ES2552627T3 - Métodos y reactivos para la detección mejorada de péptidos beta amiloides - Google Patents

Métodos y reactivos para la detección mejorada de péptidos beta amiloides Download PDF

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Abstract

Método para el diagnóstico en un sujeto de una enfermedad neurodegenerativa, para la detección de una etapa anterior de una enfermedad neurodegenerativa o para la distinción una enfermedad neurodegenerativa de una etapa anterior a dicha enfermedad neurodegenerativa, que comprende las etapas de (i) determinar uno o más parámetros seleccionados del grupo de (a) el nivel de uno o más péptidos beta amiloides libres en una muestra biológica de dicho sujeto, (b) los niveles agregados de uno o más péptidos amiloides libres en una muestra biológica de dicho sujeto y de dichos uno o más péptidos beta amiloides asociados a los componentes macromoleculares presentes en dicha muestra biológica, en el que dichos niveles agregados se determinan mediante la cuantificación de la cantidad de dichos uno o más péptidos beta amiloides en la fracción libre de células de dicha muestra después de poner en contacto dicha muestra con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para promover la disociación del péptido o péptidos beta amiloides de los componentes presentes en la muestra biológica, (c) el nivel de uno o más péptidos beta amiloides asociados a las células en una muestra biológica de dicho sujeto, en el que dicho nivel se determina mediante el aislamiento de la fracción de células de dicha muestra biológica, el contacto de dicha fracción celular de dicha muestra con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para promover la disociación del péptido o péptidos beta amiloides de las células presentes en la muestra y (ii) comparar el valor de, como mínimo, uno de los parámetros (b) o (c) o el valor de un parámetro calculado resultante de combinar aritméticamente, como mínimo, dos de los parámetros (a) a (c) con un valor de referencia correspondiente al valor de dichos parámetros (b) o (c), o dicho parámetro calculado en una muestra de referencia y (iii) diagnosticar la enfermedad neurodegenerativa, detectar una etapa anterior a una enfermedad neurodegenerativa o distinguir una enfermedad neurodegenerativa de una etapa anterior a dicha enfermedad neurodegenerativa cuando hay una alteración en el valor del parámetro o en el valor del parámetro calculado con respecto al valor de referencia, en el que la muestra biológica es plasma o sangre y en el que los parámetros determinados en la etapa (i) son uno o más de los parámetros seleccionados del grupo (a) 1ab40, correspondiente al nivel de péptido ABETA40 libre en una muestra biológica de dicho sujeto, (b) 1ab42, correspondiente al nivel de péptido ABETA42 libre en una muestra biológica de dicho sujeto, (c) 2ab40, correspondientes a los niveles agregados de péptido ABETA40 libre en una muestra biológica de dicho sujeto y de péptido ABETA40 asociado a los componentes de dicha muestra biológica, en el que 2ab40 se determina mediante la cuantificación de la cantidad de péptido ABETA40 en dicha muestra después de poner en contacto dicha muestra con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para promover la disociación del péptido ABETA40 de los componentes presentes en la muestra biológica, (d) 2ab42, correspondiente al nivel agregado de péptido ABETA42 libre en una muestra biológica de dicho sujeto y de péptido ABETA42 asociado a los componentes de dicha muestra biológica, en el que 2ab42 se determina mediante la cuantificación de la cantidad de péptido ABETA42 en dicha muestra después de poner en contacto dicha muestra con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para promover la disociación del péptido ABETA42 de los componentes presentes en la muestra biológica, (e) 3ab40, correspondiente al nivel del péptido ABETA40 asociado a las células en una muestra biológica de dicho sujeto, en el que 3ab40 se determina mediante la cuantificación de la cantidad de péptido ABETA40 después de poner en contacto la fracción celular de dicha muestra biológica con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para promover la disociación de los péptidos beta amiloides de las células presentes en la muestra y (f) 3ab42, correspondiente al nivel del péptido ABETA42 asociado a las células en una muestra biológica de dicho sujeto, en el que 3ab42 se determina mediante la cuantificación de la cantidad de péptido ABETA42 después de poner en contacto la fracción celular de dicha muestra biológica con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para promover la disociación de los péptidos beta amiloides de las células presentes en la muestra.

Description

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incapacidad para cuidar de uno mismo, deterioro físico gradual y, en última instancia, la muerte. Los pacientes que sufren la enfermedad de Alzheimer se identifican mediante el criterio NINCDS-ADRDA (CDR = 1, MMSE entre 16 y 24 puntos y atrofia temporal medial (determinada por resonancia magnética) de más de 3 puntos en la escala Scheltens.
5 Tal como se utiliza en la presente memoria descriptiva, el término "etapa anterior a dicha enfermedad neurodegenerativa", se refiere a una situación de transición que se produce entre los individuos normales y las personas que sufren de enfermedades neurodegenerativas y que se caracteriza por la aparición de algunos de los signos y síntomas de las enfermedades neurodegenerativas o por la aparición de un subconjunto de los signos y síntomas observados en los pacientes que sufren la enfermedad neurodegenerativa. En una realización preferente, la etapa anterior a dicha enfermedad neurodegenerativa es el deterioro cognitivo leve (a continuación, DCL), que se refiere a una etapa de transición de deterioro cognitivo entre el envejecimiento normal y la enfermedad de Alzheimer temprana. Generalmente, los pacientes se identifican con DCL, si cumplen los criterios de la Clínica Mayo (CDR = 0,5, que muestran una atrofia temporal medial (determinada por resonancia magnética) que es superior a 3 puntos
15 en la escala Scheltens, muestran un patrón de hipometabolismo parietal y/o temporal en la tomografía por emisión de positrones con 18-fluorodeoxiglucosa (PET-FDG) (sugestivo de EA).
