ES2338238T3 - Uso de la toxina botulinica en el tratamiento de dolor neuralgico. - Google Patents
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Abstract
Una toxina botulínica para su uso en un procedimiento para aliviar el dolor neurálgico en un paciente humano, en el que la toxina botulínica se administra periféricamente y en el que el dolor neurálgico no está asociado a un dolor de cabeza.
Description
Uso de la toxina botulínica en el tratamiento de
dolor neurálgico.
La presente invención se refiere a una toxina
botulínica para su uso en procedimientos para tratar el dolor. En
concreto, la presente invención se refiere a una toxina botulínica
para su uso en procedimientos para tratar el dolor mediante la
administración periférica de la toxina botulínica.
Muchas, si no la mayoría, de las enfermedades
del cuerpo causan dolor. Generalmente, el dolor se experimenta
cuando las terminaciones nerviosas libres, que constituyen los
receptores del dolor de la piel, así como de ciertos tejidos
internos, son sometidas a estímulos mecánicos, térmicos, químicos u
otros estímulos nocivos. Los receptores del dolor pueden transmitir
señales por las neuronas aferentes al sistema nervioso central y,
de ahí, al cerebro.
Las causas del dolor pueden incluir inflamación,
herida, enfermedad, espasmo muscular y la aparición de un evento o
síndrome neuropático. El dolor tratado ineficazmente puede ser
devastador para la persona que lo experimenta limitando la función,
reduciendo la movilidad, complicando el sueño e interfiriendo
espectacularmente en la calidad de vida.
El espasmo muscular puede conducir a la
estimulación de los receptores mecanosensibles del dolor, causando
así una sensación de dolor. De este modo, el dolor puede surgir de o
estar debido a un espasmo muscular. Adicionalmente, el espasmo
puede estimular indirectamente los receptores del dolor mediante la
compresión de los vasos sanguíneos, causando isquemia en el tejido,
lo que a su vez libera sustancias inductoras del dolor que estimulan
los receptores del dolor para que causen sensaciones dolorosas.
Además, el espasmo muscular puede causar una reducción localizada
del pH que puede ser percibida como o que puede engendrar señales de
dolor. De ahí que el dolor puede ser un efecto secundario de un
espasmo muscular o una hipertonicidad muscular.
El dolor inflamatorio puede aparecer cuando se
daña un tejido, así como resultar de una cirugía o deberse a un
evento físico, químico o térmico adverso o a la infección por un
agente biológico. Cuando se daña un tejido, se puede liberar del
tejido dañado un huésped de sustancias endógenas inductoras del
dolor, por ejemplo, bradiquinina e histamina. Las sustancias
inductoras del dolor pueden unirse a receptores en los terminales
nerviosos sensoriales e iniciar así señales aferentes de dolor.
Adicionalmente, las sustancias inductoras del
dolor pueden ser liberadas desde terminales aferentes nociceptivos,
y los neuropéptidos liberados de los terminales sensoriales pueden
acentuar una respuesta inflamatoria. De este modo, durante una
inflamación, puede haber un brote de fibras periféricas
peptidérgicas y un aumento del contenido de péptido, mostrando
muchas fibras una coexistencia de sustancia P (SP) y el péptido
relacionado con el gen de la calcitonina (PRGC). La sustancia P
puede inducir a la contracción de células endoteliales, lo que a su
vez causa una extravasación de plasma para permitir que otras
sustancias (bradiquinina, ATP, histamina) logren acceder a la zona
de la herida y a los terminales nerviosos aferentes. La sustancia P
liberada por el terminal nervioso sensorial también puede
desgranular mastocitos. Este proceso ha sido considerado como un
factor importante en la inflamación neurogénica debida a la
liberación de mediadores inflamatorios tales como la histamina y la
serotonina, y a la liberación de enzimas proteolíticas que catalizan
la producción de bradiquinina. El PRGC aparentemente no produce
extravasación de plasma, pero es un potente vasodilatador y también
puede actuar sinérgicamente con la SP y otros mediadores
inflamatorios para aumentar la extravasación de plasma. Todos los
mediadores inflamatorios anteriormente enumerados pueden bien
sintetizar nociceptores o producir dolor.
Tras la activación de las neuronas aferentes
sensoriales primarias, la siguiente etapa en la transducción de
señales sensoriales puede ser la activación de neuronas de
proyección que transportan la señal, por el tracto espinotalámico,
a las partes superiores del sistema nervioso central tales como los
núcleos talámicos. Los cuerpos celulares de estas neuronas
(distintos de aquéllos relacionados con los nervios craneales) se
localizan en el cuerno dorsal de la médula espinal. Aquí también se
puede encontrar la sinapsis entre los aferentes primarios y las
neuronas de proyección. El cuerno dorsal está organizado en una
serie de láminas que se encuentran apiladas, siendo la lámina I la
más dorsal seguida por la lámina II, etc. Las diferentes clases de
aferentes primarios hacen sinapsis en diferentes láminas. Para los
aferentes primarios cutáneos, las fibras C hacen sinapsis en las
láminas I y II, las fibras A delta, en las láminas I, II y V, y las
fibras A beta, en las láminas III, IV y V. Se cree que las láminas
más profundas (V-VII, X) participan en las rutas
sensoriales que llegan de tejidos más profundos tales como músculos
y vísceras.
Los neurotransmisores predominantes en la
sinapsis entre las neuronas aferentes primarias y las neuronas de
proyección son la sustancia P, el glutamato, el PRGC y el
neuropéptido Y. La eficacia de transmisión de estas sinapsis puede
ser alterada por rutas descendentes y por interneuronas locales de
la médula espinal. Estas neuronas moduladoras pueden liberar un
número de mediadores que son bien inhibidores (p. ej., péptidos
opioides, glicina) o excitadores (p. ej., óxido nítrico,
colecistoquinina) para un mecanismo destinado a aumentar o reducir
la conciencia de sensaciones.
Aunque el dolor inflamatorio es generalmente
reversible y disminuye cuando el tejido dañado ha sido reparado o
los estímulos inductores del dolor han sido retirados, los
procedimientos actuales para tratar el dolor inflamatorio tienen
muchas desventajas y deficiencias. De este modo, la típica
administración oral, parenteral o tópica de un fármaco analgésico
para tratar los síntomas del dolor o de, por ejemplo, un antibiótico
para tratar los factores causantes del dolor inflamatorio puede
resultar en la distribución sistémica generalizada del fármaco y en
efectos secundarios no deseables. Adicionalmente, la terapia actual
para el dolor inflamatorio adolece de duraciones breves de la
eficacia del fármaco, siendo necesaria una readministración
frecuente del fármaco que puede resultar en una resistencia al
mismo, en el desarrollo de anticuerpos y/o en una dependencia y
adicción del fármaco, siendo todo ello insatisfactorio. Además, la
administración frecuente de fármacos aumenta el gasto de la pauta
de dosificación para el paciente y puede requerir que el paciente
tenga que acordarse de cumplir con un esquema posológico.
Los ejemplos de tratamientos para la inflamación
y el dolor muscular incluyen fármacos antiinflamatorios no
esteroideos (AINES), incluyendo la aspirina y el ibuprofeno; y
opioides, tales como la morfina.
Los AINES alivian el dolor inhibiendo la
producción de prostaglandinas liberadas por los tejidos dañados. Se
ha observado que las prostaglandinas son mediadores periféricos del
dolor y la inflamación, como en enfermedades artríticas, y una
reducción en su concentración proporciona alivio a los pacientes. Se
ha sugerido que las prostaglandinas participan en la mediación del
dolor de la médula espinal y el cerebro, lo que puede explicar los
efectos analgésicos de los AINES en algunos estados de dolor que no
suponen la inflamación o el daño de tejidos periféricos. Sin
embargo, las prostaglandinas sólo son uno de los diversos mediadores
del dolor. Como tales, los AINES tienen un límite de actividad por
encima del cual las dosis mayores no proporcionan más alivio del
dolor. Además, tienen efectos secundarios que limitan su utilidad.
Por ejemplo, los AINES pueden causar irritación del tracto
gastrointestinal, y su uso prolongado puede conducir al desarrollo
de una importante ulceración del intestino. Esto es particularmente
cierto en pacientes de edad avanzada que con frecuencia usan AINES
para sus afecciones de artritis.
Las acciones terapéuticas de los opioides se
producen en la médula espinal. Los opioides inhiben la eficacia de
la neurotransmisión entre los aferentes sensoriales primarios
(principalmente, las fibras C) y las neuronas de proyección. Lo
consiguen causando una hiperpolarización prolongada de ambos
elementos de estas sinapsis. El uso de opioides es eficaz en el
alivio de la mayoría de los tipos de dolor agudo y dolor maligno
crónico. Hay, sin embargo, una serie de enfermedades de dolor
maligno crónico que son parcial o completamente refractarias a la
analgesia con opioides, particularmente aquéllas que suponen una
compresión nerviosa, por ejemplo, por formación tumoral.
Desafortunadamente, los opioides también tienen efectos secundarios
no deseados, que incluyen: (1) depresión del sistema respiratorio,
(2) estreñimiento y (3) efectos psicoactivos que incluyen la
sedación y la euforia. Estos efectos secundarios se producen a
dosis similares a aquéllas que producen analgesia, y, por tanto,
limitan las dosis que pueden ser administradas a los pacientes.
Adicionalmente, los opioides tales como la morfina y la heroína son
conocidas drogas que conducen a una dependencia física, lo que
también supone el desarrollo de una tolerancia. Con el desarrollo
de la tolerancia, la dosis de un fármaco necesaria para producir
los mismos efectos analgésicos aumenta con el tiempo. Esto puede
conducir a una condición en la que las dosis necesarias para calmar
el dolor suponen una amenaza para la vida debido a los efectos
secundarios anteriormente mencionados.
Aunque el dolor que surge de la inflamación y el
espasmo muscular puede ser iniciado por una estimulación mecánica o
química del terminal libre de neuronas sensoriales primarias, el
dolor neuropático no necesita un estímulo inicial en el terminal
nervioso libre periférico. El dolor neuropático es un síndrome de
dolor persistente o crónico que puede resultar de un daño en el
sistema nervioso, los nervios periféricos, el ganglio de la raíz
dorsal, la raíz dorsal o el sistema nervioso central.
Los síndromes del dolor neuropático incluyen
alodinia, diversas neuralgias tales como la neuralgia postherpética
y la neuralgia trigeminal, el dolor fantasma, y síndromes de dolor
regional complejo, tales como la algodistrofia simpática y la
causalgia. La causalgia a menudo se caracteriza por un dolor
ardiente espontáneo combinado con hiperalgesia y alodinia.
Trágicamente, no existe un procedimiento para
tratar adecuada, predecible y específicamente el dolor neuropático
establecido (Woolf C. et al., "Neuropathic Pain: Aetiology,
Symptoms, Mechanisms, and Management", Lancet 1999; 353:
1959-64), pues los procedimientos de tratamiento
actuales para el dolor neuropático consisten simplemente en
intentar ayudar a que el paciente pueda sobrellevar una terapia
psicológica u ocupacional, más que en reducir o eliminar el dolor
experimentado.
Por ejemplo, los procedimientos actuales para
tratar el dolor neuropático incluyen la administración de bloques
anestésicos locales dirigidos a puntos desencadenantes, nervios
periféricos, plexas, raíces dorsales y al sistema nervioso
simpático. Sin embargo, estos tratamientos sólo tienen efectos
antinociceptivos de corta duración. Adicionalmente, los
procedimientos de tratamiento analgésico de mayor duración, tales
como los bloques por inyección de fenoles o la crioterapia, suponen
un riesgo considerable de deficiencia funcional irreversible.
