ES2275336T3 - Arnm del ef-tu para determinar la viabilidad de bacterias. - Google Patents
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Abstract
Método para la determinación de la viabilidad bacteriana en el que se utiliza como diana ARNm que codifica el factor de elongación EF-Tu en una reacción de amplificación basada en la transcripción y se determina la presencia y/o la cantidad de dicho ARNm.
Description
ARNm, del EF-Tu para determinar
la viabilidad de bacterias.
La presente invención se refiere a la detección
de bacterias, tales como Micobacterias, en fluidos corporales
humanos o de animales tales como sangre, esputo y orina. La presente
invención proporciona un método para determinar la viabilidad de
bacterias tales como Mycobacterium tuberculosis sin la
necesidad de propagar las bacterias.
Por ejemplo, la tuberculosis (TB) causada por
Mycobacterium tuberculosis es un problema importante de salud
pública en muchos países de todo el mundo, con significación
particular en los países en desarrollo. Los programas para el
control de la tuberculosis se han encontrado con una carga de casos
incrementada, con un desplazamiento hacia categorías de pacientes
más difíciles desde el punto de vista diagnóstico tales como casos
extrapulmonares y de frotis negativos, y la aparición de cepas de
M. tuberculosis resistentes a múltiples fármacos. El
diagnóstico mejorado sería una valiosa contribución a los esfuerzos
resolver esta urgencia de salud pública global.
El método de la presente invención tiene que ver
con la amplificación de secuencias específicas de ácidos
nucleicos.
Las reacciones de amplificación de ácidos
nucleicos prometen reducir el tiempo del diagnóstico de semanas a
horas, a la vez que superan la sensibilidad y la especificidad de
los métodos clásicos. Además de su valor potencial en diagnóstico,
las reacciones de amplificación ofrecen la posibilidad de una
identificación rápida y de la determinación de la susceptibilidad a
fármacos. La amplificación de moléculas de ADN diana hasta un nivel
detectable mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es
el sistema mejor analizado para detectar Micobacterias.
La "Reacción en Cadena de la Polimerasa"
(PCR) está descrita en las solicitudes de patente Europeas EP 200362
y EP 201148. La PCR es un proceso cíclico que tiene como diana ADN
de doble hebra. Cada ciclo del proceso de PCR comienza con la
separación de un ADN de doble hebra diana en sus dos hebras
complementarias. A cada hebra se hibridará un cebador y las ADN
polimerasas presentes extenderán los cebadores a lo largo de la
hebra de ADN a la que se hibridaron, formado de este modo dos
nuevos dúplices de ADN. Cuando la mezcla de reacción es calentada,
las hebras de los dúplices de ADN se separarán de nuevo y podrá
comenzar un nuevo ciclo de PCR. De este modo, el proceso de PCR
produce múltiples copias de ADN de un ADN diana. La amplificación
utilizando PCR puede estar basada también en un molde de ARN. Por
ejemplo, WO 98/18958, que tiene una fecha de registro anterior a la
presente solicitud pero que ha sido publicada posteriormente siendo
de este modo relevante únicamente por la novedad y no por la etapa
inventiva de la presente solicitud, describe la utilización de PCR
para la amplificación de ARNm que codifica un factor de elongación.
La PCR real necesita estar precedida por una etapa de transcripción
inversa con el fin de copiar el ARN para dar ADN
(RT-PCR). Sin embargo, si se utiliza
RT-PCR para la detección de transcritos, es
necesaria la diferenciación de los productos de la PCR derivados de
ARNm y de ADN. Puede emplearse un tratamiento con ADNasa antes de
la RT-PCR (Bitsch, A. y col., J. Infect. Dis. 167,
740-743, 1993; Meyer, T. Y col., Mol. Cell Probes 8,
261-271, 1994), pero algunas veces no es capaz de
eliminar suficientemente el ADN contaminante [Bitsch, A. y col.,
1993].
Más recientemente, se desarrolló un clase
diferente de métodos de amplificación de ácidos nucleicos, a saber
las "técnicas de amplificación basadas en la transcripción".
Las técnicas implican la transcripción de múltiples copias de ARN a
partir de un molde que contiene un promotor reconocido por una ARN
polimerasa. Tales copias son utilizadas como entrada para una
amplificación posterior. Tales métodos han sido descritos por
Gingeras y col. en WO 88/10315 y Burg y col. en WO 89/1050.
Técnicas de amplificación basadas en una transcripción isotérmica
han sido descritas por Davey y col. en EP 323822 (relativa al método
NASBA), por Gingeras y col. en EP 373960 y por Kacian y col. en EP
408295 (el método TMA). Las reacciones de amplificación basadas en
la transcripción pueden ser realizadas también con enzimas
termoestables. Tal método termoestable está descrito en EP 682121
registrada en nombre de Toyo Boseki KK.
Las técnicas de amplificación de ácidos
nucleicos basadas en una transcripción isotérmica han sido
utilizadas para detectar micobacterias, tales como el método NASBA
[Vliet, G.M.E. van der, Schukkink, R.A.F., Gemen, B. van, Schepers,
P. y Klatser, P.R. (1993) Nucleic acid
sequence-based amplification (NASBA) for the
identification of mycobacteria, J. Gen. Microbiol. 139,
2423-2429] y otro ensayo de amplificación de ARN
mediada por la transcripción (TMA) [Jonas, V., Alden, M.J., Curry,
J.I., Kamisango, K., Knott, C.A., Lankford, R., Wolfe, J. y Moore,
D.F. (1993) Detection and identification of Mycobacterium
tuberculosis directly from sputum sediments by amplification of
rRNA, J. Clin. Microbiol. 31, 241], ambos dirigidos al ARN
ribosómico de 16S.
Las reacciones de amplificación dirigidas al
ARNr de 16S o al gen que lo codifica están dirigidas normalmente a
una región conservada que contiene secuencias variables específicas
de la especie [Vliet, G.M.E. van der, Schukkink, R.A.F., Gemen, B.
van, Schepers, P. y Klatser, P.R. (1993) Nucleic acid
sequence-based amplification (NASBA) for the
identification of mycobacteria, J. Gen. Microbiol. 139,
2423-2429; Jonas, V., Alden, M.J., Curry, J.I.,
Kamisango, K., Knott, C.A., Lankford, R., Wolfe, J. y Moore, D.F.
(1993) Detection and identification of Mycobacterium tuberculosis
directly from sputum sediments by amplification of rRNA, J. Clin.
Microbiol. 31, 241]. Tienen la ventaja de que una única reacción de
amplificación puede identificar la especie de micobacteria. Una
ventaja adicional de los ensayos de amplificación de ARN mediada por
la transcripción dirigidos al ARNr de 16S, es el elevado número de
moléculas diana por célula - ± 2000; favoreciéndose de este modo la
sensibilidad.
Como el ARN, especialmente el ARNm, tiene
generalmente un tiempo de vida media mucho más corto que el ADN, su
detección puede ser útil para la determinación de la viabilidad de
micobacterias [Moore, D.F., Curry, J.I., Knott, C.A. y Jonas, V.
