ES2286275T3

ES2286275T3 - Compuestos de pirazolo sustituidos para el tratamiento de la inflamacion.

Info

Publication number: ES2286275T3
Application number: ES02763656T
Authority: ES
Inventors: Suzanne Metz; Michael Clare; Joyce Z. Crich; Timothy J. Hagen; Gunnar J. Hanson; He Huang; Stephen J. Houdek; Michael A. Stealey; Michael L. Vazquez; Richard M. Weier; Xiangdong Xu
Original assignee: Pharmacia LLC
Current assignee: Pharmacia LLC
Priority date: 2001-09-19
Filing date: 2002-09-19
Publication date: 2007-12-01
Anticipated expiration: 2022-09-19
Also published as: BR0212617A; MXPA04002682A; CA2460939C; ATE363473T1; CA2460939A1; US7211597B2; DE60220422D1; US20030114432A1; EP1427706A1; DE60220422T2; WO2003024936A1; EP1427706B1; JP2005510466A

Abstract

Un compuesto de **fórmula**, en la que Q se selecciona del grupo constituido por: S(O)pCH2, OCH2, CR15=N, N=CR15, -CO-O-, -CO-NH-, -CO-N(alquil)- y NR5CH2; R4 se selecciona del grupo constituido por: halógeno, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, ciano, alcoxicarbonilo, alquilo, haloalquilo, hidrido, hidroxialquilo, haloalcoxi, heterociclo, nitro, acilamino, arilo, heteroarilo y alquenilo, OR13, SR8, SO2N(R8)R8'', NHR9, NHCOR9, NR9COR9, NHCO(OR9), NR9CO(OR9), NR6SO2R10, NHSO2N(R10)R10'', NR6CON(R10)R10'', COR9, CO2R8, CON(R8)R8'', en los que R8 y R8'' pueden tomarse conjuntamente formando un anillo carbocíclico de 3-7 miembros que tiene 1 a 3 heteroátomos sustituidos o no sustituidos seleccionados de S, SO, SO2, O, N y NR6, y en los que R10 y R10'' pueden tomarse conjuntamente formando un anillo carbocíclico de 3-7 miembros que tiene 1 a 3 heteroátomos sustituidos o no sustituidos seleccionados de S, SO, SO2, O, N y NR8, en los que dicho arilo, heterociclo, heteroarilo o alquenilo están opcionalmente sustituidos con R9; R5 se selecciona del grupo constituido por: hidrido, alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo y heteroarilalquilo, en los que arilo, alquilo, arilalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo o heteroarilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados del grupo constituido por OR14 y N(R14)R14''; R6 se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido, arilo, heteroarilo, alquilo inferior, haloalquilo, alquenilo, alquinilo, hidroxialquilo, aminoalquilo, alquilaminoalquilo, alcoxi, alcoxialquilo, heterocicloalquilo y heterociclo; o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

Description

Compuestos de pirazolo sustituidos para el tratamiento de la inflamación.

Campo de la invención

La presente invención pertenece en general al campo de los agentes farmacéuticos antiinflamatorios, y específicamente se refiere a derivados de pirazolilo sustituidos, a composiciones que los comprenden y a su uso en la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer, la inflamación y trastornos asociados a la inflamación tales como artritis.

Antecedentes de la invención

La siguiente descripción de los antecedentes de la invención se proporciona para ayudar a la comprensión de la invención, pero no se admite que pertenezca o describa la técnica anterior a la invención.

El NF-\kappaB es un factor de transcripción ubicuo que desempeña un papel destacado en la activación del sistema inmune y en las respuestas de estrés regulando la transcripción de muchos genes tempranos inducibles, incluyendo citocinas proinflamatorias, moléculas de adhesión, factores de crecimiento, enzimas y receptores (Ghosh, S., May, M.J. y Kopp, E. (1998) Annu. Rev. Immunol. 16, 115-260; Zandi, E. y Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274, 27399-27342). La especificidad de la expresión génica está determinada a nivel celular por un diverso grupo de estímulos externos tales como productos bacterianos, incluyendo LPS, así como citocinas, de forma más importante factor de necrosis tumoral \alpha (TNF\alpha) e interleucina \beta (IL1\beta). Mediante la interacción sinérgica con otros factores de transcripción, puede conseguirse una especificidad adicional manteniendo un enorme potencial de inducir coordinadamente un gran número de genes funcionalmente relevantes. El NF-\kappaB está compuesto por homo- y heterodímeros de la familia de la proteína Rel y es secuestrado en forma inactiva en el citoplasma por miembros de la familia de proteínas inhibidoras I\kappaB (Ghosh, S., May, M.J. y Kopp. E. (1998), Annu. Rev. Immunol. 16, 115-260; Zandi, E. y Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274, 27399-27342). Las I\kappaB enmascaran la señal de localización nuclear en NF-\kappaB, evitando la translocación nuclear y por tanto la unión de ADN a las regiones promotoras de los genes sensibles. La estimulación de las células con un agonista que active NF-\kappaB conduce a una serie de señales bioquímicas, dando como resultado en última instancia la fosforilación, ubiquitinilación y degradación de las I\kappaB, liberando así a NF-\kappaB para la translocación nuclear (Ghosh, S., May, M.J. y Kopp. E. (1998), Annu. Rev. Immunol. 16, 115-260; Zandi, E. y Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274, 27399-27342). Recientemente, se han clonado y caracterizado dos cinasas I\kappaB (IKK1 o IKK\alpha e IKK2 o IKK\beta), que fosforilan las I\kappaB y por tanto inician su degradación, por una serie de laboratorios (Ghosh, S., May, M.J. y Kopp. E. (1998), Annu. Rev. Immunol. 16, 115-260; Zandi, E. y Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274, 27399-27342). Las subunidades catalíticas, IKK1 e IKK2, son similares estructural así como enzimáticamente y existen en forma de un heterodímero en un gran complejo proteico designado como el señalosoma IKK (Regnier, C., Song. H, Gao, X., Goeddel, D., Cao, Z. y Rothe, M. (1997) Cell 90, 373-383; DiDonato, J.A., Hayakawa, M., Rothwarf, D.M., Zandi, E. y Karin, M. (1997) Nature 388, 548-554; Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B.W., Shevchenko, A., Bennett, B.L., Li, J.W., Young, D.B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. y Roa, A. (1997) Science 278, 860-866; Zandi, E., Rothwarf, D.M., Delhase, M., Hayadawa, M. y Karin, M. (1997) Cell 91, 243-252; Woronicz, J.D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. y Goeddel, D.V. (1997) Science 278, 866-869). Una tercera proteína, NEMO (EKK\gamma, IKKAP1), es una proteína adaptadora reguladora necesaria para la activación de IKK y la actividad cinasa (Yamaoka, S., Courtois, G., Bessia, C., Whiteside, S.T., Weil, R., Agou, F., Kirk, H.E., Kay, R.J. e Ireal, A. (1998) Cell 93, 1231-1240; Rothwarf, D.M., Zandi, E., Natoli, G., Karin, M. (1998) Nature 395, 297; Mercurio, F., Murray, B.W., Shevchenko, A., Bennett, B.L., Young, D.B., Li, J.W., Pascual, G., Motiwala, A., Zhu, H, Mann, M. y Manning, A.M. (1999) Mol. Cell. Biol. 2, 1526-1538). IKK1 e IKK2 se coexpresan en la mayoría de los tejidos adultos humanos, así como en diferentes etapas de desarrollo de embriones de ratón (Regnier, C., Song. H, Gao, X., Goeddel, D., Cao, Z. y Rothe, M. (1997) Cell 90, 373-383; DiDonato, J.A., Hayakawa, M., Rothwarf, D.M., Zandi, E. y Karin, M. (1997) Nature 388, 548-554; Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B.W., Shevchenko, A., Bennett, B.L., Li, J.W., Young, D.B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. y Roa, A. (1997) Science 278, 860-866; Zandi, E., Rothwarf, D.M., Delhase, M., Hayadawa, M. y Karin, M. (1997) Cell 91, 243-252; Woronicz, J.D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. y Goeddel, D.V. (1997) Science 278, 866-869; Hu, M.C.T., y Wang, Y. (1998) Gene 222, 31-40). Este complejo cinasa parece representar un denominador común crítico en la activación de NF-\kappaB en una serie de rutas de transducción de señal estimuladas por una variedad de agonistas, incluyendo citocinas tales como TNF\alpha e IL1\beta, productos microbianos tales como LPS y proteínas virales tales como TAX, así como ésteres de forbol, agentes oxidantes y serina/tirosina fosfatasas (Ghosh, S., May, M.J. y Kopp, E. (1998) Annu. Rev. Immunol. 16, 115-260; Zandi, E. y Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274, 27399-27342).

Se clonó simultáneamente IKK1 (también denominada IKK\alpha, Regnier, C., Song. H, Gao, X., Goeddel, D., Cao, Z. y Rothe, M. (1997) Cell 90, 373-383; DiDonato, J.A., Hayakawa, M., Rothwarf, D.M., Zandi, E. y Karin, M. (1997) Nature 388, 548-554; Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B.W., Shevchenko, A., Bennett, B.L., Li, J.W., Young, D.B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. y Roa, A. (1997) Science 278, 860-866) mediante purificación bioquímica convencional de la actividad cinasa I\kappaB a partir de células HeLa S3 estimuladas con TNF\alpha y mediante su interacción con MAP3K, la cinasa inductora de NF-\kappaB (NIK), en una selección de dos híbridos de levadura. Se identificó IKK1 como la serina/treonina cinasa previamente clonada CHUK (Connely, M. y Marcu, K. (1995) Cell. Mol. Biol. Res. 41, 537-549). IKK1 (también denominada IKK\alpha) es una proteína de 85 kDa y 745 aminoácidos que contiene un dominio catalítico serina/treonina cinasa N-terminal, una hélice anfipática similar a cremallera de leucina y un dominio de hélice-bucle-hélice C-terminal. Se clonó también IKK2 (también denominada IKK\beta) mediante purificación bioquímica convencional, copurificando con IKK1 a partir de células HeLa S3 estimuladas con TNF\alpha, así como se identificó en la base de datos pública a partir de un clon EST con homología de secuencia con IKK1 (Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B.W., Shevchenko, A., Bennett, B.L., Li, J.W., Young, D.B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. y Roa, A. (1997) Science 278, 860-866; Zandi, E., Rothwarf, D.M., Delhase, M., Hayadawa, M. y Karin, M. (1997) Cell 91, 243-252; Woronicz, J.D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. y Goeddel, D.V. (1997) Science 278, 866-869). IKK2 es una proteína de 87 kDa y 756 aminoácidos con la misma topología global que IKK1, excepto por la adición de una extensión de 11 aminoácidos en la terminación C. IKK1 e IKK2 son un 52% idénticas globalmente, con un 65% de identidad en el dominio cinasa y un 44% de identidad en los dominios de interacción de proteína en la terminación C. Los datos obtenidos utilizando análisis de expresión transitoria de mamífero, mediante experimentos de traducción in vitro y mediante coexpresión en un sistema baculoviral, revelan que IKK1 e IKK2 se asocian preferiblemente en forma de heterodímero a través de sus motivos de cremallera de leucina. Aunque se han descrito también homodímeros en estos sistemas, se cree que el heterodímero es la forma fisiológica de la cinasa en células de mamífero. (Zandi, E., Rothwarf, D.M., Delhase, M., Hayadawa, M. y Karin, M. (1997) Cell 91, 243-252; Li, J., Peet, G.W., Pullen, S.S., Schembri-King, J., Warren, T.C., Marcu, K.B., Kehry, M.R., Barton, R. y Jakes, S. (1998) J. Biol. Chem. 273, 30736-30741). Finalmente, NEMO (también denominada IKK\gamma) contiene tres regiones de \alpha-hélice, incluyendo una cremallera de leucina, interacciona preferiblemente con IKK2 y es necesaria para la activación del complejo de cinasa heterodimérico, quizás llevando otras proteínas al complejo de señalosoma (Yamaoka, S., Courtois, G., Bessia, C., Whiteside, S.T., Weil, R., Agou, F., Kirk, H.E., Kay, R.J. e Ireal, A. (1998) Cell 93, 1231-1240; Rothwarf, D.M., Zandi, E., Natoli, G., Karin, M. (1998) Nature 395, 297; Mercurio, F., Murray, B.W., Shevchenko, A., Bennett, B.L., Young, D.B., Li, J.W., Pascual, G., Motiwala, A., Zhu, H, Mann, M. y Manning, A.M. (1999) Mol. Cell. Biol. 2, 1526-1538).

Las actividades cinasa de IKK1 e IKK2 están reguladas por la fosforilación y requieren una cremallera de leucina (LZ) intacta para dimerización, así como un dominio de hélice-bucle-hélice (HLH) intacto, que puede ejercer un efecto regulador positivo sobre la actividad cinasa incluso cuando se expresa en trans con el resto de la proteína IKK (Regnier, C., Song. H, Gao, X., Goeddel, D., Cao, Z. y Rothe, M. (1997) Cell 90, 373-383; DiDonato, J.A., Hayakawa, M., Rothwarf, D.M., Zandi, E. y Karin, M. (1997) Nature 388, 548-554; Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B.W., Shevchenko, A., Bennett, B.L., Li, J.W., Young, D.B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. y Roa, A. (1997) Science 278, 860-866; Zandi, E., Rothwarf, D.M., Delhase, M., Hayadawa, M. y Karin, M. (1997) Cell 91, 243-252; Woronicz, J.D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. y Goeddel, D.V. (1997) Science 278, 866-869; Dehase, M., Hayakawa, M., Chen, Y. y Karin, M. (1999) Science 284, 309-313). Ambas subunidades IKK contienen un motivo de bucle de activación MAPKK canónico cerca de la terminación N que es la diana de fosforilación y activación de la actividad cinasa por MAP3K tales como NIK y MEKK1, aunque la regulación fisiológica por estas dos cinasas cadena arriba espera una caracterización adicional (Zandi, E. y Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274, 27399-27342; Karin, M. y Delhase, M. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 9067-9069). Finalmente, la fosforilación de serinas en la terminación C de IKK2 da como resultado una reducción de la actividad IKK, y se postula que es responsable de la actividad cinasa transitoria observada después de la estimulación de células con un agonista (Dehase, M., Hayakawa, M., Chen, Y. y Karin, M. (1999) Science 284, 309-313).

IKK2 demostró una actividad cinasa más potente comparada con IKK1 utilizando I\kappaB\alpha o I\kappaB\beta como sustrato (Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B.W., Shevchenko, A., Bennett, B.L., Li, J.W., Young, D.B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. y Roa, A. (1997) Science 278, 860-866; Zandi, E., Rothwarf, D.M., Delhase, M., Hayadawa, M. y Karin, M. (1997) Cell 91, 243-252; Woronicz, J.D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. y Goeddel, D.V. (1997) Science 278, 866-869; Dehase, M., Hayakawa, M., Chen, Y. y Karin, M. (1999) Science 284, 309-313). Las mutaciones de los restos de serina fosfoaceptores dentro del bucle de activación de MAPKK alteran la actividad cinasa de IKK2, las sustituciones de serina por alanina dan como resultado una actividad cinasa reducida, mientras que las sustituciones de serina por ácido glutámico dan como resultado una cinasa constitutivamente activa. Mutaciones similares en IKK1 no dan como resultado una estimulación reducida de la actividad IKK total en respuesta a TNF\alpha o IL1\beta (Dehase, M., Hayakawa, M., Chen, Y. y Karin, M. (1999) Science 284, 309-313). Que IKK2 es la actividad cinasa dominante dentro del complejo IKK está apoyado adicionalmente por el análisis de fibroblastos de ratones deficientes en IKK1 o IKK2. Los fibroblastos que carecen de IKK1 retienen la actividad IKK completa en respuesta a citocinas y podrían activar NF-\kappaB. En contraposición, los fibroblastos que carecen de IKK2 no exhiben actividad IKK cuando se estimulan con citocinas ni activan NF-\kappaB. Además, los fenotipos de cada inactivación de IKK son únicos, dando como resultado la deficiencia de IKK1 defectos cutáneos y esqueléticos y siendo la inactivación de IKK2 embriónicamente letal debido a apoptosis hepatocítica (Li, Q., Antwerp, D.V., Mercurio, F., Lee, K. y Verma, I.M. (1999) Science 284, 321-325; Takeda, K., Tekeuchi, O., Tsujimura, T., Itami, S., Adachi, O., Kawai, T., Sanjo, H., Yoshikawa, K., Terada, N. y Akira, S. (1999) Science 288, 313-316; Hu, Y., Baud, V., Delhase, M., Zhang, P., Deerinck, T., Ellisman, M., Johnson, R. y Karin, M. (1999) Science 284, 315-320; Li, Q., Lu, Q., Hwang, J.Y., Buscher, D., Lee, K., Izpisua-Belmonte, J.C. y Verma, I.M. (1999) Gene and Development 13, 1322-1328; Tanaka, M., Fuentes, M.E., Yamaguchi, K., Durnin, M.H., Dalrymple, S.A., Hardy, K.L. y Goeddel, D.V. (1999) Immunity 10, 421-429).

