ES2346570T3 - Combinacion immunoestimulante para la profilaxis y el tratamiento de la hepatitis c. - Google Patents
Combinacion immunoestimulante para la profilaxis y el tratamiento de la hepatitis c.Info
- Publication number
- ES2346570T3 ES2346570T3 ES06830863T ES06830863T ES2346570T3 ES 2346570 T3 ES2346570 T3 ES 2346570T3 ES 06830863 T ES06830863 T ES 06830863T ES 06830863 T ES06830863 T ES 06830863T ES 2346570 T3 ES2346570 T3 ES 2346570T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- baselineskip
- protein
- immunostimulant
- hepatitis
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
La presente invención se refiere a una combinación inmuno-estimuladora para la profilaxis y tratamiento de la hepatitis C, caracterizada porque comprende : un agonista de TLR3, un agonista de CD40 y la proteína NS3 del virus de la hepatitis C. Por otro lado, la invención se refiere a las composiciones farmacéuticas que comprendan dicha combinación inmunoestimuladora, al uso de las mismasy a un kit compuesto por dichas composiciones farmacéuticas. Porúltimo, la presente invención se refiere a un método para producir una respuesta inmune frente al virus de la hepatitis C, y a una vacuna frente a dicho virus.
Description
Combinación inmunoestimulante para la profilaxis
y el tratamiento de la hepatitis C.
La presente invención se refiere a una
combinación inmunoestimulante para la profilaxis y el tratamiento de
la hepatitis C, que incorpora la proteína NS3 del VHC, junto con
adyuvantes seleccionados por su capacidad de inducir respuestas
específicas CD8+ y CD4+ potentes y duraderas frente al virus
VHC.
Con una prevalencia mundial estimada de más de
170 millones de personas infectadas, la infección por el virus de
la hepatitis C (VHC) supone hoy una pesada carga para la salud
pública. Prevalencia que presumiblemente permanecerá invariable en
los próximos años.
La infección por el VHC se caracteriza por una
elevada tendencia a la cronicidad. El VHC persiste en un 70% de los
individuos infectados, de los que un 20% desarrollan cirrosis y un
2,5% evolucionan hasta producir cáncer hepático.
La herramienta terapéutica de referencia actual
son los protocolos terapéuticos basados en la utilización del
interferón. Sin embargo, estas terapias antivirales resultan
económicamente costosas, relativamente tóxicas y solamente eficaces
en el 50-60% de los pacientes tratados. Es por tanto
necesario y deseable desarrollar nuevas estrategias terapéuticas
que sean más eficaces y que toleren mejor los pacientes.
Una revisión actualizada sobre el VHC puede
encontrarse en Nature ("Insights: Hepatitis C". Nature 2005,
Supplements; Vol. 436, No. 7053, pág. 929-978).
Aunque, lamentablemente, todavía no disponemos
de una vacuna eficaz frente al virus de la hepatitis C, hay datos y
evidencias experimentales que inducen a pensar que una vacuna eficaz
es posible. Aunque se sintetizan anticuerpos antivirales en
respuesta a la infección, el estado crónico se caracteriza por la
ausencia de respuestas inmunes celulares por parte de células T
citotóxicas (CD8+) y T colaboradoras (CD4+). Así, se postula que el
VHC ha desarrollado estrategias que le permiten evadir
específicamente las respuestas inmunes antivirales, donde la
potencia y calidad de las respuestas T citotóxicas y T colaboradoras
determina si los pacientes se recuperarán (bien espontáneamente o
en respuesta a un tratamiento) o desarrollarán la infección
crónica.
El principal objetivo de cualquier vacuna es
estimular la inmunidad adquirida específica de antígeno, cuyos
mediadores son los linfocitos B y T. En este contexto, las células
presentadoras de antígeno (APC) desempeñan una función importante
en la iniciación de las respuestas inmunes específicas y en
particular en la activación de linfocitos T. Las APC,
principalmente las células dendríticas, capturan antígenos en los
órganos periféricos y, tras recibir un estímulo de activación,
migran a los órganos linfáticos. Allí, las células dendríticas
presentan superficialmente, unidos a moléculas propias del complejo
mayor de histocompatibilidad MHC, los productos peptídicos
derivados de la degradación de los antígenos (epítopos) y
simultáneamente producen quimiocinas y citoquinas para atraer y
activar células T. El proceso de activación de células dendríticas,
también conocido como maduración, está caracterizado por una
expresión elevada de moléculas MHC (señal 1), moléculas
coestimulantes (señal 2) y citoquinas polarizadoras como
interleucina-12 (IL-12) (señal 3).
La maduración se induce por factores como componentes de patógenos
o moléculas de hospedador que son frecuentes en los procesos de
inflamación o daño celular. Estos factores actúan sobre las células
dendríticas a través de receptores específicos para productos
derivados de microorganismos, como los receptores de tipo TLR
(receptor de tipo peaje), receptores para citoquinas
(TNF-\alpha, IL-1,
IFN-\alpha) o receptores para ligandos en la
superficie de las células (por ejemplo, CD40).
La estimulación y activación de las distintas
poblaciones de células T mediante las APC está restringida por el
tipo de moléculas MHC por una parte, y, por otra por las
características de los epítopos que forman complejos con dichas
moléculas MHC. Así, por ejemplo, se han identificado determinados
fragmentos de proteínas virales que inducen específicamente la
activación de linfocitos T citotóxicos CD8+ (CTL), conocidos como
epítopos de linfocitos o células T CD8+ o epítopos CD8+; o epítopos
que inducen específicamente la activación de linfocitos T
colaboradores CD4+ (HTL), epítopos CD4+. La base de datos "HCV
Immunology Database"
(http://hcv.lanl.gov/content/immuno/immuno-main.html)
compila los epítopos para linfocitos T, tanto de CTL CD8+ como de
HTL CD4+, identificados sobre la base de proteínas virales de
distintas cepas y aislados del virus de la hepatitis C.
El desarrollo de protocolos de inmunización
basados en la utilización de epítopos en forma de péptidos requiere
por tanto la selección previa de aquellos péptidos que son adecuados
para cada individuo, en función de las moléculas MHC que presente.
Esto supone que, dependiendo del MHC de cada individuo, tendría que
seleccionarse una combinación particular de péptidos que pudieran
comportarse como epítopos en ese contexto. La utilización de
antígenos grandes permite superar este problema, puesto que
habitualmente son poliepitópicos y dentro de su secuencia presentan
diversos epítopos, tanto para CTL CD8+ como para HTL CD4+, que
pueden presentar moléculas MHC de diferentes individuos. De este
modo, puede utilizarse un único antígeno como vacuna en individuos
con diversos MHC.
Dentro de las diferentes proteínas del VHC, core
y NS3 presentan una gran inmunogenicidad, y en aquellos individuos
que se reponen de la infección, se detectan potentes respuestas CTL
CD8+ y HTL CD4+ frente a ellas. Sin embargo, existen datos que
muestran que core también puede tener efectos deletéreos para las
células del sistema inmunitario cuando está en contacto con ellas,
lo que no la hace aconsejable como antígeno en estrategias de
vacunación. Por otro lado, NS3 es una proteína que apenas ha
demostrado este tipo de efecto y podría ser un buen candidato como
un antígeno para la inducción de respuestas CTL CD8+ y HTL CD4+.
En este sentido, el documento WO 2002/014362 A2
presenta el uso de la proteína NS3 de VHC como un antígeno en la
fabricación de vacunas para la profilaxis y el tratamiento de la
infección por VHC. NS3 puede acompañarse de una ribavirina
adyuvante, que puede encontrarse en la misma composición
farmacéutica o en una diferente. Adicionalmente, la administración
adyuvante puede ser simultánea a la del antígeno o en diferente
momento. Este documento, sin embargo, no demuestra que la
rivabirina potencie la respuesta inmune de CD8 frente a NS3.
