ES2341702T3 - Derivados de melfalan y su uso como farmacos quimioterapeuticos del cancer. - Google Patents
Derivados de melfalan y su uso como farmacos quimioterapeuticos del cancer. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2341702T3 ES2341702T3 ES01938945T ES01938945T ES2341702T3 ES 2341702 T3 ES2341702 T3 ES 2341702T3 ES 01938945 T ES01938945 T ES 01938945T ES 01938945 T ES01938945 T ES 01938945T ES 2341702 T3 ES2341702 T3 ES 2341702T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- melphalan
- mmol
- ethyl ester
- alkyl
- cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Un di- o tripéptido de fórmula I **(Ver fórmula)** en la que R1 es alquiloxi, cicloalquiloxi, ariloxi, arilaquiloxi, NH2, alquilamino, cicloalquilamino o arilamino; R2 es independientemente NH2, OH, O-alquilo, N-alquilo, O-acilo, NH-acilo, N(CH2CH2Cl)2, NO2, F, CF3 o H, y n es 1 ó 2; y R3 es un aminoácido natural o modificado, cíclico o aromático, o H; así como una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Description
Derivados de melfalán y su uso como fármacos
quimioterapéuticos del cáncer.
La presente invención se refiere a nuevos
derivados de melfalán útiles como fármacos alquilantes
quimioterapéuticos anticancerosos.
\vskip1.000000\baselineskip
El cáncer es una enfermedad muy importante y a
menudo fatal. Consecuentemente, los intentos para desarrollar
nuevas terapias para el cáncer constituyen un esfuerzo continuado de
la comunidad investigadora. La gran mayoría de los cánceres está
presente en forma de tumores sólidos, p.ej. cáncer de pulmón, cáncer
de mama, cáncer de próstata, mientras que el resto son malignidades
hematológicas y linfoides, p.ej. leucemias y linfomas.
La quimioterapia se usa en intentos para curar o
paliar la enfermedad. En la mayoría de los casos, esta terapia se
suministra en forma de quimioterapia de combinación, en la que dos o
más fármacos que tienen diferentes modos de acción se usan
conjuntamente a fin de optimizar el efecto antitumoral y de
minimizar los efectos secundarios. Los resultados obtenidos con la
quimioterapia varían según el tipo de tumor. Algunos tumores son
muy sensibles y el tratamiento tiene, por tanto, una elevada
probabilidad de conducir a la curación. Ejemplos de este tipo de
tumores son leucemias agudas, linfomas malignos, cáncer testicular,
carcinomas coriónicos y tumor de Wilms. En otro grupo de tumores,
la quimioterapia puede producir una buena paliación y una
supervivencia prolongada. Ejemplos de tales tumores son el cáncer
de mama, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón de células pequeñas,
cáncer de vejiga, mieloma múltiple, y leucemias crónicas, tanto de
tipo linfático como mieloide. Los tumores resistentes a los
principales fármacos son, por ejemplo, glioma maligno, melanoma,
cáncer de próstata, sarcomas y tumores gastrointestinales distintos
de los cánceres colorrectales.
Las sustancias alquilantes, como los fármacos
derivados de mostaza de nitrógeno, es decir los derivados de
bis(2-cloroetil)amina, se usan como
fármacos quimioterapéuticos en el tratamiento de una amplia variedad
de enfermedades neoplásicas. Estos fármacos actúan todos mediante
interacción covalente con heteroátomos nucleófilos en el DNA o las
proteínas. Se cree que estas sustancias difuncionales son capaces de
hibridar con una cadena de DNA incluida en una doble hélice, de
forma intracatenaria o intercatenaria, o de hibridar entre DNA y
proteínas. La hibridación produce efectos inhibitorios sobre la
replicación y transcripción del DNA, con la subsecuente muerte
celular. Estos fármacos se pueden usar como sustancias únicas o en
combinación con otras sustancias antineoplásicas. Las sustancias
alquilantes parecen tener cierta propensión para los tejidos que
crecen rápido. Ejercen efectos sobre un amplio espectro de tumores.
Los efectos secundarios están restringidos principalmente a la
médula ósea y, a dosis muy altas, también al tracto
gastrointestinal.
El melfalán, o
p-bis-(2-cloroetil)-aminofenil-alanina,
es un conjugado de mostaza de nitrógeno y del aminoácido
fenilalanina, que se sintetizó a mediados de 1950
(US-A-3.032.584). Esta sustancia
alquilante clásica se convirtió pronto en un fármaco valioso el
campo quimioterapéutico y todavía tiene importancia en el
tratamiento, por ejemplo, del mieloma. El melfalán se desarrolló
originalmente como una sustancia citotóxica selectiva frente a
células de melanoma, que utilizan grandes cantidades de fenilalanina
en la síntesis de melanina. El uso clínico del melfalán en el
tratamiento de melanomas metastáticos tiene, sin embargo, una
eficacia limitada.
En la búsqueda de una acción más selectiva sobre
las células malignas, se han sintetizado análogos de melfalán. Se
obtuvo sarcolisina,
m-bis-(2-cloroetil)aminofenilalanina,
cambiando el grupo
bis-(2-cloroetil)-amino, desde la
posición para- a la meta- de la fenilalanina. Mediante conjugación
covalente de diferentes aminoácidos en los grupos amino y
carboxilato de la sarcolisina, se preparó una mezcla de péptidos
conocida como Peptichemio® (PTC). PTC consistía en seis péptidos
diferentes (de Barbieri, "Proceedings of the symposium of
Peptichemio", Milan, 18 de noviembre, 1972). Posteriormente, se
demostró que PTC era activo sobre varios tipos de tumores, así como
sobre tumores resistentes al tratamiento con sustancias alquilantes,
incluyendo melfalán y se sometió a experimentos clínicos con
resultados prometedores. Para la comprensión de los efectos y uso
del PTC, una seria desventaja era el hecho de que es una mezcla de
seis péptidos. Los efectos citotóxicos de cada uno de los
diferentes péptidos contenidos en PTC se medían, por tanto, por
separado (Lewensohn et al., Anticancer Research 11:
321-324 (1991)) y se encontró una amplia variación
en las citotoxicidades de los péptidos. Uno de los péptidos, el
hidrocloruro de éster etílico de
L-prolil-m-L-sarcolisil-L-p-fluorofenilalanina
(P2), resultó ser más tóxico para las células de melanoma RPMI 8322
que cualquiera de los otros péptidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Lopatin et al. (CA 79:100709, Farmakol.
Toksikol. (Moscú), 1973, 36/4), 479-480), describe
que la administración de los derivados de melfalán asaley y
astyron, inhibían el crecimiento del sarcoma 45 en ratas. El
"astyron", o éster etílico de
N-acetil-L-melfalánil-L-tirosina,
así como el "asaley", o éster etílico de
N-acetil-L-melfalánil-L-valina,
tienen un grupo amino acetilado, que generalmente significa que la
citotoxicidad del compuesto frente a las células tumorales se ha
reducido considerablemente en comparación con la forma no
acetilada.
Romanova et al. (CA 66:27517, Vopr. Med.
Khim, 1966, 12(6), 586-91), se refiere a un
compuesto llamado sarcolisina o salina, que según la nomenclatura
occidental debería llamarse mejor
L-melfalánil-L-valina.
Este compuesto interumpía la fosforilación oxidativa en la
mitocondría de homogeneizados de hígado de rata y células de sarcoma
de Jensen.
Hay una ligera confusión en cuanto a la
nomenclatura de los derivados de melfalán. Cuando, en 1955, un grupo
de investigación británico informó de la síntesis y actividad
citotóxica de un derivado de fenilalanina sustituido con un grupo
bis-(2-clooetil)amino en la posición -para
del anillo aromático, los isómeros DL, L y D se denominaron
merfalán, melfalán y medfalán, respectivamente. Al mismo tiempo, un
grupo ruso, independientemente, denominó sarcolisina a la forma
racémica (DL) de
4-[bis-(2-cloroetilamino)]-fenilalanina.
Depués, el término sarcolisina empezó a usarse también para la
mostaza de meta-fenilalanina. Esta confusión de
nombres ha continuado, pero actualmente melfalán y sarcolisina se
usan normalmente para los derivados para- y meta-,
respectivamente.
Kupczyk-Subotkowska et
al. (Journal of Drug Targeting, 1997, 4(6),
359-370), describe derivados de melfalán diseñados
para incrementar la acumulación de melfalán en células cancerosas.
Se ensayaron diversos dipéptidos que comprendían melfalán y valina
o ácido glutámico, y se concluyó que la absorción celular de dichos
dipéptidos, así como de sus ésteres, se produjo probablemente a
través de difusión pasiva más que por un transportador de
aminoácidos u oligopéptidos.
Un problema con el uso de sustancias alquilantes
bifuncionales es la resistencia del tumor al tratamiento, de
carácter primario, es decir, intrínseca, y secundario, es decir,
adquirida. Se han realizado intentos para eludir la resistencia
incrementando la dosis de la sustancia alquilante administrada al
paciente. Sin embargo, no esta claro cuánto incrementa esto la
dosis efectiva a nivel de la célula tumoral.
Existe una necesidad urgente de nuevos fármacos
antitumorales en una amplia variedad de enfermedades tumorales,
especialmente en tumores que muestran una resistencia primaria a
terapia convencional, y/o en enfermedades tumorales que han
desarrollado resistencia, resistencia secundaria, tras haber
respondido al tratamiento con quimioterapéuticos anticancerosos
convencionales.
\vskip1.000000\baselineskip
El objeto de la invención es proporcionar un
derivado de melfalán con una actividad citotóxica mejorada en
células tumorales humanas.
La invención se refiere a dipéptidos y
tripéptidos que contienen una unidad de melfalán, y uno o dos
aminoácidos o derivados de aminoácidos adicionales, al uso de
dichos péptidos como medicamentos, y a composiciones farmacéuticas
que comprenden los péptidos de la invención para uso como
medicamentos, especialmente para el tratamiento de diversos tumores
malignos.
Los derivados de melfalán de la invención
presentan una eficacia incrementada sobre diversos tipos de tumores.
La hipótesis de los inventores es que la absorción y la acumulación
intracelular de los péptidos de la invención por parte de la célula
tumoral se incrementará.
\vskip1.000000\baselineskip
La figura 1 muestra las fórmulas químicas de los
compuestos conocidos melfalán, sarcolisina y P2, así como las
fórmulas de los compuestos de la invención J1, J3 y JV28.
La figura 2 muestra una comparación de los IC50
para melfalán, J1 y P2 en 27 muestras tumorales humanas.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención se refiere a nuevos
péptidos de mostaza de fenilalanina que comprenden mostaza de
p-[bis(2-cloroetil)amino]-L-fenilalanina,
L-PAM, y mostaza de
p-[bis(2-cloroetil)-amino]-D-fenilalanina,
D-PAM, covalentemente unidos a uno o dos aminoácidos
o derivados de aminoácidos, formando di- o tripéptidos alquilantes.
Se prefieren, sin embargo, las formas L.
\newpage
La presente invención se refiere a nuevos
derivados de melfalán y, especialmente, a un di- o tripéptido que
tiene la fórmula I
en la
que
R_{1} es alquiloxi, cicloalquiloxi, ariloxi,
arilalquiloxi, NH_{2}, alquilamino, cicloalquilamino o
arilamino;
R_{2} es, independientemente, NH_{2}, OH,
O-alquilo, N-alquilo,
O-acilo, NH-acilo,
N(CH_{2}CH_{2}Cl)_{2}, NO_{2}, F, CF_{3} o
H, y n es 1 ó 2; y
R_{3} es un aminoácido cíclico o aromático,
natural o modificado, o H; así como sus sales farmacéuticamente
aceptables.
