ES2269347T3

ES2269347T3 - Farmacos terapeuticos para la dermatitis, que presentan una reaccion cutanea bifasica y que contienen inhibidores de quimasa como ingrediente activo.

Info

Publication number: ES2269347T3
Application number: ES01906226T
Authority: ES
Inventors: Harukazu Fukami; Yoshiaki Tomimori; Yoshiaki Fukuda; Naohiro Watanabe
Original assignee: Daiichi Asubio Pharma Co Ltd
Current assignee: Asubio Pharma Co Ltd
Priority date: 2000-02-22
Filing date: 2001-02-22
Publication date: 2007-04-01
Anticipated expiration: 2021-02-22
Also published as: EP1192950B1; CA2368382A1; ATE333897T1; CN1366460A; KR20010109356A; EP1192950A4; AU3413601A; US7618977B2; CN1245979C; HUP0201282A2; US20100029695A1; DE60121695D1; HUP0201282A3; DE60121695T2; US20020183339A1; EP1192950A1; WO2001062294A1

Abstract

El uso de un inhibidor de quimasa como ingrediente activo en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la dermatitis que muestra una reacción de la piel bifásica.

Description

Fármacos terapéuticos para la dermatitis, que presentan una reacción cutánea bifásica y que contienen inhibidores de quimasa como ingrediente activo.

La presente invención se refiere a las aplicaciones médicas de un inhibidor de quimasa, más particularmente se refiere a un medicamento para el tratamiento de la dermatitis que muestra una reacción bifásica, el cual tiene un inhibidor de quimasa como un ingrediente activo.

Antecedentes

Las reacciones inflamatorias están causadas por bacterias, virus, y otros patógenos y por traumas, materia extraña etc. Son inmunoreacciones donde los granulocitos, monocitos, linfocitos y otras células inmunes expelen los patógenos o los tejidos dañados o los materiales extraños. La dermatitis es una inflamación aguda o crónica de la piel, y en particular, ha habido una elevación notoria de dermatitis atópica en los últimos años, lo que se está convirtiendo en un problema importante.

La dermatitis atópica es una enfermedad crónica en la que el eczema con picor es el síntoma principal, con exacerbación y remisión observadas por turnos. En la mayoría de los casos, el paciente o sus familias tienen una historia de cnidosis o rinitis alérgica y asma bronquial y otros trastornos alérgicos (J. Allergy Clin. Immunol. 104, S123, 1999). Los síntomas de la dermatitis atópica son diversos y las causas no están todavía claras, pero se cree que la enfermedad es provocada principalmente por varias sustancias naturales que incluyen garrapatas, pelos, plumas, bacterias y hongos, o alimentos que incluyen huevos, leche, o productos sintéticos que incluyen fibras y detergentes químicos, etc. Se señala también que la alteración en la función de barrera de la piel debido a la piel seca juega un importante papel en la dermatitis atópica.

El mecanismo del comienzo de la dermatitis atópica no está aún claro. Se ha pensado que el tipo I de reacción alérgica (reacción alérgica inmediata), en la que la IgE y las células mastocitos están envueltas, juega un importante papel en la dermatitis atópica, ya que esta enfermedad es una de reacciones de hipersensibilidad a una serie de antígenos, los pacientes o sus familias algunas veces tienen otras alteraciones alérgicas, y un aumento en los niveles de la IgE del suero es observado en muchos casos. Sin embargo, los agentes antialérgicos que inhiben la reacción alérgica de tipo I no son eficaces o no muestran ningún efecto terapéutico en la dermatitis atópica, mostrando que la participación de la reacción de tipo I en la patogénesis de esta enfermedad es solamente parcial.

Por otra parte, se ha descrito, que los pacientes con dermatitis atópica muestran reacción de la piel bifásica, cuando son expuestos a los alergenos. (J. Allergy Clin. Immunol. 101, 222, 1998). Esta reacción bifásica de la piel es, por ejemplo, observada en el caso de administración intradérmica de un antígeno tal como extracto de Ascaris a animales sensibilizados al mismo antígeno (J. Immunol. 131, 1096, 1983). La primera reacción, denominada reacción de fase temprana, alcanza el nivel máximo 1 hora después del enfrentamiento con el antígeno. La segunda reacción, la reacción de fase tardía, se sabe que muestra la respuesta máxima después de 8 a 24 horas (Biol. Pharm. Bull. 18, 239, 1995). La reacción de fase temprana se suprime mediante antagonistas de los receptores de histamina, sugiriendo que la reacción es inducida por IgE y las células mastocitos. En contraposición, el mecanismo de la reacción de fase tardía no está necesariamente claro, pero se caracteriza por una infiltración notoria de eosinófilos en la piel (Int. Arch. Allergy Immunol. 113, 196, 1997), que es el aspecto histológico típico observado en los pacientes con dermatitis atópica (J. Am. Acad. Dermatol. 24, 1101, 1991). Además, se sabe que la severidad de la dermatitis atópica de los pacientes se correlaciona con los niveles de suero de ECP (proteínas catiónicas eosinófilas), y el número de eosinófilos periféricos (Medicina 34,220, 1997). Además, en los últimos años, se ha señalado que los síntomas clínicos de la dermatitis atópica son extremadamente similares a los síntomas de la dermatitis de contacto clasificada como una reacción alérgica de tipo IV (Medicina 34, 220, 1997). Estos hechos sugieren la posibilidad de que una reacción alérgica de tipo IV esté también envuelta en el mecanismo de la patogénesis de la enfermedad.

Generalmente se sabe que la reacción de hipersensibilidad de contacto, la representativa reacción alérgica de tipo IV, se induce aplicando haptenos tales como DNFB (dinitrofluorobenceno) a los ratones que han sido sensibilizados una vez con el mismo hapteno, pero recientemente se ha descrito que una reacción alérgica de tipo I es inducida en adición a la reacción alérgica de tipo IV cuando repetidamente se aplica tal hapteno a la piel (J. Invest. Dermatol. 105, 749, 1995). Por ejemplo, aplicando el hapteno repetidamente, el nivel de IgE en la sangre aumenta y el curso de la reacción a lo largo del tiempo se desplaza a la de la reacción alérgica de tipo I, debido a la repetición del enfrentamiento con el hapteno. En dicho modelo animal, no solamente la respuesta transitoria al enfrentamiento con el hapteno, sino también la línea base del espesor de la piel, el espesor antes del enfrentamiento con el hapteno, aumenta gradualmente, lo que parece ser una característica de la dermatitis crónica. Se piensa que estos descubrimientos sugieren que la dermatitis inducida por la aplicación repetida del hapteno es útil como un modelo animal de la dermatitis atópica (Anitex 10, 23, 1998).

Recientemente, se ha descrito que ratones NC/nga desarrollan espontáneamente dermatitis similar a la dermatitis atópica (Int. Immunol. 9, 461, 1997). Ratones NC/Nga que se mantienen en un ambiente convencional, no libre de patógenos específicos, comienzan a exhibir comportamiento de arañado y eritema notorio después de alrededor de siete a ocho semanas de edad, después muestran hemorragias o heridas de ulceración de la piel con la edad. Además, muestran síntomas que se parecen a las observaciones clínicas de la dermatitis atópica en humanos tales como secado o espesamiento de la piel. Otros razas de ratones tales como BALB/c no sufren una dermatitis similar aún cuando cohabiten con ratones NC/Nga, sugiriendo que esta dermatitis se considera específica para ratones NC/Nga (Saishin Igaku (Latest Medicine), 53, 2848, 1998). Además, cuando se crían estos ratones en un ambiente específico libre de patógenos (SPF), no se observan anormalidades de la piel en absoluto, abriendo la posibilidad de que alguna clase de factores ambientales estén envueltos en el comienzo de la dermatitis en estos ratones. Cuando los ratones NC/Nga criados en un ambiente SPF son repetidamente pintados con hapteno, solo se causa la reacción de hipersensibilidad tipo retardado llamada dermatitis de contacto en el periodo inicial de la sensibilización, pero con el aumento en la sensibilización, se observan condiciones similares a la dermatitis atópica (CRJ Letters 11, 1, 1998). Por tanto, mientras que el estímulo natural para la dermatitis espontánea en estos ratones no está aún claro, es claro que la exposición repetida a alguna clase de antígeno en ambientes naturales es un factor importante. Así, estos ratones son extremadamente útiles como un modelo para la dermatitis atópica espontáneamente causada por la exposición repetida a un alergeno que estaría presente en el aire.

El medicamento más eficaz para el tratamiento de la dermatitis atópica es una pomada de esteroide (J. Allergy Clin. Immunol. 104, S123, 1999). El uso de tal pomada de esteroide, sin embargo, requiere la selección cuidadosa del medicamento usado según la localización de la aplicación y el momento. Si el método de uso no es apropiado, no se manifestará efecto o la condición por lo tanto se deteriorará. Además, cuando una pomada de esteroide se usa durante un largo periodo, los efectos secundarios tales como la atrofia y la rasacea ocurren. Además, si se detiene el uso de este medicamento en la mitad del tratamiento, el fenómeno de rebote, esto es, un deterioro notable de los síntomas de la piel, es observado.

Además de la pomada de esteroide, los antagonistas de histamina y los agentes antialérgicos se han usado para el tratamiento de la dermatitis atópica. Los antagonistas de histamina son eficaces en el sentido de eliminar el picor, pero no conducen a la cura de esta enfermedad. Los agentes antialérgicos tales como tranilast, ketotifeno, oxatomida, e hidrocloruro de azelastina no son eficaces en las condiciones de dermatitis atópica, o los efectos son pocos, si alguno. Esto se cree es debido al hecho de que estos fármacos tienen una acción supresora en la reacción alérgica del tipo I, pero no muestran casi ningún efecto en las acciones de los eosinófilos o la reacción alérgica de tipo IV (Jap. J. Pharmacol. 63, 73, 1993, Jap. J. Pharmacol. 51, 93, 1989). Recientemente la pomada de tacrolimus, un inmunosupresor, ha sido desarrollada como un medicamento para el tratamiento de la dermatitis atópica (J. Allergy Clin. Immunol. 104, 5126, 1999), pero no se pueden evitar varios efectos secundarios debido a la supresión de la reacción inmunológica por el uso de este medicamento. Considerado todo junto, es difícil decir que alguno de los medicamentos existentes sea suficientemente satisfactorio con respecto a la eficacia y a los efectos secundarios, y el desarrollo de un medicamento superior en eficacia y seguridad es deseable.

Por otra parte, la quimasa es una proteasa de serina que se encuentra en los gránulos de las células mastocitos y está ampliamente presente en tejidos como la piel, el corazón, las paredes vasculares, los intestinos, etc. (Mast Cell Proteases in Immunology and Biology; Caughey, G. H., Ed; Marcel Dekker, Inc.; New York, 1995). Se ha descrito hace mucho tiempo que la quimasa actúa sobre las células mastocito del peritoneo de la rata y causa la desgranulación (J. Immunol. 136, 3812, 1986) y que un inhibidor de quimasa suprime la desgranulación de células mastocitos mediada por Ig-E (Biochem. Int. 10, 863, 1985) y ha sido señalado que la quimasa está envuelta en la función de las células mastocitos. Recientemente, se ha descrito que la administración de la quimasa humana induce infiltración de leucocitos que incluyen eosinófilos en ratones así como en cobayas (Br. J. Pharmacol. 125, 14-91, 1998), que esta quimasa humana actua sobre el precursor de IL-1\beta (Interleukina 1\beta) y la convierte al tipo activo IL-1\beta (J. Exp. Med. 174, 821, 1991), y que la quimasa humana tiene la acción de digerir parcialmente al factor de célula madre unido a la membrana (SCF) convirtiéndolo a soluble SCF (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 9017, 1997), etc. Estos descubrimientos sugieren la posibilidad de que la quimasa tenga alguna clase de papel en las enfermedades alérgicas tales como las dermatitis atópicas. Sin embargo, es difícil decir que la función patofisiológica de la quimasa haya sido elucidada por estos estudios. En la actualidad, una búsqueda enérgica está realizándose sobre las sustancias que pueden inhibir la actividad de la quimasa in vivo con el propósito de clarificar el papel de la quimasa en varias enfermedades y la posibilidad de los inhibidores de quimasa como fármacos.

Hay inhibidores de quemaza tales como inhibidores de quemaza de bajo peso molecular tales como los mostrados en los libros de texto (Protease inhibitors; Barrett et al., editores; Elsevier Sciences B. V.; Ámsterdam, 1996), los derivados de \alpha-cetoácidos descritos como inhibidores de tipo péptido (documento de patente internacional WO93-25574, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92, 6738), derivados de \alpha,\alpha-difluoro-\beta-cetoácido (documento de patente japonesa JP-A-9-124691), inhibidores tripeptídicos (documento de patente internacional WO93-03625), derivados de ácido fosfórico (Oleksyszyn et al., Biochemistry 30, 485, 1991), inhibidores tipo péptido tales como derivados de trifluorometilcetona (documento de patente internacional WO96-33974, documento de patente japonesa JP-A-10-53579) y derivados de acetoamida (documentos de patente japonesa JP-A-10-7661, JP-A-10-53579, JP-A-11-246437, documentos de patente internacional WO99-41277, WO98-18794, WO96-39373), inhibidores de tipo no peptídico tales como derivados de triazina (documentos de patente japonesa Nºs JP-A-8-208654 y JP-A-10-245384), derivados de éster de fenol (documento de patente japones JP-A-10-87567) derivados de cefem (documento de patente japonesa JP-A-10-87493) derivados de isoxazol (documento de patente japonesa JP-A-11-1479), derivados de imidazolidina (documento de patente internacional WO96-04248), derivados de idantoína (documento de patente japonesa JP-A-9-31061), derivados de quinazolina (documento de patente internacional WO97-11941), etc. han sido descritos, pero no se ha establecido todavía ningún medicamento satisfactorio o método de tratamiento usando la inhibición de la actividad de la quimasa como una estrategia para el tratamiento.

Nuestro documento de patente europea EP-A-1114035 (documento de patente internacional WO00/10982) describe compuestos de quinazolina inhibidores de quimasa de la fórmula (I) descritos a continuación, que se sugieren como relevantes como un tratamiento para la dermatitis atópica (entre otras). Se ha publicado el 2 de Marzo del 2000, después de la fecha de prioridad del caso presente.

El objeto de la presente invención es proporcionar un medicamento libre de efectos secundarios, seguro para el tratamiento de dermatitis tales como la dermatitis atópica que muestran una reacción de la piel bifásica, que suprime el progreso de la condición y mejora la calidad de vida del paciente.

Los presentes inventores comprometidos en estudios intensivos tomaron nota del hecho de que la dermatitis atópica muestra reacción de la piel bifásica y de que la reacción de la fase tardía juega un papel importante en la condición. Como resultado, los presentes inventores descubrieron que un inhibidor de quimasa actúa aliviando la reacción de la fase tardía en la reacción de la piel bifásica de la dermatitis.

Esto es, de acuerdo con la presente invención, se proporciona el uso de un inhibidor de quimasa como ingrediente activo en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la dermatitis que muestra reacción de la piel bifásica.

Este puede ser un medicamento para aliviar la reacción de la fase tardía de la dermatitis que muestra reacción de la piel bifásica.

La Fig.1 es un gráfico que muestra en ratones la reacción de la piel a lo largo del tiempo en la reacción de la piel bifásica inducida por Ascaris en el ejemplo 2.

