PT1276491E - Análogos de tamandarino e didemnina e seus métodos de preparação e de utização - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "ANÁLOGOS DE TAMANDARINO E DIDEMNINA E SEUS MÉTODOS DE PREPARAÇÃO E DE UTILIZAÇÃO"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A didemnina B é um depsipéptido macrocíclico isolado de uma espécie de tunicado marinho. A didemnina B apresenta actividades antiviral, imunossupressora e antitumoral potentes in vitro e in vivo e foi o primeiro produto natural marinho a entrar em ensaios clinicos contra cancros em humanos (Li et al., 1992,

Studies in Natural Products Chemistry, 10: 241-302/ Sakai et al., 1996, J. Med. Chem. 39: 2819-2834; Wipf, 1995, Chem. Rev. 95: 2115-2134) . A didemnina B é uma didemnina, uma familia de compostos que inibem fortemente a síntese proteica e a progressão do ciclo celular, e induzem a apoptose mais rapidamente que qualquer outro produto natural que tenha sido até hoje (Grubb et al., 1995, Biochem. Biophys. Res. Commun. 215: 1130-1136; Johnson et al., 1996, FEBS Lett. 383: 1-5;

Johnson et al., 1999, Immunol. Cell Biol. 77: 242-248; Johnson et al., 1999, J. Cell. Biochem. 72: 269-278). Outros membros desta família de compostos, incluindo a didemnina M e desidrodidemnina B, apresentam, também, efeitos citotóxicos e citostáticos. A tamandarina A (também designada { (2S)Hiv2}didemnina B) é uma congénere de didemnina de ocorrência natural que foi recentemente isolado de tunicado marinho. A tamandarina A apresenta actividade biológica que é análoga às actividades 1 apresentadas pela didemnina B. Por exemplo, a tamandarina A é um inibidor potente da síntese proteica, do crescimento celular e da tumorigénese. A tamandarina A apresenta actividade in vitro superior contra o carcinoma pancreático do que a de didemnina B (Liang et al., 1999, Org. Lett. 1: 1319-1322). Uma limitação significativa na utilização da tamandarina A para investigação ou para aplicações práticas é o fornecimento limitado da tamandarina A que está disponível de fontes naturais e a dificuldade e custo do isolamento deste produto. Persiste a necessidade de um método para a síntese de tamandarina A e de outros análogos de didemnina (incluindo análogos da desidrodidemnina).

Apesar da potência de didemnina B em estudos isolados, a sua eficácia clínica está dificultada pelos efeitos secundários associados com as doses terapêuticas do composto. Tal como com muitos agentes antiproliferativos, a didemnina B apresenta uma janela terapêutica relativamente estreita. Apesar de didemnina M e da desidrodidemnina B apresentarem potencial terapêutico aumentado relativamente à didemnina B, persiste ainda a necessidade de agentes antiproliferativos que apresentem uma toxicidade inferior às doses terapêuticas (i. e., análogos de didemnina tendo um índice terapêutico superior). A presente invenção as necessidades acima enumeradas.

BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO A invenção refere-se a análogos de tamandarina e de didemnina que têm um resíduo de desoxoprolina ou um resíduo de 2

desidroprolina na sua estrutura. Numa forma de realização, a invenção refere-se a uma composição compreendendo um análogo de tamandarina tendo a estrutura de fórmula I

Na fórmula I, R1 é seleccionado do grupo consistindo de -H, - (terc-butiloxicarbonilo), -leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina, -(N-metil)leucina-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato, 3 -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo) , -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato. R2 e R3 na fórmula I, podem ser porções separadas ou podem, em conjunto, ser uma única porção. Quando R2 e R3 são porções separadas, R3 é um grupo metilo ou um radical hidreto e R2 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina, uma cadeia lateral de valina, uma cadeia lateral de alanina, uma cadeia lateral de norleucina, uma cadeia lateral de norvalina, cadeia lateral de leucina, uma cadeia lateral 4

histidina, uma cadeia lateral de triptofano, uma cadeia lateral de arginina, uma cadeia lateral de lisina, um segundo fluoróforo e um substituinte tendo a estrutura de fórmula III

Quando R2 e R3 são, em conjunto, um substituinte único, este substituinte tem a estrutura de fórmula IV

m

Nas fórmulas III e IV, cada um de R5, R6, R7, R8 e R9 é seleccionado, independentemente, do grupo consistindo de -H, -OH, -OCH3, -CO(C6H5), Br, -I, -F, -Cl, -CH3, e -C2H5; . R4 na fórmula I é uma cadeia lateral de isoleucina. Também, na fórmula I, X é -0- ou -(NH)-, Y é um radical hidreto ou um grupo protector de hidroxilo e R10 é uma cadeia lateral de 5 leucina ou uma cadeia lateral de lisina. O análogo de didemnina é um análogo diferente de tamandarina A (i. e., { (2S) Hiv2}didemnina B) . Numa forma de realização, cada porção de prolina ou lactato que está presente em R1 apresenta estereoquimica (S) . Numa outra, cada porção capaz de possuir estereoquimica em R1 está presente na sua forma de ocorrência natural (i. e., a forma (S) para resíduos de aminoácido e lactato. Pensa-se que o ciclopentanoato ocorre naturalmente na estereoquimica (S).

Noutra forma de realização, a invenção refere-se a uma composição compreendendo um análogo de didemnina tendo a estrutura de fórmula XXI

Na fórmula XXI, cada um de R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 e R10 tem o mesmo significado como na fórmula I.

Nas classes preferidas de análogos de tamandarina e de desoxoprolina didemninas tendo a fórmula de I e XXI, respectivamente, R2 tem a estrutura da fórmula III, R3 é metilo, 6 R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, cada de R5, R6, R8 e R9 é um radical hidreto, R7 é metoxilo, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é um radical hidreto. Os exemplos de análogos de tamandarina e de didemninas que estão incluídas na invenção são os compostos 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 133, 134, 136, 137, 139, 141, 142, 143, 201, 202, 203 e 204, os quais são apresentados nas Figuras.

Numa forma de realização, o análogo de tamandarina ou de didemnina tem um substituinte fotorreactivo, tal com uma porção R2 tendo a estrutura

Numa forma de realização, o análogo de tamandarina ou de didemnina tem um substituinte fotorreactivo, tal com uma porção R2 tendo a estrutura

0 substituinte fotorreactivo pode estar directamente ligado ao análogo ou pode ser ligado através de um agente de ligação tendo uma cadeia que compreende 1 a cerca de 13 ou mais átomos de carbono e, opcionalmente, tendo porções de amina secundária ou de amida na cadeia. 7

Numa outra forma de realização, o análogo de tamandarina ou de didemnina tem ligado um fluoróforo, tal como um análogo ao qual está ligado um fluoróforo na porção amino ómega de uma cadeia lateral de lisina em R2 ou em R10. Um exemplo da estrutura de um tal análogo fluorescente de didemnina é apresentado na Figura 29. Em alternativa, o análogo de didemnina pode ser ligado (e. g., covalentemente) com um suporte. Na maioria das formas de realização, Y nas fórmulas I e XXI é, de um modo preferido, um radical hidreto. A invenção inclui uma forma de realização de um análogo de tamandarina ou de didemnina que pode ser activado (ou a actividade pode ser aumentada) por clivagem enzimática de uma porção ligada ao análogo. Por exemplo, a invenção inclui composições que compreendem um análogo tendo uma estrutura seleccionada do grupo consistindo das fórmulas (a)-(d), como se segue. (a)

(b)

(c)

9

Nas fórmulas (a) - (d) , R2, R3, R4, R10, X e Y têm as mesmas identidades como descritas acima para a fórmula I. R13 é uma porção enzima-clivável que é clivável por um enzima, tal como

uma seleccionada do grupo consistindo de uma carboxipeptidase, uma beta-lactamase, uma beta-galactosidase, uma penicilina V-amidase, uma citosina desaminase, uma nitrorredutase, uma fosfatase alcalina, uma beta-glucuronidase, e um anticorpo catalítico. Como forma de exemplo, R13 pode ter a estrutura de qualquer das fórmulas V e VI

Os exemplos de tais análogos incluem o composto 131 e o composto 132.

A invenção também se refere a composições que compreendem um fragmento de didemnina tendo a estrutura da fórmula VII 10

Na fórmula VII, Y é um radical hidreto ou um grupo protector de hidroxilo, X é -0- ou -(NH)-, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina ou uma cadeia lateral de valina e APG é um grupo protector de amina. R11 pode ser qualquer de -OH, NH2, -O(alilo), -0(pentafluorofenilo) e um substituinte tendo a estrutura da fórmula VIII

Na fórmula VIII, R1, R2, R3 e R10 têm as mesmas identidades como descritas acima para a fórmula I e R12 pode ser um radical hidreto ou uma porção -2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo.

Os análogos de tamandarina e didemnina aqui descritos podem ser formulados, juntamente com um ou mais veiculos farmaceuticamente aceitáveis, para preparar preparações farmacêuticas. Estas preparações podem ser administradas a uma célula (i. e., in vitro ou in vivo) de mamifero (e. g., humano) 11 de modo a inibir síntese proteica, inibir o crescimento, inibir a proliferação, inibir a génese tumoral ou aumentar a apoptose na célula ou em um ou mais tecidos de um mamífero. A invenção inclui ainda um processo de preparação de um fragmento de didemnina. Este processo compreende a ligação de um primeiro reagente tendo a estrutura

e um segundo reagente tendo a estrutura

ΟΥ O

OH

HN ΑΡΘ para se obter um primeiro fragmento de didemnina tendo a estrutura

12

Nesta estrutura, X é -0- ou -(NH)-, APG é um grupo protector de amina; Y é um grupo protector de hidroxilo (e. g., um grupo triisopropilsililo) e R4 pode ser uma cadeia lateral de isoleucina ou uma cadeia lateral de valina. 0 primeiro fragmento de didemnina pode ser hidrolisado para se obter um segundo fragmento de didemnina tendo a estrutura

Pode ser adicionado um activador (ACT) à porção carbonilo do segundo fragmento de didemnina para se obter um terceiro fragmento de didemnina tendo a estrutura

0 terceiro fragmento de didemnina pode ser ligado com um terceiro reagente que tem a estrutura

13 para se obter um quarto fragmento de didemnina tendo a estrutura

Nestas estrutura, R2 e R3 têm as identidades descritas acima para a fórmula I, APG é um grupo protector de amina, SEM é um grupo 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo e R10 é uma cadeia lateral de leucina ou uma cadeia lateral de lisina. A invenção também se refere a um processo de preparação de um análogo de didemnina a partir do quarto fragmento de didemnina. Este processo compreende a remoção das porções SEM e CBZ do quarto fragmento de didemnina e ciclização do fragmento, para se obter um primeiro análogo de didemnina tendo a seguinte estrutura.

14 0 grupo APG (que pode, por exemplo, ser uma porção carbobenziloxilo ou uma porção terc-butiloxicarbonilo) pode ser removido do primeiro análogo de didemnina, para se obter um segundo análogo de didemnina tendo a estrutura

Este segundo análogo de didemnina pode ser ligada com um quarto reagente tendo a estrutura

O

HO

R 14 para se obter um terceiro análogo de didemnina tendo a estrutura 15

Nestas estruturas, R14 é pode ser um de - (terc-butiloxicarbonilo) , -leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina, -(N-metil)leucina-prolina lactato, -(N-metil)leucina-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-4-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), 16 -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato ou pode ser uma destas porções ligada com uma porção enzima-clivável que é clivável por um enzima, tal como um de uma carboxipeptidase, uma beta-lactamase, uma beta-galactosidase, uma penicilina V-amidase, uma citosina desaminase, uma nitrorredutase, uma fosfatase alcalina, uma beta-glucuronidase e um anticorpo catalítico. Se Y é um grupo protector de hidroxilo, então ele pode ser removido do terceiro análogo de didemnina (antes ou após adição de R14) , para se obter um quarto análogo de didemnina tendo a estrutura 17

A invenção refere-se, ainda, a um processo de preparação de análogos de tamandarina e didemnina contendo desoxo-prolina.

Estes processos utilizam processos conhecidos de preparação de análogos de tamandarina e didemnina e são modificados para incorporar um residuo de desoxo-prolina em vez de um resíduo de prolina do análogo. A invenção ainda se refere, também, a um processo de preparação de análogos de tamandarina e didemnina contendo desidro-prolina.

Estes processos utilizam processos conhecidos de preparação de análogos de tamandarina e didemnina e são modificados para incorporar um resíduo de desidro-prolina em vez de um resíduo de prolina do análogo. 18

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A Figura 1, compreendendo as Figuras IA e 1B, representa a estrutura da tamandarina A (i. e., { (2S)HIV2}didemnina B) . A

Figura IA é a estrutura da (-)tamandarina A (composto 101). A Figura 1B é a estrutura de um diastereómero (composto 102) da (-) tamandarina A. O centro quiral no qual estas duas moléculas diferem é indicado com uma seta.

A Figura 2, compreendendo as Figuras 2A e 2B, representa a estrutura da tamandarina M (i. e., { (2S) HIV2}didemnina M) . A

Figura 2A é a estrutura da (-)tamandarina M (composto 103) . A Figura 2B é a estrutura de um diastereómero (composto 104) da (-) tamandarina Μ. O centro quiral no qual estas duas moléculas diferem é indicado com uma seta.

A Figura 3, compreendendo as Figuras 3A e 3B, representa a estrutura da tamandarina B (i. e., { (2S) HIV2}didemnina B) . A

Figura 3A é a estrutura da (-)tamandarina B (composto 105). A Figura 3B é a estrutura de um diastereómero (composto 106) da (-) tamandarina B. O centro quiral no qual estas duas moléculas diferem é indicado com uma seta. A Figura 4, compreendendo as Figuras 4A, 4B, 4C e 4D, representa a estrutura de vários análogos fluorescentes do tipo tamandarina de didemninas. A Figura 4A é a estrutura do composto 107. A Figura 4B é a estrutura do composto 108. 0 centro quiral no qual diferem os compostos 107 e 108 é indicado com uma seta. A Figura 4C é a estrutura do composto 109. A Figura 4D é a estrutura do composto 110. O centro quiral no qual diferem os compostos 109 e 110 é indicado com uma seta. 19 A Figura 5, compreendendo as Figuras 5A e 5B, representa uma classe de análogos imobilizáveis do tipo tamandarina de didemninas. A Figura 5A é a estrutura de um análogo de didemnina de fórmula I aqui, onde R10 é uma cadeia lateral de lisina. A Figura 5B é a estrutura do análogo de didemnina da Figura 5A ligado a um suporte sólido (SS). A Figura 6, compreendendo as Figuras 6A e 6B, representa uma classe de análogos imobilizáveis do tipo tamandarina de didemninas. A Figura 6A é a estrutura do análogo de didemnina de fórmula I aqui, onde R1 é -leucina. A Figura 6B é a estrutura do análogo de didemnina da Figura 6A ligado com um suporte sólido (SS) . A Figura 7 é a estrutura do composto 115. A Figura 8 é a estrutura do composto 116. A Figura 9 é a estrutura do composto 117. A Figura 10 é a estrutura do composto 118. A Figura 11 é a estrutura do composto 119. A Figura 12 é a estrutura do composto 120. A Figura 13 é a estrutura do composto 121. A Figura 14 é a estrutura do composto 122. A Figura 15 é a estrutura do composto 123. 20 A Figura 16 é a estrutura do composto 124. A Figura 17 é A Figura 18 é A Figura 19 é A Figura 20 é A Figura 21 é A Figura 22 é a estrutura do composto 125. a estrutura do composto 126. a estrutura do composto 127. a estrutura do composto 128. a estrutura do composto 129. a estrutura do composto 130. A Figura 23 representa a clivagem enzimática da porção cefalosporina do análogo de didemnina 131 pela beta-lactamase, para se obter o composto 101. A Figura 24 representa a clivagem enzimática da porção glucosido do análogo de didemnina 132 pela beta-glucuronidase, para se obter o composto 101. A Figura 25, compreendendo as Figuras 25A e 25B, é um par de estruturas que ilustra a diferença estrutural entre a tamandarina A (101; Figura 25A) e a didemnina B (201; Figura 25B) . O núcleo macrociclico de 101 difere do de 201 em que o 101 contém uma porção alfa-hidroxiisovalerilo (Hiv) e o 201 contém uma porção alfa- (alfa-hidroxiisovaleril)-propionilo (Hip) na posição análoga, como indicado pelos parênteses e linhas ponteadas em cada uma das figuras. 21 A Figura 26, compreendendo as Figuras 26A-26E, representa um processo de síntese para gerar análogos de didemninas aqui descritas. A Figura 27, é a estrutura da (-) tamandarina A (i. e., {(2S)HIV2} didemnina B) , ilustrando a convenção numérica aqui utilizada e em Sakai et al. (1996, J. Med. Chem. 39:2819-2834) para análogos de didemnina. A Figura 28, compreendendo as Figuras 28A e 28B, representa a estrutura de um análogo de didemnina do tipo desidrotamandarina (i. e., { (2S) HIV2}desidrodidemnina B) . A Figura 28A é a estrutura da (-)desidrotamandarina (composto 133) . A Figura 28B é a estrutura de um diastereómero da (-) desidrotamandarina (composto 134). 0 centro quiral no qual estas duas moléculas diferem é indicado com uma seta. A posição na qual estes análogos do tipo desidrotamandarina de didemnina diferem dos análogos do tipo tamandarina de didemnina é indicada com um asterisco. A Figura 29 é a estrutura de um análogo fluorescente do tipo da desidrotamandarina de didemnina. "FL" é um fluoróforo. A Figura 30 é a estrutura do composto 136. A Figura 31 é a estrutura do composto 137. A Figura 32 representa um análogo do tipo da desidrotamandarina da didemnina ligado com um suporte sólido (SS) . 22 A Figura 33 é a estrutura do composto 139. A Figura 34 é a estrutura do composto 140. A Figura 35, compreendendo as Figuras 35A e 35B, representa a estrutura da desidrotamandarina B, também designada {(2S)Hiv2, Norstal1}didemnina B. A Figura 35A é a estrutura da (-)desidrotamandarina B (composto 141). A Figura 35B é a estrutura de um diastereómero da (-)desidrotamandarina B (composto 142) . 0 centro quiral no qual estas duas moléculas diferem é indicado com uma seta. A Figura 36 é a estrutura do composto 143 A Figura 37, compreendendo as Figuras 37A e 37B, representa um processo de síntese para gerar (-)desidrotamandarina (í. e., { (2S)HIV2}desidrodidemnina B, composto 133). A Figura 38, compreendendo as Figuras 38A, 38B e 38C, representa a processo de síntese para gerar análogos fluorescentes de didemnina aqui descritos.

Figura 39 é a estrutura de um análogo preferido da desoxo-prolina tamandarina designado como composto 201a.

Figura 40 é a estrutura um análogo preferido da desoxo-prolina análogo de didemnina designado como composto 202. A Figura 41, a Figura 42 e a Figura 43 representam, cada, um processo de preparação de porções de cadeias laterais 23 contendo desoxo-prolina para análogos de tamandarina ou de didemnina. A Figura 44 representa um processo de preparação de porções de cadeias laterais contendo desidro-prolina para análogos de tamandarina ou de didemnina. A Figura 45 é a estrutura de um análogo preferido de desidro-prolina tamandarina designado como composto 203. A Figura 46 é a estrutura de um análogo preferido de desidro-prolina didemnina designado como composto 204. A Figura 47, a Figura 48, a Figura 49 e a Figura 50 representam, cada, um processo de preparação de um análogo de didemninas tendo porções de cadeias laterais fotorreactivas.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A invenção refere-se a análogos de tamandarina e didemnina, incluindo análogos que têm um residuo de desoxo-prolina ou um residuo de desidro-prolina n sua estrutura. A invenção inclui composições compreendendo tais análogos e processos de preparação e utilização destes análogos. Estes análogos são úteis para, entre outras coisas, inibirem a síntese proteica, o crescimento celular, a proliferação celular e a génese tumoral. Os análogos da invenção podem, também, exibir actividades anti-viral, antitumoral, indutora da apoptose e imunossupressora em animais, incluindo em humanos. A invenção inclui composições compreendendo um análogo de tamandarina tendo a estrutura

em que R1, R2, R3, R4, R10, X e Y têm as identidades aqui descritas. Exemplos de análogos de acordo com esta fórmula são apresentados nas figuras. A invenção também inclui composições compreendendo um análogo de didemnina tendo a estrutura

em que R1, R2, R3, R4, R10, X e Y têm as identidades aqui descritas. 25

Definições

Como aqui utilizado, cada um dos seguintes termos tem o significado associado a ele nesta secção.

Os artigos "um" e "uma" são aqui utilizados para se referir a um ou a mais de um (i. e., a pelo menos um) do objecto gramatical do artigo. Como forma de exemplo, "um elemento" significa um elemento ou mais de um elemento.

Como aqui utilizado, residuos de aminoácido são representados pelos seus nomes completos, pelo código de três letras que lhes são correspondentes ou pelo código de uma letra que lhes são correspondentes, como indicado pelo seguinte:

Nome completo Código de três letras Código de uma letra Ácido aspártico Asp D Ácido glutâmico Glu E Lisina Lys K Arginina Arg R Histidina His H Tirosina Tyr Y Cisterna Cys C Asparagina Asn N Glutamina Gin Q Serina Ser S Treonina Thr T Glicina Gly G Alanina Ala A Valina Vai V Leucina Leu L 26

Nome completo (continuação) Código de três letras Código de uma Isoleucina Ile I Metionina Met M Prolina Pro P Fenilalanina Phe F Triptofano Trp W

Como aqui utilizado, o termo " cadeia lateral de aminoácido" refere-se a uma porção compreendendo todos os átomos de um aminoácido excluindo o átomo de carbono alfa, um átomo de hidrogénio ligado ao carbono alfa, os átomos da porção carboxilo e a porção amina alfa. Como forma de exemplo, uma "cadeia lateral de alanina" refere-se a um grupo metilo e uma "cadeia lateral de valina" refere-se a um grupo 2-propilo. "Inibição" de um processo numa célula (e. g., inibição da síntese proteica, inibição of crescimento celular, inibição do ciclo de progressão celular, inibição da proliferação celular, ou inibição da génese tumoral) significa redução (e. g., por, pelo menos, 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95% ou, mesmo, 100%) da velocidade a qual o processo se realiza, redução (e. g., por, pelo menos, 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95% ou, mesmo, 100%) da velocidade à qual o processo é iniciado, ou ambas. "Melhoramento" de um processo numa célula (e. g·. melhoramento da apoptose) significa aumento (e. g., por, pelo menos, 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95% ou, mesmo, 100%) da velocidade à qual o processo se realiza, aumento (e. g., por, pelo menos, 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95% ou, mesmo, 100%) a velocidade à qual o processo é iniciado, ou ambos. 27

Como aqui utilizado, o termo "veiculo farmaceuticamente aceitável" significa uma composição química com a qual um análogo ou fragmento de didemnina, como aqui descrito, pode ser combinado e o qual, após a combinação, pode ser administrado a um indivíduo (e. g., um humano ou outro animal).

Como aqui utilizado, o termo "fisiologicamente aceitável" associado a éster ou sal significa uma forma éster ou salina de um análogo ou fragmento didemnina, como aqui descrito, a qual é compatível com outros ingredientes de uma composição farmacêutica e a qual não é deletério para um indivíduo a quem a composição é para ser administrada.

Como aqui utilizado, "administração parentérica" de uma composição farmacêutica inclui qualquer via de administração caracterizada por abertura física de um tecido de um indivíduo e administração da composição farmacêutica através da abertura no tecido. Assim, a administração parentérica inclui, mas não está limitada a administração de uma composição farmacêutica por injecção da composição, por aplicação da composição através de uma incisão cirúrgica, por aplicação de uma composição através de uma ferida não cirúrgica que penetra o tecido, e semelhantes. Em particular, a administração parentérica pode incluir, mas não está limitada a injecção subcutânea, intraperitoneal, intramuscular, intraesternal e técnicas de infusão de diálise do rim.

Como aqui utilizado, o termo "actividade antiviral" significa a prevenção da replicação de um vírus de uma célula, prevenção da infecção da célula por um vírus, ou reversão de um efeito fisiológico da infecção da célula pelo vírus. Um agente antiviral é uma composição de matéria a qual quando cedida a uma 28 célula, apresenta actividade antiviral. Os agentes antivirais são bem conhecidos e descritos literatura. Como forma de exemplo, o AZT (zidovudina, Retrovir® Glaxo Wellcome Inc., Research Triangle Park, NC) é um agente antiviral o qual se acredita prevenir a replicação do HIV em células humanas.

Como aqui utilizado, uma porção ou residuo de "desoxo-prolina" é uma porção química que tem a seguinte estrutura.

Como aqui utilizado, uma porção ou resíduo "desidro-prolina" é uma porção química que tem a seguinte estrutura.

Descrição A presente invenção refere-se a análogos de tamandarina e didemnina, incluindo aqueles tendo uma porção desoxo-prolina ou uma desidro-prolina na sua estrutura (e, claro, aquelas que não 29 têm uma porção desoxo-prolina ou uma desidro-prolina na sua estrutura). Estes análogos exibem potentes propriedades farmacológicas quando administrados a humanos e outros mamíferos. A titulo de exemplo, estes compostos podem inibir a sintese proteica e o crescimento e proliferação celular. Estes compostos podem, também, melhorar a apoptose em células. Estas propriedades tornam os compostos úteis para o tratamento de uma variedade de distúrbios que são caracterizados por um ou mais de sintese proteica aberrante, crescimento celular aberrante, proliferação celular aberrante e apoptose aberrante. Exemplos de tais distúrbios incluem génese tumoral, crescimento tumoral, metástases tumorais, infecção de uma célula por um virus e replicação de um virus dentro de uma célula.

Entre as composições das invenções estão as que compreendem um análogo de tamandarina tendo a estrutura da fórmula I ou um análogo de didemnina tendo a estrutura da fórmula XXI.

30

0 substituinte R1 de fórmulas I e XXI pode ter uma porção desoxo-prolina na sua estrutura e pode, por exemplo, ser um átomo de hidrogénio ou um grupo protector de amina adequado para a protecção de aminoácidos. Esses grupos de protecção são conhecidos na técnica e referidos ao longo desta divulgação. Exemplos de grupos de protecção adequados podem ser encontrados em referências tais como Green e Wutz (1999, Protecting Groups Organic Synthesis, Wiley, New York) e Bodansky (1993, Principies of Peptide Synthesis, Springer, Berlin). Em alternativa, o substituinte R1 pode ser um resíduo de aminoácido (e. g., um resíduo de leucina) ou um polipéptido compreendendo um ou mais resíduos de aminoácido. Exemplos de tais resíduos e polipéptidos incluem - (N-metil)leucina, - (N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), - (N-metil)leucina-prolina, - (N-metil)leucina-prolina-lactato, 31 (N-metil)leucina-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, (N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, (N-metil)leucina-prolina-lactato-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-prolina-(N-metil)alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil)alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desidro-prolina, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e (N-metil)leucina-desidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato. 32

Exemplos adicionais de substituintes R1 alternativos incluem péptidos que compreendem um fluoróforo (e. g., rodamina ou coumarina), um residuo de aminoácido, um polipéptido, um grupo enzimaticamente clivável ou outra porção quimica ligada (e. g., ligada covalentemente) com um suporte (e. g., uma placa de vidro ou de silica, uma esfera de agarose ou outro polímero, etc.). 0 fluoróforo ou grupo enzimaticamente clivável pode estar directamente ligado com o análogo ou pode estar ligado a este com um agente de ligação contendo 1 até cerca de 13 ou mais átomos de carbono (opcionalmente incluindo um ou mais porções de amina secundária ou amida). Quando R1 compreende um residuo de N-metil-leucina, o átomo de carbono alfa desse residuo pode ter estereoquimica (R) ou (S). Outros resíduos de aminoácido dentro de R1 podem ter estereoquimica (R) ou (S) , mas, de um modo preferido, têm estereoquimica (S) no seu átomo de carbono alfa. Quando R1 compreende um residuo de lactato, o residuo de lactato é, de um modo preferido, um residuo de (S)-lactato. Numa forma de realização preferida, cada outro residuo de aminoácido (se presente) dentro de R1 que não um residuo de leucina (ou N-metil-leucina) , ligado directamente ao átomo de azoto do anel da fórmula I ou XXI tem estereoquimica (S). R3 pode ser -CH3 e -H. Em alternativa, R3 pode, juntamente com R2, ser um único substituinte. 0 substituinte R2 pode ser uma cadeia lateral de aminoácido, tal como uma cadeia lateral de isoleucina (i. e., uma porção 2-butilo, de um modo preferido, tendo estereoquimica (R)), uma cadeia lateral de valina (i. e., uma porção 2-propilo), uma cadeia lateral de alanina (i. e., uma porção metilo) , uma cadeia lateral de norleucina (i. e., uma porção 1-butilo), uma cadeia lateral norvalina (i. e., uma porção 1-propilo), uma cadeia 33 lateral de leucina (i. e., uma porção isobutilo, de um modo preferido, tendo estereoquímica (S)), uma cadeia lateral de fenilalanina (i. e., uma porção fenilmetilo), uma cadeia lateral de histidina (i. e., uma porção 4-metil-imidazole), uma cadeia lateral de triptofano (i. e., uma porção 3-metil-indole), uma cadeia lateral de tirosina (i. e., uma porção 4-hidroxifenilmetil), uma cadeia lateral de arginina (i. e., uma porção 4-guanidil-butilo) e uma cadeia lateral de lisina (i. e., uma porção 4-aminobutilo).

Um substituinte R2 pode compreender um fluoróforo (e. g., um fluoróforo ligado com uma das cadeia laterais de aminoácido descritas acima). Adicionalmente, o substituinte R2 pode ter a estrutura de fórmula III

(SM).