En dichas fórmulas, alquilo es preferiblemente
un alquilo inferior, es decir un alquilo que tiene
1-4 átomos de carbono.
En la fórmula I, si n es 1, el sustituyente
R_{2} puede estar en posición meta- o para-. Si n es 2, los dos
sustituyentes R_{2} pueden ser iguales o distintos.
Aminoácidos naturales se refiere a los
aminoácidos que existen normalmente y ejercen sus funciones en
organismos vivos. Aminoácidos modificados se refiere a aminoácidos
que se modifican de alguna forma en una estructura química y
composición química diferente de un aminoácido natural. Un ejemplo
de un aminoácido cíclico natural es la prolina. Ejemplos de
aminoácidos aromáticos son fenilalanina, tirosina, triptófano e
histidina.
El extremo N-terminal de la
molécula de melfalán debería preferentemente no estar protegido como
amida o carbamato, esto significa que R_{3}, preferentemente, no
debería ser un grupo protector, como formilo, acetilo, propionilo o
benzoílo, ya que la forma protegida del compuesto en general tiene
una actividad citotóxica menor que la forma libre
correspondiente.
Las sales farmacéuticamente aceptables son, por
ejemplo, sales de adición ácidas, como sales de HCl, HBr y ácido
metano-sulfónico.
Un di- o tripéptido preferido de la invención
tiene la fórmula II:
en la
que
R_{2} es alquiloxi, cicloalquiloxi, ariloxi,
arilalquiloxi, NH_{2}, alquilamino, cicloalquilamino o
arilamino;
R_{2} es NH_{2}, OH,
O-alquilo, N-alquilo,
O-acilo, NH-acilo,
N(CH_{2}CH_{2}Cl)_{2}, NO_{2}, F, CF_{3} o
H; y
R_{3} es un aminoácido cíclico o aromático
natural o modificado, o H; así como sus sales farmacéuticamente
aceptables.
Un grupo especialmente interesante de péptidos
de acuerdo con la invención son péptidos de fórmula I o II, en las
que R_{2} es F.
Los dipéptidos de acuerdo con la invención son
péptidos de fórmula I o II, en la que R_{2} es alquiloxi; R_{2}
es F, CF_{3}, H, OH, O-alquilo, NO_{2},
N(CH_{2}CH_{2}Cl)_{2}, NH-acilo
o NH_{2}; y R_{3} es H.
Ejemplos de dipéptidos preferidos son éster
etílico de
L-melfalánil-p-L-fluoro-fenilalanina
(J1), éster isopropílico de
L-melfalánil-p-L-fluoro-fenilalanina
(JV28), y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Tripéptidos según la invención son péptidos de
fórmula I o II, en las que R_{1} es alquiloxi; R_{2} es F,
CF_{3}, H, OH, O-alquilo,
NH-acilo, NO_{2},
N(CH_{2}CH_{2}Cl)_{2} o NH_{2}; y R_{3} es
un aminoácido cíclico o aromático natural o modificado.
Un ejemplo de un tripéptido preferido es éster
etílico de
L-prolil-L-melfalánil-p-fluorofenilalanina,
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Todos los derivados dipeptídicos de la invención
se pueden sintetizar de melfalán protegido con
terc-butoxicarbonil (Boc). El acoplamiento del
Boc-melfalán a diferentes ésteres o amidas se
realizó usando como reactivos de acoplamiento, hexafluorofosfato de
benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidino-fosfosfonio
(PyBOP)/hdrocloruro de trietilamina o
1-[3-dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida
(EDC)/ o N-metilmorfolina
(NMM)/1-hidroxibenzotriazol (HOBt). Los
procedimientos de purificación que usaban cromatografía sobre gel de
sílice permitieron el aislamiento de productos puros. La
eliminación del grupo Boc se realizó en acetato de etilo saturado
con HCl. Las sales de hidrocloruro de dipéptido se purificaron
mediante recristalización en etanol/éter dietílico.
En la síntesis de los derivados tripeptídicos,
se acoplaron aminoácidos protegidos con Boc al derivado dipeptídico
que contenía melfalán, usando EDC/NMM/HOBt como reactivos de
acoplamiento. La desprotección usando acetato de etilo saturado con
HCl, seguida de recristalización (EtOH/éter dietílico o EtOAc/éter
dietílico) permitió el aislamiento de sales de hidrocloruro de
tripéptido puras.
La invención se refiere también al uso de un
péptido según se describió anteriormente como medicamento, así como
a la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores
malignos.
Se encontró que los péptidos alquilantes de la
invención presentaban un amplio espectro de actividad con potencia
incrementada, en comparación con el melfalán y con el éster etílico
de
L-prolil-L-sarcolisil-p-L-fluorofenilalanina
(P2) sobre líneas celulares tumorales de diferentes histologías y
también sobre líneas celulares tumorales que presentan resistencia
a L-PAM. Adicionalmente, se encontró que los
péptidos alquilantes eran significativamente más efectivos en
comparación con melfalán y P2 sobre muestras tumorales recién
obtenidas de diferentes orígenes, tanto hematológicas como sólidas,
según se muestra en los ejemplos proporcionados más adelante.
Los péptidos de la invención se pueden usar como
tratamiento de primera línea, bien solos o en combinación con otros
fármacos, o de forma concomitante o secuenciada con radioterapia, de
las siguientes enfermedades tumorales y/o etapas de la enfermedad
respectiva:
(I) Tumores sólidos: para cáncerde mama operable
como tratamiento neoadyuvante o adyuvante, así como para el
tratamiento de cáncer de mama inoperable avanzado, para cáncer
pulmonar de células pequeñas de tipo LD (enfermedad limitada) o ED
(enfermedad extensiva, para etapas operables de cáncer pulmonar de
células no pequeñas como tratamiento neoadyuvante, para la etapa
IIIB o IV inoperable de cáncer pulmonar de células no pequeñas,
para cáncer de cabeza y cuello operable (neoadyuvante) e inoperable
y cáncer esofágico, para cáncer ovárico operable como tratamiento
adyuvante y para cáncer ovárico avanzado, para carcinoma de células
basales y células escamosas de la piel que no se puede corregir
mediante cirugía o radioterapia, y para neuroblastoma. Los tipos
tumorales mencionados anteriormente representan (1) tumores que han
mostrado sensibilidad al tratamiento con agentes alquilantes pero
en los que la terapia convencional no es suficientemente eficiente,
o (2) tumores que recaen frecuentemente tras una primera remisión
y, en esa etapa, muestran menos sensibilidad a la terapia
convencional (resistencia). Otros grupos de tumores que sería
razonable tratar con los nuevos péptidos son diferentes etapas del
cáncer de vejiga, cáncer de próstata avanzado, melanoma maligno,
cáncer colorrectal y sarcomas de tejidos blandos, en los que se han
obtenido frecuentemente resultados paliativos con agentes
alquilantes. Otro grupo de tumores a tratar son los tumores
generalmente resistentes a fármacos, como el cáncer renal y los
tumores cerebrales.
(II) Tumores hematológicos y linfáticos: mieloma
múltiple, linfomas de grado alto y bajo, MB. Hodgkin, leucemia
linfocítica crónica, leucemia mielógena o linfocítica aguda y
leucemia mielógena crónica.
\vskip1.000000\baselineskip
Otro objeto de la invención es una composición
farmacéutica para el tratamiento de tumores malignos, que comprenden
al menos un péptido según se describió anteriormente, junto con al
menos un vehículo y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Se puede usar una composición farmacéutica según
la presente invención para el tratamiento del cáncer de mama,
cáncer de pulmón, cáncer ovárico, leucemias, linfomas y mieloma
múltiple.
Las composiciones farmacéuticas se preparan de
una forma conocida para un experto en la técnica farmacéutica. El
vehículo o excipiente podría ser un material sólido, semisólido o
líuido que podría servir como vehículo o medio para el ingrediente
activo. Vehículos o excipientes adecuados son conocidos en la
técnica. La composición farmacéutica se podría adaptar al uso
parenteral, oral o tópico y se podría administrar al paciente en
forma de comprimidos, cápsulas, soluciones, suspensiones, ungüentos
o similares.
Para administración parenteral, los péptidos
según la invención se pueden incorporar en una solución o
suspensión. La administración parenteral se refiere a la
administración mediante inyección, por ejemplo, mediante inyección
intravenosa, intracapsular, intratecal, intrapleural, intratumoral o
intraperitoneal, o intravesicalmente. Se prefiere la administración
intravenosa. Así mismo, la médula ósea se puede tratar in
vitro. La composición farmacéutica debería contener al menos
0,001% en peso de un péptido activo según la invención,
preferiblemente de 0,1-10% en peso.
Las soluciones o suspensiones podrían comprender
también al menos uno de los siguientes adyuvantes: diluyentes
estériles como agua para inyección, solución salina, aceites
fijados, polietilenglicoles, glicerol, propilenglicol u otros
disolventes sintéticos, antioxidantes como ácido ascórbico o
bisulfito sódico, tampones como acetatos, citratos o fosfatos, y
sustancias para el ajuste de la tonicidad, como cloruro sódico o
dextrosa. La preparación parenteral se podría incluir en ampollas,
jeringas desechables o recipientes para dosificación múltiple hechas
de vidrio o plástico.
Para inyección intravenosa, la composición
farmacéutica de la invención se puede administrar mediante dos
viales, en los que el vial I comprende el péptido en forma de sal
hidróclórica, con o sin un vehículo o compuesto que incrementa la
solubilidad o logra la estabilidad, y el vial II comprende una
mezcla de propilenglicol/etanol. El péptido se disolverá
inmediatamente antes de la administración y se mezcla con glucosa o
solución salina al 5%. La dosis proporcionada puede estar en el
intervalo de 0,1 mg/kg - 1 mg/kg proporcionada como una infusión
corta.
Para administración tópica, los péptidos según
la invención se podrían incorporar en una solución, suspensión o
ungüento. Dichas composiciones podrían contener al menos 0,1% en
peso del péptido activo, preferiblemente 0,1-10% en
peso.
\vskip1.000000\baselineskip
En los siguientes ejemplos de síntesis de
derivados de melfalán de la invención, así como en los compuestos
comparativos, todos los disolventes eran de clase analítica o
sintética. Se usaron como reactivos de acoplamiento
1-hidroxi-benzotriazol, HOBt;
N-metilmorfolina, NMM; y/o hidrocloruro de
1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida,
EDC; o hexafluorofosfato de
[benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidino-fosfonio,
PyBOP; y trietilamina. Los puntos de fusión se midieron en un
aparato de punto de fusión de Büchi B-540. Se
obtuvieron espectros NMR de ^{3}H- y ^{13}C en un espectrómetro
NMR JEOL JNM-EX 400. Los espectros ^{1}H se
registraron a 400 MHz y los espectros de ^{13}C se registraron a
100 MHz, respectivamente. Las reacciones se controlaron mediante
cromatografía en capa fina (TLC), sobre láminas de aluminio
metalizadas con sílice (gel de sílice 60 F254, E. Merck), detectando
los depósitos mediante luz UV y/o ninhidrina al 2% en etanol,
seguido de calentamiento. Se realizó cromatografía en columna sobre
sílice empaquetada en húmedo (gen de sílice 60
(0,040-0,063 mm), E. Merck) usando cromatografía
instantánea.
