ES2457394T3 - Derivados de pirimidina como inhibidores de proteína cinasa - Google Patents

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Abstract

Compuesto de fórmula VIII, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,**Fórmula** en la que: X es NR7; Y es O o N-(CH2)nR19; n es 1, 2 ó 3; m es 1 ó 2; R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o cicloalquilo; R4 y R4' son cada uno independientemente H o alquilo; o R4 y R4' forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo; R19 es H, alquilo, arilo o un grupo cicloalquilo; R6 es OR8 o halógeno; y R7 y R8 son cada uno independientemente H o alquilo.

Description

Derivados de pirimidina como inhibidores de proteína cinasa
5 La presente invención se refiere a derivados de pirimidina sustituidos per se y para su uso en terapia. Más específicamente, pero no exclusivamente, la invención se refiere a compuestos que pueden inhibir una o más proteína cinasas, particularmente cinasas de tipo polo.
Antecedentes de la invención
La familia de cinasas de tipo polo consiste en enzimas reguladoras clave del ciclo celular con papeles integrales en el control de la entrada en y la progresión a través de la mitosis. Muchas células tumorales expresan altos niveles de PLK1 y son sensibles a oligonucleótidos antisentido que seleccionan como diana esta proteína.
15 La iniciación de la mitosis requiere la activación del factor promotor de la fase M (MPF), es decir, el complejo entre CDK1 y ciclinas de tipo B [Nurse, P. (1990) Nature, 344, 503-508]. Éstas últimas se acumulan durante las fases S y G2 del ciclo celular y promueven la fosforilación inhibidora del complejo MPF por cinasas WEE1, MIK1 y MYT1. Al final de la fase G2, la desfosforilación correspondiente por la fosfatasa de especificidad doble CDC25C desencadena la activación de MPF [Nigg, E.A. (2001) Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2, 21-32]. En la interfase, la ciclina B se localiza en el citoplasma y se fosforila durante la profase, seguido por translocación nuclear. Se cree que la acumulación nuclear de MPF activo durante la profase es importante para iniciar los acontecimientos de la fase M [Takizawa,
C.G. y Morgan, D.O. (2000) Curr. Opin. Cell Biol., 12, 658-665]. Sin embargo, el MPF nuclear se mantiene inactivo por WEE1 a menos que se contrarreste por CDC25C. La propia fosfatasa CDC25C, localizada en el citoplasma durante la interfase, se acumula en el núcleo en la profase. La entrada al núcleo de tanto ciclina B como CDC25C se
25 promueve a través de fosforilación por PLK1 [Roshak, A.K., Capper, E.A., Imburgia, C., Fornwald, J., Scott, G. y Marshall, L.A. (2000) Cell. Signalling, 12, 405-411]. Por tanto, esta cinasa es un regulador importante de la iniciación de la fase M.
En seres humanos, existen tres cinasas de tipo polo (PLK) estrechamente relacionadas [Glover, D.M., Hagan, I.M. y Tavares, A.A. (1998) Genres Dev., 12, 3777-3787]. Contienen un dominio cinasa catalítico N-terminal altamente homólogo y sus extremos C-terminales contienen dos o tres regiones conservadas, las cajas polo. La función de las cajas polo sigue sin comprenderse completamente pero se requiere la actividad de PLK1 dependiente de las cajas polo para la citocinesis y transición metafase/anafase apropiadas [Seong, Y.-S., Kamijo, K., Lee, J.-S., Fernandez, E., Kuriyama, R., Miki, T. y Lee, K.S. (2002) J. Biol. Chem., 277, 32282-32293]. De las tres PLK, PLK1 es la mejor 35 caracterizada; regula varios efectos del ciclo de división celular, incluyendo el inicio de la mitosis, la activación de los puntos de control de daño al ADN, la regulación del complejo promotor de la anafase, la fosforilación del proteasoma y la duplicación y maduración de los centrosomas. Originalmente se mostró que PLK2 (también conocida como SNK) y PLK3 (también conocida como PRK y FNK) de mamífero eran productos génicos tempranos inmediatos. La actividad de la cinasa PLK3 parece alcanzar un máximo durante la fase G2 y S tardía. También se activa durante la activación del punto de control de daño al ADN y estrés oxidativo grave. PLK3 también desempeña un papel importante en la regulación de la dinámica de microtúbulos y la función de los centrosomas en la célula y la expresión de PLK3 desregulada da como resultado detención del ciclo celular y apoptosis [Wang, Q., Xie, S., Chen, J., Fukusawa, K., Naik, U., Traganos, F., Darzynkiewicz, Z., Jhanwar-Uniyal, M. y Dai, W. (2002) Mol. Cell. Biol., 22, 3450-3459]. PLK2 es el homólogo peor entendido de las tres PLK. Tanto PLK2 como PLK3 pueden tener funciones
45 posmitóticas importantes adicionales [Kauselmann, G., Weiler, M., Wulff, P., Jessberger, S., Konietzko, U., Scafidi, J., Staubli, U., Bereiter-Hahn, J., Strebhardt, K. y Kuhl, D. (1999) EMBO J., 18, 5528-5539].
El hecho de que las PLK humanas regulen algunos aspectos fundamentales de la mitosis se mostró mediante microinyección de anticuerpo anti-PLK1 de células tumorales humanas [Lane, H.A. y Nigg, E.A. (1996) J. Cell. Biol., 135, 1701-1713]. Este tratamiento no tuvo ningún efecto sobre la replicación del ADN pero alteró la división celular. Se detuvieron las células en mitosis y mostraban una distribución anómala de cromatina condensada y microtúbulos monoastrales nucleados a partir de centrosomas duplicados pero no separados. Por el contrario, células humanas no inmortalizadas se detuvieron como células mononucleadas, individuales en G2. Además, cuando se bloqueó la función de PLK1 a través de suministro mediado por adenovirus de un gen dominante negativo, se observó 55 apoptosis selectiva de tumor en muchas líneas celulares tumorales, mientras que de nuevo células epiteliales normales, aunque se detuvieron en mitosis, escaparon de la catástrofe mitótica observada en células tumorales [Cogswell, J.P., Brown, C.E., Bisi, J.E. y Neill, S.D. (2000) Cell Growth Differ., 11, 615-623]. Por tanto la actividad de PLK1 es necesaria para la maduración funcional de centrosomas en G2 tardía/profase temprana y el posterior establecimiento de un huso bipolar. Además, estos resultados sugieren la presencia en células normales de un punto de control de maduración de centrosomas que es sensible a la alteración de PLK1. El agotamiento de PLK1 celular a través de la técnica de ARN de interferencia pequeño (ARNip) también confirmó que esta proteína se requiere para múltiples procesos mitóticos y para completar la citocinesis [Liu, X. y Erikson, R.L. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100, 5789-5794]. Un posible fundamento terapéutico para la inhibición de PLK también se sugiere mediante el trabajo con oligonucleótidos antisentido específicos de PLK1, que se mostró que inducían inhibición del 65 crecimiento en células cancerosas tanto in vitro como in vivo [Spankuch-Schmitt, B., Wolf, G., Solbach, C., Loibl, S., Knecht, R., Stegmuller, M., von Minckwitz, G., Kaufmann, M. y Strebhardt, K (2002) Oncogene, 21, 3162-3171]. Se
mostró que la expresión constitutiva de PLK1 en células de mamífero conducía a transformación maligna [Smith, M.R., Wilson, M.L., Hamanaka, R., Chase, D., Kung, H., Longo, D.L. y Ferris, D.K. (1997) Biochem. Biophys. Res. Commun., 234, 397-405]. Además, se observa frecuentemente sobreexpresión de PLK1 en tumores humanos y la expresión de PLK1 es de valor pronóstico para pacientes que padecen diversos tipos de tumores [Takahashi, T.,
5 Sano, B., Nagata, T., Kato, H., Sugiyama, Y., Kunieda, K., Kimura, M., Okano, Y. y Saji, S. (2003) Cancer Science, 94, 148-152; Tokumitsu, Y., Mori, M., Tanaka, S., Akazawa, K., Nakano, S. y Niho, Y. (1999) Int. J. Oncol., 15, 687692; Wolf, G., Elez, R., Doermer, A., Holtrich, U., Ackermann, H., Stutte, H.J., Altmannsberger, H.-M., Rübsamen-Waigmann, H. y Strebhardt, K. (1997) Oncogene, 14, 543-549].
10 Aunque se ha apreciado el potencial terapéutico de la inhibición farmacológica de PLK [Kraker, A.J. y Booher, R.N. (1999) en Annual Reports in Medicinal Chemistry (vol. 34) (Doherty, A.M., ed.), págs. 247-256, Academic Press], se ha notificado muy poco hasta la fecha con respecto a inhibidores de PLK de molécula pequeña que puedan ser útiles como fármacos. Uno de los pocos inhibidores de PLK1 bioquímicos caracterizado hasta la fecha es la escitonemina, un producto natural marino indólico simétrico [Stevenson, C.S., Capper, E.A., Roshak, A.K., Marquez,
15 B., Eichman, C., Jackson, J.R, Mattern, M., Gerwick, W.H., Jacobs, R.S. y Marshall, L.A. (2002) J. Pharmacol. Exp. Ther., 303, 858-866; Stevenson, C.S., Capper, E.A., Roshak, A.K., Marquez, B., Grace, K., Gerwick, W.H., Jacobs,
R.S. y Marshall, L.A. (2002) Inflammation Research, 51, 112-114]. La escitonemina inhibe la fosforilación de CDC25C por PLK1 recombinante con un valor de CI50 de aproximadamente 2 μM (a una concentración de ATP de 10 μM). La inhibición aparentemente es reversible y el mecanismo con respecto a ATP de modo competitivo mixto.
20 Se observó una potencia similar frente a otras proteína serina/treonina cinasas y cinasas del ciclo celular de especificidad doble, incluyendo MYT1, CHK1, CDK1/ciclina B y PKC. La escitonemina mostró efectos antiproliferativos pronunciados sobre diversas líneas celulares humanas in vitro. Se describen inhibidores de PLK de molécula pequeña adicionales y su uso en el tratamiento de trastornos proliferativos en la solicitud de patente internacional WO2004/067000 a nombre de Cyclacel Limited.
25 La presente invención busca dilucidar nuevos inhibidores de PLK de molécula pequeña. Más específicamente, la invención busca proporcionar inhibidores de PLK de molécula pequeña que tengan aplicaciones terapéuticas en el tratamiento de una gama de trastornos proliferativos.
30 Exposición de la de invención
Un primer aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula VIII, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en la que:
X es NR7;
Y es O o N-(CH2)nR19;
n es 1, 2 ó 3;
45 m es 1 ó 2; R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o cicloalquilo; R4 y R4’ son cada uno independientemente H o alquilo; o
R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo;
R19 es H, alquilo, arilo o un grupo cicloalquilo; R6 es OR8 o halógeno; y R7 y R8 son cada uno independientemente H o alquilo. Un segundo aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula VI, o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo,
en la que:
X es NR7;
15 R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o cicloalquilo; R4 y R4’ son cada uno independientemente H o alquilo; o R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo;
R18 es H o alquilo, en el que dicho grupo alquilo está opcionalmente sustituido con R6; cada R6 es independientemente OR8 o halógeno; y
25 R7 y R8 son cada uno independientemente H o alquilo. Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto seleccionado de los siguientes:
Compuesto n.º
Nombre
254
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
218
(±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
195
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)-benzamida
221
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
371
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
372
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
345
4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-[1-(tetrahidro-piran-4-il)-piperidin-4-il]-benzamida
373
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
374
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
194
(±)-4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
186
(±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
375
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)-3-metoxibenzamida
376
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-morfolinobenzamida
347
(R)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
348
(S)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
377
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
378
4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
379
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
380
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
381
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-(ciclopropilmetil)-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
382
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-etil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
383
N-(4-(4-bencil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
384
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
385
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
386
N-((trans)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
387
N-((cis)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
388
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
389
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
390
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
391
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto tal como se describió anteriormente mezclado con un diluyente, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.
Otro aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto tal como se describió anteriormente en la preparación de un medicamento para tratar un trastorno proliferativo.
Otro aspecto de la invención se refiere a un procedimiento para preparar compuestos tal como se definieron anteriormente.
Descripción detallada
Tal como se usa en el presente documento, el término “alquilo” incluye grupos alquilo tanto ramificados como de
5 cadena lineal saturados. Preferiblemente, el grupo alquilo es un grupo alquilo C1-20, más preferiblemente uno C1-15, más preferiblemente todavía un grupo alquilo C1-12, más preferiblemente todavía, un grupo alquilo C1-6, más preferiblemente un grupo alquilo C1-3. Los grupos alquilo particularmente preferidos incluyen, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, pentilo y hexilo.
10 Tal como se usa en el presente documento, el término “cicloalquilo” se refiere a un grupo alquilo cíclico. Preferiblemente, el grupo cicloalquilo es un grupo cicloalquilo C3-12, más preferiblemente un grupo cicloalquilo C3-6.
Tal como se usa en el presente documento, el término “arilo” se refiere a un grupo aromático C6-12 que puede estar (mono o poli) sustituido o no sustituido. Los ejemplos típicos incluyen fenilo y naftilo, etc. Los sustituyentes 15 adecuados incluyen, por ejemplo, uno o más grupos R6.
COMPUESTOS DE FÓRMULA VIII
Tal como se mencionó anteriormente, un aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula VIII, o una 20 sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización particularmente preferida, la invención se refiere a un compuesto de fórmula VIIIa, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en la que:
X es NR7;
30 R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o cicloalquilo; R4 y R4’ son cada uno independientemente H o alquilo; o
35 R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo; R19 es H, alquilo, arilo o un grupo cicloalquilo; R6 es OR8 o halógeno; y
40 R7 y R8 son cada uno independientemente H o alquilo. En una realización preferida, R19 es H, alquilo o un grupo cicloalquilo.
45 Preferiblemente, R1 es H o alquilo, más preferiblemente, alquilo. Incluso más preferiblemente, R1 es metilo o etilo,
más preferiblemente todavía, Me. Preferiblemente, R2 es un grupo cicloalquilo, más preferiblemente un grupo cicloalquilo C3-6. Incluso más preferiblemente, R2 es un grupo ciclopentilo o ciclohexilo, más preferiblemente todavía, ciclopentilo.
50 Preferiblemente, R7 es H o alquilo, más preferiblemente, H o metilo, incluso más preferiblemente, H. En una realización preferida, uno de R4 y R4’ es alquilo, y el otro es H o alquilo.
En otra realización preferida, R4 y R4’ son cada uno independientemente alquilo. Más preferiblemente, R4 y R4’ son ambos metilo.
En otra realización preferida, R4 y R4’ son ambos H.
5 En otra realización preferida, R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo, más preferiblemente, un grupo espiro-cicloalquilo C3-6. Incluso más preferiblemente, R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo C3 o C4, más preferiblemente todavía, un grupo cicloalquilo C3.
10 En una realización preferida, R6 es OR8, incluso más preferiblemente, OMe.
Preferiblemente, R19 es ciclopropilo.
En otra realización particularmente preferida, la invención se refiere a un compuesto de fórmula VIIIb, o una sal 15 farmacéuticamente aceptable del mismo,
en la que R1, R2, R6, R4, R4’ y X son tal como se definieron anteriormente.
En otra realización particularmente preferida, la invención se refiere a un compuesto de fórmula VIIIc, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en la que X, R1, R2, R6, R4, R4’ y R19 son tal como se definieron anteriormente. En una realización particularmente preferida, dicho compuesto de fórmula VIII se selecciona de los siguientes:
Compuesto n.º
Nombre
371
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
372
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
377
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
378
4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
379
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
380
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
381
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-(ciclopropilmetil)-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
382
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-etil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
383
N-(4-(4-bencil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
384
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
385
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
386
N-((trans)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
387
N-((cis)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
388
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
389
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
390
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
391
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Más preferiblemente, el compuesto de fórmula VIII se selecciona de los siguientes:
Compuesto n.º
Nombre
371
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
372
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
377
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
378
4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Incluso más preferiblemente, el compuesto de la invención es el compuesto [371]. COMPUESTOS DE FÓRMULA VII Un aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula VII, o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo,
en la que:
X es NR7; R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o cicloalquilo;
10 R4 y R4’ son cada uno independientemente H o alquilo; o R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo; y R6 es OR8 o halógeno; y
R7 y R8 son cada uno independientemente H o alquilo, en el que dicho compuesto se selecciona de los siguientes:
Compuesto n.º
Nombre
218
(±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
194
(±)-4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
186
(±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
347
(R)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
348
(S)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. 20 COMPUESTOS DE FÓRMULA VI
Un aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula VI, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, 25
en la que: 30 X es NR7;
R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o cicloalquilo;
uno de R4 y R4’ es alquilo, y el otro es H o alquilo; o 5 R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo;
R18 es H o alquilo, en el que dicho grupo alquilo está opcionalmente sustituido con R6;
10 cada R6 es independientemente OR8 o halógeno; y
R7 y R8 son cada uno independientemente H o alquilo.
Preferiblemente, R1 es alquilo, más preferiblemente metilo.
15 Preferiblemente, R2 es un grupo cicloalquilo, más preferiblemente, un grupo cicloalquilo C3-6. Incluso más preferiblemente, R2 es ciclopentilo o ciclohexilo, más preferiblemente todavía, ciclopentilo.
Preferiblemente, R7 es H o alquilo, más preferiblemente, H o metilo, incluso más preferiblemente, H. 20 En una realización preferida, uno de R4 y R4’ es alquilo, y el otro es H o alquilo.
En otra realización preferida, R4 y R4’ son cada uno independientemente alquilo. Más preferiblemente, R4 y R4’ son ambos metilo. 25 En otra realización preferida, R4 y R4’ son ambos H.
En otra realización preferida, R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo, más preferiblemente, un grupo espiro-cicloalquilo C3-6. Incluso más preferiblemente, R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo C3 o C4, 30 incluso más preferiblemente, un grupo cicloalquilo C3.
Preferiblemente, R6 es OMe o F.
Preferiblemente, R18 es metilo o CH2CH2OH. 35 En una realización preferida, el compuesto de fórmula VI se selecciona de los siguientes:
254
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
195
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(4metil-piperazin-1-il)-benzamida
221
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
373
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
374
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
375
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-N-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)-3-metoxibenzamida
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
40 En una realización especialmente preferida, el compuesto es [254], o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización altamente preferida, el compuesto es la sal de HCl del compuesto [254], es decir 4-(9’-ciclopentil45 5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4metilpiperazin-1-il)benzamida.HCl.
Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto que se selecciona de los siguientes:
Compuesto n.º
Nombre
254
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
218
(±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
195
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida
221
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
371
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
372
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
345
4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-[1-(tetrahidro-piran-4-il)-piperidin-4-il]-benzamida
373
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
374
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
194
(±)-4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
186
(±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
375
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)-3-metoxibenzamida
376
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-morfolinobenzamida
347
(R)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
348
(S)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
377
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
378
4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
379
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
380
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
381
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-(ciclopropilmetil)-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
382
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-etil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
383
N-(4-(4-bencil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
384
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
385
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
386
N-((trans)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
387
N-((cis)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
388
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
389
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
390
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
391
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Preferiblemente, el compuesto se selecciona de los siguientes:
Compuesto n.º
Nombre
254
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
218
(±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
195
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)-benzamida
221
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
345
4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-[1-(tetrahidro-piran-4-il)-piperidin-4-il]-benzamida
194
(±)-4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
186
(±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
347
(R)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
348
(S)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Ventajosamente, determinados compuestos de la invención presentan selectividad mejorada para una o más 10 cinasas en comparación con compuestos relacionados estructuralmente conocidos previamente en la técnica.
En una realización preferida, el compuesto de la invención presenta selectividad para una o más cinasas con respecto a una o más de otras cinasas.
15 Por ejemplo, en una realización preferida, el compuesto de la invención puede inhibir preferentemente cinasas de la familia PLK con respecto a una o más de otras proteína cinasas; por tanto el compuesto pueden inhibir “selectivamente” cinasas de la familia PLK con respecto a una o más de otras proteína cinasas. Tal como se usa en el presente documento, el término “selectivamente” se refiere a los compuestos que son selectivos para PLK con respecto a una o más de otras proteína cinasas. Preferiblemente, la razón de selectividad para cinasas de la familia
20 PLK con respecto a una o más de otras proteína cinasas es mayor de aproximadamente 2 a 1, más preferiblemente mayor de aproximadamente 5 a 1 o de aproximadamente 10 a 1, incluso más preferiblemente mayor de aproximadamente 20 a 1, o 50 a 1 o 100 a 1. El experto en la técnica puede determinar razones de selectividad.
En una realización particularmente preferida, el compuesto de la invención presenta selectividad para PLK1. Por tanto, en una realización preferida, el compuesto de la invención puede inhibir preferentemente PLK1 con respecto a una o más de otras proteína cinasas. Preferiblemente, la razón de selectividad para PLK1 con respecto a una o más 5 de otras proteína cinasas es mayor de aproximadamente 2 a 1, más preferiblemente mayor de aproximadamente 5 a 1 o de aproximadamente 10 a 1, incluso más preferiblemente mayor de aproximadamente 20 a 1, o 50 a 1 o 100 a 1.
En una realización incluso más preferida, el compuesto de la invención presenta selectividad para PLK1 con respecto a PLK2 y/o PLK3. Por tanto, en una realización preferida, el compuesto de la invención puede inhibir preferentemente PLK1 con respecto a PLK2 y/o PLK3. Preferiblemente, la razón de selectividad para PLK1 con respecto a PLK2 y/o PLK3 es mayor de aproximadamente 2 a 1, más preferiblemente mayor de aproximadamente 5 a 1 o de aproximadamente 10 a 1, incluso más preferiblemente mayor de aproximadamente 20 a 1, o 50 a 1 o 100 a
1.
15 A modo de ilustración, el compuesto [218] presenta selectividad para PLK1 con respecto PLK2 y PLK3 en comparación con compuestos seleccionados de la técnica anterior. Por ejemplo, el compuesto [218] de la invención es el doble de selectivo para PLK1 frente a PLK2 en comparación con el compuesto [I-64] del documento WO 07/095188, aproximadamente 6 veces más selectivo que el compuesto [I-76] y 7 veces más selectivo que el compuesto [I-4] del documento WO 07/095188. De manera similar, el compuesto [218] es 5 veces más selectivo para PLK1 frente a PLK3 en comparación con el compuesto [I-64] del documento WO 07/095188, aproximadamente 12 veces más selectivo que el compuesto [I-76] y 5 veces más selectivo que el compuesto [I-4] del documento WO 07/095188. Pueden encontrarse más detalles en los ejemplos adjuntos.
En otra realización preferida, los compuestos de la invención presentan propiedades farmacocinéticas y/o de 25 solubilidad superiores en comparación con compuestos relacionados estructuralmente ya conocidos en la técnica.
Por ejemplo, el compuesto [254] presenta propiedades farmacocinéticas y/o de solubilidad superiores con respecto a los ejemplos [I-76] y [I-253] del documento WO 07/095188, haciendo de ese modo que el compuesto sea más adecuado para el tratamiento de enfermedades. De nuevo, pueden encontrarse detalles adicionales de estos estudios comparativos en los ejemplos adjuntos.
De manera similar, el compuesto [371] presenta propiedades farmacocinéticas ventajosas en cuanto a su exposición sistémica y biodisponibilidad oral, en comparación con compuestos relacionados estructuralmente conocidos en la técnica.
35 Una realización preferida de la invención se refiere a un subconjunto de compuestos que se caracterizan por bajo flujo de salida celular por los transportadores de casete de unión a ATP (ABC) tales como la bomba de flujo de salida de fármacos P-glicoproteína (P-gp). Se sabe que los sustratos de flujo de salida de P-gp muestran comúnmente escasa absorción oral debido a la acción de P-gp que puede transportar el fármaco absorbido de vuelta al intestino [Ambudkar S.V., et al. (2003) Oncogene, 22, 7468-7485]. P-gp también puede reducir la exposición sistémica de sustratos promoviendo la excreción en bilis y orina. Además de ser bombas de flujo de salida de fármacos, los transportadores ABC pueden conferir resistencia a fármacos a células tumorales a través de expresión elevada. Se sabe ampliamente que la expresión de P-gp es un mecanismo mediante el cual las células cancerosas pueden adquirir resistencia a múltiples fármacos (MDR) [Gottesman M.M., et al. (2002) Nat. Rev.
45 Cancer, 2, 48-58]. Determinados tumores derivados de células que expresan normalmente P-gp pueden presentar resistencia a fármacos intrínseca [Ambudkar S.V., et al. (2005) Trends Pharmacol. Sci., 26, 385-387]. Los fármacos que se transportan fácilmente fuera de las células no se acumulan en niveles altos en células que expresan el transportador, limitando el éxito de la terapia debido a una interacción fármaco-diana reducida.
Por tanto, los compuestos que presentan bajo flujo de salida celular tienen potencialmente aplicaciones en el tratamiento oral de cáncer, tratamiento de tumores derivados de células epiteliales y tumores malignos resistentes a fármacos, así como tienen un potencial inferior de inducción de resistencia a fármacos a través de expresión aumentada de la bomba de flujo de salida. Los compuestos de la invención particularmente preferidos que presentan bajo flujo de salida celular incluyen los compuestos [371], [372] y [377]-[391]. Pueden encontrarse detalles
55 adicionales de ensayos de disponibilidad celular y estudios de flujo de salida celular en el ejemplo 9 y la figura 3.
Además, los compuestos de la invención que presentan baja asimetría de células parentales/MDR en ensayos de viabilidad celular también son más eficaces en la inhibición de PLK1 dentro de células tumorales MDR que los compuestos de la técnica anterior. Por tanto, estos compuestos tienen un mayor potencial como inhibidores de PLK terapéuticos. Se exponen detalles de experimentos que miden la inhibición de PLK1 en parejas de líneas celulares A2780 - A2780/ADR en los ejemplos adjuntos.
USO TERAPÉUTICO
65 Se ha encontrado que los compuestos de la invención presentan actividad antiproliferativa y por tanto se cree que son de uso en el tratamiento de trastornos proliferativos tales como cánceres, leucemias y otros trastornos asociados con proliferación celular descontrolada tales como psoriasis y reestenosis.
Por tanto, un aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento para tratar un trastorno proliferativo.
5 Tal como se usa en el presente documento la expresión “preparación de un medicamento” incluye el uso de uno o más de los compuestos descritos anteriormente de manera directa como medicamento además de su uso en un programa de selección para agentes antiproliferativos adicionales o en cualquier fase de la fabricación de un medicamento de este tipo.
Tal como se define en el presente documento, un efecto antiproliferativo dentro del alcance de la presente invención puede demostrarse mediante la capacidad para inhibir la proliferación celular en un ensayo de células completas in vitro, por ejemplo usando cualquiera de las líneas celulares AGS, H1299 o SJSA-1. Usando tales ensayos puede determinarse si un compuesto es antiproliferativo en el contexto de la presente invención.
15 Una realización preferida se refiere a uno o más compuestos de la invención para su uso en el tratamiento de trastornos proliferativos. Preferiblemente, el trastorno proliferativo es un cáncer o leucemia. El término trastorno proliferativo se usa en el presente documento en un sentido amplio para incluir cualquier trastorno que requiera el control del ciclo celular, por ejemplo trastornos cardiovasculares tales como reestenosis y cardiomiopatía, trastornos autoinmunitarios tales como glomerulonefritis y artritis reumatoide, trastornos dermatológicos tales como psoriasis, trastornos antiinflamatorios, antifúngicos, antiparasitarios tales como malaria, enfisema y alopecia. En estos trastornos, los compuestos de la presente invención pueden inducir apoptosis o mantener la estasis dentro de las células deseadas según se requiera.
25 En una realización preferida de la invención, el trastorno proliferativo es cáncer o leucemia, más preferiblemente cáncer.
En una realización preferida, el trastorno proliferativo es un tumor sólido.
En otra realización preferida, el trastorno proliferativo es un cáncer hematológico. Preferiblemente, el cáncer hematológico es leucemia, más preferiblemente, leucemias avanzadas o síndromes mielodisplásicos (MDS). Otros ejemplos incluyen leucemia mielógena aguda (LMA), leucemia linfocítica aguda (LLA) o leucemia linfocítica crónica (LLC).
35 En otra realización preferida, el trastorno proliferativo es glomerulonefritis.
Aún en otra realización preferida, el trastorno proliferativo es artritis reumatoide.
En otra realización preferida, el trastorno proliferativo es psoriasis.
En otra realización preferida, el trastorno proliferativo es un trastorno pulmonar obstructivo crónico.