Numa forma de realização alternativa, R2 e R3 são, em conjunto, um substituinte tendo a estrutura de fórmula IV 34

Nas fórmulas III e IV, cada um de R5, R6, R7, R8 e R9, independentemente, pode ser um substituinte seleccionado do grupo consistindo de H, -OH, -OCH3, -CO(C6H5), -Br, -I, -F, -Cl, -CH3 e -CH2CH3. R4 pode ser uma cadeia lateral de isoleucina ou uma cadeia lateral de valina. X pode ser -0- ou -(NH)-. Y pode ser -H ou um grupo protector de hidroxilo. Exemplos de grupos de protecção de hidroxilo que podem estar presentes em Y incluem uma porção sililo substituída com alquilo, uma porção sililo substituída com arilo ou um silano substituído com ambas as porções alquilo e arilo. Um exemplo de um grupo de protecção de hidroxilo é uma porção triisopropilsililo. Outros grupos de protecção de hidroxilo que pode ser utilizados em Y na fórmula I estão descritos em referências, tal como Green e Wutz (1999, Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York). R10 pode ser uma cadeia lateral de aminoácido, tal como uma cadeia lateral de leucina ou uma cadeia lateral de lisina. Em alternativa, R10 pode ser um aminoácido ou outra porção química 35 que é ligada com (e. g., ligada covalentemente) um suporte (e. g., um suporte sólido). Um exemplo de um suporte com um análogo tendo a estrutura de fórmula I a ele ligada é representada na Figura 5B.

Um outro grupo de composições incluídas na invenção são aquelas que compreendem um análogo de tamandarina tendo a estrutura seleccionada do grupo consistindo das fórmulas (a)-(d), apresentadas acima.

Cada um de R2, R3, R4, R10, X e Y tem o mesmo significado nas fórmulas (a) -(d) que tem nas fórmulas I e XXI.

Nas fórmulas (a) - (d) , R13 pode ser hidrogénio ou uma porção quimica que pode ser enzimaticamente clivável (i. e., na porção enzima-clivável) ou fotorreactiva. Como aqui utilizado, uma porção enzima-clivável pode incluir qualquer porção química que pode ser clivada (í. e., quimicamente removida) na presença de um enzima específico. Exemplos de enzimas capazes de remoção química de uma porção enzima-clivável incluem carboxipeptidases, beta-lactamase, beta-galactosidase, penicilina V-amidase, citosina desaminase, nitrorredutase, fosfatase alcalina, beta-glucuronidase e anticorpos catalíticos. Exemplos de porções enzima-cliváveis que pode ser incorporadas num composto aqui descrito incluem cefalosporinas, beta-glucosidos, fosfato,

pirofosfato, beta-D-galactosidos, nitrobenzamidina, citosina, carbamatos, péptidos e aminoácidos. Em alternativa, R13 pode ser uma porção enzima-clivável, tais como um dipéptido ligado a glutamina-piroglutamato, ou uma porção tendo a estrutura de fórmula V ou fórmula VI 36

Como forma de ilustração, no composto 131, representado na Figura 23, R13 é uma porção enzima-clivável tendo a estrutura de fórmula V (i. e., uma porção de cefalosporina) . A porção de cefalosporina do composto 131 pode ser clivada por contacto com a enzima beta-lactamase, para produzir o composto 101. Um substituinte R13 tendo a estrutura da fórmula VI pode, por exemplo, estar na forma de um sal de sódio ou potássio.

Após clivagem de uma porção enzima-clivável por um enzima, o análogo de didemnina resultante pode exibir uma ou mais das actividades fisiológicas aqui descritas. Um análogo de tamandarina ou de didemnina tendo a estrutura de uma das fórmulas (a)-(d), em que R13 é uma porção enzima-clivável, pode, opcionalmente, exibir estas actividades antes da clivagem da porção enzima-clivável. No entanto, numa forma de realização preferida, o análogo apresenta actividade terapêutica apenas após a clivagem da sua porção enzima-clivável. 37

Como descrito acima, um análogo de tamandarina ou de didemnina tendo a estrutura de uma das fórmulas I, XXI e (a)-(d) pode ser ligada com um suporte. A identidade do suporte não é critica. 0 suporte pode ser substancialmente qualquer material com o qual um tal análogo pode ser ligada (e. g., por ligação covalente através de uma das porções R10, R2, R3 ou R1) . Exemplos de materiais de suporte incluem silicatos, agarose reticulada, poliacrilamida, dextrano e alildextrano ligados. Tais materiais de suporte podem ser quimicamente modificados utilizando porções quimicamente reactivas de modo a facilitar a ligação covalente do análogo com o suporte. Modificações quimicas deste tipo são conhecidas na técnica e podem, por exemplo, incluir modificação de um suporte com grupos brometo de cianogénio, grupos epóxido, grupos mesilo e grupos carboxi-hexilo. Protocolos para a preparação de um suporte e subsequente ligação de um composto a um suporte estão disponíveis na técnica e podem ser modificadas por um especialista na técnica para utilização com um análogo de didemnina aqui descritos.

Exemplos de análogos de didemnina tendo a estrutura da fórmula I ou fórmula XXI, incluem o composto 21 e compostos 101-143, alguns dos quais estão representados em uma ou mais das Figuras 1-39.

No composto 21, R1 é - (terc-butiloxicarbonilo) , R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -OCH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -O-, e Y é - (triisopropilsililo) . 38

Análogos de tamandarina preferidos são baseados na estrutura da tamandarina A. Na tamandarina A ({ (2S) Hiv2} didemnina B; composto 101), R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -OCH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -O- e Y é -H.

Na tamandarina M ({ (2S) Hiv2} didemnina M; composto 103), R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato-glutaminapiroglutamato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -OCH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -O- e Y é -H.

Análogos de didemninas preferidos são baseados na estrutura de didemnina B. Na tamandarina B ({(2S)Hiv2, Norsta1} didemnina B; composto 105), R1 é - (N-metil-R-leucina)-prolina-lactato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -0CH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de valina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é -H.

No composto 107, R1 é -(N-metil-R-leucina)-glicina-(7-dimetilcoumarina-4-acetato) , R2 é uma cadeia lateral de O-metiltirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -OCH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -O- e Y é -H.

No composto 109, R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato-rodamina, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -OCH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia 39 lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -O- e Y é H.

No composto 111, R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -OCH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de lisina, X é -0- e Y é -H.

No composto 113, R1 é - (N-metil-R-leucina) , R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -0CH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é -H.

No composto 115, R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato, R2 é uma cadeia lateral de lisina, R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é -H.

No composto 123, R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato, R2 e R3, em conjunto, são um substituinte tetra-hidroisoquinolina tendo a estrutura de fórmula IV, R5, R6 e R8 são, cada, -H, R7 é -0CH3, R4 é uma cadeia lateral de valina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -O- e Y é -H.

No composto 124, R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -0CH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -(NH)- e Y é -H. 40

No composto 128, R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato- glutamina-ciclopentanoato, R2 é uma cadeia lateral de O-metiltirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -OCH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é -H.

No composto 129, R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-(N-metil-S-alanina)-leucina-piroglutamato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -OCH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é -H.

No composto 131, R1 é -(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -OCH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, R13 é uma porção cefalosporina clivável pela enzima beta-lactamase, X é -0- e Y é -H.

No composto 132, R1 é -(N-metil-R-leucina-(S)prolina-(S)lactato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5, R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -0CH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, R13 é uma porção beta-glucosido clivável pela enzima beta-glucuronidase, X é -0- e Y é -H.

No composto 134, R1 é -(N-metil-S-leucina)-(S)prolina-piruvato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5 R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -0CH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é -H. 41

No composto 137, R1 é -(N-metil-R-leucina)-(S)prolina- piruvato, R2 e R3, em conjunto, são um substituinte tetra-hidroisoquinolina tendo a estrutura da fórmula IV, R5, R6 e R8 são, cada, -H, R4é uma cadeia lateral de isoleucina, R10é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é -H.

No composto 138, R1 é -(N-metil-R-leucina)-(S)prolina- pirolina-piruvato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5 R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -0CH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de lisina, ligada covalentemente a um suporte, X é -0- e Y é -H.

No composto 142, R1 é -(N-metil-S-leucina)-(S)prolina- piruvato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tiprosina (i. e., R5 R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -0CH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de valina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é -H.

No composto 143, R1 é (N-metil-R-leucina)-(S)prolina-piruvato, R2 é uma cadeia lateral de O-metil-tirosina (i. e., R5 R6, R8 e R9 são, cada, -H e R7 é -0CH3) , R3 é -CH3, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -NH- e Y é -H. A semelhança de estrutura da didemnina B e da tamandarina A [i. e., { (2S)Hiv2}didemnina B; composto 101), é ilustrada na

Figura 25. A principal diferença estrutural, indicada por parênteses e linhas ponteadas, é na porção macrociclica destes compostos. A tamandarina A, apresentada na Figura 25A, contém uma porção alfa-hidroxiisovalerilo (Hiv) e a didemnina B, apresentada na Figura 25B, contém uma porção alfa-(alfa-hidroxiisovaleril)-propionilo (Hip). A estrutura macrociclica 42 mais simples da tamandarina A e de qualquer composto tendo a estrutura da fórmula I ou da fórmula XXI, pode ser sintetizada mais rapidamente que a estrutura macrociclica da didemnina B. Os compostos que têm a estrutura da fórmula I ou da fórmula XXI pode ser mais facilmente (e, geralmente, mais barata) preparados que os compostos que são idênticos excepto na presença de uma porção Hip em lugar de uma porção Hiv.

Outro grupo de compostos que podem exibir as actividades fisiológicas aqui descritas e que estão incluídas na invenção são compostos que correspondem a fragmentos de análogo de didemninas tendo a estrutura de fórmula I ou fórmula XXI. Os fragmentos que exibem esta actividade incluem aqueles que têm a estrutura de fórmula VII

11

R

Na fórmula VII, X, Y e R4 têm as identidades descritas para as fórmulas I e XXI e APG é um grupo protector de amina. Exemplos de grupos protectores de amina que pode estar presentes nos fragmentos activos incluem porções carbobenziloxilo (CBZ) e terc-butiloxicarbonilo (BOC). Outros grupos protectores de amina úteis estão descritos em referências, tais como Green e Wutz (1999, Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York) e Bodansky (1993, Principies of Peptide Synthesis, Springer, Berlin). 43

Na fórmula VII, R11 pode ser qualquer de -OH, NH2, -(O-alilo), e -(O-pentafluorofenilo). Em alternativa, R11 pode ser um substituinte tendo a estrutura apresentada na fórmula

VIII

Na fórmula VIII, R2, R3 e R10 têm as identidades descritas para as fórmulas I e XXI e APG é um grupo protector de amina, como descritos para a fórmula VII (embora não necessite de ser o mesmo APG como na fórmula VII) . R12 pode ser -H ou um grupo protector de hidroxilo, como aqui descrito. Compostos tendo a estrutura de fórmula VII que podem ser produzidos e utilizados como aqui descrito e incluem os compostos designados por 6, 17, 19 e 20 na Figura 26.

Processos de Utilização dos Compostos Aqui Descritos

Os análogos de didemnina e tamandarina aqui divulgados podem ser utilizados para afectar uma variedade de processos fisiológicos. Cada um destes tipos de compostos pode ser utilizado para inibir a síntese proteica. Além disso, os compostos podem ser utilizados para inibir a progressão de uma célula ao longo do ciclo celular. Embora sem estar restrita a qualquer teoria de funcionamento, acredita-se que a actividade 44 de inibição do ciclo celular pelos compostos pode ser atribuído à inibição da síntese proteica, à inibição de outras actividades celulares associadas com a replicação do DNA, divisão celular, ou alguma combinação destas actividades. Estes análogos de tamandarina e didemnina também induzem a apoptose nas células. As actividades fisiológicas atribuíveis a estes análogos de tamandarina e didemnina tornam estes compostos úteis para aliviar uma variedade de distúrbios em que um ou mais de crescimento, proliferação e sobrevivência celular são aberrantes. Exemplos de tais distúrbios incluem cancros em vários estados (e. g., génese tumoral, crescimento tumoral e metástases) e infecções virais em vários estádios (e. g., infecção de células com partículas virais, produção de partículas virais dentro da célula e sobrevivência de células infectadas por vírus).

Continuando a não estar restrito a qualquer teoria de funcionamento em particular, acredita-se que as actividades fisiológicas atribuíveis aos análogos de tamandarina e didemnina aqui descritas resultam de uma ou mais interacções entre esses análogos e pelo menos um componente celular. Esta(s) interacção(ões) leva(m), directamente ou indirectamente à resposta celular observada. Assim, a invenção envolve a utilização destes compostos para a identificação de um ou mais componentes celulares que contribuem para um fenótipo de distúrbio num indivíduo. A identificação de um tal componente celular pode indicar um esquema de tratamento eficaz para aliviar esse distúrbio. Exemplos de compostos úteis para este propósito incluem análogos que compreendem um substituinte fluorescente (e. g., em R1 ou R2) , uma porção química fotorreactiva, tal como a porção tendo a estrutura 45

ou uma porção ligada a um suporte.

Análogos de tamandarina e didemnina fluorescentes ou com outros marcadores detectáveis aqui descritos (bem como os seus fragmentos fisiologicamente activos) podem ser utilizados para identificar células nas quais esses análogos e fragmentos possam exercer os seus efeitos fisiológicos. Por exemplo, células que absorvem ou se ligam a um análogo fluorescente podem ser identificadas ou isoladas. A identificação ou isolamento de tais células pode ser utilizado para diagnosticar um distúrbio associado à presença de tais células. A identificação ou isolamento destas células pode, também, indicar quais dos análogos de tamandarina ou de didemninas são eficazes para o tratamento do distúrbio envolvendo as células.

Os análogos de tamandarina e didemnina aqui descritas podem ser utilizado para fins antiproliferativos, antitumorais, antivirais e imunossupressores. Por exemplo, estes compostos podem ser utilizados numa preparação farmacêutica ou medicamento para ser administrado a um doente afectado por um distúrbio no qual um ou mais de sintese proteica, crescimento, proliferação, e sobrevivência celular, são aberrantes. Tais medicamentos podem ser utilizados para o tratamento de distúrbios tais como cancros (e. g., cancro da mama), infecções virais, fúngicas, 46 parasitárias e bacterianas, distúrbios autoimunes, alergias, outros distúrbios hiperimunes e aterosclerose.

Exemplos de actividades antitumorais que podem pode ser exibidas pelos compostos aqui descritos incluem inibição de génese tumoral, inibição de metástases, inibição do crescimento celular tumoral, inibição da proliferação celular tumoral e melhoramento da apoptose da célula tumoral. A desidrodidemnina apresenta actividade contra linhas celulares derivadas de vários tipos de tumores sólidos humanos, incluindo o cancro da célula não pequena do pulmão e linhas celulares de tumores do cólon e apresenta actividade antitumoral selectiva contra o cancro da célula não pequena do pulmão, melanomas, cancro do ovário e cancro do colo e do recto (Depenbrock et al., 1998, Brit. J. of Câncer 78(6): 739-744). Os análogos de tamandarina e didemnina aqui descritos exibem actividade antitumoral em células de uma ou mais destas linhas, bem como em células do correspondente tipo tumoral in vivo. A determinação da eficácia de qualquer análogo em particular contra qualquer tipo tumoral em particular pode ser realizada utilizando processos padrão envolvendo, por exemplo, uma ou mais das 60 linhas celulares tumorais padrão mantidas no programa de rastreio de fármacos do U.S. National Câncer Institute.

Exemplos de actividade antiviral que podem ser exibidas pelos análogos de tamandarina e didemnina aqui descritos incluem a inibição da ligação de um virus a um alvo celular, inibição de infecção de uma célula por um virus, inibição da síntese celular de componentes virais, inibição de montagem intracelular de partículas virais, inibição de libertação de partículas virais por uma célula infectada, inibição do crescimento de uma célula infectada por um vírus, inibição da proliferação de uma célula 47 infectada por um vírus e indução da morte (i. e., apoptose) de uma célula infectada por um vírus. A actividade antiviral dos compostos aqui descritos pode, por exemplo, ser utilizada para o tratamento ou a prevenção de infecções virais de mamíferos e dos sintomas associados. Como forma de ilustração, os análogos de didemnina e tamandarina podem ser utilizados para o tratamento ou a prevenção de infecções por vírus tais como o vírus da Febre de Rift Valley, vírus Dengue ou qualquer vírus da encefalite equina.

Exemplos de actividades imunossupressoras que podem ser exibidas pelos análogos de tamandarina e didemnina aqui descritos incluem inibição de uma resposta imune celular a um imunogénio (e. g., um agente infeccioso ou um tecido ou célula transplantado) e inibição de uma resposta imune humoral a um imunogénio. Exemplos de distúrbios nos quais a imunossupressão pode ser desejável incluem distúrbios autoimunes, distúrbios de rejeição de transplantes (e. g., rejeição de um transplante de um tecido sólido ou de medula óssea), desenvolvimento de uma resposta imune a um dispositivo implantado (e. g., uma endoprótese ou uma válvula cardíaca), hipersensibilidade imune e anafilaxia.

Os análogos de tamandarina e didemnina aqui descritos podem ser administrados in vitro a uma célula ou tecido (e. g., um tecido ou célula em cultura ou uma célula ou tecido recolhidos de um animal antes da introdução no mesmo ou num animal diferente). Em alternativa, os análogos podem ser administrados à célula ou tecido in vivo pela administração do análogo ou de uma composição farmacêutica compreendendo o análogo a um animal (e. g., um mamífero, tal como um humano) que compreende a célula ou tecido. 48

Numa forma de realização dos processo de tratamento aqui descritos, um análogo de tamandarina ou de didemnina aqui descrito e tendo um grupo enzima-clivável liga a este (e. g., um composto tendo a estrutura de fórmula XXI) é administrado a um animal. Após clivagem do grupo enzima-clivável, o composto é transformado da forma inactiva (ou menos activa) para a forma activa (ou mais activa), como mostrado nas Figuras 23 e 24. Assim, um análogo de tamandarina ou de didemnina pode ser selectivamente activado numa localização corporal onde ocorre a actividade enzimática. 0 enzima que é utilizado para clivar um análogo de tamandarina ou de didemnina tendo ligada uma porção enzima-clivável pode ser um enzima de ocorrência natural numa localização corporal de um animal. Em alternativa, o enzima pode ser proporcionado ao animal, por exemplo como uma composição compreendendo o enzima ou um ácido nucleico que codifica para o enzima. Como outro exemplo, 0 enzima pode ser ligado (e. g-' covalentemente, utilizando um agente de reticulação ou por expressão como uma proteína de fusão enzima-anticorpo) com um anticorpo que se liga especificamente a um tecido (e. g-, células cancerosas, tais como células leucémicas ou células de um tumor sólido) numa localização corporal de um animal e o complexo anticorpo-enzima pode ser administrado a um animal. A administração de um análogo de tamandarina ou de didemnina tendo ligado um grupo enzima-clivável ao mesmo animal resulta na activação preferencial do composto no tecido na localização corporal. 0 efeito fisiológico do composto pode, deste modo, ser localizado no tecido ou localização corporal e qualquer efeito secundário atribuível ao composto activado pode, deste modo, ser reduzido ou minimizado. 49

Um análogo de tamandarina ou de didemnina ligado a suporte pode ser utilizado para identificar células que compreendem, na sua superfície ou em outro local, proteínas receptoras, glicoproteínas e semelhantes, que são capazes de interactuar ou ligar ao análogo. Como um exemplo, um análogo de tamandarina ou de didemnina tendo a estrutura de fórmula I ou XXI e ligado a um suporte pode, devido à sua interacção com um receptor celular particular, ser utilizado para identificar ou isolar fisicamente células de um tipo particular (e. g., células tumorais) que são caracterizadas pela presença do receptor em particular.

Processos de Preparação de Compostos Aqui Descritos A presente invenção inclui processos de preparação de análogos e fragmentos de didemninas aqui descritas. Processos de preparação de análogos de tamandarina e didemnina foram descritos (e. g., Harris et ai., 1987, Tetrahedron Lett. 28: 2837-2840; Harris et ai., 1988, Tetrahedron 44:3489-3500; Ewing et ai., 1986, Tetrahedron 42:5863-5868; Ewing, W.R., 1988, Ph.D. Dissertation, University de Pennsylvania, Philadelphia PA; Ewing et ai., 1989, Tetrahedron Lett. 30: 3757-3760; Li et ai., 1990, J. Am. Chem. Soc. 112:7 659-7 672; Mayer et ai., 1994, J. Org. Chem. 59:5192-5205; Mayer et ai., 1994, Tetrahedron: Asymmetry 5:519-522; Xiao et ai., 1997, Tetrahedron: Asymmetry 9:47-53; Pfizenmayer et al., 1998, 8:3653-3656; Pedido de Patente U.S. número 09/545.848, apresentada em 7 Abril, 2000). O conteúdo de cada uma destas referências e pedido de patente é aqui incorporado como referência. O processo exacto utilizado para preparar um macrociclo ou análogo da tamandarina ou da didemnina não é crítico. 50

De um modo preferido, o processo que é utilizado resulta na sintese estereosselectiva de um composto aqui descrito. Por exemplo, a síntese da (-) tamandarina A ({ (2S) Hiv2}didemnina B; composto 101) é aqui exemplificado no Exemplo 1.

Em referência a processos de preparação de análogos e fragmentos aqui descritos, os substituintes R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, X e Y têm os mesmos significados como utilizado acima.

Como utilizado na presente divulgação, uma reacção de protecção pode incluir qualquer reacção na qual uma ou mais porções químicas são covalentemente (mas reversivelmente) ligadas a um de um átomo de azoto, um átomo de oxigénio e um átomo de enxofre de uma molécula. Tais ligação previne o átomo ou átomos de participar em reacções químicas indesejadas, i. e., vir a ser ligado covalentemente a outras porções químicas e dar ou aceitar de protões e electrões a outras porções químicas. Uma porção química assim ligada é referida como "um grupo de protecção". A título de exemplo, o átomo de azoto de um composto tendo a estrutura da fórmula IX, tal como D-alo-isoleucina, pode ser protegido utilizando um reagente tal como carbobenziloxi-succinimida (CBZ-succinimida). A utilização deste reagente num protocolo padrão produz uma D-alo-isoleucina protegida, i. e., N (alfa)-CBZ-D-alo-isoleucina, tendo a estrutura do composto 8 na Figura 2 6A. No composto 8, a porção CBZ actua como um grupo protector de amina e o átomo de azoto ao qual está ligada não pode participar facilmente em reacções químicas adicionais. Ainda, a título de exemplo, quando X é -(NH)-, um grupo amina protegido (e. g., -N(CBZ)-) pode ser utilizado nas reacções aqui descritas. Como um exemplo alternativo, a porção hidroxilo do 51 composto 11 na Figura 2 6A, pode ser protegido utilizando um reagente, tal como triisopropilsililtriflato (TIPSOTf) para se obter o composto 12 na Figura 26A. Neste composto, Y é uma porção triisopropilsililo (TIPS) e actua como um grupo protector de hidroxilo, prevenindo reacções quimicas com o átomo de oxigénio o qual esta porção está ligada.

Os protocolos para a realização de reacções de protecção e informação abrangente sobre porções quimicas que podem ser utilizadas como grupos de protecção são encontrada em referências tais como Green e Wutz (1999, Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York) ou Bodansky (1993, Principies of Peptide Synthesis, Springer, Berlin).

Análogo de didemninas e fragmentos podem ser preparados convertendo um composto tendo a estrutura de fórmula IX

NH2 (IX)

num composto tendo a estrutura de fórmula X

HN—APG

Tal série de reacções podem incluir, mas não está limitada a uma reacção de protecção, uma reacção de activação, uma reacção de 52 esterificação e uma reacção de hidrólise de éster. 0 grupo amina de fórmula IX é, de um modo preferido, protegido antes de realizar as reacções de esterificação e de hidrólise. Um exemplo especifico de preparação de um composto tendo a estrutura de fórmula X é dado no Exemplo 1. Nas fórmulas X-XVIII, "APG" refere-se a um grupo protector de amina, tais como uma porção carbobenziloxilo (CBZ) ou uma porção terc-butiloxicarbonilo (BOC). Podem também ser utilizados grupos de protecção de amina alternativos, como aqui descrito e na técnica.

Um exemplo de uma reacção de activação incluida no processo de preparação de um composto tendo a estrutura de fórmula X é representado na Figura 26A, reacção B. A activação de um composto, tal como o composto 8, pode envolver um reagente, tal como o pentafluorofenol (PFPOH), para se obter o composto 9. 0 composto 9 é um exemplo de um intermediário activado que mais facilmente realiza as reacções subsequentes, tal como a esterificação, no carbono do carbonilo da sua porção éster PFP. Podem, também, ser utilizadas reacções de esterificação que não necessitam de um intermediário activado, para a preparação de um composto tendo a estrutura de fórmula X.

Qualquer processo de hidrólise de éster conhecido na técnica que não compreende condições severas que favorecem a racemização pode ser utilizado para preparar um composto tendo a estrutura de fórmula X. A título de exemplo, um composto tendo a estrutura

53 pode ser hidrolisado utilizando uma base forte, numa mistura de solventes, como exemplificado na Figura 26A, reacção F. Reagentes e condições adequadas para a hidrólise de éster sob condições suaves (i. e., incluindo condições que não favorecem a racemização) pode ser facilmente seleccionados pelo especialista na técnica.

Um composto tendo a estrutura

X-H

pode ser esterificado com, por exemplo, brometo de alilo (e. g., como descrito no Exemplo 1), para se obter um composto tendo a estrutura de fórmula XI

Um composto tendo tendo a estrutura de esterifiçados) para se fórmula XII a estrutura de fórmula IX e um composto fórmula XI podem ser ligados (e. g., obter um composto tendo a estrutura de 54

''APG (XO). (e. g., reacção I da Figura 26B). Opcionalmente, uma tal reacção pode ser realizada utilizando um catalizador, um reagente de acoplamento ou um reagente de esterificação. Reagentes e condições úteis para este tipo de reacção são conhecidos na técnica e exemplificados no Exemplo 1. Os fragmentos de didemnina tendo a estrutura de fórmula XII exibem uma ou mais das actividades farmacológicas aqui descritas.

Um composto tendo a estrutura de fórmula XII pode ser hidrolisado para se obter um composto tendo a estrutura de

fórmula XIII

OH cxm).

Como descrito aqui, noutra parte, condições reaccionais e reagentes adequados para hidrólise de éster são conhecidas na técnica e podem ser facilmente aplicadas pelo especialista na matéria. Um exemplo deste tipo de hidrólise é representado na Figura 26B, reacção J. Os fragmento de didemninas tendo a estrutura de fórmula XIII exibem uma ou mais das actividades farmacológicas descritas aqui. 55

0 grupo carboxilo dum composto tendo a estrutura de fórmula XIII pode ser activado para se obter um composto tendo a estrutura de fórmula XIV

Na fórmula XIV, "ACT" refere-se a um grupo activador, tal como uma porção pentafluorofenilo (PFP). Outro exemplo de um grupo activador é uma porção N-hidroxissuccinimida. A activação química pode ser realizada utilizando reagentes, tais como um reagente activador, um catalizador, um dador de grupo activador ou semelhantes. A título de exemplo, o composto 6, representado na Figura 26C, é activado por ligação covalente de um grupo PFP, para se obter o composto 19. Os protocolos para activação de um composto nos modos divulgados aqui são conhecidos na técnica. Os fragmentos de didemnina tendo a estrutura de fórmula XIV exibem uma ou mais das actividades farmacológicas aqui descritas. 0 composto activado tendo a estrutura da fórmula XIV pode ser ligada com um terceiro reagente tendo a estrutura da fórmula

XV 56 (XV)

para se obter um composto tendo a estrutura da fórmula XVI

Nas fórmulas XV e XVI, SEM refere-se a 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo. Um exemplo desta reacção é representado na reacção M da Figura 26C, na qual o composto 19 é condensado com o composto 18, para se obter o composto 20. Os reagentes e condições necessários para a preparação de um péptido protegido, tal como o composto 18, são descritos, por exemplo, em Li et al. (1990, J. Am. Chem. Soc. 112: 7659-7672) . Análogos de didemnina tendo a estrutura de fórmula XVI exibem uma ou mais das actividades farmacológicas aqui descritas.

Um análogo de didemnina tendo uma ou mais das actividades farmacológicas aqui descritas pode ser preparado por remoção de 57

um dos grupos de protecção amino e do grupo de protecção de carbonilo hidroxilo de um composto tendo a estrutura da fórmula XVI e ciclizando o composto, para se obter um PSI, tendo a estrutura da fórmula XVII

Um exemplo de reacções deste tipo é apresentado no passo N da Figura 2 6D. A desprotecção química de um composto, tal como um tendo a estrutura da fórmula XVI, pode ser conseguido fazendo reagir o composto com um ou mais reagentes para remoção de um grupo de protecção do composto. Exemplos de reacções de desprotecção são aqui divulgados, por exemplo, para o composto 20, como apresentado na Figura 26D. Outros protocolos para a desprotecção de um composto são conhecidos na técnica e podem ser facilmente aplicados por um especialista na matéria para desprotecção de um composto tendo a estrutura de fórmula XVI. A ciclização de um composto desprotegido de outro modo tendo a estrutura da fórmula XVI, pode ser conseguida utilizando qualquer processo conhecido na técnica para macrociclização de péptidos. Por exemplo, as condições de macrociclização podem ser semelhantes ou idênticas às utilizadas na ciclização que produz o composto 21, representado na Figura 26D, e descritas no Exemplo 1. Os análogos de didemnina tendo a estrutura da fórmula 58 XVII exibem uma ou mais das actividades terapêuticas aqui descritas.

Um ou mais dos grupos de protecção de um composto tendo a estrutura da fórmula XVII podem ser removidos para se obter um composto tendo a estrutura da fórmula XVIII

,2

Este tipo de desprotecção é exemplificado in reacção 0 de Figura 26E. Análogos de didemnina tendo a estrutura de fórmula XVIII exibem uma ou mais das actividades terapêuticas aqui descritas.

Ainda pode ser preparado outro composto activo por acoplamento de um composto tendo a estrutura da fórmula XVIII e um reagente tendo a estrutura da fórmula XIX

O

para se obter um PSI tendo a estrutura de fórmula XX 59

Esta reacção é exemplificada na reacção N de Figura 26E. R14 pode, por exemplo, ser qualquer das porções descritas acima como R1. O grupo substituinte R14 pode compreender uma porção enzima-clivável, de um modo preferido, em ou perto do seu terminal distai (relativo ao macrociclo) . Uma tal porção pode ser clivável por um enzima, por exemplo, uma carboxipeptidase, uma beta-lactamase, uma beta-galactosidase, uma penicilina V-amidase, uma citosina desaminase, uma nitrorredutase, uma fosfatase alcalina, uma beta-glucuronidase e um anticorpo catalítico. Um exemplo de uma porção R14 que compreende uma porção enzima-clivável é -(N-metil)leucina-(S)prolina-(S)lactato-(S)glutamina-(S)piroglutamato. Outros exemplos de porções enzima-cliváveis são aqui descritos. Como forma de ilustração, os compostos 131 e 132, representados na Figuras 23 e 24, respectivamente, podem ser preparados utilizando os processos aqui descritos. Análogos e fragmentos de didemnina que têm ligado a eles uma porção enzima-clivável e que de outro modo têm a estrutura de uma das fórmulas XII-XVIII após clivagem do seu grupo enzima-clivável, exibem uma ou mais das actividades terapêuticas aqui descritas. 60 A variação dos substituintes dos análogos e fragmentos de didemnina pode requerer pequenas modificações nos processos gerais aqui descritos. É entendido que a invenção inclui tais modificações, uma vez que elas poderão ser facilmente idealizadas por quem tenha conhecimentos gerais na técnica da síntese química.

