ES2324153T3 - Motivo de union a integrina que contiene peptidos y metodo para el tratamiento de enfermedades del esqueleto. - Google Patents

Motivo de union a integrina que contiene peptidos y metodo para el tratamiento de enfermedades del esqueleto. Download PDF

Info

Publication number
ES2324153T3
ES2324153T3 ES01965941T ES01965941T ES2324153T3 ES 2324153 T3 ES2324153 T3 ES 2324153T3 ES 01965941 T ES01965941 T ES 01965941T ES 01965941 T ES01965941 T ES 01965941T ES 2324153 T3 ES2324153 T3 ES 2324153T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
baselineskip
bone
peptide
peptides
prt
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES01965941T
Other languages
English (en)
Inventor
Yoshinari Kumagai
Russell Wayne Blacher
Toshiyuki Yoneda
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Big Bear Bio Inc
Original Assignee
Big Bear Bio Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Big Bear Bio Inc filed Critical Big Bear Bio Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2324153T3 publication Critical patent/ES2324153T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4728—Calcium binding proteins, e.g. calmodulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Un péptido tal como se describe en la SEQ ID NO: 47 ó SEQ ID NO: 49.

Description

Motivo de unión a integrina que contiene péptidos y método para el tratamiento de enfermedades del esqueleto.
Campo de la invención
La invención se encuadra en general en el campo de los péptidos, y más en particular, péptidos y formulaciones de los mismos útiles en el tratamiento de enfermedades esqueléticos.
Antecedentes de la invención
Está ampliamente documentado que los trastornos de los tejidos esqueléticos y el metabolismo de los minerales causan numerosos problemas de salud importantes a nivel mundial.
En los seres humanos, el máximo de masa ósea se da a una edad comprendida entre los 15 y los 40 años y recibe el nombre de "masa ósea pico". A partir de esa edad, una vez alcanzado dicho pico de masa ósea, la masa ósea comienza a declinar gradualmente y la resistencia mecánica del hueso se reduce correspondientemente. En consecuencia, cuando se reduce la resistencia mecánica hasta cierto nivel, el individuo se encuentra en mayor riesgo de fractura de huesos. Este hecho natural se denomina osteoporosis cuando es lo suficientemente severo como para ser patógeno.
La velocidad a la que tiene lugar la pérdida ósea difiere de un individuo a otro y, especialmente, en lo que se refiere al género. En las mujeres, la velocidad de la pérdida ósea se acelera inmediatamente después de la menopausia (ver figura 1) debido a un significativo descenso del estrógeno disponible, hormona que desempeña un papel crítico en el mantenimiento de un metabolismo óseo sano. La osteoporosis post-menopáusica constituye un problema clínico importante ya que afecta a un importante número de mujeres. Notablemente, la relación de osteoporosis en las mujeres y en los hombres es de 3:1.
La mayoría de las enfermedades óseas se caracterizan por una pérdida de los minerales del hueso, debilitamiento de los huesos y, en consecuencia, un aumento de la frecuencia y severidad de las fracturas del hueso, lo que se denomina "fractura patológica". En la población de edad, esto tiene importantes ramificaciones sociales también, ya que muchas de las personas que tienen fracturas de hueso tienen dificultades para moverse, lo que conduce a un deterioro de otras funciones físicas y mentales, desembocando en demencia, debilidad muscular y/o fatiga. Por otra parte, la morbididad y el dolor aumentan de manera significativa a través de episodios trombóticos, como embolismo pulmonar, que pueden tener lugar como resultado de fracturas pélvicas o de cadera.
En los Estados Unidos solamente, se dice que 52 millones de mujeres con una edad superior a 45 años sufrirá de osteoporosis para el año 2000. La población afectada de osteoporosis en el mundo en la actualidad es de entorno a 200 millones. La incidencia anual de fractura patológica solamente en los Estados Unidos es de aproximadamente 1,5 millones. Se estima que los costes médicos anuales para dichos pacientes de osteoporosis en los Estados Unidos y el mundo es de 14.000 millones de dólares y 60.000 millones de dólares, respectivamente.
La insuficiencia renal constituye también un problema sanitario importante que tiene relación con el metabolismo mineral y la formación del esqueleto y el número de pacientes afectados por ello aumenta cada vez más. La función renal se deteriora gradualmente a lo largo de un período comprendido entre unos años y diez años en estos pacientes. Cuando la función renal desciende hasta la cuarta (1/4) parte aproximadamente del nivel sano, los pacientes se clasifican como afectados de un fallo renal crónico. Cuando alcanza aproximadamente la sexta parte (1/6) aproximadamente, necesitan iniciar diálisis y reciben el nombre de pacientes con enfermedad renal en etapa terminal (ESRD). En los pacientes con fallo renal crónico, los niveles en suero de importantes minerales, como calcio y fosfato, pierden su homeostasia normal, con el resultado de una malformación del esqueleto. Esto se denomina osteodistrofia renal (ROD), que es una osteoporosis secundaria por fallo renal. ROD puede causar también fracturas patológicas como la osteoporosis. La presencia de enfermedad renal en etapa terminal (ESRD) en los Estados Unidos aumenta de manera rápida y está cerca de alcanzar los 300.000 casos en 2000. ROD afecta a la mayoría de los pacientes ESRD.
Existen otras enfermedades diversas de los tejidos esqueléticos y el metabolismo mineral, como la enfermedad de Paget, raquitismo, osteopefrosis, hiperparatiroidismo, etc. y una serie de pacientes que están afectados por estas enfermedades.
Metabólicamente, el hueso es un órgano muy activo pues tiene lugar de manera continua la resorción ósea y la formación de hueso (remodelación). La resorción ósea es facilitada por los osteoclastos, que están diferenciados de las células de linaje monocitos/macrófagos. Los osteoclastos se adhieren a la superficie del hueso y degradan el tejido óseo secretando ácidos y enzimas. Los osteoblastos facilitan la formación ósea adhiriéndose al tejido del hueso degradado y secretando proteínas de matriz ósea, que están mineralizadas en su mayoría con calcio y fosfato. Los osteoblastos se diferencia en células óseas (osteocitos) y entran a formar parte del tejido del hueso.
Se han realizado diversas tentativas con numerosos métodos experimentales para o bien acelerar la formación de hueso o bien disminuir la resorción ósea. Por ejemplo, se sabe que factores de crecimiento como las BMPs (proteínas morfogénicas óseas), TGF\beta (factor \beta de crecimiento de transformación), IGF (factor de crecimiento de tipo insulina) y factor de crecimiento de fibroblasto (FGF) presentan potentes actividades biológicas en la formación del hueso. En particular, alguna subfamilia de moléculas de BMP, como BMP-2, se considera como uno de los factores de crecimiento más potente para el tejido duro. No obstante, estos factores no han sido desarrollados como agentes terapéuticos para enfermedades óseas sistémicas. La razón es que ninguno de ellos se puede suministrar al hueso selectivamente y algunos de estos factores, como por ejemplo las BMPs, convierten el tejido blando en tenido duro. Es lo que se llama calcificación ectópica y constituye un efecto negativo crítico que poseen cuando se utilizan sistémicamente. Por otra parte, los procesos de formación y resorción del hueso están tan íntimamente conectados que el aumento de formación de hueso selectiva o la inhibición de la resorción ósea selectiva resulta enormemente difícil.
En el momento actual, existe la necesidad de contar con un tratamiento efectivo para combatir la pérdida ósea. Los agentes terapéuticos como estrógeno, calcitonina, vitamina D, fluoruro, Ipriflavon, bisfosfonatos, entre otros, no han conseguido proporcionar un medio de tratamiento satisfactorio. (Gennari y cols., Drug. Saf. (1994) 11(3): 179-95).
Frecuentemente se administra estrógenos y sus análogos a los pacientes afectados de osteoporosis postmenopáusica. La terapia de reemplazamiento con estrógeno implica la administración de estrógenos inmediatamente antes o después del inicio de la menopausia. No obstante, como suele ocurrir con las hormonas esteroides, el uso prolongado de estrógenos presenta importantes efectos adversos, tales como cánceres de pecho y otros cánceres ginecológicos (Schneider y cols., Int. J. Fertil. Menoapusal Study (1995) 40(1): 40-53).
La calcitonina, una hormona endógena producida por el tiroides, se une selectivamente a los osteoclastos a través de su receptor y los inactiva. Dado que el osteoclasto es la única célula que puede disolver el tejido óseo, la unión de calcitonina puede bloquear o desacelerar la degradación del hueso causada por el osteoclasto. No obstante, este mecanismo biológico es de muy corta duración, ya que los osteoclastos terminan siendo tolerantes a este fármaco con una relativa rapidez. Por consiguiente, el uso de calcitonina no proporciona una opción terapéutica efectiva.
Se ha demostrado que el fluoruro aumenta la masa ósea cuando se administra a seres humanos. No obstante, si bien se aumenta la masa ósea, no es así en lo que se refiere a la resistencia mecánica. Por lo tanto, a pesar del aumento de la masa ósea aparente, el riesgo de fractura sigue existiendo (Fratzl y cols., J. Bone Mineral Res. (1994) 9(10): 1541-1549). Por otra parte, la administración de fluoruro presenta importantes riesgos de salud.
Se ha utilizado Ipriflavon para tratar la osteoporosis en ciertas zonas del mundo. No obstante, la eficacia real de este compuesto es cuestionable y no está del todo aceptado como un agente terapéutico útil para enfermedades óseas.
Los bisfosfonatos son compuestos derivados de pirofosfato. Su síntesis implica el reemplazamiento de un átomo de oxígeno situado entre dos átomos de fósforo por carbono y la modificación del átomo de carbono con diversos sustituyentes. Si bien se sabe que los bisfosfonatos suprimen la resorción ósea, presentan un escaso efecto en la formación de hueso. Asimismo, los bisfosfonatos se adhieren a la superficie del hueso y permanecen en él durante un período muy prolongado causando una disminución a largo plazo del recambio óseo (turnover). Dado que el tejido óseo ha de recambiarse constantemente, dicha disminución en el recambio tiene como resultado del deterioro del hueso
(Lufkin y cols. Osteoporosis Int. (1994) 4(6): 320-322. Chapparel y cols., J. Bone Miner. res (1995) 10(1): 112-118).
Otro significativo problema asociado a los agentes antes descritos es que, con la excepción de fluoruro e ipriflavon, son inestables para administración oral y, por lo tanto, han de ser administrados por vía parenteral. Dado que los trastornos óseos suelen ser crónicos y requieren una terapia a largo plazo, es deseable que los agentes terapéuticos sean adecuadas para administración oral.
En suma, existe una importante necesidad de contar con un agente terapéutico con el que se pueda prevenir o tratar la pérdida ósea. En particular, es muy deseable contar un nuevo fármaco que pueda aumentar selectivamente la formación del hueso y/o el número de osteoblastos sin afectar a la resorción ósea ni al tejido blando.
Otro problema sanitario de primer orden relacionado con el esqueleto y el metabolismo mineral es el de los dientes. Tan solo en Estados Unidos, se estima que 67 millones de personas están afectadas por enfermedades periodontales y que el coste anual de este tratamiento será de aproximadamente 60.000 millones de dólares para el año 2000. Se ha señalado que el 90% de la población ha tenido alguna vez en su vida caries dentales. El coste anual para su tratamiento supera los 50.000 millones de dólares tan sólo en Estados Unidos.
Las caries dentales son una enfermedad universal que afecta a niños y adultos. Las enfermedades periodontales, por otra parte, afectan en su mayor parte a adultos, en particular, a los ancianos. En muchos casos, el paciente presenta inflamación y destrucción de la encía, y el hueso alveolar que soporta el diente está deteriorado. Asimismo, se daña el cemento que compone el núcleo de la raíz y en consecuencia, se cae el diente. Uno de los tratamientos más comunes para la pérdida del diente implica el uso de un implante dental. Se coloca un implante artificial (implantes dentales oseointegrados) en el espacio en el que se ha perdido el diente. En algunos casos graves, se reemplaza toda la dentadura con implantes. No obstante, con frecuencia los implantes se sueltan o se caen ya que su fijación en el hueso alveolar no siempre se consigue. Dado que el hueso alveolar está dañado de algún modo en estos pacientes, el implante no siempre puede estar soportado perfectamente con el hueso alveolar. Cuando el hueso alveolar está severamente dañado, se realiza un injerto de hueso autógeno. En tal caso, se introduce un injerto óseo tomado de otro tejido esquelético del mismo paciente en el área alveolar dañada de manera que el tejido duro se regenera y se eleva el seno en ese punto. Dado que estos tratamientos requieren materiales bio-compatibles caros y/o técnicas enormemente especializadas, el coste del tratamiento es normalmente muy alto.