Los compuestos de la invención pueden inhibir cualquiera de las etapas o estadios en el ciclo celular, por ejemplo, formación de la envuelta nuclear, salida de la fase quiescente del ciclo celular (G0), progresión a G1,
45 descondensación de cromosomas, rotura de la envuelta nuclear, START, iniciación de la replicación del ADN, progresión de la replicación del ADN, terminación de la replicación del ADN, duplicación de los centrosomas, progresión a G2, activación de funciones mitóticas o meióticas, condensación de cromosomas, separación de los centrosomas, nucleación de microtúbulos, formación y función del huso, interacciones con proteínas motoras de microtúbulos, separación y segregación de cromátidas, inactivación de funciones mitóticas, formación del anillo contráctil y funciones de citocinesis. En particular, los compuestos de la invención pueden influir en determinadas funciones génicas tales como unión de la cromatina, formación de complejos de replicación, permiso de replicación, fosforilación u otra actividad de modificación secundaria, degradación proteolítica, unión de microtúbulos, unión de actina, unión de septina, actividad de nucleación del centro de organización de microtúbulos y unión a componentes de rutas de señalización del ciclo celular.
55 En una realización de la invención, el compuesto de la invención se administra en una cantidad suficiente para inhibir al menos una enzima PLK.
También se da a conocer en el presente documento un método de tratamiento de un trastorno dependiente de PLK, comprendiendo dicho método administrar al sujeto que lo necesita un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tal como se definió anteriormente en una cantidad suficiente para inhibir PLK.
Las cinasas de tipo polo (PLK) constituyen una familia de serina/treonina proteína cinasas. Mutantes de Drosophila
65 melanogaster mitóticos en el locus polo presentan anomalías del huso [Sunkel et al., J. Cell Sci., 1988, 89, 25] y se encontró que polo codificaba para una cinasa mitótica [Llamazares et al., Genes Dev., 1991, 5, 2153]. En seres humanos, existen tres PLK estrechamente relacionadas [Glover et al., Genes Dev., 1998, 12, 3777]. Contienen un dominio cinasa catalítico amino-terminal altamente homólogo y sus extremos carboxilo-terminales contiene dos o tres regiones conservadas, las cajas polo. La función de las cajas polo sigue sin comprenderse completamente pero están implicadas en el direccionamiento de PLK a compartimentos subcelulares [Lee et al., Proc. Natl. Acad. Sci.
5 USA, 1998, 95, 9301; Leung et al., Nat. Struct. Biol., 2002, 9, 719], mediación de interacciones con otras proteínas [Kauselmann et al., EMBO J., 1999, 18, 5528] o pueden constituir parte de un dominio de autorregulación [Nigg, Curr. Opin. Cell Biol., 1998, 10, 776]. Además, se requiere la actividad de PLK1 dependiente de cajas polos para la citocinesis y transición metafase/anafase apropiadas [Yuan et al., Cancer Res., 2002, 62, 4186; Seong et al., J. Biol. Chem., 2002, 277, 32282].
10 Estudios han mostrado que PLK humanas regulan algunos aspectos fundamentales de la mitosis [Lane et al., J. Cell. Biol., 1996, 135, 1701; Cogswell et al., Cell Growth Differ., 2000, 11, 615]. En particular, se cree que la actividad de PLK1 es necesaria para la maduración funcional de centrosomas en G2 tardía/profase temprana y el posterior establecimiento de un huso bipolar. El agotamiento de PLK1 celular a través de la técnica de ARN de interferencia
15 pequeño (ARNip) también ha confirmado que se requiere está proteína para múltiples procesos mitóticos y para completar la citocinesis [Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2002, 99, 8672].
En una realización más preferida de la invención, el compuesto de la invención se administra en una cantidad suficiente para inhibir PLK1.
20 De las tres PLK humanas, PLK1 es la mejor caracterizada; regula varios efectos del ciclo de división celular, incluyendo el inicio de la mitosis [Toyoshima-Morimoto et al., Nature, 2001, 410, 215; Roshak et al., Cell. Signalling, 2000, 12, 405], la activación de los puntos de control de daño al ADN [Smits et al., Nat. Cell Biol., 2000, 2, 672; van Vugt et al., J. Biol. Chem., 2001, 276, 41656], la regulación del complejo promotor de la anafase [Sumara et al., Mol.
25 Cell, 2002, 9, 515; Golan et al., J. Biol. Chem., 2002, 277, 15552; Kotani et al., Mol. Cell, 1998, 1, 371], la fosforilación del proteasoma [Feng et al., Cell Growth Differ., 2001, 12, 29] y la duplicación y maduración de los centrosomas [Dai et al., Oncogene, 2002, 21, 6195].
En una realización particularmente preferida, los compuestos de la invención son inhibidores antagonistas de ATP 30 de PLK1.
En el presente contexto antagonismo de ATP se refiere a la capacidad de un compuesto inhibidor para disminuir o impedir la actividad catalítica de PLK, es decir, la transferencia de fósforo desde el ATP hasta un sustrato de PLK macromolecular, en virtud de la unión reversible o irreversible en el sitio activo de la enzima de tal manera que altera
35 o suprime la unión de ATP.
En otra realización preferida, el compuesto de la invención se administra en una cantidad suficiente para inhibir PLK2 y/o PLK3.
40 También se da a conocer en el presente documento un método de inhibición de PLK en una célula que comprende poner en contacto dicha célula con una cantidad de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de manera que se inhibe PLK en dicha célula.
También se da a conocer en el presente documento un método de tratamiento de un trastorno proliferativo que
45 comprende inhibir PLK administrando a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de modo que se produzca el tratamiento de dicho trastorno proliferativo.
En otra realización preferida, el compuesto de la invención se administra en una cantidad suficiente para inhibir al 50 menos una aurora cinasa. Preferiblemente, la aurora cinasa es aurora cinasa A, aurora cinasa B o aurora cinasa C.
También se da a conocer en el presente documento un método de tratamiento de un trastorno dependiente de aurora cinasa, comprendiendo dicho método administrar a un sujeto que lo necesita un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tal como se definió anteriormente en una cantidad suficiente para
55 inhibir una aurora cinasa.
Otro aspecto se refiere al uso de un compuesto de la invención para inhibir una proteína cinasa.
Un aspecto adicional se refiere a un método de inhibición de una proteína cinasa, comprendiendo dicho método 60 poner en contacto dicha proteína cinasa con un compuesto de la invención.
Preferiblemente, la proteína cinasa se selecciona de una aurora cinasa y una PLK. Más preferiblemente, la proteína cinasa es una PLK, más preferiblemente PLK1.
65 COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Un aspecto adicional de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención mezclado con uno o más diluyentes, excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables. A pesar de que los compuestos de la presente invención (incluyen sus sales farmacéuticamente aceptables, ésteres y solvatos farmacéuticamente aceptables) pueden administrarse solos, generalmente se administrarán en mezcla con un
5 portador, excipiente o diluyente farmacéutico, particularmente para terapia en seres humanos. Las composiciones farmacéuticas pueden ser para su uso humano o animal en medicina humana y veterinaria.
Pueden encontrarse ejemplos de tales excipientes adecuados para las diversas formas diferentes de composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento en “Handbook of Pharmaceutical Excipients”, 2ª edición, (1994), editado por A Wade y PJ Weller.
En la técnica farmacéutica se conocen bien portadores o diluyentes aceptables para su uso terapéutico, y se describen, por ejemplo, en Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985).
15 Los ejemplos de portadores adecuados incluyen lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, manitol, sorbitol y similares. Los ejemplos de diluyentes adecuados incluyen etanol, glicerol y agua.
La elección del portador, excipiente o diluyente farmacéutico puede seleccionarse con respecto a la vía de administración prevista y la práctica farmacéutica convencional. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender como, o además de, el portador, excipiente o diluyente cualquier aglutinante, lubricante, agente de suspensión, agente de recubrimiento, agente de solubilización adecuado.
Los ejemplos de aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa, lactosa anhidra, lactosa de flujo libre, beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas, tales como goma
25 arábiga, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa y polietilenglicol.
Los ejemplos de lubricantes adecuados incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares.
Pueden proporcionarse conservantes, estabilizadores, tintes e incluso agentes aromatizantes en la composición farmacéutica. Los ejemplos de conservantes incluyen benzoato de sodio, ácido sórbico y ésteres de ácido phidroxibenzoico. También pueden usarse antioxidantes y agentes de suspensión.
SALES/ÉSTERES
35 Los compuestos de la invención pueden estar presentes como sales, en particular sales farmacéuticamente aceptables.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención incluyen sales de adición de ácido o base adecuadas de los mismos. Puede encontrarse una revisión de sales farmacéuticas adecuadas en Berge et al, J Pharm Sci, 66, 1-19 (1977). Se forman sales, por ejemplo con ácidos inorgánicos fuertes tales como ácidos minerales, por ejemplo ácido sulfúrico, ácido fosfórico o hidrácidos halogenados; con ácidos carboxílicos orgánicos fuertes, tales como ácidos alcanocarboxílicos de 1 a 4 átomos de carbono que no están sustituidos o están sustituidos (por ejemplo, con halógeno), tales como ácido acético; con ácidos dicarboxílicos saturados o insaturados,
45 por ejemplo oxálico, malónico, succínico, maleico, fumárico, ftálico o tetraftálico; con ácidos hidroxicarboxílicos, por ejemplo ácido ascórbico, glicólico, láctico, málico, tartárico o cítrico; con aminoácidos, por ejemplo ácido aspártico o glutámico; con ácido benzoico; o con ácidos sulfónicos orgánicos, tales como ácidos alquil(C1-C4) o arilsulfónicos que no están sustituidos o están sustituidos (por ejemplo, con un halógeno) tales como ácido metano o ptoluenosulfónico. Preferiblemente, la sal es una sal de HCl.
ENANTIÓMEROS/TAUTÓMEROS
En todos los aspectos de la presente invención tratados anteriormente, la invención incluye, cuando sea apropiado todos los enantiómeros y tautómeros de los compuestos de la invención. El experto en la técnica reconocerá
55 compuestos que presentan propiedades ópticas (uno o más átomos de carbono quirales) o características tautoméricas. Los enantiómeros y/o tautómeros correspondientes pueden aislarse/prepararse mediante métodos conocidos en la técnica.
ESTEREOISÓMEROS E ISÓMEROS GEOMÉTRICOS
Algunos de los compuestos de la invención pueden existir como estereoisómeros y/o isómeros geométricos, por ejemplo pueden presentar uno o más centros asimétricos y/o geométricos y de ese modo pueden existir en dos o más formas estereoisoméricas y/o geométricas. La presente invención contempla el uso de todos los estereoisómeros e isómeros geométricos individuales de esos agentes inhibidores, y mezclas de los mismos. Los
65 términos usados en las reivindicaciones abarcan estas formas, siempre que dichas formas conserven la actividad funcional apropiada (aunque no necesariamente en el mismo grado).
La presente invención también incluye todas las variaciones isotópicas adecuadas del agente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Una variación isotópica de un agente de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se define como una en la que al menos un átomo se reemplaza por un 5 átomo que tiene el mismo número atómico pero una masa atómica diferente de la masa atómica encontrada habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en el agente y sales farmacéuticamente aceptables del mismo incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor y cloro tales como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F y 36Cl, respectivamente. Determinadas variaciones isotópicas del agente y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por ejemplo, en las que se incorpora un isótopo radiactivo tal como 3H o 14C, son útiles en estudios de distribución tisular de fármaco y/o sustrato. Se prefieren particularmente isótopos tritiados, es decir, 3H, y de carbono-14, es decir, 14C, por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos tales como deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, aumento de la semivida in vivo o reducción de los requisitos de dosificación y por tanto pueden preferirse
15 en algunas circunstancias. Pueden prepararse generalmente variaciones isotópicas del agente de la presente invención y sales farmacéuticamente aceptables del mismo de esta invención mediante procedimientos convencionales usando variaciones isotópicas apropiadas de reactivos adecuados.
SOLVATOS
La presente invención también incluye formas de solvato de los compuestos de la presente invención. Los términos usados en las reivindicaciones abarcan estas formas.
POLIMORFOS
25 La invención se refiere además a los compuestos de la presente invención en sus diversas formas cristalinas, formas polimórficas y formas anhidras. Está bien establecido dentro de la industria farmacéutica que pueden aislarse compuestos químicos en cualquiera de tales formas variando ligeramente el método de purificación y o aislamiento de los disolventes usados en la preparación de síntesis de tales compuestos.
ADMINISTRACIÓN
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden adaptarse para las vías de administración oral, rectal, vaginal, parenteral, intramuscular, intraperitoneal, intraarterial, intratecal, intrabronquial, subcutánea,
35 intradérmica, intravenosa, nasal, bucal o sublingual.
Para la administración oral, se hace un uso particular de comprimidos preparados mediante compresión, píldoras, comprimidos, cápsulas de gelatina, gotas y cápsulas. Preferiblemente, estas composiciones contienen desde 1 hasta 250 mg y más preferiblemente desde 10-100 mg, de principio activo por dosis.
Otras formas de administración comprenden disoluciones o emulsiones que pueden inyectarse por vía intravenosa, pro vía intraarterial, por vía intratecal, por vía subcutánea, por vía intradérmica, por vía intraperitoneal o por vía intramuscular, y que se preparan a partir de disoluciones estériles o esterilizables. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención también pueden estar en forma de de supositorios, óvulos vaginales, suspensiones,
45 emulsiones, lociones, pomadas, cremas, geles, pulverizaciones, disoluciones o polvos para uso externo.
Un medio alternativo de administración transdérmica es mediante el uso de un parche cutáneo. Por ejemplo, el principio activo puede incorporarse en una crema que consiste en una emulsión acuosa de polietilenglicoles o parafina líquida. El principio activo también puede incorporarse, a una concentración de entre el 1 y el 10% en peso, en una pomada que consiste en una base de cera blanca o parafina blanda blanca junto con tales estabilizadores y conservantes según puedan requerirse.
Las formas inyectables pueden contener entre 10 - 1000 mg, preferiblemente entre 10 - 250 mg, de principio activo por dosis. Las composiciones pueden formularse en forma farmacéutica unitaria, es decir, en forma de porciones
55 diferenciadas que contienen una dosis unitaria, o un múltiplo o subunidad de una dosis unitaria.
DOSIFICACIÓN
Un experto habitual en la técnica puede determinar fácilmente una dosis apropiada de una de las presentes composiciones para administrar a un sujeto sin experimentación excesiva. Normalmente, un médico determinará la dosificación real que será la más adecuada para un paciente individual y dependerá de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la duración de la acción de ese compuesto, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el modo y el momento de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad del estado particular y el individuo 65 que se somete a terapia. Las dosificaciones dadas a conocer en el presente documento son a modo de ejemplo del caso promedio. Por supuesto puede haber casos individuales en los que sean necesarios intervalos de dosificación
superiores o inferiores, y éstos están dentro del alcance de esta invención.
Dependiendo de la necesidad, el agente puede administrarse a una dosis de desde 0,01 hasta 30 mg/kg de peso corporal, tal como desde 0,1 hasta 10 mg/kg, más preferiblemente desde 0,1 hasta 1 mg/kg de peso corporal.
5 En una realización a modo de ejemplo, se administrarán una o más dosis de 10 a 150 mg/día al paciente para el tratamiento de tumores malignos.
COMBINACIONES
10 En una realización particularmente preferida, el uno o más compuestos de la invención se administran en combinación con uno o más de otros agentes activos, por ejemplo, fármacos anticancerígenos existentes disponibles en el mercado. En tales casos, los compuestos de la invención pueden administrarse consecutiva, simultánea o secuencialmente con el uno o más de otros agentes activos.
15 Los fármacos anticancerígenos en general son más eficaces cuando se usan en combinación. En particular, es deseable una terapia de combinación con el fin de evitar un solapamiento de las toxicidades principales, el mecanismo de acción y el/los mecanismo(s) de resistencia. Además, también es deseable administrar la mayoría de los fármacos a sus dosis toleradas máximas con intervalos de tiempo mínimos entre tales dosis. Las principales
20 ventajas de la combinación de fármacos quimioterápicos es que pueden promover posibles efectos sinérgicos o aditivos a través de interacciones bioquímicas y también pueden disminuir la aparición de resistencia en células tumorales tempranas que de lo contrario podrían ser sensibles a la quimioterapia inicial con un único agente. Un ejemplo del uso de interacciones bioquímicas en la selección de combinaciones de fármacos se demuestra mediante la administración de leucovorina para aumentar la unión de un metabolito intracelular activo de 5-fluorouracilo a su
25 diana, timidilato sintasa, aumentado así sus efectos citotóxicos.
Se usan numerosas combinaciones en los tratamientos actuales de cáncer y leucemia. Puede encontrarse una revisión más extensa de las prácticas médicas en “Oncologic Therapies” editado por E.E. Vokes y H. M. Golomb, publicado por Springer.
30 Pueden sugerirse combinaciones beneficiosas estudiando la actividad inhibidora del crecimiento de los compuestos de prueba con agentes que se sabe o se sospecha que son valiosos en el tratamiento de un cáncer particular inicialmente o líneas celulares derivadas de ese cáncer. Este procedimiento también puede usarse para determinar el orden de administración de los agentes, es decir, antes, simultáneamente o tras la administración. Tal
35 programación puede ser una característica de todos los agentes que actúan en el ciclo identificados en el presente documento.
PROCESO
40 Otro aspecto se refiere a un procedimiento para preparar un compuesto de la invención, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de:
(i) convertir un compuesto de fórmula (II) en un compuesto de fórmula (IV) o bien directamente o bien mediante
aislamiento de un compuesto de fórmula (III); y 45
(ii) convertir dicho compuesto de fórmula (IV) en un compuesto de fórmula (I)
50 Preferiblemente, la etapa (i) comprende calentar dicho compuesto de fórmula (II) con NH4Cl y Fe en EtOH/H2O.
La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos no limitativos, y con referencia a las siguientes figuras, en las que:
55 la figura 1 muestra el área bajo la curva (AUC) para la concentración plasmática de compuestos A-H frente al tiempo para cada compuesto sometido a prueba. El vehículo de dosificación a lo largo de estos experimentos permaneció constante (intravenoso = tampón citrato pH 3, 1 ml/kg; oral = DMA/PEG400/tampón tartrato 10 mM, pH 4 (1:3:6), 5 ml/kg);
la figura 2 representa los mismos datos que la figura 1, pero en forma de biodisponibilidad oral (% de F) para cada compuesto;
5 la figura 3 muestra una comparación de compuestos seleccionados frente a compuestos de la técnica anterior A’-J’ (definidos en la tabla 8) en células tumorales MDR y parentales. Se presentan razones de asimetría en relación con el compuesto [378].
Ejemplos
10 Procedimiento experimental general
Se adquirieron productos químicos y disolventes de fuentes comerciales y se usaron tal como se recibieron a menos que se indique lo contrario. Se usó MgSO4 anhidro como agente de secado convencional para disoluciones 15 orgánicas a menos que se indique lo contrario. Se registraron los espectros de RMN usando un instrumento Varian INOVA-500. Se notifican los desplazamientos químicos en partes por millón en relación con un patrón de tetrametilsilano interno. Las constantes de acoplamiento (J) se citan hasta el 0,1 Hz más próximo. Se usan las siguientes abreviaturas: s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuartete; qu, quintuplete; m, multiplete y a, ancho. Los espectros de masas se obtuvieron usando un espectrómetro de masas de cuadrupolo individual ZQ2000 de Waters
20 con ionización por electrospray (ESI). Se realizó RP-HPLC analítica y preparativa usando cualquiera de las columnas Vydac 218TP54 (250 x 4,6 mm) y Vydac 218TP1022 (250 x 22 mm) usando una elución en gradiente lineal de sistemas de agua/acetonitrilo (que contienen el 0,1% de ácido trifluoroacético) a velocidades de flujo de 1 ml/min. (analítica) y 9 ml/min. (preparativa). Los gradientes analíticos usados fueron los siguientes:
Método
% de acetonitrilo Tiempo = 0 min. % de acetonitrilo Tiempo = 20 min. % de acetonitrilo Tiempo = 25 min.
Vydac 1
0 60 100
Vydac 2
10 70 100
Vydac 3
20 80 100
25 Alternativamente, columnas Xbridge (100 x 4,6 mm) y Xbridge (100 x 19 mm) usando un gradiente lineal de sistemas de agua/acetonitrilo (que contienen el 0,1% de hidróxido de amonio) a velocidades de flujo de 1 ml/min. (analítica) y 20 ml/min. (preparativa).
30 Los gradientes analíticos usados fueron los siguientes:
Método
% de acetonitrilo Tiempo = 0 min. % de acetonitrilo Tiempo = 5 min. % de acetonitrilo Tiempo = 10 min. % de acetonitrilo Tiempo = 12 min.
XBridge1 XBridge2 XBridge3
0 10 20 70 50 100 100 100
Se usaron gel de sílice (EM Kieselgel 60, 0,040-0,063 mm, Merck) o columnas pre-rellenadas ISOLUTE (Biotage) para cromatografía ultrarrápida. 35 Abreviaturas: DIPEA diisopropiletilamina 40 DCM diclorometano DMF dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido 45 EtOAc acetato de etilo EtOH etanol 50 HCl ácido clorhídrico
K2CO3 carbonato de potasio MeI yoduro de metilo
5 MeOH metanol MgSO4 sulfato de magnesio NaH hidruro de sodio
10 NaCl cloruro de sodio NH4Cl cloruro de amonio 15 MR mezcla de reacción ta temperatura ambiente TBTU tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronio 20 TFA ácido trifluoroacético TFE 2,2,2-trifluoroetanol 25 THF tetrahidrofurano EJEMPLO 1 (Referencia)
Compuesto [2]: 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N-(1-metil30 piperidin-4-il)-benzamida
1. Cloruro de tionilo (2,1 eq.), MeOH, 0ºC para adición, 2 h de reflujo; 2. ciclopentanona (0,77 eq.), acetato de sodio
35 (0,77 eq.), triacetoxiborohidruro de sodio (1,11 eq.), DCM, 16 h a ta; 3. 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (1,1 eq.), K2CO3 (1 eq.), acetona, 16 h a 0ºC - ta; 4. NH4Cl (8,5 eq.), Fe (8 eq.), EtOH/H2O (4:1), 2,5 h a reflujo; - no aislado 5. MeI (1,18 eq.), NaH (1,07 eq.), DMF, -10ºC - ta, 3 h; 6. ácido 4-amino-3-metoxibenzoico (1,5 eq.), HCl conc., H2O/EtOH (4:1), 48 h a reflujo; 7. DIPEA (2 eq.), TBTU (1,1 eq.), 4-aminometilpiperidina (1,2 eq.), DCM, 16 h a ta.
40 Etapa 1: 3-aminopropanoato de metilo
Se añadió β-alanina (9,37 g, 0,105 mol) a MeOH (50 ml) y se enfrió la mezcla hasta 0ºC usando un baño de hielo antes de la adición gota a gota de cloruro de tionilo [precaución: adición exotérmica]. Una vez se completó la adición, se calentó la reacción hasta ta, entonces se sometió a reflujo durante 2 h. A continuación se evaporó el disolvente a
45 presión reducida y se trató el aceite resultante con éster t-butilmetílico y se separaron por filtración los cristales resultantes y se secaron adicionalmente a vacío para dar un sólido cristalino de color blanco (11 g, cuant.); 1H (DMSO-d6): δ 2,73 (dd, J= 7 Hz, 2H, CH2), 2,98 (dd, J= 7 Hz, 2H, CH2), 3,61 (s, 3H, CH3), 8,28 (sa, 2H, NH2); EM positivo: 104,1.
50 Etapa 2: 3-(ciclopentilamino)propanoato de metilo
Se solubilizó 3-aminopropanoato de metilo (9,37 g, 0,09 mol) en DCM (200 ml) y se añadieron ciclopentanona (6,43 ml, 0,07 mol), acetato de sodio (5,96 g, 0,07 mol) y triacetoxiborohidruro de sodio (22 g, 0,10 mol). Se agitó la reacción a ta durante 16 h. Entonces se añadieron bicarbonato de sodio al 20% (100 ml) e hidróxido de sodio 2 M
5 (50 ml) y se extrajo el producto usando DCM/H2O. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con NaCl sat., se secaron usando MgSO4, se filtraron y se evaporó el filtrado a presión reducida y se secó adicionalmente a vacío para dar el producto como un aceite de color amarillo pálido (8,90 g, 55%); EM positivo: 172,4.
Etapa 3: 3-[ciclopentil(2-cloro-5-nitropirimidin-4-il)amino]propanoato de metilo
Se añadieron 3-(ciclopentilamino)propanoato de metilo (838 mg, 0,005 mol) y K2CO3 (676 mg, 0,005 mol) a acetona (5 ml) y se enfrió la mezcla resultante hasta 0ºC usando un baño de hielo antes de la adición de 2,4-dicloro-5nitropirimidina (1,044 g, 1,1 eq.). Entonces se calentó la mezcla de reacción (MR) hasta ta y se continuó agitando durante 16 h adicionales antes de la adición de 0,12 eq. adicionales de la pirimidina. Entonces se continuó agitando
15 durante 3 h adicionales. Entonces se evaporó la MR a presión reducida y se extrajo el producto usando EtOAc/H2O. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con NaCl sat., se secaron usando MgSO4, se filtraron y se evaporó el filtrado a presión reducida y se secó adicionalmente a vacío para dar el producto como un residuo aceitoso de color marrón (1,04 g, 65%); Rt = 16 min. (Vydac 1); ME positivo: 329,1.
Etapa 4: 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,8,9-tetrahidro-6H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
Se añadieron 3-[ciclopentil(2-cloro-5-nitropirimidin-4-il)amino]propanoato de metilo (1,00 g, 0,003 mol) y NH4Cl (1,38 g, 0,025 mol, 8,5 eq.) a EtOH/H2O (4:1 ml, 10 ml) y se calentó la mezcla hasta reflujo antes de la adición en porciones de polvo de hierro (1,36 g, 0,024 mol, 8 eq.). Entonces se sometió la MR a reflujo durante 2 h adicionales.
25 Se monitorizó el avance de la reacción mediante HPLC y cuando no quedaba MP se filtró la MR en caliente a través de Celite. Se lavó el Celite con EtOAc (10 ml) y EtOH (10 ml) [ambos calientes] y se evaporó el filtrado a presión reducida y se secó adicionalmente a vacío para dar el producto como un sólido de color marrón (350 mg, 43%); Rt = 12 min. (Vydac 1); EM positivo: 267,2.
Etapa 5: 2-cloro-9-ciclopentil-5-metil-5,7,8,9-tetrahidro-6H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
Se añadieron 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,8,9-tetrahidro-6H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona (318 mg, 0,0012 mol) y MeI (88 μl, 0,0014 mol, 1,18 eq.) a DMF (5 ml) y se enfrió la disolución hasta -10ºC usando acetona/nieve carbónica antes de la adición de NaH (30 mg, 0,0013 mol, 1,07 eq.). Entonces se agitó la MR a 0ºC durante 30 min. y a ta
35 durante 30 min. Se concentró la MR y se extrajo el producto usando EtOAc/H2O. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con NaCl sat., se secaron usando MgSO4, se filtraron y se evaporó el filtrado a presión reducida y se secó adicionalmente a vacío para dar el producto como un residuo aceitoso de color púrpura (252 mg, 75%); Rt = 13 min. (Vydac 1); EM positivo: 281,2.
Etapa 6: (compuesto [1]) ácido 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)-benzoico.
Método de acoplamiento A
45 Se añadieron 2-cloro-9-ciclopentil-5-metil-5,7,8,9-tetrahidro-6H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona (248 mg, 0,0009 mol) y ácido 4-amino-3-metoxibenzoico (221 mg, 0,0013 mol, 1,5 eq.), HCl conc. (152 μl) y H2O/EtOH (8:2 ml) a un matraz de fondo redondo y se calentó la MR resultante hasta reflujo durante 4h. Se monitorizó el avance de la reacción mediante HPLC y cuando no quedaba material de partida (tiempo de reacción de 4 h), se concentró la MR a presión reducida y se extrajo el producto usando DCM/H2O. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con NaCl sat., se secaron usando MgSO4, se filtraron y se evaporó el filtrado a presión reducida y se secó adicionalmente a vacío para dar un residuo aceitoso de color marrón. Se añadieron algunas gotas de MeOH al residuo y se recogió el ppt sólido formado mediante filtración por succión, se lavó con MeOH y se secó adicionalmente a vacío para dar el producto como un sólido de color púrpura (51 mg, 14%); Rt = 11,2 min. (0_60_20 min., pureza del 100%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,61 (sa, 4H, ciclopent-H), 1,72 (sa, 2H, ciclopent-H), 1,94 (sa, 2H,
55 ciclopent-H), 2,59 (dd, J= 4,5 Hz, 2H, CH2), 3,18 (s, 3H, CH3), 3,63 (dd, J = 4,5 Hz, 2H, CH2), 3,95 (s, 3H, CH3), 7,51 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8 Hz, 1H, phe-H), 7,82 (s, 1H, 8,10 (s, 1H, 8,47 (d, J = 8,5 Hz, 1H, phe-H), 12,64 (sa, 1H, NH); EM positivo: 412,2.