El término "distinguir una enfermedad neurodegenerativa de una etapa anterior a dicha enfermedad neurodegenerativa" se refiere a la capacidad de discriminar entre un paciente que se encuentra en la etapa anterior
o prodrómica de una enfermedad neurodegenerativa de pacientes que ya sufren la enfermedad. En el caso particular de que la enfermedad neurodegenerativa sea la enfermedad de Alzheimer, el método de la presente invención permite la distinción entre la enfermedad de Alzheimer y la fase prodrómica de dicha enfermedad conocida como deterioro cognitivo leve (DCL):
25 En una primera etapa, el método de la presente invención comprende la determinación de, como mínimo, un parámetro seleccionado del grupo de
(a)
el nivel de uno o más péptidos beta amiloides libres en una muestra biológica de dicho sujeto,
(b)
los niveles agregados de o más péptidos amiloides libres en una muestra biológica de dicho sujeto y de dichos uno o más péptidos beta amiloides asociados a los componentes macromoleculares presentes en dicha muestra biológica, en el que dichos niveles agregados se determinan mediante la cuantificación de la cantidad de dichos uno o más péptidos beta amiloides en la fracción libre de células de dicha muestra después de poner en contacto dicha muestra con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para promover la disociación del péptido o péptidos beta amiloides de los componentes
35 presentes en la muestra biológica,
(c) el nivel de uno o más péptidos beta amiloides asociados a las células en una muestra biológica de dicho sujeto, en el que dicho nivel se determina mediante el aislamiento de la fracción de células de dicha muestra biológica, el contacto de dicha fracción celular de dicha muestra con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para promover la disociación del péptido o péptidos beta amiloides de las células presentes en la muestra
en el que la muestra biológica es plasma o sangre, y en el que los parámetros son uno o varios de los parámetros seleccionados del grupo de
45 (a) 1ab40, que corresponde al nivel de péptido ABETA40 libre en una muestra biológica de dicho sujeto,
(b)
1ab42, que corresponde al nivel de péptido ABETA42 libre en una muestra biológica de dicho sujeto,
(c)
2ab40, correspondiente a los niveles agregados del péptido ABETA40 libre en una muestra biológica de dicho sujeto y del péptido ABETA40 asociado a componentes de dicha muestra biológica, en el que 2ab40 es determinado al cuantificar la cantidad de péptido ABETA40 en dicha muestra después de contactar dicha muestra con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para producir la disociación del péptido ABETA40, a partir de los componentes presentes en la muestra biológica,
(d)
2ab42, correspondiente al nivel agregado del péptido ABETA42 libre en una muestra biológica de dicho sujeto y de péptido ABETA42 asociado a componentes de dicha muestra biológica, en el que 2ab42 es determinado al cuantificar la cantidad de péptido ABETA42 en dicha muestra después de contactar dicha
55 muestra con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para producir la disociación del péptido ABETA42 a partir de de los componentes presentes en la muestra biológica,
(e)
3ab40, correspondiente al nivel del péptido ABETA40 asociado a células en una muestra biológica de dicho sujeto, en el que 3ab40 es determinado cuantificando la cantidad de péptido ABETA40 después de contactar la fracción celular de dicha muestra biológica con un agente solubilizante de proteínas en condiciones adecuadas para producir la disociación de los péptidos amiloide beta de las células presentes en la muestra y
(f)
3ab42, correspondiente al nivel del péptido ABETA42 asociado a células en una muestra biológica de dicho sujeto, en el que 3ab42 es determinado cuantificando la cantidad de péptido ABETA42 después de contactar la fracción celular de dicha muestra biológica con un agente solubilizante de proteínas en
65 condiciones adecuadas para producir la disociación de los péptidos amiloide beta de las células presentes en la muestra.
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En la presente memoria descriptiva, el término "péptido beta amiloide" se utiliza de manera intercambiable con "Abeta", "Abeta", "beta AP", "A beta péptido ", o "péptido Aβ" se refiere a una familia de péptidos que son el componente químico principal de la placas seniles y los depósitos amiloides vasculares (angiopatía amiloide) que se encuentran en el cerebro en pacientes de la enfermedad de Alzheimer (EA), Síndrome de Down, y hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis de tipo holandés (HCHWA-D). Los péptidos beta amiloides son fragmentos de proteína precursora de beta-amiloide (APP) que comprende un número variable de aminoácidos, típicamente 38-43 aminoácidos.
Los péptidos beta amiloides se expresan comúnmente como "AβҞen el que x
x-y)" representa el número de aminoácidos del extremo amino del péptido beta amiloide e y representa el número de aminoácidos del extremo carboxílico. Por ejemplo, AβҞ
1-40) es un péptido beta amiloide cuyo amino terminal comenzará en el aminoácido número 1 y el extremo carboxílico terminal en el aminoácido número 40, cuya secuencia está dada por la Sec. No. Id. 1. Los péptidos beta amiloides que se detectan de acuerdo con el método de la presente invención son Aβ(1-40) yAβ(1-42) (Sec. No. Id. 5)
Tal como se utiliza en la presente memoria descriptiva, el término "Aβ(1-42)" se refiere a un péptido de 42 aminoácidos correspondiente a los aminoácidos 672 a 713 (Sec. No. Id. 5) de APP y que se produce por la escisión proteolítica secuencial de la proteína precursora amiloide (Sec. No. Id. 15) por las β-y -secretasas.
