ES2308223T3 - Formulaciones antitum0rales que comprenden defibrotido solo o en combinacion con otros agentes antitumorales. - Google Patents

Abstract

Uso de defibrótido para la fabricación de una formulación con acción antitumoral.

Description

Formulaciones antitumorales que comprenden defibrótido solo o en combinación con otros agentes antitumorales.

El objeto de la presente invención es tratar a un mamífero que tiene un tumor por medio de la administración a dicho mamífero de una cantidad eficaz de defibrótido.

Antecedentes de la invención

El término defibrótido (en lo sucesivo DF) normalmente identifica un polidesoxirribonucleótido que se obtiene por extracción a partir de tejidos animales y/o vegetales (1, 2); el polidesoxirribonucleótido normalmente se usa en forma de una sal de metal alcalino, generalmente una sal de sodio, y generalmente tiene un peso molecular de aproximadamente 45-50 kDa (Número de Registro CAS: 83712-60-1).

El DF se usa principalmente debido a su actividad antitrombótica (3), aunque puede usarse en otras aplicaciones tales como, por ejemplo, el tratamiento de una insuficiencia renal aguda (4) y el tratamiento de isquemia de miocardio aguda (5). El DF también se usa en el tratamiento de situaciones clínicas de urgencia, por ejemplo, para eliminar la toxicidad relacionada con altas dosis de regímenes de quimioterapia, en particular, el síndrome veno-oclusivo hepático (10, 11); se ha demostrado que el DF tiene acción protectora hacia la apoptosis inducida por fludarabina y hacia la aloactivación de células endoteliales y epiteliales, sin alterar los efectos antileucémicos de la fludarabina (12); también existen datos preclínicos sobre los efectos protectores del DF que se han conseguido en un modelo de lesión endotelial mediada por lipopolisacárido (13). En ciertas Patentes de Estados Unidos (6, 7) se describe un método para producir DF que puede producir un producto que tiene características físicas/químicas uniformes y bien definidas y que también carece de los posibles efectos secundarios.

Descripción de la invención

En el siguiente estudio, se examinó DF en combinación con agentes citotóxicos antiblásticos en un modelo de células de carcinoma mamario EMT-6 de ratón y en células endoteliales bovinas, en cultivos celulares y en un modelo experimental en el que se usaron ratas que tenían tumores sometidas a altas dosis de quimioterapia.

La exposición a DF a una concentración de 50 \mug/ml, antes y durante, o durante y después de la exposición de células de carcinoma mamario EMT-6 de ratón en cultivo con 4-hidroperoxiciclofosfamida (4HC) aumenta considerablemente la citotoxicidad de 4HC en tal medida que produce un aumento de 2 unidades logarítmicas en la destrucción de las células tumorales a concentraciones de 4HC comprendidas entre 50 y 250 \mumoles (véase la figura 1). La exposición a DF a concentraciones de 50 \mug/ml también conduce a un aumento en la citotoxicidad de tiotepa con una clara diferencia basada en el método de exposición. En particular, la exposición de células EMT-6 a DF antes y durante la exposición a tiotepa aumenta la citotoxicidad hacia las células tumorales en dos unidades logarítmicas para concentraciones de tiotepa comprendidas entre 100 y 250 \mumoles. Un dato interesante que aparece es que la exposición de células EMT-6 a DF durante y después de la exposición a tiotepa conduce a un aumento de citotoxicidad, aunque en una menor medida, mostrando un aumento comprendido entre 0,5 y 1 unidad logarítmica en la citotoxicidad de tiotepa. Se ha observado un resultado similar con el carboplatino; sin embargo, la exposición a DF antes y durante o durante y después de la exposición a melfalán no mostró ningún efecto significativo sobre la citotoxicidad del melfalán hacia células de carcinoma mamario EMT-6 de ratón en cultivo.

Por otra parte, aunque se demostró que la citotoxicidad de estos agentes alquilantes antiblásticos (AA) individuales hacia las células endoteliales bovinas en cultivo era similar a la observada en células de carcinoma mamario EMT-6, no se demostró ningún aumento de citotoxicidad cuando este tipo de modelo de cultivo de células se expuso a AA en asociación con DF a una concentración de 50 \mug/ml.

