ES2276836T3

ES2276836T3 - 7-amino-2-alquiltiopteridin-4-il-aminas para el tratamiento de enfermedades relacionadas con las quimioquinas.

Info

Publication number: ES2276836T3
Application number: ES01977001T
Authority: ES
Inventors: Roger Bonnert; Iain Walters
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2000-10-20
Filing date: 2001-10-16
Publication date: 2007-07-01
Anticipated expiration: 2021-10-16
Also published as: SE0003828D0; WO2002032507A1; ATE350102T1; US20040102447A1; EP1328319A1; JP2004511532A; AU2001296151A1; DE60125801D1; JP4250416B2; DE60125801T2; US7071193B2; EP1328319B1

Abstract

Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo: en la que R1 representa un grupo carbocíclico C3-C7, alquilo C1-C8, alquenilo C2-C6 o alquinilo C2-C6, estando cada uno de los grupos sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de átomos de halógeno, -OR4, -NR5R6, -CONR5R6, -COOR7, -NR8COR9, -SR10, -SO2R10, -SO2NR5R6, -NR8SO2R9, o un grupo arilo o heteroarilo, los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de grupos de átomos de halógeno, ciano, nitro, -OR4, -NR5R6, -CONR5R6, -COOR7, -NR8COR9, -SR10, -SO2R10, -SO2NR5R6, -NR8SO2R9, alquilo C1-C6 o trifluorometilo.

Description

7-amino-2-alquiltiopteridin-4-il-aminas para el tratamiento de enfermedades relacionadas con las quimioquinas.

La presente invención se refiere a ciertos compuestos pteridínicos, a procedimientos e intermedios usados para su preparación, a composiciones farmacéuticas que los contienen, y a su uso en terapia.

Las quimioquinas juegan un papel importante en las respuestas inmunitaria e inflamatoria en diversas enfermedades y trastornos, incluyendo asma y enfermedades alérgicas, así como patologías autoinmunitarias tales como artritis reumatoide y aterosclerosis. Estas pequeñas moléculas segregadas son una superfamilia creciente de proteínas de 8-14 kDa caracterizadas por un motivo de cuatro cisteínas conservado. La superfamilia de quimioquinas se puede dividir en dos grupos principales que muestran motivos estructurales característicos, las familias Cys-X-Cys (C-X-C) y Cys-Cys (C-C). Estas se distinguen entre sí en base a una inserción de un único aminoácido entre el par NH-proximal de los restos de cisteína, y a la similitud de secuencias.

Las quimioquinas C-X-C incluyen varios potentes quimioatrayentes y activadores de neutrófilos, tales como interleuquina-8 (IL-8) y el péptido 2 activador de neutrófilos (NAP-2).

Las quimioquinas C-C incluyen potentes quimioatrayentes de monocitos y linfocitos, pero no de neutrófilos, tales como proteínas 1-3 quimiotácticas de monocitos humanos (MCP-1, MCP-2 y MCP-3), RANTES (Reguladas por activación, expresadas y segregadas por las células T normales), eotaxina y las proteínas 1\alpha y 1\beta inflamatorias de los macrófagos (MIP-1\alpha y MIP-1\beta).

Los estudios han demostrado que las acciones de las quimioquinas están mediadas por subfamilias de receptores acoplados a proteínas G, entre los cuales están los receptores denominados CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 y CX3CR1. Estos receptores representan buenas dianas para el desarrollo de fármacos, puesto que los agentes que modulen a estos receptores serán útiles en el tratamiento de trastornos y enfermedades tales como los mencionados anteriormente.

Según la presente invención, se proporciona, por lo tanto, un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo:

1

en la que

R^{1} representa un grupo carbocíclico C_{3}-C_{7}, alquilo C_{1}-C_{8}, alquenilo C_{2}-C_{6} o alquinilo C_{2}-C_{6}, estando cada uno de los grupos sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de átomos de halógeno, -OR^{4}, -NR^{5}R^{6}, -CONR^{5}R^{6}, -COOR^{7}, -NR^{8}COR^{9}, -SR^{10}, -SO_{2}R^{10}, -SO_{2}NR^{5}R^{6}, -NR^{8}SO_{2}R^{9}, o un grupo arilo o heteroarilo, los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de grupos de átomos de halógeno, ciano, nitro, -OR^{4}, -NR^{5}R^{6}, -CONR^{5}R^{6}, -COOR^{7}, -NR^{8}COR^{9}, -SR^{10}, -SO_{2}R^{10}, -SO_{2}NR^{5}R^{6}, -NR^{8}SO_{2}R^{9}, alquilo C_{1}-C_{6} o trifluorometilo;

R^{2} y R^{3}, cada uno independientemente, representa un átomo de hidrógeno, o un grupo carbocíclico C_{3}-C_{7}, alquilo C_{1}-C_{8}, alquenilo C_{2}-C_{6} o alquinilo C_{2}-C_{6}, estos últimos cuatro grupos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados independientemente de:

(a): átomos de halógeno, -OR^{4}, -NR^{5}R^{6}, -CONR^{5}R^{6}, -COOR^{7}, -NR^{8}COR^{9}, -SR^{10}, -SO_{2}R^{10}, -SO_{2}NR^{5}R^{6}, -NR^{8}SO_{2}R^{9};

(b): un anillo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente uno o más átomos seleccionados de O, S, NR^{8}, y él mismo está opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{3} o OR^{4}; (elimínese halógeno;)

(c): un grupo arilo o heteroarilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de grupos de átomos de halógeno, ciano, nitro, -OR^{4}, -NR^{5}R^{6}, -CONR^{5}R^{6}, -NR^{8}COR^{9}, -SO_{2}NR^{5}R^{6}, -NR^{8}SO_{2}R^{9}, alquilo C_{1}-C_{6} y trifluorometilo;

\newpage

R^{4} representa hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6} o un grupo fenilo, estos dos últimos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados independientemente de átomos de halógeno, fenilo, -OR^{11} y -NR^{12}R^{13},