Análogos de tamandarina e didemnina podem, também, ser preparados por um processo que inclui incorporação de um resíduo de desoxo-prolina ou um resíduo de desidro-prolina na cadeia lateral de um análogo de tamandarina ou de didemnina. 0 resíduo de desoxo-prolina ou o resíduo de desidro-prolina pode ser utilizado em vez de um resíduo de prolina em qualquer análogo de tamandarina ou didemnina conhecido. Os análogos de tamandarina e didemnina particularmente contemplados são aqueles em que o resíduo de desoxo-prolina ou o resíduo de desidro-prolina está ligado ao macrociclo através de um resíduo de leucina tendo uma porção amina metilada (í. e., um análogo de tamandarina ou de didemnina contendo -(N-metil)leucina-(desoxo ou desidro)-prolina). Obviamente, o resíduo de (desoxo ou desidro)-prolina pode ser ainda substituído, por exemplo, por lactato, por piruvato, por lactato-fluoróforo, por lactato-glutamina-piroglutamato, por lactato-glutamina-ciclopentanoato, por -alanina-leucina-piroglutamato ou por -(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato. Um ou mais dos resíduos (desoxo ou desidro)-prolina, lactato, glutamina, piroglutamato, ciclopentanoato e alanina é, de um modo preferido, o enantiómero (S) . A incorporação de um resíduo de desoxo-prolina pode ser conseguida por qualquer processo conhecido na técnica. Exemplos 61 de processos de incorporação de um resíduo de desoxo-prolina estão incluídos na descrição no Exemplo 5 e na Figuras 41-43.

Numa forma de realização, o processo de incorporação de um resíduo de desoxo-prolina compreende a protecção das porções hidroxilo e amina da leucina, metilação da porção amina da leucina e desprotecção da porção amina da leucina. 0 grupo amina da prolina é protegido e a função éster da prolina é reduzida a um aldeído (e. g., utilizando uma base forte, tal como LiBH4 acoplado com oxidação com um agente oxidante, tal como piridina-S03) . A aminação redutora (e. g., na presença de um solvente não aquoso, uma base forte e um catalizador ácido carboxílico; e. g., na presença de Na (AcO) 3BH, AcOH, e CH2CI2) pode ser utilizada para acoplar a leucina protegida no hidroxilo com a prolina protegida na amina (e. g., para formar o composto 43 na Figura 43, numa forma de realização). A aminação redutora pode, por exemplo, ser realizada como descrito por Abdel-Magid e co-autores (e. g., Abdel-Magid et al., 1990, Tetrahedron Lett. 31:5595-5598; Abdel-Magid et al., 1990, Synlett. 537-539). O dipéptido leucina-desoxo-prolina resultante pode ser, ainda, substituído com outras porções (e. g., com -lactato, -piruvato, -lactato-fluoróforo, -lactato-glutamina-piroglutamato, -lactato-glutamina-ciclopentanoato, -alanina-leucina-piroglutamato ou -(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato), com (de um modo preferido) ou sem remoção anterior dos grupos de protecção. O dipéptido leucina-desoxo-prolina (opcionalmente, ainda substituído) pode ser ligado a um macrociclo de tamandarina ou didemnina nas posições identificadas como R1 nas fórmulas I e XXI. 62 A incorporação de um resíduo de desidro-prolina pode ser alcançada por qualquer processo conhecido na técnica. Exemplos de processos de incorporação de um resíduo de desidro-prolina estão incluídos na descrição no Exemplo 6 e na Figura 44.

Numa forma de realização, o processo de incorporação de um resíduo de desidro-prolina compreende a protecção dos grupos carboxilo e amino do 4-hidroxiprolinato, mesilação da porção 4-hidroxilo, deslocamento da porção mesilato com uma porção arilselenilo, eliminação oxidativa da porção arilselenilo e desprotecção da porção carboxilo. A porção desidro-prolina resultante pode ser acoplada com um ou mais resíduos adicionais de aminoácidos ou ácidos orgânicos (e. g., aqueles aqui identificados, removendo o grupo de protecção de amino se necessário ou desejado) e ligada com um macrociclo de tamandarina ou didemnina preparado ou obtido por meios convencionais.

Composições Farmacêuticas A invenção refere-se a composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um dos análogos de tamandarina e didemnina e os fragmentos fisiologicamente activos aqui descritos. Tais composições podem compreender o análogo/fragmento e um veículo farmaceuticamente aceitável. A título de exemplo, a composição farmacêutica pode compreender um veículo farmaceuticamente aceitável e um análogo de tamandarina ou de didemnina, tendo a estrutura de qualquer de fórmulas I, XXI e (a)-(d), como um agente activo. Como um outro exemplo, a composição farmacêutica pode compreender um veículo 63 um ou mais dos compostos farmaceuticamente aceitável e representados nas figuras nesta divulgação.

Tais composições farmacêuticas podem ser utilizadas, por exemplo, nos processos aqui descritos e para a inibição de um ou mais de sintese proteica, ciclo de progressão celular, génese tumoral, crescimento e proliferação numa célula. Adicionalmente, tais composições podem ser utilizadas nos processos aqui descritos para melhoramento da apoptose numa célula.

As composições farmacêuticas que são úteis nos processos da invenção podem ser administradas por via sistémica em formulações sólidas orais, oftálmicas, em supositório, em aerossóis, tópicas ou outras formulações semelhantes. Em adição ao agente activo, tais composições farmacêuticas podem conter veiculos farmaceuticamente aceitáveis e outros ingredientes conhecidos melhorarem e facilitarem a administração de fármacos. Outras formulações possíveis, tais como nanoparticulas, lipossomas, eritrócitos reconstituídos e sistemas de base imunológica podem também, ser utilizadas para administrar o agente activo de acordo com os processos da invenção. A invenção refere-se a composições farmacêuticas que consistem no agente activo, uma forma adequada para administração a um indivíduo, ou a composição farmacêutica pode compreender o agente activo e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, um ou mais ingredientes adicionais, ou alguma combinação desses. 0 agente activo pode estar presente na composição farmacêutica na forma de um éster ou sal fisiologicamente aceitável, tal como em combinação com um catião ou anião fisiologicamente aceitáveis, como é bem conhecido na técnica. 64

As formulações das composições farmacêuticas aqui descritas podem ser preparadas por qualquer processo conhecido ou desenvolvido na técnica da farmacologia no futuro. Em geral, tais processos preparatórios incluem o passo de colocar o agente activo em associação com um veiculo ou um ou mais outros ingredientes acessórios e, então, se necessário ou desejável, moldar ou embalar o produto numa forma unitária de dose única ou multidose.

Apesar das descrições de composições farmacêuticas aqui proporcionadas serem principalmente dirigidas a composições farmacêuticas que são adequadas para uma administração étnica a humanos, será entendido pelo especialista na técnica que tais composições são, geralmente, adequadas para administração a todos os tipos de animais. A modificação de composições farmacêuticas adequadas para administração a humanos de modo a tornar as composições adequadas para administração a vários animais é bem entendida e o farmacologista veterinário com conhecimentos gerais pode idealizar e realizar tais modificações simplesmente com experimentação comum, se qualquer. Os indivíduos para quem é contemplada a administração das composições farmacêuticas da invenção incluem, mas não se limitam a humanos e outros primatas, e mamíferos incluindo mamíferos comercialmente relevantes, tais como gado, porcos, cavalos, ovelhas, gatos e cães.

As composições farmacêuticas que são úteis nos processos da invenção podem ser preparadas, empacotadas ou vendidas em formulações adequadas para vias de administração como a oral, rectal, vaginal, parentérica, tópica, pulmonar, intranasal, bucal, oftálmica ou qualquer outra. Outras formulações 65 contempladas incluem nanopartículas projectadas, preparações lipossomais, eritrócitos reconstituídos, contendo o agente activo, e formulações de base imunológica.

Uma composição farmacêutica da invenção pode ser preparada, embalada ou vendida em bruto, como uma forma de dosagem unitária ou como uma pluralidade de formas de dosagem unitárias. Como aqui utilizado, a "dosagem unitária" é uma quantidade discreta da composição farmacêutica compreendendo uma quantidade pré-determinada do agente activo. A quantidade do agente activo é geralmente igual à dose do agente activo que seria administrada a um indivíduo ou uma fracção conveniente de tal dose, tais como, por exemplo, metade ou um terço de tal dose.

Além do agente activo, a composição farmacêutica da invenção ainda pode compreender um ou mais agente farmaceuticamente activos adicionais, tais como outros agentes de terapia de tumores, outros agentes anti-infecciosos, e semelhantes.

Formulações de libertação controlada ou sustentada de uma composição farmacêutica da invenção podem ser preparada utilizando tecnologia convencional.

Uma formulação de uma composição farmacêutica da invenção adequada para administração oral pode ser preparada, embalada, ou vendida na forma de uma dose unitária sólida discreta incluindo, não limitadas a um comprimido, uma cápsula mole ou rígida, uma pílula, uma pastilha ou um rebuçado contendo, cada, uma quantidade pré-determinada do agente activo. Outras formulações adequadas para administração oral incluem, mas não estão limitada a uma formulação granular ou em pó, uma suspensão 66 oleosa ou aquosa, uma solução aquosa ou aquecimento ou uma emulsão.

Como aqui utilizado, um líquido "oleoso" é um que compreende uma molécula líquida contendo carbono e que apresenta um carácter menos polar do que a água.

Um comprimido compreendendo o agente activo pode, por exemplo, ser preparado por compressão ou moldagem do agente activo, opcionalmente com um ou mais ingredientes adicionais. Os comprimidos comprimidos pode ser preparados por compressão, num dispositivo adequado, do agente activo numa forma que flúi livremente, tais como uma preparação em pó ou granular, opcionalmente misturada com um ou mais de um ligante, um lubrificante, um excipiente, um agente activo de superfície e um agente dispersante. Comprimidos moldados podem ser preparados por moldagem, num dispositivo adequado, de uma mistura do agente activo, um veículo farmaceuticamente aceitável e, pelo menos, líquido suficiente para humidificar a mistura. Excipientes farmaceuticamente aceitáveis utilizados na produção de comprimidos incluem, mas não estão limitados a diluentes inertes, agentes de granulação e de dispersantes, agentes de ligação e agentes lubrificantes. Agentes de dispersão conhecidos incluem, mas não estão limitados a amido de batata e glicolato de amido e sódio. Agentes activos de superfície incluem, mas não estão limitados a laurilsulfato de sódio. Diluentes conhecidos incluem, mas não estão limitados a carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, celulose microcristalina, fosfato de cálcio, hidrogenofosfato de cálcio e fosfato de sódio. Agentes de granulação e dispersantes conhecidos incluem, mas não estão limitados a amido de milho e alginato. Agentes de ligação conhecidos incluem, mas não estão limitados a gelatina, acácia, 67 amido de milho pré-gelatinizado, polivinilpirrolidona e hidroxipropilmetilcelulose. Agentes lubrificantes conhecidos incluem, mas não estão limitados a estearato de magnésio, estearato, sílica e talco.

Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos utilizando processos conhecidos para conseguir uma desintegração retardada no trato gastrointestinal de um individuo, deste modo proporcionando libertação e absorção sustentadas do agente activo. Como forma de exemplo, um material, tais como o monoestearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo, pode ser utilizado para revestir comprimidos. Ainda como forma de exemplo, os comprimidos podem ser revestidos utilizando processos descritos nas Patentes U.S. número 4.256.108; 4.160.452; e 4.265.874, para formar comprimidos de libertação osmoticamente controlada. Os comprimidos podem, ainda, compreender um agente adoçante, um agente aromatizante, um agente corante, um conservante, ou alguma dose de combinação de modo a proporcionar uma preparação farmaceuticamente elegante e dês sabor agradável.

As cápsulas rígidas compreendendo o agente activo podem ser produzidas utilizando uma composição fisiologicamente degradável, tal como a gelatina. Tais cápsulas rígidas compreendem o agente activo e podem, ainda, compreender ingredientes adicionais incluindo, por exemplo, um diluente sólido inerte, tais como carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, ou caulino.

As cápsulas de gelatina mole compreendendo o agente activo pode ser produzido utilizando uma composição fisiologicamente degradável, tal como a gelatina. Tais cápsulas moles compreendem 68 o agente activo, que pode ser misturado com água ou um óleo médio, tais como óleo de amendoim, parafina liquida ou azeite.

As formulações liquidas de uma composição farmacêutica da invenção que são adequadas para administração oral podem ser preparadas, embaladas e vendidas na forma liquida ou na forma de um produto seco destinado a ser reconstituído com água ou outro veiculo adequado antes de utilizar.

As suspensões liquidas podem ser preparadas utilizando processos convencionais para alcançar a suspensão do agente activo num veiculo aquoso ou oleoso. Veiculos aquosos incluem, por exemplo, água e solução salina isotónica. Veiculos oleosos incluem, por exemplo, óleo de amêndoas, ésteres oleosos, álcool etilico, azeite e óleos vegetais, tais como de amendoim, sésamo ou óleo de coco, óleos vegetais fraccionados e óleos minerais, tal como a parafina liquida. As suspensões liquidas podem, ainda, compreender um ou mais ingredientes adicionais incluindo, mas não limitada a agentes de suspensão, agentes dispersantes ou molhantes, agentes emulsionantes, demulcentes, conservantes, tampões, sais, aromatizantes, agentes corantes e agentes adoçantes. As suspensões oleosas podem, ainda, compreender um agente espessante. Agentes de suspensão conhecidos incluem, mas não estão limitados a xarope do sorbitol, gordura hidrogenada comestível, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto, goma de acácia e derivados de celulose, tais como carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose. Os agentes dispersantes ou molhantes conhecidos incluem, mas não estão limitados a, fosfatidios de ocorrência natural, tais como lecitina, produtos de condensação de um óxido de alquileno com um ácido gordo, com um álcool alifático de cadeia comprida, com a éster parcial derivado de um 69 ácido gordo e um hexitol, ou com um éster parcial derivado de um ácido gordo e um anidrido de hexitol (e. g., estearato de polioxietileno, heptadecaetilenoxicetanol, mono-oleato de polioxietilenossorbitol e mono-oleato de polioxietilenossorbitano, respectivamente). Agentes emulsionantes conhecidos incluem, mas não estão limitados a lecitina e acácia. Conservantes conhecidos incluem, mas não estão limitados a metilo, etilo, ou n-propil-para-hidroxibenzoatos, ascorbato e sorbato. Agentes adoçantes conhecidos incluem, por exemplo, glicerol, propilenoglicol, sorbitol, sacarose e sacarina. Agentes espessantes conhecidos para suspensões oleosas incluem, por exemplo, cera de abelha, parafina rigida e álcool cetilico.

Soluções líquidas do agente activo em solventes aquosos ou oleosos podem ser preparadas substancialmente da mesma forma que as suspensões líquidas, sendo a principal diferença que o agente activo é dissolvido, em vez de suspenso no solvente. Soluções líquidas da composição farmacêutica da invenção podem compreender cada um dos componentes descritos no que respeita a suspensões líquidas, sendo entendido que os agentes de suspensão não irão necessariamente auxiliar a dissolução do agente activo no solvente. Os solventes aquosos incluem, por exemplo, água e solução salina isotónica. Os solventes oleosos incluem, por exemplo, óleo de amêndoas, ésteres oleosos, álcool etílico, azeite óleos vegetais, tais como de amendoim, sésamo ou óleo de coco, óleos vegetais fraccionados óleos minerais, tais como parafina líquida.

Formulações em pó e granulares de uma preparação farmacêutica da invenção podem ser preparadas utilizando processos conhecidos. Tais formulações podem ser administradas 70 directamente a um indivíduo, utilizadas, por exemplo, para formar comprimidos, to encher cápsulas ou para preparar uma suspensão aquosa ou oleosa ou uma solução pela adição a estes de um veículo aquoso ou oleoso. Cada uma destas formulações pode, ainda, compreender um ou mais de um agente de dispersão ou molhante, um agente de suspensão e um conservante. Excipientes adicionais, tais como de enchimento e adoçantes, aromatizantes ou agentes corantes, podem também ser incluídos nestas formulações. A composição farmacêutica da invenção pode, também, ser preparada, embalada, ou vendida na forma de emulsão óleo em água ou uma emulsão água em óleo. A fase oleosa pode ser azeite ou um óleo vegetal, tal como óleo de amendoim, um óleo mineral, tal como parafina líquida, ou uma combinação destas. Tais composições podem, ainda, compreender um ou mais agentes emulsionantes, tais como gomas de ocorrência natural, tais como goma de acácia ou goma de tragacanto, fosfatídios de ocorrência natural, tais as fosfatídios de soja ou de lecitina, ésteres ou ésteres parciais derivados de combinações de ácido gordos e anidridos de hexitol, tais como mono-oleato de sorbitano, e produtos de condensação dos referidos ésteres parciais com óxido de etileno, tais como mono-oleato de polioxietilenossorbitano. Estas emulsões podem, também, conter ingredientes adicionais incluindo, por exemplo, agentes adoçantes e aromatizantes. A composição farmacêutica da invenção pode ser preparada, embalada, ou vendida numa formulação adequada para administração rectal. Uma tal composição pode estar na forma de, por exemplo, um supositório, uma preparação para enema de retenção e uma solução para irrigação rectal ou colónica. 71

As formulações para supositórios podem ser produzidas combinando o agente activo com um excipiente não irritante farmaceuticamente aceitável que é sólido à temperatura ambiente comum (i. e., cerca de 20 °C) e que é liquido à temperatura rectal do indivíduo (i. e., cerca de 37 °C num humano saudável). Excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem, mas não estão limitados a manteiga de cacau, polietilenoglicóis e vários glicéridos. As formulações de supositório podem, ainda, compreender vários ingredientes adicionais incluindo, mas não limitados a antioxidantes e conservantes.

Preparações para enema de retenção ou soluções para irrigação rectal ou colónica podem ser produzidas combinando o agente activo com um veículo líquido farmaceuticamente aceitável. Como é bem conhecido na técnica, as preparações de enema podem ser administradas utilizando, e pode ser embaladas dentro de um, sistema de cedência adaptado à anatomia rectal do indivíduo. As preparações de enema podem, ainda, compreender vários ingredientes adicionais incluindo, mas não limitados, antioxidantes e conservantes. A composição farmacêutica da invenção pode ser preparada, embalada ou vendida numa formulação adequada para administração vaginal. Uma tal composição pode esta na forma de, por exemplo, um supositório, um material para inserção vaginal impregnado ou revestido, tais como um tampão, uma preparação para duche, ou uma solução para irrigação vaginal.

Processos para a impregnação ou revestimento de um material com uma composição química são conhecidas na técnica e incluem, mas não estão limitados a, processos de deposição ou ligação de uma composição química numa superfície, processos de 72 incorporação de uma composição quimica numa estrutura de um material durante a sintese do material (i. e., tais como com a material fisiologicamente degradável) e processos de absorção de uma solução ou suspensão aquosa ou oleosa num material absorvente, com ou sem secagem subsequente.

As preparações para duche ou soluções para irrigação vaginal podem ser produzidas combinando o agente activo com um veiculo liquido farmaceuticamente aceitável. Como é bem conhecido na técnica, as preparações para duche podem ser administradas utilizando, e pode ser embaladas em, um dispositivo de cedência adaptado à anatomia vaginal do indivíduo. As preparações para duche podem, ainda, compreender vários ingredientes adicionais incluindo, mas não limitados a antioxidantes, antibióticos, agentes anti-fúngicos e conservantes.

Formulações de uma composição farmacêutica adequada for administração parentérica podem compreender o agente activo combinado com um veiculo farmaceuticamente aceitável, tais como água estéril ou solução salina isotónica estéril. Tais formulações podem ser preparadas, embaladas ou vendidas numa forma adequada para administração em bólus ou para administração continua. As formulações injectáveis podem ser preparadas, embaladas ou vendidas em formas de dosagem unitária, tais como em ampolas ou em recipientes de multi-doses contendo um conservante. As formulações para administração parentérica incluem, mas não estão limitados a, suspensões, soluções, emulsões em veiculos oleosos ou aquosos, pastas e formulações implantáveis de libertação sustentada ou biodegradáveis. Tais formulações podem, ainda, compreender um ou mais ingredientes adicionais incluindo, mas não limitados a agentes de suspensão, estabilizantes ou dispersantes. Numa forma de realização de uma 73 formulação para administração parentérica, o agente activo é proporcionado numa forma seca (i. e., pó ou granulado) para reconstituição com um veículo adequado (e. g., água estéril, livre de pirogénios) antes da administração parentérica da composição reconstituída.

As composições farmacêuticas podem ser preparadas, embaladas ou vendidas na forma de uma suspensão ou solução aquosa ou oleosa estéril injectável. A suspensão ou solução pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida e podem compreender, adicionalmente ao agente activo, ingredientes adicionais, tais como, os agentes dispersantes, agentes molhantes ou agentes de suspensão aqui descritas. Tais formulações injectáveis estéreis podem ser preparadas utilizando um diluente ou solvente não tóxico parentericamente aceitável, tais como água ou 1,3-butanodiol, por exemplo. Outros diluentes e solventes aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, solução de Ringer; solução isotónica de cloreto de sódio, e óleos fixos tais como mono- ou diglicéridos sintéticos. Outras formulações parentericamente administráveis que são úteis incluem as que compreendem o agente activo em forma microcristalina, numa preparação lipossomal, ou como um componente de um sistema polimérico biodegradável. As composições para libertação sustentada ou implantação podem compreender materiais poliméricos ou hidrofóbicos farmaceuticamente aceitáveis, tais como uma emulsão, uma resina de troca iónica, um polímero fracamente solúvel ou sal fracamente solúvel.

As formulações adequadas para administração tópica incluem, mas não estão limitados a, preparações líquidas ou semilíquidas, tais como linimentos, loções, emulsões óleo-em-água ou água-em-óleo, tais como cremes, pomadas ou pastas, e soluções ou 74 suspensões. As formulações administráveis topicamente, por exemplo, compreendem desde cerca de 1% a cerca de 10% (p/p) do agente activo, embora a concentração do agente activo possa ser tal elevada quanto o limite de solubilidade do agente activo no solvente. As formulações para administração tópica podem, ainda, compreender um ou mais dos ingredientes adicionais agui descritos. A composição farmacêutica da invenção pode ser preparada, embalada ou vendidas numa formulação adequada para administração pulmonar através da cavidade bucal. Uma tal formulação pode compreender partículas secas que compreendem o agente activo e que têm um diâmetro no intervalo desde cerca de 0,5 a cerca de 7 nanómetros e, de um modo preferido, desde cerca de 1 a cerca de 6 nanómetros. Tais composições estão, convenientemente, na forma de pós secos para administração utilizando um dispositivo compreendendo um recipiente de pó seco ao qual pode ser direccionado uma corrente de gás propulsor para dispersar o pó ou utilizando um solvente auto-propulsor/contentor dispensador de pó, tal como um dispositivo compreendendo o agente activo dissolvido ou suspenso num propulsor de baixo ponto de ebulição num recipiente selado. De um modo preferido, tais pós compreendem partículas em que, pelo menos, 98% em peso das partículas têm um diâmetro superior a 0,5 nanómetros e, pelo menos, 95% em número das partículas têm um diâmetro inferior a 7 nanómetros. Mais, de um modo preferido, pelo menos, 95% em peso das partículas têm um diâmetro superior a 1 nanómetro e, pelo menos, 90% em número das partículas têm um diâmetro inferior a 6 nanómetros. Composições de pó seco, de um modo preferido, incluem um diluente sólido de pó fino, tal como açúcar e são, convenientemente, proporcionados numa forma de dosagem unitária. 75

Propulsores de baixo ponto de ebulição, geralmente, incluem propulsores líquidos tendo um ponto de ebulição inferior a 65 °F à pressão atmosférica. Geralmente, o propulsor pode constituir 50 a 99, 9% (p/p) da composição e o agente activo pode constituir 0,1 a 20% (p/p) da composição. O propulsor pode, ainda, compreender ingredientes adicionais, tal como um tensoactivo não iónico líquido ou aniónico sólido ou um diluente sólido (de um modo preferido, tendo um tamanho de partículas da mesma ordem das partículas compreendendo o agente activo).

As composições farmacêuticas da invenção, formuladas para cedência pulmonar, podem, também, proporcionar o agente activo na forma de gotas de uma solução ou suspensão. Tais formulações podem ser preparadas, embaladas ou vendidas como soluções ou suspensões aquosas ou alcoólicas diluídas, opcionalmente estéreis, compreendendo o agente activo e podem, convenientemente, ser administradas utilizando qualquer dispositivo de nebulização ou atomização. Tais formulações podem, ainda, compreender um ou mais ingredientes adicionais incluindo, mas não limitados a, um agente aromatizante, tal como sacarina de sódio, um óleo volátil, um agente tamponante, um agente activo de superfície ou um conservante, tais como metil-hidroxibenzoato. As gotas proporcionadas por esta via de administração, têm, de um modo preferido, um diâmetro médio no intervalo de desde cerca de 0,1 a cerca de 200 nanómetros.

As formulações aqui descritas como sendo úteis para cedência pulmonar são, também, úteis para cedência intranasal de uma composição farmacêutica da invenção. 76

Outra formulação adequada para administração intranasal é um pó grosseiro compreendendo o agente activo e tendo uma partícula média de desde cerca 0,2 a 500 micrómetros. Uma tal formulação é administrada da mesma maneira que se dá uma fungadela, i. e., por inalação rápida através da passagem nasal a partir de um recipiente de pó, seguro perto do nariz.

As formulações adequadas para administração nasal podem, por exemplo, compreender desde cerca de tão pouco como 0,1% (p/p) e tanto quanto 100% (p/p) do agente activo, e podem, ainda, compreender um ou mais dos ingredientes adicionais aqui descritos. A composição farmacêutica da invenção pode ser preparada, embalada, ou vendida numa formulação adequada para administração bucal. Tais formulações podem, por exemplo, estar na forma de comprimidos ou rebuçados produzidos utilizando processos convencionais, e podem compreender, por exemplo, 0,1 a 20% (p/p) do agente activo, o restante compreendendo uma composição oralmente dissolúvel ou degradável e, opcionalmente, um ou mais do ingredientes adicionais aqui descritos. Em alternativa, as formulações adequadas para administração bucal podem compreender um pó ou uma solução ou suspensão, sob a forma de um aerossol ou atomizada, compreendendo o agente activo. Tais formulações em pó ou sob a forma de aerossol, quando dispersas têm, de um modo preferido, um tamanho médio de partículas ou de gotas no intervalo de desde cerca de 0,1 a cerca de 200 nanómetros e podem, ainda, compreender um ou mais dos ingredientes adicionais aqui descritos. A composição farmacêutica da invenção pode ser preparada, embalada ou vendida numa formulação adequada para administração 77 oftálmica. Tais formulações podem, por exemplo, estar na forma de gotas oculares incluindo, por exemplo, uma solução ou suspensão do agente activo a 0,1-1,0% (p/p) num veículo líquido aquoso ou oleoso. Tais gotas podem, ainda, compreender agentes tamponantes, sais ou um ou mais outros dos ingredientes adicionais aqui descritos. Outras formulações administráveis oftalmicamente que são úteis incluem as que compreendem o agente activo em forma microcristalina ou numa preparação lipossomal.

Como aqui utilizado, "ingredientes adicionais" incluem, mas não estão limitados a, um ou mais dos seguintes: excipientes; agente activos de superfície; agentes dispersantes; diluentes inertes; agentes de granulação e de desintegração; agentes de ligação; agentes lubrificantes; agentes adoçantes; agentes aromatizantes; agentes corantes; conservantes; composições fisiologicamente degradáveis, tais como gelatina; veículos aquosos e solventes; veículos oleosos e solventes; agentes de suspensão; agentes de dispersão ou molhantes; agentes emulsionantes, demulcentes; tampões; sais; agentes espessantes; agentes de enchimento; agentes emulsionantes; antioxidantes; antibióticos; agentes antifúngicos; agentes estabilizantes; e materiais poliméricos ou hidrofóbicos farmaceuticamente aceitáveis. Outros "ingredientes adicionais" que podem ser incluídos nas composições farmacêuticas da invenção são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo em Genaro, ed., 1985, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, que é aqui incorporado como referência.

As quantidades relativas do agente activo, do veículo farmaceuticamente aceitável e de quaisquer ingredientes adicionais numa composição farmacêutica da invenção irão variar, dependendo da identidade, tamanho e do tipo e gravidade do 78 estado do indivíduo tratado e, ainda, dependendo da via pela qual a composição é para ser administrada. A título de exemplo, a composição pode compreender entre 0,1% e 100% (p/p) do agente activo.

Habitualmente, as dosagens do agente activo que podem ser administradas a um animal, de um modo preferido, um humano, variam numa quantidade desde 1 micrograma a cerca de 100 gramas por quilograma de peso corporal do animal. Enquanto a dosagem precisa administrada irá variar dependendo de um qualquer número de factores, incluindo mas não limitados ao tipo de animal e tipo de patologia a ser tratada, à idade do animal e à via de administração. De um modo preferido, a dosagem do agente activo irá variar desde cerca de 1 miligrama a cerca de 10 g por quilograma de peso corporal do animal. Mais, de um modo preferido, a dosagem irá variar desde cerca de 10 miligramas a cerca de 1 grama por quilograma de peso corporal do animal. Em alternativa, a dosagem pode ser determinada na unidade metro quadrado da superfície corporal de um animal (i. e., miligramas ou quilogramas por metro quadrado, mg/m2 ou kg/m2) . De um modo preferido, esta dosagem irá variar desde cerca de 0,1 miligrama a cerca de 5 gramas por metro quadrado de superfície corporal do animal. Mais, de um modo preferido, a dosagem irá variar desde cerca de 1 miligrama a cerca de 1 grama por metro quadrado de superfície corporal do animal. O agente activo pode ser administrado a um animal tão frequentemente como várias vezes por dia ou pode ser administrado menos frequentemente, tais como uma vez por dia, uma vez por semana, uma vez de duas em duas semanas, um vez por mês ou, mesmo, menos frequentemente, tais como uma vez em vários meses ou uma vez por ano ou menos. A frequência da dose é 79 determinável pelo especialista na técnica e depende de vários factores incluindo, mas não limitado ao tipo e gravidade da doença a ser tratada, o tipo e idade do animal, etc. A invenção é, agora, descrita com referência aos seguintes Exemplos. Estes Exemplos são proporcionados apenas com a intenção de ilustração e a invenção não é limitada a estes Exemplos mas, em vez disso, abrange todas as variações que são evidentes como um resultado dos ensinamentos aqui proporcionados.

