKKIYDRIQ-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin hydrochloride Chemical compound Cl.C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 DIOIOSKKIYDRIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010549 co-Evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000011461 current therapy Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004475 heteroaralkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 125000003454 indenyl group Chemical group C1(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004491 isohexyl group Chemical group C(CCC(C)C)* 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 229960002247 lomustine Drugs 0.000 description 1
- 210000003810 lymphokine-activated killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- DOWWCCDWPKGNGX-UHFFFAOYSA-N methyl 2,2-dimethyl-1,3-dioxolane-4-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1COC(C)(C)O1 DOWWCCDWPKGNGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000012169 negative regulation of microtubule polymerization Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical group CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000013021 overheating Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N procarbazine Chemical compound CNNCC1=CC=C(C(=O)NC(C)C)C=C1 CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000624 procarbazine Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003548 sec-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GRONZTPUWOOUFQ-UHFFFAOYSA-M sodium;methanol;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OC GRONZTPUWOOUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229950004608 talampanel Drugs 0.000 description 1
- 150000004579 taxol derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001973 tert-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002948 undecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
- C07J9/005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane containing a carboxylic function directly attached or attached by a chain containing only carbon atoms to the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
El compuesto de fórmula (I)**Fórmula** donde - A representa un grupo -(R1)n- en el que R1 es un residuo aminoacídico unido por su extremo C-terminal y n >= 1 a 3, siendo cada R1 idéntico o diferente, en el que el extremo N-terminal de dicho aminoácido está sin sustituir o sustituido con un grupo -C-(O)-R2 en el que R2 es un grupo arilalquilo C6-C14 mono o policíclico; un grupo C5-C14 mono o policíclico que puede comprender uno o más heteroátomos, que pueden ser iguales o diferentes; un grupo arilalquiloxi C6-C14 mono o policíclico o un grupo heteroarilalquilooxi C5-C14 mono o policíclico que puede comprender uno o más heteroátomos, que pueden ser iguales o diferentes, un grupo -C(O)-NH-R3 o -C(S)-NH-R3 donde R3 es hidrógeno; un grupo alquilo C1-C12, lineal o ramificado, sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, donde R y R' representan independientemente hidrógeno, un alquilo C1-C12 lineal o un arilo sin sustituir; un grupo arilo sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR como se ha definido anteriormente; un grupo acilo; un grupo formilo; un grupo sulfonilo; un grupo sulfinilo, un grupo sililo sin sustituir o sustituido con un grupo arilo C6-C14 mono o policíclico, sin sustituir o sustituido con al menos un alquilo C1-C6 lineal o ramificado; un grupo alilo; un residuo de azúcar; un grupo -C(O)-OR4 en el que R4 es un alquilo C1-C12 lineal o ramificado sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, como se ha definido anteriormente; un grupo amida; un grupo tioamida; un grupo sulfonamida, un grupo -C(O)-R5 donde R5 es un heterociclo C5-C14 saturado que comprende 1 o 2 heteroátomos, sin sustituir o sustituido con al menos un alquilo C1-C6 lineal o ramificado o un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, donde R y R' representan independientemente hidrógeno, un alquilo C1-C12 o un arilo sin sustituir. - B representa un grupo -C(O)-R6 donde R6 es hidrógeno; un alquilo C1-C12, preferiblemente C1-C6, lineal o ramificado, sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, como se ha definido anteriormente; un grupo arilo, sin sustituir o sustituido por un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, como se ha definido anteriormente; o de lo contrario R6 representa OR7, en el que R7 es un alquilo C1-C12, preferiblemente C1-C6, lineal o ramificado.
Description
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Derivados de esterol, metodo para preparar los mismos, composiciones farmaceuticas que contienen los mismos y uso de los mismos para el tratamiento de glioblastomas multiples.
La invencion se refiere a derivados de esterol novedoso, el metodo de preparacion de los mismos, las composiciones farmaceuticas que los contienen y uso de los mismos para tratar enfermedades que implican celulas astrocfticas transformadas en celulas cancerosas, y en particular para tratar glioblastoma multiforme.
La transformacion celular corresponde a la transicion de una celula eucariota normal a una celula inmortalizada y/o una celula eucariota cancerosa. Las expresiones "celula transformada" o "celula cancerosa" se usaran como sinonimos en lo sucesivo en el presente documento.
El glioblastoma multiforme (GBM), tambien conocido como astrocitoma de grado IV, es un tumor cerebral caracterizado por la transformacion de celulas astrocfticas en celulas cancerosas.
A pesar de los importantes avances cientfficos y terapeuticos en el area de oncologfa, el GBM es todavfa un cancer incurable. En el mejor de los casos, los investigadores y los medicos estan satisfechos cuando la vida media de los pacientes puede prolongarse en algunos meses, como maximo quince meses.
Uno de los problemas encontrados en el tratamiento del GBM es la recafda causada por las celulas madre. De hecho, incluso cuando las terapias existentes tuvieron exito en la erradicacion de la mayor parte del tumor, las celulas madre a menudo causan el desarrollo de un nuevo tumor (1,2).
Las terapias actuales siempre consisten en la reseccion del tumor, si su ubicacion lo permite, seguido de radioterapia y/o quimioterapia segun el caso. En quimioterapia, uno de los principales tratamientos es la biterapia, que consiste en administrar Avastina (inhibicion de la union de VEGF a sus receptores) e irinotecan (inhibidor de la topoisomerasa I). La triterapia del tipo PCV, que es una combinacion de procarbazina (agente de alquilacion de ADN), lomustina (CCNU; agente de alquilacion no especffico) y vincristina (inhibicion de la polimerizacion de microtubulos) es actualmente muy controvertida. La temozolomida, un agente de alquilacion de guanina, junto con radioterapia, muestra una aumento de la supervivencia media, especialmente para pacientes con ADN hipermetilado. Estan en curso ensayos clfnicos (fase III), pruebas con cilengitida (inhibicion de algunos receptores de integrina) y talampanel (bloqueo de canales de glutamato del tipo AMPA).
Los estudios de inmunoterapia y los ensayos clfnicos son de dos tipos:
- inmunoterapia adaptativa, en la que las celulas activadas in vitro se inyectan en el paciente, tales como celulas asesinas activadas por linfoquina (LAK; ensayos clfnicos de fase II) o linfocitos T citotoxicos (CTL; ensayos clfnicos de fase I) inyectados por vfa intracraneal. En la actualidad, las observaciones muestran una supervivencia de 20 meses de una manera muy marginal.
- inmunoterapia activa, que consiste en el uso de vacunas (fase I) y celulas dendrfticas (fase II). Esto no muestra una mejora significativa en la supervivencia del paciente. Estos ensayos se han interrumpido.
Las terapias geneticas, que consisten en el uso de adenovirus, retrovirus o virus del sarampion como vectores de moleculas con potencial contra el cancer, muestran una mejora de la supervivencia de solo 6 a 11 meses. La terapia celular que propone el uso de celulas madre neuronales como transportadores de productos medicos en GBM todavfa esta en la fase de demostracion en la investigacion basica.
Un procedimiento que ha estado algo desatendido en las ultimas decadas, y que se preve de nuevo, consiste en la accion a nivel de glucolisis y la fosforilacion oxidativa. Las celulas cancerosas aumentan su consumo de glucosa ya que tienden a modificar su metabolismo hacia el metabolismo anaerobio, incluso si el suministro de oxfgeno no es un factor limitante. Este fenomeno, observado por Warburg (3), se debe a la sobreexpresion de HIF (Factor inducido por hipoxia) y del pro-oncogen Myc. HIF aumenta la conversion de piruvato a lactato, de forma anaerobia, mediante la inactivacion de piruvato deshidrogenasa, que es una enzima clave en la respiracion aerobia. MYC estimula la biosfntesis de glutamina, que esta involucrada en la respiracion anaerobia (4).
En este contexto, estan en curso ensayos clfnicos que actuan en el metabolismo energetico. Se pueden mencionar, como ejemplos (4):
- metformina: inhibidor del complejo respiratorio mitocondrial I, que, a su vez, induce la AMPK, que ralentiza la
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
proliferacion celular;
- floretina: agente para la reduccion de la importacion de glucosa;
- acetato de fenilo: agente para reducir el nivel de glutamina;
- dicloroacetato: inhibidor de piruvato deshidrogenasa.
Todas estas moleculas, excepto dicloroacetato, estan siendo ensayadas (ensayos clfnicos en fase II) y las observaciones aun no se conocen en la actualidad.
Actualmente se ha descubierto que los derivados de esterol que se dirigen a un aspecto especffico del metabolismo energetico de los astrocitos, el tipo de celula en el origen del GBM, podrfan usarse para el tratamiento del glioblastoma multiforme.
El aspecto original de la invencion consiste en el uso del metabolismo energetico particular de la celula astrocftica (de origen glial), cuya transformacion conduce en ultima instancia a la formacion de GBM.
De hecho, la celula astrocftica usa al mismo tiempo el suministro de energfa, en forma de ATP, a traves de la fosforilacion oxidativa (ciclo de Krebs acoplado al transporte de electrones en la mitocondria) y a traves de la glucolis is: En esta ultima, el piruvato no entra en el ciclo de Krebs pero se reduce a lactato por la enzima lactato deshidrogenasa (LDH) de tipo 5. Ademas del suministro de ATP, el astrocito usa la glucolisis, a traves de la produccion de lactato, para suministrar a la celula adyacente, la neurona, con un neurotransmisor (glutamato).
En la siguiente tabla, el metabolismo energetico del astrocito, normal o canceroso, se compara esquematicamente con el de otras celulas:
- Astrocitos Otras celulas
- Respiracion mitocondrial Glucolisis Respiracion mitocondrial Glucolisis
- Celulas normales
- 50 % 50 % 90 % 10 %
- Celulas cancerosas
- GBM 1 % GBM 99 % 1 % 99 %
El metabolismo energetico del astrocito es especial: de hecho, la respiracion mitocondrial y la glucolisis funcionan conjuntamente.
Es esta dualidad metabolica especffica de la celula astrocftica normal, concretamente, por un lado la respiracion mitocondrial y, por un lado, la glucolisis, la que constituye la base para la estrategia de preparacion de los derivados de esterol de acuerdo con la invencion.
De hecho, los inventores presentan la hipotesis de trabajo de acuerdo con la cual los derivados de esterol, de acuerdo con la invencion, pueden orientar el metabolismo energetico de las celulas astrocfticas cancerosas de la glucolisis a la respiracion mitocondrial, un proceso que conducira a su muerte.
7p-Hidroxicolesterol (7P-OHCH), una molecula con alto potencial anticanceroso (5,6), muestra una citotoxicidad notable sobre lfneas de astrocitos de rata inmortalizadas (transformadas espontaneamente) (7,8) y los GBM (lfnea C6 de rata) "in vitro" (9). Los estudios demuestran que la esterificacion de 7P-OHCH en C3-OH por los acidos grasos intracelulares (formacion de 7p-OHCH-C3-ester) estaba muy implicada en el efecto toxico del precursor, 7P-OHCH (7, 8, 10).
Sin embargo, el mecanismo de accion de 7P-OHCH, esterificado o no en C3-OH, en los GBM "in vitro" estaba lejos de explicarse. Recientemente, los estudios realizados en las lfneas C6 han demostrado que 7P-OHCH modula la arquitectura y la dinamica de las balsas, microdominios en la membrana plasmatica, los sitios de inicio de cierta mensajerfa celular, incluyendo la de la protefna cinasa Akt, una enzima clave en el metabolismo energetico celular (11). De hecho, el oxisterol, mediante la interrupcion de la arquitectura de las balsas, en consecuencia afectara a la actividad de Akt, particularmente durante la transformacion de las celulas normales en celulas cancerosas: La Akt regula la captura de glucosa y la actividad de la glucolisis en estas celulas.