Tal como se utiliza en la presente memoria descriptiva, el término " Aβ(1-40)" se refiere a un péptido de 40 aminoácidos correspondiente a los aminoácidos 672 a 711 (Sec. No. Id. 1) y que se produce por la escisión proteolítica secuencial de la proteína precursora amiloide (Sec. No. Id. 15) por las β-y -secretasas.
Tal como se entiende en la presente invención, el término "muestra biológica", incluye (1) fluidos biológicos tales como sangre completa, suero y plasma; y (2) componentes de la sangre, tales como plasma, suero, células sanguíneas, y plaquetas. Los métodos de la presente invención son particularmente adecuados para la medición de Aβ en una muestra de sangre de un animal humano o no humano, tal como sangre completa, plasma, o una muestra que contiene cualquiera de los componentes sanguíneos en cualquier cantidad.
El término "sangre completa" significa la sangre a partir de un humano o animal que contiene tanto componentes celulares como el componente líquido. La sangre completa puede estar en estado coagulado o en un estado no coagulado. "La sangre completa" incluye también una porción en la que la sangre o la totalidad de los componentes celulares, tales como las células blancas de la sangre o células rojas de la sangre, han sido lisados.
El término "plasma" se refiere al componente líquido de la sangre completa. Dependiendo del método de separación utilizado, el plasma puede estar completamente libre de componentes celulares, o pueden contener diversas cantidades de plaquetas y/o pequeñas cantidades de otros componentes celulares.
El término "suero" se refiere al plasma sin la proteína fibrinógena de coagulación y otros factores de coagulación.
Tal como se utiliza en la presente memoria descriptiva, el término "péptido beta amiloide libre", se refiere a péptidos beta amiloides que no están asociados a ningún componente de la muestra biológica y que están disponibles fácilmente para su unión a un anticuerpo específico. Este péptido puede determinarse por técnicas inmunológicas convencionales poniendo en contacto la muestra biológica con un anticuerpo específico para dicho péptido. En una realización preferente, el nivel de péptido amiloide libre se determina en el plasma.
Tal como se utiliza en la presente memoria descriptiva, el término "péptido beta amiloide asociado a componentes macromoleculares", se refiere al péptido beta amiloide que está unido no-covalentemente o enlazado a moléculas que se encuentran en la muestra biológica en estudio. Por lo general, este péptido no es fácilmente accesible para detección inmunológica y, por tanto, requiere de un tratamiento previo de la muestra biológica a fin de lograr la separación del péptido de los componentes. En estas condiciones, el péptido beta amiloide unido a los componentes macromoleculares será liberado de dichos componentes y estará disponible para la detección inmunológica utilizando anticuerpos específicos. Dado que la muestra biológica ya contiene una cierta cantidad de péptido beta amiloide libre, la cantidad total de péptido amiloide libre después de poner en contacto con la muestra el agente de solubilización de proteínas, será el nivel agregado de péptido beta amiloide libre presente originalmente y el nivel de péptido beta amiloide que se ha liberado mediante el tratamiento con el agente solubilizante de proteínas. En caso de que el nivel de péptido beta amiloide asociado a los componentes macromoleculares presentes en la muestra biológica necesite ser determinado, esto se puede hace típicamente determinando el nivel de péptido beta amiloide libre antes del tratamiento con el agente solubilizante de proteínas y el nivel de péptido beta amiloide libre después del tratamiento con el agente solubilizante de proteínas y restando el primer valor del segundo valor. Para el propósito de la presente invención, es generalmente adecuado determinar el nivel agregado de péptidos beta amiloides libres que incluye los péptidos beta amiloides libres originalmente, así como el nivel de péptidos beta amiloides que han sido liberados a partir de los componentes macromoleculares después del tratamiento con el agente solubilizante de proteínas. Por lo tanto, el parámetro que normalmente se determina cuando la muestra se
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Tal como se utiliza en la presente memoria descriptiva, el término "valor de referencia", se refiere a un valor del parámetro que se está utilizando para comparación y que se ha determinado en un sujeto que no sufre de una enfermedad neurodegenerativa o sin historia de enfermedad neurodegenerativa. Preferentemente, los sujetos a partir de los que se obtienen los valores de referencia para los diferentes parámetros y los parámetros calculados son pacientes que muestran una ausencia de fallos de memoria, rendimiento normal en las pruebas neuropsicológicas y ausencia de alteraciones estructurales en la imagen de resonancia magnética MRI.
En particular, se seleccionan valores de referencia que permiten una sensibilidad mayor del 85% y una especificidad superior al 75%. En otra realización preferente, se seleccionan valores de referencia de manera que se obtenga una sensibilidad mayor del 70% y una especificidad superior al 70%. Preferentemente, los valores de referencia permiten obtener una predicción con una exactitud y precisión de, como mínimo, el 80%.
En la etapa (iii) del método de la presente invención, el diagnóstico de la enfermedad neurodegenerativa, la detección de una etapa anterior a una enfermedad neurodegenerativa o la distinción de una enfermedad neurodegenerativa de una etapa anterior a una enfermedad neurodegenerativa se lleva a cabo utilizando un determinado un conjunto de marcadores o marcadores calculados que proporcionan niveles de especificidad y de sensibilidad particularmente adecuados. De este modo, en un ejemplo particular, el diagnóstico de una enfermedad neurodegenerativa se lleva a cabo comparando el valor de un parámetro seleccionado del grupo 3ab40 y 2ab42 o el valor de un parámetro calculado seleccionado del grupo 2ab40 + 3ab40 y 2ab40 + 3ab40 + 2ab42 + 3ab42.