Figs. 2A, 2B, y 2C son gráficos que muestran el efecto del inhibidor de quimasa (Fig. 2A) y fármacos de control, prednisolona (Fig. 2B) y difenhidramina (Fig. 2C), en la reacción de la piel bifásica inducida por Ascaris del

\hbox{ejemplo
3.}

Figs. 3A y 3B son gráficos que muestran la reacción de la piel a lo largo del tiempo, cuando la quimasa humana (FIG. 3A) o la histamina (Fig.3B) se administro por vía intradérmica a ratones en el ejemplo 4.

Figs. 4A y 4B son gráficos que muestran la dependencia de la dosis de quimasa en la reacción de la piel cuando la quimasa humana se administra por vía intradérmica a ratones en el ejemplo 4 (FIG. 4A, después de 1 hora de la administración de quimasa, Fig. 4B después de 16 horas de la administración de quimasa).

Fig. 5 es un gráfico que muestra el efecto del tratamiento por calefacción en la acción de la quimasa humana en la inducción de la dermatitis del ejemplo 5.

Fig. 6A a 6E son fotos que muestran el análisis histológico de la dermatitis inducida por la inyección intradérmica de la quimasa humana en el ejemplo 6, en donde Fig.. 6A, ratones normales; Fig. 6B, dermatitis inducida por extracto de Ascaris (después de 1 hora); Fig. 6C, dermatitis inducida por extracto de Ascaris (después de 24 horas); Fig. 6D, dermatitis inducida por quimasa humana (después de 1 hora); Fig. 6E dermatitis inducida por quimasa humana (después de 24 horas).

Figs. 7A y 7B son gráficos que muestran la reacción de la piel cuando la quimasa humana se administra por vía intradérmica a ratones deficientes en células mastocitos en el Ejemplo 7 (Fig. 7A, la reacción después de 1 hora, Fig. 7B la reacción después de 16 horas).

Fig. 8A es una vista que muestra la dependencia de la concentración del efecto de la quimasa humana sobre la migración de leucocitos polimorfonucleares humanos (PMN) in vitro en el ejemplo 8. Fig. 8B es un gráfico que muestra el efecto de un inhibidor de quimasa sobre la migración de PMN inducida por quimasa en el ejemplo 8.

El inhibidor de quimasa que puede ser usado en la presente invención puede seleccionarse como una sustancia capaz de mostrar una acción inhibidora de la actividad de la quimasa mediante el uso de métodos abordables para una persona conocedora de la técnica. Como el método de selección, por ejemplo, puede mencionarse el método del ejemplo 1 explicado más tarde. Los compuestos obtenidos de esta forma incluyen compuestos conocidos previamente descritos como inhibidores de quimasa, por ejemplo, inhibidores de quimasa de bajo peso molecular tales como los mostrados en los libros de texto y en las publicaciones de patentes listadas anteriormente.

Como un ejemplo típico del inhibidor de quimasa preferible, puede mencionarse un compuesto de la fórmula (I) siguiente y sus sales farmacéuticamente aceptables.

1

en donde, el anillo A representa un grupo arilo.

: R^{1} representa un grupo hidroxilo, un grupo amino, un grupo alquilamino de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo aralquilamino de C_{7} a C_{10} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino acilado con un ácido alifático de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino acilado con un ácido carboxílico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino acilado con un ácido carboxílico de un anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido alcanosulfónico de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de un anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} sustituido con un grupo de ácido carboxílico, o un grupo alquileno de C_{2} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico;

: R^{2} y R^{3} pueden ser iguales o diferentes y representan un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} sustituido o no sustituido, un átomo de halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alcoxilo de C_{1} a C_{4}, un grupo amino, un grupo alquilamino de C_{1} a C_{4} sustituido o no sustituido, un grupo aralquilamino de C_{7} a C_{10} sustituido o no sustituido, un grupo amino acilado con un ácido alifático de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino acilado con un ácido carboxílico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino acilado con un ácido carboxílico de un anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido alcanosulfónico de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de un anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, o un grupo de ácido carboxílico o

: cuando el anillo A es un anillo de benceno, R^{1} y R^{2} pueden formar, junto con el anillo de benceno sustituido, un anillo heterocíclico fusionado que puede estar sustituido con un ácido carboxílico y en el que el átomo de carbono del anillo puede formar un grupo carbonilo y R^{3} es lo mismo que se definió anteriormente; y

: X representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4}, un grupo alcoxi de C_{1} a C_{4}, un átomo de halógeno, un grupo hidroxi, un grupo amino, o un grupo nitro.

En la fórmula general (I), ejemplos preferidos del grupo arilo representado por el anillo A son un anillo de benceno y un anillo de naftaleno.

Ejemplos preferidos del grupo alquilamino de C_{1} a C_{4} que pueden estar sustituidos con el grupo de ácido carboxílico y del grupo aralquilamino de C_{7} a C_{12} que pueden estar sustituidos con un grupo de ácido carboxílico representado por R^{1} son un grupo metilamino, un grupo etilamino, un grupo propilamino, un grupo butilamino, un grupo carboximetilamino, un grupo carboxietilamino, un grupo carboxipropilamino, un grupo carboxibutilamino, un grupo bencilamino, un grupo fenetilamino, un grupo fenilpropilamino, un grupo fenilbutilamino, un grupo carboxibencilamino, un grupo carboxifenetilamino, un grupo carboxifenilpropilamino, un grupo carboxifenilbutilamino, etc.

Ejemplos preferidos del grupo de amino acilado con el ácido alifático de C_{1} a C_{4} que pueden estar sustituidos con un grupo de ácido carboxílico, el grupo de amino acilado con un ácido carboxílico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, y el grupo amino acilado con un ácido carboxílico de un anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico representado por R^{1} son un grupo de formilamino, un grupo de acetilamino, un grupo de propionilamino, un grupo de butirilamino, un grupo de benzoilamino, un grupo de naftoilamino, un grupo de piridinocarbonilamino, un grupo de pirrolcarbonilamino, un grupo de carboxiacetilamino, un grupo de carboxipropionilamino, un grupo de carboxibutirilamino, un grupo de carboxibenzoilamino, un grupo de carboxinaftoilamino, un grupo de carboxipiridincarbonilamino, un grupo de carboxipirrolcarbonilamino, etc.

Ejemplos preferidos del grupo amino sulfonilado con el ácido alcanosulfónico de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, el grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, y el grupo de amino sulfonilado con un ácido sulfónico de un anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico representado por R^{1} son un grupo metanosulfonilamino, un grupo etanosulfonilamino, un grupo propanosulfonilamino, un grupo butanosulfonilamino, un grupo bencenosulfonilamino, un grupo naftalenosulfonilamino, un grupo piridinosulfonilamino, un grupo pirrolsulfonilamino, un grupo carboximetanosulfonilamino, un grupo carboxietanosulfonilamino, un grupo carboxipropanosulfonilamino, un grupo carboxibutanosulfonilamino, un grupo carboxibencenosulfonilamino, un grupo carboxinaftalensulfonilamino, un grupo carboxipiridinosulfonilamino, un grupo carboxipirrolsulfonilamino, etc.

Ejemplos preferidos del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} sustituido con un grupo de ácido carboxílico representado por R^{1} son un grupo de ácido acético, un grupo de ácido propiónico, un grupo de ácido butírico, un grupo de ácido valérico, etc.

Ejemplos preferidos del grupo alquileno de C_{2} a C_{4} sustituido con un grupo de ácido carboxílico representado por R^{1} son un grupo de ácido acrílico, un grupo de ácido protónico, etc.

Ejemplos preferidos de grupo alquilo de C_{1} a C_{4} sustituido o no sustituido representado por R^{2} o R^{3} son un grupo alquilo de cadena lineal tal como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, y un grupo n-butilo y un grupo alquilo ramificado tal como un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo, y un grupo t-butilo.

Ejemplos preferidos del grupo de sustituyentes del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} son un grupo de ácido carboxílico, un átomo de halógeno tal como un átomo de flúor y un átomo de cloro, un grupo de alcoxi de C_{1} a C_{4}, un grupo amino, un grupo metilamino, un grupo dimetilamino, un grupo carboximetilamino, un grupo carboxietilamino, etc.

Ejemplos preferidos del átomo de halógeno representado por R^{2} o R^{3} son un átomo de fluor, un átomo de cloro, un átomo de bromo y un átomo de yodo.

Ejemplos preferidos de grupo alcoxilo de C_{1} a C_{4} representado por R^{2} o R^{3} son grupos alquiloxi de cadena lineal tales como un grupo metoxi, un grupo etoxi, un grupo n-propiloxi, y un grupo n-butoxi y un grupo alquiloxi ramificado tal como un grupo isopropiloxi, un grupo sec-butoxi, y un grupo t-butoxi.

Ejemplos preferidos de grupo alquilamino de C_{1} a C_{4} sustituido o no sustituido representado por R^{2} o R^{3} son un grupo metilamino, un grupo etilamino, un grupo propilamino, un grupo butilamino, etc.

Ejemplos preferidos del grupo de sustituyentes del grupo alquilamino de C_{1} a C_{4} son un grupo de ácido carboxílico, un átomo de halógeno tal como un átomo de fluor y un átomo de cloro, un grupo alcoxilo de C_{1} a C_{4}. etc.

Ejemplos preferidos del grupo aralquilamino de C_{7} a C_{12} sustituido o no sustituido representados por R^{2} o R^{3} son un grupo de bencilamino, un grupo de fenetilamino, un grupo de fenilpropilamino, un grupo de fenilbutilamino, etc.

Ejemplos preferidos del grupo de sustituyentes del grupo aralquilamino son un grupo de ácido carboxílico, un átomo de halógeno tal como un átomo de fluor y un átomo de cloro, un grupo alcoxilo de C_{1} a C_{4}, etc.

Ejemplos preferidos del grupo amino acilado con un ácido alifático de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, el grupo amino acilado con un ácido carboxílico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxíico, y el grupo amino acilado con un ácido carboxílico de un anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico representado por R^{2} o R^{3} son un grupo formilamino, un grupo acetilamino, un grupo propionilamino,un grupo butirilamino, un grupo benzoilamino, un grupo naftoilamino, un grupo piridincarbonilamino, un grupo pirrolcarbonilamino, un grupo carboxiacetilamino, un grupo carboxipropionilamino, un grupo carboxibutirilamino, un grupo carboxibenzoilamino, un grupo carboxinaftoilamino, un grupo carboxipiridincarbonilamino, un grupo carboxipirrolcarbonilamino etc.

Ejemplos preferidos del grupo amino sulfonilado con un ácido alcanosulfónico de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, el grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, y el grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico representado por R^{2} o R^{3} son un grupo metanosulfonilamino, un grupo etanosulfonilamino, un grupo propanosulfonilamino, un grupo bencenosulfonilamino, un grupo naftalenosulfonilamino, un grupo piridinosulfonilamino, un grupo pirrolsulfonilamino, un grupo carboximetanosulfonilamino, un grupo carboxietanosulfonilamino, un grupo carboxipropanosulfonilamino, un grupo carboxibencenosulfonilamino, un grupo carboxinaftalenosulfonilamino, un grupo carboxipiridinosulfonilamino, un grupo carboxipirrolsulfonilamino, etc.

Ejemplos preferidos de anillo heterocíclico fusionado que puede estar sustituido con un ácido carboxílico y en el que el átomo de carbono del anillo puede formar un grupo carbonilo que R^{1} y R^{2} forman junto con el anillo de benceno sustituyendo cuando el anillo A es un anillo de benceno, son un anillo de tetrahidroquinolina y un anillo de benzoxacina, por ejemplo, una tetrahidroquinolina, una benzoxacina, una quinoleína, un benzodioxano, una carboxitetrahidroquinoxalina, una carboxibenzoxazina, una carboxiquinoxalina, un carboxibenzodioxano, etc.

Ejemplos preferidos del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} representado por X son un grupo alquilo de cadena lineal tal como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, y un grupo n-butilo y un grupo alquilo ramificado tal como un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo, y un grupo t-butilo.

Ejemplos preferidos de un grupo alcoxilo de C_{1} a C_{4} representado por X son un grupo de alquiloxi de cadena lineal tal como un grupo metoxi, un grupo etoxi, un grupo n-propiloxi, y un grupo n-butoxi y un grupo alquiloxi ramificado tal como un grupo isopropiloxi, un grupo secbutoxi, y un grupo t-butoxi.

Ejemplos preferidos del átomo de halógeno representado por X, son un átomo de fluor, un átomo de cloro, un átomo de bromo y un átomo de yodo.

\newpage

Además, ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables son una sal de ácido tal como una sal de ácido clorhídrico, una sal de ácido metanosulfónico, y una sal de ácido trifluoroacético y una sal de metal alcalino tal como una sal de sodio y una sal de potasio.

Los otros ejemplos típicos del inhibidor de quimasa preferido son un derivado de quinazolina que tiene la fórmula (II) y sus sales farmacéuticamente aceptables:

2

en donde, el anillo B representa un anillo de benceno, un anillo de piridina, un anillo de pirrol,o un anillo de pirazol, m representa 0, 1, o 2,

: Y representa un grupo hidroxi, un grupo nitro, un átomo de halógeno, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un átomo de halógeno, un grupo alcoxi de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un átomo de halógeno, o un grupo aralquiloxi de C_{7} a C_{12}, o Y representa un grupo formando un anillo de naftaleno o un anillo de quinolina junto con el anillo de benceno que se muestra como sustituido con dicha Y,

: R^{5} y R^{6} son iguales o diferentes y representan un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un átomo de halógeno, un grupo nitro, un grupo ciano, un grupo pirazolilo, un grupo tetrazolilo, un grupo carboxilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4}, o un grupo alilo, un grupo alcoxi de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con uno o más grupos de sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo de morfolino, un grupo de fenilpiperazinilo, y un grupo de carboxilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} o un grupo de alilo, o, cuando el anillo B representa un anillo de benceno, R^{5} y R^{6} representan un grupo formando un anillo de naftaleno o un anillo de quinolina junto con el anillo de benceno que se muestra como sustituido con dicho R^{5} y R^{6}, y

: Z representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un átomo de halógeno, un grupo alquenilo de C_{2} a C_{5}, un grupo de aralquilo sustituido o no sustituido, un grupo alquilheterocíclico aromático sustituido o no sustituido, un grupo carboximetilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4}, o un grupo alilo, un grupo carbonilmetilo que está amidado con una amina primaria o secundaria o cíclica o un grupo arilcarbonilmetilo sustituido, o no sustituido o un grupo aralquiloximetilo sustituido o no sustituido.

En la fórmula general (II), los ejemplos preferidos del átomo de halógeno para Y son fluor, cloro, bromo, o yodo. Los ejemplos de grupo alquilo de cadena corta del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} para Y, que está sustituido con un átomo de halógeno, son grupos alquilo de cadena lineal tales como un grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo y grupo n-butilo, y grupos alquilo ramificados tales como un grupo isopropilo, grupo secbutilo y grupo t-butilo, mientras que los ejemplos del átomo de halógeno del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} para Y el cual está sustituido con un átomo de halógeno, son fluor, cloro, bromo y yodo. Los ejemplos de grupo alcoxi de cadena corta del grupo alcoxi de C_{1} a C_{4} para Y, que está sustituido con un átomo de halógeno, son grupos alcoxi de cadena lineal tales como un grupo metoxi, un grupo etoxi, un grupo n-propoxi y un grupo n-butoxi, y grupos alcoxi ramificados tales como un grupo isopropoxi, un grupo sec-butoxi y un grupo t-butoxi, mientras los ejemplos del átomo de halógeno del grupo alcoxi de C_{1} a C_{4} para Y, que está sustituido con un átomo de halógeno, son fluor, cloro, bromo, y yodo. Los ejemplos del grupo aralquiloxi de C_{7} a C_{12} para Y son un grupo benciloxi, un grupo fenetiloxi, un grupo fenilpropoxi y un grupo naftiletiloxi, etc, preferiblemente el grupo benciloxi.