Exemplos

Os reagentes e processos que foram utilizados nos Exemplos são, agora, apresentados.

Excepto se de outro modo indicado, toas as reacções foram conduzidas na presença de uma atmosfera inerte (e. g., árgon ou azoto). Todos os solventes foram de grau analítico (e. g., solventes destilados, solventes para cromatografia e solventes para finalização das reacções) ou de grau para HPLC (i. e., solventes reaccionais) . Anidro éter dietílico e tetra- hidrofurano (THF) foram destilados de sódio e benzofenona. O intervalo de pontos de ebulição do hexano utilizado foi 38-55 °C. Cloreto de metileno (CH2CI2) , benzeno, tolueno e N,N-dimetilformamida (DMF) foram destilados de hidreto de cálcio (CaH2) . Ácidos e bases orgânicos eram de grau analítico. Trietilamina (EtsN) , diisopropiletilamina (DIPEA), morfolina e N-metilmorfolina foram destilados de hidreto de cálcio (CaH2) . Todos os outros reagentes, incluindo dimetilaminofenol e 1,3-acetonadicarboxilato de dietilo, foram do grau mais elevado 80 comercialmente disponível. A cromatografia de camada fina analítica (TLC) foi realizada utilizando placas (0,25 milímetro) EM Separations Tech./Merck sílica gel (60-F254) pré-revestidas com um indicador de fluorescência. A visualização foi efectuada utilizando luz ultravioleta (254 nanómetro) e ácido fosfomolíbdico (7% p/v) em etanol a 95%. Os pontos de fusão (mp) foram determinados utilizando um dispositivo capilar de ponto de fusão Thomas-Hoover e são indicados sem correcção. Os espectros de ressonância magnética de protão e de carbono (RMN de 1H e de 13C, respectivamente) foram obtidos num espectrómetro Bruker AM-500 (500 MHz) de transformadas de Fourier e os desvios químicos foram expressos em partes por milhão (ppm) relativamente a CHCI3 como um padrão interno (7,24 ppm para 1H e 77,0 para 13C) . As multiplicidades são designadas como singuleto (s) , dupleto (d) , dupleto de dupleto (dd), dupleto de tripleto (dt), tripleto (t) , quarteto (q) multipleto (m) e singuleto largo (s) . Os espectros de infravermelhos (IR) foram obtidos utilizando um espectrofotómetro Perkin-Elmer Modelo 1600 FT-IR. As absorções foram indicadas em número de onda (cm-1) . As rotações ópticas (em graus) foram medidas utilizando polarímetro Perkin-Elmer Modelo 341. Os espectros de massa de elevada resolução (HRMS) foram obtidos utilizando um VG 70-70HS ou um Micromass AutoSpect. A análise elemental foi realizadas utilizando um Perkin-Elmer 2400 Series II CHNS/O Analyzer. A cromatografia em coluna flash foi realizada utilizando Merck sílica gel 60 (240-400 mesh) e utilizando os sistemas de solventes indicados nas experiências individuais. 81

Exemplo 1

Síntese Total da (-)tamandarina A

Um processo para sintetizar (-)tamandarina A é descrito neste exemplo. 0 processo é ilustrado na Figura 26. 0 processo é iniciado com a síntese do composto 13, representado na Figura 26A.

Reacção A da Figura 26A: Síntese do composto 8

Uma solução compreendendo 5,13 mililitros (36,9 milimoles) de EtsN foi adicionada, gota a gota, a uma solução compreendendo 1,56 gramas (11,9 milimoles) do composto 7,D-alo-isoleucina e 50 mililitros de CH2CI2 destilado recentemente, a 0 °C. Foi adicionado 3,114 grama (12,5 milimoles) de carbobenziloxilsuccinimida (Cbz-succinimida) à mistura resultante. Esta reacção foi agitada a 0 °C durante 1 hora, e mantida com agitação, à temperatura ambiente, durante a noite. A mistura reaccional foi concentrada, diluída com 20 mililitros de uma solução saturada de NaHCCt e lavada duas vezes com alíquotas de 10 mililitros de éter. As camadas combinadas de éter foram extraídas com 10 mililitros de uma solução saturada de bicarbonato de sódio (NaHCCç) . As camadas aquosas combinadas foram arrefecidas a 0 °C, acidificadas até pH 2 pela adição gota a gota de KHSO4 a 1 normal, e extraídas três vezes com 20 mililitros de acetato de etilo (EtOAc) . As camadas de EtOAc foram combinadas, lavadas com 20 mililitros de uma solução saturada de NaCl, e secas na presença de sulfato de sódio anidro (Na2S04) . A solução resultante foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida, para se obter 3,13 gramas do composto 8 82 (rendimento de 99%). 0 composto 8 foi obtido como um óleo incolor e utilizado directamente no passo seguinte sem purificação. Os resultados analiticos para o composto 8 foram como se segue: Rf 0,08 (20:80-acetato de etilorhexano)/ RMN de 1H (500 MHz, CDC13) δ 0,86-0, 90 (m, 3H) , 0, 93-0, 97 (m, 3H) , 1,20- I, 27 (m, 1H) e 1,42-1,47 (m, 1H) , 1, 98-2,09 (m, 1H) , 4,47-4,50 (dd, Ji = 9,1 Hz, J2 = 3,4 Hz, 1H) , 5,10 (s, 2H) , 5,17-5,19 (d, J = 9,1 Hz, 1H) , 7,29-7,35 (m, 5H) ; RMN de 13C (250 MHz, CDCI3) δ II, 69, 14,35, 26, 20, 37,42, 56, 9, 6, 67,20, 128,14, 128,24, 128,55, 135,06, 156,42, 177,41; IR (CHC13) 2470-3540, 3440, 2980, 2950, 2890, 1720, 1510, 1455, 1405, 1385, 1325-1355, 1230-1280, 1165, 1095, 1040, 1005, 910 cm-1.

Reacções B e C da Figura 26A: Síntese do composto 10

Uma solução compreendendo 3,534 gramas (13,3 milimoles) do composto 8 (i, e, Cbz-D-alo-isoleucina bruta) 50 mililitros de CH2CI2 anidro foi arrefecida num banho de gelo a 0 °C. Cada um dos seguintes foi adicionado na forma sólida à solução arrefecida: 2,574 gramas (14.0 milimoles) pentafluorofenol (PFPOH), 3.064 gramas (16,0 milimoles) de cloridrato de 1-etil- 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDAC.HCl) e 0,325 gramas (2,7 milimoles) de 4-dimetilaminopiridina (DMAP). A mistura resultante foi mantida a 0 °C durante meia hora, com agitação, e à temperatura ambiente durante mais 4 horas. A mistura foi diluída com 50 mililitros de CH2C12. A camada de CH2C12 foi lavada uma vez utilizando 25 mililitros de uma solução de ácido clorídrico (HC1) a 10%, uma vez utilizando 25 mililitros de uma solução de NaHC03 a 5% e uma vez utilizando 25 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A camada de CH2C12 lavada foi seca na presença de Na2S04, filtrada e concentrada, sob pressão reduzida. 83

0 éster PFP resultante, composto 9 (5,70 gramas), foi obtido sob a forma de um óleo incolor e utilizado no passo seguinte, sem purificação. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 9: Rf 0,52 (20 : 80 EtOAcrhexano) / RMN de 1H (500 MHz, CDCI3) δ 0 ,90-1, 12 (m, 6H), 1,29-1, 39 (m, 1H) e 1, 45- 1,52 (m, 1H) , 2,05- 2,15 (m, 1H) , 4,79-4, 84 (m, 1H), 5,: 10 (s, 2H) , 5, 12 -5,14 (d, J = 9,1 Hz , 1H), 7,29-7, ,37 (m, 5H); RMN de 13C (250 MHz, CDCI3) δ 11, 68 r 14,25, 26,24 37 ,64 , 57,09 67, 45, 128, 20, 128,35, 128, 59, e 135,95, 136, 9, 139 ,0, 140,0 e 142 ,0, 156,13, 168,87.

Uma solução compreendendo 5,70 gramas do composto 9 e 25 mililitros de THF anidro foi arrefecida a -78 °C. Uma solução de enolato compreendendo o enolato de lítio de acetato de metilo foi preparada por arrefecimento de uma solução compreendendo 49,2 milimoles de dialdeído de lítio e 25 mililitros de THF anidro num banho de gelo seco a -78 °C, adicionando à solução 3,92 mililitros (49,2 milimoles) de acetato de metilo por seringa e mantendo a solução resultante com agitação a - 78°C durante 1 hora. A solução de enolato resultante foi adicionada, gota a gota, à solução compreendendo o composto 9 e a mistura resultante foi mantida com agitação durante 0,75 horas a - 78°C. A reacção foi extinta a - 78°C adicionando 50 mililitros de uma solução saturada de cloreto de amónio aquoso (NH4C1). A reacção extinta foi trazida à temperatura ambiente e o THF foi removido sob pressão reduzida. A solução aquosa resultante foi extraída 3 vezes com alíquotas de 25 mililitros de CH2CI2. As camadas combinadas de CH2CI2 foram lavadas uma vez utilizando 25 mililitros de uma solução de ácido clorídrico (HC1) a 10%, uma vez utilizando 25 mililitros de uma solução de NaHCCq a 5% e uma vez utilizando 25 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A camada de CH2CI2 lavada foi seca na presença de Na2S04, 84 filtrada e concentrada, sob pressão reduzida. Esta reacção produziu um óleo amarelo o qual foi purificado por cromatografia em coluna flash. 0 óleo amarelo foi aplicado a uma coluna de silica gel e eluido com uma solução compreendendo EtOAc e hexano na razão de 10 para 95, respectivamente. O produto obtido da cromatografia foi 3,42 gramas de um óleo incolor correspondente ao beta-cetoéster, composto 10. O rendimento do composto 10 foi de 80%, tal como calculado para as Reacções B e C. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 10: Rf 0,42 (35:65, EtOAc:hexano); RMN de (500 MHz, CDC13) δ 0,75-0,79 (m, 3H) , 0, 90-0, 98 (m, 3H) , 1,26-1,30 (m, 1H) e 1,42-1,46 (m, 1H) , 1, 97- 1, 99 (m, 1H) r 3,53 ( :s, 2H) , 3, 72 (s , 3H) 1 KD LO 4,58 (d, J = 7 , 6 Hz, 1H) , 5 ,10 (s, 2H) , 5, 26-5, 28 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,30- 7, 36 (m, 5H) r RMN de 13C (250 MHz , CDC13) δ 11,83 , 13, -7 9, 26, 83 r 36, 12, 46, 56, 52, ,46, 63, 00, 67, 19, 128,10, 128, ,24, 128,5 6, 136,16, 1 56,42, 166, , 96, 201, 68; IR (CHC13) 334 í 3,1, 2964,4, 1748,3, 1712, 9, 1520, 6, 1454,8, 1328,2, 1232,1 cm-1; HRMS m/z calculado para C^t^NOsNa (M+Na+) : 344, 1498, encontrado 344,1490; [a]D20 -27,85 (c 0,53, CHCI3) ; Anal. Cale. para 0ι7Η23Ν05: C, 63,52; H, 7,22, N, 4,36. Encontrado: C, 63,32; H, 7,15, N, 4,24.

Reacção D da Figura 26A: Síntese do composto 11

Uma solução compreendendo 2,797 gramas (8,7 milimoles) do composto 10 e 30 mililitros de metanol de grau para HPLC (MeOH) foi arrefecida a -78 °C e foi adicionado, em porções, 1, 644 gramas (30,5 milimoles) de boro-hidreto de potássio (KBH4) . A mistura resultante foi inicialmente mantida com agitação a -78 °C durante 10 minutos. O vaso reaccional foi, de seguida, aquecido até -20 °C e mantido com agitação durante 30 minutos, 85 após o que o vaso reaccional foi aquecido até 0 °C e mantido com agitação durante 10 minutos. A mistura resultante foi extinta a 0 °C adicionando uma solução compreendendo ácido acético glacial, em modo gota a gota, até o pH da camada aquosa não ser inferior a pH 6 quando testado com papel de litmus. A solução em bicamada neutralizada resultante foi concentrada sob pressão reduzida e foi adicionado 50 mililitros de uma solução compreendendo EtOAc e H2O numa razão de 1 para 1. A camada orgânica foi separada da camada aquosa e lavada com 10 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A camada orgânica lavada foi seca na presença de Na2S04, filtrada e concentrada, sob pressão reduzida. O produto bruto assim obtido foi de 2,78 6 gramas de um óleo incolor compreendendo uma razão 11:1 do composto 11 e do seu estereoisómero, respectivamente. Cristalização do óleo incolor numa solução compreendendo éter e hexano rendeu o composto 11 puro sob a forma de um sólido branco cristalino com um rendimento de 99%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 11: Rf 0,29 (35:65, EtOAc:hexano) ; RMN de (500 MHz, CDC13) δ 0,83-0,85 (m, 3H) , 0, 89-0 ,92 (m, 3H) , 1,19-1 , 23 (m, 1H) e 1 , 32-1 ,34 (m, 1H) , 1, 91· 1, 93 1 (m, 1H) , 2,45-2,51 (dd, Jl = 16, 7 Hz, J2= 9,1 Hz, 1H) ( 2, 58-2 ,62 (dd, Ji = 16,7 Hz, J2 = 2,7 Hz, 1H) , 3, 12-3, 14 (d J = 4, 5 Hz, 1H) , 3,68 (s, 3H) , 3, 90- -3, 91 (m, 1H) , 4, 62-4, 65 (d J =10, 0 Hz, 1H) , 5,07-5,( 08 (d, J 5,1 Hz, 2H) , 7, 29-7, 35 (m 5H) ; RMN de 13C (250 MHz, CDCI3) δ 12,10 , 13 , 64, 27 ,52, 34, 28 38 ,74, 52,25, 57,57, 67, r 39, 69, 43, 128 ,50, 128 ,61 , 12! 3, 97 < 13 6, 82 , 157,08, 174,09; IR (CHC13) 3421, 3316, 2951, 1709, 1537 1443, 1229 cm1; HRMS m/z calculado para Ci7H25N05Na (M+Na+) : 346, 1630, encontrado 346, 1645; [a]D20 -10,9 (c 0,595, CHC13) ;

Anal. Calculado para C17H25NO5: C, 63,12; H, 7,80, N, 4,33. Encontrado: C, 63,23; H, 7,85, N, 4,06. 86

Reacção E da Figura 2 6A: Sintese do composto 12

Uma solução compreendendo 0,8636 gramas (2,67 milimoles) do composto 11 como um óleo incolor e 10 mililitros de CH2CI2 foi sob uma atmosfera de árgon e arrefecida para 0 °C. Foi adicionada uma solução compreendendo 0,778 mililitros (6,68 milimoles) de 2,6-lutidina, seguido pela adição de uma solução compreendendo 1,08 mililitros (4,01 milimoles) de triflato de triisopropilsililo (i-Pr3SiOTf) . A mistura reaccional foi inicialmente mantida com agitação a 0 °C durante 30 minutos, após o que a mistura reaccional foi mantida à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura resultante foi diluida com 2 0 mililitros de CH2CI2. A camada de CH2CI2 foi lavada uma vez utilizando 15 mililitros de uma solução de ácido clorídrico (HC1) a 10%, uma vez utilizando 15 mililitros de uma solução de NaHCCç a 5% e uma vez utilizando 15 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A camada de CH2CI2 lavada resultante foi seca na presença de Na2S04 anidro, filtrada, e concentrada sob pressão. O resíduo concentrado foi purificado por cromatografia em coluna flash, eluindo com soluções compreendendo éter e hexano numa razão de desde 2 para 98, respectivamente, a 15 para 85, respectivamente. A cromatografia rendeu 1,204 gramas (rendimento de 94%) do composto 12 com o isómero maior na forma de um óleo incolor. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 12: Rf 0,65 (35:65, EtOAc:hexano); RMN de XH (50 0 MHz , CDCI3 ) δ 0, 84 -0, 91 (m, 6H), 0, , 99· LO O \—1 1 (m, r 21H), 1, 12- 1,34 (m, 2H) , 1 ,81 -1, 84 (m, 1H) , 2 , 54-2 , 62 (m, 2H) , 3,54 (s , 3H) , 3,73- 3,75 (m , 1H), 4 ,34-4, ,36 (m, 1H) , 4, 69-4, 71 (d, J = 10 ,5 Hz, 1H) , 5,01-5, 04 (d, J = 12, , 3 H: z, 1H) e 5, 09-5, 11 (d, J = 12 ,3 Hz, 1H) , 7,28-7 ,34 (m r 5H) ; RMN de 13C (25 0 MHz , CDC1; s) δ 12 , 50 , 12 ,74, 13,97, 18, , 08, T 27,44, , 34 ,40 , 40, 45, . 51, 54, 58, , 62, 87 66,67, 70,49, 128,03, 128,08, 128,46 e 136,67, 156,51, 172,00; IR (CHCls) 3450, 3359, 2944, 2863, 1728, 1510, 1459, 1434, 1384, 1308, 1232, 1171, 1090 cm"1; HRMS m/z calculado para C26H45NSi05Na (M+Na+ ): 480,3145, encontrado 480,3128; [a]D20 +15,88 (c 0,57, CHCI3) ; Anal. Calculado para Ci7H25NOs: C, 65, 09; H, 9,46, N, 2, 92 . Encontrado: C, 64,80; H, 9,41, N, 2,69.

Reacção F da Figura 26A: Síntese do composto 13

Uma solução compreendendo NaOH a 1 normal (20 mililitros, 11 milimoles) foi adicionada a uma solução compreendendo 0,84 gramas (1,753 milimoles) do composto 12, 10 mililitros de THF e 10 mililitros de MeOH, que foi arrefecida para 0 °C. Esta mistura reaccional foi mantida com agitação a 0 °C durante 2 horas. A mistura reaccional foi, então, mantida com agitação à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida e diluida com 10 mililitros de H20. A mistura resultante foi arrefecida para 0 °C num banho de gelo, acidificada a pH 2 adicionando uma solução compreendendo KHS04 a 1 normal e extraida 3 vezes com alíquotas de 10 mililitros de EtOAc. As camadas de EtOAc foram combinadas, lavadas com 10 mililitros de uma solução saturada de NaCl, secas na presença de Na2S04 anidro, filtradas e concentradas. Esta reacção rendeu 0,7709 gramas (rendimento de 95%) do composto 13, na forma de uma espuma branca. O composto 13 foi utilizado na reacção subsequente sem purificação. Os resultados analíticos para o composto 13 foram como se segue: Rf 0, 08 (35:65-acetato de etilo:hexano) ; RMN de 1H (500 MHz, CDCI3) δ 0, 86-1, 00 (m, 6H) , 1,06-1,08 (m, 21H), 1,19-1,24 (m, 1H) e 1,64-1,72 (m, 1H), 1,85-1,92 (m, 1H) , 2,50-2,80 (m, 2H) , 3, 60-3, 80 (m, 1H) , 4,28-4,33 88 (m, 1H) , 4, 86-4, 88 (d, J = 10,4 Hz, 1H) , 5, 06-5,22 (m, 2H) , 7,29-7,45 (m, 5H).

Reacção G da Figura 26B: Síntese do composto 15 A síntese de uma forma protegida de (2S)-a- hidroxiisovaleril-isostatina (6) é representada na Figura 26B. Na reacção G da Figura 26B, L-valina (14) foi dissolvida numa solução compreendendo nitrito de sódio (NaN02) e ácido sulfúrico a 1 normal (H2SO4) . A reacção foi realizada utilizando um processo padrão como descrito, por exemplo, em Green e Wutz (1999, Protection Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York) ou Bodansky (1993, Principies of Peptide Synthesis; Springer, Berlin). Esta reacção rendeu a alfa-hidroxivalina (15).

Reacção H da Figura 26B: Síntese do composto 16

Na reacção H, 2,46 gramas (17,78 milimoles) de carbonato de potássio anidro (K2C03) e 1,25 gramas (3,4 milimoles) de iodeto de tetrabutilamónio (Bu4NI) foram adicionados a uma solução compreendendo 2 gramas (16,93 milimoles) de alfa-hidroxivalina (15) e 20 mililitros de DMF redestilado, seguido pela adição, gota a gota, de 5,86 mililitros (67,72 milimoles) de brometo de alilo. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com 20 mililitros de H20 e extraída três vezes com alíquotas de 20 mililitros de éter. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas uma vez utilizando 15 mililitros de uma solução de ácido clorídrico (HC1) a 10%, uma vez utilizando 15 mililitros de uma solução de NaHC03 a 5% e uma vez utilizando 15 89

mililitros de uma solução saturada de NaCl. As camadas orgânicas lavadas resultantes foram secas na presença de Na2S04, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida. Esta reacção rendeu 2,53 gramas (rendimento de 96%) do composto 16, na forma de um óleo laranja. O Composto 16 foi utilizado na reacção subsequente sem purificação. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 16: Rf 0,50 (25:75, EtOAc:hexano); RMN de 3Η (500 MHz, CDC13) δ 0,71-0,86 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 0,92-1,00 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 2,04-2,10 (m, 1H), 2,65-2,66 (d, J = 6,1 Hz, 1H) , 4,03-4,05 (dd, Ji = 5,9 Hz, J2 = 3,5 Hz, 1H) , 4, 62-4,70 (m, 2H) , 5,24-5,27 (dd, Ji = 10,4 Hz, J2 = 1,1 Hz, 1H) e 5,31-5,35 (dd, Ji = 17,2 Hz, J2 = 3,5 Hz, 1H) , 5, 86-5, 94 (m, 1H) ; RMN de 13C (250 MHz, CDC13) δ 15, 93, 18,76, 32,17, 66, 04, 75, 03, 119,12, 131,48, 174,62/ IR (CHC13) 3521-3458, 2964, 2880, 1735, 1646, 1462, 1367, 1257, 1204, 1136, 1073, 1026, 983, 931 cm-1.

Reacção I da Figura 26B: Síntese do composto 17

Uma solução compreendendo 0,6827 grama (1,47 milimoles) do composto 13 e 2,5 mililitros de tolueno destilado recentemente, foi colocado sob uma atmosfera inerte e arrefecida para 0 °C. Foi adicionada uma solução compreendendo 0,232 gramas (1,47 milimoles) do composto 16 e 2,5 mililitros de tolueno, gota a gota, à solução arrefecida do composto 13, seguido pela adição de 0,333 gramas (1,61 milimoles) de diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) e 0,036 grama (0,29 milimoles) de DMAP. A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 2 horas e mantida à temperatura ambiente durante a noite. A reacção foi extinta adicionando 2 mililitros de uma solução compreendendo MeOH e ácido acético (AcOH) numa razão de 1:2, e EtOAc, e agitada durante 20 minutos, à temperatura ambiente. A mistura resultante 90 foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo que permaneceu após este processo foi dissolvido em 10 mililitros de éter, o que resultou na formação de um sólido que foi removido por filtração. O filtrado foi lavado uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de ácido cítrico de 10%, uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de NaHCCb a 5% e uma vez utilizando 10 mililitros de solução salina saturada (i. e., uma solução saturada de NaCl). A camada orgânica foi seca na presença de Na2S04 anidro, filtrada e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna flash, eluindo com uma mistura de solventes compreendendo éter e hexano, numa razão de desde 2 para 98, respectivamente, a 12 para 88, respectivamente. A concentração do eluente, sob pressão reduzida, rendeu 0,5774 grama (rendimento de 65%) do composto 17, na forma de um óleo incolor. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 17: Rf 0,55 (20:80-acetato de < stilo:hexano); RMN de 1 H (5 00 MHz, CDCI3) δ 0,85-1,08 (m, 33H) , 1, 16-1 ,19 (m , 1H) , 1, 34-1, 36 (m, 1H) , , 1,80 -1,82 (m, 1H) , 2,18 -2,2 1 (m , 1H) , 2, 68 -2,7 3 (m, 2H) , 3,78- -3, 82 (m, 1H), 4 ,37- 4,42 (m, 1H) , 4,55 -4, 64 (m, 2H) , 4, 77-4 ,78 (d, J = 4,4 Hz, 1H) , 4,86 -4,8 8 (d d J = 10,7 Hz, 1H) , 5, 07 (s, 2H) , 5,21-5,23 (dd, Ji = 9, 4 Hz, J2 = 0, 9 Hz, 1H) , 5, 2 8 — £ 5,32 (dd, Ji = 17,0 Hz, J2 = 1,2 Hz, 1H) , 5, 83-! 5, 87 (m, 1H) , 7 , 27-1 ',34 (m, 5H) ; RMN de 13c (250 MHz, cdci3: ) δ 12,69 , 12, 93, 14, 14, 17,25, 18,12, 18 ,78, 26, 33, 2 !9, 98 , 34,4 8, 40 ,28, 58, ] -5, 66, 69, 68,67, 70,66, 76 ,74, 118, 82, 128, 01, 12 8,40, 128 ,47, 136 ,75, 131 ,63, 156,48, 169 ,13, 170, 78; IR (CHCI3) 3380, 2 964, 2867, 1743 , 150£ 3, 1463, 1 374, 1201, 1129, 994, 882 cm-1; HRMS m/z calculado para C33H55NSi07Na (M+Na+) : 628,364552, encontrado 628,365878; Anal. Calculado para C33H55NS1O7: C, 65,41; H, 9,16. Encontrado: C, 65, 09; H, 9,05. 91

Reacgão J da Figura 2 6B: Síntese do composto 6

Na reacção J, tetraquis-(trifenilfosfina)paládio (Pd(PPh3)4, 0,044 gramas, 0,038 milimole) foi adicionado a uma solução compreendendo 0,2315 grama (0,38 milimole) do isostatina-Hiv-aliléster, composto 17, e 3 mililitros de THF destilado recentemente. Foi adicionado, gota a gota, morfolina destilada recentemente (0.,33 mililitros, 3,8 milimoles) à mistura resultante. A adição de reagentes foi realizada numa estufa escura e a mistura reaccional foi mantida com agitação, à temperatura ambiente, e numa estufa escura durante, pelo menos, 8 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida e diluída com 5 mililitros de CH2CI2. A solução obtida deste processo foi lavada uma vez com 5 mililitros de uma solução compreendendo HC1 a 1 normal e uma vez utilizando 5 mililitros de H2O. A camada orgânica lavada foi seca na presença de Na3S04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 5 mililitros de éter, filtrado e novamente concentrada, sob pressão reduzida. O resíduo que permaneceu após este processo foi uma espuma branca correspondente ao composto 6 (rendimento quantitativo 0,218 gramas). O composto 6 foi utilizado na reacção subsequente sem purificação. A síntese de um hexapéptido linear, composto (20), é representada na Figura 26C. O composto 5 foi preparado como descrito (Li et ai., 1990, J. Am. Chem. Soc. 112:7659-7672). 92

Reacgão K da Figura 26C: Síntese do composto 18

Uma solução compreendendo 0,6653 grama (0,74 milimole) do composto 5 e 10 mililitros de MeOH foi adicionada a uma

suspensão compreendendo 0,1996 grama de Paládio a 10% em carvão (Pd/C), 10 mililitros de MeOH e 10 mililitros de EtOAc. A mistura reaccional foi agitada utilizando um dispositivo Parr durante 5 horas, à temperatura ambiente. A pasta resultante foi filtrada através de Celite® e a Celite® foi lavada com um

excesso de uma mistura de solventes compreendendo MeOH e EtOAc, numa razão de 1 para 1. O filtrado foi seco na presença de Na2S04 anidro, filtrado e concentrado sob pressão reduzida, para se obter o composto 18 (0,552 gramas, rendimento de 98%). O composto 18 (i. e., Leucilprolil-N,O-dimetiltirosina-N-Boc-O- SEM-treonina) foi obtido na forma de um sólido branco, utilizando este processo e foi utilizado, na reacção subsequente, sem purificação. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 18: Rf 0,03 (40:60, acetona:hexano) / RMN de 1H (500 MHz, CDCI3) δ -0,001 (s, 9H) , 0, 64-0,86 (m, 2H) , 0,88-0, 96 (m, 6H) , 1,19-1,21 (d, J = 6,3 Hz), 1,33-1,34 (d, J = 6,3 Hz, 3H, RI), 1,44 (s, 9H) , 1,63-1, 92 (m, 3H), 1, 92-2,01, 2,08-2,24 (m, 4H) , 2,73 (s, 3H), 2, 86-2,96 (m), 3,10-3,19 (m, 2H) , 3, 45-3, 72 (m, 4H) , 3,75 (s, 3H) , 4,34-4,69 (m, 3H) , 4 ,78- 1 co 1—1 (dd, Ji = O OO Hz, J2 = 3, r 3 Hz, 1H), 5, 01-5,10 (m, 1H) , 5 ,17- -5, 52 (m) , 7,58 -7,60 (d, J = 9 ,7 Hz, 3H) , 6, 77-6,83 (m, 2H) , 7 , 00- -7,10 (m, 2H) ; RMN de 13C (250 MHz, CDCI3) δ -í, .46, 16, 87, 17, 96, 22, 00 r 23,19, 23, 76, 25, 14, 28 ,16 , 29,31, 33, . 65, 39, 31, 47, 34, 50,54 r 55,37, 55, 46, 58, 66, 62 ,25 , 68,16, 72, . 36, \—1 OO 15, 89, 83, 114,39, 128,75, 128, 75, 130 ,47, 157,04, 158, . 84, 168,15, 168,95, 169,57, 173,13; IR (CHC13) 3285, 2951, 1740, 1709, 1641, 1511, 1448, 1365, 1250, 1161 cm-1; HRMS m/z calculado para C37H63N4SÍO10 (M+Na+) : 751,4314, encontrado 751,4343; [a]D20 93 -44, 68 (c 1,03, CHCI3) ; Anal. Calculado para C37H62N4SÍO10: C 59,17/ H, 8,33; N, 7,46, Encontrado: C, 59,17; H, 8,35; N, 7,26.

