ES2564144T3

ES2564144T3 - Derivados de 6-[2-(fosfonometoxi)alcoxi] pirimidina que tienen actividad antivírica

Info

Publication number: ES2564144T3
Application number: ES02740215.5T
Authority: ES
Inventors: Antonin Holy; Jan M.R. Balzarini; Erik Desire Alice De Clercq
Original assignee: Stichting Rega VZW; Institute of Organic Chemistry and Biochemistry CAS
Current assignee: Stichting Rega VZW; Institute of Organic Chemistry and Biochemistry CAS
Priority date: 2001-06-29
Filing date: 2002-06-28
Publication date: 2016-03-18
Anticipated expiration: 2022-06-28
Also published as: PL207187B1; CA2452036C; AU2002315625B2; HU230519B1; AP1622A; CN1533397A; NO20035797L; KR100891366B1; EP1406911B1; HUP0400345A2; NO333788B1; CN1329404C; BR0210746A; NZ530685A; IL159494A0; US6818633B2; EA200400117A1; BRPI0210746B8; CZ297267B6; HUP0400345A3

Abstract

Un compuesto de la fórmula (I)**Fórmula** en la que R1 es H, amino o metilsulfanilo; R2 es H, metilo, halo, -N(R5)2, hidroxi, hidroxi protegido o un grupo de la fórmula (Ia)**Fórmula** R3 es independientemente H, metilo, hidroximetilo, halometilo o hidroximetilo protegido; R4 es H o halo; X es independientemente oxígeno, azufre o un enlace; Z es independientemente hidroxi, un éster o una amida; R5 es independientemente H, alquilo C1-C8 o un grupo protector; y * designa un átomo de carbono quiral; y sales y solvatos del mismo.

Description

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Los compuestos de esta invención también son útiles como reticuladores o separadores en la preparación de matrices de absorción de afinidad (en lugar de funcionar como restos de afinidad per se como se aprecia en los párrafos anteriores). Los compuestos en el presente documento contienen múltiples grupos funcionales que son adecuados como sitios para reticular sustancias deseadas. Es convencional unir reactivos de afinidad, tales como

5 hormonas, péptidos, anticuerpos, encimas, fármacos, y similares, a sustratos insolubles. Estos reactivos insolubilizados se emplean de forma conocida para absorber sustancias de preparaciones fabricadas, muestras de diagnósticos y otras mezclas impuras. De forma análoga, se usan enzimas inmovilizadas para realizar conversiones catalíticas con una fácil separación de la enzima del producto.

En algunas realizaciones, no es necesario que los compuestos de esta invención se reticulen en materiales insolubles. Por ejemplo, pueden usarse para unir analitos a grupos detectables en la preparación de reactivos de diagnóstico solubles.

Se conocen bien en la técnica métodos para la reticulación usando los grupos de sustituyentes que se encuentran

15 en los compuestos de esta invención. Por ejemplo, el ácido fosfónico se usa para formar ésteres con alcoholes o amidas con aminas. De forma análoga, son adecuados el sitio amino, halo, hidroxi u otros sitios reactivos que se encuentran en la pirimidina. Por supuesto, la protección de grupos reactivos se usará cuando sea necesario al ensamblar el reactivo reticulado. En general, los compuestos de la invención se usan uniéndolos a través de ácido fosfónico a los grupos hidroxi o amino del compañero de unión, y se unen covalentemente a otro compañero de unión a través de otro sustituyente del compuesto de esta invención. Por ejemplo, un primer compañero de unión, tal como una hormona esteroide, se esterifica en el ácido fosfónico de esta invención y después este conjugado se reticula a través de R3 hidroximetilo en Sepharose activada por bromuro de cianogeno, obteniendo así el esteroide inmovilizado. Se conocen bien otras reacciones químicas para la conjugación. Véase, por ejemplo Maggio, "EnzymeImmunoassay" (CRC, 1988, págs. 71135) y las referencias citadas en ese documento.

25 Formulaciones farmacéuticas

Los compuestos de esta invención y sus sales y solvatos fisiológicamente aceptables (a partir de ahora en este documento mencionados colectivamente como los ingredientes activos) se formulan para administración por cualquier vía apropiada para la afección a tratarse. Los compuestos y formulaciones preferiblemente serán estériles.