Sorprendentemente, se ha descubierto que los derivados de esterol, de acuerdo con la invencion, que tienen una estructura basica de 7beta-hidroxicolesterol que tiene sustituyentes en la posicion 3 y grupos protectores en la posicion 7, permitiran simultaneamente la inhibicion de la glucolisis, esencial para el suministro de energfa del
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
astrocito canceroso de alto grado y, al mismo tiempo, restauraran la respiracion mitocondrial, que tambien es "mortal" para esta celula.
De hecho, esta accion dual conduce al "sobrecalentamiento" de la celula cancerosa, que conduce a su muerte.
Por otra parte, se pudo demostrar que los derivados de esterol, tambien tienen actividad con respecto a las celulas madre, permitiendo de este modo la destruccion total de las celulas de glioblastoma.
Por lo tanto, la invencion se refiere a compuestos de formula (I)
(I)
en la que
- A representa
un grupo -(Ri)n- en el que Ri es un residuo aminoacfdico unido por su extremo C-terminal y n = 1 a traves de 3, siendo cada Ri identico o diferente, en el que el extremo N-terminal de dicho aminoacido puede estar sustituido con un grupo -C-(O)-R2 en el que R2 es un grupo aralquilo C6-C14 mono o policfclico; un grupo heteroaralquilo C5-C14 mono o policfclico que puede comprender uno o mas heteroatomos, que pueden ser iguales o diferentes; un grupo aralquiloxi C6-C14 mono o policfclico o un grupo heteroaralquiloxi C5-C14 mono o policfclico que puede comprender uno o mas heteroatomos, que pueden ser iguales o diferentes, un grupo -C(O)-NH-R3 o -C(S)-NH-R3 en el que R3 es hidrogeno; un grupo alquilo C1-C12, lineal o ramificado, sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, donde R y R', independientemente, representan el hidrogeno, un alquilo lineal en C1-C12 o un arilo sin sustituir; un grupo arilo, sin sustituir o sustituido por un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR como se ha definido anteriormente; un grupo acilo; un grupo formilo; un grupo sulfinilo, un grupo sililo, sin sustituir o sustituido por un grupo arilo sin sustituir o sustituido en C6-C14, sin sustituir o sustituido con al menos un alquilo C1-C6 lineal o ramificado; un grupo alilo; un residuo de azucar; un grupo -C(O)-OR4 en el que R4 es un alquilo C1-C12, lineal o ramificado, sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, como se ha definido anteriormente; un grupo amida; un grupo tioamida; un grupo sulfonamida,
un grupo -C(O)-R5 en el que R5 es un heterociclo C5-C14 saturado que comprende 1 o 2 heteroatomos, sin sustituir o sustituido con al menos un alquilo C1-C6 lineal o ramificado o un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, como se ha definido anteriormente, donde R y R', independientemente, representan el hidrogeno, un alquilo en C1- C12 o un arilo sin sustituir.
- B representa un grupo -C(O)-R6 en el que R6 es hidrogeno; un alquilo C1-C12, preferiblemente C1-C6, lineal o ramificado, sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, como se ha definido anteriormente; un grupo arilo, sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR; o R6 representa OR7, en el que R7 es un alquilo C1-C12, preferiblemente C1-C6, lineal o ramificado.
El grupo alquilo representa un grupo C1-C12 lineal o ramificado, tal como los grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isopentilo, sec-pentilo, terc-pentilo, neo-pentilo, hexilo, isohexilo, sec- hexilo, terc-hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo o dodecilo, siendo preferidos los grupos alquilo C1-C6 lineal o ramificado.
El grupo arilo representa un grupo C6-C14 insaturado, monocfclico o policfclico, carbocfclico, tal como los grupos fenilo, naftilo, indenilo, antracenilo y, mas particularmente, el grupo fenilo.
Por "heteroatomo" se refiere a un atomo de oxfgeno, nitrogeno o azufre.
Por "residuo de azucar" se refiere, por ejemplo, a una unidad del tipo glucosa, ribosa o arabinosa.
Los residuos aminoacfdicos ventajosos son, por ejemplo, unidades metionilo, glicinilo o alanilo.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Los compuestos preferidos de formula (I) son aquellos en los que se cumple al menos una de las siguientes condiciones:
- A representa un grupo -(R1)n- en el que R1 es un residuo aminoaddico y n = 2;
- A representa un grupo -(R1)n- en el que R1 es un residuo aminoaddico, n = 2 y el extremo N-terminal de dicho aminoacido esta sustituido con un grupo arilalcoxcarbonilo, en particular benciloxicarbonilo;
- A representa un radical alanilo unido a un radical glicinilo, opcionalmente sustituido en su extremo N-terminal con un grupo arilalcoxicarbonilo, en particular benciloxicarbonilo;
- A representa un radical metionilo unido a un radical glicinilo, opcionalmente sustituido en su extremo N-terminal con un grupo arilalcoxicarbonilo, en particular benciloxicarbonilo;
- A representa un grupo -C(O)-R5 en el que R5 es un grupo 2,2-dimetil-1,3-dioxolano.
Ventajosamente, B representa un grupo acilo en el que el grupo alquilo es C1-C6, en particular acetilo o un grupo alcoxicarbonilo en el que el grupo alquilo es C1-C6, en particular un grupo terc-butoxicarbonilo.
Los compuestos preferidos de formula (I) son como se indica a continuacion:
- 2-(2-(((benciloxi)carbonil)amino)-acetamido)propanoato de 7-((terc-butoxicarbonil)oxil)-10,13-dimetil-17-(6- metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo (molecula 1 .a);
- 2-(2-(((benciloxi)carbonil)amino)-acetamido)propanoato de 7-acetoxi-10,13-dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)-
2.3.4.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo (molecula 1.b);
- 2,2-dimeti l-1,3-dioxolano-4-carboxilato de 7-((terc-butoxicarbonil)oxi)-10,13-dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)-
2.3.4.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo (molecula 2.a);
- 2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxilato de 7-acetoxi-10,13-dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)-
2.3.4.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo (molecula 2.b).
Los compuestos de formula (I) pueden obtenerse a partir de colesterol mediante un metodo que comprende las siguientes etapas:
- proteccion de la funcion hidroxilo en la posicion 3 del colesterol con un grupo protector, tal como, por ejemplo, un grupo arilalcoxicarbonilo,
- introduccion de una funcion cetona en la posicion 7,
- reduccion de la funcion cetona en una funcion hidroxilo,
- introduccion de un grupo protector en la funcion hidroxilo en la posicion 7, correspondiente al grupo B, tal como, por ejemplo un grupo acilo o alcoxicarbonilo,
- desproteccion de la funcion hidroxilo en la posicion 3.
Despues de la desproteccion de la funcion hidroxilo en la posicion 3, dicha funcion hidroxilo puede sustituirse con el grupo A deseado.
La invencion tambien se refiere a las composiciones farmaceuticas o productos medicos que comprenden al menos un compuesto de formula (I) y un veldculo farmaceuticamente aceptable.
La composicion farmaceutica de acuerdo con la invencion puede consistir en una preparacion liposomal que comprende al menos un compuesto de formula (I).
Los liposomas pueden producirse mediante diversas tecnicas conocidas por un experto en la tecnica. Pueden usarse diversos lfpidos que constituyen los liposomas [Medical Application of Liposomes (1986) editado por Kunio Yagi, Japan Scientific Societies Press, Tokio, Karger].
Un producto medico preferido de la invencion consiste en un liposoma cargado con al menos un compuesto de formula (I).
Preferiblemente, el compuesto o compuestos de formula (I) constituyen el unico o unicos principios activos contenidos en la composicion farmaceutica de acuerdo con la invencion, en particular cuando dicha composicion farmaceutica es un liposoma.
Como alternativa, el compuesto de formula (I) puede usarse junto con otro principio activo, tal como, por ejemplo un agente anticanceroso, en particular derivados de avastina, irinotecan, temozolomida o taxol.
Las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la invencion que se han descrito anteriormente pueden estar en cualquier forma adecuada para administracion oral o para administracion parenteral, en particular por inyeccion, infusion o inhalacion, conocida por un experto en la tecnica.
En particular, dicha composicion farmaceutica puede ser una solucion farmaceuticamente aceptable, en particular una solucion alcoholica, de al menos un compuesto de formula (I), en solitario o junto con otro principio activo, que puede administrate a un paciente por transfusion o infusion.
10 Los compuestos de formula (I), para su uso en el tratamiento de enfermedades que implican celulas astrocfticas transformadas, en particular en el tratamiento de glioblastoma multiforme (GBM), son tambien un objeto de la invencion. En particular, los compuestos de formula (I) pueden inyectarse directamente en la corteza cerebral, en el sitio de tratamiento.
15 La invencion tambien se refiere al tratamiento de enfermedades que implican celulas astrocfticas transformadas, en particular el tratamiento de glioblastoma multiforme (GBM), administrando una cantidad eficaz de al menos un compuesto de formula (I).
De acuerdo con una alternativa, dicho tratamiento es un tratamiento secuencial que comprende al menos una etapa 20 de administracion de un primer compuesto de formula (I) y al menos una etapa de administracion de un segundo compuesto de formula (I), diferente del primero.
Los siguientes ejemplos ilustran la invencion, pero no la limitan.
25 La seccion I se refiere a la sfntesis qufmica.
Los Ejemplos 1 y 2 se refieren a la preparacion de intermedios de sfntesis usados para la preparacion de los compuestos de formula (I). Los Ejemplos 3 a 6 se refieren a la preparacion de compuestos de formula (I).
30 La seccion II se refiere a la actividad biologica de los compuestos de formula (I).
I/ Sfntesis qufmica
Ejemplo 1: Preparacion de 7beta-acetilcolesterol (compuesto 1.4)
35
El diagrama de reaccion se muestra en la figura 1. 1
1) Preparacion del compuesto 1.1
40
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- Benzoato de colesterilo
- 490,78 100 mmol - 50 g
- Clorito sodico
- 90,44 300 mmol 3 equiv. 28 g
- N-Hidroxiftalimida
- 163,13 10 mmol 0,1 equiv. 1,7 g
- Dioxano/Agua 3/1
- 500 ml
45 El benzoato de colesterilo, la mezcla dioxano/agua, clorito sodico y N-hidroxftalimida se ponen en ese orden en un matraz de 3 bocas de 1 litro equipado con un condensador. Esta mezcla se calienta a 50 °C durante 6 h. El avance de la reaccion se controla por TLC en placa de gel de sflice (TLC gel de sflice 60 F254, Merck) en 8/2 de
hexano/Et2O.
Cuando la tasa de formacion alcanza un valor aceptable, la mezcla de reaccion en bruto se vierte en una solucion al 10 % de sulfito sodico (500 ml), y despues se extrajo con eter. La fase organica obtenida se lava con una solucion 5 saturada de hidrogenocarbonato sodico, despues con agua y finalmente con salmuera. Despues, esta fase organica se seca sobre sulfato sodico, se filtra y despues se evapora a presion reducida.
Despues, el residuo oleoso con color obtenido se purifica por recristalizacion en etanol. Dado que el solido de color blanco obtenido no es de pureza suficiente, se purifica de nuevo por cromatograffa sobre gel de sflice (sflice SDS 10 60A, 35-70 pm). Se obtiene un deposito solido recogiendo este aceite en diclorometano. La purificacion se realiza en un eluyente que pasa de 98/2 de hexano/acetato de etilo a 90/10. El producto se obtiene en forma de un solido de color blanco.
Rendimiento: 23 %
15 Analisis: Analisis por 1H RMN en CDCla, BRUKER 400 MHz. Columna HPLC de fase normal CHIRALCEL O-DH (columna ODH0CE-CE026), eluyente 9/1 de Hexano/iProH, 20 min, longitud de onda 190 nm.