Los ejemplos preferibles del átomo de halógeno para R^{5} o R^{6} son fluor, cloro, bromo, o yodo. Los ejemplos de grupo alquilo de cadena corta del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} para R^{5} o R^{6}, que está sustituido por un átomo de halógeno, son grupos alquilo de cadena lineal tales como un grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo y grupo n-butilo, grupos alquilo ramificados tales como un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo y un grupo t-butilo, mientras que los ejemplos del átomo de halógeno del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} para R^{5} o R^{6}, que está sustituido con un átomo de halógeno, son fluor, cloro, bromo, o yodo. Los ejemplos preferidos del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} de grupo carboxilo para R^{5} o R^{6}, que puede estar esterificado con el grupo alquilo de C_{1} a C_{4} o un grupo alilo, son grupos alquilo de cadena lineal tales como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo y un grupo n-butilo, y grupos alquilo ramificados tales como un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo y un grupo t-butilo. Los ejemplos del grupo alcoxi de C_{1} a C_{4} para R^{5} o R^{6}, que está sustituido con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo morfolino, un grupo fenilpiperacinilo, y un grupo carboxilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4}, o un grupo alilo, son grupos alcoxi de cadena lineal tales como un grupo metoxi, un grupo etoxi, un grupo n-propoxi y un grupo n-butoxi, y grupos alcoxi ramificados tales como un grupo isopropoxi, un grupo sec-butoxi y un grupo t-butoxi. Los ejemplos del átomo de halógeno mostrados como el grupo de sustituyente anterior, son fluor, cloro, bromo, o yodo y los ejemplos preferidos del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} del grupo carboxilo que está esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} o un grupo alilo mostrado como un grupo de sustituyente anterior, son un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo n-butilo, y otros grupos alquilo de cadena lineal y un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo, un grupo t-butilo, y otros grupos alquilo ramificados.

Los ejemplos de grupo alquilo de cadena corta del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} mostrados como Z que puede estar sustituido con halógeno, son grupos alquilo de cadena lineal tales como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo y un grupo n-butilo, y grupos alquilo ramificados tales como un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo y un grupo t-butilo, mientras los ejemplos del átomo de halógeno del grupo alquilo de C_{1} a C_{4} que pueden estar sustituidos con el átomo de halógeno son fluor, cloro, bromo o yodo. Los ejemplos del grupo alquenilo de C_{2} a C_{5} para Z son un grupo alilo, un grupo propenilo, un grupo isopropenilo, un grupo butenilo, etc.

Los ejemplos del grupo aralquilo de un grupo aralquilo sustituido o no sustituido mostrado como Z son un grupo aralquilo de C_{7} a C_{12}, preferiblemente un grupo bencilo, un grupo fenetilo, un grupo fenilpropilo, o un grupo naftiletilo. Los ejemplos preferidos del grupo de sustituyentes de un grupo aralquilo sustituido o no sustituido son un grupo carboxilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} o un grupo alilo de C_{1} a C_{4}, un grupo ciano, un grupo nitro, un grupo carbonilo amidado con una amina primaria, un grupo amino que puede estar amidado con un ácido carboxílico o un aminoácido, y un grupo de guanidino que puede estar sustituido con un grupo alcoxicarbonilo de cadena corta. Los ejemplos de un grupo alquilo de cadena corta del grupo carboxilo, que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} o un grupo alilo son grupos alquilo lineal tales como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo y un grupo n-butilo, y grupos alquilo ramificado tales como un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo y un grupo t-butilo. Los ejemplos de la amina primaria del grupo carbonilo amidado con la amina primaria son una cadena alquilamino de C_{1} a C_{4} o aquellas que pueden estar sustituidas con un grupo carboxilo, tales como, preferiblemente, metilamina, etilamina, isopropilamina y carboximetilamina; aminas que tienen grupos de hidrocarburo aromático policíclico tales como anilina y naftilamina; aminas que tienen un grupo heterocíclico aromático tales como aminopiridina, aminopirrol y otros. Los ejemplos del ácido carboxílico del grupo amino que puede estar amidado con un ácido carboxílico o un aminoácido son preferiblemente ácidos monocarboxílicos alifáticos de C_{2} a C_{5} o ácidos dicarboxílicos alifáticos tales como el ácido piválico y el ácido succínico, mientras que los ejemplos de aminoácido son aminoácidos, del que el grupo carboxilico puede estar esterificado o del que el grupo amino puede estar amidado, tal como ácido L-aspártico, ácido \alpha-O-t-butil-N-t-butoxicarbonil-L-aspártico y otros. Los ejemplos del grupo guanidino que puede estar sustituido con un grupo alcoxicarbonilo de cadena corta son preferiblemente un grupo guanidino que puede estar sustituido con un grupo alcoxicarbonilo de C_{2} a C_{5} tal como un grupo guanidino y el grupo 2,3-bis-t-butoxicarbonilguanidino.

Los ejemplos de grupo alquilo del heterociclo aromático de un grupo alquilo de heterociclo aromático sustituido o no sustituido mostrado como Z son grupos tienilalquilo tales como un grupo 2-tienilo y un grupo 2-tieniletilo, grupos furilalquilo tales como un grupo 2-furfurilo y un grupo 2-furiletilo, grupos piridilalquilos tales como un grupo 2-piridilmetilo, un grupo 3-piridilmetilo, un grupo 4-piridilmetilo y un grupo 4-piridiletilo, grupos pirimidinilalquilo tales como un grupo 5-pirimidinilmetilo, grupos pirazinilalquilo tales como un grupo 2-pirazinilmetilo, grupos piridazinilalquilo tales como un grupo 3-piridazinilmetilo, grupos tetrazolilalquilo tales como un grupo 5-tetrazolilmetilo, grupos isotiazolilalquilo tales como un grupo 4-isotiazolilmetilo y un grupo 5-isotiazolilmetilo, grupos tiazolilalquilo tales como un grupo 5-tiazolilmetilo, grupos oxazolilalquilo tales como un grupo 5-oxazolilmetilo, y grupos isoxazolilalquilo tales como un grupo 4-isoxazolilmetilo y un grupo 5-isoxazolilmetilo. Los ejemplos preferidos del grupo sustituyente de un grupo alquilo de heterociclo sustituido o no sustituido, son grupos alquilo de C_{1} a C_{4} tales como un grupo metilo y un grupo etilo, y grupos carboxilalquilo de cadena corta de C_{1} a C_{4} tales como un grupo carboxilmetilo y un grupo carboxiletilo.

Los ejemplos de grupo alquilo de cadena corta del grupo carboximetilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} o un grupo alilo mostrado como Z son grupos alquilo de cadena lineal tales como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo y un grupo n-butilo, y grupos alquilo ramificados tales como un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo y un grupo t-butilo.

Los ejemplos de amina primaria del grupo de carbonilmetilo que puede estar amidado con una amina primaria o secundaria o cíclica mostrada como Z son alquilaminas de cadenas de C_{1} a C_{4} o aquellas que pueden estar sustituidas con grupos carboxilo tales como preferiblemente metilamina, etilamina, isopropilamina y carboximetilamina, y aminas que tienen grupos de hidrocarburo saturado monocíclico tal como una ciclohexilamina, y aminas que tienen un grupo de hidrocarburo aromático mono o policíclico tales como anilina, bencilamina y naftilamina, y aminas que tienen un grupo heterocíclico aromático tales como aminopiridina, aminometilpiridina, aminopirrol, aminopirimidina, aminoindol y aminoquinolina, en donde las aminas que tienen un grupo de hidrocarburo aromático o un grupo de heterociclo aromático pueden tener sobre su anillo uno o más sustituyentes tales como

1): grupo hidroxilo,

2): –OPO(OH)_{2},

3): grupo amino,

4): grupo oxo,

5): átomo de halógeno,

6): grupo carboxilo, que puede estar esterificado con grupo alquilo de C_{1} a C_{4} tal como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo isopropilo y un grupo t-butilo, o un grupo alilo,

7): grupo alcoxi de cadena lineal o ramificada de C_{1} a C_{4} tal como un grupo metoxi, un grupo etoxi, un grupo n-propoxi y un grupo t-butoxi, que puede estar sustituido con un grupo carboxilo, que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} tal como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo isopropilo y un grupo t-butilo, o un grupo alilo,

8): grupos alquilo de cadena lineal o ramificada de C_{1} a C_{4} tales como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo n-butilo, un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo, y un grupo t-butilo, que puede estar sustituido.

Además, los ejemplos preferidos de sustituyente del grupo alquilo de C_{1} a C_{4}, que puede estar sustituido del apartado anterior 8) son,

a): un grupo carboxilo, que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} tal como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo isopropilo, y un grupo t-butilo, o un grupo alilo,

b): un grupo piperazinilo, que puede estar N-sustituido con un grupo carboxi que está esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} tal como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo isopropilo y un grupo t-butilo, o un grupo alilo,

c): un grupo morfolino, y

d): un grupo amino que puede estar amidado con un ácido carboxílico o aminoácido.

Los ejemplos del grupo ácido carboxílico o grupo amino del apartado anterior d), que pueden ser amidados con un ácido carboxílico o aminoácido, son preferiblemente ácidos mono o dicarboxílicos alifáticos de C_{2} a C_{5} tales como el ácido piválico y el ácido succínico, mientras que los ejemplos de los aminoácidos son aminoácidos en los que el grupo carboxilo puede estar esterificado o en el que el grupo amino puede estar amidado, tal como el ácido L-aspártico, el ácido \alpha-O-t-butil-N-t-butoxicarbonil-L-aspártico, y el ácido \beta-O-t-butyl-N-t-butoxicarbonil-L-aspártico. Además, la amina que tiene un grupo heterocíclico aromático puede tener el átomo de nitrógeno sobre su anillo, que puede estar sustituido con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} tal como un grupo metilo, un grupo etilo, o un grupo carboxi de alquilo de cadena corta, que puede estar esterificado, tal como un grupo carboximetilo y un grupo t-butoxicarbonilmetilo.

Los ejemplos de la amina secundaria del grupo carbonilmetilo mostrado como Z, que está amidado con una amina primaria o secundaria o una amina cíclica son alquilaminas de dialquilo de cadena corta tales como dimetilamina o dietilamina. Los ejemplos de la amina cíclica del grupo carbonilmetilo, mostrado como Z que está amidado con una amina primaria o secundaria o una amina cíclica son pirrolidina y piperidina.

Los ejemplos de grupo arilcarbonilmetilo del grupo arilcarbonilmetilo sustituido o no sustituido mostrado como Z son un grupo fenilcarbonilmetilo y un grupo naftilcarbonilmetilo, mientras que los ejemplos preferidos del grupo sustituyente son un grupo hidroxi, un grupo nitro, átomos de halógeno tales como fluor, cloro, bromo y yodo, grupos alquilo de C_{1} a C_{4} de cadena lineal o ramificada, que pueden estar sustituidos con un átomo de halógeno tal como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo n-butilo, un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo y un grupo t-butilo o grupos alcoxi de C_{1} a C_{4} lineal o ramificado, que pueden estar sustituidos con un átomo de halógeno, tales como un grupo metoxi, un grupo etoxi, un grupo n-propoxi, un grupo n-butoxi, un grupo isopropoxi, un grupo sec-butoxi y un grupo t-butoxi.

Los ejemplos del grupo aralquiloximetilo del grupo de aralquiloximetilo sustituido o no sustituido mostrado como Z son preferiblemente grupos aralquiloximetilo de C_{8} a C_{13} tales como un grupo benciloximetilo, un grupo fenetiloximetilo y un grupo naftiletiloximetilo, mientras que los ejemplos preferidos del grupo sustituyente son un grupo hidroxi, un grupo nitro, átomos de halógeno tales como fluor, cloro, bromo y yodo, grupos alquilo de C_{1} a C_{4} lineal o ramificado que pueden estar sustituidos con un átomo de halógeno, tales como un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo n-butilo, un grupo isopropilo, un grupo sec-butilo y un grupo t-butilo, grupos alcoxi de C_{1} a C_{4} lineal o ramificado, que pueden estar sustituidos con un átomo de halógeno, tales como un grupo metoxi, un grupo etoxi, un grupo n-propoxi, un grupo n-butoxi, un grupo isopropoxi, un grupo sec-butoxi y un grupo t-butoxi.

Además, los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables son sales de ácido tales como un clorato y un nitrato y sales de un metal alcalino tales como sales de sodio y sales de potasio.

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El derivado de quinazolina que tiene la fórmula (I) según la presente invención, puede, por ejemplo, sintetizarse por los siguientes métodos de síntesis (A) o (B).

Método sintético (A)

Un compuesto que tiene la fórmula (I-1):

3

en donde el anillo A es como se ha definido anteriormente y R^{1'}, R^{2'} y R^{3'} representan R^{1}, R^{2} y R^{3}, que pueden estar protegidos con un grupo protector, respectivamente, y R^{1}, R^{2} y R^{3} representan lo mismo que se ha definido anteriormente

se hace reaccionar con un derivado del ácido antranílico que tiene la fórmula (I-2):

4

en donde X' representa X, que puede estar protegido con un grupo protector y X representa lo mismo que se ha definido anteriormente usando el método descrito, por ejemplo, en el documento de patente japonesa JP-A-6-199839 para obtener un derivado de sulfonilurea que tiene la fórmula (I-3):

5

en donde el anillo A, R^{1'}, R^{2'} y R^{3'} y X' representan lo mismo que se ha definido anteriormente,

a continuación, un agente de condensación, por ejemplo, 1,1'-carbonildiimidazol (de aquí en adelante referido como CDI) se usa para obtener el anillo de quinazolina, y si es necesario, los grupos protectores de R^{1}, R^{2} y R^{3} y X se desprotegen.

En esta reacción, cuando R^{1}, R^{2} o R^{3} representan un grupo que contiene un grupo hidroxilo, amino, o de ácido carboxílico, R^{1}, R^{2} o R^{3} pueden opcionalmente estar protegidos con un grupo protector tal como un grupo benciloxicarbonilo, t-butoxicarbonilo, bencilo, alilo, t-butilo, etc. Cuando X representa un grupo hidroxilo o un grupo amino, X puede opcionalmente estar protegido con un grupo protector tal como un grupo benciloxicarbonilo, un grupo t-butoxicarbonilo, un grupo bencilo, un grupo alilo, un grupo t-butilo, etc.

El compuesto que tiene la fórmula (I-1) usado en esta reacción incluye compuestos comercializados o conocidos o un compuesto que puede sintetizarse por un método conocido. Por ejemplo, usando el método sintético descrito en la especificación del documento de patente europea Nº 0269141, es posible usar un compuesto que puede sintetizarse a partir del derivado de sulfonamida correspondiente usando clorosulfonilisocianato. Por ejemplo, es posible usar 3-aliloxicarbonilmetilbencenosulfonilisocianato, 4-aliloxicarbonilmetilbencenosulfonilisocianato, 4-aliloxibencenosulfonilisocianato, etc.