El L-melfalán usado como
compuesto de partida se obtuvo de Sigma y se recristalizó a partir
de etanol antes de usarlo. El intermediario
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalán
se sintetizó según Pai, N.N.; Miyawa, J.H.; Perrin, J.H., Drug
Dev. Industr. Pharm. 1996, 22, 181-184. Se
disolvió L-melfalán (500 mg, 1,64 mmol) en THF
acuoso al 50% (5 ml) y se añadió trietilamina (201 \mul, 1,44
mmol). La solución se enfrió hasta 0ºC y se añadió gota a gota
di-terc-dibutil-dicarbonato
(210 m, 0,96 mmol) disuelto en THF (3 ml). La solución se agitó
durante 30 min a 0ºC y luego durante 18 h a temperatura ambiente
(RT). El disolvente se eliminó por evaporación y se añadió agua, y
la solución se acidificó hasta pH 5 con ácido cítrico al 10%.
Después de extraer tres veces con acetato de etilo, el extracto
orgánico combinado se secó sobre MgSO_{4}. El disolvente se
eliminó por evaporación y el residuo se purificó mediante
cromatografía instantánea sobre sílice usando cloroformo:metanol en
3:1 y 19:1 como eluyentes, produciendo 48% de un producto puro.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,05 (d, 2H, Ph-H), 6,58
(d, 2H, Ph, H), 4,98 (br s, 1H, NH), 4,47 (br S, 1H,
\alpha-H), 3,69-3,49 (m, 8H, 4
CH_{2}-mostaza), 3,12-2,91 (M, 2H,
CH_{2}-Ph), 1,40 (s, 9H,
CH_{3}-Boc).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió
L-p-fluorofenilalanina (217 mg, 1,18
mmol) en EtOH (5 ml) burbujeado previamente con HCl. La reacción se
llevó hasta 100ºC y se mantuvo a reflujo durante 18 horas. El
disolvente se eliminó por evaporación y el producto se secó a alto
vacío, produciendo hidroclouro de éster etílico de
L-p-fluorofenilalanina en forma de
cristales blancos secos (98%). ^{1}H NMR: (CD_{3}OD) \delta
7,30-7,26 (m, 2h, Ph-H),
7,13-7,06 (m, 2H, Ph-H), 4,98 (br s, 1H,
NH), 4,29-4,22 (m, 2 H,
CH_{2}-pH), 3,31-3,10 (m, 3H,
CH_{2}-CH_{3}, \alpha-H),
1,24 (t, 3H, CH_{2}CH_{3}).
Se disolvió
N-terc-tuboxicarbonil-L-melfalán
(157 mg, 0,387 mmol) en diclorometano (4 ml). Se añadieron PyBOP
(201 mg, 0,387 mmol) y trietilamina (54 \mul, 0,387 mmol) y la
solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió una
solución de hidrocloruro de éster etílico de
L-p-fluorofenilalanina (92 mg, 0,387
mmol) y trietilamina (54 \mul, 0,387 mmol) en diclorometano (4
ml) y la reacción se agitó durante la noche. La reacción se detuvo
mediante extracción con NaHCO_{3} saturado, seguido de ácido
cítrico al 10%. La capa orgánica se secó mediatne MgSO_{4} y el
disolvente se evaporó para proporcionar 200 mg de un aceite amarillo
que se purificó mediante cromatografía en columna de gradiente
usando éter:pentano (1:2, 1:1, 1:0) como eluyente, para producir
102 mg (rendimiento del 43%) de éster etílico
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanina,
que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanina
(64 mg, 0,11 mmol) en 5 ml de EtOAc burbujeado previamente con HCl
(gas). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30
minutos. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se volvió a
cristalizar a partir de EtOH/Et_{2}O. Se aisló hidrocloruro de
éster etílico de
L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanina
(J1) en forma de cristales blancos. ^{1}H NMR: (CD_{3}OD)
\delta 7,23 (d, 2H, Ph-H, Phe), 7,13 (d, 2H, Ph-H,
Phe), 7,01 (d, 2H, Ph-H, Me1), 6,72 (d, 2H, Ph-H,
Me1), 4,68 (dd, 1H, \alpha-CH, Phe), 4,61 (br s, 1H,
\alpha-CH, Me1), 4,12 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}),
3,80-3,62 (m, 8H,
CH_{2}-mostaza), 3,22-2,86
(m, 4H, CH_{2}-Ph, 1,21 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
Análisis elemental CHN 53,7; 5,8; 7,9 (calculado
54,1; 6,1; 7,9).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvieron
N-terc-butoxicarbonil-L-prolina
(12 mg, 0,054 mmol), éster etílico de
L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanina
(24 mg, 0,045 mmol), HOBt (8 mg, 0,054 mmol) y NMM (7 \mul, 0,045
mmol) en diclorometano (5 ml). La solución se enfrió hasta 0ºC y se
añadió hidrocloruro de EDC (11 mg, 0,045 mmol). La solución se agitó
durante 1 h a 0ºC y luego durante la noche a temperatura ambiente.
La mezcla de reacción se diluyó hasta 10 ml con diclorometano y la
reacción se detuvo mediante sucesivas extracciones con ácido cítrico
acuoso al 10%, NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica se
secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y el disolvente se eliminó por
evaporación bajo presión reducida, para producir 27 mg (86%) de
hidrocloruro de éster etílico de
L-prolinil-L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanina,
que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,08-6,89 (m, 6H, Ph-H, Phe, Me1), 6,67 (br
s, 1H, NH), 6,55 (d, 2H, Ph-H), 6,24 (br s, 1H,
NH), 4,72 (m, 1H, \alpha-H), 4,55 (br s, 1H,
\alpha-H), 4,20 (br s, 1H,
\alpha-H), 4,10 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}),
3,74-3,54 (m, 8H, CH_{2}-mostaza),
3,42-3,20 (m, 2H, prolina \delta),
3,10-2,86 (m, 4H, CH_{3}-Ph),
2,20-1,74 (m, 4H, prolina \beta, \gamma), 1,40
(s, 9H, CH_{3}-Boc), 1,18 (t, 3H;
CH_{2}CH_{3}).
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-prolinil-L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanina
(25 mg) en acetato de etilo saturado con HCl (3 ml). La mezcla se
agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El disolvente se
eliminó al vacío. La recristalización a partir de acetato de
etilo y éter dietílico produjo J3 puro en forma de cristales blanco
crudo con un rendimiento de 94% (calculado a partir de hidrocloruro
de éster etílico de
L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanina).
^{1}H NMR: (CD_{3}OD) \delta
7,26-6,94 (m, 6H, Ph-H, Phe, Me1),
6,68 (d, 2H, Ph-H), 6,24 (br s, 1H, NH),
4,62-4,55 (m, 2H, \alpha-CH),
4,20-4,05 (m, 3H, \alpha-CH,
CH_{2}-CH_{3}), 3,74-3,54 (m,
8H, CH_{2}-mostaza), 3,25-2,75
(m, 6H, CH_{2}-Ph, prolina \delta),
2,40-1,85 (m, 4H, prolina \beta, \gamma), 1,23
(t, 3H, CH_{2}CH_{3}).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió
N-terc-Butoxicarbonil-L-melfalán
(150 mg; 0,37 mmol) en 2,6 ml de diclorometano. Se añadieron PyBOP
(199 mg; 0,38 mmol) y trietilamina (104 \mul; 0,75 mmol). Después
de agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, se añadió una
solución de trietilamina (104 \mul; 0,75 mmol) e hidrocloruro de
éster etílico de fenilalanina (89 mg; 0,39 mmol) en 2,6 ml de
diclorometano. Después de 4 h a temperatura ambiente, se detuvo la
reacción. Se añadió diclorometano hasta un volumen total de 20 ml
antes de la extracción con 20 ml de NaHCO_{3} saturado y 20 ml de
ácido cítrico al 10%. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se
filtró y se concentró al vacío. El producto bruto se purificó
mediante cromatografía en columna sobre sílice, usando un gradiente
de éter:pentano (2:1 \rightarrow 3:1), seguido por éter y luego
CHCl_{3}:MeOH (19:1) como eluyentes. La recogida y concentración
de las fracciones adecuadas proporcionó éster etílico de
N-terc-botoxicarbonil-L-melfalanil-L-fenilalanina
en forma de sólido blanco (110 mg, 51%). Punto de fusión:
117-120ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,29-7,16 (m, 3H, Ph-H, Phe),
7-06-6,95 (m, 4H,
Ph-H), 6,57 (d, 2H, Ph-H Me1), 6,28
(br s, 1H, NH, Phe), 4,92 (br s, 1H, NH, Me1), 4,76 (br s, 1H,
\alpha-CH, Phe), 4,26 (br s, 1H,
\alpha-CH, Me1), 4,10 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}),
3,74-3,50 (m, SH, CH_{2}-mostaza),
3,12-2,84 (m, 4H, CH_{2}-Ph),
1,40 (s, 9H, CH_{2}-Boc), 1,18 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 171,05 (2 C:s)
(C=O amida y éster), 155,10 (C=O, Boc), 145,10
(C-4'), 135,84 (Ph), 130,75 (2 C:s), 129,39 (2
C:s), 128,54 (2 C:s) (Ph y C-3'), 127,13 (Ph),
125,07 (C-1'), 112,27 (2 C:s)
(C-2'), 79,82 (C-Boc), 61,54
(CH_{2}CH_{3}), 55,51 (\alpha-CH), 53,55 (2
C:s) (N-CH_{2}), 53,32
(\alpha-CH), 40,51 (2 c:S)
(CH_{2}-C1), 38,13, 36,73
(CH_{2}-Ph), 28,35 (3 C:s)
(CH_{3}-Boc), 14,17 (CH_{2}CH_{3}).
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-fenilalanina
(100 mg; 0,17 mmol) en 6 ml de acetato de etilo saturado con 6 ml
de HCl. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30
minutos. El disolvente se eliminó al vacío. La recristalización a
partir de acetato de etilo y éter dietílico produjo JV22 puro (37
mg, 42%) en forma de sólido ligeramente amarillento/pardo. Punto de
fusión: 123-125ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,31-7,13 (m, 7H, Ph-H), 6,72 (d,
2H, Ph-H, Me1), 4,73-4,66 (m, 1H,
\alpha-CH-Phe), 4,12 (q, 2H,
CH_{2}CH_{3}), 3,99-3,92 (m, 1H,
\alpha-CH, Me1), 3,77-3,64 (m, 8H,
CH_{2}-mostaza), 3,20-2,85 (m,
4H, CH_{2}-pH), 1,18 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 171,05, 168,42
(C=O en amida y éster), 145,96 (C-4'), 136,55 (Ph),
130,43 (2 C:s) (C-3'), 128,90 (2 C:s), 128,27 (2
C:s), 126,10 (Ph), 122,35 (C-1'), 112,58 (2 C:s)
(C-2'), 61,23 (CH_{2}CH_{3}), 54,29, 54,25
(\alpha-CH), 53,06 (2 C:s)
(N-CH_{2}), 40,26 (2 C:s)
(CH_{2}-Cl), 37,12, 36,29
(CH_{2}-Ph), 13,10 (CH_{2}CH_{3}).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalán
(150 mg; 0,37 mmol) en diclorometano (3 ml). Se añadieron PyBOP
(199 mg; 0,38 mmol) y trietilamina (104 \mul; 0,75 mmol). Después
de agitar a temperatura ambiente durante 30 min, se añadió una
solución de trietilamina (104 \mul; 0,75 mmol) e hidrocloruro de
éster etílico de tirosina (94 mg; 0,38 mmol) en 3 ml de
diclorometano. Después de 100 min de agitación a temperatura
ambiente, la reacción se detuvo. Se añadió diclorometano hasta un
volumen total de 20 ml antes de la extracción con 20 ml de
NaHCO_{3} saturado acuoso y 20 ml de ácido cítrico al 10%. La capa
orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío.