Es bien conocido que el NF-\kappaB desempeña un papel clave en la expresión regulada de un gran número de mediadores proinflamatorios, incluyendo citocinas tales como IL-6 e IL-8, moléculas de adhesión celular tales como ICAM y VCAM y óxido nítrico sintasa inducible (iNOS). Dichos mediadores son conocidos por desempeñar un papel en el reclutamiento de leucocitos en sitios de inflamación y, en el caso de iNOS, pueden conducir a la destrucción de órganos en algunas enfermedades inflamatorias y autoinmunes.

La importancia del NF-\kappaB en trastornos inflamatorios está reforzada además por estudios de inflamación de vías respiratorias, incluyendo asma, en los que el NF-\kappaB se ha mostrado que está activado. Esta activación puede ser la base de la producción aumentada de citocina y la infiltración de leucocitos características de estas enfermedades. Además, es sabido que los esteroides inhalados reducen la hipersensibilidad de las vías respiratorias y suprimen la respuesta inflamatoria en vías aéreas asmáticas. A la vista de los recientes descubrimientos con respecto a la inhibición por glucocorticoides de NF-\kappaB, puede especularse que estos efectos están mediados por una inhibición de NF-\kappaB. Evidencias adicionales del papel del NF-\kappaB en trastornos inflamatorios provienen de estudios de sinovio reumático. Aunque el NF-\kappaB está normalmente presente en forma de complejo citoplasmático inactivo, recientes estudios inmunohistoquímicos han indicado que el NF-\kappaB está presente en los núcleos, y por tanto activo, en células que comprenden sinovio reumatoide. Además, el NF-\kappaB se ha mostrado que se activa en células sinoviales humanas en respuesta a la estimulación con TNF\alpha. Dicha distribución puede ser el mecanismo subyacente para la producción aumentada de citocina y eicosanoide característica de este tejido. Véase Roshak, A.K. y col., J. Biol. Chem. 271; 31496-31501
(1996).

Es también probable que las proteínas NF-\kappaB/Rel e I\kappaB desempeñen un papel clave en la transformación neoplásica. Los miembros de la familia están asociados a la transformación celular in vitro e in vivo debido a sobreexpresión, amplificación génica, redistribuciones o translocaciones génicas (Gilmore, T.D., Trends Genet. 7: 318-322, 1991; Gillmore, T.D., Oncogene 18: 6925-6937, 1999; Rayet, B. y col., Oncogene 18: 6938-6947, 1991). Además, la redistribución y/o amplificación de los genes que codifican estas proteínas se observa en un 20-25% de ciertos tumores linfoides humanos. Además, se ha reseñado un papel de NF-\kappaB en la regulación de apoptosis, progresión del ciclo celular, invasión y metástasis (Bours, V. y col., Biochemical Pharmacology 60: 1085-1090, 2000), reforzando el papel de este factor de transcripción en el control de la proliferación celular. Se ha mostrado que la inhibición del NF-\kappaB potencia el TNF y la terapia del cáncer mediante una apoptosis aumentada (Wang C.-Y. y col., Science 274: 784-787, 1996; Wang C.-Y. y col., Nat. Med. 5: 412-417, 1999). Se ha mostrado también que en las células infectadas con virus de leucemia de células T de tipo 1 (HTLV 1) (el agente etiológico de una malignidad agresiva de linfocitos T CD4^{+} activados), IKK\alpha e IKK\beta se expresan constitutivamente, funcionando normalmente de manera transitoria (Chu, Z-L. y col., J. of Biological Chemistry 273: 15891-15894, 1998). Se ha mostrado que la proteína transformante y transactivadora de HTLV1 (Tax) se une a MEKK1 y aumenta la actividad de IKK\beta potenciando la fosforilación de restos de serina en I\kappaB\alpha, lo que conduce a su degradación.

La patente de EE.UU. nº 3.940.418 de R. Hamilton describe ácidos 4,5-dihidrobenzo[g]indazol-3-carboxílicos tricíclicos como agentes antiinflamatorios.

La patente de EE.UU. nº 4.803.193 de Kanda y col. describe espiro-[3-alquil-1-aril-[1]-benzopirano[4,3-c]pirazol-4(1H)-9'-[9H]fluorenos como materiales de registro termosensibles.

V. Colota y col. (J. Med. Chem. 33, 2646 (1991)) describen sistemas heteroaromáticos tricíclicos, incluyendo 1-arilpirazolo[4,5-c]quinolin-4-onas, 1-arilpirazolo[4,5-c][1,8]naftiridin-4-onas y 1-aril-[1]benzopirano[3,4-d]pirazol-2-onas para aplicaciones al SNC. F. Melani y col. [J. Med. Chem. 29, 291 (1986) describen también 1-fenilpirazolo[4,5-c]quinolinas para aplicaciones al SNC.

Las patentes de EE.UU. nº 4.816.467 y 5.206.258 de Doria y col. describen (2-ciano-3-(1,4-dihidro)-1-fenil-[1]-benzotiopirano[4,3-c]pirazol-3-il)-3-oxopropanamidas como inmunomoduladores. G. Doria y col. (Farmaco 46, 843 (1991)) describen también la actividad inmunomoduladora de pirazolilpropanamidas, y específicamente [1-(4-fluorofenil)-1,4-dihidro-[1]benzotiopirano[4,3-c]pirazol]-3-carboxilato de etilo. La patente británica 2.227.741 describe benzopirano[4,3-c]pirazoles y benzotiopirano[4,3-c]pirazoles relacionados. La solicitud europea nº 347.773 describe de forma similar dichos compuestos de pirazol condensados, y específicamente \alpha-ciano-N,1-bis-(4-fluorofenil)-\beta-oxo-1H-[1]-benzotieno[3,2-c]pirazol-3-propanamida. La patente de EE.UU. nº 5.260.328 de Doria y col. describe 2-ciano-3-(1,4-dihidro)-1-fenil-[1]benzotiopirano[4,3-c]pirazol-3-il)-3-oxopropanamidas para el tratamiento de artritis reumatoide.

La patente de EE.UU. nº 4.678.499 de Pasteris y col. describe 1-arilindenopirazol-4-on-4-sulfonamidas que tienen actividad herbicida. Específicamente, se describen 1-fenilindenopirazol-4-on-5-sulfonamida y 1,4-dihidro-N-[[(4-metoxi-6-metil-2-pirimidinil)amino]carbonil]-3-metil-1-[4-(metilsulfonil)fenil]-4-oxoindeno[1,2-c]piraxol-5-sulfonamida.

Las patentes de EE.UU. nº 5.547.975, 5.565.482, 5.670.532 y 5.886.016 de Talley y col. describen derivados de benzopiranopirazolilo para el tratamiento de la inflamación. Fravolini, A. y col., describen compuestos de pirazolilo sustituidos que tienen actividad antiinflamatoria (Fannco, Ed. Sci 33: 855-856, 1978).

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Descripción detallada de la invención

Se define por la fórmula (I) una clase de compuestos que son útiles para tratar el cáncer, la inflamación y trastornos relacionados con la inflamación:

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1

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en la que

Q se selecciona del grupo constituido por: S(O)_{p}CH_{2}, OCH_{2}, CR^{15}=N, N=CR^{15}, -CO-O-, -CO-NH-, -CO-N(alquil)- y NR^{5}CH_{2};

R^{4} se selecciona del grupo constituido por: halógeno, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, ciano, alcoxicarbonilo, alquilo, haloalquilo, hidrido, hidroxialquilo, haloalcoxi, heterociclo, nitro, acilamino, arilo, heteroarilo y alquenilo, OR^{13}, SR^{8}, SO_{2}N(R^{8})R^{8'}, NHR^{9}, NHCOR^{9}, NR^{9}COR^{9}, NHCO(OR^{9}), NR^{9}CO(OR^{9}), NR^{8}SO_{2}R^{10}, NHSO_{2}N(R^{10})R^{10'}, NR^{6}CON(R^{10})R^{10'}, COR^{9}, CO_{2}R^{8}, CON(R^{8})R^{8'}, en los que R^{8} y R^{8'} pueden tomarse conjuntamente formando un anillo carbocíclico de 3-7 miembros que tiene 1 a 3 heteroátomos sustituidos o no sustituidos seleccionados de S, SO, SO_{2}, O, N y NR^{6}, y en los que R^{10} y R^{10'} pueden tomarse conjuntamente formando un anillo carbocíclico de 3-7 miembros que tiene 1 a 3 heteroátomos sustituidos o no sustituidos seleccionados de S, SO, SO_{2}, O, N y NR^{8}, en los que dicho arilo, heterociclo, heteroarilo o alquenilo están opcionalmente sustituidos con R^{9};

R^{5} se selecciona del grupo constituido por: hidrido, alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo y heteroarilalquilo, en los que arilo, alquilo, arilalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo o heteroarilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados del grupo constituido por OR^{14} y N(R^{14})R^{14'};

R^{6} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido, arilo, heteroarilo, alquilo inferior, haloalquilo, alquenilo, alquinilo, hidroxialquilo, aminoalquilo, alquilaminoalquilo, alcoxi, alcoxialquilo, heterocicloalquilo y heterociclo;

R^{8} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido, arilo, heteroarilo, arilalquilo, heterociclo, haloalquilo, arilalquilamino, alquilaminoalquilo, dialquilaminoalquilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, heteroarilalquilo y heterocicloalquilo;

R^{8'} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido, arilo, heteroarilo, arilalquilo, heterociclo, haloalquilo, arilalquilamino, alquilaminoalquilo, dialquilaminoalquilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, heteroarilalquilo y heterocicloalquilo;

R^{9} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido, alquilo inferior, arilo, heteroarilo, arilalquilo, heterociclo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, haloalquilo, arilalquilamino, amino, aminoalquilo, aminoacilo, nitro, azido y heteroarilalquilo, en los que alquilo, arilo, heteroarilo, aminoalquilo o arilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados del grupo constituido por: alquilsulfonamida, sulfamilo, alquilo, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquilamino, aminoalquilo, alquilaminoalquilo, alcoxi, halógeno, aciloxi, oxi, formilo, haloalquilo, ciano, haloalcoxi, acilo, carboxilo, hidroxi, hidroxialquiloxi, fenoxi, nitro, azido, benciloxi, dialquilaminoacilo, tioalquilo, aminoaciloxi, tiocianato, isotiocianato, alquildioxi, hidroxialquilo, alquilamino, alquiloxicarbonilo, alcoxialquilo, alquenilamino, alquinilamino, alquenilo, alquinilo, dialquilaminoalquiloxi y heterociclo opcionalmente sustituido con alquilo, alquilamino, aminoalquilo, hidroxialquilo y alquilaminoalquilo;

R^{10} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido, alquilo inferior, heteroarilo, heterociclo, haloalquilo, alquilamino, heteroarilalquilo, arilo y arilalquilo, en los que arilo, heteroarilo, heterociclo o arilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados de alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, ciano, haloalcoxi, acilo, carboxilo, hidroxi, hidroxialquiloxi, fenoxi, benciloxi, dialquilaminoalquiloxi y heterociclo;

R^{10} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido, alquilo inferior, heteroarilo, heterociclo, haloalquilo, arilalquilamino, heteroarilalquilo, arilo y arilalquilo, en los que arilo, heteroarilo, heterociclo o arilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados de alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, ciano, haloalcoxi, acilo, carboxilo, hidroxi, hidroxialquiloxi, fenoxi, benciloxi, dialquilaminoalquiloxi y heterociclo;

R^{13} se selecciona del grupo constituido por: hidrido, alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo y heteroarilalquilo, en los que arilo, alquilo, arilalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo o heteroarilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados del grupo constituido por: OR^{14} y N(R^{14})R^{14};

R^{14} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido y alquilo inferior;

R^{14'} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido y alquilo inferior; y

R^{15} se selecciona del grupo constituido por: hidrido, halógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, haloalquilo, heteroarilo, heterociclo, alquilalqueno, alquilalquino, hidroxi, hidroxialquilo, alquilhidroxi, amino, aminoalquilo, alquilamino, alquilaminoalquilo, alquilhidroxialquilo, nitro, ciano, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo;

en los que arilo o arilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados de alquilo, alcoxi, halo, haloalquilo, ciano, haloalcoxi, acilo, carboxilo, hidroxi, hidroxialquiloxi, fenoxi, benciloxi, dialquilaminoalquiloxi o heterociclo, en los que los grupos alquilo contienen 1 a 12 átomos de carbono, los grupos alquilo inferior contienen 1 a 5 átomos de carbono y los grupos alcoxi contienen 1 a 10 átomos de carbono;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Se define una clase adicional de compuestos dentro de la invención por la fórmula (II):

2

en la que

R^{4} se selecciona del grupo constituido por: halógeno, alquilsulfinilo, ciano, alcoxicarbonilo, alquilo, haloalquilo, hidrido, hidroxialquilo, haloalcoxi, heterociclo, nitro, acilamino, arilo, heteroarilo, alquenilo, OR^{13}, SR^{8}, NHR^{9}, NHCOR^{9}, NR^{9}COR^{9}, NHCO(OR^{9}), NR^{9}CO(OR^{9}), NR^{8}SO_{2}R^{10}, NHSO_{2}N(R^{10})R^{10'}, NR^{6}CON(R^{10})R^{10'}, COR^{9} y CO_{2}
R^{8}, CON(R^{8})R^{8'}, en los que R^{8} y R^{8'} pueden tomarse conjuntamente formando un anillo carbocíclico de 3-7 miembros que tiene 1 a 3 heteroátomos sustituidos o no sustituidos seleccionados de S, SO, SO_{2}, O, N y NR^{6}, y en los que R^{10} y R^{10'} pueden tomarse conjuntamente formando un anillo carbocíclico de 3-7 miembros que tiene 1 a 3 heteroátomos sustituidos o no sustituidos seleccionados de S, SO, SO_{2}, O, N y NR^{6}, en los que dicho arilo, heterociclo, heteroarilo o alquenilo están opcionalmente sustituidos con R^{9};

R^{13} se selecciona del grupo constituido por: hidrido, alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo y heteroarilalquilo, en los que arilo, alquilo, arilalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo o heteroarilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados del grupo constituido por: OR^{14} y N(R^{14})R^{14'};

R^{14} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido y alquilo inferior; y

R^{14'} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido y alquilo inferior;

R^{15} se selecciona del grupo constituido por: hidrido, halógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, haloalquilo, heteroarilo, heterociclo, alquilalqueno, alquilalquino, hidroxi, hidroxialquilo, alquilhidroxi, amino, aminoalquilo, alquilamino, alquilaminoalquilo, alquilhidroxialquilo, nitro, ciano, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo; en los que arilo o arilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados de alquilo, alcoxi, halo, haloalquilo, ciano, haloalcoxi, acilo, carboxilo, hidroxi, hidroxialquiloxi, fenoxi, benciloxi, dialquilaminoalquiloxi o heterociclo;

en los que los grupos alquilo contienen 1 a 12 átomos de carbono, los grupos alquilo inferior contienen 1 a 5 átomos de carbono y los grupos alcoxi contienen 1 a 10 átomos de carbono;

o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Definiciones

La presente invención incluye el uso de todos los hidratos, solvatos y complejos de los compuestos de esta invención. Si está presente un centro quiral u otra forma de centro isomérico en un compuesto de la presente invención, se pretende que todas las formas de dicho isómero o isómeros, incluyendo enantiómeros y diastereoisómeros, estén cubiertas por la misma. Los compuestos que contienen un centro quiral pueden utilizarse en forma de mezcla racémica, mezcla enriquecida enantioméricamente, o la mezcla racémica puede separarse utilizando técnicas bien conocidas y puede utilizarse un enantiómero individual solo. En casos en que los compuestos tienen dobles enlaces carbono-carbono insaturados, ambos isómeros cis (Z) y trans (E) están dentro del alcance de esta invención. En casos en que los compuestos puedan existir en formas tautoméricas, tales como tautómeros ceto-enol, está contemplado que cada forma tautomérica está incluida dentro de esta invención existente tanto en equilibrio como predominantemente en una forma.

El significado de cualquier sustituyente en cualquier aparición en la fórmula I o la fórmula II o cualquier subfórmula de las mismas es independiente de su significado, o el significado de cualquier otro sustituyente, en cualquier otra aparición, a menos que se especifique de otro modo.