Los HTL CD4+ desempeñan una función en la
inmunidad adquirida, entre otros mecanismos mediante la activación
de las APC, la activación de CTL y la inducción de memoria. En
particular, se ha descrito que las células CD4+ específicas para el
VHC son necesarias para el mantenimiento de los CTL antivirales
(Grakoui A. et al; "HCV persistence and immune evasion in
the absense of memory T cell help"; Science, 2003;
302:659-662). Por lo tanto, una vacuna eficaz frente
al virus de la hepatitis C debe proporcionar la máxima potencia en
la inducción de respuestas no solamente CTL CD8+, sino también de
respuestas HTL CD4+. Dicha vacuna requerirá, por lo tanto, una
selección de antígenos específicos que proporcione dichas
respuestas.
Sin embargo, no parece que una combinación de
antígenos sea por sí sola capaz de proporcionar una vacuna eficaz
frente al VHC. Puesto que la maduración de células dendríticas es un
requisito para la iniciación y activación eficaz de linfocitos T,
dicha vacuna podría beneficiarse con la inclusión en la combinación
inmunoestimulante de algunos adyuvantes, que estimularían la
maduración de las células dendríticas. Como adyuvantes, podrían
utilizarse ligandos de los receptores TLR, de receptores de
citoquinas o de receptores para ligandos intercelulares ya citados,
o mejor aún una combinación sinérgica de dichos adyuvantes.
De esta manera, por ejemplo, Rouas et al.
(International Immunology, May 2004, 16 (5):767-773)
describe el uso in vitro de mCD40L,
IFN-\gamma y poli(I:C), un ligando
sintético de TLR3, en una composición farmacéutica que produce
células dendríticas maduras. Este muestra que las células
dendríticas que maduran con poli(I:C) son las únicas que
secretan IL-12p70 después de la estimulación con
CD40L, que no se produce tras la maduración con
IFN-\gamma. También describe la maduración de
células dendríticas cuando se han incubado tanto con CD40L como con
poli(I:C). Las células dendríticas maduras son muy
importantes en la respuesta inmune ya que la IL-2
que estas secretan activa tanto linfocitos Th1 como linfocitos T
citotóxicos.
Además, el documento US2004/0141950 describe
combinaciones inmunoestimulantes que incluyen un agonista de TLR y
un agonista de moléculas de las superfamilias del factor de necrosis
tumoral (TNF) o de sus receptores (TNFR), que pueden incluir
también un antígeno. Entre las numerosas combinaciones posibles
presenta la combinación de un ligando de CD40 (un anticuerpo
anti-CD40) y de poli(I:C), una combinación
para la que se demuestra un efecto sinérgico en la expansión de
linfocitos T CD8+. Asimismo, Ahonen et al. (J. Exp. Med.
2004; 199:775-784) presentan datos sobre la
capacidad sinérgica de agonistas de TLR/CD40 para inducir la
expansión y diferenciación de CTL CD8+ específicos de antígeno de
una manera que es independiente de los linfocitos T CD4+. Aunque
estos trabajos describen la capacidad de TLR/CD40 para activar
linfocitos T CD8+ de memoria específica de antígeno, dichos
trabajos no permiten establecer si la combinación de agonistas de
TLR/CD40 puede además estimular las respuestas HTL CD4+.
En el caso de la infección por VHC, se han
encontrado claras diferencias en las respuestas HTL CD4+ cuando se
comparan pacientes infectados con pacientes que han podido eliminar
la infección. Sin embargo, aunque con menor intensidad que en los
pacientes curados, en los pacientes infectados todavía son
detectables las respuestas CTL CD8+. Por lo tanto, aunque los CTL
se comportan como una población efectora importante en el
aclaramiento de la infección por VHC, las células CD4+ también
desempeñan una función importante en el control de la enfermedad.
Además, se ha descrito que la inducción de linfocitos T CD4+ es
importante para el mantenimiento de las respuestas antivirales de
CTL (Grakoui A. et al; "HCV persistence and immune evasion
in the absense of memory T cell help"; Science, 2003;
302:659-662). Estos datos sugieren que para la
vacunación y terapia de las enfermedades virales debidas a VHC, es
importante la inducción de respuestas antivirales potentes y
duraderas tanto CD8+ como CD4+.
Es por tanto un objetivo de la presente
invención seleccionar combinaciones inmunoestimulantes de antígenos
y adyuvantes adecuadas para la profilaxis y tratamiento de la
hepatitis C, que proporcionarán una estimulación de respuestas
tanto CD8+ como CD4+ que sean más potentes, completas y
duraderas.
Un primer objetivo de la invención se refiere a
una combinación inmunoestimulante para la profilaxis y el
tratamiento de la hepatitis C, en adelante denominada como la
combinación inmunoestimulante de la invención, que comprende un
agonista de TLR3, un agonista de CD40 o una secuencia de ADN que lo
codifica, y un polipéptido que comprende la proteína NS3 del virus
de la hepatitis C o un fragmento de dicha proteína NS3 con capacidad
para inducir respuestas CD8+ y CD4+.
Un "agonista de TLR3" se refiere a un
ligando que puede combinarse o unirse con los receptores TLR3
("receptor de tipo peaje 3") y producir una respuesta celular.
TLR3 es un receptor para ARN bicatenario que transmite señales que
activan NF-\kappaB y la producción de interferones
(IFN) de tipo I (IFN-\alpha e
IFN-\beta) y que estimula la maduración de las
células dendríticas. Los ratones que carecen de la expresión de
TLR3 mostraron una reducción en sus respuestas a poli(I:C)
-un ligando de TLR3 similar al ARN bicatenario generado durante la
replicación de los virus del tipo del VHC-, junto con la resistencia
al efecto letal de poli(I:C) cuando están sensibilizados con
D-galactosamina y una reducción en la producción de
citoquinas inflamatorias (Alexopoulou et al. Nature, 2001,
Vol. 413, págs. 732-738). En una realización
particular de la invención, dicho ligando de TLR3 puede ser un ARN
bicatenario viral o una doble cadena de ácido
poliinosínico-policitidílico, poli(I:C).
Un "agonista CD40" se refiere a un ligando,
que puede combinarse o unirse con los receptores CD40 induciendo de
la misma manera una respuesta celular. CD40 es una molécula que se
expresa en la membrana de diferentes tipos celulares, tales como
linfocitos B o células presentadoras de antígeno (macrófagos,
células dendríticas, etc.). El ligando natural de CD40 (CD40L o
CD154) se expresa principalmente en linfocitos T que se han
activado tras el reconocimiento del antígeno. La interacción de
CD40L con la CD40 presente en la célula presentadora de antígeno
induce la maduración de ésta. Este fenómeno, de manera similar a los
estímulos que provienen de patógenos, hace que la célula
presentadora de antígeno tenga una mayor capacidad para inducir
respuestas inmunitarias. Así, el agonista de CD40 de la composición
inmunoestimulante de la invención, se refiere por una parte al
ligando CD40L o a un fragmento de dicho CD40L que conserva la
capacidad de unirse a CD40 e inducir una respuesta celular o
inmune. En una realización particular el ligando puede ser un
anticuerpo específico frente a CD40 (anti-CD40) o
un fragmento del mismo que conserve la capacidad de unirse a CD40.