Tiempo de retencion 6,682 min, pureza HPLC 99,2 %.
1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 0,71 (s, 3H, CH3), 0,89 (dd, 6H, 2CH3), 0,94 (d, 3H, CH3), 1,02-2,78 (m, 26H), 1,27 (s, 3H, CH3), 4,99 (m, 1H, CH), 5,76 (d, 1H, CH), 7,44-8,05 (m, 5H, CHAr).
20
2) Preparacion del compuesto 1.2
25 Se usaron los siguientes reactivos:
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- Benzoato de cetocolesterilo
- 504,76 15,8 mmol - 8 g
- NaBH4
- 37,83 7,9 mmol 0,5 equiv. + 0,5 equiv. 0,3 g + 0,3 g
- CeCla.7H2O
- 372,60 14,2 mmol 0,9 equiv. 5,3 g
- 1:1 de THF/MeOH
- 200 ml
El benzoato de cetocolesterilo, la mezcla de disolvente THF/MeOH y el cloruro de cerio hidratado se ponen en un matraz de 500 ml. Despues, la mezcla de reaccion en bruto se enfrfa a 0 °C con un bano de hielo, antes de anadir 30 lentamente borohidruro sodico.
Se observa desprendimiento de gas, el bano de hielo se mantiene durante 1 h, despues se agita a temperatura ambiente durante 18 h. El progreso se controla por TLC (TLC gel de sflice 60 F254, Merck) en eluyente 80/20 de Hexano/EtOAc. Si la tasa de formacion es insuficiente, se anaden 0,5 equiv. de borohidruro sodico.
35
A la mezcla de reaccion en bruto se le anaden 50 ml de agua y 200 ml de diclorometano. Despues de la transferencia a un embudo de separacion, la fase organica se recupera. La fase acuosa se extrae de nuevo con DCM. Las fases organicas se combinan, se lavan con una solucion 1 N de acido clorhfdrico y despues con una solucion saturada de NaCl.
40
Despues, la fase organica se seca sobre sulfato sodico, se filtra y se evapora a presion reducida, dando un aceite ligeramente coloreado, que cristaliza espontaneamente.
Se obtiene un deposito solido recogiendo el residuo en DCM. Este producto en bruto se purifica sobre una columna 45 de gel de sflice (sflice SDS 60A, 35-70 pm) en eluyente 9/1 de hexano/EtOAc. El producto se obtiene en forma de un solido de color blanco.
Rendimiento: 89 %
Analisis: Analisis por 1H RMN en CDCI3, BRUKER 400 MHz. Columna HPLC de fase normal CHIRALCEL O-DH (columna ODH0CE-CE026), eluyente 9/1 de hexano/iProH, 20 min, longitud de onda 190 nm.
5 Tiempo de retencion 7,076 min, pureza HPLC 98,8 %.
1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 0,63 (s, 3H, CH3), 0,79 (dd, 6H, 2CH3), 0,85 (d, 3H, CH3), 0,89-2,43 (m, 27H), 1,04 (s, 3H, CH3), 3,81 (d, 1H, CH), 4,81 (m, 1H, CH), 5,29 (d, 1H, CH), 7,34-7,99 (m, 5H, CHAr).
3) Preparaaon del compuesto 1.3
Se usaron los siguientes reactivos:
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- Benzoato de 7-p-hidroxicolesterilo
- 505,76 9,9 mmol - 5 g
- Anhfdrido acetico
- 20 ml
- Piridina
- 20 ml
15
El benzoato de 7-p-hidroxicolesterilo, piridina, y despues el anhfdrido acetico se ponen en un matraz de 100 ml. Esta mezcla se agita a temperatura ambiente durante 16 h. El progreso se controla por TLC (TLC gel de sflice 60 F254, Merck) en eluyente 9/1 de hexano/EtOAc.
20 La mezcla de reaccion en bruto se evapora a presion reducida. Se realizan dos co-evaporaciones con acetato de etilo. El residuo obtenido se recoge en acetato de etilo. La fase organica obtenida de este modo se lava con acido clorhfdrico 1 N, se seca sobre sulfato sodico y despues se evapora a presion reducida.
El solido de color blanco obtenido se introduce directamente en la siguiente etapa, sin purificacion adicional.
25
Rendimiento: 100 %
Analisis: Analisis por 1H RMN en CDCb, BRUKER 400 MHz. Columna HPLC de fase normal CHIRALCEL O-DH (columna ODH0CE-CE026), eluyente 9/1 de hexano/iProH, 20 min, longitud de onda 190 nm.
Tiempo de retencion 4,972 min, pureza HPLC 99,6 %.
30 1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 0,63 (s, 3H, CH3), 0,79 (dd, 6H, 2CH3), 0,84 (d, 3H, CH3), 0,91-2,41 (m, 26H), 1,06 (s, 3H, CH3), 1,95 (s, 3H, CH3 acetilo), 4,78 (m, 1H, CH), 4,99 (d, 1H, CH), 5,21 (s, 1H, CH), 7,33-7,98 (m, 5H, CHAr).
4) Preparacion del compuesto 1.4
35
Se usaron los siguientes reactivos:
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- Benzoato de 7-p-acetilcolesterilo
- 548,81 9,1 mmol - 5 g
- NaOH al 1 % en metanol
- 50 ml
El benzoato de 7-p-acetilcolesterilo y una solucion de sodio al 1 % en metanol se ponen en un matraz de 100 ml. Esta mezcla se agita a temperatura ambiente hasta que se disuelve completamente. El progreso se controla por TLC (TLC gel de sflice 60 F254, Merck) en un eluyente 7/3 de hexano/EtOAc.
5
Para completar la reaccion, la mezcla en bruto puede calentarse a 40 °C, en tal caso, el control por TLC se realiza cada 20 minutos.
Se anaden 200 ml de acetato de etilo y 50 ml de agua seguido de transferencia a un embudo de separacion y la 10 separacion de las fases. La fase acuosa se mezcla de nuevo una vez con acetato de etilo. Las fases organicas se combinan, se secan sobre sulfato sodico, se filtran y despues se evaporan a presion reducida, dando un residuo oleoso.
El residuo se recoge en acetato de etilo para preparar el deposito solido. La purificacion se realiza sobre una 15 columna de gel de sflice (sflice SDS 60A, 35-70 pm) en eluyente de hexano/EtOAc pasando de 9/1 a 7/3. El producto esperado se obtiene en forma de un aceite incoloro que cristaliza espontaneamente, dando un solido de color blanco. La columna se lava con acetato de etilo al 100 % para recuperar el 7-p-hidroxicolesterol formado.
Rendimiento: 38 %
20 AnaIisis: Analisis por 1H RMN en CDCb, BRUKER 400 MHz. Columna HPLC de fase normal CHIRALCEL O-DH (columna ODH0CE-CE026), eluyente 9/1 de hexano/iProH, 20 min, longitud de onda 190 nm.
Tiempo de retencion 6,186 min, pureza HPLC 91,7 %.
1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 0,62 (s, 3H, CH3), 0,78 (dd, 6H, 2CH3), 0,85 (d, 3H, CH3), 0,86-2,28 (m, 27H), 1,03 (s, 3H, CH3), 1,96 (s, 3H, CH3 acetilo), 3,47 (m, 1H, CH), 4,94 (td, 1H, CH), 5,13 (t, 1H, CH).
25
Ejemplo 2: Preparacion de 7beta-terc-butiIoxicarboniIcoIesteroI (compuesto 1.6)
El diagrama de reaccion se muestra en la figura 2.
30 El compuesto 1.6 a partir del compuesto 1.2 del Ejemplo 1.
1) Preparacion del compuesto 1.5
35
Se usaron los siguientes reactivos:
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- Benzoato de 7-p-hidroxicolesterilo
- 505,76 1,29 mmol - 0,65 g
- Boc2O
- 218,25 2,8 mmol 2,2 equiv. 0,61 g
- DMAP
- 122,17 0,13 mmol 0,1 equiv. 0,016 g
- 5:2 de Hexano/THF
- 42 ml
El benzoato de 7-p-hidroxicolesterilo, el disolvente, 2,6-dimetilaminopiridina y despues el anhfdrido de terc- 40 butiloxicarbonilo se ponen en un matraz de una boca de 100 ml. Esta mezcla se agita a temperatura ambiente hasta que se disuelve completamente. El progreso se controla por TLC en un eluyente 8/2 de hexano/EtOAc.
Se anaden 50 ml de EtOAc y 10 ml de agua. La fase organica obtenida de este modo se seca sobre sulfato sodico se filtra y despues se evapora a presion reducida, dando un residuo oleoso.
El residuo se recoge en EtOAc para preparar el deposito solido. La purificacion se realiza sobre una columna de gel 5 de sflice en eluyente 95/5 de hexano/EtOAc.
Analisis: Analisis por 1H RMN en CDCb.
1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 0,59 (s, 3H, CH3), 0,77 (dd, 6H, 2CH3), 0,84 (d, 3H, CH3), 0,86-1,98 (m, 24H), 1,09 (s, 3H, CH3), 1,41 (s, 9H, 3CH3, t-Boc), 2,42 (m, 2H, CH2), 4,80 (m, 1H, CH), 4,91 (d, 1H, CH), 5,18 (s, 1H, CH), 10 7,34-7,97 (m, 5H, CHAr).
2) Preparacion del compuesto 1.6
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- Benzoato de 7-p-t-Butiloxicarbonil- colesterilo
- 606,89 1,64 mmol - 1 g
- NaOH al 1 % MeOH
- 50 ml
El benzoato de 7-p-t-butiloxicarbonilcolesterilo y una solucion de sodio al 1 % en metanol se ponen en un matraz de 20 una boca de 50 ml. Esta mezcla se agita a temperatura ambiente hasta que se solubiliza completamente. El progreso se controla por TLC en un eluyente 7/3 de hexano/EtOAc. Para completar la reaccion, la mezcla en bruto puede calentarse a 40 °C.
Se anaden 100 ml de EtOAc y 20 ml de agua. La fase acuosa se extrae de nuevo con EtOAc. Las fases organicas 25 se combinan, se secan sobre sulfato sodico, se filtran y despues se evaporan a presion reducida, dando un residuo oleoso.
El residuo se recoge en EtOAc para preparar el deposito solido. La purificacion se realiza sobre una columna de gel de snice en eluyente de hexano/EtOAc que pasa de 9/1 a 7/3. La columna se lava con EtOAc al 100 % para 30 recuperar el 7-p-hidroxicolesterol formado.
Analisis: Analisis por 1H RMN en CDCb.
1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 0,60 (s, 3H, CH3), 0,78 (dd, 6H, 2CH3), 0,84 (d, 3H, CH3), 0,91-2,29 (m, 27H), 0,97 (s, 3H, CH3), 1,41 (s, 9H, 3CH3, t-Boc), 3,47 (m, 1H, CHb), 4,77 (td, 1H, CHc), 5,17 (t, 1H, CHa).
35
Ejemplo 3: Preparacion de 2-(2-(((benciloxi)carbonil)amino)acetamido) propanoato de 7-((terc- butoxicarbonil)oxil)-10,13-dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1H- ciclopentaralfenantren-3-ilo (molecula 1 .a)
40 Nombre simplificado: 3-benciloxicarbonil-glicinil-alanil-7-p-O-terc-butiloxicarbonil-colesterol
La Molecula 1.a se prepara a partir del compuesto intermedio 1.6. 5 Se usaron los siguientes reactivos:
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- 7-p-t-Butiloxicarbonil-colesterol (compuesto 1.6)
- 502 0,16 mmol - 80 mg
- Z-Gly-Ala-COOH
- 280,28 0,24 mmol 1,5 equiv. 68 mg
- DCC
- 206,3 0,24 mmol 1,5 equiv. 50 mg
- DMAP
- 122,17 0,24 mmol 1,5 equiv. 30 mg
- 1:1 de THF/DCE
- 6 ml
Se ponen 80 mg (0,16 mmol) de 7-p-t-butiloxicarbonilcolesterol, 68 mg (0,24 mmol, 1,5 equiv.) de dipeptido, 6 ml de mezcla de disolvente (1:1 de THF/DCE), 50 mg (0,24 mmol, 1,5 equiv.) de DCC, y 30 mg (0,24 mmol, 1,5 equiv.) de 10 DMAP en un frasco Wheaton de 10 ml. La mezcla de reaccion en bruto se agita durante 24 h a temperatura ambiente. El progreso se controla por TLC en un eluyente 7/3 de hexano/acetato de etilo.