Se utiliza el término "alquilo", solo o con otros términos tales como "haloalquilo" y "alquilsulfonilo"; comprende radicales lineales o ramificados que tienen 1 a aproximadamente 20 átomos de carbono o, preferiblemente, 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono. Los radicales alquilo más preferidos son radicales "alquilo inferior" que tienen 1 a aproximadamente 10 átomos de carbono. Los más preferidos son radicales alquilo inferior que tienen 1 a aproximadamente 5 átomos de carbono. Los ejemplos de dichos radicales incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isoamilo, hexilo, octilo y similares. El término "hidrido" designa un solo átomo de hidrógeno (H). Este radical hidrido puede estar ligado, por ejemplo, a un átomo de oxígeno formando un radical hidroxi, o dos radicales hidroxi pueden estar ligados a un átomo de carbono formando un radical metileno (-CH_{2}-). El término "halo" significa halógenos tales como átomos de flúor, cloro y bromo o yodo. El término "haloalquilo" comprende radicales en los que uno o más de los átomos de carbono de alquilo están sustituidos con halo como se define anteriormente. Se comprenden específicamente radicales monohaloalquilo, dihaloalquilo y polihaloalquilo. Un radical monohaloalquilo, por ejemplo, puede tener un átomo de bromo, cloro o fluoro en el radical. Los radicales dihalo pueden tener dos o más de los mismos átomos de halo o una combinación de diferentes radicales halo, y los radicales polihaloalquilo pueden tener más de dos de los mismos átomos de halo o una combinación de diferentes radicales halo. El término "hidroxialquilo" comprende radicales alquilo lineales o ramificados que tienen 1 a aproximadamente 10 átomos de carbono, cualquiera de los cuales puede estar sustituido con uno o más radicales hidroxilo. Los términos "alcoxi" y "alcoxialquilo" comprenden radicales que contienen oxi lineales o ramificados que tienen cada uno porciones alquilo de 1 a aproximadamente 10 átomos de carbono tales como el radical metoxi. El término "alcoxialquilo" comprende también radicales alquilo que tienen dos o más radicales alcoxi ligados al radical alquilo, es decir, formando radicales monoalcoxialquilo y dialcoxialquilo. Los radicales "alcoxi" o "alcoxialquilo" pueden estar adicionalmente sustituidos con uno o más átomos de halo tales como fluoro, cloro o bromo, proporcionando radicales "haloalcoxi" o "haloalcoxialquilo". Los ejemplos de radicales "alcoxi" incluyen metoxi, butoxi y trifluorometoxi. El término "arilo", solo o en combinación, significa un sistema aromático carbocíclico que contiene uno, dos o tres anillos, en el que dichos anillos pueden estar ligados conjuntamente de manera pendiente o pueden estar condensados. El término "arilo" comprende radicales aromáticos tales como fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indano y bifenilo. El término "heterociclo" comprende radicales saturados, parcialmente saturados e insaturados con forma de anillo que contienen heteroátomos, en los que los heteroátomos pueden seleccionarse de nitrógeno, azufre y oxígeno. Los ejemplos de radicales heterocíclicos saturados incluyen pirrolidilo y morfolinilo. El término "heteroarilo" comprende radicales heterocíclicos insaturados. Los ejemplos de radicales heterocíclicos insaturados, también denominados radicales "heteroarilo", incluyen tienilo, pirrolilo, furilo, piridilo, pirimidilo, pirazinilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, imidazolilo, tiazolilo y tetrazolilo. El término comprende también radicales en los que los radicales heterocíclicos están condensados con radicales arilo. Los ejemplos de dichos radicales bicíclicos condensados incluyen benzofurano, benzotiofeno y similares. El término "heterocicloalquilo" comprende alquilo ligado a heterociclo. El término "sulfonilo", utilizado solo o ligado a otros términos tales como alquilsulfonilo, designa respectivamente radicales divalentes -SO_{2}-. "Alquilsulfonilo" comprende radicales alquilo ligados a un radical sulfonilo, en el que alquilo es como se define anteriormente. El término "arilsulfonilo" comprende radicales sulfonilo sustituidos con un radical arilo. Los términos "sulfamilo" o "sulfonamidilo", solos o utilizados con términos tales como "N-alquilsulfamilo", "N-arilsulfamilo", "N,N-dialquilsulfamilo" y "N-alquil-N-arilsulfamilo" y "N,N-dialquilsulfamilo", designan radicales sulfamilo sustituidos, respectivamente, con un radical alquilo, un anillo cicloalquilo o dos radicales alquilo. Los términos "N-arilsulfamilo" y "N-alquil-N-arilsulfamilo" designan radicales sulfamilo sustituidos, respectivamente, con un radical arilo, y un radical alquilo y un radical arilo. Los términos "carboxi" o "carboxilo", utilizados solos o con otros términos tales como "carboxialquilo", designan -CO_{2}H. El término "carboxialquilo" comprende radicales que tienen un radical carboxi como se define anteriormente ligado a un radical alquilo. El término "carbonilo", utilizado solo o con otros términos tales como "alcoxicarbonilo" designa -(C=O)-. El término "alquilcarbonilo" comprende radicales que tienen un radical carbonilo sustituido con un radical alquilo. Es un ejemplo de un radical "alquilcarbonilo" CH_{3}-C(=O)-. El término "alquilcarbonilalquilo" designa un radical alquilo sustituido con un radical "alquilcarbonilo". El término "alcoxicarbonilo" significa un radical que contiene un radical alcoxi, como se define anteriormente, ligado mediante un átomo de oxígeno a un radical carbonilo (C=O). Los ejemplos de dichos radicales "alcoxicarbonilo" incluyen (CH_{3})_{3}CO-C(=O)- y -(O=)C-OCH_{3}. El término "alcoxicarbonilalquilo" comprende radicales que tienen "alcoxicarbonilo", como se define anteriormente, sustituido con un radical alquilo. Los ejemplos de dichos radicales "alcoxicarbonilalquilo" incluyen (CH_{3})COC(=O)(CH_{2})_{2}- y -(CH_{2})_{2}(O=)COCH_{3}. El término "amido", cuando se utiliza por sí mismo o con otros términos tales como "amidoalquilo", "N-monoalquilamido", "N-monoarilamido", "N,N-dialquilamido", "N-alquil-N-arilamido", "N-alquil-N-hidroxiamido" y "N-alquil-N-hidroxiamidoalquilo", comprende un radical carbonilo sustituido con un radical amino. Los términos "N-alquilamido" y "N,N-dialquilamido" designan grupos amido que se han sustituido con un radical alquilo y con dos radicales alquilo, respectivamente. Los términos "N-monoarilamido" y "N-alquil-N-arilamido" designan radicales amido sustituidos, respectivamente, con un radical arilo, y un radical alquilo y un radical arilo. El término "N-alquil-N-hidroxiamido" comprende radicales amido sustituidos con un radical hidroxi y con un radical alquilo. El término "N-alquil-N-hidroxiamidoalquilo" comprende radicales alquilo sustituidos con un radical N-alquil-N-hidroxiamido. El término "amidoalquilo" comprende radicales alquilo sustituidos con radicales amido. El término "aminoalquilo" comprende radicales alquilo sustituidos con radicales amino. El término "alquilaminoalquilo" comprende radicales aminoalquilo que tienen el átomo de nitrógeno sustituido con un radical alquilo. El término "amidino" designa un radical -C(=NH)-NH_{2}. El término "cianoamidino" designa un radical -C(=N-CN)-NH_{2}. El término "heterocicloalquilo" comprende radicales alquilo sustituidos con heterociclo tales como piridilmetilo y tienilmetilo. El término "arilalquilo" comprende radicales alquilo sustituidos con arilo tales como bencilo, difenilmetilo, trifenilmetilo, fenetilo y difenetilo. Los términos bencilo y fenilmetilo son intercambiables. El término "cicloalquilo" comprende radicales que tienen 3 a 10 átomos de carbono tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. El término "cicloalquenilo" comprende radicales insaturados que tienen 3 a 10 átomos de carbono tales como ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo y cicloheptenilo. El término "alquiltio" comprende radicales que contienen un radical alquilo lineal o ramificado de 1 a 10 átomos de carbono, ligado a un átomo de azufre divalente. Es un ejemplo de "alquiltio" el metiltio (CH_{3}-S-). El término "alquilsulfinilo" comprende radicales que contienen un radical alquilo lineal o ramificado de 1 a 10 átomos de carbono ligado a un átomo divalente -S(=O)-. Los términos "N-alquilamino" y "N,N-dialquilamino" designan grupos amino que se han sustituido con un radical alquilo y con dos radicales alquilo, respectivamente. El término "acilo", utilizado solo o dentro de un término tal como "acilamino", designa un radical proporcionado por el resto después de la eliminación de hidroxilo de un ácido orgánico. El término "acilamino" comprende un radical amino sustituido con un grupo acilo. Es un ejemplo de un radical "acilamino" el acetilamino (CH_{3}C(=O)-NH-).

Otro aspecto de la presente invención son procedimientos de síntesis de los compuestos reivindicados. Los compuestos de fórmula I o fórmula II serían útiles, pero sin limitación, para el tratamiento de la inflamación en un sujeto, y para el tratamiento de otros trastornos asociados a la inflamación tales como en forma de un analgésico en el tratamiento de dolor y dolores de cabeza o en forma de un antipirético para el tratamiento de la fiebre. Por ejemplo, los compuestos de fórmula I o fórmula II serían útiles para tratar la artritis, incluyendo pero sin limitación artritis reumatoide, espondiloartropatías, artritis gotosa, osteoartritis, lupus sistémico eritematoso y artritis juvenil. Dichos compuestos de fórmula I o fórmula II serían útiles en el tratamiento del asma, bronquitis, calambres menstruales, tendinitis, bursitis y afecciones relacionadas con la piel tales como psoriasis, eccema, quemaduras y dermatitis. Los compuestos de fórmula I o fórmula II serían también útiles para tratar afecciones gastrointestinales tales como enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, gastritis, síndrome del intestino irritable y colitis ulcerosa, y para la prevención del cáncer colorrectal. Los compuestos de fórmula I o fórmula II serían útiles para tratar la inflamación en enfermedades tales como enfermedades vasculares tales como vascularitis, dolores de cabeza de tipo migraña, periareritis nodosa, tiroiditis, anemia aplásica, enfermedad de Hodgkin, esclerodoma, fiebre reumática, diabetes de tipo I, miastenia grave, sarcoidosis, síndrome nefrótico, síndrome de Behcet, polimiositis, gingivitis, hipersensibilidad, conjuntivitis, hinchazón que aparece después de lesión, isquemia de miocardio y similares. Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse también para el dolor. Los compuestos son útiles como agentes antiinflamatorios tales como para el tratamiento de la artritis, con el beneficio adicional de tener efectos secundarios significativamente menos dañinos. Los compuestos de fórmula I o fórmula II son útiles como agentes para tratar el cáncer o agentes anticancerosos. Los compuestos de fórmula I o fórmula II pueden ser proapoptóticos, antiapoptóticos, anti-progresión del ciclo celular, antiinvasivos, antiproliferativos, antiangiogénicos y antimestastásicos. El cáncer puede ser de colon, ovario, mama, próstata, gástrico, linfoma de células B y mieloma múltiple. Más específicamente, los compuestos de esta invención son útiles en el tratamiento de una variedad de cánceres incluyendo, pero sin limitación: carcinoma tal como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, incluyendo cáncer pulmonar de células pequeñas, de esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello de la matriz, tiroides, próstata y piel, incluyendo carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide, incluyendo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linforma de célula pilosa y linfoma de Burkett; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluyendo leucemias mielogenosas aguda y crónica, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquemático, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantoma, cáncer folicular tiroideo y sarcoma de Kaposi. Debido al papel clave de las proteína cinasas en la regulación de la proliferación celular, estos compuestos son también útiles en el tratamiento de una variedad de trastornos proliferativos celulares tales como, por ejemplo, hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada a aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis post-quirúrgica y reestenosis. Los compuestos de fórmula I o fórmula II pueden utilizarse como agente antivírico. Los compuestos de esta invención son útiles como inhibidores de proteína cinasas. Los compuestos de la invención son útiles como inhibidores de IKK1 y/o IKK2, heterodímero IKK\alpha/IKK\beta, TBK o IKKi. Los compuestos de la invención pueden ser también útiles como inhibidores de otras proteína cinasas tales como, por ejemplo, proteína cinasa C en diferentes isoformas, cinasa dependiente de ciclina (cdk), Met, PAK-4, PAK-5, ZC-1, STLK-2, DDR-2, Aurora 1, Aurora 2, Bub-1, PLK, Chk1, Chk2, HER2, raf1, MEK1, MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R, VEGF-R, PI3K, cinasa Weel, Src, Abl, ILK, MK-2, IKK-2, Cdc7, Nek, y por tanto ser eficaces en el tratamiento de enfermedades asociadas a otras proteína cinasas. La presente invención incluye preferiblemente compuestos que inhiben selectivamente IKK2 frente a IKK1. Preferiblemente, los compuestos tienen una CI_{50} por IKK2 de menos de 1 \muM, y tienen una relación de selectividad de inhibición de IKK2 frente a IKK1 de al menos 50, y más preferiblemente al menos 100. Aún más preferiblemente, los compuestos tienen una CI_{50} por IKK1 de más de 10 \muM, y más preferiblemente de más de 100 \muM. Los compuestos de la fórmula pueden utilizarse también para tratar trastornos cardiovasculares, oftalmológicos y osteoporóticos asociados a la angiogénesis. Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse también para el tratamiento de lesiones de rodilla tales como lesiones deportivas.

Aunque es posible que un ingrediente activo pueda ser administrado solo como producto químico bruto, es preferible presentarlo en una formulación farmacéutica. La presente invención comprende una formulación farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención en asociación con al menos un vehículo, coadyuvante o diluyente farmacéuticamente aceptable. La presente invención comprende también un procedimiento de tratamiento de la inflamación o trastornos asociados a la inflamación en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar al sujeto que tiene dicha inflamación o trastornos una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención. Están también incluidas en la familia de compuestos de la presente invención las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. El término "sales farmacéuticamente aceptables" comprende sales utilizadas habitualmente para formar sales metálicas alcalinas y para formas sales de adición de ácidos libres o bases libres. La naturaleza de la sal no es crítica, a condición de que sea farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de compuestos de la presente invención pueden prepararse a partir de un ácido inorgánico o a partir de un ácido orgánico. Son ejemplos de dichos ácidos inorgánicos ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, carbónico, sulfúrico y fosfórico. Los ácidos orgánicos apropiados pueden seleccionarse de las clases de ácidos orgánicos alifática, cicloalifática, aromática, arilalifática, heterocíclica, carboxílica y sulfónica, cuyos ejemplos son ácido fórmico, acético, propiónico, succínico, glicólico, glucónico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, glucurónico, maleico, fumárico, pirúvico, aspártico, glutámico, benzoico, antranílico, mesílico, salicílico, p-hidroxibenzoico, fenilacético, mandélico, embónico (pamoico), metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, pantoténico, toluenosufónico, 2-hidroxietanosulfónico, sulfanílico, esteárico, ciclohexilaminosulfónico, algénico, \beta-hidroxibutírico, salicílico, galactárico y galacturónico. Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención incluyen sales metálicas preparadas a partir de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y cinc o sales orgánicas preparadas a partir de N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglucamina) y procaína. Todas estas sales pueden prepararse mediante medios convencionales a partir del correspondiente compuesto de la presente invención haciendo reaccionar, por ejemplo, el ácido o base apropiado con el compuesto de la presente invención.

