ES2324394T3 - Metodo para detectar la presencia de un liquido en una mezcla. - Google Patents
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Abstract
Método de detectar la presencia de un líquido en una mezcla, caracterizado porque comprende las siguientes operaciones: - producción (1) de una primera mezcla que no contenga el líquido a detectar; - excitación (2) de la primera mezcla mediante una señal luminosa de longitud de onda lambda; - medición (3) de una señal de fluorescencia S1 emitida por la primera mezcla durante un tiempo Deltat parecido a un tiempo de vida tau1 característico del líquido a detectar, con el fin de producir (4) una magnitud de referencia Ro que sea función de la señal S1 medida; - producción (5, 10) de la mezcla de constituyentes idénticos a los constituyentes que formaron la primera mezcla y de una cantidad del líquido a detectar; - excitación (6) de la mezcla mediante una señal luminosa de longitud de onda lambda; - medición (7) de una señal de fluorescencia S11 emitida por la mezcla durante el tiempo Delta t parecido a la vida útil tau 1 con el fin de producir (8) una magnitud R que sea función de la señal S11 medida; - comparación (9) de la magnitud R con una magnitud k×Ro.
Description
Método de detectar la presencia de un líquido en
una mezcla.
El presente invento se refiere a un método de
detectar la presencia de un líquido en una mezcla.
El invento se describirá más particularmente en
el contexto de detectar la presencia de un líquido, por ejemplo,
suero, introducido en una mezcla como resultado de una operación de
pipeteado.
El pipeteado de un líquido es una operación que
consiste en llenar una pipeta con líquido por succión. Se
encuentran operaciones de pipeteado, por ejemplo, en los
laboratorios para introducir diversos líquidos en celdas de ensayo
denominadas, usualmente, pocillos. La cantidad de líquido
introducido en las celdas de ensayo debe ser, por tanto, suficiente
para que sea posible validar los resultados del ensayo. Un error de
pipeteado puede originar serios problemas. Este es el caso, en
particular, cuando el líquido aspirado por pipeteado es un suero
destinado a la realización de ensayos de cribado de enfermedades
tales como, por ejemplo, ensayos de cribado de cáncer.
La mayoría de los analizadores automáticos no
incluyen un sistema de detección de errores de pipeteado. Los
únicos dispositivos conocidos se basan en mediciones llevadas a cabo
durante el pipeteado. Se puede tratar de mediciones de presión
(medición de la diferencia de presión entre el pipeteado de aire y
el pipeteado de líquido) o mediciones para vigilar una señal de
detección de líquido durante el pipeteado.
La patente US 4 794 085 describe un dispositivo
que utiliza mediciones de presión para detectar errores de
pipeteado de líquidos. Un dispositivo de esta clase exige el uso de
medios específicos de medición de presión que son voluminosos y
difíciles de utilizar. Además, únicamente puede detectarse una
interrupción en el líquido durante el pipeteado. El pipeteado
defectuoso que no sea debido a una interrupción, no es
detectable.
El invento no presenta los inconvenientes antes
mencionados.
Así, el invento se refiere a un método de
detección de la presencia de un líquido en una mezcla, caracterizado
porque comprende las operaciones siguientes:
- producción de una primera mezcla que no
contenga el líquido a detectar;
- excitación de la primera mezcla mediante una
señal luminosa de longitud de onda \lambda;
- medición de una señal de fluorescencia S1
emitida por la primera mezcla durante un tiempo \Deltat parecido
a un tiempo de vida \tau1 característico del líquido a detectar,
con el fin de producir una magnitud de referencia Ro que sea
función de la señal S1 medida;
- producción de la mezcla de constituyentes
idénticos a los constituyentes que formaron la primera mezcla y de
una cantidad del líquido a detectar;
- excitación de la mezcla mediante una señal
luminosa de longitud de onda \lambda;
- medición de una señal de fluorescencia S11
emitida por la mezcla durante el tiempo \Deltat parecido a la
vida útil \tau1 con el fin de producir una magnitud R que es
función de la señal S11 medida;
- comparación de la magnitud R con una magnitud
k\timesRo.
Debe entenderse que la expresión "tiempo
\Deltat parecido a la vida útil \tau1" significa un tiempo
suficientemente parecido a la vida útil \tau1 de modo que en
presencia de líquido en la mezcla, la señal detectada constituya un
indicador inequívoco de que está presente este líquido.
De acuerdo con un primer modo de ejecución
práctica del invento, la mezcla se prepara introduciendo la cantidad
de líquido a detectar en la primera mezcla.