En otra realización particular, la detección de una etapa anterior a una enfermedad neurodegenerativa se lleva a cabo comparando el valor de un parámetro seleccionado del grupo 2ab40, 3ab40 y 2ab42 o el valor de un parámetro calculado seleccionado del grupo 2ab40 + 3ab40, 2ab40 + 3ab40 + 2ab42 + 3ab42, 1ab40 + 2ab40 + + 3ab40 1ab42 + 2ab42 + 3ab42, 1ab40 + 2ab40 + 3ab40, 1ab42 + 2ab42 + 3ab42, 1ab40 + 1ab42 + 2ab42 + 3ab42, 1ab40 + 2ab40 + 1ab42 + 2ab42 y 1ab40 + 3ab40 + 1ab42 + 3ab42.
En aún otra realización, la distinción entre una enfermedad neurodegenerativa y una etapa anterior a dicha enfermedad neurodegenerativa se lleva a cabo comparando el valor de un parámetro seleccionado del grupo 3ab40 y 2ab42 o comparando el valor de un parámetro calculado seleccionado del grupo 2ab40 + 3ab40, 2ab40 + 3ab40 + 2ab42 + 3ab42 y 1ab40 + 2ab40 + 1ab42 + 2ab42.
Los valores de referencia adecuados para los diferentes métodos de diagnóstico de la presente invención se resumen en la Tabla 1.
Tabla 1: Resumen de los métodos preferentes de la presente invención de acuerdo con el parámetro y el valor de corte.
Valor de corte (pg/ml)
-
63,8
-
71,9
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71,1
-
211,3
-
47,4
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50,3
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151,7
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58,8
132,7
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235,5
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recubrir un soporte con un primer anticuerpo específico para el péptido beta amiloide, aplicar la muestra que contiene el péptido beta amiloide que dará como resultado la unión del péptido beta amiloide para el primer anticuerpo y la aplicación de un segundo anticuerpo específico también para el péptido beta amiloide, en el que dicho segundo anticuerpo está normalmente acoplado a un marcador detectable o a una enzima modificadora de sustrato. La señal generada por el marcador o por el sustrato convertido es el proporcional a la cantidad de antígeno en la muestra.
En el contexto de la presente invención, el primer anticuerpo se denomina "anticuerpo de captura", lo que significa que este anticuerpo se utiliza para recuperar de una muestra todas las especies moleculares a las que el anticuerpo se une específicamente. Prácticamente no hay limitación con respecto al tipo de anticuerpo que puede utilizarse como anticuerpo de captura, siempre que contenga, como mínimo, un sitio de unión de antígeno específico para Aβ40 y/o Aβ42. De este modo, cualquiera de los anticuerpos mencionados anteriormente puede utilizarse como anticuerpo de captura.
En el contexto de la presente invención, el segundo anticuerpo se denomina "anticuerpo de detección", ya que este anticuerpo se utiliza para detectar la cantidad de antígeno que ha sido retenido por el anticuerpo de captura. Al igual que con el anticuerpo de captura, prácticamente no hay limitación con respecto al tipo de anticuerpo que puede utilizarse como anticuerpo de detección. Sin embargo, se entiende también por la persona técnica en la materia que el anticuerpo de detección (i) debe unirse a una región del antígeno que no está cubierta por el anticuerpo de captura y (ii) debe contener no sólo el sitio de unión al antígeno sino además bien una marcador detectable, bien una enzima modificadora de sustrato o bien una región o regiones adicionales que pueden ser detectadas específicamente por un reactivo que muestra una afinidad elevada de unión para dicho anticuerpo, así como para permitir la detección del anticuerpo que se une al antígeno capturado por el anticuerpo de captura. Preferentemente, dichas regiones adicionales que pueden unirse específicamente por dicho reactivo corresponden a la región constante de la molécula de inmunoglobulina.
En una realización preferente, el anticuerpo de captura es un anticuerpo específico contra la región N-terminal de los péptidos beta amiloides. En una realización aún más preferente, dicho anticuerpo de captura es un anticuerpo específico contra un epítopo situado dentro de los aminoácidos 1 a 16 de Abeta40 o Abeta42. Un anticuerpo de captura particularmente preferente es el anticuerpo monoclonal 6E10, tal como el que se ha descrito por Kim, K. S. (Neuroscience. Res. Comm. 1988, 2:121-130).
En otra realización preferente, el anticuerpo de detección es un anticuerpo específico contra un epítopo localizado en la región C-terminal del péptido beta amiloide. Tal como se ha explicado anteriormente, la madurez de los anticuerpos de detección se puede elegir adecuadamente por cualquiera con habilidades normales en la técnica, dependiendo del número de especies beta amiloides que se van a detectar.
A efectos de detectar o determinar específicamente Aβ40, el anticuerpo de captura puede ser un anticuerpo que reconoce la región N-terminal de Aβ40 (y también de Aβ42, ya que ambos péptidos tienen idénticas regiones Nterminales) y el anticuerpo de detección puede ser un anticuerpo que reconoce específicamente la región C-terminal de Aβ40 sin dar ninguna reacción cruzada con Aβ42. Alternativamente, se puede detectar específicamente Aβ40 utilizando un anticuerpo de captura, que reconoce la región C-terminal de Aβ40 sin dar ninguna reacción cruzada con Aβ42 y un anticuerpo de detección, que reconoce una región de Aβ40 que es común a ambos Aβ40 y Aβ42, preferentemente la región N-terminal de Aβ42/Aβ40.