Están también comprendidas dentro de esta invención composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos de la presente invención en asociación con uno o más vehículos y/o diluyentes y/o coadyuvantes y/o excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables (designados colectivamente en la presente memoria como materiales "vehículo") y, si se desea, otros ingredientes activos. En consecuencia, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en la fabricación de un medicamento. Las composiciones farmacéuticas de los compuestos de la presente invención preparados como se describe anteriormente en la presente memoria pueden formularse en forma de disoluciones o polvos liofilizados para administración parenteral. Los polvos pueden reconstituirse mediante la adición de un diluyente adecuado u otro vehículo farmacéuticamente aceptable antes del uso. La formulación líquida puede ser una disolución acuosa isotónica tamponada. Los compuestos de la presente invención pueden administrarse mediante cualquier vía adecuada, preferiblemente en forma de una composición farmacéutica adaptada a dicha vía, y en una dosis eficaz para el tratamiento pretendido. Los compuestos y la composición pueden administrarse, por ejemplo, por vía intravascular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intramuscular, intramedular, oral o tópica. Para administración oral, la composición farmacéutica puede estar en forma, por ejemplo, de un comprimido, cápsula, suspensión o líquido. El ingrediente activo puede administrarse también mediante inyección en forma de una composición en la que, por ejemplo, pueden utilizarse disolución salina isotónica normal, dextrosa convencional al 5% en agua o disolución de acetato de sodio o amonio tamponada como vehículo adecuado. Dicha formulación es especialmente adecuada para administración parenteral, pero puede utilizarse también para administración oral o contenerse en un inhalador o nebulizador de dosis medida para insuflación. Puede ser deseable añadir excipientes tales como polivinilpirrolidona, gelatina, hidroxicelulosa, goma arábiga, polietilenglicol, manitol, cloruro de sodio o citrato de sodio. La composición farmacéutica se prepara preferiblemente en forma de una unidad de dosificación que contiene una cantidad particular del ingrediente activo. Son ejemplos de dichas unidades de dosificación comprimidos o cápsulas. La cantidad de compuesto terapéuticamente activo que se administra y el régimen de dosificación para tratar una afección patológica con los compuestos y/o composiciones de esta invención dependen de una variedad de factores, incluyendo la edad, peso, sexo y estado médico del sujeto, la gravedad de la enfermedad, la vía y frecuencia de administración, y el compuesto particular empleado, y por tanto pueden variar ampliamente. Las composiciones farmacéuticas pueden contener ingrediente activo en el intervalo de aproximadamente 0,1 a 2000 mg, preferiblemente en el intervalo de aproximadamente 0,5 a 500 mg, y lo más preferiblemente entre aproximadamente 1 y 100 mg. Puede ser apropiada una dosis diaria de aproximadamente 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal, preferiblemente entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal, y lo más preferiblemente entre aproximadamente 1 y 20 mg/kg de peso corporal. La dosis diaria puede administrarse en una a cuatro dosis al día. Con fines terapéuticos, los compuestos de esta invención se combinan normalmente con uno o más coadyuvantes apropiados para la vía de administración indicada. Si se administran por vía oral, los compuestos pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, almidón en polvo, ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ésteres alquílicos de celulosa, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfórico y sulfúrico, gelatina, goma arábiga, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y/o poli(alcohol vinílico), y después comprimirse o encapsularse para administración conveniente. Dichas cápsulas o comprimidos pueden contener una formulación de liberación controlada que puede proporcionarse en una dispersión de compuesto activo en un material de liberación sostenida tal como monoestearato de glicerilo, diestearato de glicerilo, hidroxipropilmetilcelulosa sola o con una cera. Las formulaciones para administración parenteral pueden estar en forma de disoluciones ó suspensiones de inyección isotónicas estériles acuosas o no acuosas. Estas disoluciones y suspensiones pueden prepararse a partir de polvos o gránulos estériles que tienen uno o más de los vehículos o diluyentes citados para uso en las formulaciones para administración oral. Los compuestos pueden disolverse en agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, alcohol bencílico, cloruro de sodio y/o diversos tampones. Las preparaciones farmacéuticas se preparan siguiendo las técnicas convencionales de farmacia que implican moler, mezclar, granular y comprimir, cuando sea necesario, para formas de comprimido; o moler, mezclar y rellenar formas de cápsula de gelatina dura. Cuando se utiliza un vehículo líquido, la preparación estará en forma de un jarabe, elixir, emulsión o una suspensión acuosa o no acuosa. Dicha formulación líquida puede administrarse por vía oral o rellenarse en una cápsula de gelatina blanda. Para administración rectal, los compuestos de la presente invención pueden combinarse también con excipientes tales como manteca de cacao, glicerina, gelatina o polietilenglicoles, y moldearse en un supositorio. Los procedimientos de la presente invención incluyen la administración tópica de los compuestos de la presente invención. Por administración tópica se quiere indicar administración no sistémica, incluyendo la aplicación de un compuesto de la invención externamente a la epidermis, a la cavidad bucal y la instilación de dicho compuesto en el oído, ojo y nariz, en la que el compuesto no entra significativamente en la corriente sanguínea. Por administración sistémica, se quiere indicar administración oral, intravenosa, intraperitoneal e intramuscular. La cantidad de un compuesto de la presente invención (denominado en adelante en la presente memoria como el ingrediente activo) necesaria para efecto terapéutico o profiláctico tras administración tópica variará, por supuesto, con el compuesto elegido, la naturaleza y la gravedad de la afección que se esté tratando y el animal que experimente tratamiento, y está en última instancia a discreción del médico.

Las formulaciones tópicas de la presente invención, tanto para uso veterinario como médico humano, comprenden un ingrediente activo junto con uno o más vehículos aceptables para el mismo, y opcionalmente cualquier otro ingrediente terapéutico. El vehículo debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los demás ingredientes de la formulación y no nocivo para el receptor de la misma. Las formulaciones adecuadas para administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semilíquidas adecuadas para penetración a través de la piel al sitio donde se requiere el tratamiento tales como: linimentos, lociones, cremas, ungüentos o pastas, y gotas adecuadas para administración al ojo, oído o nariz. El ingrediente activo puede comprender, para administración tópica, de 0,01 a 5,0% en peso de la formulación.

Las gotas según la presente invención pueden comprender disoluciones o suspensiones acuosas u oleosas estériles y pueden prepararse disolviendo el ingrediente activo en una disolución acuosa adecuada de un agente bactericida y/o fungicida y/o cualquier otro conservante adecuado, incluyendo preferiblemente un agente tensioactivo. La disolución resultante puede clarificarse después mediante filtración, transferirse a un envase adecuado, que se sella después y se esteriliza en autoclave o manteniendo a 90-100ºC durante media hora. Como alternativa, la disolución puede esterilizarse por filtración y transferirse al envase mediante una técnica aséptica. Los ejemplos de agentes bactericidas y fungicidas adecuados para inclusión en las gotas son nitrato o acetato fenilmercúrico (0,00217c), cloruro de benzalconio (0,01%) y acetato de clorhexidina (0,01%). Los disolventes adecuados para la preparación de una disolución oleosa incluyen glicerol, alcohol diluido y propilenglicol.

Las lociones según la presente invención incluyen aquellas adecuadas para aplicación a la piel o al ojo. Una loción ocular puede comprender una disolución acuosa estéril que contiene opcionalmente un bactericida, y puede prepararse mediante procedimientos similares a los de la preparación de gotas. Las lociones o linimentos para aplicación a la piel pueden incluir también un agente para acelerar el secado y enfriar la piel tal como un alcohol o acetona y/o un humectante tal como glicerol o un aceite tal como aceite de ricino o aceite de cacahuete. Las cremas, ungüentos o pastas según la presente invención son formulaciones semisólidas del ingrediente activo para aplicación externa. Pueden prepararse mezclando el ingrediente activo en forma finamente dividida o en polvo, solo o en disolución o suspensión en un fluido acuoso o no acuoso, con la ayuda de una maquinaria adecuada, con una base grasa o no grasa. La base puede comprender hidrocarburos tales como parafina dura, suave o líquida, glicerol, cera de abejas, un jabón metálico; un mucílago; un aceite de origen natural tal como aceite de almendra, maíz, cacahuete, ricino u oliva; grasa de lana o sus derivados, o un ácido graso tal como ácido esteárico u oleico, junto con un alcohol tal como propilenglicol o macrogoles. La formulación puede incorporar cualquier agente tensioactivo adecuado tal como un agente tensioactivo aniónico, catiónico o no iónico tal como ésteres de sorbitán o derivados de polioxietileno de los mismos. Pueden incluirse también agentes de suspensión tales como gomas naturales, derivados de celulosa o materiales inorgánicos tales como sílices silíceas, y otros ingredientes tales como lanolina. Otros coadyuvantes y modos de administración son bien y ampliamente conocidos en la técnica farmacéutica. Aunque esta invención se ha descrito con respecto a realizaciones específicas, los detalles de estas realizaciones no han de considerarse como limitaciones.

Procedimientos sintéticos generales

Los materiales de partida utilizados en la presente memoria están comercialmente disponibles o se preparan mediante procedimientos rutinarios bien conocidos por los expertos en la técnica, y pueden encontrarse en libros de referencia convencional tales como el "Compendium of organic synthesis methods" vol. I-VI (publicado por Wiley-Intersciences).

Los compuestos de la invención pueden sintetizarse según los siguientes procedimientos de los esquemas I-X, en los que los sustituyentes R_{1}-R_{16} y el engarce A son como se definen para la fórmula I anterior, excepto donde se observa otra cosa.

Esquema I

3

El Esquema Sintético I ilustra el procedimiento utilizado para preparar los pirazoles antiinflamatorios de la presente invención. Se dejan reaccionar compuestos de 1,3-dicarbonilo tales como 1, o la forma de enol mostrada que está en equilibrio con la 1,3-dicetona, con un clorhidrato de hidrazina sustituido 2 en metanol o etanol o ácido acético caliente, proporcionando los pirazoles 3 mediante una reacción de condensación. Cuando A= -CH_{2}CH_{2}-, el anillo central puede aromatizarse, proporcionando A= -CH=CH- utilizando un oxidante tal como DDQ, Pd o Pt sobre carbono con ciclooctadieno u otro aceptor de H_{2}, o azufre en un disolvente apropiado.

Esquema II

4

El Esquema Sintético II ilustra el procedimiento para la preparación de las dicetonas sustituidas 1. Se trata primero una cetona apropiadamente sustituida 4, incluyendo pero sin limitación: 1-indanonas, 1-tetralonas y 1-benzosuberonas, con una base tal como metóxido de sodio, bistrimetilsililamiduro de litio o diisopropilamiduro de litio (LDA), seguido de condensación con un agente acilante adecuado tal como oxalato de dimetilo o dietilo en un disolvente apropiado tal como metanol, dietiléter o tetrahidrofurano, proporcionando compuestos de 1,3-dicarbonilo 1 que son adecuados para la conversión en pirazoles antiinflamatorios como se ilustra en el Esquema I. Como alternativa, los compuestos de dicarbonilo 1 pueden prepararse directamente a partir de cetonas cíclicas 4 comercialmente disponibles.

Esquema III

5

El Esquema Sintético III ilustra un procedimiento de tres etapas utilizado para la preparación de 1-tetralonas sustituidas. En la etapa uno, se condensa un benceno apropiadamente sustituido 5 con anhídrido succínico y un catalizador tal como cloruro de aluminio en los correspondientes derivados de ácido 4-fenil-4-cetobutanoico 6. En la etapa dos, se reduce el grupo ceto de los ácidos 4-fenil-4-cetobutanoicos 6 utilizando hidrogenación catalítica o reducciones de tipo Wolff-Kishner, proporcionando así ácidos 4-fenilbutanoicos 7. Además, las reducciones de cetona pueden llevarse a cabo utilizando amalgamas metálicas. En la etapa tres, se tratan los ácidos 4-fenilbutanoicos con una mezcla de anhídrido trifluoroacético y ácido trifluoroacético, efectuando una acilación intramolecular de Friedel-Crafts que proporciona las tetralonas seleccionadas 8. Como alternativa, puede efectuarse una acilación de Friedel-Crafts con otros ácidos fuertes tales como ácido polifosfórico, ácido sulfúrico o cloruro de aluminio.

Esquema IV

6

El Esquema Sintético IV describe una ruta sintética alternativa para 1-tetralonas 8. En la etapa uno, la adición de bromuro de alilmagnesio en un disolvente adecuado tal como THF o dietiléter a un benzoato apropiadamente sustituido 9 proporciona las 1-fenilbut-3-en-1-onas 10. En la etapa dos, las 1-fenilbut-3-en-1-onas 10 pueden ciclarse en condiciones de alquilación de Friedel-Crafts, a condición de que R_{4} sea un sustituyente activador de anillo, utilizando catalizadores tales como cloruro de aluminio, produciendo las 1-tetralonas 8.

Esquema V

7

El Esquema V describe la modificación directa de 1-tetralona en tetralonas sustituidas. La 1-tetralona comercialmente disponible puede tratarse con una variedad de reactivos electrofílicos tales como bromo, amonio, nitrito o vinilsilanos, representados por E^{+}, con o sin un catalizador, generando directamente una tetralona sustituida 8 que contiene grupos bromo, nitro o vinilo. Dichas tetralonas 8 pueden adornarse adicionalmente proporcionando los patrones de sustitución deseados. Las mezclas pueden separarse fácilmente utilizando técnicas cromatográficas.

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Esquema VI

8

Una alternativa al Esquema V es el Esquema VI, en el que se somete una decalina apropiadamente sustituida a adición electrofílica para generar decalinas sustituidas 11. Las decalinas sustituidas pueden prepararse también mediante alquilación de Friedel-Crafts de bencenos sustituidos. Las decalinas sustituidas 11 pueden oxidarse después a tetralonas 8 utilizando oxidantes tales como KMnO_{4} o SeO_{2}.

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Esquema VII

9

El Esquema VII describe la modificación de tetralonas existentes en análogos que contienen grupos funcionales diferentes, que pueden modificarse también adicionalmente. Por ejemplo, la hidroxitetralona (8a en la que R_{4}= OH) puede convertirse en el triflato 8b mediante tratamiento con anhídrido trifluorometanosulfónico. El triflato 8b puede someterse después a Pd(OAc)_{2}, una fosfina apropiada y CO en presencia de metanol, generando la tetralona 12 que contiene un grupo carboximetilo. Pueden utilizarse triflatos en una variedad de reacciones de acoplamiento de paladio para introducir grupos funcionales adicionales.

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Esquema VIII

10

El Esquema Sintético VIII ilustra un procedimiento de tres etapas utilizado para la preparación de 1-indanonas sustituidas 16. En la etapa uno, se condensa un benzaldehído apropiadamente sustituido 13 con acetato de metilo y un catalizador tal como trietilamina en los correspondientes derivados de cinamato de metilo 14. Adicionalmente, pueden utilizarse cinamatos comercialmente disponibles en las siguientes etapas. En la etapa dos, se reduce el grupo olefina del cinamato 14 utilizando hidrogenación catalítica y se hidroliza el éster con una base tal como NaOH, proporcionando así ácidos 3-fenilpropanoicos 15. En la etapa tres, se tratan los ácidos 3-fenilpropanoicos con una mezcla de anhídrido trifluoroacético y ácido trifluoroacético para efectuar una acilación intramolecular de Friedel-Crafts, proporcionando 1-indanonas 16 seleccionadas. Como alternativa, puede efectuarse una acilación de Friedel-Crafts con otros ácidos fuertes tales como ácido sulfúrico o cloruro de aluminio.

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Esquema IX

11

El Esquema Sintético IX ilustra una ruta de dos etapas para la preparación de 1-indanonas sustituidas 16. Pueden tratarse benzoatos de metilo 9 comercialmente disponibles, u otros ésteres alquílicos, con un reactivo de vinil-litio, proporcionando fenilvinilcetonas 17. Como alternativa, pueden utilizarse dimetilamidas o N-metil-O-metilhidroxamidas en lugar de los ésteres. También pueden utilizarse otros vinilmetales tales como bromuro de vinilmagnesio en lugar del reactivo de vinil-litio. Las fenilvinilcetonas resultantes pueden ciclarse utilizando catalizadores de alquilación de Friedel-Crafts tales como cloruro de aluminio.

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Esquema X

12

El Esquema Sintético X ilustra un procedimiento de tres etapas utilizado para la preparación de 1-benzosuberonas sustituidas 20. En la etapa uno, se condensa un benceno apropiadamente sustituido 5 con anhídrido glutárico y un catalizador tal como cloruro de aluminio en los correspondientes derivados de ácido 5-fenil-5-cetopentanoico 18. En la etapa dos, se reduce el grupo ceto de los ácidos 5-fenil-5-cetopentanoicos 18 utilizando hidrogenación catalítica o reducciones de tipo Wolff-Kishner, proporcionando así ácidos 5-fenilpentanoicos 19. Además, pueden llevarse a cabo también reducciones de cetona utilizando amalgamas metálicas. En la etapa tres, se tratan los ácidos 5-fenilpentanoicos con una mezcla de anhídrido trifluoroacético y ácido trifluoroacético, efectuando una acilación intramolecular de Friedel-Crafts que proporciona benzosuberonas 20 seleccionadas. Como alternativa, la acilación de Friedel-Crafts puede efectuarse con otros ácidos fuertes tales como ácido polifosfórico, H_{2}SO_{4} o AlCl_{3}. Como alternativa, pueden prepararse ácidos 5-fenil-5-cetopentanoicos 18 a partir de ácido glutárico y un reactivo de fenil-litio o fenilo de Grignard apropiadamente sustituido y compatible con las condiciones de reacción.

Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse también según los procedimientos de la patente de Estados Unidos 5.547.975.

Se proporcionan los siguientes ejemplos sólo con fines de ejemplificación, y no se pretende que limiten el alcance de la invención, que se ha descrito en términos amplios anteriormente. Los ejemplos 1-16 no están comprendidos en las reivindicaciones, y por lo tanto ha de considerarse que son meramente comparativos.

Ejemplos Ejemplo 1 1-{4-[(Aminotio)peroxi]fenil}-8-nitro-4,5-dihidro-1H-benzo[g]indazol-3-carboxilato de etilo

13

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Etapa 1

14

Se añadió gota a gota bis(trimetilsilil)amiduro de litio (1 M en THF, 26 ml) a 7-nitro-1-tetralona (4,6 g, 0,024 mol) y oxalato de etilo (3,5 ml, 0,026 mol) en éter (100 ml). Se agitó la suspensión durante toda la noche y se filtró, proporcionando el producto en forma de un sólido verde oliva. 6,2 g (87% de rendimiento). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 8,45 (d, 1H), 8,05 (d de d, 1H), 7,42 (d, 1H), 4,08 (c, 2H), 2,82-2,72 (m, 2H), 2,51-2,43 (m, 2H), 1,21 (t, 3H).

Etapa 2

Se agitó el material de la etapa 1 (6,2 g, 0,021 mol) y clorhidrato de 4-sulfonamidofenilhidrazina (5,1 g, 0,023 mol) en metanol (100 ml) durante toda la noche. Se añadió HCl conc. (2 ml) a la suspensión densa y se calentaron los contenidos en un baño de vapor durante 1 hora. Se dejaron enfriar los contenidos y se filtraron, proporcionando un sólido blanquecino, 6,9 g. Los análisis de RMN y CL/EM muestra que el sólido contiene dos componentes, el deseado y el pirazol hidratado. Se añadieron TFA (60 ml) y TFAA (20 ml) al sólido y se calentó en un baño de vapor durante 1 hora.

Se concentraron los contenidos a vacío, dejando el producto en forma de un sólido, 6,4 g (69% de rendimiento). EMAR-FAB m/z 443,1020 (M+H, C_{20}H_{19}N_{4}O_{6}S requiere 443,1025). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 8,10 (d de d, 1H), 8,03 (d, 2H), 7,82 (d, 2H), 7,70 (d, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,50 (d, 1H), 4,33 (c, 2H), 3,20-2,95 (m, 4H), 1,33 (t, 3H).