Etapa 7: (compuesto [2]): 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
Se añadieron ácido 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)benzoico (35 mg, 0,085 mmol), DIPEA (28 μl, 0,17 mmol, 2 eq.) y TBTU (30 mg, 0,093 mmol, 1,1 eq.) a 3 ml de DCM y se agitó la disolución resultante a ta durante 30 min. antes de la adición de 4-aminometilpiperidina (13 μl, 0,10 65 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 16h. Se concentró la MR y se extrajo el producto usando
DCM/H2O. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con NaCl sat., se secaron usando MgSO4, se filtraron y se evaporó el filtrado a presión reducida y se secó adicionalmente a vacío para dar un residuo aceitoso de color amarillo (21 mg, 49%); Rt = 9,86 min. (0_60_20 min., pureza del 100%); 1H-RMN (CD3OD): δ 1,69 - 1,75 (m, 6H), 1,82 (sa, 2H), 1,96 - 1,99 (m, 2H), 2,03 - 2,05 (sa, 2H), 2,18 - 2,23 (m, 2H), 2,34 (s, 3H, CH3), 2,68 (dd, J= 4,5 Hz, 5 2H, CH2), 2,95 - 2,97 (m, 2H), 3,28 (s, 3H, CH3), 3,73 (dd, J = 4,5 Hz, 2H, CH2), 3,89 - 3,94 (m, 1H, CH), 4,01 (s, 3H, CH3), 4,91 - 4,96 (m, 1H, CH), 7,49 - 7,51 (m, 2H), 8,02 (sa, 1H), 8,50 (d, J = 8,5 Hz, 1H, phe-H); EM positivo: 508,2.
Productos intermedios de aminoéster
10 Se prepararon los siguientes productos intermedios mediante el método descrito en el ejemplo 1, etapa 2:
Éster metílico del ácido 3-ciclopentilamino-butírico
EM positivo: 186,3
Éster metílico del ácido 3-ciclohexilamino-butírico
EM positivo: 200,3
Éster metílico del ácido 3-ciclopentilamino-2-metil-propiónico
1H-RMN (CDCl3): 1,18 (3H, d, J 7Hz, CH3), 1,33 (2H, m, CH2), 1,53 (2H, m, CH2), 1,67 (2H, m, CH2), 1,82 (2H, m, CH2), 2,63 (2H, m, CH2), 2,87 (1H, m, CH), 3,06 (1H, m, CH), 3,69 (3H, s, OCH3)
Éster metílico del ácido 3-ciclohexilamino-propiónico
35 EM positivo: 186,4.
Éster metílico del ácido 3-ciclopentilamino-4-metil-pentanoico
40
1H-RMN (CDCl3): 1,18 (3H, d, J 7Hz, CH3), 1,33 (2H, m, CH2), 1,53 (2H, m, CH2), 1,67 (2H, m, CH2), 1,82 (2H, m, CH2), 2,63 (2H, m, CH2), 2,87 (1H, m, CH), 3,06 (1H, m, CH), 3,69 (3H, s, OCH3)
45
Éster metílico del ácido 3-(1-etil-propilamino)-propiónico
1H-RMN (CDCl3): 0,89 (6H, t, J 8Hz, CH3), 1,44 (4H, m, CH2CH3), 1,77 (1H, sa, NH), 2,39 (1H, m, CH), 2,53 (2H, m, CH2), 2,89 (2H, m, CH2), 3,69 (3H, s, OCH3)
Éster metílico del ácido 3-(tetrahidro-piran-4-ilamino)-propiónico
1H-RMN (CDCl3): 1,41 (2H, m, CH2), 1,86 (2H, m, CH2), 2,54 (2H, m, CH2), 2,71 (1H, m, CH), 2,95 (2H, m, CH2), 3,44 (2H, t, J 11,5Hz), CH2), 3,71 (3H, s, OCH3), 3,99 (2H, d, J 11Hz, CH2)
Éster metílico del ácido 1-ciclopentilaminometil-ciclopropanocarboxílico
10 1H-RMN (CDCl3): 0,84 (3H, t, J 7Hz, CH3), 1,25 (4H, m, CH2), 1,37 (2H, m, CH), 1,54 (2H, m, CH), 1,70 (2H, m, CH), 1,83 (2H, m, CH), 2,71 (2H, s, CH2), 3,10 (1H, m, CH), 4,16 (2H, q, J 7Hz, CH2CH3)
Éster etílico del ácido 3-ciclopentilamino-2,2-dimetil-propiónico
1H-RMN (CDCl3): 1,19 (6H, s, CH3), 1,25 (3H, t, J 7Hz, CH3), 1,28 (2H, m, CH), 1,49 (2H, m, CH), 1,65 (2H, m, CH), 2,64 (1H, s, CH2), 3,01 (1H, m, CH), 4,10 (2H, q, J 7,5Hz, CH2)
20 Método alternativo, etapa 2a: 3-aminopropanoato de metilo
Se añadió gota a gota acrilato de metilo (4,50 ml, 4,302 g, 49,97 mmol, 0,99 eq.) a una disolución de
25 ciclopentilamina (5,00 ml, 4,315 g, 50,68 mmol) en metanol (120 ml) a -60ºC (nieve carbónica, acetona). Se permitió que la mezcla de reacción se calentase hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se eliminó el disolvente (presión reducida, vacío) para proporcionar el producto como un aceite (8,236 g, rendimiento en bruto del 96%). La RMN protónica indicó que el producto contenía ~25% de un subproducto dialquilado.
30 Los siguientes compuestos se prepararon mediante un método similar.
Éster etílico del ácido 3-fenilamino-propiónico
35 1H-RMN (CDCl3): 1,29 (3H, t, J 7,5Hz, CH3), 2,64 (2H, t, J 6,5Hz, CH2), 3,48 (2H, t, J 6,5Hz, CH2), 4,18 (2H, q, J 7Hz, CH2), 6,65 - 6,74 (5H, m, Ar-H)
Productos intermedios de nitropirimidina 40 También se prepararon los siguientes productos intermedios mediante el método descrito en el ejemplo 1, etapa 3:
Éster metílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-butírico
Rt = 18,0 min. (0_60_20 min.); EM positivo: 343,20.
Éster metílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclohexil-amino]-butírico
EM positivo: 357,2.
Éster metílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-2-metil-propiónico
1H-RMN (CDCl3): 1,22 (3H, d, J 12Hz, CH3), 1,57 (2H, m, CH2), 1,76 (2H, m, CH2), 1,93 (2H, m, CH2), 1,98 (2H, m, 10 CH2), 3,18 (1H, s, CH), 3,61 (3H, m, CH + CH2), 3,68 (3H, s, OCH3), 8,74 (1H, s, Pyr-H)
Éster metílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclohexil-amino]-propiónico
Rt = 17,6 min. (Vydac 1); EM positivo: 343,1.
Éster metílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-4-metil-pentanoico
1H-RMN (CDCl3): 0,94 (6H, t, J 7Hz), 1,45 -1,82 (7H, m, 3 x CH2 + CH), 2,17 (1H, m, CH), 2,69 (2H, m, 2 x CH), 3,35 (2H, m, H2), 2,58 (1H, m, CH), 3,73 (3H, s, OCH3), 8,64 (1H, s, Pyr-H)
25 Éster metílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-(1-etil-propil)-amino]-propiónico
EM (positivo) 331,1, 333,1
Éster metílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-amino]-propiónico
35 EM (positivo) 345,1, 347,0; tR = 12,62 min. (Vydac 1).
Éster etílico del ácido 3-[bencil-(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-amino]-propiónico
1H-RMN (CDCl3): 1,26 (3H, t, J 7Hz, CH3), 2,73 (2H, t, J 7Hz, CH2), 3,85 (2H, m, CH2), 4,16 (2H, q, J 7Hz, CH2), 4,71 (2H, s, CH2), 7,20 (2H, m, Ar-H), 7,37 (3H, m, Ar-H), 8,69 (1H, s, Pyr-H).
Éster etílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-fenil-amino]-propiónico
10 1H-RMN (CDCl3): 1,22 (3H, t, J 7,5Hz, CH3), 2,73 (2H, t, J 7Hz, CH2), 4,09 (2H, q, J 7Hz, CH2), 4,43 (2H, t, J 7Hz, CH2), 7,14-7,48 (5H, m, Ar-H), 8,57 (1H, s, Pyr-H).
Éster etílico del ácido 1-{[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-metil}ciclopropanocarboxílico
EM (positivo) 381,1, 383,3; tR = 4,80 min. (XBridge 1).
Éster etílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-2,2-dimetil-propiónico
EM (positivo) 371,1, 373,1; tR=4,67 min. (XBridge 1).
25 Ésteres de aminopirimidina que conducen a cloropirimidin-diazepinas Se aislaron los siguientes compuestos a partir de la reacción de reducción mostrada en el ejemplo 1, etapa 4 como productos intermedios no ciclados.
30 Éster etílico del ácido 3-[(5-amino-2-cloro-pirimidin-4-il)-bencil-amino]-propiónico
1H-RMN (CDCl3): 1,26 (3H, t, J 7,5Hz, CH3), 2,73 (2H, t, J 7Hz, CH2), 3,86 (2H, t, J 7Hz, CH2), 4,14 (2H, q, J 7Hz, 35 CH2), 4,86 (2H, s, CH2), 7,26 - 7,39 (5H, m, Ar-H), 7,94 (1H, s, Pyr-H)
Éster etílico del ácido 3-[(5-amino-2-cloro-pirimidin-4-il)-fenil-amino]-propiónico
EM (positivo) 321,2, 323,2; tR= 3,54 min. (XBridge 1).
Éster etílico del ácido 1-{[(5-amino-2-cloro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-metil}-ciclopropanocarboxílico
EM (positivo) 339,2, 341,2; tR = 4,15 min. (XBridge 1).
Éster etílico del ácido 3-[(5-amino-2-cloro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-2,2-dimetil-propiónico
EM (positivo) 341,2, 343,2; tR = 4,25 min. (XBridge 1). 10 Entonces se ciclaron los compuestos anteriores usando el siguiente método.
Se calentó el compuesto relevante (5 mmol) en DMF (10 ml) hasta 140ºC durante 2 horas. Se evaporó el disolvente a vacío, se añadió acetato de etilo (10 ml), y se filtró el sólido resultante y se secó a vacío para dar los compuestos 15 enumerados a continuación.
Nota: Esta reacción también puede llevarse a cabo con DMSO/NaH
9-Bencil-2-cloro-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
1H-RMN (DMSO): 2,72 (2H, m, CH2), 3,67 (2H, m, CH2), 4,86 (2H, s, CH2), 7,26-7,37 (5H, m, Ar-H), 7,88 (1H, s, Pyr-H), 9,77 (1H, s, NH)
2-Cloro-9-fenil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
30 EM (positivo) 275,2, 277,2; tR = 2,80 min. (XBridge 1).
2-Cloro-9-ciclopentil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-7,1’-ciclopropan]-6-ona
2-Cloro-9-ciclopentil-7,7-dimetil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
EM (positivo) 295,1, 297,2; tR = 3,58 min. (XBridge 1). Diazepinonas alquiladas También se prepararon los siguientes productos intermedios mediante el método descrito en el ejemplo 1, etapa 5:
2-Cloro-9-ciclopentil-5,8-dimetil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
2-Cloro-9-ciclopentil-5,7-dimetil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
EM (positivo) 295,1, 297,2; tR = 9,11 min. (XBridge 2).
2-Cloro-9-ciclopentil-8-isopropil-5-metil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
EM (positivo) 323,1, 325,1; tR = 10,17 min. (XBridge 2). 20 2-Cloro-9-ciclopentil-5-etil-7-metil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
1H-RMN (CDCl3): 1,08 (6H, m, 2 x CH3), 1,38 (1H, m, CH), 1,55 -1,70 (5H, m, CH + CH2), 1,70 (1H, m, CH), 2,10 25 (1H, m, CH), 2,73 (1H, m, CH), 3,48 (2H, m, CH2), 4,03 (1H, m, CH), 4,72 (1H, m, CH), 7,98 (1H, s, Pyr-H)
2-Cloro-9-(1-etil-propil)-5-metil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
EM (positivo) 283,2, 285,1; tR = 8,44 min. (XBridge 2).
2-Cloro-9-(1-etil-propil)-5-etil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
EM (positivo) 297,12, 299,14; tR = 3,67 min. (XBridge 2).
2-Cloro-5-metil-9-(tetrahidro-piran-4-il)-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
EM (positivo) 297,1, 299,2; tR = 5,74 min. (XBridge 2).
9-Bencil-2-cloro-5-metil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
EM (positivo) 303,1, 305,2; tR = 13,57 min. (Vydac 1).
2-Cloro-5-metil-9-fenil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
EM (positivo) 289,1, 291,1; tR = 2,93 min. (XBridge 2).
2-Cloro-9-ciclopentil-5-metil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-7,1’-ciclopropan]-6-ona
EM (positivo) 307,1, 309,2; tR = 3,67 min. (XBridge 2).
2-Cloro-9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
EM (positivo) 309,1, 311,2; tR = 3,90 min. (XBridge 2).
25 Pirimidindiazepinonas acopladas También se prepararon los siguientes compuestos mediante el método descrito en el ejemplo 1, etapa 6, método de acoplamiento A:
30 Compuesto [3]: ácido 4-(9-ciclopentil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-benzoico
35 Sólido de color púrpura (29%) 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,33 (d, J = Hz, 3H, CH3), 1,52 - 1,58 (m, 3H, ciclopent-H), 1,70
-
1,78 (m, 3H, ciclopent-H), 1,87 - 1,93 (m, 2H, ciclopent-H), 2,97 - 3,00 (m, 2H, CH2), 3,94 (s, 3H, CH3), 4,15 - 4,17 (m, 1H, CH), 4,93 - 4,97 (m, 1H, CH), 7,59 - 7,60 (m, 2H), 7,82 (1, 1H), 8,01 (d, J = 9 Hz, 1H, phe-H), 9,55 (sa, 1H, OH), 9,96 (s, 1H); EM positivo: 426,2. Rt = 11,08 min. (pureza del 100%, (Vydac 1))
40 Compuesto [4]: ácido 4-(9-ciclopentil-5,8-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-benzoico
45 Sólido de color púrpura (67%). 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,26 (d, J = Hz, 3H, CH3), 1,43 - 1,93 (m, 8H, ciclopent-H),
2,52 (s, 3H, CH3), 2,99 - 3,02 (m, 2H, CH2), 3,96 (s, 3H, CH3), 4,13 - 4,16 (m, 1H, CH), 4,65 - 4,69 (m, 1H, CH), 7,60
-
7,61 (m, 2H), 8,06 (d, J = 9 Hz, 1H, phe-H), 8,17 (s, 1H), 9,35 (sa, 1H); EM positivo: 426,2. Rt = 11,59 min. (pureza del 96%, (Vydac 1))
Compuesto [5]: ácido 4-(9-ciclohexil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-benzoico
10 Sólido de color marrón (12%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,27(d, J= 6,5 Hz, 3H, CH3), 1,58 -1,87 (m, 10H, ciclohex-H), 2,85 - 2,88 (m, 2H, CH2), 3,94 (s, 3H, CH3), 4,21 - 4,23 (m, 1H, CH), 4,77 (sa, 1H, CH), 7,03 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,57 - 7,58 (m, 2H), 7,086 (s, 1H), 8,07 - 8,08 (m, 1H), 9,89 (sa, 1H, NH); ME positivo: 426,2. Rt = 11,58 min. (pureza del 90%, (Vydac 1))
15 Compuesto [6]: ácido 4-(9-ciclopentil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxibenzoico
20 Sólido de color púrpura (13%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,55 - 1,86 (m, 8H, ciclopent-H), 2,70 - 2,73 (m, 2H, CH2), 3,70
-
3,72 (m, 2H, CH2), 5,02 - 5,09 (m, 1H, CH), 7,57 - 7,59 (m, 2H), 7,77 (s, 1H, pirimid-H), 8,06 (d, J = 8,5 Hz, 1H, phe-H), 9,54 (sa, 1H, OH), 9,75 (s, 1H, NH); EM positivo: 398,2. Rt = 10,55 min. (pureza del 96%, (Vydac 1))
Compuesto [7]: ácido 4-(9-ciclopentil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)25 benzoico
Sólido blanquecino (10%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,27 (d, J= 6,5 Hz, 3H, CH3), 1,46-1,90 (m, 8H, ciclopent-H), 2,83
30 2,86 (m, 2H, CH2), 4,07 - 4,09 (m, 1H, CH), 5,04-5,09 (m, 1H, CH), 7,20 (dd, J= 3,5 y 8,5 Hz, 2H, phe-H), 7,79 (d, J= 2,0 Hz, 1H, pirimid-H), 7,86 (d, J = 8,5 Hz, 2H, phe-H), 9,78 (sa, 1H, NH); EM positivo: 382,2. Rt = 10,46 min. (pureza del 90%, (Vydac 1))
Compuesto [8]: ácido 4-(9-ciclopentil-5,8-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)35 benzoico
Sólido blanquecino (25%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,19 (d, J = 6,0 Hz, 3H, CH3), 1,32-2,10 (m, 8H, ciclopent-H), 2,73 40 - 2,76 (m, 2H, CH2), 3,22 (s, 3H, CH3), 4,04 (m, 1H, CH, 4,70 - 4,75 (m, 1H, CH, 7,78 - 7,85 (m, 4H, phe-H), 8,12 (s, 1H, pirimid-H), 9,68 (sa, 1H, NH); EM positivo: 394,0. Rt = 11,05 min. (pureza del 96%, (Vydac 1))
Compuesto [9]: ácido 4-(9-ciclohexil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxibenzoico
45 Sólido de color marrón (15%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,15 - 1,86 (m, 10H, ciclohex-H), 2,72 (dd, J = 4,5 Hz, 2H, CH2), 3,75 (dd, J = 4,5 Hz, 2H, CH2), 3,96 (s, 3H, CH3), 4,58 - 4,63 (m, 1H, CH), 7,58 - 7,60 (m, 2H), 7,79 (s, 1H, pirimido, 8,16 (d, J = 8,5 Hz, 1H, phe-H), 9,74 (sa, 1H, NH); EM positivo: 412,2. Rt = 11,19 min. (pureza del 100%, (Vydac 1))
Compuesto [10]: 9-ciclohexil-2-(4-hidroxi-fenilamino)-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
Sólido de color púrpura (7%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,17 -1,87 (m, 10H, ciclohex-H), 2,72 (sa, 2H, CH2), 3,72 (sa, 2H, CH2), 4,62 - 4,66 (m, 1H, CH), 6,82 (d, J= 8,5 Hz, 2H, phe-H), 7,13 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,34 - 7,37 (m, 3H, 2 x phe-H y NH); EM positivo: 354,2. Rt = 10,63 min. (pureza del 100%, (Vydac 1))
Compuesto [11]: 9-ciclopentil-2-(4-hidroxi-fenilamino)-7-metil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
20 1H-RMN (CD3OD):1,18 (3H, d, J 7Hz, CH3), 1,52 (1H, m, CH), 1,61 - 1,84 (6H, m, CH), 1,99 (1H, m, CH), 2,85 (1H, m, CH), 3,53 (2H, m, CH), 5,14 (1H, m, CH), 6,74 (2H, m, Ar-H), 7,34 (2H, m, Ar-H), 7,64 (1H, s, Pyr-H); EM (positivo): 354,2; tR = 10,85 min. (Vydac 1).
Compuesto [12]: 9-ciclopentil-2-(4-hidroxi-fenilamino)-8-isopropil-5-metil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,525 b][1,4]diazepin-6-ona
1H-RMN (DMSO): 0,72 (3H, d, J 7Hz, CHCH3), 0,85 (2H, d, J7Hz, CHCH3), 1,29 (1H, m, CH), 1,51 (4H, m, CH), 1,60
30 (2H, m, CH), 1,93 (1H, m, CH), 2,08 (1H, m, CH), 2,29 (2H, m, 2 x CH), 3,13 (3H, s, N-CH3), 3,82 (1H, m, CH), 4,15 (1H, m, CH), 6,65 (2H, d, J 6Hz, Ar-H), 7,47 (2H, d, J 6Hz, Ar-H), 8,14 (1H, s, Pyr-H), 8,99 (1H, s, NH); EM (positivo): 396,1; tR = 12,54 min. (Vydac 1).
Compuesto [13]: 9-ciclopentil-2-(4-hidroxi-fenilamino)-5,8-dimetil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
Sólido de color blanco (27%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,22 (d, J= 6,5 Hz, 3H, CH3), 1,38 - 1,85 (m, 8H, ciclopent-H), 2,49 - 2,53 (m, 2H, CH2), 3,18 (s, 3H, CH3), 4,05 - 4,10 (m, 1H, CH), 4,51 - 4,60 (m, 1H, CH), 6,80 (d, J = 9,0 Hz, 2H,
40 phe-H), 7,22 (d, J = 9,0 Hz, 2H, phe-H), 7,98 (s, 1H, pirimid-H), 9,53 (sa, 1H, OH), 10,05 (sa, 1H, NH); EM positivo: 368,3. Rt= 10,81 min. (pureza del 93%, (Vydac 1))
Compuesto [14]: ácido 4-(9-bencil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-benzoico
45 1H-RMN (DMSO): 2,72 (2H, m, CH2), 3,68 (2H, m, CH2), 3,90 (3H, s, OCH3), 4,88 (2H, s, CH2), 7,22 - 7,44 (6H, m, Ar-H), 7,44 (1H, s, Ar-H), 7,77 (1H, s, Pyr-H), 8,10 (1H, d, J 7Hz), 8,18 (1H, s, NH); EM (positivo): 434,2; tR= 10,97 min. (Vydac 1).
Compuesto [15]: ácido 4-(5-metil-6-oxo-9-fenil-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-benzoico
10 1H-RMN (DMSO): 2,84 (2H, m, CH2), 3,28 (3H, s, CH3), 4,08 (2H, m, CH2), 7,24 (2H, d, J 8,5Hz, Ar-H), 7,35 - 7,37 (3H, m, Ar-H), 7,47 - 7,52 (4H, m, Ar-H), 8,29 (1H, s, Pyr-H), 9,77 (1H, s, NH); EM (positivo): 390,2; tR= 1,93 min. (XBridge 2).
15 Compuesto [16]: ácido 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)-benzoico
20 1H-RMN (DMSO): 1,09 6H, s, CH3), 1,60 (4H, m, CH), 1,74 (2H, m, CH), 1,88 (2H, m, CH), 3,19 (3H, s, N-CH3), 3,37 (2H, s, CH2), 5,23 (1H, s, CH), 7,82 (4H, m, Ar-H), 7,99 (1H, s, Pyr-H), 9,57 (1H, s, NH); EM (positivo): 410,25; tR = 2,25 min. (XBridge 2).
Preparación y reacción de amino-benzamidas 25
4-Amino-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
30 A ácido 4-amino-3-metoxibenzoico (1,064 g mg, 6,37 mmol) en diclorometano (50 ml) se le añadió DIPEA (2,22 ul, 12,74 mmol) y TBTU (2,25 g, 7,0 mmol) y se agitó la mezcla durante 10 minutos. Se añadió 4-amino-1metilpiperidina (0,872 g, 7,65 mmol) y se continuó agitando durante 16 horas. Se filtró el sólido resultante y se secó a vacío (1,04 g, 3,95 mmol, 62%).
35 1H-RMN (DMSO): 1,54 (2H, m, CH), 1,68 (2H, m, CH), 1,90 (2H, m, CH), 2,15 (3H, s, N-CH3), 2,76 (2H, d, J 11,5Hz), CH), 3,66 (1H, m, CH), 3,77 (3H, s, OCH3), 6,56 (1H, m, Ar-H), 7,26 (1H, m, Ar-H), 7,75 (1H, d, J 7,5Hz); EM (positivo) 264,4; tR = 7,45 min. (Vydac 2).
Se prepararon las siguientes amino-benzamidas mediante un método similar:
40 4-Amino-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida por medio del éster terc-butílico del ácido [4-(1-metil-piperidin-4ilcarbamoil)-fenil]-carbámico
Éster terc-butílico del ácido [4-(1-metil-piperidin-4-ilcarbamoil)-fenil]-carbámico, 1H-RMN (DMSO): 1,44 (9H, s, C(CH3)3), 1,52 (2H, m, CH), 1,71 (2H, m, CH), 1,92 (2H, m, CH), 1,92 (3H, s, N-CH3), 2,74 (2H, m, CH), 3,68 (1H, m, N-CH), 7,47 (2H, d, J 8,5Hz, Ar-H), 7,72 (2H, d, J 8,5Hz, Ar-H), 8,00 (1H, d, J 7,5Hz, NH), 9,54 (1H, s, NH) Se usó este compuesto sin desprotección previa cuando se usó el método de acoplamiento B (a continuación)
Método de acoplamiento B
Compuesto [17]: 4-(9-ciclopentil-5,7-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
10 Se calentaron la anilina (149 mg, 0,57 mmol), pirimidina (53 mg, 0,19 mmol) y el TFA (109 01, 0,95 mmol) en 2,2,2trifluoroetanol (5 ml) hasta reflujo durante 18 horas. Se evaporó el disolvente, se añadió acetato de etilo (10 ml), se lavó con NaHCO3 sat., salmuera y se evaporó el disolvente. Se añadió acetato de etilo (10 ml) y se filtró el sólido resultante y se secó a vacío (30 mg, 0,06 mmol, 30%).
15 1H-RMN (DMSO): 1,06 (3H, d, J 7Hz, CHCH3), 1,52 - 1,78 (10H, m, alquilo CH + CH2), 2,01 (2H, m, CH), 2,36 (3H, s, N-CH3), 2,73 (1H, m, CH), 2,85 (2H, m, CH), 3,45 (1H, m, CH), 3,71 (1H, m, CH), 3,94 (3H, s, OCH3), 5,06 (1H, m, CH), 7,46 (2H, m, Ar-H), 7,61 (1H, s, Ar-H), 7,77 (1H, s, NH), 8,10 (1H, d, J 8Hz, Ar-H), 8,36 (1H, d, J 8Hz), Ar-H), 9,44 (1H, s, NH); EM (positivo): 508,2; tR = 7,30 min. (XBridge 2).
20 Se prepararon los siguientes compuestos de manera similar al compuesto anterior:
Compuesto [18]: 4-(9-ciclopentil-7-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N-(1-metilpiperidin-4-il)-benzamida
1H-RMN (DMSO):1,08 (3H, d, J 7Hz, CHCH3), 1,53 - 1,80 (10H, m, alquilo CH + CH2), 2,01 (2H, m, CH), 2,12 (2H, m, CH), 2,29 (3H, s, N-CH3), 2,75 (1H, m, CH), 2,90 (2H, m, CH), 3,48 (1H, m, CH), 3,77 (1H, m, CH), 5,11 (1H, m, CH),
30 7,78 (4H, m, Ar-H), 8,04 (1H, d, J 7,5Hz, NH), 9,35 (1H, s, CONH), 9,43 (1H, s, CONH); EM (positivo): 478,2; tR = 6,74 min. (XBridge 2).
Compuesto [19]: 4-(9-ciclopentil-8-isopropil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
1H-RMN (CD3OD): 0,92 (3H, d, J 6,5Hz, CHCH3), 1,04 (3H, d, J 6Hz, CHCH3), 1,65 - 1,97 (14H, m, alquilo CH + CH2), 2,25 (2H, dd, J 11,5Hz, 11,5Hz), CH), 2,36 (3H, s, N-CH3), 2,67 (1H, m, CH), 3,03 (3H, m, CH + CH2), 3,51
40 (1H, m, CH), 3,95 (1H, m, CH), 4,02 (3H, s, OCH3), 5,09 (1H, m, CH), 7,59 (2H, m, Ar-H), 7,87 (1H, s, pyr-H-H), 8,46 (1H, d, J 7Hz, Ar-H); EM (positivo): 536,3; tR = 7,68 min. (XBridge 2).
