ES2327279T3 - Procedimiento de inactivacion viral mediante calentamiento en seco. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento de inactivación viral por calentamiento en seco de un virus presente o potencialmente presente en un producto biológico secado, caracterizado por las etapas siguientes: a. determinar la temperatura de transición vítrea Tg del producto biológico secado que se tratará posteriormente, b. calentar el producto biológico secado para tratamiento de la etapa a) a una temperatura de calentamiento en seco T superior o igual a la temperatura de transición vítrea Tg determinada en la etapa a.
Description
Procedimiento de inactivación viral mediante
calentamiento en seco.
Cualquier materia biológica sólida presenta un
riesgo de contaminación viral y ésta, o sus productos derivados, o
productos obtenidos de procedimientos en los que intervendría, deben
someterse a procedimientos de inactivación viral con vistas a ser
usados en terapia o profilaxis.
En el campo terapéutico o profiláctico se usan
principios activos obtenidos de fuentes biológicas o principios
activos susceptibles de estar contaminados por una fuente biológica
en el curso de su procedimiento de fabricación.
Estos principios activos pueden ser proteínas,
péptidos, polipéptidos, anticuerpos, en su caso sustituidos por
grupos lipídicos o glucídicos, ácidos nucleicos, ADN, ARN,
polisacáridos, bacterias, partículas virales y otros.
La fuente biológica de la que se obtienen o
susceptible de contaminar su procedimiento de obtención puede ser
cualquier tejido humano o animal, sangre, plasma, huesos, cualquier
tejido vegetal, cualquier microorganismo, un medio de cultivo
celular, de cultivo de virus, bacterias, levaduras, mohos,
hongos.
En consecuencia, es corriente incluir en las
etapas de extracción de principios activos producidos a partir de
dichas fuentes biológicas, etapas de reducción o inactivación
viral.
Se entiende por producto biológico en el sentido
de la presente invención un producto que comprende un principio
activo producido a partir de una fuente biológica y de otros
compuestos o excipientes que provienen del procedimiento de
obtención de dicho principio activo.
De la técnica anterior se conocen procedimientos
de inactivación viral por tratamiento con productos químicos y/o
calor. La gran mayoría de éstos proviene del campo de la transfusión
sanguínea en el que la eficacia de una inactivación viral es
crucial, ya que es preciso intentar superar la posible contaminación
resultante de productos obtenidos de un donante.
El calentamiento se ha preconizado desde el
inicio del reconocimiento del origen viral del VIH para inactivar a
éste, en particular en la sangre, el plasma, los productos
biológicos obtenidos de la sangre o del plasma. El calentamiento en
seco, es decir, el calentamiento a una temperatura T durante un
tiempo t de un producto seco se ha preconizado, por ejemplo, para
los concentrados de factor de la coagulación liofilizados o
criodesecados que no se han calentado en forma líquida. Por
ejemplo, el factor VIII de la coagulación sanguínea, extraído del
plasma humano, se ha calentado a 60ºC durante 72 a 96 h en estado
liofilizado para asegurar este principio activo biológico destinado
a tratar a los hemofílicos. Sin embargo, la inconstancia de las
reducciones de valoración viral ha hecho abandonar este
procedimiento, ya que se han registrado varios casos de
contaminación por VIH en los hemofílicos a pesar de este
calentamien-
to.
to.
Así, se ha propuesto someter estos productos a
condiciones de calentamiento denominadas "severas", es decir,
una temperatura de 80ºC durante 72 h en estado seco.
Este procedimiento de inactivación viral ha sido
validado entonces para el VIH (virus con envoltura) a continuación
de resultados clínicos obtenidos para un factor VIII tratado en
estas condiciones (L. Winkelman y col., "Severe Heat Treatment of
Lyophilised Coagulation Factors", Curr Stud Hematol Blood
Transfus, 1989, nº 56, pág. 55-69).