A efectos de detectar o determinar específicamente Aβ42, el anticuerpo de captura puede ser un anticuerpo que reconoce la región N-terminal de Aβ42 (y también de Aβ40, ya que ambos péptidos tienen idénticas regiones Nterminales) y el anticuerpo de detección puede ser un anticuerpo que reconoce específicamente la región C-terminal de Aβ42 sin dar ninguna reacción cruzada con Aβ40. Alternativamente, se puede detectar específicamente Aβ42 utilizando un anticuerpo de captura, que reconoce la región C-terminal de Aβ42 y un anticuerpo de detección, que reconoce una región de Aβ42 que es común a ambos Aβ42 yAβ40.
A efectos de detectar o determinar simultáneamente Aβ42 y Aβ40, el anticuerpo de captura puede ser un anticuerpo que reconoce la región N-terminal común a Aβ42 y Aβ40 y el anticuerpo de detección puede ser una combinación de, como mínimo, dos anticuerpos, en el que el primer anticuerpo reconoce específicamente la región C-terminal de Aβ42 sin dar ninguna reacción cruzada con Aβ40 y el segundo anticuerpo reconoce específicamente la región Cterminal de Aβ40 sin dar ninguna reacción cruzada con Aβ42. Alternativamente, el anticuerpo de captura puede ser un anticuerpo que reconoce la región N-terminal común a Aβ42 yAβ40 y el anticuerpo de detección puede ser un anticuerpo que reconoce la región C-terminal tanto de Aβ40 y Aβ42. Alternativamente, se pueden detectar simultáneamente Aβ42 y Aβ40 utilizando como anticuerpo de captura una mezcla de, como mínimo, dos anticuerpos que comprende un primer anticuerpo que reconoce específicamente la región C-terminal de Aβ42 sin dar ninguna reacción cruzada con Aβ40 y un segundo anticuerpo que reconoce específicamente la región C-terminal de Aβ40 sin dar ninguna reacción cruzada con Aβ42 y un anticuerpo de detección, que reconoce la región N-terminal común a ambos Aβ42 yAβ40. Alternativamente, se pueden detectar simultáneamente Aβ42 yAβ40 utilizando como
17
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imagen16Tabla 2. Características demográficas
P1
Característica
EA DCL CS
Hombre/Mujer 8/8 4/4 8/8 -
Edad (años, media ± SD) 78,8 ± 4,7H 77,3 ± 3,6H 70,3 ± 4,1M,A 0,0002
Frecuencia ApoE İ4 (%)
34,4H 37,5H 3,1M,A 0,002 Nivel de educación*
* El nivel de educación se expresa como 0: imagen17no hay estudios. 1: Educación Primaria. 2: Educación Secundaria. 3: Educación universitaria. 1 U-Test de Kruskal-Wallis, contrasta con el U-test de Mann-Whitney. H, M, y A siendo significativos con respecto a CS, DCL y EA, respectivamente.
5 Los controles sanos fueron cuidadosamente seleccionados entre voluntarios residentes en la comunidad, activos socialmente con la ausencia de quejas de memoria, rendimiento normal en pruebas neuropsicológicas y ausencia de alteraciones estructurales en técnicas cuantitativas de imagen por resonancia magnética (IRM). Los participantes con deterioro cognitivo leve cumplieron con los criterios de la Clínica Mayo. Además para la
10 selección de los participantes DCL se requirió un CDR de 0,5 puntos, más de 3 puntos en la escala de Scheltens (J. Neurol Neurosurg Psychiatry 1992, 55:967-972) para la atrofia temporal medial y un patrón de parietal y/o hipometabolismo temporal en la tomografía por emisión de positrones con 18-fluorodeoxiglucosa (PET-FDG), sugerente de la conversión a EA. Se excluyeron pacientes con cualquier patología psiquiátrica o sistémica, diferente de las enfermedades neurodegenerativas posibles, que podría provocar el DCL.
15 Los criterios específicos de inclusión para el grupo de EA fueron un diagnóstico de EA probable (NINCDS-ADRDA), un CDR de 1 punto, un MMSE entre 16 y 24 puntos y más de 3 puntos en la escala Scheltens para la atrofia temporal medial.
20 Las pruebas cognitivas para el diagnóstico de DCL y EA se realizaron de acuerdo a las rutinas de la Clínica de la Memoria ECA tal como se describen en cualquier lugar.
Se obtuvo de cada participante por escrito el consentimiento informado (o en el caso de varios pacientes con EA de su pariente más cercano). Los protocolos de los estudios fueron revisados y aprobados por el Comité Ético del 25 Hospital Clínic i Provincial (Barcelona, España).
EJEMPLO 2
Preparación de la muestra
30 La sangre se recoge a partir de un sujeto y se añade un gránulo de Roche CompleteMini (inhibidores de la proteasa) por cada 10 ml. La sangre bien se centrifuga directamente o se conserva a 4°C y se centrifuga en el mismo día del ensayo.
35 El plasma se separa de la fracción celular y el plasma se recoge y se divide en alícuotas de 0,5 ml en tubos Eppendorf. Las alícuotas se pueden mantener a -80°C.