De acuerdo con un segundo modo de ejecución
práctica del invento, la mezcla se prepara mezclando la cantidad de
líquido a detectar en una segunda mezcla sustancialmente idéntica a
la primera mezcla.
La mezcla que contiene el líquido a detectar
puede dispensarse en N pocillos separados, siendo N un entero.
Ventajosamente, las operaciones de producir la primera mezcla,
excitar la primera mezcla, medir una señal de fluorescencia emitida
por la primera mezcla y calcular la magnitud de referencia Ro,
pueden llevarse a cabo solamente para M especímenes, siendo M un
entero mayor o igual que 1 y menor o igual que N, mientras que las
operaciones de excitar la mezcla, medir la señal de fluorescencia
emitida por la mezcla, calcular la magnitud R y comparar R con
k\timesRo se llevan a cabo para cada uno de los N pocillos.
Si una operación de pipeteado de líquido a
detectar interviene en la producción de la mezcla, el método de
acuerdo con el invento permite la detección de los errores de
pipeteado. El invento, por tanto, se refiere también a un método de
detección de un error en el pipeteado de un líquido, caracterizado
porque emplea un método de detección de la presencia del líquido
tal como el método antes mencionado de acuerdo con el invento.
Además, la presencia del líquido puede
establecerse con mucha precisión. No sólo es posible realizar una
medición cualitativa (líquido presente: si o no), sino, también,
una medición cuantitativa. Otra ventaja del invento consiste en que
se es capaz de detectar el líquido en cualquier momento tras
introducir el líquido en la mezcla.
Además, las características y las ventajas del
invento resultarán evidentes a partir de la lectura de la
descripción de las maneras de llevar a la práctica el invento, con
referencia a las figuras adjuntas, en las que:
- la figura 1 muestra una gráfica de proceso de
un primer modo de llevar a la práctica el método de detección de
acuerdo con el invento;
- la figura 2 ilustra una gráfica de proceso de
un segundo modo de llevar a la práctica el método de detección de
acuerdo con el invento;
- la figura 3 muestra una realización de un
dispositivo de medición para llevar a la práctica el método de
detección de acuerdo con el invento.
En todas las figuras, los mismos números de
referencia designan los mismos componentes.
A modo de ejemplo no limitativo, en el resto de
la descripción, el líquido cuya presencia ha de detectarse es
suero. Sin embargo, el invento se refiere, más generalmente, a
cualquier tipo de líquido capaz de ser detectado por la emisión de
fluorescencia resuelta en el tiempo.
La figura 1 muestra una gráfica de proceso de un
primer modo de llevar a la práctica el método de detección de la
presencia de un líquido de acuerdo con el invento.
El método de acuerdo con el primer modo de
puesta en práctica del invento comienza con la operación 1 de
producir una primera mezcla. La primera mezcla no contiene suero
alguno. La primera mezcla comprende al menos un constituyente Ci
capaz de emitir una señal de fluorescencia de longitud \lambdai
debida a la acción de una señal de excitación de longitud de onda
\lambda.
Una operación 2 de excitar la primera mezcla
mediante una señal luminosa de longitud de onda \lambda, sigue a
la operación 1. Debido a la acción de la señal luminosa de longitud
de onda \lambda, una señal de fluorescencia es emitida entonces
por el o los constituyentes Ci de la mezcla.
El análisis del espectro en el tiempo de la
desexcitación provocada por la emisión de una señal de fluorescencia
por una mezcla de constituyentes muestra que la señal emitida como
resultado de una excitación pulsatoria, es la suma de señales
individuales, siendo cada señal individual característica de un
constituyente Ci de la mezcla. La señal de fluorescencia F puede
escribirse, por tanto, como:
F =
\Sigma(Ai\times exp(-t/\tau
i)),
donde Ai y \taui son la amplitud
y el tiempo de vida, respectivamente, de una señal individual
característica del constituyente
Ci.
En el caso de suero, por ejemplo, la señal de
fluorescencia vista a través de un sistema de lectura basado en un
fotomultiplicador utilizado para contar fotones, se caracteriza por
un tiempo de vida \taui del orden de 5 \mus.
Una operación 3 de medición de fluorescencia
sigue a la operación 2 de excitación. Se mide una señal de
fluorescencia S1 dentro de un intervalo de tiempo \Deltat de
duración parecida al tiempo de vida característico de la señal que
ha de detectarse. Si el líquido a detectar es suero, el tiempo
\Deltat es, por ejemplo, el intervalo de tiempo (5 \mus, 20
\mus) que comienza en el instante de excitación de la mezcla. La
señal así medida se utiliza para calcular una magnitud de
referencia Ro en la operación 4 de cálculo.