Los ingredientes activos se colocan en formulaciones farmacéuticas. Las formulaciones, para uso tanto veterinario como humano, comprenden al menos un ingrediente activo, como se ha definido anteriormente, junto con uno o más vehículos aceptables para el mismo y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. El vehículo o vehículos deben

35 ser "aceptable" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no perjudiciales para el destinatario.

Las formulaciones se presentan convenientemente en forma monodosis y pueden prepararse por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociación de forma uniforme e íntima el ingrediente activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y después, si fuera necesario, dando forma al producto.

Las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral pueden presentarse en forma de unidades concretas tales como cápsulas, sobrecitos o comprimidos que contienen, cada uno, una cantidad

45 predeterminada del ingrediente activo; en forma de un polvo o gránulos; en forma de solución o una suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; o en forma de una emulsión líquida de aceiteenagua o una emulsión líquida de aguaenaceite. El ingrediente activo también puede presentarse en forma de bolo, electuario o pasta.

Para infecciones externas del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo, la boca y la piel, las formulaciones se aplican preferiblemente en forma de una pomada o crema tópica que contiene el ingrediente o ingredientes activos en una cantidad de, por ejemplo, el 0,075 al 20 % p/p (incluyendo el ingrediente o ingredientes activos en un intervalo entre el 0,1 % y el 20 % en incrementos del 0,1 % p/p tales como del 0,6 % p/p, 0,7 % p/p, etc.), normalmente del 0,2 al 15 % p/p y más normalmente del 0,5 al 10 % p/p. Cuando se formulan en una pomada, los ingredientes activos pueden emplearse con una base de pomada parafínica o miscible en agua. Como alternativa, los ingredientes activos

55 pueden formularse en una crema con una base de crema de aceiteenagua.

Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir, por ejemplo, al menos el 30 % p/p de un alcohol polihídrico, es decir un alcohol que tiene dos o más grupos hidroxi tales como propilenglicol, butano 1,3diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol (incluyendo PEG 400) y mezclas de los mismos. Las formulaciones tópicas pueden incluir de forma deseable un compuesto que potencia la absorción o penetración del ingrediente activo a través de la piel u otras áreas afectadas. Ejemplos de dichos potenciadores de la penetración dérmica incluyen dimetilsulfóxido y análogos relacionados.

La fase oleosa de las emulsiones de esta invención puede constituirse a partir de ingredientes conocidos de un

65 modo conocido. Esta fase puede comprender un emulsionante en solitario, o una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o tanto con una grasa como con un aceite. Preferiblemente, se incluye un

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calculado 31,83 % de C, 4,96 % de H, 21,21 % de N, 11,72 % de P; observado 31,52 % de C, 5,04 % de H, 20,96 % de N, 11,53 % de P. Espectro UV [λmáx (εmáx)] (pH 2): 276 (9100), (pH 7): 265 (7500). Estos datos confirman el espectro UV publicado para 2,4diamino6metoxipirimidina ((λmáx 263 y 275, resp.). 1H RMN (CD3SOCD3, 40 ºC): 3,58 d,2 H, J(CH2,P) = 8,7 (CH2P); 3,74 t, 2 H, J(2',1') = 4,9 (H2'); 4,23 t, 2 H,J(1',2') = 4,9 (H1'); 5,07 s, 1 H (H5);

5 5,86sa,2Hy 6,01sa,2H(2xNH2). 1H RMN (D2O): 3,69 d, 2H, J(CH2,P) = 8,7 (CH2P); 3,91 m, 2H (H2'); 4,30 m, 2 H (H1'); 5,45 s, 1 H (H5). 13C RMN (D2O): 69,30 (C1'); 70,28 d, J(CH2P) = 151,3 (CH2P); 73,35 d, J(2',P) = 10,3 (C2'); 79,63 (C5); 165,46, 169,35 y 171,08 (C2, C4 y C6). La posición de campo bajo de señal de carbono C1' en los isómeros O (diéster y fosfonato libre) (δ 63,65 y 69,30, respectivamente) indica que el grupo PME está unido al átomo de oxígeno en C6.