R^{5} y R^{6} representan independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} o fenilo, estos dos últimos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados independientemente de átomos de halógeno, fenilo, -OR_{14} y -NR^{15}R^{16}, -CONR^{15}R^{16}, -NR^{15}COR^{16}, -SONR^{15}R^{16}, NR^{15}SO_{2}R^{16},

o

R^{5} y R^{6}, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un sistema anular heterocíclico saturado, de 4 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de átomos de oxígeno y de nitrógeno, sistema anular el cual puede estar opcionalmente sustituido con uno o más grupos sustituyentes seleccionados independientemente de fenilo, -OR^{14}, -COOR^{14}, -NR^{15}R^{16}, -CONR^{15}R^{16}, -NR^{15}COR^{16}, -SONR^{15}R^{16}, NR^{15}SO_{2}R^{16} o alquilo C_{1}-C_{6}, él mismo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de grupos de átomos de halógeno y -NR^{15}R^{16} y -OR^{17};

R^{10} representa un átomo de hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6} o un grupo fenilo, estos dos últimos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados independientemente de átomos de halógeno, fenilo, -OR^{17} y -NR^{15}R^{16}; y cada uno de R^{7}, R^{8}, R^{9}, R^{11}, R^{12}, R^{13}, R^{14}, R^{15}, R^{16}, R^{17} representa independientemente un átomo de hidrógeno o un alquilo C_{1}-C_{6}, o un grupo fenilo,

con la condición de que cuando R^{1} es metilo, y tanto R^{2} como R^{3} sean hidrógeno, entonces R^{4} no represente metilo o fenilo no sustituido.

En el ámbito de la presente memoria descriptiva, excepto que se indique de otro modo, un grupo alquilo o alquenilo, o un resto alquilo o alquenilo en un grupo sustituyente, puede ser lineal o ramificado. Los grupos arilo incluyen fenilo y naftilo. Los grupos heteroarilo incluyen anillos aromáticos de 5 ó 6 miembros que contienen uno o más heteroátomos seleccionados de N, S, O. Los ejemplos incluyen piridina, pirimidina, tiazol, oxazol, pirazol, imidazol, tiofeno y furano.

J. Weinstock et al., en J. Med. Chem., 1968, 11(3), páginas 573-579, describe 4,7-diamino-2-metiltio-6-fenil-pteridina. El documento GB-A-1009477 describe 4,7-diamino-2-metiltio-6-metil-pteridina.

Algunos compuestos de fórmula (I) son capaces de existir en formas estereoisómeras. Se entenderá que la invención engloba a todos los isómeros geométricos y ópticos de los compuestos de fórmula (I), y sus mezclas, incluyendo los racematos. Los tautómeros y sus mezclas también forman un aspecto de la presente invención.

En la fórmula (I) anterior, el grupo R^{1} representa un grupo carbocíclico C_{3}-C_{7}, alquilo C_{1}-C_{8}, alquenilo C_{2}-C_{6} o alquinilo C_{2}-C_{6}, estando cada uno de los grupos opcionalmente sustituido con uno o más grupos sustituyentes seleccionados independientemente de átomos de halógeno átomos, -OR^{4}, -NR^{5}R^{6}, -CONR^{5}R^{6}, -COOR^{7}, -NR^{8}COR^{9}, -SR^{10}, -SO_{2}R^{10}, -SO_{2}NR^{5}R^{6}, -NR^{8}SO_{2}R^{9} o un grupo arilo o heteroarilo, pudiendo ambos estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de grupos de átomos halógeno, ciano, nitro, -OR^{4}, -NR^{5}R^{6}, -CONR^{5}R^{6}, -COOR^{7}, -NR^{8}COR^{9}, -SR^{10}, -SO_{2}R^{10}, -SO_{2}NR^{5}R^{6}, -NR^{8}SO_{2}R^{9}, alquilo C_{1}-C_{6} o trifluorometilo. Preferiblemente, R^{1} es un grupo CH_{2} sustituido con tienilo, furilo o fenilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con uno o más grupos alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6} o halógeno. Compuestos particularmente ventajosos de la fórmula (I) son aquellos en los que R^{1} representa un grupo bencilo opcionalmente sustituido. Más preferiblemente, R^{1} representa bencilo o bencilo sustituido con uno o más alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6} o átomos de halógeno. Lo más preferible, R^{1} representa bencilo o bencilo sustituido con fluoro, cloro, o bencilo di-sustituido con fluoro, di-sustituido con fluoro y cloro o fluoro, y metoxi.

Cuando R^{2} y R^{3} representan un grupo sustituido con uno o más anillos de 3-8 miembros que contienen opcionalmente uno o más átomos seleccionados de O, S o NR^{8}, los ejemplos de tales grupos incluyen piperidina, pirrolidina, piperazina y morfolina.

Preferiblemente, uno de R^{2} y R^{3} es hidrógeno y el otro es alquilo C_{1}-C_{8} sustituido con hidroxi, y uno o más grupos metilo o etilo. Más preferiblemente, uno de R^{2} y R^{3} es hidrógeno, y el otro es CH(CH_{3})CH_{2}OH, CH(Et)CH_{2}OH, C(CH_{3})_{2}CH_{2}OH o CH(CH_{2}OH)_{2}. Lo más preferible, uno de R^{2} y R^{3} es hidrógeno, y el otro es CH(CH_{3})CH_{2}OH. Cuando uno de R^{2} y R^{3} es hidrógeno y el otro es CH(CH_{3})CH_{2}OH o CH(Et)CH_{2}OH, los compuestos resultantes de fórmula (I) están preferiblemente en forma del isómero (R).

Preferiblemente, R^{4} es hidrógeno.

Compuestos particularmente preferidos de la invención incluyen:

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

2-[[7-amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1,3-propanodiol,

2-[[7-Amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-2-metil-1-propanol,

(2R)-2-[[7-Amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-butanol,

2-[[7-Amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-2-metil-1,3-propanodiol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[(fenilmetil)tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(2-fluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(3-cloro-4-metoxifenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(3-clorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(5-metil-2-furanil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[(2-tienilmetil)tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(2-fluoro-4-metoxifenil)metil]-tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(3-cloro-2-fluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

y sus sales farmacéuticamente aceptables y solvatos.