Se cree que las caries dentales vienen dadas por las condiciones ácidas de la cavidad bucal. Por ejemplo, los azúcares se convierten en ácido y disuelven la superficie del diente. Si bien tan solo afectan al esmalte y parte de la dentina, en muchos casos, el daño puede alcanzar la cavidad de la pulpa, cuando se trata de un caso grave, y provocar un dolor intenso. El tratamiento más típico consiste en rellenar la lesión de la caries con materiales no degradables como metales u óxido de metal. El tratamiento de las caries dentales depende en su mayor parte en dichos materiales y de las técnicas aplicadas por los dentistas, que con frecuencia son caras.
Si bien se han desarrollado algunos agentes terapéuticos y han sido utilizados en el área dental, por lo general se trata únicamente de fármacos antiinflamatorios, analgésicos y antibióticos. No se ha desarrollado ningún agente terapéutico efectivo de manera general con el que se mejoren directamente los tejidos duros periodontales.
Otro problema clínico principal en el metabolismo mineral es la pérdida excesiva o los residuos de fosfato (PO_{4}) del sistema corporal. El fosfato desempeña una serie de importantes funciones en todas las criaturas vivas. En los vertebrados, el fosfato es un componente principal del esqueleto. En todos los animales, el fosfato es un componente esencial para construir cadenas de polinucleótidos y membranas celulares; la fosforilación y desfosforilación de azúcares y nucleótidos son las reacciones esenciales por excelencia en la generación y consumo de energía; y la fosforilación y desfosforilación de proteínas, azúcares y lípidos son reacciones indispensables para la transducción de señales en las células. Por consiguiente, una escasez de fosfato puede suponer incluso el fallecimiento.
En los mamíferos, la concentración de fosfato en el fluido del cuerpo se controla dentro de un intervalo que permite todas las funciones biológicas normales del organismo. El riñón es el órgano más importante para controlar los niveles de fosfato en el cuerpo. Los glomérulos del riñón filtran el fosfato constantemente a la orina y los túbulos proximales absorben normalmente aproximadamente un 80% de dichos fosfatos filtrados. Si se daña esta función de reabsorción, el exceso de fosfato se pierde en la orina con el resultado de diversos problemas clínicos.
Por ejemplo, se sabe que la mayoría de los pacientes con transplante de riñón experimentan una filtración de fosfato renal excesiva, porque los riñones transplantados solamente reabsorben marginalmente el fosfato urinario a la circulación. Se desconocen las razonas de dicha escasa actividad de reabsorción por parte de los riñones transplantados. Frecuentemente, provoca en los pacientes malnutrición y osteoporosis secundaria. Este problema no puede ser tratado con un suplemento exógeno simple de fosfato. La filtración de fosfato renal similar con una patología desconocida se observa frecuentemente en medicina pediátrica, con resultados como malnutrición y retardación en el crecimiento.
Los problemas de salud asociados con la escasez de fosfato en la circulación no se limitan a los seres humanos. Las vacas lecheras a veces sufren de hipofosfatemia (escasez excesiva de fosfato en la sangre) por la sobreproducción de leche. No solamente deteriora la calidad nutritiva de la leche sino que también a menudo supone que las vacas resulten inútiles para la producción de leche. Esto constituye un problema relativamente común en las granjas lecheras.
Claramente, existe una significativa demanda de un agente terapéutico que promueva la regeneración de hueso alveolar y/o dientes, que aumente el número y actividad de odontoblastos/osteoblastos que ayudan a formar los tejidos dentales y que reduzca la secreción de fosfato renal.
Compendio de la invención
Se describe una clase de compuestos que son útiles en el tratamiento o prevención de un estado patológico asociado con la pérdida y/o debilitamiento esquelético o y/o que reducen la excreción de fosfato renal. Los compuestos son péptidos o análogos de los mismos que comprenden entre 10 y 50 unidades de monómero (v.g., aminoácidos). La secuencia de aminoácidos comprende uno o más de los siguientes motivos: secuencia de motivo de unión a integrina; un motivo de unión a glucosaminoglucano y un motivo de unión a calcio. Los aminoácidos pueden presentarse en la conformación D- o L-. Las unidades de monómero restante (la secuencia que es distinta a los motivos mencionados) del compuesto pueden consistir en análogos de aminoácido. Cuando el motivo es un motivo de unión a integrina, el resto de unidades de monómero son preferiblemente aminoácidos naturales que tienen una secuencia que es sustancialmente la misma que la secuencia de aminoácido contigua a la secuencia RGD en la proteína natural, fosfoglucoproteína extracelular de matriz (Rowe y cols., Genomics (2000) 67: 56-68).
Se describe un conjunto de péptidos y/o análogos de péptido.
Se describe un compuesto que comprende uno o más de los siguientes motivos: una secuencia de motivo de unión a integrina; un motivo de unión a glucosaminoglucano; un motivo de unión a calcio. Los aminoácidos pueden presentar la conformación D- o L-.
Se describe un compuesto que potencia el crecimiento esquelético.
Se describe un compuesto que potencia el número de osteoblastos y posiblemente las células odontoblásticas en la superficie de esqueleto nuevo o crecimiento dental.
Se describe un compuesto que reduce la pérdida de fosfato (Pi) del cuerpo, tal como lo indica una menor filtración de Pi urinario.
Se describe también una formulación para su uso terapéutico que comprende una concentración suficiente de un compuesto según la invención y que se puede administrar a la pulpa del diente, el espacio comprendido entre la raíz del diente y la encía, o el hueso alveolar para prevenir el daño en el diente y/o el hueso alveolar o para regenerar el tejido duro en el diente dañado y/o el hueso alveolar. Se describe también una pasta dentífrica que comprende una concentración suficiente de un compuesto según la invención para mejorar el crecimiento del diente y/o hueso alveolar en áreas en las que ha tenido lugar el deterioro, o para prevenir dicho deterioro.
Se describe un colutorio que comprende una concentración suficiente de un compuesto según la invención para potenciar el crecimiento del diente y/o hueso alveolar en las áreas en las que ha tenido lugar el deterioro, o para prevenir dicho deterioro.
Se describe también un hilo dental que tiene como recubrimiento y/o embebido un compuesto según la invención en una cantidad suficiente para que la aplicación repetida en el diente y/o hueso alveolar tenga como resultado potenciar el crecimiento del diente y/o hueso alveolar en las áreas en las que ha tenido lugar el deterioro o para prevenir dicho deterioro.
Se describe también un pequeño parche adhesivo para su aplicación en el tejido de la encía de un individuo, comprendiendo dicho parche una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto según la invención. El compuesto se libera lentamente desde el parche a la encía, de manera que el compuesto liberado penetra en la raíz del diente, así como en los huesos alveolar y/o de la mandíbula para prevenir la pérdida de los huesos y/o regenerar dichos huesos.
Se describe asimismo un método para tratar o prevenir la pérdida del hueso esquelético o del hueso dental a través de la administración /aplicación de cualquiera de las formulaciones/composiciones de la invención.
Estos y otros objetos de la invención, ventajas y características de la invención se pondrán de manifiesto para las personas especializadas en la técnica con la lectura de los detalles de la invención en cuestión, que se describe con mayor detalle a continuación.
Breve descripción de los gráficos
La figura 1 es un gráfico en el que se muestra la relación entre la masa ósea y la edad en los seres humanos.
La figura 2 es una representación esquemática de una fosfoglucoproteína extracelular de matriz en la que el área designa como "A" incluye secuencias que encajan con los péptidos de la presente invención y el área designada como "B" es un motivo altamente homólogo con un grupo de fosfoglucoproteínas de matriz hueso-diente como osteopontina (OPN), dentina sialofosfo proteína (DSPP), proteína 1 de la matriz dentinaria (DMP1) y sialoproteína II del hueso (IBSP).
Las figuras 3A, 3B, 3C y 3D son fotografías reales de secciones transversales de hueso (de un estudio de cultivo de calvaria de ratón de siete días de vida) que presenta los efectos de un control (figura 3A), factor 1 de crecimiento de fibroblasto (FGF-1) (figura 3B) y dos péptidos de la invención designados D-00004 y D-00006 (figura 3C y 3D, respectivamente).
La figura 4 es un gráfico en el que se comparan los efectos de diferentes compuestos en calvaria.
La figura 5 es un gráfico en el que se muestran los efectos in vivo de D-00006.
La figura 6 es un gráfico en el que se muestra el efecto de D-00006 en la filtración de fosfato urinario.
Descripción detallada de la invención
Antes de describir los péptidos, análogos, formulaciones y metodología de la presente invención, es necesario explicar que la presente invención no está limitada a ningún modo de realización en particular de los descritos ya que, naturalmente, es posible variarlos. Debe entenderse asimismo que la terminología utilizada aquí tiene como propósito describir los modos de realización en particular solamente, y no se pretende limitar el marco de la presente invención que se limitará solamente con las reivindicaciones adjuntas.
Cuando se expone un intervalo de valores, debe entenderse que se describe específicamente también cada uno de los valores que intervienen, hasta la décima parte de la unidad del límite inferior a no ser que el contexto lo dicte claramente de otra forma, entre los límites superior e inferior del intervalo. Cada intervalo más pequeño comprendido dentro de los mencionados queda abarcado dentro de la presente invención. Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños puede estar incluido o excluido independientemente en el intervalo y cada intervalo en el que se incluye uno, los dos o ninguno de ambos límites en los intervalos más pequeño también queda incluido dentro de la invención, sujeto a cualquier límite excluido específicamente en el intervalo señalado. Cuando el intervalo indicado incluye uno
o ambos límites, los intervalos que incluyen uno o ambos límites incluidos también se incluyen en la invención.
A no ser que se defina de otra forma, los términos técnicos y científicos aquí utilizados tienen el mismo significado que el que se entiende comúnmente entre las personas especializadas en este campo en el que se encuadra la invención. Aunque se pueden emplear métodos y materiales similares o equivalentes a los aquí descritos en la puesta en práctica y prueba de la presente invención, se describen a continuación los métodos y materiales preferibles.
\global\parskip0.900000\baselineskip
Debe advertirse que tal como se utiliza en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un(a)" y "el(la)" incluyen las referencias en plural a no ser que el contexto lo dicte claramente así de otra forma. Así pues, por ejemplo, la referencia a "un péptido" incluye varios de estos péptidos y la referencia a "el método" incluye la referencia a uno o más métodos y equivalentes de los mismos conocidos entre las personas especializadas en este campo, y así sucesivamente.
Las publicaciones aquí citadas se facilitan únicamente por su descripción anterior a la fecha de registro de la presente solicitud. No debe interpretarse nada aquí como una admisión de que la presente invención no tiene derecho a antedatar dicha publicación en virtud de la invención anterior. Asimismo, las fechas de las publicaciones citadas pueden ser diferentes de las fechas de publicación reales que pueden requerir una confirmación independiente.
Definiciones