Como derivado del ácido antranílico que tiene la fórmula (I-2) usado en esta reacción, pueden usarse compuestos comercializados o conocidos o un compuesto que puede sintetizarse con un método conocido. Por ejemplo, puede usarse el ácido antranílico, el ácido 4-cloroantranílico, el ácido 4-metoxiantranílico, el ácido 5-cloroantranílico, el ácido 4-hidroxiantranílico, etc.

La reacción para obtener el anillo de quinazolina a partir del derivado de sulfonilurea que tiene la fórmula (1-3) puede llevarse a cabo usando un disolvente aprotónico tal como, por ejemplo, un disolvente de éter tal como tetrahidrofurano y dioxano, un disolvente que contiene un halógeno tal como cloruro de metileno, o dimetilformamida etc. a temperaturas de -50ºC a 50ºC, preferiblemente -20ºC a temperatura ambiente. Además, para la reacción de ciclación, es posible usar un reactivo de condensación ordinario que incluye, por ejemplo, CDI, diciclohexilcarbodiimida, y compuestos de carbodiimida similares, anhídridos mixtos, etc. La reacción de desprotección puede llevarse a cabo con un método ordinario usando hidrólisis con un ácido o álcali, reducción u oxidación etc.

Método sintético (B)

Un compuesto que tiene la fórmula (I-4):

6

en donde el anillo A, R^{1'}, R^{2'} y R^{3'} representan lo mismo que se ha definido anteriormente se condensa con un derivado del ácido antranílico que tiene la fórmula (I-5):

7

en donde X' representa lo mismo que se ha definido anteriormente, Ph representa un grupo fenilo, y R^{4} representa un grupo protector del grupo carboxilo, que es específicamente un grupo capaz de ser liberado por hidrólisis o hidrogenolisis, tal como, por ejemplo, un grupo metilo, un grupo etilo o un grupo bencilo

usando, por ejemplo, 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno (de aquí en adelante referido como DBU) para formar un derivado de sulfonilurea que tiene la fórmula (I-6)

8

en donde el anillo A, R^{1'}, R^{2'}, R^{3'}, R^{4} y X' son como se ha definido anteriormente, que a continuación es hidrolizado con un álcali o hidrogenolizado para producir un derivado de ácido carboxílico correspondiente representado por la fórmula (I-3), después se obtiene el anillo de quinazolina y opcionalmente se desprotegen los grupos protectores de R^{1}, R^{2}, R^{3} y X, de la misma manera que en el método sintético (A). En esta reacción, cuando R^{1}, R^{2} o R^{3} representan un grupo que contiene un grupo hidroxilo, un grupo amino, o un grupo de ácido carboxílico, R^{1}, R^{2} o R^{3} pueden opcionalmente estar protegidos con un grupo protector tal como un grupo benciloxicarbonilo, un grupo t-butoxicarbonilo, un grupo bencilo, un grupo alilo, un grupo t-butilo, etc. Cuando X representa un grupo hidroxilo o un grupo amino, X puede estar opcionalmente protegido con un grupo protector tal como un grupo benciloxicarbonilo, un grupo t-butoxicarbonilo, un grupo bencilo, un grupo alilo, un grupo t-butilo, etc.

En cuanto al compuesto que tiene la fórmula (I-4) usado en la reacción, pueden usarse compuestos comercializados o conocidos o un compuesto que puede sintetizarse con un método conocido. Por ejemplo, 3-hidroxibencenosulfonamida, 2-aminobencenosulfonamida, 3-aminobencenosulfonamida, 4-aminobenceno-sulfonamida, ácido (\pm)-2-(4-aminosulfonilfenil)butírico, 3-benciloxicarbonilamino-4-clorobencenosulfonamida, 4-benciloxicarbonilamino-3-clorobencenosulfonamida, 4-amino-3,5-diclorobencenosulfonamida, 3-benciloxicarbonilamino-4-metilbencenosul-fonamida, 4-t-butoxicarbonil-3-hidroxibencenosulfonamida, 3-benciloxicarbonilamino-4-t-butoxicarbonilbencenosulfonamida, 4-t-butoxicarbonil-3-hidroxibencenosulfonamida, 3-t-butoxicarbonil-4-hidroxibencenosulfonamida, 3-acetamido-4-metoxibencenosulfo-namida, éster t-butílico del ácido 3-(3-aminosulfonil)fenilacrílico, 3-amino-4-metoxibencenosulfonamida, 4-metoxi-3-metilsulfonil-aminobencenosulfonamida, 3-carboxi-4-hidroxi-2-naftalenosulfonamida, 4-benciloxicarbonilamino-3-t-butoxicarbo-nilbencenosulfonamida, (\pm)-3-t-butoxicarbonil-2-oxo-1H,3H-quinolina-7-sulfonamida, (\pm)-2-t-butoxicarbonil-3-oxo-1,4-benzoxacina-6-sulfonamida, etc.

En cuanto al derivado del ácido antranílico que tiene la fórmula (1-5) usado en esta reacción, pueden usarse compuestos comercializados o conocidos o un compuesto que puede sintetizarse con un método conocido. Por ejemplo, 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo, 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de etilo, 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo, 5-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo, 5-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de etilo, 5-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo, 4-metoxi-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo, 4-metoxi-2-N-fenoxicarbonilantranilato de etilo, 4-metoxi-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo, 4-hidroxi-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo, 4-hidroxi-2-N-fenoxicarbonilantranilato de etilo, 4-hidroxi-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo, etc.

El compuesto que tiene la fórmula (1-4) y el derivado del ácido antranílico que tiene la fórmula (1-5) se condensan para obtener un derivado de sulfonilurea que tiene la fórmula (1-6), la reacción puede llevarse a cabo usando un disolvente aprótico, por ejemplo un disolvente de éter tal como tetrahidrofurano o dioxano, un disolvente que contiene un halógeno tal como cloruro de metileno, o dimetilformamida etc. a temperaturas de -50ºC a 50ºC, preferiblemente -20ºC a temperatura ambiente. Además, para la reacción de condensación, es posible usar una base orgánica fuerte tal como DBU, bases inorgánicas tales como carbonato potásico, carbonato sódico, hidróxido potásico, e hidróxido sódico, o bases de metales tales como hidruro de sodio.

En la reacción de hidrólisis alcalina o hidrogenólisis alcalina del derivado de sulfonilurea que tiene la fórmula (1-6) así obtenido para obtener el derivado de sulfonilurea de fórmula (1-3), pueden usarse condiciones ordinarias de hidrólisis o hidrogenólisis para ésteres.

Debe notarse que la reacción anterior puede llevarse a cabo mientras que se protegen los grupos funcionales no envueltos en la reacción. Según el tipo de grupo protector, se elimina la protección con reducción química u otras reacciones corrientes de eliminación de la protección. Por ejemplo, cuando el grupo protector es un grupo t-butilo o un grupo t-butoxicarbonilo, puede usarse el ácido trifluoroacético, mientras que cuando es un grupo alilo, pueden usarse catalizadores de paladio tales como tetrakis(trifenilfosfina)paladio.

Los compuestos que tienen la fórmula (I), en donde R^{1} representa un grupo amino acilado con un ácido alifático de cadena corta de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un ácido carboxílico, un grupo amino acilado con un ácido carboxílico de anillo aromático que puede estar sustituido con un ácido carboxílico y un grupo amino acilado con un ácido carboxílico de anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un ácido carboxílico, pueden obtenerse del compuesto que tiene la fórmula (I), en donde R^{1} representa una grupo amino, acilando el mismo con un ácido carboxílico, un cloruro de ácido carboxílico, un anhídrido de ácido carboxílico usando métodos ordinarios.

El compuesto que tiene la fórmula (I), en donde R^{1} representa un grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de alquilo de C_{1} a C_{4} de cadena corta que puede estar sustituido con un ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de anillo aromático que puede estar sustituido con un ácido carboxílico y un grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un ácido carboxílico, pueden obtenerse del compuesto que tiene la fórmula (I), en donde R^{1} representa un grupo amino, sulfonilando el mismo con un ácido sulfónico o cloruro de ácido sulfónico usando métodos ordinarios.

Un compuesto de fórmula (II) de la presente invención puede obtenerse por un método similar al anterior y además se describe en más detalle en el documento de patente internacional WO97/11941.

Un compuesto de fórmula (I) o (II) obtenido puede purificarse por un método convencional tal como la recristalización o la cromatografía de columna.

Además, cuando sea necesario, el compuesto de fórmula (I) o (II) obtenido por los procedimientos anteriores puede convertirse en una sal haciéndolo reaccionar con varios tipos de ácidos o bases. En cuanto a ácidos que pueden usarse capaces de convertir el compuesto de fórmula (I) o (II) en una sal, pueden mencionarse ácidos inorgánicos tales como el ácido clorhídrico, el ácido bromhídrico, el ácido nítrico, el ácido sulfúrico o el ácido fosfórico y ácidos orgánicos tales como el ácido metanosulfónico, el ácido bencenosulfónico, el ácido p-toluensulfónico, el ácido trifluoroacético, el ácido cítrico, el ácido láctico, el ácido maleico, el ácido fumárico, el ácido tartárico, el ácido acético, el ácido adípico, el ácido palmítico, y el ácido tánico.

En cuanto a bases que pueden usarse capaces de convertir el compuesto de fórmula (I) o (II) en una sal, pueden mencionarse el hidróxido sódico, el hidróxido de litio, el hidróxido potásico.

Los compuestos que tienen la fórmula (I) o (II) incluyen compuestos que contienen centros de asimetría. Es posible aislar un compuesto óptico activo único de una mezcla racémica por uno o más métodos. Por ejemplo pueden usarse,

(1) un método que usa una columna ópticamente activa.

(2) un método de conversión a una sal con un ácido o base ópticamente activos y a continuación recristalizar.

(3) un método que combina los métodos anteriores (1) y (2).

Estos compuestos pueden evaluarse en cuanto a su acción para prevenir o aliviar las condiciones de dermatitis que muestra reacción bifásica de la piel y la dermatitis inducida por exposición repetida a un antígeno con los métodos de los Ejemplos 3, 8, 10, 11, 12 y 18 descritos más tarde

Cuando se usa un compuesto según la presente invención como un medicamento para prevenir o tratar las dermatitis que muestran reacción bifásica de la piel, un medicamento para aliviar la reacción de fase tardía de dermatitis que exhiben reacción bifásica de la piel, o un medicamento para prevenir o tratar las dermatitis inducida por exposición repetida a un antígeno, es posible usar, por ejemplo, un tipo de compuestos o una mezcla de dos o más tipos de compuestos de la presente invención para hacer una preparación de forma adecuada para el método de administración según un método corriente. Por ejemplo, ejemplos de las formas de preparación para administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, gránulos, gránulos finos, jarabes, jarabes secos, y otras preparaciones, mientras que ejemplos de formas de preparación para administración no oral incluyen inyecciones y también supositorios tales como supositorios rectales y supositorios vaginales, preparaciones transnasales tales como aerosoles y pomadas, y preparaciones transdérmicas tales como parches de absorción transdérmica.

La dosis clínica de los compuestos según la invención varía según los síntomas, severidad, edad, presencia de complicaciones, etc. y también varía según la forma de la preparación. En el caso de administración oral, sin embargo, puede dosificarse normalmente, en términos de ingredientes activos, como de 1 a 1000 mg por adulto por día. En el caso de administración no oral, es suficiente administrar de 1/10 a 1/2 de la cantidad en el caso de administración oral. Estas dosis pueden ajustarse adecuadamente según la edad, síntomas etc del paciente.

En la presente invención, el inhibidor de quimasa puede administrarse solo como tal sin ser mezclado con otro ingrediente eficaz, pero considerando la enfermedad en cuestión, los síntomas, complicaciones etc, puede administrarse también como una preparación médica que contiene otros ingredientes eficaces. Además, puede también ser combinado con estos otros ingredientes eficaces. Las cantidades de los otros ingredientes eficaces usados no están particularmente limitadas, sino que se determinan considerando las cantidades mínimas para que sean eficaces cuando se usan solos, la aparición de efectos secundarios etc.

Durante el tratamiento, la forma de la preparación y el método de tratamiento combinado incluyendo preparaciones que contienen el inhibidor de quimasa solo como ingrediente activo y preparaciones que contienen también otros ingredientes activos son seleccionados adecuadamente por un médico según la edad del paciente, los síntomas, etc.

La toxicidad del compuesto según la presente invención es baja. El valor de toxicidad aguda DL_{50} a 24 horas después de la administración oral a ratones machos de 5 semanas fue 1 g/kg o mayor. Este valor es más de 50 veces la dosis clínica anticipada. El compuesto por lo tanto se juzga como de gran seguridad.

Ejemplos

La presente invención se explicará ahora en más detalle, pero no está de ninguna manera limitada por, los siguientes ejemplos, es innecesario decir que el alcance de la invención no está limitado a estos ejemplos.

En el ejemplo 2 y el ejemplo 3, se usó un modelo de dermatitis en el ratón que mostraba reacción bifásica de la piel para indicar la utilidad del inhibidor de quimasa mostrando los efectos de la supresión del inhibidor de quimasa. Además, en los ejemplos de 4 a 6, como prueba adicional de la relación de la quimasa con las dermatitis que muestran reacción bifásica de la piel, se presenta el hecho de que la dermatitis que muestra reacción bifásica de la piel es inducida por inoculación intradérmica de quimasa humana en la oreja del ratón. En el ejemplo 7 y ejemplo 8, se muestran los resultados del análisis de mecanismo de acción de la quimasa en dicha reacción bifásica de la piel.

Por otro lado, en los ejemplos 9 al 12, se demuestra la utilidad de un inhibidor de quimasa usando dermatitis inducida por aplicación repetida de un hapteno como un modelo para la dermatitis inducida por exposición repetida a un antígeno y analizando el modelo y mostrando el efecto de un inhibidor de quimasa en este modelo. Además, puesto que es concebible que las células mastocitos sufran varias reacciones de desgranulación debido a la exposición repetida a alergenos en los pacientes que sufren dermatitis atópica, etc., en los ejemplos 13 a 15 se analizó la dermatitis inducida por inoculación repetida de quimasa humana en las orejas con el propósito de estudiar los efectos de una reacción de desgranulación repetida sobre la piel. Además, en los ejemplos 16 a 17, los efectos de la quimasa en la expresión de SCF, la citoquina más importante de las células mastocitos, se muestran como uno de los mecanismos de la dermatitis inducida por la quimasa. Además, en el ejemplo 18, se examinaron los efectos del inhibidor de quimasa en la dermatitis usando ratones NC/Nga como segundo modelo inducido por exposición repetida al antígeno.