10 La elución adicional de la columna sobre gel de sílice con cloroformo dio 1,8 g (26 %) de 2,4diamino1[2(diisopropilfosfonilmetoxi)etil]pirimidina6(1H)ona amorfa (FR 0,35, S1) que se secó al vacío sobre P2O5. P.f. 196197 ºC. El residuo (5,17 mmol) se trató con bromotrimetilsilano (6 ml) en acetonitrilo (60 ml) durante una noche y se trató como se describe para el isómero O. La purificación de la mezcla desalada sobre columna Dowex 1 (elución

15 con agua) dio un producto que se cristalizó en agua para proporcionar 0,95 g (65 %) de 2,4diamino1[2(fosfonometoxi)etil]pirimidina(1H)ona, p.f. 228 ºC (agua). EUp 0,90. Para C7H13N4O5P.H2O (282,2) calculado 29,79 % de C, 5,36 % de H, 19,85 % de N, 10,98 % de P; observado 29,76 % de C, 5,22 % de H, 20,01 % de N, 10,92 % de P. Espectro de masas: 349,2 (MH+)(100); 265,1(MH+2x iPr)(35); 126 (BH+) (26). Espectro UV [λmáx (εmáx)] (pH 2): 264 (18000), (pH 7): 267 (12200). El valor λmáx coincide con el valor publicado para 2,4diamino1

20 metilpirimidina6(1H)ona (268 nm). 1H RMN (CD3SOCD3): 3,59 d, 2 H, J(CH2,P) = 8,4 (CH2P); 3,60 t, 2 H, J(2',1') = 6,1 (H2'); 3,96 t, 2 H, J(1',2') = 6,1 (H1'); 4,61 s, 1 H (H5); 5,88 s a, 2 H y 6,61 s a, 2 H (2 x NH2).1H RMN (D2O): 3,48 d,2 H, J(CH2,P) = 8,4 (CH2P); 3,76 t, 2 H, J(1',2') = 5,2 (H1'); 4,09 t, 2H, J(2',1') = 5,2 (H2'); 5,06 s, 1 H (H5). 13C RMN (D2O): 45,15 (C1'); 70,41 d, J(CH2P) = 154,7 (CH2P); 74,09 d, J(2',P) = 11,8 (C2'); 81,05 (C5); 159,73, 166,79 y 168,04 (C2, C4 y C6). La posición de campo alto de C1' (δ 45,15) indica Nsustitución. Dos señales de

25 grupos NH2 (δ 6,61 y 5,88) que se observan en el espectro 1H RMN en DMSO excluyen la sustitución en las posiciones exo 2NH2 y/o 4NH2 y concuerda con la sustitución esperada en N(1).

Ejemplo 2

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evaporación al vacío, el residuo se trató con agua (100 ml). Después de 10 min, a la reacción alcalina se le añadió amoniaco acuoso conc. y la mezcla se evaporó. El residuo se desionizó en una columna (100 ml) de Dowex 50 x 8 y el eluato de amoniaco de absorción UV se evaporó a sequedad. Este producto en agua (20 ml) se hizo alcalino mediante amoniaco acuoso conc. y se aplicó en una columna (150 ml) Dowex 1 x 2 (forma acetato) prelavada con 5 agua. La elución con agua seguida de gradiente lineal de ácido acético (00,4 M, 1 l cada vez) dio la fracción de absorción UV principal que se evaporó, el residuo se codestiló con agua (3 x 50 ml) y el residuo se cristalizó en agua. Rendimiento, 1,1 g 2amino4dimetilamino6[2(fosfonometoxi)etoxi]pirimidina, p.f. 168 ºC. Para C9H17N4O5P (292,23) calculado 36,99 % de C, 5,86 % de H, 19,17 % de N, 10,60 % de P; observado 37,05 % de C, 5,80 % de H, 18,98 % de N, 10,51 % de P. 1H RMN (DMSO): 6,69 s a, 2H (NH2); 4,69 s, 1H (H5); 3,98 t, J = 6,0 Hz, 2H (2xH1');

10 3,61 t, J = 6,0 Hz, 2H (2xH2'); 3,59 d, 2H, J(H,P) = 8,3 Hz (PCH2); 2,89 s, 6H (N(CH3)2). 13C RMN (DMSO): 162,37, 161,94 y 154,67 (C2, C4 y C6); 75,79 (C5); 69,82 d, J(C,P) = 10,3 Hz (C2'); 66,76 d, J(C,P) = 158,7 Hz (PCH2); ~40,0 (C1', solapado con DMSO); 36,93 (N(CH3)2).