Los términos "péptido" y "compuesto peptídico" se utilizan indistintamente en el presente documento para referirse a una forma polimérica de aminoácidos de aproximadamente 10 a aproximadamente 50 aminoácidos, que puede comprender aminoácidos codificados y no codificados, aminoácidos modificados o derivados química o bioquímicamente, aminoácidos L- o D-, péptidos que tienen cadenas principales de péptido modificadas, y péptidos que comprenden análogos de aminoácido. Los compuestos peptídicos pueden consistir en polímeros de (a) radicales de aminoácidos naturales; (b) radicales de aminoácido no naturales, v.g., glicinas N-sustituidas, sustitutos de aminoácido, etc.; o (c) radicales/sustitutos de aminoácido naturales y no naturales. Es decir, los compuestos peptídicos de la invención pueden ser péptidos o peptoides. Los compuestos peptoides y los métodos para su preparación se describen en WO 91/19735, cuya descripción se incorpora en el presente documento como referencia.
Los términos "tratar" y "tratamiento" y similares se utilizan indistintamente aquí y se refieren a la obtención de un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. El efecto puede ser profiláctico, en lo que se refiere a la prevención completa o parcial de una enfermedad o sus síntomas y/o puede ser terapéutica en lo que se refiere a la curación completa o parcial de una enfermedad y/o los efectos negativos atribuidos a la enfermedad, tales como la potenciación del efecto de la vitamina D. "Tratamiento" tal como se utiliza aquí cubre el tratamiento de enfermedades en vertebrados y en particular un mamífero y, sobre todo en particular, un ser humano, que incluye:
(a) prevención de la enfermedad para que no tenga lugar en un sujeto que puede estar predispuesto a la enfermedad pero que no ha sido diagnosticado como afectado con ella;
(b) inhibición de la enfermedad, es decir, detención de su desarrollo; o
(c) alivio de la enfermedad, es decir, causar la regresión de la enfermedad.
La invención se refiere en particular a péptidos que hacen posible el tratamiento de pacientes que han experimentado pérdida ósea o que se espera que experimenten pérdida ósea y, por consiguiente, está dirigida en particular a la prevención, inhibición o alivio de los efectos de pérdida ósea. Se "trata" a un sujeto siempre y cuando el sujeto experimente un efecto beneficioso o que se pueda detectar terapéuticamente, que se puede medir en función de una serie de criterios diferentes, entre los que se incluyen un mayor crecimiento del hueso, una mayor resistencia del hueso y otras características que según el entendimiento general de las personas especializadas en este campo son deseables en lo que se refiere al tratamiento de enfermedades relacionadas con el hueso.
El término "anticuerpo" se refiere a una proteína de inmunoglobulina capaz de unirse a un antígeno. Se pretende que el término "anticuerpo" tal como se utiliza aquí incluya fragmentos de anticuerpo (v.g., (F(ab')_{2}, Fab', y Fab) capaces de unirse a un antígeno o un fragmento de antígeno de interés.
La expresión "se une específicamente a" significa una unión de alta avidez y/o alta afinidad de un anticuerpo a un péptido específico (específicamente, un péptido de la invención). La unión de un anticuerpo a su epítopo diana específico es más fuerte que la unión del anticuerpo a otros epítopos en el péptido o a otros epítopos en otros péptidos. Los anticuerpos que se unen específicamente a un péptido de interés pueden ser capaces de unirse a otros péptidos en un nivel débil pero detectable (v.g., 10% o menos de la unión que presenta el péptido de interés). Dicha unión débil o unión de fondo, se puede discernir fácilmente de la unión de anticuerpo específica del péptido de interés, v.g., a través del uso de controles apropiados.
El término "pérdida esquelética" se refiere a cualquier situación en la que disminuye la masa esquelética, sustancia o matriz o cualquier componente del esqueleto, como calcio y fosfato, o se debilita el hueso en lo que se refiere a su capacidad para resistir las roturas.
El término "esqueleto" incluye tanto el hueso como los dientes. Igualmente, el término "esquelético" se refiere tanto al hueso como a los dientes.
Se pretende que el término "osteoporosis" se refiera a cualquier estado patológico que implique una pérdida del hueso, v.g., que implique una reducción de la cantidad de masa ósea o sustancia como resultado de cualquier causa. En particular, el término se refiere a estados que tienen como resultado una pérdida ósea como consecuencia de la desmineralización del hueso, disminución de estrógenos post-menopáusica o peri-menopáusica o daño del nervio.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Los términos "sujeto", "individuo", "paciente" y "huésped" se utilizan indistintamente en el presente documento y se refieren a cualquier vertebrado, en particular a cualquier mamífero incluyendo en particular sobre todo sujetos humanos, animales de granja y plagas de mamífero.
Compuestos peptídicos
Se describe un péptido que comprende entre 10 y 50 aminoácidos. Los aminoácidos son preferiblemente uno de los veinte L-aminoácidos naturales. No obstante, pueden estar presentes D-aminoácidos al igual que lo pueden estar análogos de aminoácido. El péptido comprenderá uno o más de los siguientes motivos de secuencia de aminoácido; un motivo de unión a integrina, como por ejemplo secuencia RGD; un motivo de unión a glucosaminoglucano; un motivo de unión a calcio. Pueden estar presentes aminoácidos individuales en los péptidos en la isoforma L o D, preferiblemente en la forma L. El péptido puede estar amidado o no amidado en su término C, o puede estar carboxilado o no carboxilado en su término N. El péptido puede contener o no un motivo de unión a glucosaminoglucano, como por ejemplo secuencia SGDG (SEQ ID Nº: 41) en la forma L- o D-isómero. El compuesto se caracteriza además por una actividad biológica, es decir, potencia el crecimiento esquelético, así como el crecimiento o reclutamiento de osteoblastos o células ondontoblásticas en la superficie del crecimiento esquelético nuevo.
El compuesto peptídico presenta una o más de las siguientes propiedades cuando se administra en una cantidad efectiva a un individuo: (1) reduce la pérdida ósea; (2) aumenta la masa ósea; (3) aumenta la resistencia del hueso; (4) reduce la excreción renal de fosfato; y (5) reduce la pérdida de fosfato de un individuo.
Los ejemplos específicos de péptidos comprenden de siete a cuarenta y siete aminoácidos en cada lado de la secuencia RGD de la secuencia natural de fosfoglucoproteína extracelular de matriz. Según esto, se muestran en negrita los ejemplos de péptidos que comprenden las secuencias tomadas de la siguiente secuencia y que incluyen la secuencia RGD:
1
Entre los ejemplos específicos de péptidos que comprenden la secuencia RGD como secuencia terminal se incluyen los siguientes:
2
3 
\vskip1.000000\baselineskip
Entre los ejemplos específicos de péptidos que comprenden RGD internamente se incluyen los siguientes:
4 
\vskip1.000000\baselineskip
En algunos modos de realización, el péptido comprende un motivo de unión a glucosaminoglucano. Un motivo de unión a glucosaminoglucano tiene la secuencia de consenso SGXG (SEQ ID NO: 50) en la que X es un aminoácido. En algunos modos de realización, un motivo de unión de glucosaminoglucano tiene la secuencia SGDG (SEQ ID NO: 41).
En otros modos de realización, el péptido comprende un motivo de unión a calcio. En algunos modos de realización, un motivo de unión a calcio tiene la secuencia DNDISPFSGDGQ (SEQ ID NO: 42). También se incluye en el término "motivo de unión a calcio" secuencias de aminoácido que difieren de la SEQ ID NO: 42 en uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho aminoácidos. Revisten un especial interés en muchos modos de realización motivos que conservan aminoácidos 1, 3, 5, 7, 9 y 12 de la SEQ ID NO: 42. Así pues, en algunos modos de realización, el péptido comprende, como motivo de unión a calcio, la secuencia DXDXSXFXGXXQ (SEQ ID NO: 43) en la que X es cualquier aminoácido o análogo de aminoácido.
En otros modos de realización, un motivo de unión a calcio tiene la secuencia DX_{1}X_{2}X_{3}X_{4}X_{5}X_{6}X_{7}X_{8}X_{9}X_{10}X_{11}X_{12}, en la que:
X_{1} es cualquier aminoácido
X_{2} es D, N o S;
X_{3} es I, L, V, F, Y o W;
X_{4} es D, E, N, S, T o G;
X_{5} es D, N, Q, G, H, R o K;
X_{6} es G o P;
X_{7} es L, I, V, M, C;
X_{8} es D, E, N, Q, S, T, A, G o C;
cada X_{9} y X_{10} es independientemente cualquier aminoácido
X_{11} es es D o E; y
X_{12}es L, L, V, K, F, Y o W.
\vskip1.000000\baselineskip
En otros modos de realización, el motivo de unión a calcio presenta la secuencia X_{1}X_{2}X_{3}X_{4}C(X_{5})_{n}C(X_{6})_{m}CX_{7}
X_{8}X_{9}X_{10}X_{11}X_{12}X_{13}X_{14}C en la que
cada X_{1} X_{3} y X_{4} es independientemente D, E, Q o N;
cada X_{2} X_{5} X_{6} X_{7} X_{9} X_{10} X_{11} X_{12} y X_{14} es independientemente cualquier aminoácido;
n es 3-14;
m es 3-7;
X_{8} es D o N; y
X_{13} es F o Y.
\vskip1.000000\baselineskip
En otros modos de realización, un motivo de unión a calcio presenta la secuencia X_{1}X_{2}X_{3}X_{4}X_{5}DX_{6}X_{7}X_{8}X_{9}X_{10}
X_{12}X_{13}X_{14}X_{15}X_{16}X_{17}X_{18}X_{19}X_{20}X_{21} en la que:
cada X_{1} y X_{2} es independientemente L, I, V, M, F, Y o W;
cada X_{3}, X_{4}, X_{6}, X_{7}, X_{8}, X_{10}, X_{11}, X_{12}, X_{15}, X_{18} y X_{19} es independientemente cualquier aminoácido; X_{5} es L o K;
X_{9} es D o N;
X_{13} es D, N, S o G;
X_{14} es F o Y;
X_{16} es E o S;
X_{17} es F, Y, V o C;
X_{20} es L, I, V, M, F o S;
y X_{21} es L, I, V, M o F.
\vskip1.000000\baselineskip
En otros modos de realización, el motivo de unión a calcio presenta la secuencia DX_{1}X_{2}X_{3}X_{4}X_{5}X_{6}GX_{7}DX_{8}X_{9}X_{10}
GGX_{11}X_{12}X_{13}D, en la que:
cada X_{1}, X_{3}, X_{4}, X_{5}, X_{6}, X_{7}, X_{8}, X_{10}, X_{11}, X_{12}, y X_{13} es independientemente cualquier aminoácido y
cada X_{2} y X_{9} es independientemente L o I.
\vskip1.000000\baselineskip
Los motivos de unión a calcio son conocidos dentro de a especialidad y están descritos de forma extensa. Ver por ejemplo, Springer y cols. (2000) Cell 102: 275-277; Kawasaki and Kretsinger (1995) Protein Prof. 2: 305-490; Moncrief y cols. (1990) J. Mol. Evol. 30-522-562; Chauvaux y cols. (1990) Biochem. J. 265:261; Bairoch and Cox (1990) FEBS Lett. 269: 454-456; Davis (1990) New Biol. 2:410-419; Schaefer y cols. (1995) Genomics 25: 638-643; y Economou y cols. (1990) EMBO J. 9: 349-354. Se puede incluir en el compuesto peptídico cualquier motivo de unión a calcio conocido.
El péptido puede comprender uno o más entre: motivos de unión a integrina, un motivo de unión a glucosaminoglucoano y un motivo de unión a calcio. Los motivos pueden estar presentes en el péptido en cualquier orden en relación unos con otros. Los motivos pueden estar separados entre sí por uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez aminoácidos o más. Asimismo, cualquiera de los motivos puede solaparse con uno o más de los demás motivos. Como ejemplo no limitativo, un péptido que tiene la secuencia TDLQERGDNDISPFSGDGQPFKD (SEQ ID NO: 49) comprende los tres motivos, que se solapan entre sí.
Cualquiera de los aminoácidos de las secuencias mencionadas pueden estar en la conformación D- o L- o pueden estar sustituidas con análogos equivalentes. Los modos de realización preferibles comprenden aminoácidos naturales en la conformación L-.
Todas las secuencias que se han mencionado pueden estar amidadas, no amidadas, o modificadas de otro modo en el término C, o pueden estar carboxiladas, no carboxiladas o modificadas de otro modo en el término N-.
Por otra parte, se proporcionan multímeros de cualquiera de los péptidos anteriores. Los multímeros incluyen dímeros, trímeros, tetrámeros, pentámeros, hexámeros, etc. Según esto, el péptido que tiene una longitud comprendida entre aproximadamente 10 y aproximadamente 50 aminoácidos puede multimerizarse, opcionalmente con un ligador que intervenga, de manera que se produzca el péptido de la invención en disposiciones en tandem de dos, tres, cuatro, cinco, seis o más copias. Asimismo, se pueden multimerizar dos o más péptidos diferentes de la invención entre sí para formar "heteromúltimeros". Por lo tanto, v.g., un multímero puede comprender un primer y un segundo péptido, unidos a través de uniones péptido, opcionalmente con una molécula ligadora, como por ejemplo de uno a diez radicales glicina.
Los compuestos peptídicos se pueden obtener aplicando cualquiera de los métodos conocidos, incluyendo, v.g., técnicas de síntesis de péptido en fase sólida, siendo dichas técnicas muy conocidas entre las personas especializadas en la técnica. Los métodos para sintetizar péptidos son muy conocidos dentro de la técnica y se han descrito extensamente en numerosas publicaciones, v.g., "The Practice of Peptide Synthesis" M. Bodanszky and A. Bodanszky, ed.s (1994) Springer-Verlag; and Jones, The Chemical Synthesis of Peptides (Clarendon Press, Oxford) (1994). Generalmente, en dichos métodos se produce un péptido a través la adición secuencial de unidades monoméricas activadas a una cadena de péptido en crecimiento unida en fase sólida. Asimismo, reviste interés el uso de submonómeros en la síntesis en fase sólida, tal como se describe en WO 94/06451.