A producto de reaccion en bruto se le anaden 30 ml de acetato de etilo y 10 ml de agua. La fase organica se separa, se seca sobre sulfato sodico, se filtra y despues se evapora a presion reducida. El residuo oleoso obtenido se recoge 15 en acetato de etilo para preparar el deposito solido.
La purificacion se realiza sobre una columna de gel de sflice en eluyente 7/3, despues 6/4, de hexano/acetato de etilo.
20 Analisis: Analisis por 1H RMN en CDCb.
1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 0,60 (s, 3H, CH3), 0,79 (dd, 6H, 2CH3), 0,83 (d, 3H, CH3), 0,94-1,88 (m, 24H), 0,98 (s, 3H, CH3), 1,19 (s, 3H, CH3 Ala), 1,40 (s, 9H, 3CH3, t-Boc), 2,27 (m, 2H, CH2), 3,83 (m, 2H, CH2), 4,47 (td, 1H, CH Ala), 4,47 (m, 1H, CH), 4,78 (td, 1H, CH), 5,07 (s, 2H, CH2 Gly), 5,22 (t, 1H, CH), 5,23 (m, 1H, NH), 6,41 (sl, 1H, NH), 7,29 (m, 5H, CHAr).
25
Eiemplo 4: Preparacion de 2-(2-(((benciIoxi)carboniI)amino)-acetamido)propanoato de 7-acetoxi-10,13- dimetiI-17-(6-metiIheptan-2-iI)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1H-cicIopentara1fenantren-3- ilo (molecula 1.b)
30 Nombre simplificado: 3-benciloxicarbonil-glidnil-alanil-7-p-O-acetil-colesterol
Se usaron los siguientes reactivos:
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- 7-p-Acetilcolesterol
- 444 0,18 mmol - 80 mg
- Z-Gly-Ala-COOH
- 280,28 0,27 mmol 1,5 equiv. 76 mg
- DCC
- 206,3 0,27 mmol 1,5 equiv. 56 mg
- DMAP
- 122,17 0,27 mmol 1,5 equiv. 33 mg
- 1:1 de THF/DCE
- 6 ml
Se ponen 60 mg (0,13 mmol) de 7-p-acetilcolesterol, 70 mg (0,19 mmol, 1,5 equiv.) de dipeptido, 6 ml de mezcla de disolvente (1:1 de THF/DCE), 42 mg (0,19 mmol, 1,5 equiv.) de DCC, y 25 mg (0,19 mmol, 1,5 equiv.) de DMAP se 5 ponen en un frasco Wheaton de 10 ml. La mezcla de reaccion en bruto se agita durante 24 h a temperatura ambiente.
El progreso se controla por TLC en un eluyente 7/3 de hexano/acetato de etilo.
10 Al producto de reaccion en bruto se le anaden 30 ml de acetato de etilo y 10 ml de agua. La fase organica se separa, se seca sobre sulfato sodico, se filtra y despues se evapora a presion reducida. El residuo oleoso obtenido se recoge en acetato de etilo para preparar el deposito solido.
La purificacion se realiza sobre una columna de gel de sflice en un eluyente 7/3, despues 6/4, de hexano/acetato de 15 etilo.
AnaIisis: Analisis por 1H RMN en CDCh.
1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 0,62 (s, 3H, CH3), 0,78 (dd, 6H, 2CH3), 0,84 (d, 3H, CH3), 0,91-1,83 (m, 25H), 1,01 (s, 3H, CH3), 1,17 (s, 3H, CH3 Ala), 1,94 (s, 3H, CH3 acetilo), 2,27 (m, 2H, CH2), 3,82 (m, 1H, CH), 4,47 (td, 1H, CH 20 Ala), 4,56 (m, 1H, CH), 4,95 (td, 1H, CH), 5,06 (s, 2H, CH2 Gly), 5,17 (sl, 1H, CH), 5,37 (t, 1H, CH), 6,49 (dl, 1H, NH), 7,24 (m, 5H, CHAr).
Eiemplo 5: Preparacion de 2,2-dimetiI-1,3-dioxoIano-4-carboxiIato de 7-((terc-butoxicarboniI)oxi)-10,13- dimetiI-17-(6-metiIheptan-2-iI)-2.3.4.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17-tetradecahidro-1H-cicIopentara1fenantren-3- 25 iIo (moIecuIa 2.a)
Nombre simplificado: 3-(S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxil-7-p-O-terc-butiloxicarbonil-colesterol
1) Preparacion del grupo 1,3-dioxolano-4-carboxilato de dimetilo
30
35 Se usaron los siguientes reactivos:
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- (S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4- carboxilato de (-)-metilo
- 160,17 31,2 mmol - 5 g
- UOH.H2O
- 41,96 78 mmol 2,5 equiv. 3,3 g
- Metanol
- 25 ml
El acetal, metanol y despues el hidroxido de litio se ponen en un matraz de 50 ml. Esta mezcla se agita a temperatura ambiente durante 16 h.
La mezcla de reaccion en bruto se evapora a presion reducida. El residuo obtenido se recoge en 75 ml de agua. Despues, esta fase se acidifica a 0 °C a pH 1 con acido clorhfdrico 1 N, despues se extrae con 2 x 100 ml de acetato de etilo. Las fases organicas se combinan, se secan sobre sulfato sodico, se filtran y despues se evaporan a presion reducida, dando un residuo oleoso ligeramente coloreado.
5
El residuo se usa directamente en la etapa de acoplamiento sin purificacion adicional.
AnaIisis: Analisis por 1H RMN en DMSO, BRUKER 400 MHz.
1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 1,32 (d, 3H, CH3), 1,42 (s, 3H, CH3), 4,14 (AB, 2H, CH2), 4,55 (dd, 1H, CH), 10,30 10 (sl, 1H, OH), 7,24 (m, 5H, CHAr).
Rendimiento: 94 %
2) Preparacion de molecula 2.a
La Molecula 2.a se prepara a partir del compuesto intermedio 1.4.
Se usaron los siguientes reactivos:
20
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- 7-p-Acetilcolesterol
- 444 3,4 mmol - 1,5 g
- Acido 3-(S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4- carboxflico
- 146,17 10,1 mmol 3 equiv. 1,35 g
- DCC
- 206,3 10,1 mmol 3 equiv. 2,1 g
- DMAP
- 122,17 10,1 mmol 3 equiv. 1,24 mg
- THF/DCE (1:1)
- 50 ml
Se ponen 50 mg (9,9 mmol) de 7-p-t-butiloxicarbonilcolesterol, 6 ml de mezcla de disolvente (1:1 de THF/DCE), y 16 mg (11,9 mmol, 1,2 equiv.) de acido 3-(S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxflico se ponen en un frasco Wheaton de 10 ml.
25
Se anaden 24,5 mg (11,9 mmol, 1,2 equiv.) de DCC y 14,5 mg (11,9 mmol, 1,2 equiv.) de DMAP, antes de agitar la mezcla de reaccion en bruto durante 24 h a temperature ambiente. El progreso se controla por TLC en un eluyente 8/2 de hexano/acetato de etilo. Se calienta a 50 °C durante 2 h para finalizar la reaccion.
30 A producto de reaccion en bruto se le anaden 30 ml de acetato de etilo y 10 ml de agua. La fase organica se separa, se seca sobre sulfato sodico, se filtra y despues se evapora a presion reducida. El residuo oleoso obtenido se recoge en acetato de etilo para preparar el deposito solido.
La purificacion se realiza sobre una columna de gel de snice en un eluyente 95/5, despues 9/1 de hexano/acetato de 35 etilo.
Analisis: Analisis por 1H RMN en CDCb.
1H RMN (CDCI3, 400,13 MHz): 6 0,60 (s, 3H, CH3), 0,79 (dd, 6H, 2CH3), 0,83 (d, 3H, CH3), 0,74-1,97 (m, 25H), 0,98 (s, 3H, CH3), 1,33 (s, 3H, CH3 Acetal), 1,40 (s, 9H, 3CH3, t-Boc), 1,42 (s, 3H, CH3 Acetal), 2,29 (m, 2H, CH2), 4,08 40 (AB, 2H, CH2 Acetal), 4,48 (ddd, 1H, CH Acetal), 4,63 (m, 1H, CH), 4,78 (td, 1H, CH), 5,22 (d, 1H, CH).
Eiemplo 6: Preparacion de 2,2-dimetiI-1,3-dioxoIano-4-carboxiIato de 7-acetoxi-10,13-dimetiI-17-(6-
metilheptan-2-il)-2.3.4.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17-tetradecahidro-1H-ciclopentaralfenantren-3-ilo (molecula
2M
Nombre simplificado: 3-(S)-2,2-d imetil-1,3-dioxolano-4-carboxil-7-p-O-acetil-colesterol
10 Se usaron los siguientes reactivos:
- PM Nb mol. equiv. Masa o Volumen
- 7-p-Acetilcolesterol
- 444 3,4 mmol - 1,5 g
- Acido 3-(S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4- carboxflico
- 146,17 10,1 mmol 3 equiv. 1,35 g
- DCC
- 206,3 10,1 mmol 3 equiv. 2,1 g
- DMAP
- 122,17 10,1 mmol 3 equiv. 1,24 mg
- THF/DCE (1:1)
- 50 ml
El colesterol, la mezcla de disolvente y el acido se ponen en un matraz de 100 ml. Se anaden DCC y DMAP, antes de agitar el producto de reaccion en bruto durante 24 h a temperatura ambiente. El progreso se controla por TLC 15 (TLC gel de sflice 60 F254, Merck) en un eluyente 8/2 de hexano/EtOAc.
A la mezcla de reaccion en bruto se le anaden 100 ml de acetato de etilo y 50 ml de agua. La fase organica se separa, se seca sobre sulfato sodico, se filtra y despues se evapora a presion reducida.
20 El residuo oleoso obtenido se recoge en acetato de etilo para preparar el deposito solido. Columna de gel de sflice (sflice SDS 60A, 35-70 pm) en un eluyente 95/5, despues 9/1, de hexano/EtoAc.
Rendimiento: 68 %
Analisis: Analisis por 1H y 13C RMN en CDCb BRUKER 400 MHz. Columna HPLC de fase normal CHIRALCEL O- 25 DH (columna ODH0CE-CE026), eluyente 9/1 de hexano/iProH, 20 min, longitud de onda 190 nm.
Tiempo de retencion 5,291 min, pureza HPLC 98,7 %.
1H RMN (CDCl3. 400.13 MHz): 6 0,62 (s, 3H, CH3), 0,79 (dd, 6H, 2CH3), 0,84 (d, 3H, CH3), 0,91-2,30 (m, 27H), 1,01 (s, 3H, CH3), 1,33 (s, 3H, CH3 Acetal), 1,42 (s, 3H, CH3 Acetal), 1,93 (s, 3H, CH3 acetilo), 4,09 (AB, 2H, CH2 Acetal), 4,48 (dd, 1H, CH Acetal), 4,62 (m, 1H, CH), 4,96 (td, 1H, CH), 5,18 (d, 1H, CH).