(1996) Amplification of rRNA for assessment of treatment response of
pulmonary tuberculosis patients during antimicrobial therapy, J.
Clin. Microbiol. 34, 1745-1749; Vliet, G.M.E. van
der, Schepers, P., Schukkink, R.A.F., Gemen, B. van y Klatser, P.R.
(1994) Assessment of mycobacterial viability by RNA amplification,
Antimicrob. Agents Chemother. 38, 1959-1965], lo
cual es relevante para los problemas de resistencia frente a
fármacos y la condición de contagioso del paciente.
La presente invención se basa en la detección de
ARNm que codifica el factor de elongación EF-Tu.
El factor de elongación EF-Tu es
esencial en la traducción (mico)bacteriana. Los factores de
elongación desempeñan un papel auxiliar en la etapa de elongación
de la traducción y son por tanto un indicador de la actividad
metabólica de la célula. Se requiere EF-Tu para cada
traducción. La cantidad de proteína EF-Tu puede ser
tan elevada como del 50% del contenido total de proteínas de las
células en proliferación activas.
Las secuencias del gen (ADN) que codifica
EF-Tu han sido utilizadas como marcador para
detectar la presencia de células bacterianas.
En EP 133288 se describe un método para la
detección de ADN bacteriano con una sonda que contiene una secuencia
de bases de al menos una porción de una de las hebras de un gen tuf
o fus. Se utilizó hibridación de transferencia Southern de los ADNs
de micoplasma digeridos con el gen tuf del factor de elongación
(EF-Tu) de E. coli como base para detectar
polimorfismo en cepas de micoplasma [Yogev y col., FEMS Microbiol.
Lett. 50(2-3), 145-9,
1988].
Se han descrito también ensayos basados en PCR
para la detección de Mycoplasma tuberculosis y de productos
de la fermentación de Micoplasma utilizando el gen que codifica el
factor de elongación Tu (tuf) como secuencia diana [Berg y col.,
Mol. Cell. Probes 10(1), 7-14, 1996 y
Luneberg y col., J. Clin. Microbiol. 31(5),
1088-94, 1993].
La presente invención, sin embargo, tiene que
ver que la detección del ARNm de EF-Tu como marcador
de la viabilidad bacteriana.
La presente invención proporciona por tanto un
método para la determinación de la viabilidad bacteriana en el que
se utiliza como diana ARNm que codifica el factor de elongación
EF-Tu en una reacción de amplificación de ácidos
nucleicos y se determina la presencia y/o la cantidad de dicho
ARNm.
El ARNm presumiblemente de vida corta que
codifica el EF-Tu es con toda probabilidad muy
abundante en la célula (mico)bacteriana y una disminución
del mismo indicará un descenso de la actividad metabólica. Además,
debido a la función esencial de EF-Tu, es plausible
asumir que está presente en todas las especies de micobacterias,
permitiendo el desarrollo de un sistema de amplificación general con
cebadores y/o sondas específicos de la especie, análogos al diseño
de NASBA con el ARNr de 16S [Vliet, G.M.E. van der, Schukkink,
R.A.F., Gemen, B. van, Schepers, P. y Klatser, P.R. (1993) Nucleic
acid sequence-based amplification (NASBA) for the
identification of mycobacteria, J. Gen. Microbiol. 139,
2423-2429].
Con el método de la presente invención, se
utiliza una técnica de amplificación basada en la transcripción,
tal como un NASBA, para la amplificación del ARNm del
EF-Tu bacteriano. En contraste con la
RT-PCR, el NASBA, que se basa en la transcripción
del ARN por la ARN polimerasa de T7 (Kievits y col., 1991; Compton,
1991), no necesita la diferenciación entre los productos de
amplificación derivados de ARN y ADN, ya que utiliza ARN como su
diana principal.
Los productos amplificados pueden ser detectados
utilizando una sonda complementaria marcada.
Se han descrito numerosos protocolos para la
detección de productos amplificados [Klatser, P.R. (1995)
Amplification reactions in mycobacteriology, J. Microbiol. Meth.
23, 75-87]. Se utilizan preferiblemente ensayos
homogéneos, ya que permitirán el establecimiento de mezclas de
reacción de amplificación antes del inicio de la amplificación. Uno
de tales sistemas, la electroquimioluminiscencia (ECL), ha sido ya
utilizado con éxito aplicado para detectar productos amplificados
en el NASBA [Gemen, B. van, Beuningen, R. van, Nabbe, A., Strijp, D.
van, Jurriaans, S., Lens, P., Kievits, T. (1994) A
one-tube quantitative HIV-I RNA
NASBA nucleid acid amplification assay using
electrochemiluminescent (ECL) labelled probes, J. Virol. Methods 49,
157-167].
El método de la presente invención es útil, en
particular, para determinar la viabilidad de especies de
micobacterias tales como M. tuberculosis o M.
leprae.
Con la presente invención se proporcionan
también oligonucleótidos que pueden ser utilizados como cebadores y
sondas para la amplificación del ARNm del EF-Tu
bacteriano.
La utilización de los oligonucleótidos de
acuerdo con la invención no está limitada a ninguna técnica de
amplificación particular ni a ninguna modificación particular de
las mismas. Es evidente que los nucleótidos de acuerdo con la
invención son útiles en muchas técnicas diferentes de amplificación
de ácidos nucleicos y en varios métodos para detectar la presencia
de ARNm del EF-Tu bacteriano (amplificado). Los
oligonucleótidos de la presente invención pueden ser utilizados de
igual forma en métodos de amplificación cuantitativos. Un ejemplo
de tales métodos cuantitativos está descrito en EP 525882.
El término "oligonucleótido", según se
utiliza en la presente, se refiere a una molécula compuesta por dos
o más desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos. Tales
oligonucleótidos pueden ser utilizados como cebadores y sondas.
Por supuesto, pueden prepararse también análogos
de oligonucleótidos basados en las secuencias de los
oligonucleótidos de la presente invención. Tales análogos pueden
constituir estructuras alternativas tales como "PNA" (moléculas
con un esqueleto similar a un esqueleto peptídico en lugar del
esqueleto de azúcar fosfato del ácido nucleico normal) o similares.
Es evidente que estas estructuras alternativas, que representan las
secuencias de la presente invención, son igualmente parte de la
presente invención.
El término "cebador", según se utiliza en
la presente, se refiere a un oligonucleótido existente en la
naturaleza (por ejemplo como un fragmento de restricción) o bien
producido sintéticamente, que es capaz de actuar como punto de
inicio de la síntesis de un producto de extensión del cebador que es
complementario a una hebra de ácido nucleico (secuencia molde o
diana) cuando es colocado bajo condiciones adecuadas (por ejemplo
tampón, sal, temperatura y pH) en presencia de nucleótidos y de un
agente para la polimerización de ácidos nucleicos, tal como una
polimerasa dependiente de ADN o dependiente de ARN. Un cebador debe
ser suficientemente largo para cebar la síntesis de los productos
de extensión en presencia de un agente para la polimerización. Un
cebador típico contiene al menos 10 nucleótidos de longitud
aproximadamente de una secuencia sustancialmente complementaria u
homóloga a la secuencia diana, pero se prefieren cebadores algo más
largos. Normalmente, los cebadores contienen 15-26
nucleótidos aproximadamente, pero pueden emplearse también cebadores
más largos, especialmente cuando los cebadores contienen secuencias
adicionales tales como una secuencia promotora para una polimerasa
particular.