En lugar de la síntesis en fase sólida, se pueden preparar los compuestos peptídicos de la invención a través de la expresión de un sistema de expresión que comprende un polinucleótido que codifica el compuesto peptídico. Se puede emplear cualquier metodología conveniente, incluyéndose entre las metodologías que se pueden emplear típicamente la preparación de una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el péptido de la invención, la introducción de la región de codificación en un vector para expresión, la transformación de una célula huésped con el vector y la expresión y recuperación del producto. Los protocolos para llevar a efecto cada una de las etapas mencionadas son muy conocidos dentro de la especialidad. Ver Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning, A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press, Inc.) (1989)
Se clonó la fosfoglucoproteína extracelular de matriz y se caracterizó desde un tumor humano que causó osteomalacia en los pacientes. Se sabe que este tipo de tumor extremadamente raro llamado tumor de osteomalacia hipofosfatémico oncogénico (OHO), provoca la filtración de fosfato renal, hipofosfatemia (bajos niveles de fosfato en suero), calcitrol en suero bajo (1,25-vitamina D3) y anormalidades en la mineralización del esqueleto (Osteomalacia). En los pacientes afectados con tumor OHO, la resección del tumor tiene como resultado la remisión de todos los síntomas citados y se ha propuesto que un factor fosfatúrico en circulación secretado desde tumores OHO desempeña cierto papel en la osteomalacia. Se ha propuesto la fosfoglucoproteína extracelular de matriz como candidato para este factor fosfatúrico (Rowe y cols. Genomics (2000) 67: 56-68).
El fosfato desempeña un papel central en muchos de los procesos básicos esenciales para la célula y la mineralización del esqueleto. En particular, la mineralización del esqueleto depende de la regulación de fosfato y calcio en el organismo y cualquier perturbación en la homeostasia fosfato-calcio puede tener una repercusión grave en la integridad del hueso. En el riñón, el fosfato se pierde pasivamente en el filtrado glomerular y se reabsorbe activamente a través de un co-transportador de fosfato dependiente de sodio (Na^{+}). En el intestino, se absorbe el fosfato desde los alimentos. Se ha observado que el co-transportador de fosfato dependiente de sodio (Na^{+}) se expresa en el intestino y ha sido clonado recientemente (Hilfiker, PNAS 95(24) (1998), 14564-14569). El hígado, la piel y el riñón participan en la conversión de la vitamina D3 en su metabolito activo, calcitriol, que desempeña un papel activo en el mantenimiento del equilibrio de fosfato y la mineralización esquelética.
La deficiencia de vitamina D causa raquitismo en los niños y osteomalacia en los adultos. Ambos estados patológicos se caracterizan por el fallo de la calcificación de osteoide, que es la matriz del esqueleto.
\newpage
Según esto, todas las funciones humorales a través de la fosfoglucoproteína extracelular de matriz, en concreto, la filtración de fosfato renal, hipofosfatemia (niveles de fosfato en suero bajos), bajo nivel de calcitriol en suero (1,25-vitamina D3) son nocivos para la formación del esqueleto sano.
La fosfoglucoproteína extracelular de matriz es un polipéptido grande de 525 aminoácidos con una secuencia de señal de término N corta. Por consiguiente, es muy probable que esta molécula sea secretada desde sus células de producción en el fluido del cuerpo y la circulación. Dentro de su secuencia de 525 aminoácidos, un motivo de 23 aminoácidos en el término C presentó una alta similitud con el grupo de las fosfoglucoproteínas de matriz mineral del hueso-diente como osteopontina (OPN), sialofosfo proteína de dentina (DSPP), proteína 1 de matriz dentinaria (DMP2) y sialoproteína II de hueso (IBSP). Se ha propuesto que estas dos fosfoproteínas de matriz mineral de hueso-diento pueden desempeñar un importante papel en la mineralización del esqueleto.
Independientemente de las observaciones que se han señalado en cuanto a la fosfoglucoproteína extracelular de matriz, una secuencia de péptido más pequeña que contiene motivo de unión a integrina que está localizada dentro de la secuencia de aminoácido y alejada de la secuencia de término C con un alto grado de similitud con otras fosfoglucoproteínas de matriz mineral hueso-diente demostró una potente actividad de formación esquelética y un aumento del número de osteoblastos en la superficie de formación del esqueleto. La potencia de dichas actividades fue equivalente al factor de crecimiento de fibroblasto (FGF). Resultó sorprendente que motivos pequeños, localizados dentro de una proteína más grande que tiene funciones destructivas en el esqueleto demostraron tener una potente actividad de formación de hueso y que dichos motivos estuvieran localizados alejados de la secuencia que presentaba homología con otra proteína de matriz de hueso-diente conocida.
Otro hecho sorprendente fue que los motivos de formación esquelética potente aquí descritos contenían un motivo de unión a integrina, en particular, la secuencia RGD. Se ha descrito que un péptido sintético que contenía la secuencia RGD inhibía la formación y resorción de hueso en un sistema de cultivo de órgano mineralizante de esqueleto de rata fetal (Gronowicz y cols., Journal of Bone and Mineral Research 9(2): 193-201 (1994) que es un método experimental muy similar al utilizado para analizar el que es objeto de la presente invención.
Por otra parte, la actividad de formación esquelética proporcionada por los pequeños péptidos descritos en el presente documento fue tan potente como un factor de crecimiento intacto como FGF.
Métodos terapéuticos
Se describen métodos para reducir la pérdida del hueso esquelético, métodos para reducir la filtración de fosfato renal, métodos para aumentar la masa ósea, métodos para aumentar la resistencia ósea y métodos para reducir la excreción de Pi, que comprenden la administración del compuesto peptídico. Típicamente, el compuesto peptídico se formula con un excipiente farmacéuticamente aceptable para administrarlo a un individuo que lo necesita.
Tal como se utiliza aquí, una "cantidad efectiva" del compuesto peptídico es una cantidad que reduce la pérdida de hueso y/o aumenta la resistencia del hueso, y/o aumenta la masa ósea, y/o reduce la pérdida de fosfato, y/o reduce la excreción de fosfato renal en al menos aproximadamente un 10%, al menos aproximadamente un 15%, al menos aproximadamente un 20%, al menos aproximadamente 25%, al menos aproximadamente un 30%, al menos aproximadamente un 35%, al menos aproximadamente un 40%, al menos aproximadamente un 45%, al menos aproximadamente un 50%, al menos aproximadamente un 55%, o al menos aproximadamente un 60%, o más, en comparación con un control adecuado. Entre los controles adecuados se incluyen, en el caso de animales experimentales, un animal no tratado con el péptido, v.g., tratado con vehículo, o tratado con un péptido irrelevante; y en el caso de sujetos humanos, un sujeto tratado con un placebo, o un sujeto humano antes del tratamiento con péptido.
En algunos modos de realización, una cantidad efectiva de un compuesto peptídico es una cantidad que reduce la excreción de fosfato renal y, por tanto, reduce la pérdida de fosfato de un individuo, en al menos aproximadamente 10%, al menos aproximadamente un 15%, al menos aproximadamente un 20%, al menos aproximadamente 25%, al menos aproximadamente un 30%, al menos aproximadamente un 35%, al menos aproximadamente un 40%, al menos aproximadamente un 45%, al menos aproximadamente un 50%, al menos aproximadamente un 55%, o al menos aproximadamente un 60%, o más en comparación con un control adecuado.
El hecho de que un péptido dado reduzca la pérdida de hueso, y/o aumente la resistencia del hueso, y/o aumente la masa ósea, y/o reduzca la pérdida de fosfato, y/o reduzca la excreción de fosfato renal en un individuo se puede determinar utilizando cualquiera de los ensayos conocidos para medir cualquier parámetro conocido asociado con uno o más entre reducción de pérdida de hueso, aumento de resistencia del hueso, aumento de la masa ósea, reducción de la pérdida de fosfato, y reducción de excreción de fosfato renal, incluyendo, pero sin limitarse sólo a ellos niveles de fósforo en suero y orina (v.g., empleo de un ensayo colorimétrico); niveles de calcio en suero y orina (v.g., empleo de un ensayo colorimétrico); niveles de cretinina en suero y orina; niveles de marcador de recambio óseo (v.g., desoxipirodinolina y osteocalcina); densidad ósea (v.g., por densitometría ósea in vivo); análisis mecánico óseo (v.g., prueba de compresión de vértebras lumbares; prueba de flexión en tres puntos del eje femoral; y similares), y similares. Dichos métodos son los acostumbrados en la técnica.
Los individuos idóneos para el tratamiento con la aplicación de los métodos descritos son individuos que presuntamente están en riesgo de pérdida de hueso, o de un trastorno causado por la pérdida ósea, o un trastorno cuyas secuelas incluyen pérdida ósea, incluyendo, pero sin limitarse sólo a ellas, caries dentales, osteoporosis, enfermedad de Paget, filtración de fosfato renal, osteodistrofia renal, osteomalacia, osteodistrofia que es el resultado de otras causas, osteolisis mediada por cáncer, fractura e hiperparatiroidismo. Dichos individuos incluyen individuos mayores, mujeres post-menopáusicas, receptores de transplante de riñón e individuos que tienen o que están en riesgo de contraer los trastornos que se han mencionado.
Rutas de administración
Se administran los péptidos a un individuo aplicando cualquiera de los métodos disponibles y a través de una ruta adecuada para el suministro del fármaco, incluyendo métodos in vivo o ex vivo, así como rutas de administración sistémica o localizada.
Las rutas de administración convencionales y farmacéuticamente aceptables incluyen las rutas de administración intranasal, intramuscular, intratraqueal, subcutánea, intradérmica, aplicación tópica, intravenosa, rectal, nasal, oral y otras rutas de administración parenterales. Las rutas de administración pueden ser combinadas, si se desea, o se pueden ajustar dependiendo de la molécula de ácido nucleico inmunomoduladora y/o el efecto deseado de la respuesta inmune. Los péptidos se pueden administrar en una sola dosis o en varias dosis.
Los péptidos se pueden administrar a un sujeto aplicando los métodos convencionales disponibles y rutas adecuadas para el suministro de fármacos convencionales, incluyendo rutas sistémicas o localizadas. En general, entre las rutas de administración contempladas por la invención se incluyen sin limitarse necesariamente sólo a ellas, entérica, parenteral o inhalación.
Las rutas de administración parenterales distintas a la administración por inhalación incluyen, sin limitarse necesariamente a ellas tópica, transdérmica, subcutánea, intramuscular, intraorbital, intracapsular, intraespinal, intrasternal e intravenosa, es decir, cualquier ruta de administración distinta a la del canal alimentario. La administración parenteral se pude realizar para llevar a efecto la administración sistémica o local de péptidos. Cuando es deseable un suministro sistémico, la administración implica típicamente la administración tópica o mucosal sistémicamente absorbida o invasiva de preparaciones farmacéuticas.
Los péptidos pueden suministrarse también al sujeto por administración entérica. Las rutas de administración entérica incluyen, sin limitarse necesariamente solo a ellas, suministro oral y rectal (utilizando, v.g., supositorio).
Los métodos de administración del péptido a través de la piel o la mucosa incluyen, sin limitarse necesariamente sólo a ellos, la aplicación tópica de una preparación farmacéutica adecuada, la transmisión transdérmica, la inyección y la administración epidérmica. Asimismo, se contempla el suministro de péptido en forma de un parche que contiene el péptido.
Se puede aplicar un parche sobre la piel o cualquier otro tejido, v.g., un tejido de la encía. Es útil cualquier sistema de suministro con parches conocidos que sea adecuado para un sistema de suministro oral. Ver v.g. la patente EE.UU. Nº 6.146.655.
Los péptidos se pueden suministrar a un individuo administrando a dicho individuo una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótido que codifica el péptido. Los términos "polinucleótido" y "molécula de ácido nucleico" se utilizan indistintamente en el presente documento para referirse a formas poliméricas de nucleótidos de cualquier longitud. Los polinucleótidos pueden contener desoxiribunucleótidos, ribonucleótidos y/o sus análogos. Para la expresión, se puede emplear un casete de expresión. El vector de expresión proporcionará una región de iniciación de la transcripción o traducción, que puede inducirse o ser constitutiva, estando operativamente unida la región de codificación bajo el control transcripcional de la región de iniciación transcripcional, y la región de terminación transcripcional o de traducción. Estas regiones de control pueden ser nativas para el gen que codifica los péptidos de la invención, o se puede suministrar desde fuentes exógenas.