Ejemplo preparativo 1

Síntesis de 7-cloro-3-(3-hidroxibencenosulfonil)-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 1)

Siguiendo el método de síntesis (B), se disolvieron 938 mg (5,42 mmoles) de 3-hidroxibencenosulfonamida en 40 ml de tetrahidrofurano, a continuación se añadieron gota a gota 892 \mul (5,96 mmoles) de 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno (de aquí en adelante referido como DBU). Se agitó la solución de reacción a temperatura ambiente durante 15 minutos, después se añadieron 1,66 g (5,42 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo y se agitó la mezcla durante la noche a temperatura ambiente. Se vertió un exceso de agua sobre la solución de reacción, y a continuación se acidificó la mezcla con ácido clorhídrico y se extrajo con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con agua y solución salina saturada, se secó sobre sulfato magnésico anhidro, y se concentró. El producto bruto así obtenido se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice (0% a 5% de metanol/diclorometano) para obtener 1,23 g (rendimiento 59%) de 4-cloro-2-{[(3-hidroxibencenosulfonilamino)carbo-nil]amino}benzoato de metilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,91 (3H, s), 7,02 (1H, m), 7,09 (1H, m), 7,34 (1H, t), 7,57 (2H, m), 7,89 (1H, d), 8,38 (1H, d), 10,94 (1H, s). A continuación se disolvieron 1,23 g (3,2 mmoles) del compuesto así obtenido en 20 ml de metanol, después se añadieron gota a gota 10 ml de solución acuosa de hidróxido sódico 2N. La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos, después se añadió un exceso de agua y se acidificó la mezcla con ácido clorhídrico. Esto se agitó a continuación para causar la precipitación de cristales que se obtuvieron por filtración y se secaron para obtener el ácido carboxílico. El producto así obtenido se disolvió en 50 ml de tetrahidrofurano (de aquí en adelante referido como THF), después se añadieron 434 mg (2,68 mmoles) de CDI con enfriamiento por hielo y se agitó la mezcla durante 30 minutos. La solución de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y solución salina saturada, se secó sobre sulfato magnésico anhidro, y después se concentró para obtener un producto bruto. El producto bruto se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice (acetato de etilo:n-hexano = 1:2) para obtener 230 mg (rendimiento 20%: 2 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 7,12 (2H, s), 7,24 (1H, d), 7,48 (1H, t), 7,58 (2H, s), 7,85 (1H, d), 10,28 (1H, s), 11,63 (1H, s).

Ejemplo preparativo 2

Síntesis de 3-(2-aminobencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 2)

Se trataron 2,7 g (15,7 mmoles) de 2-aminobencenosulfonamida y 4,8 g (15,7 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo como en el ejemplo preparativo 1 para obtener 3,2 g (rendimiento 58%: 3 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,46 (2H, s), 6,65 (1H, t), 6,81 (1H, d), 7,12 (1H, s), 7,23 (1H, d), 7,34 (1H, t), 7,76 (1H, d), 7,86 (1H, d).

Ejemplo preparativo 3

Síntesis de 7-cloro-3-(2-metilsulfonilaminobencenosulfonil)-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 3)

Se disolvieron 22 mg (0,06 mmoles) de compuesto 2 en 200 \mul de piridina, se añadieron gota a gota 11,6 \mul (0,15 mmoles) de cloruro de metanosulfonilo, y a continuación se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió un exceso de agua sobre la solución de reacción, y se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con una solución acuosa de ácido clohídrico 1N y solución salina saturada, se secó sobre sulfato magnésico anhidro, y se concentró para obtener un producto bruto. Se cristalizó el producto bruto con éter dietílico para obtener 16 mg (0,04 mmoles) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,61 (3H, s), 7,10 (1H, d), 7,20 (1H, d), 7,74 (1H, d), 7,82-7,90 (4H, m), 8,34 (1H, d), 11,70 (1H, s).

Ejemplo preparativo 4

Síntesis de 3-(4-aminobencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 4)

Se trataron 2,7 g (15,7 mmoles) de 4-aminobencenosulfonamida y 4,8 g (15,7 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo como en el ejemplo preparativo 1 para obtener 7,9 g (rendimiento 94%) de 2-{[(4-aminobencenosulfonilamino)carbonil]amino}-4-clorobenzoato de metilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,59 (3H, s), 5,37 (2H, s), 6,45 (2H, d), 6,83 (1H, dd), 7,41 (2D,d), 7,81 (1H,d), 8,66 (1H, d), 9,64 (1H, s).

A continuación partiendo de los 7,9 g (14,8 mmoles) resultantes del producto de sulfonilurea, de la misma forma se obtuvieron 4,3 g (rendimiento 83%: 2 etapas) del producto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,39 (2H, s), 6,63 (2H, d), 7,09 (1H, s), 7,22 (1H, d), 7,76 (2H, d), 7,83 (1H, d), 11,51 (1H, s).

Ejemplo preparativo 5

Síntesis de 3-(3-carboximetil-bencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 5)

Siguiendo el método sintético (A), se disolvieron 3,27 g (11,6 mmoles) de 3-aliloxicarbonilmetilbencenosulfonilisocianato en 100 ml de THF anhidro, se añadieron 1,98 g (11,5 mmoles) de ácido 4-cloroantranílico y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se enfrió la solución de reacción con hielo fundido, se añadieron 1,87 g (11,5 mmoles) de CDI y se agitó la mezcla resultante con enfriamiento con hielo durante 30 minutos. Se añadió un exceso de agua sobre la solución de reacción, y se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica, se secó y se concentró para obtener un producto bruto. Se cristalizó el producto bruto con una pequeña cantidad de acetato de etilo para obtener 2,0 g (rendimiento 40%) de 3-(3-aliloxicarbonilmetilbencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona. El producto de alilo así obtenido se disolvió en 100 ml de una mezcla de ácido fórmico-THF (1:9) y se añadieron 700 mg de trifenilfosfina. El reactor se protegió de la luz y se puso bajo atmósfera de nitrógeno y se añadió entonces 700 mg de tetrakis (trifenilfosfina)paladio (0) y la mezcla resultante se agitó protegiéndola de la luz a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la solución de reacción al vacio y el sólido obtenido se lavó con cloruro de metileno para obtener 1,47 g (rendimiento 81%) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,76 (2H, s), 7,13 (1H, s), 7,24 (1H, d), 7,61-7,69 (2H, m), 7,86 (1H, d), 8,05 (2H, s), 12,50 (1H, ancho).

Ejemplo preparativo 6

Síntesis de 3-(4-carboximetil-bencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 6)

Se trataron 1,10 g (3,95 mmoles) de 4-aliloxicarbonilmetilbencenosulfonilisocianato y 678 mg (3,95 mmoles) de ácido 4-cloroantranílico en la misma forma del ejemplo preparativo 5 para obtener 657 mg (rendimiento 38%) de 3-(4-aliloxicarbonilbencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinadiona. Se trataron 538 mg (1,24 mmoles) del mismo de la misma forma para obtener 342 mg del compuesto del epígrafe (rendimiento 70%). Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,75 (2H, s), 7,13 (1H, s), 7,23 (1H, d), 7,61-7,69 (2H, m), 7,86 (1H, d), 8,05 (2H, s), 12,07 (2H, ancho).

Ejemplo preparativo 7

Síntesis del ácido (\pm)-2-{4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolin-3-il)sulfonil]fenil}butírico (compuesto 7)

Se trataron 1,02 g (3,41mmoles) de ácido t-butil (\pm)-2-(4-aminosulfonil-fenil)butirato y 1,04 g (3,41 mmoles) de 4-cloro-2-P1-fenoxicarbonilantranilato de metilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 1 para obtener 1,46 g (rendimiento 84%) de 2-[((4-[1-(t-butoxicarbonil)propil]bencenosulfonilamino)carbonil)amino]-4-clorobenzoato de metilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, CDCl_{3}): 0,89 (3H, t), 1,38 (9H, s), 1,69-1,76 (1H, m), 2,03-2,10 (1H, m), 3,42 (1H, t), 3,94 (3H, s), 7,04 (1H, d), 7,47 (2H, d), 7,93 (1H, d), 8,01 (2H, d), 8,45 (1H, ancho), 11,04 (1H, ancho).

A continuación se usaron 4,3 ml (8,6 mmoles) de solución acuosa de hidróxido sódico 2N de forma similar para formar el ácido carboxílico en una cantidad de 1,43 g y 463 mg (2,86 mmoles) de CDI se usaron para obtener 970 mg (rendimiento 71%: 2 etapas) de (\pm)-2-{4-[(7-cloro-2,4(IH,3H)-quinazolin-3-il)sulfonil]fenil}butirato de t-butilo.

Adicionalmente, el t-butiléster así obtenido se disolvió en 5 ml de diclorometano, y a continuación se añadieron 5 ml de ácido trifluoroacético y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. La solución de reacción se concentró al vacío y el producto bruto resultante se lavó con una pequeña cantidad de éter dietílico para obtener 820 mg del compuesto del epígrafe (rendimiento 96%). Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO d_{6}): 0,84 (3H, t), 1,67-1,75 (1H, m), 1,98-2,05 (1H, m), 3,62 (1H, t), 7,11 (1H, s), 7,24 (1H, d), 7,61 (2H, d), 7,86 (1H, d), 8,13 (2H, d), 11,62 (1H, s).

Ejemplo preparativo 8

Síntesis de 3-(3-amino-4-clorobencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 8)

Se trataron 1,0 g (2,93 mmoles) de 3-benciloxicarbonilamino-4-clorobenceno-sulfonamida y 1,18 g (2,93 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 1 para obtener 1,43 g (rendimiento 78%) de 2-{[(3benciloxicarbonilamino-4-clorobencenosulfonilamino)carbonil]amino}-4-clorobenzoato de bencilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 5,19 (2H, s), 5,36 (2H, s), 7,21 (1H, dd), 7,34-7,48 (10H, m), 7,72-7,76 (2H, m), 7,97 (1H, d), 8,25 (1H, d), 8,30 (1H, d), 9,53 (1H, s), 10,30 (1H, s). Se disolvieron 1,38 g (2,20 mmoles) del mismo en 50 ml de THF, a continuación se añadieron 200 mg de carbono-paladio (10%) y se agitó la mezcla bajo flujo de hidrógeno durante 2 horas. Se filtró la mezcla de reacción con celita para eliminar el carbono-paladio, después el filtrado se concentró al vacío para obtener el ácido carboxílico. El producto obtenido se suspendió en 50 ml de THF, se añadieron después 356 mg (2,20 mmoles) de CDI con enfriamiento con hielo y la mezcla resultante se trató de la misma forma que el ejemplo preparativo 1 para obtener 560 mg (rendimiento 66%: 2 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,00 (2H, s), 7,12 (1H, s), 7,26 (2H, t), 7,48 (1H, d), 7,66 (1H, s), 7,86 (1H, d), 11,76 (1H, ancho).

Ejemplo preparativo 9

Síntesis de 3-(4-amino-3,5-diclorobencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 9)

Se trataron 1,06 g (4,40 mmoles) de 4-amino-3,5-diclorobencenosulfonamida y 1,34 g (4,40 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 1 para obtener 905 mg (rendimiento 44%) de 2-{[(4-amino-3,5-diclorobencenosulfonilamino)carbonil]amino}-4-clorobenzoato de metilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,87 (3H, s), 6,59 (2H, ancho), 7,22 (1H, dd), 7,72 (2H, s), 7,93 (1H, d), 8,24 (1H, d), 10,17 (1H, s).

A continuación a partir de 905 mg (2,0 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 660 mg (rendimiento 82%: 2 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,80 (2H, s), 7,12 (1H, s), 7,24 (1H, d), 7,86 (1H, d), 7,92 (2H, s), 11,63 (1H, ancho).

Ejemplo preparativo 10

Síntesis de 3-(3-amino-4-metilbencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 10)

Se trataron 960 mg (3,00 mmoles) de 3-benciloxicarbonilamino-4-metilbencenosulfonamida y 1,14 g (3,00 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 8 para obtener 1,14 g (rendimiento 62%) de 2-{[(3-benciloxicarbonilamino-4-metilbencenosulfonilamino)carbonil]amino}-4-clorobenzoato de bencilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 2,30 (3H, s), 5,17 (2H, s), 5,36 (2H, s), 7,20 (1H, dd), 7,33-7,48 (11H, m), 7,63 (1H, d), 7,97 (1H, d), 8,11 (1H, s), 8,25 (1H, s), 9,27 (1H, s), 10,30 (1H, s), 12,20 (1H, ancho).

A continuación a partir de 1,14 g (1,87 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 190 mg (rendimiento 27%: 2 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 2,12 (3H, s), 5,47 (2H, s), 7,12 (1H, s), 7,16-7,25 (3H, m), 7,83 (1H, s), 7,85 (1H, d), 11,58 (1H, s).

Ejemplo preparativo 11

Síntesis de 3-[(3-carboximetilaminofenilsulfonil]-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 11)

Se trataron 1,62 g (5,65 mmoles) de 3-t-butoxicarbonilmetilaminobencenosulfonamida y 1,73 g (5,65 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 7 para obtener 209 mg (rendimiento 9%: 4 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,86 (2H, s), 6,88 (1H, s), 7,12 (1H, s), 7,24 (1H, d), 7,30-7,38 (3H, m), 7,86 (1H, d), 11,61 (1H, ancho).

Ejemplo preparativo 12

Síntesis de 3-(3-aminobencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 12)

Se trataron 3,5 g (12,9 mmoles) de 3-t-butoxicarbonilaminobencenosulfonamida y 3,9 g (12,8 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 7 para obtener 2,2 g (rendimiento 49%: 4 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 5,72 (2H, s), 6,87 (1H, d), 7,12 (1H, s), 7,23-7,27 (2H, m), 7,33 (1H, s), 7,86 (1H, d), 11,61 (1H, s).

Ejemplo preparativo 13

Síntesis del ácido 2-{3-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]fenilaminocarbonil}propiónico (compuesto 13)

Se disolvieron 100 mg (0,28 mmoles) del compuesto 12 en 5 ml de THF, se añadieron 100 mg (1,0 mmoles) de anhídrido succínico, y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 3 horas. La solución de reacción se concentró al vacío y el producto bruto así obtenido se cristalizó con acetato de etilo-éter dietílico para obtener 120 mg (rendimiento 96%) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión 187-188ºC, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 2,54 (2H, d), 2,59 (2H, d), 7,12 (1H, s), 7,24 (1H, d), 7,59 (1H, t), 7,80 (1H, d), 7,86 (1H, d). 7,96 (1H, d), 8,41 (1H, s), 10,40 (1H, s), 11,63 (1H, ancho), 12,10 (1H, ancho).

Ejemplo preparativo 14

Síntesis del ácido 3-{3-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]fenil}acrílico (compuesto 14)

Se trataron 1,54 g (5,44 mmoles) de 3-(3-aminosulfonil)fenilacrilato de t-butilo y 1,66 g (5,44 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 7 para obtener 2,18 g (rendimiento 81%) de 2-({[3-t-butoxi-3-oxo-1-propenil)bencenosulfonilamino]carbonil}amino)}-4-clorobenzoato de metilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, CDCl_{3}): 1,53 (9H, s), 3,95 (3H, s), 6,46 (1H, d), 7,05 (1H, d), 7,55 (1H, m), 7,57 (1H, d), 7,72 (1H, m). 7,93 (1H, m), 8,04 (1H, m), 8,27 (1H, s), 8,46 (1H, d), 11,05 (1H, ancho).

A continuación a partir de 2,18 g (4,4 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 698 mg (rendimiento 37%: 3 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,65 (1H, d), 7,12 (1H, s), 7,25 (1H, d), 7,69 (1H, d), 7,72 (1H, t), 7,87 (1H, d), 8,12 (2H, q), 8,37 (1H, s), 11,64 (1H, s).

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Ejemplo preparativo 15

Síntesis del ácido 4-r[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]salicílico (compuesto 15)

Se trataron 1,0 g (3,66 mmoles) de 4-t-butoxicarbonil-3-hidroxibencenosulfonamida y 1,12 g (3,66 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 7 para obtener 1,79 g (rendimiento 100%) de 2-{[(4-t-butoxicarbonil-3-hidroxibencenosulfonilamino)carboni]amino}-4-clorobenzoato de metilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 1,57 (9H, s), 3,87 (3H, s), 7,14 (1H, d), 7,40-7,45 (2H, m), 7,85 (1H, d), 7,92 (1H, d), 8,32 (1H, d). 10,13 (1H, s), 10,82 (1H, s).