Compuesto [20]: 4-(9-ciclopentil-5,7-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
1H-RMN (DMSO): 1,02 (3H, d, J 6,5Hz, CHCH3), 1,54 - 1,80 (12H, m, alquilo CH + CH2), 2,10 (3H, m, (CH + CH2),
2,27 (3H, s, N-CH3), 2,84 (3H, m, CH3), 3,15 (3H, s, CH3), 3,46 (1H, m, CH), 3,80 (1H, m, N-CH), 3,95 (3H, s, OCH3), 4,76 (1H, m, CH), 7,50 (2H, m, Ar-H), 7,75 (1H, s, Ar-H), 8,10 (1H, s, NH), 8,14 (1H, d, J 7,5Hz), Ar-H), 8,40 (1H, d, J 8Hz, Ar-H); EM (positivo): 522,3; tR= 7,76 min. (XBridge 2).
Compuesto [21]: 4-[9-(1-etil-propil)-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino]-3-metoxi-N-(1metil-piperidin-4-il)-benzamida
10 1H-RMN (DMSO): 0,85 (6H, d, J 7Hz, CH2CH3), 1,59 (4H, m, CH2CH3), 1,66 (2H, m, CH), 1,83 (2H, m, CH), 2,37 (3H, s, N-CH3), 2,65 (2H, m, CH2), 2,98 (2H, m, CH), 3,50 (2H, m, CH2), 3,83 (1H, m, N-CH), 3,94 (3H, s, OCH3), 4,93 (1H, s, CH), 4.;49(2H, m, Ar-H + NH), 7,57 (1H, s, NH), 7,79 (1H, s, Ar-H), 8,15 (1H, d, J 6,5Hz, Ar-H), 8,37 (1H, d, J 8,5Hz, Ar-H), 9,41 (1H, s, NH); EM (positivo): 496,2; tR = 6,73 min. (XBridge 2).
15 Compuesto [22]: 4-[9-(1-etil-propil)-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino]-N-(1-metilpiperidin-4-il)-benzamida
20 1H-RMN (DMSO): 0,86 (6H, d, J 7Hz, CH2CH3), 1,56 (4H, m, CH2CH3), 1,62 (2H, m, CH), 1,76 (2H, m, CH), 2,52 (3H, s, N-CH3), 2,63 (2H, m, CH2), 3,22 (2H, m, CH), 3,49 (2H, m, CH2), 3,92 (1H, m, CH), 4,97 (1H, m, CH), 7,78 (4H, m, Ar-H), 8,15 (1H, s, Pyr-H), 9,31 (1H, s, NH), 9,39 (1H, s, NH); EM (positivo): 466,3; tR = 6,26 min. (XBridge 2).
25 Compuesto [23]: 4-(9-ciclopentil-8-isopropil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
30 1H-RMN (CD3OD): 0,83 (3H, d, J 7Hz, CHCH3), 0,93 (3H, d, J 7Hz, CHCH3), 1,41 (2H, m, CH), 1,65 (4H, m, CH), 1,79 (2H, M, CH), 1,91 (2H, m, CH), 2,17 (2H, m, CH), 2,41 (2H, m, 2 x CH), 2,71 (4H, m, CH3 + CH), 2,91 (2H, m, CH), 3,35 (3H, s, CH3), 3,90 (1H, m, CH), 3,94 (3H, s, OCH3), 4,21 (1H, m, CH), 4,27 (1H, m, CH), 7,18 (2H, m, Ar-H), 8,23 (1H, s, Pyr-H), 8,56 (1H, d, J 8,5Hz, Ar-H); EM (positivo): 550,3; tR = 8,40 min. (XBridge 2).
35 Compuesto [24]: 4-[9-(1-etil-propil)-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino]-3metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
40 1H-RMN (DMSO): 0,85 (6H, t, J 7,5, CH2CH3), 1,62 (8H, m, CH + CH2), 1,76 (2H, d, J 7Hz, CH), 1,94 (2H, dd, J 10Hz, 10 Hz, CH), 2,17 (3H, s, N-CH3), 2,64 (2H, m, CH2), 2,80 (2H, d, J 11Hz, CH), 3,18 (3H, s, N-CH3), 3,49 (2H, m, CH2), 3,75 (1H, m, CH), 3,95 (3H, s, OCH3), 4,65 (1H, m, CH), 7,49 (2H, m, Ar-H), 7,69 (1H, s, Pyr-H), 8,07 (1H, s, NH), 8,10 (1H, d, J 9Hz, Ar-H), 8,37 (1H, d, J 9Hz, Ar-H); EM (positivo): 510,3; tR = 8,35 min. (XBridge 2).
45 Compuesto [25]: 3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-4-[6-oxo-9-(tetrahidropiran-4-il)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5b][1,4]diazepin-2-ilamino]-benzamida
1H-RMN (CD3OD): 1,60 (2H, m, CH), 1,69 (2H, d, J 11Hz, CH), 1,93 (2H, d, J 12Hz, CH), 1,97 (2H, dd, J 12Hz), 12Hz, CH), 2,18 (3H, s, N-CH3), 2,61 (2H, m, CH2), 2,80 (2H, d, J 10,5Hz, CH), 3,48 (2H, dd, J 11Hz, CH), 3,62 (2H,
5 m, CH2), 3,75 (1H, m, CH), 3,95 (3H, s, OCH3), 4,04 (2H, d, J 8Hz, CH), 4,85 (1H, s, CH), 7,49 (2H, m, Ar-H), 7,66 (1H, s, NH), 7,81 (1H, s, Pyr-H), 8,11 (1H, d, J 7,5Hz, Ar-H), 8,33 (1H, d, J 8Hz, Ar-H), 9,45 (1H, s, NH); EM (positivo): 510,1; tR = 5,34 min. (XBridge 2).
Compuesto [26]: 3-metoxi-4-[5-metil-6-oxo-9-(tetrahidro-piran-4-il)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin10 2-ilamino]-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
1H-RMN (CD3OD): 1,73 (2H, ddd, J 3Hz, 12 Hz, 18 Hz, CH), 1,84 (2H, d, J 11Hz, CH), 1,98 (4H, m, alquilo CH), 2,19
15 (2H, dd, J 10,5Hz, 10,5Hz, CH), 2,33 (3H, s, N-CH3), 2,71 (2H, m, CH2), 2,97 (2H, d, J 12Hz, CH), 3,65 (2H, dd, J 11Hz, CH), 3,75 (2H, m, CH2), 3,92 (1H, m, CH), 4,02 (3H, s, OCH3), 4,12 (1H, dd, J 4Hz, 11Hz, CH), 4,78 (1H, m, CH), 7,53 (2H, m, Ar-H), 8,04 (1H, s, Pyr-H), 8,45 (1H, d, J 9Hz, Ar-H); EM (positivo): 524,3; tR = 5,71 min. (XBridge 2).
20 Compuesto [27]: 4-[5-etil-9-(1-etil-propil)-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino]-3-metoxiN-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
25 1H-RMN (DMSO): 0,86 (6H, t, J 7,5Hz, CH3), 0,94 (3H, d, J 7Hz, CH3), 1,63 (6H, m, alquilo CH + CH2), 1,78 (2H, d, J 11Hz, CH), 1,94 (2H, dd, J 11,5Hz), CH), 2,18 (3H, s, N-CH3), 2,57 (2H, m, CH2), 2,80 (2H, m, CH2), 3,47 (2H, m, CH2), 3,77 (3H, m, CH + CH2), 3,96 (3H, s, OCH3), 4,59 (1H, m, CH), 7,50 (2H, m, Ar-H), 7,24 (1H, s, NH), 8,01 (2H, m, Ar-H + Pyr-H), 8,39 (1H, d, J 9Hz, Ar-H); EM (positivo): 524,3; tR = 7,56 min. (XBridge 2).
30 Compuesto [29]: 4-(9-bencil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1metil-piperidin-4-il)-benzamida
35 1H-RMN (DMSO): 1,58 (2H, ddd, J 4Hz, 12,5Hz), 24,5Hz, CH), 1,73 (2H, d, J11,5Hz, CH), 1,93 (2H, dd, J 15Hz), CH), 2,17 (3H, s, N-CH3), 2,69 (2H, m, CH2), 2,78 (2H, d, J 11,5Hz), CH), 3,22 (3H, s, N-CH3), 3,63 (2H, m, CH2), 3,72 (1H, m, CH), 3,91 (3H, s, OCH3), 4,87 (2H, s, CH2), 7,23 - 7,32 (4H, m, Ar-H), 7,35 - 7,43 (2H, m, Ar-H), 7,44 (1H, d, J 2Hz, Ar-H), 7,72 (1H, s, Pyr-H), 8,04 (1H, d, J 7,5Hz, Ar-H), 8,12 (1H, d, J 8,5Hz), 8,16 (1H, s, NH); EM (positivo): 530,4; tR = 4,55 min. (XBridge 2).
40 Compuesto [30]: 3-metoxi-4-(5-metil-6-oxo-9-fenil-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N-(1metil-piperidin-4-il)-benzamida
1H-RMN (DMSO): 1,56 (2H, dd, J 11,5Hz), 20,5Hz), CH), 1,75 (2H, d, J 10Hz, CH), 1,95 (2H, m, CH), 2,18 (3H, s, N-CH3), 2,83 (3H, m, CH + CH2), 3,16 (1H, s, CH), 3,27 (3H, s, N-CH3), 3,71 (1H, m, N-CH), 3,88 (3H, s, OCH3), 4,06 (2H, m, CH2); EM (positivo): 516,3; tR = 2,72 min. (XBridge 2).
Compuesto [31]: 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-espiro[pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-3,1’ciclopropano]-2-ilamino)-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
1H-RMN (DMSO): 0,66 (2H, d, J 6Hz, ciclopropil-CH), 0,91 (2H, d, J 6Hz, ciclopropil-CH), 1,50 (2H, m, CH), 1,58 (4H, m, CH), 1,69 (2H, m, CH), 1,77 (2H, m, CH), 1,95 (4H, m, CH), 2,16 (3H, s, N-CH3), 2,73 (1H, s, CH), 2,79 (2H, d, J 11Hz, CH), 2,89 (1H, s, CH), 3,16 (3H, s, N-CH3), 3,47 (2H, s, CH2), 3,72 (1H, m, CH), 3,94 (3H, s, OCH3), 4,86 (1H,
15 m, CH), 7,46 (2H, m, Ar-H), 7,67 (1H, s, NH), 7,95 (1H, s, Pyr-H), 8,07 (1H, d, J 8Hz, Ar-H), 8,38 (1H, d, J 8Hz, Ar-H); EM (positivo): 534,3; tR = 3,05 min. (XBridge 2).
Compuesto [32]: 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
1H-RMN (DMSO): 1,09 (6H, s, CH3), 1,58 (6H, m, CH2), 1,74 (4H, m, CJ), 1,95 (4H, m, CH), 2,16 (3H, s, NCH3), 2,73 (2H, d, J 11,5Hz), CH), 3,18 (3H, s, NCH3), 3,37 (2H, s, CH2), 3,74 (1H, m, CH), 3,94 (3H, s, OCH3), 5,19 (1H, m,
25 CH), 7,46 (2H, m, Ar-H), 7,67 (1H, s, NH), 7,98 (1H, s, Pyr-H), 8,07 ~(1H, d, J 8Hz, Ar-H), 8,36 (1H, d, J 8Hz); EM (positivo): 536,40; tR = 3,32 min. (XBridge 2).
Acoplamientos de amida
30 También se prepararon los siguientes mediante el método descrito en el ejemplo 1, etapa 7:
Compuesto [33]: 4-(9-ciclopentil-5,8-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
Sólido de color amarillo (31%). 1H-RMN (CD3OD): δ 1,24 (d, J = 6,5 Hz, 3H, CH3), 1,36 - 2,17 (m, 16H, 8 x ciclopent-H y 4 x piperid-H), 2,51 (s, 3H, CH3), 3,14 - 3,16 (m, 2H, CH2), 3,28 (s, 3H, CH3), 4,00 (s, 3H, CH3), 4,04 - 4,06 (m, 1H, CH), 4,71 - 4,74 (m, 1H, CH), 7,49 - 7,52 (m, 2H), 7,99 (s, 1H), 8,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H, phe-H); EM positivo:
40 522,4. Rt = 10,03 min. (pureza del 97%, Vydac 1)
Compuesto [34]: 4-(9-ciclopentil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxiN-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
Sólido de color amarillo (38%); EM positivo: 508,3. Rt = 9,53 min. (pureza del 97%, Vydac 1)
Compuesto [35]: 4-(9-Ciclohexil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)-3-metoxiN-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
10 Sólido blanquecino (33%); 1H-RMN (CD3OD): δ 1,34 - 1,41 (m, 2H), 1,44 (d, J = 6,5 Hz, 3H, CH3), 1,60 - 1,99 (m, 8H), 2,22 - 2,26 (m, 2H), 2,73 - 2,77 (m, 1H), 2,91 (s, 3H, CH3), 2,96 - 3,25 (m, 5H), 3,61 - 3,63 (m, 2H, CH2), 4,01 (s, 3H, CH3), 4,17 - 4,21 (m, 1H, CH), 4,33 - 4,36 (m, 1H, CH), 7,59 (dd, J = 2,0 y 8,5 Hz, 1H, phe-H), 7,63 (d, J = 2,0 Hz, 1H, phe-H), 7,69 (s, 1H, pirimid-H), 8,00 (d, J = 8,5 Hz, 1H, phe-H); EM positivo: 522,2. Rt = 10,17 min. (pureza del 100%, Vydac 1)
15 Compuesto [36]: 4-(9-ciclopentil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1metil-piperidin-4-il)-benzamida
20 Sólido de color púrpura (40%); 1H-RMN (CD3OD): δ 1,65 - 2,25 (m, 8H, ciclopent-H), 2,34 (s, 3H, CH3), 2,73 - 2,75 (m, 2H, CH2), 3,69 - 3,71 (m, 2H, CH2), 3,90 - 3,94 (m, 1H, CH), 4,01 (s, 3H, CH3), 5,22 - 5,25 (m, 1H, CH), 7,48 7,51 (m, 2H, 2 x phe-H), 7,76 (s, 1H, pirimid-H), 8,47 (s, 1H, NH); EM positivo: 493,4. Rt = 9,21 min. (pureza del 92%, Vydac 1)
Compuesto [37]: 4-(9-ciclopentil-5,8-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N-(1metil-piperidin-4-il)-benzamida
30 Sólido blanquecino (45%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,17 (d, J = 6,0 Hz, 3H, CH3), 1,29-2,10 (m, 16H, 8 x ciclopent-H y 8 x piperid-H), 2,21 (sa, 3H, CH3), 2,81 - 2,83 (m, 2H, CH2), 3,21 (s, 3H, CH3), 3,73 - 3,76 (m, 1H, CH), 4,03 - 4,05 (m, 1H, CH, 4,68-4,72 (m, 1H, CH), 7,74 - 7,79 (m, 4H, phe-H), 8,11 (s, 1H, pirimid-H), 9,47 (sa, 1H, NH); EM positivo: 492,3. Rt = 9,70 min. (pureza del 92%, Vydac 1)
Compuesto [38]: 4-(9-ciclopentil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N-(1-metilpiperidin-4-il)-benzamida
40 Sólido blanquecino (15%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,25 (d, J= 7,0 Hz, 3H, CH3), 1,51 - 2,04 (m, 10H), 2,09 (s, 3H, CH3), 2,55 - 2,66 (m, 6H), 2,78 - 2,79 (m, 2H, CH2), 3,05 - 3,15 (m, 1H, CH), 3,95 - 4,04 (m, 1H, CH), 5,13 - 5,15 (m, 1H, CH), 7,75 (dd, J= 8,5 Hz, 4H, phe-H), 7,81 (s, 1H, pirimid-H), 8,24 (d, J= 7 Hz, 1H, NH), 9,48 (s, 1H, NH), 9,66 (sa, 1H, NH); EM positivo: 478,3. Rt = 9,28 min. (pureza del 100%, Vydac 1)
Compuesto [39]: 4-(9-ciclohexil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1metil-piperidin-4-il)-benzamida
Sólido blanquecino (19%); 1H-RMN (DMSO-d6): δ 1,16 - 1,98 (m, 18H, 10 x ciclohex-H) y 8 x piperid-H), 2,18 (s, 3H, CH3), 2,60 (dd, J = 5 Hz, 2H, CH2), 3,60 (dd, J = 5 Hz, 2H, CH2), 3,73 - 3,76 (m, 1H, CH), 3,95 (s, 3H, CH3), 4,58 4,63 (m, 1H, CH), 7,46 (dd, J = 2,0 y 8,0 Hz, 1H, phe-H), 7,49 (d, J = 2 Hz, 1H, phe-H), 7,60 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 8,10 (d, J = 8,0 Hz, 1H, NH), 8,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H, phe-H), 9,41 (sa, 1H, NH); EM positivo: 508,4. Rt = 9,70 min.
10 (pureza del 95%, Vydac 1)
EJEMPLO 2
Procedimiento experimental general
15 Se realizó RP-HPLC analítica y preparativa-EM usando columnas XBridge (50 x 4,6 mm C 18 3,5 μm o 100 x 4,6 mm C18 3,5 μm) y Xbridge (100 x 19 mm C 18 5 μm) de Waters usando un gradiente lineal de sistemas de disolvente A (agua que contiene el 0,1% de hidróxido de amonio y el 5% de acetonitrilo)/disolvente B (acetonitrilo). Se realizó RP-HPLC preparativa usando una columna Prepsil ODS 10 μ de Apex (22 x 250 mm) usando un
20 gradiente lineal de disolvente A (agua que contiene el 0,1% de TFA)/disolvente B (acetonitrilo). Se obtuvieron espectros de masas usando un espectrómetro de masas de cuadrupolo individual ZQ2000 de Waters con ionización por electrospray (ESI).
Los gradientes usados fueron los siguientes: 25
Modo
Método Columna Velocidad de flujo ml/min. % de disolvente B
0 min.
0,5 min. 4 min. 6 min. 8,5 min. 10 min. 12 min. 40 min.
Analítico
Analítico_1 4,6 x 50 1,6 10 100 100
Analítico
Analítico_2 4,6 x 100 1 10 50 100
Analítico
Analítico_3 4,6 x 100 1
Preparativo
Preparativo_1 19 x 100 20 10 10 100 100
Preparativo
Preparativo_2 19 x 100 20 30 30 80 100
Preparativo
Preparativo_3 19 x 100 20 10 10 55 100
Preparativo
Preparativo_4 22 x 250 9 0 60
Preparativo
Preparativo_5 19 x 100 20 55 55 100 100
Producto intermedio 1: 2-cloro-9-ciclopentil-5-metil-8,9-dihidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6(7H)-ona.
1. Cloruro de tionilo (2,1 eq.), MeOH, 0ºC durante la adición, 2 h de reflujo; 2. Ciclopentanona (0,77 eq.), acetato de sodio (0,77 eq.), triacetoxiborohidruro de sodio (1,11 eq.), DCM, 16 h a ta; 3. 2,4-Dicloro-5-nitropirimidina (1,1 eq.), K2CO3 (1 eq.), acetona, 16 h a 0ºC - ta; 4. NH4Cl (8,5 eq.), Fe (8 eq.), EtOH/H2O (4:1), 2,5 h a reflujo; 5. MeI (1,18
35 eq.), NaH (1,07 eq.), DMF, -10ºC - ta, 3 h.
Etapa 1: 3-aminopropanoato de metilo
Se añadió β-alanina (9,37 g, 0,105 mol, 1,0 eq.), a MeOH (50 ml) y se enfrió la mezcla hasta 0ºC antes de la adición gota a gota de cloruro de tionilo (16 ml, 0,221 mol, 2,1 eq.) [precaución: adición exotérmica]. Se permitió que la reacción se calentase hasta ta después se calentó a reflujo durante 2 h. Se concentró la disolución a vacío, se trató con éster t-butilmetílico y se eliminaron los cristales resultantes por filtración. El producto era un sólido cristalino de color blanco (11 g, 100%); 1H (DMSO-d6): δ 2,73 (2H, dd, J = 7 Hz, CH2), 2,98 (2H, dd, J = 7 Hz, CH2), 3,61 (3H, s,
5 CH3), 8,28 (2H, sa, NH2); EM positivo: 104,1.
Etapa 2: 3-(ciclopentilamino)propanoato de metilo
Se disolvió 3-aminopropanoato de metilo (9,37 g, 0,09 mol) en DCM (200 ml). Se añadieron ciclopentanona (6,43 ml, 0,07 mol, 0,77 eq.), acetato de sodio (5,96 g, 0,07 mol, 0,77 eq.) y triacetoxiborohidruro de sodio (22 g, 0,10 mol, 1,11 eq.), entonces se agitó la reacción a ta durante 16h. Se añadieron bicarbonato de sodio al 20% (100 ml) e hidróxido de sodio 2 M (50 ml) y se extrajo el producto usando DCM/H2O. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con NaCl sat., se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida para dar el producto como un aceite de color amarillo pálido (8,90 g, 55%); EM positivo: 172,4.
15 Etapa 3: 3-[ciclopentil(2-cloro-5-nitropirimidin-4-il)amino]propanoato de metilo
Se añadieron 3-(ciclopentilamino)propanoato de metilo (0,838 g, 0,005 mol, 1 eq.) y K2CO3 (0,676 g, 0,005mol, 1 eq.) a acetona (5 ml) y se enfrió la mezcla resultante hasta 0ºC antes de la adición gota a gota de 2,4-dicloro-5nitropirimidina (1,04 g, 0,0055 mol, 1,1 eq.). Se calentó la mezcla de reacción (MR) hasta ta y se continuó agitando durante 16 h adicionales antes de la adición de 0,12 eq. adicionales de la pirimidina. Se continuó agitando durante 3 h adicionales. Se evaporó la MR a presión reducida y se extrajo el producto usando EtOAc/H2O. Se lavaron los extractos orgánicos con NaCl sat., se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida para dar el producto como un residuo aceitoso de color marrón (1,04 g, 65%); EM positivo: 329,2; Rt = 3,78 min. (Analítico_1).
Etapa 4: 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,8,9-tetrahidro-6H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
Se añadieron 3-[ciclopentil(2-cloro-5-nitropirimidin-4-il)amino]propanoato de metilo (1,0 g, 0,003 mol, 1 eq.) y NH4Cl (1,38 g, 0,025 mol, 8,5 eq.) a EtOH/H2O (4:1, 10 ml) y se calentó la mezcla hasta reflujo. Se añadió en porciones polvo de hierro (1,36 g, 0,024 mol, 8 eq.) y tras 2 h se filtró en caliente la MR a través de Celite lavando con EtOAc (10 ml) y EtOH (10 ml) [ambos calientes]. Se evaporó el disolvente a presión reducida para dar el producto como un sólido de color marrón (0,35 g, 43%); 1H (DMSO-d6): δ 1,55 (4H, m, 2CH2), 1,7 (2H, m, CH2), 1,83 (2H, m, CH2), 2,66 (2H, t, J = 5 Hz, CH2), 3,57 (2H, t, J = 5 Hz, CH2), 5,01 (1H, m, CH), 7,83 (1H, s, CH), 9,71 (1H, s, NH); EM positivo: 267,2; Rt = 2,87 min. (Analítico_1).
35 Etapa 5: 2-cloro-9-ciclopentil-5-metil-8,9-dihidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6(7H)-ona
Se añadieron 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,8,9-tetrahidro-6H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona (0,318 g, 0,0012 mol) y MeI (0,088 ml, 0,0014 mol, 1,18 eq.) a DMF (5 ml) y se enfrió la disolución hasta -10ºC. Se añadió NaH (0,03 g, 0,0013 mol, 1,07 eq.) y se agitó la MR a 0ºC durante 30 min. y a ta durante 30 min. Se evaporó el disolvente a presión reducida y se extrajo el producto usando EtOAc/H2O. Se combinaron los extractos orgánicos, se lavaron con NaCl sat., se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida para dar el producto como un residuo aceitoso de color púrpura (0,25 g, 75%); 1H (DMSO-d6): δ 1,55 (4H, m, 2CH2), 1,7 (2H, m, CH2), 1,9 (2H, m, CH2), 2,63 (2H, t, J = 5 Hz, CH2), 3,17 (3H, s, CH3), 3,65 (2H, t, J = 5 Hz, CH2), 4,74 (1H, m, CH), 8,14 (1H, s, CH); EM positivo: 281,2; Rt
45 = 3,11 min. (Analítico_1).
Usando métodos similares a los descritos anteriormente para el producto intermedio 1, se prepararon los siguientes productos intermedios 2-4:
Producto intermedio 2: 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’-9’-dihidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-6’(5’H)-ona
La reacción del éster etílico del ácido 1-aminometil-ciclopropanocarboxílico con ciclopentanona, acetato de sodio y triacetoxiborohidruro de sodio en DCM dio éster etílico del ácido 1-ciclopentilaminometil-ciclopropanocarboxílico
1H-RMN (CDCl3): 0,84 (3H, t, J 7Hz, CH3), 1,25 (4H, m, CH2), 1,37 (2H, m, CH), 1,54 (2H, m, CH), 1,70 (2H, m, CH), 1,83 (2H, m, CH), 2,71 (2H, s, CH2), 3,10 (1H, m, CH), 4,16 (2H, q, J 7Hz, CH2CH3)
La reacción de éster metílico del ácido 1-ciclopentilaminometil-ciclopropanocarboxílico con 2,4-dicloro-5nitropirimidina y K2CO3 en acetona dio éster etílico del ácido 1-{[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]metil}ciclopropanocarboxílico. El tratamiento con NH4Cl y polvo de hierro en etanol dio éster etílico del ácido 1-{[(5amino-2-cloro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-metil}-ciclopropanocarboxílico
EM (positivo): 339,2, 341,2; Rt = 4,15 min. (Analítico_2).
Se calentó el compuesto anterior en DMF hasta 140ºC durante 2 horas. Se evaporó el disolvente a vacío, se añadió acetato de etilo, y se filtró el sólido resultante y se secó a vacío para dar 2’-cloro-9’-ciclopentil-8’,9’dihidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-6’(5’H)-ona
EM (positivo): 293,2, 295,2; Rt = 3,48 min. (Analítico_2).
La reacción de 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-7,1’-ciclopropan]-6-ona con MeI y 15 NaH en DMF dio 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’,9’-dihidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin6’(5’H)-ona
20 EM (positivo): 307,1, 309,2; Rt = 3,67 min. (Analítico_3).
Producto intermedio 3: 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-8,9-dihidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6(7H)-ona
La reacción del éster etílico del ácido 3-amino-2,2-dimetil-propiónico con ciclopentanona, acetato de sodio y
25 triacetoxiborohidruro de sodio en DCM dio éster etílico del ácido 3-ciclopentilamino-2,2-dimetil-propiónico
1H-RMN (CDCl3): 1,19 (6H, s, CH3), 1,25 (3H, t, J 7Hz, CH3), 1,28 (2H, m, CH), 1,49 (2H, m, CH), 1,65 (2H, m, CH), 30 2,64 (1H, s, CH2), 3,01 (1H, m, CH), 4,10 (2H, q, J 7,5Hz), CH2)
La reacción del éster etílico del ácido 3-ciclopentilamino-2,2-dimetil-propiónico con 2,4-dicloro-5-nitropirimidina y K2CO3 en acetona dio éster etílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-2,2-dimetil-propiónico
EM (positivo): 371,1, 373,1; Rt = 4,67 min. (Analítico_2).
La reacción del éster etílico del ácido 3-[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-2,2-dimetil-propiónico con 40 NH4Cl y polvo de hierro en etanol dio éster etílico del ácido 3-[(5-amino-2-cloro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-2,2dimetil-propiónico
EM (positivo): 341,2, 343,2; Rt = 4,25 min. (Analítico_2).
Se calentó el éster etílico del ácido 3-[(5-amino-2-cloro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-2,2-dimetil-propiónico en DMF hasta 140ºC durante 2 horas. Se evaporó el disolvente a vacío, se añadió acetato de etilo, y se filtró el sólido resultante y se secó a vacío para dar 2-cloro-9-ciclopentil-7,7-dimetil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6ona
10 EM (positivo): 295,1, 297,2; Rt = 3,58 min. (Analítico_2).
La reacción de 2-cloro-9-ciclopentil-7,7-dimetil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona con MeI y NaH en DMF dio 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-8,9-dihidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6(7H)-ona
EM (positivo): 309,1, 311,2; Rt = 3,90 min. (Analítico_3).