Anal. calc. para C_{20}H_{18}N_{4}O_{6}S: C 54,29, H 4,10, N 12,66. Encontrado: C 54,49, H 4,00, N 12,52.

Ejemplo 2 1-{4-[(Aminotio)peroxi]fenil}-8-nitro-4,5-dihidro-1H-benzo[g]indazol-3-carboxamida

15

Se agitaron el producto final del ejemplo 1 (718 mg, 0,0016 mol), hidróxido de amonio conc. (30 ml) y metanol (15 ml) en un matraz tapado durante 72 horas. Se filtraron los contenidos, proporcionando un sólido ambarino claro (606 mg). Se recristalizó el sólido con acetonitrilo, proporcionando el producto en forma de un sólido ambarino claro, 450 mg (68% de rendimiento). EMAR-FAB m/z 414,0902 (M+H, C_{18}H_{16}N_{5}O_{5}S requiere 414,0872). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz), 8,15-7,95 (m, 3H), 7,83 (d, 2H), 7,80-7,40 (m, 6H), 3,20-2,95 (m, 4H).

Anal. calc. para C_{18}H_{15}N_{5}O_{5}S: C 52,30, H 3,66, N 16,94. Encontrado: C 52,04, H 3,64, N 16,61.

Ejemplo 3 8-Amino-1-[4-(aminosulfonil)fenil]-4,5-dihidro-1H-benzo[g]indazol-3-carboxilato de etilo

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16

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Se agitaron el producto final del ejemplo 1 (2,0 g) y Pd/C al 10% (350 mg) en DMF (20 ml) a 379 kPa de hidrógeno durante 3 horas. Se filtraron los contenidos y se concentró el filtrado a vacío, dejando una cera ambarina. Se trituró la cera con metanol y se filtró, proporcionando el producto en forma de un sólido ambarino claro, 1,6 g (86% de rendimiento). EMAR-FAB m/z 413,1293 (M+H, C_{20}H_{21}N_{4}O_{4}S requiere 413,1284). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 8,00 (d, 2H), 7,73 (d, 2H), 7,50 (s, 2H), 7,01 (d, 1H), 6,43 (d de d, 1H), 6,00 (d, 1H), 4,83 (s a, 2H), 4,30 (c, 2H), 2,85-2,70 (m, 4H), 1,31 (t, 3H).

Anal. calc. para C_{20}H_{20}N_{4}O_{4}S (0,25 H_{2}O): C 57,61, H 4,96, N 13,44. Encontrado: C 57,62, H 5,11, N 13,15.

Ejemplo 4 8-Amino-1-{4-[(aminotio)peroxi]fenil}-4,5-dihidro-1H-benzo[g]indazol-3-carboxamida

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17

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Se preparó el ejemplo 4 de forma similar al ejemplo 2 con 70% de rendimiento. EMAR-FAB m/z 384,1136 (M+H, C_{18}H_{18}N_{5}O_{3}S requiere 384,1130). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 7,95 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,53 (s a, 1H), 7,43 (s a, 1H), 7,32 (s a, 1H), 7,01 (d, 1H), 6,44 (d de d, 1H), 6,03 (s, 1H), 4,81 (s, 2H), 2,93-2,65 (m, 4H).

Anal. calc. para C_{18}H_{17}N_{5}O_{3}S: C 56,38, H 4,47, N 18,27. Encontrado: C 56,31, H 4,42, N 18,31.

Ejemplo 5 (6-Hidroxi-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidronaftalen-2-il)(oxo)acetato de etilo

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18

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Se añadió gota a gota bis(trimetilsilil)amiduro de litio (1 M en THF, 130 ml) a 6-hidroxi-1-tetralona (10,4 g, 0,064 mol) y oxalato de etilo (17,4 ml, 0,128 mol) en THF (100 ml). Se agitó durante toda la noche la suspensión y se filtró un sólido. Se disolvió el sólido en agua y se acidificó a pH 2,5 con HCl 3 N, precipitando un sólido ceroso. Se extrajo el sólido ceroso con AcOEt, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío, dejando un sólido oscuro (15,7 g). Se purificó el sólido mediante cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 15% de AcOEt/hexanos, proporcionando un sólido amarillo (5,9 g). Se recristalizó el sólido con AcOEt/hexanos, proporcionando el producto en forma de un sólido amarillo. 3,7 g (22% de rendimiento). EMAR-FAB m/z 263,0925 (M+H, C_{14}H_{15}O_{5} requiere 263,0919). RMN-^{1}H (CDCl_{3}/300 MHz) 7,93 (d, 1H), 6,80 (d de d, 1H), 6,68 (s, 1H), 5,72 (s, 1H), 4,39 (c, 2H), 3,00-2,75 (m, 4H), 1,40 (t, 3H).

Anal. calc. para C_{14}H_{14}O_{5}: C 64,12, H 5,38. Encontrado: C 63,79, H 5,35.

Ejemplo 6 1-[4-(Aminosulfonil)fenil]-7-hidroxi-4,5-dihidro-1H-benzo[g]indazol-3-carboxilato de etilo

19

Se agitaron el material preparado en el ejemplo 5 (2,0 g, 0,0076 mol) y clorhidrato de 4-sulfonamidofenilhidrazina (1,9 g, 0,0085 mol) en ácido acético glacial (25 ml) durante 96 horas. Se calentaron los contenidos a 55ºC durante 5 horas, se dejaron enfriar, se diluyeron con agua (75 ml) y se filtraron, proporcionando el producto en forma de un sólido blanco, 3,1 g (90% de rendimiento). EMAR-FAB m/z 414,1146 (M+H, C_{20}H_{20}N_{3}O_{5}S requiere 414,1124). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 9,72 (s, 1H), 8,00 (d, 2H), 7,73 (d, 2H), 7,53 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,60-6,40 (m, 2H), 4,30 (c, 2H), 2,90 (s, 4H), 1,30 (t, 3H).

Anal. calc. para C_{20}H_{19}N_{3}O_{5}S (0,2 H_{2}O): C 57,60, H 4,69, N 10,08. Encontrado: C 57,72, H 4,91, N 9,68.

Ejemplo 7 1-{4-[(Aminotio)peroxi]fenil}-8-fluoro-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxilato de etilo

20

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Etapa 1

21

Se preparó el material de la etapa 1 de forma similar al ejemplo 5, con 75% de rendimiento. EMAR-FAB m/z 267,0673 (M+H, C_{13}H_{12}FO_{5} requiere 267,0669). RMN-^{1}H (CDCl_{3}/300 MHz) 7,56 (d de d, 1H), 7,25-7,15 (m, 1H), 7,00-6,90 (m, 1H), 5,35 (s, 2H), 4,40 (c, 2H), 1,40 (t, 3H).

Anal. calc. para C_{13}H_{11}FO_{5}: C 58,65, H 4,16. Encontrado C 58,38, H 4,03.

Etapa 2

Se preparó el producto final del ejemplo 7 de forma similar al ejemplo 6, partiendo del material de la etapa 1, con 75% de rendimiento. EMAR-FAB m/z 418,0872 (M+H, C_{19}H_{17}FN_{3}O_{5}S requiere 418,0873). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz), 8,05 (d, 2H), 7,82 (d, 2H), 7,60 (s, 1H), 7,20-7,00 (m, 2H), 6,40 (d, 1H), 5,47 (s, 2H), 4,31 (c, 2H), 1,30
(t, 3H).

Anal. calc. para C_{19}H_{16}FN_{3}O_{5}S: C 54,67, H 3,86, N 10,07. Encontrado: C 54,91, H 3,86, N 10,21.

Ejemplo 8 1-{4-[(Aminotio)peroxi]fenil}-8-fluoro-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida

22

Se preparó el ejemplo 8 de forma similar al ejemplo 2, partiendo del producto del ejemplo 7, con 68% de rendimiento. EMAR-FAB m/z 389,0720 (M+H, C_{17}H_{14}FN_{4}O_{4}S requiere 389,0741). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 8,05 (d, 2H), 7,82 (d, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,15-7,00 (m, 2H), 6,40 (d de d, 1H), 5,45 (s, 2H).

Anal. calc. para C_{17}H_{13}FN_{4}O_{4}S: C 52,57, H 3,37, N 14,43. Encontrado: C 52,45, H 3,32, N 14,54.

Ejemplo 9 1-{4-[(Aminotio)peroxi]fenil}-1,5-dihidroisotiocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxilato de etilo

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23

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Etapa 1

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24

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Se preparó el material de la etapa 1 de forma similar el ejemplo 5, con 74% de rendimiento. EMAR-FAB m/z 265,0496 (M+H, C_{13}H_{13}O_{4}S requiere 265,0535). RMN-^{1}H (CDCl_{3}/300 MHz) 8,00 (d, 1H), 7,60-7,50 (m, 1H), 7,50-7,40 (m, 1H), 7,32-7,20 (m, 1H), 4,42 (c, 2H), 3,80 (s, 2H), 1,42 (t, 3H).

Anal. calc. para C_{13}H_{2}O_{4}S: C 59,08, H 4,58. Encontrado: C 58,94, H 4,47.

Etapa 2

Se preparó el producto final del ejemplo 9 de forma similar el ejemplo 6, partiendo del material de la etapa 1, con 35% de rendimiento. EMAR-FAB m/z 416,0736 (M+H, C_{19}H_{18}N_{3}O_{4}S_{2} requiere 416,0739). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 8,01 (d, 2H), 7,82 (d, 2H), 7,60 (s, 2H), 7,51 (d, 1H), 7,37 (t, 1H), 7,20 (t, 1H), 6,72 (d, 1H), 4,35 (c, 2H), 4,11 (s, 2H), 1,30 (t, 3H).

Anal. calc. para C_{19}H_{17}N_{3}O_{4}S_{2} (0,5 H_{2}O): C 53,76, H 4,27, N 9,90. Encontrado: C 53,77, H 4,10, N 9,83.

Ejemplo 10 1-{4-[(Aminotio)peroxi]fenil}-1,5-dihidroisotiocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida

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25

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Se preparó el ejemplo 10 de forma similar al ejemplo 2, partiendo del material del ejemplo 9, con 56% de rendimiento. EMAR-FAB m/z 387,0623 (M+H, C_{17}H_{15}N_{4}O_{3}S_{2} requiere 387,0586). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz): 8,00 (d, 2H), 7,83 (d, 2H), 7,74 (s, 1H), 7,60-7,40 (m, 4H), 7,40-7,30 (m, 2H), 7,24-7,10 (m, 1H), 6,75 (d, 1H), 4,05 (s, 2H).

Anal. calc. para C_{17}H_{14}N_{4}O_{3}S_{2} (0,5 H_{2}O): C 52,35, H 3,72, N 14,36. Encontrado: C 52,16, H 3,57, N 14,16.

Ejemplo 11 8-{4-[(Aminotio)peroxi]fenil}-4,8-dihidro[1,3]dioxolo[7,8]isotiocromeno[4,3-c]pirazol-6-carboxamida

26

Etapa 1

27

Se añadió gota a gota bis(trimetilsilil)amiduro de litio (1 M en THF, 1,8 ml) a 6,7-metilendioxiisotiocroman-4-ona (ejemplo 33 del documento WO 96/09304) (362 mg, 0,00174 mol) y oxalato de dimetilo (213 mg, 0,0018 mol) en éter (20 ml). Se agitaron los contenidos durante 5 horas y se filtraron, proporcionando el producto en forma de un sólido verde, 700 mg. Se utilizó directamente en el ejemplo 50. RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 7,30 (d, 1H), 6,75 (d, 1H), 6,03 (s, 2H), 3,55 (s, 3H), 3,48 (s, 2H).

Etapa 2

28

Se mezclaron el material de la etapa 1 (700 mg) y clorhidrato de 4-aminosulfonilfenilhidrazina (575 mg, 0,002 mol) en metanol (20 ml) y se agitaron durante toda la noche. Se añadió HCl 3 N (6 ml) y se calentaron los contenidos durante 2 horas. Después de enfriar y diluir con agua (20 ml), se filtraron los contenidos, proporcionando el producto en forma de un sólido ambarino, 469 mg (53% de rendimiento. RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 8,00 (d, 2H), 7,81 (d, 2H), 7,55 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 6,82 (d, 1H), 6,26 (d, 1H), 6,15 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,85 (s, 2H).

Etapa 3

Se preparó el producto final del ejemplo 11 de forma similar al ejemplo 2, partiendo del material de la etapa 2, con 7% de rendimiento. EMAR-FAB m/z 431,0501 (M+H, C_{18}H_{15}N_{4}O_{5}S_{2} requiere 431,0484). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}/300 MHz) 8,00 (d, 2H), 7,80 (d, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,55 (s, 2H), 7,50 (s, 1H), 6,80 (d, 1H), 6,26 (d, 1H), 6,13 (s, 2H), 3,95 (s, 2H).

Anal. calc. para C_{18}H_{14}N_{4}O_{5}S_{2}: C 50,22, H 3,28, N 13,02. Encontrado: C 49,96, H 3,23, N 12,56.

Ejemplo 12 1-[4-(Aminosulfonil)fenil]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxilato de etilo

29

Etapa 1

30

Se añadieron lentamente ácido acrílico (7,6 ml, 110 mmol) a anilina (10 ml, 100 mmol). Después de aproximadamente 2 horas a temperatura ambiente, se había formado un gel. Se añadió piridina (125 ml) seguida de cloruro de 4-toluenosulfonilo (20,9 g, 110 mmol) en varias porciones. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 3 horas y se eliminó la piridina en un rotavapor. Se añadió agua (100 ml) al residuo y se extrajo la disolución con acetato de etilo (3 x 100 ml). Se combinaron las fases de acetato de etilo y se secaron (MgSO_{4}). La filtración y concentración en rotavapor produjeron un aceite amarillo pálido. Se disolvió el aceite en disolución saturada de NaHCO_{3} (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Se volvieron a extraer las fases orgánicas con disolución saturada de NaHCO_{3} (3 x 50 ml). Se acidificaron después las fases acuosas y se reextrajeron con acetato de etilo (3 x 100 ml). Se combinaron después las fases de acetato de etilo, se lavaron con agua y salmuera y se secaron (MgSO_{4}). La filtración y concentración produjeron un sólido blanquecino. Rendimiento: 13,6 g (58%). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) 2,32 (t, 2H), 2,40 (s, 3H), 3,76 (t, 2H), 7,02 (d, 1H), 7,37 (m, 7H).

Etapa 2

31

Se añadieron TFA (5 ml) y TFAA (15 ml, 106,2 mmol) al producto de la etapa 1 (13,5 g, 42,3 mmol). Se calentó la reacción a reflujo durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con agua (100 ml). Se extrajo la disolución con acetato de etilo (2 x 100 ml). Se combinó el acetato de etilo y se lavó con agua y salmuera. Se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró hasta un sólido. Rendimiento: 7,19 g (57%). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) 2,36 (s, 3H), 2,43 (t, 2H), 4,22 (t, 2H), 7,32 (t, 1H), 7,38 (d, 2H), 7,66 (m, 4H), 7,82 (d, 1H).

Etapa 3

32

Se calentaron a reflujo N-tosil-4-azacromanona (2 g, 6,6 mmol) en ácido acético (16 ml) y HCl 6 N (14 ml) durante 18 horas. Se enfrió la reacción hasta temperatura ambiente y se diluyó con agua (75 ml), después se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Se combinaron las fases de acetato de etilo, se lavaron con disolución saturada de NaHCO_{3} hasta que el pH permaneció superior a 7, después con agua y salmuera. Se secó después la disolución orgánica (MgSO_{4}), se filtró y se concentró hasta un aceite. Se purificó por cromatografía sobre sílice, eluyendo con hexano/acetato de etilo 4:1, obteniéndose un aceite incoloro transparente. Rendimiento: 970 mg (aprox. 100%). RMN-^{1}H (CDCl_{3}) 2,72 (t, 2H), 3,59 (t, 2H), 4,45 (s a, 1H), 6,68 (d, 1H), 6,75 (t, 1H), 7,31 (t, 1H), 7,86 (d, 1H).

Etapa 4

33

Se disolvió la 4-azacromanona (930 mg, 6,3 mmol) en diclorometano (15 ml) y se añadieron trietilamina (876 \mul, 6,3 mmol) y DMAP (768 mg, 6,3 mmol). Se añadió a la disolución en porciones dicarbonato de di-terc-butilo (2,75 g, 12,6 mmol). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 2 horas, después se concentró en un rotavapor hasta un aceite. Se purificó por cromatografía el aceite sobre sílice, eluyendo con 10% de acetato de etilo/hexano. Se obtuvo un aceite incoloro transparente. Rendimiento: 1,16 g (74%). RMN-^{1}H (CDCl_{3}) 1,58 (s, 9H), 2,79 (t, 2H), 4,18 (d, 2H), 7,17 (t, 1H), 7,51 (t, 1H), 7,78 (d, 1H), 8,01 (d, 1H).