A continuación a partir de 1,78 g (3,66 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 370 mg (rendimiento 25%: 3 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 7,13 (1H, s), 7,26 (1H, d), 7,69 (1H, d), 7,87 (1H, d), 8,01 (1H, d), 11,67 (1H, s).

Ejemplo preparativo 16

Síntesis de la sal monosódica del ácido 4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]salicílico (compuesto 16)

Se suspendieron 50 mg (0,13 mmoles) del compuesto 15 en aproximadamente 1 ml de THF, y a continuación se añadieron 126 \mul de solución acuosa de hidróxido sódico 1N gota a gota. Se confirmó que la solución era uniforme, y a continuación se añadieron 30 ml de agua y se liofilizó la mezcla para obtener cuantitativamente el compuesto del epígrafe en estado amorfo en una cantidad de 52 mg. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, CD_{3}OD): 7,11 (1H, s), 7,19 (1H, d), 7,58 (1H, d), 7,63 (1H, s), 7,92 (1H, d), 8,03 (1H, d).

Ejemplo preparativo 17

Síntesis del ácido 4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]antranílico (compuesto 17)

Se trataron 2,84 g (6,99 mmoles) de 3-benciloxicarbonilamino-4-t-butoxicarbonilbencenosulfonamida y 2,67 g (6,99 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 8 para obtener 3,74 g (rendimiento 77%) de 2-{[(3-benciloxicarbonilamino-4-t-butoxicarbonilbencenosulfonilamino)carboni]amino}-4-clorobenzoato de bencilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 1,54 (9H, s), 5,19 (2H, s), 5,34 (2H, s), 7,05 (1H, m), 7,34-7.58 (10H, m), 7,60 (1H, d), 7,90 (1H, d). 7,98 (1H, d), 8,50 (1H, ancho), 8,62 (1H, s), 10,00 (1H, ancho). 10,41 (1H, s).

A continuación a partir de 3,74 g (5,39 mmoles) de la sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 690 mg (rendimiento 30%: 2 etapas) de 4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]antranilato de t-butilo, y a continuación se sometió el producto a una reacción de desbutilación similar para obtener 503 mg (rendimiento 84%) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200º C (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 7,14 (1H, s), 7,18 (1H, d), 7,25 (1H, d), 7,59 (1H, s), 7,87 (1H, d), 7,89 (1H, d), 11,62
(1H, s).

Ejemplo preparativo 18

Síntesis de la sal monosódica del ácido 4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]antranílico (compuesto 18)

Se suspendieron 50 mg (0,13 mmoles) del compuesto 17 en aproximadamente 1 ml de THF, y a continuación se añadieron 126 \mul de solución acuosa de hidróxido sódico 1N gota a gota. Se confirmó que la solución era uniforme, y a continuación se añadieron 30 ml de agua y se liofilizó la mezcla para obtener cuantitativamente el compuesto del epígrafe en estado amorfo en una cantidad de 52 mg. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSOd_{6}): 7,11-7,22 (3H, m), 7,37 (1H, s), 7,83 (1H, d), 7,91 (1H, d).

Ejemplo preparativo 19

Síntesis de 3-(4-hidroxibencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 19)

Se trataron 1,50 g (7,03 mmoles) de 4-aliloxibencenosulfonilisocianato y 1,2 g (7,03 mmoles) del ácido 4-cloroantranílico de la misma forma que en el ejemplo preparativo 5 para obtener 1,5 g (rendimiento 53%) de 3-(4-aliloxibencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona. Se trataron 500 mg (1,27 mmoles) del mismo de forma similar para obtener 405 mg del compuesto del epígrafe (rendimiento 90%). Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,98 (2H, d), 7,11 (1H, s), 7,23 (1H, d), 7,85 (1H, d), 8,00 (2H, d), 11,25 (1H, ancho).

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Ejemplo preparativo 20

Síntesis del ácido 4-[(2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]salicílico (compuesto 20)

Se trataron 618 mg (2,26 mmoles) de 4-t-butoxicarbonil-3-hidroxibencenosulfonamida y 613 mg (2,26 mmoles) de 2-N-fenoxicarbonilantranilato de metilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 792 mg (rendimiento 78%) de 2-{[(4-t-butoxicarbonil-3-hidroxibenceno-sulfonilamino)carboni]amino}benzoato de metilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, CDCl_{3}): 1,60 (9H, s), 3,97 (3H, s), 7,09 (1H, t), 7,49-7,52 (2H, m), 7,65 (1H, d), 7,90 (1H, d), 8,01 (1H, dd). 8,33 (1H, d), 10,98 (1H, s), 11,18 (1H,s).

A continuación a partir de 790 mg (1,75 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 100 mg (rendimiento 8%: 3 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 7,13 (1H, d), 7,22 (1H, t), 7,63-7,69 (3H, m), 7,87 (1H, d), 8,01 (1H, d), 11,57 (1H, s).

Ejemplo preparativo 21

Síntesis del ácido 5-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]salicílico (compuesto 21)

Se trataron 320 mg (1,17 mmoles) de 3-t-butoxicarbonil-4-hidroxibencenosulfonamida y 447 mg (1,17 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 611 mg (rendimiento 93%) de 2-{[(3-t-butoxicarbonil-4-hidroxibenceno-sulfonilamino)carboni]amino}-4-clorobenzoato de bencilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, CDCl_{3}): 1,62 (9H, s), 5,35 (2H, s), 7,01-7,05 (2H, m), 7,37-7,41 (5H, m), 7,96 (1H, d), 8,10 (1H, dd), 8,46-8,48 (2H, m), 10,99 (1H, s), 11,66 (1H, s).

A continuación a partir de 611 mg (1,09 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 114 mg (rendimiento 33%: 3 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 7,11 (1H, s), 7,19 (1H, d), 7,24 (1H, d), 7,86 (1H, d), 8,20 (1H, d), 8,56 (1H, s), 11,57 (1H, s).

Ejemplo preparativo 22

Síntesis de 3-(3-acetamido-4-metoxibencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 22)

Se trataron 500 mg (2,19 mmoles) de 3-acetamido-4-metoxibencenosulfonamida y 836 mg (2,19 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 8 para obtener 812 mg (rendimiento 70%) de 2-{[(3-acetilamino-4-metoxibencenosulfonilamino)carbonil]amino}-4-clorobenzoato de bencilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 2,12 (3H, s), 3,93 (3H, s), 5,36 (2H, s), 7,20 (1H, d), 7,24 (1H, d), 7,36-7,48 (5H, m), 7,69 (1H, d), 7,96 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,67 (1H, s), 9,39 (1H, s), 10,25 (1H, s), 12,11 (1H, ancho).

A continuación, a partir de 611 mg (1,09 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma se obtuvieron 250 mg (rendimiento 39%: 2 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 2,12 (3H, s), 3,95 (3H, s), 7,12 (1H, s), 7,23 (1H, d), 7,30 (1H, d), 7,85 (1H, d), 7,89 (1H, d), 8,80 (1H, s), 9,42 (1H, s), 11,59 (1H, ancho).

Ejemplo preparativo 23

Síntesis de 3-(3-amino-4-metoxibencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 23)

Se trataron 400 mg (1,40 mmoles) de 3-t-butoxicarbonilamino-4-metoxibencenosulfonamida y 533 mg (1,40 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 86 mg (rendimiento 16%: 4 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,81 (3H, s), 7,26-7,37 (5H, m), 7,77 (1H, s), 7,90 (1H, d), 7,94 (1H, d), 11,73 (1H, s).

Ejemplo preparativo 24

Síntesis de 7-cloro-3-(4-metoxi-3-metilsulfonilaminobencenosulfonil)-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 24)

Se trataron 500 mg (1,89 mmoles) de 4-metoxi-3-metilsulfonilaminobencenosulfonamida y 722 mg (1,89 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 8 para obtener 888 mg (rendimiento 83%) de 2-({[(4-metoxi-3-metisulfonilamino)bencenosulfonilamino]carbonil}amino)}-4-clorobenzoato de bencilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 2,12 (3H, s), 3,93 (3H, s), 5,36 (2H, s), 7,20 (1H, d), 7,24 (1H, d), 7,36-7,48 (5H, m), 7,69 (1H, d), 7,96 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,67 (1H, s), 9,39 (1H, s), 10,25 (1H, s), 12,11 (1H, ancho).

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A continuación, a partir de 880 mg (1,55 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 620 mg (rendimiento 85%: 2 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,04 (3H, s), 3,94 (3H, s), 7,11 (1H, s), 7,23 (1H, d), 7,34 (1H, d), 7,86 (1H, d), 7,99 (1H, d), 8,10 (1H, s).

Ejemplo preparativo 25

Síntesis del ácido 4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]-1-hidroxinaftaleno-2-carboxílico (compuesto 25)

Se trataron 323 mg (1,00 mmol) de 3-t-butoxicarbonil-4-hidroxi-1-naftalenosulfonamida y 381 mg (1,00 mmol) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 447 mg (rendimiento 73%) del éster t-butílico del ácido 4-({[(2-benciloxicarbonil-5-cloroanilina)carbonil]amino}sulfonil)-1-hidroxi-2-naftalenocar-boxílico. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 1,66 (9H, s), 5,34 (3H, s), 6,98 (1H, d), 7,35-7,48 (5H, m), 7,66 (1H, m), 7,81 (1H, m), 7,89 (1H, d), 8,37 (2H, m), 8,44 (1H, s), 8,71 (1H, d), 10,02 (1H, ancho), 12,52 (1H,ancho).

A continuación a partir de 445 mg (0,72 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 56 mg (rendimiento 18%: 3 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 7,08 (1H, s), 7,20 (1H, d), 7,63 (1H, t), 7,77 (1H, t), 7,84 (1H, d), 8,42 (1H, d), 8,51 (1H, d), 8,75 (1H, s), 11,57 (1H, s).

Ejemplo preparativo 26

Síntesis del ácido 5-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]antranílico (compuesto 26)

Se trataron 834 mg (2,05 mmoles) de 4-benciloxicarbonilamino-3-t-butoxicarbonilbencenosulfonamida y 783 mg (2,05 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 1,18 g (rendimiento 83%) de 2-{[(4-benciloxicarbonilamino-3-t-butoxicarbonilbencenosulfonilamino)carbonil]amino}-4-clorobenzoato de bencilo. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, CDCl_{3}): 1,56 (9H, s), 5,22 (2H, s), 5,37 (2H, s), 7,04 (1H, dd), 7,33-7,42 (10H, m), 7,97 (1H, d), 8,14 (1H, d), 8,45 (1H, d), 8,60 (1H, d), 8,65 (1H, d), 11,01 (1H, s), 11,11 (1H,s).

A continuación a partir de 1,17 g (1,69 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 404 mg (rendimiento 60%: 3 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,89 (1H, d), 7,11 (1H, s), 7,23 (1H, d), 7,85 (1H, d), 7,98 (1H, d), 8,51 (1H, s), 11,51 (1H, s).

Ejemplo preparativo 27

Síntesis del ácido 4-[(7-metoxi-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]antranílico (compuesto 27)

Se trataron 500 mg (1,23 mmoles) de 3-benciloxicarbonilamino-4-t-butoxicarbonilbencenosulfonamida y 460 mg (1,22 mmoles) de 4-metoxi-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 15 mg (rendimiento 3,1%: 4 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,82 (3H, s), 6,58 (1H, s), 6,80 (1H, d), 7,16 (1H, d), 7,56 (1H, s), 7,80 (1H, d), 7,90 (1H, d), 11,49 (1H, s).

Ejemplo preparativo 28

Síntesis del ácido (\pm)-7-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]-2-oxo-1H,3H-quinolina-3-carboxílico (compuesto 28)

Se trataron 400 mg (1,23 mmoles) de (\pm)-3-t-butoxicarbonil-2-oxo-1H,3H-quinolina-7-sulfonamida y 468 mg (1,23 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 649 mg (rendimiento 86%) del éster t-butílico del ácido 8-({[(2-benciloxicarbonil-5-cloroanilino)carboni]amino}sulfonil)-2-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-3-quinolinocarboxílico. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, CDCl_{3}): 1,32 (9H, s), 3,18-3,30 (2H, m), 3,54 (1H, m), 5,35 (2H, s), 6,85 (1H, m), 7,00 (1H, m), 7,35-7,39 (5H, m), 7,87-7,96 (3H, m), 8,47 (1H, m), 8,78 (1H, ancho), 10,92 (1H, ancho).

A continuación a partir de 640 mg (1,04 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 258 mg (rendimiento 55%: 3 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,23-3,31 (2H, m), 3,59 (1H, t), 7,07 (1H, d), 7,12 (1H, s), 7,25 (1H, d), 7,86 (1H, d), 7,96 (1H, d), 7,98 (1H, d), 10,84 (1H, s), 11,60 (1H, s).

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Ejemplo preparativo 29

Síntesis del ácido (\pm)-6-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]-3-oxo-1,4-benzoxacino-2-carboxílico (compuesto 29)

Se trataron 300 mg (0,91 mmoles) de (\pm)-2-t-butoxicarbonil-3-oxo-1,4-benzoxacin-6-sulfonamida y 349 mg (0,91 mmoles) de 4-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 417 mg (rendimiento 74%) del éster t-butílico del ácido 5-({[(2-benciloxicarbonil-5-cloroanilino)carbonil]amino}sulfonil)-3-oxo-3,4-dihidro-2H-1,4-benzoxacina-2-carboxílico. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 1,29 (9H, s), 5,37 (2H, s), 5,42 (2H, s), 7,19-7,26 (2H, m), 7,37-7,57 (7H, m), 7,97 (1H, d), 8,25 (1H, d), 10,27 (1H, s), 11,25 (1H, s), 12,22 (1H, ancho).

A continuación a partir de 417 mg (0,68 mmoles) del producto de sulfonilurea resultante, de la misma forma, se obtuvieron 100 mg (rendimiento 32%: 3 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 5,47 (1H, s), 7,11 (1H, s), 7,24 (1H, d), 7,29 (1H, d), 7,76 (1H, s), 7,78 (1H, d), 7,86 (1H, d), 11,25 (1H, s), 11,62 (1H, s).

Ejemplo preparativo 30

Síntesis del ácido 4-[(7-hidroxi-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]antranílico (compuesto 30)

Se trataron 620 mg (1,53 mmoles) de 3-benciloxicarbonilamino-4-t-butoxicarbonilbencenosulfonamida y 550 mg (1,51 mmoles) de 4-hidroxi-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 25 mg (rendimiento 4%: 4 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,48 (1H, s), 6,61 (1H, d), 7,14 (1H, d), 7,51 (1H, s), 7,70 (1H, d), 7,90 (1H, d), 10,80 (1H, s), 11,39 (1H, s).

Ejemplo preparativo 31

Síntesis del ácido 4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]-2-N-propionilantranílico (compuesto 31)

Se disolvieron 840 mg (1,86 mmoles) de compuesto 17 en 8 ml de 1,4-dioxano, se añadieron 240 \mul (2,79 mmoles) de cloruro de propionilo gota a gota, y después la mezcla resultante se agitó a 60ºC durante la noche. Se vertió un exceso de agua sobre la solución de reacción, y se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica así obtenida, se secó y se concentró para obtener un producto bruto de 4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]-2-N-propionilantranilato de t-butilo. El producto bruto obtenido se agitó a temperatura ambiente en 3 ml de ácido trifluoroacético durante 1 hora, a continuación la solucion de reacción se concentró a vacío para obtener un producto bruto. Este se lavó con éter dietílico para obtener 400 mg (rendimiento 48%: 2 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 1,10 (3H, t), 2,45 (2H, dd), 7,11 (1H, s), 7,24 (1H, d), 7,85 (1H, d), 7,88 (1H, d), 8,17 (1H, d), 9,18 (1H, s), 11,07 (1H, s), 11,63 (1H, s).