Además, la administración epidural o intratecal crónica
(conjuntamente "intraespinal") de fármacos tales como la
clonidina, los esteroides, los opioides o el midazolam tienen
significativos efectos secundarios y una eficacia cuestionable.
La bacteria Gram positiva anaeróbica
Clostridium botulinum produce una potente neurotoxina
polipeptídica, la toxina botulínica, que causa una enfermedad
neuroparalítica en seres humanos y animales denominada botulismo.
Las esporas de Clostridium botulinum se encuentran en el
suelo y pueden crecer en latas de conserva de alimentos
inadecuadamente esterilizadas y cerradas, que son la causa de muchos
casos de botulismo. Los efectos del botulismo aparecen comúnmente
de las 18 a las 36 horas de haberse ingerido los productos
alimenticios infectados con un cultivo o esporas de Clostridium
botulinum. La toxina botulínica puede pasar aparentemente
desatenuada a través de las paredes del intestino y atacar a las
neuronas motoras periféricas. Los síntomas de la intoxicación por
la toxina botulínica pueden progresar desde una dificultad para
caminar, tragar y hablar hasta la parálisis de los músculos
respiratorios y la muerte.
La toxina botulínica de tipo A es el agente
biológico natural más letal conocido por el hombre. Aproximadamente
50 picogramos de una toxina botulínica de tipo A disponible
comercialmente (complejo de neurotoxina
purificada)^{1}
es una DL_{50} en ratones (i.e., 1 unidad). Una unidad de BOTOX® contiene aproximadamente 50 picogramos de complejo de toxina botulínica de tipo A. Lo interesante es que, en una base molar, la toxina botulínica de tipo A es aproximadamente 1,8 mil millones de veces más letal que la difteria, aproximadamente 600 millones de veces más letal que el cianuro de sodio, aproximadamente 30 millones de veces más letal que la toxina de la cobra y aproximadamente 12 millones de veces más letal que el cólera. Singh, "Critical Aspects of Bacterial Protein Toxins", páginas 63-84 (capítulo 4) de "Natural Toxins II", editado por B. R. Singh et al., Plenum Press, Nueva York (1976) (en donde la DL_{50} establecida de toxina botulínica de tipo A de 0,3 ng igual a 1 U está corregida por el hecho de que aproximadamente 0,05 ng de BOTOX® es igual a 1 unidad). Una unidad (U) de toxina botulínica se define como la DL_{50} tras una inyección intraperitoneal en ratones Webster suizos hembra con un peso de 18 a 20 gramos cada uno.
es una DL_{50} en ratones (i.e., 1 unidad). Una unidad de BOTOX® contiene aproximadamente 50 picogramos de complejo de toxina botulínica de tipo A. Lo interesante es que, en una base molar, la toxina botulínica de tipo A es aproximadamente 1,8 mil millones de veces más letal que la difteria, aproximadamente 600 millones de veces más letal que el cianuro de sodio, aproximadamente 30 millones de veces más letal que la toxina de la cobra y aproximadamente 12 millones de veces más letal que el cólera. Singh, "Critical Aspects of Bacterial Protein Toxins", páginas 63-84 (capítulo 4) de "Natural Toxins II", editado por B. R. Singh et al., Plenum Press, Nueva York (1976) (en donde la DL_{50} establecida de toxina botulínica de tipo A de 0,3 ng igual a 1 U está corregida por el hecho de que aproximadamente 0,05 ng de BOTOX® es igual a 1 unidad). Una unidad (U) de toxina botulínica se define como la DL_{50} tras una inyección intraperitoneal en ratones Webster suizos hembra con un peso de 18 a 20 gramos cada uno.
Se han caracterizado siete neurotoxinas
botulínicas inmunológicamente distintas, siendo éstas
respectivamente la neurotoxina botulínica de serotipo A, B,
C_{1}, D, E, F y G, cada una de las cuales se distingue por la
neutralización con anticuerpos específicos del tipo. Los diferentes
serotipos de toxina botulínica varían en las especies animales a
las que afectan, y en la gravedad y la duración de la parálisis que
provocan. Por ejemplo, se ha determinado que la toxina botulínica
de tipo A es 500 veces más potente, medida según la velocidad de
parálisis producida en la rata, que la toxina botulínica de tipo B.
Adicionalmente, se ha determinado que la toxina botulínica de tipo
B no es tóxica en primates a una dosis de 480 U/kg, lo que es
aproximadamente 12 veces la DL_{50} en primates para la toxina
botulínica de tipo A. La toxina botulínica aparentemente se une con
una alta afinidad a las neuronas motoras colinérgicas, es
translocalizada a las neuronas y bloquea la liberación de
acetilcolina.
Independientemente del serotipo, el mecanismo
molecular de la intoxicación por toxinas parece ser similar y
suponer al menos tres etapas o fases. En la primera etapa del
proceso, la toxina se une a la membrana presináptica de la neurona
diana a través de una interacción específica entre la cadena pesada,
la cadena P, y un receptor de la superficie celular; se cree que el
receptor es diferente para cada tipo de toxina botulínica y para la
toxina tetánica. El seg-
mento terminal carboxilo de la cadena P, P_{C}, parece ser importante en la dirección de la toxina a la superficie celular.
mento terminal carboxilo de la cadena P, P_{C}, parece ser importante en la dirección de la toxina a la superficie celular.
En la segunda etapa, la toxina cruza la membrana
plasmática de la célula envenenada. La toxina es primero engullida
por la célula mediante una endocitosis mediada por el receptor,
formándose un endosoma que contiene a la toxina. Entonces, la
toxina escapa del endosoma hacia el citoplasma de la célula. Se cree
que esta etapa está mediada por en segmento terminal amino de la
cadena P, P_{N}, que desencadena un cambio conformacional de la
toxina como respuesta a un pH de aproximadamente 5,5 o inferior. Se
sabe que los endosomas poseen una bomba de protones que disminuye
el pH intraendosómico. El cambio conformacional expone a los
residuos hidrófobos de la toxina, lo que permite que la toxina se
incruste en la membrana endosómica. La toxina (o como mínimo la
cadena ligera) se translocaliza entonces a través de la membrana
endosómica al citoplasma.
La última etapa del mecanismo de la actividad de
la toxina botulínica parece suponer la reducción del enlace tipo
disulfuro que une la cadena pesada, cadena P, y la cadena ligera,
cadena L. Toda la actividad tóxica de las toxinas botulínica y
tetánica está contenida en la cadena L de la holotoxina; la cadena L
es una endopeptidasa de cinc (Zn^{++}) que escinde selectivamente
proteínas esenciales para el reconocimiento y el acoplamiento de
vesículas que contienen neurotransmisores con la superficie
citoplasmática de la membrana plasmática, y la fusión de las
vesículas con la membrana plasmática. La neurotoxina tetánica, la
toxina botulínica B, D, F y G provocan la degradación de la
sinaptobrevina (también denominada proteína de membrana asociada a
vesículas (VAMP)), una proteína de la membrana sinaptosómica. La
mayoría de las VAMP presentes en la superficie citoplasmática de la
vesícula sináptica es eliminada como resultado de uno cualquiera de
estos hechos de escisión. Los serotipos A y E escinden
SNAP-25. Originariamente, se creía que el serotipo C
escindía la sintaxina, pero se descubrió que escinde la sintaxina y
la SNAP-25. Cada
toxina escinde específicamente un enlace distinto (excepto la tetánica y la del tipo B, que escinden el mismo enlace).
toxina escinde específicamente un enlace distinto (excepto la tetánica y la del tipo B, que escinden el mismo enlace).
Las toxinas botulínicas han sido usadas en
cuadros clínicos para el tratamiento de trastornos neuromusculares
caracterizados por músculos esqueléticos hiperactivos. La toxina
botulínica de tipo A ha sido aprobada por el Organismo
estadounidense para el Control de Alimentos y Medicamentos para el
tratamiento del blefaroespasmo, el estrabismo y el espasmo
hemifacial. Los serotipos de toxina botulínica que no son de tipo A
tienen aparentemente una menor potencia y/o una duración más corta
de su actividad en comparación con la toxina botulínica de tipo A.
Los efectos clínicos de la toxina botulínica de tipo A intramuscular
periférica son habitualmente observados a la semana de la
inyección. La duración típica del alivio sintomático a partir de una
única inyección intramuscular de toxina botulínica de tipo A es de
una media de aproximadamente tres meses.
\newpage
Aunque todos los serotipos de toxina botulínica
inhiben aparentemente la liberación del neurotransmisor acetilcolina
en la unión neuromuscular, lo hacen afectando a diferentes
proteínas neurosecretoras y/o escindiendo estas proteínas en
diferentes sitios. Por ejemplo, ambas toxinas botulínicas de tipo A
y E escinden la proteína asociada al sinaptosoma de 25 kilodalton
(kD) (SNAP-25), pero se dirigen a diferentes
secuencias de aminoácidos de esta proteína. Las toxinas botulínicas
de tipo B, D, F y G actúan sobre la proteína asociada a vesículas
(VAMP, también denominada sinaptobrevina), escindiendo cada serotipo
la proteína en un sitio distinto. Finalmente, se ha observado que
la toxina botulínica de tipo C_{1} escinde tanto la sintaxina como
la SNAP-25. Estas diferencias en los mecanismos de
acción pueden afectar a la potencia relativa y/o a la duración de la
acción de los diversos serotipos de toxina botulínica. Se sabe que
el citosol de las células B del islote pancreático contiene al
menos SNAP-25 (Biochem J 1; 339 (pt
1): 159-65 (abril 1999)) y sinaptobrevina
(Mov Disord 1995 mayo; 10(3): 376), lo cual es
significativo.
El peso molecular de la molécula de la proteína
de toxina botulínica, para la totalidad de los siete serotipos de
toxina botulínica conocidos, es de aproximadamente 150 kD.
Curiosamente, las toxinas botulínicas son liberadas por la bacteria
clostridial como complejos que comprenden la molécula de la proteína
de toxina botulínica de 150 kD junto con las proteínas asociadas
que no son toxinas. De este modo, el complejo de toxina botulínica
de tipo A puede ser producido por la bacteria clostridial como
formas de 900 kD, 500 kD y 300 kD. Las toxinas botulínicas de tipo
B y C_{1} son producidas aparentemente sólo como un complejo de
500 kD. La toxina botulínica de tipo D es producida como ambos
complejos de 300 kD y 500 kD. Finalmente, las toxinas botulínicas de
tipo E y F son sólo producidas como complejos de aproximadamente
300 kD. Se cree que los complejos (i.e., peso molecular mayor de
aproximadamente 150 kD) contienen una proteína hemaglutínica que no
es toxina y una proteína no hemaglutínica no tóxica y que no es
toxina. Estas dos proteínas no toxinas (que junto con la molécula de
toxina botulínica comprenden el complejo de neurotoxina relevante)
pueden actuar para proporcionar estabilidad frente a la
desnaturalización a la molécula de toxina botulínica, y protección
frente a los ácidos digestivos cuando la toxina es ingerida.
Adicionalmente, es posible que los complejos de toxina botulínica
más grandes (de un peso molecular mayor de aproximadamente 150 kD)
pueden resultar en una velocidad de difusión más lenta de la toxina
botulínica desde un sitio de inyección intramuscular de un complejo
de toxina botulínica.
Los estudios in vitro han indicado que la
toxina botulínica inhibe la liberación inducida por cationes de
potasio de tanto la acetilcolina como la norepinefrina desde
cultivos celulares primarios de tejido del tallo encefálico.