Se determina el amiloide libre en el plasma (1ab40 y 1ab42) directamente en plasma sin diluir clarificado obtenido tal como se explica a continuación. Estos parámetros se denominarán a continuación tal como 1ab40 o UP (plasma sin 40 diluir) AβҞҞҞ
1-40) para Aβ1-40) y como 1ab42 o UP Aβ(1-42) para Aβ1-42).
El amiloide plasmático total, correspondiente al amiloide libre en el plasma más el amiloide asociado a los componentes del plasma, se determina en muestras obtenidas por dilución de 150 �l de plasma en 300 �l de tampón de dilución (PBS que contiene 0,5% de Tween-20). Estos parámetros se denominarán a continuación como
45 2ab40 o DP (plasma diluido) AβҞҞҞ
1-40) para Aβ1-40) y como 2ab42 o DP Aβ(1-42) para Aβ1-42).
El beta amiloide enlazado a células se determina mediante la dilución de la fracción de células plasmáticas 1/5 v/v en la muestra de dilución (PBS que contiene 0,5% de Tween-20). Estos parámetros se denominarán a continuación como 3ab40 o CB (unidos a células) AβҞҞҞ
1-40) para Aβ1-40) y como 3ab42 o CB Aβ(1-42) para Aβ1-42). 50
EJEMPLO 3
Condiciones para el tratamiento de la muestra
55 Dilución de la muestra
A efectos de identificar la dilución de la muestra que proporcione la máxima absorbancia en el ensayo de ELISA, se ensayaron diferentes diluciones y soluciones tampón.
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DP Aȕ1-40 CB Aȕ1-40 UP Aȕ1-42 DP Aȕ1-42 CB Aȕ1-42 MMSE ATM derecha ATM izquierda
Tabla 8. Niveles de marcadores directos y calculados en cada grupo de participantes.
MARCADOR
EA DCL CS
DIRECTO
n Promedio CV Int. n Promedio CV Int. n Promedio CV Int.
UP Aȕ1-40 DP Aȕ1-40 CB Aȕ1-40 UP Aȕ1-42 DP Aȕ1-42 CB Aȕ1-42
15 32,2 152,5 7,2; 203,2 15 115,4 137,3 12,0; 645,7 15 103,3 88,2 15,3; 328,6 15 23,3 206,0 4,5; 195,3 15 96,5 183,3 22,3; 728,5 15 89,8H 59,0 52,6; 262,6 7 44,7H 102,7 14,4;133,6 7 124,6H 86,9 54,5;339,6 7 107,4H* 54,7 63,7;211,2 7 24,8H* 96,8 8,6;67,4 7 75,2H 66,5 34,9;151,5 7 79,8 35,5 62,9;141,9 16 15,4M 47,4 2,2;33,3 16 56,4M 36,2 21,4;104,3 16 59,3M* 28,8 14,5;89,2 16 8,0M* 38,7 3,7;16,9 16 40,1M 32,2 20,5;78,6 16 58,7A 23,2 28,4;76,8
CALCULADO
UP Aȕ42/Aȕ40 DP Aȕ42/Aȕ40 CB Aȕ42/Aȕ40 T40 T42 T-ȕAPB
15 0,6 50,0 0,3;1,2 15 0,9 55,5 0,4;2,6 15 1,2 66,7 0,4;3,8 15 218,8 109,8 27,3;946,5 15 186,3H 122,0 74,9;991,0 15 405,1 113,1 116,6;1937 7 0,6 16,7 0,5;0,7 7 0,7 14,3 0,4;0,9 7 0,8 25,0 0,4;1,1 7 232,0H 71,7 118,2;550,8 7 155,0H 48,3 103,9;293,4 7 387,0H 60,1 222,8;778 16 0,7 85,7 0,1;2,9 16 0,8 25,0 0,3;1,5 16 1,1 63,6 0,4;3,7 16 115,7M 29,2 35,9;175,4 16 98,8A,M 24,7 59,7;155,5 16 214,5M 22,1 121,8;307,2
Todos los valores se expresan en pg/ml. H, M, y A son significativos (p <0,05) con respecto a CS, DCL y AD, respectivamente.
* significa p <0,01.
En segundo lugar, los niveles de péptidos CB, medidos directamente de la fracción celular de la muestra de sangre, fueron similares a los niveles medidos en la DP. Por otra parte, los niveles de Aȕ1-40 y de Aȕ1-42 se correlacionan fuertemente cuando se mide en cualquiera de UP, DP o CB (r = 0,58, 0,71 y 0,71, respectivamente, p <0,001). Se encontraron correlaciones significativas también entre cualquier par de los seis marcadores directamente en las muestras analizadas (Aȕ1-40 y Aȕ1-42 en la UP, PD, CB, Tabla 9).
Tabla 9. La correlación entre las variables.
UP DP CB UP DP CB ATM
MMSE
Aȕ1-40 Aȕ1-40 Aȕ1-40 Aȕ1-42 Aȕ1-42 Aȕ1-42 derecha
0,935 ***
- - - - - - -
0,685 ***
0,776 *** - - - - - -
0,583 ***
0,556 *** 0,510 ** - - - - -
0,652 ***
0,717 *** 0,656 *** 0,806 *** - - - -
0,379 *
0,465 ** 0,712 *** 0,578 *** 0,693 *** - - -
-0,417 **
-0,395 * -0,214 -0,485 ** -0,450 ** -0,274 - -
0,321 *
0,280 0,257 0,530 ** 0,510 ** 0,353 * -0,756 *** -
0,198
0,187 0,192 0,442 ** 0,426 ** 0,310 -0,868 *** 0,894 ***
Coeficiente de Spearman para cada par de variables. ***, ** y * significan p <0,001, 0,01 y 0,05, respectivamente.