El producto bruto se purificó cuatro veces mediante cromatografía en
columna sobre sílice usando un sistema de eluyentes en gradiente
de éter:pentano (2:1 \rightarrow 4:1 \rightarrow 1:0) seguido
por CHCl_{3}:MeOH (19:1 \rightarrow 97:3). Se aisló éster
etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-tirosina,
en forma de aceite incoloro (59 mg; 27%).
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,05-6,92 (m, 2H,
Ph-H-Me1), 6,86-6,74
(m, 2H, Ph-H-Phe), 6,67 (d, 2H,
Ph-H, Phe), 6,59-6,43 (m, 2H,
Ph-H, Me1), 6,42-6,36 (m, 1H, NH,
Phe), 5,00 (br s, 1H, NH, Me1), 4,81-4,70 (m, 1H,
\alpha-CH, Phe), 4,26 (br s, 1H,
\alpha-CH, Me1), 4,12 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}),
3,70-3,53 (m, 8H, CH_{2}-mostaza),
3,03-2,85 (m, 4H, CH_{2}-Ph),
1,39 (s, SH, CH_{3}-Boc), 1,21 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 171,21 (2 C:s)
(C= O en amida y éster), 155,31 (2 C:s) (C=O Boc y
C-4''), 144,96 (C-4'), 130,70 (2
C:s), 130,47 (2 C:s) (Ph y C-3'), 127,12 (Ph),
125,21 (C-1'), 115,52 (2 C:s) (Ph), 112,31 (2 C:s)
(C-2'), 80,09 (C-Boc), 61,61
(CH_{2}-CH_{3}), 55,84
(\alpha-CH), 53,56 (2 C:s)
(N-CH_{2}), 53,25 (\alpha-CH),
40,55, 40,50 (CH_{2}-Cl), 37,32 (2 C:s)
(CH_{2}-Ph), 28,36 (3 C:s)
(CH_{3}-Boc), 14,22 (CH_{2}CH_{3}).
Se disolvío éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-tirosina
(48 mg; 81 \mumol) en 4 ml de acetato de etilo saturado con HCl.
La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El
disolvente se eliminó al vacío. La recristalización a partir de
acetato de etilo y éter dietílico produjo el JV24 puro. (13 mg;
30%) en forma de sólido ligeramente pardo. Punto de fusión:
150-154ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,16-6,86 (m, 4H, Ph-H),
6,75-6,65 (m, 4H, Ph-H),
4,68-4,59 (m, 1H, \alpha-CH,
Phe), 4,13 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}), 4,02-3,94 (m,
1H, \alpha-CH, Me1), 3,77-3,60 (m,
8H, CH_{2}-mostaza), 3,21-2,71
(m, 4H, CH_{2}-Ph), 1,20 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 170,94,
168,08 (C=O en amida y éster), 156,12 (C-4''),
145,68 (C-4'=, 130,41 (2 C:s), 129,68 (2 C:s),
127,03, (Ph y C-3'), 125,86 (C-1'),
114,98 (2 C:s) (Ph), 112,34 (2 C:s) (C-2'), 60,80
(CH_{2}CH_{3}), 54,48, 54,27 (\alpha-CH),
53,07 (2 C:s) (N-CH_{2}), 40,19 (2 C:s)
(CH_{2}-Cl), 36,32 (2 C:s)
(CH_{2}-Ph), 12,64 (CH_{2}CH_{3}).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-tirosina
(228 mg; 0,74 mmol) en 15 ml de acetona, y se añadió
K_{2}CO_{3} (123 mg, 0,89 mmol). Se añadió cuidadosamente
sulfato de dimetilo (77,5 \mul; 0,81 mmol) y la solución se
mantuvo a reflujo durante 20 h. Se eliminó el K_{2}CO_{3}
mediante filtración y la acetona se eliminó al vacío. La
purificación mediante cromatografía en columna sobre sílice usando
CHCl_{3}:MeOH:heptano (4:1:5) como eluyente, produjo 214 mg (90%)
de éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-p-metoxifenil-alanina,
en forma de aceite incoloro. Este intermediario se usó en la etapa
siguiente sin caracterización adicional.
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-p-metoxifenilalanina
(165 mg; 0,51 mmol) en CHCl_{3} (8,5 ml) y se añadió
yodotrimetilsilano (168 \mul; 1,22 mmol). La solución se agitó
durante 40 min a temperatura ambiente. La reacción se detuvo
mediante adición de MeOH (175 \mul; 4,3 mmol). El disolvente y el
exceso yodotrimetilsilano se eliminaron al vacío para producir 169
mg (149%) del producto bruto (éster etílico de
L-p-metoxifenilalanina) en forma de
sólido marrón-anaranjado, que se usó en la siguiente
etapa sin purificación adicional. ^{1}H NMR (CD_{3}OD) \delta
7,16 (d, 2H, Ph-H), 6,90 (d, 2H,
Ph-H), 4,28-4,18 (m, 3H,
CH_{2}CH_{3}, \alpha-CH), 3,78 (s, 3H,
OCH_{3}), 3,21-3,08 (m, 2H,
CH_{2}-Ph), 1,24 (t, 3H, CH_{2}CH_{3}).
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalán
(150 mg; 0,37 mmol) en 3 ml de diclorometano. Se añadieron PyBOP
(199 mg; 0,38 mmol) y se añadió trietilamina (104 \mul; 0,75 mmol)
y: -p-metoxifenil-alanina (124 mg;
0,55 mmol) en 3 ml de diclorometano. La solución se agitó a
temperatura ambiente durante la noche. Se añadió diclorometano
hasta un volumen total de 20 ml antes de extraer con 20 ml de
NaHCO_{3} acuoso saturado y 20 ml de ácido cítrico al 20%. La
capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al
vacío. El producto bruto se purificó cuatro veces mediante
cromatografía instantánea en columna, dos veces con éter:heptano
(3:1), y dos veces con CHCl_{3}:MeOH (19:1) como eluyentes, para
producir éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-metoxifenilalanina
en forma de sólido blanco (150 mg; 66%). Punto de fusión:
125-127,5ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,06 (d, 2H,
Ph-H, Me1), 6,90 (d, 2H, Ph-H, Phe),
6,76 (d, 2H, Ph-H, Phe), 6,59 (d, 2H,
Ph-H, Me1), 6,31 (br s, 1H, NH, Phe), 4,97 (br s,
1H, NH, Me1), 4,71 (br s, 1H, \alpha-CH, Phe),
4,27 (br s, 1H, \alpha-CH, Me1), 4,10 (q, 2H,
CH_{2}CH_{3),} 3,75 (s, 3H, OCH_{3}),
3,69-3,56 (m, 8H,
CH_{2}-mostaza), 3,00-2,85 (m, 4H,
CH_{2}-Ph), 1,40 (s, 9H,
CH_{3}-Boc), 1,19 (t, 3H, CH_{2}CH_{3}).
^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 171,11,
170,91 (C=O en amida y éster), 158,72 (C-4''),
155,30 (C=O, Boc), 145,03 (C-4'), 130,76 (2 C:s),
130,39 (2 C:s), (Ph y C-3'), 127,75 (Ph), 125,36
(C-1'); 113,96 (2 C:s) (Ph), 112,28 (2 C:s)
(C-2'), 80,12 (C-Boc), 61,50
(CH_{2}CH_{3}), 55,81 (\alpha-CH), 55,27
(OCH_{3}), 53,55 (2 C:s) (N-CH_{2}), 53,46
(\alpha-CH), 40,52 (2 C:s)
(CH_{2}-Cl), 37,33, 37,23
(CH_{2}-Ph), 28,34 (3 C:s)
(CH_{3}-Boc), 14,20 (CH_{2}CH_{3}).
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-metoxifenilalanina
(140 mg; 0,23 mmol) en 17 ml de acetato de etilo saturado con HCl.
La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El disolvente
se eliminó al vacío. El producto bruto se disolvió en etanol,
seguido de precipitación en éter dietílico, produciendo JV25 (45
mg; 36%) en forma de sólido blanco. Punto de fusión:
170-173ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,17-7,07 (m, 4H, Ph-H), 6,83 (d,
2H, Ph-H, Phe), 6,72 (d, 2H, Ph-H,
Me1), 4,68-4,61 (m, 1H,
\alpha-CH, Phe), 4,13 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}),
3,99-3,94 (m, 1H, \alpha-CH, Me1),
3,77-3,59 (m, 11H, OCH_{3} y
CH_{2}-mostaza), 3,17-2,82 (m, 4H,
CH_{2}-Ph), 1,19 (t, 3H, CH_{2}CH_{3}).
^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 171,11,
168,41 (C=O en amida y éster), 158,91 (C-4''),
146,10 (C-4'), 130,44 (2 C:s), 129,94 (2 C:s) (Ph y
C-3'), 123,38 (Ph), 122,18 (C-1'),
113,67 (2 C:s) (Ph), 112,18 (2 C:s) (C-2'), 61,19
(CH_{2}CH_{3}), 54,45, 54,37, 54,29 (\alpha-CH
y OCH_{3}), 52,99 (2 C:s) (N-CH_{2}), 40,31 (2
C:s) (CH_{2}-Cl), 36,34, 36,29
(CH_{2}-Ph), 13,14 (CH_{2}CH_{3}).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-L-p-nitrofenilalanina
(395 mg; 1,27 mmol) en etanol saturado con HCl (20 ml). La solución
se calentó a reflujo durante 20 h. La mezcla se fraccionó entre
CHCl_{3} y HCl 1M (pH 4). La capa acuosa se basificó con KOH al
5% hasta pH 10 y luego se extrajo cuatro veces con CHCl_{3}. Las
capas orgánicas se combinaron, se secaron (MgSO_{4}), se
filtraron y se concentraron al vacío para producir éster etílico de
L-p-nitrofenilalanina en forma de
aceite amarillento fino (195 mg; 65%), que se usó en la siguiente
etapa sin purificación adicional.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,14 (d, 2H,
Ph-H), 7,37 (d, 2H, Ph-H), 4,14 (q,
2H, CH_{2}CH_{3}), 3,71 (t, 1H, \alpha-CH),
3,16-2,91 (m, 2H, CH_{2}-Ph), 1,22
(t, 3H, CH_{2}CH_{3}).