Además, el ligando de CD40 o su fragmento puede estar presente en la
combinación inmunoestimulante bien en forma de proteína o también
como un ácido nucleico recombinante (ADN) que codifica dicho
ligando, por ejemplo en un vector viral para terapia génica o
transferencia.
Un "antígeno" se refiere a cualquier
sustancia que es capaz de inducir una respuesta inmune, tanto
humoral como celular, en el organismo de un individuo (un hombre o
un animal), o que puede inducir una respuesta inmune celular
(expansión, activación y/o maduración de células inmunes, producción
de citoquinas o anticuerpos) cuando entra en contacto con células
inmunitarias. En particular, un antígeno puede ser una proteína
viral, un péptido o fragmento de dicha proteína viral, una proteína
recombinante de dichas proteínas virales o incluso un péptido
sintético capaz de inducir las respuestas señaladas.
Un "epítopo inductor de CD8+" se refiere a
un fragmento o cadena polipeptídica parcial de un antígeno que es
capaz de inducir específicamente la activación de linfocitos T
citotóxicos CD8+ (CTL). Un "epítopo inductor de CD4+" se
refiere a un fragmento o cadena polipeptídica parcial de un antígeno
que es capaz de inducir específicamente la activación de linfocitos
T colaboradores CD4+ (HTL).
La "proteína NS3" se refiere a la proteína
no estructural NS3 del virus de la hepatitis C, una proteína de 67
kDa que incluye 2 dominios, una serina proteinasa que abarca los 189
aminoácidos del extremo N-terminal y un dominio con
actividad helicasa nucleósido trifosfatasa que abarca los 442
aminoácidos del extremo C-terminal. La secuencia de
la proteína NS3 incluida en el polipéptido de la combinación
inmunoestimulante de la invención puede corresponder a cualquier
cepa o aislado del virus de la hepatitis C, en particular cualquier
cepa o aislado del virus de la hepatitis C humana. En una
realización particular, el polipéptido, que comprende la proteína
NS3 se ha obtenido por tecnología recombinante. En una realización
específica no limitante de la invención, se utiliza una proteína
NS3 recombinante con la secuencia SEC. ID. Nº: 1 (correspondiente a
los números de acceso a Genebank DQ068198.1 y AAY84763.1, VRL
28-NOV-2005). También se ha
utilizado otra secuencia de proteína recombinante SEC. ID. Nº: 2
(correspondiente al número de acceso a Genebank D90208).
En otra realización alternativa de la invención,
también es posible utilizar un polipéptido que comprende un
fragmento de la proteína NS3, de tal manera que dicho fragmento es
capaz de inducir respuestas CD4+ y CD8+. Por lo tanto, dicho
fragmento deberá incluir al menos un epítopo inductor de CD8+ y un
epítopo inductor de CD4+.
En una realización específica, la combinación
inmunoestimulante de la invención comprende poli(I:C), un
anticuerpo anti-CD40 y un polipéptido que contiene
la proteína NS3.
En una realización preferida de la invención,
todos los componentes que tiene la combinación inmunoestimulante
forman parte de la misma composición farmacéutica, donde cada uno de
los componentes se encuentra presente en cantidades
farmacéuticamente aceptables. Además, la invención también se
refiere a dicha composición farmacéu-
tica.
tica.
En otra realización específica de la presente
invención, los componentes de la combinación inmunoestimulante se
encuentran formando parte de al menos dos composiciones
farmacéuticas. De la misma manera, la invención se refiere al uso
de dicha combinación inmunoestimulante caracterizado por que dichas
composiciones farmacéuticas se administran simultáneamente. En otra
realización de la invención, el uso de dicha combinación
inmunoestimulante se caracteriza por que dichas composiciones
farmacéuticas se administran en momentos diferentes, mediante la
misma vía de administración o mediante vías diferentes. Así, una
realización específica de la invención se refiere a un kit para la
administración de la combinación inmunoestimulante anteriormente
descrita, caracterizado por que comprende al menos dos
composiciones farmacéuticas diferentes.
En otro aspecto, la invención se refiere a un
método para producir una respuesta inmune frente al virus de la
hepatitis C caracterizado por que consiste en la administración de
una combinación estimulante anteriormente definida, en una cantidad
eficaz para inducir una respuesta inmune. En una realización
preferida, el método de la invención consiste en un tratamiento
profiláctico. En una realización más preferida el método de la
invención consiste en un tratamiento terapéutico.
Finalmente, la invención también se refiere a
una vacuna frente al virus de la hepatitis C, caracterizada por que
comprende una combinación inmunoestimulante anteriormente definida y
que constituye el objetivo de la presente invención.
Figura 1. La inmunización con
anti-CD40 y poli(I:C) junto con la proteína
NS3 induce respuestas T CD8+ y CD4+ multiepitópicas. Se inyectó 50
\mug de anti-CD40 (i.p) a ratones HHD (dos por
grupo). Cuatro horas más tarde, se les inyectó 50 g de
poli(I:C) (i.v.) y 500 \mug de proteína NS3 recombinante
(i.p.) (SEC. ID. Nº: 1). Seis días más tarde se sacrificaron los
animales y se extrajeron los esplenocitos para su estimulación
in vitro con diferentes antígenos y el análisis de la
respuesta inmunitaria inducida. (A) Las células se estimularon
durante cinco días con los epítopos CD8+ 1073, 1406 o 1038 (10
\muM) en presencia de IL-2. Después, para cada
grupo de esplenocitos, se midió la respuesta lítica frente a células
diana que se cargaron (péptido; barras negras) o no (control;
barras blancas) con el péptido correspondiente. Se mostraron los
resultados obtenidos con un porcentaje efectoras:diana de 100:1.
B). De la misma manera, los esplenocitos se cultivaron con
diferentes concentraciones (0,1-10 \muM) de los
péptidos 1073 (círculos negros), 1406 (triángulos blancos) o 1038
(triángulos negros) y en los sobrenadantes de cultivo obtenidos tras
48 h de estimulación se midió el contenido en
IFN-\gamma mediante ELISA. (C) También se
estimularon los esplenocitos durante 48 h con 5 o 1 \mug/ml de la
proteína NS3 utilizada en la inmunización (SEC. ID. Nº: 1), con 1
\mug/ml de proteína NS3 producida en bacterias (SEC. ID. Nº: 3) o
con medio de cultivo (control) para medir la respuesta CD4+. Tras
este periodo de tiempo se recogieron los sobrenadantes y se midió
por ELISA la cantidad de IFN-\gamma
producida.
Figura 2. Medida de la cantidad de proteína NS3
necesaria para inducir respuestas T CD4+ y CD8+ en la inmunización
con poli(I:C) y anti-CD40. Se inmunizaron
ratones HHD (dos por grupo) con proteína NS3 (SEC. ID. Nº: 1) (500,
250, 125 o 25 \mug/ratón) junto con poli(I:C) y
anti-CD40, siguiendo el protocolo que se describe en
la figura 1. También, se incluyó un grupo control inmunizado de la
misma manera, que utilizaba como antígenos 5 \mug de NS3 (SEC.
ID. Nº: 1) y 50 \mug de los péptidos 1073 y 1038, junto con
poli(I:C) y anti-CD40. Seis días más tarde
se sacrificaron los animales y se extrajeron los esplenocitos y se
estimularon con los diferentes antígenos (A). Para medir la
respuesta lítica inducida, las células se estimularon durante cinco
días con el epítopo CD8+ 1073 (10 \muM) e IL-2. A
continuación, se midió dicha respuesta enfrentando diferentes
cantidades de células efectoras frente a un número fijo de células
diana cargadas con los péptidos. Además, también se analizó la
respuesta CD8+ que se había inducido, mediante la medida de la
producción de IFN-\gamma. Para ello, las células
se estimularon con diferentes concentraciones de los péptidos 1073
(B) y 1038(C). Las células también se estimularon con la
proteína NS3 (SEC. ID. Nº: 1) (D), para cuantificar la respuesta
CD4+. Tras 48 h se midió la cantidad de
IFN-\gamma presente en los sobrenadantes.