Además, se encontró que los niveles de cada marcador aumentaron en pacientes con DCL y con EA con respecto al grupo control sano (Fig. 2, tabla 8). Estos incrementos alcanzaron significación estadística entre los grupos DCL y de CS para los tres marcadores Aȕ1-40 (UP, DP y CB, que aumentaron 2,9, 2,2 y 1,8 veces, respectivamente) y para los dos marcadores Aȕ1-42 en plasma (UP y DP, que aumentaron 3,1 y 1,8 veces, respectivamente). El nivel promedio de cada marcador en el grupo de EA fue muy similar a su nivel promedio en el grupo de deterioro cognitivo leve y no se produjeron diferencias significativas entre estos dos grupos de pacientes. De forma similar, no se encontraron diferencias estadísticas entre los grupos de EA y de CS con la excepción de los niveles de CB Aȕ1-42 (figura 2). Esta falta de significación fue debida muy probablemente a la amplia gama de mediciones individuales dentro del grupo de EA (n = 16) que mostraron un CV de 1,5 a 2,7 veces mayor que en el grupo de DCL (n = 8) y de 2,5 a 5,7 veces mayor que el grupo de CS (n = 16) para cada marcador (tabla 8).
Los marcadores plasmáticos Aȕ1-40 y Aȕ1-42 (UP y DP), pero no CB, se correlacionaron significativamente con el MMSE (tabla 9) a pesar de que podría ser, en parte, sobrestimado, dado que de la agrupación de los CS en las
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Tabla 11. Características de diagnóstico de los marcadores ȕAPB directos y calculados. Marcador Límite de corte (pg/ml) Sensibilidad (> 85%) Especificidad (> 75%) VPP VPN Precisión (> 80 %) ROC (> 0,8) 23,2 EA EA/CS 40,0 93,8 85,7 62,5 67,7 0,6 68,8 73,9 UP Aȕ1-40 (1ab40) 22,5 EA EA/DCL 40,0 71,4 75,0 35,7 50,0 0,4
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imagen28
72,2 EA EA/DCL 40,0 71,4 75,0 35,7 50,0 0,4
imagen29
71,9 EA EA/CS 53,3 87,5 80,0 66,7 70,9 0,7 211,3 EA EA/DCL 13,3 100,0 100,0 35,0 40,9 0,4
10,28 EA EA/CS 46,7 87,5 77,8 63,6 67,7 0,7 67,4 EA EA/DCL 6,7 100,0 100,0 33,3 36,3 0,3
imagen30
47,4 EA
EA/CS 46,7 87,5 77,8 63,6 67,7 0,6
DP Aȕ1-42 (2ab42)
imagen31 57,1 imagen32
151,7 EA
EA/DCL 6,7 100,0 100,0 33,3 36,3 0,4
imagen33
imagen34
76,9 EA
EA/CS 40,0 100,0 100,0 64,0 70,9 0,7
CB Aȕ1-42 (3ab42)
59,8 DCL DCL/CS 100,0 50,0 46,7 100,0 65,2 0,7
71,3 EA
EA/DCL 53,3 71,4 80,0 41,7 59,0 0,5
132,7 EA EA/CS 53,3 81,3 72,7 65 67,7 0,6 550,8 EA EA/DCL 13,3 100 100 35 40 0,4
imagen35
115,8 EA
EA/CS 53,3 87,5 80 66,7 70,9 0,7
T42 (DP + CB) (2ab42 + 3ab42)
103,3 DCL DCL/CS 100 50 46,7 100 68 0,8
113,7 EA
EA/DCL 53,3 57,1 72,7 36,4 54 0,4
T-ȕAPB (T40 235,5 EA EA/CS 53,3 81,3 72,7 65 38 0,7
+2ab42 + 3ab42) 778,1 EA EA/DCL 13,3 100 100 35 40 0,4 Resaltados en gris están los resultados que cumplieron con el criterio considerado adecuado como figura en el encabezamiento. VPP: valor predictivo positivo.VPN: valor predictivo negativo. ROC: área bajo la curva característica de funcionamiento del receptor.
La mayoría de los marcadores directos y dos marcadores calculados (T40 y T-ȕAPB) cumplieron con los criterios que se consideren idóneos para distinguir entre los pacientes DCL y CS, que es de sumo interés, porque desde cualquier punto de vista práctico, es aquí donde el diagnóstico debe ser mejorado. Por lo tanto, todos los marcadores directos, con excepción de CB Aȕ1-42, presentaron un ROC • 0,8 y entre ellos cuatro (DP Aȕ1-40, CB Aȕ1-40, UP Aȕ1-42 y DP Aȕ1-42) tienen una precisión mayor del 80%, lo que significa que el 80% de las prueba fueron correctas cuando se comparan con el estándar de referencia clínico (figura 3). Los T40 y T-ȕAPB calculados fueron igual de precisos para distinguir entre DCL y CS que los marcadores directos, mientras que la T42 parecen ser menos fiable (Figura 3). Debido a la gran variabilidad de las mediciones de Aȕ de un individuo a otro dentro del grupo de EA, no se pudo encontrar un punto de corte en la que estos marcadores discriminaran a los pacientes con EA de los otros dos grupos de participantes con una sensibilidad y especificidad aceptables (Figura 3).