Según la invención, también se proporciona un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I), que comprende calentar un compuesto de fórmula (II):

2

en la que R^{1} es como se define en la fórmula (I), con una amina R^{2}R^{3}NH. La reacción se puede llevar a cabo en amina pura o en un disolvente adecuado, tal como 1-metilimidazol, a una temperatura entre 0ºC y 150ºC.

Los compuestos de fórmula (II), en la que R^{1} es como se define en la fórmula (I), se pueden preparar mediante tratamiento de compuestos de fórmula (III), en la que R^{1} es como se define en la fórmula (I), con una base tal como hidróxido de potasio o bicarbonato potásico. La reacción se puede llevar a cabo en un disolvente, tal como una mezcla de metanol y diclorometano o NMP, a una temperatura entre 0ºC y 100ºC.

3

Los compuestos de fórmula (III), en la que R^{1} es como se define en la fórmula (I), y X es halógeno, se pueden preparar mediante tratamiento de compuestos de fórmula (IV), en la que R^{1} es como se define en la fórmula (I), con bromoacetonitrilo en presencia de una base adecuada. La reacción se puede llevar a cabo en un disolvente, tal como DMSO o dioxano, usando diisopropiletilamina como la base, a una temperatura entre 0ºC y 150ºC.

4

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Los compuestos de fórmula (IV), en la que R^{1} es como se define en la fórmula (I), se pueden preparar mediante tratamiento de un compuesto de fórmula (V) con un compuesto de fórmula R^{1}X, en la que R^{1} es como se define en la fórmula (I) anterior, y X es un grupo saliente tal como bromuro, en presencia de una base tal como hidróxido potásico, en un disolvente tal como metanol, a temperatura ambiente.

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5

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El compuesto de fórmula (V) está comercialmente disponible.

Se apreciará por los expertos en la técnica que, en los procedimientos de la presente invención, los grupos funcionales (por ejemplo, los grupos hidroxilo) de compuestos intermedios pueden necesitar ser protegidos por grupos protectores. La etapa final en la preparación de los compuestos de la invención puede implicar la eliminación de uno o más grupos protectores. La protección y desprotección de grupos funcionales está totalmente descrita en "Protective Groups in Organic Chemistry", editado por J. W. F. McOmie, Plenum Press (1973), y "Protective Groups in Organic Synthesis", 2ª edición, T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Wiley-Interscience (1991).

Los nuevos compuestos intermedios forman un aspecto adicional de la invención. En particular, los compuestos de fórmula (II) son nuevos, y forman un aspecto de la invención.

Los compuestos de fórmula (I) anteriores se pueden convertir en una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, ya sea una sal de adición de bases, tal como la sal de sodio, potasio, calcio, aluminio, litio, magnesio, cinc, benzatina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etanolamina, etildiamina, meglumina, trometamina o procaína, o una sal de adición de ácidos, tal como un hidrocloruro, hidrobromuro, fosfato, acetato, fumarato, maleato, tartrato, citrato, oxalato, metanosulfonato o p-toluenosulfonato.

Los compuestos de fórmula (I) tienen actividad como productos farmacéuticos, en particular como moduladores de receptores de quimioquinas, y se pueden usar en el tratamiento (terapéutico o profiláctico) de estados/enfermedades en seres humanos y animales no humanos que son exacerbadas o provocadas por producción excesiva o no regulada de quimioquinas. Ejemplos de tales estados/enfermedades incluyen:

(1): (el aparato respiratorio) enfermedades obstructivas de las vías respiratorias incluyendo enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD); asma, tal como asma bronquial, alérgica, intrínseca, extrínseca y por polvo, particularmente asma crónica o arraigada (por ejemplo, asma tardía e hipersensibilidad de las vías respiratorias); bronquitis; rinitis aguda, alérgica, atrófica y rinitis crónica que incluye rinitis caseosa, rinitis hipertrófica, rinitis purulenta, rinitis seca y rinitis medicamentosa; rinitis membranosa que incluye rinitis cruposa, fibrinosa y seudomembranosa y rinitis escrofulosa; rinitis estacional que incluye rinitis nerviosa (fiebre del heno) y rinitis vasomotora; sarcoidosis, pulmón del granjero y enfermedades relacionadas, pulmón fibroide y neumonía intersticial idiopática;

(2): (hueso y articulaciones) artritis reumatoide, espondiloartropatías seronegativas (que incluyen espondilitis anquilosante, artritis soriática y enfermedad de Reiter), enfermedad de Behcet, síndrome de Sjogren y esclerosis sistémica;

(3): (piel) soriasis, dermatitis atópica, dermatitis de contacto y otras dermititis eccematosas, dermatitis seborréica, líquen plano, pénfigo, pénfigo bulloso, epidermólisis bullosa, urticaria, angiodermas, vasculitis, eritemas, eosinofilias cutáneas, uveitis, Alopecia areata y conjuntivitis vernal;

(4): (tubo digestivo) enfermedad celíaca, proctitis, gastro-enteritis eosinofílica, mastocitosis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, alergias relacionadas con los alimentos que tienen efectos remotos del intestino, por ejemplo, migraña, rinitis y eccema;

(5): (otros tejidos y enfermedad sistémica) esclerosis múltiple, aterosclerosis, Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA), lupus eritematoso, lupus sistémico, eritematoso, tiroiditis de Hashimoto, miastenia grave, diabetes tipo I, síndrome nefrótico, fascitis eosinófila, síndrome hiperIgE, lepra lepromatosa, síndrome de Sezary y púrpura trombocitopénica idiopática; adhesiones pos-operatorias, y septicemia.