El tratamiento de las proteínas purificadas con
una mezcla de disolvente y de detergente se usa asimismo de forma
amplia para prevenir la transmisión de virus con envoltura por
proteínas obtenidas de fuentes biológicas (Piet y col.,
Transfusion, 30:592-98, 1990). Este tratamiento es
eficaz contra los virus que presentan una envoltura lipídica, mucho
menos contra los que no presentan una estructura semejante.
Recientemente, se ha descrito la transmisión de al menos dos virus
sin envoltura por el uso de un producto biológico tratado por
disolvente/detergente. El virus de la hepatitis A, virus de ARN sin
envoltura, se ha transmitido a pacientes que usan un Factor VIII
que había sido tratado por disolvente/detergente (Purcell y col.,
Vox Sang, 67:2-7, 1994). El Factor VIII ha sido
relacionado igualmente en la transmisión de un parvovirus sin
envoltura, B19 (Lefrere y col., Lancet, 343:211-12,
1994).
El tratamiento de proteínas purificadas por
calentamiento se ha preconizado para extender el espectro de
inactivación viral a los virus sin envolturas. Sin embargo, la
inactivación por calentamiento de virus sin envolturas es en
general más difícil que la de virus con envoltura y requiere a
menudo un tratamiento más largo y/o de temperaturas más elevadas
para asegurar una inactivación satisfactoria. Se ha transmitido B19
a pacientes mediante un Factor VIII que había sido calentado en
seco a 100ºC durante 30 min (Santagostino y col., Lancet 343:798,
1994). Así, claramente es importante determinar cómo mejorar los
procedimientos de inactivación viral para mantener o mejorar la
seguridad de los productos biológicos.
Numerosos autores han buscado observar los
grandes parámetros que influyen en la inactivación viral por
calentamiento en seco. Su objetivo es determinar un parámetro
físico-químico que permita predecir si un
tratamiento dado está adaptado a la materia sólida para tratar o
no, es decir, si permite una inactivación viral satisfactoria
conservando una estabilidad satisfactoria del producto. Además,
sería extremadamente interesante que este parámetro fuera modulable
y que en función de esta modulación se pudiera favorecer la
inactivación viral o la estabilidad del producto.
Se define el factor de reducción viral de un
procedimiento de inactivación viral como el factor de reducción de
la valoración viral, es decir, el log_{10} de la relación entre la
valoración viral antes de la etapa de inactivación y la valoración
viral después de la etapa de inactivación.
Se define la tasa de humedad como la cantidad de
agua en peso para 100 g de producto. Por este motivo se expresa en
porcentaje en peso. El procedimiento clásico de medida consiste en
determinar la pérdida en peso del producto después de calentamiento
a una temperatura superior a 100ºC hasta que el peso del producto
sea constante.
Willkommen y col. (Paul Ehrlich Institute) han
demostrado que para los liofilizados de baja tasa de humedad
(< 0,8%), los factores de reducción del virus de la hepatisis A (VHA) obtenidos por calentamiento a 80ºC durante
72 h van de 0 a 0,4 log_{10} mientras que para los liofilizados de alta tasa de humedad (> 0,8%), los factores de reducción del virus de la hepatitis A obtenidos en las mismas condiciones son superiores o iguales a 4,3 log_{10}.
(< 0,8%), los factores de reducción del virus de la hepatisis A (VHA) obtenidos por calentamiento a 80ºC durante
72 h van de 0 a 0,4 log_{10} mientras que para los liofilizados de alta tasa de humedad (> 0,8%), los factores de reducción del virus de la hepatitis A obtenidos en las mismas condiciones son superiores o iguales a 4,3 log_{10}.
Bunch y col. (Alpha Therapeutic Corporation) han
demostrado que dos tasas de humedad diferentes (0,4 y 1,4%) de un
factor VIII recombinante no tenían ninguna influencia en el factor
de reducción del virus de la hepatitis A (\geq 6,9 log_{10})
por calentamiento a 80ºC durante 72 h.