Normalmente, un conjunto de cebadores constará
de al menos dos cebadores, un cebador "corriente arriba" y un
cebador "corriente abajo", que juntos definen el amplificado
(la secuencia que será amplificada utilizando dichos
cebadores).
Ante todo, para la utilización en las técnicas
de amplificación basadas en la transcripción, los oligonucleótidos
de acuerdo con la invención pueden ser también ligados a una
secuencia promotora. El término "secuencia promotora" define
una región de una secuencia de ácido nucleico que es reconocida
específicamente por una ARN polimerasa que se une a una secuencia
reconocida e inicia el proceso de transcripción mediante el cual se
produce un transcrito de ARN. En principio, puede emplearse
cualquier secuencia promotora para la que exista una polimerasa
conocida y disponible que sea capaz de reconocer la secuencia de
inicio. Promotores conocidos y útiles son aquéllos que son
reconocidos por ciertas ARN polimerasas de bacteriófagos tales como
el bacteriófago T3, T7 o SP6. Los oligonucleótidos ligados a una
secuencia promotora son referidos comúnmente como "cebadores
promotores".
Los oligonucleótidos de acuerdo con la invención
son sustancialmente complementarios a una secuencia de ARNm del
EF-Tu bacteriano, teniendo dichos oligonucleótidos
10-50 nucleótidos de longitud y conteniendo al menos
10 nucleótidos consecutivos de una de las secuencias representadas
en SEC ID 1-8 o de la secuencia complementaria de
las mismas.
Oligonucleótidos que contienen (una parte de)
las SEC ID 1 y 2 han demostrado ser adecuados para la amplificación
de secuencias de ARNm de EF-Tu de M.
tuberculosis. En el acontecimiento de amplificación que se lleva
a cabo con una técnica de amplificación basada en la transcripción,
uno de dichos oligonucleótidos puede contener también una secuencia
promotora. Por supuesto, tales
"promotor-oligonucleótidos" son igualmente
parte de la invención. En la secuencia representada en la SEC ID 9,
el promotor de T7 ha sido ligado a la secuencia representada en la
SEC ID 1. En la parte experimental de esta solicitud estas
secuencias están indicadas como TUF 15 (SEC ID 9) y TUF 18 (SEC ID
2).
La presente invención proporciona también un par
de oligonucleótidos para la amplificación de secuencias de
EF-Tu derivadas de M. leprae. Este par consta
de un oligonucleótido que contiene al menos 10 oligonucleótidos
consecutivos de la secuencia representada en la SEC ID 3 y un
oligonucleótido que contiene al menos 10 nucleótidos consecutivos
de la secuencia representada en SEC ID 4, respectivamente.
De nuevo, para ser utilizado en los métodos
basados en la transcripción, uno de los oligonucleótidos puede ser
ligado a una secuencia promotora, y un oligonucleótidos provisto de
la secuencia promotora de T7 está representado en la SEC ID 10. En
la parte experimental de la solicitud tal par es referido como TUF
20 (SEC ID 10) y TUF 22 (SEC ID 4).
La presente invención proporciona además un par
de oligonucleótidos que son adecuados para la amplificación de
secuencias de EF-Tu derivadas de E. coli.
Este par consta de un oligonucleótido que
contiene al menos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia
representada en la SEC ID 5 y un oligonucleótido que contiene al
menos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia representada en
la SEC ID 6, respectivamente.
De nuevo, para ser utilizado en los métodos
basados en la transcripción, uno de los oligonucleótidos puede ser
ligado a una secuencia promotora, y en la SEC ID 11 está
representado un oligonucleótido provisto de la secuencia promotora
de T7. En la parte experimental de la solicitud tal par es referido
como TUF 27 (SEC ID 11) y TUF 28 (SEC ID 6).
Estos oligonucleótidos son por tanto
especialmente útiles en la determinación de la viabilidad de M.
tuberculosis, M. leprae o E. coli.
Se comprende que los oligonucleótidos que
constan de la secuencias de la presente invención pueden contener
pequeñas deleciones, adiciones y/o sustituciones de bases de ácido
nucleico, hasta el punto de que tales alteraciones no afecten
negativamente al rendimiento o al producto obtenido en un grado
significativo. Cuando se utilizan como sondas oligonucleótidos de
acuerdo con la presente invención, las alteraciones no deben tener
como resultado una disminución de la eficacia de hibridación de la
sonda.
Por ejemplo, en el caso de las técnicas de
amplificación basadas en la transcripción, en las que pueden
proporcionarse uno o más de los cebadores con una secuencia
promotora, la introducción de una secuencia de hibridación rica en
purinas (= G o A) justo después de la secuencia promotora, puede
tener efectos positivos sobre la transcripción (cuando hay Cs y Ts
puede tener lugar una transcripción abortiva). Si tal secuencia no
está disponible en el ácido nucleico diana, puede insertarse una
secuencia rica en purinas en el oligonucleótido justo después de
los últimos tres residuos de G de la secuencia promotora.
Las secuencias de la presente invención están
reflejadas como secuencias de ADN. Los equivalentes de ARN de estas
secuencias son igualmente parte de la presente invención.
Parte de los oligonucleótidos de acuerdo con la
invención son particularmente idóneos para ser utilizados como
sonda en la detección de un ácido nucleico amplificado con un par de
oligonucleótidos de acuerdo con la invención. Cuando se utilizan
como sonda, dichos oligonucleótidos pueden ser proporcionados con
una marca detectable. Se conocen en la técnica diferentes restos de
marcaje. Dicho resto puede ser, por ejemplo, un compuesto
radiactivo, un enzima detectable (por ejemplo peroxidasa de rábano
picante (HRP)), un hapteno como biotina, o bien cualquier otro
resto capaz de generar una señal detectable tal como una señal
colorimétrica, fluorescente, quimioluminiscente o
electroquimioluminiscente.
Los híbridos entre los oligonucleótidos de
acuerdo con la invención y el ácido nucleico diana (amplificado)
pueden ser también detectados mediante otros métodos conocidos por
los expertos en la técnica. Los oligonucleótidos de acuerdo con la
invención que son especialmente adecuados como sonda para la
detección de secuencias del EF-Tu de micobacterias
constan esencialmente de las secuencias representadas en las SEC ID
7 y 8 (en la parte experimental dichas secuencias están
representadas como TUF 25 y TUF 26, respectivamente).
Estas sondas pueden ser utilizadas juntas en un
ensayo de hibridación de sándwich, en el cual una puede ser
utilizada como sonda de captura y la otra puede ser marcada con una
marca detectable.