Adicionalmente, se ha informado que la toxina botulínica inhibe la
liberación provocada de tanto la glicina como del glutamato en
cultivos primarios de neuronas de la médula espinal y que, en
preparaciones de sinaptosoma cerebral, la toxina botulínica inhibe
la liberación de cada uno de los neurotransmisores acetilcolina,
dopamina, norepinefrina, PRGC y glutamato.
La toxina botulínica de tipo A puede ser
obtenida mediante el establecimiento y el desarrollo de cultivos de
Clostridium botulinum en un fermentador, y luego, la cosecha
y la purificación de la mezcla fermentada conforme a procedimientos
conocidos. Todos los serotipos de toxina botulínica son inicialmente
sintetizados como proteínas monocatenarias inactivas que deben ser
escindidas o melladas por proteasas para convertirse en
neuroactivas. Las cepas bacterianas que forman los serotipos A y G
de toxina botulínica poseen proteasas endógenas, y los serotipos A
y G pueden, por tanto, ser recuperados de cultivos bacterianos
predominantemente en su forma activa. Por el contrario, los
serotipos C_{1}, D y E de toxina botulínica son sintetizados por
cepas no proteolíticas y, por tanto, están comúnmente inactivos
cuando son recuperados del cultivo. Los serotipos B y F son
producidos por cepas tanto proteolíticas como no proteolíticas y
pueden ser, por tanto, recuperados bien en su forma activa o
inactiva. Sin embargo, incluso las cepas proteolíticas que producen,
por ejemplo, el serotipo B de la toxina botulínica sólo escinden
una parte de la toxina producida. La proporción exacta entre las
moléculas melladas y no melladas depende de la duración de la
incubación y de la temperatura del cultivo. Por lo tanto, un cierto
porcentaje de cualquier preparación de, por ejemplo, la toxina
botulínica de tipo B es probable que sea inactivo, debiéndose
probablemente a la conocida significativamente baja potencia de la
toxina botulínica de tipo B en comparación con la toxina botulínica
de tipo A. La presencia de moléculas inactivas de toxina botulínica
en una preparación clínica contribuirá a la carga de proteína global
de la preparación, lo que ha sido relacionado con una mayor
antigenicidad, sin contribuir a su eficacia clínica. Adicionalmente,
se sabe que la toxina botulínica de tipo B tiene, tras una
inyección intramuscular, una actividad de menor duración y que
además es menos potente que la toxina botulínica de tipo A al mismo
nivel de
dosis.
dosis.
La toxina botulínica de tipo A cristalina de
alta calidad puede ser producida a partir de la cepa A de Hall de
Clostridium botulinum con las características de \geq 3 x
10^{7} U/mg, un A_{260}/A_{278} de menos de 0,60 y un patrón
distinto de bandeado sobre electroforesis de gel. Se puede usar el
conocido procedimiento de Shantz para obtener toxina botulínica
cristalina de tipo A, según lo expuesto en Shantz, E.J., et
al., "Properties and use of Botulinum toxin and Other
Microbial Neurotoxins in Medicine", Microbiol Rev. 56:
80-99 (1992). Generalmente, el complejo de toxina
botulínica de tipo A puede ser aislado y purificado a partir de una
fermentación anaeróbica cultivando Clostridium botulinum de
tipo A en un medio adecuado. También se puede usar el procedimiento
conocido, tras separar las proteínas no toxinas, para obtener
toxinas botulínicas puras, tales como, por ejemplo: toxina
botulínica de tipo A purificada con un peso molecular de
aproximadamente 150 kD con una potencia específica de
1-2 x 10^{8} DL_{50} U/mg o mayor; toxina
botulínica de tipo B purificada con un peso molecular de
aproximadamente 156 kD con una potencia específica de
1-2 x 10^{8} DL_{50} U/mg o mayor; y toxina
botulínica de tipo F purificada con un peso molecular de
aproximadamente 155 kD con una potencia específica de
1-2 x 10^{7}DL_{50} U/mg o mayor.
\newpage
Se pueden obtener toxinas botulínicas y/o
complejos de toxina botulínica en List Biological Laboratories,
Inc., Campbell, California; Centre for Applied Microbiology and
Research, Porton Down, RU.; Wako (Osaka, Japón), Metabiologics
(Madison, Wisconsin), así como en Sigma Chemicals de St. Louis,
Missouri.
La toxina botulínica pura es tan lábil que
generalmente no se usa para preparar una composición farmacéutica.
Además, los complejos de toxina botulínica, tales como un complejo
de toxina de tipo A, también son extremadamente susceptibles a la
desnaturalización debida a la desnaturalización superficial, al
calor y a las condiciones alcalinas. La toxina inactiva forma
proteínas toxoides que pueden ser inmunogénicas. Los anticuerpos
resultantes pueden volver a un paciente refractario a la inyección
de toxinas.
Como ocurre con las enzimas, generalmente, las
actividades biológicas de las toxinas botulínicas (que son
peptidasas intracelulares) dependen, al menos en parte, de su
configuración tridimensional. De este modo, la toxina botulínica de
tipo A es destoxificada por calor, diversos compuestos químicos, el
alargamiento superficial y el secado superficial. Adicionalmente,
se sabe que la dilución del complejo de toxina obtenido mediante
los conocidos procedimientos de cultivo, fermentación y purificación
hasta las concentraciones de toxina mucho más bajas usadas para la
formulación de composiciones farmacéuticas resulta en una
destoxificación rápida de la toxina a no ser que esté presente un
agente estabilizador adecuado. La dilución de la toxina desde
cantidades de miligramos hasta una solución que contenga nanogramos
por mililitro presenta dificultades significativas debido a la
rápida pérdida de toxicidad específica tras una dilución tan grande.
Como la toxina puede ser usada tras meses o años de haberse
formulado la composición farmacéutica que contiene la toxina, la
toxina debe ser estabilizada con un agente estabilizador. El único
agente estabilizador que hace posible este objetivo ha sido las
proteínas de origen animal albúmina y gelatina; y como se indica, la
presencia de proteínas de origen animal en la formulación final
presenta los problemas potenciales de que ciertos virus
estables,
priones u otros compuestos infecciosos o patógenos transportados a través de donantes pueden contaminar la toxina.
priones u otros compuestos infecciosos o patógenos transportados a través de donantes pueden contaminar la toxina.
Además, una cualquiera de las duras condiciones
de pH, temperatura e intervalo de concentración necesarias para
liofilizar (criodesecar) o secar al vacío una composición
farmacéutica que contenga toxina botulínica a un formato de toxina
apto para su envío y almacenamiento (listo para se usado o
reconstituido por un médico) puede destoxificar parte de la toxina.
De este modo, las proteínas de origen animal o de mezcla de donantes
tales como la gelatina y la albúmina de suero han sido usadas con
cierto éxito para estabilizar toxina botulínica.
Hay una composición farmacéutica que contiene
toxina botulínica comercialmente disponible con la marca comercial
BOTOX® (disponible en Allergan, Inc. de Irvine, California). BOTOX®
está constituido por un complejo de toxina botulínica de tipo A
purificada, albúmina y cloruro sódico envasado en una forma estéril
secada al vacío. La toxina botulínica de tipo A se elabora a partir
de un cultivo de la cepa de Hall de Clostridium botulinum
cultivada en un medio que contiene N-Z amina y
extracto de levadura. El complejo de toxina botulínica de tipo A se
purifica a partir de la solución de cultivo mediante una serie de
precipitaciones ácidas hasta obtener un complejo cristalino
constituido por la proteína toxina de alto peso molecular activa y
una proteína hemaglutínica asociada. Se vuelve a disolver el
complejo cristalino en una solución que contiene solución salina y
albúmina, y se filtra de forma estéril (0,2 micrómetros) antes del
secado al vacío. El BOTOX® puede ser reconstituido con solución
salina estéril no conservada antes de la inyección intramuscular.
Cada vial de BOTOX® contiene aproximadamente 100 unidades (U) de
complejo de neurotoxina purificada de Clostridium botulinum
de tipo A, 0,5 miligramos de albúmina de suero humano y 0,9
miligramos de cloruro sódico en una forma secada al vacío estéril
sin conservantes.
Para reconstituir la solución salina normal
estéril de BOTOX® secada al vacío sin un conservante, se usa una
inyección de cloruro sódico al 0,9%, preparando la cantidad
apropiada de diluyente en la jeringa de un tamaño adecuado. Como se
cree que el BOTOX® es desnaturalizado mediante burbujeo o una
agitación violenta similar, el diluyente es inyectado con cuidado
en el vial. El BOTOX® debería ser administrado a las cuatro horas
posteriores a la reconstitución. Durante este período de tiempo, el
BOTOX® reconstituido es almacenado en un refrigerador (2º a 8ºC).
El BOTOX® reconstituido es claro, incoloro y está libre de materia
particulada. El producto secado al vacío es almacenado en un
congelador a o por debajo de 5ºC. El BOTOX® es administrado a las
cuatro horas de haber retirado el vial del congelador y haber sido
reconstituido. Durante estas cuatro horas, el BOTOX® reconstituido
puede ser almacenado en un refrigerados (2º a 8ºC). El BOTOX®
reconstituido es claro, incoloro y está libre de materia
particulada.
Se ha informado que la toxina botulínica de tipo
A ha sido usada en ensayos clínicos según lo siguiente:
- (1)
- aproximadamente 75-125 unidades de BOTOX® por inyección intramuscular (múltiples músculos) para tratar la distonia cervical;
- (2)
- 5-10 unidades de BOTOX® por inyección intramuscular para tratar las líneas glabelares (arrugas frontales) (5 unidades inyectadas intramuscularmente en el músculo Procerus y 10 unidades inyectadas intramuscularmente en cada músculo Corrugator supercilii);
- (3)
- aproximadamente 30-80 unidades de BOTOX® para tratar el estreñimiento mediante inyección intraesfintérica en el músculo Puborectalis;
- (4)
- aproximadamente 1-5 unidades por músculo de BOTOX® inyectado intramuscularmente para tratar el blefaroespasmo inyectado en el músculo Orbicularis oculi pretarsal lateral del párpado superior y el Orbicularis oculi pretarsal lateral del párpado inferior.
- (5)
- Para tratar el estrabismo, se han inyectado intramuscularmente en los músculos extraoculares entre aproximadamente 1-5 unidades de BOTOX®, variando la cantidad inyectada en base tanto al tamaño del músculo por ser inyectado como al grado de parálisis muscular deseado (i.e., la cantidad de corrección de dioptrías deseada).
- (6)
- Para tratar la espasticidad de las extremidades superiores tras un derrame cerebral mediante inyecciones intramusculares de BOTOX® en cinco músculos flexores diferentes de la extremidad superior, según lo siguiente:
- a.
- Flexor digitorum profundus: 7,5 U a 30 U.
- b.
- Flexor digitorum sublimus: 7,5 U a 30 U.
- c.
- Flexor carpi ulnaris: 10 U a 40 U.
- d.
- Flexor carpi radialis: 15 U a 60 U.
- e.
- Bíceps brachii: 50 U a 200 U. Cada uno de los cinco músculos indicados ha sido inyectado en la misma sesión de tratamiento, de manera que el paciente recibe de 90 U a 360 U de BOTOX® en los músculos flexores de la extremidad superior por inyección intramuscular en cada sesión de tratamiento.
- (7)
- para tratar la migraña, la inyección pericraneal (inyectada simétricamente en los músculos glabellar, frontalis y temporalis) de 25 U de BOTOX® demostró un beneficio significativo como tratamiento profiláctico de la migraña en comparación con el vehículo medido por el descenso de la frecuencia de la migraña, de la gravedad máxima, de los vómitos asociados y del uso de medicación aguda durante el período de los tres meses siguientes a la inyección de las 25 U.