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalán
(86 mg; 0,21 mmol) en diclorometano (3 ml). Se añadieron PyBOP (115
mg; 0,22 mmol) y trietilamina (58 \mul; 0,42 mmol). Tras agitar a
temperatura ambiente durante 30 minutos, se añadió una solución de
trietilamina (29 \mul; 0,21 mmol) y éster etílico de
L-p-nitrofenilalanina (55 mg; 0,23
mmol) en 3 ml de diclorometano. La solución se agitó a temperatura
ambiente durante la noche. Se añadió diclorometano hasta un volumen
total de 10 ml, antes de extracción con 10 ml de NaHCO_{3} acuoso
saturado y 10 ml de ácido cítrico al 10%. La capa orgánica se secó
(MgSO_{4}), filtró y concentró al vacío. El producto bruto se
purificó dos veces mediante cromatografía instantánea en columna
sobre sílice usando CHCl_{3}:MeOH (9:1 y 19:1) como eluyente,
para producir éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-nitrofenilalanina,
en forma de sólido amarillo pálido (90 mg; 69%). Punto de fusión:
152-155ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
8,09-8,02 (m, 2H, Ph-H, Phe),
7,21-7,01 (m, 4H, Ph-H), 6,57 (d,
2H, Ph-H, Me1), 6,50-6,44 (m, 1H,
NH, Phe), 4.92 (br s, 1H, NH, Me1), 4,77 (br s, 1H,
\alpha-CH, Phe), 4,25 (br s, 1H,
\alpha-CH, Me1), 4,11 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}),
3,70-3,53 (m, 8H, CH_{2}-mostaza),
3,25-3,10 (m, 2H, CH_{2}-Ph,
Phe), 2,97-2,84 (m, 2H, CH_{2}-Ph,
Me1), 1,40 (s, 9H, CH_{3}-Boc), 1,19 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 171,31,
170,40 (C=O en amida y éster), 155,46 (C=O, Boc), 147,14 (Ph),
145,10 (C-4'), 143,85 (Ph), 130,68 (2 C:s), 130,41
(2 C:s) (Ph y C-3'), 125,21 (C-1'),
123,62 (2 C:s) (Ph), 112,40 (2 C:s) (C-2'), 80,45
(C-Boc), 61,95 (CH_{2}CH_{3}), 55,98
(\alpha-CH), 53,54 (2 C:s)
(N-CH_{2}), 53,03 (\alpha-CH),
40,46 (2 C:s) (CH_{2}-Cl), 37,86, 37,00
(CH_{2}-Ph), 28,33 (3 C:s)
(CH_{3}-Boc), 14,20 (CH_{2}CH_{3}).
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-nitro-fenilalanina
(80 mg; 0,13 mmol) en 6 ml de acetato de etilo saturado. La mezcla
se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. El disolvente se
eliminó al vacío. El producto bruto se disolvió en etanol, seguido
por precipitación en éter dietílico, para producir JV26 (22 mg;
76%), en forma de sólido naranja. Punto de fusión:
138-142ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
8,20-8,06 (m, 2H, Ph-H, Phe),
7,52-7,33 (m, 2H, Ph-H, Phe),
7,17-6,85 (m, 2H, Ph-H, Me1),
6,77-6,60 (m, 2H, Ph-H, Me1), 4,16
(q, 2H, CH_{2}CH_{3}), 4,00-3,94 (m, 1H,
\alpha-CH, Me1), 3,79-3,54 (m,
8H, CH_{2}-mostaza), 3,19-2,71 (m,
4H, CH_{2}-Ph), 1,21 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 170,46,
168,29 (C=O en amida y éster), 147,16 (Ph), 145,61
(C-4'), 144,67 (Ph), 130,96 (2 C:s), 130,24 (2 C:s)
(Ph y C-3'), 126,72 (C-1'), 123,26
(2 C:s) (Ph), 115,45 (2 C:s) (C-2'), 61,53
(CH_{2}CH_{3}), 54,76, 54,08 (\alpha-CH),
53,54 (2 C:s) (N-CH_{2}), 39,22 (2 C:s), 36,75
36,33 (CH_{2}-Ph), 13,16 (CH_{2}CH_{3}).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalán
(35 mg; 86 \mumol) en diclorometano (2 ml). Se añadieron PyBOP
(43 mg; 83 \mumol) y trietilamina (23 \mul; 162 \mumol). Tras
agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, se añadió una
solución de trietilamina (23 \mul; 162 \mumol) en 2 ml de
diclorometano. La solución se agitó durante la noche, y se añadió
más diclorometano (hasta 10 ml) antes de la extracción con 10 ml de
NaHCO_{3} acuoso saturado y 10 ml de ácido cítrico al 10%. La capa
orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y concentró al vacío. La
purificación mediante cromatografía en columna sobre sílice, usando
CHCl_{3}:MeOH:heptano (4:1:7) y CHCl_{3}:MeOH (19:1) como
eluyentes, proporcionó éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-melfalán
en forma de goma marrón
(29 mg; 49%).
(29 mg; 49%).
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,06 (d, 2H,
Ph-H), 6,87 (d, 2H, Ph-H),
6,61-6,46 (m, 4H, Ph-H), 6,24 (br
s, 1H, \alpha-CH), 4,99 (br s, 1H, NH), 4,68 (br
s, 1H, \alpha-CH), 4,25 (br s, 1H,
\alpha-CH), 4,12 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}),
3,72-3,47 (m, 16H,
CH_{2}-mostaza), 3,02-2,87 (m, 4H,
CH_{2}-Ph), 1,40 (s, 9H,
CH_{3}-Boc), 1,21 (t, 3H, CH_{2}CH_{3}).
^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 171,16,
170,71 (C=O en amida y éster), 154,87 (C=O, Boc), 145,19 (2 C:s)
(C-4' y C-4''), 130,79 (2 C:s),
130,68 (2 C:s) (C-3' y C-3''),
125,08, 124,33 (C-1', C-1''), 112,30
(2 C:s), 112,04 (2 C:s) (C-2' y
C-2''), 79,65 (C-Boc), 61,50
(CH_{2}CH_{3}), 55,83 (\alpha-CH), 53,57 (2
C:s) (N-CH_{2}), 53,53
(\alpha-CH), 40,55, 40,47
(CH_{2}-Cl), 37,04, 36,98
(CH_{2}-Ph), 28,36 (3 C:s)
(CH_{3}-Boc), 14,24 (CH_{2}CH_{3}).
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-melfalán
(20 mg; 28 \mumol) en 3 ml de etil acetato saturado con HCl. La
mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. El disolvente
se eliminó al vacío. El producto bruto se disolvió en etanol,
seguido de precipitación en éter dietílico, para producir JV27 (11
mg; 62%) en forma de sólido marrón claro. Punto de fusión:
157-160ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,19-7,01 (m, 4H, Ph-H),
6,80-6,63 (m, 4H, Ph-H),
4,66-4,61 (m, 1H, \alpha-CH),
4,13 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}), 4,02-3,96 (m, 1H,
\alpha-CH), 3,83-3,54 (m, 16H, 8
CH_{2}-mostaza), 3,18-2,81 (m,
4H, CH_{2}-Ph), 1,17 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
\newpage
Se disolvió
L-p-fluorofenilalanina (266 mg, 1,45
mmol) en isopropanol saturado con HCl (10 ml). La solución se
calentó a reflujo durante 2,5 h. El disolvente se evaporó hasta
producir el producto en forma de sólido algodonoso blanco (350 mg,
91%). El producto se usó en la siguiente etapa sin purificación
posterior. Punto de fusión: 226-229ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,31-7,23 (m, 2H, Ph-H),
7,12-7,03 (m, 2H, Ph-H),
5,10-5,00 (m, 1H, CH-isopropilo),
4,22 (t, 1H, \alpha-CH), 3,22-3,11
(m, 2H, CH_{2}-Ph), 1,25 (d, 3H,
CH_{3}-isopropilo), 1,18 (d, 3H,
CH_{3}-isopropilo).
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalán
(52 mg; 0,13 mmol) en diclorometano (2 ml). Se añadieron PyBOP (71
mg, 0,14 mmol) y trietilamina (38 \mul; 0,27 mmol). Después de
agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos se añadió una
solución de trietilamina (38 \mul; 0,27 mmol) y éster isopropílico
de L-p-fluorofenilalanina (39 mg;
0,15 mmol) en 2 ml de diclorometano. La solución se agitó a
temperatura ambiente durante la noche. Se añadió diclorometano
hasta un volumen total de 10 ml, antes de su extracción con 10 ml de
NaHCO_{3} acuoso saturado y 10 ml de ácido cítrico al 10%. La
capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al
vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía
instantánea en columna sobre sílice usando CHCl_{3}:MeOH como
eluyente, para producir éster isopropílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanina
en forma de semisólido débilmente anaranjado (57 mg; 71%).
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,06-6,85 (m, 6H, Ph-H), 6,56 (d,
2H, Ph-H, Me1), 6,40 (br s, 1H, NH, Phe),
5,00-4,85 (m, 2H, CH-isoproilo, NH,
Me1), 4,68 (br s, 1H, \alpha-CH, Phe), 4,27 (br s,
1H, \alpha-CH, Me1), 3,69-3,52
(m, 8H, CH_{2}-mostaza), 3,02-2,85
(m, 4H, CH_{2}-Ph), 1,37 (s, 9h,
CH_{3}-Boc), 1,18 (d, 3H,
CH_{3}-isopropilo), 1,14 (d, 3H,
CH_{3}-isopropilo).
^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 171,00,
170,43 (C=O en amida y éster), 161,95 (d, J=245,0 Hz,
C-4''); 155,35 (C=O, Boc), 145,12
(C-4'), 131,60 (C-1''), 130,99 (2
C:s) (d, J = 7,75 Hz, C-2''), 130,72 (2 C:s)
(C-3'), 125,26 (C-1'), 115,29 (2
C:s) (d, J = 20,6 Hz, C-3''), 112,27 (2 C:s)
(C-2'), 80,24 (C-Boc), 69,52
(CH-isopropil), 55,82
(\alpha-CH), 53,53 (2 C:s)
(CH_{2}-Ph), 28,33 (3 C:s)
(CH_{3}-Boc), 21,81, 21,73
(CH_{3}-isopropilo).
Se disolvió éster isopropílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-fluoro-fenilalanina
(48 mg; 79 \mumol) en 4 ml de acetato de etilo saturado con HCl.
La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El
disolvente se eliminó al vacío. El producto bruto se disolvió en
etanol, seguido de precipitación en éter dietílico para producir
JV28 (22 mg; 50%) en forma de sólido blanco. Punto de fusión:
192-195ºC.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,28-7,17 (m, 2H, Ph-h, Phe), 7,14
(d, 2H, Ph-H, Phe), 7,04-6,96 (m,
2H, Ph-H, Me1), 6,76-6,67 (m, 2H,
Ph-H, Me1), 4,68-4,60 (m, 1H,
\alpha-CH, Me1), 4,00-3,93 (m, 1H,
\alpha-CH, Me1), 3,76-3,58 (m,
8H, CH_{2}-mostaza), 3,18-2,80 (m,
4H, CH_{2}-Ph), 1,24 (d, 3H,
CH_{3}-isopropilo), 1,15 (d, 3H,
CH_{3}-isopropilo).
^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 170,49,
168,42 (C=O en amida y éster), 162,06 (d, J = 242,4 Hz,
c-4''), 146,13 (C-4'), 132,48
(C-1''), 130,72 (2 C:s) (d, J = 7,64 Hz,
C-2''), 130,40 (2 C:s) (C-3'),
122,10 (C-1'), 114,87 (2 C:s) (d, J = 21,2 Hz,
C-3''), 112,45 (2 C:s) (C-2'), 69,27
(CH-isopropilo), 54,28 (2 C:s)
(\alpha-CH), 52,97 (2 C:s)
(N-CH_{2}), 40,26 (2 C:s)
(CH_{2}-Cl), 36,31 (2 C:s)
(CH_{2}-Ph), 20,70, 20,56
(CH_{3}-isopropilo).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-L-p-nitrofenilalanina
(510 mg; 1,64 mmol) en etanol al 80% (12,5 ml). Se añadió una
solución de CaCl_{2} (15 mg; 1,35 mmol) en agua (1 ml) junto con
zinc en polvo (3,79 g; 58 mmol). Tras calentar a reflujo durante
3,5 h, la suspensión se filtró y el polvo de zinc se aclaró con
etanol en exceso. El filtrado se concentró al vacío para producir
600 mg (130%) de
N-terc-butoxicarbonil-L-p-aminofenilalanina
en forma de sólido amarillo claro, que aún contenía algo de etanol.