Figura 3. La inmunización con poli(I:C) y
anti-CD40 junto con la proteína NS3 induce
respuestas CD8+ y CD4+ en otras cepas de ratones con diferente MHC.
Los ratones C57BL6 (que tienen moléculas MHC del tipo
H-2b) (dos por grupo) recibieron una (cuadrados
blancos) o dos (cuadrados negros) inmunizaciones con 100 \mug de
NS3 (SEC. ID. Nº: 1) junto con poli(I:C) y
anti-CD40 siguiendo el protocolo que se indica en la
figura 1. Seis días después, los animales se sacrificaron y los
esplenocitos se cultivaron con diferentes antígenos para medir las
respuestas CD8+ y CD4+ inducidas. El epítopo de restricción
H-2 Db 1629-1637 (GAVQNEVTL) (SEC.
ID. Nº: 7) se utilizó para estimular los esplenocitos y medir
respuestas CD8+ (A). La proteína NS3 (SEC. ID. Nº: 1) (B) se
utilizó como estímulo para determinar las respuestas CD4+. Después
de dos días de cultivo, se recogieron los sobrenadantes y se midió
la cantidad de IFN-\gamma producida.
Figura 4. La inmunización con la proteína NS3
junto con poli(I:C) y anti-CD40 induce
respuestas CD8+ capaces de reconocer a células que expresan
proteínas del VHC. (A) Se inyectó a ratones HHD (dos por grupo) 100
\mug de proteína NS3 (SEC. ID. Nº: 2) más poli(I:C) y
anti-CD40 como se indica en la figura 1. Seis días
más tarde, se sacrificaron los animales y se estimularon sus
esplenocitos con células T1/HCVcon (células T1 transfectadas con un
plásmido que expresa las proteínas del VHC) tratadas con mitomicina,
en presencia de IL-2. Tras cinco días de
estimulación, se midió la capacidad de los esplenocitos para
reconocer a las células T1/HCVcon en ensayos de actividad lítica.
Para ello, diferentes cantidades de esplenocitos se enfrentaron a un
número fijo de células T1/HCVcon (círculos negros) o de células
control T1 sin transfectar (círculos blancos).
Figura 5. La inmunización con poli(I:C) y
anti-CD40 junto con la proteína NS3 induce
respuestas T CD4+ y CD8+ de larga duración. Se inyectó a ratones
HHD (dos por grupo) 100 \mug de proteína NS3 (SEC. ID. Nº: 2) más
poli(I:C) y anti-CD40 como se indica en la
figura 1. Dos semanas después, los animales recibieron una segunda
inmunización en las mismas condiciones. Sesenta días después de la
última inmunización los animales se sacrificaron y se extrajeron
sus esplenocitos para el estudio de la respuesta T CD8+ y CD4+ de
larga duración. (A) Los esplenocitos se estimularon con el epítopo
CD8+ 1073 (10 \muM) o en ausencia de antígeno, y 48 h más tarde
se recogieron los sobrenadantes de cultivo para medir la cantidad de
IFN-\gamma producido. (B) Los esplenocitos se
cultivaron durante 5 días con el péptido 1073 (10 \muM) e
IL-2, y después se estudió su capacidad para lisar
células diana cargadas con el péptido 1073. Para ello, se
enfrentaron diferentes cantidades de células efectoras frente a un
número fijo de células diana cargadas con el péptido 1073 (círculos
negros) o sin cargar con péptido (círculos blancos). (C) Se estudió
la respuesta CD4+ mediante la estimulación de los esplenocitos con
la proteína NS3 (1 \mug/ml) (SEC. ID. Nº: 2) o en ausencia de
antígeno. Tras 48 h se recogieron los sobrenadantes y se midió la
cantidad de IFN-\gamma producido.
Los siguientes ejemplos, Sin ser en modo alguno
limitantes, pretenden ilustrar la realización de la invención que
constituye la presente solicitud de patente.
Los péptidos o epítopos utilizados se
sintetizaron manualmente en un sintetizador múltiple de péptidos
empleando la química Fmoc (Wellings DA y Atherton E. Methods
Enzymol 1997;289:44-67). Se empleó el ensayo de
ninhidrina de Kaiser para controlar cada paso. Al final de la
síntesis se escindieron y desprotegieron con ácido trifluoroacético
y se lavaron con éter dietílico. La pureza de los péptidos fue
siempre superior al 90% determinado por HPLC.
La numeración del péptido o epítopo se refiere a
su posición relativa HCVH, tomando como referencia la secuencia
completa en la cepa H de la hepatitis C humana que habitualmente se
toma como prototipo (Número de Acceso a GeneBank M67463). Así, por
ejemplo, la base de datos "HCV Immunology Database"
(http://hcv.lanl.gov/content/immuno/
immuno-main.html) compila los epítopos de linfocitos T, tanto de linfocitos T citotóxicos como T colaboradores, identificados en las proteínas virales de distintas cepas y aislados del virus de la hepatitis C, todos ellos ordenados también de acuerdo con su posición relativa respecto a la cepa H del virus de acuerdo con la referencia de GeneBank indicada.
immuno-main.html) compila los epítopos de linfocitos T, tanto de linfocitos T citotóxicos como T colaboradores, identificados en las proteínas virales de distintas cepas y aislados del virus de la hepatitis C, todos ellos ordenados también de acuerdo con su posición relativa respecto a la cepa H del virus de acuerdo con la referencia de GeneBank indicada.
Se ha utilizado como inmunógeno un polipéptido
recombinante de 655 aminoácidos que contiene la secuencia completa
de la proteína NS3 (SEC. ID. Nº: 1; número de acceso a GeneBank
AAY84763.1, VRL 28-NOV-2005; 631
aminoácidos). Así como los 631 aminoácidos de la proteína NS3, el
polipéptido incluye también una cola con una secuencia
c-myc, para la detección con el anticuerpo
monoclonal anti-cmyc y una cola de Histidinas. La
proteína se ha producido en Pichia pastoris. Se mantiene en
suspensión en una solución de Tris 22,5 mM/Urea 3,76 M/NaCl 300 mM.
La proteína se ha purificado mediante cromatografía en columna de
Ni.
También se ha utilizado como inmunógeno otro
polipéptido recombinante, que contiene los 635 aminoácidos que
comprenden la secuencia completa de la proteína NS3 (SEC. ID. Nº: 2;
Número de acceso a GeneBank D90208). Así como los aminoácidos
correspondientes a NS3, la poliproteína también contiene una cola de
Histidinas para su purificación. La secuencia de ADN
correspondiente a NS3 se obtuvo por digestion con Sal I y Not I del
plásmido gWIZ, que contenía la secuencia de NS3 (proporcionado por
la Dra. G Inchauspe, Lyon, Francia). El producto de la digestión se
clonó entre los sitios BsrG I y Not I del plásmido
pET-45b(+) (Novagen, Madison WI). Se expresó en
E.coli y se purificó mediante cromatografía de afinidad en
una columna de níquel seguida de una cromatografía de intercambio
iónico.
De la misma manera, para los ensayos in
vitro se ha utilizado como antígeno un polipéptido recombinante
(Mikrogen; Número de catálogo 94302) que contiene los últimos 20
aminoácidos de la proteína no estructural NS2 y los 508 primeros
aminoácidos de la proteína NS3 de VHC (SEC. ID. Nº: 3).