Un kit de ensayo para la detección de ARNm de
EF-Tu de micobacterias en una muestra es de igual
modo parte de la presente invención. Tal kit puede contener
- un par de oligonucleótidos de acuerdo con la invención y al menos un oligonucleótido que comprenda una secuencia de ácido nucleico sustancialmente complementaria a al menos parte de la secuencia de ácido nucleico amplificada, provista de una marca detectable, así como reactivos de amplificación adecuados.
Estos reactivos son por ejemplo los enzimas
adecuados para llevar a cabo la reacción de amplificación. Un kit,
adaptado para ser utilizado por ejemplo con NASBA, puede contener
cantidades adecuadas de transcriptasa inversa, ARNasa H y ARN
polimerasa de T7. Dichos enzimas pueden estar presentes en el kit en
una solución tamponada, pero pueden ser proporcionados de igual
modo como una composición liofilizada, por ejemplo, una partícula
esférica liofilizada. Tales partículas liofilizadas han sido
descritas en la solicitud de PCT nº WO 95/27721. El kit puede estar
además provisto de composiciones tampón, adecuadas para llevar a
cabo una reacción de amplificación. Dichos tampones pueden ser
optimizados para la técnica de amplificación particular para la que
está destinada el kit, así como para utilización con los
oligonucleótidos particulares que son proporcionados con el kit. En
las técnicas de amplificación basadas en la transcripción, tales
como NASBA, dichos tampones pueden contener, por ejemplo, DMSO que
mejora la reacción de amplificación (según está descrito en la
solicitud de PCT nº WO 91/02818).
Además, el kit puede estar provisto de un
control interno para verificar el procedimiento de amplificación y
para prevenir la aparición de resultados falsos negativos en el
ensayo debido a fallos en el procedimiento de amplificación. La
utilización de controles internos en las técnicas de amplificación
basadas en la transcripción está descrita en la solicitud de PCT nº
WO 94/04706. Una secuencia de control óptima es seleccionada de tal
manera que no compita con el ácido nucleico diana en la reacción de
amplificación. Los kits pueden contener también reactivos para el
aislamiento del ácido nucleico del espécimen biológico antes de la
amplificación. Un método adecuado para el aislamiento de ácidos
nucleicos está descrito en EP 389063.
Figura 1a: La sensibilidad analítica del NASBA
utilizando ARN de EF-Tu micobacteriano producido
in vitro.
Figura 1b: La sensibilidad analítica del NASBA
utilizando ARN de EF-Tu micobacteriano producido
in vitro.
Figura 2: Especificidad del NASBA para M.
tuberculosis.
Figura 3: Especificidad del NASBA para M.
leprae.
Figura 4: NASBA para determinación de la
viabilidad.
Fuentes de ARN. La Tabla 1 muestra las fuentes
de ARNs que fueron utilizadas en los experimentos descritos en este
ejemplo y en los ejemplos siguientes. Las micobacterias cultivables
se hicieron crecer en tubos inclinados de
Löwenstein-Jensen durante 2-3
semanas. M. leprae fue aislado de tejido esplénico de un
armadillo (Dasypus novemcinctus Linn.) infectado
experimentalmente, según está recomendado por la Organización
Mundial de la Salud [Comité de Expertos en Lepra de la OMS (1988)
Sixth Report Tech. Rep. Ser. 8, 768, World Health Organization,
Geneva]. Otras bacterias que pueden ser encontradas en muestras
humanas y/o de animales o que están estrechamente relacionadas con
las micobacterias (ver la Tabla 1), fueron utilizadas para
controles. Para Actinomyces islaelii se utilizaron bacterias
liofilizadas. Las cepas utilizadas para la producción de ARN in
vitro están descritas a continuación.
Aislamiento de ácidos nucleicos (NA). Para
llevar a cabo los experimentos descritos en todos los ejemplos, los
ácidos nucleicos fueron aislados según describimos nosotros
previamente [Vliet, G.M.E. van der, Schepers, P., Schukkink,
R.A.F., Gemen, B. van y Klatser, P.R. (1994) Assessment of
mycobacterial viability by RNA amplification, Antimicrob. Agents
Chemother. 38, 1959-1965]. En resumen, todas las
cepas bacterianas fueron ajustadas al equivalente de turbidez del
estándar nefelométrico de sulfato de bario de McFarland nº 4 según
se describió previamente [Verstijnen, C.P.H.J., H.M. Ly, K. Polman,
C. Richter, S.P. Smits, S.Y. Maselle, P. Peerbooms, D. Rienthong,
N. Montreewasuwat, S. Koanjanart, D.D. Trach, S. Kuijper y A.H.J.
Kolk (1991) Enzyme-linked immunosorbent assay using
monoclonal antibodies for identification of mycobacteria from early
cultures, J. Clin. Microbiol. 29, 1372-1375].
Cincuenta \mul de las muestras diluidas contenían aproximadamente
10^{5} micobacterias viables según se determinó mediante el
recuento del número de unidades formadoras de colonias (no se
realizó para M. leprae). Este volumen fue utilizado para
lisis y aislamiento de NA según el "protocolo Y/SC" descrito
por Boom y col. (1990) [Boom, R., C.J.A. Sol, M.M.M. Salimans, C.L.
Jansen, P.M.E. Wertheim-van Dillen y J. van der
Noordaa (1990), Rapid and simple method for purification of nucleic
acids, J. Clin. Microbiol. 28, 495-503]. Los NA
fueron eluidos de la sílice con 50 \mul o 100 \mul de H_{2}O
libre de ARNasas y almacenados a -20ºC.
Los NA de placenta humana fueron aislados de
manera similar (proporcionados amablemente por el Dr. H. Smits,
Department of Virology, Academic Medical Hospital, Amsterdam, Países
Bajos). Se analizaron 2 \mul que contenían 270 ng de NA. Esta
cantidad corresponde a 4 x 10^{5} células humanas diploides
aproximadamente. Otro lote de NA humanos fue obtenido
comercialmente de Pharmacia (Uppsala, Suecia).
Selección de cebadores y sondas. Los cebadores y
sondas utilizados en este estudio están enumerados en la Tabla
2.