Los vectores de expresión tienen generalmente sitios de restricicón convenientes que están localizados cerca de la secuencia promotora para promover la inserción de secuencias de ácido nucleico que codifican proteínas heterólogas. Puede estar presente un marcador seleccionable operativo en el huésped de expresión. Se pueden utilizar vectores de expresión para la producción de proteínas de fusión, proporcionando los péptidos de fusión exógenos una funcionalidad adicional, es decir, una mayor síntesis de proteína, estabilidad, reactividad con antisuero definido, un marcador de enzima, v.g., \beta-galactosidasa, etc.
Se pueden preparar los casetes de expresión que comprenden una región de iniciación de la transcripción, el gen o fragmento del mismo y una región de terminación transcripcional. Entre los vectores se incluyen, sin limitarse sólo a ellos, plasmidios, cosmidios, vectores virales, cromosomas artificiales (YAC's, BAC's, etc.); mini-cromosomas, y similares. Los vectores se describen ampliamente en numerosas publicaciones conocidas entre las personas especializadas en la técnica, entre las que se incluyen v.g., Short Protocols in Molecular Biology, (1999), F. Ausubel, y cols., eds. Wiley & Sons.
Se pueden utilizar vectores de expresión para introducir una molécla de ácido nucleico que codifica un péptido de la invención en una célula de un individuo. Dichos vectores tienen generalmente sitios de restricción convenientes localizados cerca de la secuencia de promotor para proporcionar la inserción de las secuencias de ácido nucleico. Se pueden preparar casetes de transcripción que comprenden una región de iniciación de la transcripción, el gen diana o fragmento del mismo y una región de terminación de la transcripción. Se pueden introducir casetes de transcripción en diversos vectores, v.g., plasmidio; retrovirus, v.g., lentivirus; adenovirus; y similares, siendo capaces los vectores de mantenerse en las células transitoriamente o establemente, normalmente durante un período de aproximadamente un día, más usualmente durante un período de al menos aproximadamente unos días a varias semanas.
Se puede introducir un vector de expresión que comprende un péptido que codifica una secuencia de nucleótido de la invención en los tejidos o células huésped a través de una serie de rutas, incluyendo infección viral, microinyección, o fusión de vesículas. Se puede utilizar asimismo la inyección para administración intramuscular, tal como describe Furth y cols. (1992), Anal Biochem. 205: 365-368. El vector de expresión puede revestirse en micropartículas de oro y suministrarse intradérmicamente con un dispositivo de bombardeo de partículas, o "pistola genética" tal como se describe en a bibliografía (ver por ejemplo, Tang y cols. (1992), Nature 356: 152-154), estando los microproyectiles revestidos con un vector de expresión, que se bombardea después a las células de la piel.
Dosis
Si bien la dosis utilizada puede variar dependiendo de los objetivos clínicos que se quieran conseguir, la dosis adecuada oscila entre una dosis que proporcione entre aproximadamente 1 \mug y aproximadamente 1.000 \mug, aproximadamente 10.000 \mug, aproximadamente 25.000 \mug o aproximadamente 50.000 \mug de un péptido de la invención. Los péptidos se pueden administrar en una sola dosis o en varias dosis más pequeñas a lo largo del tiempo. Alternativamente, se puede considerar una dosis objetivo de un péptido la comprendida entre aproximadamente 0,1 y 1000 \muM, entre aproximadamente 1 y 500 \muM, o entre aproximadamente 5 y 250 \muM en una muestra de sangre huésped extraída en las primeras 24-48 horas después de la administración del péptido.
El efecto en la pérdida ósea, la resistencia del hueso, la excreción de fosfato u otros parámetros pueden depender de la dosis. Por consiguiente, para aumentar la potencia de una magnitud de dos, se dobla la concentración de cada dosis simple. Pueden ser necesarias dosis mayores para conseguir un objetivo terapéutico deseado. La invención contempla pues la administración de varias dosis para proporcionar y mantener el efecto en la pérdida ósea, la resistencia del hueso, la excreción de fosfato y otros parámetros. Cuando se administran varias dosis, se administran varias dosis posteriores en el curso de aproximadamente 16 semanas, aproximadamente 12 semanas, aproximadamente 8 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 4 semanas, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 1 semana, aproximadamente 5 días, aproximadamente 72 horas, aproximadamente 48 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 8 horas, aproximadamente 4 horas, o aproximadamente 2 horas o menos de la dosis previa.
En vista de las directrices que se proporcionan en la presente descripción, las personas familiarizadas con la especialidad clínica conocerán, estarán familiarizadas y podrán determinar fácilmente parámetros adecuados para la administración de péptidos.
Formulaciones
En general, se preparan péptidos en una composición farmacéuticamente aceptable para su suministro a un huésped. Entre los vehículos farmacéuticamente aceptables preferibles para su uso con los péptidos e la invención se pueden incluir soluciones, suspensiones y emulsiones acuosas y no acuosas esterilizadas. Entre los ejemplos de disolventes no acuosos se incluyen propilen glicol, polietilen glicol, aceites vegetales como aceite de oliva, ésteres orgánicos inyectables como oleato de etilo. Entre los vehículos acuosos adecuados se incluyen agua soluciones, emulsiones o suspensiones, acuosas/alcóholicas, incluyendo soluciones salinas y medios tamponados. Entre los vehículos parenterales se incluyen soluciones de cloruro sódico, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro sódico, aceites fijos o de Ringer lactados. Entre los vehículos intravenosos se incluyen reponedores de nutrientes y fluidos, reponedores de electrolito (como por ejemplo los basados en dextrosa de Ringer), y similares. Se puede liofilizar una composición que comprende el péptido utilizando medios conocidos dentro de la técnica, para la reconstitución posterior y el uso según la invención. Revisten asimismo interés las formulaciones para suministro liposómico y las formulaciones que comprenden péptidos microencapsulados.
En general, las composiciones farmacéuticas se pueden preparar en diversas formas, como granulados, tabletas, píldoras, supositorios, cápsulas, suspensiones, tiritas, lociones, y similares. En algunos modos de realización, cuando se administra por vía oral a los tejidos bucales, el péptido de la invención, se puede formular el péptido de la invención en forma de pasta dentífrica, colutorio o se puede recubrir o embeber en un hilo dental. Se pueden utilizar vehículos y/o diluyentes orgánicos o inorgánicos de tipo farmacéutico adecuados para uso oral o tópico para obtener composiciones que comprenden los compuestos terapéuticamente activos. Los diluyentes conocidos dentro de la especialidad incluyen medios acuosos, aceites y grasas vegetales y animales. Se pueden utilizar agentes estabilizantes, agentes de humectación y emulsión, sales para variar la presión osmótica o tampones para asegurar un valor de pH adecuado, y potenciadores de penetración en la piel como agentes auxiliares. También pueden estar presentes conservantes y otros aditivos como por ejemplo agentes antipatógenos (v.g., antimicrobianos, antibacterianos, antivirales, antifúngicos, etc.), antioxidantes, agentes quelantes, gases inertes y similares.
\newpage
Se puede administrar el compuesto peptídico con cualquier otro agente que reduzca la pérdida ósea. Según esto, se contempla la terapia de combinación. Otros agentes que se pueden administrar con el péptido incluyen, sin limitarse sólo a ellos, estrógenos, calcitonina, vitamina D, flururo, Ipriflavon, y bisfosfonato. Se puede administrar un péptido según la invención de manera simultánea (v.g., mezclado o en formulaciones separadas) con otro agente que reduzca la pérdida de hueso, o se puede administrar al cabo de aproximadamente 15 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 60 minutos, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 5 horas, aproximadamente 10 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 36 horas, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 7 días, o más, después de otro agente que reduce la pérdida de hueso. Asimismo, se pueden administrar dos o más péptidos de la invención de manera simultánea o transucrridos aproximadamente 15 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 60 minutos, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 5 horas, aproximadamente 10 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 36 horas, aproximadamente 4 días, aproximadamente 7 días o más uno del otro.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplos
A continuación, se exponen ejemplos con el fin de proporcionar a las personas especializadas en la técnica una completa y detallada descripción sobre cómo obtener y aplicar la presente invención, no pretendiéndose con ello limitar el marco de lo que los autores de la invención consideran como su invención ni tampoco se pretende que los experimentos que se exponen a continuación sean los únicos y todos los experimentos que se puedan realizar. Se ha realizado un gran esfuerzo para asegurar la precisión en lo referente a los números utilizados (v.g., las cantidades, la temperatura, etc.) pero se deberá contar con algunos errores experimentales y desviaciones. A no ser que se indique de otro modo, todas las partes son en peso, el peso molecular es el peso molecular de peso medio, la temperatura es en grados centígrados y la presión es la presión atmosférica o una presión cercana a ella.
Ejemplo 1 Síntesis de D-00001, etc
Se sintetizaron manualmente seis péptidos diferentes a través de la estrategia con 9-fluorenil metoxi carbonil (Fmoc) y se prepararon en la forma amida C-terminal. Los seis péptidos son los siguientes:
D-0001: IPSDFEGSGYTDLQE (SEQ ID NO: 44)
D-0002: DFEGSGYTDLQERGD (SEQ ID NO 45)
D-0003: YTDLQERGDNDISPF (SEQ ID NO 46)
D-0004: ERGDNDISPFSGDGQ (SEQ ID NO 47)
D-0005: NDISPFSGDGQPFKD (SEQ ID NO 48)
D-0006: TDLQERGDNDISPFSGDGQPFKD (SEQ ID NO: 49) 
\vskip1.000000\baselineskip
(C-termino amidado)
Se adquirieron los derivados de aminoácido de Bachem. Inc. Torrance, CA, y Novabiochem, La Jolla, CA. Se condensaron manualmente los aminoácidos correspondientes por etapas, utilizando resina 4-(2'-4'-dimetoxifenil-Fmoc-aminometil)fenoxi. Se utilizó N-metil pirrolidona durante la síntesis como disolvente. Para la condensación, se empleó diisopropil carbodiimida/N-hidroxibenzotriazol, y para la desprotección de los grupos N^{\alpha}-Fmoc, se empleó piperidina al 20% en N-metil pirrolidona. Se utilizaron los siguientes grupos de protección de cadena lateral: Asn y Gln, tritilo; Asp, Glu, Ser, y Thr, t-butilo; Arg, 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo; y Lys, t-butoxicarbonilo. Se desprotegieron las resinas de péptido protegidas resultantes y se segmentaron de la resina utilizando un ácido trifluoroacético-tioanisol-m-cresol-etanoditiol-H_{2}O (80:5:5:5:5, v/v) a 20ºC durante 2 horas. Se hicieron precipitar los péptidos en bruto resultantes y se lavaron con éter etílico, después se purificaron por cromatografía de líquidos de alto rendimiento en fase inversa (utilizando columina 5C18 Vydac y un gradiente de agua/ácido trifluoroacético al 0,1% con contenido en acetonitrilo). Se obtuvieron todos los péptidos con 5-20% de rendimiento (de la resina de partida). Se confirmó la pureza de los péptidos por cromatografía de líquidos de alto rendimiento analítica. Se confirmó la identidad de los péptidos con un espetrómetro de masa de pulverización de iones de polo cuádruple triple Sciex API IIIE.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 Ensayo de calvaria de ratón fetal Reactivos
Se adquirió FGF-1 de Peprotech Inc. (Rocky Hill, NJ). RGD-1,2,3,4,5 y 6 (denominados aquí D-00001, D-00002, D-00003, D-090004, D-00005 y D-00006) de Dr. Nomizu (Hokkaido University, Japón).
Ratones
Se adquirieron ratones ICR preñados de SLC Japan Co. Ltd. (Shizouka, Japón)
Cultivo de órganos calvaria de ratón