(6): (rechazo de aloinjerto) agudo o crónico tras, por ejemplo, transplante de riñón, corazón, hígado, pulmón, médula ósea, piel y córnea; y enfermedad crónica de hospedante frente a injerto;

(7): Cánceres, especialmente cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), melanoma maligno, cáncer de próstata y sarcoma escamoso, y metástasis de tumores;

(8): Enfermedades en las que la angiogénesis está asociada con niveles elevados de quimioquinas CXCR2 (por ejemplo, NSCLC, retinopatía diabética);

(9): Fibrosis cística, lesión por reperfusión en el corazón, cerebro, limbos periféricos y otros órganos;

(10): Heridas por quemaduras y úlceras crónicas de la piel;

(11): Enfermedades del aparato reproductor (por ejemplo, trastornos de la ovulación, menstruación e implantación, dolores antes del parto, endometriosis).

De este modo, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para uso en terapia.

Preferiblemente, los compuestos de la invención se usan para tratar enfermedades en las que el receptor de quimioquinas pertenece a la subfamilia de receptores de quimioquinas CXC; más preferiblemente, el receptor de quimioquinas diana es el receptor CXCR2.

Los estados particulares que se pueden tratar con los compuestos de la invención son soriasis, artritis reumatoide, enfermedades en las que la angiogénesis está asociada con niveles elevados de quimioquinas CXCR2, y COPD. Se prefiere que los compuestos de la invención se usen para tratar artritis reumatoide.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, según se define aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para uso en terapia.

En aún un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, según se define aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o estados mórbidos del ser humano en los que es beneficiosa la modulación de la actividad del receptor de quimioquinas.

En el contexto de la presente memoria descriptiva, el término "terapia" también incluye "profilaxis", excepto que haya indicaciones específicas en sentido contrario. Los términos "terapéutico" y "terapéuticamente" se deben de interpretar en consecuencia.

La invención aún proporciona adicionalmente un método para tratar una enfermedad mediada por quimioquinas, en la que la quimioquina se une a un receptor de quimioquinas (especialmente CXCR2), que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, según se define aquí anteriormente.

La invención también proporciona un método para tratar una enfermedad inflamatoria, especialmente soriasis, en un paciente que padece de, o con riesgo de, dicha enfermedad, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, según se define aquí anteriormente.

Para los usos terapéuticos anteriormente mencionados, la dosis administrada variará, por supuesto, con el compuesto empleado, el modo de administración, el tratamiento deseado y el trastorno diagnosticado.

Los compuestos de fórmula (I), y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, se pueden usar por sí mismos, pero generalmente se administrarán en forma de una composición farmacéutica en la que el compuesto de fórmula (I)/sal/solvato (ingrediente activo) está en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Dependiendo del modo de administración, la composición farmacéutica comprenderá preferiblemente de 0,05 a 99% en peso (por ciento en peso), más preferiblemente de 0,05 a 80% en peso, aún más preferiblemente de 0,10 a 70% en peso, e incluso más preferiblemente de 0,10 a 50% en peso, de ingrediente activo, estando todos los porcentajes en peso basados en la composición total.

La presente invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, según se define aquí anteriormente, en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención proporciona además un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica de la invención, que comprende mezclar un compuesto de fórmula (I), o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, según se define aquí anteriormente, con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar tópicamente (por ejemplo, al pulmón y/o a las vías respiratorias, o a la piel) en forma de disoluciones, suspensiones, aerosoles heptafluoroalcánicos y formulaciones en polvo secas; o sistémicamente, por ejemplo, por administración oral en forma de comprimidos, cápsulas, jarabes, polvos o gránulos, o por administración parenteral en forma de disoluciones o suspensiones, o por administración subcutánea, o por administración rectal en forma de supositorios, o transdérmicamente. Preferiblemente, los compuestos de la invención se administran oralmente.

La invención se ilustrará ahora adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos. En los ejemplos, los espectros de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) se midieron en un espectrómetro Varian Unity Inova 300 o 400 MHz, y los espectros de Espectrometría de Masas (MS) se midieron en un espectrómetro Finnigan Mat SSQ7000 o Micromass Platform. Cuando fue necesario, las reacciones se realizaron en una atmósfera inerte de nitrógeno o de argón. La cromatografía se realizó generalmente usando Matrex Silica 60® (35-70 micrómetros) o Prolabo Silica gel 60® (35-70 micrómetros), adecuados para la cromatografía ultrarrápida en gel de sílice. La purificación mediante cromatografía de líquidos a alta presión se realizó usando un Waters Micromass LCZ con un controlador de bomba Waters 600, un detector Waters 2487 y un colector de fracciones Gilson FC024, o un Waters Delta Prep 4000. Las abreviaturas p.f. y DMSO usadas en los ejemplos representan el punto de fusión y dimetilsulfóxido, respectivamente.

Ejemplo 1 (2R)-2-[[7-amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol (a) 2,6-bis[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4,5-pirimidindiamina

A una disolución de polvo de hidróxido potásico (7,72 g) en metanol (250 ml) se añadió en primer lugar 5,6-diamino-2,4-pirimidinditiol (10,9 g), seguido de bromuro de 2,3-difluorobencilo (22,5 g). La mezcla de reacción se agitó durante una hora a temperatura ambiente, y después se vertió en agua (500 ml), dando un precipitado marrón. Éste se aisló mediante filtración, lavando con isopropanol y éter dietílico, para dar el compuesto del subtítulo como un sólido marrón pálido (15,0 g).

MS (APCI) 427 (M+H, 100%).

(b) [[4-amino-2,6-bis[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-5-pirimidinil]amino]acetonitrilo

Una disolución del producto del ejemplo 1, etapa a) (5,0 g), diisopropiletilamina (2,8 ml) y bromoacetonitrilo (1,1 ml), en DMSO (50 ml), se calentó a 100ºC durante 5 horas. Después de enfriar, la mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y cloruro de amonio acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para dar un aceite negro que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con 10:1 de diclorometano:acetato de etilo, para dar el compuesto del subtítulo como un sólido naranja pálido (1,6 g).