Ejemplo preparativo 32

Síntesis del ácido 4-[(6-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]antranílico (compuesto 32)

Se trataron 300 mg (0,74 mmoles) de 3-benciloxicarbonilamino-4-t-butoxicarbonilbencenosulfonamida y 310 mg (0,81 mmoles) de 5-cloro-2-N-fenoxicarbonilantranilato de bencilo de la misma forma que en el ejemplo preparativo 17 para obtener 75 mg (rendimiento 26%: 4 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 7,13-7,20 (2H, m), 7,56 (1H, s), 7,72 (1H, d), 7,82 (1H, s), 7,90 (1H, d), 11,68 (1H, s).

Ejemplo preparativo 33

Síntesis del ácido 4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]-2-N-metanosulfonilantranílico (compuesto 33)

Se trataron 200 mg (0,44 mmoles) del compuesto 17 de la misma forma que en el ejemplo preparativo 3 para obtener 81 mg de 4-[(7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodion-3-il)sulfonil]-2-N-metanosulfonilantranilato de t-butilo. Este se usó para realizar la misma reacción de desbutilación para obtener 53 mg (rendimiento 25%: 2 etapas) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 3,24 (3H, s), 7,11 (1H, s), 7,25 (1H, d), 7,85-7,91 (2H, m), 8,23 (1H, d), 8,39 (1H, s), 11,05 (1H, ancho), 11,70 (1H, s).

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Ejemplo preparativo 34

Síntesis de la sal del ácido metanosulfónico de 3-(3-aminobencenosulfonil)-7-cloro-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 34)

Se disolvieron 2,15 g (6,10 mmoles) del compuesto 12 en 65 ml de THF y se añadieron gota a gota 0,4 ml de ácido metanosulfónico. Se añadieron 200 ml de éter a esta solución, y el precipitado resultante se filtró para obtener 2,59 g (rendimiento 95%) del compuesto del epígrafe. Propiedades: amorfo sin color, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 2,35 (3H, s), 6,98 (1H, d), 7,12 (1H, m), 7,25 (1H, m), 7,34 (2H, s), 7,43 (1H, m), 7,86 (1H, s), 11,64 (1H, s).

Ejemplo preparativo 35

Síntesis del hidrocloruro de 7-cloro-3-[4-(pirazol-3-il)bencenosulfonil]-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (compuesto 35)

Siguiendo el método sintético (B), se disolvieron 5,65 g (25,34 mmoles) de 4-(pirazol-3-il)bencenosulfonamida en 60 ml de THF, y a continuación se añadieron 7,8 ml (52,16 mmoles) de DBU gota a gota. Se agitó la solución de reacción a temperatura ambiente durante 10 minutos, a continuación se añadieron 8,5 g (27,86 mmoles) de 4-cloro-2-fenoxicarbonil-aminobenzoato de metilo y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron 400 mg (0,131 mmoles) más de 4-cloro-2-fenoxicarbonil-aminobenzoato de metilo a la solución de reacción y después se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió a la solución de reacción un exceso de solución acuosa de ácido cítrico, y a continuación se realizó una extracción usando acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con agua y solución salina saturada, después se secó sobre sulfato sódico anhidro y se condensó. Se añadió metanol al residuo condensado, y a continuación se agitó la mezcla y los cristales resultantes se obtuvieron por filtración para obtener 10,49 g de producto bruto.

Se suspendieron 10,49 g del producto bruto obtenido en 45 ml de metanol, y a continuación se añadieron 90 ml de una solución acuosa de hidróxido sódico 1N. La solución de reacción se agitó a 60ºC durante 40 minutos, después se recogió el precipitado por filtración. Se concentró el filtrado a vacío y se separó por destilación el metanol, a continuación la mezcla acuosa obtenida se lavó con acetato de etilo. La capa acuosa se acidificó con ácido clorhídrico para causar la precipitación de cristales. Estos se separaron por filtración. Se extrajo el filtrado con acetato de etilo, se lavó la capa orgánica con solución salina saturada, y se secó y condensó sobre sulfato sódico anhidro. El residuo condensado y los cristales obtenidos por filtración anteriormente se combinaron y recristalizaron con THF-acetato de etilo-hexano para obtener 7,70 g (rendimiento 72% en dos etapas) de N-[4-(pirazol-3-il)bencenosulfonil]-N'-(2-carboxil-5-clorofenil)urea (propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: 129 a 132ºC, RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,81 (1H, d), 7,02 (1H, dd), 7,78 (1H, s), 7,89-7,92 (3H, m), 7,96 (2H, d), 8,24 (1H, s), 10,57 (1H, ancho).

Se disolvieron 3,0 g (7,14 mmoles) del derivado de urea obtenido anteriormente en 60 ml de THF, se añadieron 1,2 g (7,40 mmoles) de CDI a continuación con enfriamiento con hielo y se agitó la mezcla durante 2 horas. Se diluyó la solución de reacción con acetato de etilo, y se lavó sucesivamente con una solución acuosa de ácido cítrico, solución salina saturada, solución acuosa de bicarbonato sódico 0,5 M, y solución salina saturada. Se secó la capa orgánica con sulfato sódico anhidro, y después se condensó para obtener un producto bruto. El producto bruto se recristalizó con acetato de etilo para obtener 1,93 g (rendimiento: 67%) de 7-cloro-3-[4-(pirazol-3-il)bencenosulfonil]-2,4(1H,3H)-quinazolinodiona (propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: 124 a 126ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, CDCl3-CD3OD): 6,73 (1H, s), 7,09 (1H, s), 7,16 (2H, d), 7,48 (1H, s), 7,66 (1H, s), 7,9-8,1 (3H, m), 8,32
(2H, d).

Se disolvieron 545 mg (1,35 mmoles) del derivado de quinazolina obtenido anteriormente en 35 ml de THF, y a continuación se añadieron gota a gota 0,4 ml de una solución de ácido clorhídrico 4M en 1,4-dioxano. Se añadieron 20 ml de éter a esta solución, y después los cristales precipitados se obtuvieron por filtración para obtener 572 mg (rendimiento 96%) del compuesto del epígrafe. Propiedades: cristalino sin color, punto de fusión: >200ºC (con descomposición), RMN (\delta ppm, DMSO-d_{6}): 6,91 (1H, d), 7,15 (1H, d), 7,24 (1H, dd), 7,84 (1H, d), 7,86 (1H, d), 8,01 (2H, d), 8,17 (2H, d), 11,7 (1H, s).

Ejemplo 1

Medida de la actividad inhibitoria de la quimasa

Se purificó quimasa de corazón humano según el método de Urata et al. (J. Biol. Chem., 1990, 265, 22348). Se midió la actividad inhibitoria de los derivados de quinazolina aquí usados con respecto a la quimasa de la forma siguiente. O sea, la solución enzimática purificada se diluyó hasta una concentración adecuada con tampón de tris-hidrocloruro 0,1 M (pH=7,5), cloruro sódico 1M y TritonX-100 al 0,01% para obtener una solución enzimática. Una solución de Succinil-Alanina-Prolina-Fenilalanina-4-metilcumaril-7-amida, (Suc-Ala-Pro-Phe-MCA) (Peptide Institute) 10 mM en dimetilsulfóxido (de aquí en adelante referido como DMSO) se diluyó 20 veces en el momento de usarse con tris-hidrocloruro 0,1 M, cloruro sódico 1M, y TritonX-100 obteniéndose la solución de sustrato.

Se mezclaron 75 \mul de la solución enzimática calentada a 30ºC con 5 \mul de solución de la muestra de prueba en DMSO. Se preincubó la mezcla a 30ºC durante 10 minutos. A continuación, se mezclaron 20 \mul de solución de sustrato calentada a 30ºC con la muestra de prueba-mezcla enzimática y se incubó a 30ºC. Después de 10 minutos, se añadieron 50 \mul de ácido acético al 30% para detener la reacción enzimática. Se cuantificó la cantidad de AMC producida usando un fotómetro de fluorescencia. Al mismo tiempo se realizó una prueba ciega añadiendo, en lugar de la solución de muestra de prueba, 5 \mul de DMSO y realizando la misma reacción. La actividad inhibidora de la quimasa se expresó como la proporción de inhibición, o sea, el 50% de la concentración de inhibición (IC_{50}), basado en el valor de la prueba ciega.

Todos los derivados de la quinazolina usados aquí inhibieron fuertemente la quimasa humana en concentraciones de 100 \muM. Los valores IC_{50} para compuestos típicos se muestran en la Tabla 1.

TABLA 1

Ejemplo nº	Valor IC_{50} (\muM)
1	0,36
2	0,14
8	0,035
10	0,17
12	0,44
13	0,3
16	0,84
17	0,14
18	0,14
21	0,34
22	0,3
24	0,32
27	4,0
29	1,7
32	1,5
34	0,36

Ejemplo 2

Variación a lo largo del tiempo de la reacción de la piel en el modelo de dermatitis bifásica en el ratón inducida por Ascaris

Se indujo dermatitis bifásica inducida por Ascaris según el método descrito anteriormente (Folia Pharmacol. Jap. 112, 221, 1998). Esto es, se sensibilizaron ratones BALB/c (Charles River Japan) de 8 semanas con inyección intraperitoneal de 0,5 ml de una mezcla 1:1 de extracto de Ascaris (800 \mug/ml, Cosmo Bio Co., Ltd.) y una suspensión salina de alum (16 mg/ml en solución salina). Dos semanas después de la sensibilización, se inyectaron 10 \mul de extracto de Ascaris (1 mg/ml) por vía intradérmica en la oreja derecha del ratón. Se evaluó el edema inducido en la oreja inmediatamente antes de la inyección intradérmica del extracto de Ascaris (n=3) y una hora después (n=4), 2 horas después (n=4), 4 horas después (n=4), 6 horas después (n=4), 16 horas después (n=4), y 24 horas después de la inyección (n=4), pesando la biopsia de la oreja hecha con un punzón (diámetro de 6 mm, Fukui KiKo Shokal) y midiendo sus pesos. Se expresó el edema (mg) como la diferencia en el peso de la biopsia de punzón de la oreja entre la oreja derecha y la izquierda del mismo ratón.

Se indujo la dermatitis bifásica con administración intradérmica del extracto de Ascaris a las orejas de ratones sensibilizados con el mismo antígeno (Fig. 1). La primera reacción alcanzó su máximo después de 1 hora, mientras que la segunda reacción alcanzó su máximo después de 16 horas.

Ejemplo 3

Efectos del inhibidor de quimasa en el modelo de dermatitis bifásica inducida por Ascaris en el ratón

Se indujo la dermatitis según el método descrito en el Ejemplo 2 y se midió el edema de la oreja de la misma forma que en el Ejemplo 2, 1 hora (n=6) y 16 horas (n=8) después de la administración intradérmica del extracto de Ascaris a las orejas para investigar los efectos de la sustancia de prueba en la dermatitis. Se usó el compuesto 34 como inhibidor de quimasa. Se usaron como fármacos de control, difenilhidrazina (antihistamina, Sigma) y prednisolona (esteroide, Nakarai Tesc Co.). Se suspendió cada fármaco estudiado en solución salina que contenía 0,5% de hidroxipropilcelulosa y se administró por vía intraperitoneal 60 minutos antes de la administración por vía intradérmica del extracto de Ascaris. Se usó como control un grupo de ratones sensibilizados con extracto de Ascaris y enfrentado con inyección por vía intradérmica de solución salina (n=3).

Resultados

Como resultado de la administración intraperitoneal del inhibidor de quimasa (compuesto 34), ambas reacciones, la de después de 1 hora (reacción de fase temprana) y la de después de 16 horas (reacción de fase tardía) de la dermatitis bifásica inducida por el extracto de Ascaris fueron suprimidas en una manera dependiente de la dosis. Se observó una diferencia estadísticamente significativa en la dosis de 50 mg/kg (Fig. 2A). La proporción de supresión a 50 mg/kg fue de alrededor de 41% para la reacción de fase temprana y alrededor de 45% para la reacción de fase tardía (ambos p<0,01, prueba de Dunnett). La prednisolona, que es eficaz en la dermatitis atópica, fue sustancialmente ineficaz en la reacción de fase temprana, pero inhibió fuertemente la reacción de fase tardía en una dosis de 30 mg/kg (proporción de supresión: 67%) (Fig. 2B). Por otra parte, la difenilhidrazina suprimió significativamente la fase de reacción temprana (proporción de supresión: 79%), pero no mostró casi eficacia en la reacción de fase tardía (Fig. 2C).

El hecho de que un inhibidor de quimasa exhiba una acción supresora en un modelo de dermatitis alérgica que muestra una reacción bifásica de la piel muestra la relación de la quimasa en la dermatitis bifásica alérgica y la utilidad de un unhibidor de quimasa en dicha dermatitis. En particular, el hallazgo de que un inhibidor de quimasa, como un esteroide, suprime significativamente la reacción de fase tardía, en la que las antihistaminas y los agentes antialérgicos muestran poca eficacia, muestra la utilidad de un inhibidor de quimasa en la dermatitis atópica. En los siguientes Ejemplos 4 a 6, se examinaron las condiciones inducidas en la piel por inoculación de quimasa humana en las orejas de los ratones con el propósito de confirmar adicionalmente la importancia de la quimasa en la reacción bifásica de la piel.

Ejemplo 4

Habilidad de una administración única de quimasa humana para inducir dermatitis

Se usó quimasa humana recombinante en este Ejemplo. Se obtuvo quimasa humana recombinante por expresión y purificación según el método ya descrito de producción de proteasa de serina (Biochem. Biophys. Acta 1350, 11, 1997). Esto es, primero se amplificó cADN (79-756) que codifica la quimasa humana plenamente desarrollada (J. Biol. Chem. 266, 17173, 1991) por el método de PCR. Se clonó el producto de PCR en el vector pDE junto con la secuencia señal de la tripsina humana II y la región que incluye el lugar de corte de la enteroquinasa (23 aminoácidos). El plásmido de expresión de quimasa humana construido se transfirió a células CHodhfr, y se seleccionaron las transfectadas con un método ya descrito (Arch. Biochem. Biophys. 307, 133, 1993). La proteína fusionada de quimasa humana y tripsina secretada en el sobrenadante del cultivo de las células obtenidas se concentró usando una columna de heparina de HiTrap (Amersham Pharmacia Biotech), y después se cortó con enteroquinasa (Invitrogen) para producir la quimasa humana plenamente desarrollada. La quimasa humana plenamente desarrollada se purificó usando una columna 5PW de heparina (Tosoh Corp.). En análisis de electroforesis con SDS-gel de poliacrilamida, la quimasa purificada mostró una banda ancha de 33-36 kDa. Además, se midió la actividad de quimasa en un tampón 0,1 M Tris/HCl (pH 8,0) usando Succinil-Alanina-Prolina-Fenilalanina-4-metilcumaril-7-amida, (Suc-Ala-Pro-Phe-MCA) 1 mM (Peptide Institute) como sustrato y midiendo la intensidad de la fluorescencia del MCA libre. Como resultado, se confirmó que la quimasa purificada posee ciertamente actividad enzimática.