El producto se usó en la siguiente etapa sin purificación
adicional.
^{1}H NMR (CD_{3}OD) \delta 6,96 (d, 2H,
Ph-H), 6,63 (d, 2H, Ph-H),
4,16-4,07 (m, 1H, \alpha-CH),
3,05-2,76 (m, 2H, CH_{2}-Ph), 1,38
(s, 9H, CH_{3}-Boc).
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-L-p-aminofenilalanina
(201 mg; 0,72 mmol) en etanol saturado con HCl (10 ml). La solución
se calentó a reflujo durante 3 h. La mezcla se fraccionó entre
CHCl_{3}, y HCl 1M (pH 4. La capa acuosa se basificó con KOH al
5% hasta pH 10 y luego se extrajo cuatro veces con CHCl_{3}. Las
capas orgánicas se combinaron, secaron (MgSO_{4}), filtraron y
concentraron al vacío, para producir éster etílico de
L-p-aminofenilalanina en forma de
aceite amarillento (90 mg; 60%), que se usó en la etapa siguiente
sin purificación adicional.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 6,97 (d, 2H,
Ph-H), 6,61 (d, 2H, Ph-H), 4,13 (q,
2H, CH_{2}CH_{3}), 3,71 (t, 1H, \alpha-CH),
3,04-2,78 (m, 2H, CH_{2}-Ph), 1,23
(t, 3H, CH_{2}CH_{3}).
\newpage
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalán
(44 mg; 0,11 mmol) en diclorometano (2 ml), se añadieron PyBOP (55
mg; 0,11 mmol) y trietilamina (28 \mul; 0,20 mmol). Después de
agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, se añadió una
solución de trietilamina (14 \mul; 0,10 mmol) y éster etílico de
L-p-aminofenilalanina (21 mg; 0,10
mmol) en 2 ml de diclorometano. La solución se agitó a temperatura
ambiente durante la noche. Se añadió diclorometano hasta un volumen
total de 10 ml, antes de la extracción con 10 ml de NaHCO_{3}
acuoso saturado y 10 ml de ácido cítrico al 10%. La capa orgánica
se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío. El
producto bruto se purificó dos veces mediante cromatografía
instantánea en columna sobre sílice, usando CHCl_{3}:MeOH (9:1 y
19:1) como eluyentes, para producir éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-aminofenilalanina
en forma de aceite marrón-anaranjado (28 mg;
47%).
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,03 (d, 2H,
Ph-H, Me1), 6,75 (d, 2H, Ph-H, Phe),
6,59-6,52 (m, 4H, Ph-H), 6,26 (br
s, 1H, NH, Phe), 4,96 (br s, 1H, NH, Me1), 4,68 (br s, 1H,
\alpha-CH, Phe), 4,26 (br s, 1H,
\alpha-CH, Me1), 4,10 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}),
3,70-3,53 (m, 8H, CH_{2}-mostaza),
2,97-2,88 (m, 4H, CH_{2}-Ph),
1,38 (s, 9H, CH_{3}-Boc), 1,19 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 171,21,
170,83 (C=O en amida y éster), 145,37, 144,96 (C-4',
C-4''), 130,78 (3 C:s), 130,21 (2 C:s) (Ph y
C-3'), 125,37 (C-1'), 115,22 (2 C:s)
(Ph), 112,26 (2 C:s) (C-2'), 80,09
(C-Boc), 61,42 (CH_{2}CH_{3}), 55,61
(\alpha-CH), 53,56 (2 C:s)
(N-CH_{2}), 53,48 (\alpha-CH),
40,56 (2 C:s) (CH_{2}-Cl), 37,37, 37,17
(CH_{2}-Ph), 28,34 (3 C:s)
(CH_{3}-Boc), 14,21 (CH_{2}CH_{3}).
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-L-p-amino-fenilalanina
(20 mg; 34 \mumol) en 3 ml de acetato de etilo saturado con HCl.
La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El
disolvente se eliminó al vacío. El producto bruto se disolvió en
etanol, seguido de precipitación en éter dietílico, para producir
JV29 (4 mg; 22%) en forma de sólido marrón claro.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,46-7,29 (m, 4H, Ph-H, Phe),
7,18-7,07 (m, 2H, Ph-H, Me1),
6,78-6,66 (m, 2H, Ph-h, Me1),
4,73-4,66 (m, 1H, \alpha-CH, Phe),
4,10 (q, 2H, CH_{2}CH_{3}), 4,06-3,99 (m, 1H,
\alpha-CH, Me1), 3,79-3,56 (m,
8H, CH_{2}-mostaza), 3,22-2,83 (m,
4H, CH_{2}-Ph), 1,15 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió D-fenilalanina (250
mg, 1,52 mmol) en 5 ml de EtOH previamente burbujeado en HCl
(gaseoso). La solución se llevó hasta 100ºC y se mantuvo a reflujo
durante la noche. El disolvente se eliminó por evaporación,
produciendo 280 mg de producto bruto. La recristalización desde
EtOH/EtOAc/pentano, produjo 239 mg (rendimiento 81%) de éster
etílico de D-fenilalanina en forma de cristales
blancos.
^{1}H NMR (CD_{3}OD) \delta
7,4-7,22 (m, 5H, Ph-H),
4,31-4,14 (m, 3H, CH_{2}CH_{3},
\alpha-CH), 3,35-3,08 (m, 2H,
CH_{2}-Ph), 1,25-1,20 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
Se disolvieron
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalán
(65 mg, 0,16 mmol), éster etílico de D-fenilalanina
(53 mg, 0,23 mmol), HOBT (32 mg, 0,24 mmol) y NMM (25 \muL, 0,23
mmol) en 4 ml de diclorometano. Esta solución se enfrió hasta 0ºC y
se añadió EDC (44 mg, 0,23 mmol). La solución se agitó durante 0,5 h
a 0ºC y luego durante 3 h a temperatura ambiente. La mezcla de
reacción se diluyó luego hasta 20 ml con diclorometano y la reacción
se detuvo mediante sucesivas extracciones con ácido cítrico acuoso
al 10% (25 ml), NaHCO_{3} saturado (25 ml) y salmuera (25 ml). La
fase orgánica se secó luego sobre Na_{2}SO_{4} y el disolvente
se eliminó por evaporación bajo presión reducida, para proporcionar
60 mg de un aceite amarillo. El producto bruto se separó luego
mediante cromatografía instantánea, usando un sistema de gradiente
de eluyentes de éter:pentano (2:3 \rightarrow 1:1 \rightarrow
1:0). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se eliminó
por evaporación para producir 25 mg (25%) de éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-D-fenilalanina
en forma de cristales blancos.
Se disolvió éster etílico de
N-terc-butoxicarbonil-L-melfalanil-D-fenilalanina
(90 mg, 0,16 mmol) en 5 ml de EtOAc, previamente burbujeado con HCl
(gaseoso). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30
minutos. El disolvente se eliminó al vacío. El residuo se volvió a
cristalizar a partir de EtOH/Et_{2}O. Se aisló hidrocloruro de
éster etílico de
L-melfalanil-D-fenilalanina
(T4) en forma de cristales blancos, con un rendimiento de 62% (46
mg).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
Comparativo
Se disolvió hidrocloruro de éster etílico de
L-melfalanil-L-p-fluorofenilalanina
(10 mg, 0,019 mmol), en diclorometano (0,5 ml) y se añadió piridina
(4 \mul, 0,044 mmol). Se añadió anhídrido acético (2 \mul, 0,22
mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Se
añadieron más piridina (2 \mul, 0,022 mmol) y anhídrido acético
(2 \mul, 0,22 mmol) y se obtuvo una solución transparente después
de agitar durante una hora. La solución se extrajo con ácido
cítrico acuoso al 10% y salmuera. La fase orgánica se secó sobre
Na_{2}SO_{4} anhidro y el disolvente se eliminó por evaporación
bajo presión reducida. El residuo sólido se volvió a cristalizar en
EtOH/éter dietílico para producir AcJ1 en forma de cristales
blancos.
^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,09-6,90 (m, 6H, Ph-H, Phe, Me1),
6,60 (d, 2H, Ph-H, Me1), 6,25 (br d, 1H, NH), 6,04
(br d, 1H, NH), 4,73 (dd, 1H, \alpha-CH), 4,55
(dd, 1H, \alpha-CH), 4,14 (q, 2H,
CH_{2}CH_{3}), 3,76-3,58 (m, 8H,
CH_{2}-mostaza), 3,12-2,88 (m, 4H,
CH_{2}-Ph), 1,98 (s, 3H, CH_{3}CO), 1,22 (t, 3H,
CH_{2}CH_{3}).
\vskip1.000000\baselineskip
En los siguientes ensayos, se analizó la
actividad citostática de los péptidos de la invención, y se comparó
con la actividad del melfalán (en forma de hidrocloruro, sustancia
para inyección Alkeran, Glaxo Wellcome), P2 (hidrocloruro de éster
etílico de
L-prolil-m-L-sarcolisil-p.L-fluorofenilalanina;
del Istituto Sieroterapico Milanese, Milan, Italia) y varios
fármacos estándar en diferentes cultivos primarios de células
tumorales humanas de pacientes (PHTC) y líneas celulares tumorales
humanas. Los fármacos estándar ensayados fueron AraC (Cytosar),
5-fu (Flurablastina) y doxorubicina (Adramicina) de
Pharmacia & Upjohn, vincristina (Oncovin) y vinorelbina
(Navelbina) de Pierre Fabre, docetaxel (Taxotere) de Rhone Poulenc
Rorer, cisplatino (Platinol) y etoposido (Vepesid) de
Bristol-Myers Squibb, y topotecán de SmithKline
Beecham.
Se usó el ensayo de citotoxicidad de
microcultivo fluorométrico (FMCA) (Larsson, R., et al. 1992:
Int J Cancer, 50, 177-185) para evaluar los
compuestos. En resumen, se prepararon placas de microvaloración de
96 pocillos (NUNC, Roskilde, Dinamarca) con 20 \mul de solución
de fármaco y diez veces la concentración deseada, y se almacenaron
durante hasta dos meses a -70ºC. En general, las sustancias se
disuelven primero en etanol absoluto o ácido hasta concentraciones
de 4,0 a 8,2 mM y diluidos adicionalmente con agua estéril o
solución salina estéril, tamponada con fosfato (PBS, Sigma
Chemicals). Todas las diluciones con agua se realizan directamente,
antes de los experimentos, para minimizar la influencia de la
hidrólisis de la mostaza. Las concentraciones finales de etanol no
exceden del 1% V/V. En el día cero del experimento, se añaden 180
\mul de suspensión celular de concentración adecuada a los
pocillos de la placa descongelada, seis pocillos sirven como
controles (sólo suspensión de células) y seis pocillos como blancos
(sólo medio celular). Tras 72 horas de incubación, las células se
lavan una vez con PBS, y se añaden 100 \mul de diacetato de
fluoresceína (10 \mug/ml) en un tampón fisiológico. Tras otros 45
min, se mide la fluorescencia generada (ex 485 rim; em 528 nm) en un
fluorómetro de escaneo de 96 pocillos (Fluoroscan II, Labsystems,
Oy, Helsinki, Finlandia). La fluorescencia generada es proporcional
al número de células vivas, y los datos se presentan como índice de
supervivencia (fluorescencia en el pocillo ensayado en porcentaje
de pocillos control con valores de blanco restados) e IC50
(concentración inhibitoria del 50%, calculada mediante el software
GraphPad Prism® (Graphpad Software Inc., San Diego, Ca, USA). Los
criterios de calidad para un ensayo con éxito incluyen un
coeficiente de variación inferior al 30% en el blanco (seis
pocillos), control (seis pocillos) y pocillos de ensayo (tres),
respectivamente, una señal de control mayor de tres veces el blanco
y, finalmente, una viabilidad de la célula inicial de más del 70%
(cultivos tumorales humanos primarios) o 90% (líneas celulares),
según se deduce del ensayo de exclusión de azul de tripán.