EJEMPLO 12
Otros parámetro que muestran la mayor sensibilidad y precisión adecuadas para su utilización en la presente invención incluyen los que se muestran en la Tabla 12.
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Claims (1)

  1. imagen1
    imagen2
    imagen3
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20140128229A (ko) 2013-04-26 2014-11-05 한국과학기술연구원 체내 단백질 응집체의 용해를 이용한 단백질의 비정상적인 응집 또는 미스폴딩과 관련된 질환 또는 질병을 진단하는 혈액진단키트
EP3783364A3 (en) * 2014-05-22 2021-05-19 Shimadzu Corporation Surrogate biomarker for evaluating intracerebral amyloid beta peptide accumulation and method for analysis thereof
JP6675403B2 (ja) * 2014-09-05 2020-04-01 システム オブ システムズ アナリティクス インコーポレイテッド アミロイドベータオリゴマーを検出する方法
KR101786859B1 (ko) * 2015-04-30 2017-10-17 서울대학교산학협력단 혈장 내 아밀로이드베타의 농도를 통해 알츠하이머병을 임상학적 및 병리학적으로 모니터링하는 방법
RU2611408C1 (ru) * 2015-09-23 2017-02-21 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова" Способ флуоресцентного гистологического выявления амилоида
GB201518675D0 (en) * 2015-10-21 2015-12-02 Cellcap Technologies Ltd Detection of structural forms of proteins
WO2019167128A1 (ja) * 2018-02-27 2019-09-06 株式会社 島津製作所 サンドイッチ型免疫測定法
WO2019167830A1 (ja) * 2018-02-27 2019-09-06 株式会社 島津製作所 ＡＰＰ６６９－ｘのＮ末端を特異的に認識する抗体、及び免疫測定法
RU2708465C1 (ru) * 2019-02-18 2019-12-09 Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) Способ детекции модификаций амилоидного пептида с помощью высокоспецифичных антител
US20220137071A1 (en) * 2019-03-01 2022-05-05 Shimadzu Corporation Method and kit for measuring app669-711
GB201904810D0 (en) 2019-04-05 2019-05-22 Cynapsedx Ltd The treatment of protein aggregation diseases
CN114072678A (zh) * 2019-05-10 2022-02-18 奎斯特诊断投资有限责任公司 用于确定人血浆样本中的β-淀粉样蛋白42/40比率的多重测定
WO2021009074A1 (en) 2019-07-12 2021-01-21 Adx Neurosciences Nv Novel markers as early predictors of alzheimer's pathology
CN116574271B (zh) * 2023-06-06 2023-12-19 苏州谱迪生物科技有限公司 一种用于免疫检测低丰度生物标志物信号级联放大的荧光树状大分子的制备方法及其应用

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5976817A (en) * 1996-10-31 1999-11-02 Trustees Of Boston University Diagnostic method for detecting Alzheimer's disease in living patients
US8173127B2 (en) * 1997-04-09 2012-05-08 Intellect Neurosciences, Inc. Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof
BRPI0108676B8 (pt) 2000-02-24 2021-05-25 Lilly Co Eli anticorpos humanizados que sequestram peptídeo amilóide beta e seus usos no tratamento de condições caracterizadas por formação de placas amiloides, bem como composição farmacêutica que compreende os referidos anticorpos
TWI255272B (en) 2000-12-06 2006-05-21 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
ATE381346T1 (de) 2001-08-17 2008-01-15 Univ Washington Assayverfahren für alzheimer-krankheit
CA2487528A1 (en) 2002-07-24 2004-02-12 Innogenetics N.V. Prevention, treatment and diagnosis of diseases associated with beta-amyloid formation and/or aggregation
ES2201929B1 (es) 2002-09-12 2005-05-16 Araclon Biotech, S.L. Anticuerpos policlonales, metodo de preparacion y uso de los mismos.
US20040096907A1 (en) * 2002-11-06 2004-05-20 Bernd Bohrmann Quantification of beta amyloid
ES2246178B1 (es) 2003-05-08 2007-03-01 Universidad De Zaragoza. Uso de anticuerpos para el tratamiento de enfermedades amiloideas.
EP1480041A1 (en) * 2003-05-22 2004-11-24 Innogenetics N.V. Method for the prediction, diagnosis and differential diagnosis of Alzheimer's disease
AU2004266324B8 (en) * 2003-08-20 2011-04-28 Promis Neurosciences Inc. Epitope protection assay and method for detecting protein conformations
WO2006046644A1 (ja) 2004-10-28 2006-05-04 Sanko Junyaku Co., Ltd. アルツハイマー病の検定方法及び診断試薬
EP1820019A4 (en) 2004-11-12 2008-05-14 Pfizer METHOD FOR MEASURING BETA-AMYLOID PEPTIDES
WO2007022015A1 (en) 2005-08-12 2007-02-22 Georgetown University Methods to evaluate amyloid beta-lowering agents using wild-type mice
CA2626783A1 (en) 2005-10-21 2007-05-03 Merck & Co., Inc. Anti-addl monoclonal antibody and use thereof
EP2020602A1 (en) 2007-08-02 2009-02-04 Araclon Biotech High sensitivty immunoassays and kits for the determination of peptides and proteins of biological interest
WO2009048631A1 (en) * 2007-10-11 2009-04-16 University Of Tennessee Research Foundation PREPARATION OF PURIFIED COVALENTYLY CROSS-LINKED A β OLIGOMERS AND USES THEREOF
US20110166035A1 (en) * 2009-11-24 2011-07-07 Probiodrug Ag Novel diagnostic method

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