De acuerdo con una primera variante del método
del invento, la magnitud de referencia Ro es igual a la señal S1
medida. De acuerdo con una segunda variante, se mide una segunda
señal de fluorescencia S2, durante la operación 3, en un intervalo
de tiempo \DeltaT fuera del tiempo \Deltat. El intervalo de
tiempo \DeltaT puede ser, por ejemplo, el intervalo de tiempo
(100 \mus, 3000 \mus) que empieza a contar desde el instante de
excitación de la mezcla. La cantidad de referencia Ro calculada en
la operación 4 es, entonces, igual a la relación de la señal S1 con
la señal S2.
De acuerdo con la segunda variante del método
del invento, podemos escribir, por tanto:
Ro =
S1/S2.
\newpage
La ventaja de establecer una magnitud Ro en
forma de relación de las señales S1 y S2 resultará evidente más
adelante (véase la operación 8).
Una vez que se ha medido la fluorescencia, se
introduce el suero en la primera mezcla en una operación 5. A la
operación 5 le sigue una nueva operación 6 consistente en excitar la
mezcla por medio de una señal de longitud de onda \lambda y una
nueva medición de fluorescencia (operación 7) sigue a la operación
6. Se mide así una señal de fluorescencia S11 en un intervalo de
tiempo \Deltat, como antes se ha mencionado. Se utiliza luego la
señal S11 para calcular, en la operación 8, una magnitud R que es
función de la cantidad de suero presente en la mezcla.
De acuerdo con la primera variante antes
mencionada del método del invento, la magnitud R es igual a la señal
S11 medida. De acuerdo con la segunda variante, en la operación 7
se mide una segunda señal S22. La señal S22 se mide en un intervalo
de tiempo \DeltaT como se ha mencionado en lo que antecede. La
magnitud R calculada en la operación 8 es, entonces, igual a la
relación entre la señal S11 y la señal S22. Por tanto, podemos
escribir:
R =
S11/S22
La señal S11 es proporcional a la cantidad de
suero detectada. El hecho de dividir la señal S11 por la señal S22
permite, ventajosamente, que la medición S11 sea normalizada,
teniendo en cuenta la absorbencia óptica de la mezcla inducida por
el suero. La magnitud R es, entonces, independiente de las
características de absorbencia del suero y representa solamente un
valor relativo de la señal del suero.
Se lleva a cabo entonces una comparación entre
la magnitud R y una magnitud igual a k\timesRo (operación 9). Si
R es mayor o igual que k\timesRo, entonces la cantidad de suero
introducida en la mezcla en la operación 5 se considera suficiente.
De otro modo, la cantidad introducida se considera como insuficiente
y debe llevarse a cabo una nueva operación de introducción de suero
(vuelta a la operación 5). Ventajosamente, el coeficiente k puede
seleccionarse teniendo en cuenta las fluctuaciones estadísticas de R
con el fin de, por ejemplo, evitar cualquier detección
injustificada. Si R y Ro se miden sustancialmente en el mismo
instante de un ciclo de incubación, el número k es un número mayor
que 1. Si R y Ro se miden en instantes sustancialmente diferentes
de un ciclo de incubación, el número k puede ser menor que 1 debido
a las fluctuaciones de la señal durante la incubación.
En ciertas aplicaciones, la mezcla de
constituyentes a ensayar es dispensada en N pocillos separados.
Ventajosamente, las operaciones 2, 3 y 4 pueden llevarse a cabo
sólo en unos pocos o, incluso, en sólo uno, de los N pocillos,
mientras que las operaciones 5, 6, 7, 8 y 9 se refieren a todos los
N pocillos.
La figura 2 ilustra una gráfica de proceso de un
segundo modo de llevar a la práctica el método de detección de
acuerdo con el invento.
El segundo modo de llevar a la práctica el
método del invento comprende, también, las operaciones de producir
(1) una primera mezcla, excitar (2) la primera mezcla, medir (3) una
señal de fluorescencia emitida por la primera mezcla y calcular (4)
la magnitud de referencia Ro como se ha descrito en lo que
antecede.