Reacção L da Figura 26C: Síntese do composto 19

Na reacção L, o composto 6 do rendimento total da reacção J foi dissolvido em 1 mililitro de CH2CI2 destilado recentemente e arrefecido a 0 °C. A esta solução foi adicionado 0, 074 grama (0,40 milimole) de PFPOH, (0,088 gramas, 0,46 milimole) de EDAC.HC1 e 0,0093 grama de DMAP (0,076 milimole). A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 30 minutos. A mistura reaccional foi mantida à temperatura ambiente durante mais 4 horas e diluída com 10 mililitros de CH2CI2. A camada orgânica foi lavada uma vez utilizando 5 mililitros de uma solução de HC1 a 10%, uma vez utilizando 5 mililitros de uma solução de NaHCCb a 5% e uma vez utilizando 5 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A camada CH2CI2 foi seca na presença de Na2S04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna flash, eluindo com uma mistura de solventes compreendendo éter e hexano numa razão de desde 3 para 97, respectivamente, a 7 para 93, respectivamente. A concentração do eluato, sob pressão reduzida, rendeu 0,2315 grama de um óleo incolor correspondente ao éster PFP, composto 19 (rendimento de 83% para a reacção J da Figura 26B e reacção L de Figura 26C) . Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 19: R Rf 0,57 (20:80,

EtOAc:hexano) ; RMN de ΧΗ (500 MHz, CDCI3) δ 0,86- 1,09 (m, 33H) , 1,18-1,20 (m, 1H) , 1,27- 1,29 (m, 1H), 1,84-1,86 (m, 1H), 2,31- 2,36 (m, 1H) , 2, 69 -2,72 (m, 1H) , 2,80-2,85 (m, 1H) , 3,79-3,82 (m, 1H) , 4,38 -4,42 (m, 1H) , 4,78-4,80 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 4, 97-4, 98 (d, J = 4,4 Hz, 1H) , 5,00-5, 06 (m, 2H) , 7,25-7,29 (m, 94 5Η) / RMN de 13C (250 MHz, CDC13) δ 12,72, 12,95, 14, 07, 17,20, 18,09, 18,45, 27,52, 30,19, 34,40, 40,12, 58,17, 65,82, 66,74, 70,47, 127,92, 128,18, 128,33, 136,57, 138,83, 140,06, 140,65, 141, 97, 156, 56, 165, 68, 170,76; IR (CHC13) 3480, 2962, 2868,

1793, 1730, 1516, 1464, 1381, 1214, 1094, 995, 880 cm-1; HRMS m/z calculado para C36H5oNF5Si07Na (M+Na+) : 754,3174, encontrado 754,3191.

Reacção M da Figura 26C: Síntese do composto 20

Uma solução compreendendo 0,2855 grama (0,39 milimole) do composto 19 e 1,5 mililitros de CH2CI2 foi arrefecida para 0 °C, num banho de gelo. A esta solução foi adicionado, gota a gota, 0,17 mililitros (0,98 milimole) de DIEA e a mistura resultante foi mantida com agitação a 0 °C, durante 20 minutos. Uma solução compreendendo 0,522 grama do composto 18, 0,0095 grama (0, 078 milimole) de DMAP e 1,5 mililitros de CH2CI2 foi adicionada à solução compreendendo o composto 19 utilizando uma seringa. A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 1 hora e mantida à temperatura ambiente durante mais 1 hora. A reacção foi extinta a 0 °C adicionando 3 mililitros de uma solução saturada de NH4C1 e diluindo a reacção com 10 mililitros de CH2CI2. A mistura resultante foi separada à temperatura ambiente. A camada aguosa foi extraida 3 vezes utilizando aliquotas de 10 mililitros de CH2CI2 e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de HC1 a 10%, uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de NaHCCg a 5% e uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A camada orgânica lavada foi seca na presença de Na2S04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Esta reacção rendeu 0,4861 grama (rendimento de 96%) do precursor 95 hexapéptido totalmente protegido, composto 20. O composto 20 foi obtido na forma de um espuma branca utilizando este processo e foi utilizado na reacçao subsequente sem purificação adicional. Os resultados analíticos para o hexapéptido 20 foram como se segue: Rf 0,47 (05:95- acetona: CH2C12) ; RMN de (500 MHz, CDC1 3) δ - 0, 0008 (s, 9H) , 0 , 73-0,83 (m , 2H), 0,85-0, 92 ( m, 9H) , 0, 92 -1, 08 (m, 21H) , 1,40 > (s , 9H), 1 ,13 -2,19 (m, 11H) , 2, 43- 2,46 (m, 1H) e 2,54-2,58 (m, 1H) , 2,64 e 2, 88 (s, 3H, RI) , 3, 09- 3, 17 (m, 2H) , 3,44-3,73 (m, 4H) , 3,75 (s, 3H) , 3,7! 9-3, £ > 9 (m, 1H) , 4,38 -4, 45 (m, 114),4 1,21- -4,35 (m, 3H) , 4,70-4,81 (m, 1H) , 4 , 96- 5,06 (m ., 3H) , 5,18-5 ,43 (m, 3H) e 8, 32- 8,34 (d, J = 9 , 0 H z, 3H) , 5,46 -5, 48 (d, J = 6, 1 H: 2, 1H), 6,74 -6, 83 (m, 2H) , 6, 95-7 ,11 (m, 2H) , 7, 25- 7,38 (m, ! 5H) , 7,75-7,77 (d, J = 8,5 Hz) e 8, 85- 8,87 (d, J = 10 ,1 Hz, 2H) ; RMN de 13C (2 5 0 MHz, CDCI3) δ -1 ,45, 11 ,73, 12,7 3, 14, 47, 16, 54, 17 ,73, 17,99, 18, .14, 18,92 , 21 ,40, 23 ,54, 24,42, 25, 13, 28,21, 28 ,27, 29, 20, 29, .67, 30,13 , 33 ,59, 34 ,86, 39,58, 39, 73, 46, 87, 49 ,04, 55,13, 55, ,39, 56, 90 , 58 ,94, 62 ,24, 66,42, 68, 12, 70, 96, 72, 25, 78,71, 80, 39, 89, 85, 113, 92, 114 ,37, 127, 70, 127,76, 127, 86, 128 ,35, 128 ,45 , 128,81, 128, 91, 137 ,01, 130, 44, 130,86, 156, 39, 158 ,40, 158 , 82 , 169,20, 169, 75, 169 ,97, 170, 58, 17 1,77, 173, 85/ IR (CHCI3) 3275 , 2952, 2868, 1735 , 1704,

1636, 1511, 1454, 1380, 1365, 1250, 1167, 1110, 1047 cm-1/ HRMS m/z calculado para C67HinN5Si20i6Na (M+Na+) : 1320,7462, encontrado 1320,7520/ [a] D20 -44,56 (c 1,13, CHC13) ; Anal. Calculado para C67HniN5Si20i6: C, 61,95; H, 8,62; N, 5,40, Encontrado: C, 61,75; H, 8,59; N, 5,15. A ciclização do hexapéptido 20 para se obter composto 21 é representada na Figura 26D. 96

Reacgão N da Figura 26D: Síntese do composto 21

Uma solução compreendendo 0,3505 grama (0,27 milimole) do composto 20 e 5 mililitros de CH2CI2 foi arrefecida a 0 °C e foi adicionado 0,21 grama (0,81 milimole) de eterato de brometo de magnésio (MgBr2.Et20) . A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 2 horas e mantida à temperatura ambiente durante mais 4 horas. A mistura reaccional foi diluída adicionando 10 mililitros de CH2CI2 e lavada uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de HC1 a 10% e uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A camada de CH2CI2 foi seca na presença de Na2S04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A espuma branca obtida como um produto desta reacção de desprotecção foi utilizada, na reacção de hidrogenólise subsequente, sem purificação. O rendimento total de espuma branca (0,3195 gramas) foi dissolvido em 10 mililitros de MeOH e submetido a hidrogenólise, como descrito para a preparação do composto 18. Esta reacção de hidrogenólise rendeu 0,296 grama de uma espuma branca que foi utilizada, na subsequente reacção de acoplamento sem purificação. O produto da hidrogenólise foi dissolvido em 27 mililitros de DMF recentemente destilado e arrefecida para 0 °C. À solução arrefecida foi adicionado 0,123 grama (0,32 milimole) de hexafluorofosfato de 2-(lH-9- azobenzotriazole-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (HATU), seguido pela adição, gota a gota, de 0,141 mililitros (0,81 milimole) de DIEA. A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 1 hora e mantida com agitação à temperatura ambiente durante, pelo menos, 8 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão

reduzida, diluída com 10 mililitros de EtOAc e lavada uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de HC1 a 10%, uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de NaHCCb a 5% e uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A 97 camada de CH2CI2 foi seca na presença de Na2S04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. 0 residuo bruto obtido deste processo foi purificado por cromatografia em coluna flash utilizando a mistura de solventes compreendendo acetona e hexano, numa razão de desde 5 para 95, respectivamente, a 15 para 85, respectivamente. 0 eluato resultante foi concentrado, sob pressão reduzida, para se obter 0,173 grama do macrociclo protegido, composto 21, na forma de uma espuma branca. O rendimento do composto 21 representa um rendimento de 63% para as três reacções iniciando-se com o composto 20 (i. e., a desprotecção, hidrogenólise e reacções de acoplamento). Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 21: Rf 0,55 (30 : 70, acetona :hexano) ; RMN de (500 MHz, CDCls) δ 0 ,78- 1,0 7 (m, 39H) , 1,21- 1,48 (m, 17H) , . 1,56-1, 92 (m, 4H), 1, 95- 2, 11 (m, 2H) , 2,43- -2,44 (m, 1H) , 3, 11 -3,17 (m, 1H) , 2,53 ( s, 3H) , 2,8 9- 3, 02 (m, 1H) , 3,30- 3,34 (m, 1H), 3,49-3,52 (m, 1H) , 3 , 60- 3, 62 (m, 1H) , 3, 66- 3, 70 (m, 1H) , 3,77 (s, 3H) , 4,14-4 ,19 (m, 1H) r 4,37 -4,43 (m, 1H), 4,46 -4,48 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4, 55- 4,86 (m, 1H) , 4,8 8-4,91 (m; 1 , 7,60-7 , 66 (m, 4H) , 6, 82-6, 83 (d, J = 8 ,5 H: z, 2H) , 7, C >6-7, 07 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,41-7 ,48 (m, 2H) r RMN de 13 !C (250 MHz , CDCI3) δ 12,24, 12,66, 14,21, 15 ,11, 15, 61 , 17 ,98, 18,60, 18, 74, 19,31 , 21,10 ,23,92, 25,24, 27 ,21, 28, 42 , 30 ,48, 34,87, 37, 92, 39, 00 , 41,65, 47,10, 48,52, 55 , 67, 56, 16 , 57 ,25, 63, 26, 66, 33, 68,65, • 71,78, 80,46, 81,66, 114 ,50, 130 ,31, 130,82 , 156, 40, 159, 01, li 59, 13, 170, 90, 171,34, 172 ,78, 176,75/ IR (CHCI3) 3330, 2952, 2876, 1735, 1629, 1508, 1447, 1243, 1168, 1024, 843 cm-1/ HRMS m/z calculado para CssHsgNsSiO^Na (N4+Na+): 1038,6175, encontrado 1038,6166.

As reacções finais na sintese total da (-)tamandarina A, 101, estão representadas na Figura 26E. O composto 4 foi 98 preparado de forma previamente revelada em Li et al. (1990, J.

Am. Chem. Soc. 112:7659-7672).

Reacção O da Figura 26E: Síntese do composto 22

Uma solução compreendendo 167 miligramas (0,165 milimoles) de macrociclo protegido (composto 21) e 20 mililitros de EtOAc foi arrefecida para -30 °C. Foi introduzido HC1 gasoso na solução e a temperatura da mistura reaccional foi mantida entre -10 °C a -20 °C durante a introdução de HC1. A mistura reaccional foi agitada e mantida a uma temperatura de entre -0 °C a -20 °C durante mais 30 minutos. A mistura reaccional foi aquecida até 0 °C e mantida a 0 °C durante 1 hora. O vaso reaccional foi purgado com N2 gasoso durante, pelo menos, 30 minutos enquanto a temperatura do vaso foi mantida a 0 °C. A solução purgada foi aquecida até à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo que permaneceu após a concentração da reacção foi triturado e lavado por decantação utilizando três aliquotas de 5 mililitros de a mistura de solventes compreendendo éter terc-butilmetilico e hexano numa razão de 1 para 4, respectivamente. O sólido que foi produzido por este processo foi recolhido por filtração e seco sob pressão reduzida, para proporcionar 127,5 miligramas (rendimento quantitativo) do sal de cloridrato do composto 22. O composto 22 foi obtido sob a forma de um sólido branco e foi utilizado sem purificação na reacção final de acoplamento. 99

Reacgão P da Figura 26E: Síntese da (-)tamandarina A (Composto 101)

Uma solução compreendendo 63,3 miligramas (0,082 milimole) do composto 22, 37,7 miligramas (0,12 milimole) de composto 4, e 0. 50 mililitros de CH2CI2 foi arrefecida a 0 °C num banho de gelo. A esta solução arrefecida foi adicionado 53,1 miligramas (0,12 milimole) de hexafluorofosfato de benzotriazole-l-il-oxi-tris(dimetilamino)-fosfónio (BOP) e 0,035 mililitros (0,32 milimole) de NMM. A mistura reaccional foi agitada durante 30 minutos a 0 °C e deixada aquecer para a temperatura ambiente. A mistura reaccional foi mantida com agitação à temperatura ambiente durante, pelo menos, mais 8 horas. A solução resultante foi diluída com 2 mililitros de uma solução saturada de NaCl e extraídas com 10 mililitros de EtOAc. A camada orgânica extraída foi lavada uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de HC1 a 10%, uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de NaHCCb a 5% e uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A camada orgânica lavada foi seca na presença de Na2S04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash, utilizando uma mistura de solventes compreendendo MeOH e CH2CI2 numa razão de desde 2 a 98, respectivamente, de 5 a 95, respectivamente. Este processo rendeu 0,0471 gramas de tamandarina A (composto 101) na forma de um sólido amarelo esverdeado. O rendimento do composto 101 foi 56%, como calculado para as reacções O e P, e 12%, como calculado para reacções A-F,

1, J e L-P (i. e., iniciando com D-alo-isoleucina). Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para a tamandarina A (101) : Rf 0,57 (10 : 90-MeOH: CH2C12) ; RMN de XH (500 MHz, CDCI3) δ 0,86-1,08 (m, 24H), 1,19-2,30 (dd, Jl = 17,1 Hz, J2 = 7,9 Hz, 1H) , 3,29- 3,33 (d, J = 17,0 Hz, 1H) , 2, 62 (s, 3H), 3, 14 (s, 3H), 100 3,1 6- 3, 21 (dd, Jl=14, 4 Hz, J2 = \—1 M». \—1 \—1 Hz, 1H) , 3,41-3,45 (m, 1H) 3,5 9- 3, 80 (m, 5H), 3, 82 (s, 3H) , 3, 90 -3,95 (m, 1H) , 4 :, 03- 4,0 (m, 1H) 1 , 4,29- -4,30 (m, 1H) , 4 ,37- 4,42 (m, 1H) , 4, 67-' 4, 69 (m 1H) r 4, 74- 4,77 (m, 1H) 1, 4,89-4, 93 ( m, 1H), 5,06 (d, J = 4,3 Hz 1H) r 5, 31- 5,35 (q, Ji = 11, 6 Hz , J2 = 3, , 3 H: 2, 1H), 5,44- 5,46 (m 1H) r 6, 86- 6, 88 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7, ,09-7,11 (d, J = 8,3 Hz 2H) r 7, 37- 7,39 (d, J = 9,1 Hz, 1H) , 7, ,48-7,50 (d, J = 5,1 Hz 1H) r 7, 78- 7,80 (d, J = = 9,7 H z, 1H) ; RMN de 13C (250 MHz, CDC1 3) < 11, 78 r 14, 07, 16,52, 17,55, 18 ,93, 20, 28, 20, 90, 21,32 , 23 ,47 23, 79 r 24, 83, 24,90, 25,98, 27 ,33, 27, 96, 28,40, 30,11 , 31 ,26 33, 55 r 33, 93, 35,73, 38,70, 39 ,41, 39, 65, 46, 66, 47,02 , 48 , 28 54, 91 t 55, 27, 56,71, 56, 97, 57 ,90, 66, 07, 66,22, 68, 98 , 70 ,70 78, 87 r 114 1,08, 130,07 , 130, 33, 156 ,62, 168 ,52, 169,57, 170 ,11 170 ,35, 17 0,59, , 171,09, 172, 67, 173 ,84, 174 ,53; IR (CHCI3) 3330 2952, 2876, 1735, 1629, 1508, 1447, 1243, 1168, 1024, 843 cnf1; HRMS m/z calculado para Cs^ss^O^Na (M+Na+) : 1078, 6052, encontrado 1078, 6044; [a] D20 -43, 93 (c 1,05, CHCI3) .

Os requerentes acreditam que as séries de reacções divulgadas acima representam a primeira síntese estereoselectiva da (-)Tamandarina A.

Exemplo 2

Actividade Biológica de Tamandarina A

As experiências descritas neste exemplo demonstram que a tamandarina A é um inibidor efectivo da síntese proteica e um agente antitumoral. Os resultados iniciais estão apresentados na Tabela 1 para a inibição da biossíntese de proteína (coluna 1), citotoxicidade (coluna 2) e actividade antitumoral (coluna 3) da 101 tamandarina A, como comparado com o composto antitumoral relacionado, didemnina B. Os resultados na Tabela 1 são dados em unidades de concentração do composto seleccionado.

Tabela 1

Composto Síntese proteica Citotoxicidade (média de NCI-60) Actividade antitumoral (media do ensaio) Tamandarina A 1,3 μΜ GI50 = 10,4 μΜ LC50 = 4,8 μΜ 1,31 nM Didemnina B 4 μΜ GI50 = 1,8 pM LD50 = 7,4 nM 1,56 μΜ

Como aqui utilizado, "GI50" refere-se à dose de um composto que é capaz de produzir uma inibição de 50% no crescimento celular. O GI50 é determinado por comparação do crescimento de células às quais o composto foi administrado com o crescimento das mesmas células às quais o composto não foi administrado.

Como aqui utilizado, "LC50" refere-se à dose de um composto que é capaz de produzir 50% letalidade em células. O LC50 é determinado por comparação da morte celular numa população de células às quais o composto foi administrado com a morte celular de uma população das mesmas células às quais o composto não foi administrado. "NCI-60" refere-se a um painel de 60 linhas celulares tumorais obtidas do National Câncer Institute (NCI, Frederick, MD) . "Média NCI-60" é o GI5o ou LC50 médio para o painel tratado com o composto seleccionado.

Estas verificações in vitro indicam que a tamandarina A apresenta uma potência comparável à da didemnina B, um conhecido 102 agente anticancerígeno. A tamandarina A é significativamente menos tóxica nestes ensaios que a didemnina B. A comparação indica a utilidade da tamandarina A e outros análogos da didemnina como agentes farmacológicos tendo actividades anticancerigena e outras, caracteristicas da didemnina B.

Exemplo 3 Síntese de (-)Desidrotamandarina

Um processo para a sintese da (-)desidrotamandarina é descrito neste exemplo. O processo envolve o composto macrocíclico 22, o qual pode ser gerado como descrito no Exemplo 1. 0 processo descrito neste Exemplo é ilustrado na Figura 37, e inicia-se com a síntese do composto 27, representado na Figura 37A.

Reacção 0 da Figura 37A: Síntese do composto 26 A uma solução compreendendo 0,1084 grama (0,.33 milimole) do composto 25 e 1 mililitro de CH2CI2 recentemente destilado, foi adicionado 0,182 g (0,43 milimole) de peiodinano de Dess-Martin. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reaccional foi diluída com 10 mililitros de éter e vertida para 6 mililitros de uma solução saturada de NaHC03 compreendendo Na2S2C>3 a 5%. Foi adicionada outra alíquota de 10 mililitros éter à mistura bifásica e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução saturada de NaHCCb e uma vez 103 utilizando 10 mililitros de água. A camada orgânica lavada foi seca na presença de Na2S04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O residuo obtido por este processo foi purificado por cromatografia em coluna flash, eluindo com uma mistura de solventes compreendendo MeOH e CH2CI2 numa razão de 5 para 95, respectivamente, para se obter 0,083 grama do composto 26 purificado (rendimento de 77%) na forma de uma espuma branca. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 26: Rf 0,61 (10:90-MeOH: CH2C12) ; RMN de XH (500 MHz, CDC13) δ 0,86-1,05 (m, 6H) , 1,41-1,54 (m, 1H) , 1,70-1,74 (m, 2H) , 1,87- 1,89 (m, 3H) e 2,05-2,19 (m, 1H) , 2,33 (s, 3H) , 2,97 (s, 2H) , 3, 59-3, 63 (m, 2H) , 3,70 (s, 3H) , 4, 95-4, 98 (t, J = 7,97 Hz, 1H) , 5,11-5,13 (m, 1H) ; HRMS m/z calculado para C16H26N2O5 (M+H+) : 327,1920, encontrado 327,1912; [oí]d20 +1,14 (c 0,49, CHC13) .

Reacção R da Figura 37A: Síntese do composto 27

Uma solução compreendendo 0,0678 grama (0,21 milimole) do composto 26, 4 mililitros de THF destilado e 4 mililitros de

MeOH, foi arrefecida para 0 °C. A esta solução, foi adicionado 8 mililitros de uma solução compreendendo LiOH a 0,2 molar. A mistura reaccional foi inicialmente mantida com agitação a 0 °C durante 1 hora, após o que a mistura reaccional foi aquecida até à temperatura ambiente e mantida com agitação durante, pelo menos, mais 8 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida, arrefecida para 0 °C e acidificada para pH 3 adicionando KHS04 1 normal. A mistura acidificada foi extraída três vezes com alíquotas de 5 mililitros de EtOAc. As camadas combinadas de EtOAc foram secas na presença de Na2S04 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida, para se obter 0,042 grama (rendimento de 64%) do composto 27 na forma de um 104 sólido branco. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 27: RMN de (500 MHz, CDCI3) δ 0,86-1,03 (m, \—1 KD , 35- O LO 1—1 1 (m, 1H) , 1 ,70- -1,77 (m, 2H) , 1,85-1 ,93 (m, 2H) ( 2,07-2 ,18 (m, 2H) , 2,33 (s, 3H) , 3,02 (s, 3H) , 3, 58 -3, 86 (m 2H) , 4 ,78- -4,81 (m, 1H) , 5 , 08- -5, 12 (m, 1H) ; RMN de 13C (250 MHz CDCI3) δ 21,26 e 22,55, 23, 21, 24, 64 , 26 ,36 e 28,17, 31,16 37,09, 45, 70, 5 6, 79 , 58,66 , 163, 32, , 173, 12, 174,59, 199, 07

Reacção S da Figura 37B: Síntese de (-)Desidrotamandarina (Composto 133)

Uma solução compreendendo 19,7 miligramas (0,063 milimole) do composto 27, 33,4 miligramas (0,042 milimole) de composto 22 e 0,50 mililitros de CH2CI2, foi arrefecida para 0 °C num banho de gelo. A esta solução arrefecida foi adicionado 28 miligramas (0,063 milimole) de BOP e 0,0185 mililitros (0,17 milimole) de NMM. A mistura reaccional foi agitada durante 30 minutos a 0 °C e e deixada aquecer até à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi mantida com agitação à temperatura ambiente durante, pelo menos, mais 8 horas. A solução resultante foi diluída com 2 mililitros de uma solução saturada de NaCl e extraída com 10 mililitros de EtOAc. A camada orgânica extraída foi lavada uma vez utilizando 5 mililitros de uma solução de HC1 a 10%, uma vez utilizando 5 mililitros de uma solução de NaHCCç a 5% e uma vez utilizando 5 mililitros de uma solução saturada de NaCl. A camada orgânica lavada foi seca na presença de Na2S04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash, eluindo com uma combinação de misturas de solventes compreendendo MeOH e CH2CI2 em razões desde 2 para 98, respectivamente, a 10 para 90, respectivamente, para se obter 18,1 miligramas de 105 desidrotamandarina (composto 133) na forma de um sólido amarelo esbranquiçado. 0 rendimento do composto 133 foi de 41%, como calculado para a reacção 0 (i. e., a desprotecção do composto 21, para se obter composto 22 no Exemplo 1) e a reacção S. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto desidrotamandarina A: Rf 0,48 (10 : 90-MeOH: CH2CI2) ; RMN de (500 MHz, CDCI3) δ 0,80-1,00 (m, 24H) , 1,16-1,45 (m 11H) , 1,51-2,25 (m, 10H), 2,38-2,48 e 3,19-3,30 (m, 2H) , 2,52-2,53 (d, J = 6,2 Hz, 3H) , 2,57 (s, 3H) , 3,04 e 3,08 (s, 3H, rotâmeros) , 3, 12- -3, ,16 (m, 1H) e 3,31-3,35 (m, 1H) , 3,! 53-3,72 (m, 5H) , 3, 77 (s, 3H) , 3, 81- -4,03 (m, 1H), 4 , 05- 4,10 (m , 1H) , 4,25-· 4,26 (m, 1H) r 4 ,61- 4, 65 (m, 1H), 4,68-4 ,71 (m, 1H) , 4,85- 4,88 (m, 1H) , 1 O O LO -5, ,01 (d, J = 4, 6 Hz, 1H), 5,15-5,2 :o ( m, 1H), 5,28- 5, 31 (m, 1H) r 6 ,81- 6, 83 (d, J = 7,5 Hz, 2H) , 7, . 05- 7,07 (d, , J = 8,2 Hz, 2H) r 7 ,28- 7,30 (d, J = 9,8 Hz, 1H) e 7, 33- 7,35 (d, J = 10,2 Hz, 1H) r 7 , 39- 7,40 (d, J = 5,5 Hz, 1H) , 7, . 72- 7,74 (d, , J = 9,7 Hz, 1H) e 7,78 -7,8 0 (d, J = 9,7 Hz, 1H RMN de 13C (250 MHz, CDC1 3) δ 11, 80, 14, 11, 16,52, 17,63, 18, ,91, 20, 87, 21,33, 22,32 , 23 ,53, 24, 8E (sobrepo sição) , 24,83, 27 ,08, 27, 35, 27,99, 29, 62 , 30 ,13, 31, 00, 33, 56, 34,04 , 35,10, 35,84, 38 ,90, .39,65, 46, 72 , 48 ,29, 48, 81, 54, 78, 55, 27 (sobreposição), 56, 91, 57,46, 58, 91 , 66 ,10, 68, 92, 70, , 90, 78,94 , 114,12, 130, 00, 130 , 36, 158, 68, 161 ,50, 168 ,43, , 169,59 , 170, 61, 171,00, 172 ,26, 173,00, 174,52, 197 ,36; IR (KBr) 3339, 2960, 2927, 2872, 1736, 1715, 1655, 1633, 1508, 1460, 1438, 1248, 1177, 1085, 1031, 830 cm'1/ HRMS m/z calculado para C54H83N7Oi4Na (M+Na+) : 1076, 5896, encontrado 1076, 5946; [a] d20 - 35,29 (c 0,35, CHC13) . 106

Exemplo 4 Síntese de Análogos Fluorescentes de Tamandarina

Um processo para a síntese de uma tamandarina fluorescente, composto 108, é descrito neste exemplo. Como no Exemplo 3, o processo ilustrado neste Exemplo envolve o composto macrocíclico 22, que pode ser gerado como descrito no Exemplo 1. 0 processo descrito neste Exemplo é ilustrado na Figura 38 e é iniciado com síntese do composto 206a, representado na Figura 38A.

Reacção T da Figura 38A: Síntese do composto 205a.

Uma solução compreendendo 10,00 gramas (49,5 milimoles) de 1,3-acetonadicarboxilato de dietilo, 7,12 gramas (51,9 milimoles) de m-dimetilaminofenol, 8,56 gramas (62,8 milimoles) de cloreto de zinco e 25 mililitros de etanol absoluto, foi mantida em refluxo durante 13 horas. A mistura reaccional foi diluída com 50 mililitros de EtOAc e lavada utilizando 25 mililitros de H20. A camada aquosa obtida a partir deste processo foi extraída três vezes com alíquotas de 50 mililitros de EtOAc. As camadas de EtOAc combinadas foram secas na presença de sulfato de magnésio anidro (MgS04) , filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O sólido bruto resultante foi recristalizado a partir de etanol absoluto, para se obter 2,64 gramas (rendimento de 20%) do composto 205a na forma de cristais de cor laranja. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 205a: p.f. 131-132 °C; Rf 0,20 (acetona/hexano 30:70); RMN de ΧΗ (500 MHz, CDC13) δ 1,22 (3H, t, J = 7,1 Hz), 3,01 (6H, s) , 3,64 (2H, s) , 4,15 (2H, q, J = 7,2 Hz), 6,02 (1H, s) , 6,48 (1H, d, J = 2,6 Hz), 6,58 (1H, 107 dd, Ji = 2,6 Hz, J2 = 8,9 Hz), 7,37 (1H, d, J = 8,9); RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ 14,02, 38,16, 40,01, 61,49, 98,28, 108,45, 108,93, 110,63, 125,22, 148,39, 152,91, 155,89, 161,65, 169,01; IR (KBr) 2907 (w) , 1720 (s) , 1600 (2), 1534 (m) , 1484 (m) , 1427 (m) , 1405 (s), 1371 (m) , 1330 (m) , 1232 (m) cm"1; HRMS calculado para C15H18NO4 (M+H) : 276, 1236, encontrado 276, 1244, Anal.

Calculado para C15H17NO4: C, 65,43; H, 6,23; N, 5,09, Encontrado: C, 65,26; H, 6,36; N, 5,03.

Reacção U da Figura 38A: Síntese do composto 205b.