MS (APCI) 466 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (CDCl_{3}) 7,95-7,25 (6H, m), 5,15 (2H, br s), 4,45 (2H, s), 4,39 (2H, s), 3,82 (2H, d), 2,78 (1H, t).

(c) 2,4-bis[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-7-pteridinamina

Una disolución del producto del ejemplo 1, etapa b) (1,35 g), e hidróxido potásico (114 mg), en metanol (50 ml) y diclorometano (20 ml), se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de la evaporación a vacío, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con 5:1 de diclorometano:acetato de etilo, para dar el compuesto del subtítulo como un sólido amarillo pálido (0,37 g).

MS (APCI) 463 (M+H).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 8,13 (1H, s), 8,01 (2H, br s), 7,42-7,28 (4H, m),

\hbox{7,19-7,11 (2H, m), 4,52 (2H,  s), 4,49
(2H, s).}

(d) (2R)-2-[[7-amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol

Una disolución del producto del ejemplo 1, etapa c) (0,2 g), en D-alaninol (2 ml), se calentó a 120ºC durante 30 minutos. Después de enfriar, la mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y cloruro amónico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para dar un aceite marrón que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con 200:10:1 de diclorometano:metanol:disolución de amoníaco 880, para dar el compuesto del

\hbox{título como un sólido marrón 
pálido (0,08 g).}

p.f. 211-213°C

MS (APCI) 379 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,95 (1H, s), 7,62 (1H, d), 7,43 (2H, s), 7,40 (1H, m), 7,34 (1H, m), 7,13 (1H, m), 4,82 (1H, t), 4,45 (2H, s), 4,25 (1H, m), 3,48 (2H, m), 1,15 (3H, d).

Ejemplo 2 2-[[7-amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1,3-propanodiol

Una disolución del producto del ejemplo 1, etapa (c) (0,12 g), y serinol (330 mg), en 1-metilimidazol (1 ml), se calentó a 130ºC durante 90 minutos. Tras enfriar, la mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y cloruro de amonio acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para dar un sólido marrón que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con 200:20:1 de diclorometano:metanol:disolución de amoníaco 880, para dar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (0,02 g).

p.f. 251-253°C

MS (APCI) 395 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,96 (1H, s), 7,46 (2H, s), 7,41 (1H, m), 7,30 (1H, m), 7,14 (1H, m), 4,80 (2H, t), 4,46 (2H, s), 4,20 (1H, m), 3,57 (4H, m).

Ejemplo 3 2-[[7-Amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-2-metil-1-propanol

Una disolución del producto del ejemplo 1, etapa (c) (0,25 g), en 2-amino-2-metilpropanol (2,5 ml) se calentó en un microondas a 150ºC durante 45 minutos. Tras enfriar, la mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y cloruro amónico acuoso saturado. La fase orgánico se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para dar un aceite marrón que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con 100:7 de diclorometano:metanol, y mediante HPLC de fase inversa para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,034 g).

p.f. 226-229°C

MS (APCI) 393 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,94 (1H, s), 7,46 (2H, s), 7,40 (1H, m), 7,33 (1H, m), 7,16 (2H, m), 5,21 (1H, t), 4,46 (2H, s), 3,48 (2H, m), 1,36 (3H, d).

Ejemplo 4 (2R)-2-[[7-Amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-butanol

Una disolución del producto del ejemplo 1, etapa (c) (0,25 g), y R-2-aminobutanol (0,24 ml), en N-metilimidazol (1 ml), se calentó en un microondas a 150ºC durante 30 minutos. Después de enfriar, la mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y cloruro amónico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para dar un aceite marrón que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con 100:5 de diclorometano:metanol, y HPLC de fase inversa para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,033 g).

p.f. 185-189°C

MS (APCI) 393 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,96 (1H, s), 7,56 (1H, d), 7,40 (3H, m), 7,32 (1H, m), 7,14 (1H, m), 4,77 (1H, t), 4,44 (2H, dd), 4,11 (1H, m), 3,49 (2H, dm), 1,60 (2H, dm), 0,83 (3H, t).

Ejemplo 5 2-[[7-Amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-2-metil-1,3-propanodiol

Una disolución del producto del ejemplo 1, etapa (c) (0,25 g), y 2-amino-2-metil-1,3-propanodiol (0,28 ml), en N-metilimidazol (1 ml), se calentó en un microondas a 160ºC durante 95 minutos. Después de enfriar, la mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y cloruro de amonio acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para dar un aceite marrón que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con 10:1 de diclorometano:metanol, para dar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (0,031 g).

p.f. 220-227°C

MS (APCI) 409 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,95 (1H, s), 7,56 (2H, s), 7,31 (2H, m), 7,21 (1H, s), 7,15 (1H, m), 5,01 (2H, t), 4,45 (2H, s), 3,67, 3,56 (2H, 2xm), 1,32 (3H, s).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 6

(2R)-2-[[7-amino-2-[(fenilmetil)tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol (a) 2,6-bis[(fenilmetil)]tio]-4,5-pirimidindiamina

Preparada mediante el método del ejemplo 1, etapa (a), usando bromuro de bencilo.

MS (APCI) 355 (M+H, 100%).

\vskip1.000000\baselineskip

(b) [[4-amino-2,6-bis[(fenilmetil)tio]-5-pirimidinil]-amino]acetonitrilo

Preparado mediante el método del ejemplo 1, etapa (b), usando el producto del ejemplo 6, etapa (a).

MS (APCI) 394 (M+H, 100%).

\vskip1.000000\baselineskip

(c) 2,4-bis[(fenilmetil)tio]-7-pteridinamina

Preparada mediante el método del ejemplo 1, etapa (c), usando el producto del ejemplo 6, etapa (b).

MS (APCI) 390 (M+H, 100%).

\vskip1.000000\baselineskip

(d) (2R)-2-[[7-amino-2-[(fenilmetil)tio]-4-pteridinil]-amino]-1-propanol

Preparado mediante el método del ejemplo 1, etapa (d), usando el producto del ejemplo 6, etapa (c).