Se llevó a cabo un cultivo de órganos calvari de ratón tal como se describe en Mundy G. y cols. Science 286: 1946-1949, 1999 y Traianedes K y cols. Endocrinology 139: 3178-3184, 1998. Se extirparon los calvaria de ratones de 4 días de vida y se los cortó por la mitad a lo largo de una sutura sagital. Se colocó cada uno de los calvaria en una rejilla de acero inoxidable en una placa de cultivo de tejido de 12 pocillos (Asahi Glass Techno Corp. Funabashi, Japón). Cada pocillo contenía 1,5 ml de medio BGj (Sigma, St. Louis, MO) suplementado con albúmina de suero bovino al 0,1% (Sigma) de cada compuesto. Se utilizó FGF-1 como control positivo, tal como describe Mundy y cols. Se cargó el medio el día 1 a 4, y se terminó el ensayo el día 7.
Análisis histomorfométrico
Se fijaron los calvaria en formalina tamponada neutra al 10%, se descalicificó con 4,13% de EDTA y se embebió en parafina. Se obtuvieron secciones de 4 mm de grosor y se mancharon con hematoxilina y eosina. Se midió el área del hueso nuevo utilizando Image-Pro Plus (Media Cybernetics, Silver Spring, MD)
Se sometieron a ensayo los seis péptidos del ejemplo 1 para determinar su capacidad para potenciar el crecimiento del hueso llevándose a cabo las pruebas tal como se ha descrito en el ejemplo 2. Los péptidos que no incluyen la secuencia RGD no presentaron resultados positivos. Los otros cuatro péptidos presentaron resultados positivos obteniéndose los mejores resultados con las secuencias
D-00004: ERGDNDISPFSGDGQ (SEQ ID NO: 47) y
D-00006: TDLQERGDNDISPFSGDGQPFKD (SEQ ID NO: 49).
Los mejores resultados se muestran en la figura 3 (específicamente la figura 3C y 3D). Los datos de estos resultados se muestran gráficamente en las figuras 4.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 Estudio de la formación de hueso in vivo Reactivos
Se adquirió FGF-1 de Peprotech Inc. (rocky Hill, NJ). Se sintetizo RGD-6 (denominado aquí D-00006) de CS Bio (San Carlos, CA) según las instrucciones de los autores de la invención.
D-0006: TDLQERGDNDISPFSGDGQPFKD (SEQ ID NO: 49)
Ratones
Se adquirieron ratones de cuatro semanas de vida de SLC Japan Co. Ltd. (Shizuoka, Japón) y se repartieron de manera aleatoria en tres grupos (n = 5).
Ensayo de crecimiento de calvaria de ratón
Se inyectaron por vía subcutánea D-00006 (20 \mug/kg/día), FGF-1 (12,5 \mug/kg/día) o vehículo (solución salina) en tejidos blandos adyacentes a los calvaria de los animales de ensayo. Se dividió la cantidad diaria de las muestras en dos, respectivamente, y se inyectaron dos veces al día durante cinco días. Al cabo de 15 días de la administración, se extirparon los calvaria y se cortaron por la mitad a lo largo de la sutura sagital y se proporcionaron para el análisis histomorfométrico.
Análisis histomorfométrico
Se fijaron los calvaria con formalina tamponada neutra al 10%, se descalcificaron con EDTA al 4,13% y se embebieron en parafina. Se obtuvieron secciones de 4 mm de grosor y se mancharon con hematoxilina y eosina. Se midió el área del hueso nuevo utilizando Image-Pro Plus (media Cybernetics, Siver Spring, MD).
Resultados
Las secciones de los calvaria de los animales tratados con FGF-1 presentaron una significativa expansión del área del hueso en comparación con el grupo tratado con vehículo. Las de los animales tratados con D-00006 también presentaron una significativa expansión del área del hueso en comparación con el grupo tratado con vehículo y la eficacia fue equivalente a la de FGF-1. Los datos de estos resultados se muestran gráficamente en la figura 5.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 4 Efecto de D-000066 en la excreción de fosfato renal Diseño y tratamientos experimentales
Se aclimataron 40 ratas Sprague-Dawley hembra vírgenes de 3 meses de vida (Harlan Sprague Dawley, Inc.) durante una semana antes de comenzar los experimentos. Tras el período de aclimatación, se repartieron de manera aleatoria los animales según el peso inicial del cuerpo en grupos de tratamiento, tal como se indica en la tabla 1. Ovx: ovarectomizado; LD; dosis baja; HD; dosis alta; Est: estradiol, D-00006 (TDLQERGDNDISPFSGDGQPFKD; SEQ ID NO: 49)
TABLA 1
6
Un día antes de iniciar los tratamientos, se anestesiaron los animales con una mezcla de anestésico cetamina/xilazina y se ovarioectomizaron los animales del los grupos 2-5.
Se recogió orina en jaulas metabólicas el día 41. Se recogieron muestras de sangre y de orina para los ensayos químicos y para determinar los marcadores de recambio óseo una vez transcurrido un período de tratamiento de 41 días. Antes de recoger orina y sangre, se colocó a los animales en jaulas metabólicas y se les privó de alimento durante toda la noche durante un período de ayuno de 18 horas. Se recogieron las muestras de orina y se registraron los volúmenes. A continuación, se centrifugaron las muestras de orina a aproximadamente 3000 x g durante 10 minutos en una centrífuga refrigerada. Se filtraron las muestras para eliminar los sedimentos contaminantes.
Química de suero y orina
Los niveles de calcio y creatinina en suero totales fueron los mismos en todos los grupos de tratamiento, a excepción de que los animales Ovx tratados con estradiol presentaron un ligero aumento en el calcio en suero. Se produjo un aumento dependiente de dosis en el fósforo en suero en los grupos tratados con D-0006. El volumen en la orina total, recogida a lo largo de un período de 18 horas, fueron los mismos en todos los grupos. En la figura 6 se muestran los parámetros de orina derivados.
La cantidad total de fósforo en las muestras recogidas de orina a las 18 horas presentaron una significativa reducción de los grupos tratados con D-00006. Como resultado, los grupos tratados con D-0006 presentaron una eliminación de fosfato inferior y un mayor porcentaje de reabsorción tubular. Se demostró claramente que D-00006 es un agente que conserva el fósforo en la circulación.
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> Kumagai, Yoshinari
\hskip1cm
Blacher, Russell Wayne 
\hskip1cm
Yoneda, Toshiyuki 
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Contiene motivo de unión a integrina
\hskip1cm
Péptidos y métodos de tratamiento de enfermedades esqueléticas 
\vskip0.400000\baselineskip
<130> BERA-006W02
\vskip0.400000\baselineskip
<140> 09/812.485
\vskip0.400000\baselineskip
<141> 2001-03-19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 09/641.034
\vskip0.400000\baselineskip
<151> 2000-08/16
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 50
\vskip0.400000\baselineskip
<170> FastSEQ para Windows versión 4.0
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 97
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
7 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 47
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
8 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 47
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
9 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 47
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
10 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 44
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
11 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 44
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
12 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 37
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
13 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 41
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
14 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
15 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
16 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
17 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
18 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
19 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
20 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
21 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
22 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
23
24 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
25 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
26 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
27 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
28 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
29 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 40
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
30 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 40
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
31 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
32 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
33 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 45
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
34 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
35 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\vskip1.000000\baselineskip
36 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\vskip1.000000\baselineskip
37 
\hskip1.2cm
38 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\vskip1.000000\baselineskip
39 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 40
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
40 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 33
41 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 34
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 34
42 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 35
43 
\hskip1.1cm
44 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 36
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 36
\vskip1.000000\baselineskip
45 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 37
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 37
\vskip1.000000\baselineskip
46 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 38
\vskip1.000000\baselineskip
47 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 39
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 39
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
48 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 40
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 40
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
49 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 41
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 41
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
50 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 42
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Compuesto peptídico
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 42
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
51 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 43
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Motivo de unión a calcio
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2, 4, 6, 8, 10, 11
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa = cualquier aminoácido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 43
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
52 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 44
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> péptido D-00001
\vskip0.400000\baselineskip
<221> AMIDACIÓN
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 44
\vskip1.000000\baselineskip
53 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 45
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> péptido D-00002
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<221> AMIDACIÓN
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 45
\vskip1.000000\baselineskip
54 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 46
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> péptido D-00003
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<221> AMIDACIÓN
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 46
\vskip1.000000\baselineskip
55 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 47
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> péptido D-00004
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<221> AMIDACIÓN
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 47
\vskip1.000000\baselineskip
56 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 48
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> péptido D-00005
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<221> AMIDACIÓN
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 48
\vskip1.000000\baselineskip
57 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 49
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> péptido D-00006
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<221> AMIDACIÓN
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 49
\vskip1.000000\baselineskip
58 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 50
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> péptido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> motivo de unión a glucosaminoglucona
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa = cualquier aminoácido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 50
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
59