Etapa 5

34

Se disolvió N-Boc-4-azacromanona (880 mg, 3,5 mmol) en dietiléter (30 ml) y se añadió gota a gota LHMDS 1 M (3,9 ml, 3,9 mmol) durante varios minutos. Se formó lentamente un precipitado y la reacción se volvió amarilla clara. Después de aproximadamente 15 minutos, se añadió oxalato de dietilo (529 \mul, 3,9 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente. Después de 15 minutos, se añadió una segunda alícuota de LHMDS (3 ml, 3 mmol) y oxalato de dietilo (500 \mul, 3,8 mmol). Después de 24 horas, se recogió el precipitado resultante mediante filtración por succión y se lavó con dietiléter. Se obtuvo un sólido de color crema. Rendimiento: 578 mg. Se recuperó una segunda recogida de las aguas madre, 529 mg (88% combinado). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) 1,20 (t, 3H), 1,46 (s, 9H), 4,86 (c, 2H), 4,38 (s, 2H), 7,06 (t, 1H), 7,28 (t, 1H), 7,46 (d, 1H), 7,69 (d, 1H).

Etapa 6

Se combinó el enolato de la etapa 5 (530 mg, 1,5 mmol) con clorhidrato de 4-sulfonamidofenilhidrazina (669 mg, 2 mmol) en THF (6 ml) y ácido acético (3 ml). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 48 horas, después se calentó a reflujo para completar la ciclación, se dejó eliminar por ebullición el THF y se reemplazó por ácido acético (6 ml). Después de 24 horas adicionales, se recogió el precipitado amarillo resultante mediante filtración por succión y se lavó con una pequeña cantidad de THF. Rendimiento 356 mg (60%) con pérdida del grupo protector terc-butoxicarbonilo. RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}+TFA) 1,30 (t, 3H), 4,30 (c, 2H), 4,70 (s, 2H), 6,35 (t, 1H), 6,43 (d, 1H), 6,71 (d, 1H), 6,97 (t, 1H), 7,76 (d, 2H), 8,04 (d, 2H).

Ejemplo 13 1-[4-(Aminosulfonil)fenil]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

35

Se suspendió el éster etílico del ejemplo 12 (100 mg, 0,25 mmol) en metanol (2 ml) y se burbujeó con gas NH_{3} a temperatura ambiente durante 10 minutos, después se enfrió a -78ºC y se condensó aproximadamente 1 ml de amoniaco en la mezcla de reacción. Se dejó reposar la reacción a temperatura ambiente en un tubo sellado durante 6 días. Se enfrió la reacción a -78ºC, se abrió el recipiente y se dejaron evaporar los disolventes a temperatura ambiente. Se disolvió el residuo en metanol (15 ml) y se filtró. Se concentró después la disolución bajo corriente de nitrógeno hasta que se hubo formado un sólido cristalino. Se recogió el sólido y se lavó con dietiléter. Se obtiene un sólido amarillo pálido. Rendimiento: 74 mg (80%). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) 4,69 (s, 2H), 6,32 (t, 1H), 6,44 (d, 1H), 6,67 (d, 1H), 6,95 (t, 1H), 7,57 (s a, 2H), 7,76 (d, 2H), 8,02 (d, 2H). EMAR-FAB m/z 370,0963 (M+H, C_{17}H_{16}N_{5}O_{3}S requiere 370,0974).

Ejemplo 14 1-[4-(Aminosulfonil)fenil]-5-[(4-metilfenil)sulfonil]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxilato de etilo

36

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Etapa 1

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37

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Se condensó el producto de la etapa 2 del ejemplo 12 (3,01 g, 10 mmol) con oxalato de dietilo (10 mmol) en presencia de LHMDS del mismo modo que en el ejemplo 6. Se obtiene un polvo marrón claro. Rendimiento 2,26 g (55%). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) 1,18 (t, 3H), 2,36 (s, 3H), 3,98 (c, 2H), 4,61 (s, 2H), 7,13 (m, 3H), 7,32 (m, 3H), 7,50 (d, 2H), 7,60 (d, 2H).

Etapa 2

Se condensó el producto de la etapa 1 (2,04 g, 5 mmol) con clorhidrato de 4-sulfonamidofenilhidrazina (1,3 g, 5,8 mmol) según el procedimiento del ejemplo 6. Se concentró la reacción hasta un residuo, que se procesó a través de una almohadilla de gel de sílice (aprox. 50 g) eluida con CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}CN 3:1 (500 ml). Se concentró la disolución resultante y se trituró el residuo con metanol (25 ml). Se obtiene un sólido blanco. Rendimiento 1,85 g (67%). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) 1,39 (t, 3H), 2,13 (s, 3H), 4,42 (c, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,71 (d, 1H), 7,16 (s, 4H), 7,25 (m, 3H), 7,50 (t, 1H), 7,61 (s, 2H, SO_{2}NH_{2}), 7,75 (d, 1H), 8,00 (d, 2H).

Ejemplo 15 1-[4-(Aminosulfonil)fenil]-5-[(4-metilfenil)sulfonil]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

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38

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Se convirtió el producto del ejemplo 14 (1,48 g, 2,7 mmol) en la amida de la misma manera que en el ejemplo 3. Se concentró en un rotavapor hasta que se obtuvo un precipitado blanco fino. Se lavó el sólido con agua y después cuidadosamente con una pequeña cantidad de metanol, después éter y se secó a vacío. Se obtiene un sólido blanco. Rendimiento 1,15 g (81%). RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) 2,12 (s, 3H), 5,11 (s, 2H), 6,73 (d, 1H), 7,13 (s, 4H), 7,21 (m, 3H), 7,48 (t, 1H), 7,56 (m, 3H), 7,72 (t, 1H), 7,99 (d, 2H).

Ejemplo 16 1-[4-(Aminosulfonil)fenil]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida

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39

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Etapa 1

Preparación de éster metílico de ácido (2Z)-hidroxi-(4-oxo-2H-1-benzopiran-3(4H)-iliden)etanoico

Se añadió gota a gota una disolución de metóxido de sodio 0,5 M (96,9 ml, 48,28 mmol) a una disolución de 4-cromanona (6,1097 g, 40,0 mmol) y oxalato de dimetilo (5,759 g, 48,28 mmol) en metanol (50 ml) a TA en atmósfera de N_{2} durante 20 min. La disolución incolora se volvió amarilla. Se agitó la disolución a TA en atmósfera de N_{2} durante toda la noche. Después de 16 h, se eliminó la disolución de reacción a presión reducida.

Se diluyó el residuo con AE, se lavó con H_{2}O y salmuera y se secó sobre MgSO_{4}. Después de la filtración, se eliminó el disolvente a presión reducida, proporcionando el producto bruto éster metílico del ácido (2Z)-hidroxi-(4-oxo-2H-1-benzopiran-3(4H)-iliden)etanoico (8,9096 g, 95,2%) después de secar a vacío.

Etapa 2

Preparación de éster metílico del ácido 1-[4-(aminosulfonil)fenil]-1,4-dihidro-[1]benzopirano[4,3-c]pirazol-3-carboxílico

Se añadió 4-sulfonamidofenilhidrazina (1,2328 g, 5,511 mmol) a una disolución de éster metílico del ácido (2Z)-hidroxi-(4-oxo-2H-1-benzopiran-3(4H)-iliden)etanoico preparado en la etapa 1 (1,17 g, 5,0 mmol) en metanol (50 ml) (la SM no se disolvió en metanol hasta que se calentó a 60ºC). Se formó un precipitado. Se calentó la mezcla de reacción a reflujo en atmósfera de N_{2} durante toda la noche. Se separó el precipitado por filtración, se lavó con MeOH, se recogió y se secó a vacío, proporcionando el producto deseado éster metílico del ácido 1-[4-(aminosulfonil)fenil]-1,4-dihidro-[1]benzopirano[4,3-c]pirazol-3-carboxílico (1,6115 g, 84%).

Etapa 3

Preparación de 1-[4-(aminosulfonil)fenil]-1,4-dihidro-[1]benzopirano[4,3-c]pirazol-3-carboxamida

Se añadió NH_{3} líquido (5 ml) a una suspensión de éster metílico del ácido 1-[4-(aminosulfonil)fenil]-1,4-dihidro-[1]benzopirano[4,3-c]pirazol-3-carboxílico (0,77 g, 2,0 mmol) en MeOH (50 ml) en un tubo a presión. Se selló el tubo a presión a TA y después se calentó a 60ºC durante toda la noche. La suspensión se convirtió en una disolución transparente. Después de 24 h, se enfrió la disolución a TA y se alivió la presión. Se eliminó el disolvente a presión reducida. Se recristalizaron los sólidos blancos resultantes con MeOH, proporcionando el producto bruto 1-[4-(aminosulfonil)fenil]-1,4-dihidro-[1]benzopirano[4,3-c]pirazol-3-carboxamida (0,3584 g, 48%). Masa (MH^{+}) 137. Anal. calc. para C_{17}H_{14}O_{4}N_{4}S + 0,4 H_{2}O: C 54,08, H 3,95, N 14,86. Encontrado: C 54,13, H 3,90, N 14,86.

La Tabla 1 muestra la identificación de compuesto, el compuesto y los valores de ensayo de heterodímero de IKK expresados como CI_{50} para los ejemplos 7-16.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1

40

41

Los ejemplos 17 y 18 se sintetizaron utilizando el siguiente esquema general.

Esquema XI

42

1.) AcONa, AcOCu, K_{2}CO_{3}, alcohol isoamílico, reflujo, 3 h, 2.) Anhídrido acético, AcOK, 90ºC, 2 h. 3.) LiHMDSA, oxalato de dietilo, -78ºC, 1 h, t.a., ~18 h. 4.) Ácido acético, 60ºC, 6 h. 5.) H_{2}, Pd, 34,5 kPa, ácido acético, t.a., 18 h. 6.) NH_{3}, 4,14 MPa, etanol, 120ºC, 18 h. 7.) ROCl, piridina, t.a., 5 h.

Ejemplo 17 Acetato de 5-acetil-8-amino-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

43

Etapa 1

44

Se añadieron carbonato de potasio (33 g, 0,238 mol), acetato de sodio (13,5 g, 0,164 mol) y acetato de cobre (2,7 g, 0,0149 mol) a ácido 2-cloro-5-nitrobenzoico (30 g, 0,149 mol) y \beta-alanina (13,3 g, 0,149 mol) en alcohol isoamílico (200 ml). Se agitó la suspensión con un agitador mecánico y se calentó a reflujo durante 3 horas. Se filtró el sólido resultante y se lavó con acetona. Se disolvió después el sólido amarillo en NaOH 0,1 N caliente (200 ml) y se agitó después la disolución con carbón. Se filtró la suspensión resultante, se enfrió el filtrado a temperatura ambiente y después se acidificó a pH ~3 con HCl 1 N. Se filtró el precipitado resultante y se recristalizó con agua DI caliente, proporcionando el producto deseado. 28,4 g (PM= 254,05 g/mol, 75% de rendimiento). CL/EM m/z= 255,1 (M+1).

Etapa 2

1-Acetil-6-nitro-2,3-dihidroquinolin-4(1H)-ona

45

Se suspendieron el material de la etapa 1 (5 g, 0,0197 mol) y acetato de potasio (2,9 g, 0,0295 mol) en anhídrido acético (50 ml) y se calentaron a 90ºC durante 2 horas. Se enfrió después la reacción a temperatura ambiente en un baño de hielo y se eliminó el anhídrido acético a vacío. Se purificó por cromatografía el material resultante (gel de sílice 60, 10% de etanol:tolueno), produciendo el producto deseado. 3,7 g (PM= 234,21 g/mol, 80% de rendimiento). CL/EM m/z= 235,2 (M+1).

Etapa 3

(1-Acetil-6-nitro-4-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-3-il)(oxo)acetato de etilo

46

Se añadió bis(trimetilsilil)amiduro de litio (20,5 ml, 1 M en disolución de THF) al material de la etapa 2 (4,8 g, 0,0205 mol) en THF (25 ml) a -78ºC. Se añadió después oxalato de dietilo (3 g, d= 1,076 g/ml, 2,8 ml, 0,0205 mol, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. Se filtró después la suspensión, proporcionando un sólido naranja, 6,1 g (PM= 334,28 g/mol, 90% de rendimiento). CL/EM m/z= 335 (M+1).

Etapa 4

5-Acetil-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-nitro-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxilato de etilo

47

Se combinaron el material de la etapa 3 (1,1 g, 0,00331 mol) y clorhidrato de 1-(1,3-benzodioxol-5-il)hidrazina (500 mg, 0,00265 mol) en ácido acético (10 ml) y se calentó a 60ºC durante 5 horas. Se enfrió después la suspensión y se filtró, proporcionando el producto en forma de un sólido marrón. 930 mg (PM= 450,4 g/mol, 78% de rendimiento). CL/EM m/z= 451,5 (M+1).

Etapa 5

5-Acetil-8-amino-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxilato de etilo

48

Se disolvió el material de la etapa 4 (930 mg, 0,00206 mol) en ácido acético (25 ml), se trató con una cantidad catalítica de Pd(OH)_{2} al 20% y se agitó durante 12 horas a 34,5 kPa a temperatura ambiente. Se filtró después la suspensión y se concentró el filtrado a vacío, proporcionando el producto deseado en forma de la sal del ácido acético. 850 mg (PM= 480,46, 87% de rendimiento). CL/EM m/z= 421,6 (M+1).

Etapa 6

Acetato de 5-acetil-8-amino-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

49

Se disolvió el material de la etapa 5 (450 mg, 0,00094 mol) en etanol (10 ml) y NH_{3} (10 ml), se calentó la mezcla de reacción resultante a 120ºC y se agitó durante 20 horas a 4,14 MPa. Se enfrió después la reacción y se aireó durante 2 horas. Se concentró la disolución resultante a vacío, proporcionando el producto en forma de un cristal marrón. 340 mg (PM= 391,38, 93% de rendimiento). CL/EM m/z= 392,05 (M+1).

Ejemplo 18 5-Acetil-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(2-clorobenzoil)amino]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

50

Se disolvieron el material del título del ejemplo 17 (280 mg, 0,00072 mol) y cloruro de 2-clorobencilo (126 mg, 0,0072 mol, d= 1,382 g/mol, 91 \mul) en piridina (2 ml) y se agitó durante 4 horas. Se eliminó la piridina a vacío y se purificó el material resultante mediante HPLC, proporcionando el compuesto del título. 95 mg (PM= 529,93, 25% de rendimiento). CL/EM m/z= 530,95 (M+1).

Se sintetizaron los ejemplos 19 y 20 mediante el siguiente esquema general.

Esquema XII

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51

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1.) HCl concentrado, reflujo, 2 h, 2.) ROCl, piridina, t.a., 6 h

Ejemplo 19 Clorhidrato de 8-amino-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

52

Se disolvió el material del título del ejemplo 17 (50 mg, 0,00013 mol) en HCl concentrado (al 38%) (2 ml) y se calentó a reflujo durante 2 horas. Se dejó enfriar la reacción y se filtró el precipitado resultante. Se trituró el sólido amarillo con agua y se secó a vacío, proporcionando un sólido blanquecino en forma de la sal del ácido monoclorhídrico. 45 mg (PM= 383,79, 89% de rendimiento). CL/EM m/z= 348,4 (M+1).

Ejemplo 20 1-(1,3-Benzodioxol-5-il)-8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-1H-pirazolo-[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

53

Se disolvió el material del título del ejemplo 19 (310 mg, 0,00088 mol) en piridina (2 ml). Se añadió a esta disolución cloruro de 2-cloronicotinilo (155 mg, 0,00088 mol). Se agitó la reacción durante 18 horas a temperatura ambiente. Se concentró después la reacción a vacío y se purificó el material resultante mediante HPLC en fase inversa, proporcionando el producto en forma de un sólido blanco. 34 mg (PM= 486,87, 8% de rendimiento). CL/EM m/z= 487,6 (M+1).

Ejemplo 21 5-Acetil-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

54

Se disolvió el material del título del ejemplo 17 (100 mg, 0,00025 mol) en DMF (2 ml) y se añadieron ácido 2-cloronicotínico (40 mg, 0,00025 mol), HATU (144 mg, 0,00038 mol) y DIEA (49 mg, 0,00038 mol) a la disolución. Se cubrió la reacción con argón y se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Se concentró la disolución a vacío, se lavó el sólido resultante con agua y después se filtró. Se recristalizó después el producto con etanol y se aisló mediante filtración a vacío. 25 mg (PM= 530,93, 19% de rendimiento). CL/EM m/z= 531,7 (M+1).

Ejemplo 22 5-Acetil-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(3-cloroisonicotinoil)amino]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

55

Se obtuvo el producto a partir del material del título del ejemplo 17 (100 mg, 0,00025 mol), ácido 2-cloroisonicotínico (40 mg, 0,00025 mol) y mediante el procedimiento del ejemplo 21. 45 mg (PM= 530,93, 34% de rendimiento). CL/EM m/z= 531,8 (M+1).

Ejemplo 23 5-Acetil-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(metilsulfonil)amino]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

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56

Se disolvió el material del título del ejemplo 17, etapa 6 (300 mg, 0,000767 mol) en piridina (5 ml), y se añadió a esta disolución cloruro de metanosulfonilo (88 mg, 0,000767 mol). Se agitó la disolución resultante a temperatura ambiente durante 18 horas. Se concentró después la reacción a vació, se trituraron los sólidos resultantes con agua y se aisló el producto mediante filtración a vacío. 88 mg (PM= 469,48, 25% de rendimiento). CL/EM m/z= 470,3 (M+1).