Las secuencias de nucleótidos publicadas de los
genes del EF-Tu de M. tuberculosis (número de
acceso del GenBank X63539), de M. leprae (número de acceso
del GenBank D13869), de E. coli (número de acceso del GenBank
J01717), de Micrococcus luteus (número de acceso del GenBank
M17788) y de Streptomyces coelicolor (número de acceso del
GenBank X77039) fueron alineadas utilizando el programa de ordenador
GCG (National Institute of Health, EE.UU.) instalado en un
ordenador apropiado. Se seleccionaron los cebadores degenerados TUF
4 y TUF 7 (Tabla 2) para amplificar un fragmento de ADN de 764 pb
de los genes de EF-Tu mediante PCR de todos los
organismos enumerados en la Tabla 1. La PCR fue realizada utilizando
Tris-HCl 75 mM, pH 9,0,
(NH_{4})_{2}SO_{4} 20 mM, Tween 20 al 0,01% (v/v),
MgCl_{2} 4 mM, 0,2 mM de cada dNTP, 125 ng de cada cebador y 1
U/reacción de ADN polimerasa Goldstar™ (Eurogentec, Bélgica). La
PCR se inició mediante incubación a 94ºC durante 3 minutos, seguido
por 35 ciclos de 1,15 minutos a 94ºC, 1 minuto a 55ºC y 2 minutos a
72ºC. Los fragmentos generados en la PCR del ADN de los organismos
enumerados en la Tabla 1, excepto C. belfanti, H. influenza, S.
aureus, S. pneumoniae y H. sapiens, fueron purificados
utilizando una columna 300 HR MicroSpin™ Sephacryl™ (Pharmacia)
para eliminar el exceso de cebadores. Los fragmentos purificados
fueron secuenciados directamente utilizando los cebadores TUF 3F,
4F y 8F mediante la aplicación del kit de secuenciación "Autocycle
Sequencing Kit" (Pharmacia) y el secuenciador de ADN automático
A.L.F. (Pharmacia). Las secuencias fueron editadas mediante la
utilización del programa de ordenador DNASIS™ (Pharmacia)
y se realizaron posteriormente alineaciones de grupos ("clustal") utilizando el programa de ordenador PCGene.
y se realizaron posteriormente alineaciones de grupos ("clustal") utilizando el programa de ordenador PCGene.
Selección de cebadores y sondas. La Tabla 3
muestra las siete regiones variables de las secuencias de
EF-Tu que fueron definidas sobre la base de las
alineaciones de grupos ("clustal"). De estas regiones variables
es posible seleccionar cebadores y sondas que permitan la detección
específica de especie del ARNm del EF-Tu de
diferentes organismos (Tabla 4).
La Tabla 5 muestra las alineaciones de grupos
("clustal") de dos (regiones IV y VI) de las siete regiones
variables de la secuencia del EF-Tu sobre la base de
cuáles de los cebadores y sondas fueron seleccionados para la
amplificación específica del ARNm de EF-Tu de M.
tuberculosis, M. leprae y E. coli mediante NASBA. Los
criterios para seleccionar estas dos áreas fueron: la disponibilidad
de cebadores específicos de la especie, de una sonda específica del
género y de una longitud de ± 200 nucleótidos del fragmento a
amplificar.
\vskip1.000000\baselineskip
Sobre la base de estas alineaciones, se
seleccionaron cebadores específicos de la especie con el fin de ser
utilizados en NASBA para M. tuberculosis (TUF 15 y 18), para
M. leprae (TUF 20 y 22) y para E. coli (TUF 27 y 28).
Se eligieron una sonda de captura genérica TUF 25 y una sonda de
detección TUF 26 para la detección de los amplicones de ARN
micobacteriano mediante electroquimioluminiscencia (ECL). La sonda
TUF 25 es homóloga a la secuencia de EF-Tu de M.
leprae y no a la secuencia de M. tuberculosis; la
diferencia es un nucleótido (G\rightarrowA; ver la Tabla 2). Sin
embargo, esta diferencia no afectó a la detección de los amplicones
generados a partir del ARN originario de M. tuberculosis.
Para la detección de los amplicones del ARN de E. coli,
utilizamos las sondas de captura y detección específicas TUF 29 y
TUF 30, respectivamente.
En la región IV, se encontró una diferencia de
un nucleótido con la secuencia publicada del EF-Tu
de M. tuberculosis [número de acceso del GenBank X63539]: en
una de las cepas pertenecientes al complejo de M.
tuberculosis, se encontró una C en la posición 855. Sin embargo,
la posición del cebador fue elegida de tal manera que esta
discrepancia no influyera sobre la reacción de amplificación.
Se amplificó un fragmento de 764 pb del gen de
EF-Tu de M. tuberculosis H37Rv, M.
leprae y E. coli (Tabla 1) mediante PCR utilizando el
conjunto de cebadores TUF 4 y TUF 7 (Tabla 2), según se describió
anteriormente. El producto amplificado fue clonado en el vector
pCRII utilizando el kit de clonaje "TA-Cloning
Kit" (Invitrogen) siguiendo las instrucciones del fabricante. La
selección del clon apropiado con el inserto en la orientación
correcta, del tamaño correcto y de la especificidad correcta fue
determinada mediante análisis con enzimas de restricción y PCR.
Después de la linealización del plásmido con los
enzimas de restricción BamHI y HindIII, el inserto clonado en la
región del poliadaptador fue transcrito desde el sitio del promotor
de T7 utilizando el kit de transcripción SP6/T7 (Boehringer,
Mannheim). El molde de ADN fue eliminado por digestión con ADNasa
RQI (Promega) y el ARN fue purificado con el kit "RNeasy Kit"
de Qiagen, según el protocolo del fabricante. La pureza fue
comprobada mediante electroforesis en gel de agarosa y
transferencia Northern con la sonda TUF 24 marcada con digoxigenina
de acuerdo con procedimientos estándar. El ARN in vitro fue
cuantificado midiendo la extinción a 260 nm.
Un fragmento de 203, 197 y 198 nucleótidos del
ARNm de EF-Tu de M. tuberculosis, M.
leprae y E. coli, respectivamente, fue amplificado
mediante la técnica NASBA esencialmente según se ha descrito
anteriormente [Vliet, G.M.E. van der, Schepers, P., Schukkink,
R.A.F., Gemen, B. van y Klatser, P.R. (1994) Assessment of
mycobacterial viability by RNA amplification, Antimicrob. Agents
Chemother. 38, 1959-1965]. La mezcla de reacción de
20 \mul estaba compuesta por Tris-HCl 40 mM, pH
8,5, MgCl_{2} 12 mM, KCl 70 mM, DTT 5 mM, sorbitol 1,5 M, BSA 2,1
mg, 1 mM de cada dNTP, 2 mM de ATP, CTP, UTP, 1,5 mM de GTP y 0,5 mM
de ITP, un 15% (v/v) de DMSO, 0,2 mM de Cebador 1 y de Cebador 2,
0,08 U de ARNasa H, 32 U de ARN polimerasa de T7, 6,4 U de
AMV-RT polimerasa y el ARN diana. La amplificación
isotérmica del ARN diana fue realizada por incubación de estas
muestras a 41ºC durante 2,0 horas.
La detección del ARN amplificado fue realizada
mediante hibridación en solución en el ensayo de detección por ECL,
según se ha descrito previamente [Gemen, B. van, Beuningen, R. van,
Nabbe, A., Strijp, D. van, Jurriaans, S., Lens, P., Kievits, T.
(1994) A one-tube quantitative HIV-I
RNA NASBA nucleic acid amplification assay using
electrochemiluminescent (ECL) labelled probes, J. Virol. Methods 49,
1], con pequeñas modificaciones: 5 \mul del ARN amplificado
mediante NASBA fueron diluidos 20 veces en agua libre de ARNasas o
bien utilizados sin diluir. Se empleó una sonda
5'-biotinilada para capturar el producto del NASBA.