Como agonista de TLR3, se ha utilizado
poli(I:C) obtenido de Amersham (Número de catálogo
27-4732-01).
Como agonista de CD40, se utilizaron anticuerpos
anti-CD40, purificados a partir del hibridoma
FGK-45 (Rolink, A., et al. Immunity 1996.
5:319-330).
Todos los reactivos contenían <1 unidad de
endotoxina por mg de producto, determinado mediante el ensayo
QCL-1000 de lisado del amebocito limulus (Bio
Whittaker).
Los ratones C57B1/6 de seis a ocho semanas se
obtuvieron de Harlan. Se utilizaron también ratones HHD,
transgénicos para las moléculas HLA-A2.1 humanas
(Pascolo S et al. J. Exp. Med. 1997. 185:
2043-2051). Todos los animales se mantuvieron en
condiciones libres de patógenos y se trataron de acuerdo con las
normas de la institución.
Se utilizaron células T2 (Salter R et al.
Immunogenetics. 1985 21: 235-246) como células diana
para ensayos de liberación de cromo con linfocitos T citotóxicos
(CTL) procedentes de ratones HHD.
Se utilizaron células T1, transfectadas con un
plásmido portador de la región codificante del VHC (células
T1/
HCVcon), para los ensayos de reconocimiento de células que expresaban las proteínas del VHC. Estas células las proporcionó el Dr. D. Moradpour (Freiburg, Alemania; Volk B, et al. J Gen Virol. 2005; 86: 1737-1746). Se utilizaron también células T1 sin transfectar (ATCC, nº de catálogo CRL-1991) como control.
HCVcon), para los ensayos de reconocimiento de células que expresaban las proteínas del VHC. Estas células las proporcionó el Dr. D. Moradpour (Freiburg, Alemania; Volk B, et al. J Gen Virol. 2005; 86: 1737-1746). Se utilizaron también células T1 sin transfectar (ATCC, nº de catálogo CRL-1991) como control.
Todas las células se cultivaron en medio
completo (RPMI 1640 con 10% de suero bovino fetal, 100 U/ml de
penicilina, 100 \mug/ml de estreptomicina, 2mM de glutamina y 50
\muM de 2-mercaptoetanol). El medio de cultivo de
la línea T1/HCVcon contenía también 2 mg/ml de G418 (Gibco).
Se inmunizaron grupos de dos ratones por vía
i.p. con 50 \mug de anti-CD40. Cuatro horas más
tarde, se les inyectó 50 \mug de poli(I:C) (i.v.) y
diferentes cantidades de los antígenos: proteína NS3 o mezclas de
NS3 con péptidos, (i.p.).
Las células esplénicas se resuspendieron en
medio completo y se sembraron a 8x10^{5} células/pocillo en 0,2
ml en placas de 96 pocillos con fondo en forma U, en ausencia o
presencia de péptidos o de la proteína recombinante NS3 del
VHC.
Dos días después, se recogieron los
sobrenadantes para medir la presencia de
IFN-\gamma mediante ELISA
(BD-Pharmingen), siguiendo las instrucciones del
fabricante.
Para medir las respuestas CTL, se incubaron los
esplenocitos procedentes de animales inmunizados con péptidos (10
\muM) durante 2h a 37ºC, se lavaron dos veces y se cultivaron en
placas de 24 pocillos a una confluencia de 7,5x10^{6}
células/pocillo. En los experimentos realizados para medir el
reconocimiento de células T1/HCVcon, se cultivaron 7,5x10^{6}
esplenocitos de ratones HHD con 7,5x10^{5} células T1/HCVcon
previamente tratadas con Mitomicina C (Sigma). En todos los casos,
dos días más tarde, se añadió 2,5 U/ml de IL-2
(Boehringer-Mannhein GmbH, Germany) a los pocillos
y 5 días después las células se recuperaron para realizar ensayos de
liberación de cromo.
La actividad lítica se midió incubando durante
4h distintas cantidades de células efectoras con 3000 células diana
T2 previamente cargadas con 51Cr, con y sin péptido (diana). En el
caso de las células estimuladas con T1/HCVcon, las células
efectoras se enfrentaron a células T1/HCVcon o T1, previamente
cargadas con 51Cr. Los sobrenadantes de cultivo se recogieron tras
4h de incubación.
El porcentaje de lisis específica fue calculado
según la fórmula:
(cpm_{experimental} -
cpm_{espontánea})/(cpm_{máxima} - cpm_{espontánea}) x
100
donde la lisis espontánea (medida
como cpm_{espontánea}) corresponde a células diana incubadas en
ausencia de células efectoras y la lisis máxima (cpm_{máxima}) se
obtiene incubando células diana con Triton x100 al
5%.
La inmunización con anti-CD40 y
poli(I:C) ha demostrado ser muy eficaz para la inducción de
respuestas CD8+ mediante la utilización como inmunógenos de
péptidos sintéticos que representan epítopos de células CD8+.
Aunque esta estrategia induce respuestas potentes, se ha demostrado
que cuando se coinmuniza con cantidades bajas de proteína NS3 (5
\mug/ratón), que induce la respuesta CD4+, aumenta la magnitud de
la respuesta CD8+ y también aumenta la respuesta CD8+ de alta
afinidad, es decir, aquella que reconoce concentraciones bajas de
antígeno. Además, la inmunización con péptidos sólo es eficaz en
aquellos individuos que tienen moléculas HLA de la misma
restricción que los epítopos escogidos. Con objetivo de afrontar
estos dos puntos, se estudió si la inmunización con cantidades
mayores de proteína NS3 recombinante sería capaz de inducir
respuestas, no sólo CD4+, sino también CD8+. Para ello se
inmunizaron ratones con NS3 junto con poli(I:C) y
anti-CD40 y se estudiaron las respuestas inducidas.
Así, se inyectó i.p. 50 \mug de anti-CD40 a
ratones HHD (dos por grupo). Cuatro horas más tarde, se les inyectó
50 \mug de poli(I:C) (i.v.) y 500 \mug de proteína NS3
recombinante (i.p.) (SEC. ID. Nº: 1). Seis días más tarde, se
sacrificaron los animales y se extrajeron los esplenocitos. Con el
objetivo de analizar la capacidad de NS3, cuando se formula en el
adyuvante poli(I:C) + anti-CD40 para inducir
respuestas T CD8+ y CD4+, se estimularon in vitro los
esplenocitos con diferentes antígenos que activan específicamente
estas poblaciones celulares. (A) Para analizar la respuesta CD8+, en
un primer experimento se estimularon los esplenocitos durante cinco
días con los epítopos CD8+ 1073, 1406 o 1038, en presencia de
IL-2. Después, se midió para cada grupo de células
estimuladas con un péptido, su capacidad para lisar células diana
cargadas con el péptido correspondiente (barras negras) o células
diana control sin péptido (barras blancas). La Figura 1A muestra
los resultados que se obtienen con un porcentaje efectoras:diana de
100:1. (B) También se analizó la respuesta CD8+ inducida tras la
inmunización con NS3 mediante estudio de la producción de
IFN-\gamma frente a los mismos epítopos CD8+. Para
ello se cultivaron los esplenocitos con diferentes cantidades de
1073 (círculos negros), 1406 (triángulos blancos) o 1038 (triángulos
negros). Tras 48 h de cultivo, se recogieron los sobrenadantes y se
midió el contenido en IFN-\gamma. (C) Con objetivo
de analizar la respuesta CD4+ inducida, se estimularon los
esplenocitos con la proteína NS3 utilizada en la inmunización (SEC.