Roberts PL y col. (Biologicals 2000 Sep;
28(3): 185-8., "Comparison of the
inactivación of canine and bovine parvovirus by
freeze-drying and dry-heat treatment
in two high purity factor VIII concentrates") han demostrado la
influencia de la formulación del producto biológico y de la
resistencia del virus por inactivación viral de 2 parvovirus bovino
y canino por calentamiento a 80ºC durante 72 h de un concentrado de
Factor VIII en 2 formulaciones liofilizadas.
Hart HF y col. (Vox Sang. 1994; 67
(4):345-50 "Effect of terminal (dry) heat
treatment on non-enveloped viruses in coagulation
factor concentrates") han obtenido el mismo factor de reducción
del virus de la hepatitis A en liofilizados de Factor VIII por
calentamiento a 80ºC durante 24 h o 90ºC durante 2 h.
Tomokiyo y col. (Vox Sang. 2003 Jan;
84(1):54-64. "Large-scale
production and properties of human plasma-derived
activated Factor VII concentrate") han demostrado, por
inactivación de diferentes virus: CMV (Citomegalovirus), VIH (Virus
de Inmunodeficiencia Adquirida Humana), BVDV (Virus de la Diarrea
Viral Bovina), Poliovirus, PPV (Parvovirus Porcino) en liofilizados
de Factor VIIa, que la inactivación viral en liofilizados es posible
a 65ºC. Un calentamiento a 65ºC durante 96 h en productos cuya tasa
de humedad es < 1,7% muestra factores de reducción viral > 4
log_{10} en el conjunto de los virus salvo el PPV.
La solicitud de patente EP 0 844 005 divulga que
la humedad residual del producto biológico desecado para
tratamiento es el elemento crítico en la eficacia de la inactivación
viral por un procedimiento de calentamiento en seco a 80ºC, durante
72-77 h. Los virus probados son VHA, parvovirus
porcino y virus de seudorrabia. Los autores de la invención han
demostrado que la humedad residual debe ser superior o igual al 0,8%
para alcanzar un factor de reducción viral \geq 4 log_{10} con
este procedimiento. Para una humedad residual \leq 0,8%, el
factor de reducción viral es de 0,12 log_{10} en promedio.
\vskip1.000000\baselineskip
Parece, a la vista de estos resultados muy
dispersos, que no se ha definido ningún parámetro cuya medida
permita determinar de manera segura las variables operativas
características de un procedimiento de inactivación viral por
calentamiento en seco que se usará en función del producto biológico
para tratamiento.
Sin embargo, parece que existe un cierto
consenso entre los autores en el hecho de que la tasa de humedad
del producto para tratamiento desempeña un papel muy importante sin
que, sin embargo, éstos estén de acuerdo en una tasa de humedad
residual como valor umbral para obtener una inactivación viral
satisfactoria. En efecto, a veces basta con que este valor
descienda unas décimas para que la inactivación sea incompleta.
Sin embargo, al contrario de lo que podrían
hacer pensar algunos autores, el Solicitante ha demostrado que es
posible una inactivación viral en liofilizados de humedad residual
baja. Un fibrinógeno humano criodesecado con humedad residual igual
al 0,1% se ha calentado así en seco a 77ºC durante 72 h. En la tabla
1 se presentan los factores de reducción de los virus de la
hepatitis A (VHA), del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH),
del virus de la diarrea viral bovina (BVDV) y del parvovirus porcino
(PPV).
\vskip1.000000\baselineskip
La dispersión del conjunto de estas
observaciones sólo permite, así, extraer la conclusión siguiente: la
humedad residual del producto para tratamiento no es, por tanto, el
factor determinante de los resultados de la inactivación viral por
calentamiento en seco sino un factor importante del que dependía el
factor determinante.
El problema es, por tanto, determinar el
parámetro físico-químico multifactorial mensurable
que da un valor umbral, a una y otra parte del cual la inactivación
viral será satisfactoria o insatisfactoria.
\vskip1.000000\baselineskip
El Solicitante ha identificado, de forma
sorprendente, que este parámetro físico-químico
mensurable es la temperatura de transición vítrea del producto
biológico para tratamiento.