Producto intermedio 4: 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’,9’-dihidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]20 6’(5’H)-ona
La reacción del éster metílico del ácido 1-aminometil-ciclobutanocarboxílico con ciclopentanona, acetato de sodio y triacetoxiborohidruro de sodio en DCM dio éster metílico del ácido 1-ciclopentilaminometil-ciclobutanocarboxílico
1H-RMN (CDCl3): 1,36 (2H, m, CH2), 1,51 (2H, m, CH2), 1,66 (2H, m, CH2), 1,95 (4H, m, 2 x CH2), 2,15 (2H, m, CH2), 2,43 (4H, m, 2 x CH2), 2,93 (2H, s, CH2), 3,21 (1H, m, CH), 3,76 (3H, s, CH3)
30 La reacción del éster metílico del ácido 1-ciclopentilaminometil-ciclobutanocarboxílico con 2,4-dicloro-5nitropirimidina y K2CO3 en acetona dio éster metílico del ácido 1-{[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]metil-ciclobutanocarbonocarboxílico
EM (positivo):369,2, 371,2; Rt = 3,48 min. (Analítico_1).
La reacción del éster metílico del ácido 1-{[(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-il)-ciclopentil-amino]-metil}ciclobutanocarboxílico con NH4Cl y polvo de hierro en etanol dio 2’-cloro-9’-ciclopentil-8’,9’-dihidroespiro[ciclobutano40 1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-6’(5’H)-ona, aislada directamente.
EM (positivo): 307,2, 309,2; Rt = 3,48 min. (Analítico_1).
La reacción de 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-7,1’-ciclobutan]-6-ona con MeI y NaH en DMF dio 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’,9’-dihidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][4,5-b][1,4]diazepin]6’(5’H)-ona
10 EM (positivo): 321,2, 323,3; Rt = 3,77 min. (Analítico_1).
Producto intermedio 5: ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico
15 Se calentaron 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’,9’-dihidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-6’(5’H)ona (producto intermedio 2) (0,70 g, 2,5 mmol, 1 eq.), ácido 4-amino-3-metoxibenzoico (1,25 g, 7,5 mmol, 3 eq.) y TFA (1,43 g, 12,5 mmol, 5 eq.) hasta reflujo en TFE (25 ml) durante 18 horas. Se evaporó el disolvente a vacío y se trituró el residuo resultante con MeOH para dar ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (0,81 g, 74%).
Rt = 1,88 min. (Analítico_1) EM (positivo): 438,4, EM (negativo): 436,5.
25 Producto intermedio 6: ácido 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)-3-metoxibenzoico
Se calentaron 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-8,9-dihidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6(7H)-ona (producto intermedio 3) (0,35 g, 1,14 mmol, 1 eq.), ácido 4-amino-3-metoxibenzoico (0,57 g, 3,42 mmol, 3 eq.) y TFA (0,42 ml,
30 5,7 mmol, 5 eq.) hasta reflujo en TFE (10 ml) durante 36 horas. Se evaporó el disolvente a vacío y se trituró el residuo resultante con EtOAc para dar ácido 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxibenzoico (0,38 g, 76%).
35 EM (positivo): 440,3, EM (negativo): 438,5.
Producto intermedio 7: ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico
40 Se calentaron 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’,9’-dihidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-6’(5’H)ona (producto intermedio 4) (1,02 g, 3,18 mmol, 1 eq.), ácido 4-amino-3-metoxibenzoico (1,6 g, 9,5 mmol, 3 eq.) y TFA (1,2 ml, 15,9 mmol, 5 eq.) hasta reflujo en TFE (40 ml) durante 24 horas. Se evaporó el disolvente a vacío y se trituró el residuo resultante con EtOAc para dar ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’
45 tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (1,08 g, 75%).
Rt = 2,10 min. (Analítico_1); EM (positivo): 452,3, EM (negativo): 450,4.
5 Producto intermedio 8: ácido 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)-3-metoxibenzoico
Se calentaron 2-cloro-9-ciclopentil-5-metil-8,9-dihidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6(7H)-ona (producto intermedio 1) (0,70 g, 2,5 mmol, 1 eq.), ácido 4-amino-3-metoxibenzoico (1,25 g, 7,5 mmol, 3 eq.) y TFA (0,93 ml, 12,5 mmol, 5
10 eq.) hasta reflujo en TFE (25 ml) durante 20 horas. Se evaporó el disolvente a vacío y se trituró el residuo resultante con MeOH para dar ácido 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)3-metoxibenzoico (0,66 g, 64%).
15 Rt = 1,88 min. (Analítico_1); EM (positivo): 412,4, EM (negativo): 410,5.
Producto intermedio 9: ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluorobenzoico
20 Se calentaron 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’,9’-dihidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-6’(5’H)ona (producto intermedio 2) (0,42 g, 1,36 mmol, 1 eq.), ácido 4-amino-3-fluorobenzoico (0,63 g, 4,1 mmol, 3 eq.) y TFA (0,51 ml, 6,8 mmol, 5 eq.) hasta reflujo en TFE (10 ml) durante 36 horas. Se añadieron ácido 4-amino-3fluorobenzoico (0,63 g, 4,1 mmol, 3 eq.) y TFA (0,51 ml, 6,8 mmol, 5 eq.) adicionales y se calentó la reacción hasta
25 reflujo de nuevo durante 4 días. Se evaporó el disolvente a vacío y se trituró el residuo resultante con EtOAc para dar ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-fluorobenzoico (0,41 g, 71%).
30 Rt =1,93 min. (Analítico_1); EM (positivo): 426,3
Producto intermedio 10: ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluorobenzoico
35 Se calentaron 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’,9’-dihidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-6’(5’H)ona (producto intermedio 4) (0,20 g, 0,63 mmol, 1 eq.), ácido 4-amino-3-fluorobenzoico (0,30 g, 1,9 mmol, 3 eq.) y TFA (0,24 ml, 3,2 mmol, 5 eq.) hasta reflujo en TFE durante 18 horas. Se añadieron ácido 4-amino-3-fluorobenzoico (0,20 g) y TFA (0,1 ml) adicionales y se calentó la reacción hasta reflujo de nuevo durante 2 días. Se añadió TFA
40 (0,24 ml) adicional y se calentó la reacción hasta reflujo de nuevo durante 3 días. Se evaporó el disolvente a vacío y se trituró el residuo resultante con EtOAc para dar ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro [ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluorobenzoico (0,15 g, 55%).
Rt = 2,02 min. (Analítico_1); EM (positivo): 440,3; EM (negativo): 438,4
Producto intermedio 11: 4-amino-N-(trans-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
5 4-Amino-N-(trans-4-(4-(ciclopropymetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida es un compuesto conocido en la técnica y se preparó mediante los métodos descritos en el documento WO 2007/090844 A1.
Producto intermedio 12: 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-310 metoxi-N-(piperidin-4-il)benzamida
Se agitaron juntos ácido 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxibenzoico (producto intermedio 8) (0,49 g, 1,2 mmol, 1 eq.), TBTU (0,42 g, 1,3 mmol, 1,1 eq.) y DIPEA (0,40 ml, 2,4 mmol, 2 eq.) en DCM (25 ml) durante 30 min. antes de la adición de 4-amino-1-BOC-piperidina (0,29 g, 1,4
15 mmol, 1,2 eq.). Se agitó la MR a ta durante 20 horas antes de diluir con DCM (30 ml) y lavar secuencialmente con agua (2 x 15 ml), hidrogenocarbonato de sodio saturado acuoso al 50%(1 x 20 ml), carbonato de potasio saturado acuoso (1 x 20 ml) y salmuera saturada (1 x 20 ml). Se concentró a vacío para aislar 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-BOC-piperidin-4-il)benzamida que se usó sin purificación adicional (0,71 g). Rt = 3,58 min. (Analítico_1).
20 Se añadió ácido clorhídrico metanólico y se agitó la disolución durante 4 horas a ta. La concentración a vacío proporcionó la sal de clorhidrato de 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)3-metoxi-N-(piperidin-4-il)benzamida. Se repartió esta sal entre DCM y disolución acuosa de carbonato de potasio a pH 8. Se separó la fase de DCM y se extrajo la fase acuosa con DCM y EtOAc. Se secaron las fases
25 orgánicas combinadas (MgSO4) y se concentraron a vacío para proporcionar 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(piperidin-4-il)benzamida como base libre (0,51 g).
30 Rt = 2,78 min. (Analítico_1); EM (positivo): 494; EM (negativo): 492.
Compuesto [254]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1il)benzamida
35 Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (22 mg, 0,05 mmol, 1 eq.), DIPEA (17 μl, 0,10 mmol, 2 eq.) y TBTU (18 mg, 0,055 mmol, 1,1 eq.) a 0,5 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 30 min. antes de la adición de 1-amino-4-metilpiperazina (12 μl, 0,1 mmol, 2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 4 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para proporcionar 4-(9’
40 ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3metoxi-N-(4-metilpiperazin-1il)benzamida (sólido de color blanco, 8 mg, 30%).
45 Rt = 2,63 min. (Analítico_1) EM (positivo): 535,5; EM (negativo): 533,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,63 - 0,70 (2 H, m), 0,87 - 0,94 (2 H, m), 1,43 - 1,54 (2 H, m), 1,55 - 1,63 (2 H, m), 1,64 - 1,73 (2 H, m), 1,83 - 1,94 (2 H, m), 2,18 (3 H, s), 2,31 - 2,48 (4 H, m), 2,92 (4 H, m), 3,16 (3 H, s), 3,47 (2 H, s), 3,94 (3 H, s), 4,78 - 4,91 (1 H, m), 7,35 - 7,48 (2 H, m), 7,68 (1 H, s), 7,98 (1 H, s), 8,39 (1 H, d, J=8,3 Hz), 9,31 (1 H, s).
50 Compuesto [218]: (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 7) (15 mg, 0,033 mmol), DIPEA (12 μl, 0,066 mmol, 2 eq.) y TBTU (12 mg, 0,036 mmol, 1,1 eq.) a 0,5 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 5 min. antes de la adición de diclorhidrato de 3-aminoquinuclidina (8 mg, 0,04 mmol, 1,2 eq.) y DIPEA (13 μL). Entonces se agitó la MR a ta durante 3 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_2) para proporcionar (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida.
10 Rt = 3,26 min. (Analítico_1); EM (positivo): 560,4; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 8,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,45 - 7,53 (m, 2H), 4,82 (quin, J = 8,3 Hz, 1H), 3,84 - 4,01 (m, 4H), 3,64 (s, 2H), 3,18 (s, 3H), 3,04 - 3,14 (m, 1H), 2,88 (t, J = 9,8 Hz, 1H), 2,58 - 2,75 (m, 4H), 2,21 - 2,33 (m, 2H), 2,07 (s, 2H), 1,97 (s. a., 2H), 1,87 (s. a., 2H), 1,76 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 1,56 - 1,70 (m, 8H), 1,30 (s. a., 1H)
15 Compuesto [195]: 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]-diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida
Se añadieron ácido 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3
20 metoxibenzoico (producto intermedio 6) (20 mg, 0,046 mmol, 1 eq.), DIPEA (16 μl, 0,091 mmol, 2 eq.) y TBTU (16 mg, 0,05 mmol, 1,1 eq.) a 0,5 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 5 min. antes de la adición de 1-amino-4-metilpiperazina (7 mg).Entonces se agitó la MR a ta durante 16 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para proporcionar 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5Hpirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida.
Rt = 2,81 min. (Analítico_1); EM (positivo): 537,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 1,09 (6H, s), 1,61 (4H, m), 1,73 (2H, m), 1,87 (2H, m), 2,19 (3H, s), 2,42 (2H, m), 2,92 (4H, m), 3,29 (3H, s), 3,37 (3H, m), 3,93 (3H, s), 3,17 (1H, m), 7,40
30 (2H, m), 7,68 (1H, s), 7,98 (1H, s), 8,37 (1H, d, J 7Hz), 9,30 (1H, s).
Compuesto [221]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-bb][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
35 Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 7) (15 mg, 0,033 mmol, 1 eq.), DIPEA (12 μl, 0,066 mmol, 2 eq.) y TBTU (12 mg, 0,036 mmol, 1,1 eq.) a 0,5 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 5 min. antes de la adición de 1-amino-4-metilpiperazina (5 mg) y DIPEA (13 μL). Entonces se agitó la MR a ta durante 3 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_2) para proporcionar 4-(9’
40 ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxiN-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida.
45 Rt = 2,79 min. (Analítico_1); EM (positivo): 549,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 9,31 (s, 1H), 8,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,37 - 7,47 (m, 2H), 4,73 - 4,86 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,64 (s, 2H), 3,18 (s, 3H), 2,92 (s. a., 4H), 2,36 (s. a., 4H), 2,27 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,97 (s. a., 2H), 1,79-1,91 (m, 1H), 1,76 (s. a., 2H), 1,54 1,72 (m, 7H).
Compuesto [371]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
Se calentaron juntos 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’,9’-dihidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]6’(5’H)-ona (producto intermedio 2) (0,14 g, 0,45 mmol, 1 eq.), 4-amino-N-(trans-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (producto intermedio 11) (0,26 g, 0,67 mmol, 1,5 eq.) y TFA (0,17 ml, 2,2 mmol, 5 eq.) en TFE (3 ml) a 80ºC durante 18 horas. Se añadió cantidad adicional de producto intermedio 2 (0,14 g) y se calentó la reacción adicionalmente durante 48 horas. Se concentró la MR a vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre sílice eluyendo con un gradiente de amoniaco al 0-20%/MeOH en DCM seguido por HPLC preparativa (Preparativo_4) entonces finalmente RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para dar 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (0,11 g, 25%).
15 Rt = 3,18 min. (Analítico_1); ES (positivo): 657,6; ES (negativo): 655,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,05 (d, J = 4,20 Hz, 3H), 0,44 (d, J = 7,74 Hz, 2H), 0,67 (d, J = 1,61 Hz, 2H), 0,74- 0,85 (m, 1H), 0,90 (s, 2H), 1,23 - 1,44 (m, 3H), 1,44 - 1,55 (m, 2H), 1,54 - 1,64 (m, 2H), 1,64 - 1,74 (m, 2H), 1,88 (s. a., 5H), 2,08 (s, 3H), 2,13 (d, J = 6,45 Hz, 2H), 2,17 - 2,28 (m, 1H), 2,29 - 2,47 (m, 3H), 2,60 - 2,67 (m, 1H), 3,06 - 3,23 (m, 5H), 3,47 (s, 2H), 3,65 - 3,79 (m, 1H), 3,94 (s, 2H), 4,05 - 4,13 (m, 1H), 4,78 - 4,91 (m, 1H), 7,48 (s, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 8,00 - 8,07 (m, 1H), 8,31
-
8,45 (m, 1H).
Compuesto [372]: 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
25 Se calentaron juntos 2-cloro-9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-8,9-dihidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6(7H)-ona (producto intermedio 3) (0,13 g, 0,43 mmol, 1 eq.), 4-amino-N-(trans-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida (producto intermedio 11) (0,26 g, 0,67 mmol, 1,5 eq.) y TFA (0,17 ml, 2,2 mmol, 5 eq.) en TFE (3 ml) a 80ºC durante 18 horas. Se añadió cantidad adicional de producto intermedio 6 (0,13 g) y se calentó la reacción adicionalmente durante 48 horas. Se concentró la MR a vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre sílice eluyendo con un gradiente de amoniaco al 0-20%/MeOH en DCM seguido por HPLC preparativa (Preparativo_4) entonces finalmente RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para dar 4-(9ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N-((trans)-4-(4(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (0,03 g, 7%).
Rt = 3,38 min. (Analítico_1); ES (positivo): 659,6; ES (negativo): 657,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,05 (d, J = 3,86 Hz, 3H), 0,40 - 0,48 (m, 3H), 0,73 - 0,84 (m, 2H), 1,03 - 1,13 (m, 10H), 1,18 (s, 1H), 1,24 - 1,43 (m, 6H), 1,61 (s. a., 3H), 1,74 (d, J = 9,65 Hz, 2H), 1,88 (s. a., 5H), 2,08 (s, 5H), 2,13 (d, J = 6,75 Hz, 2H), 2,17 - 2,25 (m, 1H), 2,36 (s. a., 3H), 2,60 - 2,67 (m, 1H), 3,14 - 3,22 (m, 2H), 3,37 (s, 1H), 3,51 (s, 1H), 3,94 (s, 2H), 5,18 (t, J = 8,52 Hz, 1H), 7,43 7,50 (m, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 8,03 (d, J = 7,72 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 8,36 Hz, 1H).
Alternativamente, el experto apreciará que los ejemplos 5, 6 podrían sintetizarse mediante la reacción de los
45 productos intermedios 5 ó 6 con el compuesto conocido trans-4-(4-ciclopropilmetil-piperazin-1-il)-ciclohexilamina (descrito en el documento US 6.861.422 B2) usando condiciones de formación de enlace amida convencionales tales como las descritas en el ejemplo 1.
Compuesto [345]: 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxiN-[1-(tetrahidro-piran-4-il)-piperidin-4-il]-benzamida
Se hicieron reaccionar 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(piperidin-4-il)benzamida (producto intermedio 12) (35 mg, 0,07 mmol, 1 eq.) y triacetoxiborohidruro de sodio (18 mg, 0,084 mmol, 1,2 eq.) en DCM (0,5 ml) con tetrahidropiran-4-ona (6,5 μl, 0,07 mmol, 1 eq.) a ta durante 55 2 días. Se añadieron triacetoxiborohidruro de sodio (18 mg, 1,2 eq.), tetrahidropiran-4-ona (6,5 μl, 1 eq.) adicionales
y ácido acético (4 μl, 1 eq.). Tras dos días se diluyó la MR con DCM, se lavó con agua y se concentró la fase orgánica a vacío. Se purificó el residuo resultante mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para proporcionar 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-[1(tetrahidro-piran-4-il)-piperidin-4-il]-benzamida (10 mg, 25%).
Rt = 2,74 min. (Analítico_1); ES (positivo): 578,5; ES (negativo): 576,7.
10 Compuesto [373]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluorobenzoico (producto intermedio 10) (100 mg, 0,23 mmol, 1 eq.), DIPEA (80 μl, 0,46
15 mmol, 2 eq.) y TBTU (80 mg, 0,25 mmol, 1,1 eq.) a 1 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 10 min. antes de la adición de 1-amino-4-metilpiperazina (33 μl, 0,27 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 1 hora antes de fraccionar en dos lotes iguales y purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_3) para proporcionar 4-(9’-ciclopenil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’pirimido(4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida (0,05 g, 41%).
Rt = 2,74 min. (Analítico_1); EM (positivo): 537,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 1,55 - 1,65 (8H, m), 1,71 (2H, m), 1,88 (2H, m), 2,18 (3H, s), 2,28 (2H, q, J 10,5 Hz), 2,41 - 2,52 (4H, m), 2,89 (4H, m), 3,18 (3H, s), 3,61 (2H, s), 4,76 (1H,
25 quintete, 8,5 Hz), 7,61 (2H, m), 8,03 (1H, s), 8,12 (1H, dd, J 8Hz), 8,5 Hz), 8,76 (1H, s), 9,36 (1H, s).
Compuesto [374]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1il)benzamida
30 Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluorobenzoico (producto intermedio 9) (0,27 g, 0,63 mmol, 1 eq.), DIPEA (0,21 ml, 1,26 mmol, 2 eq.) y TBTU (0,22 g, 0,69 mmol, 1,1 eq.) a 5 ml de DCM y se agitó la disolución resultante a ta durante 30 min. antes de la adición de 1-amino-4-metilpiperazina (91 μl, 0,75 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 4 horas antes de lavar con agua, concentrar a vacío y purificar el residuo mediante RP-HPLC preparativa
35 EM (Preparativo_1) para proporcionar 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida (0,14 g, 44%).
40 Rt = 2,58 min. (Analítico_1); EM (positivo): 523,4; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,65 - 0,67 (2H, s, CH2), 0,85 - 0,95 (2H, m, CH2), 1,23 - 1,82 (8H, m, alquil-H), 2,18 (3H, s, CH3), 2,36-2,41 (4H, m, alquil-H), 2,88 (4H, s, alquil-H), 3,16 (3H, s, CH3), 3,44 (2H, s, alquil-H), 4,77 - 4,80 (1H, m, CH), 7,6 (2H, m, aril-H), 7,96 (1H, s, aril-H), 8,16 (1H, t, J = 8 Hz, aril-H), 8,70 (1H, s, NH), 9,35(1H, s, NH).
45 Compuesto [194]: (±)-4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
Se añadieron ácido 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxibenzoico (producto intermedio 6) (20 mg, 0,046 mmol, 1 eq.), DIPEA (16 μl, 0,091 mmol, 2 eq.) y TBTU (16 mg, 0,05 mmol, 1,1 eq.) a 0,5 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 5 min. antes de la adición de diclorhidrato de 3-aminoquinuclidina (11 mg, 0,055 mmol, 1,1 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 16 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para proporcionar (±)-4-(9-ciclopentil-5,7,7trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida (8 mg, 32%).
Rt = 3,28 min. (Analítico_1); EM (positivo): 548,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 8,37 (1H, d, J 8 Hz), 8,07 (1H, d, J 6,5
10 Hz), 7,98 (1H, s), 7,69 (1H, s), 7,47 - 7,50 (2H, m), 5,19 (1H, quint, J 8 Hz), 3,95 (4H, m), 3,37 (2H, s), 3,18 (3H, s), 3,11 (1H, m), 2,89 (1H, m), 2,65 - 2,72 (4H, m), 1,88 (2H, m), 1,73 - 1,87 (4H, m), 1,57 - 1,61 (6H, m), 1,31 (1H, m), 1,09 (6H, s).
Compuesto [186]: (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,515 b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (25 mg, 0,057 mmol, 1 eq.), DIPEA (20 μl, 0,11 mmol, 2 eq.) y TBTU (20 mg, 0,063 mmol, 1,1 eq.) a 0,5 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante
20 15 min. antes de la adición de diclorhidrato de 3-aminoquinuclidina (11 mg, 0,055 mmol, 1,1 eq.) y DIPEA (40 μL). Entonces se agitó la MR a ta durante 16 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para proporcionar (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[hidroespiro(ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida.
Rt = 3,02 min. (Analítico_1); EM (positivo): 546,4; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 8,40 (1H, d, J 8 Hz), 8,08 (1H, d, J 7 Hz), 7,98 (1H, s), 7,69 (1H, s), 7,47 - 7,50 (2H, m), 4,87 (1H, quint, J 9 Hz), 4,10 (1H, q, J 5,5 Hz), 3,95 (4H, m), 3,47 (2H, s), 3,27 (3H, s), 3,07 (1H, m), 2,08 (1H, m), 2,63 -2,86 (4H, m), 1,88 (3H, m), 1,78 (1H, m), 1,68 (2H, m), 1,50
30 1,62 (5H, m), 1,32 (1H, m), 0,90 (2H, m), 0,66 (2H, m).
Compuesto [375]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)-3-metoxibenzamida
35 Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (48 mg, 0,11 mmol, 1 eq.), DIPEA (36 μl, 0,22 mmol, 2 eq.) y TBTU (39 mg, 0,12 mmol, 1,1 eq.) a 5 ml de DCM y se agitó la disolución resultante a ta durante 15 min. antes de la adición de 2-(4-aminopiperazin-1-il)etanol (19 mg, 0,13 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 16 horas antes de concentrar a vacío y purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para
40 proporcionar 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]2’-ilamino)-N-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)-3-metoxibenzamida (24 mg, 39%).
45 Rt = 2,48 min. (Analítico_1); EM (positivo): 565,4; 1H-RMN (DMSO) δ ppm: 0,66 - 0,67 (2H, m, CH2), 0,88 - 0,90 (2H, m, CH2), 1,23 -1,90 (8H, m, alquil-H), 2,34-2,41 (4H, m, alquil-H), 2,91 (4H, t, J = 4 Hz, alquil-H), 3,16 (3H, s, CH3), 3,46-3,51 (4H, m,), 3,93 (3H, s, CH3), 4,38-4,45 (1H, m, ) 4,81-4,87 (1H, m, CH), 7,40 (2H, d, J = 10,5 Hz, aril-H), 7,67 (1H, s), 7,98 (1H, s), 8,39 (1H, d, J = 8 Hz, aril-H), 9,30 (1H, s, NH).
50 Compuesto [376]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-morfolinobenzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (50 mg, 0,11 mmol, 1 eq.), DIPEA (38 μl, 0,23
5 mmol, 2 eq.) y TBTU (40 mg, 0,12 mmol, 1,1 eq.) a 5 ml de DCM y se agitó la disolución resultante a ta durante 15 min. antes de la adición de 4-aminomorfolina (12 mg, 0,14 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 16 horas antes de concentrar a vacío y purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para proporcionar 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3metoxi-N-morfolinobenzamida (26 mg, 44%).
Rt = 2,72 min. (Analítico_1); EM (positivo): 522,4; 1H-RMN (DMSO) δ ppm: 0,65 - 0,71 (2H, m, CH2), 0,85 - 0,91 (2H, m, CH2), 1,23 - 1,88 (8H, m, alquil-H), 2,92 (4H, t, J = 4 Hz, alquil-H), 3,16 (3H, s, CH3), 3,47 (2H, s, alquil-H), 3,66
15 (4H, t, J = 4,5Hz), 3,94 (3H, s, CH3), 4,81 - 4,87 (1H, m, CH), 7,41 (2H, d, J = 9,5 Hz), 7,69 (1H, s), 7,98 (1H, s), 8,40 (1H, d, J = 8 Hz), 9,41 (1H, s, NH).
Compuesto [347]: (R)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
20 Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (0,11 g, 0,25 mmol, 1 eq.), DIPEA (0,17 ml) y TBTU (88 mg, 0,28 mmol, 1,1 eq.) a 5 ml de DCM y se agitó la disolución resultante a ta durante 30 min. antes de la adición de clorhidrato de (R)-(+)-3-aminoquinuclidina (60 mg, 0,30 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta
25 durante 16 horas antes de diluir con DCM y lavar secuencialmente con agua (x2), hidrogenocarbonato de sodio saturado acuoso al 50%, hidrogenocarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera saturada. Se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío. Se disolvió el residuo en la cantidad mínima de EtOAc antes de la adición de n-heptano para precipitar (R)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1-7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepina-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida (sólido de color blanco, 0,13 g, 96%).
Rt = 3,07 min. (Analítico_1); EM (positivo): 546,5; EM (negativo): 544,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm 0,62 - 0,72 (2 H, m), 0,87 - 0,94 (2 H, m), 1,20 - 1,38 (1 H, m), 1,44 - 1,54 (2 H, m), 1,54 - 1,64 (4 H, m), 1,64 - 1,74 (2 H, m), 1,75
35 1,85 (1 H, m), 1,85 - 1,95 (3 H, m), 2,65 - 2,79 (4 H, m), 2,83 - 3,01 (1 H, m), 3,11 - 3,21 (4 H, m), 3,47 (2 H, s), 3,95 (4 H, s), 4,77 - 4,93 (1 H, m), 7,42 - 7,54 (2 H, m), 7,69 (1 H, s), 7,98 (1 H, s), 8,10 (1 H, d, J=6,3 Hz), 8,39 (1 H, d, J=8,3 Hz).
Compuesto [348]: (S)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,540 b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (0,11 g, 0,25 mmol, 1 eq.), DIPEA (0,17 ml) y TBTU (88 mg, 0,28 mmol, 1,1 eq.) a 5 ml de DCM y se agitó la disolución resultante a ta durante 30 min. antes de la 45 adición de diclorhidrato de (S)-(-)-3-aminoquinuclidina (60 mg, 0,30 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 16 horas antes de diluir con DCM y lavar secuencialmente con agua (x2), hidrogenocarbonato de sodio saturado acuoso al 50%, hidrogenocarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera saturada. Se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío. Se disolvió el residuo en la cantidad mínima de EtOAc antes de la adición de n-heptano para precipitar (S)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’
50 pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida (sólido de color blanco, 0,075 g, 55%).
Rt = 3,04 min. (Analítico_1); EM (positivo): 546,5; EM (negativo): 544,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,59 - 0,74 (2 H, m), 0,86 - 0,97 (2 H, m), 1,20 - 1,43 (1 H, m), 1,45 - 1,75 (7 H, m), 1,76 - 1,98 (4 H, m), 2,66 - 2,86 (3 H, m), 2,89 5 3,07 (1 H, m), 3,17 (3 H, s), 3,47 (3 H, s), 3,89 - 4,02 (4 H, m), 4,76 - 4,96 (1 H, m), 7,42 - 7,59 (2 H, m), 7,70 (1 H, s), 7,98 (1 H, s), 8,14 (1 H, d, J=6,3 Hz), 8,40 (1 H, d, J=7,8 Hz).