Uma solução compreendendo 0,46 grama (11,0 milimoles) de hidróxido de litio hidratado (Li0H-H20) e 25 mililitros de H20 foi adicionada a uma solução compreendendo 1,50 gramas (5,5 milimoles) do composto 205a e 10 mililitros de THF. A mistura reaccional foi mantida com agitação à temperatura ambiente durante 2,5 horas. A solução resultante foi lavada com 10 mililitros de éter e acidificadas para pH 2. Formou-se um precipitado após acidificação e foi recolhido por filtração. O precipitado compreendeu 0,364 grama do composto 205b, na forma de cristais amarelos. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 205b: p.f. 166-167 °C, RMN de 1H (500 MHz, CDCI3/DMSO) δ 3,01 (6H, s) , 3,62 (2H, s) , 6,00 (1H, s) , 6,44 (1H, d, J = 2,3 Hz), 6,58 (1H, dd, Ji = 2,4 Hz, J2 = 8,9 Hz), 7,40 (1H, d, J = 9,0 Hz); RMN de 13C (125 MHz, CDCI3/DMSO) δ 38,42, 40,25, 98,34, 108,89, 109,35, 110,67, 125,84, 149,59, 153,22, 156,15, 162,00, 171,33; IR (KBr) 2923 (m) , 1690 (s), 1619 (s), 1534 (m), 1404 (m), 1248 (m) , 1145 (m) , 1055 (m) cm-1; HRMS Calculado para C13H14NO4 (M+H) : 248,0922, encontrado 248,0929. 108

Reacgão V da Figura 38A: Síntese do composto 206a.

Uma solução compreendendo 0,364 grama (1,47 milimoles) do composto 205b e 5 mililitros de CH2CI2 recentemente destilado foi colocada em atmosfera de árgon e arrefecida para °C. A esta solução foi adicionado 0,282 grama (1,47 milimole) de EDAC.HC1 e 0,035 grama (0,29 milimole) de DMAP. A mistura resultante foi agitada durante 10 minutos e foi adicionado 0,246 grama (1,47 milimoles) de éster terc-butilico de glicina. A mistura reaccional foi mantida com agitação a 0 °C durante 2 horas, aquecido até temperatura ambiente e mantida à temperatura ambiente durante, pelo menos, mais 8 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2CI2 e lavada, uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de HC1 a 10% e uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução saturada de NaCl. As camadas de CH2CI2 lavadas combinadas foram secas na presença de MgSCg anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna flash, eluindo com uma mistura de solventes compreendendo quantidades iguais de EtOAc e CH2CI2 para se obter 0,.250 grama (rendimento de 42%) do composto 206a, na forma de uma sólido amarelo. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 206a: RMN de 3Η (500 MHz, CDCI3) δ 1,42 (s, 9H) , 3,03 (s, 6H) , 3,64 (s, 2H) , 3,88 (d, 5,12 Hz , 2H) , 6,05 (s, 1H) , 6,48 (brs, 1H), 6,! 2,5 Hz, 1H) , 6,60 (dd, Ji = 2,6 Hz, J2 = 8, 9 Hz, 1H) J = 8, 9 Hz, 1H) ; RMN de 13 C (125 MHz, CDCI3) δ 168,5, 161, 6, 156, 0, 153, 1, 149, 2, 125, 6, 110,5, 109, 2, 108,3, 98,3, 82,5, 42,4, 40,3, 40,1, 27,9; IR (CHC13) 3450, 1679, 1618, 1530, 1405, 1370, 1230, 1157 cm-1; HRMS (Cl) m/z calculado para C19H24N2O5 (M+) : 360,1685, Encontrado 360,1686. Anal. Calculado 109 para C19H24N2O5: C, 63, 30; H, 6,72; N, 7,78, Encontrado: C, 62, 99; H, 6,60; N, 7,52.

Reacção W da Figura 38B: Síntese do composto 207a.

Uma solução compreendendo 0,250 grama (0,69 milimole) de Gly-DACA-terc-butiléster, composto 206a, e CH2CI2 foi arrefecida para 0 °C e mantida durante 10 minutos. À solução arrefecida foi adicionada, gota a gota, uma solução compreendendo ácido trifluoroacético a 10% (TFA) . Esta adição foi completada em 10 minutos. A mistura resultante foi mantida com agitação, à temperatura ambiente, durante, pelo menos, 8 horas. A mistura reaccional foi evaporada até à secura, utilizando um evaporador rotativo e o resíduo resultante, compreendendo 0,033 grama (0,108 milimole) do composto 206b, foi utilizado na reacção subsequente sem purificação adicional.

Uma solução compreendendo 0,033 grama (0,108 milimole) do composto 206b e CH2CI2 foi arrefecida para 0 °C. À solução arrefecida foi adicionado 0,027 grama (0,108 milimole) de BOP e 0,012 grama (0,108 milimole) de NMM. A mistura resultante foi mantida durante 30 minutos com agitação. Foi adicionado um excesso do éster metílico de N-metil-D-leucina à mistura agitada, após o que a reacção foi mantida com agitação a 0 °C durante, pelo menos, 8 horas. A mistura reaccional foi diluída com CH2CI2 e lavada uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução de HC1 a 10% e uma vez utilizando 10 mililitros de uma solução saturada de NaCl. As camadas lavadas combinadas de CH2CI2 foram secas na presença de MgS04 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna flash, eluindo com uma mistura de 110 solventes compreendendo quantidades iguais de EtOAc e CH2CI2. A evaporação do eluato rendeu 0,030 grama (rendimento de 63%) do composto 207a, na forma de um sólido amarelo. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 207a: [a]D20 + 19,08 (c 0,865, CHCIO ; RMN de 1 2 3 4ti (500 MHz, CDCI3) δ 0,87 (, J = 6, 52 Hz, 3H) , 0, 91 (d, J = (m, 2H) , 2,85 (s, 3H) , 3,01 (s, 4,0( 5 (m, 2H) , 5,22 (dd , Ji = 10, 1H) , 6, 47 (d, J = 2,5 Hz, J2 = = 8,9 Hz, 1H) , 6, 76 (brs, 1H) de 13C (125 MHz, CDC1 3) δ 171, 152, 9, 149, : 1, 125 ',4, 110,5, 1 41, í 3, 40,1, 39,9, 37, 1, 30,0, calculado para C23H31N3O6 (M+Na+) : 6,79 Hz, 3H) , 1,40 (m, 1H) , 1,69 6H) , 3,63 (s, 2H) , 3,67 (s, 3H) , 6 Hz, J2 = 5,2 Hz, 1H) , 6,04 (s, 1H) , 6,57 (dd, Ji = 2,5 Hz,

, 7,42 (d, J = 8,9 Hz, 1H) / RMN 7, 168, 6 167,8, 161, 6, 155, 9, 39,1, 108,4, 98,3, 54,7, 52,3, 24,8, 23, 1, 21,3 cm'1. HRMS m/z 468,2111. Encontrado 468,2133.

Reacção X da Figura 38B: Síntese do composto 207b 111 1

Uma solução compreendendo 0,135 grama (0,304 milimole) do composto 207a e THF foi arrefecida para 0°C e foi adicionada uma solução compreendendo 0,025 grama (0,606 milimole) de Li0H.H20 em 2 mililitros de água. Esta adição foi completada ao longo de um período de 5 minutos. A mistura resultante foi mantida com agitação a 0 °C durante 30 minutos e, então, aquecido até à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi mantida à temperatura ambiente durante 1,5 horas e, assim, lavada duas vezes utilizando alíquotas de 4 mililitros de éter. A camada aquosa lavada foi evaporada à secura sob pressão reduzida. O resíduo resultante, compreendendo o composto 207b, foi 3 dissolvido numa solução compreendendo 2 mililitros de água e 4

mililitros de EtOAc, arrefecida para 0°C e acidificada até pH 2 adicionando uma solução compreendendo KHSO4 a 1 normal. A camada aquosa separada, formada por este processo, foi lavada duas vezes com alíquotas de 4 mililitros de EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas na presença de anidro MgS04, filtradas e concentradas até à secura sob pressão reduzida. 0 residuo resultante deste processo compreendeu 0,010 grama (0,023 milimole) do composto 207b e foi utilizado na reacção subsequente sem purificação.

Reacção Y da Figura 38C: Síntese do composto 107

Uma solução compreendendo 0,010 grama (0,023 milimole) do composto 207b e CH2CI2 foi arrefecida para 0 °C. A esta solução arrefecida foram adicionados 0,010 grama (0,023 milimole) de BOP e 0,010 mililitro (0,092 milimole) de NMM. A mistura resultante foi mantida com agitação a 0 °C durante 10 minutos e foi adicionado o sal do cloridrato do composto 22 (0,018 grama, 0,023 milimole). A reacção foi mantida a 0 °C durante 1 hora e à temperatura ambiente, durante, pelo menos, mais 8 horas. A solução resultante foi diluída com 1 mililitro de solução salina saturada e extraída duas vezes utilizando alíquotas de 2 mililitros de EtOAc. A camada orgânica formada por extracção foi lavada uma vez utilizando 1 mililitro de uma solução de HC1 a 10% e duas vezes utilizando alíquotas de 1 mililitro de água. A camada orgânica lavada foi seca na presença de MgS04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia flash, eluindo com uma mistura de solventes compreendendo acetona e hexano numa razão de 30 para 70, respectivamente. A evaporação do eluato rendeu 0,008 grama (rendimento de 30%) do composto fluorescente 107. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 107: [a] D20 -160,1 (c 0,3, CHC13) ; RMN de (500 MHz, 112 CDC13) δ 0,73-0, 93 (m, 24H) , 1, 07-1,74 (m, 15H) , 2,04 (m, 2H) , 2,14 (s, 3H) , 2,15 (m, 2H) , 2,31 (m, 2H) , 2,53 (s, 4H) , 2,84 (s, 2H) , 3,03 (s, 6H) , 3,17 (brd, J = 10,4 Hz, 2H) , 3,35 (m, 1H) , 3,57 (m, 2H) , 3,68 (s, 2H) , 3,78 (s, 3H) , 3,99 (brd, 2H) , 4,08- 4,12 (m, 3H) , 4,55-4,56 (m, 1H) , 4,78-4, 80 (m, 1H) , 4,82-5,01 (m, 2H) , 5,13-5,14 (brd, 1H) , 6,08 (s, 1H) , 6,51 (s, 1H) , 6,61 (d, J = 9,1 Hz, 1H) , 6,83 (d, J = 8,54 Hz, 2H) , 7,07 (d, J = 8,35 Hz, 2H), 7,24-7,41 (m, 3H) , 7,51 (d, J = 8,90 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,65 Hz, 1H) ; IR (KBr) 3462, 2953, 2358, 1732, 1658, 1632, 1555, 1538, 1456 cm-1; HRMS m/z calculado para C64H92N8Oi6 (M+Na+) : 1251, 6529. Encontrado 1251, 6528.

Exemplo 5 Síntese de uma Porção de Cadeia Lateral de Desoxo-Prolina e Acoplamento a um Macrociclo de Didemnina

Uma ligação simples aminometileno foi utilizada para substituir a ligação amida entre a D-leucina e a L-prolina na cadeia lateral de didemnina B. Sinteticamente, a ligação aminometileno foi preparada por aminação redutiva, como descrito (Abdel-Magid et al., 1990, Tetrahedron Lett. 31:5595-5598; Abdel-Magid et al., 1990, Synlett. 537-539).

Num primeiro processo de sintese, a metilação exaustiva de Cbz-D-leucina foi realizada utilizando sulfato de dimetilo, como ilustrado na Figura 41. O grupo Cbz foi removido utilizando hidrogenólise, para se obter a forma de amina livre de D-leucina dimetilada (Composto 40) . A amina foi utilizada na aminação redutiva sem purificação. A L-prolina comercialmente disponível foi, primeiro, esterificada utilizando SOCI2 em MeOH e o seu 113 grupo amino foi, subsequentemente, protegido utilizando B0C2O. Após purificação, a função éster foi reduzida a um aldeído em dois passos. NaBH4 foi combinado com LiCl para produzir LiBH4 in situ e este composto foi utilizado para reduzir o éster ao álcool correspondente. A oxidação com o reagente SCb.piridina produziu o aldeído, designado como composto 42, num bom rendimento. A redução do éster a aldeído num passo utilizando DIBAL podia ser realizada, mas dependia do carácter recente do reagente de redução e não foi muito reprodutível. A aminação redutiva entre o aldeído designado por composto 40 e a amina livre (composto 42) rendeu o composto 43. 0 grupo Boc do composto 43 foi removido utilizando TFA/ CH2CI2. A amina livre resultante foi acoplada com ácido pirúvico utilizando BOP, para se obter a cadeia lateral protegida i|r(CH2NH) designada por composto 44. O passo seguinte foi a hidrólise do éster metílico do composto 44. Mas este passo foi provado não ser trivial. Talvez devido ao impedimento estérico, o éster metílico foi difícil de clivar utilizando 2 equivalentes de LÍOH.H2O em THF/H2O. Quando a quantidade de Li0H.H20 foi aumentada para 10 equivalentes, o éster metílico parecia hidrolisar, uma vez que o espectro de massa da mistura reaccional mostrou o pico do ácido. Mas o ácido foi tão hidrofílico e tão incorporado no interior dos sais inorgânicos em excesso que não pôde ser extraído por qualquer solvente orgânico. Foi, também, tentado precipitar o ácido utilizando éter mas apenas precipitaram os sais inorgânicos. Tendo em conta este problema de purificação, foi decidido não utilizar o éster metílico para a protecção do ácido. Era necessário um grupo de protecção que pudesse sobreviver a todos os passos sintéticos mas que não necessitasse de condições 114 aquosas para a sua remoção. Foi demonstrado que o grupo benzilico serve bem para este propósito. 0 processo de síntese foi modificado como indicado na Figura 42. De modo a ser compatível com o éster benzílico, o grupo amino da leucina foi protegido por Boc em vez de Cbz. A metilação selectiva do grupo amino produziu o ácido designado por composto 46. 0 ácido livre foi benzilado, para se obter o éster benzílico desejado, o composto 47. 0 grupo de protecção

Boc foi removido utilizando TFA. A amina resultante (composto 48) foi condensada com prolinal protegido por aminação redutiva. A remoção do grupo de protecção Boc e subsequente acoplamento com ácido pirúvico rendeu o composto 50. Foi utilizada hidrogenólise para a remoção do grupo benzílico e rendeu a cadeia lateral desejada ψ(0Η2ΝΗ), na forma do ácido livre (composto 51) . 0 acoplamento da cadeia lateral de ácido livre com o macrociclo de didemnina produziu o análogo desoxo-prolina de didemnina desejado, designado por composto 12.

Um segundo análogo desoxo-prolina de didemnina (designado composto 72a) foi sintetizado utilizando uma estratégia sintética semelhante, como ilustrada na Figura 43 e descrita em detalhe como se segue.

115

Benzil-N-Boc-D-leucinato (Composto 46).

Uma solução de N-Boc-D-leucina (1,0 grama, 4,1 milimoles) em 20 mililitros de DMF foi arrefecida para 0o C. Foi adicionado LÍ2CO3 (1,5 gramas, 20,5 milimoles) em pó finamente dividido, seguido pela adição de brometo de benzilo (2,43 mililitros, 20,5 milimoles). A mistura reaccional foi agitada durante 6 horas e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, a mistura reaccional foi diluída com H20 e extraída três vezes com EtOAc. Os extractos de EtOAc foram combinados e lavados com solução salina saturada. O DMF foi removido in vacuo. A mistura bruta foi purificada por cromatografia em coluna eluindo com acetona a 20%/hexano para proporcionar o composto 46 num rendimento de 78%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 46: Rf 0,60 (acetona a 40%/hexano)/ [a] d25 +16 (c = 1,0, CHCI3) ; RMN de 2H (500 MHz, CDC13) δ Ha) 0,92 (m, 6H) , Hb) 1,48 (s, 9H) , H :c) 1,50-1 ,59 (m, 1H) , Hd) 1,60- 1, 69 (dd, 2H) , He) 4,36 (m, 1H) r Hf) 4,90 (d, 1H), Hg ) 5,11-5,20 (m, 2H) , Hh) 7,33 (m, 5H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ Ca) 21,8, Ca') 22,7 , cc: ) 24, 7, Cb) 28, 2, Cd) 41,6, ce: ) 52 , 1, Cg) 66,7, Ci) 7 9, 6, ch) 128, 0, 128,2, 128 ,4, Ci ) 135,5, C3) 155,3, Ck) 173,2; IR (puro) 3367 (br) , 2958 (s) I 1732 (s), 17 15 (s), 1500 (s), 1455 (m) , 1366 (w) , 1120 (m) cm 1; HRMS m/z calculado para C11H23N4O2 (M+H) 322,2017, encontrado 322,2018.

116 N-Boc-N-metil-benzil-D-leucinato (composto 47).

Uma solução do composto 46 (1,2 gramas, 3,74 milimoles) em 200 mililitros de THF foi arrefecida para 0o C. Foi adicionado NaHMDS (1 molar em THF; 5,6 mililitros, 5,6 milimoles), seguido pela adição de iodeto de metilo (1,0 mililitro, 18,7 milimoles). A mistura reaccional foi agitada durante a noite e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, a mistura reaccional foi diluida com éter. A camada orgânica foi lavada com HC1 a 5%, NaHC03 a 5% e solução salina saturada. A solução resultante foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada. A mistura bruta foi purificada por cromatografia em coluna, eluindo com acetona a 20%/hexano para proporcionar o composto 47 num rendimento de 71%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 47: Rf 0,55 (Acetona a 30%/Hexano) ; [a]D25 +20,4 (c = 1,2, CHCI3) ; RMN de 3Η (500 MHz, CDCI3) δ Ha) 0,85-0, 90 (m, 6H) , Hc) & Hd) 1,35-1,65 (m, 3H) , Hb) 1,45 (s, 9H) , He) 2,75 (d, 3H) , Hf) 4,53-4,58 & 4,81-4,88 (rm, 1H) , Hg) 5,10 (s, 2H) , Hh) 7,15-7,28 (m, 5H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ Ca) 22,0 e 23,5, Cc) 25,8, Cb) 29,0, Cd) 31,0, Ce) 38,0, Cf) 57,0, Cg) 66,1, Cf) 80,2, Ch) 128,0, 128,2, 128,4, Ci) 136,5, C3 ) 156,3, Ck) 173,2; IR (puro) 2958,3 (m) , 1742,7 (s) , 1696,8 (s ), 1455, 6 (s), 1390,7 (s) , 1366, 6 (s) , 1323,5 (s) , 1151,3 (s) cm-1; HRMS m/z calculado para C11H23N4O2 (M+H) 336,2174, encontrado 336,2178. 117

Sal de cloridrato de benzil-N-metil-D-leucinato (composto 48) . O composto 47 (0,1 grama) foi dissolvido em HCl.dioxano

(5 mililitros) e agitado à temperatura ambiente. Quando a reacção se completou, o solvente foi removido in vacuo. Foi duas vezes adicionado tolueno e concentrado. O resíduo foi seco sob pressão reduzida, durante a noite, para proporcionar o sal de HC1 desejado (composto 48) a 98%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 48: Rf: linha de base (MeOH a 10%/ CH2CI2) ; [a] d25 + 48,5 (c = 0,2, CHCI3) ; RMN de 3H (500 MHz, CDC13) δ Ha) 0, 91 (d, 6H) , Hb) 1,75 (m, 1H) Hc) 1,90- 1, 95 (dd, 2H), Hd ) 2,71 (s, 3H) , He) 3, 83 (t, 1H), Hf) 5,20-5,30 (rm, 2H) ,

Hg) 7,35-7,40 (m, 5H) , Hh) 9,85 & 10,15 (br, 2H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDCI3) δ Ca) 21,8, e 23,4, Cc) 25,8 , Cb) 31,9, Cd) 38,2, Ce) \—1 0 to Cf) 68,8, Cg) 128,4, 128,6, 128,8, Cj) 134,6, Ca) 168,2; IR (puro] 1 2958,3 (m) , 1742 (s), 1696 (s) , 1455 (s), 1390 (s), 1366 (s) , 1323 (s), 1151 (s) cm'1; HRMS m/z calculado para C11H23N4O2 (M+H) 336,2174 , 336,2178. 118 b + Ο Ο Ό- ff i a

Metil-N-Boc-L-prolinato (composto 41). N-Boc-L-prolina (5,0 gramas, 23,2 milimoles), comercialmente disponível, foi dissolvida em acetona (200 mililitros). Foi adicionado K2CO3 (3,8 gramas, 27,84 milimoles) a 0 °C, seguido pela adição de Mel (2,9 mililitros, 46,4 milimoles). A mistura reaccional foi agitada durante a noite. A reacção foi extinta com uma solução de NaHCCt a 5% e extraída com éter. As camadas de éter combinadas foram lavadas com HC1 a 5% e solução salina saturada e concentradas para proporcionar o produto bruto (composto 41) num rendimento de 91%. Este composto foi purificado por cromatografia em coluna, eluindo com acetona a 20%/hexano. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 41: Rf 0,4 (30% acetona/hexano) / [a]D25 -61,2 (c = 0,8, CHCI3); RMN de XH (500 MHz, CDC13) δ Ha) 1,45 (s, 9H) ,

Hb) 1,98 (dd, 2H) Hc) 1,88 & 2,22 (m, rm, 2H) , Hd) 3, 42-3, 58 (m,

2H) , He) 3,74 (s, 3H) , Hf) 4,24 & 4,35 (rm, 1H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDCI3) δ Cb) 24,2, e 24,4, Ca) 28,3, Cc) 31,6 e 31,8,

Cd) 47,3, Cf) 52,1, Ce) 59,7, Cg) 80,1, Ch) 153,8, Cf) 174,0/ IR (puro) 2975 (m) , 1749 (s) , 1700 (s) , 1396 (s) , 1365 (s), 1200 (s), 1161 (s), 1151 (s); HRMS m/z calculado para C11H23N4O2 (M+H) 230,1391, encontrado 230,1389. 119 b c

N-Boc-L-Prolinol (Composto 41a). O composto 41 foi dissolvido em 200 mililitros de THF/EtOH (1:1). Foram adicionados LiCl (1,8 gramas, 32,7 milimoles) e NaBH4 (1,2 gramas, 32,7 milimoles), em porções, a 0 °C. A mistura reaccional foi agitada durante a noite e monitorizada por TLC; foram adicionados mais LiCl e NaBH4 durante a operação. A reacção se completou, o sólido branco foi recolhido e lavado com éter. O solvente foi removido utilizando um evaporador rotativo. O resíduo foi neutralizado para pH 4 e, depois, extraído duas vezes com EtOAc. Os extractos de EtOAc foram combinados, lavados com solução salina saturada, secos e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com acetona a 10%/hexano, para proporcionar o álcool desejado (composto 41a) num rendimento de 83%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 41a: Rf 0,30 (Acetona a 30%/Hexano) ; [oí]d25 -60 , 0 (c = 0,8, CHCI3) ; RMN de ΧΗ (500 MHz, CDCI3) δ Ha) 1,48 (s, 9H) , Hb) 1,60 & 2,05 (rm, 2H) Hc) 1,83-1,98 (dd, 2H) , Hd) 3,35 & 3,45 (rm, 2H) , He) 3,61-3,70 (m, 2H) , Hf) 4,03 (m, 1H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ Cc) 23,8, Ca) 28,4, Cb) 28,9, Cf) 47,3, Ce) 59,9, Cd) 67,3, Cg) 80,0, Ch) 156,8; IR (puro) 3424 (br) , 2973 (s) , 2877 (s) , 1695 (s) , 1670 (s), 1477 (s) , 1406 (s) , 1366, 2 (s) ; HRMS m/z calculado para CnH23N402 (M+H) 202,1443, encontrado 202,1449. 120 b c

N-Boc-L-prolinal (composto 42).

Uma solução do composto 41a (2,0 gramas, 9,9 milimoles) e Et3N em 200 mililitros de CH2CI2 foi arrefecida para -78 °C. Foi adicionado complexo SCç.piridina (4,7 gramas, 29,7 milimoles) em DMSO (30 mililitros) à solução anterior. A mistura reaccional foi aquecida até à temperatura ambiente, agitada durante a noite e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, a mistura reaccional foi diluída com éter. A camada orgânica foi lavada com HC1 a 5%, NaHCCç a 5% e solução salina saturada. A solução resultante foi seca sobre Na2S04 e concentrada. A mistura bruta foi purificada com uma coluna curta para proporcionar o aldeído desejado (composto 42) num rendimento de 81%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 42: Rf 0,55 (Acetona a 30%/Hexano) / [a]D25 +20,4° (c = 1,2, CHC13) ; RMN de XH (500 MHz, CDCI3) δ Ha) 1,45 (s, 9H) , Hb) 1,75-1, 90 (m, 2H) , Hc) 1,90-2,15 (m, 2H) , Hd) 3,20- -3,50 (t, 2H), He) 3, 90-4,20 (d, 1H) , Hf) 9,72 (d, 1H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDCI3) δ Cb) 24,0, Cc) 27,3, Ca) 28,9, Cd) 47,5, Ce) 65,5, Cg) 80,1, Ch) 154,2, Cf) 200,1. 121

N-Boc-pro-y(NHCH2)-N-metil-Benzil-D-leucinato (composto 43). 0 composto 42 (0,1 grama, 0,5 milimoles) foi dissolvido em CH2C12 (8 mililitros) e foi adicionado o composto de mina livre 48 (0,15 grama, 0,55 milimoles) com agitação eficaz. A 0 °C, foi adicionado AcOH (0,02 mililitros, 0,3 milimoles) como um catalizador e agitou-se durante 10 minutos antes da adição de NaBH(OAc)3 (0,13 grama, 0,6 milimoles) à mistura reaccional. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, a mistura foi diluida com CH2C12. O reagente em excesso foi extinto por adição, gota a gota, de uma solução saturada de NH4C1. A camada orgânica foi lavada com HC1 a 5%, NaHC03 a 5% e solução salina saturada, seca e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash, eluindo com EtOAc a 20%/éter de petróleo, para proporcionar a amina desejada (composto 43). Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 43: Rf 0,50 (Acetona a 30%/Hexano) ; [a]D25 -44 , 0 (c = 1,1, CHC13) ; RMN de (500 MHz, CDC13) δ Ha) 0,92 (m, 6H) , Hb) 1,45 (s, 9H) , Hc) , Hd) &

He) 1,50-1, 90 (m, 5H) , Hf) & Hg) 2,3-2,45 (m, 5H) , Hhl) 2,22-2,90 (m, 1H) , Hh2) & Hi) 3,25-3,4 (m, 3H) , H3) & Hk) 3,70-3, 95 (m, 2H) , Hi) 5,35 (m, 5H) , Hm) 7,30 (m, 5H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ Ca) 22,2, Cd) 23,4, Cc) 25,6, Cb) 28,4, Ce) 28,8, Cg) 36,6, Cf) 38,4, Ch) 46,2, Ca) 56,1, C3) 58,5, Cb) 56,2, Ck) 66,0, Cn) 79,6, 122

Cm) 128,2, Cq) 136,2, C0) 154,1, Cp) 174,2; IR (puro) 2955 (s) , 2868 (s), 1730 (s), 1693 (s), 1455 (s), 1392 (s) , 1364 (s) , 1170 (s) cm-1; HRMS m/z calculado para C24H38N2O4 (M+H) 419,2910, encontrado 419,2897.

Cloridrato do sal de L-Pro-ψ(NHCH2) -N-metil-Benzil-D- leucinato (composto 44) . O composto 43 (0,1 grama) foi dissolvido em HCl.dioxano (5 mililitros) e a solução foi agitada à temperatura ambiente. Quando a reacção se completou, todo o solvente foi removido in vacuo. Foi adicionado tolueno duas vezes e concentrado. O residuo foi seco sob pressão reduzida, durante a noite, para proporcionar o sal de HC1 desejado (composto 44) num rendimento de 98%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 44: Rf linha de base (EA a 60% /PE); [oí] d25 +15,3 (c = 0,6, CHCI3) ; RMN de (500 MHz, CDC13) δ HJ 0,91-1,10 (d, 6H) , Hb) , Hc) & Hd) 1, 68-2,30 (m, 5H) , He) 2,83 (dd, 2H) , Hf) 3,12 (s, 3H) , Hg) & Hh) 3,31-3,65 (m, 4H) , H±) & H3) 4,11-4,30 (m, 2H) , Hk) 5,28 (s, 2H) , Hk) 7,40 (m, 5H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDCl3) δ Cc) 20,8, Cb) 23,5, Ca) 25,9, Cd) 26,1, Ce) 36,2, Cf) 46,2, Cg) 55.8, Ch) 61,6, C±) 64,2, Cj) 67,0, Ck) 68,2, Cd) 125, 0, 128, 0, 128.8, 128, 9 & 134,1, Cn) 137,9, Cm) 167,0; IR (puro) 2954 (s) , 123 2360 (s), 2338 (s), 1740 (s), 1455 (s), 1389 (s), 1197 (s), 1141 (s) ; cm-1; HRMS m/z calculado para C19H30N2O2 (M+H) 319,2386, encontrado 319,2392.

L-Lactil-Pro-ψ(NHCH2) -N-metil-Benzil-D-leucinato (composto 50a) . O composto 44 (20 miligramas, 0,063 milimoles) foi

dissolvido em CH2CI2 (0,5 mililitros) e foi adicionado ácido láctico (5,55 miligramas, 0,063 milimoles) a 0 °C, seguido pela adição de BOP (28 miligramas, 0,063 milimoles) e NMM (0,035 mililitros, 0,31 milimoles). A mistura reaccional foi agitada a 0 °C e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, a mistura reaccional foi diluída com éter. A camada orgânica foi lavada com HC1 a 5%, NaHCCb a 5% e solução salina saturada. A solução resultante foi seca sobre Na2S04 e concentrada. A mistura bruta foi purificada por cromatografia em coluna, eluindo com acetona a 30%/hexano, para proporcionar o composto 50a num rendimento de 61%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para 0 composto 50a: Rf 0,50 (Acetona a 50%/Hexano); [a] d25 +21 ,0 (c = CM V 0 CHCI3) ; RMN de ΧΗ (500 MHz, CDCI3) δ Ha) 0,82-0,92 (d, 6H) , Hb) 1,20 (d, 3H) , Hc) 1,45-1,66 (m, 2H) , Hd) 1, 66-1,72 (m, 1H) , He) & Hf) 1,76-1, 90 (m, 4H) , Hg) & 124

Hh) 2,25-2,45 (m, 5H) , H±) , Hj) & Hk) 3,19-3,85 (m, 4H) , HJ 4,10-4,21 (rm, 1H) , Hm) 5,05-5,18 (s, 2H) , Hn) 7,12-7,38 (m, 5H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ Ca) 22,0, Cc) 22,8, Cd) 24,2, Ce) 24,8,

Cb) 25,4, Cf) 28,1, Cg) 37,8, ch) 38,6, Cj) 45,8, Ci) 46,2, Ck) 1—1 O O KD LO 56,8, Cm) 66, 0, Cn) 128 ,8, C0) 136,1, Cp) 173,8, Cq) 174,1; IR (puro), 3415 (br) , 2955 (s) , 2869 (m) , 1729 (s), 1638 (s), 1455 (m), 1379 (m) , 1366 (m) , 1147 (m), 1126 (m) ; HRMS m/ z calculado para C22H34N2O4 (M+Na) 413, 2416, encontrado 413,2423.