La hepatotoxina monocrotalina y el AA carmustina (BCNU), solos o en asociación con DF, se ensayaron in vivo en un modelo experimental que usaba ratas que tenían el carcinoma mamario 13762. En este modelo experimental, no se demostró ninguna toxicidad adicional en los animales cuando se expusieron a estos agentes junto con DF, pero se observó un retraso del crecimiento tumoral (TGD) significativo (véase la tabla 1 y las figuras 2a y 2b).

TABLA 1 Retraso de crecimiento tumoral en ratas que tienen el carcinoma mamario 13762 después del tratamiento con monocrotalina o BCNU, solos o en asociación con defibrótido (DF). El tumor se implantó el día 0 y la quimioterapia se administró el día 8 y el día 18

1

Estos estudios se han reproducido con el uso de monocrotalina, BCNU y ciclofosfamida (CTX), individualmente o en combinación con DF, en el mismo modelo experimental. En comparación con el control, se observó un retraso del crecimiento tumoral (TGD) significativo con el uso de DF solo (p < 0,05); este retraso fue particularmente significativo cuando el DF se asoció con CTX y BCNU (p < 0,04) y fue notablemente mayor que el obtenido por el uso individual de cada agente. De manera inesperada, cuando el DF se usó solo, al principio retrasó el crecimiento del tumor pero posteriormente el crecimiento tumoral volvió de nuevo a la situación normal. Además, cuando el DF se usó en combinación con un AA, se aceleró el crecimiento del tumor en cuanto cesó la coadministración de DF. Estos datos sugieren no sólo un efecto antitumoral adicional del DF, sino también una actividad antiblástica directa del propio DF.

También se observó una reducción en el crecimiento tumoral (TGD) y en el número de metástasis pulmonares en ratones que tenían carcinoma pulmonar de Lewis cuando se añadió DF al tratamiento con paclitaxel, tanto si estaba asociado con carboplatino como si no, y en comparación con la terapia citotóxica sola, pero sin mostrar un aumento evidente de la toxicidad (datos no presentados). El mecanismo subyacente a estos efectos aún no se ha explicado, pero es posible que intervengan las propiedades antiadhesivas del DF, dado el papel de la adhesión celular en los mecanismos implicados en la resistencia a fármacos (8, 9).

También se ensayó si el DF tiene actividad in vivo en un modelo murino de mieloma múltiple (MM) humano. Se irradiaron (450 rads) sesenta ratones SCID/NOD macho (de 6-8 semanas de edad) y, 24 horas después, se les inyectaron por vía s.c. 5 x 10^{6} células de mieloma múltiple humano MM-1S. Después de que se formaran tumores palpables, los ratones se asignaron aleatoriamente a 6 cohortes (de 10 ratones cada una) que recibieron a) vehículo; b) DF (i.v. 450 mg/kg b.i.d); c) 2,5 mg/kg de melfalán (MEL) i.p. una vez por semana; d) 50 mg/kg de ciclofosfamida (CTX) i.p., los días 8, 10, 12, 20, 22 y 24; e) y f) combinaciones de DF (300 mg/kg i.v.) con MEL o CTX, respectivamente. En los ratones se controlaron cada 3 días el peso corporal, la toxicidad potencial y los volúmenes tumorales medidos con un calibre electrónico.

El DF, como un solo agente o en combinación con MEL o CTX, se toleraba bien sin complicaciones hemorrágicas o pérdida de peso corporal (P > 0,05) en todos los grupos. Las variables de valoración principales de eficacia fueron a) los cambios en el volumen tumoral y b) la supervivencia global (tiempo transcurrido hasta el sacrificio, realizado cuando los diámetros tumorales eran mayores de 2 cm). El tratamiento con DF tuvo como resultado volúmenes tumorales significativamente menores que en los ratones de control (P < 0,05 para todas las comparaciones por análisis de varianza y ensayos post-hoc); en combinación con MEL o CTX, inducía una reducción significativa de los volúmenes tumorales en comparación con la quimioterapia citotóxica con un solo agente respectiva (P < 0,05 para todas las comparaciones). El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier demostró que la administración de DF, como un solo agente o en combinación con quimioterapia citotóxica (MEL o CTX), estaba asociada con una prolongación estadísticamente significativa de la supervivencia global, en comparación con el grupo de control tratado con vehículo o los grupos tratados con MEL o CTX, respectivamente (P < 0,001 para todas las comparaciones, ensayo de log-rank). De manera interesante, los estudios in vitro no han demostrado un efecto citotóxico directo significativo in vitro del DF contra las células MM, lo cual sugiere que la actividad observada in vivo puede deberse al efecto o efectos sobre las interacciones de las células MM con su entorno local.