Se disolvió diacetato de fluoresceína (FDA,
Sigma) en DMSO hasta 10 mg/ml y se mantuvo congelado como solución
de reserva en la oscuridad. Se usó medio de crecimiento de células
RPMI-1640 (Sigma), complementado con suero bovino
fetal inactivado por calor (FCS, Sigma Chemical Co., St. Lours, MO),
glutamina 2 mM, 100 \mug/ml de estreptomicina, y 100 \mug/ml
de penicilina.
La mayoría del trabajo con FMCA se ha centrado
en la predicción de la actividad clínica de fármacos anticancerosos
para pacientes individuales. Se ha demostrado que la capacidad
predictiva de este ensayo para esta aplicación es comparable a la
de muchos otros procedimientos de ensayo clínicamente aceptados con
sensibilidad y especificidad en el intervalo de
80-90, y 60-70, respectivamente.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo
1
Se comparó la actividad citotóxica de melfalán,
P2 (hidrocloruro de éster etílico de
L-prolil-m-L-sarcolisil-p-L-fluorofenilalanina)
y J1 (hidrocloruro de éster etílico de
L-melfalanil-p-L-fluorofenilalanina)
sobre muestras tumorales humanas, usando el ensayo de citotoxicidad
de microcultivo fluorométrico (FMCA). Cada fármaco se ensayó en seis
concentraciones, que variaban de 82 a 0,131 \muM, cada
concentración por triplicado.
En total, se analizaron veintisiete especímenes
de tumores humanos recientes, de diferente origen: se analizaron
catorce muestras hematológicas (de los que al menos cinco se habían
tratado previamente con fármacos citotóxicos en la clínica) y trece
de tumores sólidos (cintro tratados previamente). Se representaron
curvas de concentración-respuesta y se determinaron
los IC50. Los resultados se presentan en la Figura 2, en la que las
líneas sólidas diagonales representan equipotencia, y los puntos
por encima de esta línea favorecen al fármaco en el eje X y
viceversa. El resultado muestra que J1, en todos los casos era más
activo que P2, que a su vez era más activo que el melfalán.
Usando el mismo ensayo FMCA se ensayó nuevamente
la actividad citotóxica del melfalán, P2 y J1, esta vez sobre un
total de sesenta y cuatro especímenes de tumor humano recientes. Los
tumores eran de diferente origen: se analizaron cuarenta y dos
muestras hematológicas y veintidós de tumores sólidos. En paralelo,
se ensayó la actividad de algunas sustancias estándar clínicamente
bien conocidas y usadas, a concentraciones de 0,92 a 10,3 \muM.
Los fármacos estándar fueron araC, vincristina, vinorelbina,
docetaxel, cisplatino, doxorubicina y etopósido. Se presenta una
comparación de las actividades como índice de supervivencia a una
concentración definida, en la Tabla 1, debajo. J1 muestra una
actividad superior a 0,66 \muM.
Ensayo
2
Se comparó la actividad citotóxica de nueve
péptidos diferentes de la invención (preparados en los ejemplos
1-9) con melfalán, P2 (hidrocloruro de éster etílico
de
L-prolil-m-L-sarcolisil-p-L-fluorofenil-alanina),
sarcolisina y los fármacos estándar doxorubicina, vincristina,
cisplatino, 5-Fu y topotecán, en diez líneas
celulares, usando el método FMCA. Cada fármaco se ensayó en seis
concentraciones que variaban de 40 a 0,013 \muM (melfalán de 1,6
mM a 0,51 \muM), y cada concentración por duplicado. El
experimento se repitió tres veces, y todos los datos de
supervivencia se usaron luego para calcular el IC50 para cada
fármaco en cada línea.
La selección de las células en el panel de
líneas celulares se ha descrito anteriormente (Dhar, S., et
al. 1996: Br J Cancer, 74, 888-896). Se
incluyeron cuatro líneas parentales de origen diferente (linfoma
U-937 GBT; mieloma RPMI 8226; cáncer pulmonar de
células pequeñas NCI-H69; y leucemia
CCRF-CEM), cinco sublíneas seleccionadas para
varios fármacos y una línea de células resistentes principal
(carcinoma renal ACHN). La sublínea
U-937-vcr se selecciona para
resistencia a vincristina, las sublíneas 8226Dox40 y H69AR para
resistencia a doxorubicina y la sublínea 8226LR5 para resistencia a
melfalán. El crecimiento de la línea celular y la morfología se
controlaron semanalmente, y la resistencia cada dos o tres
meses.
Los resultados se presentan en la Tabla 2 y
muestran que la actividad citotóxica varía entre los péptidos y es
superior a la del melfalán,
m-L-sarcolisina y P2. Además,
algunos de los péptidos muestran mayores actividades sobre ciertas
líneas celulares que algunas de las sustancias quimioterapéuticas
estándar ensayadas.
Ensayo
3
J1 se ensayó también frente a un panel de líneas
celulares de cáncer de pulmón y se comparó con melfalán y algunas
sustancias quimioterapéuticas estándar, usando el FMCA. En total se
analizaron cuatro líneas (U-1906 L y E,
U-1285, y U-1690) y siete líneas
celulares de cáncer de pulmón de células no pequeñas
(NCI-H23, U-1752,
NCI-H611, NCI-H157,
U-1810, NCI-H125 y
U-1568). Los resultados se presentan en la tabla
3.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados muestran que J1, sobre una base
molecular, es mejor que melfalán y que la mayoría de las sustancias
estándar usadas en terapia clínica del cáncer de pulmón, y también
muestra una actividad global similar a la observada para el
docetaxel, un fármaco activo frente a tubulina, que se ha
introducido últimamente en la terapia del cáncer de pulmón. Debido
a que J1 y otros derivados de melfalán no muestran una resistencia
cruzada con los taxanos (juzgado a partir de los análisis de
correlación de patrones de actividad) estos dos tipos de fármacos
pueden formar combinaciones de tratamiento atractivas.
\newpage
Ensayo
4
En otro conjunto de experimentos, se comparó la
actividad de J1, J3 y JV28 con la de melfalán, sarcolisina y P2 en
31 cultivos de PHTC, usando el FMCA los resultados se presentan en
la Tabla 4.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados muestran que J3 y JV28 eran
significativamente (P<0,001 test t de Studen) más activos frente
a muestras PHTC hematológicas que melfalán y sarcolisina. J3 y JV28
eran también significativamente (P<0,01) más activos frente a
muestras de tumores sólidos comparados, no sólo con melfalán y
sarcolisina, sino también comparados con P2. La diferencia, tanto
entre J1 y melfalán como entre sarcolisina y P2, era
estadísticamente significativa tanto para tumores hematológicos
como sólidos. Los resultados demuestran una actividad
inesperadamente elevada de los nuevos péptidos frente a tumores
sólidos como grupo, que no era compartida por los compuestos
de
referencia.
referencia.
\newpage
Ensayo
5
El espectro de actividad antitumoral específico
para tipo de tumor se analizó en líneas celulares y cultivos
primarios de células tumorales humanas de pacientes. Aunque el
melfalán se ha clasificado como activo frente a todos los
diagnósticos hematológicos, no se observó actividad, es decir
<50% de reducción en la supervivencia de células tumorales,
frente a los tipos de tumores sólidos. Por otra parte, J3, J1 y
JV28, mostraban actividad frente a diversos tipos de tumores
sólidos, incluyendo cáncer de mama, carcinoma ovárico y cáncer de
pulmón. En la tabla 5 se representa la diferencia en la actividad
específica por tipo de tumor entre J1, J3 y JV 28 frente a P2.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Mientras que se determinó que P2 era inactivo en
los diagnósticos enumerados en la Tabla 5, se encontró que J3 era
activo. Se encontró que J1 y JV28 eran activos en la mayoría de esos
diagnósticos. Estos datos muestran que el espectro específico de
actividad por tipo de tumor para J1, J3 y JV28 es más amplio que
para los compuestos de referencia, e incluye importantes tipos de
tumores sólidos.
\newpage
Ensayo
6
Se investigó la capacidad para eludir la
resistencia a melfalán en 27 muestras PHTC de 9 pacientes con
tumores hematológicos y 18 pacientes con tumores sólidos. Las
muestras se clasificaron según la resistencia a melfalán, basada en
resultados del ensayo FMCA (Indice de supervivencia) de varios
cientos de muestras PHTC ensayadas previamente para melfalán. Estos
datos se usaron para establecer líneas límite para dividir las
muestras en tres categorías: resistencia al fármaco baja,
intermedia o extrema (LDR, IDR y EDR, respectivamente), usando el
valor medio y la media + desviación estándar de dicha base de datos.
El melfalán y los nuevos compuestos J1, J3, y JV28 se clasificaron
posteriormente en estos grupos. La clasificación de la resistencia a
melfalán se realizó según los principios descritos por Larsson y
Nygren, Anticancer Research 13; 1825-1830, 1993. Los
nuevos péptidos y P2 se ensayaron a una concentración de 4 \muM y
el melfalán a 10 \muM. Los resultados del estudio se presentan en
la Tabla 6 debajo.
Los resultados muestran que significativamente
menos muestras de los nuevos péptidos se clasificaban como IDR y
EDR, indicando que estos fármacos tienen la capacidad de eludir la
resistencia a melfalán. En este análisis se asume que al menos la
mitad de la concentración de melfalán se puede alcanzar en el
escenario clínico con los nuevos péptidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo
7
A fin de investigar la diferencia de actividad
entre un compuesto con un grupo amino libre en el extremo
N-terminal y el mismo compuesto con dicho grupo
amino protegido, se sintetizó la forma acetilada de J1 y se comparó
su actividad con la de J1, usando el procedimiento FMCA descrito
anteriormente en las líneas celulares U-937 y RPMI
8226S. Los resultados mostraban una actividad varias veces menor
(mayor IC50; 0,61 y 2,9 \muM, respectivamente) para la forma
acetilada, comparada con J1 con un grupo amino libre, indicando una
preferencia para la última forma con respecto a la actividad
antitumoral.
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados globales demuestran una actividad
significativamente mayor de los nuevos compuestos que constituyen
la invención, en comparación con todos los compuestos de referencia
(melfalán, sarcolisina y P2). Además, los nuevos compuestos
demostraron también un espectro más amplio de actividad específica
para tipo de tumor, en comparación con los compuestos de referencia
con actividad documentada observada para muchos diagnósticos de
tumor sólido. Dado que estos compuestos también muestran una
actividad relativa similar o ligeramente mejor en células malignas
frente a células normales, evaluada tomando la proporción de IC50
obtenida en linfocitos malignos (leucemias linfocíticas crónicas)
frente a linfocitos normales, se tiene que considerar que el
potencial clínico de estos nuevos compuestos es elevado.