Claims (9)

1. Un péptido tal como se describe en la SEQ ID NO: 47 ó SEQ ID NO: 49.
2. Un multímero del péptido de la reivindicaciones 1.
3. Una formulación que comprende:
un vehículo y
una cantidad terapeúticamente efectiva de un péptido según la reivindicación 1 ó 2.
\vskip1.000000\baselineskip
4. La formulación según la reivindicación 3, en la que el vehículo es una solución salina y la formulación es inyectable.
5. La formulación según la reivindicación 3, en la que el vehículo es una pasta y la formulación es una pasta dentífrica.
6. La formulación según la reivindicación 3, en la que el vehículo es una solución con sabor acuosa y la formulación es un colutorio.
7. Un parche para administración oral o transdérmica de un compuesto, comprendiendo dicho parche una formulación según la reivindicación 3.
8. Uso de un compuesto peptídico según la reivindicación 1 ó 2 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno causado por una pérdida ósea.
9. Uso de un compuesto peptídico según la reivindicación 1 ó 2 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de caries dentales, osteoporosis, enfermedad de Paget, filtración de fosfato renal, osteodistrofia renal, cáncer mediado por osteolisis, fracturas e hiperparatiroidismo.
ES01965941T 2000-08-16 2001-08-14 Motivo de union a integrina que contiene peptidos y metodo para el tratamiento de enfermedades del esqueleto. Expired - Lifetime ES2324153T3 (es)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US64103400A 2000-08-16 2000-08-16
US641034 2000-08-16
US09/812,485 US6911425B2 (en) 2000-08-16 2001-03-19 Integrin binding motif containing peptides and methods of treating skeletal diseases
US812485 2001-03-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2324153T3 true ES2324153T3 (es) 2009-07-31