Se sabe que la toxina botulínica de tipo A puede
tener una eficacia que dura hasta 12 meses (European J.
Neurology 6 (Supp 4): S111-S1150:1999, y en
algunas circunstancias, dura tanto como 27 meses, ("The
Laryngoscope" 109: 1344-1346:1999). Sin embargo,
la duración habitual de una inyección intramuscular de BOTOX® es
comúnmente de aproximadamente 3 a 4 meses.
Según lo expuesto, se han usado ciertas toxinas
botulínicas para tratar diversos trastornos del movimiento, tales
como condiciones musculares espasmódicas con un resultado de alivio
del dolor. Por ejemplo, se conoce el uso de una toxina botulínica
para tratar espasmos musculares que resulta en el alivio de tanto la
hiperactividad muscular espasmódica como del dolor que aparece
secundariamente como resultado o debido a la actividad muscular
espasmódica. Por ejemplo, Cheshire et al "Pain" 1994;
59(1) 65-69 informó que pacientes con
síndrome de dolor miofacial experimentaron una reducción del dolor
tras inyecciones de toxina botulínica de tipo A en los puntos
desencadenantes. Véase también el documento WO 94/15629. Se cree que
la toxina botulínica A puede reducir el dolor reduciendo la
contracción muscular sostenida que causó o que causó sustancialmente
el dolor en la primera zona. De este modo, el dolor que puede
resultar del o que puede acompañar al espasmo muscular puede
deberse al menor pH local causado por el espasmo. Un efecto
indirecto de la parálisis de los músculos fláccidos inducida por
una toxina botulínica es permitir que el pH vuelva a un nivel
fisiológico, causando así la reducción del dolor como efecto
secundario de la desnervación colinérgica de las placas motoras que
puede resultar de la administración periférica de toxina
botulínica.
La toxina botulínica puede ser usada para tratar
el dolor de cabeza por migrañas que está asociado con el espasmo
muscular, las alteraciones vasculares, la neuralgia y la neuropatía
(Binder, patente estadounidense nº: 5.714.468). En particular, el
dolor por espasmo muscular, el dolor por músculo hipertónico, el
dolor miofacial y el dolor de cabeza por migraña pueden todos
deberse, o al menos en parte, a la producción y a la liberación de
una o más sustancias nociceptivas desde los propios músculos durante
períodos de una mayor tensión o contracción muscular.
El éxito de la toxina botulínica de tipo A para
tratar una variedad de condiciones clínicas ha conducido al interés
en otros serotipos de toxina botulínica. Se ha llevado a cabo un
estudio de dos preparaciones de toxina botulínica de tipo A
comercialmente disponibles (BOTOX® y Dysport®) y preparaciones de
toxinas botulínicas de tipo B y F (ambas obtenidas en Wako
Chemicals, Japón) para determinar la eficacia, la seguridad y el
potencial antigénico del debilitamiento muscular local. Las
preparaciones de toxina botulínica fueron inyectadas en la cabeza
del músculo gastrocnemius derecho (0,5 a 200,0 unidades/kg) y
se midió el debilitamiento muscular usando el ensayo de puntuación
de abducción digital en ratones (DAS). Se calcularon los valores de
DE_{50} a partir de curvas de dosis-respuesta.
Otros ratones recibieron inyecciones intramusculares para determinar
las dosis de DL_{50}. Se calculó el índice terapéutico como
DL_{50}/DE_{50}. Grupos separados de ratones recibieron
inyecciones de BOTOX® en las extremidades traseras (5,0 a 10,0
unidades/kg) o de toxina botulínica de tipo B (50,0 a 400,0
unidades/kg), y se evaluó su debilitamiento muscular y el aumento en
el consumo de agua, siendo esto último un modelo putativo para la
boca seca. Se evaluó el potencial antigénico mediante inyecciones
intramusculares mensuales en conejos (1,5 ó 6,5 ng/kg de toxina
botulínica de tipo B o 0,15 ng/kg de BOTOX®). Se relacionó el
debilitamiento muscular máximo y la duración con la dosis para todos
los serotipos. Los valores de DE_{50} del DAS (unidades/kg)
fueron los siguientes: BOTOX®: 6,7; Dysport®: 24,7; toxina
botulínica de tipo B: 27,0 a 244,0; toxina botulínica de tipo F:
4,3. El BOTOX® tuvo una mayor duración de acción que la toxina
botulínica de tipo B o la toxina botulínica de tipo F. Los valores
de índice terapéutico fueron los siguientes: BOTOX®: 10,5;
Dysport®: 6,3; toxina botulínica de tipo B: 3,2. El consumo de agua
fue mayor en ratones inyectados con toxina botulínica de tipo B que
con BOTOX®, aunque la toxina botulínica de tipo B fue menos eficaz
en el debilitamiento muscular. Tras cuatro meses de inyecciones, 2
de los 4 (en los tratados con 1,5 ng/kg) y 4 de los 4 (en los
tratados con 6,5 ng/kg) conejos desarrollaron anticuerpos frente a
la toxina botulínica de tipo B. En un estudio por separado, 0 de 9
conejos tratados con BOTOX® demostraron tener anticuerpos frente a
la toxina botulínica de tipo A. Los resultados del DAS indican
potencias máximas relativas de toxina botulínica de tipo A iguales
a la toxina botulínica de tipo F, siendo la toxina botulínica de
tipo F mayor que la toxina botulínica de tipo B. Con respecto a la
duración del efecto, el de la toxina botulínica de tipo A fue mayor
que el de la toxina botulínica de tipo B, y la duración del efecto
de la toxina botulínica de tipo B fue mayor que el de la toxina
botulínica de tipo F. Según lo mostrado por los valores de índice
terapéutico, las dos preparaciones comerciales de toxina botulínica
de tipo A (BOTOX® y Dysport®) son diferentes. El comportamiento de
aumento en el consumo de agua observado tras la inyección en las
extremidades traseras de toxina botulínica de tipo B indica que
entraron cantidades clínicamente significativas de este serotipo en
la circulación sistémica murina. Los resultados también indican que
para conseguir una eficacia comparable a la toxina botulínica de
tipo A, es necesario aumentar las dosis del resto de los serotipos
examinados. Además, en conejos, el tipo B fue más antigénico de lo
que fue el BOTOX®, posiblemente, debido a la carga proteica más
elevada inyectada para conseguir una dosis eficaz de toxina
botulínica de tipo B. Eur. J. Neurol. 1999 Nov; 6 (Supl. 4):
S3-S10.
Además de tener acciones farmacológicas en la
ubicación periférica, las toxinas botulínicas también pueden tener
efectos inhibidores en el sistema nervioso central. El trabajo
realizado por Weigand et al,
Nauny-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 1976;
292, 161-165, y Habermann,
Nauny-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 1974;
281, 47-56 demostró que la toxina botulínica es
capaz de ascender a la zona espinal mediante transporte retrógado.
Como tal, una toxina botulínica inyectada en una ubicación
periférica, por ejemplo, intramuscularmente, puede ser transportada
de forma retrógrada a la médula espinal. Sin embargo, los autores
de los artículos citados no pudieron demostrar que el material
radiomarcado fuera toxina botulínica intacta.
Según lo tratado anteriormente, el dolor
asociado con el trastorno muscular, por ejemplo, el dolor de los
espasmos musculares y el dolor de cabeza asociado con los trastornos
vasculares, la neuralgia y la neuropatía pueden ser tratados
eficazmente mediante el uso de toxina botulínica. Sin embargo,
existe una clara deficiencia en los medios disponibles para el
tratamiento de una selección de otros tipos de dolor. Tal dolor
incluye, por ejemplo, el dolor no asociado con el trastorno
muscular, el dolor por neuropatía y neuralgia que no son de cabeza,
el dolor por inflamación de tejidos, el dolor por inflamación de
articulaciones, el dolor por inflamación de tejidos, el dolor
producido por el cáncer, el dolor postoperatorio, el dolor por
laceración, el dolor isquémico, etc.
Se han hecho intentos por tratar estos otros
tipos de dolor, pero su éxito potencial y su posible uso clínico
son inciertos en este momento. Por ejemplo, Foster et al. en
la patente estadounidense nº: 5.989.545 (incorporada en su
totalidad mediante referencia en la presente memoria descriptiva)
revelan que una neurotoxina clostridial, preferiblemente, una
toxina botulínica, conjugada químicamente con o fusionada
recombinantemente a un determinado resto dirigido puede ser usada
para tratar el dolor.
Comúnmente, sólo se libera un único tipo de
neurotransmisor de molécula pequeña por cada tipo de neurona en el
sistema nervioso mamífero. El neurotransmisor acetilcolina es
secretado por neuronas en muchas zonas del cerebro, pero
específicamente por las células piramidales grandes de la corteza
motora, por varias neuronas diferentes de los ganglios basales, por
las neuronas motoras que inervan los músculos esqueléticos, por las
neuronas pregangliónicas del sistema nervioso autonómico (tanto
simpático como parasimpático), por las neuronas postgangliónicas
del sistema nervioso parasimpático y por algunas de las neuronas
postgangliónicas del sistema nervioso simpático. Esencialmente,
sólo las fibras nerviosas simpáticas postgangliónicas de las
glándulas sudoríparas, los músculos piloerectores y unos cuantos
vasos sanguíneos son colinérgicos, como la mayoría de las neuronas
postgangliónicas del sistema nervioso simpático segregan el
neurotransmisor norepinefina. En la mayoría de los casos, la
acetilcolina tiene un efecto excitador. Sin embargo, se sabe que la
acetilcolina tiene efectos inhibidores en algunas de las
terminaciones nerviosas parasimpáticas periféricas, tales como la
inhibición de la frecuencia cardiaca por el nervio vagal.
Las señales eferentes del sistema nervioso
autonómico son transmitidas al cuerpo a través de bien el sistema
nervioso simpático o el sistema nervioso parasimpático. Las neuronas
pregangliónicas del sistema nervioso simpático se extienden desde
los cuerpos celulares de las neuronas simpáticas pregangliónicas
localizados en el cuerno intermediolateral de la médula espinal.
Las fibras nerviosas simpáticas pregangliónicas, que se extienden
desde el cuerpo celular, hacen sinapsis con las neuronas
postgangliónicas localizadas bien en un ganglio simpático
paravertebral o en un ganglio prevertebral. Como las neuronas
pregangliónicas del sistema nervioso tanto simpático como
parasimpático son colinérgicas, la aplicación de la acetilcolina en
los ganglios excitará a las neuronas postgangliónicas tanto
simpáticas como parasimpáticas.
La acetilcolina activa dos tipos de receptores,
los receptores muscarínicos y los nicotínicos. Los receptores
muscarínicos se encuentran en todas las células efectoras
estimuladas por las neuronas postgangliónicas del sistema nervioso
parasimpático, así como en aquéllas estimuladas por las neuronas
colinérgicas postgangliónicas del sistema nervioso simpático. Los
receptores nicotínicos se encuentran en la sinapsis entre las
neuronas pregangliónicas y las postgangliónicas tanto del simpático
como del parasimpático. Los receptores nicotínicos también están
presentes en muchas membranas de las fibras de los músculos
esqueléticos de la unión neuromuscular.
La acetilcolina es liberada desde las neuronas
colinérgicas cuando vesículas intracelulares pequeñas y claras se
fusionan con la membrana celular neuronal presináptica. Una amplia
variedad de células secretoras no neuronales, tales como las
células de la médula adrenal (así como la línea celular PC12) y las
células del islote pancreático liberan catecolaminas y hormona
paratiroidea, respectivamente, desde vesículas grandes de núcleo
denso. La línea celular PC12 es un clon de células de
feocromocitoma de rata usadas ampliamente como modelo de cultivo
tisular para estudios de desarrollo simpatoadrenal. La toxina
botulínica inhibe la liberación de ambos tipos de compuestos desde
ambos tejidos de células in vitro, permeabilizadas (como
mediante electroporación) o mediante inyección directa de la toxina
en la célula desnervada. También se sabe que la toxina botulínica
bloquea la liberación del neurotransmisor glutamato desde cultivos
de células de sinaptosomas corticales.