Compuesto [377]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
10 Se calentaron 2’-cloro-9’-ciclopentil-5’-metil-8’,9’-dihidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-6’(5’H)ona (producto intermedio 4) (0,065 g, 0,2 mmol, 1 eq.), 4-amino-N-(trans-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (producto intermedio 11) (0,24 g, 0,6 mmol, 3 eq.) y TFA (75 μl, 1 mmol, 5 eq.) en TFE (6 ml) hasta reflujo juntos 40 horas. Se concentró la MR a vacío y se repartió el residuo entre EtOAc e
15 hidrogenocarbonato de sodio saturado. Se separó la fase orgánica, se lavó con salmuera saturada y se concentró a vacío hasta un residuo que se purificó mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para dar 4-(9’-ciclopentil5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro(ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida.
Rt = 3,41 min. (Analítico_1); ES (positivo): 671,6; ES (negativo): 669,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,03 (2H, dd, J 9,5 Hz, 5 Hz), 0,41 (2H, dd, J 10 Hz, 5 Hz), 0,79 (1H, m), 1,20 - 1,37 (4H, m), 1,55 - 1,94 (18H, m), 2,04 (2H, d, J 6,5 Hz), 2,16 - 2,46 (8H, m), 3,15 (3H, s), 3,32 (2H, s), 3,69 (1H, m), 3,90 (3H, s), 4,79 (1H, m), 7,44 (2H, m), 7,68 (1H,
25 s), 8,01 (2H, m), 8,34 (1H, d, J 8,5 Hz).
Compuesto [378]: 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
30 Se calentaron juntos 2-cloro-9-ciclopentil-5-metil-8,9-dihidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6(7H)-ona (producto intermedio 1) (0,13 g, 0,43 mmol, 1 eq.), 4-amino-N-(trans-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida (producto intermedio 11) (0,26 g, 0,67 mmol, 1,5 eq.) y TFA (0,17 ml, 2,2 mmol, 5 eq.) en TFE (3 ml) a 80ºC durante 18 horas. Se añadió cantidad adicional de producto intermedio 1 (0,10 g) y se calentó la reacción adicionalmente durante 48 horas. Se concentró la MR a vacío y se purificó el residuo mediante cromatografía en
35 columna ultrarrápida sobre sílice eluyendo con un gradiente de amoniaco al 0-20%/MeOH en DCM seguido por HPLC preparativa (Preparativo_4) entonces finalmente RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_1) para dar 4-(9ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N-((trans)-4-(4(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (0,11 g, 26%).
Rt = 2,88 min. (Analítico_1); ES (positivo): 631,5; ES (negativo): 629,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: -0,15 - 0,11 (m, 2 H), 0,40 (d, J = 8,06 Hz, 2 H), 0,63 - 0,85 (m, 1 H), 1,11 - 1,41 (m, 3 H), 1,57 (s. a., 2 H), 1,69 (d, J = 17,73 Hz, 2 H), 1,74 - 1,95 (m, 6 H), 2,04 (s, 2 H), 2,09 (d, J = 6,45 Hz, 2 H), 2,16 (d, J = 9,67 Hz, 1 H), 2,32 (s. a., 2 H), 2,49 (s. a., 1
45 H), 2,51 - 2,59 (m, 2 H), 2,59 (s. a., 1 H), 3,07 - 3,17 (m, 3 H), 3,27 (s, 5 H), 3,53 - 3,62 (m, 2 H), 3,67 (dd, J = 7,41, 3,55 Hz, 1 H), 3,89 (s, 2 H), 4,04 (q, J = 5,37 Hz, 1 H), 4,76 (quin, J = 8,22 Hz, 1 H), 7,38 - 7,48 (m, 2 H), 7,68 (s, 1 H), 7,99 (d, J = 7,74 Hz, 1 H), 8,03 (s, 1 H), 8,33 (d, J = 8,06 Hz, 1 H).
Productos intermedios 13-19: 4-(amina-sustituido)ciclohexanaminas 50
1. [Análogo al método III en Abdel-Magid A.F. et al. (1996) J. Org. Chem., 61, 3849-3862] triacetoxiborohidruro de
sodio (1,5 eq.), ácido acético (1 eq.), amina (1,1 eq.), THF, 20 h a ta; 2. H2, Pd al 10%/C, 60ºC, metanol, 5 hidrogenación de flujo; 3. Yoduro de sodio (4 eq.), clorotrimetilsilano (4 eq.), acetonitrilo, 0ºC -ta, 18h.
Etapa 1:
Se añadió N-benciloxicarbonil-4-aminociclohexanona, un compuesto conocido en la técnica [documento
10 WO2007/002181 A2] (normalmente escala de 1 mmol), a un tubo de reacción que contenía THF (5 ml), la piperazina homopiperazina o morfolina sustituida apropiada, junto con ácido acético y triacetoxiborohidruro de sodio. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 20 horas. Se extinguió la reacción con disolución de NaHCO3 (2 ml) antes de acidificar hasta pH 2 con disolución de HCl 1 N. Se lavó la mezcla con EtOAc antes de separar la fase acuosa y basificar hasta pH 10 con disolución de NaOH 2 N. Se extrajo el producto en EtOAc, que se lavó con NaCl sat., se
15 secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida para proporcionar el 4-(amina-sustituido)ciclohexilcarbamato de bencilo requerido.
Etapa 2:
20 Se disolvieron cada 4-(amina-sustituido)ciclohexilcarbamato de bencilo en metanol hasta una concentración de 0,05
M. Se realizó la hidrogenación usando un reactor de flujo H-Cube ™ (ThalesNano Inc.) a una velocidad de flujo de 1 ml/min. sobre catalizador de Pd al 10%/C calentado hasta 60ºC en modo de hidrógeno completo. La concentración a presión reducida proporcionó el producto de 4-(amina-sustituido)ciclohexanamina deseado como aceites. Pudieron obtenerse las sales de clorhidrato sólidas agitando con HCl etéreo.
25 Cuando se requirió desproteger selectivamente los carbamatos de bencilo en presencia de un grupo N-bencilo (productos intermedios 16 y 18), se empleó la etapa 3 en lugar de la etapa 2.
Etapa 3:
30 Se disolvió yoduro de sodio (1,5 mmol, 4 eq.) en acetonitrilo anhidro (5 ml) y se agitó mientras se añadía clorotrimetilsilano (1,5 mmol, 4 eq.). Tras 5 minutos se añadió lentamente esta mezcla a una disolución de la 4(amina-sustituido)ciclohexanamina disuelta en acetonitrilo anhidro (2 ml), se enfrió en un baño de hielo-agua. Tras 1 hora se retiró el baño de enfriamiento y se agitó la MR a temperatura ambiente durante 18 horas. Se concentró la
35 MR a presión reducida y se volvió a disolver en disolución al 1% de agua en metanol. Se absorbió la mezcla sobre una columna SCX II, se lavó con metanol y se eluyó con amoniaco en metanol. Se concentró a vacío para proporcionar la 4-(amina-sustituido)ciclohexanamina deseada.
Producto intermedio
Estructura ES (positivo) [M+H]+ Analítico_1 Rt (min.)
13
212,3 2,05
14
252,3 2,42
15
nd -
16
nd -
17
nd -
18
274,3 3,27
19
185,2 1,47
nd = sin datos (no se detectó ionización en condiciones normales)
Compuesto [379]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
5 Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (66 mg, 0,15 mmol, 1 eq.), DIPEA (52 μl, 0,3 mmol, 2 eq.) y TBTU (54 mg, 0,17 mmol, 1,1 eq.) a 1,5 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 20 min. antes de la adición de 4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexanamina (producto intermedio 13) como la sal de clorhidrato
10 (58 mg, 0,18 mmol, 1,2 eq.) y DIPEA (78 μl, 0,45 mmol, 3 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 2 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_2) para proporcionar 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-etilpiperazin-1il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (vidrio incoloro, 26 mg, 28%).
Rt = 3,00 min. (Analítico_1) EM (positivo) 631,6; EM (negativo) 629,7; Rt = 3,00 min. (Analítico_1) EM (positivo) 631,6; EM (negativo) 629,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,59 - 0,72 (2 H, m), 0,81 - 0,92 (2 H, m), 0,97 (3 H, t, J=7,1 Hz), 1,20 - 1,42 (4 H, m), 1,42 - 1,55 (2 H, m), 1,54 - 1,64 (2 H, m), 1,64 - 1,73 (2 H, m), 1,83 (2 H, d, J=11,7 Hz),
20 1,89 (4 H, d, J=7,8 Hz), 2,14 - 2,42 (7 H, m), 3,16 (3 H, s), 3,47 (2 H, s), 3,64 - 3,79 (1 H, m), 3,94 (3 H, s), 4,84 (1 H, quin, J=8,7 Hz), 7,40 - 7,54 (2 H, m), 7,67 (1 H, s), 7,98 (1 H, s), 8,03 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,38 (1 H, d, J=8,3 Hz).
Compuesto [380]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7-pirimido[4,5b][1,7’]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
25 A partir de la síntesis y purificación del compuesto [379], se aisló como compuesto separado 4-(9’-ciclopentil-5’-metil6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-etilpiperazin1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (vidrio incoloro, 27 mg, 29%).
Rt = 3,13 min. (Analítico_1) EM (positivo) 631,6; EM (negativo) 629,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,60 - 0,72 (2 H, m), 0,83 - 0,93 (2 H, m), 0,98 (3 H, t, J=7,1 Hz), 1,38 - 1,55 (6 H, m),1,55-1,63 (2H, m),1,63-1,80 (4H, m),1,80-1,96 (4H, m),2,02-2,17 (1H, m), 2,16 - 2,44 (7 H, m), 3,16 (3 H, s), 3,47 (2 H, s), 3,79 - 3,92 (1 H, m), 3,94 (3 H, s), 4,84 (1
35 H, quin, J=8,5 Hz), 7,44 - 7,58 (2 H, m), 7,67 (1 H, s), 7,98 (1 H, s), 8,03 (1 H, d, J=7,3 Hz), 8,37 (2 H, d, J=8,8 Hz).
Compuesto [381]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-(ciclopropilmetil)-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
40 Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (88 mg, 0,2 mmol, 1 eq.), DIPEA (70 μl, 0,4 mmol, 2 eq.) y TBTU (72 mg, 0,24 mmol, 1,2 eq.) a 2 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 20 min. antes de la adición de 4-(4-(ciclopropilmetil)-1,4-diazepan-1-il)ciclohexanamina (producto intermedio 14) (60 mg, 0,24 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 2 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_2) para proporcionar 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-(ciclopropilmetil)-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida como una mezcla de isómeros cis y trans (sólido blanquecino, 67 mg, 50%).
Rt = 4,12 min. (pico ancho) (Analítico_1) EM (positivo) 671,6; EM (negativo) 669,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,01 (2 H, d, J=4,4 Hz), 0,40 (2 H, d, J=7,3 Hz), 0,63 (2 H, s. a.), 0,71 0,83 (1 H, m), 0,87 (2 H, s. a.), 1,02 (1 H, t, J=7,1
10 Hz), 1,25 - 1,38 (2,5 H, m), 1,39 - 1,52 (3,5 H, m), 1,52 - 1,61 (2 H, m), 1,65 (4 H, d; J=5,9 Hz), 1,70 - 1,80 (3 H, m), 1,85 (3 H, d, J=4,4 Hz), 2,21 - 2,31 (1 H, m), 2,55 - 2,83 (8 H, m), 3,13 (3,5 H, s), 3,35 - 3,55 (3 H, m), 3,69 (0,5 H, s. a.), 3,91 (3,5 H, s), 4,31 (0,5 H, t, J=5,1 Hz), 4,81 (1 H, t, J=8,5 Hz), 7,25 - 7,54 (2 H, m), 7,64 (1 H, s), 7,84 - 8,16 (2 H, m), 8,35 (1 H, d, J=8,3 Hz).
15 Compuesto [382]: 4-(9’-ciclopenil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-etil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (44 mg, 0,1 mmol, 1 eq.), DIPEA (35 μl, 0,2
20 mmol, 2 eq.) y TBTU (36 mg, 0,12 mmol, 1,2 eq.) a 1 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 20 min. antes de la adición de 4-(4-etil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexanamina (producto intermedio 15) como la sal de clorhidrato (32 mg, 0,1 mmol, 1 eq.) y DIPEA (53 μl, 0,3 mmol, 3 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 2 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_2) para proporcionar 4-(9’-ciclopenil-5’-metil-6’oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-etil-1,4-diazepan-1
25 il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida como una mezcla de isómeros cis y trans (sólido de color blanco, 10 mg, 16%).
Rt = 3,98 min., 4,18 min. (picos anchos) (Analítico_1) EM (positivo) 645,6; EM (negativo) 643,7; 1H-RMN (DMSO-d6)
30 δ ppm: 0,57 - 0,74 (2 H, m), 0,82 - 0,93 (2 H, m), 0,95 - 1,09 (3 H, m), 1,30 - 1,42 (2 H, m), 1,42 - 1,54 (3,5 H, m), 1,58 (2 H, d, J=4,4 Hz), 1,63 - 1,75 (3,5 H, m), 1,75 - 1,83 (1,5 H, m), 1,88 (3,5 H, s. a.), 1,98 - 2,16 (1,5 H, m), 2,59 2,86 (4 H, m), 3,17 (4 H, s), 3,41-3,53 (3,5 H, m), 3,78 (2,5 H, m), 3,88 - 4,02 (3,5 H, m), 4,06 - 4,38 (1 H, m), 4,76 4,91 (1 H, m), 7,39 - 7,57 (2 H, m), 7,59 - 7,78 (1 H, m), 7,98 (2 H, s), 8,31 - 8,45 (1 H, m)
35 Compuesto [383]: N-(4-(4-bencil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (66 mg, 0,15 mmol, 1 eq.), DIPEA (52 μl, 0,3
40 mmol, 2 eq.) y TBTU (54 mg, 0,17 mmol, 1,1 eq.) a 1 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 20 min. antes de la adición de 4-(4-bencil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexanamina (producto intermedio 16) (54 mg, 0,19 mmol, 1,27 eq.) disuelta en DMF (0,5 ml). Entonces se agitó la MR a ta durante 2 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_5) para proporcionar N-(4-(4-bencil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-4-(9’ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][diazepin]-2’-ilamino)-3
45 metoxibenzamida como una mezcla de isómeros cis y trans (sólido blanquecino, 33 mg, 31%).
Rt = 4,40 min. (Analítico_1) EM (positivo) 707,6; EM (negativo) 705,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,73 (2 H, s. a.), 50 0,96 (2 H, s. a.), 1,22 - 2,22 (19 H, m), 2,64 - 2,91 (4 H, m), 3,23 (5 H, s), 3,53 (8 H, s), 3,89 - 4,24 (4 H, m), 4,91 (1 H, t, J=8,5 Hz), 5,82 (0 H, s), 7,23-8,54 (10H, m).
Compuesto [384]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (66 mg, 0,15 mmol, 1 eq.), DIPEA (52 μl, 0,3 mmol, 2 eq.) y TBTU (54 mg, 0,17 mmol, 1,1 eq.) a 1 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 20 min. antes de la adición de 4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexanamina (producto intermedio 17) (35 mg, 0,18 mmol, 1,2 eq.) disuelta en DMF (0,5 ml). Entonces se agitó la MR a ta durante 2 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (preparativo_2 y Preparativo_3) para proporcionar 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-metilpiperazin-1il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (sólido de color blanco, 17 mg, 18%).
15 Rt = 2,85 min. (Analítico_1) EM (positivo) 617,5; EM (negativo) 615,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,61 - 0,76 (2 H, m), 0,89 (1 H, t, J=6,8 Hz), 0,92 - 0,98 (2 H, m), 1,22 - 1,47 (5 H, m), 1,47 - 1,79 (6 H, m), 1,81 - 2,02 (5 H, m), 2,07 2,20 (3 H, m), 2,20 - 2,42 (4 H, m), 3,20 (4 H, s), 3,34 (3 H, s), 3,51 (2 H, s), 3,67 - 3,82 (1 H, m), 3,98 (3 H, s), 4,88 (1 H, quin, J=8,5 Hz), 7,42 - 7,59 (2 H, m), 7,71 (1 H, s), 8,02 (1 H, s), 8,08 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,42 (1 H, d, J=8,3 Hz).
Compuesto [385]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’-9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-metilpiperazin-1il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
25 A partir de la síntesis y purificación del compuesto [384], se aisló como compuesto separado 4-(9’-ciclopentil-5’metill-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (sólido de color blanco, 34 mg, 37%).
Rt = 2,93 min. (Analítico_1) EM (positivo) 617,5; EM (negativo) 615,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,62 - 0,80 (2 H, m), 0,84 - 1,02 (4 H, m), 1,18 - 1,36 (4 H, m), 1,43 - 1,84 (12 H, m), 1,84 - 2,03 (4 H, m), 2,09 - 2,22 (4 H, m), 2,41 (4 H, s. a.), 3,21 (3 H, s), 3,52 (2 H, s), 3,89 - 3,97 (1 H, m), 3,99 (3 H, s), 4,89 (1 H, quin, J=8,5 Hz), 7,47 - 7,61 (2 H, m), 7,72 (1 H, s), 8,03 (1 H, s), 8,08 (1 H, d, J=7,3 Hz), 8,43 (1 H, d, J=9,3, Hz)
35 Compuesto [386]: N-((trans)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (66 mg, 0,15 mmol, 1 eq.), DIPEA (52 μl, 0,3 mmol, 2 eq.) y TBTU (54 mg, 0,17 mmol), 1,1 eq.) a 1 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 20 min. antes de la adición de 4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexanamina (producto intermedio 18) (35 mg, 0,18 mmol, 1,2 eq.) disuelta en DMF (0,5 ml). Entonces se agitó la MR a ta durante 2 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_2) para proporcionar N-((trans)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’
45 ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro(ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][,4]diazepin]-2’-ilamino)-3metoxibenzamida (sólido de color blanco, 13 mg, 13%).
Rt = 3,64 min. (Analítico_1) EM (positivo) 693,6; EM (negativo) 691,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,62 - 0,79 (2 H, m), 0,85 - 1,02 (2 H, m), 1,20 - 1,46 (4 H, m), 1,46 - 1,58 (2 H, m), 1,59 - 1,67 (2 H, m), 1,67 - 1,78 (2 H, m), 1,80
2,02 (6 H, m), 2,12 (1 H, s), 2,18 - 2,46 (6 H, m), 3,20 (3 H, s), 3,43 - 3,56 (5 H, m), 3,67 - 3,84 (1 H, m), 3,97 (3 H, s), 4,88 (1 H, quin, J=8,4 Hz), 7,22 - 7,42 (6 H, m), 7,44 - 7,59 (2 H, m), 7,71 (1 H, s), 8,02 (1 H, s), 8,08 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,42 (1 H, d, J=7,8 Hz)
Compuesto [387]: N-((cis)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
A partir de la síntesis y purificación del compuesto [386], se aisló como compuesto separado N-((cis)-4-(4bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro(ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida (sólido de color blanco, 20 mg, 19%).
Rt = 3,85 min. (Analítico_1) EM (positivo) 693,6; EM (negativo) 691,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,62 - 0,79 (2 H,
15 m), 0,87 - 1,01 (2 H, m), 1,43 - 1,59 (5 H, m), 1,59 - 1,67 (2 H, m), 1,66 - 1,74 (2 H, m), 1,75 - 1,84 (2 H, m), 1,92 (4 H, s. a.), 2,07 - 2,29 (2 H, m), 2,41 (4 H, s. a.), 3,20 (3 H, s), 3,51 (4 H, s), 3,87 - 4,05 (4 H, m), 4,74 - 4,99 (1 H, m), 7,24 - 7,39 (5 H, m), 7,50 - 7,56 (2 H, m), 7,71 (1 H, s), 8,02 (1 H, s), 8,07 (1 H, d, J=6,8 Hz), 8,42 (1 H, d, J=8,8 Hz)
Compuesto [388]: 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
Se añadieron ácido 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxibenzoico (producto intermedio 6) (66 mg, 0,15 mmol, 1 eq.), DIPEA (52 μl, 0,3 mmol, 2 eq.) y TBTU (54 mg, 0,17 mmol, 1,1 eq.) a 1,5 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 20 min. antes de la adición de 4
25 morfolinociclohexanamina (producto intermedio 16) (33 mg, 0,18 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 2 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (preparativo_2) para proporcionar 4-(9ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-((trans)-4morfolinociclohexil)benzamida (sólido blanquecino, 10 mg, 11%).
Rt = 3,16 min. (Analítico_1) EM (positivo) 606,4; EM (negativo) 604,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 1,07 - 1,18 (7 H, m), 1,24 - 1,49 (4 H, m), 1,58 - 1,71 (4 H, m), 1,71 - 1,84 (2 H, m), 1,83 - 2,03 (6 H, m), 2,23 (1 H, t, J=10,5 Hz), 2,43
-
2,51 (3 H, m), 3,17 - 3,28 (4 H, m), 3,42 (3 H, s. a.), 3,60 (4 H, s. a.), 3,64 (1 H, s. a.), 3,71 - 3,83 (1 H, m), 3,98 (3
35 H, s), 5,23 (1 H, t, J=8,3 Hz), 7,44 - 7,60 (2 H, m), 7,72 (1 H, s), 8,02 (1 H, s), 8,09 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,40 (1 H, d, J=8,3 Hz)
Compuesto [389]: 4-(9-ciclopentil-5,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
A partir de la síntesis y purificación del compuesto [388], se aisló como compuesto separado 4-(9-ciclopentil-5,7,7trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-((cis)-4morfolinociclohexil)benzamida (sólido de color blanco, 22 mg, 24%).
Rt = 3,31 min. (Analítico_1) EM (positivo) 606,4; EM (negativo) 604,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 1,13 (6 H, s), 1,39
-
1,60 (4 H, m), 1,60 - 1,71 (4 H, m), 1,71 - 1,85 (4 H, m), 1,85 - 2,01 (4 H, m), 2,07 - 2,22 (2 H, m), 2,42 - 2,48 (4 H, m), 3,22 (4 H, s), 3,64 (4 H, s. a.), 3,87 - 4,05 (4 H, m), 5,14 - 5,31 (1 H, m), 7,45 - 7,62 (2 H, m), 7,71 (1 H, s), 8,02 (1 H, s), 8,09 (1 H, d, J=7,3 Hz), 8,39 (1 H, d, J=8,3 Hz)
Compuesto [390]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
Se añadieron ácido 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzoico (producto intermedio 5) (66 mg, 0,15 mmol, 1 eq.), DIPEA (52 μl, 0,3 mmol, 2 eq.) y TBTU (54 mg, 0,17 mmol, 1,1 eq.) a 1,5 ml de DMF y se agitó la disolución resultante a ta durante 20 min. antes de la adición de 4-morfolinociclohexanamina (producto intermedio 16) (33 mg, 0,18 mmol, 1,2 eq.). Entonces se agitó la MR a ta durante 2 horas antes de purificar mediante RP-HPLC preparativa-EM (Preparativo_2) para proporcionar 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida (sólido blanquecino, 13 mg, 14%).
15 Rt = 2,96 min. (Analítico_1) EM (positivo) 604,4; EM (negativo) 602,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,72 (2 H, s), 0,95 (2 H, s), 1,24 - 1,49 (4 H, m), 1,49 - 1,60 (2 H, m), 1,60 - 1,69 (2 H, m), 1,69 - 1,82 (2 H, m), 1,82 - 2,03 (6 H, m), 2,14 (1 H, s), 2,17 - 2,32 (1 H, m), 3,22 (4 H, s), 3,53 (2 H, s), 3,61 (4 H, s. a.), 3,71 - 3,84 (1 H, m), 4,00 (3 H, s), 4,90 (1 H, quin, J=8,5 Hz), 7,43 - 7,61 (2 H, m), 7,73 (1 H, s), 8,04 (1 H, s), 8,10 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,44 (1 H, d, J=8,3 Hz)
Compuesto [391]: 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
A partir de la síntesis y purificación del compuesto [390], se aisló como compuesto separado 4-(9’-ciclopentil-5’-metil6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((cis)-4
25 morfolinlociclohexil)benzamida (sólido de color blanco, 27 mg, 30%).
Rt = 3,10 min. (Analítico_1) EM (positivo) 604,4; EM (negativo) 602,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,66 - 0,81 (2 H, m), 0,88 - 1,03 (2 H, m), 1,45 - 1,86 (12 H, m), 1,87 - 2,02 (4 H, m), 2,10 - 2,21 (1 H, m), 2,47 (4 H, s. a.), 3,22 (3 H, s), 3,52 (2 H, s), 3,65 (4 H, s. a.), 3,89 - 4,05 (4 H, m), 4,90 (1 H, quin, J=8,5 Hz), 7,50 - 7,63 (2 H, m), 7,73 (1 H, s), 8,03 (1 H, s), 8,10 (1 H, d, J=7,3 Hz), 8,43 (1 H,
EJEMPLO 3
35 Se aisló un clon de CD25C humano de longitud completa mediante PCR de ARNm de HeLa y se insertó en un fragmento BamHI-HindIII en pRsetA. Se cortó el fragmento amino terminal de CDC25C (que codifica para los residuos 1-300) de este vector y se insertó en pET28a (entre los sitios NcoI y BamHI). La expresión estaba bajo el control del promotor de T7, y la proteína codificada contenía una etiqueta His6 en el extremo carboxilo terminal. Se transformó el vector en una cepa de E. coli BRL(DE3) pLysS para experimentos de expresión. Se expresó CDC25C en células bacterianas BL21(DE3) RIL, se hizo crecer en medio LB a 37ºC hasta que se alcanzó una DO600nm de 0,6. Se indujo la expresión con IPTG 1 mM y se hizo crecer el cultivo bacteriano adicionalmente durante 3 h. Se recogieron las bacterias mediante centrifugación y se resuspendió el sedimento celular en Tris 50 mM pH 7,5 y sacarosa al 10%, se sometió a congelación ultrarrápida y se almacenó a -70ºC hasta que se usó. Se purificó la
45 proteína CDC25C a partir de cuerpos de inclusión de E. coli. Se aislaron los cuerpos de inclusión en un tampón (Tris 50 mM pH 8,0, EDTA 2 mM, NaCl 100 mM, Triton X-100 al 0,5%). Tras la desnaturalización en presencia de urea 6 M, se volvió a plegar la proteína por medio de diálisis lenta de la urea. Se almacenó la proteína en Tris 25 mM pH 8,0, NaCl 100 mM, DTT 1 mM, EDTA 1 mM y glicerol al 10% a -70ºC hasta que se usó.
Se amplificó un clon de PLK1 humano de longitud completa (XM_047240) (aminoácidos 1-603) a partir de una biblioteca de ADNc de pulmón fetal usando cebadores que incorporan sitios de enzimas de restricción. El cebador en 5’ (gccgctagcgacgatgacgataagatgagtgctgcagtgactgcagggaagc) tenía un sitio Nhe1 antes del codón de iniciación de ATG. El cebador en 3’ (ggaattcttaggaggccttgagacgg) incorporó un codón de terminación antes del sitio EcoR1. Se clonó el producto de PCR en los sitios Nhe1/EcoR1 de un vector de expresión de baculovirus, pSSP1. La clonación
55 en este vector dio como resultado una fusión de la etiqueta His6 en el extremo amino terminal del constructo de
PLK1. Se dividieron de nuevo células Sf9 de un número de pase inferior a 20 para dar un volumen de cultivo de 300 ml, a una densidad celular de 1,5 x 106 células/ml. Las células se usaron solamente para la expresión en fase de crecimiento logarítmico. Se añadió el baculovirus con PLK1 (de la amplificación de P2) para dar una multiplicidad de infección de 3, esto es equivalente a 3 partículas virales por cada célula de insecto. Se incubaron los matraces a 5 27ºC, con agitación a 100 r.p.m. durante 48 h. En la recogida, se determinaron la densidad y viabilidad celulares, se centrifugaron los cultivos a 2500 r.p.m. durante 5 min. y se lavaron con solución salina tamponada con fosfato helada. Se volvió a centrifugar el lavado a la misma velocidad y se congeló instantáneamente el sedimento. Se purificó la proteína PLK1 en una columna de afinidad de metal. Se lisó el sedimento de células de insecto en un tampón (Tris-HCl 10 mM pH 8,0, NaCl 150 mM, β-mercaptoetanol 5 mM, PMSF 1 mM, benzamidina 1 mM, imidazol
10 20 mM y cóctel de inhibidor de proteasa (Sigma) y se cargó el sobrenadante preaclarado sobre NiNTA-agarosa (Qiagen). Se lavó la columna de afinidad con el tampón de lisis y se eluyó la proteína unida con imidazol 250 mM en el mismo tampón. Tras diálisis durante la noche frente a Tris HCl 25 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, DTT 1 mM, PMSF 1 mM, benzamidina 1 mM, cóctel de inhibidores de proteasa (Sigma) y glicerol al 10%, se almacenó la proteína purificada a -70ºC hasta que se usó.