La sonda de detección utilizada estaba marcada con el complejo
tris[2,2-bipiridina]rutenio [II]. Esta
marca emite luz como resultado de reacciones químicas que tienen
lugar en la superficie de un electrodo. El valor de corte fue fijado
en 3000. El ensayo de detección mediante ECL fue medido en una
escala de 0 a 10^{8}.
Se incluyeron en cada experimento controles
negativos (agua únicamente) con el fin de detectar la contaminación
procedente del arrastre durante la extracción y la amplificación del
NA. Estas muestras control fueron extraídas y amplificadas mediante
NASBA de la misma manera que la anteriormente descrita.
Para la determinación de la sensibilidad del
NASBA, se cultivo M. tuberculosis ATCC 35801 en medio Tween™
Albúmina líquido a 37ºC. La concentración al comienzo del cultivo
fue de 8\cdot10^{6} bacterias/ml. El crecimiento de las
bacterias fue monitorizado midiendo la extinción a 420 nm. Después
de 13 días de cultivo, se tomó una muestra y se diluyó en tampón de
lisis [Boom, R., C.J.A. Sol, M.M.M. Salimans, C.L. Jansen, P.M.E.
Wertheim-Van Dillen y J. Van der Noordaa (1990)
Rapid and simple method for purification of nucleic acids, J. Clin.
Microbiol. 28, 495-503]. Se realizaron diluciones
seriadas en tampón de lisis, se purificó el ARN [Boom, R., C.J.A.
Sol, M.M.M. Salimans, C.L. Jansen, P.M.E.
Wertheim-Van Dillen y J. Van der Noordaa (1990)
Rapid and simple method for purification of nucleic acids, J. Clin.
Microbiol. 28, 495-503] y cada dilución fue ensayada
en el NASBA para determinar la dilución más elevada que daba
todavía una señal positiva en el NASBA. Además, la sensibilidad
analítica del NASBA fue determinada utilizando diluciones seriadas
de ARN in vitro (ver anteriormente). La especificidad del
NASBA fue determinada utilizando el ARN purificado de diferentes
organismos (Tabla 1, ver anteriormente).
Se cultivó E. coli en el medio líquido
Caldo de Luria (LB) a 37ºC durante 18 horas. La suspensión así
obtenida fue inoculada en medio fresco (1:200) (DO 600 nm = 0,015)
e incubada a 37ºC en un agitador rotatorio durante 3 horas y 15
minutos (DO 600 nm = 0,430). Se hizo una dilución seriada y se
purificó el ARNm según se describió anteriormente. Además, las
mismas diluciones fueron sembradas en placas de agar LB que fueron
incubadas a 37ºC durante 18 horas, después de lo cual se contaron
las colonias.
La sensibilidad analítica del NASBA fue
determinada utilizando diluciones seriadas de ARN in vitro
(ver anteriormente).
Sensibilidad del NASBA. La sensibilidad
analítica del NASBA utilizando ARN de EF-Tu
producido in vitro está ilustrada en las Figuras 1a y 1b. El
NASBA para M. tuberculosis y el NASBA para M. leprae
tenían una detección de 50 moléculas de ARN (Fig. 1a). El límite de
detección del NASBA para M. tuberculosis cuando se
utilizaron bacterias como material de partida para la detección, fue
de 12.000 (resultado no mostrado).
Se demostró que la sensibilidad analítica del
NASBA para E. coli era de 100 moléculas (Fig. 1b). El límite
de detección del NASBA para E. coli cuando se utilizaron
bacterias como material de partida para la detección, fue de 0,4
(resultado no mostrado).
Especificidad del NASBA. La especificidad del
NASBA para M. tuberculosis y del NASBA para M. leprae
está ilustrada en las Figuras 2 y 3, respectivamente.
El NASBA para M. tuberculosis mostró
especificidad para el ARN purificado a partir de bacterias
pertenecientes únicamente al complejo de M. tuberculosis.
Además, según está ilustrado en la Figura 2, el NASBA para M.
tuberculosis mostró una reacción positiva cuando se utilizó como
diana ARN de EF-Tu homólogo producido in
vitro.
El NASBA para M. leprae mostró
especificidad solamente para ARN de M. leprae y su ARN
homólogo producido in vitro.
E. coli fue cultivada en medio líquido LB
a 37ºC durante 18 horas. La suspensión así obtenida fue inoculada
en medio fresco (1:1000) (DO 600 nm = 0,001) e incubada a 37ºC en un
agitador rotatorio durante 4 horas. La suspensión fue dividida
posteriormente en dos partes iguales. A una parte, se añadió un
cóctel de antibióticos para destruir las bacterias: ampicilina,
rifampicina y kanamicina (50 \mug/ml de cada uno); la otra parte
se dejó intacta. Ambas fueron incubadas a 37ºC durante otras 3 horas
y 30 minutos. La DO a 600 nm fue monitorizada cada 30 minutos y se
tomó una muestra de cada cultivo y se añadió a tampón de lisis; se
purificó el ARNm según se describió anteriormente. Además, la
viabilidad de las bacterias E. coli fue monitorizada
colocando una muestra sobre placas de agar LB. Se contaron las
colonias después de 18 horas de incubación a 37ºC.
Las señales del NASBA aumentaron y alcanzaron su
nivel máximo cuando E. coli se dejó crecer intacta (Figura
4). Sin embargo, cuando se añadieron antibióticos al cultivo de
E. coli en crecimiento exponencial, la señal del NASBA
disminuyó 1 hora después de la adición de los antibióticos. Esta
disminución de la concentración del ARNm medida mediante NASBA
coincidía con una disminución del número de recuentos de viables
(Figura 4).
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Akzo Nobel N.V.