La transición vítrea es una transición de
segundo orden, es decir, una transición térmica que implica un
cambio de capacidad calorífica, pero no de calor latente. Es
característica de los líquidos sobrefundidos que se enfrían a una
temperatura suficientemente baja con suficiente rapidez sin
cristalizar y que se convierten en vidrio y polímeros amorfos o en
la parte amorfa de los polímeros cristalinos que pasan de un estado
duro y frágil a un estado blando y flexible.
La temperatura de transición vítrea o Tg es la
temperatura a la que tiene lugar la transición vítrea. Cuando un
polímero se enfría por debajo de esta temperatura se vuelve duro y
frágil, como el vidrio, y se dice que está en estado vítreo.
Cauchos elastoméricos como poliisopreno y
poliisobutileno se usan por encima de su temperatura de transición
vítrea, es decir, en estado gomoso y son blandos y flexibles.
La temperatura de transición vítrea es conocida
por el experto en la materia como dependiente de ciertos parámetros.
En el caso de los polímeros, depende de la masa molecular, de la
estructura química de la cadena, de la cantidad de
plastificantes.
Los plastificantes son pequeñas moléculas, como
las sales, que penetran entre las moléculas de polímeros y les
permiten deslizarse mejor entre sí con lo que facilitan su
movimiento. La adición de plastificante permite así reducir la
temperatura de transición vítrea.
Al contrario, las moléculas de peso molecular
elevado bloquean los movimientos de las moléculas de polímero entre
sí y aumentan la temperatura de transición vítrea.
Además, el Solicitante ha demostrado que la
temperatura de transición vítrea está correlacionada directamente
con la humedad residual de un liofilizado de Factor Von Willebrand
(FvW) dado.
La correlación entre la temperatura de
transición vítrea del liofilizado y su humedad residual se presenta
en forma de gráfico en la fig. 1.
La temperatura de transición vítrea de un
producto biológico depende así de la naturaleza del principio
activo, de la naturaleza de los excipientes: plastificantes o no,
forma cristalina o forma amorfa, de la masa molecular de los
excipientes y de la humedad residual del producto biológico.
La invención se refiere a un procedimiento de
inactivación viral por calentamiento en seco de un virus presente o
potencialmente presente en un producto biológico secado,
caracterizado por las etapas siguientes:
- a)
- determinar la temperatura de transición vítrea Tg del producto biológico secado que se tratará posteriormente,
- b)
- calentar el producto biológico secado para tratamiento de la etapa a) a una temperatura de calentamiento en seco T superior o igual a la temperatura de transición vítrea Tg determinada en la etapa a).
Un producto secado es un producto que ha
experimentado un procedimiento de desecación conocido por el experto
en la materia, como la liofilización, el secado al vacío, la
pervaporación, la atomización.
En particular, un producto secado es un producto
criodesecado, es decir, un producto congelado en primer lugar cuya
parte de agua se sublima a continuación al vacío.
En efecto, el Solicitante ha observado que el
factor de reducción viral y la cinética de inactivación viral se
favorecen cuando la temperatura de calentamiento es superior o igual
a Tg.
El valor de la temperatura de transición vítrea
permite así predecir si un procedimiento de inactivación será
satisfactorio y modificarlo en este sentido.
La medida de la temperatura de transición vítrea
de un producto biológico secado consiste en someter una muestra de
este producto a un aumento progresivo y programado de la temperatura
entre -50ºC y +100ºC y en observar sus cambios de estado, entre
ellos la transición vítrea.
Se obtiene así el termograma del producto
biológico secado y sobre todo su temperatura de transición
vítrea.
Después de haber medido la temperatura de
transición vítrea, según sus conocimientos generales en el campo de
la inactivación viral por calentamiento, el experto en la materia
sabe juzgar si para satisfacer la exigencia T \geq Tg:
- -
- Tg es satisfactoria según el virus concernido para elegir una temperatura T \geq Tg
- -
- o bien si Tg debe ajustarse para elegir T con el fin de que la inactivación viral y la estabilidad del producto buscadas sean satisfactorias.