30
II/ Actividad bioloaica A/ Protocolos
35 Se usaron los siguientes protocolos para todos los experimentos:
1) Cultivos celulares
Se usaron placas de cultivo de 96 pocillos con el fondo plano de plastico (NUNC, Estados Unidos) para el cultivo 40 celular (Sigma-Aldrich, ref. 114754); se siembran 1500 celulas por pocillo en 200 pl de medio de cultivo. En el momento del tratamiento, se anaden por pocillo 100 pl de medio de cultivo puro, 100 pl de medio de cultivo que contiene etanol, o liposomas, o 100 pl de medio de cultivo que contiene los principios activos; el volumen final del
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
medio de cultivo, despues del tratamiento es, por lo tanto, de 300 pi para todos los pocillos.
Los cultivos se incuban en una incubadora Sanyo (Japon, modelo MCO-19AIC-UV) a 37 °C y en una atmosfera con CO2 al 5 % y se saturaron en humedad. Las celulas se observan con un microscopio invertido (Nikon Eclipse TS100, Japon) y las fotograffas se toman con una camara (camara DIGITAL con c-mount; LABOVER, Francia). La campana de cultivo es una campana de seguridad microbiologica MSC (thermo SCIENTIFIC, modelo HERA SAFE KS12, Francia).
El tiempo de duplicado celular se calcula usando las formulas:
log2(a) = log10(a) x 3,32
log2(b) = log(b) x 3,32
Tiempo de duplicado = log2(b) - log2(a)
donde (a) y (b) representan el numero de celulas en los momentos a y b (b>a) (12).
La transicion se realiza por disociacion con tripsina (pancreas bovino tipo 3, Sigma, Francia). La disociacion celular se realiza a temperatura ambiente, durante 30 minutos, con una solucion al 0,04 % (p/v) en KCl de Tyrode que contiene tripsina al 0,05 % (p/v).
Despues de la disociacion, las celulas se suspenden en el medio de cultivo apropiado para las celulas y se cuentan usando un contador de celulas THOMA y se diluyeron en el mismo medio para obtener 1500 celulas por pocillo.
a) Lineas celulares
Se usaron las siguientes lineas de glioblastoma:
• Lineas C6.
La lfnea celular de tipo C6 se obtuvo por Benda y col. (13) a partir de tumores de cerebro de rata, inducidos por N- metilnitrosourea. Este tipo de celula se usa como modelo "in vitro" e "in vivo" para evaluar el potencial anti-GBM. Las lineas proceden del antiguo Strasbourg Neurochemistry Centre (U44 INSErM y UPR 416 CNRS).
El medio de cultivo esta formado por medio esencial mfnimo al 70 % (MEM; (Fischer Scientifique, ref. 61100) y una solucion de Hanks al 30 % (SIGMA, ref. H 9269). Se anaden los siguientes al medio de cultivo: suero fetal de ternero (FCS; Fischer Scientifique, ref. 10108165) a una concentracion final del 5 % (v/v), una solucion antibiotica de clorhidrato de ciprofloxacina 5 pg/ml (EUROMEDEX, ref. UC5074) y una solucion de fungizona 2,5 pg/iml (INVITROGEN, ref. 15290-026). El tiempo de duplicado de este tipo de celulas es de 17 h.
• Lineas de GBM de origen humano
Las lineas de glioblastoma humano (GBM, lfnea U-87 MG) y su medio de cultivo (medio esencial mfnimo de Eagle o EMEM) se obtuvieron de la ATCC (Estados Unidos, ref. ATCC- HTB-14). El cultivo de las celulas se inicia y se mantiene de acuerdo con las recomendaciones de la ATCC. Estas lineas se usan comunmente "in vitro" e "in vivo" para probar el potencial anti-GBM. El tiempo de duplicado de estas lineas es de 16 h.
Tambien se usaron los siguientes cultivos principales de celulas humanas:
• Celulas astrocfticas
Las celulas astrocfticas de origen humano usadas se obtuvieron de ScienCell, Estados Unidos (ref. 1800), asf como su medio de cultivo, formado por un medio basico que contiene suero FCS al 2 % (v/v) (ref. 0010), protefnas de crecimiento astrocftico (AGS, ref. 1852) y una solucion de penicilina/estreptomicina (ref. 0503). El tiempo de duplicado de estos astrocitos humanos es de 96 h.
• Celulas hepaticas
De origen humano, se obtuvieron en ScienCell, Estados Unidos (ref. 50200), asf como el medio de cultivo (ref. 5201), que contiene FCS al 10 % (v/v). El tiempo de duplicado de estas celulas es de 24 h.
• Celulas renales
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Estas celulas, de origen humano, se obtuvieron en ScienCell, Estados Unidos (ref. 4120), asf como el medio de cultivo (ref. 4101), que contiene FCS al 10 % (v/v). El tiempo de duplicado es de 96 h.
• Celulas cardiacas
Estas celulas, de origen humano, se obtuvieron en ScienCell, Estados Unidos (ref. 6300), asf como el medio de cultivo, que contiene FCS al 10 % (v/v). El tiempo de duplicado es de 72 h.
• Celulas musculoesqueleticas
De origen humano, se obtuvieron en ScienCell, Estados Unidos (ref. 3500), asf como el medio de cultivo (ref. 3501), que contiene FCS al 10 % (v/v). El tiempo de duplicado para estas celulas es de 72 h.
Tambien se usaron los siguientes cultivos de celulas cancerosas de origen humano:
• Celulas cancerosas hepaticas
Se obtuvieron en la ATCC (ref. ATCC-HB-8065). El medio de cultivo consiste en MEM (Gibco, Estados Unidos; ref. 51200) y FCS al 10 % (v/v). El tiempo de duplicado es de 60 h.
• Celulas cancerosas de prostata
Se obtuvieron en ATCC (ref. ATCC-HTB-81). El medio de cultivo es el mismo que el usado para las lfneas de cancer de hfgado. El tiempo de duplicado es de 60 h.
• Celulas cancerosas de mama
Se obtuvieron en la ATCC (ref. ATCC-HTB-19). El medio de cultivo es el mismo que el usado para las lfneas de cancer de hfgado. El tiempo de duplicado es de 20 h.
Para todos estos cultivos, el cultivo se inicio y se mantuvo de acuerdo con las recomendaciones del proveedor.
b) Tratamiento de los cultivos
Los principios activos se disuelven en etanol absoluto (AnalaR, NORMAPUR, VWR, Francia) o en forma de una solucion liposomal, tal como 10 pl de las soluciones madre diluidas en 990 pl y despues se anaden a los pocillos de cultivo (200 pl de medio de cultivo), dando concentraciones de 30,0, 15,0, 7,5 y 3,3 pM (volumen final de medio de cultivo por pocillo BI-GBM: 300 pl).
Cuando los principios activos estan en una solucion etanolica, el medio de cultivo contiene etanol al 3,3 % (v/v).
2) Preparacion de los liposomas
La metodologfa basica se describe por Werthle y col. (10).
En resumen, los compuestos a ensayar, concretamente los compuestos de acuerdo con la invencion (principios activos) o 7p-OHCH-C3-ester (un derivado de 7beta-hidroxisterol esterificado en la posicion 3 con un grupo oleato, la sfntesis de que se describe por Rakotoarivelo y col. (14) y que se usa como control), fosfatidilcolina de soja (Sigma), asf como colesteril-3-sulfato (Sigma) se toman de soluciones madre preparadas a partir de dicloroetano en el caso de los principios activos y el 7p-OHCH-C3-ester, un cloroformo: mezcla de metanol (9:1, v/v) en el caso de fosfatidilcolina y cloroformo en el caso de colesteril-3-sulfato. Las relaciones molares son 1 M/0,1 M/0,25 M para fosfatidilcolina, colesteril-3-sulfato y el 7p-OHCH-C3-ester y los principios activos respectivamente.
Despues de la evaporacion, al compuesto seco se le anade una solucion de solucion salina en PBS, sin Ca2+ y Mg2+, pH 7,2 (BioRad). El volumen de tampon y la masa de los productos se ajustan de manera que 20 o 10 pl de liposomas anadidos a 90 pl de medio de cultivo den las concentraciones finales deseadas. Los liposomas se forman por extrusion con Liposofast (Sodexim, SA Muizon, Francia). La solucion se pasa 41 veces a traves de membranas de filtracion de policarbonato (100 nm). Los liposomas se esterilizan por filtracion en membranas Millipore de 22 pm.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Se usan los mismos metodos para ambos casos. Para la activdad, se usa el potencial anti-GBM de los compuestos de ensayo, y para la toxicidad, se ensaya lo mismo en las celulas normales de origen humano mantenidas "in vitro".
Se usan los siguientes metodos de medicion:
a) Recuento celular
Se uso un metodo de recuento celular en fotograffas.
Por ejemplo, para los casos de los cultivos en placas de 96 pocillos y dependiendo del aumento del microscopio usado (x 100 o x 200), una fotograffa tomada representa un campo de vision con un diametro igual a 1/5 del diametro de un pocillo. Por lo tanto, el numero total de celulas en un pocillo es igual a 5 veces el numero de celulas por fotograffa. Esta tecnica se compara con una tecnica convencional (tripsinizacion de la capa celular, centrifugacion de las celulas, suspension de las celulas en una solucion salina fisiologica y recuento con un contador de celulas THOMA) en el caso de las celulas C6. Los resultados obtenidos son identicos para ambos metodos.
b) Ensayo de proteinas
El medio de cultivo se extrae de cada pocillo y se anaden por pocillo 50 pl de tampon de Laemmli (0,1 ml de Tris, 0,8 ml de glicerol, 1,6 ml de SDS al 10 %, 8 ml c.s.f de agua ultrapura).
En los pocillos de control se anaden 10 pl de una solucion de la gama de albumina serica bovina (BSA cristalizada, Sigma); la gama que va de 0 a 20 pg por pocillo. Despues, los pocillos se complementan con 40 pl de tampon de Laemmli. Por ultimo, se anaden 200 pl de una solucion de reactivo de BCA (Pierce, Estados Unidos; kit de ensayo de proteinas BCA Thermo Scientific, Francia).
Las placas de cultivo se incuban durante 30 min a 37 °C en una camara de calor. La densidad optica para cada pocillo se lee y se cuantifica por un lector de placas (BioRad, Estados Unidos, lector de microplacas iMark 12222) a 570 nm.
c) Viabilidad celular (prueba MTT)
Este ensayo hace posible detectar la respiracion celular, especialmente la respiracion mitocondrial. La solucion madre de sal de tetrazolio MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolio, Sigma-Aldrich, Estados Unidos, ref. M5655) se prepara con 10 mg de MTT/ml de tampon PBS (solucion salina tamponada con fosfato, SIGMA ref. D 1408). Esta solucion se anade directamente al medio de cultivo en cada pocillo; la concentracion final de MTT es de 25 pg/ ml. Despues, la placa se incuba a 37 °C durante al menos 1 h.
Despues de la aparicion de granos de formazan de color azul, producidos principalmente por el transporte de electrones mitocondriales, se tomaron fotograffas con el fin de contar las celulas con una alta densidad de granos de formazan; esta tecnica se usa en el caso de las lfneas U87-MG. Despues, para esta lfnea y los demas cultivos, los medios se retiran y se anaden 100 pl de dimetilsulfoxido (DMSO, SDS CARLO ERBA Italia) para disolver los depositos de formazan.
La densidad optica se lee y se cuantifica usando el lector de placas (BioRad, lector de microplacas iMark) a 490 nm. La viabilidad a veces tambien se ensaya por la tecnica de exclusion azul de tripano.
4) Inmunomarcado de las celulas y obtencion de imagenes
Los anticuerpos primarios anti-CD133 (poli, Abnova), anti-GFAP (poli, Sigma), anti-NFL (mono, Santa Cruz) y anti- fibroblastos (ERTR7, Santa Cruz) se diluyen hasta 1/100 en el caso de los primeros tres anticuerpos y hasta 1/50 en el caso del ultimo.