15 EJEMPLO 4
Se llevaron a cabo ensayos de proteína cinasa PLK1 usando un formato de placa de 96 pocillos incubando CDC25C (2 μg/pocillo) con PLK1 (1 μg/pocillo) en tampón Tris/HCl 20 mM pH 7,5, complementado con β-glicerofosfato 25 20 mM, EGTA 5 mM, DTT 1 mM y NaVO3 1 mM. Se añadieron diluciones en serie de compuesto de prueba en tampón de ensayo. Se inició la reacción mediante la adición de ATP 100 μM y 0,5 μCi de [γ-32P]-ATP. Se incubó la mezcla de reacción a 30ºC durante 1 h, entonces se detuvo con ácido ortofosfórico acuoso 75 mM, se transfirió a una placa con filtro P81 de 96 pocillos (Whatman), se secó, y se evaluó el grado de fosforilación de CDC25C mediante recuento de centelleo usando un lector de placas TopCount de Packard. Se analizaron los datos del ensayo sin
25 procesar mediante parámetros de análisis de regresión no lineal y se determinaron los valores de CI50 usando la ecuación: y = A + ((B-A)/(1+((C/x)^D))), en la que y es el % de inhibición, A es la inhibición mínima, B es la inhibición máxima, C es CE50 y D es el factor de pendiente.
Se llevaron a cabo ensayos de proliferación celular usando líneas celulares de tumor humanas (obtenidas de la
30 Colección americana de cultivos tipo, 10801 University Boulevard, Manessas, VA 20110-2209, EE.UU.). Se realizaron ensayos MTT de 72-h convencionales (azul de tiazolilo; bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5difeniltetrazolio) (Loveland et al, Biochem. Int., 1992, 27, 501; Haselsberger et al, Anti Cancer Drugs, 1996, 7, 331). En resumen: se sembraron células en placas de 96 pocillos según el tiempo de duplicación y se incubaron durante la noche a 37ºC. Se prepararon los compuestos de prueba en DMSO y una serie de dilución de 1/3 preparada en 100
35 μl de medio celular, se añadieron a las células (por triplicado) y se incubaron durante 72 h a 37ºC. Se preparó MTT como una disolución madre de 5 mg/ml en medio celular y se esterilizó mediante filtración. Se retiró el medio de las células seguido por un lavado con 200 μl de PBS. Entonces se añadió la disolución de MTT a 20 μl por pocillo y se incubó en la oscuridad a 37ºC durante 4 h. Se retiró la disolución de MTT y se lavaron de nuevo las células con 200 μl de PBS. Se solubilizó el colorante de MTT con 200 μl por pocillo de DMSO con agitación. Se leyó la absorbancia a
40 540 nm y se analizaron los datos usando software de ajuste de curvas (GraphPad Prism versión 3.00 para Windows, GraphPad Software, San Diego California EE.UU.) para determinar los valores de CI50 (concentración de compuesto de prueba que inhibe el crecimiento celular en un 50%).
EJEMPLO 5
45 Selectividad de PLK
La tabla 4 muestra la selectividad del compuesto [218] para PLK1 sobre PLK2 y PLK3 en comparación con los compuestos seleccionados de la técnica anterior. A modo de ilustración, el compuesto [218] de la invención es dos 50 veces más selectivo para PLK1 frente a PLK2 en comparación con el compuesto [1-64] del documento WO 07/095188, aproximadamente 6 veces más selectivo que el compuesto [I-76] y 7 veces más selectivo que el compuesto [I-4] del documento WO 07/095188. De manera similar, el compuesto [218] es 5 veces más selectivo para PLK1 frente a PLK3 en comparación con el compuesto [I-64] del documento WO 07/095188, aproximadamente 12 veces más selectivo que el compuesto [I-76] y 5 veces más selectivo que el compuesto [I-4] del documento WO
55 07/095188.
EJEMPLO 6
Estudios de solubilidad
60 La tabla 5 muestra que el compuesto [254] (estructura en el cuadro a continuación) tiene propiedades farmacocinéticas y/o solubilidad superiores en comparación con compuestos estructuralmente relacionados ya conocidos en la técnica.
Estudios de nefelometría
5 Si se introduce una disolución en DMSO de un compuesto soluble en agua en tampón acuoso, la mezcla permanece transparente a menos que se alcance el límite de solubilidad acuosa. Por encima del límite de solubilidad, se produce la precipitación y se dispersa la luz que se desplaza a través de la suspensión turbia. La medición de la intensidad de la luz dispersada es la base de la determinación de la solubilidad nefelométrica.
10 Se examinaron compuestos seleccionados usando un nefelómetro para identificar la concentración a la que se produce la turbidez, dando así una indicación de la solubilidad cinética. Mediante nefelometría (el 2% de DMSO: el 98% de solución salina tamponada con fosfato pH 7,5) el compuesto [254] era soluble libremente a 200 μM (>0,11 mg/ml) que es la concentración más alta sometida a prueba en este ensayo. Por el contrario, en el mismo ensayo de nefelometría, se determinó que la concentración soluble máxima del ejemplo [I-253] de la técnica anterior del
15 documento WO 07/095188 era de 75 μM (tabla 6). Esto muestra que el compuesto [254] es más soluble en tampón acuoso en el intervalo de concentración usado para estudiar la actividad del compuesto in vitro.
Estudios farmacocinéticos
20 Con el fin de estudiar los compuestos in vivo, a menudo se requieren concentraciones más altas. Para lograr estas concentraciones más altas, normalmente se utilizan formas de sal de los compuestos.
Se estudiaron el compuesto [254] y el ejemplo [I-76] del documento WO 07/095188 como la base libre y sales de clorhidrato en diversas mezclas de disolventes farmacéuticamente relevantes que pueden usarse para la
25 administración de compuestos a organismos vivos. Habiendo solubilizado el compuesto calentándolo en el disolvente, se enfriaron las disoluciones hasta 25ºC y se observaron. En lugar de formar un precipitado, las mezclas supersaturadas tienden a formar una mesofase gelatinosa tras enfriar que no es adecuada o conveniente para la dosificación. Queda claro a partir de los datos presentados en la tabla 5 que el compuesto [254] y su sal de HCl tienen sistemáticamente mejores perfiles de disolución que el ejemplo [I-76] y su sal de HCl correspondiente.
30 Se administró la sal de HCl del ejemplo [I-76] a ratones como una disolución en el 3% de DMA, el 97% de agua mediante inyección intravenosa. La dosis tolerada máxima parece estar dictada por alcanzar la concentración máxima de compuesto en disolución estable. A la dosis tolerada máxima no se observó eficacia antitumoral de xenoinjerto (una vez al día x 7 dosificaciones) ya que no pudo administrarse suficiente concentración de compuesto.
35 Por el contrario, el compuesto [254] y su sal, que tienen solubilidad en agua significativamente más alta, pueden inyectarse a concentraciones que es más probable que produzcan eficacia en el tratamiento de enfermedades.
EJEMPLO 8
40 Propiedades farmacocinéticas del compuesto [371]
(a) Metodología
Se llevaron a cabo investigaciones preliminares de las farmacocinéticas de compuestos seleccionados en ratones
45 CD-1 conscientes en ayunas (25-30 g). Se dosificaron los compuestos como 1 mg/kg mediante administración intravenosa o 5-10 mg/kg por vía oral. Veintiún ratones macho por vía de administración (n=3 ratones por punto de tiempo) recibieron disolución de dosis mediante inyección de bolo individual en la vena de la cola o mediante sonda nasogástrica. Se recogieron muestras de sangre mediante punción cardiaca a los 5, 15, 30, 60, 120, 240 y 360 min. tras la administración por vía i.v. y a los 30, 60, 120, 240, 360, 480 y 1440 min. tras la administración oral. Se
50 recogieron muestras de sangre en tubos que contenían el anticoagulante heparina de litio, se mezclaron y se colocaron inmediatamente sobre hielo picado. Se derivó plasma de sangre completa mediante centrifugación, se colocaron y se almacenaron a -80ºC antes del análisis. Se determinaron las concentraciones plasmáticas mediante cromatografía de líquidos-espectrometría de masas en modo positivo de electrospray en tándem (IES-CL/EM/EM) usando curvas de calibración preparadas en la matriz apropiada. El nivel inferior de cuantificación (LLOQ) en todos
55 los casos fue de aproximadamente 5 ng/ml. Se procesaron los datos de concentración plasmática-tiempo usando el programa informático WinNonLin versión 5.2 a partir de los cuales se calcularon las áreas bajo la curva de concentración plasmática-tiempo (AUCtodo) mediante análisis no compartimental usando el modelo 201 (entrada de bolo por vía i.v.) o el modelo 200 (entrada extravascular).
5 (b) Comparación de compuestos [371] y [378] con compuestos seleccionados de la técnica anterior
Se llevaron a cabo estudios farmacocinéticos adicionales para comparar los compuestos [371] y [378] con una serie de análogos relacionados (véase la tabla 7; el compuesto [371] se corresponde con el compuesto H; el compuesto
[378] se corresponde con el compuesto I).
La figura 1 representa gráficamente el área bajo la curva (AUC) para la concentración plasmática frente al tiempo para cada compuesto sometido a prueba. El vehículo de dosificación a lo largo de estos experimentos permaneció constante (vía intravenosa = tampón citrato pH 3, 1 ml/kg; vía oral = DMA/PEG400/tampón tartrato 10 mM, pH 4 (1:3:6), 5 ml/kg). La figura 2 representa los mismos datos en forma de biodisponibilidad oral (%F) para cada
15 compuesto.
Los resultados indican que los compuestos H e I presentan biodisponibilidad oral y exposición sistémica marcadamente superiores en comparación con los compuestos A-G.
EJEMPLO 9
(a) Datos de flujo de salida celular
Se han usado ensayos de viabilidad celular in vitro para medir el efecto de la acumulación de fármaco en líneas
25 celulares de tumor parentales y resistentes a fármacos emparejadas. Las parejas usadas son la línea A2780 de carcinoma de ovario humano con su homólogo de MDR A2780/ADR y la línea MES-SA de sarcoma uterino humano con su homólogo de MDR MES-SA/Dx5 [Wesolowska O., et al. (2005) Anticancer Res., 25, 383-389].
Método: Se sembraron células tumorales humanas cultivadas de la línea celular de ovario A2780 y su pareja resistente a la doxorubicina, A2780/ADR y la línea celular uterina MES-SA y su pareja resistente a la doxorubicina, MES-SA/DX5 a 3000 células por pocillo en placas de cultivo tisular de 96 pocillos de Nunc, 100 μl por pocillo en medio DMEM que contenía suero de ternero fetal al 10% y penicilina/estreptomicina. Se llenaron los pocillos de la primera columna en cada placa con 100 μl de medio DMEM en lugar de células para proporcionar un control de blanco para el Alamar Blue. Se incubaron las células durante la noche a 37ºC y un 5% de CO2. Se añadieron los
35 compuestos de interés, disueltos en DMSO, sobre las células a diversas concentraciones. En primer lugar se prepararon diluciones de los compuestos en DMEM a dos veces la concentración deseada final y se añadieron 100 μl de las diluciones sobre las células. Se sometió a prueba cada conjunto de compuestos por triplicado en cada línea celular. Tras 72 horas de incubación, se añadieron 20 μl de reactivo Alamar Blue (AbD Serotec) a cada pocillo y se incubó durante 3 horas. Entonces se leyeron las placas a 544/595 nm.
La cantidad de reactivo Alamar Blue reaccionado representa la actividad metabólica de las células. Se calculó la actividad celular relativa como un porcentaje del control (células sin compuesto) y se derivó la concentración de compuesto activo que inhibía la actividad celular en un 50% (CI50). Se calcularon los valores a partir del promedio de tres mediciones individuales con corrección de blanco (control de sólo medio).
45 Se realizó el ensayo en el instrumento Biomek FxP, plataforma de automatización de Beckman Coulter. Se leyeron las placas en el lector de placas Paradigm suministrado por Beckman Coulter. Se calcularon las razones de asimetría como el valor de CI50 del compuesto en las células resistentes a fármaco dividido entre el valor de CI50 en las células parentales. La figura 3 muestra una comparación de compuestos seleccionados frente a los compuestos de la técnica anterior A’-J’ (definidos en la tabla 8) en células tumorales parentales y MDR. Se presentan las razones de asimetría en relación con el compuesto [378].
(b) Inhibición de PLK1
55 Además, los compuestos de esta invención que presentan baja asimetría de células parentales/MDR en ensayos de viabilidad celular también son más eficaces en la inhibición PLK1 dentro de células tumorales MDR que los compuestos de la técnica anterior. Por tanto, tienen un mayor potencial como inhibidores de PLK terapéuticos. La proteína de filamento intermedia vimentina es una diana celular de la fosforilación de PLK1. La inhibición de PLK1 se asocia con una disminución en fosfo-vimentina. Esto se ha medido en la pareja de líneas celulares A2780 A2780/ADR. Método: se sembraron en placa células A2780 y células A2780/ADR en placas de 96 pocillos separadas (Perkin Elmer) a una densidad de 20.000 células/pocillo y se incubaron durante la noche a 37ºC y un 5% de CO2. Se añadieron compuestos de prueba a las células en un intervalo de concentraciones, con pocillos por triplicado para cada concentración (la concentración máxima de DMSO en las células era del 0,1%). Tras 7 h de incubación, se fijaron las células en formaldehído al 3,7% enfriado con hielo durante 10 min. Se lavaron las células
65 en PBS, entonces se permeabilizaron en metanol frío durante 10 min. Se lavaron las células de nuevo en PBS, entonces se incubaron con PBS que contenía Triton X-100 al 0,1% durante 5 min. Se lavaron las células una vez
con PBS que contenía albúmina sérica bovina al 1% (Sigma), entonces se incubaron durante 3 h con anticuerpos frente a fosfo-histona H3-Ser10 (1:4000; Millipore) y fosfo-vimentina-Ser82 (1:1000; MBL), en albúmina sérica bovina al 1%. Se detectaron los anticuerpos con anticuerpo de cabra anti-IgG de ratón conjugado con Alexafluor 488 (Invitrogen) y anticuerpo de cabra anti-IgG de conejo conjugado con Alexafluor 546 (Invitrogen), en albúmina sérica 5 bovina al 1% con DAPI 300 nM (Cambridge Biosciences). Se exploraron las placas en un lector Cellomics Arrayscan II HCS (Cellomics) usando un objetivo 10X. Se usó Cell Health Profiling V2 Bioapplication (Cellomics) para adquirir y analizar las imágenes. Se midió la tinción de fosfo-vimentina, a intensidades por encima de un umbral definido por el usuario, en células mitóticas sólo (definidas por la presencia de fosfo-histona H3) y se notificó la intensidad de tinción promedio por célula mitótica para cada pocillo. Se derivaron los valores de CI50 usando valores promedio a
10 partir de tres pocillos replicados. Se calcularon las razones de asimetría como el valor de CI50 del compuesto en las células A2780/ADR resistentes a fármaco divido entre el valor de CI50 en las células A2780 parentales. La figura 3 muestra una comparación de compuestos seleccionados frente a los compuestos de la técnica anterior A’-J’ (definidos en la tabla 8) en células tumorales parentales y MDR. Como anteriormente, se presentan las razones de asimetría en relación con el compuesto [378].
15 Los compuestos 1 a 39 en la tabla 1 están fuera del alcance de las reivindicaciones.
TABLA 1: Valores de CI50 de PLK (μM) para compuestos seleccionados de la invención; *** indica CI50 de < 0,1 μM; ** indica CI50 de <1,0 μM; * indica CI50 de <10,0 μM de AA de PLK1
20 Ácido 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5* ** b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-benzoico
4-(9-Ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin
***
2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
Ácido 4-(9-ciclopentil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
*
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-benzoico
Ácido 4-(9-ciclopentil-5,8-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
*
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-benzoico
Ácido 4-(9-ciclohexil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
*
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-benzoico
Ácido 4-(9-ciclopentil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)-3-metoxi-benzoico
Ácido 4-(9-ciclopentil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
* **
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-benzoico
Ácido 4-(9-ciclopentil-5,8-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
*** **
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-benzoico
Ácido 4-(9-ciclohexil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido(4,5-b][1,4]diazepin-2
*
ilamino)-3-metoxi-benzoico
9-Ciclohexil-2-(4-hidroxi-fenilamino)-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5
*
b][1,4]diazepin-6-ona
9-Ciclopentil-2-(4-hidroxi-fenilamino)-7-metil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5
*
b][1,4]diazepin-6-ona
9-Ciclopentil-2-(4-hidroxi-fenilamino)-8-isopropil-5-metil-5,7,8,9-tetrahidropirimido[4,5-b][1,4]diazepin-6-ona
9-Ciclopentil-2-(4-hidroxi-fenilamino)-5,8-dimetil-5,7,8,9-tetrahidro-pirimido[4,5*
b][1,4]diazepin-6-ona Ácido 4-(9-bencil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
-
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-benzoico
** * Ácido 4-(5-metil-6-oxo-9-fenil-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin2-ilamino)-benzoico
Ácido 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5b][1,4]diazepin-2-ilamino)-benzoico
4-(9-Ciclopentil-7-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-S5-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin*
2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida 4-(9-Ciclopentil-7-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin
* *
2-ilamino)N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida 4-(9-Ciclopentil-8-isopropil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
* b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-5,7-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5*** b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-[9-(1-Etil-propil)-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino]-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-[9-(1-Etil-propil)-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino]-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-8-isopropil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5* b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-[9-(1-Etil-propil)-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
*
b][1,4]diazepin-2-ilamino]-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
3-Metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-4-[6-oxo-9-(tetrahidro-piran-4-il)-6,7,8,9tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino]-benzamida
3-Metoxi-4-[5-metil-6-oxo-9-(tetrahidro-piran-4-il)-6,7,8,9-tetrahidro-5H
**
pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino]-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-[5-Etil-9-(1-etil-propil)-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin2-ilamino]-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-5-etil-7-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
**
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Bencil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2
-
*
ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
3-Metoxi-4-(5-metil-6-oxo-9-fenil-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
**
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-espiro[pirimido[4,5*** b][1,4]diazepin-3,1’-ciclopropano]-2-ilamino)-N-(1-metil-piperidin-4-il)benzamida
4-(9-Ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-5,8-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
**
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin
**
2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclohexil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin
**
2-ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2
*
ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-5,8-dimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
** **
b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-8-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin
**
2-ilamino)-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
4-(9-Ciclohexil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2
*
ilamino)-3-metoxi-N-(1-metil-piperidin-4-il)-benzamida
Comp.
CI50 de AurA CI50 de PLK1 Nombre Datos
4-(9-Ciclopentil-5-metil-6-oxo-
6,7,8,9-tetrahidro-5H
160
*** pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2
ilamino)-3-metoxi-N-(4-metil
piperazin-1-il)-benzamida
186
*** N-(1-Aza-biciclo[2.2.2]oct-3-il)4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5Hespiro[pirimido[4,5b][1,4]diazepin-3,1’ciclopropano]-2-ilamino)-3metoxibenzamida EM (positivo); 546,4; tR = 3,02 min. (xbridge 4).
N-(1-Aza-biciclo[2.2.2]oct-3-il)
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6
194
*** oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H
pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2
ilamino)-3-metoxi-benzamida
4-(9-Ciclopentil-5,7,7-trimetil-6
oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H
195
*** pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2
ilamino)-3-metoxi-N-(4-metil
piperazin-1-il)-benzamida
218
*** N-(1-Aza-biciclo[2.2.2]oct-3-il)4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5Hespiro[pirimido[4,5b][1,4]diazepin-3,1’ciclobutano]-2-ilamino)-3metoxi-benzamida
221
*** 4-(9-Ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5Hespiro[pirimido[4,5b][1,4]diazepin-3,1’ciclobutano]-2-ilamino)-N-(4metil-piperazin-1-il)-3-metoxibenzamida
254
*** 4-(9-Ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5Hpirimido[4,5-b][1,4]diazepin-3,1’ciclopropano-2-ilamino)-3metoxi-N-(4-metil-piperazin-1il)-benzamida
4-(9-Ciclopentil-5-metil-6-oxo-
6,7,8,9-tetrahidro-5H
345
*** pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)-3-metoxi-N-[1
(tetrahidro-piran-4-il)-piperidin
4-il]-benzamida
346
Éster terc-butílico del ácido 4(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5Hespiro[pirimido[4,5b][1,4]diazepin-3,1’ciclopropano]-2-ilamino)-3metoxi-benzoilamino}piperidin1-carboxílico
347
*** N-(R)-(1-Aza-biciclo[2.2.2]oct-3il)-4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5Hespiro[pirimido[4,5b][1,4]diazepin-3,1’ciclopropano]-2-ilamino)-3metoxi-benzamida
348
*** N-(S)-(1-Aza-biciclo[2.2.2]oct-3il)-4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5Hespiro[pirimido[4,5b][1,4]diazepin-3,1’ciclopropano]-2-ilamino)-3metoxi-benzamida
TABLA 3: Valores de CI50 PLK y datos de caracterización para los compuestos seleccionados de la invención; ***
indica CI50 de <0,1 μM; ** indica CI50 de entre 1 μM y 0,1 μM; * indica CI50 de entre 10 μM y 1 μM
n.º
Estructura PLK1 Nombre Datos
Rt = 2,63 min. (Analítico_1); EM (positivo): 535,5; EM (negativo): 533,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,63 0,70 (2 H, m), 0,87 - 0,94 (2
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-
H, m), 1,43 - 1,54 (2 H, m),
5’,6’,8’,9’
1,55 -1,63 (2 H, m), 1,64 -
254
*** tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ 1,73 (2 H, m), 1,83 - 1,94 (2 H, m), 2,18 (3 H, s), 2,31 -
ilamino)-3-metoxi-N-(4
2,48 (4 H, m), 2,92 (4 H, m),
metilpiperazin-1-il)benzamida
3,16 (3 H, s), 3,47 (2 H, s), 3,94 (3 H, s), 4,78 - 4,91 (1 H, m), 7,35 - 7,48 (2 H, m), 7,68 (1 H, s), 7,98 (1 H, s), 8,39 (1 H, d, J=8,3 Hz), 9,31 (1 H, s).
218
*** (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3il)benzamida Rt = 3,26 min. (Analítico_1); EM (positivo): 560,4; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 8,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,45 - 7,53 (m, 2H), 4,82 (quin., J = 8,3 Hz, 1H), 3,84 - 4,01 (m, 4H), 3,64 (s, 2H), 3,18 (s, 3H), 3,04 - 3,14 (m, 1H), 2,88 (t, J = 9,8 Hz, 1H), 2,58 - 2,75 (m, 4H), 2,21 -
2,33 (m, 2H), 2,07 (s, 2H), 1,97 (s. a., 2H), 1,87 (s. a., 2H), 1,76 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 1,56 -1,70 (m, 8H), 1,30 (s. a., 1H)
195
*** 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(4-metil-piperazin-1-il)benzamida Rt = 2,81 min. (Analítico_1); EM (positivo): 537,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 1,09 (6H, s), 1,61 (4H, m), 1,73 (2H, m), 1,87 (2H, m), 2,19 (3H, s), 2,42 (2H, m), 2,92 (4H, m), 3,29 (3H, s), 3,37 (3H, m), 3,93 (3H, s), 3,17 (1H, m), 7,40 (2H, m), 7,68 (1H, s), 7,98 (1H, s), 8,37 (1H, d, J 7Hz), 9,30 (1H, s).
Rt = 2,79 min. (Analítico_1); EM (positivo): 549,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 9,31 (s, 1H), 8,37 (d, J = 8,3
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-
Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,72
5’,6’,8’,9’
(s, 1H), 7,37 - 7,47 (m, 2H),
221
*** tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ 4,73 - 4,86 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,64 (s, 2H), 3,18 (s,
ilamino)-3-metoxi-N-(4
3H), 2,92 (s. a., 4H), 2,36
metilpiperazin-1-il)benzamida
(s. a., 4H), 2,27 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,97 (s. a., 2H), 1,79 - 1,91 (m, 1H), 1,76 (s. a., 2H), 1,54 - 1,72 (m, 7H).
Rt = 3,18 min. (Analítico_1); ES (positivo): 657,6; ES (negativo): 655,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,05 (d, J = 4,20 Hz, 3H), 0,44 (d, J = 7,74 Hz, 2H), 0,67 (d, J = 1,61 Hz, 2H), 0,74 - 0,85
371
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-N-((trans)-4-(4(ciclopropilmetil)piperazin-1il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida (m, 1H), 0,90 (s, 2H), 1,23 - 1,44 (m, 3H), 1,44 - 1,55 (m, 2H), 1,54 - 1,64 (m, 2H), 1,64 -1,74 (m, 2H), 1,88 (s. a., 5H), 2,08 (s, 3H), 2,13 (d, J = 6,45 Hz, 2H), 2,17 - 2,28 (m, 1H), 2,29 - 2,47 (m, 3H), 2,60 - 2,67 (m, 1H),
3,06 - 3,23 (m, 5H), 3,47 (s, 2H), 3,65 - 3,79 (m, 1H), 3,94 (s, 2H), 4,05 - 4,13 (m, 1H), 4,78 - 4,91 (m, 1H), 7,48 (s, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 8,00 - 8,07 (m, 1H), 8,31 - 8,45 (m, 1H).
Rt = 3,38 min. (Analítico_1); ES (positivo): 659,6; ES (negativo): 657,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,05 (d, J = 3,86 Hz, 3H), 0,40 - 0,48 (m, 3H), 0,73 - 0,84 (m, 2H), 1,03 -1,13 (m, 10H), 1,18 (s, 1H), 1,24
4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo
1,43 (m, 6H), 1,61 (s. a.,
6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5
3H), 1,74 (d, J = 9,65 Hz,
372
*** b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4 2H), 1,88 (s. a., 5H), 2,08 (s, 5H), 2,13 (d, J = 6,75
(ciclopropilmetil)piperazin-1-
Hz, 2H), 2,17 - 2,25 (m,
il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
1H), 2,36 (s. a., 3H), 2,60 - 2,67 (m, 1H), 3,14 - 3,22 (m, 2H), 3,37 (s, 1H), 3,51 (s, 1H), 3,94 (s, 2H), 5,18 (t, J = 8,52 Hz, 1H), 7,43 - 7,50 (m, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 8,03 (d, J = 7,72 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 8,36 Hz, 1H).
4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo
6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-
Rt = 2,74 min. (Analítico_1);
345
*** b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3- ES (positivo): 578,5; ES
metoxi-N-[1-(tetrahidro-piran-4-il)
(negativo): 576,7.
piperidin-4-il]-benzamida
Rt = 2,74 min. (Analítico_1); EM (positivo): 537,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm:
373
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2’ilamino)-3-fluoro-N-(4metilpiperazin-1-il)benzamida 1,55 -1,65 (8H, m), 1,71 (2H, m), 1,88 (2H, m), 2,18 (3H, s), 2,28 (2H, q, J 10,5 Hz), 2,41 - 2,52 (4H, m), 2,89 (4H, m), 3,18 (3H, s), 3,61 (2H, s), 4,76 (1H, quintete, 8,5 Hz), 7,61 (2H, m), 8,03 (1H, s), 8,12 (1H, dd, J 8Hz, 8,5 Hz), 8,76 (1H, s), 9,36 (1H, s).
Rt = 2,58 min. (Analítico_1); EM (positivo): 523,4; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,65 - 0,67 (2H, s, CH2), 0,85 - 0,95 (2H, m, CH2),
374
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-fluoro-N-(4metilpiperazin-1-il)benzamida 1,23 -1,82 (8H, m, H de alquilo), 2,18 (3H, s, CH3), 2,36 - 2,41 (4H, m, H de alquilo), 2,88 (4H, s, H de alquilo), 3,16 (3H, s, CH3), 3,44 (2H, s, H de alquilo), 4,77-4,80 (1H, m, CH), 7,6
(2H, m, H de arilo), 7,96 (1H, s, H de arilo), 8,16 (1H, t, J = 8 Hz, H de arilo), 8,70 (1 H, s, NH), 9,35 (1H, s, NH).