La unión neuromuscular se forma en el músculo
esquelético por la proximidad de axones a las células musculares.
Una señal transmitida a través del sistema nervioso resulta en un
potencial de acción en el axón terminal, con la activación de
canales iónicos y la liberación resultante del neurotransmisor
acetilcolina desde las vesículas sinápticas intraneuronales, por
ejemplo, en la placa terminal motora de la unión neuromuscular. La
acetilcolina cruza el espacio extracelular para unirse con las
proteínas receptoras de acetilcolina sobre la superficie de la
placa terminal muscular. Una vez que se ha producido suficiente
unión, un potencial de acción de la célula muscular hace que el
canal iónico de la membrana específica cambie, resultando en la
contracción de las células musculares. La acetilcolina es entonces
liberada desde las células musculares y metabolizada por la
colinesterasas en el espacio extracelular. Los metabolitos se
vuelven a reciclar en el axón terminal para volver a procesarse en
más acetilcolina.
Por lo tanto, lo que se necesita es un
procedimiento eficaz, de larga duración, no quirúrgico para tratar
el dolor, particularmente, el dolor que no está asociado con un
trastorno muscular ni con el dolor de cabeza.
La presente invención cubre esta necesidad y
permite un procedimiento eficaz, de larga duración y no quirúrgico
para tratar el dolor, particularmente, el dolor que no está asociado
con un trastorno muscular ni con el dolor de cabeza.
La presente invención proporciona una toxina
botulínica para su uso en un procedimiento para aliviar el dolor
neurálgico o en un procedimiento para tratar el dolor causado por
neuralgia, como se define en las reivindicaciones anexas.
Se cree que un mecanismo mediante el que trabaja
la presente invención es un efecto antinociceptivo ante neuronas de
dolor aferentes periféricas sensoriales, en contraposición con tener
un efecto ante neuronas motoras.
La toxina botulínica puede ser una de las
toxinas botulínicas de tipo A, B, C_{1}, D, E, F o G.
Preferiblemente, la toxina botulínica es toxina botulínica de tipo
A.
La toxina botulínica puede ser una toxina
botulínica modificada que tiene al menos un aminoácido eliminado,
modificado o reemplazado. Adicionalmente, la toxina botulínica puede
ser formada, al menos en parte, mediante un procedimiento
recombinante.
La toxina botulínica puede ser administrada en
una cantidad de entre aproximadamente 0,01 U/kg y aproximadamente
35 U/kg, y el dolor tratado puede ser sustancialmente aliviado
durante entre aproximadamente 1 mes y aproximadamente 27 meses, por
ejemplo, durante de aproximadamente 1 mes a aproximadamente 6
meses.
La administración periférica de la toxina
botulínica puede ser llevada a cabo antes de la aparición de un
evento o un síndrome nociceptivo experimentado por un paciente.
Adicionalmente, la administración periférica de la toxina
botulínica puede ser llevada a cabo posteriormente a la aparición de
un evento nociceptivo experimentado por un paciente.
Significativamente, las toxinas botulínicas
usadas dentro del alcance de la presente invención comprenden un
resto de unión de tipo nativo o salvaje con una afinidad específica
por un receptor de la superficie celular neuronal. Las toxinas
botulínicas usadas dentro del alcance de la presente invención
excluyen restos dirigidos neuronales que no sean originarios de la
toxina botulínica, porque se ha descubierto que la presente
invención puede ser llevada eficazmente a la práctica sin la
necesidad de realizar ninguna modificación ni eliminación en el
resto de unión de tipo nativo o salvaje de las toxinas botulínicas
usadas.
De este modo, queda excluido del alcance de la
presente invención como innecesario el uso de una toxina botulínica
con uno o más artefactos o constructos de resto dirigido no nativo,
porque, según lo expuesto, hemos descubierto que,
sorprendentemente, la administración periférica de una toxina
botulínica según la presente invención proporciona un alivio
significativo del dolor incluso aunque la toxina botulínica no
comprenda un resto dirigido neuronal no nativo. De este modo, hemos
descubierto que una toxina botulínica, tal como la toxina botulínica
de tipo A, puede, tras una administración periférica, proporcionar
un alivio del dolor incluso aunque la toxina botulínica no haya
recibido artificialmente ni manualmente la unión de ningún resto
dirigido neuronal no nativo.
Sorprendentemente, se ha descubierto que una
toxina botulínica que tenga un resto de unión neuronal de tipo
salvaje puede ser administrada periféricamente a un mamífero para
tratar el dolor. El resto de unión neuronal de tipo salvaje forma
parte originariamente de la toxina botulínica. Por ejemplo, la
toxina botulínica de tipo A, con su resto de unión neuronal de tipo
salvaje original puede ser administrada periféricamente en
cantidades de entre aproximadamente 0,01 U/kg y aproximadamente 35
U/kg para aliviar el dolor experimentado por un mamífero, tal como
un paciente humano. Preferiblemente, la toxina botulínica usada es
administrada periféricamente en una cantidad de entre
aproximadamente 0,1 U/kg y aproximadamente 3 U/kg.
Significativamente, el efecto de alivio del dolor de los presentes
procedimientos revelados puede durar una media de
1-6 meses y más en algunas circunstancias. Se ha
informado que el efecto de una toxina botulínica puede durar hasta
27 meses tras su administración.
En otra realización, el procedimiento de
tratamiento del dolor comprende la administración a un mamífero de
una toxina botulínica, por ejemplo, una toxina botulínica
clostridial, en el que la toxina botulínica difiere de una toxina
botulínica natural en al menos un aminoácido. La toxina botulínica
también tiene un resto de unión neuronal de tipo salvaje.
En otra realización, los procedimientos de
tratamiento del dolor comprenden la administración a un mamífero de
una toxina botulínica, teniendo la toxina botulínica un resto de
unión neuronal de tipo salvaje de otro subtipo de toxina
botulínica.
Un procedimiento preferido para tratar el dolor
comprende la etapa de la administración periférica de una toxina
botulínica a un mamífero. Se ha descubierto que, sorprendentemente,
una toxina botulínica dentro del alcance de la presente invención
puede ser usada para tratar un dolor que no sea secundario a un
espasmo muscular. De este modo, la presente invención es aplicable
al tratamiento del dolor que se produce independientemente de la
presencia o la ausencia de un trastorno muscular, tal como un
espasmo muscular. Adicionalmente, la presente invención también es
aplicable a e incluye dentro de su alcance, el tratamiento del dolor
que no es secundario a un espasmo muscular. Así, un paciente puede
tener un músculo espasmódico o hipertónico y experimentar además un
dolor que no sea secundario, es decir, que no surja de ni se deba al
espasmo muscular. Por ejemplo, un paciente puede tener un músculo
de una extremidad espasmódico y experimentar simultáneamente dolor
en el tronco, tal como dolor de espalda. En este ejemplo, un
procedimiento puede tratar el dolor de espalda mediante la
administración periférica (i.e. subcutánea) de una toxina botulínica
en la espalda del paciente.
En la presente memoria, se proporcionan y se
aplican las siguientes definiciones:
"Cadena ligera" significa la cadena ligera
de una toxina botulínica clostridial. Puede tener un peso molecular
de aproximadamente 50 kDa, y puede ser denominada cadena L, L o
(secuencia de aminoácidos) del dominio proteolítico de una toxina
botulínica.
"Cadena pesada" significa la cadena pesada
de una toxina botulínica. Puede tener un peso molecular de
aproximadamente 100 kDa y puede ser denominada en la presente
memoria cadena P o P.
"P_{N}" significa un fragmento que puede
tener un peso molecular de aproximadamente 50 kD, que está derivado
de la cadena P de una toxina botulínica clostridial y es
aproximadamente equivalente al segmento amino terminal de la cadena
P, o a la porción correspondiente al fragmento de la cadena P
intacta. Se cree que contiene la porción de la neurotoxina
clostridial de tipo natural o salvaje que participa en la
translocalización de la cadena L a través de una membrana
endosómica intracelular.
"P_{C}" significa un fragmento (de
aproximadamente 50 kDa) derivado de la cadena P de una toxina
botulínica que es aproximadamente equivalente al segmento carboxilo
terminal de la cadena P, o a la porción correspondiente al
fragmento de la cadena P intacta. Se cree que es inmunogénico y que
contiene la porción de la toxina botulínica de tipo natural o
salvaje que participa en la unión presináptica de alta afinidad con
las neuronas motoras.
"Resto de unión neuronal de tipo salvaje"
significa la porción de una toxina botulínica que es originaria de
la toxina botulínica y que presenta una afinidad de unión específica
por un receptor sobre una neurona. De este modo, el resto de unión
neuronal nativo o de tipo salvaje excluye un resto de unión que no
sea originario de la toxina botulínica.
"Resto dirigido" significa una molécula que
tiene una afinidad de unión específica para un receptor de la
superficie celular. El resto dirigido no es una P_{C} de
neurotoxina clostridial ni péptidos derivados de una P_{C} con al
menos uno de sus aminoácidos eliminados, modificados o reemplazados.
El resto dirigido es una molécula que no es una toxina botulínica,
por ejemplo, puede ser una bradiquinina.
"Administración local" significa
administración por una vía no sistémica en la o en la proximidad de
la zona de una dolencia, un trastorno o un dolor percibido.
"Administración periférica" significa
administración por medio de una vía no sistémica en una ubicación
periférica de un mamífero. Una ubicación periférica significa
generalmente bajo la piel o en un músculo esquelético. La
administración periférica incluye las vías de administración
intramuscular, intraglandular y subcutánea, pero excluye la
administración intravenosa u oral, e incluye además cualquier
administración directa en el sistema nervioso central.
Éstas y otras características, aspectos y
ventajas de la presente invención pueden comprenderse mejor a partir
de la siguiente descripción, reivindicaciones y figuras anexas,
significando "inyección" en las figuras 1 y 2 inyección o
administración periférica.
La figura 1 es un gráfico de
dosis-respuesta que muestra que un procedimiento
alivia el dolor inflamatorio inducido conforme a un modelo de
formalina en ratas durante al menos cinco días. El eje X representa
el tiempo en minutos tras el comienzo del modelo de formalina en
ratas. El eje Y representa el tiempo transcurrido levantando y
lamiendo la pata inyectada con formalina tras el uso de inyecciones
de control (solución salina, n = 7) y de BOTOX® (complejo de
neurotoxina purificada de toxina botulínica de tipo A) a
concentraciones de 7 U/kg (n = 8), 15 U/kg (n = 5) y 30 U/kg (n =
4). El BOTOX® fue inyectado 5 días antes del comienzo del desafío
con formalina.
La figura 2 es un gráfico de
dosis-respuesta que muestra que un procedimiento
alivia el dolor inflamatorio inducido conforme a un modelo de
formalina en ratas durante al menos doce días. El eje X representa
el tiempo en minutos tras el comienzo del modelo de formalina en
ratas. El eje Y representa el tiempo transcurrido levantando y
lamiendo la pata inyectada con formalina tras el uso de inyecciones
de control (solución salina, n = 3) y de BOTOX® (complejo de
neurotoxina purificada de toxina botulínica de tipo A) a
concentraciones de 3,5 U/kg (n = 7) y 7 U/kg (n = 8). El BOTOX® fue
inyectado 12 días antes del comienzo del desafío con formalina.