La elución adicional de la columna sobre gel de sílice con gradiente de cloroformoetanol proporcionó 2amino4

15 dimetilamino1[2(diisopropilfosfonilmetoxi)etil]pirimidin6(1H)ona en forma de un aceite pegajoso (2,0 g) que se trató con bromotrimetilsilano (5 ml) y acetonitrilo (50 ml) durante una noche y se trató de forma similar. Después de la cromatografía en Dowex 1, el producto dio en cristalización en agua 2amino4dimetilamino1[2(fosfonometoxi)etil]pirimidin6(1H)ona, p.f. 235 ºC. Para C9H17N4O5P (292,23) calculado 36,99 % de C, 5,86 % de H, 19,17 % de N, 10,60 % de P; observado 37,15 % de C, 5,92 % de H, 19,28 % de N, 10,66 % de P. 1H RMN (DMSO):

20 6,03sa,2H(NH2); 5,20 s, 1H (H5); 4,26 m, 2H (2xH1'); 3,74 m, 2H (2xH2'); 3,58 d, 2H, J(H,P) = 8,8 Hz (PCH2); 2,93 s, 6H (N(CH3)2). 13C RMN (DMSO): 169,93, 164,91 y 161,92 (C2, C4 y C6); 75,02 (C5); 70,89 d, J(C,P) = 11,4 Hz (C2'); 66,96 d, J(C,P) = 160,7 Hz (PCH2); 64,28 (C1'); 36,95 (N(CH3)2).

Ejemplo 7

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2Amino4ciclopropilamino6[2(fosfonometoxi)etoxi]pirimidina y 2Amino4ciclopropilamino1[2(fosfonometoxi)etil]pirimidin6(1H)ona

Se calentó 2amino4cloro6hidroxipirimidina monohidrato (5,0 g) a reflujo en etanol (150 ml) con ciclopropilamina durante 12 h. La mezcla se evaporó al vacío, se codestiló con etanol (3 x 50 ml), se adsorbió en metanol sobre gel de sílice y se aplicó sobre una columna de gel de sílice (200 ml) en cloroformo. La elución con gradiente de cloroformoetanol proporcionó un producto cristalino que se filtró del éter y se secó al vacío para proporcionar 2

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C10H19N3O10P2 (403,22) calculado 29,79 % de C, 4,75 % de H, 10,42 % de N, 15,36 % de P; observado 29,90 % de C, 4,87 % de H, 10,24 % de N, 15,64 % de P.

Ejemplo 11

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(a) 2,4Diamino6[2(fosfonometoxi)etoxi]pirimidina

10 Se añadió con precaución en porciones hidruro sódico (suspensión al 60 % en aceite de parafina) (2,4 g, 60 mmol) a etilenglicol destilado de nuevo (50 ml) en exclusión de humedad hasta su disolución. Después, se añadió en una porción 2,4diamino6cloropirimidina (2,89 g, 20 mmol) y la mezcla se agitó durante 6 h a 80 ºC. La mezcla de reacción se enfrió, se diluyó con agua (200 ml) y se pasó a través de una columna (200 ml) de Dowex 50 x 8 en ciclo de ácido. La columna se lavó con agua (1 l) y la resina se suspendió en agua (300 ml). Esta suspensión se hizo

15 alcalina con amoniaco acuoso conc., se filtró y la resina se lavó con agua en ebullición (1 l). Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad y el residuo se cristalizó en agua para proporcionar 2,4diamino6(2hidroxietoxi)pirimidina, p.f. 190 ºC. Rendimiento, 2,3 g (79,4 %). Para C6H10N4O2 (170,18) calculado 42,34 % de C, 5,92 % de H, 30,37 % de N; observado 42,09 % de C, 5,89 % de H, 30,63 % de N. Espectro de masas: 171,3 (MH+). 1H RMN (CD3SOCD3): 3,67 c a, 2H, J(CH2,CH2)�J(CH2,OH) =4,8 (O-CH2); 4,10 t, 2H, J(CH2,CH2) = 5,0 (O-CH2);

20 4,79 t, 1H, J(OH,CH2) = 4,5 (OH); 5,05 s, 1H (H-5); 5,89 s a, 2H y 6,01 s a, 2H (NH2).