194
*** (±)-4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5Hpirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3il)benzamida Rt = 3,28 min. (Analítico_1); EM (positivo): 548,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 8,37 (1H, d, J 8 Hz), 8,07 (1H, d, J 6,5 Hz), 7,98 (1H, s), 7,69 (1H, s), 7,47 - 7,50 (2H, m), 5,19 (1H, quint., J 8 Hz), 3,95 (4H, m), 3,37 (2H, s), 3,18 (3H, s), 3,11 (1 H, m), 2,89 (1 H, m), 2,65 -
2,72 (4H, m), 1,88 (2H, m), 1,73 -1,87 (4H, m), 1,57 - 1,61 (6H, m), 1,31 (1H, m), 1,09 (6H, s).
186
*** (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil)-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3il)benzamida Rt = 3,02 min. (Analítico_1); EM (positivo): 546,4; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 8,40 (1H, d, J 8 Hz), 8,08 (1H, d, J 7 Hz), 7,98 (1H, s), 7,69 (1H, s), 7,47 - 7,50 (2H, m), 4,87 (1H, quint., J 9 Hz), 4,10 (1H, q, J 5,5 Hz), 3,95 (4H, m), 3,47 (2H, s), 3,27 (3H, s), 3,07 (1H, m), 2,08 (1H, m), 2,63 - 2,86 (4H, m), 1,88 (3H, m), 1,78 (1H, m), 1,68 (2H, m), 1,50-1,62 (5H, m), 1,32 (1H, m), 0,90 (2H, m), 0,66 (2H, m).
375
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(2hidroxietil)piperazin-1-il)-3metoxibenzamida Rt = 2,48 min. (Analítico_1); EM (positivo): 565,4; 1H-RMN (DMSO) δ ppm: 0,66 - 0,67 (2H, m, CH2), 0,88 0,90 (2H, m, CH2), 1,23 1,90 (8H, m, H de alquilo), 2,34-2,41 (4H, m, H de alquilo), 2,91 (4H, t, J = 4 Hz, H de alquilo), 3,16 (3H, s, CH3), 3,46-3,51 (4H, m,), 3,93 (3H, s, CH3), 4,38-4,45 (1H, m,) 4,81-4,87 (1H, m, CH), 7,40 (2H, d, J = 10,5 Hz, H de arilo ), 7,67 (1H, s), 7,98 (1H, s), 8,39 (1H, d, J = 8 Hz, H de arilo), 9,30 (1H, s, NH).
376
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxi-Nmorfolinobenzamida Rt = 2,72 min. (Analítico_1); EM (positivo): 522,4; 1H-RMN (DMSO) δ ppm: 0,65 - 0,71 (2H, m, CH2), 0,85 0,91 (2H, m, CH2), 1,23 1,88 (8H, m, H de alquilo), 2,92 (4H, t, J = 4 Hz, H de alquilo), 3,16 (3H, s, CH3), 3,47 (2H, s, H de alquilo), 3,66 (4H, t, J = 4,5Hz), 3,94 (3H, s, CH3), 4,81 - 4,87
(1H, m, CH), 7,41 (2H, d, J = 9,5 Hz), 7,69 (1H, s), 7,98 (1H, s), 8,40 (1H, d, J = 8 Hz), 9,41 (1H, s, NH).
347
*** (R)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3il)benzamida Rt = 3,07 min. (Analítico_1); EM (positivo): 546,5; EM (negativo): 544,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,62 0,72 (2 H, m), 0,87 - 0,94 (2 H, m), 1,20 - 1,38 (1 H, m), 1,44 - 1,54 (2 H, m), 1,54 - 1,64 (4 H, m), 1,64 - 1,74 (2 H, m), 1,75 - 1,85 (1 H, m), 1,85 - 1,95 (3 H, m), 2,65 - 2,79 (4 H, m), 2,83 - 3,01 (1 H, m), 3,11 - 3,21 (4 H, m), 3,47 (2 H, s), 3,95 (4 H, s), 4,77 - 4,93 (1 H, m), 7,42 - 7,54 (2 H, m), 7,69 (1 H, s), 7,98 (1 H, s), 8,10 (1 H, d, J=6,3 Hz), 8,39 (1 H, d, J=8,3 Hz).
348
*** (S)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3il)benzamida Rt = 3,04 min. (Analítico_1); EM (positivo): 546,5; EM (negativo): 544,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,59 0,74 (2 H, m), 0,86 - 0,97 (2 H, m), 1,20 - 1,43 (1 H, m), 1,45 - 1,75 (7 H, m), 1,76 1,98 (4 H, m), 2,66 - 2,86 (3 H, m), 2,89 - 3,07 (1 H, m), 3,17 (3 H, s), 3,47 (3 H, s), 3,89 - 4,02 (4 H, m), 4,76 -
4,96 (1 H, m), 7,42 - 7,59 (2 H, m), 7,70 (1 H, s), 7,98 (1 H, s), 8,14 (1 H, d, J=6,3 Hz), 8,40 (1 H, d, J=7,8 Hz).
Rt = 3,41 min. (Analítico_1); ES (positivo): 671,6; ES (negativo): 669,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,03
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo
(2H, dd, J 9,5 Hz, 5 Hz),
5’,6’,8’,9’
0,41 (2H, dd, J 10 Hz, 5
tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-
Hz), 0,79 (1H, m), 1,20
377
*** pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ 1,37 (4H, m), 1,55 -1,94
ilamino)-N-((trans)-4-(4
(18H, m), 2,04 (2H, d, J 6,5
(ciclopropilmetil)piperazin-1-
Hz), 2,16 - 2,46 (8H, m),
il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
3,15 (3H, s), 3,32 (2H, s), 3,69 (1H, m), 3,90 (3H, s), 4,79 (1H, m), 7,44 (2H, m), 7,68 (1H, s), 8,01 (2H, m), 8,34 (1H, d, J 8,5Hz)
Rt = 2,88 min. (Analítico_1); ES (positivo): 631,5; ES (negativo): 629,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: -0,15 0,11 (m, 2 H), 0,40 (d, J = 8,06 Hz, 2 H), 0,63 - 0,85 (m, 1 H), 1,11 - 1,41 (m, 3 H), 1,57 (s. a., 2 H), 1,69 (d, J = 17,73 Hz, 2 H), 1,74
378
*** 4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4(ciclopropilmetil)piperazin-1il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida 1,95 (m, 6 H), 2,04 (s, 2 H), 2,09 (d, J = 6,45 Hz, 2 H), 2,16 (d, J = 9,67 Hz, 1 H), 2,32 (s. a., 2 H), 2,49 (s. a., 1 H), 2,51 - 2,59 (m, 2 H), 2,59 (s. a., 1 H), 3,07 - 3,17 (m, 3 H), 3,27 (s, 5 H), 3,53
- 3,62 (m, 2 H), 3,67 (dd, J = 7,41, 3,55 Hz, 1 H), 3,89 (s, 2 H), 4,04 (q, J = 5,37 Hz, 1 H), 4,76 (quin., J = 8,22 Hz, 1 H), 7,38 - 7,48 (m, 2 H), 7,68 (s, 1 H), 7,99 (d, J = 7,74 Hz, 1 H), 8,03 (s, 1 H), 8,33 (d, J = 8,06 Hz, 1 H)
379
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-N-((trans)-4-(4etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida Rt = 3,00 min. (Analítico_1) EM (positivo) 631,6; EM (negativo) 629,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,59 0,72 (2 H, m), 0,81 - 0,92 (2 H, m), 0,97 (3 H, t, J=7,1 Hz), 1,20 - 1,42 (4 H, m), 1,42 - 1,55 (2 H, m), 1,54 - 1,64 (2 H, m), 1,64 - 1,73 (2 H, m), 1,83 (2 H, d, J=11,7 Hz), 1,89 (4 H, d, J=7,8 Hz), 2,14 - 2,42 (7 H, m), 3,16 (3 H, s), 3,47 (2 H, s), 3,64 - 3,79 (1 H, m), 3,94 (3 H, s), 4,84 (1 H, quin., J=8,7 Hz), 7,40 - 7,54 (2 H, m), 7,67 (1 H, s), 7,98 (1 H, s), 8,03 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,38 (1 H, d, J=8,3 Hz)
Rt = 3,13 min. (Analítico_1) EM (positivo) 631,6; EM (negativo) 629,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,60 0,72 (2 H, m), 0,83-0,93 (2 H, m), 0,98 (3 H, t, J=7,1
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-
Hz), 1,38 - 1,55 (6 H, m),
5’,6’,8’,9’
1,55 - 1,63 (2 H, m), 1,63 -
380
*** tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2’ 1,80 (4 H, m), 1,80 - 1,96 (4 H, m), 2,02 - 2,17 (1 H, m),
ilamino)-N-((cis)-4-(4-etilpiperazin
2,16 - 2,44 (7 H, m), 3,16 (3
1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
H, s), 3,47 (2 H, s), 3,79 - 3,92 (1 H, m), 3,94 (3 H, s), 4,84 (1 H, quin., J=8,5 Hz), 7,44 - 7,58 (2 H, m), 7,67 (1 H, s), 7,98 (1H, s), 8,03 (1 H, d, J=7,3 Hz), 8,37 (2 H, d, J=8,8 Hz)
381
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-N-(4-(4-(ciclopropilmetil)1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida Rt = 4,12 min. (Analítico_1) EM (positivo) 671,6; EM (negativo) 669,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,01 (2 H, d, J=4,4 Hz), 0,40 (2 H, d, J=7,3 Hz), 0,63 (2 H, s. a.), 0,71 - 0,83 (1 H, m), 0,87 (2 H, s. a.), 1,02 (1 H, t, J=7,1 Hz), 1,25 - 1,38 (2,5 H, m), 1,39 -1,52 (3,5 H, m), 1,52 - 1,61 (2 H, m), 1,65 (4 H, d, J=5,9 Hz), 1,70 -1,80 (3 H, m), 1,85 (3 H, d, J=4,4 Hz), 2,21 - 2,31 (1 H, m), 2,55 - 2,83 (8 H, m), 3,13 (3,5 H, s), 3,35 - 3,55 (3 H, m), 3,69 (0,5 H, s. a.), 3,91 (3,5 H, s), 4,31 (0,5 H, t, J=5,1 Hz), 4,81 (1 H, t, J=8,5 Hz), 7,25 - 7,54 (2 H, m), 7,64 (1 H, s), 7,84 - 8,16 (2 H, m), 8,35 (1 H, d, J=8,3 Hz)
Rt = 3,98 min., 4,18 min.
(Analítico_1) EM (positivo)
645,6; EM (negativo) 643,7;
1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm:
0,57 - 0,74 (2 H, m), 0,82 -
0,93 (2 H, m), 0,95 - 1,09 (3
H, m), 1,30 - 1,42 (2 H, m),
4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo
1,42 - 1,54 (3,5 H, m), 1,58
5’,6’,8’,9’
(2 H, d, J=4,4 Hz), 1,63 -
382
*** tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ 1,75 (3,5 H, m), 1,75 -1,83 (1,5 H, m), 1,88 (3,5 H, s.
ilamino)-N-(4-(4-etil-1,4-diazepan
a.), 1,98 - 2,16 (1,5 H, m),
1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
2,59 - 2,86 (4 H, m), 3,17 (4
H, s), 3,41 - 3,53 (3,5 H, m),
3,78 (2,5 H, m), 3,88 - 4,02
(3,5 H, m), 4,06 - 4,38 (1 H,
m), 4,76 - 4,91 (1 H, m),
7,39 - 7,57 (2 H, m), 7,59 -
7,78 (1 H, m), 7,98 (2 H, s),
8,31 - 8,45 (1 H, m)
Rt = 4,40 min. (Analítico_1)
EM (positivo) 707,6; EM
383
** N-(4-(4-bencil-1,4-diazepan-1il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxibenzamida (negativo) 705,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,73 (2 H, s. a.), 0,96 (2 H, s. a.), 1,22 - 2,22 (19 H, m), 2,64 - 2,91 (4 H, m), 3,23 (5 H, s), 3,53 (8 H, s), 3,89 - 4,24 (4 H, m), 4,91 (1 H, t, J=8,5
Hz), 5,82 (0 H, s), 7,23 -
8,54 (10 H, m)
384
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-N-((trans)-4-(4metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida Rt = 2,85 min. (Analítico_1) EM (positivo) 617,5; EM (negativo) 615,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,61 0,76 (2 H, m), 0,89 (1 H, t, J=6,8 Hz), 0,92 - 0,98 (2 H, m), 1,22 - 1,47 (5 H, m), 1,47 - 1,79 (6 H, m), 1,81 - 2,02 (5 H, m), 2,07 - 2,20 (3 H, m), 2,20; - 2,42 (4 H, m), 3,20 (4 H, s), 3,34 (3 H, s), 3,51 (2 H, s), 3,67 - 3,82 (1 H, m), 3,98 (3 H, s), 4,88 (1
H, quin., J=8,5 Hz), 7,42 - 7,59 (2 H, m), 7,71 (1 H, s), 8,02 (1 H, s), 8,08 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,42 (1 H, d, J=8,3 Hz)
385
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-N-((cis)-4-(4metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida Rt = 2,93 min. (Analítico_1) EM (positivo) 617,5; EM (negativo) 615,6; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,62 0,80 (2 H, m), 0,84 - 1,02 (4 H, m), 1,18 - 1,36 (4 H, m), 1,43 - 1,84 (12 H, m), 1,84 - 2,03 (4 H, m), 2,09 - 2,22 (4 H, m), 2,41 (4 H, s. a.), 3,21 (3 H, s), 3,52 (2 H, s), 3,89 - 3,97 (1 H, m), 3,99 (3 H, s), 4,89 (1 H, quin., J=8,5 Hz),
7,47 - 7,61 (2 H, m), 7,72 (1 H, s), 8,03 (1 H, s), 8,08 (1 H, d, J=7,3 Hz), 8,43 (1 H, d, J=9,3 Hz)
Rt = 3,64 min. (Analítico_1) EM (positivo) 693,6; EM (negativo) 691,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,62 0,79 (2 H, m), 0,85 - 1,02 (2 H, m), 1,20 - 1,46 (4 H, m),
N-((trans)-4-(4-bencilpiperazin-1
1,46 -1,58 (2 H, m), 1,59
il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’
1,67 (2 H, m), 1,67 - 1,78 (2
386
*** metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’- H, m), 1,80 - 2,02 (6 H, m), 2,12 (1 H, s), 2,18 - 2,46 (6
pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-
H, m), 3,20 (3 H, s), 3,43 -
ilamino)-3-metoxibenzamida
3,56 (5 H, m), 3,67 - 3,84 (1 H, m), 3,97 (3 H, s), 4,88 (1 H, quin., J=8,4 Hz), 7,22 - 7,42 (6 H, m), 7,44 - 7,59 (2 H, m), 7,71 (1 H, s), 8,02 (1 H, s), 8,08 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,42 (1 H, d, J=7,8 Hz)
Rt = 3,85 min. (Analítico_1) EM (positivo) 693,6; EM (negativo) 691,7; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,62 0,79 (2 H, m), 0,87 - 1,01 (2
387
** N-((cis)-4-(4-bencilpiperazin-1il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxibenzamida H, m), 1,43 - 1,59 (5 H, m), 1,59 - 1,67 (2 H, m), 1,66 - 1,74 (2 H, m), 1,75 - 1,84 (2 H, m), 1,92 (4 H, s. a.), 2,07 - 2,29 (2 H, m), 2,41 (4 H, s. a.), 3,20 (3 H, s), 3,51 (4 H, s), 3,87 - 4,05 (4 H, m), 4,74
- 4,99 (1 H, m), 7,24 - 7,39 (5 H, m), 7,50 - 7,56 (2 H, m), 7,71 (1 H, s), 8,02 (1 H, s), 8,07 (1 H, d, J=6,8 Hz), 8,42 (1 H, d, J=8,8 Hz)
388
*** 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((trans)-4morfolinociclohexil)benzamida Rt = 3,16 min. (Analítico_1) EM (positivo) 606,4; EM (negativo) 604,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 1,07 1,18 (7 H, m), 1,24 - 1,49 (4 H, m), 1,58 - 1,71 (4 H, m), 1,71 - 1,84 (2 H, m), 1,83 - 2,03 (6 H m), 2,23 (1 H, t, J=10,5 Hz), 2,43 - 2,51 (3 H, m), 3,17 - 3,28 (4 H, m), 3,42 (3 H, s. a.), 3,60 (4 H, s. a.), 3,64 (1H, s. a.), 3,71 - 3,83 (1 H, m), 3,98 (3 H, s),
5,23 (1 H, t, J=8,3 Hz), 7,44 - 7,60 (2 H, m), 7,72 (1 H, s), 8,02 (1 H, J=8,3 Hz), 7,44 - 7,60 (2 H, m), 7,72 (1 H, 8,02 (1 H, s). 8,09 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,40 (1 H, d, J=8,3 Hz)
389
** 4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((cis)-4morfolinociclohexil)benzamida Rt = 3,31 min. (Analítico_1) EM (positivo) 606,4; EM (negativo) 604,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 1,13 (6 H, s), 1,39 - 1,60 (4 H, m), 1,60 - 1,71 (4 H, m), 1,71 - 1,85 (4 H, m), 1,85 - 2,01 (4 H, m), 2,07 - 2,22 (2 H, m), 2,42 - 2,48 (4 H, m), 3,22 (4 H, s), 3,64 (4 H, s. a.), 3,87 - 4,05 (4 H, m), 5,14 - 5,31 (1 H, m), 7,45 - 7,62 (2 H, m), 7,71 (1 H, s), 8,02 (1 H, s), 8,09 (1 H, d, J=7,3 Hz), 8,39 (1 H, d, J=8,3 Hz)
390
*** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxi-N-((trans)-4morfolinociclohexil)benzamida Rt = 2,96 min. (Analítico_1) EM (positivo) 604,4; EM (negativo) 602,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,72 (2 H, s), 0,95 (2 H, s) 1,24 - 1,49 (4 H, m), 1,49 - 1,60 (2 H, m), 1,60 - 1,69 (2 H, m), 1,69 1,82 (2 H, m), 1,82 - 2,03 (6 H, m), 2,14 (1 H, s), 2,17 - 2,32 (1 H, m), 3,22 (4 H, s), 3,53 (2 H, s), 3,61 (4 H, s. a.), 3,71 - 3,84 (1 H,
m), 4,00 (3 H, s), 4,90 (1 H, quin., J=8,5 Hz), 7,43 - 7,61 (2 H, m), 7,73 (1 H, s), 8,04 (1 H, s), 8,10 (1 H, d, J=7,8 Hz), 8,44 (1 H, d, J=8,3 Hz)
391
** 4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’ilamino)-3-metoxi-N-((cis)-4morfolinociclohexil)benzamida Rt = 3,10 min. (Analítico_1) EM (positivo) 604,4; EM (negativo) 602,5; 1H-RMN (DMSO-d6) δ ppm: 0,66 0,81 (2 H, m), 0,88 - 1,03 (2 H, m), 1,45 - 1,86 (12 H, m), 1,87 - 2,02 (4 H, m), 2,102,21 (1 H, m), 2,47 (4 H, s. a.), 3,22 (3 H, s), 3,52 (2 H, s), 3,65 (4 H, s. a.), 3,89 4,05 (4 H, m), 4,90 (1 H,
quin., J=8,5 Hz), 7,50 - 7,63 (2 H, m), 7,73 (1 H, s), 8,03 (1 H, s), 8,10 (1 H, d, J=7,3 Hz), 8,43 (1 H, d, J=8,3 Hz)
TABLA 4: Datos de actividad de PLK para el compuesto [218] frente a compuestos seleccionados de la técnica anterior
Compuesto
Estructura PLK1 CI50 de PLK2 / CI50 de PLK1 CI50 de PLK3 / CI50 de PLK1
[218]
*** 35 330
[I-64] del documento WO 2007/095188
*** 17 67
[I-76] del documento WO 2007/095188
*** 6 26
[I-4] del documento WO 2007/095188
*** 5 64
*** indica CI50 de <0,1 μM
TABLA 5: Datos de solubilidad para el compuesto [254] y su sal de HCl frente al ejemplo [I-76] del documento WO 07/095188 y su sal de HCl
Compuesto
Descripción Fase líquida Concentración basada en la base libre (mg/ml) Forma disolución estable ¿Forma gel?
[254]
base libre DMA/PEG400/tampón tartrato 10 mM pH 4 (1:3:6) 8 s
Ejemplo [I-76] del documento WO 07/095188
base libre DMA/PEG400/tampón tartrato 10 mM pH 4 (1:3:6) 8 n s
[254].HCl
sal de HCl de [254] Captisol al 40%/agua 20 s
[254].HCl
sal de HCl de [254] Captisol al 30%/agua 20 s
[254].HCl
sal de HCl de [254] HPβCD al 20%/agua 20 s
[I-76].HCl
sal de HCl de [I-76] Captisol al 40%/agua 20 n s
[I-76].HCl
sal de HCl de [I-76] Captisol al 30%/agua 15 n s
[1-76].HCl
sal de HCl de [I-76] HPβCD al 20%/agua 10 n s
Compuesto [I-76] del documento WO 07/095188 (= Ejemplo 246 del documento WO 08/003958)
Compuesto [254]
TABLA 6: Concentración soluble máxima por nefelometría para el compuesto [254] de la invención frente al compuesto [I-253] del documento WO 07/095188
Compuesto
Ki de PLK1 (nM) Concentración soluble máxima por nefelometría (μM)
Compuesto [254] <10 >200
Ejemplo [I-253] del documento WO 07/095188 <10 75
[254].HCl
<10 >200
TABLA 7: Compuestos sometidos aprueba en estudios farmacocinéticos; compuesto H = compuesto [371]; compuesto I = compuesto [378]; los compuestos A-G son para fines comparativos
A
B
C
D
E
F
G
H
I
TABLA 8: Compuestos comparadores sometidos a prueba en ensayos celulares; las letras corresponden a las marcas en la figura 3.
Estructura
Marca de la figura A’
Ejemplo 76 en el documento WO 07/095188
B (véase el ejemplo 59 en el documento WO 07/095188)
B’
Ejemplo 28 en el documento WO 07/095188
C’
D (véase el ejemplo 28 en el documento WO 07/095188)
D’
E (véase el ejemplo 360 en el documento WO 08/003958)
E’
F (véase el ejemplo 360 en el documento WO 08/003958)
F’
G (véase el ejemplo 394 en el documento WO 08/003958)
G’
H (véase el ejemplo 394 en el documento WO 08/003958)
H’
Ejemplo 360 en el documento WO 08/003958 (trans)
I’
Ejemplo 360 en el documento WO 08/003958 (cis)
J’

Claims (18)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Compuesto de fórmula VIII, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
    en la que:
    X es NR7;
    Y es O o N-(CH2)nR19;
    n es 1, 2 ó 3;
    15 m es 1 ó 2; R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o cicloalquilo; R4 y R4’ son cada uno independientemente H o alquilo; o
    R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo; R19 es H, alquilo, arilo o un grupo cicloalquilo;
    25 R6 es OR8 o halógeno; y R7 y R8 son cada uno independientemente H o alquilo.
  2. 2. Compuesto según la reivindicación 1, que es de fórmula VIIIa, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
    en la que:
    35 X es NR7; R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o cicloalquilo; R4 y R4’ son cada uno independientemente H o alquilo; o R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo;
    R19 es H, alquilo, arilo o un grupo cicloalquilo; 5 R6 es OR8 o halógeno; y
    R7 y R8 son cada uno independientemente H o alquilo.
    10 3. Compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que R1 es H o alquilo, más preferiblemente, metilo.
  3. 4. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R2 es cicloalquilo, más preferiblemente,
    ciclopentilo o ciclohexilo. 15
  4. 5.
    Compuesto según cualquier reivindicación anterior, en el que R7 es H o alquilo, más preferiblemente, H.
  5. 6.
    Compuesto según cualquier reivindicación anterior, en el que R4 y R4’ son cada uno independientemente alquilo,
    más preferiblemente, metilo. 20
  6. 7. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R4 y R4’ forman juntos un grupo espirocicloalquilo, más preferiblemente, un grupo espiro-cicloalquilo C3.
  7. 8. Compuesto según cualquier reivindicación anterior, en el que R6 es OR8, más preferiblemente, OMe. 25
  8. 9.
    Compuesto según cualquier reivindicación anterior, en el que R19 es ciclopropilo.
  9. 10.
    Compuesto según la reivindicación 1, que se selecciona de los siguientes:
    y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
  10. 11.
    Compuesto de fórmula VI, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
    Compuesto n.º
    Nombre
    371
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
    372
    4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    377
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
    378
    4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    379
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    380
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    381
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-(ciclopropilmetil)-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
    382
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-etil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    383
    N-(4-(4-bencil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
    384
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    385
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    386
    N-((trans)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
    387
    N-((cis)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
    388
    4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
    389
    4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
    390
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
    391
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
    en la que:
    10 X es NR7; R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o cicloalquilo; R4 y R4’ son cada uno independientemente H o alquilo; o
    15 R4 y R4’ forman juntos un grupo espiro-cicloalquilo; R18 es H o alquilo, en el que dicho grupo alquilo está opcionalmente sustituido con R6;
    20 cada R6 es independientemente OR8 o halógeno; y R7 y R8 son cada uno independientemente H o alquilo.
  11. 12. Compuesto según la reivindicación 11, en el que R1, R2, R4, R4’, R6, R7 y R8 son según una cualquiera de las 25 reivindicaciones 3 a 8.
  12. 13.
    Compuesto según la reivindicación 11 que se selecciona de los siguientes:
    y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
  13. 14.
    Compuesto que se selecciona de los siguientes:
    Compuesto n.º
    Nombre
    254
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
    195
    4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida
    221
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
    373
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
    374
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
    375
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)-3-metoxibenzamida
    Compuesto n.º
    Nombre
    218
    (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    194
    (±)-4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    186
    (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    347
    (R)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    348
    (S)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
  14. 15. Compuesto que se selecciona de los siguientes:
    Compuesto n.º
    Nombre
    254
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
    218
    (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    195
    4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida
    221
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
    371
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
    372
    4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    345
    4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3-metoxiN-[1-(tetrahidro-piran-4-il)-piperidin-4-il]-benzamida
    373
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
    374
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-fluoro-N-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida
    194
    (±)-4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    186
    (±)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    375
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)-3-metoxibenzamida
    376
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-morfolinobenzamida
    347
    (R)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    348
    (S)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-(quinuclidin-3-il)benzamida
    377
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclobutano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
    378
    4-(9-ciclopentil-5-metil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-N((trans)-4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    379
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    380
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-etilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    381
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro(ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-(ciclopropilmetil)-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3metoxibenzamida
    382
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-(4-(4-etil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    383
    N-(4-(4-bencil-1,4-diazepan-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
    384
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5 ’ ,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((trans)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    385
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-N-((cis)-4-(4-metilpiperazin-1-il)ciclohexil)-3-metoxibenzamida
    386
    N-((trans)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
    387
    N-((cis)-4-(4-bencilpiperazin-1-il)ciclohexil)-4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxibenzamida
    388
    4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
    389
    4-(9-ciclopentil-5,7,7-trimetil-6-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirimido[4,5-b][1,4]diazepin-2-ilamino)-3metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
    390
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((trans)-4-morfolinociclohexil)benzamida
    391
    4-(9’-ciclopentil-5’-metil-6’-oxo-5’,6’,8’,9’-tetrahidroespiro[ciclopropano-1,7’-pirimido[4,5b][1,4]diazepin]-2’-ilamino)-3-metoxi-N-((cis)-4-morfolinociclohexil)benzamida
    y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
  15. 16. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquier reivindicación anterior mezclado con 5 un diluyente, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.
  16. 17. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 en la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno proliferativo.
    10 18. Uso según la reivindicación 17, en el que el trastorno proliferativo es cáncer o leucemia.
  17. 19. Uso según la reivindicación 17, en el que el trastorno proliferativo es glomerulonefritis, artritis reumatoide, psoriasis o trastorno pulmonar obstructivo crónico.
    15 20. Procedimiento para preparar un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de:
    (i) convertir un compuesto de fórmula (II) en un compuesto de fórmula (IV) o bien directamente o bien mediante
    aislamiento de un compuesto de fórmula (III); y 20
    (ii) convertir dicho compuesto de fórmula (IV) en un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15
    5 21. Procedimiento según la reivindicación 20, en el que la etapa (i) comprende calentar dicho compuesto de fórmula
    (II) con NH4Cl y Fe en EtOH/H2O.
  18. 22. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para su uso en medicina.
    10 23. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo.
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