La presente invención se basa en el
descubrimiento de que la administración periférica de una toxina
botulínica puede proporcionar un tratamiento eficaz del dolor
crónico. En particular, la toxina botulínica tiene un resto de
unión neuronal nativo o de tipo salvaje. El dolor tratado no se debe
a un espasmo muscular, ni tampoco es dolor de cabeza. El dolor
crónico es tratado debido al efecto antinociceptivo a largo plazo de
las toxinas botulínicas usadas. El componente de resto de unión
neuronal de la toxina botulínica es un resto de unión neuronal que
es originario de la toxina botulínica seleccionada, porque hemos
descubierto que la presente invención puede ser llevada a la
práctica sin el reemplazo del resto de unión neuronal de tipo
salvaje por un resto dirigido de tipo no nativo o no salvaje. El
tratamiento del dolor de cabeza no pertenece al alcance de la
presente invención, porque las zonas preferidas de administración
periférica de una toxina botulínica conforme a la presente
invención excluyen la cabeza y el
cuello.
cuello.
Con anterioridad al descubrimiento de los
inventores, se ha estado usando una toxina botulínica para tratar
el dolor asociado con diversos trastornos musculares. De este modo,
se sabe que un trastorno muscular, tal como un músculo espasmódico,
puede producir dolor y que, mediante el tratamiento del espasmo, el
dolor también puede ser aliviado. Foster et al. revelan que
la neurotoxina es ligada a un resto dirigido para su uso en el
tratamiento del dolor, es decir, que el resto de unión de tipo
salvaje de una neurotoxina clostridial es eliminado completamente y
reemplazado por un resto dirigido.
Sorprendentemente, los inventores han
descubierto que una toxina botulínica que no haya sido conjugada
con, unida a, adherida a o fusionada con un resto dirigido neuronal
puede ser administrada periféricamente conforme a los
procedimientos para tratar el dolor. Preferiblemente, el dolor
tratado no se debe, es decir, el dolor no surge directamente como
resultado secundario de un espasmo muscular. Nuestra invención
puede ser usada para tratar el dolor que resulta de una amplia
variedad de afecciones neuropáticas, inflamatorias, cancerígenas y
traumáticas.
Antes de la invención de los inventores, se
sabía que una toxina botulínica podía ser usada para tratar
eficazmente el dolor, no debiéndose el dolor a un espasmo muscular
ni a una afección de músculo hipertónico. El mecanismo fisiológico
mediante el cual la administración periférica de una neurotoxina
puede resultar en un alivio a largo plazo del dolor no está claro.
Los inventores observaron que mientras que el dolor debido a un
espasmo muscular o a una afección de músculo hipertónico puede
producir un pH local reducido, nuestra invención no se basa en ni
necesita la elevación de un nivel de pH bajo local. Adicionalmente,
mientras que una afección de espasmo muscular o de músculo
hipertónico puede ser aliviada mediante un efecto anticolinérgico de
una toxina botulínica sobre las neuronas motoras, nuestra invención
no se basa en un efecto sobre las neuronas motoras. Sin desear
quedar vinculados a la teoría, los inventores plantearon como
hipótesis que un efecto de la administración periférica de una
toxina botulínica según la presente invención puede ser un efecto
antinociceptivo sobre una neurona aferente sensorial periférica. En
la invención de los inventores, el alivio del dolor es un efecto
primario, en contraposición con un efecto secundario, de la
administración periférica de una toxina botulínica lo cual es
significativo.
De este modo, la presente invención se basa, al
menos en parte, en el descubrimiento de que una toxina botulínica
con un resto de unión neuronal de tipo salvaje puede ser
administrada periféricamente a un mamífero para aliviar el dolor.
La toxina botulínica según esta invención no está acoplada a un
resto dirigido no nativo. Un resto de unión de tipo salvaje según
la presente invención puede ser un segmento de P_{C} natural de
una toxina botulínica o una secuencia de aminoácidos
sustancialmente completamente derivada del segmento de P_{C} de la
toxina botulínica.
Como se usa en lo que sigue, una secuencia de
aminoácidos, por ejemplo, un resto de unión de tipo salvaje,
"derivado de" otra secuencia de aminoácidos, por ejemplo, el
segmento de P_{C}, significa que la secuencia de aminoácidos
resultante está duplicada exactamente como la secuencia de
aminoácidos de la que deriva; o la secuencia de aminoácidos
resultante tiene al menos un aminoácido eliminado, modificado o
reemplazado en comparación con la secuencia de aminoácidos de la
que deriva.
Según un aspecto amplio, se proporcionan
procedimientos para el tratamiento del dolor que comprenden la
administración a un mamífero de dosis eficaces de una toxina
botulínica que tiene un resto de unión neuronal de tipo salvaje. En
una realización, los procedimientos incluyen la administración a un
mamífero de una toxina botulínica que tiene un resto de unión
neuronal de tipo salvaje que ya es originariamente una parte de la
toxina botulínica. Preferiblemente, la toxina botulínica
administrada al mamífero se selecciona de un grupo constituido por
los tipos A, B, C_{1}, D, E, F o G de toxina botulínica, cada uno
de los cuales tiene su propio resto de unión neuronal de tipo
salvaje original. Más preferiblemente, los procedimientos incluyen
la administración de toxina botulínica de tipo A con su resto de
unión neuronal de tipo salvaje original. Los procedimientos también
incluyen la administración de una mezcla de dos o más de las
toxinas botulínicas anteriores a un mamífero para tratar el
dolor.
En otra realización, los procedimientos
comprenden la administración de una toxina botulínica a un mamífero,
difiriendo la neurotoxina de una neurotoxina natural en al menos un
aminoácido. Por ejemplo, se pueden administrar variantes de toxina
botulínica de tipo A según lo revelado en Biochemistry 1995,
34, páginas 15175-15181 y Eur. J. Biochem,
1989, 185, páginas 197-203 (incorporados en la
presente memoria por referencia en su integridad) a un mamífero
para tratar un dolor no relacionado con un espasmo. Estas variantes
también tienen restos de unión neuronal de tipo salvaje.
En otra realización, se proporcionan
procedimientos para una administración de una toxina botulínica a un
mamífero para tratar un dolor no causado por un espasmo, teniendo
la neurotoxina un resto de unión neuronal de tipo salvaje de otra
toxina botulínica. Por ejemplo, el procedimiento incluye la etapa de
administrar a un mamífero toxina botulínica de tipo A que tenga un
resto de unión neuronal de tipo salvaje de toxina botulínica de
tipo B. El resto de tales combinaciones está incluido en el alcance
de la presente invención.
En otra realización amplia, los procedimientos
para tratar el dolor no relacionado con espasmos incluyen la
administración periférica local de la toxina botulínica en una
ubicación del dolor real o percibida del mamífero. En una
realización, la toxina botulínica es administrada subcutáneamente en
o cerca de la ubicación del dolor percibido, por ejemplo, en o
cerca de una articulación dolorosa crónicamente. En otra
realización, la toxina botulínica es administrada
intramuscularmente en o cerca de la ubicación del dolor, por
ejemplo, en o cerca de un neoplasma del mamífero. En otra
realización, la toxina botulínica es inyectada directamente en una
articulación de un mamífero para tratar o aliviar afecciones
artríticas causantes de dolor. También pertenecen al alcance de la
presente invención las inyecciones o infusiones repetidas y
frecuentes de la neurotoxina en una ubicación periférica del dolor.
Sin embargo, dados los efectos terapéuticos de larga duración de la
presente invención, puede que no sean necesarias las inyecciones o
infusiones frecuentes de la neurotoxina. Por ejemplo, la práctica
de la presente invención puede proporcionar un efecto analgésico,
por inyección, durante 2 meses o más, por ejemplo, durante 7 meses,
en seres humanos.
Sin desear limitar la invención a ningún
mecanismo ni teoría de uso, se cree que cuando la toxina botulínica
es administrada localmente en una ubicación periférica, inhibe la
liberación de neurosustancias, por ejemplo, de sustancia P, desde
el terminal sensorial primario periférico. Según lo tratado
anteriormente, una liberación de sustancia P por el terminal
sensorial primario periférico puede causar o al menos amplificar el
proceso de transmisión del dolor. Por lo tanto, la inhibición de su
liberación en el terminal sensorial primario periférico apagará el
proceso de transmisión del dolor.
Además de tener acciones farmacológicas en una
ubicación periférica de la administración, un procedimiento también
puede tener un efecto antinociceptivo debido al transporte
retrógrado de la toxina botulínica desde la zona de la inyección
periférica (i.e., subcutánea) hasta el sistema nervioso central.
Hemos determinado que la toxina botulínica de tipo A puede ser
transportada retrógradamente desde la zona periférica de
administración de vuelta al cuerno dorsal de la médula espinal.
Presumiblemente, el transporte retrógrado se realiza por el
aferente primario. Este descubrimiento concuerda con el trabajo
realizado por Weigand et al.,
Nauny-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 1976;
292, 161-165, y Habermann,
Nauny-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 1974;
281, 47-56 que mostró que la toxina botulínica es
capaz de ascender a la zona espinal por transporte retrógrado. De
este modo, se informó que la toxina botulínica de tipo A inyectada
intramuscularmente puede ser transportada retrógradamente desde el
terminal sensorial primario periférico hacia el terminal sensorial
primario central.
Nuestro descubrimiento difiere
significativamente de lo tratado en los artículos citados en el
párrafo anterior. Hemos descubierto que, en la rata, tras una
administración subcutánea periférica, se encontró toxina botulínica
localizada en el cuerno dorsal del animal, es decir, en la zona en
la que las fibras C hacen sinapsis. Una inyección subcutánea es una
inyección en un lugar en el que están localizadas muchas fibras
nerviosas nociceptivas bipolares. Estas fibras sensoriales van
desde la periferia hasta el cuerno dorsal de la médula espinal. Por
el contrario, en uno o más artículos citados en el párrafo anterior,
tras llevar a cabo una inyección intramuscular de toxina, se
encontró algo de toxina botulínica radiomarcada localizada en las
raíces ventrales. La raíz ventral de la médula espinal es donde se
localizan las neuronas motoras eferentes (de tráfico de salida)
monopolares. De este modo, la técnica conduce a la expectativa de
la espasticidad muscular periférica como resultado del transporte
retrógrado de una toxina botulínica desde la periferia hasta un
lugar de la médula espinal.
\newpage
De este modo, los expertos en la técnica han
creído que la aparición de una toxina botulínica en la médula
espinal de un mamífero: (1) induciría a una espasticidad
significativa en el receptor, y; (2) promovería efectos
perjudiciales para las funciones de la médula espinal y del cerebro.
De este modo, con respecto al efecto nocivo citado (1): se informó
que, como ejemplos, en Williamson et al., en "Clostridial
Neurotoxins and Substrate Proteolysis in Intact Neurons", J.
of Biological Chemistry 271:13; 7694-7699
(1996), que tanto la toxina tetánica como la toxina botulínica de
tipo A inhiben la liberación provocada de los neurotransmisores
glicina y glutamato desde cultivos celulares de espina dorsal de
ratones fetales, mientras que fue informado por Hagenah et
al., en "Effects of Type A Botulinum Toxin on the Cholinergic
Transmission at Spinal Renshaw Cells and on the Inhibitory Action
at la Inhibitory Interneurones",
Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 299,
267-272 (1977), que la inyección intraespinal
directa de toxina botulínica de tipo A en gatos anestesiados
preparados experimentalmente inhibe la actividad de las células de
Renshaw en el SNC. La inhibición de la liberación central de los
neurotransmisores glicina y glutamato, así como la regulación
descendente de la actividad de las células de Renshaw pueden ambas
resultar presumiblemente in vivo en la promoción de una
hiperactividad motoneuronal significativa, seguida por una
espasticidad muscular periférica.