Los anticuerpos secundarios correspondientes al reconocimiento de los anticuerpos primarios son anticuerpos anti- conejo acoplados a peroxidasa (cabra, Sigma), anti-raton acoplados a Dylight 488 (oveja, Sigma), anti-raton acoplados a Dylight 488 (oveja, Sigma) y anti-rata acoplados a FlTC (conejo, Sigma). Las diluciones son 1/4000, 1/1000, 1/4000 y 1/400 respectivamente.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Las celulas se permeabilizan durante 5 min con Triton X-100 al 0,1 % (Sigma) en PBS (Fisher Scientific). Los sitios no especficos se bloquean con BSA al 2 % (Sigma) en PBS. Las incubaciones se realizan respectivamente durante 1 h a temperature ambiente, 48 h a 4 °C, 24 h a 4 °C y 1 h a temperature ambiente durante los anticuerpos anti- 00133, anti-GFAP, anti-NFL y anti-Fibroblastos. La incubacion con los anticuerpos secundarios se realiza durante 1 h a temperature ambiente. Las celulas positivas CD133 se detectan por el sistema DAB/H2O2 (Sigma), y se observan con un microscopio optico. La fluorescencia se detecta y las imagenes se obtienen usando un microscopio de epifluorescencia (Axiovert, Zeiss, Alemania).
5) Extraccion de los lipidos y la identificacion de los oxiesteroles
Las celulas se lavan con NaCl al 0,9 %q se recogen mecanicamente, se suspenden en tampon Tris-HCl (10 mM; pH 7,4) y se homogenizan con un Potter (1000 r.p.m. y 13 reciprocidades). La homogeneizacion se realiza en hielo. La extraccion se realiza a 4 °C despues de anadir 19 volumenes de cloroformo:metanol (2:1, v/v) durante 1 volumen de suspension celular de acuerdo con Folch y col. (13). La fase organica y la fase acuosa se separan anadiendo 0,2 volumenes de KCl al 0,74 % (p/v).
Despues de la evaporacion de la fase organica en un evaporador rotatorio (Buchi, R-215, Suiza), el residuo lipfdico se recoge en cloroformo. Las capas TLC se lavan previamente con cloroformo:metanol (1:1, v/v) y se activan a 100 °C durante 1 h. Los lfpidos se eluyen con el siguiente sistema: eter de petroleo (punto de ebullicion: 6070 °C):eter:acido acetico (80:20:1,3, v/v/v). Los estandares depositadas son colesterol, 7-ceto-colesterol, 7beta- OHCH, 7beta-OHCH-C3-ester y la molecula 2.b. Los hpidos y estandares se detectan con reactivo Maccala. Los valores Fr son respectivamente 0,21, 0,09, 0,08, 0,27 y 0,23 para colesterol, 7-ceto-colesterol, 7beta-OHCH, 7beta- OHCH-C3-ester y molecula 2.b. Los rangos de calibracion de 0,5 a 2 pg para cada estandar se realizan por separado. Las intensidades de los puntos de interes se calculan con respecto a los estandares despues de explorar las capas finas de sflice que se han desarrollado.
Los disolventes usados son de grado AnalAR o HPLC.
B/ Actividad anti-GBM "in vitro"
B.1. El modelo animal
Se usaron cultivos de celulas C6 (rata) en las condiciones operativas que se han mencionado anteriormente (seccion II, A).
Ejemplo7: Actividad anti-GBM "in vitro" en cultivos de celulas C6 (rata)
Los resultados obtenidos se resumen en la Tabla 1 a continuacion, asf como en la figura 3.
Tabla 1
- Moleculas ensayadas (etanol al 3 %)
- 1 a (Ej. 3) 15 pm 2 a (Ej. 5) 15 pm 1 .a despues 2.a 15 pm + 7,5 pm
- Celulas vivas residuales
- 3 % 100 % 0 %
La figura 3 (aumento x 200) muestra la aparicion de los cultivos de celulas C6 en las condiciones operativas que se han mencionado anteriormente (seccion II, A) en presencia de molecula 1.a (Ej. 3) o despues del tratamiento secuencial con la molecula 1.a y despues la molecula 2.a (Ej. 5), en 19 dfas y en 35 dfas.
Los resultados (Tabla 1) muestran que la molecula 1.a, en forma etanolica, es citotoxica, esto despues de 19 dfas de tratamiento. A 15 pM de 1.a y despues de 14 dfas de tratamiento, el numero de celulas, el nivel de protemas y el ensayo MTT se reduce en un 30 % para alcanzar una reduccion del 97 %, como mucho, en 19 dfas. A los 19 dfas de tratamiento, tambien se observa dependencia de la dosis durante 7,5 y 3,3 pM de 1.a y a 15 pM se observa un aumento al 20 % de la relacion MTT/celula con respecto a los cultivos de control.
Con el fin de eliminar las celulas residuales, se uso un tratamiento secuencial. En primer lugar, las celulas se tratan con 15 pM de molecula 1.a y el dfa 19° de tratamiento, se anade la molecula 2.a a una concentracion de 7,5 pM.
No se observo ninguna celula viable; unicamente se adhieren los "cadaveres" celulares al sustrato solido del cultivo celular (fondo del pocillo) como se muestra en la figura 3.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Para resumir, el tratamiento secuencial con la molecula 1.a, y la molecula 2.a, muestra una eficacia completa frente a este tipo celular. Las observaciones indican un aumento de la respiracion total de las celulas antes de su destruccion.
B.2. El modelo humano: actividad anti-GBM "in vitro" en cultivos de celulas humanas (lfnea U-87 GBM)
B.2.1 Definicion del modelo "in vitro" y de la expresion de los resultados
a) Caracterizacion de los diferentes tipos celulares
Las celulas U-87GM se cultivaron en las condiciones operativas que se han descrito anteriormente (seccion II, A).
Los cultivos se forman por dos componentes celulares: una capa celular compuesta por celulas que se comportan como celulas normales (no cancerosas) y agregados celulares formados por celulas de tipo GBM.
La figura 4 muestra una imagen fotonica (x 100) que es caracterfstica del cultivo. Puede observarse una capa celular (CL), sobre la que los agregados celulares (CA) de forma hemisferica se fijan. La figura 5 (x 200) muestra, por inmunomarcado, que las celulas CD133+ (celulas madre), descritas en los GBM humanos, se situan en los agregados celulares y no en la CL. El marcado por inmunofluorescencia muestra la presencia de GFAP, un marcador de astrocitos normales (figuras 6 y 7; x 200) (16) en la CL y CA (figuras 6 y 7; x 200) y de neurofilamentos en CL y CA Sin embargo, el marcado especffico de fibroblastos, celulas con alto potencial de multiplicacion, unicamente se encuentra en el caso de CA La observacion fotonica muestra claramente que las celulas de los CA se dividen muy rapidamente (96 h de tiempo de duplicacion, al menos), mientras que las celulas que forman el CA tienen un tiempo de duplicado de 16 h.
Estas observaciones justifican el metodo de recuento celular (celulas marcadas o no con granos de formazan) que se ha desarrollado; de hecho, el recuento despues de la tripsinizacion no puede distinguir entre las celulas de CL y CA Las imagenes tambien muestran que unicamente los CA tienen un caracter de GBM (tiempo de duplicado corto, presencia de celulas madre y fibroblastos). Por lo tanto, los resultados obtenidos son los del efecto de las moleculas ensayadas en CA
b) Expresion de los resultados
Los resultados se expresan de acuerdo con los siguientes parametros:
(i) Eficacia de las moleculas, de acuerdo con la invencion
- Cuantificacion de las celulas residuales, las celulas madre en particular.
- Eficacia de las moleculas de acuerdo con la invencion con el tiempo
El medio de cultivo que contiene las moleculas de acuerdo con la invencion se reemplaza con medio fresco y la multiplicacion celular "de novo" se examina: ninguna multiplicacion "de novo" significa una destruccion total de las celulas GBM, incluyendo las celulas madre.
(ii) Efecto de las moleculas en la respiracion total de las celulas GBM.
(iii) Comparacion de los resultados obtenidos con las moleculas de acuerdo con la invencion con los obtenidos con 7 p-OHCH-C3-ester (control).
B.2.2 Resultados
Se usaron cultivos de celulas U87-MG (humanas) en las condiciones operativas que se han mencionado anteriormente (seccion II, A).
Se uso 7beta-OHCH-C3-ester como control.
Eiemplo 8: Estudio de la actividad anti-GBM "in vitro" de la molecula 2.a (Ei. 5) en forma liposomal
Los resultados obtenidos se presentan en la Tabla 2 a continuacion.
Tabla 2
- Molecula 2.a (15 pM) en forma liposomal 7 p-OHCH-C3-este r (80 pM) en forma liposomal
- Dfas de tratamiento
- Protefnas MTT/celula Protefnas MTT/celula
- 6
- 70 100 70 100
- 8
- 25 140 20 100
- 13
- 15 120 15 100
- 15
- 0 0 15 100
Estos resultados son el valor medio de tres experimented independientes realizados por triplicado. Los resultados se 5 expresan como un porcentaje con respecto a los controles.
Las observaciones muestran que 15 pM de la molecula 2.a, en forma liposomal, reducen la presencia de celulas GBM (CA) a cero despues de 15 dfas de tratamiento.
10 Unicamente permanecen las celulas con baja division (CL). El efecto no es dependiente de la dosis. El 7p-OHCH- C3-ester no actua en forma etanolica en los GBM (CA) (vease tambien el Ejemplo 9), y unicamente actua en forma liposomal, concretamente a 80 pM. Si eficacia no es mejor, o incluso disminuye, al aumentar la dosis de 7p-OHCH- C3-ester en forma liposomal.
15 Sin embargo, si el dfa 13° de tratamiento el medio de cultivo que contiene el 7p-OHCH-C3-ester se retira y se reemplaza con un medio de cultivo recien preparado que no contiene este farmaco, se observa multiplicacion celular y en paralelo, un aumento en el ensayo MTT despues de dos dfas; este aumento es del 40 %. Este no es el caso para la molecula 2.a: en ausencia de esta molecula, no se observa ninguna multiplicacion celular.
20 La Tabla 2 tambien muestra un gran aumento en MTT/celula (140 % con respecto a los controles) en el momento cuando la mayor parte de las celulas desaparecen (8 dfas de tratamiento). Este no es el caso para el 7p-OHCH-C3- ester liposomal: incluso a 80 pM, la relacion MTT/celular no varfa.
Esta observacion muestra una accion diferente entre las dos moleculas: la respiracion celular total aumenta antes de 25 la muerte masiva de las celulas. Este no es el caso para el 7p-OHCH-C3-ester.
Ejemplo 9: Estudio de actividad anti-GBM "in vitro" de molecula 2.b (Ej. 6) en forma etanolica
Los resultados obtenidos se presentan en la Tabla 3 a continuacion.
30
Tabla 3
- Molecula 2.b (30 pM) en forma etanolica 7p-OHCH-C3-ester (30 pM) en forma etanolica
- Dfas de tratamiento
- Protefnas MTT/celula Protefnas MTT/celula
- 4
- 100 100 100 100
- 6
- 100 100 100 100
- 9
- 90 160 100 100
- 15
- 50 130 100 100
- 22
- 0 0 100 100
Estos resultados son el valor medio de tres experimentos independientes realizados cada uno por triplicado. Los resultados se expresan como un porcentaje con respecto a los controles. Por encima de 30 pM, el 7p-OHCH-C3- 35 ester ya no es soluble en etanol.