MS (APCI) 343 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,95 (1H, s), 7,58 (1H, d), 7,45-7,20 (5H, m), 4,82 (1H, t), 4,83 (1H, t), 4,38 (2H, m), 4,27 (1H, m), 3,54-3,42 (2H, m), 1,16 (3H, d).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 7

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(2-fluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol (a) (2R)-2-[(7-amino-2-mercapto-4-pteridinil)amino]-1-propanol

A una suspensión del producto del ejemplo 6, etapa (b) (300 mg), en amoníaco líquido (20 ml), se añadió sodio metálico hasta que resultó un color azul consistente. Éste se paralizó entonces con polvo de cloruro amónico. El disolvente se dejó evaporar, y el residuo se recogió en agua (20 ml), y el pH se ajustó hasta 5-6 con ácido clorhídrico concentrado. El producto se recogió entonces mediante filtración (75 mg).

MS (APCI) 253 (M+H, 100%).

(b) (2R)-2-[[7-amino-2-[[(2-fluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol

A una mezcla del producto del ejemplo 7, etapa (a) (75 mg), en DMSO (1 ml) y en la base de Hunig (0,2 ml), se añadió bromuro de 2-fluorobencilo (30 \mul), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se vertió en agua (10 ml), se extrajo en acetato de etilo, se secó y se evaporó hasta sequedad. El residuo se purificó entonces mediante HPLC. El procedimiento anterior se repitió, y ambos rendimientos se combinaron para dar el compuesto del título como un sólido blanco (145 mg).

MS (APCI) 361 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,96 (1H, s), 7,42 (2H, m), 7,34 (2H, s), 7,29-7,11 (3H, m), 4,83 (1H, t), 4,36 (2H, m), 4,26 (1H, m), 4,05 (2H, m), 1,16 (3H, d).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 8

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(3-cloro-4-metoxifenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol

Preparado mediante el método del ejemplo 7, etapa (b), usando bromuro de 3-cloro-4-metoxibencilo. El producto se purificó mediante recristalización en acetonitrilo.

MS (APCI) 407 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,95 (1H, d), 7,58 (1H, d), 7,50 (1H, d), 7,41 (2H, m), 7,05 (1H, d), 4,82 (1H, t), 4,37 (2H, m), 4,27 (1H, m), 3,82 (3H, s), 3,49 (2H, m), 1,16 (3H, d).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 9

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(3-clorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol

Preparado mediante el método del ejemplo 7, etapa (b), usando bromuro de 3-cloro-bencilo.

MS (APCI) 377 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,95 (1H, d), 7,62 (1H, d), 7,51 (1H, m), 7,41 (3H, m), 7,31 (2H, m), 4,82 (1H, t), 4,39 (2H, m), 4,26 (1H, m), 3,53-3,41 (2H, m), 1,16 (3H, d).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 10

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(5-metil-2-furanil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol (a) (2R)-2-[[7-amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]-sulfonil]-4-pteridinil]amino]-1-propanol

A una suspensión del producto del Ejemplo 1 (0,54 g) en acetonitrilo (200 ml) se añadió una disolución de Oxona (5,4 g) en agua (200 ml), y la mezcla se agitó toda la noche. Después de eliminar el acetonitrilo mediante concentración, la disolución acuosa se neutralizó con disolución de hidróxido sódico, y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para dejar el compuesto del subtítulo como un sólido marrón (0,38 g).

MS (ESI) 411 (M+H, 100%).

(b) (2R)-2-[[7-amino-2-[[(5-metil-2-furanil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol

Una disolución del producto del ejemplo 10, etapa (a) (0,18 g), y 5-metil-2-furanometanotiol (75 mg), en DMSO anhidro (3 ml), se trató con disolución de t-butóxido de potasio en THF (1,0 M, 0,44 ml), y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La disolución se purificó directamente mediante HPLC preparativa de fase inversa, en una columna de sílice Symmetry C8 de 19 x 50 mm de Waters, que se eluyó con 0,1% de acetato amónico acuoso:acetonitrilo (70:30) para dar un sólido blanquecino que se secó a presión reducida a 40ºC (8 mg).

MS (APCI) 347 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,95 (1H, s), 7,61 (1H, d), 7,40 (2H, br), 6,18 (1H, m), 5,96 (1H, s), 4,83 (1H, t), 4,37 (2H, s), 4,27 (1H, m), 3,42-3,54 (2H, m), 2,22 (3H, s), 1,17 (3H, d).

Ejemplo 11 (2R)-2-[[7-amino-2-[(2-tienilmetil)tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol

Una disolución del producto del Ejemplo 10, etapa (a) (0,18 g), y 2-tienilmercaptano (70 mg), en DMSO anhidro (3 ml), se trató con disolución de t-butóxido de potasio en THF (1,0 M, 0,44 ml), y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La disolución se purificó directamente mediante HPLC preparativa de fase inversa, en una columna de sílice Symmetry C8 de 19 x 50 mm de Waters, que se eluyó con 0,1% de acetato amónico acuoso:acetonitrilo (70:30) para dar un sólido blanquecino que se secó a presión reducida a 40º (20 mg).

MS (APCI) 349 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,96 (1H, s), 7,62 (1H, d), 7,42 (2H, br), 7,34 (1H, m), 7,08 (1H, m), 6,92 (1H, m), 4,83 (1H, t), 4,59 (2H, m), 4,29 (1H, m), 3,42-3,54 (2H, m), 1,17 (3H, d).

Ejemplo 12 (2R)-2-[[7-amino-2-[[(2-fluoro-4-metoxifenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol

Se añadió cloruro de tionilo (0,19 ml) a una disolución enfriada en hielo de 2-fluoro-4-metoxibencenometanol (0,188 g) en diclorometano (10 ml), y la disolución resultante se agitó durante 1 hora, y después se concentró. El residuo se disolvió en DMSO (3 ml), y se añadieron N,N-diisopropiletilamina (0,35 ml) y el producto del ejemplo 7, etapa (a) (0,252 g). Después de agitar a temperatura ambiente toda la noche, la mezcla se purificó directamente mediante HPLC preparativa de fase inversa, en una columna de sílice Symmetry C8 de 19 x 50 mm de Waters, que se eluyó con 0,1% de acetato amónico acuoso:acetonitrilo (65:35) para dar un polvo marrón pálido que se secó a presión reducida a 40º (0,173 g).