De acuerdo con el segundo modo de llevar a la
práctica el invento, se produce (en la operación 10) la mezcla que
contiene el líquido a detectar, no introduciendo el líquido a
detectar en la primera mezcla, sino mezclando la cantidad de
líquido a detectar en una segunda mezcla sustancialmente idéntica a
la primera mezcla. Debe entenderse que la expresión "segunda
mezcla sustancialmente idéntica a la primera mezcla" significa
una segunda mezcla que contiene los mismos constituyentes que la
primera mezcla, en cantidades sustancialmente idénticas. La mezcla
que contiene el líquido a detectar puede obtenerse pipeteando los
diversos componentes de que está compuesta.
Una vez producida la mezcla, el método de
acuerdo con el segundo modo de puesta en práctica del invento,
comprende las operaciones sucesivas de excitar la mezcla (operación
6), medir la fluorescencia (operación 7) y calcular la magnitud R
(operación 8). La magnitud R se compara entonces (operación 9) con
la magnitud Ro. Si R es mayor o igual que k\timesRo, entonces la
cantidad de suero presente en la mezcla producida en la operación
10, se considera suficiente. De otro modo, la cantidad de suero se
considera insuficiente y debe producirse una nueva mezcla (vuelta a
la operación 10).
De acuerdo con una variante del segundo modo de
llevar a la práctica el invento, la primera mezcla contiene,
también, un líquido que no presenta características de fluorescencia
a la longitud de onda \lambda. Este líquido, que es inerte desde
el punto de vista de las características de fluorescencia, permite
entonces que la primera mezcla tenga un volumen global
sustancialmente idéntico al volumen global de la mezcla que contiene
el líquido a detectar. Es posible, por tanto, garantizar un ajuste
óptimo del dispositivo de medición.
En general, el invento encuentra aplicación, de
forma particularmente ventajosa, si los constituyentes de la mezcla
distintos del líquido cuya presencia ha de detectarse, deben
medirse, también, mediante fluorescencia resuelta en el tiempo.
El dispositivo utilizado para tomar las
mediciones de fluorescencia proyectadas puede utilizarse, por tanto,
también para tomar mediciones que indiquen si la cantidad de
líquido presente en la mezcla, es suficiente. Ventajosamente, no es
necesario, por tanto, dispositivo dedicado adicional alguno para
detectar el líquido.
Este es el caso, por ejemplo cuando se llevan a
cabo bioensayos tales como, por ejemplo, ensayos inmunológicos
utilizando marcadores fluorescentes. En el caso de ensayos
inmunológicos utilizando fluorescencia resuelta en el tiempo en una
fase homogénea, como se describe en la memoria descriptiva de la
patente europea publicada con el número 0 539 477, la mezcla de
constituyentes comprende un donante conjugado y un aceptor
conjugado. El donante conjugado puede contener una molécula
biológicamente activa marcada por un quelato o criptato de tierras
raras tamponado y el aceptor conjugado puede contener una molécula
biológicamente activa marcada por un compuesto aceptor
fluorescente, tamponado. A modo de ejemplos no limitativos, la
molécula biológicamente activa puede seleccionarse de entre un
anticuerpo, un antígeno, un péptido, una proteína, un receptor, un
ligando, un ácido nucleico, un nucleótido o un medicamento y el
compuesto aceptor fluorescente puede seleccionarse de entre
ficobiliproteínas fluorescentes (aloficocianina, aloficocianina B,
C-ficocianina o R-ficocianina) o
moléculas orgánicas fluorescentes.
Los criptatos de tierras raras utilizados para
estos bioensayos se describen en las memorias descriptivas de
patente europea presentadas a nombre de CIS BIO Internacional y
publicadas con los números EP 0 180 492, Ep 0 321 353 y EP 0 601
113.
El dispositivo descrito en la figura 3 muestra
un dispositivo para medición de fluorescencia para llevar a cabo
bioensayos como los antes mencionados. A modo de ejemplo, el
dispositivo representado en la figura 3 muestra una realización de
un dispositivo para medición de fluorescencia resuelta en el tiempo
para llevar a la práctica el método de acuerdo con el invento.
A modo de ejemplo no limitativo en el resto de
la descripción, el donante conjugado es un conjugado que contiene
un anticuerpo marcado con un criptato de europio tamponado y el
aceptor conjugado es un conjugado que contiene un anticuerpo
marcado con un compuesto aceptor fluorescente. El líquido
introducido en la mezcla es suero.