ID. Nº: 1). Además, también se estimularon las células con proteína
NS3 comercial producida en bacterias (SEC. ID. Nº: 3). De la misma
manera que en el punto anterior, el grado de activación se midió
mediante la producción de IFN-\gamma.
En primer lugar, se pudo comprobar que este
antígeno era capaz de inducir respuestas CD8+, que podrían
detectarse tanto en ensayos de liberación de cromo (Figura 1A) como
mediante la inducción de la producción de
IFN-\gamma (Figura 1B). Además, esta respuesta
fue multiepitópica, dirigiéndose frente a varios epítopos CD8+, que
se han caracterizado dentro de la secuencia de NS3 (por ejemplo:
péptidos 1073, 1406 y 1038). Finalmente, también se comprobó que
era capaz de inducir respuestas CD4+, que reconocían a la proteína
NS3 utilizada en la inmunización y la proteína NS3 comercial
producida en bacterias (Figura 1C). La respuesta frente a esta
última fue menor, presumiblemente debido al hecho de que existían
algunos cambios en la secuencia de ambas proteínas y a que la
proteína expresada en bacterias era más corta, con lo que se podrían
perder algunos epítopos reconocidos por los linfocitos T CD4+.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sabía de experimentos anteriores, que con 5
\mug de NS3 se inducían respuestas CD4+ pero no CD8+ y por ello
se quiso descubrir la cantidad mínima de NS3 que sería suficiente
para inducir respuestas T CD8+. Para ello se inmunizaron ratones
HHD con 500, 250, 125 y 25 \mug de NS3 (SEC. ID. Nº: 1). También
se incluyó como control un grupo inmunizado con péptidos que
correspondían a epítopos CD8+, que inducirían respuestas CD8+, más
5 \mug de NS3 (SEC. ID. Nº: 1), que induciría respuestas CD4+.
Para ello, en cada grupo de animales inmunizado con una dosis de
NS3 se realizó un análisis de la respuesta CD8+ y la respuesta CD4+.
La respuesta CD8+ se analizó como la capacidad para lisar células
diana cargadas con el epítopo CD8+ 1073 (Fig. 2A), junto con la
capacidad de producir IFN-\gamma respecto a
diferentes concentraciones de los epítopos CD8+ 1073 (Fig. 2B) y
1038 (Fig. 2C). Las respuestas CD4+ se midieron mediante la
capacidad para producir IFN-\gamma respecto a
diferentes concentraciones de NS3 (SEC. ID. Nº: 1) (Fig. 2D). Este
experimento demostró que todas las cantidades de NS3 ensayadas
fueron capaces de inducir respuestas CD8+, cuando se estudiaron las
respuestas líticas frente al péptido 1073 (Fig. 2A), siendo la
dosis de 25 \mug la que indujo respuestas de menor intensidad.
Además, todas las dosis fueron capaces de inducir la producción de
IFN-\gamma frente a los epítopos 1073 (Fig. 2B) y
1038 (Fig. 2C), lo que indicaba que incluso cuando se reducían las
dosis se mantenía la capacidad de inducir respuestas
multiepitópicas. Finalmente, y como se esperaba, todas ellas
indujeron respuestas CD4+. Puesto que, en la mayoría de los casos,
la respuesta inducida era menor cuando se utilizaban 25 \mug de
NS3, para experimentos posteriores se escogió una dosis de 100
\mug/ratón, dosis a partir de la cual ya no se observaba un
aumento de la inducción de respuestas.
\vskip1.000000\baselineskip
Puesto que en un antígeno tan grande como la
proteína NS3, es posible encontrar epítopos CD4+ y CD8+ que pueden
presentar diferentes moléculas de MHC, se estudió la capacidad de
este protocolo de inmunización para inducir respuestas CD4+ y CD8+
en otra cepa de ratón con moléculas de MHC diferentes. Para ello, se
inmunizaron ratones C57/Bl6, que tienen moléculas MHC de
restricción H-2b, con 100 \mug de NS3 (SEC. ID.
Nº: 1). Con el objetivo de mejorar las respuestas, un grupo recibió
una única inmunización y otro grupo recibió una segunda inmunización
de refuerzo. En primer lugar, se midió la respuesta CD8+, como la
producción de IFN-\gamma frente al péptido
1629-1637 (SEC. ID. Nº: 7), que contiene un epítopo
CD8+ presentado por las moléculas MHC de clase I H-2
Db. Como se puede ver en la Figura 3A, en ambos grupos de ratones
se indujo una respuesta detectable, aunque los niveles fueron
considerablemente mayores en el grupo que había recibido dos
inmunizaciones (cuadrados negros) que en el que recibió una
inmunización (cuadrados blancos). La respuesta CD4+, medida como
producción de IFN-\gamma frente a la proteína NS3
recombinante (SEC. ID. Nº: 1), también se detectó en los dos grupos
(Figura 3B) y de nuevo se demostró que dos inmunizaciones
(cuadrados negros) indujeron respuestas más potentes que una única
inmunización (cuadrados blancos).
Con el objetivo de estudiar si la inmunización
utilizando proteína NS3 junto con poli(I:C) y
anti-CD40 sería capaz de inducir respuestas que
podrían matar potencialmente a células infectadas con el VHC, se
utilizó un modelo in vitro de células diana transfectadas
con un plásmido que expresaba las proteínas del VHC (T1/HCVcon).
Estas células expresaron los mismos péptidos que expresaría una
célula infectada con el VHC en sus moléculas MHC de clase I; por lo
tanto, se podría asumir como una respuesta frente a las últimas
cualquier respuesta frente a ellas. La proteína NS3 (SEC. ID. Nº:
1) utilizada en los experimentos de las figuras 1 a 3 corresponde a
una cepa viral diferente a la cepa viral que está presente en las
células T1/HCVcon. Estas dos cepas presentan algunas diferencias en
los epítopos CD8+ estudiados hasta ahora. Con el objetivo de
optimizar la capacidad de reconocimiento de los epítopos CD8+
presentes en las células T1/HCVcon, se utilizó para este experimento
una proteína NS3 (SEC. ID. Nº: 2) como inmunógeno, cuya secuencia
tenía un grado de homología mayor que la proteína presente en las
células T1/HCVcon. Seis días después de la inmunización de ratones
HHD con 100 \mug de NS3, los esplenocitos se estimularon con
células T1/HCVcon. La capacidad de reconocimiento de células
T1/HCVcon se analizó en ensayos de actividad lítica. Para ello, se
enfrentaron los esplenocitos estimulados a células T1/HCVcon y a
células T1 de control. Como se muestra en la figura 4, la
inmunización con NS3 indujo respuestas con una capacidad mayor de
lisar las células T1, que expresaban proteínas del VHC (círculos
negros), que la inmunización con las células de control T1
(círculos blancos).