Estos resultados prometedores demuestran que el DF no confiere protección tumoral en este modelo de quimioterapia del MM y constituye la primera prueba de principio de que el DF no sólo tiene actividad antitumoral in vivo contra MM, sino que también aumenta las respuestas al tratamiento citotóxico. Este estudio sugiere que la actividad anti-MM del DF se debe posiblemente a sus efectos sobre las interacciones de las células MM con su microentorno y proporciona un marco para ensayos clínicos futuros del DF en combinación con otros agentes para el tratamiento del MM y otras neoplasias. Por lo tanto, es un objeto de la presente invención el uso de DF para la fabricación de una formulación con actividad antitumoral. El DF puede administrarse en combinación con al menos otro ingrediente activo con acción antitumoral. El otro ingrediente activo con actividad antitumoral puede seleccionarse entre paclitaxel, monocrotalina, BCNU, melfalán y/o ciclofosfamida.

Para los fines de la presente invención, el término diafibrótido (DF) debe entenderse como cualquier oligonucleótido y/o polinucleótido producido por extracción a partir de tejidos animales y/o vegetales, en particular, a partir de órganos de mamífero. Preferiblemente, el DF se producirá de acuerdo con el método descrito en las patentes de Estados Unidos (6, 7) que se incorporan en el presente documento como referencia.

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Bibliografía

1. Documento US-3.770.720

2. Documento US-3.839.481

3. Documento US-3.829.,567

4. Documento US-4.694.134

5. Documento US-4.693.995

6. Documento US-4.985.552

7. Documento US-5.223.609

8. Carlo-Stella, C., Di Nicola, M., Magni M., et al. Defibrotide in Combination with Granulocyte Colony-stimulating Factor Significantly Enhances the Mobilization of Primitive and Committed Peripheral Blood Progenitor Cells in Mice. Cancer Research, 2002, 62:6152-6157 (1 de noviembre de 2002).

9. Hazlehurst, L., Damiano, J., Buyuksal, I., Pledger, W.J., Dalton, W.S., Adhesion to fibronectin via b1 integrins regulates p27 kip 1 levels and contributes to cell adhesion mediated drug resistance (CAM-DR). Oncogene, 2000; 19:4319-4327.

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10. Richardson, P.G., Elias, A.D., Krishnan, A., et al. Treatment of severe veno-occlusive disease with defibrotide: compassionate use results in response without significant toxicity in a high-risk population. Blood, 1998; 92: 737-44.

11. Richardson, P., Murakami, C., Jin, Z. et al., Multi-institutional use of defibrotide in 88 patients after stem cell transplantation with severe veno-occlusive disease and multi-system organ failure: response without significant toxicity in a high risk population and factors predictive of outcome. Blood, 2002; 100(13):4337-4343.

12. Eissner, G., Multhoff, G., Gerbitz, A., et al., Fiudarabine induces apoptosis, activation, and allogenicity in human endothelial and epithelial cells: protective effect of defibrotide. Blood, 2002; 100:334-340.

13. Falanga, A., Vignoii, A., Marchetti, M., Barbui, T. Defibrotide reduces procoagulant activity and increases fibrinolytic properties of endothelial cells. Leukemia, 2003; en prensa.

Claims (6)

1. Uso de defibrótido para la fabricación de una formulación con acción antitumoral.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el defibrótido se usa en combinación con al menos otro ingrediente activo con acción antitumoral.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque dicho otro ingrediente activo con acción antitumoral se selecciona entre paclitaxel, monocrotalina, BCNU, melfalán y/o ciclofosfamida.

4. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque dicho mamífero es un ser humano.

5. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque dicho mamífero padece mieloma múltiple.

8. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque dicho mamífero padece carcinoma mamario.