Este compuesto (4,25 g, 25 mmol) y p-toluenosulfoniloximetilfosfonato de diisopropilo (8,75 g, 25 mmol) en DMF (50 ml) se trató con NaH al 60 % (3,5 g, 3,5 equivalentes). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 días y se añadió gota a gota ácido acético (4 ml). El disolvente se retiró por destilación al vacío y el residuo se 25 extrajo con cloroformo. El producto de reacción se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar, después de la cristalización en acetato de etilo-éter de petróleo, 2,4-diamino-6-[2(diisopropilfosfonilmetoxi)etoxi]pirimidina, p.f. 159 ºC. Rendimiento, 6,45 g (74 %). Para C13H25N4O5P (348,3) calculado 44,83 % de C, 7,23 % de H, 16,08 % de N, 8,89 % de P; observado 44,86 % de C, 7,15 % de H, 16,21 % de N, 9,05 % de P. Espectro de masas: 349,3 (MH+). El espectro 1H RMN (CD3SOCD3) es idéntico al descrito en el

30 Ejemplo 1.

La conversión de este compuesto en 2,4-diamino-6-[2-(fosfonometoxi)etoxi]pirimidina se realizó básicamente como se ha descrito en el Ejemplo 1 y proporcionó un compuesto idéntico con este material auténtico de acuerdo con la RMN y los espectros de masas.

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(b) 2,4Diamino6[2(fosfonometoxi)etoxi]pirimidina

La reacción se realizó básicamente como se describe en el punto (a), excepto que se reemplazó NaH por la misma cantidad molar de terc-butóxido potásico. El rendimiento de 2,4-diamino-6-(2-hidroxietoxi)pirimidina fue del 81 %. El

40 procedimiento adicional permaneció inalterado.

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Ejemplo 15

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5 2,4Diamino5bromo6[2(fosfonometoxi)etoxi]pirimidina

Se agitó 2,4-diamino-6-[2-(diisopropilfosfonilmetoxi)etoxi]pirimidina (4,3 g, 12,3 mmol) en DMF (40 ml) con solución de bromo en CCl4 (0,3 M, 50 ml) durante 3 h a temperatura ambiente, se hizo alcalina con trietilamina y se evaporó. El producto en bruto se purificó sobre columna de gel de sílice (150 ml) en el sistema cloroformo-etanol y se 10 cristalizó en acetato de etilo-éter de petróleo. Rendimiento, 3,9 g (11,9 mmol) del diéster que se trató con bromotrimetilsilano (20 ml) en acetonitrilo (50 ml) durante una noche, se evaporó al vacío y se descompuso por amoniaco-agua. Después de la desionización sobre Dowex 50 (columna de 100 ml), el residuo del eluato de amoniaco se purificó por columna Dowex 1 x 2 (100 ml) cromatografía con un gradiente de ácido acético (0-0,5 M, 1 l cada vez). La fracción principal se evaporó y se cristalizó en agua para proporcionar 3,1 g (84 %) del compuesto

15 del título, p.f. 218 ºC. Para C7H12BrN4O5P (343,07) calculado 24,51 % de C, 3,53 % de H, 23,29 % de Br, 16,33 % de N, 9,03 % de P; observado 24,56 % de C, 3,55 % de H, 23,51 % de Br, 16,07 % de N, 8,89 % de P.

Esta reacción se repite con 2-amino-6-[2-diisopropilfosfonilmetoxi)etoxi]-4-hidroxipirimidina para proporcionar el análogo 5-halógeno.

20 Ejemplo 16

Las actividades antivirales de los compuestos de este documento se determinaron de acuerdo con los procedimientos generales descritos en J. Balzarini, et al. "9-(2-phosphonylmethoxyethyl)adenine (PMEA) effectively

25 inhibits retrovirus replication in vitro and simian immunodeficiency virus infection in rhesus monkeys" AIDS 5:21-28, 1991 y J. Balzarini, et al. "Differential antiherpesvirus and antiretrovirus effects of the (S) and (R) enantiomers of acyclic nucleoside phosphonates: potent and selective in vitro and in vivo antiretrovirus activities of (R)-9-(2phosphonomethoxypropyl)-2,6-diaminopurine" Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 37:332-338, 1993.

30 Los resultados se muestran en la Tabla 1a, en la que se indica la mayor potencia por valores absolutos más bajos.

Ejemplo 17

Virus. Los orígenes de VSM, VIH tipo 1 (VIH-1) (cepa IIIB y Ba-L), VIH-2 (cepa ROD) y VIF (cepa Petaluma) se han

35 descrito previamente (Balzarini et al., AIDS 5: 21-28, 1991; De Clercq et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 137:590-594, 1971; Egberink et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 87:3087-3091, 1990; Hartmann et al., Antiviral Chem. Chemother. 5:1319, 1994; Popovic et al., Science 224:497-500, 1984). Se obtuvieron soluciones madre de VIH-1(IIIB) y VIH-2(ROD)

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