Por ejemplo, si el experto en la materia sabe
que Tg es demasiado baja para que el virus en cuestión pueda
inactivarse a T de manera que Tg \leq T y que el producto
permanezca estable, entonces aumentará Tg para que T se sitúe en
una gama de temperatura que él sabe que puede inactivar este virus y
que la separación entre T y Tg no sea demasiado importante para que
el producto se degrade. Por el contrario, si el experto en la
materia sabe que Tg es demasiado elevada para que T \geq Tg y que
el producto permanezca estable entonces disminuirá Tg antes de
elegir T.
El procedimiento de inactivación viral por
calentamiento en seco en un producto biológico según la invención
es apropiado en particular en el caso de un virus sin envoltura.
Este procedimiento puede permitir tratar una
composición que contiene una o varias proteínas extraídas del
plasma sanguíneo en tanto que producto biológico secado.
En una forma de realización en particular, la
temperatura de calentamiento en seco T se elige para permitir la
inactivación de un virus sin envoltura.
De manera preferida, la temperatura de
transición vítrea se incrementa por adición de excipientes de masa
molecular elevada en el producto biológico o por disminución de la
humedad del producto biológico o bien se reduce por adición de
sales o de excipientes de: baja masa molecular en el producto
biológico o por aumento de la humedad del producto biológico.
En particular, la temperatura de transición
vítrea se mide por medio de un termoanalizador diferencial de
barrido. Los cambios de estado se definen por un campo de capacidad
calorífica medida con respecto a un producto inerte que no
experimenta transformación en el intervalo de temperatura
considerada.
Se preferirá que la temperatura de calentamiento
T del procedimiento según la invención esté comprendida entre Tg y
Tg + 20ºC para conservar una estabilidad del producto satisfactoria.
En este intervalo, se podría bien elegir T de manera que incremente
la separación entre Tg y T en el límite de Tg + 20ºC, para favorecer
el factor de reducción viral y la cinética de inactivación viral, o
bien elegir T de manera que disminuya la separación entre Tg y T,
para favorecer la estabilidad del producto.
\newpage
De manera preferida particularmente, la
temperatura de calentamiento en seco T se elige para permitir la
obtención de un factor de reducción viral \geq 3 log_{10},
preferentemente \geq 4 log_{10}.
En una forma de realización particular, en una
etapa final, se mide la eficacia de la inactivación viral en el
producto biológico secado tratado y, si dicha eficacia se juzga
insuficiente, la inactivación viral de producto biológico secado se
prosigue después de incrementar la separación entre la temperatura
de calentamiento T y la temperatura de transición vítrea Tg. En
otra forma de realización particular, en una etapa final, se evalúa
la estabilidad del producto biológico secado tratado y, si dicha
estabilidad se juzga insuficiente, la inactivación viral del
producto biológico secado se prosigue después de disminuir la
separación entre la temperatura de calentamiento T y la temperatura
de transición vítrea Tg.
Fig. 1: correlación Tg/HR, Tg = temperatura de
transición vítrea y HR = humedad residual
Fig. 2: factor de reducción de PR772 por
calentamiento en seco a 62ºC en función de Tg
Fig. 3: factor de reducción de PR772 por
calentamiento en seco a 80ºC en función de Tg
Fig. 4: factor de reducción de PPV por
calentamiento en seco a 80ºC en función de Tg
Fig. 5: factor de reducción de PPV, HAV, BVDV,
PR772, Phi174 a T = Tg = 80ºC
Fig. 6: factor de reducción de PPV, HAV, BVDV,
PR772, Phi174 a T = Tg = 62ºC
Las características físicas de los liofilizados
se modifican con el fin de hacer variar la temperatura de transición
vítrea (Tg).
La temperatura de transición vítrea se determina
mediante un termoanalizador diferencial de barrido. La temperatura
del termoanalizador diferencial de barrido se calibra con ayuda de
indio (Tm 156,6ºC) y de n-octadecano (Tm 28,2ºC).
Las muestras experimentan temperaturas de -50ºC a 130ºC a la
velocidad de 20ºC/min. Se usa nitrógeno líquido para llevar los
experimentos a una temperatura inferior a la temperatura ambiente.