Ácido N-metil-leu-ψ(NHCH2)-lac-pro (composto 51a). O composto 50a (20 miligramas, 0,063 milimoles) foi dissolvido em 0,5 mililitros de MeOH/EtOAc (1:1). A mistura foi adicionada a uma solução de MeOH e EtOH (1:1) contendo o catalizador Pd/C (10 miligramas). A mistura reaccional foi agitada num hidrogenador de Parr, sob H2 (40 libras por polegada quadrada, manómetro) e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, o catalizador foi removido por filtração. A restante solução foi concentrada in vacuo. O produto bruto (composto 51a) foi utilizado directamente no passo seguinte. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 51a: Rf 0,20 (MeOH a 10%/CH2C12); [a]D25 +65, 0 (c = 0,2, CHC13 RMN de 2Η (500 MHz, CDC13) δ Ha) 0,82-0, 92 (d, 6H) , Hb) 1,34 (d, 3H) , Hc) 125 1,45-1,55 (m, 1H) , Hd) 1,78 1 ,91 (m, 2H) , He) 1,91-2,0 (m, 2H) , Hf) 2,0-2,18 (m, 2H) , Hg) 2,81 (s, 3H) , Hh) 3,03-3,18 (d, . 2H) , HJ 3,45-3,54 (m, 1H) , Hj) 3,56-3, . 68 (t, 2H) , Hk) 4,25-4,35 (m, 1H) , Hi) 4,40-4,49 (m, 1H) ; RMN de 13c (125 MHz, CDCI3) δ Ca) 21, 0, cb) 22,8, Cc) 23, 4, Cd) 24,8, Ce) 25,8 , Cf) 29,4, Cg) 36,5, Ch) 38,6, Ci) 47,2, Cj) 55,2, Ck) 66,4, Ci) 68,2, Cm) 172,4, Cn) 176, 2 ; IR (puro), 3336 (br) , 2957 (s), 2870 (m) , 1718 (m) , 1627 (s) , 14 66 (s) , 1368 (s) , 1250 (m), 1197 (w) , 1128 (w); HRMS m/z calculado para C15H27N2O4 (M+Na) 323,1947, encontrado 323,1939.

Ciclo[N-(N-3,4-didesidro-L-prolil-N-metil-D-leucil)-0[[N-[(2S,3S,4S)-4-[(3S,4R,5S)-4-amino-3-hidroxi-5-metil-heptanoil]oxi-3-oxo-2,5-dimetilhexanoil]-L-leucil]-L-prolil-N,0-dimetil-L-tirosil]-L-treonilo] (composto 72a). 0 ácido bruto (12,5 miligramas, 0,038 milimoles) foi combinado com sal HC1 do macrociclo (15,0 miligramas, 126 0,019 milimole) em CH2CI2 (0,25 mililitro) a 0o C. Foram adicionados HATU (8,2 miligramas, 0020 milimole) e DIEA (0,026 mililitro, 4 equivalentes). A reacção foi agitada a 0 °C durante a noite e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, a mistura foi diluída com Et20 e a camada orgânica foi lavada com HC1 a 5%, NaHCCt a 5% e solução salina saturada. A solução resultante foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna, eluindo com MeOH a 5%/ CH2CI2, para se obter o produto desejado (composto 72a) num rendimento de 72%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 72a: Rf 0,40 (MeOH a 10%/ CH2CI2) ;

[oí] d25 +81 ,2 (c = 0 ,15, CHC13); RMN de XH (500 MHz , CDCI3) δ Ha) 0,85-0,97 (m, 24H) , Hb) 1,17-1,27 (m, 2H) , Hc) 1,28 -1,39 (s 3H) , Hd) 1,40 (d, 3H) , H te) 1 ,43 (d, 3H) , Hf) 1, 46-1, . 50 (m, 1H) e 1, 61 (t, 1H) , Hg) 1,68-1 ,73 (m, 1H), Hh) 1,74-1 ,79 (m, 1H), Hi) 1 , 82- 1,8 8 (m, 2H) , , 2,02 -2, Oí 3 (m, 1H) e 2,11-2, ,17 (m, : 2H), Hj) 2 ,34- 2,37 (m, 1H) , Hk) 2 ,57 (s, 3H) , Hi) 2,38 (d, 2H) , H m) 3,18 e 3, 39 (dd , 1H) , Hn 2,83 (s, 3H) , H0) 3,37-3,57 (m, 2H) , Hp) 3, 60 (d, 1H) , Hq) 3,70 -3,73 (m, 1H) , Hr) 3,80 (s, 3H) , Hs) 4,05-4, 14 (m, 3H) e 4,3 6-4, 48 (m, 2H) , Ht) 4,27 (q, 1H), Hu) 4,56 (dd, 1H), Hv) 4,65 (dd, 1H) , Hw) 4,81 (t, 1H), Hx) 5,19 (d, 1H) , Hy) 5,35 (dd, 1H) , Hz) 5,42 (dd, 1H) , Haa) 5,61 (dd, 1H), Hbb) 5,73-5, 75 (m, 1H) , Hcc) 6, 1] - (dd, 1H) , Hdd) 6,85 (d, 2H) , Hee) 7, 0( 5 (d, 2H), Hff) 7,2 0 (d, 1H) , Hgg) 7,54 (d, 1H), Hhh) 7,7 '8 (d, 1H) / RMN de : 13C (12 5 MHz, CDCI3) δ Ca) , Cc) 11,7 , 14,7, 15 ',2, 16,3 , 16,9, 1 8, 6, 20, 1 e 20 ,9, Cd) 23 ,3, Ce) 23,7, Cb) 24,8 e 27,2 !, Ci ) 24,9, 25 , 0 e 33, 9, Cf) 27, 9, Cg) 31,: 2, Ch) 31,3, Cj) 33, -9, Cf) 36,2, Cm) 38,7, ck) 38,8, Cn) 41,3, Co) 46,9, Cq) 49, 46, Cs ) 4 9, ,52, 53,0, e * 67,9, Cr) 55,3, Cv) 55,4, Cw) 55,5, Cu) 57,2, C5 f) 57 ,6, Ct) 63,! 9, Caa) 65, 9, Cs) 66, r 4, Cp ) 66 ,5, Cx) 70,4, Cz) 81,5 , Cdd) 114,1, Ccc) 124 ,0, Cbb) 129,1, Cu) 130,0, Cee) 130,3, Cj j) 158, 6, Ckk) 168,6, 169 ,3, 17 0,5, 170,( 5, 171,3, 171,5, 172,4, 173 ,9, Cu) 204 ,9 ; IR 127 (puro) 3331 (br) , 2956 (s) , 2871 (m) , 1732 (s) , 1638,3 (br, sobreposição), 1543 (m), 1513 (s), 1448 (m) , 1379 (m) , 1247 (w) , 1167 (w) cm-1/ HRMS m/z calculado para C57H91N7O14 (M+H) 1098,6702, encontrado 1098,6726.

Exemplo 6 Síntese de uma Porção de Cadeia Lateral de 3,4-Desidro-Prolina e Acoplamento a um Macrociclo de Didemnina A síntese da unidade 3,4-desidroprolina começou com a trans-4-hidroxi-L-prolina (composto 52) , a qual foi produzida como descrito (Rueger et al., 1982, Can. J. Chem. 60:2918; ver Figura 44) . O ácido foi, primeiro, protegido para o seu éster etílico. O grupo amino foi, ainda, protegido utilizando B0C2O, para se obter composto 53. O grupo hidroxilo foi mesilado utilizando MsCl e piridina. O mesilato (í. e., a porção metilsulfonato do composto 53) foi deslocado com benzenosselenito de sódio com inversão de estereoquímica, para se obter composto 54. Eliminação oxidativa do grupo fenilselénio proporcionou o alceno correspondente (composto 55) num rendimento de 73%.

Se o composto 54 fosse directamente exposto a condições de eliminação básicas, seriam gerados dois regioisómeros. Mas a eliminação oxidativa do composto 54, através do fenilsselénio como o intermediário, produziu apenas o regioisómero desejado. Esta regiosselectividade pode ser devida ao facto de o estado de transição que conduz ao isómero indesejado ter um momento dipolar maior com uma energia superior. 128 A hidrólise do éster etilico (composto 55) rendeu o ácido de desidroprolina livre (composto 56) , o qual foi acoplado com o éster de D-leucina, para se obter o composto 57. A hidrólise do éster metilico proporcionou o ácido livre, o qual foi acoplado ao sal do macrociclo da didemnina, utilizando HATU, para proporcionar o composto 58. 0 grupo de protecção Boc foi removido utilizando HC1 gasoso e o sal do HCl foi neutralizado utilizando uma solução saturada de NaHCCt, para proporcionar o análogo final, composto 59.

Os passos nesta síntese são agora descritos em maior detalhe.

N-Boc-trans-4-Hidroxiprolinato de Etilo (composto 53). O sal do cloridrato de trans-4-hidroxi-prolinato de etilo (1,0 grama, 0,005 mole) foi dissolvido em CH2CI2 saturado (10 mililitro). Foi adicionado EtsN (2,09 mililitro, 0,015 mole) a 0 °C, seguido pela adição de B0C2O (2,23 g, 0,01 mole) . A mistura reaccional foi agitada durante a noite. Quando a reacção se completou, o pH foi determinado e foi, então de 8. A mistura reaccional foi lavada com éter e a camada de éter foi rejeitada. A camada aquosa foi acidificada com KHS04 a 1 normal até pH 4, seguido pela extracção, por três vezes, com acetato de etilo. Os extractos 129 orgânicos foram combinados, lavados com solução salina saturada, secos e concentrados. A mistura bruta foi purificada por cromatografia em coluna, eluindo com acetona a 20%/hexano para proporcionar o produto desejado (composto 53) num rendimento de 71%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 53: Rf 0,50 (Acetona a 40%/Hexano) ; [a] d25 +71,3 (c = 0,2, CHC13 RMN de ΧΗ (500 MHz, CDC13) δ Ha) 1,07-1,13 (t, 6H) , Hb) 1,32-1,36 (m, 9H) , Hc) 1,84-2,15 (m, dr, 2H) , Hd) 3,23-3,49 (m, dr, 2H) , He) 3,78-3, 95 (br, 1H) , Hf) 3, 96-4, 09 (m, 2H) , Hg) 4,17-4,26 (m, 1H) , Hh) 4,27-4,32 (t, 1H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ

Ca) 14,0, Cb) 28,1, Cc) 38,2, Cd) 54,2, Cf) 57,7, Cg) 61,0, Ch) 69, 0 , Cx) 80,0, Cj) 153,9, Ck) 172 ,6; IR (puro) 3448 (br), 2978 (s) , 2935 (m), 1746 (m), 1702 (s) , 1676 (s) , 1477 (m), 1402 (s), 1367 (m) , 1339 (m) cm"1; HRMS m/ z calculado para C11H23N4O2 (M+H) 260, 1497, encontrado 260,1503. h

N-Boc-cis-4-fenilselenil-L-prolinato de etilo (composto 54). Foi adicionado boro-hidreto de sódio (0,15 grama, 0,004 mole) em pequenas porções, à temperatura ambiente, a uma solução de difenildisselenito (0,556 grama, 0,0018 mole) em EtOH. A mistura foi agitada durante cerca de 5 minutos, até a cor amarela brilhante ter desaparecido. Foi adicionado o mesilato previamente preparado (1,0 grama, 0,003 mole), a solução foi 130 submetida a refluxo durante 2 horas e o solvente foi removido in vacuo. 0 resíduo foi diluído com Et20 (5 mililitros) e a camada orgânica foi lavada com H2O (10 mililitros) e solução salina saturada. A camada resultante orgânica foi seca e concentrada. O óleo bruto foi purificado por cromatografia em coluna, eluindo com acetona a 10%/hexano, para proporcionar o produto (composto 54) num rendimento de 85%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 54: Rf 0,53 (30% Acetona/Hexano); [a] d25 -16,4 (c = 0,3, CHC13) ; RMN de ΧΗ (500 MHz, CDC13) δ Ha) 1,21- 1,24 (t, - 3H) , Hb) 1,45 (s, 9H) , Hc ) 2 , 05 & 2, 68 (dr, 2H) Hd) 3 ,40 (m, 1H), He d 3 ,58 (m, , 1H), Hfl) 3, 95 (m, 1H) , Hf 2) , & Hg 4,10- 4,28 (m, , 2H) , Hh) 7,25, 7,55 (m, 5H) ; RMN de 13C (125 MHz CDCI3 ) δ Ca) 14,0, cb) 28,2, Cc) 36,1, Cd) 39,8, Ce) 53, 6, cf 58,8, Cg) 60, 8, Ci) 80, 2, Ch) 127,0, 128, 2, 134,3, Cj) 152,8, , ck 171,8; IR (puro) 2977,0, 1747,1, 1701,9, 1477,4, 1394,4, 1190,1, 1114,1 (m) cm-1; HRMS m/z calculado para CisthsNChSe (M+H) 399,0948, encontrado 399,0957.

N-Boc-3,4-desidro-L-prolinato de etilo (composto 55). A mistura do composto 54 (0,9 grama, 2,26 milimoles) e CH2C12 foi inicialmente arrefecida para 0 °C num banho de gelo. Foi adicionada piridina (0,27 mililitro, 3,4 milimoles) gota a gota, a esta solução. Uma solução de H202 aquoso a 30% (0,58 mililitro) foi, então, gradualmente adicionada ao longo de um período de 5 minutos. A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 131 1 hora e, depois, diluída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HC1 a 5%, solução saturada de Na2CC>3 e solução salina saturada. A solução resultante foi seca e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna, para proporcionar o produto desejado (composto 55) num rendimento de 73%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 55: Rf 0,63 (Acetona a 30%/Hexano) ; [oí]d25-32,3 (c = 0,3, CHCI3) ; RMN de ΧΗ (500 MHz, CDCI3) δ Ha) 1,15-1,30 (t, 3H) , Hb) 1,45 (s, 9H) , Hc) & Hd) 4,15-4,30 (m, 4H) , He) 4,98 (d, 1H) , Hf) 5,75 (dt, 1H) , Hg) 5,95 (dd, 1H) / RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ Ca) 14,1, Cb) 29,2,

Cc) 53,8, Cd) 61,8, Ce) 67,0, Cb) 80,1, Cf) 125,0, Cg) 129,2, Cb) 154,0, Cj) 170,2/ IR (puro) 3458 (br) , 2979 (s) , 1786 (s) , 1750 (s), 1710 (s), 1448 (m), 1395 (m), 1369 (s) , 1318 (s) , 1258 (m) , 1159 (s) , 1896 (m) cm-1; HRMS m/z calculado para C12H19NO4 (M+H) 242,1392, encontrado 242,1386.

N-Boc-3,4-desidro-L-prolina (composto 56). O éster etílico 55 (0,18 grama, 0,8 milimole) foi dissolvido em THF/H2O (1:1, 10 mililitros). Foi adicionado Li0H.H20 (0,33 grama, 8 milimoles) à solução a 0 °C. A mistura foi agitada durante cerca de 6 horas e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, o THF foi removido in vacuo. Foi adicionada uma solução saturada de NaHCCç e lavada com éter duas vezes. Todas as camadas aquosas foram combinadas e acidificadas para pH 4 com KHSO4 1 normal. Foi utilizado acetato de etilo três vezes para extrair a solução 132 aquosa acidificada. Os extractos foram secos e concentrados para proporcionar o ácido desejado (composto 56) num rendimento de 92%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 56: Rf 0, 20 (acetona a 30%/hexano ) ; [oí] d25 +8,4 (c = 0,2 CHCI3) ; RMN de (500 MHz, CDCI3) δ Ha) 1, 4 9 (s, rm, 9H), Hb 4,25 (d, 2H) , Hc) 5,05 (d, 1H) , Hd) 5,80 (dt , 1H), He) 6,01 (dd 1H) , Hf) 8,40 (br, 1H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ Ca) 28,9, Cb) 53,9, Cc) 66,2, Cg) 81,8, Cd) 124,2, Ce) 129,9, Ch) 154,5, CJ 165,3; IR (puro) 3000-3400 (br) , 2957 (s) , 1736 (s) , 1704 (s) , 1666 (s), 1400,2 (s) , 1367 (m) , 1177 (s) , 1136 (s) cm'1; HRMS m/z calculado para Ci0H15NO4 (M+H) 213, 1079, encontrado 242,1086.

N-Boc-3,4-desidro-L-Prolil-Metil-N-metil-leucinato (composto 57). O composto 56 (0,1 grama, 0,469 milimole) foi dissolvido em CH2CI2 (5 mililitros) . Foi adicionado, a 0 °C, HATU (0,26 grama, 0,58 milimole), seguido pela adição de DIEA (0,26 mililitro, 1,88 milimoles). Finalmente, foi adicionado o sal de cloridrato de dimetil-D-leucina (0,09 grama, 0,469 milimole) à mistura. A mistura reaccional foi agitada durante 6 horas e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, a mistura foi diluída com Et20 e a camada orgânica foi lavada com HC1 a 5%, NaHC03 a 5% e solução salina saturada. A solução resultante foi seca e concentrada. O resíduo bruto foi purificado por coluna, para proporcionar o produto desejado (composto 57) num rendimento de 133 76%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 57: Rf 0,32 (Acetona a 30%/ Hexano) ; [a] d25 -22,7 (c = 0,4, CHC1; 3) / RMN de ΧΗ (500 MHz , CDCI3) δ Ha) 0, 90 LO O \—1 1 (d, rm, 6H) , Hb) 1 ,48 (s, rm, 9H) , Hc) & Hd) 1, 65 O OD \—1 1 (m, 3H) , He) 3, 05 (s, 3H) , Hf) 3,7. 5 (s, 3H) , Hg) 4,20 -4, 35 (m, 2H) , Hh) 5,28 (t, 1H) , Hi) 5, , 40 (d, 1H) , Hj) 5 ,70 (dt, 1H) r Hk) 6 \—1 O (dd, 1H) / RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ Ca) 22,0, 23, 8, Cc) 25,2, Cb) 29,0,

Cd) 37,8, Ce) 52,2, Ch) 53,8, C±) 65,8, Ci) 80,0, Cj) 124,0, Ck) 129,2, Cm) 159,5, Cn) 171,0, C0) 172,2/ IR (puro) 2956 (s) , 1743 (s), 1705 (s), 1667 (s), 1400 (s), 1366 (m), 1316 (w) , 1258 (w), 1177 (m) , 1128 (m) cm’1/ HRMS m/z calculado para C18H30N2O5 (M+H) 355,2233, encontrado 355,2225.

N-Boc-3,4-desidro-L-Prolil-N-metil-leucina (composto 57a). O composto 57 (0,13 grama, 0,37 milimole) foi dissolvido em THF/H20 (1:1, 5 mililitros). Foi adicionado Li0H.H20 (0,15 grama, 3,7 milimoles) à solução a 0 °C. A mistura foi agitada durante cerca de 6 horas e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, o THF foi removido in vacuo. Foi adicionada uma solução saturada de NaHCCb e lavada duas vezes com éter. Todas as camadas aquosas foram combinadas e acidificadas para pH 4 com KHSO4 a 1 normal. Foi utilizado acetato de etilo para extrair três vezes a solução aquosa acidificada. Os extractos foram 134 secos e concentrados, para proporcionar o ácido desejado (composto 57a) num rendimento de 92%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 57a: Rf 0,20 (Acetona a 40%/Hexano); [a]D20 +52,3 (c = 0,2, CHC13) ; RMN de XH (500 MHz, CDC13) δ Ha) 0,85-1,05 (d, rm, 6H) , Hb) 1,48 (s, rm, 9H) , Hc) &

Hd) 1,65-1,92 (m, 3H) , He) 3,12 (s, rm, 3H) , Hf) br, 1H, Hg) 4,10- 4,28 (m, 2H) , Hh) 5,15 (t, 1H), Hi) 5,35 (d, 1H), Hj) 5,70 (dt, 1H) , Hk) 6,01 (dd, 1H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDCI3) δ Ca) 23,3, 24,5, Cc) 25,0, Cb) 28, 3, Cd) 31, 5, Cg) 38,5, Ce) 53,6, Ce) 55,8, Ch) 65,2, Ci) 80,0, Cj) 124,1, Ck) 129,5, Cm) 153,8, Cn) 171,3, C0) 175,3; IR (puro) 3300 (br), 2957 (s) , 1731 (m) , 1783 (s), 1667 (s) , 1612 (m) , 1481 (m) , 1400 (s), 1367 (m) , 1177 (s), 1136,7 (s) cm-1; HRMS m/z calculado para C17H28N2O5 (M+H) 341,2076, encontrado 341,2063.

Ciclo[N-(N-Boc-3,4-desidro-L-prolil-N-metil-D-leucil)-O[[N-[(2 S,3S,4S)-4[(3 S,4R,5S)-4-amino-3-hidroxi-5-metil- 135 heptanoil]oxi-3-oxo-2,5-dimetil-hexanoil]-L-leucil]-L-prolil- N, O-dimetil-L-tirosil]-L-treonilo] (composto 58). 0 ácido bruto 57a (5,0 miligramas, 0,012 milimole) foi combinado com o sal de HC1 do macrociclo (14,9 miligramas, 0,012 milimole) em CH2CI2 (0,1 mililitro) a 0 °C. Foram adicionados HATU (48 miligramas,

O, 012 milimole) e DIEA (0,048 mililitro, 0,048 milimole). A

reacção foi agitada a 0 °C durante a noite e monitorizada por TLC. Quando a reacção se completou, a mistura foi diluída com Et20 e a camada orgânica foi lavada com HC1 a 5%, NaHCCb a 5% e solução salina saturada. A solução resultante foi seca e concentrada. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna, eluindo com MeOH a 5%/CH2Cl2, para proporcionar o produto desejado (composto 58) num rendimento de 72%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 58: Rf 0,40 (MeOH a 10%/CH2C12) ; [a] d25 -83,2 (c = 0,3, CCHC13C13) / RMN de XH (500 MHz, CDCI3) δ Ha) 0,85-0,97 (m, 24H) , Hb) 1,17 -1,27 (m, 3H) , Hc) 1,45 (s, 9H) , Hd) 1,40 (d, 3H) , He) 1,43 (d, 3H) , Hf) 1,46- 1,50 (m, 1H) e 1,61 (t , 1H), Hg) 1, 68 -1,73 (m, 1H) , Hh) 1,74 -1,79 (m, 1H) , HJ 1,82- 1,88 (m, 2H), 2,02-: 2,08 (m, 1H) e 2,11 -2,17 (m, 2H) , Hj) 2,34 -2,37 (m, 1H), Hk) 2,57 (s, 3H) , Hi) 2 ,63 (dd, 1H) e 2, 95 (d, 1H) , Hm) 3, 1! 3 e 3,39 (dd, 1H) , Hn) 3,23 ; (s, 3H) , H0) 3,57 -3, 61 (m, . 2H) , Hp) 3,33 (d, 1H) , Hq) 3,69-3,i: L (m, 1H) , Hr) 3, 80 (s, 3H) , Hs) 4,05- -4,14 (m, 2H) e 4,3 16-4,4 18 (m, 2H) , Ht) 4,27 (q, 1H) , Hu) 4,56 (dd, 1H), Hv) 4, 65 (dd, , 1H) , Hw) 4,81 (t, 1H) , Hx) 5,19 (d, 1H) , Hy) 5,35 (dd, 1H) , Hz) 5, 42 (dd, 1H) , Haa) 5, 61 (dd, 1H) , Hbb) 5,73-5, 75 (m, 1H), Hcc) í ,,11 (dd, 1H) , Hdd) 6, 85 (d, 2H) , Hee) 7,08 (d, 2H), Hff) 7,20 (d, 1H) , Hgg) 7,54 (d, 1H) , Hhh) 7,78 (d, 1H) ; RMN de 13C (12 5 MHz, < 7DC13) 1 δ C, a) 11 ,7, 14,7, 15,2 , 16, 3, 1 6,9, 18, 6 , 20,1 e : 20,9, Cd) 23, 3, Ce) 23,7, Ca) 24, 8 e 27 ,2, Ci) 24,9, 25, 0 e 33,9, Cf) 27,9, Cc) 28, 6, Cg) 31,2 , ch) 31,3 , Cj) 33, 9, Ci ) 36, .2, Cm) 38 ,7, C k) 38,8, Cn) 4 1,3, C0) 46,9, Cq) 49, 46 , cs ) 49, 52, 53,0, e 67 ',9, C :r) 55,3, Cv) 55,4, C„) 55, 5, 136

Cu) 57,2, Cy) 57,6, Ct) 63,9, Caa) 65, 9, Cp) 66,5, Cx) 70,4, Cz) 81,5, Cz) 81,7, Cdd) 114,1, Ccc: ) 124,0, Cbb) 129,1, Cu) 130,0, Cee) 130,3, Cjj ) 158,6, Ckk) 168, 6, 169, 3, 170,5, 170, 6, 171 ,3, 171,5, 172,4, 173,9, 204,9; IR (puro) 3337 (s), 2959 (s), 2870 (m) , 1733 (s), 1645 (s), 1640 (s), 1543 (m) , 1514 (m), 1454 (m) , 1407 (m), 1368 (m), 1302 (w), 1248 (m), 1171 (m) cm-1; HRMS m/z calculado para C59H91N7O15 ( (M+Na+) 1160,6471, encontrado 1160,6415.

Ciclo[N-(N-3,4-desidro-L-prolil-N-metil-D-leucil)-O[[N-[ (2S, 3S, 4S) -4[ (3S,4R,5S)-4-amino-3-hidroxi-5-metil-heptanoil]oxi-3-oxo-2,5-dimetil-hexanoil]-L-leucil]-L-prolil-N,O-dimetil-L-tirosil]-L-treonilo] (composto 59). 0 composto 58 (4 miligramas) foi dissolvido em HCl.dioxano (0,5 mililitro) e agitou-se à temperatura ambiente. Quando a reacção se completou, o solvente foi removido in vacuo. Foi adicionado tolueno, duas vezes, e a solução foi concentrada. O residuo foi seco in vacuo durante a noite, para proporcionar o sal de HC1 desejado em 98%. 137 0 sal de HC1 foi dissolvido em EtOAc, lavado com NaHCOs saturado, e a camada orgânica lavada novamente com solução salina saturada, seca novamente com Na2SC>4 e concentrada, para proporcionar o produto desejado (composto 59) num rendimento de 75%. Foram obtidos os seguintes resultados analíticos para o composto 59: Rf 0,20 (MeOH a 10%/ CH2C12) ; [a]D25 -242,3 (c = 0,2, CHCI3) ; RMN de (500 MHz, CDCI3) δ Ha) 0,79- 0, 97 (m, 24H) , HJ 1, 12-1, 23 (m, 3H) , Hd) 1,32 -í, 40 (d, 3H) , He) 1,43 (d , 3H), Hf) 1, 46-1, 50 (m, 1H) e 1, 61 (t, 1H) , Hg) 1, 68- 1,73 (m, 1H) , HJ 1, 74-1, 79 (m, 1H), Hi) & Hj) 1, 82-1,88 i (m, 2H) , 2,02 -2, 08 (m, 1H) e 2,11- 2,17 (m, 3H) , Hk) 2,25 (s, 3H) , HJ 1 2,51 - (d, 2H) , hj : 3,18 e 3,39 (dd, 1H) , Hn) 2 , 95 (s , 3H) , H0) 3,57- -3, 61 (m, 2H) , Hp)

3,33 (d, 1H) , HJ 3, 69- -3,71 (m, 1H) , HJ 3,73 (s, 3H) , HJ 3 , 90- 4,18 (m, 2H) , HJ 4,49 (q, 1H) , HJ 4,56 (dd, 1H) , HJ 4, 65 (dd, 1H) , Hw) 4,81 (t, 1H) , HJ 5,19 (m, 3H) , Hbb) & Haa l ) 5,73 -5, 75 (m, 3H) , Hcc) & Hz ) 6, ,01 (dd, 3H) , Hdd) 6,85 (d, 2H) , Hee) 7,08 (d, 2H) , Hff) 7,20 (d, 1H) , Hgg ) 7,54 (d , 1H) , Hhh) 7, 78 (d, 1H) ; RMN de 13C (125 MHz, CDC13) δ Ca) 11,7, 14,7, 15,2, 16,3, 16,9, 18,6, 20, 1 e 20 ,9, Cd) 23 ,3, Cf ;) 23,7, Ca l) 24, 8 e 27,2, CJ 24,9, 25, 0 e 33, 9, Cf) 27, 9, CJ 28, 6 , Cg) 31 ,2 , CJ 31, 3, CJ 33,9, CJ 36,2, CJ 38 ,7, CJ 38, 8 , CJ 41,3, Co ) 46, 9, Cq) 4 9 ,46, CJ 49, 52, 53, 0, e 67,9, - CJ 55,3, CJ 55, 4, Cw) 55, 5, CJ 57,2, CJ 57, 6, CJ 63, r 9, Caa) 65,9, Cp) 66,5, Cx ) 70,4, Cz) 81,5, Cdd) 114, 1, Ccc) 124,0, Cbb) 129,1, Cu) 130,0, Cee) 130,3, Cjj) 158,6, Ckk) 168,6, 169, 3, 170,5, 171,3, 171,5, 172,4, 173, 9, Clb) 204, 9; IR (puro) 3337 (s), 2958 (s), 2861 (m), 1734 (s) , 1642 (s) , 1638 (s) , 1547 (m) , 1514 (m) , 1451 (m) , 1385 (w) , 1243 (w) , 1166 (w) cm'1; HRMS m/z calculado para C54H83N7O13 (M+H) 1038, 6127, encontrado 1038,6103. 138

Exemplo 7 Síntese e Avaliação Biológica dos Análogos de Fotoafinidade de Didemnina

Foram identificadas duas proteínas que se ligam com a didemnina, nomeadamente, factor 1 alfa de aumento eucariótico (EF-la; Crews et al., 1994 J. Biol. Chem. 269:15411-15414) e tioesterase 1 da palmitoilproteína (PPT1; Crews et ai., 1996, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 93:4316-4319). No entanto, a interaeção estrutural precisa entre a didemnina B e estas duas proteínas não está completamente compreendida. As experiências descritas neste Exemplo foram realizadas de forma a gerar derivados fotorreactivos de didemnina que podem ser utilizados para investigar a ligação das didemninas correspondentes com estes e outros alvos celulares e que derivados análogos fotorreactivos da tamandarina podem ser sintetizados. A síntese de análogos de didemnina designados como compostos 403, 404, 405 e 406 é descrito neste exemplo. Estes compostos têm a estrutura da fórmula XXI, em que R2 é um substituinte tendo a estrutura de fórmula III, R3 é metilo, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, cada de R5, R6, R8 e R9 é um radical hidreto, R7 é um radical metoxilo, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -O-, Y é um radical hidreto e R1 tem a identidade apresentada nas Figuras 47A, 47B, 47C e 47D, respectivamente.