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Velperweg 76
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Arnhem
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Países Bajos
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): 6824 BM
\vskip0.500000\baselineskip
- (G)
- TELÉFONO: 04 12 666379
\vskip0.500000\baselineskip
- (H)
- TELEFAX: 04 12 650592
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: ARNm del EF-Tu como marcador de la viabilidad de bacterias
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 95
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disco magnético flexible
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- PROGRAMA: PatentIn Release #1.0, Versión #1.3 (EPO)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 48 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAATTCTAATA CGACTCACTA TAGGGAGAGC TTGGTGGTCG ATGGGCGA
\hfill48
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTCTGTCGA GGAACTGATG A
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 49 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAATTCTAATA CGACTCACTA TAGGGAGAGG GTCGTCTGAC GAATGCCGA
\hfill49
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:4:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGTCTGTCAC ACAGTTGATG G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:5:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 49 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAATTCTAATA CGACTCACTA TAGGGAGAGC TGAGTCTCTT TGATACCAA
\hfill49
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:6:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:6:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGAAAATCCT GGAACTGGCT G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:7:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCGCGGCGTG GTCAACGT
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:8:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:8:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACGAGGAAGT TGAGATCG
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:9:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTTGGTGGTC GATGGGCGA
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:10:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTCGTCTGA CGAATGCCGA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:11:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:11:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGAGTCTCT TTGATACCAA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:12:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:12:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACGCGGTATC ATCAAAGT
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:13:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:13:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGAAGAAGT TGAAATCG
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:14:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:14:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCGGAAGTA GAACTGCG
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:15:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:15:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGACCCCGGCA CGCCGACT
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:16:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:16:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGACAAGCCGT TCCTGTGCC
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:17:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:17:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCGGAAGTA GAACTGCG
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:18:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:18:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGCACAGGAA CGGCTTGTC
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:19:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:19:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGCATCAGGA ACGGCTTGTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:20:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:20:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGTGGGTGTG CCCTACATCC TGGTAGCGCT G
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:21:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:21:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTGGGTGTA CCTTACATCC TGGTCGCACT T
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:22:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:22:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTCGGTGTG CCCTACATCC TGGTCGCGCT G
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:23:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:23:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTCGGCGTG CCGGCCCTGC TCGTGGCCCT G
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:24:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:24:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTCGGCGTT CCGTACATCG TGGTCGCCCT G
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:25:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:25:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTTGGCGTT CCTTACATCC TCGTTGCTCT T
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:26:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:26:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTTGGCGTT CCTTACATCC TGGTTGCACT G
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:27:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:27:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTAGGCGTT CCGTACATCA TCGTGTTCCT G
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:28:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:28:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTAGGCGTT CCCTACATCG TCGTGTTCCT G
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:29:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:29:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGCCCAGGA ATTCGACGAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:30:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:30:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCGCCCAGGA GTTCGACGAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:31:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 14 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:31:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCGCCCAGGA GTTC
\hfill14
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:32:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:32:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCTCAGTACG ACTTCCCGGG C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:33:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº33:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCTCAGTACG ATTTCCCGGG C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:34:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:34:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTCCAGGAG CTTCGACGTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:35:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:35:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTCCGAGTAC GAGTTCCCGG GCGAC
\hfill25
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:36:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:36:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGAGCAGGA CTACGAC
\hfill17
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:37:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:37:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAACACCTACG ACTTCCCGGG C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:38:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:38:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTC
\hfill4
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:39:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:39:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATTG
\hfill4
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:40:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:40:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCTG
\hfill4
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:41:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:41:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTG
\hfill4
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:42:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:42:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGCTCTGTC GAGGAACTGA TGA
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:43:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:43:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGCCTCTGT CGAGGAACTG ATGA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:44:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:44:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGAGTCTGT CACACAGTTG ATGG
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:45:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:45:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCAAGTCCGT CGAGGACCTC ATGG
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:46:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:46:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAACTCGGT CCTCGAGCTC ATGA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:47:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:47:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAAGCAGAT CCTTGAGCTC ATGC
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:48:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:48:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGAGTCCGT CGAGCAG
\hfill17
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº49:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:49:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAGCGAAAAT CCTGGAACTG GCTGGC
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:50:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:50:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAGCGAAAAT C
\hfill11
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:51:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:51:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCATTACCGGC CGCGGA
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:52:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:52:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTATCACCGGT CGTGGC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:53:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:53:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATTCG CCCATCGACC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:54:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:54:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATTCG TCAGACGACC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:55:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº55:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCCG CCCGACCAGC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:56:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:56:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCCG CCCGTCCAGC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:57:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:57:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCCG CCCGGAGACC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:58:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:58:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGGTATCAA AGAGACTCAG AAGT
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:59:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:59:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGGTATCAA AGAGACCGCG AAAA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:60:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:60:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCAA GGCGACCACC AAGA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:61:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:61:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCATTAAGCCG CCCAGCACCA AGA
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:62:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:62:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCCG TCCGACACCA CCAAGA
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:63:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:63:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGTTTGCTG CTGCGGGGCG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:64:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:64:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGTCTGTTG TTGCGTGGCA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:65:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:65:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGGTCTGCTG CTGCGTGGTA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:66:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:66:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGTAACCTG CTGCGCTGGC A
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:67:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:67:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGGTCTGTTG CTCCGTGGCA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:68:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:68:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGGGTCTGTT TGCTGCGTGG TG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:69:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:69:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGTGTTCTG CTGCGCGGTA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:70:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:70:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGTGTTCTG CTGCGTGGTA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:71:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:71:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGCCTCTGT CGAGGAACTG ATGA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:72:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:72:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGAGTCTGT CACACAGTTG ATGG
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:73:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:73:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCAAGTCCGT CGAGGACCTC ATGG
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:74:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:74:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAACTCGGT CCTCGAGCTC ATGA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:75:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:75:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAAGCAGAT CCTTGAGCTC ATGC
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:76:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 14 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:76:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGAGTCTGT CAAC
\hfill14
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:77:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:77:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGCTCTGTC GAGGAACTGA T
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:78:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:78:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGAGTCCGT CGAGCAGCTG AT
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:79:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:79:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGAGTCCGT CGAGCAG
\hfill17
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:80:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 14 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:80:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGCTCTGTC GAGG
\hfill14
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:81:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:81:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAGCGAAAAT CCTGGAACTG GCTGGC
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:82:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº82:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAGCGAAAAT CCTGGAACTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:83:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:83:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAGCGAAAAT C
\hfill11
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:84:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:84:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATTCG TCAGACGACC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:85:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:85:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATTCG CCCATCGACC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:86:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:86:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATTCG TCAGACGACC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:87:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:87:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCCG CCCGACCAGC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:88:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:88:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATTCG CCCATCGACC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:89:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:89:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCCG CCCGTCCAGC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:90:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:90:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCCG CCCGGAGACC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:91:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:91:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCAGCATTAA GCCGCCCAGC ACCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:92:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:92:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCCG TCCGACACCA CCAAG
\hfill25
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:93:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:93:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGGTATCAA AGAGACTCAG AAGT
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:94:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:94:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGGTATCAA AGAGACCGCG AAAA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:95:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:95:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGGCATCAA GGCGACCACC AAGA
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<110> Akzo Nobel N.V.