La temperatura de transición vítrea se toma en el punto medio del
cambio endotérmico en el calor específico aparente. Se realizan dos
medidas y su media da la Tg.
El calentamiento se efectúa a una temperatura
inferior a Tg, bien en estado sólido vítreo, o a una temperatura
superior a Tg de aproximadamente 20ºC, bien en estado viscoelástico
(gomoso).
Todos los liofilizados presentan un contenido en
agua inferior al 1%.
El contenido en agua se determina por el
procedimiento de Karl-Fischer, bien conocido por el
experto en la materia, basado en la reacción entre agua y yodo.
El producto A presenta una Tg de 62ºC.
El producto B presenta la misma formulación que
el producto A a la que se ha añadido NaCl. Esto ha permitido
reducir la Tg a aproximadamente 40ºC (la humedad residual HR
permanece sin cambios).
C es un concentrado de FvW criodesecado y D es
un fibrinógeno humano criodesecado.
Los productos C y D presentan Tg respectivamente
de 80ºC y 90ºC.
Se mide el factor de reducción del bacteriófago
PR772 a 12, 24 y 72 h para un calentamiento a 62 y 80ºC.
La valoración viral se calcula según la fórmula
de Spearman-Kärber tal como se describe en la
Federal Gazette nº 84, 4 de mayo de 1994 y en Schmidt, N.J. y
Emmons, R.W. (1989) en Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial
and Chlamydial Infection, 6ª edición.
El factor de reducción es el resultado de la
relación entre la valoración viral/ml antes del tratamiento por
calentamiento en seco y la valoración viral/ml después del
tratamiento por calentamiento en seco.
Los resultados se representan mediante los
gráficos de las fig. 2 y 3.
Se puede observar que:
- para un calentamiento a T = 80ºC,
- 1.
- del producto A cuya Tg = 62ºC (T-Tg = 20ºC), la cinética de inactivación es muy rápida y el factor de reducción alcanza 4 log_{10} en menos de 24 horas
- 2.
- del producto C cuya Tg = T, el factor de reducción alcanza 4 log_{10} al cabo de 72 horas
- 3.
- del producto D cuya Tg = 90ºC, el factor de reducción es inferior a 4 log_{10} al cabo de 72 horas
- para un calentamiento a 62ºC,
- 1.
- del producto A cuya Tg = T, el factor de reducción alcanza 4 log_{10} al cabo de 72 horas
- 2.
- del producto B cuya Tg = 40ºC (T-Tg = 20ºC), la cinética de inactivación es muy rápida y el factor de reducción alcanza 4 log_{10} en menos de 24 horas
Se mide el factor de reducción del PPV a 12, 24
y 72 h para un calentamiento a 80ºC en liofilizados de Tg = 80 ó
90ºC.
Los resultados están representados por el
gráfico de la fig. 4.
Se puede observar que para un calentamiento a T
= 80ºC,
- a Tg = T, el factor de reducción es próximo a
4 log_{10},
- a T < Tg, el factor de reducción es bajo,
del orden de 2 log_{10}.
Se mide el factor de reducción de PPV, HAV,
BVDV, PR772 y del bacteriófago Phi174 a 12, 24 y 72 h para un
calentamiento a T = Tg = 80ºC (en un liofilizado de Tg = 80ºC) o a T
= Tg = 62ºC (en un liofilizado de Tg = 62ºC). Los resultados están
representados por los gráficos de las fig. 5 y 6.
Se puede observar que, para virus poco
resistentes: HAV, BVDV, Phi174, un calentamiento a T = Tg es
suficiente para alcanzar un factor de reducción de 4 log_{10} a
partir de 24 horas.
Por el contrario, para virus más resistentes:
PPV y PR772, el tiempo de calentamiento debe prolongarse a 72 horas
para alcanzar un factor de reducción próximo a de 4 log_{10}.
En consecuencia, para estos virus más
resistentes, al ser el objetivo inactivarlos, se puede favorecer el
factor de reducción viral y la velocidad de inactivación viral
aumentando la temperatura de calentamiento T o reduciendo la Tg del
producto con el fin de incrementar la separación entre T y Tg.