Con respecto al efecto perjudicial (2): se cree
que la presencia central (en la médula espinal) de una neurotoxina
tetánica ejerce, por movimiento retrógrado de la toxina tetánica por
las neuronas del SNC, efectos significativamente negativos en las
funciones de la médula espinal y del cerebro, contraindicando así
cualquier deseo de tener la aparición de una neurotoxina
relacionada, tal como una toxina botulínica (como por transporte
retrógrado), en la médula espinal. En particular, la toxina
botulínica y la toxina tetánica están ambas formadas por bacterias
clostridiales, aunque por diferentes especies de Clostridium.
Algunos investigadores han informado que la toxina botulínica
comparte, al menos en algún grado, la característica ascendente
neuronal indicada de la toxina tetánica, lo cual es significativo.
Véase, por ejemplo, Habermann E., "125I-Labeled
Neurotoxin from Clostridium Botulinum A: Preparation, Binding to
Synaptosomes and Ascent in the Spinal Cord",
Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 281,
47-56 (1974).
Nuestra invención no se encuentra
sorprendentemente con ninguno de los efectos perjudiciales (1) ni
(2), y los procedimientos de administración periférica (subcutánea)
revelados pueden ser llevados a la práctica para proporcionar un
alivio eficaz y de larga duración de un dolor que no se deba a un
espasmo muscular, y proporcionar una mejora general de la calidad
de vida experimentada por el paciente tratado. El dolor
experimentado por el paciente es dolor neurálgico o dolor causado
por neuralgia.
Una vez en el terminal sensorial primario
central localizado en el cuerno dorsal de la médula espinal, la
toxina botulínica puede inhibir además la liberación del
neurotransmisor responsable de la transmisión de las señales
dolorosas, por ejemplo, la sustancia P. Esta inhibición evita la
activación de las neuronas de proyección en el tracto
espinotalámico, aliviando así el dolor. Por lo tanto, la
administración periférica de la toxina botulínica, debido a su
efecto antinociceptivo central ahora descubierto, sirve como
procedimiento alternativo a la administración central (i.e.,
intraespinal) de un analgésico, eliminando así las complicaciones
asociadas con la administración central de un fármaco
analgésico.
Además, ha sido observado por Habermann en
"Experientia" 1988; 44: 224-226 que la toxina
botulínica puede inhibir la liberación de noradrenalina y GABA
desde homogeneizados cerebrales. Este descubrimiento sugiere que la
toxina botulínica puede entrar en los terminales nerviosos
simpáticos adrenérgicos y en los terminales nerviosos de GABA. Como
tal, la toxina botulínica puede ser administrada en el sistema
simpático para proporcionar un bloqueo y un alivio del dolor a
largo plazo, por ejemplo, del dolor neuropático. La administración
de una neurotoxina, preferiblemente de toxina botulínica de tipo A,
proporciona un beneficio de bloqueo a largo plazo sin el riesgo de
una afección funcional permanente, lo que no es posible con los
compuestos farmacéuticos actualmente en uso.
La cantidad de toxina botulínica administrada
puede variar ampliamente según el trastorno en concreto que esté
siendo tratado, de su gravedad y de otras diversas variables del
paciente, incluyendo el tamaño, el peso, la edad y la receptividad
a la terapia. Por ejemplo, se cree que la extensión de la zona del
dolor periférico es proporcional al volumen de neurotoxina
inyectado, mientras que se cree que la cantidad de la analgesia es,
para la mayoría de los intervalos posológicos, proporcional a la
concentración de neurotoxina inyectada. Además, el lugar particular
para la administración de la neurotoxina puede depender de la
ubicación del dolor por ser tratado.
Generalmente, la dosis de neurotoxina por
administrar variará con la edad, la afección que se presente y el
peso del mamífero por ser tratado. También se tendrá en cuenta la
potencia de la toxina botulínica.
En una realización según esta invención, las
dosis terapéuticamente eficaces de una toxina botulínica, por
ejemplo, de toxina botulínica de tipo A, en una ubicación
periférica, pueden ser en cantidades de entre aproximadamente 0,01
U/kg y aproximadamente 35 U/kg. Un intervalo preferido para la
administración de una toxina botulínica que tenga un resto de unión
neuronal de tipo salvaje, tal como la toxina botulínica de tipo A,
para conseguir un efecto antinociceptivo en el paciente tratado es
de aproximadamente 0,01 U/kg a aproximadamente 35 U/kg. Un
intervalo más preferido para la administración periférica de una
toxina botulínica, tal como la toxina botulínica de tipo A, para
alcanzar un efecto antinociceptivo en el paciente tratado es de
aproximadamente 1 U/kg a aproximadamente 15 U/kg. Menos de
aproximadamente 0,1 U/kg puede resultar en que el efecto terapéutico
deseado sea de una duración menor a la duración óptima o la más
larga posible, mientras que más de aproximadamente 2 U/kg puede
resultar en que se sigan presentando algunos síntomas de flacidez
muscular. Un intervalo más preferido para la administración
periférica de una toxina botulínica, tal como toxina botulínica de
tipo A, para alcanzar un efecto antinociceptivo en el paciente
tratado es de aproximadamente 0,1 U/kg a aproximadamente 1
U/kg.
Aunque se proporcionan ejemplos de vías de
administración y dosificaciones, la vía de administración y la
dosificación apropiadas son generalmente determinadas en base al
caso por el médico que lo trate. Tales determinaciones son
rutinarias para cualquier experto habitual en la técnica (véase, por
ejemplo, "Harrison's Principles of Internal Medicine" (1998),
editado por Anthony Fauci et al., XIV edición, publicado por
McGraw Hill). Por ejemplo, la vía y la dosificación de
administración de una neurotoxina según la presente invención
revelada pueden ser seleccionadas en base a criterios tales como las
características de solubilidad de la neurotoxina elegida, así como
de la intensidad del dolor percibido.
Si se va a usar una toxina botulínica no
modificada para tratar un dolor no relacionado con un espasmo según
lo descrito en la presente memoria, la toxina botulínica puede ser
obtenida mediante el cultivo de una especie bacteriana apropiada.
Por ejemplo, la toxina botulínica de tipo A puede ser obtenida
mediante el establecimiento y el desarrollo de cultivos de
Clostridium botulinum en un fermentador, y luego, la cosecha
y la purificación de la mezcla fermentada según procedimientos
conocidos. Todos los serotipos de toxina botulínica son sintetizados
inicialmente como proteínas monocatenarias inactivas que deben ser
escindidas o melladas por proteasas para convertirse en
neuroactivas. Las cepas bacterianas que forman los serotipos A y G
de toxina botulínica poseen proteasas endógenas, y, por tanto, los
serotipos A y G pueden ser recuperados de cultivos bacterianos,
predominantemente, en su forma activa. Por el contrario, los
serotipos C_{1}, D y E de toxina botulínica son sintetizados por
cepas no proteolíticas, y, por consiguiente, están comúnmente
inactivos cuando son recuperados del cultivo. Los serotipos B y F
son producidos por cepas tanto proteolíticas como no proteolíticas,
y pueden ser, por lo tanto, recuperados bien en su forma activa o
inactiva. Sin embargo, incluso las cepas proteolíticas que
producen, por ejemplo, el serotipo B de toxina botulínica sólo
escinden una porción de la toxina producida. La proporción exacta
entre las moléculas melladas y las no melladas depende de la
duración de la incubación y de la temperatura del cultivo. Por
consiguiente, un cierto porcentaje de cualquier preparación de, por
ejemplo, toxina botulínica de tipo B es probable que esté inactivo,
debiéndose posiblemente a la conocida significativamente baja
potencia de la toxina botulínica de tipo B en comparación con la
toxina botulínica de tipo A. La presencia de moléculas inactivas de
toxina botulínica en una preparación clínica contribuirá a la carga
proteica global de la preparación, lo que se ha relacionado con una
mayor antigenicidad, sin contribuir a su eficacia clínica.
Adicionalmente, se sabe que la toxina botulínica de tipo B tiene,
tras una inyección intramuscular, una menor duración de su
actividad, y además es menos potente que la toxina botulínica de
tipo A al mismo nivel de
dosificación.
dosificación.
Si se va a usar una toxina botulínica modificada
según esta invención para tratar un dolor no relacionado con un
espasmo, se pueden usar técnicas recombinantes para producir las
toxinas botulínicas deseadas. La técnica incluye las etapas de
obtener materiales genéticos de origen natural, u origen sintético,
que tengan códigos para un resto de unión neuronal, una secuencia
de aminoácidos eficaz para translocalizar la toxina botulínica o
una parte de la misma, y una secuencia de aminoácidos que tenga una
actividad terapéutica cuando sea liberada en el citoplasma de una
célula diana, preferiblemente, de una neurona. En una realización
preferida, los materiales genéticos tienen códigos para la cadena
P_{C}, P_{N} y L de las toxinas botulínicas, las toxinas
botulínicas modificadas y los fragmentos de las mismas. Los
constructos genéticos son incorporados en las células huésped para
una amplificación fusionando primero los constructos genéticos con
vectores de clonación, tales como fagos o plásmidos. Luego, los
vectores de clonación son insertados en huéspedes, preferiblemente,
de E. coli. Tras las expresiones de los genes recombinantes
en células huésped, las proteínas resultantes pueden ser aisladas
usando técnicas convencionales.
Aunque se proporcionan técnicas recombinantes
para la producción de toxinas botulínicas modificadas, también se
pueden emplear técnicas recombinantes para producir toxinas
botulínicas no modificadas, por ejemplo, toxina botulínica A como
existe de forma natural, pues se conoce la secuencia genética de la
toxina botulínica de tipo A.
Hay muchas ventajas en producir estas toxinas
botulínicas de forma recombinante. Por ejemplo, la producción de
toxinas botulínicas desde cultivos anaeróbicos de Clostridium
es un procedimiento pesado que lleva mucho tiempo que incluye un
protocolo de purificación en varias etapas que supone varias etapas
de precipitación de proteínas, y bien una cristalización prolongada
y repetida de la toxina o varias etapas de cromatografía en
columna. La elevada toxicidad del producto establece que el
procedimiento debe ser realizado bajo una estricta contención
(BL-3), lo cual es significativo. Durante el
procedimiento de fermentación, las neurotoxinas monocatenarias
plegadas son activadas por proteasas clostridiales endógenas a
través de un procedimiento denominado mellado. Esto supone la
eliminación de aproximadamente 10 residuos de aminoácido de la
cadena simple para crear la forma dicatenaria en la que dos cadenas
permanecen unidas mediante enlace covalente a través de un enlace
disulfuro entre las cadenas.
La toxina botulínica mellada es mucho más activa
que la forma no mellada. La cantidad y la ubicación precisa del
mellado varía con los serotipos de las bacterias que producen la
toxina. Las diferencias en la activación de neurotoxinas
monocatenarias y, por consiguiente, en la producción de toxina
mellada, son debidas a las variaciones en el tipo y en las
cantidades de actividad proteolítica producidas por una determinada
cepa. Por ejemplo, más del 99% de la neurotoxina monocatenaria de
Clostridium botulinum de tipo A es activado por la cepa de
Clostridium botulinum A de Hall, mientras que las cepas de
tipo B y E producen toxinas con menores cantidades de activación
(del 0 al 75% en función del tiempo de fermentación). De este modo,
la elevada toxicidad de la toxina botulínica madura desempeña una
parte muy importante en la fabricación comercial de toxinas
botulínicas como agentes terapéuticos.