Las observaciones muestran que la molecula 2.b es completamente eficaz a 30 pM en forma etaiolica: no queda ninguna celula GBM, incluso despues de eliminar el principio activo. Al igual que para la molecula 2.a, en forma liposomal, la respiracion celular aumenta antes de la muerte celular. Este no es el caso para el 7p-OHCH-C3-ester
Ademas, el reemplazo del medio de cultivo con medio fresco que no contiene el compuesto 2.b en 22 dfas no conduce a ninguna multiplicacion celular.
Ejemplo 10: Inmunomarcado de las celulas madre CD133+ con el sistema A/B peroxidasa
El inmunomarcado se realiza como se ha descrito anteriormente (seccion II, A).
10 Los resultados obtenidos se presentan en la Tabla 4 a continuacion.
Tabla 4
- Dfas de tratamiento
- Celulas CD133+
- Cultivos no tratados (Controles)
- Molecula 2.b (30 pM) en forma etanolica 7p-OHCH-C3-ester (80 pM) en forma liposomal
- 4
- 100 100 100
- 22
- 100 0 50
Estos resultados son el valor medio de dos experimentos independientes realizados cada un por triplicado. Los 15 resultados se expresan como un porcentaje de celulas positivas CD133 con respecto a los controles. Estos experimentos son independientes de los descritos en los Ejemplos 8 y 9.
Como en las observaciones descritas en las Tablas 2 y 3, 7p-OHCH-C3-ester en forma liposomal y la molecula 2.b en forma etanolica reducen el nivel de protefnas en un 85 % y en un 100 % con respecto a las celulas de control no 20 tratadas.
Los resultados muestran que las celulas madre se destruyen completamente por la molecula 2.b. Este no es el caso para el 7p-OHCH-C3-ester, incluso cuando se administra en forma liposomal.
25 La figura 9 (inmunomarcado de las celulas CD133+) muestra claramente su desaparicion despues de 22 dfas de tratamiento. Este no es el caso para el 7p-OHCH-C3-ester en forma liposomal (figura 10, inmunomarcado de las celulas CD133+); en este caso, aun esta presente el 50 % de las celulas CD133+ entre las celulas residuales. El reemplazo del medio de cultivo con medio fresco que no contiene el compuesto 2.b en 22 dfas no conduce a la aparicion de celulas madre CD133+.
30
Ejemplo 11: Estudio del destino de la molecula 2.b (Ej. 6) en forma etanolica "in vitro" en GBM de oriaen humano
La extraccion y el analisis de los lfpidos de GBM tratado con 30 pM de la molecula 2.b en forma etanolica no 35 muestra la presencia de 7beta-OHCH-C3-ester despues de 24 h o 10 dfas de tratamiento, siendo este ultimo momento cuando se activa la muerte celular. Sin embargo, se observa un 0,12 % y un 0,18 % de la molecula 2.b transformada en 7beta-OHCH despues de 1 dfa y 10 dfas de tratamiento respectivamente. Los experimentos de control muestran que estos niveles tan bajos de 7beta-OHCH no inducen ninguna muerte de GBM.
40 Ejemplo 12: Estudio de toxicidad
La toxicidad se ensayo "in vitro" en diversos tipos de celulas normales de origen humano.
a) En astrocitos
45
Las celulas usadas son celulas de origen humano (ScienCell, Estados Unidos, ref. 1800), que se han mencionado anteriormente (seccion II, A).
El tipo de astrocito se valida por la presencia de GFAP, el marcador estandar de astrocitos normales (figura 11;
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
aumento x 200).
Las moleculas 2.a (forma liposomal) y 2.b (forma etanolica) no son toxicas en cultivos primarios de astrocitos humanos normales (no cancerosos) a 30 pM, despues de 30 dfas de tratamiento.
b) En otras celulas
Las celulas usadas son celulas hepaticas (ScienCell, Estados Unidos, ref. 50200), celulas renales (ScienCell, Estados Unidos, ref. 4120), celulas musculoesqueleticas (ScienCell, Estados Unidos, ref. 3500) y celulas cardiacas (ScienCell, Estados Unidos, ref. 6300), de origen humano, que se han mencionado anteriormente (seccion II, A).
Las moleculas 2.a (forma liposomal) y 2.b (forma etanolica) no son toxicas a 30 pM y despues de al menos 30 dfas de tratamiento, en cultivos primarios de celulas hepaticas, celulas renales, celulas musculoesqueleticas y celulas cardiacas de origen humano.
Ejemplo 13: Estudio de la actividad de la molecula 2.b (Ej. 6) "in vitro" en otros canceres
Las celulas cancerosas usadas son de celulas cancerosas de hfgado (ref. ATCC-HB-8065), prostata (ref. ATCC- HTB-81), mama (ref. ATCC-HTB-19), de origen humano, que se han mencionado anteriormente.
A 30 pM y en forma etanolica, la molecula 2.b no muestra ningun efecto sobre la division celular y la respiracion de las celulas cancerosas de hfgado, prostata o de mama de origen humano.
Bibliograffa
1. Kando T, Setoguchi T, Taga T. PNAS. 2004, 101: 781-786.
2. Zhou Y Zhou Y Shingu T, Feng L, Chen Z, Ogasawara M, Keating MJ.
J. Biol. Chem. 2011,286: 32843-32853).
3. Warburg O. Biochemische Zeitschrift. 1923, 142: 317-333.
4 Tennant DA Duran RV, Gottlieb E. Nature Reviews Cancer. 2010, 10: 267-277.
5. Cheng KP, Nagano H, Bang L, Ourisson G, Beck JP Journal of Chemistry Research (M). 1977, 217: 2501-2521.
6. Carvalho JFS, Cruz Silva MM, Moreira JN, Simoes S, Sa e Melo ML. Journal of Medicinal Chemistry. 2011,54: 6375-6393.
7. Kupferberg A Teller G, Behr P, Leray C, Urban PF, Vincendon G, Mersel M.
Biochim Biophys Acta. 1989, 1013: 231-23.
8. Kupferberg A Behr P, Mersel M. Biochim Biophys Acta. 1990, 1046: 106-109.
9. Adamczyck M, Scherrer E, Kupferberg A Malviya AN, Mersel M. Journal of Neuroscience Research.1988,53: 38-50.
10. Werthle M, Bochelen D, Adamczyck M, Kupferberg A Poulet P, Chambron J, Lutz P, Privat A Mersel M. Cancer Research. 1994, 54: 998-1003.
11. Clarion L, Schindler M, de Weille J, Lolmede K, Laroche-Clary A, Uro-Coste E, Robert J, Mersel M, Bakalara N. Biochemical Pharmacology 2012, 83: 37-46
12. Manford K, Patterson JR. Methods in Enzymology 1979, 58: 150.
13. Benda P, Lightbody J, Sato G, Levine L, Sweet W. Science.1968, 161: 370-371.
14. Rakotoarivelo C, Adamczyck M, Desgeorges M, Langley K, Lorentz JG, Mann A Ricard D, Scherrer E, Privat A Mersel M. Anticancer Research. 2006, 26: 2053-2062.
15. Folch J, Lees M, Sloane-Stanley GHJournal of Biological Chemistry. 1957, 226: 497-509.
16. Sensenbrenner M, Devilliers G, Bock E, Porte A Differentiation, 1980, 17: 51-61
Claims (19)
- 5101520253035404550
imagen1 donde- Arepresentaun grupo -(Ri)n- en el que Ri es un residuo aminoacfdico unido por su extremo C-terminal y n = 1 a 3, siendo cada Ri identico o diferente, en el que el extremo N-terminal de dicho aminoacido esta sin sustituir o sustituido con un grupo -C-(O)-R2 en el que R2 es un grupo arilalquilo C6-C14 mono o policfclico; un grupo C5-C14 mono o policfclico que puede comprender uno o mas heteroatomos, que pueden ser iguales o diferentes; un grupo arilalquilox C6-C14 mono o policfclico o un grupo heteroarilalquilooxi C5-C14 mono o policfclico que puede comprender uno o mas heteroatomos, que pueden ser iguales o diferentes,un grupo -C(O)-NH-R3 o -C(S)-NH-R3 donde R3 es hidrogeno; un grupo alquilo C1-C12, lineal o ramificado, sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, donde R y R' representan independientemente hidrogeno, un alquilo C1-C12 lineal o un arilo sin sustituir; un grupo arilo sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR como se ha definido anteriormente; un grupo acilo; un grupo formilo; un grupo sulfonilo; un grupo sulfinilo, un grupo sililo sin sustituir o sustituido con un grupo arilo C6-C14 mono o policfclico, sin sustituir o sustituido con al menos un alquilo C1-C6 lineal o ramificado; un grupo alilo; un residuo de azucar; un grupo -C(O)-OR4 en el que R4 es un alquilo C1-C12 lineal o ramificado sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, como se ha definido anteriormente; un grupo amida; un grupo tioamida; un grupo sulfonamida,un grupo -C(O)-R5 donde R5 es un heterociclo C5-C14 saturado que comprende 1 o 2 heteroatomos, sin sustituir o sustituido con al menos un alquilo C1-C6 lineal o ramificado o un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, donde R y R' representan independientemente hidrogeno, un alquilo C1-C12 o un arilo sin sustituir.- B representa un grupo -C(O)-R6 donde R6 es hidrogeno; un alquilo C1-C12, preferiblemente C1-C6, lineal o ramificado, sin sustituir o sustituido con un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, como se ha definido anteriormente; un grupo arilo, sin sustituir o sustituido por un grupo seleccionado entre OR, NRR', NHR y SR, como se ha definido anteriormente; o de lo contrario R6 representa OR7, en el que R7 es un alquilo C1-C12, preferiblemente C1-C6, lineal o ramificado. - 2. El compuesto de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, donde se cumple al menos una de las siguientes condiciones:- Arepresenta un grupo -(R1V donde R1 es un residuo aminoacfdico y n = 2;- A representa un grupo -(R1V donde R1 es un residuo aminoacfdico, n = 2 y el extremo N-terminal de dicho aminoacido esta sustituido con un grupo arilalcoxicarbonilo, en particular benciloxicarbonilo;- A representa un radical alanilo unido a un radical glicinilo, opcionalmente sustituido en su extremo N-terminal con un grupo arilalcoxicarbonilo, en particular benciloxicarbonilo;- Arepresenta un radical metionilo unido a un radical glicinilo, opcionalmente sustituido en su extremo N-terminal con un grupo arilalcoxicarbonilo, en particular benciloxicarbonilo.
- 3. El compuesto de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, donde Arepresenta un grupo -C(O)-R5 en el que R5 es un grupo 2,2-dimetil-1,3-dioxolano.51015202530354045505560
- 4. El compuesto de formula (I) de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, donde B representa un grupo acilo en el que el grupo alquilo es C1-C6, en particular acetilo, o un grupo alcoxicarbonilo en el que el grupo alquilo es C1-C6, en particular un grupo ferc-butoxicarbonilo.
- 5. El compuesto de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado por que se selecciona entre los siguientes compuestos:- 2-(2-(((benciloxi)carbonil)amino)-acetamido)propanoato de 7-((ferc-butoxicarbonil)oxi)-10,13-dimetil-17-(6- metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo (molecula 1 .a);- 2-(2-(((benciloxi)carbonil)amino)-acetamido)propanoato de 7-acetoxi-10,13-dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)-
- 2.3.4.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo (molecula 1.b);- 2,2-dimeti l-1,3-dioxolano-4-carboxlato de 7-((terc-butoxicarbonil)oxi)-10,13-dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)-
- 2.3.4.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo (molecula 2.a);- 2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxilato de 7-acetoxi-10,13-dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)-
- 2.3.4.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]-fenantren-3-ilo (molecula 2.b).