Cada dos compostos 403, 404, 405 e 406 é um derivado de didemnina A e cada uma dessas moléculas compreende uma porção ácido 4-benzoilbenzóico. Este tipo de derivados de benzofenona foi seleccionado como o grupo fotorreactivo devido às suas múltiplas vantagens na marcação de fotoafinidade, como descrito 139 (Dormán et al., 1994, Biochemistry 33:5661-5673; Fleming, 1995, Tetrahedron 51:12479-12520). As benzofenonas são facilmente manipuladas à luz ambiente, mas são fotoactivadas por luz tendo um comprimento de onda de cerca de 350 nanómetros. A luz tendo este comprimento de onda não danifica, de um modo geral, as proteínas e foi utilizada de modo a evitar alterações induzidas pela luz nas proteínas alvo, utilizadas nestas experiências. O di-radical de benzofenona activado tende a evitar moléculas de solvente e nucleófilos e reticula, de um modo preferido, em centro de carbono não reactivos. Uma vez que a foto-excitação das benzofenonas é reversível, uma dada molécula do análogo que não é ao sítio de ligação do ligando pode sofrer vários ciclos de excitação-relaxamento sem sofrer reacções secundárias não específicas. Como resultado, as benzofenonas tendem a reticular com maior fotoespecificidade que os fotóforos, tais como azidas de arilo, que sofrem reacções de fotólise irreversíveis.

As porções de cadeia lateral dos compostos 403, 404, 405 e 406 foram sintetizadas e, depois, acopladas a um intermediário macrólido avançado, como um passo final. A Figura 48 mostra a síntese da porção D-leucina que é comum a todos os quatro análogos. A D-leucina foi convertida no seu carbamato de benzilo (composto 407) utilizando cloroformato de benzilo em NaHCCb e água. O composto 407 foi dialquilado utilizando sulfato de dimetilo na presença de KOH, THF e Bu4N+HS04~ em pó. A hidrogenólise catalítica do carbamato sobre um catalizador de Pd/C na presença de hidrogénio e acetato de etilo:metanol (1:1), seguido pela captura com HC1 na presença de metanol, rendeu o sal de cloridrato da amina, o composto 409. Como mostrado na Figura 49, o composto 409 foi acoplado com ácido 4- benzoilbenzóico mantendo o ácido com BOP-C1, um reagente que é geralmente útil no acoplamento a N-metilaminas na presença de 140 NMM e DMF, a 0 °C durante 30 minutos e, então, contactando o produto da reacção com composto 409. A remoção do grupo metilo por saponificação do éster rendeu o composto 412. O derivado de benzofenona designado por composto 410 (ver Figura 50) foi alongado por acoplamento mediado por BOP com um agente de ligação de éster de metilo e glicina na presença de BOP, NMM, DMF e o sal do cloridrato do éster de metilo e glicina. A saponificação do éster composto 413 na presença de LiOH, água, THF e metanol, seguido pelo acoplamento com o sal de amina 409, na presença de BOP-C1, NMM e DMF, e subsequente saponificação na presença de LiOH, água, THF e metanol, rendeu o composto 415. O composto 417 foi preparado de uma maneira análoga, utilizando um éster metilico do ácido 6-amino-hexanóico. O composto 419 foi preparado dois acoplamentos do composto 410 com o éster metilico do ácido 6-amino-hexanóico antes do acoplamento com o composto 409 e subsequente saponificação.

Os compostos 412, 415, 417 e 419 foram acoplados com o sal macrociclico anteriormente referido (preparado como descrito, Mayer et al., 1994, J. Org. Chem. 59:5192-5205; Mayer et ai., 1995, Acta Crystallogr. 051:1609-1614) utilizando o reagente de acoplamento BOP, para obter os compostos 403, 404, 405 e 406, respectivamente, com um rendimento de 68-81%.

De forma a avaliar a sua adequabilidade para a marcação de fotoafinidade da proteína de ligação EF-la, os compostos 403, 404, 405 e 406 foram ensaiados para a potência de inibição da biossíntese de proteína. Os resultados desta avaliação estão listados na Tabela 2. O sistema de ensaio de tradução livre de células foi como descrito (SirDeshpande et al., 1995, 141

Biochemistry 34:9177-9184; Ahuja et al., J. Med. Chem. 2000 43:4212-4218). Neste ensaio, a didemnina B exibiu um valor de metade da concentração inibidora máxima (IC50) de 3 micromolar. Os resultados na Tabela 2 demonstram que a potência de inibição da biossintese de proteina se mantém intacta mesmo quando é incorporada uma porção de benzofenona grande numa estrutura de didemnina B. O comprimento do agente de ligação parece exercer um efeito marginal, com as duas cadeias laterais mais curtas (i. e., compostos 403 e 404) a serem quase equipotentes com a didemnina B. O aumento do comprimento da cadeia lateral correlaciona-se com reduções modestas na potência inibidora. Estes resultados são consistentes com os obtidos por outros (Sakai et al., 1996, J. Med. Chem. 39:2819-2834; Ahuja et al., J. Med. Chem. 2000 43:4212-4218) e demonstram que a inibição da síntese de proteína é muito tolerante à modificação da cadeia lateral.

Tabela 2

Composto Rendimento de acoplamento (IC50 (micromolar) Didemnina B 3, 0 403 68% 4,0 404 78% LO 405 74% 24, 406 81% 19 A Tabela 3 lista resultados preliminares obtidos utilizando o painel de células tumorais NCI-60 (descrito em Boyd et al., 1995, Drug Dev. Res. 34:91-109). Os resultados na Tabela 3 indicam que os análogos de fotoafinidade de benzofenona podem ser utilizados para estudar a actividade antitumoral das didemninas. A observação do parâmetro inibição a 50% do 142 crescimento celular (GI5o) mostra que todos os quatro análogos mantêm uma potência comparável à didemnina B. Em contraste com os resultados obtidos no que respeita à biossintese de proteínas in vitro, parece não existir qualquer linha delimitadora da relação entre o comprimento do agente de ligação e actividade. No entanto, a inibição do crescimento total (TGI) pelos quatro análogos requer concentrações significativamente mais elevadas do que é necessário para a didemnina B. De um modo interessante, todos os quatro análogos exibem três a dez vezes menos toxicidade, como determinado pelo parâmetro concentração letal, LC50 ·

Tabela 4

Composto GI50 (nanomolar) TGI (micromolar) LC50 (micromolar) Didemnina B 13 0,0066 3, 8 403 3, 0 0,35 15 404 13 2,0 23 405 4,3 20,5 19 406 17 5, 0 48

Os resultados das experiências apresentadas neste Exemplo demonstram que os análogos de didemnina contendo benzofenona pode ser obtidas por síntese total. A avaliação biológica dos análogos indica que a incorporação da benzofenona na cadeia lateral de péptido é uma estratégia possível para a marcação de fotoafinidade de alvos moleculares de didemninas.

As revelações de cada patente, pedidos de patente e publicações aqui citadas são, deste modo, aqui incorporadas como referência, na sua totalidade. 143

Embora esta invenção seja divulgada com referência a formas especificas de realização, outras formas de realização e variações desta invenção podem ser deduzidas por outros especialistas na matéria sem ir além do verdadeiro espirito e âmbito da invenção. As reivindicações anexas incluem todas essas formas de realização e variações equivalentes.

Lisboa, 20 de Dezembro de 2006 144

Claims (66)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composição compreendendo um análogo de tamandarina tendo a estrutura

   em que i) R1 é seleccionado do grupo consistindo de -H, - (terc-butiloxicarbonilo) , -leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina, -(N-metil)leucina-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, 1 -(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desidro-prolina-(N-metil-alanina) leucina-piroglutamato; ii ou) 2 (a) R3 é seleccionado do grupo consistindo de -CH3 e -H; e R2 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina, uma cadeia lateral de valina, uma cadeia lateral de alanina, uma cadeia lateral de norleucina, uma cadeia lateral de norvalina, cadeia lateral de leucina, uma cadeia lateral histidina, uma cadeia lateral de triptofano, uma cadeia lateral de arginina, uma cadeia lateral de lisina, um segundo fluoróforo e um substituinte tendo a estrutura,

   (b) R2 e R3 são, em conjunto, um substituinte tendo a estrutura

   iii) cada um de R5, R6, R7, R8 e R9, quando presente, é seleccionado, independentemente, do grupo consistindo de 3 -Η, -OH, -OCH3, -CO(C6H5) -C2H5; -Br, -I -F, -Cl, -CH3, e iv) R4 é uma cadeia lateral de isoleucina; v) X é seleccionado do grupo consistindo de -O- e -(NH)-; vi) Y é seleccionado do grupo consistindo de -H e um grupo protector de hidroxilo; vii) R10 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de leucina e uma cadeia lateral de lisina; e viii) a molécula não é tamandarina A.
2. 2. Composição da reivindicação 1, em que R1 é seleccionado do grupo consistindo de -H - (terc-butiloxicarbonilo) , -leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato, 4 -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(N-metil-alanina) leucina-piroglutamato. 5
3. 3. Composição da reivindicação 1, em que R1 é seleccionado do grupo consistindo de -H, - (terc-butiloxicarbonilo) , -leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato (um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato, 6 -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)leucina-(S)-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo). -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)leucina-(S)-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina) (S)-leucina-(S)-piroglutamato.
4. 4. Composição da reivindicação 1, em que R2 é

   R3 é metilo, cada de R5, R6, R8 e R9 é um radical hidreto, R7 é metoxilo, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é um radical hidreto. 7 5. Composição da reivindicação 1, em que o análogo de tamandarina é
5. 6. Composição da reivindicação 1, em que o análogo de tamandarina é
6. 7. Composição da reivindicação 1, em que R1 é -(N-metil)leuci-na-desoxo-(S)-prolina-lactato.
7. 8. Composição da reivindicação 1, em que R1 é - (N-metil-R-leucina).
8. 9. Composição da reivindicação 1, em que R1 é - (N-metil-R-leucina)-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S) -piroglutamato, Y é -H e X é -0-.
9. 10. Composição da reivindicação 9, em que o análogo de tamandarina é
10. 11. Composição da reivindicação 1, em que R1 é - (N-metil)leu-cina-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo) . 12 . Composição da reivindicação 11, tamandarina é seleccionado do grupo em que o análogo consistindo de de 9

    10 e
11. 13. Composição da reivindicação 1, em que R1 é -(N-metil)leuci-na-(S)-prolinapiruvato.
12. 14. Composição da reivindicação 13, em que o análogo de tamandarina é

    ou 11

    15. Composição da reivindicação 1, em que Y é -H e em que R2 tem a estrutura
13. 16. Composição da reivindicação 1, em que R2 é uma cadeia lateral de lisina e Y é -H.
14. 17. Composição de reivindicação 1, em que o análogo de tamandarina tem a seguinte estrutura

    12 em que FL é um fluoróforo.
15. 18. Composição de reivindicação 1, em que X é -(NH)-.
16. 19. Composição da reivindicação 1, em que o análogo de tamandarina é seleccionado do grupo consistindo de

    e 13
17. 20. Composição da reivindicação 1, em que o análogo de tamandarina é seleccionado do grupo consistindo de

    14

    15

    16

    17

    e
18. 21. Composição da reivindicação 1, compreendendo ainda um veiculo farmaceuticamente aceitável.
19. 22. Suporte tendo o análogo de tamandarina da reivindicação 1 ligado a este por ligação covalente.
20. 23. Composição compreendendo um composto tendo a estrutura seleccionada do grupo consistindo de (a) 18 (b)

    19 em que: i) ou (a) R3 é seleccionado do grupo consistindo de -CH3 e -H; e R2 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina, uma cadeia lateral de valina, uma cadeia lateral de alanina, uma cadeia lateral de norleucina, uma cadeia lateral de norvalina, uma cadeia lateral de prolina, cadeia lateral de leucina, uma cadeia lateral histidina, uma cadeia lateral de triptofano, uma cadeia lateral de arginina, uma cadeia lateral de lisina, um segundo fluoróforo e um substituinte tendo a estrutura,

    (b) R2 e R3 são, em conjunto, um substituinte tendo a estrutura

    20 ii) cada um de R5, R6, R7, R8 e R9, quando presente, é seleccionado, independentemente, do grupo consistindo de -H, -OH, -OCH3, -CO(C6H5) ,-Br, -I, -F, -Cl, -CH3 e -C2H5; iii) R4 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina e uma cadeia lateral de valina; iv) X é seleccionado do grupo consistindo de -0- e -(NH) v) Y é seleccionado do grupo consistindo de -H e um grupo protector de hidroxilo; vi) R10 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de leucina e uma cadeia lateral de lisina; e vii) R13 é uma porção enzima-clivável que é clivável por um enzima seleccionado do grupo consistindo de uma carboxipeptidase, uma beta-lactamase, uma beta-galactosidase, uma penicilina V-amidase, uma citosina desaminase, uma nitrorredutase, uma fosfatase alcalina, uma betaglucuronidase e um anticorpo catalítico.
21. 24. Composição da reivindicação 25, em que R13 tem a estrutura 21
22. 25. Composição da reivindicação 25, em que R13 tem a estrutura
23. 26. Composição compreendendo um análogo de didemnina tendo a estrutura

    em que: i) R1 é seleccionado do grupo consistindo de - (terc-butiloxicarbonilo) , -leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina, 22 (N-metil)leucina-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), (N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, (N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, (N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desidro-prolina, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina piroglutamato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina ciclopentanoato, 23 -(N-metil)leucina-desidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato; ii ou) (a) R3 é seleccionado do grupo consistindo de -CH3 e -H; e R2 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina, uma cadeia lateral de valina, uma cadeia lateral de alanina, uma cadeia lateral de norleucina, uma cadeia lateral de norvalina, cadeia lateral de leucina, uma cadeia lateral histidina, uma cadeia lateral de triptofano, uma cadeia lateral de arginina, uma cadeia lateral de lisina, um segundo fluoróforo e um substituinte tendo a estrutura,

    (b) R2 e R3 são, em conjunto, um substituinte tendo a estrutura 24

    iii) cada um de R5, R6, R7, R8 e R9, quando presente, é seleccionado, independentemente, do grupo consistindo de -H, -OH, -OCH3, -CO(C6H5), -Br, -I, -F, -Cl, -CH3, e -C2H5; iv) R4 é uma cadeia lateral de isoleucina; v) X é seleccionado do grupo consistindo de -0- e -(NH) vi) Y é seleccionado do grupo consistindo de -H e um grupo protector de hidroxilo; e vii) R10 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de leucina e uma cadeia lateral de lisina.
24. 27. Composição da reivindicação 26, em que R1 é seleccionado do grupo consistindo de - (terc-butiloxicarbonilo) , -leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina, 25 -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato, 26 -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato
25. 28. Composição da reivindicação 26, em que R1 é seleccionado do grupo consistindo de - (terc-butiloxicarbonilo) , -leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato, 27 -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)- (S)-leucina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)- (S)-leucina-(S)-piroglutamato.
26. 29. Composição da reivindicação 26, em que R2 é

    R3 é metilo, R4 é uma cadeia lateral de isoleucina, cada de R5, R6, R8 e R9 é um radical hidreto, R7 é metoxilo, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -0- e Y é um radical hidreto. 28
27. 30. Composição da reivindicação 26, em que o análogo de didemnina é
28. 31. Composição da reivindicação 26, em que o análogo de didemnina é
29. 32. Composição da reivindicação 26, em que R é - (N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-lactato.
30. 33. Composição da reivindicação 26, em que Y é -H, e em que R2 tem a estrutura 29 34 .

    2 , Composição da reivindicação 2 6, em que R e uma cadeia lateral de lisina e Y é -H.
31. 35. Composição da reivindicação 26, em que X é -(NH)-.
32. 36. Composição da reivindicação 26, compreendendo ainda um veiculo farmaceuticamente aceitável.
33. 37. Suporte ligado covalentemente com o análogo de didemnina da reivindicação 26.
34. 38. Processo de preparação de um análogo da tamandarina da reivindicação 1 ou um análogo de didemnina de reivindicação 26, o melhoramento compreendendo a incorporação de um residuo de desoxo-prolina no lugar de um residuo prolina do análogo, em que R1 compreende um residuo de desoxo-prolina.
35. 39. Processo da reivindicação 38, em que o análogo compreende uma porção de (N-metil)leucina-prolina e em que a porção (N-metil)leucina-prolina é substituída por uma porção (N-metil)leucina-desoxo-prolina.
36. 40. Processo da reivindicação 39, em que a porção (N-metil)leucina-desoxoprolina é produzida por redução da função éster de prolina a uma função aldeido; e acoplamento da prolina com a porção (N-metil)leucina por aminação 30 redutiva, para se obter a porção (N-metil)leucina-desoxo-prolina.
37. 41. Processo da reivindicação 40, em que a porção amina da prolina é protegida com um grupo protector de amina anteriormente à aminação redutiva.
38. 42. Processo da reivindicação 40, em que a função éster do prolina é reduzido a uma função aldeido por colocar em contacto a prolina com uma base forte e, depois, colocar em contacto a prolina com um agente oxidante.
39. 43. Processo da reivindicação 40, em que a minação redutiva é realizada num solvente não aquoso na presença de uma base forte e um catalizador de ácido carboxilico.
40. 44. Processo de preparação de um análogo de tamandarina da reivindicação 1 ou um análogo de didemnina da reivindicação 2 6, o melhoramento compreendendo a incorporação de um resíduo de desidro- -prolina no lugar de um resíduo de prolina do análogo, em que R1 compreende um resíduo de desidroprolina.
41. 45. Processo da reivindicação 44, em que o análogo compreende uma porção (N-metil) leucina-prolina e em que a porção (N-metil)leucina-prolina é substituída por uma porção (N-metil)leucina-desidro-prolina.
42. 46. Processo da reivindicação 44, em que o resíduo de desidroprolina é produzido por protecção das porções carboxilo e amino do 4-hidroxiprolinato, alquil-sulfonilação da porção 4-hidroxilo, deslocamento da porção alquil-sulfonato com 31 47 . uma porção aril-selenilo, eliminação oxidativa da porção aril-selenilo, para se obter uma porção desidro-prolina tendo as porções carboxilo e amina protegidas e acoplamento da porção desidro-prolina com uma porção amina do análogo. Processo da reivindicação 46, em que a porção alquil-sulfonato é uma porção metil-sulfonato. 48. 49. 50. Processo da reivindicação 46, em que a porção aril-selenilo é uma porção fenilselenilo. Processo da reivindicação 44, em que o 4-hidroxiprolinato é o trans-4-hidroxiprolinato. Composição compreendendo um fragmento de didemnina tendo a estrutura

    em que: i) Y é seleccionado do grupo consistindo de -H e um grupo protector de hidroxilo; ii) X é seleccionado do grupo consistindo de -O- e -(NH)-; iii) R4 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina e uma cadeia lateral de valina; 32 iv) APG é um grupo protector de amina; e v) R11 é seleccionado do grupo consistindo de -OH, -NH2, -O(alilo), -0(pentafluorofenilo) e um substituinte tendo a estrutura

    em que: (a) R1 é seleccionado do grupo consistindo de -H e um grupo protector de amina; (b) ou (I) R3 é seleccionado do grupo consistindo de -CH3 e -H; e R2 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina, uma cadeia lateral de valina, uma cadeia lateral de alanina, uma cadeia lateral de norleucina, uma cadeia lateral de norvalina, uma cadeia lateral de prolina, cadeia lateral de leucina, uma cadeia lateral histidina, uma cadeia lateral de triptofano, uma cadeia lateral de arginina, uma cadeia lateral de lisina, um segundo fluoróforo e um substituinte tendo a estrutura, 33

    ou (II) R2 e R3 são, em conjunto, um substituinte tendo a estrutura

    (c) cada de R5, R6, R7, R8 e R9, quando presente, é seleccionado, independentemente, do grupo consistindo de -H, -OH, -OCH3, -CO(C6H5), -Br, -I, -F, -Cl, -CH3, e -C7H5; d) R10 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de leucina, uma cadeia lateral de lisina, e uma cadeia lateral de lisina protegida; e e) R12 é seleccionado do grupo consistindo de -H, e 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo. 34
43. 51. Processo de preparação de um fragmento de didemnina, o processo compreendendo o acoplamento de um primeiro reagente tendo a estrutura O e um segundo reagente tendo a estrutura m o

    para se obter um primeiro fragmento de didemnina tendo a estrutura

    >lPG em que X é seleccionado do grupo consistindo de -0-, e -(NH)-: em que APG é um grupo protector de amina; em que Y é um grupo protector de hidroxilo; e em que R4 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina e uma cadeia lateral de valina.
44. 52. Processo da reivindicação 51, em que Y é -triisopro-pilsililo. 35
45. 53. Processo da reivindicação 52, compreendendo ainda a hidrólise do primeiro fragmento de didemnina para se obter um segundo fragmento didemnina tendo a estrutura
46. 54. Processo da reivindicação 53, compreendendo ainda a adição de um activador à porção carbonilo do segundo fragmento de didemnina para se obter um terceiro fragmento de didemnina tendo a estrutura

    D-ADT AP© em que -ACT é um activador.
47. 55. Processo da reivindicação 54, compreendendo ainda o acoplamento do terceiro fragmento de didemnina e um terceiro reagente tendo a estrutura

    para se obter a quarto fragmento de didemnina tendo a estrutura 36

    em que: i) ou (a) R3 é seleccionado do grupo consistindo de -CH3 e -H; e R2 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina, uma cadeia lateral de valina, uma cadeia lateral de alanina, uma cadeia lateral de norleucina, uma cadeia lateral de norvalina, uma cadeia lateral de prolina, cadeia lateral de leucina, uma cadeia lateral histidina, uma cadeia lateral de triptofano, uma cadeia lateral de arginina, uma cadeia lateral de lisina, um segundo fluoróforo e um substituinte tendo a estrutura,

    ou 37 (b) R2 e R3 são, em conjunto, um substituinte tendo a estrutura

    de -H, -OH, -OCH3, -CO(C6H5), -Br, -I, -F, presente, é consistindo -Cl, -CH3, e -C2H5; iii) APG é um grupo protector de amina; iv) SEM é 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo e v) R10 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de leucina e uma cadeia lateral de lisina.
48. 56. Processo de preparação de um análogo de didemnina, o processo compreendendo a remoção da porção SEM e da porção APG de protecção do grupo amino ligada ao átomo de carbono ao qual R4 está ligado, do quarto fragmento de didemnina da reivindicação 55 e ciclização do quarto fragmento de didemnina, para se obter um primeiro análogo de didemnina tendo a estrutura 38
49. 57. Processo da reivindicação 56, compreendendo ainda a remoção do grupo APG do primeiro análogo de didemnina para se obter um segundo análogo de didemnina tendo a estrutura
50. 58. Processo da reivindicação 56, em que o grupo APG é seleccionado do grupo consistindo de uma porção carbobenziloxilo e uma porção terc-butiloxicarbonilo.
51. 59. Processo da reivindicação 57, compreendendo ainda o acoplamento do segundo análogo de didemnina e um quarto reagente tendo a estrutura O

    para se obter um terceiro análogo de didemnina tendo a estrutura 39

    em que R14 é seleccionado do grupo consistindo de -leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina, -(N-metil)leucina-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo) , 40 -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-(N-metil-alanina}-leucina-piroglutamato; e qualguer uma das porções acima ligada com uma porção enzima-clivável que é clivável por um enzima seleccionado do grupo consistindo de uma carboxipeptidase, uma beta-lactamase, uma betagalactosidase, uma penicilina V-amidase, uma citosina desaminase, uma nitrorredutase, uma fosfatase alcalina, uma beta-glucuronidase e um anticorpo catalítico. 41
52. 60. Processo da reivindicação 59, em que Y é um grupo protector de hidroxilo, o processo compreendendo ainda a remoção do grupo protector de hidroxilo do segundo análogo de didemnina, para se obter um quarto análogo de didemnina tendo a estrutura
53. 61. Utilização de qualquer uma das composições das reivindicações 1, 23, 26 ou 50 para a preparação de um medicamento para a inibição da síntese proteica numa célula. 62. Utilização de qualquer uma das composições das reivindicações 1, 23, 26 ou 50 para a preparação de um medicamento para a inibição do crescimento de uma célula. 63. Utilização de qualquer uma das composições das reivindicações 1, 23, 26 ou 50 para a preparação de um medicamento para a inibição da proliferação de uma célula. 64 . Utilização de qualquer uma das composições das reivindicações 1, 23, 26 ou 50 para a preparação de um medicamento para a inibição da génese tumoral numa célula. 42
54. 65. Utilização de qualquer uma das composições das reivindicações 1, 23, 26 ou 50 para a preparação de um medicamento para a inibição do melhoramento da apoptose de uma célula.
55. 66. Composição compreendendo um análogo de tamandarina tendo a estrutura

    em que: i) R1 é seleccionado do grupo consistindo de -H, - (terc-butiloxicarbonilo) , -leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina, -(N-metil)leucina-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, 43 (N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, (N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desidro-prolina, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina piroglutamato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina ciclopentanoato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e (N-metil)leucina-desidro-prolina-(N-metil-alanina) leucina-piroglutamato; 44 ii) ou (a) R3 é seleccionado do grupo consistindo de -CH3 e -H; e R2 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina, uma cadeia lateral de valina, uma cadeia lateral de alanina, uma cadeia lateral de norleucina, uma cadeia lateral de norvalina, uma cadeia lateral de leucina, uma cadeia lateral histidina, uma cadeia lateral de triptofano, uma cadeia lateral de arginina, uma cadeia lateral de lisina, um segundo fluoróforo e um substituinte tendo a estrutura,

    ou (b) R2 e R3 são, em conjunto, um substituinte tendo a estrutura

    45 iii) cada de R5, R6, R7, R8 e R9, quando presente, é seleccionado, independentemente, do grupo consistindo de -H, -OH, -OCH3, -CO(C6H5), -Br, -I, -F, -Cl, -CH3 e -C2H5; iv) R4 é uma cadeia lateral de valina; v) X é seleccionado do grupo consistindo de -0- e -(NH)-; vi) Y é seleccionado do grupo consistindo de -H e um grupo protector de hidroxilo; vii) R10 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de leucina e uma cadeia lateral de lisina; e viii) a molécula não é a tamandarina B.
56. 67. Composição da reivindicação 66, em que R4 é uma cadeia lateral de valina, Y é -H, e X é -0-.
57. 68. Análogo de tamandarina seleccionado do grupo consistindo de 46

    47
58. 69. Composição da reivindicação 67, em que o análogo de tamandarina é 48
59. 70. Composição compreendendo a análogo de didemnina tendo a estrutura

    em que: i) R1 é seleccionado do grupo consistindo de -H, -(terc-butiloxicarbonilo), -leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina, 49 (N-metil)leucina-prolina-lactato, (N-metil)leucina-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), (N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, (N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, (N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, (N-metil)leucina-desidro-prolina, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-piruvato, (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-(um primeiro fluoróforo), (N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina piroglutamato, 50 -(N-metil)leucina-desidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato; ii) ou (a) R3 é seleccionado do grupo consistindo de -CH3 e -H; e R2 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de isoleucina, uma cadeia lateral de valina, uma cadeia lateral de alanina, uma cadeia lateral de norleucina, uma cadeia lateral de norvalina, uma cadeia lateral de leucina, uma cadeia lateral histidina, uma cadeia lateral de triptofano, uma cadeia lateral de arginina, uma cadeia lateral de lisina, um segundo fluoróforo e um substituinte tendo a estrutura,

    (b) R2 e R3 são, em conjunto, um substituinte tendo a estrutura 51

    iii) cada de R5, R6, R7, R8 e R9, quando presente, é seleccionado, independentemente, do grupo consistindo de -H, -OH, -OCH3, -CO(C6H5), -Br, -I, -F, -Cl, -CH3 e -C2H5; iv) R4 é uma cadeia lateral de valina; v) X é seleccionado do grupo consistindo de -0- e -(NH) vi) Y é seleccionado do grupo consistindo de -H e um grupo protector de hidroxilo; vii) R10 é seleccionado do grupo consistindo de uma cadeia lateral de leucina e um lado de lisina.
60. 71. Composição da reivindicação 70, em que R1 é seleccionado do grupo consistindo de -H, - (terc-butiloxicarbonilo) , -leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina, 52 -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desidro(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato, 53 -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(S) -lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desidro-(S)-prolina-(N-metil-alanina) leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina (S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina (S)-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, e -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina) -(S)-leucina-(S)-piroglutamato. -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(um primeiro fluoróforo), -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato. -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato, e 54 -(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)- (S)-leucina-(S)-piroglutamato.
61. 72. Composição da reivindicação 70, em que R2 é

    R3 é metilo, cada de R5, R6, R8 e R9 é um radical hidreto, R7 é metoxilo, R10 é uma cadeia lateral de leucina, X é -O- e Y é um radical hidreto.
62. 73. Composição da reivindicação 70, em que R é - (N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-lactato .
63. 74. Composição da reivindicação 70, em que Y é -H e em que R2 tem a estrutura 75.

    Composição da reivindicação 70, lateral de lisina e Y é -H. em que R2 é uma cadeia
64. 76. Composição da reivindicação 70, em que X é -(NH)-. 55
65. 77. Composição da reivindicação 70, compreendendo ainda um veiculo farmaceuticamente aceitável.
66. 78. Suporte ligado covalentemente com o análogo de didemnina da reivindicação 70. Lisboa, 20 de Dezembro de 2006 56