Ejemplo 24 5-Acetil-8-amino-1-(4-fluorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

57

Etapa 1

5-Acetil-1-(4-fluorofenil)-8-nitro-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxilato de etilo

58

Se disolvió el material de la etapa 3 del ejemplo 17 (15 g, 0,044 mol) en 100 ml de ácido acético glacial y después se añadió clorhidrato de 4-fluorofenilhidrazina (7,15 g, 0,044 mol). Se agitó después la reacción a temperatura ambiente durante 18 horas en atmósfera de argón, y después se concentró eliminando la mayoría del ácido acético. Se trituró el aceite viscoso restante con 250 ml de acetonitrilo. Se aisló el sólido resultante mediante filtración a vacío y se secó, proporcionando el producto en forma de un sólido naranja/rosa. 11 g (PM= 424,38, 59% de rendimiento). CL/EM m/z= 425,2 (M+1).

Etapa 2

5-Acetil-8-amino-1-(4-fluorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxilato de etilo

59

Se obtuvo el producto en forma de la sal del ácido acético a partir del material de la etapa 1 (10 g, 0,0236 mol) y mediante el procedimiento del ejemplo 17. 9,8 g (PM= 454,45, 91% de rendimiento). CL/EM m/z= 395 (M+1).

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Etapa 3

5-Acetil-8-amino-1-(4-fluorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

60

Se obtuvo el producto a partir del material de la etapa 2 (9,8 g, 0,0216 mol) utilizando el procedimiento del ejemplo 17 etapa 6. 7,5 g (PM= 365,4, 95% de rendimiento). CL/EM m/z= 366 (M+1).

Ejemplo 25 5-Acetil-1-(4-fluorofenil)-8-[(metilsulfonil)amino]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida

61

Se combinó el material de la etapa 3 del ejemplo 24 (1 g, 0,0027 mol) con cloruro de metanosulfonilo (345 mg, 0,003 mol) en 10 ml de piridina. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de argón durante 3 horas. Se concentró después la reacción a vacío. Se lavó el sólido resultante con agua y dietiléter y después se secó al aire, proporcionando el compuesto deseado en forma de un sólido de color tostado. 950 mg (PM= 443,46, 79% de rendimiento). CL/EM m/z= 444 (M+1).

Ejemplo 26 5-Acetil-8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-1-(4-fluorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-car- boxamida

62

Se combinaron el material del título del ejemplo 24 (1,2 g, 0,0033 mol) y ácido 2-cloronicotínico (517 mg, 0,0033 mol) en atmósfera de argón en 5 ml de DMF. Se añadieron diisopropiletilamina (862 \mul, 0,00495 mol) y HATU (1,88 g, 0,00495 mol), se trituraron los sólidos resultantes con agua y se aislaron mediante filtración a vacío, proporcionando el producto en forma de un sólido blanquecino. 652 mg (PM= 504,91, 39% de rendimiento). CL/EM m/z= 505,7 (M+1).

Ejemplo 27 8-{[(2-Cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-1-(4-fluorofenil)-5-(metilsulfonil)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin- 3-carboxamida

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63

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Etapa 1

1-(4-Fluorofenil)-8-nitro-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxilato de etilo

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64

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Se suspendió el material de la etapa 1 del ejemplo 24 (5 g, 0,0117 mol) en 100 ml de EtOH absoluto y 60 ml de HCl 1 N. Se calentó después la mezcla a 80ºC durante 18 horas. Se terminó después el calentamiento y se filtró el compuesto tras enfriar, proporcionando el producto deseado puro en forma de un sólido naranja. 3,8 g (PM= 382,35, 85% de rendimiento). CL/EM m/z= 383,4 (M+1).

Etapa 2

1-(4-Fluorofenil)-5-(metilsulfonil)-8-nitro-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxilato de etilo

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65

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Se obtiene el compuesto del título a partir del material de la etapa 1, cloruro de metanosulfonilo, mediante el procedimiento del ejemplo 25 (PM= 382,35).

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Etapa 3

66

Se obtiene el compuesto del título a partir del material de la etapa 2, mediante el procedimiento del ejemplo 21.

Se muestran en la Tabla 2 la estructura y la bioactividad medidas en el ensayo de resina IKK2 de los compuestos de los ejemplos 17-27.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 2

67

68

69

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Se sintetizaron los ejemplos 26-46 utilizando el siguiente esquema general. Los ejemplos 28, 29 y 30 se describen con detalle y son ilustrativos de los compuestos de la Tabla 3.

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Esquema XIII

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70

Ejemplo 28 8-Amino-1-[1,3-benzodioxol-5-il]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxilato de etilo

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71

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Etapa 1

7-Nitro-4-cromanona

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72

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Se añadió en porciones una disolución de KNO_{3} (21,84, g, 0,216 mol) en 400 ml de H_{2}SO_{4} conc. a una disolución de 4-cromanona (30,0 g, 0,196 mol) en 600 ml de H_{2}SO_{4} conc. a 0ºC. Se agitó la disolución durante 3 h o más a 0ºC hasta que todo el material de partida se hubo consumido (la reacción se siguió por CL/EM). Se vertió lentamente la disolución en una mezcla de agua-hielo y se formó un precipitado blanco. Se recogió el precipitado mediante filtración, se lavó con éter y se secó al aire, proporcionando una mezcla bruta que contiene 7-nitro-4-cromanona como isómero mayoritario y 5-nitro-4-cromanona como isómero minoritario. La recristalización de la mezcla bruta de acetato de etilo/hexano proporcionó 7-nitro-4-cromanona pura (21,08 g, 55,6%), que se caracterizó mediante RMN-^{1}H, CL/EM (MH^{+} 194) y HPLC (99% de pureza).

Etapa 2

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73

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Se añadió oxalato de dietilo (24,79 ml, 0,179 mol) a una suspensión de 7-nitro-4-cromanona de la etapa 1 (32 g, 0,165 mol) en tetrahidrofurano seco (750 ml) y éter seco (3 l) (el tetrahidrofurano debería añadirse primero a temperatura ambiente, seguido del éter). Se enfrió la mezcla resultante a -30ºC, seguido de la adición de hexametildisilazida de litio 1 N (185 ml, 0,185 mol) durante un periodo de 2 horas. Se agitó la mezcla de reacción en atmósfera de N_{2} y se dejó calentar desde -30ºC hasta temperatura ambiente durante toda la noche. Se recogió el precipitado de color naranja resultante mediante filtración, se lavó con éter y secó al aire, proporcionando el producto deseado en forma de la sal de litio (47 g, 99,3% de rendimiento). Se caracterizó el producto mediante RMN-^{1}H, CL/EM y HPLC.

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Etapa 3

1-[1,3-Benzodioxol-5-il]-8-nitro-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxilato de etilo

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74

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Se añadió clorhidrato de 3,4-metilendioxifenilhidrazina (12,2954 g, 65,2274 mmol) a una disolución del material de la etapa 2 (17,72 g, 59,2977 mmol) en ácido acético (500 ml). Se calentó la disolución de reacción a reflujo en atmósfera de N_{2} durante toda la noche. Se siguió la reacción con CL/EM (habitualmente la reacción termina en 3 a 4 horas). Se enfrió la mezcla se reacción a TA, se recogió el precipitado mediante filtración y se lavó con ácido acético (el ácido acético se desplazó con éter), se secó al aire, proporcionando el producto deseado 1-[1,3-benzodioxol-5-il]-8-nitro-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxilato de etilo (1ª recogida, 9,5894 g, 39,5%). Se concentraron las aguas madre y se recuperó más producto deseado (2ª recogida, 6,7935 g, 28,0%) mediante recristalización de las aguas madre. Se caracterizó el producto mediante RMN-^{1}H, CL/EM (MH^{+} 410) y HPLC (100% de
pureza).

Etapa 4

8-Amino-1-[1,3-benzodioxol-5-il]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxilato de etilo

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75

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Se trató el material del título de la etapa 3 (17 g, 0,0416 mol) con níquel Raney en DMF a 172 kPa a TA durante 17 h. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó con DMF. Se concentraron los filtrados y lavados combinados a presión reducida. Se diluyó el residuo resultante con MeOH, se sometió a sonicación a 40ºC y se recogió el sólido mediante filtración, proporcionando 8-amino-1-[1,3-benzodioxol-5-il]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxilato de etilo (12,3415 g, 78,3%). Se caracterizó el producto mediante RMN-^{1}H, CL/EM (MH^{+} 380) y HPLC (98% de
pureza).

Ejemplo 29 8-Amino-1-[1,3-benzodioxol-5-il]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida

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76

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Se trató el material del título de la etapa 3 del ejemplo 28 (11,25 g, 0,0297 mol) con NH_{3} líquido en EtOH a 120ºC a 414 kPa durante 20 h. Se concentró la disolución de reacción hasta sequedad. Se recristalizó el sólido resultante con MeOH caliente, proporcionando 8-amino-1-[1,3-benzodioxo-5-il]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida (9,8842 g, 95,4%), que se caracterizó mediante RMN-^{1}H, CL/EM (MH^{+} 350) y HPLC (100% de pureza).

Ejemplo 30 8-Amino-1-[1,3-benzodioxol-5-il]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida

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77

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Se añadió cloruro de 2-cloronicotinoílo (0,0487 g, 0,2712 mmol) a una disolución del material del título del ejemplo 28 (0,0791 g, 0,226 mmol) en piridina seca (3 ml). Se agitó la reacción a TA durante toda la noche. Se inactivó la reacción con PS-trisamina (4,61 mmol/g, 0,2021 g, 0,9318 mmol) y se agitó durante toda la noche. Se filtraron las resinas, se lavaron con piridina. Se concentraron los filtrados y lavados combinados hasta sequedad. Se recristalizó el residuo resultante con metanol caliente, proporcionando 8-amino-1-[1,3-benzodioxol-5-il]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida (0,0922 g, 83,3%), que se caracterizó mediante RMN-^{1}H, CL/EM (MH^{+} 489) y HPLC (96,6% de pureza).

Se muestran en la Tabla 3 la estructura y bioactividad medidas en el ensayo de resina de IKK2 de los compuestos de los ejemplos 28-62.

TABLA 3

78

79

80

81

82

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Se sintetizaron los ejemplos 47-53 de manera similar al esquema XIII como se describe en los ejemplos 28-30, en los que X es fluoro. Se muestran en la Tabla 4 la estructura y la bioactividad medidas en el ensayo de resina IKK de los compuestos de los ejemplos 47-53.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 4

83

84

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Se sintetizaron los ejemplos 54-58 de manera similar al esquema XIII como se describe en los ejemplos 28-30, en los que X es metilsulfonilo, metilsulfinilo o metiltio. Se muestran en la Tabla 5 la estructura y la bioactividad medidas en el ensayo de resina IKK2 de los compuestos de los ejemplos 54-58.

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TABLA 5

85

86

Evaluación biológica Materiales

Las placas de captura de biotina SAM^{2_{TM}} fueron de Promega. Se obtuvieron resina de afinidad anti-FLAG, péptido-FLAG, NP-40 (Nonidet P-40), BSA, ATP, ADP, AMP, LPS (serotipo 0111:B4 de E. coli) y ditiotreitol de SigmaChemicals. Los anticuerpos específicos de NEMO (IKK\gamma) (FL-419), IKK1 (H-744), IKK2 (H-470) e I\kappaB\alpha (C-21), se adquirieron en Santa Cruz Biotechnology. La resina Ni-NTA se adquirió en Qiagen. Los péptidos se adquirieron en American Peptide Company. Los comprimidos de cóctel inhibidor de proteasa fueron de Boehringer Mannheim. La columna de Sephacryl S-300 fue de Pharmacia LKB Biotechnology. Los concentradores Centriprep-10 con un corte de peso molecular de 10 kDa y las membranas con corte de peso molecular de 30 kDa se obtuvieron de Amicon. [\gamma-^{33}P]ATP (2.500 Ci/mmol) y [\gamma-^{32}P]ATP (6.000 Ci/mmol) se adquirieron en Amersham. Los demás reactivos utilizados aquí fueron de la pureza más alta comercialmente disponible.

Clonación y expresión

Se amplificaron ADNc de IKK1 e IKK2 humanos mediante transcriptasa inversa-reacción en cadena con polimerasa a partir de ARN placentario humano (Clonetech). Se subclonó hIKK1 en pFastBac HTA (Life Technologies) y se expresó en forma de proteína de fusión marcada con His_{6} N-terminal. Se amplificó el ADNc de hIKK2 utilizando un cebador oligonucleotídico inverso que incorporaba la secuencia peptídica de un marcaje de epítopo FLAG en la terminación C de la región de codificación de IKK2 (DYKDDDDKD). Se subclonó el ADNc de hIKK2:FLAG en el vector de baculovirus pFastBac. Se construyó el mutante rhIKK2 (S177S, E177E) en el mismo vector utilizado para rhIKK2 de tipo silvestre utilizando un kit de mutagénesis QuikChange® (Stratagene). Se utilizaron disoluciones madre víricas de cada constructo para infectar células de insecto cultivadas en cultivo en suspensión de 40 l. Se lisaron las células en el momento de máxima expresión y se demostró la actividad rhIKK. Se almacenaron los lisados celulares a -80ºC hasta que se emprendió la purificación de las proteínas recombinantes como se describe a continuación.

Aislamiento enzimático

Todos los procedimientos de purificación se llevaron a cabo a 4ºC a menos que se observe otra cosa. Los tampones utilizados son: tampón A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,6, que contiene NaCl 50 mM, NaF 20 mM, \beta-glicerofosfato 20 \muM, ortovanadiato de sodio 500 \muM, metabisulfito de sodio 2,5 mM, benzamidina 5 mM, EDTA 1 mM, EGTA 0,5 mM, 10% de glicerol, DTT 1 mM, 1 x inhibidores de proteasa Complete^{TM}; tampón B: igual que el tampón A, excepto por NaCl 150 mM, y tampón C: igual que tampón A, excepto por NaCl 500 mM.

Aislamiento del homodímero rhIKK1

Se centrifugaron células de una fermentación de 8 l de IKK1 expresada en baculovirus marcada con el péptido His y se resuspendió el sedimento celular (MOI 0,1, l= 72 h) en 100 ml de tampón C. Se microfluidizaron las células y se centrifugaron a 100.000 x g durante 45 min. Se recogió el sobrenadante, se añadió imidazol a una concentración final de 10 nM y se incubó con 25 ml de resina Ni-NTA durante 2 horas. Se vertió la suspensión en una columna de 25 ml, se lavó con 250 ml de tampón C, y después con 125 ml de imidazol 50 mM en tampón C. Se eluyó el homodímero rhIKK1 utilizando imidazol 300 mM en tampón C. Se añadieron BSA y NP-40 a las fracciones enzimáticas a una concentración final de 0,1%. Se dializó la enzima frente a tampón B, se tomaron alícuotas y se almacenaron a -80ºC.

Aislamiento del homodímero rhIKK2

Se recogió un máximo de proteína y se incubó con resina de afinidad anti-FLAG en un rotavapor en tampón B. Se lavó la resina en lotes con 10-15 volúmenes de lecho de tampón C. Se vertió la resina lavada en una columna y se eluyó el homodímero rhIKK2 utilizando 5 volúmenes de lecho de tampón C que contiene péptido FLAG. Se añadieron DTT 5 mM, 0,1% de NP-40 y BSA (concentrada a 0,1% en la cantidad final) a la enzima eluida antes de concentrar utilizando una membrana Amicon con un corte de peso molecular de 30 kDa. Se tomaron alícuotas de la enzima y se almacenaron a -80ºC.

Aislamiento del heterodímero rhIKK1/IKK2

Se produjo la enzima heterodimérica mediante coinfección en un sistema de baculovirus (FLAG IKK2/IKK1 His, MOI: 0,1 y l= 72 horas). Se centrifugaron las células infectadas y se suspendió el sedimento celular (10,0 g) en 50 ml de tampón A. Se microfluidificó la suspensión de proteína y se centrifugó a 100.000 x g durante 45 minutos. Se añadió imidazol al sobrenadante hasta una concentración final de 10 mM. Se dejó unir la proteína a 25 ml de resina Ni-NTA mezclando durante 2 horas. Se vertió la suspensión de proteína-resina en una columna de 25 ml y se lavó con 250 ml de tampón A que contenía imidazol 10 mM, seguido de 125 ml de tampón A que contenía imidazol 50 mM. Se utilizó después tampón A que contenía imidazol 300 mM para eluir la proteína. Se recogió un conjunto de 75 ml y se añadió NP-40 a una concentración final de 0,1%. Se dializó después la disolución de proteína frente a tampón B. Se dejó unir después la enzima heterodimérica dializada a 25 ml de gel de afinidad de agarosa M2 anti-FLAG durante toda la noche con mezclado constante. Se centrifugó después la suspensión de proteína-resina durante 5 min a 2.000 rpm. Se recogió el sobrenadante y se resuspendió la resina en 100 ml de tampón C que contenía 0,1% de NP-40. Se lavó la resina con 375 ml de tampón C que contenía 0,1% de NP-40. Se vertió la proteína-resina en una columna de 25 ml y se eluyó la enzima utilizando tampón B que contenía péptido FLAG. Se recogieron las fracciones enzimáticas (100 ml) y se concentraron hasta 20 ml utilizando una membrana Amicon con un corte de peso molecular de 30 kDa. Se añadió albúmina de suero bovino a la enzima concentrada a una concentración final de 0,1%. Se tomaron después alícuotas de la enzima y se almacenaron a -80ºC.