Claims (12)
1. Un di- o tripéptido de fórmula I
en la
que
R_{1} es alquiloxi, cicloalquiloxi, ariloxi,
arilaquiloxi, NH_{2}, alquilamino, cicloalquilamino o
arilamino;
R_{2} es independientemente NH_{2}, OH,
O-alquilo, N-alquilo,
O-acilo, NH-acilo,
N(CH_{2}CH_{2}Cl)_{2}, NO_{2}, F, CF_{3} o
H, y n es 1 ó 2; y
R_{3} es un aminoácido natural o modificado,
cíclico o aromático, o H; así como una de sus sales
farmacéuticamente aceptables.
2. Un di- o tripéptido según la reivindicación
1, de fórmula II
en la
que
R_{1} es alquiloxi, cicloalquiloxi, ariloxi,
arilalquiloxi, NH_{2}, alquilamino, cicloalquilamino o
arilamino;
R_{2} es NH_{2}, OH,
O-alquilo, N-alquilo,
O-acilo, NH-acilo,
N(CH_{2}CH_{2}Cl)_{2}, NO_{2}, F, CF_{3} o
H; y
R_{3} es un aminoácido cíclico o aromático,
natural o modificado, o H; así como sus sales farmacéuticamente
aceptables.
3. Un péptido según la reivindicación 1 ó 2 para
uso como medicamento.
4. Uso de un péptido según la reivindicación 1 ó
2 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de
tumores malignos.
5. Un péptido según la reivindicación 1 ó 2, en
la que R_{2} es F.
6. Un péptido según la reivindicación 2, en la
que el péptido es un dipéptido y R_{1} es alquiloxi; R_{2} es
F, CF_{3}, H, OH, O-alquilo, NO_{2},
N(CH_{2}CH_{2}Cl)_{2}, NH-acilo
o NH_{2}; y R_{3} es H.
7. Un péptido según la reivindicación 6, que es
éster etílico de
L-melfalanil-p-L-fluoro-fenil-alanina
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
8. Un péptido según la reivindicación 6, que es
éster isopropílico de
L-melfalanil-p-L-fluoro-fenil-alanina
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
9. Un péptido según la reivindicación 2, en la
que el péptido es un tripéptido y R_{1} es
alquil-oxi; R_{2} es F, CF_{3}, H, OH,
O-alquilo, NH-acilo, NO_{2},
N(CH_{2}CH_{2}Cl)_{2} o NH_{2}; y R_{3} es
un aminoácido cíclico o aromático, natural o modificado.
10. Un péptido según la reivindicación 9, que es
éster etílico de
L-prolil-L-melfalanil-p-fluoro-fenil-alanina
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
11. Composición farmacéutica para el tratamiento
de tumores malignos, caracterizada por que comprende al menos
un compuesto peptídico según una cualquiera de las reivindicaciones
1, 2 o 5-10, junto con al menos un vehículo y/o
excipiente faramacéuticamente aceptable.
12. Composición farmaceútica según la
reivindicación 11, para el tratamiento de cáncer de mama, cáncer de
pulmón, cáncer de ovario, leucemias, linfomas y mieloma
múltiple.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US21122700P | 2000-06-13 | 2000-06-13 | |
| SE2000102202 | 2000-06-13 | ||
| US211227P | 2000-06-13 | ||
| SE0002202A SE0002202D0 (sv) | 2000-06-13 | 2000-06-13 | New peptides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2341702T3 true ES2341702T3 (es) | 2010-06-25 |
Family
ID=20280067
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES01938945T Expired - Lifetime ES2341702T3 (es) | 2000-06-13 | 2001-06-11 | Derivados de melfalan y su uso como farmacos quimioterapeuticos del cancer. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1290011B1 (es) |
| JP (1) | JP4798930B2 (es) |
| AT (1) | ATE458746T1 (es) |
| AU (1) | AU2001264515A1 (es) |
| CA (1) | CA2408501C (es) |
| DK (1) | DK1290011T3 (es) |
| ES (1) | ES2341702T3 (es) |
| PT (1) | PT1290011E (es) |
| SE (1) | SE0002202D0 (es) |
| WO (1) | WO2001096367A1 (es) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1374907A3 (en) * | 2002-06-24 | 2004-01-07 | Ghanem Elias c/o Institut Jules Bordet Ghanem | Drug transport and delivery system |
| DE10239832A1 (de) * | 2002-08-29 | 2004-03-18 | Lipal Biochemicals AG c/o University of Zurich | Sarcolysyl-Derivate und Verfahren zu deren Herstellung |
| WO2011011865A1 (en) * | 2009-07-29 | 2011-02-03 | 3R Valo, S.E.C. | Anticancer agents based on amino acid derivatives |
| WO2011078782A1 (en) * | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Oncopeptides Ab | A composition comprising of melphalan derivatives and gemcitabine or etoposide useful in the treatment of cancer |
| EP2701720B1 (en) | 2011-04-28 | 2017-07-12 | Oncopeptides AB | Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides |
| LT3228319T (lt) * | 2011-04-28 | 2020-09-25 | Oncopeptides Ab | Liofilizuotas citotoksinių dipeptidų preparatas |
| LT2928463T (lt) * | 2012-10-26 | 2020-02-10 | Oncopeptides Ab | Liofilizuoti melfalano flufenamido preparatai |
| JP6284945B2 (ja) | 2012-10-26 | 2018-02-28 | オンコペプティデス エービーＯｎｃｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ＡＢ | メルファランフルフェナミドの凍結乾燥製剤 |
| GB201507903D0 (en) | 2015-05-08 | 2015-06-24 | Oncopeptides Ab | Process for preparation of nitrogen mustard derivatives |
| GB201521217D0 (en) * | 2015-12-01 | 2016-01-13 | Oncopeptides Ab | Dosage regimens |
| CN108864251B (zh) * | 2018-06-30 | 2022-06-14 | 大连理工大学 | 一类氨肽酶n激活的药物前体化合物及其制备方法和应用 |
| ES2942468T3 (es) * | 2018-10-18 | 2023-06-01 | Oncopeptides Ab | Compuestos que contienen deuterio |
| EP3946309A1 (en) | 2019-04-03 | 2022-02-09 | Oncopeptides AB | Treatment of al amyloidosis with melflufen |
| GB201905477D0 (en) * | 2019-04-17 | 2019-05-29 | Oncopeptides Ab | Novel formulations |
| WO2021053185A1 (en) | 2019-09-20 | 2021-03-25 | Oncopeptides Ab | Melflufen formulations and their use in the treatment or prophylaxis of osteosarcoma |
| WO2022167087A1 (en) * | 2021-02-05 | 2022-08-11 | Oncopeptides Ab | Peptidase enhanced cytotoxic dipeptides |
| EP4083052A1 (en) | 2021-04-29 | 2022-11-02 | BKmdcl AB | Peptide conjugates of melphalan for the treatment of cancer |
| WO2022253894A1 (en) | 2021-06-01 | 2022-12-08 | Synthon B.V. | Process for making melflufen or a salt thereof |
| EP4366721A1 (en) | 2021-07-08 | 2024-05-15 | Oncopeptides Innovation AB | Melflufen for use in the treatment of multiple myeloma |
| GB202109896D0 (en) | 2021-07-08 | 2021-08-25 | Oncopeptides Ab | Novel treatments |
| GB202109895D0 (en) | 2021-07-08 | 2021-08-25 | Oncopeptides Ab | Novel treatments |
| GB202109894D0 (en) | 2021-07-08 | 2021-08-25 | Oncopeptides Ab | Novel treatments |
| GB202204171D0 (en) | 2022-03-24 | 2022-05-11 | Oncopeptides Ab | Novel formulations |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB750155A (en) | 1953-03-17 | 1956-06-13 | Nat Res Dev | Substituted alanines |
-
2000
- 2000-06-13 SE SE0002202A patent/SE0002202D0/xx unknown
-
2001
- 2001-06-11 ES ES01938945T patent/ES2341702T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-11 AU AU2001264515A patent/AU2001264515A1/en not_active Abandoned
- 2001-06-11 WO PCT/SE2001/001318 patent/WO2001096367A1/en active Application Filing
- 2001-06-11 EP EP01938945A patent/EP1290011B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-11 AT AT01938945T patent/ATE458746T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-06-11 JP JP2002510508A patent/JP4798930B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-11 DK DK01938945.1T patent/DK1290011T3/da active
- 2001-06-11 CA CA2408501A patent/CA2408501C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-11 PT PT01938945T patent/PT1290011E/pt unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2001096367A1 (en) | 2001-12-20 |
| DK1290011T3 (da) | 2010-06-07 |
| EP1290011A1 (en) | 2003-03-12 |
| CA2408501C (en) | 2011-01-18 |
| SE0002202D0 (sv) | 2000-06-13 |
| JP4798930B2 (ja) | 2011-10-19 |
| JP2004503564A (ja) | 2004-02-05 |
| ATE458746T1 (de) | 2010-03-15 |
| CA2408501A1 (en) | 2001-12-20 |
| PT1290011E (pt) | 2010-05-11 |
| AU2001264515A1 (en) | 2001-12-24 |
| EP1290011B1 (en) | 2010-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2341702T3 (es) | Derivados de melfalan y su uso como farmacos quimioterapeuticos del cancer. | |
| ES2200902T3 (es) | Profarmacos de carbamato inhibidores de la impdh. | |
| CA2703491C (en) | Tubulysins and processes for preparing | |
| ES2226482T3 (es) | Inhibidores de trombina. | |
| ES2272763T3 (es) | Derivados de dolastatina 10. | |
| ES2258149T3 (es) | Derivados de acido 2-((n-(2-amino-3-(heteroaril o aril)propionil)aminoacil)amino)alquilboronico. | |
| CA2338524A1 (en) | Inhibitors of urokinase and blood vessel formation | |
| PT2178888E (pt) | Inibidores do proteassoma | |
| PT88992B (pt) | Processo para a preparacao de compostos contendo fosforo uteis como inibidores de colagenase | |
| ES2659778T3 (es) | Conjugado farmacéutico de polietilenglicol-oligopéptido de aminoácidos-irinotecán y composición farmacéutica del mismo | |
| KR20110022594A (ko) | 신규한 이중 표적화 항종양성 접합체 | |
| CZ246697A3 (en) | Proline derivatives, process of their preparation and pharmaceutical composition containing thereof | |
| PT1276491E (pt) | Análogos de tamandarino e didemnina e seus métodos de preparação e de utização | |
| US20040097421A1 (en) | Melphalan derivatives and their use as cancer chemotherapeutic drugs | |
| WO2021177336A1 (ja) | ペプチド及び細胞膜透過剤 | |
| US5763464A (en) | Retroviral agents containing anthranilamide, substituted benzamide and other subunits, and methods of using same | |
| AU750561B2 (en) | Amino acid amidinohydrazones, alkoxyguanidines and aminoguanidines as protease inhibitors | |
| RU2257379C2 (ru) | Производные n-деацетилтиоколхицина и содержащие их фармацевтические композиции | |
| CN115703755B (zh) | 2h-苯并吡喃-2-酮衍生物及其用途 | |
| ES2261422T3 (es) | Derivados de amida de acido 2-amino-3-hidroxi-4-terc-leucilamino-5-fenilpentanoico. | |
| EP3431478B1 (en) | Micromolecular lung-targeting drug | |
| EP3378495A1 (en) | Composition comprising novel glutamic acid derivative and block copolymer, and use thereof | |
| EP0173510A2 (en) | Tripeptide derivatives for use as anti-hypertensive agents | |
| JPH05508851A (ja) | アスパラギン酸プロテアーゼ類の抑制薬 | |
| CN102875651B (zh) | 抗肿瘤靶向激活的多肽阿霉素、其制备方法和用途 |