Además, se preferirá bien el dominio
T-Tg \geq 20ºC para favorecer más bien la
velocidad de la inactivación viral, o bien el dominio
T-Tg \leq 20ºC para favorecer más bien la
estabilidad del producto.
Se han calentado a 80ºC tres liofilizados de FvW
caracterizados por tres temperaturas de transición vítrea
diferentes durante 72 h. Se han observado entonces diferentes
parámetros: el aspecto del liofilizado, su tiempo de disolución y
el aspecto de la solución así obtenida.
Los resultados se presentan en la Tabla 2.
Se observa que un calentamiento a una
temperatura T \geq Tg y T-Tg \leq 20ºC permite
conservar una estabilidad satisfactoria del producto siempre que la
temperatura escogida permita un cambio de estado del estado vítreo
hacia el estado gomoso.
Se observa igualmente que una separación
demasiado importante entre la temperatura de calentamiento y Tg,
aquí 38ºC, es desfavorable para la estabilidad del producto.
En consecuencia, cuanto más próxima se elige T a
Tg, más se favorece la estabilidad del producto.
Claims (15)
1. Procedimiento de inactivación viral por
calentamiento en seco de un virus presente o potencialmente presente
en un producto biológico secado, caracterizado por las
etapas siguientes:
- a.
- determinar la temperatura de transición vítrea Tg del producto biológico secado que se tratará posteriormente,
- b.
- calentar el producto biológico secado para tratamiento de la etapa a) a una temperatura de calentamiento en seco T superior o igual a la temperatura de transición vítrea Tg determinada en la etapa a.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque la temperatura de transición vítrea Tg
del producto biológico secado se ajusta previamente a la
implementación del calentamiento en seco.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque el producto biológico secado es un
liofilizado.
4. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el producto
biológico secado es una composición que contiene una o varias
proteínas extraídas del plasma sanguíneo.
5. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la temperatura
de calentamiento en seco T se elige para permitir la inactivación
de un virus sin envoltura.
6. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 2 a 5, caracterizado porque la temperatura
de transición vítrea se incrementa mediante adición de excipientes
de masa molecular elevada al producto biológico o por disminución
de la humedad del producto biológico.
7. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 2 a 5, caracterizado porque la temperatura
de transición vítrea se reduce por adición de sales o de
excipientes de baja masa molecular al producto biológico o por
aumento de la humedad del producto biológico.
8. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque Tg se mide
gracias a un termoanalizador diferencial de barrido.
9. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque T está
comprendida entre Tg y
Tg + 20ºC.
Tg + 20ºC.
10. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la temperatura
de calentamiento en seco T se elige para permitir la obtención de
un factor de reducción viral \geq 3 log_{10}.
11. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la temperatura
de calentamiento en seco T se elige para permitir la obtención de
un factor de reducción viral \geq 4 log_{10}.
12. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque se elige T de
manera que se incrementa la separación entre Tg y T en el límite de
Tg + 20ºC para favorecer el factor de reducción viral y la
velocidad de inactivación viral.
13. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque se elige T de
manera que se reduce la separación entre Tg y T para favorecer la
estabilidad del producto.
14. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 9 a 13, caracterizado porque en una etapa
final, se mide la eficacia de la inactivación viral en el producto
biológico secado tratado y, si dicha eficacia se juzga
insuficiente, la inactivación viral del producto biológico secado se
prosigue según una de las reivindicaciones 9 a 11, después de un
incremento de la separación entre dicha temperatura de calentamiento
T y dicha temperatura de transición vítrea Tg.
15. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 9 a 13, caracterizado porque en una etapa
final, se evalúa la estabilidad del producto biológico secado
tratado y, si dicha estabilidad se juzga insuficiente, la
inactivación viral del producto biológico secado se prosigue según
una de las reivindicaciones 9 a 11, después de una disminución de
la separación entre dicha temperatura de calentamiento T y dicha
temperatura de transición vítrea Tg.
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