Cultivo celular

Se proporcionaron generosamente la línea celular pre-B humana de tipo silvestre (wt) 70Z/3 y su mutante 1.3E2 por la Dra. Carol Sibley. Se hicieron crecer células wt 70Z/3 y 1.3E2 en RPMI 1640 (Gibco) suplementado con 7% de suero bovino definido (Hyclones) y 2-mercaptoetanol 50 \muM. Se cultivaron células THP-1 de leucemia monocítica humana, obtenidas de la ATCC, en RPMI 1640 suplementado con 10% de suero bovino definido, HEPES 10 mM, piruvato de sodio 1,0 M y 2-mercaptoetanol 50 \muM. Para los experimentos, se sembraron células en placas de 6 pocillos a 1 x 10^{6} células/ml en medios recientes. Se estimularon las células pre-B mediante la adición de LPS 10 \mug/ml durante periodos variables de tiempo en el intervalo de 0-4 h. Se estimularon células THP-1 mediante la adición de LPS 1 \mug/ml durante 45 minutos. Se sedimentaron las células, se lavaron con tampón fosfato de sodio 50 mM frío, pH 7,4, que contenía NaCl 0,15 M y se lisaron a 4ºC en tampón Hepes 20 mM, pH 7,6, que contenía NaCl 50 mM, EDTA 1 mM, EGTA 1 mM, ortovanadiato de sodio 1 mM, \beta-glicerofosfato 10 \muM, NaF 1 mM, PMSF 1 mM, DTT 1 M y 0,5% de NP-40 (tampón de lisis). Se almacenaron a -80ºC las fracciones citosólicas obtenidas después de centrifugación a 10.000 x g hasta utilizarlas.

Inmunoprecipitación y transferencia Western

Se centrifugó pasta celular SF9 que contiene rhIKK (100.000 x g, 10 min) para eliminar los desechos. Se inmunoprecipitaron las rhIKK (100 \mug de pasta celular) a partir del sobrenadante celular utilizando 3 \mug de anticuerpo anti-NEMO (FL-419), seguido de acoplamiento a perlas de proteína A-Sepharose. Se inmunoprecipitaron también las rhIKK a partir de preparaciones de proteína purificadas por cromatografía de afinidad (1 \mug) utilizando anticuerpos anti-FLAG, anti-His o anti-NEMO (1-4 \mug), seguido de acoplamiento con proteína A-Sepharose. Se inmunoprecipitó el complejo IKK humano nativo a partir de homogeneizados de células THP-1 (300 \mug/condición) utilizando el anticuerpo anti-NEMO. Se sedimentaron los complejos inmunes y se lavaron 3 veces con 1 ml de tampón de lisis frío. Se purificaron por cromatografía las rhIKK inmunoprecipitadas mediante PAGE-SDS (8% de Tris-glicina), se transfirieron a membranas de nitrocelulosa (Novex) y se detectaron mediante quimioluminiscencia (SuperSignal) utilizando anticuerpos anti-IKK específicos (H-470 de IKK2, H-744 de IKK1). Se separaron las proteínas IKK2 nativa, I\kappaB\alpha y NEMO de los lisados citosólicos (20-80 \mug) mediante PAGE-SDS, y se visualizaron mediante quimioluminiscencia utilizando anticuerpos específicos.

Tratamiento con fosfatasa

Se lavaron las rhIKK inmunoprecipitadas 2 veces con Tris-HCl 50 mM, pH 8,2, que contenía EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, PMSF 1 mM y MnCl_{2} 2 mM, y se resuspendieron en 50 \mul. Se prediluyó fosfatasa (\lambdaPPasa, 1000 U) en el mismo tampón y se añadió a las muestras de IKK. Después de una incubación a temperatura ambiente durante 30 minutos con mezclado intermitente, se añadió tampón de lisis frío a los tubos para detener la reacción. Después de varios lavados, se separaron un 10% de las perlas para análisis Western, se sedimentó el material restante y se resuspendió en 100 \mul del tampón utilizado para el ensayo de cinasa in vitro.

Ensayo de enzima IKK\alphaSAM

Se midió la actividad cinasa IKK\alpha utilizando un péptido I\kappaB\alpha biotinilado (Gly-Leu-Lys-Lys-Glu-Arg-Leu-Leu-Asp-Asp-Arg-His-Asp-Ser_{32}-Gly-Leu-Asp-Ser_{36}-Met-Lys-Asp-Glu-Glu), una placa de captura de biotina SA^{2}^{TM} 96 y un sistema de vacío. La mezcla de reacción convencional contenía péptido I\kappaB\alpha biotinilado 5 \muM, [\gamma-^{33}P]ATP 1 \muM (aproximadamente 1 x 10^{5} cpm), DTT 1 mM, KCl 50 mM, MgCl_{2} 2 mM, MnCl_{2} 2 mM, NaF 10 mM, tampón Hepes 25 mM, pH 7,6 y solución enzimática (1-10 \mul) en un volumen final de 50 \mul. Después de la incubación a 25ºC durante 30 min, se extrajeron 25 \mul de la mezcla de reacción y se añadieron a una placa de captura de 96 pocillos de biotina SAM^{2}^{TM} 96. Se lavó después cada pocillo sucesivamente con 800 \mul de NaCl 2 mM, 1,2 ml de NaCl que contiene 1% de H_{3}PO_{4}, 400 \mul de H_{2}O y 200 \mul de etanol al 95%. Se dejó secar la placa en una campana a 25ºC durante 1 hora, y después se añadieron 25 \mul de fluido de centelleo (Microscint 20) a cada pocillo. Se midió la incorporación de [\gamma-^{33}ATP] utilizando un Top-Count NXT (Packard). En cada condición de ensayo, el grado de fosforilación del sustrato peptídico I\kappaB\alpha era lineal con el tiempo y la concentración para todas las enzimas purificadas. Se confirmaron los resultados del ensayo de péptido biotinilado mediante análisis PAGE-SDS de la reacción de cinasa utilizando GST-I\kappaB\alpha_{1-54} y [\gamma-^{32}P]ATP. Se cuantificó el sustrato radiomarcado resultante mediante Phosphoimager (Molecular Dynamics). Se empleó también un ensayo de resina de intercambio iónico utilizando [\gamma^{33}P]ATP y proteína de fusión GST-I\kappaB\alpha_{1-54} como sustratos. Cada sistema de ensayo proporcionó resultados consistentes con respecto a la K_{m} y actividades específicas para cada una de las isoformas de cinasa purificadas. Se definió una unidad de actividad enzimática como la cantidad necesaria para catalizar la transferencia de 1 nmol de fosfato de ATP al péptido I\kappaB\alpha por minuto. Se expresó la actividad específica como unidades por mg de proteína. Para experimentos relacionados con la determinación de la K_{m} de enzimas purificadas, se utilizaron diversas concentraciones de ATP o péptido I\kappaB\alpha en el ensayo a una concentración fija de I\kappaB\alpha o ATP. Para la K_{m} del péptido I\kappaB\alpha, se llevaron a cabo ensayos con 0,1 \mug de enzima, ATP 5 \muM y péptido I\kappaB\alpha de 0,5 a 20 \muM. Para la K_{m} de ATP, se llevaron a cabo ensayos con 0,1 \mug de enzima, péptido I\kappaB\alpha 10 \muM y ATP de 0,1 a 10 \muM. Para la determinación de la K_{m} del homodímero rhIKK1, debido a su baja actividad y mayor K_{m} por el péptido I\kappaB\alpha, se ensayó el homodímero rhIKK1 (0,3 \mug) con péptido I\kappaB\alpha 125 \muM, y una actividad específica 5 veces mayor de ATP (de 0,1 a 10 \muM) para experimentos de K_{m} de ATP y una actividad específica 5 veces mayor de ATP 5 \muM y péptido I\kappaB\alpha (de 5 a 200 \muM) para experimentos de K_{m} de péptido.

Ensayo enzimático de resina IKK\beta

Se midió la actividad cinasa IKK\beta utilizando un péptido I\kappaB\alpha biotinilado (Gly-Leu-Lys-Lys-Glu-Arg-Leu-Leu-Asp-Asp-Arg-His-Asp-Ser_{32}-Gly-Leu-Asp-Ser_{36}-Met-Lys-Asp-Glu-Glu) (American Peptide Co.). 20 \mul de la mezcla de reacción convencional contenían péptido I\kappaB\alpha biotinilado 5 \muM, 0,1 \muCi/reacción de [\gamma-^{33}P]ATP (Amersham) (aproximadamente 1 x 10^{5} cpm), ATP 1 \muM (Sigma), DTT 1 mM (Sigma), MgCl_{2} 2 mM (Sigma), MnCl_{2} 2 mM (Sigma), NaF 10 mM (Sigma), tampón Hepes 25 mM (Sigma), pH 7,6, y 20 \mul de disolución enzimática y 10 \mul de inhibidor en un volumen final de 50 \mul. Después de la incubación a 25ºC durante 30 min, se añadieron 150 \mul de resina (resina de intercambio aniónico Dowex AG1X8 malla 200-400) en formiato 900 mM, pH 3,0, a cada pocillo para detener la reacción. Se dejó asentar la resina durante 1 hora y se retiraron 50 \mul de sobrenadante a una placa de fondo plano Micolite-2 (Dynex). Se añadieron 150 \mul de fluido de centelleo (Microscint 40) (Packard) a cada pocillo. Se midió la incorporación de [\gamma-^{33}P]ATP utilizando un Top-Count NXT (Packard).

Ensayo enzimático de resina de heterodímero IKK

Se midió la actividad cinasa de heterodímero IKK utilizando un péptido I\kappaB\alpha biotinilado (Gly-Leu-Lys-Lys-Glu-Arg-Leu-Leu-Asp-Asp-Arg-His-Asp-Ser_{32}Gly-Leu-Asp-Ser_{36}-Met-Lys-Asp-Glu-Glu) (American Peptide Co.). 20 \mul de la mezcla de reacción convencional contenían péptido I\kappaB\alpha biotinilado 5 \muM, 0,1 \muCi/reacción de [\gamma-^{33}P]ATP (Amersham) (aproximadamente 1 x 10 cpm), ATP 1 \muM (Sigma), DTT 1 mM (Sigma), MgCl_{2} 2 mM (Sigma), MnCl_{2} 2 mM (Sigma), NaF 10 mM (Sigma), tampón Hepes 25 mM (Sigma), pH 7,6 y 20 \mul de disolución enzimática y 10 \mul de inhibidor en un volumen final de 50 \mul. Después de la incubación a 25ºC durante 30 min, se añadieron 150 \mul de resina (resina de intercambio aniónico Dowex AG1X8 malla 200-400) en formiato 900 mM, pH 3,0, a cada pocillo para detener la reacción. Se dejó asentar la resina durante 1 hora y se retiraron 50 \mul de sobrenadante a una placa de fondo plano Micolite-2 (Dynex). Se añadieron 150 \mul de fluido de centelleo (Microscint 40) (Packard) a cada pocillo. Se midió la incorporación de [\gamma-^{33}P]ATP utilizando un TopCount NXT (Packard).

Claims

1. Un compuesto de fórmula:

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87

\vskip1.000000\baselineskip

en la que

R^{4} se selecciona del grupo constituido por: halógeno, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, ciano, alcoxicarbonilo, alquilo, haloalquilo, hidrido, hidroxialquilo, haloalcoxi, heterociclo, nitro, acilamino, arilo, heteroarilo y alquenilo, OR^{13}, SR^{8}, SO_{2}N(R^{8})R^{8'}, NHR^{9}, NHCOR^{9}, NR^{9}COR^{9}, NHCO(OR^{9}), NR^{9}CO(OR^{9}), NR^{6}SO_{2}R^{10}, NHSO_{2}N(R^{10})R^{10'}, NR^{6}CON(R^{10})R^{10'}, COR^{9}, CO_{2}R^{8}, CON(R^{8})R^{8'}, en los que R^{8} y R^{8'} pueden tomarse conjuntamente formando un anillo carbocíclico de 3-7 miembros que tiene 1 a 3 heteroátomos sustituidos o no sustituidos seleccionados de S, SO, SO_{2}, O, N y NR^{6}, y en los que R^{10} y R^{10'} pueden tomarse conjuntamente formando un anillo carbocíclico de 3-7 miembros que tiene 1 a 3 heteroátomos sustituidos o no sustituidos seleccionados de S, SO, SO_{2}, O, N y NR^{8}, en los que dicho arilo, heterociclo, heteroarilo o alquenilo están opcionalmente sustituidos con R^{9};

R^{10'} se selecciona independientemente del grupo constituido por: hidrido, alquilo inferior, heteroarilo, heterociclo, haloalquilo, arilalquilamino, heteroarilalquilo, arilo y arilalquilo, en los que arilo, heteroarilo, heterociclo o arilalquilo están opcionalmente sustituidos con uno o más radicales seleccionados de alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, ciano, haloalcoxi, acilo, carboxilo, hidroxi, hidroxialquiloxi, fenoxi, benciloxi, dialquilaminoalquiloxi y heterociclo;

o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

2. El compuesto de la reivindicación 1 seleccionado del grupo constituido por:

acetato de 5-acetil-8-amino-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida, clorhidrato de 8-amino-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida y amino-1-[1,3-benzodioxol-5-il]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida.

3. El compuesto de la reivindicación 1 de fórmula

88

en la que

o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

\vskip1.000000\baselineskip

4. El compuesto de la reivindicación 3, seleccionado del grupo constituido por:

acetato de 5-acetil-8-amino-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolon-3-carboxamida,

5-acetil-1-(1,3-benzodioxol)-5-il)-8-[(2-clorobenzoil)amino]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxa-
mida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxa-
mida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-{[(6-cloro-1,3-benzodioxol-5-ilcarbonil]-amino}-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(3-cloroisonicotinoil)amino]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

8-[(5-amino-2-clorobenzoil)amino]-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(2-clorobenzoil)amino]-1,4-dihidrocromeno-[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(2-cloro-4,5-dimetoxibenzoil)amino]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-{[2-cloro-5-(metilsulfinil)benzoil]amino}-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-car-
boxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(3-hidroxi-2-metilbenzoil)amino]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(2-cloro-4-nitrobenzoil)amino]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-{[2-cloro-5-(dimetilamino)benzoil]amino}-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-{[(2,5-dicloropiridin-3-il)carbonil]amino}-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(2-cloro-4-metoxibenzoil)amino]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

8-[(4-amino-2-clorobenzoil)amino]-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(3-metoxi-2-metilbenzoil)amino]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

acetato de 3-({[3-(aminocarbonil)-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-1,4-dihidrocromano[4,3-c]pirazol-8-il]amino}carbo-
nil)-2-metilfenilo,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(2,3-diclorobenzoil)amino]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(2-cloro-5-nitrobenzoil)amino]-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

5-acetil-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quino-
lin-3-carboxamida), y

5-acetil-1-(1,3-benzodioxol-5-il)-8-[(3-cloroisonicotinoil)amino]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-car-
boxamida.

\vskip1.000000\baselineskip

5. Un compuesto de fórmula

89

en la que

o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

\vskip1.000000\baselineskip

6. El compuesto según la reivindicación 5, seleccionado del grupo constituido por:

8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-1-(4-fluorofenil)-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-1-(3-fluorofenil)-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

8-[(2-clorobenzoil)amino]-1-(4-fluorofenil)-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

8-[(2-clorobenzoil)amino]-1-(3-fluorofenil)-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

8-[(2,3-diclorobenzoil)amino]-1-(3-fluorofenil)-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

8-amino-1-(4-fluorofenil)-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida,

5-acetil-8-amino-1-(4-fluorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida,

5-acetil-1-(4-fluorofenil)-8-[(metilsulfonil)amino]-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-carboxamida,

5-acetil-8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-1-(4-fluorofenil)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quinolin-3-car-
boxamida,

8-{[(2-cloropiridin-3-il)carbonil]amino}-1-(4-fluorofenil)-5-(metilsulfonil)-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]quino-
lin-3-carboxamida, y

8-[(3-cloroisonicotinoil)amino]-1-(4-fluorofenil)-1,4-dihidrocromeno[4,3-c]pirazol-3-carboxamida.

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7. Una composición que comprende el compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer, la inflamación o un trastorno asociado a la inflamación.

9. Uso según la reivindicación 8 para el tratamiento de cáncer.

10. Uso según la reivindicación 8 para el tratamiento de la inflamación.

11. Uso según la reivindicación 8 para el tratamiento de un trastorno asociado a la inflamación.

12. Uso según la reivindicación 11, en el que el trastorno asociado a la inflamación es artritis.

13. Uso según la reivindicación 11, en el que el trastorno asociado a la inflamación es dolor.

14. Uso según la reivindicación 11, en el que el trastorno asociado a la inflamación es fiebre.