El dispositivo de la figura 3 comprende una
fuente 11 de láser de nitrógeno que emite luz con una longitud de
onda de 337 nm, una lente de enfoque 12 asociada con un filtro 13 de
paso de banda centrado en torno a los 337 nm, un espejo dicroico
14, un objetivo colector 15, un divisor de haz dicroico 16, un
filtro 17 de paso de banda centrado en torno a 665 nm asociado con
una lente de enfoque 18, un filtro de paso de banda 19 centrado en
torno a 620 nm, asociado con una lente de enfoque 20, un
fotomultiplicador PMTA para detectar fotones con una longitud de
onda de 665 nm, un fotomultiplicador PMTB para detectar fotones de
620 nm de longitud de onda y una celda de ensayo 21 que contiene la
mezcla a estudiar (aceptor conjugado, donante conjugado y
suero).
El espejo dicroico 14 hace posible que la luz
emitida por la fuente de láser 11, tras haber sido enfocada (12) y
filtrada (13) sea dirigida sobre la celda de ensayo (21). Los
constituyentes de la mezcla son excitados entonces por la luz que
reciben. Una señal de fluorescencia de trabajo a la longitud de onda
de 665 nm emitida por el aceptor, es medida por el
fotomultiplicador PMTA. Al mismo tiempo, una señal de fluorescencia
a la longitud de onda de 620 nm, emitida por el criptato de
europio, es medida por el fotomultiplicador PMTB. La señal emitida
por el criptato de europio se utiliza como señal de referencia. El
resultado de la medición adopta la forma de la relación entre la
señal de trabajo emitida por el aceptor y la señal de referencia
emitida por el criptato de europio. La absorción de la energía de
excitación o de la energía de emisión es, por tanto, capaz de
ofrecer una señal más débil sin que se modifique la relación.
Dentro del contexto de la ejecución práctica del
método de acuerdo con el invento utilizando un dispositivo como el
representado en la figura 3, la señal de excitación de longitud de
onda \lambda es una señal con una longitud de onda de 337 nm,
emitida por la fuente de láser 11, las señales S1 y S11, medidas
durante el tiempo \Deltat parecido al tiempo de vida \tau1
característico del suero, son señales cuya longitud de onda es
igual a 620 nm o a 665 nm y las señales S2 y S22, medidas durante el
tiempo \DeltaT fuera de tiempo \Deltat, son señales cuya
longitud de onda es igual a 620 nm o a
665 nm.
665 nm.
Como se ha mencionado en lo que antecede, el
dispositivo para medición de fluorescencia de la figura 3 es de
aplicación a una amplia gama de donantes y aceptores conjugados. La
fuente de láser 11 puede, por tanto, ser una fuente de luz cuya
longitud de onda varíe entre 300 nm y 400 nm, aproximadamente. De
igual modo, la señal de fluorescencia emitida por el donante
conjugado puede tener una longitud de onda \lambda1 que varíe
entre 500 nm y 750 nm, aproximadamente, y la señal de fluorescencia
emitida por el aceptor conjugado puede tener una longitud de onda
\lambda2 que varíe entre 550 nm y 850 nm, aproximadamente.
El método de acuerdo con el invento se refiere
también, por tanto, a una ejecución práctica en la que la longitud
de onda \lambda de la señal de excitación se encuentre, por
ejemplo, aproximadamente entre 300 nm y 400 nm y las longitudes de
onda de las señales de fluorescencia S1, S2, S11 y S22 se
encuentren, por ejemplo, dentro del intervalo de [500 nm -
750 nm] o dentro del intervalo de [550 nm - 850 nm].
750 nm] o dentro del intervalo de [550 nm - 850 nm].
Claims (16)
1. Método de detectar la presencia de un líquido
en una mezcla, caracterizado porque comprende las siguientes
operaciones:
- producción (1) de una primera mezcla que no
contenga el líquido a detectar;
- excitación (2) de la primera mezcla mediante
una señal luminosa de longitud de onda \lambda;
- medición (3) de una señal de fluorescencia S1
emitida por la primera mezcla durante un tiempo \Deltat parecido
a un tiempo de vida \tau1 característico del líquido a detectar,
con el fin de producir (4) una magnitud de referencia Ro que sea
función de la señal S1 medida;
- producción (5, 10) de la mezcla de
constituyentes idénticos a los constituyentes que formaron la
primera mezcla y de una cantidad del líquido a detectar;
- excitación (6) de la mezcla mediante una señal
luminosa de longitud de onda \lambda;
- medición (7) de una señal de fluorescencia S11
emitida por la mezcla durante el tiempo \Deltat parecido a la
vida útil \tau1 con el fin de producir (8) una magnitud R que sea
función de la señal S11 medida;
- comparación (9) de la magnitud R con una
magnitud k\timesRo.