Una de las principales propiedades que debe
tener un protocolo de vacunación es su capacidad de inducir
respuestas inmunitarias de larga duración, de modo que la
protección conferida por la inmunización pueda persistir a largo
plazo. Para estudiar si la inmunización con
anti-CD40 y poli(I:C) junto con la proteína
NS3 sería capaz de inducir este tipo de respuesta, se inmunizaron
ratones HHD con 100 \mug de NS3 de acuerdo con el protocolo
descrito en el ejemplo 1. Con el objetivo de reforzar la respuesta,
después de 15 días, los animales recibieron una dosis de refuerzo
en las mismas condiciones. Sesenta días después de la segunda
inmunización, se sacrificaron los animales y sus esplenocitos se
estimularon con diferentes antígenos para analizar las respuestas T
CD8+ y CD4+ que persistían en ese momento. Para estudiar la
respuesta T CD8+, se estimularon las células con el epítopo 1073 y
se midió la producción de IFN-\gamma y la
actividad lítica. Como se muestra en la figura 5A, sesenta días
después de la segunda inmunización, los esplenocitos de los ratones
inmunizados con anti-CD40 y poli(I:C) junto
con la proteína NS3, fueron capaces de producir grandes cantidades
de IFN-\gamma cuando se estimulaban con el
péptido 1073, pero no en ausencia de antígeno. Además, estas células
fueron capaces de lisar células diana pulsadas con el péptido 1073
(círculos negros), pero no células diana que no contenían antígeno
(círculos blancos) (Figura 5B). Finalmente, también se estudió la
respuesta CD4+, utilizando como antígeno la proteína NS3 usada en
la inmunización. La Figura 5C muestra que este protocolo de
inmunización también induce potentes respuestas CD4+ de larga
duración, que reconocen específicamente a NS3.
<110> PROYECTO DE BIOMEDICINA CIMA
S.L.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> COMBINACIÓN INMUNOESTIMULANTE PARA
PROFILAXIS Y TRATAMIENTO DE HEPATITIS C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 055009
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> Versión de Patente 3.1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 631
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Virus hepatitis C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MISC_FEATURE
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Proteína no estructural NS3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> SEC ID. Nº: 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 635
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Virus hepatitis C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MISC_FEATURE
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Proteína no estructural NS3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> SEC ID. Nº: 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 528
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Proteína recombinante quimérica
obtenida de las proteínas NS2 y NS3 del virus de la hepatitis
C.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> SEC ID. Nº: 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Virus de la hepatitis C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Epítopo 1038-1047
correspondiente a la proteína viral NS3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> SEC ID. Nº: 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Virus de la hepatitis C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Epítopo 1073-1081
correspondiente a la proteína viral NS3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> SEC ID. Nº: 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Virus de la hepatitis C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Epítopo 1406-1415
correspondiente a la proteína viral
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> SEC ID. Nº:7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Virus de la hepatitis C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
Claims (18)
1. Una combinación inmunoestimulante para la
profilaxis y el tratamiento de la hepatitis C, caracterizada
por que comprende:
- a)
- un agonista de TLR3,
- b)
- un agonista de CD40 o una secuencia de ADN que lo codifica y
- c)
- un polipéptido, que comprende la proteína NS3 del virus de la hepatitis C, o un fragmento de dicha proteína NS3 con capacidad para inducir respuestas CD8+ y CD4+.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Una combinación inmunoestimulante de acuerdo
con la reivindicación 1, caracterizada por que el agonista
de CD40 se selecciona de entre un anticuerpo
anti-CD40, CD40L y fragmentos de los anteriores que
conservan su capacidad para unirse a CD40.
3. Una combinación inmunoestimulante de acuerdo
con la reivindicación 2, caracterizada por que el agonista
de CD40 es un anticuerpo anti-CD40.
4. Una combinación inmunoestimulante de acuerdo
con la reivindicación 1, caracterizada por que comprende:
- a)
- poli(I:C),
- b)
- un anticuerpo anti-CD40 y
- c)
- un polipéptido que contiene la proteína NS3.
\vskip1.000000\baselineskip
5. Una combinación inmunoestimulante de acuerdo
con la reivindicación 3 ó 4, caracterizada por que el
polipéptido que contiene la proteína NS3 es un polipéptido con SEC
ID. Nº: 1.
6. Una combinación inmunoestimulante de acuerdo
con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada
por que todos los componentes forman parte de una única composición
farmacéutica.
7. Una combinación inmunoestimulante de acuerdo
con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada
por que todos los componentes forman parte de al menos dos
composiciones farmacéuticas diferentes.
8. Uso de una combinación inmunoestimulante de
acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la
preparación de una medicina para la profilaxis y el tratamiento de
la hepatitis C.
9. Uso de una combinación inmunoestimulante
definida en cualquiera de las reivindicaciones 1-7
en la preparación de una medicina para la profilaxis y el
tratamiento de la hepatitis C.
10. Uso de una combinación inmunoestimulante de
acuerdo con las reivindicaciones 8 ó 9, caracterizada por
que dicha medicina comprende al menos dos composiciones
farmacéuticas adecuadas para la administración simultánea.
11. Uso de una combinación inmunoestimulante de
acuerdo con las reivindicaciones 8 ó 9, caracterizada por que
dicha medicina comprende al menos dos composiciones farmacéuticas
adecuadas para la administración por separado.
12. Uso de una combinación inmunoestimulante de
acuerdo con la reivindicación 11, caracterizada por que
dichas composiciones farmacéuticas son adecuadas para la
administración por separado mediante distintas vías.
13. Una composición farmacéutica que contiene
una combinación inmunoestimulante descrita en cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizada por que cada uno de los
componentes está presente en cantidades farmacéuticamente
aceptables.
14. Un kit para la administración de una
combinación inmunoestimulante descrita en cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que comprende al
menos dos composiciones farmacéuticas diferentes como se define en
la reivindicación 13, conteniendo cada una de ellas al menos uno de
los componentes a), b) o c) de dicha combinación inmunoestimulante
como se define en la reivindicación 1.
15. Una combinación inmunoestimulante definida
en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en una cantidad eficaz
para inducir una respuesta inmune frente al virus de la hepatitis
C.
16. Una combinación inmunoestimulante de acuerdo
con la reivindicación 15, para uso como tratamiento
profiláctico.
17. Una combinación inmunoestimulante de acuerdo
con la reivindicación 15, para uso como tratamiento terapéutico.