A continuación, se administraron por vía intradérmica 20 \mul (0,1 mg/ml) de la quimasa humana recombinante anterior (de aquí en adelante llamada quimasa humana) por vía intradérmica a la oreja de ratones BALB/c (Japan Charles River) y la variación a lo largo del tiempo de la reacción edematosa de las orejas se midió con el método descrito en el Ejemplo 2 con el propósito de investigar el papel de la quimasa en la dermatitis (n=3 a 4). Además se administró de forma similar histamina, un mediador de inflamación de las células mastocitos, por vía intradérmica y la variación a lo largo del tiempo se comparó con el caso de administración de quimasa humana. La histamina (Sigma-Aldrich) se inyectó disolviéndola en solución salina (0,25 mg/ml).

Como se muestra en la Fig. 3A, administrando quimasa humana (2,0 \mug/oreja) a las orejas de ratones, se indujo una reacción edematosa bifásica parecida a la reacción alérgica de la piel que se muestra en el caso del Ejemplo 2. O sea, la primera reacción de la piel fue inmediatamente inducida después de la administración de quimasa y alcanzó un máximo después de 30 minutos a 1 hora. Además, la segunda reacción de la piel alcanzó un máximo después de 6 horas y continuó durante al menos 24 horas. Por otro lado, se indujo una reacción edematosa inmediata incluso cuando se inoculó histamina, pero esta reacción de la piel desapareció completamente 20 horas después de la inoculación, en contraste con el caso de inoculación de quimasa (Fig. 3B). El análisis de la dependencia de la dosis en la dermatitis inducida por quimasa reveló que la reacción de fase temprana (después de 1 hora) es dependiente de la dosis y que la reacción máxima se observa con la cantidad de 2,0 \mug/oreja que es la dosis usada en el experimento (Fig. 4A). Por otro lado, en la segunda reacción (después de 16 horas), mientras que las reacciones a 0,5 \mug/oreja y 1,0 \mug/oreja fueron alrededor del mismo nivel, la respuesta máxima se obtuvo a 2,0 \mug/oreja igual que ocurrió en la primera reacción
(Fig. 4B).

Se ha mostrado anteriormente, que la administración por vía intradérmica de quimasa humana en ratones induce dermatitis, y que su variación a lo largo del tiempo se parece al de la dermatitis bifásica inducida por antígenos, un modelo agudo de dermatitis, lo que muestra la relación de la quimasa en la dermatitis bifásica.

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Ejemplo 5

Papel de la actividad de la quimasa en la dermatitis inducida por una única administración de quimasa

Se investigó la habilidad de quimasa humana tratada con calefacción para inducir la dermatitis con el propósito de estudiar si la actividad enzimática de la quimasa tiene un papel en la dermatitis inducida por la quimasa humana mostrada. Se inactivó la quimasa humana incubando una solución de quimasa humana de 0,1 mg/ml a 50ºC durante 2 horas, y a continuación hirviéndola a 100ºC durante 5 minutos. Esta quimasa humana inactivada se administró a ratones en las orejas (2,0 \mug/oreja) por el método descrito en el Ejemplo 4, y se evaluó la dermatitis 1 hora después de la administración.

Como resultado del tratamiento por calefacción de la quimasa humana, la reacción de edema inducida por la quimasa humana desapareció completamente (p<0,01 frente al grupo donde no se administró quimasa, prueba de la t de Student, (n=4) (Fig.5). Este resultado muestra que la actividad de la quimasa es esencial para inducir la dermatitis.

Ejemplo 6

Análisis histológico de la dermatitis inducida por una única administración de quimasa

Se realizo un análisis patohistológico de la dermatitis inducida por la quimasa y se hizo una comparación con la dermatitis bifásica mostrada en el Ejemplo 2 con el propósito de investigar en más detalle el papel de la quimasa en la dermatitis bifásica. Estos tipos de dermatitis se indujeron según los métodos descritos en el Ejemplo 2 y el Ejemplo 4 (la dosis de quimasa humana fue 2,0 \mug/oreja). Se fijaron las orejas con formalina y se prepararon secciones de parafina según un método ordinario 1 hora y 24 horas después de la administración en ambos modelos. Las secciones se tiñeron con hematoxilina y eosina, después se observaron con el microscopio y se fotografiaron. Además se usaron secciones de las orejas de ratones BALB/c normales como controles negativos.

Se observó un notable espesamiento en la sección de 1 hora después de la aparición de la dermatitis de quimasa (Fig. 6D), se observó un notable espesamiento comparado con las secciones de las orejas de ratones normales (Fig. 6A), pero no pudo observarse ninguna diferencia entre los dos en relación a la infiltración de leucocitos. Sin embargo, como se muestra en la fig. 6E, se observó una notable infiltración celular en las secciones de 24 horas después de la inyección de quimasa. El patrón de cambios histológicos mostrado por la dermatitis de quimasa se parecía al modelo de dermatitis bifásica inducida por Ascaris (Figs. 6B y 6C). O sea, hubo notable espesamiento del tejido después de 1 hora, pero se observó infiltración celular solo en las secciones de después de 24 horas. Resumiendo, se mostró que la dermatitis inducida por quimasa se parece a la dermatitis bifásica inducida por un antígeno incluso en un análisis patohistológico.

En los siguientes Ejemplo 7 y Ejemplo 8, se realizó un análisis sobre el mecanismo de la dermatitis inducida por quimasa para investigar el papel de la quimasa en la dermatitis bifásica.

Ejemplo 7

Habilidad de la quimasa humana para inducir dermatitis en ratones deficientes en células mastocitos

Puesto que se ha descrito que la quimasa induce una desgranulación en las células mastocitos peritoneales de la rata (J. Immunol. 136, 3812, 1986), se consideró posible que la dermatitis inducida por la quimasa se induzca a través de la liberación del mediador de inflamación de las células mastocitos. Así, se estudió a continuación la relación de células mastocitos en la dermatitis inducida por la quimasa usando ratones deficientes en células mastocitos (Blood 52, 447-425, 1978). Ratones deficientes en células mastocitos (WBB6F1-W/W^{v}) y sus ratones de control (WBB6F1-+/+) se obtuvieron de SLC Japan. Se indujo la dermatitis de quimasa por administración por vía intradérmica de la quimasa humana (2,0 \mug/oreja) y se evaluó la reacción de edema después de 1 hora y 16 horas usando el método descrito en el Ejemplo 4.

Como se muestra en las Figs. 7A y 7B, se observó una reacción de la piel del mismo alcance que en los ratones de control (WBB6F1-+/+) incluso con los ratones deficientes en células mastocitos (WBB6F1-W/W^{v}) después de 1 hora (Fig. 7A) y después de 16 horas (Fig. 7B). Este resultado indica que la quimasa induce una reacción de la piel de fase bifásica independientemente de la existencia de células mastocitos.

Ejemplo 8

Habilidad de la quimasa humana para promover la emigración de leucocitos polimorfonucleares

En el Ejemplo 6, se demostró que se observa una notable infiltración de leucocitos en la fase tardía de la dermatitis inducida por quimasa humana. Se investigó el efecto de la quimasa humana en la emigración de leucocitos polimorfonucleares (PMN) in vitro con el propósito de investigar el mecanismo de la infiltración de leucocitos inducida por la quimasa. Se aislaron los PMN añadiendo un volumen de 1/5 de solución de dextrano al 6% a sangre entera heparinizada de sujetos sanos normales y dejándola reposar a 37ºC durante 1 hora, después poniendo en capas el sobrenadante sobre Ficoll-Paque (Amersham Pharmacia Biotech) y centrifugando. Además, se midió la emigración de PMN usando una cámara de quimiotaxis de 48 pocillos (NeuroProbe Co.) según el método de libros de texto (Seibutsu Yakkagaku Jikken Koza (Biopharmacology Experiment Lectures) 12.315, Hirokawa Shoten). Esto es, un medio que contiene quimasa humana (200 a 800 nM) o fMLP (N-formil-L-metionil-L-leucil-L-fenilalanina, Sigma-Aldrich Co.) (10 nM) se puso en los pocillos inferiores de la cámara. Los pocillos supriores y los pocillos inferiores estaban separados por un filtro de policarbonato (tamaño del poro 5 \mum) (NeuroProbe Co.). Se añadieron PMN (1 x 10^{6}/ml) a los pocillos superiores y se cultivaron a 37ºC durante 1 hora, a continuación se fijó el filtro, se tiñó y se contó el número de células en la membrana con un microscopio (400X) (Seibutsu Yakkagaku Jikken Koza (Biopharmacology Experiment Lectures) 12.315). Para el teñido de las células se usó una solución de hemacolor (Merck). En esta prueba, cuando se investigaba el efecto del inhibidor de quimasa, se disolvió un inhibidor de quimasa (Compuesto 18 o Compuesto 34) en dimetilsulfóxido y se añadió a los pocillos inferiores de la cámara justo antes de la adición de la quimasa humana. La concentración del compuesto se ajustó de manera que la concentración final en dimetilsulfóxido fue 1%.

Como se muestra en la Fig. 8A, la quimasa humana mostró una actividad promotora de la emigración de PMN humanos en una manera dependiente de la concentración, con una significación estadística observada a \geq400 nM (p<0,05, prueba de Dunnett). Basados en el hecho de que la quimasa humana muestra actividad promotora de la emigración a una concentración de 200 a 400 nM en la misma magnitud que fMLP 10 nM, se deduce que tiene una actividad de alrededor de 1/30 la de fMLP. La acción de la quimasa humana para promover la emigración de los PMN humanos fue suprimida significativamente por los inhibidores de quimasa, Compuesto 18 y Compuesto 34 (Fig. 8B). Estos resultados sugieren que la quimasa actúa directamente en los leucocitos polimorfonucleares para promover su migración, y muestra el papel de la actividad enzimática de la quimasa en esa acción.

Considerando todo ello, puesto que la quimasa liberada por las células mastocitos después del estímulo de un antígeno induce reacción bifásica de la piel cuando se la inyecta en las orejas de ratones por vía intradérmica, (Ejemplos 4 a 6), está claro que la quimasa juega un papel importante en una reacción de la piel que muestra reacción bifásica de la piel. Los datos de los Ejemplos 7 y 8 sugieren un mecanismo de relación de la quimasa en la reacción bifásica de la piel. Además se ha mostrado también que un inhibidor de la quimasa suprime la dermatitis inducida por Ascaris, una reacción bifásica de la piel (Ejemplo 2 y Ejemplo 3).

Ejemplo de formulación 1

Producción de comprimidos

Se mezclaron 100,0 g del Compuesto 1 con 22,5 g de celulosa microcristalina y 2,5 g de estearato magnésico y después se formaron los comprimidos con una máquina de acción única para producir comprimidos de un diámetro de 9 mm y un peso de 250 mg cada uno que contenían 200 mg del Compuesto 1.

Ejemplo de formulación 2

Producción de gránulos

Se mezclaron bien 30 g de Compuesto 1 con 265 g de lactosa y 5 g de estearato magnésico. Se moldeó la mezcla en una prensa, después se pulverizó, se granuló, y se gradó para obtener gránulos excelentes al 10% de 20 a 50 de criba.

Ejemplo de formulación 3

Producción de supositorios rectales

Se calentó Vitepsol H-15 (Dynamit Nobel Co.) hasta la fusión. Se añadió a esto el compuesto 1 en una concentración de 12,5 mg/ml. Esto se mezcló homogéneamente, se añadió a moldes de supositorios rectales en cantidad de 2 ml y se enfrió para obtener supositorios rectales que contenían cada uno 25 mg de Compuesto 1.

Aplicación industrial

Según la presente invención, un inhibidor de la quimasa alivia una reacción bifásica de inflamación de la piel o su reacción de fase tardía, y puede eficazmente prevenir y/o tratar condiciones de dermatitis que exhiben una reacción bifásica de inflamación.

Claims

1. El uso de un inhibidor de quimasa como ingrediente activo en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la dermatitis que muestra una reacción de la piel bifásica.

2. El uso según la reivindicación 1, en donde la dermatitis que muestra una reacción de la piel bifásica es la dermatitis atópica.

3. El uso según la reivindicación 1 o 2, en donde el inhibidor de quimasa se selecciona de derivados de quinazolina que tienen la formula (I) a continuación y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos:

9

en donde el anillo A representa un grupo arilo;

: R^{1} representa un grupo hidroxilo, un grupo amino, un grupo alquilamino de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo aralquilamino de C_{7} a C_{10} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino acilado con un ácido alifático de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino acilado con un ácido carboxílico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino acilado con un ácido carboxílico de anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido alcanosulfónico de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de un anillo aromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo amino sulfonilado con un ácido sulfónico de un anillo heteroaromático que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} sustituido con un grupo de ácido carboxílico, o un grupo alquileno de C_{2} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico;

: X representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4}, un grupo alcoxilo de C_{1} a C_{4}, un átomo de halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo amino, o un grupo nitro.

4. El uso según la reivindicación 3, en donde R^{1} es un grupo hidroxilo, un grupo amino, un grupo alquilamino de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo carboxílico, o un grupo amino acilado con un ácido alifático de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un grupo de ácido carboxílico.

5. El uso según una cualquiera de la reivindicación 3 o la reivindicación 4, en donde R^{2} es un grupo carboxílico o un átomo de hidrógeno.

6. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 4 o 5, en donde R^{3} es un átomo de hidrógeno.

7. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, en donde A es un anillo de benceno o un anillo de naftaleno.

8. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7 en donde X es un átomo de halógeno o un grupo alcoxi de C_{1} a C_{4}.

9. El uso según la reivindicación 1 o 2 en donde el inhibidor de quimasa se selecciona de derivados de quinazolina que tienen la siguiente fórmula (II) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos:

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en donde el anillo B representa un anillo de benceno, anillo de piridina, anillo de pirrol, o anillo de pirazol y m representa 0, 1, o 2;

: R^{5} y R^{6} pueden ser iguales o diferentes y representan un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un átomo de halógeno, un grupo nitro, un grupo ciano, un grupo pirazolilo, un grupo tetrazolilo, un grupo carboxilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4}, o un grupo alilo o un grupo alcoxi de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con uno o más grupos de sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en un átomo de halógeno, un grupo de morfolino, un grupo de fenilpiperazinilo, y un grupo de carboxilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} o un grupo alilo, o, cuando el anillo B representa un anillo de benceno, R^{5} y R^{6} representan grupos que forman un anillo de naftaleno o un anillo de quinolina junto con el anillo de benceno que se muestra como sustituido con dichos R^{5} y R^{6}, y

: Z representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un átomo de halógeno, un grupo alquenilo de C_{2} a C_{5}, un grupo de aralquilo sustituido o no sustituido, un grupo alquilheterocíclico aromático sustituido o no sustituido, un grupo carboximetilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4}, o un grupo alilo, un grupo carbonilmetilo que está amidado con una amina cíclica primaria o secundaria o un grupo arilcarbonilmetilo sustituido o no sustituido, o un grupo aralquiloximetilo sustituido o no sustituido.

10. El uso según la reivindicación 9, en donde Z es un átomo de hidrógeno, o un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un átomo de halógeno.

11. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10, en donde Y es un halógeno o un grupo alcoxi de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un átomo de halógeno.

12. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en donde R^{5} y R^{6} están independientemente seleccionados de un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} que puede estar sustituido con un átomo de halógeno, un grupo carboxilo que puede estar esterificado con un grupo alquilo de C_{1} a C_{4} o un grupo alilo de C_{1} a C_{4}.

13. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en donde B es un anillo de benceno.

14. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 en el que el medicamento es para aliviar la fase tardía de dicha dermatitis.