MS (APCI) 391 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,95 (1H, s), 7,59 (1H, d), 7,47 (1H, t), 7,41 (2H, br), 6,82 (1H, m), 6,72 (1H, m), 4,82 (1H, t), 4,33 (2H, s), 4,22-4,29 (1H, m), 3,74 (3H, s), 3,41-3,55 (2H, m), 1,17 (3H, d).

Ejemplo 13 (2R)-2-[[7-amino-2-[[(3-cloro-2-fluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol (a) 2,6-bis[[(3-cloro-2-fluorofenil)metil]tio]-4,5-pirimidindiamina

A una disolución de polvo de hidróxido potásico (2,5 g) en metanol (80 ml) se añadió en primer lugar 5,6-diamino-2,4-pirimidinditiol (3,6 g), seguido de bromuro de 3-cloro-2-fluorobencilo (6,3 g). La mezcla de reacción se agitó durante una hora a temperatura ambiente, y después se vertió en agua (180 ml), dando un precipitado marrón. Éste se aisló por filtración, lavando con alcohol isopropílico y éter dietílico, para dar el compuesto del subtítulo como un sólido marrón pálido (5,4 g).

MS (APCI + ve) 459/461/463 (M+H, 100%).

(b) [[4-amino-2,6-bis[[(3-cloro-2-fluorofenil)metil]tio]-5-pirimidinil]amino]acetonitrilo

A una disolución del producto del ejemplo 13, etapa (a) (4,2 g), y diisopropiletilamina (1,2 ml) en dioxano (40 ml) se añadió bromoacetonitrilo (1,2 g), y la mezcla se calentó a 100ºC durante 23 horas. Después de enfriar, la disolución roja de la reacción se adsorbió sobre sílice, y se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con diclorometano y después con 95:5 de diclorometano:acetato de etilo, para dar el compuesto del subtítulo como un sólido naranja pálido (3,1 g).

MS (APCI + ve) 498 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,38-7,16 (6H, m), 6,97 (2H, br s), 4,42 (1H, s), 4,34 (4H, s), 3,86 (2H, d).

(c) 2,4-bis[[(3-cloro-2-fluorofenil)metil]tio]-7-pteridinamina

Una disolución del producto del ejemplo 13, etapa (b) (1,4 g), e hidróxido de potasio (110 mg) en metanol (80 ml) y diclorometano (120 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de la evaporación a vacío, el residuo dio el compuesto del subtítulo como un sólido amarillo pálido (1,4 g).

MS (APCI + ve) 496/498/500 (M+H).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 8,13 (1H, s), 8,02 (2H, br s), 7,46-7,17 (6H, m), 4,44 (4H, s).

(d) (2R)-2-[[7-amino-2-[[(2,3-difluorofenil)metil]tio[-4-pteridinil]amino]-1-propanol

Una disolución del producto del ejemplo 13, etapa (c) (1,0 g), en D-alaninol (10 ml), se calentó a 120ºC durante 40 minutos. Después de enfriar, la mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y cloruro amónico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para dar un sólido marrón claro, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con diclorometano y después con 30:1 y posteriormente 20:1 de diclorometano:metanol, para dar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (0,25 g).

p.f. 224-226°C

MS (APCI) 394/396 (M+H, 100%).

RMN \deltaH (d_{6}-DMSO) 7,95 (1H, s), 7,61 (1H, t), 7,56 (1H, s), 7,45 (3H, m), 7,16 (1H, t), 4,83 (1H, t), 4,34 (2H, s), 4,23 (1H, m), 3,50 (2H, m), 1,15 (3H, d).

Datos farmacológicos Ensayo de unión a ligandos

La [^{125}I]IL-8 (humana, recombinante) se compró a Amersham, R.U., con una actividad específica de 2.000
Ci/mmol. Todos los otros productos químicos tuvieron grado analítico. Se expresaron niveles elevados de hrCXCR2 en células HEK 293 (células 293 de riñón embrionario humano ECACC nº 85120602) (Lee et al. (1992) J. Biol. Chem. 267, p. 16283-16291). El ADNc de hrCXCR2 se amplificó y se clonó a partir de ARNm de neutrófilos humanos. El ADN se clonó en PCRScript (Stratagene), y los clones se identificaron usando ADN. La secuencia codificante se subclonó en el vector de expresión eucariota RcCMV (Invitrogen). El ADN del plásmido se preparó usando Quiagen Megaprep 2500, y se transfectó en células HEK 293 usando reactivo Lipofectamine (Gibco BRL). Las células del clon que más se expresa se cosecharon en disolución salina tamponada con fosfato que contiene ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) al 0,2% (p/v), y se centrifugaron (200 g, 5 min.). El pelete celular se resuspendió en tampón de homogeneización enfriado con hielo [10 mM de HEPES (pH 7,4), 1 mM de ditiotreitol, 1 mM de EDTA y un panel de inhibidores de proteasas (1 mM de fluoruro de fenilmetilsulfonilo, 2 \mug/ml de inhibidor de tripsina de haba de soja, 3 mM de benzamidina, 0,5 \mug/ml de leupeptina y 100 \mug/ml de bacitracina)], y las células se dejaron hinchar durante 10 minutos. La preparación celular se rompió usando un homogeneizador de tipo mortero de vidrio manual con mano de mortero de PTFE, y las membranas celulares se cosecharon por centrifugación (45 minutos, 100.000 g, 4°C). La preparación de membranas se almacenó a -70°C en tampón de homogeneización suplementado con disolución de sal de Tyrode (137 mM de NaCl, 2,7 mM de KCl, 0,4 mM de NaH_{2}PO_{4}), 0,1% (p/v) de gelatina y 10% (v/v) de
glicerol.