El grado de activación de las toxinas
botulínicas diseñadas genéticamente es, por lo tanto, una
consideración importante para la fabricación de estos materiales.
Sería una ventaja muy importante si se pudieran expresar toxinas
botulínicas, recombinantemente, con un alto rendimiento en bacterias
de crecimiento rápido (tales como células de E. coli
heterológas) como cadenas simples relativamente no tóxicas (o
cadenas simples que tengan una actividad tóxica reducida) que sean
seguras, fáciles de aislar y de una conversión simple en la forma
completamente activa.
Con la seguridad como principal preocupación, el
trabajo anterior se ha centrado en la expresión en E. coli y
en la purificación de cadenas P y L individuales de toxinas tetánica
y botulínica; estas cadenas aisladas son, por sí mismas, no tóxicas;
véase Li et al., Biochemistry
33:7014-7020 (1994); Zhou et al.,
Biochemistry 34: 15175-15181 (1995),
incorporados en la presente memoria por referencia. Tras la
producción separada de estas cadenas peptídicas y en condiciones
estrictamente controladas, las cadenas P y L pueden ser combinadas
mediante un enlace disulfuro oxidativo para formar las cadenas
dobles neuroparalíticas.
Los siguientes ejemplos no restrictivos
proporcionan a los expertos en la técnica procedimientos específicos
preferidos para tratar el dolor no relacionado con espasmos dentro
del alcance de la presente invención, y no pretenden limitar el
alcance de la invención. En los siguientes ejemplos, se pueden
llevar a cabo diversos modos de administración no sistémica de una
toxina botulínica. Por ejemplo, mediante inyección en bolo
intramuscular, mediante múltiples inyecciones subcutáneas en zonas
dérmicas y en la región del dolor o mediante la implantación de un
implante de liberación controlada.
(Referencia)
Se llevaron a cabo dos experimentos. Se usaron
ratas Sprague-Dawley (de aproximadamente 300 a
aproximadamente 350 gramos) en ambos experimentos. La toxina
botulínica usada en ambos experimentos era BOTOX® (complejo de
neurotoxina purificada de toxina botulínica de tipo A). En el primer
experimento, había 4 grupos de tratamiento (dosis): ratas control
(inyectadas con solución salina) (n = 4), ratas de 7U de BOTOX®/kg
(n = 8), ratas de 15 U de BOTOX®/kg (n = 5) y ratas de 30 U de
BOTOX®/kg (n = 4). Para las ratas control, se inyectaron
subcutáneamente 25 microlitros de solución salina al 0,9% en la
superficie plantar de la pata trasera del animal. La zona y la vía
de administración del BOTOX® fueron las mismas que para el grupo
control con inyección de solución salina.
Cinco días después de la inyección bien de
solución salina o de BOTOX®, se inyectaron 50 microlitros de
formalina al 5% en la zona de cada una de las ratas de los cuatro
grupos en los que se había inyectado previamente bien solución
salina o BOTOX®. Entonces se registró el elevamiento/lamido de las
extremidades por parte de los animales del estudio en intervalos de
5 minutos durante una hora.
El segundo juego de experimentos supuso el mismo
protocolo que el primer experimento. En el segundo experimento,
había tres grupos de tratamiento (dosis): ratas control (inyectadas
con solución salina) (n = 3), ratas de 3,5 U/kg (n = 7) y ratas de 7
U / kg (n = 8); y la prueba de la formalina fue realizada en el
decimosegundo día de haber realizado la inyección original de
BOTOX® o solución salina.
Los resultados de estos dos experimentos se
muestran en las figuras 1 y 2, respectivamente. Los primeros 5 a 10
minutos pueden ser referidos como la fase 1, que es seguida por la
fase 2. Como se muestra en las figuras 1 y 2, tanto a los 5 como a
los 12 días de realizar la inyección, se produjo un significativo
alivio del dolor en función de la dosis en los animales tratados
con BOTOX®.
\vskip1.000000\baselineskip
(Referencia)
Una mujer de 46 años presenta un dolor
localizado en la región deltoidea debido a una afección artrítica.
El músculo no sufre un espasmo ni presenta una afección hipertónica.
La paciente es tratada mediante una inyección en bolo de entre
aproximadamente 50 unidades y 200 unidades de toxina botulínica
intramuscular de tipo A. A los 1-7 días de la
administración de la neurotoxina el dolor de la paciente es aliviado
sustancialmente. La duración del alivio significativo del dolor es
de aproximadamente 2 a aproximadamente 6 meses. El dolor de hombro,
de brazo y de mano debido a la osteoporosis, la fijación de
articulaciones, insuficiencia coronaria, osteoartritis cervical,
enfermedad de hombro localizada, o debido a un período de descanso
prolongado en cama pueden ser tratados de manera similar.
\vskip1.000000\baselineskip
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La neuralgia posterapéutica es uno de los
problemas de dolor crónico de más difícil cura. Los pacientes que
padecen este proceso tan terriblemente doloroso suelen ser de edad
avanzada, tienen una enfermedad debilitante y no son adecuados para
los principales procedimientos intervencionistas. El diagnóstico se
realiza fácilmente en base al aspecto de las lesiones de herpes
cicatrizadas y al historial del paciente. El dolor es intenso y
angustiante. La neuralgia posterapéutica puede producirse en
cualquier parte, pero lo más habitual es que sea en el tórax.
Un hombre de 76 años presenta un dolor de tipo
posterapéutico. El dolor se localiza en la región abdominal. El
paciente es tratado por una inyección en bolo de entre
aproximadamente 50 unidades y 200 unidades de toxina botulínica de
tipo A subcutáneamente en la región abdominal. A los
1-7 días de la administración de la neurotoxina, el
dolor del paciente es sustancialmente aliviado. La duración del
alivio significativo del dolor es de aproximadamente 2 a
aproximadamente 6 meses.
\vskip1.000000\baselineskip
(Referencia)
Estos tumores, lo más habitual, carcinomas de
células escamosas, están habitualmente en la fosa de Rosenmuller y
pueden invadir la base del cráneo. El dolor de cara es común. Es
constante y sordo por naturaleza.
Un hombre de 35 años presenta un dolor del tipo
de tumor nasofaringeal. Se informa que el dolor es en la mejilla
izquierda inferior. El paciente es tratado por una inyección en bolo
de entre aproximadamente 10 unidades y aproximadamente 35 unidades
de toxina botulínica de tipo A intramuscularmente en la mejilla. A
los 1-7 días de la administración de la
neurotoxina, el dolor del paciente es subcutáneamente aliviado. La
duración del alivio significativo del dolor es de aproximadamente 2
a aproximadamente 6 meses.
\vskip1.000000\baselineskip
(Referencia)
Un paciente, de 45 años, presenta un dolor
inflamatorio crónico en la región pectoral. El paciente es tratado
por una inyección en bolo de entre aproximadamente 50 unidades y 200
unidades de toxina botulínica de tipo A intramuscular. A los
1-7 días de la administración de la neurotoxina, el
dolor del paciente es sustancialmente aliviado. La duración del
alivio significativo del dolor es de aproximadamente 2 a
aproximadamente 6 meses.
\vskip1.000000\baselineskip
(Referencia)
Un paciente, de 51 años, padece un dolor
posterior a quemaduras graves y de consideración de primer o segundo
grado por el brazo. El paciente es tratado por una inyección en
bolo de entre aproximadamente 30 unidades y aproximadamente 200
unidades de toxina botulínica de tipo A, subcutáneamente en el
brazo. A los 1-7 días de la administración de la
neurotoxina, el dolor del paciente es sustancialmente aliviado. La
duración del alivio significativo del dolor es de aproximadamente 2
a aproximadamente 6 meses.
\vskip1.000000\baselineskip
(Referencia)
Un paciente, de 63 años, que padece un dolor de
articulaciones como resultado de una artritis. El paciente es
tratado por una inyección en bolo de entre aproximadamente 30
unidades y 150 unidades de toxina botulínica de tipo A
intramuscular en la región de la articulación dolorosa. A los
1-7 días de la administración de la neurotoxina, el
dolor del paciente es sustancialmente aliviado. La duración del
alivio significativo del dolor es de aproximadamente 2 a
aproximadamente 6 meses.
\global\parskip1.000000\baselineskip
(Referencia)
Un paciente, de 39 años, de 1 hora a diez días
antes de la operación, recibe local y periféricamente una inyección
en bolo o una inyección subcutánea con de aproximadamente 20
unidades a aproximadamente 300 unidades de una toxina botulínica,
tal como toxina botulínica de tipo A, en o en los alrededores de la
zona de una incisión prospectiva en la dermis del paciente. La
inyección de toxina botulínica puede ser subcutánea o intramuscular.
La cirugía no es llevada a cabo para tratar ni aliviar un trastorno
muscular, tal como un músculo hiperactivo o hipertónico. La
duración del alivio significativo del dolor postoperatorio es de
aproximadamente 2 a aproximadamente 6 meses.
\vskip1.000000\baselineskip
(Referencia)
Un paciente varón de 46 años presenta un dolor
abdominal crónico de origen visceral pero de etiología desconocida.
Se plantea como hipótesis un tumor o una constricción de conductos.
Se administra subcutáneamente o intraorgánicamente (en la zona en
la que se percibe el dolor) toxina botulínica subcutánea o
intraorgánica, tal como de aproximadamente 20 unidades a
aproximadamente 300 unidades de toxina botulínica de tipo A. Entre
los uno y siete días, el dolor es aliviado subcutáneamente. La
duración del alivio significativo del dolor es de aproximadamente 2
a aproximadamente 6 meses.
Aunque la presente invención ha sido descrita en
detalle con respecto a ciertos procedimientos preferidos, son
posibles otras realizaciones, versiones y modificaciones dentro del
alcance de la presente invención. Por ejemplo, se puede usar
eficazmente una amplia variedad de toxinas botulínicas en la
presente invención. Adicionalmente, la presente invención permite
procedimientos de administración periférica para aliviar el dolor
no relacionado con un trastorno muscular, siendo dos o más toxinas
botulínicas administradas simultáneamente o consecutivamente. Por
ejemplo, la toxina botulínica de tipo A puede ser administrada hasta
que se desarrolle una pérdida de la respuesta clínica o de
anticuerpos neutralizantes, seguida por la administración de toxina
botulínica de tipo E. Alternativamente, se puede administrar
localmente una combinación de cualquier dos o más serotipos
A-G de toxina botulínica para controlar la aparición
y la duración del resultado terapéutico deseado. Además, se pueden
administrar compuestos de toxina no botulínica antes de,
simultáneamente con o posteriormente a la administración de la
neurotoxina para que un efecto complementario probado, tal como una
aparición mejorada o más rápida de la desnervación anterior a la
toxina botulínica comience a ejercer su efecto terapéutico.
Claims (6)
1. Una toxina botulínica para su uso en un
procedimiento para aliviar el dolor neurálgico en un paciente
humano, en el que la toxina botulínica se administra
periféricamente y en el que el dolor neurálgico no está asociado a
un dolor de cabeza.
2. La toxina botulínica de la reivindicación 1,
que se selecciona del grupo constituido por los tipos A, B,
C_{1}, D, E, F y G de toxina botulínica.
3. La toxina botulínica de la reivindicación 1,
que es toxina botulínica de tipo A.
4. Una toxina botulínica para su uso en un
procedimiento para tratar el dolor causado por neuralgia, en el que
la toxina botulínica se administra periféricamente a una zona
afectada de un paciente.
5. La toxina botulínica de la reivindicación 4,
en la que el dolor está causado por neuralgia trigeminal.
6. La toxina botulínica de la reivindicación 4,
que se selecciona del grupo que está consituido por inmunotipos
A-G.
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