\vskip0.400000\baselineskip
<120> ARNm del EF-Tu como
marcador de la viabilidad de bacterias
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 98349
\vskip0.400000\baselineskip
<140>
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 95
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Versión 2.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 48
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipaattctaata cgactcacta tagggagagc ttggtggtcg atgggcga
\hfill48
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcctctgtcga ggaactgatg a
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 49
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipaattctaata cgactcacta tagggagagg gtcgtctgac gaatgccga
\hfill49
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipagtctgtcac acagttgatg g
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 49
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipaattctaata cgactcacta tagggagagc tgagtctctt tgataccaa
\hfill49
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcgaaaatcct ggaactggct g
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgcgcggcgtg gtcaacgt
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipacgaggaagt tgagatcg
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcttggtggtc gatgggcga
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggtcgtctga cgaatgccga
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipctgagtctct ttgataccaa
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipacgcggtatc atcaaagt
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgtgaagaagt tgaaatcg
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgtcggaagta gaactgcg
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgaccccggca cgccgact
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgacaagccgt tcctgtgcc
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgtcggaagta gaactgcg
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggcacaggaa cggcttgtc
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
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<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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<400> 80
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\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipttgctctgtc gagg
\hfill14
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<210> 81
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<211> 26
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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<400> 81
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\hfill26
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<210> 82
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<211> 20
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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\hfill20
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<210> 83
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<211> 11
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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<400> 83
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\hskip-.1em\dddseqskipaagcgaaaat c
\hfill11
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<210> 84
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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\hskip-.1em\dddseqskiptcggcattcg tcagacgacc accaag
\hfill26
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<210> 85
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<211> 26
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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\hfill26
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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Artificial: oligonucleótido sintético
\newpage
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<400> 87
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\hskip-.1em\dddseqskiptcggcatccg cccgaccagc accaag
\hfill26
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<210> 88
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<211> 26
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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<400> 88
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\hfill26
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<210> 89
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<211> 26
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
\vskip1.000000\baselineskip
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<400> 89
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\hfill26
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<211> 26
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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<400> 90
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\hskip-.1em\dddseqskiptcggcatccg cccggagacc accaag
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> Descripción de la Secuencia
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\hskip-.1em\dddseqskiptcagcattaa gccgcccagc accaag
\hfill26
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<210> 92
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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\hskip-.1em\dddseqskiptcggcatccg tccgacacca ccaag
\hfill25
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<211> 24
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
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<400> 93
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\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipttggtatcaa agagactcag aagt
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
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<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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\hfill24
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<212> ADN
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<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido sintético
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<400> 95
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\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptcggcatcaa ggcgaccacc aaga
\hfill24
Claims (18)
1. Método para la determinación de la viabilidad
bacteriana en el que se utiliza como diana ARNm que codifica el
factor de elongación EF-Tu en una reacción de
amplificación basada en la transcripción y se determina la
presencia y/o la cantidad de dicho ARNm.
2. Método de acuerdo con la reivindicación 1,
donde el método de amplificación basada en la transcripción es el
NASBA.
3. Método de acuerdo con la reivindicación 1 o
con la reivindicación 2, en el que el ARNm amplificado es detectado
con una sonda complementaria marcada.
4. Método de acuerdo con la reivindicación 3, en
el que la sonda está provista de una marca
electroquimioluminiscente.
5. Método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que las bacterias son
Mycobacteria.
6. Método de acuerdo con la reivindicación 5, en
el que las especies de Mycobacteria son M.
tuberculosis o M. leprae.
7. Oligonucleótido complementario a, o
conteniendo al menos una alteración que no disminuya la eficacia de
hibridación de este oligonucleótido con, una secuencia de la
secuencia del ARNm del EF-Tu bacteriano, teniendo
dicho oligonucleótido 10-50 nucleótidos de longitud
y conteniendo al menos 10 nucleótidos consecutivos de una de las
secuencias representadas en las SEC ID 1-6 u 8 o su
secuencia complementaria.
8. Oligonucleótido complementario a, o
conteniendo al menos una alteración que no disminuya la eficacia de
hibridación de este oligonucleótido con, una secuencia de la
secuencia del ARNm del EF-Tu bacteriano, teniendo
dicho oligonucleótido como máximo 50 nucleótidos de longitud y
conteniendo la secuencia representada en la SEC ID 7 o su secuencia
complementaria.
9. Un par de oligonucleótidos para la
amplificación de una secuencia del gen del EF-Tu de
M. tuberculosis, constando dicho par de un oligonucleótido
que tiene 10-50 nucleótidos de longitud y
conteniendo al menos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia
representada en la SEC ID 9 y un oligonucleótido que tiene
10-50 nucleótidos de longitud y que contiene al
menos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia representada en
la SEC ID 2, respectivamente.
10. Un par de oligonucleótidos para la
amplificación de una secuencia del gen del EF-Tu de
M. leprae, constando dicho par de un primer oligonucleótido
que tiene 10-50 nucleótidos de longitud y que
contiene al menos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia
representada en la SEC ID 10 y un segundo oligonucleótido que tiene
10-50 nucleótidos de longitud y que contiene al
menos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia representada en
la SEC ID 4, respectivamente.
11. Un par de oligonucleótidos para la
amplificación de una secuencia del gen del EF-Tu de
E. coli, constando dicho par de un primer oligonucleótido
que tiene 10-50 nucleótidos de longitud y que
contiene al menos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia
representada en la SEC ID 11 y un segundo oligonucleótido que tiene
10-50 nucleótidos de longitud y que contiene al
menos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia representada en
la SEC ID 6, respectivamente.
12. Un par de oligonucleótidos de acuerdo con la
reivindicación 10 ó 11, donde el primer oligonucleótido contiene
además la secuencia de un promotor reconocido por una ARN
polimerasa.
13. Un par de oligonucleótidos de acuerdo con la
reivindicación 12, donde la secuencia del promotor es la secuencia
del promotor reconocido por la ARN polimerasa de T7.
14. Método de acuerdo con la reivindicación 1
para la determinación de la viabilidad de M. tuberculosis, M.
leprae o E. coli, en el que se utiliza un par de
oligonucleótidos de acuerdo con la reivindicación 9, 10 u 11,
respectivamente, para amplificar el ARNm de EF-Tu y
se detecta la presencia y/o la cantidad del ácido nucleico
amplificado.
15. Método de acuerdo con la reivindicación 14,
en el que se determina la viabilidad de M. tuberculosis o
M. leprae y la detección del ácido nucleico amplificado se
lleva a cabo utilizando un ensayo de hibridación de sándwich con
una sonda de captura que tiene al menos 10 nucleótidos consecutivos
de una secuencia como la representada en la SEC ID 7 y una sonda de
detección marcada que tiene al menos 10 nucleótidos consecutivos de
la secuencia representada en la SEC ID 8.
16. Método de acuerdo con la reivindicación 14,
en el que se determina la viabilidad de E. coli y la
detección del ácido nucleico amplificado se lleva a cabo utilizando
un ensayo de hibridación de sándwich con una sonda de captura que
tiene al menos 10 nucleótidos consecutivos de una secuencia como la
representada en la SEC ID 12 y una sonda de detección marcada que
tiene al menos 10 nucleótidos consecutivos de la secuencia
representada en la SEC ID 13.
17. Un kit de ensayo para la detección de ARNm
del EF-Tu micobacteriano en una muestra, que
comprende:
- -
- un par de oligonucleótidos de acuerdo con la reivindicación 9 ó 10,
- -
- al menos un oligonucleótido que comprende una secuencia de ácido nucleico sustancialmente complementaria a al menos parte de la secuencia de ácido nucleico amplificada, provisto de una marca detectable,
- -
- reactivos de amplificación adecuados.
18. Un kit de ensayo para la detección de ARNm
del EF-Tu bacteriano de E. coli en una
muestra, que comprende:
- -
- un par de oligonucleótidos de acuerdo con la reivindicación 11,
- -
- al menos un oligonucleótido que comprende una secuencia de ácido nucleico sustancialmente complementaria a al menos parte de la secuencia de ácido nucleico amplificada, provisto de una marca detectable,
- -
- reactivos de amplificación adecuados.
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2010
- 2010-10-06 JP JP2010226408A patent/JP2011050387A/ja active Pending
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