2. Método de acuerdo con la reivindicación 1,
caracterizado porque la mezcla se produce introduciendo (5)
la cantidad de líquido a detectar en la primera mezcla.
3. Método de acuerdo con la reivindicación 2,
caracterizado porque la cantidad de líquido a detectar se
introduce (5) por pipeteado.
4. Método de acuerdo con la reivindicación 1,
caracterizado porque la mezcla se produce mezclando (10) la
cantidad de líquido a detectar en una segunda mezcla sustancialmente
idéntica a la primera mezcla.
5. Método de acuerdo con la reivindicación 4,
caracterizado porque la primera mezcla contiene un líquido
que no tiene características de fluorescencia a la longitud de onda
\lambda, de manera que el volumen global de la primera mezcla sea
sustancialmente idéntico al volumen global de la mezcla.
6. Método de acuerdo con la reivindicación 4 o
la reivindicación 5, caracterizado porque la primera mezcla
y la mezcla que contiene el líquido a detectar se obtienen, cada
una, pipeteando los componentes de que están constituidas.
7. Método de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la primera
mezcla comprende, al menos, un constituyente Ci capaz de emitir una
señal de fluorescencia de longitud de onda \lambdai debido a la
acción de una señal de excitación de longitud de onda \lambda.
8. Método de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, caracterizado porque las
magnitudes Ro y R son iguales, respectivamente, a las señales S1 y
S11 medidas.
9. Método de acuerdo con la reivindicación 8,
caracterizado porque la primera mezcla comprende, al menos,
dos constituyentes C1 y C2, asociados con las respectivas longitudes
de onda \lambda1 y \lambda2, y porque las señales de
fluorescencia S1 y S11 son señales cuya longitud de onda es igual a
\lambda1 o a \lambda2.
10. Método de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la magnitud Ro
es igual a la relación entre la señal de fluorescencia medida, S1, y
una señal de fluorescencia S2 medida durante un tiempo de
integración \DeltaT fuera del tiempo \Deltat, y porque la
magnitud R es igual a la relación entre la señal de fluorescencia
medida S11 y una señal de fluorescencia S22 medida durante el tiempo
de integración \DeltaT.
11. Método de acuerdo con la reivindicación 10,
caracterizado porque la primera mezcla comprende, al menos,
dos constituyentes C1 y C2 asociados con las respectivas longitudes
de onda \lambda1 y \lambda2, y porque las señales de
fluorescencia S1, S2, S11 y S22 son señales cuya longitud de onda es
igual a \lambda1 o a \lambda2.
12. Método de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 7 a 11, caracterizado porque un primer
constituyente C1 es un conjugado que contiene una molécula
biológicamente activa marcada por un criptato o un quelato de
tierras raras tamponado, y un segundo constituyente C2 es un
conjugado que contiene una molécula biológicamente activa marcada
por un compuesto aceptor fluorescente tamponado, encontrándose la
longitud de onda \lambda entre 300 nm y 400 nm, aproximadamente,
encontrándose la longitud de onda \lambda1 entre 500 nm y 750 nm,
aproximadamente, y encontrándose la longitud de onda \lambda2
entre 550 nm y 850 nm, aproximadamente.
\newpage
13. Método de acuerdo con la reivindicación 12,
caracterizado porque las moléculas biológicamente activas se
seleccionan de entre anticuerpos, antígenos, péptidos, proteínas,
receptores, ligandos, ácidos nucléicos, nucleótidos y medicamentos,
y porque el compuesto aceptor fluorescente se selecciona de entre
ficobiliproteínas, (aloficocianina, aloficocianina B,
C-ficocianina o R ficocianina) o moléculas orgánicas
fluorescentes.
14. Método de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el líquido
a detectar es suero.
15. Método de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, caracterizado porque las
operaciones de producir (1) la primera mezcla, de excitar (2) la
primera mezcla y de medir (3) una señal de fluorescencia emitida
por la primera mezcla, se llevan a cabo sobre M muestras, siendo M
un entero mayor o igual que 1, y porque la mezcla se produce en N
pocillos separados, siendo N un entero mayor o igual que M,
llevándose a cabo las operaciones de excitar la mezcla y de medir
una señal de fluorescencia emitida por la mezcla para cada uno de
los N pocillos.
16. Método de detección de errores en el
pipeteado de un líquido, caracterizado porque hace uso de un
método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3, 6 o
7 a 15.
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