18. Una vacuna frente al virus de la hepatitis
C, caracterizada por que comprende una combinación
inmunoestimulante definida en cualquiera de las reivindicaciones 1
a 7.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200502446 | 2005-10-07 | ||
| ES200502446 | 2005-10-07 | ||
| ES200601563 | 2006-06-09 | ||
| ES200601563A ES2334472B1 (es) | 2006-06-09 | 2006-06-09 | Combinacion inmunoestimuladora para profilaxis y tratamiento de hepatitis c. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2346570T3 true ES2346570T3 (es) | 2010-10-18 |
Family
ID=37942331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES06830863T Active ES2346570T3 (es) | 2005-10-07 | 2006-10-05 | Combinacion immunoestimulante para la profilaxis y el tratamiento de la hepatitis c. |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20100047231A1 (es) |
| EP (1) | EP1949913B1 (es) |
| JP (1) | JP2009511452A (es) |
| CN (1) | CN101330928B (es) |
| AT (1) | ATE469657T1 (es) |
| AU (1) | AU2006301171B9 (es) |
| BR (1) | BRPI0616978A2 (es) |
| CA (1) | CA2625506C (es) |
| CY (1) | CY1110744T1 (es) |
| DE (1) | DE602006014720D1 (es) |
| DK (1) | DK1949913T3 (es) |
| ES (1) | ES2346570T3 (es) |
| HR (1) | HRP20100473T1 (es) |
| PL (1) | PL1949913T3 (es) |
| PT (1) | PT1949913E (es) |
| RS (1) | RS51402B (es) |
| RU (1) | RU2431499C2 (es) |
| SI (1) | SI1949913T1 (es) |
| WO (1) | WO2007042583A1 (es) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101522210B (zh) | 2006-09-18 | 2017-03-22 | 阿肯色大学评议会 | 增强免疫应答的组合物和方法 |
| NZ585776A (en) * | 2007-10-30 | 2012-07-27 | Univ Arkansas | Compositions and methods of enhancing immune responses to flagellated bacterium |
| PL2214701T3 (pl) * | 2007-11-01 | 2017-01-31 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Kompozycje i sposoby wzmacniania odpowiedzi odpornościowych na Eimeria |
| US20110268757A1 (en) | 2008-12-03 | 2011-11-03 | Institut Pasteur | Use of phenol-soluble modulins for vaccine development |
| BRPI1009458A2 (pt) * | 2009-03-10 | 2016-03-01 | Baylor Res Inst | vacinas antivirais direcionadas às células de apresentação de antígeno |
| UA110024C2 (uk) | 2010-01-21 | 2015-11-10 | Вакцинний вектор і спосіб посилення імунної відповіді | |
| KR102007132B1 (ko) | 2010-06-09 | 2019-08-05 | 더 보드 오브 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 아칸소 | 캄필로박터 감염을 감소시키기 위한 백신 및 방법 |
| NZ711019A (en) | 2013-02-14 | 2019-07-26 | Univ Arkansas | Compositions and methods of enhancing immune responses to eimeria or limiting eimeria infection |
| EP2968423A4 (en) | 2013-03-15 | 2016-11-09 | Univ Arkansas | COMPOSITIONS AND METHODS FOR INCREASING IMMUNE REACTIONS AGAINST ENTERAL PATHOGENES |
| BR112018072592A2 (pt) | 2016-05-03 | 2019-04-16 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | vetor de vacina de levedura que inclui polipeptídeos imunoestimulantes e antigênicos, e métodos de uso dos mesmos |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5049390A (en) * | 1987-09-02 | 1991-09-17 | Allergy Immuno Technologies, Inc. | Liposome containing immunotherapy agents for treating IgE mediated allergies |
| CN1325517C (zh) * | 1998-07-21 | 2007-07-11 | 展马博联合股份有限公司 | 抗丙型肝炎病毒抗体及其用途 |
| AU9215101A (en) * | 2000-08-17 | 2002-02-25 | Tripep Ab | Vaccines containing ribavirin and methods of use thereof |
| US7022830B2 (en) * | 2000-08-17 | 2006-04-04 | Tripep Ab | Hepatitis C virus codon optimized non-structural NS3/4A fusion gene |
| EP2258712A3 (en) * | 2002-03-15 | 2011-05-04 | Multicell Immunotherapeutics, Inc. | Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs |
| JP2006512391A (ja) * | 2002-12-30 | 2006-04-13 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 組み合わせ免疫賦活薬 |
-
2006
- 2006-10-05 JP JP2008534032A patent/JP2009511452A/ja active Pending
- 2006-10-05 CN CN2006800457078A patent/CN101330928B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-05 DK DK06830863.4T patent/DK1949913T3/da active
- 2006-10-05 RU RU2008117328/15A patent/RU2431499C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-10-05 AU AU2006301171A patent/AU2006301171B9/en not_active Ceased
- 2006-10-05 CA CA2625506A patent/CA2625506C/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-05 PL PL06830863T patent/PL1949913T3/pl unknown
- 2006-10-05 EP EP06830863A patent/EP1949913B1/en active Active
- 2006-10-05 SI SI200630732T patent/SI1949913T1/sl unknown
- 2006-10-05 DE DE602006014720T patent/DE602006014720D1/de active Active
- 2006-10-05 ES ES06830863T patent/ES2346570T3/es active Active
- 2006-10-05 AT AT06830863T patent/ATE469657T1/de active
- 2006-10-05 US US12/083,217 patent/US20100047231A1/en not_active Abandoned
- 2006-10-05 BR BRPI0616978-3A patent/BRPI0616978A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-10-05 PT PT06830863T patent/PT1949913E/pt unknown
- 2006-10-05 RS RSP-2010/0373A patent/RS51402B/en unknown
- 2006-10-05 WO PCT/ES2006/000554 patent/WO2007042583A1/es active Application Filing
-
2010
- 2010-08-19 CY CY20101100769T patent/CY1110744T1/el unknown
- 2010-08-30 HR HR20100473T patent/HRP20100473T1/hr unknown
-
2013
- 2013-09-27 US US14/039,269 patent/US20140056943A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE469657T1 (de) | 2010-06-15 |
| BRPI0616978A2 (pt) | 2011-07-05 |
| HRP20100473T1 (hr) | 2010-10-31 |
| US20100047231A1 (en) | 2010-02-25 |
| SI1949913T1 (sl) | 2011-02-28 |
| JP2009511452A (ja) | 2009-03-19 |
| RU2008117328A (ru) | 2009-11-20 |
| PT1949913E (pt) | 2010-08-24 |
| CA2625506C (en) | 2014-06-10 |
| EP1949913A1 (en) | 2008-07-30 |
| CN101330928B (zh) | 2012-11-14 |
| RS51402B (en) | 2011-02-28 |
| WO2007042583A1 (es) | 2007-04-19 |
| CN101330928A (zh) | 2008-12-24 |
| EP1949913B1 (en) | 2010-06-02 |
| DE602006014720D1 (de) | 2010-07-15 |
| PL1949913T3 (pl) | 2010-10-29 |
| AU2006301171B2 (en) | 2011-10-27 |
| AU2006301171B9 (en) | 2012-03-29 |
| CA2625506A1 (en) | 2007-04-19 |
| CY1110744T1 (el) | 2015-06-10 |
| RU2431499C2 (ru) | 2011-10-20 |
| DK1949913T3 (da) | 2010-10-04 |
| AU2006301171A1 (en) | 2007-04-19 |
| US20140056943A1 (en) | 2014-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2346570T3 (es) | Combinacion immunoestimulante para la profilaxis y el tratamiento de la hepatitis c. | |
| CN111892648B (zh) | 偶联tlr7激动剂的新型冠状病毒多肽疫苗及其应用 | |
| JP5788676B2 (ja) | デングウイルスの複数のサブタイプに対する新規ワクチン | |
| ES2775278T3 (es) | Composición formada por un antígeno ligado a un ligando de la superfamilia TNF | |
| KR20050044886A (ko) | 면역보조 바이러스 입자 | |
| Yu et al. | A novel dendritic-cell-targeting DNA vaccine for hepatitis B induces T cell and humoral immune responses and potentiates the antivirus activity in HBV transgenic mice | |
| Shi et al. | The expression of membrane protein augments the specific responses induced by SARS-CoV nucleocapsid DNA immunization | |
| CA2901346C (en) | Chimeric vaccine antigens against hepatitis c virus | |
| TWI754817B (zh) | 以人工混雜ｔ輔助細胞抗原決定位以有限度的ｔ細胞發炎反應促進目標抗體的生產 | |
| WO2005042564A1 (en) | Flagellin fusion proteins as adjuvants or vaccines and methods of use | |
| Mansilla et al. | Immunization against hepatitis C virus with a fusion protein containing the extra domain A from fibronectin and the hepatitis C virus NS3 protein | |
| ES2334472B1 (es) | Combinacion inmunoestimuladora para profilaxis y tratamiento de hepatitis c. | |
| ES2541443T3 (es) | Adyuvantes peptídicos | |
| WO2014046994A1 (en) | Compositions and methods for antigen targeting to cd180 | |
| ES2299626T3 (es) | Aumento de timosina para asegurar una inmunizacion genetica. | |
| WO2023020637A1 (es) | Antigenos quimericos para el control de coronavirus y composiciones que los comprenden | |
| Ben-Yedidia | A peptide-based vaccine against influenza | |
| WO2002053182A1 (en) | Chimeric t helper-b cell peptide vaccine for japanese encephalitis virus |