- 6. Metodo para la preparacion de un compuesto de formula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que comprende las siguientes etapas:- proteccion de la funcion hidroxilo en la posicion 3 del colesterol con un grupo protector,- introduccion de una funcion cetona en la posicion 7,- reduccion de la funcion cetona en una funcion hidroxilo,- introduccion de un grupo protector en la funcion hidroxilo en la posicion 7, correspondiente al grupo B, y- desproteccion de la funcion hidroxlo en la posicion 3,
- 7. Metodo de acuerdo con la reivindicacion 6, caracterizado por que, despues de la desproteccion, la funcion hidroxilo en la posicion 3 puede estar sustituida con el grupo A deseado.
- 8. Com posicion farmaceutica que comprende al menos un compuesto de formula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.
- 9. Composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 8, caracterizado por que dicho compuesto de formula (I) se usa como el unico principio activo, o junto con un agente anticanceroso.
- 10. Composicion farmaceutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 o 9, caracterizado por que consiste en un liposoma o una solucion de alcohol de al menos un compuesto de formula (I), en solitario o en una mezcla con otro principio activo.
- 11. El compuesto de formula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en el tratamiento de enfermedades que implican celulas astrocfticas transformadas.
- 12. El compuesto de formula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en el tratamiento de glioblastoma multiforme.
- 13. El compuesto de formula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en el tratamiento de enfermedades que implican celulas astrocfticas transformadas, siendo dicho tratamiento un tratamiento secuencial que comprende al menos una etapa de administracion de un primer compuesto de formula (I), y al menos una etapa de administracion de un segundo compuesto de formula (I), diferente del primero.
- 14. El compuesto de formula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en el tratamiento de glioblastoma multiforme, siendo dicho tratamiento un tratamiento secuencial que comprende al menos una etapa de administracion de un primer compuesto de formula (I), y al menos una etapa de administracion de un segundo compuesto de formula (I), diferente del primero.
- 15. Composicion farmaceutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizado por que dicho compuesto de formula (I) es 2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxilato de 7-acetoxi-10,13- dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1 H-ciclopenta[a]-fenantren-3-ilo5 (molecula 2.b).
- 16. El compuesto de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 5, para su uso de acuerdo con lareivindicacion 14, caracterizado por que el primer compuesto de formula (I) es 2-(2-(((benciloxi)carbonil)amino)- acetamido)propanoato de 7-((terc-butoxicarbonil)oxil)-10,13-dimetil-17-(6-metilheptan-2-il)-10 2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo (molecula 1.a) y el segundo compuesto de formula (I) es 2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxilato de 7-((terc-butoxcarbonil)oxi)-10,13-dimetil-17- (6-metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1 H-ciclopenta[a]fenantren-3-ilo (molecula 2.a).
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP12305518.8A EP2662382B1 (fr) | 2012-05-10 | 2012-05-10 | Dérivés de stérol, leur procédé de préparation, les compositions pharmaceutiques les contenant et leur utilisation pour le traitement du glioblastome multiple |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2580331T3 true ES2580331T3 (es) | 2016-08-23 |
Family
ID=46149353
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES12305518.8T Active ES2580331T3 (es) | 2012-05-10 | 2012-05-10 | Derivados de esterol, método para preparar los mismos, composiciones farmacéuticas que contienen los mismos y uso de los mismos para el tratamiento de glioblastomas múltiples |
| ES13729470.8T Active ES2662123T3 (es) | 2012-05-10 | 2013-05-07 | Derivados de esterol y uso de los mismos para tratar enfermedades que implican células astrocíticas transformadas o para el tratamiento de hemopatías malignas |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES13729470.8T Active ES2662123T3 (es) | 2012-05-10 | 2013-05-07 | Derivados de esterol y uso de los mismos para tratar enfermedades que implican células astrocíticas transformadas o para el tratamiento de hemopatías malignas |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10800806B2 (es) |
| EP (2) | EP2662382B1 (es) |
| JP (1) | JP6270823B2 (es) |
| KR (1) | KR102160316B1 (es) |
| CN (1) | CN104302655B (es) |
| BR (1) | BR112014026948B1 (es) |
| CA (1) | CA2871714C (es) |
| CY (2) | CY1117723T1 (es) |
| DK (2) | DK2662382T3 (es) |
| ES (2) | ES2580331T3 (es) |
| HR (2) | HRP20180345T1 (es) |
| HU (2) | HUE029243T2 (es) |
| IN (1) | IN2014DN09437A (es) |
| LT (1) | LT2847204T (es) |
| ME (1) | ME02436B (es) |
| PL (2) | PL2662382T3 (es) |
| PT (2) | PT2662382T (es) |
| RS (2) | RS54926B1 (es) |
| RU (1) | RU2627710C2 (es) |
| SI (2) | SI2662382T1 (es) |
| SM (2) | SMT201800147T1 (es) |
| TR (1) | TR201802700T4 (es) |
| WO (1) | WO2013168096A1 (es) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR3013048A1 (fr) * | 2013-11-12 | 2015-05-15 | Beta Innov | Derive de sterol, son procede de preparation, composition pharmaceutique le contenant et son utilisation pour le traitement du glioblastome multiforme |
| EP3593789A1 (fr) * | 2018-07-11 | 2020-01-15 | Beta Innov | Composition contenant un dérivé de 7beta-hydroxycholestérol et un véhicule lipidique, et son utilisation dans le traitement de pathologies néoplasiques |
| WO2022245122A1 (ko) * | 2021-05-18 | 2022-11-24 | 연세대학교 산학협력단 | 암의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
| KR102689231B1 (ko) * | 2021-05-18 | 2024-07-30 | 연세대학교 산학협력단 | 암의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
| WO2024030660A2 (en) * | 2022-08-04 | 2024-02-08 | University Of Massachusetts | Cholesterol-modified hyaluronic acids |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE9602100D0 (sv) * | 1996-05-30 | 1996-05-30 | Magnus Axelson | New pharmaceuticals |
| EP1556406A1 (en) * | 2002-09-25 | 2005-07-27 | Forbes Medi-Tech Inc. | Derivatives comprising sterols and/or stanols and specific classes of anti-inflammatory agents and use thereof in treating or preventing cardiovascular disease |
-
2012
- 2012-05-10 SI SI201230585A patent/SI2662382T1/sl unknown
- 2012-05-10 HU HUE12305518A patent/HUE029243T2/en unknown
- 2012-05-10 DK DK12305518.8T patent/DK2662382T3/en active
- 2012-05-10 ES ES12305518.8T patent/ES2580331T3/es active Active
- 2012-05-10 RS RS20160499A patent/RS54926B1/sr unknown
- 2012-05-10 ME MEP-2016-134A patent/ME02436B/me unknown
- 2012-05-10 EP EP12305518.8A patent/EP2662382B1/fr active Active
- 2012-05-10 PL PL12305518.8T patent/PL2662382T3/pl unknown
- 2012-05-10 PT PT123055188T patent/PT2662382T/pt unknown
-
2013
- 2013-05-07 HR HRP20180345TT patent/HRP20180345T1/hr unknown
- 2013-05-07 JP JP2015510925A patent/JP6270823B2/ja active Active
- 2013-05-07 BR BR112014026948-3A patent/BR112014026948B1/pt active IP Right Grant
- 2013-05-07 SM SM20180147T patent/SMT201800147T1/it unknown
- 2013-05-07 KR KR1020147034290A patent/KR102160316B1/ko active Active
- 2013-05-07 PT PT137294708T patent/PT2847204T/pt unknown
- 2013-05-07 HU HUE13729470A patent/HUE037004T2/hu unknown
- 2013-05-07 RS RS20180237A patent/RS57065B1/sr unknown
- 2013-05-07 CA CA2871714A patent/CA2871714C/en active Active
- 2013-05-07 IN IN9437DEN2014 patent/IN2014DN09437A/en unknown
- 2013-05-07 LT LTEP13729470.8T patent/LT2847204T/lt unknown
- 2013-05-07 EP EP13729470.8A patent/EP2847204B1/en active Active
- 2013-05-07 RU RU2014149705A patent/RU2627710C2/ru active
- 2013-05-07 PL PL13729470T patent/PL2847204T3/pl unknown
- 2013-05-07 DK DK13729470.8T patent/DK2847204T3/en active
- 2013-05-07 WO PCT/IB2013/053669 patent/WO2013168096A1/en active Application Filing
- 2013-05-07 CN CN201380023824.4A patent/CN104302655B/zh active Active
- 2013-05-07 TR TR2018/02700T patent/TR201802700T4/tr unknown
- 2013-05-07 SI SI201330962T patent/SI2847204T1/en unknown
- 2013-05-07 US US14/399,336 patent/US10800806B2/en active Active
- 2013-05-07 ES ES13729470.8T patent/ES2662123T3/es active Active
-
2016
- 2016-06-07 HR HRP20160624TT patent/HRP20160624T1/hr unknown
- 2016-07-05 CY CY20161100621T patent/CY1117723T1/el unknown
- 2016-07-05 SM SM201600215T patent/SMT201600215B/it unknown
-
2018
- 2018-03-13 CY CY20181100306T patent/CY1120395T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI850613B (zh) | 脂質化合物、其組合物、其藥物組合物、製備脂質奈米顆粒的方法及其用途 | |
| CA2910133C (en) | Modified drugs for use in liposomal nanoparticles | |
| ES2580331T3 (es) | Derivados de esterol, método para preparar los mismos, composiciones farmacéuticas que contienen los mismos y uso de los mismos para el tratamiento de glioblastomas múltiples | |
| ES2529060T3 (es) | Derivados antioxidantes de la camptotecina y nanoesferas antineoplásicas antioxidantes de los mismos | |
| ES3025192T3 (en) | Crystal form of lanosterol prodrug compound and application thereof | |
| CA2945404A1 (en) | Bone-selective osteogenic oxysterol bisphosphonate analogs | |
| EA004459B1 (ru) | Сложные эфиры l-карнитина или алканоил l-карнитинов, полезные в качестве катионных липидов для внутриклеточной доставки фармакологически активных соединений | |
| Zhu et al. | Synthesis and evaluation of new 5-aminolevulinic acid derivatives as prodrugs of protoporphyrin for photodynamic therapy | |
| ES2225214T3 (es) | Nuevos compuestos de xantona, su preparacion y uso como medicamento. | |
| WO2024187158A1 (en) | Benzaldehyde acetal acid-degradable amphiphilic lipid and self-assembling peptides | |
| CN103127522B (zh) | 一种脂肪酸-姜黄素衍生物的缀合物及其应用 | |
| CN113786386B (zh) | Ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体及其制备方法和应用 | |
| US20160060288A1 (en) | Ester derivatives of 7-alpha-[9-(4,4,5,5,5-pentafluoropentylsulfinyl)nonyl)-estra-1,3,5(10)-triene-3,17beta-diol having anticancer activity and preparation method thereof | |
| ES3023858T3 (en) | Pharmaceutical products based on cannabinoid acid esters | |
| RU2440998C1 (ru) | Производные 4-арилкумаринов и противоопухолевое лекарственное средство на их основе | |
| JP2014510734A (ja) | Ｄ−ガンマ−グルタミル−ｄ−トリプトファンおよびｄ−ガンマ−グルタミル−ｌ−トリプトファンのプロドラッグ | |
| US20170252442A1 (en) | Photohexer compounds and pharmaceutical composition and use thereof | |
| HK1191654B (en) | Sterol derivatives, method for preparing same, pharmaceutical compositions containing same and use thereof for the treatment of multiple glioblastomas | |
| AU2023359279A1 (en) | Amino lipid compound and lipid nanoparticle for delivering bioactive ingredient | |
| CN119912351A (zh) | 脂质化合物及其组合物 | |
| HK1207385B (en) | Sterol derivatives and use thereof for treating diseases involving transformed astrocyte cells or for treating malignant haemopathies | |
| JPH03106896A (ja) | ３０位置換グリチルリチン誘導体及びそれを膜形成成分とするリポソーム製剤 | |
| HK1240574B (zh) | 光己醚化合物及其藥物組合物和用途 |