Family

ID=27093672

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES01965941T Expired - Lifetime ES2324153T3 (es) 2000-08-16 2001-08-14 Motivo de union a integrina que contiene peptidos y metodo para el tratamiento de enfermedades del esqueleto.

Country Status (11)

Country Link
US (5) US6911425B2 (es)
EP (1) EP1309616B1 (es)
JP (3) JP4318246B2 (es)
CN (1) CN100488980C (es)
AT (1) ATE430165T1 (es)
AU (2) AU8649101A (es)
CA (1) CA2418716A1 (es)
DE (1) DE60138552D1 (es)
ES (1) ES2324153T3 (es)
MX (1) MXPA03001394A (es)
WO (1) WO2002014360A1 (es)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4424575B2 (ja) * 1998-05-18 2010-03-03 ユニバーシティー カレッジ ロンドン 新規ポリペプチドホルモン・フォスファトニン
US6911425B2 (en) * 2000-08-16 2005-06-28 Acologix, Inc. Integrin binding motif containing peptides and methods of treating skeletal diseases
JP4638653B2 (ja) * 2000-08-16 2011-02-23 アコロジックス インコーポレイテッド 骨成長促進ペプチドを含む歯科用製品
BRPI0417098B1 (pt) * 2003-12-01 2015-07-07 Arla Foods Amba Formulação dental compreendendo osteopontina, bem como o uso da mesma
JP2008526871A (ja) * 2005-01-07 2008-07-24 アコロジックス インコーポレイティッド 歯周および歯の治療のためのペプチド製剤
JP2009502782A (ja) * 2005-07-18 2009-01-29 アコロジックス インコーポレイティッド 硬組織形成を促進するためのタンパク質製剤
CN100366302C (zh) * 2006-09-14 2008-02-06 清华大学 一种用于骨修复的矿化多肽材料及其制备方法
EP2117578B1 (en) * 2007-01-22 2015-04-22 OrthoTrophix, Inc. A peptide composition and a method of promoting cartilage formation
JP5519121B2 (ja) * 2008-06-02 2014-06-11 学校法人東日本学園 新規ｒｇｄ含有ペプチドおよび象牙質再生剤、骨再生剤、歯周組織再生剤
EP2575740A4 (en) * 2010-06-01 2015-09-30 Belle Aire Fragrances Inc METHOD AND PRODUCT FOR COMBATTING ORAL ODORS
RU2503458C1 (ru) * 2012-08-27 2014-01-10 Сергей Васильевич Чуйкин Способ местного лечения и профилактики основных стоматологических заболеваний у детей с хронической почечной недостаточностью с применением жевательного фитосубстрата
JP6692676B2 (ja) * 2016-04-12 2020-05-13 学校法人東日本学園 ネフロネクチンを含むう蝕治療剤
CN106943311A (zh) * 2017-04-07 2017-07-14 缪来耿 一种用于预防和或治疗牙周炎的牙膏及其制备方法
WO2018231793A1 (en) * 2017-06-14 2018-12-20 Othrotrophix Method of alleviating joint pain
US11963996B2 (en) 2018-10-24 2024-04-23 Orthotrophix, Inc. Method of treating knee pain
CN109762069B (zh) * 2018-11-05 2022-01-14 广州领晟医疗科技有限公司 一种融合蛋白、其药物组合物及用途
CN111358935B (zh) * 2020-02-27 2023-06-27 广州领晟医疗科技有限公司 多肽在制备抗肿瘤和/或抑制肿瘤转移药物中的用途及药物
CN111265652B (zh) * 2020-02-27 2023-06-27 广州领晟医疗科技有限公司 多肽在制备治疗缺血性脑血管疾病的药物中的应用
CN111249446B (zh) * 2020-02-27 2023-06-27 广州领晟医疗科技有限公司 多肽及其盐的新用途
CN111569046B (zh) * 2020-04-14 2023-06-27 广州领晟医疗科技有限公司 多肽在制备治疗胰腺炎药物中的用途及含有其的药物
US11793857B2 (en) 2020-10-01 2023-10-24 Orthotrophix, Inc. Hard tissue therapeutics

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5015628A (en) 1986-06-12 1991-05-14 The University Of Melbourne Anticariogenic phosphopeptides
US5120829A (en) * 1989-03-20 1992-06-09 La Jolla Cancer Research Foundation Hydrophobic attachment site for adhesion peptides
JPH0474132A (ja) * 1990-07-13 1992-03-09 Lion Corp 歯根膜ならびに歯槽骨組織再生修復促進剤
GB9203958D0 (en) 1992-02-25 1992-04-08 Norske Stats Oljeselskap Catalytic multi-phase reactor
US5981478A (en) * 1993-11-24 1999-11-09 La Jolla Cancer Research Foundation Integrin-binding peptides
US6103709A (en) 1993-12-23 2000-08-15 The Regents Of The University Of California Therapeutically effective 1α,25-dihydroxyvitamin D3 analogs and methods for treatment of vitamin D diseases
US5770565A (en) * 1994-04-13 1998-06-23 La Jolla Cancer Research Center Peptides for reducing or inhibiting bone resorption
US6027592A (en) 1995-06-06 2000-02-22 Gillette Canada Inc. Dental floss
US6300062B1 (en) 1995-07-13 2001-10-09 Biora Ab Enamel matrix related polypeptide
US5837674A (en) 1996-07-03 1998-11-17 Big Bear Bio, Inc. Phosphopeptides and methods of treating bone diseases
JP2002500898A (ja) 1997-08-15 2002-01-15 チルドレンズ メディカル センター コーポレーション オステオポンチン被膜表面及びその利用法
US6146655A (en) 1997-08-29 2000-11-14 Softy-Flex Inc. Flexible intra-oral bandage and drug delivery system
US6410248B1 (en) 1998-01-30 2002-06-25 Massachusetts Institute Of Technology General strategy for selecting high-affinity zinc finger proteins for diverse DNA target sites
WO1999043844A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Reciprocal subtraction differential display
JP4424575B2 (ja) 1998-05-18 2010-03-03 ユニバーシティー カレッジ ロンドン 新規ポリペプチドホルモン・フォスファトニン
US6673900B2 (en) * 1999-11-04 2004-01-06 University College London Polypeptide hormone-phosphatonin
US6045780A (en) 1998-06-22 2000-04-04 Shemberg Marketing Corporation Toothpaste composition
AUPP893999A0 (en) * 1999-03-01 1999-03-25 Csl Limited Synthetic peptides containing protective epitopes for the treatment and prevention of periodontitis associated with porphyromonas gingivalis
US6145655A (en) * 1999-10-04 2000-11-14 Tsai; Allan Lens cleaning kit
EP1130098A3 (en) 2000-02-29 2003-09-10 Pfizer Products Inc. Mammalian osteoregulins
WO2001072826A2 (en) 2000-03-24 2001-10-04 Genzyme Corporation Oncogenic osteomalacia-related gene 1
EP1301196B1 (en) 2000-07-19 2003-11-26 The Board of Regents, The University of Texas System Stimulation of bone growth with thrombin peptide derivatives
JP4638653B2 (ja) * 2000-08-16 2011-02-23 アコロジックス インコーポレイテッド 骨成長促進ペプチドを含む歯科用製品
US6911425B2 (en) * 2000-08-16 2005-06-28 Acologix, Inc. Integrin binding motif containing peptides and methods of treating skeletal diseases

Also Published As

Publication number Publication date
MXPA03001394A (es) 2004-12-13
CN1458935A (zh) 2003-11-26
US20090042791A1 (en) 2009-02-12
AU8649101A (en) 2002-02-25
EP1309616A1 (en) 2003-05-14
CN100488980C (zh) 2009-05-20
US20050163728A1 (en) 2005-07-28
AU2001286491B2 (en) 2006-04-27
JP4318246B2 (ja) 2009-08-19
ATE430165T1 (de) 2009-05-15
EP1309616B1 (en) 2009-04-29
US20070014742A1 (en) 2007-01-18
DE60138552D1 (de) 2009-06-10
US20090062201A1 (en) 2009-03-05
CA2418716A1 (en) 2002-02-21
JP2007302673A (ja) 2007-11-22
US20020197267A1 (en) 2002-12-26
US7160862B2 (en) 2007-01-09
EP1309616A4 (en) 2004-12-08
WO2002014360A1 (en) 2002-02-21
JP2004506654A (ja) 2004-03-04
US6911425B2 (en) 2005-06-28
JP2011032286A (ja) 2011-02-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2324153T3 (es) Motivo de union a integrina que contiene peptidos y metodo para el tratamiento de enfermedades del esqueleto.
US7498021B2 (en) Dental products comprising bone growth enhancing peptide
JP7107600B2 (ja) 象牙質知覚過敏症緩和のための歯磨き剤組成物
ES2224260T3 (es) Fosfopeptido sintetico para tratar enfermedades oseas.
AU2001286491A1 (en) Integrin binding motif containing peptides and methods of treating skeletal diseases
US20090074680A1 (en) Statherin peptide and use in medicine
JP2022177133A (ja) 象牙質知覚過敏症緩和のための口腔衛生用組成物
AU2001283268A1 (en) Dental products comprising bone growth enhancing peptide