Todos los ensayos se realización en placas de filtración de 0,45 \mum MultiScreen de 96 pocillos (Millipore, R.U.). Cada ensayo contenía -50 pM de [^{125}I]IL-8 y membranas (equivalente a \sim200.000 células) en tampón de ensayo [disolución de sal de Tyrode suplementada con 10 mM de HEPES (pH 7,4), 1,8 mM de CaCl_{2}, 1 mM de MgCl_{2}, 0,125 mg/ml de bacitracina y 0,1% (p/v) de gelatina]. Además, se predisolvió en DMSO un compuesto de fórmula (I) según los Ejemplos, y se añadió para alcanzar una concentración final de 1% (v/v) de DMSO. El ensayo se inició con la adición de las membranas y, tras 1,5 horas a temperatura ambiente, las membranas se cosecharon por filtración usando un filtro de vacío Millipore MultiScreen, y se lavaron dos veces con tampón de ensayo (sin bacitracina). Las placas posteriores se retiraron del montaje de placas MultiScreen, los filtros se secaron a temperatura ambiente, se perforaron y entonces se contaron en un contador \gamma Cobra.

Se encontró que los compuestos de fórmula (I) según los Ejemplos tenían valores de IC_{50} menores que (<) 10 \muM.

Ensayo de movilización de calcio intracelular

Se prepararon neutrófilos humanos a partir de sangre periférica tratada con EDTA, como se ha descrito previamente (Baly et al. (1997) Methods in Enzymology 287, p. 70-72), en tampón de almacenamiento [disolución de sal de Tyrode (137 mM de NaCl, 2,7 mM de KCl, 0,4 mM de NaH_{2}PO_{4}) suplementada con 5,7 mM de glucosa y 10 mM de HEPES (pH 7,4)].

La quimioquina GRO\alpha (humana, recombinante) se obtuvo de R&D Systems (Abingdon, R.U.). Todos los otros productos químicos tuvieron grado analítico. Los cambios en el calcio libre intracelular se midieron fluorométricamente cargando los neutrófilos con el colorante fluorescente sensible al calcio, fluo-3, como se ha descrito previamente (Merritt et al. (1990) Biochem. J. 269, p. 513-519). Las células se cargaron durante 1 hora a 37°C en tampón de carga (tampón de almacenamiento con 0,1% (p/v) de gelatina) que contiene 5 \muM de éster AM de fluo-3, se lavaron con tampón de carga y entonces se resuspendieron en disolución de sal de Tyrode suplementada con 5,7 mM de glucosa, 0,1% (p/v) de albúmina de suero bovino (BSA), 1,8 mM de CaCl_{2} y 1 mM de MgCl_{2}. Las células se pipetearon en microplacas de 96 pocillos de paredes negras y fondo transparente (Costar, Boston, U.S.A.), y se centrifugaron (200 g, 5 minutos, temperatura ambiente).

\newpage

Se predisolvió en DMSO un compuesto de fórmula (I) según los Ejemplos, y se añadió hasta una concentración final de 0,1% (v/v) de DMSO. Los ensayos se iniciaron por adición de una concentración A_{50} de GRO\alpha, y se monitorizó el aumento transitorio en la fluorescencia de fluo-3 (\lambda_{Ex} = 490 nm y \lambda_{Em} = 520 nm) usando un FLIPR (Lector de Placas Formador de Imágenes Fluorométrico, Molecular Devices, Sunnyvale, U.S.A.).

Se analizaron los compuestos de fórmula (I) según los Ejemplos, y se encontró que eran antagonistas del receptor de CXCR2 en neutrófilos humanos.

Claims

1. Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo:

6

en la que

(b): un anillo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente uno o más átomos seleccionados de O, S, NR^{8}, y él mismo está opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{3} o halógeno;

R^{4} representa hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6} o un grupo fenilo, estos dos últimos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados independientemente de átomos de halógeno, fenilo, -OR^{11} y -NR^{12}R^{13};

R^{5} y R^{6} representan independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} o fenilo, estos dos últimos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados independientemente de átomos de halógeno, fenilo, -OR^{14} y -NR^{15}R^{16}, -CONR^{15}R^{16}, -NR^{15}COR^{16}, -SONR^{15}R^{16}, NR^{15}SO_{2}R^{16};

o

R^{10} representa un átomo de hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6} o un grupo fenilo, estos dos últimos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados independientemente de átomos de halógeno, fenilo, -OR^{17} y -NR^{15}R^{16}; y

cada uno de R^{7}, R^{8}, R^{9}, R^{11}, R^{12}, R^{13}, R^{14}, R^{15}, R^{16}, R^{17} representa independientemente un átomo de hidrógeno o un alquilo C_{1}-C_{6}, o un grupo fenilo,

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{1} representa un grupo bencilo opcionalmente sustituido.

3. Un compuesto según la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que uno de R^{2} y R^{3} es hidrógeno y el otro es alquilo C_{1}-C_{8} sustituido con hidroxi y uno o más grupos metilo o etilo.

4. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R^{4} es hidrógeno.

5. Un compuesto según la reivindicación 1, seleccionado de:

(2R)-2-[[7-amino-2-[(fenilmetil)tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(2-fluorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[[(3-clorofenil)metil]tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

(2R)-2-[[7-amino-2-[(2-tienilmetil)tio]-4-pteridinil]amino]-1-propanol,

y sus sales farmacéuticamente aceptables y solvatos.

6. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, que comprende:

(a) tratar un compuesto de fórmula (II):

7

en la que R^{1} es como se define en la fórmula (I), con una amina R^{2}R^{3}NH, y opcionalmente después formar una sal farmacéuticamente aceptable.

7. Un compuesto de fórmula (II), en el que R^{1} es como se define en la fórmula (I).

8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en asociación con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. Un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica según la reivindicación 8, que comprende mezclar un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para uso en terapia.

11. Uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la fabricación de un medicamento para uso en terapia.